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DE2163791C2 - Verfahren zur Herstellung von 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure und ihrer Ester - Google Patents

Verfahren zur Herstellung von 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure und ihrer Ester

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DE2163791C2
DE2163791C2 DE2163791A DE2163791A DE2163791C2 DE 2163791 C2 DE2163791 C2 DE 2163791C2 DE 2163791 A DE2163791 A DE 2163791A DE 2163791 A DE2163791 A DE 2163791A DE 2163791 C2 DE2163791 C2 DE 2163791C2
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methyl
cephem
carboxylic acid
ifo
esters
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Kenji Osaka Kawahara
Takeshi Takahashi
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Takeda Pharmaceutical Co Ltd
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Takeda Chemical Industries Ltd
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    • C12P35/02—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin by desacylation of the substituent in the 7 position
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Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure der Formel (I) oder ihrer Ester aus bestimmten 7-Acylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäuren oder ihren Estern durch enzymatische N-Deacylierung.
Die als Produkt gewünschte 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure der Formel
"2^~1 I 12
COOH
oder ihr Ester an der 4-Carboxylgruppe ist als wichtiges Zwischenprodukt für die Synthesen von Cephalosporinen mit breitem antibiotischem Spektrum, z. B. Cefalexin, bekannt.
Es ist bekannt, daß die Verbindung (I) oder ihr Ester chemisch durch Hydrolyse von 7-Phenoxyacetamido-3-methyl-S-cephem^-carbonsäureester oder durch reduzierende Eliminierung «ler Acetoxygruppe aus 7-Aminocephalosporansäure oder ihrem Ester hergestellt werden kann. Beim erstgenannten Verfahren ergeben sich jedoch Schwierigkeiten, spezifisch die endständige Säureamidbindung an der 7-Stellung abzuspalten, ohne andere Teile des Moleküls zu beeinträchtigen. Insbesondere muß in Fällen, in denen die Verbindung (I) gewünscht wird, der Esterrest ein ganz spezielles Radikal sein, das leicht hydrolysierbar ist. Ferner schwankt die Ausbeute der gewünschten Verbindung selbst bei einer geringen Abweichung von den Reaktionsbedingungen. Beim letztgenannten Verfahren ist die Ausbeute noch niedriger als beim erstgenannten Verfahren.
Von der Anmelderin wurde das erstgenannte Verfahren ausgeweitet, jedoch in völlig verschiedener Weise mit Hilfe eines Enzymsystems von Mikroorganismen, wobei die Ausbildung eines großtechnisch durchführbaren Verfahrens gelang, wie es durch den Anspruch gekennzeichnet ist.
Es wurde gefunden, daß diese Umwandlung auf die Fähigkeit der Mikroorganismen zurückzuführen ist, ausschließlich die Amidbindung zu hydrolysieren, wenn 4-Carbonsäure als Substrat verwendet wird, und entweder ausschließlich die Säureamidbindung oder sowohl die Säureamidbindung als auch die Carbonsäureesterbindung zu hydrolysieren, wenn der 4-Carbonsäureester das Substrat ist.
Beim Verfahren gemäß der Erfindung wird 7-Phenyl-acetamido- oder 7-Phenoxyacetamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ihre Ester mit einer Kulturbrühe des Mikroorganismus oder einem verarbeiteten oder behandelten Bestandteil der Kulturbrühe in einem wäßrigen Medium zusammengeführt.
Die Herstellung der Ausgangsverbindungen erfolgt beispielsweise durch Umwandlung aus den entsprechenden 6-Acylamidopenicillansäureestern über ihre S-Oxyde, wie in der US-PS 32 75 626 und in der BE-PS 747118 beschrieben.
Die Ausgangsverbindung kann in Form der freien Säure oder als Natriumsalz, Kaliumsalz, Ammoniumsalz, Aminsalz ode eines anderen Salzes eingesetzt werden. Beispiele von Estern, die als Ausgangsverbindungen geeignet sind, sird~Alkylester (z. B. Methylester, Äthylester, Butylester und Hexylester), substituierte Alkylester (z. B. Methylthiomethylester, Methylsulfenylmethylester, Methylsulfonylmethylester, Chlormethylester, Brommethylester und Trichloräthylester, bei denen also der Substituent ein Alkylthiorest, Alkylsulfenylrest, Alkylsulfonylrest, Halogenatom usw. ist) und Aralkylester (z. B. Benzylester oder Phenyläthylester).
Der Kontakt des Substrats mit der Kulturbrühe oder ihren verarbeiteten Bestandteilen kann so erfolgen, daß der Mikroorganismus in einem Kulturmedium kultiviert wird, das das Substrat enthält, wenn der Mikroorganismus widerstandsfähig gegen das Substrat ist. Im allgemeinen wird jedoch so gearbeitet, daß der Mikroorganismus in geeigneter Weise kultiviert und dann die erhaltene Kulturbrühe oder ihre verarbeiteten Bestandteile ver-
w) wendet werden. Die Kultivierung kann unter Rühren mit Belüftung, unter Schütteln oder stationär erfolgen, jedoch wird allgemein eine ;ierobe Kultivierung bevorzugt. Die Kulturmedien werden hergestellt, indem die Komponenten allein oder in Kombination nach der Notwendigkeit aus folgenden Stoffen ausgewählt werden: Heischextrakt, Hefeextrakt, I'epton, Caseinhydrolysat, Maisquellwasscr, Kartoffelsaft oder beliebige andere üblicherweise verwendete natürliche StofTe, Kohlenstoffverbindungen, z. B. Zucker, organische Säuren oder n-
(i5 Paralfine, die verschiedensten anorganischen und organischen Verbindungen, die Stickstoff- Form von AminostickstolToder NitratstickstolTcnthalten, Phosphate, Magnesiumsalze, Kochsalzoderandere Metallionen und die verschiedensten Vitamine. Der Zusatz von Phenoxyessigsäure oder Phenylessigsäure, die dem Acylrest des zu verwendenden Substrats entspricht, zum Kulturmedium in einer Konzentration von 0,05 bis 1% kann zur
Folge haben, daß die Aktivität der erhaltenen Kulturbrühe für die Bildung des gewünschten Produkts aus dem Substrat gesteigert wird. Der geeignete Pn-Wert des Kulturmediums und die Kultivierungstemperatur variieren in Abhängigkeit von der Art des Mikroorganismus. Geeignet ist jedoch gewöhnlich ein Pn-Wert im Bereich von Pn 6 bis 9. Die Temperatur liegt im allgemeinen im Bereich von etwa 10 bis 400C. Die Zeit, zu der die Aktivität der Kulturbrühe das Maximum erreicht, ist verschieden in Abhängigkeit von der Art des verwendeten Mikroorganismus, so daß die optimale Kultivierungszeit zweckmäßig für jeden Stamm bestimmt wird. Die in dieser Weise erhaltene Kulturbrühe oder ein verarbeiteter Bestandteil dieser Brühe wird für die Herstellung von 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ihres Esters verwendet. Als verarbeiteter Bestandteil der Kulturbrühe kann alles verwendet werden, was durch geeignete Behandlungen zur Steigerung oder Konzentrierung der Umwandlungsaktivität so umgewandelt worden ist, daß es für die Herstellung der gewünschten Verbindung vorteilhaft ist Wenn beispielsweise die Aktivität hauptsächlich intrazellulär vorliegt, verwendet man zweckmäßig 1) Zellsuspensionen, die verschiedene Konzentrationen der abgetrennten Zellen in einer Pufferlösung enthalten, 2) zellfreie Extrakte der Zellen, die nach üblichen Methoden erhalten worden sind, oder 3) Enzymlösungen, die nach üblichen Verfahren von den zellfreien Extrakten gereinigt oder teilweise gereinigt worden sind. Wenn die Aktivität hauptsächlich extrazeüulär konzentriert ist, können beispielsweise 1) überstehende Lösungen, die durch Entfernung der Zellen aus der Kulturbrühe erhalten werden, oder 2) Enzymlösungen, die von den überstehenden Lösungen nach an sich bekannten Methoden zur Reinigung von Enzymen gereinigt oder teilweise gereinigt worden sind, verwendet werden.
Das Substrat wird mit der in dieser Weise hergestellten Kulturbrühe oder ihren verarbeiteten Bestandteilen in Wasser oder beliebigen anderen wäßrigen Medien zusammengeführt. Der pH-Wert der Reaktionsmedien wird zweckmäßig auf einen Wert zwischen 4 und 9, insbesondere zwischen 6 und 8 eingestellt. Die geeignete Reaktionszeit wird von den Konzentrationen der Substrate, der Aktivität der Kulturbrühe oder ihrer verarbeiteten Bestandteile für die Umwandlung, die Reaktionstemperatur usw. beeinflußt, jedoch genügen im allgemeinen 1 bis 24 Stunden. Die Reaktionstemperatur liegt zwischen 10 und 50 0C, zweckmäßig zwischen 15 und 400C. Die Konzentration des Substrats wird hauptsächlich in Abhängigkeit von der Intensität der Umwandlungsaktivität zur Bildung der gewünschten Verbindung bestimmt, jedoch im allgemeinen aus einem Bereich von 0,1 bis 5% (Gewicht/Volumen), gerechnet als Ausgangsverbindung und bezogen auf das Medium, gewählt.
Die 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ihr Ester kann unter milden Bedingungen durch Kombination an sich bekannter Verfahren, z. B. durch Extraktion mit Lösungsmitteln oder durch Chromatographie, isoliert und gereinigt werden. Es ist besonders zu empfehlen, das Filtrat des Reaktionsgemisches der Säulen-Chromatographie an dem Ionenaustauscherharz »Amberlile* XAD-2« zu unterwerfen und die Elution mit Wasser vorzunehmen und hierbei die Fraktionen aufzufangen, die das gewünschte Produkt enthalten.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele weiter erläutert. Dort sind die Prozentsätze der Bestandteile des Kulturmediums auf Basis von Gewicht/Volumen, d. h. in Gramm/100 ml angegeben. Die übrigen Mengenangaben beziehen sich auf das Gewicht, falls nicht anders angegeben. Gewichtsteile verhalten sich zu Raum- teilen wie Gramm zu Kubikzentimeter. In den Tabellen bedeutet»-«, daß das Produkt nicht nachweisbar war. Die IFO- und ATCC-Nummern, die den Namen der jeweiligen Mikroorganismen hinzugefügt sind, sind die Hinterlegungsnummern beim Institute for Fermentation, Osaka, Japan und bei der American Type Culture Collection, Maryland, USA:
Escherichia coli IFO-3210 ATCC-21758 Escherichia coli IFO-3467 ATCC-21753 Xanthomonas oryzae IFO-3312 ATCC-21754 Protaminobacter alboflavus IFO-13221 ATCC-21755 Mycoplana sp. IFO-13240 ATCC-21756 Aeromonas hydrophila IFO-12634 ATCC-21757
Für Mycoplana sp. IFO13240 ist die Spezies noch nicht festgelegt worden. Daher werden die Charakteristiken des Stammes nachstehend angegeben:
Unregelmäßige Stäbchen von 0,6 x 2 bis 0,6 X 6μ, zuweilen gekrümmt und in sehr jungem Stadium verzweigt.
Beweglich mit Hilfe von polaren Geißeln. Gramnegativ, aerob.
Agarkolonien: kreisrund, hellgrau, konvex, glatt, geschlossen. Agar-Schrägkultur: fadenförmig, hellgrau, glatt, Brühe: trübe,
Gelatine-Stichkultur: keine Verflüssigung. Dünnes Oberflächenwachstum. Casein, Stärke und Cellulose werden nicht hydrolysiert. <io
Keine Bildung von Nitriten aus Nitraten. Keine Schwefelwasserstoffbildung. Keine Indolbildung. Methylrottest: negativ
Katalase: positiv ,,5
Lackmusmilch: unverändert Kartoffel: kein Wachstum Kein Wachstum oder nur spärliches Wachstum in Kohlenhydratmedien.
Aromatische Verbindungen, ζ. Β. Phenylglycin, wurden verwendet. Vom Boden isoliert.
Beispiel !
Ein 2-Tage-lnoculum (5 Raunueile) von Escherichia coli IFO-3210 wurde in 200 Raumteile eines Kulturmediums geimpft, das einen p„-Wert von 7,2 hatte und 1,0% Fleischextrakt, 1,0% Pepton, 0,5%. Natriumglutamat, 0,5% Natriumchlorid und 0,05% Phenylessigsäure enthielt Das Kulturmedien wurde unter Schütteln 48 Stunden bei 37°C bebrütet, worauf eine Lösung von 0,8 Gew.-Teilen Methyl-T-phcnyl-acetamido-J-methyl-S- cephem-4-carboxylat in 8 Raumteilen Aceton zusammen mit 50 Raumteilen einer 0,25-moIaren Phosphatpufferlösung (Ph 7,0) zugesetzt wurde. Das gesamte Gemisch wurde dann 16 Stunden bei 28°C geschüttelt, worauf das Methyl-7-pbenylacetamido-3-met!hyl-3-cephem-4-carboxylat im Gemisch vollständig verschwand und 0,4 Gew.-Teile 7-Amino-3-methyI-3-cephem-4-carbonsäure darin gebildet worden war. Das Reaktionsgemisch wurde zur Entfernung der Zellen filtriert. Das Filtrat wurde der Säulenchromatogra phie an »Amberlite* XAD-2« unter Verwendung von destilliertem Wasser als Elutionsmittel unterworfen, wobei 0,35 Gew.-Teile 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure vom Schmelzpunkt 240-2420C (Zers.) erhalten wurden.
Beispiel 2
Auf die in Beispiel I beschriebene Weise wurden 2-Tage-Kulturen der in Tabelle 2 genannten Bakterienstämme hergestellt. Zu 200 ml jeder Kulturbrühe wurde eine Lösung von 800 mg Methyl^-phenylacetamidoO-methyl-3-cephem-4-carboxylat (Substrat 1) in 8 ml Aceton und 50 ml einer 0,25-molaren PhosphatpufTerlösung Cpn 7,0) gegeben. Zu einer weiteren Menge von 200 ml jeder Kulturbrühe wurde eine Lösung von 800 mg 7-Phe nylacetamido-3-methyl-3-cephem-4-cairbonsäure (Substrat 2) in 50 ml einer 0,25-molaren Phosphatpufferlö sung (pH 7,0) gegeben. Die Gemische wurden weitere 16 Stunden bei 280C geschüttelt, um die Reaktion stattfinden zu lassen. Die Produkte wurden vom Reaktionsgemisch abgetrennt und durch Säulenchromatograhie gereinigt. Die Ausbeuten wurden nach den Absorptionen bei 260 ηημ bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabeile 2 genannt, worin Methyl-7-amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat das Produkt A und 7-Amino-3-methyl-3-
30 cephem-4-carbonsäure das Produkt B ist.
Tabelle 2 Mikroorganismus Substrat 1 Substrat 2 Produkt A Produkt B Produkt B
Escherichia coli IFO-3467 Xanthomonas oryzae IFO-3312
40 ProtaminobacteralboflavusIFO-13221
Mycoplana sp. IFO-13240 Aeromonas hydrophile IFO-12634 150 mg
Beispiel 3
Eine Ösenmenge des in der Tabelle 3 genannten Bakterienstammes wurde in 5 ml eines wäßrigen Mediums (Ph T-O) geimpft, das 0,8% »Bacto-Nutrient Broth, dehydrated« (im Handel erhältlich, Hersteller Difco Laborato ries, USA) und 0,3% Phenylessigsäure enthielt, worauf 24 Stunden unter Schütteln bei 28°C bebrütet wurde. Der Kulturbrühe wurde eine Lösung von entweder 30 mg 7-Phenylacetamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure (Substrat 1) oder von 30 mg 7-Phcnoxyacetamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure (Substrat 2) in 1 ml einer 0,25-molaren PhosphatpufTerlösung (pl( 7,0) zugesetzt. Dann wurde im Falle des Substrats 1 weitere 4 Stunden bei 28°C und im Falle des Substrats 2 weitere 24 Stunden bei 28°C geschüttelt, worauf das Reaktionsge misch keine antimikrobielle Aktivität zeigte. Dies bedeutet, daß die Substrate vollständig umgewandelt waren. Die Ausbeute an 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure wurde mit Hilfe der wiederhergestellten antimikrobiellen Aktivität nach Phenylacetylierung mit Phenylacetylchlorid bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 genannt.
60 Tabelle 3
400 mg 420 mg
350 mg 300 mg
140 mg 370 mg
370 mg 250 mg
- 300 mg
Mikroorganismus Substrat 1 Substrat 2
Hschcrichia coli IFO-3210 18 mn 15 mg Beispiel 4
Eine Ösenmenge von Escherichia coli 1FO-3210 wurde in 50 Raumteile eines wäßrigen Kulturmediums (pM 7,0) geimpft, das 1% Pepton, 1% Fleischextrakt, 0,5% NaCl und 0,3% Phenylessigsäure enthielt, worauf eine Impfkultur durch 24stündiges Bebrüten unter Schütteln hergestellt wurde. Die Impfkullur wurde in 500 Raumteile eines wäßrigen Mediums der obengenannten Zusammensetzung inoculiert.
Das Gemisch wurde 24 Stunden bei 280C geschüttelt. Die Kulturbrühe wurde zur Abtrennung der Zellen filtriert. Die Zellen wurden dann mit Wasser gewaschen und in 50 Raumteilen destilliertem Wasser suspendiert.
Zur Zellsuspension wurden 50 Raumteile einer wäßrigen Lösung von 2 Gew.-Teilen 7-Phenylacetamido-3-methyl-3cephem-4-carbonsäure gegeben. Das Gemisch wurde 3 Stunden bei 37°C gerührt, wobei der pH-Wert durch intermittierende Zugabe von 0,In-NaOH bei 7,0 gehalten wurde. In Abständen von 30 Minuten wurde ein kleiner Teil des Reaktionsgemisches entnommen und seine Extinktion bei 260 ιτίμ gemessen. Die gleiche Probe wurde dann der Dünnschichtchromatographie an Kieselgel unter Verwendung eines Gemisches von Äthylacetat, Essigsäure und Wasser (Volumenverhäitnis 50:5:4) als Entwickler unterworfen. Aus den Ergebnissen zeigte sich, daß das Substrat (Rf 0,50) in der 3stündigen Reaktion vollständig verschwand und 7-Amino-3- is methyl-S-cephem^-carbonsäure (RfO,O5) gebildet wurde. Die Extinktion des Reaktionsgemisches bei 260 ΐημ veränderte sich während der Reaktion nicht wesentlich.
Das Reaktionsgemisch wurde zur Entfernung der Zellen filtriert. Das Filtrat wurde mit der Waschflüssigkeit für die Zellen vereinigt. Die vereinigte Lösung wurde an »Amberlite* XAD-2« Chromatographien. Die Säule wurde mit destilliertem Wasser eluiert. Die Gefriertrocknung der Eluate ergab 1,0 Gew.-Teil reine 7-Amino-3-methylO-cephem^-carbonsäure als Pulver, das mit einer authentischen Probe in Bezug auf Schmelzpunkt, spezifische Drehung, Infrarotspektrum, kernmagnetisches Resonanzspektrum und UV-Spektrum gut übereinstimmte.

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Herstellung von 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ihrer Ester, dadurch ge kennzeichne«, daß man 7-Acylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ihre Ester, wobei der Acylresf. der 7-Acylamidogruppe ein Phenylacetylrest oder Phenoxyacetylrest ist, mit einer Kulturbrühe eines Mikroorganismus aus der Gruppe Escherichia coli IFO-3210, Escherichia coli IFO-3467, Xanthomonas oryzae IFO-3312, Protaminobacter alboflavus IFO-13 221, Mycoplana sp. IFO-13 240 und Aeromonas hydrophila IFO-12634 in einem wäßrigen Medium oder mit einem verarbeiteten Bestandteil dieser Kulturbrühe zusammenführt.
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SE (1) SE402123B (de)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5341232B2 (de) * 1972-06-17 1978-11-01
US4059573A (en) * 1973-08-01 1977-11-22 Glaxo Laboratories Limited Extraction of N-blocked amino acids from aqueous media
JPS5417032B2 (de) * 1974-01-23 1979-06-27
US4001600A (en) * 1975-06-02 1977-01-04 Watkins-Johnson Company Interconnecting circuit for ebs diodes and method
US3972774A (en) * 1975-07-28 1976-08-03 Eli Lilly And Company Enzymatic de-esterification of cephalosporin para-nitrobenzyl esters
JPS52143289A (en) * 1976-05-24 1977-11-29 Meiji Seika Kaisha Ltd Production of 7-amino-cephem derivatives by filamentous fungi
US4230799A (en) * 1977-02-09 1980-10-28 Schering Corporation Process for the preparation of antibiotic W-10 complex and for the isolation of Antibiotic 20561 and Antibiotic 20562 therefrom
US4316958A (en) * 1979-02-10 1982-02-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing optically active cephalosporin analogs
US4414328A (en) * 1980-07-21 1983-11-08 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Process for the preparation of deacetylcephalosporin C
US4316955A (en) * 1980-11-10 1982-02-23 Eli Lilly And Company Enzymatic deesterification of cephalosporin methyl esters
US4618583A (en) * 1984-11-19 1986-10-21 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method of preparing L-(+)-β-hydroxyisobutyric acid by fermentation
US4981789A (en) * 1987-03-18 1991-01-01 Merck & Co., Inc. One-step enzymatic conversion of cephalosporin C and derivatives to 7-aminocephalosporanic acid and derivatives
US5229274A (en) * 1989-06-27 1993-07-20 Merck & Co., Inc. Gene encoding one step cephalosporin C amidase and expression thereof in recombinant bacillus
US5104800A (en) * 1989-06-27 1992-04-14 Merck & Co., Inc. One-step cephalosporin c amidase enzyme
GB9216759D0 (en) * 1992-08-07 1992-09-23 Finpael Spa Process for the production of 7-amino thiazolyl cephalosporins

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD74282A (de) *
FR1357977A (fr) * 1963-05-20 1964-04-10 Merck & Co Inc Procédé de production d'acide 7-aminocéphalosphalosporanique par voie enzymatique
US3284451A (en) * 1965-07-22 1966-11-08 Bristol Myers Co Activated esters of 7-amino-cephalosporanic acid
NL150798B (nl) * 1967-08-07 1976-09-15 Koninklijke Gist Spiritus Werkwijze voor de bereiding van 7-aminocefalosoranzuur en derivaten daarvan.
US3522250A (en) * 1968-10-15 1970-07-28 American Home Prod Derivatives of 7-aminocephalosporanic acid

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