CN1305460C

CN1305460C - 糖摄取的促进方法

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Publication number: CN1305460C
Application number: CNB028082079A
Authority: CN
Inventors: 奥田拓道; 森本千惠; 龟田健治; 原野史树
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2001-04-13
Filing date: 2002-03-20
Publication date: 2007-03-21
Anticipated expiration: 2022-03-20
Also published as: EP1378224A1; CA2442809C; CN1503655A; EP1378224A4; KR20030089715A; KR20080070782A; US7820636B2; ES2420104T3; HK1063604A1; US20040116373A1; WO2002083087A1; AU2002238988B2; EP1378224B1; TWI324932B; CA2442809A1; BR0208886A; EP1378224B8

Abstract

本发明的目的是提供可以活化表皮细胞的糖摄取，因此可以期待在促进皮肤细胞新生和新陈代谢方面有效。本发明提供表皮角化细胞的糖摄取促进剂，其含有嘌呤碱或其盐作为有效成分。本发明另外提供促进表皮角化细胞的糖摄取的方法，包括在皮肤上应用嘌呤碱或其盐。

Description

糖摄取的促进方法

技术领域

本发明涉及具有促进表皮角化细胞的糖摄取的作用的糖摄取促进剂。本发明还涉及促进表皮角化细胞的糖摄取的方法。

背景技术

表皮从角层向基底层由各种类型的细胞构成，如表皮角化细胞、朗氏(Langerhans)细胞和黑素细胞。表皮，特别是表皮角化细胞的糖摄取在表皮细胞新生、细胞分裂和分化(角化)中起着重要作用。因此，表皮角化细胞的糖摄取的活化可以促进皮肤更新(turnover)和新陈代谢，因此被期待对黑色素等色素沉积的预防或消除、细胞赋活、皮肤老化防止、或由紫外线引起的表皮角化细胞损害的预防或消除有效果。

发明的公开

本发明的目的是提供可以促进表皮细胞的糖摄取的物质。更具体地，本发明的目的是提供可以促进表皮细胞，特别是表皮角化细胞的糖摄取，特别是葡萄糖摄取的物质。本发明的另一个目的是提供促进表皮角化细胞的糖摄取的方法。

本发明人对表皮细胞的葡萄糖摄取的促进进行了研究，结果发现，嘌呤碱，特别是一磷酸腺苷，即腺苷的一磷酸酯具有优良的促进表皮角化细胞的葡萄糖摄取的作用。基于该发现完成了本发明。

本发明具有以下方面：

(1)一种表皮角化细胞的糖摄取促进剂，含有嘌呤碱或其盐作为有效成分。

(2)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其中嘌呤碱为选自腺嘌呤、鸟嘌呤、一磷酸腺苷、5’-二磷酸腺苷、5’-三磷酸腺苷、黄素腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的至少一种。

(3)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其中所述的嘌呤碱为一磷酸腺苷。

(4)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其以每100重量％促进剂至少0.1重量％的比例含有嘌呤碱或其盐。

(5)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其以每100重量％促进剂0.1-10重量％的比例含有嘌呤碱或其盐。

(6)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其以每100重量％促进剂0.1-7重量％的比例含有嘌呤碱或其盐。

(7)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其中所述的糖为选自葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和果糖的至少一种。

(8)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其pH范围为2-8。

(9)上述(1)所述的糖摄取促进剂，其为外用形式。

(10)一种促进表皮角化细胞的糖摄取的方法，包括在皮肤上应用嘌呤碱或其盐。

(11)上述(10)所述的方法，其中所述的嘌呤碱为选自腺嘌呤、鸟嘌呤、一磷酸腺苷、5’-二磷酸腺苷、5’-三磷酸腺苷、黄素腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的至少一种。

(12)上述(10)所述的方法，其中所述的嘌呤碱为一磷酸腺苷。

(13)上述(10)所述的方法，其中所述的糖为选自葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和果糖的至少一种。

(14)上述(10)所述的方法，包括在皮肤上应用一种组合物，所述的组合物以至少0.1重量％的比例含有嘌呤碱或其盐。

(15)上述(10)所述的方法，包括在皮肤上应用一种组合物，所述的组合物以0.1-10重量％的比例含有嘌呤碱或其盐。

(16)上述(10)所述的方法，包括在皮肤上应用一种组合物，所述的组合物以0.1-7重量％的比例含有嘌呤碱或其盐。

(17)上述(14)所述的方法，其中所述的组合物的pH范围为2-8。

(18)嘌呤碱或其盐在制备表皮角化细胞的糖摄取促进剂中的应用。

(19)嘌呤碱或其盐在促进表皮角化细胞的糖摄取中的应用。

附图的简单说明

图1表示实验例1的结果，考查了AMP-2Na(-■-)、腺苷(-▲-)和次黄苷(-○-)对于表皮角化细胞的³H-2-脱氧葡萄糖(2-DG)摄取的促进效果。图中，横坐标表示各嘌呤碱的浓度(log M)，纵坐标表示每μg细胞蛋白质的³H-2-脱氧葡萄糖摄取量(把对照的量设为1，2-脱氧葡萄糖摄取量相对于该量的比)。

实施发明的最佳方式

1.表皮角化细胞的糖摄取促进剂

本发明的表皮角化细胞的糖摄取促进剂含有嘌呤碱或其盐作为有效成分。

嘌呤碱是嘌呤和具有嘌呤核的各种嘌呤衍生物的总称。例子包括，腺嘌呤、鸟嘌呤以及它们的脱氨基化合物(次黄嘌呤、黄嘌呤)、腺苷、鸟苷、次黄苷、磷酸腺苷(2’-磷酸腺苷、3’-磷酸腺苷、5’-磷酸腺苷、5’-二磷酸腺苷、5’-三磷酸腺苷)、磷酸鸟苷(3’-磷酸鸟苷、5’-磷酸鸟苷、5’-二磷酸鸟苷、5’-三磷酸鸟苷)、腺苷酸基琥珀酸、黄原酸、次黄苷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)等。优选用于本发明的嘌呤碱的例子包括腺嘌呤、鸟嘌呤、一磷酸腺苷[2’-磷酸腺苷、3’-磷酸腺苷、5’-磷酸腺苷(AMP)]、5’-二磷酸腺苷(ADP)、5’-三磷酸腺苷(ATP)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)。更优选一磷酸腺苷，特别优选5’-磷酸腺苷(AMP)。

本发明中，嘌呤碱的盐可以代替嘌呤碱使用，或者与其结合使用。这样的嘌呤碱的盐的例子包括碱金属盐如钠盐和钾盐；碱土金属盐如镁盐、钙盐和钡盐；碱性氨基酸如精氨酸和赖氨酸的盐；铵和铵盐如三环己基铵盐；以及链烷醇胺如单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、单异丙醇胺、二异丙醇胺和三异丙醇胺的盐。优选碱金属盐如钠盐。特别优选一磷酸腺苷一钠和一磷酸腺苷二钠。

嘌呤碱或其盐可以单独使用或者两种以上组合使用。组合的方式没有特别的限制，只要其不影响本发明的效果即可。

嘌呤碱或其盐对皮肤表皮细胞起作用，特别是促进表皮角化细胞的糖摄取能力。因此，通过应用于皮肤上嘌呤碱或其盐可以产生其效果，从而可以有效利用该效果。嘌呤碱或其盐可以单独用作表皮角化细胞的糖摄取促进剂。或者，它们可以作为有效成分，与其它的药学或美容上容许的基剂、载体或添加剂组合，调制成具有糖摄取促进作用的化妆品或皮肤外用制剂(糖摄取促进剂)如外用医药品或准医药品。在后一种情况下，嘌呤碱或其盐在皮肤制剂中的比例没有特别的限制，只要可以取得本发明的效果即可。嘌呤碱或其盐通常可以以每100重量％最终制品皮肤制剂(糖摄取促进剂)为约0.1重量％以上、优选约0.5重量％以上的比例加入。嘌呤碱或其盐的比例没有上限，只要制剂取得本发明的糖摄取促进效果即可。上限可以为例如约10重量％、优选约7重量％、更优选约6重量％。嘌呤碱或其盐的比例可以通过上面的上限和下限值作为指导进行适当选择。其比例可以为例如每100重量％最终制品皮肤制剂(糖摄取促进剂)为0.1-10重量％、0.1-7重量％、或0.5-10重量％。考虑到制品稳定性及与其它成分的平衡，该比例优选为0.5-7重量％，更优选1-6重量％。

本发明的促进剂在促进表皮细胞的葡萄糖摄取能力方面特别卓越。作为目标的糖不限于葡萄糖，也包括阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、果糖等单糖。本发明的糖摄取促进剂具有促进表皮角化细胞中至少一种糖，特别是至少一种单糖的摄取的作用，但不必促进所有糖的摄取。葡萄糖是特别优选的糖。

本发明的糖摄取促进剂可以根据需要含有通常加到外用剂中的各种成分，如表面活性剂、增溶成分、油脂类、多元醇、增稠剂、防腐剂、着色剂、分散剂、pH调节剂和香料。这些成分可以单独使用或两种以上组合使用。

可用的表面活性剂的例子包括阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、和两性表面活性剂。

增溶成分的例子包括低级醇如乙醇；多元醇如甘油、乙二醇和丙二醇；氢化大豆磷脂、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯羊毛脂醇、蓖麻油聚氧乙烯醚、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚、甾醇聚氧乙烯醚、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚等。

油脂类的例子包括花生油、芝麻油、大豆油、红花油、鳄梨油、向日葵油、玉米油、菜籽油、棉籽油、蓖麻油、山茶油、椰子油、橄榄油、罂粟子油、可可油、霍霍巴油(jojoba oil)、牛油、猪油、羊毛油等油脂类；凡士林、液体石蜡、角鲨烷、α-烯烃低聚物等烃类液状油；肉豆蔻酸异丙酯、异硬脂酸异丙酯、肉豆蔻酸肉豆蔻基酯、棕榈酸鲸蜡酯、异辛酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸异鲸蜡酯、肉豆蔻酸正丁酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、亚麻酸异丙酯、蓖麻油酸丙酯、蓖麻油酸异丙酯、蓖麻油酸异丁酯、蓖麻油酸庚酯、癸二酸二乙酯、己二酸二异丙酯等高级脂肪酸酯类；白蜂蜡、鲸脂、野漆树蜡等蜡类；鲸蜡醇、硬脂醇、二十二醇、鲨肝醇、银鲛肝醇等高级脂肪醇类；蜡类；硬脂酸、油酸、棕榈酸等高级脂肪酸类；甲基聚硅氧烷、二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、甲基氢聚硅氧烷等链状硅酮类；C_12-18饱和或不饱脂肪酸的单-、二-或三甘油酯混合物；十甲基环五硅氧烷、八甲基环四硅氧烷、甲基环硅氧烷等环状硅酮；交联甲基聚硅氧烷、交联甲基苯基聚硅氧烷等交联硅酮；以及硅油如聚氧乙烯、聚氧丙烯等改性的硅酮。优选烃类液状油如凡士林、液体石蜡、角鲨烷、和α-烯烃低聚物。当油为固体时，优选使用辅助溶解剂。

多元醇的实例包括甘油、聚合度为2-10的聚甘油(例如，二甘油、三甘油、四甘油)、乙二醇、二乙二醇、聚乙二醇、1，3-丁二醇、丙二醇、二丙二醇、异戊二醇(isoprene glycol)、戊二醇、山梨醇、麦芽糖醇、果糖等。

通过根据需要在嘌呤碱或其盐中添加上述成分，并进一步根据需要加入其它溶剂和通常用于外用剂的基剂或载体，本发明的糖摄取促进剂可以调制成各种所需要的外用剂形式，如糊剂、摩丝、凝胶、液体、乳液、悬浮液、霜剂、软膏、板状、气雾剂和喷雾剂。这些制品可以通过常规的方法制备。

本发明的糖摄取促进剂的pH范围通常为2-8。从对皮肤和粘膜的低刺激性以及皮肤使用感良好的角度考虑，优选pH范围为2-7，更优选3-7，进一步更优选轻微酸性至中性的pH范围5-7。

本发明的糖摄取促进剂的具体形式及用途没有特别的限制，只要其是以可适用于皮肤的形式即可，如化妆品、皮肤外用医药品或皮肤外用准医药品。例子包括补充化妆品(makeup cosmetic)如粉底霜、口红、唇膏、染眉毛油、眼影膏、眼线膏、扑面粉、眉笔和指甲护理品；基础皮肤护理品如乳液、雪花膏、洗剂、油和剥撕式面膜(pack)；洗净剂如洗面奶(facial washes)、清洁霜和沐浴露(body washes)；发用化妆品如整发剂、养发剂；各种外用组合物如伤口愈合剂、清洗剂、清洁剂、增白剂、UV保护剂和浴用剂。根据使用者的年龄和性别、用途、皮肤患部的症状程度等，合适量的这些制品可以在皮肤上应用一次或多次。

本发明的糖摄取促进剂可以通过涂布、贴附或喷雾到皮肤上促进表皮角化细胞的糖摄取，因此被期待在促进皮肤更新和防止或改善皮肤病或皮肤障碍、皮肤老化等方面有效果。皮肤病和皮肤障碍包括斑点、雀斑、红斑、晒斑、无光泽(dullness)等色素(黑色素)沉积、皱纹等。

II.促进表皮角化细胞的糖摄取的方法

如上所述，嘌呤碱或其盐可以促进表皮角化细胞的糖摄取。因此，本发明提供使用嘌呤或其盐促进表皮角化细胞的糖摄取的方法。

本发明的促进表皮角化细胞的糖摄取的方法可以通过在皮肤上仅应用嘌呤碱或其盐，或应用含有嘌呤碱或其盐作为有效成分的组合物来进行。

可用于本发明的嘌呤碱或其盐与上述的糖摄取促进剂中使用的相同，作为目标的糖也与上述的糖摄取促进剂中的相同。

在本发明的方法中，在皮肤上应用嘌呤碱或其盐的方法没有特别的限制，只要嘌呤碱或其盐能与目标皮肤部位接触即可。例如，嘌呤碱或其盐单独，或者含有该物质作为有效成分并进一步含有药学或美容上容许的基剂、载体或添加剂的组合物，可以涂布或喷雾到皮肤上或以贴片的形式贴附到皮肤上。当以组合物形式使用时，只要可以取得本发明的效果，嘌呤碱或其盐的比例没有特别的限制。嘌呤碱或其盐通常可以以每100重量％组合物为约0.1重量％以上、更优选约0.5重量％以上的比例加入。嘌呤碱或其盐的比例没有上限，只要可以取得本发明的糖摄取促进效果即可。上限可以是例如约10重量％、优选约7重量％、更优选约6重量％。可以使用上述的上限和下限值作为指导，适当选择嘌呤碱或其盐的比例，该比例可以是例如每100重量％组合物为0.1-10重量％、0.1-7重量％、0.5-10重量％。该比例优选为0.5-7重量％，更优选1-6重量％。该组合物的pH范围通常为2-8。考虑到对皮肤和粘膜的低刺激性以及皮肤使用感良好，pH范围优选2-7，更优选3-7，进一步更优选弱酸性pH范围5-7。

实施本发明的方法的方式包括例如通过使用含有嘌呤碱或其盐的各种外用组合物(例如，补充化妆品如粉底霜、口红、唇膏、染眉毛油、眼影膏、眼线膏、扑面粉、眉笔和指甲护理品；基础皮肤护理品如乳液、雪花膏、洗剂、油和剥撕式面膜；洗净剂如洗面奶、清洁霜和沐浴露；发用化妆品如整发剂、养发剂；各种外用组合物如伤口愈合剂、清洗剂、清洁剂、增白剂、UV保护剂和浴用剂)将嘌呤碱或其盐应用到皮肤上。

嘌呤碱或其盐的涂布量和涂布次数没有特别的限制。例如，根据使用者的年龄、性别、用途、皮肤患部的症状程度、涂布形式等，可以将适当量的嘌呤碱或其盐以每天一次至数次涂布到皮肤上。

实施例

以下的实验例和实施例用于说明本发明，不是对本发明范围的限制。在这些例子中，如果没有特别指明，百分数均指重量百分数。

实验例1

使用5’-磷酸腺苷-2Na(AMP-2Na)、腺苷和次黄苷作为试验化合物，考查了嘌呤碱对表皮角化细胞的葡萄糖摄取的影响。作为对照，除没有使用试验化合物外以同样的方式进行试验。

<试药等的制备方法>

1.人表皮角化细胞的准备

将人表皮角化细胞(正常人新生儿包皮表皮角化细胞，“EpidercellNHEK(F)”，Kurabo Industries，Ltd.制)首先在10cm佩氏培养皿中培养，并在使用前冷冻保存。使用时将该冷冻保存的细胞在24孔板中培养约6-7天，并当细胞达到70-80％融合时，用于该实验。

2.1％BSA/不含葡萄糖的培养基(pH7.4)的调制

通过在表皮角化细胞增殖用无血清培养基(“HuMedia-KG2”，特别定制的培养基，Kurabo Industries，Ltd.制)中加入该培养基产品附带的钙溶液1ml和酚红0.1ml调制不含葡萄糖的培养基。在培养基中加入经活性碳处理除去了杂质的牛血清白蛋白(BSA)至浓度为1％，并用NaOH将培养基的pH调节至7.4。

3.³H-2-脱氧葡萄糖溶液的调制

将10mM 2-脱氧葡萄糖1ml、250μCi/250μl ³H-2-脱氧葡萄糖60μl和1％BSA/不含葡萄糖的培养基(pH7.4)940μl混合。

<实验方法>

用PBS(-)(不含Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水)将在24孔板中培养的表皮角化细胞洗涤三次。加入表皮角化细胞增殖用无血清培养基(“HuMedia-KG2”，特别定制的培养基，Kurabo Industries，Ltd.制)后，将细胞培养2小时，然后用PBS(-)洗涤三次。加入溶解有试验化合物的1％BSA/不含葡萄糖的培养基(pH7.4)1ml后，将细胞培养30分钟，然后每1ml培养基加入20μl ³H-2-脱氧葡萄糖溶液。将细胞静置10分钟，然后用冰冷的含有葡萄糖的PBS(-)洗涤三次。加入含有0.1％SDS的0.1N NaOH 0.5ml后，将细胞在静止条件下放置至少2小时，制成细胞溶解液。加入含有0.1％SDS的0.11NHCl 0.5ml，以酸化该细胞溶解液。80μl细胞溶解液用于蛋白质分析(“DC ProteinAssay”，Bio-Rad制)，并将750μl同样的溶液放置到玻璃瓶中。加入20ml液体闪烁计数器用的鸡尾酒(ACS-II，Amersham制)。轻轻搅拌混合物后，使用液体闪烁计数器测定放射活性。从得到的放射活性求出每单位蛋白质量的放射活性，并通过减去由非特异的³H-2-脱氧葡萄糖摄取造成的放射活性算出³H-2-脱氧葡萄糖摄取量(H-DPM(μg)/μg蛋白质)。

<结果>

进行上述试验两次，并计算平均值。为与对照比较，将各值转换成与设为1的对照值的比。图1示出了结果。图1中，横坐标表示各嘌呤碱(AMP-2Na、腺苷、次黄苷)的浓度(logM)，纵坐标表示细胞摄取的2-脱氧基葡萄糖量(H-DPM(μg)/μg蛋白质)与设为1的对照的比。

如图1所示，在第一实验中，浓度为10^-6M和10^-5M的AMP-2Na促进葡萄糖摄取分别为对照(无试验化合物)的约1.48倍和约1.61倍。在第二实验中，浓度为10^-6M和10^-5M的AMP-2Na促进糖摄取分别为对照的约1.48倍和约1.43倍。

另外确认了腺苷和次黄苷与AMP-2Na一样，也具有促进表皮角化细胞的葡萄糖摄取的作用。但是，如图1所示，当用相同浓度作比较时，AMP-2Na在低浓度时对葡萄糖摄取的促进比腺苷有效。浓度为10^-6M的AMP-2Na的促进效果在第一实验中比同样浓度的腺苷的效果高约1.16倍，在第二实验中高约1.32倍，这是统计学上的显著差异(第一实验：p＜0.05，第二实验：p＜0.05)。也可以说AMP-2Na在低浓度(10^-7M)时比次黄苷更有效地促进葡萄糖摄取。

上述结果说明嘌呤碱如AMP-2Na、腺苷和次黄苷具有促进表皮角化细胞的葡萄糖摄取能力的作用，特别是AMP-2Na即使低浓度也能取得这种效果。因此嘌呤碱在促进葡萄糖摄取能力方面是卓越的。

实施例1 乳液

羧基乙烯基聚合物 0.3(％)

AMP-2Na 1.5

十甘油单肉豆蔻酸酯 2.0

角鲨烷 5.0

精制甘油 6.0

pH调节剂将pH调至7所需的量

防腐剂适量

净化水余量

总量 100.0％

实施例2 化妆水

氢化蓖麻油聚氧乙烯醚(E.O.60) 0.7(％)

AMP-2Na 3.0

乙醇 5.0

甘油 2.0

pH调节剂将pH调至7所需的量

防腐剂适量

香料适量

净化水余量

总量 100.0％

实施例3 养发剂

水杨酸 0.1(％)

AMP-2Na 10.0

乙醇 20.0

甘油 2.0

pH调节剂将pH调至7所需的量

防腐剂适量

香料适量

净化水余量

总量 100.0％

工业实用性

根据本发明，表皮角化细胞的糖摄取能力可被促进，并且可以期待皮肤的更新和新陈代谢促进效果。因此本发明的糖摄取促进剂可用作期待在抗皮肤老化和皮肤美化，即、预防细皱纹、赋予皮肤弹性、预防色素沉积、维持和促进皮肤的美白化方面有效的皮肤化妆品、外用医药制剂或外用准医药制剂。

Claims

1.一种促进表皮角化细胞的糖摄取的非医疗方法，包括在皮肤上应用一磷酸腺苷或其盐，其中所述一磷酸腺苷或其盐以含有至少0.1重量％的一磷酸腺苷或其盐的组合物的形式应用于皮肤。

2.权利要求1所述的方法，其中所述的一磷酸腺苷为选自2’-磷酸腺苷、3’-磷酸腺苷和5’-磷酸腺苷的至少一种。

3.权利要求1所述的方法，其中所述的一磷酸腺苷为5’-磷酸腺苷。

4.权利要求1所述的方法，其中所述的糖为选自葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和果糖的至少一种。

5.权利要求1所述的方法，包括在皮肤上应用一种组合物，所述的组合物含有至少0.1重量％的一磷酸腺苷或其盐。

6.权利要求1所述的方法，包括在皮肤上应用一种组合物，所述的组合物含有0.1-10重量％的一磷酸腺苷或其盐。

7.权利要求1所述的方法，包括在皮肤上应用一种组合物，所述的组合物含有0.1-7重量％的一磷酸腺苷或其盐。

8.权利要求5所述的方法，其中所述的组合物的pH范围为2-8。

9.一磷酸腺苷或其盐在制备表皮角化细胞的外用糖摄取促进剂中的应用。

10.一磷酸腺苷或其盐在促进表皮角化细胞的糖摄取中的外部非医疗应用。