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CN112999360B - DMP纳米粒在mRNA递送中的用途 - Google Patents

DMP纳米粒在mRNA递送中的用途 Download PDF

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CN112999360B CN202110363541.0A CN202110363541A CN112999360B CN 112999360 B CN112999360 B CN 112999360B CN 202110363541 A CN202110363541 A CN 202110363541A CN 112999360 B CN112999360 B CN 112999360B
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Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。针对目前mRNA递送缺乏高效安全的载体的问题，本发明提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途，为mRNA递送提供一种新的递送载体。本发明的DMP纳米粒由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG‑PCL混合制备得到。本发明所述的DMP纳米粒递送mRNA细胞毒性低、转染率高，具有很好的前景。同时，本发明的DMP纳米粒与mRNA复合而成的复合物，可以在体内有效抑制结肠癌肿瘤组织的生长，为疾病治疗提供了一种新的策略。

Description

DMP纳米粒在mRNA递送中的用途
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。
背景技术
结直肠癌的治疗包括手术切除和辅助化疗，或靶向治疗和化疗的联合治疗。此外，基因治疗也是一种潜在的治疗选择，它主要是通过载体将外源核酸导入靶细胞，改变基因表达，治疗疾病。信使RNA是一类能被翻译成细胞蛋白质的RNA分子。已有许多现有的研究发现将mRNA导入细胞可以治疗遗传性疾病或作为抗肿瘤疫苗。由于mRNA在细胞质中发挥作用，可以避免作为pDNA主要障碍的核膜，也可以避免插入诱变的风险。此外，mRNA的结构元件比质粒少，降低了递送的难度。例如，对mRNA不需要启动子依赖的基因表达调节。然而，与DNA相比，RNA的稳定性要差得多。而mRNA为单链，具有灵活的线性结构，难以通过基因传递载体形成纳米颗粒。因此，理想的mRNA传递载体除了需要具有较高的转染效率外，还应当要具有保护和压缩RNA的能力。
现有的mRNA递送载体系统主要是单载体系统和双载体系统。双载体系统是由两个载体组成，分别承担mRNA的压缩和递送功能。双载体系统更加成熟，体内研究报道较多，脂质体-鱼精蛋白是经典的组合之一；鱼精蛋白作为一种聚阳离子肽，可以压缩mRNA；脂质体作为常用的阳离子载体。在实践中，鱼精蛋白必须将mRNA压缩成纳米复合物之后，脂质体再将鱼精蛋白-RNA复合物输送到细胞中。然而，鱼精蛋白的提取和制备比较困难，双载体系统的复杂成分和操作步骤也限制了基因治疗临床的应用。单载体系统是指用一种载体，简单快速地与mRNA形成载药复合物。但是目前的单一载体大多存在原料类型过多，合成复杂等问题。因此，急需开发出一种原料简单，合成方法简单的单一载体来进行mRNA的递送。
DMP纳米粒，即DOTAP-mPEG-PCL纳米粒，是一种由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物混合制备得到的纳米粒，目前，还没有关于DMP纳米粒递送mRNA的相关研究。
发明内容
本发明要解决的技术问题为：为mRNA递送提供一种高效、安全的递送载体，也为DMP纳米粒开发了一种新的用途。
本发明解决上述技术问题的技术方案为：提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。
其中，上述用途中，所述的DMP纳米粒由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到。
其中，上述用途中，所述DMP纳米粒的平均粒径为28.30±0.86nm，平均电位为+39.03±0.26mV。
其中，上述用途中，所述的DOTAP重量份数为1份，所述两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为9份。
其中，上述用途中，所述DMP纳米粒由以下方法中的任意一种制备得到；
方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP 1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化直到完全溶解，得到DMP纳米粒溶液；
方法B为微流控法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP 1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于有机相溶剂中，然后以2mL/min的速度与水相溶剂共同通过微流控系统并收集，得到DOTAP-mPEG-PCL纳米粒溶液。
进一步的，上述用途中，所述的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或环己烷中的至少一种；所述的有机相溶剂为乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、甲醇中的至少一种。
其中，上述DOTAP-mPEG-PCL纳米粒的制备方法中，步骤b所述的水化溶液为双蒸水、去离子水、纯水、5％葡萄糖溶液或生理盐水中的至少一种。
其中，上述用途中，所述的mRNA为表达IL-22BP蛋白、Bim蛋白或IL-15蛋白的mRNA分子。
本发明还提供了一种上述DMP纳米粒复合mRNA的纳米复合物。
本发明还提供了一种上述纳米复合物在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途。
其中，所述的纳米复合物的制备方法为：取DMP纳米粒25份，mRNA 1份，在室温下混合即可。
进一步的，所述的肿瘤为结肠癌、肺癌或乳腺癌。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。所用的DMP纳米粒为阳离子磷脂DOTAP与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到，制备方法可采用现有的薄膜旋蒸法，也可采用微流控法。该纳米粒能通过静电相互作用结合mRNA，可以有效地将目的基因导入细胞中，其本身具有细胞毒性低、转染率高等特征，在基于mRNA的基因功能研究、基因治疗研究及临床应用中有很好的应用前景。本发明的DMP纳米粒可介导不同基因发挥疗效，如DMP纳米粒递送的IL-22BP、Bim或IL-15等基因的mRNA分子可以在体内有效抑制结肠癌肿瘤组织的生长。DMP纳米粒是一种相对安全且高效的mRNA分子非病毒基因递送载体，制备所得DMP/mRNA复合物为疾病治疗提供了一种新的策略。
附图说明
图1为本发明所用的DOTAP化学结构式。
图2为本发明所用的mPEG-PCL化学结构式。
图3为本发明试验例1中乳腺癌动物模型治疗效果图；a表示肿瘤生长曲线，b表示平均肿瘤重量。
图4为本发明试验例2中结肠癌动物模型治疗效果图；a表示平均肿瘤重量，b表示平均肿瘤结节数。
图5为本发明试验例3中结肠癌动物模型治疗效果图；a表示肺重，b表示平均肺肿瘤结节数。
具体实施方式
本发明提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途，所述的DMP纳米粒是由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到的。
本发明中所采用的两亲性阳离子物质DOTAP，化学命名为(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵；所采用的两亲性mPEG-PCL共聚物，甲氧基聚乙二醇-聚己内酯，简称mPEGPCL。甲氧基聚乙二醇-聚己内酯纳米颗粒具有两亲性、良好的生物可降解性和生物相容性、避免了吞噬细胞吞噬、增加了药物在血液中的循环时间和生物利用度，持续释放和靶向传递从而增加了药效、减小了副作用。
本发明通过大量筛选，发现当DOTAP重量份数为1份，两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为9份时，得到的DMP纳米粒递送mRNA的效果更好。本发明的DMP纳米粒可以采用常规方法制备得到。
如，本发明给出了两种制备DMP纳米粒的方法，方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP 1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化直到完全溶解，得到DMP纳米粒溶液。
方法B为微流控法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP 1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于有机相溶剂中，然后以2mL/min的速度与水相溶剂共同通过微流控系统并收集，得到DOTAP-mPEG-PCL纳米粒溶液。
上述两种方法都可以制备得到DMP纳米粒，并且制备得到的DMP纳米粒都具有递送mRNA的用途，本发明不将DMP纳米粒的制备方法限制在上述两种以内，其他能制备得到DMP纳米粒的方法都在本发明的保护范围中。
下面将通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例中所用的试剂和原料均为普通市售产品。
实施例1 DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物的制备
1、薄膜旋蒸法制备DMP纳米粒
将阳离子脂质(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane，DOTAP)(结构如图1所示)与甲基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)高分子聚合物(结构如图2所示)(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)按1：9的质量比进行混合，并将混合物用二氯甲烷进行溶解，并置于旋转蒸发仪上以60℃旋蒸45min后成膜。所成的膜取出后溶解于去离子水中，然后在60℃水浴条件下震荡5min，得到特定浓度的DMP阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
2、微流控法制备DMP纳米粒
将阳离子脂质(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane，DOTAP)与甲基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)高分子聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)按1：9的质量比进行混合，并将混合物用乙醇进行溶解，接着将混合溶液吸入注射器A中，将装有等量体积双蒸水的注射器B与注射器A一同固定到恒流泵上，随后通过恒流泵以2mL/min的速度挤压注射器，使注射器中液体通过微流控芯片，随后收集得到的液体即为DMP阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
3、IL-22BP mRNA溶液的制备
以pVAX1-IL-22BP质粒为模板，通过PCR扩增得到IL-22BP基因的DNA片段。经琼脂糖凝胶电泳后切下与目的基因大小一致的片段区域凝胶，采用胶回收试剂盒回收该片段，得到纯化后的IL-22BP PCR产物。随后采用T7体外转录试剂盒，以0.5μg的IL-22BP基因PCR产物为模板，在37℃恒温条件下进行过夜转录，然后在37℃恒温条件下进行5’端加帽和3’端加尾修饰。修饰后的mRNA用转录纯化试剂盒进行纯化，最后用去离子水进行洗脱，得到IL-22BP mRNA溶液。
4、制备DMP/IL-22BP mRNA复合物
按DMP阳离子纳米粒：IL-22BP mRNA以25：1(w/w)的比例将纳米粒溶液(分散于去离子水中，浓度为5mg/mL)加入到mRNA溶液(分散于去离子水中，浓度为1mg/mL)中，之后立刻用移液枪吹打混匀，再在室温环境静置15分钟，即得DMP阳离子纳米粒质粒IL-22BP mRNA复合物。
实施例2 DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物的制备
1、薄膜旋蒸法制备DMP纳米粒
将阳离子脂质(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane，DOTAP)与甲基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)高分子聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)按1：9的质量比进行混合，并将混合物用二氯甲烷进行溶解，并置于旋转蒸发仪上以60℃旋蒸45min后成膜。所成的膜取出后溶解于去离子水中，然后在60℃水浴条件下震荡5min，得到特定浓度的DMP阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
2、微流控法制备DMP纳米粒
将阳离子脂质(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane，DOTAP)与甲基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)高分子聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)按1：9的质量比进行混合，并将混合物用乙醇进行溶解，接着将混合溶液吸入注射器A中，将装有等量体积双蒸水的注射器B与注射器A一同固定到恒流泵上，随后通过恒流泵以2mL/min的速度挤压注射器，使注射器中液体通过微流控芯片，随后收集得到的液体即为DMP阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
3、Bim mRNA溶液的制备
以pVAX1-Bim质粒为模板，通过PCR扩增得到Bim基因的DNA片段。经琼脂糖凝胶电泳后切下与目的基因大小一致的片段区域凝胶，采用胶回收试剂盒回收该片段，得到纯化后的Bim PCR产物。随后采用T7体外转录试剂盒，以0.5μg的Bim基因PCR产物为模板，在37℃恒温条件下进行过夜转录，然后在37℃恒温条件下进行5’端加帽和3’端加尾修饰。修饰后的mRNA用转录纯化试剂盒进行纯化，最后用去离子水进行洗脱，得到Bim mRNA溶液。
4、制备DMP/Bim mRNA复合物
按DMP阳离子纳米粒：Bim mRNA以25：1(w/w)的比例将纳米粒溶液(分散于去离子水中，浓度为5mg/mL)加入到mRNA溶液(分散于去离子水中，浓度为1mg/mL)中，之后立刻用移液枪吹打混匀，再在室温环境静置15分钟，即得DMP阳离子纳米粒质粒BimmRNA复合物。
实施例3 DMP阳离子纳米粒/IL-15 mRNA基因复合物的制备
1、薄膜旋蒸法制备DMP纳米粒
将阳离子脂质(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane，DOTAP)与甲基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)高分子聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)按1：9的质量比进行混合，并将混合物用二氯甲烷进行溶解，并置于旋转蒸发仪上以60℃旋蒸45min后成膜。所成的膜取出后溶解于去离子水中，然后在60℃水浴条件下震荡5min，得到特定浓度的DMP阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
2、微流控法制备DMP纳米粒
将阳离子脂质(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane，DOTAP)与甲基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)高分子聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)按1：9的质量比进行混合，并将混合物用乙醇进行溶解，接着将混合溶液吸入注射器A中，将装有等量体积双蒸水的注射器B与注射器A一同固定到恒流泵上，随后通过恒流泵以2mL/min的速度挤压注射器，使注射器中液体通过微流控芯片，随后收集得到的液体即为DMP阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
3、IL-15 mRNA溶液的制备
以pVAX1-IL-15质粒为模板，通过PCR扩增得到Bim基因的DNA片段。经琼脂糖凝胶电泳后切下与目的基因大小一致的片段区域凝胶，采用胶回收试剂盒回收该片段，得到纯化后的IL-15PCR产物。随后采用T7体外转录试剂盒，以0.5μg的IL-15基因PCR产物为模板，在37℃恒温条件下进行过夜转录，然后在37℃恒温条件下进行5’端加帽和3’端加尾修饰。修饰后的mRNA用转录纯化试剂盒进行纯化，最后用去离子水进行洗脱，得到IL-15mRNA溶液。
4、制备DMP/IL-15 mRNA复合物
按DMP阳离子纳米粒：IL-15 mRNA以25：1(w/w)的比例将纳米粒溶液(分散于去离子水中，浓度为5mg/mL)加入到mRNA溶液(分散于去离子水中，浓度为1mg/mL)中，之后立刻用移液枪吹打混匀，再在室温环境静置15分钟，即得DMP阳离子纳米粒质粒IL-15mRNA复合物。
试验例1本发明DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物抗乳腺癌试验
为了研究DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物在体内的抗肿瘤效应，在BalB/c小鼠(6-8周龄，雌性)皮下建立了乳腺癌异位移植瘤模型。将体外培养的4T1乳腺癌细胞用胰蛋白酶消化，并定容在无血清、无抗生素的1640培养基中，在每只小鼠的皮下接种5×106个细胞，细胞接种7天后，开始按以下进行随机分组治疗(每组5只)：
A)空白对照组：5％的葡萄糖溶液；
B)空白载体对照组：DMP阳离子纳米粒置于5％的葡萄糖溶液中；
C)IL-22BP治疗组：DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物置于5％的葡萄糖溶液中。
采取瘤内注射方式进行治疗，DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物按实施例1的方法制备，其配比如下：mRNA：阳离子纳米粒＝1：25(W/W)，将阳离子纳米粒/mRNA复合物稀释在葡萄糖溶液中，并调整使得葡萄糖终浓度为5％。每次每只小鼠的注射体积为100μL，其中含mRNA 5μg以及阳离子纳米粒125μg。每天给药1次，共治疗7次。治疗开始后每天测量肿瘤体积大小。治疗结束后第3天将动物处死并解剖，分离皮下肿瘤组织并进行称重。肿瘤生长抑制用方差分析，P<0.05则认为有统计学意义。以上各组动物的肿瘤重量、肿瘤生长曲线见图3，其中图3a表示肿瘤生长曲线，图3b表示平均肿瘤重量。
从图3可以看出，DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物治疗组肿瘤生长缓慢，而对照组肿瘤生长较快，DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物表现出极强的抑制肿瘤生长的作用，与空白对照组相比抑瘤率达到65.2％。
以上实验结果表明，DMP阳离子纳米粒/IL-22BP mRNA基因复合物具有显著的抗乳腺癌的作用。
试验例2本发明DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物抗结肠癌试验
为了研究DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物在体内的抗肿瘤效应，在BalB/c小鼠(6-8周龄，雌性)腹腔建立了结肠癌腹腔转移瘤模型。将体外培养的C26结肠癌细胞用胰蛋白酶消化，并定容在无血清、无抗生素的DMEM培养基中，在每只小鼠的腹腔接种1×106个细胞，细胞接种3天后，开始按以下进行随机分组治疗(每组5只)：
A)空白对照组：5％的葡萄糖溶液；
B)空白载体对照组：DMP阳离子纳米粒置于5％的葡萄糖溶液中；
C)Bim治疗组：DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物置于5％的葡萄糖溶液中。
采取腹腔注射方式进行治疗，DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物按实施例2的方法制备，其配比如下：mRNA：阳离子纳米粒＝1：25(W/W)，将阳离子纳米粒/mRNA复合物稀释在葡萄糖溶液中，并调整使得葡萄糖终浓度为5％。每次每只小鼠的注射体积为100μL，其中含mRNA 5μg以及阳离子纳米粒125μg。每天给药1次，共治疗7次。治疗结束后第3天将动物处死并解剖，分离腹腔肿瘤组织并进行称重和肿瘤结节计数。肿瘤生长抑制用方差分析，P<0.05则认为有统计学意义。以上各组动物的肿瘤重量、肿瘤结节数见图4，其中图4a表示平均肿瘤重量，图4b表示平均肿瘤结节数。
从图4可以看出，DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物治疗组肿瘤生长缓慢，而对照组肿瘤生长较快，DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物表现出极强的抑制肿瘤生长的作用，与空白对照组相比抑瘤率达到65.1％。
以上实验结果表明，DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物具有显著的抗结肠癌的作用。
试验例3本发明DMP阳离子纳米粒/IL-15 mRNA基因复合物抗肺转移瘤试验
为了研究DMP阳离子纳米粒IL-15 mRNA基因复合物在体内的抗肿瘤效应，在BalB/c小鼠(6-8周龄，雌性)肺部建立了肺转移瘤模型。将体外培养的C26结肠癌细胞用胰蛋白酶消化，并定容在无血清、无抗生素的DMEM培养基中，在每只小鼠的静脉接种5×106个细胞，细胞接种3天后，开始按以下进行随机分组治疗(每组5只)：
A)空白对照组：5％的葡萄糖溶液；
B)空白载体对照组：DMP阳离子纳米粒置于5％的葡萄糖溶液中；
C)IL-15治疗组：DMP阳离子纳米粒/IL-15 mRNA基因复合物置于5％的葡萄糖溶液中。
采取腹腔注射方式进行治疗，DMP阳离子纳米粒/IL-15 mRNA基因复合物按实施例3的方法制备，其配比如下：mRNA：阳离子纳米粒＝1：25(W/W)，将阳离子纳米粒/mRNA复合物稀释在葡萄糖溶液中，并调整使得葡萄糖终浓度为5％。每次每只小鼠的注射体积为100μL，其中含mRNA 5μg以及阳离子纳米粒125μg。每天给药1次，共治疗7次。治疗结束后第3天将动物处死并解剖，分离肺组织并进行称重。肿瘤生长抑制用方差分析，P<0.05则认为有统计学意义。以上各组动物的肺重量、肺结节数见图5，其中图5a表示肺重，图5b表示平均肺肿瘤结节数。
从图5可以看出，DMP阳离子纳米粒/IL-15 mRNA基因复合物治疗组肿瘤生长缓慢，而对照组肿瘤生长较快，DMP阳离子纳米粒/IL-15 mRNA基因复合物表现出极强的抑制肿瘤生长的作用，与空白对照组相比抑瘤率达到78.4％。
以上实验结果表明，DMP阳离子纳米粒/IL-15 mRNA基因复合物具有显著的抗肺转移肿瘤的作用。

Claims (9)

1.DMP纳米粒在制备递送mRNA药物中的用途；所述的DMP纳米粒由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到。
2.根据权利要求1所述的DMP纳米粒在制备递送mRNA药物中的用途，其特征在于：所述DMP纳米粒的平均粒径为28.30±0.86nm，平均电位为+39.03±0.26mV。
3.根据权利要求1所述的DMP纳米粒在制备递送mRNA药物中的用途，其特征在于：所述的DOTAP重量份数为1份，所述两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为9份。
4.根据权利要求1所述的DMP纳米粒在制备递送mRNA药物中的用途，其特征在于：所述DMP纳米粒由以下方法中的任意一种制备得到；
方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP 1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化直到完全溶解，得到DMP纳米粒溶液；
方法B为微流控法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP 1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于有机相溶剂中，然后以2mL/min的速度与水相溶剂共同通过微流控系统并收集，得到DOTAP-mPEG-PCL纳米粒溶液。
5.根据权利要求1所述的DMP纳米粒在制备递送mRNA药物中的用途，其特征在于：所述的mRNA为表达IL-22BP蛋白、Bim蛋白或IL-15蛋白的mRNA分子。
6.权利要求1-5任一项的DMP纳米粒复合mRNA形成的纳米复合物。
7.权利要求6所述的纳米复合物在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的纳米复合物在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途，其特征在于：所述的肿瘤为结肠癌、肺癌或乳腺癌。
9.根据权利要求7所述的纳米复合物在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途，所述的纳米复合物的制备方法为：取DMP纳米粒25份，mRNA 1份，在室温下混合即可。
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