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CN112512582B - Tim-3抗体在制备治疗肿瘤的药物中的用途 - Google Patents

Tim-3抗体在制备治疗肿瘤的药物中的用途 Download PDF

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CN112512582B CN201980050193.2A CN201980050193A CN112512582B CN 112512582 B CN112512582 B CN 112512582B CN 201980050193 A CN201980050193 A CN 201980050193A CN 112512582 B CN112512582 B CN 112512582B
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Abstract

本发明公开了TIM‑3抗体在制备治疗肿瘤的药物中的用途。具体而言，提供了TIM‑3抗体或其抗原结合片段在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的用途，所述TIM‑3抗体包含SEQ ID NO:33所示的重链可变区和SEQ ID NO:36所示的轻链可变区。进一步地，本公开中还提供了TIM‑3抗体或其抗原结合片段和PD‑1抗体或其抗原结合片段联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

Description

TIM-3抗体在制备治疗肿瘤的药物中的用途
技术领域
本公开中涉及一种TIM-3抗体在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
背景技术
T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulinand mucin-domain-containing molecule 3，TIM-3)，又称甲型肝炎病毒细胞受体2(hepatitis A viruscellular receptor 2，HAVCR-2)，是一种I型膜表面蛋白分子，属TIM家族成员。人类TIM-3分子由301个氨基酸组成，包含信号肽、Ig可变区(IgV区)、富含丝氨酸/苏氨酸的黏蛋白区、跨膜区和胞质区，人鼠之间的同源性63％。
TIM-3可从多方面调节免疫系统的功能，在Th1细胞表面与配体Gal-9结合可下调Th1细胞应答，并能诱导Th1细胞凋亡，在自身和异体免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、哮喘)以及免疫耐受中起着重要作用。
除此，TIM-3不仅表达于免疫细胞，在卵巢癌、脑膜瘤、黑色素瘤等肿瘤细胞中也有过表达，并直接促进肿瘤的增长。下调TIM-3的表达可以明显抑制Hela细胞的侵袭和转移。TIM-3的过表达均与肺癌、胃癌、前列腺癌和宫颈癌的不良预后密切相关。在血液系统肿瘤中，TIM-3过表达于急性髓系白血病的白血病干细胞、MDS患者的造血干细胞上，且TIM-3+造血干细胞具有低分化、低凋亡及高增殖的恶性生物学特征。因此，通过抑制TIM-3的活性(如TIM-3抗体)以提高固有免疫系统的功能，有望成为治疗肿瘤的新方法(参见，例如，Ngiowet al.，Cancer Res.，71(21)：1-5(2011)；Guo et al.，Journαl of TranslationαlMedicine，11：215(2013)；and Ngiow et al.，Cancer Res.，71(21)：6567-6571(2011))。
目前已有专利报道了有关TIM-3的抗体，如WO2011159877、WO2013006490、WO2015117002、WO2016144803、WO2016161270、US20150218274。
WO2018153366(申请日2018年2月26日)中描述了一种新的TIM-3抗体，具有高活性、优异亲和力和稳定性。
作为肿瘤免疫治疗的代表，PD-1抗体的效果是有目共睹的，临床数据已经证明：PD-1抗体可以将恶性肿瘤患者的5年生存率从17％提高到34％，将非小细胞肺癌患者的5年生存率从4％提高到16％。然而，并不是所有的患者都能从中获益，或根本不起作用或只是维持短暂的疗效。
2016年2月《Nature Communication》杂志报道PD-1抗体耐药的原因之一是由于肿瘤又开发了新的免疫逃逸通路TIM-3。该研究通过使用EGFR(T790M/L858)及KRAS(G12D)突变的肺癌小鼠模型，分别构建抗PD-1耐药的小鼠模型。研究人员首先分析了治疗前及抗PD-1治疗耐药后小鼠肿瘤中T细胞的数量变化，再具体分析了TIM-3阳性表达与抗PD-1治疗的关系，结果发现TIM-3阳性表达与抗PD-1治疗时间呈显著地时间依赖性，治疗前及治疗敏感期TIM-3阳性表达较低，而发生耐药后TIM-3阳性表达显著增加，在发生耐药的肿瘤中TIM-3阳性表达还与T细胞中PD-1抗体结合程度显著相关，T细胞与PD-1抗体结合程度越高则TIM-3阳性表达亦越强。总而言之，抗PD-1治疗失败与TIM-3表达上调有关，该分子以类似PD-1/L1抑制T细胞功能及促进T细胞衰竭的方式促使免疫逃逸(Nature volume 545，第60-65页)，另外，已有两个TIM-3抗体联合PD-1治疗恶性肿瘤或晚期实体瘤处于临床研究阶段阶段(NCT02608268和NCT02817637)。为此，开发新的TIM-3抗体单用或联合PD-1用于治疗肿瘤的应用引起药学研究者的足够兴趣。
发明内容
本公开中提供了一种TIM-3抗体在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段包含1个或多个选自以下的CDR区序列或与其具有至少95％序列同一性的氨基酸序列：
抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：14、15和16氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：17、18和19氨基酸序列所示。
在一些实施方案中，所述TIM-3抗体轻、重链中CDR序列如下表所示：
在一些实施方案中，所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段包含1个或多个选自以下的CDR区序列或与其具有至少95％序列同一性的氨基酸序列：
抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：8、43和10氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：11、12和13氨基酸序列所示，
其中所述的SEQ ID NO：43如DIIPX1X2X3GSKYNQKFKD序列所示：
其中，X1选自N、L、V、M或E，X2选自N、E、M、H、K、L、A或V，X3选自G或A。
在另一些实施方案中，所述TIM-3抗体轻、重链中CDR序列如下表所示：
优选地，在一些实施方案中，所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述的人源化抗体轻链和重链可变区上的轻链和重链FR区序列分别来源于人种系轻链和重链或其突变序列。
进一步地，在一些实施方案中，所述的人源化抗体含有SEQ ID NO：31所示的重链可变区或其变体，所述变体优选在SEQ ID NO：31所示的重链可变区序列上具有1-10个氨基酸变化，更优选为Q3K和R87K的氨基酸回复突变；所述的人源化抗体含有SEQ ID NO：32所示的轻链可变区或其变体，所述变体优选在SEQ ID NO：32所示的轻链可变区上具有1-10个氨基酸变化，更优选为Q3K和I48V、K45Q、A43S或T85S的氨基酸回复突变。
前述的人源化抗体重、轻链可变区的序列如下所示：
重链可变区序列SEQ ID NO：31
轻链可变区序列SEQ ID NO：32
注：顺序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，序列中斜体为FR序列，下划线为CDR序列。
在一些实施方案中，所述的人源化TIM-3抗体重、轻链可变区的序列如下所示：
重链可变区序列SEQ ID NO：33：
轻链可变区序列SEQ ID NO：36：
在一些实施方案中，所述的人源化抗体含有SEQ ID NO：20所示的重链可变区或其变体，所述变体优选在SEQ ID NO：20所示的重链可变区序列上具有1-10个氨基酸变化，更优选为D89E，R98T，G49A，M48I，M70L，R38K和V68A的氨基酸回复突变；所述的人源化抗体含有SEQ ID NO：21所示的轻链可变区或其变体，所述变体优选在SEQ ID NO：21所示的轻链可变区上具有1-10个氨基酸变化的序列，更优选为A43S的氨基酸回复突变。
前述的人源化抗体重、轻链可变区的序列如下所示：
重链可变区序列SEQ ID NO：20
轻链可变区序列SEQ ID NO：21
注：顺序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，序列中斜体为FR序列，下划线为CDR序列。
在一些实施方案中，所述的人源化TIM-3抗体重、轻链可变区的序列如下所示：
重链可变区序列SEQ ID NO：51
轻链可变区序列SEQ ID NO：29
优选地，所述TIM-3抗体为全长抗体，进一步包括人抗体恒定区，优选包含SEQ IDNO：41所示的人重链恒定区序列和优选SEQ ID NO：42所示的人轻链恒定区序列。
重链恒定区序列如SEQ ID NO：41所示：
轻链恒定区序列如SEQ ID NO：42所示：
在一些实施方案中，所述的TIM-3抗体的抗原结合片段是选自Fab、Fab′、F(ab′)2、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽的抗原结合片段。
另一方面，本公开用途中所述TIM-3抗体或其抗原结合片段联合抗PD-1抗体或其抗原结合片段施用。
抗PD-1抗体是已知的，可选自但不限于：AMP-224、GLS-010、IBI-308、REGN-2810、PDR-001、BGB-A317、Pidilizumab、PF-06801591、Genolimzumab、CA-170、MEDI-0680、JS-001、TSR-042、Camrelizumab、Pembrolizumab、LZM-009、AK-103和Nivolumab。
优选地，所述的PD-1抗体的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77和SEQ ID NO：78所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述的抗PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74和SEQ ID NO：75所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在另一些实施方案中，所述抗PD-1抗体各CDR序列如下表所示：
名称 序列 编号
HCDR1 SYMMS SEQID NO：73
HCDR2 TISGGGANTYYPDSVKG SEQID NO：74
HCDR3 QLYYFDY SEQID NO：75
LCDR1 LASQTIGTWLT SEQID NO：76
LCDR2 TATSLAD SEQID NO：77
LCDR3 QQVYSIPWT SEQID NO：78
优选地，所述的抗PD-1抗体为人源化抗体或其片段。
在可选实施方案中，本公开中所述抗PD-1抗体抗原结合片段选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段组成的组的抗体片段。
免疫球蛋白可以来源于任何通常已知的同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员众所周知的，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的Ab种类或亚类(例如，IgM或IgG1)。在一些可选实施方案中，本公开中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的重链恒定区，优选包含IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。
在另一些可选实施方案中，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含κ或λ的轻链恒定区的轻链恒定区。
进一步地，优选人源化抗体轻链可变区序列为如SEQ ID NO：82所示的序列或其变体，所述变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为A43S的氨基酸变化；所述人源化抗体重链可变区序列为如SEQ ID NO：81所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为G44R的氨基酸变化。
在一些实施方案中，所述人源化抗PD-1抗体重、轻链可变区的序列如下所示：
重链可变区
轻链可变区
优选的，所述人源化抗PD-1抗体轻链序列为如SEQ ID NO：80所示的序列或其变体；所述变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为A43S的氨基酸变化；所述人源化抗体重链序列为如SEQ ID NO：79所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为G44R的氨基酸变化。
在另一实施方案中，所述人源化抗PD-1抗体的轻链序列为如SEQ ID NO：80所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO：79所示的序列：
重链
轻链
本公开中所述抗PD-1抗体联合TIM-3抗体在制备治疗肿瘤的药物用途展现药物的协同作用。
根据疾病的类型和严重性，本文中所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量(按患者体重给药)为0.1～10.0mg/kg，可以为0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、08mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.2mg/kg、1.4mg/kg、1.6mg/kg、1.8mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg、2.4mg/kg、2.6mg/kg、2.8mg/kg、3.0mg/kg、3.2mg/kg、3.4mg/kg、3.6mg/kg、3.8mg/kg、4.0mg/kg、4.2mg/kg、4.4mg/kg、4.6mg/kg、4.8mg/kg、5.0mg/kg、5.2mg/kg、5.4mg/kg、5.6mg/kg、5.8mg/kg、6.0mg/kg、6.2mg/kg、6.4mg/kg、6.6mg/kg、6.8mg/kg、7.0mg/kg、7.2mg/kg、7.4mg/kg、7.6mg/kg、7.8mg/kg、8.0mg/kg、8.2mg/kg、8.4mg/kg、8.6mg/kg、8.8mg/kg、9.0mg/kg、9.2mg/kg、9.4mg/kg、9.6mg/kg、9.8mg/kg、10.0mg/kg。
在可选实施方案中，其中所述TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量(按患者体重给药)为1～1000mg，可以为1.0mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、1.8mg、2.0mg、2.2mg、2.4mg、2.6mg、2.8mg、3.0mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4.0mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5.0mg、5.2mg、5.4mg、5.6mg、5.8mg、6.0mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7.0mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8.0mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9.0mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10.0mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、275mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、570mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595mg、600mg、605mg、610mg、615mg、620mg、625mg、630mg、635mg、640mg、645mg、650mg、655mg、660mg、665mg、670mg、675mg、680mg、685mg、690mg、695mg、700mg、705mg、710mg、715mg、720mg、725mg、730mg、735mg、740mg、745mg、750mg、755mg、760mg、765mg、770mg、775mg、780mg、785mg、790mg、795mg、800mg、805mg、810mg、815mg、820mg、825mg、830mg、835mg、840mg、845mg、850mg、855mg、860mg、865mg、870mg、875mg、880mg、885mg、890mg、895mg、900mg、905mg、910mg、915mg、920mg、925mg、930mg、935mg、940mg、945mg、950mg、955mg、960mg、965mg、970mg、975mg、980mg、985mg、990mg、995mg、1000mg，优选50～600mg，最优选200mg。
施药的频率会随疾病的类型和严重性而变化，在一些实施方案中，本公开中所述TIM-3抗体或其抗原结合片段的给药频为一周一次、二周一次、三周一次、四周一次、六周一次或八周一次。
在可选实施方案中，本公开中所述TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量(按患者体重给药)为50～600mg/2-3周一次，然而，其它剂量可以是有用的，优选为200mg/2-3周一次。
在本文中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为0.1～10.0mg/kg，可以为0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.2mg/kg、1.4mg/kg、1.6mg/kg、1.8mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg、2.4mg/kg、2.6mg/kg、2.8mg/kg、3.0mg/kg、3.2mg/kg、3.4mg/kg、3.6mg/kg、3.8mg/kg、4.0mg/kg、4.2mg/kg、4.4mg/kg、4.6mg/kg、4.8mg/kg、5.0mg/kg、5.2mg/kg、5.4mg/kg、5.6mg/kg、5.8mg/kg、6.0mg/kg、6.2mg/kg、6.4mg/kg、6.6mg/kg、6.8mg/kg、7.0mg/kg、7.2mg/kg、7.4mg/kg、7.6mg/kg、7.8mg/kg、8.0mg/kg、8.2mg/kg、8.4mg/kg、8.6mg/kg、8.8mg/kg、9.0mg/kg、9.2mg/kg、9.4mg/kg、9.6mg/kg、9.8mg/kg、10.0mg/kg。
在可选实施方案中，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为1～1000mg，可以为1.0mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、1.8mg、2.0mg、2.2mg、2.4mg、2.6mg、2.8mg、3.0mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4.0mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5.0mg、5.2mg、5.4mg、5.6mg、5.8mg、6.0mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7.0mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8.0mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9.0mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10.0mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、275mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、570mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595mg、600mg、605mg、610mg、615mg、620mg、625mg、630mg、635mg、640mg、645mg、650mg、655mg、660mg、665mg、670mg、675mg、680mg、685mg、690mg、695mg、700mg、705mg、710mg、715mg、720mg、725mg、730mg、735mg、740mg、745mg、750mg、755mg、760mg、765mg、770mg、775mg、780mg、785mg、790mg、795mg、800mg、805mg、810mg、815mg、820mg、825mg、830mg、835mg、840mg、845mg、850mg、855mg、860mg、865mg、870mg、875mg、880mg、885mg、890mg、895mg、900mg、905mg、910mg、915mg、920mg、925mg、930mg、935mg、940mg、945mg、950mg、955mg、960mg、965mg、970mg、975mg、980mg、985mg、990mg、995mg、1000mg，优选50～600mg，最优选200mg。
施药的频率会随疾病的类型和严重性而变化，在一些实施方案中，本公开中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的给药频为一周一次、二周一次、三周一次、四周一次、六周一次或八周一次。
在可选实施方案中，本公开中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的给药剂量为50～600mg/2-3周一次，然而，其它剂量可以是有用的，优选为200mg/2-3周一次。
在一些实施方案中，所述TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量(按患者体重给药)为0.1～10.0mg/kg，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的给药剂量为0.1～10.0mg/kg。
在一些实施方案中，所述TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为1～1000mg，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的给药剂量为1～1000mg，三周一次。
在一些实施方案中，所述TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量(按患者体重给药)为1～1000mg，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的给药剂量为50～600mg，三周一次。
在一些实施方案中，所述TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量(按患者体重给药)为1～1000mg，三周一次，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量(按患者体重给药)为1～1000mg。
本公开中所述给药途径可以为经口给药、胃肠外给药、经皮给药，所述胃肠外给药包括但不限于静脉注射、皮下注射、肌肉注射。
在本公开中优选的实施方案中，所述的PD-1抗体以注射的方式给药，例如皮下或静脉注射，注射前需将PD-1抗体配制成可注射的形式。特别优选的PD-1抗体的可注射形式是注射液或冻干粉针，其包含PD-1抗体、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，优选所述聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯为聚山梨酯20、40、60或80，最优选聚山梨酯20。最为优选的PD-1抗体的可注射形式包含PD-1抗体、醋酸盐缓冲剂、海藻糖和聚山梨酯20。
本公开中还提供了一种药物套组，或者一种药物组合，其中含有抗TIM-3抗体或其抗原结合片段和抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
本公开还提供了一种治疗肿瘤的方法，包括向肿瘤患者施用治疗有效量的TIM-3抗体或其抗原结合片段或/和抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
在本公开中的用途中所述肿瘤示例选自但不限于：乳腺癌(如三阴性乳腺癌)、肺癌、胃癌、结直肠癌(如直肠癌、结直肠癌)、肾癌(如肾细胞癌)、肝癌(如肝细胞癌)、黑素瘤(如转移性黑色瘤)、非小细胞肺癌、成淋巴细胞T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞白血病(AML)、慢性中性粒细胞白血病、急性成淋巴细胞T细胞白血病、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤巨核母细胞白血病、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)。
在可选实施方案中，本公开中的用途中肿瘤为非小细胞肺癌、乳腺癌(如三阴性乳腺癌)、黑素瘤(如转移性黑色瘤)、肾癌、结直肠癌或肝癌，优选为结直肠癌、非小细胞肺癌。
如无相反解释，本公开中术语具有如下含义：
本公开中，所谓“联合”是一种给药方式，是指一定时间期限内给予至少一种剂量的TIM-3抗体或其抗原结合片段和至少一种剂量的抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其中，两种药物都显示药理学作用产生药理作用。这种时间限期可以为一个给药周期。两种药物可以同时或依次给药。
本公开中所述“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-grafted antibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。在本公开中一个优选的实施方案中，所述的PD-1人源化抗体的CDR序列选自SEQ ID NO：73，74，75，76，77，78。
本公开中所述“鼠源抗体”在本发明中为根据本领域知识和技能制备的对人TIM-3的单克隆抗体。制备时用TIM-3抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。在本发明一个优选的实施方案中，所述的鼠源TIM-3抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或其变体的重链恒定区。
本公开中所述“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入表达载体中，最后在真核系统或原核系统中表达嵌合抗体分子。在本发明一个优选的实施方案中，所述的TIM-3嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的TIM-3嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1、IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变(如YTE突变或回复突变)的IgG1、IgG2或IgG4变体。
本公开中所述抗PD-1抗体的“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab‘片段，F(ab’)2片段，以及与人PD-1结合的Fv片段sFv片段；包含本公开中所述抗体的选自SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6中的一个或多个CDR区。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chain antibody)或单链Fv(sFv)。本公开中的术语“与PD-1结合”，指能与人PD-1相互作用。本公开中的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本公开中抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。
本公开中所述TIM-3抗体的“抗原结合片段”或“功能片段”是指抗体的保持特异性结合抗原(例如，TIM-3)的能力的一个或多个片段。已显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段，(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH和VL结构域组成的Fv片段；(v)单结构域或dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341：544-546)，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)可任选地通过合成的接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用重组方法，通过合成的接头连接它们，从而使得其能够产生为其中VL和VH区配对形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人(1988)Science242：423-426；和Huston等人(1988)Proc Natl.Acad.Sci USA85：5879-5883)。此类单链抗体也意欲包括在术语抗体的“抗原结合片段”中。使用本领域技术人员已知的常规技术获得此类抗体片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就功用性筛选片段。可通过重组DNA技术或通过酶促或化学断裂完整免疫球蛋白来产生抗原结合部分。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
Fab是通过用蛋白酶木瓜蛋白酶(切割H链的224位的氨基酸残基)处理IgG抗体分子所获得的片段中的具有约50,000的分子量并具有抗原结合活性的抗体片段，其中H链N端侧的约一半和整个L链通过二硫键结合在一起。
本公开中所述的Fab可以通过用木瓜蛋白酶处理本发明的特异性识别人TIM-3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的单克隆抗体来生产。此外，可以通过将编码所述抗体的Fab的DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中并将载体导入到原核生物或真核生物中以表达Fab来生产所述Fab。
F(ab′)2是通过用酶胃蛋白酶消化IgG铰链区中两个二硫键的下方部分而获得的分子量为约100,000并具有抗原结合活性并包含在铰链位置相连的两个Fab区的抗体片段。
本公开中所述的F(ab′)2可以通过用胃蛋白酶处理本发明的特异性识别人TIM-3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的单克隆抗体来生产。此外，可以通过用硫醚键或二硫键连接下面描述的Fab′来生产所述F(ab′)2。
Fab′是通过切割上述F(ab′)2的铰链区的二硫键而获得的分子量为约50,000并具有抗原结合活性的抗体片段。本发明的Fab′可以通过用还原剂例如二硫苏糖醇处理本发明的特异性识别TIM-3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的F(ab′)2来生产。
此外，可以通过将编码抗体的Fab′片段的DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中并将载体导入到原核生物或真核生物中以表达Fab′来生产所述Fab′。
本公开中所述“单链抗体”、“单链Fv”或“scFv”意指包含通过接头连接的抗体重链可变结构域(或区域；VH)和抗体轻链可变结构域(或区域；VL)的分子。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成，例如使用1-4个重复的变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448)。可用于本发明的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng 8：725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immunol.31：94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56：3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293：41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。
本公开中所述scFv可以通过以下步骤来生产：获得本发明的特异性识别人TIM-3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的单克隆抗体的VH和VL的编码cDNA，构建编码scFv的DNA，将所述DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中，然后将所述表达载体导入到原核生物或真核生物中以表达scFv。
本公开中所述“有效量”包含足以改善或预防医学病症的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：如待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
本公开中所述“CDR”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一。所述6个CDR的最常用的定义之一由Kabat E.A.等人，(1991)Sequences of proteinsof immunological interest.NIH Publication91-3242)提供。如本文中使用的，CDR的Kabat定义只应用于轻链可变结构域的CDR1、CDR2和CDR3(CDR L1、CDRL2、CDRL3或L1、L2、L3)，以及重链可变结构域的CDR2和CDR3(CDR H2、CDR H3或H2、H3)。
本公开中工程化的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至GS表达载体。重组的免疫球蛋白表达载体可以稳定地转染CHO细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的高度保守N端位点。通过表达与人TIM-3特异性结合的抗体得到稳定的克隆。阳性的克隆在生物反应器的无血清培养基中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常规技术纯化。比如，用含调整过的缓冲液的A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗去非特异性结合的组分。再用PH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃，或者冻干。
本公开所述“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，例如包含本发明的任一种结合化合物的组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。
人与动物对同一药物的耐受性相差较大，一般来说，动物的耐受性要比人大。一般可按下列比例换算：人用药量为1，小白鼠、大白鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-10。此外，可以采用人与动物表面积计算法来换算，1)人体表面积计算法，一般认为如许文氏公式(中国生理学杂志，12，327，1937)、Mech-Rubner氏公式。上述方法可适用于本公开中人与不同种类动物之间药物剂量的换算。
本公开所述“同源性”是指两个多核苷酸序列之间或两个多肽之间的序列相似性。当两个比较序列中的位置均被相同碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如如果两个DNA分子的每一个位置都被腺嘌呤占据时，那么所述分子在该位置是同源的。两个序列之间的同源性百分率是两个序列共有的匹配或同源位置数除以比较的位置数×100的函数。例如，在序列最佳比对时，如果两个序列中的10个位置有6个匹配或同源，那么两个序列为60％同源；如果两个序列中的100个位置有95个匹配或同源，那么两个序列为95％同源。一般而言，当比对两个序列而得到最大的同源性百分率时进行比较。
本公开所述“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
总生存期(OS)指从随机期至任何原因导致死亡的期。末次随访时仍存活的受试者，其OS以末次随访时间计为数据删失。失访的受试者，其OS以失访前末次证实存活时间计为数据删失。数据删失的OS定义为从随机分组到删失的时间。
客观缓解率(Objective response rate，ORR)指肿瘤缩小达到一定并且保持一定时间的病人的比例，包含了CR和PR的病例。采用实体瘤缓解评估标准(RECIST 1.1标准)来评定肿瘤客观缓解。受试者在基线时必须伴有可测量的肿瘤病灶，疗效评定标准根据RECIST 1.1标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD)。
疾病控制率(Disease Control Rate，DCR)：肿瘤第一次评估为CR/PR/SD开始到第一次评估为PD或任何原因死亡的时间。
12个月/24个月的生存率(Overall survival rate，OSR)：从首次用药开始经过12个月/24个月随访后，尚存活的病例数所占比例。
疾病控制率(Disease Control Rate，DCR)：指最佳总缓解(BOR)为完全缓解(CR)或部分缓解(PR)或疾病稳定(SD≥8周)的受试者比例。
完全缓解(CR)：所有靶病灶消失，全部病理淋巴结(包括靶结节和非靶结节)短直径必须减少至＜10mm。
部分缓解(PR)：靶病灶直径之和比基线水平减少至少30％。
疾病进展(PD)：以整个实验研究过程中所有测量的靶病灶直径之和的最小值为参照，直径和相对增加至少20％(如果基线测量值最小就以基线值为参照)；除此之外，必须满足直径和的绝对值增加至少5mm(出现一个或多个新病灶也视为疾病进展)。
疾病稳定(SD)：靶病灶减小的程度没达到PR，增加的程度也没达到PD水平，介于两者之间，研究时可以直径之和的最小值作为参考。
附图说明
图1：TIM-3抗体对人非小细胞肺癌HCC827小鼠移植瘤的疗效。
图2：抗体对小鼠相对肿瘤体积的影响。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本公开，但这些实施例并非限制本公开的范围。
实施例1、TIM-3抗原及检测用蛋白的制备
1.TIM-3抗原设计及表达
以UniProt Hepatitis A virus cellular receptor 2(人HAVCR2，人TIM-3，Uniprot号：Q8TDQ0)作为本发明TIM-3的模板，设计本发明涉及的抗原及检测用蛋白的氨基酸序列，可选的在TIM-3蛋白基础上融合不同的标签，分别克隆到pHr载体上(自产)或pTargeT载体上(promega，A1410)，在293细胞瞬转表达或CHO-S稳定表达纯化，获得编码本发明抗原及检测用蛋白。以下TIM-3抗原未特殊说明的均指人TIM-3。
TIM-3胞外区和hIgG1 Fc的融合蛋白：TIM-3-Fc(SEQ ID NO：1)，用于小鼠免疫
注释：划横线部分为信号肽，斜体部分为Fc。
带Flag标签和His标签的TIM-3胞外区：TIM-3-Flag-His(SEQ ID NO：2)，用于检测
TIM-3-flag-His
注释：划横线部分为信号肽，斜体部分为Flag-His标签。
全长TIM-3：用于构建TIM-3过表达细胞株
TIM-3-全长(SEQ ID NO：3)
注释：信号肽+胞外区+
2.TIM-3相关重组蛋白的纯化，以及杂交瘤抗体、重组抗体的纯化
2.1 TIM-3-Flag-His重组蛋白的纯化步骤：
将样品高速离心去除杂质，并浓缩至适当体积。利用PBS平衡NI-NTA亲和柱(QIAGEN，Cat No.30721)，冲洗2-5倍柱体积。将除杂后的细胞表达上清样品上柱。用PBS冲洗柱子，至A280读数降至基线。用PBS冲洗柱子，冲洗杂蛋白，并收集。依次用洗涤缓冲液(咪唑20mM)和洗脱缓冲液(咪唑300mM)洗脱目的蛋白，并收集洗脱峰。
收集的洗脱液用离子交换(Hiload 16/600 superdex 200柱)进一步纯化。用PBS平衡2个柱体积左右，保证pH7.4。将鉴定含目的蛋白的elution buffer浓缩后上样，收集样品，SDS-PAGE和LC-MS鉴定为正确后分装备用。
2.2杂交瘤，重组抗体，Fc融合蛋白的纯化
将细胞表达上清样品高速离心去除杂质，杂交瘤表达上清用Protein G柱，重组抗体、Fc融合蛋白表达上清用Protein A柱进行纯化。用PBS冲洗柱子，至A280读数降至基线。用100mM乙酸pH3.0洗脱目的蛋白，用1M Tris-HCl，pH8.0中和。洗脱样品适当浓缩后利用PBS平衡好的凝胶层析Superdex200(GE)进一步纯化，去聚体的峰收集好后分装备用。
实施例2、抗人TIM-3单克隆抗体的制备
1.动物免疫
抗人TIM-3单克隆抗体通过免疫小鼠产生。实验用SJL白小鼠，雌性，6-8周龄(北京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号：SCXK(京)2012-0001)。饲养环境：SPF级。小鼠购进后，实验室环境饲养1周，12/12小时光/暗周期调节，温度20-25℃；湿度40-60％。将已适应环境的小鼠按以下方案免疫。免疫抗原为带Fc标签的人TIM-3胞外区(SEQID NO：1)。
免疫方案：用QuickAntibody-Mouse5W(KX0210041)对小鼠进行免疫。抗原与佐剂比例为1∶1，10μg/只/次(首免/加强免疫)。抗原与佐剂迅速充分混匀后接种，接种时间为第1和第2次免疫间隔21天，之后每次免疫间隔14天。于每次免疫后7天取血，用ELISA方法确定小鼠血清中的抗体滴度。选择血清中抗体滴度高并且滴度趋于平台的小鼠进行脾细胞融合。在进行脾细胞融合前3天加强免疫，腹膜内(IP)注射20μg/只的生理盐水配制的抗原溶液。
2.脾细胞融合
采用优化的PEG介导的融合步骤将脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0细胞(CRL-8287TM)进行融合得到杂交瘤细胞。融合好的杂交瘤细胞以4-5E5/ml的密度用完全培养基(含20％FBS、1×HAT、1×OPI的DMEM培养基)重悬，100μl/孔种于96孔板中，37℃，5％CO2孵育3-4天后，补充HAT完全培养基100μl/孔，继续培养3-4天至形成针尖般克隆。去除上清，加入200μl/well的HT完全培养基(含20％FBS、1×HT和1×OPI的RPMI-1640培养基)，37℃，5％CO2培养3天后进行ELISA检测。
3.杂交瘤细胞筛选
根据杂交瘤细胞生长密度，用结合ELISA方法进行杂交瘤培养上清检测(见实施例4测试例1)。并将结合ELISA检测的阳性孔细胞上清进行TIM-3过表达细胞结合实验(见实施例4测试例2)。蛋白结合和细胞结合均为阳性的孔细胞及时进行扩增冻存保种和二到三次亚克隆直至获得单细胞克隆。
每次亚克隆细胞均需进行TIM-3结合ELISA、细胞结合实验检测。通过以上实验筛选得到杂交瘤克隆，并获得其分泌的抗体mAb-1701和mAb-1799，用无血清细胞培养法进一步制备抗体，按纯化实例纯化抗体，供在检测例中使用。
4.杂交瘤阳性克隆序列测定
从阳性杂交瘤中克隆序列过程如下。收集对数生长期杂交瘤细胞，用Trizol(Invitrogen，Cat No.15596-018)按照试剂盒说明书步骤提取RNA，用PrimeScriptTMReverse Transcriptase试剂盒反转录(Takara，Cat No.2680A)。将反转录得到的cDNA采用mouse Ig-Primer Set(Novagen，TB326Rev.B 0503)进行PCR扩增后送测序公司测序。得到mAb-1701和mAb-1799的重链和轻链可变区DNA序列对应的氨基酸序列：
mAb-1701重链可变区(SEQ ID NO：4)
mAb-1701轻链可变区(SEQ ID NO：5)
mAb-1799重链可变区(SEQ ID NO：6)
mAb-1799轻链可变区(SEQ ID NO：7)
其中各抗体轻重链中CDR序列如表1所示。
表1 各重链及轻链CDR区序列
实施例3、抗人TIM-3鼠杂交瘤单克隆抗体的人源化
1.抗TIM-3抗体mAb-1701号的人源化
通过比对IMGT人类抗体重、轻链可变区种系基因数据库和MOE软件，分别挑选与mAb-1701抗体同源性高的重链和轻链可变区种系基因作为模板，将鼠源抗体的CDR分别移植到相应的人源模板中，形成次序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的可变区序列。其中氨基酸残基由Kabat编号系统确定并注释。
1.1杂交瘤克隆mAb-1701号人源化构架选择
鼠源抗体mAb-1701号的人源化轻链模板为IGKV1-33*01和hjk4.1，人源化重链模板为IGHV1-18*01和hjh4.1，人源化可变区序列如下：
h1701VH-CDR graft(SEQ ID NO：20)
h1701VL-CDR graft(SEQ ID NO：21)
注：顺序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，序列中斜体为FR序列，下划线为CDR序列。
1.2 h1701号的模板选择和回复突变设计
具体突变设计见下表2：
表2 h1701的模板选择和回复突变设计
注：如A43S表示依照Kabat编号系统，将43位A突变回S。Grafted代表鼠抗体CDR植入人种系FR区序列。
表3 h1701人源化抗体重轻链可变区相互组合表
注：该表表示各种突变组合所得的序列。如h1701-007表示，在人源化的鼠抗体h1701-007上的有轻链h1701_VL.1A、重链h1701_VH.1A两种突变。其它类推。
1701号人源化具体序列如下：
＞h1701_VH.1(同h1701VH-CDR graft，SEQ ID NO：22)
＞h1701h1701_VH.1A(SEQ ID NO：23)
＞h1701_VH.1B(SEQ ID NO：24)
＞h1701_VH.1C(SEQ ID NO：25)
＞h1701_VH.1D(SEQ ID NO：26)
＞h1701_VH.1E(SEQ ID NO：27)
＞h1701_VH.1F(SEQ ID NO：28)
＞h1701_VL.1(同h1701VL-CDR graft，SEQ ID NO：29)
＞h1701_VL.1A(SEQ ID NO：30)
2.抗TIM-3抗体mAb-1799号的人源化
通过比对IMGT人类抗体重轻链可变区种系基因数据库和MOE软件，分别挑选与mAb-1799号抗体同源性高的重链和轻链可变区种系基因作为模板，将鼠源抗体的CDR分别移植到相应的人源模板中，形成次序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的可变区序列。其中氨基酸残基由Kabat编号系统确定并注释。
2.1杂交瘤克隆1799号人源化构架选择
鼠源抗体1799号的人源化轻链模板为IGKV1-39*01和hjk2.1，人源化重链模板为IGHV3-7*01和hjh4.1，人源化可变区序列如下：
h1799VH-CDR graft(SEQ ID NO：31)
h1799VL-CDR graft(SEQ ID NO：32)
注：顺序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，序列中斜体为FR序列，下划线为CDR序列。
2.2杂交瘤克隆1799号的模板选择和回复突变设计，见下表4：
表4 h1799的模板选择和回复突变设计
注：如I48V表示依照Kabat编号系统，将48位I突变回V。Grafted代表鼠抗体CDR植入人种系FR区序列。
表5 鼠抗1799号人源化抗体重轻链可变区序列组合
注：该表表示各种突变组合所得的序列。如h1799-005表示，在人源化的鼠抗体h1799-005上的有轻链h1799_VL.1A、重链h1799_VH.1两种突变。其它类推。
1799号人源化具体序列如下：
＞h1799_VH.1(同h1799VH-CDR graft，SEQ ID NO：33)
＞h1799_VH.1A(SEQ ID NO：34)
＞h1799_VH.1B(SEQ ID NO：35)
＞h1799_VL.1(同h1799VL-CDR graft，SEQ ID NO：36)
＞h1799_VL.1A(SEQ ID NO：37)
＞h1799_VL.1B(SEQ ID NO：38)
＞h1799_VL.1C(SEQ ID NO：39)
＞h1799_VL.1D(SEQ ID NO：40)
实施例4.重组嵌合抗体以及人源化抗体的制备及效果测试
抗体选用人重链IgG4/轻链kappa的恒定区与各可变区组合，在Fc段做了S228P突变来增加IgG4抗体的稳定性，也可选用本领域其它已知的突变来增加其性能。
重链恒定区序列如SEQ ID NO：41所示：
轻链恒定区序列如SEQ ID NO：42所示：
1.重组嵌合抗体的分子克隆
杂交瘤筛选所获得的阳性抗体分子经过测序后，得到可变区编码基因序列。以测序所得序列设计首尾引物，以测序基因为模板，经过PCR搭建各抗体VH/VK基因片段，再与表达载体pHr(带信号肽及hIgG4/hkappa恒定区基因(CH1-FC/CL)片段)进行同源重组，构建重组嵌合抗体全长表达质粒VH-CH1-FC-pHr/VL-CL-pHr，形成Ch1701和Ch1799两个嵌合抗体。
2.人源化抗体的分子克隆
人源设计之后的抗体序列，经过密码子优化后产生人密码子偏好的编码基因序列，设计引物PCR搭建各抗体VH/VK基因片段，再与表达载体pHr(带信号肽及hIgG4/hkappa恒定区基因(CH1-FC/CL)片段)进行同源重组，构建人源化抗体全长表达质粒VH-CH1-FC-pHr/VL-CL-pHr。
3.重组嵌合抗体以及人源化抗体的表达与纯化
分别表达抗体轻重链的质粒以1∶1.2的比例转染HEK293E细胞，6天后收集表达上清，高速离心去除杂质，用Protein A柱进行纯化。用PBS冲洗柱子，至A280读数降至基线。用pH3.0-pH3.5的酸性洗脱液洗脱目的蛋白，用1M Tris-HCl，pH8.0-9.0中和。洗脱样品适当浓缩后，利用PBS平衡好的凝胶层析Superdex200(GE)进一步纯化，以去除聚体，收集单体峰，分装备用。
实施例5、h1701抗体的点突变
脱酰胺修饰是抗体中可能影响后期稳定性的一种常见的化学修饰，尤其是CDR区域的部分氨基酸高度脱酰胺、氧化或者异构化修饰一般选择尽量避免或者突变降低。根据加速稳定性实验和计算机模拟抗体结构和热点预测，h1701抗体重链CDR2中的NNG是易于发生脱酰胺化的位点，上述NNG分别位于h1701抗体重链可变区的第54-56位，根据氨基酸性质和计算机抗体结构模拟技术，上述位点的氨基酸可以进行任意的氨基酸取代，优选地，h1701的CDR2突变体为：DIIPX1X2X3GSKYNQKFKD(SEQ ID NO：43)，其中X1X2X3分别为h1701抗体重链可变区第54-56位氨基酸残基，X1选自Asn、Leu、Mal、Met或Glu，X2选自Asn、Glu、Met、His、Lys、Leu、Ala或Val，X3选自Gly或Ala。
进一步地，含上述第54-56位突变的CDR2与含不同回复突变的FR区可形成如下的重链可变区：＞h1701_VH.1-CDR2突变体(SEQ ID NO：44)
＞h1701_VH.1A-CDR2突变体(SEQ ID NO：45)
＞h1701_VH.1B-CDR2突变体(SEQ ID NO：46)
＞h1701_VH.1C-CDR2突变体(SEQ ID NO：47)
＞h1701_VH.1D-CDR2突变体(SEQ ID NO：48)
＞h1701_VH.1E-CDR2突变体(SEQ ID NO：49)
＞h1701_VH.1F-CDR2突变体(SEQ ID NO：50)
h1701的HCDR2突变体相关的示例性序列，及包含相应CDR2突变体的人源化序列h1701_VH.1B-CDR2突变体(SEQ ID NO：46)见以下突变体及表6。
示例性地，把h1701-009的HCDR2中的NNG设计突变为NLG、NVG、NNA、NMA、NEA、NHA、NMG、NEG、NKG、NAG、NHG(上述重链可变区的CDR2氨基酸突变体的序列分别如SEQ ID NO：51-61所示)，通过分子克隆的方法进行表达质粒构建和293E表达，纯化后进一步检测突变体抗体的亲和力和稳定性。
其中示例性变体的亲和力检测结果分别见测试例1、3。
对h1701-009进行系列氨基酸突变具体相关序列包括但不限于表6所述，具体化学稳定性检测结果见测试例9：
表6 h1701-009防脱酰胺化修饰突变体重链可变区序列
重链可变区 VH序列代号 对应的HCDR2序列
h1701-009 SEQ ID NO：24 DIIPNNGGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：9)
h1701-009NLG SEQ ID NO：51 DIIPNLGGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：62)
h1701-009NVG SEQ ID NO：52 DIIPNVGGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：63)
h1701-009NNA SEQ ID NO：53 DIIPNNAGSKYNQKFKD(SEQ ID N0：64)
h1701-009NMA SEQ ID NO：54 DIIPNMAGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：65)
h1701-009NEA SEQ ID NO：55 DIIPNEAGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：66)
h1701-009NHA SEQ ID NO：56 DIIPNHAGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：67)
h1701-009NMG SEQ ID NO：57 DIIPNMGGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：68)
h1701-009NEG SEQ ID NO：58 DIIPNEGGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：69)
h1701-009NKG SEQ ID NO：59 DIIPNKGGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：70)
h1701-009NAG SEQ ID NO：60 DIIPNAGGSKYNQKFKD(SEQ ID N0：71)
h1701-009NHG SEQ ID NO：61 DIIPNHGGSKYNQKFKD(SEQ ID NO：72)
测试例1：评价并比较TIM-3抗体对人非小细胞肺癌HCC827小鼠皮下移植瘤的疗效。
实验动物和饲养条件
NOG雌性小鼠，购自北京维通利华实验动物有限公司(中国北京，合格证编号11400700200456，许可证SCXK(京)2016-0006)，购入时4-6周龄，体重约18g，5只/笼饲养，12/12小时光/暗周期调节，温度23±1℃恒温，湿度50～60％，自由进食进水。
受试抗体
C25-hIgG4(WTRC25，US6114143)，浓度5.39mg/ml，送样量37.73mg。
h1799-005，浓度12.00mg/ml，送样量27mg。
MBG-453(Novartis AG)，浓度5.44mg/ml，送样量25mg。
h1701-009NLG，浓度6.30mg/ml，送样量24mg。
配制方法：将以上抗体在无菌条件下使用无热源枪头用PBS稀释成2mg/ml浓度，并分装为1.2ml/管，共10管，置于4度保存，每次注射取用1管。
PBMCs提取
本实验所使用PBMCs为2名志愿者新鲜血液中提取，提取方法如下：
a)将用肝素抗凝处理的静脉血与同体积含2％FBS的PBS混合；
b)无菌转移15ml分离液1077到50ml分离管中(之前轻轻颠倒瓶子使1077充分混合)；
c)仔细的将稀释血液25ml加入离心管中的1077(室温，缓慢加入，在血液和1077中形成一个明显的分层，不要将稀释血液混合入1077中)；
d)室温下1200g离心10分钟，离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以在1077上形成一层单核淋巴细胞。吸出淋巴细胞上方4-6cm的血浆；
e)吸取淋巴细胞层以及它下面一半的1077转移到另外的一个离心管。加入等体积的PBS，室温下300g离心8分钟；
f)用PBS或RPMI-1640培养基清洗细胞，用含血清的RPMI-1640培养基重悬细胞。
实验步骤：
将HCC827细胞(1×10^7cells/mouse)200μl(含50％matrigel)接种于NOG小鼠右肋部皮下，16天后去除肿瘤体积过大过小的动物，按平均肿瘤体积约215mm^3将小鼠随机分为：无关抗体C25 IgG4 10mpk、MBG-453 10mpk、h1799-005 10mpk和h1701-009NLG 10mpk组共4组，每组10只(Day0)，实验过程中#60-008L 10mpk组1只动物在注射PBMCs后体重持续降低并在Day19发现死亡，疑发生GVHD，实际为9只。将新鲜提取的两名志愿者的PBMCs以1∶1比例混合，以5×10^6cells/100μl注射到NOG小鼠腹腔，并开始腹腔注射各抗体，每周2次，共给药7次(表1)，每周2次监测肿瘤体积、动物重量并记录数据。实验结束时将动物进行安乐死，剥取肿瘤并称取肿瘤重量。
数据处理
所有数据使用Excel和GraphPad Prism 5软件进行作图及统计分析。
肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×a×b2其中a、b分别表示长、宽。
相对肿瘤增殖率T/C(％)＝(T-T0)/(C-C0)×100其中T、C为实验结束时治疗组和对照组的肿瘤体积；T0、C0为实验开始时的肿瘤体积。
抑瘤率TGI(％)＝1-T/C(％)。
表7：TIM-3抗体对人非小细胞肺癌HCC827小鼠移植瘤的疗效
D0：第一次给药时间；a：实际数量(分组数量)
**p＜0.01、***p＜0.001v.s.C25 IgG4-10mpk by two-way ANOVA，Bonferroni’spost-hoc test.i.p.是腹腔注射。
实验结果显示：3个TIM-3抗体MBG-453(10mpk，I.P.，BIW×7)、h1799-005(10mpk，I.P.，BIW×7)、h1701-009NLG(10mpk，I.P.，BIW×7)都能明显抑制人非小细胞肺癌HCC827小鼠皮下移植瘤的生长，Day21(末次测量)平均瘤体积由小到大依次是h1799-005(10mpk，I.P.，BIW×7)、h1701-009NLG(10mpk，I.P.，BIW×7)、MBG-453(10mpk，I.P.，BIW×7)，它们的抑瘤率分别为120.86％(p＜0.001)、85.01％(p＜0.05)、78.15％(p＜0.05)(表7及图1)。
离体的肿瘤重量与肿瘤体积趋势一致，3个TIM-3抗体组的肿瘤重量都明显小于无关抗体C25 IgG4(10mpk，I.P.，BIW×7)，由小到大分别为h1799-005(10mpk，I.P.，BIW×7)、h1701-009NLG(10mpk，I.P.，BIW×7)、MBG-453(10mpk，I.P.，BIW×7)，且都与有C25 IgG4(10mpk，I.P.，BIW×7)有统计学差异，分别为p＜0.001、p＜0.05、p＜0.05。
荷瘤小鼠对各TIM-3抗体均能很好耐受，在整个给药过程中体重只轻微波动，除h1701-009NLG(10mpk，I.P.，BIW×7)一只动物在注射PBMCs后体重持续降低并在Day19发现死亡外(该动物死亡时腹部呈黑色，用镊子触碰皮肤即烂，明显的恶臭味，死亡时间应大于8h，结合死亡前体重持续降低，怀疑为该动物移植人PBMCs后对移植物不能很好耐受而发生GVHD)，无明显药物致体重减轻等症状发生。
测试例2：
评价并比较TIM-3抗体对小鼠结肠癌MC38皮下移植瘤作用。
受试药物名称：
TIM-3抗体，h1799-005。
PD-I抗体，鼠源PD-1抗体J43(J Immunol.196(1)：144-55.)。
实验步骤：
将1×106个小鼠结肠癌MC38细胞注射入小鼠腋下。待肿瘤生长至平均体积50～200mm3后，将动物按瘤体积随机分组后给药。40只小鼠分为4组：阴性对照组(组1)，TIM-3抗体、30mg/kg组(组2)，PD-1抗体、5mg/kg组(组3)，和TIM-3抗体联用PD-1抗体组(组4)，每组10只，各组按10ml/kg的给药容量尾静脉注射给予相应浓度的受试物，联用组给药总量为20mL/kg，每周2次，给药周期21天。
实验结果：
1、与阴性对照组肿瘤体积581±63mm3相比，TIM-3抗体、30mg/kg组、PD-1抗体、5mg/kg组和联用组肿瘤体积显著减小，分别为406±31(P＜0.05)、245±26(P＜0.01)和166±19(P＜0.001)mm3；
2、与阴性对照组相对肿瘤体积(RTV)值5.38±0.56相比，TIM-3抗体、30mg/kg组、PD-1抗体、5mg/kg组和联用组RTV值分别为3.76±0.32(P＜0.05)、2.20±0.21(P＜0.01)和1.44±0.08(P＜0.001)；T/C值分别为69.91％、40.92％和26.66％；
3、与阴性对照组瘤块重量0.3502±0.0298g相比，TIM-3抗体、30mg/kg组、PD-1抗体、5mg/kg组和联用组的瘤块重量分别为0.2550±0.0159(P＜0.01)、0.1820±0.0178(P＜0.001)和0.1102±0.0106(P＜0.001)g；IR分别为27.19％、48.05％和65.36％；
4、对肿瘤体积，RTV值以及瘤块重量进行分析，与TIM-3抗体、30mg/kg组相比，联合组抑制肿瘤生长作用显著增强(P＜0.001)；与PD-1抗体、5mg/kg组相比，联合组抑制肿瘤生长作用显著增强(P＜0.05)。
表8：抗体对小鼠结肠癌MC38皮下移植瘤的作用
与组1相比，*：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001。与组2相比，###：P＜0.001。与组3相比，△：P＜0.05
表9：抗体对小鼠结肠癌MC38皮下移植瘤肿瘤重量的影响
与组1相比，*：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001。与组2相比，###：P＜0.001。与组3相比，△：P＜0.05，△△：P＜0.01，△△△：P＜0.001。
序列表
<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司
上海恒瑞医药有限公司
<120> TIM-3抗体在制备治疗肿瘤的药物中的用途
<130> 719057CPCT
<160> 82
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 430
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(430)
<223> TIM-3胞外区和hIgG1 Fc的融合蛋白
<400> 1
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln Asn Ala
20 25 30
Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu Val Pro
35 40 45
Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly Asn Val
50 55 60
Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser Arg Tyr
65 70 75 80
Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr Ile Glu
85 90 95
Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile Gln Ile
100 105 110
Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val Ile Lys
115 120 125
Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe Thr Ala
130 135 140
Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala Glu Thr
145 150 155 160
Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Asn Leu Thr Gln Ile Ser Thr
165 170 175
Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu Arg Asp
180 185 190
Ser Gly Ala Thr Ile Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
195 200 205
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
210 215 220
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
225 230 235 240
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
245 250 255
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
260 265 270
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
275 280 285
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
290 295 300
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
305 310 315 320
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
325 330 335
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
340 345 350
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
355 360 365
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
370 375 380
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
385 390 395 400
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
405 410 415
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
420 425 430
<210> 2
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(215)
<223> 带Flag标签和His标签的TIM-3胞外区
<400> 2
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln Asn Ala
20 25 30
Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu Val Pro
35 40 45
Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly Asn Val
50 55 60
Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser Arg Tyr
65 70 75 80
Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr Ile Glu
85 90 95
Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile Gln Ile
100 105 110
Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val Ile Lys
115 120 125
Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe Thr Ala
130 135 140
Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala Glu Thr
145 150 155 160
Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Asn Leu Thr Gln Ile Ser Thr
165 170 175
Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu Arg Asp
180 185 190
Ser Gly Ala Thr Ile Arg Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp
195 200 205
Lys His His His His His His
210 215
<210> 3
<211> 301
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<222> (1)..(301)
<223> TIM-3全长序列
<400> 3
Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu
35 40 45
Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly
50 55 60
Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser
65 70 75 80
Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile
100 105 110
Gln Ile Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val
115 120 125
Ile Lys Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe
130 135 140
Thr Ala Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala
145 150 155 160
Glu Thr Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Asn Leu Thr Gln Ile
165 170 175
Ser Thr Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu
180 185 190
Arg Asp Ser Gly Ala Thr Ile Arg Ile Gly Ile Tyr Ile Gly Ala Gly
195 200 205
Ile Cys Ala Gly Leu Ala Leu Ala Leu Ile Phe Gly Ala Leu Ile Phe
210 215 220
Lys Trp Tyr Ser His Ser Lys Glu Lys Ile Gln Asn Leu Ser Leu Ile
225 230 235 240
Ser Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Gly Leu Ala Asn Ala Val Ala Glu
245 250 255
Gly Ile Arg Ser Glu Glu Asn Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Asn Val Tyr
260 265 270
Glu Val Glu Glu Pro Asn Glu Tyr Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Arg Gln
275 280 285
Gln Pro Ser Gln Pro Leu Gly Cys Arg Phe Ala Met Pro
290 295 300
<210> 4
<211> 121
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> mAb-1701抗体重链可变区
<400> 4
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ala
115 120
<210> 5
<211> 107
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> mAb-1701抗体轻链可变区
<400> 5
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Gln Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Pro Ile Gly Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Ser Phe Lys Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 6
<211> 122
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(122)
<223> mAb-1799抗体重链可变区
<400> 6
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Glu Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Val Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ile Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly Tyr Tyr Gly Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 7
<211> 107
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> mAb-1799抗体轻链可变区
<400> 7
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(5)
<223> mAb-1701抗体重链的HCDR1
<400> 8
Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> mAb-1701抗体重链的HCDR2
<400> 9
Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 10
<211> 12
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(12)
<223> mAb-1701抗体重链的HCDR3
<400> 10
Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(11)
<223> mAb-1701抗体轻链的LCDR1
<400> 11
Leu Ala Ser Gln Pro Ile Gly Ile Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 12
<211> 7
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(7)
<223> mAb-1701抗体轻链的LCDR2
<400> 12
Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(9)
<223> mAb-1701抗体轻链的LCDR3
<400> 13
Gln Gln Leu Tyr Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(5)
<223> mAb-1799抗体重链的HCDR1
<400> 14
Asp Tyr Tyr Met Ala
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> mAb-1799抗体重链的HCDR2
<400> 15
Asn Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 16
<211> 13
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(13)
<223> mAb-1799抗体重链的HCDR3
<400> 16
Asp Val Gly Tyr Tyr Gly Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(11)
<223> mAb-1799抗体轻链的LCDR1
<400> 17
Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(7)
<223> mAb-1799抗体轻链的LCDR2
<400> 18
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(9)
<223> mAb-1799抗体轻链的LCDR3
<400> 19
Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu Thr
1 5
<210> 20
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> 鼠源抗体mAb-1701号的人源化重链可变区
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 21
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> 鼠源抗体mAb-1701号的人源化轻链可变区
<400> 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Pro Ile Gly Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 22
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701_VH.1
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 23
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701h1701_VH.1A
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 24
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701_VH.1B
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 25
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701_VH.1C
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701_VH.1D
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701_VH.1E
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701_VH.1F
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Asp Ile Ile Pro Asn Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> h1701_VL.1
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Pro Ile Gly Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 30
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> h1701_VL.1A
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Pro Ile Gly Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(122)
<223> h1799VH-CDR graft
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly Tyr Tyr Gly Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 32
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> h1799VL-CDR graft
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(122)
<223> h1799_VH.1
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly Tyr Tyr Gly Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(122)
<223> h1799_VH.1A
<400> 34
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly Tyr Tyr Gly Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 35
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(122)
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<400> 35
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly Tyr Tyr Gly Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<221> DOMAIN
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> h1799_VL.1A
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
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<400> 39
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
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<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(327)
<223> 重链恒定区
<400> 41
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> 轻链恒定区
<400> 42
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 43
Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 44
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (54)..(54)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (55)..(55)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (56)..(56)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 45
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (54)..(54)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (55)..(55)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (56)..(56)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 46
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (54)..(54)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (55)..(55)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (56)..(56)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 47
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (54)..(54)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (55)..(55)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (56)..(56)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 48
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (54)..(54)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (55)..(55)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (56)..(56)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 49
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (54)..(54)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (55)..(55)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (56)..(56)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (54)..(54)
<223> Xaa可以是Asn, Leu, Val, Met或Glu
<220>
<221> DOMAIN
<222> (55)..(55)
<223> Xaa可以是Asn, Glu, Met, His, Lys, Leu, Ala或Val
<220>
<221> DOMAIN
<222> (56)..(56)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Asp Ile Ile Pro Xaa Xaa Xaa Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NLG重链可变区
<400> 51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Leu Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NVG重链可变区
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Val Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 53
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NNA重链可变区
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Asn Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 54
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NMA重链可变区
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Met Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 55
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NEA重链可变区
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Glu Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 56
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NHA重链可变区
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn His Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 57
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NMG重链可变区
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Met Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 58
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NEG重链可变区
<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Glu Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 59
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NKG重链可变区
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Lys Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 60
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NAG重链可变区
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn Ala Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 61
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(121)
<223> h1701-009NHG重链可变区
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Ile Pro Asn His Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Arg Trp Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NLG的HCDR2
<400> 62
Asp Ile Ile Pro Asn Leu Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NVG的HCDR2
<400> 63
Asp Ile Ile Pro Asn Val Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NNA的HCDR2
<400> 64
Asp Ile Ile Pro Asn Asn Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 65
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NMA的HCDR2
<400> 65
Asp Ile Ile Pro Asn Met Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NEA的HCDR2
<400> 66
Asp Ile Ile Pro Asn Glu Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 67
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NHA的HCDR2
<400> 67
Asp Ile Ile Pro Asn His Ala Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NMG的HCDR2
<400> 68
Asp Ile Ile Pro Asn Met Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NEG的HCDR2
<400> 69
Asp Ile Ile Pro Asn Glu Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NKG的HCDR2
<400> 70
Asp Ile Ile Pro Asn Lys Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NAG的HCDR2
<400> 71
Asp Ile Ile Pro Asn Ala Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> h1701-009NHG的HCDR2
<400> 72
Asp Ile Ile Pro Asn His Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 73
<211> 5
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(5)
<223> 抗PD-1抗体的HCDR1
<400> 73
Ser Tyr Met Met Ser
1 5
<210> 74
<211> 17
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(17)
<223> 抗PD-1抗体的HCDR2
<400> 74
Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 75
<211> 7
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(7)
<223> 抗PD-1抗体的HCDR3
<400> 75
Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(11)
<223> 抗PD-1抗体的LCDR1
<400> 76
Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Thr
1 5 10
<210> 77
<211> 7
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(7)
<223> 抗PD-1抗体的LCDR2
<400> 77
Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(9)
<223> 抗PD-1抗体的LCDR3
<400> 78
Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp Thr
1 5
<210> 79
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<222> (1)..(443)
<223> 人源化抗PD-1抗体的重链
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 80
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<222> (1)..(214)
<223> 人源化抗PD-1抗体的轻链
<400> 80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 81
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(116)
<223> 人源化抗PD-1抗体重链可变区
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(107)
<223> 人源化抗PD-1抗体轻链可变区
<400> 82
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

Claims (37)

1.一种TIM-3抗体或其抗原结合片段在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的用途，其中所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段的抗体重链可变区包含分别如SEQ ID NO：14、15和16氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和抗体轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：17、18和19氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或其抗原结合片段。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的人源化抗体包含分别来源于人种系轻链和重链或其突变序列的轻链和重链FR区序列。
4.根据权利要求2所述的用途，其中所述的人源化抗体含有SEQ ID NO:31所示的重链可变区或其变体，所述的人源化抗体含有SEQ ID NO:32所示的轻链可变区或其变体。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述重链可变区的变体在SEQ ID NO:31所示的重链可变区序列上具有1-10个氨基酸变化，所述轻链可变区的变体在SEQ ID NO:32所示的轻链可变区上具有1-10个氨基酸变化的序列。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述重链可变区的变体在SEQ ID NO:31所示的重链可变区序列上具有Q3K和R87K的氨基酸回复突变，所述轻链可变区的变体在SEQ ID NO:32所示的轻链可变区上具有Q3K和I48V、K45Q、A43S或T85S的氨基酸回复突变。
7.根据权利要求2所述的用途，其中所述的人源化抗体包含如SEQ ID NO:33所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:36所示的轻链可变区。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的用途，其中所述TIM-3抗体为全长抗体，包括人抗体恒定区。
9.根据权利要求8所述的用途，其中，所述TIM-3抗体包含SEQ ID NO:41所示的人重链恒定区和包含SEQ ID NO:42所示的人轻链恒定区。
10.根据权利要求1-7中任一项所述的用途，其中所述TIM-3抗体的抗原结合片段是选自Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽的抗原结合片段。
11.一种TIM-3抗体或其抗原结合片段联合抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备治疗肿瘤的药物中的用途；
其中所述TIM-3抗体或其抗原结合片段的抗体重链可变区包含分别如SEQ ID NO：14、15和16氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和抗体轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：17、18和19氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:76、SEQ IDNO:77和SEQ ID NO:78所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，重链可变区包含分别如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
所述肿瘤为乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、肾癌、黑素瘤或非小细胞肺癌。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或其抗原结合片段。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述人源化抗体包含分别来源于人种系轻链和重链或其突变序列的轻链和重链FR区序列。
14.根据权利要求12所述的用途，其中所述的人源化抗体含有SEQ ID NO:31所示的重链可变区或其变体，所述的人源化抗体含有SEQ ID NO:32所示的轻链可变区或其变体。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述重链可变区的变体在SEQ ID NO:31所示的重链可变区序列上具有1-10个氨基酸变化，所述轻链可变区的变体在SEQ ID NO:32所示的轻链可变区上具有1-10个氨基酸变化的序列。
16.根据权利要求15所述的用途，其中所述重链可变区的变体在SEQ ID NO:31所示的重链可变区序列上具有Q3K和R87K的氨基酸回复突变，所述轻链可变区的变体在SEQ IDNO:32所示的轻链可变区上具有Q3K和I48V、K45Q、A43S或T85S的氨基酸回复突变。
17.根据权利要求12所述的用途，其中所述的人源化抗体包含如SEQ ID NO:33所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:36所示的轻链可变区。
18.根据权利要求11所述的用途，其中所述TIM-3抗体为全长抗体，包括人抗体恒定区。
19.根据权利要求18所述的用途，其中所述TIM-3抗体为全长抗体，包含SEQ ID NO:41所示的人重链恒定区和包含SEQ ID NO:42所示的人轻链恒定区。
20.根据权利要求11所述的用途，其中所述TIM-3抗体的抗原结合片段是选自Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽的抗原结合片段。
21.根据权利要求11所述的用途，其中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自人源化抗体或其片段。
22.根据权利要求11所述的用途，其中所述抗PD-1抗体的抗原结合片段选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段组成的抗体片段。
23.根据权利要求21所述的用途，其中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的重链恒定区。
24.根据权利要求23所述的用途，其中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。
25.根据权利要求23所述的用途，其中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含κ或λ的轻链恒定区。
26.根据权利要求21所述的用途，其中所述抗PD-1抗体包含如SEQ ID NO:82所示的轻链可变区或其变体，所述抗PD-1抗体包含如SEQ ID NO:81所示的重链可变区或其变体。
27.根据权利要求26所述的用途，其中所述轻链可变区的变体在SEQ ID NO:82所示的轻链可变区有0-10的氨基酸变化，所述重链可变区的变体在SEQ ID NO:81所示的重链可变区有0-10的氨基酸变化。
28.根据权利要求27所述的用途，其中所述轻链可变区的变体在SEQ IDNO:82所示的轻链可变区有A43S的氨基酸变化，所述重链可变区的变体在SEQ ID NO:81所示的重链可变区有G44R的氨基酸变化。
29.根据权利要求21所述的用途，其中所述抗PD-1抗体包含如SEQ ID NO:80所示的轻链或其变体，所述抗PD-1抗体包含如SEQ ID NO:79所示的重链或其变体。
30.根据权利要求29所述的用途，其中所述轻链的变体在SEQ ID NO:80所示的轻链有0-10的氨基酸变化，所述重链的变体在SEQ ID NO:79所示的重链有0-10的氨基酸变化。
31.根据权利要求30所述的用途，其中所述轻链的变体在SEQ ID NO:80所示的轻链有A43S的氨基酸变化，所述重链的变体在SEQ ID NO:79所示的重链有G44R的氨基酸变化。
32.根据权利要求21所述的用途，其中所述抗PD-1抗体包含如SEQ ID NO:80所示的轻链和如SEQ ID NO:79所示的重链。
33.根据权利要求11所述的用途，其中所述肿瘤为非小细胞肺癌、乳腺癌、黑素瘤、肝癌、结直肠癌或肾癌。
34.根据权利要求33所述的用途，其中所述肿瘤为结直肠癌或非小细胞肺癌。
35.权利要求1或11所述的用途，其中所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为0.1～10.0mg/kg。
36.根据权利要求11所述的用途，其中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为0.1～20.0mg/kg。
37.一种药物组合，其包含抗TIM-3抗体或其抗原结合片段和抗PD-1抗体或其抗原结合片段；其中所述的TIM-3抗体或其抗原结合片段的抗体重链可变区包含分别如SEQ ID NO：14、15和16氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和抗体轻链可变区包含分别如SEQ IDNO：17、18和19氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:76、SEQ IDNO:77和SEQ ID NO:78所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，重链可变区包含分别如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
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