CN111394371B

CN111394371B - 飞蝗V-ATPase-V1结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用

Info

Publication number: CN111394371B
Application number: CN202010249056.6A
Authority: CN
Inventors: 刘晓健; 梁晓宇; 史学凯; 张建珍
Original assignee: Shanxi University
Current assignee: Shanxi University
Priority date: 2020-03-31
Filing date: 2020-03-31
Publication date: 2022-01-28
Anticipated expiration: 2040-03-31
Also published as: CN111394371A

Abstract

本发明公开了飞蝗V‑ATPase‑V1结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用，飞蝗V‑ATPase‑V1结构域基因包括飞蝗V‑ATPase‑A、V‑ATPase‑B、V‑ATPase‑C、V‑ATPase‑D、V‑ATPase‑E、V‑ATPase‑F和V‑ATPase‑G基因，通过生物信息学方法，从飞蝗转录组数据库中获取V‑ATPase‑A至V‑ATPase‑G基因，分别对其进行克隆测序后获得各基因全长cDNA序列；基于上述各基因序列，通过PCR方法分别获得V‑ATPase‑A至V‑ATPase‑G基因片段，并合成对应的dsRNA，分别将合成的dsRNA注射进入飞蝗体腔后可以特异性沉默靶标基因，从而使飞蝗生长发育受阻导致死亡，致死率达到60.3％‑93.7％。由于本发明的特异性及高效的致死率，对于害虫防治具有重要意义，为害虫防治提供新的途径。

Description

飞蝗V-ATPase-V1结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术及农业害虫防治领域，具体涉及飞蝗V-ATPase-V1结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用。

背景技术

飞蝗Locusta migratoria，是一种洲际性的农业害虫，主要分布于亚、欧、非、澳四大洲。它具有暴发性、群集性和迁飞性的特点，一旦发生，不仅涉及面广，而且来势凶猛，致灾严重。目前在蝗虫防治工作中，仍以化学杀虫剂为主要手段，化学杀虫剂的大量使用，不仅容易导致昆虫产生抗药性，并且给生态环境带来严重污染，对人类的健康也构成威胁，因此研发绿色新型农药对我国防治蝗虫工作具有重要意义。

RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA分子引起的特异性转录后基因沉默的现象，自2006年获得诺贝尔奖以来，RNAi技术一直跻身于科技前沿。RNAi不仅是研究基因功能的有力工具，同时在害虫防治方面也具有极大潜力。通过RNAi进行害虫防治具有如下特点：1)杀虫具有专一性，对非靶标生物无杀伤作用；2)RNA在自然界极易降解，无残留；3)对环境无毒无害，相对安全。目前国际上已将RNAi技术称为第四代杀虫剂核心技术。由美国孟山都公司研发的表达玉米根叶甲Snf7基因dsRNA的RNAi转基因玉米(MON87411)已经获得美国农业部(USDA)和环保署(EPA)批准，即将开展商业化应用。实验表明这种转基因玉米不仅可以有效杀死玉米根甲虫且对蜜蜂等非靶标生物没有明显毒性作用。筛选和鉴定对害虫生长发育至关重要的基因是应用RNAi技术开发新型杀虫剂的关键环节，因为不是所有的dsRNA都能有效的沉默靶基因的表达，也不是所有的dsRNA都能杀死害虫。

V-ATPase(Vacuolar-type ATPase)，一种H⁺通道蛋白，其广泛存在于原核和真核生物的内涵体、溶酶体等多种细胞器膜及某些特殊细胞的质膜上，调节细胞内外环境的pH，对维持生物体正常生命活动至关重要。V-ATPase是一类高度保守的复合酶，由胞外的V1结构域和跨膜的V0结构域组装而成，其中，V1结构域由A、B、C、D、E、F、G、H大亚基组成，负责ATP的水解；V0结构域由a,c,c',c",d,e组成(c'存在于酵母细胞中)，行使质子转运功能。目前未见针对飞蝗V-ATPase-V1结构域基因(V-ATPase-A、V-ATPase-B、V-ATPase-C、V-ATPase-D、V-ATPase-E、V-ATPase-F和V-ATPase-G)的相关研究。本发明首次证实分别注射上述飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA至3龄若虫后出现60.3％-93.7％致死现象。因此，V-ATPase-V1结构域基因可作为基于RNAi的害虫防治技术的高致死靶标基因。

发明内容

针对上述现有技术现状，本发明的目的是提供飞蝗V-ATPase-V1结构域基因、基因片段及其dsRNA在致死飞蝗中的应用。

本发明提供飞蝗V-ATPase-V1结构域基因，包括以下基因：

飞蝗V-ATPase-A基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，核苷酸长度为1848bp；氨基酸序列为SEQ ID NO：2，序列长度为615个氨基酸；

蝗V-ATPase-B基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：6，核苷酸长度为1503bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：7，序列长度为500个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-C基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：11，核苷酸长度为1158bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：12，序列长度为385个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-D基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：16，核苷酸长度为753bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：17，序列长度为250个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-E基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：21，核苷酸长度为684bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：22，序列长度为227个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-F基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：26，核苷酸长度为372bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：27，序列长度为123个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-F基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：31，核苷酸长度为357bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：32，序列长度为118个氨基酸。

本发明提供的一种飞蝗V-ATPase-V1结构域基因片段，包括以下基因片段：

V-ATPase-A基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：3；

V-ATPase-B基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：8；

V-ATPase-C基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：13；

V-ATPase-D基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：18；

V-ATPase-E基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：23；

V-ATPase-F基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：28；

V-ATPase-G基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：33。

本发明提供的一种飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA，包括以下dsRNA：

由飞蝗V-ATPase-A基因片段SEQ ID NO：3合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-B基因片段SEQ ID NO：8合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-C基因片段SEQ ID NO：13合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-D基因片段SEQ ID NO：18合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-E基因片段SEQ ID NO：23合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-F基因片段SEQ ID NO：28合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-G基因片段SEQ ID NO：33合成的dsRNA。

本发明提供飞蝗V-ATPase-V1结构域基因dsRNA在害虫防治中的应用，基于飞蝗V-ATPase-V1结构域中包含的飞蝗V-ATPase-A、V-ATPase-B、V-ATPase-C、V-ATPase-D、V-ATPase-E、V-ATPase-F和V-ATPase-G基因，对于其中每一个基因，通过primer premier 5.0软件设计针对该基因的含有T7启动子的上游引物和下游引物，通过PCR扩增获得两端为T7启动子的DNA模板。按照HiScribe^TM T7 High Yield RNA Synthesis Kit(NEW ENGLAND

Inc.)试剂盒说明体外转录合成相应的dsRNA。通过微量注射器分别将每一个合成的dsRNA注射进入3龄飞蝗体腔内。结果表明：

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-A基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致79.7％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-B基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致85.7％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-C基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致69.8％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-D基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致90.4％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-E基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致93.7％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-F基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致77.8％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-G基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致60.3％的死亡。

其中，在飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA的合成中，基于不同的基因，设计的上游引物和下游引物如下所示：

飞蝗V-ATPase-A基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；

飞蝗V-ATPase-B基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；

飞蝗V-ATPase-C基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15；

飞蝗V-ATPase-D基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20；

飞蝗V-ATPase-E基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25；

飞蝗V-ATPase-F基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30；

飞蝗V-ATPase-G基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：35。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1、由于本发明的飞蝗V-ATPase-V1结构域基因片段合成的dsRNA特异性及高效的致死率，对于害虫防治具有重要的现实意义，可以为害虫防治提供新的途径。

2、本发明的dsRNA易于合成，方便制备成喷洒式杀虫剂或饵剂，具有较好的推广应用价值。

附图说明

图1为注射V-ATPase-A基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-A)至3龄飞蝗后对V-ATPase-A基因mRNA表达的影响；dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-A为处理组，β-actin为内参基因。其中***P<0.001。

图2为注射V-ATPase-A基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-A)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响；左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：3合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-A的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡；3为处理组飞蝗4龄蜕5龄前1-2天死亡；4为处理组飞蝗4龄蜕5龄时旧表皮无法蜕掉死亡。

图3为注射V-ATPase-B基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-B)至3龄飞蝗后对V-ATPase-B基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-B为处理组，β-actin为内参基因。其中**P<0.01。

图4为注射V-ATPase-B基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-B)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：8合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-B的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时前1-2天死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时，旧表皮紧裹虫体无法蜕掉死亡；3为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡。

图5为注射V-ATPase-C基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-C)至3龄飞蝗后对V-ATPase-C基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-C为处理组，β-actin为内参基因。其中***P<0.001。

图6为注射V-ATPase-C基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-C)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：13合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-C的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡。

图7为注射V-ATPase-D基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-D)至3龄飞蝗后对V-ATPase-D基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-C为处理组，β-actin为内参基因。其中**P<0.01。

图8为注射V-ATPase-D基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-D)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：18合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-D的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时无法顺利蜕掉旧表皮死亡。3为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡。

图9为注射V-ATPase-E基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-E)至3龄飞蝗后对V-ATPase-E基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-E为处理组，β-actin为内参基因。其中***P<0.001。

图10为注射V-ATPase-E基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-E)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：23合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-E的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡。

图11为注射V-ATPase-F基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-F)至3龄飞蝗后对V-ATPase-F基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-F为处理组，β-actin为内参基因。其中**P<0.01。

图12为注射V-ATPase-F基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-F)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：28合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-F的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时无法顺利蜕掉旧表皮并死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡。

图13为注射V-ATPase-G基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-G)至3龄飞蝗后对V-ATPase-G基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-G为处理组，β-actin为内参基因。其中***P<0.001。

图14为注射V-ATPase-G基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-G)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：33合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-G的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时无法顺利蜕掉旧表皮死亡。

具体实施方式

下面结合附图并通过具体实施例来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述具体实施方式仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

飞蝗V-ATPase-V1结构域基因，包括以下基因：

飞蝗V-ATPase-A基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1；

飞蝗V-ATPase-B基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：6；

飞蝗V-ATPase-C基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：11；

飞蝗V-ATPase-D基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：16；

飞蝗V-ATPase-E基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：21；

飞蝗V-ATPase-F基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：26；

飞蝗V-ATPase-G基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：31。

实施例1：飞蝗V-ATPase-V1结构域中各基因及基因片段的获得

1)飞蝗V-ATPase-V1结构域中各基因的获得

飞蝗V-ATPase-V1结构域基因包括飞蝗V-ATPase-A、飞蝗V-ATPase-B、飞蝗V-ATPase-C、飞蝗V-ATPase-D、飞蝗V-ATPase-E、飞蝗V-ATPase-F和飞蝗V-ATPase-G共7个基因。

基于飞蝗的转录组数据库，采用生物信息学方法对飞蝗V-ATPase-A、飞蝗V-ATPase-B、飞蝗V-ATPase-C、飞蝗V-ATPase-D、飞蝗V-ATPase-E、飞蝗V-ATPase-F和飞蝗V-ATPase-G基因进行搜索，获得飞蝗V-ATPase-A基因(LmV-ATPase-A)序列，飞蝗V-ATPase-B基因(LmV-ATPase-B)序列，飞蝗V-ATPase-C基因(LmV-ATPase-C)序列，飞蝗V-ATPase-D基因(LmV-ATPase-D)序列，飞蝗V-ATPase-E基因(LmV-ATPase-E)序列，飞蝗V-ATPase-F基因(LmV-ATPase-F)序列，飞蝗V-ATPase-G基因(LmV-ATPase-G)序列。

采用primer premier 5.0软件分别设计各自的上下游引物用于验证上述获得的各序列，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。选取生长健康，大小一致雌雄各半的3龄飞蝗若虫4头，在体式显微镜下将其体壁快速解剖下来，并冷冻于液氮中。依照TaKaRaRNAiso Plus试剂盒提取RNA，采用Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)试剂按照说明书将所提RNA反转录成第一链cDNA，以此cDNA为模板，结合设计的各个基因的上下游引物，通过PCR扩增LmV-ATPase-A基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-B基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-C基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-D基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-E基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-F基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-G基因cDNA全长序列。将得到的各个产物分别进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，并送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，结果为：

飞蝗V-ATPase-A基因序列为SEQ ID NO：1，核苷酸长度为1848bp；

飞蝗V-ATPase-B基因序列为SEQ ID NO：6，核苷酸长度为1503bp；

飞蝗V-ATPase-C基因序列为SEQ ID NO：11，核苷酸长度为1158bp；

飞蝗V-ATPase-D基因序列为SEQ ID NO：16，核苷酸长度为753bp；

飞蝗V-ATPase-E基因序列为SEQ ID NO：21，核苷酸长度为684bp；

飞蝗V-ATPase-F基因序列为SEQ ID NO：26，核苷酸长度为372bp；

飞蝗V-ATPase-G基因序列为SEQ ID NO：31，核苷酸长度为357bp。

2)飞蝗V-ATPase-V1结构域中各基因的氨基酸序列分析

通过ExPaSy在线软件分别对已获LmV-ATPase-A、LmV-ATPase-B、LmV-ATPase-C、LmV-ATPase-D、LmV-ATPase-E、LmV-ATPase-F、LmV-ATPase-G基因的核苷酸序列进行翻译，预测各基因的开放阅读框编码、分子量和等电点，结果如下：

LmV-ATPase-A基因的开放阅读框编码615个氨基酸，分子量为58KDa，等电点为5.11；

LmV-ATPase-B基因的开放阅读框编码500个氨基酸，分子量为55.6KDa，等电点为5.33；

LmV-ATPase-C基因的开放阅读框编码385个氨基酸，分子量为44.4KDa，等电点为8.16；

LmV-ATPase-D基因的开放阅读框编码250个氨基酸，分子量为28KDa，等电点为9.63；

LmV-ATPase-E基因的开放阅读框编码227个氨基酸，分子量为28KDa，等电点为8.51；

LmV-ATPase-F基因的开放阅读框编码123个氨基酸，分子量为13.8KDa，等电点为5.92；

LmV-ATPase-G基因的开放阅读框编码118个氨基酸，分子量为14KDa，等电点为9.66。

3)飞蝗V-ATPase-V1结构域中各基因片段的获得

根据SEQ ID NO：1的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：4，下游引物序列为SEQ ID NO：5，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：1的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-A基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：3。

根据SEQ ID NO：6的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：9，下游引物序列为SEQ ID NO：10，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：6的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-B基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：8。

根据SEQ ID NO：11的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：14，下游引物序列为SEQ ID NO：15，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：11的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-C基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：13。

根据SEQ ID NO：16的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：19，下游引物序列为SEQ ID NO：20，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：16的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-A基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：18。

根据SEQ ID NO：21的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：24，下游引物序列为SEQ ID NO：25，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：21的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-A基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：23。

根据SEQ ID NO：26的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：29，下游引物序列为SEQ ID NO：30，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：26的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-A基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：28。

根据SEQ ID NO：31的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：34，下游引物序列为SEQ ID NO：35，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：31的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-A基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：33。

实施例2：飞蝗V-ATPase-V1结构域中各基因特异性dsRNA合成

分别以实施例1中获得的SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：33的基因片段为模板，经Gel ExtractionKit(OMEGA)试剂盒纯化后按照HiScribe^TM T7 High Yield RNA Synthesis Kit(NEWENGLAND

Inc.)试剂盒说明体外转录合成相应的dsRNA。使用NANODROP 2000(Thermo scientific)进行定量，使其终浓度达到2μg/μL。保存于-80℃超级低温冰箱备用。

实施例3：飞蝗V-ATPase-V1结构域中各基因dsRNA致死飞蝗实验

1)飞蝗V-ATPase-V1结构域各基因dsRNA的注射

选取生长健康、大小一致共72头3龄第1天若虫进行LmV-ATPase-A基因dsRNA(dsLmV-ATPase-A)的注射。将合成的dsLmV-ATPase-A使用微量注射器将3μL(6μg dsLmV-ATPase-A)轻轻注射进入若虫侧腹部的二、三腹节之间。同时注射相同量的dsGFP至对照组。将注射dsRNA后飞蝗置于人工气候箱中饲养(光照：黑暗时间＝14h:10h，温度30±2℃，湿度60％)，每天饲喂新鲜小麦幼苗和麦麸。

V-ATPase-B基因dsRNA(dsLmV-ATPase-B)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-A基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-C基因dsRNA(dsLmV-ATPase-C)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-A基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-D基因dsRNA(dsLmV-ATPase-D)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-A基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-E基因dsRNA(dsLmV-ATPase-E)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-A基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-F基因dsRNA(dsLmV-ATPase-F)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-A基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-G基因dsRNA(dsLmV-ATPase-G)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-A基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

2)飞蝗V-ATPase-V1结构域各基因沉默效率检测

分别收集注射dsGFP的对照组和注射dsLmV-ATPase-A、dsLmV-ATPase-B、dsLmV-ATPase-C、dsLmV-ATPase-D、dsLmV-ATPase-E、dsLmV-ATPase-F和dsLmV-ATPase-G的处理组24h这一时间点的若虫进行总RNA提取，对照和注射V-ATPase-V1结构域各基因dsRNA组均为3个生物学重复，每个生物学重复3头试虫，并反转录成第一链cDNA，采用RT-qPCR方法分别检测各个靶标基因(LmV-ATPase-A、LmV-ATPase-B、dsLmV-ATPase-C、LmV-ATPase-D、LmV-ATPase-E、LmV-ATPase-F和LmV-ATPase-G)和内参基因(β-actin)的相对表达量，从而对其沉默效率进行计算。RT-qPCR反应体系及程序参考

Green Realtime PCR MasterMix(TOYOBO)说明书。结果表明，与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-A组试虫LmV-ATPase-A基因表达显著降低，***P<0.001(图1)，注射dsLmV-ATPase-B组试虫LmV-ATPase-B基因表达显著降低，**P<0.01(图3)，注射dsLmV-ATPase-C组试虫LmV-ATPase-C基因表达显著降低，***P<0.001(图5)，注射dsLmV-ATPase-D组试虫LmV-ATPase-D基因表达显著降低，***P<0.001(图7)，注射dsLmV-ATPase-E组试虫LmV-ATPase-E基因表达显著降低，***P<0.001(图9)，注射dsLmV-ATPase-F组试虫LmV-ATPase-F基因表达显著降低，***P<0.001(图11)、注射dsLmV-ATPase-G组试虫LmV-ATPase-G基因表达显著降低，***P<0.001(图13)。

3)注射V-ATPase-V1结构域各基因dsRNA后3龄若虫表型观察

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-A后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-A后飞蝗，死亡率达到79.7％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡。3为处理组飞蝗4龄蜕5龄前1-2天死亡；4为处理组飞蝗4龄蜕5龄时旧表皮无法蜕掉并死亡，结果如图2所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-B后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-B后飞蝗，死亡率达到85.7％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时，旧表皮紧裹虫体无法蜕掉死亡。3为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡，结果如图4所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-C后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-C后飞蝗，死亡率达到69.8％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂无法顺利蜕皮并死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡，结果如图6所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-D后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-D后飞蝗，死亡率达到90.4％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时无法顺利蜕掉旧表皮死亡。3为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡，结果如图8所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-E后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-E后飞蝗，死亡率达到93.5％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡，结果如图10所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-F后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-F后飞蝗，死亡率达到77.8％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄时无法顺利蜕掉旧表皮并死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡，结果如图12所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-G后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-G后飞蝗，死亡率达到60.3％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时无法顺利蜕掉旧表皮死亡，结果如图14所示。

综上所述，飞蝗V-ATPase-V1结构域基因片段包括的飞蝗V-ATPase-A、飞蝗V-ATPase-B、飞蝗V-ATPase-C、飞蝗V-ATPase-D、飞蝗V-ATPase-E、飞蝗V-ATPase-F、飞蝗V-ATPase-G的基因片段，由各基因片段合成的dsRNA，分别注射进入飞蝗体腔后可以特异性沉默靶标基因，从而使飞蝗生长发育受阻导致死亡，致死率达到60.3％-93.7％。因此，飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA应用于飞蝗防治中，具体实现方法为：将所述dsRNA制备成喷洒式杀虫剂，或者dsRNA制备成饵剂，或者将dsRNA转入飞蝗摄食植物体。任选其中一种或几种dsRNA制备成喷洒式杀虫剂或饵剂，或者将dsRNA转入飞蝗摄食植物体，应用于飞蝗防治中。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

LmV-ATPase-A SEQ ID NO：1

atgacgagcacattgataaagacgtccgatgaggaccgggagtccaaattcggctttgtttttgccgtatctggacctgtggtgacagctgaacgaatggccggttctgctatgtacgaactggtgcgtgtcggttattatgaactggtcggagagatcatccggttggagggtgacatggcaacaatccaagtatacgaagacacctcaggtgtgacagtaggcgatcccgtgctgcgcacaggcaagccgctgtccgtggaactgggacccggaatcatgggcagcatcttcgacggtatccagcgaccgctgaaggatatcaatgaactgtcaaatagtatctacatcccgaaaggtgtcaatgtgcctgccctgagtcgcactgcacagtgggacttcagtcccgtcagtgtcaaggttggaagccacattactggtggtgacctgtacggtttggtccacgaaaatactctggtgaaacacaagttgctgctgccgccccgtgccaagggaactgtcacgtacattgcagaacctggaaactacacagttgatgatgttgtcctggagacagaatttgacggcgagcgatcaaagttcaccatgctgcaagtgtggcctgtacgtcagcccaggcctgttacagaaaagttgccagctaactaccccctccttactggccagcgtgtgctcgactccctattcccgtgtgtccagggtggaacaacagctattcctggggccttcggatgtggcaagactgtaatatcacagtctttgtcaaaatactcaaactccgatgtaattatctatgtaggttgtggtgagcgaggtaatgaaatgtcagaagtactcagggatttccccgagttgtcggtggagattgatggtgtgactgaatcaatcatgaagagaacagccctggtcgcaaacacatcaaacatgcctgtggctgctcgagaagcatctatctacacaggtattacactgtcagaatacttcagggacatgggttacaatgtatccatgatggctgactcaacttcacgatgggccgaagctcttcgagaaatctcaggtcgattggctgaaatgcctgccgacagcggttatcccgcctacctaggtgcacgacttgccagtttctacgagcgtgccggccgtgtgaagtgcttgggtaacccagacagggagggctccgtgagtatagtgggcgccgtgtcgccgcccggtggagacttctcagatcccgtgacgacggccacactaggtatcgtccaggtgttctggggtctcgacaagaaacttgcccagcgaaagcacttcccatccatcaactggctcatctcgtacagtaaatacatgcgtgctctggatgacttctacgacaagaatttcccagagtttgtcccactgcgtacaaaggtgaaggagattttgcaggaggaagaagacctgtctgaaattgtgcagttggtcggtaaagcttcattggcagaaactgacaagatcacacttgaggttgccaaactattaaaggatgatttcctgcaacagaacagctattcaccatatgaccgtttctgcccattctacaagacagtaggaatgctgaaaaatatgattgctttctacgatatgtctcggcatgcagttgaatctactgctcagagcgagaacaagatcacttggaatgttattagagattctatgggcaatattctgtatcagctttcctccatgaaattcaaggatccagtcaaggatggagaagcgaagatcaaggcagactttgagcagcttcatgaagacattcagcaagccttcaggaacctggaggattaa

LmV-ATPase-A SEQ ID NO：2

MTSTLIKTSDEDRESKFGFVFAVSGPVVTAERMAGSAMYELVRVGYYELVGEIIRLEGDMATIQVYEDTSGVTVGDPVLRTGKPLSVELGPGIMGSIFDGIQRPLKDINELSNSIYIPKGVNVPALSRTAQWDFSPVSVKVGSHITGGDLYGLVHENTLVKHKLLLPPRAKGTVTYIAEPGNYTVDDVVLETEFDGERSKFTMLQVWPVRQPRPVTEKLPANYPLLTGQRVLDSLFPCVQGGTTAIPGAFGCGKTVISQSLSKYSNSDVIIYVGCGERGNEMSEVLRDFPELSVEIDGVTESIMKRTALVANTSNMPVAAREASIYTGITLSEYFRDMGYNVSMMADSTSRWAEALREISGRLAEMPADSGYPAYLGARLASFYERAGRVKCLGNPDREGSVSIVGAVSPPGGDFSDPVTTATLGIVQVFWGLDKKLAQRKHFPSINWLISYSKYMRALDDFYDKNFPEFVPLRTKVKEILQEEEDLSEIVQLVGKASLAETDKITLEVAKLLKDDFLQQNSYSPYDRFCPFYKTVGMLKNMIAFYDMSRHAVESTAQSENKITWNVIRDSMGNILYQLSSMKFKDPVKDGEAKIKADFEQLHEDIQQAFRNLED

LmV-ATPase-A SEQ ID NO：3

gcaaacacatcaaacatgcctgtggctgctcgagaagcatctatctacacaggtattacactgtcagaatacttcagggacatgggttacaatgtatccatgatggctgactcaacttcacgatgggccgaagctcttcgagaaatctcaggtcgattggctgaaatgcctgccgacagcggttatcccgcctacctaggtgcacgacttgccagtttctacgagcgtgccggccgtgtgaagtgcttgggtaacccagacagggagggctccgtgagtatagtgggcgccgtgtcgccgcccggtggagacttctcagatcccgtgacgacggccacactaggtatcgtccaggtgttctggggtctcgacaagaaacttgcccagcgaaagcacttcccatccatcaactggctcatctcgtacagtaaatacatgcgtgctctggatgacttctacgacaagaatttcccagagtttgtcccactgcgtacaaaggt

LmV-ATPase-A SEQ ID NO：4

taatacgactcactataggggcaaacacatcaaacatgcc

LmV-ATPase-A SEQ ID NO：5

taatacgactcactatagggacctttgtacgcagtgggac

LmV-ATPase-B SEQ ID NO：6

atgtcgtacaacaaagttataagtccaaatcaggcgaataaagaacatgttttggcagtttcaagagattttatatcccagcctcgtctaacatataaaactgtatctggtgtcaatggaccactagttattctcgacgaagttaagttcccaaagttcgctgaaattgttcagttgaaacttgcagatggaactatcagatcgggccaggtcttggaagtcagtggatctaaagctgttgtccaagtttttgaaggtacatcaggtatagacgccaaaaatacactatgtgaattcacaggagatattctgcggacaccagtgtcagaggatatgttgggcagagtattcaatgggagtgggaaacccattgacaaaggcccacctattttggctgaagattatcttgatattcagggtcaacctattaacccatggtctcgtatatatccggaagaaatgatccagacaggtatatctgccattgatgtgatgaattccattgcccgtgggcaaaagattccaatcttctctgctgctggcttgccacacaatgaaattgctgctcagatctgccgtcaagcaggacttgttaagcttccaggaaagtcagttttggatgatcatgaggataattttgctatcgtatttgcagctatgggtgttaacatggagacagctcgtttcttcaagcaggactttgaggaaaatggttctatggaaaacgtgtgtctgttcttgaacttggccaatgatccaaccattgaacgtatcatcacaccccggcttgcattgacagctgctgaattcctggcatatcaatgtgagaaacacgtattagtcattctcacagacatgagttcatatgctgaggctttgcgagaggtttcagctgctagggaggaagtaccagggcgaagaggattccctggttacatgtacacagatcttgccaccatctatgaaagagctgggagagtggaaggtcgaagtggttccattacacagattcccattctgactatgcccaatgatgacattacacatcctatcccagatctgacaggatacatcacagaaggtcaaatatatgtagaccgtcagttgcacaacaggcaaatatatcctccagtcaatgtattgccatcactcagtcgtctcatgaagtcggccattggtgaaaacatgactcgtaaggaccatgctgatgtatcaaaccagctgtacgcttgttacgctattgggaaagatgtgcaggccatgaaggctgttgttggtgaggaagctcttaccccagatgaccttctgtatctcgaattcctcacaaaatttgagaagaatttcatatctcaaggtaactatgagaaccgtaccgtatttgaatcattggatattggttggcaactgcttcgaattttcccgaaggagatgttgaagaggatcccagcatcaatacttgcagaattctatccacgtgactcaagacaccctcaaactaaatag

LmV-ATPase-B SEQ ID NO：7

MSYNKVISPNQANKEHVLAVSRDFISQPRLTYKTVSGVNGPLVILDEVKFPKFAEIVQLKLADGTIRSGQVLEVSGSKAVVQVFEGTSGIDAKNTLCEFTGDILRTPVSEDMLGRVFNGSGKPIDKGPPILAEDYLDIQGQPINPWSRIYPEEMIQTGISAIDVMNSIARGQKIPIFSAAGLPHNEIAAQICRQAGLVKLPGKSVLDDHEDNFAIVFAAMGVNMETARFFKQDFEENGSMENVCLFLNLANDPTIERIITPRLALTAAEFLAYQCEKHVLVILTDMSSYAEALREVSAAREEVPGRRGFPGYMYTDLATIYERAGRVEGRSGSITQIPILTMPNDDITHPIPDLTGYITEGQIYVDRQLHNRQIYPPVNVLPSLSRLMKSAIGENMTRKDHADVSNQLYACYAIGKDVQAMKAVVGEEALTPDDLLYLEFLTKFEKNFISQGNYENRTVFESLDIGWQLLRIFPKEMLKRIPASILAEFYPRDSRHPQTK

LmV-ATPase-B SEQ ID NO：8

tgacagctgctgaattcctggcatatcaatgtgagaaacacgtattagtcattctcacagacatgagttcatatgctgaggctttgcgagaggtttcagctgctagggaggaagtaccagggcgaagaggattccctggttacatgtacacagatcttgccaccatctatgaaagagctgggagagtggaaggtcgaagtggttccattacacagattcccattctgactatgcccaatgatgacattacacatcctatcccagatctgacaggatacatcacagaaggtcaaatatatgtagaccgtcagttgcacaacaggcaaatatatcctccagtcaatgtattgccatcactcagtcgtctcatgaagtcggccattggtgaaaacatgactcgtaaggaccatgctgatgtatcaaaccagctgtacgcttgttacgctattgggaaagatgtgcaggccatgaaggctgttgttggtgag

LmV-ATPase-B SEQ ID NO：9

taatacgactcactatagggtgacagctgctgaattcctg

LmV-ATPase-B SEQ ID NO：10

taatacgactcactatagggctcaccaacaacagccttca

LmV-ATPase-C SEQ ID NO：11

atgacggaatactggctaatatcggctccaggagacaaaacttgccagcaaacatgggaaactttgaataatctgacgagtaaacagaacaatgtatcagtaaactacaaattccatattccagacctaaaggttggtacactggatcagctggttggtttatcagatgatttagggaagctagacagctatgttgaacaagtgaccaggaaggttgcagcctatcttggtgaagtactcgaagaccaaagagacaaactccatgaaaaccttttggcaaacaatagtgatcttcctgggtacatcacacgttttcagtgggatatggcaaaatatcccatcaaacaatctttgcggaacatagctgacattatcagtaaacaagtaggtcagatagatgctgatttaaaaacaaaatctactgcttataataatttgaaaggcaacctgcaaaatctggagaagaagcaaactgggagtctactaacgagaaatctcgctgatttagtgaagaaagagcacttcatattggattctgaataccttactacactattggttattgtaccaaaaatactattcaatgaatggaatcagaactatgagaaaattacagatatgattgtacctcgatcaagccaattgatttaccaggattcggactttggcttgtacactgtgactttgttcaagaaagttgttgatgaatttaaactccatgctcgagagagaaagtttgttgtaagagatttcacttacaatgaggaagaattgttggctgggaaaaatgaaatgacaaaactggttacggacaagaagaaacaatttggcccattagtacgctggctcaaagtcaacttcagtgaatgtttctgtgcatggatacatgttaaagcactgagagtgtttgtggaatctgttctgaggtatggactgcccgtgaacttccaagctatgctgcttcacccacacaaaaaaagtacgaagaggttacgagacctcctgaaccaattatatggtcatctagacagcagtgcctcacaagggctgggtgcacatgatagtgtggagataccaggacttgggtttggccatgctgagtattacccatatgtttattacaaaattaatgttgatatggttgatactaaagtgtaa

LmV-ATPase-C SEQ ID NO：12

MTEYWLISAPGDKTCQQTWETLNNLTSKQNNVSVNYKFHIPDLKVGTLDQLVGLSDDLGKLDSYVEQVTRKVAAYLGEVLEDQRDKLHENLLANNSDLPGYITRFQWDMAKYPIKQSLRNIADIISKQVGQIDADLKTKSTAYNNLKGNLQNLEKKQTGSLLTRNLADLVKKEHFILDSEYLTTLLVIVPKILFNEWNQNYEKITDMIVPRSSQLIYQDSDFGLYTVTLFKKVVDEFKLHARERKFVVRDFTYNEEELLAGKNEMTKLVTDKKKQFGPLVRWLKVNFSECFCAWIHVKALRVFVESVLRYGLPVNFQAMLLHPHKKSTKRLRDLLNQLYGHLDSSASQGLGAHDSVEIPGLGFGHAEYYPYVYYKINVDMVDTKV

LmV-ATPase-C SEQ ID NO：13

aaggcaacctgcaaaatctggagaagaagcaaactgggagtctactaacgagaaatctcgctgatttagtgaagaaagagcacttcatattggattctgaataccttactacactattggttattgtaccaaaaatactattcaatgaatggaatcagaactatgagaaaattacagatatgattgtacctcgatcaagccaattgatttaccaggattcggactttggcttgtacactgtgactttgttcaagaaagttgttgatgaatttaaactccatgctcgagagagaaagtttgttgtaagagatttcacttacaatgaggaagaattgttggctgggaaaaatgaaatgacaaaactggttacggacaagaagaaacaatttggcccattagtacgctggctcaaagtcaacttcagtgaatgtttctgtgcatggatacatgttaaagcactgagagtgtttgtggaatctgttctgaggtatggactgccc

LmV-ATPase-C SEQ ID NO：14

taatacgactcactatagggaaggcaacctgcaaaatctg

LmV-ATPase-C SEQ ID NO：15

taatacgactcactataggggggcagtccatacctcagaa

LmV-ATPase-D SEQ ID NO：16

atgtcgggaaaagacagaattcaaatatttccctcgcgaggtgcgcagatgttaatgaaagctagactaaaaggagcacaaaaaggtcacagtttactgaagaaaaaggcagatgctttgcaaatgcgatttcggcagatactgggcaaaatcatagagactaagacgctcatgggagaagtaatgaaagaagctgctttctcattagctgaagcaaaatttactaccggagatttcaaccaagttgttctgcagaacgtaaatagggcacaagtgaagattcgcacaaagaaggacaatgttgcaggtgttatgttaccagtatttgaaagttatcaagatggttcagacacatatgaactggcaggtttggcaagaggaggacagcagcttgccaaactaaaaaagaactaccagagtgcagtaaagttgttagttgaattagcttctctacagacatcttttgttactcttgacgaggtcatcaaaattaccaatagaagagttaatgcaattgaacatgtaattattccacgcattgaacgtactcttgcctacattatatctgaattggatgaattggagagagaagagttttaccggttgaagaaaattcaagacaagaaacgcatagccagagccaaagccgaggcgaaagcagaagcccagaagcaggccctcctgaaggcgggccaagacgtcacctacaccccgagcctgctcgacgaaggggacgaagacatcttgttctag

LmV-ATPase-D SEQ ID NO：17

MSGKDRIQIFPSRGAQMLMKARLKGAQKGHSLLKKKADALQMRFRQILGKIIETKTLMGEVMKEAAFSLAEAKFTTGDFNQVVLQNVNRAQVKIRTKKDNVAGVMLPVFESYQDGSDTYELAGLARGGQQLAKLKKNYQSAVKLLVELASLQTSFVTLDEVIKITNRRVNAIEHVIIPRIERTLAYIISELDELEREEFYRLKKIQDKKRIARAKAEAKAEAQKQALLKAGQDVTYTPSLLDEGDEDILF

LmV-ATPase-D SEQ ID NO：18

gcgcagatgttaatgaaagctagactaaaaggagcacaaaaaggtcacagtttactgaagaaaaaggcagatgctttgcaaatgcgatttcggcagatactgggcaaaatcatagagactaagacgctcatgggagaagtaatgaaagaagctgctttctcattagctgaagcaaaatttactaccggagatttcaaccaagttgttctgcagaacgtaaatagggcacaagtgaagattcgcacaaagaaggacaatgttgcaggtgttatgttaccagtatttgaaagttatcaagatggttcagacacatatgaactggcaggtttggcaagaggaggacagcagcttgccaaactaaaaaagaactaccagagtgcagtaaagttgttagttgaattagcttctctacagacatcttttgttactcttgacgaggtcatcaaaattaccaatagaagagttaatgcaattgaacatgtaattattccacgcattgaacgtactcttgcctac

LmV-ATPase-D SEQ ID NO：19

taatacgactcactataggggcgcagatgttaatgaaagc

LmV-ATPase-D SEQ ID NO：20

taatacgactcactataggggtaggcaagagtacgttca

LmV-ATPase-E SEQ ID NO：21

atggctctaagcgatgctgatgtccaaaaacagattaagcatatgatggcctttatagatcaagaggcaaatgaaaaggccgaagaaatagatgcaaaagctgaagaagaattcaatattgagaaaggccgattggtgcaacagcaacgtttaaaaataatggaatattatgaaagaaaggaaaaacaagtggaactccagaagaaaattcagtcttcaaacatgctaaaccaagcacgcttaaaagctctgaaagttcgtgaggatcatgtgcgtggtgtacttgaagaggcaagaaagagattgggggagatcacaaaggatcagtctcgatacagccatgttctccatcagttaataatgcaggggctgctgcagctcttggagccgaatgtcactgtaaggacacgtgaagttgaccagcgcattgttgatagcatcttgccagctattacacaaaagtacaaagaaattactggtgggaaggatatctcgctaaaagtggatactgaagccttcttgaacccagaagttactggtggaatagagttgctagcacaaaagggcagaattaaaattgttaatactttggaagcacggctggagctcattgcccagcaacttattcctgagatacgatgtgcattgtttggtcgtaacccaaatcgcaagttcgctgactaa

LmV-ATPase-E SEQ ID NO：22

MALSDADVQKQIKHMMAFIDQEANEKAEEIDAKAEEEFNIEKGRLVQQQRLKIMEYYERKEKQVELQKKIQSSNMLNQARLKALKVREDHVRGVLEEARKRLGEITKDQSRYSHVLHQLIMQGLLQLLEPNVTVRTREVDQRIVDSILPAITQKYKEITGGKDISLKVDTEAFLNPEVTGGIELLAQKGRIKIVNTLEARLELIAQQLIPEIRCALFGRNPNRKFAD

LmV-ATPase-E SEQ ID NO：23

ctaagcgatgctgatgtccaaaaacagattaagcatatgatggcctttatagatcaagaggcaaatgaaaaggccgaagaaatagatgcaaaagctgaagaagaattcaatattgagaaaggccgattggtgcaacagcaacgtttaaaaataatggaatattatgaaagaaaggaaaaacaagtggaactccagaagaaaattcagtcttcaaacatgctaaaccaagcacgcttaaaagctctgaaagttcgtgaggatcatgtgcgtggtgtacttgaagaggcaagaaagagattgggggagatcacaaaggatcagtctcgatacagccatgttctccatcagttaataatgcaggggctgctgcagctcttggagccgaatgtcactgta

LmV-ATPase-E SEQ ID NO：24

taatacgactcactatagggctaagcgatgctgatgtcca

LmV-ATPase-E SEQ ID NO：25

taatacgactcactatagggtacagtgacattcggctcca

LmV-ATPase-F SEQ ID NO：26

atggcattacattcggcttacaaagggaaactcgtctctgtcatcggagatgaggacacctgcgttggctttcttcttggaggagttggagaagtcaataaaagcagacatcccaatttcatggtggtggacaaaaacaccagtgttggtgagatagaagagtgcttcaaaagatttgtgaagagagatgatattgacatcatactgattaaccagaatattgctgagatgattcgacacgtaatcgacagccactcgcagcccgttccgtctgtcctcgagataccgtcaaaggaccatccttatgatgccaccaaagattcgatattacgtagggcaaagggaatgttcaacccagatgacttcaagtaa

LmV-ATPase-F SEQ ID NO：27

MALHSAYKGKLVSVIGDEDTCVGFLLGGVGEVNKSRHPNFMVVDKNTSVGEIEECFKRFVKRDDIDIILINQNIAEMIRHVIDSHSQPVPSVLEIPSKDHPYDATKDSILRRAKGMFNPDDFK

LmV-ATPase-F SEQ ID NO：28

acattcggcttacaaagggaaactcgtctctgtcatcggagatgaggacacctgcgttggctttcttcttggaggagttggagaagtcaataaaagcagacatcccaatttcatggtggtggacaaaaacaccagtgttggtgagatagaagagtgcttcaaaagatttgtgaagagagatgatattgacatcatactgattaaccagaatattgctgagatgattcgacacgtaatcgacagccactcgcagcccgttccgtctgtcctcgagataccgtcaaaggaccatcctta

LmV-ATPase-F SEQ ID NO：29

taatacgactcactatagggacattcggcttacaaaggga

LmV-ATPase-F SEQ ID NO：30

taatacgactcactatagggtaaggatggtcctttgacgg

LmV-ATPase-G SEQ ID NO：31

atggctagccagactcagggaattcaacagcttctagcagctgaaaaaagggcagcagagaaggtttcagaagcaagaaagcgaaaagcacgcaggttgaaacaggccaaagaagaagcccaggaagaaattgaaaaatacagacaagaaagagagaggcagtttaaagagtttgaagcaaagcacatgggctcacgagaggatagggctgcacagattgaagcagaaacaaaagtaaagattgcagaaatggagaaatctgtaaatcagcggaaggaaaagttgatagaaaggattttggaattggtgtacgatatcaagcccgaactccataagaacttcagagctgcaaagtag

LmV-ATPase-G SEQ ID NO：32

MASQTQGIQQLLAAEKRAAEKVSEARKRKARRLKQAKEEAQEEIEKYRQERERQFKEFEAKHMGSREDRAAQIEAETKVKIAEMEKSVNQRKEKLIERILELVYDIKPELHKNFRAAK

LmV-ATPase-G SEQ ID NO：33

aagggcagcagagaaggtttcagaagcaagaaagcgaaaagcacgcaggttgaaacaggccaaagaagaagcccaggaagaaattgaaaaatacagacaagaaagagagaggcagtttaaagagtttgaagcaaagcacatgggctcacgagaggatagggctgcacagattgaagcagaaacaaaagtaaagattgcagaaatggagaaatctgtaaatcagcggaaggaaaagttgat

LmV-ATPase-G SEQ ID NO：34

taatacgactcactatagggaagggcagcagagaaggttt

LmV-ATPase-G SEQ ID NO：35

taatacgactcactatagggatcaacttttccttccgctg

序列表

<110> 山西大学

<120> 飞蝗V-ATPase-V1结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用

<160> 35

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1848

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 1

atgacgagca cattgataaa gacgtccgat gaggaccggg agtccaaatt cggctttgtt 60

tttgccgtat ctggacctgt ggtgacagct gaacgaatgg ccggttctgc tatgtacgaa 120

ctggtgcgtg tcggttatta tgaactggtc ggagagatca tccggttgga gggtgacatg 180

gcaacaatcc aagtatacga agacacctca ggtgtgacag taggcgatcc cgtgctgcgc 240

acaggcaagc cgctgtccgt ggaactggga cccggaatca tgggcagcat cttcgacggt 300

atccagcgac cgctgaagga tatcaatgaa ctgtcaaata gtatctacat cccgaaaggt 360

gtcaatgtgc ctgccctgag tcgcactgca cagtgggact tcagtcccgt cagtgtcaag 420

gttggaagcc acattactgg tggtgacctg tacggtttgg tccacgaaaa tactctggtg 480

aaacacaagt tgctgctgcc gccccgtgcc aagggaactg tcacgtacat tgcagaacct 540

ggaaactaca cagttgatga tgttgtcctg gagacagaat ttgacggcga gcgatcaaag 600

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gctaactacc ccctccttac tggccagcgt gtgctcgact ccctattccc gtgtgtccag 720

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ttgtcaaaat actcaaactc cgatgtaatt atctatgtag gttgtggtga gcgaggtaat 840

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cgagaagcat ctatctacac aggtattaca ctgtcagaat acttcaggga catgggttac 1020

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<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

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Met Thr Ser Thr Leu Ile Lys Thr Ser Asp Glu Asp Arg Glu Ser Lys

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Phe Gly Phe Val Phe Ala Val Ser Gly Pro Val Val Thr Ala Glu Arg

20 25 30

Met Ala Gly Ser Ala Met Tyr Glu Leu Val Arg Val Gly Tyr Tyr Glu

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Leu Val Gly Glu Ile Ile Arg Leu Glu Gly Asp Met Ala Thr Ile Gln

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Val Tyr Glu Asp Thr Ser Gly Val Thr Val Gly Asp Pro Val Leu Arg

65 70 75 80

Thr Gly Lys Pro Leu Ser Val Glu Leu Gly Pro Gly Ile Met Gly Ser

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Ile Phe Asp Gly Ile Gln Arg Pro Leu Lys Asp Ile Asn Glu Leu Ser

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Asn Ser Ile Tyr Ile Pro Lys Gly Val Asn Val Pro Ala Leu Ser Arg

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Ile Thr Gly Gly Asp Leu Tyr Gly Leu Val His Glu Asn Thr Leu Val

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Lys His Lys Leu Leu Leu Pro Pro Arg Ala Lys Gly Thr Val Thr Tyr

165 170 175

Ile Ala Glu Pro Gly Asn Tyr Thr Val Asp Asp Val Val Leu Glu Thr

180 185 190

Glu Phe Asp Gly Glu Arg Ser Lys Phe Thr Met Leu Gln Val Trp Pro

195 200 205

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210 215 220

Leu Leu Thr Gly Gln Arg Val Leu Asp Ser Leu Phe Pro Cys Val Gln

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Gly Gly Thr Thr Ala Ile Pro Gly Ala Phe Gly Cys Gly Lys Thr Val

245 250 255

Ile Ser Gln Ser Leu Ser Lys Tyr Ser Asn Ser Asp Val Ile Ile Tyr

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Val Gly Cys Gly Glu Arg Gly Asn Glu Met Ser Glu Val Leu Arg Asp

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Lys Arg Thr Ala Leu Val Ala Asn Thr Ser Asn Met Pro Val Ala Ala

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Asp Met Gly Tyr Asn Val Ser Met Met Ala Asp Ser Thr Ser Arg Trp

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Ala Glu Ala Leu Arg Glu Ile Ser Gly Arg Leu Ala Glu Met Pro Ala

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Leu Asp Lys Lys Leu Ala Gln Arg Lys His Phe Pro Ser Ile Asn Trp

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<212> DNA

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tag 1503

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<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

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His Ala Asp Val Ser Asn Gln Leu Tyr Ala Cys Tyr Ala Ile Gly Lys

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Asp Val Gln Ala Met Lys Ala Val Val Gly Glu Glu Ala Leu Thr Pro

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Asp Asp Leu Leu Tyr Leu Glu Phe Leu Thr Lys Phe Glu Lys Asn Phe

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<212> DNA

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<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

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Gln Thr Trp Glu Thr Leu Asn Asn Leu Thr Ser Lys Gln Asn Asn Val

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Asn Leu Lys Gly Asn Leu Gln Asn Leu Glu Lys Lys Gln Thr Gly Ser

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Glu Cys Phe Cys Ala Trp Ile His Val Lys Ala Leu Arg Val Phe Val

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His Asp Ser Val Glu Ile Pro Gly Leu Gly Phe Gly His Ala Glu Tyr

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<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

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Leu Lys Lys Lys Ala Asp Ala Leu Gln Met Arg Phe Arg Gln Ile Leu

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<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 18

gcgcagatgt taatgaaagc tagactaaaa ggagcacaaa aaggtcacag tttactgaag 60

aaaaaggcag atgctttgca aatgcgattt cggcagatac tgggcaaaat catagagact 120

aagacgctca tgggagaagt aatgaaagaa gctgctttct cattagctga agcaaaattt 180

actaccggag atttcaacca agttgttctg cagaacgtaa atagggcaca agtgaagatt 240

cgcacaaaga aggacaatgt tgcaggtgtt atgttaccag tatttgaaag ttatcaagat 300

ggttcagaca catatgaact ggcaggtttg gcaagaggag gacagcagct tgccaaacta 360

aaaaagaact accagagtgc agtaaagttg ttagttgaat tagcttctct acagacatct 420

tttgttactc ttgacgaggt catcaaaatt accaatagaa gagttaatgc aattgaacat 480

gtaattattc cacgcattga acgtactctt gcctac 516

<210> 19

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 19

taatacgact cactataggg gcgcagatgt taatgaaagc 40

<210> 20

<211> 39

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 20

taatacgact cactataggg gtaggcaaga gtacgttca 39

<210> 21

<211> 684

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 21

atggctctaa gcgatgctga tgtccaaaaa cagattaagc atatgatggc ctttatagat 60

caagaggcaa atgaaaaggc cgaagaaata gatgcaaaag ctgaagaaga attcaatatt 120

gagaaaggcc gattggtgca acagcaacgt ttaaaaataa tggaatatta tgaaagaaag 180

gaaaaacaag tggaactcca gaagaaaatt cagtcttcaa acatgctaaa ccaagcacgc 240

ttaaaagctc tgaaagttcg tgaggatcat gtgcgtggtg tacttgaaga ggcaagaaag 300

agattggggg agatcacaaa ggatcagtct cgatacagcc atgttctcca tcagttaata 360

atgcaggggc tgctgcagct cttggagccg aatgtcactg taaggacacg tgaagttgac 420

cagcgcattg ttgatagcat cttgccagct attacacaaa agtacaaaga aattactggt 480

gggaaggata tctcgctaaa agtggatact gaagccttct tgaacccaga agttactggt 540

ggaatagagt tgctagcaca aaagggcaga attaaaattg ttaatacttt ggaagcacgg 600

ctggagctca ttgcccagca acttattcct gagatacgat gtgcattgtt tggtcgtaac 660

ccaaatcgca agttcgctga ctaa 684

<210> 22

<211> 227

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 22

Met Ala Leu Ser Asp Ala Asp Val Gln Lys Gln Ile Lys His Met Met

1 5 10 15

Ala Phe Ile Asp Gln Glu Ala Asn Glu Lys Ala Glu Glu Ile Asp Ala

20 25 30

Lys Ala Glu Glu Glu Phe Asn Ile Glu Lys Gly Arg Leu Val Gln Gln

35 40 45

Gln Arg Leu Lys Ile Met Glu Tyr Tyr Glu Arg Lys Glu Lys Gln Val

50 55 60

Glu Leu Gln Lys Lys Ile Gln Ser Ser Asn Met Leu Asn Gln Ala Arg

65 70 75 80

Leu Lys Ala Leu Lys Val Arg Glu Asp His Val Arg Gly Val Leu Glu

85 90 95

Glu Ala Arg Lys Arg Leu Gly Glu Ile Thr Lys Asp Gln Ser Arg Tyr

100 105 110

Ser His Val Leu His Gln Leu Ile Met Gln Gly Leu Leu Gln Leu Leu

115 120 125

Glu Pro Asn Val Thr Val Arg Thr Arg Glu Val Asp Gln Arg Ile Val

130 135 140

Asp Ser Ile Leu Pro Ala Ile Thr Gln Lys Tyr Lys Glu Ile Thr Gly

145 150 155 160

Gly Lys Asp Ile Ser Leu Lys Val Asp Thr Glu Ala Phe Leu Asn Pro

165 170 175

Glu Val Thr Gly Gly Ile Glu Leu Leu Ala Gln Lys Gly Arg Ile Lys

180 185 190

Ile Val Asn Thr Leu Glu Ala Arg Leu Glu Leu Ile Ala Gln Gln Leu

195 200 205

Ile Pro Glu Ile Arg Cys Ala Leu Phe Gly Arg Asn Pro Asn Arg Lys

210 215 220

Phe Ala Asp

225

<210> 23

<211> 396

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 23

ctaagcgatg ctgatgtcca aaaacagatt aagcatatga tggcctttat agatcaagag 60

gcaaatgaaa aggccgaaga aatagatgca aaagctgaag aagaattcaa tattgagaaa 120

ggccgattgg tgcaacagca acgtttaaaa ataatggaat attatgaaag aaaggaaaaa 180

caagtggaac tccagaagaa aattcagtct tcaaacatgc taaaccaagc acgcttaaaa 240

gctctgaaag ttcgtgagga tcatgtgcgt ggtgtacttg aagaggcaag aaagagattg 300

ggggagatca caaaggatca gtctcgatac agccatgttc tccatcagtt aataatgcag 360

gggctgctgc agctcttgga gccgaatgtc actgta 396

<210> 24

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 24

taatacgact cactataggg ctaagcgatg ctgatgtcca 40

<210> 25

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 25

taatacgact cactataggg tacagtgaca ttcggctcca 40

<210> 26

<211> 372

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 26

atggcattac attcggctta caaagggaaa ctcgtctctg tcatcggaga tgaggacacc 60

tgcgttggct ttcttcttgg aggagttgga gaagtcaata aaagcagaca tcccaatttc 120

atggtggtgg acaaaaacac cagtgttggt gagatagaag agtgcttcaa aagatttgtg 180

aagagagatg atattgacat catactgatt aaccagaata ttgctgagat gattcgacac 240

gtaatcgaca gccactcgca gcccgttccg tctgtcctcg agataccgtc aaaggaccat 300

ccttatgatg ccaccaaaga ttcgatatta cgtagggcaa agggaatgtt caacccagat 360

gacttcaagt aa 372

<210> 27

<211> 123

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 27

Met Ala Leu His Ser Ala Tyr Lys Gly Lys Leu Val Ser Val Ile Gly

1 5 10 15

Asp Glu Asp Thr Cys Val Gly Phe Leu Leu Gly Gly Val Gly Glu Val

20 25 30

Asn Lys Ser Arg His Pro Asn Phe Met Val Val Asp Lys Asn Thr Ser

35 40 45

Val Gly Glu Ile Glu Glu Cys Phe Lys Arg Phe Val Lys Arg Asp Asp

50 55 60

Ile Asp Ile Ile Leu Ile Asn Gln Asn Ile Ala Glu Met Ile Arg His

65 70 75 80

Val Ile Asp Ser His Ser Gln Pro Val Pro Ser Val Leu Glu Ile Pro

85 90 95

Ser Lys Asp His Pro Tyr Asp Ala Thr Lys Asp Ser Ile Leu Arg Arg

100 105 110

Ala Lys Gly Met Phe Asn Pro Asp Asp Phe Lys

115 120

<210> 28

<211> 297

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 28

acattcggct tacaaaggga aactcgtctc tgtcatcgga gatgaggaca cctgcgttgg 60

ctttcttctt ggaggagttg gagaagtcaa taaaagcaga catcccaatt tcatggtggt 120

ggacaaaaac accagtgttg gtgagataga agagtgcttc aaaagatttg tgaagagaga 180

tgatattgac atcatactga ttaaccagaa tattgctgag atgattcgac acgtaatcga 240

cagccactcg cagcccgttc cgtctgtcct cgagataccg tcaaaggacc atcctta 297

<210> 29

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 29

taatacgact cactataggg acattcggct tacaaaggga 40

<210> 30

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 30

taatacgact cactataggg taaggatggt cctttgacgg 40

<210> 31

<211> 357

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 31

atggctagcc agactcaggg aattcaacag cttctagcag ctgaaaaaag ggcagcagag 60

aaggtttcag aagcaagaaa gcgaaaagca cgcaggttga aacaggccaa agaagaagcc 120

caggaagaaa ttgaaaaata cagacaagaa agagagaggc agtttaaaga gtttgaagca 180

aagcacatgg gctcacgaga ggatagggct gcacagattg aagcagaaac aaaagtaaag 240

attgcagaaa tggagaaatc tgtaaatcag cggaaggaaa agttgataga aaggattttg 300

gaattggtgt acgatatcaa gcccgaactc cataagaact tcagagctgc aaagtag 357

<210> 32

<211> 118

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 32

Met Ala Ser Gln Thr Gln Gly Ile Gln Gln Leu Leu Ala Ala Glu Lys

1 5 10 15

Arg Ala Ala Glu Lys Val Ser Glu Ala Arg Lys Arg Lys Ala Arg Arg

20 25 30

Leu Lys Gln Ala Lys Glu Glu Ala Gln Glu Glu Ile Glu Lys Tyr Arg

35 40 45

Gln Glu Arg Glu Arg Gln Phe Lys Glu Phe Glu Ala Lys His Met Gly

50 55 60

Ser Arg Glu Asp Arg Ala Ala Gln Ile Glu Ala Glu Thr Lys Val Lys

65 70 75 80

Ile Ala Glu Met Glu Lys Ser Val Asn Gln Arg Lys Glu Lys Leu Ile

85 90 95

Glu Arg Ile Leu Glu Leu Val Tyr Asp Ile Lys Pro Glu Leu His Lys

100 105 110

Asn Phe Arg Ala Ala Lys

115

<210> 33

<211> 240

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 33

aagggcagca gagaaggttt cagaagcaag aaagcgaaaa gcacgcaggt tgaaacaggc 60

caaagaagaa gcccaggaag aaattgaaaa atacagacaa gaaagagaga ggcagtttaa 120

agagtttgaa gcaaagcaca tgggctcacg agaggatagg gctgcacaga ttgaagcaga 180

aacaaaagta aagattgcag aaatggagaa atctgtaaat cagcggaagg aaaagttgat 240

<210> 34

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 34

taatacgact cactataggg aagggcagca gagaaggttt 40

<210> 35

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 35

taatacgact cactataggg atcaactttt ccttccgctg 40

Claims

1.飞蝗V-ATPase-V1结构域基因，其特征是：包括以下基因：

飞蝗V-ATPase-F基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：26。

2.飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA，其特征是：包括以下dsRNA：

由飞蝗V-ATPase-F基因片段SEQ ID NO：28合成的dsRNA。

3.飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA的合成方法，其特征是：以含有飞蝗V-ATPase-F基因SEQ ID NO：26的质粒为模板，对应基因的上游引物和下游引物，PCR扩增获得两端为T7启动子的DNA模板，按照HiScribe™ T7 High Yield RNA Synthesis Kit试剂盒说明体外转录合成相应的dsRNA。

4.如权利要求3所述的飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA的合成方法，其特征是：

所述飞蝗V-ATPase-F基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30。

5.飞蝗V-ATPase-V1结构域基因的dsRNA在害虫防治中的应用，其特征是：将权利要求2所述的飞蝗V-ATPase-F基因的dsRNA，制备成喷洒式杀虫剂或饵剂，或者将dsRNA转入飞蝗摄食植物体，应用于飞蝗防治中。