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CN110628882B - 用于pcr扩增的引物、试剂盒、检测msi状态的方法及应用 - Google Patents

用于pcr扩增的引物、试剂盒、检测msi状态的方法及应用 Download PDF

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CN110628882B
CN110628882B CN201910995495.9A CN201910995495A CN110628882B CN 110628882 B CN110628882 B CN 110628882B CN 201910995495 A CN201910995495 A CN 201910995495A CN 110628882 B CN110628882 B CN 110628882B
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terminal
dna
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homo sapiens
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Naonda Nanjing Biological Technology Co ltd
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
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Abstract

本发明提供了一种用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用。该引物包括目标序列扩增区域和设置在目标序列扩增区域3’末端的封闭区域，封闭区域具有R(D)n1DsDsDx或R(D)n2DsDsMx所示结构，其中，R表示RNA碱基，D表示互补配对碱基，M表示错配碱基，n1和n2表示括号中D碱基的个数，n1为1或2，n2为2，s表示相邻的两个核苷酸之间的3’氧原子进行硫代修饰，x表示封闭修饰。最后三个碱基间的硫代连接防止末端带封闭修饰的碱基被酶切掉，故可采用高保真酶扩增，且既能保证扩增的准确性，又不产生非特异扩增和引物二聚体，从而提高了MSI状态检测的准确性。

Description

用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用
技术领域
本发明涉及高通量测序检测领域，具体而言，是一种用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用。
背景技术
在人类基因组中，广泛分布着许多短的(1-6个碱基)串联重复DNA序列，即微卫星序列 (MicroSatellite，MS)。微卫星不稳定性(MicroSatellite Instability，MSI)是指某一微卫星由于重复单位的插入或缺失而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的微卫星等位基因现象。由于错配修复基因功能丧失，在细胞增殖的过程中，导致DNA复制时，这些序列常发生小范围的碱基缺失，插入或者替换不被修复状态。根据MSI不稳定性的程度，可分为微卫星高度不稳定型 (MSI-H)、微卫星低度不稳定型(MSI-L)和微卫星稳定型(microsatellite stability，MSS)。
传统的检测MS位点的稳定性主要是采用PCR扩增结合毛细管电泳的方法，由于这种方法检测的位点数量有限，一般只是检测6个常见位点，大于等于2个位点不稳定判断是微卫星高度不稳定型(MSI-H)，有1个位点不稳定判断是，微卫星低度不稳定型(MSI-L)，没有位点被发现不稳定判定是微卫星稳定型(microsatellite stability，MSS)。所以检测的准确性和检测的科学性有待进一步提升。
发明内容
本发明提供了一种用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用，以减少 PCR扩增目的片段时的非特异性扩增，从而提高对MSI状态检测的准确性。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种用于PCR扩增的引物，该引物包括目标序列扩增区域和设置在目标序列扩增区域3’末端的封闭区域，封闭区域具有R(D)n1DsDsDx或R(D)n2DsDsMx所示结构，其中，R表示RNA碱基，D表示互补配对碱基， M表示错配碱基，n1和n2表示括号中D碱基的个数，n1为1或2，n2为2，s表示相邻的两个核苷酸之间的3’氧原子进行硫代修饰，x表示封闭修饰。
进一步地，封闭修饰选自如下任意一种：MGB修饰、C3间臂修饰，3’磷酸化修饰，3’地高辛修饰，3’生物素修饰及3’端的碱基为双脱氧碱基。
进一步地，引物为扩增表1所示位点的引物。
进一步地，引物如SEQ ID NO:70至SEQ ID NO:207所示。
根据本发明的第二个方面，提供了一种试剂盒，该试剂盒包括上述任一种引物。
进一步地，试剂盒还包括测序平台接头通用引物。
进一步地，通用引物为：SEQ ID NO:208和SEQ ID NO:209所示的MGI测序平台的通用引物，或者，通用引物为SEQ ID NO:210和SEQ ID NO:211所示的Illumina测序平台的通用引物。
根据本发明的第三个方面，提供了一种检测MSI状态的方法，该方法包括对目标MSI位点进行PCR扩增检测的步骤，采用上述任一种引物进行扩增；或者采用上述任一种试剂盒进行扩增。
根据本发明的第三个方面，提供了上述任一种引物在制备检测MSI状态的试剂盒中的应用。
进一步地，该试剂盒为扩增子文库构建试剂盒。
应用本发明的技术方案，本申请改进的引物中，R表示的RNA碱基后面的4个或5个碱基能够保证能被Rnase H2很好的识别和切割，最后三个碱基之间通过硫代连接，硫代连接能够有效防止引物末端的封闭区域的序列被反应中的酶切掉，这样本发明的扩增子就可以用高保真的扩增酶扩增而不用担心封闭被切掉的问题，所以本发明的扩增引物既能保证扩增的准确性，又不产生非特异扩增和引物二聚体，避免了测序数据的浪费的同时也提升扩增子的检测准确性，进而提高了微卫星不稳定状态检测的准确性。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1示出了本申请的一种优选的实施例中扩增子文库构建的流程示意图；
图2示出了本申请的一种优选的实施例中基因组DNA的建库质控图；
图3示出了本申请的一种优选的实施例中采用本申请的方法所扩增的一对肿瘤样本的扩增子均衡性数据；
图4a、图4b及图4c分别示出了本申请的一种优选的实施例中采用本申请的方法对一对肿瘤样本中Bat26、Bat25和NR27三个位点的MSI状态检测的结果，其中横坐标显示的是扩增子的重复碱基和部分外侧序列的长度，纵坐标显示的是扩增子的测序深度；
图5示出了本申请的一种优选的实施例中采用本申请的方法对血浆DNA和基因组DNA 建库对比结果；
图6示出了本申请的一种优选的实施例中采用本申请的方法所得到的扩增子和普通扩增子的中靶率对比结果；
图7示出了本申请的一种优选的实施例中采用本申请的方法所得到的扩增子和IDT扩增子的中靶率对比结果。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本申请。
如背景技术所提到的，现有的微卫星不稳定状态的检测方法存在检测准确性低的缺陷，为了进一步提高检测准确性，本申请的申请人针对现有状况，一方面从微卫星序列为1-6个碱基串联重复序列的结构特征出发，改进扩增重复序列的扩增特异性和扩增效率。另一方面从微卫星位点的选择和数量角度进行改进，以通过更多的位点相对更准确地评价微卫星的状态。
此外，为了满足增多的微卫星位点的检测通量，本申请利用扩增子的方法把备选MSI位点扩增建库，经过高通量测序，通过对测序数据的分析判来断MSI的序列是否稳定，结果发现本申请改进后的方法不仅能够检测血浆DNA和降解比较严重的样本，而且不产生引物二聚体和非特异性扩增，因而所得到的扩增子的测序数据中有效数据的占比较高，从而提高检测的效率和准确性。
在提高目的位点的扩增特异性的过程中，申请人采用IDT公司的rhAMP方法进行扩增，该方法是一种RNA酶H2依赖的PCR扩增方法(rhPCR)。RNA酶H2依赖的PCR扩增方法的扩增原理是：目的片段扩增引物的3’末端带有一段特殊的序列，这段特殊的序列的基本结构为RDDDDMx，其中R表示RNA碱基，D表示互补配对碱基，M表示错配碱基，x表示封闭修饰。当引物中RNA碱基之前的序列与目的片段完全匹配时，RNA酶H2从RNA碱基处切开，引物末端的封闭去除，从而使得引物能够在聚合酶的作用下对目的片段进行延伸扩增。而当引物中RNA碱基之前的序列与目的片段不匹配时，RNA酶H2无法从RNA碱基处切开，因而由于末端碱基封闭修饰的存在，使得引物无法对目的片段进行延伸扩增。这样能够避免引物的非特异性扩增，同时也能避免引物二聚体的生成。
然而，在采用上述引物进行扩增的过程中，发现仍然有非特异性扩增的存在。申请人尝试对上述特殊结构进行改进，以进一步降低非特异性扩增。经研究，申请人发现，上述引物必须与其所提供的DNA聚合酶进行配套使用才能降低非特异性扩增，而当换成其他高保真性的聚合酶，如NEB公司的Q5高保真DNA聚合酶时，就会出现相对较多的非特异性扩增。由于高保真DNA聚合酶具有错配检测和修复能力，当上述引物中RNA碱基之前的序列与目的片段不匹配时，RNA酶H2不能切开而去除封闭，但高保真DNA聚合酶的错配检测和修改功能，能够检测到错配，从而启动3’到5’端外切酶活性而将末端碱基切除，从而去除封闭，使得非目的片段启动扩增，从而产生非特异性扩增。因此，如何能够防止高保真聚合酶在引物与目标序列存在错配的情况不启动对末端封闭碱基的切割即可有效防止非特异性扩增。因此，申请人提出了将上述引物的特殊结构末端的3个核苷酸之间连接的连接键(核糖3’位置上的氧原子改为硫原子)进行S修饰的改进方案，并经试验验证这种改进后的引物扩增的非特异性大大降低。
在上述研究结果的基础上，申请人提出了本申请。在一种典型的实施方式中，提供了一种用于PCR扩增的引物，该引物包括目标序列扩增区域和设置在目标序列扩增区域3’末端的封闭区域，封闭区域具有R(D)n1DsDsDx或R(D)n2DsDsMx所示结构，其中，R表示RNA碱基，D表示互补配对碱基，M表示错配碱基，n1和n2表示括号中D碱基的个数，n1为1或 2，n2为2，s表示相邻的两个核苷酸之间的3’氧原子进行硫代修饰，x表示封闭修饰。
本申请上述改进的引物中，R表示的RNA碱基后面的4个或5个碱基能够保证能被Rnase H2很好的识别和切割，最后三个碱基之间通过硫代连接，硫代连接能够有效防止引物末端的封闭区域的序列被反应中的酶切掉，这样本申请的扩增子就可以用高保真的扩增酶扩增而不用担心封闭被切掉的问题，所以本申请的扩增引物既能保证扩增的准确性，又不产生非特异扩增和引物二聚体，避免了测序数据的浪费的同时也提升扩增子的检测准确性。
上述封闭修饰的具体修饰类型不限，只要能实现封闭3’末端的修饰都适用于本申请。因此，在本申请中，上述封闭修饰包括但不限于如下任意一种：MGB修饰、C3间臂修饰，3’磷酸化修饰，3’地高辛修饰，3’生物素修饰及3’端的碱基为双脱氧碱基。上述末端修饰配合末端最后面的三个碱基连接是硫代，从而使得本申请的改进引物上述引物能够采用高保真的扩增酶扩增。
如前述，现有MSI检测方法所针对的位点偏少，导致准确性不足，因而为了提高检测的准确性，本申请在保留传统检测的6个位点(表1中加黑部分)外，还选取了其余60多个位点。在选择新位点时，充分考虑MSI检测的特点，优先选择单碱基重复检测位点，少量选择双碱基或三碱基重复位点(如下表1)。因而，在本申请一种优选的实施例中，上述引物可以是扩增本申请所选取的60多个位点。本申请选择更多的检测位点还有一个好处是在检测肿瘤样本和癌旁组织对照时，兼具样本配对功能，避免取样和实验环节的样本混淆错误，增加检测的准确性(肿瘤的MSI位点会存在不稳定，传统方法检测位点偏少，肿瘤组织和患者血液样本或癌旁组织有差异就认为不稳定，如果是样本混淆弄错了，本来就不是一对样本也无法判定。但本申请改进的方法所检测位点比较多，可以间接验证样本是不是一对样本)。
表1：
Figure GDA0002555750270000041
Figure GDA0002555750270000051
Figure GDA0002555750270000061
其中，a表示重复单元，b表示重复单元的重复次数。
针对上述位点，根据测序平台所用的接头的通用引物的不同，可以设计不同的引物进行扩增在文库构建测序检测。在本申请一种优选的实施例中，上述引物如下表2所示的SEQ ID NO:70至SEQ ID NO:207所示。
表2.69个扩增子对应引物序列
Figure GDA0002555750270000062
Figure GDA0002555750270000071
Figure GDA0002555750270000081
Figure GDA0002555750270000091
注：上表2中，/rA/、/rC/和/rG/分别代表一个核糖核酸碱基，*代表硫代，x表示封闭修饰C3间隔臂。
上表2中的引物，3’末端的倒数5位碱基为该引物中的末端封闭区域，其中，末端后三位碱基之间的连接键由-S-取代-O-。
在本申请第二种典型的实施方式中，提供了一种试剂盒，该试剂盒包括上述任一种引物。采用本申请的引物既能在引物与目标序列完全匹配的情况下启动扩增延伸，又能在与目标序列存在错配碱基时，有效防止因高保真DNA聚合酶的错配检测与修复而剪切掉引物末端的封闭序列区域，从而大大降低非特异性扩增和引物二聚体。
上述试剂盒，根据检测方便需要，还可以包括测序平台接头通用引物，以便于在Illumina 或MGI两个测序平台进行，只需要在合成时把上述引物中的5’端的部分序列改动为相应的测序平台接头通用部分即可。优选地，上述通用引物可以是SEQ ID NO:208和SEQID NO:209 所示的MGI测序平台的通用引物，或者，上述通用引物为SEQ ID NO:210和SEQID NO:211 所示的Illumina测序平台的通用引物。
针对MGI测序平台：
/dnSeq-f/序列：SEQ ID NO:208：TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGGCCTCCGACTT；
/dnSeq-r/序列：SEQ ID NO:209：GAACGACATGGCTACGATCCGACTT。
针对Illumina测序平台：
/dnSeq-f/序列：SEQ ID NO:210：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT；
/dnSeq-r/序列：SEQ ID NO:211：GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT。
在本申请第三种典型的实施方式中，提供了一种检测MSI状态的方法，该方法包括对目标MSI位点进行PCR扩增检测的步骤，采用上述任一种引物进行扩增；或者采用上述任一种试剂盒进行扩增。
在一种优选的实施例中，通过采用本申请改进的上述引物对改进的69个微卫星不稳定位点进行扩增子文库构建，并通过高通量测序检测。优选地，其建库流程与现有流程相似，如图1，第一步，采用引物对各位点进行特异引物扩增。与现有普通的扩增效果不同的是不产生非特异扩增和引物二聚体扩增。因为本申请中该步骤的扩增引物的末端是带封闭的序列(图1 中的R代表RNA碱基，x代表封闭修饰)，这个封闭序列只有在结合到完全配对的区域才能被Rnase H2识别，把RNA碱基以后的序列切掉解除封闭开启扩增；第二步是带有index的测序引物和进行扩增；第一步之后和第二步之后最好都进行对反应产物纯化的步骤。
在本申请第四种典型的实施方式中，提供了上述任一种引物在制备检测MSI状态的试剂盒中的应用，该试剂盒优选为扩增子文库构建试剂盒。
下面将通过实施例进一步说明本申请的有益效果，需要说明的是，以下实施例仅是示例性的，并不造成对本申请的限制。如无特殊说明，以下实施例所用试剂和耗材都来自NEB公司。
实施例1用基因组DNA或FFPE样本DNA建库
本实施例采用三对肿瘤样本，两个是MSI-H(ND18161和ND18163),一个是MSI-L(ND18171)，其中，ND18162是ND18161的对照；ND18164是ND18163的对照；ND18172 是ND18171的对照。每一对肿瘤组织和癌旁组织的DNA取自冻存物(当然，也可以是FFEP 样本，因为引物设计的目标片段的长度在100～160bp之间，所以对大FFPE样本都适用)，分别采用天根公司的DNA提取试剂盒提取gDNA。
一、实验步骤如下：
第一步，PCR扩增
1.配置表2所示的多重扩增的正向和反向引物，每条引物配置成0.1nmol/μl的浓度，上下游引物等比混合。按照表3配置第一步多重扩增的体系。
表3：
Figure GDA0002555750270000101
Figure GDA0002555750270000111
混合均匀，瞬时离心使全部反应液置于PCR管底部。
在PCR仪上启动如下反应程序，热盖温度105℃，等温度稳定至95℃时将反应管放进PCR 仪。
表4：
Figure GDA0002555750270000112
第二步，纯化第一扩增产物
2.1向PCR管中加入30μl的NanoPrepTM SP Beads(1.5×磁珠)混合均匀，25℃孵育5～10 min。
2.2将PCR管瞬时离心后放置于磁力架上5min，至液体完全澄清，使用移液器吸取移弃上清。
2.3沿PCR管侧壁缓慢加入150μl 80％乙醇，注意勿扰动磁珠，静置30s，使用移液器吸取移弃上清。
2.4重复步骤3一次。
2.5PCR管瞬时离心，放置于磁力架上，使用10μl吸头移去少量残留乙醇，注意勿吸到磁珠。
2.6打开PCR管管盖，并于室温静置约5min，至乙醇挥发完全。
2.7移出PCR管，向PCR管中加入21μl TE Solution，使用移液器将磁珠悬浮均匀，25℃孵育2min。
2.8将PCR管瞬时离心后放置于磁力架上2min，至液体完全澄清，使用移液器小心将 20μl上清移取至一个新的0.2ml PCR管中进行保存，注意勿吸到磁珠。
第三步，Index引物扩增
3.1MGI测序平台用NanoPrepTM M-index Primer Mix置于冰上自然溶解(Illumina测序平台用NanoPrepTM UDI index Primer Mix)，混合均匀，瞬时离心备用。
3.2按照以下表5所示体系在置于冰上的PCR管中进行反应体系配制。
表5：
Figure GDA0002555750270000121
3.3混合均匀，瞬时离心使全部反应液置于PCR管底部。
3.4在PCR仪上启动如下表6所示反应程序，热盖温度105℃，等温度稳定至95℃时将反应管放进PCR仪。
表6：
Figure GDA0002555750270000122
第四步，文库纯化
4.1向PCR管中加入75μl的NanoPrepTM SP Beads(1.5×磁珠)混合均匀，25℃孵育5～10min。
4.2将PCR管瞬时离心后放置于磁力架上5min，至液体完全澄清，使用移液器吸取移弃上清。
4.3沿PCR管侧壁缓慢加入150μl 80％乙醇，注意勿扰动磁珠，静置30s，使用移液器吸取移弃上清。
4.4重复步骤3一次。
4.5PCR管瞬时离心，放置于磁力架上，使用10μl吸头移去少量残留乙醇，注意勿吸到磁珠。
4.6打开PCR管管盖，并于室温静置约5min，至乙醇挥发完全。
4.7向PCR管加入20μl TE Solution，使用移液器将磁珠悬浮均匀，25℃孵育2min。
4.8将PCR管瞬时离心后放置于磁力架上2min，至液体完全澄清，使用移液器小心将上清移取至一个新的0.2ml PCR管中进行保存，注意勿吸到磁珠。
4.9使用Qubit对文库进行定量。
4.10使用Qsep100(Bioptic)片段分析仪器进行文库片段分布检测，见图2。从图2可以看出，目的片段长度在200～350bp之间，符合预期的长度大小。
二、建库实验数据
三对肿瘤样本的建库数据如下表7。
表7：
Figure GDA0002555750270000131
三、测序数据分析
6个文库经过Illumina测序平台PE150测序，得到的数据经过分析比对，69个扩增子的 reads，如果图3，除了一个扩增子reads比较低，其他都很均衡。
本申请扩增子的测序数据分析，ND18161和ND18171与传统PCR结合毛细电泳结果一致，而ND18163的结果明显不一致，ND18163用PCR扩增结合毛细管电泳的方法检测6个位点就有3个位点判断不稳定，本发明检测发现这6个位点只有一个是不稳定位点比较确定，另两个位点不太确定，但由于本发明检测位点比较多，从其它位点检测出来的不稳定比例也说明这个样本的大部分位点是稳定的，具体检测结果见下表8。由于MS位点本来是单碱基或少量二碱基重复，在PCR扩增的过程中会有微小的波动，所以只是基于6个位点判断是不科学的，同时传统方法受毛细管电泳的影响判断较大，因此，本申请方法较传统的PCR结合毛细管电泳的方法更科学和准确。
表8：
Figure GDA0002555750270000141
为了进一步说明本申请方法和传统方法的检测方法的差异，把ND18163位点毛细管电泳的结果统计如下表9，与这三个位点对应的本发明方法检测结果见图4a、图4b及图4c，Bat26 位点确定是不稳定的位点，Bat25和NR27位点是在判断的临界点附近，判断是与不是对结果影响很大，相比传统方法有限的位点数，本申请的方案把检测位点由6个扩大到60多个，检测结果相对更科学可靠。
表9：
Figure GDA0002555750270000142
实施例2对血浆DNA建库
一、实验步骤
具体步骤见实施例1，与实施例1的区别是投入的DNA是血浆DNA，且部分DNA投入量少的样本，第二步扩增的循环数增加1～2个。
二、建库实验数据
为了检测本申请的扩增引物是否可以用血浆DNA作为模板，本实施例用一个基因组DNA 作为对照，同时做了血浆DNA三个梯度投入量的文库，分别是1ng，2.5ng和5ng，流程相应的在第二步的扩增选择不同的扩增循环数如下表10：
表10：
Figure GDA0002555750270000143
Figure GDA0002555750270000151
三、测序数据分析
通过对上述表10所示文库的测序数据进行分析，发现本申请的扩增子不仅可以检测基因组DNA，还能很好的检测血浆DNA。血浆DNA的数据均衡性虽然不如基因组DNA表现好，但也都能有很好的覆盖(见图5)，除了个别位点的数据偏差稍大，这也符合血浆DNA的特征，血浆的片段的主峰在167bp附近。
此外，从测序数据的分析结果中可以看出，本申请的扩增子还有另外一个突出特点，如图6所示，即中靶率特别高，尤其是与普通的扩增子相比较，本申请方案的扩增子的中靶率都在99％左右，引物二聚体和非特异性扩增很少，而普通扩增子设计和本申请一样长度大小的扩增子时，非特异扩增和引物二聚体一般都比较高，尤其在以血浆DNA为模板时的二聚体更多。由此可见，在采用本申请的扩增引物以血浆DNA为模板进行扩增时中靶率有明显的优势。
需要说明的是，本申请通过利用多重PCR扩增的方法，一次性可以检测几十甚至上百个微卫星位点，同时不受检测样本的限制，既可以检测FFPE样本，也可以检测血浆DNA样本，因而相比现有的检测方法，更具有临床推广价值。
从以上的描述中，可以看出，本申请上述的实施例实现了如下技术效果：本申请改进的引物中，R表示的RNA碱基后面的4个或5个碱基能够保证能被Rnase H2很好的识别和切割，最后三个碱基之间通过硫代连接，硫代连接能够有效防止引物末端的封闭区域的序列被反应中的酶切掉，IDT的末端结构只适合普通扩增酶，不适合用高保真的酶扩增，见图7(采用表 2中末位碱基是M的引物，与ITD引物进行扩增建库比对)。这样本申请的扩增子就可以用高保真的扩增酶扩增而不用担心封闭被切掉的问题，所以本申请的扩增引物既能保证扩增的准确性，又不产生非特异扩增和引物二聚体，避免了测序数据的浪费的同时也提升扩增子的检测准确性。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
序列表
<110> 纳昂达（南京）生物科技有限公司
<120> 用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用
<130> PN121051NAGD
<160> 211
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
gtgggttttt tttttttttt ctcca 25
<210> 2
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
acagtaaaaa aaaaaaaaaa aatgtgg 27
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
aaaagaaaaa aaaaaaaaaa aaggacc 27
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
gtagcaaaaa aaaaaaaaaa caatt 25
<210> 5
<211> 52
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
acaaagtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgca tg 52
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
taatcaaaaa aaaaaaaaaa tgcat 25
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
acctgaaaaa aaaaaaagga aa 22
<210> 8
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
ggttgttttt tttttttttt ctggt 25
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
ttgttttttt ttttttttaa ggg 23
<210> 10
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
gcttcttttt tttttttttt ttcaaaa 27
<210> 11
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
tttttaaaaa aaaaaaaaaa aatctaa 27
<210> 12
<211> 26
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
cacctaaaaa aaaaaaaaaa accacc 26
<210> 13
<211> 26
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
catccaaaaa aaaaaaaaaa acctgc 26
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
aaaggaaaaa aaaaaaactg tg 22
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 15
gtcacaaaaa aaaaaaaaaa aatcact 27
<210> 16
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 16
aacagttttt tttttttttt gtggt 25
<210> 17
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 17
cagtgttttt tttttttttc tcac 24
<210> 18
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
ataccaaaaa aaaaaaaaaa tggac 25
<210> 19
<211> 26
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
gtggtaaaaa aaaaaaaaaa atccat 26
<210> 20
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
tagggttttt tttttttttt ttggccc 27
<210> 21
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
ggttcttttt tttttttttt ccagc 25
<210> 22
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
agctgttttt tttttttttt ctgtt 25
<210> 23
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
gggtcttttt tttttttttt aaaga 25
<210> 24
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
gagccttttt tttttttttc agat 24
<210> 25
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
tgtagttttt tttttttttc tgtt 24
<210> 26
<211> 56
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
agcatacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca ctggcc 56
<210> 27
<211> 23
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
agagtaaaaa aaaaaaaata gca 23
<210> 28
<211> 23
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
tctgcttttt ttttttttgg tcc 23
<210> 29
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
gagcattttt tttttttttt ggtct 25
<210> 30
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
cgggcttttt tttttttttt ttcttaa 27
<210> 31
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 31
tctacttttt tttttttttt ccttg 25
<210> 32
<211> 55
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
atttatcctc ctcctcctcc tcctcctcct cctcctcctc ctcctcctcc tctcc 55
<210> 33
<211> 23
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
tattgttttt ttttttttag aag 23
<210> 34
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 34
taatgaaaaa aaaaaaaaaa aagtaat 27
<210> 35
<211> 28
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 35
agaccaaaaa aaaaaaaaaa aaagactt 28
<210> 36
<211> 40
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 36
cgcgcacaca cacacacaca cacacacaca cacaccccgg 40
<210> 37
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 37
gtgttaaaaa aaaaaaaaaa aaggctt 27
<210> 38
<211> 22
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 38
tgtagttttt tttttttctg tc 22
<210> 39
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 39
ataggaaaaa aaaaaaaaaa aacctag 27
<210> 40
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 40
tattgaaaaa aaaaaaaaaa cttaa 25
<210> 41
<211> 72
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
tcggcgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 60
tgtgtgtaat tt 72
<210> 42
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
ctaggaaaaa aaaaaaaaaa aaccgct 27
<210> 43
<211> 46
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
tgtatacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca ctctct 46
<210> 44
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
atgtgttttt tttttttttt cccat 25
<210> 45
<211> 22
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 45
ctgtgaaaaa aaaaaaagcc aa 22
<210> 46
<211> 26
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 46
cttccttttt tttttttttt tcttct 26
<210> 47
<211> 28
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 47
tgcagaaaaa aaaaaaaaaa aaagcctc 28
<210> 48
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 48
tagagttttt tttttttttt aaatg 25
<210> 49
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 49
actgcaaaaa aaaaaaaaaa tagcc 25
<210> 50
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 50
gctgattttt tttttttttt ttacctg 27
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 51
aaggcttttt tttttttttc tgat 24
<210> 52
<211> 48
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 52
ttgtaacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cactaacc 48
<210> 53
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 53
gctttaaaaa aaaaaaaaaa gaatt 25
<210> 54
<211> 29
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 54
aaaccaaaaa aaaaaaaaaa aaaacacct 29
<210> 55
<211> 27
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 55
atttgttttt tttttttttt ttacata 27
<210> 56
<211> 47
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 56
ttttcttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt ttgagac 47
<210> 57
<211> 38
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 57
tccagttttt tttttttttt tttttttttt tttgagac 38
<210> 58
<211> 37
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 58
caggtaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aagggtt 37
<210> 59
<211> 52
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 59
gtgatacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacata tt 52
<210> 60
<211> 33
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 60
tcctattttt tttttttttt ttttttttgt gag 33
<210> 61
<211> 20
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 61
gaaggaaaaa aaaaagcctg 20
<210> 62
<211> 35
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 62
tttgattttt tttttttttt tttttttttt gagaa 35
<210> 63
<211> 50
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 63
tactctgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtaaat 50
<210> 64
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 64
ctggtaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agccac 36
<210> 65
<211> 31
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 65
gaagattttt tttttttttt ttttttaata t 31
<210> 66
<211> 31
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 66
ttgctaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaggcc a 31
<210> 67
<211> 56
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 67
gcatggtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tatggg 56
<210> 68
<211> 44
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 68
cctttacaca cacacacaca cacacacaca cacacacacg gctc 44
<210> 69
<211> 62
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 69
aagaatgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtct 60
aa 62
<210> 70
<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，C为核糖核苷酸，GAG之间通过-S-键连接，末位碱基G3'端带有C3间隔臂修饰。
<400> 70
aggcaaggat ataaatgttg aattcccaga g 31
<210> 71
<211> 33
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (29)..(33)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，倒数三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 71
gcatctatat ggtcatattg ttgaaatgat tct 33
<210> 72
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，倒数三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 72
acttcctgtg aactaaggtt gctgca 26
<210> 73
<211> 24
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(24)
<223> 末端封闭序列，倒数第4位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 73
tcgctgactt tttggagtag gatg 24
<210> 74
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 74
cagattgtgg tgcagtacat ttaagaa 27
<210> 75
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第4位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 75
ttgctcacaa gaggatttca atgttc 26
<210> 76
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 76
ggcattggaa acttcatatc ctggacat 28
<210> 77
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 77
gaattttgca tttctcaagt gctcctgt 28
<210> 78
<211> 29
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(29)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 78
gcacatcaag tttggtagga tattggtaa 29
<210> 79
<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(30)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 79
tagctaaaat ccttttggag gtatgccttg 30
<210> 80
<211> 33
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (29)..(33)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 80
acaataaaga tctcatggtt aaagactaac gga 33
<210> 81
<211> 34
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(34)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 81
gtcttttgta actccataat ttaacatcag cttc 34
<210> 82
<211> 32
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(32)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 82
agatttagag tataacctga tgcaaagcct ca 32
<210> 83
<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 83
ccttcactgg cttttctaaa ataaaaccac a 31
<210> 84
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 84
gatgacattc acagccttca catac 25
<210> 85
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 85
agctgtactc tgaggaatac acaaac 26
<210> 86
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 86
aaaagctgct ggacatactc taagttac 28
<210> 87
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 87
agaggcattg cttattgagg ttcaaaa 27
<210> 88
<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(30)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 88
gtcatttaag ttttctaagg agccacaaac 30
<210> 89
<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(30)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 89
ggtagattct ccctacttct acttccctta 30
<210> 90
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 90
ttcctgcttt cccagatgac cagaa 25
<210> 91
<211> 24
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(24)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 91
atcttggaat gctgcacctc tctt 24
<210> 92
<211> 29
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(29)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 92
ccttcattca attaagcatg tgtccttgg 29
<210> 93
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 93
ctgtgtgaag ctttcaattt accagaag 28
<210> 94
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 94
agctaaaaca gaagtctcac ccagga 26
<210> 95
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 95
gtaaacacct ttgactggct gattt 25
<210> 96
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 96
aaggatggct agaatgaggg cagag 25
<210> 97
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 97
cctacctcag aaagatagca ccctag 26
<210> 98
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 98
cagaaatggt taaatgcagg caagaaaa 28
<210> 99
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 99
acattagcat atggtttgat ccgggcat 28
<210> 100
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 100
gctcactaaa tgaatgggtg actttc 26
<210> 101
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 101
ctcaaggtct ctgcagagtt aggtta 26
<210> 102
<211> 24
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(24)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 102
tctctcggct tcccctaaac acac 24
<210> 103
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 103
caacagacag gaaagtgcag gagag 25
<210> 104
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 104
ttgacgatgc ttatgcggtt tctgaa 26
<210> 105
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 105
cccaggtgac taagaaatgc ctttc 25
<210> 106
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 106
gtctgtgctg tcgtgaaatt ccaag 25
<210> 107
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 107
tgaatcaagt cggtgaactg cccct 25
<210> 108
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 108
ccgaggtgat tgattggttt ggtca 25
<210> 109
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 109
ctgtaactat tcagccagca cttgc 25
<210> 110
<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(30)
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<400> 110
caggtaagtg gattgatgtg gttatcttac 30
<210> 111
<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 111
ccttgattat tttgcttggt tctcaactga g 31
<210> 112
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (18)..(22)
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<400> 112
ctctggaccc gagacagctg ct 22
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(23)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 113
aggttgagaa gccagtggcc gag 23
<210> 114
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(24)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 114
taggcagggt ccccaaatac atca 24
<210> 115
<211> 24
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(24)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 115
gctgagtaga caccatgcca aaaa 24
<210> 116
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 116
agggttacta ctttttagcc tgtcttaa 28
<210> 117
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 117
tctccgacaa caacaacaaa accacac 27
<210> 118
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 118
tttggtgaca ggtctcacat gagct 25
<210> 119
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 119
ggtatttctg tcacccacat ccctca 26
<210> 120
<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 120
ctgtcatact tagctactac cttgatcctt t 31
<210> 121
<211> 32
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(32)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 121
tgctattgtc gttattaaag tccagatctg at 32
<210> 122
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 122
tccatattcc atagtgtcct cccactt 27
<210> 123
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 123
agccgttcac taaagataac aatgaagg 28
<210> 124
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 124
cagcagcttc attctttcca gcata 25
<210> 125
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 125
tgcctcccag ttcttatcct aggaaa 26
<210> 126
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 126
ctcaactctc tcacagtgtt ggggatt 27
<210> 127
<211> 29
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(29)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 127
gtaaggtgta gatggaaatg ggatatagg 29
<210> 128
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 128
ggcacgcatt atttcagaac atactaga 28
<210> 129
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 129
gtctcctaat gttatcctct cctcactt 28
<210> 130
<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 130
ggtagtataa tcacgagcta atggtcccaa a 31
<210> 131
<211> 32
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(32)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 131
catttccatc tgattgttga cgatattgac aa 32
<210> 132
<211> 34
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(34)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 132
gaactattat atgttttgat ttgagggctg atag 34
<210> 133
<211> 33
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (29)..(33)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 133
gggtacaatt gtttttatca gagaaacagc ata 33
<210> 134
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 134
gaaacctacc agagtccttg atacagtt 28
<210> 135
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 135
ttggtgtctt taaccctcaa aagagga 27
<210> 136
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 136
ccctgtttcc ttgtcttgat tgtctc 26
<210> 137
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 137
gaggaatggg aagaagaagt ggcaga 26
<210> 138
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 138
tgtatgcaca cacaccttta aacacag 27
<210> 139
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 139
gggcctgata tatggtagga taacctta 28
<210> 140
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 140
atcaggatac caaaaattac cccccgat 28
<210> 141
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 141
tgagtgttgg aatcctagtg aaagaaag 28
<210> 142
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 142
gttctgtaac ataacccaac tcaccaat 28
<210> 143
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 143
cttgtcaaca cgaggttatg tcaactt 27
<210> 144
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 144
tgcattgatg aggtcttgtt gctagc 26
<210> 145
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 145
acagcatccc agacattatg actctg 26
<210> 146
<211> 33
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (29)..(33)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 146
gagtaggaga gaaatttgac ataatcaagt aaa 33
<210> 147
<211> 32
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(42)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 147
cttcatcaac atgtttctgt ttaactacag tg 32
<210> 148
<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 148
tcaagtagat ttgctttgaa ataggaggct a 31
<210> 149
<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(30)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 149
ttcctatgtg atgtgttttc aaaggcaagg 30
<210> 150
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 150
tgccttttat gtatattcgc tgtggagt 28
<210> 151
<211> 29
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(29)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 151
gatgagtaat gctatataca ccgccactg 29
<210> 152
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 152
agagactaca gctggctcct tca 23
<210> 153
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 153
agagtgttct cctaatccca gaacc 25
<210> 154
<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(30)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 154
caactatgta acttgtcagg aacatgattg 30
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(29)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 155
gacactgcaa aagcatgaaa attcccaca 29
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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<400> 156
cgatcattca ataaatgcag aaaaagtagc aca 33
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<211> 33
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (29)..(33)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 157
gaagcaattt ctaacatcat ttcatgagcc tca 33
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<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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<400> 158
catttctcta ccctctttca aacttccttc 30
<210> 159
<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 159
caaagttgat ctgactcttt taatgacttg c 31
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(27)
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<400> 160
ccatggtctt gtaaataggc atcatcc 27
<210> 161
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(23)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
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attgtaggca tggcactgcg aag 23
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<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<400> 162
agatgaacta ttcctagttt ccttcctgcc 30
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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gaataaaaca gcattttaaa ccccagacca 30
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<212> DNA/RNA
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<222> (28)..(32)
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<212> DNA/RNA
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<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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<212> DNA/RNA
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
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<213> 智人(Homo sapiens)
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<221> misc_feature
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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gagatagttt aggagaaagt gatacaaggg atg 33
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<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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ccagtatatg aaattggata ttgcagcagt c 31
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<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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gctcctttat aagcttcttc agtatatgtc 30
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
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<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
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<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<222> (24)..(28)
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<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
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ctagcaatga ccaataagca agtcactg 28
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
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gagaacacga aaaatattcc tactccgcat t 31
<210> 193
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(32)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
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cgctggcaca gttctatttt tatatttaaa tg 32
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<222> (22)..(26)
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ccccattgct gaattttacc tcctga 26
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
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<400> 195
gagattgtgc cattgcattc caacc 25
<210> 196
<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 196
agttctggcc agagaaatta gacacag 27
<210> 197
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
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<400> 197
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<210> 198
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
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<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 198
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<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
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<211> 30
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(30)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 200
tgggagtgat tctctaaaga gttttgtgtt 30
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<211> 31
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(31)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 201
aactaaattt cctctgcttt tggttaccac a 31
<210> 202
<211> 29
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(29)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 202
gaatgacgag aacataacac tagagacag 29
<210> 203
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 203
ctacaggaac acatgaagaa agtctcac 28
<210> 204
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 204
aaacactgtt tggactccac ctagg 25
<210> 205
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(26)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 205
ctgttggatt ctggaaacct actcct 26
<210> 206
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(28)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 206
aggcatgaat tactactgtc ctactgtg 28
<210> 207
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(25)
<223> 末端封闭序列，倒数第5位为RNA残基，末端三位之间为-S-连接，末位3’端为C3间隔臂封闭修饰。
<400> 207
agtgagctgt gattgcacta cactc 25
<210> 208
<211> 32
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 208
ttgtcttcct aagaccgctt ggcctccgac tt 32
<210> 209
<211> 25
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 209
gaacgacatg gctacgatcc gactt 25
<210> 210
<211> 33
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 210
acactctttc cctacacgac gctcttccga tct 33
<210> 211
<211> 34
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 211
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atct 34

Claims (7)

1.一种用于PCR扩增的引物组合，其特征在于，所述引物组合为SEQ ID NO:70至SEQ IDNO:207所示的引物的组合。
2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：权利要求1所述的引物组合。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括测序平台接头通用引物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述通用引物为SEQ ID NO:208和SEQID NO:209所示的MGI测序平台的通用引物，或者，所述通用引物为SEQ ID NO:210和SEQ IDNO:211所示的Illumina测序平台的通用引物。
5.一种非诊断目的的检测MSI状态的方法，所述方法包括对目标MSI位点进行PCR扩增检测的步骤，其特征在于，采用权利要求1所述的引物组合进行扩增；或者采用权利要求3或4所述的试剂盒进行扩增。
6.权利要求1所述的引物组合在制备检测MSI状态的试剂盒中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为扩增子文库构建试剂盒。
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