CN110129369B - 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用 - Google Patents
一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110129369B CN110129369B CN201810136172.XA CN201810136172A CN110129369B CN 110129369 B CN110129369 B CN 110129369B CN 201810136172 A CN201810136172 A CN 201810136172A CN 110129369 B CN110129369 B CN 110129369B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sequence
- cells
- chimeric antigen
- antigen receptor
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 66
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 63
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 41
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 108
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims abstract description 35
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims abstract description 28
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 108091093126 WHP Posttrascriptional Response Element Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 78
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 78
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 47
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 47
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 41
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 41
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 31
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 18
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 16
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 13
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 12
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 11
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 11
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 11
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 claims description 9
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 claims description 9
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 9
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 9
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 9
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims description 8
- 102100026423 Adhesion G protein-coupled receptor E5 Human genes 0.000 claims description 8
- 102100035248 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Human genes 0.000 claims description 8
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims description 8
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 claims description 8
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 8
- 108060001253 CD99 Proteins 0.000 claims description 8
- 102000024905 CD99 Human genes 0.000 claims description 8
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims description 8
- 101000718243 Homo sapiens Adhesion G protein-coupled receptor E5 Proteins 0.000 claims description 8
- 101001022185 Homo sapiens Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 claims description 8
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 8
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 8
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 8
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 claims description 8
- 102100040120 Prominin-1 Human genes 0.000 claims description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 8
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 claims description 6
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100037589 OX-2 membrane glycoprotein Human genes 0.000 claims description 6
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 claims description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 6
- 102100030801 Elongation factor 1-alpha 1 Human genes 0.000 claims description 5
- 101000920078 Homo sapiens Elongation factor 1-alpha 1 Proteins 0.000 claims description 5
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 5
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000010008 shearing Methods 0.000 claims description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 abstract description 36
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 31
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 8
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 abstract description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract description 4
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 abstract description 4
- 102100035932 Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein Human genes 0.000 description 62
- 101000715592 Homo sapiens Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein Proteins 0.000 description 62
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 34
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 10
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 9
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 9
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 9
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 8
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 5
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 5
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 5
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 5
- -1 acam6 Proteins 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 5
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 description 3
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000874179 Homo sapiens Syndecan-1 Proteins 0.000 description 3
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 3
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 3
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 3
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 3
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 3
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101800001494 Protease 2A Proteins 0.000 description 3
- 101800001066 Protein 2A Proteins 0.000 description 3
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 description 3
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 3
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 102220354910 c.4C>G Human genes 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 description 2
- 208000006468 Adrenal Cortex Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101001005269 Arabidopsis thaliana Ceramide synthase 1 LOH3 Proteins 0.000 description 2
- 101001005312 Arabidopsis thaliana Ceramide synthase LOH1 Proteins 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 2
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 description 2
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 2
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100028801 Calsyntenin-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 2
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 102100031734 Fibroblast growth factor 19 Human genes 0.000 description 2
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 102100022103 Histone-lysine N-methyltransferase 2A Human genes 0.000 description 2
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 2
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000846394 Homo sapiens Fibroblast growth factor 19 Proteins 0.000 description 2
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 101001045846 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2A Proteins 0.000 description 2
- 101001078143 Homo sapiens Integrin alpha-IIb Proteins 0.000 description 2
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 2
- 101000608935 Homo sapiens Leukosialin Proteins 0.000 description 2
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 101000971513 Homo sapiens Natural killer cells antigen CD94 Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 101000633786 Homo sapiens SLAM family member 6 Proteins 0.000 description 2
- 101000633784 Homo sapiens SLAM family member 7 Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 102100025306 Integrin alpha-IIb Human genes 0.000 description 2
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 2
- 102100037872 Intercellular adhesion molecule 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 2
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 2
- 102100039564 Leukosialin Human genes 0.000 description 2
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 102100021462 Natural killer cells antigen CD94 Human genes 0.000 description 2
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 2
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 2
- 108010069196 Neural Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 2
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 102100029197 SLAM family member 6 Human genes 0.000 description 2
- 101000668858 Spinacia oleracea 30S ribosomal protein S1, chloroplastic Proteins 0.000 description 2
- 101000898746 Streptomyces clavuligerus Clavaminate synthase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 2
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 2
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 201000011649 lymphoblastic lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 210000000626 ureter Anatomy 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000029584 urinary system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 102100033793 ALK tyrosine kinase receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000000872 ATM Human genes 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 108010004586 Ataxia Telangiectasia Mutated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100021247 BCL-6 corepressor Human genes 0.000 description 1
- 102100021256 BCL-6 corepressor-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 206010005098 Blastomycosis Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101001042041 Bos taurus Isocitrate dehydrogenase [NAD] subunit beta, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108700015174 CBFbeta-MYH11 fusion Proteins 0.000 description 1
- 102100034808 CCAAT/enhancer-binding protein alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100040750 CUB and sushi domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029968 Calreticulin Human genes 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003606 Congenital Rubella Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010043471 Core Binding Factor Alpha 2 Subunit Proteins 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 108010076010 Cystathionine beta-lyase Proteins 0.000 description 1
- 102100024812 DNA (cytosine-5)-methyltransferase 3A Human genes 0.000 description 1
- 108010024491 DNA Methyltransferase 3A Proteins 0.000 description 1
- 102100037799 DNA-binding protein Ikaros Human genes 0.000 description 1
- 101100193633 Danio rerio rag2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 102100029952 Double-strand-break repair protein rad21 homolog Human genes 0.000 description 1
- 102100035813 E3 ubiquitin-protein ligase CBL Human genes 0.000 description 1
- 208000001976 Endocrine Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100031785 Endothelial transcription factor GATA-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 1
- 206010014950 Eosinophilia Diseases 0.000 description 1
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 1
- 102100031690 Erythroid transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100033175 Ethanolamine kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100030708 GTPase KRas Human genes 0.000 description 1
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 102100032610 Guanine nucleotide-binding protein G(s) subunit alpha isoforms XLas Human genes 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 102100038885 Histone acetyltransferase p300 Human genes 0.000 description 1
- 102100027755 Histone-lysine N-methyltransferase 2C Human genes 0.000 description 1
- 102100027768 Histone-lysine N-methyltransferase 2D Human genes 0.000 description 1
- 102100038970 Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039121 Histone-lysine N-methyltransferase MECOM Human genes 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000779641 Homo sapiens ALK tyrosine kinase receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000894688 Homo sapiens BCL-6 corepressor-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100165236 Homo sapiens BCOR gene Proteins 0.000 description 1
- 101000945515 Homo sapiens CCAAT/enhancer-binding protein alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000892017 Homo sapiens CUB and sushi domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000793651 Homo sapiens Calreticulin Proteins 0.000 description 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000599038 Homo sapiens DNA-binding protein Ikaros Proteins 0.000 description 1
- 101000584942 Homo sapiens Double-strand-break repair protein rad21 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101001066265 Homo sapiens Endothelial transcription factor GATA-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001066268 Homo sapiens Erythroid transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 101000851032 Homo sapiens Ethanolamine kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000584612 Homo sapiens GTPase KRas Proteins 0.000 description 1
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001014590 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein G(s) subunit alpha isoforms XLas Proteins 0.000 description 1
- 101001014594 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein G(s) subunit alpha isoforms short Proteins 0.000 description 1
- 101000882390 Homo sapiens Histone acetyltransferase p300 Proteins 0.000 description 1
- 101001008892 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2C Proteins 0.000 description 1
- 101001008894 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2D Proteins 0.000 description 1
- 101000882127 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Proteins 0.000 description 1
- 101001033728 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase MECOM Proteins 0.000 description 1
- 101000726740 Homo sapiens Homeobox protein cut-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 description 1
- 101000960234 Homo sapiens Isocitrate dehydrogenase [NADP] cytoplasmic Proteins 0.000 description 1
- 101000599886 Homo sapiens Isocitrate dehydrogenase [NADP], mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000653374 Homo sapiens Methylcytosine dioxygenase TET2 Proteins 0.000 description 1
- 101001014610 Homo sapiens Neuroendocrine secretory protein 55 Proteins 0.000 description 1
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001109719 Homo sapiens Nucleophosmin Proteins 0.000 description 1
- 101000692980 Homo sapiens PHD finger protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 101001126417 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000728236 Homo sapiens Polycomb group protein ASXL1 Proteins 0.000 description 1
- 101000584499 Homo sapiens Polycomb protein SUZ12 Proteins 0.000 description 1
- 101000574016 Homo sapiens Pre-mRNA-processing factor 40 homolog B Proteins 0.000 description 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000797903 Homo sapiens Protein ALEX Proteins 0.000 description 1
- 101000761460 Homo sapiens Protein CASP Proteins 0.000 description 1
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 description 1
- 101000650694 Homo sapiens Roundabout homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000650697 Homo sapiens Roundabout homolog 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000654718 Homo sapiens SET-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 101000616523 Homo sapiens SH2B adapter protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000587430 Homo sapiens Serine/arginine-rich splicing factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 1
- 101000707546 Homo sapiens Splicing factor 3A subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000808799 Homo sapiens Splicing factor U2AF 35 kDa subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000658071 Homo sapiens Splicing factor U2AF 65 kDa subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000633429 Homo sapiens Structural maintenance of chromosomes protein 1A Proteins 0.000 description 1
- 101000708766 Homo sapiens Structural maintenance of chromosomes protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000799466 Homo sapiens Thrombopoietin receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000813738 Homo sapiens Transcription factor ETV6 Proteins 0.000 description 1
- 101000823316 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ABL1 Proteins 0.000 description 1
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 description 1
- 101000934996 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK3 Proteins 0.000 description 1
- 101001087416 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Proteins 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102100039905 Isocitrate dehydrogenase [NADP] cytoplasmic Human genes 0.000 description 1
- 102100037845 Isocitrate dehydrogenase [NADP], mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 101150069255 KLRC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 206010062038 Lip neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000035809 Lymphohistiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 101100404845 Macaca mulatta NKG2A gene Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 description 1
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 description 1
- 102100030803 Methylcytosine dioxygenase TET2 Human genes 0.000 description 1
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 101100193635 Mus musculus Rag2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037538 Myelomonocytic Juvenile Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014767 Myeloproliferative disease Diseases 0.000 description 1
- 102100022682 NKG2-A/NKG2-B type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 206010029132 Nephritis haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 102000007530 Neurofibromin 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010085793 Neurofibromin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000001759 Notch1 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010029755 Notch1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100022678 Nucleophosmin Human genes 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100026365 PHD finger protein 6 Human genes 0.000 description 1
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100029799 Polycomb group protein ASXL1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030702 Polycomb protein SUZ12 Human genes 0.000 description 1
- 206010036105 Polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 102100025820 Pre-mRNA-processing factor 40 homolog B Human genes 0.000 description 1
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 102100024933 Protein CASP Human genes 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 201000008183 Pulmonary blastoma Diseases 0.000 description 1
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 102100027702 Roundabout homolog 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100027739 Roundabout homolog 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025373 Runt-related transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032741 SET-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 102100021778 SH2B adapter protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102100029666 Serine/arginine-rich splicing factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 description 1
- 102100031713 Splicing factor 3A subunit 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038501 Splicing factor U2AF 35 kDa subunit Human genes 0.000 description 1
- 102100035040 Splicing factor U2AF 65 kDa subunit Human genes 0.000 description 1
- 206010041736 Sporotrichosis Diseases 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100029538 Structural maintenance of chromosomes protein 1A Human genes 0.000 description 1
- 102100032723 Structural maintenance of chromosomes protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 102100034196 Thrombopoietin receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100039580 Transcription factor ETV6 Human genes 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 102100022596 Tyrosine-protein kinase ABL1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025387 Tyrosine-protein kinase JAK3 Human genes 0.000 description 1
- 102100033019 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Human genes 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 1
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 1
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000026563 adrenal gland neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010420 adrenal neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 208000022506 anaerobic bacteria infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000016644 chronic atrophic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 201000011523 endocrine gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000010435 extracellular transport Effects 0.000 description 1
- 206010016629 fibroma Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000024348 heart neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 201000005992 juvenile myelomonocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006721 lip cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000017830 lymphoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000000516 mast-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000009091 myxoma Diseases 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 208000031223 plasma cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 201000006292 polyarteritis nodosa Diseases 0.000 description 1
- 208000019629 polyneuritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029340 primitive neuroectodermal tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010006693 promyelocytic leukemia-retinoic acid receptor alpha fusion oncoprotein Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000014680 small intestine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 208000025444 tumor of salivary gland Diseases 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 208000005494 xerophthalmia Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/27—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by targeting or presenting multiple antigens
- A61K2239/29—Multispecific CARs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/867—Retroviral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明属于细胞治疗领域，公开了一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用，包括慢病毒载体骨架、连接在慢病毒载体骨架上的调控元件和嵌合抗原受体基因序列，所述的调控元件包括WPRE元件、cPPT元件和RRE元件。所述的嵌合抗原受体基因序列包括独立表达的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列；或者，所述的嵌合抗原受体基因序列包括融合表达的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列。本发明的嵌合抗原受体基因工程载体安全性好，转染效率高，转染的免疫细胞能够快速扩增，杀伤效果大大提高。另外，较单一靶点的嵌合抗原受体免疫细胞对靶细胞的识别更精准，防止单靶点的脱靶效应。
Description
技术领域
本发明属于细胞治疗领域，具体地说，涉及一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用。该基因工程载体经病毒包装后可以稳定转染自体或者异体免疫细胞，通过双靶向识别达到特异性杀伤体内具有靶分子的目的细胞，从而起到临床治疗作用。
背景技术
嵌合抗原受体-Chimeric antigen receptor，简写为CAR。其中基于T细胞的嵌合抗原受体细胞治疗简称CART治疗，基于NK细胞的嵌合抗原受体细胞治疗简称CAR-NK治疗，也有基于γ/δT细胞的嵌合抗原受体细胞治疗，称为为Universal-CAR。不管采用哪种细胞，均是利用相应免疫细胞对靶细胞的强大的杀伤能力，达到清除体内肿瘤和某些类型细胞的作用。
自国际上首例复发的急性淋巴细胞白血病患者接受CART治疗到现在，对于复发难治B系急性淋巴细胞白血病和淋巴瘤的疗效取得了显著的临床疗效，并得到了业界公认。CART治疗技术经历了不断的更新，从最早的一代CART鲜有临床疗效，到二代CART取得显著疗效，后者是在一代CART的基础上增加了共刺激分子，如4-1BB或CD28。三代CART是在二代CART的基础上增加了两种共刺激分子，但一般认为三代CART不比二代CART具有优势，因此目前主流的还是基于二代CART技术进行的嵌合抗原受体治疗。
二代CART技术主要是针对肿瘤细胞膜表面抗原，将可识别该抗原的抗体分子中的轻链和重链可变区，通过连接肽进行串联，形成单链亲和抗体结构，然后与铰链区/跨膜区、共刺激分子和效应器分子进行病毒制备后在免疫细胞中融合表达，使得相应的免疫细胞具有特异性杀伤靶细胞的作用。目前基于CD19、CD20、CD30、CD33、GD2、BCMA、EGFR VIII、Mesothelin、CD138、CD38等的CART载体构建均是采用相同的融合表达策略。当前，基于嵌合抗原受体细胞治疗技术对于CD19阳性淋巴细胞白血病和淋巴瘤取得了非常显著的疗效。联合PD-1抗体和CART细胞治疗是一个不错的选择，目前有很多临床实验正在进行中。
然而，CART细胞应用于癌症治疗，在显示出疗效的同时，伴随有毒性和风险，甚至导致病人死亡。主要面临的问题有两个，首先，细胞因子释放综合症(cytokines releasesyndrome，CRS)是最显著的毒性，为头号安全风险。细胞因子释放综合症是基于T细胞的激活，是T细胞激活活性的一个反应，所以副作用是与CART的治疗机制正相关的临床反应。高度增殖的T细胞能引起CRS，表现为高热和肌痛，不稳定的低血压和呼吸衰竭。一般而言，CRS风暴的严重程度与患者接受CART治疗前体内的肿瘤细胞负荷有很大的相关性，但不排除少数患者在低负荷的情况下也会产生比较严重的CRS。其次，少数患者出现急性脑水肿，我们推测是由于患者基因组中转录翻译成为神经元细胞膜上某个蛋白的编码序列存在多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)或者突变(single nucleotide variant,SNV)，使得其抗原表位在结构上与CD19抗原表位结构上趋同，从而导致CART细胞对CD19阳性白血病细胞产生杀伤的同时，也产生了针对自身神经元细胞的细胞毒作用(脱靶效应)，并且我们觉得应该称为CART相关急性坏死性脑炎(CART related acute necroticencephalitis,CANE)更为合适。综上，目前一代、二代及三代的嵌合抗原受体仍然存在治疗副作用多、特异性差等问题。有鉴于此特提出本发明。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用。本发明的嵌合抗原受体基因工程载体安全性好，转染效率高，转染的免疫细胞能够快速扩增，杀伤效果大大提高。另外，本发明较单一靶点的嵌合抗原受体免疫细胞对靶细胞的识别更加精准，防止单一靶点的脱靶效应。
为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：
本发明的第一目的是提供一种嵌合抗原受体基因工程载体，包括慢病毒载体骨架、连接在慢病毒载体骨架上的调控元件和嵌合抗原受体基因序列，所述的调控元件包括WPRE元件、cPPT元件和RRE元件。
本申请将Gag(编码病毒结构蛋白)、Pol(编码病毒所需酶类蛋白)、Env(编码病毒膜蛋白)和Rev(编码一个可作用于Rev反应元件，即RRE的蛋白，调节病毒mRNA的细胞核外转运)等慢病毒所需元件放到三种不同的载体中表达，形成三质粒系统，大大降低了病毒重组的概率，可以确保人体使用的安全性。通过对入组患者的检测，最长患者治疗后10个月，体内未检测到慢病毒分子存在。
本申请的慢病毒载体骨架可以为常用的慢病毒载体，例如HIV-1来源的病毒载体。WPRE元件有助于提高病毒mRNA分子的稳定性，cPPT元件有助于病毒向细胞核内转移，从而更容易进行基因组的整合，提高稳定转染效率，而RRE元件有助于mRNA分子的核外转运，从而使得包装获得的病毒滴度高，病毒活力强，这是提高转染效率的关键。由于只有病毒转染阳性的细胞才具有特异性杀伤肿瘤细胞的作用，提高转染效率可以大大降低培养细胞的体系，节约前期生产成本。
进一步的方案，所述的嵌合抗原受体基因序列的上游插入有哺乳类组成型启动子，优选EF1A启动子。本申请的载体优选采用EF1A启动子启动外源基因的表达，EF1A启动子为人延长因子1α来源的哺乳动物组成型表达启动子，使得外源基因表达十分稳定，并且不受细胞类型的影响，可广泛用于T细胞、NK细胞、巨噬细胞等不同细胞类型。相对于CMV、SV40等启动子，除不受细胞类型影响外，更为重要的是外源蛋白表达稳定，不会过高的表达，从而对细胞生长影响小，这是CAR阳性T淋巴细胞在体外高速扩增的基础。
进一步的方案，所述的嵌合抗原受体基因序列包括独立表达的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列；或者，所述的嵌合抗原受体基因序列包括融合表达的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列。
独立表达的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列之间连接有自剪切序列；共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列分别独立跨膜表达，且在同时与靶位点结合、被激活时产生效应。本申请载体上的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列，在表达后为两条独立的跨膜的信号通路融合蛋白，一条为共刺激信号通路，一条为效应器信号通路；当两条信号通路均被激活时，嵌合抗原受体基因工程载体所修饰的免疫细胞才能够被激活，对靶细胞产生杀伤作用。当只有一条通路被激活时，免疫细胞不能够被激活，也不能产生杀伤作用。因此，与单一靶点的嵌合抗原受体免疫细胞对靶细胞的识别相比，这种方式更加精确；同时双靶向的联合识别作用也可以更好的防止单一靶点的脱靶，增强对靶细胞的特异性和杀伤力。
有研究发现CD19-CART治疗患者中部分患者出现急性脑水肿等严重危及生命的副反应，我们分析可能是患者神经元细胞中某种膜蛋白分子发生了突变，从而结构上与CD19抗体识别的抗原表位相近，造成了脱靶效应。而采用本申请的针对CD19抗原不同的抗原表位(至少两个抗原表位)的ScFv抗体，可以在很大程度上避免类似严重不良事件发生。
本申请提供的嵌合抗原受体基因工程载体策略，也可以也包括采用IRES和/或双启动子载体和/或多启动子载体等构建的嵌合抗原受体载体。
进一步的方案，所述的共刺激信号通路序列按照转录方向包括依次连接的第一引导肽序列、第一抗体序列和共刺激分子序列，所述的效应器信号通路序列按照转录方向包括依次连接的第二引导肽序列、第二抗体序列和效应器分子序列；所述的共刺激分子序列与第二引导肽序列之间，或者效应器分子序列与第一引导肽序列连接有自剪切序列。
第一引导肽序列和第二引导肽序列表达相同或不同的引导肽，能够分别引导共刺激信号通路序列表达的蛋白、效应器信号通路序列表达的蛋白至细胞膜；第一抗体和第二抗体位于细胞膜表面。当靶细胞表面存在与两个抗体分别作用的分子时，本申请的两个抗体分别与其结合，导致抗体结构发生改变，产生的信号可以激活其下游融合的蛋白。第一抗体产生的信号激活其下游的共刺激分子，第二抗体产生的信号激活其下游的效应器分子；共刺激分子和效应器分子均被激活后，导致ZNP70激活，这样免疫细胞，也就是CART细胞就激活了，且产生各种细胞因子，能够对靶细胞产生快速、特异性高的杀伤作用。
进一步的方案，所述的第一抗体序列或第二抗体序列包括但不限于：与靶细胞的细胞膜表面分子相互作用的分子序列、与靶细胞内部递呈到其细胞膜表面的特异分子相互作用的分子序列。抗体可以与靶细胞的细胞膜表面原有的分子设计的序列发生相互的结合作用包括：与靶细胞的细胞膜表面抗原作用，或者与非抗原蛋白作用。另外，靶细胞内表达的蛋白经降解等过程而递呈(包含但不限于MHC递呈途径)到细胞膜表面的蛋白片段或短肽所形成的特异性嵌合抗原受体靶点，抗体也可以与此类靶点结合而被激活。本申请中的双靶向是指该嵌合抗原受体基因工程表达载体上同时插入了两种针对靶细胞表面的两种相同或者不同的分子(抗原)所对应的ScFv抗体序列。优选的，第一抗体序列或第二抗体序列均为ScFv抗体序列，选自：与靶细胞的细胞膜表面抗原相互作用的分子序列。
进一步的方案，第一抗体序列或第二抗体序列选自：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27、CD28、CD30、CD33、CD34、CD36、CD37、CD38、CD40、CD41、CD42、CD43、CD44、CD45、CD56、CD58、CD66c、CD70、CD73、CD74、CD80、CD81、CD86、CD94、CD97、CD99、CD102、CD123、CD133、CD134、CD137、CD138、CD200、GD2、EGFR VIII、GD3、NG2、CA125、A33、CEA、CEACAM6、CS1、EGFR、ERBB2、FGF19、HER3、IL3Ra、NCAM、NKG2A、BCMA、NTBA、PD-1、PDL-1、PSMA、PSGL1、ROR1、VEGF中的至少一种。
进一步的方案，第一抗体序列和第二抗体序列的组合选自：CD19/CD19、CD19/CD20、CD19/CD123、CD19/CD66c、CD19/CD58、CD19/CD56、CD19/CD13、CD19/CD33、CD19/CD44、CD19/CD73、CD19/CD86、CD19/CD86、CD19/CD99、CD19/CD24、CD19/CD200、CD19/CD97、CD19/BDCA4、CD19/CD133、CD19/CD15、CD19/NG2、CD19/sIgM、CD20/CD20、CD20/CD20、CD20/CD123、CD20/CD66c、CD20/CD58、CD20/CD56、CD20/CD13、CD20/CD33、CD20/CD44、CD20/CD73、CD20/CD86、CD20/CD86、CD20/CD99、CD20/CD24、CD20/CD200、CD20/CD97、CD20/BDCA4、CD20/CD133、CD20/CD15、CD20/NG2、CD20/sIgM、CD22/CD22、CD22/CD22、CD22/CD123、CD22/CD66c、CD22/CD58、CD22/CD56、CD22/CD13、CD22/CD33、CD22/CD44、CD22/CD73、CD22/CD86、CD22/CD86、CD22/CD99、CD22/CD24、CD22/CD220、CD22/CD97、CD22/BDCA4、CD22/CD133、CD22/CD15、CD22/NG2、CD22/sIgM。上述组合可以单一，或者联合使用，从而可减少由于靶点丢失造成的治疗失败。优选地，采用CD19/CD19的组合。
上述方案中提到的不同ScFv抗体组合，是根据急性白血病细胞独特的免疫表型特征设计的，上述组合中CD19和CD22基本上是所有B系白血病细胞都表达的细胞膜抗原，而CD20是所有B系淋巴瘤淋巴瘤均表达的细胞膜抗原，同时联合相同的抗体序列或者其它抗体序列，可以做到特异性杀伤肿瘤细胞的作用，同时对正常的B淋巴细胞没有影响。我们进行了双靶向嵌合抗原受体的临床实验，11例入组患者均在CART细胞输注后8～28天获得分子缓解(MRD<0.01％)，从而证明了上述基于双靶向嵌合抗原受体治疗的有效性。
或者，所述的第一抗体序列和第二抗体序列还包括针对靶细胞内表达的蛋白经降解等过程而递呈到细胞膜表面的蛋白片段或短肽所形成的特异性前核抗原受体靶点设计的抗体序列。具体是指细胞内一些肿瘤源性基因突变蛋白产物或异常表达蛋白产物经蛋白酶体或其它机制降解后，经MHC分子或其它分子递呈到细胞膜表面，可以作为免疫细胞识别的靶点。针对这些递呈的肿瘤细胞突变蛋白产物或异常表达蛋白产物设计相应的抗体序列，经组装成嵌合抗原受体基因工程载体和病毒，通过转染免疫细胞并表达，可以识别特定的肿瘤细胞从而产生靶向杀伤作用。
优选的，突变蛋白产物或异常表达蛋白产物包括但不限于ABL1、ALK、ASXL1、ATM、BCOR、BCORL1、BRAF、CALR、CBL、CEBPA、CSF3R、CSMD1、CUX1、DNMT3A、EP300、ETNK1、ETV6、EZH2、FLT3、GATA1、GATA2、GNAS、IDH1、IDH2、IKZF1、JAK1、JAK2、JAK3、KIT、KMT2A、KMT2C、KMT2D、KRAS、MPL、NF1、NOTCH1、NPM1、NRAS、PDGFRA、PHF6、PRPF40B、PRPF8、PTEN、PTPN11、RAD21、ROBO1、ROBO2、RUNX1、SETBP1、SF1、SF3A1、SH2B3、SMC1A、SMC3、SRSF2、STAG2、SUZ12、TET2、TP53、U2AF1、U2AF2、WT1、ZRSR2等基因的突变；包括但不限于AML1-ETO、EWS-ETV1、NPM1-RARα、SCAF11-PDGFRA、AML1-MDS1/EVI1、EWS-ETV4、NUMA1-RARα、SDC4-ROS1、AML1-MTG16、EWSR1-ZNF384、NUP214-ABL1、SEC31A-ALK、ATF7IP-JAK2、EZR-ROS1、NUP98-HoxA9/11/13、SET-CAN、AXL-MBIP、FAM46C-MYC、NUP98-HoxC11、SFPQ-ABL1、BCOR-RARα、FGFR2-CIT、NUP98-HoxD13、SIL-TAL1、BCR-ABL1、FGFR2-WARS、NUP98-PMX1、SLC34A2-ROS1、BMP6-MYC、FGFR3-TACC3、OFD1-JAK2、SNX2-ABL1、CARS-ALK、FIG-ROS1、P2RY8-CRLF2、SPECC1-PDGFRB、CBFβ-MYH11、FIP1L1-PDGFRA、PAG1-ABL2、SQSTM1-ALK、CCDC6-PDGFRB、FIP1L1-RARα、PAX5-ASXL1、SSBP2-CSF1R、CCDC6-ROS1、FOXJ2-MEF2D、PAX5-AUTS2、SSBP2-JAK2、CCND1-MYC、FOXO3-MYC、PAX5-CBFA2T3、SSBP2-PDGFRB、CCND3-MYC、FOXP1-ABL1、PAX5-ESRRB、STAT5b-RARα、CD74-ROS1、FUS-CHOP、PAX5-JAK2、STRN3-JAK2、CLTC-ALK、FUS-FEV、PAX5-KIF3B、STRN-ALK、CREBBP-ZNF384、HBA1-CD74、PAX5-MLLT3、STRN-PDGFRA、DEK-CAN、HLXB9-ETV6、PAX5-RNF38、SYNRG-ZNF384、DGKH-ZFAND3、IQGAP2-TSLP、PAX5-SP2、TAF15-ZNF384、E2A-HLF、JAK2-SNX29、PAX5-TMEM14B、TCF3-ZNF384、E2A-PBX1、KDELR2-ROS1、PAX5-ZNF521、TERF2-JAK2、EBF1-JAK2、KIF5B-ALK、PCM1-JAK2、TFG-ALK、EBF1-PDGFRB、KIF5B-PDGFRA、PLEKHA6-NTRK3、TLS-ERG、EML4-ALK、KIF5B-RET、PLZF-RARα、TNIP1-PDGFRB、EP300-ZNF384、KLC1-ALK、PML-RARα、TPM3-ALK、ETV6-ABL、LRIG3-ROS1、PPF1BP1-JAK2、TPM3-ROS1、ETV6-ABL1、MEF2D-BCL9、PPFIBP1-ALK、TPM4-ALK、ETV6-ABL2、MEF2D-DAZAP1、PRKAR1A-RARα、TPR-JAK2、ETV6-JAK2、MEF2D-HNRNPUL1、PTK2B-KDM6A、TPR-MET、ETV6-NIPBL、MEF2D-JAK2、PTK2B-STAG2、TTL-ETV6、ETV6-NTRK3、MEF2D-SS18、PTPN3-ALK、TXNDC5-MYC、ETV6-PDGFRA、MLL rearrangement、PTPRZ1-MET、TYK2-MYB、ETV6-PDGFRB、MN1-ETV6、RANBP2-ABL1、UQCRH-EWS、ETV6-RUNX1、MN1-TEL、RB1-MYC、XBP1-MYC、ETV6-STL、MSN-ALK、RBM15-MKL1、ZC3HAV1-ABL2、EWS-ATF1、MYH9-ALK、RCSD1-ABL1、ZEB2-PDGFRB、EWS-CHN、MYH9-IL2RB、RCSD1-ABL2、ZMIZ1-ABL1、EWS-CHOP、NCOR1-LYN、RET-KTN1、ZMYM2-FGFR1、EWS-CREB1、NPM1-ALK、RET-RAB6IP2、ZNF384-RNF180、EWS-ERG、NPM1-MLF1、RNF213-ALK、ZSG-UQCRH等融合基因产物；包含但不限于IG和TCR重排产生的蛋白产物等。
进一步，共刺激信号通路序列包括按照转录方向依次连接的第一引导肽序列、第一抗体轻链VL序列、第一抗体连接肽序列、第一抗体重链VH序列、铰链区序列、跨膜区序列和共刺激分子序列；效应器信号通路序列包括按照转录方向依次连接的第二引导肽序列、第二抗体轻链VL序列、第二抗体连接肽序列、第二抗体重链VH序列、铰链区序列、跨膜区序列以及效应器分子序列；所述的共刺激分子序列与第二引导肽序列之间连接有自剪切序列。
进一步的方案，所述的共刺激分子序列选自4-1BB、OX40、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS序列中的至少一种；优选的，共刺激分子序列为4-1BB序列；所述的效应器分子序列选自CD3δ；自剪切序列选自P2A、T2A、F2A、E2A、BmCPV2A、BmIFV2A序列中的至少一种；优选的，自剪切序列为P2A序列。
进一步的方案，第一抗体序列或第二抗体序列选自SEQ ID NO:11～50所示的核苷酸序列；优选的，针对急性白血病和淋巴瘤，选择SEQ ID NO:11～40中的序列；优选的，针对神经母细胞瘤，选择SEQ ID NO:41～50中的序列。也可以使用相同的上述序列用于急性白血病和淋巴瘤B系恶性肿瘤的细胞免疫治疗。
进一步的，第一引导肽序列或者第一引导肽序列包括但不限于：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27、CD28、CD30、CD33、CD34、CD36、CD37、CD38、CD40、CD41、CD42、CD43、CD44、CD45、CD56、CD58、CD66c、CD70、CD73、CD74、CD80、CD81、CD86、CD94、CD97、CD99、CD102、CD123、CD133、CD134、CD137、CD138、CD200、EGFR、GD3、NG2、CA125、A33、CEA、CEACAM6、CS1、EGFR、ERBB2、FGF19、HER3、IL3Ra、NCAM、NKG2A、BCMA、NTBA、PD-1、PDL-1、PSMA、PSGL1、ROR1、VEGF等膜蛋白引导肽序列。优选的，引导肽序列选自SEQ ID NO:1～10。
连接肽序列是指将VL和VH串联起来的氨基酸序列，优选的序列为SEQ ID NO:51所示的核苷酸序列。铰链区序列是指介导激活信号从ScFv抗体传递到跨膜区的氨基酸序列，优选的序列为SEQ ID NO:52所示的核苷酸序列。跨膜区序列是指介导激活信号从铰链区跨膜传递到胞内区的氨基酸序列，优选的序列为SEQ ID NO:53所示的核苷酸序列。共刺激分子包含但不限于4-1BB、OX40、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS等分子的序列，优选的，共刺激分子序列为4-1BB序列，优选序列为SEQ ID NO:54所示的核苷酸序列。自剪切序列是指包含但不限于P2A、T2A、F2A、E2A、BmCPV2A、BmIFV2A序列，优选地，选自SEQ ID NO:55～58所示的核苷酸序列。效应器分子序列是指包含但不限于CD3δ序列，优选SEQ ID NO:59所示的核苷酸序列。
本发明的第二目的是提供一种采用如上所述的嵌合抗原受体基因工程载体制备的病毒，嵌合抗原受体基因工程载体与包装质粒转染于包装细胞系中，获得相应病毒；优选的，所述的病毒选自慢病毒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等。
本发明的第三目的是提供一种免疫细胞，所述的免疫细胞转染了如上所述的嵌合抗原受体基因工程载体或如上所述的病毒；
优选的，免疫细胞包括T细胞、NK细胞；所述的T细胞包括未经改造的T细胞、改造的T细胞、自体T细胞、异体T细胞；所述的NK细胞包括未经改造的NK细胞、改造的NK细胞、自体NK细胞、异体NK细胞；优选的，T细胞选自CD4阳性T淋巴细胞、CD8阳性T淋巴细胞、CD4和CD8双阳性T淋巴细胞中的至少一种；
优选的，免疫细胞由CD4阳性T淋巴细胞和CD8阳性T淋巴细胞组成，其中，CD4阳性T淋巴细胞的数量占总细胞数量的10％～90％；优选的，CD4阳性T淋巴细胞的数量占总细胞数量的20％～80％，更优选的，CD4阳性T淋巴细胞的数量占总细胞数量的40％～60％。
本发明的第四目的是提供如上所述的嵌合抗原受体基因工程载体，或者如上所述的病毒，或者如上所述的免疫细胞在制备治疗肿瘤疾病或免疫系统疾病的药物中的应用；
优选的，治疗肿瘤疾病的药物针对的疾病包括：急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、毛细胞白血病、肥大细胞白血病、浆细胞白血病、骨髓瘤、骨髓增生性疾病、幼年型粒单核细胞型白血病、混合系白血病、各种淋巴瘤和淋巴母细胞瘤、何杰金氏病、神经母细胞瘤、肺母细胞瘤、胰母细胞瘤、肾母细胞瘤、原始神经外胚层肿瘤、肾癌、膀胱癌、生殖腺肿瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤、骨肿瘤、骨肉瘤、尤文肉瘤、软组织肉瘤、黑色素瘤、各种小圆细胞瘤、肾、输尿管、膀胱、尿道肿瘤、肾上腺皮质肿瘤、肾上腺神经母细胞瘤、视网膜瘤、星形细胞瘤、脑胶质瘤、室管膜瘤、软黄囊瘤、畸胎瘤、髓母细胞瘤、小细胞和非小细胞肺癌和支气管肿瘤、朗格罕氏细胞淋巴组织细胞增生症、嗜酸细胞增多综合征、嗜酸细胞肿瘤、各种类型皮肤癌、各种纤维瘤和纤维肉瘤、乳腺癌、口腔癌、鼻咽癌、颅咽管瘤、唇癌、涎腺肿瘤、食管癌、胃癌、小肠肿瘤、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、胆管癌、心脏肿瘤、阴道肿瘤、子宫癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸肿瘤、多发性内分泌瘤综合征、垂体瘤、胸腺瘤、粘液瘤；
优选的，治疗免疫系统疾病的药物针对的疾病包括：自身免疫性疾病、病毒感染性疾病、细菌性或真菌性感染疾病；其中，自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、慢性溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、寻常天疱疮、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、多发性脑脊髓硬化症、急性特发性多神经炎、系统性红斑狼疮、口眼干燥综合征、强直性脊柱炎、硬皮病、结节性多动脉炎、Wegener肉芽肿病。细菌性或真菌性感染疾病包括葡萄球菌、链球菌、变形杆菌、绿脓杆菌痢疾杆菌、百日咳杆菌、放线菌、破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌、脑膜炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、肺炎球菌、肺炎杆菌、肠球菌、不动杆菌、流血嗜血杆菌、大肠杆菌、军团菌、芽孢菌、厌氧菌感染；各种念珠菌、曲霉菌、毛霉菌、隐球菌、马内菲青霉菌、孢子丝菌、着色芽生菌感染；立克次氏体、螺旋体、支原体、衣原体、各种原虫感染。
采用上述技术方案后，本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
1、本发明通过改造嵌合抗原受体基因工程载体，插入调控元件、启动子、优化碱基序列等使载体的安全性好，转染效率高，转染的免疫细胞能够快速扩增，杀伤效果大大提高。
2、本发明通过采用双靶向的嵌合抗原受体基因工程载体作为CART治疗的的载体，相应的载体经病毒包装后可以进行自体或异体免疫细胞(T细胞和/或NK细胞和/或γ/δT细胞)的转染和扩增，用以细胞免疫治疗。双靶向嵌合抗原受体可以针对细胞膜表面的一种或者几种抗原设计，相同抗原可以为相同或者不同的ScFv序列。嵌合抗原受体与靶细胞膜表面抗原结合后，经过信号转导，可以实现共刺激信号分子和效应器信号分子的同时且单独激活，从而激活修饰的免疫细胞发挥抗肿瘤等的作用。因此，与单一靶点的嵌合抗原受体免疫细胞对靶细胞的识别相比，这种方式更加精确；同时双靶向的联合识别作用也可以更好的防止单一靶点的脱靶，增强对靶细胞的特异性和杀伤力。另外，能够降低与正常细胞表面类似的或者异变分子的结合作用，减少了其攻击正常细胞的几率，提高了使用的安全性。
3、本申请的嵌合抗原受体序列中，跨膜区序列与共刺激信号分子或者效应器信号分子之间没有linker，能够缩短信号通路，提高信号转导效率，从而使得T细胞等免疫细胞的激活效率提高，对于提高CART细胞的体外杀伤效果非常重要。
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的描述。
附图说明
附图作为本发明的一部分，用来提供对本发明的进一步的理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，但不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1是本发明的嵌合抗原基因工程载体的结构示意图；
图2是独立表达的共刺激分子信号通路和效应器分子信号通路的核心序列；
图3是本发明双靶向嵌合抗原受体结构图；
图4是本申请的载体与Novartis慢病毒载体的转染效率的比较结果；其中，a～c为Novartis慢病毒载体包装的转染效率，d～e为采用本专利载体包装的慢病毒转染效率，f为未转染的对照。
图5是本发明CD19双靶向特异性CAR的T淋巴细胞体外细胞杀伤实验；其中，图5a-图5c分别为试验组第0天、第1天以及第2天的体外细胞杀伤实验结果；图5d-图5f分别为对照组第0天、第1天以及第2天的体外细胞杀伤实验结果；
图6是本发明一例难治性急性淋巴细胞白血病CD19双靶向特异性CART输注前后微量残留病检测结果；6A-6C是CD19双靶向特异性CART细胞输注前残留病的检测结果；6D-6F是输注CD19双靶向特异性CART细胞后第8天的检测结果；
图7是一例二次复发急性淋巴细胞白血病CD19双靶向特异性CART输注前后微量残留病检测结果；
图8是一例移植后复发急性淋巴细胞白血病CD19双靶向特异性CART输注前后微量残留病检测结果；
图9是CD19双靶向特异性CART细胞体外增殖实验与其他公司的比较结果；其中，起始细胞的数目为1×109；
图10是本申请的Double-CAR-CD19与Novartis CD19-CAR杀伤效果对比(E/T＝1:20)；
图11是本申请双靶向载体和Novartis慢病毒载体公司转染细胞体外杀伤效果比较；
图12是CD4与CD8的合适比例与细胞毒作用的关系；
图13是入组患者的无复发生存率(Relapse-free survival,RFS)；
图14是入组患者的总生存率(Overall survival,OS)。
需要说明的是，这些附图和文字描述并不旨在以任何方式限制本发明的构思范围，而是通过参考特定实施例为本领域技术人员说明本发明的概念。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1：1)首先，构建嵌合抗原受体基因工程载体。通过基因合成的方法合成相应的序列，并测序验证。选择合适的酶切位点将上述序列插入到腺病毒、逆转录病毒或慢病毒载体中合适的位置，并经测序验证。如图1和图2所示，嵌合抗原受体基因工程载体包括：
RRE序列插入到载体的多克隆位点的上游，WPRE序列和cPPT序列插入到多克隆位点的下游，EF1A启动子插入到RRE序列与多克隆位点的上游之间，用于启动插入多克隆位点的嵌合抗原受体基因。对嵌合抗原受体结构蛋白上游的序列进行优化，优化后序列如SEQID NO60所示，使得外源蛋白表达稳定且持续，对于提高CART细胞的体外杀伤效果非常重要。
引导肽序列构建：膜蛋白引导肽序列，优选引导肽序列见SEQ ID NO:1～10。
与靶细胞上A或B靶点对应的第一抗体和第二抗体的序列，也就是ScFv抗体轻链VL序列和重链VH序列构建：针对急性白血病和淋巴瘤，我们选择SEQ ID NO:11～40中的序列，可以选择相同的或者不同的两个序列用于这些疾病的细胞免疫治疗。以CD19为靶点治疗CD19阳性白血病和淋巴瘤的的ScFv抗体轻链VL序列和重链VH序列为例，可以选择SEQ IDNO:11～14,19～40中的序列，可以选择相同的基于CD19的上述序列用于B系恶性肿瘤的细胞免疫治疗。针对神经母细胞瘤，我们选择SEQ ID NO:19～20，41～50中的序列。
连接肽序列构建：指将VL和VH串联起来的氨基酸序列，优选的序列见SEQ ID NO:51中提供的序列。铰链区序列构建：指介导激活信号从ScFv传递到跨膜区的氨基酸序列，优选的序列见SEQ ID NO:52中提供的序列。跨膜区序列构建：是指介导激活信号从铰链区跨膜传递到胞内区的氨基酸序列，优选的序列见SEQ ID NO:53中提供的序列。共刺激分子序列构建：是指包含但不限于4-1BB、OX40、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS等分子的序列。优选地，4-1BB的序列见SEQ ID NO:54中提供的序列。自剪切序列构建：指包含但不限于P2A、T2A、F2A、E2A、BmCPV2A、BmIFV2A等，优选地，P2A序列见SEQ ID NO:55～58中提供的序列。效应器分子序列：是指包含但不限于CD3δ序列，相应的序列见SEQ IDNO:59中提供的序列。
序列组装：除了一般的表达载体组件，以CD19为靶点的嵌合抗原受体基因工程载体序列组成包含但不限于下述结构：CD8引导肽—CD19ScFv—铰链区—CD8跨膜区—4-1BB—P2A—CD8引导肽—CD19ScFv—铰链区—CD8跨膜区—CD3δ-TGA。本申请的跨膜区序列与共刺激信号分子或者效应器信号分子之间没有linker，能够缩短信号通路，提高信号转导效率，从而使得T细胞等免疫细胞的激活效率提高，对于提高CART细胞的体外杀伤效果非常重要。
通过设计合适的酶切位点，将上述序列进行酶切后与采用相同酶切的载体进行连接，连接产物转化DH5α或stbl3感受态大肠杆菌，阳性克隆接种后过夜，细菌抽提质粒后酶切鉴定和送测序。测序结果完全正确的载体即为本实施例的嵌合抗原受体基因工程载体。共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列分别表达后的双靶向嵌合抗原受体的结构如图3所示。
其次，通过将上述载体和病毒包装质粒进行合适比例混合，转染293T细胞72h和96h后收集培养上清并进行病毒浓缩。再次，通过实时定量PCR方法，结合病毒的不同浓度梯度转染293细胞进行病毒滴度的确定。再次，通过收集人外周血不同的免疫细胞进行上述病毒的转染，确保转染效率在20％以上，从中找到合适的MOI值用于临床治疗。需要指出的是，每批病毒均需要进行上述操作，确保临床试验的疗效稳定可靠。
再次，通过转染人外周血不同的免疫细胞进行转染效率的检测，对CD19为靶点的CART而言，采用针对ScFv的Fab片段作为流式细胞检测阳性转染效率的客观依据。也可以采用实时定量PCR的方法进行转染效率的检测方案。
再次，通过将病毒转染的CART细胞等免疫细胞与CD19阳性细胞株进行一定比例混合和共孵育，在0h、24h和48h后通过流式细胞技术进行体外杀伤检测，比较不同孵育时间的细胞杀伤效果并与对照病毒进行比较。
再次，通过采集外周血0.5～1ml/Kg，磁珠分选获得CD3阳性T细胞或者CD56获得NK细胞，或者TCRγ/δ分选获得γ/δT细胞，加入CD3/CD28免疫磁珠进行刺激激活和病毒转染，继续给予CD3/CD28免疫磁珠、Interleukin7和Interleukin15进行体外扩增，一般7～8天可以扩增100倍以上，达到合适细胞数量后经洗涤回输人体。回输人体CART阳性细胞数量在1×104/Kg～5×107/Kg，并根据体内负荷进行调整，优选地在2×105/Kg～2×107/Kg。
由于病毒转染阳性的细胞才具有特异性杀伤肿瘤细胞的作用，提高转染效率可以大大降低培养细胞的体系，节约前期生产成本。同时转染阴性的细胞在培养时也会被CD3/CD28免疫磁珠激活，与病毒转染阳性的细胞争夺营养，且由于转染阴性的细胞没有产生额外表达外源蛋白的压力，培养时间长后会导致转染体系中病毒转染阳性细胞比例的进一步降低。本发明的双靶向嵌合抗原受体载体制备的针对CD19阳性白血病和淋巴瘤病毒，经体外转染后一般转染效率在20％以上，绝大部分在40～70％之间，如附图4所示，图4中，a～c为其它慢病毒载体包装的转染效率，d～e为采用本项专利技术载体包装的慢病毒转染效率，f为未转染的对照。
本发明的双靶向嵌合抗原受体载体制备的针对CD19阳性白血病和淋巴瘤病毒，经体外转染后按照CART细胞：CD19阳性白血病细胞株＝1:10～1:20的比例混合和共孵育，作为试验组；同时采用无关序列制备载体包装获得的病毒作为对照组。两组细胞对靶细胞的杀伤作用的结果如图5所示。其中，图5a-图5c分别为试验组第0天、第1天以及第2天的体外细胞杀伤实验结果；图5d-图5f分别为对照组第0天、第1天以及第2天的体外细胞杀伤实验结果。可以看出，与对照组相比，本方案的CD19双靶向嵌合抗原受体载体制备的病毒转染的CART细胞在24h和48h共孵育后，对靶细胞的杀伤作用大大增强。
试验例1：一例复发的CD19阳性急性淋巴细胞白血病患者经此CD19双靶向嵌合抗原受体载体制备的病毒转染的CART细胞，结果如附图6所示。图6中，6A-6C是CD19双靶向特异性CART细胞输注前残留病的检测结果；6D-6F是输注CD19双靶向特异性CART细胞后第8天的检测结果，MRD为33.1％。说明其在CART治疗后第8天，骨髓MRD达到分子缓解(MRD<0.01％)。
试验例2：一例二次复发后再诱导失败的CD19阳性急性淋巴细胞白血病患者经此CD19双靶向嵌合抗原受体载体制备的病毒转染的CART细胞，结果如附图7所示.图7中，7A-7C是CD19双靶向特异性CART细胞输注前残留病的检测结果，MRD为11.7％；7D-7F是输注CD19双靶向特异性CART细胞后第8天的检测结果。说明在CART治疗后第8天，骨髓MRD达到分子缓解(MRD<0.01％)。
试验例3：一例骨髓复发的CD19阳性淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病患者经此CD19双靶向嵌合抗原受体载体制备的病毒转染的CART细胞后检测结果如图8所示。图中，如8A-8C所示，没有输注CART细胞前，骨髓中有大量的肿瘤细胞，MRD＝95.6％，而其在CART治疗后第8天，骨髓中仅有少量肿瘤细胞(MRD＝0.012％)，如8D-8F所示；CART治疗后第28天，骨髓MRD达到分子缓解(MRD<0.01％)，如8G-8I所示，说明治疗的过程快速且有效。
试验例4：CART细胞的体外扩增实验发现，如图9所示，采用本申请双靶向嵌合抗原受体载体制备的慢病毒、Novartis慢病毒载体在体外转染人T淋巴细胞后的生长大为不同。其它公司的病毒转染后CART细胞在7天的时间内扩增了14倍左右，而本申请载体转染的CART细胞在7天的少见内扩增了160倍，体外扩增速度大大提高。由于这些患者均处于疾病终末期，体外培养扩增时间的缩短对于治疗安全非常重要。
试验例5：将本发明制备的病毒转染的CART细胞与来自Novartis的CART细胞进行了体外杀伤实验的比较，实验结果如图10所示。结果表明，与Novartis公司的CD19-CAR杀伤效果对比，本发明的双靶向基因工程载体制备获得的CART细胞(Double-CAR-CD19)的体外杀伤活性明显增强，其结果如图10所示。其中，图10A为输注0小时效果的比较，图10B为输注16小时的效果比较。
试验例6：将本申请的体外杀伤作用与专利CN103483452A中的技术进行了比较，本申请着重提出效靶比的问题。效靶比是效应器细胞(CART细胞)：靶细胞(肿瘤细胞)，我们在1:10～1:20的时候可以获得99.9％的杀伤效果，专利CN103483452A中做的是1～50:1，得到的杀伤效果也达不到本申请的水平。如图11所示。说明：采用E:T不同比例组合进行体外杀伤实验，在E:T＝1:20时，可以将99.9％的靶细胞杀死，而专利CN103483452A的CART在E:T＝50:1时尚达不到上述杀伤效果，值得注意的是，由于T细胞与靶细胞存在非特异性杀伤，在E:T＝1:1或更低时，专利CN103483452A的CART细胞与对照无显著差异。
试验例7：我们在体外研究中发现，转染阳性的CART细胞中CD4与CD8细胞的合适比例是取得更好细胞毒作用的关键因素之一，通过体外实验我们发现，当CD4:CD8比例介于40％～60％之间时，可以获得对靶细胞的高效杀伤，而由于患者接受化疗药物等，其CD4:CD8细胞比例常常偏离上述范围，对其临床疗效的发挥影响巨大。相应的检测结果见图12所示。其中，CD4:CD8＝10％:90％的结果与CD4:CD8＝0％:100％的结果类似；CD4:CD8＝90％:10％的结果与CD4:CD8＝100％:0％的结果类似，这两个结果未在图中展示。由结果可以看出，当CD4的数量占总细胞数量的40％-60％时，杀伤效果最佳。尤其是CD4：CD8＝60％:40％时，杀伤效果最好。
试验例8：CART细胞获得高的转染效率、高效扩增和合适比例是造成体内高效杀伤靶细胞和获得体内临床疗效的基础，采用本专利技术的CART细胞治疗临床入组患者，所有入组10例难治、复发的CD19阳性血液系统恶性肿瘤患者(9例B系急性淋巴细胞白血病患者和1例B系淋巴瘤患者)均在CD19-CART治疗后15天～1个月获得形态学完全缓解和分子缓解，后者经过流式细胞技术检测微量残留病(MRD)均<0.01％。其中1例患者早期死于验证的中枢神经系统细胞因子风暴，3例患者复发，其中2例患者经二次CART治疗后获得再次形态和分子缓解，平均6个月的无复发生存率(RFS)且经过1年的临床观察，入组患者的无事件生存率为52.5％。除上述1例患者死于早期中枢神经系统细胞因子风暴外，3例复发患者中1例死于后期化疗相关的感染，8例患者存活，且骨髓形态学和MRD检测均处于缓解状态，没有原发病存在依据，总生存率达到77.14％，结果如图13和图14所示。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。
Claims (10)
1.一种嵌合抗原受体基因工程载体，其特征在于，包括慢病毒载体骨架、连接在慢病毒载体骨架上的调控元件和嵌合抗原受体基因序列，所述的调控元件包括WPRE元件、cPPT元件和RRE元件；
所述的嵌合抗原受体基因序列的上游插入有EF1A启动子；
所述的嵌合抗原受体基因序列包括独立表达的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列；
独立表达的共刺激信号通路序列和效应器信号通路序列中，共刺激信号通路序列按照转录方向包括依次连接的第一引导肽序列、第一抗体序列和共刺激分子序列，所述的效应器信号通路序列按照转录方向包括依次连接的第二引导肽序列、第二抗体序列和效应器分子序列；所述的共刺激分子序列与第二引导肽序列之间，或者效应器分子序列与第一引导肽序列连接有自剪切序列；
共刺激信号通路序列包括按照转录方向依次连接的第一引导肽序列、第一抗体轻链VL序列、第一抗体连接肽序列、第一抗体重链VH序列、铰链区序列、跨膜区序列以及共刺激分子序列；
效应器信号通路序列包括按照转录方向依次连接的第二引导肽序列、第二抗体轻链VL序列、第二抗体连接肽序列、第二抗体重链VH序列、铰链区序列、跨膜区序列以及效应器分子序列；
跨膜区序列与共刺激信号分子或者效应器信号分子之间没有linker；
第一抗体序列或第二抗体序列选自SEQ ID NO:11～50所示的核苷酸序列；针对急性白血病和淋巴瘤，选择SEQ ID NO:11～40中的序列；针对神经母细胞瘤，选择SEQ ID NO:41～50中的序列；
第一引导肽和第二引导肽的序列选自SEQ ID NO:1～10所示的序列；第一抗体连接肽序列和第二抗体连接肽序列如SEQ ID NO:51所示；铰链区序列如SEQ ID NO:52所示；跨膜区序列如SEQ ID NO:53所示；
共刺激分子序列为4-1BB序列，所述的4-1BB序列如SEQ ID NO:54所示；
自剪切序列为P2A序列，P2A序列选自如SEQ ID NO:55-58所示的序列；
效应器分子序列为CD3ζ序列，CD3ζ序列如SEQ ID NO:59所示。
2.根据权利要求1所述的一种嵌合抗原受体基因工程载体，其特征在于，所述的第一抗体序列或第二抗体序列选自：与靶细胞的细胞膜表面分子相互作用的分子序列、与靶细胞内部递呈到其细胞膜表面的特异分子相互作用的分子序列。
3.根据权利要求2所述的一种嵌合抗原受体基因工程载体，其特征在于，第一抗体序列和第二抗体序列的组合选自：CD19/CD19、CD19/CD20、CD19/CD123、CD19/CD66c、CD19/CD58、CD19/CD56、CD19/CD13、CD19/CD33、CD19/CD44、CD19/CD73、CD19/CD86、CD19/CD99、CD19/CD24、CD19/CD200、CD19/CD97、CD19/BDCA4、CD19/CD133、CD19/CD15、CD19/NG2、CD19/sIgM、CD20/CD20、CD20/CD123、CD20/CD66c、CD20/CD58、CD20/CD56、CD20/CD13、CD20/CD33、CD20/CD44、CD20/CD73、CD20/CD86、CD20/CD99、CD20/CD24、CD20/CD200、CD20/CD97、CD20/BDCA4、CD20/CD133、CD20/CD15、CD20/NG2、CD20/sIgM、CD22/CD22、CD22/CD123、CD22/CD66c、CD22/CD58、CD22/CD56、CD22/CD13、CD22/CD33、CD22/CD44、CD22/CD73、CD22/CD86、CD22/CD99、CD22/CD24、CD22/CD97、CD22/BDCA4、CD22/CD133、CD22/CD15、CD22/NG2、CD22/sIgM。
4.一种免疫细胞，其特征在于，所述的免疫细胞转染了如权利要求1-3任一所述的嵌合抗原受体基因工程载体。
5.根据权利要求4所述的免疫细胞，其特征在于，免疫细胞包括T细胞、NK细胞；所述的T细胞包括未经改造的T细胞、改造的T细胞、自体T细胞、异体T细胞；所述的NK细胞包括未经改造的NK细胞、改造的NK细胞、自体NK细胞、异体NK细胞。
6.根据权利要求5所述的免疫细胞，其特征在于，T细胞选自CD4阳性T淋巴细胞、CD8阳性T淋巴细胞、CD4和CD8双阳性T淋巴细胞中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的免疫细胞，其特征在于，免疫细胞由CD4阳性T淋巴细胞和CD8阳性T淋巴细胞组成，其中，CD4阳性T淋巴细胞的数量占总细胞数量的10%～90%。
8.根据权利要求7所述的免疫细胞，其特征在于，CD4阳性T淋巴细胞的数量占总细胞数量的20%～80%。
9.根据权利要求8所述的免疫细胞，其特征在于，CD4阳性T淋巴细胞的数量占总细胞数量的40%～60%。
10.如权利要求1-3任一项所述的嵌合抗原受体基因工程载体，或者如权利要求4-9任意一项所述的免疫细胞在制备治疗肿瘤疾病或免疫系统疾病的药物中的应用；所述的肿瘤疾病包括急性白血病，淋巴瘤和神经母细胞瘤。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810136172.XA CN110129369B (zh) | 2018-02-09 | 2018-02-09 | 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用 |
| PCT/CN2019/073843 WO2019154204A1 (zh) | 2018-02-09 | 2019-01-30 | 一种嵌合抗原受体基因工程载体、修饰的免疫细胞及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810136172.XA CN110129369B (zh) | 2018-02-09 | 2018-02-09 | 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110129369A CN110129369A (zh) | 2019-08-16 |
| CN110129369B true CN110129369B (zh) | 2023-10-13 |
Family
ID=67549279
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810136172.XA Active CN110129369B (zh) | 2018-02-09 | 2018-02-09 | 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110129369B (zh) |
| WO (1) | WO2019154204A1 (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110331134B (zh) * | 2019-07-19 | 2023-09-08 | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 | 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用 |
| CN115427055A (zh) * | 2020-03-09 | 2022-12-02 | 四川大学华西医院 | IFN-γ在制备抗肿瘤辅助药物中的应用 |
| US20230310600A1 (en) * | 2020-08-07 | 2023-10-05 | Crage Medical Co., Limited | Engineered cells and method for engineering cells |
| CN112301059B (zh) * | 2020-09-23 | 2023-04-25 | 杭州美中疾病基因研究院有限公司 | 一种基于复制缺陷性重组慢病毒的car-nk转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN118064467A (zh) * | 2020-11-02 | 2024-05-24 | 上海医药集团生物治疗技术有限公司 | 两个或多个靶点嵌合抗原受体基因工程载体及其应用 |
| CN113388643A (zh) * | 2021-06-18 | 2021-09-14 | 廖文强 | 一种具有分子开关的基因序列、质粒和免疫细胞 |
| CN117761308B (zh) * | 2023-07-21 | 2024-08-30 | 上海市第一人民医院 | 筛选目标抗原特异性t细胞的标志物组合及其用途 |
Citations (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103483452A (zh) * | 2012-06-12 | 2014-01-01 | 上海吴孟超医学科技基金会 | 双信号独立的嵌合抗原受体及其用途 |
| CN103965361A (zh) * | 2013-02-06 | 2014-08-06 | 上海细胞治疗工程技术研究中心有限公司 | 一种t细胞信号的嵌合分子转换器及其用途 |
| EP2817331A1 (en) * | 2012-02-22 | 2014-12-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of the cd2 signaling domain in second-generation chimeric antigen receptors |
| WO2015188141A2 (en) * | 2014-06-06 | 2015-12-10 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Ceneter | Mesothelin-targeted chimeric antigen receptors and uses thereof |
| CN105384825A (zh) * | 2015-08-11 | 2016-03-09 | 南京传奇生物科技有限公司 | 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用 |
| CN105950664A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-21 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向cd123的复制缺陷性重组慢病毒car-t转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN105950663A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-21 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向cd30的复制缺陷性重组慢病毒car-t转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN105950662A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-21 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向cd22的复制缺陷性重组慢病毒car-t转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN105969805A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-28 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向Mesothelin的复制缺陷性重组慢病毒CAR-T转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN106279438A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-01-04 | 胜武（北京）生物科技有限公司 | 新型嵌合抗原受体及其用途 |
| CN106573050A (zh) * | 2014-05-29 | 2017-04-19 | 宏观基因有限公司 | 特异性结合多种癌症抗原的三特异性结合分子和其使用方法 |
| CN106749675A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-05-31 | 深圳市体内生物医药科技有限公司 | 一种重组慢病毒及其应用 |
| CN107099546A (zh) * | 2017-06-07 | 2017-08-29 | 胜武（北京）生物科技有限公司 | 一种调控嵌合抗原受体表达的方法 |
| CN107164410A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-09-15 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的前列腺癌car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107177632A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-09-19 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的髓系白血病car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107245500A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-10-13 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的淋系白血病car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107267555A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-10-20 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的恶性胶质瘤car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107287164A (zh) * | 2017-07-07 | 2017-10-24 | 青岛协和华美医学诊断技术有限公司 | 靶向cd19的嵌合抗原受体t细胞、制备方法及应用 |
| CN107299110A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-10-27 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的胰腺癌、恶性间皮瘤car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107326014A (zh) * | 2017-07-31 | 2017-11-07 | 时力生物科技（北京）有限公司 | 一种双特异性嵌合抗原受体修饰的t淋巴细胞及其制备方法和应用 |
| CN107325185A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-11-07 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 基于octs‑car的抗psca及pdl1双靶向嵌合抗原受体、编码基因及表达载体 |
| CN107337736A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-11-10 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | Octs‑car双靶向嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体及其构建和应用 |
| CN107557388A (zh) * | 2017-07-26 | 2018-01-09 | 生研医药科技（武汉）有限公司 | 一种用于car‑t制备的慢病毒载体及其构建方法和应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105602992B (zh) * | 2016-03-17 | 2019-06-21 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于复制缺陷性重组慢病毒的car-t转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN106047934B (zh) * | 2016-08-09 | 2020-04-07 | 李因传 | 一种多编码框、非整合型慢病毒载体的构建和应用 |
| CN107287207B (zh) * | 2017-08-01 | 2019-02-26 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种用于体内示踪和人工清除car-t细胞的标签和应用 |
-
2018
- 2018-02-09 CN CN201810136172.XA patent/CN110129369B/zh active Active
-
2019
- 2019-01-30 WO PCT/CN2019/073843 patent/WO2019154204A1/zh active Application Filing
Patent Citations (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2817331A1 (en) * | 2012-02-22 | 2014-12-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of the cd2 signaling domain in second-generation chimeric antigen receptors |
| CN103483452A (zh) * | 2012-06-12 | 2014-01-01 | 上海吴孟超医学科技基金会 | 双信号独立的嵌合抗原受体及其用途 |
| CN103965361A (zh) * | 2013-02-06 | 2014-08-06 | 上海细胞治疗工程技术研究中心有限公司 | 一种t细胞信号的嵌合分子转换器及其用途 |
| CN106573050A (zh) * | 2014-05-29 | 2017-04-19 | 宏观基因有限公司 | 特异性结合多种癌症抗原的三特异性结合分子和其使用方法 |
| WO2015188141A2 (en) * | 2014-06-06 | 2015-12-10 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Ceneter | Mesothelin-targeted chimeric antigen receptors and uses thereof |
| CN107106665A (zh) * | 2014-06-06 | 2017-08-29 | 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 | 靶向间皮素的嵌合抗原受体及其用途 |
| CN105384825A (zh) * | 2015-08-11 | 2016-03-09 | 南京传奇生物科技有限公司 | 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用 |
| CN105950663A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-21 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向cd30的复制缺陷性重组慢病毒car-t转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN105969805A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-28 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向Mesothelin的复制缺陷性重组慢病毒CAR-T转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN105950662A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-21 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向cd22的复制缺陷性重组慢病毒car-t转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN105950664A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-09-21 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种靶向cd123的复制缺陷性重组慢病毒car-t转基因载体及其构建方法和应用 |
| CN106279438A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-01-04 | 胜武（北京）生物科技有限公司 | 新型嵌合抗原受体及其用途 |
| CN106749675A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-05-31 | 深圳市体内生物医药科技有限公司 | 一种重组慢病毒及其应用 |
| CN107245500A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-10-13 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的淋系白血病car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107164410A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-09-15 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的前列腺癌car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107177632A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-09-19 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的髓系白血病car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107267555A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-10-20 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的恶性胶质瘤car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107299110A (zh) * | 2017-05-27 | 2017-10-27 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的胰腺癌、恶性间皮瘤car‑t治疗载体及其构建方法和应用 |
| CN107325185A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-11-07 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 基于octs‑car的抗psca及pdl1双靶向嵌合抗原受体、编码基因及表达载体 |
| CN107337736A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-11-10 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | Octs‑car双靶向嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体及其构建和应用 |
| CN107099546A (zh) * | 2017-06-07 | 2017-08-29 | 胜武（北京）生物科技有限公司 | 一种调控嵌合抗原受体表达的方法 |
| CN107287164A (zh) * | 2017-07-07 | 2017-10-24 | 青岛协和华美医学诊断技术有限公司 | 靶向cd19的嵌合抗原受体t细胞、制备方法及应用 |
| CN107557388A (zh) * | 2017-07-26 | 2018-01-09 | 生研医药科技（武汉）有限公司 | 一种用于car‑t制备的慢病毒载体及其构建方法和应用 |
| CN107326014A (zh) * | 2017-07-31 | 2017-11-07 | 时力生物科技（北京）有限公司 | 一种双特异性嵌合抗原受体修饰的t淋巴细胞及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| CD19-CART技术在B细胞淋巴瘤及白血病中的应用进展;李斌等;临床血液学杂志(05);735-738 * |
| The novel anti-CD19 chimeric antigen receptors with humanized scFv (single-chain variable fragment) trigger leukemia cell killing;Liren Qian等;《Cell Immunol 》;304-305 * |
| 嵌合抗原受体T细胞治疗非霍奇金淋巴瘤的最新研究进展;王天怡等;《国际输血及血液学杂志》;20170131;第40卷(第1期);第56-61页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110129369A (zh) | 2019-08-16 |
| WO2019154204A1 (zh) | 2019-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110129369B (zh) | 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用 | |
| US11299525B2 (en) | Chimeric antigen receptor-modified immune effector cell carrying PD-L1 blocking agent | |
| EP3630980B1 (en) | Chimeric antigen receptor cell preparation and uses thereof | |
| EP3170842B1 (en) | Immunologic effector cell of targeted cld18a2, and preparation method and use thereof | |
| US10604740B2 (en) | Nucleic acids encoding chimeric antigen receptor proteins which bind epidermal growth factor receptor and T lymphocyte expressing the protein | |
| KR20220145374A (ko) | 신규 키메라 항원 수용체 및 그 용도 | |
| CN112142854B (zh) | 免疫调节特异性嵌合抗原受体细胞及制备方法和应用 | |
| WO2020108646A1 (en) | Cd19-and psma-based combined car-t immunotherapy | |
| US20210213119A1 (en) | Improved therapeutic t cell | |
| WO2013061273A1 (en) | A modified effector cell (or chimeric receptor) for treating disialoganglioside gd2 -expressing neoplasia | |
| EP3805270A1 (en) | Improved anti-cd19 car-t cell | |
| US11273178B2 (en) | Affinity maturated T cell receptors and use thereof | |
| CN113896801B (zh) | 靶向人Claudin18.2和NKG2DL的嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用 | |
| CN111263808A (zh) | 一种靶向HPK1的gRNA和一种编辑HPK1基因的方法 | |
| CN110257338B (zh) | 嵌合细胞因子受体 | |
| CN113416260B (zh) | 靶向Claudin18.2的特异性嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用 | |
| EP4038103A1 (en) | Dimerizing agent regulated immunoreceptor complexes | |
| Lin et al. | Evaluation of nonviral piggyBac and lentiviral vector in functions of CD19chimeric antigen receptor T cells and their antitumor activity for CD19+ tumor cells | |
| CN112500497A (zh) | Cltx-nkg2d双特异性嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用 | |
| US20230399627A1 (en) | Vector genetically engineered with chimeric antigen receptor and against two or more targets and application thereof | |
| US20210401890A1 (en) | Chimeric antigen receptor t lymphocyte for treating tumors, preparation method therefor, and use thereof | |
| WO2023236796A1 (en) | Cd79b humanized antibody-based chimeric antigen receptor and use thereof | |
| WO2023207390A1 (zh) | 一种ciita基因被敲除的工程化免疫细胞及其用途 | |
| CN112375136B (zh) | Ny-eso-1特异性t细胞受体筛选及其抗肿瘤用途 | |
| CN114058589B (zh) | 具有嵌合抗原受体修饰的免疫细胞、制备方法和药物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |