CN115057912A - 一种制备普卡那肽的方法 - Google Patents
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Abstract
一种制备普卡那肽的方法，它涉及多肽治疗领域，本发明要解决原有固相法普卡那肽线性肽的合成难度大，固液结合法处理较为复杂，时间成本高的问题。本发明选取较优片段肽1号位到10号位作为第一片段、11号位到16号位作为第二片段、1号位到5号位作为第三片段，6号位到10号位作为第四片段合成线性肽，相较于传统的循环偶联方式固相合成及固液结合方式合成普卡那肽合成周期短，提高合成效率，通过工艺参数控制，提高片段肽纯度及收率，缩短肽链长度，减少自身二级结构的影响导致树脂收缩严重问题，偶联反应难度降低。本发明通过对工艺每个过程控制提高收率，成本低、收率较高、适合规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及多肽治疗领域，尤其涉及一种多肽类化合物普拉那肽的制备方法。
背景技术
慢性特发性便秘(CIC)和便秘型肠易激综合症(IBS-C)是常见的功能性胃肠道疾病。CIC是指无明确病因的慢性便秘。全球患病率14％，中国患病率为6％，中国就诊率为8％。IBS-C是指一种以腹痛、腹胀和腹部不适为症状的功能性肠病，常伴有排便习惯改变。全球患病率20％-50％。普卡那肽是由Synergy Pharma开发的口服鸟苷酸环化酶激动剂，2017年在美国上市，商品名为Trulance。用于治疗慢性特发性便秘(CIC)和便秘型肠易激综合症(IBS-C)。结构式如下：
目前普卡那肽主链的合成主要包括:固相法、固相片段法、固液结合法。
固相法：采用常规先固相合成线性多肽后，再围绕二硫键键合方式的不同形成的不同的实验方案。如专利：CN103694320B、CN104211777 A、CN111057129、CN107313870A、CN107313871A、CN 108440652 A、CN104628827A。上述方案均有一显著缺点：忽略了普卡那肽线性肽的合成难度，按上述方案，普卡那肽线性肽由于自身二级结构的影响导致树脂收缩严重，偶联困难，线性肽的纯度低，再进行二硫键的键合得到的终产品收率较低。且固相法合成主链需要高倍量的物料加入，原料利用率差，生产时原料利用率低。
固液结合法：如专利：CN103764672A、CN107090016A、CN10867067A、CN105764916B。固液结合法通过片段之间的相互缩合完成主链，该方法需要制备至少2 个及以上的片段，并进行缩合偶联，完成主链的制备。固液结合法，后处理操作较为复杂，时间成本高不排除合成中杂质多、纯度低、收率低和氨基酸消旋等问题。
所以，目前需要一种简单、高效、低成本适合工业化生产的普卡那肽制备方法。
发明内容
本发明要解决原有固相法普卡那肽线性肽的合成难度大，固液结合法处理较为复杂，时间成本高的问题，而提供一种制备普卡那肽的方法。
本发明的一种制备普卡那肽的方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)制备普卡那肽第一片段：所述第一肽片段具备普卡那肽序列脱除Fmoc的从位置N到位置16的氨基酸单元的第一序列；
(2)制备普卡那肽第二片段：所述第二片段具备普卡那肽序列的从位置1到位置N-1 的氨基酸单元的第二序列；所述第二片段是采用裂解剂从树脂裂解下来得到；
(3)采用固相合成，使用缩合剂将第一肽片段和第二肽片段连接在一起，采用多肽裂解剂将16肽直链线性粗肽从树脂上裂解下来，得到16肽直链线性粗肽固体；
(4)将得到的16肽直链线性粗肽溶解，经氧化完成4位和12位的二硫键，脱除7 号位和15号位半胱氨酸上保护基，再经过氧化完成7位和15位的二硫键，经纯化分离得到普卡那肽纯品；
普卡那肽从N-末端到C-末端的顺序为：
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-L eu16-OH；
所述N为11，K为5、6、7，优选6。
进一步地，所述固相合成的方法为Fmoc固相合成，固相合成在wang树脂和CTC树脂上进行，所述wang树脂取代范围优选地0.4～0.9mmol/g，CTC树脂取代范围 0.3～1.0mmol/g。
本发明的wang树脂取代范围优选地0.4-0.9mmol/g，CTC树脂取代范围 0.3～1.0mmol/g。更优选wang树脂取代范围0.5-0.8mmol/g，更优选CTC树脂取代范围 0.7-0.98mmol/g。
进一步地，步骤(2)中所述裂解剂为TFA/DCM或TFE/DCM，TFA/DCM是由体积比1～5:95～99的TFA和DCM组成；TFE/DCM由体积比15～25:75～85的TFE和DCM组成。
本发明步骤(2)中所述裂解剂优选地由TFE/DCM 20:80组成混合溶液。
进一步地，步骤(3)中所述多肽裂解剂为TFA、TIS、H2O、EDT、苯甲硫醚、苯酚、对甲苯酚中的2种以上组成的混合溶液。
本发明步骤(3)中所述多肽裂解剂优选的由体积比95:2.5:2.5TFA、EDT、H2O组成的混合溶液。
进一步地，步骤(4)中溶解16肽直链线性粗肽的溶剂为MeOH、EtOH、iPrOH、 MeCN或其水溶液的一种或几种组合的混合溶液；氧化中的氧化剂为氧气、双氧水、 DMSO、NCS和碘单质中的一种或几种。
本发明步骤(4)中16肽直链线性粗肽溶剂优选为10％MeCN水溶液，氧化剂优选地为H2O2和碘单质中的一种或两种。
进一步地，步骤(4)中所述的保护基为Trt、Mmt、tBu或Acm。其中4号位12号位保护基相同，7号位15号位保护基相同，4号位12号位保护基不同于7号位15号位。
本发明步骤(4)中所述的保护基优选为Trt或Acm。
进一步地，所述的普卡那肽片段的制备方法如下：
步骤(1)中制备普卡那肽第一片段，具体为：
通过缩合偶联，将第一肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料Fmoc-Leu-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Leu-树脂，并用乙酸酐进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Leu- 树脂；通过缩合偶联，按照第一肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Leu-树脂上，进行酰胺化反应，酰胺化反应完成后脱除Fmoc保护基团，得到第一肽片段；
步骤(2)中制备普卡那肽第二片段，具体为：通过缩合偶联，将第二肽片段肽序列C- 末端第一个氨基酸原料Fmoc-Val-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Val-树脂，并用甲醇进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Val-树脂；通过缩合偶联，按照第二肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Val-树脂上，酰胺化反应完成时，脱除树脂得到第二肽片段；
步骤(3)中通过缩合偶联，将第二肽片段固载偶联在第一片段树脂上得到16肽直链线性粗肽。
进一步地，脱除Fmoc的试剂由体积比1:1～10的哌啶和DMF组成。
本发明脱除Fmoc保护基试剂优选由体积比1:4哌啶和DMF组成。
本发明的一种制备普卡那肽的方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)制备普卡那肽第一片段：所述第一肽片段具备普卡那肽序列脱除Fmoc的从位置N到位置16的氨基酸单元的第一序列；
(2)制备普卡那肽第三片段及第四肽片段：所述第三肽片段具备普卡那肽序列的从位置K到位置N-1的氨基酸单元的第三序列；所述的第四肽片段具备普卡那肽序列的从位置1到位置K-1的氨基酸单元的第四序列；所述的第三片段及第四肽片段是采用裂解剂从树脂裂解下来得到；
(3)采用固相合成，使用缩合剂将第一肽片段和第三肽片段第四肽片段连接在一起，采用多肽裂解剂将16肽直链线性粗肽从树脂上裂解下来，得到16肽直链线性粗肽固体；
(4)将得到的16肽直链线性粗肽溶解，经氧化完成4位和12位的二硫键，脱除7 号位和15号位半胱氨酸上保护基，再经过氧化完成7位和15位的二硫键，经纯化分离得到普卡那肽纯品；
普卡那肽从N-末端到C-末端的顺序为：
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-L eu16-OH；
所述N为11，K为5、6、7，优选6。
进一步地，所述的普卡那肽片段的制备方法如下：
步骤(1)中制备普卡那肽第一片段，具体为：
通过缩合偶联，将第一肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料Fmoc-Leu-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Leu-树脂，并用乙酸酐进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Leu- 树脂；通过缩合偶联，分别将第一肽序列从C的末端到N的末端的每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Leu-树脂上，进行酰胺化反应，酰胺化反应完成后脱除Fmoc保护基团，得到第一肽片段；
步骤(2)中制备普卡那肽第三片段及第四肽片段，具体为：
通过缩合偶联，将第三肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料Fmoc-Val-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Val-树脂，并用甲醇进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Val-树脂；通过缩合偶联，按照第一肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Val-树脂上，酰胺化反应完成时，脱除树脂得到第三肽片段；
通过缩合偶联，将第四肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料固载偶联在树脂上得到Fmoc-氨基酸-树脂，并用甲醇进行封端，脱除Fmoc保护基，得到脱保护后的的氨基酸 -树脂；通过缩合偶联，按照第一肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到氨基酸-树脂上，酰胺化反应完成时，脱除树脂得到第四肽片段。
步骤(3)中通过缩合偶联，将第三肽片段和第四肽片段固载偶联在第一片段树脂上得到16肽直链线性粗肽。
本发明缩合偶联指缩合剂和催化剂、碱、反应溶剂中两种或两种以上(缩合剂必选)。所述缩合剂选自HATU、HBTU、HCTU、DIC、HyBOP、HyAOP。所述催化剂HOBT、 HOAT。所述碱DIEA。反应溶剂NMP、DMF、DMSO。缩合偶联系统优选DIC/HOBT/DMF。
本发明步骤(4)中氧化首先使用双氧水完成第一对二硫键的氧化，然后使用碘完成第二对二硫键的氧化。
本发明普卡那肽的制备方法，分别选取较优片段肽1号位到10号位作为第一片段、11号位到16号位作为第二片段、1号位到5号位作为第三片段，6号位到10号位作为第四片段合成线性肽，相较于传统的循环偶联方式固相合成及固液结合方式合成普卡那肽合成周期短，提高合成效率，通过工艺参数控制，提高片段肽纯度及收率，缩短肽链长度，减少自身二级结构的影响导致树脂收缩严重问题，偶联反应难度降低。降低了普卡那肽线性肽合成难度,解决了常规工艺杂质多，纯度低，收率低等问题。选取4号位和12号位为 Trt保护的Cys选取7号位和15号位为Acm保护的Cys，裂解过后过后进行4号位和12 号位氧化后在进行第二次氧化，在保证收率及纯度的情况下，完成选择性氧化，降低错配风险，通过氧化过程的工艺参数控制，解决了粗肽的纯度及收率低的问题。通过对工艺每个过程控制提高收率，导致成本低、收率较高、适合规模化生产，并且避免了普卡那肽的生物提取带来的提取过程繁琐、提取效率低、以及提取纯度低的弊端。
本发明通过四个片段合成普卡那肽过程个个工艺参数的选取，解决了上诉众多问题，最终收率和纯度较高，本发明的收率可达45％左右，远高于目前的普卡那肽收率。本发明的方法适合大规模生产应用。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面将详细叙述本发明所揭示内容的精神，任何所属技术领域技术人员在了解本发明内容的实施例后，当可由本发明内容所教示的技术，加以改变及修饰，其并不脱离本发明内容的精神与范围。
本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
本发明采用的试剂皆为普通市售品，皆可在市场购得。
本发明采用的试剂的中英文对照表如表1所示。
所使用的氨基酸原料
Fmoc-Glu(R)-OH:N-芴甲氧羰基-侧链保护R基保护的谷氨酸。
Fmoc-Asp(R)-OH:N-芴甲氧羰基-侧链保护R基保护的天冬氨酸。
Fmoc-Asn(Trt)-OH:N-芴甲氧羰基-侧链保护三苯甲基基保护的天冬酰胺。
Fmoc-Leu-OH:N-芴甲氧羰基亮氨酸。
Fmoc-Cys(R)-OH:N-芴甲氧羰基-侧链保护R基保护的半胱氨酸。
Fmoc-Gly-OH:N-芴甲氧羰基甘氨酸。
Fmoc-Thr(tBu)-OH:N-芴甲氧羰基-侧链保护叔丁基基保护的苏氨酸。
Fmoc-Ala-OH:N-芴甲氧羰基丙氨酸。
Fmoc-Val-OH:N-芴甲氧羰基缬氨酸。
当氨基酸为Asp(天冬氨酸)和Glu(谷氨酸)时，侧链R为OtBu(叔丁氧基)。当氨基酸为Cys(半胱氨酸)时，侧链R为Trt(叔丁氧基)、Mmt(4-甲氧基三苯甲基)、tBu (叔丁基)、Acm(乙酰胺甲基)。所使用的氨基酸原料均为天然氨基酸构型均为L构型或绝对构型。
下面结合实施例进一步阐述本发明。
实施例1：第一肽片段的制备
第一肽片段结构式：
H-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin。
(1)Fmoc-Leu-Wang-Resin的合成
称取20g取代度1.09mmol/g的Wang树脂加入至多肽反应器中，同时量取200mL DCM洗涤并溶涨树脂1小时，抽干滤液。称取Fmoc-Leu-OH(11.5g,32.7mmol)、HOBT(4.4 g,32.7mmol)、DMAP(0.27g，2.18mmol)、DIC(5.2ml，32.7mmol)加入至重新量取50mL DMF中进行溶解，将溶解后的反应液加入至树脂中，等待反应液搅拌均匀后，保持20～30℃下反应2小时。反应完成后，继续向反应液中加入32mL吡啶和38ml醋酸酐用于封闭树脂上未反应完的活性位点，继续搅拌1小时，静止12小时。反应完毕，抽干反应溶剂，将70mL DMF洗涤树脂70ml DCM洗涤树脂70mL甲醇洗涤树脂，重复3次上述洗涤操作。所得Fmoc-Leu-Wang-Resin进行干燥处理，所得树脂27.1g。经检测树脂取代度为0.78 mmol/g。
(2)Fmoc-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin制备
称取Fmoc-Leu-Wang-Resin(20g，15.6mmol)加入到多肽反应器中，向反应器中加入 120mL 20％的哌啶/DMF溶液，保持20～30℃并搅拌1h抽干反应溶剂，重复上述操作1次。以茚三酮法检测判断反应终点。树脂显红棕色，则表示反应到达终点。待反应结束，排干反应液，加入40mL DMF洗涤树脂，并重复洗涤操作3次。得到H-Leu-Wang-Resin 树脂。
称取Fmoc-Cys(Acm)-OH(12.9g,31.2mmol)，HOBT(4.2g,31.2mmol)加入至装有120mL DMF的反应器内进行溶解,在氮气保护下将反应器置于0～5°冰浴中，保持容器内温在该温度下加入DIC(5.4mL，34.3mmol)搅拌30分钟。待活化较为充分后，将预制好的活性溶剂加入至制备的H-Leu-Wang-Resin树脂中20～30℃反应2小时。反应过程取样，进行茚三酮检测判断反应终点，树脂显无色，缩合反应完全。若树脂显色，缩合反应不完全，抽干反应液用40mL DMF洗涤树脂3次。加入Fmoc-Cys(Acm)-OH(6.5g,15.6mmol)， HOBT(2.1g,15.6mmol)DIC(2.7mL，17.2mmol)重复上述偶联操作。20～30℃反应2小时，树脂显无色，缩合反应完全。
重复上述脱除Fmoc保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤。按照上述肽序，依次完成 Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH的偶联。每种氨基酸、HOBT的投料量每次分别为31.2mmol，DIC投料量为34.3mmol。偶联完毕将所得树脂分别用40mL DCM和40mL MeOH交替洗涤树脂3次。洗涤完成后，将树脂置于真空干燥箱内至恒重，得到38.2g树脂Fmoc-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin。
(3)H-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin制备
称取Fmoc-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin38.2g加入至多肽反应器中，重复上述脱除Fmoc保护基的步骤。干燥后恒重为33.5g淡黄色固体。
实施例2：第二肽片段的制备
第二肽片段结构式：
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-As n(Trt)9-Val10-OH。
(1)Fmoc-Val-CTC-Resin的合成
称取20g取带度1.02mmol/g的CTC树脂加入至多肽反应器中，同时量取200mL DCM洗涤并溶涨树脂1小时，抽干滤液。称取Fmoc-Val-OH(10.3g,30.6mmol)、DIC(4.8 mL,30.6mmol)加入至重新量取260mL DCM中进行溶解，将溶解后的反应液加入至树脂中，等待反应液搅拌均匀后，保持20～30℃下反应2小时。反应完成后，抽干反应液。继续向反应器中加入40mL甲醇和12mL DIEA用于封闭树脂上未反应完的活性位点，继续搅拌2小时，等待反应完成。反应完毕，抽干反应溶剂，将80mL DMF洗涤树脂，80 mL DCM洗涤树脂，80mL乙醚洗涤树脂，重复3次上述洗涤操作。所得 Fmoc-Val-CTC-Resin进行干燥处理,所得树脂28.3g。经检测树脂取代度为0.93mmol/g。
(2)Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8- Asn(Trt)9-Val10-O-CTC-Resin的制备
称取Fmoc-Val-CTC-Resin(20g，18.6mmol)加入到多肽反应器中，向反应器中加入80mL 20％的哌啶/DMF溶液，保持20～30℃并搅拌15分钟抽干反应溶剂，重复上述操作1次。以茚三酮法检测判断反应终点。树脂显红棕色，则表示反应到达终点。待反应结束，排干反应液，加入40mL DMF洗涤树脂，并重复洗涤操作3次。得到H-Leu-CTC-Resin树脂。
称取Fmoc-Asn(Trt)-OH(22.2g,37.2mmol)、HOBT(5.0g,37.2mmol)加入至装有200DMF的反应器内进行溶解,在氮气保护下将反应器置于0～5°冰浴中，保持容器内温在该温度下加入DIC(5.6mL，37.2mmol)搅拌30分钟。待活化较为充分后，将预制好的活性溶剂加入至制备的H-Val-CTC-Resin树脂中20～30℃反应2小时，反应过程取样，进行茚三酮检测判断反应终点，树脂显无色，缩合反应完全。若树脂显色，缩合反应不完全，抽干反应液用70mLDMF和70mL MeOH洗涤树脂3次。加入Fmoc-Asn(Trt)-OH(11.1g, 18.6mmol)，HOBT(2.5g,18.6mmol)DIC(2.8mL，18.6mmol)重复上述偶联操作。 20～30℃反应2小时，树脂显无色，缩合反应完全。
重复上述脱除Fmoc保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤。按照上述肽序，依次完成 Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH的偶联。每种氨基酸、HOBT的投料量每次分别为37.2mmol，DIC投料量为37.2mmol。偶联完毕将所得树脂分别用40ml DMF，70mL DCM 和70mLMeOH交替洗涤树脂3次。洗涤完成后，将树脂置于真空干燥箱内至恒重，得到57.3g树脂
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-As n(Trt)9-Val10-O-CTC-Resin。
(3)制备
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-As n(Trt)9-Val10-OH
称取
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-As n(Trt)9-Val10-O-CTC-Resin 57.3g加入至多肽裂解仪中，加入570mL预先降温至0℃的裂解液20％TFE/DCM溶液。室温条件下搅拌2小时，反应完成后。将反应液过滤，滤液旋干。所得固体加入预先降温至0℃乙醚溶液中进行打浆，收集白色固体，真空干燥至恒重为35.3g白颜色固体。收率为94.1％，纯度为96.6％。
实施例3：第三肽片段和第四片段的制备
第三肽片段结构式：
Fmoc-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn(Trt)9-Val10-OH。
称取Fmoc-Asn(Trt)-OH(22.2g,37.2mmol)、HOBT(5.0g,37.2mmol)加入至装有200DMF的反应器内进行溶解,在氮气保护下将反应器置于0～5°冰浴中，保持容器内温在该温度下加入DIC(5.6mL，37.2mmol)搅拌30分钟。待活化较为充分后，将预制好的活性溶剂加入至制备的Fmoc-Val-CTC-Resin(26.3g，18.6mmol)脱除Fmoc保护基团 H-Val-CTC-Resin树脂(H-Val-CTC-Resin制备参考实施例2)中20～30℃反应2小时，反应过程取样，进行茚三酮检测判断反应终点，树脂显无色，缩合反应完全。若树脂显色，缩合反应不完全，抽干反应液用40mL DMF洗涤树脂3次。加入Fmoc-Asn(Trt)-OH(11.1 g,18.6mmol)，HOBT(2.5g,18.6mmol)，DIC(2.8mL，18.6mmol)重复上述偶联操作。 20～30℃反应2小时，树脂显无色，缩合反应完全。
重复上述脱除Fmoc保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤。按照上述肽序，依次完成 Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH的偶联。每种氨基酸、HOBT的投料量每次分别为37.2mmol，DIC投料量为37.2mmol。偶联完毕将所得树脂分别用100ml DMF，100mL DCM和100mL MeOH交替洗涤树脂3次。洗涤完成后，将树脂置于真空干燥箱内至恒重，得到39.4g树脂Fmoc-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn(Trt)9-Val10-O-CTC-Resin。
(3)制备
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-A sn(Trt)9-Val10-OH
称Fmoc-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn(Trt)9-Val10-O-CTC-Resin 39.4g加入至多肽裂解仪中，加入390mL预先降温至0℃的裂解液20％TFE/DCM溶液。室温条件下搅拌2小时，反应完成后。将反应液过滤，滤液旋干。所得固体加入预先降温至0℃乙醚溶液中进行打浆，收集白色固体，真空干燥至恒重为18.2g白颜色固体。收率为89.0％，纯度为94.1％。
第四肽片段结构式：
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-OH。
(1)Fmoc-Glu(OtBu)-CTC-Resin的合成
称取20g取带度1.02mmol/g的CTC树脂加入至多肽反应器中，同时量取200mL DCM洗涤并溶涨树脂1小时，抽干滤液。称取Fmoc-Glu(OtBu)-OH(13.0g,30.6mmol)、 DIC(4.8mL,30.6mmol)加入至重新量取260mL DCM中进行溶解，将溶解后的反应液加入至树脂中，等待反应液搅拌均匀后，保持20～30℃下反应2小时。反应完成后，抽干反应液。继续向反应器中加入90mL甲醇和12mL DIEA用于封闭树脂上未反应完的活性位点，继续搅拌2小时，等待反应完成。反应完毕，抽干反应溶剂，将100mL DMF洗涤树脂，100mL DCM洗涤树脂，100mL乙醚洗涤树脂，重复3次上述洗涤操作。所得 Fmoc-Val-CTC-Resin进行干燥处理,所得树脂31.0g。经检测树脂取代度为0.89mmol/g。
(2)Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-O-CTC-Resin的制备
称取Fmoc-Glu(OtBu)-O-CTC-Resin(20.8g，18.6mmol)加入到多肽反应器中，向反应器中加入80mL 20％的哌啶/DMF溶液，保持20～30℃并搅拌15分钟抽干反应溶剂，重复上述操作1次。以茚三酮法检测判断反应终点。树脂显红棕色，则表示反应到达终点。待反应结束，排干反应液，加入40mL DMF洗涤树脂，并重复洗涤操作3次。得到 H-Glu(OtBu)-O-CTC-Resin树脂。
称取Fmoc-Cys(Trt)-OH(21.7g,37.2mmol)、HOBT(5.0g,37.2mmol)加入至装有200DMF的反应器内进行溶解，在氮气保护下将反应器置于0～5°冰浴中，保持容器内温在该温度下加入DIC(5.6mL，37.2mmol)搅拌30分钟。待活化较为充分后，将预制好的活性溶剂加入至制备的H-Glu(OtBu)-O-CTC-Resin树脂中20～30℃反应2小时，反应过程取样，进行茚三酮检测判断反应终点，树脂显无色，缩合反应完全。若树脂显色，缩合反应不完全，抽干反应液用40mL DMF洗涤树脂3次。加入Fmoc-Cys(Trt)-OH(10.9g,18.6 mmol)，HOBT(2.5g,18.6mmol)，DIC(2.8mL，18.6mmol)重复上述偶联操作。20～30℃反应2小时，树脂显无色，缩合反应完全。
重复上述脱除Fmoc保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤。按照上述肽序，依次完成 Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH的偶联。每种氨基酸、HOBT的投料量每次分别为37.2mmol，DIC投料量为37.2mmol。偶联完毕将所得树脂分别用 40mLDMF，40mL DCM和40mL MeOH交替洗涤树脂3次。洗涤完成后，将树脂置于真空干燥箱内至恒重，得到57.3g树脂
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-O-CTC-Resin。
(3)制备Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-OH
称取Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-O-CTC-Resin 64.5g 加入至多肽裂解仪中，加入570mL预先降温至0℃的裂解液20％TFE/DCM溶液。室温条件下搅拌2小时，反应完成后。将反应液过滤，滤液旋干。所得固体加入预先降温至 0℃乙醚溶液中进行打浆，收集白色固体，真空干燥至恒重为25.3g白颜色固体。收率为92.3％，纯度为95.7％。
实施例4：16肽直链线性粗肽制备
16肽直链线性粗肽结构式：
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-C ys(Acm)15-leu16-OH。
(1)制备
Fmoc-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-A sn(Trt)9-Val10-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin
称取第二肽片段(40.6g，17.46mmol),HOBT(1.1g,8.7mmol)加入至装有400mL DMF的反应器内进行溶解,在氮气保护下将反应器置于0～5°冰浴中，保持容器内温在该温度下加入DIC(1.4mL，8.7mmol)搅拌30分钟。待活化较为充分后，将预制好的活性溶剂加入至制备的第一肽片段树(28.5g，8.7mmol)脂中20～30℃反应，反应过程取小样，进行茚三酮检测判断反应终点，树脂显黄色，缩合反应完全。偶联完毕将所得树脂分别用 200mL DCM和200mL MeOH交替洗涤树脂3次。向反应器中加入500mL 20％的哌啶 /DMF溶液，并搅拌1h抽干反应溶剂，重复上述操作1次。以茚三酮法检测判断反应终点。树脂显红棕色，则表示反应到达终点。待反应结束，排干反应液，加入200mL DMF 洗涤树脂，并重复洗涤操作3次。得到H-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn(Trt)9-V al10-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin，树脂44.1g淡黄色固体。
称取
H-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn(Tr t)9-Val10-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin(44.1g)加入至多肽裂解仪中，加入400mL预先降温至0℃的裂解液由体积比为95:2.5:2.5的 TFA/EDT/H2O溶液。室温条件下搅拌3小时，反应完成后。将反应液过滤。所得滤液加入预先降温至0℃乙醚溶液中进行打浆3小时，收集白色固体，真空干燥至恒重为14.5g灰白色颜色固体为
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-C ys(Acm)15-leu16-OH。收率为91.1％，纯度为91.5％。
称取第三肽片段(18.2g，16.81mmol),HOBT(1.1g,8.7mmol)加入至装有300mL DMF的反应器内进行溶解，在氮气保护下将反应器置于0～5°冰浴中，保持容器内温在该温度下加入DIC(1.4mL，8.7mmol)搅拌30分钟。待活化较为充分后，将预制好的活性溶剂加入至制备的第一肽片段树(28.5g，8.7mmol)脂中20～30℃反应，反应过程取小样，进行茚三酮检测判断反应终点，树脂显黄色，缩合反应完全。偶联完毕将所得树脂分别用 100mL DCM和100mL MeOH交替洗涤树脂3次。向反应器中加入300mL 20％的哌啶 /DMF溶液，并搅拌1h抽干反应溶剂，重复上述操作1次。以茚三酮法检测判断反应终点。树脂显红棕色，则表示反应到达终点。待反应结束，排干反应液，加入100mL DMF 洗涤树脂，并重复洗涤操作3次。称取第四肽片段(25.3g，17.7mmol),HOBT(1.1g,8.7 mmol)加入至装有300mL DMF的反应器内进行溶解，在氮气保护下将反应器置于0～5°冰浴中，保持容器内温在该温度下加入DIC(1.4mL，8.7mmol)搅拌30分钟。反应过程取小样，进行茚三酮检测判断反应终点，树脂显黄色，缩合反应完全。偶联完毕将所得树脂分别用100mL DCM和100mL MeOH交替洗涤树脂3次。向反应器中加入300mL 20％的哌啶/DMF溶液，并搅拌1h抽干反应溶剂，重复上述操作1次。以茚三酮法检测判断反应终点。树脂显红棕色，则表示反应到达终点。待反应结束，排干反应液，加入100mL DMF洗涤树脂，并重复洗涤操作3次。得到 H-Asn(Trt)1-Asp(OtBu)2-Glu(OtBu)3-Cys(Trt)4-Glu(OtBu)5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn(Trt)9-V al10-Ala11-Cys(Trt)12-Thr(tBu)13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-O-Wang-Resin树脂42.5g淡黄色固体。
实施例5：普卡那肽纯品的制备
普卡那肽结构式N-末端到C-末端的顺序为：
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-le u16-OH。二硫键位置(4，12)和(7，15)。
称取
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-C ys(Acm)15-leu16-OH(14.5g，7.9mmol)用3670mL 10％MeCN水溶液溶解，加入氨水调节pH值至8.0～9.0，添加20mL 3％双氧水室温搅拌1小时，HPLC监控反应至4号位12号位氧化完全。然后用10％醋酸水溶液调节pH值至3.0～4.0，加入1.3％碘的乙腈溶液至黄色的碘不消失，HPLC监控反应4号位和12号位氧化的单环肽峰完全消失，二次氧化完成。用少量的坏血酸中和过量的碘。反应液经HPLC纯化冻干处理，得到白色普卡那肽5.9g，收率45％，纯度99.1％。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域普通技术知识和管用手段在不脱离本发明上述思想的技术前提下，还可做出其他多种形式的修改，替换或变更。
以上实施例形式的具体实施方式，是对本发明的上述内容在做进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以上实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
Claims (10)
1.一种制备普卡那肽的方法，其特征在于所述制备方法包括如下步骤：
(1)制备普卡那肽第一片段：所述第一肽片段具备普卡那肽序列脱除Fmoc的从位置N到位置16的氨基酸单元的第一序列；
(2)制备普卡那肽第二片段：所述第二片段具备普卡那肽序列的从位置1到位置N-1的氨基酸单元的第二序列；所述第二片段是采用裂解剂从树脂裂解下来得到；
(3)采用固相合成，使用缩合剂将第一肽片段和第二肽片段连接在一起，采用多肽裂解剂将16肽直链线性粗肽从树脂上裂解下来，得到16肽直链线性粗肽固体；
(4)将得到的16肽直链线性粗肽溶解，经氧化完成4位和12位的二硫键，脱除7号位和15号位半胱氨酸上保护基，再经过氧化完成7位和15位的二硫键，经纯化分离得到普卡那肽纯品；
普卡那肽从N-末端到C-末端的顺序为：
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Le u16-OH；
所述N为11。
2.根据权利要求1所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于所述固相合成的方法为Fmoc固相合成，固相合成在wang树脂和CTC树脂上进行，所述wang树脂取代范围优选地0.4～0.9mmol/g，CTC树脂取代范围0.3～1.0mmol/g。
3.根据权利要求1所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于步骤(2)中所述裂解剂为TFA/DCM或TFE/DCM，TFA/DCM是由体积比1～5:95～99的TFA和DCM组成；TFE/DCM由体积比15～25:75～85的TFE和DCM组成。
4.根据权利要求1所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于步骤(3)中所述多肽裂解剂为TFA、TIS、H2O、EDT、苯甲硫醚、苯酚、对甲苯酚中的2种以上组成的混合溶液。
5.根据权利要求1所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于步骤(4)中溶解16肽直链线性粗肽的溶剂为MeOH、EtOH、iPrOH、MeCN或其水溶液的一种或几种组合的混合溶液；氧化中的氧化剂为氧气、双氧水、DMSO、NCS和碘单质中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于步骤(4)中所述的保护基为Trt、Mmt、tBu或Acm。
7.根据权利要求1所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于所述的普卡那肽片段的制备方法如下：
步骤(1)中制备普卡那肽第一片段，具体为：
通过缩合偶联，将第一肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料Fmoc-Leu-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Leu-树脂，并用乙酸酐进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Leu-树脂；通过缩合偶联，按照第一肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Leu-树脂上，进行酰胺化反应，酰胺化反应完成后脱除Fmoc保护基团，得到第一肽片段；
步骤(2)中制备普卡那肽第二片段，具体为：通过缩合偶联，将第二肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料Fmoc-Val-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Val-树脂，并用甲醇进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Val-树脂；通过缩合偶联，按照第二肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Val-树脂上，酰胺化反应完成时，脱除树脂得到第二肽片段；
步骤(3)中通过缩合偶联，将第二肽片段固载偶联在第一片段树脂上得到16肽直链线性粗肽。
8.根据权利要求1所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于脱除Fmoc的试剂由体积比1:1～10的哌啶和DMF组成。
9.一种制备普卡那肽的方法，其特征在于所述制备方法包括如下步骤：
(1)制备普卡那肽第一片段：所述第一肽片段具备普卡那肽序列脱除Fmoc的从位置N到位置16的氨基酸单元的第一序列；
(2)制备普卡那肽第三片段及第四肽片段：所述第三肽片段具备普卡那肽序列的从位置K到位置N-1的氨基酸单元的第三序列；所述的第四肽片段具备普卡那肽序列的从位置1到位置K-1的氨基酸单元的第四序列；所述的第三片段及第四肽片段是采用裂解剂从树脂裂解下来得到；
(3)采用固相合成，使用缩合剂将第一肽片段和第三肽片段第四肽片段连接在一起，采用多肽裂解剂将16肽直链线性粗肽从树脂上裂解下来，得到16肽直链线性粗肽固体；
(4)将得到的16肽直链线性粗肽溶解，经氧化完成4位和12位的二硫键，脱除7号位和15号位半胱氨酸上保护基，再经过氧化完成7位和15位的二硫键，经纯化分离得到普卡那肽纯品；
普卡那肽从N-末端到C-末端的顺序为：
H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Le u16-OH；
所述N为11，K为5、6、7。
10.根据权利要求9所述的一种制备普卡那肽的方法，其特征在于所述的普卡那肽片段的制备方法如下：
步骤(1)中制备普卡那肽第一片段，具体为：
通过缩合偶联，将第一肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料Fmoc-Leu-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Leu-树脂，并用乙酸酐进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Leu-树脂；通过缩合偶联，分别将第一肽序列从C的末端到N的末端的每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Leu-树脂上，进行酰胺化反应，酰胺化反应完成后脱除Fmoc保护基团，得到第一肽片段；
步骤(2)中制备普卡那肽第三片段及第四肽片段，具体为：
通过缩合偶联，将第三肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料Fmoc-Val-OH固载偶联在树脂上得到Fmoc-Val-树脂，并用甲醇进行封端，脱除Fmoc保护基，得到H-Val-树脂；通过缩合偶联，按照第一肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到H-Val-树脂上，酰胺化反应完成时，脱除树脂得到第三肽片段；
通过缩合偶联，将第四肽片段肽序列C-末端第一个氨基酸原料固载偶联在树脂上得到Fmoc-氨基酸-树脂，并用甲醇进行封端，脱除Fmoc保护基，得到脱保护后的的氨基酸-树脂；通过缩合偶联，按照第一肽序列从C的末端到N的末端分别将每一个带有保护基团的氨基酸偶联到氨基酸-树脂上，酰胺化反应完成时，脱除树脂得到第四肽片段；步骤(3)中通过缩合偶联，将第三肽片段和第四肽片段固载偶联在第一片段树脂上得到16肽直链线性粗肽。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116947966A (zh) * | 2023-09-18 | 2023-10-27 | 哈药集团生物工程有限公司 | 一种伊特卡肽中间体及伊特卡肽的制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109354607A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-02-19 | 浙江苏泊尔制药有限公司 | 一种普利卡那肽的固相片段合成方法 |
| CN112940078A (zh) * | 2019-12-11 | 2021-06-11 | 四川科伦药物研究院有限公司 | 一种普卡那肽的制备方法 |
| CN113444150A (zh) * | 2021-08-10 | 2021-09-28 | 礼济生物医药科技(南京)有限公司 | 一种普卡那肽的固相制备方法 |
| CN114315974A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-12 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种普卡那肽的合成方法 |
-
2022
- 2022-07-06 CN CN202210799222.9A patent/CN115057912A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109354607A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-02-19 | 浙江苏泊尔制药有限公司 | 一种普利卡那肽的固相片段合成方法 |
| CN112940078A (zh) * | 2019-12-11 | 2021-06-11 | 四川科伦药物研究院有限公司 | 一种普卡那肽的制备方法 |
| CN113444150A (zh) * | 2021-08-10 | 2021-09-28 | 礼济生物医药科技(南京)有限公司 | 一种普卡那肽的固相制备方法 |
| CN114315974A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-12 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种普卡那肽的合成方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116947966A (zh) * | 2023-09-18 | 2023-10-27 | 哈药集团生物工程有限公司 | 一种伊特卡肽中间体及伊特卡肽的制备方法 |
| CN116947966B (zh) * | 2023-09-18 | 2023-12-26 | 哈药集团生物工程有限公司 | 一种伊特卡肽中间体及伊特卡肽的制备方法 |
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