CN101967204B - 太子参多糖在润肺镇咳中的应用 - Google Patents

Abstract

太子参多糖在润肺镇咳中的应用。太子参药材，用乙醇提取后的药渣，再经水提取、乙醇沉淀，氯仿和正丁醇除去蛋白类物质，得太子参多糖提取物，具有润肺镇咳活性。

Description

太子参多糖在润肺镇咳中的应用

技术领域

本发明属于中药领域，更具体涉及太子参多糖提取物在润肺镇咳中的应用。

背景技术

由于社会的老龄化以及环境污染的加剧，呼吸系统疾病的发病率不断上升。咳嗽是呼吸道感染、哮喘、慢性肺阻塞性疾病(COPD)、嗜酸粒细胞性支气管炎（EB）和肺癌等疾病的常见症状，每年全世界用于治疗咳嗽的药物社会经济开支高达几十亿美元，当前应用最多的镇咳药物大部分是西药，如磷酸可待因、右美沙芬、咳必清等。西药止咳大多作用于中枢神经，镇静，便秘，恶心呕吐等容易产生副作用；且临床对病因不清的非特异性咳嗽治疗效果较差。

咳嗽分外感咳嗽与内伤咳嗽，均是病邪引起肺气不清失于宣肃，迫气上逆而作咳，风寒袭肺、风热犯肺、风燥伤肺、痰湿蕴肺、肝火犯肺、肺阴亏耗。中医对咳嗽的治疗，除直接治肺外，从整体出发注意治脾、治肝、治肾等。外感咳嗽一般均忌敛涩留邪，当因势利导，俟肺气宣畅则咳嗽自止；内伤咳嗽应防宣散伤正，注意调理脏腑，顾护正气。咳嗽是人体祛邪外达的一种病理表现，治疗决不能单纯见咳止咳，必须按照不同的病因分别处理。

中医药治疗咳嗽有悠久的历史，许多预防和治疗咳嗽的中草药和复方已经应用了几千年，实践表明在预防和治疗咳嗽方面具有很好的临床疗效，这为我们从中寻找具有良好药效，副作用小，安全稳定的药物奠定了很好的临床基础。当今随着天然药物在全球应用的不断兴起，从天然药物中获取活性化合物是当前新药研究的重要方向。 

太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm. 的干燥块根。2010版《中国药典》：太子参味甘、微苦，性平；归脾、肺经。具有益气健脾，生津润肺之功效；用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗口渴，肺燥干咳；《本草再新》：味甘，性温，无毒；治气虚肺燥，补脾土，消水肿，化痰止渴。《中药志》：甘苦，微寒。”入肺、脾经；治肺虚咳嗽，脾虚泄泻。《陕西中草药》：补气益血，健脾生津；治病后体虚，肺虚咳嗽，脾虚腹泻等。用药配伍：太子参配麦冬，补肺并润肺养阴，用治肺阴亏虚的肺虚咳嗽最宜。

发明内容

  基于太子参生津润肺、治疗肺燥干咳之功效，本发明的目的在于提供一种太子参提取物在润肺镇咳中的应用，该方法提取的太子参多糖可润肺镇咳，因此阐明了太子参生津润肺、治疗肺燥干咳之功效的物质基础。

  一种具有润肺镇咳作用的太子参提取物，是以由太子参中提取到的太子参多糖为有效成分，具有润肺镇咳作用。

所述提取、分离方法的具体步骤在于：

1）太子参干燥药材，加入8-10倍量的70-95%乙醇浸泡2h，置于加压连续回流提取罐中，提取罐油液温度90-130℃, 提取液温度70-90℃，灌内压力0.03 -0.06MPa，回流提取3次，每次2小时；

2）上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇再用7-10倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩浓缩至原体积的1/5—1/10，得到太子参粗多糖提取物。根据Sevag法将太子参粗多糖提取物用适量的蒸馏水稀释溶解，加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度在65-85%范围内，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/4—1/6蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇5-10 min，静置，离心出去中间的乳化层（即蛋白沉淀物），重复操作5次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度在在65-85%范围内，低温静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物，将多糖提取物冷冻干燥，称重得到太子参多糖提取物。

所述的润肺镇咳药是以太子参多糖为该药物的主要有效成分，在制备治疗润肺镇咳药的应用。

本发明的优点在于：

 通过对太子参润肺止咳活性的研究，制备具有润肺止咳功效的多糖提取物，为其临床应用提供科学依据；其提取，分离技术的推广及应用，为太子参深加工产品的研发奠定了基础。

 附图说明

 图1枸橼酸喷雾诱导咳嗽模型中Medlab生物信号采集处理系统通过呼吸流量计记录不同给药组豚鼠灌胃给药后，在喷雾诱导咳嗽开始后60～120 s内咳嗽变化情况—模型对照组。曲线类型：潮气量（容积法）。

图2枸橼酸喷雾诱导咳嗽模型中Medlab生物信号采集处理系统通过呼吸流量计记录不同给药组豚鼠灌胃给药后，在喷雾诱导咳嗽开始后60～120 s内咳嗽变化情况—阳性对照组磷酸可待因。曲线类型：潮气量（容积法）。

图3枸橼酸喷雾诱导咳嗽模型中Medlab生物信号采集处理系统通过呼吸流量计记录不同给药组豚鼠灌胃给药后，在喷雾诱导咳嗽开始后60～120 s内咳嗽变化情况—多糖提取部位组。曲线类型：潮气量（容积法）。

图4空白模型对照(Vehicle control)，阳性对照磷酸可待因10 mg/kg(Codeine phosphate)，太子参多糖提取部位高、中、低剂量(100-400 mg/kg polysaccharides)，给药后45，90，120，150 min对枸橼酸诱导的豚鼠咳嗽频率变化的作用效果。统计数据以平均值±标准偏差表示，*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 表示给药后咳嗽次数变化同模型对照组的比较(n=10)。 

具体实施方式

一种太子参有效成分的提取、分离的具体步骤在于：

1）太子参干燥药材，加入8-10倍量的70-95%乙醇浸泡2h，置于加压连续回流提取罐中，提取罐油液温度90-130℃, 提取液温度70-90℃，灌内压力0.03 -0.06MPa，回流提取3次，每次2小时；

2）上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇再用7-10倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩浓缩至原体积的1/5—1/10，得到太子参粗多糖提取物。根据Sevag法将太子参粗多糖提取物用适量的蒸馏水稀释溶解，加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度在65-85%范围内，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/4—1/6蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇5-10 min，静置，离心出去中间的乳化层（即蛋白沉淀物），重复操作5次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度在在65-85%范围内，低温静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物，将多糖提取物冷冻干燥，称重得到太子参多糖提取物。

太子参提取物镇咳药效实验

豚鼠咳嗽模型的复制  

将体重250～300 g的豚鼠(批号：skxk(沪)2007-0011，由上海市松江区松联实验动物场提供)，雌雄兼用，于实验前2天置于20 cm ×10 cm ×10 cm的透明有机密闭箱，适应1 min后，用超声雾化器喷雾17.5% 枸橼酸2 min（雾化的颗粒大小为0.9 μm，雾化流速0.6 ml/min）引咳，通过呼吸流量计连接到Meblab生理信号仪记录豚鼠在7 min（从枸橼酸喷雾引咳开始计时）内的咳嗽次数变化（豚鼠咳嗽和喷嚏的信号波形可以在生理仪上明显的区别开），经过训练的实验记录人员同时以豚鼠咳嗽时的躯体伸缩运动变化和咳嗽声音为标准记录豚鼠7 min咳嗽次数，每只豚鼠对应的咳嗽次数作为对照数据Cc。咳嗽次数在10至35次的豚鼠可用于下述实验。

数据记录与统计分析

豚鼠在第一次诱导咳嗽初筛结束后第二天灌胃给药，给药后45 min分别诱导咳嗽采用Medlab生物信号采集处理系统记录，测试豚鼠给药后的咳嗽次数变化，药效评价指标以咳嗽的百分抑制率表示，咳嗽百分抑制率=[(Cc-Ct)/Cc]×100%。 实验数据以统计平均数 ± 标准偏差表示，SPSS 16.0软件进行统计数据处理。

 1.太子参多糖提取物给药前后药效比较

豚鼠吸入枸橼酸诱导咳嗽及给药效果如图1—3所示，咳嗽和呼气反应被观察记录，同时可以根据记录的咳嗽波形大小变化来区分咳嗽和呼气反应；

2.太子参多糖提取物镇咳量效、时效关系研究   

选取合格豚鼠50只，随机分为5组，每组10只。太子参多糖活性部位高、中、低剂量3组；阳性对照组（磷酸可待因10 mg/kg）, 模型对照组（给予同体积生理盐水），在第二次引咳实验前45 min分别灌胃给药，分别测试记录给药后45，90，120，150 min豚鼠的咳嗽次数变化情况；太子参粗多糖低剂量给药，给药后45, 90, 120, 150 min的咳嗽 % 抑制率分别为：9.01%，1.938%，20.623%，12.629%；太子参粗多糖提取物中剂量给药，给药后45, 90, 120, 150 min的咳嗽 % 抑制率分别为18.293%，24.707%，30.016%，17.693%；太子参粗多糖高剂量给药，给药后45, 90, 120, 150 min的咳嗽 % 抑制率分别为：25.414%，31.876%，37.515%，21.934%。太子参多糖在给药后120 min的镇咳效果最强，高剂量给药的咳嗽抑制率 % 在给药后120 min时达到37.51 %，咳嗽抑制率 % 呈现明显的剂量、时间依赖性。见图4

实施例1

一种太子参多糖提取的具体步骤在于：

1）加入8倍量的95%乙醇，提取罐油液温度90℃, 提取液温度70℃，灌内压力0.03 -MPa；

2）上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇再用7倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩浓缩至原体积的1/5，得到太子参粗多糖提取物。

3）加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度为65%，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/4蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇5 min，静置，除去蛋白沉淀物，重复操作5次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度为65%，低温静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物。

其余步骤同具体实施例中太子参多糖提取的具体步骤。

实施例2

一种太子参多糖提取的具体步骤在于：

 1）加入10倍量的70%乙醇，提取罐油液温度130℃, 提取液温度90℃，灌内压力0.06MPa；

2）上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇再用10倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩浓缩至原体积的1/10，得到太子参粗多糖提取物。

3）加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度为85%，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/6蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇10 min，静置，除去蛋白沉淀物，重复操作5次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度为85%，低温静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物。

其余步骤同具体实施例中太子参多糖提取的具体步骤。

实施例3

一种太子参多糖提取的具体步骤在于：

 1）加入9倍量的85%乙醇，提取罐油液温度105℃, 提取液温度80℃，灌内压力0.04MPa；

2）上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇再用8倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩浓缩至原体积的1/8，得到太子参粗多糖提取物。

3）加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度为80%，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/5蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇8 min，静置，除去蛋白沉淀物，重复操作5次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度为80%，低温静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物。

其余步骤同具体实施例中太子参多糖提取的具体步骤。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (2)

1.一种太子参多糖提取物，其特征在于：太子参中提取到的太子参多糖具有润肺镇咳作用；

其制备方法的具体步骤如下：

1）太子参干燥药材，加入8-10倍量的70-95%乙醇浸泡2h，置于加压连续回流提取罐中，提取罐油液温度90-130℃, 提取液温度70-90℃，罐内压力0.03 -0.06MPa，回流提取3次，每次2小时；

2）上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇再用7-10倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩至原体积的1/5—1/10，得到太子参粗多糖提取物；根据Sevag法将太子参粗多糖提取物用适量的蒸馏水稀释溶解，加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度在65-85%范围内，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/4—1/6蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇5-10 min，静置，离心除去蛋白沉淀物，重复操作5次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度在65-85%范围内，低温静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物初产品，经冷冻干燥，称重得到太子参多糖提取物产品。

2.一种如权利要求1所述的太子参多糖提取物的应用，其特征在于：把太子参多糖提取物应用于制备治疗润肺镇咳药。

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