CN109580504B - 一种脂蛋白胆固醇测定试剂及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种脂蛋白胆固醇测定试剂及试剂盒，属于生化检测技术领域，含有聚а‑烯烃、胆固醇氧化酶和反应促进剂，还包括胆固醇酯酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化氢酶抑制物、表面活性剂、乳化剂、多聚阴离子、二价阳离子、稳定剂、抗干扰剂、显色剂和防腐剂。本发明可用于全自动生化分析仪检测，操作简便，可提高检测效率和准确度，降低检测成本。
Description
技术领域
本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种脂蛋白胆固醇测定试剂及试剂盒。
背景技术
按照物理性质的不同，人体血浆脂蛋白主要可分为以下四种：高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒(CM)，它们是血浆中胆固醇的主要存在和运输形式。其中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量分别与人类动脉硬化类疾病冠心病的发生率成负、正相关，两者在人体血浆中的含量受多种因素影响，如年龄、性别、遗传因素、吸烟/运动情况、日常饮食、肥胖等，按我国《血脂异常防治建议》提出的判断标准，按我国《血脂异常防治建议》提出的判断标准，正常情况下，男性的HDL-C在1.16-1.42mmol/L间，女性在1.29-1.55mmol/L间；青年人的平均LDL-C含量约为2.7mmol/L，中老年人约为3.37mmol/L。HDL-C、LDL-C含量的测定具有重要意义，是目前临床上心脑血管疾病的重要危险因素指标。
HDL-C、LDL-C含量的测定方法有多种，在超速离心、电泳法之后，市场上的测定方法都为直接测定法。HDL-C、LDL-C的直接测定法都可分为三代，目前被各临床实验室广泛使用的是第三代的匀相测定法，该方法都为两步法，不需样本预处理、沉淀分离等人为处理，试剂及样本用量少，可在全自动生化分析仪上测定，测定结果的准确度及精确度较高。HDL-C匀相测定法主要包括以下5种：PEG/抗体包裹法(IRC)、PEG酶修饰法(PEGME)、反应促进剂/过氧化物酶清除法(SPD)、过氧化氢酶清除法(CAT)、抗体免疫分离法(AB)。LDL-C匀相测定法主要为：可溶性反应法(SOL)、表面活性剂清除法(SUR)、保护性试剂法(PRO)、过氧化氢酶清除法(CAT)、杯芳烃法(CAL)。
不同测定法原理不同，但都普遍存在一定的缺陷，在第一步反应中不能完全将Non-HDL-C或non-LDL-C包裹或清除，易导致测定结果偏高；第二步反应中HDL-C或LDL-C不能释放完全，易导致测定结果偏低；在血浆中磷脂、胆固醇异常的病人样本中，HDL-C或LDL-C测定会出现异常，抗干扰能力弱，稳定性能差。
发明内容
本发明的目的是提供一种脂蛋白胆固醇测定试剂及试剂盒，可用于全自动生化分析仪检测，操作简便，可提高检测效率和准确度，降低检测成本。
本发明提供了如下的技术方案：
一种脂蛋白胆固醇测定试剂，含有聚а-烯烃、胆固醇氧化酶和反应促进剂。
优选的，所述а-烯烃的浓度为0.0005-0.005％(v/v)。
优选的，所述胆固醇氧化酶的分子量为25-45KDa，浓度为0.1-2KU/L。
优选的，所述反应促进剂为氟芬那酸、甲芬那酸、夫西地酸、6,6-二溴-2,2:6,2-三联吡啶、莫能菌素中的至少一种，浓度为50-200umol/L。
优选的，还包括胆固醇酯酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化氢酶抑制物、表面活性剂、乳化剂、多聚阴离子、二价阳离子、稳定剂、抗干扰剂、显色剂和防腐剂。
优选的，胆固醇酯酶为修饰酶或未修饰酶中的至少一种，浓度为0.1-2KU/L。
优选的，酶的修饰物为PEG6000、双臂PEG7000、二乙三胺五乙酸中的至少一种。
优选的，过氧化物酶的浓度为0.1-3KU/L。
优选的，过氧化氢酶的浓度为0.1-3KU/L。
优选的，过氧化氢酶抑制物为叠氮钠、3-氨基-1,2,4-三氮唑中一种或两种，浓度为1-30g/L。
优选的，所述表面活性剂为Emulgen B-66、Triton-X、三甲基-β-环糊精、环氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆-F88、布里杰-58、吐温系列、SDS、醚羧酸盐、烷基甘油醚、聚氧乙烯鲸蜡基醚、聚氧乙烯辛基苯基醚中的至少一种，所述表面活性剂的HLB值为10-15。
优选的，乳化剂为乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚中的至少一种。
优选的，多聚阴离子为肝素硫酸盐、硫酸葡聚糖、钨磷酸钠、聚乙二醇中的至少一种，浓度为0.1-1g/L。
优选的，所述二价阳离子为Mg2+、Mn2+、Ca2+中的至少一种，浓度为0.1-5g/L。
优选的，所述稳定剂可为谷胱甘肽、海藻糖、卵磷脂、甘油、EDTA、甜菜碱、明胶、牛血清蛋白中的至少一种，浓度为0.1-5g/L。
优选的，抗干扰剂为氯仿、硫酸鱼精蛋白、甘露醇、抗坏血酸氧化酶中的至少一种，浓度为0.1-6g/L。
优选的，显色剂为苯酚、3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠(DHBS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-丙磺基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-二(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOPS)中的至少一种，浓度为5-15mL/L。
优选的，防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin系列、KroVin系列中的至少一种，浓度为1-15g/L。
一种用于HDL-C测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有缓冲液、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、表面活性剂、抗干扰剂、反应促进剂、防腐剂、二价阳离子、稳定剂和多聚阴离子，所述第二试剂含有缓冲液、过氧化氢酶、表面活性剂、抗干扰剂、聚а-烯烃、防腐剂、稳定剂、显色剂和4-氨基安替比林。
一种用于LDL-C测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有缓冲液、聚а-烯烃、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、过氧化氢酶、表面活性剂、抗干扰剂、反应促进剂、防腐剂和稳定剂，所述第二试剂含有缓冲液、显色剂、4-氨基安替比林、过氧化物酶、表面活性剂、防腐剂、过氧化氢酶抑制物和稳定剂。
本发明的有益效果是：
(1)本发明提供的脂蛋白胆固醇测定试剂，引入聚а-烯烃以提高脂蛋白胆固醇测定的准确度，聚а-烯烃能够提高表面活性剂的选择性。
(2)本发明提供的脂蛋白胆固醇测定试剂，引入低分子量的胆固醇氧化酶，能够提高脂蛋白胆固醇的清除能力，进一步提高不同脂蛋白胆固醇测定的准确度，该类胆固醇氧化酶能够提高反应中胆固醇的氧化。
(3)本发明提供的脂蛋白胆固醇测定试剂，引入一种或两种以上反应促进剂以提高脂蛋白胆固醇测定效率，一方面能够减少酶的用量，节约成本，另一方面，在一定程度上能够缩短反应时间。
(4)本发明提供的HDL-C测定的试剂盒，加入的聚а-烯烃提高了表面活性剂对HDL-C的特异性，提高了HDL-C测定的准确度。
(5)本发明提供的LDL-C测定的试剂盒，加入的聚а-烯烃提高了表面活性剂对LDL-C的选择，提高了LDL-C测定的准确度。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为实施例2测试1中实施例2试剂盒测试值和理论值的线性相关性图；
图2为实施例2测试4中实施例2试剂盒和对照试剂盒的线性相关性图；
图3为实施例3测试1中实施例3试剂盒测试值和理论值的线性相关性图；
图4为实施例3测试4中实施例3试剂盒和对照试剂盒的线性相关性图。
具体实施方式
实施例1
一种脂蛋白胆固醇测定试剂，含有聚а-烯烃、胆固醇氧化酶和反应促进剂。所述а-烯烃的浓度为0.0005-0.005％(v/v)。所述胆固醇氧化酶的分子量为25-45KDa，浓度为0.1-2KU/L。所述反应促进剂为氟芬那酸、甲芬那酸、夫西地酸、6,6-二溴-2,2:6,2-三联吡啶、莫能菌素中的至少一种，浓度为50-200umol/L。
该脂蛋白胆固醇测定试剂还包括胆固醇酯酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化氢酶抑制物、表面活性剂、乳化剂、多聚阴离子、二价阳离子、稳定剂、抗干扰剂、显色剂和防腐剂。
胆固醇酯酶(CHE)为修饰酶或未修饰酶中的至少一种，浓度为0.1-2KU/L。酶的修饰物为PEG6000、双臂PEG7000、二乙三胺五乙酸中的至少一种。
过氧化物酶(POD)可源于植物(如大豆、萝卜)、动物(如动物白细胞)、微生物(如酵母)中的至少一种，浓度为0.1-3KU/L。
过氧化氢酶(CAT)可源于植物(叶绿体)、动物(如牛肝脏)、微生物(如红假单胞菌属)中的至少一种，浓度为0.1-3KU/L。
过氧化氢酶抑制物为叠氮钠、3-氨基-1,2,4-三氮唑中一种或两种，浓度为1-30g/L。
表面活性剂为Emulgen B-66、Triton-X、三甲基-β-环糊精、环氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆-F88、布里杰-58、吐温系列、SDS、醚羧酸盐、烷基甘油醚、聚氧乙烯鲸蜡基醚、聚氧乙烯辛基苯基醚中的至少一种，所述表面活性剂的HLB值为10-15。
乳化剂为乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚中的至少一种。
多聚阴离子为肝素硫酸盐、硫酸葡聚糖、钨磷酸钠、聚乙二醇中的至少一种，浓度为0.1-1g/L。
二价阳离子为Mg2+、Mn2+、Ca2+中的至少一种，浓度为0.1-5g/L。
稳定剂可为谷胱甘肽、海藻糖、卵磷脂、甘油、EDTA、甜菜碱、明胶、牛血清蛋白中的至少一种，浓度为0.1-5g/L。
抗干扰剂为氯仿、硫酸鱼精蛋白、甘露醇、抗坏血酸氧化酶中的至少一种，浓度为0.1-6g/L。
显色剂为苯酚、3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠(DHBS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-丙磺基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-二(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOPS)中的至少一种，浓度为5-15mL/L。
防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin系列、KroVin系列中的至少一种，浓度为1-15g/L。
实施例2
一种用于HDL-C测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有缓冲液、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、表面活性剂、抗干扰剂、反应促进剂、防腐剂、二价阳离子、稳定剂和多聚阴离子，所述第二试剂含有缓冲液、过氧化氢酶、表面活性剂、抗干扰剂、聚а-烯烃、防腐剂、稳定剂、显色剂和4-氨基安替比林。
本试剂盒的具体原料及配比如下：
表1第一试剂的组成和浓度
| 缓冲液PIPES(PH＝7.0) | 50mmol/L |
| 胆固醇氧化酶(25-45KDa,CHO) | 1.5KU/L |
| 胆固醇酯酶(CHE) | 1.5KU/L |
| 过氧化物酶(POD) | 1.5KU/L |
| 布里杰-58 | 0.5％ |
| 环氧乙烷十八烷胺 | 0.5％ |
| 硫酸鱼精蛋白 | 3g/L |
| 抗坏血酸氧化酶(ASO) | 2KU/L |
| 氟芬那酸 | 120umol/L |
| Proclin 300 | 5g/L |
| MgSO<sub>4</sub> | 2g/L |
| 甘油 | 8ml/L |
| 硫酸葡聚糖(DS) | 0.5g/L |
| α-环糊精 | 0.5g/L |
表2第二试剂的组成和浓度
| 缓冲液PIPES(PH＝7.0) | 50mmol/L |
| 过氧化氢酶(CAT) | 1.5KU/L |
| Emulgen B-66 | 1％ |
| 甘露醇 | 5g/L |
| 聚а-烯烃 | 0.001％ |
| Proclin 300 | 5g/L |
| 甜菜碱 | 0.3mol/L |
| TOOS | 8mL/L |
| 4-氨基安替比林(4-AAP) | 1g/L |
本实施例选用匀相测定法中的SPD法，该方法基于如下原理：利用表面活性剂与不同脂蛋白亲和力差异，直接测定HDL-C。本方法主要包括两步反应：第一步反应中，利用反应促进剂(合成的多聚物/表面活性剂)，使non-HDL形成可溶性复合物，并在POD作用下，使复合物表面游离的胆固醇被清除；第二步反应中，在表面活性剂作用下，使HDL颗粒可溶，其释放的胆固醇在CHO、CHE及CAT作用下与氨基安替比林生成青紫色苯醌色素。通过测定吸光度实现无需沉淀分离直接测定HDL-C的目的。
本实施例对样品中HDL-C进行检测，待测样品为血清、血浆中的一种，具体步骤如下：
(1)将300uL第一试剂和3uL待测样品混合均匀，37℃孵育后得到反应液1；
(2)然后加入100uL第二试剂混合均匀，得到反应液2，测定反应液2的吸光度A1；
(3)5min后再次测定反应液2的吸光度A2，测定主波长为600nm、副波长为700nm；
(4)用步骤(1)-(3)的操作对高密度脂蛋白胆固醇标准液的吸光度进行测定，分别得到吸光度A3和A4，测定主波长为600nm、副波长为700nm；
(5)用吸光度差值进行计算，根据公式计算HDL-C含量：HDL-C浓度＝样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度(A4-A3)。
实验例
以其他公司同类型产品作为对照试剂盒，与本实施例提供的用于HDL-C测定的试剂盒同时进行HDL-C的测试，结果如表3所示：
表3实施例2试剂盒与对照试剂盒参数对比
| 线性范围(mmol/L) | 准确度 | 分析灵敏度(mmol/L) | |
| 对照试剂盒 | 0.00～3.00 | ≦±10％ | 3.0 |
| 实施例2试剂盒 | 0.00～5.50 | ≦±10％ | 1.5 |
对照试剂盒为一国内市售的HDL-C检测试剂盒，其成分及配方为：试剂1包括PIPES缓冲液、TOOS、抗坏血酸氧化酶、吐温80；试剂2包括PIPES缓冲液、4-AAP、CHOD、CHER、POD。由表3可知，实施例2试剂盒的分析灵敏度更高。
测试1
配制高密度脂蛋白胆固醇不同浓度的标准样本，分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5、5.5mmol/L，分别用实施例2试剂盒和对照试剂盒测定其浓度，所有测试进行3次重复，取平均值。结果如表4：
表4线性范围对比
由表4和图1结果可以看出：样本浓度为≧3.5mmol/L时，由于线性范围较小，对照试剂盒在测定时误差变大，不能较准确的检出HDL-C的浓度，而实施例2试剂盒仍处于正常的误差范围之内，由此可见本发明试剂盒线性范围更广。
测试2
以对照试剂盒和实施例2试剂盒为材料，采用朗道校准品进行校准，以罗氏高值和低值质控进行测定，所有测试进行3次重复，取平均值。结果如表5：
表5准确度对比
| 靶值 | 对照试剂盒 | 实施例2试剂盒 |
| 高值1.53mmol/L | 1.56 | 1.52 |
| 低值0.844mmol/L | 0.85 | 0.84 |
表5结果表明：实施例2试剂盒的测试结果更接近靶值，准确度比对照试剂盒高。
测试3
批内精密度：以罗氏高值和低值质控品为样本，分别重复测定10次(n＝10)，计算变异系数(CV％)值。具体如表6：
表6批内精密度对比
由上表的结果可以看出：实施例2试剂盒的批内精密度高于对照试剂盒。
测试4
用朗道校准品进行校准，测定40例临床样本的HDL-C的含量，如表7和图2结果表明实施例2试剂盒测试结果与对照试剂所得结果有良好的相关性，所有测试进行3次重复。
表7线性相关性对比
实施例3
一种用于LDL-C测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有缓冲液、聚а-烯烃、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、过氧化氢酶、表面活性剂、抗干扰剂、反应促进剂、防腐剂和稳定剂，所述第二试剂含有缓冲液、显色剂、4-氨基安替比林、过氧化物酶、表面活性剂、防腐剂、过氧化氢酶抑制物和稳定剂。
本试剂盒的具体原料及配比如下：
表8第一试剂的组成和浓度
表9第二试剂的组成和浓度
| 缓冲液MOPS(PH＝7.0) | 50mmol/L |
| TOOS显色剂 | 10mL/L |
| 4-氨基安替比林(4-AAP) | 1g/L |
| 过氧化物酶(POD) | 1KU/L |
| Triton-X | 1.2％ |
| Proclin 300 | 5g/L |
| 叠氮钠 | 2g/L |
| 甜菜碱 | 1.5g/L |
本实施例选用匀相测定法中的CAT法，该方法基于如下原理：利用表面活性剂与不同脂蛋白亲和力差异，直接测定LDL-C。本方法主要包括两步反应：第一步反应中，利用表面活性剂及离子缓冲液特异性作用于non-LDL，使non-LDL的胆固醇释放，并在CAT作用下，使释放的胆固醇被清除；第二步反应中，在另一表面活性剂作用下，使LDL颗粒的胆固醇被释放，其释放的胆固醇在CHO、CHE及POD作用下与氨基安替比林生成青紫色苯醌色素。通过测定吸光度实现无需沉淀分离直接测定LDL-C的目的。
本实施例对样品中LDL-C进行检测，待测样品为血清、血浆中的一种，具体步骤如下：
(1)将300uL试剂第一试剂和3uL待测样品混合均匀，37℃孵育后得到反应液1；
(2)然后加入100uL试剂第二试剂混合均匀，得到反应液2，测定反应液2的吸光度A1；
(3)5min后再次测定反应液2的吸光度A2，测定主波长为545nm、副波长为700nm；
(4)用步骤(1)-(3)的操作对高密度脂蛋白胆固醇标准液的吸光度进行测定，分别得到吸光度A3和A4，测定主波长为545nm、副波长为700nm；
(5)用吸光度差值进行计算，根据公式计算LDL-C含量：LDL-C浓度＝样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度(A4-A3)。
实验例
以其他公司同类型产品作为对照试剂盒，与本实施例提供的用于LDL-C测定的试剂盒同时进行LDL-C的测试，结果如表10所示：
表10实施例3试剂盒与对照试剂盒参数对比
| 线性范围(mmol/L) | 准确度 | 分析灵敏度(mmol/L) | |
| 对照试剂盒 | 0.00～6.00 | ≦±10％ | 4.0 |
| 实施例3试剂盒 | 0.00～16.00 | ≦±10％ | 2 |
对照试剂盒为一国内市售的LDL-C检测试剂盒，其成分及配方为：试剂1包括Good’s缓冲液；试剂2包括Good’s缓冲液、4-AAP、CHOD、CHER、POD。由表10可知，实施例3试剂盒的分析灵敏度更高
测试1
配制低密度脂蛋白胆固醇不同浓度的标准样本，分别为0、2、4、6、8、10、12、14、16mmol/L，分别用实施例3试剂盒和对照试剂盒测定其浓度，所有测试进行3次重复，取平均值。结果如表11：
表11线性范围对比
由表11和图3结果可以看出：样本浓度为≧6mmol/L时，由于线性范围较小，对照试剂盒在测定时误差变大，不能较准确的检出LDL-C的浓度，而实施例3试剂盒仍处于正常的误差范围之内，由此可见本发明试剂盒线性范围更广。
测试2
以对照试剂盒和实施例3试剂盒为材料，采用朗道校准品进行校准，以罗氏高值和低值质控进行测定，所有测试进行3次重复，取平均值。结果如表12：
表12准确度对比
| 靶值 | 对照试剂盒 | 实施例3试剂盒 |
| 高值2.62mmol/L | 2.55 | 2.64 |
| 低值1.56mmol/L | 1.43 | 1.53 |
结果表明：实施例3试剂盒的测试结果更接近靶值，准确度比对照试剂盒高。
测试3
批内精密度：以罗氏高值和低值质控品为样本，分别重复测定10次(n＝10)，计算变异系数(CV％)值。具体如表13：
表13批内精密度对比
由上表的结果可以看出：实施例3试剂盒的批内精密度高于对照试剂盒。
测试4
用朗道校准品进行校准，测定40例临床样本的LDL-C的含量，如下表14和图4结果表明，实施例3试剂盒测试结果与对照试剂所得结果有良好的相关性，所有测试进行3次重复，取平均值。
表14线性相关性对比
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种脂蛋白胆固醇测定试剂，其特征在于，含有聚а-烯烃、胆固醇氧化酶和反应促进剂；所述聚а-烯烃的浓度为0.0005-0.005％(v/v)；所述胆固醇氧化酶的分子量为25-45KDa，浓度为0.1-2KU/L；所述反应促进剂为氟芬那酸、甲芬那酸、夫西地酸、6,6-二溴-2,2:6,2-三联吡啶、莫能菌素中的至少一种，浓度为50-200umol/L。
2.根据权利要求1所述的一种脂蛋白胆固醇测定试剂，其特征在于，还包括胆固醇酯酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化氢酶抑制物、表面活性剂、乳化剂、多聚阴离子、二价阳离子、稳定剂、抗干扰剂、显色剂和防腐剂。
3.根据权利要求2所述的一种脂蛋白胆固醇测定试剂，其特征在于，所述表面活性剂为Emulgen B-66、Triton-X、三甲基-β-环糊精、环氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆-F88、布里杰-58、吐温、SDS、醚羧酸盐、烷基甘油醚、聚氧乙烯鲸蜡基醚、聚氧乙烯辛基苯基醚中的至少一种，所述表面活性剂的HLB值为10-15。
4.根据权利要求2所述的一种脂蛋白胆固醇测定试剂，其特征在于，所述二价阳离子为Mg2+、Mn2+、Ca2+中的至少一种，浓度为0.1-5g/L。
5.根据权利要求2所述的一种脂蛋白胆固醇测定试剂，其特征在于，所述稳定剂可为谷胱甘肽、海藻糖、卵磷脂、甘油、EDTA、甜菜碱、明胶、牛血清蛋白中的至少一种，浓度为0.1-5g/L。
6.一种用于HDL-C测定的试剂盒，其特征在于，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有缓冲液、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、表面活性剂、抗干扰剂、反应促进剂、防腐剂、二价阳离子、稳定剂和多聚阴离子，所述胆固醇氧化酶的分子量为25-45KDa，浓度为0.1-2KU/L；所述第二试剂含有缓冲液、过氧化氢酶、表面活性剂、抗干扰剂、聚а-烯烃、防腐剂、稳定剂、显色剂和4-氨基安替比林；所述聚а-烯烃的浓度为0.0005-0.005％(v/v)。
7.一种用于LDL-C测定的试剂盒，其特征在于，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有缓冲液、聚а-烯烃、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、过氧化氢酶、表面活性剂、抗干扰剂、反应促进剂、防腐剂和稳定剂，所述胆固醇氧化酶的分子量为25-45KDa，浓度为0.1-2KU/L，所述聚а-烯烃的浓度为0.0005-0.005％(v/v)；所述第二试剂含有缓冲液、显色剂、4-氨基安替比林、过氧化物酶、表面活性剂、防腐剂、过氧化氢酶抑制物和稳定剂。
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