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CN109370936A - 一株广谱抗噬菌体的大肠埃希氏菌bl21(de3)-pr及其应用 - Google Patents

一株广谱抗噬菌体的大肠埃希氏菌bl21(de3)-pr及其应用 Download PDF

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CN109370936A
CN109370936A CN201811249585.5A CN201811249585A CN109370936A CN 109370936 A CN109370936 A CN 109370936A CN 201811249585 A CN201811249585 A CN 201811249585A CN 109370936 A CN109370936 A CN 109370936A
Authority
CN
China
Prior art keywords
escherichia coli
coli
bacteriophage
application
recombinant protein
Prior art date
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Pending
Application number
CN201811249585.5A
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Inventor
李萍
童贻刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing University of Chemical Technology
Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Original Assignee
Beijing University of Chemical Technology
Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Beijing University of Chemical Technology, Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS filed Critical Beijing University of Chemical Technology
Priority to CN201811249585.5A priority Critical patent/CN109370936A/zh
Publication of CN109370936A publication Critical patent/CN109370936A/zh
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Pending legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • C12R2001/19—Escherichia coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli

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Abstract

本发明公开了一株广谱抗噬菌体的E.coli BL21‑(DE3)‑PR及其应用。本发明以工程菌株大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)为亲本株成功筛选到一株重组蛋白表达菌株大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)‑PR，该菌株能够抵抗可以裂解大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)的噬菌体的侵染。本发明对重组蛋白表达菌株大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)‑PR进行生长曲线和蛋白表达测定，结果表明该菌株的生长能力和蛋白表达能力与原出发菌株E.coli BL21(DE3)基本一致。

Description

一株广谱抗噬菌体的大肠埃希氏菌BL21(DE3)-PR及其应用
技术领域
本发明涉及一株广谱抗噬菌体的E.coli BL21-(DE3)-PR及其应用，具体涉及一株在生长及蛋白表达过程中不易受噬菌体感染的E.coli BL21-(DE3)-PR，属于生物工程领域。
背景技术
噬菌体是一类感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒，广泛存在于自然界中。由于噬菌体具有数量多，体积小，繁殖快和基因组的高度可塑性等特点，使得工业发酵过程极易受到噬菌体的感染。噬菌体感染具有普遍性和顽固性，发酵企业一旦受到其感染，损失是不可估量的，并且至今仍无应对良策。
pET系统使用T7启动子，是有史以来在大肠杆菌中克隆表达重组蛋白的功能最强大的系统，E.coli BL21(DE3)是pET系统的常用表达宿主菌，现已作为商品化产品被广泛应用。E.coli BL21(DE3)在工厂和实验室经常受到噬菌体感染，因此防治噬菌体感染问题亟需解决。
目前防治噬菌体感染的常见措施主要包括控制感染源，菌株轮换，传统的基因工程策略以及基于CRISPR/Cas系统的噬菌体防治策略等。其中通过自然突变筛选抗噬菌体菌株的方法由于其操作简单，效果显著而被广泛使用。但是目前各个工厂或者实验室使用的抗噬菌体菌株大多只能抵抗某一株或某一类噬菌体的感染，能够抵抗多株噬菌体感染的工程菌株依然值得挖掘。
发明内容
本发明的一个目的是提供一株大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR。
本发明提供的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR的保藏编号为CGMCC No.16406。
本发明提供的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR的分类命名为大肠埃希氏菌Escherichia coli，该菌株已于2018年8月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.16406。
本发明的另一个目的是提供上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液的新用途。
本发明提供了上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在抵抗噬菌体侵染和/或防治噬菌体感染中的应用。
本发明还提供了上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在制备抵抗噬菌体侵染和/或防治噬菌体感染的产品中的应用。
上述应用中，所述噬菌体为肌尾科噬菌体和/长尾科噬菌体。
进一步的，所述肌尾科噬菌体可为T4、vB_EcoM_IME281、vB_EcoM_IME338、vB_EcoM_IME339、vB_EcoM_IME340、vB_EcoM_IME341等肌尾科噬菌体，所述长尾科噬菌体可为T1、vB_EcoS_IME18、vB_EcoS_IME253、vB_EcoS_IME347、JMPW1、EEP等长尾科噬菌体。
本发明还提供了上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在表达重组蛋白中的应用。
本发明还提供了上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在制备表达重组蛋白的产品中的应用。
本发明还提供了上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在表达重组蛋白且抵抗噬菌体侵染中的应用。
本发明还提供了上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在制备表达重组蛋白且抵抗噬菌体侵染的产品中的应用。
本发明还提供了上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在表达重组蛋白中的应用。
本发明还提供了大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在制备表达重组蛋白的产品中的应用。
本发明还有一个目的是提供一种重组蛋白的表达方法。
本发明提供的重组蛋白的表达方法包括如下步骤：将重组蛋白的编码基因导入上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR中，得到重组菌；对所述重组菌进行诱导表达，得到所述重组蛋白。
上述方法中，所述重组蛋白的编码基因通过重组质粒导入上述大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR中。所述重组质粒是将重组蛋白的编码基因克隆到表达质粒上得到的。
本发明使用大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)成功筛选到一株重组蛋白表达菌株大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)-PR，该菌株能够抵抗可以裂解大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)的噬菌体的侵染。本发明对重组蛋白表达菌株大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)-PR进行生长曲线和蛋白表达测定，结果表明该菌株的生长能力和蛋白表达能力与原出发菌株E.coli BL21(DE3)基本一致。
附图说明
图1为噬菌体噬斑图。A：E.coli BL21(DE3)的噬菌体噬斑图；B：E.coli BL21(DE3)-PR的噬菌体噬斑图。第一列均为肌尾噬菌体，第二列均为长尾噬菌体。
图2为E.coli BL21(DE3)和E.coli BL21(DE3)-PR的生长曲线图。
图3为E.coli BL21(DE3)和E.coli BL21(DE3)-PR的蛋白表达SDS-PAGE图。M：Maker；1：E.coli BL21(DE3)的pET-28a空白质粒；2：E.coli BL21(DE3)的pET-28a-EGFP质粒，IPTG诱导8h；3：E.coli BL21(DE3)的pET-28a-EGFP质粒，IPTG诱导10h；4：E.coli BL21(DE3)的pET-28a-EGFP质粒，IPTG诱导12h；5：E.coli BL21(DE3)-PR的pET-28a-EGFP质粒，IPTG诱导8h；6：E.coli BL21(DE3)-PR的pET-28a-EGFP质粒，IPTG诱导10h；7：E.coli BL21(DE3)-PR的pET-28a-EGFP质粒，IPTG诱导12h。其中，箭头所指为目的条带。
保藏说明
菌种名称：大肠埃希氏菌
拉丁名：Escherichia coli
菌株编号：BL21(DE3)-PR
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2018年8月30日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16406
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中的E.coli BL21(DE3)是北京全式金生物公司产品，BL21(DE3)Chemically Competent Cell，货号为CD601-01。
下述实施例中的LB液体培养基的溶剂为水，溶质及其浓度分别如下：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L。LB半固体培养基是在LB液体培养基中加入琼脂后得到的，琼脂在LB半固体培养基中的质量分数为0.7％。LB固体培养基是在LB液体培养基中加入琼脂后得到的，琼脂在LB固体培养基中的质量分数为1.5％。
下述实施例中的噬菌体vB_EcoM_IME281、vB_EcoM_IME338、vB_EcoM_IME339均已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。噬菌体vB_EcoM_IME281的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16291；噬菌体vB_EcoM_IME338的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16292；噬菌体vB_EcoM_IME339的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16293。
下述实施例中的噬菌体T4记载于文献“陈昭斌,许欣,代小英,曾忠铭,张朝武.MS2和T4噬菌体对短波紫外线抵抗力的比较研究[J].现代预防医学,2007(03):469-471.”中，公众可从申请人处获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的噬菌体T1记载于文献“Wietzorrek A,Schwarz H,Herrmann C,Braun V.The genome of the novel phage Rtp,with a rosette-like tail tip,ishomologous to the genome of phage T1.J Bacteriol.2006Feb；188(4):1419-36.”中，公众可从申请人处获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的噬菌体vB_EcoS_IME253记载于文献“邢少贞,赵飞扬,孙强,米志强,安小平,童贻刚,赵宝华.利用比较基因组学快速鉴定大肠埃希菌噬菌体耐受基因[J].中国抗生素杂志,2017,42(10):871-879.”中，公众可从申请人处获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的噬菌体vB_EcoS_IME18记载于文献“李萍，林洪，童贻刚，王静雪。一株T1样噬菌体vB_EcoS_IME18的鉴定及其受体分析[J/OL].食品科学:1-11[2018-10-22].”，公众可从申请人处获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的噬菌体vB_EcoS_IME347记载于文献:“Ping Li,Hong Lin,Zhiqiang Mi,Yigang Tong,Jingxue Wang.vB_EcoS_IME347a novel T1-likeEscherichia coli bacteriophage.Journal of Basic Microbiology.doi:10.1002/jobm.201800271”中，公众可从申请人处获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的噬菌体JMPW1记载于文献“Shen M,Zhu H,Lu S,Le S,Li G,TanY,Zhao X,Shen W,Hu F,Wang J.Complete Genome Sequences of T1-Like PhagesJMPW1and JMPW2.Genome Announc.2016Jun 23；4(3).pii:e00601-16.doi:10.1128/genomeA.00601-16.”中，公众可从申请人处获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的噬菌体EEP记载于文献“Li S,Liu L,Zhu J,Zou L,Li M,Cong Y,Rao X,Hu X,Zhou Y,Chen Z,Hu F.Characterization and genome sequencing of anovel coliphage isolated from engineered Escherichia coli.Intervirology.2010；53(4):211-20.doi:10.1159/000299063.Epub 2010Mar 23.”中，公众可从申请人处获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
实施例1、抗噬菌体菌株E.coli BL21(DE3)-PR的筛选及其保藏
一、抗噬菌体菌株E.coli BL21(DE3)-PR的筛选
1、BL21(DE3)菌液的制备
将E.coli BL21(DE3)接种于LB液体培养基中，在37℃，220rpm条件下过夜培养，得到BL21(DE3)菌液。
2、噬菌体的分离
取污水(污水来源于中国人民解放军307医院的废弃水)，10 000r/min离心10min，收集上清液。将上清液用0.22μm的滤器过滤，得到污水滤液。然后将200μL污水滤液和4mL步骤1制备的BL21(DE3)菌液加入2mL 3×LB液体培养基中，37℃，220rpm培养6h，得到噬菌体原液。再将噬菌体原液用0.22μm微孔滤膜过滤，得到噬菌体保存液，并于4℃保存。
3、噬菌体的纯化
以BL21(DE3)为指示菌，使用双层平板法培养上述噬菌体原液中的噬菌体。具体步骤如下：
1)噬菌体保存液的稀释
用Gibco磷酸盐缓冲液PBS(Thermo Fisher Scientific，C10010500BT)将步骤2制备的噬菌体保存液进行梯度稀释，得到不同稀释度(101-108pfu/mL)的噬菌体保存液。
2)双层平板法培养噬菌体
将300μL步骤1制备的BL21(DE3)菌液分别与100μL步骤1)制备的不同稀释度(101-108pfu/mL)的噬菌体保存液混合，室温吸附5min。然后分别将混合液加入5mL LB半固体培养基中，混合均匀，平铺在含下层LB固体培养基平板上，室温晾干5min。再将平板于37℃培养8h，观察噬菌斑。
3)噬菌体的纯化
挑取上述双层平板上单个噬菌斑与300μL步骤1制备的BL21(DE3)菌液加入5mL LB液体培养基中，37℃，220rpm培养6h，得到培养液。然后将培养液用0.22μm微孔滤膜过滤并于4℃保存。
4)按照以上步骤2)-3)重复三次，得到纯化的噬菌体保存液。
4、抗噬菌体菌株的筛选
将300μL步骤1制备的BL21(DE3)菌液分别与100μL步骤3制备的纯化的不同稀释度(101-108pfu/mL)的噬菌体保存液混合，室温吸附5min。然后将混合液加入5mL LB半固体培养基中，混合均匀，平铺在含下层LB固体培养基平板上，室温晾干5min。再将平板于37℃培养24-48h，直至在全是噬菌斑的透亮平板长出直径为2～3mm的光滑型菌落。最后将菌落进行平板划线培养，得到抗噬菌体菌株单克隆。
5、噬斑法鉴定抗噬菌体菌株
取300μL过夜培养的亲本株E.coli BL21(DE3)菌液和300μL过夜培养的上述步骤4制备的抗噬菌体菌株菌液分别加入5mL LB半固体培养基中，混合均匀，平铺在含下层LB固体培养基平板上，室温晾干5min；分别将1滴(2μL)步骤3制备的纯化的噬菌体保存液(108pfu/mL)滴在细菌层培养基上，37℃培养8h，观察噬菌斑，并选取无法形成噬菌斑且生长状况良好的菌株为抗噬菌体菌株。
6、抗噬菌体菌株E.coli BL21(DE3)-PR的筛选
依次按照上述步骤1-5所述的方法，得到噬菌体IME18(步骤1-3)和耐受噬菌体IME18的菌株R1(步骤4和5)。然后以菌株R1为亲本株，依次按照上述步骤1-5所述的方法，得到噬菌体IME253和耐受噬菌体IME253的菌株R2。以此类推，经过7轮筛选，依次得到噬菌体IME18，IME253，IME281，IME338，IME339，IME340，IME347，最终得到一株广谱抗噬菌体的菌株，并将其记作BL21(DE3)-PR。
二、抗噬菌体菌株BL21(DE3)-PR的分子鉴定
采用通用引物对抗噬菌体菌株BL21(DE3)-PR的16S rDNA基因序列进行扩增，并进行测序。结果表明：抗性菌株BL21(DE3)-PR的16S rDNA基因序列如序列1所示。
三、抗噬菌体菌株BL21(DE3)-PR的保藏
抗噬菌体菌株BL21(DE3)-PR的分类命名为大肠埃希氏菌Escherichia coli，该菌株已于2018年8月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.16406。
实施例2、抗噬菌体菌株BL21(DE3)-PR的性能检测
一、抗噬菌体菌株BL21(DE3)-PR的噬菌体噬斑试验
为了检测抗噬菌体菌株大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR(下文简记作为E.coli BL21(DE3)-PR)的抗噬菌体性能进行噬菌体噬斑试验。具体步骤如下：取300μL实施例1步骤一的1中制备的BL21菌液和300μL实施例1步骤一的6筛选的抗噬菌体菌株BL21(DE3)-PR菌液分别加入5mL LB半固体培养基中，混合均匀，平铺在含下层LB固体培养基平板上，室温晾干5min；分别将1滴(2μL)浓度为108pfu/mL的噬菌体保存液(T4、vB_EcoM_IME281、vB_EcoM_IME338、vB_EcoM_IME339、vB_EcoM_IME340、vB_EcoM_IME341、T1、vB_EcoS_IME18、vB_EcoS_IME253、vB_EcoS_IME347、JMPW1、EEP)滴在细菌层培养基上，37℃培养8h，观察有无噬菌斑出现。
结果如图1所示。图1A为E.coli BL21(DE3)的噬菌体噬斑图；图1B为E.coli BL21(DE3)-PR的噬菌体噬斑图。其中，第一列均为肌尾噬菌体，由上至下依次为T4噬菌体、vB_EcoM_IME281噬菌体、vB_EcoM_IME338噬菌体、vB_EcoM_IME339噬菌体、vB_EcoM_IME340噬菌体、vB_EcoM_IME341噬菌体；第二列均为长尾噬菌体，由上至下依次为T1噬菌体、vB_EcoS_IME18噬菌体、vB_EcoS_IME253噬菌体、vB_EcoS_IME347噬菌体、JMPW1噬菌体、EEP噬菌体。从图中可以看出：所有噬菌体均可裂解E.coli BL21(DE3)菌株，形成噬菌斑，而E.coli BL21(DE3)-PR菌株均无噬菌斑出现，说明E.coli BL21(DE3)-PR菌株能够抵抗可以裂解E.coli BL21(DE3)的噬菌体的侵染，包括抵抗多株肌尾科噬菌体(T4、vB_EcoM_IME281、vB_EcoM_IME338、vB_EcoM_IME339、vB_EcoM_IME340、vB_EcoM_IME341)的感染和抵抗多株长尾科噬菌体(T1、vB_EcoS_IME18、vB_EcoS_IME253、vB_EcoS_IME347、JMPW1、EEP)的感染。
二、抗噬菌体菌株E.coli BL21(DE3)-PR的生长曲线测定
测定E.coli BL21(DE3)和E.coli BL21(DE3)-PR的生长曲线。具体步骤如下：将E.coli BL21(DE3)和E.coli BL21(DE3)-PR分别接种于5mL LB培养基中，37℃，220rpm振荡培养12h。次日分别取500μL于50mL LB培养基中，37℃，220rpm振荡培养12h。在培养第0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h时分别取出1mL，使用紫外分光光度计测定OD600。
结果如图2所示。从图中可以看出：E.coli BL21(DE3)和E.coli BL21(DE3)-PR的生长状况基本一致。
三、抗噬菌体菌株E.coli BL21(DE3)-PR的蛋白表达水平测定
测定E.coli BL21(DE3)和E.coli BL21(DE3)-PR的蛋白表达水平。具体步骤如下：
1、重组质粒的制备
将序列2所示的DNA分子插入pET-28a载体(优宝生物，VT1207)的EcoRI和XhoI酶切位点间，得到pET-28a-EGFP重组质粒。pET-28a-EGFP重组质粒表达EGFP蛋白。
2、重组菌的制备
将步骤1制备的pET-28a-EGFP重组质粒分别导入E.coli BL21(DE3)和E.coliBL21(DE3)-PR中，分别得到含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)和含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)-PR。
3、重组菌的诱导表达
将步骤2制备的含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)和含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)-PR分别接种于5mL含有50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，37℃，220rpm振荡培养12h。次日分别将500μL上述菌液转接于50mL含有50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，37℃，220rpm振荡培养。使用紫外分光光度计测定OD600，当OD600＝0.6时，使用IPTG诱导(终浓度为0.8mM)，在诱导培养第8h、10h、12h时分别取样1mL。将1mL菌液12000rpm离心1min，用1mL PBS重悬，取50μL菌液加10μL 6×上样缓冲液，煮沸7min，进行SDS-PAGE电泳检测。
结果如图3所示。从图中可以看出：含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)和含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)-PR菌株表达EGFP蛋白条带基本相同，说明含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)和含有pET-28a-EGFP的E.coli BL21(DE3)-PR表达EGFP蛋白的能力基本一致。
序列表
<110>中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 北京化工大学
<120>一株广谱抗噬菌体的大肠埃希氏菌BL21-(DE3)-PR及其应用
<160>2
<170>PatentIn version 3.5
<210>1
<211>1355
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>1
gctacctact tcttttgcaa cccactccca tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg 60
ggaacgtatt caccgtggca ttctgatcca cgattactag cgattccgac ttcatggagt 120
cgagttgcag actccaatcc ggactacgac gcactttatg aggtccgctt gctctcgcga 180
ggtcgcttct ctttgtatgc gccattgtag cacgtgtgta gccctggtcg taagggccat 240
gatgacttga cgtcatcccc accttcctcc agtttatcac tggcagtctc ctttgagttc 300
ccggccggac cgctggcaac aaaggataag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac 360
atttcacaac acgagctgac gacagccatg cagcacctgt ctcacggttc ccgaaggcac 420
cttcccatct ctgaaaactt ctgtggatgt caagaccagg taaggttctt cgcgttgcat 480
cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg tcaattcatt tgagttttaa 540
ccttgcggcc gtactcccca ggcggtcgac ttaacgcgtt agctccggaa gccacgcctc 600
aagggcacaa cctccaagtc gacatcgttt acggcgtgga ctaccagggt atctaatcct 660
gtttgctccc cacgctttcg cacctgagcg tcagtcttcg tccagggggc cgccttcgcc 720
accggtattc ctccagatct ctacgcattt caccgctaca cctggaattc tacccccctc 780
tacgagactc aagcttgcca gtatcagatg cagttcccag gttgagcccg gggatttcac 840
atctgactta acaaaccgcc tgcgtgcgct ttacgcccag taattccgat taacgcttgc 900
accctccgta ttaccgcggc tgctggcacg gagttagccg gtgcttcttc tgcgggtaac 960
gtcaatgagc aaaggtatta actttactcc cttcctcccc gctgaaagta ctttacaacc 1020
cgaaggcctt cttcatacac gcggcatggc tgcatcaggc ttgcgcccat tgtgcaatat 1080
tccccactgc tgcctcccgt aggagtctgg accgtgtctc agttccagtg tggctggtca 1140
tcctctcaga ccagctaggg atcgtcgcct aggtgagccg ttaccccacc tactagctaa 1200
tcccatctgg gcacatccga tggcaagagg cccgaaggtc cccctctttg gtcttgcgac 1260
gttatgcggt attagctacc gtttccagta gttatccccc tccatcaggc agtttcccag 1320
acattactca cccgtccgcc actcgtcagc gaagc 1355
<210>2
<211>732
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>2
gaattcatgg tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag 60
ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc 120
acctacggca agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg 180
cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac 240
atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc 300
atcttcttca aggacgacgg caactacaag acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac 360
accctggtga accgcatcga gctgaagggc atcgacttca aggaggacgg caacatcctg 420
gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag 480
aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag 540
ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac 600
aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac 660
atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac 720
aagtaactcg ag 732

Claims (9)

1.一株大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR，其保藏编号为CGMCCNo.16406。
2.权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在抵抗噬菌体侵染和/或防治噬菌体感染中的应用。
3.权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在制备抵抗噬菌体侵染和/或防治噬菌体感染的产品中的应用。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述噬菌体为肌尾科噬菌体和/或长尾科噬菌体。
5.权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在表达重组蛋白中的应用；
或，权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在制备表达重组蛋白的产品中的应用。
6.权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在表达重组蛋白且抵抗噬菌体侵染中的应用；
或，权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR作为宿主菌在制备表达重组蛋白且抵抗噬菌体侵染的产品中的应用。
7.权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在表达重组蛋白中的应用。
8.权利要求1所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR或其菌液或其代谢液或其培养液在制备表达重组蛋白的产品中的应用。
9.一种重组蛋白的表达方法，包括如下步骤：将重组蛋白的编码基因导入权利要求1中所述的大肠埃希氏菌Escherichia coli BL21(DE3)-PR中，得到重组菌；对所述重组菌进行诱导表达，得到所述重组蛋白。
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