KR20110041670A - 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지 - Google Patents

Abstract

본 발명은 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지에 관한 것으로 구체적으로 본 발명은 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균에 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지, 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 항균제, 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 사료첨가제 또는 식품첨가제에 관한 것이다. 본 발명의 박테리오파지는 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균을 특이적으로 사멸시킬 수 있어, 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물은 항균제, 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 사료첨가제 또는 식품첨가제로 효과적으로 사용될 수 있다.

대장균, 시겔라, 박테리오파지, 항균제

Description

대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지{Bacteriophage having killing activity specific to Escherichia coli or Shigella}

본 발명은 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지에 관한 것으로 구체적으로 본 발명은 기탁번호 KCTC 11428BP를 가지는 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지, 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 항균제, 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 사료첨가제 또는 식품첨가제에 관한 것이다.

대장균(Escherichia coli)는 전체 박테리아의 0.1%정도를 차지하며 인간뿐만 아니라 다른 동물의 장에서 주로 서식한다. 대장균은 대부분이 유해성 박테리아가 아니지만 병원성 대장균도 많이 존재한다. 예를 들어, Enterotoxigenic E.coli (ETEC), enteroinvasive E.coli (EIEC), enteropathogenic E.coli (EPEC), enteroaggregative E.coli (EAEC) 및 enterohemorrhagic E.coli (EHEC)들은 장독소 (enterotoxin), 시가 독소 (shiga toxin), 세포 독소 (cytotoxin) 및 내독소 (endotoxin) 등의 독소를 배출하여 설사나 장내 질병을 일으킨다. 또한 이들 병원성 대장균은 개발도상국의 여행자들에게서 빈번히 발견되며, 살균되지 않은 우유, 요리되지 않은 쇠고기, 상한 물 등을 섭취함으로써 쉽게 감염된다.

또한 시겔라(Shegella)속에 속하는 균은 장내세균과에 속하는 세균으로 운동성이 없고 협막도 없으며 아포도 형성하지 않는 그람음성 세균으로 S.flexneri, S.sonnei, S.doydii, S.dysenteriae의 4종으로 나뉜다. 상기 균들은 세균성 이질을 발생시키는 데, 상기 질환은 감염력이 강해 매개체 내의 증식없이도 환자나 보균자의 손에 묻어있는 세균만으로도 전파가 가능하며, 점촉감염증이 쉬겔라 감염증의 주된 전파 방법이다. 세계적으로 매년 2억명의 발병을 보이고 있으며 그중 65만명이 사망하고 있는 실정이다. 우리나라에서 세균성 이질의 발병은 감소추세를 보이다 1998년이후 전국적으로 집단 발병하는등 발병이 현격히 증가하여 사회문제화 되고 있다. 또한 1998년 이후 분리된 이질균의 경우 테트라싸이클린, 스트렙토마이신등 항생제에 대하여 내성을 보이는 등 항균제에 대한 내성이 심각한 수준으로 대두대고 있다.

상기 대장균 또는 시겔라속 균과 같은 미생물에 의한 감염이 발생하는 경우 그 치료를 위하여 주로 항생제를 사용한다. 하지만 항생제가 남용되는 경우 항생제 내성 미생물들이 발생하여 부작용이 발생할 수 있다. 구체적으로 항생제가 남용되는 경우 미생물들은 항생제에 대한 내성을 획득하게 되었고 내성을 지닌 미생물들은 다른 미생물에게 내성을 전달하여 확산 속도가 빠르게 퍼져나갔다. 따라서 상기 항생제가 아닌 다른 방법으로 대장균 또는 시겔라속 균을 사멸시킬 수 있는 방법이 필요한 실정이다.

한편, 박테리오파지(bacteriophage)는 세균에 특이적으로 침투하여 용균하는 바이러스로 유전물질 (single DNA, double DNA, RNA)을 단백질 외피가 싸고 있는 유기체다. 상기 박테리오파지는 자연에 존재하는 모든 생물체를 감염시킬 수 있으며, 생물이 존재하는 거의 모든 곳에 함께 존재할 수 있다. 뿐만 아니라 그 수와 다양성도 엄청난 것으로 밝혀지고 있고, 실제로 해양이나 토양의 경우 박테리아의 수보다 많이 존재하는 것으로 추정되고 있으며 그 다양성도 어마어마한 것으로 알려지고 있다. 이들을 이용한 파지 치료법 (phage therapy)은 인간뿐만 아니라 식물, 동물, 음식 등 그 응용분야가 매우 다양할 뿐 아니라 잠재적 응용성도 많다고 할 수 있으며 나아가 항생제보다 보다 특이적인 치료가 가능하다.

이에 본 발명자들은 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지에 대하여 연구하던 중, 하수로부터 신규한 박테리오파지를 분리하고 상기 박테리오파지가 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능이 있음을 밝혀 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명은 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지 (기탁번호 KCTC 11428BP)를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 항균제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 포함하는 사료첨가제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 포함하는 식품첨가제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지 (기탁번호 KCTC 11428BP)를 제공한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 항균제를 제공한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 포함하는 사료첨가제를 제공한다.

또한 본 발명은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 포함하는 식품첨가제를 제공한다.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명에서 항균제는 미생물의 성장을 억제할 뿐 아니라 미생물을 파괴 또는 무력화하는 제제를 의미한다.

본 발명에서 배양물은 본 발명의 박테리오파지의 배양액, 상기 배양액의 농축액, 상기 배양액 또는 농축액의 건조물을 포함한다. 상기 배양물은 본 발명의 박테리오파지를 당업계에 공지된 박테리오파지 배양용 배지에 본 발명의 박테리오파지를 접종하여 제조될 수 있으며, 상기 배지는 이에 한정되지 않지만 TSA(Tryptic Soy Agar)일 수 있다.

본 발명의 박테리오파지는 대장균 또는 시겔라속 균이 서식하는 곳에서 당업계에 공지된 방법에 따라 분리될 수 있다. 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 박테리아는 여과하지만 박테리오파지는 통과시킬 수 있는 구멍크기의 필터로, 대장균 또는 시겔라속 균이 서식하는 곳에서 채취한 시료를 여과시킨 다음, 원심분리하여 상등액을 회수하고 상기 상등액을 이용하여 용균반 분석(plaque assay)을 함으로써 대장균 또는 시겔라속 균을 특이적으로 사멸시킬 수 있는 본 발명의 박테리오파지를 분리할 수 있다 (<실시예 1-1> 참조).

본 발명의 박테리오파지는 형태학적 분류상 시포비리대(Siphoviridae) 및 람다 유사 파지(lamda-like phage)속에 속하며, 본 발명에서 상기 박테리오파지를 'bacteriophage EP23'으로 명명하고, 2008년 11월 19일자로 생명공학연구소 유전자은행(korean collection for type cultures, KCTC)에 기탁번호 KCTC 11428BP로 기탁하였다 (<실시예 1-2> 참조).

본 발명의 박테리오파지는 35분 정도의 암흑기, 45분 정도의 잠복기를 가지며, 10±1 PFU/infected cell의 방출량(burst size)을 가지는 생장 특성이 있다 (<실시예 1-3> 참조).

본 발명의 박테리오파지는 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 유전체를 가지며, 상기 염기서열은 gDNA 서열이다. 또한 본 발명의 박테리오파지의 DNA 중합 효소 단백질의 DNA 및 아미노산 서열을 다른 박테리오파지와 비교한 결과, 본 발명의 박테리오파지는 다른 박테리오파지와 동일하지 않으며 신규한 것이다 (<실시예 1-4> 참조).

본 발명의 박테리오파지는 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 가지는 것을 특징으로 한다. 상기 시겔라속 균은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 시겔라소네이(Shigella sonnei ) 균일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 박테리오파지는 대장균 또는 시겔라속 균에 대해서 특이적인 사멸효과가 있으며, Escherichia blattae , Escherichia hermannii , Escherichia vulneris , Escherichia fergusonii 및 살모넬라 속 균에 대해서는 사멸효과가 없다 (<실시예 2> 참조).

한편, 본 발명의 항균제는 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기 박테리오파지 또는 이의 배양물은 상기 기재한 바와 같이 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능이 있어, 상기 성분을 함유하는 항균제는 대장균 또는 시겔라속 균을 사멸시킬 수 있는 특성이 있다. 상기 시겔라속 균은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 시겔라소네이(Shigella sonnei ) 균일 수 있다.

상기 대장균 또는 시겔라속 균은 주로 식품 또는 화장품을 오염시킬 있다. 식품은 미생물의 탄소원 및 질소원 등 수 많은 유기물, 무기물을 함유하고 있으며, 화장품은 기름이나 물을 주성분으로 하며, 미생물의 탄소원이 되는 글리세린이나 솔비톨 등과 질소원이 되는 아미노산 유도체, 단백질 등이 배합된 것이 많아, 대장균 또는 시겔라속 균이 번식하기 용이하기 때문이다. 따라서 본 발명의 항균제는 식품이나 화장품에 첨가되어 사용될 수 있다.

본 발명의 항균제는 유익한 균은 사멸시키지 않고 병원성 균인 대장균 또는 시겔라속 균만을 선택적으로 죽일 수 있어, 부작용이 없으며 병원성 균의 내성 내지 저항성을 유도하지 않아 기존의 항생물질에 비하여 효과적으로 이용될 수 있다.

본 발명의 항균제는 통상적인 항균제 제조방법으로 제조될 수 있으며, 유효성분인 본 발명의 박테리오파지 또는 이의 배양물 외에 필요에 따라 담체, 기타 보조제 등을 추가적으로 포함할 수 있는데, 상기 담체는 생리식염수, 증류수, 사료, 박테리아용 배지(예, Tryptic Soy Agar) 등일 수 있으며, 보조제는 pH 교정 등의 목적으로 완충액 등일 수 있으나 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 항균제는 액상, 반 고체상 또는 고체상으로 제제 형태는 분말제, 과립제, 정제 등의 고체상 제제, 현탁제 또는 주사액제 등의 액상 제제 및 크림, 로션, 젤, 페이스트 등의 반 고체상 제제 등으로 제형화될 수 있다.

한편, 본 발명의 약학적 조성물은 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용인 것을 특징으로 한다.

상기 박테리오파지 또는 이의 배양물은 상기 기재한 바와 같이 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능이 있어, 상기 성분을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 약학적 조성물은 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용으로 효과적으로 사용될 수 있다. 상기 시겔라속 균은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 시겔라소네이(Shigella sonnei ) 균일 수 있다.

상기 대장균에 의해 유발되는 질환은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 대 장균 감염증, 보다 바람직하게는 장침습성 대장균 감염증, 장출혈성 대장균 감염증, 장독소성 대장균 감염증 및 장병원성 대장균 감염증으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

또한 상기 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 세균성 이질일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 상기 질환 부위에의 도포 또는 분무하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 밖에 경구 또는 비경구 투여를 통해 투여할 수도 있으며, 비경구 투여의 경우 경피 투여, 정맥내 투여, 복강내 투여, 근육내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 약학적 조성물은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 1x10³ 내지 1x 10¹⁰ pfu/ml의 박테리오파지를 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 당업자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카 시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다. 또한, 상기 약학 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

한편, 본 발명의 사료첨가제 또는 식품첨가제는 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물을 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 박테리오파지 또는 이의 배양물은 상기 기재한 바와 같이 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능이 있어, 상기 성분을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 사료첨가제 또는 식품첨가제는 대장균 또는 시겔라속 균을 특이적으로 사멸시킬 수 있다. 상기 시겔라속 균은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 시겔라소네이(Shigella sonnei ) 균일 수 있다.

상기 식품첨가제가 사용될 수 있는 식품에는 제한이 없으며, 상기 식품첨가제는 대장균 또는 시겔라속 균에 감염되기 쉬운 식품에 당업계에 공지된 방법에 따 라 첨가제의 형태로 제조된 것을 말한다. 상기 사료첨가제는 이에 한정되지 않지만 가축용 및 어류용 사료에 첨가제의 형태로 제조된 것을 말한다. 상기 사료첨가제 또는 식품첨가제의 첨가량은 당업자라면 용이하게 정할 수 있으며, 대장균 또는 시겔라속 균의 감염 용이성, 감염 정도에 따라 달리 정할 수 있다.

본 발명의 박테리오파지는 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균을 특이적으로 사멸시킬 수 있어, 상기 박테리오파지 또는 이의 배양물은 항균제, 대장균 또는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 사료첨가제 또는 식품첨가제로 효과적으로 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1>

본 발명의 박테리오파지의 분리 및 동정

<1-1> 본 발명의 박테리오파지의 분리

대장균을 특이적으로 사멸시킬 수 있는 박테리오파지를 분리하기 위하여, 대장균이 존재할 것으로 예상되는 곳에서 시료를 채집한 후 이의 배양액을 대장균에 접종하여 대장균을 사멸시키는 박테리오파지를 분리하였다.

구체적으로 박테리오파지가 존재할 것이라 예상되는 하천수에서 검체를 채집하여 여과 종이로 일차 여과한 후에 상기 회수된 여과액을 0.22 ㎛의 필터를 이용하여 여과한 다음, 여과액을 대장균과 함께 30℃에서 1일 동안 배양하고 다시 8,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 상기 회수된 상등액을 0.22 ㎛의 필터를 이용하여 다시 여과한 다음, 그 여과액을 이용해 용균반 분석(plaque assay) (Calson, K. (2004) Appendix. Working with Bacteriophages: Common Techniques and Methodological Approaches. In the Bacteriophages: Biology and Applications (Kutter, E & Sulakvelidze, A eds) pp 437-494, CRC Press, Florida)을 함으로써 대장균을 특이적으로 사멸시킬 수 있는 박테리오파지를 분리하였다.

<1-2> 본 발명의 박테리오파지의 형태학적 분류 및 기탁

상기 <실시예 1-1>에서 수득한 박테리오파지의 형태학적 특성을 살펴보기 위해, 상기 박테리오파지를 10%(w/v) 폴리에틸렌 글리콜 8000에 넣은 후 4℃에서 하룻밤 동안 클로로포름으로 대장균과 파괴된 세포 잔해를 제거하였다. 이 후 염화세슘(CsCl) 밀도 구배법(밀도: 1.15 g/㎖, 1.45 g/㎖, 1.50 g/㎖ 및 1.70 g/㎖)을 이용한 원심분리(20,000 rpm, 2시간, 4℃)를 통하여 박테리오파지를 정제하였다.

상기 정제된 박테리오파지를 구리 그리드(copper grid)에 묻고, 2% 우라닐 아세테이트(uranyl acetate)로 대조 염색(negative staining) 및 건조한 다음, 투 과전자현미경을 이용하여 형태를 관찰하고 그 결과를 도 1에 기재하였다.

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 박테리오파지는 형태학적 분류상 시포비리대(Siphoviridae) 속 및 람다 유사 파지(lamda-like phage)에 속하는 것을 알 수 있고 도 3에 나타낸 바와 같이 계통학적으로 람다 유사 파지에 속하는 것을 알 수 있다.

상기와 같이 분리한 박테리오파지를 'bacteriophage EP23'으로 명명하고 2008년 11월 19일자로 생명공학연구소 유전자은행(Korean Collection for Type Cultures, KCTC)에 기탁번호 KCTC 11428BP로 기탁하였다.

<1-3> 본 발명의 박테리오파지의 생장 특성

본 발명의 박테리오파지의 생장특성을 살펴보기 위하여 생장곡선을 작성하였다. 구체적으로 one-step growth curve test를 실시하였으며, 보다 구체적으로 대장균을 TSB (tyrptic soy broth, Difco)에 접종한 후 30℃에서 exponential time (OD 0.6-0.7)까지 20 ㎖에서 배양한 후 원심 분리하고 세포를 수집한 후, TSB (trypic soy broth, Difco) 0.25 배 (v/v)를 추가로 첨가하였다. MOI (multiplicity of infection) 0.1 수준의 본 발명의 박테리오파지를 접종 한 후 상온에서 5분 동안 흡착시킨 다음, 원심 분리하여 상등액을 버리고 TSB 20 ㎖을 추가 첨가 하였다. 상기 첨가 후, 상온에서 5분 간격으로 샘플링하고 한 셋은 바로 파지 적정(phage titration)을 위해 대장균이 도말된 플레이트 위에 도말하였다. 또한 다른 한 셋은 세포내 파지(intracellular phages)의 해방을 위해 1% 클로로포름을 처리 한 후 파지 적정(phage titration)을 위해 대장균이 도말된 플레이트 위에 도말하였다. 이후, 시간 추이에 따른 적정된 박테리오파지의 수(plaque form unit, PFU)를 측정한 결과를 도 2에 기재하였다.

상기 도 2에 기재한 바와 같이, 본 발명의 박테리오파지는 35분 정도의 암흑기가 있으며, 45분 정도의 잠복기를 가진다. 이들의 방출량(burst size)은 10±1 PFU/infected cell임을 알 수 있다.

<1-4> 본 발명의 박테리오파지의 유전자 서열 분석 및 비교

1L의 TSB에서 30℃에서 배양한 후 본 발명의 박테리오파지를 접종하여 용균 현상이 관찰될 때 폴리에틸린글리콜 침전 및 염화세슘 고속원심분리를 통하여 박테리오파지를 농축하였다(Calson, K. (2004) Appendix. Working with Bacteriophages: Common Techniques and Methodological Approaches. In the Bacteriophages: Biology and Applications (Kutter, E & Sulakvelidze, A eds) pp 437-494, CRC Press, Florida).상기 농축된 박테리오 파지에서 DNA를 분리하여 (Sambrook, J. & Russell, D. W. (2001). Molecular cloning: A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.) 박테리오파지의 전체 유전체 서열 (44077개의 DNA 서열)을 밝혀 서열번호 1에 기재하였다.

또한 본 발명의 박테리오파지의 DNA 중합 효소 단백질의 DNA 서열(서열번호 2)을 다른 박테리오파지와 비교한 결과, 도 3에 기재한 바와 같이 본 발명의 박테리오파지는 다른 박테리오파지와 동일하지 않으며 차이가 있음을 알 수 있으며 가 장 가까운 엔테로파지 SSL-2009a와 DNA 서열과 92% 상동성을 가지는 것에 불과하여 신규한 것임을 알 수 있었다.

< 실시예 2>

본 발명의 박테리오파지의 대장균 또는 시겔라속 균주에 대한 특이적 사멸 효과

본 발명의 박테리오파지의 숙주에 대한 감염성을 조사하기 위하여, 대장균 및 시겔라속 균주 등를 숙주로 하고 실험을 수행하였다. 상기 균주를 TSA(tryptic soy agar, Difco) 배지에 배양하고 페이퍼 디스크(paper disc)를 가운데 놓은 후, <실시예 1-2>에서 정제된 박테리오파지 30ul를 디스트 위에 접종하였다. 상기 접종 후, 30℃에서　24시간 동안 배양한 후, 환이 생기면 본 발명의 박테리오파지의 용균(lysis) 활성이 있는 것으로 나타냈으며, 상기 결과를 하기 표 1에 기재하였다.

본 발명의 박테리오파지의 대장균 또는 시겔라속 균주에 대한 특이적 사멸 효과

번호	기탁번호	균주의 종류	사멸여부
1	KCTC2223	Escherichia coli	+
2	KCTC2293	Escherichia coli	+
3	ATCC21278	Escherichia coli	+
4	DSM4481	Escherichia blattae	-
5	DSM4560	Escherichia hermannii	-
6	DSM4564	Escherichia vulneris	-
7	DSM13698	Escherichia fergusonii	-
8	KCTC2518	Shigella sonnei	+
9	DSM5570	Shigella sonnei	+
10	DSM 14848	Salmonella choleraesuis indica	-
11	DSM 14846	Salmonella choleraesuis choleraesuis	-
12	DSM 13772	Salmonella bongori	-
13	DSM 9386	Salmonella choleraesuis arizonae	-
14	DSM 9221	Salmonella choleraesuis hountenae	-
15	DSM 9220	Salmonella choleraesuis salamae	-
16	ATCC 13311	Salmonella typhimurium	-
17	ATCC 13076	Salmonella enteritidis	-
18	DSM 14847	Salmonella choleraesuis diarizonae	-

- KCTC: the Korean Collection for Type Cultures

- DSM: the German Collection of Microorganisms and Cell Cultures

- ATCC: the American Type Culture Collection

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 박테리오파지는 대장균 또는 시겔라속 균주에 대한 특이적 사멸 효과가 우수함을 알 수 있다.

도 1은 본 발명의 박테리오파지를 투과전자현미경으로 관찰한 사진이다.

도 2는 본 발명의 박테리오파지의 생장 특성을 나타낸 one-step 생장곡선이다. (점선: 클로로포름을 처리한 경우, 실선: 클로로포름을 처리하지 않은 경우)

도 3은 본 발명의 박테리오파지의 단백질 서열 중 하나인 DNA 중합 효소 단백질의 아미노산 서열을 다른 박테리오파지와 비교하여 계통학적 위치를 나타낸 것이다.

<110> Industry Academic Cooperation Foundation of KyungHee University <120> Bacteriophage having killing activity specific to Escherichia coli or Shigella <130> DPP20094090KR <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 44077 <212> DNA <213> Bacteriophage EP23 <400> 1 aggatttagt ctttcaggtc gtcatcggtc gccgaaagcg ttatggggat ctccgatttg 60 atgactaaat tcgacgaccc atatatggcc ccggtgtgcg ggtctgtata gaaaccaatc 120 acgccgcgct cgaccatatc gtcgattgcc ttcgtcgaag tgccaccctt agcgagtccc 180 gcctggcgta caattgccga tttactgaat ccagtatggt cagggttatc tgccatcagt 240 ttttccaggg ccgcataaag cactttctct ttttcgttgc gcggaccggc ggtgttctct 300 tccttaactg cggctttgcc cgccgccttc gcctgttcta tcgcgaacgg tgccagggct 360 accggtacga ggtatagagt ctcgtcgcgc ggggtggacg caattggttt gacgtcccaa 420 ccggcaacca catcgccgaa gtctggcccg gtgctggtgg actggtgggc ttcgaacgct 480 tcggacttgc ggagatccac cttaaccttg cacttgagca ggacgaagcc gcgcggcgct 540 tgcttgatgc cgttacgtgc cttttcgtga tacaggttca attgacctgg ctggttgtcg 600 tccggttgct ccaggaagaa cgcagaatcg acagcaccat gcagcgcgcc ggacccacgg 660 ggagatctgc ggccgtttgc acctttcgcc gggtggtgga tgacgcccgc actgccgcct 720 gtattttccg caatggcctt cagcgctttg accacttcgc ccatatcgct ggcgttgttc 780 tcgtcgaacg gttttgcatc ggcggaccgc agcgcaacag tctggttgag tgagtcgaac 840 gccaccaggc caaccggctc gccgttagcg gtgcggttga tgaagctgat aacttcacgc 900 aagcctgatt tgctggtgat atcccagccg cgtgattgca ggtcaataat gtgcagcttg 960 tccaggtcgt gctcatattt gatctgcaat gcttccttac gctggttgga ggcttcgcca 1020 ccttccgcgt cgaaatagaa gcaatgagac tggacgacct tcgcaccgcc gaacggaatc 1080 cccgcggcaa ccgcgcccat ttggcccagc acgtagaacg atttaccgat gttcgactcg 1140 ccagccatgt accaggtcga tttgaagttg accaggcctt cgatgatcgg gtcgtgctta 1200 ctgaatagtg cgaccggctc gttatccaga tccgcatcgg tgcacacgcc gtattcttcg 1260 ccgtcgccaa ctgcatcaac aatatgatca tataaggatt cgacttcctc gtcgtccaga 1320 cctggcagga tggcggcgat ttgcttacgc gacatgttgt gcggctcgac gttcaggtgg 1380 tccggtatcc cgataagacg tagcgccagg tgctggtgtc tatttagctc agagcaacac 1440 tcgttgcctg tgtgcataca cttgaaacgg atctcgccat ccttgaccat gatagccgtc 1500 gacccttcgc cgctgtgcag atgttcgttc gggcatggca cttcataacc gcgaccggaa 1560 gataactcct caaatcctgc ctggaagcac cagtccagaa tcccgtccgc cactgcgtcg 1620 tcgccctggg taagctcgcg gcgtacttct tccttctcca cgccaagcgt atccgccagg 1680 cgaagcagac gacggacgcg ggcacgtttg ccgtagtggc acttaataac cgattgctgg 1740 tgcggcaggt acatcaggcg gtttgtgtct ttcgtgcaat cgtcgaagtc cacatccgac 1800 agaccaagtt gatgtaatag cgcatactgg acacggccca ggtcttcagc cgggaccggc 1860 ttatcagtga gtaccaggaa gcgagcgcaa cgcgtgccgc ctttaagcgg gtggcggtcg 1920 ccggtggttg tgtggaatac gtgttccaga cccgcgtcaa tgaacgcctt acggcagcgg 1980 cgtaaggtgc gagtgtcggt gcggtcaata tcaaagaaca ggatcgagcg gtccaccgcg 2040 ctggtcttgc ggcgtaagcc gtcactggta tacgctacga tgccatcggc cttacgcttg 2100 cggcgcgcat actccgcttt atcctcggtc ttgttgatat gcaccgatga tatttctttc 2160 gcgtcattga taaattcgaa aaattcatcg gtggtcatct ggaagttttc cgccctggct 2220 ttttcgcctt ttttagcggg tcgtgttaca gcgaatttaa ttaagctcat tgccgttgcc 2280 ttacttcgaa gttttgttat tgcgtaccca ggagcgcacg gtgctctgat taattcctgt 2340 caactcagcg atcatcgccc aggattttcc ctcggcgcgc aaacggataa cctgtttttt 2400 gtattcttcc atttcttcat tgtgcttttg cagcttgctg gctgccgtac cgttgagtaa 2460 ttccagcttc gcgcgcaatt ctttttcggt aagtcgcaga cgttcgattt caaatagcac 2520 cgcccccacg gcatcggtat acgcccagga ccggctagtc tcactgcaga cagtcttcgt 2580 tagcatttcg attgcgtcgt tgatattcat tattctgtct ccggttggtt aatgaccaat 2640 gaaactacac ctaaaaccgc agggtgtcaa ctcctttggg atattgaaac gggcgcgcac 2700 gcgtgtaata atactcccgt ctcattgtct cttattggtt agcgccgtcg cattttgctt 2760 cggcgctttt tttttttaaa ttagttgttg actcccttct gcaaccaatc taatattcac 2820 ctcgtcgaca ggatgcagga cgcaaactgg agaggggcaa cgcaggggcc ggatcgaagt 2880 gtcaggattc ccaaccgtga ttatataacc aggtccacta cccgaacggg agaacgcgta 2940 acctggcact atgttaaggc caccgacgaa gttaatggtc gacacctaaa cttaaccaat 3000 cggagatata ccatgtttga gcaaatcgta aacctgatca ctcgcggcgt agtagcactg 3060 gaaatcatcg ctaagcatta tgaaaccgtt ggcgctgccg ttggtaaaca ggaagacaag 3120 aagccgtcta aggccaaaaa agaagtcgta gaagatgacg 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atttctcttt tcttgttgtt 4020 aacaaggacg cctcgatgtg ctggaccgat gcgcagcatg aagtgcgcag ccgtgtcgaa 4080 aaagcgggct tggcgaatgt gaaatatgta attgtccagt ttacacgggt ggaataatgg 4140 cgattaaacc aaaacgtaaa acgcaatccg gtagtaatac ggaacactca ttacttggcc 4200 catccggtgc taaaaaatgg atggggtgtc ccgccgccct ggtggtggaa aaagatatcc 4260 cgaacgaatc cgggcaagcg gcgattaacg gtacgagtat gcacaccgta tctgaagtgg 4320 tgctaaaccg catcattgcc ggggagaagc tgataaccgc taagacgtac aaagggtgct 4380 acgtagagaa cgaaggtaag gggccggtaa aggcccaccc gaaagcaccg aaaggcggcg 4440 tactggtcaa cgacgacatg gtgaaacagt gcgacgcgta catcgaccac tggcgaccgc 4500 tcctcgaagt ggcggagttt gttcagcttg agatgcgcgc cgatctgacc cgcgtccttc 4560 actcaggctt cgagatcgac ggcaaccggg ttaagacgtt cggtactgcc gatatggtca 4620 tggtcatgaa gaagaccgac ggcacgtaca tgctgattgt tggcgacctg aagacggggc 4680 ggcataaggt cgaggcgaaa gaaaacaaac agcttatgtt gtatgcgctg ggcttgctgc 4740 gcaagctgaa aactatgtac gacattacaa ccgtgcgcct tgttatcttc cagccgtatt 4800 gcggcggggc gtcggagtgg gatatttcgg tagaagccct ggagatattc gctaagtttg 4860 cgtccaagcg tgctatcgcc gccctggaag cgtactcccg cggaaaaaag ggactcaccc 4920 gcgccgactt ccgaccgagc gttgatgcgt gtcagtggtg cagatttgcg gatcagtgta 4980 gcgcccgcgc taaggctgca atcggcacga tgaccccacc aacggcaaca gacgaagacc 5040 tgggcgacga cgtgagtatt gcgacagagg aagaatgcgc caatcacgac cgcaatatgg 5100 cccgcgaagc ccgcaaagcg gcacgacgtg cgaagcgtgg caagaaagaa gcggcccccg 5160 gcgctatgac cgccgcggaa ctgcgcaagg cttatgaagg cctggacgca atgcgccagc 5220 acatcaaggc tatcgagtcc gcggtattca aggctgtgat ggcgggcgac ggcgaatcgc 5280 tgggcctcaa gatggttgca ggtaaggaag ggattcgcaa gtgggcggac gaaagcgaag 5340 tgattgaaat cttcacgaag gcccggatca agcgcgatgt gatgtacaaa gaaacattac 5400 tcagccctac tgatgccgag aaggtattga aggacgagaa gccgaaagta tgggcgaagc 5460 tgtgtgataa aatcacgcgc gcaccagcta aaccggtatt agcacccatc gacgacccgc 5520 gccctgcgtg gtctgtagct actgacgagg acttaagcaa tgaataaagt attcgcaatc 5580 ttattgatgt ttgttatcgg cgcgctgggc tttatcctgc attgtgtgca aggcgtgtta 5640 atggtggcat ggatgattag acatccgacc cgctggctgg atgacggcta tagcgaagct 5700 gccgtcgatt gggtggagaa gaacatcaac cgcccgccgt taagctggat cgagaacgcg 5760 accaactacg ttacccgaaa tctttttaat gaaaatgctt gaccgctcag gcgcaaccaa 5820 gtaaattagc aaccaagccg aacggggtgg cttccaataa ccccgataca tgtgaaaatg 5880 aggaattgga aaatggctaa agtcaacctg aaaaatgtgc gcgtatgttt ccttaaaatt 5940 tgggaacgtg atacccctaa acaggatgga caaaaaccgg cataccgtgc agtgattctt 6000 cttgataaag aagatccgca ggtggacaaa gtggaagcgg cagcgcgcgc agtgctaacc 6060 gacaagctga aatccgagaa gaatgctgat aagtggatgg accgccacta cgcccaggat 6120 tctaaggaat gcgcagttcg cgacggtgac gagcgcgacg aagtaaccga agaattcgaa 6180 ggcatgttgt acatcaacgc caaatcgttc aaacagccga tcatccagac ttccgaaggc 6240 gagaagcaga cggagcaggg tctgaccatc gacggcgacg aaatcgaagg gaaggaaatc 6300 tattccggtt gctattgcaa cgtttcctta gatatttggg cctggaacaa taccaacggc 6360 aaaggcttag gctgtggtct gctgggtatg cgcttccgtg atgacggcga agccttcggc 6420 ggtggcgggt cttcatgttc cgacgaagac ctgggcgacg atgacgaaga tgaaagcccg 6480 cgtaagtcca aaaagtcaaa acgtcgtgat gacgatgacg aagacgacga cgaagacgaa 6540 gcgccacgta aacgtcgccg ccgttaaggg caaagcccac tattcaagcc cgcttaatgc 6600 gggcttttta acaggacaat gaaaaatgcg tattaaagcc agcgaagtaa aagtcggaat 6660 gcaagtatgg tccaagctac tgggggaata tttcacagtt gccgagattc gcaacaacgg 6720 cgaagagatc gccctgtccg acggcatctt ctccatgatc ggcagcgctg acgccgtagt 6780 gaggataaag caatgaaaga cttcgaacgc ctgtttctcg acaccgagac atttagcggg 6840 gtggacctga agaaagttgg ggcgtacgcc tacgcggagc acccaaccac agagattatg 6900 atttgcacct acgccataga cgagggccgc gtgcagacat gggatgccac tgaatccccc 6960 acaatgccgc gtgaactgcg caaggcgctc cgccgggtat cccgcaagaa ggctaaaata 7020 gtgatggcta acggcctcct gtttgaccgc ctggttatcc gcgagaagtg gggtattgac 7080 ctgccggtaa gccagatcga agacactatg attatggcct ttcgccacgc gctgcccggt 7140 agcctcgata tgcagtgcca ggttctgggc gttgacgcag agcacgcgaa ggataaggca 7200 ggcaaggcgc tgattaaccg attctgtaag cctaccccta agacctacaa aatccgccgc 7260 tacactcgcg agactcaccc ggaagaatgg gccaaatttc tgcgctatgc cgcgctggat 7320 attatcgcaa tgcgtgaagt ctactggcgc ataccggact ggggaaactc gcctaaggaa 7380 gatgaaatcc tgctcatcga ccagttgatt aacgaccgcg gcttctacgt cgacgttgac 7440 ctggcgaacg ccgcgatcaa agcggtgcag gcgcataagg aagaattgaa ggaagaagcc 7500 tgggagcgat ttggcggtaa gctgacaggc aatgacttcc tgccaatcct gcgtgatatc 7560 gccccggcgt tcacgatcca caacgcgcag aaatccacgc ttaacgacct gcttgaagac 7620 ccggacttcc ccgacgaagg caaagcgctt atcgaaatgc gcctcggggc gtcatcaacg 7680 gcatcgacta agtacaatcc gctagttaac ggcttatccg cagatggtcg ccgccgtggg 7740 tgtcttcagt atggcggcgc aaagcgcacg ctgcgctggg cgggcaaagg cttccagcct 7800 caaaacctgg cgcgtggcga gtacagcgac gaccacgaag ggaagattaa acgccgcgag 7860 ggtgaaagcg acgtctcgtt ttgggtccgg tcgcacatgc tcaccaacgg catcaactcc 7920 ctgttacgcg ggaccgcaca ctgggcgtat gacatatcga agctaacggc ctcgaccgtt 7980 cgcgggtgca ttattccggc gaagggcaag aagtttgtcg tagcggacta ctccaatgtg 8040 gaagggcgtg gacttgcctg gatcgctggc gagaaaacag cgttaatggt ctttaaggcc 8100 ggtcgcgata tctattgcga gactgccggt aagatgttcg gccttgaccc ggattacatt 8160 aaagccaacc gcaaggactt acgccagatc ggtaaggctt gcttgcaccg ccatacccaa 8220 gtattgacca atggcgggtt caaggatatt atggccgtaa catcaacgga taaagtatgg 8280 aacggcgaaa aatgggtgag tacaaaaggc gcgcacctta tggggtggaa accagtgata 8340 gacgtggacg gggtcttgat gacagaagac cacaaaatct tgacgcattc atggaaggag 8400 gcaaggcaac tcgtttcaga caggtgcacg atggtccgcg ccctggcgag aggtatggac 8460 gcctggttat cctgcgcgaa ttaccaaaac gacagggtca cagacaactg ctggcccaat 8520 gtgattgcgg agcgatgcca ggacgcgtcg ggtatgacaa cgtccgaagg ggtaaaacat 8580 cccaatgcaa cctctgcgca attgaagcga caaagcggta tcgtaaacag tatttttgct 8640 acgatgacgc aatgccagac gatgcgcaca gaacgcggct actcaaccgg ctgtcagcgg 8700 caatatcacg aacgacaaac ccccgcgcca aagggtataa aaactacggc ggtcgtggga 8760 ttgccgtatg tgacgaatgg aagagagata aaaggtcgtt tcttctctac gttcaaacgc 8820 tggacggctg ggataagcca gacttcgaaa tggacaggat cgatacagac ggcgactatg 8880 agcctggaaa ccttcggttt gtcagccgtt cggaaaactg ccgtaaccgg cgcagcgtgc 8940 ccgagcttca gagaaagtac gatgaagccc ttacccgcat tgctgaactg gaacgggaag 9000 ttaacctatt gcgagccggt ttacgacctg attgatgtgg aagacggaaa ccggttcctt 9060 attgcgtcta agtctggttt tctggtggcg cataactgcg agcttggcct gggctatggt 9120 ggcggcgtcg cggcgttctt gcagttcgct aaaaacctgg gcctcgacct ttacactatg 9180 gctgacgtca tgaagggcac attcccggat cacatttggg cggcggcgaa gcggggttat 9240 gagtacgctc gcattaacga ggagaagcgc ccgccgaagc ctggcaagaa agacgagcgc 9300 ccaacttaca tactgccgaa aaacgtgtgg ctgacgtgtg acgcgatcaa acgtatgtgg 9360 cgtgagtctc acccgatgac ggtagccttt tgggccgaac tggaggacgc ggtgctctgc 9420 gcgatccgca atccgggcaa agcgtactgg gctggcgcga acgttcgccc ggatggcagg 9480 aaagcgctca aaattgttcg aacgaaggcg aagcatgacc cgaccttcga cgaggagcgc 9540 gacgacccga acgcggcggg gtggtggctt aaaattgagt tgccgtcagg gcgcatcatg 9600 agctaccctg gcatcgcgct gtctgtcacg accgagatcg acgaagacac cggcaagaag 9660 cgcaccagca cacgcattaa atatcagggc gagaatcaga cgacgcgcca gtggggattc 9720 cagtatacct acggcggcaa actgacggaa aacatcgtac aggcgttgtg ccgcgatatt 9780 ctcgcatggt ccatgcctgg cgttgaagct gcggggtatg agatcgtact ttccgtacac 9840 gatgagctga taaccgaagt gccggatacc gacgactaca caaccgagga gttgtgcgcg 9900 ctgatgtgcg acctgccggt ttgggcgaaa ggcttcccac ttgccgcaga gggcgattgc 9960 atgtatcgct accgcaagta atgacaccag aaggcaagat tcaaagccac ctgatgagac 10020 gggtgaaaga tgttggcgga ttctgccgaa aactggcatg ggaggggcgc gcaggtgcgc 10080 ccgacctgat tattatcatc aacggcaaaa tagtgttcgt cgaagtgaag cgccccggag 10140 gaaaaccgaa gccgcaccag gtacgtgaac atgagcgaat ggcccgccgc ggtgctgacg 10200 ttcgcgttat cgacaacata tccgactgcg atttattggt tgctgaattg gtcgcatagc 10260 ggtatagtgt gccggttagc catatcgagg attttagaga tgattgaaga aaaacgttgt 10320 agtaattgcg gctgtgtaaa gccgctatcc cagttccaca aatacaccgg taagactgcg 10380 cgcagtccag acgggtatcg ggcagagtgc aaatcgtgcc gcaataagaa agagcgcgaa 10440 cggcagcgcc gctaccgtgc agaacaaaaa taattaatac ggcgggcttg tcccgccatt 10500 tttgggagac atgacgatga aagaacatta ccgactcacc aagctgggcg aatgtaaacc 10560 aggcgatcgc gtgtggttta tcgcgggcct aaattaccca ctgccgttga cggtgtgctg 10620 gcaaaaattt aagagcttcc gggctaccgg tgtccacgtc ggacacgcca ccaactacga 10680 cgccacaaag aggaactggg atagtgaaac tgaagtctgg aaaaaggcgg aataaagaaa 10740 tggcacgttt ccgacgtcgc gaatatcaga agttgataac cgcgttcatc ctcaagcata 10800 agcgatgcaa tatatgggcg acaatggggt cgggtaaaac cggcgcgacc atgtgggcgc 10860 tgaataaaat gttccagact ggcatcctgt ccaaccagga tgaccgcgta ctggtgctgg 10920 ccccgctgcg cgttgcgtcc ggtacatggc ccccggaaca ggagaaatgg cgcttcccag 10980 ccttgctggt agtagacggc actgggccag agaaggaccg catcgctgcg cttgagagcg 11040 acgctaacgt ggtttgtatt aactatgatg tagttgagtg gcttgttgag tattgcggcg 11100 acgagtggcc ctttacggtc gtggttgccg atgaatccac taagctgaaa ggctatagaa 11160 gcaagcaggg aagtaagcgc gcccgtgcgc tggcagcgat cgcacataag cacgtcaagc 11220 gctggattaa cctgactggc acacccgcac cgaacgggct gaaagaccta tggggtcaga 11280 cgtggtttgt cgacggcggc gaacgtctcg gcagtagcta taaggcgttc acggaccgct 11340 ggtttattag caagcctgtt aagcctggca gcttcacgat gcagcacgcc ccgcttaaga 11400 actccgagaa agaaatacaa caacgactgt ccgacgtgtc gctaaccgtt gatgcggctg 11460 aatacttcgg gtgtgacaag ccaatctata cgccggttgt tgtggacctg ccgaagaaag 11520 cccgcaagat ttatgaccag 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Claims (11)

1. 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지 (기탁번호 KCTC 11428BP).
2. 제1항에 있어서, 상기 박테리오파지는 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 유전체를 갖는 박테리오 파지.
3. 제1항에 있어서, 상기 시겔라속 균은 시겔라소네이(Shigella sonnei ) 균인 박테리오 파지.
4. 제1항의 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 항균제.
5. 제4항에 있어서, 상기 항균제는 대장균 또는 시겔라속(Shigella) 균을 사멸시키는 것인 항균제.
6. 제5항에 있어서, 상기 시겔라속 균은 시겔라소네이(Shigella sonnei ) 균인 항균제.
7. 제1항의 박테리오파지 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 대장균 또 는 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
8. 제7항에 있어서, 상기 대장균에 의해 유발되는 질환은 대장균 감염증인 약학적 조성물.
9. 제7항에 있어서, 상기 시겔라속 균에 의해 유발되는 질환은 세균성 이질인 약학적 조성물.
10. 제1항의 박테리오파지 또는 이의 배양물을 포함하는 사료첨가제.
11. 제1항의 박테리오파지 또는 이의 배양물을 포함하는 식품첨가제.

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