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CN106461661A - 用于诊断和治疗脑膜炎的方法及组合物 - Google Patents

用于诊断和治疗脑膜炎的方法及组合物 Download PDF

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CN106461661A
CN106461661A CN201580035273.2A CN201580035273A CN106461661A CN 106461661 A CN106461661 A CN 106461661A CN 201580035273 A CN201580035273 A CN 201580035273A CN 106461661 A CN106461661 A CN 106461661A
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CN
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CN201580035273.2A
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S.R.巴努姆
T.N.拉莫斯
J.M.约翰斯顿
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UAB Research Foundation
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Abstract

本发明提供了在个体中鉴别脑膜炎是细菌性脑膜炎还是无菌性脑膜炎的方法，包括：a)在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体膜攻击复合物(MAC)蛋白、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且b)将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC蛋白、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC蛋白、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC蛋白、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC蛋白、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体中的脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎。

Description

用于诊断和治疗脑膜炎的方法及组合物
优先权声明
本申请要求根据35 U.S.C. § 119(e)享有于2014年5月2日提交的美国临时专利申请序列号61/988,025和于2015年2月13日提交的美国临时专利申请序列号62/116,213的权益，上述各文件的全部内容通过引用并入本文。
政府资助声明
本发明是在国家卫生研究院资助的经费编号NS29719下由政府支持完成的。美国政府享有本发明的某些权利。
发明领域
本发明涉及用于通过检测个体的脑脊液（CSF）中特定补体蛋白的水平变化而在该个体中区分细菌性脑膜炎与无菌性脑膜炎的方法和组合物。
发明背景
细菌性脑膜炎一直是发病和死亡的主要原因，其具有高发生率的残余神经损伤。早期诊断并立即开始适当的抗菌剂治疗对于细菌性脑膜炎患者的存活至关重要。然而，确立对细菌性脑膜炎的诊断在大多数情况下是一项困难的工作，因为急性脑膜炎的临床征象是非特异性的，并且对脑脊液（CSF）的实验室检查往往不能准确区分细菌性和无菌性脑膜炎。准确区分细菌性和无菌性（例如，病毒性）脑膜炎是困难的，因为两者均是炎症性疾病，其引发相似的宿主防御反应和临床症状。可以基于受影响个体的脑脊液中细菌识别呈阳性而做出鉴别诊断。遗憾的是，生长并识别细菌可能需要若干天，并且即使患者患有细菌性脑膜炎，有25%的时间培养结果依然呈阴性或模棱两可。类似的或更大的误差率几乎影响着每项用于诊断目的的实验室参数。
由于早期治疗对细菌性脑膜炎的有益效果，所以往往在病因诊断确立之前即开始使用抗生素。因此，大量无菌性脑膜炎患者接受了不必要的抗生素治疗，导致不必要的和/或延长的住院、加重了健保系统的财政负担并使患者暴露于医院获得性感染和疾病以及其它与住院相关的危险。
少数脑脊液实验室参数可以绝对确定性来确定细菌性脑膜炎，如呈阳性的脑脊液培养和革兰氏染色。尽管高度特异，但这些参数表现出极低的敏感性因而不可用于排除细菌感染。除了微生物分析以外，非特异性的脑脊液参数也常用于细菌性和无菌性脑膜炎的鉴别诊断，如脑脊液白细胞的总体和分类计数、脑脊液蛋白质和葡萄糖浓度、CSF/血清葡萄糖比率、脑脊液乳酸和C-反应性蛋白水平。然而，这些参数的诊断值仍然存在争议，因为其分布范围在无菌性和细菌性脑脊液中广泛重叠。现有的用于诊断细菌性脑膜炎的测试需要数小时至数天来完成并且具有显著的假阳性率。可以采用聚合酶链式反应（PCR），但只有当拥有专用设备和受过训练的人员时才可进行，并且脊髓液中应存在大量的病原体。无菌性脑膜炎患者的住院治疗是不必要的，其会给健保系统增加显著的财政负担（估计在$1-2B/年）并且增加危险的医院获得性感染的风险。迫切需要可以区分细菌性脑膜炎和无菌性脑膜炎的廉价的快速测定法。
本发明通过提供用于通过检测个体的CSF中补体蛋白水平的变化而在该个体中区分细菌性脑膜炎与无菌性脑膜炎的方法和组合物，克服了本领域的前述缺点。
发明概述
在一个方面，本发明提供了在有需要的个体中鉴别脑膜炎是细菌性脑膜炎还是无菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC(包含补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和补体C9的复合物、主要由其组成或由其组成)、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且 b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体中的脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎。
在另一方面，本发明提供了在有需要的个体中诊断细菌性脑膜炎的方法，包括：a)在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且 b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为患有细菌性脑膜炎。
本发明的另外的方面是为患有脑膜炎或疑似患有脑膜炎的个体实施治疗方案的方法，包括：在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎，指示住院和抗生素疗法的治疗方案，而其中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量小于或等于所述对照样品中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将鉴别为无菌性脑膜炎，指示不住院和无抗生素疗法的治疗方案；并且c) 实施所指示的治疗方案。
在额外的方面，本发明提供了干试纸条，其能够通过试纸条内的毛细作用芯吸施加其上的液体，所述试纸条以上游（于第一端）至下游（于第二端）方向并且依以下次序包括：1) 样品施加区，2) 反应区，和 3) 检测区，其中所述反应区包含非固定的经标记的第一抗体，其特异于
补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的表位，有效地与之形成可移动的补体MAC（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）蛋白/抗体复合物，并且所述检测区包含固定的第二抗体，其特异于所述复合物中的补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9蛋白）的表位，其中所述第一和第二抗体特异于同一补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9蛋白）上的不同表位，并且其中，在将体液样品施加到位于所述第一端的所述样品施加区之后：(i) 样品在所述试纸条上向着所述反应区朝下游方向迁移，(ii) 所述样品中的补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9蛋白）与此前存在于所述反应区中的所述第一抗体反应以形成可移动的经标记的补体MAC（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）蛋白/抗体复合物，(iii) 所述可移动的经标记的补体MAC（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）蛋白/抗体复合物朝位于所述第二端的所述检测区迁移，(iv) 所述可移动的经标记的补体MAC（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）蛋白/抗体复合物结合此前存在于所述检测区中的所述固定的第二抗体，从而将所述复合物固定在所述检测区中。
本文还提供了用于检测标志物的侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；检测抗体，其结合所述标志物的第一表位；测试线，其包含捕获抗体，所述捕获抗体结合所述标志物的第二表位；和对照线，其包含结合对照被分析物的抗体，其中所述标志物选自：补体蛋白C3、补体蛋白因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和补体蛋白C9以及其任意组合。
另外，本发明提供了侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的第二表位；第二检测抗体，其结合补体C3的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合补体C3的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
本文还提供了侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的第二表位；第二检测抗体，其结合补体因子B的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合补体因子B的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
本发明还提供了侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的第二表位；第二检测抗体，其结合补体C3的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合补体C3的第二表位；第三检测抗体，其结合补体因子B的第一表位；第三测试线，其包含第三捕获抗体，所述第三捕获抗体结合补体因子B的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
此外，本发明提供了监测个体的方法，所述个体正在接受针对细菌性脑膜炎的治疗，所述方法包括：(a) 从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；(b) 测定所述样品的每一者中补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9；补体C3和/或补体因子FB）的水平；(c) 比较所述系列样品中补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9；补体C3和/或补体因子FB）的所述水平以检测补体MAC（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9; 补体C3和/或补体因子FB）水平随时间的变化；并且 (d) 根据所述比较步骤(c)的结果，调整对所述个体的治疗。
附图简述
图1.比较了细菌性脑膜炎的标准诊断检查与本发明的示例性实施方案（其为侧流测定法，以盒构造显示）的成本和时间表。
图2.感染性脑膜炎患者或对照的CSF中补体C3和B因子(FB)的浓度。通过ELISA测量了20名经确认的细菌性脑膜炎患者、21名无菌性脑膜炎患者和63名对照患者中的C3(图板A)和FB(图板B) CSF水平。相比无菌性脑膜炎患者或对照，细菌性脑膜炎患者的C3和FBCSF水平显著升高(p<0.001, 针对所有比较的Wilcoxon秩和检验)。水平实线表明各组的平均补体蛋白水平。虚线是无菌性脑膜炎组的平均值± 2 SD，并被用于区分细菌性与无菌性脑膜炎。
图3.有和没有感染的分流器/EVD患者的CSF中的C5b-9(MAC)浓度。通过ELISA测量了3名具有经确认的细菌感染的患者和24名没有感染的患者中的MAC CSF水平。相比没有感染的患者，具有细菌感染的患者的MAC CSF水平显著升高(p<0.0002, 非配对t-检验)。线是感染组的平均值± 2 SD，并被用于区分感染与未感染组。
图4.具有分流器感染的患者中CSF MAC水平的变化，以时间函数的形式。使用特异于可溶性MAC的ELISA(Quidel Corp., San Diego, CA)对CSF MAC水平进行定量。根据需要稀释样品以获得可定量的数据，并按照制造商说明测定重复样品。
图5.具有经确认的细菌感染、无细菌感染或具有隐球菌感染的患者中可溶性CSFMAC水平的变化。通过ELISA测量了2名经确认的细菌性脑膜炎患者(如通过细菌培养所测定)、73名无菌性患者(细菌培养呈阴性) 和1名具有经确认的隐球菌感染的患者中的MACCSF水平。相比具有可检测的MAC水平的无菌性患者，具有细菌感染的患者的MAC CSF水平显著升高(p<0.0001, 非配对t-检验)。虚线表示无菌性患者中可检测的MAC CSF水平的平均值± 2SD，并被用于区分细菌性与无菌性脑膜炎。根据需要稀释样品以获得可定量的数据，并按照制造商说明测定重复样品。
图6.具有分流器感染、无症状脑室扩大(VE)、症状性脑室扩大(SVE，“分流器失效”)和正常的患者中CSF MAC水平的变化。通过ELISA无法在3名正常患者中检测到CSF MAC水平。类似地，在无症状VE患者中基本上无法检测到CSF MAC水平(8名患者中仅1名具有可检测的MAC水平)。相比之下，SVE患者具有升高的CSF MAC水平，其中35名患者中的22名具有可检测的MAC，而相比SVE患者，在6名具有经确认的细菌感染的患者中的CSF MAC水平显著升高(p<0.0001, 非配对t-检验)。根据需要稀释样品以获得可定量的数据，并按照制造商说明测定重复样品。
图7.具有分流器感染、无症状脑室扩大(VE)、症状性脑室扩大(SVE，“分流器失效”)和正常的患者中CSF C3水平的变化。如通过ELISA所测定，正常和无症状VE患者中的CSF C3水平较低。相比之下，SVE患者具有升高的CSF C3水平，其中所有患者均具有可检测的C3，而相比SVE患者，在3名具有经确认的细菌感染的患者中的CSF C3水平显著升高(p<0.017, 非配对t-检验)。根据需要稀释样品以获得可定量的数据，并按照制造商说明测定重复样品。
发明详述
本发明更详细地描述于下。本说明书并非意图作为详细的目录而囊括可能实现本发明的所有不同方式或可能添加到本发明中的所有特征。例如，针对一个实施方案说明的特征可能被结合到其它实施方案中，而针对具体实施方案说明的特征可能从该实施方案中被删除。另外，按照本公开，本文建议的针对各种实施方案的大量变型和添加对于本领域技术人员将是显而易见的，其并不脱离本发明。因此，以下说明书旨在说明本发明的一些具体实施方案，而并非意图详尽地规定所有排列、组合及其变型形式。
除非上下文另外指明，否则特别设想了本文所述的本发明的各种特征可以任意组合使用。此外，本发明还设想了在本发明的一些实施方案中，可以排除或省略本文所示的任何特征或特征组合。
本发明是基于这样的意外发现：可以通过检测个体的脑脊液（CSF）中特定补体蛋白的水平变化而在该个体中区分细菌性脑膜炎与无菌性脑膜炎。在具体的实施方案中，本发明提供了基于细菌性而非病毒性诱导特定补体蛋白的床边侧流测定法（LFA）。本发明的LFA对于使用补体生物标志物诊断细菌性脑膜炎显示出高特异性和灵敏度。本发明的LFA提供了优于当前使用的常规实验室方法的显著优点，如：1) 易用性，允许基本上所有医疗人员实施此测定法；2) 迅速，在急诊室(ER)或乡村/偏远诊所或护理机构中于数分钟内得到现场（床边）结果；3) 大幅降低临床实验室成本；以及 4) 无需专用设备、试剂或保存。本发明的诊断测试允许医生启动适当的治疗方案，例如，通过最小化或防止不必要的医学治疗和住院而导致健保成本大幅节省（参见，例如，图1）。
虽然补体反应是对抗疾病的重要防御系统，但是若干特征使得难以准确测量补体蛋白，尤其是在临床相关时期。已知技术需要至少约一个小时，并且通常两个小时或更久以测定补体蛋白水平。在此期间，患者状况可能发生显著恶化，其没有明显体现直到已经发生显著的或甚至不可逆的损害。另外，已知通过处理及可以显著影响测定结果的其它实验条件可容易地活化补体蛋白。时间推移也是自发补体活化（即使没有处理）的显著因素。
本发明提供了解决这些此前原因不明的问题的技术。例如，在一些实施方案中，本发明提供了这样的方法，其相关步骤均在限制时间内进行。根据本发明，此类方法提供的优点包括：最小化自发补体活化，以及作为另外一种选择或除此之外，在相比标准方法大幅缩短的时间（从个体样品采集开始测量）内提供临床相关数据。在一些实施方案中，本发明的测定法在小于以下时间（从个体样品采集开始测量）内完成：约120分钟或更短、75分钟或更短、60分钟或更短、约50分钟或更短、约40分钟或更短、约30分钟或更短、约20分钟或更短、约10分钟或更短、或约5分钟或更短或约3分钟或更短。目前尚无可用的此类测试、测定法或方案，其将允许快速的周转时间因而将有关诊断、治疗和/或进一步测试的信息实时告知医生。因此，本发明提供了这样的方法，其极大改善了用于鉴别和/或诊断本发明的个体的现有方案以及护理和治疗此类个体的现有标准。
补体非常挑剔并且可以因为标准分析程序（处理、保存以及在分析中暴露于接触C3的外来物质）而被活化。补体在伤处非常有效地裂解入侵微生物并启动伤口愈合反应。这种有效性是部分由于C3被外来物质（如细菌细胞壁成分）活化的能力。虽然此特性可用于引导针对新外来病原体的免疫应答，但这一相同特性对实验和诊断研究造成了艰巨的挑战。样品处理中所用的材料（如塑料）、操纵样品本身以及不合适的保存条件也可以触发补体活化。实施给定测定法所需的加工和处理步骤越多，则由于测定法本身造成的补体活化，可以预期越多的假阳性结果。此类假阳性结果使传统测试复杂化并且使得现有测试方法不适合用于近乎实时地指导患者护理。
补体系统包含超过40种血清和细胞蛋白质，并且在固有免疫和适应性免疫中起重要作用。存在四种主要的补体活化途径。经典途径主要通过免疫复合物（具体地讲，结合至抗原的IgG/IgM抗体）活化。其它活化因子包括脂多糖、髓磷脂、聚阴离子化合物、C反应蛋白（CRP）以及微生物DNA和RNA。凝集素途径通过具有游离甘露糖基团的多糖以及真菌和细菌中常见的其它糖类而活化。旁路途径由通过“外来”物质（其经常包括微生物细胞壁成分）直接活化C3而介导。全部三种主要的补体活化途径均在中心蛋白质补体成分3（C3）上殊途同归。C3是炎症的中心介质并且由大多数引起炎症的因素所活化。经典途径通常由免疫复合物触发，所述免疫复合物是抗原与抗体结合的复合物，通常属于IgM或IgG的同种型。免疫复合物继而结合至补体成分C1，其由C1q、C1r和C1s构成。C1q与抗体-抗原复合物的结合触发C1r和C1s的活化。随后，活化的C1s裂解成分C4以产生C4a和C4b。C4b能够共价附接至细胞表面，但仅有约百分之五这样做。剩下的95%与水反应以形成可溶的、活化的C4b。然后，补体成分2（在其被C1s活化成C2a和C2b后）可以与C4b结合。C4b与C2a结合形成C4bC2a，即经典途径(CP)C3转化酶。
CP C3转化酶裂解C3以形成C3a和C3b。类似于活化的C4b，C3b可以共价结合至细胞表面或与H2O反应并保持在溶液中。活化的C3b具有多种功能。就其本身，其可以充当调理素以使得所修饰的细胞或颗粒更容易被吞噬细胞消化。另外，C3b可以与C4bC2a(CP C3转化酶)结合以形成C5转化酶。这种被称为C4bC2aC3b的复合物被命名为CP C5转化酶。作为另外一种选择，C3b可以形成被称为旁路途径(AP)C3转化酶的另一种C3转化酶的核心。
旁路途径（AP）是另一种可以活化C3的机制。其通常由靶标（如微生物表面和各种复合多糖及其它物质）活化。此旁路途径还可以通过C3中的硫酯键被水分子裂解形成C3(H2O)而自发地启动。C3(H2O)结合B因子，这允许D因子将B因子裂解成Ba和Bb。Bb保持与C3(H2O)结合以形成C3(H2O)Bb复合物，其充当C3转化酶并裂解C3，得到C3a和C3b。
经由此过程或经由经典或凝集素途径形成的C3b结合至靶标（例如，在细胞表面上）并与B因子形成复合物，其随后被D因子裂解并形成Bb，得到被称为旁路途径(AP) C3转化酶的C3bBb。另一个C3b分子与AP C3转化酶的结合产生C3bBbC3b，即AP C5转化酶。
凝集素补体途径通过甘露糖结合凝集素(MBL)和MBL相关的丝氨酸蛋白酶(MASP)与糖类的结合而启动。MBL1基因(在人类中被称为LMAN1)编码定位在内质网和高尔基复合体之间的中间区域的1型膜整合蛋白。MBL2基因编码存在于血清中的可溶性甘露糖结合蛋白。在人类凝集素途径中，MASP1和MASP2涉及C4和C2的蛋白水解，得到C3转化酶，其导致产生如上所述CP的C5转化酶。
经由这三种途径中的任一种生成的C5传化酶裂解C5以产生C5a和C5b。然后，C5b结合至C6、C7和C8，这催化C9的聚合以形成C5b-9膜攻击复合物(MAC)。装配中的MAC将其自身插入到靶细胞膜中，形成由C9分子的环划定的孔。MAC的形成引起入侵微生物细胞裂解，在宿主细胞上形成MAC也可以但不一定引起裂解。细胞膜上亚溶破量的MAC可以各种方式影响细胞功能。小型的裂解产物C3a、C4a和C5a是过敏毒素，并且在急性炎症反应中介导多种反应。C3a和C5a还是强力的趋化因子，其将免疫系统细胞（如中性粒细胞和巨噬细胞）吸引到危机区域中。
外部蛋白酶途径是新近表征的补体活化途径，其通过一种或多种活化的凝结酶（包括凝血酶、纤溶酶和活化因子IX、X和XII）的酶促作用直接活化C3和C5。在不存在通过所述其它三种补体途径活化而形成的规范的C3和C5转化酶的情况下，通过此途径活化C3和C5生成有活性的C3a、C3b、C5a和C5b。
补体成分C3可用作这样的一般警报生物标志物：身体正对某种形式的生理危机（如损伤、感染或其它疾病过程）作出反应。类似地，补体成分C9，由于其联同MAC复合物中的补体蛋白C5b-C9以裂解可能引起细菌性脑膜炎的易感细菌菌株的能力，而是脑脊液中独特的生物标志物。补体介导的（C9）裂解导致细菌细胞壁和细胞内组分的释放，其直接活化固有的免疫炎症机制，所述机制促进了脑膜炎的严重程度。已经将补体与多种疾病相关联，包括狼疮、关节炎、颅内出血、糖尿病、多发性硬化症、心脏病以及老年性黄斑变性。在多种情况下，疾病的严重程度与补体活化水平相关。在一些情况下，补体可以在疾病病理学中起作用。在这些情况下，身体不能成功控制炎症成因，其从局部损伤部位扩散为全身性炎症。补体活化可以直接损坏组织或间接地，通过过度活化细胞并募集免疫细胞继而引起组织破坏。过度活化的实例包括：过敏性休克、多器官功能衰竭（MOF）、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）和全身炎症反应综合征（SIRS）。
本发明的测定法和方法提供了优于此前本领域已知的补体测定法和方法的若干优点。例如，本发明的测定法和方法适于床边（POC）使用，在数分钟而非数小时内得到结果。迅速返回结果允许临床医生采取近乎实时的行动以指导患者护理。本发明的测定法和方法易于使用并且不需要有可用的实验室或熟练的实验室技术员。另外，本发明的测定法和方法需要更少的处理步骤，并因而最小化由于处理和加工造成的补体活化（其导致假阳性测试结果）。
因此，在一个方面，本发明提供了在个体（例如，有需要的个体）中鉴别脑膜炎是细菌性脑膜炎还是无菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体中的脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎。
在另一方面，本发明提供了在个体（例如，有需要的个体）中诊断细菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且 b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为患有细菌性脑膜炎。
本发明的另外的方面是为患有脑膜炎或疑似患有脑膜炎的个体（例如，有需要的个体）实施治疗方案的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎，指示住院和抗生素疗法的治疗方案，而其中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量小于或等于所述对照样品中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将鉴别为无菌性脑膜炎，指示不住院和无抗生素疗法的治疗方案；并且 c) 实施所指示的治疗方案。
用于根据本文所述的方法被鉴别为患有细菌性脑膜炎的个体的其它治疗方案的非限制性实例包括：调整抗生素疗法的持续时间、类型和/或量；采用静脉内输液等施用辅助疗法；调整地塞米松疗法的持续时间和/或量；与抗生素疗法组合施用抗补体疗法和/或抗炎症疗法，或以之取代抗生素疗法；以及/或者调整辅助疗法、抗补体疗法和/或抗炎症疗法的持续时间和/或量。可调整的其它治疗方案包括：需要对脑部进行CT或MRI成像（用于鉴别梗塞、脓肿、脑积水及其它状况）以及在抗性和/或并发感染的情况下重复CSF分析。
许多补体抑制剂是本领域已知的并适合与本发明的方法一起使用。在一些实施方案中，所述补体抑制剂选自：天然补体抑制剂及其衍生物、坎普他汀（compstatin）及其类似物、抗-膜攻击复合物(MAC)抗体、抗-C3抗体、抗-C5抗体、C3a受体拮抗剂和C5a受体拮抗剂。另外的补体抑制剂的实例可见于，例如，Emlen 等人“Therapeutic complementinhibition: new developments” Semin.Thromb.Hemost.36(6):660-68 (2101); Wagner等人“Therapeutic potential of complement modulation” Nat. Rev. Drug Discov.9 (1):43-56 (2010); 和 Ricklin 等人“Complement-targeted therapeutics” Nat. Biotechnol.25(11):1265-75 (2007)中，上述各文献的内容全文以引用方式并入本文中。
用于根据本文所述的方法被鉴别为患有无菌性脑膜炎的个体的其它治疗方案的非限制性实例包括：缩短住院时间和/或施用抗生素、辅助疗法、地塞米松疗法、抗补体和抗炎症疗法的持续时间；减少脑部成像的需求以及降低与主治医生的联系频率。
本发明的方法还可以用于调整用于诊断细菌性脑膜炎的标准方案。目前，标准诊断检查包括革兰氏染色、葡萄糖测量、蛋白质测量、白细胞（WBC）计数、培养并可能包括PCR，其均在得自个体的CSF样品上进行。本发明的方法可以作为初步测试在来自个体的CSF样品上进行，而如果在所述CSF样品中检测到各个成分补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、由C5b-C9、补体C3和/或补体因子B组成的膜攻击复合物(MAC)的水平升高，则将所述个体中的脑膜炎区分为细菌性脑膜炎，随后的测试可包括例如革兰氏染色和/或培养以鉴别引起所述细菌性脑膜炎的细菌病原体，例如，以确定最佳抗生素方案。
在另外的方面，本发明提供了在有需要的个体中鉴别脑膜炎是细菌性脑膜炎还是无菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C3、补体因子B、补体膜攻击复合物(MAC)和/或补体C9的量；并且b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体中的脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎。
本文还提供了在有需要的个体中鉴别脑膜炎是细菌性脑膜炎还是无菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体膜攻击复合物(MAC)、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体中的脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎。
本文还提供了在有需要的个体中诊断细菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且 b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为患有细菌性脑膜炎。
本发明另外提供了在有需要的个体中诊断细菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体诊断为患有细菌性脑膜炎。可以在一些实施方案中进行的额外的步骤包括：用抗生素和/或其它治疗剂治疗所述个体、让所述个体住院，等。
在另外的实施方案中，本发明提供了在有需要的个体中诊断与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且 b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染。此方法允许在个体中鉴别与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染，所述个体可能未表现出此类感染的症状以及/或者对于所述个体而言，感染源尚未确定或难以确定。采用本发明的方法可以告知医生是否需要治疗和/或采取何种治疗方法。通过使用本文所述的方法，医生可以在较根据现有诊断方案将花费的时间（例如，等待培养数据）短得多的时间内掌握有关所述个体是否具有感染的信息。因此，通过使用本发明的方法，如果鉴别出感染，则所述个体可以更早接受治疗，或所述个体可以避免因为疑似但尚未证实（例如，通过培养结果）的感染而可能开具的不必要的治疗（例如，采用抗生素）。
本文还提供了在有需要的个体中诊断与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体诊断为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染。
在另外的实施方案中，本发明提供了在有需要的个体中诊断自身免疫性疾病、创伤性脑损伤和/或脑卒中的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且 b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为患有自身免疫性疾病、创伤性脑损伤和/或脑卒中。
本文还提供了在有需要的个体中诊断自身免疫性疾病、创伤性脑损伤和/或脑卒中的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体诊断为患有自身免疫性疾病、创伤性脑损伤和/或脑卒中。
此外，本发明提供了将个体鉴别为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且 b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险。通过采用本发明的方法，可以鉴别出哪些个体将受益于医疗干预，即使所述个体未显现出或表现出问题或并发症或炎症状况和/或与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的症状。此类个体可以接受预防性治疗（例如，采用抗生素、类固醇、抗炎剂，等）。可以进行所述个体的CSF的培养以确定所述个体是否具有感染，而如果所述培养结果鉴别出感染，则可以针对该感染治疗所述个体。根据本文所述的方法鉴别为具有运作不当的留置分流器和/或脑室外装置的个体可以接受：冲洗所述分流器和/或装置、移除或更换所述分流器和/或装置，等。根据如本文所述的方法所鉴别的个体可以接受成像分析和/或其它测试以寻找脑室尺寸的变化、脑部出血，等。因此，本发明的方法的益处在于：当不存在其它指标表明个体有此需要时，可以将所述个体鉴别为需要此类测试和/或医疗干预的个体。目前尚不存在鉴别此类个体和/或基于有关此类个体的CSF中补体蛋白水平的信息进行测试和/或治疗的测试或方案。
另外，本发明提供了将个体鉴别为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体诊断为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险。
本文还提供了在有需要的个体中指导针对细菌性脑膜炎的治疗的方法，包括：a)在于施用所述针对细菌性脑膜炎的治疗之前得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 向所述个体施用所述治疗；c) 在于(b)之后的一个或多个时间点得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；d)使用(c)的测量结果指导所述个体的所述针对细菌性脑膜炎的治疗，即：在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量增加或无变化导致随后增强所述治疗，而在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量减少导致不改变所述治疗或随后减弱所述治疗。
本文还提供了在有需要的个体中指导针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的治疗的方法，包括：a) 在于施用所述针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染的治疗之前得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 向所述个体施用所述治疗；c) 在于(b)之后的一个或多个时间点得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；d) 使用(c)的测量结果指导所述个体的所述针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染的治疗，即：在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量增加或无变化导致随后增强所述治疗，而在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量减少导致不改变所述治疗或随后减弱所述治疗。
在另外的方面，本发明提供了在有需要的个体中指导针对自身免疫性疾病、创伤性脑损伤和/或脑卒中的治疗的方法，包括：a) 在于施用所述治疗之前得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 向所述个体施用所述治疗；c) 在于(b)之后的一个或多个时间点得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；d) 使用(c)的测量结果指导所述个体的所述针对自身免疫性疾病（例如，多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)）、创伤性脑损伤和/或脑卒中（包括与脑部和中枢神经系统相关的炎症状况和/或疾病、脑部脓肿、中枢神经系统损伤）的治疗，即：在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量增加或无变化导致随后增强所述治疗，而在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量减少导致不改变所述治疗或随后减弱所述治疗。
本发明另外提供了治疗具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的个体的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体鉴别为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染；并且 c) 在(b)中所鉴别出的个体中治疗与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染。
此外，本发明提供了治疗具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的个体的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体鉴别为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染；并且 b) 在(a)中所鉴别出的个体中治疗与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染。
在另外的实施方案中，本发明另外提供了治疗具有运作不当的留置分流器和/或脑室外装置的个体的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将鉴别为运作不当的留置分流器和/或脑室外装置；并且 c) 治疗在(b)中所鉴别出的个体以矫正所述运作不当的留置分流器和/或脑室外装置。
本文还提供了治疗具有运作不当的留置分流器和/或脑室外装置的个体的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将鉴别为运作不当的留置分流器和/或脑室外装置；并且 b) 治疗在(a)中所鉴别出的个体以矫正所述运作不当的留置分流器和/或脑室外装置。
本发明的另外的实施方案提供了为患有细菌性脑膜炎的个体确定治疗方案的方法，包括：在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎，确定住院和抗生素疗法的治疗方案，而其中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量小于或等于所述对照样品中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将鉴别为无菌性脑膜炎，确定不住院和无抗生素疗法的治疗方案；并且c) 实施所确定的治疗方案。
本发明还包括监测个体的方法，所述个体正在接受针对细菌性脑膜炎的治疗，所述方法包括：a) 于启动治疗前和治疗期间从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；b)测量所述样品的每一者中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的水平；c) 比较所述系列样品中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的所述水平以检测补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B水平随时间的变化；并且 (d) 根据所述比较的结果，调整对所述个体的治疗。
本发明还提供了监测个体的方法，所述个体正在接受针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的治疗，所述方法包括：a) 于启动治疗前和治疗期间从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；b) 测量所述样品的每一者中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的水平；c) 比较所述系列样品中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的所述水平以检测补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B水平随时间的变化；并且 (d) 根据所述比较步骤的结果，调整对所述个体的治疗。
本文另外提供了监测个体状态的方法，所述个体具有留置分流器和/或脑室外装置，所述方法包括：a) 从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；b) 测量所述样品的每一者中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的水平；c) 比较所述系列样品中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的所述水平以检测补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B水平随时间的变化；并且 (d) 根据所述比较步骤的结果，实施和/或启动和/或继续和/或调整和/或停止对所述个体的治疗。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体MAC的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C5b的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C6的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C7的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C8的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C9的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C3的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体因子B的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，测量CSF样品中补体MAC的量和补体C9的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，测量CSF样品中补体MAC的量和补体C3的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，测量CSF样品中补体MAC的量和补体因子B的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，测量CSF样品中补体C9的量和补体C3的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，测量CSF样品中补体C9的量和补体因子B的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，测量CSF样品中补体MAC的量、补体因子B的量和补体C3的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，测量CSF样品中补体C9的量、补体因子B的量和补体C3的量。
在本发明的方法的一些实施方案中，所述测量步骤可以采用床边（POC）快速测定系统进行。
在本发明的方法的一些实施方案中，所述测量步骤可以采用侧流系统进行。
在本发明的方法的一些实施方案中，所述测量步骤可以采用免疫测定法进行。
在本发明的方法的一些实施方案中，所述测量步骤可以采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行。
对照（例如，健康或未感染个体）CSF样品中补体C3的平均水平为2.5微克/ml。在患有细菌性脑膜炎的个体中，CSF样品中补体C3的平均水平为48微克/ml。在本发明的方法中，CSF样品中补体C3的参考水平为约10微克/ml。因此，CSF样品中补体C3水平大于10微克/ml则相对于对照是增加的，而将个体鉴别为患有细菌性脑膜炎而非无菌性脑膜炎。CSF样品中补体C3水平小于10微克/ml则将患有脑膜炎的个体鉴别为患有无菌性脑膜炎而非细菌性脑膜炎。
对照（例如，健康或未感染个体）CSF样品中补体因子B（FB）的平均水平为0.5微克/ml。在患有细菌性脑膜炎的个体中，CSF样品中补体FB的平均水平为16微克/ml。在本发明的方法中，CSF样品中补体C3的参考水平为约1.0微克/ml。因此，CSF样品中补体FB水平大于1.0微克/ml则相对于对照是增加的，而将个体鉴别为患有细菌性脑膜炎而非无菌性脑膜炎。CSF样品中补体FB水平小于1.0微克/ml则将患有脑膜炎的个体鉴别为患有无菌性脑膜炎而非细菌性脑膜炎。
对照（例如，健康或未感染个体）CSF样品中补体C9的水平可以在约200 ng/ml至约500 ng/ml的范围内。在本发明的方法中，CSF样品中补体C9的参考水平为约500 ng/ml。因此，CSF样品中补体C9水平大于500 ng/ml则相对于对照是增加的，而将个体鉴别为患有细菌性脑膜炎而非无菌性脑膜炎。CSF样品中补体C9水平小于500纳克/ml则将患有脑膜炎的个体鉴别为患有无菌性脑膜炎而非细菌性脑膜炎。
在一些实施方案中，CSF样品或对照（例如，健康或未感染个体或没有留置分流器和/或脑室外装置的个体）中补体MAC的水平小于约10 ng/ml。
在一些实施方案中，具有分流器失效和/或与留置分流器相关的并发症的个体和/或具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险的个体的CSF样品中补体MAC的水平可以，例如，在约20 ng/ml至约100 ng/ml的范围内。因此，在一些实施方案中，用于鉴别此类个体的阈限值可以是CSF中补体MAC水平大于10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、75、100、125、150、200 ng/ml但小于约240、245或250 ng/ml。
在一些实施方案中，具有细菌感染（例如，细菌性脑膜炎、与留置分流器或脑室外装置相关的细菌感染）的个体的CSF样品中补体MAC的水平可以，例如，大于250 ng/ml。因此，在一些实施方案中，用于鉴别此类个体的阈限值可以是CSF中补体MAC水平大于200、225、250、300、350、400、450、500、1000、2000、3000或4000 ng/ml。
在本发明的方法中，阈限值还可以被确定为相对于对照值增加的百分比，例如大于或相对于对照值增加5%、10%、15%、20%、25%、30%、35% 40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%、400%、500%或甚至1000%。
可以在本发明的方法和测定法中采用的针对补体C3的抗体的非限制性实例包括列于本文表1中的抗体以及现在已知或以后鉴别出的任何其它针对补体C3的抗体。这些抗体可以C3的任意组合而用在本发明的方法和测定法中。
可以在本发明的方法和测定法中采用的针对补体因子B的抗体的非限制性实例包括：来自Hycult的抗体，确定为补体因子B/Bb，人类，mAb M13/12，HM2256；来自Comptech的抗体，确定为山羊抗-人B因子，目录号A235；来自Abcam的抗体，确定为抗-B因子抗体(ab182924；针对B因子的山羊多克隆)；来自Abcam的抗体，确定为抗-B因子抗体(ab72658；针对B因子的兔多克隆)；和来自Abcam的抗体，确定为抗-B因子抗体(ab190494；针对B因子的山羊多克隆)，以及现在已知或以后鉴别出的任何其它针对补体因子B的抗体。这些抗体可以FB抗体的任意组合而用在本发明的方法和测定法中。在一些实施方案中，所述抗体可以结合Bb。
可以在本发明的方法和测定法中采用的针对补体C9的抗体的非限制性实例包括针对肽序列CMPIPVSREEQEQHYPIPID而在小鼠中生产的多克隆兔抗-C9。此C9抗体与人类补体C9交叉反应。可以在本发明的方法和测定法中采用的针对补体C9的抗体的其它实例包括：来自Hycult的抗体，确定为C9，人类，mAb X197，HM2111；来自Hycult的抗体，确定为C9新抗原，人类，mAb WU 13-15，HM2264；来自Comptech的抗体，确定为山羊抗-人C9，目录号A226；来自Quidel的抗体，确定为山羊抗-人C9 #A310；来自Quidel的抗体，确定为小鼠抗-人C9 #A223；来自Abcam的抗体，确定为抗-C9抗体(ab118902；针对C9的兔多克隆)；来自Abcam的抗体，确定为抗-C9抗体(ab92690；针对C9的兔多克隆)；和来自Abcam的抗体，确定为抗-C9抗体(ab53896；针对C9的绵羊多克隆)，以及现在已知或以后鉴别出的任何其它针对补体C9的抗体。这些抗体可以C9的任意组合而用在本发明的方法和测定法中。
可以在本发明的方法和测定法中采用的针对补体MAC的抗体的非限制性实例包括针对C5、C5b、C6、C7、C8、C9及其任意组合的抗体。针对补体MAC的抗体可以是结合C5、C5b、C6、C7、C8和/或C9的抗体，当所述补体MAC中存在这些相应的补体蛋白时。例如，针对补体MAC的抗体可以是结合补体C9上的新表位的抗体，当补体C9是所述补体MAC的一部分时，提供所述新表位。针对补体MAC的抗体可以包括结合补体蛋白C5、C5b、C6、C7、C8或C9中任一者上的新表位的抗体，当这些蛋白是所述补体MAC的一部分时，提供所述新表位。可以采用本发明的测定法和装置以检测和/或定量任意组合的这些抗体中的任一者。
如本文所述的针对C3的抗体、针对FB的抗体、针对补体MAC的抗体和针对C9的抗体可以C3、FB、MAC和C9抗体的任意组合而用在本发明的方法和测定法中。
此外，在采用抗体的本发明的实施方案中，结合补体C9的抗体、结合C3的抗体、结合MAC的抗体和结合FB的抗体基本上没有交叉反应。在本发明的方法和测定法中采用的抗体可以是任意组合的单克隆抗体或多克隆抗体。
在本发明的方法的一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C9的量。在一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体C3的量。在一些实施方案中，仅测量CSF样品中补体因子B的量。在一些实施方案中，测量CSF样品中补体C9的量和补体C3的量。在一些实施方案中，测量CSF样品中补体C9的量和补体因子B的量。在一些实施方案中，测量CSF样品中补体C9的量和补体C3的量以及补体因子B的量。在一些实施方案中，可以根据本文所述的方法测量CSF样品中另外的补体蛋白，所述测量可与补体C9、补体C3和/或补体因子B的测量以任意组合进行，或单独进行。因此，可以根据本发明的方法单独或以任意组合检测和/或测量的补体蛋白的非限制性实例包括：C3、C9、B因子(FB)、C5a、C5b、C3a、C8-α、C8-β、C8-γ、C7、C4、C6、膜攻击复合物(MAC)、甘露糖结合蛋白(MBP)和MBP相关的丝氨酸蛋白酶1(MASP-1)。可以单独或以任意组合检测和/或测量这些补体蛋白。
在本发明的一些实施方案中，使用免疫测定系统实施本文所述的方法。在一些实施方案中，使用床边（POC）快速测定系统实施本文所述的方法。在一些实施方案中，使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)实施本发明的方法。在一些实施方案中，使用侧流系统实施本发明的方法。
在一个实施方案中，本发明提供了干试纸条，其能够通过试纸条内的毛细作用芯吸施加其上的液体，所述试纸条以上游（于第一端）至下游（于第二端）方向并且依以下次序包括：1) 样品施加区，2) 反应区，和 3) 检测区，其中所述反应区包含非固定的经标记的第一抗体，其特异于补体C9蛋白的表位，有效地与之形成可移动的补体C9蛋白/抗体复合物，并且所述检测区包含固定的第二抗体，其特异于所述复合物中的补体C9蛋白的表位，其中所述第一和第二抗体特异于同一补体C9蛋白上的不同表位，并且其中，在将体液样品施加到位于所述第一端的所述样品施加区之后：(i) 样品在所述试纸条上向着所述反应区朝下游方向迁移，(ii) 所述样品中的补体C9蛋白与此前存在于所述反应区中的所述第一抗体反应以形成可移动的经标记的补体C9蛋白/抗体复合物，(iii) 所述可移动的经标记的补体C9蛋白/抗体复合物朝位于所述第二端的所述检测区迁移，(iv) 所述可移动的经标记的补体C9蛋白/抗体复合物结合此前存在于所述检测区中的所述固定的第二抗体，从而将所述复合物固定在所述检测区中。在本发明的干试纸条的一些实施方案中，在将所述体液样品施加到所述干试纸条上之前，所述第一抗体和第二抗体即存在于所述干试纸条上。在一些实施方案中，所述第一抗体是单克隆抗体，而在一些实施方案中，所述第二抗体是单克隆抗体。在一些方面，所述第一抗体和所述第二抗体均为单克隆抗体。
在一个实施方案中，本发明提供了干试纸条，其能够通过试纸条内的毛细作用芯吸施加其上的液体，所述试纸条以上游（于第一端）至下游（于第二端）方向并且依以下次序包括：1) 样品施加区，2) 反应区，和 3) 检测区，其中所述反应区包含非固定的经标记的第一抗体，其特异于补体C3蛋白的表位，有效地与之形成可移动的补体C3蛋白/抗体复合物，并且所述检测区包含固定的第二抗体，其特异于所述复合物中的补体C3蛋白的表位，其中所述第一和第二抗体特异于同一补体C3蛋白上的不同表位，并且其中，在将体液样品施加到位于所述第一端的所述样品施加区之后：(i) 样品在所述试纸条上向着所述反应区朝下游方向迁移，(ii) 所述样品中的补体C3蛋白与此前存在于所述反应区中的所述第一抗体反应以形成可移动的经标记的补体C3蛋白/抗体复合物，(iii) 所述可移动的经标记的补体C3蛋白/抗体复合物朝位于所述第二端的所述检测区迁移，(iv) 所述可移动的经标记的补体C3蛋白/抗体复合物结合此前存在于所述检测区中的所述固定的第二抗体，从而将所述复合物固定在所述检测区中。在本发明的干试纸条的一些实施方案中，在将所述体液样品施加到所述干试纸条上之前，所述第一抗体和第二抗体即存在于所述干试纸条上。在一些实施方案中，所述第一抗体是单克隆抗体，而在一些实施方案中，所述第二抗体是单克隆抗体。在一些方面，所述第一抗体和所述第二抗体均为单克隆抗体。
在一个实施方案中，本发明提供了干试纸条，其能够通过试纸条内的毛细作用芯吸施加其上的液体，所述试纸条以上游（于第一端）至下游（于第二端）方向并且依以下次序包括：1) 样品施加区，2) 反应区，和 3) 检测区，其中所述反应区包含非固定的经标记的第一抗体，其特异于补体因子B（FB）蛋白的表位，有效地与之形成可移动的补体FB蛋白/抗体复合物，并且所述检测区包含固定的第二抗体，其特异于所述复合物中的补体FB蛋白的表位，其中所述第一和第二抗体特异于同一补体FB蛋白上的不同表位，并且其中，在将体液样品施加到位于所述第一端的所述样品施加区之后：(i) 样品在所述试纸条上向着所述反应区朝下游方向迁移，(ii) 所述样品中的补体FB蛋白与此前存在于所述反应区中的所述第一抗体反应以形成可移动的经标记的补体FB蛋白/抗体复合物，(iii) 所述可移动的经标记的补体FB蛋白/抗体复合物朝位于所述第二端的所述检测区迁移，(iv) 所述可移动的经标记的补体FB蛋白/抗体复合物结合此前存在于所述检测区中的所述固定的第二抗体，从而将所述复合物固定在所述检测区中。在本发明的干试纸条的一些实施方案中，在将所述体液样品施加到所述干试纸条上之前，所述第一抗体和第二抗体即存在于所述干试纸条上。在一些实施方案中，所述第一抗体是单克隆抗体，而在一些实施方案中，所述第二抗体是单克隆抗体。在一些方面，所述第一抗体和所述第二抗体均为单克隆抗体。
在一个实施方案中，本发明提供了干试纸条，其能够通过试纸条内的毛细作用芯吸施加其上的液体，所述试纸条以上游（于第一端）至下游（于第二端）方向并且依以下次序包括：1) 样品施加区，2) 反应区，和 3) 检测区，其中所述反应区包含非固定的经标记的第一抗体，其特异于补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的表位，有效地与之形成可移动的补体蛋白/抗体复合物，并且所述检测区包含固定的第二抗体，其特异于所述复合物中的补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的表位，其中所述第一和第二抗体特异于同一补体蛋白上的不同表位，并且其中，在将体液样品施加到位于所述第一端的所述样品施加区之后：(i) 样品在所述试纸条上向着所述反应区朝下游方向迁移，(ii) 所述样品中的补体蛋白与此前存在于所述反应区中的所述第一抗体反应以形成可移动的经标记的补体蛋白/抗体复合物，(iii) 所述可移动的经标记的补体蛋白/抗体复合物朝位于所述第二端的所述检测区迁移，(iv) 所述可移动的经标记的补体蛋白/抗体复合物结合此前存在于所述检测区中的所述固定的第二抗体，从而将所述复合物固定在所述检测区中。在本发明的干试纸条的一些实施方案中，在将所述体液样品施加到所述干试纸条上之前，所述第一抗体和第二抗体即存在于所述干试纸条上。在一些实施方案中，所述第一抗体是单克隆抗体，而在一些实施方案中，所述第二抗体是单克隆抗体。在一些方面，所述第一抗体和所述第二抗体均为单克隆抗体。
在本文所述的干试纸条的实施方案中，可以将所述干试纸条构造成检测或测量所述样品中的单一补体蛋白（例如，仅C3、C5b、C6、C7、C8、C9、MAC or FB）或构造成检测或测量任意组合的两种或更多种（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10，等）补体蛋白（例如，C3和C9、C3和FB、C9和FB、C3和C9以及FB、C3和一种或多种MAC蛋白、FB和一种或多种MAC蛋白、MAC蛋白C5b、C6、C7、C8和C9中的任意两种或更多种）。可以在所述干试纸条上串行或并行检测所述两种或更多种补体蛋白。例如，可以将多个干试纸条并行布置并且/或者可以将多条测试线串行布置在单个干试纸条上。
在另外的实施方案中，本发明提供了用于检测标志物的侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；检测抗体，其结合所述标志物的第一表位；测试线，其包含捕获抗体，所述捕获抗体结合所述标志物的第二表位；和对照线，其包含结合对照被分析物的抗体，其中所述标志物单独地或以任意组合选自：补体蛋白C3、补体蛋白因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体蛋白C9。
另外，本发明提供了侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体C9的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体C9的第二表位；第二检测抗体，其结合补体C3的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合补体C3的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
本文还提供了侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体C9的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体C9的第二表位；第二检测抗体，其结合补体因子B的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合补体因子B的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
本发明还提供了侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体C9的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体C9的第二表位；第二检测抗体，其结合补体C3的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合补体C3的第二表位；第三检测抗体，其结合补体因子B的第一表位；第三测试线，其包含第三捕获抗体，所述第三捕获抗体结合补体因子B的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
在另外的实施方案中，本发明提供了干试纸条，其能够通过试纸条内的毛细作用芯吸施加其上的液体，所述试纸条以上游（于第一端）至下游（于第二端）方向并且依以下次序包括：1) 样品施加区，2) 反应区，和 3) 检测区，其中所述反应区包含非固定的经标记的第一抗体，其特异于补体MAC蛋白（例如，C5b、C6、C7、C8和/或C9）的表位，有效地与之形成可移动的补体MAC/抗体复合物，并且所述检测区包含固定的第二抗体，其特异于所述复合物中的补体MAC的表位，其中所述第一和第二抗体特异于同一补体MAC上的不同表位，并且其中，在将体液样品施加到位于所述第一端的所述样品施加区之后：(i) 样品在所述试纸条上向着所述反应区朝下游方向迁移，(ii) 所述样品中的补体MAC与此前存在于所述反应区中的所述第一抗体反应以形成可移动的经标记的补体MAC/抗体复合物，(iii) 所述可移动的经标记的补体MAC/抗体复合物朝位于所述第二端的所述检测区迁移，(iv) 所述可移动的经标记的补体MAC/抗体复合物结合此前存在于所述检测区中的所述固定的第二抗体，从而将所述复合物固定在所述检测区中。
本文还提供了用于检测标志物的侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；检测抗体，其结合所述标志物的第一表位；测试线，其包含捕获抗体，所述捕获抗体结合所述标志物的第二表位；和对照线，其包含结合对照被分析物的抗体，其中所述标志物选自：补体蛋白C3、补体蛋白因子B、补体MAC、补体蛋白C9以及其任意组合。正如本领域众所周知的，此类侧流免疫测定装置可以包括包含提供信号的标记的检测抗体，例如，用于检测和/或定量。
在另外的实施方案中，本发明提供了侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合第一蛋白的第一表位，所述第一蛋白选自补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合所述第一蛋白的第二表位；第二检测抗体，其结合第二蛋白的第一表位，所述第二蛋白选自补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC，其中所述第二蛋白不同于所述第一蛋白；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合所述第二蛋白的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
在一些实施方案中，本文所述的侧流免疫测定装置还可以包括：第三检测抗体，其结合第三蛋白的第一表位，所述第三蛋白选自补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC，其中所述第三蛋白不同于所述第一蛋白和所述第二蛋白；和第三测试线，其包含第三捕获抗体，所述第三捕获抗体结合所述第三蛋白的第二表位。
在又另外的实施方案中，本文所述的侧流免疫测定装置可以包括：第四检测抗体，其结合第四蛋白的第一表位，所述第四蛋白选自补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC（例如，C5b、C6、C7、C8和/或C9），其中所述第四蛋白不同于所述第一蛋白和所述第二蛋白以及所述第三蛋白；和第四测试线，其包含第四捕获抗体，所述第四捕获抗体结合所述第四蛋白的第二表位。
本文所述的侧流免疫测定装置可以包括检测抗体，其中各个相应检测抗体包含提供不同信号的标记，所述不同信号将所述检测抗体各自相互区别开来。
此外，本发明提供了监测个体的方法，所述个体正在接受针对细菌性脑膜炎的治疗，所述方法包括：(a) 从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；(b) 测定所述样品的每一者中补体C9、补体C3、补体MAC（其可以是C5b、C6、C6、C8和/或C9）和/或补体因子B的水平；(c) 比较所述系列样品中补体C9、补体C3、补体MAC（其可以是C5b、C6、C6、C8和/或C9）和/或补体因子B的所述水平以检测补体C9、补体C3、补体MAC（其可以是C5b、C6、C6、C8和/或C9）和/或补体因子B水平随时间的变化；并且 (d) 根据所述比较步骤(c)的结果，调整对所述个体的治疗。此类调整可以包括，例如，根据所述比较结果而启动治疗、增强治疗、恢复治疗、维持治疗、减弱治疗、停止治疗等。例如，在一些实施方案中，随时间升高将导致启动治疗、增强治疗、恢复治疗或维持治疗。在一些实施方案中，随时间降低将导致减弱治疗或停止治疗。
例如，临床医生可检测到来自所述个体治疗期间的样品中本发明的一种或多种补体蛋白减少。因此，临床医生可随即通过调整所施用药物（如抗生素、抗炎剂和/或补体抑制剂）的剂量或通过一旦补体水平已经恢复正常即停止治疗来调整所述个体的治疗。
在其它实施方案中，临床医生可检测到来自所述个体治疗期间的样品中本发明的一种或多种（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10，等）补体蛋白增加。因此，临床医生可随即，例如，通过增加药物（如抗生素、抗炎剂和/或补体抑制剂）的剂量来调整所述个体的治疗方案，直至补体蛋白水平达到所需的稳定或降低。如果在来自所述个体治疗期间的样品中未检测到补体蛋白水平的变化，则临床医生可调整所述个体的治疗方案或可保持所述个体的治疗方案直至观察到补体蛋白水平的变化。
本文描述了本发明的侧流免疫测定装置的实施方案，其构成如下：纤维素膜试纸条，其上设置有样品垫以吸收样品液并允许样品与颗粒结合物的免疫复合物逐渐迁移；吸芯，其位于所述试纸条的远端，吸收液体样品与结合物质以促进毛细管迁移通过所述纤维素膜试纸条；以及颗粒结合物垫，其包含结合至标记的检测抗体或检测结合物。所述纤维素膜试纸条是测试区域，其上设置有：测试线，其包含单克隆或多克隆抗体条纹以捕获所述检测结合物；以及对照线，其包含结合对照被分析物的抗体（如IgG）并向用户表明测试已成功运行。所述侧流免疫测定还包括附接至所述纤维素膜试纸条的聚酯薄膜背衬和压敏复合薄膜背衬。可将每个侧流免疫测定包装在例如MYLAR零蒸气屏蔽袋中。
当测试样品被施加到所述样品垫，所述样品从所述样品垫迁移通过所述颗粒结合物垫，在其中，存在的任何靶被分析物将结合至所述检测抗体结合物。所述样品随后继续迁移穿过所述膜直至其到达所述测试线，在其中，所述靶/结合物复合物将结合至所述固定的抗体而在所述膜上产生可见的线。所述样品随后沿着所述膜试纸条进一步迁移直至其到达所述对照线，在其中，未结合所述测试线的过量的抗体结合物将结合所述对照线并在所述膜上产生第二道可见的线。所述对照线配体通常是针对所述结合抗体的Fc区的抗体。此对照线表明所述样品已经如预期迁移穿过所述膜。
在某些实施方案中，根据本发明的侧流免疫测定装置包括用于检测单一被分析物的单个膜试纸条。在其它实施方案中，所述侧流免疫测定检测两种或更多种（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10，等）被分析物。当所述侧流免疫测定检测两种或更多种被分析物时，所述测试可以被构造成将多个膜试纸条并行布置或在单个膜试纸条上串行布置多条测试线。
在一些实施方案中，所述侧流免疫测定被构造成在单个测试盒内并行测试两种被分析物。在一些实施方案中，所述侧流免疫测定包括用于灌输测试样品的两个口和每种被分析物的单独的膜试纸条。在其它实施方案中，所述侧流免疫测定包括用于灌输样品的一个口和每种被分析物的单独的膜试纸条。
在一些实施方案中，所述侧流免疫测定装置可被构造成在单个测试盒内并行测试三种被分析物。在一些实施方案中，所述侧流免疫测定可包括用于灌输测试样品的三个口和每种被分析物的单独的膜试纸条。在其它实施方案中，所述侧流免疫测定可包括用于灌输测试样品的一个口和每种被分析物的单独的膜试纸条。
在某些实施方案中，所述侧流免疫测定装置可被构造成在单个测试盒内串行测试多种被分析物，例如，所述测试盒包括具有串行布置的两个测试线和一个对照线的膜试纸条，或所述测试盒包括具有串行布置的三个测试线和一个对照线的膜试纸条。
本公开的侧流免疫测定装置可提供对靶标志物的定性和/或定量检测。定性地，所述膜上两道清晰的线可表示阳性结果，而对照区中的单条线可表示阴性结果。定量地，可以根据与标准曲线的比较来测定样品中所述靶标志物的水平或量，所述标准曲线是针对每种靶标分别建立的并在测定测试样品之前运行。
在一些实施方案中，所述检测抗体包含提供信号的标记，所述信号可以由临床医生视觉读取或经由商用读出器电子读取或经由侧流测定盒内安装的印刷电路板上的内部读出器阵列电子读取。各种标记均适合用于本公开的测定法中。在特定的实施方案中，所述标记可能是胶体金。
本领域技术人员将认识到，各种对照被分析物均适合用于本发明的方法中以验证所述测定已成功完成。在一个实施方案中，所述对照被分析物是IgG。
在本发明的方法的一些实施方案中，希望拥有可以在单个测定中检测不止一种补体蛋白的侧流免疫测定。例如，可能非常需要这样的双重侧流免疫测定，其可以在体液的同一等分试样中，除了C3、MAC或FB之外，定性并定量地检测C9。因此，在另一个实施方案中，提供了侧流免疫测定装置，用于在包含补体蛋白的体液样品中床边检测补体蛋白，所述侧流免疫测定装置包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体C9的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体C9的第二表位；第二检测抗体，其结合C3、MAC或FB的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合C3或FB的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
在一些实施方案中，可能非常需要这样的双重侧流免疫测定，其可以在体液的同一等分试样中，除了C3、MAC和FB之外，定性并定量地检测C9。因此，在另一个实施方案中，提供了侧流免疫测定装置，用于在包含补体蛋白的体液样品中床边检测补体蛋白，所述侧流免疫测定装置包括：膜试纸条；第一检测抗体，其结合补体C9的第一表位；第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合补体C9的第二表位；第二检测抗体，其结合C3的第一表位；第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合C3的第二表位；第三检测抗体，其结合补体FB的第一表位；第三测试线，其包含第三捕获抗体，所述第三捕获抗体结合补体FB的第二表位；和至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。可以包括额外的测试线，其包含结合补体MAC蛋白（其可以是补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9）的抗体。本发明的此类侧流测定可以本发明普通技术人员已知的适当构造、以任意组合并以任意次序（第一抗体、第二抗体、第三抗体，等）包含针对补体C3、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9和/或补体FB的抗体。
存在多种标记可与结合部分（抗体或抗原）一起使用以形成经标记的试剂。对标记的选择取决于所需要的灵敏度、与结合部分结合的容易程度、稳定性要求、可用的仪器以及处理规定。本发明的标记可能是可溶的或颗粒状的、金属的、有机的或无机的，并且可包括光谱标记如绿色荧光蛋白、荧光染料（例如，荧光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、生物素、亲和素和链亲和素）、化学发光化合物（例如，萤光素和发光氨）；和酶（例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶，等）、光谱比色标记如胶体金、或碳粒、或有色玻璃或塑料（例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等）微珠。
可以根据本领域熟知的方法将所述标记直接或间接连接至所述结合部分的组分上，如在美国专利号4,863,875 和 4,373,932中所述的那些方法，其分别通过引用并入本文中。非放射性标记往往通过间接方式附接。通常，配体分子（例如，生物素）共价结合至所述结合部分。所述配体随后结合至抗-配体（例如，链亲和素）分子，所述分子要么固有地可检测，要么共价结合至信号系统（如可检测的酶、荧光化合物或化学发光化合物）。所述标记可通过化学接头而被附接至所述结合部分。接头域通常是多肽序列，如具有约5至200个氨基酸的聚甘氨酸序列。优选的接头往往是柔性氨基酸子序列。此类柔性接头是本领域技术人员已知的。例如，聚(乙二醇)是可商购获得的（Shearwater Polymers, Inc.Huntsville, Ala.）。所述检测部分也可以例如通过与酶或荧光团结合而直接结合至所述信号生成化合物。
可以通过检验，或监测特定探针或探针组合的检测器来检测标记的存在。典型的检测器包括分光光度计、光电管和光电二极管、显微镜、闪烁计数器、照相机、胶片等以及其组合。合适的检测器的实例可广泛地得自本领域技术人员已知的各种商业来源。
对于本发明的目的而言，优选的标记是非放射性的并且易于检测而无需使用复杂的仪器。优选地，所述标记将产生从视觉检验上或通过荧光检测可立即分辨的可见信号。优选的标记包括可以下列形式观察到的那些：1) 化学发光(使用辣根过氧化物酶和/或碱性磷酸酶与产生光子作为分解产物的底物)；2) 颜色变化(胶体金，其与免疫反应事件产生有色沉淀物)，和 3) 荧光(使用，例如，荧光素和其它荧光标签)。在本发明的一个优选的实施方案中，胶体金被用作标记，并且所述标记直接结合至所述结合部分（所述抗体或抗原）。当使用金作为标记时，经标记的试剂-被分析物复合物与捕获试剂的反应导致出现红色的沉淀。正如本领域技术人员将认识到的，在复合物与固定于捕获区内的捕获试剂反应时出现的颜色将取决于所用的标记。
在本发明的测定形式的一个实施方案中，所述捕获及对照捕获试剂均被固定在固体基底上。存在各种适合与本发明一起使用的本领域已知的固体载体。例如，所述固体载体可能是微珠、膜（例如，硝化纤维素）、微量滴定孔（例如，PVC或聚苯乙烯）、线丝、塑料、试纸条或可将抗体放置或固定其上的任何表面。另外，可采用各种各样的有机和无机聚合物（天然的和合成的）作为所述固体表面的材料。示例性的聚合物包括：聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)、人造丝、尼龙、聚(乙烯丁酸)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、硅胶、聚甲醛、纤维素、醋酸纤维素、硝化纤维素，等。可采用的其它材料包括：纸张、玻璃、陶瓷、金属、类金属、半导体材料、黏固剂，等。另外，可以使用形成凝胶的物质，如蛋白质（例如，明胶）、脂多糖、硅酸盐、琼脂糖和聚丙烯酰胺。形成若干水相的聚合物（如葡聚糖和聚亚烷基二醇）或表面活性剂（如磷脂或长链（12-24个碳原子）烷基季铵盐）等也是适用的。
将各种各样的化合物连接至各种表面的方式是众所周知的并在文献中有充分说明。参见，例如，IMMOBILIZED ENZYMES, Ichiro Chibata, Halsted Press, New York,1978, 和 Cuatrecasas, 1970，其公开内容通过引用并入本文中。所述捕获和对照试剂可共价结合或通过非特异性键合而非共价附接。如果需要化合物与表面之间共价键合，则该表面将通常是多官能的或能够被多官能化。可存在于表面上并被用于连接的官能团可包括：羧酸、醛、氨基、氰基、乙烯基团、羟基、巯基等。除了共价键合之外，还可以使用各种用于非共价结合测定组分的方法。非共价结合通常是将化合物非特异性吸收至表面。通常，用第二化合物阻断表面以防止经标记的测定组分的非特异性结合。
在本发明的一个实施方案中，所述捕获和对照试剂被非特异性地吸收在硝化纤维素膜上并被阻断缓冲液（例如，含0.5% BSA；4% 蔗糖的PBS）所阻断。
本发明还提供了试剂盒，其包括本发明的干试纸条或侧流测定盒或组合物，以及试剂和使用说明。
定义
如本文所用，“一个（种）”和“该”，根据其所用于的上下文，可意指一个（种）或不止一个（种）。例如，“一个”细胞可意指一个细胞或多个细胞。
同样，如本文所用，“和/或”指代并涵盖一个或多个相关列出项目的任何以及所有可能的组合，以及当被解释为替代形式（“或”）时不含组合。
此外，术语“约”，如本文中所用，当指代可测量的值（如本发明的化合物或试剂的量、剂量、时间、温度等）时，意在涵盖指定量的 ± 20%、± 10%、± 5%、± 1%、± 0.5%或甚至 ± 0.1% 的变化。
本发明的“个体”包括但不限于易感脑膜炎的任何动物，包括例如：人、非人灵长类、马、牛、猫、狗、猪、大鼠和小鼠。施用本发明的各种组合物可以通过若干不同途径中的任一种而实现。在特定的实施方案中，所述组合物可以肌内、皮下、腹腔内、皮内、鼻内、颅内、舌下、阴道内、直肠内、口腔或局部施用。本文的组合物可经由皮肤划痕法施用，或经由贴剂或液体透皮施用。所述组合物可以可生物降解材料的形式皮下递送，其在一个时间段内释放所述组合物。
“细菌性脑膜炎”意指由任何细菌物种引起的脑膜炎（即，脑膜的炎症），所述细菌物种包括但不限于：链球菌属物种、埃希氏菌属物种、葡萄球菌属物种、李斯特氏菌属物种、奈瑟氏球菌属物种、沙门氏菌属物种、嗜血杆菌属物种以及其它革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。
当炎症并非由细菌引起或如果在实验室中无法生长并鉴别该细菌生物体，则其被称为“无菌性脑膜炎”。因此，无菌性脑膜炎通常是由于细菌以外病原体（其可以是，例如，柯萨奇病毒、埃可病毒、腺病毒、肠道病毒、疱疹病毒、腮腺炎病毒、狂犬病毒以及其它未指明的病毒）造成的感染、隐球菌感染或由其它真菌生物体造成的感染以及由于寄生生物造成的感染而引起的。无菌性脑膜炎（也被称为无菌脑膜炎）也已经在一些情况下与自身免疫性疾病、癌症、莱姆病或药物不良反应相关联。脑膜炎也可以由分枝杆菌物种引起并被视为无菌性脑膜炎。
细菌性脑膜炎和无菌性脑膜炎在成人中的症状相似并且可以包括但不限于：发烧、头痛、颈部僵硬、意识降低、癫痫、眼部敏感和/或疼痛、皮疹、眩晕和呕吐。在幼儿中，脑膜炎的病症可能是发烧、难以平复的烦躁、食欲减退、皮疹、呕吐和尖叫。幼儿还可能身体僵硬并在头部有非哭叫引起的凸出软点。当被抱住时，患有脑膜炎的幼儿可能哭叫。患有脑膜炎的小孩可能表现类似于其患有流感（流行性感冒）、咳嗽或呼吸困难。老人和具有其它医疗状况的人可能仅有轻微头痛和发烧。他们可能感觉不舒服并可能精力不济。
因此，如本文所述的“有需要的个体”是这样的个体，其具有脑膜炎症状并且/或者已经被诊断患有脑膜炎并且/或者曾经暴露于具有脑膜炎症状的和/或已经被诊断患有和/或疑似患有脑膜炎的其它个体或曾经与之接触。
术语“被分析物”意指待评估的任何实体（特别是化学、生物化学或生物实体），例如，其量（例如，浓度或质量）、活性、组成或其它性质有待检测、测量、定量、评价、分析等。“被分析物”可以是单一分子物质或可以由多种不同分子物质构成。
术语“抗体”涵盖：IgA、IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgE、IgD、IgM、IgY型的完整和/或全长免疫球蛋白；抗原结合片段或单链完整免疫球蛋白（例如，单链抗体、Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、scFv(可变单链)和dAb片段）；和包含至少一个抗原结合免疫球蛋白可变区的其它蛋白质，例如，包含免疫球蛋白可变区（例如，重（H）链可变区（VH）和轻（L）链可变区（VL））的蛋白质。抗体的轻链可能是κ或λ型。抗体可能是多克隆或单克隆的。多克隆抗体含有具有不同互补决定区（CDR）序列的免疫球蛋白分子，并因而通常识别抗原的不同表位。多克隆抗体往往来源于多个不同的B细胞系，其各自生产具有不同特异性的抗体。多克隆抗体可主要由若干个抗体亚群构成，其各自来源于单独的B细胞系。单克隆抗体由单独的免疫球蛋白分子构成，所述免疫球蛋白分子包含具有相同序列的CDR，并因而识别相同的表位（即，该抗体是单特异性的）。单克隆抗体往往来源于单个B细胞系或杂交瘤。抗体可能是“人源化”抗体，其中例如，源于啮齿类动物的可变域被融合至源于人类的恒定域，或其中来自啮齿类动物（例如，小鼠）的一些或全部的互补决定区氨基酸连同一个或多个框架氨基酸被“接枝”到人类抗体，从而保持该啮齿类动物抗体的特异性。
“体液”意指可测定补体蛋白的存在的体内任何液体。体液包括但不限于：全血、血清、血浆、尿液、泪液、唾液、伤口渗出液、支气管肺泡灌洗液和脑脊液（CSF）。
“对照”指代具有已知量或水平的补体蛋白的样品。在一些实施方案中，所述对照具有与没有细菌性脑膜炎的个体相当的补体蛋白水平，使得具有相比所述对照升高的补体蛋白水平的测试样品指示细菌性脑膜炎。
“表位”指代这样的最小分子部分，其为结合至此类表位的抗体所识别并因而决定该抗体的免疫特异性。该术语还在本文中用于指代这样的最小分子部分，其为非抗体特异性结合试剂所识别。
“标记”指代可检测部分，其有利于直接或间接检测和/或定量或相对测量其所附接至的分子。可检测标记或可检测部分往往产生信号（如荧光、化学发光、放射性、颜色、磁性或顺磁性等）使其可例如，通过使用检测荧光、化学发光、放射性、颜色、磁场、磁共振等的仪器，或在一些情况下通过视觉检验而被检测到。所述标记可能是例如：荧光物质；色素；化学发光或发光物质；有色物质；磁性物质；或非磁性金属颗粒如胶体金。在一个实施方案中，适合用于本发明的方法和测定法的检测抗体被结合至胶体金标记，其提供了颜色信号。
“新表位”指代由于补体组分的蛋白水解裂解或裂解产物而生成的或变得可检测的表位。
在本文公开的测定法和方法的某些实施方案中，存在于所测试的体液样品中的补体基本上不被所述测定法或方法本身活化。“基本上不被活化”，如本上下文中所用，意指本发明的方法和测定法基本上不存在由测试方法和/或材料引起的体外活化。这样，由于侧流免疫测定是快速的并需要更少的样品操纵，因而避免了许多有助于体外补体活化的刺激，从而避免了假阳性测试结果。
“床边”，如本文所用，指代可以在床边、医生办公室、健保或治疗机构或可以从待测试个体获得样品的任何地点使用或实施的装置或方法。床边测试通常不需要将样品寄送到实验室进行处理，也不需要熟练的实验室技术员的专业知识。本文所述的床边方法和测试允许临床医生在患者床边或评价或治疗现场接收到关键信息，其可以更高效并有效地指导患者护理。
“读出器”指代适于检测所述标记产生的信号的仪器。本领域已知用于在诊断测试中检测标记信号的各种仪器。在本发明的一个实施方案中，所述标记是胶体金，而所述读出器是适于定性和/或定量检测所述标记产生的颜色信号的仪器。合适的读出器可从多家供应商商购获得，包括：BioAssay Works(Ijamsville, Md.)、来自Qiagen的ESE-Quant(Hilden, Germany)、Easterline LRE (Nordlingen, Germany)和Detekt Biomedical(Austin, Tex.)。在一些特定的实施方案中，所述读出器是手持式读出器，其对正接受评价的补体蛋白的量或浓度进行定量。
如本文所用，样品的“系列”采集指代在一定时间内（例如，数分钟、数小时、数天、数周、数月，等）从个体采集单独的样品（例如，CSF样品）。
如本文所用，“有效量”指代本发明的组合物或制剂的量，其足以产生所需效果（可以是治疗效果）。有效量将随所述个体的年龄、一般状况、正接受治疗的状况的严重程度、所施用的具体试剂、治疗的持续时间、任何同步治疗的性质、所用的药学上可接受的载体等本领域技术人员的知识和专业技能内的因素而变化。任何个案的“有效量”可以由本领域普通技术人员参考相关文档和文献和/或通过使用常规实验手段而酌情确定。(参见，例如，Remington, The Science And Practice of Pharmacy (第20版，2000))。
本发明的组合物还可以包含其它药剂、药物试剂、载体、稀释剂、免疫刺激细胞因子等。对于本领域技术人员而言，制备此类剂型的实际方法是已知的或将是显而易见的。剂量方案可以是认为有必要的每小时、每天、每周、每月、每年等一个或多个剂量，以达到通过向个体施用本发明的组合物所达到的所需预防和/或治疗效果。可以根据本领域熟知的方法确定具体剂量的功效。
作为另外一种选择，本发明的药物制剂可适于向个体的粘膜施用（例如，经由鼻内施用、颊面施用和/或吸入）。所述制剂可以单位剂型方便地制备，并且可通过本领域熟知的任何方法制备。
可以根据用于确定本发明的疾病或感染的治疗结果的熟知的方案来确定本发明的治疗方法的功效。正如本领域所熟知的，治疗功效的决定因素包括但不限于：总存活率、无病存活率、症状的改善、进展时间和/或生活质量等。
正如本领域所熟知的，“治疗”（“treat”或“treating”或“treatment”）指代为患有障碍、疾病或病症的个体赋予调节作用（其例如可以是有益效果）的任何类型的行为，包括：改善所述个体的状况（例如，在一种或多种症状上）、推迟或减少所述状况的进展、推迟所述障碍、疾病或病症的发作、和/或改变障碍、疾病或病症的任何临床参数，等。
应当理解，上述详细说明仅以示例方式给出，并且可对其做出修改和变型而不脱离本发明的精神和范围。
实施例
实施例1.C3和B因子(FB)作为细菌性脑膜炎生物标志物
细菌性脑膜炎的特征在于高死亡率和高比率的持续性神经损伤。快速病理学诊断对于细菌性脑膜炎患者的充分临床管理至关重要。遗憾的是，非特异性临床症状和早期实验室发现往往无法明确区分细菌性和无菌性脑膜炎。因此，鉴别出单个区别参数将在急性脑膜炎的鉴别诊断中具有很高价值。
本发明提供了基于特定补体蛋白的脑脊液（CSF）水平相比正常CSF水平的变化而诊断细菌性和无菌性脑膜炎的方法，所述特定补体蛋白包括但不限于C3、b因子(FB)、MAC、C5b、C6、C7、C8和C9。本发明是基于这样的发现：许多补体蛋白的CSF水平（其通常很低（纳克至微克范围））在细菌性脑膜炎中升高一至两个数量级或以上，但在无菌性或病毒诱导的脑膜炎中则不然。这种升高允许使用各种定量或半定量测定平台（如酶联免疫测定法（ELISA）、多重或侧流测定法等）而容易地区分细菌性和无菌性脑膜炎。
目前尚不存在可用于快速并准确区分细菌性和无菌性脑膜炎的廉价的床边（POC）测定法。本发明包含的快速测定系统可用于临床环境，其中基于对细菌性脑膜炎的怀疑而抽取了CSF。以此类平台的形式，出于诊断目的，在美国，所述测定法将被使用1-2百万次/年，并在欧洲和亚洲具有类似规模的市场。
在得自患有经确认的细菌性或病毒性脑膜炎的患者的残留CSF样品上进行了针对C3和FB的ELISA。据发现，相比病毒性脑膜炎和对照，两种蛋白在细菌性脑膜炎中均显著升高(图2和表2)。
细菌性脑膜炎患者的CSF水平相比无菌性脑膜炎高出21倍，而相比对照高出将近19倍。细菌性脑膜炎中因子B的CSF水平甚至更高：是无菌性脑膜炎的63倍，并且是对照的53倍。比较细菌性脑膜炎中成对的C3和FB CSF水平的线性回归分析证实了这两种蛋白之间具有显著的相关性（r2=0.33, p=0.008），有力地表明，共同的炎症机制导致它们的升高。另外，两种蛋白均以极高的灵敏度和特异性区分细菌性和病毒性脑膜炎(表2)。
现有的区分细菌性和无菌性脑膜炎的方法耗时且昂贵。目前仅有的用于诊断细菌性脑膜炎的测试（革兰氏染色、生物化学和细菌培养）需要数小时至数天来完成并且具有显著的假阳性率。现有的用于诊断细菌性脑膜炎的全套实验室测试项目花费至少$1000。在本发明的一个实施方案中，POC侧流测定法将需要大约10-15分钟并花费例如$100左右。这节省了大量时间和成本。此类POC测定法可以例如被用在全世界的急诊室和独立诊所或健保机构中。
实施例2.C9作为细菌性脑膜炎生物标志物
作为病原体清除的单独但不可或缺的一部分，末端补体途径包含许多不同的蛋白质。其中之一，C9，对于膜攻击复合物（MAC）的形成至关重要，MAC是大型成孔复合物，其能够裂解包括许多细菌和包膜病毒在内的宿主病原体。MAC由以下五种补体蛋白构成：C5b、C6、C7、C8和多个C9分子（范围在12-18个/MAC）。MAC中的C9分子形成实际的孔结构，所述孔结构插入到细菌膜中导致其渗透裂解。
作为细菌性脑膜炎的生物标志物，C9不同于C3和FB，因为其功能不相关并且独立于这两种蛋白。
C9是急性时相蛋白，即，其产量响应于创伤或感染造成的炎症而升高。已经证明，在不存在感染时，C9以低水平被转运穿过血脑屏障。在细菌性脑膜炎期间，由于细胞因子介导的炎症削弱了血脑屏障，所以此过程很可能显著增加。响应于炎症和感染，中枢神经系统中若干种细胞类型的C9产量增加。
与C3和B因子不同，许多病毒感染导致C9产量的下调，这是一些病毒用来限制补体介导的宿主防御功能的策略。这提高了C9作为细菌性脑膜炎的生物标志物的相关性，因为在病毒感染中C9水平不太可能升高，这将提高本发明的测定法的特异性和灵敏度。
C9免疫生物学的这些独特的特征，当与C3和因子B区分细菌性与无菌性脑膜炎的能力搭配时，提供了具有加成和/或协同灵敏度的诊断测定法。
因此，在本发明的一些实施方案中，可以根据本文所述的方法和测定法从个体（例如，有需要的个体）获得并测试CSF样品以确定C9的量。
实施例3.MAC作为细菌性脑膜炎生物标志物
作为病原体清除的单独但不可或缺的一部分，末端补体途径包含许多不同的蛋白质。其中之一，MAC，是大型成孔复合物，其能够裂解包括许多细菌和包膜病毒在内的宿主病原体。MAC由以下五种补体蛋白构成：C5b、C6、C7、C8和多个C9分子（范围在12-18个/MAC）。MAC中的C9分子形成实际的孔结构，所述孔结构插入到细菌膜中导致其渗透裂解。
作为细菌性脑膜炎的生物标志物，MAC不同于C3和FB，因为其功能不相关并且独立于这两种蛋白。
MAC的组分是急性时相蛋白，即，其产量响应于创伤或感染造成的炎症而升高。响应于炎症和感染，中枢神经系统中若干种细胞类型以及其它细胞类型的MAC亚组分的产量增加。
仅凭MAC免疫生物学的这些独特的特征即允许其在诊断测定法中区分细菌性与无菌性脑膜炎。另外，当与其它补体成分（如C3）区分细菌性与无菌性脑膜炎的能力搭配时，提供了具有加成和/或协同灵敏度的诊断测定法。
因此，在本发明的一些实施方案中，可以根据本文所述的方法和测定法从个体（例如，有需要的个体）获得并测试CSF样品以确定MAC（例如，C5、C6、C6、C8和/或C9）的量。
实施例4.
在示例性实施方案中，本发明提供了在具有留置分流器或脑室外装置（EVD）的个体中诊断细菌感染的方法，所述方法基于特定补体蛋白（包括但不限于C3、C5b-9 (MAC)和B因子）的脑脊液（CSF）水平相比对照CSF水平的变化。此实施方案是基于这样的观察结果：许多补体蛋白的CSF水平（其通常很低（纳克至低微克范围））在经确认的细菌感染的CSF中可以升高若干个数量级。这种急剧升高允许使用各种定量或半定量测定平台（如ELISA、多重或侧流测定法）而快速确定分流器/EVD感染/脑膜炎。目前尚不存在可用于快速并准确诊断分流器/EVD感染的廉价的床边（POC）测定法。
当将本发明应用到快速测定系统中时，所述测定法可被用于任何临床环境，其中基于对分流器/EVD感染的怀疑而抽取了CSF。以此类平台的形式，出于诊断目的，在美国，所述测定法将被使用约1百万次/年，并在欧洲和亚洲具有类似规模的市场。
基于对细菌感染的怀疑，我们在得自具有分流器或EVD的儿科神经手术个体的CSF样品上进行了针对MAC的ELISA。我们发现，在具有经确认的细菌感染的个体中，相比没有感染的那些（对照个体），其MAC水平显著上调(图3和5、表3)。从具有分流器/EVD感染的患者（n=3）中第一次抽取的CSF中的平均MAC CSF水平相比没有感染的那些（n=24）高出100倍。这些数据表明，MAC以及可能的其它补体蛋白或活化片段具有显著潜力成为分流器/EVD感染的诊断标志物。
目前，对分流器/EVD感染的诊断耗时且昂贵。目前仅有的用于诊断细菌性脑膜炎的测试（革兰氏染色、生物化学和细菌培养）需要数小时至数天来完成并且具有显著的假阳性率。现有的用于确定CSF是否感染的全套实验室测试项目花费至少$1,000。在本发明的一些实施方案中，采用POC侧流测定法将是快速（例如，可以在大约10-15分钟内得到测试结果）并且低成本的（例如，$100左右）。这为患者节省了大量的时间和成本。另外，POC生物标志物测定法将允许更好的患者管理。
本发明一旦被应用到POC快速测定法中将具有巨大的市场潜力。其可以被用在全世界的手术室和诊所中。
实施例5.
为了确定来自具有经确认的分流器感染的患者的CSF的重复监测的值，我们测定了在初次穿刺后的多个时间点（最长达十五天）的MAC的CSF水平。初次穿刺时的MAC CSF水平相比在未感染的患者中观察到的正常水平大400倍(图4)。开始了静脉内抗生素疗法并对该患者进行重复穿刺以跟踪所述抗生素治疗的有效性。随着该患者好转以及感染被清除，MAC的CSF水平随时间下降。这些数据表明，跟踪MAC以及可能的其它补体活化成分的CSF水平，可在临床上用于监测抗生素及其它治疗模式在分流器感染中的有效性。
实施例6.MAC和C3作为分流器失效的指标
在示例性实施方案中，本发明提供了在具有留置分流器或脑室外装置（EVD）的个体中区分分流器失效（症状性脑室扩大，SVE）与细菌感染和/或无症状脑室扩大（AVE）的方法，所述方法基于特定补体蛋白（包括但不限于C3、C5b-9 (MAC)和B因子）的脑脊液（CSF）水平相比对照CSF水平的变化。此实施方案是基于这样的观察结果：许多补体蛋白的CSF水平（其通常很低（纳克至低微克范围））在SVE患者中相比AVE患者可以升高8-10倍，但相比在经确认的细菌感染的CSF中可以低若干个数量级。补体水平的这种不同范围允许使用各种定量或半定量测定平台（如ELISA、多重或侧流测定法）而快速确定分流器/EVD失效与感染/脑膜炎。目前尚不存在可用于快速并准确诊断分流器失效的廉价的床边（POC）测定法。
当将本发明应用到快速测定系统中时，所述测定法可被用于任何临床环境，其中基于对分流器失效的怀疑而抽取了CSF。以此类平台的形式，出于诊断目的，在美国，所述测定法将被使用约1百万次/年，并在欧洲和亚洲具有类似规模的市场。
基于对分流器失效或细菌感染的怀疑，我们在得自具有分流器或EVD的儿科神经手术个体的CSF样品上进行了针对MAC的ELISA。我们发现，在具有经确认的分流器失效的个体中，相比具有细菌感染的那些，其MAC水平明显更低(图6)。具有分流器失效的患者（n=35）的CSF中的平均MAC CSF水平相比具有AVE的那些高出8-10倍，但相比具有细菌感染的患者（n=6）低30-40倍。这些数据表明，MAC具有巨大潜力成为分流器失效的诊断标志物。类似地，基于对分流器失效或细菌感染的怀疑，我们在得自具有分流器或EVD的儿科神经手术个体的CSF样品上进行了针对C3的ELISA。我们发现，在具有经确认的分流器失效的个体中，相比具有细菌感染的那些，其C3水平明显更低(图7)。具有分流器失效的患者（n=13）的CSF中的平均C3 CSF水平相比具有AVE的那些高出2倍，但相比具有细菌感染的患者（n=3）低3倍。这些数据表明，C3具有巨大潜力成为分流器失效的诊断标志物。
目前，对分流器失效的诊断耗时且昂贵。采用革兰氏染色、生物化学和细菌培养以确定患者是具有轻度感染还是分流器失效需要数小时至数天来完成并且具有显著的假阳性率。现有的用于确定CSF是否感染的全套实验室测试项目花费至少$1,000。疑似具有分流器失效的患者还接受昂贵的成像研究以确定是否存在脑室扩大的特征或分流器失效。在本发明的一些实施方案中，采用POC侧流测定法将是快速（例如，可以在大约10-15分钟内得到测试结果）并且低成本的（例如，$100左右）。这为患者节省了大量的时间和成本。另外，POC生物标志物测定法将允许更好的患者管理。
本发明一旦被应用到POC快速测定法中将具有巨大的市场潜力。其可以被用在全世界的手术室和诊所中。
本文所引用的所有参考文献，包括非专利出版物、专利申请、GenBank®数据库登录号和专利，正如每者被单独且特别指明通过引用并入并以其全文重现于本文中的相同程度，均全文以引用方式并入本文中。
虽然已经示出并描述了本发明的具体实施方案，但本领域技术人员将理解，可以做出各种其它变化和修改而不脱离本发明的精神和范围。因此，其旨在于所附权利要求书中涵盖落在本发明范围内的所有此类变化和修改。
表1：针对C3的抗体
菌种 抗原 供应商
小鼠 C3a Hycult (HM2075)
小鼠 C3a Quidel (A203)
鸡 C3a GenTex (GTX78198)
小鼠 C3a Quidel (A203)
山羊 C3a SantaCruz (sc17237)
小鼠 C3a Hycult (HM2073)
小鼠 C3a Hycult (HM2074)
鸡 C3a Abcam (ab48580)
小鼠 C3a Hycult (HM2073)
小鼠 C3a Quidel (A203)
鸡 C3a Abcam (ab48580)
小鼠 C3a Hycult (HM2073)
山羊 C3a SantaCruz (sc17237)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
鸡 C3a Abcam (ab48580)
鸡 C3a Abcam (ab48580)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
小鼠 C3a Quidel (A2103)
鸡 C3a GenTex (GTX78198)
山羊 C3a SantaCruz (sc17237)
鸡 C3a Abcam (ab48580)
小鼠 C3a Hycult (HM2073)
小鼠 C3a Hycult (HM2074)
小鼠 iC3b Quidel (A209)
小鼠 iC3b AbD serotec (MCA2607)
小鼠 iC3b AbD serotec (MCA2607)
小鼠 iC3b Quidel (A209)
小鼠 iC3b Quidel (A209)
小鼠 iC3b Quidel (A209)
小鼠 iC3b Quidel (A209)
大鼠 iC3b Hycult (HM2199)
大鼠 iC3b Hycult (HM2199)
大鼠 iC3b Hycult (HM2199)
大鼠 iC3b Hycult (HM2199)
大鼠 iC3b Hycult (HM2199)
小鼠 有活性的C3 Hycult (HM2168)
小鼠 有活性的C3 Hycult (HM2168)
小鼠 有活性的C3 Hycult (HM2257)
小鼠 有活性的C3 Hycult (HM2257)
小鼠 C3 α Meridian (H54189M)
小鼠 新C3d Quidel (A250)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
兔 C3d Abcam (ab15981)
兔 C3d Abcam (ab15981)
大鼠 C3d Hycult (HM2198)
大鼠 C3g Hycult (HM2199)
小鼠 新C3d Quidel (A250)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
小鼠 有活性的C3 Hycult (HM2168)
小鼠 有活性的C3 Hycult (HM2257)
小鼠 iC3b Quidel (A209)
小鼠 新C3d Quidel (A250)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
大鼠 C3g Hycult (HM 2199)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
大鼠 C3g Hycult (HM 2199)
山羊 C3 MP Biomedicals (55237)
大鼠 C3g Hycult (HM 2199)
表2：细菌性与无菌性脑膜炎中C3和B因子的统计参数
BM，细菌性脑膜炎，AM，无菌性脑膜炎。
表3：分流器/EVD感染中MAC的统计参数
分流器感染 对照
n 3 24
平均值 ± SEM (ng/ml) 1581 ± 1218 15.6 ± 5
范围 270-4014 0-97

Claims (67)

1.在有需要的个体中鉴别脑膜炎是细菌性脑膜炎还是无菌性脑膜炎的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B(FB)、补体膜攻击复合物(MAC)、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且
b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，
其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体中的脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎。
2.在有需要的个体中鉴别脑膜炎是细菌性脑膜炎还是无菌性脑膜炎的方法，包括：a)在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体膜攻击复合物(MAC)、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体中的脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎。
3.在有需要的个体中诊断细菌性脑膜炎的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且
b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，
其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为患有细菌性脑膜炎。
4.在有需要的个体中诊断细菌性脑膜炎的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体诊断为患有细菌性脑膜炎。
5.在有需要的个体中诊断与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且
b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，
其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染。
6.在有需要的个体中诊断与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的方法，包括：a)在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体诊断为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染。
7.将个体鉴别为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；并且
b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，
其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体诊断为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险。
8.将个体鉴别为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险的方法，包括：a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体诊断为具有增加的发生与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的风险。
9.在有需要的个体中指导针对细菌性脑膜炎的治疗的方法，包括：
a) 在于施用所述针对细菌性脑膜炎的治疗之前得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
b) 向所述个体施用所述治疗；
c) 在于(b)之后的一个或多个时间点得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
d) 使用(c)的测量结果指导所述个体的所述针对细菌性脑膜炎的治疗，即：在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量增加或无变化导致随后增强所述治疗，而在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量减少导致不改变所述治疗或随后减弱所述治疗。
10.在有需要的个体中指导针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的治疗的方法，包括：
a) 在于施用所述针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染的治疗之前得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
b) 向所述个体施用所述治疗；
c) 在于(b)之后的一个或多个时间点得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
d) 使用(c)的测量结果指导所述个体的所述针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染的治疗，即：在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量增加或无变化导致随后增强所述治疗，而在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量减少导致不改变所述治疗或随后减弱所述治疗。
11.在有需要的个体中指导针对自身免疫性疾病、创伤性脑损伤和/或脑卒中的治疗的方法，包括：
a) 在于施用所述治疗之前得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
b) 向所述个体施用所述治疗；
c) 在于(b)之后的一个或多个时间点得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
d) 使用(c)的测量结果指导所述个体的所述针对自身免疫性疾病、创伤性脑损伤和/或脑卒中的治疗，即：在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量增加或无变化导致随后增强所述治疗，而在(c)中测得的量相对于在(a)中测得的量减少导致不改变所述治疗或随后减弱所述治疗。
12.治疗具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的个体的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，
其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述个体鉴别为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染；并且
c) 在(b)中所鉴别出的个体中治疗与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染。
13.治疗具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的个体的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将所述个体鉴别为具有与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染；并且
b) 在(a)中所鉴别出的个体中治疗与留置分流器和/或脑室外装置相关的所述感染。
14.治疗具有运作不当的留置分流器和/或脑室外装置的个体的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，
其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将鉴别为运作不当的留置分流器和/或脑室外装置；并且
c) 治疗在(b)中所鉴别出的个体以矫正所述运作不当的留置分流器和/或脑室外装置。
15.治疗具有运作不当的留置分流器和/或脑室外装置的个体的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量，其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的阈限量将鉴别为运作不当的留置分流器和/或脑室外装置；并且
b) 治疗在(a)中所鉴别出的个体以矫正所述运作不当的留置分流器和/或脑室外装置。
16.为患有细菌性脑膜炎的个体确定治疗方案的方法，包括：
a) 在得自所述个体的脑脊液（CSF）样品中测量补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量；
b) 将在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量与在对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量进行比较，
其中在(a)中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量大于在所述对照样品中测得的补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将所述脑膜炎鉴别为细菌性脑膜炎，确定住院和抗生素疗法的治疗方案，而其中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量小于或等于所述对照样品中补体C3、补体因子B、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体C9的量将鉴别为无菌性脑膜炎，确定不住院和无抗生素疗法的治疗方案；并且
c) 实施所确定的治疗方案。
17.监测个体的方法，所述个体正在接受针对细菌性脑膜炎的治疗，所述方法包括：
a) 于启动治疗前和治疗期间从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；
b) 测量所述样品的每一者中补体C9、补体C3、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体因子B的水平；
c) 比较所述系列样品中补体C9、补体C3、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体因子B的所述水平以检测补体C9、补体C3、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体因子B水平随时间的变化；并且 (d) 根据所述比较步骤的结果，调整对所述个体的治疗。
18.监测个体的方法，所述个体正在接受针对与留置分流器和/或脑室外装置相关的感染的治疗，所述方法包括：
a) 于启动治疗前和治疗期间从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；
b) 测量所述样品的每一者中补体C9、补体C3、补体MAC、补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8和/或补体因子B的水平；
c) 比较所述系列样品中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的所述水平以检测补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B水平随时间的变化；并且 (d) 根据所述比较步骤的结果，调整对所述个体的治疗。
19.监测个体状态的方法，所述个体具有留置分流器和/或脑室外装置，所述方法包括：
a) 从所述个体获得一系列脑脊液（CSF）的样品；
b) 测量所述样品的每一者中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的水平；
c) 比较所述系列样品中补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B的所述水平以检测补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体MAC和/或补体因子B水平随时间的变化；并且
(d) 根据所述比较步骤的结果，启动对所述个体的治疗。
20.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体MAC的量。
21.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体C8的量。
22.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体C7的量。
23.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体C6的量。
24.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体C5b的量。
25.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体C9的量。
26.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体C3的量。
27.权利要求1-19中任一项的方法，其中仅测量所述CSF样品中补体因子B的量。
28.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体MAC的量和补体C5b的量。
29.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体MAC的量和补体C6的量。
30.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体MAC的量和补体C7的量。
31.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体MAC的量和补体C8的量。
32.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体MAC的量和补体C9的量。
33.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体MAC的量和补体C3的量。
34.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体MAC的量和补体因子B的量。
35.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C9的量和补体C3的量。
36.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体C9的量和补体因子B的量。
37.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C9的量和补体C5b的量。
38.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C9的量和补体C6的量。
39.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C9的量和补体C7的量。
40.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C9的量和补体C8的量。
41.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C8的量和补体C3的量。
42.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体C8的量和补体因子B的量。
43.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C8的量和补体C5b的量。
44.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C8的量和补体C6的量。
45.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C8的量和补体C7的量。
46.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C7的量和补体C3的量。
47.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体C7的量和补体因子B的量。
48.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C7的量和补体C5b的量。
49.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C7的量和补体C6的量。
50.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C6的量和补体C3的量。
51.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体C6的量和补体因子B的量。
52.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C6的量和补体C5b的量。
53.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF样品中补体C5b的量和补体C3的量。
54.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体C5b的量和补体因子B的量。
55.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体MAC的量和补体因子B的量以及补体C3的量。
56.权利要求1-19中任一项的方法，其中测量所述CSF中补体C9的量和补体因子B的量以及补体C3的量。
57.前述权利要求中任一项的方法，其中所述测量采用床边（POC）快速测定系统进行。
58.前述权利要求中任一项的方法，其中所述测量采用侧流系统进行。
59.前述权利要求中任一项的方法，其中所述测量采用免疫测定法进行。
60.前述权利要求中任一项的方法，其中所述测量采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行。
61.干试纸条，其能够通过所述试纸条内的毛细作用芯吸施加其上的液体，所述试纸条以上游（于第一端）至下游（于第二端）方向并且依以下次序包括：
1) 样品施加区，
2) 反应区，和
3) 检测区，
其中所述反应区包含非固定的经标记的第一抗体，所述第一抗体特异于补体MAC蛋白的表位，有效地与之形成可移动的补体MAC/抗体复合物，所述补体MAC蛋白可以包含补体C5b、C6、C7、C8和/或C9，并且所述检测区包含固定的第二抗体，所述第二抗体特异于所述复合物中的补体MAC的表位，其中所述第一和第二抗体特异于同一补体MAC蛋白上的不同表位，并且其中，在将体液样品施加到位于所述第一端的所述样品施加区之后：
(i) 样品在所述试纸条上向着所述反应区朝下游方向迁移，
(ii) 所述样品中的补体MAC蛋白与此前存在于所述反应区中的所述第一抗体反应以形成可移动的经标记的补体MAC/抗体复合物，
(iii) 所述可移动的经标记的补体MAC/抗体复合物朝位于所述第二端的所述检测区迁移，并且
(iv) 所述可移动的经标记的补体MAC/抗体复合物结合此前存在于所述检测区中的所述固定的第二抗体，从而将所述复合物固定在所述检测区中。
62.用于检测标志物的侧流免疫测定装置，包括：膜试纸条；检测抗体，其结合所述标志物的第一表位；测试线，其包含捕获抗体，所述捕获抗体结合所述标志物的第二表位；和对照线，其包含结合对照被分析物的抗体，其中所述标志物选自：补体蛋白C3、补体蛋白因子B、补体MAC蛋白、补体蛋白C5b、补体蛋白C6、补体蛋白C7、补体蛋白C8、补体蛋白C9及其任意组合。
63.权利要求62的侧流免疫测定装置，其中所述检测抗体包含提供信号的标记。
64.侧流免疫测定装置，包括：
膜试纸条；第一检测抗体，其结合第一蛋白的第一表位，所述第一蛋白选自补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC；
第一测试线，其包含第一捕获抗体，所述第一捕获抗体结合所述第一蛋白的第二表位；第二检测抗体，其结合第二蛋白的第一表位，所述第二蛋白选自补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC，其中所述第二蛋白不同于所述第一蛋白；
第二测试线，其包含第二捕获抗体，所述第二捕获抗体结合所述第二蛋白的第二表位；和
至少一个对照线，其包含结合对照被分析物的抗体。
65.权利要求64的侧流免疫测定装置，还包括：第三检测抗体，其结合第三蛋白的第一表位，所述第三蛋白选自补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC，其中所述第三蛋白不同于所述第一蛋白和所述第二蛋白；和第三测试线，其包含第三捕获抗体，所述第三捕获抗体结合所述第三蛋白的第二表位。
66.权利要求65的侧流免疫测定装置，还包括：第四检测抗体，其结合第四蛋白的第一表位，所述第四蛋白选自补体C5b、补体C6、补体C7、补体C8、补体C9、补体C3、补体蛋白因子B和补体MAC，其中所述第四蛋白不同于所述第一蛋白和所述第二蛋白以及所述第三蛋白；和第四测试线，其包含第四捕获抗体，所述第四捕获抗体结合所述第四蛋白的第二表位。
67.权利要求62-66中任一项的侧流免疫测定装置，其中所述检测抗体各自包含提供不同信号的标记，所述不同信号将所述检测抗体各自相互区别开来。
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