[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CN103261893A - 用于诊断组织损害的新抗体 - Google Patents

用于诊断组织损害的新抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN103261893A
CN103261893A CN2011800609531A CN201180060953A CN103261893A CN 103261893 A CN103261893 A CN 103261893A CN 2011800609531 A CN2011800609531 A CN 2011800609531A CN 201180060953 A CN201180060953 A CN 201180060953A CN 103261893 A CN103261893 A CN 103261893A
Authority
CN
China
Prior art keywords
new
new anti
cross reaction
tissue
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2011800609531A
Other languages
English (en)
Inventor
R·班赛尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novelmed Therapeutics Inc
Original Assignee
Novelmed Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novelmed Therapeutics Inc filed Critical Novelmed Therapeutics Inc
Publication of CN103261893A publication Critical patent/CN103261893A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6878—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids in eptitope analysis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1018—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4716—Complement proteins, e.g. anaphylatoxin, C3a, C5a
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/16—Ophthalmology

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

一种用于诊断受试者体内组织损害的发展的方法，包括给所述受试者组织施用新抗体样品，以达到检测是否存在承载新抗原表位的补体蛋白的目的。

Description

用于诊断组织损害的新抗体
相关申请
本申请要求于2010年11月29日提交的美国临时申请号61/417,682的优先权，其通过引用的方式整体并入本文。
技术领域
本发明涉及在受试者中在诊断或鉴定组织损害的组合物和方法，更具体地，本发明涉及在受试者中在诊断或鉴定补体介导的组织损害的组合物和方法。
背景技术
当补体激活完成终端途径以产生膜攻击复合体(MAC，C5b-9)时，会发生补体介导的组织损害。已知这些复合体导致组织损害。在一些疾病的指征，包括黄斑变性、类风湿性关节炎、心肌梗塞、和器官的再灌注损害中，补体起着重要的病理作用。使用非侵入性技术难以确定部位、强度和组织损伤的程度。在人类受试者中，一般是很难使用其他的非侵入性技术，以确定内部组织损伤，包括眼睛的损害。然而，可以应用诊断程序，如在本申请中提出的那些，以显示该信息。
发明概述
本申请涉及新抗体(neoantibody)或其片段，以及新抗体或其片段用于在受试者中以非侵入性或最小侵入方式诊断或鉴别组织损害。在某些实施方案中，所述新抗体或其片段可以用来鉴别和/或诊断疾病，如黄斑变性，中老年人中常见的眼科疾病。预期由新抗体或其片段明确确定该补体介导的病理学部位。通过沉积的C5b-9和作为补体激活的结果而在蛋白质上形成的其他新抗原表位(neoepitope)来测定病理学部位。
在一些实施方案中，所述疾病可以是年龄相关的黄斑变性(AMD)，并且玻璃膜疣可以是眼部组织中的病理位点。玻璃膜疣为黄色或白色的细胞外沉积，位于RPE和Bruch膜之间的黄斑区内，围绕视盘或外围。有两类玻璃膜疣；那些病理的和其他无病理的。本发明描述的新抗体或其片段通过检测与病理玻璃膜疣相关的补体蛋白质活化产物，能检测病理玻璃膜疣的存在。
根据本申请的新抗体或其片段能靶向独特的抗原表位，称为“新抗原表位(neoepitope)”，其在补体活化过程中形成，并且在补体活化之前不存在于补体蛋白质上。新抗原表位可以包括独特的抗原表位(其在补体片段上形成，作为补体蛋白质的裂解结果，并且其在母体补体(parentcomplement)蛋白质上不存在)、以及独特的抗原表位(其在补体活化产物中形成，作为补体蛋白质或片段在补体活化中复合或聚集的结果，并且在补体活化之前不存在于补体蛋白质上)。
例如，在补体激活中，C3被转换成C3a和C3b。可以通过抗-C3抗体检测到C3a和C3b，检测C3a和C3b的共同抗原表位。C3a和C3b还包括新抗原表位，其作为C3裂解的结果出现并且不存在于母体C3分子中。补体活化产物的新抗原表位的检测可以用于在受试者中补体-介导的组织损伤的检测。相似地，C5a和C5b含有作为C5裂解结果形成的新抗原表位。靶向针对C5a和C5b的新抗体及其片段不与C5蛋白质交叉反应，即使两者都来自C5。B因子通过D因子裂解成Ba和Bb，在本发明中，可以使用Ba和Bb的新抗体。虽然结合Ba和Bb的抗体还将结合B因子，新抗-Ba和新抗-Bb将不会结合B因子。针对Ba和Bb的新抗体或其片段可以用于补体介导组织损伤的检测。尽管结合Ba和Bb的抗体会与因子B结合，但是新抗-Ba(neo anti-Ba)和新抗-Bb(neo anti-Bb)不会结合因子B。
同样地，对C5b-9具有特异性的新抗体或其片段也是这样，被称为MAC复合体。MAC复合体由蛋白C5、C6、C7、C8和C9组成。C6，C7和C8的抗体将检测C5b-9的存在。在血液中或MAC复合体中发现的它们各自的游离蛋白质之间，这种抗体不会区分。能特异性地检测MAC复合体C5b-9的新抗体或其片段可以包括抗-聚合体C9或抗-C5b-9。非新抗体(Non-neoantibody)也会识别和检测这些蛋白质。然而，只有新抗-聚合体C9和新抗-C5b-9能在受试者中，在MAC复合体C5b-9和它的组成补体蛋白质之间区别。这些新抗体或其片段将无法识别组成MAC的组成蛋白质的可溶性形式。
可以使用各种抗-补体抗体来分析采自患者的血液样品是否存在补体蛋白。然而，不论组织是否损伤，可溶性补体蛋白基本上存在于血液中。补体激活后形成的新抗原表位非特异的抗体，将检测这些蛋白质和可溶性形式，并且检测病理将不可靠。在本发明中描述的新抗体或其片段能用来获得补体介导的组织损伤的特定属性。
在一些实施方案中，通过施用合适量的新抗体或其片段，本文中描述的新抗体或其片段可以用来检测病理学玻璃膜疣的存在。补体蛋白质包括被发现与玻璃膜疣相关的MAC(C5b-9)、布鲁赫膜(Bruch′s membrane)，RPE的基底面，在眼部组织中的下-RPE(sub-RPE)。因子C3、C5、C9、以及所述C5b-9终端复合体已经发现与玻璃膜疣相关。已经发现，其它补体-相关分子CR1、CR2、clustrin和玻连蛋白与玻璃膜疣相关。定位在布鲁赫膜和/或玻璃膜疣中的其它补体途径相关分子包括：C3d、C6、C7、C8、C9、因子D、因子H、因子L、因子B、丛生蛋白(clusterin)、和甘露糖结合蛋白(mannose binding protein)。而且，一些补体途径相关分子(例如CD21、CD35、CD55/衰变加速因子、和CD59/保护)存在于PRE的基底面中。
检测玻璃膜疣的新抗体或其片段能包括抗-新聚合体C9(anti-neopolymeric C9)抗体，其仅识别由在所述C5b-9复合体中聚合体C9形成的新抗原表位。在补体介导的病理学中，可发生组织损伤，作为C5b-9在组织上沉积的结果。这种沉积，以及组织损伤的程度，因此，可以使用抗聚合体C9来可视化。
可以用成像方法诊断眼相关性疾病，包括年龄相关性黄斑变性(AMD)，North Carolina黄斑营养不良，Sorsby′s眼底营养不良，ChemicalStargardt′s疾病，图形样营养不良，Best疾病，显性玻璃膜疣，malattialeventinese，视网膜脱离，脉络膜退化，视网膜退化，光感受器退化，RPE退化，黏多糖症，杆锥细胞营养不良，锥杆细胞营养不良，和视锥细胞退化。
替代的补体途径的异常激活已经涉及到急性和慢性性质的几个病理情况。在几个损害的迹象中已经发现了替代途径激活副产物的水平升高，如体外循环损害，心血管疾病，移植排斥反应，眼部疾病，溶血性疾病，呼吸系统疾病，神经系统疾病，外伤引起的损伤，全身炎症&骨相关疾病，肾脏疾病，器官的再灌注损伤，生殖和泌尿生殖系统疾病，皮肤疾病，胃肠道疾病，内分泌疾病，或其他疾病的适应症如下所示。通过这些损伤相关的产物，本文描述的新抗体或其片段能用在这些补体活化的检测中。
体外循环损害的例子包括：体外循环后炎症，手术后的肺功能不全，体外循环，血液透析，白细胞分离法，血浆除去法，血小板除去法，肝素诱导体外LDL沉淀(HELP)，灌注后综合征，体外膜肺氧合(ECMO)，全身性炎症反应，和多器官功能衰竭。
心血管疾病的例子包括：川崎氏症，过敏性紫癜性肾炎，血管渗漏综合征，经皮冠状动脉介入治疗(PCI)，缺血再灌注后急性心肌梗塞，心肌梗塞，动脉粥样硬化，血管炎，免疫复合体性血管炎，败血症，动脉炎，动脉瘤，心肌病，Takayasu′s动脉炎，扩张型心肌病，静脉气体栓塞(VGE)，韦格纳肉芽肿病，以及白塞氏综合征。
移植损害的例子包括：移植的排斥反应，移植物抗宿主病，器官或移植的异种器官移植，器官或移植物的同种异体移植，和超急性排斥反应。
眼部疾病的例子包括：年龄相关性黄斑变性(干性和湿性)，脉络膜的neurovascularization(CNV)，角膜新生血管，视网膜新生血管，视网膜损伤，糖尿病视网膜病变，糖尿病视网膜微血管病变，糖尿病性黄斑水肿，眼部组织胞浆菌病，葡萄膜炎，病理性近视，视网膜中央静脉阻塞(CRVO)，视网膜色素上皮细胞(RPE)，和Purtscher retinpathyretinopathy。
溶血性疾病的例子包括：灾难性抗磷脂综合征(CAPS)，冷凝集素疾病(CAD)，自身免疫性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，内毒素血症，非典型溶血尿毒综合征(aHUS)，阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)，败血症，感染性休克，镰状细胞性贫血，溶血性贫血，嗜酸性细胞增多综合征，抗磷脂综合征(APLS)。
呼吸系统疾病的例子：哮喘，嗜酸细胞性肺炎，过敏性肺炎，过敏性支气管炎bronchiecstasis，反应性气道疾病综合征，呼吸道合胞病毒(RSV)感染，副流感病毒感染，鼻病毒感染，腺病毒感染，过敏性支气管肺曲霉病(ABPA)，结核病，寄生虫肺部疾病，成人呼吸窘迫综合征，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，肺气肿，支气管炎，囊性纤维化，间质性肺疾病，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，输血相关的急性肺损伤，急性肺损伤，棉尘肺，和石棉诱发的炎症。
神经系统疾病的例子包括：重症肌无力，多发性硬化症，格林巴利综合征，中风，阿尔茨海默氏病，多灶性运动神经病(MMN)，亨廷顿氏病，肌萎缩性侧索硬化症(ALS)，帕金森氏病，退变性椎间盘疾病(DDD)，脑膜炎颅神经损伤，变异型克雅氏症(vCJD)，特发性多发性神经病，和神经病理性疼痛。
外伤引起的损伤的例子包括：失血性休克，低血容量性休克，脊髓损伤，神经损伤，脑外伤，脑缺血再灌注损伤，挤压伤，伤口愈合，严重烧伤和冻伤。
全身炎症&骨炎&骨相关病症的例子包括：系统性红斑狼疮(SLE)，类风湿性关节炎，全身性幼年型类风湿关节炎，骨关节炎，骨质疏松症，肉样瘤。
肾脏疾病的例子包括：肾缺血再灌注损伤，链球菌感染后肾炎(PSGN)，肺出血-肾炎疾病，膜性肾炎，伯杰氏病/IgA肾病，系膜增生性肾小球肾炎，膜性肾小球肾炎，膜增生性肾小球肾炎，和肾皮质坏死(RCN)。
器官的再灌注损伤的例子可包括，但不限于，心脏，脑，肾，和肝。
生殖和泌尿生殖系统疾病的例子包括：自然流产，母胎耐受，先兆子痫，感觉膀胱疾病，间质性膀胱炎。
皮肤疾病的例子包括：类天疱疮，获得性大疱性表皮松解，自身免疫性大疱性皮肤病，大疱性类天疱疮，硬皮病，血管神经性水肿，遗传性血管神经性水肿(HAE)，多形性红斑，疱疹妊娠期，干燥综合征，牛皮癣，皮肌炎，嗜酸(细胞)性海绵样水肿，特应性皮炎，和疱疹性皮炎。
胃肠道疾病的例子包括：克罗恩氏病，腹腔疾病/麸胶敏感性肠病，Whipple氏病，肠道缺血，炎症性肠道疾病，和溃疡性结肠炎。
内分泌疾病的例子包括：桥本氏甲状腺炎，少年淋巴细胞性甲状腺炎，I型糖尿病，应激焦虑，疾病影响催乳激素，生长因子，和促肾上腺皮质激素释放，胰腺炎，阿狄森氏病，和抗胰岛素性。
其它疾病的例子可以包括：肺出血-肾炎病，帕金森氏病，烧伤，阿尔茨海默氏病，荨麻疹，亨廷顿氏病，Berger疾病，心脏外科，低血容量性休克，克罗恩氏病，器官移植超急性排斥反应，热损伤，重症哮喘，肠道炎症，经皮冠状动脉介入治疗，肝素诱导的体外膜肺氧合，和过敏性休克。
本申请的其它实施方案涉及新抗体或其片段，其与注射到血流中的标记试剂缀合，使能够检测到感兴趣的病理组织。在一些实施方案中，新抗体也可以包括完整的IgG或其片段。新抗体或其片段能与标记、成像或对照试剂(如吲哚青绿染料，99mTc，immunoPET)缀合，并通过对这些标记、成像或对照试剂特异性的成像方法检测到。
本申请的其它实施方案又涉及在受试者中通过检测在组织中补体活化的片段，诊断黄斑变性相关疾病的方法。存在的任何大小的玻璃膜疣可用新抗体及其片段检测。这种抗体不可与衍生出所述新抗原表位的游离母体蛋白交叉反应。在一些实施方案中，这种新抗体特异性结合在眼部组织内的补体途径相关分子。在其它实施方案中，只检测到异常水平的新抗原表位。
本申请的其它实施方案涉及在受试者中诊断、或者鉴定发展为黄斑变性相关病症的易患病体质的方法。这些方法检测在眼部组织中含有补体蛋白质和/或片段的新抗原表位的存在。所述眼部组织可以来自患有黄斑变性的患者。所述黄斑变性相关新抗原(neoantigen)含有分子，选自：C3b，iC3b，C3dg，C3c，C5b，C5b-9，C3a和C5a。在一些实施方案中，组织样品来自患有疾病的受试者，可以用于诊断目。所述组织样品可以包括体液和眼睛的液体。
在其它实施方案中，所述检测步骤限定使用标记的新抗体或者其片段，以在患有黄斑眼睛疾病患者的眼部组织中检测新抗原表位。在这种方法中，在使用成像系统检测后，所述标记的新抗体片段结合黄斑变性相关分子。一些方法包括在所述受试者中检测至少一个黄斑变性相关的新抗原表位。一些方法进一步包括用眼科成像方法检验所述受试者。
本申请的其它实施方案又涉及在受试者中诊断或鉴定发展为黄斑变性相关疾病的易患病体质的试剂盒。所述标记的抗体将包括至少一个黄斑变性相关新抗原、成像试剂标记的新抗体、以及介质样品，从而建立所述新抗体与新抗原的结合。
附图概述
图1显示了新抗-iC3b的所述结合特性，其中，新抗-iC3b检测底物结合的iC3b，但不检测C3c、C3d。
图.2显示了新抗-C3d的所述结合特性，其中，在新抗-C3d结合C3d，但不结合C3c。
图3显示了抗-Bb和新抗-Bb关于因子B的所述结合特性。
图4显示了新抗-SC5b-9的所述结合特征，其中，新抗-SC5b-9仅结合到聚合体C9和SC5b-9。
图5显示了C5、C6、C7、C8、和C9与抗-C5、抗-C6、抗-C7、抗-C8和抗-C9的所述结合特性之间的所述关系。
图6显示了抗-C5的所述结合特征，其中，抗-C5与C5结合，但不与SC5b-9结合。
图7显示了抗-C6的所述结合特征，其中，抗-C6与C6和SC5b-9结合。
图8显示了抗-C7的所述结合特征，其中，抗-C7与C7和SC5b-9结合。
图9显示了抗-C8的所述结合特征，其中，抗-C8与C8和SC5b-9结合。
图10显示了抗-C9的所述结合特征，其中，抗-C9与C9结合，但不与SC5b-9结合。
图11显示了新抗-聚合体C9的所述结合特征，其中，新抗-聚合体C9与聚合体C9和SC5b-9结合。
图12显示了抗-聚体C9的所述结合特征，其中，底物结合的SC5b-9的抗-聚合体C9检测，在人类血清中不受蛋白抑制。
图13显示了新抗-聚合体C9、抗-C6、抗-C7、和抗-C8的所述结合特征，其中，这些抗体检测所述MAC复合体。
图14显示了新抗-聚合体C9的所述结合特征，其中，新抗-聚合体C9检测病理玻璃膜疣。
发明详述
如本文所述，所述术语“抗体”包括全长单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体和多克隆抗体。生物抗体通常是约150,000道尔顿，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重链(H)组成的杂四聚体糖蛋白。两条重链通过二硫键连接在一起，并且每一个重链与轻链由二硫键连接。每个全长IgG分子含有至少两个对目标或抗原特异性的结合位点。轻链为κ(kappa)或λ(lambda)。这两个轻链含有可变氨基酸序列的结构域，称为可变区(分别称为“VL”，“Vκ”或“Vλ-区域”)和氨基酸序列相对保守的结构域，称为恒定域(“CL区域”)。同样的，每一个重链含有可变区(VH-区域)和三个恒定结构域(″CH1-，″″CH2-，″和″CH3-区域″)和铰链区。
如本文所述，所述术语“抗体片段”、“抗原-结合片段”或抗体的“其片度”是指全长抗体的部分，一般被称为作为靶结合或可变区。例子包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段。“Fv”片段是含有完整的目标识别和结合位点的最小抗体片段。Fab、Fab′、F(ab′)2缺乏Fc区。片段可以由全长抗体通过蛋白酶消化制备。片段可由本领域的技术人员使用标准的重组DNA方法生产。
如本文所述，所述术语“抗原表位”是指蛋白质、多肽、补体因子、补体片段上的(与抗体和其片段结合的)位点，并且执行功能活性。所述术语抗原表位与“抗原位点”、“抗体结合位点”是相同的。
如本文所述，“Fab片段”是指轻链的恒定区和重链的第一恒定区。Fab′片段与Fab片段不同，区别为在重链CH1结构域的羧基端有额外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或更多个的半胱氨酸。F(ab′)片段通过在F(ab′)2胃液素消化产物的铰链半胱氨酸的二硫键断裂而产生。
如本文所述，所述术语抗体的“功能片段”是指具有与全长抗体性质上相同的生物活性的抗体片段。
如本文所述，所述术语“人类共同框架”指的是一个框架，它指示在人免疫球蛋白VL或VH框架序列选择中最常出现的氨基酸残基。一般来说，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择是来自可变结构域序列的子群。
如本文所述，“人源化抗体”是指主要是人序列组成的抗体，除了CDR1、CDR2和CDR3。所有框架区域也人源化。嵌合抗体包含鼠CDR、鼠框架区、和人恒定区。总的来说，嵌合抗体含有鼠可变区和人恒定区。
如本文所述，关于抗体链多肽序列，所述术语“相同的”或“基本相同的”可以被解释为相对于存在于抗原结合片段可变区中存在的多肽序列，该抗体链表现出至少65％，70％，80％，90％或95％的序列同一性。关于核苷酸序列，所述术语被解释为相对于核苷酸序列，该核苷酸序列表现至少约65％，75％，85％，90％，95％或97％的序列同一性。
如本文所述，所述术语“个体”或“受试者”是指脊椎动物，优选哺乳动物，更优选人。服从治疗的个人，包括那些目前无症状但是具有发展为有症状的紊乱的风险，其中补体替代途径起到了重要作用，或补体替代途径的激活起到了重要作用。
如本文所述，所述术语“哺乳动物”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人类、高等灵长类动物、驯养的和农场动物，马、猪、牛、狗、猫和雪貂等。在本发明的一个实施方案中，所述哺乳动物是人。
如本文所述，“单克隆抗体”是指抗体的同质群体。这样的抗体是高度特异性的，并且针对单个目标抗原。通过杂交瘤培养同质地产生这些单克隆抗体，不被其他的免疫球蛋白。单克隆抗体也可以由其他程序，例如已知方法的phase display来产生。
本文所述实施方案包括包含新抗体或其片段的组合物和方法，其结合蛋白质分子上的新表位。结合补体活化产物的新抗体或其片段包括那些与在补体活化产物内的新颖表位结合的抗体，其不结合存在于母体补体蛋白质或分子内的。例如，本文描述的新抗体或其片段能结合C3b而不结合C3，结合C3a而不结合C3，结合C3d而不结合C3，结合C3c而不结合C3，结合iC3b而结合C3，结合C5b但不结合C5，结合C5b-9不结合C5、C6、C7、C8、C9。
为了检测在眼内到正在进行的补体活化，需要目标高度特异性的单克隆抗体，其可以特异性地识别激活的、沉积的蛋白质(而没有结合游离蛋白质)。这种新的和特定的位点驱动的单克隆抗体是本文所描述的抗体的目标之一。这些抗体也被称为新抗体。这些单克隆抗体结合在蛋白质上、在活化发生后形成的新的抗原决定簇。单克隆抗体不识别C3但识别抗原，可以选自：抗-C3b、抗-iC3b、抗-C3c、和抗-C3d；并且单克隆抗体不识别C5、C6、C7、C8和C9，但却识别“聚合体C9”或其他C5b-9复合体的新抗原表位。
本文所述的新抗体或其片段能使用成像系统，检测到存在于眼部组织中的新抗原。用显像剂标签的新抗体可以注射和施用至眼，或者通过任意给药途径给药。新抗体然后结合新抗原表位(其在活化补体的组织内，在补体蛋白质上形成)。在眼部组织中，所述活化的补体蛋白(新抗原)是病理指标。因此在组织中的新表位的鉴定可以翻译成病理位点的鉴定。眼部组织可以使用先进的成像技术检验新抗体结合(例如，RPE，脉络膜)。
这是可能的，以区分作为经典的(CP)与替代(AP)的补体活化途径的结果形成的新抗原。如果经典补体途径被激活，那么可以识别对CP活化特异性形成的新抗原。如果替代途径被激活，则可以识别对AP激活特异性的新抗原。
可以产生许多不同的抗体，靶向巨大的蛋白质。通过新表位为基础的筛选选择新抗体或其片段。例如，抗-C3b、抗-iC3b、抗-C3c、和抗-C3d仅识别和检测新表位，而不检测母体分子C3。单克隆和多克隆抗体都可以在新表位为基础的筛选中使用。新抗原含有新颖的表位，其：a)不存在于母体分子中；并且b)只存在于新形成的子分子中。新抗原的例子包括C3b、iC3b、C3c、C3dg。虽然这些分子是来自于C3分子，但是它们带有新颖的表位，其对单独的蛋白片段具有特异性。
新抗体或其片段针对多种黄斑变性相关的新抗原，例如(a)C3a、C3b、iC3b、C3c、C3dg；(b)Ba、Bb；(c)C5b、C5a；(d)C5b-9；以及(e)C4b，能与它们的母体分子相区别。这些分子可以通过各自的对上述的每个分子具有特异性的新抗体或其片段检测到。本文描述的新抗体将不检测C3、因子B、C5、C6、C7、C8、和C9。
例如，C3a、C3b、iC3b、C3c、和C3dg是C3的裂解产物。因此，抗-C3单克隆抗体和多克隆抗体可以与C3a、C3b、iC3b、C3c、和C3dg交叉反应。本文描述的新抗体或其片段不与C3交叉反应，并且只分别结合C3a、C3b、iC3b、C3c、和C3dg。C3片段的形成暴露了在所述片段内的新基序，称为新表位。这种表位仅被新抗体检测到。
在C5b-9中，为由C5裂解产物和蛋白质(例如C6、C7、C8、和多个单体的C9)组成的复合体。因此，抗-C6、C7和C8将检测所述C5b-9复合体。这些抗体也检测游离蛋白质，并且因此不能将存在的游离蛋白质与所述C5b-9复合体的组成部分区分开。本文描述的新抗体或其片段仅包括新抗体或其片段，其识别在所述复合体内的新表位，即抗-C5b、抗-聚合的C9、和抗-C5b-9。
抗-C5b抗体即能识别游离C5，又识别C5b。本文描述的新抗体或其片段能识别C5b，但不识别C。抗-聚合体C9能识别C5b-9，并且不识别游离C9。抗-C5b-9能识别MAC，而不识别单个的组成蛋白质。
本申请的一些实施方案包括通过测定补体新抗原的存在，来诊断、或测定发展为黄斑变性相关病症的易患病体质的方法。可以用这些方法诊断的所述指征包括：年龄相关性黄斑变性(AMD)、北卡罗莱纳州黄斑营养不良、Sorsby的眼底营养不良、Stargardt病、图形样营养不良(patterndystrophy)，卵黄状黄斑变性(Best disease)，显性玻璃膜疣，和MalattiaLeventinese。可以用这些方法诊断的其他眼部病症包括：视网膜脱离、脉络膜视网膜变性、视网膜变性、光感受器变性、视网膜色素上皮变性、黏多糖症、杆锥细胞营养不良、视锥杆细胞营养不良、和视锥细胞变性。
本文描述所述的方法可以用于群体大规模筛选黄斑变性相关的疾病的存在。本文描述的方法可用于监测已经被诊断并正接受治疗的受试者的治疗响应。所述方法检测针对一些黄斑变性相关分子的新抗原的存在，并且可以与检测其它(与黄斑变性相关疾病或者玻璃膜疣相关疾病相关的)表型或基因型标记的方法联合进行。。
在其它实施方案中，本文所述的新抗体或其片段可以以标签、对照或显像剂被标记。使用化学实体标记蛋白质是众所周知的。这些标记的新抗体可用于体外、离体和体内试验。使用类似的化学产品、化学实体，可以特异地缀合至IgG，Fab，F(ab′)2，Fab′和单链新抗体的位点。使用的Fab′来生产生物缀合物是已知的。此生物缀合物可用于检测组织或体液是否存在新抗体目标。在这些生物缀合物施用于人体，并通过成像的方法可视化。新抗体或其片段也可以与化学实体是共轭的。化学实体包括放射性同位素或成像荧光团，其可以使用各种成像过程来检测。
在一些实例中，该标记可以包括锝-99m。锝-99m一般可作为高锝酸钠。高锝酸盐可以与还原剂，如氯化亚锡接触。在蛋白质，螯合剂，或类似的物质(其是放射性标记的)的存在下，其还原锝为+3，+4或+5氧化态。锝可以保持在此还原状态下，以保持锝分子和被放射性标记的新抗体之间的化学键。锝能够牢固地绑定到新抗体，使得还原的锝不传输到在试验中存在的其它分子或其它蛋白质，患者的血液或其他介质(在其中放射性标记的物质)将被利用。已经描述了锝-99m放射性标记的单克隆抗体的几种不同的方法。
在一些实施方案中，使用新抗体或其片段检测补体介导的病理可以提供干性和湿性AMD位点和疾病进展程度的准确描绘。本文所述的新抗体或其片段也可用于测量治疗个体的进展程度或疾病回归。本文所述的新抗体或其片断也可以检测AMD的发病和进展。新抗体或其片段可用于适合于眼睛的配方。
通过举例的方式，在个体的快速(相对缓慢)的疾病进展之间，眼底成像可以区分。具体而言，病理损伤的位点和损伤的萎缩性补丁可以很容易地识别。明确的例子可能为老妇的场景，其一只眼睛中具脉络膜新生血管(CNV)，以及另一只眼睛中具软性玻璃膜疣。本文所述的诊断方法可以区分在新抗体沉积水平基础上的CNV眼和玻璃膜疣眼之间的疾病进展的相对程度。通过成像比较新抗体的相对水平，临床医生可以判断，是否眼睛只含有玻璃膜疣将发展为CNV。本文所述的方法可以揭露信息表明疾病的进展以及病理玻璃膜疣沉积向CNV潜在的过渡。
Bruch′s膜破裂为重要的病理标记，用于检测从干性，无渗出型AMD转换成湿性，渗出型AMD。Bruch′s膜的破裂与视网膜和脉络膜中的流体或出血性分泌物临床结果相关联。因此，本文描述的方法可以通过检测膜区域来识别Bruch′s膜破裂上的位点，其显示高水平新抗体沉积。来自成像研究的信息其用于新抗体或其片断可以给予是否需要临床干预-手术或药物的洞察力。
实施例
实施例1：新抗-iC3b(neo anti-iC3b)抗体针对iC3b的结合，但是不针对 C3c和C3d
新抗-iC3b(Neo anti-iC3b)抗体应该与在抗原iC3b上的新抗原表位结合。预期此抗体还没有结合C3c或者C3d。所述C3分子激活后转化为C3b和C3a。C3b被因子I灭活生成iC3b。新抗-iC3b(Neo anti-iC3b)识别iC3b分子上的新抗原表位。该新抗体不结合C3c表明，C3b受体分子的α链和β链不具备的新抗原表位。新抗-iC3b(neo anti-iC3b)对于C3c和C3d的交叉反应性的缺乏表明，当C3c和C3d产生时识别抗原表位的抗体丢失。预计新抗-iC3b(neo anti-iC3b)在体内对组织表现出类似的结合特性。
聚苯乙烯微量滴定板涂有人类因子iC3b、C3d和C3c(泰勒(TX)，德克萨斯州(TX)，Complement Technology)，每个以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％牛血清白蛋白(BSA，Sigma-Aldrich公司，圣路易斯，密苏里州)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-iC3b(neo anti-iC3b)(Quidel公司，San Diego，CA)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测蛋白质结合的新抗-iC3b。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)底物(Kirkegaard & Perry Laboratories，Gaithersburg，MD)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上读数。新抗-iC3b对多种底物-结合蛋白结合的估计Kd值，是根据在50％最大结合(Microcal Origin，Northampton，MA)时新抗-iC3b的浓度。
新抗-iC3b以262pM的亲和力与iC3b结合，但不结合C3d和C3c，因此新抗-iC3b具有高度特异性。来自这些数据的表观结合常数，定义为达到最大结合的一半时需要的新抗-iC3b的浓度，为大约200-300pM。这些数据在图1中示出。
实施例2：新抗-C3d(neo anti-C3d)抗体针对C3d的结合，但是不针对 C3c
新抗-C3d抗体不结合C3c分子(C3c分子含有C3b分子的α和β链)。C3b的裂解后，C3c和C3d的形成。C3d分子从C3b分子释放，以产生C3c。新抗-C3d特异性地结合C3d分子，不结合C3c。
聚苯乙烯微量滴定板涂有人类C3d和C3c(Complement Technology)，每个以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-C3d(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测蛋白质-结合的新抗-C3d。在室温孵育1小时之后，冲洗所述平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)在25℃孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。新抗-C3d对多种底物-结合蛋白结合的估计Kd值，是根据在50％最大结合(Microcal Origin)时新抗-C3d的浓度。
新抗-C3d以447pM的亲和力结合C3d，但不结合C3c，因此新抗-C3d具有高度特异性。来自这些数据的表观结合常数，定义为达到最大结合的一半时需要的新抗-C3d的浓度，为大约350-550pM。这些数据在图2中示出。
实施例3：抗-Bb(Anti-Bb)和新抗-Bb(neo anti-Bb)对B因子具有不 同的结合率
新抗-Bb抗体不结合B因子(Factor B)，但是非-新抗-Bb(non-neoanti-Bb)结合因子B。Bb是可选途径的特异性蛋白质，并且能用新抗-Bb抗体(neo anti-Bb antibody)检测。
聚苯乙烯微量滴定板涂有人类B(Complement Technology)，每个以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-Bb(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到B因子涂覆的孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测B因子结合的新/非-新抗-Bb(neo/non-neo anti-Bb)。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。
新抗-Bb不结合底物-涂覆的B因子表明，所述新抗原表位在B因子上不表达。来自这些数据的表观结合常数，定义为达到最大结合的一半时需要的非新抗-Bb(non-neo anti-Bb)的浓度，为大约212pM。这些数据在图3中示出。新抗-Bb(neo anti-Bb)似乎仅仅对在Bb上的新抗原表位具有特异性。
实施例4：新抗-SC5b-9(Neo anti-SC5b-9)只结合聚合体C9(Polymeric C9)和SC5b-9
新抗-C5b-9识别底物-结合的C9，具有1.12nM亲和力。底物-结合的C9功能类似于在所述SC5b-9复合体中的聚合体C9。聚合体C9含有在补体活化途径中形成的新抗原表位。所述新抗体与在SC5b-9复合体中由聚合体C9形成的表位。新抗-SC5b-9抗体以1.12nM的亲和力结合底物-结合的(聚合)C9，与之相比，该抗体以585pM的结合亲和力结合SC5b-9。该新抗体不结合底物-结合的C5、C6、C7、和C8蛋白质。
聚苯乙烯微量滴定板涂有人类C9或SC5b-9(ComplementTechnology)，以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-SC5b-9(QuidelCorporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测蛋白质-结合的新抗-SC5b-9。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。新抗-SC5b-9以高亲和力(使用Microcal Origin计算)既结合C9，又以高亲和力(使用Microcal Origin计算)结合SC5b-9。
新抗-SC5b-9以585pM的亲和力结合SC5b-9，并以1120pM的亲和力结合聚合体C9。来自这些数据的表观结合常数，定义为达到最大结合的一半时需要的新抗-SC5b-9的浓度，是高度亲和的。这些数据在图4示出。
实施例5：抗-C5、-C6、-C7、-C8、和-C9与相应蛋白质的结合
为了确保C5、C6、C7、C8和C9蛋白质与ELISA平板结合，在实施例4中，我们用相应的抗体检测了这些蛋白质。允许抗-C5、-C6、-C7、-C8、和-C9与底物-结合的蛋白质结合。如在图5中所示的，所述抗体以相似的亲和力结合相应的抗原。单一浓度图在图5中示出。
聚苯乙烯微量滴定板涂有C5、C6、C7、C8和C9(ComplementTechnology)，以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。在封闭液中相应抗体(QuidelCorporation)的等分试样，被添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测抗原结合的抗体。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。形成饱和结合曲线，并且对所有抗体绘制接近饱和的单一浓度，以进行比较。所述数据在图5中示出。
如在图5中示出，所有抗体，抗-C5、抗-C6、抗-C7、抗-C8和抗-C9是有完全活性，并且表明与相应抗原具有良好的结合力。
实施例6：抗-C5，对底物-结合的C5、以及SC5b-9的结合
如图6所示，抗C5结合C5，但不检测在所述SC5b-9复合体中的C5b，表明了：抗-C5不能检测由C5b-9导致的损伤。这个发明选择识别在SC5b-9或者C5b-9上的新抗原表位的新抗体。
聚苯乙烯微量滴定板涂有C5和SC5b-9(Complement Technology)，以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-C5(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测C5和SC5b-9结合的抗体。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。形成饱和结合曲线，并且对所有抗体绘制接近饱和的单一浓度，以进行比较。
如图6所示，抗-C5识别底物-结合的C5而不是SC5b-9。因此，抗-C5不能检测补体介导的组织损伤。
实施例7：抗-C6对于底物-结合的C6、以及SC5b-9的结合
如在图7中所示，抗-C6以大约200pM的相似亲和力，结合C6和SC5b-9复合体，表明：抗-C6将既检测C6又检测SC5b-9，并且不能区分C5b-9和游离C6。
聚苯乙烯微量滴定板涂有C6和SC5b-9(Complement Technology)，以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-C6(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测C6和SC5b-9结合的抗体。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。形成饱和结合曲线，并且对所有抗体绘制接近饱和的单一浓度，以进行比较。
如在图7中所示，抗-C6既识别底物-结合的C6又识别SC5b-9。因此，抗-C6不能特异性检测组织损伤。
实施例8：抗-C7对于底物-结合的C7、以及SC5b-9的结合
如在图8中所示，抗-C7以200-400pM范围的亲和力既结合C7又结合SC5b-9复合体，表明：抗-C7不检测C7和SC5b-9，并且不能区分SC5b-9和游离C7。
聚苯乙烯微量滴定板涂有C7和SC5b-9(Complement Technology)，以(05μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-C7(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测C7和SC5b-9结合的抗体。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。形成饱和结合曲线，并且对所有抗体绘制接近饱和的单一浓度，以进行比较。
如在图8中所示，抗-C7既识别底物-结合的C7又识别SC5b-9。因此，抗-C7不能特异性检测组织损伤。
实施例9：抗-C8针对底物-结合的C8、以及SC5b-9的结合
如在图9中所示，抗-C8以600-1000pM范围的亲和力既结合C8又结合SC5b-9复合体，表明，抗-C8将既检测C8又SC5b-9，并且不区分SC5b-9和游离C8之间。
聚苯乙烯微量滴定板涂有C8和SC5b-9(Complement Technology)，以(0.5μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-C8(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测C8和SC5b-9结合的抗体。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard&Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。形成饱和结合曲线，并且对所有抗体绘制接近饱和的单一浓度，以进行比较。
如在图9中所示，抗C8，既识别底物-结合的C8又识别SC5b-9。因此，抗-C8不能特异性检测组织损伤。
实施例10：抗-C9针对底物-结合的C9、以及SC5b-9的结合
如在图10中所示，抗-C9结合C9但不结合SC5b-9复合体，表明，抗-C9不检测组织损伤因为它不识别SC5b-9。
聚苯乙烯微量滴定板涂有C9和SC5b-9(Complement Technology)，每个以(1μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-C9(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测C9和SC5b-9结合的抗体。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。形成饱和结合曲线，并且对所有抗体绘制接近饱和的单一浓度，以进行比较。
如在图10中所示，抗C9识别底物-结合的C9，但不识别SC5b-9。因此，抗-C9不检测由SC5b-9引起的组织损伤。
实施例11：新抗-聚合体C9(Neo anti-polymeric C9)结合聚合体C9和 SC5b-9
新抗-聚合体C9以1.12nM亲和力识别底物-结合的C9。底物-结合的C9也表现聚合体C9的性质。因为它是人工建立的聚合体C9，所述C9可以作为单体或者聚合体存在。所述底物-结合的C9可以模仿聚合的C9。聚合体C9含有在活化过程中形成的新抗原表位。所述新抗-聚合体C9抗体结合聚合体C9和在SC5b-9复合体中的聚合体C9。所述新抗-聚合体C9抗体以1.12nM的亲和力结合底物-结合的(聚合的)C9，与之相比较，此抗体与SC5b-9的结合亲和力为585pM。没有观察到这个抗体结合底物-结合的C5、C6、C7、和C8蛋白质。
聚苯乙烯微量滴定板涂有C9或者SC5b-9(Complement Technology)，以(0.5μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。新抗-SC5b-9(Quidel Corporation)的等分试样，在封闭液中以不同浓度添加到孔中。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。
通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测底物-涂覆的C5b-9和C9结合的新抗C5b-9。在室温孵育1小时之后，冲洗所述平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices，Sunnyvale)上读数。新抗-SC5b-9既以高亲和力(使用Microcal Origin计算)结合C9，又以高亲和力使用Microcal Origin计算)结合SC5b-9。
新抗-聚合体C9以585pM的亲和力结合SC5b-9，并以1120pM的亲和力结合聚合体C9。来自这些数据的表观结合常数，定义为达到最大结合的一半时需要的新抗-聚合体C9(neo抗-聚合体C9)的浓度，是高度亲和的。这些数据在图11中示出。
实施例12：抗-聚合体C9抗体在存在正常人类血清的情况下检测底物-结 合的SC5b-9
图1至11的结果证明，新抗体(新抗体)将特异性地检测组织损伤(以聚合体C9的形成为代表)。例如，新抗-iC3b、新抗-C3d、新抗-Bb、和新抗-聚合体C9将检测在补体途径中的多个步骤中的AP活化。新抗-聚合体C9将检测AP活化的最终步骤。聚合体C9的存在指示了组织损伤，因为所述C5b-9复合体是细胞裂解的原因。为了确保新抗-聚合体C9能特异性结合活体内的聚合体C9，进行了竞争实验。这个实验使用过量的正常人类血清，以与底物-结合的SC5b-9竞争，去结合新抗-聚合体C9。在高达50％的生理血清浓度下，正常人类血清没有抑制新抗-聚合体C9对底物-结合的SC5b-9的结合。因此，新抗-聚合体C9将对活体内的C5b-9具有特异性，并且不会结合在血清中存在的游离补体蛋白质。在血清中正常存在的C9的量为60μg/ml。在这个研究中使用的血清最高浓度为50％，其转化为30μg/ml的C9。就nM而言，对于每个稀释使用的在血清中的所述C9浓度为：422nM、253nM、126nM、42nM、25nM、12nM、4.2nM、2.5nM、1.3nM、0.42nM和0nM。
新抗-聚合体C9而不是抗-单体的C9检测新抗原SC5b-9。这表明，聚合体C9抗体特异性检测底物-结合的SC5b-9。此聚合体C9抗体不识别游离的或者单体的C9，并且因此对于由C5b-9表达的新抗原表位是目标特异的。抗-单体的C9仅结合游离的C9，但不识别SC5b-9。
在这个模型中，用SC5b-9涂覆ELISA孔，以指示含有C5b-9复合体的组织。此涂覆的板然后用各种浓度的正常人血清以及固定浓度的新抗-聚合体C9孵育。新抗体将结合SC5b-9，因此在体内将对C5b-9具有特异性。
在这个实验中，聚苯乙烯微量滴定板涂有SC5b-9或C9(ComplementTechnology)，以(0.5μg/50μL/孔)在PBS中4℃过夜。在抽吸蛋白质溶液后，孔用含1.0％BSA(Sigma-Aldrich)的PBS室温下封闭1小时。无蛋白质涂层的孔类似地封闭，并作为背景对照。固定浓度的新抗-SC5b-9(Quidel Corporation)与不同浓度的正常人类血清，在封闭液中混合。在室温下孵育1小时后，用PBS洗涤各孔。通过添加过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，以1∶2000稀释，检测(结合SC5b-9的)新抗-聚合体C9。在室温孵育1小时之后，洗涤平板，并添加100μl的TMB底物(Kirkegaard & PerryLaboratories)。在室温孵育30分钟之后，通过添加100μl的1M磷酸使所述TMB反应终止，并且所述平板在450nm，在酶标仪(SPECTRAMAX250，Molecular Devices)上读数。存在于血清或其它中的游离C9将不影响结合到C5b-9复合体的新抗-聚合体C9的特异性结合。
如在图12中所示，新抗-聚合体C9对SC5b-9的结合不受人正常血清抑制。这表明新抗-聚合体C9能用来检测活体内的组织损伤。
实施例13：新抗-聚合体C9检测来自正常人类血清的沉积的C5b-9
为了测定新抗-聚合的是否结合从正常人血清中形成的沉积C5b-9，使用体外试验。在该试验中，涂上lipopolysacccharide(LPS)的孔与50％、30％、20％、10％、8％、6％、4％、0％正常人血清在缓冲液中孵育，使替代途径(AP)活化。已知LPS激活替代途径，并因此C5b-9在LPS的表面上形成。使用抗-C5、抗-C6、抗-C7、抗-C8、抗-C9、和新抗-聚合体C9，以检测新沉积的C5b-9。抗-C6、抗-C7、抗-C8能够检测到沉积的C5b-9。此外，新抗-聚合体C9(但不是抗-单体C9)检测沉积的C5b-9。新抗-聚合体C9以高亲和力结合C5b-9说明，这种抗体将是一个有效的方法来检测在体内形成的C5b-9。
如在图13中所示，即使在存在正常人血清的情况下，新抗-聚合体C9特异性地检测C5b-9。
实施例14：新抗-聚合体C9抗体检测在病理玻璃膜疣中沉积的C5b-9
眼睛采购自AMD患者，通过经IRB批准的眼库。制备石蜡块的和显示黄斑的切片。切片用新抗-聚合体C9进行染色。如在图14中所示，新抗-聚合体C9通过在来自AMD患者组织中的聚合体C9沉积，检测玻璃膜疣。因此，被归类为正常的个人可能有AMD的风险。
虽然本发明已参考其优选实施例具体地示出和描述，本领域技术人员可以理解，不脱离由所附权利要求涵盖的本发明范围的情况下，可以做出多种形式和细节上的改变。在前述说明书中引用的所有专利、出版物和参考文献通过引用的方式全文并入本文。

Claims (140)

1.一种在受试者中诊断组织损害的发展的方法，包括给所述受试者的组织施用新抗体的样品，以达到检测承载新抗原表位的补体蛋白是否存在的目的。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述组织来自身体的任何部分。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述的组织为眼部组织。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的组织损害是组织疾病的结果。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述的组织损害是眼部组织疾病的结果。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述眼部组织疾病是黄斑变性相关的病症。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，黄斑变性相关的病症能够是渗出性的与年龄有关的黄斑变性(AMD)，非渗出性的与年龄相关的黄斑变性(AMD)，北卡罗来纳州黄斑营养不良症，Sorsby′s眼底营养不良症，Chemical Stargardt′s疾病，图形样营养不良，卵黄状黄斑变性疾病，显性玻璃膜疣，malattia leventinese，视网膜脱离，脉络膜退化，视网膜退化，光感受器退化，RPE退化，黏多糖症，视杆锥细胞营养不良，视锥杆细胞营养不良，或视网膜退化。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述眼部组织疾病是AMD。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述新抗体是scFv、双特异抗体、minibody、ScFv-Fc和完整抗体、Fab或Fab′。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述承载新抗原表位的补体蛋白，选自：C3b、C3a、iC3b、C3dg、C3d、C4d、Ba、Bb、C5b、C5a、和C5b-9/SC5b-9。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述承载新抗原表位的补体蛋白由称为新抗体的抗体检测。
12.根据权利要求10所述的方法，其中，所述新抗体识别不存在于所述母体分子中的非天然的或新颖的抗原表位。
13.根据权利要求10所述的方法，其中，所述新补体蛋白在所述眼部组织中表达。
14.一种用于诊断在受试者中与年龄有关的黄斑变性(AMD)的发展的方法，包括：检测所述受试者的眼部组织在的一种新补体蛋白，其指示补体激活，并且与没有AMD的受试者的对照群的基线水平相比显著升高。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新补体蛋白选自：C3b、C3a、iC3b、C3dg、C3d、C4d、Ba、Bb、C5b、C5a和C5b-9。
16.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新补体蛋白被分类为新抗-C3b、新抗-C3a、新抗-iC3b、新抗-C3dg、新抗-C3d、新抗-C4d、新抗-Ba、新抗-Bb、新抗-Cb5、新抗-C5a或新抗-C5b-9。
17.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C3b不识别所述母体分子C3。
18.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C3a不识别C3。
19.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-1C3b不识别C3。
20.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C3dg不与C3交叉反应。
21.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C3dg不与C3交叉反应。
22.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C4d不与C4交叉反应。
23.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-Ba不与B交叉反应。
24.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-Bb不与B交叉反应。
25.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5b不与C5交叉反应。
26.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5a不与C5交叉反应。
27.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C5交叉反应。
28.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C6交叉反应。
29.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C7交叉反应。
30.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C8交叉反应。
31.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C9交叉反应。
32.根据权利要求14所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9能够与聚合体C9交叉反应，但不与单体C9交叉反应。
33.根据权利要求14所述的方法，其中，C5b-9只由新抗聚合体C9抗体检测。
34.根据权利要求14所述的方法，其中，抗-C5、抗-C6、抗-C7、抗-C8、和抗-C9抗体不检测所述新抗原。
35.一种用于在受试者体中诊断与年龄相关的黄斑变性(AMD)的发展的方法，包括：检测所述受试者眼部组织中的一种替代途径特异性新补体蛋白，其指示替代补体活化，并且与没有AMD的受试者的对照群的基线水平相比显著升高。
36.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新补体蛋白选自：C3b、C3a、iC3b、C3dg、C3d、C4d、Ba、Bb、C5b、C5a和C5b-9。
37.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新补体蛋白选自：新抗-C3b、新抗-C3a、新抗-iC3b、新抗-C3dg、新抗-C3d、新抗-C4d、新抗-Ba、新抗-Bb、新抗-Cb5、新抗-C5a或新抗-C5b-9。
38.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C3b不识别母体分子C3。
39.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C3a不识别C3。
40.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-1C3b不识别C3。
41.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C3dg不与C3交叉反应。
42.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C3d不与C3交叉反应。
43.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-Ba不与B交叉反应。
44.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-Bb不与B交叉反应。
45.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5b不与C5交叉反应。
46.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5a不与C5交叉反应。
47.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C5交叉反应。
48.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C6交叉反应。
49.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C7交叉反应。
50.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C8交叉反应。
51.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C9交叉反应。
52.根据权利要求35所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9能够与聚合体C9交叉反应，但不与单体C9交叉反应。
53.根据权利要求35所述的方法，其中，C5b-9只由新抗聚合体C9抗体检测。
54.根据权利要求35所述的方法，其中，抗-C5、抗-C6、抗-C7、抗-C8，和抗-C9抗体不检测新抗原。
55.一种用于诊断在受试者体中与年龄相关的黄斑变性(AMD)的发展的方法，包括：通过标记抗体至新补体蛋白来检测所述受试者眼部组织中替代途径特异性新补体蛋白，其指示替代补体活化，并且与没有AMD的受试者的对照群的基线水平相比显著升高。
56.根据权利要求37所述的方法，其中，所述新抗体是IgG或IgM。
57.根据权利要求55所述的方法，其中，所述抗体是鼠的，嵌合的，人源化的，de-免疫的，全人或重组的。
58.根据权利要求55所述的方法，其中，所述新重组抗体是IgG，Fab2，Fab′，Fab或单链。
59.根据权利要求55所述的方法，其中，所述新抗体在动物、培养基或合成途径产生。
60.根据权利要求55所述的方法，其中，所述新抗体上的标记能够选自：Tc99，immunoPet或其它显像剂。
61.一种使用锝-99m标记所述新抗体的方法，其中，结合锝到蛋白在所述组织中有效地识别所述新抗原。
62.根据权利要求61所述的方法，其中，所述的组织来自人体。
63.根据权利要求61所述的方法，其中，在所述人体内的所述组织选自：肝脏，肾脏，心脏，肠，胰腺或眼睛。
64.根据权利要求63所述的方法，其中，所述的组织来自眼睛。
65.根据权利要求61所述的方法，其中，所述新抗原的存在于人体的任何部分中。
66.根据权利要求61所述的方法，其中，所述新抗原存在于补体蛋白/片段中。
67.一种在组织样品中检测新抗原的方法，该方法包括以下所述步骤：
(a)在所述组织中使特异性抗体结合新补体抗原；
(b)使用成像技术测定结合的新抗体的量，以获得各试剂的结合值；
(c)将在步骤(b)中测定的值与从结合所述样品中存在的新补体抗原的特定新补体抗体的量计算的值相关联。
68.根据权利要求67所述的方法，其中，所述的特异性结合剂是抗体。
69.根据权利要求67所述的方法，其中，至少一种所述特异性结合剂是标记的。
70.根据权利要求67所述的方法，其中，单克隆抗体是针对补体成分片段的新抗原的。
71.一种创建诊断测试系统以用于测定结合组织的特定新补体成分片段的种类和量的方法，所述系统包括下列的试剂盒形式：
(a)第一特异性结合剂，其对补体成分C3b、C3a、iC3b、C3dg、C3d、C4d、Ba、Bb、C5b、C5a和C5b-9具有特异性；和；
(b)第二特异性结合剂，在该情况下标记的次级抗体至新抗体，包括标记；当与待测样品中所述新抗体接触时，所述第一和第二特异性结合剂单独结合，并形成复合体。
72.根据权利要求71所述的方法，其中，所述第一结合剂特异于新抗原，以及所述所述第二结合剂对免疫复合体的抗体成分具特异性。
73.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新补体蛋白选自：C3b、C3a、iC3b、C3dg、C3d、C4d、Ba、Bb、C5b、C5a和C5b-9。
74.权利要求71所述的方法，其中，所述新补体蛋白被分类为新抗C3b、新抗-C3a、新抗-iC3b、新抗-C3dg、新抗-C3d、新抗-C4d、新抗-Ba、新抗-Bb、新抗-Cb5、新抗-C5a或新抗C5b-9。
75.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C3b不识别所述母体分子C3。
76.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C3a不识别C3。
77.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-1C3b不识别C3。
78.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C3dg不与C3交叉反应。
79.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C3d不与C3交叉反应。
80.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C4d不与C4交叉反应。
81.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-Ba不与B交叉反应。
82.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-Bb不与B交叉反应。
83.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5b不与C5交叉反应。
84.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5a不与C54交叉反应。
85.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C5交叉反应。
86.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C6交叉反应。
87.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C7交叉反应。
88.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C8交叉反应。
89.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C9交叉反应。
90.根据权利要求71所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9与聚合体C9交叉反应，但不与单体C9交叉反应。
91.根据权利要求71所述的方法，其中，C5b-9仅由新抗聚合体C9抗体检测。
92.根据权利要求71所述的方法，其中，抗-C5、抗-C6、抗-C7、抗-C8，和抗-C9抗体不检测所述新抗原。
93.一种用于诊断在受试者体中与年龄相关的黄斑变性(AMD)的发展的方法，包括：在新抗体组上施用放置标记的样品，用于检测在所述组织中是否存在所述承载新抗原表位的补体蛋白的异常水平。
94.根据权利要求93所述的方法，其中，所述标记是放射性和非放射性的示踪。
95.根据权利要求93所述的方法，其中，通过两种光子成像捕获所述标记。
96.根据权利要求93所述的方法，其中，所述标记为immuno-pet。
97.一种用于诊断在受试者体中组织伤害的发展的方法，包括：在所述受试者组织的样品中施用抗-聚合体C9抗体样品，用于检测在所述组织中是否存在承载聚合体C9的补体复合体。
98.根据权利要求97所述的方法，其中，所述组织来自身体的任何部分。
99.根据权利要求97所述的方法，其中，所述的组织为眼部组织。
100.根据权利要求97所述的方法，其中，所述的组织为肾组织。
101.根据权利要求97所述的方法，其中，所述组织在活的个体中。
102.根据权利要求97所述的方法，其中，所述的组织在外植体的条件。
103.根据权利要求97所述的方法，其中，所述的组织在培养条件。
104.根据权利要求97所述的方法，其中，所述的组织在哺乳动物中。
105.根据权利要求97所述的方法，其中，所述的组织损害为组织疾病的结果。
106.根据权利要求105所述的方法，其中，所述的组织损害为眼部组织疾病的结果。
107.根据权利要求97所述的方法，其中，所述的眼部组织疾病为黄斑变性-相关的病症。
108.根据权利要求97所述的方法，其中，所述黄斑变性相关的病症能够是与年龄有关的黄斑变性(AMD)、北卡罗来纳州黄斑营养不良症、Sorsby′s眼底营养不良症、Chemical Stargardt′s疾病、模式营养不良、卵黄状黄斑变性疾病、显性玻璃膜疣、malattia leventinese、视网膜脱离、脉络膜退化、视网膜退化、光感受器退化、RPE退化、黏多糖症、视杆锥细胞营养不良、视锥杆细胞营养不良、或视锥细胞退化。
109.根据权利要求108所述的方法，其中，所述的眼部组织疾病为AMD。
110.一种使用新抗体定位在黄斑变性相关的病症中的Bruch’s膜的损伤和/或损害的位点的方法。
111.根据要求110所述的方法，其中，所述新抗体包括：新抗C3b、新抗-C3a、新抗-iC3b、新抗-C3dg、新抗-C3d、新抗-C4d、新抗-Ba、新抗-Bb、新抗-Cb5、新抗-C5a、或新抗-C5b-9。
112.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C3b不识别母体分子C3。
113.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C3a不识别C3。
114.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-1C3b不识别C3。
115.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C3dg不与C3交叉反应。
116.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C3d不与C3交叉反应。
117.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-Ba不与B交叉反应。
118.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-Bb不与B交叉反应。
119.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5b不与C5交叉反应。
120.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5a不与C5交叉反应。
121.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C5交叉反应。
122.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C6交叉反应。
123.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C7交叉反应。
124.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C8交叉反应。
125.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9不与C9交叉反应。
126.根据权利要求111所述的方法，其中，所述新抗-C5b-9与聚合体C9交叉反应，但不与单体C9交叉反应。
127.根据权利要求111所述的方法，其中，C5b-9仅由新抗聚合体C9抗体检测。
128.根据权利要求111所述的方法，其中，抗-C5、抗-C6、抗-C7、抗-C8、和抗-C9抗体不检测所述新抗原。
129.一种用于诊断在受试者体中组织伤害的发展的方法，包括：向所述受试者组织的样品施用新抗体样品，以达到检测是否存在承载新抗原表位的补体蛋白的目的。
130.根据权利要求129所述的方法，其中，所述新抗-聚合体C9识别底物沉积的C9。
131.根据权利要求129所述的方法，其中，所述新抗-聚合体C9不识别单体C9。
132.根据权利要求129所述的方法，其中，所述新抗-聚合体C9不识别体液中的单体C9。
133.根据权利要求129所述的方法，其中，新抗-聚合体C9在组织内识别聚合体C9以反映组织损害。
134.根据权利要求133所述的方法，其中，组织损害在眼睛内。
135.根据权利要求133所述的方法，其中，组织损害在人体内。
136.根据权利要求129所述的方法，其中，所述新抗-聚合体C9使用标签标记。
137.根据权利要求136所述的方法，其中，所述标签能够是放射性的，基于正电子的、或本技术领域的。
138.根据权利要求129所述的方法，其中，所述新抗聚体C9可以用作为示踪剂，以确定组织损害。
139.根据权利要求129所述的方法，其中，所述新抗聚合体C9能够为IgG、Fab’、Fab、scFv、nanobody、双特异抗体。
140.一种用于诊断在受试者体中年龄相关的黄斑变性(AMD)的发展的方法，包括：通过标记在所述受试者的眼睛组织中检测一种替代途径特异性新补体蛋白。
CN2011800609531A 2010-11-29 2011-11-29 用于诊断组织损害的新抗体 Pending CN103261893A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41768210P 2010-11-29 2010-11-29
US61/417,682 2010-11-29
PCT/US2011/062418 WO2012075023A2 (en) 2010-11-29 2011-11-29 Neoantibodies for diagnosing tissue injury

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103261893A true CN103261893A (zh) 2013-08-21

Family

ID=46172508

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2011800609531A Pending CN103261893A (zh) 2010-11-29 2011-11-29 用于诊断组织损害的新抗体

Country Status (7)

Country Link
US (2) US8940490B2 (zh)
EP (1) EP2646821A4 (zh)
JP (1) JP6110306B2 (zh)
CN (1) CN103261893A (zh)
AU (1) AU2011336702B2 (zh)
CA (1) CA2821067C (zh)
WO (1) WO2012075023A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110244053A (zh) * 2019-05-09 2019-09-17 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 用于诊断狼疮肾炎并肺动脉高压疾病的分子标志物及其用途

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6643244B2 (ja) 2014-02-27 2020-02-12 アラーガン、インコーポレイテッドＡｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ 補体因子Ｂｂ抗体
EP3137908B1 (en) * 2014-05-02 2020-10-14 UAB Research Foundation Methods and compositions for diagnosis and treatment of meningitis
ES2725703T3 (es) * 2014-09-09 2019-09-26 Svar Life Science Ab Anticuerpos específicos para el componente del complemento C4d y usos del mismo
CN107278206B (zh) 2014-12-19 2021-04-02 雷根尼桑斯公司 结合人c6的抗体及其用途
GB2583560A (en) 2018-12-11 2020-11-04 Admirx Inc Fusion protein constructs for complement associated disease
MA54468A (fr) 2018-12-11 2022-04-13 Q32 Bio Inc Constructions de protéines de fusion pour une maladie associée au complément

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004112572A2 (en) * 2003-06-13 2004-12-29 University Of Pittsburgh Monitoring immunologic, hematologic and inflammatory diseases
WO2005108988A2 (en) * 2004-04-09 2005-11-17 University Of Pittsburgh Real time method of detecting acute inflammatory conditions
CN101355956A (zh) * 2005-11-04 2009-01-28 健泰科生物技术公司 利用补体途径抑制剂治疗眼部疾病
WO2009102488A2 (en) * 2008-02-15 2009-08-20 Tufts University A humanized model of membrane attack complex (mac) formation on murine retina and compositions, kits and methods for treatment of macular degeneration
CN101848937A (zh) * 2007-11-02 2010-09-29 诺瓦提斯公司 调节补体组分的分子和方法
WO2010135717A2 (en) * 2009-05-21 2010-11-25 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Complement assays and uses thereof

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5707810A (en) 1991-03-11 1998-01-13 Creative Biomolecules, Inc. Method of diagnosing renal tissue damage or disease
WO1995017673A1 (en) 1993-12-21 1995-06-29 Ocutech, Inc. Ocular diagnostics and therapies
DK2026073T3 (en) * 2000-04-29 2016-07-25 Univ Iowa Res Found Diagnosis and treatment of macular degeneration-related disorders
US7172874B2 (en) * 2001-04-30 2007-02-06 The Cleveland Clinic Foundation Diagnostic methods for age related macular degeneration
US7816497B2 (en) * 2002-10-30 2010-10-19 University Of Kentucky Compositions and methods for inhibiting drusen complement components C3a and C5a for the treatment of age-related macular degeneration
US7553496B2 (en) * 2004-12-21 2009-06-30 University Of Kentucky Research Foundation VEGF-A as an inhibitor of angiogenesis and methods of using same
KR101572700B1 (ko) * 2007-06-07 2015-11-30 제넨테크, 인크. 보체-관련 장애의 예방 및 치료를 위한 Ｃ３ｂ 항체 및 방법
GB0816702D0 (en) * 2008-09-12 2008-10-22 Trinity College Dublin Complement proteins
US20100291106A1 (en) * 2009-05-06 2010-11-18 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting complement protein c3b
EP2496259B1 (en) * 2009-11-05 2017-02-22 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004112572A2 (en) * 2003-06-13 2004-12-29 University Of Pittsburgh Monitoring immunologic, hematologic and inflammatory diseases
WO2005108988A2 (en) * 2004-04-09 2005-11-17 University Of Pittsburgh Real time method of detecting acute inflammatory conditions
CN101355956A (zh) * 2005-11-04 2009-01-28 健泰科生物技术公司 利用补体途径抑制剂治疗眼部疾病
CN101848937A (zh) * 2007-11-02 2010-09-29 诺瓦提斯公司 调节补体组分的分子和方法
WO2009102488A2 (en) * 2008-02-15 2009-08-20 Tufts University A humanized model of membrane attack complex (mac) formation on murine retina and compositions, kits and methods for treatment of macular degeneration
WO2010135717A2 (en) * 2009-05-21 2010-11-25 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Complement assays and uses thereof

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HENDRIK P. N. SCHOLL 等: "Systemic Complement Activation in Age-Related Macular Degeneration", 《PLOS ONE》, vol. 3, no. 7, 2 July 2008 (2008-07-02), pages 2593 *
LINCOLN V. JOHNSON 等: "Complement Activation and Inflammatory Processes in Drusen Formation and Age Related Macular Degeneration", 《EXPERIMENTAL EYE RESEARCH》, vol. 73, no. 6, 31 December 2001 (2001-12-31), XP 002386744, DOI: doi:10.1006/exer.2001.1094 *
MIHO NOZAKI 等: "Drusen complement components C3a and C5a promote choroidal neovascularization", 《PNAS》, vol. 103, no. 7, 14 February 2006 (2006-02-14), XP 007908457, DOI: doi:10.1073/pnas.0408835103 *
NALINI S. BORA 等: "The role of complement in ocular pathology", 《SEMIN IMMUNOPATHOL》, vol. 30, no. 2, 26 February 2008 (2008-02-26), XP 019625604 *
RONALD J. FALK 等: "Neoantigen of the Polymerized Ninth Component of Complement CHARACTERIZATION OF A MONOCLONAL ANTIBODY AND IMMUNOHISTOCHEMICAL LOCALIZATION IN RENAL DISEASE", 《JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110244053A (zh) * 2019-05-09 2019-09-17 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 用于诊断狼疮肾炎并肺动脉高压疾病的分子标志物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
JP2014500967A (ja) 2014-01-16
US9816999B2 (en) 2017-11-14
EP2646821A4 (en) 2015-09-23
AU2011336702A1 (en) 2013-06-20
EP2646821A2 (en) 2013-10-09
US8940490B2 (en) 2015-01-27
WO2012075023A2 (en) 2012-06-07
US20140056808A1 (en) 2014-02-27
JP6110306B2 (ja) 2017-04-05
CA2821067A1 (en) 2012-06-07
AU2011336702B2 (en) 2016-10-06
WO2012075023A3 (en) 2012-11-29
US20150139899A1 (en) 2015-05-21
CA2821067C (en) 2019-06-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103261893A (zh) 用于诊断组织损害的新抗体
CN104220453B (zh) 人源化的嵌合抗因子c3抗体及其用途
CN104220454B (zh) 人源化的嵌合抗因子Bb抗体及其用途
CN101883791B (zh) 人源化抗体
CN103782171B (zh) 用于检测流体样品中淀粉状蛋白β寡聚体的方法及其用途
JP6944375B2 (ja) 発作性夜間血色素尿症（ｐｎｈ）患者の亜集団の同定および処置
CN108779171A (zh) 抗补体因子c1q的fab片段及其应用
JP2017521097A (ja) ヒト化抗タウ抗体
CN103429260B (zh) 用于治疗神经疾病的人抗体及其诊断和治疗用途
US20190315846A1 (en) Antibodies to Human Alpha-Synuclein
TW201038282A (en) Novel anti-α5β1 antibodies and uses thereof
JP2013528607A (ja) 血管新生に基づく眼障害の処置のための抗ｃｄ１６０特異的抗体
CN103003302B (zh) 人源化和嵌合抗-备解素抗体
CN103140500A (zh) 抗addl单克隆抗体及其用途
CN104093454A (zh) 治疗阿耳茨海默氏病的组合物和方法
JP2024056941A (ja) 抗第ＩＸ因子Ｐａｄｕａ抗体
CN108285483A (zh) 用于中风和缺血或缺血性病况的人抗体及其特异性结合序列
JP7197494B2 (ja) 抗Ｔａｕナノボディ
WO2021219092A1 (en) Pharmaceutical compositionscontaining anti-cd47 antibodies
CN103068396B (zh) 抑制c5和备解素相互作用的抗-备解素抗体在制备抑制交替途径活化的药剂中的用途
CN107690439A (zh) Igf‑1r抗体及其诊断癌症的用途
CN110343181B (zh) 针对凝血因子ix(fix)的单域抗体
Ando et al. Clinical Features of Japanese Patients With Anti-α-enolase Antibody–Positive Autoimmune Retinopathy: Novel Subtype of Multiple Drusen
CN108064284A (zh) 极其特异性识别淀粉样蛋白β的22位及23位的转角结构的抗体
Troisi et al. Human monoclonal antibodies reveal subdominant gonococcal and meningococcal cross-protective antigens

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20130821