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CN106061969B - Trpa1调节剂 - Google Patents

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CN106061969B
CN106061969B CN201480076547.8A CN201480076547A CN106061969B CN 106061969 B CN106061969 B CN 106061969B CN 201480076547 A CN201480076547 A CN 201480076547A CN 106061969 B CN106061969 B CN 106061969B
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alkyl
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Abstract

本公开涉及用作TRPA1调节剂的多环杂芳族化合物，以及包括所述化合物的组合物和治疗疼痛的方法。

Description

TRPA1调节剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年1月6日提交的美国临时专利申请No. 61/924,119的优先权，该申请通过引用整体并入本文。
引用在光盘上提交的表格或计算机程序列表附录“SEQUENCE LISTING,”
本申请包括2014年12月16日创建的以“97382-925619(00110PC) SequenceListing.txt,”命名并含有66,887字节的文本文件的序列表。该文本文件中含有的材料出于所有目的通过引用整体并入。
关于在联邦资助的研究和开发下对本发明权利的声明
本发明是在由美国国家药物滥用研究院(National Institute on Drug Abuse)颁发的第1R43DA031516号拨款下借助政府资助进行的。政府享有本发明的某些权利。
发明领域
本公开涉及用于治疗疼痛的TRPA1-调节化合物以及包括所述化合物的组合物和方法。在一些实施方案中，本发明化合物应用于在各种手术性和介入性程序(包括手术、诊断和治疗程序)中预防、减少或抑制急性或慢性疼痛。
发明背景
超过1亿美国人患有慢性疼痛。此外，使用违禁药物的问题包括镇痛药物误用、滥用和成瘾。由此，对于含有阿片类的药物(像维柯丁)有合法医学需求的患者越来越难以获得处方。美国药物滥用和精神卫生管理局(Substance Abuse and Mental HealthServices Administration)估计在2008年有2,010万美国人是违禁药物使用者并且那些人中估计有470万人非医学地使用镇痛药物。因此，具有较少的上瘾潜力和滥用倾向的对慢性疼痛的有效治疗是当今医学上未满足的重大需求。
瞬时受体电位阳离子通道，亚家族A，成员1，(“TRPA1”；野生型，SEQ ID NO:1；变体，SEQ ID NOS:2-7)是存在于哺乳动物细胞中的非选择性的阳离子通道。TRPA1-受体/通道在传递响应于炎症以及神经损害(特别是在慢性病状中)的疼痛感觉和痛觉过敏的感觉神经中发挥高度特异作用。理解针对TRPA1通道的内源性配体的功能和鉴定中的最新进展表明TRPA1与检测伤害感受信号相关。
发明概述
在一个方面，本发明提供式I化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
A是式Ia的环状基团：
其中Z1、Z2、Z3、Z4和Z5各自是选自由N、CH和CRa组成的组的成员；或者，可选地对于Z1，成员Z1和X连同它们所连接的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至4个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
条件是选自由Z2、Z3和Z4组成的组的至少一个成员是N；
每个Rz是独立选自由卤基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C3烷氧基组成的组的成员；或者，可选地，两个Rz取代基连同它们所连接的碳原子一起连接形成氧代、螺环烷基或螺杂环基；
B是式Ib的环状基团：
其中Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自是独立选自由N、CH和CRb组成的组的成员；或者，可选地，成员-Y2＝Y3-或-Y4＝Y5-组合成选自由 NH、NRc、O和S组成的组的单个成员；
每个Ra和Rb是独立选自由氰基、羧基、C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、C3-C8环烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、卤基、C0-C6氨基、C1-C6酰氨基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C6烷基磺酰基和羟基组成的组的成员；或者，可选地，两个相邻的Ra或Rb连同它们所连接的基团A或B中的原子一起形成另外的稠合的具有0至4 个Rz取代基的芳基、杂芳基、环烷基或杂环基环；
每个Rc是独立选自由C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、 (C3-C6环烷基)C1-C3烷基和C1-C7酰基组成的组的成员；
每个u是独立选自0至4的整数；
v是0至5的整数；
X是N或CRd；或者，可选地，X是CRd，其中X和成员Z1与包括它们的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至4个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
每个Rd是独立选自由卤基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、 C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C3-C6环烷基和C3-C6环烷氧基组成的组的成员；
每个L1、L2和L3，如果存在，是独立选自由C＝O、C＝S、C＝NH 和C＝NRc组成的组的成员；
C是式Ic的环状基团：
其中Q是选自由C(Re)(D)、N(E)、F和G组成的组的成员；或者，可选地，成员-W3-Q-或-W4-Q-连接形成成员H；并且
其中W1、W2、W3和W4各自是独立选择的C(Rf)2；或者，可选地，成员-W3-Q-或-W4-Q-连接形成成员H；
Re是选自由氢、C1-C3烷基和C1-C3氟烷基组成的组的成员；或者，可选地，Re和W1、W2、W3或W4的Rf取代基连接形成-(C(Rz)2)t- 桥，其中t是选自2或3的整数；
每个Rf是独立选自由氢、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基和卤基组成的组的成员；或者，可选地，两个相邻的Rf连同它们所连接的基团C 中的原子一起形成另外的具有0至4个Rz取代基的芳基、杂芳基、环烷基或杂环基稠环；或者，可选地，两个偕Rf连同它们所连接的基团C中的原子一起形成具有0至4个Rz取代基的螺环烷基或螺杂环基环；或者，可选地，选自由(W1和W2)、(W2和W3)和(W3和W4) 组成的组的一对Wn的两个轴Rf取代基连接形成-(C(Rz)2)t-桥；或者，可选地，Re和W1、W2、W3或W4的Rf取代基连接形成-(C(Rz)2)t-桥；
每个t是选自2或3的整数；
D是式Id的二环基团：
E是式Ie的二环基团：
F是式If的螺环基团：
G是式Ig的双环螺环基团：
H是式Ih的稠合基团：
其中H环是稠合的五至八元环烷基或杂环基环；
其中v是0至4的整数；并且
其中w是0至2的整数；并且
Y6、Y7、Y8、Y9和Y10，如果存在，各自是独立选自由N、CH 和CRb组成的组的成员；或者，可选地对于Y8和Y9，成员–Y6＝Y7- 或-Y8＝Y9-组合成选自由NRc、O和S组成的组的单个成员。
在一个方面，本发明提供式II化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
A是式IIa的环状基团：
其中Z1、Z2、Z3、Z4和Z5各自是选自由N、CH和CRa组成的组的成员；或者，可选地对于Z1，成员Z1和X连同它们所连接的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至5个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
条件是选自由Z2、Z3和Z4组成的组的至少一个成员是N；
每个Rz是独立选自由卤基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C3烷氧基组成的组的成员；或者，可选地，两个Rz取代基连同它们所连接的碳原子一起连接形成氧代、螺环烷基或螺杂环基；
B是式IIb的环状基团：
其中Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自是独立选自由N、CH和CRb组成的组的成员；或者，可选地，成员-Y2＝Y3-或-Y4＝Y5-组合成选自由 NH、NRc、O和S组成的组的单个成员；
每个Ra和Rb是独立选自由氰基、羧基、C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、C3-C8环烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、卤基、C0-C6氨基、C1-C6酰氨基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C6烷基磺酰基和羟基组成的组的成员；或者，可选地，两个相邻的Ra或Rb连同它们所连接的基团A或B中的原子一起形成另外的稠合的具有0至5 个Rz取代基的芳基、杂芳基、环烷基或杂环基环；
每个Rc是独立选自由C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、 (C3-C6环烷基)C1-C3烷基和C1-C7酰基组成的组的成员；
每个u是独立选自0至4的整数；
v是0至5的整数；
X是N或CRd；或者，可选地，X是CRd，其中X和成员Z1与包括它们的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至5个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
每个Rd是独立选自由卤基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、 C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C3-C6环烷基和C3-C6环烷氧基组成的组的成员；
L1是选自由C＝O、C＝S、C＝NH和C＝NRc组成的组的成员；
Y6、Y7、Y8、Y9和Y10，如果存在，各自是独立选自由N、CH 和CRb组成的组的成员；或者，可选地对于Y8和Y9，成员–Y6＝Y7- 或-Y8＝Y9-组合成选自由NRc、O和S组成的组的单个成员。
在另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式I或II化合物和至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
在另一方面，本发明提供一种治疗或预防疼痛的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量或预防有效量的式I或II化合物。
本发明的某些其它方面和实施方案在本文阐述并且对本领域技术人员将是显而易见的。
附图简述
图1示出在脊神经结扎后用本发明化合物处理的大鼠中观察到的缩足阀值(PWT以g计)。
图2示出如在脊神经结扎后用本发明化合物处理的大鼠中观察到的所述化合物在减轻神经性疼痛中的最大可能作用百分比 (％MPE)。
发明详述
I.定义
除非另外说明，否则本申请(包括说明书和权利要求)中所用的以下术语具有以下给出的定义。标准化学术语的定义可见于参考著作，包括Carey和Sundberg(2007)AdvancedOrganic Chemistry第5版.第 A和B卷,Springer Science+Business Media LLC,NewYork。
必须指出，除非上下文另有明确规定，否则如说明书和随附权利要求中所用，单数形式“一种/个(a/an)”和“该/所述(the)”包括复数指示物。例如，包括“TRPA1-调节化合物和赋形剂”的实施方案应被理解呈现具有至少第二TRPA1-调节化合物、至少第二赋形剂或二者的某些方面。
除非另外说明，否则本发明实践将采用合成有机化学、质谱、色谱的制备和分析方法、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。有机化学的常规方法包括在March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第6版,M.B. Smith和J.March,John Wiley&Sons,Inc.,Hoboken,NJ,2007中所包括的那些。尽管与本文所述的那些相似或等效的方法和材料可用于实践或测试本发明，但合适的方法和材料在以下描述。材料、方法和实例仅是说明性的而不旨在限制。
如本文所用修饰数值的术语“约”指示该值周围的限定范围。如果“X”是值，“约X”将通常指示0.95X至1.05X的值。对“约X”的任何引用特别指示至少值X、0.95X、0.96X、0.97X、0.98X、0.99X、1.01X、 1.02X、1.03X、1.04X和1.05X。因此，“约X”旨在教导和提供对例如，“0.98X”的所要求保护的限制的书面描述支持。当数量“X”仅包括全部整数值(例如，“X个碳”)时，“约X”表示(X-1)至(X+1)。在这种情况下，如本文所用“约X”特别指示至少值X、X-1和X+1。
当“约”应用于数值范围的开头时，它也应用于该范围的两端。因此，“约5至20％”等效于“约5％至约20％”。当“约”应用于一组值的第一个值时，它也应用于该组中的所有值。因此，“约7、9或11％”等效于“约7％、约9％或约11％”。
如本文所用的术语“酰基”包括如本文所定义的烷酰基、芳酰基、杂环酰基(heterocycloyl)或杂芳酰基。酰基的实例包括但不限于乙酰基、苯甲酰基和烟酰基。
术语“激动剂”涵盖例如，增加、加速或激活所述靶蛋白的表达或结合、刺激、增加、打开、激活、增强、增加活化、敏化或上调一种或多种蛋白(或编码多核苷酸)的活性的试剂。如本文所用，“激动剂”通常包括部分激动剂、完全激动剂和超激动剂(即，大于完全激动)。用于确定化合物是否“激动”或“不激动”蛋白的测定包括(例如)使一种或多种蛋白质与化合物接触然后测定对蛋白质活性的功能影响或使表达一种或多种蛋白质的细胞与化合物接触然后测定对所述靶蛋白质活性的功能影响。本领域技术人员将能确定测定是否适用于确定化合物激动还是不激动蛋白质。将包含TRPA1靶的样品或测定用测试化合物处理并且与不含测试化合物的对照样品(并且与通过暴露于已知TRPA1激动剂而激活的阳性对照样品)比较以测量对TRPA1活性的影响程度。将对照样品(未用激动剂处理)用于确立基线活性值。当活性值相对于未处理的对照增加(例如，增加20％、30％、40％、50％、 75％，或100％，或甚至更多)时，实现TRPA1蛋白或通道的激动。
术语“拮抗剂”涵盖例如，减慢或减少所述靶蛋白的表达或者阻断、去刺激、减轻、关闭、去激活、干扰、减少活化、脱敏或下调一种或多种蛋白质(或编码多核苷酸)的活性的试剂。如本文所用，“拮抗剂”通常包括部分拮抗剂和完全拮抗剂。用于确定化合物是否“拮抗”或“不拮抗”蛋白质的测定包括(例如)使一种或多种蛋白质与测试化合物接触然后测定对蛋白活性的功能影响或使表达一种或多种蛋白质的细胞与测试化合物接触然后确定对所述靶蛋白活性的功能影响。本领域技术人员将能确定测定是否适用于确定化合物拮抗还是不拮抗蛋白质。将包含TRPA1靶的样品或测定用推定拮抗剂处理并与不含化合物的对照样品(并与被已知激动剂激活的对照样品)比较以测量对TRPA1活性的影响程度。将激动剂-激活的对照样品(未用拮抗剂处理)指定为100％的相对活性值。当活性值相对于激动剂-激活的对照小于100％(例如，80％、50％、40％、30％、20％，或10％，或甚至更低)时，实现TRPA1蛋白或通道活性的拮抗。
用于确定本发明化合物的激动剂或拮抗剂活性的细胞可以是用适当的编码TRPA1的核酸瞬时或永久地转染或转化的细胞或细胞系或者可以是从内源基因表达TRPA1的细胞或细胞系。通常，TRPA1 受体通道表达于重组宿主细胞诸如人胚肾(HEK)、CHO、SH-SY5Y 或COS-7细胞的表面。可选地，内源性表达TRPA1的细胞(诸如背根神经节神经元)可以从动物分离、培养并用于测定拮抗剂活性。适合使用的内源性表达TRPA1的细胞系的实例还包括但不限于人WI-38 细胞系、分化的人成神经细胞瘤IMR-32细胞系和分化的大鼠PC12 细胞系。本文所述的测定还可以使用表达变体TRPA1蛋白的细胞进行。用于进行测定以确定化合物是TRPA1通道的激动剂还是拮抗剂的方法是本领域熟知的。一个非限制性实例包括荧光光度法测定，其中使加载对细胞内钙浓度敏感的荧光染料的细胞随后与目标化合物接触以确定其改变细胞内钙水平的能力。另一个方法包括使用电生理学测定(诸如膜片钳)来测试化合物。
如本文所用的术语“烷酰基”涵盖其中烷基如本文所定义的烷基 -C(O)-基团。烷酰基的实例包括但不限于乙酰基和丙酰基。
单独或在诸如“卤代烷基”和“烷基氨基”的其它术语内的术语“烷基”涵盖具有一至约十二个碳原子的直链或支链基团。“低级烷基”具有一至约六个碳原子。此类基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。术语“亚烷基”涵盖桥接的二价直链和支链烷基。实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基等。
术语“烯基”涵盖具有两个至约十二个碳原子的至少一个碳碳双键的直链或支链基团。“低级烯基”涵盖具有两个至约六个碳原子的基团。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基和 4-甲基丁烯基。术语“烯基”和“低级烯基”涵盖具有“顺式”和“反式”取向或可选地“E”和“Z”取向的基团。
如本文所用的术语“烷氧基”涵盖具有低级烷基作为取代基的氧并且包括甲氧基、乙氧基、丁氧基等。
术语“炔基”表示具有至少一个碳碳三键并具有两个至约十二个碳原子的直链或支链基团。“低级炔基”具有两个至约六个碳原子。此类基团的实例包括炔丙基、丁炔基等。
如本文所用的术语“芳酰基”涵盖芳基-CO-，其中芳基如本文所定义。实例包括但不限于苯甲酰基、萘-1-酰基和萘-2-酰基。
单独或组合的术语“芳基”意指含有一个或两个环的碳环芳族系统其中此类环可以稠合方式连接在一起。术语“芳基”涵盖诸如苯基、萘基、茚基、四氢萘基和茚满基的芳族基团。
术语“包含”意指开放末端的，包括指定的成分但不排除其它元素。
“保守修饰的变体”涵盖氨基酸和核酸序列二者。关于特定核酸序列，保守修饰的变体是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或当核酸不编码氨基酸序列时，是指基本上相同的序列。由于遗传密码的简并性，大量功能上相同的核酸对任何给定蛋白质进行编码。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU均编码氨基酸丙氨酸。因此，在丙氨酸由密码子指定的每一个位置处，密码子可以被改变成所述相应密码子中的任一个而不改变所编码的多肽。此类核酸变异是“沉默变异”，它是保守修饰的变异的一个种类。本文每一个编码多肽的核酸序列还描述核酸的每一个可能的沉默变异。本领域技术人员将认识到核酸中的每个密码子(除了通常为甲硫氨酸的唯一密码子的 AUG)可被修饰以产生功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每个沉默变异均隐含在每个所述序列中。
关于氨基酸序列，本领域技术人员将认识到改变所编码序列中单个氨基酸或小百分比的氨基酸的核酸、肽、多肽或蛋白质序列中的单个取代是“保守修饰的变体”其中所述改变导致氨基酸被化学相似的氨基酸取代。提供功能相似的氨基酸的保守取代表是本领域熟知的。
以下六组各自含有为彼此的保守取代的氨基酸：
1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；
2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；以及
6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
(参见，例如，Creighton,Proteins(1984))。
术语“环状基团”意指环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。
术语“环烷基”包括3至10个碳的饱和碳环基团。低级环烷基包括C3-C6环。实例包括环戊基、环丙基和环己基。
如本文所用，“环烷基烷基”涵盖其中烷基包括一个或多个环烷基取代基(通常一个)的烷基。实例包括但不限于环己基甲基、环戊基甲基和环丙基甲基。
术语“偕”涵盖直接连接到相同原子的两个或更多个取代基。实例是在环己基或螺环己基环上的3,3-二甲基取代。
术语“卤基”意指卤素诸如氟、氯、溴或碘原子(即，氟、氯、溴或碘)。
术语“卤代烷基”涵盖其中任何一个或多个烷基碳原子被如上所定义的一个或多个卤基取代的基团。实例包括单卤代烷基、二卤代烷基和包括全卤代烷基的多卤代烷基。举个例子，单卤代烷基的基团内可具有碘、溴、氯或氟原子。二卤代和多卤代烷基可具有两个或更多个相同卤基原子或者不同卤基的组合。“低级卤代烷基”涵盖具有1-6 个碳原子的基团。卤代烷基的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。“全氟烷基”意指所有氢原子被氟原子取代的烷基。实例包括三氟甲基和五氟乙基。
术语“卤代烷氧基”意指其中任何一个或多个烷基碳原子被如上所定义的一个或多个卤基取代的烷氧基。实例包括单卤代烷氧基、二卤代烷氧基和包括全卤代烷氧基的多卤代烷氧基。实例还包括二氟甲氧基、三氟甲氧基和三氟乙氧基。
术语“杂芳基”表示含有一个或多个选自O、N和S的组的杂原子的芳基环系统，其中环氮和硫原子被任选地氧化，并且氮原子被任选地季胺化。实例包括含有1至4个氮原子的不饱和5至6元杂单环基，例如，吡咯基、咪唑基、吡唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基；含有氧原子的不饱和5-至6-元杂单环基团，例如，吡喃基、2-呋喃基、3-呋喃基等；含有硫原子的不饱和5至6-元杂单环基团，例如，2-噻吩基、3-噻吩基等；含有1 至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和5-至6-元杂单环基团，例如，噁唑基、异噁唑基、噁二唑基[例如，1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基]；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和5至6-元杂单环基团，例如，噻唑基、噻二唑基[例如，1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基]。
术语“杂芳酰基”涵盖其中杂芳基如本文所定义的杂芳基-C(O)-基团。杂芳酰基包括但不限于噻吩酰基(thiophenoyl)、烟酰基、吡咯-2- 基羰基和吡啶酰基(pyridinoyl)。
术语“杂环基”(或“杂环”)涵盖饱和及部分饱和的含有杂原子的环基团，其中杂原子可选自氮、硫和氧。杂环包含单环6-8元环，以及 5-16元二环环系统(其可包括桥接稠合和螺稠合的二环环系统)。它不包括含有-O-O-、-O-S-或-S-S-部分的环。
饱和杂环基团的实例包括含有1至4个氮原子的饱和3-至6-元杂单环基团[例如吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、吡咯啉基、哌嗪基]；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的饱和3至6-元杂单环基团[例如吗啉基]；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的饱和3至6-元杂单环基团[例如，噻唑烷基]。部分饱和杂环基的实例包括二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、二氢噻唑基等。
部分饱和及饱和杂环基团的具体实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、吡咯啉基、吡唑烷基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、噻唑烷基、二氢噻吩基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、异色满基、色满基、1,2-二氢喹啉基、1,2,3,4-四氢-异喹啉基、1,2,3,4-四氢-喹啉基、 2,3,4,4a,9,9a-六氢-lH-3-氮杂-芴基、5,6,7-三氢-l,2,4-三唑并[3,4-a]异喹啉基、3,4-二氢-2H-苯并[l,4]噁嗪基、苯并[l,4]二噁烷基、2,3-二氢 -1H-1λ’-苯并[d]异噻唑-6-基、二氢吡喃基、二氢呋喃基和二氢噻唑基等。
杂环基团还包括其中杂环基团与芳基稠合(fused/condensed)的基团：含有1至5个氮原子的不饱和稠合杂环基团，例如，吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并三唑基、四唑并哒嗪基[例如，四唑并[1,5-b]哒嗪基]；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和稠合杂环基团[例如苯并噁唑基、苯并噁二唑基]；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和稠合杂环基团[例如，苯并噻唑基、苯并噻二唑基]；以及含有1至2个氧或硫原子的饱和、部分不饱和及不饱和的稠合杂环基团[例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、2,3-二氢-苯并[1,4]二氧杂环己烯基和二氢苯并呋喃基]。
术语“杂环酰基”涵盖其中杂环基如本文所定义的杂环基-C(O)-基团。实例包括但不限于N-甲基吡咯啉酰基(N-methylprolinoyl)和四氢呋喃酰基(tetrahydrofuranoyl)。
术语“羟基(hydroxy)”或“羟基(hydroxyl)”涵盖-OH。
术语“羟烷基”涵盖其中任何一个或多个烷基碳原子被一个或多个羟基取代的基团。实例包括羟基甲基、2-羟基乙基和(R)-或(S)-1-羟基乙基。
当任何两个取代基或相同取代基的任何两个实例“独立选自”一系列替代基团时，所述基团可以是相同或不同的。例如，如果Ra和 Rb独立选自烷基、氟、氨基和羟烷基，则具有两个Ra基团和两个Rb基团的分子的所有基团均可以是烷基(例如，四个不同的烷基)。可选地，第一Ra可以是烷基，第二Ra可以是氟，第一Rb可以是羟烷基，并且第二Rb可以是氨基(或取自该组的任何其它取代基)。可选地， Ra和第一Rb可以是氟，而第二Rb可以是烷基(即，一些取代基对可以是相同的，而其它对可以是不同的)。在一些实施方案中，可选自一系列替代基团的可变基团的多个实例是独立选择的。
术语“介入性程序”涵盖用于涉及切口、穿刺、进入体腔或使用电离、电磁或声能的诊断或治疗的任何医学程序。
如本文所用，“或”通常应解释为非排他的。例如，“包含A或B 的组合物”的实施方案将通常呈现具有包含A和B两者的组合物的方面，并且“治疗或预防的方法”的实施方案可以治疗、预防或组合二者。然而，“或”应被解释为排除呈现为不能无矛盾地联合的那些方面(例如，组合物的pH在9和10之间，或在7和8之间)。
如本文所用的术语“氧代”涵盖以双键连接的氧原子。
术语“围手术期地”涵盖在医学程序期间(程序中)、之前(程序前) 或之后(程序后)施用化合物。在一个实施方案中，本发明化合物(i)程序前或程序后；以及(ii)程序中施用。本发明化合物通过本领域普通技术人员所熟知的技术施用于手术、诊断或治疗程序部位。化合物可以围手术期施用，其可包括临近手术(即，手术程序之前、期间或之后)。
“药学上可接受的”意指由美国联邦或州政府的管理机构已批准或可批准的，或在美国药典或其它公知的药典中列出的，以用于动物并且更具体地用于人。它可为不是生物上或其它不希望的物质，即，可将所述物质施用于个体而不会引起任何不希望的生物效果或以有害的方式与含有其的组合物的任何组分相互作用。
术语化合物的“药学上可接受的盐”意指药学上可接受(即，在治疗剂量上无毒)且具有母体化合物的所需药理活性的盐。例如，这类盐包括酸加成盐和碱加成盐。药学上可接受的盐的实例包括无机酸加成盐，如氯化物、溴化物、硫酸盐、磷酸盐和硝酸盐；有机酸加成盐，如醋酸盐、半乳糖酸盐(galactarate)、丙酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐，甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和抗坏血酸盐；与酸性氨基酸形成的盐，如天冬氨酸盐和谷氨酸盐；碱金属盐，如钠盐和钾盐；碱土金属盐，如镁盐和钙盐；铵盐；有机碱盐，如三甲胺盐、三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、二环己基胺盐和N,N′-二苄基亚乙基二胺盐；和与碱性氨基酸形成的盐，如赖氨酸盐和精氨酸盐。盐可能在一些情况下是水合物或乙醇溶剂化物。
如本文所用，提及式A、B、C的组合物或其盐涵盖A、A的盐、 B、B的盐、C，或C的盐。
术语“螺环烷基”涵盖其中碳原子上的偕取代基被替换以连接形成1,1-取代的环的环烷基。例如，但不限于，对于作为较长碳链的部分的–C(R1)(R2)-基团，如果R1和R2连接形成合并R1和R2所键合的碳的环丙基环，则其可能是螺环烷基(即，螺环丙基)。
术语“螺杂环基”涵盖其中碳原子上的偕取代基被替换以连接形成1,1-取代的环的杂环烷基。例如，但不限于，对于作为较长碳链的部分的–C(R1)(R2)-基团，如果R1和R2连接形成合并R1和R2所键合的碳的吡咯烷环，则其可能是螺杂环基。
术语“TRPA1调节剂”是可测量地增加或减少TRPA1的活性的组合物。
本公开的化合物可以立体异构体形式存在，其中存在非对称或手性中心。根据手性碳原子周围的取代基的构型将立体异构体命名为(R) 或(S)。本文使用的术语(R)和(S)为如在此以引用方式并入的IUPAC 1974 Recommendations for Section E,FundamentalStereochemistry, Pure Appl.Chem.,(1976),45:13-30中所定义的构型，。本公开涵盖各种立体异构体及其混合物，并且这些异构体(例如，本发明手性化合物的基本上纯的(R)或(S)对映体)明确包括在本公开的范围内。立体异构体包括对映体、非对映体以及对映体或非对映体的混合物。本公开的化合物的单个立体异构体可通过从含有不对称或手性中心的可商购获得的起始材料用合成方法制备，或通过制备外消旋混合物、随后进行本领域普通技术人员熟知的拆分方法来制备。通过以下举例说明这些拆分方法：(1)对映体的混合物附接至手性助剂、通过重结晶或层析分离所产生的非对映体的混合物并且从所述助剂释放光学纯产物或(2)在手性色谱柱上直接分离光学对映体的混合物。
在某些实施方案中，本发明化合物可以N-氧化物形式获得。将本发明化合物中的叔胺基团(即，具有式R3N的化合物)转化成相应的 N-氧化物(即，具有式的化合物)可根据本领域已知的方法用化学方法进行。化合物向N-氧化物的转化还可以在施用于受试者或患者之后发生。在某些情况下，这类转化经酶促催化(例如，通过细胞色素P450酶)。在一些情况下，N-氧化物可以是本发明化合物中存在的叔胺的代谢物。N-氧化物可以是叔胺及其N-去烷基化类似物之间的中间体。取决于特定的化合物，N-氧化物可以比其母体胺更具活性或较不具活性。
当本公开化合物包括F、I、C或H时，本公开不限于这些元素的最常见同位素。含有例如18F、19F、11C、13C、14C、123I、125I、3H 和2H的化合物特别预期为包括在本公开中。本发明化合物可以根据多种已知技术进行放射性标记。化合物可以(例如)通过将卤素的一个或多个放射性同位素(例如，125I)附加于芳族环上，或通过用包含放射性同位素的基团使本发明化合物的氮烷基化进行放射性标记。放射性标记的化合物可用于测量化合物与TRPA1的结合；监测施用化合物的受试者的细胞、组织或器官中的化合物；能够分析化合物代谢；或用于放射治疗技术。本发明放射性标记的化合物还可以用作表征天然 TRPA1配体的研究中的竞争性结合剂。其它元素的同位素可用于与本发明化合物和方法结合。
在上述发明概述、发明详述和以下权利要求中，参考本发明的具体特征和方面，包括方法步骤。本说明书中本发明的公开包括公开的本发明的实施方案中此类特定特征的所有可能组合，程度至少为这类组合是非矛盾的。例如，如果发明详述呈现实施方案的方面A、B和 C，则应理解这也公开了包括A和B两方面、B和C两方面、以及A 和C两方面的具体实施方案，以及具有A、B和C方面的实施方案。
II.本发明化合物
在一个方面，本发明阐述式I化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
A是式Ia的环状基团：
其中Z1、Z2、Z3、Z4和Z5各自是选自由N、CH和CRa组成的组的成员；或者，可选地对于Z1，成员Z1和X连同它们所连接的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至4个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
条件是选自由Z2、Z3和Z4组成的组的至少一个成员是N；
每个Rz是独立选自由卤基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C3烷氧基组成的组的成员；或者，可选地，两个Rz取代基连同它们所连接的碳原子一起连接形成氧代、螺环烷基或螺杂环基；
B是式Ib的环状基团：
其中Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自是独立选自由N、CH和CRb组成的组的成员；或者，可选地，成员-Y2＝Y3-或-Y4＝Y5-组合成选自由 NH、NRc、O和S组成的组的单个成员；
每个Ra和Rb是独立选自由氰基、羧基、C1-C4烷基、C3-C8环烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、卤基、C0-C6氨基、C1-C6酰氨基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C6烷基磺酰基和羟基组成的组的成员；或者，可选地，两个相邻的Ra或Rb连同它们所连接的基团A或B中的原子一起形成另外的稠合的具有0至4个Rz取代基的芳基、杂芳基、环烷基或杂环基环；
每个Rc是独立选自由C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、 (C3-C6环烷基)C1-C3烷基和C1-C7酰基组成的组的成员；
每个u是独立选自0至4的整数；
v是0至5的整数；
X是N或CRd；或者，可选地，X是CRd，其中X和成员Z1与包括它们的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至4个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
每个Rd是独立选自由卤基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、 C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C3-C6环烷基和C3-C6环烷氧基组成的组的成员；
每个L1、L2和L3，如果存在，是独立选自由C＝O、C＝S、C＝NH 和C＝NRc组成的组的成员；
C是式Ic的环状基团：
其中Q是选自由C(Re)(D)、N(E)、F和G组成的组的成员；或者，可选地，成员-W3-Q-或-W4-Q-连接形成成员H；并且
其中W1、W2、W3和W4各自是独立选择的C(Rf)2；或者，可选地，成员-W3-Q-或-W4-Q-连接形成成员H；
Re是选自由氢、C1-C3烷基和C1-C3氟烷基组成的组的成员；或者，可选地，Re和W1、W2、W3或W4的Rf取代基连接形成-(C(Rz)2)t- 桥，其中t是选自2或3的整数；
每个Rf是独立选自由氢、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基和卤基组成的组的成员；或者，可选地，两个相邻的Rf连同它们所连接的基团C 中的原子一起形成另外的具有0至4个Rz取代基的芳基、杂芳基、环烷基或杂环基稠环；或者，可选地，两个偕Rf连同它们所连接的基团C中的原子一起形成具有0至4个Rz取代基的螺环烷基或螺杂环基环；或者，可选地，选自由(W1和W2)、(W2和W3)和(W3和W4) 组成的组的一对Wn的两个轴Rf取代基连接形成-(C(Rz)2)t-桥；或者，可选地，Re和W1、W2、W3或W4的Rf取代基连接形成-(C(Rz)2)t-桥；
每个t是选自2或3的整数；
D是式Id的二环基团：
E是式Ie的二环基团：
F是式If的螺环基团：
G是式Ig的双环螺环基团：
H是式Ih的稠合基团：
其中H环是稠合的五至八元环烷基或杂环基环；
其中v是0至4的整数；并且
其中w是0至2的整数；并且
Y6、Y7、Y8、Y9和Y10，如果存在，各自是独立选自由N、CH 和CRb组成的组的成员；或者，可选地对于Y8和Y9，成员-Y6＝Y7- 或-Y8＝Y9-组合成选自由NRc、O和S组成的组的单个成员。
在一些实施方案中，Q是C(Re)(D)。在一些实施方案中，Q是 N(E)。在一些实施方案中，Q是F。在一些实施方案中，Q是G。在一些实施方案中，成员-W3-Q-或-W4-Q-连接形成成员H。
在一些实施方案中，W1、W2、W3和W4包含1至4个独立选择的除了氢之外的Rf基团。在一些实施方案中，W1、W2、W3和W4包含1至4个独立选择的Rf烷基。
在一些实施方案中，W1和W2组合成单个部分W2(例如，以形成基于吡咯烷的五元C环而不是基于哌啶或哌嗪的六元C环)。
在一些实施方案中，C是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，C是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，一对Wn选自由(W1和W2)和(W3和W4)组成的组。在一些实施方案中，C是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，D是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，D是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，D是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，L1是C＝O。在一些实施方案中，L2是C＝O。在一些实施方案中，L3是C＝O。
在一些实施方案中，该化合物选自由表7中所列的化合物组成的组。在一些实施方案中，该化合物选自由表7中所列的具有“A”-水平活性的化合物组成的组。在一些实施方案中，该化合物选自化合物 49、55、77、99、175和177。
在一些实施方案中，Z1、Z2、Z3、Z4和Z5各自是选自由N、CH 和CRa组成的组的成员。
在一些实施方案中，Z1和X连同它们所连接的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至4个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环。
在一些实施方案中，Z2是N。在一些优选的实施方案中，Z3或 Z4是N。在一些实施方案中，Z3是N。在一些实施方案中，Z4是N。
在一些实施方案中，A是选自由以下组成的组的成员：
及其盐。
在一些实施方案中，A是选自由以下组成的组的成员：
及其盐。
在一些实施方案中，A是选自由以下组成的组的成员：
及其盐。
在一些实施方案中，A是选自由以下组成的组的成员：
及其盐。
在一些实施方案中，Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自是独立选自由N、 CH和CRb组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y1是N。在一些实施方案中，Y1是CH。
在一些实施方案中，Y1是CRb。在一些实施方案中，Y1Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y2是N。在一些实施方案中，Y2是CH。
在一些实施方案中，Y2是CRb。在一些实施方案中，Y2Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y3是N。在一些实施方案中，Y3是CH。
在一些实施方案中，Y3是CRb。在一些实施方案中，Y3Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y4是N。在一些实施方案中，Y4是CH。
在一些实施方案中，Y4是CRb。在一些实施方案中，Y4Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y5是N。在一些实施方案中，Y5是CH。
在一些实施方案中，Y5是CRb。在一些实施方案中，Y5Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
在一些实施方案中，B是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，B是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，B是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，B是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，每个Ra和Rb是独立选自由氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、卤基、C0-C6氨基、C1-C6酰氨基和羟基组成的组的成员。在一些实施方案中，每个Ra和Rb是独立选自由氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基和卤基组成的组的成员。
在一些实施方案中，u是独立选自0至3的整数(例如，0、1、2 或3)。在一些实施方案中，u是独立选自0至4的整数(例如，0、1、 2、3或4)。在一些实施方案中，u是独立选自0至5的整数(例如，0、 1、2、3、4或5)。
在一些实施方案中，v是独立选自0至3的整数(例如，0、1、2 或3)。在一些实施方案中，v是独立选自0至4的整数(例如，0、1、 2、3或4)。在一些实施方案中，v是独立选自0至5的整数(例如，0、 1、2、3、4或5)。
在一些实施方案中，X是N。
在一些实施方案中，每个Rc独立选自由氢、氰基、C1-C3烷基、三氟甲基、环烷基、三氟甲氧基和C1-C3烷氧基组成的组。在一些实施方案中，每个Rc独立选自由氢、氰基、C1-C3烷基、三氟甲基、环丙基、三氟甲氧基和C1-C3烷氧基组成的组。在一些实施方案中，每个Rc独立选自由氢、甲基、溴、氯、三氟甲基、乙基、异丙基、异丁基、环丙基、环丁基和环丙基甲基组成的组。
在一些实施方案中，Y6是N。在一些实施方案中，Y6是CH。
在一些实施方案中，Y6是CRb。在一些实施方案中，Y6Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。在一些实施方案中，Y6Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、-C(O)N(H)Me、-NMe2和-SO2Me组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y7是N。在一些实施方案中，Y7是CH。
在一些实施方案中，Y7是CRb。在一些实施方案中，Y7Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。在一些实施方案中，Y7Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、-C(O)N(H)Me、-NMe2和-SO2Me组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y8是N。在一些实施方案中，Y8是CH。
在一些实施方案中，Y8是CRb。在一些实施方案中，Y8Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。在一些实施方案中，Y8Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、-C(O)N(H)Me、-NMe2和-SO2Me组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y9是N。在一些实施方案中，Y9是CH。
在一些实施方案中，Y9是CRb。在一些实施方案中，Y9Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。在一些实施方案中，Y9Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、-C(O)N(H)Me、-NMe2和-SO2Me组成的组的成员。
在一些实施方案中，Y10是N。在一些实施方案中，Y10是CH。
在一些实施方案中，Y10是CRb。在一些实施方案中，Y10Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。在一些实施方案中，Y10Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、-C(O)N(H)Me、-NMe2和-SO2Me组成的组的成员。
在涉及马库什(Markush)组的方面或实施方案中，在一些其它实施方案中，本发明仅涉及马库什组的单个成员。
在一些实施方案中，是选自由以下组成的组的成员：
在一些实施方案中，是选自由以下组成的组的成员：
在涉及马库什组的方面或实施方案中，在一些其它实施方案中，本发明仅涉及马库什组的单个成员。
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
在一些实施方案中，化合物合并一个或多个针对式II或式III所述的实施方案的结构特征的特征。在一些实施方案中，化合物组合两个(或更多个)实施方案的特征。
在一个方面，本发明提供式II化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
A是式IIa的环状基团：
其中Z1、Z2、Z3、Z4和Z5各自是选自由N、CH和CRa组成的组的成员；或者，可选地对于Z1，成员Z1和X连同它们所连接的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至5个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
条件是选自由Z2、Z3和Z4组成的组的至少一个成员是N；
每个Rz是独立选自由卤基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C3烷氧基组成的组的成员；或者，可选地，两个Rz取代基连同它们所连接的碳原子一起连接形成氧代、螺环烷基或螺杂环基；
B是式Ib的环状基团：
其中Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自是独立选自由N、CH和CRb组成的组的成员；或者，可选地，成员-Y2＝Y3-或-Y4＝Y5-组合成选自由 NH、NRc、O和S组成的组的单个成员；
每个Ra和Rb是独立选自由氰基、羧基、C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、C3-C8环烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、卤基、C0-C6氨基、C1-C6酰氨基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C6烷基磺酰基和羟基组成的组的成员；或者，可选地，两个相邻的Ra或Rb连同它们所连接的基团A或B中的原子一起形成另外的稠合的具有0至5 个Rz取代基的芳基、杂芳基、环烷基或杂环基环；
每个Rc是独立选自由C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、 (C3-C6环烷基)C1-C3烷基和C1-C7酰基组成的组的成员；
每个u是独立选自0至4的整数；
v是0至5的整数；
X是N或CRd；或者，可选地，X是CRd，其中X和成员Z1与包括它们的环中的原子一起形成另外的稠合的具有0至5个Rz取代基的五至八元环烷基或杂环基环；
每个Rd是独立选自由卤基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、 C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C3-C6环烷基和C3-C6环烷氧基组成的组的成员；
L1是选自由C＝O、C＝S、C＝NH和C＝NRc组成的组的成员；
Y6、Y7、Y8、Y9和Y10，如果存在，各自是独立选自由N、CH 和CRb组成的组的成员；或者，可选地对于Y8和Y9，成员–Y6＝Y7- 或-Y8＝Y9-组合成选自由NRc、O和S组成的组的单个成员。
在一些实施方案中，化合物合并一个或多个针对式I或式III所述的实施方案的结构特征的特征。在一些实施方案中，化合物组合两个(或更多个)实施方案的特征。
在一个方面，本发明提供根据式III的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
环A和环B各自独立地是：
5-或6-元环状基团，条件是环A和环B并不都是未取代的苯基；或者
具有任选地1、2、3或4个选自N、O或S的杂原子作为9-10 个成员的部分的9-10-元稠合芳族二环；
Ra和Rb各自独立选自由-CN、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、卤素和羟基组成的组；
任选地，两个Ra连同它们所连接的环A中的原子一起连接形成环；
任选地，两个Rb连同它们所连接的环B中的原子一起连接形成环；
u和v各自独立地是0、1、2或3；
X是CRx或N，其中Rx选自H、-CN、C1-C3烷基、-CF3环丙基和C1-C3烷氧基；
L是–[C(O)]0,1–(CH2)0,1,2–
环C是选项A、选项B或选项C其中：
选项A是任选地具有1-4个选自N和O的杂原子并且任选地被 1-4个R3取代的或稠合8-14元二环状基团或三环环状基团，其中：
Y是键、-CH2-、-S(O)2-、-S(O)-、-C(O)-、-NH-或–O-；条件是如果两个Y是键，则第三个Y是-CH2-；
每个Z独立地是-CH2-、-NH-、–S-或–O-，条件是至少2个Z是 -CH2-；
每个n独立地是0、1或2，前提是如果一个n是0，则另一个n 不是0；
s是0、1、2、3或4；
t是1、2、3或4；
每个R1a独立地是C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、 C1-C4卤代烷基、-CN或卤素；
R1b是：
具有0、1或2个选自S、N和O的杂原子，被一个或多个氧代或(＝S)取代并且任选地被一个或多个选自由卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的8-至9-元二环环状基团，或者
-R4-R5其中每个R4和R5是具有0、1或2个选自N和O的杂原子并且各自任选地被氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和 C1-C4卤代烷基取代的5-至6-元环状基团；
每个R2独立选自由-CN、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、-(C1-C4烷基)-OH、C1-C4卤代烷基、卤素、氧代、羟基以及具有0、1或2个选自N和O的杂原子的5-至9-元单环环状基团或二环环状基团组成的组，并且其中：
如果一个R2是氧代，则t是2或3并且一个R2不是氧代，
如果R2是环状基团，则它任选地被一个或多个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代，并且
任选地，两个R2连同它们所连接的原子一起连接形成任选地被 1-4个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-或6-元环状基团；
一个R3是氧代并且任何剩余的R3独立选自由具有0、1或2个选自N和O的杂原子的5-至9-元单环环状基团或二环环状基团、-CN、 C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷基、卤素、氧代和羟基组成的组，并且如果R3是环状基团，则它任选地被一个或多个选自由卤素、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代；
选项B是如果环A是6-元环状基团，则环C选自由任选地具有 1-4个选自N和O的杂原子并且任选地被1-3个R3取代的稠合8-14 元二环状基团或三环环状基团、组成的组，其中：
Y是键、-CH2-、-S(O)2-、-S(O)-、-C(O)-、-NH-或–O-，条件是如果两个Y是键，则第三个Y是-CH2-；
每个n独立地是0、1或2，前提是如果一个n是0，则另一个n 不是0；
每个Z独立地是-CH2-、-NH-、–S-或–O-，条件是至少2个Z是 -CH2-；
每个R1a独立地是C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、 C1-C4卤代烷基、-CN或卤素；
R1b是：
具有0、1或2个选自S、N和O的杂原子任选地被一个或多个选自由(＝S)、氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-至9-元单环环状基团或二环环状基团，并且其中如果环C是每个n是1并且s是0，则R1b不是苯基、吡啶或嘧啶，或者
-R4-R5其中每个R4和R5是具有0、1或2个选自N和O的杂原子并且各自任选地被氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和 C1-C4卤代烷基取代的5-至6-元环状基团；
每个R2和R3独立选自由具有0、1或2个选自N和O的杂原子的5-至9-元单环环状基团或二环环状基团、-CN、C1-C4烷基、-(C1-C4烷基)-OH、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷基、卤素、氧代和羟基组成的组并且如果R2是环状基团，则它任选地被一个或多个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代；
任选地，两个R2连同它们所连接的原子一起连接形成任选地被 1-4个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-或6-元环状基团；
s是0、1、2、3或4；并且
t是0、1、2、3或4；
条件是，在选项B中，如果X是N，则环C不是或者
选项C是如果环A是除吡啶之外的6-元环状基团，则环C选自由任选地具有1-4个选自N和O的杂原子并且任选地被1-3个R3取代的稠合8-14元二环状基团或三环环状基团、 组成的组其中：
Y是键、-CH2-、-S(O)2-、-S(O)-、-C(O)-、-NH-或–O-，条件是如果两个Y是键，则第三个Y是-CH2-；
每个n独立地是0、1或2，前提是如果一个n是0，则另一个n 不是0；
每个Z独立地是-CH2-、-NH-、–S-或–O-，条件是至少2个Z是 -CH2-；
每个R1a独立地是C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、 C1-C4卤代烷基、-CN或卤素；
R1b是：
具有0、1或2个选自S、N和O的杂原子任选地被一个或多个选自由(＝S)、氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-至9-元单环环状基团或二环环状基团，或者
-R4-R5其中每个R4和R5是具有0、1或2个选自N和O的杂原子并且各自任选地被氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和 C1-C4卤代烷基取代的5-至6-元环状基团；
每个R2和R3独立选自由具有0、1或2个选自N和O的杂原子的5-至9-元单环环状基团或二环环状基团、-CN、-C1-C4烷基、-(C1-C4烷基)-OH、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷基、卤素、氧代和羟基组成的组并且如果R2是环状基团，则它任选地被一个或多个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代；
任选地，两个R2连同它们所连接的原子一起连接形成任选地被 1-4个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-或6-元环状基团；
s是0、1、2、3或4；并且
t是0、1、2、3或4；
条件是，在选项C中，如果X是N，则环C不是
RN是H或C1-C4烷基；并且
Rc是：
任选地被1-4个R4取代的5-6元杂芳基；
具有0、1或2个选自N和O的杂原子并且如果RN不是H则任选地被1-3个R4取代的稠合8-10元环状基团；或者
如果环A是6-元环状基团，则RC是具有0、1或2个选自N和O的杂原子并且任选地被1-3个R4取代的稠合8-10元环状基团，其中：
每个R4独立选自由具有0、1或2个选自N和O的杂原子的5- 至9-元单环环状基团或二环环状基团、-CN、-C1-C4烷基、-(C1-C4烷基)-OH、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷基、卤素、氧代和羟基组成的组；并且
如果R4是环状基团，则它任选地被一个或多个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代。
在一些实施方案中两个R2连同它们所连接的原子一起连接形成任选地被1-4个选自由–CN、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和 C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-或6-元芳基或杂芳基。
在一些实施方案中两个R2连同它们所连接的原子一起连接形成任选地被1-4个选自由卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-或6-元芳基或杂芳基。
在一些实施方案中环A或环B中的至少一个是芳基或杂芳基。
在一些实施方案中环A或环B中的至少一个是6-元芳基或6-元杂芳基。
在一些实施方案中环A和环B二者是6-元芳基或6-元杂芳基。
在一些实施方案中环A和环B二者不是苯基。
在一些实施方案中环A和环B中的至少一个是具有两个杂原子的5-元环状基团。
在一些实施方案中环A是6-元环状基团或5-元环状基团，其中 5-元环状基团包括0、2或3个杂原子。
在一些实施方案中环B是6-元环状基团或5-元环状基团，其中 5-元环状基团包括0、2或3个杂原子。
在一些实施方案中每个Ra独立地是–CN、卤素、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷基；独立地是卤素、C1-C4卤代烷氧基、 C1-C4卤代烷基或C1-C4烷基；独立地是–CN、F、Cl、-OCF3、-OCHF2、–CF3或–CH3；或独立地是F、Cl、-OCF3、-OCHF2、–CF3或–CH3。
在一些实施方案中u是1、2或3，并且每个Ra独立地是F或–CF3。
在一些实施方案中每个Rb独立地是–CN、卤素、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷基；独立地是卤素、C1-C4卤代烷氧基、 C1-C4卤代烷基或C1-C4烷基；独立地是–CN、F、Cl、-OCF3、-OCHF2、–CF3或–CH3；或独立地是F、Cl、-OCF3、-OCHF2、–CF3或–CH3。
在一些实施方案中每个Rb独立地是–CN、卤素、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷基。
在一些实施方案中每个Rb独立地是–CN、F、Cl、-OCF3、-OCHF2、–CF3或–CH3。
在一些实施方案中v是1、2或3并且每个Rb独立地是F或–CF3。
在第一方面环C是
在第二方面环C是
在第一或第二方面的一些实施方案中Y是-CH2-。
在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是具有0、1、2或3个选自S、N和O的杂原子并且被一个或多个选自由氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的5-至9-元单环环状基团或二环环状基团。
在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是其任选地被一个或多个选自由(＝S)、氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代并且其中每个Q独立地选自–N-、-NH-、-CH-和-CH2-前提是不超过三个Q是–N-或-NH-。在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是其任选地被一个或多个选自由氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代并且其中每个Q独立地选自–N-、-NH-、-CH- 和-CH2-前提是不超过三个Q是–N-或-NH-。
在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是其任选地被一个或多个选自由(＝S)、氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代；并且其中Q1是–C-或–N-；Q2是–CH2-、-NH-、-O-或–S-；并且Q3是–CH-或–N-。在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是其任选地被一个或多个选自由卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代并且其中Q1是–C-或–N-；Q2是–CH2-、-NH-、 -O-或–S-；并且Q3是–CH-或–N-。
在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是其任选地被一个或多个选自由(＝S)、氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代；并且其中Q1是–C-或–N-；Q2是–CH2-、-NH-、-O-或–S-；并且Q3是–CH-或–N-。在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是其任选地被一个或多个选自由卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代并且其中Q1是–C-或–N-；Q2是–CH2-、-NH-、 -O-或–S-；并且Q3是–CH-或–N-。
在第一或第二方面的一些实施方案中R1b被F、Cl、Br、I、-CF3、 -OCF3、-OH或C1-C4烷基取代。
在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是被氧代取代并且任选地被一个或多个选自由卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代的9-元二环环状基团。
在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是并且其中任选地被一个或多个选自由(＝S)、氧代、卤素、C1-C4烷基、 C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代。在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是并且其中任选地被一个或多个选自由氧代、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代。在第一或第二方面的一些实施方案中R1b是并且其中任选地被一个或多个选自由卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷氧基和C1-C4卤代烷基组成的组的取代基取代。
在第三方面，环C是
在第三方面的一些实施方案中环C是其中每个Z 独立地是CH2、NH或O；t是1或2并且至少一个R2是氧代。
在第三方面的一些实施方案中t是2并且两个R2是氧代和苯基，其任选地被氟、1-3个卤素或其中之一是氟的2-3个卤素取代。
在第三方面的一些实施方案中一个Z是O并且一个Z是-CH2-； t是2并且两个R2是卤素。
在第三方面的一些实施方案中X是–CRx-并且环C是
在第四方面，环C是任选地被1-4个R3取代的稠合三环环状基团。
在第四方面的一些实施方案中环C是任选地被1-4个R3取代的
还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的如本文任一方面或实施方案所要求保护的化合物；和药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或其混合物。
在一些实施方案中，药物组合物包含选自由以下组成的组的第二治疗剂：i)阿片受体激动剂、ii)阿片受体拮抗剂、iii)钙通道拮抗剂、iv)5-HT受体激动剂、v)5-HT受体拮抗剂vi)钠通道拮抗剂、vii) NMDA受体激动剂、viii)NMDA受体拮抗剂、ix)COX-2选择性抑制剂、x)神经激肽受体拮抗剂，包括NK1拮抗剂、xi)非甾体抗炎药物、 xii)选择性血清素再摄取抑制剂、xiii)选择性血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、xiv)三环抗抑郁药物、xv)去甲肾上腺素调节剂、xvi)5- 脂肪氧合酶抑制剂、xvii)大麻素受体激动剂、xviii)脂肪酸酰胺水解酶抑制剂、ixx)β-肾上腺素能受体激动剂、x)前列腺素受体拮抗剂、xxi) 白三烯受体拮抗剂、xxii)组胺受体拮抗剂、xxiii)甾体类、xxiv)CGRP 拮抗剂、xxv)过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂、和xxvi) 对乙酰氨基酚。
还提供一种治疗或预防疼痛的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量或预防有效量的所公开的化合物。在一些实施方案中治疗的疼痛包括急性疼痛、伤害感受性疼痛、炎性疼痛、神经性疼痛和围手术期疼痛(例如，手术后)。在一些实施方案中治疗的方法还包括施用选自由以下组成的组的第二治疗剂：i)阿片受体激动剂、ii) 阿片受体拮抗剂、iii)钙通道拮抗剂、iv)5-HT受体激动剂、v)5-HT 受体拮抗剂vi)钠通道拮抗剂、vii)NMDA受体激动剂、viii)NMDA 受体拮抗剂、ix)COX-2选择性抑制剂、x)神经激肽受体拮抗剂，包括NK1拮抗剂、xi)非甾体抗炎药物、xii)选择性血清素再摄取抑制剂、 xiii)选择性血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、xiv)三环抗抑郁药物、xv)抗癫痫药物、xvi)5-脂肪氧合酶抑制剂、xvii)大麻素受体激动剂、xviii)脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)抑制剂、ixx)β-肾上腺素能受体激动剂、xx)前列腺素受体拮抗剂、xxi)白三烯受体拮抗剂、xxii)组胺受体拮抗剂、xxiii)甾体类、xxiv)CGRP拮抗剂、xxv)过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂、和xxvi)对乙酰氨基酚。
在一些实施方案中5-HT受体激动剂是5-HT1B受体激动剂或 5HT1D受体激动剂。在一些实施方案中5-HT受体激动剂是曲坦类 (triptan)。在一些实施方案中曲坦类是舒马普坦、利扎曲普坦、那拉曲坦、佐米曲普坦、依来曲普坦、阿莫曲普坦或夫罗曲坦。
在一些实施方案中阿片受体激动剂是吗啡、可待因、羟吗啡酮、喷他佐辛、芬太尼、舒芬太尼、曲马朵、哌替啶、美沙酮或埃托啡。
在一些实施方案中NSAID是阿司匹林、布洛芬、萘普生、酮洛芬、洛索洛芬、美洛昔康或双氯芬酸。
在一些实施方案中COX-2抑制剂是塞来昔布、依托考昔、罗美昔布、帕瑞昔布、罗非昔布或伐地考昔。
还提供一种在手术程序之前、期间或之后治疗或预防疼痛的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量或预防有效量的所公开的化合物的步骤。
III.药物组合物
还提供包含所公开化合物的药物组合物。在第一实施方案中，药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或媒介物和任选地其它治疗和/或预防成分。此类赋形剂是本领域技术人员已知的。对药学上可接受的赋形剂和盐的充分讨论见于Remington'sPharmaceutical Sciences,第18版(Easton,Pennsylvania:Mack Publishing Company,1990)。组合物可以口服、经粘膜、肠胃外、局部、经皮、鼻内、静脉内或通过吸入施用。
取决于施用的预期模式，药物组合物可以呈固体、半固体或液体剂型，诸如例如，片剂、栓剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、液体剂、混悬剂、霜剂、软膏剂、洗剂等，优先呈适用于精确剂量的单次施用的单位剂型。组合物将包括有效量的所选药物和药学上可接受的载体的组合，并且另外可包括其它药学试剂、佐剂、稀释剂、缓冲剂等。
药物组合物包含包括同分异构体、同分异构体的外消旋或非外消旋混合物的所公开的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物连同一种或多种药学上可接受的载体和任选地其它治疗和/或预防成分。
对于固体组合物，常规无毒固体载体包括(例如)药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。
对于口服施用，组合物将通常采用片剂、胶囊剂、软胶囊剂非水溶液剂、混悬剂或糖浆剂形式。片剂和胶囊剂是优选的口服施用形式。口服使用的片剂和胶囊剂将通常包括一种或多种常用载体，如乳糖和玉米淀粉。还通常添加润滑剂如硬脂酸镁。当使用液体混悬剂时，活性试剂可以结合乳化剂和助悬剂。如果需要，也可以添加调味剂、着色剂和/或甜味剂。用于并入本文口服制剂的其它可选成分包括但不限于防腐剂、助悬剂、增稠剂等。
肠胃外施用包括关节内、膀胱内、静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、眼内、玻璃体内、鞘内和皮下施用。用于肠胃外施用的组合物包括水性和非水性、等渗无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预期接收者的生理体液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌混悬剂，其可以包括助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。
本发明化合物的另一个施用模式是用于局部镇痛。硬膜外镇痛和脊髓镇痛提供劳动、手术程序和诊断程序期间疼痛缓解的常用技术。硬膜外镇痛可以通过注入硬膜外腔来施用或留置导管可以直接进入硬膜外腔并且病人接受连续输注或多次注射本发明化合物。施用还可涵盖硬膜外和脊髓镇痛的组合。此外，施用可包括伤口浸润或注射来形成神经丛阻滞。
用于局部、吸入和经皮施用途径的组合物包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、霜剂、凝胶剂、洗剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。除所公开组合物之外，软膏剂、糊剂、霜剂和凝胶剂还可包含赋形剂，如动植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或其混合物。所公开化合物的干粉制剂或气溶胶制剂用于肺部递送。
除所公开组合物之外，粉剂、气溶胶和喷雾剂还可以包含赋形剂，如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可另外含有常规推进剂，如氯氟烃和挥发性未取代的烃，如丁烷和丙烷。透皮贴剂的附加优势是提供所公开化合物到身体的受控递送。这种剂型可以通过将化合物溶解或分散于适当的介质中来制备。吸收增强剂也可以用来增加化合物穿过皮肤的通量。此通量的速率可以通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。
眼科制剂、眼用软膏剂、粉剂、溶液剂等也涵盖在本公开的范围内。眼科施用的制剂包括通常配制成无菌水性溶液并且与眼相容。配制旨在直接应用于眼的眼科制剂以具有与眼相容的pH和张力。pH 范围的实例是4至9，更优选5.5至8.5，且最优选7至8。溶液中一种或多种所公开化合物的渗透压是200至350毫摩尔/千克(mOsm/kg) 或250至330mOsm/kg。优选使用非离子型渗透压调节剂。实例包括丙二醇、丙三醇、木糖醇或其组合。也可利用硼酸作为眼科制剂中的渗透压调节剂。硼酸(如果利用)将存在于组合物中作为离子型和非离子型种类的混合物。眼科制剂可包含各种类型的药学赋形剂，如表面活性剂、粘度调节剂如羧甲基纤维素、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等，前提是这类赋形剂是非离子型的。一种或多种传统的抗菌防腐剂，如苯扎氯铵、聚季铵盐-1或EDTA可以存在于眼科制剂中。总组成可包括足够的抗菌活性以满足USP/FDA/ISO防腐剂功效需求。眼科制剂可以制成单剂量或多剂量包装。
药物组合物可以通过药学和药物递送领域熟知的任何方法来制备。一般来说，制备组合物的方法包括将活性成分与包含一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。药物组合物通常是通过使活性成分与液体载体或微细固体载体或两者均匀并紧密地结合，随后在需要时使产物成型为所需制剂来制备。
IV.治疗疼痛的方法
提供通过所公开化合物治疗疼痛的方法。由所提供的化合物治疗的疼痛的示例性类型包括(1)急性、慢性、内脏性、炎性和/或神经性疼痛综合征；(2)来源于外伤性神经损伤、神经压迫或卡压、急性疱疹和疱疹后神经痛、三叉神经痛、纤维肌痛、糖尿病性神经病变、癌症和/或化疗的疼痛或与上述有关的疼痛；(3)下背疼痛；(4)幻肢疼痛； (5)来源于包括骨关节炎、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风、神经性关节病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、其它脊椎关节病、结晶样关节病或系统性红斑狼疮(SLE)的炎性疾病的疼痛；(6)头痛、偏头痛和丛集性头痛；(7)HIV-和HIV治疗-诱导的神经病变、慢性骨盆疼痛、神经瘤疼痛、复杂的局部疼痛综合征；或(8)中风或神经创伤。
本发明化合物应用在预防、减少或抑制各种手术和介入程序中的急性和/或慢性疼痛，包括手术、诊断和治疗程序。介入程序被定义为用于诊断或治疗的任何程序，包括切口；穿刺；进入体腔；或使用电离、电磁或声能。
在一些实施方案中，在围手术期施用化合物，其可包括临近手术。在一些实施方案中，在程序前或程序后以及程序中施用本发明化合物。在一些实施方案中，通过本领域普通技术人员所熟知的技术将本发明化合物施用于手术、诊断或治疗程序部位。在一些实施方案中，手术后疼痛通过本发明方法来治疗。
治疗疼痛的方法通常包括向有此需要的受试者施用本发明化合物。在一些实施方案中，治疗疼痛的方法包括调节受试者中TRPA1 (SEQ ID NO:1)或其变体(例如，选自SEQID NOS:2-7的变体)的活性。调节TRPA1的活性可包括激活TRPA1或抑制TRPA1。在一些实施方案中，治疗疼痛的方法包括向受试者施用本发明化合物并调节受试者中TRPA1(SEQ IDNO:1)的活性。在一些实施方案中，治疗疼痛的方法包括向受试者施用本发明化合物以及抑制受试者中TRPA1(SEQ ID NO:1)的活性。
在一些实施方案中，治疗疼痛包括施用所公开化合物和选自以下类别中的一种或多种的第二化合物：i)阿片受体激动剂、ii)阿片受体拮抗剂、iii)钙通道拮抗剂、iv)血清素(5-HT)受体激动剂、v)5-HT受体拮抗剂vi)钠通道拮抗剂、vii)NMDA受体激动剂、viii)NMDA受体拮抗剂、ix)COX-2选择性抑制剂、x)神经激肽受体拮抗剂，包括 NK1拮抗剂、xi)非甾体抗炎药物(NSAID)、xii)选择性血清素再摄取抑制剂、xiii)选择性血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、xiv)三环抗抑郁药物、xv)去甲肾上腺素调节剂、xvi)5-脂肪氧合酶抑制剂、xvii) 大麻素受体激动剂、xviii)脂肪酸酰胺水解酶抑制剂、ixx)β-肾上腺素能受体激动剂、x)前列腺素受体拮抗剂、xxi)白三烯受体拮抗剂、xxii) 组胺受体拮抗剂、xxiii)甾体类、xxiv)CGRP拮抗剂、xxv)过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂、和xxvi)对乙酰氨基酚。
5-HT受体激动剂的实例包括5-HT1B受体激动剂和5-HT1D受体激动剂。5-HT1B和5-HT1D受体激动剂的实例包括曲坦类诸如舒马普坦、利扎曲普坦、那拉曲坦、佐米曲普坦、依来曲普坦、阿莫曲普坦和夫罗曲坦。阿片受体激动剂的实例包括吗啡、可待因、氢可酮、羟吗啡酮、喷他佐辛、纳布啡、芬太尼、舒芬太尼、曲马朵、哌替啶、美沙酮和埃托啡。NSAID的实例包括阿司匹林、布洛芬、萘普生、酮洛芬、氟比洛芬、洛索洛芬、吲哚美辛、依托度酸、二氟尼柳、酮咯酸、萘丁美酮、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康和双氯芬酸。COX-2抑制剂的实例包括塞来昔布、依托考昔、罗美昔布、帕瑞昔布、罗非昔布和伐地考昔。PPAR激动剂的实例包括PPAR-γ亚型诸如噻唑烷二酮类，其实例包括罗格列酮、比格列酮和曲格列酮。有用的PPAR激动剂还包括PPAR-α亚型激动剂。钠通道拮抗剂的实例包括利多卡因、布比卡因、依替卡因、罗哌卡因(ropivicaine)、甲哌卡因(mepivicaine)、普鲁卡因、2-氯普鲁卡因、普莫卡因、丙胺卡因、丙美卡因和丁卡因。
在一些实施方案中，治疗疼痛的方法还包括施用镇痛剂、抗抑郁药、抗焦虑药、止吐药、抗癫痫药或抗痉挛剂。
在本发明方法中化合物可以任何合适剂量施用。一般而言，本发明化合物以约0.01毫克至约100毫克/千克受试者体重(即，约0.01-100 mg/kg)范围的剂量施用。化合物的剂量可以是(例如)约0.01-100mg/kg 或约0.5-50mg/kg或约1-25mg/kg或约2-10mg/kg。化合物的剂量可以是约0.01、0.05、0.1、0.25、0.50、0.75、1、2、3、4、5、10、15、 20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、85、90、95 或100mg/kg。剂量可以根据使用的特定化合物、患者的需求、受治疗的疼痛的类型和严重程度、以及施用的特定制剂而变化。一般而言，施用于患者的剂量足以引起患者中的有益治疗反应。剂量的大小还将由特定患者中伴随药物施用的任何不利副作用的存在、性质和程度确定。特定情况下合适剂量的确定在典型从业者的技能内。在适合治疗疼痛的一段时间内可以将总剂量分开并逐份施用。
在一些实施方案中，本发明阐述用于药物的化合物或制剂，如在本文的一个实施方案中所述。在一些实施方案中，本发明阐述化合物或制剂在制造用于治疗疼痛(例如，针对在本文方法实施方案中所述的一个病症)的药物中的用途，如在本文的一个实施方案中所述。
本发明化合物可使用本文所述的任何药物组合物来施用。本领域技术人员将理解组合物的类型和施用途径将部分取决于诸如所治疗疼痛的类型和严重程度的因素。在一些实施方案中，急性疼痛通过肠胃外注射本发明化合物的溶液剂或混悬剂来治疗。在某些其它实施方案中，慢性疼痛通过口服施用呈诸如片剂、丸剂或胶囊剂形式的本发明化合物来治疗。
本发明化合物的施用可进行一段时间，这将根据所治疗疼痛的类型、其严重程度和患者的整体病状而变化。可以(例如)每小时、每2 小时、三小时、四小时、六小时、八小时或每天两次包括每12小时或其任何中间间隔进行施用。施用可以每天一次，或每36小时或48 小时一次，或以其它间隔进行。治疗后，可以监测患者的病状变化和疼痛缓解。如果患者对特定剂量水平不产生明显响应，则可以增加化合物剂量，或者如果观察到疼痛缓解或消失，或如果发现伴随特定剂量的不可接受的副作用，则可以减少剂量。
治疗有效量的本发明化合物可以施用于包括剂量间至少1小时，或6小时，或12小时，或24小时，或36小时，或48小时间隔的治疗方案中的受试者。施用可以至少72、96、120、168、192、216或 240小时或等效数量天数的间隔进行。剂量方案可以由两个或更多个不同间隔组组成。例如，剂量方案的第一部分可以每天多次、每天、每隔一天或每三天施用于受试者。剂量方案可以每隔一天、每三天、每周、每两周或每月给受试者给药开始。给药方案的第一部分可以施用(例如)长达30天，诸如7、14、21或30天。以每周、每14天或每月施用的不同间隔施用的给药方案的随后第二部分可任选地随后进行，持续4周长达两年或更久，诸如4、6、8、12、16、26、32、 40、52、63、68、78或104周。可选地，如果在患者中疼痛减弱或通常改善，则剂量可以维持或保持在低于最大量。如果疼痛再次发生，则第一剂量方案可以重新开始直到发现改善，并且可以再次进行第二给药方案。必要时该循环可以重复多次。
用于体内测试的动物疼痛模型
动物模型用于理解疼痛机制并针对其最优管理开发有效治疗。已开发许多疼痛模型以模拟具有不同病因学的临床疼痛病状。这些模型的开发极大地有助于理解急性和慢性疼痛及潜在的外周机制。这包括 TRPA1在急性和慢性疼痛模型中的作用。基于这些动物疼痛模型，研究已导致开发新的疼痛管理治疗剂，并且使用这些动物模型获得的临床前数据已成功地转化为临床研究中的有效疼痛管理。使用具体的方法学来创建每个动物模型。在具体疼痛模型的背景下来解释来自每个不同模型的数据。
疼痛模型的数据分析
在评估急性、炎性、神经性疼痛和围手术期(例如，手术后)疼痛的充分表征的体内模型中来评价化合物。将动物随机分配到每个处理组。将结果表示为平均值+S.E.M。每只大鼠或小鼠的逆转百分比计算为(给药后–给药前)/(损伤前-给药前)x100。100％对应于痛觉过敏或触摸痛的完全逆转，等效于未损伤值，并且0％对应于与损伤后基线无差异的值。适当时，使用单因素ANOVA或双因素ANOVA(针对给药和给药后时间)测试和随后的Bonferroni事后检验来分析结果用于多重比较(Prism,Graph Pad,San Diego,CA)。ED50计算为对应于50％作用(100％作用对应于损伤不存在时恢复到基线值)的剂量。一般而言，实验和对照组每组包含至少六只动物。
V.实施例
实施例1.本发明化合物的合成
分析型TLC在Merck硅胶60F254铝背板上进行。通过UV光和/ 或用I2或高锰酸钾溶液染色然后加热使化合物可视化。在硅胶上进行快速柱色谱。在具有BBO(宽带观察)和BBFO(宽带氟观察)探针的 Bruker Avance-400MHz光谱仪上记录1H-NMR谱。参考作为内标的四甲基硅烷低磁场以百万分率(ppm)来表示化学位移(δ)。将裂分模式指定为s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)和 br s(宽单峰)。耦合常数(J)以赫兹(Hz)给出。使用电喷射电离(ESI)技术在Acquity BEH C-18柱(2.10×100mm,1.70μm)或Acquity HSS-T3(2.1x100mm,1.8μm)上进行LCMS分析。
以下溶剂、试剂或科学术语可由其缩写表示：
TLC 薄层色谱
CDCl3 氘代氯仿
DCM 二氯甲烷
THF 四氢呋喃
MeOH 甲醇
EtOH 乙醇
IPA 异丙醇
EtOAc 乙酸乙酯
Et2O 乙醚
DMF N,N-二甲基甲酰胺
TEA/Et3N 三乙胺
DIPEA 二异丙基乙胺(Hunig氏碱)
LiHMDS 双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂
HATU N,N,N,N-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐
AcOH 乙酸
TFA 三氟乙酸
mL 毫升
mmol 毫摩尔
h 小时
min 分钟
g 克
mg 毫克
μL 微升
M 摩尔浓度
μM 微摩尔浓度
μm 微米
N 标准浓度
eq 当量
rt或RT 室温，环境温度，约27℃
MS 质谱分析法
Hz 赫兹
在以下方案中，相同编号的化合物不必相同。每个方案重新开始编号。
所公开的化合物可根据以下一般方案A制备。
方案A
该方案可以进行修改以通过用提供所需环或–N(RN)(RC)的那些材料替代各种起始材料来提供所公开化合物的各种环A和B以及环 C或–N(RN)(RC)。使用以下方案A-1代替A，可以制备如本文所示在吡唑4-位上具有取代(诸如–CH3)的组合物。
方案A-1
在一个实施方案中，可根据方案B制备化合物。
方案B
2,4-二氧代-4-(吡啶-4-基)丁酸乙酯(B-2)的制备:将4-乙酰基吡啶 (10.0g,82.55mmol)在乙醚(160mL)中的溶液冷却至-78℃然后加入 LiHMDS(15.16g,90.80mmol)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45 min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物(18.0g,98％)，将其不经纯化进行下一步骤。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.66(d,J＝4.80Hz,2H),7.70(d, J＝5.20Hz,2H),6.43(s,1H),4.15(q,J＝7.20Hz,2H)和1.25(t,J＝7.20 Hz,3H).
1-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(B-3)的制备:向2,4- 二氧代-4-(吡啶-4-基)丁酸乙酯B-2(18g,81.45mmol)在EtOH(500 mL)中的溶液中加入盐酸苯肼(9.68g,89.59mmol)和乙酸(140.0mL)。将所得反应混合物在90℃下搅拌3-4h。反应完成后(TLC监测)蒸发溶剂并将残余物直接经硅胶(100-200目，10％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物(8.0g,33％)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.55(d,J＝6.0Hz,2H),7.51(m, 3H),7.38(m,3H),7.24(m,2H),4.35(q,J＝7.20Hz,2H)和1.32(t,J＝ 7.20Hz,3H).
1-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸的制备(B-4):向1-苯基 -5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯B-3(5.50g,18.77mmol)在EtOH (110mL)中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(2.25g溶解于 5.50mL H2O中)。将所得溶液在室温下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4-5然后用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机物经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩以得到呈白色固体的所需产物(3.0g,61％)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.11(br s,1H),8.55(d,J＝5.60 Hz,2H),7.50(m,3H),7.38(m,2H),7.31(s,1H)和7.23(d,J＝6.0Hz, 2H).
制备具有吡啶基环A和苯基环B的最终化合物
方法1:向1-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸4(0.10g,0.38 mmol,1.0当量)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(0.145g, 1.13mmol,3.0当量)和HATU(0.214g,0.56mmol,1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(2.0当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌4-6h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经硅胶(100-200目，1-5％MeOH-DCM)纯化以得到通常呈现良好至极好产率(18-96％)的所需产物。单个产率和溶剂系统示于表1。在后处理后通过用表1中公开的溶剂研磨残余物直接获得化合物14、 31、38和39。使用溶剂系统5％MeOH-DCM经由制备型TLC纯化化合物40。
方法2:向1-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸4(0.10g,0.38 mmol,1.0当量)在DMA(5mL)中的冰冷溶液中逐滴加入甲磺酰氯 (0.129g,1.13mmol,3.0当量)和2,6-二甲基吡啶(0.12g,1.13mmol,3.0 当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.30当量)然后在50℃进行搅拌6h。反应完成后(TLC监测)，然后将溶液冷却至室温，用冰冷的水(25-50mL)稀释然后用EtOAc(3 x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经硅胶(100-200目，1-2％MeOH-DCM)纯化以得到中等产率(21-54％)的所需产物。单个产率和洗脱化合物的溶剂系统在表1中。
方法3:将1-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸4(0.10g,0.38 mmol,1.0当量)和SOCl2(0.15g,1.13mmol,3.0当量)的混合物加热至 90℃保持2h。反应完成后(通过加入MeOH以将其转化成Me酯来进行TLC监测)，反应混合物减压浓缩。同时在另一个RB烧瓶中，向相应的胺(对于酸1.50当量)在THF(5mL)中的冰冷溶液中加入NaH (对于酸1.50eq或对于胺1.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌1h 然后加入因此产生于THF中的酰基氯溶液。将所得反应混合物在室温下搅拌5-6h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质用冰冷的水淬灭并用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水 Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经硅胶(100-200目，2-5％ MeOH-DCM)纯化以得到中等产率(10-15％)的所需产物。单个产率和洗脱化合物的溶剂系统提供于表1中。
分析仪器细节:在Bruker 400MHz光谱仪上获得1H-NMR谱，同时在Acquity C-18柱(2.10mm x 100mm,1.70μm)上使用电喷射电离(ESI)技术(制造商：Waters)进行LCMS分析。参考作为内标的四甲基硅烷低磁场以百万分率(ppm)来表示化学位移(δ)。将裂分模式指定为s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)和br s(宽单峰)。耦合常数(J)以Hz给出。
表1示出最终化合物的列表数据，包括合成最终化合物的方法。用于制备以下化合物(经由方法1、2或3)的胺可商购获得或可由普通技术人员合成。
表1.本公开的实例化合物。
方案C
制备化合物C-2(i,l)的一般程序：将化合物C-1(i,l)(1当量)在乙醚中的溶液冷却至-78℃然后加入LiHMDS(1.10当量)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC 和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物C-2(i,l)，其不经纯化进行下一步骤。
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(C-2i): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.97(s,1H),7.70(s,1H),8.14(m, 1H),7.43(m,1H),6.41(s,1H),4.13(q,J＝6.8Hz,2H)和1.23(t,J＝7.2 Hz,3H).MS:220.12(M-H)+。产率：88％。
1-(3,5-二甲基吡嗪-2-基)-4-乙氧基-3,4-二氧代丁-1-烯-1-醇锂盐 (C-2l):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.40(s,1H),6.35(s,1H),4.12 (q,J＝7.2Hz,2H),2.55(s,3H),2.32(s,3H)和1.21(t,J＝6.8Hz,3H). MS:249.09(M-H)+。产率：96％。
制备化合物C-3(i,l)的一般程序：向化合物C-2(i,l),(1.0当量) 在IPA中的冰冷溶液中加入(4-(三氟甲基)苯基)肼(1.10当量)和TFA (2.0当量)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200目，10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物C-3(i,l)。
5-(吡啶-3-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(C-3i)： LCMS:362.14(M+H)+,90.26％。产率：71％。
5-(3,5-二甲基吡嗪-2-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(C-3l):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.46(s,1H),7.76(d,J＝8.4Hz, 2H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),7.33(s,1H),3.99(q,J＝7.20Hz,2H),2.43 (s,3H),2.26(s,3H)和1.15(t,J＝7.2Hz,3H)。产率：26％。
制备化合物C-4(i,l)的一般程序：向化合物C-3(i,l)(1.0当量) 在EtOH中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约6。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物C-4(i,l)。
5-(吡啶-3-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(C-4i): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.56(dd,J＝分别1.6&4.8Hz,1H), 8.52(d,J＝1.6Hz,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H), 7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(m,1H)和7.11(s,1H).LCMS:334.11 (M+H)+,97.80％。产率：83％。
5-(3,5-二甲基吡嗪-2-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸 (C-4l):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.46(s,1H),7.76(d,J＝8.4 Hz,2H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),7.33(s,1H),2.43(s,3H)和2.26(s,3H). LCMS:363.16(M+H)+,97.35％。产率：67.50％。
制备最终化合物C-5(i,l)的一般程序：向羧酸C-4(i,l)(1.0当量) 在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(3.0当量)和HATU(1.50 当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入1-(4- 氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL) 稀释然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物使用溶剂系统3-5％ MeOH-DCM经由制备型TLC纯化。最终步骤以50-100mg规模进行。
在一些实施方案中，根据合成方案D制备1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮。
方案D
1-苄基-4-(4-氟苯基氨基)哌啶-4-甲腈(D-2)的制备：向1-苄基哌啶 -4-酮D-1(25g,132.10mmol)在乙酸(80mL)中的冰冷溶液中加入4- 氟苯胺(14.0mL,145.31mmol)和三甲基氰硅烷(26.42mL,198.15 mmol)。将所得反应物质在RT下搅拌18h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至0℃并使用5.0N氢氧化钠溶液将pH调节至约10。将水性部分用DCM(3x250mL)萃取。将合并的有机物经无水 Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈淡黄色固体的所需产物D-2(30g,75％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.32-7.34(m,5H),6.91-6.94(m, 4H),3.55(s,2H),3.47(br s,1H),2.81-2.84(m,2H),2.39-2.45(m,2H), 2.21-2.24(m,2H)和1.87-1.94(m,2H).LC-MS:310.13(M+H)+, 96.16％。
1-苄基-4-(4-氟苯基氨基)哌啶-4-甲酰胺(D-3)的制备：向1-苄基 -4-(4-氟苯基氨基)哌啶-4-甲腈D-2(30g,97.06mmol)的冰冷溶液中加入90％硫酸水溶液(150mL)并将所得反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至0℃并使用5.0N氢氧化钠溶液将pH调节至约10。将水性部分用DCM(3x250mL)萃取。将合并的有机物经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物D-3(27g,87％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.23-7.30(m,5H),6.87-6.91(m, 3H),6.55-6.59(m,2H),5.47(br s,1H),3.93(s,1H),3.48(s,2H), 2.72-2.75(m,2H),2.28-2.35(m,2H),2.04-2.10(m,2H)和1.86-1.89(m, 2H).LCMS:328.12(M+H)+,99.60％。
8-苄基-1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(D-4)的制备：将1-苄基-4-(4-氟苯基氨基)哌啶-4-甲酰胺(2.50g,7.63mmol)在原甲酸三乙酯(3.20mL)和AcOH(1.20mL)中的溶液在密封管中经微波照射至180℃保持30min。将反应混合物用水稀释并用EtOAc(3x100 mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物经硅胶(100-200M,4％MeOH-DCM)纯化以得到呈淡黄色固体的所需产物D-4(1.20g,60％)。LCMS:338.22(M+H)+, 82.22％。
1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(D-5)的制备：向8-苄基 -1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(1.30g,3.85mmol)在 MeOH(16mL)和AcOH(0.40mL)中的溶液中加入10％Pd-C(0.34g) 并将所得溶液在氢气气氛下(1个大气压)在环境温度下搅拌16h。将反应混合物通过CeliteTM床过滤并将滤液减压浓缩以得到呈灰白色固体的所需产物D-5(0.95g,99％)，将其不经进一步纯化原样用于下一步骤。LCMS:250.13(M+H)+,81.19％。
方案D可进行修改以提供除在苯基环4-位之外的位置处的取代以及提供除氟之外的取代。
表2示出根据方案C和D制备的化合物的单个化合物产率：
表2.本公开的实例化合物。
在一些实施方案中，根据方案E制备所公开化合物。
方案E
2,4-二氧代-4-(吡啶-4-基)丁酸乙酯(E-2)的制备：将4-乙酰基吡啶 (10.0g,82.55mmol)在乙醚(160mL)中的溶液冷却至-78℃然后加入 LiHMDS(15.16g,90.80mmol)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45 min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯(13.5mL,98.92mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物(18.0g,98％)，将其不经纯化进行下一步骤。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.66(d,J＝4.80Hz,2H),7.70(d, J＝5.20Hz,2H),6.43(s,1H),4.15(q,J＝7.20Hz,2H)和1.25(t,J＝7.20 Hz,3H).
制备化合物E-3a-f的一般程序：向2,4-二氧代-4-(吡啶-4-基)丁酸乙酯E-2(1.0当量)在IPA中的冰冷溶液中加入相应的肼(1.10当量) 和TFA(2.0当量)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌 4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200目，10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物。
5-(吡啶-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(E-3a): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(d,J＝6.0Hz,2H),7.66(d,J＝8.4 Hz,2H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.17(s,1H),7.11(m,2H),4.44(q,J＝ 7.20Hz,2H)和1.41(t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:362.21(M+H)+, 99.95％。产率：50％。
1-(3,4-二氟苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(E-3b): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(d,J＝6.0Hz,2H),7.31(m,1H), 7.30(s,1H),7.19(m,1H),7.04(m,2H),7.01(m,1H),4.43(q,J＝7.20 Hz,2H)和1.39(t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:330.14(M+H)+,93.07％。产率：55％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (E-3c):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.68(dd,J＝1.6&4.40Hz,2H), 7.60(m,1H),7.36(m,1H),7.14(m,4H),4.44(q,J＝7.20Hz,2H)和 1.39(t,J＝6.80Hz,3H).MS:380.0(M+H)+。产率：45％。
5-(吡啶-4-基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (E-3d):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.67(m,3H),7.92(dd,J＝2.0& 8.40Hz,1H),7.76(s,1H),7.18(m,3H),4.45(q,J＝7.20Hz,2H)和1.42 (t,J＝6.80Hz,3H).LCMS:362.89(M+H)+,98.45％。产率：50％。
1-(吡嗪-2-基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(E-3e):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ9.21(d,J＝1.20Hz,1H),8.62(m,2H),8.60(m, 1H),8.23(dd,J＝1.2&2.40Hz,1H),7.17(d,J＝6.0Hz,2H),7.14(s, 1H),4.45(q,J＝7.20Hz,2H)和1.42(t,J＝6.80Hz,3H).LCMS:296.18 (M+H)+,96.22％。产率：30％。
5-(吡啶-4-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(E-3f): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.72(d,J＝5.60Hz,2H),7.31(m,2H), 7.21(s,1H),7.05(m,2H),4.47(q,J＝6.80Hz,2H)和1.43(t,J＝6.80Hz, 3H).MS:348.12(M+H)+。产率：76％。
制备化合物E-4a-f的一般程序：向化合物(E-3a-f)(1.0当量)在 EtOH中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约6。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物(60-80％)。
5-(吡啶-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(E-4a)：支架 A。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.84(br s,1H),8.58(d,J＝5.60 Hz,2H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.28(m,3H). LCMS:334.13(M+H)+,97.98％。产率：95％。
1-(3,4-二氟苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(E-4b)：支架C。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.17(br s,1H),8.57(d,J＝5.60Hz, 2H),7.69(m,1H),7.54(m,1H),7.22(m,4H).MS:302.18(M+H)+。产率：78％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (E-4c)：支架G。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.60(d,J＝5.6Hz, 2H),7.88(m,1H),7.67(s,1H),7.32(m,4H).LCMS:352.17(M+H)+, 98.60％。产率：92％。
5-(吡啶-4-基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (E-4d)：支架H。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.07(br s,1H),8.81 (s,1H),8.60(d,J＝6.0Hz,2H),8.05(m,2H),7.34(m,3H).LCMS: 335.13(M+H)+,97.97％。产率：75％。
1-(吡嗪-2-基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(E-4e)：支架I。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.40(br s,1H),9.15(s,1H),8.75(d, J＝6.4Hz,1H),8.56(m,2H),8.43(s,1H),7.33(s,3H).LCMS:268.17 (M+H)+,99.0％。产率：74％。
5-(吡啶-4-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(E-4f)：支架 K。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.58(d,J＝5.60Hz,2H),7.58(m, 2H),7.29(d,J＝6.0Hz,2H)和7.16(s,1H).LCMS:320.09(M+H)+, 94.66％。产率：91％。
制备最终化合物(E-5)的一般程序：向羧酸E-4(a-f)(1.0当量)在 DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(3.0当量)和HATU(1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后 (TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL) 萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物使用溶剂系统3-5％MeOH-DCM经由制备型TLC 纯化。最终步骤以50-100mg规模进行。
需要时，根据合成方案D制备1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5] 癸-4-酮。方案D可进行修改以提供除在苯基环的4-位之外的位置处的取代以及提供除氟之外的取代。根据方案E用于制备示于表5的最终化合物的其它胺可商购获得或可由普通技术人员合成。
表5.本公开的实例化合物。
在另一个实施方案中，根据方案F制备本公开化合物。
方案F
2,4-二氧代-4-(吡啶-4-基)丁酸乙酯(F-2)的制备：将4-乙酰基吡啶(10.0g,82.55mmol)在乙醚(160mL)中的溶液冷却至-78℃然后加入 LiHMDS(15.16g,90.80mmol)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45 min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯(13.5mL,98.92mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物(18.0g,98％)，将其不经纯化进行下一步骤。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.66(d,J＝4.80Hz,2H),7.70(d, J＝5.20Hz,2H),6.43(s,1H),4.15(q,J＝7.20Hz,2H)和1.25(t,J＝7.20 Hz,3H).
制备化合物F-3a-j的一般程序：向2,4-二氧代-4-(吡啶-4-基)丁酸乙酯F-2(1.0当量)在IPA中的冰冷溶液中加入相应的肼(1.10当量) 和TFA(2.0当量)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌 4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200目，10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物。
5-(吡啶-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(F-3a): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(d,J＝6.0Hz,2H),7.66(d,J＝8.4 Hz,2H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.17(s,1H),7.11(m,2H),4.44(q,J＝ 7.20Hz,2H)和1.41(t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:362.21(M+H)+, 99.95％。产率：50％。
5-(吡啶-4-基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(F-3b): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.60(d,J＝6.0Hz,2H),7.73(s,1H),7.67 (d,J＝8.0Hz,1H),7.49(m,1H),7.35(m,1H),7.23(s,1H),7.14(m,2H), 4.29(q,J＝7.20Hz,2H)和1.42(t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:362.22 (M+H)+,91.70％。产率：62％。
1-(3,4-二氟苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(F-3c): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(d,J＝6.0Hz,2H),7.31(m,1H), 7.30(s,1H),7.19(m,1H),7.04(m,2H),7.01(m,1H),4.43(q,J＝7.20 Hz,2H)和1.39(t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:330.14(M+H)+,93.07％。产率：55％。
1-(2,4-二氟苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(F-3d): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.62(d,J＝6.4Hz,2H),7.82(m,1H), 7.55(m,1H),7.53(s,1H),7.34(m,3H),4.32(q,J＝7.20Hz,2H)和1.30 (t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:330.21(M+H)+,91.46％。产率：65％。
1-(苯并[d][1,3]二氧代l-5-基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (F-3e):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.57(d,J＝6.0Hz,2H),7.10(m, 3H),6.81(s,1H),6.72(m,2H),6.04(s,2H),4.42(q,J＝7.20Hz,2H)和 1.40(t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:338.20(M+H)+,77.49％。产率：20％。
1-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (F-3f):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.56(dd,J＝1.6&4.40Hz,2H), 7.90(s,1H),7.82(s,2H),7.20(s,1H),7.12(dd,J＝1.6&4.40Hz,2H), 4.45(q,J＝7.20Hz,2H)和1.42(t,J＝7.20Hz,3H).LCMS:430.26 (M+H)+,93.03％。产率：32％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (F-3g):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.68(dd,J＝1.6&4.40Hz,2H), 7.60(m,1H),7.36(m,1H),7.14(m,4H),4.44(q,J＝7.20Hz,2H)和 1.39(t,J＝6.80Hz,3H).MS:380.0(M+H)+。产率：45％。
5-(吡啶-4-基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (F-3h):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.67(m,3H),7.92(dd,J＝2.0& 8.40Hz,1H),7.76(s,1H),7.18(m,3H),4.45(q,J＝7.20Hz,2H)和1.42 (t,J＝6.80Hz,3H).LCMS:362.89(M+H)+,98.45％。产率：50％。
1-(吡嗪-2-基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(F-3i):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ9.21(d,J＝1.20Hz,1H),8.62(m,2H),8.60(m, 1H),8.23(dd,J＝1.2&2.40Hz,1H),7.17(d,J＝6.0Hz,2H),7.14(s, 1H),4.45(q,J＝7.20Hz,2H)和1.42(t,J＝6.80Hz,3H).LCMS:296.18 (M+H)+,96.22％。产率：30％。
1-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(F-3j):1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6):δ8.55(d,J＝6.0Hz,2H),7.51(m,3H),7.38(m,3H), 7.24(m,2H),4.35(q,J＝7.20Hz,2H)和1.32(t,J＝7.20Hz,3H)。产率： 33％。
制备化合物F-4a-j的一般程序：向化合物(F-3a-j)(1.0当量)在 EtOH中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约6。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物(60-80％)。
5-(吡啶-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.84(br s,1H),8.58(d,J＝5.60Hz, 2H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.28(m,3H). LCMS:334.13(M+H)+,97.98％。产率：95％。
5-(吡啶-4-基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.58(d,J＝6.00Hz,2H),7.85(d,J＝ 8.0Hz,1H),7.79(s,1H),7.69(m,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(s, 1H),7.26(m,2H).LCMS:334.13(M+H)+,98.62％。产率：94％。
1-(3,4-二氟苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.17(br s,1H),8.57(d,J＝5.60Hz, 2H),7.69(m,1H),7.54(m,1H),7.22(m,4H).MS:302.18(M+H)+。产率：78％。
1-(2,4-二氟苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4d): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.20(br s,1H),8.56(d,J＝5.60Hz, 2H),7.80(m,1H),7.51(m,1H),7.32(m,2H),7.25(m,2H).LCMS: 301.80(M+H)+,98.31％。产率：85％。
1-(苯并[d][1,3]二氧代l-5-基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (F-4e):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.12(br s,1H),8.56(m,2H), 7.25-7.27(m,3H),7.04(m,1H),6.97(d,J＝8.0Hz,1H),6.79-6.81(m, 1H)和6.14(s,2H).LCMS:310.10(M+H)+,99.56％。产率：82％。
1-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4f): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.17(br s,1H),8.59(d,J＝6.0Hz, 2H),8.26(s,1H),8.07(s,2H),7.32(m,3H).LCMS:402.15(M+H)+, 91.73％。产率：94％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4g): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.60(d,J＝5.6Hz,2H),7.88(m,1H), 7.67(s,1H),7.32(m,4H).LCMS:352.17(M+H)+,98.60％。产率：92％。
5-(吡啶-4-基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (F-4h):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.07(br s,1H),8.81(s,1H), 8.60(d,J＝6.0Hz,2H),8.05(m,2H),7.34(m,3H).LCMS:335.13 (M+H)+,97.97％。产率：75％。
1-(吡嗪-2-基)-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4i):1H-NMR (400MHz,DMSO-d6):δ13.40(br s,1H),9.15(s,1H),8.75(d,J＝6.4 Hz,1H),8.56(m,2H),8.43(s,1H),7.33(s,3H).LCMS:268.17(M+H)+, 99.0％。产率：74％。
1-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(F-4j):1H-NMR(400MHz, DMSO-d6):δ13.11(br s,1H),8.55(d,J＝5.60Hz,2H),7.50(m,3H), 7.38(m,2H),7.31(s,1H)和7.23(d,J＝6.0Hz,2H)。产率：61％。
制备最终化合物(F-5)的一般程序：向羧酸F-4(a-j)(1.0当量)在 DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(3.0当量)和HATU(1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后 (TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL) 萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物使用溶剂系统3-5％MeOH-DCM经由制备型TLC 纯化。最终步骤以75-100mg规模进行。
根据方案F用于制备表6中示出的最终化合物的胺可商购获得或可由普通技术人员合成。
表6.根据方案F中公开的一般方法制备的本公开的其它化合物。
实验程序：
本文报道的产率涉及纯化的产物(除非指出)并且是未优化的。分析型TLC在Merck硅胶60F254铝背板上进行。通过UV光和/或用I2或高锰酸钾溶液染色然后加热使化合物可视化。在硅胶上进行快速柱色谱。在具有BBO(宽带观察)和BBFO(宽带氟观察)探针的BrukerAvance-400MHz光谱仪上记录1H-NMR谱。参考作为内标的四甲基硅烷低磁场以百万分率(ppm)来表示化学位移(δ)。将裂分模式指定为 s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)和br s(宽单峰)。耦合常数(J)以赫兹(Hz)给出。使用电喷射电离(ESI)技术在 Acquity BEH C-18柱(2.10×100mm,1.70μm)或Acquity HSS-T3(2.1 x100mm,1.8μm)上进行LCMS分析。以下溶剂、试剂或科学术语可由其缩写表示：
TLC 薄层色谱
CDCl3 氘代氯仿
DMF N,N-二甲基甲酰胺
TEA/Et3N 三乙胺
DIPEA 二异丙基乙胺(Hunig氏碱)
NBS N-溴代丁二酰亚胺
LiHMDS 双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂
HATU N,N,N,N-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐
AcOH 乙酸
TFA 三氟乙酸
mL 毫升
mmol 毫摩尔
h 小时
min 分钟
g 克
mg 毫克
μl 微升
eq 当量
rt或RT 室温，环境温度，约27℃
MS 质谱分析法
采用下面提到的2种方法中的任一种经由RP制备型HPLC纯化最终化合物。
1.柱：SUNFIRE C 18(19x250)mm，5μ粒径，流动相：A 0.1％在水中的TFA，B ACN
流动模式：
时间 ％A ％B
1.00 50 50
15.00 36 74
15.10 10 90
17.00 10 90
17.10 50 50
20.00 50 50
或
2.柱：X TERRA C 18(19x250)mm，5μ粒径，流动相：A 5mM 在水中的乙酸铵，B ACN
流动模式：
时间 ％A ％B
1.00 60 40
10.00 35 65
11.00 35 65
11.10 60 40
14.00 60 40
方案1
参考文献：WO 2005/040166和Tett.Lett；2007,55,501-502
制备2(a-h)的一般程序：
一般方法A:向1-苄基哌啶-4-酮1.1(5.0-7.0g,1.0当量)在乙酸中的冰冷溶液中加入相应的胺(1.1当量)和三甲基氰硅烷(1.5当量)。将所得反应物质在RT下搅拌18h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至0℃并使用5.0N氢氧化钠溶液将pH调节至约10。将水性部分用DCM(3x250mL)萃取。将合并的有机物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物 1.2(a-h)。
1-苄基-4-((4-氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-a):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.35-7.38(m,5H),6.90-6.95(m,4H),3.54(s,2H),3.48 (br s,1H),2.80-2.84(m,2H),2.38-2.41(m,2H),2.22-2.24(m,2H)和 1.89-1.94(m,2H).LC-MS:310.23(M+H)+,95.66％。产率：58％。
1-苄基-4-((3,4-二氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-b):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.27-7.31(m,5H),7.03-7.08(m,1H),6.75-6.79(m,1H), 6.60-6.63(m,1H),3.59(br s,1H),3.55(s,2H),2.80-2.84(m,2H), 2.41-2.47(m,2H),2.26-2.39(m,2H)和1.87-1.89(m,2H).LC-MS: 328.42(M+H)+,94.27％。产率：40％。
1-苄基-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-c):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.28-7.34(m,5H),7.01-7.05(m,1H),6.95-6.97(m,1H), 6.79-6.82(m,1H),3.57(s,3H),2.80-2.83(m,2H),2.41-2.46(m,2H), 2.24-2.27(m,2H)和1.87-1.92(m,2H).LC-MS:344.28(M+H)+, 99.52％。产率：32％。
1-苄基-4-((3,4,5-三氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-d):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ7.31-7.34(m,5H),6.48-6.51(m,2H),3.73(s,1H), 3.56(s,2H),2.75-2.80(m,2H),2.45-2.48(m,2H),2.29-2.32(m,2H)和 1.86-1.88(m,2H).MS:346.00(M+H)+,99.52％。产率：25％。
1-苄基-4-((4-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-e): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.29-7.31(m,5H),7.10-7.11(m,3H), 3.69(s,1H),3.56(s,2H),2.82-2.85(m,2H),2.45-2.48(m,2H), 2.19-2.22(m,2H)和1.92-1.92(m,2H).LC-MS:378.33(M+H)+, 94.03％。产率：45％。
1-苄基-4-((4-氟-3,5-二甲基苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-f): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.26-7.31(m,5H),6.55-6.57(m,1H), 6.37-6.38(m,1H),3.60(s,1H),3.53(s,2H),2.76-2.81(m,2H), 2.45-2.50(m,2H),2.28-2.32(m,2H),2.09(m,6H),和1.88-1.93(m, 2H).MS:338.33(M+H)+,产率：60％。
1-苄基-4-((4-氟-2-甲氧基苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-g):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ7.31-7.35(m,5H),6.99-7.03(m,1H),6.58-6.62(m, 2H),4.09(s,1H),3.82(s,3H),3.55(s,2H),2.73-2.76(m,2H),2.44-2.47 (m,2H),2.27-2.31(m,2H)和1.90-1.93(m,2H).MS:340.25(M+H)+。产率：60％。
1-苄基-4-((4-(二氟甲氧基)苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(1.2-h): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.25-7.34(m,5H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H), 6.89(d,J＝8.8Hz,2H),3.61(br s,1H),3.49(s,3H),2.80-2.83(m,2H), 2.43-2.47(m,2H),2.17-2.22(m,2H)和1.88-1.94(m,2H).LC-MS: 358.0(M+H)+,96.98％。产率：52.23％。
制备1.3(a-h)的一般程序：一般方法B：将1.2(a-g)(3.0-4.0g,1.0 当量)在90％硫酸水溶液中的冰冷溶液在0℃下搅拌30.0min，然后升温至RT并搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至0℃并使用5.0N氢氧化钠溶液将pH调节至约10。将水性部分用DCM萃取。将合并的有机物经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物1.3(a-g)。
一般方法C:向1-苄基-4-((4-(二氟甲氧基)苯基)氨基)哌啶-4-甲腈1.2-h(2.5g,7.0mmol,1.0当量)在DMSO中的冰冷溶液中加入H2O2 (30％水溶液，1.5当量)和K2CO3(0.2当量)。将所得反应混合物在RT 下搅拌30.0min。反应完成后(TLC监测)，加入H2O并用DCM萃取(3次)。将合并的有机物经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物1.3-h。
1-苄基-4-(4-氟苯基氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-a):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.23-7.25(m,5H),6.85-6.87(m,3H),6.54-6.55(m,2H), 5.47(br s,1H),3.93(s,1H),3.48(s,2H),2.72-2.74(m,2H),2.28-2.29 (m,2H),2.04-2.07(m,2H)和1.86-1.89(m,2H).LCMS:328.22(M+H)+, 98.42％。产率：84％。
1-苄基-4-((3,4-二氟苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-b):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ7.31-7.33(m,5H),6.89-6.92(m,1H),6.79(br s, 1H),6.45-6.48(m,1H),6.29-6.31(m,1H),5.51(br s,1H),3.98(s,1H), 3.49(s,2H),2.74-2.75(m,2H),2.28-2.31(m,2H),2.04-2.07(m,2H)和 1.85-1.87(m,2H).LCMS:346.14(M+H)+,94.52％。产率：85％。
1-苄基-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-c):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ7.28-7.32(m,6H),7.07-7.00(m,2H),6.68(br s, 1H),6.50(br s,1H),5.75(brs,1H),3.42(s,2H),2.50-2.52(m,2H), 2.22-2.24(m,2H),1.98-2.00(m,2H)和1.76-1.79(m,2H).LCMS: 362.05(M+H)+,90.00％。产率：79％。
1-苄基-4-((3,4,5-三氟苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-d):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ7.28-7.34(m,6H),7.11(br s,1H),6.31-6.35(m, 2H),6.11(br s,1H),3.48(s,2H),2.50-2.53(m,2H),2.22-2.25(m,2H), 1.95-1.97(m,2H)和1.77-1.80(m,2H).LCMS:364.00(M+H)+,91.64％。产率：40％。
1-苄基-4-((4-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-e): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.28-7.35(m,5H),7.17-7.22(m,2H), 7.08(br s,1H),6.94-6.95(m,1H),6.73-6.75(m,1H),6.00(br s,1H), 3.42(s,2H),2.49-2.53(m,2H),2.23-2.28(m,2H),1.97-2.02(m,2H)和 1.76-1.80(m,2H).LCMS:396.20(M+H)+,95.56％。产率：45％。
1-苄基-4-((4-氟-3,5-二甲基苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-f): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.28-7.34(m,6H),7.15(br s,1H),7.01(s, 1H),6.21-6.27(m,2H),3.48(s,2H),2.50-2.51(m,2H),2.22-2.24(m, 2H),2.06(d,J＝6.0Hz,6H),1.96-1.99(m,2H)和1.77-1.81(m,2H).MS: 356.37(M+H)+。产率：56.6％。
1-苄基-4-((4-氟-2-甲氧基苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-g): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.22-7.30(m,6H),7.05(br s,1H), 6.80-6.83(m,1H),6.54-6.58(m,1H),6.25-6.28(m,1H),4.55(s,1H), 3.82(s,3H),3.33-3.38(m,2H),2.54-2.56(m,2H),1.94-2.08(m,4H)和 1.80-1.83(m,2H).LCMS:358.40(M+H)+,99.78％。产率：61.38％。
1-苄基-4-((4-(二氟甲氧基)苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(1.3-h): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.21-7.29(m,6H),7.02(br s,1H), 6.90-6.95(m,3H),6.56(d,J＝8.8Hz,2H),3.42(s,3H),2.53-2.59(m, 2H),2.32-2.36(m,2H),1.99-2.11(m,2H)和1.82-1.90(m,2H).MS: 376.30(M+H)+。产率：30％。
制备1.4(a-h)的一般程序：
一般方法D:将化合物1.3(a-c)(2.0-4.0g,1.0当量)在原甲酸三乙酯和AcOH(3:1)中的溶液在密封管中经微波照射至190℃保持2h。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物经硅胶(100-200M,2-4％ MeOH-DCM)纯化以得到呈灰白色固体的所需产物1.4(a-c)。
一般方法E:向化合物1.3(a-h)(1.0-2.5g,1.0当量)在甲醇中的溶液中加入DMF-DMA(3.0当量)。将所得反应物质在65℃下加热h。反应完成后(TLC监测)，将溶剂蒸发至干。将所得粗残余物用乙醚研磨以得到呈灰白色固体产物的所需产物1.4(a-h)。
8-苄基-1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(1.4-a): H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.65(s,1H),7.44-7.46(m,2H), 7.31-7.34(m,2H),7.13-7.16(m,5H),3.41(s,2H),2.66-2.69(m,2H), 2.41-2.44(m,2H)和1.75-1.78(m,4H).MS:338.22(M+H)+。产率：方法D 48％并且方法E 89％。
8-苄基-1-(3,4-二氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(4-b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.69(s,1H),7.66-7.71(m,1H), 7.56-7.61(m,1H),7.19-7.30(m,6H),3.47(s,2H),2.72-2.78(m,2H), 2.43-2.46(m,2H)和1.72-1.80(m,4H).LCMS:356.40(M+H)+,87.67％。产率：方法D 22％并且方法E 85％。
8-苄基-1-(3-氯-4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (1.4-c):LCMS:372.40(M+H)+,75.07％。产率：方法D 20％。
8-苄基-1-(3,4,5-三氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (1.4-d):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.71(s,1H),7.57-7.60(m, 2H),7.24-7.28(m,5H),3.49(s,2H),2.73-2.75(m,2H),2.48-2.49(m, 2H),1.83-1.85(m,2H)和1.71-1.77(m,2H).MS:373.96(M+H)+。产率：方法E 65％。
8-苄基-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4- 酮(1.4-e):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.22(s,1H),7.33-7.42(m, 8H),3.50(s,2H),2.92-2.95(m,2H),2.68-2.70(m,2H),1.90-1.91(m, 2H)和1.72-1.73(m,2H).MS:406.56(M+H)+。产率：方法E 63％。
8-苄基-1-(4-氟-3,5-二甲基苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (1.4-f):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.15(s,1H),7.48-7.49(m, 4H),7.26-7.28(m,1H),7.80-7.81(m,2H),3.60(s,2H),2.87-2.91(m, 2H),2.59-2.61(m,2H),2.28(s,6H),1.88-1.89(m,2H)和1.56-1.58(m, 2H).MS:366.35(M+H)+。产率：方法E 79％。
8-苄基-1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (1.4-g):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.01(s,1H),7.22-7.26(m, 5H),7.08-7.12(m,1H),6.70-6.74(m,2H),3.77(s,3H),3.55(s,2H), 2.87-2.95(m,2H),2.59-2.62(m,2H)和1.83-1.98(m,4H).LCMS:368.00(M+H)+,90.91％。产率：方法E 78％。
8-苄基-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (1.4-h):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.67(s,1H),7.45(d,J＝8.8 Hz,2H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.21-7.26(m,5H),3.46(s,2H), 3.28-3.32(m,1H),2.67-2.72(m,2H),2.45-2.49(m,2H)和1.74-1.75(m, 4H).MS:386.0(M+H)+。产率：方法E 53％。
制备1.5(a-h)的一般程序：
一般方法F:向化合物1.4(a-h)(0.50-1.5g,1.0当量)在MeOH和 AcOH(40:1,20mL)中的溶液中加入Pd-C(10mol％w/w)并将所得溶液在氢气气氛下(1个大气压)在环境温度下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩。将残余物经硅胶(碱性氧化铝， 2-4％MeOH-DCM)纯化以得到呈灰白色固体的所需产物1.5(a-h)。
1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(1.5-a):中间体1: 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.81(br s,1H),7.05-7.08(m,2H), 6.95-6.96(m,2H),4.58(s,2H),3.34-3.37(m,3H),2.97-2.99(m,2H), 2.35-2.36(m,2H)和1.61-1.63(m,2H).LCMS:250.23(M+H)+,88.25％。产率：90％
1-(3,4-二氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(1.5-b):中间体2:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.77(br s,1H),7.17-7.28(m, 2H),6.90-6.94(m,1H),6.68-6.71(m,1H),4.55(s,2H),3.22-3.25(m, 2H),2.94-2.97(m,2H),2.37-2.40(m,2H)和1.54-1.57(m,2H).MS: 268.25(M+H)+。产率：86％
1-(3-氯-4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(1.5-c):中间体3: MS:284.12(M+H)+。产率：50％。
1-(3,4,5-三氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(1.5-d):中间体4: 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.27(s,1H),9.07(s,1H),6.90-6.92 (m,1H),4.59(s,2H),3.28-3.33(m,2H),2.74-2.76(m,2H),2.50-2.52(m, 2H)和1.82-1.85(m,2H).MS:286.24(M+H)+。产率：60％。
1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(1.5-e): 中间体5:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.77(br s,1H),7.33-7.35 (m,2H),6.92-6.93(m,1H),6.70-6.71(m,1H),4.62(s,2H),3.17-3.20(m, 2H),2.88-2.90(m,2H),2.33-2.39(m,2H)和1.53-1.56(m,2H).LCMS: 318.29(M+H)+,90.82％。产率：64％。
1-(4-氟-3,5-二甲基苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(1.5-f):中间体-6:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.83(s,1H),7.66-7.68(m, 1H),6.60-6.66(m,2H),4.54(s,2H),3.38-3.41(m,2H),3.12-3.16(m, 2H),2.50-2.53(m,2H),2.19(s,6H)和1.67-1.70(m,2H).MS:278.32 (M+H)+。产率：80％。
1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(1.5-g):中间体7:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.51(s,1H),7.62-7.69(m,1H), 7.22-7.26(m,1H),6.92-6.98(m,1H),6.72-6.76(m,1H),4.66(s,2H), 3.76(s,3H),3.19-3.26(m,2H),2.90-3.01(m,2H),2.50-2.54(m,2H) 和1.50-1.52(m,2H).MS:280.26(M+H)+。产率：71％。
1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(1.5-h):中间体8:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.05(br s,1H),7.10-7.13(m, 3H),6.93-6.96(m,2H),4.57(s,2H),3.25-3.28(m,3H),2.97-2.99(m, 2H),2.40-2.42(m,2H)和1.59-1.64(m,2H).MS:298.34(M+H)+。产率： 78％。
方案2
制备2.6(a-b)的一般程序：根据一般方法A制备。
1-苄基-4-((4-溴苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(2.6-a):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.35-7.38(m,7H),6.79(d,J＝8.4Hz,2H),6.30(br s, 1H),3.51(s,2H),2.74-2.76(m,2H),2.28-2.31(m,4H)和1.81-1.83(m, 2H).MS:369.98(M+H)+。产率：52％。
1-苄基-4-((4-碘苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(2.6-b):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.45(d,J＝7.6Hz,2H),7.26-7.30(m,5H),6.68(d, J＝2.0Hz,2H),6.32(br s,1H),3.51(s,2H),2.73-2.75(m,2H),2.28-2.34 (m,4H)和1.81-1.83(m,2H).MS:418.35(M+H)+。产率：40％。
制备2.7(a-b)的一般程序：根据一般方法B制备。
1-苄基-4-(4-溴苯基氨基)哌啶-4-甲酰胺(2.7-a):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.34-7.56(m,10H),6.51-6.53(m,2H),3.41(s,2H), 2.66-2.72(m,2H),2.23-2.26(m,2H),1.96-1.98(m,2H)和1.78-1.82(m, 2H).MS:388.26(M+H)+。产率：60％。
1-苄基-4-(碘苯基氨基)哌啶-4-甲酰胺(2.7-b):1H-NMR(400MHz, CDCl3):δ7.26-7.37(m,8H),7.01(s,1H),6.41(d,J＝8.4Hz,2H),5.72 (br s,1H),3.41(s,2H),2.49-2.52(m,2H),2.20-2.25(m,2H),1.95-2.00 (m,2H)和1.78-1.81(m,2H).LCMS:436.32(M+H)+,93.67％。产率： 41％。
制备2.8(a-b)的一般程序：根据一般方法E制备。
8-苄基-1-(4-溴苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(2.8-a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.25(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H), 7.26-7.31(m,5H),7.08(d,J＝7.2Hz,2H),3.59(s,2H),2.86-2.88(m, 2H),2.30-2.35(m,2H),2.02-2.06(m,2H)和1.65-1.68(m,2H).LCMS: 398.31(M+H)+,83.8％。产率：89％。
8-苄基-1-(4-碘苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(2.8-b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.70(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,2H), 7.19-7.30(m,7H),3.47(s,2H),2.72-2.78(m,2H),2.46-2.49(m,2H)和 1.70-1.79(m,4H).MS:446.18(M+H)+。产率：59％。
制备2.9(a-b)的一般程序：
一般方法G:向化合物2.8(a-b)(1.0-1.5g,1.0当量)在甲醇中的冰冷溶液中逐份加入NaBH4(2.5当量)。将所得反应混合物在RT下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，冷却至0℃加入水并用EtOAc萃取 (3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物2.9(a-b)。
8-苄基-1-(4-溴苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(2.9-a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.66(s,1H),7.39(d,J＝8.8Hz,2H), 7.31-7.34(m,4H),7.24-7.26(m,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),4.55(s, 2H),3.52-3.54(m,2H),2.66-2.71(m,4H)和1.54-1.58(m,4H).LCMS: 400.32(M+H)+,98.11％。产率：83％。
8-苄基-1-(4-碘苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(2.9-b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.66(s,1H),7.53(d,J＝8.8Hz,2H), 7.31-7.34(m,4H),7.24(br s,1H),6.67(d,J＝8.4Hz,2H),4.50(s,2H), 3.52-3.53(m,2H),2.66-2.69(m,4H)和1.53-1.57(m,4H).LCMS: 448.20(M+H)+,96.28％。产率：91％。
制备2.10(a-b)的一般程序：
一般方法H:向2.9(a-b)(0.50-1.0g,1.0当量)在DCE中的冰冷溶液中加入氯甲酸1-氯乙酯(2.0当量)。将所得反应混合物回流5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂至干。将粗残余物溶解于MeOH中并在65℃下加热16h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂。将粗品经硅胶(100-200M)纯化，并用3-5％MeOH/DCM洗脱以得到呈灰白色固体的所需产物2.10(a-b)。
1-(4-溴苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(2.10-a):中间体9: LCMS:310.16(M+H)+,87.90％。产率：43％。
1-(4-碘苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(2.10-b):中间体10: 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.34(br s,1H),8.99(s,1H),7.45(d, J＝8.8Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),4.61(s,2H),3.51-3.53(m,2H), 3.28-3.33(m,2H),2.79-2.83(m,2H)和1.75-1.79(m,2H).LCMS: 358.17(M+H)+,89.37％。产率：68％。
方案3
8-苄基-3-((4-氟苯基)氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-甲腈(3.12)的制备:根据一般方法A制备。MS:336.14(M+H)+。产率：32％。
8-苄基-3-((4-氟苯基)氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-甲酰胺(3.13) 的制备:根据一般方法B制备。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.63 (br s,1H),7.46-7.52(m,2H),7.41-7.46(m,2H),7.26-7.30(m,3H), 6.87-6.91(m,2H),6.59(br s,2H),5.44(m,1H),4.15(m,1H), 3.83-3.85(s,2H),3.37-3.40(m,2H),2.72-2.78(m,2H),2.12-2.17(m, 2H)和1.80-1.90(m,2H).LCMS:354.36(M+H)+,93.06％。产率：45％。
8-苄基-3'-(4-氟苯基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,4'-咪唑]-5'(3'H)-酮(3.14)的制备:根据一般方法E制备。MS:363.98 (M+H)+。产率：50％。
3'-(4-氟苯基)-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,4'-咪唑烷]-5'-酮(3.15) 的制备:中间体11:根据一般方法F制备。MS:276.18(M+H)+。产率：29％。
方案7
8-苄基-1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸烷-2,4-二酮(7.27)的制备:向1-苄基-4-((4-氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈1.2-a(1.0g,3.23 mmol)在CHCl3(50mL)中的冰冷溶液中加入异氰酸氯磺酰酯(0.56 mL,6.47mmol)。将反应物质在RT下搅拌1h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质浓缩以得到白色固体产物，将其溶解于1M-HCl(100mL) 中并在100℃下加热2h。反应完成后(TLC监测)，反应物质冷却至0℃并使用5N-NaOH溶液调节pH约10。将所得固体过滤并用乙醚洗涤以得到呈灰白色固体的所需产物7.27(1.0g,87％)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.08(br s,1H),7.19-7.32(m, 9H),3.31-3.37(m,2H),2.55-2.65(m,4H),1.94-1.97(m,2H)和1.58-1.63(m,2H).LCMS:354.36(M+H)+,98.93％.
1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸烷-2,4-二酮(7.28)的制备:中间体15根据一般方法F制备:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.61 (br s,1H),7.30-7.32(m,4H),5.75-5.77(m,1H),2.55-2.58(m,4H)和 1.84-1.92(m,4H).MS:264.27(M+H)+。产率：94％。
方案8
制备8.30(a-e)的一般程序：
一般方法I:向4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯8.24(1.0-2.5g,1.0当量) 在DMF中的冰冷溶液中加入DIPEA(1.5当量)和相应的硝基化合物 8.29(a-e)(1.0当量)。将所得反应混合物在RT下搅拌2-3h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质用冰冷的水稀释并用EtOAc萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物 8.30(a-e)。
4-((2,3-二氟-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.30-a): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.00-8.04(m,1H),7.94(d,J＝8.0Hz, 1H),6.48-6.54(m,1H),4.01-4.02(m,3H),2.94-2.99(m,2H),2.04-2.06 (m,2H)和1.46-1.49(m,11H).LCMS:356.52(M-H)+,99.10％。产率： 56％。
4-((3-氟-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 (8.30-b):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.25-8.28(m,1H),7.03(m,1H), 6.67-6.71(m,1H),4.01-4.04(m,2H),3.39-3.42(m,1H),2.78-2.84(m, 2H),1.91-1.93(m,2H),1.45(s,9H)和1.40-1.41(m,2H).LCMS:406.19 (M-H)+,88.60％。产率：78％。
4-((3-氟-2-甲基-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.30-c): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.98-8.02(m,1H),8.62-8.67(m,1H), 3.97-4.02(m,2H),2.48(s,1H),3.38-3.40(m,1H),2.80-2.86(m,2H), 2.24(s,3H),1.85-188(m,2H),1.44(s,9H)和1.34-1.37(m,2H).LCMS: 352.28(M-H)+,99.33％。产率：40％。
4-((3-硝基吡啶-2-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.30-d):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ8.38-8.41(m,2H),8.15-8.16(m,1H),6.63-6.66(m, 1H),4.32-4.39(m,1H),2.48(s,1H),4.05-4.07(m,1H),2.96-3.02(m, 2H),2.04-2.07(m,2H),1.55-1.62(m,2H)和1.48(s,9H).LCMS:321.24 (M-H)+,95.81％。产率：80％。
4-((5-氰基-2-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.30-e): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.25(d,J＝8.8Hz,1H),8.25(m,J＝7.2 Hz,1H),7.17(s,1H),6.86(d,J＝8.8Hz,1H),4.04-4.10(m,2H), 3.60-3.67(m,1H),3.03-3.08(m,2H),2.03-2.07(m,2H),1.57-1.63(m, 2H)和1.51(s,9H).LCMS:345.22(M-H)+,99.0％。产率：75.3％。
制备8.31(a-d)的一般程序：
一般方法J:向化合物8.30(a-d)(1.0-2.5g,1.0当量)在EtOAc中的溶液中加入Pd-C(w/w,10mol％)并将所得溶液在氢气气氛下(1个大气压)在环境温度下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩以得到所需产物8.31(a-d)。
4-((6-氨基-2,3-二氟苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.31-a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.58-6.65(m,1H),6.33-6.36(m,1H), 4.80(br s,2H),3.87-4.05(m,3H),3.17-3.20(m,1H),2.73-2.75(m,2H), 1.73-1.76(m,2H),1.39(s,9H)和1.23-1.25(m,2H).LCMS:328.41 (M+H)+,97.70％。产率：97％。
4-((6-氨基-3-氟-2-(三氟甲基)苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 (8.31-b):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.85-6.89(m,1H),6.70-6.79 (m,1H),4.90(br s,2H),3.92-3.99(m,3H),3.09-3.11(m,1H),2.64-2.68 (m,2H),1.69-1.73(m,2H),1.38(s,9H)和1.26-1.27(m,2H).LCMS: 356.30(M-H)+,96.01％。产率：75％。
4-((6-氨基-3-氟-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.31-c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.62-6.64(m,1H),6.51-6.53(m,1H), 4.10-4.12(m,3H),3.41-3.45(m,2H),3.11-3.14(m,1H),2.66-2.69(m, 2H),2.14(s,3H),1.85-1.86(m,2H),1.42(s,9H)和1.27-1.29(m,2H). LCMS:324.31(M-H)+,88.69％。产率：80％。
4-((3-氨基吡啶-2-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.31-d):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ6.68-6.69(m,1H),7.86-7.88(m,1H),6.51-6.55(m, 1H),4.49-4.53(br s,1H),3.98-4.12(m,3H),3.45-3.48(m,2H), 2.97-2.99(m,2H),2.04-2.09(m,2H),1.48(s,9H)和1.30-1.32(m,2H). LCMS:293.23(M+H)+,98.28％。产率：85％。
一般方法K:向化合物8.30-e(1.0-2.0g,1.0当量)在MeOH中的溶液中加入甲酸铵(5.0当量)和Pd-C(w/w,10mol％)并将所得溶液在 RT下搅拌3-4h。将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩以得到所需产物8.31-e。
4-((2-氨基-5-氰基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.31-e): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.01(d,J＝8.8Hz,1H),6.87(s,1H),6.68 (d,J＝8.8Hz,1H),4.05-4.10(br s,3H),3.36-3.39(m,1H),2.91-2.94 (m,2H),2.00-2.03(m,4H)和1.40(s,11H).MS:317.39(M+H)+。产率： 85％。
制备8.32(a-e)的一般程序：
一般方法L:向化合物8.31(a-e)(0.50-1.50g,1.0当量)在THF 中的冰冷溶液中加入Et3N(2.0当量)和三光气(1.5当量)。将所得反应混合物在RT下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,30-40％ EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物8.32(a-e)。
4-(6,7-二氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.32-a):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.24(br s,1H), 7.02-7.06(m,1H),6.76-6.79(m,1H),4.47-4.52(m,1H),3.99-4.05(m, 2H),2.87-2.89(m,2H),1.90-1.98(m,2H),1.71-1.74(m,2H)和1.42(s, 9H).LCMS:354.55(M+H)+,86.20％。产率：92％。
4-(6-氟-2-氧代-7-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶 -1-羧酸叔丁酯(8.32-b):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ10.27(br s,1H), 7.17-7.21(m,1H),6.91-6.99(m,1H),3.70-3.73(m,3H),2.68-2.74(m, 4H),1.71-1.73(m,2H)和1.46(s,9H).LCMS:354.55(M+H)+,86.20％。产率：72％。
4-(6-氟-7-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.32-c):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ9.02(br s,1H), 6.75-6.82(m,2H),4.49(s,1H),4.30-4.32(m,2H),2.73(s,3H), 2.44-2.48(m,2H),1.79-1.80(m,2H),1.60-1.62(m,2H)和1.48(s,9H). LCMS:350.36(M+H)+,90.82％。产率：80％。
4-(2-氧代-1,2-二氢-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.32-d):LCMS:319.33(M+H)+,87.69％。产率：85％。
4-(6-氰基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.32-e):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ10.01(br s,1H),7.38-7.41 (m,2H),7.16(d,J＝8.0Hz,1H),4.37-4.45(m,3H),2.84-2.90(m,2H), 2.30-2.35(m,2H),1.83-1.85(m,2H)和1.52(s,9H).LCMS:343.37 (M+H)+,86.18％。产率：60％。
制备8.33(a-e)的一般程序：
一般方法M:将化合物8.32(a-e)(0.5g-1.0g,1.0当量)在二噁烷 -HCl(约4N)中的冰冷溶液在RT下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质减压干燥。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物8.33(a-e)。
6,7-二氟-1-(哌啶-4-基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮盐酸盐 (8.33-a):中间体16:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.38(br s,1H), 9.44(br s,1H),8.65(br s,1H),7.01-7.07(m,1H),6.78-6.79(m,1H), 4.58-4.60(m,1H),3.63-3.65(m,2H),2.45-3.49(m,2H),3.03-3.12(m, 2H)和2.35-2.38(m,2H).LCMS:254.11(M+H)+,95.61％。产率：定量。
6-二氟-1-(哌啶-4-基)-7-(三氟甲基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2- 酮盐酸盐(8.33-b):中间体17:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.66 (br s,1H),9.40(br s,1H),8.57(br s,1H),7.28-7.28(m,1H),7.04-7.08 (m,1H),4.43-4.45(m,3H),2.82-2.90(m,4H)和1.88-1.98(m,2H). LCMS:304.21(M+H)+,92.41％。产率：92％。
6-氟-7-甲基-1-(哌啶-4-基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮盐酸盐 (8.33-c):中间体18:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.94(br s,1H), 9.44(br s,1H),8.48(br s,1H),6.76-6.83(m,2H),4.44-4.48(m,1H), 3.32-3.38(m,2H),3.01-3.07(m,2H),2.77-2.83(m,2H),2.46(s,3H)和 1.93-1.96(m,2H).MS:250.29(M+H)+。产率：93％。
3-(哌啶-4-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-酮盐酸盐 (8.33-d):中间体19:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.25(br s,1H), 9.36(br s,1H),8.57(br s,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.31(d,J＝7.6Hz, 1H),7.00(t,J＝7.6Hz,1H),4.55-4.61(m,1H),3.35-3.38(m,2H), 3.03-3.11(m,2H),2.69-2.78(m,2H)和1.86-1.89(m,2H).LCMS:219.14(M+H)+,90.67％。产率：90％。
2-氧代-3-(哌啶-4-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈盐酸盐 (8.33-e):中间体20:1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.55(br s,1H), 8.93(br s,1H),8.75(br s,1H),7.86(s,1H),7.47(d,J＝7.2Hz,1H),7.14 (d,J＝8.8Hz,1H),4.57-4.60(m,1H),3.35-3.40(m,2H),3.04-3.08(m, 2H),2.55-2.61(m,2H)和1.85-1.88(m,2H).LCMS:243.32(M+H)+,98.82％。产率：85％。
方案9
1-苄基-2,6-二甲基哌啶-4-酮(9.35)的制备:
向3-氧代戊二酸9.34(10g,64.49mmol)在水(30mL)中的冰冷溶液加入乙醛(6g,137mmol)和苄胺(7.50mL,64.49mmol)。将所得黄色溶液在RT下搅拌78h。反应完成后(TLC监测)，冷却反应物质，使用1N HCl调节pH约2并在RT下搅拌1h。将所得混合物用NaHCO3水溶液中和并用DCM(2x100ml)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并蒸发以得到棕色液体。将粗品通过快速柱色谱使用 10％EtOAc/己烷纯化以得到呈粘性液体的产物9.35(10g，产率： 68％)。
NMR(400MHz,CDCl3):δ7.26-7.40(m,5H),3.90-.94(m,1H), 3.51-3.53(m,1H),3.24-3.30(m,2H),2.42-2.51(m,2H),2.12-2.21(m, 2H)和1.05(m,6H).MS:218.10(M+H)+。
2,6-二甲基哌啶-4-酮(9.36)的制备:向1-苄基-2,6-二甲基哌啶-4- 酮9.35(8.0g,36.78mmol)在IPA(100mL)中的溶液中加入Pd(OH)2 (10％w/w,0.8g,3.67mmol)。将所得混合物在RT在H2气氛下搅拌16 h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质通过硅藻土床过滤，用EtOAc (100mL)洗涤。将滤液减压浓缩以得到呈粘性液体的所需产物9.36 (3.6g,产率：77％)。将粗品不经纯化用于下一步骤。MS:128.14 (M+H)+。
2,6-二甲基-4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(9.37)的制备:向2,6-二甲基哌啶-4-酮9.36(3.6g,28.34mmol)在DCM(50mL)中的冰冷溶液中加入Et3N(9.8mL,70.8mmol)和boc酸酐(12.1mL,56.6mmol)。将所得反应混合物在RT下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质用水稀释并用DCM萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％ EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物9.37(3.9g，产率：60.9％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ2.85(d,J＝6.4Hz,1H),2.81(d, J＝6.4Hz,1H),2.38-2.39(m,2H),2.34-2.36(m,2H),1.48(s,9H)和 1.25-1.27(m,6H).MS:228.08(M+H)+。
4-(苄基氨基)-2,6-二甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(9.38)的制备:向2,6- 二甲基-4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯9.37(3.4g,14.9mmol)在DCM(50 mL)中的冰冷溶液中加入苄胺(2.13mL,17.9mmol)和AcOH(1.02mL, 17.9mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌2h然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.3g,29.8mmol)。将所得反应混合物在RT下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质用水稀释并用DCM萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,20％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物9.38(1.8 g，产率：37.8％)。MS:319.34(M+H)+。
4-氨基-2,6-二甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(9.39)的制备:根据一般方法F制备。MS:229.20(M+H)+。产率：定量。
4-((2,3-二氟-6-硝基苯基)氨基)-2,6-二甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯 (9.40)的制备:根据一般方法I制备。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ 7.95-8.04(m,2H),6.47-6.54(m,1H),4.30-4.35(m,2H),3.88-3.89(m, 1H),2.31-2.34(m,1H),2.18-2.20(m,1H),1.88-1.90(m,2H),1.62(s, 9H)和1.31-1.33(m,6H).MS:386.31(M+H)+。产率：35％。
4-((6-氨基-2,3-二氟苯基)氨基)-2,6-二甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯 (9.41)的制备:根据一般方法J制备。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ 6.57-6.64(m,1H),6.34-6.36(m,1H),4.78(s,2H),4.16(s,1H), 4.01-4.03(m,1H),3.89-3.91(m,1H),3.62(br s,1H),1.88-1.89(m,1H), 1.72-1.74(m,2H),1.35-1.39(m,1H),1.39(s,9H)和1.31-1.33(m,6H). MS:356.38(M+H)+。产率：35％。
4-(6,7-二氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-2,6-二甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(9.42)的制备:根据一般方法L制备。LCMS:380.28 (M-H)+,84.35％。产率：80％。
1-(2,6-二甲基哌啶-4-基)-6,7-二氟-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮盐酸盐(9.43)的制备:中间体21:根据一般方法M制备。1H-NMR (400MHz,DMSO-d6):δ11.33(br s,1H),9.20-9.25(m,1H),8.89-8.99 (m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.75-6.78(m,1H),4.73-4.79(m,1H), 3.61-3.64(m,2H),3.35-3.38(m,1H),2.19-2.25(m,1H),2.00-2.03(m, 1H),1.81-1.84(m,1H)和1.29-1.35(m,6H).LCMS:280.13(M-H)+, 84.65％。产率：90％。
方案10
2,4-二甲基-3-氧代戊二酸二甲酯(45)的制备:
向3-氧代戊二酸二甲酯44(10.0g,57.47mmol)在THF(150mL) 中的冰冷溶液中加入K2CO3(11.8g,86.2mmol)和甲基碘(9.0mL, 143.67mmol)。将所得反应混合物在RT下搅拌16h。反应完成后(TLC 监测)，将反应物质用水稀释并用DCM萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到呈粘性液体的所需产物45(10.0g,产率：86％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ5.09-5.16(m,2H),3.85-3.87(m,6H) 和3.51-3.54(m,6H).MS:203.10(M+H)+。
1-苄基-3,5-二甲基-4-氧代哌啶-3,5-二羧酸二甲酯(46)的制备:
向2,4-二甲基-3-氧代戊二酸二甲酯45(10.0g,49.3mmol)在 CH3OH(100mL)中的冰冷溶液中加入1M-HCl(15.0mL)、苄胺(5.4 mL,49.3mmol)和甲醛(37％在H2O中，9.0mL,108.46mmol)。将所得反应混合物在RT下搅拌72h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质用水稀释并用EtOAc萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到呈粘性液体的所需产物46(12.0g, 产率：73％)。将粗品不经纯化用于下一步骤。MS:334.18(M+H)+。
1-苄基-3,5-二甲基哌啶-4-酮(47)的制备:
将1-苄基-3,5-二甲基-4-氧代哌啶-3,5-二羧酸二甲酯46(12.0g, 36.01mmol)在1N-HCl(100mL)中的溶液在100℃下加热16h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至0℃，使用氢氧化铵溶液调节pH约10并用DCM萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到呈粘性液体的所需产物47(7.5g，产率：定量)。将粗品不经纯化用于下一步骤。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.32-7.35(m,5H),3.64-3.66(m, 2H),3.10-3.13(m,2H),2.66-2.69(m,2H),2.02-2.07(m,2H)和0.95(d, J＝6.4Hz,6H).MS:203.10(M+H)+。
1-苄基-3,5-二甲基哌啶-4-酮肟(48)的制备:向盐酸羟胺(2.4g, 34.56mmol)在H2O(30mL)中的溶液中加入CH3COONa(5.6g,69.12 mmol)。将反应混合物在60℃下加热然后加入1-苄基-3,5-二甲基哌啶 -4-酮47(5.0g,23.04mmol)。将所得反应混合物在60℃下加热2h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至RT并用DCM萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到所需产物48(5.0g，产率：定量)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ10.28(s,1H),7.44-7.58(m,5H), 3.40-3.50(m,2H),3.20-3.22(m,2H),2.56-2.59(m,2H),2.03-2.10(m, 2H)和1.17(d,J＝7.2Hz,6H).MS:233.20(M+H)+。
1-苄基-3,5-二甲基哌啶-4-胺(49)的制备:向1-苄基-3,5-二甲基哌啶-4-酮肟48(2.0g,8.62mmol)的冰冷溶液中加入LAH(2.0M在THF 中，13.0mL)。将所得反应混合物在65℃下加热3h。反应完成后(TLC 监测)，将反应物质冷却至0℃，逐滴加入15％NaOH溶液(10mL)。将反应物质通过硅藻土垫过滤，并用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到所需产物49(1.4g，产率：70％)。 MS:219.21(M+H)+。
1-苄基-N-(2,3-二氟-6-硝基苯基)-3,5-二甲基哌啶-4-胺(50)的制备: 根据一般方法I制备。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.02-8.05(m,1H), 7.38-7.50(m,5H),6.44-6.51(m,1H),4.29-4.30(m,1H),3.70-3.73(m, 2H),2.81-2.84(m,2H),2.11-2.17(m,2H),1.55-1.57(m,2H),1.31-1.32 (m,1H)和0.86(d,J＝6.4Hz,6H).LCMS:376.06(M+H)+,96.22％。产率：25％。
N1-(1-苄基-3,5-二甲基哌啶-4-基)-5,6-二氟苯-1,2-二胺(51)的制备:根据一般方法J制备。LCMS:344.39(M-H)+,81.10％。产率：80％。
1-(1-苄基-3,5-二甲基哌啶-4-基)-6,7-二氟-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮(52)的制备:根据一般方法L制备。MS:370.36(M-H)+。产率：60％。
1-(3,5-二甲基哌啶-4-基)-6,7-二氟-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮 (53):中间体22的制备:根据一般方法F制备。1H-NMR(400MHz, CDCl3):δ10.25(br s,1H),7.02-7.09(m,1H),6.75-6.79(m,1H),4.58 (br s,1H),3.48-3.51(m,2H),3.38-3.40(m,2H),3.00-3.02(m,2H), 1.22-1.25(m,1H)和0.80(d,J＝6.4Hz,6H).LCMS:282.25(M+H)+, 88.77％。产率：90％。
最终化合物的合成
方案11
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(55)的制备: 将3-乙酰基吡啶54(20g,165.09mmol)在乙醚(250mL)中的溶液冷却至-78℃然后加入LiHMDS(1.0M在THF中,181.60mL,181.60 mmol)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45min然后在约20min内逐滴加入草酸二乙酯55(27.03mL,198.10mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却至0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物56(30 g)，将其不经纯化进行下一步骤。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.95(s,1H),8.61(d,J＝4.0Hz, 1H),8.14(m,1H),7.44(m,1H),6.40(m,1H),4.12(q,J＝7.20Hz,2H) 和1.21(t,J＝7.2Hz,3H).MS:221.95(M+H)+。产率：82％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (58)的制备:向4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐 56(10g,45.23mmol)在IPA(60mL)中的冰冷溶液中加入(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)肼盐酸盐57(10.5g,54.28mmol)和TFA(7.25mL,90.46 mL)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取 (3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物58(8.0g,47％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.72(m,2H),7.74(m,3H),7.51(d, J＝7.6Hz,1H),7.48(d,J＝7.6Hz,1H),7.15(s,1H),4.48(q,J＝6.8Hz, 2H)和1.40(t,J＝7.2Hz,3H).MS:379.90(M+H)+。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(59) 的制备:向1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯58(8.0g,21.09mmol)在EtOH(60mL)中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠在8mL H2O中的水溶液(1.68g,42.18mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物59(4.5g,61％)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.10(br s,1H),8.59(m,2H), 7.88(t,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(m,1H),7.45(m, 1H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H)和7.26(s,1H).LCMS:351.96(M+H)+, 93.37％.
制备最终化合物(一般结构60)的一般程序：
一般方法N:向1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸59(0.150g,0.43mmol)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(2.5当量)和HATU(1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水 (30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化。
最终化合物的单个产率和分析数据请参考表6.1。
表6.1:包括获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案12
5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(62)的制备:向4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐56(10.0g, 45.23mmol)在IPA(50mL)中的冰冷溶液中加入(3,4,5-三氟苯基)肼盐酸盐61(10.77g,54.28mmol)和TFA(6.9mL,90.46mmol)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶 (100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物62(5.50g, 35％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.68(m,1H),8.61(s,1H),7.61(d, J＝8.0Hz,1H),7.42(m,1H),7.14(s,1H),7.03(m,2H),4.48(q,J＝7.2 Hz,2H)和1.41(t,J＝7.2Hz,3H).MS:348.15(M+H)+。
5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(63)的制备: 向5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯62(5.50g, 15.82mmol)在EtOH(40mL)中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(1.26g,31.64mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2h。反应完成后 (TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100 mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物63(3.0 g,59％)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.13(br s,1H),8.59(s,2H), 7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.52(m,2H),7.41(m,1H)和7.25(s,1H). LCMS:320.14(M+H)+,95.20％.
制备最终化合物(一般结构64)的一般程序：根据一般方法N制备最终化合物。向羧酸63(125-150mg)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(2.5当量)和HATU(1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化。
最终化合物的单个产率和分析数据请参考表6.2。
表6.2:包括获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案13
4-溴-5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(65) 的制备:向5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯62 (1.0g,2.88mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入NBS(0.77g,4.32 mmol)。将所得反应混合物在50℃下加热4h。反应完成后(TLC监测)，溶剂为冰冷的水并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用冰冷的水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶 (100-200M,3-5％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物65(0.99g,产率： 81％)
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.71-8.72(m,1H),8.53(s,1H),7.66 (d,J＝7.88Hz,1H),7.42-7.45(m,1H),6.93-6.99(m,2H),4.50(q,J＝ 7.12Hz,2H)和1.39(t,J＝7.2Hz,3H).MS:426.18(M+H)+。
4-溴-5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(66):向4- 溴-5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯65(0.99g, 2.33mmol)在EtOH(20mL)中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(0.19g,4.66mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2h。反应完成后 (TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100 mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物66(0.35 g,产率：39％)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.45(br s,1H),8.64-8.65(m, 1H),8.57(s,1H),7.77(d,J＝7.96Hz,1H)和7.48-7.52(m,3H).LCMS: 397.94(M+H)+,86.45％.
制备最终化合物(一般结构67)的一般程序：根据一般方法N以 100-150mg规模制备最终化合物。最终化合物的单个产率和分析数据请参考表6.3。
表6.3:包括获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案14
制备化合物68(a-l)的一般程序：向4-乙氧基-2-甲基-3,4-二氧代 -1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐56(3.0g,13.21mmol)在IPA中的冰冷溶液中加入相应的肼盐酸盐(1.2当量)和TFA(2.0当量)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶 (100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物68(a-l)。
1-(4-氰基苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-a): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ9.17(m,1H),8.80-8.81(m,1H), 8.22-8.24(m,1H),7.61-7.63(m,2H),7.42-7.45(m,2H),7.14(s,1H), 7.05-7.09(m,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H)和1.35(t,J＝7.2Hz,3H).MS: 319.03(M+H)+。产率：13％。
1-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (68-b):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.62-8.68(m,2H),7.61-7.63(m, 1H),7.41-7.44(m,1H),7.29-7.34(m,2H),7.14(s,1H),7.07-7.10(m, 1H),4.44(q,J＝7.6Hz,2H)和1.38(t,J＝7.2Hz,3H).MS:396.14 (M+H)+。产率：41％。
1-(4-氰基-3-氟苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-c): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.71-8.72(m,1H),8.62(s,1H),7.61-7.64 (m,2H),7.44-7.47(m,1H),7.35-7.38(m,1H),7.19(s,1H),7.15-7.17(m, 1H),4.42(q,J＝7.6Hz,2H)和1.36(t,J＝7.6Hz,3H).LCMS:337.13 (M+H)+,96.65％。产率：26％。
1-(4-(叔丁基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-d): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.58-8.62(m,1H),8.54-8.58(m,1H), 7.52-7.54(m,1H),7.39-7.41(m,2H),7.22-7.28(m,3H),7.11(s,1H), 4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.37(t,J＝7.6Hz,3H)和1.25(s,9H).MS: 350.23(M+H)+。产率：23％。
1-(2-氯-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (68-e):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.57-8.58(m,1H),8.48(s,1H), 7.65-7.70(m,3H),7.48-7.50(m,1H),7.24-7.27(m,1H),7.14(s,1H), 4.44(q,J＝7.2Hz,2H)和1.36(t,J＝7.2Hz,3H).MS:396.27(M+H)+。产率：30％。
1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-f):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.71-8.76(m,1H),8.62-8.65 (m,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(s,2H),7.46-7.49(m,1H),7.21(s, 1H),4.45(q,J＝7.6Hz,2H)和1.38(t,J＝7.2Hz,3H).MS:430.08 (M+H)+。产率：31％。
5-(吡啶-3-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (68-g):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.73-8.81(m,2H),8.39-8.41(m, 1H),7.72-7.74(m,1H),7.52-7.54(m,1H),7.45-7.47(m,2H),7.33-7.35 (m,2H),4.52(q,J＝7.6Hz,2H)和1.51(t,J＝7.2Hz,3H).LC-MS: 378.28(M+H)+,88.27％产率：40％。
1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (68-h):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.59-8.66(m,1H),7.77-7.78(m, 1H),7.56(d,J＝8.04Hz,1H)7.38-7.41(m,2H),7.23-7.25(m,1H),7.21 (s,1H),7.07-7.10(m,1H),4.48(q,J＝7.2Hz,2H)和1.38(t,J＝7.6Hz, 3H).MS:380.22(M+H)+。产率：35％。
1-(2,3-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-i):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.75-8.79(m,1H),8.50-8.51(m, 1H),7.52-7.57(m,3H),7.26(s,1H),7.15(s,1H),4.44(q,J＝6.92Hz, 2H)和1.39(t,J＝7.16Hz,3H).MS:397.94(M+H)+。产率：16％。
1-(2,5-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-j):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.66-8.73(m,2H),7.80(d,J＝ 8.0Hz,1H),7.62-7.66(m,1H),7.55-7.58(m,1H),7.35-7.35(m,1H), 7.21(s,1H),4.48(q,J＝7.20Hz,2H)和1.42(t,J＝7.20Hz,3H).MS: 398.15(M+H)+。产率：35％。
1-(4-氰基-3-氟苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-k): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.71-8.72(m,1H),8.62(s,1H),7.61-7.64 (m,2H),7.44-7.47(m,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.26(s,1H), 7.15-7.17(m,1H),4.50(q,J＝7.16Hz,2H)和1.43(t,J＝7.24Hz,3H). MS:337.14(M+H)+。产率：26％。
1-(2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(68-l):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.51-8.55(m,2H),8.40-8.42(m, 1H),7.32-7.34(m,1H),7.20-7.24(m,1H),7.17(s,1H),6.94-6.99(m, 2H),4.43(q,J＝7.20Hz,2H),1.98(s,3H)和1.42(t,J＝7.24Hz,3H). MS:392.54(M+H)+。产率：29％。
制备化合物69(a-l)的一般程序：向化合物68(a-l)(0.80-1.5g,1.0 当量)在EtOH中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌2-3h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物69(a-l)。
1-(4-氰基苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(69-a):LC-MS: 291.27(M+H)+,85.5％。产率：66％。
1-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (69-b):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.15(br s,1H),8.56-8.59(m, 2H),7.68-7.71(m,3H),7.41-7.44(m,1H),7.25-7.29(m,1H)和7.17(s, 1H).LCMS:368.29(M+H)+,94.25％。产率：61％。
1-(4-氰基-3-氟苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(69-c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.18(br s,1H),8.59-8.91(m,2H), 7.67-7.68(m,2H),7.41-7.44(m,1H),7.25-7.27(m,2H)和7.22(s,1H). MS:309.11(M+H)+。产率：30％。
1-(4-(叔丁基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(69-d): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.0(br s,1H),8.54-8.55(m,1H), 8.48(s,1H),7.66-7.68(m,1H),7.47-7.49(m,2H),7.39-7.42(m,1H), 7.26-7.28(m,2H),7.20(s,1H)和1.29(s,9H).LCMS:322.0(M+H)+, 98.33％。产率：30％。
1-(2-氯-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(69-e): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.19(br s,1H),8.50-8.54(m,2H), 8.14(s,1H),8.04(d,J＝8.16Hz,1H),7.96(d,J＝8.20Hz,1H), 7.62-7.63(m,1H),7.37-7.43(m,1H)和7.33(s,1H).LCMS:368.12 (M+H)+,97.38％。产率：81％。
1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (69-f):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.33(br s,1H),8.57(d,J＝ 1.6Hz,1H),8.52(s,1H),8.28(s,2H),7.60-7.62(m,1H)和7.41-7.44(m, 2H).LCMS:402.08(M+H)+,96.28％。产率：84％。
5-(吡啶-3-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(69-g): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.09(br s,1H),8.52-8.57(m,2H), 7.66-7.70(m,1H),7.40-7.43(m,5H)和7.23(s,1H).LCMS:350.27 (M+H)+,91.79％。产率：63％。
1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(69-h): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.15(br s,1H),8.57-8.58(m,2H), 7.84-7.86(m,1H),7.60-7.69(m,3H),7.40-7.45(m,1H)和7.24(s,1H). LCMS:352.24(M+H)+,95.84％。产率：73％。
1-(2,3-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (69-i):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.30(br s,1H),8.60-8.61(m, 2H),7.80-7.83(m,1H),7.63-7.73(m,2H),7.41-7.44(m,1H)和7.25(s, 1H).MS:370.08(M+H)+,产率：86％。
1-(2,5-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (69-j):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.34(br s,1H),8.60(s,2H), 7.99-8.10(m,2H),7.72(d,J＝7.0Hz,1H),7.43(s,1H)和7.33(s,1H). LCMS:370.27(M+H)+,97.55％。产率：68％。
1-(4-氰基-3-氟苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(69-k): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.18(br s,1H),8.59(s,2H), 8.01-8.05(m,1H),7.81(d,J＝8.32Hz,1H),7.67-7.70(m,2H),7.25-7.27 (m,1H)和7.22(s,1H).MS:309.11(M+H)+。产率：30％。
1-(2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (69-l):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.08(br s,1H),8.51-8.57(m, 1H),8.47(s,1H),7.55-7.62(m,2H),7.44(s,1H),7.34-7.38(m,2H), 7.29(s,1H)和1.93(s,3H).LCMS:364.26(M+H)+,92.06％。产率：75％。
制备最终化合物(一般结构70)的一般程序：根据一般方法N制备最终化合物。向羧酸69(a-l)(125-150mg)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(2.5当量)和HATU(1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。最终化合物经由制备型HPLC纯化。
最终化合物的单个产率和分析数据请参考表6.4。
表6.4:包括获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案15
制备化合物72(a-b)的一般程序：将化合物71(a-b)(2.5g)在乙醚中的溶液冷却至-78℃然后加入LiHMDS(1.10当量)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯 55(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后 (TLC和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物72(a-b)，将其不经纯化进行下一步骤。
4-乙氧基-1-(4-甲基吡啶-3-基)-3,4-二氧代丁-1-烯-1-醇锂盐(72-a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.44(s,1H),8.38-8.39(m,1H), 7.21-7.22(m,1H),5.93(s,1H),4.10(q,J＝7.16Hz,2H),2.36(s,3H)和 1.20(t,J＝7.6Hz,3H).MS:236.0(M+H)+。产率：定量。
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(哒嗪-4-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(72-b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.48-9.56(m,2H),9.20-9.21(m,1H), 6.46(s,1H),4.10(q,J＝7.20Hz,2H)和1.21(t,J＝7.6Hz,3H).MS: 223.04(M+H)+。产率：76％。
制备化合物73(a-b)的一般程序：向化合物72(a-b)(2.50-3.0g, 1.0当量)在IPA中的冰冷溶液中加入(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)肼盐酸盐57(1.10当量)和TFA(2.0当量)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物73(a-b)。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(4-甲基吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(73-a):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.60-8.66(m,2H),7.53-7.55 (m,1H),7.46-7.47(m,1H),7.21-7.28(m,1H),7.08(s,1H),6.99-7.05(m, 1H),4.45(q,J＝7.2Hz,2H),2.15(s,3H)和1.42(t,J＝7.6Hz,3H).MS: 394.33(M+H)+。产率：22％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(哒嗪-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (73-b):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.61-7.71(m,2H),7.41-7.55(m, 4H),7.11(s,1H),4.46(q,J＝7.16Hz,2H)和1.42(t,J＝7.24Hz,3H). MS:381.25(M+H)+。产率：27％。
制备化合物74(a-b)的一般程序：向化合物73(a-b),(1.0-1.2g) (1.0当量)在EtOH中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌2-3h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物74(a-b)。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(4-甲基吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (74-a):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.20(br s,1H),8.50(d,J＝ 4.12Hz,1H),8.39(s,1H),7.82(t,J＝7.88Hz,1H),7.51-7.53(m,1H), 7.35-7.37(m,1H),7.24-7.26(m,1H),7.17(s,1H)和2.08(s,3H).LCMS: 366.22(M+H)+,99.72％。产率：60％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(哒嗪-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(74-b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.20(br s,1H),9.24-9.27(m,2H), 7.89-7.90(m,1H),7.75-7.77(m,1H),7.53-7.54(m,1H)和7.40-7.46(m, 2H).LCMS:353.19(M+H)+,93.39％。产率：70％。
制备最终化合物(75-a和75-b)的一般程序：根据一般方法N制备最终化合物。向羧酸74(a-b),(125mg,1.0当量)在DMF(2.0mL) 中的冰冷溶液中加入DIPEA(3.0当量)和HATU(1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入6,7-二氟-1-(哌啶 -4-基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮中间体16(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化。
6,7-二氟-1-(1-(1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(4-甲基吡啶-3- 基)-1H-吡唑-3-羰基)哌啶-4-基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮(75-a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.25(br s,1H),8.50-8.52(m,1H), 8.42(s,1H),7.80(t,J＝8.12Hz,1H),7.51-7.53(m,1H),7.37(d,J＝4.92 Hz,1H),7.22(d,J＝8.92Hz,1H),7.07(s,1H),7.00-7.05(m,1H), 6.77-6.80(m,1H),4.81-4.84(m,1H),4.64-4.72(m,2H),3.38-3.41(m, 1H),2.94-3.00(m,1H),2.10-2.22(m,5H),和1.87-1.90(m,2H).LCMS: 601.17(M+H)+,99.94％。产率：24％。
6,7-二氟-1-(1-(1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(哒嗪-4-基)-1H-吡唑 -3-羰基)哌啶-4-基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮(75-b):1H-NMR (400MHz,DMSO-d6):δ11.25(br s,1H),9.26-9.29(m,2H),7.89-7.93 (m,1H),7.75-7.78(m,1H),7.57(d,J＝4.04Hz,1H),7.42-7.44(m,2H), 7.00-7.06(m,1H),6.78-6.79(m,1H),4.67-4.77(m,3H),3.32(s,1H), 2.95-3.00(m,1H),2.08-2.15(m,2H)和1.85-1.92(m,2H).LCMS: 588.26(M+H)+,99.30％。产率：32％。
方案16
制备80(a-d)的一般程序：
一般方法I:向4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯24(1.0-2.5g,1.0当量) 在DMF中的冰冷溶液中加入DIPEA(1.5当量)和相应的硝基化合物 76(a-d)(1.0当量)。将所得反应混合物在RT下搅拌2-3h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质用冰冷的水稀释并用EtOAc萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物77 (a-d)。
4-((4-氰基-2-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(77-a):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ8.42(d,J＝6.8Hz,1H),7.58(dd,J＝2.0&8.8Hz, 1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),4.04-4.06(m,2H),3.67-3.74(m,1H), 3.01-3.06(m,2H),2.04-2.07(m,2H),1.59-1.63(m,3H)和1.47(s,9H). LCMS:345.53(M-H)+,92.45％。产率：57％。
4-((2-氰基-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(77-b):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ8.37-8.40(m,1H),7.73-7.75(m,1H),6.72-6.76(m, 1H),4.47-4.54(m,1H),4.04-4.06(m,2H),3.01-3.03(m,2H),2.12-2.15 (m,2H),1.50-1.56(m,3H)和1.44(s,9H).LCMS:345.28(M-H)+, 95.79％。产率：77％。
4-((2-氰基-3-氟-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(77-c): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.81-8.83(m,1H),8.44-8.48(m,1H), 6.49-6.54(m,1H),4.53-4.60(m,1H),4.07-4.10(m,2H),3.00-3.06(m, 2H),2.14-2.17(m,2H),1.62-1.67(m,2H)和1.40(s,9H).LCMS:363.32 (M-H)+,97.61％。产率：59％。
4-((4-氰基-5-氟-2-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(77-d): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.51-8.56(m,2H),8.60-8.63(m,1H), 4.04-4.07(m,2H),3.57-3.61(m,1H),3.01-3.07(m,2H),2.03-2.06(m, 2H),1.56-1.60(m,2H)和1.47(s,9H).MS:363.37(M-H)+。产率：77％。
制备78(a-d)的一般程序：
一般方法J:向化合物77(a-d)(1.0-2.5g,1.0当量)在EtOAc中的溶液中加入Pd-C(w/w,10mol％)并将所得溶液在氢气气氛下(1个大气压)在环境温度下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩以得到所需产物78(a-d)。
4-((2-氨基-4-氰基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(78-a):1H-NMR (400MHz,DMSO-d6):δ6.89(d,J＝6.8Hz,1H),6.77(s,1H),6.54-6.56 (m,1H),5.11-5.12(m,1H),4.98(br s,2H),3.89-3.91(m,2H),3.52(br s, 1H),2.89(s,2H),1.88-1.90(m,2H)和1.17-1.29(m,11H).MS:315.18 (M-H)+。产率：78％。
4-((2-氨基-6-氰基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(78-b):1H-NMR (400MHz,DMSO-d6):δ6.95-6.96(m,1H),6.88-6.91(m,2H),4.11-4.12 (m,2H),3.48-3.49(m,1H),3.34-3.37(m,1H),2.73-2.79(m,2H), 1.89-1.92(m,2H),1.59-1.61(m,2H)和1.45-1.49(m,11H).MS:315.55 (M-H)+。产率：40％。
4-((6-氨基-2-氰基-3-氟苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(78-c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.81-6.84(m,1H),6.54-6.58(m,1H), 4.09-4.14(m,2H),3.78-3.82(m,1H),3.66-3.68(m,1H),3.44-3.48(m, 2H),2.80-2.85(m,2H),1.95-1.98(m,2H)和1.43-1.48(m,11H).LCMS: 333.56(M-H)+,82.07％。产率：88％。
4-((2-氨基-4-氰基-5-氟苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(78-d): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ6.92-6.94(m,1H),6.30-6.36(m,1H), 4.39-4.41(br s,1H),4.06-4.10(m,2H),3.38-3.40(m,2H),2.91-2.97(m, 2H),2.00-2.03(m,2H)和1.48(s,12H).MS:333.56(M-H)+。产率：62％。
制备79(a-d)的一般程序：
一般方法L:向化合物78(a-d)(0.50-1.50g,1.0当量)在THF中的冰冷溶液中加入Et3N(2.0当量)和三光气(1.5当量)。将所得反应混合物在RT下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,30-40％ EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物79(a-d)。
4-(5-氰基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(79-a):
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.08(br s,1H),7.38-7.40(m, 2H),7.18-7.20(m,1H),4.43-4.46(m,1H),4.32-4.36(m,2H),2.87-2.87 (m,2H),2.25-2.28(m,2H),1.83-1.85(m,2H)和1.44(s,9H).LCMS: 343.41(M+H)+,93.09％。产率：90％。
4-(7-氰基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(79-b):LCMS:341.14(M-H)+,83.61％。产率：75％。
4-(7-氰基-6-氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(79-c):LCMS:359.32(M-H)+,83.11％。产率：48％。
4-(5-氰基-6-氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(79-d):LCMS:359.57(M-H)+,81.30％。产率：82％。
制备80(a-d)的一般程序：
一般方法M:将化合物79(a-d)(0.5g-1.0g,1.0当量)在二噁烷 -HCl(约4N)中的冰冷溶液在RT下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质减压干燥。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物80(a-d)。
2-氧代-1-(哌啶-4-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈盐酸盐 (80-a):中间体23
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.45(br s,1H),9.11(br s,2H), 7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.50-7.52(m,1H),7.40-7.41(m,1H),4.56-4.62 (m,1H),3.34-3.41(m,2H),3.03-3.08(m,2H),2.58-2.64(m,2H)和1.83-1.90(m,2H).LCMS:243.16(M+H)+,98.94％。产率：89％。
2-氧代-3-(哌啶-4-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-甲腈盐酸盐 (80-b):中间体24
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.50(br s,1H),9.13(br s,1H), 8.62(br s,1H),7.40-7.42(m,1H),7.32-7.36(m,1H),7.28-7.30(m,1H), 4.72-4.78(m,1H),3.35-3.48(m,2H),2.86-2.95(m,2H),2.67-2.72(m, 2H)和2.06-2.09(m,2H).LCMS:241.05(M-H)+,89.68％。产率：95％。
5-氟-2-氧代-3-(哌啶-4-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-甲腈盐酸盐(80-c):中间体25
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.58(br s,1H),9.35(br s,1H), 8.76(br s,1H),7.20-7.25(m,1H),7.06-7.11(m,1H),4.65-4.71(m,1H), 3.56-3.63(m,2H),2.85-2.90(m,2H),2.67-2.73(m,2H)和2.08-2.11(m, 2H).LCMS:260.96(M+H)+,95.41％。产率：28％。
6-氟-2-氧代-1-(哌啶-4-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈盐酸盐(80-d):中间体26
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.51(br s,1H),9.13-9.24(m, 2H),7.76(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(d,J＝5.2Hz,1H),4.55-4.61(m,1H), 3.31-3.35(m,2H),3.04-3.07(m,2H),2.60-2.66(m,2H)和1.84-1.87(m, 2H).LCMS:259.2(M-H)+,97.74％。产率：91％。
方案17
3-((2,3-二氟-6-硝基苯基)氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(82)的制备:
根据一般方法I制备。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(d,J＝6.0Hz,1H),8.01-8.04 (m,1H),6.45-6.51(m,1H),4.21-4.31(m,3H),2.29-2.35(m,2H), 2.07-2.09(m,2H),1.94-1.96(m,2H),1.68-1.73(m,2H)和1.47(s,9H). LCMS:384.36(M+H)+,99.35％。产率：78％。
3-((6-氨基-2,3-二氟苯基)氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(83)的制备:
根据一般方法J制备。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.57-6.60(m,1H),6.39-6.41(m, 1H),4.70(br s,2H),4.17-4.19(m,1H),4.01-4.08(m,2H),3.64(br s, 1H),1.98-2.06(m,4H),1.84-1.86(m,2H),1.61-1.64(m,2H)和1.38(s, 9H).MS:354.13(M+H)+。产率：95％。
3-(6,7-二氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-8-氮杂二环 [3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(84)的制备:
根据一般方法L制备。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ10.03(br s,1H),6.85-6.97(m,1H), 6.74-6.75(m,1H),4.52-4.59(m,1H),4.34-4.46(m,2H),2.52-2.54(m, 2H),2.06-2.10(m,2H),1.80-1.89(m,4H)和1.52(s,9H).LCMS:378.13 (M-H)+,96.51％。产率：85％。
1-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-6,7-二氟-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑 -2-酮盐酸盐(85)的制备:中间体27:
根据一般方法L制备。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.34(br s,1H),9.02(br s,1H), 8.87(br s,1H),7.03-7.10(m,1H),6.80-6.81(m,1H),4.89-4.93(m,1H), 4.08-4.10(m,2H),2.49-2.52(m,2H),2.08-2.09(m,2H)和1.90-1.97(m, 4H).LCMS:278.06(M-H)+,99.73％。产率：94％。
最终目标的制备
表6.5:包括获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案18:
制备化合物18.2(a-c)的一般程序：将化合物18.1(a-c)(1当量) 在乙醚中的溶液冷却至-78℃然后加入LiHMDS-THF(1M溶液，1.10 当量)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16 h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物18.2(a-c)，将其不经纯化进行下一步骤。
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-4-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(18.2a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.93(s,1H),8.62(m,1H),8.10(m, 1H),7.40(m,1H),6.38(m,1H),4.11(q,J＝7.20Hz,2H)和1.22(t,J＝ 7.2Hz,3H).MS:221.96(M+H)+。产率：90％。
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(18.2b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.97(s,1H),8.63(d,J＝4.0Hz,1H), 8.14(m,1H),7.43(m,1H),6.41(m,1H),4.13(q,J＝7.20Hz,2H)和 1.23(t,J＝7.2Hz,3H).MS:221.92(M+H)+。产率：76％。
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-2-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(18.2c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.60(d,J＝4.4Hz,1H),7.98(m,1H), 7.87(m,1H),7.45(m,1H),6.48(s,1H),4.15(q,J＝7.20Hz,2H)和 1.19(t,J＝6.8Hz,3H).MS:221.97(M+H)+。产率：96％。
制备化合物18.3(a-c)的一般程序：向化合物18.2(a-c),(1.0当量) 在IPA中的冰冷溶液中加入3,4,5-三氟苯基肼HCl(1.10当量)和TFA (2.0当量)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物18.3(a-c)。
5-(吡啶-4-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(18.3a): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.70(m,1H),8.65(s,1H),7.62(d,J＝8.0 Hz,1H),7.42(m,1H),7.15(s,1H),7.03(m,2H),4.49(q,J＝7.2Hz,2H) 和1.45(t,J＝7.2Hz,3H).MS:348.09(M+H)+。产率：28％。
5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(18.3b): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.67(m,1H),8.60(s,1H),7.59(d,J＝8.0 Hz,1H),7.41(m,1H),7.12(s,1H),7.00(m,2H),4.47(q,J＝7.2Hz,2H) 和1.43(t,J＝7.2Hz,3H).MS:348.15(M+H)+。产率：22％。
5-(吡啶-2-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(18.3c): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.53(m,1H),7.75(m,1H),7.45(d,J＝ 8.0Hz,1H),7.30(m,1H),7.23(s,1H),7.03(m,2H),4.39(q,J＝6.8Hz, 2H)和1.41(t,J＝7.2Hz,3H).MS:347.88(M+H)+。产率：23％。
制备化合物18.4(a-c)的一般程序：向化合物18.3(a-c)(1.0当量) 在EtOH中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌2-3h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物18.4(a-c)。
5-(吡啶-4-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(18.4a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.40(br s,1H),8.62(m,2H),7.68(d, J＝8.0Hz,1H),7.56(m,2H),7.45(m,1H)和7.22(s,1H).LCMS: 320.17(M+H)+,96.12％。产率：65％。
5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(18.4b): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.12(br s,1H),8.58(s,2H),7.64(d, J＝8.4Hz,1H),7.50(m,2H),7.40(m,1H)和7.24(s,1H).LCMS: 320.14(M+H)+,94.25％。产率：61％。
5-(吡啶-2-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(18.4c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ.8.45(d,J＝5.4Hz,1H),7.87(m,1H), 7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(m,3H)和7.25(s,1H).LCMS:320.12 (M+H)+,98.46％。产率：55％。
制备最终化合物5(18.a-h)的一般程序：向羧酸18.4(a-c)(1.0当量)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(3.0当量)和HATU (1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化。
经由方案18合成的最终化合物的单个产率和分析数据列于表 6.6。
表6.6:包括经由方案18获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案19:
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(19.2-b)的制备:将3-乙酰基吡啶19.1-b(25g,206.37mmol)在乙醚(300mL)中的溶液冷却至-78℃然后加入LiHMDS(1.0M在THF中，250mL,227.01 mmol)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯(33.8mL,247.64mL)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却至0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物2(34g,76％)，将其不经纯化进行下一步骤。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.97(s, 1H),8.63(d,J＝4.0Hz,1H),8.14(m,1H),7.43(m,1H),6.41(m,1H), 4.13(q,J＝7.20Hz,2H)和1.23(t,J＝7.2Hz,3H).MS:221.92(M+H)+。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (19.6)的制备:向4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐19.2-b(10g,45.23mmol)在IPA(60mL)中的冰冷溶液中加入(3-氟 -4-(三氟甲基)苯基)肼盐酸盐10.5g,54.28mmol)和TFA(7.25mL, 90.46mL)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物19.6(7.5g,41％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.70(m,2H), 7.73(m,3H),7.48(d,J＝7.6Hz,1H),7.46(d,J＝7.6Hz,1H),7.13(s, 1H),4.47(q,J＝6.8Hz,2H)和1.43(t,J＝7.2Hz,3H).MS:379.88 (M+H)+。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸19.7 的制备:向1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯19.6(7.5g,19.77mmol)在EtOH(50mL)中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(1.6g在5mL H2O中)。将所得溶液在室温下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物19.7(4.0g,58％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ.8.58 (m,2H),7.86(t,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(m,1H),7.43(m,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H)和7.24(s,1H).LCMS:351.96 (M+H)+,90.40％.
制备最终化合物19.8(a-f)的一般程序：向1-(3-氟-4-(三氟甲基) 苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸19.7(1.0当量)在DMF(2.0mL) 中的冰冷溶液中加入DIPEA(3.0当量)和HATU(1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化。
经由方案19合成的最终化合物的产率和分析数据列于表6.7。
表6.7:包括经由方案19获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案20:
4-乙氧基-1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氧代丁-1-烯-1-醇锂盐 (20.10)的制备:将1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)乙-1-酮20.9(5g,24.25 mmol)在乙醚(60mL)中的溶液冷却至-78℃然后加入LiHMDS(1.0M 在THF中，27mL,26.68mmol)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌 45min然后在约30min内逐滴加入草酸二乙酯(4.0mL,29.10mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物20.10(7.4g,99％)，将其不经纯化进行下一步骤。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6):δ7.76(m,3H),6.44(s,1H),4.14(q,J＝7.20Hz,2H) 和1.23(t,J＝7.2Hz,3H).MS:306.98(M+H)+。
5-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (20.11)的制备:向4-乙氧基-1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氧代丁 -1-烯-1-醇锂盐20.10(2.5g,8.01mmol)在IPA(20mL)中的冰冷溶液中加入3-肼基吡啶盐酸盐1.5g,8.01mmol)和TFA(1.2mL,16.03 mmol)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物20.11(1.0g,34％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.65(m,1H), 8.56(s,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.39(m, 1H),7.14(s,1H),7.00(m,2H),4.39(q,J＝7.6Hz,2H)和1.42(t,J＝7.2 Hz,3H).MS:380.17(M+H)+。
5-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸(20.12) 的制备:向5-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯20.11(1.0g,2.63mmol)在EtOH(30mL)中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(0.22g在3mL H2O中)。将所得溶液在室温下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物20.12(0.8g,86％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6): δ.13.23(br s,1H),8.66(t,J＝4.0Hz,1H),8.60(m,1H),7.84(d,J＝8.4 Hz,1H),7.77(t,J＝7.6Hz,1H),7.54(m,2H),7.34(s,1H)和7.23(d,J＝ 8.0Hz,1H).LCMS:352.00(M+H)+,95.49％.
8-(5-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羰基)-1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(化合物267)的制备:向 5-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸20.12(0.15 g,0.43mmol)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(0.22mL, 1.29mmol)和HATU(0.25g,0.65mmol)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4- 酮(0.11g,0.43mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x50 mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化(0.045g,18％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.80(s,1H),8.60-8.63(m,2H), 7.78-7.83(m,2H),7.53-7.56(m,1H),7.50-7.52(m,1H),7.24(d,J＝8.0 Hz,1H),7.22(s,1H),7.07(d,J＝8.8Hz,2H),6.84-6.87(m,2H), 4.58-4.59(m,2H),4.42-4.48(m,2H),3.84-.387(m,1H),3.51-3.56(m, 1H),2.19-2.23(m,2H)和1.74-1.79(m,2H).LCMS:583.14(M+H)+, 96.73％.
方案21:
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(21.2-b)的制备:按照方案19中提及的程序制备中间体21.2-b。
1-(3,5-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(21.14)的制备:向4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐21.2-b(1.5g,6.78mmol)在IPA(20mL)中的冰冷溶液中加入(3,5- 二氟-4-(三氟甲基)苯基)肼盐酸盐(1.68g,6.78mmol)和TFA(1.0mL, 13.56mL)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物21.14(0.66g,25％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.70(m,1H), 8.58(m,1H),7.57(m,1H),7.38(m,1H),7.08(s,1H),7.03(m,2H), 4.44(q,J＝6.8Hz,2H)和1.41(t,J＝6.8Hz,3H).MS:398.16(M+H)+。
1-(3,5-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (2.15)的制备:向1-(3,5-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H- 吡唑-3-羧酸乙酯2.14(0.60g,1.65mmol)在EtOH(20mL)中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(0.13g在3mLH2O中)。将所得溶液在室温下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物2.15(0.3g,51％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.31(br s,1H),8.59(m,2H),7.73(m,1H),7.45(m,2H), 7.38(m,1H)和7.04(m,1H).MS:368.14(M-H)+.
8-(1-(3,5-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羰基)-1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-4-酮(化合物268)的制备: 向1-(3,5-二氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸2.15 (0.10g,0.27mmol)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(0.14 mL,0.81mmol)和HATU(0.154g,0.41mmol)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5] 癸-4-酮(0.067g,0.27mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc (3x50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化(0.035g,21％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O):δ8.59-8.60(m,1H),8.54-8.55 (m,1H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H)7.46-7.47(m,1H),7.30-7.32(m,2H), 7.05-7.09(m,3H),6.84-6.88(m,2H),4.56(s,2H),4.31-4.35(m,2H), 3.79-3.81(m,1H),3.48-3.51(m,1H),2.15-2.19(m,2H)和1.71-1.75(m, 2H).LCMS:601.10(M+H)+,99.21％.
方案22:
22.18(a-b)和18.1-c的制备:根据方案18中提及的一般程序制备中间体。
4-乙氧基-1-(6-甲基吡啶-3-基)-3,4-二氧代丁-1-烯-1-醇锂盐 (22.18-a):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.85(s,1H),8.03(d,J＝ 7.2Hz,1H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),6.40(s,1H),4.14(q,J＝6.8Hz,2H), 2.45(s,3H)和1.25(t,J＝7.2Hz,3H).MS:236.14(M+H)+。产率：80％。
4-乙氧基-1-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3,4-二氧代丁-1-烯 -1-醇锂盐(22.18-b):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.87(d,J＝7.6 Hz,1H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),5.91(s,1H),4.17(q,J＝7.6Hz,2H), 2.58(s,3H)和1.16(t,J＝7.2Hz,3H).MS:304.12(M+H)+。产率：93％。
4-乙氧基-3,4-二氧代-1-(吡啶-2-基)丁-1-烯-1-醇锂盐(18.2-c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.60(d,J＝4.4Hz,1H),7.98(m,1H), 7.87(m,1H),7.45(m,1H),6.48(s,1H),4.15(q,J＝7.20Hz,2H)和1.19 (t,J＝6.8Hz,3H).MS:221.97(M+H)+。产率：96％。
22.19(a-c)的制备:根据方案18中提及的一般程序制备这些中间体。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(6-甲基吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(22.19-a):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(m,1H),7.60(t,J＝ 8.0Hz,1H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(m,2H),7.13(m,2H),4.44(q, J＝7.2Hz,2H),2.68(s,3H)和1.41(t,J＝7.2Hz,3H).MS:394.17 (M+H)+。产率：57％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3- 基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(22.19-b):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ 7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.60(t,J＝6.8Hz,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H), 7.30(m,2H),7.03(s,1H),4.46(q,J＝6.8Hz,2H),2.37(s,3H)和1.38(t, J＝6.8Hz,3H).MS:462.25(M+H)+。产率：26％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (22.19-c):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.52(d,J＝4.4Hz,1H),7.77 (t,J＝8.0Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.29 (m,2H),7.25(m,1H),7.19(m,1H),4.43(q,J＝7.2Hz,2H)和1.39(t,J＝ 7.2Hz,3H).MS:380.20(M+H)+。产率：40％。
22.20(a-c)的制备:根据方案18中提及的一般程序制备这些中间体。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(6-甲基吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (22.20-a):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.44(s,1H),7.87(m, 1H),7.64(d,J＝7.2Hz,1H),7.57(m,1H),7.29(m,2H),7.19(m,1H)和 2.50(s,3H).MS:366.15(M+H)+。产率：59％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3- 基)-1H-吡唑-3-羧酸(22.20-b):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(m,1H),7.62(m, 1H),7.27(m,1H),7.08(m,1H)和2.63(s,3H).MS:432.09(M-H)+。产率：83％。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-5-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (22.20-c):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.45(d,J＝4.0Hz,1H), 7.90(t,J＝8.0Hz,1H),7.76(m,2H),7.54(d,J＝7.2Hz,1H),7.37(m, 1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H)和7.20(s,1H):LC-MS:351.97(M+H)+,99.57％。产率：47％。
22.21(a-c)的制备:根据方案18中提及的一般程序制备这些中间体。
最终化合物的产率和分析数据列于表6.8中。
表6.8:包括获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案23:
4-乙氧基-2-甲基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐 (23.23)的制备:将3-丙酰基吡啶23.22(2g,14.8mmol)在乙醚(20mL) 中的溶液冷却至-78℃然后加入LiHMDS(1.0M在THF中，17mL, 17.0mmol)。将所得反应混合物在-78℃下搅拌45min然后在约30min 内逐滴加入草酸二乙酯(2.32mL,17.0mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC和MS监测)，然后将溶液冷却0℃并将所得沉淀物过滤以得到呈灰白色固体的所需产物23.23(3.4g, 98％)，将其不经纯化进行下一步骤。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.41(m,2H),7.56(d,J＝7.60Hz,1H),7.25(d,J＝7.60Hz,1H),3.65(q, J＝7.20Hz,2H),3.36(s,3H)和1.08(t,J＝6.8Hz,3H).MS:236.10 (M+H)+。
制备化合物23.24(a-b)的一般程序：向4-乙氧基-2-甲基-3,4-二氧代-1-(吡啶-3-基)丁-1-烯-1-醇锂盐23.23(1当量)在IPA中的冰冷溶液中加入相应的肼盐酸盐(1当量)和TFA(2当量)。将所得反应混合物升温至室温然后在90℃下搅拌4-5h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200 M,10-15％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物23.24(a-b)。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(23.24-a):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.73(m,1H),8.57(s, 1H),7.68(m,1H),7.60(m,3H),7.02(m,1H),4.45(q,J＝7.2Hz,2H), 2.33(s,3H)和1.18(t,J＝7.6Hz,3H).MS:394.08(M+H)+。产率：25％。
4-甲基-5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯 (23.24-b):1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.62(m,1H),8.49(s,1H), 7.69(m,1H),7.49(m,1H),7.40(m,2H),4.36(q,J＝6.8Hz,2H),2.22(s, 3H)和1.17(t,J＝6.8Hz,3H).MS:362.13(M+H)+。产率：22％。
制备化合物23.25(a-b)的一般程序：向化合物23.24(a-b)(1.0当量)在EtOH中的冰冷溶液中逐滴加入氢氧化钠的水溶液(3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂，向残余物中加入H2O然后用EtOAc(2x100mL)萃取。丢弃有机层并通过加入1N HCl将水层的pH调节至约4。将所得沉淀物过滤并真空干燥以得到呈白色固体的所需产物23.25(a-b)。
1-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-5-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-羧酸 (23.25-a):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.12(br s,1H),8.64(m, 1H),8.50(s,1H),7.81(t,J＝8.0Hz,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.48 (m,2H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H)和2.21(s,3H).MS:366.17(M+H)+。产率：65％。
4-甲基-5-(吡啶-3-基)-1-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸 (23.25-b):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.07(br s,1H),8.62(m, 1H),8.49(s,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.46(m,1H),7.36(m,2H)和 2.20(s,3H).LCMS:334.13(M+H)+,99.66％。产率：55％。
制备最终化合物23.26(a-b)的一般程序：向羧酸23.25(a-b)(1.0 当量)在DMF(2.0mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(3.0当量)和HATU (1.50当量)。将所得混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌15min然后加入相应的胺(1.20当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将溶液用冰冷的水(30mL)稀释然后用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由制备型HPLC纯化。
最终化合物的产率和分析数据列于表6.9。
表6.9:包括获得的单个产率的最终化合物的列表数据。
方案24:
制备24.28(a-d)的一般程序：向1-苄基哌啶-4-酮24.27(1当量) 在乙酸中的冰冷溶液中加入相应的芳胺(1.1当量)和三甲基氰硅烷(1.5 当量)。将所得反应物质在RT下搅拌18h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至0℃并使用5.0N氢氧化钠溶液将pH调节至约10。将水性部分用DCM(3x250mL)萃取。将合并的有机物经无水 Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物24.28(a-d)。
1-苄基-4-((4-氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(24.28-a):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.32(m,5H),6.91-6.94(m,4H),3.55(s,2H),3.47(br s, 1H),2.81-2.84(m,2H),2.39(m,2H),2.21-2.24(m,2H)和1.87-1.94(m, 2H).LC-MS:310.13(M+H)+,96.16％。产率：84％
1-苄基-4-((3,4-二氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(24.28-b):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ7.28(m,5H),7.00(m,1H),6.73(m,1H),6.61(m, 1H),3.58(br s,1H),3.55(s,2H),2.80(m,2H),2.41(m,2H),2.26(m, 2H)和1.87(m,2H).LC-MS:328.42(M+H)+,94.27％。产率：50％
1-苄基-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(24.28-c): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.31(m,5H),6.87(m,1H),6.74(m,2H), 3.55(s,2H),3.40(s,1H),2.81-2.84(m,2H),2.39(m,2H),2.23(s,3H), 2.21(m,2H)和1.87(m,2H).LC-MS:324.40(M+H)+,92.13％。产率： 77％
1-苄基-4-((2,4-二氟苯基)氨基)哌啶-4-甲腈(24.28-d):1H-NMR (400MHz,CDCl3):δ7.28(m,5H),7.12(m,1H),6.69(m,2H),3.71(br s,1H),3.62(s,2H),2.81(m,2H),2.41(m,2H),2.19(m,2H)和1.91(m, 2H).LC-MS:328.26(M+H)+,95.96％。产率：36％
制备24.29(a-d)的一般程序：向24.28(a-d)(1.0当量)的冰冷溶液中加入90％硫酸水溶液并将所得反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质冷却至0℃并使用5.0N氢氧化钠溶液将pH调节至约10。将水性部分用DCM萃取。将合并的有机物经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品用乙醚研磨以得到呈灰白色固体的所需产物24.29(a-d)。
1-苄基-4-(4-氟苯基氨基)哌啶-4-甲酰胺(24.29-a):1H-NMR(400 MHz,CDCl3):δ7.23(m,5H),6.87(m,3H),6.55(m,2H),5.47(br s, 1H),3.93(s,1H),3.48(s,2H),2.72(m,2H),2.28(m,2H),2.04(m,2H) 和1.86(m,2H).LCMS:328.12(M+H)+,99.60％。产率：84％
1-苄基-4-((3,4-二氟苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(24.29-b): 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.30(m,5H),6.88(m,1H),6.78(br s, 1H),6.42(m,1H),6.29(m,1H),5.51(br s,1H),3.98(s,1H),3.48(s, 2H),2.73(m,2H),2.28(m,2H),2.04(m,2H)和1.85(m,2H).LCMS:346.14(M+H)+,92.24％。产率：66％
1-苄基-4-((3-氟-4-甲基苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(24.29-c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.24(m,5H),7.18(s,1H),7.02(br s, 1H),6.81(m,1H),6.45(m,1H),6.35(m,1H),5.34(br s,1H),3.41(s, 2H),2.50(m,2H),2.24(m,2H),2.09(s,3H),1.95(m,2H)和1.81(m, 2H).LCMS:342.33(M+H)+,97.83％。产率：59％
1-苄基-4-((2,4-二氟苯基)氨基)哌啶-4-甲酰胺(24.29-d): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.20(m,6H),7.10(m,1H),7.07(br s, 1H),6.82(m,1H),6.46(m,1H),4.78(s,1H),3.41(s,2H),2.52(m,2H), 2.13(m,2H),1.98(m,2H)和1.83(m,2H).LCMS:346.25(M+H)+,96.72％。产率：46.9％
制备24.30(a-d)的一般程序：将化合物24.29(a-d)在原甲酸三乙酯和AcOH(3:1)中的溶液在密封管中经微波照射至190℃保持2h。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物经硅胶(100-200M,2-4％ MeOH-DCM)纯化以得到呈灰白色固体的所需产物24.30(a-d)。
8-苄基-1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(24.30-a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.65(s,1H),7.44(m,2H),7.34(m, 2H),7.13(m,5H),3.41(s,2H),2.66(m,2H),2.41(m,2H)和1.75(m, 4H).MS:338.22(M+H)+。产率：48％。
8-苄基-1-(3,4-二氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (24.30-b):LCMS:356.29(M+H)+,82.22％。产率：22％。
8-苄基-1-(4-氟-3-甲基苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (24.30-c):MS:352.13(M+H)+。产率：31％。
8-苄基-1-(2,4-二氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮 (24.30-d):MS:356.19(M+H)+。产率：18％。
制备24.31(a-d)的一般程序：向化合物24.30(a-d)(1.0当量)在MeOH和AcOH(40:1,20mL)中的溶液加入Pd-C(w/w,10mol％)并将所得溶液在氢气气氛下(1个大气压)在环境温度下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩。将残余物经硅胶(碱性氧化铝，2-4％MeOH-DCM)纯化以得到呈灰白色固体的所需产物 24.31(a-d)。
1-(4-氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(24.31-a): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.79(br s,1H),7.03(m,2H),6.95(m, 2H),4.56(s,2H),3.37(m,3H),2.95(m,2H),2.33(m,2H)和1.62(m, 2H).LCMS:250.13(M+H)+,81.19％。产率：70％
1-(3,4-二氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(24.31-b):MS: 268.20(M+H)+。产率：25％
1-(4-氟-3-甲基苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(24.31-c): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.58(br s,1H),6.96(m,1H),6.83(m, 2H),4.52(s,2H),3.40(m,1H),3.17(m,2H),2.83(m,2H),2.15(m,3H), 2.09(m,2H)和1.49(m,2H).MS:264.14(M+H)+。产率：50％
1-(2,4-二氟苯基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2-烯-4-酮(24.31-d): 1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.66(br s,1H),7.47(m,1H),7.27(m, 1H),7.08(m,1H),4.51(s,2H),3.12(m,1H),2.81(m,2H),1.83(m,4H) 和1.40(m,2H).LCMS:268.12(M+H)+,92.83％。产率：90％
方案25:
3-氯吲哚-2-酮(25.33)的制备:向硝基苯乙烯25.32(5.0g,335.55 mmol)在DCM中的冰冷溶液中加入乙酰氯(5.0mL,67.11mmol)和 FeCl3(13.0g,67.11mmol)。将所得反应物质在0℃下搅拌5h。反应完成后(TLC监测)，加入0.1M HCl(100mL)并在RT下搅拌16h。将所得反应混合物用DCM(3x100mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物经硅胶(100-200M, 25％EtOAc/己烷)纯化以得到呈灰白色固体的所需产物25.33(2.4g, 43％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.76(br s,1H),7.35(d,J＝7.6 Hz,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,1H),7.03(t,J＝7.2Hz,1H),6.86(d,J＝7.6 Hz,1H)和5.57(s,1H).LCMS:166.07(M-H)+,99.70％。
3-(4-苄基哌嗪-1-基)吲哚-2-酮(25.34)的制备:向3-氯吲哚-2-酮 25.33(1.0g,5.97mmol)在ACN(10mL)中的溶液加入碳酸钾(1.23g, 8.96mmol)和1-苄基哌嗪(1.16g,6.57mmol)。将所得反应混合物在 80℃下加热16h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水 Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,40％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物25.34(0.62g,31％)。1H-NMR(400MHz, DMSO-d6):δ7.84(br s,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.20(m,6H),7.01 (t,J＝7.6Hz,1H),6.80(d,J＝7.6Hz,1H),4.29(s,1H),3.51(s,2H),2.88(m,2H),2.65(m,2H)和2.49(m,4H).MS:308.21(M+H)+。
3-(哌嗪-1-基)吲哚-2-酮(25.35)的制备:向3-(4-苄基哌嗪-1-基) 吲哚-2-酮25.34(0.30g,0.98mmol)在MeOH和AcOH(40:1,10mL) 中的溶液中加入Pd-C(w/w,10mol％)并将所得溶液在氢气气氛下(1 个大气压)在环境温度下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩以得到呈灰白色固体的所需产物25.35(0.16g, 76％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.32(br s,1H),7.23(d,J＝7.2 Hz,1H),7.17(m,1H),6.93(t,J＝6.8Hz,1H),6.71(d,J＝8.0Hz,1H), 4.25(s,1H),2.53(m,1H),2.50(m,4H),2.38(m,2H)和1.87(m,2H). MS:218.16(M+H)+。
方案26:
4-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(26.37)的制备:向2-甲基-4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯26.36(2.0g,9.38mmol)在甲醇氨(约4N,200mL) 中的溶液中加入Pd/C(10mol％,0.2g)。将所得反应混合物在氢气气氛下在50PSI下搅拌60h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质通过硅藻土床过滤。将滤液减压干燥以得到呈半固体的所需产物26.37 (2.0g，定量产率)。MS:215.17(M+H)+。
2-甲基-4-((2-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(26.38)的制备: 向4-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯26.37(1.7g,7.93mmol)在DMF (10mL)中的冰冷溶液中加入DIPEA(2.0mL,11.89mmol)和1-氟-2-硝基苯(1.2g,7.93mmol)。将所得反应混合物在80℃下加热16h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取 (3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,10％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物 26.38(1.3g,50％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.38(m,1H),8.18(d, J＝8.8Hz,1H),7.42(t,J＝7.2Hz,1H),6.82(d,J＝8.8Hz,1H),6.40(t, J＝7.6Hz,1H),4.30(m,1H),3.90(m,1H),3.21(m,2H),1.95(m,2H), 1.77(m,2H),1.47(s,9H)和1.30(d,J＝6.8Hz,3H).LCMS:334.21 (M-H)+,89.85％。
4-((2-氨基苯基)氨基)-2-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(26.39)的制备: 向2-甲基-4-((2-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯26.38(1.30g,3.87 mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd-C(w/w,10mol％)并将所得溶液在氢气气氛下(1个大气压)在环境温度下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土床过滤并将滤液减压浓缩以得到呈灰白色固体的所需产物26.39(1.15g，定量)。MS:306.20(M+H)+。
2-甲基-4-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(26.40)的制备:向4-((2-氨基苯基)氨基)-2-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯26.39(0.50g,1.64mmol)在THF(20mL)中的冰冷溶液中加入Et3N (0.34mL,2.46mmol)和三光气(0.59g,1.96mmol)。将所得反应混合物在RT加热4h。反应完成后(TLC监测)，蒸发溶剂并将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取(3次)。将合并的有机物用盐水洗涤，经无水 Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗品经硅胶(100-200M,40％EtOAc-己烷)纯化以得到所需产物26.40(0.5g,90％)。1H-NMR(400MHz, DMSO-d6):δ10.86(br s,1H),7.23(m,1H),6.97(m,3H),4.34(m,1H), 3.64(m,2H),2.27(m,1H),1.94(m,2H),1.72(m,2H),1.43(s,9H)和 1.35(m,3H).MS:330.22(M-H)+。
1-(2-甲基哌啶-4-基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮盐酸盐(26.41) 的制备:将2-甲基-4-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-1- 羧酸叔丁酯26.40(0.25g,0.75mmol)在1,4-二噁烷-HCl(约4N,10mL) 中的冰冷溶液在RT下搅拌2h。反应完成后(TLC监测)，将反应物质减压干燥以得到呈灰白色固体的所需产物26.41(0.2g，定量)。MS: 232.12(M+H)+。
实施例2.本发明化合物的生物学活性。
由于TRPA1起配体门控离子通道作用，该通道为钙可渗透的相对非选择性阳离子通道，因此采用测量用激动剂配体激活后细胞内钙 ([Ca2+]i)增加的基于细胞的功能测定来测试未知化合物。在该测定中采用以可诱导方式表达人TRPA1的稳定的HEK293细胞系。这些 HEK293细胞生长于含有4.5mg/ml葡萄糖的补充有10％热灭活胎牛血清、50单位/ml青霉素、50μg/ml链霉素的达尔伯克(Dulbecco's)最小必需培养基上，在37℃在95％空气5％CO2中补充有5μg/ml杀稻瘟菌素和50μg/ml潮霉素B。TRPA1的表达是通过将1μg/ml多西环素包括在培养基中来诱导的。对于诱导的细胞，还加入钌红(5μM) 以使组成型TRPA1通道活性最小化并在诱导后14–18小时使用细胞。为测量[Ca2+]i变化，将细胞以约100,000个细胞/孔接种于96孔板的孔中并生长14–18小时以达到汇合。为防止细胞从随后的清洗中损失，将孔用20μg/ml聚鸟氨酸(MW>30,000,Sigma,St Louis,MO)处理>15min并用不含Mg2+和Ca2+的汉克(Hank’s)平衡盐溶液冲洗一次。为加载Ca2+指示剂染料，将细胞用pH 7.4的含有140mMNaCl、5mM KCl、1mM MgCl2、1.8mM CaCl2、10mM葡萄糖和15mM HEPES 的细胞外溶液(ECS)洗涤一次然后在补充有2μM Fluo4-AM和0.05％普朗尼克F-127的50μL ECS中在37℃下孵育60min。在一些实验中，将Fluo-8-AM替代Fluo-4-AM用作钙敏感的荧光探针。在所有溶液中包括丙磺舒(2mM)以防止Fluo-4或Fluo-8从细胞中渗出。在孵育结束时，将细胞用ECS洗涤三次并置于80μL的相同溶液中。使用流体处理集成的荧光板读数仪FlexStation(Molecular Devices, Sunnyvale,CA)测量荧光变化。将测试化合物的储备溶液首先溶解于 100％DMSO中然后连续稀释以实现所需终浓度。测定中DMSO的终浓度不超过0.3％(v/v)。将药物以2x或3x所需终浓度稀释到ECS中并通过集成的自动8-通道移液器在预先编程的时间点递送到样品板。使用494nm激发波长和525nm发射波长以0.67Hz从板底读取 Fluo-4或Fluo-8荧光。在20–25℃进行实验。对于某些实验，包括0.1％ BSA与细胞和测试化合物。
在药物的每个测试浓度获得的动力学数据表示作为时间函数的一系列荧光强度。将数据从Softmax Pro软件转移以构建每个活性化合物的浓度-反应曲线并且将使用逻辑斯谛方程的曲线拟合(Prism, Graphpad,San Diego,CA)用于获得拮抗剂的抑制常数(IC50)或激动剂配体的激活常数(EC50)。
使用连续添加方案，将测试化合物首先应用于加载有Fluo-4或 Fluo-8的细胞并监测每孔中的荧光变化2.5min。在用参比TRPA1激动剂挑战后用测试化合物孵育15-30min后再次读取板。测试每种化合物中的参比TRPA1激动剂包括氟芬那酸(FFA)、异硫氰酸烯丙酯 (AITC)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)中的至少一种。显示拮抗剂活性的化合物示出初始速率的浓度依赖性降低和/或由参比激动剂刺激的活性量级的降低。
对于TRPA1，拮抗剂活性可表示为IC50并且对于TRPA1，激动剂活性可表示为EC50。所公开的化合物的TRPA1调节活性结果见下表7中；示于表7的IC50值是由在通过向含有TRPA1和测试化合物的混合物中加入参比TRPA1激动剂而开始的时间段期间收集的数据确定的。对于每种化合物，将活性分类为A、B或C其中A为0.05-5 μM的IC50；B为5-25μM的IC50；且C为>25μM的IC50。本领域技术人员将理解其它分析技术(例如，如下所述的膜片钳实验)可用来表征化合物活性，并且针对特定化合物观察的IC50或EC50值可根据所采用的技术而变化。
表7.本公开化合物的TRPA1调节活性。
实施例3.本发明化合物的电生理学测试。
全细胞膜片钳实验允许检测如上所述细胞系中通过TRPA1通道的电流。使玻璃电极与单细胞接触然后使膜破裂，允许控制细胞膜电压并使用连接于电极的放大器测量流过膜的电流。输注系统允许控制细胞外溶液，包括快速添加分别诱导或抑制电流的TRPA1激动剂和拮抗剂。通过向溶液中应用适当浓度的选自由氟芬那酸、异硫氰酸烯丙酯(AITC)或15-脱氧-PGJ2前列腺素组成的组的已知激动剂来激活 TRPA1特异性电流。为测定本发明化合物的活性，在加入激动剂之前加入化合物以测定预孵育对TRPA1活性的影响或可选地同时加入化合物与激动剂以测定同时加入对TRPA1活性的影响。
在膜片形成前一天将表达人TRPA1的HEK293细胞接种于聚鸟氨酸处理过的盖玻片上。当充满含有(以mM计)以下的pH 7.4的移液器溶液时：117CsCl、9EGTA、1.8MgCl2、14Tris-磷酸肌酸、4Mg-ATP、 0.3Tris-GTP、9HEPES，将记录移液器从微量移液器玻璃(World Precision Instruments Inc,Sarasota,FL)拉至2–4MΩ并置于含有(以 mM计)以下的pH 7.4的电解液中：150NaCl、4KCl、2CaCl2、2MgCl2、 10葡萄糖、10HEPES。将分离的细胞使用EPC10放大器以全细胞模式进行电压钳，在PatchMaster(HEKA Instruments)的控制下使用模拟数字转换器以5kHz的采样率收集数据。每0.5s施加从-60mV保持电位-100mV至+100mV的100ms电压斜升。形成膜片的细胞由电解液通过8-通道SmartSquirt输注系统(AutoMate Scientific,Inc., Berkeley,CA,USA)连续灌注。将化合物稀释到终浓度并根据需要施加10–40秒。对于动力学或浓度-反应研究，应用参比激动剂10秒并且将在-100和+100mV下的最大电流密度用于计算。所有记录均在室温(约23℃)下进行。
实施例4.弗氏(Freund's)完全佐剂痛觉过敏模型中的化合物活性
使用已建立的用于测试化合物的潜在镇痛活性的动物模型即广泛所知的弗氏完全佐剂(CFA)痛觉过敏模型来测试本公开化合物在减少或缓解炎性疼痛中的功效。CFA模型是已经确立的急性炎性疼痛模型，在医药行业被广泛用于评估包括TRPA1拮抗剂的化合物的镇痛活性(Eid,SR,等人(2008)“HC-030031,a TRPA1selective antagonist attenuatesinflammatory-and neuropathy-induced mechanical hypersensitivity.”Mol Pain 4:48-58.)
测试采用用于测量动物中疼痛反应的技术的Randell-Selitto测试或爪压测试。对于该炎性疼痛模型，向大鼠的左爪足底注射1:1盐水中的200μl弗氏完全佐剂(CFA)(Colpaert,1987)。使用爪压的缩足阀值(Randal-Selitto测试)，在CFA施用后3天测试动物的痛觉过敏。为研究在重复给药之后能否观察到测试化合物的抗痛觉过敏作用，以包括0.3、1、3、10和30mg/kg的剂量范围每天口服或i.p.施用来施用化合物3天。在口服或i.p.给药测试化合物(1-7小时)给药后在第1、2 和3天在对应于每种药物峰值血浆水平的时间(在单独的药代动力学实验中确定)来评估机械痛觉过敏的逆转。可以包括萘普生、吲哚美辛和双氯芬酸(3-30mg/kg PO)作为阳性对照测试药剂。在该模型中具有功效的本公开化合物与不存在化合物时的反应相比减少疼痛反应。
实施例5.脊神经结扎神经性疼痛模型中的化合物活性
本实施例描述了动物模型用于测试本公开化合物减少神经性疼痛的能力的用途。对于也称为Chung模型的神经性疼痛模型(脊神经结扎，SNL)，将大鼠用异氟烷麻醉并置于加热垫上。使用无菌技术，将L5和L6脊神经暴露、结扎并横切(Kim,S.H.和Chung,J.M,(1992), Pain,50(3):355-363)。将肌肉和皮肤分别用4-0聚对二氧六环酮和伤口夹封闭。SNL手术后2-4周评估触摸痛并且仅使用形成如由使用 von Frey细丝其机械阀值显著减少所定义的触摸痛的大鼠。使用上下模式，用经校准的von Frey细丝(Stoelting Co,WoodDale,IL)来评估触觉性触摸痛(Chaplan,S.R.,等人(1994)J.Neurosci.Methods,53(1):55-63)。包括普瑞巴林(Pregabalin)(3-30mg/kg PO)或加巴喷丁(50-100 mg/kg PO或100-150mg I.P)作为阳性对照。
向手术处理过的大鼠口服或I.P施用测试化合物，并且以对应于接近测试化合物的最大峰值血浆浓度和具体施用模式的给药后间隔评估疼痛测量值。
在手术诱导神经病变后在Chung模型中评估测试化合物175、180 和198的作用。向手术处理过的大鼠在L5-L6脊神经损伤后18天以 30mg/kg i.p(10ml/kg)施用测试化合物。以150mg/kg i.p.(10ml/kg)施用加巴喷丁作为阳性对照组。将媒介物和测试化合物溶解于10％ DMSO、20％吐温-80和40％PEG-400中。在处理前一天，通过von Frey 测试来测量神经性疼痛基础反应并基于PWT反应将大鼠进行随机化。在选择动物进行处理之前考虑<4.0g的截止值。在处理当天，以30mg/kg i.p.(10ml/kg)施用溶解于10％DMSO、20％吐温-80、40％PEG-400中的测试化合物。其它测试组包括以150mg/kg i.p.(10ml/kg) 的媒介物对照和加巴喷丁。在给药后2小时测量机械性触摸痛。化合物175的结果示于图1和2中，其中数据表示为缩足阀值(PWT以g 计)(图1)和最大可能作用百分比(％MPE)(图2)。每个棒条表示8只大鼠的平均值±SEM。测试化合物显示对缩足阀值的显著抗异常性疼痛作用和％MPE(p<0.001)。使用单因素ANOVA然后Dunnett’s事后检验来完成统计分析。测试化合物所展现的％MPE值示于表8中。
表8.在神经性疼痛的脊神经结扎模型中Algomedix化合物的功效
化合物编号 剂量 ％MPE
175 30mg/kg,i.p 59±10(3)
180 30mg/kg,i.p. 65(1)
198 30mg/kg,i.p. 41(1)
％MPE＝最大可能作用％
()实验次数
测试化合物抑制触摸痛和痛觉过敏而施用组的媒介物不显示任何改善。统计分析显示媒介物和测试化合物组之间的差异高度显著。从这些结果中看出，测试化合物对减少神经性疼痛示出高水平效力 (41-65％最大可能作用)。
实施例6.切口疼痛模型中的化合物活性
使用切口疼痛模型评估本公开化合物对手术后疼痛的作用，如Brennan等人(1996)先前所述。在切口疼痛模型中，对Sprague-Dawley 大鼠(重量200-300g)通过爪的跖面的皮肤和筋膜切开1cm纵向切口以使其经历手术。未进行操作的大鼠用作对照。使用痛觉测量仪确定后爪对有害机械刺激的缩足阀值(PWT)。通过使用经校准的von Frey 细丝来确定对加强的机械刺激的缩足反应。将截止值设置在250g并且将终点视作完全爪缩回。跖面切口后24小时，测量前药PWT，并且大鼠(9-20只/组)接受单剂量3、10或30mg/kg p.o.或i.p.测试化合物、30mg/kg p.o.塞来昔布作为阳性对照，或媒介物。在药物施用后多个间隔(例如在1、3、5和24小时)再次测定PWT。每只动物痛觉过敏的逆转百分比由以下计算：(给药后阀值–给药前阀值)/(基线阀值–给药前阀值)x100。
实施例7.碘乙酸盐骨关节炎疼痛模型中的化合物活性
骨关节炎相关疼痛的已建立的动物模型被称为碘乙酸盐模型，因为它是基于向大鼠的膝关节空间注射碘乙酸盐后发生的进行性关节破坏(Marker和Pomonis,2012)。可以测量的疼痛相关行为包括后肢承重和原发性机械性痛觉过敏。在骨关节炎的大鼠模型中，在短暂的异氟烷麻醉下将碘乙酸盐(IOA，每只大鼠2mg/25μL在pH 7.4盐水中) 施用于大鼠左膝关节并且在IOA施用后6周评估对von Frey细丝的超敏性和承重变化。在以由达到单个测试剂的峰值血浆水平所需的时间确定的间隔测试之前大鼠接受单剂量的1、3、10或30mg/kgp.o. 或i.p.施用的测试化合物。超敏性的逆转百分比计算为：(给药后– IOA注射后)/(IOA注射前–IOA注射后)x100，其中100％等效于完全逆转。
实施例8.福尔马林伤害感受性疼痛模型中的化合物活性
福尔马林模型广泛用于评价镇痛化合物在实验室动物中的作用。它是伤害感受性疼痛的有用模型。在该测试中，将稀释的(0.5–5％)福尔马林溶液(其中甲醛是活性成分)注射到啮齿动物的爪中，并且经过两个短暂的不同阶段来评估疼痛相关行为，所述阶段包括初始健壮期，其中在前10min期间对举爪、舔爪和缩爪进行评分，随后是这些行为的瞬间减弱以及持续30–60min的行为的第二阶段。
对于福尔马林-诱导的模型，将小鼠或大鼠施用福尔马林和/或所公开的化合物之一。在福尔马林注射之前，将测试化合物皮内注射、口服递送或通过i.p.施用30-120min。然后将福尔马林(50μl的2.5％福尔马林，在盐水中稀释)注射到大鼠右后爪的背侧面，并将动物置于装置的仓内，在其中记录注射福尔马林的爪的运动。在接下来的 60min以分钟来计数缩爪或舔爪和咬爪的次数。在对所收集数据的一些分析中，将60分钟的观察期分成各个阶段。
实施例9.慢性压迫性损伤神经性疼痛模型中的化合物活性
由Bennett和Xie(1988)开发的神经性疼痛的大鼠慢性压迫性损伤(CCI)模型是广泛用于评价测试化合物的镇痛活性的神经性疼痛模型。继坐骨神经的结扎之后，外周神经的最终损伤部分由于产生引起并维持神经性疼痛的几种炎性介质(例如，促炎性细胞因子和趋化因子)而发生。
用于产生CCI大鼠的手术方案由Bennett和Xie所述(Bennett,GJ, Xie,YK(1988)Pain 33(1):87-107.)。简言之，使雄性Sprague-Dawley 大鼠(175-250g)麻醉，通过1.5cm纵向切口而暴露右坐骨神经的中间三分之一并且将三条结扎线(5-0铬肠线)宽松地系于最接近坐骨三叉分支的坐骨神经周围。然后将切口缝合并封闭，给大鼠施用抗生素并在恢复期间每日评价一般健康状况。神经结扎后两周，使用缩足阀值 (PWT)<4g来限定大鼠被纳入研究之中的资格，按描述针对大鼠 Chung模型和CCI大鼠测量基底机械性触摸痛(Kim,SH,Chung,JM (1992).Pain 50(3):355-363；Chaplin,SR,等人(1994)J Neurosci Methods 53(1):55-63)。
在第二天，使本发明化合物溶解于预先确认的媒介物中并以1、 3、10和30mg/kg(口服或i.p.)的剂量施用并且在对应于化合物峰值血浆水平的时间段期间测量PWT。每个实验组由8只大鼠组成。将加巴喷丁用作阳性对照组并且将实验者记录行为对处理组设盲。使用 Prism(Graphpad)使用单因素ANOVA然后Dunnett事后检验来分析 50％PWT和最大可能作用％数据。
实施例10.链脲霉素糖尿病性神经性疼痛模型中的化合物活性
糖尿病相关的对感觉神经的损伤(糖尿病性神经病变)是1型和2 型糖尿病的常见并发症并且患有该神经病变的人遭受慢性疼痛。向大鼠注射链脲霉素(STZ)是常用的诱导导致糖尿病性神经性疼痛的糖尿病病状的化学法。STZ神经性疼痛模型常用来评价包括TRPA1拮抗剂的镇痛化合物的功效(Courteix,C,等人(1994)Pain 57(2):153-160； Wei,H,等人(2009)Anesthesiology 111:147-154.)STZ施用后，出现高血糖症和低胰岛素血症并由于不可逆的毒性而持续。
使用以下确立的程序在该模型中测定本发明化合物对于抑制或减轻糖尿病性神经性疼痛和减轻疼痛超敏性的功效。简言之，向雄性 Sprague-Dawley大鼠(175-200)克的背侧尾静脉施用STZ(45mg/kg i.v. 在0.1M柠檬酸缓冲液中)，并且通过测量STZ施用后3、10和17天的葡萄糖水平来确认高血糖症。机械性触摸痛通常出现在注射STZ 后三周并持续大约七周。在STZ施用后第17天，按描述针对有资格进行该研究的展现<5g的50％PWT值的大鼠SNL模型和大鼠测量基底机械性触摸痛。第二天，将本发明化合物溶解于预先确认的媒介物中并以1、3、10和30mg/kg(口服或i.p.)的剂量施用以使大鼠具有资格。按描述在对应于观察到研究化合物的峰值血浆水平的时间段的时间针对Chung模型测量机械性触摸痛。每个实验组将包括八只大鼠并且将曲马朵(30mg/kg,i.p.)用作阳性对照。使用计算机程序Prism (Graphpad)使用单因素ANOVA和Dunnett’s事后检验来分析50％ PWT和％MPE数据。
实施例11.化学疗法诱导的神经性疼痛模型中的化合物活性
化学疗法诱导的外周神经病变是抗癌药物治疗最严重的并发症之一。例如，包括最有效且最常使用的化疗剂紫杉醇(Taxol)或奥沙利铂的试剂产生外周神经毒性，患者报道在化学疗法治疗期间和化学疗法治疗之后常持续的神经性疼痛。已报道TRPA1拮抗剂AD_09在奥沙利铂模型中减轻神经性疼痛(Nativi,C,等人(2013)Scientific Reports 3,2005,1-10.)
如下所述的研究提供在已建立的紫杉醇诱导的神经性疼痛的大鼠模型中测试本发明化合物的方法(Flatters,SJ和Bennett,G,Pain (2004)109:150-161)。在该程序中，雄性Sprague-Dawley大鼠每隔一天接受i.p.注射1mg/kg紫杉醇或媒介物溶液持续总共4次注射(第0、 2、4和6天)。在偶数实验天数接受注射后，在奇数实验天数测试大鼠的机械和寒冷触摸痛。在最后一次注射紫杉醇(约第10天)后完全形成触摸痛后，使一个亚组的大鼠(每个处理组12只大鼠)接受口服剂量或i.p.注射本发明化合物(1、3、10或30mg/kg)或其媒介物溶液。使用von Frey测定测量机械性触摸痛以评估化合物减轻疼痛的作用。在给药后1小时开始测试大鼠的机械和寒冷触摸痛并且之后可以 2小时间隔进行测试(时间间隔取决于作用)只要TRPA1拮抗剂的作用持续。在一些情况下，在之前给药作用减弱之前或之后给予本发明化合物(TRPA1拮抗剂)一次以上的处理以提供重复给药方案。
在本说明书中引用的所有出版物和专利申请均以引用的方式并入本文，如同将各个单独的出版物或专利申请特定地和单独地以引用的方式并入。
尽管前述已通过说明和实例的方式出于清楚理解的目的做出详细描述，但容易为本领域普通技术人员所显而易见的是根据所公开的教义可以对其做出某些变化和修改而不偏离本公开的精神或范围。

Claims (71)

1.一种式I化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
A是式Ia的环状基团：
Z1、Z2、Z3、Z4和Z5各自是选自由N、CH和CRa组成的组的成员；其中选自由Z2、Z3和Z4组成的组的至少一个成员是N；
B是式Ib的环状基团：
Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自是独立选自由N、CH和CRb组成的组的成员；
每个Ra和Rb是独立选自由氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基和卤基组成的组的成员；
Rc选自由氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基和(C3-C6环烷基)C1-C3烷基组成的组；
u是0至4的整数；
v是0至5的整数；
X是CRd；
Rd选自由氢、卤基、氰基、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基组成的组；
每个L1、L2和L3，如果存在，是独立选自由C＝O和C＝S组成的组的成员；
C是式Ic的环状基团：
Q是选自由C(Re)(D)、N(E)、F和G组成的组的成员；并且
W1、W2、W3和W4各自是独立选择的C(Rf)2；或者，可选地，所述成员-W3-Q-或-W4-Q-连接形成成员H；
Re是选自由氢、C1-C3烷基和C1-C3氟烷基组成的组的成员；
每个Rf是独立选自由氢、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基和卤基组成的组的成员；或者，可选地，选自由(W1和W2)、(W2和W3)和(W3和W4)组成的组的一对Wn的两个轴Rf取代基连接形成-(C(Rz)2)t-桥；
每个Rz是独立选自由卤基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C3烷氧基组成的组的成员；或者，可选地，两个Rz取代基连同它们所连接的碳原子一起连接形成氧代、螺环烷基或螺杂环基；
每个t是选自2或3的整数；
或者可选地，C是选自由组成的组的成员；
D是式Id的二环基团：
E是式Ie的二环基团：
F是式If的螺环基团：
G是式Ig的双环螺环基团：
H是式Ih的稠合基团：
其中所述H环是稠合的五至八元环烷基或杂环基环；
其中s是0至4的整数；并且
其中w是0至2的整数；并且
Y6、Y7、Y8、Y9和Y10，如果存在，各自是独立选自由N、CH和CRb组成的组的成员。
2.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Z2是N。
3.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Z3是N。
4.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Z4是N。
5.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中每个Ra独立地选自C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基和卤基。
6.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中u是0至3的整数。
7.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中A是选自由以下组成的组的环状基团：
8.如权利要求7所述的化合物或其盐，其中A是选自由以下组成的组的环状基团：
9.如权利要求8所述的化合物或其盐，其中A是选自由以下组成的组的成员：
10.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y1是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
11.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y1是N。
12.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y2是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
13.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y2是N。
14.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y3是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
15.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y3是N。
16.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y4是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
17.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y4是N。
18.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y5是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
19.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y5是N。
20.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中v是0至3的整数。
21.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中B是选自由以下组成的组的环状基团：
22.如权利要求21所述的化合物或其盐，其中B是选自由以下组成的组的环状基团：
23.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Rd选自氢、卤基和C1-C4烷基。
24.如权利要求23所述的化合物或其盐，其中Rd选自氢、溴和甲基。
25.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中L1是C＝O。
26.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中所述Rf基团独立地选自C1-C3烷基、C1-C3氟烷基和卤基。
27.如权利要求26所述的化合物或其盐，其中每个Rf基团独立地选自C1-C3烷基。
28.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中C是选自由以下组成的组的成员：
29.如权利要求28所述的化合物或其盐，其中C是选自由以下组成的组的成员：
30.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中C是选自由以下组成的组的成员：
31.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Q是C(Re)(D)。
32.如权利要求31所述的化合物或其盐，其中L2是C＝O。
33.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Q是N(E)。
34.如权利要求33所述的化合物或其盐，其中L2是C＝O。
35.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Q是F。
36.如权利要求35所述的化合物或其盐，其中L2是C＝O，且L3是C＝O。
37.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Q是G。
38.如权利要求37所述的化合物或其盐，其中L2是C＝O。
39.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中所述成员-W3-Q-或-W4-Q-连接形成成员H。
40.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Rc选自由氢和C1-C4烷基组成的组。
41.如权利要求40所述的化合物或其盐，其中Rc选自由氢和甲基组成的组。
42.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y6是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
43.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y6是N。
44.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y7是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
45.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y7是N。
46.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y8是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
47.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y8是N。
48.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y9是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
49.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y9是N。
50.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y10是CRb，并且其中所述Rb是选自由氯、氰基、氟、甲基、三氟甲基和三氟甲氧基组成的组的成员。
51.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y10是N。
52.如权利要求31所述的化合物或其盐，其中D选自由以下组成的组：
53.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中选自由以下组成的组：
54.一种化合物，其选自：
或其盐。
55.一种药物组合物，其包含治疗有效量的如权利要求1-54中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
56.根据权利要求55所述的药物组合物，其还包含选自由以下组成的组的第二治疗剂：i)阿片受体激动剂、ii)阿片受体拮抗剂、iii)钙通道拮抗剂、iv)5-HT受体激动剂、v)5-HT受体拮抗剂、vi)钠通道拮抗剂、vii)NMDA受体激动剂、viii)NMDA受体拮抗剂、ix)COX-2选择性抑制剂、x)神经激肽受体拮抗剂、xi)非甾体抗炎药物、xii)选择性血清素再摄取抑制剂、xiii)选择性血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、xiv)三环抗抑郁药物、xv)去甲肾上腺素调节剂、xvi)5-脂肪氧合酶抑制剂、xvii)大麻素受体激动剂、xviii)脂肪酸酰胺水解酶抑制剂、ixx)β-肾上腺素能受体激动剂、x)前列腺素受体拮抗剂、xxi)白三烯受体拮抗剂、xxii)组胺受体拮抗剂、xxiii)甾体类、xxiv)CGRP拮抗剂、xxv)过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂、和xxvi)对乙酰氨基酚。
57.如权利要求55所述的药物组合物，其中所述组合物被配制成溶液或混悬。
58.如权利要求55所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于关节内、膀胱内、肌肉内、皮内、腹膜内、眼内、玻璃体内、鞘内、皮下或静脉内施用。
59.如权利要求1-54中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防有需要的患者的疼痛的药物组合物中的用途。
60.如权利要求59所述的用途，其中疼痛包括急性疼痛、慢性疼痛、炎性疼痛、神经性疼痛、伤害感受性疼痛或围手术期疼痛。
61.如权利要求59所述的用途，其中对所述患者施用选自由以下组成的组的第二治疗剂：i)阿片受体激动剂、ii)阿片受体拮抗剂、iii)钙通道拮抗剂、iv)5-HT受体激动剂、v)5-HT受体拮抗剂、vi)钠通道拮抗剂、vii)NMDA受体激动剂、viii)NMDA受体拮抗剂、ix)COX-2选择性抑制剂、x)神经激肽受体拮抗剂、xi)非甾体抗炎药物、xii)选择性血清素再摄取抑制剂、xiii)选择性血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、xiv)三环抗抑郁药物、xv)抗癫痫药物、xvi)5-脂肪氧合酶抑制剂、xvii)大麻素受体激动剂、xviii)脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)抑制剂、ixx)β-肾上腺素能受体激动剂、xx)前列腺素受体拮抗剂、xxi)白三烯受体拮抗剂、xxii)组胺受体拮抗剂、xxiii)甾体类、xxiv)CGRP拮抗剂、xxv)过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂、和xxvi)对乙酰氨基酚。
62.如权利要求61所述的用途，其中所述5-HT受体激动剂是5-HT1B受体激动剂或5HT1D受体激动剂。
63.如权利要求61所述的用途，其中所述5-HT受体激动剂是曲坦类。
64.如权利要求63所述的用途，其中所述曲坦类是舒马普坦、利扎曲普坦、那拉曲坦、佐米曲普坦、依来曲普坦、阿莫曲普坦或夫罗曲坦。
65.如权利要求61所述的用途，其中所述阿片受体激动剂是吗啡、可待因、氢可酮、羟吗啡酮、喷他佐辛、纳布啡、芬太尼、舒芬太尼、曲马朵、哌替啶、美沙酮或埃托啡。
66.如权利要求61所述的用途，其中所述非甾体抗炎药物是阿司匹林、布洛芬、萘普生、酮洛芬、氟比洛芬、洛索洛芬、吲哚美辛、依托度酸、二氟尼柳、酮咯酸、萘丁美酮、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康或双氯芬酸。
67.如权利要求61所述的用途，其中所述COX-2抑制剂是塞来昔布、依托考昔、罗美昔布、帕瑞昔布、罗非昔布或伐地考昔。
68.如权利要求61所述的用途，其中所述第二治疗剂是对乙酰氨基酚。
69.如权利要求1-54中任一项所述的化合物在制备用于在手术程序之前、期间或之后治疗或预防疼痛的药物组合物中的用途。
70.如权利要求1-54中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防与介入性程序有关的疼痛的药物组合物中的用途。
71.如权利要求59-70中任一项所述的用途，其中所述药物组合物配制用于关节内、膀胱内、肌肉内、皮内、腹膜内、眼内、玻璃体内、鞘内、皮下或静脉内施用。
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