[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

BRPI0615087A2 - métodos e composições para a expressão de um polinucleotìdeo de interesse - Google Patents

métodos e composições para a expressão de um polinucleotìdeo de interesse Download PDF

Info

Publication number
BRPI0615087A2
BRPI0615087A2 BRPI0615087-0A BRPI0615087A BRPI0615087A2 BR PI0615087 A2 BRPI0615087 A2 BR PI0615087A2 BR PI0615087 A BRPI0615087 A BR PI0615087A BR PI0615087 A2 BRPI0615087 A2 BR PI0615087A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
polynucleotide
plant
cell
enhancer
interest
Prior art date
Application number
BRPI0615087-0A
Other languages
English (en)
Inventor
Billy Fred Mccutchen
Christine B Hazel
Donglong Liu
Albert L Lu
Wayne J Mehre
Paul D Olson
James F H Wong
Original Assignee
Pioneer Hi Bred Int
Du Pont
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pioneer Hi Bred Int, Du Pont filed Critical Pioneer Hi Bred Int
Publication of BRPI0615087A2 publication Critical patent/BRPI0615087A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8278—Sulfonylurea
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
    • C12N9/1092—3-Phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase (2.5.1.19), i.e. 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Catching Or Destruction (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

MéTODOS E COMPOSIçõES PARA A EXPRESSãO DE UM POLINUCLEOTìDEO DE INTERESSE. Métodos e composições para a expressão de um polinucleotídeo de interesse são fornecidos. As composições compreendem um domínio intensificador apresentado em Id. de Seq. N : 1, 10, 15 ou 16 e variantes e fragmentos ativos destes. Também são fornecidas construções de DNA que compreendem pelo menos uma sequência intensificadora de transcrição que compreende a sequência de nucleotídeos apresentada em Id. de Seq. N :1, 10, 15 ou 16 ou uma variante e fragmento ativo destes, operacionalmente ligados a um promotor heterólogo. Tais regiões reguladoras de transcrição quiméricas podem ser operacionalmente ligadas a qualquer polinucleotídeo de interesse. Também são fornecidas células, plantas, partes de plantas, e germeplasma que compreendem a construção de DNA. Métodos de uso da região reguladora de transcrição quimérica são também fornecidos. Em modalidades específicas, métodos de expressão de um polinucleotídeo de interesse, incluindo, por exemplo, sequências que conferem tolerância a herbicidas, e métodos para selecionar uma célula que tem a construção de DNA, são fornecidos.

Description

MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA A EXPRESSÃO DE UMPOLINUCLEOTÍDEO DE INTERESSECampo da invenção
A presente invenção é dirigida ao campo de genética ebiologia molecular, mais particularmente, as composições emétodos são direcionados ã expressão de polinucleotídeos deinteresse.
Fundamento da invenção
Expressão de seqüências de DNA heterólogo em umhospedeiro de planta é dependente da presença de umpromotor operacionalmente ligado que é funcional em umhospedeiro de planta. A escolha da seqüência do promotordeterminará quando e onde no organismo a seqüência de DNAheterólogo é expressa. Quando a expressão em tecidos ouórgãos específicos é desejada, promotores com preferênciapara tecido podem ser usados. Quando a expressão de gene emresposta a um estímulo é desejada, promotores indutíveissão o elemento regulador de escolha. Em contraste, quandoexpressão contínua é desejada através das células de umaplanta, são utilizados promotores constitutivos. Seqüênciasreguladoras adicionais acima e/ou abaixo da seqüência depromotor de núcleo podem ser incluídas nas construções deexpressão de vetores de transformação para realizar níveisvariáveis de expressão de seqüências de nucleotídeosheterólogos em uma planta transgênica.
Freqüentemente é desejável expressar uma seqüência deDNA em tecidos ou órgãos em particular de uma a planta. Porexemplo, resistência aumentada de uma planta à infecção porpatógenos que nascem no solo e ar deve ser realizada pormanipulação genética do genoma da planta para compreenderum promotor com preferência para tecido operacionalmenteligado a um gene de resistência a patógeno heterólogo demodo que as proteínas de resistência a patógeno sejamproduzidas no tecido de planta desejado.
Alternativamente, deve ser desejável inibir aexpressão de uma seqüência de DNA nativa em tecidos deplanta para atingir um fenótipo desejado. Nesse caso, talinibição deve ser realizada com transformação de uma plantapara compreender um promotor com preferência para tecidooperacionalmente ligado a uma seqüência de nucleotídeosanti-senso, de modo que a expressão da seqüência anti-sensoproduz um transcrito de RNA que interfere com a tradução domRNA da seqüência de DNA nativo.
Portanto, a isolação e caracterização de seqüênciasreguladoras que podem ser posicionadas acima e/ou abaixo daseqüência de promotor de núcleo e que geram níveisvariáveis de expressão de seqüências de nucleotídeosheterólogos em uma planta transgênica são necessárias paraa manipulação genética de plantas.
Breve sumário da invenção
Métodos e composições para expressão de umpolinucleotídeo de interesse são fornecidos. As composiçõescompreendem um domínio intensificador apresentado em Id. deSeq. N0 :1, 10, 15, 16, 17 ou 18 e variantes e fragmentosativos desses. Também são fornecidas construções DNA quecompreendem pelo menos uma seqüência intensificadora detranscrição que compreende a seqüência de nucleotídeosapresentada em Id. de Seq. N0 :1, 10, 15, 16, 17, ou 18 ouuma variante e fragmento ativo desses, operacionalmenteligado a um promotor heterólogo. Tais regiões reguladorasde transcrição quiméricas podem ser operacionalmenteligadas a qualquer polinucleotídeo de interesse. Também sãofornecidas células, plantas, partes de plantas egermeplasma que compreendem a construção de DNA.
Métodos de uso da região reguladora de transcriçãoquimérica são também fornecidos. Em modalidadesespecíficas, métodos de expressão de um polinucleotídeo deinteresse, que incluem, por exemplo, seqüências queconferem tolerância a herbicidas, e métodos para selecionaruma célula que tem a construção de DNA são fornecidos.
Breve descrição dos desenhos
A Figura 1 fornece exemplos de construções que têmelementos intensificados 35S.
A Figura 2 fornece um esquema que demonstra o efeitode intensificadores 35S sobre a eficácia de TX.
A Figura 3 fornece um esquema que demonstra o efeitode intensificadores 35S sobre a eficácia de TO.
A Figura 4 fornece um esquema que demonstra o efeitode intensificadores 35S sobre número de cópia de eventos.
A Figura 5 fornece um esquema que demonstra o efeitode intensificadores 35S sobre a expressão.
A Figura 6 fornece um ensaio de avaliação de geneinseticida.
A Figura 7 fornece um esquema que mostra odesenvolvimento de um esquema de seleção de GAT.
A Figura 8 demonstra que GAT pode ser usado como ummarcador selecionável.
A Figura 9 fornece um esquema que demonstra aseficiências de transformação de GAT.Descrição detalhada da invenção
A presente invenção será agora descrita maiscompletamente com referência aos desenhos em anexo, em quealgumas, mas não todas as modalidades da invenção sãomostradas. De fato, essas invenções podem ser englobadas emvárias diferentes formas e não devem ser interpretadas comolimitadas às modalidades aqui apresentadas; ao contrário,essas modalidades são fornecidas de modo que essa revelaçãosatisfaça requisitos legais aplicáveis. Números semelhantesreferem-se a elementos semelhantes.
Várias modificações e outras modalidades da invençãoaqui apresentadas estarão óbvias para a pessoa habilitadana técnica a qual essa invenção pertence tendo o benefíciodos ensinamentos apresentados na descrição antecedente e osdesenhos associados. Portanto, deve-se compreender que ainvenção não deve ser limitada às modalidades específicasaqui reveladas e que modificações e outras modalidadesdevem ser incluídas no escopo das modalidades aquireveladas. Embora termos específicos sejam aqui empregados,eles são usados em um sentido genérico e descritivo apenase não com o objetivo de limitação.
I. Polinucleotídeos
Composições da invenção compreendem um domíniointensificador de uma região de controle de transcrição evariantes e fragmentos daquele domínio intensificador.Quando o domínio intensificador é operacionalmente ligado aum promotor, uma região de regulação de transcriçãofuncional é formada que pode direcionar a expressão de umpolinucleotídeo operacionalmente ligado de interesse. Emparticular, a presente invenção gera polinucleotídeosisolados que compreendem o domínio intensificadorapresentado em Id. de Seq. N°: 1, 10, 15, 16, 17 ou 18;variantes e fragmentos ativos desses; e, polinucleotídeosque consistem na seqüência de Id. de Seq. Nc:1, 10, 15, 16,17 ou 18. Ainda em modalidades adicionais, o domíniointensificador empregado não compreende a região para opromotor 35S de cerca de posição -90 a cerca de -46. Aregião de -90 a -46 do promotor é apresentada em Id. deSeq. N°:5.
0 termo "promotor" deve significar uma regiãoreguladora de DNA que compreende uma região de iniciação detranscrição, que, em algumas modalidades, compreende umacaixa TATA capaz de direcionar RNA polimerase II parainiciar a síntese de RNA no sítio de iniciação detranscrição adequado para uma seqüência codificadoraparticular. 0 promotor também pode ser operacionalmenteligado a elementos reguladores adicionais que influenciam atranscrição, incluindo, sem limitação, íntrons, regiões nãotraduzidas 5' e elementos intensificadores. Como aquiusado, uma "seqüência intensificadora", "domíniointensificador", "elemento intensificador" ou
"intensificador", quando operacionalmente ligados a umpromotor adequado, modularão o nível de transcrição de umpolinucleotídeo de interesse operacionalmente ligado. Emmodalidades específicas, o intensificador da invenção podealterar padrões de expressão de promotor normais. Por
<formula>formula see original document page 6</formula> exemplo, um promotor preferido/específico para tecido,quando operacionalmente ligado a um intensificador dainvenção, demonstrará expressão ectópica que não énormalmente observada com o promotor isoladamente. Porexemplo, o promotor de oleosina é um promotor compreferência por semente mas mostra expressão de folha napresença do intensificador da invenção ou variante efragmento ativo desses. Em um outro exemplo, o promotorZrp2, que é um promotor com preferência para folha, torna-se constitutivo quando operacionalmente ligado à seqüênciaintensificadora da invenção ou uma variante e fragmentobiologicamente ativo desses, e o promotor RM2, um promotorde raiz, quando operacionalmente ligado ao intensificadorda invenção ou variante e fragmento biologicamente ativodesses mostrará expressão em folha. Portanto, ascomposições da presente invenção também compreendem umpolinucleotideo que compreende uma região de controle detranscrição quimérica que compreende o promotoroperacionalmente ligado a pelo menos uma, duas, três,quatro ou mais cópias do domínio intensificador ou umavariante ou fragmento ativo do domínio. Tais composiçõespermitem a expressão de um polinucleotideo operacionalmenteligado de interesse.
A invenção engloba polinucleotideo isolado ousubstancialmente purificado ou composições da proteína. Umpolinucleotideo "isolado" ou "purificado" ou porçõesbiologicamente ativas desse, é substancial ouessencialmente livre de componentes que normalmenteacompanham ou interagem com o polinucleotideo comoencontrado em seu ambiente de ocorrência natural. Dessaforma, um polinucleotideo isolado ou purificado ésubstancialmente livre de outro material celular ou meio decultura quando produzido por técnicas recombinantes, ousubstancialmente livre de precursores químicos ou outrassubstâncias químicas quando sintetizado quimicamente.
Otimamente, um polinucleotídeo "isolado" é livre deseqüências (preferivelmente seqüências codificadoras deproteína) que flanqueiam naturalmente o polinucleotídeo (ouseja, seqüências localizadas nas extremidades 5' e 3' dopolinucleotídeo) no DNA genômico do organismo do qual opolinucleotídeo é derivado. Por exemplo, em váriasmodalidades, o polinucleotídeo isolado pode conter menos doque cerca de 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb, ou 0,1kb de seqüências de nucleotídeos que flanqueiamnaturalmente o polinucleotídeo no DNA genômico da célula daqual o polinucleotídeo é derivado.
Um polinucleotídeo que é substancialmente livre dematerial celular inclui preparações que têm menos que cercade 30%, 20%, 10%, 5%, ou 1% (em peso seco) de proteína oupolinucleotídeos contaminantes. Quando o polinucleotídeo dainvenção ou porção biologicamente ativa desse érecombinantemente produzido, o meio de cultura representamenos que cerca de 30%, 20%, 10%, 5%, ou 1% (em peso seco)de precursores químicos.
Fragmentos e variantes da seqüência intensificadorarevelada são também englobados pela presente invenção. Emparticular, fragmentos e variantes do domíniointensificador de Id. de Seq. N0 :1, 10, 15, 16, 17 ou 18são fornecidos. Como aqui usado, o termo "fragmento"significa uma porção do polinucleotídeo. Fragmentos de umdomínio intensificador podem reter a atividade biológica demodulação (aumento ou diminuição) do nível de transcriçãoquando operacionalmente ligado a um promotor adequado.
Alternativamente, fragmentos de um polinucleotídeo que sãoúteis como marcadores de hibridização podem não reternecessariamente a atividade biológica. Fragmentos de umpolinucleotídeo para o domínio intensificador podem variarde pelo menos cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 100nucleotídeos, cerca de 150 nucleotídeos, cerca de 200nucleotídeos, cerca de 250 nucleotídeos, cerca de 300nucleotídeos, cerca de 350 nucleotídeos, cerca de 400nucleotídeos, cerca de 450 nucleotídeos, cerca de 500nucleotídeos, e até a seqüência de nucleotídeos decomprimento total da invenção para o domínio intensificadorda invenção. Em outras modalidades, um fragmento do domíniointensificador compreende um comprimento de cerca de 50 acerca de 100, 100 a cerca de 150, 150 a cerca de 200, 200 acerca de 250, cerca de 250 a cerca de 300, cerca de 300 acerca de 350, cerca de 350 a cerca de 400, cerca de 400 acerca de 450, cerca de 450 a cerca de 500, cerca de 500 acerca de 535 nucleotídeos.
Em modalidades específicas, as variantes ativas efragmentos do intensificador compreendem regiõesconservadas. Tais regiões incluem uma ou mais dasseqüências sublinhadas apresentadas abaixo
<table>table see original document page 9</column></row><table>
(Id. de Seq. N°:l). Veja, também, Fang e cols. (1989) ThePlant Cell 1:141-150, aqui incorporado por referência.
Uma porção biologicamente ativa do domíniointensificador pode ser preparada por isolação da porção dodomínio intensificador da invenção e avaliação da atividadede regulação da transcrição do fragmento. Métodos paradetectar regulação de transcrição incluem, por exemplo,avaliação do nível do polinucleotídeo operacionalmenteligado de interesse ou avaliação da expressão de umpolipeptídeo codificado por uma seqüência operacionalmenteligada de interesse. Tais ensaios podem medir diretamente onível do polinucleotídeo ou polipeptídeo ou eles podemavaliar a atividade ou um fenótipo esperado quando aexpressão da seqüência é alterada. Tais ensaios sãoconhecidos na técnica.
Como aqui usado, o termo "variantes" refere-se aseqüências substancialmente similares. Parapolinucleotídeos, variantes de ocorrência natural podem seridentificadas com o uso de técnicas de biologia molecularbem conhecidas, como, por exemplo, com reação de cadeia depolimerase (PCR) e técnicas de hibridização como aquiapontado. Para polinucleotídeos, uma variante compreendeuma deleção e/ou adição de um ou mais nucleotídeos em um oumais sítios internos no polinucleotídeo nativo e/ou umasubstituição de um ou mais nucleotídeos em um ou maissítios no polinucleotídeo nativo. Como aqui usado, umpolinucleotídeo "nativo" compreende uma seqüência denucleotídeos de ocorrência natural. Para polinucleotídeos,variantes de ocorrência natural podem ser identificadas como uso de técnicas de biologia molecular bem conhecidas ,como por exemplo, com reação de cadeia de polimerase (PCR)e técnicas de hibridização como apontado abaixo.Polinucleotídeos variantes também incluem seqüências denucleotídeos sinteticamente derivadas, como aquelasgeradas, por exemplo, pelo uso de mutagênese direcionada asítio.
Geralmente, variantes de um polinucleotídeo particularda invenção terão pelo menos cerca de 40%, 45%, 50%, 55%,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%,96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de seqüênciaàqueles polinucleotídeos particulares como determinado porprogramas de alinhamento de seqüência e parâmetrosdescritos em outra parte nessa. Uma variante biologicamenteativa de um polinucleotídeos da invenção pode diferirdaquela seqüência em 1-15 resíduos de ácido nucleico, as 1-10, 6-10, e tão poucos quantos 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2,ou mesmo 1 resíduo de ácido nucleico.
Portanto, os genes e polinucleotídeos da invençãoincluem as seqüências de ocorrência natural bem como formasmutantes. Tais variantes continuarão a possuir a atividadereguladora de transcrição desejada. As deleções, inserções,e substituições das seqüências englobadas nessa não devemproduzir mudanças radicais nas características daseqüência. Entretanto, quando é difícil prever o efeitoexato da substituição, deleção, ou inserção comantecedência, uma pessoa habilitada na técnica perceberáque o efeito será avaliado por ensaios rotineiros derastreamento. Ou seja, a atividade pode ser avaliada com ouso de ensaios em outra parte nessa.
Polinucleotídeos variantes também englobam seqüênciasderivadas de um procedimento mutagênico e recombinogênicocomo embaralhamento de DNA. Com tal procedimento, uma oumais diferentes seqüência de domínio intensificador para opromotor podem ser manipuladas para criar um novo domíniointensificador. Desse modo, bibliotecas de polinucleotídeosrecombinantes são geradas a partir de uma população depolinucleotídeos de seqüência relacionados que compreendemregiões de seqüência que têm identidade de seqüênciasubstancial e podem ser recombinados de forma homóloga invitro ou in vivo. Estratégias para tal embaralhamento deDNA são conhecidas na técnica. Veja, por exemplo, Stemmer(1994) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91: 10747-10751; Stemmer(1994) Nature 370: 389-391; Crameri e cols. (1997) NatureBiotech. 15: 436-438; Moore e cols. (1997) J. Mol. Biol.272: 336-347; Zhang e cols. (1997) Proc. Natl. Acad. Sei.USA 94: 4504-4509; Crameri e cols. (1998) Nature 391: 288-291; e Patentes U.S. Nos. 5.605.793 e 5.837.458.
Os polinucleotídeos da invenção podem ser usados paraisolar seqüências correspondentes de outros organismos,particularmente outras plantas, mais particularmente outrasmonocotiledôneas. Dessa forma, podem ser usados métodostais como PCR, hibridização, e semelhantes para identificartais seqüências com base em sua homologia de seqüência comas seqüências aqui apresentadas. As seqüências isoladas combase em sua identidade de seqüência com o domíniointensificador inteiro aqui apresentado ou a fragmentos ouvariantes dessas são englobadas pela presente invenção.
Em uma abordagem de PCR, podem ser projetadosiniciadores de oligonucleotídeo para uso em reações de PCRpara amplificar seqüências de DNA correspondentes a partirde DNA genômico extraído de qualquer planta de interesse.Métodos para o projeto de iniciadores de PCR e clonagem porPCR são geralmente conhecidos na técnica e revelados emSambrook e cols. (198 9) Molecular Cloning: A LaboratoryManual (2a ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press,Plainview, Nova York) aqui referido a seguir comowSambrook". Veja também Innis e cols., eds. (1990) PCRProtocols: A Guide to Methods and Applications (AcademicPress, Nova York); Innis e Gelfand, eds. (1995) PCRStrategies (Academic Press, Nova York); e Innis e Gelfand,eds. (1999) PCR Methods Manual (Academic Press, Nova York).Métodos de PCR conhecidos incluem, sem limitação, métodosque usam iniciadores pareados, iniciadores abrigados,iniciadores únicos específicos, iniciadores degenerados,iniciadores gene-específicos, iniciadores vetor-específicos, iniciadores parcialmente não combinados eoutros.
Em técnicas de hibridização, toda ou parte de umpolinucleotídeo conhecido é usada como um marcador quehibridiza seletivamente para outras seqüências denucleotídeos correspondentes presentes em uma população defragmentos clonados de DNA genômico de um organismoescolhido. Os marcadores de hibridização podem serrotulados com um grupo detectável como por exemplo 32P, ouqualquer outro marcador detectável. Dessa forma, porexemplo, podem ser feitos marcadores para hibridizaçãorotulando -se oligonucleotideos sintéticos com base domíniointensificador da invenção. Métodos para a preparação demarcadores para hibridização e para a construção debibliotecas genômicas são geralmente conhecidos na técnicae revelados em Sambrook.
Por exemplo, a seqüência de domínio intensificadorinteira aqui revelada, ou uma ou mais porções dessa, podeser usada como um marcador capaz de hibridizarespecificamente para seqüência de domínio intensificadorcorrespondentes. Para se obter hibridização específica sobvárias condições, esses marcadores incluem seqüências quesão exclusivas dentre seqüências de domínio intensificadortêm comprimento preferivelmente de pelo menos cerca de 10nucleotídeos ou pelo menos cerca de 20 nucleotídeos. Taismarcadores podem ser usados para amplificar seqüênciasintensificadoras 35S correspondentes de um certo organismopor PCR. Essa técnica pode ser usada para isolar seqüênciascodificadoras adicionais de um organismo desejado ou comoum ensaio diagnóstico para determinar a presença deseqüências codificadoras em um organismo. Técnicas dehibridização incluem seleção de hibridização de bibliotecasde DNA plaqueadas (placas ou colônias; veja, por exemplo,Sambrook e cols. (1989) Molecular Cloning: A LaboratoryManual (2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press,Plainview, Nova York)).
A hibridização de tais seqüências pode ser realizadasob condições rigorosas. Os termos "condições rigorosas" ou"condições rigorosas de hibridização" significa condiçõessob as quais um marcador irá hibridizar para sua seqüênciaalvo em um grau passível de detecção maior do que outrasseqüências (por exemplo, pelo menos 2 vezes em relação aonível de base). Condições rigorosas são dependentes deseqüência e serão diferentes em circunstâncias diferentes.Controlando-se o rigor da hibridização e/ou as condições delavagem, podem ser identificadas seqüências alvo que são100% complementares ao marcador (marcação homóloga).Alternativamente, as condições de rigor podem ser ajustadaspara permitir alguma não combinação nas seqüências de formaque graus menores de similaridade sejam detectados(marcação heteróloga). De forma geral, um marcador temcomprimento menor do que cerca de 1.000 nucleotídeos,preferivelmente menor do que 500 nucleotídeos.
Tipicamente, condições rigorosas são aquelas nas quaisa concentração de sal é de pelo menos cerca de 1,5 M de íonNa, tipicamente cerca de 0,01 a 1,0 M concentração de íonNa (ou outros sais) em pH 7,0 a 8,3 e a temperatura é depelo menos cerca de 30°C para marcadores curtos (porexemplo, 10 a 50 nucleotídeos) e de pelo menos cerca de600C para marcadores longos (por exemplo, maiores do que 50nucleotídeos). Condições rigorosas também podem ser obtidascom a adição de agentes de desestabilização como porexemplo formamida. Condições de baixo rigor exemplaresincluem hibridização com uma solução tampão de formamida 3 0a 35%, 1 M NaCl, SDS 1% (sódio dodecil sulfato) a 37°C, euma lavagem em IX a 2X SSC (2OX SSC = 3,0 M NaCl/0,3 Mcitrato trissódico) a 50 a 55°C. Condições de rigormoderado exemplares incluem hibridização em formamida 4 0 a45%, 1,0 M NaCl, SDS 1% a 37°C, e uma lavagem em 0,5X a IXSSC a 55 a 60°C. Condições de alto rigor exemplares incluemhibridização em formamida 50%, 1 M NaCl, SDS 1% a 370C porpelo menos 4 horas mais preferivelmente até 12 horas oumais e uma lavagem em 0,1X SSC a 60 a 65°C por pelo menoscerca de 3 0 minutos. A duraçao da hibridização é geralmentemenor do que cerca de 24 horas, normalmente cerca de 4 acerca de 12 horas. A duração do tempo de lavagem será pelomenos de um tempo suficiente para atingir o equilíbrio.
A especificidade é tipicamente a função de lavagenspós-hibridização, os fatores críticos sendo a força iônicae temperatura da solução de lavagem final. Para híbridosDNA-DNA, o ponto de fusão térmica (Tm) pode ser aproximadoa partir da equação de Meinkoth e Wahl (1984) Anal.Biochem. 138:267-284: Tm = 81,5°C + 16,6 (log M) + 0,41(%GC) - 0,61 (% form) - 500/L; onde M é a molaridade decátions monovalentes, %GC é a percentagem de nucleotídeosguanosina e citosina no DNA, % form é a percentagem deformamida na solução de hibridização, e L é o comprimentodo híbrido em pares de base. A Tm é a temperatura (sobforça iônica e pH definidos) na qual 50% de uma seqüênciaalvo complementar hibridiza para um marcador que combinaperfeitamente. A Tm é reduzida em cerca de 1°C para cada 1%de não combinação; dessa forma, Tm, condições dehibridização, e/ou de lavagem podem ser ajustadas para sehibridizar seqüências da identidade desejada. Por exemplo,caso se procure seqüências com >90% identidade, a Tm podeser diminuída em 10°C. De forma geral, as condiçõesrigorosas são selecionadas para serem cerca de 5°C maisbaixas do que ponto térmico de fusão (Tm) para a seqüênciaespecífica e seu complemento em uma força iônica e pHdefinidos. No entanto, condições severamente rigorosaspodem utilizar uma hibridização e/ou lavagem a 1, 2, 3, ou4°C mais baixa do que o ponto térmico de fusão (Tm) ;condições moderadamente rigorosas podem utilizar umahibridização e/ou lavagem em 6, 7, 8, 9, ou 10°C mais baixado que a Tm; condições de baixo rigor podem utilizar umahibridização e/ou lavagem em 11, 12, 13, 14, 15, ou 20°Cmais baixa do que o Tm. Usando a equação, as composições dehibridização de lavagem, e a Tm desejada, aqueles comhabilidade na técnica entenderão que são inerentementedescritas variações no rigor de hibridização e/ou desoluções de lavagem. Se o grau desejado de não combinaçãoresulta em um Ttn de menos do que 450C (solução aquosa) ou32 °C (solução de formamida), prefere-se aumentar aconcentração de SSC de forma que possa ser usada umatemperatura mais elevada. Um guia detalhado para ahibridização de ácidos nucléicos é encontrado em Tijssen(1993) Laboratory Technigues in Biochemistry and MolecularBiology Hybridization with Nucleic Acid Probes, Parte I,Capítulo 2 (Elsevier, Nova York); e Ausubel e cols., eds.(1995) Current Protocols in Molecular Biologyl Capítulo 2(Greene Publishing e Wiley- Interscience, Nova York). VejaSambrook.
Dessa forma, seqüências isoladas que têm atividade depromotor com preferência para embrião e que hibridizam sobcondições rigorosas às seqüências de domíniointensificador aqui reveladas, ou para fragmentos dessas,são englobadas pela presente invenção. Geralmente,condições de alto rigor são selecionadas para serem cercade 5°C menores que o Tm para a seqüência específica em umaforça iônica definido e pH. No entanto, condições de altorigor englobam temperaturas na faixa de cerca de 1°C acerca de 20°C menores que a Tm, dependendo do grau desejadode rigor como aqui qualificado.
Os seguintes termos são usados para descrever osrelacionamentos de seqüência entre dois ou maispolinucleotídeos ou polipeptídeos: (a) "seqüência dereferência", (b) "janela de comparação", (c) "identidade deseqüência" e (d) "percentagem de identidade de seqüência".(a) Como aqui usado, "seqüência de referência" é umaseqüência definida usada como uma base para comparação deseqüência. A seqüência de referência pode ser umsubconjunto ou a totalidade de uma seqüência especificada;por exemplo, como um segmento de uma seqüência decomprimento total de cDNA ou de gene, ou a seqüênciacompleta de cDNA ou de gene.
(b) Como aqui usado, "janela de comparação" fazreferência a um segmento contíguo e especificado de umaseqüência de polinucleotídeos, em que a seqüência depolinucleotídeos na janela de comparação pode compreenderadições ou deleções (ou seja, intervalos), comparada àseqüência de referência (que não compreende adições oudeleções) para alinhamento ótimo dos dois polinucleotídeos.Geralmente, a janela de comparação tem pelo menos de 20nucleotídeos contíguos de comprimento, e opcionalmente podeter 30, 40, 50, 100, ou mais. Aqueles habilitados natécnica compreendem que, para evitar uma alta similaridadea uma seqüência de referência devido à inclusão deintervalos na seqüência de polinucleotídeos, uma penalidadede intervalo é tipicamente introduzida e é subtraída donúmero de combinações.
Métodos de alinhamento de seqüências para comparaçãosão bem conhecidos na técnica. Assim, a determinação depercentual de identidade de seqüência entre quaisquer duasseqüências pode ser realizada com o uso de um algoritmomatemático. Exemplos não limitantes de tais algoritmosmatemáticos são o algoritmo de Myers e Miller (1988) CABIOS4:11-17; o algoritmo de alinhamento local de Smith e cols.(1981) Adv. Appl. Math. 2:482; o algoritmo de alinhamentoglobal de Needleman e Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453; o método de procura-por-alinhamento local de Pearson eLipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. 85:2444-2448; oalgoritmo de Karlin e Altschul (1990) Proc. Natl. Acad.Sei. USA 87:2264, modificado como em Karlin e Altschul(1993) Proe. Natl. Acad. Sei. USA 90:5873-5877.
Implementações de computador desses algoritmosmatemáticos podem ser utilizadas para comparação deseqüências para determinar identidade de seqüência. Taisimplementações incluem, mas não são limitadas a: CLUSTAL noprograma PC/Gene (disponível por Intelligenetics, MountainView, Califórnia); o programa ALIGN (Versão 2.0) e GAP,BESTFIT, BLAST, FASTA, e TFASTA no pacote de programas decomputador de Wisconsin Genetics, Versão 10 (disponível porAccelrys Inc., 9685 Scranton Road, San Diego, Califórnia,USA). Alinhamentos que usam esses programas podem serrealizados usando os parâmetros padrão. 0 programa CLUSTALé bem descrito por Higgins e cols. (1988) Gene 73:237-244(1988); Higgins e cols. (1989) CABIOS 5:151-153; Corpet ecols. (1988) Nucleic Acids Res. 16:10881-90; Huang e cols.(1992) CABIOS 8:155-65; e Pearson e cols. (1994) Meth. Mol.Biol. 24:307-331. 0 programa ALIGN é baseado no algoritmode Myers e Miller (1988) supra. Uma tabela de peso deresíduo PAM120, uma penalidade de comprimento de intervalode 12, e uma penalidade de intervalo de 4 podem ser usadascom o programa ALIGN quando da comparação de seqüências deaminoácidos. 0 programa BLAST de Altschul e cols (1990) J.Mol. Biol. 215:403 é baseado no algoritmo de Karlin eAltschul (1990) supra. Pesquisas de nucleotídeo de BLASTpodem ser realizadas com o programa BLASTN, pontuação =100, comprimento de palavra = 12, para obter seqüências denucleotídeos homólogas à seqüência de nucleotídeos quecodifica uma proteína da invenção. Pesquisas de proteína deBLAST podem ser realizadas com o programa BLASTX, pontuação= 50, comprimento de palavra = 3, para obter seqüências deaminoácidos homólogas a uma proteína ou polipeptídeo dainvenção. Para obter alinhamentos com intervalos paraobjetivos de comparação, Gapped BLAST (em BLAST 2.0) podeser utilizado como descrito em Altschul e cols. (1997)Nucleic Acids Res. 25:3389. Alternativamente, PSI-BLAST (emBLAST 2.0) pode ser usado para realizar uma pesquisarepetida que detecta relações distantes entre moléculas.Veja Altschul e cols. (1997) supra. Quando da utilização deBLAST, Gapped BLAST, PSI-BLAST, os parâmetros padrão dosrespectivos programas (por exemplo, BLASTN para seqüênciasde nucleotídeos, BLASTX para proteínas) podem ser usados. 0programa BLAST é publicamente disponível no endereço da webde NCBI O alinhamento também pode ser realizado manualmentepor inspeção.
A menos que determinado de outro modo, valores deidentidade/similaridade de seqüência aqui fornecidos sereferem ao valor obtido usando GAP versão 10 usando osseguintes parâmetros: % de identidade e % de similaridadepara a seqüência de nucleotídeos usando GAP Weight de 50 eLength Weight de 3 e a matriz de pontuação nwsgapdna.cmp; %de identidade e % de similaridade para a seqüência deaminoácidos usando GAP Weight de 8 e Length Weight de 2 e amatriz de pontuação BLOSUM62; ou qualquer programaequivalente. Por "programa equivalente", entende-sequalquer programa de comparação de seqüência que, paraquaisquer duas seqüências em questão, gera um alinhamentotendo combinações de nucleotídeo ou de resíduos deaminoácidos idênticas e um percentual de identidade deseqüência idêntico quando comparado ao alinhamentocorrespondente gerado por GAP Versão 10.
GAP usa o algoritmo de Needleman e Wunsch (1970) J.Mol. Biol. 48: 443-453, para descobrir o alinhamento deduas seqüências completas que maximizam o número decombinações e minimizam o número de intervalos. GAPconsidera todos os possíveis alinhamentos e posições deintervalo e cria o alinhamento com o maior número de basescombinadas e os menores intervalos. Ele permite ofornecimento de uma penalidade de criação de intervalo euma penalidade de extensão de intervalo em unidades debases combinadas. GAP deve se beneficiar do número decombinações de penalidades de criação de intervalo paracada intervalo que ele insere. Se uma penalidade deextensão de intervalo maior que zero é escolhida, GAP deve,em adição, se beneficiar para cada intervalo inserido docomprimento do intervalo vezes a penalidade de extensão deintervalo. Valores padrão de penalidade de criação deintervalo e valores de penalidade de extensão de intervalona Versão 10 do pacote de programa de computador WisconsinGenetics para seqüências de proteína são 8 e 2,respectivamente. Para seqüências de nucleotídeos, apenalidade de criação de intervalo padrão é 50, enquanto apenalidade de extensão de intervalo padrão é 3. Aspenalidades de extensão de intervalo e de criação deintervalo podem ser expressas como um número inteiroselecionado do grupo de números inteiros que consiste em 0a 200. Assim, por exemplo, as penalidades de extensão deintervalo e de criação de intervalo podem ser 0, 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55,60, 65 ou maiores.
GAP apresenta um membro da família de melhoresalinhamentos. Pode haver vários membros dessa família, masnenhum outro membro tem a melhor qualidade. GAP exibequatro figuras de mérito para alinhamentos: Qualidade,Proporção, Identidade e Similaridade. A qualidade é amétrica maximizada a fim de alinhar as seqüências. Aproporção é a qualidade dividida pelo número de bases nosegmento mais curto. Percentual de Identidade é opercentual dos símbolos que realmente combinam. Percentualde Similaridade é o percentual dos símbolos que sãosimilares. Símbolos que são transversais dos intervalos sãoignorados. A similaridade é pontuada quando o valor dematriz de pontuação para um par de símbolos é maior que ouigual a 0,50, o limiar de similaridade. A matriz depontuação usada na Versão 10 do pacote de programa decomputador GCG Wisconsin Genetics é BLOSUM62 (veja Henikoffe Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89:10915).
(c) Como aqui usado, "identidade de seqüência" ou"identidade" no contexto de duas seqüências depolinucleotídeos ou polipeptídeos faz referência aosresíduos nas duas seqüências que são os mesmos quandoalinhados para correspondência máxima e por uma janela decomparação especificada. Quando a percentagem de identidadede seqüência é usada em referência a proteínas, éreconhecido que posições de resíduos que não são idênticasfreqüentemente diferem por substituições de aminoácidosconservadoras, em que resíduos de aminoácidos sãosubstituídos por ouros resíduos de aminoácidos comsimilares propriedades químicas (por exemplo, carga ouhidrofobia) e, portanto não mudam as propriedadesfuncionais da molécula. Quando seqüências diferem emsubstituições conservadoras, o percentual de identidade deseqüência pode ser ajustado acima para corrigir para anatureza conservadora da substituição. Seqüências quediferem em tais substituições conservadoras são ditas comotendo "similaridade de seqüência" ou "similaridade" . Meiospara fazer esse ajuste são bem conhecidos por aqueleshabilitados na técnica. Tipicamente, isso envolve apontuação de uma substituição conservadora como umaparcial, em vez de uma descombinação completa, dessa formaaumentando o percentual de identidade de seqüência. Assim,por exemplo, quando um aminoácido idêntico recebe umapontuação de 1 e uma substituição não conservadora recebeuma pontuação de zero, uma substituição conservadora recebeuma pontuação entre zero e 1. A pontuação de substituiçõesconservadoras é calculada, por exemplo, como implementadono programa PC/GENE (Intelligenetics, Mountain View,Califórnia).
(d) Como aqui usado, "percentagem de identidade deseqüência" significa o valor determinado por comparação deduas seqüências alinhadas de forma ótima por uma janela decomparação, em que a porção da seqüência depolinucleotídeos na janela de comparação pode compreenderadições ou deleções (ou seja, intervalos) quandocomparada à seqüência de referência (que não compreendeadições ou deleções) para alinhamento ótimo das duasseqüências. A percentagem é calculada por determinação donúmero de posições nas quais o ácido nucléico, base ouresíduo de aminoácido idêntico ocorre em ambas asseqüências para produzir o número de posições combinadas,dividindo o número de posições combinadas pelo número totalde posições na janela de comparação, e multiplicando oresultado por 100 para produzir a percentagem de identidadede seqüência.
II. Construções de DNA
0 uso de o termo "polinucleotídeo" não deve serlimitar a presente invenção a polinucleotídeos quecompreendem DNA. Aqueles de habilidade comum na técnicareconhecerão que polinucleotídeos podem compreenderribonucleotídeos e combinações de ribonucleotídeos edesoxirribonucleotídeos. Tanto desoxirribonucleotídeosquanto ribonucleotídeos incluem moléculas de ocorrêncianatural e análogos sintéticos. Os polinucleotídeos dainvenção também englobam todas as formas de seqüências queincluem, sem limitação, formas de filamento único, formasde filamento duplo, hairpins, estruturas em ramo e alça, eoutros.
0 polinucleotídeo revelado na presente invenção, bemcomo variantes e fragmentos desse, são úteis na manipulaçãogenética de qualquer planta. 0 domínio intensificador ou ofragmento ativo ou variante desse são úteis nesse aspectoquando operacionalmente ligado a um promotor heterólogo.Tais regiões de controle regulador de transcrição são aquireferidas como regiões de controle regulador de transcrição"quiméricas".
As regiões de controle de transcrição quiméricas podemser operacionalmente ligadas a um polinucleotídeo cujaexpressão deve ser controlada para tingir uma respostafenotípica desejada. Desse modo, o polinucleotídeo para odomínio intensificador ou a região de controle reguladorade transcrição quimérica da invenção podem ser fornecidosem cassetes de expressão junto com um polinucleotídeo deinteresse para expressão no organismo de interesse.
A região reguladora de transcrição quimérica podecompreender múltiplas cópias do domínio intensificador ouvariantes e fragmentos ativos desses. Em modalidadesespecíficas, a região de controle reguladora de transcriçãoquimérica compreende pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou maiscópias do domínio intensificador. Em modalidadesadicionais, o domínio intensificador empregado nãocompreende a seqüência apresentada em Id. de Seq. N°:5.
A distância entre o promotor e o domíniointensificador pode variar, contanto que a regiãoreguladora de transcrição quimérica continue a direcionar atranscrição do polinucleotídeo de interesseoperacionalmente ligado na maneira desejada. Por exemplo,um domínio intensificador pode ser posicionado pelo menoscerca de 10.000 a cerca de 15.000, cerca de 10.000 a cercade a 9.000, cerca de 9.000 a cerca de 8.000, cerca de 8.000a cerca de 7.000, cerca de 7.000 a cerca de 6.000, cerca de6.000 a cerca de 5.000, cerca de 5.000 a cerca de 4.000,cerca de 4.000 a cerca de 3.000, cerca de 3.000 a cerca de2.000, cerca de 2.000 a cerca de 1.000, cerca de 1.000 acerca de 500, cerca de 500 a cerca de 250, cerca de 250 aimediatamente adjacente ao promotor. É também reconhecidoque uma ou mais cópias do intensif icador podem sercolocadas acima (5') do promotor, ou, alternativamente, umaou mais cópias do intensificador podem ser localizadas 3'ao promotor. Em modalidades específicas, quando localizado3' do promotor, o intensificador é abaixo da regiãoterminadora. Ainda em modalidades adicionais, um ou maisdos intensificadores podem ser arrumados na orientação 5'ou 3' (como mostrado no Id. de Seq. N0:1) ou na orientação3' para 5'.
Se múltiplos intensificadores são empregados, osintensificadores podem ser posicionados na construção comrelação ao promotor de modo que o efeito desejado sobre aexpressão seja atingido. Por exemplo, os intensificadorespodem ser imediatamente adjacentes um ao outro ou pelomenos entre 1 a 100, 100 a 300, 300 a 500, 500 a 1.000nucleotídeos afastados.
Tais construções podem ser fornecidas em cassetes deexpressão para expressão no organismo de interesse. Ocassete pode incluir seqüências reguladoras 3' e seqüênciasreguladoras 5' operacionalmente ligadas a umpolinucleotídeo de interesse. "Ligada operacionalmente"significa uma ligação funcional entre dois ou maiselementos. Por exemplo, uma ligação operável entre umpolinucleotídeo de interesse e uma seqüência reguladora (ouseja, um promotor) é uma ligação funcional que permite aexpressão do polinucleotídeo de interesse. Uma ligaçãooperável entre um intensificador e uma região de iniciaçãode transcrição é uma ligação que a região de controle detranscrição transcreva um polinucleotídeo operacionalmenteligado de interesse. Elementos operacionalmente ligadospodem ser contíguos ou não contíguos. Quando usados para sereferir à união de duas regiões de codificação de proteína,entende-se por operacionalmente ligado que as regiõescodificadoras estão na mesma estrutura de leitura. 0cassete pode conter adicionalmente pelo menos um geneadicional a ser co-transformado no organismo.
Alternativamente, o gene(s) adicional pode ser fornecido emmúltiplos cassetes de expressão. Tal cassete de expressão éfornecido com vários sítios de restrição e/ou sítios derecombinação para que a inserção da seqüência esteja sob aregulação de transcrição das regiões reguladoras. 0 cassetede expressão pode conter adicionalmente genes de marcadorselecionável.
O cassete de expressão irá incluir na direção 5' para3' de transcrição, a região reguladora de transcriçãoquimérica que compreende o domínio intensificador ou umavariante e fragmento ativo desses, um promotor, ou variantee fragmento ativo desses, uma região de iniciação detradução, um polinucleotídeo de interesse, uma região determinação de tradução e, opcionalmente uma região determinação de transcrição funcional no organismohospedeiro. As regiões reguladoras (ou seja, domíniosintensificadores e regiões de terminação de tradução etc)e/ou polinucleotídeo de interesse podem ser nativos ouanálogos à célula hospedeira ou um ao outro.
Alternativamente, as regiões reguladoras e/ou opolinucleotídeo de interesse podem ser heterólogos à célulahospedeira ou um ao outro.
Como aqui usado, "heterólogo" em referência a umaseqüência é uma seqüência que se origina de uma espécieestranha, ou, se da mesma espécie, é substancialmentemodificada de sua forma nativa em composição e/ou lócusgenômico por intervenção humana deliberada. Por exemplo, umpromotor operacionalmente ligado a um polinucleotídeoheterólogo é de uma espécie diferente daquela da qual opolinucleotídeo é derivado, ou, se da mesma espécie (ouseja, análogo), um ou ambos são substancialmentemodificados de sua forma original e/ou lócus genômico, ou opromotor não é o promotor nativo para o polinucleotídeooperacionalmente ligado. Um "polinucleotídeo heterólogo"uma vez que se relaciona a um domínio intensificador devesignificar uma seqüência que não é de ocorrência naturalcom a seqüência de domínio intensificador da invenção.Embora esse promotor seja heterólogo à seqüência de domíniointensificador, ele pode ser homólogo, ou nativo, ouheterólogo, ou estranho a um hospedeiro de planta.
A região de terminação pode ser nativa com o domíniointensificador ou região de iniciação de transcrição, podeser nativa com o polinucleotídeo operacionalmente ligado deinteresse, pode ser nativa com um hospedeiro de planta, oupode ser derivada de uma outra fonte (ou seja, estranha ouheteróloga) ao domínio intensificador, a região deiniciação de transcrição, o polinucleotídeo de interesse,um hospedeiro de planta ou qualquer combinação desses.Regiões de terminação convenientes estão disponíveis apartir do Ti-plasmídeo de A. tumefaciens, tais como asregiões de terminação de octopina sintase e nopalinasintase. Veja também Guerineau e cols. (1991) Mol. Gen.Genet. 262: 141-144; Proudfoot (1991) Cell 64: 671-674;Sanfacon e cols. (1991) Genes Dev. 5: 141-149; Mogen ecols. (1990) Plant Cell 2: 1261-1272; Munroe e cols. (1990)Gene 91: 151-158; Bailas e cols. (1989) Nucleic Acids Res.17: 7891-7903; e Joshi e cols. (1987) Nucleic Aeid Res. 15:9627-9639.
O cassete de expressão que compreende as seqüências dapresente invenção também pode conter pelo menos umaseqüência de nucleotídeos adicional para um gene a sercotransformado no organismo. Alternativamente, aseqüência(s) adicional pode ser fornecida em um outrocassete de expressão.
Modificações adicionais de seqüência são conhecidaspor aumentarem a expressão de gene em um hospedeirocelular. Essas incluem a eliminação de seqüências quecodificam falsos sinais de poliadenilação, sinais de sítiode junção éxon-íntron, repetições semelhantes a transposon,e outras seqüências bem caracterizadas que podem serdanosas à expressão de gene. 0 conteúdo de GC da seqüênciapode ser ajustado a níveis médios para um certo hospedeirocelular, como calculado com relação a genes conhecidosexpressos na célula hospedeira. Quando possível, aseqüência é modificada para evitar estruturas de mRNAsecundárias em hairpin previstas.
Os cassetes de expressão podem conter adicionalmenteseqüências líderes 5'. Tais seqüências líderes podem atuarpara aumentar a tradução. Líderes de tradução sãoconhecidos na técnica e incluem: líderes de picornavírus,por exemplo, líder de EMCV (região não codificadora 5' deencefalomiocardite) (Elroy-Stein e cols. (1989) Proc. Natl.Acad. Sei. USA 86: 6126-6130); líderes de potivírus, porexemplo, líder de TEV (Vírus Etch do Tabaco) (Gallie ecols. (1995) Gene 165(2): 233-238), líder de MDMV (Vírus emMosaico do Nanismo do Milho) (Virology 154:9-20), e aproteína de ligação de cadeia pesada da imunoglobulinahumana (BiP) (Macejak e cols. (1991) Nature 353: 90-94);líder não traduzido do mRNA da proteína de revestimento dovírus do mosaico da alfafa (AMV RNA 4) (Jobling e cols.(1987) Nature 325: 622-625); vírus do mosaico do tabaco(TMV) (Gallie e cols. (1989) em Molecular Biology of RNA1ed. Cech (Liss, Nova York) , pp. 237-256) ; e líder de vírusda matiz clorótica do milho (MCMV) (Lommel e cols. (1991)Virology 81: 382-385). Veja também, Della-Cioppa e cols.(1987) Plant Physiol. 84: 965-968.
Na preparação do cassete de expressão, os váriosfragmentos de DNA podem ser manipulados de forma afornecerem as seqüências de DNA na orientação adequada e,quando necessário, na estrutura de leitura aberta adequada.Para esse objetivo, podem ser empregados adaptadores ouligantes para unir os fragmentos de DNA ou podem ser usadasoutras manipulações para o fornecimento de sítios derestrição convenientes, remoção de DNA supérfluo, remoçãode sítios de restrição, ou outros. Para essa finalidade,pode-se utilizar mutagênese in vitro, reparo de iniciador,restrição, enrijecimento, re-substituições, por exemplo,transições e transversões.
0 cassete de expressão também pode compreender um genede marcador selecionável para a seleção de célulastransformadas. Genes de marcador selecionável são utilizadospara a seleção de células transformadas ou tecidos. Genesmarcadores incluem genes que codificam resistência aantibióticos, tais como aqueles que codificam neomicinafosfotransferase II (NEO) e higromicina fosfotransferase(HPT), assim como genes que conferem resistência a compostosherbicidas, tais como glifosinato amônio, bromoxinil,imidazolinonas, e 2,4-dicloro-fenoxiacetato (2,4-D).Marcadores selecionáveis adicionais incluem marcadoresfenotípicos como β-galactosidase e proteínas fluorescentescomo proteína fluorescente verde (GFP) (Su e cols. (2004)Biotechnol Bioeng 85: 610-9 e Fetter e cols. (2004) PlantCell 16: 215-28), proteína fluorescente ciano (CIP) (Boltee cols. (2004) J. Cell Science 117: 943-54 e Kato e cols.(2002) Plant Physiol 129: 913-42), e proteína fluorescenteamarela (PhiYFP de Evrogen, veja, Bolte e cols. (2004) J.Cell Science 117: 943-54). Para marcadores selecionáveisadicionais, veja, de modo geral, Yarranton (1992) Curr.Opin. Biotech. 3: 506-511; Christopherson e cols. (1992)Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 6314-6318; Yao e cols.(1992) Cell 71: 63-72; Reznikoff (1992) Mol. Microbiol. 6:2419-2422; Barkley e cols. (1980) in The Operon, pp. 177-220; Hu e cols. (1987) Cell 48: 555- 566; Brown e cols.(1987) Cell 49: 603-612; Figge e cols. (1988) Cell 52: 713-722; Deuschle e cols. (198 9) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86:5400-5404; Fuerst e cols. (1989) Proc. Natl. Acad. Sei. USA86: 2549-2553; Deuschle e cols. (1990) Science 248: 480-483; Gossen (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg;Reines e cols. (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 1917-1921; Labow e cols. (1990) Mol. Cell. Biol. 10: 3343-3356;Zambretti e cols. (1992) Proc. Nall. Acad. Sei. USA 89:3952-3956; Bairn e cols., (1991) Proc. Natl. Acad. Sei. USA88: 5072-5076; Wyborski e cols. (1991) Nucleic Acids Res.19: 4647-4653; Hillenand-Wissman (1989) Topics Mol. Struc.Biol. 10: 143-162; Degenkolb e cols. (1991) Antimicrob.Agents Chemother. 35: 1591-1595; Kleinschnidt e cols.(1988) Biochemistry 27: 1094-1104; Bonin (1993) Ph.D.Thesis, University of Heidelberg; Gossen e cols. (1992)Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 55475551; Oliva e cols.(1992) Antimicrob. Agents Chemother. 36: 913-919; Hlavka ecols. (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78(Springer-Verlag, Berlin); Gill e cols. (1988) Nature 334:721-724. Tais revelações são aqui incorporadas porreferência. A lista acima de genes de marcador selecionávelnão deve ser limitante. Qualquer gene de marcadorselecionável pode ser usado na presente invenção.
Como discutido acima, a região reguladora detranscrição quimérica que compreende pelo menos uma cópiado domínio intensificador ou variante e fragmento ativodessa operacionalmente ligada a um promotor heterólogo éfornecida. Qualquer promotor de interesse pode seroperacionalmente ligado ao domínio intensificador dainvenção. Tais promotores podem ser selecionados com baseno resultado desejado. Ou seja, os ácidos nucléicos podemser combinados com promotores constitutivos, compreferência de tecido, ou outros para expressão na célulahospedeira de interesse. Tais promotores constitutivosincluem, por exemplo, o promotor central do promotor Rsyn7e outros promotores constitutivos revelados na WO 99/43838e Patente U.S. No. 6.072.050; o promotor central CaMV 35S(Odell e cols.(1985) Nature 313: 810-812); actina de arroz(McElroy e cols. (1990) Plant Cell 2: 163-171); ubiquitina(Christensen e cols. (1989) Plant Mol. Biol. 12: 619-632 eChristensen e cols. (1992) Plant Mol. Biol. 18: 675-689);ρEMU (Last e cols. (1991) Theor. Appl. Genet. 81: 581-588);MAS (Velten e cols. (1984) EMBO J. 3: 2723-2730); promotorALS (Patente U.S.No. 5.659.026), e semelhantes. Outrospromotores constitutivos incluem, por exemplo, aquelesrevelados nas Patentes U.S. Nos. 5.608.149; 5.608.144;5.604.121; 5.569.597; 5.466.785; 5.399,680; 5.268.463;5.608.142; e 6.177.611, aqui incorporadas por referência.
Tais promotores podem ser selecionados com base noresultado final desejado e podem compreender promotoresconstitutivos, indutíveis, de preferência para tecido, ououtros promotores para expressão em uma célula hospedeirade interesse (ou seja, uma planta). Promotoresconstitutivos incluem, por exemplo, o promotor central dopromotor Rsyn7 e outros promotores constitutivos reveladosna WO 99/43838 e na Patente U.S. N0 6.072.050; o promotorcentral CaMV 35S promotor (Odell e cols. (1985) Nature313:810-812); actina de arroz (McElroy e cols. (1990) PlantCell 2:163-171); ubiqüitina (Christensen e cols. (1989)Plant Mol. Biol. 12:619-632 e Christensen e cols. (1992)Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last e cols. (1991)Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS (Velten e cols. (1984)EMBO J. 3:2723-2730); promotor ALS (Patente U.S. N05.659.026), e semelhantes. Outros promotores constitutivosincluem, por exemplo, aqueles discutidos nas Patentes U.S.Nos 5.608.149; 5.608.144; 5.604.121; 5.569.597; 5.466. 785;5.399.680; 5.268.463; 5.608.142; e 6.177.611.
Em uma modalidade, o promotor compreende um promotorindutível, particularmente a partir de um promotorindutível por patógeno. Tais promotores incluem aqueles deproteínas relacionadas à patogênese (proteínas PR), que sãoinduzidos após infecção por um patógeno; por exemplo,proteínas PR, proteínas SAR, beta-1, 3-glucanase, quitinaseetc. Veja, por exemplo, Redolfi e cols. (1983) Neth. J.Plant Pathol. 89: 245-254; Uknes e cols. (1992) Plant Cell4: 645-656; e Van Loon (1985) Plant Mol. Virol. 4: 111-116.Veja também WO 99/43819 aqui incorporada por referência.
Promotores que são expressos localmente ou próximo aosítio de infecção por patógeno podem ser usados. Veja, porexemplo, Marineau e cols. (1987) Plant Mol. Biol. 9: 335-342; Matton e cols. (198 9) Molecular Plant-MicrobeInteractions 2: 325-331; Somsisch e cols. (1986) Proc.Natl. Acad. Sei. USA 83: 2427-2430; Somsisch e cols. (1988)Mol. Gen. Genet. 2: 93-98; e Yang (1996) Proc. Natl. Acad.Sei. USA 93: 14972-14977. Veja também, Chen e cols. (1996)Plant J. 10: 955-966; Zhang e cols. (1994) Proc. Natl.Acad. Sei. USA 91: 2507-2511; Warner e cols. (1993) PlantJ. 3: 191-201; Siebertz e cols. (1989) Plant Cell 1: 961-968; Patente U.S. No. 5.750.386 (indutível-nematódeo); e asreferências nelas citadas. É de particular interesse opromotor indutível para o gene de milho PRms gene, cujaexpressão é induzida pelo patógeno Fusarium moniliforme(veja, por exemplo, Cordero e cols. (1992) Physiol. Mol.Plant Path. 41: 189-200).
Adicionalmente, uma vez que patógenos ganham entradaem plantas através de ferimento ou dano de inseto, umpromotor indutível por ferimento pode ser usado nasconstruções da invenção. Tais promotores indutíveis porferimento incluem gene inibidor de proteinase de batata(pin II) (Ryan (1990) Ann. Rev. Phytopath. 28: 425-449;Duan e cols. (1996) Nature Biotechnology 14: 494-498); wunle wun2, Patente U.S. No. 5.428.148; winl e win2 (Stanford ecols. (1989) Mol. Gen. Genet. 215: 200-208); sistemain(McGurl e cols. (1992) Science 225: 1570-1573); WIPl(Rohmeier e cols. (1993) Plant Mol. Biol. 22: 783-792;Eckelkamp e cols. (1993) FEBS Letters 323: 73-76); gene MPI(Corderok e cols. (1994) Plant J. 6 (2) : 141-150); esemelhantes, aqui incorporados por referência
Promotores regulados por substância química podem serusados para modular a expressão de um gene em uma plantaatravés da aplicação de um regulador químico exógeno.
Dependendo do objetivo, o promotor pode ser um promotorindutível por substância química, onde a aplicação dasubstância química induz expressão de gene, ou um promotorreprimível por substância química, onde a aplicação dasubstância química reprime a expressão de gene. Promotoresindutíveis por substância química são conhecidos na técnicae incluem, mas não estão limitados, o promotor de milhoIn2-2, que é ativado por safeners de herbicida debenzenossulfonamida, o promotor de milho GST, que é ativadopor compostos hidrofóbicos eletrofílicos que são usadoscomo herbicidas pré-emergentes, e o promotor de tabaco PR-la, que é ativado por ácido salicílico. Outros promotoresregulados por substância química de interesse incluempromotores que respondem a esteróide (veja, por exemplo,promotor indutível por glicocorticóide em Schena ecols. (1991) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 10421-10425 eMcNellis e cols. (1998) Plant J. 14 (2) : 247-257) epromotores indutíveis por tetraciclina e reprimíveis portetraciclina (veja, por exemplo, Gatz e cols. (1991) Mol.Gen. Genet. 227: 229237, e Patentes U.S. Nos. 5.814.618 e5.789.156), aqui incorporadas por referência.
Promotores com preferência de tecido podem serutilizados para ter como alvo expressão de defensina
aumentada dentro de um tecido de plante em particular.Promotores com preferência de tecido incluemYamamoto e cols. (1997) Plant J. 12(2): 255-265; Kawamata ecols. (1997) Plant Cell Physiol. 38(7): 792-803; Hansen ecols. (1997) Mol. Gen Genet. 254(3): 337-343;Russell e cols. (1997) Transgenic Res. 6(2): 157-168;Rinehart e cols. (1996) Plant Physiol. 112(3): 1331-1341;Van Camp e cols. (1996) Plant Physiol. 112(2): 525-535;Canevascini e cols. (1996) Plant. Physiol. 112(2): 513-524;Yamamoto e cols. (1994) Plant Cell Physiol. 35(5): 773-778;Lam (1994) Resultados Probl. Cell Differ. 20: 181-196;Orozco e cols. (1993) Plant Mol. Biol. 23 (6) :1129-1138 ;Matsuoka e cols. (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90 (20):9586-9590; e Guevara-Garcia e cols. (1993) Plant J. 4(3):495-505. Tais promotores podem ser modificados, senecessário, para expressão fraca.
Promotores com preferência de folha são conhecidos natécnica. Veja, por exemplo, Yamamoto e cols. (1997) PlantJ. 12(2): 255-265; Kwon e cols. (1994) Plant Physiol.105:357-67; Yamamoto e cols. (1994) Plant Cell Physiol.35(5): 773-778; Gotor e cols. (1993) Plant J. 3: 509-18;Orozcoe cols. (1993) Plant Mol. Biol. 23 (6) :1129-1138; eMatsuoka e cols. (1993) Proc. Natl. Acad Sei. USA 90 (20) :9586-9590.
Promotores com preferência por raiz são conhecidos epodem ser selecionados dos vários disponíveis na literaturaou isolados novamente de várias espécies compatíveis. Veja,por exemplo, Hire e cols. (1992) Plant Mol. Biol. 20(2):207-218 (gene de glutamina sintetase específico para raizde soja); Keller e Baumgartner (1991) Plant Cell 3(10):1051-1061 (elemento de controle específico para raiz nogene GRP 1.8 de feijão francês); Sanger e cols. (1990)Plant Mol. Biol. 14 (3): 433-443 (promotor específico pararaiz do gene da manopina sintase (MAS) de Agrobacteriumtumefaciens); e Miao e cols. (1991) Plant Cell 3(l):ll-22(clone de cDNA de comprimento total que codifica glutaminasintetase citosólica (GS), que é expresso em raízes enódulos de raiz de soja). Veja também Bogusz e cols. (1990)Plant Cell 2 (7) : 633-641, onde dois promotores comespecificidade de raiz isolados de genes de hemoglobina donão legume fixador de nitrogênio Parasponia andersonii e donão legume fixador de nitrogênio relacionado Trematomentosa são descritos. Os promotores desses genes estavamligados a um gene repórter de β-glicuronidase eintroduzidos tanto em Nicotiana tabacum não legume quantoem Lotus corniculatus legume, e em ambos os casos aatividade de promotor com especificidade de raiz foipreservada. Leach e Aoyagi (1991) descrevem sua análise dospromotores dos genes altamente expressos indutores de raizrolC e rolD de Agrobacterium rhizogenes (veja Plant Science(Limerick) 79 (1) :69-76). Eles concluíram que determinantesde DNA intensificadores e com preferência de tecido estãodissociados daqueles promotores. Teeri e cols. (198 9)usaram fusão de gene a IacZ para mostrar que o gene T-DNAde Agrobacterium que codifica octopina sintase éespecialmente ativo na epiderme da ponta da raiz e que ogene gene TR2' tem especificidade de raiz na planta intactae é estimulado por feridas no tecido de folha, umacombinação de características especialmente desejável parauso com um gene inseticida ou larvicida (veja EMBO J.8 (2) : 343-350) . O gene TRl' fundido a nptll (neomicinafosfotransferase II) mostrou características similares.Promotores com preferência de raiz adicionais incluem opromotor do gene VfENOD-GRP3 (Kuster e cols. (1995) PlantMol. Biol. 29 (4) -.153-112) ; e o promotor rolB (Capana ecols. (1994) Plant Mol. Biol. 25 (4) :681-691. Veja tambémPatentes U.S. Nos 5.837.876; 5.750.386; 5.633.363;5.459.252; 5.401.836; 5.110.732; e 5.023.179.
Promotores com "preferência de semente" incluem tantopromotores com especificidade de semente (aquelespromotores ativos durante o desenvolvimento da semente taiscomo promotores de proteínas de estocagem de semente), bemcomo promotores de germinação de semente (aquelespromotores ativos durante germinação da semente). VejaThompson e cols. (1989) BioEssays 10: 108, aqui incorporadopor referência. Tais promotores com preferência de sementeincluem, mas não estão limitados a, Ciml (mensagem induzidapor citocinina) ; CZ19B1 (zeína de milho de 19 kDa) ; milps(mio-inositol-l-fosfato sintase); e celA (celulose sintase)(veja WO 00/11177, aqui incorporada por referência). Gama-zeína é um promotor com especificidade de endospermapreferido. Globulina 1 (Glb-I)é um promotor comespecificidade de embrião preferido. Para dicotilédones,promotores com especificidade de semente incluem, mas nãoestão limitados a, β-faseolina de feijão, napina, β-conglicinina, lectina de soja, cruciferina, e semelhantes.Para monocotilédones, promotores com especificidade desemente incluem, mas não estão limitados a, zeína de milhode 15 kDa, zeína de 22 kDa, zeína de 27 kDa, g-zeína, waxy,shrunken 1, shrunken 2, globulina 1 etc. Veja também WO00/12733, onde promotores com preferência de semente degenes endl e end 2 são revelados; aqui incorporada porreferência.
Seqüências de polinucleotídeos expressas pela regiãode controle reguladora de transcrição quimérica da invençãopodem ser usadas para a variação do fenótipo de uma planta.Várias mudanças no fenótipo são de interesse incluindo amodificação da expressão de um gene em um embrião deplanta, alteração de um patógeno de planta ou mecanismo dedefesa de inseto, aumento da tolerância das plantas aherbicidas em uma planta, alteração do desenvolvimento doembrião para responder a estresse ambiental e outros. Essesresultados podem ser atingidos pela expressão de umaseqüência de nucleotideos heteróloga de interesse quecompreende um produto de gene adequado. Em modalidadesespecíficas, a seqüência de nucleotideos heteróloga deinteresse é uma seqüência de planta endógena cujo nível deexpressão é aumentado em uma planta ou parte de planta.
Alternativamente, os resultados podem ser atingidos aofornecer uma redução da expressão de um ou maispolinucleotídeo de interesse.
A região de controle reguladora de transcriçãoquimérica da invenção também pode compreender porçõesadicionais das outras regiões reguladoras de transcrição.Portanto, o elemento de controle regulador de transcriçãoaqui revelado, que compreende o domínio intensificador e umpromotor heterólogo pode compreender elementos reguladoresacima como, aqueles responsáveis por expressão em tecido etemporal da seqüência codificadora. No contexto dessarevelação, o termo "elemento regulador" também se refere auma seqüência de DNA, comumente, mas nem sempre, acima (5')da seqüência codificadora de um gene estrutural, que incluiseqüências que modulam a expressão da região codificadora.
Deve ser entendido que as seqüências de nucleotídeos,localizadas em íntrons, ou 3' da seqüência de regiãocodificadora põem também contribuir para a regulação daexpressão de uma região codificadora de interesse. Exemplosde íntrons adequados incluem, mas não são limitados, aoíntron IVS6 de milho, ou o íntron de actina de milho. Umelemento regulador também pode incluir aqueles elementoslocalizados abaixo (3') ao sítio de iniciação detranscrição, ou em regiões transcritas, ou ambos. Nocontexto da presente invenção um elemento regulador pós-transcrição pode incluir elementos que são ativos apósiniciação da transcrição, por exemplo, intensificadores detradução e transcrição, repressores de tradução etranscrição e determinantes de estabilidade de mRNA.
É também reconhecido que o intensificador da invençãopode ser posicionado na construção de DNA entre eoperacionalmente ligado a um primeiro e um segundopromotor. Em tais modalidades, o intensificador permite amodulação na expressão do primeiro e segundo promotores deuma direção divergente. Exemplos não limitantes de taisconstruções de DNA compreendem na orientação 5' para 3' ou3' para 5': um primeiro polinucleotídeo de interesseoperacionalmente ligado a um primeiro promotor,operacionalmente ligado a pelo menos uma cópia de umintensificador da invenção, operacionalmente ligado a umsegundo promotor, operacionalmente ligado a um segundopolinucleotídeo de interesse. Em modalidades específicas, aseqüência intensificadora é heteróloga à primeira e segundaseqüência intensificadora.
III Plantas e partes dessas
Como usado aqui, o termo "planta" inclui células deplantas, protoplastos de plantas, culturas de tecidos decélula de plantas das quais as plantas podem serregeneradas, calo de planta, protuberâncias de planta, ecélulas de plantas que são intactas em plantas ou partes deplantas como embriões, pólen, óvulos, sementes, folhas,flores, galhos, frutos, sementes, espigas, cascas, caule,raízes, pontas de raiz, anteras, e outros. Grão devesignificar a semente madura produzida por cultivadorescomerciais para objetivos outros que não o crescimento oureprodução das espécies. Prole, variantes e mutantes dasplantas regeneradas são também incluídos no escopo dainvenção, desde que essas partes compreendam ospolinucleotídeos introduzidos.
A presente invenção pode ser usada para transformaçãode quaisquer espécies de planta, incluindo, mas nãolimitadas a, monocotilédones e dicotilédones. Exemplos deplantas de interesse incluem, mas não estão limitados a,milho (Zea mays, também aqui referida como "miho"),Brassica spp. (por exemplo, B. napus, B. rapa, B. juncea),particularmente aquelas espécies de Brassica úteis comofontes de óleo de semente (também referida como "canola"),flax (Linum spp.), alfafa (Medicago sativa), arroz (Oryzasativa), centeio (Secale cereale), sorgo (Sorghum bicolor,Sorghum vulgare), painço (por exemplo, milhete (Pennisetumglaucum), proso painço (Panicum miliaceum), painço foxtail(Setaria italica), painço finger (Eleusine coracana)),girassol (Helianthus annuus) , açafroa (Carthamustinctorius), trigo (Triticum aestivum), soja (Glicina max) ,tabaco (Nicotiana tabacum), batata (Solanum tuberosum),amendoim (Arachis hypogaea) , algodão (Gossypium barbadense,Gossypium hirsutum), batata doce (Ipomoea batatus) ,mandioca (Manihot esculenta), café (Coffea spp.), coco(Cocos nucifera), abacaxi (Ananas comosus), árvorescítricas (Citrus occidentale), cacau (Theobroma cacao), chá(Camellia sinensis), banana (Musa spp.), abacate (Perseaamericana), figo (Ficus casica), goiaba (Psidium guajava),manga (Mangifera indica), oliva (Olea europaea), papaia(Carica papaya), castanha de caju (Anacardium occidentale),macadâmia (Macadamia integrifolia) , amêndoa (Prunusamygdalus), beterraba (Beta vulgaris) , cana de açúcar(Saeeharum spp.), aveias, cevada, vegetais, frutas,ornamentais e coníferas.
Vegetais incluem tomates (Lyeopersieon eseulentum),alface (por exemplo, Laetuea sativa), feijão verde(Phaseolus vulgaris), favas (Phaseolus limensis), ervilha(Lathyrus spp., Pisum spp.), e membros do gênero Cueumis,tais como pepino (C. sativus) , melão (C. eantalupensis), emelão almíscar (C. melo). Plantas ornamentais incluemazálea (Rhododendron spp.), hortênsia (Hydrangeamaerophylla) , hibisco (Hibiseus rosasanensis) , rosas (Rosaspp.), tulipas (Tulipa spp.), narcisos (Nareissus spp.),petúnias (Petunia hybrida) , cravos (Dianthus earyophyllus),copo-de-leite (Euphorbia puleherrima) , e crisântemo.
Coníferas que podem ser empregadas na prática dapresente invenção incluem, por exemplo, pinheiros tais comopinheiro loblolly (Pinus taeda), pinheiro pinus ellioti(Pinus elliotii), pinheiro ponderosa (Pinus ponderosa),pinheiro lodgepole (Pinus conforta), e pinheiro de Monterey(Pinus radiata); abeto de Douglas (Pseudotsuga menziesii);cicuta do Ocidente (Tsuga canadensis); abeto Sitka (Piceaglauca); sequóia canadense (Sequoia sempervirens) ; abetosverdadeiros, tais como abeto de prata (Abies amabilis) eabeto de bálsamo (Abies balsamea) ; e cedros, tais comocedro vermelho do ocidente (Thuja plicata) e cedro amarelodo Alaska (Chamaeciparis nootkatensis). Em modalidadesespecíficas, milho e plantas de soja são ótimas, e ainda emoutras modalidades plantas de milho são ótimas.
Outras plantas de interesse incluem plantas de grãosque fornecem sementes de interesse, plantas de sementesoleaginosas, e plantas leguminosas. Sementes de interesseincluem sementes de grãos, tais como milho, trigo, cevada,arroz, sorgo, centeio etc. Plantas de sementes oleaginosasincluem algodão, soja, açafroa, girassol, Brassica, milho,alfafa, palma, coco etc. Plantas leguminosas incluemfeijões e ervilhas. Feijões incluem guar, alfarroba, feno-grego, soja, feijões de jardim, feijão-fradinho, munguba,feijão-de-lima, feijão-fava, lentilhas, grão-de-bico etc.
Uma "planta em questão ou célula de planta" é uma emque a alteração genética, como transformação, foi efetuadacom relação a um gene de interesse, ou é uma planta oucélula de planta que e descendente de uma planta ou célulaassim alterada e que compreende a alteração. Uma planta de"controle" ou "planta de controle" ou "célula de planta decontrole" fornece um ponto de referência para medição demudanças no fenótipo de uma planta em questão ou célula deplanta.
A planta de controle ou célula de planta podecompreender, por exemplo: (a) uma planta ou célula de tiposelvagem, ou seja, do mesmo genótipo que o material deiniciação para a alteração genética que resultou na plantaou célula em questão; (b) uma planta ou célula de planta domesmo genótipo que o material de iniciação, mas que foitransformada com uma construção nula (ou seja, com umaconstrução que não tem efeito conhecido sobre o traço deinteresse, como uma construção que compreende um genemarcador) ; (c) uma planta ou célula de planta que é umsegregante não transformado entre a prole de uma planta emquestão ou célula de planta; (d) uma planta ou célula deplanta que é geneticamente idêntica à planta em questão oucélula de planta, mas que não é exposta a condições ouestímulos que induziriam a expressão do gene de interesse;ou (e) a planta em questão ou célula de planta em si, sobcondições em que o gene de interesse não é expresso.
Qualquer organismo que tem uma região de controle detranscrição quimérica que compreende um domíniointensificador da invenção ou uma variante e fragmentoativo desses é fornecido. Em modalidades específicas,plantas, partes e planta, células, e germeplasma que têmuma região de controle de transcrição quimérica quecompreende um domínio intensificador da invenção ou umavariante e fragmento ativo desses são fornecidas. Emmodalidades específicas, a região de controle detranscrição quimérica é operacionalmente ligada a apolinucleotídeo de interesse. Tais polinucleotídeosincluem, por exemplo, qualquer polinucleotídeo que conferetolerância a um herbicida. Células de planta, partes deplanta e germeplasma que compreendem tais seqüências sãotambém fornecidos.
IV Polinucleotídeos de interesse
A região de controle reguladora de transcrição quiméricaque tem o domínio intensificador ou uma variante efragmento ativo desses pode ser usada para expressarqualquer polinucleotídeo de interesse. Categorias gerais depolinucleotídeos de interesse incluem, por exemplo, aquelesgenes envolvidos na informação, como dedos de zinco,aqueles envolvidos em comunicação, como quinases, e aquelesenvolvidos em housekeeping, como proteínas heat shock.
Categorias mais específicas de transgenes, por exemplo,incluem genes que codificam importantes traços paracaracterísticas agronômicas, de resistência a insetos,resistência a doença, resistência a herbicida, eresistência a estresse ambiental Otolerancia alterada aofrio, sal, seca etc.).
Genes de resistência a insetos podem codificarresistência a pragas que têm grande impacto no rendimentocomo rootworm, cutworm, European Corn Borer e outros. Taisgenes incluem, por exemplo, genes de proteína tóxica deBacillus thuringiensis (Patentes U.S. Nos. 5.366.892;5.747.450; 5.736.514; 5.723.756; 5.593.881; e Geiser ecols. (1986) Gene 48: 109); e outros.
Genes que codificam traços de resistência a doençaincluem genes de desintoxicação, como contra fumonosin(Patente U.S. No. 5.792.931); avirulência (avr) e genes deresistência a doença (R) (Jones e cols. (1994) Science 266:789; Martin e cols. (1993) Science 262: 1432; e Mindrinos ecols. (1994) Cell 78: 1089); e outros.
Produtos exógenos incluem enzimas e produtos deplantas bem como aqueles de outras fontes incluindoprocariotas e outros eucariotas. Tais produtos incluemenzimas, co-fatores, hormônios e outros.
Exemplos de outros genes aplicáveis e de seu fenótipoassociado incluem o gene que codifica proteína de coberturaviral codificada e/ou RNA, ou outros genes virais ou deplanta que conferem resistência viral; genes que conferemresistência a fungos; genes que promovem melhoria norendimento; e genes que fornecem resistência a estresse,como frio, desidratação resultante da seca, calor esalinidade, metal tóxico ou elementos de traço ou outros.
Como observado, o polinucleotídeo operacionalmenteligado à região de controle de transcrição que compreende odomínio intensificador que aqui pode ser uma seqüênciaanti-senso para um gene direcionado. Assim, as seqüênciaspromotoras aqui reveladas podem ser operacionalmenteligadas a seqüências de DNA anti-senso para reduzir ouinibir a expressão de uma proteína nativa em um embrião deplanta planta.
"RNAi" refere-se a uma série de técnicas relacionadaspara reduzir a expressão de genes (veja, por exemploPatente U.S. No. 6.506.559). Acredita-se que técnicas maisantigas referidas por outros nomes se baseiem no mesmomecanismo, mas recebem diferentes nomes na literatura.Essas incluem "inibição anti-senso" a produção detranscrições de RNA anti-senso capazes de suprimir aexpressão da proteína alvo e "Co-supressão" ou "supressãosenso" que se refere à produção de transcrições de RNAsenso capazes de suprimir a expressão de genes endógenos ouestranhos idênticos ou substancialmente similares (PatenteU.S. No. 5.231.020, aqui incorporada por referência). Taistécnicas se baseiam no uso de construções que resultam noacúmulo de RNA de duplo filamento com um filamentocomplementar ao gene alvo a ser silenciado. 0intensificador 3 5S no contexto da região de controle detranscrição das modalidades pode ser usado para dirigir aexpressão de construções que resultarão em interferência deRNA incluindo microRNAs e siRNAs.
Quando adequado, os polinucleotídeos podem serotimizados para aumentar a expressão na plantatransformada. Ou seja, o polinucleotídeo pode sersintetizado com o uso de códons com preferência por plantapara melhor expressão. Veja, por exemplo, Campbell e Gowri(1990) Plant Physiol. 92:1-11 para uma discussão de uso decódon com preferência por hospedeiro. Métodos sãodisponíveis na técnica para síntese de genes preferidos deplanta. Veja, por exemplo, Patentes U.S. Nos. 5.380.831, e5.436.391, e Murray e cols. (1989) Nucleic Acids Res.17:477-498, aqui incorporado por referência.
Em uma modalidade, o polinucleotídeo que conferetolerância ao herbicida de interesse compreende umpolipeptídeo inibidor-tolerante a ALS que conferetolerância a uma dose de herbicidas de sulfoniluréia,imidazolinona, triazolpirimidinas,pirimidinioxi(tio)benzoatos, e/ou sulfonilamino-carbonil-triazonlina. Herbicidas de sulfoniluréia e imidazolinonainibem o crescimento de plantas superiores por bloqueio daacetolactato sintase (ALS), também conhecida como ácidoacetohidroxi sintase (AHAS). Por exemplo, plantas contendomutações particulares em ALS (por exemplo, as mutações S4e/ou HRA) são tolerantes a herbicidas de sulfoniluréia. Aprodução de plantas tolerantes a sulfoniluréia e plantastolerantes a imidazolinona é descrita mais completamentenas Patentes U.S. Nos. 5.605.011; 5.013.659; 5.141.870;5.767.361; 5.731.180; 5.304.732; 4.761.373; 5.331.107;5.928.937; e 5.378.824; e publicação internacional WO96/33270, que são aqui incorporadas em suas totalidades porreferência para todos objetivos. Em modalidadesespecíficas, o polipeptídeo inibidor-tolerante a ALScompreende uma acetolactato sintase tolerante asulfonamida, uma ácido acetohidroxi sintase tolerante asulfonamida, uma acetolactato sintase tolerante aimidazolinona ou uma ácido acetohidroxi sintase tolerante aimidazolinona.
Polinucleotídeos que codificam para resistência aherbicidas que agem inibindo a ação de glutamina sintase,como fosfinotricina ou basta (por exemplo, o gene bar) ,glifosato (por exemplo, o gene EPSPS e o gene GAT; veja,por exemplo, Publicação U.S. No. 20040082770 e WO03/092360) ou outros genes conhecidos na técnica tambémpodem ser usados. 0 gene bar codifica resistência aoherbicida basta, o gene nptll codifica resistência aoantibiótico kanamicina e geneticina, e os mutantes de geneALS codificam resistência herbicida clorsulfurona.
Resistência a glifosato é transmitida por genes de 5-enolpiruvil-3-fosfiquiimato sintase (EPSP) e aroA mutantes.Veja, por exemplo, Patente U.S. No. 4.94 0.835 para Shah ecols., que revela uma seqüência de nucleotídeos de umaforma de EPSPS que pode conferir resistência a glifosato.Patente U.S. No. 5.627.061 para Barry e cols. tambémdescreve genes que codificam enzimas de EPSPS. Veja tambémPatentes U.S. Nos. 6.248.876 BI; 6.040.497; 5.804.425;5.633.435; 5.145.783; 4.971.908; 5.312.910; 5.188.642;4.940.835; 5.866.775; 6.225.114 BI; 6.130.366; 5.310.667;4.535.060; 4.769.061; 5.633.448; 5.510.471; Re. 36.449; RE37.287 E; e 5.491.288; e publicações internacionais WO97/04103; WO 97/04114; WO 00/66746; WO 01/66704; WO00/66747 e WO 00/66748, que são aqui incorporadas em suastotalidades por referência para todos os objetivos.Resistência a glifosato também pode ser transmitida aplantas que expressam um gene que codifica uma enzima deglifosato óxido-redutase, como descrito mais completamentenas Patentes U.S. Nos. 5.776.760 e 5.463.175, que são aquiincorporadas em suas totalidades por referência para todosos objetivos. Adicionalmente, resistência a glifosatotambém pode ser transmitida a plantas pela superexpressãode genes que codificam glifosato N-acetiltransferase.
Veja, por exemplo, Pedido de Patente U.S. Nos. de série10/004.357 e 10/427.692, cada um desses aqui incorporadopor referência.
Polipeptideos que conferem tolerância a herbicidas queinibem a enzima glutamina sintase, como fosfinotricina ouglifosinato (por exemplo, o gene bar) também podem serusados. Glutamina sintetase (GS) parece ser uma enzimaessencial necessária para o desenvolvimento e vida damaioria das células de plantas, e inibidores de GS sãotóxicos para células de plantas. Herbicidas de glifosinatoforam desenvolvidos baseados no efeito tóxico devido àinibição de GS em plantas. Esses herbicidas são nãoseletivos; ou seja, eles inibem o crescimento de todas asdiferentes espécies de plantas presentes. 0 desenvolvimentode plantas que contêm uma fosfinotricina acetiltransferaseexógena é descrito nas Patentes U.S. Nos. 5.969.213;5.489.520; 5.550.318; 5.874.265; 5.919.675; 5.561.236;5.648.477; 5.646.024; 6.177.616; e 5.879.903, que são aquiincorporadas em suas totalidades por referência para todosos objetivos. Fosfinotricina acetiltransferase mutada quetem essa atividade é também revelada.
Ainda em outras modalidades, polipeptídeos queconferem tolerância a herbicidas que inibem protox(protoporfirinogênio oxidase) podem ser usados. Protox énecessário para a produção de clorofila, que é necessáriapara a sobrevivência de todas as plantas. A enzima protoxserve como um alvo para vários compostos herbicidas. Essesherbicidas também inibem o crescimento de todas asdiferentes espécies de plantas presentes. 0 desenvolvimentode plantas que contêm atividade alterada de protox que sãoresistentes a esses herbicidas é descrito nas Patentes U.S.Nos. 6.288.306; 6.282.837; e 5.767.373; e publicaçãointernacional WO 01/12825, que são aqui incorporadas emsuas totalidades por referência para todos os objetivos.
Ainda em outras modalidades, os polipeptídeos queenvolvem outros modos de resistência a herbicida sãoempregados. Por exemplo, hidroxifenilpiruvatodioxigenasessão enzimas que catalisam a reação em queparahidroxifenilpiruvato (HPP) é transformado emhomogentisato. Moléculas que inibem essa enzima e que seligam à enzima para inibir a transformação do HPP emhomogentisato são úteis como herbicidas. Plantas maisresistentes a certos herbicidas são descritas nas PatentesU.S. Nos. 6.245.968; 6.268.549; e 6.069.115; e publicaçãointernacional WO 99/23886, que são aqui incorporadas emsuas totalidades por referência para todos os objetivos.Hidroxifenilpiruvatodioxigenases mutados que têm essaatividade são também revelados.
Herbicidas adicionais, incluem, sem limitação, uminibidor de acetil Co-A carboxilase como quizalofop-P-etil,uma auxina sintética como quinclorac, um herbicida inibidorde protoporfirinogênio oxidase (PPO) (como sulfentrazona) ,um herbicida inibidor da síntese de pigmento como uminibidor de hidroxifenilpiruvato dioxigenase (por exemplo,mesotriona ou sulcotriona) , uma fosfinotricinaacetiltransferase, ou um inibidor de fitoeno desaturasecomo diflufenican ou inibidor da síntese de pigmento.
V. Métodos de Introdução
A construção de DNA que compreende o domíniointensificador da presente invenção operacionalmente ligadoa um promotor heterólogo pode ser usada para transformarqualquer organismo de interesse. Em modalidadesespecíficas, o organismo compreende uma planta ou partedessa. Dessa maneira, plantas geneticamente modificadas,célula de plantas, tecido de planta, semente, embriões, eoutros podem ser obtidos.
Os métodos da invenção envolvem a introdução de umpolipeptídeo ou polinucleotídeo em uma planta. "Introdução"deve significar a apresentação a uma planta dopolinucleotídeo em uma tal maneira que a seqüência ganhaacesso ao interior de uma célula da planta. Os métodos dainvenção não dependem de um método particular paraintrodução de uma seqüência em uma planta, apenas que opolinucleotídeo ou polipeptideo ganhe acesso ao interior depelo menos uma célula da planta. Métodos para introdução depolipeptideos em plantas são conhecidos na técnicaincluindo, sem limitação, métodos de transformação estável,métodos de transformação transitória, métodos mediados porvírus e reprodução.
"Transformação estável" deve significar que aconstrução de nucleotídeo introduzida em um planta seintegra no genoma da planta e é capaz de ser herdada pelaprole dessa. "Transformação transitória" deve significarque um polinucleotídeo é introduzido na planta e não seintegra no genoma da planta ou um polipeptideo éintroduzido em uma planta.
Protocolos de transformação, bem como protocolos paraa introdução de polipeptideos ou seqüências depolinucleotídeos em plantas podem variar dependendo do tipode planta ou célula de planta (ou seja, monocotiledônea oudicotiledônea), visada para transformação. Métodosadequados de introdução de polipeptideos e polinucleotídeosem células de planta incluem microinjeção (Crossway ecols. (1986) Biotechnigues 4: 320-334), eletroporação (Riggse cols. (1986) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 83: 5602-5606,transformação mediada por Agrobacterium (Patente U.S. N05.563.055; Patente U.S. N0 5.981.840), transferência diretade gene (Paszkowski e cols. (1984) EMBO J. 3: 2717-2722)),e aceleração balística de partícula (veja, por exemplo,Patentes U.S. N° 4.945.050; Patente U.S. No. 5.879.918;Patente U.S. No. 5.886.244; e 5.932.782; Tomes e cols.(1995) em Plant Cell, Tissuef and Organ Culture:Fundamental Methods, ed. Gamborg e Phillips (Springer-Verlag, Berlim); e McCabe e cols. (1988) Biotechnology 6:923-926) ; e transformação Lecl (WO 00/28058) . Veja tambémWeissinger e cols. (1988) Ann. Rev. Genet. 22: 421-477;Sanford e cols. (1987) Particulate Science and Technology5: 27-37 (cebola); Christou e cols. (1988) Plant Physiol87: 671-674 (soja); McCabe e cols. (1988) Bio/Technology 6:923-926 (soja); Finer e McMullen (1991) In Vitro Cell Dev.Biol. 27P: 175-182 (soja); Singh e cols. (1998) Theor.Appl. Genet. 96: 319-324 (soja); Datta e cols. (1990)Biotechnology 8: 736-740 (arroz); Klein e cols. (1988)Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85: 4305-4309 (milho); Klein ecols. (1988) Biotechnology 6: 559-563 (milho); PatentesU.S. Nos 5.240.855; 5.322.783 e 5.324.646; Klein e cols.(1988) Plant Physiol. 91: 440-444 (milho); Fromm e cols.(1990) Biotechnology 8: 833-839 (milho); protocolospublicados eletronicamente por "IP.com" sob osidentificadores de publicação permanentes IPCOM000033402D,IPCOM000033402D, e IPCOM000033402D e disponíveis noendereço da internet "IP.com" (algodão); Hooykaas-VanSlogteren e cols. (1984) Nature (Londres) 311: 763-764;Patente U.S. N0 5.736.369 (cereais); Bytebier e cols.(1987) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84: 5345-5349(Liliaceae) ; De Wet e cols. (1985) em The ExperimentalManipulation of Ovule Tissues, ed. Chapman e cols.(Longman, Nova York), pp. 197-209 (pólen); Kaeppler e cols.(1990) Plant Cell Reports 9: 415-418 e Kaeppler e cols.(1992) Theor. Appl. Genet. 84: 560-566 (transformaçãomediada por bigode de animal); D'Halluin e cols. (1992)Plant Cell 4: 1495-1505 (eletroporação) ; Li e cols. (1993)Plant Cell Reports 12: 250-255 e Christou e Ford (1995)Annals of Botany 75: 407-413 (arroz); Osjoda e cols. (1996)Nature Biotechnology 14: 745-750 (milho por meio deAgrobacterium tumefaciens); todos são aqui incorporados porreferência.
Em modalidades específicas, a construção de DNA dainvenção pode ser fornecida a uma planta que usa váriosmétodos de transformação transitória. Tais métodos detransformação transitória incluem, a construção de DNA quecompreende o domínio intensificador que pode sertransitoriamente transformado na planta usando técnicasconhecidas na prática. Tais técnicas incluem sistema devetor viral e a precipitação do polinucleotídeo em um modoque impeça subseqüente liberação do DNA. Portanto, atranscrição do DNA ligado a partícula pode ocorrer, mas afreqüência com a qual ele é liberado para se tornarintegrado no o genoma é amplamente reduzida. Tais métodosincluem o uso de partículas revestidas com polietilimina(PEI; Sigma #P314 3).
Em outras modalidades, o polinucleotídeo da invençãopode ser introduzido em plantas por contato de plantas comum vírus ou ácidos nucleicos virais. Geralmente, taismétodos envolvem a incorporação de uma construção denucleotídeo da invenção em um DNA viral ou molécula de RNA.Também, é reconhecido que promotores da invenção tambémenglobam promotores utilizados para transcrição por RNApolimerases virais. Métodos para introdução depolinucleotídeos em plantas e expressão de uma seqüênciaoperacionalmente ligada, que envolve DNA viral ou moléculasde RNA, são conhecidos na técnica. Veja, por exemplo,Patentes U.S. Nos. 5.889.191, 5.889.190, 5.866.785,5.589.367, 5.316.931 e Porta e cols. (1996) MolecularBiotechnology 5: 209-221; aqui incorporado por referência.
Métodos são conhecidos na técnica para a inserçãodirecionada de um polinucleotídeo em uma localizaçãoespecífica em um genoma de planta. Em uma modalidade, ainserção do polinucleotídeo em uma localização genômicadesejada é realizada com o uso de um sistema derecombinação específico para sítio. Veja, por exemplo,W099/25821, W099/25854, W099/25840, W099/25855, eW099/25853, todos são aqui incorporados por referência. Demodo breve, o polinucleotídeo pode estar contido em umcassete de transferência flanqueado por dois sítios derecombinação não recombinogênicos. 0 cassete detransferência é introduzidos em uma planta que temincorporada de forma estável em seu genoma um sítio alvoque é flanqueado por dois sítios de recombinação nãorecombinogênicos que correspondem aos sítios do cassete detransferência. Uma recombinase adequada é fornecida e ocassete de transferência é integrado no sítio alvo. 0polinucleotídeo de interesse é assim integrado em umaposição cromossômica específica em um genoma de planta.
As células que foram transformadas podem crescer emplantas de acordo com meios convencionais. Veja, porexemplo, McCormick e cols. (1986) Plant Cell Reports 5: 81-84. Essas plantas podem então crescer, e serem polinizadascom a mesma cepa transformada ou com cepas diferentes, e ohíbrido resultante tem expressão constitutiva dacaracterística fenotípica desejada identificada. Duas oumais gerações podem crescer para assegurar que a expressãoda característica fenotípica desejada seja mantida de formaestável e herdada e, então, terem as sementes colhidas paraassegurar que a expressão da característica fenotípicadesejada foi obtida. Dessa forma, a presente invençãofornece semente transformada (também referida como "sementetransgênica") que tem um polinucleotídeo da invenção, porexemplo, um cassete de expressão da invenção, incorporadode forma estável em seu genoma.
Em certas modalidades, os polinucleotídeos da presenteinvenção podem ser empilhados com qualquer combinação deseqüências de polinucleotídeos de interesse para criarplantas com um traço desejado. Um traço, como aqui usado,refere-se ao fenótipo derivado de uma seqüência ou gruposde seqüências em particular. Por exemplo, ospolinucleotídeos da presente invenção podem ser sobrepostocom quaisquer outros polinucleotídeos que codificampolipeptídeos tendo atividade pesticida e/ou inseticidae/ou atividade herbicida,, como outras proteínas tóxicas deBacillus thuringiensis (descrito nas Patentes U.S. Nos.5.366.892; 5.747.450; 5.737.514; 5.723.756; 5.593.881;Geiser e cols (1986) Gene 48: 109, lectinas (Van Damme ecols. (1994) Plant Mol. Biol. 24:825, pentina (descrita naPatente U.S. No. 5.981.722) e outros. As combinaçõesgeradas também podem incluir múltiplas cópias de qualquerum dos polinucleotídeos de interesse. Os polinucleotídeosda presente invenção também podem ser empilhado comquaisquer outros genes ou combinação de genes para produzirplantas com várias combinações de traços desejadosincluindo, sem limitação, traços desejáveis paraalimentação animal, como alto conteúdo de óleo (porexemplo, Patente U.S. No. 6.232.529); conteúdo equilibradode aminoácidos (por exemplo, hordotioninas (Patentes U.S.Nos. 5.990.389; 5.885.801; 5.885.802; e 5.703.409); cevadade alta lisina (Williamson e cols. (1987) Eur. J. Biochem.165: 99-106; e WO 98/20122) e altas proteínas de metionina(Pedersen e cols. (1986) J Biol. Chem. 261: 6279; Kiriharae cols. (1988) Gene 71: 359; e Musumura e cols. (1989)Plant Mol. Biol. 12:123)); digestibilidade aumentada (porexemplo, proteínas de estocagem modificadas (Pedido U.S.No. de série 10/053.410, depositado em 7 de novembro de2001); e t iorredoxinas (Pedido U.S. No. de série10/005,429, depositado em 3 de dezembro de 2001)); essasrevelações são aqui incorporadas por referência.
Os polinucleotídeos da presente invenção também podemser empilhados com traços desejáveis para herbicidaresistência a doença ou a herbicidas, (por exemplo, genesde desintoxicação de fumonisim (Patente U.S. No.5.792.931), genes de avirulência e resistentes a doença(Jones e cols. (1994) Science 266: 789; Martin e cols.(1993) Science 262: 1432; Mindrinos e cols. (1994) Cell 78:108 9), mutantes de acetolactato sintase (ALS) que levam aresistência a herbicidas como as mutações S4 e HRA;inibidores de glutamina sintase como fosfinotricina oubasta (por exemplo, gene bar); e resistência a glifosato(EPSPS gene)); e traços desejáveis para processamento ouprodutos de processo como alto conteúdo de óleo (porexemplo, Patente U.S. No. 6.232.529 ); óleos modificados(por exemplo, genes de ácido graxo desaturase (Patente U.S.No. 5.952.544; WO 94/11516)); amidos modificados (porexemplo, ADPG pirofosforilases (AGPase), amido sintases(SS), enzimas de ramificação de amido (SBE), e enzimas dedesramificação de amido (SDBE)); e polímeros oubioplásticos (por exemplo, Patente U.S. No. 5.602.321;beta-cetotiolase, polihidroxibutirato sintase, eacetoacetil-CoA redutase (Schubert e cols. (1988) JBacteriol. 170:5837-5847) facilitam a expressão depolihidroxialcanoatos (PHAs)); cujas revelações são aquiincorporadas por referência. Uma pessoa também podecombinar os polinucleotídeos da presente invenção compolinucleotídeos que fornecem traços agronômicos comoesterilidade masculina (por exemplo, veja a Patente U.S.No. 5.583.210),traços de alongamento do caule, tempo defloração, ou tecnologia de transformação como regulação dociclo celular ou alvo de gene (por exemplo, WO 99/61619, WO00/17364, e WO 99/25821); cujas revelações são aquiincorporadas por referência.
Essas combinações empilhadas podem ser criadas porquaisquer métodos, que incluem, sem limitação, reproduçãode plantas por qualquer metodologia convencional ouTopCross, ou transformação genética. Se as seqüências sãoempilhadas por transformação genética das plantas, asseqüências de polinucleotídeos de interesse podem sercombinadas em qualquer momento e em qualquer ordem. Porexemplo, uma planta transgênica que compreende um ou maistraços desejados pode ser usada como o alvo para introduzirtraços adicionais por subseqüente transformação. Os traçospodem ser introduzidos simultaneamente em um protocolo deco-transformação com os polinucleotídeos de interessefornecidos por qualquer combinação de cassetes detransformação. Por exemplo, se duas seqüências sãointroduzidas, as duas seqüências podem ser contidas emcassetes de transformação separados (trans) ou contidas nomesmo cassete de transformação (eis). A expressão dasseqüências pode ser dirigida pelo mesmo promotor ou pordiferentes promotores. Em certos casos, pode ser desejávelintroduzir um cassete de transformação que suprimirá aexpressão do polinucleotídeo de interesse. Isso pode sercombinado com qualquer combinação de outros cassetes desupressão ou cassetes de superexpressão para gerar acombinação desejada de traços na planta. É tambémreconhecido que seqüências de polinucleotídeos podem serempilhadas em uma localização genômica desejada com o usode um sistema de recombinação sítio-específico. Veja, porexemplo, W099/25821, W099/25854, W099/25840, W099/25855, eW099/25853, todos aqui incorporados por referência.VI Métodos de Uso
Um método para modular a concentração e/ou atividadede qualquer polinucleotídeo ou polipeptídeo aqui codificadoé fornecido. Em geral, a concentração e/ou atividade éaumentada ou diminuída em pelo menos 1%, 5%, 10%, 20%, 30%,40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ou 90% em relação a uma planta decontrole nativa, parte de planta, ou célula que não tem aseqüência da invenção introduzida. A modulação na presenteinvenção pode ocorrer durante e/ou subseqüente aocrescimento de uma planta ao estágio de desenvolvimentodesejado. O nível de expressão do polinucleotídeo oupolipeptídeo de interesse pode ser medido diretamente, porexemplo, por avaliação do nível do polipeptídeo oupolinucleotídeo no organismo, ou indiretamente, porexemplo, por medição da atividade do polipeptídeo oupolipeptideo no organismo.
Em modalidades específicas, a construção de DNA quecompreende o domínio intensificador é introduzida na célulade planta. Subseqüentemente, a célula de planta que tem aseqüência introduzida da invenção é selecionada com o usode métodos conhecidos por aqueles habilitados na técnicacomo, sem limitação, análise de Southern blot,seqüenciamento de DNA, análise de PCR, ou análisefenotípica. Em um método, a população de células éfornecida e a construção de DNA que compreende uma regiãoreguladora de transcrição quimérica da invençãooperacionalmente ligada ao polinucleotídeo que compreendeum marcador selecionável é introduzida em pelo menos umacélula da população. A população de células faz entãocontato com uma concentração eficaz de um agente de seleçãoadequado; e, a célula de planta que Expressa opolinucleotídeo é selecionada. As células de planta que têma construção de DNA são assim identificadas. Uma planta ouparte de planta alterada ou modificada pelas modalidadesanteriores cresce sob condições de formação de planta porum tempo suficiente para modular a concentração e/ouatividade do polinucleotídeo operacionalmente ligado àregião de controle de transcrição que compreende o domíniointensificador. As condições de formação de planta são bemconhecidas na técnica e são discutidas brevemente em outraparte nessa.
Em uma modalidade, o intensificador da invenção éempregados para modular a expressão de doispolinucleotídeos de interesse. Em tais métodos, aconstrução de DNA que tem o intensif icador da invençãoposicionado entre e operacionalmente ligada a um primeiro eum segundo promotor é introduzida em uma planta. Em taismétodos, o intensificador gera a modulação na expressão doprimeiro e segundo promotores a partir de uma direçãodivergente. Exemplos não limitantes de tais construções deDNA compreendem a orientação 5' para 3' ou 3' para 5' : umprimeiro polinucleotídeo de interesse operacionalmenteligado a um primeiro promotor, operacionalmente ligado apelo menos uma cópia de um intensificador da invenção,operacionalmente ligado a um segundo promotor,operacionalmente ligado a um segundo polinucleotídeo deinteresse. Em modalidades específicas, a seqüênciaintensificadora é heteróloga à primeira e segunda seqüênciaintensificadora.
Em algumas modalidades, a região reguladora detranscrição quimérica que compreende o domíniointensificador pode ser usada em construções de DNA que sãooperacionalmente ligadas a um marcador selecionável, comoum polinucleotídeo que pode conferir tolerância a umherbicida. Por exemplo, a construção de DNA que compreendeuma região reguladora de transcrição quimérica quecompreende um domínio intensificador da invenção éoperacionalmente ligada a um polinucleotídeo que podeconferir tolerância a um herbicida que pode funcionar comoum marcador selecionável, por exemplo, em uma planta,bactéria, actinomiceto, levedura, algas ou outros fungos.Por exemplo, um organismo que foi transformado com talconstrução de DNA pode ser selecionado com base em suacapacidade de crescer na presença de um herbicida que nãopermitiria que um organismo de controle crescesse. Comoaqui usado "uma concentração eficaz" de um agente seletivoé a concentração de um agente que permite que células queexpressam o polinucleotídeo de interesse sobrevivam, mas ascélulas que não expressam a seqüência de polinucleotídeosde interesse ao sobreviverão na presença do agente naquelaconcentração.
Como demonstrado no Exemplo 4 e Figura 6, tais métodosde seleção permitem que uma pessoa avalie a expressão de umpolinucleotídeo de interesse. Por exemplo, em modalidadesespecíficas tais métodos permitem que uma pessoa chegue aproblemas potenciais com a expressão de um polinucleotídeode interesse em estágios precoces no processo detransformação. Em tais modalidades, a construção quecompreende a região reguladora de transcrição quimérica éoperacionalmente ligada a um polinucleotídeo que codificaum marcador selecionável. A mesma construção tambémcompreende um polinucleotídeo de interesse que é tambémoperacionalmente ligado à região reguladora de transcriçãoquimérica ou a um promotor de interesse separado. Emboraqualquer polinucleotídeo de interesse possa ser empregado,em exemplos específicos, polinucleotídeos inseticidas sãoempregados.
Em outras modalidades, uma construção que compreendeuma região reguladora de transcrição quimérica quecompreende um domínio intensificador operacionalmenteligada a um polinucleotídeo de interesse pode exibir umaeficiência de transformação muito alta, como uma eficiênciade pelo menos 20%, 30%, 40%, 50%, ou 60% ou maior. Emmodalidades específicas, o polinucleotídeo de interesseconfere tolerância a um marcador selecionável, e em umamodalidade mais específica, a seqüência confere tolerânciaa um herbicida de interesse). Dessa forma, métodosmelhorados de transformação são fornecidos. Além disso,quando uma construção que compreende um domíniointensificador da invenção operacionalmente ligado a umpolinucleotídeo que pode conferir tolerância to um marcadorselecionável (como a seqüência que confere tolerância aherbicida), os transformantes que são obtidos podem exibiruma freqüência muito alta de tolerância ao marcador, demodo que, por exemplo, pelo menos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%,70%, 80%, 90%, ou 100% dos transf ormantes são tolerantesaos marcadores. Como aqui usado, "eficácia detransformação" é definida como a percentagem de eventos TOque apresenta o fenótipo desejado do polinucleotídeo deinteresse (ou seja, apresenta tolerância a um herbicida).
Além disso, quando uma construção que compreende umdomínio regulador de transcrição quimérico que compreendepelo menos uma cópia do domínio intensificador éoperacionalmente ligada a um polinucleotídeo de interesse,a freqüência de eventos de transformação em que apenas umaúnica cópia da construção é inserida no genoma pode ser tãoalta quanto pelo menos 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%,ou maior. Dessa maneira, a invenção também fornece métodosaperfeiçoados de transformação. É reconhecido que múltiplascópias do domínio intensificador podem ser usadas,incluindo 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou mais. Em tais métodos, ostransformantes podem ser selecionados com o uso do métodoadequado com base no polinucleotídeos introduzido noorganismo.A invenção ainda fornece um kit que compreende pelomenos uma construção de ácido nucleico que compreende aregião reguladora de transcrição quimérica um quecompreende pelo menos uma cópia do domínio intensificadorda invenção ou uma variante e fragmento ativo desses. Emalguns aspectos, uma construção da invenção compreenderáuma seqüência de T DNA.
Os exemplos a seguir são oferecidos por via deilustração e não por via de limitação
EXPERIMENTAL
Exemplo 1. Métodos de transformação que empregam umaseqüência GAT em milho
I. Preparação de uma placa máster de Agrobacterium1. Obter cepa construída de Agrobacterium tumefaciens comcomponentes de GAT (Id. de Seq. N°: 7 ou 8) e estocada emcongelador a -800C como um estoque a 50% de glicerol. Aregião de controle de transcrição usada foi a 3X35S ENH (-operacionalmente ligada ao promotor de intron 1 ZmUbiPRO-5UTR-ZmUbi (Id. de Seq. N°:9). Essa região de controlede transcrição (Id. de Seq. N°:9) é apresentada abaixoindicando a localização das várias regiões da regiãoreguladora: a) o intensificador 35S (3X) na direção reversatem sublinhado único; b) o promotor UBI tem um sublinhadoduplo, e c) o intron UBI está em itálico.
atcacatcaatccacttectttgaagaccrtgettggaacgtcttcttmccacaatffctcctc^aeetaggggtccatcttigetraccactgtcggcagagecatcffi<table>table see original document page 65</column></row><table>ccigitgtttggtgUacttctgca (Id- de Seq. N°: 9)
2. Preparar a placa máster a partir de um estoque deglicerol fazendo tiras das bactérias para produzir colôniasúnicas em meio #800 e incubar as bactérias a 28°C no escuropor 3-4 dias.
3. Preparar uma placa de trabalho fazendo tiras de 1colônia a partir da placa máster por todo o meio #810.Incubar as bactérias a 280C no escuro por 1-2 dias.
II. Preparação de bactérias para infecção em embrião
1. Preparar cultura líquida de Agrobacterium 1 dia antesda isolação do embrião. Preparar um frasco com 3 0 mis demeio 557A, 30 μΐ de 2% acetosiringona e 30 μΐ 5%espectinomicina.
2. Inocular com uma alça cheia de Agrobacteriwn de meio810 e colocar em agitador (200 rpm) em sala escura a 280Cde um dia para outro.
3. Na manhã da infecção, retirar amostras da culturalíquida de Agrobacterium e fazer uma diluição a 1/4 com557A. Usar a cultura líquida diluída para fazer leitura deOD usando uma luz visível a 550 nm.
4. Fazer diluições na cultura de Agrobacterium comoadequado de acordo com a leitura OD para manter a leituraOD entre 0,2-0,8 durante a isolação do embrião.
5. Quando da preparação do Agrobacterium para infecção,repetir a leitura OD da cultura líquida. Usando a leituraOD calcular o número de mis necessários para obter 5 ElOcfu/ml (cfu = unidades de formação de colônias) pelo uso dafórmula EXPONENT (1,755 * (InOD) + 21,77) como derivada deuma curva padrão. Pipetar a quantidade calculada de culturalíquida de Agrobacterium em ura tubo de 14 ml e centrifugara 4.500 rpm a 4—200C por dez minutos. Remover osobrenadante e ressuspender Agrobacterium em quantidadeadequada de 100 uM de solução de acetosiringona em 561Q.
III. Isolação de embrião imaturo
1. Colher espigas GS3 com 9-11 dias após polinização comtamanho de embrião de 1-2 mm de comprimento.
2. Esterilizar a espiga em 50% alvejante e 1 gota Tweenpor 20-30 minutos. Enxaguar 3-5 vezes em água estéril .
3. Isolar embriões dos grãos e colocar em microtubocontendo 2 mis 561Q.
VI. Infecção por Agrobacteriiam dos embriões.
1. Remover 561Q com pipeta do microtubo com embriõesisolados e adicionar 1 ml de suspensão de Agrobacterium emOD acima descrito.
2. Misturar por turbilhonamento por cerca de 30 segundos.
3. Deixar por 5 minutos para infecção em temperaturaambiente.
V. Co-cultivo
1. Após remoção do meio líquido, transferir embriões eorientar os embriões cora eixos embriônicos para baixo nasuperfície de meio de co-cultivo 562P.
2. Colocar os embriões em incubador a 20°C por 3 dias.Transferir a 28°C por 3 dias adicionais.
VI. Seleção de eventos de calo transgênico suposto
1. Depois de co-cultivo, transferir os embriões para meiode seleção 5631 contendo 1 mM glifosato. Cultivar osembriões a 280C no escuro.
2. A cada 14-21 dias transferir os embriões para meiofresco 5631. O processo de seleção pode durar cerca de 2meses até que crescimento ativo de eventos do calo supostopossam ser identificados. Manter eventos do calo supostoem meio 5631 e retirar amostra do calo para PCR.
VII. Regeneração de plantas T0
1. Transferir eventos de calo para meio 2871 contendo 0,1mM Glifosato até embriões somáticos maduros. Cultivar ocalo a 280C no escuro.
2. Transferir eventos de calo para meio 2731 degerminação de embrião contendo 0,1 mM glifosato em placas.Cultivar as placas a 28°C em luz.
3. Quando ramos e raízes surgirem, transferir plantasindividuais para 2731 contendo 0,125 mM Glifosato em tubos.Cultivas os tubos a 280C em luz.
4. Brotos com ramos e raízes estabelicidos devem sertransferidos para estufa para posterior crescimento eprodução de semente Tl.
Exemplo 2. Efeito de intensificador 35S sobre a eficiênciade transformação e eficácia de GAT e ALS em milhoMateriais e Métodos
Quatro construções de intensificador 35S(PHP20118, PHP20120, PHP20122, PHP20124) e uma construçãonão-35S (PHP19288) foram usadas para produzir eventos paraavaliar o efeito de intensificador 35S sobre a eficiênciade transformação e eficácia de GAT (Id. de Seq. N°:7) (Fig.1). As diferenças entre as quatro construções deintensificador 35S são os números de cópia dointensificador 35S e as orientações do intensificador 35Snas construções. Um resumo de cada construção deintensificador 3 5S é fornecido abaixo.
PHP20118 compreende 35S ENH(+):ZmUBI PRO-5UTR-UBIINTR0N1 (+ denota direção adiante do intensificador 35S) .Essa região de controle de transcrição (Id. de Seq.N°:11) é apresentada abaixo indicando a localização dasvárias regiões da região reguladora: a) o intensificador5S na direção adiante tem sublinhado único; b) o promotorUBI tem um sublinhado duplo, e c) o intron UBI está emitálico.
fltqrecctctctapaaataataaacattqratatGtaaatgctcaccctgttgtttggtgttacttctgca (id. de Seq. N°:ii)PHP20122 compreende 3X35S ENH (+):ZmUBI PRO-5UTR-UBIINTR0N1 (+ indica direção adiante do intensificador 35S) .Essa região de controle de transcrição (Id. de Seq. N°:12)é apresentada abaixo indicando a localização das váriasregiões da região reguladora: a) o intensificador 35S nadireção adiante tem sublinhado único; b) o promotor UBI temum sublinhado duplo, e c) o intron UBI está em itálico.
aaagactggcgaacagttcatacagaetotcttacacacttfnctactccaaaaa
ecRsa^cetcctc^»attccattecccaectatctgtcacmattgt^aagatagtgpaaaaggaaggtagctcCta^aa
tgcgtggcggagcggcagacateagocggcaeggcaggcggcctcctcctcctctciacpocaccppcapKtacgppp(Id. de Seq. N0: 12)
PHP2 012 0 compreende 35S ENH (-) :ZmUBI PRO-5UTR-UBIINTRON1 (- indica direção reversa do intensificador 35S) .Essa região de controle de transcrição (Id. de Seq. Ne:13)é apresentada abaixo indicando a localização das váriasregiões da região reguladora: a) o intensificador 35S nadireção reversa tem sublinhado único; b) o promotor UBI temum sublinhado duplo, e c) o íntron UBI está em itálico.
2McttcacaataaagtgacapalagctpppnaafppTaatccgaggag^ccggatattaccctttgttgaaaagtclcaat(Id. de Seq. N°: 13)
PHP20124 compreende 3X35S ENH (-): ZmUBI PRO- 5 UTR-UEINTRON1 (indica direção reversa do intensificador 35S)Essa região de controle de transcrição (id. de Seq. N°14) é apresentada abaixo indicando a localização das váriaregiões da região reguladora: a) o intensificador 35S ηdireção reversa tem sublinhado único; b) o promotor UBI te,um sublinhado duplo, e c) o íntron UBI está em itálico.<table>table see original document page 73</column></row><table>cctgttgmggtgttacttctgca (Id. de Seq. N°: 14)
Os experimentos de transformação foram conduzidoslado-a-lado usando os mesmos embriões das mesmas espigas.Embriões imaturos de linhagem GS3 foram assepticamenteremovidos de cada espiga e divididos em cinco porções. Cadaporção dos embriões foi então infectada com A. tumefacienscepa LBA44 04 contendo os cassetes de expressão de cada umadas cinco construções, respectivamente. Depois de 6 dias deco-cultivo, os embriões foram transferidos para meio deseleção fresco contendo glifosato. As célulastransformadas, que sobreviveram à seleção de glicofosato,proliferaram e produziram calos embriogênicos somáticos.Depois de cerca de dois meses de subcultura, os calos forammanipulados para regenerar plantas transgênicas inteirascom presença de glifosato e foram transferidos para aestufa. Plantas TO foram então submetidas a spray deglifosato a 6X (156 oz/ac) Roundup Ready UltraMaxTMatestágios V3 ou V4 na estufa. Plantas positivas tiveramamostras retiradas para PCR quantitativo para número decópia e western para expressão. Plantas TO foram entãocruzadas com linhagens inatas para obter sementes paraposterior avaliação.
Resultados
A eficiência da transformação foi medida como apercentagem dos embriões infectados que produziram calosresistentes após seleção. As eficiências de transformaçãomédias para PHP19288, PHP20118, PHP20120, PHP20122, ePHP20124 foram de 58%, 63%, 59%, 57%, and 51%,respectivamente. Os dados indicaram que todas asconstruções tinham eficiências de transformação bastantealtas e similares, embora PHP20118 mostrasse um leveaumento(Fig 2).
A eficácia da planta TO foi definida como apercentagem dos eventos TO que foram completamenteresistentes ao spray de 6x glifosato. A eficácia daconstrução não-35S (PHP19288) foi de 48,1%. Em contraste,as eficácias das construções de intensificador 35S(PHP20118, PHP20120, PHP20122, e PHP20124) foram 96,6%,93,5%, 89,1%, e 91,1%, respectivamente (Fig. 3). Os dadosmostraram que todas as construções de intensificador 35Saumentaram significativamente a eficácia da planta contraglifosato.
Uma outra melhoria significativa do uso deintensificador 35S foi no padrão de integração dotransgene. A percentagem dos eventos testados que foramcópia única para a construção de intensificador não-35Sfoi de apenas 38%, mas para as quatro construções deintensificador 35S (PHP20118, PHP20120, PHP20122, ePHP20124) os eventos de cópia única representaram 65%, 63%,71%, e 88% dos eventos, respectivamente (Fig. 4).
Foi feita uma amostra do subconjunto de eventos detodas as cinco construções por análise Western paraobservar quaisquer diferenças comparativas em expressão deGAT entre eventos não 35S e 35S. Essa análise mostrou queeventos da construção de intensificador não-35S tiveramníveis muito baixos de expressão de GAT enquanto a maioriados eventos das construções de intensificador 35S mostrouníveis muito altos de expressão de GAT (Fig. 5).
Exemplo 3. Uso de GAT de Intensificador 35S nodesenvolvimento de um novo sistema de Avaliação deGene/Construção baseado em calo.
Materiais e Métodos
Esse ensaio está sendo desenvolvido para melhorar aavaliação da expressão de um gene inseticida em um estágiomuito precoce no processo de transformação para identificarproblemas potenciais com a expressão. A base desse ensaio éo uso de the glifosato acetil transferase (GAT) gene (Id.de Seq. N°:55) as a marcador selecionável. Tanto o gene deGAT e quanto o gene de teste inseticida serão dirigidos porum forte promotor constitutivo e ligado na mesmaconstrução. 0 promotor empregado compreende ZmUBI PRO-5UTR-UBI INTR0N1 com o intensificador 3X35S como acima descritono Exemplo 7. Como um resultado é esperado que a seleção emaltos níveis de glifosato identificará expressores de genede teste altamente inseticida. 0 tecido do calo dessesaltos expressores supostos serão então usados em bioensaiosde inseto para determinar se o produto do gene é funcional.
Aquelas construções que mostram eficácia podem seravançadas na transformação. Se a construção não mostraeficácia então acompanhamento bioquímico e análisemolecular podem ser conduzidos para identifica o problema eo gene será redesenhado e novamente testado no sistema(Fig. 6) .
Resultados
Dados preliminares mostraram que a atividade de umgene de controle de inseto eficaz pode ser detectada noestágio de calo. A correlação entre a atividade do calo e aeficácia da planta está atualmente sendo avaliada.Exemplo 4. GAT como um marcador selecionávelMateriais e métodos
Transformação mediada por Agrobacterium foi usada paraintroduzir o cassete de expressão GAT (Id. de Seq. N°:8) nogenoma do milho. 0 cassete de expressão GAT compreende,promotor que compreende ZmUBI PR0-5UTR-UBI INTR0N1 com ointensificador 3X355 (como descrito acima no Exemplo 1)operacionalmente ligado ao gene de GAT, e terminador pinll.Agrobacterium tumefaciens, cepa LBA4404, foipatogenicamente desarmado por remoção de seu T-DNA nativo.Ao contrário, o sitio de T-DNA no plasmídeo Ti continha ocassete de expressão GAT.
Embriões imaturos de milho foram assepticamenteremovidos do caryopsis em desenvolvimento e tratados com A.tumefaciens cepa LBA4404 contendo cassetes de expressãoGAT. Depois de um período de co-cultivo do embrião eAgrobacterium em meio de cultura sólido sem presença deglifosato, os embriões foram transferidos para meio deseleção fresco que continha antibióticos e glifosato. Osantibióticos matam qualquer Agrobacterium restante. 0 meiode seleção é estimulante para embriogênese somática demilho e seletivo para aquelas células que contêm um gene deGAT integrado. Portanto, o calo que sobrevive a glifosatopara proliferar e produzir tecido embriogênico épresumivelmente geneticamente transformado. Amostras decalo foram feiras para análise molecular para verificar apresença do transgene por PCR. 0 tecido embriônico é entãomanipulado para regenerar plantas transgênicas na presençade glifosato que são então transferidas para a estufa.Plantas TO são pulverizadas com glifosato em diferentesconcentrações. Plantas positivas tiveram amostras retiradaspara análise molecular para número de cópia de transgene ecruzadas com linhagens inatas para obter sementes dasplantas inicialmente transformadas.
Uma curva de morte de glifosato foi estabelecida porteste de resposta de embriões não transformados em meio comdiferentes níveis de glifosato. Embriões GS3 foram isoladosde uma espiga imatura e colocados em um meio contendoglifosato a 0,0, 0,5, 1,0, e 2,0 mM. Depois de cerca de 40dias de cultura, a resposta dos embriões foi observada eregistrada. De modo similar, embriões GS3 infectados com aconstrução GAT foram colocados em meio contendo glifosato a0,0, 0,5, 1,0, e 2,0 mM. Depois de cerca de 40 dias decultura, a resposta dos embriões infectados foi observada eregistrada. (Fig. 7).
Um experimento lado-a-lado foi conduzido para comparar aseficiências de transformação de GAT, bar e mopat. Embriõesimaturos de linhagem GS3 foram assepticamente removidos decada espiga e divididos em três porções. Cada porção dosembriões foi então infectada com A. twnefaciens cepaLBA4404 contendo os cassetes de expressão de GAT, bar, oumopat, respectivamente. Depois de co-cultivo, os embriõesinfectados com construção GAT foram selecionados em meio deglifosato rotineiro e os embriões infectados comconstruções bar ou mopat foram selecionados em meio deglifosato rotineiro. As subculturas foram feitas a cada 2semanas. Em cerca de 50 dias a seleção das respostas dosembriões foi observada e registrada.
Resultados
A partir do experimento de curva de morte deglifosato, todos os embriões em meio com 0,0 mM glifosatoiniciaram calo saudável, enquanto cerca de metade dosembriões no meio com 0,5 mM de glifosato mostraram iníciodo calo. Houve muito pouco crescimento de calo com embriõesem meio que contém 1,0 e 2,0 mm de glifosato. Isso indicouque 0,5 mM não é suficiente para inibir todo o crescimentodos embriões, mas 1 mM ou 2 mM é forte o suficiente paramatar os embriões não transformados. No experimento deembrião infectado, mais calo cresceu em meio com 0,0 e 0,5mM de glifosato, mas alguns embriões iniciaram caloresistente em meio com .1,0 mM ou 2,0 mM de glifosato.
Análise de Western ou PCR confirmaram que esses calosresistentes foram transformados. Atualmente, GAT tem agidoconsistentemente como um marcador selecionável eficaz comexcelente eficiência de transformação em genótipos GS 3 eintroEF09B (Fig. 9 e Tabela 1).
Tabela 1 Eficiência de transformação de GAT em introEF09Bgenotipo construção
<table>table see original document page 79</column></row><table>
No experimento lado-a-lado para comparar GAT, bar emopat, GAT teve a melhor eficiência de transformação emcerca de 64%, bar a 34%, e mopat a 30%. Calo com seleção deGAT parece crescer mais rápido que aqueles selecionados emglifosinato (Fig. 9)Exemplo 5: Transformação e regeneração de plantastransgênicas
Embriões imaturos de milho de plantas doadoras deestufa são bombardeados com um plasmídeo que contém aregião reguladora de transcrição quimérica que compreende odomínio intensificador de Id. de Seq. N0:l operacionalmenteligado a ZmUBI PR0-5UTR-ZmUBI INTR0N1 (Id. de Seq. N°:6). Aregião reguladora de transcrição quimérica éoperacionalmente ligado a um polinucleotídeo de interesse eo gene de marcador selecionável PAT (Wohlleben e cols.(1988) Gene 70:25-37), que confere resistência ao herbicidaBialafos. Alternativamente, o gene de marcador selecionávelé fornecido em um plasmídeo separado. A transformação érealizada como se segue. Receitas de meios estão abaixo.
Preparação de tecido alvo
As espigas são descascadas e a superfície éesterilizada em 30% alvejante Clorox mais 0,5% Microdetergente por 20 minutos, e enxaguadas duas vezes com águaestéril. Os embriões imaturos são retirados e colocados como lado do eixo do embrião para baixo (lado do escutelo paracima), 25 embriões por placa, em meio 560Y por 4 horas eentão alinhados com a zona alvo de 2,5 cm na preparaçãopara bombardeamento.
Um vetor de plasmídeo que compreende a construçãoacima descrita é feito. Esse DNA de plasmídeo mais DNA deplasmídeo que contém um marcador selecionável PAT éprecipitado em um pélete de tungstênio de 1,1 μm (diâmetromédio) usando um procedimento de precipitação de CaCl2 comose segue: 100 μl de partículas de tungstênio preparadas emágua; 10 μl (1 μ9) DNA em tampão Tris EDTA (1 μ5 DNAtotal); 100 μΐ 2,5 M CaCl2; e 10 μΐ 0,1 M espermidina.
Cada reagente é adicionado seqüencialmente à suspensãode partículas de tungstênio, enquanto são mantidas novortexer de multitubos. A mistura final é sonifiçadabrevemente e deixada para incubar sob turbilhonamentoconstante por 10 minutos. Depois do período deprecipitação", os tubos são centrifugados brevemente, olíquido removido, lavados com 500 ml 100% etanol, ecentrifugados por 30 segundos. Novamente o líquido éremovido, e 105 μΐ 100% etanol é adicionado às partículasfinais de pélete de tungstênio. Para bombardeamento depistola de partículas, as partículas de tungstênio/DNA sãobrevemente sonificadas e 10 μΐ são salpicados no centro decada macrocarreador e deixados para secar cerca de 2minutos antes do bombardeamento.
A placas de amostra são bombardeadas no nível #4 napistola de partículas. Todas as amostras recebem um únicotiro a 4481,59 kPa, com um total de dez alíquotas tomadasde cada tubo de partículas/DNA preparados.
Após o bombardeamento, os embriões são mantidos em meio560Y por 2 dias, e então são transferidos para meio deseleção 560R contendo 3 mg/litro de Bialaphos, esubcultivados a cada 2 semanas. Após aproximadamente 10semanas de seleção, clones de calo resistentes à seleçãosão transferidos para meio 288J para iniciar a regeneraçãoda planta. Após a maturação somática do embrião (2-4semanas), embriões somáticos bem desenvolvidos sãotransferidos para meio para germinação e transferidos paraa sala de cultura iluminada. Aproximadamente 7-10 dias maistarde, as plântulas em desenvolvimento são transferidaspara meio 272V livre de hormônios em tubos por 7-10 diasaté que as plântulas estejam bem estabelecidas. As plantassão então transferidas para inserções em planos(equivalente a pote de 6,35 cm) contendo solo envasado ecrescem por 1 semana em uma câmara de crescimento,subseqüentemente crescem por mais 1-2 semanas na estufa, eentão são transferidas para 600 potes clássicos (6,05litros) e crescem até a maturidade. As plantas sãomonitoradas e pontuadas para o fenótipo desejado com baseno polinucleotídeo de interesse.
0 meio de bombardeamento (560Y) compreende 4,0 g/L desais basais N6 (SIGMA C-1416) , 1,0 ml/L de Mistura deVitamina de Eriksson (lOOOx SIGMA-1511), 0,5 mg/L de HCl detiamina, 120,0 g/L de sacarose, 1,0 mg/12,4-D, e 2,88 g/Lde L-prolina (trazida ao volume com D-I H2O após ajuste atéPH 5,8 com KOH) ; 2,0 g/L de Gelrite™ (adicionados apóstrazer ao volume com dl H2O); e 8,5 mg/L de nitrato deprata (adicionados após esterilização do meio eresfriamento até a temperatura ambiente). 0 meio de seleção(560R) compreende 4,0 g/L de sais basais N6 (SIGMA C-1416),1,0 ml/L Mistura de Vitamina de Eriksson (lOOOx SIGMA-1511), 0,5 mg/L de HCl de tiamina, 30,0 g/L de sacarose, e2,0 mg/L de 2,4-D (trazida ao volume com dl H2O após ajusteaté pH 5,8 com KOH) ; 3,0 g/L Gelrite™ (adicionados apóstrazer ao volume com dl H2O); e 0,85 mg/L de nitrato deprata e 3,0 mg/L de Bialaphos (ambos adicionados apósesterilização do meio e resfriamento até a temperaturaambiente).
O meio de regeneração de planta (288J) compreende 4,3g/L de sais MS (GIBCO 11117-074), 5,0 mL de MS solução deestoque de vitaminas (0,100 g ácido nicotínico, 0,02 g/L deHCl de tiamina, 0,10 g/L de HCl de piridoxina, e 0,40 g/Lde Glicina trazida ao volume com D-I H2O polida) (Murashigee Skoog (1962) Physiol. Plant. 15:473), 100 mg/L demioinositol, 0,5 mg/L de zeatina, 60 g/L de sacarose, e 1,0ml/L de 0,1 mM ácido abscísico (trazido ao volume com dlH2O polido após ajuste até pH 5,6); 3,0 g/L de Gelrite™(adicionados após trazer ao volume com dl H2O); e 1,0 mg/Lde ácido indolacético e 3,0 mg/L de Bialaphos (adicionadosapós esterilização do meio e resfriamento até 60°C) . Meiolivre de hormônio (272V) compreende 4,3 g/L MS de sais(GIBCO 11117-074), 5,0 ml/L solução de estoque de vitaminasMS (0,100 g/L de ácido nicotínico, 0,02 g/L de HCl detiamina, 0,10 g/L de HCl de piridoxina, e 0,40 g/L deGlicina trazida ao volume com dl H2O polido), 0,1 g/L demioinositol, e 40,0 g/L de sacarose (trazida ao volume comdl H2O polido após ajuste do pH até 5,6); e 6 g/L deBactoagar (adicionados após trazer ao volume com dl H2Opolido), esterilizado e resfriado até 60° C.
Exemplo 6. Transformação de embrião de soja
Condições de cultura
As culturas de suspensão embriogênica de soja (cv.Jack) são mantidas em 35 ml de meio líquido SB 196 (vejareceitas abaixo) em um agitador rotatório, a 150 rpm, a26°C, com luzes fluorescentes frias brancas em um esquemade dia/luz de 16:8 horas em intensidade de luz de 60-85ME/m2/s. As culturas são subcultivadas a cada sete dias aduas semanas por inoculação de aproximadamente 35 mg detecido em 35 ml de meio líquido SB 196 (o intervalo desubcultura preferido é a cada 7 dias).As culturas de suspensão embriogênica de soja sãoentão transformadas com os plasmídeos e fragmentos de DNAdescritos nos exemplos a seguir pelo método debombardeamento com pistola de partículas (Klein e cols.(1987) Nature 327: 70).
Iniciação da cultura de suspensão de soja embriogênica
Culturas de soja são iniciadas duas vezes a cada mêscom 5-7 dias entre cada iniciação.
Vagens com sementes imaturas de plantas de sojadisponíveis de 45-55 dias após a plantação são colhidas,removidas de suas cascas e colocadas em uma caixa magentaesterilizada. As sementes de soja são esterilizadas poragitação delas por 15 minutos em uma solução a 5% de Cloroxcom uma gota de sabão "ivory" (95 ml de água destiladaautoclavada mais 5 ml Clorox e 1 gota de sabão) . Misturarbem. As sementes são enxaguadas com o uso de 2 garrafas de1 litro de água destilada estéril e aquelas com menos que 4mm são colocadas em laminas de microscópio individuais. Aspequenas extremidades da semente são cortadas e oscotilédones pressionados do revestimento da semente. Oscotilédones são transferidos para placas contendo meio SBl(25-30 cotilédones por placa). As placas são envolvidas comfita de fibra e estocadas por 8 semanas. Depois desse tempoos embriões secundários são cortados e colocados em meio SB196 líquido por 7 dias.
Preparação de DNA para bombardeamento
Um plasmídeo intacto ou um ou fragmento de DNA deplasmídeo contendo os genes de interesse e o gene demarcador selecionável são usados para bombardeamento. DNAde plasmídeo para bombardeamento é rotineiramente preparadoe purificado com o uso do método descriro no Promega™Protocols and Applictions Guide, Segunda Edição (página106). Fragmentos dos plasmideos que carregam a regiãoreguladora de transcrição quimérica que compreende odomínio intensificador de Id. de Seq. N0:1 operacionalmenteligado a ZmUBI PRO-5UTR-ZmUBI INTRONl (Id. de Seq. N0 :6)que é operacionalmente ligado a um polinucleotídeo deinteresse são obtidos por isolação de gel de plasmideosduplamente digeridos. Em cada caso, 100 μg de DNA deplasmídeo são digeridos em 0,5 ml da mistura de enzimaespecífica que é adequada para o plasmídeo de interesse. Osfragmentos de DNA resultantes são separados poreletroforese de gel em 1% SeaPlaque GTG agarose(BioWhitaker Molecular Apllications) e os fragmentos de DNAque contêm a construção acima descrita são cortados do gelde agarose. DNA é purificado da agarose com o uso da enzimade digestão GELase seguindo o protocolo do fabricante.
Uma alíquota de 50 μΐι de água destilada estérilcontendo 3 mg de partículas de ouro (3 mg de ouro) éadicionado a 5 μΐϋ de uma solução de DNA de 1 μg/μL(plasmídeo intacto ou fragmento de DNA preparado como acimadescrito), 50 μΙ, de CaCl2 2,5 M e 20 ml de 0,1 M deespermidina. A mistura é então agitada por três minutos nonível 3 de um agitador de turbilhonamento e centrifugada emuma microfuga por 10 segundos. Após uma lavagem com 400 μ]^de etanol 100% o pélete é suspenso por sonificação em 40 μΐde 100% etanol. Cinco μΐ de suspensão de DNA são colocadosem cada disco do instrumento Biolistic PDS 1000/HE. Cadaalíquota de 5 μΐι conte aproximadamente 0,375 mg de ouro porbombardeamento (ou seja, por disco).Preparação de tecido e bombardeamento com DNA
Aproximadamente 150-200 mg de culturas de suspensãoembriônicas de 7 dias de idade são colocados em uma placade petri vazia, estéril de 60 χ 15 mm e a placa é cobertacom trama plástica. O tecido é bombardeado 1 ou 2 vezes porplaca com pressão para ruptura da membrana ajustada em7,584 MPa, e a câmara foi evacuada até um vácuo de 711,20milímetros de mercúrio. O tecido foi colocadoaproximadamente 8,8 9 cm afastado da tela de retenção.
Seleção de Embriões Transformados
Embriões transformados foram selecionados com o uso dehigromicina (quando a higromicina fosfotransferase, HPT,gene foi usada como o marcador selecionável) ouclorsulfurona (quando a acetolactato sintase, ALS, gene foiusada como o marcador selecionável).
Seleção de Higromicina (HPT)
Após bombardeamento, o tecido é colocado em meiofresco SB 196 e cultivado como acima descrito, seis diaspós-bombardeamento, o SB 196 é trocado por SB 196 frescocontendo um agente de seleção de 3 0 mg/L higromicina. 0meio de seleção é trocado semanalmente. Quatro a seissemanas pós-seleção, tecido verde, transformado pode serobservado crescendo a partir de grupos embriogênicosnecróticos, não transformados. Tecido verde isolado éremovido e inoculado em placas de várias cavidades paragerar novas culturas de suspensão embriogênica, clonalmentepropagadas, transformadas.
Seleção de Clorsulfurona (ALS)
Após bombardeamento, o tecido é dividido entre 2frascos com meio fresco SB 196 e cultivado como acimadescrito. Seis a sete dias pós-bombardeamento, o SB 196 étrocado por SB 196 fresco contendo um agente de seleção de100 mg/L Clorsulf urona. 0 meio de seleção é trocadosemanalmente. Quatro a seis semanas pós-seleção, tecidoverde, transformado pode ser observado crescendo a partirde grupos embriogênicos necróticos, não transformados.Tecido verde isolado é removido e inoculado em placas devárias cavidades contendo SB 196 para gerar novas culturasde suspensão embriogênica, clonalmente propagadas,transformadas.
Regeneração de embriões somáticos de soja em plantas
Para obter plantas inteiras a partir de culturas desuspensão embriogênica, o tecido deve ser regenerado.
Maturação do Embrião
Os embriões são cultivados por 4-6 semanas a 260C emSB 196 sob luz fluorescente fria branca (Phillips Econowattbranca fria F40/CW/RS/EW) e Agro (Phillips F40 Agro) (40watt) em um esquema de dia/luz de 16:8 horas em intensidadede luz de 90-120 μΕ/ιτ^/ε. após esses tempo os grupos deembrião são removidos para um meio de Agar sólido, SB 166,por 1-2 semanas. Os grupos são então subcultivados parameio SB103 'por 3 semanas. Durante esse período, embriõesindividuais podem ser removidos dos grupos e rastreadospara o fenótipo desejado com base no polinucleotídeo deinteresse empregado. Deve ser observado que qualquerfenótipo detectável, resultante da expressão do gene deinteresse, pode ser rastreado nesse estágio.Dissecação e germinação do embrião
Embriões individuais maduros são dissecados colocando-se em pequenas placas de petr vazias (35 χ 10 mm) poraproximadamente 4-7 dias. As placas são seladas com fita defibra (criando uma pequena câmara de umidade). Os embriõesdissecados são plantados em meio SB71-4 em que eles foramdeixados para germinar sob as mesmas condições de culturaacima descritas. As plântulas germinadas são removidas domeio de germinação e enxaguadas completamente com água eentão plantadas em Redi-Earth em bandeja de 24 células,cobertas com cobertura de plástico transparente. Depois de2 semanas a cobertura é removida e as plantas endurecidaspor mais uma semana. Se as plântulas parecem fortes elassão transplantadas para um pote de 10" de Redi-Earth comaté 3 plântulas por pote. Depois de 10 a 16 semanas, assementes maduras são colhidas, picadas e analisadas paraproteínas.
Receitas de meio
<table>table see original document page 88</column></row><table>1 MS Fe EDTA IOOx estoque
Na2 EDTA* 3,724 g 1,862 g
FeSO4 - 7H20 2,784 g 1,3 92 g
* Adicionar primeiramente, dissolver em, frasco escuro comagitação
2 MS Sulfato IOOx estoque
MgSO4 - 7H20 37,0 g 18,5 g
MnSO4 - H2O 1,69 g 0,845 g
ZnSO4 - 7H20 0,86 g 0,43 g
CuSO4 - 5H20 0,0025 g 0,00125 g
0,0025 g 0,00125 g
3 FN Lite Haletos IOOx estoque
CaCl2 - 2H20 30,0 g 15,0 g
KI 0,083 g 0,0715 g
CaCl2- 6H20
4 FN Lite P,B,Mo IOOx estoque
KH2PO4 18,5 g 9,25 g
H3BO3 0,62 g 0,31 g
Na2MoO4 - 2H20 0,025 g 0,0125 g
Meio sólido SBl (por litro) compreende: 1 pkg. Sais MS(Gibco/ BRL - Cat# 11117-066); 1 ml de vitaminas B5 1.000 Xestoque; 31,5 g sacarose; 2 ml 2,4-D (20 mg/L concentraçãofinal); pH 5.7; e, 8 g TC agar.
Meio sólido SB 166 (por litro) compreende: 1 pkg. SaisMS (Gibco/ BRL - Cat# 11117-066) ; 1 ml de vitaminas B51.000 X estoque; 60 g maltose; 750 mg hexahidrato de MgCl2;5 g carvão ativado; pH 5,7; e 2 g gelrite.
Meio sólido SB 103 (por litro) compreende: 1 pkg. SaisMS (Gibco/BRL - Cat# 11117-066); 1 ml de vitaminas B5 1.000X estoque; 60 g maltose; 750 mg hexahidrato de MgCl2; pH5,7; and, 2 g gelrite.
Meio sólido SB 71-4 (por litro) compreende: 1 frascode sais B5 de Gamborg com sacarose (Gibco/BRL - Cat# 21153-036); pH 5,7; e 5 g TC agar.
Estoque de 2,4-D é obtido preparado anteriormente porPhytotech cat# D 295 — concentração é 1 mg/ml.
Estoque de Vitaminas B5 (por 100 ml) que é estocada emalíquotas a -20C compreende: 10 g mio-inositol; 100 mgácido nicotínico; 100 mg piridoxina HCl; e 1 g tiamina. 25Se a solução não se dissolve rapidamente, aplicar um baixonível de calor por meio da placa de agitação quente.Estoque de clorsulfurona compreende 1 mg/ml em 0,01 Nhidróxido de amônio.
0 artigo "um" e "uma" são aqui utilizados para sereferir a um ou mais de um (ou seja, a pelo menos um) doobjeto gramatical do artigo. Como forma de exemplo, "umelemento" significa um ou mais elementos.
Todas as publicações e pedidos de patente mencionadosna especificação são indicativos do nível daqueles comhabilidade na técnica à qual essa invenção pertence. Todasas publicações e pedidos de patente são aqui incorporadospor referência na mesma extensão como se cada publicação oupedido de patente individual fosse específica eindividualmente indicado para ser incorporado porreferência.
Embora a invenção precedente tenha sido descrita emalgum detalhe como forma de ilustração e exemplo para finsde clareza de compreensão, estará óbvio que certas mudançase modificações podem ser praticadas dentro do escopo dasmodalidades aqui descritas.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS
<110> McCutchen, Billy FredHazel, Christine B.Liu, DonglongLu, Albert L.Mehre( Wayne J.Olson, Paul D.Wong, James F. H.
<120> Métodos e composições para a expressão de um polinucleotídeo deinteresse
<130> 035718/315230
<150> 60/710,854<151> 24-08-2005
<150> 60/817,011<151> 28-06-2006
<160> 18
<170> FastSEQ for Windows Versão 4.0
<210> 1
<211> 438
<212> DNA
<213> Vírus mosaico de couve-flor
<220>
<221> Intensificador
<222> (0) . . . (0)
<223> Intensificador 35S
<400> 1
cccatggagt caaagattca aatagaggac ctaacagaac tcgccgtaaa gactggcgaa 60cagttcatac agagtctctt acgactcaat gacaagaaga aaatcttcgt caacatggtg 120
gagcacgaca cgcttgtcta ctccaaaaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg 180
gcaattgaga cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc tcctcggatt ccattgccca 240gctatctgtc actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag gtggctccta caaatgccat 300cattgcgata aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat 360ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag 420caagtggatt gatgtgat 43 8
<210> 2<211> 534<212> DNA
<213> Vírus mosaico de couve-flor<220>
<221> promotor<222> (0)...(0)<223> Intensificador 35S com promotor central mínimo
<400> 2
cccatggagt caaagattca aatagaggac ctaacagaac tcgccgtaaa gactggcgaa 60cagttcatac agagtctctt acgactcaat gacaagaaga aaatcttcgt caacatggtg 120gagcacgaca cgcttgtcta ctccaaaaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg 180gcaattgaga cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc tcctcggatt ccattgccca 240gctatctgtc actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag gtggctccta caaatgccat 300
cattgcgata aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat 360
ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag 420
caagtggatt gatgtgatat ctccactgac gtaagggatg acgcacaatc ccactaagct 480
tcgcaagacc cttcctctat ataaggaagt tcatttcatt tggagaggac aggg 534
<210> 3
<211> 52
<212> DNA
<213> Vírus mosaico de couve-flor
<220>
<221> promotor
<222> (0)...(0)
<223> promotor central mínimo
<400> 3
gcaagaccct tcctctatat aaggaagttc atttcatttg gagaggacag gg
52
<210> 4
<211> 162<212 > DNA
<213> Vírus mosaico de couve-flor<400> 4
catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag 60catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag caagtggatt gatgtgatat 120ctccactgac gtaagggatg acgcacaatc ccactaagct tc 162
<210> 5
<211> 44
<212> DNA
<213> Vírus mosaico de couve-flor
<400> 5
atctccactg acgtaaggga tgacgcacaa tcccactaag cttc
44
<210> 6
<211> 1991
<212> DNA
<213> seqüência artificial
<220>
<223> seqüência de promotor que compreende ZmUBI PRO-5'UTR-ZMUBIINTRON 1
<400> 6
gcagtgcagc gtgacccggtttataaaaaa ttaccacatatttatacata tatttaaact
tcagtgttttattttgacaattgcaaatagttagggttaacctctaaattaaatagaatactaaggaaacagtctaacgggcacggcatcttgctccgctcaggcggcct
agagaatcatcaggactctacttcacctattggtttttataagaaaactaaaataaagtgatttttcttgacaccaaccatctgtcgctggtcggcatcccctcctcctc
cgtgcccctcttttttttgtttactctacgataaatgaaccagttttatcataatacttcagactaatttaaactctattactaaaaatttttcgagtaggcgaaccagccctctggaccagaaattgcgtcacggcacc
tctagagatacacacttgttaataatataaagttagacattttttagtgtatccattttattttagtacattagttttttaaacaaatacataatgccagagcgtcgcgtcctctcgagatggcggagcgggcagctacg
atgagcattgtgaagtgcagtctatagtacggtctaaagggcatgtgttcttagtacatctctattttattatttaataacctttaagaacctgttaaaccgggccaagcgttccgctccgcagacgtgaggggattcct
catgtctaag 60tttatctatc 120tacaataata 180acaattgagt 240tccttttttt 300catttagggt 360tctattttag 420tttagatata 480attaaaaaaa 540gccgtcgacg 600gaagcagacg 660accgttggac 720gccggcacgg 780ttcccaccgc 840tccttcgctt tcccttcctc gcccgccgta ataaatagac accccctcca caccctcttt 900ccccaacctc gtgttgttcg gagcgcacac acacacaacc agatctcccc caaatccacc 960
cgtcggcacc tccgcttcaa ggtacgccgc tcgtcctccc ccccccccct ctctaccttc 1020tctagatcgg cgttccggtc catggttagg gcccggtagt tctacttctg ttcatgtttg 1080tgttagatcc gtgtttgtgt tagatccgtg ctgctagcgt tcgtacacgg atgcgacctg 1140
tacgtcagac acgttctgat tgctaacttg ccagtgtttc tctttgggga atcctgggat 1200ggctctagcc gttccgcaga cgggatcgat ttcatgattt tttttgtttc gttgcatagg 1260
gtttggtttg cccttttcct ttatttcaat atatgccgtg cacttgtttg tcgggtcatc 1320ttttcatgct tttttttgtc ttggttgtga tgatgtggtc tggttgggcg gtcgttctag 1380
atcggagtag aattctgttt caaactacct ggtggattta ttaattttgg atctgtatgt 1440gtgtgccata catattcata gttacgaatt gaagatgatg gatggaaata tcgatctagg 1500
ataggtatac atgttgatgc gggttttact gatgcatata cagagatgct ttttgttcgc 1560ttggttgtga tgatgtggtg tggttgggcg gtcgttcatt cgttctagat cggagtagaa 1620tactgtttca aactacctgg tgtatttatt aattttggaa ctgtatgtgt gtgtcataca 1680
tcttcatagt tacgagttta agatggatgg aaatatcgat ctaggatagg tatacatgtt 1740
gatgtgggtt ttactgatgc atatacatga tggcatatgc agcatctatt catatgctct 1800aaccttgagt acctatctat tataataaac aagtatgttt tataattatt ttgatcttga 1860
tatacttgga tgatggcata tgcagcagct atatgtggat ttttttagcc ctgccttcat 1920
acgctattta tttgcttggt actgtttctt ttgtcgatgc tcaccctgtt gtttggtgtt 1980
acttctgcag g 1991
<210> 7
<211> 441
<212 > DNA
<213> seqüência artificial
<220>
<223> seqüência GAT otimizada (GAT4 602)
<221> CDS
<222> (1)...(441)
<400> 7
atg ata gag gtg aaa ccg att aac gca gag gat acc tat gaa cta agg 4 8
Met Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Glu Leu Arg
15 10 15
cat aga ata ctc aga cca aac cag ccg ata gaa gcg tgt atg ttt gaa 96His Arg Ile Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe Glu40 20 25 30
age gat tta ctt cgt ggt gca ttt cac tta ggc ggc tat tac ggg ggc 144Ser Asp Leu Leu Arg Gly Ala Phe His Leu Gly Gly Tyr Tyr Gly Gly35 40 45
aaa ctg att tcc ata gct tca ttc cac cag gcc gag cac tca gaa ctc 192Lys Leu Ile Ser Ile Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu Leu50 55 60
50 caa ggc cag aaa cag tac cag ctc cga ggt atg gct acc ttg gaa ggt 240Gln Gly Gln Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Met Ala Thr Leu Glu Gly65 70 75 80
tat cgt gag cag aag gcg gga tcg agt cta att aaa cac gct gaa gaa 288Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Ser Leu Ile Lys His Ala Glu Glu
85 90 95
att ctt cgt aag agg ggg gcg gac ttg ctt tgg tgt aat gcg cgg aca 336Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Leu Leu Trp Cys Asn Ala Arg Thr60 100 105 110tcc gcc tca ggc tac tac aaa aag tta ggc ttc age gag cag gga gag 3 84Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Lys Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly Glu115 120 125
gta ttc gac acg ccg cca gta gga cct cac ate ctg atg tat aaa agg 432Val Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys Arg130 135 140
ate aca taa 441
Ile Thr *145
<210> 8
<211> 444
<212> DNA
<213> seqüência artificial<220>
<223> seqüência GAT otimizada -- GAT4621
<221> CDS
<222> (1)...(444)
<400> 8
atg gct att gag gtt aag cct ate aac gea gag gat acc tat gac ctt 48Met Ala Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Asp Leu1 5 10 15
agg cat aga gtg ctc aga cca aac cag cct ate gaa gcc tgc atg ttt 96Arg His Arg Val Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe20 25 30
gag tet gac ctt act agg agt gea ttt cac ctt ggt gga ttc tac gga 144Glu Ser Asp Leu Thr Arg Ser Ala Phe His Leu Gly Gly Phe Tyr Gly35 40 45
ggt aaa ctg att tcc gtg gct tca ttc cac caa gct gag cac tet gaa 192Gly Lys Leu Ile Ser Val Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu50 55 60
ctt caa ggt aag aag cag tac cag ctt aga ggt gtg gct acc ttg gaa 24 0Leu Gln Gly Lys Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Val Ala Thr Leu Glu65 70 75 80
ggt tat aga gag cag aag gct ggt tcc agt ctc gtg aaa cac gct gaa 288Gly Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Ser Leu Val Lys His Ala Glu85 90 95
gag att ctc aga aag aga ggt gct gac atg ate tgg tgt aa.t gcc agg 336Glu Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Met Ile Trp Cys Asn Ala Arg100 105 110
aca tet gct tca gga tac tac agg aag ttg gga ttc agt gag caa gga 384Thr Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Arg Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly115 120 125
gag gtg ttc gat act cct cca gtt gga cct cac ate ctg atg tat aag 432Glu Val Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys130 135 140agg ate aca taa 444
Arg Ile Thr *145
<210> 9<211> 3359<212> DNA
<213> seqüência artificial<220>
<223> intensificador 35S operacionalmente ligado ao promotor de íntron1 ZmUbi RO-5UTR-ZmUbi; intensificador 35S na direção reversa
<4 0 0 > 9
atcacatcaa
cctcgtgggt
ctttccttta
aataaagtga
ttgaaaagtc
gacaagcgtg
gagactctgt
aatctttgac
tttgaagacg
tctttgggac
tggcatttgt
gggcaatgga
ctttggtctt
accatgttga
tcgccagtct
gaattatcac
atgctcctcg
atggcctttc
ttcacaataa
ctttgttgaa
gagtagacaa
cgtaagagac
atttgaatct
gtgacccggt
ttaccacata
tatttaaact
agagaatcat
caggactcta
cttcacctat
tggtttttat
aagaaaacta
aaataaagtg
atttttcttg
acaccaacca
tctgtcgctg
gtcggcatcc
cctcctcctc
tcccttcctc
gtgttgttcg
tccgcttcaa
cgttccggtc
gtgtttgtgt
acgttctgat
gttccgcaga
cccttttcct
tttttttgtc
tccacttgctgggggtccattcgcaatgatcagatagctgtcaattgccctcgtgctccaatgaactgtttccatggacgtggttggaaccactgtcggcaggagccaccatccgaggagctgagactgtcgaagattttttacggcgagatcaatccactgggtgggggctttatcgcaagtgacagataagtctcaatgcgtgtcgtgtctgtatgaattgactccatcgtgcccctcttttttttgtttactctacgataaatgaaccagttttatcataatacttcagactaatttaaactctattactaaaaatttttcgagtaggcgaaccagccctctggaccagaaattgcgtcacggcaccgcccgccgtagagcgcacacggtacgccgccatggttaggtagatccgtgtgctaacttgcgggatcgatttatttcaatttggttgtga
ttgaagacgtctttgggaccggcatttgtaggcaatggaatttggtcttcccatgttgaccgccagtcttgtatcgataagtcttcttttagaggcatctttccttttccgtttccggatatctttgatacttcttgtcattctgttaggttgctttgaatccatctttgatgatggcatagctgggcaatgccctttggctccaccatgctgttcgccagggaattccttetagagatacacacttgttaataatataaagttagacattttttagtgtatccattttattttagtacattagttttttaaacaaatacataatgccagagcgtcgcgtcctctcgagatggcggagcgggcagctacgataaatagacacacacaacctcgtcctcccgcccggtagtctgctagcgtccagtgtttcttcatgatttatatgccgtgtgatgtggtc
ggttggaacgactgtcggcaggagccaccttccgaggaggtgagactgtagaagattttctacggcgagtgctagcttgatccacgatgctcaacgatggactatcttcaattacccttttttttggagtttgagtcgtatcctctatttgacgtggttgggaccactgtttgtaggagctggaatccgatcttctgagattgacgaagagtctttacgggcagcccagcatgagcattgtgaagtgcagtctatagtacggtctaaagggcatgtgttcttagtacatctctattttattatttaataacctttaagaacctgttaaaccgggccaagcgttccgctccgcagacgtgaggggattcctaccccctccaagatctcccccccccccccttctacttctgtcgtacacggtctttggggatttttgtttccacttgtttgtggttgggcg
tcttctttttgaggcatctttccttttccatttccggatatctttgatatttcttgtcattctgttaggttatcacatcatcctcgtgggcctttcctttcaataaagtggttgaaaagtagacaagcgtagagactctggaatctttgagaacgtcttccggcagaggccaccttccttggaggtttccctgtatctttttttcttcttcgagttctgtttgcatgcctcatgtctaagtttatctatctacaataataacaattgagttcctttttttcatttagggttctattttagtttagatataattaaaaaaagccgtcgacggaagcagacgaccgttggacgccggcacggttcccaccgccaccctctttcaaatccaccctctaccttcttcatgtttgatgcgacctgatcctgggatgttgcataggtcgggtcatcgtcgttctag
ccacgatgctcaacgatggcctatcttcacttaccctttgttttggagtatgagtcgtaacctctatttgatccacttgctgggggtccaatcgcaatgaacagatagctctcaattgccgtcgtgctcctatgaactgtctccatgatctttttccacgatcttcaacgttccactatcggatattaccgatatttttggtcattgagttaggtcctctgcagtgcagcttataaaaaatttatacatatcagtgttttattttgacaattgcaaatagttagggttaacctctaaattaaatagaatactaaggaaacagtctaacgggcacggcatcttgctccgctcaggcggccttccttcgcttccccaacctccgtcggcacctetagateggtgttagatcctacgtcagacggctctagccgtttggtttgttttcatgctatcggagtag
60
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1560
1620
1680
1740
1800
1860
1920
1980
2040
2100
2160
2220
2280
2340
2400
2460
2520
2580
2640
2700
2760aattctgttt caaactacct ggtggattta ttaattttgg atctgtatgt gtgtgccata 2820
catattcata gttacgaatt gaagatgatg gatggaaata tcgatctagg ataggtatac 2880atgttgatgc gggttttact gatgcatata cagagatgct ttttgttcgc ttggttgtga 2 94 0tgatgtggtg tggttgggcg gtcgttcatt cgttctagat cggagtagaa tactgtttca 3 000
aactacctgg tgtatttatt aattttggaa ctgtatgtgt gtgtcataca tcttcatagt 3060
tacgagttta agatggatgg aaatatcgat ctaggatagg tatacatgtt gatgtgggtt 3120
ttactgatgc atatacatga tggcatatgc agcatctatt catatgctct aaccttgagt 3180acctatctat tataataaac aagtatgttt tataattatt ttgatcttga tatacttgga 3240tgatggcata tgcagcagct atatgtggat ttttttagcc ctgccttcat acgctattta 3300
tttgcttggt actgtttctt ttgtcgatgc tcaccctgtt gtttggtgtt acttctgca 3359
<210> 10
<211> 1343
<212> DNA
<213> Vírus mosaico de couve-flor<220>
<221> intensificador
<222> (0) . . . (0)
<223> intensificador 35S 3X na direção reversa
<400> 10
atcacatcaa tccacttgct ttgaagacgt ggttggaacg tcttcttttt ccacgatgct 60cctcgtgggt gggggtccat ctttgggacc actgtcggca gaggcatctt caacgatggc 120ctttccttta tcgcaatgat ggcatttgta ggagccacct tccttttcca ctatcttcac 180aataaagtga cagatagctg ggcaatggaa tccgaggagg tttccggata ttaccctttg 24 0ttgaaaagtc tcaattgccc tttggtcttc tgagactgta tctttgatat ttttggagta 300gacaagcgtg tcgtgctcca ccatgttgac gaagattttc ttcttgtcat tgagtcgtaa 360gagactctgt atgaactgtt cgccagtctt tacggcgagt tctgttaggt cctctatttg 420aatctttgac tccatggacg gtatcgataa gctagcttga tatcacatca atccacttgc 480tttgaagacg tggttggaac gtcttctttt tccacgatgc tcctcgtggg tgggggtcca 540tctttgggac cactgtcggc agaggcatct tcaacgatgg cctttccttt atcgcaatga 600tggcatttgt aggagccacc ttccttttcc actatcttca caataaagtg acagatagct 660gggcaatgga atccgaggag gtttccggat attacccttt gttgaaaagt ctcaattgcc 720
ctttggtctt ctgagactgt atctttgata tttttggagt agacaagcgt gtcgtgctcc 780
accatgttga cgaagatttt cttcttgtca ttgagtcgta agagactctg tatgaactgt 840tcgccagtct ttacggcgag ttctgttagg tcctctattt gaatctttga ctccatgatc 900gaattatcac atcaatccac ttgctttgaa gacgtggttg gaacgtcttc tttttccacg 960atgctcctcg tgggtggggg tccatctttg ggaccactgt cggcagaggc atcttcaacg 1020
atggcctttc ctttatcgca atgatggcat ttgtaggagc caccttcctt ttccactatc 1080
ttcacaataa agtgacagat agctgggcaa tggaatccga ggaggtttcc ggatattacc 114 0ctttgttgaa aagtctcaat tgccctttgg tcttctgaga ctgtatcttt gatatttttg 1200gagtagacaa gcgtgtcgtg ctccaccatg ttgacgaaga ttttcttctt gtcattgagt 1260cgtaagagac tctgtatgaa ctgttcgcca gtctttacgg cgagttctgt taggtcctct 1320atttgaatct ttgactccat ggg 1343
<210> 11
<211> 2479
<212> DNA
<213> seqüência artificial
<220>
<223> intensificador 35S( + ): íntron 1 ZmUbi RO-SUTR-ZmUbi;intensificador 3 5S na direção reversa
<400> 11
cccatggagt caaagattca aatagaggac ctaacagaac tcgccgtaaa gactggcgaa 60cagttcatac agagtctctt acgactcaat gacaagaaga aaatcttcgt caacatggtg 120gagcacgaca cgcttgtcta ctccaaaaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg 180gcaattgaga cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc tcctcggatt ccattgccca 240gctatctgtc actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag gtggctccta caaatgccat 3 00cattgcgata aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat 360ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag 420caagtggatt gatgtgatat caagcttatc gataccgtcg acctcgaggg ggggcccagc 480ttgcatgcct gcagtgcagc gtgacccggt cgtgcccctc tctagagata atgagcattg 54 0catgtctaag ttataaaaaa ttaccacata ttttttttgt cacacttgtt tgaagtgcag 600tttatctatc tttatacata tatttaaact ttactctacg aataatataa tctatagtac 660tacaataata tcagtgtttt agagaatcat ataaatgaac agttagacat ggtctaaagg 720acaattgagt attttgacaa caggactcta cagttttatc tttttagtgt gcatgtgttc 780tccttttttt ttgcaaatag cttcacctat ataatacttc atccatttta ttagtacatc 840catttagggt ttagggttaa tggtttttat agactaattt ttttagtaca tctattttat 900tctattttag cctctaaatt aagaaaacta aaactctatt ttagtttttt tatttaataa 960tttagatata aaatagaata aaataaagtg actaaaaatt aaacaaatac cctttaagaa 1020attaaaaaaa ctaaggaaac atttttcttg tttcgagtag ataatgccag cctgttaaac 1080gccgtcgacg agtctaacgg acaccaacca gcgaaccagc agcgtcgcgt cgggccaagc 1140gaagcagacg gcacggcatc tctgtcgctg cctctggacc cctctcgaga gttccgctcc 1200accgttggac ttgctccgct gtcggcatcc agaaattgcg tggcggagcg gcagacgtga 1260gccggcacgg caggcggcct cctcctcctc tcacggcacc ggcagctacg ggggattcct 1320ttcccaccgc tccttcgctt tcccttcctc gcccgccgta ataaatagac accccctcca 1380caccctcttt ccccaacctc gtgttgttcg gagcgcacac acacacaacc agatctcccc 144 0caaatccacc cgtcggcacc tccgcttcaa ggtacgccgc tcgtcctccc ccccccccct 1500ctctaccttc tctagatcgg cgttccggtc catggttagg gcccggtagt tctacttctg 1560ttcatgtttg tgttagatcc gtgtttgtgt tagatccgtg ctgctagcgt tcgtacacgg 1620atgcgacctg tacgtcagac acgttctgat tgctaacttg ccagtgtttc tctttgggga 1680atcctgggat ggctctagcc gttccgcaga cgggatcgat ttcatgattt tttttgtttc 1740gttgcatagg gtttggtttg cccttttcct ttatttcaat atatgccgtg cacttgtttg 1800tcgggtcatc ttttcatgct tttttttgtc ttggttgtga tgatgtggtc tggttgggcg 1860gtcgttctag atcggagtag aattctgttt caaactacct ggtggattta ttaattttgg 1920atctgtatgt gtgtgccata catattcata gttacgaatt gaagatgatg gatggaaata 1980tcgatctagg ataggtatac atgttgatgc gggttttact gatgcatata cagagatgct 2 04 0ttttgttcgc ttggttgtga tgatgtggtg tggttgggcg gtcgttcatt cgttctagat 2100cggagtagaa tactgtttca aactacctgg tgtatttatt aattttggaa ctgtatgtgt 2160gtgtcataca tcttcatagt tacgagttta agatggatgg aaatatcgat ctaggatagg 2220tatacatgtt gatgtgggtt ttactgatgc atatacatga tggcatatgc agcatctatt 2280catatgctct aaccttgagt acctatctat tataataaac aagtatgttt tataattatt 2340ttgatcttga tatacttgga tgatggcata tgcagcagct atatgtggat ttttttagcc 2400ctgccttcat acgctattta tttgcttggt actgtttctt ttgtcgatgc tcaccctgtt 2460gtttggtgtt acttctgca 2479
<210> 12<211> 3331<212> DNA
<213> seqüência artificial<220>
<223> intensificador 35S( + ): íntron 1 ZmUbi RO-5UTR-ZmUbi;intensificador 3 5S na direção reversa
<400> 12
cccatggagt caaagattca aatagaggac ctaacagaac tcgccgtaaa gactggcgaa 60
cagttcatac agagtctctt acgactcaat gacaagaaga aaatcttcgt caacatggtg 120
gagcacgaca cgcttgtcta ctccaaaaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg 180
gcaattgaga cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc tcctcggatt ccattgccca 240
gctatctgtc actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag gtggctccta caaatgccat 3 00
cattgcgata aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat 360
ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag 420
caagtggatt gatgtgataa ttcgatcatg gagtcaaaga ttcaaataga ggacctaaca 480
gaactcgccg taaagactgg cgaacagttc atacagagtc tcttacgact caatgacaag 54 0
aagaaaatct tcgtcaacat ggtggagcac gacacgcttg tctactccaa aaatatcaaa 600
gatacagtct cagaagacca aagggcaatt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga 660
aacctcctcg gattccattg cccagctatc tgtcacttta ttgtgaagat agtggaaaag 720
gaaggtggct cctacaaatg ccatcattgc gataaaggaa aggccatcgt tgaagatgcc 780tctgccgacagacgttccaagccatggagtcagttcatacgagcacgacagcaattgagagctatctgtccattgcgataggacccccaccaagtggatttaatgagcattttgaagtgcaatctatagtatggtctaaagtgcatgtgttattagtacacatctatttttttatttaataccctttaagagcctgttaagtcgggccaagagttccgctcggcagacgtcgggggattcacaccccctcccagatctccccccccccccgttctacttcgttcgtacactctctttgggtttttttgtttgcacttgtttctggttgggtattaatttttggatggaaatacagagatgttcgttctagaactgtatgtatctaggatagcagcatctatttataattaatttttttaggctcaccctg
gtggtcccaaccacgtcttccaaagattcaagagtctcttcgcttgtctacttttcaacaactttattgtaaggaaaggcccacgaggaggatgtgatgttgcatgtctaagtttatctaactacaataaggacaattgatctccttttttccatttaggattctattttaatttagataaaattaaaaaacgccgtcgagcgaagcagaccaccgttgggagccggcacctttcccacccacaccctctcccaaatccactctctaccttgttcatgttggatgcgaccgaatcctgggtcgttgcatatgtcgggtcacggtcgttctggatctgtattatcgatctactttttgttcatcggagtaggtgtgtcataggtatacatgttcatatgctttttgatcttccctgccttcttgtttggtg
agatggacccaaagcaagtgaatagaggacacgactcaatctccaaaaataagggtaatagaagatagtgcatcgttgaacatcgtggaactgcagtgcaagttataaaatctttatacatatcagtgttgtattttgacttttgcaaatgtttagggttagcctctaaataaaatagaaaactaaggaacgagtctaaccggcacggcaacttgctccgggcaggcggcgctccttcgcttccccaacccccgtcggcatctctagatctgtgttagattgtacgtcagatggctctaggggtttggtttcttttcatgagatcggagtgtgtgtgccaggataggtatgcttggttgtaatactgtttcatcttcatattgatgtgggctaaccttgagatatacttgatacgctattttacttctgc
ccacccacgagattgatgtgctaacagaacgacaagaagaatcaaagatatccggaaaccgaaaaggaaggatgcctctgaaagaagacggcgtgacccgaattaccacatatatttaaattagagaatcaacaggactcagcttcacctaatggtttttttaagaaaactaaaataaagacatttttctggacaccaactctctgtcgcctgtcggcatctcctcctcctttcccttcctcgtgttgttcctccgcttcggcgttccggccgtgtttgtacacgttctgccgttccgcatgcccttttccttttttttgagaattctgttacatattcaacatgttgatgatgatgtggcaaactacctgttacgagttttttactgatgtacctatctgatgatggcatatttgcttg
ggagcatcgtatatcaagcttcgccgtaaaaaatcttcgtcagtctcagatcctcggattgtggctcctaccgacagtggttccaaccacgtcgtgcccctattttttttctttactctaatataaatgatacagttttaatataatactatagactaattaaaactctatgactaaaaatgtttcgagtcagcgaaccatgcctctggaccagaaattgtctcacggcatcgcccgccgcggagcgcacaaggtacgcctccatggttagttagatccgattgctaactgacgggatcgctttatttcatcttggttgtttcaaactactagttacgaagcgggttttatgtggttgggggtgtatttataagatggatgcatatacatattataataatatgcagcaggtactgtttc
ggaaaaagaatatcgataccgactggcgaacaacatggtgagaccaaaggccattgcccacaaatgccattcccaaagatgtcttcaaagtctctagagagtcacacttgcgaataatatacagttagactctttttagttcatccatttttttttagtattttagttttttaaacaaatagataatgccgcagcgtcgccccctctcgacgtggcggagccggcagctataataaatagacacacacaagctcgtcctcgggcccggtatgctgctagctgccagtgttatttcatgatatatatgccggatgatgtggctggtggattttgaagatgactgatgcatacggtcgttcattaattttggggaaatatcggatggcatatacaagtatgtctatatgtggttttgtcgat
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1560
1620
1680
1740
1800
1860
1920
1980
2040
2100
2160
2220
2280
2340
2400
2460
2520
2580
2640
2700
2760
2820
2880
2940
3000
3060
3120
3180
3240
3300
3331
<210> 13
<211> 2454
<212> DNA
<213> seqüência artificial<220>
<223> intensificador 35S(-): íntron 1 ZmUbi RO-5UTR-ZmUbi;intensificador 35S na direção reversa
<400> 13
atcacatcaa
cctcgtgggt
ctttccttta
aataaagtga
ttgaaaagtc
gacaagcgtg
gagactctgt
tccacttgctgggggtccattcgcaatgatcagatagctgtcaattgccctcgtgctccaatgaactgtt
ttgaagacgtctttgggaccggcatttgtaggcaatggaatttggtcttcccatgttgaccgccagtctt
ggttggaacgactgtcggcaggagccaccttccgaggaggtgagactgtagaagattttctacggcgagt
tcttctttttgaggcatctttccttttccatttccggatatctttgatatttcttgtcattctgttaggt
ccacgatgct 60caacgatggc 120ctatcttcac 180ttaccctttg 240ttttggagta 300tgagtcgtaa 360cctctatttg 420aatctttgacccggtcgtgcacatatttttaaactttactatcatataaactctacagttcctatataattttatagactaactaaaactaagtgactaatcttgtttcgaaccagcgaacgctgcctctcatccagaaatcctctcacgtcctcgcccggttcggagcgttcaaggtaccggtccatggtgtgttagatctgattgctagcagacgggattcctttattttgtcttggttgtttcaaactcatagttacgatgcgggtttggtgtggttcctggtgtatgtttaagatggatgcatatatctattataagcatatgcagttggtactgt
tccatgggaaccctctctagtttgtcacacctacgaataatgaacagttattatctttttacttcatccaaatttttttactattttagtaaattaaacaagtagataatccagcagcgtggacccctctttgcgtggcggcaccggcagccgtaataaacacacacacagccgctcgtcttagggcccgccgtgctgctacttgccagttcgatttcattcaatatatgtgtgatgatgtacctggtgggaattgaagattactgatgcgggcggtcgtttattaatttgatggaaatacatgatggcataaacaagtacagctatatgttcttttgtc
ttcctgcagcagataatgagttgtttgaagtataatctatgacatggtctagtgtgcatgttttattagtgtacatctatttttttatttaataccctttgccagcctgtcgcgtcgggccgagagttccgagcggcagactacgggggatagacacccccaaccagatcctccccccccgtagttctacagcgttcgtagtttctctttgattttttttccgtgcactttggtctggttatttattaattgatggatggatatacagagtcattcgttctggaactgtatcgatctaggtatgcagcattgttttataatggattttttgatgctcacc
ccagcttgcacattgcatgttgcagtttatagtactacaaaaaggacaattgttctccttacatccattttttattctataataatttagaagaaattaataaacgccgtcaagcgaagcgctccaccgtcgtgagccggttcctttcccctccacaccctcccccaaatcccctctctattctgttcatcacggatgcgggggaatcctgtttcgttgcgtttgtcggggggcggtcgttttggatctgaaatatcgatatgctttttgtagatcggagtgtgtgtgtcataggtatacctattcatatttattttgattagccctgccctgttgtttg
tgcctgcagtctaagttatactatctttattaatatcagttgagtatttttttttttgcaagggtttaggtttagcctctatataaaataaaaaactaagcgacgagtctagacggcacgtggacttgctcacggcaggcaccgctcctttctttccccaccacccgtcgccttctctaggtttgtgttaacctgtacgtgggatggctcatagggtttgtcatcttttctctagatcggtatgtgtgtgctaggataggttcgcttggttagaatactgatacatcttcatgttgatgtgctctaacctcttgatatacttcatacgctgtgttacttc
gcagcgtgacaaaaattaccacatatatttgttttagagagacaacaggaaatagcttcagttaatggttaaattaagaagaataaaatagaaacattttaacggacaccgcatctctgtccgctgtcggggcctcctcccgctttccctacctcgtgttgcacctccgcatcggcgttcgatccgtgttcagacacgtttagccgttccgtttgcccttatgcttttttagtagaattcccatacatattatacatgtttgtgatgatgtttcaaactaatagttacgagggttttacttgagtacctattggatgatgatttatttgctgca
4805406006607207808409009601020108011401200126013201380144015001560162016801740180018601920198020402100216022202280234024002454
<210> 14<211> 3359<212> DNA
<213> seqüência artificial<220>
<223> intensificador 35S(-) : íntron 1 ZmUbi RO-5UTR-ZmUbi;intensificador 35S na direção reversa
<400> 14
atcacatcaa
cctcgtgggt
ctttccttta
aataaagtga
ttgaaaagtc
gacaagcgtg
gagactctgt
aatctttgac
tttgaagacg
tctttgggac
tggcatttgt
gggcaatgga
ctttggtctt
accatgttga
tcgccagtct
gaattatcac
tccacttgctgggggtccattcgcaatgatcagatagctgtcaattgccctcgtgctccaatgaactgtttccatggacgtggttggaaccactgtcggcaggagccaccatccgaggagctgagactgtcgaagattttttacggcgagatcaatccac
ttgaagacgtctttgggaccggcatttgtaggcaatggaatttggtcttcccatgttgaccgccagtcttgtatcgataagtcttcttttagaggcatctttccttttccgtttccggatatctttgatacttcttgtcattctgttaggttgctttgaa
ggttggaacgactgtcggcaggagccaccttccgaggaggtgagactgtagaagattttctacggcgagtgctagcttgatccacgatgctcaacgatggactatcttcaattacccttttttttggagtttgagtcgtatcctctatttgacgtggttg
tcttctttttgaggcatctttccttttccatttccggatatctttgatatttcttgtcattctgttaggttatcacatcatcctcgtgggcctttcctttcaataaagtggttgaaaagtagacaagcgtagagactctggaatctttgagaacgtcttc
ccacgatgct 60caacgatggc 120ctatcttcac 180ttaccctttg 240ttttggagta 300tgagtcgtaa 360cctctatttg 420atccacttgc 480tgggggtcca 540atcgcaatga 600acagatagct 660ctcaattgcc 720gtcgtgctcc 780tatgaactgt 840ctccatgatc 900tttttccacg 960atgctcctcg tgggtggggg tccatctttg ggaccactgt cggcagaggc atcttcaacg 102 0atggcctttc ctttatcgca atgatggcat ttgtaggagc caccttcctt ttccactatc 1080ttcacaataa agtgacagat agctgggcaa tggaatccga ggaggtttcc ggatattacc 1140ctttgttgaa aagtctcaat tgccctttgg tcttctgaga ctgtatcttt gatatttttg 1200gagtagacaa gcgtgtcgtg ctccaccatg ttgacgaaga ttttcttctt gtcattgagt 1260cgtaagagac tctgtatgaa ctgttcgcca gtctttacgg cgagttctgt taggtcctct 1320atttgaatct ttgactccat gggaattcct gcagcccagc ttgcatgcct gcagtgcagc 1380gtgacccggt cgtgcccctc tctagagata atgagcattg catgtctaag ttataaaaaa 1440ttaccacata ttttttttgt cacacttgtt tgaagtgcag tttatctatc tttatacata 1500tatttaaact ttactctacg aataatataa tctatagtac tacaataata tcagtgtttt 1560agagaatcat ataaatgaac agttagacat ggtctaaagg acaattgagt attttgacaa 1620caggactcta cagttttatc tttttagtgt gcatgtgttc tccttttttt ttgcaaatag 1680cttcacctat ataatacttc atccatttta ttagtacatc catttagggt ttagggttaa 1740tggtttttat agactaattt ttttagtaca tctattttat tctattttag cctctaaatt 1800aagaaaacta aaactctatt ttagtttttt tatttaataa tttagatata aaatagaata 1860aaataaagtg actaaaaatt aaacaaatac cctttaagaa attaaaaaaa ctaaggaaac 1920atttttcttg tttcgagtag ataatgccag cctgttaaac gccgtcgacg agtctaacgg 1980acaccaacca gcgaaccagc agcgtcgcgt cgggccaagc gaagcagacg gcacggcatc 2040tctgtcgctg cctctggacc cctctcgaga gttccgctcc accgttggac ttgctccgct 2100gtcggcatcc agaaattgcg tggcggagcg gcagacgtga gccggcacgg caggcggcct 2160
cctcctcctc tcacggcacc ggcagctacg ggggattcct ttcccaccgc tccttcgctt 2220tcccttcctc gcccgccgta ataaatagac accccctcca caccctcttt ccccaacctc 2280gtgttgttcg gagcgcacac acacacaacc agatctcccc caaatccacc cgtcggcacc 2340tccgcttcaa ggtacgccgc tcgtcctccc ccccccccct ctctaccttc tctagatcgg 2400cgttccggtc catggttagg gcccggtagt tctacttctg ttcatgtttg tgttagatcc 2460gtgtttgtgt tagatccgtg ctgctagcgt tcgtacacgg atgcgacctg tacgtcagac 2520acgttctgat tgctaacttg ccagtgtttc tctttgggga atcctgggat ggctctagcc 2580gttccgcaga cgggatcgat ttcatgattt tttttgtttc gttgcatagg gtttggtttg 2640cccttttcct ttatttcaat atatgccgtg cacttgtttg tcgggtcatc ttttcatgct 2700
tttttttgtc ttggttgtga tgatgtggtc tggttgggcg gtcgttctag atcggagtag 2760
aattctgttt caaactacct ggtggattta ttaattttgg atctgtatgt gtgtgccata 2820catattcata gttacgaatt gaagatgatg gatggaaata tcgatctagg ataggtatac 2880atgttgatgc gggttttact gatgcatata cagagatgct ttttgttcgc ttggttgtga 2940tgatgtggtg tggttgggcg gtcgttcatt cgttctagat cggagtagaa tactgtttca 3000
aactacctgg tgtatttatt aattttggaa ctgtatgtgt gtgtcataca tcttcatagt 3060
tacgagttta agatggatgg aaatatcgat ctaggatagg tatacatgtt gatgtgggtt 312 0ttactgatgc atatacatga tggcatatgc agcatctatt catatgctct aaccttgagt 3180acctatctat tataataaac aagtatgttt tataattatt ttgatcttga tatacttgga 3240tgatggcata tgcagcagct atatgtggat ttttttagcc ctgccttcat acgctattta 3300
tttgcttggt actgtttctt ttgtcgatgc tcaccctgtt gtttggtgtt acttctgca 3359
<210> 15<211> 1340<212> DNA<213> seqüência artificial
<220>
<223> intensifiçador 35S 3X na direção adiante<400> 15
cccatggagt caaagattca aatagaggac ctaacagaac tcgccgtaaa gactggcgaa 60
cagttcatac agagtctctt acgactcaat gacaagaaga aaatcttcgt caacatggtg 12 0
gagcacgaca cgcttgtcta ctccaaaaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg 180
gcaattgaga cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc tcctcggatt ccattgccca 240
gctatctgtc actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag gtggctccta caaatgccat 300
cattgcgata aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat 360
ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag 420
caagtggatt gatgtgataa ttcgatcatg gagtcaaaga ttcaaataga ggacctaaca 480
gaactcgccg taaagactgg cgaacagttc atacagagtc tcttacgact caatgacaag 54 0
aagaaaatct tcgtcaacat ggtggagcac gacacgcttg tctactccaa aaatatcaaa 600
gatacagtct cagaagacca aagggcaatt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga 660aacctcctcggaaggtggcttctgccgacagacgttccaagccatggagtcagttcatacgagcacgacagcaattgagagctatctgtccattgcgataggacccccaccaagtggatt
gattccattgcctacaaatggtggtcccaaccacgtcttccaaagattcaagagtctcttcgcttgtctacttttcaacaactttattgtaaggaaaggcccacgaggaggatgtgatgt
cccagctatcccatcattgcagatggacccaaagcaagtgaatagaggacacgactcaatctccaaaaataagggtaatagaagatagtgcatcgttgaacatcgtggaa
tgtcactttagataaaggaaccacccacgagattgatgtgctaacagaacgacaagaagaatcaaagatatccggaaaccgaaaaggaaggatgcctctgaaagaagacg
ttgtgaagataggccatcgtggagcatcgtatatcaagcttcgccgtaaaaaatcttcgtcagtctcagatcctcggattgtggctcctaccgacagtggttccaaccac
agtggaaaagtgaagatgccggaaaaagaatatcgataccgactggcgaacaacatggtgagaccaaaggccattgcccacaaatgccattcccaaagatgtcttcaaag
7207808409009601020108011401200126013201340
<210> 16<211> 438<212> DNA
<213> Vírus mosaico de couve-flor<220>
<221> misc_feature<222> (0) . . . (0)
<223> intensificador 35S IX na direção reversa
<400> 16
atcacatcaa
cctcgtgggt
ctttccttta
aataaagtga
ttgaaaagtc
gacaagcgtg
gagactctgt
aatctttgac
tccacttgctgggggtccattcgcaatgatcagatagctgtcaattgccctcgtgctccaatgaactgtttccatggg
ttgaagacgtctttgggaccggcatttgtaggcaatggaatttggtcttcccatgttgaccgccagtctt
ggttggaacgactgtcggcaggagccaccttccgaggaggtgagactgtagaagattttctacggcgagt
tcttctttttgaggcatctttccttttccatttccggatatctttgatatttcttgtcattctgttaggt
ccacgatgct 60caacgatggc 12 0ctatcttcac 180ttaccctttg 240ttttggagta 300tgagtcgtaa 3 60cctctatttg 420438
<210> 17
<211> 1344
<212> DNA
<213> seqüência artificial<220>
<223> intensificador 35S 3X na direção adiante
<400> 17
cccatggagt
cagttcatac
gagcacgaca
gcaattgaga
gctatctgtc
cattgcgata
ggacccccac
caagtggatt
gaactcgccg
aagaaaatct
gatacagtct
aacctcctcg
gaaggtggct
tctgccgaca
gacgttccaa
taccgtccat
gcgaacagtt
tggtggagca
aaagggcaat
caaagattcaagagtctcttcgcttgtctacttttcaacaactttattgtaaggaaaggcccacgaggaggatgtgataataaagactggtcgtcaacatcagaagaccagattccattgcctacaaatggtggtcccaaccacgtcttcggagtcaaagcatacagagtcgacacgctttgagactttt
aatagaggacacgactcaatctccaaaaataagggtaatagaagatagtgcatcgttgaacatcgtggaattcgatcatgcgaacagttcggtggagcacaagggcaattcccagctatcccatcattgcagatggacccaaagcaagtgattcaaatagctcttacgacgtctactccacaacaaaggg
ctaacagaacgacaagaagaatcaaagatatccggaaaccgaaaaggaaggatgcctctgaaagaagacggagtcaaagaatacagagtcgacacgcttggagacttttctgtcactttagataaaggaaccacccacgagattgatgtgaggacctaactcaatgacaaaaaatatcaataatatccgg
tcgccgtaaaaaatcttcgtcagtctcagatcctcggattgtggctcctaccgacagtggttccaaccacttcaaatagatcttacgacttctactccaaaacaaagggtttgtgaagataggccatcgtggagcatcgtatatcaagctagaactcgccgaagaaaatcagatacagtcaaacctcctc
gactggcgaacaacatggtgagaccaaaggccattgcccacaaatgccattcccaaagatgtcttcaaagggacctaacacaatgacaagaaatatcaaaaatatccggaagtggaaaagtgaagatgccggaaaaagaaagcttatcgagtaaagactgttcgtcaacatcagaagaccggattccatt
120180240300360420480540600660720780840900960102010801140gcccagctat ctgtcacttt attgtgaaga tagtggaaaa ggaaggtggc tcctacaaat 1200gccatcattg cgataaagga aaggccatcg ttgaagatgc ctctgccgac agtggtccca 1260aagatggacc cccacccacg aggagcatcg tggaaaaaga agacgttcca accacgtctt 1320caaagcaagt ggattgatgt gatg 1344
<210> 18<211> 1344<212> DNA
<213> seqüência artificial<220>
<223> intensificador 35S 3X na direção reversa
<400> 18
catcacatca
tcctcgtggg
cctttccttt
caataaagtg
gttgaaaagt
agacaagcgt
agagactctg
gaatctttga
ctttgaagac
atctttggga
atggcatttg
tgggcaatgg
cctttggtct
caccatgttg
ttcgccagtc
cgaattatca
gatgctcctc
gatggccttt
cttcacaata
cctttgttga
ggagtagaca
tcgtaagaga
tatttgaatc
atccacttgctgggggtccaatcgcaatgaacagatagctctcaattgccgtcgtgctcctatgaactgtctccatggacgtggttggaaccactgtcggtaggagccacaatccgaggatctgagactgacgaagattttttacggcgacatcaatccagtgggtggggcctttatcgcaagtgacagaaaagtctcaaagcgtgtcgtctctgtatgatttgactcca
tttgaagacgtctttgggactggcatttgtgggcaatggactttggtcttaccatgttgatcgccagtctggtatcgatacgtcttctttcagaggcatccttccttttcggtttccggatatctttgattcttcttgtcgttctgttagcttgctttgagtccatctttaatgatggcatagctgggcattgccctttggctccaccatactgttcgcctggg
tggttggaaccactgtcggcaggagccaccatccgaggagctgagactgtcgaagattttttacggcgagagctagcttgttccacgatgttcaacgatgcactatcttctattacccttatttttggagattgagtcgtgtcctctattagacgtggttgggaccactgtttgtaggagatggaatccggtcttctgaggttgacgaagagtctttacg
gtcttctttt tccacgatgcagaggcatct tcaacgatggttccttttcc actatcttca
gtttccggatatctttgatacttcttgtcattctgttaggatatcacatcctcctcgtgggcctttccttacaataaagttgttgaaaagtagacaagcgaagagactcttgaatctttgggaacgtctttcggcagaggccaccttcct
attacccttttttttggagtttgagtcgtatcctctatttaatccacttggtgggggtcctatcgcaatggacagatagctctcaattgctgtcgtgctcgtatgaactgactccatgatctttttccaccatcttcaactttccactat
aggaggtttc cggatattacactgtatctt tgatatttttattttcttct tgtcattgaggcgagttctg ttaggtcctc
601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401200126013201344

Claims (47)

1. Método para a expressão de um polinucleotídeo deinteresse caracterizado pelo fato de que compreende aintrodução em uma célula de pelo menos uma construção deDNA que compreende uma região reguladora de transcriçãoquimérica que compreende pelo menos um domíniointensificador operacionalmente ligado a um promotorheterólogo, a referida região reguladora de transcriçãoquimérica operacionalmente ligada ao polinucleotídeo deinteresse, em que o referido domínio intensificador éselecionado do grupo que consiste em:(a) a seqüência de nucleotídeos que compreende Id. deSeq. N°: 1, 17;(b) a seqüência de nucleotídeos que compreende pelomenos 95% de identidade de seqüência a Id. de Seq. Nc: 1 ou 17, em que o referido polinucleotídeo tem atividadereguladora de transcrição; e,(c) a seqüência de nucleotídeos que compreende pelomenos 100 nucleotídeos consecutivos de Id. de Seq. N°: 1 ou 17.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o referido domíniointensificador não compreende a seqüência apresentada emId. de Seq. N0:5.
3. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que areferida região reguladora de transcrição quiméricacompreende pelo menos duas cópias ou pelo menos três cópiasdo referido intensificador.
4. Método, de acordo com a reivindicação 3,caracterizado pelo fato de quea) as referidas cópias do referido intensificadorsão imediatamente adjacentes uma a outra; ou,b) pelo menos um dos referidos intensificadores estáorientado na orientação adiante ou reversa com relação aoreferido promotor.
5. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, ou 4, caracterizado pelo fato deque o referido polinucleotideo de interesse codifica umpolipeptideo.
6. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, ou 5, caracterizado pelo fato deque o referido polinucleotideo de interesse compreende ummarcador selecionável.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que o referido marcadorselecionável compreende um polinucleotideo que conferetolerância a um herbicida.
8. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caracterizado pelofato de que a referida célula é uma célula de planta.
9. Método, de acordo com a reivindicação 7,caracterizado pelo fato de que o referido método tambémcompreende o cultivo da referida célula em um meio quecompreende uma concentração eficaz do herbicida.
10. Método, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de que a referida célula de plantaé de uma dicotiledônea.
11. Método, de acordo com a reivindicação 10,caracterizado pelo fato de que a referida dicotiledônea ésoja, trigo, canola, girassol, algodão ou alfafa.
12. Método, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de que a referida célula de plantaé de uma monocotiledônea.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12,caracterizado pelo fato de que a referida monocotiledônea émilho, trigo, arroz, cevada, sorgo ou centeio.
14. Método para selecionar uma célula que tem umpolinucleotídeo de interesse caracterizado pelo fato de quecompreendea) o fornecimento de uma população de células;b) a introdução em pelo menos uma célula da referidapopulação de uma construção de DNA que compreende opolinucleotídeo de interesse e também que compreende umaregião reguladora de transcrição quimérica que compreendepelo menos um domínio intensificador operacionalmenteligado a um primeiro promotor heterólogo, a referida regiãoreguladora de transcrição quimérica operacionalmente ligadaa um marcador selecionável, em que o referido domíniointensificador é selecionado do grupo que consiste em:i) a seqüência de nucleotídeos que compreendeId. de Seq. N0:1 ou 17;ii) a seqüência de nucleotídeos que compreendepelo menos 95% de identidade de seqüência a Id. de Seq. N°:-1 ou 17, em que o referido polinucleotídeo tem atividadetranscricional reguladora; e,iii) a seqüência de nucleotídeos que compreendepelo menos 100 nucleotídeos consecutivos de Id. de Seq. N°: 1 ou 17;c) o contato da referida população de células comuma concentração eficaz de um agente de seleção adequado;e,d) seleção da planta que expressa o referidomarcador selecionável, e dessa forma identificação dasplantas que têm o polinucleotídeo de interesse.
15. Método, de acordo com a reivindicação 14,caracterizado pelo fato de que o referido domíniointensificador não compreende a seqüência apresentada emId. de Seq. N°:5.
16. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que areferida região reguladora de transcrição quiméricacompreende pelo menos duas cópias ou pelo menos três cópiasdo referido intensificador.
17. Método, de acordo com a reivindicação 16,caracterizado pelo fato de quea) as cópias do referido intensificador sãoimediatamente adjacentes uma a outra; ou,b) pelo menos um dos referidos intensificadores estáorientado na orientação adiante ou reversa com relação aoreferido promotor.
18. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 14, 15, 16 ou 17, caracterizado pelo fato deque o referido marcador selecionável codifica umpolipeptídeo que confere tolerância a um herbicida.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18,caracterizado pelo fato de que o referido agente seletivocompreende um herbicida.
20. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 14, 15, 16, 17, 18 ou 19, caracterizado pelofato de que a referida célula compreende uma célula deplanta.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que a referida célula de plantaé de uma dicotiledônea.
22. Método, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que a referida dicotiledônea ésoja, trigo, canola, girassol, algodão ou alfafa.
23. Método, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que a referida célula de plantaé de uma monocotiledônea.
24. Método, de acordo com a reivindicação 23,caracterizado pelo fato de que a referida monocotiledônea émilho, trigo, arroz, cevada, sorgo ou centeio.
25. Método, de acordo com a reivindicação 14,caracterizado pelo fato de que a referida construção de DNAcompreende na orientação 5' a 3' ou 3' a 5': o primeiropolinucleotídeo de interesse operacionalmente ligado a umsegundo promotor heterólogo, operacionalmente ligado a pelomenos um dos referidos domínios intensificadores,operacionalmente ligado ao primeiro promotor heterólogo,operacionalmente ligado ao marcador selecionável, em que oreferido primeiro polinucleotídeo de interesse e o referidomarcador selecionável são expressos em direçõesdivergentes.
26. Polinucleotídeo caracterizado por compreender umelemento regulador de transcrição quimérico que compreendeum promotor que dirige a expressão em uma célulaoperacionalmente ligada a pelo menos uma cópia de umdomínio intensificador heterólogo em que o referido domíniointensificador é selecionado do grupo que consiste em:(a) a seqüência de nucleotídeos que compreende Id. deSeq. N0: 1 ou 10;(b) a seqüência de nucleotídeos que compreende pelomenos 95% de identidade de seqüência a Id. de Seq. N°:1 ou-17, em que o referido polinucleotídeo tem atividadetranscricional reguladora; e,(c) a seqüência de nucleotídeos que compreende pelomenos 100 nucleotídeos consecutivos de Id. de Seq. N0:1 ou-17.
27. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação-26, caracterizado pelo fato de que e o referido domíniointensificador não compreende a seqüência de Id. de Seq.N0 : 5 .
28. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 26 ou 27, caracterizado pelo fato de que areferida região reguladora de transcrição quiméricacompreende pelo menos duas cópias ou pelo menos três cópiasdo referido intensificador.
29. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação-27, caracterizado pelo fato de quea) as cópias do referido intensificador sãoimediatamente adjacentes uma a outra;b) pelo menos um dos referidos intensificadores estáorientado na orientação adiante ou reversa com relação aoreferido promotor.
30. Vetor de expressão caracterizado por compreendero polinucleotídeo de qualquer uma das reivindicações 26,-27, 28 ou 29.
31. Célula caracterizada por compreender opolinucleotídeo de qualquer uma das reivindicações 26, 27,- 28, 2 9 ou 30.
32. Célula, de acordo com a reivindicação 31,caracterizada pelo fato de que a referida célula é umacélula de planta.
33. Célula, de acordo com a reivindicação 32,caracterizada pelo fato de que a referida célula de plantaé de uma dicotiledônea.
34. Célula, de acordo com a reivindicação 33,caracterizada pelo fato de que a referida dicotiledônea ésoja, trigo, canola, girassol, algodão ou alfafa.
35. Célula, de acordo com a reivindicação 32,caracterizada pelo fato de que a referida célula de plantaé de uma monocotiledônea.
36. Célula, de acordo com a reivindicação 35,caracterizada pelo fato de que a referida monocotiledônea émilho, trigo, arroz, cevada, sorgo ou centeio.
37. Planta caracterizada por compreender opolinucleotídeo de qualquer uma das reivindicações 26, 27,- 28 ou 29.
38. Planta, de acordo com a reivindicação 37,caracterizada pelo fato de que a referida planta é umadicotiledônea.
39. Planta, de acordo com a reivindicação 38,caracterizada pelo fato de que a referida dicotiledônea ésoja, trigo, canola, girassol, algodão ou alfafa.
40. Planta, de acordo com a reivindicação 37,caracterizada pelo fato de que a referida planta é umamonocotiledônea.
41. Planta, de acordo com a reivindicação 40,caracterizada pelo fato de que a referida monocotiledônea émilho, trigo, arroz, cevada, sorgo ou centeio.
42. Método para melhoria da eficiência datransformação, com o aumento de um evento de integração decópia única, ou aumento da eficácia de transformação de umaplanta caracterizado pelo fato de que compreende:a) a introdução na planta de um cassete quecompreende uma região reguladora de transcrição quiméricaque compreende pelo menos um domínio intensificadoroperacionalmente ligado a um promotor heterólogo, areferida região reguladora de transcrição quiméricaoperacionalmente ligada a um marcador selecionável em que oreferido domínio intensificador é selecionado do grupo queconsiste em:i) a seqüência de nucleotídeos que compreendeId. de Seq. N0:1 ou 17;ii) a seqüência de nucleotídeos que compreendepelo menos 95% de identidade de seqüência a Id. de Seq. N°:-1 ou 17, em que o referido polinucleotídeo tem atividadetranscricional reguladora; e,iii) a seqüência de nucleotídeos que compreendepelo menos 100 nucleotídeos consecutivos de Id. de Seq. N0: 1 ou 17;b) contato da referida planta com uma concentraçãoeficaz de um agente de seleção adequado; e,c) seleção da planta que expressa o referidomarcador selecionável.
43. Método, de acordo com a reivindicação 42,caracterizado pelo fato de que o referido intensificadornão compreende a seqüência apresentada em Id. de Seq. N°:
44. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 42 ou 43, caracterizado pelo fato de que areferida região reguladora de transcrição quiméricacompreende pelo menos duas cópias ou pelo menos três cópiasdo referido intensificador.
45. Método, de acordo com a reivindicação 44,caracterizado pelo fato de quea) as cópias do referido intensificador sãoimediatamente adjacentes uma a outra;b) pelo menos um dos referidos intensificadores estáorientado na orientação adiante ou reversa com relação aoreferido promotor.
46. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 42, 43, 44 ou 45, caracterizado pelo fato deque o referido cassete também compreende um polinucleotídeode interesse.
47. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 42, 43, 44, 45 ou 46, caracterizado pelofato de que o referido marcador selecionável conferetolerância a um herbicida.
BRPI0615087-0A 2005-08-24 2006-08-22 métodos e composições para a expressão de um polinucleotìdeo de interesse BRPI0615087A2 (pt)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US71085405P 2005-08-24 2005-08-24
US60/710.854 2005-08-24
US81701106P 2006-06-28 2006-06-28
US60/817.011 2006-06-28
PCT/US2006/032792 WO2007024866A2 (en) 2005-08-24 2006-08-22 Methods and compositions for the expression of a polynucleotide of interest

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BRPI0615087A2 true BRPI0615087A2 (pt) 2011-05-03

Family

ID=37772256

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0615088-8A BRPI0615088A2 (pt) 2005-08-24 2006-08-22 composições que fornecem toleráncia a herbicidas múltiplos e métodos de uso das mesmas
BRPI0615087-0A BRPI0615087A2 (pt) 2005-08-24 2006-08-22 métodos e composições para a expressão de um polinucleotìdeo de interesse

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0615088-8A BRPI0615088A2 (pt) 2005-08-24 2006-08-22 composições que fornecem toleráncia a herbicidas múltiplos e métodos de uso das mesmas

Country Status (22)

Country Link
US (8) US7973218B2 (pt)
EP (2) EP1931791B1 (pt)
JP (1) JP2009505654A (pt)
KR (1) KR20080052606A (pt)
AP (1) AP2008004392A0 (pt)
AR (2) AR057091A1 (pt)
AT (1) ATE544861T1 (pt)
AU (1) AU2006283504B2 (pt)
BR (2) BRPI0615088A2 (pt)
CA (2) CA2625371C (pt)
CL (1) CL2009001635A1 (pt)
CR (1) CR9757A (pt)
EA (2) EA201000757A1 (pt)
EC (1) ECSP088304A (pt)
MA (1) MA29777B1 (pt)
ME (1) MEP3508A (pt)
MX (2) MX2008002615A (pt)
NZ (1) NZ568867A (pt)
RS (1) RS20080076A (pt)
TW (1) TW200730625A (pt)
UY (1) UY29761A1 (pt)
WO (2) WO2007024782A2 (pt)

Families Citing this family (625)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7462481B2 (en) * 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
MXPA06011412A (es) * 2004-03-30 2007-01-23 Monsanto Technology Llc Metodos para controlar patogenos en plantas utilizando n-fosfonometilglicina.
US20070197474A1 (en) * 2004-03-30 2007-08-23 Clinton William P Methods for controlling plants pathogens using N-phosphonomethylglycine
US7405074B2 (en) 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
US8314290B2 (en) 2004-12-21 2012-11-20 Monsanto Technology Llc Temporal regulation of gene expression by MicroRNAs
US7973218B2 (en) * 2005-08-24 2011-07-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for controlling weeds
WO2007146678A1 (en) 2006-06-06 2007-12-21 Monsanto Technology Llc Method for selection of transformed cells
US7855326B2 (en) 2006-06-06 2010-12-21 Monsanto Technology Llc Methods for weed control using plants having dicamba-degrading enzymatic activity
US7951995B2 (en) * 2006-06-28 2011-05-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and detection thereof
US7968770B2 (en) 2006-06-28 2011-06-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for improving yield using soybean event 3560.4.3.5
ES2655700T3 (es) 2006-08-31 2018-02-21 Monsanto Technology, Llc ARN pequeños en fase
US7939721B2 (en) 2006-10-25 2011-05-10 Monsanto Technology Llc Cropping systems for managing weeds
US7897846B2 (en) * 2006-10-30 2011-03-01 Pioneer Hi-Bred Int'l, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
US7928296B2 (en) * 2006-10-30 2011-04-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
CL2007003744A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un derivado 2-piridilmetilbenzamida y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
CL2007003743A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende fenamidona y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
US7838729B2 (en) * 2007-02-26 2010-11-23 Monsanto Technology Llc Chloroplast transit peptides for efficient targeting of DMO and uses thereof
EP1969931A1 (de) * 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Fluoalkylphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
US8080688B2 (en) 2007-03-12 2011-12-20 Bayer Cropscience Ag 3, 4-disubstituted phenoxyphenylamidines and use thereof as fungicides
EP1969930A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
US9199922B2 (en) 2007-03-12 2015-12-01 Bayer Intellectual Property Gmbh Dihalophenoxyphenylamidines and use thereof as fungicides
EP1969934A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG 4-Cycloalkyl-oder 4-arylsubstituierte Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969929A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Substituierte Phenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
JP2008237025A (ja) * 2007-03-23 2008-10-09 Research Institute Of Innovative Technology For The Earth 植物において根特異的に発現誘導するプロモーターおよびその利用
CN101663285A (zh) * 2007-04-19 2010-03-03 拜尔农作物科学股份公司 噻二唑基羟苯基脒及其用作杀菌剂的用途
CA2688682A1 (en) * 2007-05-30 2008-12-11 Syngenta Participations Ag Cytochrome p450 genes conferring herbicide resistance
MX2010000923A (es) * 2007-07-23 2010-06-02 Gowan Co Procesos mejorados para el control de vegetacion indeseada.
DE102007045920B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistische Wirkstoffkombinationen
DE102007045956A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045919B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045953B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045922A1 (de) 2007-09-26 2009-04-02 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045955A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045957A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akarziden Eigenschaften
EP2090168A1 (de) 2008-02-12 2009-08-19 Bayer CropScience AG Methode zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2052604A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Salz des 2-lodo-N-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl] benzolsulfonamids,Verfahren zu deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumregulatoren
EP2052603A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Verwendung des 2-lodo-N-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl] benzolsulfonamids und/oder dessen Salze zur Bekämpfung von unerwünschtem Pflanzenwuchs in ausgewählten Nutzpflanzenkulten oder Nichtkulturland
US8097712B2 (en) 2007-11-07 2012-01-17 Beelogics Inc. Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof
EP2064952A1 (en) 2007-11-29 2009-06-03 Bayer CropScience AG Method for reducing mycotoxin contamination in maize
EP2070411A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070414A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070413A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070415A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2072506A1 (de) 2007-12-21 2009-06-24 Bayer CropScience AG Thiazolyloxyphenylamidine oder Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
US20090203526A1 (en) * 2008-02-12 2009-08-13 Arysta Lifescience North America, Llc Method of controlling unwanted vegetation
EP2092824A1 (de) 2008-02-25 2009-08-26 Bayer CropScience AG Heterocyclyl-Pyrimidine
EP2103615A1 (de) 2008-03-19 2009-09-23 Bayer CropScience AG 4'4'-Dioxaspiro-spirocyclisch substituierte Tetramate
EP2103216A1 (de) 2008-03-19 2009-09-23 Bayer CropScience AG Ausgewählte Salze des 3-(5,6-dihydro-1,4,2-dioxazin-3-yl)-N-[(4,6-dimethoxypyrimidin-2-yl)carbamoyl] pyridin-2-sulfonamids, Verfahren zur deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
US8569509B2 (en) 2008-04-30 2013-10-29 Bayer Intellectual Property Gmbh Thiazole-4-carboxylic acid esters and thioesters as plant protection agents
EP2288254B1 (en) * 2008-05-06 2016-11-30 Agriculture Victoria Services Pty Ltd Herbicide resistant barley
EA019002B1 (ru) 2008-06-27 2013-12-30 Байер Кропсайенс Аг Тиадиазолилоксифениламидины, их получение и применение для борьбы с нежелательными микроорганизмами
EP2168434A1 (de) 2008-08-02 2010-03-31 Bayer CropScience AG Verwendung von Azolen zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
JP2011530276A (ja) 2008-08-08 2011-12-22 バイエル・バイオサイエンス・エヌ・ヴェー 植物繊維を特性解析および同定する方法
CA2733958A1 (en) 2008-08-14 2010-02-18 Bayer Cropscience Ag Insecticidal 4-phenyl-1h-pyrazoles
DE102008041695A1 (de) 2008-08-29 2010-03-04 Bayer Cropscience Ag Methoden zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2161259A1 (de) 2008-09-03 2010-03-10 Bayer CropScience AG 4-Halogenalkylsubstituierte Diaminopyrimidine als Fungizide
PE20100269A1 (es) * 2008-09-05 2010-04-30 TransAlgae Ltd Resistencia a herbicida para mantener cultivos axenicos por manipulacion genetica
US8367392B2 (en) * 2008-09-05 2013-02-05 Transalgae Ltd. Genetic transformation of algal and cyanobacteria cells by microporation
GB0816880D0 (en) * 2008-09-15 2008-10-22 Syngenta Ltd Improvements in or relating to organic compounds
BRPI0920767B1 (pt) * 2008-10-01 2018-07-17 Bayer Intellectual Property Gmbh tiazóis substituídos por heterociclila como agentes protetores de cultura, seus usos e seus processos de preparação, composições e seu processo de preparação, e método para combate a fungos nocivos fitopatogênicos
AP2674A (en) 2008-10-15 2013-05-23 Bayer Cropscience Ag Use of dithiin tetracarboximides for treating phytopathogenic fungi
UA106052C2 (uk) * 2008-10-21 2014-07-25 Басф Се Застосування карбоксамідів на культивованих рослинах
AR075465A1 (es) * 2008-10-22 2011-04-06 Basf Se Uso de herbicidas de sulfonilurea en plantas cultivadas
AR075469A1 (es) * 2008-10-22 2011-04-06 Basf Se Uso de inhibidores de acetolactato sintasa en plantas cultivadas
WO2010046420A2 (en) * 2008-10-22 2010-04-29 Basf Se Use of protoporphyrinogen oxidase inhibitors on cultivated plants
EP2184273A1 (de) 2008-11-05 2010-05-12 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide
TW201031327A (en) 2008-11-14 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations having insecticidal and acaricidal properties
EP2201838A1 (de) 2008-12-05 2010-06-30 Bayer CropScience AG Wirkstoff-Nützlings-Kombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2376487B1 (de) 2008-12-11 2016-01-06 Bayer Intellectual Property GmbH Thiazolyoximether und -hydrazone als pflanzenschutzmittel
WO2010069495A1 (de) * 2008-12-18 2010-06-24 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Atpenine
EP2198710A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verwendung von 5-Pyridin-4yl-(1,3)Thiazole zur Bekämpfung phytopathogener Pilze
EP2198709A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verfahren zur Bekämpfung resistenter tierischer Schädlinge
US9763451B2 (en) 2008-12-29 2017-09-19 Bayer Intellectual Property Gmbh Method for improved use of the production potential of genetically modified plants
EP2204094A1 (en) 2008-12-29 2010-07-07 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants Introduction
EP2223602A1 (de) 2009-02-23 2010-09-01 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials genetisch modifizierter Pflanzen
EP2039770A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039771A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039772A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants introduction
WO2010081646A2 (de) 2009-01-15 2010-07-22 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungizide wirkstoffkombinationen
WO2010081645A2 (de) 2009-01-15 2010-07-22 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungizide wirkstoffkombinationen
EP2387309A2 (en) 2009-01-19 2011-11-23 Bayer CropScience AG Cyclic diones and their use as insecticides, acaricides and/or fungicides
EP3156489B1 (en) * 2009-01-22 2019-03-06 Syngenta Participations Ag Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
EP2227951A1 (de) 2009-01-23 2010-09-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren
ES2406131T3 (es) 2009-01-28 2013-06-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Derivados fungicidas de N-cicloalquil-N-biciclometileno-carboxamina
AR075126A1 (es) 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
EP2223917A1 (de) 2009-02-02 2010-09-01 Bayer CropScience AG Isothiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2393363B1 (de) 2009-02-03 2013-11-06 Bayer CropScience AG Verwendung von einem schwefelhaltigen heteroaromatischen säureanalogon als ein bakterizid
EP2218717A1 (en) 2009-02-17 2010-08-18 Bayer CropScience AG Fungicidal N-((HET)Arylethyl)thiocarboxamide derivatives
WO2010094666A2 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Bayer Cropscience Ag Fungicidal n-(phenylcycloalkyl)carboxamide, n-(benzylcycloalkyl)carboxamide and thiocarboxamide derivatives
ES2344185B1 (es) * 2009-02-18 2011-08-11 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas (Csic) (95%) Uso de una secuencia nucleotidica que regula el momento de la floracion, plantas que la expresan y metodo para producirlas.
TW201031331A (en) 2009-02-19 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Pesticide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a fungicide or an insecticide active substance
DE102009001469A1 (de) 2009-03-11 2009-09-24 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
MX338802B (es) 2009-03-11 2016-05-02 Bayer Cropscience Ag Cetoenoles sustituidos con haloalquilmetilenoxi-fenilo.
DE102010000662A1 (de) 2009-03-18 2010-10-21 Bayer Cropscience Ag Aminopropylthiazol-Derivate als Fungizide
DE102009001681A1 (de) 2009-03-20 2010-09-23 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001730A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001732A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001728A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
KR101647703B1 (ko) 2009-03-25 2016-08-11 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 상승적 활성 성분 배합물
EP2232995A1 (de) 2009-03-25 2010-09-29 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
CN102448304B (zh) 2009-03-25 2015-03-11 拜尔农作物科学股份公司 具有杀昆虫和杀螨特性的活性成分结合物
CN102361555B (zh) 2009-03-25 2014-05-28 拜尔农作物科学股份公司 具有杀昆虫和杀螨特性的活性化合物结合物
BRPI0924986A8 (pt) 2009-03-25 2016-06-21 Bayer Cropscience Ag "combinações de substâncias ativas com propriedades inseticidas e acaricidas, seus usos e método para o controle de pragas animais".
EP2239331A1 (en) 2009-04-07 2010-10-13 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
JP5771189B2 (ja) 2009-05-06 2015-08-26 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ シクロペンタンジオン化合物、ならびにこの殺虫剤、殺ダニ剤および／または抗真菌剤としての使用
AR076839A1 (es) 2009-05-15 2011-07-13 Bayer Cropscience Ag Derivados fungicidas de pirazol carboxamidas
EP2251331A1 (en) 2009-05-15 2010-11-17 Bayer CropScience AG Fungicide pyrazole carboxamides derivatives
WO2010135324A1 (en) * 2009-05-18 2010-11-25 Monsanto Technology Llc Use of glyphosate for disease suppression and yield enhancement in soybean
JP5892927B2 (ja) 2009-05-19 2016-03-23 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 除草活性を有するスピロヘテロ環式テトロン酸誘導体
EP2253617A1 (de) 2009-05-20 2010-11-24 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide
EP2255626A1 (de) 2009-05-27 2010-12-01 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat Dehydrogenase Inhibitoren zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
EA023833B1 (ru) 2009-06-02 2016-07-29 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Применение ингибиторов сукцинатдегидрогеназы для контроля sclerotinia ssp.
EP2264012A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2264010A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Hetarylamidine
EP2264011A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide
CN102803496A (zh) 2009-06-10 2012-11-28 淡马锡生命科学研究院有限公司 用于棉花中基因功能性分析的病毒诱导的基因沉默(vigs)
CA2758247A1 (en) * 2009-06-15 2010-12-23 Huttenbauer, Samuel, Jr. Herbicide resistant camelina sativa
WO2010145789A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Bayer Cropscience Ag Propargyloxybenzamide derivatives
EP2272846A1 (de) 2009-06-23 2011-01-12 Bayer CropScience AG Thiazolylpiperidin Derivate als Fungizide
EP2277868A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Phenyloxy(thio)phenylamidbenzoxa(thia)zole
EP2277869A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Cycloalkylamidbenzoxa(thia)zole als Fungizide
EP2277870A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Substituierte Benzoxa(thia)zole
WO2011005823A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Castle Linda A Crystal structure of glyphosate acetyltransferase (glyat) and methods of use
WO2011003528A2 (de) 2009-07-08 2011-01-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Substituierte phenyl(oxy/thio)alkanol-derivate
CN104262272A (zh) 2009-07-08 2015-01-07 拜耳作物科学公司 苯基(氧基/硫基)烷醇衍生物
CN102510721B (zh) 2009-07-16 2014-11-19 拜尔农作物科学股份公司 含苯基三唑的协同活性物质结合物
WO2011006604A1 (de) 2009-07-17 2011-01-20 Bayer Cropscience Ag Substituierte aminothiazole und deren verwendung als fungizide
WO2011015524A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Bayer Cropscience Ag Fungicide heterocycles derivatives
TW201113376A (en) * 2009-09-01 2011-04-16 Basf Agrochemical Products Bv Herbicide-tolerant plants
US11096345B2 (en) 2009-09-01 2021-08-24 Basf Se Method for treating post-emergent rice
EP2292094A1 (en) 2009-09-02 2011-03-09 Bayer CropScience AG Active compound combinations
AR077956A1 (es) 2009-09-14 2011-10-05 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
WO2011032656A1 (de) 2009-09-18 2011-03-24 Bayer Cropscience Ag 5-fluor-2-thio-substituierte pyrimidin-derivate
US20110081706A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 TransAlgae Ltd Method and system for efficient harvesting of microalgae and cyanobacteria
CA2775093A1 (en) 2009-10-02 2011-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Down-regulation of acc synthase for improved plant performance
EP2308866A1 (de) 2009-10-09 2011-04-13 Bayer CropScience AG Phenylpyri(mi)dinylpyrazole und ihre Verwendung als Fungizide
US8962584B2 (en) 2009-10-14 2015-02-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Compositions for controlling Varroa mites in bees
BR112012006841B8 (pt) 2009-10-15 2021-06-08 Bayer Cropscience Ag combinação de composto ativo, seus usos e método para curativamente ou preventivamente controlar os fungos fitopatogênicos e/ou microrganismos e/ou pragas de plantas ou safras
JP5940452B2 (ja) 2009-10-16 2016-06-29 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌剤としてのアミノプロペン酸化合物
WO2011051243A1 (en) 2009-10-29 2011-05-05 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
WO2011051198A2 (de) 2009-10-30 2011-05-05 Bayer Cropscience Ag Pyridin-derivate als pflanzenschutzmittel
MX2012005067A (es) 2009-10-30 2012-06-13 Bayer Cropscience Ag Derivados de heteroarilpiperidina y heteroarilpiperazina.
WO2011061156A1 (en) 2009-11-17 2011-05-26 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
US8581046B2 (en) 2010-11-24 2013-11-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brassica gat event DP-073496-4 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
EP2343280A1 (en) 2009-12-10 2011-07-13 Bayer CropScience AG Fungicide quinoline derivatives
WO2011082941A1 (de) 2009-12-16 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Benzylsubstituierte thiadiazolyloxyphenylamidiniumsalze als fungizide
WO2011080044A2 (en) 2009-12-16 2011-07-07 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
KR101808074B1 (ko) 2009-12-21 2017-12-12 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 살진균제로 사용되는 비스(디플루오로메틸)피라졸
EP2516423A1 (en) 2009-12-21 2012-10-31 Bayer CropScience AG Thienylpyri (mi) dinylazole and their use for controlling phytopathogenic fungi
EP2516630B1 (en) 2009-12-23 2017-11-15 Bayer Intellectual Property GmbH Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
CA2785220C (en) 2009-12-23 2018-12-04 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides.
EP2516631B1 (en) 2009-12-23 2018-02-14 Bayer Intellectual Property GmbH Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
UY33142A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
CA2785225C (en) 2009-12-23 2019-01-22 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides.
JP5782657B2 (ja) 2009-12-28 2015-09-24 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EP2519502A2 (en) 2009-12-28 2012-11-07 Bayer CropScience AG Fungicidal hydroximoyl-heterocycles derivatives
TW201138624A (en) 2009-12-28 2011-11-16 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
PE20121693A1 (es) 2010-01-22 2012-12-01 Bayer Ip Gmbh Combinacion de espiromesifeno y abamectina como insecticidas
AR080021A1 (es) 2010-01-26 2012-03-07 Pioneer Hi Bred Int Tolerancia a los herbicidas inhibidores de hppd (hidrofenil piruvato dioxigenasa)
JP5892949B2 (ja) 2010-02-10 2016-03-23 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ ビフェニル置換環状ケトエノール類
BR112012020082A2 (pt) 2010-02-10 2015-10-20 Bayer Ip Gmbh derivados de ácido tetrâmico substituídos espiroheterociclicamente
UA106786C2 (uk) 2010-02-19 2014-10-10 ДАУ АГРОСАЙЄНСІЗ ЕлЕлСі Синергічна гербіцидна/фунгіцидна композиція, яка містить піридинкарбонову кислоту і фунгіцид
UA108638C2 (uk) 2010-03-04 2015-05-25 Застосування солей імідів малеїнової кислоти для боротьби з фітопатогенними грибами
JP2013521255A (ja) 2010-03-04 2013-06-10 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング フルオロアルキル置換２−アミドベンズイミダゾールおよび植物中のストレス耐性を強化するためのその使用
WO2011107445A1 (de) 2010-03-04 2011-09-09 Bayer Cropscience Ag Hydrat und wasserfreie kristallform des natriumsalzes des 2-iodo-n-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl]benzolsulfonamids, verfahren zu deren herstellung, sowie deren verwendung als herbizide und pflanzenwachstumsregulatoren
EA029482B1 (ru) 2010-03-08 2018-04-30 Монсанто Текнолоджи Ллс Молекулы полинуклеотидов для регуляции генов у растений
DK2547766T3 (en) * 2010-03-17 2018-04-16 Basf Agrochemical Products Bv Herbicide tolerant plants
JP2013522274A (ja) 2010-03-18 2013-06-13 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 非生物的な植物ストレスに対する活性剤としてのアリールスルホンアミド類及びヘタリールスルホンアミド類
WO2011117184A1 (de) 2010-03-24 2011-09-29 Bayer Cropscience Ag Fludioxonil-derivate
CN102933078A (zh) 2010-04-06 2013-02-13 拜耳知识产权有限责任公司 4-苯基丁酸和/或其盐用于提高植物应激耐受性的用途
AR081810A1 (es) 2010-04-07 2012-10-24 Bayer Cropscience Ag Piridinilpirazoles biciclicos
CN102933083B (zh) 2010-04-09 2015-08-12 拜耳知识产权有限责任公司 (1-氰基环丙基)苯基次膦酸或其酯的衍生物和/或其盐提高植物对非生物胁迫耐受性的用途
WO2011128300A2 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
PT2558470E (pt) 2010-04-14 2014-09-24 Bayer Cropscience Ag Derivados de ditiinopiridazinadiona como fungicidas
EP2703397B1 (de) 2010-04-14 2015-08-12 Bayer Intellectual Property GmbH Dithiin-derivate alz fungizide
MX2012011783A (es) 2010-04-14 2012-11-22 Bayer Cropscience Ag Derivados de tienoditiina.
EP2377867A1 (de) 2010-04-14 2011-10-19 Bayer CropScience AG Dithiinopyridazinon-Derivate
BR112012026211A2 (pt) 2010-04-14 2015-09-15 Bayer Ip Gmbh combinações de composto ativo
EP2563784A1 (en) 2010-04-28 2013-03-06 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives
JP2013525400A (ja) 2010-04-28 2013-06-20 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺菌剤ヒドロキシモイル−複素環誘導体
WO2011134911A2 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
CN102971314B (zh) 2010-04-28 2016-03-23 拜耳知识产权有限责任公司 酮基杂芳基哌啶和酮基杂芳基哌嗪衍生物作为杀菌剂
US8815775B2 (en) 2010-05-18 2014-08-26 Bayer Cropscience Ag Bis(difluoromethyl)pyrazoles as fungicides
WO2011147815A1 (de) 2010-05-27 2011-12-01 Bayer Cropscience Ag Heterocyclische alkanolderivate als fungizide
EA201291320A1 (ru) 2010-05-27 2013-05-30 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Гетероциклические тиозамещенные производные алканолов в качестве фунгицидов
CA2800712A1 (en) 2010-05-27 2011-12-01 Carl Friedrich Nising Heterocyclic alkanol derivatives as fungicides
BR112012030191A2 (pt) 2010-05-27 2015-09-22 Bayer Intelectual Property Gmbh derivados de alcanol heterocíclicos como fungicidas
ES2660611T3 (es) 2010-05-27 2018-03-23 Bayer Cropscience Ag Derivados de ácido piridinilcarboxílico como fungicidas
UA110705C2 (uk) 2010-05-27 2016-02-10 Баєр Інтеллекчуел Проперті Гмбх Нові гетероциклічні похідні алканолів
ES2533026T3 (es) 2010-06-03 2015-04-07 Bayer Intellectual Property Gmbh N-[(het)arilalquil)]pirazol (tio)carboxamidas y sus análogos heterosustituidos
UA110703C2 (uk) 2010-06-03 2016-02-10 Байєр Кропсайнс Аг Фунгіцидні похідні n-[(тризаміщений силіл)метил]-карбоксаміду
KR20130088022A (ko) 2010-06-03 2013-08-07 바이엘 크롭사이언스 아게 Ｎ-[(헤트)아릴알킬] 피라졸 (티오)카르복사미드 및 이의 헤테로치환된 유사체
US9574201B2 (en) 2010-06-09 2017-02-21 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
US9593317B2 (en) 2010-06-09 2017-03-14 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
WO2011161035A1 (de) 2010-06-22 2011-12-29 Bayer Cropscience Ag 3-aryl-4-(2-thienylmethylen)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide
WO2011161034A1 (de) 2010-06-22 2011-12-29 Bayer Cropscience Ag 3-aryl-4-(2,6-dimethylbenzyliden)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide
JP6215052B2 (ja) 2010-06-28 2017-10-18 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 有害生物防除剤としての複素環化合物
JP2013532648A (ja) 2010-07-20 2013-08-19 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 抗菌剤としてのベンゾシクロアルケン類
JP5863793B2 (ja) 2010-08-05 2016-02-17 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 活性化合物の組合せ
US20120122928A1 (en) 2010-08-11 2012-05-17 Bayer Cropscience Ag Heteroarylpiperidine and -Piperazine Derivatives as Fungicides
AU2011289274B2 (en) 2010-08-13 2015-02-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods comprising sequences having hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) activity
US8759527B2 (en) 2010-08-25 2014-06-24 Bayer Cropscience Ag Heteroarylpiperidine and -piperazine derivatives as fungicides
EP2423210A1 (de) 2010-08-25 2012-02-29 Bayer CropScience AG Heteroarylpiperidin- und -piperazinderivate als Fungizide
AR082536A1 (es) 2010-08-26 2012-12-12 Bayer Cropscience Ag Derivados de 5-yodo-triazol
EP2611300B1 (de) 2010-09-03 2016-04-06 Bayer Intellectual Property GmbH Substituierte anellierte dihydropyrimidinonderivate
CN103442575A (zh) 2010-09-22 2013-12-11 拜耳知识产权有限责任公司 生物或化学防治剂用于在抗性作物中防治昆虫和线虫的用途
EP2460406A1 (en) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Use of fluopyram for controlling nematodes in nematode resistant crops
BR112013008446B1 (pt) 2010-10-07 2018-06-12 Bayer Cropscience Ag ''composição e método para controlar os fungos fitopatogênicos ou insetos danificadores de plantas,safras ou sementes''
WO2012045726A2 (en) 2010-10-07 2012-04-12 Bayer Cropscience Ag 5-heteroarylimino-1,2,3-dithiazoles
EP3284346B1 (en) * 2010-10-15 2021-07-07 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Use of als inhibitor herbicides for control of unwanted vegetation in als inhibitor herbicide tolerant beta vulgaris plants
AR083501A1 (es) 2010-10-21 2013-02-27 Bayer Cropscience Ag 1-(heterociclo carbonil)piperidinas
EP2630125B1 (en) 2010-10-21 2016-08-24 Bayer Intellectual Property GmbH N-benzyl heterocyclic carboxamides
PE20141002A1 (es) 2010-10-27 2014-08-17 Bayer Ip Gmbh Derivados de heteroarilpiperidina y -piperazina como fungicidas
JP2013542215A (ja) 2010-11-02 2013-11-21 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー Ｎ−ヘタリールメチルピラゾリルカルボキサミド類
ES2588991T3 (es) 2010-11-10 2016-11-08 Bayer Cropscience Ag Variantes de HPPD y procedimientos de uso
JP2013543858A (ja) 2010-11-15 2013-12-09 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー ５−ハロゲノピラゾール（チオ）カルボキサミド類
US9375004B2 (en) 2010-11-15 2016-06-28 Bayer Intellectual Property Gmbh 5-halogenopyrazolecarboxamides
WO2012065944A1 (en) 2010-11-15 2012-05-24 Bayer Cropscience Ag N-aryl pyrazole(thio)carboxamides
US8575431B2 (en) 2010-11-24 2013-11-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brassica GAT event DP-061061-7 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
WO2012072660A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Bayer Cropscience Ag Use of fluopyram for controlling nematodes in crops and for increasing yield
US20130289077A1 (en) 2010-12-29 2013-10-31 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2474542A1 (en) 2010-12-29 2012-07-11 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2471363A1 (de) 2010-12-30 2012-07-04 Bayer CropScience AG Verwendung von Aryl-, Heteroaryl- und Benzylsulfonamidocarbonsäuren, -carbonsäureestern, -carbonsäureamiden und -carbonitrilen oder deren Salze zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
AU2012205427B2 (en) * 2011-01-14 2015-09-03 Dow Agrosciences Llc Growth inhibition of cotton with penoxsulam
CN104987330B (zh) 2011-02-01 2019-04-05 拜耳知识产权有限责任公司 作为杀真菌剂的杂芳基哌啶和杂芳基哌嗪衍生物
EP2675788A1 (de) 2011-02-17 2013-12-25 Bayer Intellectual Property GmbH Substituierte 3-(biphenyl-3-yl)-8,8-difluor-4-hydroxy-1-azaspiro[4.5]dec-3-en-2-one zur therapie
WO2012116960A1 (de) 2011-03-01 2012-09-07 Bayer Cropscience Ag 2-acyloxy-pyrrolin-4-one
EP2494867A1 (de) 2011-03-01 2012-09-05 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden
EP2683239A1 (en) 2011-03-10 2014-01-15 Bayer Intellectual Property GmbH Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
EP2499911A1 (en) 2011-03-11 2012-09-19 Bayer Cropscience AG Active compound combinations comprising fenhexamid
CN103502238A (zh) 2011-03-14 2014-01-08 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌剂肟基-四唑衍生物
JP5951650B2 (ja) 2011-03-18 2016-07-13 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ Ｎ−（３−カルバモイルフェニル）−１ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体及び害虫を防除するためのそれらの使用
HUE038497T2 (hu) 2011-03-23 2018-10-29 Bayer Ip Gmbh Hatóanyag-kombinációk
MX2013010821A (es) 2011-03-25 2013-10-17 Bayer Ip Gmbh Uso de n-(1,2,5-oxadiazol-3-il)benzamidas para combatir plantas no deseadas en areas en plantas de cultivo transgenicas tolerantes a los herbicidas inhibidores de la hppd.
JP2014508792A (ja) 2011-03-25 2014-04-10 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 活性化合物の組み合わせ
CN103534267B (zh) * 2011-03-25 2017-07-14 孟山都技术公司 植物调控元件及其用途
EA201391301A1 (ru) 2011-03-25 2014-03-31 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Применение n-(тетразол-4-ил)- или n-(триазол-3-ил)арилкарбоксамидов или их солей для борьбы с нежелательными растениями в районах произрастания трансгенных культурных растений, устойчивых к гербицидам-ингибиторам hppd
WO2012136581A1 (en) 2011-04-08 2012-10-11 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
AR085587A1 (es) 2011-04-13 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
AR085588A1 (es) 2011-04-13 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
AR085585A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Vinil- y alquinilciclohexanoles sustituidos como principios activos contra estres abiotico de plantas
AR090010A1 (es) 2011-04-15 2014-10-15 Bayer Cropscience Ag 5-(ciclohex-2-en-1-il)-penta-2,4-dienos y 5-(ciclohex-2-en-1-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas, usos y metodos de tratamiento
AR085568A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-penta-2,4-dienos y 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas
EP2511255A1 (de) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer CropScience AG Substituierte Prop-2-in-1-ol- und Prop-2-en-1-ol-Derivate
EP2510787A1 (en) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer Cropscience AG Propenoates as fungicides
HUE043158T2 (hu) 2011-04-22 2019-08-28 Bayer Cropscience Ag (Tio)karboxamid-származékot és fungicid vegyületet tartalmazó hatóanyag készítmények
EP2794643A1 (en) 2011-04-29 2014-10-29 Pioneer Hi-Bred International Inc. Down-regulation of a homeodomain-leucine zipper i-class homeobox gene for improved plant performance
EP2524600A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising phosphorous acid or a derivative thereof and Tebuconazole or Myclobutanil
EP2524598A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising dithianon
AU2012257748B2 (en) 2011-05-17 2016-06-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations
EP2524599A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2524601A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising a phosphorous acid derivative and cyazofamid
CN103597082B (zh) 2011-06-06 2017-09-15 拜尔作物科学公司 用于在预选位点修饰植物基因组的方法和手段
EP2532233A1 (en) 2011-06-07 2012-12-12 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2720543B1 (en) 2011-06-14 2018-08-22 Bayer CropScience AG Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent
AR086992A1 (es) 2011-06-20 2014-02-05 Bayer Ip Gmbh Tienilpiri(mi)dinilpirazoles
EP2540165A1 (en) 2011-06-30 2013-01-02 Bayer CropScience AG Use of a halogenated pesticide in combination with a biological pest control agent
BR112014000267A2 (pt) 2011-07-04 2016-09-20 Bayer Ip Gmbh utilização de isoquinolinonas, isoquinolinedionas, isoquinolinetrionas e dihidroisoquinolinonas substituídas ou, em cada caso, sais das mesmas como agentes ativos contra o stress abiótico em plantas
US9303270B2 (en) 2011-07-22 2016-04-05 Ricetec Aktiengesellschaft Rice resistant to HPPD and accase inhibiting herbicides
CN103717076B (zh) 2011-08-10 2016-04-13 拜耳知识产权股份有限公司 含有特定特特拉姆酸衍生物的活性化合物组合物
CN103857661B (zh) 2011-08-11 2016-11-16 拜耳知识产权有限责任公司 1,2,4‑三唑基取代的酮烯醇
CN103717612A (zh) 2011-08-12 2014-04-09 拜尔作物科学公司 转基因在棉花中的保卫细胞特异性表达
MX346439B (es) 2011-08-22 2017-03-17 Bayer Cropscience Nv Métodos y medios para modificar un genoma vegetal.
JP2014524455A (ja) 2011-08-22 2014-09-22 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺真菌性ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
US20140221210A1 (en) 2011-09-09 2014-08-07 Peter Dahmen Acyl-homoserine lactone derivatives for improving plant yield
CN103874681B (zh) 2011-09-12 2017-01-18 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌性4‑取代的‑3‑{苯基[(杂环基甲氧基)亚氨基]甲基}‑1,2,4‑噁二唑‑5(4h)‑酮衍生物
US10829828B2 (en) 2011-09-13 2020-11-10 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US10760086B2 (en) 2011-09-13 2020-09-01 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
EP2756086B1 (en) 2011-09-13 2018-02-21 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for weed control
CA2848689A1 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control targeting pds
UA116093C2 (uk) 2011-09-13 2018-02-12 Монсанто Текнолоджи Ллс Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти)
US9840715B1 (en) 2011-09-13 2017-12-12 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for delaying senescence and improving disease tolerance and yield in plants
CA2848685A1 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control comprising topical application of a glutamine synthetase polynucleotide
WO2013040005A1 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US10806146B2 (en) 2011-09-13 2020-10-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US9920326B1 (en) 2011-09-14 2018-03-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for increasing invertase activity in plants
CA2848620C (en) 2011-09-16 2020-03-10 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of cyprosulfamide for inducing a growth regulating response in useful plants and increasing the yield of harvested plant organs therefrom
WO2013037956A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2 isoxazoline-3 carboxylates for improving plant yield
EA029005B1 (ru) 2011-09-16 2018-01-31 Байер Интеллектчуал Проперти Гмбх Применение фенилпиразолин-3-карбоксилатов для повышения урожайности растений
JP2014527973A (ja) 2011-09-23 2014-10-23 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 非生物的な植物ストレスに対する作用剤としての４−置換１−フェニルピラゾール−３−カルボン酸誘導体の使用
US20150082495A1 (en) 2011-10-04 2015-03-19 Bayer Intellectual Property Gmbh RNAi FOR THE CONTROL OF FUNGI AND OOMYCETES BY INHIBITING SACCHAROPINE DEHYDROGENASE GENE
MX355016B (es) 2011-10-06 2018-04-02 Bayer Ip Gmbh Heterociclilpiri(mi)dinilpirazoles como fungicidas.
WO2013050324A1 (de) 2011-10-06 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b)
PL2763993T3 (pl) 2011-10-06 2017-09-29 Bayer Intellectual Property Gmbh Heterocyklilopiry(mi)dynylopirazol
WO2013075817A1 (en) 2011-11-21 2013-05-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicide n-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
CA2857438A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal n-bicycloalkyl and n-tricycloalkyl (thio)carboxamide derivatives
EP2606732A1 (en) 2011-12-19 2013-06-26 Bayer CropScience AG Use of an anthranilic diamide derivatives with heteroaromatic and heterocyclic substituents in combination with a biological control agent
CN104270946B (zh) 2011-12-19 2017-05-10 拜耳农作物科学股份公司 邻氨基苯甲酸二酰胺衍生物用于防治转基因作物中的害虫的用途
US9204645B2 (en) 2011-12-20 2015-12-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Insecticidal aromatic amides
ES2695232T3 (es) 2011-12-27 2019-01-02 Bayer Cropscience Ag Derivados de oxazol
WO2013098146A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal 3-[(1,3-thiazol-4-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-one derivatives
TWI557120B (zh) 2011-12-29 2016-11-11 拜耳知識產權公司 殺真菌之３－［（吡啶－２－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物
US9204638B2 (en) 2011-12-30 2015-12-08 Plant Health Care, Inc. Method for increasing plant yield, and yield improving compositions
WO2013109754A1 (en) 2012-01-17 2013-07-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant transcription factors, promoters and uses thereof
WO2013110594A1 (en) 2012-01-25 2013-08-01 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
JP6182158B2 (ja) 2012-01-25 2017-08-16 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ フルオピラムとバシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）と生物学的防除剤とを含んだ活性化合物組合せ
EP2622961A1 (en) 2012-02-02 2013-08-07 Bayer CropScience AG Acive compound combinations
ES2664230T3 (es) 2012-02-22 2018-04-18 Bayer Cropscience Ag Uso de fluopiram para el control de las enfermedades de la madera en la vid
PE20190343A1 (es) 2012-02-27 2019-03-07 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos
WO2013138309A1 (en) 2012-03-13 2013-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genetic reduction of male fertility in plants
CA2867385A1 (en) 2012-03-13 2013-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genetic reduction of male fertility in plants
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
US9357778B2 (en) 2012-04-12 2016-06-07 Bayer Cropscience Ag N-acyl-2-(cyclo)alkypyrrolidines and piperidines useful as fungicides
BR112014025976B1 (pt) 2012-04-20 2019-10-29 Bayer Cropscience Ag composto, processo para preparar um composto, composição fungicida, método para controlar fungos, uso de compostos e processo para produzir composições para controlar fungos
CN104244717A (zh) 2012-04-20 2014-12-24 拜尔农科股份公司 N-环烷基-n-[(三取代的甲硅烷基苯基)亚甲基]-(硫代)羧酰胺衍生物
BR112014026203A2 (pt) 2012-04-23 2017-07-18 Bayer Cropscience Nv engenharia do genoma direcionado nas plantas
CN104364236B (zh) 2012-05-09 2018-01-16 拜尔农作物科学股份公司 5‑卤代吡唑二氢茚基甲酰胺
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
WO2013167545A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Bayer Cropscience Ag Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
US10240162B2 (en) 2012-05-24 2019-03-26 A.B. Seeds Ltd. Compositions and methods for silencing gene expression
MX355327B (es) 2012-05-30 2018-04-16 Bayer Cropscience Ag Composiciones que comprenden un agente de control biologico y un fungicida seleccionado de inhibidores de la cadena respiratoria en el complejo i o ii.
CN107711889A (zh) 2012-05-30 2018-02-23 拜耳作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀虫剂的组合物
PL2854552T3 (pl) 2012-05-30 2019-11-29 Bayer Cropscience Ag Kompozycja zawierająca środek kontroli biologicznej i środek grzybobójczy wybrany spośród inhibitorów biosyntezy aminokwasów lub białek, inhibitorów wytwarzania ATP i inhibitorów syntezy ściany komórkowej
CN104507319B (zh) 2012-05-30 2018-08-03 拜尔农作物科学股份公司 包含生物防治剂和选自脂质膜合成抑制剂、黑素生物合成抑制剂、核酸合成抑制剂或信号转导抑制剂的杀真菌剂的组合物
BR112014029688A2 (pt) 2012-05-30 2018-04-17 Bayer Cropscience Ag composição que compreende um agente de controle biológico e um fungicida.
BR122019010801B1 (pt) 2012-05-30 2020-04-28 Bayer Cropscience Ag composição compreendendo um agente de controle biológico e um fungicida, seus usos, semente resistente a fitopatógenos, e método para reduzir o dano total das plantas e partes de plantas
MX362859B (es) 2012-05-30 2019-02-20 Bayer Cropscience Ag Composiciones que comprenden un agente de control biologico y un insecticida.
PL2854549T3 (pl) 2012-05-30 2019-02-28 Bayer Cropscience Ag Kompozycja zawierająca środek kontroli biologicznej i fluopikolid
BR112014031260A2 (pt) * 2012-06-15 2019-08-20 Du Pont métodos e composições que envolvem variantes de als com preferência de substrato nativo
EP2871958A1 (en) 2012-07-11 2015-05-20 Bayer CropScience AG Use of fungicidal combinations for increasing the tolerance of a plant towards abiotic stress
US8791048B2 (en) * 2012-07-24 2014-07-29 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and clomazone
US8841233B2 (en) * 2012-07-24 2014-09-23 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and 4-hydroxyphenyl-pyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors
US8846570B2 (en) * 2012-07-24 2014-09-30 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and microtubule inhibiting herbicides
US8871680B2 (en) * 2012-07-24 2014-10-28 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and a di-methoxy-pyrimidine and derivatives thereof
US8883682B2 (en) 2012-07-24 2014-11-11 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and auxin transport inhibitors
US8796177B2 (en) * 2012-07-24 2014-08-05 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and acetyl-CoA carboxylase (ACCase) inhibitors
US8871681B2 (en) * 2012-07-24 2014-10-28 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and certain sulfonylureas
US8889591B2 (en) 2012-07-24 2014-11-18 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and bromobutide, daimuron, oxaziclomefone or pyributicarb
US8901035B2 (en) 2012-07-24 2014-12-02 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and cellulose biosynthesis inhibitor herbicides
US9644469B2 (en) 2012-07-24 2017-05-09 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and VLCFA and lipid synthesis inhibiting herbicides
US8906826B2 (en) 2012-07-24 2014-12-09 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and imidazolinones
US8916499B2 (en) 2012-07-24 2014-12-23 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and a protoporphyrinogen oxidase inhibitor
US8912120B2 (en) 2012-07-24 2014-12-16 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and synthetic auxin herbicides
US8809232B2 (en) * 2012-07-24 2014-08-19 Dow Agroscience Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and halosulfuron, pyrazosulfuron and esprocarb
US8906825B2 (en) 2012-07-24 2014-12-09 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and triazolopyrimidine sulfonamides
US8895470B2 (en) 2012-07-24 2014-11-25 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and glyphosate or glufosinate
US8912121B2 (en) 2012-07-24 2014-12-16 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and certain PS II inhibitors
WO2014019983A1 (en) 2012-07-31 2014-02-06 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a pesticidal terpene mixture and an insecticide
JP2015532650A (ja) 2012-09-05 2015-11-12 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 非生物的植物ストレスに対する活性物質としての置換された２−アミドベンズイミダゾール類、２−アミドベンゾオキサゾール類および２−アミドベンゾチアゾール類またはそれらの塩の使用
US10793872B2 (en) 2012-09-14 2020-10-06 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC HPPD variants and methods of use
CN104870647A (zh) 2012-10-18 2015-08-26 孟山都技术公司 用于植物害虫控制的方法和组合物
DE102012219029A1 (de) 2012-10-18 2014-04-24 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Dithiin-tetracarboximiden zum Bekämpfen von neuer Blattfallkrankheit Marssonia coronaria
PL2908642T3 (pl) 2012-10-19 2022-06-13 Bayer Cropscience Ag Sposób wzmacniania tolerancji roślin na stres abiotyczny z zastosowaniem pochodnych karboksyamidowych lub tiokarboksyamidowych
CA2888556C (en) 2012-10-19 2020-07-07 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
ES2665320T3 (es) 2012-10-19 2018-04-25 Bayer Cropscience Ag Procedimiento de tratamiento de plantas contra hongos resistentes a fungicidas usando derivados de carboxamida o de tiocarboxamida
AU2013333916B2 (en) 2012-10-19 2017-05-25 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations comprising carboxamide derivatives
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
WO2014079957A1 (de) 2012-11-23 2014-05-30 Bayer Cropscience Ag Selektive inhibition der ethylensignaltransduktion
EA201890495A3 (ru) 2012-11-30 2019-01-31 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Тройные фунгицидные и пестицидные смеси
MX2015006327A (es) 2012-11-30 2015-10-05 Bayer Cropscience Ag Mezclas fungicidas ternarias.
BR112015012057B1 (pt) 2012-11-30 2020-05-12 Bayer Cropscience Ag Composição de fórmula (i) e seu processo de preparação, método para controlar um ou mais microorganismos nocivos e para tratar sementes
UA117820C2 (uk) 2012-11-30 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Подвійна фунгіцидна або пестицидна суміш
US9510596B2 (en) 2012-11-30 2016-12-06 Bayer Cropscience Ag Binary pesticidal and fungicidal mixtures
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
US20150305348A1 (en) 2012-12-03 2015-10-29 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
CA2893083A1 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
JP2015535531A (ja) 2012-12-03 2015-12-14 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 生物農薬および殺菌剤を含む組成物
EP2925144A2 (en) 2012-12-03 2015-10-07 Bayer CropScience AG Composition comprising a biological control agent and an insecticide
MX2015006631A (es) 2012-12-03 2015-08-05 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un insecticida.
ES2770775T3 (es) 2012-12-03 2020-07-03 Bayer Cropscience Ag Procedimiento para el control de plagas aplicando una combinación de Paecilomyces lilacinus y Fluopyram
MA38142A1 (fr) 2012-12-03 2016-02-29 Bayer Cropscience Ag Composition comprenant un agent de lutte biologique et un fongicide
EP2740720A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte bicyclische- und tricyclische Pent-2-en-4-insäure -Derivate und ihre Verwendung zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
BR112015012926A2 (pt) 2012-12-05 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag uso de 1-(aril etinil)-, 1-(heteroaril etinil)-, 1-(heterociclil etinil)- substituído e 1-(cicloalquenil etinil)-ciclohexanóis como agentes ativos contra o estresse abiótico da planta
EP2740356A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte (2Z)-5(1-Hydroxycyclohexyl)pent-2-en-4-insäure-Derivate
US9149037B2 (en) * 2012-12-12 2015-10-06 Dow Agrosciences Llc Synergistic weed control from applications of aminocyclopyrachlor and 2,4 dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D)
WO2014090765A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Bayer Cropscience Ag Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops
US20140173781A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for producing and selecting transgenic wheat plants
EA031973B1 (ru) * 2012-12-13 2019-03-29 Сесвандерхаве Н.В. Способ получения растений сахарной свеклы, устойчивых к гербицидам
ES2687545T5 (es) * 2012-12-13 2022-08-31 Bayer Cropscience Ag Uso de herbicidas inhibidores de ALS para el control de vegetación indeseada en plantas Beta vulgaris tolerantes a herbicidas inhibidores de ALS
US10412964B2 (en) 2012-12-14 2019-09-17 Dow Agrosciences Llc Synergistic weed control from applications of aminopyralid and clopyralid
MX2015007614A (es) 2012-12-14 2015-09-08 Dow Agrosciences Llc Control sinergico de malezas con aplicaciones de aminopiralid y clopiralid.
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
CA3062365C (en) * 2012-12-19 2022-03-29 Monsanto Technology Llc Plant regulatory elements and uses thereof
IN2015DN04206A (pt) 2012-12-19 2015-10-16 Bayer Cropscience Ag
WO2014100525A2 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for auxin-analog conjugation
EP2941488B1 (en) 2013-01-01 2023-03-22 Monsanto Technology LLC Methods of introducing dsrna to plant seeds for modulating gene expression
US10683505B2 (en) 2013-01-01 2020-06-16 Monsanto Technology Llc Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression
BR102013021210B1 (pt) 2013-01-25 2015-12-01 Fundação Universidade Fed De São Carlos processo de obtenção de nanopartículas biopoliméricas contendo óleo e extratos de azadirachta indica a. juss (neem), nanopartículas biopoliméricas e micropartículas em pó
US9247707B2 (en) * 2013-01-25 2016-02-02 Barenbrug Usa, Inc. Kentucky bluegrass variety named ‘Barvette’ selected for healthy turf
US10000767B2 (en) 2013-01-28 2018-06-19 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for plant pest control
MY172725A (en) 2013-02-06 2019-12-11 Vetoquinol Sa Halogen-substituted pyrazol derivatives as pest-control agents
BR112015018726A2 (pt) 2013-02-11 2017-07-18 Bayer Cropscience Lp composições compreendendo gougerotina e um fungicida
JP2016506973A (ja) 2013-02-11 2016-03-07 バイエル クロップサイエンス エルピーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｐ グーゲロチンおよび殺虫剤を含む組成物
MX2015010259A (es) 2013-02-11 2015-10-29 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden un agente de control biologico basado en la cepa nrrl b-50550 de streptomyces microflavus y otro agente de control biologico.
MX2015011043A (es) 2013-02-25 2015-10-22 Dow Agrosciences Llc Métodos para el control de malezas en plantíos de piña.
US20160016944A1 (en) 2013-03-07 2016-01-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungicidal 3--heterocycle derivatives
MX369500B (es) 2013-03-07 2019-11-11 Athenix Corp Genes de toxinas y métodos para su uso.
UA123082C2 (uk) 2013-03-13 2021-02-17 Монсанто Текнолоджи Ллс Спосіб та гербіцидна композиція для боротьби з видами рослин роду sorghum
UY35385A (es) 2013-03-13 2014-09-30 Monsanto Technology Llc ?métodos y composiciones para el control de malezas?.
AU2014241045B2 (en) 2013-03-13 2017-08-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate application for weed control in brassica
CA2906445C (en) * 2013-03-14 2019-08-13 J.R. Simplot Company Turfgrass varieties having desirable looking turf when mowed infrequently
CA2904537A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions having dicamba decarboxylase activity and methods of use
US20140283211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Monsanto Technology Llc Methods and Compositions for Plant Pest Control
CA2905595A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions having dicamba decarboxylase activity and methods of use
US20160219823A1 (en) * 2013-03-14 2016-08-04 J.R. Simplot Company Turfgrass varieties having desirable looking turf when mowed infrequently
CN105339380A (zh) 2013-03-14 2016-02-17 先锋国际良种公司 用以防治昆虫害虫的组合物和方法
US20140304857A1 (en) 2013-03-14 2014-10-09 Pioneer Hi Bred International Inc Maize stress related transcription factor 18 and uses thereof
RU2015143825A (ru) 2013-03-15 2017-04-26 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Полипептиды phi-4 и способы их применения
US10568328B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US9730445B2 (en) 2013-03-15 2017-08-15 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and fungicides
CA2903555A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods of use of acc oxidase polynucleotides and polypeptides
US8841234B1 (en) * 2013-03-15 2014-09-23 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and fungicides
EP2981614A1 (en) 2013-04-02 2016-02-10 Bayer CropScience NV Targeted genome engineering in eukaryotes
WO2014167008A1 (en) 2013-04-12 2014-10-16 Bayer Cropscience Ag Novel triazolinthione derivatives
WO2014167009A1 (en) 2013-04-12 2014-10-16 Bayer Cropscience Ag Novel triazole derivatives
JP2016519687A (ja) 2013-04-19 2016-07-07 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト バイナリー殺虫または農薬混合物
US20160058001A1 (en) 2013-04-19 2016-03-03 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
EP2801575A1 (en) 2013-05-07 2014-11-12 Bayer CropScience AG Heteroaryldihydropyridine derivatives as fungicides
US9770022B2 (en) 2013-06-26 2017-09-26 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-N-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
US20160150782A1 (en) 2013-07-09 2016-06-02 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of selected pyridone carboxamides or salts thereof as active substances against abiotic plant stress
RU2703498C2 (ru) 2013-07-19 2019-10-17 Монсанто Текнолоджи Ллс Композиции и способы борьбы с leptinotarsa
US9850496B2 (en) 2013-07-19 2017-12-26 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling Leptinotarsa
EP2837287A1 (en) 2013-08-15 2015-02-18 Bayer CropScience AG Use of prothioconazole for increasing root growth of Brassicaceae
EP3032942B1 (en) 2013-08-16 2020-03-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3692786B1 (en) 2013-09-13 2022-11-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EA036403B1 (ru) 2013-09-24 2020-11-06 Басф Се Белок с активностью целлюлоза:ксилоглюкан-эндотрансглюкозилазы (cxe) и его применение
RU2654634C2 (ru) 2013-09-25 2018-05-21 ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи Способы борьбы с сорняками в цикории
US10602742B2 (en) * 2013-10-17 2020-03-31 Sumitomo Chemical Company, Limited Method for cultivating corn or soybean
CA2927180A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-n-acetyltransferase (glyat) sequences and methods of use
WO2015066681A1 (en) 2013-11-04 2015-05-07 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations
CA2932484A1 (en) 2013-12-05 2015-06-11 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
WO2015082587A1 (en) 2013-12-05 2015-06-11 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
UA119253C2 (uk) 2013-12-10 2019-05-27 Біолоджикс, Інк. Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл
BR112016013172B8 (pt) * 2013-12-11 2020-04-28 Oxiteno S A Ind E Comercio formulações agroquímicas
TW201527315A (zh) * 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（四）
TW201527312A (zh) * 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（一）
TW201527314A (zh) * 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（三）
TW201527313A (zh) 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（二）
US10334848B2 (en) 2014-01-15 2019-07-02 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control using EPSPS polynucleotides
CA2939156A1 (en) 2014-02-07 2015-08-13 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2015120270A1 (en) 2014-02-07 2015-08-13 Pioneer Hi Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3117003B1 (en) 2014-03-11 2019-10-30 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
US10055700B2 (en) 2014-03-30 2018-08-21 Trimble Inc. Intelligent tool for collecting and managing data during manual harvesting of fruits and vegetables
US11091770B2 (en) 2014-04-01 2021-08-17 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling insect pests
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
WO2015164805A1 (en) * 2014-04-24 2015-10-29 Purdue Research Foundation Induced mutagenesis
US10988764B2 (en) 2014-06-23 2021-04-27 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for regulating gene expression via RNA interference
EP3161138A4 (en) 2014-06-25 2017-12-06 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression
WO2016000237A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Pioneer Overseas Corporation Plants having enhanced tolerance to insect pests and related constructs and methods involving insect tolerance genes
AR101214A1 (es) 2014-07-22 2016-11-30 Bayer Cropscience Ag Ciano-cicloalquilpenta-2,4-dienos, ciano-cicloalquilpent-2-en-4-inas, ciano-heterociclilpenta-2,4-dienos y ciano-heterociclilpent-2-en-4-inas sustituidos como principios activos contra el estrés abiótico de plantas
EP3174982A4 (en) 2014-07-29 2018-06-20 Monsanto Technology LLC Compositions and methods for controlling insect pests
WO2016044092A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Pioneer Hi Bred International Inc Compositions and methods to control insect pests
MX2017004745A (es) 2014-10-16 2017-10-20 Pioner Hi-Bred Int Inc Proteinas insecticidas y metodos de uso.
US10266837B2 (en) 2014-10-22 2019-04-23 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Terpene synthases from ylang ylang (Cananga odorata var. fruticosa)
AR103024A1 (es) 2014-12-18 2017-04-12 Bayer Cropscience Ag Piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como sustancias activas contra estrés abiótico de las plantas
US20170359965A1 (en) 2014-12-19 2017-12-21 E I Du Pont De Nemours And Company Polylactic acid compositions with accelerated degradation rate and increased heat stability
MX2017009521A (es) 2015-01-22 2018-11-09 Monsanto Technology Llc Composiciones y métodos para controlar leptinotarsa.
CA2977026A1 (en) 2015-03-11 2016-09-15 E.I. Du Pont De Nemours And Company Insecticidal combinations of pip-72 and methods of use
WO2016166077A1 (en) 2015-04-13 2016-10-20 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives
RU2017144238A (ru) 2015-05-19 2019-06-19 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные белки и способы их применения
AU2016270870A1 (en) 2015-06-02 2018-01-04 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for delivery of a polynucleotide into a plant
US10655136B2 (en) 2015-06-03 2020-05-19 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for introducing nucleic acids into plants
CN107771181A (zh) 2015-06-16 2018-03-06 先锋国际良种公司 用以防治昆虫有害生物的组合物和方法
JP6274161B2 (ja) 2015-06-25 2018-02-07 トヨタ自動車株式会社 薬剤誘導性プロモーター及びこれを用いた遺伝子発現誘導方法
MX2018001523A (es) 2015-08-06 2018-03-15 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas derivadas de plantas y metodos para su uso.
EP3347475B1 (en) 2015-09-11 2022-11-16 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
BR112018006543B1 (pt) 2015-09-30 2022-04-05 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Uso de isotianil para o controle da zebra da batata frita
WO2017105987A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3416487A4 (en) * 2016-02-08 2019-12-11 Colorado Wheat Research Foundation, Inc. HERBICIDAL SAFENER COMBINATIONS FOR ACETYLCOENZYME-A-CARBOXYLASE-HERBICIDE-RESISTANT PLANTS
WO2017178407A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungicidal combinations
EP3960863B1 (en) 2016-05-04 2024-11-13 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
BR112018076047A2 (pt) 2016-06-16 2019-03-26 Pioneer Hi Bred Int elemento de silenciamento, construto de dna, cassete de expressão, célula hospedeira, composição, célula vegetal, planta ou parte de planta, semente transgênica, método para controlar um inseto-praga de planta e kit
BR112018077339A2 (pt) 2016-07-01 2019-04-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. polipeptídeo inseticida recombinante, composição, polinucleotídeo recombinante, construto de dna, planta transgênica e métodos
US20210292778A1 (en) 2016-07-12 2021-09-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
CN109688816A (zh) 2016-07-29 2019-04-26 拜耳作物科学股份公司 活性化合物结合物和保护植物的繁殖材料的方法
BR112019002342A2 (pt) 2016-08-05 2019-10-01 Ricetec Inc métodos e composições para combinações de mutações associadas a resistência/tolerância contra herbicidas no arroz
CN106148558B (zh) * 2016-09-19 2019-08-02 山东农业大学 一种玉米烟嘧磺隆抗感分子标记及其应用
WO2018054829A1 (en) 2016-09-22 2018-03-29 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives and their use as fungicides
EP3515907A1 (en) 2016-09-22 2019-07-31 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives
US20190225974A1 (en) 2016-09-23 2019-07-25 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome optimization in plants
CA3041351A1 (en) 2016-10-26 2018-05-03 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of pyraziflumid for controlling sclerotinia spp in seed treatment applications
EP3535285B1 (en) 2016-11-01 2022-04-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CA3202115C (en) * 2016-11-16 2023-12-19 Floratine Products Group, Inc. Method to use a colored photoluminescent composition in agricultural applications
CN110267975B (zh) 2016-11-23 2024-04-19 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 Axmi669和axmi991毒素基因及其使用方法
BR112019011616A2 (pt) 2016-12-08 2019-10-22 Bayer Ag uso de inseticidas no controle de larvas
WO2018108627A1 (de) 2016-12-12 2018-06-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
EP3332645A1 (de) 2016-12-12 2018-06-13 Bayer Cropscience AG Verwendung substituierter pyrimidindione oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
US11174295B2 (en) 2016-12-14 2021-11-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3559241A1 (en) 2016-12-22 2019-10-30 Basf Agricultural Solutions Seed Us Llc Use of cry14 for the control of nematode pests
CA3046226A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
BR112019014720A2 (pt) 2017-01-18 2020-04-07 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC métodos para conferir resistência a doença em uma planta e para aumentar o rendimento em uma planta
EP3571303A1 (en) 2017-01-18 2019-11-27 Basf Agricultural Solutions Seed Us Llc Bp005 toxin gene and methods for its use
BR112019016394A2 (pt) 2017-02-08 2020-04-07 Pioneer Hi Bred Int construto de dna, pilha molecular, pilha de melhoramento, planta transgênica ou progênie da mesma, composição e método para controlar uma população de praga de inseto
CA3055317A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
RU2019140646A (ru) 2017-05-11 2021-06-11 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные белки и способы их применения
WO2019025153A1 (de) 2017-07-31 2019-02-07 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung von substituierten n-sulfonyl-n'-aryldiaminoalkanen und n-sulfonyl-n'-heteroaryldiaminoalkanen oder deren salzen zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
WO2019057661A1 (en) 2017-09-19 2019-03-28 Bayer Aktiengesellschaft USE OF ISOTIANIL AGAINST PANAMA'S DISEASE
BR112020008092A2 (pt) 2017-10-24 2020-09-15 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica
US20210032651A1 (en) 2017-10-24 2021-02-04 Basf Se Improvement of herbicide tolerance to hppd inhibitors by down-regulation of putative 4-hydroxyphenylpyruvate reductases in soybean
CA3120976A1 (en) 2017-11-30 2019-06-06 Boragen, Inc. Benzoxaborole compounds and formulations thereof
CA3087861A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant health assay
EP3764796A4 (en) 2018-03-14 2021-12-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. INSECTICIDAL PROTEINS FROM PLANTS AND METHOD OF USING THEM
CN112020302B9 (zh) 2018-03-14 2023-05-09 先锋国际良种公司 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
EP3768845A1 (en) 2018-03-23 2021-01-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of identifying, selecting, and producing disease resistant crops
WO2019203942A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of identifying, selecting, and producing bacterial leaf blight resistant rice
WO2019233863A1 (de) 2018-06-04 2019-12-12 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame bizyklische benzoylpyrazole
WO2019236257A1 (en) 2018-06-06 2019-12-12 Huazhong Agricultural University Methods of identifying, selecting, and producing southern corn rust resistant crops
AU2019309023A1 (en) 2018-07-26 2021-02-18 Bayer Aktiengesellschaft Use of the succinate dehydrogenase inhibitor fluopyram for controlling root rot complex and/or seedling disease complex caused by rhizoctonia solani, fusarium species and pythium species in brassicaceae species
MX2021001904A (es) 2018-08-18 2021-05-27 Boragen Inc Formas solidas de benzoxaborol sustituido y composiciones de las mismas.
US11878999B2 (en) 2018-08-29 2024-01-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CN109220774B (zh) * 2018-09-12 2021-05-07 烟台市林业科学研究所 一种黑松化学去雄方法
EP3852532A1 (en) 2018-09-17 2021-07-28 Bayer Aktiengesellschaft Use of the fungicide isoflucypram for controlling claviceps purpurea and reducing sclerotia in cereals
EA202190783A1 (ru) 2018-09-17 2021-07-02 Байер Акциенгезельшафт Применение флуопирама, ингибитора сукцинатдегидрогеназы, для борьбы с claviceps purpurea и уменьшения количества склероциев в зерновых культурах
US11109588B2 (en) 2019-02-19 2021-09-07 Gowan Company, L.L.C. Stable liquid formulations and methods of using the same
TW202118392A (zh) 2019-07-22 2021-05-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之５－胺基取代的吡唑及三唑
CN118496198A (zh) 2019-07-23 2024-08-16 拜耳公司 作为农药的新的杂芳基-三唑化合物
MX2022000954A (es) 2019-07-23 2022-02-14 Bayer Ag Novedosos compuestos de heteroaril-triazol como plaguicidas.
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
WO2021041077A1 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of identifying, selecting, and producing anthracnose stalk rot resistant crops
EP4034656A1 (en) 2019-09-26 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
US20220361492A1 (en) 2019-10-02 2022-11-17 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
KR20220081359A (ko) 2019-10-09 2022-06-15 바이엘 악티엔게젤샤프트 살충제로서의 신규 헤테로아릴-트리아졸 화합물
DK4041721T3 (da) 2019-10-09 2024-05-27 Bayer Ag Hidtil ukendte heteroaryltriazolforbindelser som pesticider
CN110656114B (zh) * 2019-10-18 2022-07-01 云南中烟工业有限责任公司 一种烟草色素合成相关的基因及其应用
CN114641467A (zh) 2019-11-07 2022-06-17 拜耳公司 用于防治动物有害物的取代的磺酰胺
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
EP4061131A1 (en) 2019-11-18 2022-09-28 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
CN111153974A (zh) 2020-01-15 2020-05-15 华中农业大学 玉米抗病基因和分子标记及其应用
CA3165291A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Pairwise Plants Services, Inc. Suppression of shade avoidance response in plants
CN111154748B (zh) * 2020-02-06 2022-06-10 江南大学 一种提高l-异亮氨酸合成纯度的乙酰羟酸合酶突变体
JP2023513624A (ja) 2020-02-18 2023-03-31 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 殺有害生物剤としてのヘテロアリール－トリアゾール化合物
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
US20230151382A1 (en) 2020-04-15 2023-05-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant pathogen effector and disease resistance gene identification, compositions, and methods of use
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
MX2022012878A (es) 2020-04-16 2022-12-08 Pairwise Plants Services Inc Metodos para controlar el tama?o del meristema para la mejora de cultivos.
US20230212163A1 (en) 2020-04-21 2023-07-06 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituted condensed heterocyclic derivatives as pest control agents
CN115915941A (zh) 2020-05-06 2023-04-04 拜耳公司 作为杀真菌化合物的吡啶（硫代）酰胺
TW202208347A (zh) 2020-05-06 2022-03-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
BR112022023012A2 (pt) 2020-05-12 2022-12-20 Bayer Ag (tio)amidas de triazina e pirimidina como compostos fungicidas
EP4153566A1 (en) 2020-05-19 2023-03-29 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds
CN116096230A (zh) 2020-06-02 2023-05-09 成对植物服务股份有限公司 控制分生组织大小以改良作物的方法
EP4161906A1 (en) 2020-06-04 2023-04-12 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides
WO2021249995A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Bayer Aktiengesellschaft Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides
US20210395767A1 (en) 2020-06-17 2021-12-23 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
CN116157017A (zh) 2020-06-18 2023-05-23 拜耳公司 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物
CA3187291A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
BR112022025710A2 (pt) 2020-06-19 2023-03-07 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
WO2021255091A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
EP4175961A1 (de) 2020-07-02 2023-05-10 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
CN115867564A (zh) 2020-07-14 2023-03-28 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022040510A1 (en) 2020-08-21 2022-02-24 Bayer Cropscience Lp Combinations of trichoderma and bradyrhizobium
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129200A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Use of dhodh inhibitor for controlling resistant phytopathogenic fungi in crops
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
MX2023009468A (es) 2021-02-11 2024-01-31 Pairwise Plants Services Inc Metodos y composiciones para modificar niveles de citoquinina oxidasa en plantas.
CA3211121A1 (en) 2021-02-25 2022-09-01 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture in plants
WO2022207494A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2022207496A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
CN115216554A (zh) 2021-04-16 2022-10-21 华中农业大学 植物病原体效应子和疾病抗性基因鉴定、组合物和使用方法
CN117597344A (zh) 2021-05-06 2024-02-23 拜耳公司 烷基酰胺取代的环状咪唑及其作为杀虫剂的用途
TW202311258A (zh) 2021-05-12 2023-03-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為除蟲劑之經2-(雜)芳基取代之稠合雜環衍生物
US20220411813A1 (en) 2021-06-17 2022-12-29 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of growth regulating factor family transcription factors in soybean
KR102307187B1 (ko) * 2021-06-17 2021-10-01 주식회사 명주산업 살균 및 살충 효과를 갖는 친환경 제초제 조성물 및 이를 이용한 잡초 제거방법
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
EP4362663A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing root system development
WO2023012342A1 (en) 2021-08-06 2023-02-09 Kws Vegetables B.V. Durable downy mildew resistance in spinach
WO2023019188A1 (en) 2021-08-12 2023-02-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
WO2023017120A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
EP4388110A1 (en) 2021-08-17 2024-06-26 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants
IL310966A (en) 2021-08-25 2024-04-01 Bayer Ag Pyrazyl-triazole as pesticidal compounds
WO2023034731A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
CA3232804A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
EP4413127A1 (en) 2021-10-04 2024-08-14 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
WO2023060152A2 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
EP4426677A1 (en) 2021-11-03 2024-09-11 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds
CN118317956A (zh) 2021-11-30 2024-07-09 拜耳公司 作为杀真菌化合物的双(杂)芳基硫醚噁二嗪
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
AR128372A1 (es) 2022-01-31 2024-04-24 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas
WO2023148029A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in cereals
WO2023148033A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in oilseed rape
WO2023148028A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests
WO2023148035A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in rice
WO2023148036A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in soybean
WO2023148030A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in corn
AU2023216389A1 (en) 2022-02-01 2024-08-08 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in cotton
MX2024010647A (es) 2022-03-02 2024-09-06 Pairwise Plants Services Inc Modificacion de genes del receptor de brasinoesteroides para mejorar rasgos de rendimiento.
WO2023192838A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
AU2023251095A1 (en) 2022-04-07 2024-10-17 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
US20230383305A1 (en) 2022-04-21 2023-11-30 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
US20230348922A1 (en) 2022-05-02 2023-11-02 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance
WO2023213670A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine
WO2023213626A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms
WO2023215809A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits
AR129709A1 (es) 2022-06-27 2024-09-18 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas
AR129749A1 (es) 2022-06-29 2024-09-25 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos
AR129748A1 (es) 2022-06-29 2024-09-25 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos
US20240043857A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
US20240060081A1 (en) 2022-08-11 2024-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024054880A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4385326A1 (en) 2022-12-15 2024-06-19 Kimitec Biogorup Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants
WO2024137438A2 (en) 2022-12-19 2024-06-27 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Insect toxin genes and methods for their use
WO2024173622A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
US20240294933A1 (en) 2023-03-02 2024-09-05 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
US20240301438A1 (en) 2023-03-09 2024-09-12 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid signaling pathway genes for improving yield traits in plants

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4535060A (en) 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
US4658093A (en) * 1983-07-11 1987-04-14 Hellman Martin E Software distribution system
ATE93542T1 (de) 1984-12-28 1993-09-15 Plant Genetic Systems Nv Rekombinante dna, die in pflanzliche zellen eingebracht werden kann.
US4685131A (en) * 1985-03-11 1987-08-04 General Instrument Corp. Program blocking method for use in direct broadcast satellite system
AU590597B2 (en) 1985-08-07 1989-11-09 Monsanto Technology Llc Glyphosate-resistant plants
US4940835A (en) * 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
US4822146A (en) 1986-04-07 1989-04-18 Canon Kabushiki Kaisha Optical modulation element
US5605011A (en) * 1986-08-26 1997-02-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5013659A (en) * 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
IL83348A (en) * 1986-08-26 1995-12-08 Du Pont Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5378824A (en) * 1986-08-26 1995-01-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5010571A (en) * 1986-09-10 1991-04-23 Titan Linkabit Corporation Metering retrieval of encrypted data stored in customer data retrieval terminal
US5312910A (en) 1987-05-26 1994-05-17 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5145783A (en) 1987-05-26 1992-09-08 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US4971908A (en) * 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US4999806A (en) * 1987-09-04 1991-03-12 Fred Chernow Software distribution system
US4868877A (en) * 1988-02-12 1989-09-19 Fischer Addison M Public key/signature cryptosystem with enhanced digital signature certification
US5084082A (en) * 1988-09-22 1992-01-28 E. I. Du Pont De Nemours And Company Soybean plants with dominant selectable trait for herbicide resistance
US5310667A (en) 1989-07-17 1994-05-10 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5097025A (en) 1989-08-01 1992-03-17 The Rockefeller University Plant promoters
US5138712A (en) * 1989-10-02 1992-08-11 Sun Microsystems, Inc. Apparatus and method for licensing software on a network of computers
DE3938937A1 (de) 1989-11-24 1991-05-29 Wacker Chemitronic Verfahren und vorrichtung zur herstellung von siliciumstaeben mit hohem sauerstoffgehalt durch tiegelfreies zonenziehen, dadurch erhaeltliche siliciumstaebe und daraus hergestellte siliciumscheiben
EP0536330B1 (en) 1990-06-25 2002-02-27 Monsanto Technology LLC Glyphosate tolerant plants
US5058162A (en) * 1990-08-09 1991-10-15 Hewlett-Packard Company Method of distributing computer data files
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5866775A (en) 1990-09-28 1999-02-02 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5599769A (en) 1990-11-13 1997-02-04 Hoechst Aktiengesellschaft Synergistic herbicidal compositions comprising glyphosate or glufosinate in combination with a sulfonylurea herbicide
JPH0799497B2 (ja) * 1990-12-14 1995-10-25 インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレイション ソフトウェアの使用を管理するための装置及び方法
FR2673642B1 (fr) 1991-03-05 1994-08-12 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimere comprenant un promoteur capable de conferer a une plante une tolerance accrue au glyphosate.
FR2673643B1 (fr) * 1991-03-05 1993-05-21 Rhone Poulenc Agrochimie Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide.
US5237614A (en) * 1991-06-07 1993-08-17 Security Dynamics Technologies, Inc. Integrated network security system
US5731180A (en) 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants
JPH05201815A (ja) 1991-08-02 1993-08-10 Monsanto Co 除草剤組成物、その製造方法およびその使用方法
US5521815A (en) * 1992-01-31 1996-05-28 K.L.E. Irrevocable Trust Uniform system for verifying and tracking articles of value
US5276735A (en) * 1992-04-17 1994-01-04 Secure Computing Corporation Data enclave and trusted path system
US5235642A (en) * 1992-07-21 1993-08-10 Digital Equipment Corporation Access control subsystem and method for distributed computer system using locally cached authentication credentials
BR9408093A (pt) * 1993-11-19 1997-08-12 Biotechnology Res & Dev Região reguladora quimérica para expressar genes em plantas cassete para expressão de um gene cassete para expressão induzível de um gene estranho processo para expressar um gene em uma planta plasmideo processo para expressão induzível de um gene estranho em uma planta processo para expressão induzível de um gene estranho em uma planta plasmídeo e planta transgênica
EP1235177A3 (en) * 1993-12-16 2003-10-08 divine technology ventures Digital active advertising
US5537618A (en) * 1993-12-23 1996-07-16 Diacom Technologies, Inc. Method and apparatus for implementing user feedback
US5608147A (en) * 1994-01-11 1997-03-04 Kaphammer; Bryan J. tfdA gene selectable markers in plants and the use thereof
US5509074A (en) * 1994-01-27 1996-04-16 At&T Corp. Method of protecting electronically published materials using cryptographic protocols
US5505461A (en) * 1994-04-19 1996-04-09 Caesars World, Inc. Method for meeting IRS reporting requirements related to an electronic gaming machine
US5563946A (en) * 1994-04-25 1996-10-08 International Business Machines Corporation Method and apparatus for enabling trial period use of software products: method and apparatus for passing encrypted files between data processing systems
JP3638309B2 (ja) * 1994-06-23 2005-04-13 株式会社シマノ 自転車用ハブブレーキ
JPH10504150A (ja) * 1994-07-19 1998-04-14 バンカーズ トラスト カンパニー 商用暗号システムにおけるディジタル署名を安全に使用するための方法
DE69534757T2 (de) * 1994-09-15 2006-08-31 International Business Machines Corp. System und Verfahren zur sicheren Speicherung und Verteilung von Daten unter Verwendung digitaler Unterschriften
US5717923A (en) * 1994-11-03 1998-02-10 Intel Corporation Method and apparatus for dynamically customizing electronic information to individual end users
US5630131A (en) * 1994-11-14 1997-05-13 Object Technology Licensing Corp. Method and apparatus for importing and exporting archive files for a graphical user interface
US5629980A (en) * 1994-11-23 1997-05-13 Xerox Corporation System for controlling the distribution and use of digital works
JPH08263438A (ja) * 1994-11-23 1996-10-11 Xerox Corp ディジタルワークの配給及び使用制御システム並びにディジタルワークへのアクセス制御方法
US6367013B1 (en) * 1995-01-17 2002-04-02 Eoriginal Inc. System and method for electronic transmission, storage, and retrieval of authenticated electronic original documents
US5677955A (en) * 1995-04-07 1997-10-14 Financial Services Technology Consortium Electronic funds transfer instruments
AU691425B2 (en) * 1995-04-10 1998-05-14 Monsanto Technology Llc Glyphosate formulations containing etheramine surfactants
ZA964248B (en) 1995-06-23 1997-11-27 Du Pont Uniform mixtures of pesticidal granules.
FR2736926B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene
EP0880840A4 (en) * 1996-01-11 2002-10-23 Mrj Inc DEVICE FOR CONTROLLING ACCESS AND DISTRIBUTION OF DIGITAL PROPERTY
PL329125A1 (en) 1996-03-29 1999-03-15 Monsanto Europe Sa Novel application of n-(phosphonomethyl) glycin and derivatives thereof
US6072050A (en) 1996-06-11 2000-06-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic promoters
US5727920A (en) * 1996-07-19 1998-03-17 Hull, Deceased; Harold Lawrence Vertical lift towing dolly including variable, attachable platforms
US5821195A (en) * 1996-08-16 1998-10-13 Monsanto Company Sequential application method for enhancing glyphosate herbicidal effectiveness with reduced antagonism
NZ334187A (en) 1996-08-16 2000-09-29 Monsanto Co Sequential application method for treating plants with exogenous chemicals and an accession agent
EP0936858B1 (en) * 1996-10-25 2003-03-12 Monsanto Technology LLC Composition and method for treating plants with exogenous chemicals
US20030041357A1 (en) * 1996-11-07 2003-02-27 Zeneca Limited Herbicide resistant plants
US6376754B1 (en) * 1997-03-07 2002-04-23 Asgrow Seed Company Plants having resistance to multiple herbicides and its use
US7022896B1 (en) * 1997-04-04 2006-04-04 Board Of Regents Of University Of Nebraska Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
US6133199A (en) 1997-07-30 2000-10-17 Monsanto Company Process and compositions promoting biological effectiveness of exogenous chemical substances in plants
DE19754929A1 (de) * 1997-12-10 1999-06-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Verfahren zur Herstellung transgener Pflanzen mit veränderter 5-Aminolävulinsäure-Biosynthese und Verfahren zur Identifizierung von Effektoren der 5-Aminolävulinsäure Synthese
IL138260A0 (en) * 1998-03-06 2001-10-31 Zeneca Mogen B V Method for the induction of pathogen resistance in plants
ES2200509T3 (es) 1998-03-09 2004-03-01 Monsanto Technology Llc Mezclas para el control de las malas hierbas en cultivos de soja tolerantes a glifosato.
US5914451A (en) 1998-04-06 1999-06-22 Monsanto Company Efficiency soybean transformation protocol
CN1314911A (zh) * 1998-05-01 2001-09-26 麦克西根股份有限公司 用dna改组优化害虫抗性基因
DE122009000030I2 (de) * 1998-06-16 2009-11-05 Basf Se Herbizide mischung mit synergistischer wirkung
KR100414132B1 (ko) * 1998-07-02 2004-01-07 아스트로파워 다결정성 실리콘 박막, 다결정성 실리콘 박막 전자 디바이스, 집적 태양 전지, 태양전지 모듈 및 그 제조방법
AU5482299A (en) 1998-08-12 2000-03-06 Maxygen, Inc. Dna shuffling to produce herbicide selective crops
US6333449B1 (en) * 1998-11-03 2001-12-25 Plant Genetic Systems, N.V. Glufosinate tolerant rice
EP1135511B1 (en) 1998-11-17 2009-06-17 Monsanto Technology LLC Phosphonate metabolizing plants
AU2159800A (en) 1998-11-30 2000-06-19 Monsanto Technology Llc Promoting biological effectiveness of exogenous chemical substances in plants
CN1359422A (zh) 1999-04-29 2002-07-17 辛甄塔有限公司 抗除草剂植物
CA2365592C (en) * 1999-04-29 2011-11-15 Zeneca Limited Herbicide resistant plants comprising epsps
RU2235778C2 (ru) 1999-04-29 2004-09-10 Синджента Лимитед Выделенный полинуклеотид, способный придавать растению устойчивость или толерантность к глифосатному гербициду, вектор, способ получения растений, толерантных или устойчивых к глифосатному гербициду, способ регенерации трансформированного растения и способ селективной борьбы с сорняками
BR0010069A (pt) 1999-04-29 2002-01-22 Syngenta Ltd Polinucelotìdeo isolado, vetor, material vegetal, plantas ineiras, férteis, morfologicamente normais, plantas de milho, métodos para controlar seletivamente ervas daninhas em um campo, e para produzir vegetais que sejam substancialmente tolerantes resistentes ao herbicida glifosato, uso de polinucleotìdeo, e, métodos para selecionar material biológico transformado, e para regenerar uma planta transformada fértil para conter dna estranho
US6369001B1 (en) 1999-08-11 2002-04-09 Monsanto Technology, Llc Microemulsion coformulation of a graminicide and a water-soluble herbicide
US6908882B1 (en) 1999-09-09 2005-06-21 Monsanto Company Enhanced method of killing weeds with glyphosate herbicide
US6842863B1 (en) * 1999-11-23 2005-01-11 Microsoft Corporation Certificate reissuance for checking the status of a certificate in financial transactions
WO2001065922A2 (en) * 2000-03-09 2001-09-13 E. I. Du Pont De Nemours And Company Sulfonylurea-tolerant sunflower plants
AU4200501A (en) 2000-03-09 2001-09-17 Monsanto Technology Llc Methods for making plants tolerant to glyphosate and compositions thereof
US6943280B2 (en) 2000-05-10 2005-09-13 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Resistance to acetohydroxycid synthase-inhibiting herbicides
DE10022989A1 (de) * 2000-05-11 2001-11-22 Aventis Cropscience Gmbh Kombinationen von Pflanzenschutzmitteln mit organischen oder anorganischen Trägermaterialien
BRPI0100752B1 (pt) 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
CA2421118A1 (en) 2000-09-09 2002-03-14 Basf Plant Science Gmbh Modified tet-inducible system for regulation of gene expression in plants
US7018794B2 (en) 2000-10-06 2006-03-28 Novozymes, Inc. Methods for monitoring multiple gene expression
AU2002220181B2 (en) 2000-10-30 2007-12-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Novel glyphosate n-acetyltransferase (gat) genes
US20090011938A1 (en) * 2000-10-30 2009-01-08 Pioneer Hi--Bred International, Inc. Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes
US7462481B2 (en) * 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
JP4091429B2 (ja) 2000-11-29 2008-05-28 クミアイ化学工業株式会社 アセト乳酸シンターゼ遺伝子をコードする遺伝子
US7356690B2 (en) * 2000-12-11 2008-04-08 International Business Machines Corporation Method and system for managing a distributed trust path locator for public key certificates relating to the trust path of an X.509 attribute certificate
US7687434B2 (en) 2000-12-22 2010-03-30 Monsanto Technology, Llc Method of improving yield and vigor of plants
US7395430B2 (en) * 2001-08-28 2008-07-01 International Business Machines Corporation Secure authentication using digital certificates
US20020144108A1 (en) * 2001-03-29 2002-10-03 International Business Machines Corporation Method and system for public-key-based secure authentication to distributed legacy applications
WO2002092856A1 (en) 2001-05-15 2002-11-21 Monsanto Technology Llc A method of selecting dna constructs for herbicide tolerance in plants
AU2003224032A1 (en) * 2002-04-03 2003-10-13 Syngenta Participations Ag Herbicidal composition comprising phenylpropynyloxypyridine compounds
AR039501A1 (es) 2002-04-30 2005-02-23 Verdia Inc Genes de glifosato n-acetil transferasa (gat)
US20040023802A1 (en) 2002-05-16 2004-02-05 Monsanto Technology, L.L.C. Increasing plant yield and/or vigor by seed treatment with a neonicotinoid compound
JP2007500514A (ja) 2003-04-29 2007-01-18 パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド 新規なグリホセートｎ−アセチルトランスフェラーゼ（ｇａｔ）遺伝子
BRPI0416159A (pt) 2003-11-03 2007-01-16 Bayer Cropscience Gmbh agente de eficácia herbicida
WO2005069986A2 (en) * 2004-01-20 2005-08-04 Monsanto Technology Llc Chimeric promoters for use in plants
US7405074B2 (en) 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
DK2308976T4 (en) 2004-04-30 2017-07-03 Dow Agrosciences Llc Enjoy herbicide resistance gene
US7306946B2 (en) * 2004-07-02 2007-12-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Antifungal polypeptides
US7496887B2 (en) * 2005-03-01 2009-02-24 International Business Machines Corporation Integration of data management operations into a workflow system
US7973218B2 (en) 2005-08-24 2011-07-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for controlling weeds
CN1313614C (zh) 2005-10-17 2007-05-02 中国农业科学院生物技术研究所 草甘膦乙酰转移酶基因及其应用
US7928296B2 (en) * 2006-10-30 2011-04-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof

Also Published As

Publication number Publication date
MA29777B1 (fr) 2008-09-01
US20080234130A1 (en) 2008-09-25
US20130288898A1 (en) 2013-10-31
US7973218B2 (en) 2011-07-05
JP2009505654A (ja) 2009-02-12
AP2008004392A0 (en) 2008-04-30
CA2625371A1 (en) 2007-03-01
BRPI0615088A2 (pt) 2009-07-14
US7803992B2 (en) 2010-09-28
US7622641B2 (en) 2009-11-24
EP1931791B1 (en) 2012-02-08
ECSP088304A (es) 2008-04-28
MEP3508A (xx) 2010-02-10
US20070130641A1 (en) 2007-06-07
CA2620002A1 (en) 2007-03-01
WO2007024866A2 (en) 2007-03-01
US20120157308A1 (en) 2012-06-21
AR057091A1 (es) 2007-11-14
CA2625371C (en) 2012-06-26
MX2008002615A (es) 2008-03-14
US20070079393A1 (en) 2007-04-05
UY29761A1 (es) 2007-03-30
AR055128A1 (es) 2007-08-08
EP1917360A2 (en) 2008-05-07
WO2007024782A2 (en) 2007-03-01
AU2006283504B2 (en) 2011-08-25
WO2007024782A3 (en) 2007-08-09
EP1931791A2 (en) 2008-06-18
WO2007024866A3 (en) 2007-06-21
US20090264290A1 (en) 2009-10-22
ATE544861T1 (de) 2012-02-15
KR20080052606A (ko) 2008-06-11
CL2009001635A1 (es) 2009-12-11
US8203033B2 (en) 2012-06-19
MX2008002616A (es) 2008-03-14
CR9757A (es) 2008-05-09
EA201000757A1 (ru) 2010-12-30
RS20080076A (en) 2009-07-15
US20070074303A1 (en) 2007-03-29
CA2620002C (en) 2012-04-10
EA200800622A1 (ru) 2008-08-29
TW200730625A (en) 2007-08-16
US20070061917A1 (en) 2007-03-15
AU2006283504A1 (en) 2007-03-01
NZ568867A (en) 2010-12-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0615087A2 (pt) métodos e composições para a expressão de um polinucleotìdeo de interesse
US8772024B2 (en) Yield enhancement in plants by modulation of a ZM-ZFP1 protein
US7868224B2 (en) Compositions and methods for increasing plant tolerance to high population density
US20120079622A1 (en) Yield Enhancement in Plants by Modulation of a ZM-LOBDP1 Protein
BRPI0710455A2 (pt) polipeptìdeo isolado, polinucleotìdeo isolado e métodos para aumentar o nìvel de um polipeptìdeo em uma planta, para modular o nìvel de um polipeptìdeo em uma planta e para modificar o crescimento de uma planta
CN101410524A (zh) 表达目标多核苷酸的方法和组合物
US20040248304A1 (en) Nematode-regulated genes and promoters
EP1228226B1 (en) Genes and methods for manipulation of growth
WO2009000789A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of maize myb-ada2 gene
WO2008145761A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of garp transcripton factor zmrr10_p
WO2009000848A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of zmago1
US20130111634A1 (en) Methods and compositions for silencing genes using artificial micrornas
WO2008138975A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of zmpkt
US20120073019A1 (en) Yield Enhancement in Plants by Modulation of a ZM-CIPK1 Protein
EP2155882A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of maize mads box transcription factor silky1
WO2009000876A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of maize rp120-rna binding protein homolog (ebna2-coact)
WO2008135603A2 (en) Over-expression of maize cox viia subunit for enhanced yield
US20140115738A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of a maize wspl1 protein
US20110078826A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of a zm-eref-ts protein
US20100269228A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of a maize transcription coactivator p15 (pc4) protein
US20110047650A1 (en) Yield enhancement in plants by modulation of zea mays protein kinase-like gene (zmpkl1)

Legal Events

Date Code Title Description
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B11E Dismissal acc. art. 34 of ipl - requirements for examination incomplete
B11T Dismissal of application maintained [chapter 11.20 patent gazette]