BRPI0514685B1

BRPI0514685B1 - Sistema de amostrador de semente automatizado e método de triar uma pluralidade de sementes para uma característica testável

Info

Publication number: BRPI0514685B1
Application number: BRPI0514685-2A
Authority: BR
Inventors: Kevin L. Deppermann; Qiang Zhang; Terri B. Hinchey
Original assignee: Monsanto Technology Llc
Priority date: 2004-08-26
Filing date: 2005-08-26
Publication date: 2019-04-16
Also published as: ZA200701589B; US11530963B2; US7849632B2; US20060048248A1; US20130244321A1; BRPI0514685A; US20110081716A1; EP1869961A3; EP1869961A2; MX2007002306A; US20060046264A1; EP1862051A2; US20060048247A1; ES2485892T3; EP2798947A3; WO2006026466A2; US7877926B2; CN102742394A; EP2279658B1; US20090025288A1

Abstract

coletor de amostra de semente automatizado e métodos de amostrar, testar e aumentar semente a presente invenção refere-se a um coletor de amostra de semente automatizado, que inclui uma estação de amostragem; coletor de amostra para remover o material de uma semente na estação de amostragem; um transportador de semente para transportar a semente da estação de amostragem para um compartimento em uma bandeja de semente; e um transportador para transportar a material removido da semente para um compartimento correspondente em uma bandeja de amostra. o método da presente invenção compreende alimentar as sementes individualmente para uma estação de amostragem, remover uma amostra da semente na estação de amostragem; transportar a amostra para um compartimento em uma bandeja de amostra e transportar a semente para um compartimento correspondente em uma bandeja de semente. as amostras podem ser testadas, e as sementes podem ser classificadas de acordo com os resultados da testagem de suas amostras correspondentes.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para SISTEMA DE AMOSTRADOR DE SEMENTE AUTOMATIZADO E MÉTODO DE TRIAR UMA PLURALIDADE DE SEMENTES PARA UMA CARACTERÍSTICA TESTÁVEL.

REFERÊNCIA CRUZADA PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS [001] Este pedido de patente reivindica prioridade ao Pedido Provisório US No. 60/604.604, depositado em 26 de agosto de 2004 e Pedido Provisório US No. 60/691.100, depositado em 15 de junho de 2005, as descrições inteiras destes são aqui incorporadas por referência.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [002] A presente invenção refere-se aos sistemas e métodos para tirar amostras de materiais biológicos como sementes.

[003] Em desenvolvimento e melhoria de planta, melhorias genéticas são feitas na planta, ou através de procriação seletiva ou manipulação genética, e quando uma melhoria desejável é alcançada, uma quantidade comercial é desenvolvida plantando e colhendo as sementes em várias gerações. Nem todas as sementes expressam os traços desejados, e desse modo estas sementes necessitam ser separadas da população. Para acelerar o processo de aumentar a população, amostras estatísticas são tiradas e testadas para selecionar sementes da população que não adequadamente expressam o traço desejado. Porém esta amostragem estatística necessariamente permite algumas sementes sem o traço desejável permanecer na população, e também pode inadvertidamente excluir algumas sementes com o traço desejável da população desejada.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [004] A presente invenção refere-se aos sistemas e métodos de não destrutivamente colher material das sementes. Os métodos são particularmente adaptados para automatização, que permite maior

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2/29 amostragem que foi previamente praticado. Com colhimento automatizado, não destrutivo permitido por pelo menos algumas das modalidades desta invenção, é possível testar cada semente na população, e separar aquelas sementes que não expressam o traço desejado. Isto acelera grandemente o processo de aumentar uma população de semente dada, e pode resultar em uma população final melhorada.

[005] Modalidades desta invenção facilitam a testagem de maior parte ou todas as sementes em uma população antes da plantação, de forma que o tempo e recursos não são perdidos em cultivar plantas sem os traços desejados.

[006] Em geral o sistema desta invenção compreende: uma estação de amostragem; amostrador para remover o material de uma semente na estação de amostragem; um transportador de semente para transportar a semente da estação de amostragem para um compartimento em uma bandeja de semente; e um transportador para transportar o material removido da semente para um compartimento correspondente em uma bandeja de amostra.

[007] De acordo com o método desta invenção, as sementes são individualmente alimentadas para uma estação de amostragem; e contidas na estação de amostragem enquanto uma amostra é tirada da semente. Cada amostra é transportada para pelo menos um compartimento individual em uma bandeja de amostra, e cada semente é transportada para um compartimento em uma bandeja de semente com uma relação conhecida com o(s) compartimento(s) da bandeja de amostra para o(s) qual(is) a amostra correspondente foi transportada. As amostras podem ser testadas, e as sementes podem ser classificadas com base nos resultados do teste.

[008] Este sistema e método desta invenção facilitam a amostragem automatizada, não-destrutiva das sementes. Eles

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3/29 permitem a testagem e classificação de volumes grandes de sementes, assim facilitando o aumento das populações de semente com traços desejáveis. Estas e outras características e vantagens serão em parte evidentes, e em parte apontadas doravante.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [009] Figura 1 é uma vista em perspectiva de uma primeira modalidade de um sistema de amostrador de semente construído de acordo com os princípios desta invenção;

[0010] Figura 2 é uma vista em perspectiva aumentada do conjunto de amostrador de semente do sistema de amostrador de semente;

[0011 ] Figura 3 é uma vista em perspectiva aumentada do depósitoalimentador e mecanismo de alimentação de semente do conjunto de amostrador de semente;

[0012] Figura 4 é uma vista em perspectiva do furador para raspar amostras das sementes;

[0013] Figura 5 é uma vista em perspectiva da corrediça para dirigir o furador;

[0014] Figura 6 é uma vista em perspectiva do pistão no mecanismo de alimentação do depósito-alimentador;

[0015] Figura 7 é uma vista em perspectiva de uma plataforma com uma pluralidade de bandejas de semente e bandejas de amostra montadas nelas;

[0016] Figura 8 é uma vista em perspectiva do mecanismo de translação bidimensional;

[0017] Figura 9 é uma vista em perspectiva da entrada do transportador de semente;

[0018] Figura 10 é uma vista em perspectiva da saída do transportador de semente;

[0019] Figura 11 é uma vista em perspectiva da saída do transportador de amostra;

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4/29 [0020] Figura 12 é uma vista em perspectiva do multiplicador de ar usado nos transportadores de semente e de amostra;

[0021] Figura 13 é uma vista de cima do topo de um sistema de amostrador de semente de processamento alto de acordo com os princípios desta invenção;

[0022] Figura 14 é uma vista de elevação lateral do sistema de amostrador de semente de processamento alto;

[0023] Figura 15 é uma vista em perspectiva frontal do sistema de amostrador de semente;

[0024] Figura 16 é uma vista em perspectiva traseira do sistema de amostrador de semente;

[0025] Figura 17 é uma vista em perspectiva da estação de amostragem do sistema de amostrador de semente de processamento alto;

[0026] Figura 18A é uma vista em perspectiva parcial de uma porção da estação de amostragem de semente de acordo com os princípios desta invenção, com o furador retraído;

[0027] Figura 18B é uma vista em perspectiva parcial de uma porção da estação de amostragem de semente de acordo com os princípios desta invenção, com o furador estendido;

[0028] Figura 19A é uma vista de elevação lateral da estação de amostragem de semente, com o furador em sua posição retraída;

[0029] Figura 19B é uma vista de elevação lateral da estação de amostragem de semente, com o furador em sua posição estendida; [0030] Figura 20 é uma vista de corte transversal longitudinal da estação de amostragem de semente;

[0031] Figura 21 é uma vista de elevação de extremidade frontal da estação de amostragem de semente;

[0032] Figura 22 é uma vista de corte transversal da estação de amostragem de semente;

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5/29 [0033] Figura 23A é uma vista de elevação lateral da roda de seleção de semente;

[0034] Figura 23B é uma vista explodida da roda de seleção de semente;

[0035] Figura 23C é uma vista de corte transversal vertical da roda de seleção de semente;

[0036] Figura 24 é uma vista de elevação frontal do mecanismo de alimentação;

[0037] Figura 25 é uma vista de elevação lateral do mecanismo de alimentação;

[0038] Figura 26A é uma vista em perspectiva do mecanismo de alimentação;

[0039] Figura 26B é uma vista de elevação lateral do mecanismo de alimentação;

[0040] Figo 26C é uma vista de corte transversal longitudinal do mecanismo de alimentação, tirada do plano da linha 26C-26C na Figura 26B;

[0041] Figura 26D é uma vista de cima do fundo do mecanismo de alimentação;

[0042] Figura 27A é uma vista de corte transversal longitudinal vertical do mecanismo de amostragem;

[0043] Figura 27B é uma vista de corte transversal vertical parcial aumentada do mecanismo de amostragem como mostrado na Figura 27A;

[0044] Figura 28A é uma vista de corte transversal vertical do mecanismo de amostragem;

[0045] Figura 28B é uma vista de corte transversal parcial aumentada do mecanismo de amostragem como mostrado na Figura 28A; e [0046] Figura 29 é um Alelograma que descreve amostras de tecido

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6/29 de endosperma de milho que sofreram PCR para detecção de um polimorfismo de SNP particular.

[0047] Numerais de referência correspondentes indicam partes correspondentes ao longo das várias vistas dos desenhos. DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERIDAS [0048] Uma primeira modalidade de um sistema de amostrador de semente automatizado construído do sistema de acordo com os princípios da presente invenção é indicada em geral como 20 na Figura

1. O sistema de amostrador de semente 20 é adaptado para isolar uma semente de um depósito-alimentador, alimentar para uma estação de amostragem, raspar uma amostra da semente, transportar a amostra para um recipiente de amostra e transportar a semente para um recipiente de semente correspondente. Como mostrado na Figura 1, o sistema de amostrador de semente compreende um suporte 22, uma estrutura 24 no suporte; conjunto de amostrador 26, uma plataforma 28 montada em um mecanismo de translação bidimensional 30 (vide também Figuras 7 e 8), um transportador de semente 32 para transportar as sementes do conjunto de amostrador de semente e um transportador de amostra 34 para transportar uma amostra removida de uma semente para o conjunto de amostrador de semente.

[0049] Como mostrado na Figura 1, na primeira modalidade preferida o suporte 22 compreende um carro com rodas 40, tendo uns quatro postes verticais 42 conectados por membros longitudinais superiores e inferiores 44 e 46, na frente e atrás, e membros transversais superiores e inferiores 48 e 50 nos lados esquerdo e direito e um tampo de mesa 52 montado sobre eles. Um rodízio 54 pode ser montado no fundo de cada poste 42 para facilitar mover o suporte 22. Os detalhes da construção do suporte 22 não são críticos à invenção, e desse modo o suporte 22 poderia ter alguma outra configuração sem divergir dos princípios desta invenção.

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7/29 [0050] Como também mostrado na Figura 1, a estrutura 24 compreende quatro postes 60 verticalmente se estendendo montados no tampo de mesa 52, que suporta uma placa em geral horizontal 62. O conjunto de amostrador 26 é montado na placa 62, como descrito em mais detalhe abaixo. Uma pérgula 64 é também montada na placa, e se estende em geral horizontalmente dele. A extremidade livre da pérgula 64 tem primeiro e segundo postes verticais 66 e 68 para montar um transportador de semente 32 e partes do transportador de amostra 34, respectivamente. Os detalhes da construção da estrutura 24 não são críticos à invenção, e desse modo a estrutura poderia ter alguma outra configuração sem divergir dos princípios desta invenção.

[0051] Como mostrado nas Figuras 1 e 2, o conjunto de amostrador 26 é montado na placa 62 da estrutura 24. O conjunto de amostrador compreende uma caixa ou depósito-alimentador 70, uma estação de amostragem 72 e um mecanismo de alimentação 74 para liberar uma semente simples do depósito-alimentador 70 para a estação de amostragem.

[0052] Como mostrado nas Figs. 1 e 7, o estágio 28 é adaptado para montar com segurança uma pluralidade de bandejas de semente 80 e bandejas de amostra 82 em posições e orientações fixas. Cada uma das bandejas de semente 80 e bandejas de amostra 82 é preferivelmente dividida em uma pluralidade de compartimentos. O número e arranjo dos compartimentos nas bandejas de semente 80 preferivelmente corresponde ao número e arranjo dos compartimentos nas bandejas de amostra 82. Isto facilita a correspondência de um-paraum entre uma semente e sua amostra. Porém, em algumas modalidades pode ser desejável fornecer compartimentos múltiplos na bandeja de amostra para cada compartimento na bandeja de semente, por exemplo, onde testes múltiplos podem ser feitos nas amostras, ou onde diferentes amostras podem ser tiradas da mesma semente (e.g.

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8/29 amostras de profundidades diferentes).

[0053] Em referência adicional a Figura 8, a plataforma 28 é montada em um mecanismo de translação bidimensional 30 que nesta modalidade preferida compreende uma base 90 com um primeiro atuador linear 92, tendo um carro transladável 94 montado em uma base 90, e um segundo atuador linear 96, tendo o carro 98 montado no carro 94 do primeiro atuador linear 92. A plataforma 28 é montada em carro 98 do segundo atuador 96 linear, e desse modo pode ser movido precisamente em duas dimensões através da operação do primeiro e segundo atuadores lineares 92 e 96.

[0054] Em referência, novamente, a Figura 1, o transportador de semente 32 compreende um tubo 100 com uma extremidade de entrada 102 adjacente à estação de amostragem 72, e uma extremidade de saída 104 montada no poste 66 da estrutura 24. Há um primeiro dispositivo venturi 106 (vide Figuras 9, 10 e 12) na extremidade de entrada 102 do tubo 100 para induzir um fluxo de ar no tubo para a extremidade de saída 104 do tubo, e um segundo dispositivo de venturi 108 na extremidade de saída 104 do tubo 100 para induzir um fluxo de ar para a extremidade de entrada 102 do tubo. O primeiro dispositivo de venturi 106 é operado para criar um fluxo de ar no tubo e tirar uma semente da estação de amostragem no tubo ao longo da primeira extremidade. O segundo dispositivo de venturi 108 é depois operado para criar um fluxo de ar na direção oposta, assim desacelerando a semente para reduzir o potencial de danificar a semente à medida que sai da extremidade de saída 104 do tubo e é liberada para um compartimento na bandeja. Nesta modalidade preferida, o segundo venturi 108 de fato pára o movimento da semente, permitindo-a cair sob gravidade em seu compartimento em uma bandeja 80. Vários sensores de posição no tubo 100 podem ser fornecidos para detectar a presença da semente, e confirmar a operação apropriada do transportador de

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9/29 semente 32.

[0055] Conforme mostrado também na Figura 1, o transportador de amostra 34 compreende um tubo 120 com uma extremidade de entrada 122 adjacente à estação de amostragem 72, e uma extremidade de saída 124 montada no poste 68 da estrutura 24. Há um primeiro dispositivo venturi 126 (vide também Figura 12) na extremidade de entrada 122 do tubo 120 para induzir um fluxo de ar no tubo para a extremidade de saída 124 do tubo. Um separador 128 (Figura 11) é fornecido na extremidade de saída para separar o material de amostra da corrente de ar que o carrega, de forma que a corrente de ar não assopra a amostra para fora do compartimento na bandeja 82. O separador preferivelmente também contém um filtro para impedir contaminação secundária das amostras.

[0056] Como mostrado na Figura 2, o conjunto de amostrador de semente 26 é adaptado para ser montado na placa 62 em um poste 140. O conjunto de amostrador de semente 26 compreende uma placa de montagem do depósito-alimentador 142, uma placa de montagem da corrediça 144 e quatro suportes de isolamento corrediços 146 entre eles. O depósito-alimentador 70 (mostrado na Figura 3) que alimenta sementes individuais para uma estação de amostragem 72 (vide também Figura 1) é montado na placa de montagem do depósitoalimentador 142. A estação de amostragem 72 compreende um ninho de semente 148 montado em uma base de ninho 150 que é suportada da placa de montagem da corrediça 144 por um par de isolantes 152. O ninho 148 tem um recesso abrindo em sua superfície de fundo, dentro do qual o depósito-alimentador 70 alimenta uma única semente. Há uma fenda no topo do ninho de semente 148 através da qual uma porção de uma semente no recesso é exposta. Um furador 154 (Figura 4) é montado em um retentor de furador 156 que é montado em uma placa de transição de corrediça 158 em uma corrediça programável 160, com

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10/29 um bloco de travamento do furador 162. A corrediça programável 160 (Figura 5) é montada no lado inferior da placa de montagem da corrediça 144, e move o furador 154 através da fenda no ninho de semente 148 para remover uma amostra de uma semente no recesso no ninho de semente.

[0057] Como melhor mostrado na Figura 4 o furador 154 tem uma pluralidade de dentes 164 que aumenta em altura para a extremidade proximal, de forma que à medida que o furador 154 é avançado na fenda, ele corta cada vez mais profundo na semente no recesso no ninho 148. A raspa gradual resultante reduz o dano à semente, ao mesmo tempo protegendo sua viabilidade. Além disso, como descrito em mais detalhe abaixo, cortando em profundidades diferentes em tempos diferentes, amostras de profundidades diferentes da mesma semente podem ser separadas para análise separada.

[0058] Em referência, novamente, a Figura 2, um tubo de transferência de amostra 166 estende-se do recesso no ninho de semente 148, etem um conector 168 em sua extremidade para conexão ao transportador de amostra 34.

[0059] O conjunto de amostrador 26 também inclui um depósito-alimentador 70, melhor mostrado na Figura 3. O depósito-alimentador 70 compreende placas de montagem do depósito-alimentador esquerda e direita 170 e 172, e uma placa de montagem do cilindro 174 e um consolo de cilindro superior 176. O depósito-alimentador 70 também tem um painel frontal 178, um painel traseiro 180, primeiro e segundo painéis de extremidade 182 e 184, e fundo 186. Um divisor 188 divide o depósito-alimentador em primeiro e segundo compartimentos 190 e 192. O primeiro compartimento 190 retém uma provisão de sementes que são transferidas individualmente ao segundo compartimento 192. [0060] Um atuador de pistão 194 opera um pistão 196 para içar uma semente do primeiro compartimento. Um conjunto de jato de ar 198

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11/29 transfere uma semente da extremidade do pistão 196 para o segundo compartimento 192. O segundo compartimento tem um fundo configurado 200, com um poço 202 para receber a semente e posicionála. Um atuador de pistão 210 opera um pistão 214 para içar uma semente do segundo compartimento 192. Um conjunto de jato de ar 216 é usado para agitar as sementes durante o procedimento de captura de semente.

[0061] Como mostrado na Figura 7, a plataforma 28 tem consolos 220 para montar as bandejas de semente 90 e bandejas de amostra 82 em registro de forma que o transportador de semente e o transportador de amostra liberem as sementes e amostras para os compartimentos correspondentes, nas respectivas bandejas. As bandejas de amostra 82 podem (como mostrado) ser adaptadas para reter frascos individuais. Claro que, bandejas de diferentes configurações poderiam ser usadas, por exemplo, onde múltiplos compartimentos são providos para múltiplas amostras da mesma semente. Por exemplo, onde uma amostra é dividida em várias amostras, ou onde as amostras são separadas de onde elas são tiradas, e.g. através de profundidade. [0062] Como mostrado na Figura 8, o mecanismo de translação bidimensional 30 também inclui uma corrediça 230 tendo um trilho 232 e um carro 234, que é posicionado paralelo ao primeiro atuador linear 92. O segundo atuador linear 96 é montado no carro 94 tendo o carro 98 montado no carro 94 do primeiro atuador linear 92. A plataforma 28 é montada no carro 98 do segundo atuador linear 96, e desse modo pode ser movido precisamente em duas dimensões através da operação dos primeiro e segundo atuadores lineares 92 e 96. O mecanismo de translação pode alinhar os compartimentos individuais das bandejas de semente 80 e bandejas de amostra 82 com as saídas do transportador de semente e transportador de amostra sob controle apropriado.

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12/29 [0063] Como mostrado nas Figuras 1 e 9, na extremidade de entrada 102 do tubo 100 do transportador de semente 32, um consolo 240 monta um amplificador de ar 242 e um tubo de sensor de semente 244. O consolo 240 compreende seções 246, 248, 250, 252 e 254. Como mostrado na Figura 2, o consolo 240 é montado na placa de montagem do depósito-alimentador 142. O amplificador de ar 242 (também mostrado na Figura 12) é adaptado para ser conectado a uma fonte de ar comprimido. Quando ar for aplicado ao amplificador de ar, ele induz um fluxo de ar através do tubo 100, empregando o efeito venturi. O tubo de sensor 244 carrega sensores de semente 256 por sentir a passagem de uma semente através dele. Os sensores 256 são preferivelmente sensores ópticos alinhados com aberturas no tubo de sensor 244 que opticamente detectam a passagem de uma semente. [0064] Como mostrado nas Figuras 1 e 10, um conjunto de descarga de semente 260 está disposto na extremidade de saída 104 do tubo 100 do transportador de semente 32. O conjunto de descarga é montado no poste 66, com um consolo 262 e um suporte de descarga 264. Um tubo de sensor de semente 266 é montado no consolo 262, e carrega sensores de semente 268 para sentir a passagem de uma semente através dele. Os sensores 268 são preferivelmente sensores ópticos alinhados com aberturas no tubo de sensor 266 que opticamente detecta a passagem de uma semente. Um amplificador de ar 270 é conectado ao tubo de sensor de semente 266. O amplificador de ar 270 (conforme também mostrado na Figura 12) é adaptado para ser conectado a uma fonte de ar comprimido. Quando ar for aplicado ao amplificador de ar, induz um fluxo de ar através do tubo 100, empregando o efeito venturi. Abaixo do amplificador de ar 270 está um tubo conector 272, e abaixo dele está um tubo de descarga de semente ventilado 274 que é também suportado por um retentor do tubo de descarga de semente 276, carregado em um atuador do tubo de

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13/29 descarga de semente 278.

[0065] Em referência, novamente, as Figuras 1 e 2, a extremidade de entrada 122 do tubo 120 do transportador de amostra 34 é conectada por meio do conector 168 ao tubo de descarga de amostra 166. Em referência à Figura 11, a extremidade de saída 124 do tubo 120 é conectada a um conector de amostra 280, que por sua vez é conectado ao amplificador de ar 282, que é conectado ao conjunto de bico de cinzelamento 284. O conjunto de bico de chip 284 é montado no retentor do tubo de descarga de semente 286, que é carregado em um atuador de descarga 288. O atuador de descarga é montado no poste 68. Filtros 290 são montados nas saídas do conjunto de bico de chip 284, para impedir amostras que são descarregadas de contaminar os outros compartimentos.

OPERAÇÃO DO SISTEMA DE AMOSTRADOR [0066] Em operação, uma pluralidade de sementes, por exemplo, feijões-sojas, são depositadas no depósito-alimentador 70. O mecanismo de alimentação de semente 74 carrega uma semente individual para a estação de amostragem 72. Na estação de amostragem, uma amostra de material é removida da semente de uma maneira que minimiza o impacto à viabilidade da semente.

[0067] A amostra é removida da estação de amostragem 72 pelo transportador de amostra 34. O dispositivo venturi 126 cria um fluxo de ar no tubo 120 para a extremidade de saída 124. O material de amostra é tirado do tubo e em direção ao compartimento da bandeja de amostra alinhado com a extremidade de saída 124 do tubo 120. O separador 128 separa a amostra da corrente de ar que o carrega, e permite a amostra cair no compartimento. Em algumas modalidades, a amostra pode ser distribuída a dois ou mais compartimentos na bandeja de amostra em cujo caso o mecanismo de translação bidimensional 30 é operado para colocar um ou mais compartimentos mais adicionais em alinhamento

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14/29 com a extremidade de saída 124. É possível coordenar com precisão o movimento das bandejas de amostra com a operação da estação de amostragem 72 de forma que as amostras de porções diferentes da semente, e em particular profundidades diferentes da semente, possam ser liberadas a compartimentos separados na bandeja de amostra. [0068] Após a amostragem da semente ser completada, o transportador de semente 32 é operado para remover a semente da estação de amostragem. O primeiro dispositivo venturi 106 é operado para criar um fluxo de ar no tubo e tirar uma semente da estação de amostragem 72 no tubo 100. O segundo dispositivo venturi 108 é depois operado para criar um fluxo de ar na direção oposta, assim desacelerando a semente para reduzir dano à semente à medida que sai da extremidade de saída 104 do tubo 100 e é liberada a um compartimento na bandeja de semente 80. O dispositivo de segundo venturi 108 preferivelmente para o movimento da semente, permitindoa cair sob gravidade em seu compartimento em uma bandeja 80. A operação dos primeiro e segundo dispositivos de venturis 106 e 108 pode ser temporizada, ou eles podem ser acionados por sensores de posição que monitoram o tubo 100.

[0069] Outra modalidade de um sistema de amostrador de semente de processamento alto é indicada em geral como 500 nas Figs. 13-28. Como mostrado nas Figs. 13 e 14, o sistema de amostrador de semente 500 compreende um conjunto de amostrador 502, uma estação de manipulação de amostra 504 e uma estação de manipulação de semente 506. É desejável, mas não essencial, que o sistema de amostrador de semente 500 encaixe em um ou mais carros com rodas que podem passar através das entradas convencionais, de forma que o sistema pode ser convenientemente transportado. Nesta modalidade preferida, o conjunto de amostrador de semente 502 é montada em um carro 508, a estação de manipulação de amostra é montada em um

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15/29 carro 510, e a estação de manipulação de semente é montada em um carro 512.

[0070] O conjunto de amostrador de semente 502 compreende um alimentador de semente 514 e suporta o cinzelador de semente 516. Uma pluralidade de colunas 518 se estendem verticalmente para cima da superfície 520 do carro 508. Uma plataforma 522 é montada em cima das colunas 518 e suporta o cinzelador de semente 516. Dois consolos em L 524 se estendem horizontalmente das colunas 518, e suportam uma plataforma 526. Uma plataforma 528 é montada na plataforma 526 por uma pluralidade de postes 530 e suporta o alimentador de semente 514.

[0071] Em referência adicional à Figura 17, uma pluralidade de pilares 532 se estende para cima da placa 522. Uma placa 534 é montada nos pilares 532. Uma pluralidade de postes 536 depende da placa 534 e suporta uma prateleira 538.

[0072] Como mostrado nas Figs. 13, 14, 15 e 16, o alimentador de semente 514 compreende um depósito-alimentador 550, com uma superfície configurada adaptada para alimentar as sementes depositadas no depósito-alimentador para uma roda separadora 552 (ver também Figs. 23A a 23C). A roda separadora 552 é montada para rotação em um plano vertical adjacente ao depósito-alimentador 550, e tem uma pluralidade de recessos espaçados 554 cada um tendo uma abertura 556 que comunica com um sistema de vácuo (não mostrado). A roda 552 é avançada com um motor de indexação 560. Sementes individuais são apanhadas pelos recessos 554 na roda 552 e contidas nos recessos através de sucção do sistema de vácuo por meio das aberturas 556. Um limpador 562 limpa as sementes individuais dos recessos 554, lhes permitindo cair através de um guia 564 em uma abertura em um distribuidor 566.

[0073] Em referência adicional às Figs. 24-26, o distribuidor 566

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16/29 compreende um eixo 568 tendo uma pluralidade (seis na modalidade preferida) de passagens 570 transversalmente estendendo-se por dele. Luvas 572 e 574 são deslizavelmente montadas em cada extremidade do eixo 568 para transladar entre as primeira (interna) e segunda (externo) posições. As luvas 572 e 574 têm uma pluralidade de pares de aberturas alinhadas 576 e 578 em lados opostos destas. As aberturas 576 são alongadas, e as aberturas 576 e 578 são dimensionadas e dispostas de forma que quando as luvas 572 e 574 estão primeiro em sua posição (interna) (no lado esquerdo na Figura 24), uma porção das aberturas alongadas 576 é alinhada com uma passagem 570 no eixo 568, e quando as luvas estão em suas segundas posições (externas), uma porção das aberturas alongadas 576 e das segundas aberturas 578 é alinhada com a passagem (no lado direito na Figura 24). Um atuador 580 seletivamente desliza as luvas 572 e 574 entre suas primeira e segunda posições.

[0074] O distribuidor 566 é montado por um consolo 582 no carro 584 de um atuador linear 586 para transladar com relação ao guia 564, sucessivamente colocando cada uma das passagens 570 no eixo 568 em alinhamento com o guia 564 de forma que uma semente possa ser depositada nele. Um sensor de semente (não mostrado) pode ser montado adjacente ao guia 564 para confirmar que uma semente seja depositada em cada passagem 570. Uma pluralidade de bicos de ar 590 é montada na plataforma 528, e é alinhada com as passagens 570 quando o distribuidor 566 é movido para sua posição de dispensação pelo atuador 586. Um tubo 592 é alinhado com cada passagem 570, e cada tubo conecta a um de uma pluralidade de estações de amostragem de semente 600 no cinzelador de semente 516. As luvas 572 e 574 são transladadas permitindo as sementes nas passagens 570 cair nos tubos 592. Um dos bicos 590 é alinhado com cada uma das passagens 570, e é atuado para facilitar o movimento das sementes das passagens 570

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17/29 através dos tubos 592 para suas respectivas estações de amostragem de semente 600.

[0075] Há preferivelmente uma porta 596 através do depósito-alimentador 550 que alinha com a abertura 556 em cada recesso 554 à medida que a roda 552 gira. A porta 596 pode ser conectada a um vácuo para retirar qualquer sujeira ou pedaços de cascas de semente ou semente que poderíam entupir as aberturas 556 nos recessos 554, e prejudicar a habilidade da roda 552 para selecionar sementes individuais do depósito-alimentador 550.

[0076] Em referência as Figuras 17-22 e 27A-28B, o cinzelador de semente 516 compreende pelo menos um, e nesta modalidade preferida seis, estações de amostragem 600. Cada estação de amostragem de semente 600 remove uma amostra de material de uma semente liberada nele. Nesta modalidade preferida, as estações de amostragem 600 são dispostas ou reunidas em dois grupos de três, mas o número e arranjo das estações de amostragem poderíam variar. A estação de manipulação de amostra 504 recebe amostras de tecido removidas de uma semente e transportou longe de cada estação de amostragem 600. Similarmente, a estação de manipulação de semente 506 recebe uma semente após a amostra ter sido removida da semente, e a semente é transportada da estação de amostragem 600.

[0077] Cada estação de amostragem de semente 600 tem um colar de entrada 602 conectado ao tubo 590, que abre para uma câmara 604 (Figura 20). A superfície de fundo da câmara 604 é formada no final de uma haste 606 do atuador 608. A superfície do fundo fica abaixo do colar de entrada 602 para assegurar que a semente inteira caia na câmara 604 e não seja pega em uma posição apenas em parte na câmara. Uma abertura 610 pode ser posicionada oposta ao colar de entrada 602 para permitir ar dos bicos de ar 590 escapar. A abertura 610 pode ser coberta com uma grade de malha 612 para impedir a

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18/29 semente de escapar da câmara 604 e amortecer a semente quando for liberado dentro da câmara.

[0078] Esta haste 606 iça uma semente da câmara 604 e para dentro de um recesso de recepção de semente 614 no lado inferior de uma placa de amostragem de semente 616. A placa de amostragem 616 tem uma abertura de amostragem 618 através da qual uma semente no recesso de recepção de semente 614 protrae. Um sulco de amostragem 620 é formado na superfície de topo da placa de amostragem 616 de modo que uma porção de uma semente no recesso 614 protrae no sulco. A placa de amostragem 616 também tem aberturas lateralmente orientadas 622 e 624 alinhadas com o recesso de recepção de semente 614. Quando a haste 606 iça uma semente liberada à estação de amostragem 600 no recesso 614 na placa 616, dedos 626 e 628 se estendem transversalmente através das aberturas 622 e 624 e são operados através do atuador 630 para engastar e comprimir a semente. Foi descoberto que comprimindo pelo menos certos tipos de sementes durante o processo de amostragem pode melhorar a viabilidade das sementes após a amostragem. Para sementes como sementes de feijão-soja, foi observado que uma pressão compressiva intensifica a viabilidade da semente, e aquela pressão compressiva de entre cerca de 1,13 e cerca de 2,26 kg (entre cerca de 2,5 e cerca de 5 libras) é suficiente para intensificar a viabilidade.

[0079] Um perfurador de amostragem 650 tendo uma pluralidade de bordas cortantes 652 recíproca no sulco 620 de forma que as bordas cortantes 652 podem raspar uma amostra de uma semente que é retida no recesso 614 pela haste 606 e pelos dedos 626 e 628. As bordas cortantes 652 são preferivelmente paralelas e orientadas a um ângulo oblíquo menor que 90°com relação à direção de perc urso do furador. É desejável, mas não essencial, que as bordas cortantes 652 sejam

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19/29 suficientemente anguladas à borda que permanece em contato com a semente em todo o momento. Angulando as bordas cortantes permite a próxima lâmina estabelecer contato com a semente antes de a lâmina atual perder contato com a semente. Na modalidade preferida, as bordas cortantes são orientadas a um ângulo de cerca de 60°, embora este ângulo dependerá um pouco da largura do furador. A largura do furador pode também ser importante para preservar a viabilidade da semente após amostragem, e pode variar, dependendo do tipo de semente e seu teor de umidade.

[0080] As bordas cortantes 652 são escalonadas, cada uma cortando progressivamente mais profundo que a anterior. A quantidade de material de amostra e a profundidade do corte podem ser controlados controlando o avanço do furador 650. Para amostras menores e profundidades mais rasas de corte, o curso do furador 650 é mais curto, e para amostras maiores ou profundidades mais profundas de corte, o curso do furador é mais longo. Para cursos parciais, o tecido da semente pode ser capturado entre as bordas 652. O furador 650 pode ser avançado e retraído para ajudar a liberar toda a amostra. Por exemplo, após a semente ser liberada, o furador pode ser avançado e retraído para ajudar a remover o tecido de semente capturado entre as bordas cortantes. A faixa total de percurso do furador 650 é mostrada nas Figs. 19Ae 19B.

[0081] O perfurador de amostragem 650 é preferivelmente dirigido por um atuador linear 654. Na modalidade preferida, três perfuradores 650 são acionados por um atuador simples 654. Usando um atuador simples para operar múltiplos perfuradores poupa espaço e é mais econômico.

[0082] Em referência as Figuras 17-22 e 27A-28B, um sistema de transporte de amostra 656 compreendendo um canal 658 tendo uma entrada 660 que comunica com uma passagem 662 que abre na

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20/29 abertura de amostragem 618 e no sulco 620 na placa de amostragem 616 remove as amostras de tecido feitas pela ação das bordas cortantes 652 do perfurador de amostragem 650. O canal 658 transporta a amostra para a saída 664 onde é depositada em um único retentor de amostra na estação de manipulação de amostra 504 (Figuras 13-16). Este retentor de amostra pode ser, por exemplo, um poço 666 em uma bandeja 668 montada em uma tabela de indexação x-y 670 no carro 510, de forma que a relação entre as amostras e suas respectivas sementes possa ser determinada. O sistema de transporte de amostra 656 inclui um jato de ar 672 que induz fluxo de ar através do canal 658 para mover a amostra através do canal.

[0083] Um segundo mecanismo de amostragem pode ser montado no atuador linear 654 e pode ser movido com o furador 650. O segundo mecanismo de amostragem pode compreender um dispositivo centralizador 674 tendo uma ferramenta de centralização 676 para tirar uma amostra de tampão da semente do entalho feito pelo furador 650. Este tecido nesta amostra é de uma localização mais profunda que o tecido raspado pelo furador 650, e fornece informação diferente. Em algumas modalidades o material removido pelo furador 650 poderia ser simplesmente descartado, e apenas a amostra tira com dispositivo de centralizador 674 mantida. Em algumas modalidades ambas as amostras podem ser retidas e separadamente armazenadas para testagem separada. Em ainda outras modalidades a única amostra é a amostra removida pelo furador 650. Em modalidades sem o segundo mecanismo de amostragem, o dispositivo centralizador 674 e ferramenta de centralização 676 podem ser substituídos com um atuador com uma haste de empurrar simples que se estende através da abertura de amostragem 618 para ajudar a empurrar uma semente para dentro do recesso 614.

[0084] Um sistema de transporte de semente 680 que tem uma

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21/29 entrada 682 adjacente ao recesso 614 para capturar sementes após elas serem liberadas pelos dedos 626 e 628 e pela haste 606 diminui a semente após a operação de amostragem. O sistema de transporte de semente 680 transporta as sementes para um único retentor de semente na estação de manipulação de semente 506 no carro 512. Este retentor de semente pode ser, por exemplo, um poço 684 em uma bandeja 686 montado em uma tabela de indexação x-y 688 no carro 612, de forma que a relação entre as amostras e suas respectivas sementes podem ser determinadas. O mecanismo de transporte de semente 680 inclui um jato de ar 690 que induz fluxo de ar através do canal 680 para mover a amostra através do canal.

OPERAÇÃO [0085] Em operação, uma pluralidade de sementes, e.g. sementes de feijão-soja, é descarregada no depósito-alimentador 550 do sistema de amostrador 500. Estas sementes fluem sob gravidade para a roda 552, sucção através das aberturas 556 prende uma semente em cada recesso 554. À medida que a roda 552 é girada pelo motor de indexação 560, sementes individuais são limpadas da roda pelo limpador 562, e caem sob gravidade através do guia 564 para a saída. O atuador linear 586 move o distribuidor 566 de forma que cada passagem 570 do distribuidor alinha com o guia 564 para carregar uma semente através da abertura 576 e sob passagem 570. Quando todas as passagens 570 no distribuidor 566 estão cheias, o atuador linear 586 move o distribuidor para posição para carregar suas sementes para dentro das estações de amostragem 600 no cinzelador de semente 516. As luvas 572 e 574 são movidas pelo atuador 580 que alinha as aberturas 578 com as passagens 570 permitindo as sementes nas passagens 570 entrarem nos tubos 592 que leva às estações de amostragem 600. Os bicos 590 fornecem uma explosão de ar que ajuda empurrar as sementes das passagens 570 através dos tubos 592 para as câmaras 604 nas

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22/29 estações de amostragem 600.

[0086] Preferivelmente todas as passagens 570 são carregadas em série e descarregadas suas sementes simultaneamente para as estações de amostragem 600, mas o distribuidor poderia ser programado para operar de alguma outra maneira. Uma vez as sementes chegam às estações de amostragem 600, as hastes 606 içam as sementes nos recessos 614 no lado inferior das placas 616. Os recessos 614 podem ser dimensionados e configurados para ajudar a orientar otimamente a semente. Nos recessos 614, uma porção das sementes protrae através das aberturas de amostragem 618 e nos sulcos 620. Os furadores 650 são transladados nos sulcos 620, permitindo suas bordas cortantes 652 remover o material das porções das sementes que protraem nos sulcos 620, e formando entalhos pequenos nas sementes. À medida que cada furador 650 remove o material, o sistema de transporte de amostra 656 retira o material de amostra através da passagem 662 e na entrada 660. As amostras percorrem nos canais 658 distantes das estações de amostragem 600 para uma localização de armazenamento de amostra, como poços 666 em uma bandeja de amostra 668. Uma segunda amostra pode ser tirada pela ferramenta de centralização 676 do dispositivo de extração 674 através da abertura 618 na placa de amostragem 616. Após a amostragem estar concluída, a haste 606 retrai, e à medida que a semente cai o sistema de transporte de semente amostrada 680 transporta a semente amostrada para uma localização de armazenamento de semente, como um poço 684 em uma bandeja de semente 686.

[0087] As tabelas de indexação 670 e 688 movem-se para alinhar os poços diferentes com as saídas do sistema de transporte de amostra 656 e o sistema de transporte de semente 680, e o processo da amostra é repetido. Quando todos os poços 666 em uma bandeja de amostra

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668 estão cheios, as amostras podem ser testadas na bandeja de amostra, e as sementes na bandeja de semente 686 correspondente podem ser selecionadas com base nos resultados da testagem das amostras. A amostragem preferivelmente não afeta de forma substancial adversamente a viabilidade das sementes.

EXEMPLOS [0088] Os exemplos a seguir são meramente ilustrativos, e não limitam esta revelação de forma alguma.

EXEMPLO 1 [0089] Este exemplo descreve um ensaio para prognosticar a zigosidade de embriões de milho usando um gene homozigoto de controle interno (IC) no locus (isto é., duas cópias de IC no embrião diplóide e três cópias de IC no endosperma triplóide). Em uma linhagem consanguínea de um organismo diplóide (ou ploidia mais alta) como milho, o controle interno endógeno é tipicamente homozigoto; eventos transgênicos em tais organismos na primeira geração (denominada RO em milho) são tipicamente hemizigotos (ou seja, o transgene está tipicamente presente em apenas um dos dois ou cromossomos mais homólogos). Milho (Zea mays) é um organismo diplóide, desse modo um evento de cópia única de RO tem uma cópia do GOI por célula, mas 0,5 cópia por genoma haplóide, um evento de duas cópias de R0 tem duas cópias do GOI por célula, mas 1 cópia por genoma haplóide, e assim sucessivamente.

[0090] Neste exemplo, tubulina foi usada como o gene de IC, e o GOI era um transgene que codifica neomicina fosfotransferase II (NPT II) que é usada para seleção de resistência à canamicina. Tecido de endosperma (triplóide) foi tirado da semente (ou amostragem à mão ou raspando uma semente com amostrador automatizado da presente invenção). A semente de amostra de endosperma foi germinada, e o tecido de folha (diplóide) das plantas com sucesso germinadas foi

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24/29 também amostrado para análise genética. O tecido de folha correlata diretamente com a zigosidade do embrião e foi desse modo usado para demonstrar que a zigosidade do endosperma em geral prognosticou zigosidade do embrião e confirmar chamadas de homozigosidade do endosperma. DNA genômico total foi extraído do tecido de endosperma e do tecido de folha, e quantitativamente analisado usando um ensaio Invader® com sondas de oligonucleotídeos específicos para o gene de interesse, NPT II, ou para o gene de controle interno, tubulina. A razão do GOI para IC foi medida usando técnicas de biologia moleculares convencionais. Ver Tabela 1. Um sumário dos resultados de múltiplos experimentos é mostrado na Tabela 2.

[0091] Resultados indicaram que a zigosidade do endosperma em geral prognosticou zigosidade do embrião (como indicado pela zigosidade de folha) e foi seguro em prognosticar a homozigosidade para todas as sementes que germinaram. Além disso, análise da zigosidade de endosperma deu poucas predições homozigotas falsonegativas (especialmente quando o tecido do endosperma foi obtido com o amostrador automatizado). Estes resultados demonstram que para uma célula de um nível de ploidia conhecido, a razão de número de cópias de um GOI para o de um IC indica a zigosidade daquela célula. Além disso, o ensaio de zigosidade da presente invenção pode prognosticar zigosidade de um tecido com base na zigosidade de outro, ou seja, o ensaio pode prognosticar a zigosidade do embrião com base na zigosidade do endosperma.

TABELA 1


razão automatizada	zigosidade automatizada	razão manual	zigosidade manual
1,39	heterozigoto	1,42	Heterozigoto
0,14	homozigoto neg	0,12	homozigoto neg

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0,08	homozigoto neg	0,08	homozigoto neg
0,13	homozigoto neg	0,10	homozigoto neg
0,10	homozigoto neg	0,08	homozigoto neg
1,55	Heterozigoto	1,38	Heterozigoto
0,84	Heterozigoto	1,45	Heterozigoto
0,14	homozigoto neg	1,48	Heterozigoto
1,48	Heterozigoto	1,37	Heterozigoto
1,39	Heterozigoto	1,47	Heterozigoto
2,03	homozigoto pos	1,93	homozigoto pos
0,13	homozigoto neg	0,05	homozigoto neg
1,71	Inconclusive	1,81	homozigoto pos
0,81	Heterozigoto	1,41	Heterozigoto
1,84	homozigoto pos	1,77	homozigoto pos
1,54	Heterozigoto	1,43	Heterozigoto
1,48	Heterozigoto	1,50	Heterozigoto
0,92	Heterozigoto	1,40	Heterozigoto
1,51	Heterozigoto	1,42	Heterozigoto
1,60	Heterozigoto	1,37	Heterozigoto
0,86	Heterozigoto	1,47	Heterozigoto
1,81	homozigoto pos	2,02	homozigoto pos
0,15	homozigoto neg	DNA baixo
1,89	homozigoto pos	1,85	homozigoto pos
0,21	homozigoto neg	0,10	homozigoto neg
0,09	homozigoto neg	0,11	homozigoto neg
0,89	Heterozigoto	1,50	Heterozigoto
1,50	Heterozigoto	1,37	Heterozigoto
1,82	Inconclusive	2,02	homozigoto pos
2,14	homozigoto pos	0,99	Inconclusive
1,22	Heterozigoto	1,44	Heterozigoto
2,22	homozigoto pos	2,24	homozigoto pos
0,79	Heterozigoto	1,40	Heterozigoto
1,23	Heterozigoto	1,47	Heterozigoto
1,49	Heterozigoto	1,38	Heterozigoto
1,33	Heterozigoto	1,37	Heterozigoto

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TABELA 2

Método de amostragem de endosperma	número de sementes homozigo- tas identificadas por análise de endosperma	número de sementes homozigo- tas prognostica das que não germinaram	número de chamadas homozigotas confirmadas com base na análise de folha	número de chamadas homozigotas falso-negativas com base na análise de endosperma
Manual	8 de 36	0	8(todas)	5(13,9%)
Automatiza- do	6 de 24	1	5	0
Manual	6 de 36	0	6 (todas)	2(5,6%)
Automatiza- do	6 de 24	1	5	0
Manual	5 de 36	0	5(todas)	7(19,4%)
Automatiza- do	7 de 24	2	5	0
Manual	7 de 36	1	6	0
Automatiza- do	5 de 24	2	3	0

EXEMPLO 2 [0092] Este exemplo demonstra o uso dos métodos de triagem da presente invenção em um programa para seleção assistida por marcador de feijões-sojas para Ácido Linoléico Baixo.

[0093] Feijão-soja é a mais valiosa plantação de legume, com muitos usos nutricionais e industriais devido a sua única composição química. Sementes de feijão-soja são uma fonte importante de óleo vegetal que é usado em produtos alimentícios ao longo do mundo. O nível relativamente alto (usualmente cerca de 8%) de ácido linolênico (18:3) em óleo de feijão-soja reduz sua estabilidade e sabor.

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Hidrogenação de óleo de feijão-soja é usada para diminuir o nível de ácido linolênico (18:3) e melhora a estabilidade e sabor dos óleos de feijão-soja. Porém, hidrogenação resulta na produção de ácidos graxos trans que aumentam o risco de cardiopatia coronariana quando consumidos. O desenvolvimento de feijão-soja de ácido linolênico baixo foi complicado pela natureza quantitativa do traço. As variedades que foram desenvolvidas de feijão-soja de ácido linolênico baixo foram observadas render pobremente, limitando sua utilidade na maioria dos cenários comerciais. Desenvolvendo um produto com rendimento de semente comercialmente de significação é uma prioridade alta na maioria dos programas de desenvolvimento de cultivar de feijão-soja. [0094] Um exemplo da aplicação dos métodos de triagem da presente invenção é seleção de plantas de feijão-soja com rendimento alto e teor de ácido linoléico baixo. Desempenho de progênie de feijãosoja diminuído uma vez que ele diz respeito ao ácido linoléico baixo conta principalmente com dois locus de traço quantitativo principal (QTL) em Fad3-1b e Fad3-1c. Análise de plantas de segregação demonstrou que Fad3-1b e Fad3-1c aditivamente controlam o teor linolênico em feijão-soja. Portanto, usando uma combinação de marcadores para Fad3-1b e Fad3-1c, o criador usando a invenção pode prognosticar o teor de ácido linolênico com precisão em plantas de feijão-soja. Os marcadores podem ser usados para deduzir o estado genotípico de uma semente em qualquer plataforma no processo de procriação, por exemplo, no estágio de linhagem consanguínea acabado, ou o Fi, F2, F3, etc.

[0095] Um híbrido de F1 seminal pode ser produzido cruzando duas linhagens de feijão-soja consanguíneas (por exemplo, cruzando uma planta contendo os alelos de Fad3-1b e/ou Fad3-1c associados ao teor de ácido linoléico diminuído para uma planta que carece destes alelos) seguido por auto-polinização natural. Uma vez que os marcadores

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28/29 podem ser usados para deduzir o estado genotípico de uma semente simples obtida de um intercombinação de tais linhagens consanguíneas, procriação assistida por marcador de geração precoce (isto é., F2) pode ser conduzida.

[0096] Semente de feijão-soja em temperatura e umidade ambientes tipicamente equilibram em 8% de umidade em uma base de peso seco. Semente de feijão-soja neste nível de umidade tende a rachar quando cinzelada. Para reduzir a rachadura, a semente deveria ser umedecida em nível de umidade de 12%. Quando pré-tratada desta maneira, a rachadura é significativamente reduzida para < 5%.

[0097] A semente de F2 selecionada tendo 0 genótipo desejado pode ser avolumada ou mantida separada dependendo dos objetivos de procriação. Se QTLs múltiplos com efeitos variados estivessem sendo selecionados de uma população dada, 0 criador poderia preservar a identidade da semente simples para diferenciar os indivíduos com várias combinações da resistência de QTL alvo. Estas sementes poderíam ser plantadas no campo com identificação de campo apropriada. Vários métodos de preservar a identidade de semente simples podem ser usados enquanto transferindo a semente do laboratório de cinzelamento para 0 campo. Métodos incluem transferir os indivíduos selecionados para fita de semente hortícola que poderia também incluir identificação da radiofrequência para auxiliar na identificação da semente genotipada individual. Outros métodos seriam para usar uma bandeja de indexação, sementes de planta em potes de turfa e depois as transplantar, ou plantar à mão os pacotes de semente individuais.

EXEMPLO 3 [0098] Este exemplo demonstra 0 uso dos métodos de triagem da presente invenção em um programa para alelos de origem recorrentes em um programa de procriação recessiva.

[0099] Os métodos de triagem da presente invenção podem ser

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29/29 usados para seleção de transgenes como também identificação de alelos de origem recorrentes. A identificação de genótipos com frequências de alelo de origem recorrentes desejadas antes da plantação permite o número de fileiras por população ser reduzido ao longo do programa de procriação inteiro junto com um aumento no número de populações inclusas no programa de conversão dentro de uma unidade de campo dada. Isto resulta em uso de terra melhorado, custos de terra e de mão-de-obra reduzidos, etc.

[00100] Um exemplo de triar o tecido de endosperma de milho para alelos de origem recorrentes em um programa de procriação recessiva é mostrado na Figura 29.

EXEMPLO 4 [00101] Este exemplo demonstra o uso dos métodos de triagem da presente invenção para uso em impressão digital de linhagem de DNA e determinação da fase de ligação.

[00102] Combinada com aumento do DNA de uma semente simples, impressão digital da linhagem poderia ser realizada sem a necessidade de amostrar a linhagem no campo.

[00103] Usando tecido de endosperma de semente (revestimento de semente em feijão-soja) derivado de uma planta diplóide, os haplotipos de marcadores parentais podem ser determinados usando um sistema de genotipagem que permite a detecção de frequências de alelo diferentes nas amostras de DNA. Uma vez que tecido de endosperma é triplóide, com duas cópias derivadas do gameta fêmea, a fase de ligação da linhagem parental pode ser derivada dissecando os genótipos de progênie heterozigota. A amostra de DNA do tecido de endosperma permite uma determinação do nível de ploidia do marcador genético. Um nível de ploidia diplóide no marcador genético indica a herança materna e um nível de ploidia haplóide no marcador genético indica herança paterna.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Sistema de amostrador de semente automatizado (20, 500), caracterizado pelo fato de que compreende:

uma estação de amostragem (26, 72, 502, 600); um amostrador (154, 650) para remover o material de uma semente na estação de amostragem;

um transportador de semente (32) para transportar a semente da estação de amostragem para um compartimento em uma bandeja de semente (80, 686);

um transportador (34) para transportar o material removido da semente para um compartimento correspondente em uma bandeja de amostra (82, 668).
2. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o transportador de semente (32) é um transportador pneumático.
3. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o transportador de amostra (34) é um transportador pneumático.
4. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que também compreende uma mesa para suportar a bandeja de semente (80, 686) tendo uma pluralidade de compartimentos para sementes individuais, e a bandeja de amostra (82, 668) tendo uma pluralidade de compartimentos para amostras individuais, e um posicionador para mover a mesa para alinhar um compartimento na bandeja de semente (80, 686) na mesa com o transportador de semente (32), e alinhar um compartimento correspondente na bandeja de amostra (82, 668) com o transportador de amostra (34).
5. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o posicionador traduz a mesa em duas direções

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2/4 mutuamente perpendiculares.
6. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda:

um depósito-alimentador (70, 550) para reter uma pluralidade de sementes; e uma estação de amostragem (26, 72, 502, 600); um alimentador de semente (541) para liberar uma semente individual do depósito-alimentador (70, 550) para a estação de amostragem.
7. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda:

um depósito-alimentador (550) para reter uma pluralidade de sementes;

um seletor (552) para selecionar as sementes individuais da pluralidade de sementes no depósito-alimentador e liberar a semente para uma saída;

pelo menos um distribuidor (566) tendo uma pluralidade de poços para receber e reter uma semente, cada poço sendo seletivamente conectável a uma saída;

transmissor (586) para mover pelo menos um distribuidor com relação à saída do seletor, de forma que a saída do seletor libera uma semente em cada poço no pelo menos um distribuidor; e uma pluralidade de estações de amostragem (502, 600), cada estação de amostragem tendo uma entrada que comunica com uma saída de um poço do pelo menos um distribuidor, e compreendendo uma câmara tendo uma estrutura de amostragem com uma cavidade (614) para receber uma semente e um sulco de amostragem (620) dentro do qual uma porção de uma semente na cavidade projeta-se.
8. Sistema de acordo com a reivindicação 7, caracterizado

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3/4 pelo fato de que o pelo menos um distribuidor compreende um invólucro externo (572, 574), e uma corrediça (568) transladável dentro do invólucro externo, o invólucro tendo uma pluralidade de aberturas de entrada, e uma pluralidade de aberturas de saída, e a corrediça tendo uma pluralidade de poços, a corrediça sendo operável entre uma primeira posição, em que os poços são alinhados com as aberturas de entrada para receber as sementes através das aberturas de entrada, e uma segunda posição, em que os poços são alinhados com as aberturas de saída para descarregar as sementes dos poços.
9. Sistema de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um distribuidor inclui dois distribuidores, cada um tendo uma pluralidade de vias separadas através dele, e, em que há uma estação de amostragem para cada via do distribuidor.
10. Sistema de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o seletor para selecionar sementes individuais da pluralidade de sementes no depósito-alimentador e liberar as sementes para uma saída compreende uma roda de separação (552) tendo uma pluralidade de aberturas em sua superfície, e um sistema de vácuo para criar sucção em cada uma da pluralidade de aberturas, a sucção sugando e de forma solta retendo uma semente contra a roda de separação (552) na abertura.
11. Método de triar uma pluralidade de sementes para uma característica testável, caracterizado pelo fato de que compreende:

alimentar sementes individualmente para uma estação de amostragem (26, 72, 502, 600); reter a semente na estação de amostragem; remover uma amostra da semente sendo retida na estação de amostragem; transportar cada amostra para um compartimento individual em uma bandeja de amostra (82, 668); transportar a semente para um compartimento em uma bandeja de semente (80, 686) com uma relação conhecida com o compartimento

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4/4 da bandeja de amostra para o qual a amostra correspondente foi transportada;

testar cada amostra para a característica;

separar as sementes cujas amostras testaram positivo para a característica, das sementes cujas amostras não testaram positivo para a característica.
12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as sementes são pneumaticamente transportadas para seus respectivos compartimentos na bandeja de semente (80, 686) da estação de amostragem.
13. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as amostras são pneumaticamente transportadas da estação de amostragem para a bandeja de amostra (82, 668).
14. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a etapa de remover uma amostra da semente compreende arrastar uma ferramenta multidentada (154, 650) ao longo da superfície da semente.
15. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a etapa de reter a semente em uma estação de amostragem compreende reter a semente contra uma superfície (616) que orienta a semente com relação à ferramenta multidentada (154, 650) para apresentar uma superfície à ferramenta multidentada que minimiza o impacto para a viabilidade da semente.