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BR112017002819B1 - Composição compreendendo cultura de tecido líquido micélico e método deintensificação do sabor de um produto alimentício - Google Patents

Composição compreendendo cultura de tecido líquido micélico e método deintensificação do sabor de um produto alimentício Download PDF

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BR112017002819B1
BR112017002819B1 BR112017002819-0A BR112017002819A BR112017002819B1 BR 112017002819 B1 BR112017002819 B1 BR 112017002819B1 BR 112017002819 A BR112017002819 A BR 112017002819A BR 112017002819 B1 BR112017002819 B1 BR 112017002819B1
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tissue culture
supernatant
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James Patrick Langan
Brooks John Kelly
Huntington DAVIS
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Mycotechnology, Inc
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Publication date
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Abstract

A presente invenção refere-se a um método de intensificação do sabor de um produto alimentício, o qual inclui; as etapas de cultivar uma cultura de tecido líquido de micélio submerso em um meio, coletar o fluido de sobrenadante da cultura de tecido líquido de micélio submerso, e adicionar o fluido de sobrenadante coletado a um produto alimentício em uma quantidade suficiente para intensificar o sabor do produto alimentício. Em uma modalidade, a cultura de tecido líquido de micélio compreende C. sinensis, e a etapa de cultura é realizada entre, aproximadamente, um e sessenta dias. Os produtos alimentícios incluem partes de planta de estévia, glicosídeo de esteviol, aspartame, acessulfame-K, sucralose, carboidratos, fruta de monge, cacau, licor de cacau, chá, ginseng, proteína da ervilha, álcool de açúcar, café, arando, toranja, romã, coco, vinho, cerveja, licor e bebidas alcoólicas. A presente invenção também inclui produtos produzidos pelos métodos descritos.

Description

CAMPO TÉCNICO
[001] A presente invenção refere-se a, produtos, e utilizações destes, produzidos com cultura tissular de líquido micélico da ordem superior gastronômica e terapêutica Basidiomycetes e Ascomycetes, pelos métodos da presente invenção.
FUNDAMENTO DA INVENÇÃO
[002] US2693665 discute cultura de Agaricus campestris em su co cítrico, suco de pêra, suco de aspargos, "material orgânico", um carboidrato, uma fonte de nitrogênio e qualquer combinação desses materiais, opcionalmente, suplementados com uréia e/ou vários sais de amônio para produzir um micélio para uso como um gênero alimentício.
[003] US 2761246 descreve um método para a produção de mi- célio submerso de Morchella esculenta e Helvellaceae spp. para alimentação humana. Este documento discute o uso de várias soluções de melaço como meio com suplementos de sal de amônio. A patente descreve que carbonato de cálcio ou sulfato de cálcio adicionado age como sítios de nucleação da esfera hífica, aumentando o rendimento de biomassa 30 vezes.
[004] US 2928210 descreve um método para produzir micélio de cogumelos a partir de meios de resíduos de licor de sulfito suplementado com sais orgânicos e inorgânicos.
[005] US 3086320 descreve um método para melhorar o sabor de micélio submerso de Morchella esculenta, Helvella gigas, Coprinus comatus e Agaricus campestris, cultivando as estirpes em um meio que "deve conter, em água, um carboidrato como uma fonte de ener- gia, uma fonte de nitrogênio e minerais adequados", e inclui receitas que compreendem leite, o qual é reivindicado para melhorar rendimento e sabor de micélio quando usado corretamente.
[006] US 4071973 discute condições de cultura para Basidio- mycetes. Fungos são inoculados e cultivados em sais inorgânicos nutrientes de nitrogênio, fosfato e potássio, misturados com sacarose em 50-70 g/L e suplementados com pó fino de "cana-de-açúcar triturada, bagaço de cana-de-açúcar, tecido de pinheiro e farelo de trigo" em 0,2 -15 g/L. Oxigênio é controlado a 30 - 90% (v/v) aos meios, o recipiente é pressurizado a 0,12 - 0,5 MPa (17,4 - 72,5 psi) com oxigênio suprido a 0,1 - 1,0 L/minuto. Sais utilizados incluem nitrato de amônio, fosfato de sódio, sulfato de magnésio heptaidratado, sulfato de ferro(II) hep- taidratado e hidrogenofosfato dipotássico. Ciclos de pressão de ar criativos são discutidos e controlados com um regulador de pressão. Um esquema de engenharia alternativa usaria um regulador de contra- pressão, com um regulador de pressão no tanque receptor de ar suprindo o ar.
[007] Organizações ao redor do mundo têm procurado diligente mente por novos bloqueadores de sabor amargo. Apenas um punhado de patentes sobre bloqueadores de sabor amargo foram depositadas e muitos são em compostos sintéticos ou dependem de permutações de um motivo molecular de base, ver, por exemplo, EP2570035A1, US4154862, US5631292, US6265012, US7939671, US20080226788A1, US20100227039A1, US20020177576, US20110086138 e WO2008119197A1.
[008] Estévia (Stevia rebaudiana) tem sido utilizada por socieda des humanas durante milhares de anos como uma medicina popular e adoçante. Hoje, muitos países cultivam a planta, incluindo, Coréia, Taiwan, Tailândia, Malásia, Brasil, Colômbia, Peru, Paraguai, Uruguai e Israel. A FDA rotulou tanto rebaudiosídeo A e esteviosídeo como Ge- ralmente Reconhecido como Seguro (GRCS), resultando em vários aditivos alimentares de extrato de estévia que entram no mercado dos Estados Unidos. O termo "estévia" é geralmente utilizado para referir- se às folhas e/ou partes da planta, frescas ou secas, ou um extra- to/decocção/xarope de folha de Stevia rebaudiana, bruto ou ainda purificado para glicosídeos específicos, o termo "estévia" conforme usado daqui por diante neste documento pode referir-se a qualquer uma dessas formas da planta. Os compostos responsáveis pelo sabor doce e ressaibo metálico e amargo de Stevia rebaudiana são conhecidos como os glicosídeos de esteviol. Dez (10) foram identificados no total, e a classe de compostos é marcada por várias formas glicosiladas, ra- nosiladas e xiladas do esteviol aglicona diterpeno.
[009] Para produzir glicosídeos de esteviol, plantas de stevia são secas e submetidas a um processo de extração. Os vários glicosí- deos podem ser obtidos em diferentes purezas através de cristalização com vários solventes, tais como metanol ou etanol, por meio de cro- matografia em coluna ou filtração.
[0010] Vários métodos foram empregados para alterar o perfil de sabor de chá verde. Chás fermentados foram consumidos por centenas de anos, embora esses sempre fossem conduzidos com flora ambiental. Chás são fermentados tipicamente não mais limitados que três meses, e às vezes até 50 anos.
[0011] O que é desejado é um modo de produção de um produto alimentício, tal como, por exemplo, estévia ou chá que alcança um produto de bom sabor, enquanto reduz as deficiências de sabor. Desse modo, uma necessidade permanece no estado da técnica, de produtos que apresentam níveis reduzidos de componentes de sabor indesejáveis e/ou níveis elevados de componentes de aroma e/ou promotores de saúde em relação à estévia ou chá, e para métodos de obtenção desses produtos. A presente invenção refere-se no sentido de superar um ou mais dos problemas discutidos acima.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0012] Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método de intensificar o sabor de um produto alimentício, o qual pode incluir as etapas de cultivar uma cultura de tecido de líquido micélico submerso em um meio, coletar o fluido de sobrenadante da cultura de tecido de líquido micélico submerso; e adicionar o fluido de sobrenadante coletado a um produto alimentício em uma quantidade suficiente para intensificar o sabor do produto alimentício.
[0013] Os fungos utilizados para cultura do tecido de micélio submerso pode incluir pelo menos uma das seguintes espécies: Gano- derma lucidum, Ganoderma applanatum, Cordyceps sinensis, Cor- dyceps militaris, Hericium erinaceus, Lentinula edodes, Agaricus bla- zei, Grifola frondosa, Auricularia auricula, Flammulina velutipes, Tra- metes versicolor, Morchella spp., Inonotus obliquus, Laricifomes officinalis, Fomes fomentarius, Fomes officinalis, Fomes fomitopisis, Tricho- loma matsutake, Boletus edulis, Clitocybe nuda, Clitocybe saeva, Plea- rotus spp., Tremella fuciformis, Piptoporus betulinis, Polyporus umbel- latus, Pholiota nameko, Volvariella volvacea, Hypsizygus marmoreus, Stropharia rugosoannulata e Laetiporus sulfureus. Em uma modalidade, o fungo é Cordyceps sinensis.
[0014] Em algumas modalidades, o sabor do produto alimentício é acentuado quando combinado com o fluido de sobrenadante coletado. A intensificação do sabor pode tomar qualquer forma, tais como, por exemplo, redução de sabores amargos, redução de ressaibos indesejáveis, e redução de adstringência no produto alimentício.
[0015] O produto alimentício pode incluir ingredientes alimentícios,suplementos dietéticos, aditivos alimentares, produtos nutracêuticos e produtos farmacêuticos. Um exemplo de um produto alimentício inclui partes da planta de estévia, glicosídeo de esteviol, aspartame, aces- sulfame-K, sucralose, carboidratos, frutadosmonges, cacau, licor de cacau, chá, ginseng, álcool de açúcar, café, arando, toranja, romã, coco, vinho, cerveja, licor e bebidas alcoólicas.
[0016] Em uma modalidade, o fluido de sobrenadante coletado pode ser opcionalmente pasteurizado ou esterilizado. O fluido de so- brenadante coletado pode também ser opcionalmente seco, antes ou após a etapa de pasteurização ou esterilização opcional. Em algumas modalidades, a etapa de cultivo pode ser realizada entre, aproximadamente, um e, aproximadamente, sessenta dias.
[0017] Várias modificações e adições podem ser feitas às modalidades discutidas sem desviar-se do escopo da invenção. Por exemplo, embora as modalidades descritas acima, se referem às características particulares, o escopo desta invenção também incluiu modalidades que apresentam diferente combinação de características e modalidades que não incluíram todas as características acima descritas.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0018] Embora vários aspectos e características de certas modali dades sejam resumidos acima, a seguinte descrição detalhada ilustra algumas modalidades em detalhes adicionais para permitir que aquele versado na técnica pratique tais modalidades. Os exemplos descritos são proporcionados para finalidades ilustrativas e não pretendidos limitar o escopo da invenção.
[0019] Na seguinte descrição, para os propósitos de explicação, são descritos numerosos detalhes específicos a fim de proporcionar u um entendimento completo das modalidades descritas. Será evidente àquele versado no estado da técnica, entretanto, que outras modalidades da presente invenção podem ser praticadas sem alguns desses detalhes específicos. Várias modalidades são descritas e reivindicadas neste relatório, e embora várias características sejam atribuídas a diferentes modalidades, deve-se ser considerado que as características descritas com relação a uma modalidade podem ser incorporadas também com outras modalidades. De igual modo, contudo, nenhuma característica única ou características de qualquer modalidade descrita ou reivindicada deve ser considerada essencial para cada modalidade da invenção, como outras modalidades da invenção podem omitir tais características.
[0020] A não ser que indicado de outra maneira, todos os numerous aqui utilizados para expressar quantidades, dimensões e, assim por diante utilizados, devem ser entendidos como sendo modificados em todos os casos pelo termo "aproximadamente". Neste pedido, o uso do singular inclui o plural, a menos que especificamente estabelecido de outra maneira, e utilização dos termos "e" e "ou" significa "e/ou", a não ser que indicado de outro modo. Além disso, o uso do termo "incluindo", bem como, outras formas, tais como "inclui" e "incluído", deve ser considerado não-exclusivo. Também, termos tais como "elemento" ou "componente" abrangem tanto elementos quanto componentes que compreendem uma unidade e elementos e componentes que compre-endem mais de uma unidade, a menos que estabelecido especificamente de outra maneira.
[0021] Em uma modalidade, a presente invenção baseia-se na descoberta de que meios cultivados de fungos (em qualquer meio conforme descrito neste relatório) tais como meios de cultura de Cor- dyceps sinensis, Hericum erinaceus ou Ganoderma lucidum, podem ser utilizados diretamente como um gênero alimentício, após tratamento adequado, tal como pasteurização ou esterilização antes de consumo. Os meios de cultura podem ser secos, diluídos, concentrados ou usados puros nas formas de um concentrado, pó seco; e similares.
[0022] Como culturas de matriz miceliana estacionária, a interface entre solução de metabólito fúngico e meio remanescente afunda-se firmemente. Deslocamento da interface é uma observação convenien- te para determinar a saúde da cultura, e indica quando a cultura entrou em uma fase estacionária ou de crescimento. O pool formador de me- tabólitos apresenta frequentemente uma coloração agradável e sem estar ligada por teoria, acredita-se que contenha material fúngico benéfico tais como enzimas, carboidratos, lipídios, pequenas moléculas, e assim por diante, o que tornaria o material desejável como ingredien- te/suplemento/aditivo alimentício. Os inventores verificaram que a cultura de micélio submerso, em uma modalidade, necessita apenas ser filtrada (com, por exemplo, filtro de algodão, filtro de café, filtro de 0,2 mícrons) e pasteurizada para isolar o fluido sobrenadante. As culturas flutuantes podem ser utilizadas de acordo com a presente invenção se misturadas.
[0023] Em uma modalidade, os presentes inventores verificaram que a porção de um fluido de cultura de tecido líquido fúngico, o fluido sobrenadante (contendo quantidades reduzidas de micélio, aqui referida como a "porção livre de micélio"), quando adicionado diretamente a um produto alimentício, apresenta de aperfeiçoar sabores indesejáveis no produto alimentício, tais como, por exemplo, sabores amargos, sabores adstringentes e/ou ressaibos indesejáveis. Intensificar o sabor de um produto alimentício inclui edulcoração aperfeiçoada por esse produto alimentício. Aperfeiçoamento de sabor também inclui redução de ressaibos característicos associados à estévia e chá, incluindo, sem limitação, um sabor amargo, um sabor metálico, um sabor de alcaçuz, comumente, como um ressaibo, que se ajusta após a sensação inicial de doce ou chá. Reduzir esses sabores pode também ser referido como mitigação de deficiências de sabor. Por exemplo, os glicosí- deos de esteviol possuem amargor residual e ressaibo, o que afeta as suas características qualitativas.
[0024] O sabor aperfeiçoado de produtos alimentares tratados por produtos da invenção pode ser medido de várias maneiras, tais como a análise química que demonstra doçura melhorada, amargor reduzido e/ou deficiências de sabor atenuado. Testes de sabores com painéis de sabor podem também ser conduzidos para proporcionar dados qualitativos com relação aos sabores aperfeiçoados nos produtos, com os painéis determinando se doçura aperfeiçoada e/ou deficiências de sabor reduzidas foram exibidas nos produtos tratados.
[0025] Em uma modalidade, a presente invenção inclui miceliza- ção de folhas de Stevia rebaudianna com, por exemplo, Cordyceps sinensis para proporcionar um melhor sabor de extrato aquoso de S. rebaudianna comparado com o controle não-micelizado. Contudo, os presentes inventores também verificaram que adicionar simplesmente uma cultura líquida completa de C. sinensis a uma amostra de extrato aquoso de S. rebaudianna eliminou ressaibos indesejáveis do S. re- baudianna (por exemplo, um ressaibo desagradável). Por exemplo, incubou-se uma mistura de Rebaudiosídeo A a 60% com uma cultura de tecido líquido total de C. sinensis e G. lucidum. Os inventores verificaram que o ressaibo comumente associado da mistura de glicosídeo de esteviol foi completamente eliminado quando misturado com toda a cultura líquida de Cordyceps sinensis após uma incubação de 6 horas. Nenhum efeito deste tipo foi observado com G. lucidum, Hericium eri- naceus, Grifola frondosa, Lentinula edodes, Tricholoma matsutake, Morchella esculenta, Trametes versicolor ou Ganoderma lucidum. Contudo, os inventores entendem que a propriedade de melhorar o perfil de sabor será provavelmente encontrada em outros gênios de fungos e, provavelmente, em outras espécies de fungos Cordyceps, tais como, por exemplo, qualquer espécie de Ophiocordyceps, Elapho- cordyceps ou Cordyceps, tais como, C. sinensis e C. militaris.
[0026] Especificamente, os inventores utilizaram cultura de tecido líquido de C. sinensis filtrado para misturar com uma mistura de glico- sídeo de esteviol durante uma incubação de seis horas. Após realiza- ção de um estudo de curso no tempo, os inventores descobriram sur-preendentemente que o efeito intensificador do sabor se mantinha imediatamente após a adição do filtrado à mistura de glicosídeo de es- teviol, indicando que o processo era possivelmente não enzimático. Presumiu-se que a cultura de tecido líquido de C. sinensis filtrado apresentava propriedades de aperfeiçoamento do sabor e/ou bloquea- dor de sabor amargo. A cultura de tecido líquido de C. sinensis filtrada (filtrado) foi então combinada com outras substâncias como descritas neste relatório na Tabela 9 e verificou-se apresentar propriedades gerais de aperfeiçoamento de sabor/bloqueador de sabor amargo para essas substâncias. Os inventores verificaram que o filtrado pode ser adicionalmente purificado, por exemplo, para aumentar solubilidade, e pode ser seco, tal como secagem por pulverização, e combinado com produtos alimentícios para aperfeiçoar os perfis de sabor dos produtos alimentícios, incluindo, redução de sabores amargos e/ou ressaibos. A presente invenção assim descreve um bloqueador de sabor amargo que parece ser eficaz em vários tipos diferentes de produtos alimentícios.
[0027] Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método de acentuar o sabor de um produto alimentício, que inclui as etapas de cultivar uma cultura de tecido líquido de micélio submerso em um meio, coletar uma porção livre de micélio da cultura e adicionar a porção livre de micélio a um produto alimentício para acentuar o sabor dos produtos alimentícios.
[0028] Um produto alimentício de acordo com a presente invenção pode incluir qualquer produto alimentício, que inclui quaisquer substâncias que são tomadas por administração oral (por via oral) e incluem produtos alimentícios, ingredientes alimentícios, suplementos dietéticos, aditivos alimentares, produtos farmacêuticos, gêneros alimentícios, ingredientes cosméticos, ingredientes nutracêuticos, ingredien- tes dietéticos e auxiliares de processamento. Qualquer produto alimentício que apresente ou pode apresentar características de sabor indesejável, tais como sabores amargos, ressaibos indesejáveis, sabores adstringentes e similares, pode ser tratado com a composição de blo- queador de sabor amargo da presente invenção. Em algumas modalidades, o produto alimentício inclui partes de plantas de chá, decoc- ções de chá ou extratos de chá purificados. Em algumas modalidades, o produto alimentício inclui partes de planta de estévia, glicosídeo de esteviol, aspartame, acessulfame-K, sucralose, carboidratos, fruto de monge, cacau, licor de cacau, chá, ginseng, proteína de ervilha, álcool de açúcar, café, arando, toranja, romã, coco, vinho, cerveja, licor e bebidas alcoólicas.
[0029] Os produtos alimentícios incluem todos os cereais, grãos, todas as espécies de trigo, centeio, arroz integral, arroz branco, arroz vermelho, arroz ouro, arroz selvagem, arroz, cevada, triticale, arroz, sorgo, aveia, painço, quinoa, trigo-sarraceno, Fonio (painço), amaran- to, cereal africano (teff) e trigo-duro; maçãs e peras, damascos, cerejas, amêndoas, pêssegos, morangos, uva passa, mandioca, cacau, banana, Rubiaceae sp. (café), limões, laranjas e toranja; tomates, batatas, pimentão, berinjela, pimenta-da-jamaica, pó de manga, angélica, anis (Pimpinella anisum), murta da semente do anis (Syzygium anisa- tum), anato (Bixa orellana), menta (Mentha suaveolens), Artemisia vulgaris, artemísia, assa-fétida (Ferula assafoetida), Berberis, banana, manjericão (Ocimum basilicum), folhas de louro, bistorta (Persicaria bistorta), cardamomo preto, cominho preto, groselha preta, limas pretas, Fava-do mar (Fucus vesiculosus), actéia azul, eucaliptos de folhas azuis (Eucalyptus polybractea), chá de pântano labrador (Rhododen-dron groenlandicum), Boldo (Peumus boldus) coentro boliviano (Po- rophyllum ruderale), borragem (Boro officinalis), Cálamo, Calêndula, Calumba (Jateorhiza calumba), camomila, cânhamo, alcaparra (Capparis spinosa), alcaravia, cardamomo, cártamo, vagem de alfarroba, cássia, casuarina, gatária, unha-de-gato, catsear, pimenta-de-caiena, Celastrus paniculatus, confrei, sal de aipo, semente de aipo, centáurea, cerefólio (Anthriscus cerefolium), morrião-branco, chicória, pimenta do Chile, pó de pimentão, cinchona, cebolinha (Allium schoenopra- sum), cerefólio anisado, (Myrrhis odorata), Cilantro (ver coentro) (Cori- andrum sativum), cinamomo (e Cássia), murta de cinamomo (Backhousia myrtifolia), esclaréia, aparina, trevo, cravo-da-índia, café, unha-de-cavalo, confrei, arruda comum, condurango, Coptis, coentro, hortelã francesa (Tanacetum balsamita), grama-do-campo, salsa-de- vaca (Anthriscus sylvestris), prímula, Cramp Bark (Viburnum opulus), agrião, orégano cubano (Plectranthus amboinicus), cotonária, comi-nho, folha de caril (Murraya koenigii), Damiana (Turnera aphrodisiaca), Dente-de-leão (Taraxacum officinale), Demulcente, garra do diabo (Harpagophytum procumbens), semente de endro, aneto (Anethum graveolens), pimenta Dorrigo (Tasmannia stipitata), Equinácea, Echinopanax Elatum, Edelvais, baga de sabugueiro, flor de sabugueiro, Ênula-campana, Eleutherococcus senticosus, erva-de-santa-maria (Chenopodium ambrosioides), Efedra, Eryngium foetidum, Eucalipto, funcho (Foeniculum vulgare), feno-grego, matricária, escrofulária, pó de cinco condimentos (chinês), Fo-ti-tieng, fumária, rizoma de galanga, Garam masala, agrião de jardim, cebolinha, alho, gengibre, (Zingiber officinale), Ginkgo biloba, Ginseng, Ginseng Siberiano (Eleutherococ- cus senticosus), arruda caprária (Galega officinalis), Goada masala, vara-de-ouro, hidraste (Hydrastis canadensis), Gotu Kola, grãos de paraíso (Aframomum melegueta), grãos de Selim (Xylopia aethiopica), extrato de sementes de uva, chá verde, hera terrestre, guaco, marroio- de-água, Pilriteiro (Crataegus sanguinea), Pilriteiro, cânhamo, Ervas de Provença, hibisco, azevinho, cardo-santo, lúpulos, marroio-branco, rábano-bastardo, cavalinha, (Equisetum telmateia), hissopo (Hyssopus officinalis), jalapa, jasmim, pérola do jasmim, cipó-doce (Gynostemma pentaphyllum), eupatório (Gravelroot), John the Conqueror, junípero, folhas de lima Kaffir (Citrus hystrix, C. papedia), Kaala masala, polig- nácea, Kokam, chá de labrador, rubiáceas (Lady’s Bedstraw), alquemi- la, agrião-de-sequeiro, lavanda (Lavandula spp.), Ledum, erva-cidreira, (Melissa officinalis), manjericão, capim-limão (Cymbopogon citratus, C. flexuosus, e outras espécies) Lemon Ironbark (Eucalyptus staigeriana), Lemon Mint, murta de limão (Backhousia citriodora), tomilho-limão, verbena de limão (Lippia citriodora), alcaçuz - adaptogênio, flor de lima, Limnophila aromatica, linhaça, alcaçuz, pimenta longa, ligústica, (Levisticum officinale), fruta-dos-monges (Luohanguo), macis, cereja preta selvagem (Mahlab), Malabathrum, Manchurian Thorn Tree (Ara- lia manchuria), mandrágora, manjerona (Origanum majorana), Marrubium vulgare, chá de alecrim selvagem, malvaísco, almécega, rainha- dos-prados, Mei Yen, pimenta malagueta (Aframomum melegueta), hortelã, cardo mariano (Silybum), bergamota (Monarda didyma), agripalma, escutelária da montanha, verbasco (Verbascum thapsus), mostarda, semente de mostarda, Nashia inaguensis, Nim, erva dos gatos (Nepeta), urtiga, Nigella sativa, Kolanji, Noni, noz-moscada, macis, maconha, erva-dos-burros (Oenothera biennis), Olida (Eucalyptus oli- da), orégano (Origanum vulgare, O. heracleoticum), rizoma de lírio, Osmorhiza, folha de Oliveira (usada no chá e como suplemento herbáceo), Panax quinquefolius, folha de Pandan, páprica, salsa (Petroseli- num crispum), flor-da-paixão, patchouli, poejo, pimenta (preta, branca e verde), hortelã-pimenta, goma de hortelã-pimenta (Eucalyptus dives), perila, banana-de-são-tomé, romã, Ponch phoran, semente de papoula, prímula (Primula), flores cristalizadas, misturas secas de chá, Psyllium, beldroega, quássia, Quatre epices, Ramsons, framboesa, framboesa (folhas), cogumelo-rei, resta-boi, Rhodiola rosea, jambinho cascata (Syzygium luehmannii), Roquete/rúcula, camomila-romana, Rooibos, fruto da roseira, alecrim (Rosmarinus officinalis), bagas de sorveira-brava, arruda, açafrão-bastardo, açafrão, Salva (Salvia officinalis), Saigon Cinnamon, erva-de-são-joão, Salad Burnet (Sanguisorba minor ou Poterium sanguisorba), sálvia, pimenta de Sichuan (Sansho), sassafrás, segurelha, (Satureja hortensis, S. montana), esquisandra (Schisandra chinensis), Scutellaria costaricana, sene (erva), Senna obtusifolia, semente de sesámo, azedinha, bolsa-de-pastor, sialagogo, ginseng siberiano (Eleutherococcus senticosus), Siraitia grosvenorii (fruta-dos-monges), escutelária, bagas de abrunheiro, Smudge Stick, Sonchus, azeda, (Rumex spp.), abrótano, hortelã-verde, verônica, ce- bola-albarrã, estrela-de-anis, estévia, folhas de morango, Suma (Pfaf- fia paniculata), sumagre, segurelha-dos-jardins, Sutherlandia frutes- cens, erva-doce, cerefólio anisado (Myrrhis odorata), aspérula odorífe-ra, pimenta de Szechuan (Xanthoxylum piperitum), tacamaca, tamarindo, Tandoori masala, tanásia, estragão (Artemisia dracunculus), chá, Teucrium polium, manjericão tailandês, cardo, tomilho, Toor Dall, tor- mentilha, Tribulus terrestris, manjericão Tulsi (Ocimum tenuiflorum), açafrão-da-índia (Curcuma longa), uva-de-urso também conhecida como uva-ursina, baunilha (Vanilla planifolia), noz de malabar, verbena, vetivéria, Vietnamese Coriander (Persicaria odorata), wasabi (Wa- sabia japonica), agrião, semente de acácia, gengibre silvestre, alface brava, tomilho selvagem, segurelha-de-inverno, hamamélis, sinforina, erva-benta, betônica, aspérula, absinto, milefólio, Yerba Buena, erva- mate, ioimbina, Zátar, raiz de zedoária, ou derivados destes em soluções aquosas ou semi-aquosas.
[0030] A etapa de cultivo de um tecido líquido de micélio submerse pode ser realizada por quaisquer métodos conhecidos no estado da técnica. Em uma modalidade, os métodos para cultivar uma cultura de tecido líquido de micélio submerso podem ser encontrados, por exemplo, em PCT/US14/29989, depositado em 15 de março de 2014, PCT/US14/29998, depositado em 15 de março de 2014, US 61/953. 821, depositado em 15 de março de 2014, US 61/953.823, depositado em 15 de março de 2014, US 62/042.071, depositado em 26 de agosto de 2014, todos os quais são aqui incorporados como referência em sua totalidade.
[0031] Em uma modalidade, a cultura de tecido líquido de micélio submerso é realizada em um recipiente de biorreator sob pressão que é construído idealmente com um domo torisférico, corpo cilíndrico e base de tampa esférica, encamisado em torno do corpo, equipado com um misturador de acionamento magnético e portas através de invólucro encamisado encrespado para proporcionar acesso de equipamento compreendendo sondas DO, medidores de pH, medidores de con- dutividade, termopares, etc., como é conhecido no estado da técnica. Esses medidores e sondas devem ser registrados por dados. Em uma modalidade, a base cilíndrica apresenta uma válvula ligada a uma linha de colheita que é iniciada com uma válvula a outra em forma de T, a qual é iniciada com um dissipador de fundo e em linha com uma derrapagem de CIP, a linha de colheita em linha T para uma derrapagem de pasteurização, e finalmente, um dispositivo de secagem, tal como um secador por pulverização, um secador de leito fluido, um secador cônico ou outras aplicações de secagem. Em uma modalidade, a cultura de tecido líquido de micélio processada pode ser embalada imediatamente a partir do secador. Uma amostra deve ser mantida como controle e uma amostra apropriada enviada a um controle de qualidade de terceira, provedor Certificate of Analysis. O ar pode ser proporcionado por um tanque receptor de ar conectado a um compressor de ar de 120/240 V. O compressor de ar libera o ar através de um regulador de pressão com válvulas a montante e a jusante, imediatamente, a montante da válvula a montante sendo um T, teed-off com uma válvula que conduz a outro T, teed-off com uma válvula para uma derrapagem de CIP, em linha com um suprimento de vapor com válvula, a válvula reguladora de pós-pressão em linha com uma válvula e um filtro de aço inoxidável de 0,2 μm (o qual pode ser limpo em um dissipador de ultra-sons) em um invólucro de cartucho de aço inoxidável, o qual leva a uma válvula de retenção opcional para obrigar a válvula no domo do recipiente de pressão, o sistema de válvula final, opcionalmente, sendo a montante da válvula de retenção, teed-off com uma peça em Y que conduz a duas configurações similares de retenção válvula para válvula para esferas de pulverização a 360°. As duas esferas de pulverização são colocadas por ser responsável pela sombra apresentada pelo percolador de ar que se estende através do recipiente. Medidores de pressão ao longo do ajuste podem ser estrategicamente colocados para monitorar a pressão, e fluxômetros usados para monitorar as taxas de suprimento de ar. Tanques receptores de gás adicionais tais como tanques de oxigênio, podem ser colocados em linha entre o regulador de pressão e os filtros para calibrar as pressões parciais de qualquer gás. Os inventores recomendam cartuchos de filtro de volta para trás, embora isto não seja necessário. O gás é exaurido através de uma válvula de retenção com baixa pressão de fracionamento, tal como uma válvula de comporta, ou uma válvula de retenção de mola com pressão de fracionamento de 0,01 MPa a 0,02 MPa (2 a 3 psi), para um regulador de contrapressão que mantém o recipiente sob uma pressão de 0,03 MPa a 0,17 MPa (5 a 25 psi). O regulador de contra- pressão pode também levar a uma armadilha de vapor e dissipador de fundo. Em uma modalidade, o ajuste proporciona 0,5 a 5,0 ACH. Outros esquemas de engenharia conhecidos daqueles versados no estado da técnica podem também ser utilizados.
[0032] O reator é preferencialmente equipado com um meio para inoculação estéril. Em uma modalidade, para inocular o reator, uma solução de glicerol de estoque de fungos, consistindo de um recipiente de autoclave de válvula (por exemplo, polipropileno) é retirada do congelador, removida de sua vedação e ligada a um cruzamento, em linha com uma válvula para a câmara. A linha de cruzamento transversal é vedada em ambas as extremidades, com a válvula a montante ligada a um invólucro de cartucho de aço inoxidável mantendo um filtro de aço inoxidável de 0,2 μm. Essa linha é ligada com uma válvula T (também com válvula no lado a montante) em linha para a linha de suprimento de ar principal. A jusante do cruzamento está uma válvula para uma armadilha de vapor para um dissipador de fundo. O vapor é executado para esterilizar o ar entre a reserva de glicerol e a válvula para a câmara. Uma vez esterilizado e arrefecido, o vácuo entre a reserva de glicerol e a válvula para a câmara é quebrado. As válvulas no lado do cruzamento são fechadas, e as válvulas na reserva de glicerol e recipiente de pressão são abertas para inocular o meio. Podem também ser utilizados outros esquemas de engenharia conhecidos daqueles versados na técnica.
[0033] O reator deve ser equipado para ser preenchido com água. O sistema de abastecimento de água é idealmente um sistema WFI, com uma linha esterilizável entre o alambique e o reator. Os ingredientes sólidos do meio devem ser adicionados à pré-esterilização do tanque, idealmente através de um sistema transportador a vácuo. Esterilizações sob alta temperatura são suficientemente rápidas para não serem prejudiciais para o meio. Uma vez que água é adicionada, o tanque deve ser levemente agitado e inoculado. Em outra modalidade, os ingredientes sólidos do meio são adicionados a água filtrada ou destilada, e o meio líquido esterilizado sob altas temperaturas e bombeado através de uma linha estéril para dentro do recipiente sob pressão. Em outra modalidade, o tanque é preenchido com água filtrada ou destilada, os ingredientes sólidos do meio são adicionados, e o meio é esterilizado por vaporização da camisa, câmara, ou ambos, enquanto o meio é opcionalmente agitado.
[0034] Pelo menos um reator de expansão deve ser utilizado antes de tanques de abordagens com volumes na ordem de 1 x 105. São re-comendados até 3 a 4. Os inventores recomendam ir da ordem de 1 x 100 L para 1 x 102 L para 1 x 104 L para 1 x 105-6 L. Meios mais ricos podem ser utilizados para os reatores de expansão e os motivos de cultura de pré-glicerol de reserva.
[0035] O material de reserva glicerol aqui descrito é preparado, em uma modalidade, por um motivo de propagação simples de placa de Petri para um balão de agitação Erlenmeyer de 0,1 L a 4 L para material de reserva glicerol a 50%. Placas de Petri podem compreender ágar em 25 a 35 g/L além de variações dos meios descritos acima para motivo do biorreator. Conduzidas em operação estéril, as placas de Petri escolhidas que crescem em qualquer parte de 3 a 90 dias podem ser propagadas em frascos de Erlenmeyer de 4 L (ou frascos de Wheaton de 250 a 1.000 mL) para incubação em uma mesa vibratória. Quanto menor o recipiente, mais rápido o agitador deve ser. Os inventores recomendam em qualquer parte de 40 a 160 rpm dependendo do tamanho do recipiente, com cerca de 2,54 cm (1") de raio de oscilação. Após agitação de 1 a 10 dias, pode-se verter uma alíquota (por exemplo, 10 a 500 mL) do balão de agitação em um recipiente autoclavável esterilizado com válvula, o qual é então ajustado com glicerol estéril à temperatura ambiente a 40 a 60% (v/v). O material de reserva de glice- rol pode ser selado com uma vedação apertada de água e pode ser colocado em um saco de plástico estéril, e colocado no congelador a - 20°C para armazenamento e eventual transporte a frio para qualquer sítio de fabricação. O congelador é idealmente um congelador de temperatura constante. Os materiais de estoque de cultura de tecido líquido não ajustados ao glicerol podem também ser usados e armazenados a 4°C ou -20°F. Podem também ser utilizados materiais de esto- que de glicerol armazenados a 4°C.
[0036] A presente invenção faz-se uso do conceito de que qual quer meio de qualidade humana, excluindo quaisquer ingredientes de qualidade humana discutidos no fundamento, pode ser usado como uma receita de meio para a produção de cultura de micélio líquido comestível, como é conhecido na técnica e também descrito em outro lugar, por exemplo, PCT/US14/29989, depositado em 15 de Março de 2014, PCT/US14/29998, depositado em 15 de Março de 2014, US 61/953.821, depositado em 15 de Março de 2014, US 61/953.823 depositado em 15 de março de 2014, US 62/042.071, depositado em 26 de Agosto de 2014, todos os quais são aqui incorporados como referência em sua totalidade. De preferência, um sal de nitrogênio, se utilizado, é acetato de amônio, por ser o sal mais "natural". Outros ingredientes de meios suplementares incluem xarope de arroz integral, melaço, purês de fruta (manga, maçã, etc.) em concentrações na ordem de 1 x 10-2 a 1 x 102 mL/L (ou simplesmente como o meio), farinha de arroz integral de grãos curtos, flocos de levedura nutricional, carboxi- metilcelulose, sais de carboximetilcelulose, soro de leite, caseína e proteína de planta e de semente. Os ingredientes são escolhidos de modo a minimizar as possibilidades de reações alérgicas e proporcionar rendimento elevado. Acetato de amônio é opcionalmente incorporado como um ingrediente de alimentação contínua.
[0037] A presente invenção pode também ser usada com meios de classe animal e produtos alimentícios de classe animal.
[0038] Em uma modalidade, culturas de tecido líquido de meio mínimo são suplementadas com grandes volumes de meio máximo, de modo a levar vantagem de tempos curtos de log e metabolismo secundário.
[0039] Em uma modalidade, uma estirpe de fungo útil para o componente fúngico da presente invenção em uma modalidade é estirpe de C. sinensis WC859, comercialmente disponível de Pennsylvania State University (The Pennsylvania State University Mushroom Culture Collection, disponível do College of Agriculture Sciences, Department of Plant Pathology and Environmental Microbiology (Departamento de Patologia Vegetal e Microbiologia Ambiental), 117 Buckhout Laboratory, The Pennsylvania State University, University Park, Pensilvânia, EUA 16802). Componentes fúngicos úteis na presente invenção podem ser preparados por métodos aqui descritos. Podem ser utilizados outros métodos conhecidos na técnica.
[0040] Alternativamente, a cultura de tecido líquido fúngica pode incluir outras espécies de fungos do gênero, Cordyceps Ophio- cordyceps, Elaphocordyceps, Metacordyceps, tais como, por exemplo, C. militaris. Existem muitas outras espécies do gênero, entretanto, essas espécies são geralmente não cultivadas comercialmente. Contudo, espera-se que, por exemplo, C. scarabaeicola, C. takaomontana, Ophiocordyceps dipterigena, Ophiocordyceps amazonica, C. cylindri- ca, Cordyceps sphecocephala, Metacordyceps martialis, Ophio- cordyceps melonlonthae, Ophiocordyceps nutans, Ophiocordyceps curculionium, Ophiocordyceps australis, Ophiocordyceps tiputini, Cor- dyceps caloceroides, e Cordyceps variabilis terá a mesma ou similar capacidade de bloqueio de sabor amargo como C. sinensis.
[0041] Alternativamente, fungos adequados para a presente invenção compreendem: Ganoderma applanatum, C. militaris, Hericium erinaceus, Lentinula edodes, Agaricus blazei, Grifola frondosa, Auricu- laria auricula, Flammulina velutipes, Trametes versicolor, Morchella spp., Inonotus obliquus, Laricifomes officinalis, Fomes fomentarius, Fomes officinalis, Fomes fomitopisis, Tricholoma matsutake, Boletus edulis, Clitocybe nuda, Clitocybe saeva, Plearotus spp., Tremella fuci- formis, Piptoporus betulinis, Polyporus umbellatus, Pholiota nameko, Volvariella volvacea, Hypsizygus marmoreus, Stropharia rugosoannu- lata, Laetiporus sulfureus, e combinações dos mesmos.
[0042] Em uma modalidade, a invenção inclui um método de pre paração de uma porção livre de micélio da cultura de tecido líquido de micélio submerso após cultura. A porção livre de micélio inclui sólidos sobrenadantes biomoleculares micélicos, material celular e meios residuais da cultura de tecido líquido de micélio submerso.
[0043] Conforme descrito acima, para preparar a cultura, os meios preparados são inoculados em um recipiente de meios de classe humana esterilizados em água, preferencialmente, filtrados por meio de qualquer método conhecido no estado da técnica, tais como osmose reversa, desionização ou destilação. Em outra modalidade a água não é filtrada. Em outra modalidade, os meios são de classe animal. Conforme descrito, o frasco e meios podem ser esterilizados por qualquer método conhecido no estado da técnica, tais como exposição in situ a 121oC (250oF) sob corrente saturada de 0,16 MPa (23 psi) para um período de tempo apropriado, tais como 2 - 2,5 horas por um frasco de Erlenmeyer de 4,0 L preenchido com 1,5 L de meios. O frasco esterilizado pode ser inoculado uma vez fresco por qualquer meio conhecido no estado da técnica, tal como por uma placa de Petri, cultura de líquido flutuante ou submerso, material agrícola miceliado, material de estoque de glicerol, etc. O frasco é prontamente para uso após 3 - 60 dias de cultura apropriada conforme é conhecida no estado da técnica, tal como uma mesa agitadora em 130 rpm sob temperatura ambiente em um ambiente limpo. Uma placa de Petri de controle da cultura residual deixada no frasco pode ser produzida para assegurar que o frasco está vazio de contaminação. O frasco pode também ser utilizado para graduação em um biorreator grande (por exemplo, 5 - 500 L) produzido do mesmo meio de qualidade, o qual pode ser utilizado de maneira similar.
[0044] Em algumas modalidades, a cultura tissular de líquido fún- gico é C. sinensis crescido em um meio líquido que consiste de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica. Esse meio mínimo verificado pelos inventores é uma receita de meio eficaz para produção de bloqueador de sabor amargo (produto alimentício intensificador de sabor) conforme anteriormente descrito. O efeito bloqueador de sabor amargo/intensificação de sabor do produto da invenção pode ser perdido com meios diferentes, tal como a adição de 20 g/L de purê de manga orgânica, o qual introduz defeitos de sabor em uma solução aquosa de glicosídeo de esteviol. O pó sobrena- dante resultante pode ser utilizado como um bloqueador de sabor amargo em aplicações do produto conforme discutido neste relatório.
[0045] Após um tempo adequado para cultura, o qual pode ser de terminado por aquele versado no estado da técnica, a parte livre de micélio (conforme definido neste relatório) pode ser coletada a partir da cultura. A parte livre de micélio da cultura de tecido líquido de micé- lio submerso pode ser, opcionalmente, utilizada para aperfeiçoar e/ou intensificar o sabor de um produto alimentício. Cultura pode ocorrer, por exemplo, de entre, aproximadamente, um e aproximadamente sessenta dias, entre, aproximadamente, dois e aproximadamente cinquenta dias, entre, aproximadamente, três e aproximadamente, quarenta dias, entre, aproximadamente, quatro e aproximadamente trinta dias, entre, aproximadamente cinco e aproximadamente vinte e cinco dias, entre aproximadamente, seis e aproximadamente vinte dias, entre, aproximadamente sete e aproximadamente, quinze dias, entre, aproximadamente, oito e aproximadamente doze dias, e entre, apro-ximadamente nove e aproximadamente dez dias. O comprimento de tempo para cultura pode ser determinado mediante, por exemplo, considerações econômicas de número de dias em cultura e o grau de intensificação de sabor observado para um tempo particular de cultura.
[0046] A cultura para uso na presente invenção pode ser qualquer cultura de tecido líquido que compreende micélio, por exemplo, cultura submersa ou flutuante. Uma cultura submersa é geralmente agitada, visto que a cultura flutuante é minimamente agitada, a qual permite que o micélio cresça de uma forma emaranhada. As porções da cultura para uso com a presente invenção incluem qualquer e todas as partes ou porções da cultura, incluindo, micélio, sobrenadante ou filtrado de cultura, ou quaisquer proporções ou frações desta. Em uma modalidade, a cultura pode ser combinada (mecanicamente ou de outra maneira) antes de utilização, e todo o material misturado utilizado, ou alguma fração do mesmo. Em algumas modalidades, a porção da cultura para utilização é a porção da cultura que é comumente entendida como o "sobrenadante de cultura celular" ou "filtrado de cultura celu-lar", isto é, a porção fluida da cultura que foi separada das células mi- celianas, e contém uma quantidade relativamente pequena ou menor de micélio quando oposta a uma porção de células micelianas, a qual é enriquecida em células micélicas, mas ainda conterá alguma porção fluida. Desse modo, deve-se entender que, esse sobrenadante de cultura de tecido fluido também conterá comumente micélio, mesmo se não visível ao olho ou mesmo facilmente visível sob um microscópio. Essa porção da cultura é denominada neste relatório a porção "livre de micélio" de conveniência, contudo, conforme estabelecido deve-se entender que, essa porção conterá comumente alguma quantidade mínima de micélio, mesmo que não visível ao olho.
[0047] A fim de preparar a porção livre de micélio da cultura, o mi-célio pode ser removido por qualquer método conhecido no estado da técnica para separar fluidos de sobrenadante de cultura celular. Por exemplo, a cultura pode ser filtrada por qualquer meio conhecido no estado da técnica para obter o filtrado, tal como, por exemplo, filtros de 0,2 μm, e similares. Alternativamente, a porção livre de micélio da cultura pode ser coletada por meio de centrifugação. A porção livre de micélio coletado da cultura tissular líquida de micélio submerso pode ser referida neste relatório como sobrenadante coletado, sobrenadan- te, fluido de sobrenadante, sobrenadante de C. sinensis, filtrado, produto e termos similares, tais como o produto intensificador de sabor ou bloqueador de sabor amargo/produto de bloqueio, ou bloqueador de sabor amargo.
[0048] Opcionalmente, a cultura de tecido líquido pode ser tratada para reduzir ou eliminar a viabilidade de organismos vivos, tais como pasteurização ou esterilização, por meio de métodos conhecidos na técnica. A cultura de tecido líquido coletado pode ser pasteurizada ou esterilizada antes ou após separação para obter a porção livre de mi- célio da cultura, por qualquer método conhecido na técnica. Em uma modalidade, o material é esterilizado sob condições, tais como aproximadamente 30 a 50 minutos de exposição a 121oC (250oF) de corrente saturada a 0,16 MPa (23 psi). Alternativamente, o material pode ser pasteurizado mantendo o material em um banho de água quente a 71,11oC a 76,67oC (160 a 170oF) por 20 minutos, duas vezes, resfriando-o novamente a temperatura ambiente entre processos.
[0049] Essa cultura de tecido líquido pasteurizado ou esterilizado pode ser utilizada como uma nova bebida, ou seu pó como um novo gênero alimentício, ingrediente alimentício, suplemento dietético, ingrediente dietético ou aditivo alimentício que pode ser utilizado de 0,1 - 40.000 ppm em várias aplicações do produto.
[0050] O filtrado (sobrenadante coletado) pode apresentar seu volume ou componente líquido ajustado conforme determinado por aquele versado na técnica para produzir concentrados, diluentes, ou pós- secos. Em uma modalidade, o filtrado pode ser opcionalmente, seco por qualquer método conhecido no estado da técnica, incluindo, o uso de secagem ao ar aberto, dessecadores contínuos pequenos, secadores de forma a vácuo, leitos fluidos ou secadores por pulverização, ou secadores por congelação para secar o líquido a um pó. O filtrado é, em uma modalidade, seco após esterilização/pasteurização.
[0051] O pó resultante ou produto intensificador de sabor pode ser utilizado para intensificar o sabor de um produto alimentício, e pode ser misturado em qualquer alimento/bebida conforme descritos neste relatório sob concentrações de 0,1 - 40.000 ppm e mesmo maior dependendo da natureza da aplicação. Determinação da quantidade do produto intensificador de sabor para uso pode ser determinada por aquele versado no estado da técnica por meio de ensaio com a meta de reduzir ou eliminar componente de sabor indesejável no produto alimentício e/ou intensificar o sabor do produto alimentício, sem introduzir defeitos de aroma.
[0052] Uma faixa geral de concentrações de sobrenadante de C.sinensis (bloqueador de sabor amargo) como um pó seco para utilizar com vários produtos alimentícios é mostrada na Tabela 9 abaixo. Está dentro da capacidade daquele versado no estado da técnica determinar razões ótimas do sobrenadante de C. sinensis para ser utilizado com um produto particular, com base nos perfis de sabor. Por exemplo, sob concentrações muito altas de sobrenadante de C. sinensis, o efeito intensificador de aroma cessará, ou o produto introduzirá defeitos de aroma no material final. Sob uma concentração baixa demais de sobrenadante, haverá um grau insuficiente de aperfeiçoamento de sabor. A concentração do material agrícola, tal como uma mistura de gli- cosídeo de esteviol que é tipicamente utilizada sob 200 - 450 rpm, essencialmente, determina a concentração ideal de bloqueador de sabor amargo. Por exemplo, diluição/concentração em série pode ser usada como uma ferramenta na determinação do uso das concentrações limiares superiores e inferiores do sobrenadante. Formular o bloquea- dor de sabor amargo para o material em qualquer concentração inicial que se deseja testar. Se esta proporciona a alteração de aroma dese- jado, reduz à metade a concentração até que a alteração de aroma seja insuficiente. Levar as concentrações finais entre aquelas processadas e as não processadas, e aplicar o bloqueador de sabor amargo na média. Se este processo reduz à metade a concentração até que esta não mais se processa, e a concentração acima dessa que não se processa é a concentração limiar inferior. Se esta não se processa, dobra a concentração até que esta alteração aconteça. A concentração limiar inferior pode ser dobrada indefinidamente para atingir a concentração limiar superior, em que o verificador de sabor determina se o efeito modificador de aroma é eventualmente perdido ou o bloquea- dor de sabor amargo dá partida para introduzir a deficiência de sabor.
[0053] O pó pode também ser reidratado, filtrado e secado novamente para aumentar solubilidade do produto. O produto seco por pulverização apresenta alta solubilidade e, opcionalmente, não é reiidra- tado antes de uso, e pode ser simplesmente misturado como um pó com um produto alimentício (particularmente, em aplicações edulco- rantes não-nutritivas). Alternativamente, o produto alimentício intensifi- cador de sabor pode ser combinado com um produto alimentício em forma líquida, e, opcionalmente, o produto alimentício/produto intensi- ficador de sabor pode ser seco juntamente. O pó sobrenadante pode também ser seco em um leito fluido, ou seco por pulverização para um produto fluidizado e mesmo aglomerado, tal como, na produção de uma mistura de glicosídeo de esteviol compreendendo o produto.
[0054] A presente invenção inclui um produto bloqueador de sabor amargo produzido pelos métodos descritos neste relatório.\
[0055] A presente invenção oferece um meio eficaz de cultivar mi-célio submerso ao redor do mundo como alimento humano por meio de apresentar a fonte inoculante sob um sítio de produção na forma de um material de estoque de tecido líquido ajustado em 50% (v/v) de gli- cerol, o qual pode ser mantido a -20oC. Essa cultura, pelo menos para ambas as estirpes testadas (G. lucidum e C. sinensis), exibe o fenômeno de aumentar em vigor sob revisão por mais tempo que esta é mantida em armazenagem a -20oC, e não necessita de ser aquecida antes de propagação.
[0056] A presente invenção também proporciona um método para produzir um produto alimentício, o qual compreende cultivar uma cultura de tecido líquido de micélio submerso em um meio, coletar a porção livre de micélio do sobrenadante, e utilizar a porção livre de micélio da cultura como o produto alimentício. Fungos apropriados para utilização, meios apropriados, métodos apropriados de coletar a porção livre de micélio do sobrenadante são descritos neste relatório. A porção livre de micélio do fluido de cultura (ou meio condicionado) pode ser usada como si própria como um produto alimentício. A porção livre de micélio pode ser opcionalmente concentrada, diluída ou seca conforme descrita neste relatório, e pode ser combinada com qualquer produto alimentício conforme descrito neste relatório antes de utilização. A presente invenção também inclui produtos alimentícios produzidos pelos processos descritos neste relatório.
[0057] Os exemplos seguintes são proporcionados para fins ilustrativos apenas, e não pretendem limitar o escopo da invenção.
EXEMPLOS EXEMPLO 1
[0058] Um extrato aquoso de RO filtrado foi produzido a partir de 453,59 g (1 libra) de batata e cenoura orgânicas/frescas, e 1 L de suco de fruta orgânica para criar culturas de 1 L em 6 frascos de Erlenme- yer de 4 L. Essas culturas foram produzidas com qualquer parte de extrato aquoso de estévia/chá a 0 - 100%. Os frascos foram submetidos à autoclave e esfriados. Uma vez frio, uma cultura de placa de Petri de fase log de C. sinensis WC859 foi propagada no frasco e subsequentemente agitada (60 rpm com um raio de oscilação de 1,27 cm (^ polegada). Uma cultura de tecido líquido totalmente desenvolvida (crescimento em fase log) foi observada em aproximadamente 3 - 4 dias, 20 g de folha de estévia foram colocados em um recipiente de grau alimentício e, aproximadamente 100 mL de cultura de líquido de fase log conforme descrita acima foram adicionados ao recipiente. O recipiente foi deixado a incubar-se, coberto, em aproximadamente 24oC (75oF) por cerca de seis horas. Após incubação as folhas de es- tévia foram ligeiramente pasteurizadas e secas. 5 g das folhas de es- tévia tratadas foram impregnados em um copo de água, filtrados e aromatizados em um teste duplo-cego randomizado com estévia não tratada por cinco avaliadores. Os avaliadores verificaram que a estévia tratada tinha aumentado doçura comparada com estévia de controle não tratada e apresentava um ressaibo mitigado de sabor amar- go/licor.
EXEMPLO 2
[0059] Um extrato aquoso de RO filtrado foi produzido a partir de 453,59 g (1 libra) de batata e cenoura orgânica/fresca, e 1 L de suco de fruta orgânica para criar culturas de 1 L em 6 frascos de Erlenme- yer de 4 L. Essas culturas foram produzidas com extrato aquoso de chá a 0 - 100%. Os frascos foram submetidos à autoclave e esfriados. Uma vez frio, uma cultura de placa de Petri de fase log de estirpe de C. sinensis WC859 foi propagada no frasco e subsequentemente agitada (60 rpm com um raio de oscilação de 1,27 cm (^ polegada). Uma cultura de tecido líquido de fase log totalmente colonizada foi observada em aproximadamente 3 - 4 dias. Aproximadamente, 20 g de folhas de chá verde foram colocados em um recipiente de grau alimentício e, aproximadamente 100 mL de cultura de líquido de fase log conforme descrita acima foram adicionados ao recipiente. O recipiente foi deixado a incubar-se, coberto, em aproximadamente 24oC (75oF) por cerca de seis horas. Após incubação ter terminado, de acordo com teste de sabor, as folhas de chá verde foram ligeiramente enxaguadas, mode-radamente pasteurizadas e secas. 5 g das folhas de chá verde tratadas foram secos e impregnados em um copo de água, filtrados e aromatizados em um teste duplo-cego randomizado com folhas de chá verde de controle não tratadas por cinco avaliadores. Os avaliadores verificaram que as folhas de chá verde tratadas tinham diminuído amargor comparadas com as folhas de chá verde de controle.
EXEMPLO 3
[0060] Um frasco de vidro manipulado limpo de 1,5 L foi preenchido com 1 L de meio que consiste de 17 g/L de ágar, 8 g/L de amido de batata orgânica, 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica, e 20 mL/L de purê de manga orgânica. A tampa do frasco de vidro manipulado foi frouxamente aparafusada e coberta com folha de estanho. Os inventores recomendam o uso desses frascos de vidro manipulados com seus puxadores, os quais tornam mais fácil derramamento. O frasco foi colocado em uma autoclave e esterilizado em um ciclo de líquido de 2,33 horas. Uma vez que o ciclo foi concluído, o frasco foi rapidamente colocado em um exaustor de fluxo laminar estéril para esfriá-lo até que pudesse ser tocado, o qual levou aproximadamente 1,3 horas. Nesse ponto, os teores do frasco foram cuidadosamente derramados em 120 placas de Petri. As placas esfriadas da noite para o dia nos exaustores (hoods).
[0061] Uma vez frios, os fungos de cultura de estoque foram utilizados para inocular as placas recentemente derramadas. Esses fungos foram crescidos em um meio idêntico. Os fungos foram transferidos com espetos de bambu de 30,48 cm (12") que tinham sido submetidos a autoclave em um pote de conserva de esfera com o ágar a partir do dia anterior. Uma dessas espécies de fungos foi Hericium erina- ceus. Quinze (15) placas com Hericium erinaceus foram produzidas e uma foi selecionada para propagação em um frasco de Erlenmeyer de 4 L, 8 dias após propagação. No 7°. dia de crescimento, o frasco de Erlenmeyer de 4 L foi preparado. O frasco continha 1,5 L de meio, consistindo de 8 g/L de farinha de milho, 4 g/L de farinha de aveia orgânica, 2 g/L de purê de manga orgânica e 2 g/L de pó de amido de batata orgânica. O frasco agitado vigorosamente a 60 rpm por 6 dias em um raio de oscilação de 2,54 cm (1"). No 2°. dia dessa cultura, um biorreator de 100 L foi preenchido com 58 L de água RO e um concentrado contendo 800 g de pó de amido de batata orgânica, 80 g de pó de cenoura orgânica, 50 g de bagas de trigo branco macias orgânicas misturadas e 1 L de purê de manga orgânica, ajustado em 2 L com água RO, foi derramado no reator para levar o volume até 60 L. O rea-tor não foi encamisado assim 121 a 122oC foi injetado e ventilado na câmara por meio de tubos de distribuição conectados ao topo do recipiente de pressão ajustado por aquele versado no estado da técnica. O biorreator foi esterilizado em um ciclo líquido de 4,5 horas, e preenchido com 85 L devido à condensação de corrente. O reator resfriado a temperatura ambiente por quatro dias por meio de difusão térmica, em cujo ponto este foi inoculado.
[0062] O recipiente tinha acesso a uma linha de entrada de ar, o qual compreendido com um cavalo-vapor 1/4, 115 V, compressor de ar 50/60 Hz suprindo ar por meio de dois filtros de cápsula autoclavável em linha de 0,2 μm, através de uma válvula de controle e válvula esférica na câmara. A válvula do filtro de cápsula inteira ajustada foi esterilizada antes de esterilização do biorreator e meios, e montada no bior- reator em operação estéril. Uma vez frio após 86 horas, ar foi processado para pressurizar o recipiente, mas em vez de processamento por meio de um tubo de distribuição de exaustão de ar, o tubo de distribuição de exaustão de ar foi fechado e um calibrador de pressão no topo do recipiente, imediatamente, removido a fim de criar um bico positivamente pressurizado. A tampa da cultura de H. erinaceus submerso foi removida, o topo 12,7 cm (5 polegadas) do frasco de Erlenmeyer flamejado com um maçarico de propano por aquele versado no estado da técnica, e, uma vez que o frasco é esfriado (um tempo de espera de 8 segundos), o frasco foi derramado no biorreator por meio do bico positivamente pressurizado. O calibrador de pressão foi colocado de volta ao reator, e o tubo de distribuição de exaustão de ar, imediatamente aberto. A pressão do reator equilibrada a 0,01 MPa - 0,02 MPa (2 - 3 psi), a pressão de fracionamento das válvulas de controle de entrada e saída. Placas de Petri do inoculante de H. erinaceus foram produzidas para QC.
[0063] Ar foi suprido como tal, e o biorreator cultivado por 13 dias.A cultura pareceu entrar na fase log no 2°.dia, e cultivada vibrantemente com esferas de 0,5 cm até o 9°. dia, em que divisão celular pareceu parar. No 13°. dia, os teores do biorreator foram derramados em um tubo plástico de 6 m2 com paredes de 25,4 cm (10 polegadas) com tampas, o tubo sendo revestido com material de revestimento de plástico de grau alimentício. O tubo foi mantido sob uma altura de aproximadamente 121,92 cm (4 pés), e duas ventoinhas foram posicionadas para soprar o ar sobre o tubo. Após quatro dias, a cultura ser seca, e um material semelhante à carne desidratada (beef jerky) foi recuperado e misturado para produzir 724 g de pó. O pó tinha um sabor muito leve de cenoura, e principalmente, um sabor semelhante à cereal que foi muito neutro.
EXEMPLO 4
[0064] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de duas semanas de cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 7 dias sob temperatura ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm (1"), a cultura foi filtrada por meio de três filtros de café empilhados, pasteurizada por 40 minutos a 73,89oC (165oF) e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 60oC (140oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 4,5 g/L para um total de 6,75 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 53,34 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1 kg de rebaudiosídeo A a 97% dissolvido em 1,6 L de água RO. Essa solução foi completamente misturada e seca em um dessecador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zíper, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.667 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudiosídeo A a 97% a 0,8 ppm de sólidos do sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio a todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi indetectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de rebaudiosídeo A a 97%. EXEMPLO 5
[0065] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de duas semanas de cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 15 dias sob temperatura ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm), a cultura foi filtrada por meio de três filtros de café empilhados, pasteurizada por 40 minutos a 73,89oC (165oF) e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 60oC (140oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 4,1 g/L para um total de 6,15 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 53,34 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1 kg de rebaudiosídeo A a 97% dissolvido em 1,6 L de água RO. Essa solução foi completamente misturada e seca em um dessecador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zíper, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.667 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudiosídeo A a 97% a 0,8 ppm de sólidos do sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio para todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi indetectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de rebaudiosídeo A a 97%.
EXEMPLO 6
[0066] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de duas semanas de cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 35 dias sob temperatura ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm), a cultura foi filtrada por meio de três filtros de café empilhados, pasteurizada por 50 minutos a 73,89oC (165oF) e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 60oC (140oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 5,5 g/L para um total de 8,25 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente e aquecidos em uma placa quente retornada ao meio por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 53,34 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1 kg de rebaudiosídeo A a 97% dissolvidos em 1,6 L de água RO. Essa solução foi completamente misturada e seca em um desse- cador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zíper, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.667 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudiosídeo A a 97% a 0,8 ppm de sólidos de sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio para todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi indetectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de rebaudiosídeo A a 97%.
EXEMPLO 7
[0067] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de duas semanas de cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 7 dias sob temperatura ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm (1"), a cultura foi filtrada por meio de gaze de algodão, pasteurizada por 50 minutos a 71,11oC (160oF) e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 54,44oC (130oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 4,4 g/L para um total de 6,6 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 53,34 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1 kg de rebaudiosídeo A a 97% dissolvido em 1,6 L de água RO. Essa solução foi completamente misturada e seca em um dessecador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zíper, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.667 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudiosídeo A a 97% a 0,8 ppm de sólidos do sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio para todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi indetectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de rebaudiosídeo A a 97%.
EXEMPLO 8
[0068] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de duas semanas de cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 10 dias sob temperatura ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm), a cultura foi filtrada por meio de três filtros de café empilhados, pasteurizada por 40 minutos a 76,67oC (170oF) e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 60oC (140oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 4,6 g/L para um total de 6,9 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 40,00 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1,6 L de água destilada contendo 1 kg de rebaudio- sídeo A a 97%. Essa solução foi completamente misturada e seca em um dessecador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zí- per, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.000 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudiosídeo A a 97% a 0,6 ppm de sólidos do sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio para todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi indetectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de rebaudiosídeo A a 97%. Essa mistura de glicosídeo de esteviol teve o sabor muito similar à mistura contendo 0,8 ppm de sólidos do sobrenadante.
EXEMPLO 9
[0069] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de 10°. dia de cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 4 dias sob temperatura ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm), a cultura foi filtrada por meio de gaze de algodão e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 60oC (140oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 4,5 g/L para um total de 6,75 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 53,34 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1 kg de rebaudiosídeo A a 97% dissolvido em 1,6 L de água RO. Essa solução foi completamente misturada e seca em um dessecador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zíper, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.667 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudiosídeo A a 97% a 0,8 ppm de sólidos do sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio para todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi indetectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de rebaudiosídeo A a 97%.
EXEMPLO 10
[0070] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de duas semanas de cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 7 dias sob temperatu- ra ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm), a cultura foi filtrada por meio de três filtros de café empilhados e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 60oC (140oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 4,5 g/L para um total de 6,75 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 53,34 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1 kg de rebaudiosídeo A a 60% dissolvido em 1,6 L de água RO. Essa solução foi completamente misturada e seca em um dessecador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zíper, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.667 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudiosídeo A a 60% a 0,8 ppm de sólidos do sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio para todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi inde- tectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de re- baudiosídeo A a 60%.
EXEMPLO 11
[0071] Um frasco de 4 L preenchido com 1,5 L de 8 g/L de pó de amido de batata orgânica e 0,8 g/L de pó de cenoura orgânica em água RO foi esterilizado e inoculado a partir de 20 dias de uma cultura de C. sinensis de P1 gasto. Após cultura de 7 dias sob temperatura ambiente a 60 rpm (raio de oscilação de 2,54 cm), a cultura foi filtrada por meio de um filtro a vácuo de 0,2 μm e colocada em um dessecador contínuo pequeno a 65,56oC (150oF) da noite para o dia. O dia seguinte, o material seco foi coletado e misturado com um rendimento de 4,3 g/L para um total de 6,45 g. 5 g do material colhido foram derramados em 1 L de água RO e agitados intermitentemente por 15 minutos. A partir dessa cultura de estoque, 53,34 mL de solução foram adicionados a outra solução contendo 1 kg de rebaudiosídeo A a 60% dissolvido em 1,6 L de água RO. Essa solução foi completamente misturada e seca em um dessecador contínuo pequeno da noite para o dia, e o material resultante foi misturado e embalado em um saco limpo com fecho de zíper, apresentando uma concentração dos sólidos de filtrado coletado de 2.667 ppm. 150 mg dessa mistura foram adicionados a 500 mL de água RO para criar uma solução de 300 ppm de rebaudio- sídeo A a 60% a 0,8 ppm de sólidos do sobrenadante de C. sinensis. Quando sabor testado contra um controle, isto foi óbvio para todos os três inventores que o ressaibo da mistura de glicosídeo de esteviol contendo os sólidos do sobrenadante de C. sinensis foi indetectável comparado com um controle de 300 ppm de solução de rebaudiosídeo A a 60%.
EXEMPLO 12
[0072] Dezesseis receitas de meios diferentes para determinar o efeito de meios em atividade de bloqueio de sabor amargo contra uma amostra de rebaudiosídeo A a 60% utilizando o método de Exemplo 4, enquanto meios variáveis conforme mostrados abaixo. Tabela 1 abaixo mostra quais meios foram testados e os resumos de resposta sensória.
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[0073] Tabela 1 mostra que muitas receitas são aplicáveis à produção do bloqueador de sabor amargo embora nem toda receita seja processada. Os inventores recomendam a receita de batata/cenoura ou milho/aveia conforme descrita neste relatório.
EXEMPLO 13
[0074] A composição molecular do bloqueador de sabor amargo descrito foi determinada a partir de uma amostra produzida de duas bateladas de 40 L de uma cultura submersa de C. sinensis de 200 L crescida em um meio de água RO de pó de amido de batata orgânica de 8 g/L e pó de cenoura orgânica de 0,8 g/L. A cultura foi colhida em 41 e 48 dias para um total de 230 g de bloqueador de sabor amargo em pó (um rendimento de ~2,9 g/L), o qual foi misturado juntamente. 150 g da amostra foram utilizados para terceira parte de análise com- posicional. Os dados, tomados em duplicata técnica, mostram que esse processo contínuo de bloqueador de sabor amargo é de 86,9% de carboidrato. O material é composto adicionalmente de, uma gama descendente de concentrações: água, cinzas, gordura e proteína. Nenhuma molécula estranha ao suprimento de alimento foi detectada nesse estudo. Esses dados são resumidos na Tabela 2, embora informação mais detalhada seja mostrada nas tabelas subseqüentes. Qui- localorias (comumente denominada "calorias" em rótulos de alimentos) são listadas, também. O bloqueador de sabor amargo é tipicamente processado no 8°. - 12°. dia de cultura, mas essa abordagem foi tomada para desenvolver entendimento da forma mais concentrada do produto, isto é, os meios mais transformados.
Figure img0004
[0075] O teor de lipídio do bloqueador de amargor é provavelmen te responsável por alguma fração de sua natureza hidrofóbica. O blo- queador de amargor solubiliza mais rápido quando aquecido a 60oC - 71oC (140 - 160oF) em solução aquosa. Sob temperatura ambiente, o processo contínuo levou 15 minutos em relação a 0,3 g para solubili- zar-se em 500 mL com agitação intermitente. O teor de lipídio, mostrado na Tabela 3, é composto de 10 moléculas diferentes e de forma interessante suficientemente contém ambos os ácidos graxos essenciais. As estruturas moleculares dessas moléculas, e todas as moléculas em tabelas subseqüentes, são mostradas no anexo. A soma das médias indica que esses dados são responsáveis por 99,3% do perfil total de lipídios.
Figure img0005
[0076] O teor de gordura, mostrado na Tabela 4, proporciona a interrupção de gordura saturada, poliinsaturada e monoinsaturada, e a interrupção de ômega-ácido da amostra.
Figure img0006
[0077] Tabela 5, mostrada abaixo, detalhes da interrupção de sal, algum elemento, molécula pequena e vitamina do bloqueador de amargor.
Figure img0007
[0078] O teor de aminoácido esparso do bloqueador de amargor, mostrado na Tabela 6, é composto de ácido aspártico, ácido glutâmi- co, cisteína e lisina.
Figure img0008
[0079] Tabela 7 mostra o teor de carboidrato e interrupção do blo- queador de amargor. O β-glicano e quitina são bons indicadores de biomassa total fúngica (como é ergosterol e D-manitol, mostrados na Tabela 5). Esses dados são responsáveis por aproximadamente 99,8% do perfil de carboidrato.
Figure img0009
[0080] Tabela 8, mostrada abaixo, descreve em linhas gerais o teor de NBST do bloqueador de amargor. Os dados indicam que vias de salvamento são ativadas para produzir o material de NBST necessário para crescimento. Indicação como o teor de NBST do bloqueador de amargor é um ajuste separado do teor de NBST do pó de C. sinensis. Os NBSTs não retidos devem ser intracelulares.Tabela 8. Teor de NBST de pó de meio de crescimento, sólidos de cultura submersa de C. sinensis Penn State 859 e sólidos de sobrenadante submerso de C. sinesis*
Figure img0010
[0081] Uma investigação de CG/MS revelou três biomoléculas vo láteis presentes no bloqueador de amargor. Essas são éster metílico de ácido hexadecanóico, éster metílico de ácido 9-octadecanóico e estearato de metila. Suas concentrações serão determinadas uma vez que padrões são processados.
EXEMPLO 14
[0082] O pó do sobrenadante de C. sinensis (bloqueador de amar gor) é produzido pelos métodos descritos em linhas gerais no Exemplo 4 e usado com produtos alimentícios em uma base de ppm.
Figure img0011
[0083] A descrição das várias modalidades foi apresentada para fins de ilustração e descrição, mas não se pretende ser exaustiva ou limitação da invenção à forma descrita. O escopo da presente invenção é limitado apenas pelo escopo das reivindicações seguintes. Muitas modificações e variações serão visíveis àqueles versados na técnica. As modalidades descritas e mostradas nas figuras foram escolhidas e descritas a fim de explicar os princípios da invenção, a aplicação prática, e para permitir que outros versados na técnica entendam a invenção a várias modalidades com várias modificações, como são adequadas ao uso particular considerado. Todas as referências citadas neste relatório são incorporadas em sua totalidade como referência.

Claims (4)

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma combinação de um produto alimentício e um fluido coletado de sobrenadante separado a partir de uma cultura de tecido líquido micé- lico, em que o fluido sobrenadante é suficiente para intensificar o sabor do produto alimentício, em que a intensificação no sabor compreende sabores amargos reduzidos, ressaibos indesejáveis reduzidos, e/ou adstringência reduzida, em que o produto alimentício é um edulcorante não nutritivo, em que o produto alimentício é selecionado do grupo que consiste em: aspartame, acessulfame-k, sucralose, estévia, rebaudio- sídeo A, mistura de glicosídeo de esteviol, partes da planta estévia, e combinações destes, em que o produto alimentício é selecionado do grupo que consiste em carboidratos, fruta-dos-monges, cacau, licor de cacau, chá, ginseng, proteína de ervilha, álcool de açúcar, café, arando, toranja, romã, coco, vinho, cerveja, licor e bebidas alcoólicas, em que o sobrenadante da cultura de tecido líquido micélico de Cordyceps sinensis é filtrado e seco e é obtido através de filtração ou centrifugação, em que a cultura de tecido líquido micélico pode ser usada de 0,1 a 40.000 ppm.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zada pelo fato de que o produto alimentício é selecionado do grupo que consiste em: suplementos dietéticos, aditivos alimentícios, produtos farmacêuticos e nutracêuticos.
3. Método de intensificação do sabor de um produto alimen-tício, que compreende: cultivar uma cultura de tecido líquido micélico submersa em um meio; coletar o fluido do sobrenadante da cultura de tecido líquido micélico; e adicionar o fluido de sobrenadante coletado a um produto alimentício para intensificar o sabor do produto alimentício, caracterizado pelo fato de que a intensificação no sabor compreende reduzir sabores amargos, reduzir ressaibos indesejáveis, e/ou reduzir adstringência no produto alimentício, em que o sobrenadante da cultura de tecido líquido micélico é obtido de Cordyceps sinensis, em que o produto alimentício é selecionado do grupo con-sistindo em ingredientes alimentares, suplementos dietéticos, aditivos alimentícios, produtos farmacêuticos e nutracêuticos, em que o fluido sobrenadante coletado é pasteurizado, es-terilizado e/ou seco, em que a cultura de tecido líquido micélico é filtrada ou cen-trifugada; em que a etapa de cultura é realizada por entre um dia e sessenta dias.
4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o produto alimentício é selecionado do grupo que con-siste em: partes da planta estévia, glicosídeo de esteviol, aspartame, acessulfame-K, sucralose, carboidratos, fruta-dos-monges, cacau, licor de cacau, chá, ginseng, proteína de ervilha, álcool de açúcar, café, aran-do, toranja, romã, coco, vinho, cerveja, licor e bebidas alcoólicas.
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