BG98695A - Получаване на гама-линоленова киселина чрез делта6-дезатураза - Google Patents
Получаване на гама-линоленова киселина чрез делта6-дезатураза Download PDFInfo
- Publication number
- BG98695A BG98695A BG98695A BG9869594A BG98695A BG 98695 A BG98695 A BG 98695A BG 98695 A BG98695 A BG 98695A BG 9869594 A BG9869594 A BG 9869594A BG 98695 A BG98695 A BG 98695A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- nucleic acid
- desaturase
- isolated nucleic
- acid
- gla
- Prior art date
Links
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 64
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 40
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 40
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 claims abstract description 16
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims abstract description 10
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims abstract description 10
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 claims abstract description 8
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims abstract description 8
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims abstract description 7
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 4
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 claims description 58
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 36
- 241000192542 Anabaena Species 0.000 claims description 28
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims description 16
- 241000192584 Synechocystis Species 0.000 claims description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 claims description 14
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 8
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- 101710202365 Napin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 241000700110 Myocastor coypus Species 0.000 claims 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 claims 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 abstract description 21
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 abstract description 20
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 abstract description 20
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 abstract description 20
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 abstract description 11
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 7
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 abstract description 5
- 244000038559 crop plants Species 0.000 abstract description 4
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 3
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 abstract 1
- MWWATHDPGQKSAR-UHFFFAOYSA-N propyne Chemical group CC#C MWWATHDPGQKSAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 abstract 1
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 57
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 46
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 108010037138 Linoleoyl-CoA Desaturase Proteins 0.000 description 13
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 11
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 11
- 229960004232 linoleic acid Drugs 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 10
- 102100034544 Acyl-CoA 6-desaturase Human genes 0.000 description 9
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 7
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 7
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 241000192707 Synechococcus Species 0.000 description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 4
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 4
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 4
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 3
- 102100022524 Alpha-1-antichymotrypsin Human genes 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 101000678026 Homo sapiens Alpha-1-antichymotrypsin Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 241000192581 Synechocystis sp. Species 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 3
- LGHXTTIAZFVCCU-SSVNFBSYSA-N (2E,4E,6E,8E)-octadeca-2,4,6,8-tetraenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O LGHXTTIAZFVCCU-SSVNFBSYSA-N 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241001464430 Cyanobacterium Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N His-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N L-Prolyl-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N Leu-Phe-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N 0.000 description 2
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241001478892 Nostoc sp. PCC 7120 Species 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N Phe-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 2
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 2
- HOTVCUAVDQHUDB-UFYCRDLUSA-N Pro-Phe-Tyr Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=C(O)C=C1 HOTVCUAVDQHUDB-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 2
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 229960002733 gamolenic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002169 hydrotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108010039224 Amidophosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N Arg-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N Arg-Tyr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- WCFCYFDBMNFSPA-ACZMJKKPSA-N Asp-Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O WCFCYFDBMNFSPA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N Asp-His Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 1
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001072256 Boraginaceae Species 0.000 description 1
- 101100315627 Caenorhabditis elegans tyr-3 gene Proteins 0.000 description 1
- LVNMAAGSAUGNIC-BQBZGAKWSA-N Cys-His Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 LVNMAAGSAUGNIC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OOULJWDSSVOMHX-WDSKDSINSA-N Cys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS OOULJWDSSVOMHX-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- -1 Dahmer et al. Chemical class 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 101710129170 Extensin Proteins 0.000 description 1
- 102100034543 Fatty acid desaturase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010087894 Fatty acid desaturases Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N Gly-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102100022662 Guanylyl cyclase C Human genes 0.000 description 1
- 101710198293 Guanylyl cyclase C Proteins 0.000 description 1
- OOFLZRMKTMLSMH-UHFFFAOYSA-N H4atta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC1=CC=CC(C=2N=C(C=C(C=2)C=2C3=CC=CC=C3C=C3C=CC=CC3=2)C=2N=C(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)C=CC=2)=N1 OOFLZRMKTMLSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N His-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N Leu-Gly-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ISSAURVGLGAPDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 101001090725 Leuconostoc gelidum Bacteriocin leucocin-A Proteins 0.000 description 1
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N Met-Gly-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N Met-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N)O NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 description 1
- PKFBJSDMCRJYDC-GEZSXCAASA-N N-acetyl-s-geranylgeranyl-l-cysteine Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CSC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O PKFBJSDMCRJYDC-GEZSXCAASA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 101150030193 Nanp gene Proteins 0.000 description 1
- 101100285000 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) his-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000219925 Oenothera Species 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- HQPWNHXERZCIHP-PMVMPFDFSA-N Phe-Leu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 HQPWNHXERZCIHP-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- BEPSGCXDIVACBU-IUCAKERBSA-N Pro-His Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CN=CN1 BEPSGCXDIVACBU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HFNPOYOKIPGAEI-SRVKXCTJSA-N Pro-Leu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HFNPOYOKIPGAEI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- YYARMJSFDLIDFS-FKBYEOEOSA-N Pro-Phe-Trp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O YYARMJSFDLIDFS-FKBYEOEOSA-N 0.000 description 1
- NAIPAPCKKRCMBL-JYJNAYRXSA-N Pro-Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 NAIPAPCKKRCMBL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N Thr-Glu-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N)O OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- XSTGOZBBXFKGHA-YJRXYDGGSA-N Thr-His-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O XSTGOZBBXFKGHA-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- RPVDDQYNBOVWLR-HOCLYGCPSA-N Trp-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPVDDQYNBOVWLR-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- UJRIVCPPPMYCNA-HOCLYGCPSA-N Trp-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N UJRIVCPPPMYCNA-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N Trp-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- XHALUUQSNXSPLP-UFYCRDLUSA-N Tyr-Arg-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 XHALUUQSNXSPLP-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- YLHFIMLKNPJRGY-BVSLBCMMSA-N Tyr-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O YLHFIMLKNPJRGY-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- PRONOHBTMLNXCZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PRONOHBTMLNXCZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- WTTRJMAZPDHPGS-KKXDTOCCSA-N Tyr-Phe-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O WTTRJMAZPDHPGS-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- XGZBEGGGAUQBMB-KJEVXHAQSA-N Tyr-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O XGZBEGGGAUQBMB-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 229940098330 gamma linoleic acid Drugs 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 229940049918 linoleate Drugs 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000001402 polyadenylating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000021003 saturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 108010015666 tryptophyl-leucyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 235000021081 unsaturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0083—Miscellaneous (1.14.99)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/8247—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified lipid metabolism, e.g. seed oil composition
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/19—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with oxidation of a pair of donors resulting in the reduction of molecular oxygen to two molecules of water (1.14.19)
- C12Y114/19003—Linoleoyl-CoA desaturase (1.14.19.3)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до получаване на -линоленова киселина (glа) чрез ензима 6-дезатураза, катонуклеиновите киселини и рекомбинантните конструкции се използват за получаване на glа в трансгенниорганизми. 6-дезатуразата е ензим от около 359 аминокиселини, има мембранно свързана част и активномясто за дезаториране на мастни киселини. С него се осигурява възможност за получаването на големиколичества glа, използвана в диетологията за предотвратяване на хиперхолестеролемия, атеросклероза и др. Коронарни заболявания. Осигуряват се също клетки и организми, съдържащи насочващите вектори съгласно изобретението и потомци на такива организми. Насочващите вектори се състоят от 6-дезатуразен промотор, кодираща област и ограничаваща област. Изолираната нуклеинова киселина се съдържа в трансгенен организъм, който може да е бактерия, гъба, растителна клетка или животно. Изобретението се отнася и до метод за получаване на растения с увеличеносъдържание на -линоленова киселина, например слънчоглед, соя, царевиц а, тютюн, фъстък или маслодайна рапица, който се състои в трансформиране на растителна клетка с изолирана нуклеинова киселина съгласно изобретението и регенериране на растения сувеличено съдържание на glа от посочената растителнаклетка. Изобретението се отнася и до метод за придаване на студоустойчивост на културните растения.
Description
ИолучаВанс иа гама лимолейова киселина чрез А6-дезатураза
Линолова киселина (18:2) (LA) се трансформира в гама линоленова киселина (18:3) (GLA) чрез ензима Д6-дезатураза. Когато този ензим, или нуклеиновата киселина, която го кодира, сс прехвърли в LA-произвеждащи клетки, се получава GLA. Настоящето изобретение осигурява нуклеинова киселииа, съдържаща Л6-дезатуразния ген. По-специално, нуклеиновата киселина се състои от промотор, кодираща област и ограничаващи области на Δό-дезатуразния ген. Настоящето изобретение е още насочено към рекомбинантни конструкции на Д6-дсзатуразна кодираща област във функционална комбинация с хетероложни регулиращи последователности. Нуклеиновите киселини и рекомбинантните конструкции от настоящето изобретение се използват за получаване на GLA в транегенни организми.
Ненаситеии мастни киселини, такива като линолова (С]8Д9,12) и α-линоленова (Cj8A9,12,18) киселини, са важни диетични съставни части, които не могат да бъдат синтезирани от гръбначни животни, тъй като гръбначните клетки могат да Ш»· вкарват двойни връзки в позицията на мастни киселини, но не могат да вкарват допълнителни двойни връзки между А9 двойната връзка и метиловия край па мастната киселинна верига. Тъй като те са предшественици на други продукти, линоловата и α,-линоленовата киселини са важни мастни киселини и обикновено се получават от растителни източници. Линоловата киселина може да бъде превърната в γ-линоленова (GLA, CjgA6>9,12) киселина от бозайници, която от своя страна може да бъде превърната в арахидонова киселина (20:4), крайно важна мастна киселина, тъй като тя е важна основа за повечето прост агландини.
Диетичното осигуряване на линолова киселина, благодарение на нейното превръщане в GLA и арахидонова киселина, задоволява диетичната нужда от GLA и арахидонова киселина. Все пак, показано е, чс има връзка между консумацията на наситени .мазнини и болестни състояния, такива като хиперхолестеролемиа, атеросклероза и други химични нарушения, свързани с податливост към коронарни заболявания, докато консумацията на ненаситени мазнини се свързва с намаляване на концентрацията на холесшерол в кръвта и намаляване риска от атеросклероза. Терапевтичната полза от диетичната GLA е, че тя е предшественик на арахидоновата киселина и така спомага за простагланднновия синтез. Съответно, консумацията на попе наситената GLA, вместо линоловата киселина, има потенциални здравни предимства. Обаче, GLA не присъства в буквално пито едно от търговско отглежданите културни растения.
Линоловата киселина се превръща в GLA, чрез ензима Абдезатураза. Аб-дезатураза, ензим от около 359 амино киселини, има мембранно-свързана част и активно място за дезатуриране на мастни киселини. Когато този ензим премине в клетки, ендогенно произвеждащи линолова киселина, но не GLA, се получава GLA. Чрез осигуряване на аен-кодираща Аб-дезатураза, настоящето изобретение позволява получавието на трапсгепни организми, които съдържат функционална Аб-дезатураза и които произвеждат GLA. Освен че позволява получаването на големи количества GLA, настоящето изобретение осигурява нови диетични източници на GLA.
л
Настоящето изобретение е насочено към изолиран Δ6дезатуразен ген. По-специално, изолирания ген се състои от А6дезатуразен промотор, кодираща област и ограничаваща област.
Настоящето изобретение още описва насочващи вектори, състоящи се от Аб-дезатуразен промотор, кодираща област и ограничаваща област.
Настоящето изобретение също описва насочващи Вектори, състоящи се от А6-дезатуразна кодираща област В функционална комбинация с хетероложни регулиращи области, т.е. елементи не произтичащи от Аб-дезатуразния ген.
Настоящето изобретение също осигурява клетки и организми, съдържащи векторите от настоящето изобретение и потомци на такива организми.
Настоящето изобретение също осигурява изолирана бактериална А6-дезатураза и освен това е насочено към изолирана нуклеинова киселина, кодираща бактериална Л6дезатураза.
По-нататък, настоящето изобретение осигурява метод за получаване на растения с увеличено съдържание на гама линоленова киселина (GLA), които се състои в трансформиране на растителна клетка с изолирана нуклеинова киселина от настоящето изобретение и регенериране на растение с увеличено съдържание на GLA от споменатата растителна клетка.
Настоящето изобретение също осигурява метод за получаване на студоустойчиви растения.
фиг .1 описва хидропатиините профили на извлечените амино-киселинни последователности на Synechocystis Δ6дезатураза /част А) и А12-дезатураза (част В). Предполагаемите мембранно-въртящи се области са обозначени чрез плътни линии. Хидрофобния индекс е изчислен за отрязък от яминокиселинни утайки [Kyte, и др. (1982) J. Molec. Biol. 157]
Фиг.2 описВа газ-течни хроматографски профили на дива (част А) и трансгенна (част В) Anabaena.
Фиг.З е диаграма от карти на козмидите cSy75, cSyl3 и cSy7 със застъпващи сс области и клонинги. Произхидът на клонингите на cSy75, cSy75-3.5 и cSy7 са обозначени чрез наклонени диагонални линии. Дезактивираните ограничителни места са в скоби.
фиг 4 описва газ-течни хроматографски профили на див (част А) и транегенен (част В) тютюн.
Настоящето изобретение осигурява изолирана нуклеинова киселина, кодираща Л6-дезатураза. За да се идентифицира нуклеиновата киселина, кодираща Δό-дсзатураза, сс изолира DNA от организъм, които произвежда GLA. Споменатия организъм може да бъде например животинска клетка, някои гъби (например Mortierella). някои бактерии (като Synechocystis) или определени растения (пореч, Oenothera, френско грозде). Изолирането на геномната DNA може да бъде осъществено чрез множество методи, добре известни за средния специалист в областта, онагледени с примери от Sambrook и др. (1989) в Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor, NY. Изолираната DNA cc разделя на части чрез физични методи или ензимно разлагане и се клонира до подходящ вектор, като бактериофага или козмиден вектор, чрез които и да е от множество добре известни от литературата методи, например от Sambrook и др. (1989). Поспециално разглеждани тук, са насочващи вектори, съдържащи DNA от настоящето изобретение. DNA кодиращата Δ6дезатураза може да бъде идентифицирана чрез функционален анализ. Векторът, съдържащ разделената на части DNA, се прехвърля, например посредством инфекция, трансконюгация и трансфекция, в гостоприемен организъм, които произвежда линолова киселина, но не GLA. Използваният тук термин трансформация означава най-общо вграждане на чужда DNA в гостоприемна клетка. Методи за вкарване на рекомбинантна DNA в гостоприемен организъм са известни на средния специалист В областта и са изложени, например, в Sambrook и др_. (1989). Произвеждането на GLA от тези организми (те. придобиване на функция) се изследва, например, чрез газова хроматография или други методи, известни на средния специалист в областта. Организмите накарани да произвеждат GLA, т е. придобили функция, чрез Вкарването на Вектора, се идентифицират, като се извлича DNA кодиращата Δ6дезатураза, а споменатата DNA се възстановява от организмите. Възстановената DNA може отново да се раздели на части, да сс клонира с насочВащи Вектори и да се оцени функционално по горните процедури, за да се определи с по-голяма точност DNA кодиращата Д6-дезатураза.
Като пример от настоящето изобретение се изолира произволна DNA от цианобактерията Synechocystis Pasteur Culture Collection (PCC) 6803, American Type Culture Collection (ATCC) 27184, клонира се в козмиден вектор и се вкарва чрез трансконюгация в цианобактерийния щам Anabaena РСС 7120, АТСС 27893, който е с недостиг на GLA. Получаването на GLA от съдържаща Anabaena линолова киселина се следи чрез газова хроматография и се изолира съответния DNA фрагмент.
Изолираната DNA се структурира чрез методи добре известни на средния специалист в областта, като например в Sambrook и др. (1989).
В съответствие с настоящето изобретение се изолира DNA съдържаща Д6-дезатуразен ген. По-специално, от цианобактерията Synechocystis се изолират 3.588 килобаза (kb) DNA. съдържаща А6-дезатуразен ген. Определя се нуклеотидната последователност на 3.588 kb DNA, която е показана в SEQ ID N0:1. Отворени отчитащи контури, определящи потенциални кодиращи области, присъстват в нуклеотиди от 317 до 1507 и в нуклеотиди от 2002 до 3081. За да се определят нуклеотидите кодиращи А6-дезатураза, 3.588 kb фрагмента, който причиняВа Лб-дезатуразна активност се разцепва на два подфрагмента, всеки от които съдържа само един отворен отчитащ контур. Фрагментът ORF1 съдържа нуклеотиди от 1 до 1704, докато фрагмента ORF2 съдържа нуклеотиди от 1705 до 3588. Всеки фрагмент се субклонира в двете права и обратна ориентации до копюгиращ насочващ вектор (АМ542, Wolk и др. [1984] Proc. Natl. Acad. Sei, USA 81, 1561), който съдържа цианобактериален карбоксилазен промотор. Получените структури [т.е. ORF1(F), ORF1(R), ORF2(F) и ORF2(R)] се конюгират до див тип Anabaena РСС 7120 посредством стандартни методи (виж, например, Wolk и др. (1984) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81, 1561). Конюгираните клетки от Anabaena се идентифицират, като NeoR зелени колонии върху кафява основа от умиращи неконюгирани клетки, след двуседмичен растеж върху селективна среда (стандартна минерална среда BG11N + съдържаща 30 цгр/мл неомицин, съгласно Rippka и др., (1979) J. Gen Microbiol. Ill, 1). Подбират се зелените колонии и израстват в селективна течна среда (BG11N + с 15 нгр/мл неомицин). Чрез стандартни методи се екстрахират липиди (например, Dahmer и др., (1989) Journal of American Oil Chemical Society 66, 543) от получените трансконюгати, съдържащи право и обратно ориентираните ORF1 и ORF2 конструкции. За сравнение, липидите също се екстрахират от диви типове култури Anabaena и Synechocystis. Метиловите естери на мастни киселини се анализират чрез газ-течна хроматография (GLC), например с Тгасог-560 газ-течен хроматограф, снабден с йонизиращ детектор с водороден пламък и капилярна колона. Резултатите от GLC анализа са показани в таблица 1.
Таблица 1: Разпространение на С18 мастни киселини във диВ тип цианобактерия и трансгенна цианобактерия
| Източник | 18:0 | 18:1 | 18:2 | γ18:3 | ο 18:3 | 18:4 |
| Anabaena(див тип) | 4- | + | + | - | 4- | - |
| Anabaena 4- ORF1(F) | + | + | + | - | + | - |
| Anabaena + ORF1(R) | + | 4- | - | + | - | |
| ΐ Anabaena + ORF2(F) | + | + | + | + | 4· | 4- |
| 1 Anabaena + ORF2(R) | 4- | 4- | + | - | 4- | - |
| 1 Synechocystis (див тип) | + | + | + | + | • | - |
Както показва GLC анализът, Anabaena с недостиг на GLA придобива свойството (функцията) да произвежда GLA, когато се вкарва чрез трансконюгация, конструкцията съдържаща ORF2 в права ориентация. Транконюгати, съдържащи конструкции с ORF2 в обратна ориентация спрямо карбоксилазния промотор или ORF1 в която и да е ориентация, не произвеждат GLA. Този анализ показва, че единичния отворен отчитащ контур (ORF2) в 1884-ия Ьр фрагмент кодира Л6-дезатураза. 1884-ия Ьр фрагмент е SEQ ID N0:3. Това се потвърждава от цялата прилика на хидропатийните профили между Аб-дезатураза и А12-дезатураза [Waga и др. (1990) Nalure 347], както е показано на Фиг.1, като (А) и (В), съответно.
Изолираните нуклеинови киселини, кодиращи Аб-дезатураза, могат да бъдат различени от другите организми, които произвеждат GLA, чрез описания по-горе анализ за придобито свойство или чрез хибридизационни методи с нуклеинова киселица, използващи изолираната нуклеинова киселина, която кодира Anabaena Аб-дезатураза, като хибридизационна проба. И двата геномен и cDNA клониращ метод са известни на специалистите и са изложени в настоящето изобретение. Хибридизационната проба може да съдържа цялата DNA последователност, описана като SEQ. ID N0:1 или ограничаващ фрагмент или друг съответен DNA фрагмент, включващ олигонуклеотидна проба. Методите за клониране на хомоложни гени чрез кръстосана хибридизация са известни на средния специалист в областта и са описани, например, в Sambrook (1989) и Beltz и др. (1983) Methods in Enzymology 100. 266.
Трансгенните организми, които са придобили функцията да произвеждат GLA, чрез вкарване на DNA кодираща А-дезатураза, също така придобиват свойството да произвеждат октадекатетраеонна киселина (18:4дбА12,15) f Октадекатетраеонна киселина присъства обикновено в рибни масла и в някои растителни видове от рода Boraginaceае (Craid и др_. [1964] J. Amer, Oil Chem. Soc. 41. 209-211; Gross и qp. [1976] Can. J. Plant Sei. 56, 659-664). В трансгенните организми от настоящето изобретение октадекатетраеноената киселина се получава от по-нататъито дезатуриране на а-линоленова киселина чрез Аб-дезатураза или дезатуриране на GLA посредством А15-дезатураза.
359-те аминокиселини кодирани от ORF2, т.е. отворения отчитащ контур кодиращ Аб-дезатураза, са показани като SEQ.
ID N0:2. Настоящето изобретение също описва други нуклеотидни последователности, които кодират аминокиселините от SEQ ID N0:2. В компетенцията на средния специалист е да идентифицира такива последователности, които се получаВат, например, от дегенерирането на генетичния код. ОсВен тоВа, средния специалист В областта може да определи, посредством описания по-горе анализ за придобито свойство, по-малки подфрагменти на 1884-ия Ьр фрагмент, съдържащ ORF2, които кодира Аб-дезатураза.
Настоящето изобретение изследва който и да е полипептиден фрагмент на Аб-дезатураза и съответните нуклеинови киселини, който запазва активност за превръщане на LA в GLA.
В друг аспект на настоящето изобретение, вектор съдържащ 1884-ия Ьр фрагмент или по-малък фрагмент съдържащ промотор, кодираща последователност и ограничаваща област па Аб-дезатуразен ген се прехвърля в организъм, например цианобактерия, в която Аб-дезатуразния промотор и ограничаващите области са функционални. Съответно, това изобретение осигурява организми произвеждащи рекомбинантна Аб-дезатураза. Още един аспект на настоящето изобретение е осигуряването на изолирана Аб-дезатураза, която може да бъде пречистена от рекомбинантните организми, чрез стандартни методи за протеиново пречистване. (Виж, например, Ausubel и др. [1987] Current Protocols in Molecular Bioloev. Green Publishing Associates, New York).
Настоящето изобретение също осигурява вектори съдържащи DNA кодираща Аб-дезатураза. За средния специалист в областта е очевидно, че могат да бъдат конструирани подходящи вектори, които да насочват преминаването на Δ6дезатуразната кодираща последователност в множество организми. По-специално се предпочиташ възпроизвеждащи се насочващи вектори. Описаните тук възпроизвеждащи се насочващи вектори са DNA или RNA молекули, конструирани за контролирано насочване на желания ген, т.е. Аб-дезатуразния ген. За предпочитане векторите са плазмиди, бактериофаги, козмиди или Вируси. Совалкови вектори, като описаните от Wolk и др. (1984) Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1561-1565 u Bustos и дд. (1991) J, Bacteriol. 174, 7525-7533, се изследват в настоящето изобретение. Sambrook и др. (1989), Goeddel, ed. (1990) Methods in Enzymology 185 Academic Press u Perba.1 (1988) A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons, Inc., дават подробен преглед на вектори в които може да бъде вкарана и насочена нуклеинова киселина кодираща наличната Аб-дезатураза. Такива вектори също съдържат нуклеинови киселинни последователности, които могат да влияят на насочването на нуклеиновите киселини, кодиращи Аб-дезатураза. Последователности, способни да Влияят на насочВането на генен продукт, са промотори, усилващи елементи, възходящо активиращи последователности, транскрипционни ограничаващи сигнали и полиаденилиращи f места. Разглеждат се и двата съставен и тъканно-специфичен промотори. По-специално интересни за трансформиране на растителни клетки са 35S промотора на цветнозелевия мозаечен Вирус (CaMV) и промотори, които се регулират по време на узряването на растителните семена. Всички тези промотори и транскрипционни регулаторни елементи, самостоятелно или в комбинация, се разглеждат за използване в настоящите възпроизвеждащи се насочващи вектори и са известни на средния специалист в областта. CaMV 355 промотора е описан, например, от Restrepo и др. (1990) Plant Cell 2, 987. Също се изследват генетично конструирани и мутирали регулаторни последователности. Средния специалист в областта може да определи подходящите вектори и регулаторни елементи за носител в конкретна гостоприемна клетка. Например, вектор съдържащ промотора от гена, кодиращ карбоксилазата на Anabaena. оперативно свързан с кодиращата област на Δ6дезатураза и също оперативно свързан с ограничаващ сигнал от Synechocystis, е подходящ за носител на Лб-дезатураза в цианобактерия. Оперативно свързан, в този контекст, означава, че промотора и ограничаващите последователности действат ефективно за регулиране на транскрипцията. Примерно, вектор, подходящ за носител на Δό-дезатураза в трансгенни растения, може да включва семенно-специфична промоторна последователност, получена от хелиантинин, напин или глицин, оперативно свързана с Лб-дезатуразната кодираща област и също оперативно свързана със семенен ограничаващ сигнал или с нопалиновия синтазен ограничаващ сигнал.
По-специално, хелиантининовите регулаторни елементи, описани в нерешена U.S. заявка No. 682 354, заявена на осми април 1991 и цитирана тук за справка, са описани като промоторни елементи, насочващи пренасянето на А6-дезатуразата от настоящето изобретение.
Модификациите на описаните тук нуклеотидни последователности или регулаторни елементи, които притежават дадените тук функции са в обхвата на това изобретение. Такива модификации са прибавки, заместители и заличите ли и специфични заместители, които отразяват разрушаването на генетичния код.
Стандартните методи за конструиране на такива хибридни вектори са добре известни на средните специалисти в областта и са описани в публикации, такива като Sambrook и др. (1989) или който и да е от миогобройните, широко разпространени лабораторни наръчници за рекомбинантна DNA технология. Познати са множество подходи за лигазиране на фрагментите на DNA, изборът на които зависи от естеството на края на DNA фрагментите. По-нататък се описва Включването в хибридните вектори на други елементи с нуклеотидни последователности, които улесняват клонирането, насочването или обработката, например последователности, кодиращи сигнални пептиди, последователност, кодираща KDEL, която е необходима за задържане на протеините в ендоплазмичния ретикулум или последователности, кодиращи транзитни пептиди, които насочват Дб-дезатуразата към хлоропласта. Такива последователности са известни на средния специалист в областта. Оптимизиран транзитен пептид е описан, например, в Van den Broeck и др. (1985) Nature 313. 358. Прокариотни и еукариотни сигнални последователности са описани, например, от Michaelis и др. (1982) Ann. Rev. Microbiol. 36, 425.
Друг аспект от настоящето изобретение осигурява организми различни от цианобактерията, които съдържат DNA, кодираща Дб-дезатуразата от това изобретение. Трансгенните организми, съответно описани в настоящето изобретение, са бактерии, циано бактерии, гъби и растения и животни. Изолираната DNA от настоящето изобретение може да бъде вкарана в гостоприемника по методи известни от нивото на техниката, например, инфекция, трансфекция, трансформиране или трансконюгация. Методите за трансфер на DNA от настоящето изобретение в такива организми са добре известни и са описани в публикациии, такива като Sambrook и др. (1989).
Известни са множество методи за трансформиране на растения. А6-дезатуразния ген може да бъде вкаран в растенията през листото, чрез трансформационно-регерациоина процедура, описана от Horsch и др_. (1985) Science 227, 1229. Други методи за трансформация, такива като протопластиа култура (Horsch и др. (1984) Science 223. 496; DeBlock и др. (1984) ЕМВО J. 2. 2143; Barton и др. (1983) Cell 32, 1033), могат също да бъдат използвани и са в обхвата на това изобретение. За предпочитане е растенията да се трансформират с Agrobacterium- получени вектори. Все пак, известни са и други методи за вкарване на Δ6дезатуразния ген от настоящето изобретение в растителни клетки. Такива алтернативни методи са бнолистни подходи (Klein и др. (1987) Nature 327. 70), електроиорация, химическииндуцирано DNA поемане или използване на вируси или цветен прашец, като вектори.
Когато е необходимо за метода на трансформация, Δ6дезатуразния ген от настоящето изобретение може да бъде вкаран в растителен трансформационен Вектор, като двойния вектор, описан от Bevan (1984) Nucleic Acids Res. 12. 8111. Растителни трансформационни вектори могат да бъдат получени чрез модифициране на естествената генна система за трансфер на Agrobacterium tumefaciens. Естествената система включва големг Ti (тумор-предизвикващи)-плазмиди, съдържащи голям сегмент, известен като Т-DNA, който е прехвърлен на трансформираните растения. Друг сегмент от Ti плазмида, vir областта, е необходим за Т-DNA трансфер. Т-DNA областта граничи с крайни повтарящи се елементи. В модифицираните двойни вектори тумор-предизвикващите гени са премахнати и функциите на vir областта се използват да прехвърлят чуждата DNA, граничеща с Т-DNA граничните последователности. Тобластта съдържа, също, селективен маркер за антибиотична устойчивост и многократно клониращо място за вкарване на последователности за трансфер. Такива конструирани щамове са известни като обезвредени A. tumefaciens щамове и позволяват ефикасна трансформация иа последователности, граничещи с Тобластта в ядрените геноми на растенията.
Повърхностно-стерилизирани листа се заразяват с обезвредения A. tumefaciens. съдържащ чужда DNA, култивират се за два дни и след това се прехвърлят в среда, съдържаща антибиотик. След внедряването в среда, съдържаща подходящ антибиотик се избират трансформирани части от тъкан, прехвърлят се в пръст и регенерират.
Като друг аспект от това изобретение се осигуряват трансгенни растения или прогени на тези растения, съдържащи изолирана DNA от това изобретение. Изследват се както едносемеделни, така и двусемеделни растения. Растителни клетки се трансформират с изолираната DNA кодираща Δ6дезатураза по който и да е от методите за трансформиране на растения, описани по-горе. Трансформираната растителна клетка, обикновено намираща се в новообразувание на кората или в листото, регенерира до завършено трансгенно растение по методи добре известни на средния специалист от областта (nanp. Borsch и gp, (1985) Science 227. 1129). За предпочитане, трансгсниото растение е слънчоглед, маслодайна рапица, царевица, тютюн, фъстък или соя. Тъй като прогените на трансформираните растения наследяват DNA кодираща Δ6дезатураза, семена или отрязъци от трансформираните растения се използват, за да поддържат трансгенната растителна линия.
Настоящето изобретение съгцо осигурява метод за получаване на трансгенни растения с увеличено съдържание на GLA. Този метод включва вкарване на DNA кодираща Δ6 дезатураза В растителни клетки, които нямат GLA или са с ниски ниВа на GLA, но съдържат LA, и регенериране на растения с увеличено съдържание на GLA от трансгенните клетки. Поспециално, като трансгенен организъм се използВат търговско отглеждани културни растения, като слънчоглед, соя, маслодайна рапица, царевица, фъстък и тютюн, без те да се считат за ограничаващи.
Настоящето изобретение, също осигурява метод за получаване на трансгенни организми, които съдържат GLA. Този метод Включва вкарване на DNA кодираща Аб-дезатураза В организъм, който няма GLA или е с ниски ниВа на GLA, но съдържа LA. В друг случай, Включва вкарване на един или повече насочващи вектори, които съдържат DNA кодираща А12дезатураза и Аб-дезатураза в организми, които са с недостатъчно GLA и LA. Съответно, организми с недостатъчно GLA и LA се предизвикват да произвеждат LA чрез вкарването на А12-дезатураза, а след това генерират GLA, вследствие на Вкарването Аб-дезатураза. Насочващи вектори, съдържащи DNA кодираща А 12-дезатураза или А12-дезатураза и Аб-дезатураза, могат да бъдат конструирани по методите на рекомбинантната технология, известни на средния специалист от областта (Sambrook и др., 1989) и публикуваната последователност на А 12дезатураза (Wada и др [1990] Nature (London) 347. 200-203). Също така е намерено, в съответствие с настоящето изобретение, че иуклеотиди 2002-3081 от SEO. ID N0:1 кодират цианобактериалната А 12-дезатураза. Съответно, тази последователност може да се използва за конструиране на споменатите насочващи вектори. По-специално, като шраисгенен организъм се използват търговско отглеждани културни растения, като слънчоглед, соя, маслодайна рапица, царевица, фъстък и тютюн, без те да се считат за ограничаващи.
Настоящето изобретение съгцо е насочено към метод за предизвикване на студоустойчивост в растения. Чувствителността към студ може да се дължи на фазово преминаване на липиди в клетъчни мембрани. Температурата на фазово преминаване зависи от степента на ненаситеност на мастни киселини В липидните мембрани и по-този начин увеличавайки степента на ненаситеност, например чрез Вкарване на Лб-дезатураза, която да преобразува LA в GLA, може да се предизвика или подобри студоустойчивостта. Съответно, настоящият метод включва вкарването на DNA кодираща Δ6с^езатураза в растителна клетка и регенериране на растение с подобрена студоустойчивост от споменатата трансформирана растителна клетка. За предпочитане растението е слънчоглед, соя, маслодайна рапица, царевица, фъстък или тютюн.
СледВащите примери илюстрират настоящето изобретение.
Пример 1
Щамове и условия за култивиране
Synechocyslis (РСС 6803, АТСС 27184), Anabaena (РСС 7120, АТСС 27893) и Synechococcus (РСС 7942, АТСС 33912) се отглеждат фотоаВтотропно при 30° С В BG11N + среда (Rippka и др. [1979] J, Gen. Microbiol. 111. 1-61) при осветяване от лампи с мажежаема жички (60 itE.m-Z.S-1). Избират се козмиди и плазмиди и се размножават в Escherichia coli щам DH5a върху LB среда с прибаВеии антибиотици при стандартни концентрации, както е описано om Maniatis u cip. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring, New York.
Пример 2
Конструиране на Synechocystis козмидна геномна съвкупност
Общата геномна DNA от Synechocystis (РСС 6803) се разрежда частично с Sau3A и се фракционира при захарозеи градиент (Ausubel и др. [1987] Current Protocols in Molecular Bjplogy, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, New York). Избират се фракциите, съдържащи 30 до 40 kb DNA фрагменти и се лигазират в дефосфорилираното Bam.HI място на козмидпия вектор, pDUCA7 (Buikema и др. [1991] J. Bacteriol. 173. 1879-1885). Аигазираната DNA се опакова in vitro както е описано от Ausubel и др. (1987) и опакованата фага се размножава В Е. coli DH5a, съдържаща Aval и Есо4711 метилазен помощен плазмид, pRL528, както е описан от Buikema и др., .1991. Общо 1152 колонии се изолират в произволен ред и се отглеждат индивидуално в дванадесет 96-гнездни микротитърни плочи.
Пример 3
Придобиване на функция след вкарване на GLA в Anabaena
Anabaena (РСС 7120), пръчковидна цианобактерия, е с недостиг иа GLA, но съдържа значителни количества линолова киселина, която е предшественик на GLA (фигура 2, таблица 2). Svnechocvstis козмидната съвкупност, описана в пример 2, се конюгира в Anabaena (РСС 7120), за да се идентифицират трансконюгатите, които произвеждат GLA. Клетките Anabaena се отглеждат до средна фаза в BG11N+ течна среда и се pecycnengupam В същата среда до получаване на крайна концентрация от приблизително 2х108 клетки на мл. Културата от средната фаза, Е. coli RP4 (Burkardt и др. [1979] J. Gen. Microbiol. 114. 341-348), отгледана в LB, съдържаща ампицилин, се промива и ресуспендира в свежа LB среда. След това Anabaena и RP4 се смесват и се разполагат равномерно върху BG11N 4- плочи, съдържащи 5% LB. Козмидната геномна съвкупност отново се разполага върху LB плочи, съдържащи 50 цгр/мл канамицин и 17.5 цгр/мл хлорамфеникол и последователно се поставя на BG11N + плочи, съдържащи Anabaena и RP4. След 24 часов престой в инкубатор при 30° С, се подслоява 30 цгр/мл неомицин и престоя в инкубатор, при 30° С, продължава докато се появят т р а нсконю гат и.
След конюгация се изолират индивидуални трансконюгати и се отглеждат в 2 мл. BG11N + течна среда с 15 цгр/мл неомицин. Получават се метилови естери на мастна киселина от див тип култури и култури съдържащи множества от по десет трансконюгати, както следва. След центрофугиране се получават див тип и трансгенни цианобактериални култури, които се промиват двукратно с дестилирана вода. От тези култури се екстрахират метилови естери на мастна киселина, както е описано от Dahmer и др. (1989) J.Amer. Oil. Chem. Soc. 66, 543-548, и се анализират чрез газ-течна хроматография (GLC), като се използва Tracer-560, снабден с водородно-пламъчен йонизационен детектор и капилярна колона (30 м х 0.25 мм свързана с FSOT Superox И, Alltech Associates Inc., IL). За идентифициране на мастни киселини се използват времената на задържане и кохроматография на стандартни проби (получени от Sigma Chemical Co.). Средната мастно-кисела композиция се определя като съотношение на пиковата стойност (област) на всяка CI8 мастна киселина към нейната стандартна стойност.
Представителни GLC профили са показани на фиг. 2. Показани са метилови естери на С18 мастна киселина. Пиковете се идентифицират, чрез сравняване на времената за елюиране с известните стандартни стойности за метилови естери на мастна киселина и след това се потвърждават чрез газхроматографска масс спектрометрия. Част А представлява GLC анализ на мастни киселини от див тип Anabaena. Стрелката показва миграционното време на GI.A. Част В представлява G1.C профил на мастни киселини на трансконюгати от Anabaena с pAM54'2 + 1.8F. За две GLA произвеждащи множества (от 25 множества с общо 250 трансконюгати) се доказва, че произвеждат GL.A. Индивидуални трансконюгати от всяко от тези множества се анализира за това дали произвежда GLA; два независими трансконюгата, AS13 и AS75, по един от Всяко множество, се идентифицират, че имат значителни ниВа GLA и че съдържат козмиди, съответно, cSyl3 и сВу75 (фигура 3). Козмидите се застъпват в област с дължина приблизително 7.5 * kb. 3.5 kb Nhel фрагмент от cSy75 се реклонира във вектор pDUCA7 и се прехвърля в Anabaena, която придобива функция да отделя GLA (таблица 2).
Два Nhel/Hind III подфрагмента (1.8 и 1.7 kb) па 3.5 kb Nhe I фрагмента на cSy75-3.5 се субклонират в pBLUESCRIPT (Stratagene) (фигура 3) за получаване на последователност. Прилагат се стандартни молекулярни биологични методи, както е описано от Maniatis и др. (1982) и Ausubel и др. (1987). Осъществява се получаване на дидеокси последователност (Sanger и др. [1977] Proc. Natl. Acad, Sei, USA 74, 5463, 5467) на pBSl.8 c SEQUENASE (United States Biochemical) на двете вериги, чрез използване на специфични олигонуклеотидни първични слоеве, синтезирани от Advanced DNA Technology Laboratory (Biology Department, Texas A & M University). Осъществява се анализ на DNA последователността с GCG ( Madison, WI) софтуер, както е описано от Devereux и др. (1984) Nucleic Acids Res. 12, 387-395.
Двата подфрагмента Nhel/Hindlll се прехВърлят в конюгиращ насочващ Вектор АМ542, както В праВа, така и В обратна ориентация спрямо цианобактериалния карбоксилазен промотор и се вкарват в Anabaena чрез конюгацпя. Траискоиюгатите, съдържащи 1.8 kb фрагмента в права ориентация (AM542-1.8F) произвеждат значителни количества GLA и октадекатетраеноена киселина (фигура 2; таблица 2). Траиконюгати, съдържащи други конструкции, обратно ориентиран 1.8 kb фрагмент или праВо и обратно ориентиран 1.7 kb фрагмент, не произвеждат Видими ниВа GLA (таблица 2).
Във фигура 2 се сравняват С18 мастно-киселинен профил на екстракт от диВ тип Anabaena (фигура 2А) с този на траисгенна Anabaena. съдържаща 1.8 kb фрагмента на cSy75-3.5 В праВата си ориентация (фигура 2В). GLC анализът на метилови естери на мастна киселина от AM542-1.8F показва пик с Време на задържане, идентично с тоВа на автентичната стандартна GLA. Анализът на този пик чрез газ-хроматографска масс спектрометрия (GC-MS) показва, че той има същото масс фрагментиране, като GLA проба. Трансгенни Anabaena с променени нива на полиненаситени мастни киселини са подобни на дивия тип по темп на растеж и морфология.
Таблица 2 ( 'ucmaB ма (18 мастни киселини В диВ тип и В трансаениа цианобактерия
| Щам | Мастна киселина (%) | | |||||
| 18:0 1 | 18:1 | 18:2 | 18:3 (α) | 18:3 (у) | 18:4 1 | |
| Див тип | 1 | |||||
| Synechocystis (sp.PCC6803) | 13.6 | 4.5 | 54.5 | - | 27.3 | • |
| An abac п a (sp.PCC'7120) | 2.9 | 24.8 | 37.1 | 35.2 | - | |
| Synecliococcus ! (Sp.PCC7942) | 20.6 | 79.4 | - | - | - | |
| Anabaena трансконк | ______ щати | _ | ||||
| cSy'75 | 3 8 | 24.4 | 22.3 | 9.1 | 27.9 | 12.5 |
| c Sy 75-3.5 | 4.3 | 27.6 | 18.1 | 3.2 | 40.4 | 6.4 |
| p/kM542- 1.8F | 4.2 | 13.9 | 12.1 | .19.1 | 25.4 | 25.4 |
| pAM542-1.8R | 7.7 | 23.1 | 38.4 | 30.8 | - | - |
| pAM542-1.7F | 2.8 | 27.8 | 36.1 | -*> «-V | - | - |
| pAM542-1.7R | 2.8 | 25.4 | 42.3 | 29.6 | - | 1 |
Synecliococcus трансформанти
| р AM 854 | 27.8 | 72.2 | - | - | - | - |
| ρΛΜ854-Δ12 | 4.0 | 43.2 | 46.0 | - | - | - |
| ρΛΜ854-Δ6 | 18.2 | 81.8 | - | - | - | - |
| ρΛΜ854-Δ6 & Δ12 | 42.7 | 25.3 | 19.5 | - | 16.5 | • 1 |
18:0, стеаринова киселина; 18:1, олеинова киселина; 18:2, линолова киселина; 18:3(а), α-линолеиова киселина; 18:3(у), у-линолепова киселина; 18:4, октадекатстраеноена киселина
Пример 4
Трансформиране на Svnechococcus с Аб и Δ12 дезатуразни гени
Трета козмид, cSy'7, който съдържа А12-дезатуразен ген, се изолира чрез отделяне от Synechocystis геномната съвкупност на олигонуклеотид, синтезиран от публикуваната Synechocystis дезатуразиа генна последователност (Wada и др. [1990] Nature (London) 347, 200-203). 1.7 kb Aval фрагмент от този козмид, съдържащ Л12-дезатуразния геи, се идентифицира и служи като пример, за да демонстрира, не cSy!3 съдържа не само Лбдезатуразеи ген, но също и Д12-дезатуразен ген (фигура 3). ’w Геиомния Southern Blot анализ показва, че и двата Δ6 и Δ12дезатуразни гена са уникални за Synechocystis геном, така че двата функционални гена, включени в С18 мастно-киселинното дсзатуриранс, са тясно свързани в Synechocystis генома.
Едноклетъчната цианобактерия Synechocystis (РСС 7942) е с недостатъчно съдържание, както па линолоВа киселина, така и на GLA(3). А12 и Δ6 дезатуразните гени се клонират индивидуално и заедно в рАМ854 (Bustos и др. [1991] J. Bacteriol. 174. 7525-7533), совалков вектор, който съдържа последователности, необходими за интегриране на чуждата DNA в генома Synecliococcus (Golden и др. [1987] Methods in Enzymol. 153. 215-231). Synecliococcus се трансформира с тези гении конструкции и се избират колонии. Метиловите естери на мастна киселина се екстрахират от транегенна Synechococcus и се анализират чрез GLC.
Таблица 2 показва, че основните мастни киселини на дивия тип Svnechococcus са стеаринова киселина (18:0) и олеинова киселина (18:1). Synechococcus трансформиран с ρΑΜ854-Δ12 отделя линолова киселина (18:2), освен основните мастни киселини. Трансформантите с ρΑΜ854-Δ6 и Δ12 произвеждат, както линолеат, така u GLA (таблица 1). Тези резултати показват, че Synechococcus. съдържащ и двата Л12- и Лбдезатуразни гена, придобива способността да вкара втора двойна връзка в Δ 12 позиция и трета двойна връзка в Δ6 позиция на С18 мастни киселини. Все пак, не се забелязват промени в мастнокиселинния състав на трансформанта, съдържащ рАМ854-лб, което показва, че при отсъствието па субстрат синтезиран от л !2-дезатураза, лб-дезатуразата не е активна. Освен тоВа този експеримент показва, че 1.8 kb Nhel/Hindlll фрагмента (фигура 3) съдържа, както кодираща, така и промоторна област на Svnecliocvstis Аб-дезатуразния ген. Трансгенните Synechococcus с променени нива на полиненаситени мастни киселини са подобни на дивия тип по темп иа растеж и морфология.
Пример 5
Нуклеотидна последователност на Дб-дезатураза
Определя се нуклеотидната последователност на 1.8 кв фрагмента на cSv75-3.5, Включващ функционалния Аб-дезатуразен ген. Идентифицира се отворен отчитащ контур, кодиращ полипептид от 359 амино киселини (фигура 4). Kyte-Doolittle хидропатисн анализ (Kytc и др. [1982] J. Mol. Biol. 157. 105-132) показВа две области на хидрофобни амино киселини, които могат да представляват трансмембранни домени (фигура 1А); освен това, хидропатийпия профил на лб-дезатуразата е подобен на този на А12-дезатуразния ген (фигура IB; Wada и др.) и на Δ9дезатуразите (Thiede и др. [1986] J. Biol. Chem. 261, 13230-13235). Подобието на последователностите между Synechocystis Δ6- и Δ12- дезатурази е по-малко от 40% при нуклеотидното пиво и е приблизително 18% при амино-киселинното ниво.
Пример 6
Трансфер на цианобактериална А6-дезатураза в тютюн
Цианобактериалния Д6-дезатуразен ген се вкарва в растителен насочващ вектор и се прехвърля в тютюн, като се използва гении методи за трансфер, посредством Agrobacterium среда За да сс осигури, че прехвърлената дезатураза е подходящо внедрена в листа и развиващи се семена и че дезатуразния генеи продукт е насочен към ендоплазмения ретикулум или към хлоропласта, се коиструират разнообразни насочващи касети с Syncchocystis А-дезатуразен отворен отчитащ контур (ORF). Компонентите на тези касети са : (1) 35S промотор или семенноспецифичен промотор, извлечен от слънчогледовия хелиаптишшоВ геи, за насочване па А6-дезатуразното генио отделяне ВъВ Всички растителни тъкани или съответно само в развиващите се семена, (Н) предполагаем сигнален пептид от морковен екстенсинов ген или от слънчогледов хелиантининов геи, които да насочи ново-синтезираната Аб-дезатураза в ER, (iii) ER лумен ограничаваща сигнална последователност (KDEL) в СООН-края иа А6-дезатуразш1я ORl·' и (iv) оптимизиран транзитен пептид, за насочване на Аб-дезатуразата в хлоропласта. 35S промотора е производно на pRTL2, описано от Restrepo и др. (1990). Оптимизираната транзитна пептидна последователност ,е описана от Van de Broeck и др. (1985). Морковният екстенсинов сигнален пептид е описан от Chen и др (1985) ЕМВО J. 9, 2145.
Получават се транегенни тютюневи растения, съдържащи химеричен цианобактериален дезатуразен ген, състоящ се от Synechocystis А6-дезатуразния ген свързан с ендоплазмена ретикулумна ограничаваща последователност (KDEL) и екстснсинов сигнален пептид, движен от CaMV 35S промотор. PCR увеличения на трансгенната тютюнева ге помпа DNA показват, че Аб-дезатуразния ген е вграден в тютюневия геном. Метилови естери на мастна киселина от листата на тези трансгенни тютюневи растения се екстрахират и анализират чрез газ-течна хроматография (GLC). Този трапсгепен тютюн акумулира значителни количества GLA (фигура 4). фигура 4 показва метилови естери на мастна киселина, както са определени, чрез GLC. Пиковете се определят, чрез сравняване на времето за елюиране с известните стандарти за метилов естер на мастна киселина. Съответно, цианобактериални гени, включени в мастно-киселинния метаболизъм, могат да бъдат използвани за да генерират трансгенни растения с променен мастно-кисел състав.
Списък на последователности (1) Обща информация :
(i) Заявител : Thomas, Terry L.
Reddy, Avutu S. Nuccio, Michael Freyssinet, Georges L.
Hi) Заглавие на изобретението : Получаване па гама линоленова киселина чрез делта 6-дезатураза (iii) Брои последователности : 3 (iv) Адрес за кореспонденция :
(A) Адресант : Scully, Scott, Murphy & Presser (B) Улица : 400 Garden City Plaza (C) i’pag : Garden City (D) Щат : New York (E) Държава : САЩ (F) ZIP kog : 11530 (v) Компютърно оборудване (А) Носител : Флопи диск (Ί3) Компютър : IBM PC съвместим (C) Операционна система : PC-DOS/MS-DOS (D) Софтуер : Patentin Release #1.0, Version #1.25 (vi) Налични данни за описанието (A) Номер на описанието :
(B) Дата на подаване : 08 януари 1992 (C) Класификация :
(vii) Информация за пълномощника :
(A) Име : McNulty, William Е.
(B) Регистрационен номер : 22606 (C) Списъчен номер : 8383Z (ix) Телекомуникационна информация (A) Телефон : (516) 742-4343 (B) Телефакс : (516) 742-4366 (C) Телекс : 230 901 SANS UR (2) Информация за SEQ (последователност) ID N0:1 :
(i) Характеристики на последователността (A) Дължина : 3588 базови двойки (B) Тип : нуклеинова киселина (C) Вид на веригата : и двата вида (D) Топология : линейна (и) Тип молекула : DNA (гепомна) (ix) Особености :
(A) Име/код : CDS (B) Местонахождение : 2002...3081 (xi) Описание на последователността : SEQ ID N0:1 :
| GCTAGCCACC | AGT GACGAT G | CCTTGAATTT | GGCCATTCTG | ACCCAGGCCC | GTATTCTGAA | 60 |
| TCCCCGCATT | CGCATTGTTZi | ATCCtTTTGTT | C A AC C AT GC C | CTGGGTAAAC | GT T TAG AC AC | 120 |
| CACCTTGCCA | GACCACGTTA | GTT-TGAGTGT | TTCCGCCCTG | GCGGCCCCGA | TTTTTTCCTT | 180 |
| TGCGGCTTTG | GGCAATCAGG | CCrATCGGGCA | ATTGCGTTTG | TTTGACCAGA | CTTGGCCCAT | 240 |
| TCAGGAAATT | GT CAT TO ACC | AAGACCATCC | CTGGCTCAAT | TTACCCCTGG | CGGATTTATG | 300 |
| GGATGATCCG | AGCCGAATGT | TGATCT ATTA | CCT ACCGGCC | C AC AGT GA A A | CGGATTT AGT | 360 |
| AGGCGCAGTG | GT G A AT A AT T | TAACGTTGCA | ATCTGGGGAC | CATTTAATAG | TGGGACAAAA | 420 |
| ACCCCAACCC | A AG ACC A A AC | GGCGATCGCC | TTGGCGCAAA | TTTTCCAAAC | TGATTACCAA | 480 |
| C C T GC GGG AG | TA'fCAGCGGT | ATGTCCAACA | GGTGATATGG | GTGGTGTTGT | TTTTATTGTT | 540 |
| GATGATTTTT | C T GGC C AC C T | TCATCTACGT | TTCCATTGAT | CAACATATTG | CCCCAGTGGA | 600 |
| CGCGTTGTAT | TTTTCCGTGG | GC AT GATT AC | CGGGGCCGGT | GGCAAGGAAG | AGGTGGCCGA | 660 |
| AAAGTCCCCC | GAT AT CATC A | AACrT ATTCAC | AGTGGTGATG | ATGATCGCCG | GGGCGGGGGT | 720 |
| Q AT T GGT AT T | TGTT ATGC.CC | TACT GA AT GA | TTTCATCCTT | GGCAGTCGCT | TTAGTCAGTT | 780 |
| TTTGGATGCG | GCC A AGT T AC | CCGATCGCCA | TCACATCATC | ATTTGTGGGC | TGGGGGGAGT | 840 |
| GAGCATGGCC | ATTATTGAAG | AGTTAATTCA | CCAGGGCCAT | GAAATTGTGG | TAATCGAAAA | 900 |
GGATACAGAT AATCGTTTCT TGCATACGGC CCGCTCCCTG GGGGTGCCCG TAATTGTGGA 960
| CCIATGCCCGC | CT AGAAAGAA | CGTTGGCCTG | CGCCAATATC | AACCGAGCCG | AAGCCATTGT | 102i |
| Crf JT<O. a'ACC | AGCGACGAC/\ | CCGTTAACTT | GGAAATTGGC | CTAACTGCCA | AGGCGATCGC | IDS' |
| C ·.'']' Ai ni. ”T Ct | CCAGTGGTGT | TGCGTTGCCA | GGATGCCCAG | TTTAGCCTGT | CCCTGCAGGA | 11Γ |
| ACTATITGAA | TTTGAAACGG | TGCTTTGTCC | GGCGGAATTG | GCCACCTATT | CCTTTGCGGC | T.’T |
| GGCGCtCCCTG | GGGGGCAAAA | TTTTGGGCAA | CCiGCATGACC | GATGATTTGC | TGTGGGTAGC | 126' |
| CCTAGCCACC | TTAATCACTC | CTAACCATCC | CTTTGCCGAC | CAATTGGTTA | AAATTGCAGC | 132' |
| CCAAAAGTCT | GATTTCGTTC | CCCTCTATCT | AGAACGGGGT | GGCAAAACCA | TCCATAGCTG | 13S |
| •GGAATTATTG | GGTACCCATC | TCGACTCTGG | AG AC GT GT TG | ТАТТТАЛССА | TGCCCGCCAC | 1-U |
| Ti ’CCCT /V r/\G | CAACTTTGGC | GATCGCCCCG | TGCCACTGCT | GATCCTCTGG | ACTCTTTTTT | 150 |
| ίΉ’TTT AGC AT | GGGGGGAT GG | AACTCTTGAC | TCGGCCCAAT | GGTGATCAAG | AAAGAACCiCT | 156 |
| TI GT CT AT GT | ttagtatttt | TAAGTTAACC | AAC AGC AG AG | GATAACTTCC | AAAAGAAATT | 162J |
| A AGC T ί. A f\ Λ f\ | AGTAGCAAAA | TAAGTTTAAT | TCATAACTGA | GTTTTACTGC | TAAACAGCGG | 16R‘ |
| Tf. jC /k A A A A AG | TCAGATAAAA | TAAAAGCTTC | ACTTCGGTTT | TATATTGTGA | CCATGGTTCC | 17Λι |
| CACTK’ATCTG | CTCT AGGGAG | TTTTTCCGCT | GCCTTTAGAG | AGTATTTTCT | CCAAGTCGGC | ISO' |
| ТЛАСТССССС | ATTTTTAGGC | AAAATCATAT | ACAGACTATC | CCAATATTGC | CAGAGCTTTG | lS6i |
| ATGACTCACT | GTAGAAGGCA | GACTAAAATT | CTAGCAATGG | ACTCCCAGTT | GGAAT A A ATT | 1921 |
| TTTAGTCTCC | CCCGGCGCTG | GAGTTTTTTT | GTAGTTAATG | GCGGTATAAT | GTGAAAGTTT | 192.1 |
| TTTATCTATT | ΤΑΑΛΤΤΤΑΤΑ | A ATG CTA AC A GCG CAA Met I.eu Thr Ale G1U 1 5 | AGA ATT AAA Arg lie L y s | TTT ACC Phe Thr 10 | 20- | |
| CAG AAA CGG Q 1 v. L у г A r j | GGG TTT CGT CGG GTA CTA AAC CAA Gly Plic Arg Arg Vai Leu Asn Gin 15 2 0 | CGG GTG GAT Arg Vai Asp | GCC TAC Ala T y r 2 5 | 207'. | ||
| TTT GCC GAG FiiC A 1 ύ U ι U | CAT GGC CI 1113 Gly Le ? 0 | G ACC CAA AGG GAT AAT u Thr Gin Arg A s p Asn 3 5 | CCC TCC ATG Tro Ser Met 10 | TAT CTG T y r Leu | 212 |
Г
| AAA Lys | ACC Thr | CTG Leu 1 5 | ATT lie | ATT lie | GTG Vai | CTC Leu | TGG Trp 50 | TTG Leu | TTT Phe | TCC Ser | GCT Ala | TGG T r p 55 | GCC A1 a | TTT Phe | GTG Va 1 | 2175 |
| GIT | TTT | GCT | CCA | GTT | ATT | TTT | CCG | GTG | CGC | CT A | CTG | GGT | TGT | ATG | GTT | 2223 |
| x. e u | The | A 1 tl | Γΐυ | Vai | lie | The | Pro | Vi 1 | Arg | Leu | Leu | Gly | C y s | Met | Va 1 | |
| 6 0 | 6 5 | 70 | ||||||||||||||
| TTG | GCG | ATC | GCC | TTG | GCG | GCC | TTT | TCC | TTC | AAT | GTC | GGC | CAC | GAT | GCC | 2271 |
| Leu | A1 a | lie | Ala | Leu | Ala | Ala | Phe | Ser | Phe | As n | Va 1 | Gly | His | Asp | A1 a | |
| 7 5 | SO | 85 | 90 | |||||||||||||
| AAC | C.AC | AAT | GCC | TAT | TCC | TCC | AAT | CCC | CAC | ATC | AAC | CGG | GTT | CTG | GGC | 2319 |
| 'λ s n | H i s | Ain | A 1 a | Tyr | Ser | Ser | A s n | Pro | His | lie | A 8 n | Arg | Va 1 | Leu | Gly | |
| 9 5 | 1 00 | 105 | ||||||||||||||
| ATG | ACC | TAC | GAT | TTT | GTC | GGG | TTA | TCT | AGT | TTT | CTT | TGG | CGC | TAT | CGC | 2367 |
| M e 1 | Th r | T y r | Asp | Phe | Va 1 | G1 y | Leu | Ser | Ser | Phe | Leu | T r p | Arg | Tyr | Arg | |
| 1 1 0 | 1 1 5 | 1 2 0 | ||||||||||||||
| C AC | A AC | T AT | TTG | CAC | CAC | ACC | T AC | ACC | AAT | ATT | CTT | GGC | CAT | GAC | GTG | 2415 |
| Ilia | A a u | Tyr | Leu | Hie | His | Thr | Tyr | Thr | A s n | He | Leu | Gly | His | Asp | Va 1 | |
| 1 2 5 | 130 | 135 | ||||||||||||||
| GA A | ATC | CAT | GGA | GAT | GGC | GCA | GT A | CGT | ATG | AGT | CCT | GAA | CAA | GAA | CAT | 2463 |
| G i u | lie | II 18 | G 1 y | Asp | Gly | Al a | Va 1 | Arg | Met | Ser | Pro | Glu | Gin | Glu | H18 | |
| 14 0 | 145 | 150 | ||||||||||||||
| GTT | GGT | ATT | TAT | CGT | TTC | CAG | CAA | TTT | T.AT | ATT | TGG | GGT | TTA | TAT | CTT | 2511 |
| Vn 1 | G 1 y | He | Ty r | Arg | Phe | Gin | G I n | Phe | Tyr | lie | Trp | Gly | Leu | Tyr | Leu | |
| 1 55 | 160 | 165 | 170 | |||||||||||||
| TTC | ATT | CCC | TTT | TAT | TGG | TTT | CTC | TAC | GAT | GTC | TAC | CT A | GTG | CTT | AAT | 2559 |
| Phe | lie | Pro | Phe | Tyr | Trp | Phe | Leu | Tyr | Asp | Vai | Tyr | Leu | Vai | Leu | A s n | |
| 1 7 5 | 180 | 185 | ||||||||||||||
| AAA | GGC | AAA | TAT | CAC | GAC | CAT | AAA | ATT | CCT | CCT | TTC | CAG | CCC | CTA | GAA | 2607 |
| L j г | G 1 y | I. y 8 | ’Τ' i y 1' | II is | Asp | His | L y s | lie | Pro | Pro | Phe | Gin | Pro | Leu | Glu | |
| 1 9 0 | 19 5 | 200 | ||||||||||||||
| TTA | GGT | AGT | TTG | CT A | GGG | ATT | AAG | CT A | TTA | TGG | CTC | GGC | TAC | GTT | TTC | 2655 |
| Leu | A i a | Ser | Leu | Leu | Gly | 11 e | Lys | Leu | Leu | Trp | Leu | Gly | Tyr | Vai | Phe | |
| 205 | 210 | 215 | ||||||||||||||
| GGC | TTA | CCT | CTG | GCT | CTG | GGC | TTT | TTC | ATT | CCT | GAA | GT A | TTA | ATT | GGT | 2703 |
| Gly | Leu | Pro | Leu | AI a | Leu | Gly | Phe | Ser | lie | Pro | Glu | Vai | Leu | lie | Gly | |
| 2 2.0 | 2 2 5 | 23 0 |
| GCT A1 a 2 3 5 | TCG Ser | GT A Va 1 | ACC Thr | TAT Tyr | ATG Met 240 | ACC Thr | TAT Tyr | GGC Gly | ATC lie | GTG Vai 245 | GTT Vai | TGC Cy s | ACC Thr | ATC lie | TTT Phe 250 | 2751 |
| AT G | CTG | GCC | CAT | GTG | TTG | GAA | TCA | ACT | GAA | TTT | CTC | ACC | CCC | GAT | GGT | 2799 |
| ΐνί e t | Leu | A 1 u | His | Va 1 | Leu | Glu | 5 e i | Thr | Glu | Phe | Leu | Thr | Tro | Asp | Gly | |
| 255 | 260 | 26 5 | ||||||||||||||
| GAA | TCG | GGT | GCC | ATT | GAT | GAC | GAG | TGG | GCT | ATT | TGC | CAA | ATT | CGT | ACC | 2847 |
| Glu | Ser | Gly | Ala | lie | Asp | Asp | Glu | Trp | Ala | lie | Cy 8 | Gin | lie | Arg | Thr | |
| 270 | 275 | 280 | ||||||||||||||
| ACG | GCC | AAT | TTT | GCC | ACC | AAT | AAT | CCC | TTT | TGG | AAC | TGG | TTT | TGT | GGC | 2895 |
| Thr | A 1 я | A s n | Phe | Ala | Thr | A s n | As n | Pro | Phe | Trp | Ain | Trp | Phe | Cys | Gly | |
| 2 8 5 | 290 | 295 | ||||||||||||||
| GGT | TTA | AAT | CAC | CAA | GTT | ACC | CAC | CAT | CTT | TTC | CCC | AAT | ATT | TGT | CAT | 2943 |
| Gly | Leu | A s n | His | Gin | Va 1 | Thr | His | His | Leu | Phe | Pro | As n | lie | Cys | His | |
| 3 00 | 305 | 3 1 0 | ||||||||||||||
| ATT | CAC | TAT | CCC | CAA | TTG | GAA | AAT | ATT | ATT | AAG | GAT | GTT | TGC | CAA | GAG | 2991 |
| lie | II is | Tyr | Γ i o | G1 n | L e u | Glu | As n | lie | lie | L y s | Asp | Vai | Cys | Gin | Glu | |
| J 1 5 | 3 20 | 3 2 5 | 330 | |||||||||||||
| TTT | GGT | GTG | GAA | TAT | AAA | GTT | TAT | CCC | ACC | TTC | AAA | GCG | GCG | ATC | GCC | 3039 |
| Phe | G 1 y | V« 1 | GI u | Tyr | L y s | Va 1 | Tyr | Pro | Thr | Phe | Lys | A1 a | Ala | lie | A1 a | |
| 335 | 340 | 34 5 | ||||||||||||||
| TOT | AAC | TAT | CGC | TGG | CT A | GAG | GCC | ATG | GGC | AAA | GCA | TCG | TGACATTGCC | 3088 | ||
| Ser | A s n | Tyr | Arg | Trp | Leu | Glu | Ala | Met | Gly | Lys | A1 a | Ser |
350 355 360
| TTGGGATIG A | AGCAAAATGG | CAAAATCCCT | CGTAAATCTA | TGATCGAAGC | CTTTCTGTTG | 3148 |
| CCCGCCGACC | AAATCCCCGA | TGCTGACCAA | AGGTTGATGT | TGGCATTGCT | CCAAACCCAC | 3208 |
| TTTGAGGGGG | TTCATTGGCC | GCAGTTTCAA | GCTGACCTAG | GAGGCAAAGA | TTGGGTGATT | 3268 |
| TTGCTCAAAT | CCGCTGGGAT | ATTGAAAGGC | TTCACCACCT | TTGGTTTCTA | CCCTGCTCAA | 3328 |
| TGGGAAGGAC | aaaccgtcAg | AATTGTTTAT | TCTGGTGACA | CCATCACCGA | CCCATCCATG | 3388 |
| TGGTCTΛACC | CAGCCCTGGC | CAAGGCTTGG | ACCAAGGCCA | TGCAAATTCT | CCACGAGGCT | 3448 |
| AC-GCCAGAAA | AATTATATTG | GCTCCTGATT | TCTTCCGGCT | ATCGCACCTA | CCGATTTTTG | 3508. |
AGCATTTTTG CCAAGGAATT CTATCCCCAC TATCTCCATC CCACTCCCCC GCCTGTACAA 3568.
AATTTTATCC ATCAGCTAGC (2) Информация за SEQ ID N0:2 :
(i) Характеристики на последователността (A) Дължина : 359 амино киселини (B) Тип : амино киселина (D) Топология: линейна (ii) Тип молекула : протеин (xi) Описание на последователността : SEQ ID N0:2 :
3588
| М е t 1 | L е u | Thr | A 1 a | GJ u 5 | Arg | lie | |
| A r g | V a 1 | Leu | Aan 20 | Gin | Arg | Va 1 | |
| Thr | Gin | Arg 3 5 | Asp | As n | Pro | Ser | |
| Leu | Trp 50 | Leu | Phe | Scr | A1 a | Trp 55 | |
| Phe 65 | Pro | Ve 1 | Arg | Leu | Leu 70 | Gly | |
| A1 a | Fhe | Ser | Fhe | As n 85 | V,a I | Gly | |
| Ser | A s n | Pro | Hi» 1 00 | lie | А» n | Arg | |
| Gly | Leu | Scr 115 | Ser | Phe | Leu | Trp | |
| T h r | Tyr 130 | Thr | Aan | He | Leu | GLy 135 | |
| A 1 a 145 | Vai | A r g | M e t | Ser | Pro 150 | Crlu | |
| G 1 n | Gin | Phe | Tyr | lie 165 | Trp | Gly |
| L y s | Phe | Thr 10 | QI n. | L y s | Arg | Gly | Phe 15 | Arg |
| Asp | Ala 25 | Tyr | Phe | Ala | Glu | His 30 | Gly | L е u |
| Met 40 | Tyr | Leu | Lys | Thr | Leu 45 | lie | He | Ve 1 |
| A1 a | Phe | Vai | L е u | Phe 60 | Ala | Pro | Va 1 | He |
| Cys | Met | Vai | Leu 75 | Ala | lie | Ala | Leu | Al a 80 |
| His | Asp | Alt 90 | Aan. | Hit | As n | Ala | Tyr 95 | Ser |
| Vai | L e U 105 | Qly | Met | Thr | Tyr | Asp 110 | Phe | Vai |
| Arg 120 | Tyr | Arg | Hit | Aan | Tyr 125 | Leu | His | Ilis |
| His | Asp | Vai | Glu | lie 140 | H i s | Gly | Asp | Gly |
| Gin | Glu | His | Vai 155 | Qly | lie | Tyr | Arg | Phe 160 |
| Leu | Tyr | Leu 170 | Phe | lie | Pro | Phe | Tyr 175 | Trp |
| Г It с | L c u | Tyr | A s P 1 3 0 | V β 1 | Tyr | T л ,. 4-> v U | Ve 1 | Leu 185 | A з n | L y з | Gly | L y a | Tyr 190 | His | A 3 p |
| Η. 1 5 | 1. y a | 1 Ic i 9 5 | P r o | Pro | Phe | G1 n | Pro 2 00 | L е u | G1 u | Le U | A I a | Ser 205 | L. е u | Lc u | G i y |
| I ! г | Г V ? :> 1 n | I.r n | L. е u | T .· p | L е. и | G 1 -j 2 1 5 | T y .· | V η 1 | Fhe | Gly | L е u 2 2 0 | P r o | Leu | /У. I a | Le и |
| G 1 у | The | Ser | He | Pro | G1 u 2 3 0 | Vai | Leu | lie | Gly | Al a 23 5 | Ser | Va 1 | Thr | Tyr | Met 24 0 |
| Т ь ,· | T У r | 01 | lie | Vs! 2 4 5 | Vs 1 | C у? | T h r | lie | The 2 5 0 | Met | L е u | Ale | His | Vai 2 5 5 | Leu |
| G ΐ и | Ser | T h r | ί.τ 1 U 2 6 0 | F h e | L е u | T h r | r r o | A s p 265 | G1 y | G1 u | Ser | GI y | A1 a 270 | lie | /4 3 p |
| Λ П р | ('hl | T r P 2 7 5 | /\ 1 n | He | C v | G 1 n | Ur 2 8 0 | Are | T h r | Thr | Ala | Л я n 28 5 | Phe | Ala | Thr |
| А л i t | A 2. 11 ? ’? i'- | F . ... | Fl.e | Tip | A a n | TrP ο ς | The | C У 5 | G1 y | Gly | Leu 3 0 0 | As n | I-Iie | Gin | Va 1 |
| Т Ιί r _< ύ 5 | Hi?. | H i s | Leu | Phe | Pro 3 1 0 | А я n | He | C у я | Hi? . | He 3 15 | His. | Tyr | Pro | Gin | L. е u 3 20 |
| G 1 11 | A s n | I! r | He | Ln 32 5 | Asp | Va 1 | C y s | Gin | G 1 u 3 3 0 | Phe | Gly | Va 1 | Glu | Tyr 3 3 5 | Lys |
| V ο 1 | Г y r | Pro | T h 1 .? Д | Phe | I. y λ | A 1 a | A 1 й | lie 3 45 | Ala | Ser | А я n | T y r | A r R 3 50 | T r p | Le и |
| d I ., | Λ ] c | M 1 | G 1 y | L V s | A1 h | Ser |
5 5 (2) Информация за SEQ ID N0:3 :
Ci) Характеристики на последователността (A) Дължина : 1884 базови двойки (B) Тип ; нуклеинова киселина (C) Вид на веригата : и двата вида (D) Топология : линейна (И) Тип молекула : DNA (геномна) (xi) Описание на последователността : SEQ ID N0:3 :
'Ν
| AGCTTCACTT | CGGTTTTATA | TTGTGACCAT | GGTTCCCAGG | CATCTGCTCT | AGGGAGTTTT | © |
| TCCGCTGCCT | TTAGAGAGTA | TTTTCTCCAA | GTCGGCTAAC | TCCCCCATTT | TTAGGCAAAA | 133 |
| TC.AT AT AC AC' | ACTATCCCAA | T ATTGCCAGA | GCTTTGATGA | CTCACTGT AG | AAGGCAGACT | 183 |
| AAAATTCTAG | CAATGGACTC | CCAGTTGGAA | TAAATTTTTA | GTCTCCCCCG | GCGCTGGAGT | 240 |
| TTTTTTGTAG | TTAATGGCGG | TATAATGTGA | AAGTTTTTTA | TCTATTTAAA | TTTATAAATG | Tn |
| CTAACAGCGG | AAAGAATTAA | ATTTACCCAG | AAACGGGGGT | TTCGTCGGGT | ACTAAACCAA | 333 |
| CCG'IT GGA.T G | CCT ACTTTGC | cgagcatggc | CTGACCCAAA | GGGATAATCC | CT CC AT GT AT | 430 |
| < 3 T13 A. .A A. AC C C | T GATT ATT GT | OCT CT GGT T G | TTTTCCGCTT | GGGCCTTTGT | GCTTTTTGCT | 430 |
| ГГ Д(ТГТ ДТТТ | TTCCGGTGCG | CCT ACTGGGT | TGTATGGTTT | TGGCGATCGC | CTTGGCGGCC | 540 |
| TTTTCCTTCA | ATGTCGGCCA | CGATGCCAAC | CACAATGCCT | ATTCCTCCAA | TCCCCACATC | ©0 |
| AAC C GGGTT C | TGGGCATGAC | CTACGATTTT | GTCGGGTTAT | CTAGTTTTCT | TTGGCGCTAT | 6© |
| CGCC AC AACT | ATT TGC ACC A | CACCTACACC | AATATTCTTG | GCCATGACGT | GGAAATCCAT | 720 |
| GGAGATGGCG | CAGTACGTAT | GAGTCCTGAA | C A AG A AC AT G | TTGGTATTTA | TCGTTTCCAG | 700 |
| CAATTTTATA | TTTGGGGTTT | ATATCTTTTC | ATTCCCTTTT | ATTGGTTTCT | CTACGATGTC | &Ю |
| T ACCTA.QTGC | TT AATAAAGG | CAAATATCAC | GACCATAAAA | TTCCTCCTTT | CCAGCCCCTA | SOO |
| G.AA.TT ACCT A | GTTTGCTAGG | GATTAAGCTA | TTATGGCTCG | GCTACGTTTT | CGGCTTACCT | s© |
| CTGGCTCTGG | QCTTTTCCAT | TCCTGAAGTA | TTAATTGGTG | CTTCGGTAAC | CT AT AT G ACC | 1CG0 |
| T ATGGCATCG | TGGTTTGC AC | CATCTTTATG | CTGGCCCATG | TGTTGGAATC | AACT GA ATTT | 1C0O |
| CTC ACCCCCC· | AT GGT G A AT C | CGGTGCCATT | GATGACGAGT | GGGCTATTTG | CCAAATTCGT | 1140' |
| ACCACGGCCA | ATTTTGCCAC | CAATAATCCC | TTTTGGAACT | GGTTTTGTGG | CGGTTTAAAT | 1203 |
| C ACC .AACT T A | CCCACCATCT | TTTCCCCAAT | ATTTGTCATA | TTCACTATCC | CCAATTGGAA | 1333 |
| A AT AT T ATT A | AGC-ATGTTTG | CCAAGAGTTT | GGTGTGGAAT | ATAAAGTTTA | TCCCACCTTC | 1333 |
| AAAGCGGCGA | TCGCCTCTAA | CTATCGCTGG | CTAGAGGCCA | TGGGCAAAGC | ATCGTGACAT | 1200 |
TCCCTTGGGA TTGAAGCAAA ATGGCAAAAT CCCTCGTAAA TCTATGATCG AAGCCTTTCT 1440
| GTTGCCCGCC | GACCAAATCC | CCGATGCTGA | CCAAAGGTTG | ATGTTGGCAT | TGCTCCAAAC | 13DL |
| CCACTTTGAG | GGGGTTCATT | GGCCGCAGTT | TCAAGCTGAC | CTAGGAGGCA | AAGATTGGGT | 159 |
| ( тЛ 1111 CK- 1 G | AAATCCGCTG | (.K.iAl All GA A | AGGCTTCACC | ACCTTTGOTT | TCTACCCTGC | 1® |
| TC Λ/XT GGGAA | GGACAAACCG | TCAGAA'l’TGT | TTATTCTGGT | GACACCATCA | CCGACCCATC | 1® |
| C ATGT GGTCT | AACCCAGCCC | TGGCCAAGGC | TTGGACCAAG | GCCATGCAAA | TTCTCCACGA | 17« |
| GGC T AGGC C /X | GAAAAATTAT | ATTGGCTCCT | GATTTCTTCC | GGCTATCTCA | CCTACCGATT | 1ЯГ |
| TTTGAGCATT | TTTGCCAAGG | ЛАТТСТАТСС | CCACTATCTT | САТСССЛСТС | CCCCGCCTGT | 139 |
| АСЛАЛАТТТТ | ATCCATCAGC | T AGC |
Claims (22)
- Патентни претенции :1. Изолирана нуклеинова киселина, кодираща бактериална Абдезатураза.
- 2. Нуклеиновата киселина от претенция 1, съдържаща нуклеотидите от SEQ. ID N0:3.
- 3. Изолирана нуклеинова киселина, която кодира ами но киселинната последователност кодирана от нуклеиновата киселина от претенция 1.
- 4. Изолираната нуклеинова киселина, съгласно която и да е претенция 1-3, където споменатата нуклеинова киселина се съдържа във вектор.
- 5. Изолираната нуклеинова киселина от претенция 4, функционално свързана с промотор и/или ограничаващ сигнал, способен да осъществи насочването на генния продукт на споменатата изолирана нуклеинова киселина.
- 6. Изолираната нуклеинова киселина от претенция 5, където споменатия промотор е Аб-дезатуразен промотор, Anabaena карбоксилазен промотор, хелиантининов промотор, глицинов промотор, напинов промотор или хелиантининов тъканноспецифичен промотор.
- 7. Изолираната нуклеинова киселина от претенция 5, където споменатия ограничаващ сигнал е Synechocystis ограничаващ сигнал, иопалимов синтазен ограничаващ сигнал или семенен ограничаващ сигнал.
- 8. Изолираната нуклеинова киселина, съгласно която и да е от претенции 1-7, където споменатата изолирана нуклеинова киселина се съдържа в транегенем организъм.
- 9. Изолиранат нуклеинова киселина, съгласно претенция 8, където споменатия транегенен организъм е бактерия, гъба, растителна клетка или животно.
- 10. Растение или потомство на тоВа растение, което е регенерирано от трансгенната растителна клетка от претенция9.I I Растението, съгласно претенция 10, което е слънчоглед, соя, царевица, тютюн, фъстък или маслодайна рапица.
- 12. Метод за получаване на растение с увеличено съдържание на гама липоленоВа киселина (GLA), който Включва:(а) трансформиране на растителна клетка с изолираната пуклеиноВа киселина, съгласно която и да е от претенции 1-7; и (в) регенериране на растение с увеличено съдържание на GLA от споменатата растителна клетка.
- 13. Метод съгласно претенция 12, където споменатото растение е слънчоглед, соя, царевица, тютюн, фъстък или мас л ода й н а р а п и ц а.
- 14. Метод за предизВикВаие получаването на гама липолеиоВа киселина (GLA) В организъм с недостатъчна или липсваща GLA, които Включва трансформиране на споменатия организъм с изолираната нуклеинова киселина от която и да е от претенции 1-7.
- 15. Метод за предизвикване получаването на гама линоленова киселииа (GLA) В организъм с недостатъчна или липсВаща GLA и линолова киселина (LA), който Включва трансформиране на споменатия организъм с изолирана нуклеинова киселина, кодираща бактериална Аб-дезатураза и изолирана нуклеиноВа киселина, кодираща л12-дезатураза.
- 16. Метод за предизвикване получаването на гама линоленова киселина (GLA) В организъм с недостатъчна или липсваща GLA и линолова киселина (LA), който Включва трансформиране на споменатия организъм с най-малко един насочващ Вектор, включващ изолирана нуклеиноВа киселина, кодираща бактериална лб-дсзатураза υ изолирана нуклеинова киселина, кодираща Δ12деза тураза.
- 17 Метод, съгласно която и да е ош претенции 15 или 16, където споменатата изолирана нуклеинова киселина, кодираща Дб-дезатураза, включва нуклеотиди 317 до 1507 от SEQ. ID N0:1.
- 18 Метод за предизвикване получаването на октадекатетраеонна киселина в организъм с недостатъчна или липсваща гама лииоленова киселина, койпю се състои в трансформиране на споменатия организъм с изолирана нуклеиноваw. киселина, съгласно която и да е от претенции I до 7.
- 19. Метод, съгласно претенция 18, където споменатия организъм е бактерия, гъба, растение или животно.
- 20 Метод за използване на изолираната нуклеинова киселина, съгласно която и да е от претенции 1 до 7, за получаване на растение с подобрена студоустойчивост, който включва :а) трансформиране на растителна клетка с изолираната нуклеинова киселина от която и да е от претенции 1 до 7; ив) регенериране на споменатото растение с подобрена студоустойчивост от споменатата трансформирана растителна клетка.
- 21 Метод, съгласно претенция 20, където споменатото растение е слънчоглед, соя, царевица, тютюн, фъстък или маслодайна рапица.
- 22. Изолирана бактериална Лб-дезатураза.
- 23. Изолираната . бактериална Дб-дезатураза, съгласно претенция 22, притежаваща амиио-киселинна последователност от SEQ ID N0:2.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US77447591A | 1991-10-10 | 1991-10-10 | |
| US81791992A | 1992-01-08 | 1992-01-08 | |
| PCT/US1992/008746 WO1993006712A1 (en) | 1991-10-10 | 1992-10-13 | Production of gamma linolenic acid by a δ6-desaturase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG98695A true BG98695A (bg) | 1995-05-31 |
| BG61791B1 BG61791B1 (bg) | 1998-06-30 |
Family
ID=27118889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG98695A BG61791B1 (bg) | 1991-10-10 | 1994-04-05 | Получаване на гама-линоленова киселина чрез делта6-дезатураза |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5552306A (bg) |
| EP (1) | EP0666918B1 (bg) |
| JP (1) | JP3537434B2 (bg) |
| KR (1) | KR100316068B1 (bg) |
| CN (2) | CN1053469C (bg) |
| AT (1) | ATE284961T1 (bg) |
| AU (1) | AU667848B2 (bg) |
| BG (1) | BG61791B1 (bg) |
| BR (1) | BR9206613A (bg) |
| CA (1) | CA2120629C (bg) |
| CZ (1) | CZ285471B6 (bg) |
| DE (1) | DE69233459T2 (bg) |
| DK (1) | DK0666918T3 (bg) |
| ES (1) | ES2231767T3 (bg) |
| HU (1) | HU217328B (bg) |
| IL (1) | IL103407A (bg) |
| MX (1) | MX9205820A (bg) |
| NZ (1) | NZ244685A (bg) |
| PH (1) | PH31293A (bg) |
| RO (1) | RO113256B1 (bg) |
| RU (1) | RU2152996C2 (bg) |
| UA (1) | UA43314C2 (bg) |
| WO (1) | WO1993006712A1 (bg) |
Families Citing this family (119)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070130654A1 (en) * | 1991-10-10 | 2007-06-07 | Thomas Terry L | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase |
| US5614393A (en) * | 1991-10-10 | 1997-03-25 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Production of γ-linolenic acid by a Δ6-desaturase |
| US6372965B1 (en) | 1992-11-17 | 2002-04-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Genes for microsomal delta-12 fatty acid desaturases and hydroxylases from plants |
| US6872872B1 (en) | 1992-11-17 | 2005-03-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Genes for microsomal delta-12 fatty acid desaturases and related enzymes from plants |
| WO1994018337A1 (en) * | 1993-02-05 | 1994-08-18 | Monsanto Company | Altered linolenic and linoleic acid content in plants |
| US5639645A (en) * | 1993-09-22 | 1997-06-17 | Mitsubishi Corporation | Recombinant Δ9 desaturase and a gene encoding the same |
| US6310194B1 (en) * | 1994-09-26 | 2001-10-30 | Carnegie Institution Of Washington | Plant fatty acid hydroxylases |
| US5965793A (en) | 1995-09-20 | 1999-10-12 | Monsanto Company, Inc. | Strong early seed-specific gene regulatory region |
| US5959175A (en) * | 1997-04-09 | 1999-09-28 | Thomas; Terry L. | Sunflower albumin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
| US5977436A (en) * | 1997-04-09 | 1999-11-02 | Rhone Poulenc Agrochimie | Oleosin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
| AU720677B2 (en) * | 1997-04-11 | 2000-06-08 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants |
| US7745694B1 (en) | 1997-04-11 | 2010-06-29 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants |
| US6432684B1 (en) | 1997-04-11 | 2002-08-13 | Abbott Laboratories | Human desaturase gene and uses thereof |
| US6428990B1 (en) | 1997-04-11 | 2002-08-06 | Abbott Laboratories | Human desaturase gene and uses thereof |
| US6051754A (en) * | 1997-04-11 | 2000-04-18 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
| US5968809A (en) * | 1997-04-11 | 1999-10-19 | Abbot Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
| US6075183A (en) * | 1997-04-11 | 2000-06-13 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
| US5972664A (en) * | 1997-04-11 | 1999-10-26 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
| US6080911A (en) * | 1997-04-15 | 2000-06-27 | Ohio University | Mice models of growth hormone insensitivity |
| CN100482797C (zh) * | 1997-04-15 | 2009-04-29 | 联邦科学和工业研究组织 | 植物脂肪酸环氧化酶及其用途 |
| US6100450A (en) * | 1997-10-22 | 2000-08-08 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Seed specific promoters based on arabidopsis genes |
| CA2329159A1 (en) * | 1998-05-29 | 1999-12-02 | Bruce Kelder | Compositions and methods for the synthesis of fatty acids, their derivatives and downstream products |
| EP1895009A1 (en) * | 1998-06-12 | 2008-03-05 | Calgene LLC | Polyunsaturated fatty acids in plants |
| US20030163845A1 (en) * | 1998-09-02 | 2003-08-28 | Pradip Mukerji | Elongase genes and uses thereof |
| US6677145B2 (en) | 1998-09-02 | 2004-01-13 | Abbott Laboratories | Elongase genes and uses thereof |
| US6403349B1 (en) | 1998-09-02 | 2002-06-11 | Abbott Laboratories | Elongase gene and uses thereof |
| US6913916B1 (en) | 1998-09-02 | 2005-07-05 | Abbott Laboratories | Elongase genes and uses thereof |
| DE50013231D1 (de) | 1999-06-07 | 2006-09-07 | Basf Plant Science Gmbh | Delta6-acetylenase und delta6-desaturase aus ceratodon purpureus |
| DE10030976A1 (de) | 2000-06-30 | 2002-01-10 | Basf Ag | DELTA6-Desaturasegene exprimierende Pflanzen und PUFAS enthaltende Öle aus diesen Pflanzen und ein Verfahren zur Herstellung ungesättigter Fettsäuren |
| US7070970B2 (en) | 1999-08-23 | 2006-07-04 | Abbott Laboratories | Elongase genes and uses thereof |
| GB9929897D0 (en) * | 1999-12-18 | 2000-02-09 | Slabas Antoni R | Improvements in or relating to conjugated fatty acids and related compounds |
| FR2803592A1 (fr) | 2000-01-06 | 2001-07-13 | Aventis Cropscience Sa | Nouveaux derives de l'acide 3-hydroxypicolinique, leur procede de preparation et compositions fongicides les contenant. |
| FR2810994B1 (fr) * | 2000-06-30 | 2004-03-12 | Biogemma Fr | Acides nucleiques codant pour une phosphatase vegetale de type mipp a activite phytasique et applications |
| EP1197550A3 (en) * | 2000-08-25 | 2002-11-20 | Pfizer Products Inc. | Methods and compositions for diagnosing and treating disorders involving angiogenesis |
| JP4071622B2 (ja) | 2000-09-28 | 2008-04-02 | バイオリジナル フード アンド サイエンス コーポレーション | 脂肪酸不飽和化酵素ファミリーのメンバーであるｆａｄ４、ｆａｄ５、ｆａｄ５−２およびｆａｄ６、ならびにそれらの使用方法 |
| FR2815969B1 (fr) | 2000-10-30 | 2004-12-10 | Aventis Cropscience Sa | Plantes tolerantes aux herbicides par contournement de voie metabolique |
| DE10102337A1 (de) | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren, neue Biosynthesegene sowie neue pflanzliche Expressionskonstrukte |
| AU2002309482B2 (en) * | 2001-01-25 | 2007-08-30 | Abbott Laboratories | Desaturase genes and uses thereof |
| US6635451B2 (en) * | 2001-01-25 | 2003-10-21 | Abbott Laboratories | Desaturase genes and uses thereof |
| US7045683B2 (en) | 2001-05-04 | 2006-05-16 | Abbott Laboratories | Δ4-desaturase genes and uses thereof |
| EP1392278A4 (en) * | 2001-05-14 | 2005-05-04 | Martek Biosciences Corp | PRODUCTION AND USE OF A LIPID-RICH POLAR FRACTION CONTAINING STEARIDONIC ACID AND GAMMA-LINOLENIC ACID EXTRACTED FROM SEEDS AND MICROORGANISMS |
| EP2255668A3 (en) * | 2001-05-14 | 2012-04-04 | Martek Biosciences Corporation | Production and Use of a Polar Lipid-Rich Fraction Containing Omega-3 and/or Omega-6 Highly Unsaturated Fatty Acids from Microbes, Genetically Modified Plant Seeds and Marine Organisms |
| US7211656B2 (en) * | 2002-01-30 | 2007-05-01 | Abbott Laboratories | Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof |
| BR0306883A (pt) | 2002-01-30 | 2004-12-07 | Basf Plant Science Gmbh | ácido nucléico isolado, sequências de ácido nucléico isolado e de aminoácido, construção de gene, vetor, organismo, processo para a produção de pufas, óleo, lipìdeo ou ácido graxo ou uma fração destes, composição de óleo, lipìdeo ou de ácido graxo, e, uso da mesma |
| GB2385852A (en) | 2002-02-27 | 2003-09-03 | Rothamsted Ex Station | Delta 6-desaturases from Primulaceae |
| WO2005024017A1 (en) * | 2002-03-15 | 2005-03-17 | Monsanto Technology Llc | Nucleic acid molecules associated with oil in plants |
| DE10219203A1 (de) | 2002-04-29 | 2003-11-13 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in Pflanzen |
| EP2216405A1 (en) | 2002-05-03 | 2010-08-11 | Monsanto Technology LLC | Speed specific USP promoters for expressing genes in plants |
| FR2848064B1 (fr) * | 2002-12-06 | 2006-01-13 | Bayer Cropscience Sa | Plantes legumineuses transplastomiques fertiles |
| FR2848570B1 (fr) | 2002-12-12 | 2005-04-01 | Bayer Cropscience Sa | Cassette d'expression codant pour une 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps) et plantes tolerantes aux herbicides la contenant |
| US7078234B2 (en) | 2002-12-18 | 2006-07-18 | Monsanto Technology Llc | Maize embryo-specific promoter compositions and methods for use thereof |
| ES2525212T3 (es) | 2002-12-19 | 2014-12-19 | University Of Bristol | Procedimiento novedoso de producción de ácidos grasos poliinsaturados |
| ATE517984T1 (de) | 2003-02-27 | 2011-08-15 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren |
| CN1836045B (zh) | 2003-03-28 | 2012-05-09 | 孟山都技术有限公司 | 用于早期种子发育的新型植物启动子 |
| CA2868312A1 (en) | 2003-03-31 | 2004-10-14 | University Of Bristol | Novel plant acyltransferases specific for long-chained, multiply unsaturated fatty acids |
| EP1613744B1 (de) | 2003-04-08 | 2015-09-09 | BASF Plant Science GmbH | Delta-4-desaturasen aus euglena gracilis, exprimierende pflanzen und pufa enthaltende öle |
| US11952581B2 (en) | 2003-08-01 | 2024-04-09 | Basf Plant Science Gmbh | Process for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| PT2166069T (pt) | 2003-08-01 | 2016-09-13 | Basf Plant Science Gmbh | Método de produção de ácidos gordos polinsaturados em organismos transgénicos |
| DK1656449T3 (da) | 2003-08-21 | 2009-06-02 | Monsanto Technology Llc | Fedtsyredesaturaser fra primula |
| CA2450000A1 (en) * | 2003-12-18 | 2005-06-18 | Alberta Research Council Inc. | Method of creating plants with reduced level of saturated fatty acid in seed oil |
| JP4567047B2 (ja) | 2004-02-27 | 2010-10-20 | ビーエーエスエフ プラント サイエンス ゲーエムベーハー | トランスジェニック植物における多価不飽和脂肪酸の製造方法 |
| WO2005083053A2 (de) | 2004-02-27 | 2005-09-09 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur herstellung von ungesättigten omega-3-fettsäuren in transgenen organismen |
| US20050220901A1 (en) * | 2004-03-22 | 2005-10-06 | Huttenbauer Samuel Jr | Methods of pharmaceutical separation from plants |
| EP2902021B1 (en) | 2004-04-16 | 2018-11-14 | Monsanto Technology LLC | Expression of fatty acid desaturases in corn |
| ES2715640T3 (es) | 2004-04-22 | 2019-06-05 | Commw Scient Ind Res Org | Síntesis de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga por células recombinantes |
| CN102559364B (zh) | 2004-04-22 | 2016-08-17 | 联邦科学技术研究组织 | 用重组细胞合成长链多不饱和脂肪酸 |
| US7138391B2 (en) * | 2004-08-09 | 2006-11-21 | Silverbrook Research Pty Ltd | Hydrophilizable and hydrophilic cyanine dyes |
| US7456270B2 (en) * | 2004-09-01 | 2008-11-25 | Abbott Laboratories | Δ6-desaturase genes and uses thereof |
| EP1856264B1 (en) | 2005-02-26 | 2014-07-23 | BASF Plant Science GmbH | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| DE102005013779A1 (de) | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von mehrfach ungesättigten C20- und C22-Fettsäuren mit mindestens vier Doppelbindungen in transgenen Pflanzen |
| WO2006133983A1 (en) | 2005-04-19 | 2006-12-21 | Basf Plant Science Gmbh | Starchy-endosperm and/or germinating embryo-specific expression in mono-cotyledonous plants |
| US7902423B2 (en) | 2005-04-20 | 2011-03-08 | Basf Plant Science Gmbh | Expression cassettes for seed-preferential expression that utilize the promoter from a flax tonoplast intrinsic protein gene |
| CA2607263A1 (en) | 2005-05-10 | 2006-11-16 | Basf Plant Science Gmbh | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| EP1885862B1 (en) | 2005-05-23 | 2015-07-29 | Arcadia Biosciences Inc. | Safflower with elevated gamma-linolenic acid |
| DE102005038036A1 (de) | 2005-08-09 | 2007-02-15 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Arachidonsäure und/oder Eicosapentaensäure in transgenen Nutzpflanzen |
| GB2431158A (en) | 2005-10-13 | 2007-04-18 | Rothamsted Res Ltd | Process for the production of arachidonic and/or eicosapentaenoic acid |
| DE102005052551A1 (de) | 2005-11-02 | 2007-05-16 | Rothamsted Res Harpenden | Verfahren zur Herstellung von y-Linolensäure und/oder Stearidonsäure in transgenen Brassicaceae und Linaceae |
| EP1806398A1 (en) * | 2006-01-04 | 2007-07-11 | Monsanto S.A.S. | Fad-2 mutants and high oleic plants |
| GB0603160D0 (en) | 2006-02-16 | 2006-03-29 | Rothamsted Res Ltd | Nucleic acid |
| AR059376A1 (es) | 2006-02-21 | 2008-03-26 | Basf Plant Science Gmbh | Procedimiento para la produccion de acidos grasos poliinsaturados |
| US8629195B2 (en) | 2006-04-08 | 2014-01-14 | Bayer Materialscience Ag | Production of polyurethane foams |
| PT2041275E (pt) | 2006-07-19 | 2011-08-18 | Monsanto Technology Llc | Dessaturases de ácidos gordos derivadas de tetraselmis suecica |
| WO2008022963A2 (en) | 2006-08-24 | 2008-02-28 | Basf Plant Science Gmbh | Isolation and characterization of a novel pythium omega 3 desaturase with specificity to all omega 6 fatty acids longer than 18 carbon chains |
| EP2059588A4 (en) | 2006-08-29 | 2010-07-28 | Commw Scient Ind Res Org | FATTY ACID SYNTHESIS |
| CA2665336C (en) | 2006-10-06 | 2016-01-05 | Basf Plant Science Gmbh | Process for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| AU2008214568B2 (en) | 2007-02-16 | 2013-04-18 | Basf Plant Science Gmbh | Nucleic acid sequences for regulation of embryo-specific expression in monocotyledonous plants |
| WO2008151149A2 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-11 | Solazyme, Inc. | Production of oil in microorganisms |
| WO2009016208A2 (de) | 2007-07-31 | 2009-02-05 | Basf Plant Science Gmbh | Elongasen und verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren in transgenen organismen |
| US20130323801A1 (en) * | 2007-11-01 | 2013-12-05 | Wake Forest University School Of Medicine | Compositions, Methods, and Kits for Polyunsaturated Fatty Acids from Microalgae |
| US20100263088A1 (en) | 2007-12-14 | 2010-10-14 | Basf Plant Science Gmbh | Promoters From Brassica Napus For Seed Specific Gene Expression |
| EP2281051B1 (en) | 2008-04-30 | 2015-03-11 | Rothamsted Research Limited | Desaturase and method for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| EP2826864B1 (en) | 2008-07-01 | 2018-04-18 | BASF Plant Science GmbH | Promoters from Brassica napus for seed specific gene expression |
| DE112009002048T5 (de) | 2008-08-26 | 2012-01-26 | Basf Plant Science Gmbh | Nukleinsäure, die Desaturasen kodieren, und modifiziertes Planzenöl |
| JP6068800B2 (ja) | 2008-11-18 | 2017-01-25 | コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガナイゼーション | オメガ−３脂肪酸を産生するための酵素および方法 |
| US7883882B2 (en) | 2008-11-28 | 2011-02-08 | Solazyme, Inc. | Renewable chemical production from novel fatty acid feedstocks |
| PL2376638T3 (pl) | 2008-12-12 | 2014-01-31 | Basf Plant Science Gmbh | Desaturazy oraz sposób wytwarzania wielonienasyconych kwasów tłuszczowych w organizmach transgenicznych |
| AR074941A1 (es) | 2009-01-07 | 2011-02-23 | Bayer Cropscience Sa | Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion |
| CA2758824A1 (en) | 2009-04-17 | 2010-10-21 | Basf Plant Science Company Gmbh | Plant promoter operable in endosperm and uses thereof |
| CA2756146C (en) | 2009-04-22 | 2018-12-04 | Basf Plant Science Company Gmbh | Whole seed specific promoter |
| EP2821492A3 (en) | 2009-05-13 | 2015-04-08 | BASF Plant Science Company GmbH | Acyltransferases and uses thereof in fatty acid production |
| CA2766858A1 (en) | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expression cassettes for endosperm-specific expression in plants |
| US8188335B2 (en) | 2009-07-17 | 2012-05-29 | Abbott Laboratories | Δ9-elongase for production of polyunsaturated fatty acid-enriched oils |
| WO2011067712A1 (en) | 2009-12-03 | 2011-06-09 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expression cassettes for embryo-specific expression in plants |
| US20120311743A1 (en) | 2010-02-02 | 2012-12-06 | Bayer Cropscience Ag | Soybean transformation using hppd inhibitors as selection agents |
| SG10201504187YA (en) | 2010-05-28 | 2015-06-29 | Solazyme Inc | Tailored oils produced from recombinant heterotrophic microorganisms |
| NO2585603T3 (bg) | 2010-06-25 | 2018-05-19 | ||
| CN103282473A (zh) | 2010-11-03 | 2013-09-04 | 索拉兹米公司 | 具有降低倾点的微生物油、从其中产生的介电流体、以及相关方法 |
| MX351063B (es) | 2011-02-02 | 2017-09-29 | Terravia Holdings Inc | Aceites adaptados producidos a partir de microorganismos oleaginosos recombinantes. |
| ES2769448T3 (es) | 2012-04-12 | 2020-06-25 | Rothamsted Res Limited | Producción de ácidos grasos poliinsaturados omega-3 de cadena larga |
| US9719114B2 (en) | 2012-04-18 | 2017-08-01 | Terravia Holdings, Inc. | Tailored oils |
| JP6499577B2 (ja) | 2012-04-18 | 2019-04-10 | テラヴィア ホールディングス， インコーポレイテッド | 調整油 |
| CN104853596B (zh) | 2012-06-15 | 2018-10-09 | 联邦科学技术研究组织 | 在植物细胞中产生长链多不饱和脂肪酸 |
| GB201217524D0 (en) | 2012-10-01 | 2012-11-14 | Rothamsted Res Ltd | Recombinant organisms |
| EP2993993A2 (en) * | 2013-04-26 | 2016-03-16 | Solazyme, Inc. | Low polyunsaturated fatty acid oils and uses thereof |
| SG10201802834YA (en) | 2013-10-04 | 2018-05-30 | Terravia Holdings Inc | Tailored oils |
| KR102386838B1 (ko) | 2013-12-18 | 2022-04-15 | 커먼웰쓰 사이언티픽 앤 인더스트리알 리서치 오거니제이션 | 장쇄 다중불포화 지방산을 포함하는 지질 |
| CN105219789B (zh) | 2014-06-27 | 2023-04-07 | 联邦科学技术研究组织 | 包含二十二碳五烯酸的提取的植物脂质 |
| ES2764273T3 (es) | 2014-07-10 | 2020-06-02 | Corbion Biotech Inc | Nuevos genes de cetoacil ACP sintasa y uso de los mismos |
| KR102054762B1 (ko) | 2018-03-06 | 2020-01-22 | 대한민국(관리청: 특허청장, 승계청: 농촌진흥청장) | 갈고리 흰오징어 유래의 지방산 사슬연장효소 유전자 및 이의 용도 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4736866B1 (en) * | 1984-06-22 | 1988-04-12 | Transgenic non-human mammals | |
| NZ221259A (en) * | 1986-07-31 | 1990-05-28 | Calgene Inc | Seed specific transcriptional regulation |
| ZA888155B (en) * | 1987-11-04 | 1989-07-26 | Merrell Dow Pharma | Fluorinated arachidonic acid derivatives |
| BR9007159A (pt) * | 1989-02-24 | 1991-12-10 | Monsanto Co | Genes sinteticos de plantas e processo para a preparacao dos mesmos |
| CA2077896C (en) * | 1990-03-16 | 2008-02-19 | Gregory A. Thompson | Plant desaturases - compositions and uses |
-
1992
- 1992-10-07 PH PH45060A patent/PH31293A/en unknown
- 1992-10-09 IL IL10340792A patent/IL103407A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 MX MX9205820A patent/MX9205820A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 NZ NZ244685A patent/NZ244685A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-10-10 CN CN92113085A patent/CN1053469C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 CZ CZ94817A patent/CZ285471B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 BR BR9206613A patent/BR9206613A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-10-13 UA UA94005172A patent/UA43314C2/uk unknown
- 1992-10-13 HU HU9401007A patent/HU217328B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 DK DK92922205T patent/DK0666918T3/da active
- 1992-10-13 JP JP50724393A patent/JP3537434B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-13 DE DE69233459T patent/DE69233459T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 AU AU28812/92A patent/AU667848B2/en not_active Expired
- 1992-10-13 EP EP92922205A patent/EP0666918B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 KR KR1019940701152A patent/KR100316068B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 AT AT92922205T patent/ATE284961T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 WO PCT/US1992/008746 patent/WO1993006712A1/en active IP Right Grant
- 1992-10-13 CA CA002120629A patent/CA2120629C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 RO RO94-00585A patent/RO113256B1/ro unknown
- 1992-10-13 ES ES92922205T patent/ES2231767T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 RU RU94030816/13A patent/RU2152996C2/ru active
-
1994
- 1994-04-05 BG BG98695A patent/BG61791B1/bg unknown
- 1994-09-14 US US08/307,382 patent/US5552306A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-07 US US08/473,508 patent/US5689050A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-07 US US08/478,727 patent/US5663068A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-21 CN CN97104566A patent/CN1121499C/zh not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU667848B2 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase | |
| AU707061B2 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase | |
| US6355861B1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a Δ6-desaturase | |
| US10174297B2 (en) | Fatty acid desaturases from primula | |
| US6683232B1 (en) | Production of γ linolenic acid by a Δ6-desaturase | |
| US20070130654A1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase | |
| US20090077692A1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase |