WO2022224980A1

WO2022224980A1 - 抗ｃｄ２０抗体の放射性複合体、及び、放射性医薬

Info

Publication number: WO2022224980A1
Application number: PCT/JP2022/018246
Authority: WO
Inventors: 稔河谷; 文章竹中; 貴寿花田; 豪太殿谷; 拓也武田
Original assignee: 日本メジフィジックス株式会社
Priority date: 2021-04-20
Filing date: 2022-04-20
Publication date: 2022-10-27
Also published as: US20240207464A1; TW202306983A; JPWO2022224980A1; EP4327831A1

Abstract

本発明は、薬効を損なうことなく従来よりも安定性が高められた複合体を提供することを課題とする。本発明の複合体は、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との複合体であって、キレート剤に放射性金属核種がキレート化しており、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤とがリンカー（Ｌ）を介して連結しており、リンカー（Ｌ）はチオウレア結合を含まない。

Description

抗ＣＤ２０抗体の放射性複合体、及び、放射性医薬

　本発明は、抗ＣＤ２０抗体の放射性複合体、及び、放射性医薬に関する。

　ＣＤ２０はヒトＢリンパ細胞表面に発現している３３～３７ｋＤａの分子量を示す、膜貫通型リン酸化タンパク質で、末梢血、脾臓、扁桃、骨髄中の正常Ｂ細胞に加えて、多くの悪性腫瘍Ｂ細胞に発現している。

　抗ＣＤ２０抗体としてリツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）が知られている。リツキシマブは、ヒトＢ細胞であるＳＢ細胞株を免疫して得られるマウス抗体２Ｂ８から由来するヒト・マウスキメラ抗体からなるモノクローナル抗体（特許文献３）であり、その製剤は分子標的治療薬のひとつとして抗がん剤・免疫抑制剤などとして使用されている。

　リツキシマブはＡＤＣ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ（抗体薬物複合体））で使用されている抗体であることが知られている。リツキシマブを使用したＡＤＣとしては、抗体にリンカーを介して化学療法剤であるペイロード（薬物）を共有結合した薬剤がある。
　抗体医薬は、標的への選択性が高く比較的副作用が少ない一方で、薬効が不十分な場合があることがある。ペイロードの一種である化学療法剤は、強力な薬効を有するが、標的に対する選択性が低いため、がん細胞を死滅させるために必要な最小有効量が高く、一方で、毒性の観点から用量をあまり上げられないことから最大耐性用量が低く、治療用量域が狭いことが課題とされている。
　ＡＤＣによれば、化学療法剤をがん細胞に選択的に多く届けることができるようになり、その結果、より少量で効果を示すようになり、正常細胞へ到達する化学療法剤が低減することから最大耐性用量も高くなることで、治療用量域が広くなることが期待される。

　ＡＤＣの一つのアプローチとして放射性免疫複合体（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）がある。放射性免疫複合体においては、ペイロードの代わりに放射性核種が用いられる。

　特許文献１は抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣに関し、抗ＣＤ２０抗体がＲＩ標識されることが開示されている。特許文献２は抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）のＡＤＣに関し、抗体にリンカーを介してペイロードを共有結合した薬剤が記載され、リンカーとしてＤＯＴＡ－Ｂｎ－チオウレアリンカーが記載されている。

国際公開第２００４／０３２８２８号特表２００６－５１１５３２号公報米国特許第５７３６１３７号

　しかしながら、従来の抗ＣＤ２０抗体の放射性複合体は、安定性が低い等の課題があることが本発明者らの知見により明らかとなった。

　特許文献１や特許文献２には、チオウレア結合を形成した抗ＣＤ２０抗体の課題についての開示ないし示唆はない。

　本発明の一態様は、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との複合体であって、キレート剤に放射性金属核種がキレート化しており、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤とがリンカー（Ｌ）を介して連結しており、リンカー（Ｌ）はチオウレア結合を含まない、複合体である。

　本発明の他の態様は、上記の複合体を有効成分として含有する放射性医薬である。

　また、本発明の他の態様は、放射性金属核種がキレート化したキレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合体を有効成分として含有し、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との連結にチオウレア結合を含まず、室温で７日間保管した時の複合体の放射化学的純度が９０％以上である、放射性医薬である。

　なお、本発明でいう「連結」とは、特に断りがない場合、直接的または間接的に接続していることの両方を意味する。

　本発明によれば、薬効を損なうことなく従来よりも安定性が高められた抗ＣＤ２０抗体の放射性複合体が提供される。

リツキシマブの軽鎖のアミノ酸配列を示す。リツキシマブの重鎖のアミノ酸配列を示す。リツキシマブの重鎖のアミノ酸配列を示す。リツキシマブの重鎖のアミノ酸配列を示す。実施例１及び比較例１の記載に従って製造した放射性複合体の抗原結合活性を評価した結果を示したグラフである。縦軸は、使用した腫瘍切片に設定したＲＯＩ内のカウント値をＲＯＩの面積で除算した値を、標準線源のカウント値をＲＯＩの面積で除算した値で補正した値を示し、横軸は、評価に使用した腫瘍切片の細胞種を示す。グラフは、各サンプル内に設定したＲＯＩ（ｎ＝１０）の平均値±標準偏差を示す。放射性複合体（実施例１）群、放射性複合体（比較例１）群、抗体対照群及びＶｅｈｉｃｌｅ群の担癌マウスにおける経時的な腫瘍体積の変化を示したグラフである（ｎ＝６）。縦軸は、各薬剤投与時の腫瘍体積を１とした場合の相対値を表し、横軸は、各薬剤を投与してからの経過日数を示す。グラフは各群の腫瘍体積（相対値）の平均値±標準偏差を表し、「＊」は抗体対照群に対して有意差（ｐ＜０．０５）が認められた時点、「†」はＶｅｈｉｃｌｅ群に対して有意差（ｐ＜０．０５）が認められた時点を示す。実施例３及び比較例２の記載に従って製造した放射性複合体の抗原結合活性を評価した結果を示したグラフである。縦軸は、使用した腫瘍切片に設定したＲＯＩ内のカウント値をＲＯＩの面積で除算した値を、標準線源のカウント値をＲＯＩの面積で除算した値で補正した値を示し、横軸は、評価に使用した腫瘍切片の細胞種を示す。グラフは、各サンプル内に設定したＲＯＩ（ｎ＝１０）の平均値±標準偏差を示す。実施例３の記載に従って製造した放射性複合体を投与した担癌マウスにおける、血液に対する腫瘍の放射能集積の比率を示したグラフである（ｎ＝３）。縦軸は血液への放射能集積に対する腫瘍への放射能集積の比率を表し、横軸は評価に使用した担癌腫瘍を示す。グラフは血液に対する腫瘍の放射能集積の比率の平均値±標準偏差を表す。ＳＵ－ＤＨＬ－２細胞に対する^２２５Ａｃ錯体標識リツキシマブの殺細胞効果を示したグラフである。比較対象として未標識のリツキシマブ及びＰＯＬＩＶＹ（登録商標）を添加した。グラフは各群（ｎ＝４）の平均値±標準偏差を示す。

（１）放射性複合体
　本発明は、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との複合体であって、キレート剤に放射性金属核種がキレート化しており、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤とがリンカー（Ｌ）を介して連結しており、リンカー（Ｌ）はチオウレア結合を含まない、複合体（以下、本発明の放射性複合体とも称する）である。

（１－１）放射性金属核種
　本発明の放射性複合体に含まれる放射性金属核種は、α線を放出する放射性核種、β線を放出する放射性核種、ポジトロンを放出する放射性核種又はγ線を放出する放射性核種である。本発明の放射性複合体をがん治療に用いる場合は、α線を放出する放射性核種又はβ線を放出する放射性核種を用いることが好ましい。また、本発明の放射性複合体をがんの診断若しくは検出に用いる場合は、ポジトロンを放出する放射性核種又はγ線を放出する放射性核種を用いることが好ましい。α線を放出する放射性核種として、Ｂｉ－２１２、Ｂｉ－２１３、Ａｃ－２２５、Ｔｈ－２２７が例示される。また、β線を放出する放射性核種として、Ｃｕ－６４、Ｙ－９０又は、Ｌｕ－１７７が例示される。また、ポジトロンを放出する放射性核種として、Ｃｕ－６４、Ｇａ－６８、Ｙ－８６、Ｚｒ－８９が例示される。また、γ線を放出する放射性核種として、Ｔｃ－９９ｍ又はＩｎ－１１１が例示される。本発明の放射性複合体に含まれる放射性金属核種は、Ｇａ－６８、Ｚｒ－８９、Ｙ－９０、Ｉｎ－１１１、Ｌｕ－１７７又はＡｃ－２２５がより好ましく、Ｚｒ－８９、Ｙ－９０、Ｌｕ－１７７又はＡｃ－２２５であることが、さらに好ましい。

（１－２）抗体
　本発明の放射性複合体に含まれる抗体は、ＣＤ２０に特異的に結合する免疫グロブリン（以下、本発明で用いられる抗体とも称する）である。本発明で用いられる抗体は、ポリクローナル抗体であってもよいし、モノクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。抗体の由来は、特に限定されないが、例えば、非ヒト動物の抗体、非ヒト哺乳動物の抗体、およびヒト抗体が挙げられ、好ましくは、ヒト、ラット、マウス及びウサギの抗体を例示できる。抗体がヒト以外の種に由来する場合は、周知の技術を用いて、キメラ化又はヒト化することが好ましいが、本発明に用いられる抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であってもよい。また、本発明で用いられる抗体は、二重特異性抗体であってもよい。本発明で用いられる抗体は、例えば、ＩｇＧであり、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であり得る。

　本発明の放射性複合体に用いられる抗体は、リツキシマブ又はイブリツモマブであることがより好ましい。
　本明細書において、リツキシマブは、具体的には、
図１に記載の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１）
及び図２－１～図２－３に記載の重鎖アミノ酸配列（配列番号２）
を含むヒト化抗体である。
　リツキシマブは、ＣＤ２０陽性のＢ細胞性非ホジキンリンパ腫や免疫抑制状態下のＣＤ２０陽性のＢ細胞性リンパ増殖性疾患を適応症とする抗がん剤として、臨床にて用いられており、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ；登録商標）として入手可能である。

　イブリツモマブは、マウス型ＣＤ２０モノクローナル抗体であり、イットリウム（Ｙ－９０）で標識した薬剤がゼヴァリン（Ｚｅｖａｌｉｎ；登録商標）として入手可能である。

（１－３）キレート剤
　本発明においてキレート剤は、放射性金属核種が配位する部位を構造中に有するものであれば特に限定されない。キレート剤として、例えば、CB-TE2A（1,4,8,11-Tetraazabicyclo[6.6.2]hexadecane-4,11-diacetic acid）、CDTA（Cyclohexane-trans-1,2-diamine tetra-acetic acid）、CDTPA（4-cyano-4-[[(dodecylthio)thioxomethyl]thio]-pentanoicacid）、DOTA(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTMA((1R,4R,7R,10R)-α,α’,α”,α’”-tetramethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTAM（1,4,7,10-tetrakis(carbamoylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane）、DOTPA (1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetra propionic acid), 1,4,7,10-tetrakis(pyridin-2-ylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane (L^py), DOTA-GA(α-(2-Carboxyethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTP(((1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrayl)tetrakis(methylene))tetraphosphonic acid)、DOTMP(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis(methylenephosphonic acid))、DOTA-4AMP(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis(acetamidomethylenephosphonic acid)、D02P(Tetraazacyclododecane dimethanephosphonic acid)、Deferoxamine (DFO)、DTPA(Glycine, N,N-bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]-)、CHX-A”-DTPA(2,2'-((2-(((1S,2R)-2-(bis(carboxymethyl)amino)cyclohexyl)(carboxymethyl)amino)ethyl)azanediyl)diacetic acid)、DTPA-BMA(5,8-Bis(carboxymethyl)-11-[2-(methylamino)-2-oxoethyl]-3-oxo-2,5,8,11-tetraazatridecan-13-oic acid)、EDTA(2,2',2”,2’”-(ethane-1,2-diylbis(azanetriyl))tetraacetic acid)、NOTA(1,4,7-Triazacyclononane-1,4,7-triacetic acid)、NOTP(1,4,7-Triazacyclononane-1,4,7-triyltris(methylenephosphonic acid))、TETPA(1,4,8,11-tetraazacyclotetradecane-1,4,8,11-tetrapropionic acid)、TETA(1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-N,N',N”,N’”-tetraacetic acid)、TTHA(3,6,9,12-Tetrakis(carboxymethyl)-3,6,9,12-tetraazatetradecanedioic acid)、HEHA(1,2,7,10,13-hexaazacyclooctadecane-1,4,7,10,13,16-hexaacetic acid)、1,2-HOPO(N,N’,N”,N’”-tetra(1,2-dihydro-1-hydroxy-2-oxopyridine-6-carbonyl)-1,5,10,14-tetraazatetradecane)、PEPA(1,4,7,10,13-pentaazacyclopentadecane-N,N’,N”,N’”,N””-pentaacetic acid)、H4octapa(N,N’-bis(6-carboxy-2-pyridylmethyl)-ethylenediamine-N,N’-diacetic acid)、H2bispa2(6,6’-({9-hydroxy-1,5-bis(methoxycarbonyl)-2,4-di(pyridine-2-yl)-3,7-diazabicyclo[3.3.1]nonane-3,7-diyl}bis(-methylene))dipicolinic acid)、H2dedpa(1,2-[{6-(carboxy)-pyridin-2-yl}-methylamino]ethane)、H2macropa(6-(1,4,10,13-tetraoxa-7,16-diazacyclooctadecan-N,N’-methyl)picolinic acid)、H5decapa(N,N”-bis(6-carboxy-2-pyridylmethyl)-diethylenetriamine-N,N’,N”-triacetic acid)、H6phospa(N,N’-(methylenephosphonate)-N,N’-[6-(methoxycarbonyl)pyridin-2-yl]-methyl-1,2-diaminoethane)、HP-D03A(Hydroxypropyltetraazacyclododecanetriacetic acid)、porphyrinといったものが挙げられるが、下記式（Ａ）で表される化合物が好ましい。

（式（Ａ）中、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は、それぞれ独立して、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｐＣ_５Ｈ_５Ｎ、－（ＣＨ_２）_ｐＰＯ_３Ｈ_２、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＮＨ_２若しくは、－（ＣＨＣＯＯＨ）(ＣＨ_２)_ｐＣＯＯＨからなる基であり、Ｒ_１５が、水素原子であり、ｐが０以上３以下の整数である。）

　式（Ａ）で表される化合物としては、好ましくは１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、又はその誘導体に由来する構造を含む化合物であり、具体的には、構造中にDOTA(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTMA((1R,4R,7R,10R)- α,α’,α”,α’”-tetramethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTAM(1,4,7,10-tetrakis(carbamoylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane)、DOTPA (1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrapropionic acid), 1,4,7,10-tetrakis(pyridin-2-ylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane (L^py), DOTA-GA(α-(2-Carboxyethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTP(((1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrayl)tetrakis(methylene))tetraphosphonicacid)、DOTMP(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis(methylenephosphonic acid))、DOTA-4AMP(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis(acetamidomethylenephosphonic acid)、D02P(Tetraazacyclododecane dimethanephosphonic acid)から選択される一のキレート剤に由来する構造を含むことができ、より好ましくは以下の式（Ａ－１）～（Ａ－６）で表される化合物が挙げられる。本発明の放射性複合体に用いられるキレート剤は、ＤＯＴＡ－ＧＡ（式（Ａ－６）で表される化合物）がさらにより好ましい。用いられるキレート剤がＤＯＴＡ－ＧＡである場合、前記キレート剤は、立体異性体（Ｓ体、Ｒ体）であっても、ラセミ体であってもよい。Ｓ体とＲ体の立体異性体が任意の割合で混合されたものであってもよい。

　本発明で用いられるキレート剤は、リンカー（Ｌ）を介して抗ＣＤ２０抗体と連結している。好ましくは、本発明で用いられる抗ＣＤ２０抗体は、ペプチドで部位特異的に修飾されており、この場合は本発明で用いられるキレート剤は、リンカー（Ｌ）を介して、ペプチドと連結している。本発明の放射性複合体において、キレート剤とリンカー（Ｌ）とは共有結合により接続されていることが好ましい。したがって、前述したキレート剤は、本発明の放射性複合体においては、化合物内の一部の基がリンカー（Ｌ）と共有結合を形成する基に置換されていてもよい。例えば、本発明で用いられるキレート剤が、式（Ａ）で表される化合物である場合は、Ｒ_１２又はＲ_１５がリンカー（Ｌ）と共有結合を形成する基に置換されていてもよい。好ましくは、Ｒ_１２がリンカー（Ｌ）と共有結合を形成する基に置換されているときＲ_１５は水素原子であり、Ｒ_１２が－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｐＣ_５Ｈ_５Ｎ、－（ＣＨ_２）_ｐＰＯ_３Ｈ_２、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＮＨ_２又は、－（ＣＨＣＯＯＨ）(ＣＨ_２)_ｐＣＯＯＨからなる基であるとき、Ｒ_１５がリンカー（Ｌ）と共有結合を形成する基に置換されている。

　キレート剤とリンカー（Ｌ）との共有結合は、チオウレア結合を含まなければよく、炭素－炭素結合、アミド結合、エーテル結合、エステル結合などが挙げられる。

　キレート剤とリンカー（Ｌ）との接続は、例えば、下記式（Ａ－７）や（Ａ－８）のＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）基、又は、下記式（Ａ－９）の２，６－ジオキソテトラヒドロ－２Ｈ－ピラニル基と、リンカー（Ｌ）の第１級アミンとの反応により形成される。

（１－４）抗体修飾ペプチド
　本発明においてペプチドは、抗体を部位特異的に、好ましくはＦｃ領域を部位特異的に、より好ましくは抗体のＦｃ領域におけるリシン残基を部位特異的に修飾するものであれば、特に限定されない。これにより、抗体そのものの活性（抗原認識作用、中和作用、補体活性化作用及び／又はオプソニン作用）を維持することができる。

　本発明に用いられるペプチドは、鎖状ペプチドでも環状ペプチドであってもよいが、環状ペプチドが好ましい。より好ましくは、下記式（ｉ）で表される、１３以上１７以下のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（以下、「抗体修飾ペプチド」ともいう。）を含み、かつ架橋剤で修飾されている。なお、式（ｉ）において、アミノ酸配列の紙面左側がＮ末端側を示し、アミノ酸配列の紙面右側がＣ末端側を示すものとして説明する。

　(Xa)-Xaa₁-(Xb)-Xaa₂-(Xc)-Xaa₃-(Xd)・・・（ｉ）
　式（ｉ）中、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄは、それぞれ、連続するａ個のＸ、連続するｂ個のＸ、連続するｃ個のＸ、及び連続するｄ個のＸを表し、
Ｘは、側鎖にチオール基及びハロアセチル基のいずれも有しないアミノ酸残基であり、
ａ、ｂ、ｃ及びｄはそれぞれ独立に１以上５以下の整数で、かつａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ≦１４を満たし
Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、それぞれ独立に、
側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基、又は、側鎖にハロアセチル基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、ただし、Ｘａａ_１及びＸａａ_３のいずれか一方がチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であり、好ましくは、Ｘａａ_１及びＸａａ_３が連結することで、環構造が形成されており、
Ｘａａ_２は、リシン残基、アルギニン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸、好ましくはリシン残基であり、かつＸａａ_２が架橋剤で修飾されている。

　上記式（ｉ）におけるＸに含まれ得るアミノ酸残基としては、例えば、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、プロリン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、チロシン、メチオニン等のアミノ酸に由来するものが挙げられ、Ｘが複数存在する場合は、それらは同一の種類のアミノ酸からなるアミノ酸残基であってもよく、それぞれ異なる種類のアミノ酸からなるアミノ酸残基であってもよい。

　式（ｉ）中のａ、ｂ、ｃ及びｄは、上述した範囲の数であれば特に制限はないが、ペプチドと抗ＣＤ２０抗体との結合安定性の観点から、ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ≦１４を条件として、ａは好ましくは１以上３以下の整数、ｂは好ましくは１以上３以下の整数、ｃは好ましくは３以上５以下の整数、及びｄは好ましくは１以上３以下の整数である。

　Ｘａａ_１及びＸａａ_３の少なくとも一方は、側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であり、該アミノ酸はそれぞれ同一であってもよく、異なっていてもよい。側鎖にチオール基を有するアミノ酸としては、例えばシステイン、ホモシステインが挙げられる。このようなアミノ酸残基は、ジスルフィド結合によって結合しているか、又は以下の式（４）に示す構造を介して、スルフィド基が結合されていることが好ましい。式（４）中、波線部分はスルフィド基との結合部分を示す。

　Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、上述した組み合わせに代えて、Ｘａａ_１及びＸａａ_３のうち一方が側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であり、他方が側鎖にハロアセチル基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であってもよい。これらは、チオエーテル結合を介して結合している。ハロアセチル基は、その末端がヨウ素等のハロゲンで置換されており、他方の側鎖におけるチオール基との反応によってハロゲンが脱離して、チオエーテル結合が形成される。

　式（ｉ）で表される抗体修飾ペプチドの具体的なアミノ酸配列は、例えば国際公開第２０１６／１８６２０６号、国際公開第２０１７／２１７３４７号及び国際公開第２０１８／２３０２５７号に記載のペプチドが挙げられ、これらを用いることもできる。
　好ましくは、本発明で用いられる抗体修飾ペプチドは、下記の式（ｉ）’で表される、１３～１７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
(X_1-3)-C-(Xaa₃’)-(Xaa₄’)-H-(Xaa₁’)-G-(Xaa₂’)-L-V-W-C-(X_1-3) （ｉ）’

　式（ｉ）’中、Ｘの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、
Ｃはシステイン残基であり、
Ｈはヒスチジン残基であり、
Ｘａａ_１’はリシン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸であり、
Ｇはグリシン残基であり、
Ｘａａ_２’はグルタミン酸残基又はアスパラギン残基であり、
Ｌはロイシン残基であり、
Ｖはバリン残基であり、
Ｗはトリプトファン残基であり、
Ｘａａ_３’はアラニン残基、セリン残基又はトレオニン残基であり、かつ
Ｘａａ_４’はチロシン残基又はトリプトファン残基である。
　上記式（ｉ）’で、Ｎ末端又はＣ末端のＸ_１－３という表記は、システイン（Ｃ又はＣｙｓ）以外の独立的に任意のアミノ酸残基Ｘが１～３個連続していることを意味し、それを構成するアミノ酸残基は同じか又は異なる残基であるが、好ましくは３個すべてが同じ残基でない配列からなる。

　これらのうち、抗体修飾ペプチドのアミノ酸配列として、以下の配列（１）～（１４）のいずれか一つを有していることが好ましく、以下の配列（１）、（２）、（１３）又は（１４）を有していることが更に好ましい。以下のアミノ酸配列（１）～（１４）において、（Ｘａａ_２）はリシン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸、好ましくはリシン残基を示し、好ましくは（Ｘａａ_２）は架橋剤で修飾されており、（Ｘａａ_１）及び（Ｘａａ_３）はともにホモシステイン残基を示す。また、以下のアミノ酸配列（１）～（１４）中、（Ｘａａ_１）、（Ｘａａ_２）及び（Ｘａａ_３）以外のアミノ酸は一文字略号にて表記する。

　（１）DCAYH(Xaa₂)GELVWCT（配列番号３）
　（２）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH（配列番号４）
　（３）RCAYH(Xaa₂)GELVWCS（配列番号５）
　（４）GPRCAYH(Xaa₂)GELVWCSFH（配列番号６）
　（５）SPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH（配列番号７）
　（６）GDDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH（配列番号８）
　（７）GPSCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH（配列番号９）
　（８）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCSFH（配列番号１０）
　（９）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTHH（配列番号１１）
　（１０）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFY（配列番号１２）
　（１１）SPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFY（配列番号１３）
　（１２）SDDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFY（配列番号１４）
　（１３）RGNCAYH(Xaa₂)GQLVWCTYH（配列番号１５）
　（１４）G(Xaa₁)DCAYH(Xaa₂)GELVWCT(Xaa₃)H（配列番号１６）

　上記の式（ｉ）又は（ｉ）’で表されるペプチド、又は、配列（１）～（１４）を有するペプチドは、好ましくはＮ末端にリンカー（Ｌ）が導入され、Ｃ末端がアミド化される。また、これらのペプチドのＸａａ_２（又はＸａａ_２相当部分）が架橋剤で修飾されており、これにより、架橋剤を介してペプチドが抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域と共有結合することができる。式（ｉ）’においてＸａａ_２相当部分はＸａａ_１’である。

　架橋剤は、当業者であれば適宜選択することが可能であり、所望のアミノ酸（例えば、リシン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸、及びアルギニン残基等）と結合可能な部位を少なくとも２箇所有する化合物とすることができる。その例として、限定するものではないが、ＤＳＧ（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｇｌｕｔａｒａｔｅ、ジスクシンイミジルグルタレート）、ＤＳＳ（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｓｕｂｅｒａｔｅ、ジスクシンイミジルスベレート）等のスクシンイミジル基を好ましくは２以上含む架橋剤、ＤＭＡ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、アジプイミド酸ジメチル二塩酸塩）、ＤＭＰ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｐｉｍｅｌｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、ピメルイミド酸ジメチル二塩酸塩）、及びＤＭＳ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｓｕｂｅｒｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、スベルイミド酸ジメチル二塩酸塩）等のイミド酸部分を好ましくは２以上含む架橋剤、並びにＤＴＢＰ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　３，３’－ｄｉｔｈｉｏｂｉｓｐｒｏｐｉｏｎｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、３，３’－ジチオビスプロピオンイミド酸ジメチル二塩酸塩）及びＤＳＰ（ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ジチオビススクシンイミジルプロピオン酸））等のＳＳ結合を有する架橋剤、ＳＢＡＰ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　３－（ｂｒｏｍｏａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）が挙げられる。ＤＳＳ又はＤＳＧ等のスクシンイミジル基を含む架橋剤は、ペプチドのＮ末端に存在する一級アミンと反応するため、Ｎ末端をブロッキングした上でＤＳＳ又はＤＳＧと反応させることで、Ｘａａ_２のアミノ基のみをＤＳＳ又はＤＳＧで特異的に修飾することができる。例えば、抗体修飾ペプチドのＮ末端にあらかじめリンカー（Ｌ）を導入させた後にＤＳＳ又はＤＳＧと反応させてもよい。ＤＳＳ又はＤＳＧのスクシンイミジル基が、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）におけるＥｕ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従うＬｙｓ２５０残基又はＬｙｓ２５２残基と反応することで、抗ＣＤ２０抗体がペプチドで部位特異的に修飾される。これらのＬｙｓ残基は、ヒトＩｇＧにおけるＦｃ領域に存在し、リツキシマブ以外の抗ＣＤ２０抗体であっても当業者であれば抗体のアミノ酸配列をアラインメントし、相当するＬｙｓ残基を特定することができる。

（１－５）リンカー（Ｌ）
　リンカー（Ｌ）は、本発明の放射性複合体において、キレート剤とペプチドとを連結できるものであれば特に限定されない。本発明で用いられるリンカー（Ｌ）は、チオウレア結合を含むものでなければ特に限定されず、置換又は無置換のアルキル基、置換又は無置換のヘテロアルキル基、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基、ペプチド、糖鎖、ジスルフィド基、アミド基、及びこれらの組み合わせなどが挙げられる。
　本明細書においてリンカー（Ｌ）とは、ペプチドで修飾された抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との接続に用いられるリンカーの総称であり、抗体修飾リンカー（Ｌ_１）及びキレートリンカー（Ｌ_２）を含む用語である。抗体修飾リンカー（Ｌ_１）は、詳細は後述するが、（１－４）で説明したペプチドのＮ末端側に導入されるものであり、キレートリンカー（Ｌ_２）も、詳細は後述するが、（１－３）で説明したキレート剤の官能基に導入されるものである。

　本発明で用いられるリンカー（Ｌ）は、クリック反応で形成された結合部位を含んでいてもよく、好ましくは、抗体修飾リンカー（Ｌ_１）とキレートリンカー（Ｌ_２）とがクリック反応により結合している。本発明において、クリック反応で形成された結合部位と、キレート剤との間に、チオウレア結合を含まないことが好ましい。言い換えると、キレートリンカー（Ｌ_２）がチオウレア結合を含まないことが好ましい。ここで、クリック反応で形成された結合部位は、好ましくは、下記式（１０ａ）又は（１０ｂ）で表されるトリアゾール骨格含有構造又は下記式（１０ｃ）で表されるピリダジン骨格含有構造が考えられる。式（１０ａ）と式（１０ｂ）は異性体の関係にあるため任意の割合で含まれていてもよい。

　式（１０ａ）及び式（１０ｂ）中、Ｒ_１Ａはキレート剤との連結部位を示し、Ｒ_２Ａは抗体修飾ペプチドとの連結部位を示す。式（１０ｃ）中、Ｒ_３Ａ及びＲ_４Ａのうち一方は水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示し、他方はキレート剤との連結部位を示し、Ｒ_５Ａは抗体修飾ペプチドとの連結部位を示す。式（１０ａ）、式（１０ｂ）及び式（１０ｃ）において、抗体修飾ペプチドとの連結部位は、抗体修飾リンカー（Ｌ_１）を介してペプチドが連結しており、キレート剤との連結部位は、キレートリンカー（Ｌ_２）を介してキレート剤が連結している。

　本発明の放射性複合体は、ペプチドで部位特異的に抗体が修飾され、ペプチドとキレート剤とがリンカー（Ｌ）を介して連結するため、抗ＣＤ２０抗体１分子に対して1分子又は２分子のキレート剤を複合化させたものになる。

（１－６）複合体の製造方法
　本発明の放射性複合体は、キレート剤と抗ＣＤ２０抗体とをコンジュゲーションするコンジュゲーション工程と、放射性金属核種とキレート剤との錯体を形成する錯体形成工程との２つの工程から製造することができる。コンジュゲーション工程は、錯体形成工程の前であってもよいし錯体形成工程の後であってもよい。

　コンジュゲーション工程においては、前述した抗体修飾ペプチドを有するキレート剤またはリンカー（Ｌ）を、抗体のＦｃ領域に部位特異的に修飾する。

　錯体形成工程では、キレート剤に放射性金属核種をキレート（錯体形成）させる。ここで使用する放射性金属核種は、錯体形成効率を高める観点から、電離可能な態様で用いることが好ましく、イオンの態様で用いることが更に好ましい。錯体形成工程は、放射性金属核種との錯体形成が可能であれば、キレート剤への放射性金属核種の添加順序は問わない。例えば、水を主体とする溶媒に、放射性金属イオンが溶解した溶液を放射性核種として用いることができる。
　錯体形成後、ろ過フィルター、メンブランフィルター、種々の充填剤を充填したカラム、クロマトグラフィー等を用いて、得られた錯体を精製してもよい。

　本発明の放射性複合体の製造方法は、錯体形成工程の後にコンジュゲーション工程が実行されることが好ましい。
　より好ましい態様において、錯体形成工程（Ａ）では、放射性金属核種と、クリック反応可能な第１原子団を抗体と複合化を可能とするための置換基として有するキレート剤と、の間で錯体を形成する。次いで、コンジュゲーション工程（Ｂ）では、前述した抗体修飾ペプチドとクリック反応可能な第２原子団とを有する抗体修飾リンカー（Ｌ_１）を用いて、Ｆｃ領域を部位特異的に修飾されたペプチド修飾抗体と、工程（Ａ）で得られた錯体形成されたキレート剤との間でクリック反応を実行し、本発明の放射性複合体を得る。
　以下工程（Ａ）及び（Ｂ）について、詳述する。

　クリック反応可能な第１原子団と第２原子団の組み合わせとしては、クリック反応の種類に応じて適切なものが選択され、例えば、アルキンとアジドとの組み合わせ、１，２，４，５－テトラジンとアルケンとの組み合わせ等が挙げられる。これらの原子団は、第１原子団が上記原子団の組み合わせのうち一つを有し、第２原子団が上記原子団の組み合わせのうち第１原子団と異なる一つとなる原子団を有していればよい。キレート剤及び抗体の安定性と、これらの結合効率の向上とを両立する観点から、キレートリンカー（Ｌ_２）がアルキンであり且つ抗体修飾リンカー（Ｌ_１）がアジドであるか、又はキレートリンカー（Ｌ_２）が１，２，４，５－テトラジンであり且つ抗体修飾リンカー（Ｌ_１）がアルケンであることが好ましい。このような原子団の組み合わせによるクリック反応の具体例として、ヒュスゲン環化付加反応、あるいは逆電子要請型ディールスアルダー反応等が挙げられる。

　クリック反応可能な原子団の組み合わせの具体例としては、以下の式に示すように、第１原子団のアルキンとしてジベンジルシクロオクチン（ＤＢＣＯ）を含む原子団（式（１ａ））と、第２原子団のアジドとしてアジド基を含む原子団（式（２ａ））との組み合わせ、あるいは、第１原子団として１，２，４，５－テトラジンを含む原子団（式（１ｂ））と、第２原子団のアルケンとしてｔｒａｎｓ－シクロオクテン（ＴＣＯ）を含む原子団（式（２ｂ））との組み合わせが挙げられる。好ましくは式（１ａ）と式（２ａ）との組合せである。

　式（１ａ）中、Ｒ_１は、キレート剤との連結部位を示し、式（２ａ）中、Ｒ_２は、抗体修飾ペプチドとの連結部位を示す。

　式（１ｂ）中、Ｒ_３及びＲ_４のうち一方がキレート剤との連結部位または抗体修飾ペプチドとの連結部位を示し、他方が水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示す。Ｒ_５は、式（１ｂ）の原子団がキレート剤と連結しているとき、抗体修飾ペプチドとの連結部位であり、式（１ｂ）の原子団が抗体修飾ペプチドと連結しているときキレート剤との連結部位を示す。

　第１原子団のアルキンとして、上記式（１ａ）で表されるジベンジルシクロオクチン（ＤＢＣＯ）を含む原子団を用いる場合は、市販されている種々のＤＢＣＯ試薬が挙げられる。具体的には、例えば、DBCO-C6-Acid、Dibenzylcyclooctyne-Amine、Dibenzylcyclooctyne Maleimide、DBCO-PEG acid、DBCO-PEG-Alcohol、DBCO-PEG-amine、DBCO-PEG-NH-Boc、Carboxyrhodamine-PEG-DBCO、Sulforhodamine-PEG-DBCO、TAMRA-PEG-DBCO、DBCO-PEG-Biotin、DBCO-PEG-DBCO、DBCO-PEG-Maleimide、TCO-PEG-DBCO、DBCO-mPEGなどが選択でき
るが、好ましくはDibenzylcyclooctyne Maleimideを用いる。

　錯体形成工程（Ａ）では、より好ましくは、以下の式（ｉｉ）で表される構造を有する化合物を用いる。
　Ａ－Ｂ－Ｃ　・・・（ｉｉ）
　式（ｉｉ）中、Ａは、前述したキレート剤であり、ＢとＣとの総称がキレートリンカー（Ｌ_２）である。

　式（ｉｉ）中、Ｂは以下の式（ｉｉｂ）で表される。

　式（ｉｉｂ）中、Ｌａ及びＬｂは、独立して、少なくともアミド結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｔは０以上３０以下の整数であり、ｓは０又は１であり、＊はＡとの結合部位であり、＊＊はＣとの結合部位である。

　式（ｉｉ）中、Ｃは、以下の式（ｉｉｃ）で表されるアルキン誘導体又は式（ｉｉｄ）で表されるテトラジン誘導体のいずれかである。

　式（ｉｉｃ）中、ＸはＣＨＲｋ－＊＊又はＮ－＊＊であり、ＹはＣＨＲｋ又はＣ＝Ｏであり、Ｒｋは独立して水素原子であるか、炭素数１以上５以下のアルキル基であって、ＸがＣＨＲｋ－＊＊で、ＹがＣＨＲｋである場合は、Ｒｋ部分が一緒になってシクロアルキル基を形成してもよく、Ｒｆ、Ｒｇ、Ｒｈ及びＲｉは、独立して、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１以上５以下のアルキル基であり、ＲｆとＲｇが一緒になって、若しくはＲｈとＲｉが一緒になって炭化水素環を形成してもよく、＊＊はＢとの結合部位を示し、式（ｉｉｄ）中、＊＊はＢとの結合部位を示し、Ｒｊは水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示す。

　工程（Ａ）で使用されるキレート剤として、上記式（Ａ）中、Ｒ_１１乃至Ｒ_１４が、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨであり、ｐが１であり、Ｒ_１５がＢとの結合部位であるＤＯＴＡ誘導体；又はＲ_１１乃至Ｒ_１４が、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨであり、ｐが１であり、Ｒ_１２がＢとの結合部位（＊）であり、Ｒ_１５が水素原子であるＤＯ３Ａ誘導体若しくはＤＯＴＡＧＡ誘導体のいずれかがより好ましい。

　式(ｉｉ)中、Ａが上記ＤＯ３Ａである場合、Ｂは、Ｌａがアミド結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｓが０又は１であり、ｓが１である場合は、ｔが０以上３０以下の整数であり、Ｌｂがアミド結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、Ｃは、式（ｉｉｃ）で表されるアルキン誘導体であり、式（ｉｉｃ）中、ＸがＮ－＊＊であり、ＹがＣＨＲｋであり、Ｒｋが水素原子であり、ＲｆとＲｇが一緒になってベンゼン環を形成しており、ＲｈとＲｉが一緒になってベンゼン環を形成しており、＊＊はＢとの結合部位である、ＤＯ３Ａ－ＰＥＧｔ－ＤＢＣＯが好ましい。

　式（ｉｉ）中、Ａが上記ＤＯＴＡＧＡ誘導体である場合、Ｂは、Ｌａがアミド結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｓが０又は１であり、ｓが１である場合は、ｔが０以上３０以下の整数であり、Ｌｂがアミド結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、Ｃは、式（ｉｉｃ）で表されるアルキン誘導体であり、式（ｉｉｃ）中、ＸがＮ－＊＊であり、ＹがＣＨＲｋであり、Ｒｋが水素原子であり、ＲｆとＲｇが一緒になってベンゼン環を形成しており、ＲｈとＲｉが一緒になってベンゼン環を形成しており、＊＊はＢとの結合部位である、ＤＯＴＡＧＡ－ＰＥＧｔ－ＤＢＣＯ誘導体が好ましい。より好ましくは、下記のＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯである。

　キレート剤と放射性金属核種とのモル比率は、キレート部／放射性金属核種として、下限が、１０／１以上が好ましく、１００／１以上がより好ましく、５００／１以上がさらに好ましく、上限が、１００００／１以下が好ましく、８０００／１以下がより好ましく、７０００／１以下がさらに好ましく、例えば、１００／１以上７０００／１以下の範囲が好ましく、より好ましくは５００／１以上７０００／１以下の範囲である。

　錯体形成反応は、溶媒下に行うことが好ましい。溶媒としては、例えば水、生理食塩水、又は酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液（Ｔｒｉｓ緩衝液）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液（ＨＥＰＥＳ緩衝液）、若しくはテトラメチルアンモニウム酢酸緩衝液等の緩衝液等を用いることができる。

　溶媒の液量は特に限定されないが、製造工程における実用性の観点から、工程（Ａ）の開始時において、下限は、０．０１ｍＬ以上、好ましくは０．１ｍＬ以上、より好ましくは１．０ｍＬ以上、さらに好ましくは１０ｍＬ以上、よりさらに好ましくは１００ｍＬ以上であり、上限は、好ましくは１０００ｍＬ以下、より好ましくは１００ｍＬ以下、さらに好ましくは１０ｍＬ以下、よりさらに好ましくは１．０ｍＬ以下であり、例えば、０．０１ｍＬ以上１００ｍＬ以下の範囲である。

　錯体形成反応の反応液中のキレート剤の濃度は、目的とするキレート剤の収率の観点から、それぞれ独立して、工程（Ａ）の開始時において、下限は、好ましくは０．００１μｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは０．０１μｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．１μｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは１μｍｏｌ／Ｌ以上であり、上限は、好ましくは１０００μｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは１００μｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以下であり、例えば、１μｍｏｌ／Ｌ以上１００μｍｏｌ／Ｌ以下の範囲が挙げられる。

　錯体形成反応の温度としては、例えば室温（２５℃）であってもよく、加熱条件下であってもよいが、キレート剤の分解抑制と錯体の形成効率向上とを両立する観点から、下限は、好ましくは２０℃以上、より好ましくは３０℃以上、さらに好ましくは３５℃以上、よりさらに好ましくは３７℃以上、特に好ましくは４５℃以上であり、上限は、好ましくは１５０℃以下、より好ましくは１２０℃以下、さらに好ましくは１００℃以下、よりさらに好ましくは９０℃以下であり、例えば、３０℃以上１００℃以下の範囲が好ましく、より好ましくは３５℃以上９０℃以下の範囲である。

　工程（Ｂ）で使用される抗体は、前述した抗体修飾ペプチドと、クリック反応可能な第２の原子団とを有する抗体修飾リンカー（Ｌ_２）を用いて、上記「（１－２）抗体」の項で詳述した抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域（定常領域）が部位特異的に修飾されたペプチド修飾抗体である。

　抗体修飾ペプチドは、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸を問わないアミノ酸を組み合わせて用いて、例えば液相合成法、固相合成法、自動ペプチド合成法、遺伝子組み換え法及びファージディスプレイ法等のペプチド合成法に供することよって製造することができる。ペプチドの合成にあたり、必要に応じて、用いられるアミノ酸の官能基の保護を行ってもよい。これらは、例えば、国際公開第２０１７／２１７３４７号及び国際公開第２０１８／２３０２５７号に記載の方法に準じて行うことができる。

　抗体修飾リンカー（Ｌ_２）は、抗体修飾ペプチドと、以下の式（Ｓ１）で表されるリンカー（Ｌ_２）とが結合したものであってもよい。
　　＊－（（Ｌ_i）_ｍ－Ｚ）_ｋ－Ｌ_ii－ＡＧ２　・・・（Ｓ１）
（式中、＊は、ペプチドのＮ末端又はＣ末端との結合部位を示し、
　Ｌ_iは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカー部であり、
　ｍは、１以上５０以下の整数であり、
　Ｚは、（Ｌ_i）_ｍとＬ_iiとを結合する第２リンカー部であり、
　ｋは、０又は１であり、
　Ｌ_iiは、第２のＰＥＧリンカー部であり、
　ＡＧ２は第２原子団である。）

　前記式（Ｓ１）において、Ｚの構造は、（Ｌ_i）_ｍとＬ_iiとを互いに結合するリンカー構造であれば特に限定されないが、例えば１以上５以下のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むことができる。この場合、Ｚに含まれるアミノ酸配列は、システイン残基を含むことが好ましく、システイン残基のチオール基とマレイミド基との結合により形成されたチオエーテル基を介してＬ２と結合していることがより好ましい。

　本発明において、Ｌ_iiを構成するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカー部は、以下の式（Ｐ２）に示す構造を有していることが好ましい。式（Ｐ２）中、ｎは整数であり、好ましくは１以上５０以下、より好ましくは１以上２０以下、さらに好ましくは２以上１０以下、一層好ましくは２以上６以下である。

　ＰＥＧリンカー部の構造の一端は、市販されているＰＥＧ化試薬に由来する構造又はＰＥＧ化する際に通常用いられる試薬に由来する構造によって修飾されていてもよく、特に限定されないが、例えばジグリコール酸又はその誘導体、マレイミド又はその誘導体に由来する構造が例示される。

　抗体修飾リンカー（Ｌ_２）への前記第２原子団への導入方法は、上述の方法によって所望のアミノ酸配列を有する抗体修飾ペプチドを得た後、該ペプチドを、溶解補助剤及び還元剤、並びに必要に応じて酸を加えた溶液に溶解し、該溶液に第２原子団として、アジド基又はｔｒａｎｓ－シクロオクテン（ＴＣＯ）を含む原子団の有機溶媒溶液を添加し、室温で攪拌することにより導入する方法が挙げられる。

　第２原子団としてアジド基を含む原子団を導入する場合には、市販のアジド基導入試薬を用いて、常法に従い、ペプチドのＮ末端又はＣ末端に直接アジド基を導入するか、又は上述したリンカー構造を介してアジド基を含む原子団を導入することができる。用いられるアジド基導入試薬としては例えば、シリルアジド、リン酸アジド、アルキルアンモニウムアジド、無機アジド、スルホニルアジド、又はＰＥＧアジド等が挙げられる。

　また、第２原子団としてＴＣＯを含む原子団を導入する場合には、ＴＣＯを含む市販のクリックケミストリー用試薬を用いて、常法に従い、ペプチドのＮ末端又はＣ末端に直接ＴＣＯを導入するか、又は上述したリンカー構造を介してＴＣＯを含む原子団を導入することができる。

　抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体とを結合させて、ペプチド修飾抗体を得る方法は、国際公開第２０１７／２１７３４７号の記載に準じて、例えば、上述した抗体修飾ペプチドと、抗ＣＤ２０抗体と、架橋剤と、必要に応じて触媒とを、適切な緩衝液中に分散させて行うことができる。ここで、架橋剤は上述のものを用いることができる。また、抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体とを結合させる際に、必要に応じて抗ＣＤ２０抗体を含む溶液を、限外ろ過フィルター等で処理して緩衝液に分散させる緩衝液置換を１回又は２回以上実施してから、抗体修飾ペプチドと結合させてもよい。

　一態様において、本開示は、架橋剤で修飾されている抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体を混合する工程を含む、抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体の複合体を生産する方法に関する。本工程により、架橋剤で修飾されている抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体の間で架橋反応が生じ得る。架橋反応は、例えば、リツキシマブでは、抗体修飾ペプチドの上記Ｘａａ_２のアミノ酸残基と、ヒトＩｇＧ　ＦｃにおけるＥｕ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従うＬｙｓ２５０残基又はＬｙｓ２５２残基、好ましくはＬｙｓ２５２残基との間で部位特異的に生じ得る。

　該混合工程の条件は、抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体の間で架橋反応が生じる条件で行うものであれば特に限定しない。例えば、抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体を、適当なバッファー中において、室温（例えば約１５℃～３０℃）で混合することにより反応を行うことができる。該混合工程は、必要に応じて架橋反応を促進する触媒を適量加えて行ってもよい。

　一例として、少なくとも水を含む溶媒を加えて、抗ＣＤ２０抗体を溶解する。この溶媒は、水以外には、例えば、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、生理食塩水、又は、酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、テトラメチルアンモニウム酢酸緩衝液若しくはヒスチジン緩衝液等の緩衝液等が挙げられる。緩衝液を用いる場合、抗体の安定性の観点から、２５℃におけるｐＨを好ましくは４．０以上１０．０以下、より好ましくは５．５以上８．５以下とする。抗体の濃度は、架橋反応の開始時において、好ましくは、下限を１．０μｍｏｌ／Ｌ以上、上限を１０００μｍｏｌ／Ｌ以下とし、上限についてより好ましくは５００μｍｏｌ／Ｌ以下とすることが好ましい。

　次いで、架橋剤により修飾された抗体修飾ペプチドと必要に応じて触媒を加え、１０℃以上３０℃以下で分散させて行うことができる。
　該混合工程における抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体の混合比率は、特に限定しない。抗体修飾ペプチドと抗ＥＧＦＲ抗体のモル比率は、例えば１：１～２０：１、好ましくは２：１～２０：１又は５：１～１０：１とすることができる。

　ある好ましい態様では、上記混合工程においては、抗ＣＤ２０抗体に対して抗体修飾ペプチド（モル比）は、０．５～２．２、好ましくは０．８～１．８で混合することができる。このようにすることで、抗ＣＤ２０抗体１分子に対して抗体修飾ペプチド１分子が結合した抗体（以下、「一価抗体」という）を効率よく得ることができる。

　該混合工程における混合時間（反応時間）は、抗体修飾ペプチドと抗ＣＤ２０抗体の間で架橋反応が生じる限り限定するものではないが、例えば、１分～５時間、好ましくは１０分～２時間とすることができる。

　以上の工程を経て得られるペプチド修飾抗体は、抗ＣＤ２０抗体１分子に対して抗体修飾ペプチド1分子が結合した抗体（以下、「一価抗体」という）と、抗ＣＤ２０抗体1分子に対して抗体修飾ペプチド２分子が結合した抗体（以下、「二価抗体」という）とを任意の割合で含有する混合物であるが、これをそのままで以後の工程に供してもよく、ろ過フィルター、メンブランフィルター、種々の充填剤を充填したカラム、各種クロマトグラフィー等の方法で、未修飾抗体と、一価抗体と、二価抗体と、を分離精製したあとでいずれかの価数の抗体のみを以後の工程に供してもよい。精製の結果、未修飾抗体と他の価数の抗体との分離ができない場合には、これらを含有する混合物として以降の工程に供してもよい。
　未修飾抗体と、一価抗体と、二価抗体とを分離精製する場合は、上記のいずれの精製方法で分離精製してもよいが、種々の充填剤を充填したカラムを用いることができ、例えば、プロテインＡ、プロテインＧ又は上述の抗体修飾ペプチド等のタンパク質が担体に結合した充填剤が充填されたカラムを用いることができる。このようなカラムに充填される充填剤の担体の形状としては、ゲル（例えばカラム用ゲル）、粒子、ビーズ、ナノ粒子、微粒子及びマクロビーズなどの形状が挙げられ、担体の材質としては、磁性物質、ラテックス、アガロース、ガラス、セルロース、セファロース、ニトロセルロース、ポリスチレン、その他の高分子材料が挙げられる。具体的には上述の抗体修飾ペプチドを、カラム用ゲルに結合させたＩｇＧ－ＢＰカラムが例示できる（国際公開第２０２１／０８０００８号）。

　このＩｇＧ－ＢＰカラムを用いて、抗体修飾ペプチドに対するそれぞれの相互作用の違いを利用して、未修飾抗体および一価抗体を相対的に多く含む第一の抗体組成物と、二価抗体を相対的に多く含む第二の抗体組成物とをそれぞれ分離精製することができる。分離精製した第一の抗体組成物又は第二の抗体組成物は、そのまま以降の工程（Ｂ）におけるクリック反応に用いてもよく、含有するペプチド修飾抗体のタンパク質濃度を調節してから工程（Ｂ）におけるクリック反応に用いてもよい。

　工程（Ｂ）におけるクリック反応は、キレート剤が有するクリック反応可能な第一原子団と、ペプチド修飾抗体が有するクリック反応可能な第二原子団との間で実行されるものである。かかるクリック反応によりキレート剤と抗体とを連結する結合基（抗体との複合化を可能とする置換基）が形成される。

　ペプチド修飾抗体と工程（Ａ）で得られた錯体とがクリック反応可能であれば、これらの添加順序は問わず、例えば、溶媒を収容した反応容器に、該錯体及び該ペプチド修飾抗体の一方を添加し、次いで他方を添加して反応させてもよく、該キレート剤及び該抗体の一方を溶媒に分散した分散液に他方を添加して反応させてもよい。あるいは、溶媒を収容した反応容器に、これらを同時に添加して反応させてもよい。

　工程（Ｂ）のクリック反応に用いられる溶媒としては、水を含む溶媒を用いることができ、例えば、水、生理食塩水、又は酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、若しくはテトラメチルアンモニウム酢酸緩衝液等の緩衝液等を用いることができる。緩衝液を用いる場合、錯体及び抗体の安定性と、これらの結合効率とを両立する観点から、２５℃におけるｐＨを好ましくは４．０以上１０．０以下、更に好ましくは５．５以上８．５以下とする。

　反応液量は、特に限定されないが、製造工程における実用性の観点から、工程（Ｂ）の開始時において、下限は、０．００１ｍＬ以上が好ましく、０．０１ｍＬ以上がより好ましく、０．１ｍＬ以上がさらに好ましく、１ｍＬ以上がよりさらに好ましく、上限は、１０００ｍＬ以下が好ましく、１００ｍＬ以下がより好ましく、１０ｍＬ以下がさらに好ましく、１ｍＬ以下がよりさらに好ましく、例えば０．００１ｍＬ以上１０００ｍＬ以下の範囲が好ましく、０．１ｍＬ以上１０ｍＬ以下の範囲がより好ましい。

　また、キレート剤及び抗体の反応液中の濃度は、それぞれ独立して、工程（Ｂ）の開始時において、下限として、０．００１μｍｏｌ／Ｌ以上が好ましく、０．０１μｍｏｌ／Ｌ以上がより好ましく、０．１μｍｏｌ／Ｌ以上がさらに好ましく、１．０μｍｏｌ／Ｌ以上がよりさらに好ましく、上限として、１０００μｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、１００μｍｏｌ／Ｌ以下がより好ましく、例えば、０．１μｍｏｌ／Ｌ以上１０００μｍｏｌ／Ｌ以下の範囲が好ましく、１μｍｏｌ／Ｌ以上１００μｍｏｌ／Ｌ以下の範囲であることが、目的とする複合体の収量の観点からより好ましい。

　抗体の意図しない変性を防ぎつつ、反応効率を高める観点から、工程（Ｂ）におけるクリック反応は、反応温度の上限は、５０℃以下が好ましく、４０℃以下がより好ましい。また、反応温度の下限は、反応が進行する温度であれば特に制限はないが、１５℃以上が好ましい。クリック反応の反応時間は、上述の反応温度であることを条件として、好ましくは５分以上、より好ましくは１０分以上であり、２４時間以下が好ましく、より好ましくは２０時間以下であり、例えば、５分以上２４時間以下の範囲が好ましく、より好ましくは１０分以上２０時間以下の範囲である。

　得られた複合体は、これをそのままで用いてもよく、あるいは、ろ過フィルター、メンブランフィルター、種々の充填剤を充填したカラム、クロマトグラフィー等を用いて精製してもよい。

　工程（Ａ）及び（Ｂ）によって製造される複合体は、抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域のリシン残基がキレート剤により特異的に修飾されたものである。この複合体は、該抗体１分子に対し、前記キレート剤を１分子又は２分子備える。キレート剤は、リンカー（Ｌ）を介して、本発明の抗体のＦｃ領域を部位特異的に修飾している。該リンカー（Ｌ）は、キレート剤に接続するキレートリンカー（Ｌ_２）、該リンカー（Ｌ_２）に接続する第１原子団、第１原子団とクリック反応し得る第２原子団、第２原子団に接続する抗体修飾リンカー（Ｌ_１）（上記式（ｉ）で表される抗体修飾ペプチドを含む）で構成される。従って、該リンカー（Ｌ）は、第１原子団と第２原子団とに由来する化学構造を有する。このような化学構造としては、前述の式（１０ａ）又は（１０ｂ）で表されるトリアゾール骨格含有構造又は前述の式（１０ｃ）で表されるピリダジン骨格含有構造が考えられる。式（１０ａ）と式（１０ｂ）は異性体の関係にあるため任意の割合で含まれていてもよい。

（１－７）放射性医薬（放射性医薬（１））
　放射性医薬とは、本発明の放射性複合体を含み、対象の生体内への投与に適した形態となっている組成物を指す。放射性医薬は、例えば上述の（１－６）に示す方法で製造した放射性複合体をそのままで、又はこれを精製したあとで、水を主体とし、且つ生体と等張の溶媒に溶解させて製造することができる。この場合、放射性医薬は水溶液の形態であることが好ましく、必要に応じて、薬学的に許容される他の成分を含んでいてもよい。放射性医薬は、その有効量が、経口的に、又は静脈内、皮下、腹腔内若しくは筋肉内等の非経口的に生体に投与され、がんの治療、がんの診断、あるいは病巣の検出等に用いられる。
　ここで投与対象としてはヒト、またはマウス、ラット、サル、モルモット、チンパンジー、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシもしくはウマなどの動物であるが、特に限定されるものではない。好ましくはヒトである。
　好ましい対象疾患としてＣＤ２０が過剰発現している疾患が挙げられる。具体的には、ＣＤ２０陽性のＢ細胞性非ホジキンリンパ腫、免疫抑制状態下のＣＤ２０陽性のＢ細胞性リンパ増殖性疾患、多発血管炎性肉芽腫症（ヴェゲナ肉芽腫症）、顕微鏡的多発血管炎、難治性のネフローゼ症候群、腎移植・肝移植時のＡＢＯ血液型不適合移植における抗体関連型拒絶反応の抑制等が挙げられる。
　ここでの「有効量」とは、投与対象における診断上または治療上有効な効果を得ることができる量である。対象に投与するべき有効量は、対象の種類、対象の体重、投与する剤形（錠剤、注射剤など）および経路（経口投与、非経口投与など）、および疾患（例、がん）の重篤度などにより異なる。医師や獣医師はそれらの因子を考慮して、適切な有効量を決定することができる。

　本発明の放射性医薬は、室温で保管したとき、その放射性医薬を構成する放射性金属核種の半減期を基準として、半減期の１以上５以下の倍数の期間経過時点において、一定の割合以上の放射化学的純度を有する。上記の放射性金属核種がβ線核種（例えば、Ｌｕ－１７７又はＹ－９０）であるとき、好ましくは、室温で製造終了から７日間保管した時の複合体の放射化学的純度が９０％以上である。また、放射性金属核種がα線核種（例えば、Ａｃ－２２５）であるときに、好ましくは、室温で製造終了から１４日間保管した時の複合体の放射化学的純度が９０％以上であり、より好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９７％以上である。ここで本明細書における「室温」とは、好ましくは日本薬局方で定義される「常温」をいい、具体的には１５～２５℃である。
　ここで、放射化学的純度は、試料を市販の放射線検出器で分析した場合に検出された全放射能（カウント）に対する、複合体に相当するピークの放射能（カウント）の百分率をいう。放射化学的純度の分析には高速液体クロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーを用いることができるが、薄層クロマトグラフィーを用いることが好ましい。より好ましくは後述する実施例に記載の条件を用いた薄層クロマトグラフィーを用いる。
　前述のとおり、本発明の放射性医薬は、水溶液の形態であることが好ましいが、上記の通り放射化学的純度を維持する観点から緩衝液の形態がより好ましい。緩衝液としては、抗ＣＤ２０抗体または抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣを有効成分として含有する抗体医薬で使用されている任意の緩衝液を用いることができ、特に限定されない一例として、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、またはクエン酸緩衝液を使用することができる。ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとその塩から構成され、例えば、ヒスチジンとその塩酸塩、または、ヒスチジンとその酢酸塩から構成することができる。酢酸緩衝液は、酢酸とその塩から構成され、例えば酢酸とそのナトリウム塩から構成することができる。リン酸緩衝液は、リン酸とその塩から構成され、例えばリン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム等から構成することができる。クエン酸緩衝液は、クエン酸とその塩から構成され、例えば、クエン酸とそのナトリウム塩から構成することができる。本発明の放射性医薬には、スクロース（精製白糖）などの任意の糖類を含んでいてもよいし、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などの可溶化剤を含んでいてもよいし、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）又はその塩、エチレンジアミン四酢酸（エデト酸、ＥＤＴＡ）又はそのナトリウム塩などの金属封鎖剤を含んでいてもよいし、ヒト血清アルブミンを含んでいてもよい。

　放射性金属核種として治療効果を有するもの、具体的には、α線を放出する核種又はβ線を放出する核種（好ましくは、Ａｃ－２２５、Ｙ－９０、Ｌｕ－１７７であり、より好ましくはＡｃ－２２５）を選択することにより、本発明の放射性医薬は、がんの放射線内用療法に用いることができる。この放射線内用療法では、本発明の放射性医薬を静注や経口で投与し、がん原発巣や転移巣のような病巣部位に本発明の放射性複合体を集積させ、放射性金属核種から放出される放射線により、病巣部位のがん細胞を破壊することができる。本発明の放射性医薬の投与量、用量は、有効成分の有効性、投与の形態・経路、がんの進行ステージ、患者の体型・体重・年齢、併用する他の疾患の治療薬の種類や量に応じ、適宜選択される。

　また、放射性金属核種として、ポジトロンを放出する放射性核種やγ線を放出する放射性核種（好ましくは、Ｇａ－６８、Ｚｒ－８９、Ｉｎ－１１１、より好ましくは、Ｚｒ－８９）を選択することで、がんの診断又は病巣の検出に用いることができる。ポジトロンを放出する放射性核種が用いられた放射性医薬の場合、ＰＥＴ（Positron Emission Tomography）検査に好適に用いることができ、γ線を放出する放射性核種が用いられた放射性医薬の場合、ＳＰＥＣＴ（Single Photon Emission Computed Tomography）検査に好適に用いることができる。これを上述したがんの放射線内用療法におけるがんの診断又は病巣の検出に併用してもよい。本発明のがんの診断用放射性医薬は、がんの放射線内用療法を行う前の診断に用いてもよいし、がんの放射線内用療法を行った後の診断に用いてもよい。がんの放射線内用療法を行う前の診断に用いられることによって、α線を放出する金属核種を備えた本発明の放射性医薬を用いたがんの放射線内用療法を実行するかどうかの治療選択の判断に用いることができる。また、がんの放射線内用療法を行った後の診断に用いられることによって、本発明の放射性医薬を用いたがんの放射線内用療法の効果があるかどうかの判定や投与量の増減などの治療計画の適正化に用いることができる。

（２）放射性医薬（（放射性医薬（２））
　本発明の他の態様は、放射性金属核種がキレート化したキレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合体を有効成分として含有し、抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との連結にチオウレア結合を含まず、室温で保管したとき、その放射性医薬を構成する放射性金属核種の半減期を基準として、半減期の１以上５以下の倍数の期間経過時点において、一定の割合以上の放射化学的純度を有する。上記の放射性金属核種がβ線核種（例えば、Ｌｕ－１７７又はＹ－９０）であるとき、好ましくは、室温で製造終了から７日間保管した時の前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である。また、放射性金属核種がα線核種（例えば、Ａｃ－２２５）であるときに、好ましくは、室温で製造終了から１４日間保管した時の複合体の放射化学的純度が９０％以上であり、より好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９７％以上である。室温の定義は上述の放射性医薬（１）と同様である。
　放射性医薬（２）では、キレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合化において、ペプチドを用いた部位特異的修飾の方法に加えて、以下（ａ）から（ｄ）の方法も使用することができるが、これ以外は、放射性医薬（１）と同様であるため、説明を省略する。
（ａ）抗体のヒンジ部位にあるポリペプチド鎖間のジスルフィド結合（SS結合）を部分的に還元することによって生じるスルフヒドリル(SH)基に対して、SH基に反応性を有するマレイミド基を持つキレート剤またはリンカー（Ｌ）で修飾する方法
（ｂ）遺伝子工学によるアミノ酸変異によって、抗体に新たに導入されたシステインに対してマレイミド基をもつキレート剤またはリンカー（Ｌ）を修飾する方法
（ｃ）遺伝子工学によるアミノ酸変異によって、抗体に新たに導入されたアジド化リシンのアジド基に、クリック反応を利用して、アルキン（例えばDibenzylcyclooctyne: DBCO）をもつキレート剤またはリンカー（Ｌ）を修飾する方法
（ｄ）トランスグルタミナーゼを利用して、抗体の特定の位置に導入されたグルタミンに、リシンの側鎖を有するキレート剤またはリンカー（Ｌ）を修飾する方法

　本発明では、抗ＣＤ２０抗体を部位特異的に修飾するペプチドとキレート剤とをチオウレア結合を使用せずに連結させているので、室温においても安定な放射性複合体および放射性医薬とすることができる。抗体の部位特異的修飾は、ランダム修飾とは異なり、一価抗体もしくは二価抗体又はこれらの両方を任意の割合で含むようにできるので、安定した品質の放射性複合体および放射性医薬となる。また、本発明の放射性複合体は、従来と同等な薬効を維持している。したがって、本発明によれば、薬効を維持しつつ、より品質の優れた抗ＣＤ２０抗体の複合体及びその放射性医薬を提供することができる。

　以下の態様も本発明の技術的思想に包含される。
［１］抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との複合体であって、
　前記キレート剤に放射性金属核種がキレート化しており、
　前記抗ＣＤ２０抗体とキレート剤とがリンカー（Ｌ）を介して連結しており、前記リンカー（Ｌ）はチオウレア結合を含まない、複合体。
［２］前記複合体は、ペプチドで部位特異的に修飾された抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との複合体であり、前記ペプチドと前記キレート剤とが前記リンカー（Ｌ）を介して連結している、［１］に記載の複合体。
［３］前記キレート剤がＤＯＴＡＧＡ（α－（２－Ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ）－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｚａｃｙｃｌｏｄｏｄｅｃａｎｅ－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ）である、［１］に記載の複合体。
［４］前記ペプチドが、下記の式（ｉ）：
　(Xa)-Xaa₁-(Xb)-Xaa₂-(Xc)-Xaa₃-(Xd)・・・（ｉ）
（式（ｉ）中、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄは、それぞれ、連続するａ個のＸ、連続するｂ個のＸ、連続するｃ個のＸ、及び連続するｄ個のＸを表し、
Ｘは、側鎖にチオール基及びハロアセチル基のいずれも有しないアミノ酸残基であり、
ａ、ｂ、ｃ及びｄはそれぞれ独立に１以上５以下の整数で、かつａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ≦１４を満たし
Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、それぞれ独立に、
側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基、又は、側鎖にハロアセチル基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、ただし、Ｘａａ_１及びＸａａ_３のいずれか一方がチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であり、
Ｘａａ_１及びＸａａ_３が連結することで、環構造が形成されており、
Ｘａａ_２は、リシン残基、アルギニン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸であり、かつＸａａ_２が架橋剤で修飾されている。)
で表される、１３～１７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である、［２］又は［３］に記載の複合体。
［５］前記放射性金属核種がＡｃ－２２５、Ｙ－９０、Ｌｕ－１７７又はＺｒ－８９である、［１］乃至［４］いずれか一項に記載の複合体。
［６］前記リンカー（Ｌ）が式（１０ａ）、式（１０ｂ）又は式（１０ｃ）を含む、［１］乃至［５］いずれか一項に記載の複合体。

（式（１０ａ）及び式（１０ｂ）中、Ｒ_１Ａは前記キレート剤との連結部位を示し、Ｒ_２Ａは前記抗体又は前記ペプチドとの連結部位を示す。式（１０ｃ）中、Ｒ_３Ａ及びＲ_４Ａのうち一方は水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示し、他方は前記キレート剤との連結部位を示し、Ｒ_５Ａは前記抗体又は前記ペプチドとの連結部位を示す。）
［７］前記抗体又は前記ペプチドとの連結部位と前記抗体又は前記ペプチドとの間に、ポリエチレングリコール基を含む、［６］に記載の放射性複合体。
［８］Ｎ末端にアジド基が導入された前記ペプチドが部位特異的に修飾している抗ＣＤ２０抗体と、下記式で表されるＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯの放射性金属錯体とをクリック反応させることで複合化した、［２］乃至［７］いずれか一項に記載の放射性複合体。

［９］前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、［１］乃至［８］いずれか一項に記載の複合体。
［１０］［１］乃至［９］いずれか一項に記載の複合体を有効成分として含有する放射性医薬。
［１１］がんの放射線内用療法に用いられる、［１０］に記載の放射性医薬。
［１２］がんの診断に用いられる、［１０］に記載の放射性医薬。
［１３］［１１］に記載された放射性医薬を用いたがんの放射線内用療法に併用される、［１２］に記載の放射性医薬。
［１４］放射性金属核種がキレート化したキレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合体を有効成分として含有し
　抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との連結にチオウレア結合を含まず、
　室温で７日間保管した時の前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である、放射性医薬。
［１５］前記複合体が［１］乃至［９］いずれか一項に記載の複合体である、［１４］に記載の放射性医薬。
［１６］がんの放射線内用療法に用いられる、［１５］に記載の放射性医薬。
［１７］がんの診断に用いられる、［１５］に記載の放射性医薬。
［１８］［１６］に記載された放射性医薬を用いたがんの放射線内用療法に併用される、［１７］に記載の放射性医薬。
［１９］放射性金属核種がキレート化したキレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合体を有効成分として含有し
　抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との連結にチオウレア結合を含まない、下記（１）または（２）の条件を満たす放射性医薬：
（１）前記放射性金属核種が^１７７Ｌｕ又は^９０Ｙであって、室温で７日間保管した時の前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である。
（２）前記放射性金属核種が^２２５Ａｃであって、室温で１４日間保管した時の前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である。
［２０］放射性金属核種がキレート化したキレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合体を有効成分として含有し
　抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との連結にチオウレア結合を含まず、
　前記放射性金属核種の半減期を基準として、前記半減期の１以上５以下の倍数の期間経過時点において、前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である放射性医薬。

　以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。しかしながら本発明の範囲は、かかる実施例に制限されない。以下の表中、「－」欄は、実施していないことを示す。

［実施例１］^２２５Ａｃ標識ＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯを用いたリツキシマブとの複合体の製造
（１．抗体修飾工程）
　国際公開第２０１７／２１７３４７号に記載の方法で、下記式（Ｐ３）で表される１７個のアミノ酸残基を含むペプチド（配列番号１７）を得た。このペプチドのアミノ酸配列は、配列番号（２）のＸａａ_２がリシン残基である配列と同一であり、リシン残基の側鎖末端アミノ基がＲ_１で示される構造で修飾されていた。また、２つのシステイン残基で互いにジスルフィド結合しており、ペプチドのＮ末端はジグリコール酸及び８つのＰＥＧを有するリンカー（Ｌ_１）構造を介して、第２原子団であるアジド基を含む原子団として、エチルアジドが結合しているものであった。

（式（Ｐ３）中、Ｇｌｙはグリシンを、Ｐｒｏはプロリンを、Ａｓｐはアスパラギン酸を、Ｃｙｓはシステインを、Ａｌａはアラニンを、Ｔｙｒはチロシンを、Ｈｉｓはヒスチジンを、Ｌｙｓはリシンを、Ｇｌｕはグルタミン酸を、Ｌｅｕはロイシンを、Ｖａｌはバリンを、Ｔｒｐはトリプトファンを、Ｔｈｒはトレオニンを、Ｐｈｅはフェニルアラニンをそれぞれ示す。）

　上述のペプチドと、リツキシマブ（メルク社製）とを、０．２ｍｏｌ／Ｌ酢酸・酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に混合した混合液を、室温で６０分間反応させて、ペプチド修飾抗体を含む溶液を得た。このペプチド修飾抗体は、上記のペプチドによって抗体のＦｃ領域が部位特異的に修飾されたものである。

　次いで、ＩｇＧ－ＢＰカラムに通液して、未標識抗体及び一価抗体を相対的に多く含む第一の抗体組成物を得た。回収した画分に含まれる一価抗体の濃度が１５ｍｇ／ｍＬになるように０．１５４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム含有０．０２５ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）で濃度を調整した。得られた第一の抗体組成物を含む溶液を後述の標識工程に供した。

（２．錯体形成工程）
　下記式で表されるＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯをＢｅｒｎｈａｒｄ　ｅｔ　ａｌ．　ＤＯＴＡＧＡ－Ａｎｈｙｄｒｉｄｅ：　Ａ　Ｖａｌｕａｂｌｅ　Ｂｕｉｌｄｉｎｇ　Ｂｌｏｃｋ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＯＴＡ－Ｌｉｋｅ　Ｃｈｅｌａｔｉｎｇ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１２，１８，７８３４－７８４１に記載の方法を基にして製造した。このキレート剤を、溶媒として０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に分散させて、キレート剤を１．７ｍｍｏｌ／Ｌ含む分散液とした。この分散液０．００３ｍＬと、０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）０．０４５ｍＬと、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸０．００１ｍLと、放射性金属源として^２２５Ａｃイオン含有溶液（０．２ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液、放射能濃度９９４ＭＢｑ／ｍＬ、Ｏａｋ　Ｒｉｄｇｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製より調製、液量０．００２ｍＬ）約２．０ＭＢｑ（検定日時放射能量から減衰計算した計算値）とを混合した反応液を、加熱条件下で反応させて、^２２５Ａｃ錯体溶液を得た。キレート剤と放射性金属イオンとのモル比率は、キレート剤：^２２５Ａｃイオン＝約１２３０：１であり、反応液の加熱温度は７０℃、加熱時間は３０分間とした。

　得られた^２２５Ａｃ錯体の放射化学的純度（ＲＣＰ）を次の方法で測定した。すなわち、^２２５Ａｃ錯体溶液の一部を薄層クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ社製、型番：ＳＧＩ０００１、展開溶媒：アセトニトリル／水混合液（体積比１：１））で展開し、その後、ラジオγ－ＴＬＣアナライザー（ｒａｙｔｅｓｔ製、ＭＯＤＥＬ　ＧＩＴＡ　Ｓｔａｒ）で測定した。検出された全放射能（カウント）に対する、溶媒先端付近に検出されたピークの放射能（カウント）の百分率を^２２５Ａｃ錯体のＲＣＰ（％）とした。その結果、^２２５Ａｃ錯体のＲＣＰは９３％であった。得られた^２２５Ａｃ錯体溶液は、そのまま標識工程に用いた。

（３．標識工程）
　上述の工程（２．錯体形成工程）を経て得られた未精製のままの^２２５Ａｃ錯体の溶液に、上記の工程（１．抗体修飾工程）で得られたペプチド修飾抗体（一価抗体）を含む溶液を添加し、３７℃で１２０分間クリック反応させて、^２２５Ａｃ錯体標識抗体を得た。^２２５Ａｃ錯体の量及びペプチド修飾抗体（一価抗体）の量はそれぞれ５．１ｎｍｏｌ及び６.０ｎｍｏｌであり、ＤＢＣＯ基とアジド基とのモル比はそれぞれ約１：１．２であった。未精製時の^２２５Ａｃ錯体標識抗体の反応率（％）は７５％であった。ここで、反応率（％）とは、錯体形成工程での標識率（％）に対する^２２５Ａｃ錯体標識抗体の放射化学的純度（％）を意味し、標識率（％）とは仕込み放射能量に対する^２２５Ａｃ錯体の放射能量の割合（％）を意味する。
　更に、３７℃で２時間反応させて得られた^２２５Ａｃ錯体標識抗体の溶液を限外ろ過フィルター（Ｍｅｒｃｋ社製、型番：ＵＦＣ５０５０９６）を用いて精製した。精製後の^２２５Ａｃ錯体標識抗体のＲＣＰは９３％、放射化学的収率（ＲＣＹ）は６１％であった。

　^２２５Ａｃ錯体標識抗体のＲＣＰ及びＲＣＹの測定方法は以下のとおりとした。すなわち、薄層クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ社製、型番：ＳＧＩ０００１、展開溶媒はアセトニトリル：０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ溶液の混液（体積比1：1））で展開し、その後、ラジオγ－ＴＬＣアナライザー（ｒａｙｔｅｓｔ製、ＭＯＤＥＬ　ＧＩＴＡ　Ｓｔａｒ）で測定した。検出された全放射能（カウント）に対する、原点付近に検出されたピークの放射能（カウント）の百分率をＲＣＰ（％）とした。また、標識工程開始時に加えた全放射能（γ線スペクトロメーター（Ｇｅ半導体検出器：ＧＭＸ１０Ｐ４－７０（ＯＲＴＥＣ社製）、マルチチャンネルアナライザ：Ｍ７－０００（セイコー・イージーアンドジー社製）、データ処理：ＳｐｅｃｔｒｕｍＮａｖｉｇａｔｏｒ：ＤＳ－Ｐ３００（セイコー・イージーアンドジー社製）及びＧａｍｍａＳｔｕｄｉｏ：ＤＳ－Ｐ６００（セイコー・イージーアンドジー社製））で測定したカウントから計算した放射能量）に対して、限外ろ過精製後に回収した放射能（上述と同様に、γ線スペクトロメーターで測定したカウントから計算した放射能量）の百分率をＲＣＹ（％）とした。

［比較例１］^２２５Ａｃ標識ＤＯＴＡ－ＤＢＣＯを用いたリツキシマブとの複合体の製造
　ＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯを下記ＤＯＴＡ－ＤＢＣＯに変えた以外は、実施例１に準じて操作を行った。その結果、反応２時間後の反応率は７１％、精製後の^２２５Ａｃ錯体標識抗体のＲＣＰは９９％、ＲＣＹは４６％であった。

［実施例２］製剤化工程
　実施例１および比較例１の記載に従って製造する放射性複合体をそれぞれ５ｍＬエッペンチューブ（ＬｏＢｉｎｄ、エッペンドルフ製）に一部抜き取り、保存緩衝液（０．１５４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム含有０．０２５ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）、並びに０．０７重量／体積％ポリソルベート８０、０．１５４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム含有０．０２５ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）混液）で希釈した。

［評価１］安定性評価
　実施例２で得られた各放射性複合体を、室温で保存し、各時間点（０日点、１日点、７日点、１４日点、２１日点、３０日点、及び／又は４０日点）において、放射化学的純度及び抗原結合活性を評価した。なお、放射性金属核種がＡｃ－２２５である場合には、製造終了から１４日間は約１．５半減期に相当し、製造終了から２１日間は約２半減期に相当し、製造終了から３０日間は約３半減期に相当し、製造終了から４０日間は約４半減期に相当する。
［評価１－１］放射化学的純度（ＲＣＰ）
　ＲＣＰを薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で分析した。ＴＬＣの条件は、実施例１で反応率を調べるときに使用した条件と同様とした。
　結果を表１に示す。

　チオウレア結合を含まない実施例１の記載に従って製造した放射性複合体は、製造終了後室温で７日間保存した場合、ＲＣＰとして９９％以上が維持されていた。また、製造終了後室温で１４日間保存した場合でもＲＣＰとして９９％以上が維持されていた。また、製造終了後室温で３０日間保存した場合でもＲＣＰとして９０％以上が維持されていた。
　チオウレア結合を含む比較例１の記載に従って製造した放射性複合体は、製造終了後室温で７日間保存した場合、ＲＣＰとして７５％以上が維持されていたが、９９％を下回っていた。また、製造終了後室温で１４日間保存した場合、ＲＣＰとして８５％を下回っていた。

［評価１－２］抗原結合活性
　抗原結合活性はｉｎ　ｖｉｔｒｏ　オートラジオグラフィー（ＡＲＧ）で確認した（製造日（０日点）のみ）。ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から購入したＣＤ２０陽性のヒトバーキットリンパ腫由来細胞株であるＲａｍｏｓ細胞及びＣＤ２０陰性のヒト急性リンパ芽球性白血病・Ｔリンパ球様細胞株であるＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞を雌性ＢＡＬＢ／ｃ　ｎｕ／ｎｕマウス（日本チャールス・リバー社製）の脇腹皮下にそれぞれ５×１０^６ｃｅｌｌｓ投与して担癌マウスを作製した。その後、Ｒａｍｏｓ腫瘍およびＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍を摘出してティシュー・テック　Ｏ．Ｃ．Ｔ．コンパウンド（サクラファインテックジャパン社製）に包埋して凍結切片を作製した。１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳに実施例１及び比較例１で得られた放射性複合体をそれぞれ１ｋＢｑ／ｍＬとなるように添加し、Ｒａｍｏｓ腫瘍切片およびＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍切片を浸漬した。切片をイメージングプレートにコンタクトした後、スキャナータイプ画像解析装置（Ｔｙｐｈｏｏｎ　ＦＬＡ　７０００、ＧＥヘルスケアジャパン社製）で読み取り、切片に結合した放射能量を評価した。結果を図３に示す。実施例１及び比較例１の記載に従って製造した放射性複合体のいずれにおいてもＣＤ２０に対する結合活性が確認された。実施例１及び比較例１に従って製造した放射性複合体はどちらもＲａｍｏｓ腫瘍切片にのみ結合し、ＣＤ２０選択的な結合を示した。Ｒａｍｏｓ腫瘍切片に結合した放射能は、実施例１に従って製造した放射性複合体を用いたサンプルの方が、比較例１の記載に従って製造した放射性複合体よりも多くなっていた。

［評価１－３］^２２５Ａｃ錯体標識リツキシマブの血漿中安定性評価
　実施例１の記載に従って製造した放射性複合体を各動物種（ヒト（ヒト血漿（プール、ヘパリン）、コスモバイオ社製）、マウス（マウス血漿プール　ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ系統、日本チャールス・リバー社製）、ラット（血漿（プール）　Ｗｉｓｔａｒ、日本チャールス・リバー社製）、サル（カニクイザル血漿、日本チャールス・リバー社製））の血漿中に３７℃で２週間保存し、各時間点（０日点、1日点、７日点、１４日点（ヒト血漿のみ））での^２２５Ａｃ標識リツキシマブの血漿中での安定性を評価した。各動物種の血漿を３７℃でインキュベートし、実施例１の記載に従って製造した放射性複合体を最終濃度で１００ｋＢｑ／ｍＬとなるように添加した。各評価時間点において、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、免疫沈降を行い、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳによる洗浄後、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇと結合した抗体を回収した。洗浄に用いた０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳは回収し、回収した洗浄液の放射能、及び回収した抗体の放射能をオートウェルガンマカウンター（２４８０　ＷＩＺＡＲＤ^２　ガンマカウンター、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）を用いて測定した。ビーズの洗浄に用いた０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳの放射能と回収した抗体の放射能の合計に対する、回収した抗体の放射能の比率を算出することでＰｒｏｔｅｉｎ　Ｇと結合した^２２５Ａｃ標識リツキシマブの割合を評価した。その結果を表２に示す。表内の数値は、ビーズの洗浄に用いた０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳの放射能と回収した抗体の放射能の合計に対する、回収した抗体の放射能の比率の平均値±標準偏差（ｎ＝３）を表している。

　実施例１の記載に従って製造した放射性複合体は各動物種の血漿中に７日間保存した場合でも、ビーズによる回収率は８０％以上となっており、また、ヒト血漿においては血漿中に１４日保存した場合でもビーズによる回収率は７６％以上が維持されており、評価した各動物血漿中で安定であると考えられる。

［評価２］薬効評価
　マウスを用いてＲａｍｏｓ細胞の皮下担癌モデルを作製し、実施例１及び比較例１の記載に従って製造した放射性複合体の抗腫瘍効果を確認した。
　ＡＴＣＣから購入したＲａｍｏｓ細胞をＲＰＭＩ１６４０培地（ｇｉｂｃｏ、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）に懸濁し、５週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃ　ｎｕ／ｎｕ（日本チャールス・リバー）の脇腹皮下に５×１０^６ｃｅｌｌｓ投与して担癌マウスを作製した。腫瘍体積がおおよそ１００～４００ｍｍ^３となるまで成長させ、腫瘍径測定に適した形状の個体から無作為に群分けを実施した。その際の各マウスの腫瘍体積と体重を表３に示す。腫瘍体積は以下の式に従って算出した。
　腫瘍体積（ｍｍ^３）＝（腫瘍長径×（腫瘍短径）^２）×１／２

　実施例１および比較例１の記載に従って製造した放射性複合体をいずれも１５ｋＢｑ／匹（リツキシマブとして５６μｇ／匹）の用量で尾静脈内投与した。また、コントロール群として、各放射性複合体と同じ抗体量のリツキシマブを投与した群（抗体対照群）および保存緩衝液を投与するＶｅｈｉｃｌｅ群を設定した。各群は6匹とし、投与後２０日まで経時的に腫瘍体積を計測した。経時的な腫瘍体積の変化を図４に示す。

　実施例１および比較例１の記載に従って製造した放射性複合体を投与した群は、投与後２０日点において、２つのコントロール群（抗体対照群、Ｖｅｈｉｃｌｅ群）と比較して抗腫瘍効果に有意な差が認められた（Ｐ＜０．０５）。また、実施例１の記載に従って製造した放射性複合体を投与した群と比較例１の記載に従って製造した放射性複合体を投与した群間で、抗腫瘍効果に有意な差は確認されなかった。有意差の検定には、統計解析ソフトＳｔａｔ　Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａ（タクミインフォメーションテクノロジー社製）を用いてＳｔｅｅｌ－Ｄｗａｓｓ検定を行った。

［実施例３］^８９Ｚｒ標識ＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯを用いたリツキシマブとの複合体の製造
（１．錯体形成工程）
　ＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯを、溶媒として０．１５６ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）に分散させて、キレート剤を０．３ｍｍｏｌ／Ｌ含む分散液とした。この分散液０．０４５ｍＬと０．１５ｍｏｌ／Ｌゲンチジン酸含有０．１５６ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）０．０３０ｍＬと、放射性金属源として^８９Ｚｒイオン含有溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液、放射能濃度１．９ＧＢｑ／ｍＬ、日本メジフィジックス株式会社製より調製、液量０．０３ｍＬ）５７．２ＭＢｑとを混合した反応液を、加熱条件下で反応させて、^８９Ｚｒ錯体溶液を得た。キレート剤と放射性金属イオンとのモル比率は、キレート剤：^８９Ｚｒイオン＝約６３０：１であり、反応液の加熱温度は７０℃、加熱時間は６０分間とした。

　得られた^８９Ｚｒ錯体のＲＣＰを、次の方法で測定した。すなわち、^８９Ｚｒ錯体溶液の一部を薄層クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ社製、型番：ＳＧＩ０００１、展開溶媒：アセトニトリル／水混合液（体積比１：１））で展開し、その後、ラジオγ－ＴＬＣアナライザー（ｒａｙｔｅｓｔ社製、ＭＯＤＥＬ　ＧＩＴＡ　Ｓｔａｒ　ＰＳ）で測定した。検出された全放射能（カウント）に対する、溶媒先端付近に検出されたピークの放射能（カウント）の百分率を^８９Ｚｒ錯体のＲＣＰ（％）とした。その結果、^８９Ｚｒ錯体のＲＣＰは９８％であった。得られた^８９Ｚｒ錯体溶液は、そのまま標識工程に用いた。

（２．標識工程）
　上述の工程（１）を経て得られた未精製のままの^８９Ｚｒ錯体の溶液と、実施例１と同様にして得られたペプチド修飾抗体（一価抗体）を含む溶液とを、未精製のまま混合し、３７℃で２時間クリック反応させて、^８９Ｚｒ錯体標識抗体を得た。ＤＢＣＯとアジドとのモル比はそれぞれ約１：１であった。未精製時の実施例の^８９Ｚｒ錯体標識抗体の反応率（％）は７２％であった。ここで、反応率（％）とは、錯体形成工程での標識率（％）に対する^８９Ｚｒ錯体標識抗体のＲＣＰ（％）を意味し、標識率（％）とは仕込み放射能量に対する^８９Ｚｒ錯体の放射能量の割合（％）を意味する。
　更に、３７℃で２時間反応させて得られた^８９Ｚｒ錯体標識抗体の溶液を限外ろ過フィルター（Ｍｅｒｃｋ社製、型番：ＵＦＣ８０３０９６）を用いて精製した。精製後の^８９Ｚｒ錯体標識抗体の放射化学的純度（ＲＣＰ）は９６％、放射化学的収率（ＲＣＹ）は４９％であった。

　^８９Ｚｒ錯体標識抗体のＲＣＰ及びＲＣＹの測定は、実施例１と同様に行った。

［比較例２］^８９Ｚｒ標識ＤＯＴＡ－ＤＢＣＯを用いたリツキシマブとの複合体の製造
　ＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯをＤＯＴＡ－ＤＢＣＯに変えた以外は、実施例３に準じて操作を行った。その結果、反応２時間後の反応率は６１％、精製後の^８９Ｚｒ錯体標識抗体の放射化学的純度（ＲＣＰ）は９３％、放射化学的収率（ＲＣＹ）は４８％であった。

［実施例４］製剤化工程
　実施例３及び比較例２に従って製造した放射性複合体をそれぞれ５ｍＬエッペンチューブ（ＬｏＢｉｎｄ、エッペンドルフ社製）に一部抜き取り、保存緩衝液（０．１５４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム含有０．０２５ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）並びに０．０７重量／体積％ポリソルベート８０、０．１５４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム含有０．０２５ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）混液）で希釈した。

［評価３－１］^８９Ｚｒ錯体標識リツキシマブの抗原結合活性
　抗原結合活性は評価１－２と同様にｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ＡＲＧにより確認した。また、実施例３の溶液にリツキシマブを添加した溶液で同様に評価を行うことで、各放射性複合体のＣＤ２０に対する特異性を確認した。結果を図５に示す。実施例３及び比較例２の記載に従って製造した放射性複合体のいずれにおいてもＣＤ２０に対する結合活性が確認された。実施例３及び比較例２に従って製造した放射性複合体はいずれもＲａｍｏｓ腫瘍切片にのみ結合し、ＣＤ２０選択的な結合を示した。また、リツキシマブを添加した溶液ではＲａｍｏｓ腫瘍切片に対する結合が阻害され、結合のＣＤ２０特異性が確認された。

［評価４－１］^８９Ｚｒ錯体標識リツキシマブの腫瘍集積の評価
　マウスを用いてＲａｍｏｓ細胞及びＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞の皮下担癌モデルを作製し、実施例３の記載に従って製造した放射性複合体の腫瘍集積を確認した。
　評価２と同様にＲａｍｏｓ細胞及びＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞担癌マウスを作製した。担癌処置から約２週間後、腫瘍体積がおおよそ１００～４００ｍｍ^３であることを確認した。実施例３の記載に従って製造した放射性複合体を４ＭＢｑ／匹（各群ｎ＝３）の用量で尾静脈内投与した。その際の各マウスの腫瘍体積と体重は表４に示す。腫瘍体積は以下の式に従って算出した。
　腫瘍体積（ｍｍ^３）＝（腫瘍長径×（腫瘍短径）^２）×１／２

　実施例３の記載に従って製造した放射性複合体を投与１８６時間後にマウスをイソフルラン麻酔下で心臓からの採血により安楽殺後、血液及び腫瘍を採取した。採取した血液及び腫瘍の重量を測定し、γ線ウェルシンチレーション測定装置（ＪＤＣ－１７１２、日立製作所社製）を用いて血液及び腫瘍の計数率を測定した。得られた組織重量及び計数率、及び投与放射能を用いて、単位重量当たりの投与放射能の集積率を算出した。算出された単位重量当たりの投与放射能の集積率を用いて、血液に対する腫瘍への集積比率を求め、実施例３の記載に従って製造した放射性複合体の腫瘍集積のＣＤ２０選択性を評価した。その結果を図６に示す。

　血液に対する腫瘍への集積比率は、ＣＤ２０陰性のＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍と比較して、ＣＤ２０陽性のＲａｍｏｓ腫瘍の方が高くなっており、実施例３の記載に従って製造した放射性複合体のＣＤ２０選択的な集積が確認された。

［評価５－１］^２２５Ａｃ錯体標識リツキシマブと既存薬剤とのｉｎ　ｖｉｔｒｏ薬効比較
　培養細胞を用いて、実施例１の記載に従って製造した放射性複合体の殺細胞効果を既存薬と比較した。ＡＴＣＣから購入したＣＤ２０陽性であるヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫由来細胞のＳＵ－ＤＨＬ－２細胞をＲＰＭＩ１６４０培地（ｇｉｂｃｏ、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で培養し、実施例１の記載に従って製造した放射性複合体を０、０．００１、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０ｋＢｑ／ｍＬ（リツキシマブとして０．０００８７４、０．００８７４、０．０２６２、０．０８７４、０．２６２、０．８７４、２．６２、８．７４、２６．２μｇ／ｍＬ）となるよう各培地で希釈し、細胞に添加した。また、比較対象として、ＰＯＬＩＶＹ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社製）を最終濃度が０、０．００１、０．０１、０．１、１、２、５、１０μｇ／ｍＬとなるように添加した。また、未標識のリツキシマブを、各放射能濃度のサンプルにおいて添加した総抗体濃度と同様になるように（０，０．００５、０．０５、０．１５、０．５、１．５、５、１５、５０、１５０μｇ／ｍＬ）添加し、培養した。サンプル添加から１２０時間後、培地にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０　Ｃｅｌｌ　Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を添加し、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ　ｉ３ｘ、モレキュラーデバイス社製）を用いて化学発光を検出し、生細胞数を算出した。算出された生細胞数に対し、サンプルを添加していない条件の生細胞数との比率を取り，殺細胞効果を評価した。結果を図７に示す。グラフの縦軸は、抗体を添加しなかった条件での生細胞数を１とした場合の相対値を表し、横軸は、添加した抗体濃度を示す。グラフは各群（ｎ＝４）の平均値±標準偏差を表す。

　ＳＵ－ＤＨＬ－２細胞において、未標識のリツキシマブでは殺細胞効果は確認されず、実施例１の記載に従って製造した放射性複合体では、ＰＯＬＩＶＹ（登録商標）よりも低い添加抗体濃度において殺細胞効果が確認された。

　本出願は、日本で出願された特願２０２１－０７１３２０（出願日：２０２１年４月２０日）、及び特願２０２２－０３０３８９（出願日：２０２２年２月２８日）を基礎としておりそれらの内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

　抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との複合体であって、
　前記キレート剤に放射性金属核種がキレート化しており、
　前記抗ＣＤ２０抗体とキレート剤とがリンカー（Ｌ）を介して連結しており、前記リンカー（Ｌ）はチオウレア結合を含まない、複合体。
　前記複合体は、ペプチドで部位特異的に修飾された抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との複合体であり、
　前記ペプチドと前記キレート剤とが前記リンカー（Ｌ）を介して連結している、請求項１に記載の複合体。
　前記キレート剤がＤＯＴＡＧＡ（α－（２－Ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ）－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｚａｃｙｃｌｏｄｏｄｅｃａｎｅ－１，４，７，１０－ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ）である、請求項１に記載の複合体。
　前記ペプチドが、下記の式：
　(Xa)-Xaa₁-(Xb)-Xaa₂-(Xc)-Xaa₃-(Xd)・・・（ｉ）
（式（ｉ）中、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄは、それぞれ、連続するａ個のＸ、連続するｂ個のＸ、連続するｃ個のＸ、及び連続するｄ個のＸを表し、
Ｘは、側鎖にチオール基及びハロアセチル基のいずれも有しないアミノ酸残基であり、
ａ、ｂ、ｃ及びｄはそれぞれ独立に１以上５以下の整数で、かつａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ≦１４を満たし
Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、それぞれ独立に、
側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基、又は、側鎖にハロアセチル基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、ただし、Ｘａａ_１及びＸａａ_３のいずれか一方がチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であり、
Ｘａａ_１及びＸａａ_３が連結することで、環構造が形成されており、
Ｘａａ_２は、リシン残基、アルギニン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸であり、かつＸａａ_２が架橋剤で修飾されている。)
で表される、１３～１７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である、請求項２に記載の複合体。
　前記放射性金属核種がＺｒ－８９、Ｙ－９０、Ｌｕ－１７７又はＡｃ－２２５である、請求項１に記載の複合体。
　前記リンカー（Ｌ）が式（１０ａ）、式（１０ｂ）又は式（１０ｃ）を含む、請求項１に記載の複合体。

（式（１０ａ）及び式（１０ｂ）中、Ｒ_１Ａは前記キレート剤との連結部位を示し、Ｒ_２Ａは前記抗体又は前記ペプチドとの連結部位を示す。式（１０ｃ）中、Ｒ_３Ａ及びＲ_４Ａのうち一方は水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示し、他方は前記キレート剤との連結部位を示し、Ｒ_５Ａは前記抗体又は前記ペプチドとの連結部位を示す。）
　前記抗体又は前記ペプチドとの連結部位と前記抗体又は前記ペプチドとの間に、ポリエチレングリコール基を含む、請求項６に記載の放射性複合体。
　Ｎ末端にアジド基が導入された前記ペプチドが部位特異的に修飾している抗ＣＤ２０抗体と、下記式で表されるＤＯＴＡＧＡ－ＤＢＣＯの放射性金属錯体とをクリック反応させることで複合化した、請求項２に記載の放射性複合体。
　前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項１に記載の複合体。
　請求項１乃至９いずれか一項に記載の複合体を有効成分として含有する放射性医薬。
　がんの放射線内用療法に用いられる、請求項１０に記載の放射性医薬。
　がんの診断に用いられる、請求項１０に記載の放射性医薬。
　請求項１１に記載された放射性医薬を用いたがんの放射線内用療法に併用される、請求項１２に記載の放射性医薬。
　放射性金属核種がキレート化したキレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合体を有効成分として含有し
　抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との連結にチオウレア結合を含まない、下記（１）または（２）の条件を満たす放射性医薬：
（１）前記放射性金属核種が^１７７Ｌｕ又は^９０Ｙであって、室温で７日間保管した時の前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である。
（２）前記放射性金属核種が^２２５Ａｃであって、室温で１４日間保管した時の前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である。
　放射性金属核種がキレート化したキレート剤と、抗ＣＤ２０抗体との複合体を有効成分として含有し
　抗ＣＤ２０抗体とキレート剤との連結にチオウレア結合を含まず、
　前記放射性金属核種の半減期を基準として、前記半減期の１以上５以下の倍数の期間経過時点において、前記複合体の放射化学的純度が９０％以上である放射性医薬。