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WO2019078498A1 - 아마톡신 유도체 및 이의 제조방법 - Google Patents

아마톡신 유도체 및 이의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
WO2019078498A1
WO2019078498A1 PCT/KR2018/011144 KR2018011144W WO2019078498A1 WO 2019078498 A1 WO2019078498 A1 WO 2019078498A1 KR 2018011144 W KR2018011144 W KR 2018011144W WO 2019078498 A1 WO2019078498 A1 WO 2019078498A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
formula
compound represented
protecting group
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Application number
PCT/KR2018/011144
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김필호
김형래
윤창수
조성윤
황종연
하재두
정희정
강가다 마티
Original Assignee
한국화학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국화학연구원 filed Critical 한국화학연구원
Publication of WO2019078498A1 publication Critical patent/WO2019078498A1/ko

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present invention relates to a specific derivative, a method for producing the same, a synthetic agent for the production of an amaroxindine derivative 1, and a pharmaceutical composition for treating cancer comprising an amaroxindine derivative.
  • apoptosis apoptosis
  • the use of amarotic streptomycin as a cytotoxic powder for tumor therapy was achieved by coupling the anti-Thy 1,2 antibody to ⁇ -amanitine using a linker attached to the indole ring of Trp through diazotyping .
  • Davis & Preston identified the attachment site as the V position.
  • Morris & Benton has published derivatives that retain cytotoxic activity by substitution at the V position.
  • the anticancer drug industry is currently in the spotlight as an anti-cancer drug and anti-cancer drug targeting agent, as well as ADC ntibody-drug conjugate technology.
  • ADC technology consists of a linker linking drug and monoclonal anti-drug, and it is possible to target only a specific cell of an antibody and a drug, and studies for development thereof have been actively carried out (see Non-Patent Document 1, Nature Reviews Drug Discovery 16, 315-337 (2017)). At this time, in order to bind the drug to the monoclonal antibody, it is preferable that not only an appropriate linker but also a proper functional group is present on the surface of the drug showing a therapeutic effect. Accordingly, the inventors of the present invention have been studying to utilize the amaric acid in ADC technology.
  • amethoxine derivative provided in one aspect of the present invention may be useful as an ADC drug due to the existence of an amine group in the indole group.
  • the process for producing an amoxicillin derivative provided in another aspect of the present invention is not limited to the conventional synthesis route Can be produced through intermediates of very different structures, and have completed the present invention.
  • An object of one aspect of the present invention is to provide a specific derivative. Another object of the present invention is to provide a method for producing the above-mentioned specific derivative. Another object of the present invention is to provide an intermediate which is synthesized in the production of the above amorphous derivative. It is another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing the amoxicillin derivative as an active ingredient. Another object of the present invention is to provide a method for treating cancer, which comprises administering the above-mentioned non-specific derivative to a subject in need thereof. Another object of the present invention is to provide a use (us e) of a pharmaceutical composition containing the above-mentioned specific derivative as an active ingredient in the prevention, alleviation or treatment of cancer. Another object of the present invention is to provide the use (us e) of the above-mentioned non-specific derivative for the preparation of a medicament for the prevention, alleviation or treatment of cancer. -
  • R 1 is -H, -OH, -OR, -SH, -SR, -NH 2 , -NHR, or -NR 2 wherein R is a straight or branched chain alkyl or protecting group )ego;
  • R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are independently H, -OH, -NH 2 , or (-) straight-chain or branched alkyl.
  • L is member, -O-, -NH-, -NR-, or -S-;
  • n, R, R 1 to R 5 are independently as defined in formula (I) above;
  • PGi to PG < 3 > is a protecting group.
  • a 1 and A 2 are independently or a protecting group.
  • a compound, or a pharmaceutically acceptable salt thereof there is provided a compound, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • R 3 is as defined in Formula I above;
  • ⁇ 1, ⁇ 2 and ⁇ 3 are independently -0 ⁇ , or a protecting group (protecting group)).
  • a compound of formula I, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cancers containing cancer.
  • a method of treating cancer comprising administering to a subject in need thereof a compound of formula I, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, Provide treatment methods.
  • a use of a pharmaceutical composition comprising, as an active ingredient, a compound represented by the above-mentioned formula (I), an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the prevention, (use).
  • a compound of formula (I), an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the manufacture of a medicament for the prevention, alleviation or treatment of cancer use.
  • amroxine derivative provided in one aspect of the present invention may be useful as an ADC drug due to the presence of an amine group in the indole group, and the method for preparing the analogous derivative, which is provided in another aspect of the present invention, ≪ / RTI > can be produced via the simian body of a very different structure.
  • n is an integer from 0 to 2;
  • R 1 is -H, -OH, -OR, -SH, -SR, -NH 2 , -NHR, or -NR 2 wherein R is d- straight or branched chain alkyl or protecting group )ego;
  • R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are independently -H, -OH, -NH 2 or straight or branched chain alkyl of di 0 .
  • n is an integer from 0 to 2;
  • R 1 is -H, -OH, -OR, -SH, -NH 2, -NHR, or a -NR 2, where, with R Or branched alkyl, or a protect ins group;
  • R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are independently -H, -OH, -NH 2 , or (- 5 linear or branched chain alkyl).
  • n is an integer from 0 to 2;
  • R 1 is -H, -OH, -OR, -SH, -NH 2 , -NHR, or -NR 2 , wherein R is an alkyl group, gt; is a protecting group;
  • R 2 is ⁇ 2, or -OH, and
  • R 3 , R 4 and R 5 are independently H, or -0H.
  • the compound represented by formula (I) may be a compound having
  • the protecting group can be used without limitation as long as it is a known protecting group in the field of compound synthesis, and some specific examples are as follows:
  • Methoxymethyl ether MCM
  • Methoxytrityl Methoxytrityl
  • PMB p-Methoxybenzyl ether
  • Methyl thiomethyl ether Pivaloyl, Piv, triphenylmethyl, tert-butyloxycarbonyl, Boc, 9-fluorenylmethyloxycarbonyl, Fmoc, Tosyl (Ts), tert-Butyl esters.
  • the compound represented by Formula (I) may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt.
  • the salt an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful Do.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid, phosphorous acid and the like, Non-toxic organic acids such as carboxamides, carboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxyalkanoates and alkanedioates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, Methanesulfonic acid, and 4-is obtained from a vegetable acid such as rubenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid and the like.
  • inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid, phosphorous acid and the like
  • Non-toxic organic acids such as carboxamides, carboxylates, phenyl
  • Such pharmaceutically non-toxic salts include sulfates, pyrosulfates, bisulfates, sulfites, bisulfites, nitrates, phosphates, monohydrogenphosphates, dihydrogenphosphates, metaphosphates, pyrophosphate chlorides, And the like may be used in combination with at least one compound selected from the group consisting of bromide, iodide, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, But are not limited to, nitrate, nitrate, succinate, suverate, sebacate, fumarate, malate, butyne-1,4-dioate, nucleic acid-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, Hydroxybenzoate, methicibenzoate, phthalate, phthalate,
  • the acid addition salt according to another aspect of the present invention can be prepared by a conventional method, for example, by dissolving a derivative of the formula (I) in an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, dichloromethane, acetonitrile and the like, And then precipitating the resulting precipitate by filtration and drying.
  • the precipitate may be produced by distilling the solvent and excess acid under reduced pressure, followed by drying and crystallization in an organic solvent.
  • bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • the alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess amount of an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate.
  • the metal salt Or a calcium salt.
  • the salt to be obtained is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable salt (for example, silver nitrate).
  • a suitable salt for example, silver nitrate
  • the compound represented by the above formula (I) and pharmaceutically acceptable salts thereof, as well as solvates, optical isomers, hydrates and the like which can be prepared therefrom are all included. Further, in another aspect of the present invention, as shown in the following Equation 1,
  • L is member, -O-, -NH-, -NR-, or -S-;
  • n, R, R 1 to R 5 are independently as defined in formula (I) above;
  • R 1 and R 2 are C cc Hi kyeomyeot -N3 ⁇ 4 gt;
  • R 3 is as defined in Formula I above;
  • R 4 and R 5 are - OH
  • PGi is tert-Butyloxycarbonyl (Boc); PG 2 is acetoxy (Acetoxy, OAc); And
  • PG 3 is triphenylmethyl.
  • ⁇ the half of the compound represented by the general formula (m), and the compound represented by the general formula (IV) can be carried out at room temperature, although not limited thereto. In this case of example to a 10 ° C to 50 ° C, 20 ° C to 50 ° C, 25 ° C through to 50 ° C, 35 ° C to 50 ° C, 40 ° C to 50 ° C, 45 ° C
  • reaction time is not limited, some examples include lh to 24h,
  • the target compounds can be obtained through a work-up process commonly performed in the synthesis field. Since the reaction temperature and the reaction time in the step of producing the compound represented by the formula V from the compound represented by the formula IV prepared in the above step are the same as the above conditions, they are omitted to avoid redundant description.
  • This step is a step of removing the protecting group. The protecting group can be removed through an acid treatment commonly known in the field of compound synthesis.
  • reaction temperature and the reaction time in the step of preparing the compound represented by the formula (VI) through the cyclization reaction through the dehydration of the compound represented by the formula (V) prepared in the above step are the same as the above conditions, Omission.
  • This step is a step of cyclizing through dehydration, and cyclization can be carried out through a dehydration reaction commonly known in the field of compound synthesis.
  • the reaction temperature and the reaction time in the step of preparing the compound represented by the formula (I) by removing the protective group from the compound represented by the formula (VI) prepared in the above step are the same as the above conditions, and therefore, the description is omitted in order to avoid redundant description.
  • This step is a step for removing the protecting group.
  • the protecting group can be removed through an acid treatment commonly known in the field of compound synthesis, and thereby, a fumarate derivative which is provided in one aspect of the present invention can be prepared.
  • a method for preparing the compound represented by the formula (VI) and the compound represented by the formula (m), which are the starting materials of the van Gogh formula 1 will be described.
  • the compound represented by the general formula [pi] is represented by the following formula (2)
  • L is member, -O-, -NH-, -NR-, or -S-;
  • n is as defined in formula I above;
  • PGi and PG < 4 > are protecting groups.
  • PGi and PG < 4 > are protecting groups.
  • PGi is tert- butyloxycarbonyl (tert-Butyloxycarbonyl, Boc); PG 4 is 9-fluorenyl methyloxy carbonyl (9
  • the reaction time of the step of preparing the compound represented by formula (X3) by reacting the compound represented by formula (XI) with the compound represented by formula (X2) is the same as the above conditions, so as to avoid redundant description.
  • This step is a step in which a compound represented by the general formula X3 is prepared by combining an amine group of a compound represented by the formula XI and a dehydrating group of a hydroxyl group of the compound represented by the chemical X2.
  • the reaction temperature of the step of converting the -OMe group of the compound represented by the formula X3 prepared in the above step to -OH to the compound represented by the formula X4 is not particularly limited, but some examples include 40 ° C to 120 ° C, 50 ° C to 120 ° C, 60 ° C to 120 ° C, 70 ° C to 120 ° C, 80 ° C to 120 ° C, 90 ° C to about 1201, 100 ° C to 120 ° C , Between 110 ° C and 120 ° C, between 40 ° C and 110 ° C, between 40 ° C and 100 ° C, between 40 ° C and 90 ° C, between 40 ° C and 80 ° C, between 40 ° C and 70 ° C, 40 ° C to 60 ° C, or 40 ° C to 50 ° C.
  • This step can be carried out by using a known method for converting the -OMe group to -OH, and in one embodiment, Me 3 SnOH can be carried out by treating the compound represented by the above formula X3.
  • the reaction temperature of the step of preparing the compound represented by the general formula X5 by cyclizing the compound of the formula X4 prepared in the above step is the same as the above-mentioned conditions, and thus, the description thereof is omitted in order to avoid redundant description.
  • the time period is from 1 minute to 20 minutes, from 5 minutes to 20 minutes, from 10 minutes to 20 minutes, from 15 minutes to 20 minutes, from 1 minute to 15 minutes, from 1 minute to 10 minutes, 5 minutes.
  • This step removes PG 4 , the protecting group, and the resulting amine group is cyclized through the adjacent hydroxy group and dehydration reaction.
  • the reaction temperature of the step of converting the -OtBu group of the compound represented by the formula X5 to the -OH into the compound represented by the formula ⁇ is not particularly limited, but may be carried out at room temperature , And room temperature may be 10 ° C to 50 ° C, 20 ° C to 50 ° C, 25 ° C to 501, 30 ° C to 50 ° C, 35 ° C to 50 ° C, 40 ° C to 50 ° C, 45 ° C to 50 ° C, 10 ° C to 40 ° C, 10 ° C to 35 ° C, 10 ° C to 30 ° C, 10 ° C to 25 ° C, 10 ° C to . 20 ° C, or 10 ° C to 15 ° C.
  • reaction time is not particularly limited, there are some examples of lh to 24h, 5h to 24h, 10h to 24h, 15h to 24h, 20h to 24h, lh to 20h, lh to 15h, lh to lOh, To 5h.
  • This step is a step of converting the -OtBu group to -OH. Any conversion method commonly known in the field of compound synthesis can be used without limitation, and one example can be performed by treating HC 1 dissolved in dioxane.
  • the compound represented by the formula (m) can be prepared by reacting a compound represented by the formula
  • the compound represented by the formula Y3 is reacted with the compound represented by the formula Y2 to produce a compound represented by the formula Y3;
  • R 3 is as defined in Formula I above;
  • PG 2 to PG 4 are protecting groups.
  • PG 2 is acetoxy (Acetoxy, OAc);
  • PG 3 is triphenylmethyl
  • the reaction temperature of the step of reacting the compound represented by the formula Y1 and the compound represented by the formula Y2 to produce the compound represented by the formula Y3 is not particularly limited, but may be carried out at room temperature.
  • the room temperature may be 10 ° C to 50 ° C, 20 ° C to 50 ° C, 25 ° C to 50 ° C, 30 ° C to 50 ° C, 35 ° C to 50 ° C, ° C to 50 ° C, 45 ° C to 50 ° C, 10 ° C to 40 ° C, 10 ° C to 35 ° C, 10 ° C to 30 ° C, 10 ° C to 25 ° C, 10 ° C To 20 ° C, or from 10 ° C to 15 ° C.
  • reaction time is not particularly limited, there are some examples, from lh to 24h, from 5h to 24h, from 10h to 24h, from 15h to 24h, from 20h to 24h, from lh to 20h, from lh to 15h, from lh to 10h, To 5h.
  • This step is a reaction in which the hydroxy group of the compound represented by the formula Y1 and the amine group of the compound represented by the formula Y2 are bonded through dehydration condensation. Banung temperature of the step of removing the PG 4 saver of the compound represented by general formula Y3 prepared in step, to prepare a compound represented by the formula m is omitted to avoid a duplicate description identical to the above conditions so.
  • the reaction time may be, for example, from 1 minute to 60 minutes, from 10 minutes to 60 minutes, from 20 minutes to 60 minutes, from 30 minutes to 60 minutes, from 40 minutes to 60 minutes, from 50 minutes to 60 minutes, , From 1 minute to 40 minutes, from 1 minute to 30 minutes, from 1 minute to 20 minutes, or from 1 minute to 10 minutes.
  • the present invention in one aspect,
  • a 1 and A 2 are independently -H, or a protecting group.
  • the protecting group of A 2 may be tert-butyloxycarbonyl (Boc).
  • R 3 is as defined in Formula I above;
  • E 1 , E 2 and E 3 are independently H, -OH, or protecting group).
  • the protecting group of E 1 , E 2 is acetoxy (Acetoxy, OAc);
  • the protecting group of E 3 may be triphenylmethyl.
  • a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising as an active ingredient a compound represented by the formula (I), an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the pharmaceutical composition may be in the form of an ADC.
  • the compound represented by formula (I) may be administered in various formulations for oral administration and parenteral administration in clinical administration.
  • the compound used in the present invention may be a commonly used layering agent, Disintegrating agents, surfactants, and the like.
  • Solid form preparations for oral administration include tablets, patients, powders, granules, capsules, troches and the like, which may contain one or more excipients such as starch, calcium carbonate, It is mixed with sucrose, lactose or gelatin.
  • excipients such as starch, calcium carbonate, It is mixed with sucrose, lactose or gelatin.
  • lubricants such as magnetostrictal talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, contents solutions, emulsions or syrups.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, perfumes, preservatives And the like.
  • Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, suppositories, and the like.
  • the non-aqueous solvent and suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like.
  • injectable ester such as ethyl oleate
  • As a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerin, gelatin and the like can be used.
  • the effective dose of the compound in the human body may vary depending on the age, weight, sex, dosage form, health condition and disease severity of the patient, and is generally about 0.001 to 100 mg / kg / day, preferably 0.01-35 mg / kg / day. It is generally 0.07 to 7000 mg / day, preferably 0.7 to 2500 mg / day, based on an adult patient weighing 70 kg, and may be administered once a day at a predetermined time interval according to the judgment of a doctor or pharmacist It may be divided into several doses.
  • Step 2 allyl _ (2S, 4R) -1- ( N 2 - ((( fluoren-9-yl) meteuk when 9H-) carbonyl) -N 4 - trityl -L- asparaginyl carbonyl) -4 -Hydroxyquistyridine-2-carboxylate
  • tryptophan 2a To a suspension of L-tryptophan (20.4 g, 100 mmol) and urea (0.25 g, 4.16 mmol) dissolved in glacial acetic acid (250 mL) was added a solution of fuming nitric acid dissolved in glacial acetic acid (15 mL). The 'mixture was stirred at 0 until the resulting yellow solution turned into a suspension. Fuming nitric acid (8.75 mL) dissolved in glacial acetic acid (35 mL) was slowly added dropwise at 15 ° C.
  • Boc anhydride (8.9 g, 40.78 mmol) was added to a solution of 2c (5.0 g, 18.53 ⁇ ol) in DCM (150 mL) at 0 ° C and triethylamine (8.3 mL, 59.3 mmol) Respectively.
  • the reaction mixture was stirred for 5 h at rt. When the reaction was complete, it was quenched with water (100 mL) and extracted with DCM (2 X 150 mL). The collected base layer was washed with sat brine solution, dried with Na 2 SO 4 , and the solvent was removed under reduced pressure to obtain crude product.
  • the crude product was purified by column chromatography to obtain the title compound
  • the collected organic layer was washed with brine solution, dried over sodium sulfate, and then concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • the crude product was purified by silica gel column chromatography using EtOAc / nucleic acid (4: 1) as eluent to give the title compound 3 (3.6 g, 7.09 mmol, 71%) as a white solid .
  • Step 1 Preparation of tert-butyl N - (((9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) glycyl-L- isoleucylsulyl-S- (6 - ((tert-butoxycarbonyl (S ⁇ Z-tert-butoxycarbonyl) amino) -3-methoxy-3-oxopropyl) -lH-indol-
  • Example 2 To a solution of the compound 2-1 (2.1 g, 3.45 mmol) in Example 2 dissolved in DMF (50 mL) at rt was added the compound 3-1 (1.7 g, 3.62 mmol) prepared in Example 3 . PyBOP (2.7 g, 5.17 mmol) and DIPEA (0.9 mL, 1.848 ol ol) were added to the reaction mixture and stirred for 12 h. The reaction mixture was poured into water (100 mL) and extracted with ethyl acetate (2 X 250 mL). The extract was washed with brine solution, dried over sodium sulfate, The product was obtained. The crude product was purified by silica gel column chromatography using MeOH / MC (1: 4) as eluent to give the title compound 4 (3.1 g, 2.93 ⁇ ol, 85%) as a brown solid.
  • the mixture was extracted with EtOAc (2 X 150 mL), and the base layer was washed with brine solution (2 X 150 mL), then with sodium sulfate, and dried under reduced pressure
  • the crude product was obtained by concentration.
  • the crude product was purified by column chromatography using MeOH / MC (1: 4) as the eluant to give the title compound 6 (810 mg, 1.0 mmol, 53% .
  • the crude product formed was purified via HPLC using 0.1% TFA sol dissolved in 0.1% TFA and H 2 O dissolved in CAN.
  • the desired fractions obtained from HPLC were lyophilized under reduced pressure to give the title compound 9 (26 mg, 0.026 mmol, 40%) as a white solid.
  • amroxine derivative provided in one aspect of the present invention is useful as an ADC drug due to the presence of an amine group in the indole group.

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Abstract

본 발명의 일 측면에 있어서, 아마록신 유도체, 이의 제조방법, 아마톡신 유도체의 합성 증간체, 아마록신 유도체를 포함하는 암 치료 용 약학적 조성물이 제공된다.

Description

체장활 을한항 [명세서】
【발명의 ί제부명칭】
아마특신 유도체 및 이의 제조방법 【기술분야】
아마특신 유도체， 이의 제조방법， 아마록신 유도체의 합성 증간 처 1， 아마록신 유도체를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물에 관한 것 이다. 【배경기술】
아마특신류는 8개 아미노산으로 구성된 환형 펩타이드류이다. 이 것들은， 예를 들어， Amanita phal loides (아마니타 팔로이데스) 버섯 으로부터 분리될 수 있거나 합성 제조될 수 있다. 아마특신류는 포유 동물 세포의 DNA-의존성 RNA 폴리머라제 II를 특이적으로 저해하여 감 염된 세포의 전사 및 단백질 활성을 저해한다. 세포에서 전사를 저해 하는 것은 세포 성장과 증식을 정지시킨다. 비록 공유결합되어 있진 않으나， 아마니틴 및 RNA 폴리머라제 II 사이의 복합체는 매우 단단하다 (KD = 3 nM) . 상기 효소로부터 아마니 틴이 해리되는 것은 매우 느린 과정이고， 따라서， 감염된 세포가 회복 이 되는 것이 어렵다. 전사의 저해가 너무 길게 지속되면， 그 세포는 예정된 세포 사멸 (어팝토시스)로 진행될 것이다. 아마록신류를 종양 치료에 대한 세포독성 분체로서 사용하는 것 은 디아조화를 통해서 Trp의 인돌 고리에 부착된 링커를 사용하여 항- Thy 1,2 항체를 α -아마니틴에 커플링함으로써 1981년에 개발된 바 있 다. 데이비스와 프레스톤 (Davis & Preston)은 부착 부위를 V 위치로 동정하였다. 또한， 모리스 및 벤톤 (Morris & Venton)은 V 위치에서의 치환으로 세포독성 활성이 유지되는 유도체를 발표한 바 있다. 한편， 항암제 산업은 현재 '면역 항암제 '와 '내성 극복 표적항암 제 ' 분야뿐만 아니라, 항체 치료제의 새로운 기술로서 ADC ntibody- Drug Conjugate) .기술이 각광받고 있다. ADC 기술은 약물， 단일클론항 약물을 연결하는 링커로 구성되어 있으며， 항체와 약제의 ， 특정 세포만 타겟팅하는 것을 가능하게 하여 현재 이를 개발을 위한 연구가 활발히 진행되고 있다 (비특허문헌 1, Nature Reviews Drug Discovery 16， 315-337 (2017) ) . 이때， 단일클론항체에 약물을 결합시키기 위해서는 적절한 링커 뿐만 아니라， 치료 효과를 보이는 약물 표면에 적절한 작용기 (functional group)가 있어야 바람직하다. 이에， 본 발명자들은 ADC 기술에 아마록신류를 활용하기 위한 연 구를 진행하던 중， .
본 발명의 일 측면에서 제공되는 아마톡신 유도체는 인돌기에 아 민기가 존재하여 ADC 약물로서 유용하게 사용될 수 있으며， 본 발명의 다른 일 측면에서 제공되는 아마톡신 유도체의 제조방법은 종래에 알 려진 합성 경로와 비교하여 매우 상이한 구조의 중간체를 거쳐 제조될 수 있음을 실험을 통해 입증하고 본 발명을 완성하였다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
본 발명의 일 측면에서의 목적은 아마특신 유도체를 제공하는 것 이다. 본 발명의 다른 측면에서의 목적은 상기 아마특신 유도체의 제조 방법올 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 측면에서의 목적은 상기 아마록신 유도체의 제조시 합성되는 중간체를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 측면에서의 목적은 상기 아마톡신 유도체를 유효 성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 측면에서의 목적은 상기 아마특신 유도체를， 이를 필요로 하는 대상 ( subj ec t )에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 측면에서의 목적은 암의 예방， 완화 또는 치 료에 있어서의 상기 아마특신 유도체를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 용도 ( us e )를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 측면에서의 목적은 암의 예방， 완화 또는 치료용 약제 ( med i c ament )의 제조를 위한， 상기 아마특신 유도체의 용도 ( us e ) 를 제공하는 것이다. -
【기술적 해결방법】
상기 목적을 달성하기 위하여 ,
본 발명의 일 측면에서 하기 화학식 I로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
[화학식 I ]
Figure imgf000004_0001
R1은 -H, -OH, -OR, -SH, -SR, -NH2, -NHR, 또는 -NR2이고， 여기서， 상기 R은 -^의 직쇄 또는 분지쇄 알킬， 또는 보호기 (protecting group)이고; 및
R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 H, — OH, -NH2, 또는 ( -^의 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다). 본 발명의 다른 측면에서 하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이， 화학식 Π로 표시되는 화합물과， 화학식 m으로 표시되는 화합물 올 반웅시켜， 화학식 IV로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ;
상기 단계에서 제조한 화학식 IV로 표시되는 화합물로부터， 화학 식 V로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ;
상기 단계에서 제조한 화학식 V로 표시되는 화합물을 탈수를 통 한 고리화 반웅을 통해 , 화학식 VI로 표시되는 화합물을 제조하는 단 계 ; 및
상기 단계에서 제조한 화학식 VI으로 표시되는 화합물에서 보호 기를 제거하여， 화학식 I로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함 하는， 상기 화학식 I로 표시되는 화합물의 제조방법이 제공된다.
[반웅식 1]
Figure imgf000005_0001
Figure imgf000005_0002
(상기 반웅식 1에서
L은 부재， -0-， -NH-, -NR-, 또는 -S-이고;
n, R, R1 내지 R5는 독립적으로 상기 화학식 I 에서 정의한 바와 같고; 및
PGi 내지 PG3는 보호기 (protect ing group)이다) . 본 발명의 또 다른 측면에서 , 하기 화학식 α로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체 , 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된 다.
[화학식 α ]
Figure imgf000006_0001
II
(상기 화학식 α에서，
η 및 L은 상기 반웅식 1에서 정의한 바와 같고; 및
A1 및 A2는 독립적으로 또는 보호기 (protecting group)이다). 본 발명의 다른 측면에서， 하기 화학식 β로 표시되는 화합물， 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된
[화학 β ]
Figure imgf000006_0002
(상기 화학식 β에세
R3는 상기 화학식 I 에서 정의한 바와 같고; 및
Ε1, Ε2 및 Ε3는 독립적으로 -0Η, 또는 보호기 (protecting group)이다 ) . 본 발명의 또 다른 측면에서， 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성 분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다. 또한， 본 발명의 다른 측면에서 상기 화학식 I 로 표시되는 화합 물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을， 이 를 필요로 하는 대상 ( subj ect )에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치 료방법을 제공한다. 나아가, 본 발명의 또 다른 측면에서 암의 예방, 완화 또는 치료 에 있어서의 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학 적 조성물의 용도 ( use )를 제공한다. 또한， 본 발명의 다른 측면에서 암의 예방， 완화 또는 치료용 약 제 ( med i cament )와 제조를 위한, 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체 , 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도 ( use )를 제공한다 .
【유리한 효과】
본 발명의 일 측면에서 제공되는 아마록신 유도체는 인돌기에 아 민기가 존재하여 ADC 약물로서 유용하게 사용될 수 있으며， 본 발명의 다른 일 측면에서 제공되는 아마특신 유도체의 제조방법은 종래에 알 려진 합성 경로와 비교하여 매우 상이한 구조의 증간체를 거쳐 제조될 수 있다. 【발명의 실시를 위한 최선의 형태】
이하， 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명의 일 측면에서， 하기 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이 의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
[화학식 I ]
Figure imgf000008_0001
(상기 화학식 I 에서，
n은 0 내지 2의 정수이고; R1은 -H, -OH, -OR, -SH, -SR, -NH2 , -NHR, 또는 -NR2이고， 여기서， 상기 R은 d- 의 직쇄 또는 분지쇄 알킬 , 또는 보호기 (protecting group)이고; 및
R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 -H, -OH, -NH2) 또는 d-i0의 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다) . 다른 즉면에서，
n은 0 내지 2의 정수이고;
R1은 -H, -OH, -OR, -SH, -NH2, -NHR, 또는 -NR2이고， 여기서， 상기 R은 -5의
Figure imgf000008_0002
또는 분지쇄 알킬， 또는 보호기 (protect ins group)이고; 및
R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 -H, -OH, -NH2, 또는 ( -5의 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다. 또 다른 측면에서，
n은 0 내지 2의 정수이고;
R1은 -H, -OH, -OR, -SH, -NH2, -NHR, 또는 -NR2이고, 여기서， 상기 R은 의 또는 분지쇄 알킬， 또는 보호기 (protecting group)이고;
R2는 ΝΉ2, 또는 -OH이고; 및
R3, R4 및 R5는 독립적으로 H, 또는 -0H이다. 다른 측면에서 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물은 하기 를 갖는 화합물일 수 있다.
Figure imgf000009_0001
한편 , 상기 보호기란 .화합물 합성분야에서 공지된 보호기라면 제 한 없이 사용 가능하며， 몇 가지 구체예를 들면 다음과 같다: 아세틸
(Acetyl , Ac) , 아세록시 (Acetoxy， OAc) , β -메톡시에록시메틸 에테르 ( β -Methoxyethoxymethyl ether , MEM) , 디메특시트리틸
(Dimethoxytr ityl ) , 메톡시메틸 에테르 (Methoxymethy 1 ether , MOM) , 메톡시트리틸 (Methoxytrityl), p-메톡시벤질 에테르 (p-Methoxybenzy 1 ether, PMB) , 메틸티오메틸 에테르 (Methyl thiomethyl ether) , 피발로 일 (Pivaloyl, Piv) , 트리페닐메틸 (tr iphenylmethyl )， tert-부틸옥시카 보닐 (tert-Butyloxycarbonyl， Boc), 9—플루오레닐메틸옥시카보닐 ( 9- Fl uorenylmethyloxycarbonyl , Fmoc) , 토실 (Tosyl, Ts) , tert一부틸 에 스테르 (tert-Butyl esters) . 본 발명의 또 다른 측면에서 , 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물 은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며， 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염 이 유용하다. 산 부가염은 염산， 질산， 인산， 황산, 브롬화수소산, 요 드화수소산， 아질산， 아인산 등과 같은 무기산류， 지방족 모노 및 디 카르복실레이트， 페닐-치환된 알카노에이트, 히드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트， 방향족 산류， 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같 은 무독성 유기산， 아세트산, 안식향산， 구연산， 젖산, 말레인산， 글 루콘산， 메탄설폰산， 4-를루엔설폰산， 주석산， 푸마르산 등과 같은 유 기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페 이트, 피로설페이트， 바이설페이트， 설파이트， 바이설파이트， 니트레 이트， 포스페이트， 모노하이드로겐 포스페이트， 다이하이드로겐 포스 페이트， 메타포스페이트， 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드， 아 이오다이드， 플루오라이드， 아세테이트， 프로피오네이트, 데카노에이 트， 카프릴레이트， 아크릴레이트， 포메이트， 이소부티레이트， 카프레 이트， 헵타노에이트， 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트， 석시 네이트， 수베레이트， 세바케이트， 푸마레이트， 말리에이트， 부틴 -1， 4- 디오에이트， 핵산 - 1 , 6-디오에이트， 벤조에이트, 클로로벤조에이트， 메 틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트， 히드록시벤조에이트, 메특시벤조 에이트， 프탈레이트, 테레프탈레이트， 벤젠설포네이트， 를루엔설포네 이트， 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트， 페 닐프로피오네이트， 페닐부티레이트， 시트레이트， 락테이트， β -히드록 시부티레이트， 글리콜레이트, 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트, 나프탈렌 -2-설포네이트， 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명의 다른 측면에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조 할 수 있으며， 예를 들면 화학식 I 의 유도체를 메탄올， 에탄올， 아세 톤， 디클로로메탄， 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나， 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화 시켜서 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량 의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용 해하고， 비용해 화합물 염을 여과하고， 여액을 증발， 건조시켜 얻는다 이때， 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약 상 적합하다 . 또한， 이에 대웅하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토 금속 염을 적당한 음염 (예， 질산은)과 반응시켜 얻는다. 나아가， 본 발명의 다른 측면에서， 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라， 이로부터 제조 될 수 있는 용매화물， 광학 이성질체， 수화물 등이 모두 포함된다. 또한， 본 발명의 다른 측면에서， 하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이 ,
화학식 π로 표시되는 화합물과， 화학식 m으로 표시되는 화합물 을 반웅시켜， 화학식 IV로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ; 상기 단계에서 제조한 화학식 IV로 표시되는 화합물로부터， 화학 식 V로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ;
상기 단계에서 제조한 화학식 V로 표시되는 화합물을 탈수를 통 한 고리화 반웅을 통해， 화학식 VI로 표시되는 화합물을 제조하는 단 계 ; 및
상기 단계에서 제조한 화학식 VI으로 표시되는 화합물에서 보호 기를 제거하여， 화학식 I로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함 하는， 상기 화학식 I로 표시되는 화합물의 제조방법이 제공된다.
Figure imgf000011_0001
-
(상기 반웅식 1에서，
L은 부재， -0-， -NH-, -NR-, 또는 -S-이고;
n, R, R1 내지 R5는 독립적으로 상기 화학식 I에서 정의한 바와 같고; 및
PGi 내지 PG3는 보호기 (protecting group)이다) . ᄋ ,，，상기 반응식 1의 또 다른 측면에서，
^응특 L화특 1은 31
0시별00학별。 0。 -NH-이고;
R1 및 C c c히켜몇식히 R2는 -N¾이고；
R3는 상기 화학식 I 에서 정의한 바와 같고;
R4 및 R5는 — 0H이고；
PGi은 tert-부틸옥시카보닐 (tert-Butyloxycarbonyl， Boc)이고; PG2는 아세톡시 (Acetoxy, OAc)이고; 및
PG3은 .트리페닐메틸 (triphenylmethyl)이다 . π로 표시되는 화합물과, 화학식 m으로 표시되는 화합물 반 ， 화학식 IV로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반웅온 제한되는 것은 아니지만， 상온에서 수행할 수 있다. 이때 가지 예시로 10°C 내지 50 °C , 20 °C 내지 50 °C , 25 °C 내지 내지 50 °C , 35 °C 내지 50 °C , 40 °C 내지 50 °C , 45 °C 내지
50 내지 40 °C , 10°C 내지 35°C， 10 °C 내지 30 °C , 10 °C 내지
25 내지 20°C， 또는 10°C 내지 15°C일 수 있다 . 또한， 반응시 간은 제한되는 것은 아니지만， 몇 가지 예시로 lh 내지 24h ,
5h 내지 24h, 10h 내지 24h, 15h 내지 24h, 20h 내지 24h, lh 내지 20h, lh 내지 15h, lh 내지 10h, 또는 lh 내지 5h일 수 있다. 나아가, 합성 분야에서 일반적으로 수행하는 워크-업 (work— up) 과정을 통해 목 적 화합물을 얻을 수 있다. 상기 단계에서 제조한 화학식 IV로 표시되는 화합물로부터， 화학 식 V로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반웅온도와 반웅시간은 상기 조건과 동일하므로 중복 설명을 피하기 위해 생략한다. 본 단계 는 보호기를 제거하는 단계로， 화합물 합성분야에서 통상적으로 알려 진 산 처리를 통해 보호기를 제거할 수 있다. 상기 단계에서 제조한 화학식 V로 표시되는 화합물을 탈수를 통 한 고리화 반웅을 통해， 화학식 VI로 표시되는 화합물을 제조하는 단 계의 반응온도와 반웅시간은 상기 조건과 동일하므로 중복 설명을 피 하기 위해 생략한다. 본 단계는 탈수를 통해 고리화시키는 단계로， 화 합물 합성분야에서 통상적으로 알려진 탈수 반응을 통해 고리화를 유 도할 수 있다. 상기 단계에서 제조한 화학식 VI으로 표시되는 화합물에서 보호 기를 제거하여， 화학식 I 로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반응 온도와 반웅시간은 상기 조건과 동일하므로 중복 설명을 피하기 위해 생략한다. 본 단계는 보호기를 제거하는 단계로， 화합물 합성분야에서 통상적으로 알려진 산 처리를 통해 보호기를 제거할 수 있으며， 이로 부터 본 발명의 일 측면에서 제공되는 아마특신 유도체를 제조할 수 있다. 이하, 상기 반웅식 1의 출발물질인 화학식 Π로 표시되는 화합물 과 화학식 m으로 표시되는 화합물의 제조방법을 설명한다. 상기 화학식 Π로 표시되는 화합물은 하기 반웅식 2에 나타난 바 와 같이，
화학식 XI으로 표시되는 화합물과， 화학식 Χ2로 표시되는 화합물 을 반응시켜， 화학식 Χ3로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ;
상기 단계에서 제조한 화학식 Χ3로 표시되는 화합물의 -OMe 기를 -0H로 전환시켜 , 화학식 X4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ; 상기 단계에서 제조한 화학식 X4로 표시되는 화합물을 고리화 반 웅시켜 화학식 X5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ; 및
상기 단계에서 제조한 화학식 X5로 표시되는 화합물의 ᅳ Ot Bu 기 를 -0H로 전환시켜， 화학식 Π로 표시되는 화합물을 제조하는 단계로 제조될 수 있다.
[반웅식 2 ]
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000013_0002
13
_도시 ¾여a r 0-
(상기 반응식 2에서，
L은 부재， -0—, -NH-, -NR-, 또는 -S-이고;
n은 상기 화학식 I에서 정의한 바와 같고; 및
PGi 및 PG4는 보호기 (protecting group)이다). 다른 측면에서 ,
PGi은 tert-부틸옥시카보닐 (tert-Butyloxycarbonyl， Boc)； PG4는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (9-
Fluorenylmethyloxycarbonyl , Fmoc)일 수 있다. 화학식 XI으로 표시되는 화합물과， 화학식 X2로 표시되는 화합물 반응시켜， 화학식 X3로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반웅온 반웅시간은 상기 조건과 동일하므로 중복 설명을 피하기 위해 생 다 . 본 단계는 화학식 XI으로 표시되는 화합물의 아민기와， 화학 X2로 표시되는 화합물의 하이드록시기의 탈수 반웅을 통해 결합하 화학식 X3로 표시되는 화합물이 제조되는 단계이다. 상기 단계에서 제조한 화학식 X3로 표시되는 화합물의 -OMe 기를 -0H로 전환시켜， 화학식 X4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반 응온도는 특별히 제한되는 것은 아니지만， 몇 가지 예시를 들면 40°C 내지 120 °C , 50 °C 내지 120 °C , 60 °C 내지 120 °C , 70 °C 내지 120 °C , 80 °C 내지 120 °C , 90 °C 내지 1201 , 100 °C 내지 120 °C， 110 °C 내지 120 °C , 40 °C 내지 110°C , 40 °C 내지 100 °C , 40 °C 내지 90 °C , 40 °C 내 지 80 °C , 40 °C 내지 70 °C , 40 °C 내지 60 °C , 또는 40°C 내지 50°C일 수 있다. 반웅 시간은 상기 조건과 동일하므로 중복 설명을 피하기 위해 생략한다. 본 단계는 —OMe 기를 -0H로 전환하는 공지된 방법을 사용할 수 있으며， 하나의 구체예로 Me3SnOH을 상기 화학식 X3로 표시되는 화 합물에 처리함으로써 수행될 수 있다. 상기 단계에서 제조한 화학식 X4로 표시되는 화합물을 고리화 반 웅시켜 화학식 X5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반응온도는 상기 조건과 동일하므로 중복 설명을 피하기 위해 생략한다. 다만ᅳ 반 웅시간은 몇 가지 예시로 1분 내지 20분, 5분 내지 20분， 10분 내지 20분， 15분 내지 20분 , 1분 내지 15분， 1분 내지 10분， 또는 1분 내지 5분으로 수행할 수 있다. 본 단계는 보호기인 PG4가 제거되며 생성되 는 아민기가 인접한 하이드록시기와 탈수 반웅을 통해 고리화되는 단 계이다. 상기 단계에서 제조한 화학식 X5:로 표시되는 화합물의 -OtBu 기 를 -0H로 전환시켜， 화학식 Π로 표사되는 화합물을 제조하는 단계의 반응온도는 특별히 제한되는 것은 아니지만， 상온에서 수행할 수 있다 이때， 상온이란 몇 가지 예시로 10 °C 내지 50°C， 20 °C 내지 50 °C , 25 °C 내지 501 , 30 °C 내지 50 °C , 35 °C 내지 50 °C , 40 °C 내지 50 °C , 45 °C 내지 50 °C , 10 °C 내지 40 °C , 10 °C 내지 35 °C , 10 °C 내지 30 °C , 10 °C 내지 25 °C , 10 °C 내지 .20 °C , 또는 10 °C 내지 15 °C일 수 있다. 또 한, 반웅시간은 특별히 제한되는 것은 아니지만， 몇 가지 예시로 lh 내지 24h , 5h 내지 24h , 10h 내지 24h , 15h 내지 24h , 20h 내지 24h , lh 내지 20h , lh 내지 15h , lh 내지 10h , 또는 lh 내지 5h일 수 있다. 본 단계는 -OtBu 기를 -OH로 전환시키는 단계로， 화합물 합성분야에서 일반적으로 알려진 전환 방법이면 제한 없이 사용할 수 있으며， 한 가 지 예로는 디옥산에 용해된 HC 1을 처리함으로써 수행될 수 있다. 상기 화학식 m으로 표시되는 화합물은 하기 반웅식 3에 나타난 바와 같이 ,
화학식 Y1으로 표시되는 화합물과， 화학식 Y2로 표시되는 화합물 을 반웅시켜， 화학식 Y3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ; 및
상기 단계에서 제조한 화학식 Y3으로 표시되는 화합물의 PG4 보 호기를 제거하여， 화학식 m으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계로 제조될 수 있다.
[반웅식
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0002
R3는 상기 화학식 I에서 정의한 바와 같고 ; 및
PG2 내지 PG4는 보호기 (protecting group)이다) . 다른 측면에서，
PG2는 아세톡시 (Acetoxy, OAc)이고;
PG3은 트리페닐메틸 (triphenylmethyl)이고; 및
PG4는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (9-
Fluorenylmethyloxycarbonyl , Fmoc)일 수 있다. 화학식 Y1으로 표시되는 화합물과, 화학식 Y2로 표시되는 화합물 을 반응시켜， 화학식 Y3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반응 온도는 특별히 제한되는 것은 아니지만， 상온에서 수행할 수 있다. 이 때， 상온이란 몇 가지 예시로 10°C 내지 50 °C , 20 °C 내지 50 °C , 25 °C 내지 50 °C , 30 °C 내지 50 °C , 35 °C 내지 50 °C , 40 °C 내지 50 °C , 45 °C 내지 50 °C , 10°C 내지 40°C， 10 °C 내지 35°C， 10 °C 내지 30 °C , 10 °C 내지 25 °C , 10 °C 내지 20°C， 또는 10°C 내지 15°C일 수 있다. 또한, 반응시간은 특별히 제한되는 것은 아니지만， 몇 가지 예시로 lh 내지 24h, 5h 내지 24h, 10h 내지 24h, 15h 내지 24h, 20h 내지 24h, lh 내 지 20h, lh 내지 15h, lh 내지 10h, 또는 lh 내지 5h일 수 있다. 본 단계는 화학식 Y1으로 표시되는 화합물의 하이드록시기와 화학식 Y2로 표시되는 화합물의 아민기가 탈수 축합을 통해 결합되는 반응이다. 상기 단계에서 제조한 화학식 Y3으로 표시되는 화합물의 PG4 보 호기를 제거하여， 화학식 m으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계의 반웅온도는 상기 조건과 동일하므로 중복 설명을 피하기 위해 생략한 다. 다만， 반응시간은 몇 가지 예시로 1분 내지 60분， 10분 내지 60분， 20분 내지 60분， 30분 내지 60분， 40분 내지 60분， 50분 내지 60분， 1 분 내지 50분, 1분 내지 40분， 1분 내지 30분， 1분 내지 20분， 또는 1 분 내지 10분으로 수행할 수 있다 V 본 발명은 일 측면에서，
합성 중간체인 하기 화학식 α로 표시되는 화합물， 이의 광학 이 성질체 , 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
[화학식 α ] 광
학또본 ί
이다발학
성르시 rt」 Γo
P C
Figure imgf000017_0001
II
(상기 화학식 α에서，
η 및 L은 상기 반웅식 1에서 정의한 바와 같고; 및
A1 및 A2는 독립적으로 -H, 또는 보호기 (protecting group)이다). 다른 측면에서，
상기 A1 및. A2의 보호기는 tert—부틸옥시카보닐 (tert- Butyloxycarbonyl , Boc)일 수 있다. 즉면에서 ,
은 합성 중간체인 하기 화학식 β로 표시되는 화합물， 이 질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
Figure imgf000017_0002
(상기 화학식 β에서，
R3는 상기 화학식 I 에서 정의한 바와 같고; 및
Ε1, Ε2 및 Ε3는 독립적으로 Η, -0Η, 또는 보호기 (protecting group)이다 ) · 다른 측면에서，
E1, E2의 보호기는 아세톡시 (Acetoxy, OAc)이고; 및
E3의 보호기는 트리페닐메틸 (triphenylmethyl)일 수 있다. 본 발명의 또 다른 측면에서 , 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성 분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다. 다른 측면에서， 상기 약학적 조성물은 ADC 형태일 수 있다. 본 발명의 다른 측면에서， 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으 며， 제제화할 경우에는 보통 사용하는 층진제， 증량제， 결합제， 습윤 게， 붕해제， 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된 다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제， 환자， 산제 , 과립제， 캡술 제， 트로키제 등이 포함되며， 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발 명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면， 전분， 탄산칼슘， 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 ( lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조 제된다. 또한， 단순한 부형제 외에 마그네슴 스티레이트 탈크 같은 윤 활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제 , 내용액 거 1， 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데， 흔히 사용되는 단순 희석제인 물， 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 , 예를 들면 습윤제 , 감미 제， 방향제， 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액， 비수성용제， 현탁 용제， 유제， 동결건조제제 , 좌제 등이 포함된다. 비수성용제， 현탁용 제로는 프로필렌글리콜， 폴리에틸렌 글리콜， 올리브 오일과 같은 식물 성 기름， 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골， 트원 (tween) 61， 카카오지， 라우린지， 글리세를， 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 또한， 본 발명의 다른 측면에서 , 상기 화합물의 인체에 대한 효 과적인 투여량은 환자의 나이 , 몸무게， 성별， 투여형태， 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며， 일반적으로 약 0.001~100 mg/kg/ 일이며 , 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70 kg인 성인 환자를 기준으로 할 때， 일반적으로 0.07~7000 mg/일이며 , 바람직하게 는 0.7-2500 mg/일이며， 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격 으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. 【발명의 실시를 위한 형태】
이하， 본 발명의 일 측면에 따른 내용을 실시예 및 실험예를 통 해 상세히 설명한다. 단， 후술하는 실시예 및 실험예는 본 발명을 예 시하는 것일 뿐 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> (2R,3R,4S)-5-(tert-부특시 )-4-((2S,4R)-4-하이드록 시 -1-(N4-트리틸 -L-아스파라기닐 )피를리딘 -2-카복스아미도 )-3-메틸 -5- 옥소펜탄 -1,2-다이일 다이아세테이트 (1-1) 단계 1: (2S,4R)-2- ( (알릴옥시 )카보닐 )-4—하이드록시피를리딘 -1- 움 4-메틸벤젠설포네이트 (la)
Figure imgf000019_0001
1a
자기교반 바 및 딘-스타크 리시버가 담긴 건조된 플라스크에， 트 랜스 -L-하이드록시프를린 (1.0 g, 7.63 隱 101)， P-를루엔 설포닉 에시 드' 모노하이드레이트 (1.6 g, 8.39 匪 ol), 알릴 알콜 (5.2 mL, 76.3 mmol) 및 벤젠 (60 mL)을 담았다. 상기 흔합물을 4 h 동안 가열 환류 하여 갈색의 균질 용액을 얻었다. 상기 용액을 상온으로 냉각하고， 감 압 하에 농축하여 표제의 염 la (2.52 g, 7.34 mmol , 96%)를 갈색 오 일로서 제조하였다. 조 흔합물은 별도의 정제 없이 다음 단계에 사용 하였다. 단계 2: 알릴 _(2S,4R)-1-(N2-(((9H-플루오렌 -9-일)메특시 )카보 닐 )-N4-트리틸 -L-아스파라기닐 )-4-하이드록시꾀를리딘 -2-카복시레이트
(lb)
Figure imgf000019_0002
1b
THF (25 mL)에 용해된 ( (9 -플루오렌 -9-일)메록시 )카보닐) - 트리틸—L-아스파라긴 (1.0 g, 1.67 mmol) 용액에， 상기 단계 1에서 제조한 la (1.15 g, 3.35 隱 ol)를 첨가하였다. 0°C에서 HATU (1.27 g, 3.35 隱 ol)와 DIPEA (0.87 mL , 5.02 隱 ol)를 순차적으로 첨가하고, 상 기 반웅 흔합물을 rt에서 12 h 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출 발 물질의 완전한 소모를 확인하였다. THF를 제거하기 위하여 상기 반 응 흔합물을 농축하고， 물을 첨가한 후， EtOAc (2 X 50 mL)로 농축하 고, 유기층올 브라인 용액 (2 X 15 mL)으로 세척한 후， 소듐 설페이트 로 건조하고， 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻고 이를 컬럼 크로 마토그래피로 정제하여 표제의 화합물 lb (810 mg, 1.08 mmol , 64%)를 흰색 고체로서 제조하였다.
¾ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7.72 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.52 (t / = 6.5 Hz, 2H) , 7.36 (t , J = 7.4 Hz, 2H) , 7.39 - 7.21 (m, 16H) , 7.14 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H) , 6.31 (d, J = 7.89 Hz, 1H) , 5.88 - 5.76 (m, 1H) , 5.30 - 5.17 (m, 2H) , 4.76 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 4.66
- 4.60 ( m, 1H) , 4.53 - 4.44 (m, 3H), 4.32 - 4.11 (m , 1H)： , 3. 76 -
3.59 (m, 2H), 2.69 (s, 2H) , 2.50 (s, 1H), 2.02 - 1.93 (m， 1H)
13C 匪 R (125 MHz, CD3OD) δ 173 .00, 172.96, 172 .65， 170 .96,
158.00, 145.81, 145.74, 145.18, 145. 06, 142.53， 142. 50， 133 .29,
130.05, 128.77, 128.74, 128.71， 128. 20， 128.18, 127. 80， 126 .26，
126.21, 126.10, 120.89, 118.76, 71.91, 70.86, 68.19, 66.82, 61.51 59.56, 56.12， 51.60, 48.25, 39.56, 38.19， 20.86, 14.46；
LC/MS m/z 750.7 [M + H+] .
HRMS (EI) /z calcd for C46H43N307 [M+] 749.3101. 단계 3: (2S,4R)-1-(N2-(((9H-플루오렌 -9-일)메톡시 )카보닐) 트리틸 -L-아스파라기닐 )_4_하이드록시피를리딘 -2_카복실릭 에入' (lc)
Figure imgf000020_0001
1b 1c
THF (200 mL)에 용해된 상기 단계 2의 lb (800 mg, 1.06 mmol) 화합물 용액에 , PhSiH3 (577 mg, 5.33 mmol)를 첨가하였다. 0， 질소 분위기 하에서 , 상기 흔합물에 Pd(PPh3)4 (123 mg, 0.106 mmol)를 첨 가하고， rt에서 4 h 동안 교반하였다. 그 후， H20로 희석하고， EtOAc (2 X 150 mL)로 추출하였다. 수집된 유기층을 감압 하에 증류하여 조 흔합물을 얻었으며， Me0H/MC (1/4)를 사용한 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피를 통해 정제하여 표제 화합물
미색 고체로서 제조하였다.
^ NMR (300 MHz, DMS0_ /6) δ 8.58 (s, 1Η) , 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.77 - 7.62 (m, 3H) , 7.41 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 7.33 -
7.07 (m, 18H) , 5.17 (s, 4.49 (t , J = 8.1 Hz, 1H) , 4.41 - 4.12 (m, 4H), 3.58 (dd, 10.4, 4.7 Hz, 1H) , 3.49 - 3.38 (m, 1H) , 2.62 (dd, J 14.6, 9.9 Hz, 1H) , 2.47 - 2.36 (m, 1H) , 2.15 1.98 (m, 1H) , 1.96 - 1.82 (m, 1H)；
13C NMR (125 MHz, CD30D) δ 175.15, 172.65, 171.06, 158.03 145.82, 145.73, 145.17, 145.08, 142.51, 133.09, 133.00, 130.05 129.90， 128.76， 128.74, 128.70, 128.21， 128.18， 127.79, 126.20 126.10, 120.88, 71.90, 70.86, 68.19， 61.52, 59.45, 56.08 51.67 48.26, 39.59, 38.32, 20.86, 14.46；
LC/MS m/z 708.2 [M - H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C43H39N3O7 [M+] 709.2788. 단계 4: (2R,3R,4S)-4-((2S,4R)-l-(N2-(((9H-플루오렌 -9-일 )메톡 시 )카보닐) -N4-트리틸 -L-아스파라기닐 )-4-하이드록시피를리딘 -2-카복 스아미도) -5-(tert_부톡시 )-3-메틸 -5-옥소펜탄 -1,2-다이일 다이아세테 이트 (1)
HRMS: 303.1647
Figure imgf000021_0001
1c 1
0°C에서 DCM (25 mL)에 용해된 상기 단계 3의 lc (500 mg, 0.704 mmol) 화합물 용액에， 상기 반웅식에서 화학식 11-11 (263 mg, 0.774 隱 ol)로 표시되는 화합물을 첨가하였다. 이 흔합 용액에， PyBOP (476 mg, 0.915 mmol) 및 DIPEA (0.36 mL， 2.11 隱 ol)를 첨가하고， 12 h 동 안 교반하였다. 물 (10 mL)을 사용하여 반웅 흔합물을 뭔치 (quenched) 하고， DCM (2 X 25 mL)으로 추출하였다. 수집된 유기층을 브라인 용액 으로 세척하고， 소듐 설페이트로 건조한 후， 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성물은 용리액으로서 Me0H/MC (1:9)를 사 용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 1 (595 mg, 0.598 mmol , 85%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다. XH NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.80 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.69 - 7.62 (m, 2H)， 7.39 (t , / = 7.5 Hz, 2H) , 7.26 (q, / = 6.0 Hz, 17H) 5.04 ― 4.95 (m, 1H), 4.73 - 4.56 (m, 2H) , 4.46 - 4.30 (m, 5H),
4.26 - 4.18 (m, 1H) , 3.99 (dd, J 12.4, 5.8 Hz, 1H) , 3.78 - 3.66 (in, 1H), 3.53 (dd, J = 10.8， 4.4 Hz, 1H) , 3.23 (q, J = 7.4 Hz, 1H) , 2.73 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 2.36 - 2.16 (m, 2H) , 2.12 - 2.06 (m, 1H) , 2.04 - 2.00 (m, 3H) , 1.96 (s , 2H) , 1.47 (s , 9H) , 0.97 (d J = 7.0 Hz, 2H) , 0.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H) .
1 C NMR (125 MHz, CDC13) δ 157.29, 155.37 155.25 146.54 138.35, 134.64, 131.35, 128.68, 127.90， 125.01, 123.59 123.33 121.17, 120.62, 117.84， 110.48， 106.49, 56.02, 55. 21.69 18.94, 15.37.
LC/MS m/z 995.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C57H62N4012 [M+] 994.4364. 단계 5: (2R,3R,4S)-5-(tert_부톡시 )-4-((2S,4R)-4-하이드록시 1-(N4-트리틸 -L—아스파라기닐 )피를리딘 -2-카복스아미도 )-3-메틸 -5-옥 소펜 -1,2-다이일 다이아세테이트 (1-1)
Figure imgf000022_0001
rt에서 DCM (15 mL)에 용해된 상기 단계 4에서 제조한 1 (590 mg,
0.593 mmol) 화합물 용액에， DBU (95 mg, 0.622 隱 ol)를 첨가하고 30 분 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출발 물질의 완전한 소모를 확 인하였다. 물 (10 niL)을 사용하여 반웅 흔합물을 퀀치 (quenched)하고， 에틸 아세테이트 (2 X 30 mL)를 사용하여 추출하였다. 수집된 유기층 을 브라인 용액으로 세척하고， 소듐 설페이트로 건조한 후， 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성물은 용리액으로서 MeOH/MC (1:4)를 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 1-1 (385 mg, 0.498 mmol , 84%) 화합물을 흰색 고체로서 제 조하였다.
^ NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.28 - 7.04 (m, 15H), 4.94 - 4.82
(m, 1H) , 4.50 - 4.41 (m, 1H) , 4.34 - 4.29 (m, 1H), 4.28 - 4.23 (m, 1H) , 4.18 (dd, J = 12.3, 2.5 Hz, 1H) ,. 3.92 - 3.82 (m, 1H) , 3.81 - 3.75 (m, 1H) , 3.38 - 3.31 (m, IH) , 3.27 - 3.23 (m, 1H) , 2.65 - 2.45 (m, 2H) , 2.21 - 2.08 (m, 2H), 1.99 - 1.93 (m, IH) , 1.92 - 1.89 (m, 3H) , 1.85 (s, 2H)， 1.41 - 1.32 (m, 9H) , 0.84 (d, J = 7.1 Hz, 2H)， 0.69 (d, J = 7.0 Hz, IH) .
13C 丽 R (125 MHz, CDC13) δ 157.29, 155.37, 155.25, 146.54, 138.35, 134.64, 131.35, 128.68， 127.90， 125.01, 123.59, 123.33, 121.17， 120.62, 117.84, 110.48， 106.49, 56.02, 55.53, 21.69, 18.94, 15.37.
LC/MS m/z 773.3 [M + H+] .
HRMS (ΕΓ) m/z calcd for C42H52N4010 [M+] 772.3683, found 772.3672.
<실시예 2> tert-부틸 S-(6-((tert-부특시카보닐)아미노 )-3- ((S)-2-((tert-부록시카보닐 )아미노 )-3-메록시 -3-옥소프로필 ) -1H-인돌 -2-일 ) -L-시스테이네이트 (2-1)
Figure imgf000023_0001
.-tryptophan 2a 빙초산 (250 mL)에 용해된 L-트립토판 (20.4 g, 100 mmol) 및 우 레아 (0.25 g, 4.16 mmol) 현탁액에 , 빙초산 (15 mL)에 용해된 발연 질산 용액을 첨가하였다. 이에' 얻어지는 노란색의 용액이 현탁액으로 변할 때까지 0에서 교반하였다. 빙초산 (35 mL)에 용해된 발연 질산 (8.75 mL)을 15°C에서 액적으로 천천히 첨가하였다. Rt에서 18 h 동안 교반한 후， 얻어지는 노란색의 침전물을 필터하여 수집하여 조 생성물 을 얻었고， 이를 뜨거운 물 (100 mL)에 용해시킨 후 , 소듐 카보네이트 로 중화하고， 에탄올로 재결정화하여 표제 화합물인 2a (10.7 g, 42.9 mmol , 43%) 화합물을 노란색의 고체로서 제조하였다.
NMR (300 MHz, CDC13) δ 8.45 (s, IH), 8.04 (d, / = 9.0 Hz
IH) , 7.83 (d, J = 9.0 Hz, IH) , 7.67 (s, IH) , 3.69 (t , / = 6.0 Hz, IH) , 3.18-3.33 (m, 2H)；
LC/MS m/z 249.1 [M + H+] . 단계 2: 메틸 (S)-2-아미노 -3 (6-나이트로 -IH-인돌 -3-일)프로파 노에이트 하이드로클로라이드 (2b)
Figure imgf000024_0001
MeOH (80 mL)에 용해된 상기 단계 1의 2a (10.0 g, 40.1 mmol) 화합물 용액을 0°C로 넁각하고, 티오닐 클로라이드 (6.4 mL, 88.2 隱 ol)를 첨가한 후, 30분 동안 교반하였다. 반응 흔합물을 가열 환류
1 8 h 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출발 물질의 완전한 소모 확인하였다. 반웅 흔합물을 감압 하에 농축하여 티오닐 클로라이드 MeOH를 제거하였다. 잔여물에 DCM을 첨가하고， 고체 침전물을 필터 후, 건조하여 표제 화합물인 2b (11.3 g, 37.70 mmol , 94%) 화합물 흰색 고체로서 제조하였다.
:H NMR (300 MHz, CD30D) δ 8.39 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.01
(dd, J = 8.9, 2.1 Hz, 1H) , 7.69 (d, J = 8.8 Hz, 1H)， 7.57 (s, 1H) 4.38 (dd, J = 6.9, 6.0 Hz, 1H) , 3.80 (s, 3H) , 3.54 - 3.34 (m, 2H)；
13C NMR (125 MHz, DM SO) δ 169.53, 141.93， 134.59, 132.15, 131.82, 118.44, 113.82， 108.41, 108.09, 52.72, 52.61, 25.57；
LC/MS m/z 264.2 [M + H+] .
HRMS (EI) nil z calcd for C12H13N304 [M+] 263.0906. 단계 3: 메틸 (S)_2-아미노 -3-(6-아미노 1H-인돌— 3-일)프로파노 에이 하이드로클로라이드 (2c)
Figure imgf000024_0002
2b 2c
MeOH (100 ml)에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 2b (10 g, 33.3 mmol) 화합물 용액에， Pd/C (10 mol%, 1.0 g)를 첨가하였다. 상기 흔 합물을 수소 분위기 (벌룬) 하에 12 h 동안 교반하였다. TLC를 통해 반 웅이 완결됨을 확인한 후， 샐라이트를 통한 필터로 촉매를 제거하였다 필터된 흔합물을 감압 하에 농축하여 표제 화합물인 2c (8.9 g, 32.9 mmol , 99%) 화합물을 갈색 고체로서 제조하였다.
¾ NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 6.98 (s 1H), 6.82 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 6.65 (dd, J = 8.4, 1,9 Hz, 1H) , 4.24 (dd, J = 7.5， 5.4 Hz, 1H) , 3.79 (s, 3H) , 3.41 - 3.20 (m, 2H)；
13C NMR (125 MHz, CD30D) δ 171.32, 141.71， 139.31， 123.96 122.69， 119.48, 112.34, 107.75, 99.83, 54.70, 53.52, 27.93；
LC/MS m/z 234.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for 233.1164, found 233.1164. 단계 4: 메틸 -(S)-2-((tert_부특시카보닐)아미노 )-3-(6-((tert_
Figure imgf000025_0001
2c 2d
0°C에서 DCM (150 mL)에 용해된 2c (5.0 g, 18.53 隱 ol) 화합물 용액에， Boc 무수물 (8.9 g, 40.78 mmol)을 첨가하고， 트리에틸아민 (8.3 mL, 59.3 mmol)을 첨가하였다. 반웅 흔합물을 rt에서 5 h 동 교반하였다. 반응이 완결되면 물 (100 mL)을 사용하여 퀸치하고， DCM (2 X 150 mL)으로 추출하였다. 수집되는 ^기층을 sat 브라인 용액으 로 세척하고， Na2S04로 건조한 후， 용매를 감압 하에 제거하여 조 생 성물을 얻었고， 이를 컬럼 크로마토그래피 - 통해 정제하여 표제 화합
2d (7.9 g, 18.22 mmol , 98%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였 다.
匪 R (300 MHz, CDC13) δ 7.95 (s, 1H) , 7.76 (s, 1H) , 7.41
(d, J = 8.5 Hz, 1H) , 6.93 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 8.9， 1.3 Hz, 1H) , 6.51 (s, 1H) , 5.05 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 4.69 - 4.53 (m, 1H) , 3.66 (s, 3H) , 3.24 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 1.53 (s, 9H), 1.42 (s, 9H)；
13C 匪 R (125 MHz, CDCI3) δ 172.93, 155.37, 153.35， 136.70,
133.44, 123.97, 122.72, 118.87, 112.52， 109.89, 101.81， 80.30, 79.94， 54.29, 52.31， 28.53， 28.44, 28.14;
LC/MS m/z 434.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C22H31N306 [M+] 433.2213, found 433.2213. 단계 5: 다이 -tert-부틸 -3，3'-다이설판다이일 (2R,2'R)_비스 (2ᅳ ((((9H-플루오렌 -9-일)메톡시 )카보닐) 아미노)프로파노에이트) (2e)
Figure imgf000026_0001
2e
0°C에서 물 (25 mL) 및 디옥산 (50 mL)에 용해된 (2R,2'R)-3,3'- 다이설판다이일비스 (l-(tert-부톡시 )-1-옥소프로판 -2-아미늄) 클로라 이드 (5.0 g, 11.75 mmol) 용액에， NaHC03 (4.9 g, 58.76 mmol)와 Fmoc-OSu (11.9 g, 35.2 隱 ol)를 순차적으로 첨가하였다. 반응 흔합물 을 rt에서 12 h 동안 교반하였다. 반옹이 종결되면， 반웅 흔합물을 DCM (2 X 150 mL)으로 추출하였다. 수집되는 유기층을 sat . 브라인 용 액으로 세척하고， Na2S04로 건조한 후， 감압 하에 용매를 제거하여 조 생성물을 얻었고, 이를 DCM/EtOAc를 사용한 재결정화를 통해 정제하여 표제 화합물인 2e (8.2 g, 10.28 mmol , 87%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다. '
¾ 匪 R (300 MHz, CDCls) δ 7.77 (d, J = 7.3 Hz, 4H) , 7.61 (d J = 7.2 Hz, 4H) , 7.40 (t , J = 7.5 Hz, 4H) , 7.32 (d, J = 7.2 Hz, 4H) , 5.75 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 4.60 (d, / = 7.7 Hz, 2H) , 4.38 (d, J = 6.6 Hz, 4H), 4.22 (t , J = 7.2 Hz, 2H) , 3.23 (t , J = 5.8 Hz, 4H) , 1.50 (s, 18H)；
UC NMR (125 MHz, CDCI3) δ 169.45, 155.83， 143.94, 143.89 141.39, 127.81, 127.18, 125.28 120.08， 83.25， 67.35, 54.28 47.22, 42.03, 28.13;
LC/.MS m/z 434.2 [M + H+] .
HRMS (EI) /z calcd for C44H48N208S2 [M+] 796.2852, found 796.2831. 단계 6: tert-부틸 N-(((9H-플루오렌 -9-일)메톡시 )카보닐) -S-(6- ((tert-부톡시카보닐)아미노 )-3-((S)_2-((tert 부톡시카보닐)아미노) -
3-메톡시 -3-옥소프로필 ) -1H-인돌 -2-일：) -L-시스테이네이트 (2) so2ci2
CHCI3, 40 min, rt
Figure imgf000027_0001
2e 2 무수 클로로포름 (90 mL)에 용해된 상기 단계 5의 2e (8.0 g, 10.0 mmol) 화합물 용액을 대기 하에 격렬히 교반하고， 술퍼릴 클로라 이드 (3.24 mL, 40.1 mmol)를 액적으로 첨가하였다. 대기 하 상은에서 상기 용액을 45분 동안 교반하고， 시간이 지남에 따라 노란색으로 변 화하는 것을 확인하였다. TLC를 통해 술페닐 클로라이드의 생성이 대 부분 완료되었음을 확인하였다. 상기 용액을 진공 하에 빠르게 농축하 여 과량의 술퍼릴 클로라이드를 제거하여， 술페닐 클로라이드를 점성 의 노란색 오일로서 얻었다. 상기 술페닐 클로라이드를 즉시 무수 CHC13 및 THF (3:1) (120 mL)에 용해시키고， 질소 분위기 하 얼음조에 서 5분 동안 교반하였다. 상기 용액에 NaHC03 (2.81 g, 33.4 隱 ol)를 빠르게 처리하고， 즉시 상기 반응식에서 화학식 2d (2.9 g, 6.69 隨 ol)로 표시되는 화합물이 용해된 무수 CHC13 및 THF (3:1) (25 mL) 용액을 처리하였다. 상기 용액을 얼음조에서 15분 동안 교반하고， 상 온으로 승온하여 12 h 동안 교반하였다. 상기 용액을 감압 하에 농축 하고， 잔여물을 EA/MC (1:9)를 용리액으로서 사용한 실리카 플래쉬 컬 럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 2 (3.5 g, 4.21 mmol , 63%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다.
¾ 丽 R (300 MHz, CDCI3) δ 9.84 (s, 1H), 7.77 (d, J = 7.7 Hz
2H) , 7.64 (d, J = 6.6 Hz, 2H) , 7.44 - 7.27 (m, 6H) 6.75 (d, J = 9.7 Hz, 1H) , 6.49 (s, 1H) , 5.59 (d, / = 8.1 Hz, 1H) 5.12 (d, J = 9.9 Hz, 1H) , 4.59 (d, / = 5.9 Hz, 1H) , 4.53 - 4.35 (m, 3H), 4.24 (t , J = 6.8 Hz, 1H) , 3.58 (s, 3H) , 3.32 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.73- 2.64 (m, 1H) , 1 52 (s, 9H) , 1.44 (s, 9H)；
13C NMR (125 MHz CDCls) δ 172.79, 169.74， 156.92 155.19 153.01, 143.88， 143.80 141.44， 141.40， 137.31, 137.16 134.39 127.82， 127.21, 125.41 125.30, 125.02, 124.86, 124.09 120.07
119.41， 115.87 112.46， 101.12， 83.59, 80.40, 79.84, 67.60, 54.70 54.61， 54.26, 54.17， 52.36, 47.21, 40.97， 28.52, 28.48, 28.15， 28.07；
LC/MS m/z 831.4 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C44H54N40i0S [M+] 830.3561. 단계 7: tert-부틸 S-(6-((tert-부톡시카보닐)아미노 )-3-((S)-2- (( tert-부톡시카보닐)아미노 )-3—메톡시 -3-옥소프로필) -1H-인돌 -2-일 )-
L-시
Figure imgf000028_0001
2 2-1
rt에서 DCM (250 mL)에 용해된 상기 단계 6의 2 (3.5 g, 4.211 隱 ol) 화합물 용액에， DBU (0.67 g, 4.42 隱 ol)를 액적 첨가하고， 반 응 흔합물을 1 h 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출발 물질의 완전 한 소모를 확인하였다. 반응 흔합물을 물 (100 mL)로 퀸치하고， DCM (2 X 150 mL)으로 추출하였다. 수집되는 유기층을 브라인 용액으로 세 척하고， 소듐 설페이트로 건조한 후， 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성물은 MeOH/MC (1:4)를 용리액으로서 사용하는 컬 럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 2-1 (2.2 g, 3.61 誦 ol, 86%) 화합물을 갈색 고체로서 제조하였다.
¾ NMR (300 MHz, CDC13) δ 10.64 (s, 1H) , 7.74 (s, 1H) , 7.33
(d, J = 8.5 Hz, 1H) , 6.70 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 6.53 (s, 1H), 5.15
(d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.57 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 3.72 (t , J = 5.1 Hz, 1H) , 3.65 (s, 3H) , 3.26 (d, J = 5.5 Hz, 2H) , 3.04 (d, J = 4.3 Hz, 2H) , 1.83 (s, 2H) , 1.53 (s, 9H), 1.49 (s, 9H) , 1.40 (s, 9H)；
13C NMR (125 MHz, CD30D) δ 174.41, 173.84， 157.51, 155.59,
138 89， 136.02, 126.04, 125.15， 119.74, 116.77， 82.93, 80.61, 56.08, 55.76, 52.68, 41.78， 28.79， 28.71， 28.67， 28.20；
LC/MS m/z 608.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C29H44N408S [M+] 608.2880.
<실시예 3> (((9H-플루오렌 -9-일)메록시)카보닐)글리실 -L-이소류 실글라이신 단계 1: 2- (알릴옥시 ) -2-옥소에탄 -1-아미늄 4-메틸벤젠설포네 o (3a)
Figure imgf000029_0001
3a
자기교반 바 및 딘-스타크 리시버가 담긴 건조된 플라스크에， 글 라이신 (2.0 g, 26.3 讓 ol), P-를루엔 설포닉 에시드 모노하이드레이 트 (5.0 g, 26.3 mmol) , 알릴 알콜 (10.7 mL, 158 mmol) 및 벤젠 (100 mL)을 첨가하였다. 9.0 ml H20가 수집될 때까지 상기 흔합물을 4 h 동 안 가열 환류하고， TLC를 통해 완전한 전환을 확인하였다. 상기 현탁 액을 감압 하에 농축하고， 에테르 (100 mL)로 재결정하여 표제 염인 3a (7.3 g, 25.4 mmol , 97%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다. 단계 2: 알릴 (((9Η—플루오렌 -9-일)메톡시 )카보닐) -L-이소류실 리시네이트 (3b)
Figure imgf000029_0002
3a 3b
0°C에서 DCM (.40 mL)에 용해된 Fmoc-L-이소류신 (4.0 g, 11.3 mmol) 용액에， 상기 단계 1에서 제조한 3a (3.9 g, 13.6 mmol) 화합물 을 첨가하였다. 이 반웅 흔합물에 PyBOP (7.64 g, 14.7 mmol) 및 DIPEA (5.9 mL, 33.9 隱 ol)를 첨가하고, 상기 반웅 흔합물을 2 h 동안 교반하였다. 반웅 흔합물은 물 (40 mL)를 사용하여 퀸치하였고， DCM (2 X 45 mL)으로 추출하였다. 수집되는 유기층을 브라인 용액으로 세 척하고， 소듬 설페이트로 건조한 후， 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성물은 용리액으로서 Et0Ac/Hx (1:1)를 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 3b (4.6 g, 10.2 mmol , 90%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다.
¾ 匪 R (300 MHz, CDC13) δ 7.77 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.59 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 7.40 (t , J = 7.3 Hz, 2H) , 7.31 (t , J = 7.3 Hz, 2H) , 6.34 (s, 1H) , 5.98 - 5.81 (m, 1H) , 5.41 - 5.19 (m, 3H) , 4.65 (d, J = 5.8 Hz, 2H) , 4.42 (s, 2H) , 4.22 (t , J = 6.8 Hz, 1H), 4.14 - 3.95 (m, 3H) , 1.92 (s, 1H) , 1.58 (s, 1H) , 1.16 (s, 1H)， 1.01 - 0.79 (m, 6H)；
13C NMR (125 MHz, CDC13) δ 171.68, 169.37, 156.46， 143.94, 143.87, 141.42, 131.51, 127.83, 127.20, 127.17, 125.19, 120.10 119.19， 67.16, 66.20, 59.72, 47.32, 41.35, 37.47, 26.39, 26.33 24.88, 15.54, 11.48；
LC/MS m/z 451.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C26H30N205 [M+] 450.2155. 단계 3: 알릴 (((9H-플루오렌 -9-일)메톡시 )카보닐)글리실 -L-이소 류실글리시네이트 (3)
Figure imgf000030_0001
rt에서 DMF (70 mL)에 용해된 상기 단계 2의 3b (4.51 g, 10.0 匪 ol) 화합물 용액에， DBU (1.57 mL, 10.51 隱 ol)를 첨가하고， 상기 반응 흔합물을 10분 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출발 물질의 완전한 소모를 확인하였다. 이 반웅 흔합물에， DMF (30 mL)에 용해된 Fmoc-Gly-OH (3.57 g, 12.01 睡 ol) 및 PyBOP (6.25 g, 12.01 隱 ol) 용 액을 첨가하고， 상기 반응 흔합물을 1 h 동안 교반하였다. 반웅 흔합 물을 물 (100 mL)로 희석하고， 에틸 아세테이트 (3 X 250 mL)로 추출 하였다. 상기 수집된 유기층은 브라인 용액으로 세척하고, 소듐 설페 이트로 건조한 후， 감압 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성 물은 용리액으로 EtOAc/핵산 (4:1)올 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마 토그래피를 통한 정제를 통해 표제 화합물인 3 (3.6 g, 7.09 醒 ol, 71%) 화합물올 흰색 고체로서 제조하였다.
XH NMR (300 MHz, DMS0_d6) δ 8.51 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.85 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 7.72 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.55 (t , / = 6.1 Hz, 1H) , 7.42 (t , J = 7.4 Hz, 2H), 7.33 (t , J = 7.4 Hz, 2H) , 5.99 - 5.80 (m, 1H) , 5.32 (d, J = 17.3 Hz, 1H) , 5.22 (d, J = 10.5 Hz, 1H) , 4.57 (d, J = 5.5 Hz, 2H) , 4.26 (q, J = 7.0， 6.3 Hz, 4H) , 4.00 - 3.75 (m, 2H) , 3.68 (d, J = 6.1 Hz, 2H) , 1.82 - 1.65 (m, 1H) , 1.44 (s, 1H), 1.08 (dt , J = 14.6, 7.6 Hz, 1H) , 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 0.80 (t , J = 7.3 Hz, 3H)；
13C NMR (125 MHz, DMS0) δ 171.50, 169.33, 168.88, 156.47, 143.84, 140.72, 132.35, 127.62, 127.08， 125.24, 120.10, 117.89 65.74, 64.77, 56.53, 46.64, 43.31, 40.62, 36.95, 24.17， 15.21 11.12;
LC/MS m/z 508.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C28H33N306 [M+] 507.2369. 단계 4: (((9H-플루오렌 -9—일)메톡시 )카보닐)글리실 -L-이소류실
Figure imgf000031_0001
3 3-1 0°C에서， THF (300 mL)에 용해된 상기 단계 3에서 제조한 3 (3.5 g, 6.89 mmol) 화합물의 현탁액에， PhSiH3 (4.25 mL, 34.4 隱 ol)를 첨 가하였다. 상기 흔합물에 Pd(PPh3)4 (797 mg, 0.69 隱 ol)를 첨가하고， 2 h 동안 교반하였다. 상기 반응 흔합물을 H20로 희석하고， EtOAc (2 X 150 mL)로 추출하였다. 상기 수집된 유기층을 감압 하에 증류하여 조 생성물을 얻었고， 이는 Me0H/MC (1/4)를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 3-1 (2.45 g, 5.24 mmol , 76%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다.
XH NMR (500 MHz, DMS0-d6) δ 8.32 (t , J = 5.9 Hz, 1H), 7.89 (d, / = 7.4 Hz, 2H) , 7.80 (d, J = 8.9 Hz, 1H) 7.71 (d, J = 7.3 Hz, 2H) , 7.53 (t , J = 6.0 Hz, 1H) , 7.41 (t , / = 7.4 Hz, 2H) , 7.32 (t , J = 7.3 Hz, 2H) , 4.28-4.22 (m, 4H) , 3.76-3 67 (m, 4H) , 1.78- 1.68 (m, 1H), 1.48-1.39 (m, 1H) , 1.11-0.98 (m, 1H)， 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 0.79 (t , J = 7.3 Hz, 3H)；
13C NMR (125 MHz, DMSO) δ 170.96, 168.91; 156.52, 143.87 140.75, 133.74, 131.23, 127.67， 127.43， 127.33, 127.13, 125.29 120.14， 65.80， 56.78， 46.67， 43.39, 37.03, 24.24 15.36， 11.20； LC/MS m/z 468.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C25H29N306 [M+] 467.2056.
<실시예 4> 하기 화학식 10으로 표시되는 화합물
Figure imgf000032_0001
단계 1: tert-부틸ᅳ N-(((9H-플루오렌 -9-일 )메톡시 )카보닐)글리실 -L-이소류실글리실 -S-(6-((tert-부톡시카보닐) 아미노 )— 3_( (S^Z- tert-부톡시카보닐)아미노 )-3-메톡시 -3-옥소프로필) -1H-인돌 -2-일：) -
L-시 ᄋ (4)
Figure imgf000032_0002
rt에서 DMF (50 mL)에 용해된 상기 실시예 2에서 제조한 2-1 (2.1 g, 3.45 mmol) 화합물 용액에， 상기 실시예 3에서 제조한 3-1 (1.7 g, 3.62 mmol) 화합물을 첨가하였다. 상기 반응 흔합물에 PyBOP (2.7 g, 5.17 mmol) 및 DIPEA (0.9 mL, 1.848 隱 ol)를 첨가하고， 12 h 동안 교반하였다. 반웅 흔합물은 물 (100 mL)로 회석하고， 에틸 아세 테이트 (2 X 250 mL)로 추출하였다 상기 브라인 용액으로 세척하고 소듐 설페이트로 건조한 후， 감압 하 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성물은 용리액으로 MeOH/MC (1:4)를 사용 한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 4 (3.1 g, 2.93 隱 ol , 85%) 화합물을 갈색 고체로서 제조하였다.
NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.77 (d, J = 7.5 Hz, 2H) 7.68 (s 7.66 - 7.55 (m, 1H) , 7.37 (t , J = 7.1 Hz, 3H) , 7.28 (t J = Hz, 2H) , 6.92 (d, / = 8.4 Hz, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 1H), 4.31 J = 6.9 Hz, 3H) , 4.25 - 4.11 (m, 2H) , 4.05 - 3.95 (m, 1H),
3.87 3.73 (m, 3H) 3.65 - 3.54 (m, 3H) , 3.41 - 3.36 Cm, 1H) , 3.30 3.24 (m, 1H) 3.21 - 3.11 (m, 1H) , 3.07 - 2.95 (m, 애), 2.02 1.85 (m, 1H) , 1.68 - 1.57 (m, 1H), 1.53 (s, 9H) , 1.39 (s, 9H) , 1.36 (s, 9H) , 1.28 - 1.21 (m, 1H) , 0.99 (d, 7 = 6.8 Hz, 3H) , 0.92 (t , J = 7.3 Hz, 3H)；
13C NMR (125 MHz, CD30D) δ 174.46, 174.40 ， 172.57, 171.50 170.70， 158.98, 157.49, 155.62, 145.19， 142.52 , 138.78, 136.06
133.09 130.00, 129.91, 128.77, 128.17， 126.22 , 125.06, 120.91 119.92 117.53， 83.61, 80.62, 68.28, 60.01, 56.11， 54.46 52.70 48.26, 47.34， 44.78 43.48, 38.61， 37.57， 28.81， 28.68 28.16 26.10, 15.91, 11.49；
LC/MS m/z 1058.2 [M + H+] .
HRMS (EI) ml z calcd for C54H71N7013S [M 1057.4831 단계 2: (S)-3-(2— (((8S,14R)-14-(tert_부톡시카보닐 )-8-((S)_ sec-부틸) -1-(9H-플루오렌 -9-일 )— 3 , 6 , 9， 12-테트라옥소 -2-옥사-
4,7, 10, 13-테트라아자펜타데칸 -15—일 )티오) -6-( (tert-부톡시카보닐)아 1H-인돌 -3-일 )— 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노 ol 어'시
Figure imgf000033_0001
rt에서 DCE (200 mL)에 용해된 상기 단계 1에서 제조한 4 (3.0 g 2.83 議 ol) 화합물 용액에， Me3SnOH (2.56 g, 14.2 隱 ol)를 첨가하고， 80에서 12 h 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출발 물질의 완전한 소모를 확인하였다. 반응 흔합물을 농축하여 DCE를 제거하였고， EtOAc (150 mL)에 용해시킨 후， 수성 KHS04로 세척하였다. 유기층을 sat . 브 라인으로 세척하고 , 소듐 설페이트로 건조한 후， 감압 하 농축하여 조 생성물을 제조하였다. 상기 조 생성물은 용리액으로 MeOH/MC (1:4)를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정쩨하여 표제 화합물 인 5 (2.07 g, 1.98 mmol , 70%) 화합물을 갈색 고체로서 제조하였다.
:H NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.80 (d, 7.5 Hz, 2H) , 7.63 (t J = 7.4 Hz, 3H) , 7.48 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.39 (t , J = 7.4 Hz, 2H), 7.30 (t , / = 7.2 Hz, 2H) , 6.91 (d, / = 8.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.29 (m, 4H) , 4.25 - 4.14 (m, 2H) , 4.05 - 3.96 (m, 1H) , 3.87 - 3.74 (m, 3H), 3.39 (d, / = 4.2 Hz, 1H) , 3.22 - 3 12 (m, 2H), 3.10 一 2.98 (m, 1H) , 2.03 - 1.90 (m, 1H) , 1.67 - 1.58 (m, 1H) , 1.54 (s 9H) , 1.41 (s, 9H) , 1.34 (s, 9H), 1.28 - 1.20 (m 1H), 1.00 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 0.93 (t , J = 7.3 Hz, 3H)；
13C NMR (126 MHz, CD30D) δ 174.43, 171.49, 170.72 159.02
157.49， 145.20, 142.53, 138.82， 135.97, 128.77， 128.18 126.24 120.90, 120.23, 118.11， 83.62, 80.45, 68.31, 60.03, 56.25, 54.54 48.27, 47.38, 47.34, 44.80, 43.47, 37.57， 28.81, 28.70， 28.25 28.17， 27.38， 27.31， 26.10， 15.93， 11.48；
LC/MS m/z 1044.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C53H69N7013S [M+] 1043.4674. 단계 3: 6 -부틸-(3^95,155)-15，19-비스(^^卜부톡시카보닐) 아미노)-9-((에6(：-부틸)—5,8,11，14-테트라옥소-
2,3,4,5,6,7,8,9， 10， 11， 12, 13， 14, 15， 16,21-핵사데카하이드로 -[1]티아 [4,7,10,13]테트라아자사이클로옥타데시노 [18,17— b]인돌 _3_카복시레
흔고유용제건
Figure imgf000034_0001
rt에서 DMF (100 mL)에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 5 (2.0 g 1.91 mmol) 용액에， DBU (0.57 mL , 3.83 隱 ol)를 첨가하고 10분 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출발 물질의 완전한 소모를 확인하였다. 상기 반웅 흔합물을 DCM (1900 mL) 및 EDCI HC1 (1.83 g, 9.57 mmol) 로 희석하고 , rt에서 HOBt (1.46 g, 9.57 隱 ol)를 첨가한 후 , 반웅 합물을 28에서 24시간 동안 교반하였다. 반웅 흔합물을 농축하여 을 제거하였고， 물을 첨가한 후， EtOAc (2 X 150 mL)로 추출하고, 기층을 브라인 용액 (2 X 150 mL)으로 세척한 후， 소듐 설페이트로 조하고, 감압 하 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성물은 리액으로 Me0H/MC (1:4)를 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 ？ 하여 표제 화합물인 6 (810 mg, 1.0 mmol , 53%) 화합물을 노란색의 체로서 제조하였다.
:H NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.60 (s, 1H) , 7.48 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.92 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H) , 4.46 - 4.30 (m, 2H), 4.25 (d, J = 5.9 Hz, 1H) , 4.15 ― 4.04 (m, 1H) , 4.01 - 3.92 (m, 1H)， 3.90 - 3.78 (m, 2H) , 3.48 - 3.33 (m, 2H) , 3.23 - 3.10 (m, 1H) , 3.08 - 2.94 (m, 1H) , 2.08 - 1.98 (m, 1H), 1.64 - 1.56 (m, 1H), 1.53 (s, 9H) , 1.33 (s, 9H) , 1.30 (s, 9H) , 1.16 - 1.08 (m, 1H) . 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 0.93 (t , J 7.3 Hz, 3H)；
13C NMR (125 MHz, CD30D) δ 176.19, 174.06, 172.39, 171.62 170.60, 157.49, 155.52, 139.11, 136.10, 125.26, 125.04, 120.10 118.42' 113.70， 102.06, 83.57， 80.79, 80.58, 60.26, 57.48: 54.79 54.31， 44.36, 43.53, 38.37, 37.11， 29.49, 28.79, 28.59, 28.07 25.91, 16.09， 11.87；
LC/MS m/z 803.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C38H57N7O10S [ΜΊ 803.3888, found 803.3888. 단계 4: (3R,9S, 15S)-15, 19-비스 ((tert-부톡시카보닐)아미노 )-9-
((에6(：—부틸)ᅳ5，8,11，14-테트라옥소- 2,3,4,5,6,7,8,9, 10,11,12, 13, 14,15, 16,21-핵사데카하이드로 -[1]티아 [4， 7， 10， 13]테트라아자사이클로옥타데시노 [18,17-b]인돌 -3-카복실릭 에 -1)
Figure imgf000035_0001
0°C에서 DCM (100 mL)에 용해된 상기 단계 3에서 제조한 6 (800 mg, 0.99 mmol) 화합물 용액에， 디옥산 (15 mL)에 용해된 4.0 M HC1을 첨가하고， rt에서 12 h 동안 교반하였다. 반웅 흔합물을 증류하여 용 매를 제거하고， 진공 하에 건조하였다. 조 생성물을 얻고， 이를 THF (100 mL)에 재용해시키고， 0에서 Boc20 (651 mg, 2.98 mmol)를 첨가한 후'， 1.0 M NaHC03 (10 mL)를 잇달아 첨가하였다. 반웅 흔합물을 rt에 서 12 h 동안 교반하였다. 반응이 완결되면， THF를 제거하고， 상기 흔 합물을 1.0 M HC1로 산화한 후， DCM (2 X 150 mL)으로 추출하였다. 상 기 수집된 유기층은 sat . 브라인 용액으로 세척하고， Na2S04로 건조한 후， 감압 하에 용매를 제거하여 조 생성물을 얻었고， 이는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 6-1 (520 mg, 0.695 mmol , 70%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다.
¾ NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.57 (s, 1H) , 7.48 (d, / = 8.6 Hz 1H) , 6.94 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 4.45-4.32 (m, 2H) , 4.23 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.14-4.09 (m, 1H) , 4.02-3.97 (m, 1H)， 3.88-3.74 (m, 2H) , 3.52-3.35 (m, 2H), 3.21-3.15 (m, 1H) , 3.09-3.01 (m, 1H), 2.08-1.98 (m, 1H) , 1.65-1.57 (m, 1H), 1.54 (s, 9H), 1.33 (s, 9H) , 1.24-1.17 (m, 1H)， 0.97 (d, J = 6.2 Hz, 3H) , 0.94 (t , J 7.3 Hz, 3H)；
13C NMR (125 MHz, CD30D) δ 176.81, 176.09, 174.35, 172.71, 171.43, 157.57, 155.56, 138.79， 135.87, 126.56, 125.06, 119.97， 117.93, 113.73, 102.34, 80.86, 80.57, 68.83, 60.68, 57.78, 56.02, 49.85, 44.15， 43.87, 39.78， 37.02, 29.49, 28.82, 28.67, 26.06, 15.96, 11.81；
LC/MS m/z 747.9 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C34H49N7Oi0S [M+] ' 747.3262. 단계 5: (2R,3R,4S)-4-((2S,4R)-l-(N2-((3R,9S,15S)-15,19ᅳ비스 ((tert 부톡시카보닐 )아미노)-9-((에6(-부틸 )-5，8,11，14-테트라옥소 -2,3,4,5,6,7,8,9, 10.11, 12， 13， 14， 15, 16， 21ᅳ핵사데카하이드로 -[1]티아
[4,7,10,13] 테트라아자사이클로옥타데시노 [18, 17-b]인돌 -3-카보닐 )
N4-트리틸 -L-아스파라기닐 )-4-하이드록시피를리딘 -2-카복스아미도 )-5
(tert- -3-메틸 -5-옥 -1,2-다이일 다이아세테。 (7)
Figure imgf000036_0001
0°C에서， DMF (20 mL)에 용해된 상기 단계 4에서 제조한 6-1 (500 mg, 0.668 mmol ) 화합물 및 상기 실시예 1에서 제조한 1-1 (516 mg, 0.668 mmol ) 화합물 맑은 용액에， HATU (381 mg, 1.0 隱 οθ를 첨 가하고， 잇달아 DIPEA (0.17 mL, 1.0 mmol)를 액적 첨가하였다. 상기 반웅 흔합물을 rt에서 12 h 동안 교반하였다. TLC 분석을 통해 출발 물질의 완전한 소모를 확인하였다. 물을 반응 흔합물에 첨가하고， EtOAc (2 X 50 mL)로 추출한 후， 유기충을 브라인 용액 (2 X 50 mL)으 로 세척하고， 소듐 설페이트로 건조한 후， 감압 하에 농축하여 조 생 성물을 얻었다. 상기 조 생성물은 용리액으로 MeOH/MC (1:9)를 사용하 는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물인 7 (650 mg, 0.432 mmol , 65%)를 미색의 고체로서 제조하였다.
XH NMR (300 MHz, CD30D) δ 7.61 (s, 1H) , 7.52 (d, / = 8.6 Hz 1H) , 7.33 - 7.16 (m, 15H) , 6.96 (dd, J = 8.6， 1.7 Hz, 1H) , 4.99 ᅳ 4.92 (m, 1H) , 4.73 (t , J = 6.4 Hz, 1H), 4.59 - 4.52 (m, 1H) , 4.49
- 4.42 (m, 1H) , 4.42 - 4.30 (m, 3H), 4.24 (dd, J = 12.4, 2.2 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.03 - 3.95 (m, 1H) , 3.93 (d, J = 5.9 Hz, 1H) , 3.90 (d, / = 4.0 Hz, 1H) , 3.86 - 3.79 (m, 1H) , 3.78
- 3.68 (m, 1H) , 3.60 - 3.52 (m, 1H) , 3.47 - 3.38 (m, 2H)， 3.18 - 3.07 (m, 1H) , 3.05 - 2.95 (m, 1H) , 2.81 (d, J = 6.5 Hz, 2H) , 2.26
- 2.15 (m, 2H) , 2.10 - 2.01 (m, 2H) , 1.99 (s, 3H) , 1.98 ― 1.94 (m 1H) , 1.91 (s, 3H) , 1.66 - 1.58 (m, 1H) , 1.55 (s, 9H) , 1.48 (s, 9H) , 1.37 (s, 9H), 1.25 - 1.14 (m, 2H), 1.00 - 0.88 (m, 8H) , 0.77 (d, / = 7.0 Hz, 1H) .
13C NMR (125 MHz, CD30D) δ 175.61, 174.38, 173.99, 172.43,
172.34, 172.12, 172.02, 171.54, 170.98, 170.76， 157.48, 155.47, 145.71, 145.69， 139.06， 136.04, 130.08, 128.76, 127.79， 125.51, 125.03, 120.24, 118.33, 113.60, 83.21, 83.16, 80.80, 80.57, 74.01 71.73, 71.58， 70.74, 70.30, 64.63, 64.51, 60.92, 60.60, 60.37, 56.96， 56.29, 55.26, 55.22, 54.81， 50.13, 49.85, 44.22， 43.75, 39.32, 38.74, 37.27, 36.73, 28.83, 28.68， 28.41, 26.04, 21.02, 20.71, 16.02, 13.49, 11.63；
LC/MS m/z 1503.2 [M + H+] .
HRMS (EI) m/z calcd for C76H99Nn0i9S [M+] 1501.6839. 단계 6： (2S,3R,4R)-4,5-디아세톡시 -2-( (2S , 4R)-1- 소 -2,3,4,5 ,6， 7,8, 9， 10, 11,12, 13, 14， 15, 16,21-핵 λ\데 7]·하이 Ξ ^로 -[1]티 아 [4,7, 10, 13] 테트라아자사이클로옥타데시노 [18,17-b]인도 _ 3 카보 닐 )-L-아스파라기닐 )-4-하이드록시피를리딘ᅳ 2-카복스아미도) -3-메틸펜 타노익 에시드 (8)
Figure imgf000038_0001
0°C에서， DCM (5.0 mL)에 용해된 상기 단계 5에서 제조한 7 (100 mg, 0.066 mmol ) 화합물 용액에， HFIP에 용해된 1.0 N HC1 2.5 mL (디 옥산에 용해된 4.0 N HC1 5.0 mL와， HFIP 15.0 mL를 흔합하여 준비 )를 액적 첨가하였다. rt에서 12 h 동안 교반하였으며， 반응 흔합물이 즉 시 진한 노란색의 색으로 변화하는 것올 확인하였다. 반웅의 진행은 LCMS를 통해 모니터링하였다. 반응 흔합물을 감압 하에 농축하여 용매 를 제거하고, 높은 진공 하에 건조하였다. 얻어지는 고체는 핵산으로 세척하고， 필터한 후 감압 하에 건조하여 표제 화합물인 8 (65 mg, 0.064 mmol , 98%) 화합물을 옅은 갈색 고체로서 제조하였다. 이는 별 도의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
LC/MS m/z 1004.1 [M + H+]； 1002.0 [M - H+] . : 하기 화학식 9로 표시되는 화합물
Figure imgf000038_0002
8 9
0°C에서， DMF/DCM (1: 1) (10.0 mL)에 용해된 상기 단계 6에서 제 조한 8 (65 mg, 0.065 mmol ) 화합물 용액에， PyAOP (41 mg, 0.077 mmol ) 및 HOAt (1.8 mg, 0.013 mmol )를 첨가하고， DIPEA (34 μ L, 0.194 mmol )를 잇따라 액적 첨가하였다. 반응 흔합물을 rt에서 12 h 동안 교반하였다. 반웅의 진행 정도는 LCMS를 통해 모니터링하였다. 반응 흔합물을 15에서 감압 하에 농축하여 DCM을 제거하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고 2 h 동안 교반하였다. 고체 침전물을 필터하고， 물 및 DMF를 제거하기 위하여 감압 하에 동결 건조하였다. 형성되는 조 생성 물은 CAN에 용해된 0.1% TFA 및 H20에 용해된 0.1% TFA올 용리액으로 서 사용한 HPLC를 통해 정제하였다. HPLC로부터 얻어지는 목적한 부분 (fract ions)을 감압 하에 동결 건조하여 표제 화합물인 9 (26 mg, 0.026 mmol , 40%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다.
¾ NMR (500 MHz, CD30D) δ 8.88 (dd, J = 7.6 5.0 Hz, 1H) , 8.80 (d, J 3.0 Hz, 1H) , 8.53 (t , J = 8.8 Hz, 2H) 8.45 (d, J =
3.5 Hz, 1H) , 8.42 (t , J = 8.5 Hz, 2H) , 8.24 (s, 1H) , 7.89 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.46 (s, 1H) , 7.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H) 7.04 (dd, J
= 8.5， 2.1 Hz, 1H) , 5.26 (p, / = 3.9 Hz, 1H) , 5.15 (p, J = 6.8 Hz, 1H) , 4.82 - 4.72 (m, 2H), 4.62 - 4.52 (m, 3H) , 4.43 (dd, 18.2， 8.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 11.9， 4.0 Hz, 1H) , 4.20 - 4.10 (m, 2H) , 4.01 (dd, J = 11.2， 3.3 Hz, 1H) , 3.78 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 3.74 - 3.65 (m, 2H) , 3.60 (d, J = 18.0 Hz, 1H) , .3.54 (dd, J = 17.7，
4.6 Hz, 1H) , 3.49 - 3.43 (m, 1H) , 3.28 (dd, J = 14.9， 6.8 Hz, 1H) , 3.24 - 3,18 (m, 1H) , 3.12 (dd, J = 16.1， 4.0 Hz, 1H) , 3.02 (dd, J = 10.9, 4.0 Hz, 1H) , 2.53 - 2.47 (m, 1H) , 2.46 - 2.41 (m, 1H), 2.13 (td, J = 12.7， 3.6 Hz, 1H) , 2.09 (s, 3H) , 2.05 (s, 3H), 1.73 - 1.59 (m, 2H) , 1.26 - 1.18 (m, 1H) , 1.11 (d, J = 7.2 Hz, 3H) , 0.97 - 0.89 (m, 6H) . !H NMR (500 MHz, D20) δ 7.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.34 (s, 1H) , 7.04 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 5.18 - 5.13 (m, 1H) , 4.87 (t, / = 5.3 Hz, 1H) , 4.82 - 4.74 (m, 2H) , 4.69 - 4.62 (m, 2H) , 4.64 - 4.56 (m, 1H) , 4.41 - 4.32 (m, 2H) , 4.16 - 4.08 (m, 2H), 4.07 (d, J 3.1 Hz, 1H) , 3.99 - 3.95 (m, 1H) , 3.89 - 3.82 (m, 2H), 3.71 (d, J = 17.6 Hz, 1H) , 3.66 - 3.57 (m, 2H) , 3.46 - 3.40 (m, 1H), 3.21 (dd, J = 14.1， 6.5 Hz, 1H), 3.14 - 3.09 (m,
1H) , 3.07 - 3.01 (m, 2H) , 2.59 - 2.51 (m, 1H) , 2.43 (dd: J 13.8 7.0 Hz, 1H) , 2.15 - 2.11 (m, 1H) , 2.10 (s, 3H) , 2.03 (s, 3H) , 1.72 - 1.63 (m, 1H) , 1.54 - 1.44 (m, 1H) , 1.23 1.12 (m, 1H) , 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H) , 0.85 - 0.78 (m, 6H) .
13C NMR (125 MHz, D20) δ 175.04， 174.36, 173.84, 173.40， 173.37, 172.47， 172.06, 171.33, 170.69, 170.13, 169.77, 136.26, 127.14， 126.37, 126.21, 120.84, 115.26， 114.08 105.64 72.45, 69.89, 63.19， 61.94, 59.42, 56.40, 55.43, 54.53 52.20 51.08,
57, 41.80, 37.44, 37.15, 35.78， 34.87, 34.48, 28.06 25.17，
56， 20.13， 14.24， 11.82, 9.63；
LC/MS m/z 987.5 [M + H+]， m/z 984.6 [M - H+] ,
HRMS (EI) m/z calcd for C43H59Nu0i4S [M+] 985.3964. 단계 8: 하기 화학식 10으로 표시되는 화합물
Figure imgf000040_0001
9 10
0°C에서， MeOH (1.0 mL)에 용해된 상기 단계 7에서 제조한 9 (10 mg, 0.01 mmol) 화합물 용액에 , MeOH (1.0 mL)에 용해된 0.02M K2C03 을 첨가하고, 반웅 흔합물을 rt에서 2 h 동안 교반하였다. 반응의 진 행을 LCMS로 모니터링하였다 . 반웅 흔합물을 15 감압 하에 농축하여 MeOH를 제거하였다. 조 반웅 흔합물은 용리액으로 ACN에 용해된 0.1% TFA 및 H20에 용해된 TFA를 사용하는 HPLC를 통해 정제하였다. HPLC로 부터 얻어지는 목적한 부분 (fractions)을 감압 하에 동결 건조하여 표 제 화합물인 10 (5.3 mg, 0.0058 mmol , 58%) 화합물을 흰색 고체로서 제조하였다.
l NMR (500 MHz, CD30D) δ 8.96 - 8.89 (m, 1H), 8.67 ― 8.61 (m, 1H) , 8.53 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 8.14 (d, J = 9.8 Hz, 1H)， 8.03 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 7.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 8.5， 2.0 Hz, 1H) , 5.45 - 5.39 (m, 1H) , 4.83 (d, J = 3.3 Hz, 1H) , 4.82 - 4.77 (m, 1H) , 4.73 (dd, J = 9.8, 4.3 Hz, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 2H) , 4.31 (dd, J = 18.3， 8.2 Hz, 1H) , 4.21 - 4.13 (m, 1H) , 4.00 (dd, J = 11.2， 3.3 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 8.4, 3.8 Hz, 1H), 3.68 - 3.65 (m, 1H), 3.63 (d J = 2.6 Hz, 1H) , 3.60 - 3.58 (m, 1H) , 3.58 - 3.55 (m, 1H) , 3.51 - 3.46 (m, 1H) , 3.44 - 3.39 (m, 1H), 3.37 - 3.35 (m, 1H) , 3.24 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 3.22 - 3.17 (m, 2H) , 3.05 (dd, J = 11.1， 4.0 Hz, 1H) , 2.62 - 2.56 (m, 1H) , 2.47 (dd, J = 13.2， 6.9 Hz, 1H) , 2.09 (td, J = 12.6， 3.6 Hz, 1H) , 1.74 - 1.68 (m, 1H), 1.67 - 1.61 (m, 1H) , 1.27 - 1.20 (m, 1H) , 1.01 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 0.96 - 0.90 (m, 6H)； LC/MS m/z 902.72 [M + H+]， m/z 900.77 [M - H+] .
【산업상 이용가능성】
본 발명의 일 측면에서 제공되는 아마록신 유도체는 인돌기에 아 민기가 존재하여 ADC 약물로서 유용하다.

Claims

【청구의 범위】
【청구항 1】
하기 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 :
Figure imgf000041_0001
(상기 화학식 I 에서，
n은 0 내지 2의 정수이고; R1은 -H, -OH, -OR, -SH, -SR, -NH2， -NHR, 또는 -NR2이고， 여기서， 상기 R은 -10의 직쇄 또는 분지쇄 알킬， 또는 보호기 (protecting group)이고; 및
R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 -H, -OH, -NH2, 또는 d-10의 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다).
【청구항 2】
제 1항에 있어서，
n은 0 내지 2의 정수이고;
R1은 -H, -OH, -OR, -SH, -SR, -NH2 , -NHR, 또는 -NR2이고, 여기서 , 상기 R은 의 직쇄 또는 분지쇄 알킬， 또는 보호기 (protecting group)이고; 및
R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 -OH, -NH2, 또는 d-5의 직쇄 또는 분지쇄 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물， 이의 광학 이성질처)， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 .
【청구항 3】
제 1항에 있어서，
n은 0 내지 2의 정수이고;
R1은 -H, -OH, -OR, -SH, -SR, -NH2， -NHR, 또는 -NR2이고， 여기서， 상기 R은 d-3의 직쇄 또는 분지쇄 알킬， 또는 보호기 (protecting group)이고;
R2는 -NH2, 또는 -0H이고; 및
R3, R4 및 R5는 독립적으로 -H, 또는 -0H인 것을 특징으로 하는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 .
【청구항 4】
제 1항 내지 게 3항 중 어느 한 항에 있어서，
보호기 (protecting group)는 하기 군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질 체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 :
아세틸 (Acetyl, Ac) , 아세특시 (Acetoxy， OAc) , β -메톡시에특시 메틸 에테르 ( β -Methoxyethoxymethyl ether , MEM) , 디메특시트리틸 (Dimethoxytr ityl ) , 메톡시메틸 에테르 (Methoxymethy 1 ether , MOM) , 메특시트리틸 (Methoxytrityl), pᅳ메톡시벤질 에테르 (p-Methoxybenzy 1 ether , Ρ Β) , 메틸티오메틸 에테르 (Methyl thi oniethyl ether) , 피발로 일 (Pivaloyl , Piv) , 트리페닐메틸 (tr iphenylmethyl )， tert-부틸옥시카 보닐 (tert-Butyloxycarbonyl， Boc) , 9—플루오레닐메틸옥시카보닐 (9- Fluorenylmethyloxycarbony 1 , Fmoc) , 토실 (Tosyl, Ts ) 및 tert一부틸 에스테르 (tert-Butyl esters) .
[청구항 5】
제 1항에 있어서，
상기 화학식 I 로 표시되는 화합물은 하기 화합물인 것을 특징으 로 하는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가 능한 염 :
Figure imgf000043_0001
【청구항 6】
하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이，
화학식 Π로 표시되는 화합물과， 화학식 ΠΙ으로 표시되는 화합물 을 반웅시켜， 화학식 IV로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ;
상기 단계에서 제조한 화학식 IV로 표시되는 화합물로부터， 화학 식 V로 표시되는 화합물올 제조하는 단계 ;
상기 단계에서 제조한 화학식 V로 표시되는 화합물을 탈수를 통 한 고리화 반웅을 통해， 화학식 VI로 표시되는 화합물을 제조하는 단 계 ; 및
상기 단계에서 제조한 화학식 VI으로 표시되는 화합물에서 보호 기를 제거하여， 화학식 I 로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함 하는， 제 1항의 화학식 I 로 표시되는 화합물의 제조방법 .
[반웅식 1 ]
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000044_0002
(상기 반웅식 1에서 ,
L은 부재， -0-, -NH -， -NR-, 또는 -S-이고;
n, R, R1 내지 R5는 독립적으로 제 1항의 화학식 I 에서 정의한 바와 같고; 및
PGi 내지 PG3는 보호기 (protecting group)이다) .
【청구항 7】
제 6항에 있어서 .
L은 -NH—이고；
R1 및 R2는 -NH2이고；
R3는 제 1항의 화학식 I 에서 정의한 바와 같고;
R4 및 R5는 -0H이고；
PG & tert-부틸옥시카보닐 (tert-Butyloxycarbonyl， Boc)이고; PG2는 아세톡시 (Acetoxy, OAc)이고; 및
PG3은 트리페닐메틸 (triphenylniethyl)인 것을 특징으로 하는 제 조방법 .
【청구항 8】
제 6항에 있어서 ,
상기 화학식 Π로 표시되는 화합물은 하기 반웅식 2에 나타난 바 와 같이 ,
화학식 XI으로 표시되는 화합물과， 화학식 X2로 표시되는 화합물 을 반웅시켜， 화학식 X3로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ;
상기 단계에서 제조한 화학식 X3로 표시되는 화합물의 -OMe 기를 -0H로 전환시켜， 화학식 X4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ; 상기 단계에서 제조한 화학식 X4로 표시되는 화합물을 고리화 반 웅시켜 화학식 X5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ; 및
상기 단계에서 제조한 화학식 X5로 표시되는 화합물의 -Ot Bu 기 를 -0H로 전환시켜， 화학식 Π로 표시되는 화합물을 제조하는 단계로 제조되는 것을 특징으로 하는 제조방법 :
[반응식 2 ]
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000045_0002
(상기 반응식 2에서，
L은 부재， -0-， -NH-, -NR-, 또는 -S-이고;
n은 제 1항의 화학식 I 에서 정의한 바와 같고； 및
PGi 및 PG4는 보호기 (protecting group)이다).
【청구항 9】
제 6항에 있어서 ,
상기 화학식 m으로 표시되는 화합물은 하기 반웅식 3에 나타난 바와 같이，
화학식 Y1으로 표시되는 화합물과， 화학식 Y2로 표시되는 화합물 을 반웅시켜， 화학식 Y3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계 ; 및 상기 단계에서 제조한 화학식 Y3으로 표시되는 화합물의 PG4 보 호기를 제거하여 , 화학식 ΠΙ으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계로 제조되는 것을 특징으로 하는 제조방법 :
Figure imgf000046_0001
(상기 반웅식 3에서，
R3는 제 1항의 화학식 I 에서 정의한 바와 같고; 및
PG2 내지 PG4는 보호기 (protect ing group)이다) .
【청구항 10】
하기 화학식 α로 표시되는 화합물
이의 약학적으로 허용 가능한 염 :
[화학식 α ]
Figure imgf000047_0001
(상기 화학식 α에서，
η 및 L은 제 6항의 반응식 1에서 정의한 바와 같고; 및
A1 및 A2는 독립적으로 H, 또는 보호기 (protect ing group)이다).
【청구항 11】
하기 화학식 β로 표시되는 화합물 , 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 :
[화학식 ]
Figure imgf000047_0002
(상기 화학식 β에서，
R3는 제 1항의 화학식 I에서 정의한 바와 같고; 및
Ε1, Ε2 및 Ε3는 독립적으로 -Η, -0Η, 또는 보호기 (protecting group)이다) .
【청구항 12]
제 1항의 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체 , 또 는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예 방 또는 치료용 약학적 조성물.
【청구항 13】
거 U항의 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또 는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을， 이를 필요로 하는 대상 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법 .
【청구항 14】
암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한， 제 1항의 화학식 I 로 표 시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이의 약학적으로 허용 가능 한 염ᅳ
【청구항 15】
암의 예방， 완화 또는 치료용 약제 (medicament)의 제조를 위한， 게 1항의 화학식 I 로 표시되는 화합물， 이의 광학 이성질체， 또는 이 의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도.
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