WO1998004558A1

WO1998004558A1 - Piegeurs d'oxygene actifs a base de derives de pterine

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Publication number: WO1998004558A1
Application number: PCT/JP1997/002649
Authority: WO
Inventors: Toshiyuki Arai; Keisuke Makino; Kenjiro Mori
Original assignee: Artemis, Inc.
Priority date: 1996-07-31
Filing date: 1997-07-30
Publication date: 1998-02-05
Also published as: CN1084332C; NZ330078A; DE69733308D1; CN1198161A; KR19990063880A; ATE295847T1; US6162806A; EP0884317A2; EP0884317B1; IL123884A; EP0884317A4; AU3707197A; AU739069B2; IL123884A0

Description

明細書プテリン誘導体含有活性酸素消去剤技術分野

本発明は、プテリン誘導体を含有する活性酸素消去剤に関する。また、本発明は、前記のプテリン誘導体を含有する医薬組成物又は化粧料組成物に関する。背景技術

従来から、活性酸素が関与すると考えられている疾病が数多く知られている。こうした疾病の例としては、虚血障害（例えば、虚血性心疾患後遺症、脳梗塞後遺症、又はストレス潰瘍）、再カン流障害、炎症性疾患（例えば、慢性リュウマチ、腎炎、又は喘息）、癌、糖尿病、白内障、動脈硬化、薬物中毒、農薬中毒、薬物の過多量投与による肝障害、農薬の過多量摂取による肝障害、未熟児網膜症、光線過敏症、又は放射線障害などがある。

このような疾病の治療には、活性酸素消去作用を有する酵素、例えば、スーパ一才キシドジスムタ一ゼ（以下、 S O Dと称することがある）の投与が有効とされている。しかし、 S O Dは生体内半減期が極めて短いので、大量に投与することカ^?必要である。また、酵素はタンパク質であるために、抗原性を有し、長期投与が必要な場合には抗原抗体反応によるアナフィラキシーショックなどの副作用を考慮する必要があった。更に、経口投与では効果が得られない等の種々の問題が、めった。

活性酸素に対して消去作用を有する非タンパク質化合物としては、プテリン誘導体が知られている。例えば、特開平 6— 5 6 6 6 9号公報には、プテリン誘導体又はネォプテリン誘導体が活性酸素消去作用を有することが記載されている。また、特開平 7— 1 8 8 2 3 2号公報には、前記と同様のプテリン誘導体又はネォプテリン誘導体が、フリーラジカルによる細胞障害に有効であることが記載されている。

前記のプテリン誘導体又はネオプテリン誘導体の代表的化合物であるネオブテリン〔すなわち、 2—アミノー 4—ォキソ一 6 _ (D—エリス口一 1，， 2，， 3，一トリヒドロキシプロピル）一プテリジン：略称は NP〕は、マクロファージによつて産生される物質であり、その生理的役割は現在のところ未だよく分かつていないが、活性酸素に対して抗酸化作用を有することは知られている〔例えば、 S. Ko j i ma等， FEBS, 304, 2， 3， 163— 166， 1 992 ； S. Ko j i ma等， FEBS, 329， 1, 2， 125— 128， 1 993〕。また、還元型ネオプテリンに相当する 5, 6， 7， 8—テトラヒドロネォプテリン〔略称は NFH4〕が、強力な抗酸化作用を有することも知られており、各種の疾患に有効であることが報告されている〔例えば、 S. K 0 j i ma等， F EBS， 304， 2， 3, 163 - 1 66, 1 992 ; I c h o等， B i o c h i m i c a 1 Ph a rma c o l o g y, 45， 1 0, 1 953 - 1 958, 1993 ; A r a i等， Ne u r o s c i e n c e L e t t e r s, 1 73 ( 1994) 107 - 1 10〕。

しかしながら、前記の 5， 6, 7， 8—テトラヒドロネオプテリン〔NPH4〕には催奇形性があるので、活性酸素消去作用を有する別異の非タンパク質化合物が求められていた。

本発明者は、活性酸素消去作用を有する非タンパク質化合物を鋭意探求した結果、従来、活性酸素消去作用を有することが全く知られていなかったプテリン誘導体が活性酸素消去作用を示すことを見出した。本発明は、こうした知見に基づくものである。発明の開示

前記の目的は、本発明による、式（I) ：

R¹ \

ノ N — A— (CH== N—— A)— X は）

、 I n

〔式中、 R¹ 及び R² は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数 1〜4のアルキル基、又は式 R ³ —C O— ( R ³ は炭素数 1 〜 4のアルキル基である）で表されるァシル基であり、 Xは、ホルミル基又はヒドロキシメチル基であり、 Aは式 ( I a ) 二

で表される基であり、 nは 0又は 1以上の整数である力;'、但し、 Xがヒドロキシメチル基である場合には nは 0であるものとし、そして nが 1以上の整数である場合には、 R ¹ 及び R ² はそれぞれ水素原子であり、 Xはホルミル基であるものとする〕で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を有効成分として含有することを特徴とする、活性酸素消去剤によつて達成することができる。

また、本発明は、前記式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又は薬剤学的に許容することのできるその塩を有効成分として含有することを特徴とする、医薬組成物にも関する。

更にまた、本発明は、前記式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を含有することを特徴とする、化粧料組成物にも関する。図面の簡単な説明

図 1は、 P MN— P MA系における 6—ホルミループテリンの活性酸素消ま活性を活性酸素の積算発光量によつて示すグラフである。

図 2は、 DM S O中の超酸化カリウム溶液に 6 —ホルミル一プテリンを加えた場合の低温電子スピン共鳴法で測定した結果を示すグラフである。

図 3は、血流遮断を行っていない完全に正常な砂ネズミの脳海馬領域組織切片の顕微鏡写真である。

図 4は、砂ネズミ一過性脳虚血モデルの対照群の脳海馬領域組織切片の顕微鏡写真である。図 5は、砂ネズミ一過性脳虚血モデルの 6—ホルミル—プテリン投与群の脳海馬領域組織切片の顕微鏡写真である。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明の活性酸素消去剤は、有効成分として前記式（I) で表されるプテリン誘導体を含有する。

R¹ 、 R² 、及び R³ で表される炭素数 1〜 4のアルキル基とは、直鎖又は分枝鎖の炭素数 1〜 4のアルキル基であり、例えば、メチル基、ェチル基、 n—プ口ピル基、 i—プロピル基、 n—ブチル基、 i—ブチル基、 s e c—ブチル基、又は t e r t—ブチル基であり、メチル基又はェチル基が好ましい。前記式（I ) で表される化合物において、 R¹ 及び R² は、それぞれ独立して、问ー又は異なる、水素原子、前記の炭素数 1〜 4のアルキル基、又は式 R³ — CO— (R³ は前記の炭素数 1〜 4のアルキル基である）で表されるァシル基であることができる。前記式（I ) において、 nは、 0又は 1以上の整数、好ましくは 0又は 1〜 1 00の整数、より好ましくは 0又は 1〜 1 0の整数である。

前記式（I) で表されるプテリン誘導体としては、 R¹ 及び R² が、それぞれ独立に、水素原子、炭素数 1〜 4のアルキル基、又は式 R^:i — CO—で表されるァシル基であり、 R³ が炭素数 1〜 4のアルキル基であり、 Aが式（l a) で表される基であり、 nが 0又は 1以上の整数であり、 Xがホルミル基である 6—ホルミループテリン誘導体が好ましい。

更に、前記式（ I) で表されるプテリン誘導体としては、 R' 及び R² が水素原子であり、そして nが 0である前記式（I) で表される化合物、すなわち、式

(II) ：

(II)

で表される 6—ホルミループテリンがより好ましい。

6—ホルミル一プテリンは、アミノ基及びホルミル基を有するので、水溶液中で複数の分子間でシッフ塩基を自然に形成し、 6—ホルミル—プテリンのォリゴマー又はポリマーとなることができる。このオリゴマー又はポリマ一には、直鎖状のオリゴマ一又はポリマーだけでなく、環状のォリゴマ一又はポリマ一も含まれる。単量体からオリゴマー又はポリマーへの反応は可逆反応であり、アルカリ条件下では、 6—ホルミループテリンオリゴマー又はポリマーは、単量体である 6—ホルミル—プテリンに容易に分解する。従って、生体内や皮膚上でも同様の可逆反応が行われるものと思われる。前記 6—ホルミループテリンオリゴマ一又はポリマーは、 R¹ 及び R² が同時に水素原了-であり、そして nが 1以上（好ましくは 1〜 1 00) の整数である前記式（I ) で ¾される化合物であり、本発明の活性酸素消去剤における有効成分として使用することができる。

生体内で、前記式（I) で表されるプテリン誘導体に容¾に変換することのできる誘導体、すなわち、プロドラッグも本発明の有効成分として使用することできる。適当なプロドラッグの選択及び製造に一般的に川いられる方法は、例えば、 De s i g n o f P r o d r u g s, e d. H. B u n d g a a r d, E l s e v i e r, 1 985に記載されている。

6—ホルミル—プテリンは、遊離化合物の形で有効成分として使用すること力できると共に、その塩、特に薬剤学的に許容することのできるその塩、例えば、無機酸塩（例えば、塩酸塩若しくは硫酸塩）又は -機酸塩（例えば、カンファースルホン酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、若しくはシュゥ酸塩など）の形で使用することもできる。また、前記の 6—ホルミループテリンオリゴマー又はポリマーの形で使用することもできる。 6—ホルミループテリンオリゴマ一又はポリマ一は、公知化合物であり、それ自体公知の方法によって、遊離化合物をその塩へ、あるいはその塩を遊離化合物又は別の塩に変換することができる。

前記式（I) で表されるプテリン誘導体も、遊離化合物の形で有効成分として使用することができると共に、その塩、特に薬剤学的に許容することのできるその塩、例えば、無機酸塩（例えば、塩酸塩若しくは硫酸塩）又は有機酸塩（例えば、カンファースルホン酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、若しくはシユウ酸塩など）の形で使用することもできる。前記式（I ) で表されるプテリン誘導体は、公知化合物であり、それ自体公知の方法で調製することができる。また、それ自体公知の方法によって、遊離化合物をその塩へ、あるいはその塩を遊離化合物又は別の塩に変換することができる。

前記式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその薬剤学的に許容することのできる塩は、活性酸素消去作用を有するかあるいは活性酸素消去作用を有する化合物を誘導することができるので、本発明による医薬組成物の有効成分として用いることができる。

すなわち、前記式（ I ) で表されるプテリン誘導体の内、 nが 0であり、そして R ' 又は R ² のいずれかが水素原子でない式（ I ) で表されるプテリン誘導体、又は 6 —ホルミループテリン〔すなわち、 nが 0であり、そして R ¹ 及び R ² 力^∑ 同時に水素原子で有り、 Xがホルミル基である式（I ) で表される化合物〕は、それ自体が、活性酸素を消去する作用を有するので、活性酸 ¾生成系の種類を問わず、種々の原因で発生する活性酸素に対して広く有効である。

また、前記式（I ) で表されるプテリン誘導体の内、 ηが 1以上の整数、特に ηが 1 〜 1 0 0の整数である式（ I ) で表されるプテリン誘導体は、投与した動物の体内又は体表で徐々に分解し、 6—ホルミループテリンを放出するので、活性酸素生成系の種類を問わず、種々の原因で発生する活性酸素に対して広く有効である。

従って、本発明の医薬組成物は、活性酸素やラジカルが関与する種々の疾病、例えば、虚血障害（例えば、虚血性心疾患後遺症、脳梗塞後遺症、又はストレス潰瘍）、再カン流障害、炎症性疾患（例えば、慢性リュウマチ、腎炎、又は喘息）、癌、糖尿病、白内障、動脈硬化、薬物中毒、農薬中毒、薬物の過多量投与による肝障害、農薬の過多量摂取による肝障害、未熟児網膜症、光線過敏症、又は放射線障害などを効果的に治療又は予防することができる。

本発明による医薬組成物は、ブテリン誘導体又は薬剤学的に許容することのできるその塩を、それ単独で、又は好ましくは薬剤学的若しくは獣医学的に許容することのできる通常の担体と共に、動物、好ましくは哺乳動物（特には、ヒト）に投与することができる。投与剤型としては、特に限定はなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、ェマルジヨン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤などの経口剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、ゼリ一、ジエル、ペースト、若しくは点眼薬などの非経口剤を挙げることができる。これらの経口剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケィ酸マグネシウム、無水ケィ酸、又は合成ゲイ酸アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剂、着色剤、香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常法に従って製造することができる。例えば、 6—ホルミル一プテリンと乳糖とを混合して充填した力プセル剤などである。

非経口投与方法としては、クリーム乂は軟膏等による局所投与、注射（皮下、静脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなかで、注射剤が最も好適に用いられる。

例えば、注射剤の調製においては、有効成分としてのプテリン誘導体の他に、例えば、生理食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナ卜リウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤等を任意に用いることができる。

また、本発明の医薬組成物は、徐放性ポリマ一などを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与してもよい。例えば、本発明の医薬組成物をエチレンビニル酢酸ポリマ一のペレツトに取り込ませて、このペレツトを治療すべき組織中に外科的に移植することができる。

本発明の医薬組成物は、これに限定されるものではないが、プテリン誘導体又は薬剤学的に許容することのできるその塩を、 0 . 0 1〜 9 9重量％、好ましくは 0 . 1 〜 8 0重量⁰ /₀の量で含有することができる。

本発明の医薬組成物を、その活性酸素消去作用を利用して用いる場合の投与量は、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などにより異なり、特に制限はないが、通常成人で 6 —ホルミループテリン量として 0 . 1 〜 1 0 O m g Z k g体重を、 1日 1 〜 4回程度にわけて経口的に又は非経口的に投与することができる。

前記式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその薬剤学的に許容することのできる塩は、活性酸素消去作用を有するかあるいは活性酸素消去作用を有する化合物を誘導することができるので、本発明による化粧料組成物の有効成分として用いることができる。皮膚は、生体の最外層にあるため、環境要因（特に、紫外線の作用）による活性酸素の影響を受ける。活性酸素の影響による皮膚疾患としては、例えば、炎症性皮廇疾患、膠原病、角化症、水疱症、又は光線過敏症を挙げることができる。皮膚の角質にはバリヤ機能があるので、化粧料などの外用剤の形で投与すると、有効成分が主に表皮でのみ作用し、例えば、表皮における脂質過酸化反応の抑制にかなり有用であることも知られている。従って、本発明の化粧料組成物は、紫外線の作 Hをはじめ、放射線、二酸化窒素又はタバコ煙などの関与により皮膚表面に発生することのある活性酸素を消去することにより、活性酸素による皮膺損傷を回避若しくは軽減、あるいは予防することができる。

本発明による化粧ネ且成物において、前記式（ I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩の配合率は、特に限定されないが、 0 . 0 1 〜 9 9重量％、好ましくは 0 . 1 〜 8 0重量％の量で含冇することができる。

本発明の化粧料組成物には、一般的に化粧品に使用される他の成分、例えば、油分、酸化防止剤、界面活性剤、保湿剤、香料、水、アルコール、増粘剂、防腐剤、防徵剤、色剤、粉末、及び Z又は薬剤等を適宜配合することができる。また、これらとは別に、必要に応じて当業者に周知の紫外線吸収剤、例えば、安息香酸系紫外線吸収剤（例えば、パラアミノ安息香酸）、アントラニル酸系紫外線吸収剤（例えば、ホモメチルー N—ァセチルアントラニレート）、サリチル酸系紫外線吸収剤（例えば、アミルザリシレート）、桂皮酸系紫外線吸収剤（例えば、ォクチルシンナメート）、及び/又はベンゾフヱノン系紫外線吸収剤（例えば、 2 , 4—ジヒドロキシベンゾフエノン）等を配合することもできる。本発明の化粧料組成物は、溶液、乳化液、練り状混合物、固形物（プレス品）、粉末等任意の形態をとることが可能であり、日焼け化粧料、日焼け止め化粧料、化粧下地、ノ、。ック、化粧水、ファンデーション、クリーム、乳液、シャンプー、リンス、頭髮化粧料等として利用することができる。前記のように、活性酸素は強紫外線存在下で過剰に発生することがあるために、強紫外線存在下で使用する日焼け化粧料又は日焼け止め化粧料、例えば、サンオイル、サンローション、サンスクリーン、日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼け止め用ファンデーシヨン、日焼け止め用化粧下地、又は fcl焼け ihめ川ヘア一トニック等にすることが好ましい。

6—ホルミループテリンについて、ラットを用いる .' II:. 性試験を行つたところ、静脈内注射により 6mg/k g体重量の 6—ホルミル—プテリンを 1 0匹のラットに投与し、 3か月間観察した力死亡例はめられなかった。

本発明による活性酸素消去剤の用途も医薬や化杌抖に^定されるものではなく、種々の用途、例えば、機能性食品や健康食品として飲物の形で与えることも可能であり、更に飼料として非ヒト動物（特に飼 ύ·力物）にえることができ、また臓器移植用の臓器を保存するための保存液屮に^)川剂として用いることもできる。実施例

以下、実施例により本発明を具体的に説明する力これらは本発明を限定するものではない。

実施例 1 ： 6—ホルミル—プテリンの活性酸素消去^ 11:の測定（ Ρ Μ Ν— P M A 系）

健康成人より静脈血 1 Om 1を採血し、分離採取した好中球（p 0 1 y m 0 r p h o n u c l e a r l e u k o c y t e ;略称は PMN) を約 1 X 1 0 ^fi 細胞 m 1になるように HBS S (H a n k s' b a l a n c e d s a l t s o 1 u t i o n) に懸濁した。化学発光物質（すなわち、话性酸素の存在により化学発光を生じる化合物）である 2—メチル一 6—フヱニルー 3， 7—ジヒドロイミダゾ一（1， 2— α) —ピラジン一 3—オン（以ド、 CLAと称する）を 5 0〃Mになるようにリン酸バッファ一溶液（以下、 P B Sと称する）に溶解した。好中球を刺激することによって活性酸素を発生させる、いわゆる好中球刺激剤でめるホルポ Jレミリステートアセテート (p h o r b o l m y r i s t a t e a c e t a t e ;略称は P MA) を 2 0 / gZm lになるように P B Sに溶解した。こうして調製した好中球懸濁液、 C L A溶液、及び PMA溶液は、測定に使用するまで氷冷保存した。

本発明の活性酸素消去剤の有効成分である 6—ホルミループテリンを 1 0 0 M、 2 5 0〃M、又は 5 0 0〃Μになるように P B Sに溶解し、測定に使用する前に 3 7 °Cに加温した。併せて、コントロールとして使用する P B Sも測定に使用する前に 3 7 °Cに加温した。

測定は、以下の手順で実施した。好中球懸濁液 2 m 1力、ら遠心抽出した好中球に、各種濃度の 6—ホルミループテリン溶液、乂は P B Sを加えて総容量を 1 9 3 0 μ \ に調整し、試験管に入れて 3 7でで 1 5分間加温した。 C L A溶液 5 0 μ 1 を添加した後、化学発光測定器にセットし、化学発光量の測定を開始した。測定開始から 1分後に、 ΡΜΑ溶液 2 0 /ノ 1 を注射器で試験管に注入した。測定は、温度 3 7でで 1 0秒ごとに実施し、約 1 0分間続けた。

結果を、図 1に示す。図 1のグラフは、 1 0秒ごとの ¾光量を次々に積算した合計発光量を示す。曲線 aは、コントロール、すなわち、 6—ホルミル一プテリンの代わりに P B Sのみを添加した場合の測定結果を/- 1くし、曲線 bは、 1 0 0 M 6 _ホルミループテリンを添加した垛合の測定結果を示し、曲線 cは、 2 5 0 / M 6—ホルミル一プテリンを添加した場合の測定結果を示し、曲線 dは、 5 0 0 M6—ホルミループテリンを添加した場合の測定結果を示す。 6—ホルミル —プテリンの代わりに P B Sのみを添加したコントロール（曲糸泉 a ) に比べ、 1 0 0 // M6—ホルミル—プテリンを添加した場合（曲線 b ) では、化学発光量、すなわち活性酸素量が大きく抑制され、更に、 2 5 0〃M又は 5 0 0 M6—ホルミループテリンを添加した場合（曲線 c又は曲線 d ) では、化学発光量、すなわち活性酸素量がほぼ消失した。

実施例 2 ： 6—ホルミループテリンの活性酸素消去活性の測定（超酸化力リウム由来）ジメチルスルホキシド（DMSO) 2 Om I中に超酸化カリウム（K0₂ ) 2 8mgを添加して飽和溶液を調製し、 DM S O中で活性酸素を発生させた。ここで、標準物質として 2, 2， 6， 6—テトラメチルピペリジン一 N—ォキシド (TEMPO) を使用し、これを DMSOに加え、 0. 1、 0. 3、 0. 5、 0. 7、 1、 1. 2、又は 1. 5mM溶液として用いた。得られた電子スピン共鳴シグナル（77Kで測定）を積分し、検量線を作成した。この検量線により、 DM S 0中の活性酸素の濃度を測定したところ、約 0. 5mMであった。

本発明の活性酸素消去剤の有効成分である 6—ホルミループテリンを 1 0 mM になるように DMSOに溶解した。前記の K0₂ 溶液に 6—ホルミループテリンを加えない場合の活性酸素発生量（コントロール）、及び前記の Κ0₂ 溶液に所定濃度の 6—ホルミル一プテリンを加えた場合の活性酸量を、低温（77 Κ) 電子スピン共鳴法により測定した。

測定結果を図 2に示す。 6—ホルミループテリンの DM S 0中の最終濃度を 0. 001 mMから 1 mMまで 1 0倍ずつ上げていった場合の K 0₂ からの活性酸素発生量は、矢印 Aで示す位置、すなわち、 328 mTの位置に表れるピーク (微分型）を 2回積分して求めた値の大きさから求めることができる。曲線 aはコントロール、すなわち、 6—ホルミループテリンを加えない場合の測定結果を示し、曲糸泉 b〜 eは、 0. 001 mM、 0. 01 mM、 0. 1 mM、及び 1 mM 6—ホルミループテリンを添加した場合のそれぞれの測定結果を示す。

K0₂ 溶液に 6—ホルミル—プテリンを加えない場合に比べて、 Κ0₂ 溶液に 6一ホルミル一プテリンを加えた場合には、 6—ホルミループテリン濃度が 0. ImMになると、 K0₂ からの活性酸素発生量が低下し、 6—ホルミル一プテリン濃度が 1 mMになると、 K0₂ からの活性酸素発生量がほぼ消失した。先に確認したように、 DMSO20m lに Κ0₂ 28 m gを加えた系から発生する活性酸素量は、約 0. 5mMであることから、 6—ホルミル一プテリンカ K〇₂ から発生する活性酸素を約 1 ： 1の割合で消去したと考えられる。

実施例 3 ：ヒドロキシメチル体の活性酸素消去活性の測定（超酸化力リウム由来）

0. 001 mM〜 1 mMの 6—ホルミル一プテリンに替えて、 0. 01 mM〜 1 OmMの 6—ヒドロキシメチル一プテリン〔前記式（ I) において、 Ri 及び R² が水素原子であり、 Xがヒドロキシメチル基であり、 nが 0である化合物〕を使用すること以外は、前記実施例 2に記載の操作を繰り返すことによって、 6 ーヒドロキシメチループテリンの活性酸素消去活性を測定したところ、 6—ホルミループテリンと同様の活性酸素消去活性力 6—ホルミル一プテリンの 10倍濃度の 6—ヒドロキシメチル一プテリンにおいて観察された。

実施例 4 ：活性酸素消去作用による遅発性神経細胞死の抑制

全身麻酔した砂ネズミ（体重 =約 80 g) の頸部を切開し、直視下で両側頸動脈をクリツプで結紮することにより血流を遮断した _c 5分後に血流を再開させ、創部を縫合した。血流の再開から 30分経過後に、対照群には生理食塩水 l m 1 を腹腔内投与し、薬物投与群には 50 mM 6—ホルミル一プテリン（生理食塩水内） 1 m lを腹腔内投与し、その後麻酔から覚まして、 1週間飼育した。 1週間後、前記の砂ネズミを全身麻酔して脳を摘出し、組織切片を作成し、神経細胞を特異的に描出する微小管結合タンパク質 2 (m i c r o t u b u l e - a s s o c i a t e d p r o t e i n 2 ; MAP 2) 染色を施すことにより、脳海馬領域の遅発性神経細胞死（d e l a y e d ne u r o n a l d e a t h ; DND) の程度を評価した。

図 3〜図 5に前記砂ネズミの脳海馬領域の組織切片の顕微鏡写真を示す。図 3 は血流遮断を行っていない完全に正常な組織状態の組織切片写真であり、図 4は対照群の組織切片写真であり、そして図 5は 6—ホルミループテリン投与群の組織切片写真である。また、図 3 (1) 、図 4 ( 1) 及び図 5 ( 1) は、それぞれ約 60倍の拡大写真であり、図 3 (2) 、図 4 (2) 及び図 5 (2) は、それぞれ約 600倍の拡大写真である。

図 4では、神経細胞力完全に脱落した状態を示しており、図 5では、多くの神経細胞が生存している状態を示している。

前記の結果は、 6—ホルミル一プテリンはその活性酵素消去作用により、砂ネズミ一過性脳虚血モデルにおいて遅発性神経細胞死が抑制されることを示している。産業上の利用可能性本発明の活性酸素消去剤は、種々の原因で発生する活性酸素に対して広く有効である。従って、前記の活性酸素消去剤を含有する本発明の医薬組成物は、活性酸素が関与するものと考えられる各種の疾病を効果的に治療することができるものと期待される。また、前記の活性酸素消去剤を含有する本発明の化粧料組成物は、紫外線などの作用によつて発生する活性酸素による悪影響を軽減ないし回避することが期待される。

Claims

請求の範囲

1. 式（I)

〔式中、 R¹ 及びは、それぞれ独立に、水素原子、炭素数 1〜4のアルキル基、又は式 R³ — CO— (R³ は炭素数 1〜 4のアルキル基である）で表されるァシル基であり、 Xは、ホルミル基又はヒドロキシメチル基であり、 Aは式

(l a) ：

で表される基であり、 nは 0又は 1以上の整数である力但し、 Xがヒドロキシメチル基である場合には ηは 0であるものとし、そして ηカ 1以上の整数である場合には、 R¹ 及び R² はそれぞれ水素原子であり、 Xはホルミル基であるものとする〕で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を有効成分として含有することを特徴とする、活性酸素消去剤。

2. 式 (II) ：

で表される 6—ホルミル一プテリン又はその塩を有効成分として含有する、請求項 1に記載の活性酸素消去剤。

3. 請求項 1に記載の式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又は薬剤学的に許容することのできるその塩を有効成分として含有することを特徴とする、医薬組成物。

4 . 活性酸素が関与する疾病の予防又は治療用である、請求項 3に記載の医薬組成物。

5 . 活性酸素が関与する疾病が、虚血障害、再カン流障害、炎症性疾患、癌、糖尿病、 A内障、動脈硬化、薬物中毒、農薬中毒、薬物の過多量投与による肝障害、農薬の過多量摂取による肝障害、未熟児網膜症、光線過敏症、又は放射線障害である、請求項 4に記載の医薬組成物。

6. 請求項 1に記載の式（ I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を含有することを特徴とする、化粧科組成物。

7. 請求項 1に記載の式（ I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を含有することを特徴とする、活性酸素が関与する疾病の予防又は治療用の機能性食品。

8. 請求項 1に記載の式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を含有することを特徴とする、活性酸素が関与する疾病の予防又は治療用の飼料。

9. 請求項 1に記載の式（ I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を含有することを特徴とする、臓器保存液用添加剤。

1 0 . 請求項 1に記載の式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を、活性酸素が関与する疾病の予防又は治療に有効な量で、活性酸素が関与する疾病の予防又は治療が必要な対象に投与することを含む、活性酸素が関与する疾病の予防又は治療方法。

1 1 . 請求項 1に記載の式（I ) で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩の、医薬組成物製造への使用。