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WO1997047659A1 - Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant - Google Patents

Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant Download PDF

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Publication number
WO1997047659A1
WO1997047659A1 PCT/FR1997/001048 FR9701048W WO9747659A1 WO 1997047659 A1 WO1997047659 A1 WO 1997047659A1 FR 9701048 W FR9701048 W FR 9701048W WO 9747659 A1 WO9747659 A1 WO 9747659A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
methyl
sulfo
acid
formula
glucopyranosyl
Prior art date
Application number
PCT/FR1997/001048
Other languages
English (en)
Inventor
Philippe Duchaussoy
Jean-Marc Herbert
Guy Jaurand
Maurice Petitou
Constant Van Boeckel
Original Assignee
Sanofi
Akzo Nobel N.V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi, Akzo Nobel N.V. filed Critical Sanofi
Priority to AU32667/97A priority Critical patent/AU3266797A/en
Priority to EP97928337A priority patent/EP0904299B1/fr
Priority to JP50130798A priority patent/JP3501813B2/ja
Priority to DE69706418T priority patent/DE69706418T2/de
Priority to CA002258146A priority patent/CA2258146C/fr
Priority to DK97928337T priority patent/DK0904299T3/da
Priority to AT97928337T priority patent/ATE204883T1/de
Priority to BRPI9709722-5A priority patent/BR9709722B1/pt
Publication of WO1997047659A1 publication Critical patent/WO1997047659A1/fr
Priority to NO19985831A priority patent/NO319037B1/no
Priority to US10/677,894 priority patent/US7919614B2/en

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Definitions

  • the present invention relates to new synthetic polysaccharides having the pharmacological activities of heparin but exercised selectively.
  • Heparin belongs to the family of glycosaminoglycans (GAG), which are heterogeneous natural sulfated polysaccharides.
  • Heparin preparations are mixtures of chains comprising a number of monosaccharide units ranging from 10 to 100 and more. To this heterogeneity of size is added a heterogeneity of structure, at the level of the nature of the constituent monosaccharides, but also at the level of the substituents which they carry (L. Rodén in The Biochemistry of
  • GAGs Each family of natural GAGs generally has a range of pharmacological activities. All of them come together in the preparations that can be obtained from natural products. Thus, for example, hepans and heparan sulphates have an antithrambotic activity which is linked to the simultaneous action on several coagulation factors. They also exert an action on numerous growth factors, the most notorious being the basic fibroblast growth factor (bFGF, basic fibroblast growth factor).
  • bFGF basic fibroblast growth factor
  • Heparin also exerts effects on autoimmunity, inflammation and the formation of tumor metastases Heparin catalyzes in particular the inhibition of two enzymes which intervene in the blood coagulation cascade, namely, the factor
  • LMWH low molecular weight hepanes
  • EP 84999 have the property of selectively inhibiting, via antithrombi ⁇ e III, factor Xa without any activity on thrombin.
  • GAGs glycosammoglycans
  • sulfated and alkylated decasaccha ⁇ des can be potent antithrombotics or selective bFGF inhibitors depending on the arrangement of alkyl groups and sulfate groups in the decacchandic chain and that it is also possible to get inhibitors selective for factor Xa, for example with a tetradecasaccha ⁇ de or products having an activity of the heparin type, namely an activity both on factor Xa and on thrombin, for example with a hexadecasaccha ⁇ de
  • a tetradecasaccha ⁇ de or products having an activity of the heparin type, namely an activity both on factor Xa and on thrombin for example with a hexadecasaccha ⁇ de
  • the present invention relates to a new synthetic polysaccharide containing from 8 to 24 monosaccharide units formed by a chain of disaccharides consisting of a uronic acid and a hexose, said polysaccharide being characterized in that all its hydroxyl groups are etherified with a group
  • the invention relates to a polysaccharide as defined above, characterized in that all of its hydroxyl groups are ethenified by a methyl group or esterified in the form of the sulfo group, each disaccharide being at least monoethenfied, and its salts, in particular pharmaceutically acceptable
  • Advantageous products are alkylated, preferably methylated, on the hydroxyls in position 2 and 3 of uronic acid, said uronic acid being preferably glucuronic acid or iduronic acid and sulfates on hexose, said hexose being preferably glucose
  • Another group of preferred products consists of polysaccharides which are alkylated, preferably methylated, on the hydroxyls in position 3 of uronic acid, said acid preferably being glucuronic acid or iduronic acid and alkylated, preferably methylated, on the hydroxyl in position 3 of glucose
  • the products of the present invention therefore preferably consist of regular sequences of repeating disaccharides in turn formed of glucuronic acid and glucose or iduronic acid and glucose represented by the following formula ⁇
  • 6 represent a (C ⁇ -C6) a'kyle
  • R 15 and R 17 represent a (C ⁇ -C5) alkyl or an SO3 group " ,
  • n and p are such that the sum m + n + p is greater than or equal to 4 and less than or equal to 12, one or two of the three may represent zero, or one of their salts, in particular pharmaceutically acceptable
  • a wavy line designates either a connection below or above the plane of the pyranosic cycle
  • the structures (a) or (b) below represent a skeleton of glucose in the conformation 4 C-].
  • the structures (c) or (d) below represent a backbone of uronic acid which is either L-iduronic acid (represented HERE in its conformation Î C4) or D-glucuronic acid (represented HERE in its conformation 4 C-
  • structures (a) and (b) are the same representation of a glucose skeleton in the conformation 4 C-
  • Structures (c) and (d) represent a skeleton of uronic acid which is either L-iduronic acid (represented here in its conformation 1 CA) or D-glucuronic acid (represented here in its conformation 4 C-
  • Preferred compounds according to the invention are those of formula (I) in which n and p are equal to zero and m represents 4 to 10 and their salts, in particular pharmaceutically acceptable. Also advantageous are the compounds of formula (I) in which n and p are equal to zero, m represents 4 to 10; at least one of the substituents R 12- R 13 ′ R 14 e * R 15 represents a sulfate group; R-
  • n and p are equal to zero, m represents 4 to 10; at least two of the substituents R 12 ' R 13 ⁇ R 14 and R 15 represent a sulfate group; R-
  • n and p are equal to zero, m represents 4 to 10; at least three of the substituents R 12 ' R 13- R 14 and R 15 represent a sulfate group; R- ⁇ , RJ Q and R17 being as defined for (I), as well as their pharmaceutically acceptable salts in particular.
  • R-15 all represent a sulfate group, R-
  • each uronic acid being either an iduronic or glucuronic acid
  • the cation being a pharmaceutically acceptable monovalent cation, as well as their corresponding acids.
  • each uronic acid being either an iduronic or glucuronic acid and where the cation is a pharmaceutically acceptable monovalent cation, as well as their corresponding acids, are also advantageous.
  • the etherifying alkyl groups are preferably methylated.
  • each uronic acid being either an iduronic acid or glucuronic and in which the cation is a pharmaceutically acceptable monovalent cation, as well as their corresponding acids, are particularly advantageous.
  • Rj represents a methyl
  • R13 in position 3 of glucose represents a methyl
  • R-J2 in position 2 and R14 in position 6 of glucose represent an SO3 "and R16 in position 3 of the iduronic or glucuronic unit represents a methyl
  • m being equal to 2 or 3.
  • the preferred salts of the invention are those in which the cation is chosen from the cations of alkali metals and more preferably still those in which the cation is Na + or K + .
  • the present invention also relates to a process for the preparation of the compounds of formula (I) characterized in that:
  • T2 to T7 and Z are as defined above for (A) and X represents an anomeric carbon activating group, such as an imidate, a thioglycoside, a pentenyl glycoside, a xanthate, a phosphite, a halide or any other group well known for activating anomeric carbon.
  • X represents an anomeric carbon activating group, such as an imidate, a thioglycoside, a pentenyl glycoside, a xanthate, a phosphite, a halide or any other group well known for activating anomeric carbon.
  • semi-permanent groups the groups which can be eliminated first after glycosylation reactions when the carbohydrate backbone has the number of desired units, without removal or alteration of the other groups present, then allowing the introduction of desired functional groups at the positions that they occupy.
  • Permanent groups are groups capable of maintaining the protection of -OH radicals during the introduction of functional groups in place of semi-permanent groups.
  • These groups are chosen from those compatible with the functional groups introduced after elimination of the semi-permanent groups. They are, moreover, groups inert with respect to the reactions carried out for the establishment of these functional groups and which are eliminable without these functional groups being altered.
  • the permanent groups are the C- alkyl groups
  • , Te, T12- T ⁇ s and T24 have the same definition as R ⁇ , R ⁇ , Ru and RJ Q in formula (I), ie they represent a (C ⁇ -Cg) alkyl.
  • the protective groups used in the process for the preparation of the compounds (I) are those commonly used in sugar chemistry, for example in Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley & sons, New York, 1981.
  • the protective groups are advantageously chosen, for example, from acetyl, halomethyl, benzoyl or levulmyl groups, benzyles, substituted benzyles, optionally substituted t ⁇ tyles, tetrahydropyranyl, allyles, pentenyles, fert-butyldimethylsilyles (tBDMS) or trimethylsilylethyls
  • acetyl, halomethyl, benzoyl or levulmyl groups benzyles, substituted benzyles, optionally substituted t ⁇ tyles, tetrahydropyranyl, allyles, pentenyles, fert-butyldimethylsilyles (tBDMS) or trimethylsilylethyls
  • the activating groups are those conventionally used in sugar chemistry according to, for example, G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1 121. These activating groups are chosen, for example, from imidates, thioglycosides, pentenylglycosides, xanthates, phosphites or halides.
  • the compounds of the invention in the form of acids can then be neutralized with a base to obtain a desired salt.
  • a base for the preparation of the salts of the compounds of formula (I), any mineral or organic base can be used, giving, with the compounds of formula (I), pharmaceutically acceptable salts.
  • Sodium, potassium, calcium or magnesium hydroxide is preferably used as the base.
  • the sodium and calcium salts of the compounds of formula (I) are the preferred salts.
  • the protective groups used are those usually used by those skilled in the art in sugar chemistry for example according to EP 084999 or also according to Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, J. Wiley & sons , 1995.
  • the protective groups Z, protecting position 4 of the non-reducing terminal end, and Tj, protecting position 1 of the reducing terminal unit, are selectively removable to allow the functionalization of the corresponding positions of the disaccharide during the steps following of the synthesis.
  • the nature of the other protective groups T2 to Tg is chosen taking into account the alcohol functions which have to be sulfated in the final product. A position carrying an alkyl group in the final product is protected by this group from the start of the synthesis, while a position to be sulfated is protected by a temporary protective group such as aralkyl (benzyl or substituted benzyte), esters
  • Disaccha ⁇ dique resulting from (A) One can obtain a large variety of disaccharides of the type of those of formula (A).
  • the preparation of the disaccharides of formula (A) is carried out essentially as described in application EP 90201006 or also in the publication C.A.A. van Boeckel and M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690 or according to G.J. Boons Tetrahedron, cited above.
  • step (b) it is possible, when T1 represents an alkyl, to use an acetolysis reaction in acetic anhydride, which then serves as solvent and reagent, in the presence of a strong acid such as sulfuric acid. or trifluoroacetic acid to selectively release the protecting group from the anomeric position.
  • T1 represents an ester
  • this ester can be eliminated selectively using, for example, benzylamine and an aprotic solvent such as diethyl ether or dichloromethane, or alternatively the
  • T1 is an allyl group
  • it can be vinyl isomerized and then carry out a mild acid hydrolysis of the vinyl ether, for example in the presence of mercu ⁇ que chloride in an acetone solution.
  • a hydroxyl compound is obtained which is then transformed into compound (B) for example by means of a reaction with tnchloroacetonitrile in the presence of a base to obtain in this case a compound (B) in which X represents an imidate
  • the groupTI in the compound (A) can be equal to X.
  • a glycosidic binding acceptor disaccharide can be obtained by selectively eliminating the group Z according to a well-known process depending on the nature of Z, for example using (1) hydrazine acetate or hydrazine hydrate, in pyndme or toluene, in the case where Z is a levuhnic group or (2) thiourea in ethanol in the case where Z is a trichloroacetyl group.
  • a glycosidic donor disaccharide of formula (B) obtained above and a glycosidic acceptor disaccharide of formula (C) obtained above are coupled so as to obtain a completely protected tetrasaccharide of formula (D), we use for this a known activator of the glycosyl donor X, for example t ⁇ methylsilyl ⁇ or TMS tfl or terrbutyldimethylsilyl triflate or TBDMS or boron tfluoride in diethyl ether for example when it is an imidate, or else the system N-iodosuccmimide or NIS, t ⁇ flic acid when it is a thioglycoside or any other system known to activate X according to the references cited above.
  • a known activator of the glycosyl donor X for example t ⁇ methylsilyl ⁇ or TMS tfl or terrbutyldimethylsilyl triflate or TBDMS or boron
  • the solvents used for the reaction are preferably dichloromethane, dichloroethane, chloroform, chlorobenzene, diethyl ether, toluene, benzene, the process is carried out under anhydrous conditions, and generally at low temperature between -70 and 0 ° C. One can also operate at room temperature.
  • step (e) the procedure is essentially as described in step (b) from the tetrasaccharides obtained according to step (d).
  • step (f) proceed as described in (c) to selectively deprotect the tetrasaccharides obtained according to step (d), and the tetrasaccharides of formula (F) are obtained.
  • step (g) proceed as described in step (d), advantageously the reaction products of formula (G) are separated by means of gel permeation chromatography.
  • step (h) the procedure is essentially carried out as described in step (b) from the hexasaccharides or octasacchanes of formula (H) obtained according to step (g).
  • step (j) by saponification with sodium hydroxide or lithium hydroxide and / or by hydrogenation catalytic, for example in the presence of palladium on carbon, the groups protecting the alcohol functions which must be sulfated
  • step (k) sulfation is carried out using a sulfating agent such as an S ⁇ 3-am ⁇ ne complex, for example the SO3-py ⁇ dine complex, or using chlorosulfonic acid in a solvent.
  • a sulfating agent such as an S ⁇ 3-am ⁇ ne complex, for example the SO3-py ⁇ dine complex, or using chlorosulfonic acid in a solvent.
  • aprotic such as dimethylformamide preferably at a temperature between 0 ° C and 100 ° C to obtain the compounds (I) which are optionally purified by gel permeation chromatography using water or a solution of sodium chloride as eluent
  • the compounds (I) thus obtained can be optionally salified.
  • the compounds of formula (I) above also include those in which one or more hydrogen or carbon atoms have been replaced by their radioactive isotope, for example tntium or carbon-14 Such labeled compounds are useful in research, metabolism or pharmacokinetics, in biochemical tests as ligands
  • the compounds according to the invention have been the subject of biochemical and pharmacological studies which have shown that they have very advantageous properties.
  • the compounds of the present invention which bind to AT III (KQ ⁇ 200nM) or heparin co-factor (HC II) with an affinity equal to or greater than that of heparin, have the anticoagulant properties of l heparin They therefore inhibit several coagulation factors such as factor Xa (titer> 10u anti-Xa / mg) or thrombin (IC50 ⁇ 10 ⁇ g / ml) and are therefore excellent antithrombotic agents in venous thrombosis and arterial thrombosis models
  • anti-factor Xa activity of the products of the invention was evaluated at pH 8.4, according to the method described by Teien A N and Lie M, in
  • factor Xa activates prothrombin into thrombin, which proteolyses soluble fibrogenic agent with release of insoluble fibrin, the main constituent of the blood clot. Inhibition of factor Xa is therefore a privileged means for obtain anticoagulant and antithrombotic activity
  • the overall antithrombotic activity of the products of formula (I) was evaluated by the intravenous or subcutaneous route in the rat, by a model of venous stasis and induction by thromboplasm, according to the method described by J Reyers et al in Thrombosis Research, 1980, 18, 669-674
  • the ED 50 of the compounds of the invention is at least of the same order or lower than that of the other known synthetic hepanoids (ED 50 between 5 and 500 ⁇ g / kg).
  • the compounds of the invention therefore exhibit a specificity of action and a particularly advantageous anticoagulant and antithrombotic activity.
  • the compounds of the present invention which are capable of modulating, in particular inhibiting the activity of growth factors, in particular bFGF, make it possible to inhibit the proliferation of vascular smooth muscle cells in culture (CML) with an inhibitory effect slightly greater than that of heparin, on the growth of smooth muscle cells.
  • CML vascular smooth muscle cells in culture
  • the action of the compounds of the invention on the activity of bFGF was evaluated by binding of iodinated FGF to human CML in culture
  • the inhibition of the proliferation of CML was evaluated in vitro on cultures of human aortic CML (R. Ross, J. Cell. Biol., 1971, 172-186)
  • the compounds of the present invention which also have antiviral, lipid-lowering properties, anti-free radical properties by release of superoxide dismutase, anti-metastatic, anti-angiogenic, anti-inflammatory properties, can also act on the growth and differentiation of neuronal cells in culture. They are therefore usable in all pathologies where disturbances of these biological mechanisms occur.
  • Certain compounds of the invention also exert a protective and regenerative action on nerve fibers Thanks to their selective biochemical and pharmaceutical activity, the compounds of the present invention are very interesting drugs Their toxicity is perfectly compatible with this use They are also very stable and are therefore particularly suitable for constituting the active principle of pharmaceutical specialties
  • the compounds of the invention can be used in various pathologies linked to coagulation and in particular in disorders of the cardiovascular and cerebrovascular system. They more particularly have a strong affinity for antithrombin III as well. that a significant anti-factor Xa and antithrombin activity The inhibition of these coagulation factors therefore constitutes a privileged means for obtaining anticoagulant and antithrombotic activity
  • thromboembolic disorders associated with atherosclerosis and with diabetes such as unstable angina, stroke, restenosis after angioplasty, endarterectomy, fitting of endovascular prostheses; or thromboembolic disorders associated with rethrombosis after thrombolysis, infarction, dementia of ischemic origin, peripheral arterial diseases, hemodialysis, atrial fibrillation or when using aortic bypass vascular prostheses -coronanens
  • thromboembolic disorders associated with rethrombosis after thrombolysis, infarction, dementia of ischemic origin, peripheral arterial diseases, hemodialysis, atrial fibrillation or when using aortic bypass vascular prostheses -coronanens
  • These products can also be used for the treatment or prevention of thromboembolic pathologies of venous origin such as pulmonary embolism.
  • the compounds of the present invention can cover prostheses and thus make them hemocompatible.
  • they can be attached to intravascular prostheses (stents).
  • they can optionally be chemically modified by introduction into the non-reducing or reducing end of an appropriate arm, as described according to EP 649,854
  • compositions prepared with the products of formula (I), which are the subject of the present invention are absorbed by the digestive tract, without the quantities administered being prohibitive for use in human therapy. are therefore useful for the preparation of pharmaceutical compositions, administered both parenterally and orally
  • the compounds of the invention are very stable and are therefore particularly suitable for constituting the active principle of medicaments
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition containing, as active principle, a synthetic polysaccharide containing from 8 to 24 monosaccharide units formed by a chain of disaccharides consisting of uronic acid and a hexose, said polysaccharide being characterized in that all of its hydroxyl groups are etherified with a group (C ⁇ -Cs) alkyl or esterified in the form of sulfo group, each dissaccha ⁇ de being at least monoethenfied, or one of its pharmaceutically acceptable salts
  • Said polysaccharide synthetic, active principle of the compositions of the present invention is preferably alkylated by a methyl group
  • the invention preferably relates to pharmaceutical compositions containing as active ingredient, a compound of formula (I), (1 1), (1.2), (I 3) or one of its pharmaceutically acceptable salts, optionally in combination with one or more inert and suitable excipients
  • each dosage unit the active principle is present in the quantities adapted to the daily doses envisaged.
  • each dosage unit is suitably adjusted according to the dosage and the type of administration intended, for example tablets, capsules and the like, sachets, ampoules, syrups and the like, drops, transdermal or transmucosal patch so that such a dosage unit contains from 0.1 to 100 mg of
  • the compounds according to the invention can also be used in combination with another active ingredient which is useful for the desired therapy, such as, for example, antithrombotics, anticoagulants, antiplatelet agents such as, for example, dipyridamole, aspirin, ticlopidme, clopidogrel. or antagonists of the Ilb / IIIa glycoproteme complex
  • compositions are formulated for administration to mammals, including humans, for the treatment of the above diseases.
  • the pharmaceutical compositions thus obtained are advantageously presented in various forms, such as for example, injectable or drinkable solutions, dragees, tablets or capsules.
  • the injectable solutions are the preferred pharmaceutical forms.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention are especially useful for the treatment for preventive or curative purposes, disorders of the vascular wall, such as atherosclerosis, the states of hypercoagulability observed for example following surgical operations for tumor development or coagulation disturbances, induced by bacterial activators, viral, or enzymatic
  • the dosage may vary widely depending on the age, weight and state of health of the patient, the nature and severity of the condition, as well as the route of administration. includes administration of one or more doses of approximately 0.1 mg to 100 mg daily, p reference about 0.5 to 50 mg per day, intramuscularly or subcutaneously, in discontinuous administrations or at regular intervals
  • a subject of the present invention is therefore also pharmaceutical compositions which contain, as active principle, one of the above compounds optionally in association with another active principle. These compositions are produced so that they can be administered by the digestive or parenteral route.
  • the active ingredient can be administered in unit administration forms, as a mixture with conventional pharmaceutical supports, to animals and beings humans.
  • Suitable unit administration forms include oral forms such as tablets, capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions, sublingual and oral administration forms, subcutaneous administration forms , intramuscular, intravenous, mtranasal or i ⁇ traocular and forms of rectal administration.
  • the main active ingredient is mixed with a pharmaceutical vehicle such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
  • a pharmaceutical vehicle such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
  • the tablets can be coated with saccha ⁇ rose or other suitable materials or they can be treated in such a way that they have a prolonged or delayed activity and that they continuously release a predetermined quantity of active principle.
  • a preparation in capsules is obtained by mixing the active ingredient with a diluent and by pouring the mixture obtained into soft or hard capsules.
  • a preparation in the form of a syrup or elixir may contain the active ingredient together with a sweetener, preferably water-based, methyl paraben and propylparaben as an antiseptic, as well as a flavoring agent and an appropriate color.
  • a sweetener preferably water-based, methyl paraben and propylparaben as an antiseptic, as well as a flavoring agent and an appropriate color.
  • the water-dispersible powders or granules may contain the active ingredient in admixture with dispersing agents or wetting agents, or suspending agents, such as polyvinylpyrroli ⁇ done, as well as with sweeteners or flavor correctors.
  • Suppositories are used for rectal administration which are prepared with binders that melt at rectal temperature, for example cocoa butter or polyethylene glycols.
  • aqueous suspensions for example aqueous suspensions, isotonic saline solutions or sterile and injectable solutions are used which contain pharmacologically compatible dispersing agents and / or wetting agents, for example propylene glycol or butylene glycol.
  • pharmacologically compatible dispersing agents and / or wetting agents for example propylene glycol or butylene glycol.
  • the active principle can be formulated in the presence of a promoter such as a bile salt, of a hydrophilic polymer such as for example hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxyethylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose , dextran, polyvinylpyrrolidone, pectins, starches, gelatin, casein,
  • a promoter such as a bile salt
  • a hydrophilic polymer such as for example hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxyethylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose , dextran, polyvinylpyrrolidone, pectins, starches, gelatin, casein,
  • the active principle can also be formulated in the form of microcapsules, optionally with one or more carriers or additives.
  • the active principle can also be presented in the form of a complex with a cyclodextn ⁇ e, for example ⁇ , ⁇ or ⁇ cyclodextrin, 2-hydroxypropyl- ⁇ -cyclodext ⁇ ne or methyl- ⁇ -cyclodext ⁇ ne.
  • the active principle can also be released by a rod containing it or by an endovascular expander introduced into the blood vessels The pharmacological effectiveness of the active principle is thus not affected.
  • Administration by subcutaneous route is the preferred route
  • the following METHODS, PREPARATIONS and SCHEMAS illustrate the synthesis of the various intermediates useful for obtaining the polysaccharides according to the invention.
  • Te / ⁇ -butyldimethylsilyl tnflate (0.5 mol / mol imidate) is added dropwise, under argon, to a stirred and cooled solution (-20 ° C) of the acceptor alcohol and the imidate donor, in toluene (35 r ⁇ l / mmol), in the presence of 4 ⁇ molecular sieve powder. After 15-30 minutes (TLC), solid sodium hydrogen carbonate is introduced with stirring. After 5 minutes toluene is added, the solution is filtered, washed with a 2% solution of sodium hydrogen carbonate, with water. , dried (sodium sulfate), and concentrated.
  • Trnmethylsilyl tnflate (0.04 M in toluene; 0.06 mol / mol of imidate) is added dropwise, under argon, to a stirred and cooled solution (-20 ° C) of acceptor alcohol and donor imidate, in toluene (15 ml / mmol), in the presence of 4 ⁇ molecular sieve powder After 15-30 minutes (TLC), the mixture is introduced with stirring solid sodium hydrogencarbonate After 5 minutes toluene is added, the solution is filtered, washed with a 2% solution of sodium hydrogencarbonate, with water, dried (magnesium sulfate), and concentrated
  • Methyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O- (4,6-isopropylidene-2,3-di-O-methyl- ⁇ - L-idopyranosyl) - ⁇ -D-glucopyranoside (5) Methyl iodide (3.2 ml, 50.8 mmol) is added, at 0 ° C, to a solution of 4 (26.6 g, 39.1 mmol) and sodium hydride (1, 48 g, 58.7 mmol) in dimethylformamide (60 ml).
  • Trifluoroacetic acid (28 ml, 0.364 mol) is added to a solution of 12 (7.8 g, 9.1 mmol) in acetic anhydride (194 ml, 2.06 mol) and acid acetic (7.8 ml, 0.136 mol). After heating at 60 ° C for 4 hours the solution is cooled to 0 ° C and water (30 ml) is introduced dropwise, followed by triethylamine (69 ml). After evaporation the residue is dissolved in dichloromethane, washed with saturated sodium hydrogencarbonate solution, water, dried (sodium sulfate), and concentrated.
  • Methyl 0- (4-O-levulinyl-2,3-di-0-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) -0- (3,6-di-0-acetyl-2- 0-be ⁇ zyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - 0- (2,3-di-0-methyl-ot-L-idopyranosyluronate) - (1-4) -2.3.6 -tri-0- benzyl- ⁇ -D-glucopyranoside (16).
  • hexadecasacchande 30 (100 mg; 19 ⁇ mol) is treated according to method 1 to give 31 used directly in the next step.
  • [ ⁇ ] p +20 (c 0.38, dichloromethane).
  • glycosyl donor and the glycosyl acceptor are the glycosyl donor and the glycosyl acceptor

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Abstract

L'invention concerne des polysaccharides de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formées par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C1-C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié; ainsi que leurs sels.

Description

POLYSACCHARIDES SYNTHEΗQUES, PROCEDE POUR LEUR PREPARATION ET COMPOSITIONS PHARMACEU¬ TIQUES LES CONTENANT
La présente invention concerne de nouveaux polysaccharides de synthèse possédant les activités pharmacologiques de l'héparine mais exercées de façon sélective.
L'héparine appartient à la famille des glycosaminoglycanes (GAG), qui sont des polysaccharides sulfatés naturels hétérogènes.
Les préparations d'héparine sont des mélanges de chaînes comprenant un nombre d'unités monosaccharidiques allant de 10 jusqu'à 100 et plus. A cette hétérogénéité de taille s'ajoute une hétérogénéité de structure, au niveau de la nature des monosaccharides constitutifs, mais également au niveau des substituants qu'ils portent (L. Rodén in The Biochemistry of
Glycoproteins and Glycosaminoglycans, Ed by Leπnarz W.J., Plénum Press, 1980, New York and London, 267-371 )
Chaque famille de GAG naturel possède en général un éventail d'activités pharmacologiques. Toutes sont réunies dans les préparations que l'on peut obtenir à partir de produits naturels. Ainsi, par exemple, les hépannes et les héparanes sulfate possèdent une activité antithrσmbotique qui est liée à l'action simultanée sur plusieurs facteurs de la coagulation. Ils exercent également une action sur de nombreux facteurs de croissance, le plus notoire étant le facteur de croissance basique des fibroblastes (bFGF, basic fibroblast growth factor).
Cette action se manifeste par un effet sur la prolifération des cellules musculaires lisses et sur l'angiogénèse. L'héparine exerce en outre des effets sur l'autoimmunité, l'inflammation et la formation de métastases tumorales L'héparine catalyse notamment l'inhibition de deux enzymes qui interviennent dans la cascade de la coagulation du sang à savoir, le facteur
Xa et le facteur lia (ou thrombtne). Les préparations d'hépaπnes de bas poids moléculaire (HBPM), contiennent des chaînes formées de 4 à 30 monosaccharides et ont la propriété d'agir plus sélectivement sur le facteur Xa que sur la thrombine. Certains oligosacchandes de synthèse notamment ceux décrits dans
EP 84999 ont la propriété d'inhiber sélectivement, via l'antithrombiπe III, le facteur Xa sans aucune activité sur la thrombine.
Le brevet US 5,378,829 décrit des dérivés glycosammogiycanoides sulfatés du type héparine ou héparaπe sulfate ayant une activité 5 antithrombotique et inhibitnce de la prolifération des cellules musculaires lisses Ce document ne décrit cependant que des ohgosacchandes ayant au maximum 7 unités monosaccharidiques
Au cours des années précédentes, la tendance dans le domaine des GAGS était de rechercher notamment des ohgosacchandes de masse moléculaire la plus faible possible, mais il a ete par la suite observé que plusieurs des activités biologiques sus-mentioπnees sont soutenues par des fragments ayant au moins 8 unités sacchandiques Par exemple, l'activité inhibitnce de la thrombine nécessiterait des fragments contenant au moins entre 14 et 20 unités sacchandiques tandis que pour l'activation du bFGF au moins 12 unités sacchandiques seraient nécessaires (M Maccarana et al , J
Biol Chem , 1993, 268, 23998-23905 , J E Tumbull ét al , J Biol Chem , 1992, 267, 10337-10341 )
Une synthèse de polysaccharides de cette taille présente de grandes difficultés et, en fait, elle n'a jamais été réalisée
Dans le but de retrouver l'activité de produits de longue taille, il a été proposé de relier deux oligosacchandes de petite taille par une entité n' intervenant pas dans I' activité biologique EP 649854 décrit de tels dérives possédant une activité antithrombotique De façon analogue WO 95 05182 décrit des conjugués actifs sur la régulation du bFGF
Ces produits présentent en effet une activité sélective sur les différents facteurs de la coagulation et des propriétés inhibitnces des facteurs de croissance se traduisant par une inhibition de la prolifération cellulaire
Il a maintenant été trouvé que des fragments de GAGs (glycosammoglycanes) contenant 8 ou plus unités sacchandiques et pouvant être synthétisés de façon relativement simple possèdent des activités biologiques qui sont non seulement sélectives mais aussi quantativement élevées
Plus particulièrement, il a été trouvé qu'il est possible de moduler quantitativement l'activité desdits polysaccharides selon la longueur des chaînes et la distribution des substituants fonctionnels
Ainsi, par exemple, il a été trouvé de façon surprenante que des décasacchaπdes sulfatés et alkylés peuvent être des puissants antithrombotiques ou des inhibiteurs sélectifs du bFGF selon la disposition des groupes alkyles et des groupes sulfates dans l'enchaînement décacchandiques et qu'il est également possible d'obtenir des inhibiteurs sélectifs du facteur Xa par exemple avec un tétradecasacchaπde ou des produits ayant une activité du type héparine, a savoir une activité aussi bien sur le facteur Xa que sur la thrombine, par exemple avec un hexadecasacchaπde De façon plus générale, il a été trouve que par réalisation de séquences disacchaπdiques formées par un acide uronique et par un hexose de façon a constituer des polysaccharides de 8 à 24 unités monosaccharidiques dont les groupes hydroxyles sont tous substitués par des groupes alkyles ou par des groupes sulfates il est possible de moduler avec précision les activités du type GAGs pour obtenir des produits très actifs et sélectifs
Ainsi, selon un de ses aspects, la présente invention concerne un nouveau polysaccharide de synthèse contenant de 8 a 24 unités monosaccharidiques formé par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthénfiés avec un groupe
(C-|-C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthénfié , ainsi que ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables
De préférence, I' invention se rapporte à un polysaccharide tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyle sont éthénfiés par un groupe méthyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthénfié, et à ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables
Des produits avantageux sont alkyles, de préférence méthylés, sur les hydroxyles en position 2 et 3 de l'acide uronique, ledit acide uronique étant de préférence l'acide glucuronique ou l'acide iduronique et tnsulfates sur l'hexose, ledit hexose étant de préférence le glucose Un autre groupe de produits préférés est constitué des polysaccharides qui sont alkyles, de préférence méthylés, sur les hydroxyles en position 3 de l'acide uronique ledit acide étant de préférence l'acide glucuronique ou l'acide iduronique et alkyles, de préférence méthylés, sur l'hydroxyle en position 3 du glucose
Les produits de la présente invention sont donc de préférence constitués de séquences régulières de disaccharides répétés à leur tour formés d'acide glucuronique et de glucose ou d'acide iduronique et de glucose représentés par la formule suivante ^
Figure imgf000006_0001
DB1 DB2 DB3
(D dans laquelle
- le trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle pyranosique ,
- R-| , Rβ, Ri 1 et R-|6 représentent un (Cι-C6)a'kyle ,
- R2, R3, R4, R5, R7, Rβ. R9, R10. R12. R13. R14. R15 et R17 représentent un (Cι-C5)alkyle ou un groupe SO3" ,
- m, n et p sont tels que la somme m + n + p est supérieure ou égale à 4 et inférieure ou égale à 12, un ou deux des trois pouvant représenter zéro, ou un de leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables
On notera que de façon générale dans la présente description, un trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle pyranosique
Dans la formule générale (I) et dans la présente description, les structures (a) ou (b) ci-dessous représentent un squelette de glucose dans la conformation 4C-] . Les structures (c) ou (d) ci-dessous représentent un squelette d'acide uronique qui est soit de l'acide L-iduronique (représenté ICI dans sa conformation Î C4) soit de l'acide D-glucuronique (représenté ICI dans sa conformation 4C-| )
Sur ces structures (a), (b), (c) et (d) les substituants Rx ont les définitions attribuées pour R-j à R<| 7 dans (I)
Ainsi, les structures (a) et (b) sont la même représentation d'un squelette de glucose dans la conformation 4C-|
Figure imgf000007_0001
(a) (b)
Les structures (c) et (d) représentent un squelette d'acide uronique qui est soit de l'acide L-iduronique (représenté ici dans sa conformation 1 CA) soit de l'acide D-glucuronique (représenté ici dans sa conformation 4C-| ).
Figure imgf000007_0002
(c) (d) Lorsqu'il s'agit d'acide L-iduronique (c) et (d) sont les conformères suivants:
Figure imgf000007_0003
Lorsqu'il s'agit d'acide D-glucuronique (c) et (d) sont les conformères suivants:
Figure imgf000007_0004
^ D,ans la présente description, il a été choisi de représenter les conformations ^ CA pour l'acide-L-iduronique, 4C-| pour l'acide D- glucuronique, mais il est notoire que la conformation en solution des unités monosaccharides est fluctuante. Les disaccharides DB1 , DB2 et DB3 représentent des disaccharides identiques ou différents.
Des composés préférés selon l'invention sont ceux de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro et m représente 4 à 10 et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables. Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; un au moins des substituants R12- R13' R14 e* R15 représente un groupe sulfate ; R-| , R-jβ et R17 étant tels que définis pour (I) ainsi que leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables. Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; deux au moins des substituants R12' R13< R14 et R15 représentent un groupe sulfate ; R-| , R-| β et R17 étant tels que définis pour (I) ainsi que leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables. Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; trois au moins des substituants R12' R13- R14 et R15 représentent un groupe sulfate ; R-\ , RJ Q et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que leurs sels notamment pharmaceutiquement acceptables. Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; les groupes R12. R13, R14 et
R-15 représentent tous un groupe sulfate , R-| , R-|g et R17 étant tels que définis pour (I) et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
D'autres composés avantageux sont les sels constitués d'un anion et d'un cation, l'anion répondant à la formule (1.1 ) -
Figure imgf000009_0001
dans laquelle m représente 4 à 10 ; R-j , R15, R-|β et R17 sont tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, et, le cation étant un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants.
Les sels constitués d'un anion et d'un cation où Fanion répond à la formule (1.2) :
Figure imgf000009_0002
(1.2)
dans laquelle m représente 4 à 10 ; R-\ , R15, R-jβ et R17 sont teis que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique et où le cation est un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants, sont également avantageux.
Dans les formules (I), (1.1 ), (1.2) ci-dessus, les groupes alkyle éthérifiants sont de préférence des méthylés.
Les sels constitués d'un anion et d'un cation, où l'anion a pour formule
(1.3) :
Figure imgf000010_0001
(1.3)
dans laquelle m représente 2 ou 3, R-| , R12, R13, R14, R15, R16 et R-17 étant tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique et où le cation est un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants, sont particulièrement avantageux.
Parmi ces composés (1.3), on préfère tout particulièrement ceux pour lesquels R-j représente un méthyle, R13 en position 3 du glucose représente un méthyle, R-J2 en position 2 et R14 en position 6 du glucose représentent un SO3" et R16 en position 3 de l'unité iduronique ou glucuronique représente un méthyle, m étant égal à 2 ou 3.
Les sels préférés de l'invention sont ceux dont le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins et plus préférablement encore ceux dont le cation est Na+ ou K+.
Particulièrement préférés sont les polysaccharides suivants
1 ) Méthyl 0-(acιde 2,3-di-0-méthyl-4-O-sulfo-α-L-idopyraπosyluronique)- (1 -4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyraπosyl)-(1 -4)-O-(acιde 2,3-di-0- méthyl-α-L-idopyranosyluronιque)-(1 -4)]g-2,3,6-tri-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium
2) Méthyl 0-(acιde 2,3-dι-0-méthyl-4-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)- (1 -4)-[0-(2,3,6-tπ-0-sulfo-α-D-glucopyraπosyl)-(1 -4)-O-(acιde 2,3-di-O- méthyl-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 -4)]4-2,3,6-trι-O-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium 3J Méthyl 0-(acιde 2,3-dι-0-méthyl-4-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)- (1-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-0-(acιde 2,3-dι-O- méthyl-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1-4)]5-2,3,6-tri-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium.
4) Méthyl 0-(acιde 2,3-di-0-méthyl-4-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyiuronιque)- (1 -4)-[0-(2,3,6-trι-0-sulfo-α-D-glucopyranosylH1-4)-O-(acιde 2,3-di-0- méthyl-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1-4)]5-2)3,6-tπ-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium.
5) Méthyl 0-(acιde 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)- (1 -4)-[0-(2,3,6-trι-0-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acιde 2,3-dι-0- méthyl-α-L-ιdopyranosyluronιquθ)-(1-4)]7-2,3,6-trι-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium.
6) Méthyl 0-(acιde 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)- (1-4HO-(2,3,6-trι-0-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acιde 2,3-dι-0- méthyl-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1-4)]8-2,3,6-trι-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium.
7) Méthyl 0-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-β-D- glucopyranosyluronιque)-(1-4)-[0-(2,3,6-th-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)- 0-(acιde 2,3-di-O-méthyl-β-D-glucopyranosyluronιque)-(1-4)]4-2,3,6-trι-0- sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium.
8) Méthyl O-(acιde 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-β-D- glucopyranosyluronιque)-(1-4HO-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)- O-(acιde 2,3-di-O-méthyl-β-D-glucopyranosyluronιque)-(1-4)]3-2,3,6-tri-O- sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium
9) Méthyl 0-(acιde 3-O-méthyl-2,4-di-0-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)- (1 -4)-[0-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-0-(acιde 3-0- méthyl-2-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-0-méthyl-2,6-di-0- sulfo-<x-D-glucopyranosιder sel de sodium 10) Méthyl 0-(acιde 3-0-méthyl-2,4-dι-0-sulfo-α-L- ιdopyranosyluronιque)-(1 -4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-dι-0-sulfo-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acιde 3-0-méthyl-2-0-sulfo-α-L- ιdopyraπosyluronιque)-( 1 -4)]3-3-O-méthyl-2,6-di-O-suïfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium.
1 1 ) Méthyl 0-(acιde 3-O-méthyl-2,4-di-0-sulfo-α-L- ιdopyranosyluronιque)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acιde 3-O-méthyl-2-O-sulfo-α-L- ιdopyranosyluronιque)-( 1 -4)]5-3-O-méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium.
12) Méthyl 0-(acιde 3-0-méthyl-2,4-di-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl- uronιque)-(1 -4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O- (acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-β-D-glucopyranosyluronιc acιd)-(1 -4)]4-3-O- méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium
13) Méthyl O-( acide 3-O-méthyl-2,4-di-0-sulfo-α-L- ιdopyranosyluronιque)-(1 -4)-[O-(3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-α-L- ιdopyranosyluronιque)-(1 -4)]2-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)- O-( acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)-( 1 -4)-3-O-méthyl- 2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium.
14) Méthyl 0-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-α-L- idopyranosyluronιque)-( 1 -4)-[O-(3-0-méthyl-2,6-dι-O-sulfo-o:-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-O-( acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)]3-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)- O-(acιde 3-O-méthyl-2-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 -4)-3-O-méthyl- 2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium.
La présente invention concerne également un procédé pour la préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que :
(a) on couple selon les méthodes classiques de la chimie des sucres un monosacchande donneur de liaison glycosidique à un monosacchande accepteur de liaison glycosidique pour obtenir après les modifications chimiques bien connues de l'homme du métier un synthon sacchandique intermédiaire de type disaccharide complètement protégé de formule (A) .
1
Figure imgf000013_0001
(A)
dans laquelle les substituants Ti , T2, T3, T4, T5, TQ, TJ, et Z identiques ou différents sont choisis parmi les groupes protecteurs utilisés en chimie des sucres comme groupe protecteur permanent, semi-permanent ou temporaire,
(b) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon sacchandique intermédiaire de type disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) :
Figure imgf000013_0002
(B)
dans laquelle T2 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et X représente un groupe activateur du carbone anomérique, tel qu'un imidate, un thioglycoside, un pentenyl glycoside, un xanthate, un phosphite, un halogenure ou tout autre groupement bien connu pour activer le carbone anomérique. puis (c) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C) :
Figure imgf000014_0001
(C)
dans laquelle Ti à T7 sont tels que définis ci-dessus pour (A), en éliminant sélectivement le groupe protecteur Z selon des méthodes bien connue de l'homme de l'art, puis
(d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) obtenu ci-dessus et un disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tetrasaccharide complètement protégé de formule (D) :
Figure imgf000014_0002
(D) dans laquelle Ti à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et TQ, τ9- "1*10> Ti 1 , T<| 2 et T"ι 3 sont te's que définis pour T2 à T7 puis,
(e) on modifie ensuite chimiquement le tetrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type tetrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E) :
Figure imgf000015_0001
(E) dans lequel X a la même définition que pour (B) et T2 à T13 sont tels que définis pour (D) puis,
(f) on déprotège ensuite sélectivement le tetrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un tetrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de fo
Figure imgf000015_0002
(F) dans laquelle T-| à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) puis, (g) on couple le tetrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) tel que ceux obtenus ci-dessus pour former un synthon saccharidique intermédiaire de type hexasaccharide complètement protégé de formule (G) :
Figure imgf000015_0003
^
(G) dans laquelle T-| à T-13 sont tels que définis précédemment pour (D) et τ14 à T-| g sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B), ou bien on couple le tetrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un tetrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E) de façon à obtenir un octasacchaπde complètement protégé de formule (H) :
Figure imgf000016_0001
(H) dans laquelle T-| à T19 et Z sont tels que définis précédemment et T20 à T25 sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B) puis,
(h) on modifie chimiquement l'hexasacchande de formule (G) ou l'octasacchande de formule (H) obtenus ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type hexasacchande accepteur de liaison glycosidique de formule (G) dans lequel Z représente l'hydrogène ou bien un octasacchaπde accepteur de liaison glycosidique de formule (H) dans lequel Z représente l'hydrogène,
(i) on répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons sacchandiques intermédiaires donneurs de glycosyle et accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des groupes protecteurs Ti détermine la position des groupes sulfates et alkyles sur le produit final (I), et
(j) on procède à la déprotection des fonctions alcools qui doivent être sulfatées, et acide carboxyliques, en éliminant les groupes protecteurs Ti qui protégeaient ces fonctions au cours des étapes d'élaboration du squelette, puis, finalement
(k) on procède à la sulfatation pour obtenir les composés (I), ou un de leurs sels.
Le procédé décrit ci-dessus est le procédé préféré de l'invention. Toutefois, les composés de formule (I) peuvent être préparés par d'autres métho « des connues de la chimie des sucres décrites par exemple dans
Monosaccharides, Their chemistry and their rôles in natural products, P. M. Collins et R.J. Ferner, J. Wiley & sons, 1995 et dans G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1 121. En variante, les composés de formule (I) peuvent être préparés selon le procédé décrit dans M. Dreef, XVIIe Symposium sur les carbohydrates, Ottawa, 1 -22 juillet 1994, Abstract D 2.5.
Par groupements semi-permanents, on entend les groupements éliminables en premier lieu après les réactions de glycosylation lorsque le squelette glucidique comporte le nombre de motifs désirés, sans enlèvement ou altération des autres groupes présents, permettant alors l'introduction de groupements fonctionnels souhaités aux positions qu'ils occupent.
Les groupements permanents sont des groupements capables de maintenir la protection des radicaux -OH durant l'introduction de groupements fonctionnels à la place des groupements semi-permanents.
Ces groupements sont choisis parmi ceux compatibles avec les groupes fonctionnels introduits après élimination des groupes semi-permanents. Il s'agit, en outre, de groupements inertes vis-à-vis des réactions effectuées pour la mise en place de ces groupes fonctionnels et qui sont éliminables sans que ces groupements fonctionnels ne soient altérés.
Selon l'invention, les groupes permanents sont les groupes alkyle en C-| -
Ce-
Comme exemple de groupe semi-permanent et/ou temporaire on peut citer les groupes benzyle et acétate. Les substituants en position 3 des motifs uroniques du composé cible peuvent être déjà présents dans les synthons de départ de formule (A), ainsi que le substituant R-| .
Dans le procédé ci-dessus, les substituants T-| , Te, T12- Tπ s et T24 ont la même définition que Rπ , Rβ, Ru et R-J Q dans la formule (I) c'est à dire qu'ils représentent un (Cι-Cg)alkyle.
Les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparations des composés (I) sont ceux couramment utilisés dans la chimie des sucres par exemple dans Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley & sons, New-York, 1981. Les groupes protecteurs sont avantageusement choisis par exemple parmi les groupes acétyles, halogénométhyles, benzoyles, levulmyles, benzyles, benzyles substitués, tπtyles éventuellement substitués, tétrahydropyranyles, allyles, pentenyles, fert-butyldiméthylsilyles (tBDMS) ou triméthylsilyléthyles (...).
Les groupes activateurs sont ceux classiquement utilisés en chimie des sucres selon par exemple G.J.Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1 121 . Ces groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates, les thioglycosides, les penténylglycosides, les xanthates, les phosphites ou les halogénures.
Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention sous forme de sels. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous forme de sels, sont mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide.
Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent être ensuite neutralisés par une base pour obtenir un sel souhaité. Pour la préparation des sels des composés de formule (I), on peut utiliser toute base minérale ou organique, donnant avec les composés de formule (I), des sels pharmaceutiquement acceptables.
On utilise de manière préférentielle comme base l'hydroxyde de sodium, de potassium, de calcium ou de magnésium. Les sels de sodium et de calcium des composés de formule (I), sont les sels préférés.
Dans l'étape (a) du procédé, les groupes protecteurs utilisés sont ceux habituellement utilisés par l'homme du métier en chimie des sucres par exemple selon EP 084999 ou encore selon Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, J. Wiley & sons, 1995.
Les groupes protecteurs Z, protégeant la position 4 de l'extrémité terminale non-réductrice, et T-j , protégeant la position 1 de l'unité terminale réductrice, sont éliminables de façon sélective pour permettre la fonctionalisation des positions correspondantes du disaccharide au cours des étapes suivantes de la synthèse. La nature des autres groupements protecteurs T2 à Tg est choisie en tenant compte des fonctions alcool devant être sulfatées dans le produit final. Une position porteuse d'un groupe alkyle dans le produit final est protégée par ce groupe dès le départ de la synthèse, alors qu'une position devant être sulfatée est protégée par un groupement protecteur temporaire tels que aralkyle (benzyle ou benzyte substitué), esters
(acétates, benzoates). La position et la nature des substituants Ti déterminent donc dans le produit final le profil de sulfatation du fragment
« disacchaπdique issu de (A) On peut obtenir une grande variété de disaccharides du type de ceux de formule (A). La préparation des disaccharides de formule (A) est réalisée essentiellement comme décrit dans la demande EP 90201006 ou encore dans la publication C.A.A. van Boeckel et M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690 ou encore selon G.J. Boons Tetrahedron, cité précédemment.
Selon l'étape (b), on peut lorsque T1 représente un alkyle, utiliser une réaction d'acétolyse dans l'anhydride acétique, qui sert alors de solvant et de réactif, en présence d'un acide fort tel que l'acide sulfuπque ou l'acide trifluoroacétique pour libérer sélectivement le groupement protecteur de la position anomérique. Lorsque T1 représente un ester on peut éliminer de façon sélective cet ester en utilisant par exemple la benzylamine et un solvant aprotique tel que l'éther diéthylique ou le dichlorométhane, ou bien encore la
N-méthylmorpholine dans le tétrahydrofurane. Lorsque T1 est un groupe allyle on peut l'isoméπser en vinyle et procéder ensuite à une hydrolyse acide douce de l'éther vinylique par exemple en présence de chlorure mercuπque dans une solution acétonique. Par les méthodes ci-dessus on obtient un composé hydroxyle qui est ensuite transformé en composé (B) par exemple au moyen d'une réaction avec le tnchloroacétonitrile en présence d'une base pour obtenir dans ce cas un composé (B) dans lequel X représente un imidate Dans le cas où X représente un thioglycoside, ou un peπtényle glycoside, le groupeTI dans le composé (A) peut être égal à X.
Selon l'étape (c), on peut obtenir un disaccharide accepteur de liaison glycosidique en éliminant sélectivement le groupement Z selon un procédé bien connu dépendant de la nature de Z, mettant par exemple en oeuvre (1 ) l'acétate d'hydrazine ou l'hydrate d'hydrazine, dans la pyndme ou le toluène, dans le cas où Z est un groupe lévuhnique ou bien (2) la thiourée dans l'éthanol dans le cas où Z est un groupe trichloroacétyle.
Selon l'étape (d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) obtenu ci-dessus et un disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tetrasaccharide complètement protégé de formule (D), on utilise pour cela un activateur connu du donneur de glycosyle X par exemple le tπflate de tπméthylsilylβ ou TMS ou le triflate de terrbutyldiméthylsilyle ou TBDMS ou encore le tπfluorure de bore dans l'éther diéthylique par exemple lorsqu'il s'agit d'un imidate, ou bien le système N-iodosuccmimide ou NIS, acide tπflique lorsqu'il s'agit d'un thioglycoside ou tout autre système connu pour activer X selon les références précédemment citées. Les solvants utilisés pour la réaction sont de façon préférée le dichlorométhane, le dichloroéthane, le chloroforme, le chlorobenzène, l'éther diéthylique, le toluène, le benzène , on opère dans des conditions anhydre, et généralement à basse température entre -70 et 0°C. On peut également opérer à température ambiante.
Pour l'étape (e) on procède essentiellement comme décrit dans l'étape (b) à partir des tétrasaccharides obtenus selon l'étape (d).
Pour l'étape (f) on procède comme décrit en (c) pour déprotéger sélectivement les tétrasaccharides obtenus selon l'étape (d), et on obtient les tétrasaccharides de formule (F).
Pour l'étape (g) on procède comme décrit dans l'étape (d), avantageusement on sépare les produits de la réaction de formule (G) au moyen d'une chromatographie par perméation sur gel.
Pour l'étape (h) on procède essentiellement comme décrit dans l'étape (b) à partir des hexasaccharides ou des octasacchandes de formule (H) obtenus selon l'étape (g).
On répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons sacchandiques intermédiaires donneurs de glycosyle et accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des groupes protecteurs Ti détermine la position des groupes sulfates et alkyles sur le produit final (I).
On élimine ensuite selon l'étape (j), par saponification avec de l'hydroxyde de sodium ou de l'hydroxyde de lithium et/ou par hydrogénation catalytique par exemple en présence de palladium sur charbon, les groupements protecteurs des fonctions alcools qui doivent être sulfatées
Selon l'étape (k) on procède à la sulfatation à l'aide d'un agent sulfatant tel qu' un complexe Sθ3-amιne, par exemple le complexe SO3- pyπdine, ou à l'aide d'acide chlorosulfonique dans un solvant aprotique tel que le dimethylformamide de préférence a une température comprise entre 0°C et 100°C pour obtenir les composés (I) qui sont éventuellement purifiés par chromatographie par perméation sur gel en utilisant l'eau ou une solution de chlorure de sodium comme eluant
Les composés (I) ainsi obtenus peuvent être éventuellement salifiés Les composés de la formule (I) ci-dessus comprennent également ceux dans lesquels un ou plusieurs atomes d'hydrogène ou de carbone ont été remplacés par leur isotope radioactif par exemple le tntium ou le carbone-14 De tels composés marqués sont utiles dans les travaux de recherche, de métabolisme ou de pharmacocmétique, dans les essais biochimiques en tant que ligands
Les composés selon l'invention ont fait l'objet d' études biochimiques et pharmacologiques qui ont montré qu'ils possèdent des propriétés très intéressantes
Les composés de la présente invention qui se lient à l'AT III (KQ < 200nM) ou à l'héparine co-facteur (HC II) avec une affinité égale ou supérieure à celle de l'héparine, possèdent les propriétés anticoagulantes de l'héparine Ils inhibent de ce fait plusieurs facteurs de la coagulation tel que le facteur Xa (titre > 10u anti-Xa/mg) ou la thrombine (CI50 < 10 μg/ml) et sont à ce titre d'excellents agents antithrombotiques dans les modèles de thrombose veineuse et de thrombose artérielle
L'affinité des composés de formule (I) pour l'AT III, a été déterminée par spectrofluorométrie, dans les conditions décrites par D Atha er al dans
Biochemistry, 1987, 26, 6454-6461 Les résultats des essais ont démontré que les composés de l'invention possèdent une très grande affinité pour l'AT III (KQ compris entre 0.1 μM et 1 nM)
L'activité anti-facteur Xa (anti-Xa) des produits de l'invention a été évaluée à pH 8,4, selon la méthode décrite par Teien A N et Lie M , dans
Thrombosis Research, 1977, 10, 399-410, et il a été démontré que des comp.osés de l'invention possèdent une activité anti-Xa égale ou supérieure à celle des hépannoides de synthèse déjà connus, notamment est supérieure à
Figure imgf000022_0001
Comme cela a été mentionné précédemment, dans la cascade de coagulation le facteur Xa active la prothrombine en thrombine, qui protéolyse le fibrmogène soluble avec libération de la fibrine insoluble, constituant principal du caillot sanguin L'inhibition du facteur Xa constitue donc un moyen privilégié pour obtenir une activité anticoagulante et antithrombotique
L'activité antithrombotique globale des produits de formule (I) a été évaluée par voie intraveineuse ou sous cutanée chez le rat, par un modèle de stase veineuse et induction par la thromboplastme, selon la méthode décrite par J Reyers et al dans Thrombosis Research, 1980, 18, 669-674 La DE50 des composés de l'invention est au moins du même ordre ou inférieure à celle des autres hépaπnoides de synthèse déjà connus (DE50 comprises entre 5 et 500μg/kg). Les composés de l'invention présentent donc une spécificité d'action et une activité anticoagulante et antithrombotique particulièrement intéressantes.
Les composés de la présente invention qui sont capables de moduler, notamment d'inhiber l'activité des facteurs de croissance en particulier du bFGF permettent d'inhiber la prolifération des cellules musculaires lisses vasculaires en culture (CML) avec un effet inhibiteur légèrement supérieur à celui de l'héparine, sur la croissance des cellules musculaires lisses.
U action des composés de I' invention sur I' activité du bFGF a été évaluée par fixation du FGF iodé aux CML humaines en culture L'inhibition de la prolifération des CML a été évaluée m vitro sur des cultures de CML aortiques humaines (R. Ross, J. Cell. Biol., 1971 , 172-186)
Les composés de la présente invention qui possèdent également des propriétés antivirales, hypolipidémiantes, des propriétés antiradicaux libres par libération de la superoxyde dismutase, des propriétés antimétastasiques, antiangiogentques, anti-inflammatoires, peuvent également agir sur la croissance et la différenciation des cellules neuronales en culture Ils sont de ce fait utilisables dans toutes les pathologies où des perturbations de ces mécanismes biologiques interviennent.
Certains composés de l' invention exercent aussi une action protectrice et régénératrice sur les fibres nerveuses Grâce à leur activité biochimique et pharmaceutique sélective, les composés de la présente invention sont des médicaments très intéressants Leur toxicité est parfaitement compatible avec cette utilisation Ils sont également très stables et sont donc particulièrement appropriés pour constituer le principe actif de spécialités pharmaceutiques
Pour leur activité sur les facteurs de la coagulation, les composés de l'invention peuvent être utilisés dans diverses pathologies liées à la coagulation et en particulier dans les troubles du système cardiovasculaire et cérébrovasculaire Ils possèdent plus particulièrement une forte affinité pour l'antithrombine III ainsi qu' une importante activité anti-facteur Xa et antithrombine L'inhibition de ces facteurs de la coagulation constitue donc un moyen privilégié pour obtenir une activité anticoagulante et antithrombotique
Ils peuvent être utilisés dans diverses pathologies consécutives à une modification de I' hémostasie du système de la coagulation apparaissant en particulier lors des troubles du système cardiovasculaire et cérébrovasculaire comme les troubles thromboemboliques associés à l'arthérosclérose et au diabète tels l'angine instable, l'attaque cérébrale, la resténose après angioplastie, l'endartérectomie, la pose de prothèses endovasculaires; ou les troubles thromboemboliques associés à la rethrombose après thrombolyse, à l'infarctus, à la démence d'origine ischémique, aux maladies artérielles périphériques, à l'hémodialyse, aux fibrillations auriculaires ou encore lors de l'utilisation de prothèses vasculaires de pontages aorto-coronanens Ces produits peuvent par ailleurs être utilisés pour le traitement ou la prévention de pathologies thrombo-emboliques d' origine veineuse telles les embolies pulmonaires. Ils peuvent être utillisés ou pour prévenir ou pour traiter les complications thrombotiques apparaissant lors d'interventions chirurgicales ou conjointement à d'autres pathologies telles que cancer, infections bactériennes ou virales. Dans le cas de leur utilisation lors de la pose de prothèses, les composés de la présente invention peuvent recouvrir des prothèses et les rendre ainsi hémocompatibles. En particulier, ils peuvent être fixés à des prothèses intravasculaires (stents). Dans ce cas, ils peuvent éventuellement être modifiés chimiquement par introduction à l'extrémité non réductrice ou réductrice d'un bras approprié, comme décrit selon EP 649 854
L' utilisation dans la resténose après angioplastie est favorisée par les propriétés inhibitnces de certains facteurs de croissance, tels que le bFGF Les composés de la présente invention peuvent également être utilises
« comme adjuvant lors d' endartérectomie réalisée avec des ballonets poreux
Les résultats obtenus lors de différentes études pharmacocinétiques effectuées avec les produits de l'invention, ont démontré qu'ils sont très bien absorbés par le tractus gastro-intestinal et que leur demi-vie est longue Cela permet d'envisager lors de leurs utilisations en thérapeutique, la possibilité d'une administration unique journalière
Ces études ont aussi démontré que les compositions pharmaceutiques préparées avec les produits de formule (I), objet de la présente invention, sont absorbés par le tractus digestif, sans que les quantités administrées ne soient prohibitives pour une utilisation en thérapeutique humaine Les composés de l'invention sont donc utiles pour la préparation des compositions pharmaceutiques, administrâmes aussi bien par voie parentérale, que par voie orale Les composés de l'invention sont très stables et sont donc ainsi particulièrement appropriés pour constituer le principe actif de médicaments
Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet une composition pharmaceutique contenant, en tant que principe actif, un polysacchande de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formé par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d' un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthénfiés avec un groupe (Cι-Cs)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque dissacchaπde étant au moins monoéthénfié, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables Ledit polysaccharide de synthèse, principe actif des compositions de la présente invention est de préférence alkyle par un groupe méthyle
L'invention concerne de préférence, des compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif, un composé de formule (I), (1 1 ), (1.2), (I 3) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients inertes et appropriés
Dans chaque unité de dosage le principe actif est présent dans les quantités adaptées aux doses journalières envisagées. En général, chaque unité de dosage est convenablement ajustée selon le dosage et le type d' administration prévu, par exemple comprimés, gélules et similaires, sachets, ampoules, sirops et similaires, gouttes, patch transdermique ou transmucosal de façon à ce qu'une telle unité de dosage contienne de 0, 1 à 100 mg de
* principe actif, de préférence 0,5 à 50 mg
Les composés selon l'invention peuvent également être utilisés en association avec un autre principe actif utile pour la thérapeutique souhaitée tels que par exemple des antithrombotiques, des anticoagulants, des antiagregants plaquettaires tels que par exemple le dipyridamole, l'aspirine, la ticlopidme le clopidogrel ou des antagonistes du complexe de ta glycoproteme Ilb/IIIa
Les compositions pharmaceutiques sont formulées pour l'administration aux mammifères, y compris l'homme, pour le traitement des maladies susdites.
Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues sont présentées avantageusement sous des formes diverses, telles que par exemple, des solutions injectables ou buvables, dragées, comprimés ou gélules Les solutions injectables sont les formes pharmaceutiques préférées Les compositions pharmaceutiques de la présente invention sont notamment utiles pour le traitement à titre préventif ou curatif, des troubles de la paroi vasculaire, tels que l'athérosclérose, les états d'hypercoagulabilité observés par exemple à la suite d'opérations chirurgicales de développement tumoraux ou de dérèglements de la coagulation, induits par des activateurs bactériens, viraux, ou enzymatiques La posologie peut largement varier en fonction de l'âge, du poids et de l'état de santé du patient, de la nature et de la sévérité de l'affection, ainsi que de la voie d'administration Cette posologie comprend l'administration d'une ou plusieurs doses d'environ 0, 1 mg à 100 mg par jour, de préférence d'environ 0,5 à 50 mg par jour, par voie intramusculaire ou sous cutanée, en administrations discontinues ou à intervalles réguliers
La présente invention a donc également pour objet les compositions pharmaceutiques qui contiennent à titre de principe actif un des composés ci- dessus éventuellement en association avec un autre principe actif Ces compositions sont réalisées de façon à pouvoir être administrées par la voie digestive ou parentérale
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra¬ veineuse, transdermique, transmucosale, locale ou rectale, l'ingrédient actif peut être administré sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, tes granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale et buccale, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, mtranasale ou iπtraoculaire et les formes d'administration rectale.
Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccha¬ rose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif.
On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, acaloπque de préférence, du méthyl- paraben et du propylparaben comme antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié.
Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, comme la polyvinylpyrroli¬ done, de même qu'avec des édulcorants ou des correcteurs du goût. Pour une administration rectale, on recourt à des suppositoires qui sont préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exemple du beurre de cacao ou des polyéthylèneglycols.
Pour une administration parentérale, mtranasale ou intraoculaire, on uti¬ lise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol.
Pour une administration transmucosale le principe actif peut être formulé en présence d'un promoteur tel qu'un sel biliaire, d'un polymère hydrophile tel que par exemple l'hydroxypropylcellulose, l'hydroxypropylméthylcellulose, l'hydroxyéthylcellulose, l'éthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le dextran, la polyvinylpyrrolidone, les pectines, les amidons, la gélatine, la caséine, les
* acides acryliques, les esters acryliques et leurs copolymères, les polymères ou copolymères de vinyle, les alcools vinyliques, les alcoxypolymeres, les polymères d'oxyde de polyéthylène, les polyéthers ou leur mélange. Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsu¬ les, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs.
Le principe actif peut être également présenté sous forme de complexe avec une cyclodextnπe, par exemple α, β ou γ cyclodextrine, 2-hydroxypropyl- β-cyclodextπne ou méthyl-β-cyclodextπne. Le principe actif peut également être libéré par un bâtonnet le contenant ou par un extenseur endovasculaire introduit dans les vaisseaux sanguins L' efficacité pharmacologique du principe actif n'est ainsi pas affectée. L'administration par voie sous-cutanée est la voie préférée Les METHODES, les PREPARATIONS et les SCHEMAS suivants illustrent la synthèse des différents intermédiaires utiles à l'obtention des polysaccharides selon l'invention.
Les EXEMPLES ci-après illustrent également l'invention sans toutefois la limiter
Pour une meilleure compréhension du procédé selon l'invention, l'obtention des composés (I) peut être schématisé comme suit
SCHEMA 1
Figure imgf000028_0001
Stratégie employée pour la synthèse d'oligomères du disacchahde méthyl 4-0-(2, 3-di-0-méthyl-α-L-idopyranosyluronate)-2, 3, 6-tπ-O-sulfo-α-D-gluco- pyranoside. En condensant les imidates (colonne de gauche, thangle blanc à l'extrémité réductrice) et les accepteurs de glycosyle (colonne du centre, triangle noir à l'extrémité non-réductrice) on obtient les oligosaccharides complètement protégés de la colonne de droite. Ces derniers sont ensuite déprotégés et fonctionnalisés pour livrer les composés de /'EXEMPLE 1 et du TABLEAU I.
Tous les composés décrits ci-dessous sont homogènes en chromatographie sur couche mince (CCM) et ont des propriétés spectrales en accord avec leur structure Les points de fusion sont déterminés dans des
* tubes capillaires à l'aide d'un appareil Mettler, et ne sont pas corrigés Les pouvoirs rotatoires sont mesurés à l'aide d'un polaπmètre Perkin-Elmer 241 à 22 ± 3 °C La pureté des composés est vérifiée par CCM sur Silica Gel 60® F254 C= Merck) avec détection par carbonisation en présence d'acide sulfunque Sauf mention particulière les chromatographie sur colonne sont réalisées sur Silica Gel 60®, 40-63 or 63-200 μm (E. Merck) Les spectres de 1 H RMN sont enregistrés sur des appareils Bruker AC 200, AM 250, AC 300 ou AM500, sur des solutions des produits dans CDCI3 ou D2O Avant analyse dans D2O les échantillons sont passés au travers d'une colonne de résine échangeuse d'ions Chelex® (Bio-Rad) puis lyophilisés trois fois dans D2O Les déplacements chimiques sont relatifs au TMS externe quand les spectres sont enregistrés dans CDCI3, et au TSP externe quand les spectres sont enregistrés dans D2O Les analyses de spectrometrie de masse sont effectuées sur un instrument ZAB-2E (Fisons) Les analyses élémentaires sont effectuées sur un analyseur Fisons
Les abréviations suivantes sont utilisées TBDMS te/τ-butyldiméthyisilylβ; Lev levulinyle; Bn • benzyle, Bz benzoyle, MCA chloroacétyle; CCM chromatographie sur couche mince, Olm tπchtoroacétimidyle, LSIMS est le sigle anglais de ϋquid Secondary Ion Mass Spectrometry, ESIMS est le sigle anglais de Electron Spray Ionisation Mass Spectrometry, TMS tnméthylsilyle; TSP tπméthylsilyle tétradeuteπo propionate de sodium; Tf triflate; MS tamis moléculaire Dowex®, Sephadex®, Chelex®, Gel 60® sont des marques déposées
Dans les METHODES, les PREPARATIONS et dans les EXEMPLES décrits ci-après, des modes opératoires généraux concernant le clivage des esters levuliniques, le couplage catalytique des imidates, la déprotection et la sulfatation des oligo et des polysaccharides par hydrogénolyse des esters ou des éthers beπzyliques, la saponification des esters ou encore les sulfatations peuvent êtres réalisés en appliquant les méthodes générales ci- après aux intermédiaires appropriés METHODES GENERALES
METHODE 1. Coupure du groupe Lev.
Une solution d'hydrate d'hydrazine (1 M dans 32 pyridine/acide acétique) est ajoutée (5 ml/mmole) à une solution refroidie (0 °C) dans la pyridine (5 ml/mmole) du composé à traiter. Après 15-30 minutes (CCM) la solution est concentrée Le résidu est dissous dans l'acétate d'éthyle, lavé avec de l'eau, une solution à 10% d'hydrogénosutfate de potassium, une solution à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré
METHODE 2. Couplage aux imidates catalysé par le tπflate de tert- butyldiméthylsilyle
Du tnflate de te/τ-butyldiméthylsilyle (0,5 mol/mol d'imidate) est ajouté goutte à goutte, sous argon, à une solution agitée et refroidie (-20 °C) de l'alcool accepteur et de l'imidate donneur, dans le toluène (35 rπl/mmol), en présence de tamis moléculaire 4 Â en poudre. Après 15-30 minutes (CCM), on introduit sous agitation de l'hydrogénocarbonate de sodium solide Après 5 minutes du toluène est ajouté, la solution est filtrée, lavée avec une solution à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée.
METHODE 3. Couplage aux imidates catalysé par le tnflate de tπméthylsilyle Du tnflate de trtméthylsilyle (0,04 M dans le toluène; 0,06 mol/mol d'imidate) est ajouté goutte à goutte, sous argon, à une solution agitée et refroidie (-20 °C) de l'alcool accepteur et de l'imidate donneur, dans le toluène (15 ml/mmol), en présence de tamis moléculaire 4 Â en poudre Après 15-30 minutes (CCM), on introduit sous agitation de l'hydrogénocarbonate de sodium solide Après 5 minutes du toluène est ajouté, la solution est filtrée, lavée avec une solution à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séchée (sulfate de magésium), et concentrée
METHODE 4. Déprotection et sulfatation des oligo- et polysacchandes Hydrogénolyse des benzyt éthers et benzyl esters Une solution du composé (5 mg/ml), dans te diméthylformamide ou le méthanol, est agitée pendant 2-6 heures (contrôle CCM) sous une atmosphère d'hydrogène (5
* bar) en présence de catalyseur Pd/C 10% (2 x masse du composé). Après filtration le produit est engagé directement dans l'étape suivante.
Saponification des esters. Une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 5 M est ajoutée (en quantité telle que la concentration d'hydroxyde de sodium soit de 0,5 M en fin d'addition) à une solution d'un ester dans le méthanol (150 ml/mmol). Après 2-5 heures (CCM) de l'eau est introduite suivie par de la résine Dowex® 50 H+ jusqu'à pH 1 -2. Après filtration et concentration le résidu est passé au travers d'une colonne de gel Sephadex® G-25 (1 ,6 x 115 cm) éluée par l'eau. Le composé complètement déprotégé est alors obtenu après lyophilisation. A ce stade on vérifie par 1 H RMN que tous les groupes protecteurs ont été enlevés. Si cela est nécessaire le produit est de nouveau soumis à l'hydrogénation et/ou la saponification.
Sulfatation. Du complexe pyridine/trioxyde de soufre (5 mmol/mmol fonction hydroxyle) est ajouté à une solution dans le diméthylformamide (10 mg/ml) du composé à sulfater. Après un jour à 55 °C la solution est déposée au sommet d'une colonne de Sephadex® G-25 (1 ,6 x 115 cm) éluée par du chlorure de sodium 0,2 M. Les fractions contenant le produit sont concentrées et dessalées en utilisant la même colonne éluée par l'eau Le composé final est obtenu après lyophilisation.
SCHEMA 2
Synthèse du disaccharide 5
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000032_0002
Figure imgf000032_0003
5 PREPARATION 1
Méthyl 4-O-(2-O-benzoyl-4,6-isopropylidène-3-O-méthyl-α-L-ido- pyranosyl)-2,3,6-trl-O-benzyl-α-D-glucopyranoside (3).
Une solution d'acide triflique dans le toluène (0,15 M, 0,27 ml) est ajoutée, sous agitation sous argon, à une solution refroidie (-20 °C) d'éthyl 2- O-benzoyl-4,6-O-isopropylidène-3-O-méthyl-1-thio-α-L-idopyranoside 2 (Jaurand.G. et al., BioMed. Chem. Lett. 1992, 2, 897-900). (1 ,1 g, 2,87 mmol), de 1 (Garegg P.J., Hultberg H., Carbohydr. Res. 93, 1981 C10-C11 ) (1 ,34 g, 2,87 mmol), et de Λ/-iodosuccinimide (1 ,61 g, 7,2 mmol), dans le toluène (40 ml) contenant des tamis moléculaires 4 Â en poudre. La même quantité d'acide est ajoutée après 25 et 50 minutes. Après 1 ,5 h, du bicarbonate de sodium solide (20 mg) est introduit, et, 15 minutes plus tard la solution est filtrée, diluée avec du dichlorométhane, lavée avec une solution de thiosulfate de sodium, de l'eau, séchée (sulfate de sodium) et évaporée. Le produit brut ainsi obtenu (2,49 g) est utilisé directement pour la préparation de 4. Après chromatographie sur colonne (3:1 cyclohexane/acétate d'éthyle) on obtient le composé 3 pur. CCM, Rp = 0,36, 3:1 cyclohexane/acétate d'éthyle; [α]D + 31 (c = 1 , dichlorométhane). ESI SM, mode positif: m/z + NaCl, 345 (M+Na)+; + KF, 361 (M+K)+ 1 H RMN (CDCI3) δ 7, 17-7,35 (m, 20H, 4Ph), 5,10 (d, 1 H, H-1'), 4,60 (d, 1 H, J = 3,0 Hz, H-1 ), 3,37 (s, 3H, OMe), 1 ,95; 2,04;
2,09 (3s, 9H, 3Ac), 1 ,24; 1 ,33 (2s, 6H, :C(CH3)2).
Anal. Calculé pour C45H52O12 (784,86) : C, 68,86; H, 6,68. Trouvé : C, 68,61; H, 6,77.
PREPARATION 2
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4,6-isopropylidène-3-O-méthyl-α-l_- idopyranosyl)-α-D-glucopyranoside (4).
Une solution 2 M de méthylate de sodium (2,2 ml, 4,4 mmol) est ajoutée à une solution du composé 3 (2,34 g) dans un mélange 1 :1 méthanol/dichlorométhane (13 ml). Après 2,5 heures à température ambiante le mélange est neutralisé avec de la résine Dowex® 50 (H+), filtré et concentré, pour donner 4 (1 ,74 g; 86% par rapport à 1 et 2) après chromatographie sur colonne (3:1 puis 2:1 cyclohexane/acétate d'éthyle); [α JD + 23 (c = 1 , dichlorométhane). ESI SM, mode positif: m/z + NaCl, 703 (M+Na)+; + KF, 719 (M+K)+. 1 H RMN (CDCI3) δ 7,31-7,21 (m, 15H, 3Ph),
4,94 (d, 1 H, H-1'),
4,60 (d, 1 H, J = 3,6 Hz, H-1 ), 3,44; 3,36 (2s, 6H, OMe); 3,06 (dd, 1 H, J = 3,6 Hz, J = 12,2 Hz, H-6*), 1 ,31 ; 1 ,28 (2s, 6H, :C(CH3)2).
Anal. Calculé pour C38H48O11 (680,76) : C, 67,04; H, 7,11. Trouvé : C, 67,05; H, 7,16.
PREPARATION 3
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4,6-isopropylidène-2,3-di-O-méthyl-α - L-idopyranosyl)-α-D-glucopyranoside (5). De l'iodure de méthyle (3,2 ml, 50,8 mmol) est ajouté, à 0 °C, à une solution de 4 (26,6 g, 39,1 mmol) et d'hydrure de sodium (1 ,48 g, 58,7 mmol) dans le diméthylformamide (60 ml). Une nouvelle addition d'iodure de méthyle (1 ,6 ml, 25,4 mmol) et d'hydrure de sodium (0,74 g, 29,3 mmol) est réalisée après 5 heures à température ambiante. Après 1 nuit, du méthanol (10 ml) est introduit goutte à goutte, et après 1 ,5 heure le mélange reactionnel est concentré. Le produit est extrait avec de l'acétate d'éthyle (1 ,5 I). La solution est lavée avec de l'eau, séchée (sulfate de sodium) et concentrée. Le composé brut 5, ainsi obtenu (32,1 g), est utilisé tel quel dans l'étape suivante. CCM, Rp = 0,55, 3:2 cyclohexane-acétate d'éthyle.
SCHEMA 3
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000035_0002
Figure imgf000035_0003
15 Syntήèse des disacchandes de base pour la préparation d'oligomères du méthyl 4-0-(2, 3-dι-0-méthyl-α-L-ιdopyranosyluronate)-2, 3, 6-tn-O-sulfo-α-D- glucopyranoside
PREPARATION 4
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyl)-α-D- glucopyranoside (6)
Une solution aqueuse d'acide tnfluoroacétique (70%, 43 ml) est ajoutée goutte à goutte pendant 10 minutes à une solution du composé brut ci-dessus (32,1 g) dans du dichlorométhane (215 ml) Après 25 minutes à température ambiante la solution est diluée avec du dichlorométhane (11), lavée avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, avec de l'eau et séchée (sulfate de sodium) Le composé brut 6 obtenu après concentration (27,5 g) est utilisé tel quel dans l'étape suivante. CCM, RF = 0,29, 2 3 cyclohexane-acétate d'éthyle.
PREPARATION 5
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(6-O-fert-butyldiméthylsilyl-4-O- lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyl)-α-D-glucopyranoside (10). Une solution de 6 (1 ,7 g), de tnéthylamine (0,54 ml, 3,8 mmol), de 4- diméthylaminopyπdine (38 mg, 0,3 mmol) et de chlorure de tert- butyldiméthylsilyle (0,54 g, 3,6 mmol), dans le chlorure de méthylène (6 ml), est chauffée à 50° C pendant 3 heures pour donner 9 qui n'es pas isolé Après refroidissement à température ambiante, de l'anhydride lévulinique (0,771 g, 3,6 mmol), de la triéthylamine (0,50 ml, 3,6 mmol) et de ta 4- diméthylaminopyπdine (59 mg, 0,48 mmol) sont ajoutés Après 4 heures le mélange est dilué avec du chlorure de méthylène, et lavé successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium, de l'eau, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, de l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré pour donner 10 (2,45 g) qui est utilisé tel quel dans l'étape suivante. TLC, Rp 0,5, 12:1 cyclohexane/acétate d'éthyle PREPARATION 6
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(benzyl 4-O-levulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-
L-ldopyranosyluronate)-α-D-glucopyranoside (12). Une solution de trtoxyde de chrome (0,64 g, 6,4 mmol) dans l'acide sulfurique aqueux (3,5 M, 2,7 ml) est ajoutée lentement à une solution refroidie (0° C) de 10 (2,45 g) dans l'acétone (18 ml). Après 5 heures du chlorure de méthylène est introduit, puis le mélange est versé dans de l'eau galcée, agité vigoureusement, lavé à l'eau jusqu'à un pH neutre et séché (sulfate de sodium). La concentration donne 11 (2,45 g), sous forme de sirop.
TLC, Rp 0,56, 12:1 chlorure de méthylène/méthanol. Ce produit est ensuite dissous dans le diméthylformamide (19 ml) et traité une nuit à température ambiante avec du bromure de benzyle (2,9 ml, 12 mmol). Du méthanol (1 ,5 ml) est ajouté et le produit est extrait avec de l'éther, lavé à l'eau, séché et concentré. Après chromatographie sur colonne (2: 1 puis 3:2 cyclohexane/acétate d'éthyle) on obtient 12 (1 ,07 g). TLC, Rp 0,53, 5:1 chlorure de méthylène-acétate d'éthyle.
PREPARATION 7 Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(benzyl 2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyl- uronate)-α-D-glucopyranoside (8).
Le disaccharide 12 (0,65 g, 0,76 mmol) traité selon la méthode générale 1 donne 8 (0,52 g, 91 %) après chromatographie sur colonne (2:1 puis 3.1 cyclohexane/acétate d'éthyle). [α]p +34 (c = 0,97, chlorure de méthylène).
PREPARATION 8
1,3,6-tri-O-Acόtyl-2-0-benzyl-4-O-(4.0-lévulinyl-2,3-dl-O.méthyl-α-L- idopyranosyluronate de beπzyle)-D-glucopyranose (13).
De l'acide trifluoroacétique (28 ml, 0,364 mol) est ajouté à une solution de 12 (7,8 g, 9,1 mmol) dans de l'anhydride acétique (194 ml, 2,06 mol) et de l'acide acétique (7,8 ml, 0,136 mol). Après chauffage à 60 °C pendant 4 heures la solution est refroidie à 0 °C et de l'eau (30 ml) est introduite goutte à goutte, suivie de triéthylamine (69 ml). Après evaporation le résidu est dissous dans dichlorométhane, lavé avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, de l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré. Une chromatographie sur colonne (5: 1 dichlorométhane/acétate d'éthyle) donne un mélange (α/β=8/2) des anomères de 13 (4,7 g, 67%) CCM, RF 0,35, 3 2 cyclohexane-acétone 1 H RMN (CDCI3) δ 7,37-7,20 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-1α), 5,62 (d, J = 7,6 Hz, H-1 β), 5,04 (t, 1 H, H-4'), 3,45, 3,41 (2s, 6H, 2 OMe), 2,6-2,3 (m, 4H, O(C.O)CH2CH2(C.O)CH3), 2,15; 2,12, 2,06, 1 ,94, 1 ,88 (5s, 12H, 3 Ac et
O(C O)CH2CH2(C O)CH3).
PREPARATION 9
3,6-di-O-Acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-ido pyranosyiuronate de benzyle)-D-glucopyranose (14).
Une solution d'éthanolamme (1 ,3 ml, 21 ,6 mmol) et de 13 (4,25 g, 5,28 mmol) dans le tétrahydrofurane (80 ml) est abandonnée une nuit à 4 °C De l'éthanolamme (0,65 ml, 10,8 mmol) est alors ajoutée, puis le mélange est laissé à température ambiante pendant 3 h Après refroidissement à 0 °C, on ajoute de l'acide chlorhydrique 1 M jusqu'à pH acide, puis du dichlorométhane (150 ml). La solution est lavée avec de l'eau, séchée, et concentrée Une chromatographie sur colonne (2 1 puis 1 1 dichlorométhane/acétate d'éthyle) donne 14 (3 g, 74%). CCM, RF 0,21 , 1 1 toluène-acétate d'éthyle. [α]n +3 (c = 1 , dichlorométhane) LSIMS, mode positif m/z thioglycérol + NaCl, 769 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 785 (M+K)+
1 H RMN (CDCI3) δ 7,36-7,25 (m, 10H, 2Ph), 5,21 (d, J = 3,5 Hz, H-1α), 4,98 (d, 1 H, J = 3,4 Hz, H-1'), 4,79 (d, J = 8 Hz, H-1 β), 3,45, 3,42 (2s, 6H, 2 OMe), 2,56-2,23 (m, 4H, O(C.O)C/-/2CH2(C.O)CH3), 2,23, 2,12, 1 ,94; 1 ,88 (4s, 9H, 2 Ac, α et β O(C.O)CH2CH2(C.O)CH3) Anal. Calculé pour C37H46O16 (746,72): C, 59,51 , H, 6,21 Trouvé' C,
58,87, H, 6,13.
PREPARATION 10
3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-ldopy- ranosyluronate de benzyle)-D-glucopyranose trichloroacétimidate (15).
Un mélange de trichloroacetonitrile (0,7 ml; 6,92 mmol), de 14 (1 ,03 g; 1 ,38 mmol), et de carbonate de potassium (191 mg, 2,21 mmol), dans le chlorure de méthylène (26 ml) est agité pendant 1 ,5 heure à température ambiante. La solution est alors filtrée et concentrée. Une chromatographie sur colonne (4i toluène/acétone) donne 15 (1 16 g; 94%). CCM, RF 0,31 et 0,48,
2:3 cyclohexane-acétate d'éthyle. LSIMS, mode positif m/z thioglycérol + LiCI, 896 (M+Lι)+; thioglycérol + NaCl, 912 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 928 (M+K)+. 1 H RMN (CDCI3) δ 8,67 (s, NH-β), 8,60 (s, NH-α), 7,37-7,22 (m, 10H, 2Ph); 6,44 (d, J = 3,6 Hz, H-1α), 5,83 (d, J = 7,3 Hz, H-1 β), 3,47; 3,44; 3,42; 3,40 (4s, 6H, 2 OMe), 2,7-2,2 (m, 4H, O(C.O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,15, 2,08, 1 ,94; 1 ,88 (4s, 9H, α et β Ac, et O(C:O)CH2CH2(C.O)CH3).
SCHEMA 4
8 + 15
CH2CI2, MS, TMSOTf
Figure imgf000039_0001
16
NH2NH2 , pyπdine-AcOH
Figure imgf000039_0002
+ 15 CH2CI2, MS, TMSOTf
Figure imgf000039_0003
18
Synthèse de l'hexasaccharide 18. La préparation d'oligomères de taille supérieure est effectuée selon la même stratégie (coupure du groupe Lev pour obtenir un accepteur de glycosyle, couplage avec un di-, tetra-, ou hexasacchaπde imidate -comme indiqué sur le schéma 1- et finalement, déprotection et sulfatation). Le groupe Lev de 18 est sélectivement éliminé pour donner l'hexasaccharide accepteur 19 (SCHEMA 1). PREP «ARATION 11
Méthyl 0-(4-O-lévulinyl-2,3-di-0-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de beπzyle)-(1-4)-0-(3,6-di-0-acétyl-2-0-beπzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)- 0-(2,3-di-0-méthyl-ot-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-2,3,6-tri-0- benzyl-α-D-glucopyranoside (16).
Un mélange de 8 (2,90 g, 3,83 mmol) et 15 (4,16 g, 4,67 mmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (1 1 cyclohexane/acétate d'éthyle) donne 16 pur ( 3,2 g; 54%). CCM, Rp 0,52, 2.3 cyclohexane/acétate d'éthyle. 1 H RMN (CDCI3) δ 7,21 -7,36 (m, 30H, 6Ph), 5,27 (d, 1 H, H-1 , unité non réductrice), 5,14 (d, 1 H, H-1 unité "central next to non reducing"), 4,90 (d, 1 H, H-1 , unité "central next to reducmg"), 4,56 (d, 1 H, H-1 unité réductrice), 3,43; 3,39; 3,35; 3,25 (5s, 15H, 5 OMe), 2,25-2,60 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,12; 2,00; 1 ,91 (3s, 9H, 2Ac et O(C.O)CH2CH2(C:O)CH3).
PREPARATION 12
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronatθ de benzyle)-(1-4)-O-
(3,6-di-O-acόtyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-2,3,6-tri-O-beπzyl- α-D-glucopyranoside (17).
Le composé 16 (1 g; 0,672 mmol) est traité selon la méthode 1 pour donner quantitativement 17 après chromatographie sur colonne (1 :1 cyclohexane/acétone).
PREPARATION 13
Méthyl O-(4-O-lόvulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[0-(3,6-dl-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)- O-(2,3-di-O-mόthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzylθ)-(1-4)]2-2,3,6-tri- O-benzyl-α-D-glucopyranoside (18). Un mélange de 15 (386 mg, 434 μmol) et 17 (500 mg; 360 μmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (Sephadex® LH 20, 195 x 3,7 cm; 1 :1 dichlorométhane/éthanol) donne l'hexasaccharide 18 ( 495 mg; 64%). CCM, Rp 0,36, 10:1 dichlorométhane/acétone.
1 H RMN (CDCI3) δ: 5,23; 5,12; 5,10; 4,92; 4,89; 4,56 ppm. PREP «ARATION 14
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyraπosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O- (3,6-dl-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyleH1-4)]2-2,3,6-tri-O- benzyl-α-D-glucopyranoside (19).
Le composé 18 (485 mg; 229 μmol) est traité selon la méthode 1. Une chromatographie sur colonne (10:1 dichlorométhane/acétone) donne 19 (392 mg; 85%). CCM, Rp 0,38, 10:1 dichlorométhane/acétone.
SCHEMA 5
Synthèse du disaccharide accepteur 22 8
Figure imgf000041_0001
21
Figure imgf000041_0002
22 PREPARATION 15
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4-O-chloroacétyl-2,3-di-O-méthyl-α-L- idopyranosyiuronate de benzyle)-α-D-glucopyranoside (20).
Un mélange de 8 (326 mg, 0,43 mmol), d'anhydride chloroacétique (103 g, 0,6 mmol), de 4-diméthylamιnopyrιdine (5,3 mg, 42 μmol), et de triéthylamine (90 μl, 64 μmol) dans le dichlorométhane (96 ml) est agitée à température ambiante pendant 30 minutes. Du méthanol (0,5 ml) est alors ajouté, la solution est diluée avec du dichlorométhane, lavée à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur colonne (2:3 puis 1 :2 cyclohexane/éther) donne 20 pur (242 mg, 67%). CCM, Rp 0,35, 1 :2 cyclohexane/éther. 1 H RMN (CDCI3) δ 7,36-7,19 (m, 20H, 4Ph), 5,20 (d, 1 H, H-1'), 4,56 (d, 1H, H-1 ), 3,70 et 3,36 (système AB, J = 15,3 Hz, CICH2(C.O)O), 3,49, 3,35; 3,26 (3s, 3 OCH3).
PREPARATION 16
1,3,6-tri-O-acétyl-2-O-bβnzyl-4-O-(4-O-chloroacétyl-2,3-di-0-méthyl-α-L- idopyranosyluronate de benzyle)-α,β-D-glucopyranose (21).
Une solution d'acide trifluoroacétique (183 μl, 2,4 mmol) est ajoutée à une solution de 20 (50 mg, 0,06 mmol) dans l'anhydride acétique (1 ,28 ml, 13,5 mmol) et l'acide acétique (52 μl, 0,9 mol). Après chauffage à 60 °C pendant 4 heures la solution est refroidie à 0 °C et neutralisée avec de la triéthylamine. Après evaporation, une chromatographie sur colonne du résidu (1 :2 puis 2:5 cyclohexane/éther) donne un mélange (oc/β = 8/2) des anomères de 21 (28 mg, 60%). CCM, RF 0,31 , 2:5 cyclohexane/éther. "Η RMN (CDCI3) δ 7,20- 7,35 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J ≈ 3,6 Hz, H-1α), 5,63 (d, J = 8,1 Hz, H-1 β),
3,39 et 3,46 (2s, 2 OCH3)
PREPARATION 17
1,3,6-tri-O-acétyl-2-O-benzyl-4-O-(2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosylu- ronate de benzyle)-α,β-D-glucopyranosθ (22).
De la thiourée (678 mg; 8,9 mmol) est ajoutée à une solution de 21 (1 ,71 g; 2,23 mmol) dans un mélange de pyridine (108 ml) et d'éthanol (22 ml), et le mélange est chauffé à 110 "C pendant 30 minutes. Après refroidissement et evaporation le résidu est dissous dans du dichlorométhane. La solution est lavée à l'aide d'une solution saturée aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium, puis une solution à 5% d'hydrogénosulfate de potassium, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur colonne (1 :1 , puis 1 :2 cyclohexane/acétate d'éthyle) donne 22 pur (1 ,17 g; 76%). CCM, Rp 0,34, 3:1 dichtorométhane/éther. 1 H RMN (CDCI3) δ 7,36-7,20 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-1α), 5,65 (d, J = 8 Hz, H-1 β), 4,90 (1 H, H-1"), 3,41 et 3,40 (2s, 2 OCH3)
SCHEMA 6
Synthèse du tetrasaccharide imidate 25
15 + 22
CH2CI2; MS; TMSOTf
Figure imgf000043_0001
NH2NH2 , pyridine-AcOH
Figure imgf000043_0002
PREPARATION 18
O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)- (1-4)-O-(3,6-dl-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2.3-dl-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-1,3,6-tri-O-acétyl-2-O- benzyl-α,β-D-glucopyranose (23).
Un mélange de 15 (1 ,5 g, 1 ,7 mmol) et 22 (1 ,18 g; 1 ,7 mmol) est traité selon la méthode 3 (en remplaçant le toluène par du dichlorométhane). Une chromatographie par perméation sur gel sur une colonne de LH-20, équilibrée dans dichlorométhane/éthanol 1 1 , donne 23 pur (1 ,75 g, 73%) [α]o +19 (c = 0,9, dichlorométhane). LSIMS, mode positif m/thioglycérol +
NaCl, 1441 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 1457 (M+K)+ 1 H RMN (CDCI3) δ. 6,27, 5,45, 5,10, 4,96, 4,90 ppm Anal Cale pour C71 H86O30 (1419,46). C, 60,08; H, 6,11 Trouvé C, 60,06; H, 6,40
PREPARATION 19
O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)- (1-4)-O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-beπzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-3,6-di-O-acétyl-2-O- benzyl-α,β-D-glucopyranose (24).
De l'éthanolamine (80 μt; 1 ,31 mmol) est ajoutée à une solution du tetrasaccharide 23 (465 mg; 327 μmol) dans le tétrahydrofurane (5 ml), puis la solution est laissé la nuit à 4 °C Après neutralisation par l'acide chlorhydrique (1 M; 2 ml), du dichlorométhane (20 ml) est ajouté, puis la solution est lavée à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée Une chromatographie sur colonne (3:1 toluène/acétone) donne 24 (326 mg, 79%). CCM, Rp 0,33, 3:1 toluène/acétone. LSIMS, mode positif m/z thioglycérol + NaCl, 1399 (M+Na)+, thioglycérol + KF, 1415 (M+K)+
1 H RMN (CDCI3) δ. 5,18; 5,10; 4,96; 4,93; 4,75
PREPARATION 20
O-(4-O-lόvulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronatθ de benzyle)- (1-4)-O-(3,6.dl-0-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-dl-O- méthyl-α-L-ldopyranosyluronate de benzyle)-(1 -4)-3,6-di-O-acétyl-2-O- benzyl-α,β-D-glucopyranose trichloroacétimidate (25). Un mélange de tπchloroacétonitnle (151 μl, 1 ,5 mmol), du tetrasaccharide 24 (343 mg, 249 μM), et de carbonate de potassium (62 mg, 448 μmol) dans le dichlorométhane (2 ml) est agitée une nuit à température ambiante Du dichlorométhane est ajouté, et après filtration la solution est concentrée Une chromatographie sur colonne (3 1 toluène/acétone) donne 25 (346 mg, 91 %)
CCM, Rp 0,42, 0,63, 2 1 dichiorométhane/acétate d'éthyle
1 H RMN (CDCI3) δ 8,67 (s, NH-b), 8,59 (s, NH-a), 7,40-7,20 (m, 10H, 2Ph),6,40 (d, J = 3,5 Hz, H-1α), 5,90 (d, J = 7,5 Hz, H-1 β), 3,45, 3,44, 3,42, 3,40, 3,39, 3,37 (6s, 12H, 4 OMe), 2,7-2,2 (m, 4H, O(C O)CH2CH2(C O)CH3), 2,12, 2,08, 2,07, 2,04, 2,02, 1 ,91 , 1 ,89 (7s, 15H,
4 Ac, et O(C O)CH2CH2(C O)CH3) NH-a et NH-b désignent les signaux obtenus pour chacun des isomères syn et anti
PREPARATION 21 Méthyl O-(4-O-lόvulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyrano-syluronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)- O-(2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1 -4)]3-2,3,6-tri- O-benzyl-α-D-glucopyranoside (26).
A partir de 17 et 25. — Un mélange de 17 et 25 (459 mg, 0,3 mmol) est traité selon la méthode 3 Une chromatographie sur colonne (Sephadex® LH
20, 195 x 3,7 cm, 1 1 dichlorométhane/éthanol), suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (3 2 cyclohexane-acétone) donne 26 pur ( 420 mg, 59%) [α]o +20 (c = 0,20, dichlorométhane) LSIMS, mode positif m/z thioglycérol + NaCl, 2771 (M+Na)+, thioglycérol + KF, 2787 (M+K)+
^ H RMN (CDCI3) δ 5,26, 5, 14, 5,10, 4,93, 4,92, 4,90, 4,56
PREPARATION 22
26 à partir de 15 et 19. — Un mélange de 15 (332 mg, 373 μmol) et 19 (377 mg; 186 μmol) est traité selon la méthode 2 Une chromatographie sur colonne (Sephadex® LH 20, 195 x 3,7 cm, 1 1 dichlorométhane/éthanol) donne l'octasacchande 26 pur ( 460 mg, 90%) PREPARATION 23
Méthyl 0-(2,3-di-0-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de beπzyle)-(1 -4)-[0- (3,6-di-O-acétyl-2-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronate de beπzyle)-(1-4)]3-2,3,6-tri-0-beπzyl- α-D-glucopyranoside (27).
Le composé 26 (275 mg; 100 μmol) est traité selon la méthode 1 pour donner 27 (265 mg; 96%); [α]o +27 (c = 0,56, dichlorométhane). LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCl, 2673 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 2689 (M+K)+. 1 H RMN (CDCI3) δ: 5,26; 5,15; 5, 10; 5,08; 4,89; 4,88; 4,55
PREPARATION 24
Méthyl O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-mόthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-dl-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O- (2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]5-2,3,6-tri-O- beπzyl-α-D-glucopyranoside (28).
Un mélange de 27 (97,3 mg; 36 μmol) et de 25 (83,8 mg, 55 μmol) est traité selon la méthode 3. Une chromatographie sur colonne (cyclohexane- acétone 2:1 , puis 7:4, puis 3:2) donne 28 pur ( 102 mg; 69%). [α]o + 22 (c = 0,51 , dichlorométhane). CCM, Rp 0,18, 3:2 cyclohexane-acétone.
1 H RMN (CDCI3) δ: 5,26; 5,14; 5,10; 5,08; 4,93; 4,92; 4,90; 4,56
PREPARATION 25
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O- (3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]5-2,3,6-tri-O-benzyl- α-D-glucopyranoside (29).
Le composé 28 (216 mg; 54 μmol) est traité selon la méthode 1 pour donner 29 (199 mg; 95%). CCM, Rp 0,56, 1 :1 cyclohexane-acétone; Rp 0,55, 2:1 toluène-acétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCl, 3934
(M+Na)+; thioglycérol + KF, 3950 (M+K)+. PREPARATION 26
Méthyl O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluroπate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acόtyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)- O-(2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1 -4)]7-2,3,6- tri-O-benzyl-α-D-glucopyranoside (30).
Un mélange de 25 (33 mg, 21 ,4 μmol) et de 29 (52,4 mg; 13,3 μmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (7 4 cyclohexane-acétone) donne 30 pur ( 43,8 mg; 62%). [αjo +19 (c = 0,5, dichlorométhane). CCM, Rp 0,36, 3:2 cyclohexane-acétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + KF, 5310 (M+K)+.
1 H RMN (CDCI3) δ des protons anomères principaux : 5,26; 5, 14; 5,10; 5,08; 4,92; 4,90; 4,56
PREPARATION 27 Méthyl O-(2,3-di-O-mόthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O-
(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]7-2,3,6-tri-O-benzyl- α-D-glucopyranoside (31).
L'hexadécasacchande 30 (100 mg; 19 μmol) est traité selon la méthode 1 pour donner 31 utilisé directement dans l'étape suivante. [α]p +20 (c = 0,38, dichlorométhane). CCM, Rp 0,31 , 4:3 cyclohexane-acétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCl, 5196 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 5212
(M+K)+
PREPARATION 28
Méthyl O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)- O-(2,3-di-O-mόthyl-α-L-idopyranosyluroπate de benzyle)-(1 -4)]c;-2,3t6-tri- O-beπzyl-α-D-glucopyranoside (32). Un mélange de 25 (31 mg; 21 ,7 μmol) et de 31 (94,5 mg, 18,3 μmol) est traité selon la méthode 3 pour donner 32 après plusieurs chromatographies sur colonne ( 29,2 mg; 25%). [α]o +22 (c = 0,33, dichlorométhane). CCM, Rp 0,26, 4:3 cyclohexane-acétone. 1 H RMN (CDCI3) δ des protons anomères principaux : 5,26; 5,14; 5,10; 5,09; 4,92; 4,91 ; 4,90; 4,56 ppm. EXEM « PLE 1
Méthyl 0-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronique- (1 -4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acide 2,3-dl-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronlque)-(1-4)]9-2,3,6-tri-0-sulfo-α-D-gluco- pyranoside, sel de sodium (33).
Figure imgf000048_0001
33
Le composé 32 est traité selon la méthode 4 pour donner 33 (60% sur les trois étapes). [α]p +27 (c = 0,4, D2O) ; ESIMS, mode négatif: masse expérimentale = 7077,3 ± 3,2 u.m.a.
1 H RMN (D2O) δ principaux protons anomériques δ 5,41 ; 5,40; 5,15; 5,09; 5,07; 5,06 ppm.
En procédant selon l'EXEMPLE 1 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus on prépare les composés 34 à 38 (EXEMPLE 2 à 6) décrits dans le TABLEAU I ci-après.
TABLEAU
Figure imgf000049_0001
Figure imgf000049_0002
E *XEMPLE 7
Méthyl 0-(acide 2,3-di-0-méthyl-4-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl- uronique)-(1-4)-[0-(2(3,6-tri-0-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acide 2,3-dl-0-méthyl-β-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]4-2,3,6-tri-0-sulfo-α" D-glucopyranoside, sel de sodium (39).
Figure imgf000050_0001
Le disacchandique donneur de glycosyle
Figure imgf000050_0002
et le disaccharide accepteur de glycosyle
Figure imgf000050_0003
sont préparés selon les méthodes décrites dans Westerduin et al., BioOrg. Med. Chem., 2 , 1994, 1267, puis combinés comme décrit lors de la préparation de 34. Le decasacchande résultant est traité selon la méthode 4 pour donner 39.
[α]p + 45 (c = 1 , H2O). 1 H RMN (D2O) δ des protons anomériques principaux : 5,53; 5,18; 4,65; 4,63 ppm.
En procédant selon l' EXEMPLE 7 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus, on prépare le composé 40 (EXEMPLE 8) décrit dans le TABLEAU II ci-après. TABLEAU II
Figure imgf000051_0001
(1.1)
Figure imgf000051_0002
EXEMPLE 9
Méthyl 0-( acide 3-0-méthyl-2,4-di-0-sulfo-α-L-idopyrano- syluronique)-(1-4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D-gluco- pyranosyl)-(1-4)-0-(acide 3-O-méthyl-2-0-sulfo -α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-0-méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium (41).
Figure imgf000052_0001
Le synthon disaccharidique
Figure imgf000052_0002
(CCM, Rp 0,54, 1 :1 cyclohexane/EtOAc) est traité comme décrit pour 12 pour donner l'imidate donneur de glycosyle
Figure imgf000052_0003
et l'accepteur
Figure imgf000052_0004
[1.H RMN (CDCI3) δ 8,00-7,15 (m, 20H, 4Ph), 5, 15 (d, 1 H, H-1'), 4,57 (d, 1 H, H-1 ), 3,48; 3,47, 3,32 (3s, 3 OCH3)].
Ces trois synthons sont alors combinés comme il est décrit pour la préparation de 34. Le decasacchande résultant est alors traité selon la méthode 4 pour donner 41.
[α]p + 17 (c = 1 , H2O). 1 H RMN (D2O) δ des protons anomériques principaux : 5,36; 5,34; 5,13; 5,11 ; 5,09; 5,05 ppm.
En procédant selon l'EXEMPLE 9 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus on prépare les composés 42 et 43 (EXEMPLE 10 et 11 ) décrits dans le TABLEAU III ci-après.
TABLEAU III
Figure imgf000053_0001
d-2)
Figure imgf000053_0002
EXEMPLE 12
Méthyl 0-(acide 3-0-méthyi-2,4-di-0-sulfo-β-D- glucopyranosyluronique)-(1-4)-[0-(3-O-méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acide 3-0-méthyl-2-0-sulfo-β-D- glucopyranosyluroniqueH1-4)]4-3-0-méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium (44).
Figure imgf000054_0001
Les synthons disaccharidiques
Figure imgf000054_0002
et
Figure imgf000054_0003
sont préparés puis combinés comme décrit pour 34. Le decasacchande obtenu traité selon la méthode 4 donne 44:
[αJo + 25 (c = 0,2, H2O). 1 H RMN (D2O) δ des protons anomériques principaux : 5,47; 5,07; 4,74; 4,71; 4,70 ppm. EXEMPLE 13
Méthyl Oxacide 3-0-méthyl-2,4-di-0-sulfo-α-L-idopyranosyluronique)-(1-
4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acide 3-O- méthyl-2-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronlque)-(1-4)]2-0-(2f3,6-tri-0-sulfo-α
-D-glucopyraπosyl)-(1-4)-0-(acide 3-0-rnéthyl-2-0-sulfo-α-L-ido- pyraπosyluronique)-(1-4)-3-0-méthyl-2,6-dl-0-sulfo-α-D-glucopyrano- side, sel de sodium (45).
Figure imgf000055_0001
Le donneur de glycosyle 15 et l'accepteur de glycosyle
Figure imgf000055_0002
combinés selon la méthode 3 donnent le tetrasaccharide
Figure imgf000055_0003
Après coupure du groupe Lev (méthode 1 ) et réaction répétée avec le disaccharide donneur de glycosyle suivant, selon le principe décrit dans le schéma 1.
Figure imgf000055_0004
on obtient le précurseur complètement protégé de 45 qui est traité selon la méthode 4 pour donner 45
1 H RMH (D2O) δ (ppm) [600 MHz] des protons anomériques principaux 5,35; 5,33; 5,30; 5,22, 5,21 ; 5,18, 5,15; 4,98
En procédant selon l'EXEMPLE 13 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus à partir des précurseurs ohgosacchaπdiques complètement protégés on prépare le composé 46 (EXEMPLE 14) décrits dans le TABLEAU IV ci-après.
TABLEAU IV
Figure imgf000056_0001
(1.3)
Figure imgf000056_0002

Claims

REVENDICATIONS
Polysaccharide de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formée par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C-|-C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié ; ainsi que ses sels.
2. Sel constitué d'un anion et d'un cation, l'anion ayant pour formule
v ^
Figure imgf000057_0001
(D dans laquelle
- le trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle pyranosique;
- Rπ , RQ, R-| -| et R-J6 représentent un (C-|-C6)alkyle ;
- R2- «3. «4. ^5. R7. Rθ. ^9. R10. «12. R13. R14. R15 et R17 représentent un (C-|-C6)alkyle ou un groupe SO3" ;
- m, n et p sont tels que la somme m + n + p est supérieure ou égaie à 4 et inférieure ou égale à 12, un ou deux des trois pouvant représenter zéro; le cation étant un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que l'acide correspondant.
Sel selon la revendication 2 dans lequel le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins, en particulier le sodium et le potassium.
4. Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel les alkyles sont des méthylés, ainsi que l'acide correspondant . Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans iequel π et p sont égaux a zéro, ainsi que l'acide correspondant
Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel n et p sont égaux a zéro et m représente 4 à 10, ainsi que l'acide correspondant
Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 , un au moins des substituants Ri2> Rl 3, Rl4 et R15 représente un groupe sulfate , R-j , R-ie et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant
Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 , deux au moins des substituants R12. R13. R14 et R-]5 représentent un groupe sulfate , R-j , R-|g et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant
Sel selon l'une des revendications 2 ou 3, dans lequel n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 , trois au moins des substituants R12. R13. R-I4 et R<| 5 représentent un groupe sulfate , R<| , R-JQ et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant
Sel selon la revendication 2 ou 3 dont l'anion a pour formule (1 1 )
Figure imgf000058_0001
(1 1 ) dans laquelle m représente 4 à 10 , R-j , R15, R15 et R17 sont tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant 1 1 Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dont fanion a pour formule (I 2)
Figure imgf000059_0001
dans laquelle m représente 4 à 10 ; R-j , R15, Ri6 et Rl7 sont te,s que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.
12. Sel selon les revendications 2 ou 3 dont fanion a pour formule (1.3) :
V ^
Figure imgf000059_0002
(1.3)
dans laquelle m représente 2 ou 3, R1 ( R12. Rl3. R14. Rl5. R16 et R-I7 étant tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.
13. Sel selon la revendication 12 dans lequel R-| représente un méthyle, R13 en position 3 du glucose représente un méthyle, R12 eπ position 2 et R14 en position 6 du glucose représentent un SO3" et R16 en position 3 de l'unité iduronique ou glucuronique représente un méthyle, m étant égal à 2 ou 3. Polysacchande choisi parmi -
Méthyl 0-(acιde 2,3-di-0-méthyl-4-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 - 4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-0-(acιde 2,3-di-0- méthyl-α-L-idopyranosyluronιque)-( 1 -4)]g-2, 3,6-trι-O-sulfo-α-D-glucopyra- noside, sel de sodium;
Méthyl 0-(acιde 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)-(1 - 4HO-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acιde 2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronιque)-(1 -4)]4-2,3,6-trι-O-sulfo-α-D-glucopyra- noside, sel de sodium;
Méthyl 0-( acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyiuronιque)-(1 - 4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-0-(acιde 2,3-di-O- mόthyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1 -4)]5-2,3,6-trι-0-sulfo-α-D-glucopyra- noside, sel de sodium;
Méthyl O-( acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 - 4)-[0-(2,3,6-trι-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-0-(acιde 2,3-di-0- méthyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1 -4)]Q-2,3,6-trι-0-suifo-α-D-glucopyra- noside, sel de sodium;
Méthyl O-(acιde 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 - 4HO-(2,3,6-th-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acιde 2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronιque)-(1 -4)]7-2,3,6-tri-0-sulfo-α-D-glucopyra- noside, sel de sodium;
Méthyl 0-( acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)-(1 - 4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acιde 2,3-di-O- méthyl-α-L-idopyranosyluronιque)-(1-4)]8-2,3,6-th-O-sulfo-α-D-glucopyra- noside, sel de sodium;
Méthyl 0-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-β-D-glucopyranosyluronιque)- (1-4)-[O-(2,3,6-tri-0-sulfo-α-D-giucopyranosyl)-(1-4)-0-(acιde 2,3-di-O- méthyl-β-D-glucopyranosyluronιque)-(1-4)]4-2,3,6-tπ-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium; Méthyl 0-(acιde 2,3-di-0-méthyl-4-O-sulfo-β-D-glucopyranosyluronιque)- (1 -4)-[0-(2,3,6-trι-0-sulfo-α-D-glucopyraπosyl)-(1 -4)-0-(acιde 2,3-dι-O- méthyl-β-D-glucopyranosyluroπιque)-(1 -4)]3-2,3,6-tri-0-sulfo-α-D- glucopyranoside, sei de sodium;
Méthyl 0-(acιde 3-0-méthyl-2,4-di-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 - 4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-( 1 -4)-0-(acιde 3-0- méthyl-2-0-suifo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-0- sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl 0-(acide 3-0-méthyl-2,4-di-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)-(1 - 4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-giucopyranosyl)-(1-4)-0-(acιde 3-0- méthyl-2-0-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)-(1-4)]3-3-0-méthyl-2,6-dι-0- sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl 0-(acιde 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 - 4)-[0-(3-0-méthyt-2,6-dι-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acιde 3-0- méthyl-2-0-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)-(1-4)]5-3-0-méthyl-2,6-di-0- sulfo-α-D-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl 0-(acιde 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-β-D-glucopyranosyluroπιque)- (1 -4)-[0-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-0- (acide 3-0-méthyl-2-O-sulfo-β-D-glucopyranosyluronιque)-( 1 -4)]4-3-0- méthyl-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopyranosιde, sel de sodium;
Méthyl 0-( acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-(1 - 4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acide 3-0- méthyl-2-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronique)-(1 -4)]2-0-(2,3,6-trι-O-sutfo-α -D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acιde 3-0-méthyl-2-0-sulfo-α-L-ιdopyrano- syluronιque)-(1-4)-3-O-méthyl-2,6-di-0-sulfo-<x-D-glucopyranosιde, sel de sodium; et
Méthyl 0-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-α-L-ιdopyranosyluronιque)-( 1 - 4)-[O-(3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acιde 3-0- méthyl-2-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronιque)-(1-4)]3-0-(2,3,6-trι-0-sulfo-α
-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acιde 3-0-méthyl-2-0-sulfo-α-L-ιdopyrano- syluronιque)-(1-4)-3-0-méthyl-2.6-dι-0-sulfo-α-D-glucopyranosιde sel de sodium
15 Procédé de préparation des composes de formule (I) selon la revendication 2, caractérisé en ce que
(a) on couple selon les méthodes classiques de la chimie des sucres un monosacchande donneur de liaison glycosidique a un monosacchande accepteur de liaison glycosidique pour obtenir un synthon sacchandique intermédiaire de type disaccharide complètement protégé de formule (A)
Figure imgf000062_0001
(A) dans laquelle les substituants Ti , T2, T3, T4, T5, T6, T7, Ts et Z identiques ou différents sont choisis parmi les groupes protecteurs utilisés en chimie des sucres comme groupe protecteur permanent, semi- permanent ou temporaire,
(b) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B)
Figure imgf000062_0002
dans laquelle T2 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et X représente un groupe activateur du carbone anomérique, puis (c) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci -dessus de façon a obtenir un synthon sacchandique intermédiaire de type disacchande accepteur de liaison glycosidique de formule (C)
Figure imgf000063_0001
(C)
dans laquelle Ti à T7 sont tels que définis ci-dessus pour (A), en éliminant sélectivement le groupe protecteur Z selon des méthodes classiques de la chimie des sucres, puis
(d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) obtenu ci-dessus et un disacchande accepteur de liaison glycosidique de formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tetrasaccharide complètement protégé de formule (D)
&
Figure imgf000063_0002
(D)
dans laquelle Ti à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et Te, Tg, T-j Q, T-| 1 , T-| 2 et Η 3 sont te's que définis pour T2 à T7 puis,
(e) on modifie ensuite chimiquement le synthon sacchandique intermédiaire de type tetrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un synthon sa « ccharidique intermédiaire de type tetrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E)
Figure imgf000064_0001
(E)
dans lequel X a la même définition que pour (B) et T2 à T13 sont tels que définis pour (D) puis, (f) on déprotège ensuite sélectivement le tetrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un tetrasacchande accepteur de liaison glycosidique de formule (F)
Figure imgf000064_0002
(F)
dans laquelle T-| à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) puis,
(g) on couple le tetrasacchande accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) tel que ceux obtenus ci-dessus pour former un synthon intermédiaire de type hexasacchaπde complètement protégé de formule (G)
Figure imgf000065_0001
(G)
dans laquelle T-j à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) et τ14 à T-jg sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B); ou bien on couple le tetrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un tetrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E) de façon à obtenir un octasacchaπde complètement protégé de formule (H) :
Figure imgf000065_0002
(H) dans laquelle T-| à T^g et Z sont tels que définis précédemment et T20 à
T25 sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B) puis,
(h) on modifie chimiquement l'hexasaccharide de formule (G) ou l'octasaccharide de formule (H) obtenus ci-dessus de façon à obtenir un synthon intermédiaire de type hexasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (G) dans lequel Z représente l'hydrogène ou bien un octasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (H) dans lequel Z représente l'hydrogène,
(i) on répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons intermédiaires sacchandiques donneurs de glycosyle et accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des substituants protecteurs détermine la position des groupes sulfates et alkyles sur le produit final (I), et
(j) on procède à la déprotection des fonctions alcools qui doivent être sulfatées, en éliminant les substituants T-| à T25 qui protégeaient les fonctions au cours des étapes d'élaboration du squelette, puis, finalement
(k) on procède à la sulfatation pour obtenir les composés (I), ou un de leurs sels
16. Compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif un polysacchande ou sel selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, sous forme de sel avec une base pharmaceutiquement acceptable ou sous forme acide, en association ou en mélange avec un excipient inerte, non toxique, pharmaceutiquement acceptable
17 Composition pharmaceutique selon la revendication 16, sous forme d'unités de dosage, dans laquelle le principe actif est mélangé à au moins un excipient pharmaceutique.
18 Composition selon la revendication 17 dans laquelle chaque unité de dosage contient de 0,1 à 100 mg de principe actif
19. Composition selon la revendication 18 dans laquelle chaque unité de dosage contient de 0,5 à 50 mg de principe actif
20. Composition pharmaceutique contenant un polysacchande ou sel selon les revendications 1 à 14 en association avec un autre principe actif antithrombotique, anticoagulant.antiagrégant plaquettaire ou antagoniste du complexe de la glycoproteine Ilb/IIIa
21. Composition pharmaceutique selon la revendication 20 caractérisé en ce que le principe actif associé est le dipyπdamoie, l'aspirine, la ticlopidme ou le ciopidogrel 22. U «tilisation des polysaccharide et sel selon les revendications 1 à 14 pour la préparation d'un médicament utile dans les pathologies dépendantes d'un dysfonctionnement de la coagulation
23. Utilisation des polysaccharide et sel selon les revendications 1 à 14 pour la préparation d'un médicament utile pour l'inhibition des facteurs de croissance se traduisant par une inhibition de la prolifération cellulaire
24. Utilisation des polysaccharide et sel selon les revendications 1 à 14 pour la préparation d'un médicament présentant des propriétés antivirales, hypolipidémiantes, antiradicaux libres, antimétastasiques, antiangiogéniques, anti-inflammatoires.
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