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TW202432605A - 使用至少結合ｅｇｆｒ的抗體和免疫檢查點抑制劑組合治療癌症 - Google Patents

使用至少結合ｅｇｆｒ的抗體和免疫檢查點抑制劑組合治療癌症 Download PDF

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TW202432605A
TW202432605A TW112150387A TW112150387A TW202432605A TW 202432605 A TW202432605 A TW 202432605A TW 112150387 A TW112150387 A TW 112150387A TW 112150387 A TW112150387 A TW 112150387A TW 202432605 A TW202432605 A TW 202432605A
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TW
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cancer
egfr
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Prior art date
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TW112150387A
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恩尼斯托 Ｉ 瓦瑟曼
愛德華多 Ｊ 佩內拉
Original Assignee
荷蘭商美勒斯公司
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Abstract

本發明相關於治療癌症的手段和方法。本發明特別相關於一種使用至少結合EGFR的抗體和免疫檢查點抑制劑(ICI)治療個體之癌症的方法。本發明更相關於使用於此方法中之用途以及用於製造供治療先前未經具抗癌特性的治療試劑治療癌症的藥物之用途。此種所述抗體和ICI之組合特別可用於治療癌症，例如頭頸癌。

Description

使用至少結合EGFR的抗體和免疫檢查點抑制劑組合治療癌症
本發明相關於治療癌症的手段和方法。本發明特別相關於一種使用至少單價結合EGFR的抗體和免疫檢查點抑制劑(ICI)治療個體之癌症的方法。本發明更相關於所述抗體在此方法中的用途，以及製造用於治療頭頸癌藥物之用途。此抗體特別可用於治療癌症，例如頭頸癌。
儘管在疾病治療方面已有許多進展且對導致癌症的分子事件的了解不斷增加，癌症目前仍然是世界上主要的死亡原因。
傳統上，大多數癌症藥物的發現都集中在阻斷基本細胞功能和殺死分裂細胞的試劑。然而，對於晚期癌症，無論採取多麼積極的治療方法，即使到患者因治療而出現危及生命的副作用，化療也很少能達到徹底治癒。在大多數情況下，患者體內的腫瘤會停止生長或暫時縮小(稱為緩解)，之後又開始增殖，有時甚至更快(稱為復發)，並且變得越來越難以治療。最近，癌症藥物開發的重點已從廣泛的細胞毒性化療轉向毒性較小的標靶細胞抑制療法。晚期癌症的治療已在白血病和其他一些癌症中得到臨床驗證。然而，在大多數癌症中，標靶方法仍然被證實不夠有效，存在大量未滿足的醫療需求，因此需要更安全、更有效的治療選擇。
目前已使用多種不同的方法達成癌症靶向，包括例如靶向癌症賴以生存及/或生長的信號蛋白的小分子；含有腫瘤特異性蛋白質的疫苗；含有主動殺死腫瘤細胞的免疫細胞和將細胞毒性分子靶向腫瘤之抗體之細胞療法；干擾訊息傳遞及/或將宿主的免疫系統(重新)引導至腫瘤細胞。
據報導，在美國，頭頸癌特別是口腔和咽部的癌症已佔惡性腫瘤的3%，每年約有53,000名美國人發展出此類癌症，並有10,800人因此死亡 (Siegel等人, CA Cancer J Clin. 2020;70(1):7. Epub 2020 Jan 8.)。此外，據報導頭頸鱗狀細胞癌 (HNSCC)是全球發病率第六大癌症，HNSCC患者的五年總存活率約為40-50% (Head and Neck Cancer, Union for International Cancer Control, 2014 Review of Cancer Medicines on the WHO List of Essential Medicines)。
在KEYNOTE-048研究中 (Burtness等人, Vol. 394, 10212, pages 1915-1928, November 23, 2019, the Lancet)，帕博利珠單抗 (pembrolizumab)作為單一療法，以200 mg IV Q3W投與最長24個月。在CPS ≧1的患者中，平均OS為12.3個月 (95%信賴區間[CI]：10.8、14.9)；平均PFS為3.2個月 (95% CI：2.2、3.4)；確認完全反應 (CR)或PR的最佳客觀反應僅為19% (CI：14.5、24.4)；平均反應持續時間 (DOR)為20.9個月 (95% CI：1.5、34.8)。
最近一項將帕博利珠單抗 (pembrolizumab)與西妥昔單抗(cetuximab)組合治療的第2期研究，針對先前未接受抗-PD1或EGFR治療的HNSCC患者群體進行，33名參與者中有15名在6個月內達到客觀反應率 (ORR) (45% [95% CI: 28,62])；平均DOR為13.1個月(95% CI 6.5，未達到)，其中1名患者在6個月後達到反應，從而將ORR提高至48%。平均PFS為6.5個月 (95% CI：2.1，未達到)，平均OS為18.4個月 (95% CI：11.0，未達到) (Sacco等人, 2021, Lancet Oncol. Jun;22(6):883-892)。在該第2期組合研究中，根據每種藥物的單獨毒性特徵，觀察到的不良事件 (AE)符合預期。疲勞、皮膚事件 (紅疹和皮膚乾燥)、低鎂血症和轉胺炎是報告最多的TEAE。與帕博利珠單抗 (pembrolizumab)相關的免疫相關AE與其毒性特徵一致。觀察到潛在的重疊毒性為口腔黏膜炎和皮膚毒性。
一項針對局部晚期頭頸鱗狀細胞癌 (LA-HNSCC)的統合分析報告指出，在放療或放化療中加入抗-EGFR藥物並不能改善LA-HNSCC患者的臨床結果 (Oncotarget. 2017; 8(60):102371-102380)。此外，據報導加入抗-EGFR藥物會增加皮膚毒性和黏膜炎的風險。
因此目前需要增進的癌症治療，特別是頭頸癌的治療。
本發明提供以下較佳態樣。然而，本發明不受限於此。
本發明相關於一種組合療法，其中包含結合EGFR胞外部分的抗原結合位點之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物係與免疫檢查點抑制劑一起用於治療有需要個體之癌症之方法中。
本發明提供在癌症治療中(重新)引導免疫系統成分的手段和方法。
此外，本發明相關於包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，用於治療個體的癌症，其中該治療更包含投與免疫檢查點抑制劑。
此外，本發明相關於使用包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物及免疫檢查點抑制劑，於製造一或多種用於治療個體之癌症的藥物之用途。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑係用於製造分開的藥物。在某些態樣中，該癌症的治療包含投與抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑。
本發明亦相關於一種治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與有效量之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及有效量之免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，所述免疫檢查點抑制劑包含PD-L1、PD-L2或PD-1抑制劑。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為PD-L1、PD-L2或PD-1抑制劑。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為靶向PD-L1、PD-L2或PD-1的抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抑制PD-L1、PD-L2或PD-1的抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抑制PD-L1的抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抑制PD-L2的抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抑制PD-1的抗體。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、派安普利單抗 (penpulimab)、瑞替凡利單抗 (retifanlimab)、信迪利單抗 (sintilimab)、替雷利珠單抗 (tislelizumab)、特瑞普利單抗 (toripalimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab) 或度伐魯單抗 (durvalumab)。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為納武利單抗 (nivolumab)。
在某些態樣中，該癌症包括或為腺癌、鱗狀細胞癌或頭頸癌，包括頭頸鱗狀細胞癌(SCCHN)。
在某些態樣中，該癌症包含或為頭頸癌，包括頭頸鱗狀細胞癌(SCCHN)。
在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含或為多特異性抗體。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含或為雙特異性抗體。
在某些態樣中，本發明的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為至少結合EGFR的多特異性抗體。在某些態樣中，本發明的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為至少結合EGFR的雙特異性抗體。在某些態樣中，該抗體單價性地結合EGFR。在某些態樣中，該抗體包含不結合EGFR的第二可變域。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含結合LGR5的可變域。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為ADCC增強的。此外，在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為無岩藻糖基化的。在某些態樣中，該至少結合EGFR的抗體包含或為派森妥單抗 (petosemtamab)。
在某些態樣中，該癌症表現PD-L1、EGFR及/或LGR5。在某些態樣中，該癌症表現PD-L1和EGFR。
在某些態樣中，該治療為第一線治療。在某些態樣中，接受治療的個體尚未接受過針對所述癌症的早期或先前的抗癌治療。
在某些態樣中，該至少結合EGFR的抗體為派森妥單抗 (petosemtamab)且以1500mg的劑量投與。在某些態樣中，派森妥單抗 (petosemtamab)以1500 mg的劑量每兩週投與一次。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)並以600 mg的劑量投與。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)並以600 mg的劑量每六週一次投與。
在某些態樣中，本發明的個體為哺乳動物個體，例如人類個體。
本發明更包含一種(醫藥)組合物或組件套組，其包含本發明的至少結合EGFR的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，與本發明的免疫檢查點抑制劑之組合。所述組合在某些態樣並非物理性連接，並包含一內含有所述至少結合EGFR的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物之容器，以及一內含有本發明之免疫檢查點抑制劑之容器。所述組合在某些態樣中附有使用說明。該使用說明包括臨床相關資訊，例如靜脈投與說明、投與劑量和投與時間間隔。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物特別是派森妥單抗 (petosemtamab)，以及免疫檢查點抑制劑特別是帕博利珠單抗 (pembrolizumab)，將依據相關主管機關核准之使用說明投與。
本發明相關於一種組合療法，其中包含結合EGFR胞外部分的抗原結合位點之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物係與免疫檢查點抑制劑一起用於治療有需要個體之癌症的方法中。
本發明相關於一種包含結合EGFR胞外部分的抗原結合位點之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，用於治療有需要個體之癌症的方法中，該方法更包含投與免疫檢查點抑制劑來治療所述癌症。
此外，本發明相關於包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，用於治療個體之癌症的方法，其中該治療更包含使用免疫檢查點抑制劑。
此外，本發明相關於一種治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與有效量之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及有效量之免疫檢查點抑制劑。
此外，本發明相關於使用包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和免疫檢查點抑制劑，製造一或多種用於治療個體之癌症的藥物之用途。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑係用於製造分開的藥物，例如兩種分開的藥物，其中一者為所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，另一者為所述免疫檢查點抑制劑。包含所述包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物之所述藥物，可保持在一容器中，該容器與包含所述免疫檢查點抑制劑作為藥物的容器分開 (意思是不呈物理性連接)。在某些態樣中，該癌症的治療包含投與至少結合EGFR之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，本發明提供使用包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和免疫檢查點抑制劑，製造用於治療癌症之藥物之用途。
在某些態樣中，本發明提供使用包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物製造藥物之用途，該藥物用於增強免疫檢查點抑制劑治療癌症之作用。
在某些態樣中，本發明提供使用免疫檢查點抑制劑製備藥物之用途，該藥物用於增加本發明包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療癌症之作用。
此外，本發明提供一種組件套組，其包含該包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、免疫檢查點抑制劑、使用所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的說明、以及使用所述免疫檢查點抑制劑的說明。
此外，本發明提供一種包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物與本文提及的免疫檢查點抑制劑的組合，用於治療有需要個體之癌症。
此外，本發明提供本文提及的免疫檢查點抑制劑、使用所述免疫檢查點抑制劑治療個體之癌症的使用說明、以及使用本文提及的包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療所述個體之所述癌症的使用說明之組合。
此外，本發明提供如本文提及的包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、使用該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體之癌症的使用說明、以及使用本文提及的免疫檢查點抑制劑治療個體之所述癌症的使用說明之組合。
在某些態樣中，本發明提供一種醫藥組成物，其包含該包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及與免疫檢查點抑制劑一起用於治療所述癌症之使用說明。
在某些態樣中，本發明提供一種用於治療癌症的醫藥組成物，其包含該包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及一種用於治療癌症的藥物組合物，其包含本發明的免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，本發明提供一種用於治療癌症的醫藥組成物，其包含一含有結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其中該醫藥組成物係與本發明的免疫檢查點抑制劑組合投與。
在某些態樣中，本發明相關於一種用於治療癌症的醫藥組成物，其包含一含有結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其中在投與所述雙特異性抗體之前、同時或之後，進一步向待治療的個體投與免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，本發明相關於一種用於治療個體之癌症的醫藥組成物，其包含免疫檢查點抑制劑，其中在投與所述免疫檢查點抑制劑之前、同時或之後，進一步向所述待治療的個體投與本發明之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物。
因此，本發明相關於一種用於治療個體之癌症的藥物組合，其包括向所述個體投與多種不同的藥物以治療所述癌症，該治療包含同時、依序或分開投與所述藥物。在某些態樣中，所述藥物包含本發明之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及所述之其他不同藥物包含免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，本發明之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，可與本發明之免疫檢查點抑制劑同時、依次或分開投與。因此，所述本發明之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物與免疫檢查點抑制劑之組合，涵蓋同時、依序或分開投與。
因此，在某些態樣中，本發明提供一種包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，用於治療癌症之方法中，其中所述治療進一步包含投與免疫檢查點抑制劑，其中視情況所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物與所述免疫檢查點抑制劑係同時、依序或分開投與。
因此，在某些態樣中，本發明提供一種治療患有癌症的個體之方法，包含向該個體投與有效量的免疫檢查點抑制劑和本發明之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其中視情況該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物係與所述免疫檢查點抑制劑同時、依序或分開投與。
因此，在某些態樣中，本發明提供使用本發明之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑，製造用於治療癌症之藥物之用途，其中視情況所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物與所述免疫檢查點抑制劑係同時、依次或分開投與。在某些態樣中，所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物在投與所述免疫檢查點抑制劑之前、同時或之後投與。
在某些態樣中，本發明之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，係用於製造用於治療癌症的藥物，以及該免疫檢查點抑制劑係用於製造用於治療所述癌症的藥物，其中視情況所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物與所述免疫檢查點抑制劑係同時、依次或分開投與。視情況所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物在投與所述免疫檢查點抑制劑之前、同時或之後投與。
為了更容易理解本揭示，於此定義某些術語。如果需要的話，可在整個詳細描述中闡述額外的定義。除非本文單獨定義，本文使用的所有技術和科學術語皆具有與本領域通常知識者通常理解的相同含義，並採用免疫學、蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術和藥理學的常規方法。
如本文所用，單數形式「一 (a)」、「一 (an)」和「該 (the)」包括複數所指物件。使用術語「包含 (comprising)」、「具有 (having)」、「包括 (including)」，以及其他形式，例如「包含 (comprise, comprises, comprised)」、「具有 (has, have, had)」、「包括 (include, includes, included)」並非限制性的。
本文所使用的術語「抗體」是指屬於免疫球蛋白類的蛋白質分子，其含有結合至抗原表位的一或多個結構域，其中此類結構域為或衍生自一抗體的可變區或與其共享序列同源性。抗體通常由基本結構單元組成，每一單元都有兩條重鏈和兩條輕鏈。本發明的抗體不受限於任何特定的形式或其產生方法。
「雙特異性抗體」為如本文所述的抗體，其中該抗體之一結構域結合一抗原，而該抗體的另一結構域結合另一抗原，其中所述一抗原和另一抗原不相同，或其中一個結構域結合一抗原上之一表位，而另一結構域則結合該抗原上之另一抗原表位。術語「雙特異性抗體」也涵蓋一抗體，其中一個重鏈可變區/輕鏈可變區(VH/VL)組合係結合一抗原或抗原上之一表位，而另一VH/VL組合則結合另一抗原或該抗原上之另一表位。該術語更包括一抗體，其中VH能夠特異性地辨識一抗原，且該與免疫球蛋白可變區中的VH配對的VL能夠特異性地辨識另一抗原。所得VH/VL對將結合抗原1或抗原2。此種所謂的「二合一抗體」描述於例如WO 2008/027236、WO 2010/108127和Schaefer等人 (Cancer Cell 20, 472-486, October 2011)之文獻。本發明的雙特異性抗體不限於任何特定的雙特異性形式或其產生方法。
本文所使用的術語「共同輕鏈」是指雙特異性抗體中的兩條輕鏈 (或其VL部分)。該兩條輕鏈 (或其VL部分)可為相同或具有一些胺基酸序列差異但不影響全長抗體的結合特異性。術語「共同輕鏈」、「共同VL」、單一輕鏈」、「單一VL」，加上或不加上術語「重排」在本文中都可互換使用。「共同」亦指胺基酸序列不相同的輕鏈的功能等效物。所述輕鏈存在許多變體，其中存在不影響功能性結合區形成的突變 (缺失、取代、插入及/或添加)。在某些態樣中，本發明的輕鏈亦可為本文指定的輕鏈，其具有0至10個胺基酸插入、缺失、取代、添加或其組合。在實施例中，所述0至10個胺基酸插入、缺失、取代、添加或其組合不在CDR區內。在某些態樣中，本發明的輕鏈亦可為本文指定的輕鏈，其具有0至5個胺基酸插入、缺失、取代、添加或其組合。例如，在本文所使用的常見輕鏈定義的範圍內，製備或發現不相同但仍功能等同的輕鏈，例如藉由引入和測試保守胺基酸變化、當與重鏈配對時不會或僅部分有助於結合特異性的區域中胺基酸的變化，及類似變化。
如本文所用，「包含」及其詞形變化以其非限制性意義使用，意指包括該詞後面的項目，但不排除未具體提及的項目。此外，動詞「由…組成」可替換為「基本上由…組成」，意即本文定義的化合物或輔助化合物可包含除具體指出的成分之外的額外成分，所述額外成分不改變本發明的獨特特徵。
「抗體之衍生物」是除了CDR區之外與天然抗體的胺基酸序列最多有20個胺基酸偏差的蛋白質。本文所揭示的抗體之衍生物是與所述胺基酸序列有最多20個胺基酸偏差的抗體。該功能性部分、衍生物及/或類似物保持該(雙特異性)抗體的結合特異性。「抗體之類似物」是指結構、形式或來源可能不同，但保持其類似的抗體之結合特異性的蛋白質。
本文中提及核酸或胺基酸序列的「一致性百分比(%)」定義為在為了最佳比較目的而比對序列之後，候選序列中與所選定序列中的相同殘基之百分比。使用Vector NTI Advance Ⓡ11.5.2軟體的AlignX應用程式，使用預設設定決定比較核酸序列的序列一致性百分比，該應用程式採用修改的ClustalW演算法 (Thompson, J.D., Higgins, D.G., and Gibson T.J., (1994) Nuc. Acid Res. 22(22): 4673-4680)，swgapdnamt分數矩陣，空格開放罰分15和空格延長罰分6.66。胺基酸序列比對係使用Vector NTI Advance Ⓡ11.5.2軟體之AlignX應用程式進行比對，使用預設設定，該應用程式採用修改的ClustalW演算法 (Thompson, J.D., Higgins, D.G., and Gibson T.J., (1994) Nuc. Acid Res. 22(22): 4673-4680)，blosum62mt2分數矩陣，空格開放罰分10和空格延長罰分0.1。
由於抗體通常會辨識抗原的表位，且此表位也可存在於其他化合物中，因此「特異性辨識」一抗原例如PD-L1、EGFR或LGR5的本發明抗體，也可以辨識其他化合物，若該其他化合物含有相同類型的表位。因此，關於抗原和抗體交互作用的術語「特異性地辨識」並不排除該抗體與含有相同類型表位的其他化合物的結合。
術語「表位」或「抗原決定簇」是指抗原上被免疫球蛋白或抗體特異性結合的位點。表位可由藉由蛋白質三級折疊並置的連續胺基酸或非連續胺基酸形成 (所謂的直線型和構型表位)。由連續的直線型胺基酸形成的表位通常在暴露於變性溶劑時保留，而由三級折疊、構形形成的表位通常在變性溶劑處理時喪失。表位通常可包括呈獨特空間構形的3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸。
本文所使用的術語「個體」和「患者」可互換使用，是指哺乳動物，例如人類、小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、兔、貓、狗、猴、牛、馬、豬、及類似動物 (例如，患有癌症的患者，例如人類患者)。
本文所使用的術語「治療(treat, treating, treatment)」是指對個體進行或投與個體活性試劑或活性試劑組合的任何類型的干預或過程，其目的是逆轉、減輕、改善、抑制或減緩與疾病相關的症狀、併發症、病況或生化指標的進展、發展、嚴重性或復發。
如本文所用，「有效治療」或「陽性治療反應」是指產生有益效果的治療，例如改善疾病或病症例如癌症的至少一種症狀。有益效果可以採取相對於基線改善的形式，包括相對於根據該方法開始治療之前進行的測量或觀察的改善。例如，有益效果可採取減緩、穩定、停止或逆轉個體在任何臨床階段的癌症進展的形式，證據如該疾病的臨床或診斷症狀或癌症的標記物之減少或消除。有效的治療可例如減少腫瘤大小、減少循環腫瘤細胞的存在、減少或預防腫瘤轉移、減緩或休止腫瘤生長，及/或預防或延遲腫瘤再度發生或復發。
術語「有效量」或「治療有效量」是指提供期望的生物學、治療及/或預防結果的試劑或試劑組合的量。此結果可為疾病的一或多種體徵、症狀或原因的降低、改善、緩和、減少、延遲及/或緩和，或生物系統的任何其他期望的改變。就腫瘤發展而言，有效量為足以延緩腫瘤發展的量。就腫瘤復發而言，有效量為足以預防或延遲腫瘤復發的量。有效量可以在一次或多次投藥中投與。試劑或組合物之有效量可：(i) 減少癌細胞數量；(ii) 減小腫瘤大小；(iii) 在一定程度上抑制、延遲、減緩並可能阻止癌細胞浸潤到周圍器官；(iv) 抑制腫瘤轉移；(v) 抑制腫瘤生長；(vi) 預防或延緩腫瘤的發生及/或復發；及/或(vii) 在一定程度上緩解一或多種與癌症相關的症狀。在一態樣中，「有效量」是本文所揭示的抗體作為治療劑，以降低癌症 (例如癌細胞數量減少)；減緩癌症的進展或防止癌症的再生長或復發的量。本發明之結合EGFR或結合EGFR和LGR5的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物在本文中也稱為「治療試劑」。在某些態樣中，本文之派森妥單抗 (petosemtamab)之有效量為每兩週向患有本發明所述之癌症的個體投與1500 mg的固定劑量。此外，免疫檢查點抑制劑在本文中被稱為「治療試劑」。在某些態樣中，本文的免疫檢查點抑制劑的有效量為每六週一次向患有本發明癌症的個體投與固定劑量的400 mg帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。在某些態樣中，本發明的免疫檢查點抑制劑的有效量是每三週一次向患有本發明癌症的個體投與200 mg帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的固定劑量。
如本文所用，術語「癌症」同樣適用於術語「腫瘤」，使得腫瘤的治療也適用於癌症的治療。
本文中的術語「固定劑量」是指一投藥方案，其中在多次投與中向個體投與固定量的治療物質，與個體的體重無關。固定劑量通常縮寫為qnw，其中n是表示間隔的整數，w是週數。例如，1500 mg抗體的q2w固定劑量投與方案係指每2週一次投與固定量的1500 mg抗體。在本文中，在某些態樣中，治療物質為結合EGFR或結合EGFR和LGR5的抗體，以1500 mg的q2w投與。在某些態樣中，對所述個體的投與包括至少三次1500 mg的q2w固定劑量。在某些態樣中，所述投與包含至少四次或更多劑次並可持續直到患者表現出足夠的臨床或放射學進展。在某些態樣中，治療物質為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)並以400 mg作為有效量的q6w給藥方案投與。在某些態樣中，對所述個體的投與包含至少三次400 mg的q6w固定劑量。在某些態樣中，所述投與包含至少四次或更多劑次並可持續直到個體表現出足夠的臨床或放射學進展。
術語「H分數」，在本領域中有時被稱為「histo」分數，是指一種可重複且標準化的評分方法，其可用於半定量計算腫瘤樣本中感興趣基因的表現，基於免疫組織化學(IHC)或原位雜交技術(ISH)的方法流程，這些方法都是本領域通常知識者所熟知的，並遵循ASCO 2015年4月10日發布的如何計算H分數。另請參閱Hirsch FR, Varella-Garcia M, Bunn PA Jr, 等人: Epidermal growth factor receptor in non- small-cell lung carcinomas: Correlation between gene copy number and protein expression and impact on prognosis. J Clin Oncol 21:3798-3807, 2003；以及John T, Liu G, Tsao M-S: Overview of molecular testing in non-small-cell lung cancer: Mutational analysis, gene copy number, protein expression and other biomarkers of EGFR for the prediction of response to tyrosine kinase inhibitors. Oncogene 28:S14-S23, 2009。這些參考文獻的相關揭示藉由引用併入本文。
在EGFR的H評分的內文中，術語「使用IHC判定」是指使用或包含IHC作為隨後決定H評分的基礎之方法，這與IHC的替代方法相反。
本發明亦提供包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑，用於治療個體的癌症，其中所述癌症表現EGFR，其特徵在於IHC評分為3+，且其中所述可變域包含如本文進一步揭示之胺基酸。
本發明亦提供包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑，用於治療個體的癌症，其中所述癌症表現EGFR，其特徵在於其H評分為大於200，且其中所述可變域包含如本文進一步揭示之胺基酸。
本發明亦提供治療患有表現EGFR的癌症之個體的方法，其中所述個體尚未接受任何先前的抗癌治療，該方法包括向該個體提供有效量之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及免疫檢查點抑制劑。
本發明亦提供包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑，用於治療個體的頭頸癌，其中所述癌症表現EGFR，其特徵在於IHC評分為3+。 本發明作為標靶之EGFR 、LGR5 、PD-L1/2 及PD-1
表皮生長因子 (EGF)受體 (EGFR、ErbB1或HER1)是四個受體酪胺酸激酶 (RTK)家族的成員，稱為Her-或cErbB-1、-2、-3和-4。EGFR有多個名稱，最常見的是EGFR。EGFR具有一個由四個子結構域組成的胞外域(ECD)，其中兩個子結構域涉及配體結合，另外兩個子結構域涉及同二聚化和異二聚化。EGFR整合來自多種配體的細胞外信號，產生不同的細胞內反應。EGFR活化的主要訊息傳遞途徑由Ras-絲裂原-激活蛋白激酶(MAPK)促有絲分裂訊息傳遞級聯組成。該路徑的活化是藉由將Grb2召集到酪胺酸磷酸化EGFR來啟動的。這導致Ras透過Grb2結合的Ras-鳥嘌呤核苷酸交換因子Son of Sevenless (SOS)而活化。此外，PI3-激酶-Akt訊息傳遞路徑也被EGFR激活，儘管在ErbB-3 (HER3)共表現的情況下，此種活化要強得多。EGFR與數種人類上皮惡性腫瘤有關，特別是乳癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、肺癌、結腸癌、卵巢頭頸癌和腦癌。已發現基因中的突變活化以及受體及其配體的過度表現，從而產生自分泌激活環。因此，此種RTK已被廣泛作為癌症治療的標靶。靶向RTK的小分子抑制劑和導向細胞外配體結合域的單株抗體(mAb)均已開發出，迄今已顯示出一些臨床成功案例，儘管主要針對選定群組之患者。人類EGFR蛋白及其編碼基因的資料庫登錄號為GenBank NM_005228.3。此登錄號主要是為了提供進一步辨識出作為標靶的EGFR蛋白的方法，而與抗體結合的EGFR蛋白的實際序列可能會有所不同，例如，由於編碼基因的突變，例如某些癌症及類似病症發生的突變等。
當本文提及EGFR時，除非另有說明，否則該提及是指人類EGFR。結合EGFR的可變域抗原結合位點係結合EGFR及其各種變體，例如在某些EGFR陽性腫瘤上表現者。
術語「LGR」是指被稱為富含白胺酸重複的G蛋白偶聯受體的蛋白質家族。已知該家族的數個成員參與WNT訊息傳遞路徑，特別是LGR4；LGR5和LGR6。
LGR5是含有富含白胺酸重複之G蛋白偶聯受體5。此基因或蛋白的替代名稱為富含白胺酸重複之G蛋白偶聯受體5；富含白胺酸重複之G蛋白偶聯受體5；G蛋白偶聯受體HG38；G蛋白偶聯受體49；G蛋白偶聯受體67；GPR67；GPR49；孤兒G蛋白偶聯受體HG38；G蛋白偶聯受體49；GPR49；HG38和FEX。本發明之LGR5結合蛋白或抗體係結合人類LGR5。由於人類和其他哺乳動物同源物之間的序列和三級結構相似性，本發明之LGR5結合蛋白或抗體也可結合此類同源物，但並非必定如此。人類LGR5蛋白及其編碼基因的資料庫登錄號為 (NC_000012.12; NT_029419.13; NC_018923.2; NP_001264155.1; NP_001264156.1; NP_003658.1)。提供登錄號主要是為了提供進一步辨識出LGR5作為標靶的方法，與LGR5蛋白結合的實際序列可能會有所不同，例如由於編碼基因中的突變，例如在某些癌症或類似病症中發生的突變。當本文提及LGR5時，除非另有說明，否則該提及是指人類LGR5。LGR5抗原結合位點係結合LGR5及其多種變體，例如由一些LGR5陽性腫瘤細胞表現者。
程序性死亡配體1 (PD-L1、CD274或B7同源物1 (B7-H1)；HGNC：17635；NCBI Entrez Gene: 29126; UniProtKB/Swiss-Prot: Q9NZQ7)為人類中由CD274編碼的蛋白質基因。此基因編碼一免疫抑制性受體配體，其由造血和非造血細胞表現，例如T細胞和B細胞以及各種類型的腫瘤細胞。編碼的蛋白質為第I型跨膜蛋白，具有免疫球蛋白V-類似和C-類似域。此配體與其受體的相互作用抑制T細胞活化和細胞激素產生。在正常組織感染或發炎期間，此相互作用對於藉由維持免疫反應的穩態來預防自體免疫非常重要。在腫瘤微環境中，此相互作用經由使​​細胞毒性T細胞失活而為腫瘤細胞提供免疫逃脫。
PD-L1是一種第1型跨膜蛋白，在特定事件 (如懷孕、異體移植、自體免疫疾病和其他疾病狀態如肝炎)期間扮演抑制免疫反應的角色。PD-L1在多種類型的癌症中表現，特別是在NSCLC (Boland et al., 2013. Tumor B7-H1 and B7-H3 expression in Squamous cell carcinoma of the lung. Clinical lung cancer Vol. 14, No. 2, 157-63; Velcheti et al., 2014. Programmed death ligand-1 expression in non-small cell lung cancer. Laboratory investigation. 94, 107-116)、黑色素瘤、腎細胞癌、胃癌、肝細胞癌以及各種白血病和多發性骨髓瘤 (Bernstein et al., 2014. Radiation-Induced modulation of costimulatory and coinhibitory T-cell signaling molecules on human prostate carcinoma cells promotes productive antitumor immune interactions. Cancer biotherapy and radiopharmaceuticals. Vol. 29. No. 4, 153-161; Thompson et al., 2005. Costimulatory molecule B7-H1 in primary and metastatic clear cell renal cell carcinoma. Cancer 104:2084-91)。PD-L1存在於癌細胞的細胞質和細胞膜，但並非所有癌症或腫瘤內的所有細胞都表現PD-L1 (Dong et al., 2002. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: A potential mechanism of immune invasion. Nature medicine. Vol 8 NO 8 793-800)。多種腫瘤微環境細胞透過上調PD-L1表現來促進免疫抑制。此種效應被稱為「適應性免疫抗性」，因為腫瘤會藉由回應活化T細胞產生的IFN-γ而誘發PD-L1來保護自身 (Sharma et al., 2017. Primary, adaptive, and acquired resistance to cancer immunotherapy. Cell. Vol. 168. 707-723)。PD-L1也可受到致癌基因的調節，此機制被稱為固有免疫抗性 (Akbay et al., 2013. Activation of the PD-1 pathway contributes to immune excape in EGFR-driven lung tumors. Cancer discovery. 1355-1363)。在腫瘤微環境中，PD-L1也在骨髓細胞和活化的T細胞上表現 (Tumeh et al., 2014. PD-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immune resistance. Nature. 515(7528): 568-571)。PD-L1的表現由多種促發炎分子誘發，包括第I型和第II型IFN-γ、TNF-α、LPS、GM-CSF和VEGF，以及細胞因子IL-10和IL-4，其中IFN-γ是最有效的誘發劑 (Sznol and Chen, 2013. Antagonist antibodies to PD-1 and B7-H1 (PD-L1) in the treatment of advanced human cancer. Clin Cancer Res; 19(5); 1021-34)。
程序性細胞死亡1蛋白 (PD-1)是一種細胞表面受體，屬於CD28受體家族，在T細胞和祖-B細胞上表現。目前已知PD-1與兩種配體結合，PD-L1和PD-L2。PD-1作為免疫檢查點，藉由抑制T-細胞的活化而在下調免疫系統中扮演重要角色，其之後降低自體免疫性並促進自體耐受性。PD-1的抑制作用被認為是經由促進淋巴結中的抗原特異性T細胞凋亡 (程序性細胞死亡)同時減少調節性T細胞 (抑制性T細胞)凋亡的雙重機制而達成。PD-1也有許多不同的別名，諸如PDCD1；程序性細胞死亡1；系統性紅斑狼瘡易感性2；蛋白質PD-1；HPD-1；PD1；程序性細胞死亡1蛋白；CD279抗原；CD279；HPD-L；HSLE1；SLEB2；及PD-1。PD-1的外部ID為HGNC: 8760；Entrez基因: 5133; Ensembl: ENSG00000188389；OMIM: 600244；和UniProtKB: Q15116。阻斷PD-1活性的新類型藥物，即PD-1抑制劑，可活化免疫系統攻擊腫瘤，因此成功用於治療某些類型的癌症。當本文提及PD-1時，除非另有說明，否則該提及是指人類PD-1。該PD-1抗原結合位點係結合PD-1及其多種變體，例如藉由一些PD-1陽性腫瘤細胞表現者。
PD-L1與PD-1或B7.1 (CD80)之結合會傳遞抑制信號，因而降低表現PD-1的T細胞增殖。PD-1被認為能夠經由細胞凋亡來控制外來抗原特異性T細胞的累積。PD-L1由多種癌細胞表現，且該表現被認為至少部分負責抑制對抗癌細胞的免疫反應。PD-L1是蛋白質B7家族的一員，有各種其他名稱，諸如CD274分子；CD274抗原；B7同源物1；PDCD1配體1；PDCD1LG1；PDCD1L1；B7H1；PDL1；程序性細胞死亡1配體1；程序性死亡配體1；B7-H1；以及B7-H。CD274的外部ID為HGNC: 17635; Entrez Gene: 29126; Ensembl: ENSG00000120217; OMIM: 605402; UniProtKB: Q9NZQ7。當本文提及PD-L1時，除非另有說明，否則該提及是指人類PD-L1。該PD-L1抗原結合位點係結合PD-L1及其多種變體，例如藉由一些PD-L1陽性腫瘤細胞表現者。
PD-L2是PD-1的第二配體。PD-L2與PD-1的結合會抑制T細胞受體 (TCR)-介導的增殖和CD4+ T細胞產生的細胞因子。在低抗原濃度下，PD-L2/PD-1結合會抑制B7-CD28信號。在高抗原濃度下，PD-L2/PD-1的結合會減少細胞因子的產生。藉由干擾素γ處理，在抗原呈現細胞上的PD-L表現會被上調。其在一些正常組織和多種腫瘤中均有表現。PD-L1和PD-L2被認為具有重疊功能並調節T細胞反應。該蛋白質有許多其他名稱，諸如程式化細胞死亡1配體2；B7樹突狀細胞分子；程式化死亡配體2；嗜乳脂蛋白B7-DC；PDCD1配體2；PD-1配體2；PDCD1L2；B7-DC；CD273；B7DC；PDL2；PD-1-配體2；CD273抗原；BA574F11.2；和Btdc。PD-L2的外部ID為HGNC: 18731；Entrez 基因: 80380；Ensembl: ENSG00000197646；OMIM: 605723；和UniProtKB: Q9BQ51。當本文提及PD-L2時，除非另有說明，否則該提及是指人類PD-L2。該PD-L2抗原結合位點係結合PD-L2及其多種變體，例如藉由一些PD-L2陽性腫瘤細胞表現者。 免疫檢查點抑制劑
在某些態樣中，所述免疫檢查點抑制劑包含PD-L1、PD-L2或PD-1抑制劑。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為靶向PD-L1、PD-L2或PD-1的抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抑制PD-L1、PD-L2或PD-1的抗體。在某些態樣中，該PD-1、PD-L2或PD-L1抑制劑為抗體或其他結合分子。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為PD-L1抑制劑。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為PD-1抑制劑。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抗PD-L1抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為抗PD-1抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為結合或可結合PD-L1或PD-1的抗體。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或為納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、派安普利單抗 (penpulimab)、瑞替凡利單抗 (retifanlimab)、信迪利單抗 (sintilimab)、替雷利珠單抗 (tislelizumab)、特瑞普利單抗 (toripalimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab) 或度伐魯單抗 (durvalumab)。
免疫檢查點抑制劑，例如PD-1抑制劑，是本領域已知的。它們包括結合並阻斷PD-1的抗體。例如，帕博利珠單抗 (pembrolizumab)是一種用於癌症免疫療法的人源化抗體，可治療黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、何杰金氏淋巴瘤、胃癌和子宮頸癌。它是透過緩慢注射到靜脈中來給予。帕博利珠單抗 (pembrolizumab)是一種治療性抗體，可結合並阻斷淋巴細胞上的PD-1。此受體是所謂的「免疫檢查點」，因此通常負責防止免疫系統攻擊人體自身組織。正常情況下，經活化T細胞上的PD-1受體係結合至存在於體內的正常細胞上的PD-L1或PD-L2配體，而使針對這些細胞的任何潛在的細胞介導的免疫反應失活。許多癌症產生的蛋白質(如PD-L1)也會與PD-1受體結合，從而關閉身體殺死癌細胞的能力。帕博利珠單抗 (pembrolizumab)會藉由抑制淋巴細胞的PD-1受體、阻斷會使其失活並阻止免疫反應的配體。這使免疫系統能夠靶向並摧毀癌細胞，但也阻斷了防止免疫系統攻擊自身的關鍵機制。
帕博利珠單抗 (pembrolizumab)於2014年在美國獲准用於醫療用途。2017年，美國食品藥物管理局(FDA)核准用於治療任何具有某些基因異常 (錯配修復缺陷或微衛星不穩定)的不可切除或轉移性實體瘤。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、派安普利單抗 (penpulimab)、瑞替凡利單抗 (retifanlimab)、信迪利單抗 (sintilimab)、替雷利珠單抗 (tislelizumab)、特瑞普利單抗 (toripalimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為納武利單抗 (nivolumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為PD-L1抑制劑。在某些態樣中，該PD-L1抑制劑為阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)或度伐魯單抗 (durvalumab)。所有所述免疫檢查點抑制劑的胺基酸序列為本領域眾所周知的。
度伐魯單抗 (durvalumab) (以商品名Imfinzi™販售)是FDA核准的免疫檢查點抑制劑，用於治療膀胱癌和肺癌等癌症。它是一種人類免疫球蛋白G1 kappa (IgG1κ)單株抗體，可結合PD-L1並阻斷其與PD-1 (CD279)的交互作用。度伐魯單抗 (durvalumab)是一種免疫檢查點抑制劑，有時也稱為免疫檢查點抑制劑藥物。
帕博利珠單抗 (pembrolizumab) (以商品名Keytruda™販售)是一種用於癌症免疫療法的人源化抗體，用於治療多種癌症，包括黑色素瘤、肺癌和何杰金氏淋巴瘤，並作為免疫檢查點抑制劑。它是一種IgG4同種型抗體，並靶向淋巴細胞的程序性細胞死亡蛋白1 (PD-1)受體。帕博利珠單抗 (pembrolizumab)於2014年在美國被核准用於醫療用途。2017年，美國食品和藥物管理局(FDA)核准其用於任何具有某些基因異常的不可切除或轉移性實體瘤。它被列入世界衛生組織的必需藥物清單。
納武利單抗 (nivolumab) (以商品名Opdivo™販售)是一種免疫檢查點抑制劑，用於治療多種癌症，包括黑色素瘤、肺癌、惡性胸膜間皮瘤、腎細胞癌、何杰金氏淋巴瘤、頭頸癌、尿路上皮癌、結腸癌、食道鱗狀細胞癌、肝癌、胃癌及食道或胃食道交界處(GEJ)。納武利單抗 (nivolumab)是一種人類IgG4單株抗體，可阻斷PD-1。納武利單抗 (nivolumab)於2014年在美國被核准用於醫療用途。它被列入世界衛生組織的必需藥物清單。納武利單抗 (nivolumab)是FDA核准的第二種用於間皮瘤的全身療法，也是首個FDA核准用於胃癌第一線治療的免疫療法。
阿替利珠單抗 (atezolizumab)(以商品名Tecentriq™販售)是一種單株抗體藥物，用於治療尿路上皮癌、非小細胞肺癌 (NSCLC)、三陰性乳癌 (TNBC)、小細胞肺癌 (SCLC)和肝細胞癌(HCC)。它是IgG1同種型的人源化單株抗體，靶向程序性細胞死亡配體1 (PD-L1)。阿替利珠單抗 (atezolizumab)是美國食品藥物管理局核准的第一個PD-L1抑制劑。
瑞替凡利單抗 (retifanlimab)(以前稱為MGA012)是一種人源化抗-PD-1單株抗體，正在開發用於單一療法以及與其他癌症療法組合使用。瑞替凡利單抗 (retifanlimab)正在進行臨床試驗(NCT04472429和NCT04205812)，作為微衛星不穩定性高的子宮內膜癌、默克爾細胞癌和肛管鱗狀細胞癌(SCAC)患者的單一療法；與鉑類化療組合治療非小細胞肺癌和SCAC患者。瑞替凡利單抗 (retifanlimab)已被FDA通過指定為治療肛門癌的孤兒藥資格，可每4週靜脈注射500 mg(500 mg q4w)投藥。
西米普利單抗 (cemiplimab)(以商品名Libtayo®出售)為一種單株抗體藥物，用於治療鱗狀細胞皮膚癌。西米普利單抗 (cemiplimab)屬於一類與程序性死亡受體-1 (PD-1)結合、阻斷PD-1/PD-L1路徑的藥物。2018年9月，它被FDA核准用於治療不適合治癒性手術或治癒性放射治療的轉移性皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)或局部晚期CSCC患者。它於2019年6月在歐盟獲准用於醫療用途。
多斯塔利單抗 (dostarlimab)(Jemperli)是一種PD-1阻斷抗體，適用於治療患有錯配修復缺陷 (dMMR)之復發性或晚期子宮內膜癌的成年患者，經FDA核准的測試測定，該患者在先前含鉑療法治療期間或之後出現進展。劑量和投藥包括1至4劑之500 mg，每三週一次(q3w)，之後在第四劑後三週(第五劑之前)開始，每六週一次1,000 mg。劑型和規格為單劑量小瓶中之500 mg/10 mL (50 mg/mL)注射溶液。
阿維魯單抗(avelumab)(或Bavencio®)為一種PD-L1阻斷抗體，適用於默克爾細胞癌、尿路上皮癌和腎細胞癌。其劑量和適應症包括前四次輸注的術前用藥以及隨後根據需要進行的用藥。阿維魯單抗(avelumab)用於治療默克爾細胞癌、尿路上皮癌，在本文中為每兩週800  mg(q2w)；每2週800 mg。視情況，阿維魯單抗(avelumab)以每兩週800 mg與阿西替尼 (axitinib)5 mg組合口服投與，每日兩次。阿維魯單抗(avelumab) 靜脈輸注投與，歷時60分鐘。劑型和規格為單劑量小瓶中之200 mg/10 mL (20 mg/mL)注射溶液。
派安普利單抗 (penpulimab)是Akeso Biopharma與Chia Tai Tianqing合作開發的人源化抗-PD-1單株抗體，用於治療多種癌症，包括何杰金氏淋巴瘤、鼻咽癌、非小細胞肺癌(NSCLC)和實體瘤。派安普利單抗 (penpulimab)是一種免疫球蛋白G1單株抗體，經改造完全消除Fcγ受體結合和Fc介導的效應子功能，這些功能可能會損害抗腫瘤活性。2021年8月，派安普利單抗 (penpulimab)在中國首次獲准用於治療至少接受過第二線化療的復發或難治性經典型何杰金氏淋巴瘤成人患者。派安普利單抗 (penpulimab)的建議劑量為每兩週一次200 mg靜脈注射 (200 mg q2w)，直至疾病進展或出現無法耐受的毒性。
信迪利單抗 (sintilimab) (Tyvyt®)是一種抗-PD-1、全長人類IgG4單株抗體，可與T細胞表面的PD-1結合，阻斷PD-1/PD-L1路徑，並重新活化T細胞以殺死癌細胞。信迪利單抗 (sintilimab)由Innovent Biologics和Eli Lilly公司開發，已被中國國家藥品監督管理局核准用於治療接受過兩線或以上之全身化療的復發或難治性典型何杰金氏淋巴瘤患者。其使用說明包括每三週一次靜脈注射200 mg (q3w)。
替雷利珠單抗(tislelizumab)是一種人源化IgG4抗PD-1單株抗體，既可以作為單一療法，也可以與其他療法組合開發。BLA提交基於第III期合理性302試驗的數據，該試驗顯示死亡風險降低了30% (HR=0.70，95% CI: 0.57-0.85，p=0.0001)，與先前接受過全身性治療的不可切除復發性局部晚期或轉移性食道鱗狀細胞癌患者的化療相較，總生存期中位數延長2.3個月。從第IA期和IB期獲得的藥物動力學、安全性和抗腫瘤活性，測定替雷利珠單抗(tislelizumab)每三週靜脈注射200 mg (200mg q3w)的建議劑量，以及從而建議後續臨床試驗採用的劑量和時間表。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑是全長抗體或抗體片段，例如Fab片段或單股可變片段(scFv)。在某些態樣中，根據本發明的用途或方法的免疫檢查點抑制劑是全長抗體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含選自納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)的抗體或其功能片段或變體。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含帕博利珠單抗 (pembrolizumab)或其功能片段或變體。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或由與下列之一者之抗原結合位點的胺基酸序列有或實質上有序列一致性之胺基酸序列組成：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含或由與下列之抗原結合位點的胺基酸序列有或實質上有序列一致性之胺基酸序列組成：帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。
特瑞普利單抗 (toripalimab) (或Tuoyi™)是Shanghai Junshi Bioscience Co., Ltd.開發的選擇性、重組、人源化PD-1單株抗體。特瑞普利單抗能夠與PD-1結合並阻斷其與配體的相互作用。特瑞普利單抗 (toripalimab)於2018年12月在中國獲得有條件核准用於治療黑色素瘤。2021年，其亦獲得治療鼻咽癌和尿路上皮癌的核准。此外，特瑞普利單抗 (toripalimab)亦獲得美國食品藥物管理局的數項孤兒藥資格認定。在首次人體第I期試驗NCT02836795中，建議的第II期劑量決定為3 mg/kg Q2W。在該試驗中，劑量遞增隊列的患者接受1 mg/kg、3 mg/kg 和10 mg/kg Q2W靜脈輸注；首次給藥後28天，個體繼續接受Q2W預期劑量水平的特瑞普利單抗 (toripalimab)。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含與納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)之一者，尤其是帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的CDR相同或實質上相同之至少一個、更佳至少二個，尤佳三個重鏈CDR。在某些實施例中，該PD-1或PD-L1抑制劑包含與帕博利珠單抗 (pembrolizumab)中發現的CDR相同的至少一個、更佳至少二個、尤佳三個CDR。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含一重鏈CDR1，其與來自以下之一者的CDR1相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)單抗和度伐魯單抗 (durvalumab)；一重鏈CDR2，其與來自以下之一者的CDR2相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)；或一重鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含一重鏈CDR1和一重鏈CDR2，其與來自以下之一者的CDR1和CDR2相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)；一重鏈CDR1和一重鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR1和CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)；一重鏈CDR2和一重鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR2和CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)。某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含一重鏈CDR1、一重鏈CDR2和一重鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR1、CDR2和CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)。某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含重鏈CDR1、CDR2和CDR3，其與來自以下的CDR1、CDR2和CDR3相同：帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。
用於決定或註解所指抗體的CDR序列的方法為本領域通常知識者已知，使用例如註解系統如IMGT、Chothia、Kabat或其他適當的註解系統。
在某些態樣中該免疫檢查點抑制劑為或包含至少一、更佳至少二、尤佳三個輕鏈CDR，其與來自以下之一者的CDR相同或實質上相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)，尤其是帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。在某些實施例中，該PD-1或PD-L1抑制劑包含與帕博利珠單抗 (pembrolizumab)中發現的CDR相同的至少一、更佳至少二、尤佳三個CDR。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含一輕鏈CDR1，其與來自以下之一者的CDR1相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)單抗和度伐魯單抗 (durvalumab)；一輕鏈CDR2，其與來自以下之一者的CDR2相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)單抗和度伐魯單抗 (durvalumab)；或一輕鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)單抗和度伐魯單抗 (durvalumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含一輕鏈CDR1和一輕鏈CDR2，其與來自以下之一者的CDR1和CDR2相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)；一輕鏈CDR1和一輕鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR1和CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)；或一輕鏈CDR2和一輕鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR2和CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為或包含一輕鏈CDR1、一輕鏈CDR2和一輕鏈CDR3，其與來自以下之一者的CDR1、CDR2和CDR3相同：納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab)和度伐魯單抗 (durvalumab)。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑包含一輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3，其與來自以下的CDR1、CDR2和CDR3相同：帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑係根據FDA核准的當前建議進行投與。所述建議通常包含在治療個體癌症的使用說明中。因此，在某些態樣中，本發明相關於所述免疫檢查點抑制劑的使用說明。 本發明之癌症
除非另有明確說明，本文所使用的字詞「癌症」和「腫瘤」通常均指癌症。
統稱為頭頸癌的癌症通常起源於頭部和頸部內部 (例如口腔、鼻子和喉嚨內部)的潮濕黏膜表面的鱗狀細胞。這些鱗狀細胞癌通常被稱為頭頸鱗狀細胞癌，且所述癌症在本發明的某些態樣中待治療。儘管罕見，頭頸癌亦可能發生在唾腺中。在某些態樣中，頭頸癌可能發生在口腔中。這包括嘴唇、舌頭前端三分之二、牙齦、臉頰和嘴唇內襯、舌頭下方的口腔底部、硬腭以及智齒後面的牙齦的小區域。
因此，在某些態樣中，頭頸癌是鱗狀細胞癌並包括喉癌、下咽癌、鼻腔癌、副鼻竇癌、口腔癌、口咽癌或唾腺癌。在某些態樣中，本發明相關於癌症的治療，所述癌症包括鱗狀細胞頭頸癌，例如位於口咽、下咽、喉、口腔或舌頭。
在某些態樣中，該癌症包含或為腺癌、鱗狀細胞癌或頭頸癌，包括頭頸鱗狀細胞癌 (SCCHN)。
在某些態樣中，該癌症為頭頸鱗狀細胞癌。在某些態樣中，該癌症為表現EGFR和PD-L1的頭頸鱗狀細胞癌。在某些態樣中，該癌症為表現EGFR和PD-L1的鱗狀細胞癌。
在某些態樣中，該癌症為咽癌，包括口咽和下咽、口腔、喉、副鼻竇、鼻腔或唾腺的癌症。
在某些態樣中，該癌症為口咽、口腔、下嚥或喉的癌症。
在某些態樣中，該癌症的主要位置是口咽、口腔、下咽或喉部。在某些態樣中，該頭頸癌為未知的原發性鱗狀細胞癌 (在本領域中也稱為未知的原發性癌症或CUP)。
在某些態樣中，該癌症為局部晚期、不可切除或轉移性癌症，例如頭頸鱗狀細胞癌。 本發明的標靶在癌症中的表現
在某些態樣中，該癌症表現EGFR、LGR5及/或PD-L1。在某些態樣中，該癌症表現EGFR。在某些態樣中，該癌症表現LGR5。在某些態樣中，該癌症表現PD-L1。在某些態樣中，該癌症表現EGFR和PD-L1。在某些態樣中，該癌症表現EGFR、LGR5和PD-L1。
如本文所用，若癌症包含表現EGFR的細胞，則癌症表現EGFR。表現EGFR的細胞包含可偵測水平之編碼EGFR的RNA。在某些態樣中，EGFR的表現以ISH測定。如本文所用，如果該癌症包含表現LGR5的細胞，則該癌症表現LGR5。表現LGR5的細胞包含可偵測水平之編碼LGR5的RNA。
在某些態樣中，EGFR蛋白表現係藉由IHC檢測。在某些態樣中，藉由IHC測定EGFR表現，使用市售EGFR檢測套組，例如用於Dako自動染色機(Agilent)的EGFR pharmDx™套組，使用製造商的建議，或基於EGFR殖株113 (其結合EGFR胞外域)的市售IHC EGFR檢測套組 (Leica, https://shop.leicabiosystems.com/us/ihc-ish/ihc-primary-antibodies/pid-epidermal-growth-factor-receptor)。或者，使用基於殖株EGFR.113的Novocastra TM液體小鼠單株抗體表皮生長因子受體 (產品代碼：NCL-L-EGFR，表皮生長因子受體-IHC一級抗體，來自leicabiosystems.com)測定EGFR的表現。
簡而言之，市售的EGFR pharmDx™ IHC套組系統包含完成常規固定石蠟包埋標本的IHC染色程序所需的試劑。在與人類EGFR蛋白之初代、非Her2、Her3和Her4交叉反應單株抗體 (殖株2-18C9)一起靜置後，此套組採用基於葡聚醣技術的即用型可視化試劑。此試劑由二級山羊抗-小鼠抗體分子和綴合至共同葡聚醣聚合物主鏈的辣根過氧化物酶分子組成。隨後添加的色素原進行酵素轉化，在抗原位點形成可見的反應產物。通常使用光學顯微鏡評估結果。對照玻片包含兩種經福馬林固定、石蠟包埋的人類細胞株，染色強度評分為2+和0，用於套組試劑表現度的品質控制。
染色強度建立如下：3+ (強染色)：在低倍放大倍率、x5物鏡下可見，可根據需要在更高水平下確認；2+ (中度染色)：在中等放大倍率、x10或x20物鏡下可見；1+ (弱染色)：僅在高放大倍率、x40物鏡下才能可靠確認；0 (無染色)：在高放大倍率下沒有可見染色。
在某些態樣中，使用免疫組織化學 (IHC)測定EGFR的表現，且癌症對於EGFR為IHC陽性。在某些態樣中，該癌症的特徵為EGFRIHC分數為2+或3+。在某些態樣中，該癌症的特徵為EGFR的H分數大於50、大於80或大於200，但不大於300。
在某些態樣中，使用免疫組織化學(IHC)測定EGFR的表現，之後使用0-300的範圍指定EGFR的H分數。在某些態樣中，本發明的癌症特徵為EGFR的H分數在0-300的範圍內大於200。在某些態樣中，EGFR的H分數因此＞200，最多並包括300。在某些態樣中，本發明的癌症特徵為EGFR的H評分在0-300的範圍內大於50。在某些態樣中，本發明的癌症為頭​​頸癌，其特徵為EGFR的H分數在0-300的範圍內大於50。在某些態樣中，本發明的癌症特徵為EGFR的H評分在0-300的範圍內大於80。在某些態樣中，本發明的癌症為頭​​頸癌，其特徵為EGFR的H分數在0-300的範圍內大於80。
在另一態樣中，該癌症為頭頸癌，其特徵為EGFRIHC分數為2+或3+。
於此，決定H分數以指定EGFR表現狀態涉及建立膜染色強度的第一步 (結果評分為0、1+、2+或3+)，該強度是針對本文預定義領域內的每一細胞測定。隨後，計算每一染色強度等級的細胞百分比，最後使用以下公式分配H分數：[1 × (具有1+染色的細胞%) + 2 × (具有2+染色的細胞%) + 3 × (具有3+染色的細胞%)]，得EGFR的H分數，範圍在0-300之間。因此，H分數對給定腫瘤樣本中較高的染色強度或染色量賦予更大的相對權重。
視情況，以抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的治療包含 (或在某些態樣中在其之前有)診斷個體的EGFR狀態的步驟。在某些態樣中，選擇IHC評分為3+的個體或所述癌症特徵為EGFR的H分數在0-300的範圍內大於200，進行治療。在某些態樣中，在治療個體之前進行診斷所述個體的EGFR之H分數在0-300的範圍內大於200之步驟。
在某些態樣中，該癌症表現LGR5。如本文所用，如果該癌症包含表現LGR5的細胞，則癌症表現LGR5。表現LGR5的細胞包含可偵測水平之碼LGR5的RNA。
通常也可以將細胞與結合至LGR5的抗體一起靜置來檢測表現。然而，有些細胞的蛋白質表現量不足以進行此類抗體測試。在這種情況下，較佳以mRNA或其他形式的核酸序列檢測。在某些態樣中，LGR5透過mRNA表現來檢測。在某些態樣中，LGR5檢測是藉由RNA定序進行的。在某些態樣中，LGR5檢測是藉由組織微陣列(TMA)染色進行的。在某些態樣中，LGR5表現是使用原位雜交(ISH)測定。因此，較佳地，該癌症對於LGR5呈ISH陽性。ISH陽性較佳意指該表現的特徵為H分數為1或更高。
基於TMA、ISH和IHC的檢測和評分技術均是本領域通常知識者眾所周知的，且通常可以標準套組商購獲得。例如用於LGR5，係使用ISH定量mRNA水平並以H分數為基礎表示，可使用市售套組進行，例如Advanced Cell Diagnostics (Hayward, CA, USA)的RNAscope®套組，在染色平台例如BondRx平台 (Leica, Wetzlar, Germany)上進行。通常，用於LGR5定量的ISH H分數範圍為0-400。或者，LGR5表現藉由RNA定序 (RNAseq)測定。
在某些態樣中，該癌症以足以使抗體結合至LGR5蛋白的水平表現LGR5，例如包含結合LGR5的可變域之VH鏈的抗體，所述可變域包含如圖3描述之MF5816的VH鏈的胺基酸序列，或本文列出的結合LGR5的另一可變域。在某些態樣中，該癌症以足以使抗體結合至EGFR蛋白的水平表現EGFR，例如包含結合EGFR的可變域之VH鏈的抗體，所述可變域包含如圖3描述之MF3755的VH鏈的胺基酸序列，或本文列出的結合EGFR的另一可變域。
在某些態樣中，該癌症表現PD-L1。在某些態樣中，PD-L1蛋白表現係藉由IHC檢測。在某些態樣中，從所述個體獲得的樣本進行綜合陽性評分(CPS)評分。在某些態樣中，CPS由FDA核准的測試決定。在某些態樣中，使用IHC，特別是使用殖株22C3 (Agilent)來測定CPS。在某些態樣中，使用pharmDx PD-L1 IHC套組，使用殖株22C3測定CPS。在某些態樣中，根據實例4決定綜合陽性評分。在某些態樣中，使用市售的PD-L1檢測套組測定PD-L1的表現，例如PD-L1 IHC 22C3 pharmDx™測定 (Agilent Technologies, Carpinteria, CA, USA)，用於Dako自動染色儀，使用製造商的建議。
在某些態樣中，該癌症的PD-L1表現的CPS為1或更多，但不超過100。本文中的CPS是PD-L1染色細胞 (腫瘤細胞、淋巴球、巨噬細胞)的數量除以存活腫瘤細胞的總數，再乘以100。雖然計算結果可以超過100，但是最大分數被定義為CPS 100。在某些態樣中，CPS是使用IHC判定。在某些態樣中，CPS使用殖株22C3藉由IHC測定。在某些態樣中，所述癌症具有≧1和＜20之間的CPS評分。在某些態樣中，所述癌症具有≧20至100的CPS評分。在某些態樣中，所述個體之p16狀態呈陽性，如同從個體或癌症獲得的樣本測定所示，特別是在口咽癌的情況下，如下文所述。在某些態樣中，所述個體之p16狀態呈陰性，如同從個體或癌症獲得的樣本測定所示，特別是在的頭頸癌 (口咽癌除外)的情況下。
在某些態樣中，CPS使用殖株22C3藉由IHC測定。在某些態樣中，使用PD-L1 IHC 22C3藉由IHC檢測PD-L1蛋白表現，PD-L1 IHC 22C3是使用單株小鼠抗-PD-L1殖株22C3的定性免疫組織化學測定法，旨在使用Autostainer Link 48上的EnVision FLEX可視化系統而用於檢測經福馬林固定、石蠟包埋 (FFPE)的癌症組織中之PD-L1蛋白。
簡而言之，PD-L1 IHC 22C3 pharmDx套組包括免疫組織化學染色所需的試劑 (洗滌緩衝液除外)、代表PD-L1蛋白不同表現量的對照玻片，以及詳細說明。該套組專為在Autostainer Link 48儀器上使用而定制。PD-L1 IHC 22C3 pharmDx包含使用Autostainer Link 48和PT link預處理模組完成FFPE檢體之IHC染色程序所需的最佳化試劑和流程。與PD-L1的一級單株抗體或陰性對照試劑一起靜置後，將樣本與特異於該一級抗體之宿主物種的連接子抗體一起靜置，之後與由二級抗體分子和綴合至共同葡聚醣聚合物主鏈的辣根過氧化物酶分子組成的即用型可視化試劑一起靜置。隨後添加的色素原之酵素轉化產生可見反應產物在抗原位點沉澱。顯色反應的顏色由色素原增強試劑修飾。之後可將樣本複染並蓋上蓋玻片。使用光學顯微鏡解釋結果。提供包含兩個FFPE人類細胞株的對照玻片來驗證染色運作。
在某些態樣中，CPS使用殖株28-8以IHC測定。在某些態樣中，使用PD-L1 IHC 28-8藉由IHC檢測PD-L1蛋白表現，PD-L1 IHC 28-8是使用單株兔抗-PD-L1殖株28-8的定性免疫組織化學測定法，旨在使用Autostainer Link 48上的EnVision FLEX可視化系統而用於檢測經福馬林固定、石蠟包埋 (FFPE)的頭頸鱗狀細胞癌 (SCCHN) 組織中之PD-L1蛋白。
在某些態樣中，測試從患有本發明癌症的個體獲得的樣本之PD-L1 CPS分數並測試p16狀態。本文的相關CPS分數在≧1和100之間，或在≧1和＜20之間，或CPS分數在≧20和100之間。相關p16狀態結果為p16陽性或陰性。
因此，在某些態樣中，患有依本發明的方法或用途進行治療的癌症之個體具有≧1至100的CPS分數，且p16狀態呈陽性。
或者，在某些態樣中，患有依本發明的方法或用途進行治療的癌症之個體具有≧1至100之間的CPS分數，且p16狀態為陰性。
或者，在某些態樣中，患有依本發明的方法或用途進行治療的癌症之個體具有≧1及＜20的CPS分數，且p16狀態呈陽性。
或者，在某些態樣中，患有依本發明的方法或用途進行治療的癌症之個體具有≧1和＜20之間的CPS分數，且p16狀態為陰性。
或者，在某些態樣中，患有依本發明的方法或用途進行治療的癌症之個體具有≧20和100之間的CPS分數，且p16狀態為陽性。
或者，在某些態樣中，患有依本發明的方法或用途進行治療的癌症之個體具有≧20和100之間的CPS分數，且p16狀態為陰性。
視情況，以抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及所述免疫檢查點抑制劑的治療包含一診斷個體的PD-L1狀態的步驟。在某些態樣中，在治療之前有一所述診斷PD-L1狀態的步驟。在某些態樣中，選擇CPS分數為至少1且不超過100之患有頭頸癌的個體進行治療。在某些態樣中，在治療個體之前進行診斷所述個體具有1至100之間的PD-L1的CPS分數之步驟。在某些態樣中，所述個體的PD-L1狀態被診斷為CPS分數界於≧1和＜20之間或界於≧20和100之間。此外，在用抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及所述免疫檢查點抑制劑治療之前，視情況有一診斷個體的p16狀態之步驟。所述個體可被測定或診斷為p16陽性或陰性。
在某些態樣中，本發明提供一種診斷患有頭頸癌的個體並選定所述個體以本發明之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及本發明之免疫檢查點抑制劑進行治療的方法，包含決定 (從個體或癌症獲得的樣本中之) PD-L1的CPS分數的步驟，如果所述CPS分數為1或更高，視情況不超過100，則選定所述個體進行所述治療，並治療所述個體之所述癌症。在某些態樣中，如果建立CPS分數≧1至＜20之間，則選定所述個體進行治療。在某些態樣中，如果建立CPS分數≧20至100之間，則選定所述個體進行治療。此外，診斷和選定個體視情況包含決定從個體或癌症獲得的樣本之p16狀態的步驟，且如果所述p16狀態為陽性，特別是在口咽癌的情況下，則選定所述個體進行治療。此外，診斷和選定個體視情況包含決定從個體或癌症獲得的樣本之p16狀態的步驟，且如果所述p16狀態為陰性，特別是在頭頸癌 (口咽癌除外)的情況下，則選定所述個體進行治療。
亦提供一種選定患有頭頸癌的個體進行以本文揭示之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和本文揭示之免疫檢查點抑制劑治療之方法，該方法包含：a) 決定從該個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS為1或更高，但視情況不超過100，則選定該個體進行所述治療。在某些態樣中，所述個體的CPS分數界於≧1和＜20之間並被選定進行治療，或選定CPS分數界於≧20至100者進行治療。此外，所述方法可視情況包含決定從個體或癌症獲得的樣本的p16狀態之進一步步驟，且如果所述p16狀態為陽性，特別是在口咽癌的情況下，則選定所述個體進行治療。此外，所述方法可視情況包含決定從個體或癌症獲得的樣本的p16狀態之進一步步驟，且如果所述p16狀態為陰性，特別是在頭頸癌 (口咽癌除外)的情況下，則選定所述個體進行治療。
亦提供一種建立確定患有頭頸癌的個體是否可能對以本文揭示之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和本文揭示之免疫檢查點抑制劑之治療有反應之方法，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS為1或更高，但視情況不超過100，則建立該樣本來源的個體可能對所述治療有反應。在某些態樣中，所述個體的CPS分數界於≧1和＜20之間，則建立該個體可能對所述治療有反應。在某些態樣中，所述個體的CPS分數界於≧20至100，則建立所述個體可能對所述治療有反應。此外，所述方法可視情況包含決定從個體或癌症獲得的樣本的p16狀態之進一步步驟。在某些態樣中，所述個體之p16狀態為陽性，特別是在口咽癌的情況下，則建立該個體可能對所述治療有反應。在某些態樣中，所述個體之p16狀態為陰性，特別是在頭頸癌 (口咽癌除外)的情況下，則建立所述個體可能對所述治療有反應。
亦提供一種在用本文揭示之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及本文揭示的免疫檢查點抑制劑治療之前，根據PD-L1表現的綜合陽性評分對患有頭頸癌的個體進行分類的方法，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS為1或更高，但視情況不超過100，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。在某些態樣中，在步驟b)中，所述個體的PD-L1表現的CPS分數界於≧1和＜20之間，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。在某些態樣中，在步驟b)中，若所述個體的PD-L1表現的CPS分數界於≧20至100，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。此外，所述方法可視情況包含決定從個體或癌症獲得的樣本的p16狀態之進一步步驟。在某些態樣中，所述個體之p16狀態為陽性，特別是在口咽癌的情況下，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。在某些態樣中，所述個體之p16狀態為陰性，特別是在頭頸癌 (口咽癌除外)的情況下，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。
在某些態樣中，該綜合陽性評分由FDA核准的測試決定。在某些態樣中，使用IHC，特別是使用殖株22C3來決定綜合陽性評分。
在某些態樣中，CPS是經組織學證實的具有1或更大、視情況不超過100的數值的CPS，其中CPS定義為PD-L1陽性腫瘤細胞、淋巴細胞和巨噬細胞的數量除以腫瘤細胞的總數，再乘以100。
在某些態樣中，本發明的個體具有PD-L1 CPS分數 ≧1且＜20。在某些態樣中，本發明的個體具有PD-L1 CPS分數 ≧20但不超過例如100。
p16 (INK4a，細胞週期蛋白依賴性激酶抑制劑2A (CDKN2A)) 通常作為HPV狀態的標記物。在某些態樣中，p16狀態是藉由免疫組織化學 (IHC)測定。在某些態樣中，p16 IHC狀態的測試是基於遵循CAP指南2018的頭頸癌之p16/HPV測試。p16狀態的IHC測試可根據製造商的說明使用任何市售的測試進行。範例包括市售檢測套組，例如基於殖株E6H4 (CINtec® Histology, Roche Diagnostics)或抗-p16一級抗體6H12 (例如目錄號：PA0016，Leica Biosystems)的IHC檢測。
在某些態樣中，p16狀態的測試遵循CAP指南2018 (Lewis等人, Human Papillomavirus Testing in Head and Neck Carcinomas; Guideline From the College of American Pathologists, Arch Pathol Lab Med, Vol 142, May 2018)。在某些態樣中，遵循所述指南的聲明8，該聲明陳述，當至少70%的細胞核和細胞質表現具有至少中度至強度時，病理學家應報告p16 IHC陽性作為組織樣本中高風險HPV的代表。在某些態樣中，對從患有口咽癌的個體獲得的樣本或對口咽癌/腫瘤樣本進行p16測試。在某些態樣中，p16狀態的測試係根據實例6進行。 先前治療
在某些態樣中，該個體之前沒有接受過用於治療所述癌症的抗癌治療。
在某些態樣中，該個體先前未接受過抗PD-L1、抗PD-1或抗EGFR療法的治療。本發明的治療對於尚未接受任何先前抗癌治療的個體群組特別有效。而且，將未接受治療的癌症暴露於本發明的治療也是特別有效的。涉及先前未接受過抗癌治療的個體或癌症的治療也稱為第一線治療。因此，在某些態樣中，本發明的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑係使用作為第一線治療。
在某些態樣中，在接受所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及所述免疫檢查點抑制劑之前至少六個月，該個體尚未接受過用於治療所述癌症的先前抗癌治療。
在某些態樣中，所述先前的抗癌治療包括化療、免疫療法、抗EGFR試劑、靶向EGFR的抗體、西妥昔單抗(cetuximab)、PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。
在某些態樣中，該個體先前未曾用抗EGFR試劑治療。在某些態樣中，該個體尚未以靶向EGFR的抗體治療。在某些態樣中，該個體尚未使用西妥昔單抗(cetuximab)治療。這樣的個體也稱為未接觸過西妥昔單抗或未接觸過抗EGFR的個體。換句話說，所述個體的癌症先前未曾用任何抗癌試劑例如抗EGFR試劑治療。在某些態樣中，所述個體的癌症尚未使用靶向EGFR的抗體治療。在某些態樣中，所述個體的癌症尚未使用西妥昔單抗(cetuximab)治療。這樣的個體也稱為未接觸過西妥昔單抗(cetuximab)或未接觸過抗EGFR的個體。
在某些態樣中，本發明的個體尚未接受過抗癌免疫療法的先前治療。在某些態樣中，所述免疫療法包含抗PD-L1或抗PD-1治療，包括帕博利珠單抗(pembrolizumab)、納武利單抗 (nivolumab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、瑞替凡利單抗 (retifanlimab)、西米普利單抗 (cemiplimab)，或其他已核准或正在開發的抗PD1、抗PD-L1抗體。在某些態樣中，該抗癌免疫療法包含免疫檢查點抑制劑，包括先前的帕博利珠單抗 (pembrolizumab)治療。
在某些態樣中，本發明的個體在接受所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及所述免疫檢查點抑制劑之前，至少六個月尚未接受過用於治療所述癌症的先前抗癌治療。在某些態樣中，所述個體在接受所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和所述免疫檢查點抑制劑治療之前六個月以上，已接受多模式治療，其包含手術、放療及/或含鉑化療，例如順鉑。在某些態樣中，所述個體接受所述多模式治療以治療可治癒的局部疾病。 本發明之結合EGFR 和視情況LGR5 的抗體或其功能部分、衍生物及/ 或類似物
在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含結合EGFR胞外部分的可變域。本文進一步描述此類可變域。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物更包含結合LGR5的胞外部分的可變域。本文進一步描述此類可變域。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含結合EGFR胞外部分的可變域和結合LGR5胞外部分的可變域。
在某些態樣中，該抗體或其功能性部分、衍生物及/或類似物包含或為多特異性抗體。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含或為雙特異性抗體。
在某些態樣中，本文所揭示的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為多特異性抗體。在某些態樣中，所述抗體為雙特異性抗體。在某些態樣中，所述多特異性或雙特異性抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含結合表皮生長因子(EGF)受體的胞外部分的可變域與在某些態樣中不結合EGFR的可變域。在某些態樣中，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物單價結合EGFR。此外，在某些態樣中，所述多特異性或雙特異性抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含結合LGR5的可變域。
在某些態樣中，該EGFR為人類EGFR。被本發明的所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物結合的EGFR包括野生型EGFR以及具有致癌驅動突變的EGFR。在某些態樣中，所述致癌驅動突變為一活化EGFR突變。在某些態樣中，此類突變不會在構形上改變被本發明抗體結合之表位。在某些態樣中，本發明的EGFR突變包括突變，例如外顯子18上之突變，包括G719A、G719C、2E709_T710D、E709A、G719S；外顯子19上之缺失突變，包括LREA或VAIKEL的缺失；外顯子19上之點突變G735S、P753L、L747S、D761Y；外顯子20上之框內1-7個胺基酸插入突變、外顯子20上之點突變，包括V765A、T783A、V774A、S784P、V769M、T790M；外顯子21上之突變，包括L858R、T854A、A871E、L861A、L861C、L861S、V843I或P848L。本發明的抗體與不緊鄰所述突變的表位結合。特別是，EGFR上之突變為S492R，此導致西妥昔單抗與EGFR的結合喪失。本發明之抗體結合至與西妥昔單抗 (Cetuximab)辨識的表位不同的表位。不受任何理論的束縛，一般相信如圖2所示之胺基酸殘基I462；G465；K489；I491；N493；和C499涉及本發明的抗體結合之表位。在某些態樣中，藉由觀察該可變域與具有選自以下的一或多個胺基酸殘基取代的EGFR之結合降低來確定有參與結合：I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；和C499A。在某些態樣中，使用霰彈槍突變分析建立EGFR以及LGR5的表位結合。
在一態樣中，該結合人類EGFR胞外部分上的表位之可變域是結合位於圖2所示序列的胺基酸殘基420-480內者。在某些態樣中，該可變域與EGFR之結合藉由一或多個以下胺基酸殘基取代而降低：EGFR中的I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；和C499A。在某些態樣中，該抗體與人類EGFR的結合係干擾EGF與受體的結合。在某些態樣中，EGFR上的表位是構形表位。在一態樣中，該表位係位於圖2所示序列的胺基酸殘基420-480內，或430-480內。在某些態樣中，所述表位係位於圖2所示序列的438-469內。
不受理論的束縛，一般相信表位的接觸殘基，即可變域接觸人類EGFR之處可能為I462；K489；I491；和N493。胺基酸殘基G465和C499可能間接參與抗體與EGFR的結合。
在某些態樣中，該可變域結合LGR5。在某些態樣中，該LGR5為人類LGR5。本文所述的多特異性或雙特異性抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含結合人類表皮生長因子(EGF)受體的胞外部分的可變域與在某些態樣中結合LGR5的可變域。。
在某些態樣中，本文所述的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含一結合表皮生長因子(EGF)受體的胞外部分並干擾EGF與受體的結合之可變域、以及一結合LGR5的可變域，其中該抗體與表現LGR5的細胞上之LGR5的交互作用不會阻斷Rspondin (RSPO)與LGR5的結合。用於決定抗體是否阻斷或不阻斷Rspondin與LGR5結合的方法描述於WO2017069528中，其經由引用併入本文。
當本文給出蛋白質/基因的登錄號或替代名稱時，它們主要是為了提供辨識作為標靶的提及蛋白質的進一步方法，由本發明的抗體結合的標靶蛋白的實際序列可變化，例如，由於編碼基因中的突變及/或選擇性剪接，例如在一些癌症或類似病症中發生者。只要標靶蛋白中存在表位且抗體可接近該表位，則該蛋白質就會被抗體結合。
在某些態樣中，本文所述的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物干擾EGFR的配體與EGFR的結合。本文所使用的術語「干擾結合」是指抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物與EGFR的結合係與配體與EGF受體的結合競爭。當配體已與EGF受體結合時，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物可降低配體結合、置換配體，或者它可例如經由空間位阻至少部分地阻止配體與EGF受體結合。
在某些態樣中，本文所揭示的EGFR抗體分別抑制EGFR配體誘發的訊息傳遞，其係以配體誘發的BxPC3細胞 (ATCC CRL-1687)或BxPC3-luc2細胞 (Perkin Elmer 125058)的生長或配體誘發的A431 (ATCC CRL-1555)細胞死亡而測量。EGFR可結合多種配體並刺激上述BxPC3細胞或BxPC3-luc2細胞的生長。當EGFR配體存在時，BxPC3或BxPC3-luc2細胞的生長受到刺激。EGFR配體誘發的BxPC3細胞生長可藉由比較不存在和存在配體時細胞的生長來測量。用於測量EGFR配體誘發的BxPC3或BxPC3-luc2細胞生長的較佳EGFR配體為EGF。在某些態樣中，使用飽和量的配體測量配體誘發的生長。在某些態樣中，EGF以100 ng/ml培養基的量使用。在某些態樣中，所述EGF為R&D系統之EGF，目錄編號：396-HB和236-EG (亦請參見WO2017/069628；其經引用併入本文)。
在某些態樣中，本文所揭示的EGFR抗體抑制EGFR配體誘發的BxPC3 細胞 (ATCC CRL-1687)或BxPC3-luc2細胞 (Perkin Elmer 125058)的生長。EGFR可結合多種配體並刺激上述BxPC3細胞或BxPC3-luc2細胞的生長。當配體存在時，BxPC3或BxPC3-luc2細胞的生長受到刺激。EGFR配體誘發的BxPC3細胞生長可藉由比較不存在和存在配體時細胞的生長來測量。在某些態樣中，用於測量EGFR配體誘發的BxPC3或BxPC3-luc2細胞生長的較佳EGFR配體為EGF。在某些態樣中，使用飽和量的配體測量配體誘發的生長。在某些態樣中，EGF以100 ng/ml培養基的量使用。在某些態樣中，EGF為R&D系統之EGF，目錄編號：396-HB和236-EG (亦請參見WO2017/069628；其經引用併入本文)。
為了避免疑問，本文所使用的細胞生長是指細胞數量的變化。生長的抑制是指本來可獲得的細胞數量的減少。生長的增加是指本來可獲得的細胞數量的增加。細胞的生長通常是指細胞的增生。
在某些態樣中，本文所述的抗體是否以多特異性形式抑制訊息傳遞或抑制生長，係藉由本文上述的方法使用單特異性單價或單特異性二價形式的抗體來決定。在某些態樣中，此類抗體具有待決定之訊息傳遞受體之結合位點。單特異性單價抗體可具有不相關結合特異性 (例如破傷風類毒素特異性)的可變域。在某些態樣中，所述抗體為二價單特異性抗體，其中該抗原結合可變域由結合EGF受體家族成員的可變域組成。
在Biclonics®抗體計畫中，Merus開發出靶向EGFR和LGR5 (富含白胺酸重複之G蛋白偶聯受體)的多特異性抗體。已分別使用源自患者的CRC類器官和小鼠PDX模型，在體外和體內評估此類多特異性抗體的功效 (請參見例如WO2017/069628；其經由引用併入本文)。靶向EGFR和LGR5的多特異性抗體已被證實可抑制腫瘤生長。研究表明，此種抑制性抗體的效力與癌細胞的LGR5 RNA表現水平有關。在某些態樣中，所述靶向EGFR和LGR5的多特異性抗體係描述於WO2017/069628。
本文所述的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含一結合LGR5胞外部分的可變域。在某些態樣中，該結合LGR5胞外部分的可變域係結合位於圖1之序列的胺基酸殘基21-118內的表位，其中胺基酸殘基D43；G44、M46、F67、R90、和F91參與抗體與表位的結合。
在某些態樣中，該LGR5可變域為其中有如下之一或多個胺基酸殘基取代之可變域：LGR5中之D43A；G44A、M46A、F67A、R90A、和F91A，其降低該可變域與LGR5的結合。
在某些態樣中，LGR5的胞外部分上的表位係位於圖1之序列的胺基酸殘基21-118內。在某些態樣中，該表位為其中LGR5可變域與LGR5之結合被以下之一或多個胺基酸殘基取代降低之表位：LGR5中之D43A；G44A、M46A、F67A、R90A、和F91A。
本發明亦提供一種具有結合EGFR胞外部分的可變域和結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其中該LGR5可變域結合LGR5上的表位，該表位係位於圖1所示序列之胺基酸殘基21-118內。
在某些態樣中，LGR5上的表位是構形表位。在某些態樣中，該表位係位於圖1序列的胺基酸殘基40-95內。在某些態樣中，該抗體與LGR5之結合被以下之一或多個胺基酸殘基取代降低：D43A；G44A、M46A、F67A、R90A、和F91A。
不受理論的束縛，一般相信如圖1所示的LGR5的M46、F67、R90和F91是上文指出的可變域之接觸殘基，即結合LGR5表位之可變域的抗原結合位點。該胺基酸殘基取代D43A和G44A會降低與抗體之結合，可能是因為它們也是接觸殘基，然而，這些胺基酸殘基取代也可能誘導LGR5的一部分構形(輕微)改變，該LGR5的一部分具有一或多個其他接觸殘基 (即在位置46、67、90或91)且該構形變化使得抗體結合降低。該表位的特徵在於所提及的胺基酸取代。抗體是否結合相同的表位可藉由多種方式確定。在一示範方法中，CHO細胞在細胞膜上表現LGR5，或其丙胺酸取代突變體例如包含取代M46A、F67A、R90A或F91A之一或多者的突變體。將測試抗體與CHO細胞接觸並比較抗體與細胞的結合。如果測試抗體與LGR5結合，且與具有M46A、F67A、R90A或F91A取代的LGR5之結合程度較低，則判定該測試抗體結合至表位。較佳比較與各自包含一個丙胺酸殘基取代的一組突變體的結合。此類結合研究是本領域眾所周知的。通常該組包含覆蓋基本上所有胺基酸殘基的單一丙胺酸取代突變體。對於LGR5，此組僅需要覆蓋該蛋白質的細胞外部分以及想當然爾在使用細胞時保證與細胞膜結合的部分。特定突變體的表現可能會受到損害，但這可藉由結合至不同區域之一或多種LGR5抗體輕易偵測。如果這些對照抗體的表現也降低，則該特定突變體的膜上蛋白質的水平或折疊會受到損害。測試抗體與該組的結合特徵可容易地辨識出該測試抗體是否表現出與具有M46A、F67A、R90A或F91A取代的突變體的結合降低，並因此辨識出該測試抗體是否為本發明的抗體。與具有M46A、F67A、R90A或F91A取代的突變體的結合降低也辨識出位於圖1序列的胺基酸殘基21-118內的表位。在某些態樣中，該組包括D43A取代突變體；兩者的G44A取代突變體。具有MF5816之VH的VH序列的抗體表現出與這些取代突變體的結合降低。
不受任何理論的束縛，一般相信圖2所示之胺基酸殘基I462；G465；K489；I491；N493；及C499涉及包含上述可變域的抗體與表位之結合。在某些態樣中，藉由觀察可變域與具有選自以下的一或多個胺基酸殘基取代的EGFR之結合降低來確定其參與結合：I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；及C499A。在示範性方法中，CHO細胞在細胞膜上表現EGFR，或其丙胺酸取代突變體，例如包含取代I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；及C499A之一或多者的突變體。將測試抗體與CHO細胞接觸並比較抗體與該細胞的結合。如果測試抗體與EGFR結合，且與具有I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；及C499A取代的EGFR結合程度較低，則判定該測試抗體結合至該表位。較佳比較與各自包含一個丙胺酸殘基取代的一組突變體之結合。此類結合研究是本領域眾所周知的。通常該組包含覆蓋基本上所有胺基酸殘基的單一丙胺酸取代突變體。對於EGFR，此組僅需要覆蓋該蛋白質的細胞外部分以及想當然爾在使用細胞時保證與細胞膜結合的部分。特定突變體的表現可能會受到損害，但這可藉由結合至不同區域之一或多種EGFR抗體輕易偵測。如果這些對照抗體的表現也降低，則此特定突變體的膜上蛋白質的水平或折疊會受到損害。測試抗體與該組的結合特徵可容易地辨識出該測試抗體是否表現出與具有I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；及C499A取代的突變體的結合降低。
在一態樣中，該結合人類EGFR胞外部分上的表位之可變域為結合如圖2所示序列的胺基酸殘基420-480內的表位的可變域。在某些態樣中，該可變域與EGFR之結合係藉由以下胺基酸殘基取代之一或多者降低：EGFR中之I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；及C499A。在某些態樣中，該抗體與人類EGFR的結合干擾EGF與受體的結合。在某些態樣中，EGFR上的表位是構形表位。在一態樣中，該表位係位於圖2所示序列的胺基酸殘基420-480內，例如圖2所示序列的430-480內。在某些態樣中，所述表位係位於圖2所示序列的438-469內。
不受理論的束縛，一般相信表位的接觸殘基，即該可變域接觸人類EGFR之位點為I462；K489；I491；和N493。胺基酸殘基G465和C499可能間接參與該抗體與EGFR的結合。
在某些態樣中，該結合人類EGFR的可變域是具有重鏈可變區的可變域，此重鏈可變區至少包含如圖3所示的MF3755的VH之CDR3序列，或與如圖3所示的MF3755的VH之CDR3序列有最多三個或最多兩個或不超過一個胺基酸不同的CDR3序列。
在某些態樣中，該結合人類EGFR的可變域是具有重鏈可變區的可變域，此重鏈可變區至少包含如圖3所示的MF3755的VH之CDR1、CDR2和CDR3序列，或與如圖3所示的MF3755的VH之CDR1、CDR2和CDR3序列有最多三個或最多兩個或至多一個胺基酸取代。
在某些態樣中，該結合人類EGFR的可變域是具有重鏈可變區的可變域，此重鏈可變區至少包含如圖3所示的MF3755的VH鏈，或與如圖3所示的MF3755的VH鏈的胺基酸序列具有至多15個 (或在某些態樣中有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中有1、2、3、4、5個) 相對於MF3755的VH鏈胺基酸插入、缺失、取代或其組合。
在某些態樣中，本發明提供一種包含結合EGFR胞外部分的可變域和結合LGR5胞外部分的可變域之抗體， 其中所述可變域的重鏈可變區包含至少選自由下列組成群組之EGFR特異性重鏈可變區的CDR3序列：如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289，或其中所述可變域的重鏈可變區包含一重鏈CDR3序列，其與選自由下列組成群組之一VH的CDR3序列有最多三個、或最多兩個、或不超過一個胺基酸不同：如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289。在某些態樣中，所述可變域包含一重鏈可變區，其包含至少如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之CDR3序列。
在某些態樣中，所述可變域包含一重鏈可變區，其至少包含選自由下列組成群組之EGFR特異性重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3序列：如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289，或其中所述可變域的重鏈可變區包含至少CDR1、CDR2和CDR3序列，其與選自由下列組成群組之EGFR特異性重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3序列有最多三個、或最多兩個、或最多一個胺基酸不同：如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289。在某些態樣中，所述可變域包含一重鏈可變區，其至少包含如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之CDR1、CDR2和CDR3序列。在某些態樣中，該重鏈可變區為MF3755。在某些態樣中，該重鏈可變區為MF4280。
在某些態樣中，包含結合EGFR胞外部分的可變域和結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其中該結合EGFR之可變域具有CDR3、CDR1、CDR2和CDR3及/或如上文所示的VH序列，具有結合LGR5的可變域，其包含至少選自由以下組成群組之LGR5特異性重鏈可變區的CDR3序列：如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818，或一重鏈CDR3序列，其與選自由下列組成群組之VH的CDR3序列有最多三個、或最多兩個、或不超過一個胺基酸不同：如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818。在某些態樣中，所述可變域包含一重鏈可變區，其包含至少如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之CDR3序列。
在某些態樣中，其中LGR5可變域包含一重鏈可變域，其包含至少選自由以下組成群組之一LGR5特異性重鏈可變區的至少CDR1、CDR2和CDR3序列：如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818，或一重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，其與選自由下列組成群組之LGR5特異性重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3序列有最多三個、或最多兩個、或最多一個胺基酸不同：如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818。在某些態樣中，所述可變域包含一重鏈可變區，其至少包含圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之CDR1、CDR2和CDR3序列。在某些態樣，重鏈可變區是MF5790； MF5803； MF5814； MF5816； MF5817； 或 MF5818。 在某些方面，重鏈可變區是MF5790； MF5814； MF5816； 和MF5818。 在某些方面，重鏈可變區域是MF5814、MF5818或MF5816。 在某些方面，重鏈可變區是MF5816。 在某些方面，重鏈可變區是MF5818。
已顯示包含具有重鏈可變區MF3755之一或多個可變域，或其一或多個CDR的抗體在用於抑制EGFR配體反應性癌症或細胞的生長時具有更好的效果。在雙特異性或多特異性抗體的情況下，包含具有重鏈可變區MF3755或其一或多個CDR的可變域之一抗體臂與包含具有重鏈可變區MF5818或其一或多個CDR的可變域之一臂良好組合。
結合EGFR或LGR5之可變域的VH鏈可具有一或多個胺基酸取代，相對於如圖3中所示的序列。在某些態樣中，VH鏈具有如圖3所示的EGFR或LGR5 VH的胺基酸序列，其具有至多15個、或1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，且在某些態樣中，具有1、2、3、4或5個胺基酸插入、缺失、取代或其組合，相對於圖3所示的VH鏈序列。
相對於各圖中的CDR序列，CDR序列可具有一或多個胺基酸殘基取代。例如為了最佳化目的而進行此一或多個取代，例如為了提高抗體的結合強度或穩定性。例如藉由突變程序進行最佳化，其中較佳測試所得抗體的穩定性及/或結合親和力，並較佳地選擇具增進的EGFR特異性CDR序列或LGR5特異性CDR序列。技術人員完全能夠產生包含至少一個本發明之經改變的CDR序列之抗體變體。例如，可應用保守胺基酸取代。保守胺基酸取代的實例包括以一個疏水性殘基例如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸取代另一個疏水性殘基，以及用一個極性殘基取代另一極性殘基，例如用精胺酸取代離胺酸、用麩胺酸取代天冬胺酸，或用麩醯胺取代天冬醯胺。
在某些態樣中，位於本文指出的VH或VL中的最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個)胺基酸取代是保守胺基酸取代。在某些態樣中，本文指出的VH或VL中的胺基酸插入、缺失和取代不存在於CDR3區。在某些態樣中，所提及的胺基酸插入、缺失和取代也不存在於CDR1和CDR2區。在某些態樣中，所提及的胺基酸插入、缺失和取代也不存在於FR4區域。
在某些態樣中，所述之最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個)胺基酸取代是保守胺基酸取代。在某些態樣中，該插入、缺失、取代或其組合不存在於VH鏈的CDR3區中，在某些態樣中，不存在於VH鏈的CDR1、CDR2或CDR3區中，且在某些態樣中，不存在於FR4區中。
在某些態樣中，本發明的治療係使用包含結合EGFR胞外部分的可變域以及在某些態樣中結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其包含 - 如圖3所示之VH鏈MF3755的胺基酸序列；或者 - 如圖3所示的VH鏈MF3755的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個)胺基酸插入、缺失、取代或其組合，相對於所述VH；以及 其中該結合LGR5的可變域之VH鏈包含 - 如圖3所示之VH鏈MF5790的胺基酸序列；或 - 如圖3所示的VH鏈MF5790的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個)胺基酸插入、缺失、取代或其組合，相對於所述VH。
在某些態樣中，本發明的治療係使用包含結合EGFR胞外部分的可變域以及在某些態樣中結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其包含 - 如圖3所示之VH鏈MF3755的胺基酸序列；或者 - 如圖3所示的VH鏈MF3755的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合；以及 其中該結合LGR5的可變域之VH鏈包含 - 如圖3所示之VH鏈MF5803的胺基酸序列；或 - 如圖3所示的VH鏈MF5803的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合。
在某些態樣中，本發明的治療係使用包含結合EGFR胞外部分的可變域以及在某些態樣中結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其包含 - 如圖3所示之VH鏈MF3755的胺基酸序列；或者 - 如圖3所示的VH鏈MF3755的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合；以及 其中該結合LGR5的可變域之VH鏈包含 - 如圖3所示之VH鏈MF5814的胺基酸序列；或 - 如圖3所示的VH鏈MF5814的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合，。
在某些態樣中，本發明的治療係使用包含結合EGFR胞外部分的可變域以及在某些態樣中結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其包含 - 如圖3所示之VH鏈MF3755的胺基酸序列；或者 - 如圖3所示的VH鏈MF3755的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合；以及 其中該結合LGR5的可變域之VH鏈包含 -如圖3所示之VH鏈MF5816的胺基酸序列；或 - 如圖3所示的VH鏈MF5816的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合。
在某些態樣中，本發明的治療係使用包含結合EGFR胞外部分的可變域以及在某些態樣中結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其包含 - 如圖3所示之VH鏈MF3755的胺基酸序列；或者 - 如圖3所示的VH鏈MF3755的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合；以及 其中該結合LGR5的可變域之VH鏈包含 -如圖3所示之VH鏈MF5817的胺基酸序列；或 - 如圖3所示的VH鏈MF5817的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合。
在某些態樣中，本發明的治療係使用包含結合EGFR胞外部分的可變域以及在某些態樣中結合LGR5胞外部分的可變域之抗體，其包含 - 如圖3所示之VH鏈MF3755的胺基酸序列；或者 - 如圖3所示的VH鏈MF3755的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個)胺基酸相對於所述VH插入、缺失、取代或其組合；以及 其中該結合LGR5的可變域之VH鏈包含 -如圖3所示之VH鏈MF5818的胺基酸序列；或 - 如圖3所示的VH鏈MF5818的胺基酸序列，其具有最多15個 (或在某些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，或在某些態樣中，1、2、3、4或5個) 相對於所述VH的胺基酸插入、缺失、取代或其組合。
在某些態樣中，該結合EGFR胞外部分的可變域包含一重鏈可變區，其包含選自由以下組成群組的可變區之CDR1、CDR2和CDR3序列：如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289，且其中結合LGR5的胞外部分的可變域包含一重鏈可變區，其包含選自由以下組成群組的可變區之CDR1、CDR2和CDR3序列：如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818。
在某些態樣中，該結合EGFR胞外部分的可變域包含一重鏈可變區，其包含如圖3所示之MF3755的可變區之CDR1、CDR2和CDR3序列；以及其中結合LGR5的胞外部分的可變域包含一重鏈可變區，其包含如圖3所示之MF5816的可變區之CDR1、CDR2和CDR3序列。
在某些態樣中，結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之胺基酸；或如圖3所示之VH鏈MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之胺基酸，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個相對於所述VH的胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合；以及其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之胺基酸；或如圖3所示之VH鏈MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之胺基酸，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個相對於所述VH之胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合。
在某些態樣中，該結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3755之胺基酸；或如圖3所示之VH鏈MF3755之胺基酸，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個相對於所述VH之胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合；以及其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5816之胺基酸；或如圖3所示之VH鏈MF5816之胺基酸，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個相對於所述VH之胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合。
在某些態樣中，該結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之胺基酸；以及其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之胺基酸。
在某些態樣中，該結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3755之胺基酸；且其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5816之胺基酸。
在某些態樣中，該結合EGFR和結合LGR5的所述二可變域均包含如圖4b所示之輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區。
在某些態樣中，該結合EGFR和結合LGR5的所述二可變域均包含如圖4b所示的輕鏈可變區，其包含0至10個胺基酸插入、缺失、取代、添加或其組合，其中該CDR1、CDR2和CDR3輕鏈可變區中不存在胺基酸插入、缺失和取代。
保留EGFR或LGR5結合的所揭示胺基酸序列之額外變體可從例如含有重排的人類IGKVl-39/IGKJl VL區的噬菌體展示庫獲得 (De Kruif等人 Biotechnol Bioeng. 2010 (106)741-50)，以及加入胺基酸取代至本文所揭示的EGFR或LGR5 VH區的胺基酸序列中的VH區的集合，如先前所描述 (例如，WO2017/069628)。編碼結合EGFR或LGR5的Fab區的噬菌體可經選擇，並藉由流式細胞儀進行分析，並進行定序，以辨識出具有保留抗原結合的胺基酸取代、插入、缺失或添加的變體。
EGFR/LGR5抗體的VH/VL EGFR和LGR5可變域的輕鏈可變區可相同或不同。在某些態樣中，EGFR/LGR5抗體的VH/VL EGFR可變域的VL區與VH/VL LGR5可變域的VL區相似。在某些態樣中，結合EGFR和LGR5的VH/VL可變域中的VL區是相同的。
在某些態樣中，EGFR/LGR5抗體之一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區包含一共同輕鏈可變區。在某些態樣中，該一或二個VH/VL可變域的共同輕鏈可變區包含種系IgVκ1-39可變區V區段。在某些態樣中，該一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區包含κ輕鏈V區段IgVκ1-39*01。IgVκ1-39是免疫球蛋白可變Kappa 1-39基因的縮寫。該基因也稱為免疫球蛋白Kappa可變1-39；IGKV139；IGKV1-39。該基因的外部ID為HGNC: 5740；Entrez Gene: 28930；Ensembl: ENSG00000242371。圖4中提供合適的V區的胺基酸序列。V區可與五個J區之一組合。在某些態樣中，J區是jk1和jk5，且連接的序列表示為IGKV1-39/jk1和IGKV1-39/jk5；替代名稱為IgVκ1-39*01/IGJκ1*01或IgVκ1-39*01/IGJκ5*01 (根據IMGT資料庫全球網路imgt.org命名)。在某些態樣中，該一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區包含κ輕鏈IgVκ1-39*01/IGJκ1*01或IgVκ1-39*01/IGJκ1*05 (如圖4描述)。。
在某些態樣中，圖4d)的輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2和LCDR序列。此類序列可由技術人員使用例如註解系統如IMGT、Chothia、Kabat或其他適當的註解系統來決定或註解。在某些態樣中，所述輕鏈可變區由一或二個VH/VL可變域組成，並存在於本發明EGFR結合抗體中且包含LCDR1、LCDR2和LCDR序列。此類序列可以由技術人員使用例如註解系統如IMGT、Chothia、Kabat或其他適當的註解系統來決定或註解。在某些態樣中，EGFR/LGR5雙特異性抗體的一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區包含一含有胺基酸序列QSISSY的LCDRl (如圖4所描述)、一含有胺基酸序列AAS的LCDR2 (如圖4所描述)，以及一含有胺基酸序列QQSYSTP的LCDR3 (如圖4所描述)。在某些態樣中，這些CDR是根據IMGT命名。在某些態樣中，EGFR/LGR5抗體的一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區包含一含有胺基酸序列QSISSY的LCDR1、一含有胺基酸序列AASSLQS的LCDR2、以及一含有胺基酸序列QQSYSTP的LCDR3。
在某些態樣中，EGFR/LGR5雙特異性抗體的一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區包含一含有胺基酸序列QSISSY的LCDRl (如圖4所描述)、一含有胺基酸序列AAS的LCDR2 (如圖4所描述)，以及一含有胺基酸序列QQSYSTPPT的LCDR3，即根據IMGT命名的CDR (如圖4所述)。在某些態樣中，EGFR/LGR5抗體的一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區包含一含有胺基酸序列QSISSY的LCDRl、一含有胺基酸序列AASSLQS的LCDR2，以及一含有胺基酸序列QQSYSTPPT的LCDR3。
在某些態樣中，EGFR/LGR5抗體的一或二個VH/VL可變域包含一輕鏈可變區，其包含至少90%、在某些態樣中至少95%、在某些態樣中至少97%、在某些態樣中至少98%、在某些態樣中至少99%、或在某些態樣中100%一致於圖4所示的胺基酸序列。在某些態樣中，該EGFR/LGR5抗體的一或二個VH/VL可變域包含一輕鏈可變區，其包含至少90%、在某些態樣中至少95%、在某些態樣中至少97%、在某些態樣中至少98%、在某些態樣中至少99%、或在某些態樣中100%一致於圖4所示的胺基酸序列。
例如，相對於圖4所示的序列，EGFR/LGR5抗體的一或二個VH/VL可變域的可變輕鏈可具有0至10個、或在某些態樣中0至5個胺基酸插入、缺失、取代、添加或其組合。在某些態樣中，EGFR/LGR5抗體的一或二個VH/VL可變域的可變輕鏈區包含0至9個、0至8個、0至7個、0至6個、0至5個、0至4個、0至3個、0至2個、或在某些態樣中0至1個、或在某些態樣中0個胺基酸插入、缺失、取代、添加，相對於指示的胺基酸序列或其組合。
此外，EGFR/LGR5抗體的一或二個VH/VL可變域的輕鏈可變區可包含如圖4所示的胺基酸序列。在某些態樣中，EGFR/LGR5抗體的兩個VH/VL可變域包含相同的VL區。在某些態樣中，EGFR/LGR5雙特異性抗體的兩個VH/VL可變域的VL皆包含如圖4所示的胺基酸序列。
在某些態樣中，本文所述的EGFR/LGR5抗體是具有兩個可變域的雙特異性抗體，其中一可變域結合EGFR，而另一個則結合LGR5，如本文所述。用於本發明方法中的EGFR/LGR5雙特異性抗體可以多種形式提供。許多不同形式的雙特異性抗體是本領域已知的，且綜述於Kontermann (Drug Discov Today, 2015 Jul;20(7):838-47; MAbs, 2012 Mar-Apr;4(2):182-97)和Spiess等人 (Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies. Mol. Immunol. (2015) http: //dx.doi.org/10.1016/j.molimm.2015.01.003)，其分別藉由引用併入本文。例如，並非典型具有兩個VH/VL組合的抗體之雙特異性抗體形式具有至少一可變域，其包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區。此可變域可連接至提供第二結合活性的單鏈Fv片段、單體、VH和Fab片段。
在某些態樣中，本文提供的方法中所使用的EGFR/LGR5雙特異性抗體通常屬於人類IgG亞類 (例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)。在某些態樣中，該抗體屬於人類IgG1亞類。全長IgG抗體因其良好的半衰期和低免疫原性而為較佳者。因此，EGFR/LGR5雙特異性抗體在某些態樣中為全長IgG分子。在某些態樣中，EGFR/LGR5雙特異性抗體為全長IgG1分子。
因此，在某些態樣中，EGFR/LGR5雙特異性抗體包含一可結晶片段(Fc)。在某些態樣中，EGFR/LGR5雙特異性抗體的Fc由人類恆定區組成。EGFR/LGR5雙特異性抗體的恆定區或Fc可含有與天然發生的人類抗體的恆定區域之一或多個、或不超過10個、或不超過5個胺基酸差異。例如，該雙特異性抗體的每一Fab臂可更包括一Fc區，其包含促進雙特異性抗體形成、促進穩定性及/或本文所述的其他特徵的修飾。
雙特異性抗體通常由表現編碼該抗體的核酸的細胞產生。因此，在某些態樣中，本文所揭示的雙特異性EGFR/LGR5抗體藉由提供包含一或多種編碼雙特異性EGFR/LGR5抗體的重鏈和輕鏈可變區和恆定區的核酸之細胞產生。在某些態樣中，該細胞為動物細胞，例如哺乳動物細胞或靈長類細胞，且在某些態樣中為人類細胞。合適的細胞為能夠包含且較佳產生EGFR/LGR5雙特異性抗體的任何細胞。
用於產生抗體的合適細胞是本領域已知的且包括雜交瘤細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NS0細胞或PER-C6細胞。各種機構和公司已開發出用於大規模生產抗體的細胞株，例如用於臨床用途。此類細胞株的非限制性實例為CHO細胞、NS0細胞或PER.C6細胞。特別地，所述細胞為人類細胞。較佳為被腺病毒E1區或其功能等效物轉型的細胞。這種細胞株的較佳實例為PER.C6細胞株或其等效物。特別地，所述細胞為CHO細胞或其變體。較佳地，該變體利用麩醯胺酸合成酶(GS)載體系統來表現抗體。在某些態樣中，該細胞為CHO細胞。
在某些態樣中，該細胞表現構成EGFR/LGR5雙特異性抗體的不同輕鏈和重鏈。在某些態樣中，該細胞表現兩種不同的重鏈和至少一種輕鏈。在某些態樣中，該細胞表現如本文所述的「共同輕鏈」以減少不同抗體種類 (不同重鏈和輕鏈的組合)的數量。例如，使用本領域已知的用於產生雙特異性IgG的方法 (WO2013/157954；經由引用併入本文)，與重排的人類IGKV1-39/IGKJ1 (huVκ1 39)輕鏈結合，將各個VH區選殖到表現載體上，先前已顯示能夠與大於一個重鏈配對，從而產生具有不同特異性的抗體，其促進雙特異性分子的產生 (De Kruif等人 J. Mol. Biol. 2009 (387) 548 58; WO2009/157771)。
表現一共同輕鏈和等量兩條重鏈的抗體產生細胞通常產生50%的雙特異性抗體和25%的每種單特異性抗體 (即具有相同的重輕鏈組合)。已發表數種方法可傾向該雙特異性抗體的產生，而不是相應的單特異性抗體的產生。這通常是藉由修飾重鏈的恆定區，使得它們有利於異二聚化 (即與其他重/輕鏈組合的重鏈二聚化)而非同二聚化來達成。在某些態樣中，本發明的雙特異性抗體包含具有相容的異二聚化域的兩條不同免疫球蛋白重鏈。本技術領域已描述各種相容的異二聚化域。在某些態樣中，該相容的異二聚化域為相容的免疫球蛋白重鏈CH3異二聚化域。本技術領域描述可實現此類重鏈異二聚化的多種方式。
用於產生EGFR/LGR5雙特異性抗體的較佳方法揭示於US 9,248,181和US 9,358,286。具體地，基本上僅產生雙特異性全長IgG分子的較佳突變為第一CH3域中的胺基酸取代L351K和T366K (EU編號) (「KK變體」重鏈)，以及第二域中的胺基酸取代L351D和L368E (「DE變體」重鏈)，反之亦然。如前所述，DE變體和KK變體較佳配對形成異二聚體 (所謂的「DEKK」雙特異性分子)。由於相同重鏈之間的CH3-CH3界面中帶電殘基之間的強烈排斥力，DE變體重鏈的同二聚化 (DEDE同二聚體)或KK變體重鏈 (KKKK同二聚體)的同二聚化幾乎不會發生。
因此，在某些態樣中，包含結合EGFR的可變域之重鏈/輕鏈組合包含該重鏈的DE變體。在某些態樣中，包含結合LGR5的可變域的重鏈/輕鏈組合包含該重鏈的KK變體。
可使用任何合適的測定法來測試候選EGFR/LGR5 IgG雙特異性抗體的結合。例如，可藉由流式細胞儀評估與CHO細胞膜上表現的EGFR或LGR5的結合 (根據先前在WO2017/069628中描述的FACS程序)。在某些態樣中，候選EGFR/LGR5雙特異性抗體與CHO細胞上的LGR5的結合，係藉由本領域已知的標準程序進行的流式細胞儀來進行。將與CHO細胞之結合與未以EGFR及/或LGR5表現卡匣轉染的CHO細胞進行比較。使用經EGFR表現構建體轉染的CHO細胞測定候選雙特異性IgG1與EGFR的結合；LGR5單特異性抗體和EGFR單特異性抗體，以及不相關的IgG1同種型對照mAb包括在測定法中作為對照 (例如，結合LGR5和另一種抗原 (如破傷風毒素 (TT)的抗體)。
候選EGFR/LGR5雙特異性抗體的LGR5和EGFR Fab與其標靶的親和力，可使用BIAcore T100藉由表面等離子共振 (SPR)技術來測量。簡而言之，使用遊離胺化學 (NHS/EDC)將抗人類IgG小鼠單株抗體 (Becton and Dickinson, 目錄編號555784)偶聯至CM5感測晶片的表面。然後，bsAb被捕獲到感測器表面上。隨後，將重組純化抗原人類EGFR (Sino Biological Inc, 目錄編號11896-H07H)和人類LGR5蛋白以一定濃度範圍流過感測器表面以測量結合率和解離率。每一循環後，感測器表面藉由HCl脈衝再生，並再次捕獲bsAb。根據所獲得的感測圖，使用BIAevaluation軟體決定與人類LGR5和EGFR結合的結合率和解離率以及親和力值，如先前在US 2016/0368988中針對CD3所述。
在人類IgG亞類的某些態樣中，本文所揭示的抗體通常是雙特異性全長抗體。在某些態樣中，所述抗體屬於人類IgG1亞類。此類抗體具有良好的ADCC特性，如果需要，其可藉由本領域已知的技術增強，在體內投與至人類時，具有有利的半衰期，並存在可在選殖細胞中共表現時提供優先形成異二聚體而非同二聚體之經修飾重鏈的CH3改造技術。
當抗體本身具有低ADCC活性時，可藉由修飾抗體的恆定區來提高抗體的ADCC活性。提高抗體ADCC活性的另一種方法是藉由酵素干擾醣基化途徑，導致岩藻醣減少。有數種體外方法測定抗體或效應細胞在引發ADCC中的功效。其中為鉻51[Cr51]釋放測定、銪[Eu]釋放測定和硫35[S35]釋放測定。通常，表現某種表面暴露抗原的經標記標靶細胞株與對該抗原具有特異性的抗體一起靜置。洗滌後，表現Fc受體CD16的效應細胞與經抗體標記的標靶細胞共靜置。隨後藉由閃爍計數器或分光光度法測量釋放之細胞內標記來測量標靶細胞的裂解。
本文所揭示的雙特異性抗體可為經ADCC增強的。在某些態樣中，此類雙特異性抗體為無岩藻醣基化的。在某些態樣中，當與正常CHO細胞中產生的相同抗體相比時，該雙特異性抗體包含減少量的在Fc區中的N-連接醣類結構的岩藻醣基化。低岩藻醣水平與NK效應細胞上的CD16 (FcγRIIIa)結合增加有關，從而導致ADCC活性增加。在某些態樣中，除了其直接抗腫瘤活性之外，本發明的雙特異性抗體可在調理作用和隨後的自然殺手(NK)細胞介導的ADCC活性和補體依賴性細胞毒(CDC)活性下消除腫瘤細胞。
包含結合EGFR胞外部分的可變域和結合LGR5胞外部分的可變域之抗體可更包含一或多個額外可變域，其可結合一或多種其他標靶。在某些態樣中，該其他標靶是蛋白質，例如包含胞外部分的膜蛋白。本文所使用的膜蛋白為細胞膜蛋白，例如在細胞外膜中的蛋白質，該膜將細胞與外界分開。該膜蛋白具有細胞外部分。如果膜蛋白包含位於細胞的細胞膜中的跨膜區域，則該膜蛋白至少位於細胞上。
具有多於兩個可變域的抗體是本領域已知的。例如，可連結一額外的可變域。在某些態樣中，具有三個或更多個可變域的抗體為多價多聚體抗體，如PCT/NL2019/050199中所述的，其藉由引用併入本文。
在某些態樣中，該抗體為包含兩個可變域的雙特異性抗體，其中一個可變域結合EGFR的胞外部分且另一可變域結合LGR5的胞外部分。在某些態樣中，該可變域為本文所述的可變域。
本文所述抗體的功能部分包含結合EGFR胞外部分的至少一可變域和結合本文所述LGR5胞外部分之一可變域。因此，其包含本文所述抗體的抗原結合部分且通常包含該抗體的可變域。一功能部分的可變域可為單鏈Fv片段或所謂的單域抗體片段。在某些態樣中，該抗體部分或衍生物具有抗體或其等效物的至少兩個可變域。此類可變域或其等效物的非限制性實例為F(ab)-片段和單鏈Fv片段。雙特異性抗體的功能部分包含雙特異性抗體的抗原結合部分，或該結合部分的衍生物及/或類似物。如上所述，抗體的結合部分包含在該可變域中。
在某些態樣中，包含結合EGFR胞外部分的一個可變域的抗體選自阿米萬他單抗 (amivantamab)(Janssen Biotech)、八弗妥單抗(bafisontamab)(EpimAb Biotherapeutics)、REGN-7075 (Regeneron Pharmaceuticals Inc.)、BCA-101 (Bicara Therapeutics)、PM-1080 (Biotheus Inc.)、度戈妥珠單抗 (duligotuzumab)(Genentech、Inc.)、AFM-24 (Affimed GmbH)。 配方和醫藥組成物
在某些態樣中，本發明的治療利用本文所揭示的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物 (即，作為治療試劑)以及本文所揭示的醫藥學上可接受的載體，以及免疫檢查點抑制劑 (即，作為另一治療試劑)和醫藥學上可接受的載體。此類藥物組成物可用於治療癌症，特別是用於治療頭頸癌。本文所使用的術語「醫藥學上可接受的」是指由政府監管機構批准或在美國藥典或另一普遍認可的藥典中列出的用於動物、特別是人類的藥物，並包括任何和所有溶劑、鹽、分散介質、包衣劑、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑及類似物，其為生理上相容的。術語「載體」是指與化合物一起投與的稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。此類醫藥載體可為無菌液體，例如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油、甘油聚乙二醇蓖麻油酸酯及類似物。水或生理食鹽水溶液以及葡萄醣水溶液和甘油溶液可使用作為載體，特別是用於注射溶液。用於腸胃外投與的液體組成物可配製成用於注射或連續輸注投與。經由注射或輸注的投與途徑包括膀胱內、腫瘤內、靜脈內、腹膜內、肌肉內、鞘內和皮下。根據投與途徑 (例如，靜脈內、皮下、關節內，及類似途徑)，該活性化合物可塗覆於材料，以保護化合物免受酸和可能使化合物失活的其他天然條件的作用。
包含所述包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體、其功能部分、衍生物及/或類似物的所述醫藥組成物可包含在一容器中，其與包含所述免疫檢查點抑制劑的所述醫藥組成物之容器分開，意味著沒有物理連接。
在某些態樣中，包含所述包含結合EGFR胞外部分和LGR5的可變域之抗體、其功能部分、衍生物及/或類似物之所述醫藥組成物可包含在一容器中，其與包含所述免疫檢查點抑制劑如帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的醫藥組成物之容器分開，意味著沒有物理連接。
在某些態樣中，所述醫藥組成物包含派森妥單抗 (petosemtamab)並可包含在一容器中，其與包含所述免疫檢查點抑制劑如帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的醫藥組成物之容器分開，意味著沒有物理連接。
適合投與人類患者的醫藥組成物通常配製為用於腸胃外投與，例如在液體載體中，或適合重組為用於靜脈內投與的液體溶液或懸浮液。該組成物可配製為劑量單位形式，以便於投與和藥劑的均勻性。亦包括固體製劑，其用於在使用前不久轉化為用於口服或腸胃外投與的液體製劑。此類液體形式包括溶液、懸浮液和乳液。 本發明EGFR 結合抗體和免疫檢查點抑制劑的使用說明。
在某些態樣中，納武利單抗 (nivolumab)以每2週240 mg或每4週480 mg、或1 mg/kg投與，之後在同一天投與伊匹木單抗 (ipilimumab) 3 mg/kg，每3週一次，共4劑，之後為每2週240 mg或每4週480 mg。在某些態樣中，納武利單抗以每2週3 mg/kg與伊匹木單抗每6週1 mg/kg一起投與，或納武利單抗以每3週360 mg伊匹木單抗每6週1 mg/kg一起投與，以及2個週期的鉑-雙重化療。在某些態樣中，納武利單抗以每3週360 mg和伊匹木單抗每6週1 mg/kg一起投與。在某些態樣中，納武利單抗以每2週240 mg或每4週480 mg、或每2週3 mg/kg、或3 mg/kg投與，之後在同一天投與伊匹木單抗1 mg/kg，每3週一次，共4劑，之後每2週240 mg或每4週480 mg。
伊匹木單抗 (Ipilimumab)(商品名為Yervoy™)是一種單株抗體和免疫檢查點抑制劑，其作用為藉由靶向CTLA-4 (一種下調免疫系統的蛋白質受體)來活化免疫系統。伊匹木單抗於2011年3月獲得美國食品藥物管理局 (FDA)核准用於治療黑色素瘤。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為納武利單抗(nivolumab)且每兩週以3 mg/kg的量作為靜脈輸注(例如歷時60分鐘)投與，直到疾病進展或出現不可接受的毒性。
在某些態樣中，納武利單抗 (nivolumab)用於頭頸癌，例如復發性或轉移性鱗狀細胞癌，並以每2週240 mg或每4週480 mg投與。
在某些態樣中，納武利單抗 (nivolumab)的劑型和強度為40 mg/4 mL (即10 mg/mL)、100 mg/10 mL (即10 mg/mL)、120 mg/12 mL (即 10 mg/mL)或 240 mg/24 mL(即 10 mg/mL)溶液，在單劑量小瓶中。在某些態樣中，納武利單抗 (nivolumab)的投與是藉由30分鐘靜脈輸注進行的。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為西米普利單抗 (cemiplimab)，且每三週以350 mg的量作為靜脈輸注投與 (例如歷時30分鐘)，通常直至疾病進展或出現不可接受的毒性。在某些態樣中，該投與是藉由30分鐘靜脈輸注進行的，經由含有無菌、內聯或外加的0.2微米至5微米過濾器的靜脈內管線進行。在某些態樣中，西米普利單抗 (cemiplimab)的劑型和規格為350 mg/7 mL(即50 mg/mL)注射溶液，在單劑量小瓶中。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑是多斯塔利單抗 (dostarlimab) (或Jemperli)且每3週以500 mg投與第一劑至第四劑，在第4劑後3週(第5劑之前)開始後續給藥：每6週1,000 mg，以靜脈輸注 (例如歷時30分鐘)，直至疾病進展或出現不可接受的毒性。在某些態樣中，多斯塔利單抗的劑型和規格為500 mg/10 mL(即50 mg/mL)注射溶液，在單劑量小瓶中。在某些態樣中，該投與是藉由靜脈輸注，歷時30分鐘，使用聚氯乙烯或鉑固化矽製成管之靜脈內管線；由聚氯乙烯或聚碳酸酯製成的配件；以及無菌、無致熱原、低蛋白結合、0.2微米、內聯或外加的過濾器。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為阿替利珠單抗 (atezolizumab)，並以每2週840 mg、每3週1200 mg或每4週1680 mg的量作為靜脈輸注投與 (例如歷時60分鐘)，通常直至疾病進展或出現不可接受的毒性。如果第一次輸注可以耐受，則所有後續輸注都將在30分鐘內輸送。在某些態樣中，注射劑為在單劑量小瓶中的840 mg/14 mL(即60 mg/mL)或1200 mg/20 mL(即60 mg/mL)溶液。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為阿維魯單抗 (avelumab)，並以每兩週10 mg/kg的量作為靜脈輸注投與 (例如歷時60分鐘)，通常直到疾病進展或出現不可接受的毒性。在某些態樣中，以每2週800 mg的量作為靜脈輸注投與 (例如歷時60分鐘)，通常直至疾病進展或出現不可接受的毒性。在某些態樣中，注射劑為在單劑量小瓶中的200 mg/10 mL(即20 mg/mL)溶液。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為阿維魯單抗 (avelumab)並以每兩週800 mg (800 mg q2w)使用，視情況與每日兩次口服5 mg阿西替尼 (axitinib)組合。阿維魯單抗 (avelumab)以靜脈輸注給藥，歷時60分鐘。劑型和規格為在單劑量小瓶中的200 mg/10 mL (20 mg/mL)注射溶液。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為度伐魯單抗 (durvalumab)並以每2週10 mg/kg的量靜脈輸注投與 (例如歷時60分鐘)，直至疾病進展或出現不可接受的毒性。在某些態樣中，注射劑為500 mg/10 mL(即50 mg/mL)或120 mg/2.4 mL(即50 mg/mL)溶液，在單劑量小瓶中。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)，並以每3週靜脈輸注200 mg的量投與。在某些態樣中，所述投與為200 mg的固定劑量且每3週進行一次，直至疾病進展或出現不可接受的毒性。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)，並以每6週靜脈輸注400 mg的量投與。在某些態樣中，所述投與為400 mg的固定劑量且每6週進行一次，直至疾病進展或出現不可接受的毒性。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)，且用於兒科，以每3週一次靜脈輸注2 mg/kg(最多200 mg)投與。
在某些態樣中，帕博利珠單抗(pembrolizumab)注射劑的劑型和規格為在單劑量小瓶中100 mg/4 mL(或25 mg/mL)溶液。在某些態樣中，帕博利珠單抗 (pembrolizumab)係以單一藥物使用，並適用於患有轉移性或不可切除的復發性HNSCC個體的第一線治療，這些個體的腫瘤表現PD-L1 [綜合陽性評分 (CPS)≧1]，係以由FDA批准的測試測定。在某些態樣中，帕博利珠單抗 (pembrolizumab)之投與是藉由30分鐘的靜脈輸注進行的。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為派安普利單抗 (penpulimab)，且其使用說明包括每兩週一次投與200 mg(200 mg q2w)。該投與通常是靜脈注射。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為信迪利單抗 (sintilimab)，且其使用說明包括每三週一次 (q3w)投與200 mg。該投與通常是靜脈注射。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為替雷利珠單抗 (tislelizumab)且其使用說明包括每三週投與200 mg(200 mg q3w)。該投與通常是靜脈注射。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑是瑞替凡利單抗 (retifanlimab)，且其使用說明包括每四週投與500 mg(500 mg q4w)。該投與通常是靜脈注射。
在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑為特瑞普利單抗 (toripalimab)，其建議的第II期劑量決定為3 mg/kg Q2W。使用說明包括每兩週投與3 mg/kg。該投與通常是靜脈注射。
此外，在某些態樣中，本發明包含結合EGFR和視情況LGR5的所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物(例如派森妥單抗 (petosemtamab))的使用說明。這些使用說明在本發明中更詳細地提供，並相關於使用適應症 (例如用於治療頭頸癌)、投與途徑 (例如靜脈注射)、劑量 (例如1500 mg)，與個體體重無關的劑量 (即固定劑量)和給藥間隔 (例如每兩週一次)。
在某些態樣中，所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含派森妥單抗 (petosemtamab) (請參見Recommended INN list 83, WHO Drug Information Vol. 34, No. 1, 2020)，且使用說明包括以1500 mg的量作為靜脈輸注投與，每兩週一次。在某些態樣中，所述劑量為1500 mg的固定劑量。
在某些態樣中，所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含派森妥單抗 (petosemtamab)，且使用說明包括以1100 mg的量作為靜脈輸注投與，每兩週一次。在某些態樣中，所述劑量為1100 mg的固定劑量。
在某些態樣中，派森妥單抗 (petosemtamab)和帕博利珠單抗 (pembrolizumab)係依序投與。在某些態樣中，當帕博利珠單抗 (pembrolizumab)和派森妥單抗 (petosemtamab)在同一天投與時，帕博利珠單抗 (pembrolizumab)係在派森妥單抗 (petosemtamab)之後投與。
在某些態樣中，派森妥單抗 (petosemtamab)以1500 mg的量投與，每兩週一次，帕博利珠單抗(pembrolizumab)以400 mg的量投與，每六週一次。在某些態樣中，所述劑量二者都是固定劑量。
在某些態樣中，派森妥單抗 (petosemtamab)以1100 mg的量投與，每兩週一次，且帕博利珠單抗(pembrolizumab)以400 mg的量投與，每六週一次。在某些態樣中，所述劑量二者都是固定劑量。 投藥、劑量方案、治療
所揭示的治療試劑 (例如派森妥單抗 (petosemtamab))可根據合適的劑量和合適的途徑 (例如靜脈內、腹膜內、肌肉內、鞘內或皮下)投與。例如，可投與單次推注、可隨著時間投與數次分開的劑量、或可根據治療情況的緊急程度按比例減少或增加劑量。在某些態樣中，向個體投與單劑量的本文所揭示的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物。在某些態樣中，治療試劑將在治療過程中被重複投與。例如，在某些態樣中，將多次 (例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多次)劑量的治療試劑投與需要治療的個體。在某些態樣中，治療試劑的投與可每週一次、每兩週一次或每月一次進行。
臨床醫生可根據待治療的患者狀況使用較佳的劑量。劑量可取決於多種因素，包括疾病階段等。基於一或多種此類因素的存在來決定應投與的特定劑量，係落於技術人員的技術範圍內。通常，以小於化合物最佳劑量的較小劑量開始治療。此後，小量增加劑量，直到達到具體情況下的最佳效果。為了方便起見，如果需要，可以將每日總劑量分開並在一天中分次投與。也可以使用間歇療法 (例如，三週中的一週或四週中的三週)。
在某些態樣中，治療試劑以0.1、0.3、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 mg/kg體重的劑量投與。或者，治療試劑以0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 mg/kg體重的劑量投與。
在某些態樣中，使用1500 mg的固定劑量向個體提供治療試劑 (例如派森妥單抗 (petosemtamab))。與體表或體重給藥相比，固定劑量具有多個優點，因為它可以減少準備時間並減少潛在的劑量計算錯誤。在某些態樣中，以至少500 mg的劑量提供治療試劑。在某些態樣中，所述劑量在1100至2000 mg之間。在某些態樣中，所述劑量介於1100至1800 mg之間。如本領域通常知識者所理解的，該劑量可隨時間投與。例如，劑量可藉由IV投與，例如1-6小時輸注，較佳2-4小時輸注。在某些態樣中，治療試劑每兩週投與一次。具體地，本文所揭示的固定劑量適合用於成人及/或體重至少35 kg的個體。在某些態樣中，該個體患有頭頸癌。
在某些態樣中，所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含派森妥單抗 (petosemtamab)，並以1100 mg的量作為靜脈輸注投與，每兩週一次。在某些態樣中，所述劑量是1100 mg的固定劑量。
在某些態樣中，所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物包含派森妥單抗 (petosemtamab)，並以下列量投與：達到與EGFR和LGR5二者的人類受體標靶之結合達至少90%、至少95%，至少99%，在相關體重中，針對統計學上顯著的個體數。所述90%的量可使用約1000 mg Q2W的固定劑量達成。所述95%的量可使用約1100至約1200 mg Q2W的固定劑量達成。
在某些態樣中，可使用預用藥方案。此方案可用於降低輸注相關反應的可能性或嚴重性。一般而言，在使用本文提及的治療試劑治療之前投與 (例如口服、靜脈內)類固醇例如地塞米松 (dexamethasone)及/或抗組織胺劑例如右氯苯那敏(dexchlorpheniramine)、苯海拉明(diphenhydramine)、或氯苯那敏(chlorpheniramine)。
只要監督患者照護的臨床醫生認為該治療方法有效，即患者對治療有反應，則本文描述的治療方法通常就可持續。指示治療方法有效的非限制性參數可包括以下一或多項：腫瘤細胞的減少；腫瘤細胞增生的抑制；腫瘤細胞消除；無惡化存活；適當的腫瘤標記 (如果適用)的適當反應。
關於投與治療試劑的頻率，本領域通常知識者將能夠決定合適的頻率。例如，臨床醫生可決定相對不頻繁地投與治療試劑 (例如，每兩週一次)，並根據患者的耐受性逐漸縮短劑量之間的時間段。與根據所申明的方法之治療過程相關的示範性時間長度包括：約一週；兩週；約三週；約四週；約五週；約六週；約七週；約八週；約九週；約十週；約十一週；約十二週；約十三週；約十四週；約十五週；約十六週；約十七週；約十八週；約十九週；約二十週；約二十一週；約二十二週；約二十三週；約二十四週；約七個月；約八個月；約九個月；約十個月；約十一個月；約十二個月；約十三個月；約十四個月；約十五個月；約十六個月；約十七個月；約十八個月；約十九個月；約二十個月；約二十一個月；約二十二個月；約二十三個月；約二十四個月；約三十個月；約三年；約四年；約五年；永久性 (例如持續維持治療)。前述持續時間可與一或多輪/治療週期相關。
可使用任何合適的手段來評估本文所提供的治療方法的功效。在某些態樣中，使用癌細胞數量減少作為客觀反應標準來分析治療的臨床功效。根據本文所揭示的方法治療的患者，例如人類，較佳經歷至少一種癌症徵象的改善。在某些態樣中，可發生以下一或多者：癌細胞的數量可被減少；預防或延緩癌症復發；一或多種與癌症相關的症狀可在一定程度上得到緩解。此外，進行體外測定以測定T細胞介導的標靶細胞裂解。在某些態樣中，腫瘤評估是基於CT掃描及/或MRI掃描，請參閱例如RECIST 1.1指南 (實體腫瘤中的反應評估標準) (Eisenhauer等人, 2009 Eur J Cancer 45:228–247)。此評估通常在治療後每4-8週進行一次。
某些態樣中，在如本文所述的治療後，腫瘤細胞不再是可偵測到的。在某些態樣中，個體處於部分或完全緩解。在某些態樣中，個體具有增加的總存活率、存活率中位數及/或無惡化存活率。
治療試劑 (即，包含結合EGFR胞外部分的可變域和結合LGR5胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物)在本文中與免疫檢查點抑制劑聯合使用，作為進一步的治療試劑，因為它們對正在治療的癌症特別有用。
在某些態樣中，在治療開始時，以下納入因子IF1-IF16中的至少一種、多於一種或全部適用於個體進行治療。在某些態樣中，個體包含或符合全部IF1-IF16： IF 1. 年齡至少 18 歲。 IF 2. 患有經組織學或細胞學證實的實體瘤，並有轉移性或局部晚期疾病不適合以治癒為目的之標準治療的證據，具有局部晚期不可切除或轉移性HNSCC疾病且腫瘤表現PD-L1、CPS ≧1(以在美國通過FDA核准的測試，或在其他國家通過核准的等效測試測定)的個體。 IF 3. 以前未接受過在復發或轉移性情況下進行的全身治療，儘管作為局部晚期疾病多模式治療的一部分的全身治療，若在投與派森妥單抗 (petosemtamab)及/或帕博利珠單抗 (pembrolizumab)之前結束至少6個月，則允許。 IF 4. HNSCC原發腫瘤位於口咽、口腔、下咽或喉部。 IF 5. 先前未接受過抗PD-L1、抗PD-1或​​抗EGFR療法的抗癌治療。 IF 6. 具有來自轉移或原發部位的基線腫瘤樣本(例如福馬林固定石蠟包埋塊，[FFPE])。如果個體有此類來自足夠材料集合的腫瘤樣本 (至少20片具有 ＞20%腫瘤含量的玻片)，且自所述樣本收集之後沒有接受進一步的抗癌治療，則不需要在基線時進行新的腫瘤切片。不接受存檔FFPE玻片。只有當患者未接受抗EGFR治療時，原發性腫瘤材料才是可接受的。 IF 7. 適合進行切片檢查。 IF 8. 患有RECIST 1.1版定義的可藉由放射學方法測量的疾病。 IF 9. 具有美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)表現狀態為0或1。 IF 10. 具有預期壽命≧ 12週，通常根據研究者評估。 IF 11. 超音波心電圖 (ECHO)或多門控採集掃描 (MUGA)顯示左心室射血分數 (LVEF)至少為50%。 IF 12.足夠的器官功能： • IF 12.1 具有中性顆粒細胞絕對計數 (ANC)至少1.5 x 10 9/L。 • IF 12.2 具有血紅素水平為至少9 g/dL。 • IF 12.3 具有血小板水平至少100 x 10 9/L。 • IF 12.4 具有校正後的總血清鈣處於正常範圍。 • IF 12.5 具有血清鎂水平處於正常範圍內或以補充劑矯正。 • IF 12.6 具有丙胺酸轉胺酶 (ALT)、天冬胺酸轉胺酶 (AST)等於或小於2.5倍正常值上限 (ULN)、及總膽紅素等於或小於1.5倍ULN，條件是個體患有吉爾伯特症候群、總膽紅素小於或等於3.0倍ULN，或直接膽紅素小於或等於1.5倍ULN；條件是在肝臟受累的情況下，ALT/AST等於或小於5倍ULN、及總膽紅素等於或小於2倍ULN，或如果患有Child-Pugh A級評分的肝細胞癌 (HCC)，則總膽紅素低於3 mg/dL。 • IF 12.7 針對65歲或以上的患者，具有血清肌酐水平等於或小於1.5 x ULN，或具有肌酐清除率至少60 mL/min，根據Cockroft和Gault公式或腎臟病飲食調整 (MDRD)公式計算 • IF 12.8 具有血清白蛋白水平至少為3 g/dL。 • IF 12.9 具有國際標準化比率 (INR)或凝血酶原時間 (PT)水平低於1.5 x ULN，除非患者接受抗凝血治療且處於預期使用的抗凝血劑的治療範圍內。 • IF 12.10 具有活化部分凝血活酶時間 (APTT)或PTT小於1.5 x ULN，除非患者正在接受抗凝血治療且處於預期使用的抗凝血劑的治療範圍內。 • IF 13.1. 人類免疫缺陷病毒感染的檢測結果為陰性，且檢測日期不超過本發明的治療前六個月。 • IF 13.2. 如果人類免疫缺陷病毒感染檢測結果呈陽性，且CD4+數至少為300/µL，檢測不到病毒量，且個體正在接受高效抗逆轉錄病毒治療 (HAART)。 • IF 14. 患有活動性B型肝炎 (HBsAg陽性)感染，但接受拉米夫定(lamivudine)、替諾福韋(tenofovir)、恩替卡韋(entecavir)或其他抗病毒劑的抗病毒治療，從本發明的治療開始至少7天起。 • IF 15. 有B型肝炎病史 (抗-HBc陽性、HBsAg和B型肝炎病毒[HBV]-DNA陰性)。 • IF 16. C型肝炎病毒 (HCV)核醣核酸 (RNA)檢測呈陽性，且所述HCV感染自發性消退的個體 (即HCV抗體呈陽性，但未檢測到HCV-RNA)，或經抗病毒治療後達到持續緩解，且在停止抗病毒治療後，使用無IFN治療方案至少6個月或使用基於IFN的治療方案至少12個月，未顯示出可檢測的HCV RNA的個體。
在某些態樣中，根據IF12的器官功能測量值的所有值均具有在健康個體中觀察到的上限。
在某些態樣中，待治療的個體符合選自IF1-IF16的任何一或多種因素。在某些態樣中，用於治療的個體符合因子IF2、IF3、IF4、IF5、IF8、IF9、IF10、IF11、IF12、IF13、IF14、IF15和IF16。在某些態樣中，接受治療的個體符合因子IF2、IF3、IF4和IF5。在某些態樣中，接受治療的個體符合因子IF3。
在某些態樣中，在治療開始時，至少一、大於一個或所有以下排除因素EF1-EF16適用於治療個體： EF 1. 有中樞神經系統轉移，其未經治療且有症狀，或需要放射線治療或手術，或需要持續的類固醇治療，以在本發明治療開始14天內控制症狀。 EF 2. 具有已知的軟腦膜受累 EF 3.在本發明治療開始前4週內參加過另一項臨床試驗或使用任何試驗藥物進行治療。 EF 4. 在本發明第一劑後4週或5個半衰期 (以較長者為準)內進行全身性抗癌治療。對於具有主要延遲毒性的細胞毒性試劑 (例如，絲裂黴素C、亞硝基脲)，或抗癌免疫療法，在開始本發明的治療之前需要六週的清除期。 EF 5. 需要免疫抑制藥物 (例如甲胺蝶呤、環磷醯胺) EF 6. 在本發明開始治療3週內接受過大手術或放射線治療。在任何時候接受過至少25%或更高的骨髓先前放射線治療的個體不符合資格。 EF 7. 具有＞1級的持續等級的臨床顯著毒性，與先前的抗腫瘤治療相關 (脫髮除外)；條件是美國國家癌症研究所—不良事件通用術語標準 (NCI-CTCAE) v4.03或v5.0等級等於2(或更低)的穩定感覺神經病變是允許的或如同截至投藥時的當前狀態。 EF 8. 具有歸因於人類蛋白質或任何賦形劑的過敏反應史或任何毒性，需要永久停用這些試劑。 EF 9. 經適當治療後表現出不受控制的高血壓 (收縮壓BP ＞ 150 mmHg及/或舒張壓BP ＞ 100 mmHg)，或不穩定型心絞痛。 EF 10. 有充血性心臟衰竭病史，其定義為紐約心臟協會 (NYHA)標準第II-IV級，或需要治療的嚴重心律不整 (心房顫動、陣發性室上性心搏過速除外)。 EF 11. 在本發明的治療開始後六個月內患有心肌梗塞。 EF 12. 具有先前惡性腫瘤病史，但切除的子宮頸上皮內瘤變、或非黑素瘤皮膚癌、或在開始本發明的治療之前至少三年內被認為具有低復發風險且沒有疾病證據的治癒性治療的癌症除外。 EF 13. 患有任何原因的休息時呼吸困難，或其他需要持續氧氣治療的疾病。 EF 14. 有間質性肺部疾病 (ILD)(例如肺炎或肺纖維化)病史，或基線胸部電腦斷層掃描 (CT)掃描有ILD證據。 EF 15. 在本發明的治療開始時患有嚴重疾病或醫療狀況，包括但不限於：不受控制的活動性感染、臨床上顯著的肺部、代謝或精神疾病。 EF 16. 患有活動性B型肝炎表面抗原感染 (HBsAg陽性)但未接受抗病毒治療的個體。 EF 17. 具有Child-Pugh B級或C級肝硬化狀態的個體；患有纖維板層HCC的個體、患有肉瘤樣HCC的個體、或患有混合性膽管癌和HCC的個體。 EF 18. 懷孕個體或正在哺乳的個體；具有生育能力的個體必須在開始本發明的治療之前、在所述治療期間以及最後一次投與派森妥單抗 (petosemtamab)後的六個月內使用高效避孕方法。 EF 19. 診斷為免疫缺陷，或在開始本發明的治療之前7天內正在接受全身性類固醇療法或任何形式的免疫抑制療法。值得注意的是，允許使用皮質類固醇作為本文指定的過敏反應或輸注相關反應的預用藥。 EF 20. 患有活動性自體免疫疾病，在開始本發明的治療之前的兩年內需要全身性免疫抑制治療；條件為接受替代療法 (例如甲狀腺素、胰島素或針對腎上腺或腦下腺功能不全的生理性皮質類固醇替代療法等)不被視為免疫抑制治療。 EF 21. 在開始本發明的治療之前已進行過同種異體組織/實體器官移植。 EF 22. 具有任何組織學的鼻咽原發腫瘤部位。
在某些態樣中，待治療的個體符合選自EF1-EF22的任一或多種因素。在某些態樣中，接受治療的個體符合所有因素EF1-EF22。在某些態樣中，接受治療的個體符合因素IF13、IF16、IF19、IF20和IF21。
本領域ECOG表現狀態評分等級定義如下，意思是：0 完全活動，能夠不受限制地進行所有疾病前的表現。1 劇烈體力活動受到限制，但可以走動，能夠從事輕度或久坐的工作，例如輕度家務、辦公室工作。2 能夠走動並且能夠自理，但無法進行任何工作活動。大約超過50%的清醒時間。3 只能進行有限的自我護理，50%以上的醒著時間都限制在床上或椅子上。4 完全失能。無法進行任何自我照顧。完全限制在床上或椅子上。5 死亡。
Child-Pugh評分，也稱為Child-Pugh分類、Child-Turcotte-Pugh(CTP)計算器或Child標準，在本文中根據標準臨床實務應用。Child-Pugh評分是藉由對肝病的五個臨床指標和最終肝衰竭的可能性進行評分來確定的。每項指標的評分為1、2或3，其中3分最嚴重。這五個臨床指標分別是總膽紅素、血清白蛋白水平、凝血酶原時間 (或延長或INR，作為血液凝固時間)、腹水和肝性腦病變。A級代表5到6分，最不嚴重的肝病，一到五年存活率為95%。B級：7至9分，中重度肝病，1至5年存活率75%。C級：10到15分，最嚴重肝病，一到五年存活率為50%。根據臨床測量，給出以下分數。腦病變：無 = 1分，1級和2級 = 2分，3級和4級 = 3分。腹水：無 = 1分，輕微 = 2分，中度 = 3分。膽紅素：低於2 mg/ml = 1分，2至3 mg/ml = 2分，高於3 mg/ml = 3分。白蛋白：大於3.5 mg/ml = 1分，2.8至3.5 mg/ml = 2分，小於2.8 mg/ml = 3分。凝血酶原時間(PT，延長秒數)：少於4秒 = 1分，4至6秒 = 2分，超過6秒 = 3分。或者，國際標準化比率 (INR)將作為PT的替代，INR低於1.7 = 1分，INR 1.7至2.2 = 2分，INR高於2.2 = 3分。
本發明治療試劑的投與可預用藥，這意味著在投與本發明的抗體或免疫檢查點抑制劑之前向個體投與藥物。在某些態樣中，在1500 mg派森妥單抗 (petosemtamab)投藥之前投與抗組織胺、止痛藥物、退燒藥物及/或抗發炎藥物。
主要允許的藥物如下。在某些態樣中，本發明的治療包括使用撲熱息痛 (paracetamol )/乙醯胺酚、抗組織胺或皮質類固醇進行預用藥。在某些態樣中，根據標準當地臨床實施，在發生輸注相關反應、超敏反應及/或過敏反應的情況下，投與所述預用藥。
在某些態樣中，本發明的治療更包括患者安全和健康所需的所有藥物，且預期不會干擾試驗藥物的評估，可由研究者酌情給予。也允許對症狀和不良事件進行支持性治療，或對伴隨病症進行標準治療，包括阿斯匹靈、輸血支持、顆粒細胞集落刺激因子、抗生素、吸入性類固醇 (治療氣喘)、止吐藥、止瀉藥 (例如洛哌丁胺 (loperamide))和雙磷酸鹽(根據其產品許可證和常規臨床實施)。也允許使用輔助荷爾蒙治療藥物，用於治療被認為復發風險較低且沒有疾病證據的治癒性治療癌症。此可包括用於治療早期乳癌的輔助性黃體生成激素釋放激素 (LHRH)促效劑與抗雌激素的組合(5年)，以及用於局部前列腺癌的LHRH促效劑+/-抗雄激素。也允許在所述治療期間同時進行用於控制症狀而沒有進展證據的放射治療。
主要禁用藥物如下。在某些態樣中，本發明的治療不包含用於免疫抑制風險的伴隨藥物。此類藥物通常包括慢性口服皮質類固醇 (＞10 mg/天之潑尼松(prednisone)等效物，不包括吸入和局部類固醇)、腫瘤壞死因子 (TNF)-α抑制劑、抗T細胞抗體、和其他免疫抑制藥物。在某些態樣中，本發明的治療在所述治療期間或在投與目前治療的第一劑之前的四週內或五個半衰期內(如果已知)，以較長者為準，不包含任何研究藥物或其他抗癌療法。在某些態樣中，本發明的治療不包括具有主要延遲毒性的細胞毒性劑 (例如絲裂黴素C、亞硝基脲或抗癌免疫療法)，其需要六週的清除期。在某些態樣中，本發明的治療不包含在首次投與本發明的治療試劑之前尚未開始的用於癌症治療的草藥療法。允許在所述治療期間繼續使用草藥治療癌症。
在某些態樣中，本發明的治療不包含在投與第一劑所述治療之前三週內的大手術或放射治療，或針對待治療的個體的總骨髓至少25%的先前放射治療。
在上述治療期間，不允許同時服用慢性口服皮質類固醇 (＞10 mg/天之潑尼松(prednisone)等效物，不包括吸入和局部類固醇)、腫瘤壞死因子 (TNF)-α抑制劑、抗T細胞抗體或其他免疫抑制藥物。因此，在某些態樣中，在本發明的治療期間不伴隨慢性口服皮質類固醇 (＞10 mg/天之潑尼松(prednisone)等效物，不包括吸入和局部類固醇)、腫瘤壞死因子 (TNF)-α抑制劑、抗T細胞抗體或其他免疫抑制藥物。
本文所揭示的化合物和組成物可作為療法和治療性治療，且因此可作為藥物並用於製備藥物的方法中。 治療試劑的組件套組和組合
在某些態樣中，本發明也提供一種組件套組，其包含本文定義的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、本文定義的免疫檢查點抑制劑，以及所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的使用說明，以及所述免疫檢查點抑制劑的使用說明。
在某些態樣中，本發明也提供一種組件套組，其包含本文定義的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、及所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的使用說明，以及所述免疫檢查點抑制劑的使用說明。
此外，在某些態樣中，本發明提供一種組件套組，其包含本文定義之結合EGFR的胞外部分和視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、一免疫檢查點抑制劑，以及所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的使用說明，以及所述免疫檢查點抑制劑的使用說明。
此外，本發明提供一種包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物與本文提及的免疫檢查點抑制劑的組合，用於治療有需要個體之癌症。
此外，本發明提供本文提及的免疫檢查點抑制劑、使用所述免疫檢查點抑制劑治療個體之癌症的使用說明、以及使用本文提及的包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體之癌症的使用說明之組合。
此外，本發明提供如本文提及的包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、使用該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體之所述癌症的說明、以及使用本文提及的免疫檢查點抑制劑治療個體之所述癌症的說明之組合。
在某些態樣中，本發明提供一種醫藥組成物，其包含本發明包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、以及與免疫檢查點抑制劑一起用於治療所述癌症之說明。
在某些態樣中，本發明提供一種用於治療癌症的醫藥組成物，其包含本發明之包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及一種用於治療癌症的醫藥組成物，其包含本發明的免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，本發明提供一種用於治療癌症的醫藥組成物，其包含本發明包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其中該醫藥組成物係與本發明的免疫檢查點抑制劑組合投與。
在某些態樣中，本發明相關於一種用於治療癌症的醫藥組成物，其包含本發明結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其中在投與所述雙特異性抗體之前、同時或之後，向待治療的個體投與免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，本發明相關於一種用於治療個體之癌症的醫藥組成物，其包含免疫檢查點抑制劑，其中在投與所述免疫檢查點抑制劑之前、同時或之後，向所述待治療的個體投與本發明之包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物
因此，本發明相關於一種用於治療個體之癌症的藥物組合，其包含向所述個體投與多種不同的藥物以治療所述癌症，該治療包含同時、依序或分開投與所述藥物。在某些態樣中，所述藥物包含本發明之包含結合EGFR胞外部分及視情況LGR5的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及所述其他不同藥物包含免疫檢查點抑制劑。
在某些態樣中，組件套組或組合包含以1500 mg投與派森妥單抗 (petosemtamab)的說明。在某些態樣中，所述套組包含每兩週一次以1500 mg投與派森妥單抗 (petosemtamab)的說明。在某些態樣中，所述套組包含使用派森妥單抗 (petosemtamab)和免疫檢查點抑制劑例如帕博利珠單抗 (pembrolizumab)治療頭頸癌的說明。所述套組包含使用派森妥單抗 (petosemtamab)和所述免疫檢查點抑制劑治療頭頸鱗狀細胞癌的使用說明。在某些態樣中，所述套組包含派森妥單抗 (petosemtamab)和帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的使用說明。在某些態樣中，所述套組包含使用本文提及的派森妥單抗 (petosemtamab)和帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的使用說明，例如400 mg、q6w的帕博利珠單抗 (pembrolizumab)和1500 mg、q2w的派森妥單抗 (petosemtamab)。在某些態樣中，所述套組包含使用派森妥單抗 (petosemtamab)的固定劑量和帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的固定劑量的說明。
在某些態樣中，本發明提供一種如本文定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及如本文定義之免疫檢查點抑制劑之組合，用於治療有需要個體之癌症。
在某些態樣中，本發明亦提供一種如本文定義之免疫檢查點抑制劑，用於治療有需要個體之癌症，其中該免疫檢查點抑制劑係與如本文定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物同時或依序投與。
在某些態樣中，向患有癌症的個體投與所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，該個體已投與或將投與所述免疫檢查點抑制劑。在某些態樣中，向患有癌症的個體投與所述免疫檢查點抑制劑，該個體已投與或將投與所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物。
在某些態樣中，本發明亦提供如本文所定義的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、使用所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體中的癌症的說明，以及使用本文定義的免疫檢查點抑制劑治療個體中的癌症的說明之組合。
在某些態樣中，本發明亦提供如本文所定義之免疫檢查點抑制劑、使用該抑制劑治療個體的癌症之說明，以及使用如本文定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療所述癌症之說明之組合。
在某些態樣中，該使用說明包含待使用的免疫檢查點抑制劑的量，以及待使用的抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的量、給藥間隔和待治療的癌症。
本文所述的所有文件和參考文獻，包括Genbank條目、專利和公開的專利申請案以及網站，均經由引用明確併入本文，其程度與全部或部分寫入本文件相同。
為了清楚和簡明描述之目的，本文特徵將係以本發明的相同或分開部分的一部分描述，然而，應理解，本發明的範圍可包括具有全部或一些特徵的組合的較佳態樣。
現在參考以下實例描述本發明，這些實例僅是說明性的，並不旨在限制本發明。雖然已參考本發明的具體態樣詳細描述本發明，但對於本領域通常知識者來說顯而易見的是，可對其進行各種改變和修飾而不背離其精神和範圍。 條文列表條文
1.  一種包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其用於治療個體的癌症，其中該治療更包含投與免疫檢查點抑制劑。
2. 一種使用包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物及免疫檢查點抑制劑，於製造一或多種用於治療個體之癌症的藥物之用途。
3. 如條文2所述之用途，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物及免疫檢查點抑制劑係用於製造分開的藥物或藥物配方。
4. 如條文2或3所述之用途，其中該癌症治療包含投與該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物及免疫檢查點抑制劑。
5. 一種治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與有效量之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及有效量之免疫檢查點抑制劑。
6. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述免疫檢查點抑制劑包含PD-L1抑制劑、PD-L2或PD-1抑制劑。
7. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述免疫檢查點抑制劑包含PD-L2抑制劑。
8. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述免疫檢查點抑制劑包含PD-1抑制劑。
9. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述免疫檢查點抑制劑包含納武利單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、派安普利單抗 (penpulimab)、瑞替凡利單抗 (retifanlimab)、信迪利單抗 (sintilimab)、替雷利珠單抗 (tislelizumab)、特瑞普利單抗 (toripalimab)、多斯塔利單抗 (dostarlimab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab) 或度伐魯單抗 (durvalumab)，特別是帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。
10. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述免疫檢查點抑制劑包含或為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。
11. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為腺癌或鱗狀細胞癌，特別是頭頸癌。
12. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為頭頸癌。
13. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為頭頸鱗狀細胞癌。
14. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為咽 (包括鼻咽、口咽和下咽)、口腔、喉、副鼻竇、鼻腔或唾腺的癌症。
15. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為口咽癌、口腔癌、下咽癌或喉癌。
16. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症的主要位置為口咽、口腔、下咽或喉部。
17. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，該癌症表現EGFR，且視情況表現LGR5。
18. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症表現EGFR，其特徵為IHC分數為2+或3+，或特徵為EGFR的H分數超過50，例如80、100或200，但不超過300。
19. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症表現PD-L1。
20. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症的PD-L1表現之綜合陽性評分 (CPS)為1或更高但不超過100。
21. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症的PD-L1表現之綜合陽性評分 (CPS)介於(並包括) 1或更高至最多20 (不包括)。
22. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症的PD-L1表現之綜合陽性評分 (CPS)介於(並包括) 20或更高至最多100 (包括)。
23. 如條文20至22中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中CPS係使用IHC決定。
24. 如條文20至23中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中CPS係使用IHC、使用殖株22C3決定。
25. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該個體或癌症之p16狀態呈陽性。
26. 如條文25所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為或個體患有(原發性)口咽癌。
27. 如條文1至24中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該個體或癌症之p16狀態呈陰性。
28. 如條文27所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為或個體患有(原發性)口咽癌除外的頭頸癌。
29. 如條文25至28中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該p16狀態使用IHC決定。
30. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症表現LGR5。
31. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為LGR5 ISH陽性。
32. 如條文31所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中LGR5的表現係使用LGR5的原位雜交 (ISH)、RNA定序、組織微陣列 (TMA)染色或計算H分數而決定。
33. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述個體先前未接受過用於治療所述癌症的抗癌治療。
34. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述個體在接受所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及所述免疫檢查點抑制劑之前至少六個月，未接受過用於治療所述癌症的先前抗癌治療。
35. 如條文34所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述個體在接受所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和所述免疫檢查點抑制劑治療之前六個月以上，已接受多模式治療，其包含手術、放療及/或含鉑化療，例如順鉑。
36. 如條文35所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述個體進行所述多模式治療，以治療可治癒的局部疾病。
37. 如條文33或34所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述先前抗癌治療包含使用抗PD-L1、抗PD-1或抗EGFR療法進行治療。
38. 如條文33或34所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述先前抗癌治療包含以化療、免疫療法、抗EGFR試劑、靶向EGFR的抗體、西妥昔單抗(cetuximab)、PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑進行治療。
39. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該個體為哺乳動物。
40. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該個體為人類個體。
41. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述治療包含每週、每兩週或每三週投與該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，較佳每兩週投與一次，更佳向個體投與至少3次或更多次雙週劑量之該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物。
42. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述治療包含每兩週向個體投與派森妥單抗 (petosemtamab)作為抗體。
43. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述治療包含每兩週向個體投與劑量1100或1500 mg之派森妥單抗 (petosemtamab)。
44. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述治療包含向個體投與劑量1100或1500 mg之派森妥單抗 (petosemtamab)。
45. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物係靜脈內投與該個體。
46. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中所述治療包含每六週向該個體投與劑量400 mg 之帕博利珠單抗 (pembrolizumab)，作為免疫檢查點抑制劑。
47. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中派森妥單抗 (petosemtamab)和帕博利珠單抗 (pembrolizumab)係依序投與。
48. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中若帕博利珠單抗 (pembrolizumab)及派森妥單抗 (petosemtamab)於同一天投與，則帕博利珠單抗係於派森妥單抗之後投與。
49. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中在所述治療期間，不允許伴隨使用慢性口服皮質類固醇 (＞10 mg/天之潑尼松(prednisone)等效物，不包括吸入和局部類固醇)、腫瘤壞死因子 (TNF)-α抑制劑、抗T細胞抗體或其他免疫抑制藥物。
50. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為經ADCC增強的。
51. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為無岩藻醣基化的。
52. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該癌症為復發性、不可切除、局部晚期及/或轉移性癌症。
53. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為多特異性。
54. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為雙特異性。
55. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該抗體包含不結合EGFR的可變域。
56. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該抗體包含結合LGR5的可變域。
57. 如條文1至55中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該抗體為單價抗體，或其中該抗體包含所述EGFR結合可變域作為唯一的可變域。
58. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該治療包含或在其之前有一診斷或測試該個體或該癌症之EGFR、LGR5及/或PD-L1表現的步驟。
59. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該治療包含或在其之前有一診斷或測試該個體或該癌症之PD-L1表現的步驟。
60. 如條文58或59中所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該診斷或測試係藉由ISH或IHC進行。
61. 如條文58至60中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中係藉由IHC診斷或測試PD-L1之表現。
62. 如條文58至60中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中診斷或測試PD-L1表現是藉由建立PD-L1的CPS達成。
63. 如條文63中所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中診斷或測試PD-L1表現是藉由建立由IHC測定PD-L1表現的CPS而達成。
64. 如條文63中所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中PD-L1表現的CPS是藉由IHC使用殖株22C3測定。
65. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合EGFR胞外部分的可變域為重鏈可變區，其包含 - 如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之VH的至少CDR3 序列，或一CDR3序列，其與如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之VH之一CDR3序列有最多三個、較佳最多兩個、較佳不超過一個胺基酸不同； - 如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之VH的至少CDR1、 CDR2和CDR3序列，或與如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之VH的CDR1、 CDR2和CDR3序列有最多三個、較佳最多兩個、較佳最多一個胺基酸取代；或者 - 如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之VH的序列，或如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之VH的胺基酸序列，其具有最多15個，較佳有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，且較佳有1、2、3、4、5個胺基酸插入、缺失、取代或其組合，相對於MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之VH鏈。
66.  如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該結合EGFR胞外部分之可變域，係結合位於如(圖2)所示之人類EGFR序列的胺基酸殘基420-480內的表位。
67. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該可變域與EGFR之結合係藉由以下胺基酸殘基取代之一或多者降低：EGFR之I462A；G465A；K489A；I491A；N493A；及C499A，與不包含所述取代的EGFR蛋白相比。
68.  如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合LGR5的可變域為重鏈可變區，其包含 - 如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之VH之至少CDR3序列，或一CDR3序列，其與如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之VH之一CDR3序列有最多三個、較佳最多兩個、較佳不超過一個胺基酸不同； - 如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之VH的至少CDR1、CDR2和CDR3序列，或與如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之VH的CDR1、CDR2和CDR3序列有最多三個、較佳最多兩個、較佳最多一個胺基酸取代；或 - 如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之VH的序列，或如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之VH的胺基酸序列，其具有最多15個，較佳有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，且較佳有1、2、3、4、5個胺基酸插入、缺失、取代或其組合，相對於MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之VH鏈。
69. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該結合EGFR胞外部分之可變域包含一重鏈可變區，其包含選自由下列組成群組之可變域的CDR1、CDR2和CDR3序列：如圖3所示之MF3370；MF3755；MF4280或MF4289，以及其中該結合LGR5胞外部分之可變域包含一重鏈可變區，其包含選自由下列組成群組之可變域的CDR1、CDR2和CDR3序列：如圖3所示之MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818。
70. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該結合EGFR胞外部分之可變域包含一重鏈可變區，其包含如圖3所示之MF3755之可變域的CDR1、CDR2和CDR3序列，以及其中該結合LGR5胞外部分之可變域包含一重鏈可變區，其包含如圖3所示之MF5816之可變域的CDR1、CDR2和CDR3序列。
71. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之胺基酸序列；或如圖3所示之VH鏈MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之胺基酸序列，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合，相對於所述VH；且其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之胺基酸序列；或如圖3所示之VH鏈MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817；或MF5818之胺基酸序列，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合，相對於所述VH。
72. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3755之胺基酸序列；或如圖3所示之VH鏈MF3755之胺基酸序列，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合，相對於所述VH；且其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5816之胺基酸序列；或如圖3所示之VH鏈MF5816之胺基酸序列，其具有最多15個，較佳不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，較佳不超過5、4、3、2或1個胺基酸修飾，包括插入、缺失、取代或其組合，相對於所述VH。
73. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3370；MF3755；MF4280或MF4289之胺基酸序列；且其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5790；MF5803；MF5805；MF5808；MF5809；MF5814；MF5816；MF5817或MF5818之胺基酸序列。
74. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合EGFR之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF3755之胺基酸序列；且其中結合LGR5之可變域的VH鏈包含如圖3所示之VH鏈MF5816之胺基酸序列。
75. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合EGFR和結合LGR5的所述二可變域均包含如圖4b所示之輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區
76. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中結合EGFR和結合LGR5的所述二可變域均包含如圖4b所示的輕鏈可變區，該可變輕鏈區包含0至10個胺基酸插入、缺失、取代、添加或其組合，其中該CDR1、CDR2和CDR3輕鏈可變區中不存在胺基酸插入、缺失和取代。
77 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該結合LGR5胞外部分的可變域係結合位於圖1之人類LGR5序列的胺基酸殘基21-118內的表位。
78. 如前述條文中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或用途或方法，其中該結合EGFR胞外部分的抗體為派森妥單抗 (petosemtamab)。
79. 一種組件套組，其包含如前述條文中任一項所定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、如前述條文中任一項所定義的免疫檢查點抑制劑，以及所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的使用說明，以及所述免疫檢查點抑制劑的使用說明。
80. 如條文79所述之套組，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的使用說明包含劑量1500 mg之說明。
81. 如條文79或80所述之套組，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物的使用說明包含每兩周一次劑量1500 mg之說明。
82. 如條文79至81中任一項所述之組件套組，其中該套組包含使用該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑治療頭頸癌之說明。
83.  如條文79至82中任一項所述之組件套組，其中該套組包含使用該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及免疫檢查點抑制劑治療頭頸鱗狀細胞癌之說明。
84. 一種如條文1至78中任一項所定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及如條文1至78中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑之組合，其係用於治療有需要個體之癌症。
85. 如條文1至78中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑，係用於治療有需要個體之癌症，其中該免疫檢查點抑制劑係與如條文1至78中任一項所定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物同時或依序投與。
86.  如條文1至78中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，係用於治療個體之癌症，其中如條文1至78中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑已或將被投與。
87.  如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑，係用於治療個體之癌症，其中如條文1至78中任一項所定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物已經或將被投與。
88. 一種如條文1至78中任一項所定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、使用該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體之癌症的使用說明，以及使用如條文1至78中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑治療個體之癌症的使用說明之組合。
89.  一種如條文1至78中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑、使用所述抑制劑治療個體之癌症的使用說明、以及使用如條文1至78中任一項所定義之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體之癌症的使用說明之組合。
90. 如條文88或89所述之組合，其中該使用說明包含待使用的免疫檢查點抑制劑之量、該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物之量、給藥間隔及待治療之癌症。
91. 一種選定患有頭頸癌的個體進行以如條文1至78中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑治療之方法，該方法包含：a) 決定從該個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS為1或更高，但視情況不超過100，則選定個體進行所述治療。
92. 一種選定患有頭頸癌的個體進行以如條文1至78中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑治療之方法，該方法包含：a) 決定從該個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS介於≧1和＜20，則選定個體進行所述治療。
93. 一種選定患有頭頸癌的個體進行以如條文1至78中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑治療之方法，該方法包含：a) 決定從該個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS介於≧20和100，則選定個體進行所述治療。
94. 如條文91至93中任一項所述之方法，其中所述方法更包括測定來自所述個體的樣本之p16狀態。
95. 如條文94所述之方法，其中來自所述個體的樣本之p16狀態為陽性。
96. 如條文94所述之方法，其中來自所述個體的樣本之p16狀態為陰性。
97. 一種建立患有頭頸癌的個體是否可能對以如條文1至88中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑之治療有反應之方法，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS為1或更高，但視情況不超過100，則建立該樣本來源的個體可能對所述治療有反應。
98. 一種建立患有頭頸癌的個體是否可能對以如條文1至88中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑之治療有反應之方法，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS介於≧1和＜20之間，則建立該樣本來源的個體可能對所述治療有反應。
99. 一種建立患有頭頸癌的個體是否可能對以如條文1至88中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑之治療有反應之方法，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS介於≧20和100之間，則建立該樣本來源的個體可能對所述治療有反應。
100. 如條文97至99中任一項所述之方法，其中所述方法更包括測定來自所述個體的樣本之p16狀態。
101. 如條文100所述之方法，其中來自所述個體的樣本之p16狀態為陽性。
102. 如條文100所述之方法，其中來自所述個體的樣本之p16狀態為陰性。
103. 一種基於PD-L1表現的綜合陽性評分對患有頭頸癌的個體進行分類的方法，在以如條文1至78中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑治療之前進行，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS為1或更高，但視情況不超過100，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。
104. 一種基於PD-L1表現的綜合陽性評分對患有頭頸癌的個體進行分類的方法，在以如條文1至78中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑治療之前進行，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS介於≧1和＜20，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。
105. 一種基於PD-L1表現的綜合陽性評分對患有頭頸癌的個體進行分類的方法，在以如條文1至78中任一項所述之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及如條文1至78中任一項所述之免疫檢查點抑制劑治療之前進行，該方法包含：a) 決定從個體獲得的樣本中PD-L1表現的綜合陽性評分(CPS)； b) 如果樣本的PD-L1表現的CPS介於≧20和100之間，則將樣本來源的個體分類為有資格接受所述治療。
106. 如條文103至105中任一項所述之方法，其中所述方法更包括測定來自所述個體的樣本之p16狀態。
107. 如條文106所述之方法，其中來自所述個體的樣本之p16狀態為陽性。
108. 如條文106所述之方法，其中來自所述個體的樣本之p16狀態為陰性。
109. 如條文91至108中任一項所述之方法，其中PD-L1表現的CPS使用IHC測定。
110. 如條文91至109中任一項所述之方法，其中PD-L1表現的CPS使用IHC使用殖株22C3測定。
111. 如條文91至110中任一項所述之方法，其中該樣本包含或為腫瘤樣本或癌症樣本。
112. 如條文91至111中任一項所述之方法，其中該癌症包含或為頭頸癌。
113. 如條文91至112中任一項所述之方法，其中該癌症包含或為頭頸鱗狀細胞癌 (HNSCC)。
114. 如條文91至113中任一項所述之方法，更包含向所述選定進行治療或符合治療資格的所述個體或可能對該治療有反應的所述個體投與有效量之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及有效量之免疫檢查點抑制劑。
115. 如條文91至114中任一項所述之方法，其中所述個體或其樣本具有介於≧1至100的CPS分數，且p16狀態呈陽性。
116. 如條文91至114中任一項所述之方法，其中所述個體或其樣本具有介於≧1至100的CPS分數，且p16狀態呈陰性。
117. 如條文91至114中任一項所述之方法，其中所述個體或其樣本具有介於≧1和＜20的CPS分數，且p16狀態呈陽性。
118. 如條文91至114中任一項所述之方法，其中所述個體或其樣本具有介於≧1和＜20的CPS分數，且p16狀態呈陰性。
119. 如條文91至114中任一項所述之方法，其中所述個體或其樣本具有介於≧20和100的CPS分數，且p16狀態呈陽性。
120. 如條文91至114中任一項所述之方法，其中所述個體或其樣本具有介於≧20和100的CPS分數，且p16狀態呈陰性。 實例
如本文所用，「MFXXXX」，其中X獨立地為數字0-9，是指包含一可變域的Fab，其中VH具有由4位數字標識的胺基酸序列。除非另有說明，否則可變域的輕鏈可變區通常具有圖4b的序列。各實例中的輕鏈具有如圖4a所示的序列。「MFXXXX VH」是指由4位數字標識的VH的胺基酸序列。MF更包含一輕鏈恆定區和一通常與輕鏈恆定區相互作用的重鏈恆定區。重鏈的VH/可變區不同且通常CH3區亦不同，其中一條重鏈的CH3結構域上具有KK突變，而另一條重鏈的CH3結構域上具有互補的DE突變 (請見參考文件PCT/NL2013/050294 (公開號為WO2013/157954)) 以及圖5d和5e。各實例中的雙特異性抗體具有如圖5所示的帶有一KK/DE CH3異二聚化結構域、一CH2結構域和一CH1結構域的Fc尾、如圖4a所示的一共同輕鏈以及由MF編號指定的VH。例如，由MF3755 xMF5816表示的雙特異性抗體具有上述一般序列和具有MF3755的序列的VH的可變域和具有MF5816的序列的VH的可變域。。
各重鏈可變區(VH)的胺基酸序列如圖3所示。雙特異性抗體EGFR/LGR5、MF3755xMF5816；包含重鏈可變區MF3755和MF5816，以及一共同輕鏈，以及包括來自無岩藻醣基化的增強ADCC修飾，以及如圖3所示的其他LGR5和EGFR組合，已在WO2017/069628中顯示出有效。 實例1. 產生雙特異性抗體
雙特異性抗體是藉由瞬時共轉染編碼具有不同VH域的IgG的二質體而產生，使用專有的CH3改造技術，以確保有效的異二聚化和雙特異性抗體的形成。共同輕鏈也在同一細胞中進行共轉染，在同一質體或另一質體上。在我們的申請案 (例如WO2013/157954和WO2013/157953；經由引用併入本文)中，我們已揭示用於從單一細胞中製造雙特異性抗體的方法和手段，由此提供有利於形成雙特異性抗體而非形成單特異性抗體的手段。這些方法也可有利地使用於本發明。具體而言，基本上僅產生雙特異性全長IgG分子的較佳突變為第一個CH3域 (稱之為「KK-變體」重鏈)中的位置351和366的胺基酸取代例如L351K和T366K (根據EU編號系統編號)，以及第二個CH3域 (稱之為「DE-變體」重鏈)中的位置351和368的胺基酸取代例如L351D和L368E，反之亦然(請見圖5d和5e)。先前在前述申請案中已證實，帶負電的DE-變體重鏈和帶正電的KK-變體重鏈會優先配對形成異二聚體 (稱之為「DEKK」雙特異性分子)。DE-變體重鏈的同二聚化 (DE-DE同二聚體)或KK-變體重鏈的同二聚化 (KK-KK同二聚體)很難發生，此係由於相同重鏈之間CH3-CH3界面中帶電殘基之間的強烈排斥所致。
將上述結合LGR5的可變域的VH基因選殖到編碼帶正電荷的CH3域的載體上。將結合EGFR的可變域的VH基因，例如WO 2015/130172 (經引用併入本文)中所揭示者，選殖到編碼帶負電荷的CH3域的載體上。將適應懸浮生長的293F Freestyle細胞培養在搖床平台上的T125燒瓶中，直到密度為3.0 x 10e6個細胞/ml。將細胞以0.3-0.5 x 10e6個活細胞/ml的密度接種到24-深孔盤的每孔中。這些細胞經編碼不同抗體並選殖至專有的載體系統之二質體混合物瞬時轉染。轉染後7天，收集細胞上清液並通過0.22 μM過濾器 (Sartorius)過濾。將無菌上清液保存在4°C直至純化抗體。 實例2：IgG純化與定量
在無菌條件下，使用Protein-A親和層析法在過濾盤中純化。首先，將培養基的pH值調節至pH 8.0，接著將含有IgG的上清液與Protein A Sepharose CL-4B微珠 (50% v/v) (Pierce)在25°C、600 rpm的搖床平台上靜置2小時。接下來，藉由過濾收穫微珠。用PBS pH 7.4清洗微珠兩次。之後用0.1 M檸檬酸鹽緩衝液在pH 3.0下沖提出結合的IgG，並立即使用Tris pH 8.0中和該沖提物。使用多重篩Ultracel 10多重篩盤 (Millipore)離心進行緩衝液更換。最後在pH7.4的PBS中收穫樣本。使用Octet測量IgG濃度。蛋白質樣本儲存於4°C。
為了決定純化的IgG的量，使用蛋白質A生物感測器 (Forte-Bio，根據供應商的建議)使用總人類IgG (SigmaAldrich，目錄編號I4506)作為標準物，藉由Octet分析決定抗體濃度。
以下雙特異性抗體適用於本實例並適用於本發明的方法中：MF3370xMF5790、MF3370x5803、MF3370x5805、MF3370x5808、MF3370x5809、MF3370x5814、MF3370x5816、MF3370x5817、MF3370x5818、MF3755xMF5790、MF3755x5803、MF3755x5805、MF3755x5808、MF3755x5809、MF3755x5814、MF3755x5816、MF3755x5817、MF3755x5818、MF4280xMF5790、MF4280x5803、MF4280x5805、MF4280x5808、MF4280x5809、MF4280x5814、MF4280x5816、MF4280x5817、MF4280x5818、MF4289xMF5790、MF4289x5803、MF4289x5805、MF4289x5808、MF4289x5809、MF4289x5814、MF4289x5816、MF4289x5817、及MF4289x5818。每一雙特異性抗體包含兩個由能夠分別結合EGFR和LGR5的MF編號指定的VH，進一步包含一具有KK/DE CH3異二聚化域的Fc尾，分別如SEQ ID NO: 117 (圖5d)和SEQ ID NO: 118 (圖5e)所示、一如SEQ ID NO: 116 (圖5c)所示的CH2域和一如SEQ ID NO:114 (圖5a)所示的CH1域、以及一如SEQ ID NO: 107 (圖4)所示的共同輕鏈。 實例3：使用派森妥單抗 (petosemtamab)和帕博利珠單抗 (pembrolizumab)治療HNSCC患者的劑量擴展
派森妥單抗 (petosemtamab)和帕博利珠單抗 (pembrolizumab)的組合將首度在HNSCC患者中進行探索。正在接受復發/轉移性疾病第一線全身治療的HNSCC患者符合資格。此組合將從兩種治療試劑的全劑量開始。 試驗設計
進行第1期開放標籤多中心研究，具初始劑量遞增部分，以決定派森妥單抗 (petosemtamab) (一種抗EGFR x 抗LGR5雙特異性抗體)治療mCRC實體瘤患者的建議第2期劑量(RP2D)，起始劑量為5 mg固定劑量。由於RP2D已建立為1500 mgQ2W，因此該抗體在試驗的擴展部分中進行進一步評估，包括在診斷為頭頸癌 (包括頭頸鱗狀細胞癌 (SCCHN))的患者中進行評估。對所有患者進行抗體的安全性、PK、免疫原性和初步抗腫瘤活性的鑑定，並進行生物標記分析，包括EGFR和LGR5狀態。
納入標準 1. 在開始任何研究程序之前簽署知情同意書(ICF)。 2. 在簽署知情同意書時年齡 ≧ 18。 3. 經組織學或細胞學證實的實體HNSCC瘤，並有轉移性或局部晚期疾病的證據，不適合具有治癒目的之標準治療： 擴展隊列：患有以下適應症的局部晚期不可切除或轉移性疾病的患者： 第一線HNSCC：有資格接受帕博利珠單抗 (pembrolizumab)作為第一線單一治療，具有表現PD-L1、CPS ≧1  (以在美國通過FDA核准的測試，或在其他國家通過核准的等效測試測定)的患者；患者先前應未接受過在復發或轉移性情況下進行的全身治療，儘管如果在簽署ICF之前已結束 ≧6 個月，或如果最後一次含鉑治療劑量後疾病進展 ≧6 個月，則允許先前的全身治療作為局部晚期疾病多模式治療的一部分。符合資格的HNSCC原發腫瘤位於口咽、口腔、下咽或喉部。不允許先前接受過抗PD-(L)1或​​抗EGFR療法。 4. 由當地實驗室進行的原發性口咽癌患者之IHC p16狀態(陽性或陰性)記錄。 5. 來自轉移或原發部位的基線腫瘤樣本 (例如福馬林固定石蠟包埋塊，[FFPE])。如果個體有此類具足夠材料的腫瘤樣本 (至少20片具有＞20%腫瘤含量的玻片)，且自該樣本收集之後沒有接受進一步的抗癌治療，則不需要在基線時進行新的腫瘤切片。不接受存檔FFPE玻片。只有當患者未接受抗EGFR或抗人類表皮生長因子受體 (HER)-2治療時，HNSCC原發性腫瘤材料才是可接受的。 6. 適合切片。 7. 如RECIST 1.1版放射學方法定義的可測量疾病。 8. 美國東岸癌症臨床研究合作組織 (ECOG)表現狀態為0或1。 9. 具有預期壽命≧ 12週，經研究者評估。 10. 超音波心電圖 (ECHO)或多門控採集掃描 (MUGA)顯示左心室射血分數 (LVEF) ≧ 50%。 11. 足夠的器官功能： ANC ≧1.5 X 10 9/L 血紅素 ≧9 g/dL 血小板 ≧100 x 10 9/L 校正後的總血清鈣處於正常範圍 血清鎂水平處於正常範圍內 (或以補充劑矯正) 允許丙胺酸轉胺酶 (ALT)、天冬胺酸轉胺酶 (AST) ≦2.5 x正常值上限 (ULN)、及總膽紅素≦1.5 x ULN (除外者為已知有吉爾伯特症候群，如果總膽紅素＞3.0 x ULN，或直接膽紅素＞1.5 x ULN)；在肝臟受累的情況下，ALT/AST≦5 x ULN及總膽紅素 ≦2 x ULN是被允許的，除非是由於已知的吉爾伯特症候群，當總膽紅素 ≦3.0 x ULN或直接膽紅素 ≦1.5 x ULN是被允許的，或肝細胞癌 [Child-Pugh A級]，當總膽紅素＜ 3 mg/dL是被允許的。 針對＞65歲的患者，血清肌酐水≦1.5 x ULN，或具有肌酐清除率≧60 mL/min，根據Cockroft和Gault公式或腎臟病飲食調整 (MDRD)公式計算 血清白蛋白 ≧3 g/dL 國際標準化比率 (INR)或凝血酶原時間 (PT)水平≦1.5x ULN，除非患者接受抗凝血治療且處於預期使用的抗凝血劑的治療範圍內 活化部分促凝血酶原激酶時間 (APTT)或PTT≦1.5x ULN，除非患者正在接受抗凝血治療且處於預期使用的抗凝血劑的治療範圍內 12. 願意接受人類免疫缺陷病毒 (HIV) 檢測，如果在(進入研究時)6個月內未進行檢測。CD4+數 ≧ 300/µL、偵測不到病毒量的HIV-陽性患者，且該患者正在接受高效抗逆轉錄病毒治療 (HAART)，係符合資格。
排除標準 1. 有中樞神經系統轉移，其未經治療且有症狀，或需要放射線治療或手術，或需要持續的類固醇治療，以在本發明治療開始14天內控制症狀。 2. 已知軟腦膜受累。 3. 在進入試驗前4週內參加過另一項臨床試驗或使用任何研究藥物進行治療。 4. 在試驗治療第一劑後4週或5個半衰期 (以較長者為準)內進行全身性抗癌治療。對於具有主要延遲毒性的細胞毒性試劑 (例如，絲裂黴素C、亞硝基脲)，或抗癌免疫療法，需要六週的清除期。 5. 需要免疫抑制藥物 (例如甲胺蝶呤、環磷醯胺) 6. 在試驗治療第一劑的3週內接受過大手術或放射線治療。不論何時接受過先前 ≧25%骨髓放射線治療的患者不符合資格。 7. 具有＞1級的持續等級的臨床顯著毒性，與先前的抗腫瘤治療相關 (脫髮除外)；美國國家癌症研究所—不良事件通用術語標準 (NCI-CTCAE) v4.03或v5.0等級≦ 2級的穩定感覺神經病變是允許的。 8. 有歸因於人類蛋白質或任何賦形劑，例如帕博利珠單抗 (pembrolizumab)或派森妥單抗 (petosemtamab)，的過敏反應史或任何毒性，需要永久停用這些試劑。 9. 經適當治療後表現出不受控制的高血壓 (收縮壓BP ＞ 150 mmHg及/或舒張壓BP ＞ 100 mmHg)，或不穩定型心絞痛。 10. 紐約心臟協會 (NYHA)標準第II-IV級之充血性心臟衰竭病史，或需要治療的嚴重心律不整 (心房顫動、陣發性室上性心搏過速除外)。 11. 在進入試驗後六個月內患有心肌梗塞病史。 12. 具有先前惡性腫瘤病史，但切除的子宮頸上皮內瘤變、或非黑素瘤皮膚癌、或被認為在至少三年內具有低復發風險且沒有疾病證據的治癒性治療的癌症除外。 13. 目前患有任何原因的休息時呼吸困難，或其他需要持續氧氣治療的疾病。 14. 有間質性肺部疾病 (ILD)(例如肺炎或肺纖維化)病史，或基線胸部電腦斷層掃描 (CT)掃描有ILD證據的患者。 15. 當前的嚴重疾病或醫療狀況，包括但不限於：不受控制的活動性感染、臨床上顯著的肺部、代謝或精神疾病。 16. 患有下列傳染病的患者： 活動性B型肝炎表面抗原感染 (HBsAg陽性)但未接受抗病毒治療。請注意： 患有活動性B型肝炎 (HbsAg陽性)的患者必須接受拉米夫定 (lamivudine)、替諾福韋 (tenofovir)、恩替卡韋 (entecavir)或其他抗病毒藥物的抗病毒治療，在試驗治療開始前至少≧7天開始 患有B型肝炎病史 (抗-HBc陽性、HbsAg和B型肝炎病毒[HBV]-DNA陰性)的患者符合條件 C型肝炎病毒(HC)核醣核酸(RNA)檢測呈陽性。注意：HCV感染自發性消退的患者 (即HCV抗體陽性但未偵測到HCV-RNA)，或在抗病毒治療後獲得持續反應並顯示無可偵測的HCV RNA≧6個月 (使用無IFN的處方)，或停止抗病毒治療後≧12個月 (使用基於IFN的處方)者符合條件。 17. 具有Child-Pugh B級或C級肝硬化狀態；患有已知纖維板層HCC、患有肉瘤樣HCC、或患有混合性膽管癌和HCC的患者。 18. 懷孕個體或正在哺乳的患者；具有生育能力的患者必須在進入試驗之前、在參與試驗期間以及最後一劑派森妥單抗 (petosemtamab)後的六個月內使用高效避孕方法。 19. 已診斷為免疫缺陷，或在第一劑之前7天內正在接受全身性類固醇療法或任何形式的免疫抑制療法。允許使用皮質類固醇作為本流程指定的過敏反應或IRR的預用藥。 20. 在過去兩年內患有活動性自體免疫疾病，需要全身性免疫抑制治療；替代療法 (例如甲狀腺素、胰島素或針對腎上腺或腦下腺功能不全的生理性皮質類固醇替代療法等)不被視為免疫抑制治療。 21. 已進行過同種異體組織/實體器官移植。 22. 具有(任何組織學的)鼻咽原發腫瘤部位的患者。 劑量擴展
在擴展部分中，派森妥單抗 (petosemtamab)以RP2D向頭頸癌 (特別是SCCHN)患者投與。RP2D定義為1500 mg Q2W，額外的患者將接受此劑量和時間表的治療，以進一步鑑定抗體的安全性、耐受性、PK和免疫原性，並進行抗腫瘤活性和生物標記評估的初步評估。或者，派森妥單抗 (petosemtamab)以1100 mg固定劑量Q2W，或以達成EGFR和LGR5二者的人類受體佔據率至少95%或至少99%的劑量給藥。
頭頸癌 (尤其是SCCHN)患者的抗體治療正在探索其抗腫瘤活性。該藥物的整體安全性也將探詢。 研究性治療和治療方案
派森妥單抗 (petosemtamab)是一種抗EGFR x 抗LGR5雙特異性抗體，被配製為靜脈輸注用的透明液體溶液。使用標準輸注程序每兩週進行一次靜脈輸注，起始劑量為5 mg (固定劑量)，建議的第2期劑量為1500 mg (固定劑量)。一旦達到RP2D，就停止劑量遞增。第1週期期間，輸注時間必須超過最低4小時。在沒有IRR的情況下，第1週期後的後續輸注時間可根據研究者的判斷減少至2小時。一個週期被認為是4週。 帕博利珠單抗 (pembrolizumab)之投與
帕博利珠單抗 (pembrolizumab)劑量為400 mg Q6W，但也可為200 mg Q3W。經由30分鐘靜脈輸注，及/或遵循投藥處的每個國家的標籤說明進行投藥。注射液為單劑量小瓶中的100 mg/4 mL (25 mg/mL)溶液。 預用藥
在第1週期期間，所有輸注將投與至少4小時，並採用以下預用藥方案：在輸注開始前24小時，8 mg地塞米松(dexamethasone) PO在輸注開始前1小時投與，每一患者將接受地塞米松20 mg IV、右氯苯那敏5 mg IV或苯海拉明(diphenhydramine) 50 mg PO或氯苯那敏 (chlorpheniramine ) 10 mg IV、雷尼替丁 (Ranitidine ) 50 mg IV或150 mg PO，以及撲熱息痛(Paracetamol) 1g IV或650 mg PO。 治療期間
試驗治療持續進行，直至確認疾病進展 (根據RECIST 1.1)、不可接受的毒性、撤回同意、患者不遵從、研究者判定 (例如臨床惡化)、或抗體中斷＞連續6週。在最後一次抗體輸注後，對患者進行至少30天的安全性追蹤，直至所有相關毒性恢復或穩定，並對疾病進展和生存狀態進行12個月的追蹤。 藥效評估
治療開始後，每8週根據RECIST 1.1 (Eisenhauer等人, 2009 Eur J Cancer 45:228–247)基於CT/MRI進行腫瘤評估。客觀反應必須在首次觀察後至少4週確認。對於在基線時有骨轉移或試驗中疑似病變的患者，根據臨床指示進行骨骼掃描。循環血液腫瘤標記物，包括癌胚抗原 (CEA)，在篩選時和每一週期的第一天進行評估。 伴隨藥物
主要允許的藥物如下：撲熱息痛 (paracetamol)/乙醯胺酚、抗組織胺或皮質類固醇允許進行預用藥治療方案，也可以在出現IRR、超敏反應或過敏反應時投與，根據當地標準臨床實踐。研究者可自行決定是否給予患者安全和健康所需的所有藥物，並預期這些藥物不會干擾試驗藥物的評估。本試驗期間同時進行放射治療以控制症狀，而沒有進展證據。
主要禁用藥物如下：同時使用慢性口服皮質類固醇 (＞10 mg/天之潑尼松(prednisone)等效物)、腫瘤壞死因子 (TNF)-α抑制劑、抗T細胞抗體、或其他免疫抑制藥物。試驗期間或試驗治療首劑前4週內 (或，如果已知，5個半衰期內) (以較長者為準)使用任何研究藥物或其他抗癌療法。對於具有主要延遲毒性的細胞毒性試劑 (例如絲裂黴素C、亞硝基脲)或抗癌免疫療法，則需要6週的清除期。在試驗治療第一劑前3週內進行過大手術或放射治療，或之前對 ≧25%骨髓進行放療。 實例4. HNSCC癌症患者的CPS評分
在開始組合治療之前，根據臨床試驗流程，HNSCC患者需要進行預先篩選，以偵測出表現PD-L1的腫瘤。PD-L1測試必須在CLIA認證的實驗室 (或同級實驗室)中進行，並藉由美國FDA核准的測試或其他國家批准的同等測試進行。為了符合納入資格，HNSCC患者必須具備經組織學證實的CPS ≧1；CPS定義為PDL1陽性腫瘤細胞、淋巴球和巨噬細胞的數量除以腫瘤細胞總數，再乘以100。如果無法進行當地檢測，則將在有資格進行此類檢測的中心實驗室進行檢測測試。 試劑製備
染色前必須準備以下試劑。EnVision FLEX 標靶修復溶液，低pH值 (50x)。使用蒸餾水或去離子水 (試劑級水)以1:50稀釋標靶修復溶液，低pH值 (50x)，製備足量的1x 標靶修復溶液，低pH值；1x 標靶修復溶液的pH值必須為6.1 ± 0.2。1x 標靶修復溶液的pH值低於5.9可能會產生錯誤結果。一瓶30 mL之低pH值 (50x) 標靶修復溶液以1:50稀釋可提供1.5 L之1x試劑，足以填充一個PT Link槽，每次使用最多可處理24張玻片。1x 標靶修復溶液使用3次後丟棄，稀釋後5天後請勿使用。
EnVision FLEX清洗緩衝液 (20x)。使用蒸餾水或去離子水 (試劑級水)以1:20稀釋清洗緩衝液 (20x)，準備足夠量的清洗緩衝液以進行清洗步驟。未使用的1x溶液在2-8℃下保存不超過1個月。如果緩衝液外觀混濁則丟棄。
DAB+受質-色素原溶液。此溶液在使用前應充分混合。溶液中產生的任何沉澱不會影響染色品質。為了製備DAB+受質-色素原溶液，在每mL DAB+受質緩衝液中加入1滴液體DAB+色素原並混合。若在2-8°C避光保存，製備的受質-色素原可穩定保存5天。 標本製備
組織標本必須經處理以保存組織，以進行IHC染色。所有標本均應使用組織處理的標準方法。適合使用石蠟包埋標本 (FFPE)。替代固定劑尚未經過驗證，可能會給出錯誤的結果。建議在10%中性緩衝福馬林 (NBF)中的固定時間為12-72小時。應避免固定時間≦3小時。將標本切成3或4 mm厚，在福馬林中固定，並在一系列醇和二甲苯中脫水和澄清，之後用熔化的石蠟滲透。石蠟溫度不應超過60 °C。5年或以上的NSCLC FFPE組織塊可能會導致PD-L1免疫反應性喪失。
組織標本應切成4-5 µm的切片。切片後，組織應封於Dako FLEX IHC顯微鏡玻片 (代號K8020)或Superfrost Plus玻片上，之後放入58 ± 2 °C烘箱中1小時。
切割部分保存建議。為了保持抗原性，組織切片封於玻片上後，應在2-8 °C (較佳)或室溫最高25 °C的黑暗條件下保存。玻片儲存和處理條件在封片後的任何時間都不應超過25 °C，以確保組織完整性和抗原性。
HNSCC切片必須在2-8 °C保存時(較佳)，在6個月內進行染色，或在25 °C保存時，在4個月內進行染色。 自動化染色儀Link 48溶液的染色程序。
在免疫染色之前，所有試劑應平衡至室溫 (20-25 °C)。同樣地，所有靜置均應在室溫下進行。在染色過程中不要讓組織切片乾燥。乾燥的組織切片可能顯示出增加的非特異性染色。染色所需的所有步驟和靜置時間均在Dako Link軟體中預先編程。 染色流程
PD-L1 IHC 22C3 pharmDx染色流程可從Dako Link下拉選單中的選項中選擇。染色所需的所有步驟和靜置時間均在自動化染色儀Link 48中預先編程。 步驟1：脫蠟、再水合和標靶修復 (三合一)程序
設定PT Link (代碼PT100/PT101/PT200)預熱並冷卻至65 °C。設定加熱至97 °C、20分鐘。將PT Link槽中填充入每槽1.5 L標靶修復溶液、低pH值、1x工作溶液，以覆蓋組織切片。將標靶修復溶液預熱至65 °C。將裝有已封片的FFPE組織切片的自動染色架浸入PT Link槽中預熱的標靶修復溶液，低pH值 (1x工作溶液)中。在97 °C靜置20分鐘。當標靶修復靜置完成且溫度冷卻至65 °C時，從PT Link槽中移出每一個帶有玻片的自動染色儀玻片架，並立即將該帶有玻片的自動染色儀玻片架放入含有稀釋的室溫清洗緩衝液 (代碼K8007)的槽中 (例如PT Link清洗站，代碼PT109)。將玻片在稀釋的室溫清洗緩衝液中靜置5分鐘。
步驟2：染色程序。在脫蠟、再水合和標靶修復 (三合一)程序後，將帶有玻片的自動染色儀架放置在自動染色儀Link 48上。儀器將藉由施加適當的試劑、監控靜置時間並在各試劑之間清洗玻片來進行染色過程。試劑時間在Dako Link軟體中預先編程。
步驟3：複染。玻片應用蘇木精(Hematoxylin) (代碼 K8008)複染5分鐘。蘇木精靜置時間在流程中預先設定。
步驟4：封片。需要非水性、永久封片介質。 品質控制
PD-L1 IHC 22C3 pharmDx中的試劑已使用標靶修復和染色程序藉由免疫組織化學進行品質控制。每次染色運作都應包括品質控制。這些品質控制包括：H&E染色的患者組織標本；實驗室提供的陽性和陰性對照組織；以及Dako提供的對照細胞株玻片。
測定法驗證。在診斷程序中首次使用染色系統之前，使用者應藉由在一系列實驗室提供的組織上進行測試，來驗證該測定法的表現度，這些組織具有代表已知陽性和陰性組織的已知IHC表現度特徵。對於每一新抗體批次，或每當測定參數發生變化時，都應重複這些品質控制程序。 評分解釋。
必須評估整個組織切片上的所有活腫瘤細胞並將其納入PD-L1表現評估中。PD-L1表現藉由CPS測定，其為PD-L1染色細胞 (腫瘤細胞、淋巴球、巨噬細胞)的數量除以活腫瘤細胞總數，再乘以100。活腫瘤細胞、淋巴球和巨噬細胞的區別對於準確估計分母至關重要。儘管計算結果可超過100，但最高分數定義為CPS 100。玻片評估必須由病理學家使用光學顯微鏡進行。對於免疫組織化學染色的評估，10-20 x放大倍率的物鏡是合適的。為了測定PD-L1表現，需要20x放大倍率的物鏡。根據定義，PD-L1染色細胞為： • 腫瘤細胞，其具有令人信服的部分或完整的線性膜染色 (任何強度)，其與細胞質染色有區分，以及 • 腫瘤巢及/或鄰近支持基質內的淋巴細胞和巨噬細胞 (單核發炎細胞，MIC)，其具有令人信服的膜及/或細胞質染色 (任何強度)。MIC必須與針對腫瘤的反應直接相關。
對於每次染色運作，應按照表2中所示的順序檢查玻片，以確定染色運作的有效性並能評估樣本組織的染色。在評估PD-L1表現時，檢查PD-L1染色的病人標本和PD-L1 IHC 22C3 pharmDx的陰性對照試劑。以陰性對照試劑染色的樣本必須具有0的特異性染色和 ≦1+的非特異性染色。
HNSCC-CPS解釋。PD-L1染色玻片中必須至少存在100個活腫瘤細胞，該標本才足以進行PD-L1評估。CPS分母包括所有存活的侵襲性腫瘤細胞 (PD-L1染色和未染色)。所有免疫細胞、良性細胞、壞死或無活力的腫瘤細胞、原位癌、基質細胞 (包括纖維母細胞)以及壞死細胞及/或細胞碎片均被排除。表1詳細介紹HNSCC的CPS之分子包括和排除的組織成分。 表1：CPS之分子的包括/排除標準
組織元素 包括在分子內的 排除於分子外的
腫瘤細胞 對活的侵襲性腫瘤細胞進行令人信服的部分或完整線性膜染色 (任何強度) – 不染色的腫瘤細胞 – 僅細胞質染色的腫瘤細胞
免疫細胞 腫瘤巢和鄰近支持基質內的單核發炎細胞 (MIC)的膜及/或細胞質*染色 (任何強度)：** – 淋巴球 (包括淋巴球聚集體) – 巨噬細胞*** 僅對與腫瘤反應直接相關的MIC進行評分 – 不染色MIC – 與潰瘍或其他發炎過程相關的MIC (包括淋巴聚集體) – 與原位癌相關的MIC – 與良性結構相關的MIC – 嗜中性球、嗜酸性球和漿細胞
其他細胞 不包括 – 原位癌 – 良性細胞 – 基質細胞 (包括纖維母細胞) – 壞死細胞及/或細胞碎片
*在MIC中，由於核比細胞質的高比例，因此膜和細胞質染色通常無法區分。因此，MIC的膜及/或細胞質染色皆包括在評分中。 **相鄰MIC定義為與腫瘤位於同一20x視野內。然而，應排除與腫瘤反應 不直接相關的MIC。 ***巨噬細胞和組織細胞被認為是相同的細胞 表2
標本 基本原理 要求
H&E (實驗室提供) 首先評估組織樣本的蘇木精和伊紅 (H&E)染色，以評估組織學和保存品質。 PD-L1 IHC 22C3 pharmDx和H&E 染色應在該標本的同一石蠟塊的連續切片上進行。 組織標本應完整、保存完好，並應確認腫瘤指徵。
對照玻片 (套組提供) 應檢查以PD-L1 IHC 22C3 pharmDx的PD-L1一級抗體染色的對照細胞株玻片 (CCLS)，以確定所有試劑均正常運作 CCLS包含PD-L1陽性細胞株沉澱和PD-L1-陰性細胞株沉澱 在每一染色運作中，應使用PD-L1一級抗體對一CCLS進行染色。NCI-H226 (PD-L1陽性對照細胞株)接受標準： ≧70%細胞的細胞膜染色；平均染色強度 ≧2+；非特異性染色強度＜1+。 MCF-7 (PD-L1-NC細胞株)接受標準：無特異性染色；非特異性染色強度 ＜1+。請注意，有時可能會觀察到MCF-7細胞沉澱中少數細胞的染色。可適用以下接受標準：MCF-7細胞沉澱邊界內存在 ≦10個總細胞具有明顯細胞膜染色，或 ≧1+強度的細胞質染色是可接受的。如果任一CCLS不符合這些標準，則該患者的標本的所有結果應視為無效。
陽性對照組 (PC) 組織玻片 (實驗室提供) 接下來應檢查以PD-L1一級抗體和NC試劑染色的PC組織玻片。這些玻片驗證固定方法和表位修復過程是有效的。已知的陽性組織對照組只能用於監測處理過的組織和測試試劑的正確表現度，無法幫助制定患者樣本的特定診斷。 對照組應是與患者標本具有相同腫瘤指徵的切片/手術標本，並以與患者樣本相同的方式盡快固定、處理和包埋。使用保存完好的標本來解釋染色結果，因為壞死或退化的細胞通常表現出非特異性染色。選定使用作為陽性組織對照組的組織，在PD-L1染色時應呈現弱到中度的陽性染色，以幫助偵測測定法靈敏度的細微變化。 每一染色回合應包括兩張陽性組織對照玻片。 以PD-L1染色的玻片：應觀察棕色細胞膜染色的存在。非特異性染色應 ≦1+。 用NC試劑染色的玻片：無膜染色。非特異性染色應 ≦ 1+。 如果陽性組織對照組未能表現出適當的陽性染色，則該測試樣本的結果應被視為無效。
陰性對照組(NC) 組織玻片(實驗室-提供) 接下來應檢查以PD-L1一級抗體和NC試劑染色的NC組織玻片(已知為PD-L1陰性)，以驗證該一級抗體標記標靶抗原的特異性。或者，該PC組織的陰性部分可用作NC組織，但這應由使用者驗證。 對照組應是與患者標本具有相同腫瘤指徵的切片/手術標本，並以與病患樣本相同的方式盡快固定、處理和包埋。每一染色回合應包括兩張陰性組織對照玻片。以PD-L1染色的玻片：腫瘤細胞中無膜染色。非特異性染色應 ≦ 1+。 以NC試劑染色的玻片：無膜染色。非特異性染色應 ≦ 1+。 如果NC組織玻片中出現特異性細胞膜染色，則該患者標本的結果應視為無效。
扁桃腺對照組織 (任選)(實驗室提供) 使用與患者樣本類似的方式固定、處理和包埋的人類扁桃腺組織作為額外的對照材料，以驗證該測定法的靈敏度、特異性和非特異性背景染色 隱窩上皮部分應檢測到強陽性染色，生長中心的濾泡巨噬細胞應檢測到弱至中度染色。內皮細胞、纖維母細胞以及表面上皮細胞應觀察到陰性染色。
患者組織玻片使用NC試劑 (NCR)染色 玻片使用NCR染色 檢驗以NCR染色的病人檢體之PD-L1 IHC 22C3 pharmDx。NCR用於代替一級抗體，有助於解釋抗原位點的特異性染色。 缺乏細胞膜染色證實該一級抗體對標靶抗原的特異性標記。非特異性染色應≦ 1+。
患者組織玻片使用PD-L1一級抗體染色 組織玻片使用PD-L1一級抗體染色 最後檢驗患者切片的完整玻片，使用來自PDL1 IHC 22C3 pharmDx的PD-L1一級抗體染色。 陽性染色強度應在同一回合中，在患者NCR玻片上觀察到任何非特異性背景染色的程度下進行評估。與任何IHC測試一樣，陰性結果意味著未檢測到抗原，但不一定表示所檢測的細胞/組織中不存在抗原。必須評估整個PD-L1染色的患者玻片上的所有活腫瘤細胞，並將其納入PD-L1評分評估中。樣本中必須至少存在100個活腫瘤細胞才能被認為足以進行PD-L1評估。
實例5. 經由IHC進行EGFR評分
EGFR pharmDx™測定法是一種定性免疫組織化學 (IHC)套組系統，用於識別正常組織和腫瘤組織中表皮生長因子受體 (EGFR)的表現，該等組織經常規固定以進行組織學評估。EGFR pharmDx特異性檢測EGFR表現細胞中的EGFR (HER1)蛋白。
EGFR pharmDx™測定法使用EGFR抗體、殖株2-18C9 (2-18C9)檢測EGFR蛋白。殖株2-18C9已針對表現EGFR、HER2、HER3和HER4的細胞株進行反應性測試。在SKBR3和A431細胞裂解物的西方印跡法中，2-18C9辨識出170 kD條帶，該條帶與已知的EGFR分子量一致。在EGFRvIII轉染細胞株的免疫組織化學、流式細胞儀和西方印跡法中觀察到，也發現殖株2-18C9能夠辨識該受體的EGFRvIII (145kD)形式。在西方印跡實驗中，2-18C9與HER2陽性CAMA-1細胞裂解物、經HER3轉化的大腸桿菌BL-21蛋白萃取物和CHO-HER4經轉染的細胞裂解物不會發生反應。此外，表現myc (載體標籤)的中國倉鼠卵巢(CHO)轉染子 (單獨或與HER家族成員之一者共表現)，係於腔室玻片中生長、經福馬林固定和石蠟包埋，並以抗myc和2-18C9染色。myc抗體可染色所有5個CHO轉染子，而2-18C9僅會染色經HER1轉染的CHO細胞。
EGFR評分是根據製造商的說明和建議，使用Dako EGFR pharmDx™ 使用者流程進行。請參閱全球網頁：agilent.com/cs/library/usermanuals/public/08052_egfr_pharmdx_interpretation_manual.pdf. 標本製備
處理切片標本以保存組織以進行IHC染色。所有標本均應使用組織處理的標準方法進行。在以下固定劑中保存的標本適合使用EGFR pharmDx進行測試：10% (v/v) 中性緩衝福馬林、10% (v/v) 無緩衝福馬林、25% (v/v ) 無緩衝福馬林、AFA(醋酸福馬林醇)、Richard-Allen Scientific的Pen-fix和Bouin的固定劑。 石蠟包埋切片
經常規處理的組織和經石蠟包埋的組織都適合使用。切片標本應切成3或4 mm的厚度，並於適合該固定劑的一段時間下進行固定。之後將組織在一系列醇和二甲苯中脫水和澄清，之後用熔化的石蠟滲透。石蠟溫度不應超過60 °C。如果儲存在陰涼處 (15–25 °C)，則經適當固定和包埋的表現EGFR蛋白的組織塊將在切片和玻片封片之前無限期保存。
組織標本應切成3-5 µm的切片。切片後，組織應封於玻片上並放置在乾燥架上。建議使用以下玻片：Fisher’s SuperFrost Plus, Dako’s Silanized (代號S3003)、帶電或聚L-離胺酸塗層玻片。應在吸水毛巾上敲擊玻片架，以除去石蠟下和玻璃上殘留的水，然後在室溫下乾燥一小時。之後將玻片架放入56-60 °C培養箱中一小時。從培養箱中取出玻片後，應藉由在毛巾上敲擊玻片並在培養箱中額外乾燥一小時，來除去玻片上殘留的任何多餘水分。從培養箱中取出後，玻片應保持在室溫下，直到冷卻且石蠟硬化。為了保留抗原性，將組織切片封於玻片上 (Fisher’s SuperFrost Plus、聚L-離胺酸塗層、帶電Dako’s Silanized玻片 (代號S3003))在室溫 (20–25°C)下保存時，應在切片後2個月內進行染色。
應同時製備用於EGFR評估和腫瘤存在驗證所需的玻片。
建議至少使用5張玻片，其中1張玻片用於評估腫瘤存在，2張玻片用於EGFR蛋白評估 (一張玻片用於一級抗體，一張玻片用於陰性對照試劑)，以及2張玻片備用。 試劑製備
染色前製備以下試劑： 清洗緩衝液：使用蒸餾水或去離子水(試劑級水)將清洗緩衝液以1:10稀釋10倍，以製備足夠量的清洗緩衝液以進行清洗步驟。如果緩衝液外觀混濁則丟棄。 受質-色素原溶液(DAB+)：此溶液在使用前應充分混合。溶液中產生的任何沉澱不會影響染色品質。要製備DAB+受質-色素原溶液，請將11滴液體DAB+色素原加入一小瓶DAB+受質緩衝液中並混合。丟棄任何未使用的溶液。根據上述指南進行稀釋。在DAB+受質緩衝液中添加過量的液體DAB+色素原將導致陽性訊號惡化。 複染。 如果需要，準備氨水用於複染藍色。氨水 (0.037 mol/L)由2.5 (±0.5) mL之15 mol/L(濃)氫氧化銨與1公升試劑級水混合而製備。未使用的0.037 mol/L氨水可在室溫(20–25°C)下在密封瓶中保存長達12個月。 封片介質。 建議使用封片介質如Dako的Faramount水性封片介質，即用型 (代號S3025)或Dako的甘油凝膠封片介質 (代號C0563)進行水性封片。使用前加熱至約40(±5) °C，使甘油凝膠液化。非水性、永久封片也適用，例如Dako的Ultramount (代碼S1964) Dako自動染色儀上的染色程序
在免疫染色之前，所有試劑應平衡至室溫 (20–25°C)。同樣地，所有靜置均應在室溫下進行。在染色過程中不要讓組織切片乾燥。乾燥的組織切片可能顯示出增加的非特異性染色。
脫蠟和再水合化。在染色前，組織玻片必須脫蠟以除去包埋介質，並再水合。避免石蠟去除不完全。殘留的包埋介質會導致非特異性染色增加。 步驟1. 將玻片放入二甲苯浴中並靜置5(±1)分鐘。更換浴液並重複一次。 步驟2. 移除多餘的液體並將玻片放入無水乙醇中3(±1)分鐘。更換浴液並重複一次。 步驟3. 移除多餘的液體，並將玻片放入95%乙醇中3(±1)分鐘。更換浴液並重複一次。 步驟4. 移除多餘的液體並將玻片放入試劑級水中5(±1)分鐘。 步驟5. 拍掉多餘的液體並將玻片放入清洗緩衝液中。按照染色流程中所述開始染色程序。
二甲苯和酒精溶液應在40張玻片後更換。可使用甲苯或二甲苯替代品 (例如Histoclear)來代替二甲苯。EGFR pharmDx包括藉由蛋白水解酶消化步驟進行預處理。組織切片有時可能會過度消化，導致細胞膜和整體組織結構被破壞。進行測定法時要仔細注意蛋白水解消化步驟的持續時間。
固定後程序 1. 將切片脫蠟並浸入試劑級水中。 2. 將玻片浸入10%中性緩衝福馬林中10分鐘。 3. 用去離子水或蒸餾水沖洗玻片兩次。 4. 繼續EGFR pharmDx染色程序。
自動化染色流程 步驟 1. 選擇所需的流程和染色運作程序。 步驟 2. 使用自動程式設定程式並啟動EGFR pharmDx程式。 步驟 3. 依照電腦產生的試劑地圖將試劑小瓶放入DAKO自動染色儀的試劑架中。 步驟 4. 根據電腦產生的玻片地圖將玻片載入DAKO自動染色儀上。 步驟 5. 開始運作。 步驟 6. 從DAKO自動染色儀中取出玻片。
繼續複染和封片。在DAB+ 受質-色素原溶液步驟後，以試劑級水沖洗玻片。(DAKO自動染色儀硬體版本02和03，在受質-色素原步驟後用試劑級水沖洗玻片。DAKO自動染色儀01硬體版本則是在緩衝液中沖洗玻片。因此，在01硬體上染色的玻片必須在從自動染色機取出後，用試劑級水沖洗玻片)。 染色程序的解釋
玻片評估應由病理學家使用光學顯微鏡進行。所有評估均針對標本的腫瘤區域進行。對於免疫細胞化學染色和評分的評估，10X或20X放大倍率的物鏡是合適的。
使用完整細胞解釋染色結果；壞死或退化的細胞通常會出現非特異性染色。每個EGFR pharmDx套組中均包含陽性和陰性細胞株，以在每次進行檢測時驗證染色運作。對照細胞株的適當染色提供了EGFR pharmDx測定正常運作的證據。CAMA-1對照細胞株無膜染色(0)、HT-29對照細胞系呈中度棕色完全或不完全膜染色(2+)，顯示該染色運作有效。如果陽性對照細胞株的染色強度太弱或太強，可能會得到偽陰性或偽陽性結果，應重複測試。參考影像可在EGFR pharmDx解釋指南中找到。
EGFR pharmDx主要對細胞膜進行染色，顯示完整和不完整的圓周染色。免疫染色模式通常是不均勻的，在單一腫瘤內會展現出不同的染色強度。在細胞質和細胞外空間也觀察到染色。細胞質染色很常見，但如果顯著的細胞質染色導致難以區分膜染色和解釋結果，則應重複測試。
腫瘤應報告為EGFR-陽性或EGFR-陰性，使用膜染色作為可評估結構。如果腫瘤細胞具有任何高於背景的膜染色，無論其是否完全呈圓周狀，則該腫瘤細胞為EGFR陽性。任何腫瘤細胞中沒有高於背景膜染色的腫瘤則報告為EGFR陰性腫瘤。
根據所用蘇木精的培養時間和效力，複染將導致細胞核呈現淺藍色至深藍色。過度或不完整的複染可能會影響結果的解釋。
染色強度建立如下：3+ (強染色)：在低倍放大倍率、x5物鏡下可見，可根據需要在更高水平下確認；2+ (中度染色)：在中等放大倍率、x10或x20物鏡下可見；1+ (弱染色)：僅在高放大倍率、x40物鏡下才能可靠確認；0 (無染色)：在高放大倍率下沒有可見染色。
向治療醫生報告 定義
EGFR陰性腫瘤 所有腫瘤細胞均不存在高於背景的膜染色
EGFR陽性腫瘤 EGFR陽性染色被定義為腫瘤細胞膜的任何IHC染色高於背景水平；不論圓周染色是否完整或不完整
染色強度 腫瘤細胞染色百分比
1+、2+或3+ ＞ 0%
EGFR H評分
使用IHC進行的膜染色評估係將樣本分為4個染色強度類別 (0至3+)。值得注意的是，只有腫瘤細胞的線性細胞間染色才被認為是陽性，完整和不完整的膜染色都被考慮和記錄。此外，對於組織分數計算，所有膜染色都被認為與該完整性 (完整和不完整的膜染色)無關。
H分數使用以下公式分配：[1 × (具有1+染色的細胞百分比) + 2 × (具有2+染色的細胞百分比) + 3 × (具有3+染色的細胞百分比)]，得EGFR的H分數，範圍在0-300之間。 實例6
使用基於殖株E6H4 (CINtec® Histology, Roche Diagnostics)的市售測試套組測定樣本的p16狀態，此外更使用自動化玻片製備系統，例如BenchMark讀取技術，例如BenchMark XT、BenchMark ULTRA或BenchMark GX，依據要求的效能和需求。
根據2018年CAP指南對樣本進行評分，當至少有70%的核和細胞質表現且強度至少為中等到強時，則報告為p16 IHC陽性。如果由於外部因素妨礙解釋而無法評估結果，則測試結果被認為是不確定的。p16測試可針對從患有口咽癌的個體獲得的樣本或口咽癌/腫瘤樣本進行。 實例7
一名66歲男性患者被診斷患有無法治癒的頭頸癌晚期疾病，特別是原發腫瘤位於喉部的鱗狀細胞癌，係以1500 mg Q2W之派森妥單抗 (petosemtamab)加上400 mg Q6W之帕博利珠單抗 (pembrolizumab)治療。患者使用pharmDx PD-L1 IHC套組、使用殖株22C3 (Agilent)測試，建立為PD-L1+，CPS分數為1。
約8週後使用RECIST 1.1標準進行的腫瘤評估顯示部分反應 (PR)，目標病灶縮小76%。第二次腫瘤評估顯示目標病灶縮小81%後，PR得到確認。 實例8
一名66歲女性患者被診斷出患有無法治癒的頭頸癌晚期疾病，特別是原發腫瘤位於口腔的鱗狀細胞癌，係以1500 mg Q2W之派森妥單抗 (petosemtamab)及400 mg Q6W之帕博利珠單抗 (pembrolizumab)治療。患者使用pharmDx PD-L1 IHC套組、使用殖株22C3 (Agilent)測試，建立為PD-L1陽性，CPS分數超過1。
7週後使用RECIST 1.1標準進行的腫瘤評估顯示完全反應 (CR)，目標病灶縮小100%。第二次腫瘤評估後，CR得到確認。 實例9
一名63歲男性患者被診斷患有頭頸癌，特別是原發腫瘤位置不明的鱗狀細胞癌，係以1500 mg Q2W之派森妥單抗 (petosemtamab)及400 mg Q6W之帕博利珠單抗 (pembrolizumab)治療頸部、淋巴結、肺和肝臟的晚期疾病。患者使用pharmDx PD-L1 IHC套組、使用殖株22C3 (Agilent)測試，建立為PD-L1 +，CPS分數為43。
約7週後使用RECIST 1.1標準進行的腫瘤評估顯示部分反應 (PR)，目標病灶縮小51%。第二次腫瘤評估顯示目標病灶縮小62%後，PR得到確認。
無
圖1. 人類LGR5序列；序列編號:1（Sequence ID NO: 1）。
圖2. 人類EGFR序列；序列編號:2.。
圖3. (a)與一共同輕鏈可變區 (例如人類kappa輕鏈可變區IgVκ1 39*01/IGJκ1*01)一起形成結合LGR5和EGFR的可變域的重鏈可變區之胺基酸序列 (序列編號:3-15)。CDR和框架區如圖3b所示，依據Kabat編號。
圖4. a) 共同輕鏈的胺基酸序列。b) 共同輕鏈可變區 (IGKV1-39/jk1)。c) 輕鏈恆定區。d) V區IGKV1-39A；e) 根據IMGT編號的共同輕鏈的CDR1、CDR2和CDR3。
圖5. 用於產生雙特異性分子的IgG重鏈。a) CH1區。b) 鉸鏈區。c) CH2區。d) 包含變異L351K和T366K (KK)的CH3域。e)包含變異L351D和L368E (DE)的CH3域。殘基位置係依據EU編號。
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無。

Claims (37)

  1. 一種包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其用於治療個體的癌症，其中該治療更包含投與免疫檢查點抑制劑。
  2. 一種治療個體的癌症之方法，該方法包含向該個體投與有效量之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及有效量之免疫檢查點抑制劑。
  3. 如請求項1所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，或如請求項2所述之方法，其中該癌症為腺癌、鱗狀細胞癌、或頭頸癌，其包括頭部和頸部的鱗狀細胞癌(SCCHN)。
  4. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該癌症為咽 (包括鼻咽、口咽和下咽)、口腔、喉、副鼻竇、鼻腔或唾腺的癌症。
  5. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中所述免疫檢查點抑制劑包括PD-L1、PD-L2或PD-1抑制劑。
  6. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該免疫檢查點抑制劑為結合PD-L1、PD-L2或PD-1的抗體。
  7. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)。
  8. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該個體之前未接受過用於治療所述癌症的抗癌治療。
  9. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該個體為哺乳動物。
  10. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該個體為人類個體。
  11. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為多特異性抗體。
  12. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為雙特異性抗體。
  13. 如請求項1至10中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或用途或方法，其中該抗體為單價抗體，或其中該抗體包含所述EGFR結合可變域作為唯一的可變域。
  14. 如請求項1至12中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該抗體包含結合LGR5的可變域。
  15. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體為派森妥單抗 (petosemtamab)。
  16. 如請求項15所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或方法，其中該治療包含向該個體提供每兩週一次的1500 mg劑量的抗體。
  17. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或方法，其中所述治療包含向該個體每六週一次投與劑量為400 mg的帕博利珠單抗 (pembrolizumab)作為免疫檢查點抑制劑。
  18. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或方法，其中作為包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體之派森妥單抗 (petosemtamab)以及作為免疫檢查點抑制劑之帕博利珠單抗 (pembrolizumab)係依序投與。
  19. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或方法，其中若作為免疫檢查點抑制劑之帕博利珠單抗 (pembrolizumab)及作為包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體之派森妥單抗 (petosemtamab)於同一天投與，則帕博利珠單抗 (pembrolizumab)係於派森妥單抗 (petosemtamab)之後投與。
  20. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或該免疫檢查點抑制劑係經由靜脈內提供給該個體。
  21. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為ADCC增強的。
  22. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物為無岩藻糖基化的。
  23. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該癌症為復發性、不可切除、局部晚期及/或轉移性癌症。
  24. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該治療包含或在之前有診斷該個體或該癌症之PD-L1表現的步驟。
  25. 如請求項24所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、或方法，其中係藉由免疫組織化學法 (IHC)診斷PD-L1之表現。
  26. 如前述請求項中任一項所述之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物或方法，其中該癌症的PD-L1表現之綜合陽性評分 (CPS)為1或更高但不超過100。
  27. 一種組件套組，其包含如前述請求項中任一項所定義之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、如前述請求項中任一項所定義的免疫檢查點抑制劑以及所述抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物和所述免疫檢查點抑制劑的使用說明。
  28. 如請求項27所述之套組，其中該抗體為派森妥單抗 (petosemtamab)，以及該說明包含每兩週一次以1500 mg給藥的說明。
  29. 如請求項27或28所述之套組，其中該免疫檢查點抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab)，以及該使用說明包含每六週一次以400 mg給藥的說明。
  30. 如請求項27至29中任一項所述之組件套組，其中該套組包含該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，以及該免疫檢查點抑制劑在治療頭頸癌中的使用說明。
  31. 一種如請求項1至26中任一項所定義之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物以及如請求項1至26中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑之組合，其係用於治療有需要個體之癌症。
  32. 如請求項1至26中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑，係用於治療有需要個體之癌症，其中該免疫檢查點抑制劑係與如請求項1至26中任一項所定義之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物同時或依序投與。
  33. 如請求項1至26中任一項所定義之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物，其係用於治療已投與或將投與如請求項1至26中任一項所定義的免疫檢查點抑制劑之個體的癌症。
  34. 如請求項1至26中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑，係用於治療已投與或將投與如請求項1至26中任一項所定義之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物之個體的癌症。
  35. 一種如請求項1至26中任一項所定義之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物、使用該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體之癌症的使用說明，以及使用如請求項1至26中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑治療個體之癌症的使用說明之組合。
  36. 一種如請求項1至26中任一項所定義之免疫檢查點抑制劑、使用如請求項1至26中任一項所定義之該抑制劑治療個體之癌症的使用說明、以及使用如請求項1至26中任一項所定義之包含結合EGFR胞外部分的可變域之抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物治療個體之癌症的使用說明之組合。
  37. 如請求項35或36所述之組合，其中該使用說明包含待使用的免疫檢查點抑制劑之量、該抗體或其功能部分、衍生物及/或類似物之量、給藥間隔及待治療之癌症。
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