SU845827A1 - Способ получени алкалоидов спорыньи - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к химико-фармацевтической промышленности и касаетс  микробиологического получени  алкалоидов спорыньи, которые могут быть использованы в медицине, неврологии и гинекологии. Известен способ получени  алкалоидов спорыньи путем выращивани  продуцента штамма Claviceps purpurea на питательной среде с последующей экстракцией целевого продукта органическим растворителем 1. Однако данный способ обеспечивает недостаточно высокий выход целевого продукта . Выход алкалоидов 2,2-3,8 мг/л.ср. Цель изобретени  - повышение выхода целевого продукта. Цель достигаетс  тем, что в качестве продуцента используют щтамм У МЕТ РА 130 Claviceps purpurea (Fr) Tul, подвергают экстракции культуральную жидкость или мицелий и фильтрат культуральной жидкости , экстракцию ведут низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты при рН 8-9, экстракт концентрируют, осаждают из него хлороформом кристаллический аддукт эргометрин-хлороформ и перевод т его в соль, а алкалоидный фильтрат после выделени  эргометрина подвергают хроматографической очистке. элюируют, выдел ют из элюата эрготок далее перевод т его в аддукт- эрготок ароматический углеводород и гидрирую Кроме того, в качестве низшего э4 алкилкарбоновой кислоты используют э ацетат. При этом к культуральной жидкости перед экстракцией низшим эфиром алкил1сарбоновой кислоты предварительно добавл ют 10 вес.°/о сульфата аммони , экстрагируют этилацетатом при рН 8-9 и отдел ют экстракт .1 Культуральную жидкость перед экстракцией низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты разбавл ют водой, отфильтровьп ают мицелий, фильтрат экстрагируют этилацетатом или хлористым метиленом при рН и, отдел ют экстракт. Кроме того, мицелий предварительно экстрагируют ацетоном, полученный экст)акт подкисл ют до рН 2-3, очищают петролейным эфиром и отдел ют водную фазу з кстракта . Дл  получени  алкилоидов спорынь: используют штамм У МЕТ РА 130 Clav eps purpurea (Fr) Tul, который выращива эт в питательной среде, содержащей неорганические соединени  азота, сахар, органические кислоты, неорганические соли в погруженном виде, образу  при этом алкалоиды группы эрготоксина, а также эргометрин. Далее с помощью твердых или жидких сред можно достигнуть большее число спор. Образовавшийс  эрготоксин и эргометрин содержитс  в окружаюпдей мицелий ферментационной среде. Полученный фильтрат культуральной жидкости экстрагируют назшим эфиром алкилкарбоновых кислот предпочтительно этилацетатом при рН 8-9. Выдел ющуюс  после фильтрации биомассу в зависимости от остаточного содержани  алкалоидов экстрагируют ацетоном. Полученный путем фильтрации прозрачный экстракт после установлени  рН 2-3 помощью водных кислот, предпочтительно фосфорной кислоты , очищают петролейным эфиром или петролейным эфир-ксилолом, отдел ют водную фазу с помощью водного раствора аммиака, устанавливают рН 8-9, экстрагируют низшими алкиловыми эфирами карбоновых кислот , предпочтительно этилацетатом, и полученпые экстракты промывают водой.

Алкалоиды спорыньи экстрагируют из подщелоченной аммиаком культуральной жидкости без предварительного отделени  биомассы при добавлении сульфата аммони  с помощью низших алкиловых эфиров карбоновых кислот, предпочтительно этилацетата , и путем экстракции с помощью разбавленных водных кислот, предпочтительно фосфорной кислоты, а также провод т экстракцию при рН 8-9 этилацетатом, освобожда  от примесей. Очищенные экстракты алкалоидов выпаривают при температуре не менее 30°С и полученные концентраты после конечной очистки перевод т в алкалоиды. Дл  получени  чистых алкалоидов концентраты неочищенных алкалоидов раствор ют в 1-3 об.ч. хлороформа, хран т растворы при 10°С, отдел ют выкристаллизовывающийс , обедненный пигментом аддукт эргометрин-хлороформ и перевод т в соли, предпочтительно в гидромалоинат. Полученный после отделени  эргометрина фильтрат при 30°С концентрируют путем адсорбции и последующей десорбции по Batch-способу или по способу колоночной хроматографии при использовании окиси алюмини  в предпочтительном соотношении 1:20 или в соотношении 1:5, в расчете на общее количество алкалоида в концентрате алкалоидов при добавке активированного угл  (соотнощепие адсорбирующих средств окись алюмини  : активированный уголь 5:1) и низщих алкиловых эфиров карбоновых кислот, предпочтительно этилацетата или хлорированных углеводородов, предпочтительно хлороформа или двухкомпонентных смесей растворителей друг с другом или с ароматическими углеводородами, предпочтительно бензолом , после выпаривани  экстрактов или элюатов при перевод т в эрготоксин -

эрготоксининовые смеси, последние путем кристаллизации из ароматических углеводородов , как бензол, толуол или ксилол, перевод т в несодержащие эпимеров высокой чистоты кристаллические аддукты эрготоксии - ароматические углеводороды и последние при известных услови х превращают в соли присоединени  кислот эрготоксина, предпочтительно этансульфонат.

Полученный эрготоксин гидрируют в присутствии менее активного никел  Рене  при 20-70°С, предпочтительно 60°С и давлении водорода 30-70 атм, предпочтительно 50 атм, в диоксане или при нормальном давлении и при 20-30°С, предпочтительно 25°С, в присутствии 5-10%-ного катализатора

палладий на угле в водном диоксане по способу рециркул ции с образованием не содержащего пигменты 9,10-дигидроэрготоксина . Гидрированные основани  перевод т в терапевтически приемлемые соли присоединени  кислот, предпочтительно гидромалеинат и этансульфонат.

Пример. Дл  культивировани  спор каждый из консервантов, которые в обезжиренном молоке содержат лиофильно высущенные споры, приготовл ют суспензию, которую перенос т на 3%-ную агаровую среду (рН 6,0) с 15% пивного сусла, 0,5% дрожжевого экстракта, 0,5% ( и 0,1% цитрата аммони , и в виде культуры косого агара выдерживают 14 дней при 19°С. В качестве затравочного материала дл  погруженных культур по этому способу получают в широкогорлых колбах (скл нках) емкостью 1000 мл спор/сосуд дл  культивировани , с помощью которых можно инфицировать при надобности до 120.л питательного раствора.

Пример2. Получение инокул та осуществл ют с помощью суспензии спор, полученной аналогично примеру 1, которую в концентрации 1-10 спор/мл перенос т в жидкую среду, содержащую 15% пивного сусла

и 2% дрожжевого экстракта. Культивирование провод т при 22°С в круглодонной колбе емкостью 500 мл с 120 мл жидкой среды на качающейс  машине дл  встр хивани . Культура спуст  14 дней содержит 6-10 спор/колбу, которые примен ютс  в качестве затравочного материала дл  ферментации алкалоидов.

Пример 3. Получение инокул та дл  культивировани  спор осуществл ют согласно примеру 1. В качестве питательной среды примен ют 3%-ную агаровую среду (рН 6,8- 6,9), котора  содержит 3% сахарозы, 0,3% NaNOa, 0,1%; КгРО, 0,005% MgSO4- HzO; 0,05% KCl, 0,001% FeSO+-7H2O и 1% воды набухани  кукурузы. В стекл нных узкогорлых емкост х объемом 500 мл в культуре косого агара после культивировани  в течение 14 дней при 24°С получают ЗЮ спор/сосуд дл  культивировани , которые могут примен тьс  дл  погруженных культур при синтезе алкалоидов. Пример 4. Споры культуры затравочного материала, полученные согласно примеру 1, суспензируют и часть их в качестве инокул та распредел ют в одинаковых количествах в вертикально сто щие круглодонные колбы (емкостью 500 мл), кажда  из которых содержит по 120 мл среды предварительной культуры (10% сахарозы, 1,5% цитрата аммони , 0,1% Ca(NO;)., 0,025% КНаРО,, 0,01% КС1, 0,03% MgSOb 0,001% FeS04, 0,0004% ZnSO4, дистиллированна  вода, рН 5,5, стерилизаци  30 мин FeSOi, 0,0004%, 0,0004% ZnSO,, дистиллированна  вода, рН 5,5, стерилизаци  30 мин при 0,5 атм). Колбы встр хивают при 24°С на (круглой) качающейс  машине дл  встр хивани  (175 об/мин). Спуст  7 дней содержимое колбы в соотношении 1:10 пересевают в колбы Эрленмейера (емкостью 500 мл), из которых кажда  содержит по 120 мл основной культуральной среды (20% сахарозы , 1% цитрата аммони , 0,1% Са(МОз)г, 0,025% КНзРО, 0,01% КС1, 0,03% MgSO4, 0,001% FeSO4, 0,0004% ZnSOt, дистиллированна  вода, рН 5,5, стерилизаци  30 мин при 0,5 атм). Эти колбы встр хивают, как указано ранее, при одинаковых услови х. Спуст  14 дней с помощью реакции Урка определ ют 2470 мг алкалоидов/л культуральной жидкости, в расчете на бималеинат эрготоксина. Аналоиды экстрагируют хлористым метиленом, раздел ют с помощью тонкослойной хроматографии на пропитанном формамидином кизельгура и определ ют УФспектрофотометрически . Наход т 1280 мг эрготоксина и 340 мг эргометрина/л, из остатка выдел ют два неизвестных нативных нептидных алкалоида и простые производные эрголина, как агроклавин, ханоклавин и т.д. Проведенное параллельно этому определение выделенного путем вакуумной фильтрации мицели  и фильтрата показывает, что эргометрин полностью и сверх того 90% образовавщегос  эрготоксина содержатс  в фильтрате. Пример 5. 10 стекл нных ферментеров (емкостью по 2 л) засевают приготовленный согласно примеру 2 культурой погруженных спор. Ферментеры содержат по 1,3 л питательного раствора А с 10% сахарозы 1,5% цитрата аммони , 0,05% , 0,03% MgSq,, 0,001% FeSO и 0,0004% ZnSO, в водопроводной воде (рН 5,5; стерилизаци  30 мин при 0,5 атм). Ферментацию осуществл ют при 24°С и при перемешивании со скоростью 400 об/мин, соответственно при аэрации 0,3 л воздуха/мин. Спуст  7 дней содержимое ферментора перенос т в ферментор из высококачественной стали емкостью 18 л с 10 л питательного раствора В, содержащего 10% сахарозы, 1,4% лимонной кис-, лоты, 1,0% гидроокиси аммони  (25%-ной), 0,05% Са(МОз)г 0,025%. КН РО, 0,01% КС1, 0,03% MgSO«,0,001% FeSO и 0,0004% ZnSO в водопроводной воде, рН 5,5. По :ле культивировани  при 24°С, 360 об/мин 2,5 л воздуха/мин на п тый день полов ну содержимого ферментора примен ют в честве инокул та дл  ферментора из вы кокачественной стали емкостью 63 л с 4( % питательного раствора С, содержащего 2( сахарозы 1,75% лимонной кислоты , 0, КНгРО4,0,02% КС1, 0,03% MgSO,, 0,00: FeSO4, 0,0012 ZnSO4 в водопроводной веде. добавл ют гидроокись аммони  до рН стерилизуют 60 мин при 110°С. Культ ру перемешивают в течение 7 дней при 24°С со скоростью 300 об/мин и аэрируют 27 воздуха/мин, при необходимости осуществл ют добавку антивспенивател . Культура. на  жидкость содержит при культивиро НИИ 2640 мг всех алкалоидов/л. Провед( ный согласно примеру 4 анализ показыва что в ней содержатс  1300 мг эрготокси и 550 мг эргометрина. Пример 6. Количество спор, получс ных согласно примеру 3, культуры затравс ного материала в качестве инокул та рг номерно распредел ют в два ферментора высококачественной стали (емкостью 18 . каждый из которых содержит по 10 л г тательного раствора А согласно примеру 5. Содержимое ферменторов перемешивают 7 дней при 24°С со скоростью 360 об/мин и аэрируют 2,5 л воздуха/мин. Затем содержимое двух ферменторов перенос т в ферментор из высококачественной стали емкс тью 250 л, который содержит 180 л питате; ного раствора В согласно примеру 5, и Kyj тивируют при 24°С, 160 об/мин и 0,5 возд| ха/л питательного раствора в минуту. Сп т  5 дней культуру перенос т в фермент высококачественной стали емкост 2000 л с 1400 л питательного раствора согласно примеру 5, однако питательн раствор содержит дополнительно 0,0005 NiSO4. Культивирование осуществл ют п 24°С, 160 об/мин и 0,6 л воздуха/л питате/ ного раствора в минуту. При необходимо ти во все ферменторы добавл ют антивсп ниватель. На седьмой день культура соде )жит 2430 мг всех алкалоидов/л культурал ной жидкости. При аналитическом опред лении согласно примеру 4 найдено 1150 эрготоксина и 490 мг эргометрина/л культ ральной жидкости. Пример 7. 200 л культурально фильтрата из соответствующего количест культуральной жидкости (по примеру ( которую перед отделением мицели  разба л ют при перемешивании путем добавки в( ды в объемном соотношении 1:1, подщел; чивают с помощью 25%-ного водного рас вора аммиака до рН 8,5 и аналоиды эрп токсина и эргометрина экстрагируют 50 этилацетата при использовании двухст пенчатого устройства дл  экстракции, р iботающего противотоком. Этилацетатнь

экстракт концентрируют в вакууме при t + 30°С до 1/20 исходного объема, смеижвают остаток после вы11арива 1и  с двум  объемными част ми хлороформа, оставл ют на 15 ч при 4°С дл  выкриеталлизовывани  аддукта эргометрипа с хлороформом, отсасывают и получают 35,4 г желтоватого аддукта эргометрина с хлороформом с 75°/оным выходом. 35,4 г аддукта эргометрина с хлороформом в присутствии активного угл  при нагревании раствор ют в 3,1 л ацетона, добавл ют к фильтрату рассчитанное количество раствора малеиьювой кислоты в ацетоне , полученный кристаллический бималеинат эргометрина отсасывают и вещество высушивают при 70°С. Получают соль алкалоида в виде с1с-чисто10, окрашенного от белого до желтоватого, кристаллического nopoiHка с ЭО /о-ным выходом со степенью чистоты 98-- 1000/0. Удельное врап1ение -50 ( в воде). После дальнейшего концентрировани  получепного содержащего эрготоксин фильтрата до 0,297 л хроматографируют при нрименении, в расчете на общее количество алкалоидов в алкалоидном концентрате , двадцатикратного количества окиси алюмини  нейтральной стадии активности через ко:юнну с по.мондью этилацетата и элюируют 3,8 л такого же растворител . Полученный после выпаривани  досуха элюата в вакууме при t 30°С остаток носле выпаривани  (74,2) путем растворени  в 0,212 л бензола и сто ни  раствора в течение 5 ч при 4°С превращают в аддукт эрготокси 1а с бензоло.м, выкристаллизовавН1ИЙСЯ продукт отсасьнзают, нромывают бензолом и высушивают в вакуумном эксикаторе . Получают 55,2 г dc-чистого, белого кристаллического аддукта эрготоксина с бензоло .м со степенью чистоты ). Удельпое вращепие d ---183° (е-1,8 в CHClj), или перемегнивают с двадцатикратпым количеством окиси алюмипи  нейтральной стадии активности, в расчете на o6niee количество алкалоидов в алкалоидном концентрате , до тех пор, пока смесь не становитс  i;Morei Horo цвета. После сто ни  в течение 15 мин экстрагируют трм раза по 3,82 л этилацетата, сгун|,ают объедипешп гй экстракт при 30°С досуха, подвергают дальнейHJeй обработке аналогичны.м образо.м и получают 52,5 г dc чистого белого кристаллическо1о аддукта эрготоксина с бензолом со степенью чистоты Удельпое вращение -183° (с-1,8 в CHCij).

Хроматографируют при нрименении, в расчете на o6Hj,ee количество алкалоидов в алкалоидном концентрате, п тикратного количества окиси алюмини , нейтральной стадии активности при добавке а.ктпвированного угл  (адсорбционное соотношение окись алюмини  : активированный угол 5:1) через колонну с помоплью этилацетата и э.;попруют 4 л того же растворител , при дальиейнгеи обработке поступают аналогичным образом и получают 55 г dt-чиетого, белого кристаллического аддукта, эрготоксина с бензолом со степенью чиетоты 96%. Удельпое вран1ение --183 (с 1,8 в CHCIj) Перемешивают при использовании, в расчете па общее количество алкалоидов в алкалоидном концентрате, п тикратного количества окиси алюмини , нейтральной стадии активности при добавке активированного угл  (адсорбционное соотношение окись алюмини  : активированный уголь 5:1) в фильтрационном устройстве с перемешиванием с помощью 3 л этилацетата, экстрагируют еще два раза по 2,5 л этилацетата, концентрируют объединенный экстракт при 30°С досуха, при дальнейшей обработке поступают аналогичным образом и получают 55 г dc-чистого , белого, кристаллического аддакта эрготоксина с бензоло.м со степенью чистоты 96%. Удельное вращение с --183 (с 1,8 CHClj).55 ,2 г аддукта эрготоксина е бензолом при легком нагревании раствор ют в 830 мл абсолютного этанола, добавл ют рассчитанное количество 0,5 .мол рного этанольного раствора (абсолютный этанол) этанолсульфокислоты и затем 4,2 л абсолютного эфира, полученный криеталлизат отсасывают, вещество высущивают при 70°С и получают с 95%-ным выходом d(,-чиcтый, белый, кристаллический , эрготоксинэтансульфонат со степенью чиетоты 98-100%

Пример 8. 12 кг полученного путе.м фильтрации соответствующего количества культуральной жидкости мицели  в течение 3 ч при 20°С экстрагируют 18 л ацетона, отделенный .м фильтрации водноацетоновый экстракт довод т до рН 2-3 с помощью фосфорной кислоты и обезжиривают и очищают двукратный экстракцией 17 л нетролейного эфира и 11 л нетролейный эфир/ксилол (объемное соотношение 1:1). Полученную алкалоидеодержащую т желую фазу экстрагируют нри рН 8-9 (а.ммиачпа  вода) до истощени  в целом 7 л этилацетата , промывают водой в объемно.м соотношении 1:1 верхнюю фазу выпаривают 1гри 30°С до 0,7 л, смещивают с 1,40 л хлороформа и после сто ни  в течение ночи при 4°С отдел ют от выпавшего гр зеподобного осадка. Фильтрат концентрируют при указанных услови х до объема 0,180 л, хроматографируют на 1,100 кг окиси алюмини  (активна  стади  1) с помощью 2 л этилацетата , полученные элюаты выпаривают в вакууме досуха и остатки после высушивани  раствор ют в 1000 мл толуола (бензола или ксилола). После сто ни  в течение ночи при 4°С отдел ют выделившеес  вещество, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 14,0 г белого, кристаллического аддукта эрготоксина с толуолом ео степенью чистоты 98--100%.

Пример 9. 10,0 л полученной согласно примеру 5 культуральной жидкости при перемешивании и добавке 10 вес.% сульфата аммони  при рН 9 и 20°С экстрагируют 25,0 л этилацетата, отбрасывают т желую биофазу , органическую фазу экстрагируют дважды по 5,0 л 2%-ной фосфорной кислоты, экстрагируют собранные водные фазы, в которых установлено рН 8-9 с помощью аммиачной воды, дважды по 5,0 л этилацетата, собранные органические фазы выпаривают до объема 200 мл при , смешивают с 400 мл хлороформом остаток после выпаривани , отсасывают выкристаллизовавшеес  после сто ни  на холоду при 4°С в течение ночи вещество, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 4,20 г (71,2% от теории) аддукта эргометрина с хлороформом со степенью чистоты 90,7°/о. Содержащий эрготоксин фильтрат, сконцентрированный при указанных услови х до 120 мл, хроматографируют на 300 г окиси алюмини ) с помощью этилацетата, элюат выпаривают в вакууме досуха, остаток после высушивани  раствор ют в 30 мл бензола, оставл ют на ночь при , выпавшее вещество отсасывают, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 7,95 г (73,6% от теорий) белого, кристаллического аддукта эрготоксина с бензолом со степенью чистоты 91,6%.

Пример 10. 50,0 г полученного согласно примеру 7 аддукта эрготоксина с бензолом гидрируют в 0,7 л диоксана при 60°С под давлением водорода 50 атм, в обогреваемом вращающемс  автоклаве с перемешиванием или при встр хивании, в присутствии никел  Рене  в течение 2 ч дл  получени  9,10-дигидроэрготоксина, отфильтровывают от катализатора, прозрачный фильтрат выпаривают в вакууме досуха, гидрированное основание оставл ют выкристаллизовыватьс  при 4°С в этилацетате, кристаллизат отсасывают и высущивают при 60°С. Получают 47,5 г (90% от теории) d,-чистого, кристаллического продукта эрготоксинового основани  со степенью чистоты 90%. Удельное вращение ,6 (с 2 в пиридине ). Полученное кристаллическое дигидроэрготоксиновое основание внос т в 200 мл метацола и рассчитанное количество 1 М метанольного раствора этансульфокислоты при перемешивании, причем спуст  непро,должительное врем  выдел етс  кристаллическа  соль алкалоида. После отсасывани  и высушивани  продукта получают 48,5 г (95% от теории) ё(;-чистого, белого, кристаллического дигидроэрготоксин-этансульфоната со степенью чистоты 98-100%. Пример 11. Гидрируют 7,20 г полученного согласно примеру 9 аддукта эрготоксина с бензолом в 250 мл 90%-ного водного диоксана при 20-25°С при отсутствии света на 2,9 г 5%-ного паллади  на угле в специальной циркул ционной аппаратуре, состо щей из емкости дл  гидрировани  с трубопроводами питани  и циркул ции, термо раметром , эжектором, резервуаром дл  нени  газа и лабораторного шлангового наcoca , при числе оборотов 138,5 ч

давлении эжектора 120 мм H2SO4 ст 1лба 4 ч и с диаметром жиклера 2 мм, в течение в 9,10-дигидроэрготоксин, отфильтровы а ют от катализатора, прозрачный фильтрат выпаривают досуха на роторном испари геле остаток под вакуумом при t 30°C, сухой раствор ют в 35 мл хлороформа, смещ иваи} тeнют с 35 мл диэтилового эфира и при

0 оса}(дасивном перемешивании полностью

фир 1ОГО ют с помощью 30 мл насыщенного э раствора малеиновой кислоты дигидро:

рготоксинбималеинат . Отсасывают, промы: ают 30 мл диэтилового эфира и тотчас вые ши5 вают над п тиокисью фосфора в вакуул ном эксикаторе. Получают 6,55 г (93,5% от теории ) ё -чистого, белого, кристалличес ого дигидроэрготоксинбималеината со степ нью чистоты 97,9%.

Приведены морфологические свой

ства

Claviaps purpurea штамм У МЕТ РА 130 на различных агаровых средал 1-3 п1осле культивировани  в течение 14 дней в ащках Петри при 24°С.

Среда 1 (3% сахарозы, 0,001% Fe

0ц7Н2О , 0,3 NaNOs, 1% воды набухани 

5

ку5% курузы, 0,1 К2НРО4, 3% агара, 0,( MoSOr7H2O, рН 6,8-6,9). Форма коле

НИИ

(невыпукла , компактна , беспор дочна  правильна ) и сильно складчата , них н   :тисторона гладка , не отстает от дна плг

0 ны. Диаметр колоний 1,0-1,5 см. Окр ска колоний: верхн   сторона от светлоко ичневого до фиолетового, край белый, ни  н  

-коричневый, сторона коричнева , край светлоСреднее спорообразование (Verspori ng) 46,3-10 конидий/колони .

5

Среда 2 (15% пивного сусла, 0,1%

штрата аммони , 0,5% дрожжевого экстр кта, 3% агара, 0,5(NH4)2PO, рН 6,0). Фдрма колонии: середина выпукла  с кратерооб зазным опусканием, край радиально скла 1ча0 тый, агар пророс, колони  отстает от дна пластины. Диаметр колонии 2-3 см. Ок )асс1ветка колонии: верхн   и нижн   стороны ло-коричневые. Среднее спорообразов, ние 34,1 10 конидий/колони .

Среда 3 (2% глюкозы, 50% водного

сар5 тофельного экстракта, 3% агара, рН ,0). с Форма колонии: середина выпукла кратерообразным спуском (опускани

м), агар пророс, колони.  отстает от дна пластины. Диаметр колонии 1,5-2,0 см.

Окраска колонии: верхн   сторона серо-фиолетова , нижн   сторона сере коричнева .. Среднее спорообразование 3,3 10 конидий/колони .

Приведена микроскопическа  характ

ристика конидий и гиф. Конидии во всех :луча х имеют эллипсоидную форму с ра 1мерами 6-10 ит (больша  ось), соответс11венно 4-8 ит (мала  ось). Субстратные

фы

Г1 имеют длину до 200 ит и диаметр 4-J ит.

11 845827,2

В случае пузырчатых вздутий диаметр сое-выдел ют из элюата эрготоксин, далее перетавл ет 8-16 ит. Образуютс  воздушныевод т его в аддукт эрготоксин-ароматичесгифы , их длина выше 200 ит и их диаметркий углеводород и гидрируют,

составл ет только 2-4 ит.2. Способ по п. 1, отличающийс  тем,

Предлагаемый способ позвол ет увели-что в качестве низшего эфира алкилкарбоночить выход целевого продукта.5 вой кислоты используют этилацетат.

Claims (1)

1. Формула изобретени ракцией низшим эфиром алкилкарбоновой

   1. Способ получени  алкалоидов споры-сульфата аммони , экстрагируют этилацетаньи путем выращивани  продуцента штамма том при рН 8-9 и отдел ют экстракт. Claviceps purpurea на питательной среде с4. Способ по п. 1, отличающийс  тем, последующей экстракцией целевого продук-что культуральную жидкость перед экстракта органическим растворителем, отличаю-цией низшим эфиром алкилкарбоновой кисщийс  тем, что, с целью повышени  выходалоты разбавл ют водой, отфильтровывают целевого продукта, в качестве продуцента15 мицелий, фильтрат экстрагируют этилацетаиспользуют штамм У МЕТ РА 130 Clavicepsтом или хлористым метиленом при рН 8-9 purpurea (Fr) Tul, экстракции подвергаюти отдел ют экстракт.

   культуральную жидкость или мицелий и5. Способ по п. 1, отличающийс  тем,

   фильтрат культуральной жидкости, экстрак-что мицелий предварительно экстрагируют

   цию ведут низшим эфиром алкилкарбоновойацетоном, полученный экстракт подкисл ют

   кислоты при рН 8-9, экстракт концентриру-.20 до р 2-3, очищают петролейным эфиром и

   ют, осаждают иЗ него хлороформом кристал-отдел ют водную фазу экстракта,

   лический аддукт эргометрин-хлороформ иИсточники информации,

   перевод т его в соль, а алкалоидный фильт-прин тые во внимание при экспертизе

   рат после выделени  эргометрина подверга-I. Патент Великобритании № 1158380,

   ют хроматографйческой очистке, элюируют,кл. С 02 С, опублик. 1969.

   3. Способ по п. 1, отличающийс  тем,

   что к культуральной жидкости перед эксткислоты предварительно добавл ют 10 вес.°/о