SU1084299A1

SU1084299A1 - Способ получени комплекса внеклеточных ферментов

Info

Publication number: SU1084299A1
Application number: SU823520061A
Authority: SU
Inventors: Валерий Дмитриевич Семичаевский; Николай Ильич Даниляк; Ирина Анатольевна Трутнева
Original assignee: Институт Ботаники Им.Н.Г.Холодного
Priority date: 1982-12-08
Filing date: 1982-12-08
Publication date: 1984-04-07

Abstract

,VCnOCOB ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ;ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ФЕРМЕНТОВ, предусматривающий культивирование продуцентовгрибов базидиомицетов на питательной среде, содержащей лигнинсодержащие отходы в качестве источника углерода , минеральные соли и воду с последуннцим отделением грибного мицелр от культуральной жидкости, содержащей внеклеточные ферменты, о т л ичающийс тем, что, с целью повьшени активности комплекса, а также упрощени и удешевлени способа , в качестве источника углерода используют агримус - отход производства фурфурола, содержащий целлолигнин и свободный фурфурол в соотношении 42:1, в количестве 0,55 ,0%. 2.Способ по п. 1, отлича ющ и и с тем, что, с целью получени преимущественно фермента пероксидазы , культивирование провод т путем образовани поверхностной пленки при использовании агримуса в концентрации 1,0-2,5%. 3.Способ по пп. 1 и 2, о т л ичающийс тем, что, с целью (Л получени преимущественно фермента t монофенол-монооксигеназы, культивирование провод т путем образовани поверхностной пленки при использовании агримуса в концентрации 4,05 ,0%.

Description

1 Изобретение относитс к микробиологической промышленности, в частности к способам получени ферментов , продуцируемых базидиомицетами . Известен способ культивировани базидиомицетов на питательной среде , содержащей источник углерода и минеральные соли, а также отходы производства jl . Однако данный способ не позвол е получить широкий спектр продуцируем ферментов. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту к предлагаемому вл етс способ получени комплекса внеклеточных ферментов, предусматривающий культи вирование продуцентов-грибов бази- диомицетов на питательной среде, содержащей лигнинсодержащие отходы в качестве источника углерода, минеральные соли и воду с последующим отделением грибного мицели от куль туральной жидкости, содержащего вне клеточные ферменты . К недостаткам этого способа относ тс сложность технологии его. осуществлени и значительные затрат времени и средств. Кроме того, спос ограничиваетс использованием единственного штамма дереворазрушающего гриба. В нем использован недостаточ но широкий ассортимент лигнинсодержащих отходов и получаемых при этом продуктов биосинтеза микроорганизмо в частности внеклеточных ферментов, обладающих недостаточно высокой активностью. Цель изобретени - повышение активности комплекса ферментов, а также упрощение и удешевление- способа . I.. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени комплекса внеклеточных ферментов, предусматривающему культивирование продуцентов-грибов базидиомицетов на питательной среде, содержащей лигнинсодержащие отходы в качестве источника углерода, минеральные сол и воду с последующим отделением гри ного мицели от культуральной жидкости , содержащей внеклеточные ферменты , в качестве источника углерода использзтот агримус-отход произ водства фурфурола, содержащий целлолигнин и свободный фурфурол в 99 соотношении 42:1, в количестве 0,55 ,0%. Кроме того, с целью получени преимущественно фермента пероксидазы культивирование провод т путем образовани поверхностной пленки при использовании агримуса в концентрации 1,0-2,5%. С целью получени преимущественно фермента монофенол-монооксигеназы, культивирование провод т путем образовани поверхностной пленки при ис.пользовании агримуса в концентрации 4,0-5,0%. Агримус представл ет собой многотоннажньй отход, полученный при производстве фурфурола из стержней початков кукурузы, который частично используют как лигноцеллюлозное удобрение в сельском хоз йстве. Пример 1. Готов т питательную среду следующего состава N 2,0 КН2Р040,6 К НР040,4 МрЗрф0,5 Агримус5,0 Водопроводна вода 1 л. Приготовленную таким образом среду автоклавируют, охлаждают и засевают чистыми культурами базидиомицетов Pfeurotus ostreatus (Fr.) Kumm. HMBF1300 .или CorioZus versicofor (Fr.) Que2.087. Культивирование провод т в глубинных услови х на качалке в колбах Эрленмейера в течение 7 сут. при 28°С. Дл сравнени в качестве контрол выращивание указанных базидиомицетов провод т также в аналогичных услови х на питательной среде, содержащей вместо агримуса целлюлозу (фильтровальную :бумагу) в количестве 15,0 г/л. В табл. 1 и 2 приведены результаты измерений активностей внеклегточных пероксидазы (КФ 1.11.1.7), монофенол-монооксигеназы (КФ 1.14. 18.1), Эндо-1,4-/3-глюканазы (КФ.3.2. 1.4), полигалактуроназы (КФ 3.1.1.15), экзополигалактуроназы (КФ 3.2.1.67) и пектинэстеразы (КФ 3.1111) в культуральных фильтратах указанных продуцентов, полученных после отделени мицели и остатков твердого субстрата. По сравнению с контролем среда с агримусом более эффективна дл получени большинства 3 ,; 10 исследуемых ферментов. Так, при выращивании PJeurotus ostreatus на среде с агримусом достигнуто увеличение активности пероксидазы .и монофенол-монооксигеназы , более чем в 12 раз по сравнению с контролем. П р и,м е р. 2. Готов т питательную среду по примеру 1, которую засевают чистыми культурами базидиомицетов Pieurotus ostreatus (Fr.) Kurara. HMBF-1300, Funalia trogii (Berk.) Bond et. Sing БИН-2 или Oxyporus obducens (Fr.) Donk.HBK-85. В отличие от примера 1 культивировав ние провод т в стационарных уелоВИЯХ методом поверхностной пленки в течение 10 сут при 28 С. Дл сравнени в качестве контрол выращивание указанных базидирмицетов провод т также в аналогичных услови х на питательных средах, содержащих вместо агримуса .целлюлозу (фильтровальную бумагу) в количестве 15,0 г/л или экстракт из свекловичного жома в количестве 100 мл/л. В табл. 3 приведены результаты измерений активностей внеклеточных пероксидазы и монофенол-моноксигеназы в культуральных фильтратах указанных продуцентов, полученных после отделени -мицели и остатков твердого субстрата. На среде с агримусом активность обоих ферментов згачитель но выше, чем в контрольном варианте. Так, дл культуры Pjeurotus ostreatus активность пероксидазы на среде с агримусом составл ет 18,6 ед/л. Активность внеклеточных HMBF-1300 при глубинном ферментов Fleurotus ostreatus (Fr.) Kunnn выращивании на агримусе и целлюлозе 9 тогда как в контроле с целлюлозой обнаружены следы активности этого фермента, на среде с экстрактом из свекловичного жома активность пероксидазы составл ет 14,2 ед/л. П р и м е .р 3. Готов т питательную среду по примеру 1, в которую в качестве единственного источника углерода ввод т агримус в количествах 5,0-50,0 г/л. Указанные среды засевают чистой культурой базидиомицета PJeurotus ostreatus (Fr.) Kumm. HMBF-1300. Культивирование провод т в стационарных услови х методом поверхностной пленки в течение 10 сут при 28°С. В табл. 4 приведены результаты измерений активностей внеклеточной пероксидазы и монофенолмонооксигеназы- в культуральных.фильтратах , полученных после отделени мицели и остатков твердого субстрата . Из табл, 4 видно, что наибольша активность пероксидазы культуры гриба Pleurotus ostreatus -56,2 ед/л при концентрации агримуса 1,0%, а наибольша активность монофенол-монооксигеназы - 56,0 ед/л при концентрации агримуса в среде 4,0%. Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позвол ет повысить активность ферментов получаемого комплекса в 12 раз, а также упростить и удешевить способ за счет использовани отходов производства . Та б л л. ц а

ед/л

Пероксидаза Бензидин

-

Вензидин

% депоНатриева соль карболимеризации ксиметилцеллюлозы

1244

0,9

11,2

1285

0,7

9,0

203,5

19,9

40,5

силированный ед/мл 0,05

Продолжение табл. 1

125,0

0,04 Активность внеклеточных ферментов базидиомицетов при выращивании

методом поверхностной пленки на агримусе, целлюлозе и экстракте из жома .

Pteurotus ostreatus (Fr.) Kumra HMBF-1300 Перексидаза Бензидин ед/л 18,6 Следы

||

Funalia trogli (Berk) Bond. et. Sing БИН-2 - 14,0 Следы МонофенолмонооксигеOxyporus Пероксидаза - Монофенолмонооксигеназа

Активность внеклеточных ферментов Pteurotus ostreatus (Fr) Kumm ИШР-1300 при выращивании методом поверхностной пленки в зависимости от содержани arpimyca в питательной среде

Таблица 3

14,2

18,0 Следы

13,0

г

8,0

5,0

Следы

Таблица 4 otducens (Fr.) Donk ИБК-85 14,6 Следы 10,0 Следы

Claims

Д.СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ФЕРМЕНТОВ, предусматривающий культивирование продуцентовгрибов базидиомицетов на питательной среде, содержащей лигнинсодержащие отходы в качестве источника углерода, минеральные соли и воду с последующим отделением грибного мицелия от культуральной жидкости, содержащей внеклеточные ферменты, о т лича ю щ и й с я тем, что, с целью повышения активности комплекса, а также упрощения и удешевления способа, в качестве источника углерода используют агримус - отход производства фурфурола, содержащий целлолигнин и свободный фурфурол в соотношении 42:1, в количестве 0,55,0%.
2. Способ поп. 1, отлича ю-о щ и й с я тем, что, с целью получения преимущественно фермента пероксидазы, культивирование проводят путем образования поверхностной пленки при использовании агримуса в концентрации 1,0-2,5%.
3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что, с целью получения преимущественно фермента монофенол-монооксигеназы, культивирование проводят путем образования поверхностной пленки при использовании агримуса в концентрации 4,05,0%.

>