SA519410870B1 - أَسْباراجيناز مُعدل l- - Google Patents
أَسْباراجيناز مُعدل l- Download PDFInfo
- Publication number
- SA519410870B1 SA519410870B1 SA519410870A SA519410870A SA519410870B1 SA 519410870 B1 SA519410870 B1 SA 519410870B1 SA 519410870 A SA519410870 A SA 519410870A SA 519410870 A SA519410870 A SA 519410870A SA 519410870 B1 SA519410870 B1 SA 519410870B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- ala pro
- pro ala
- amino acid
- asparaginase
- protein
- Prior art date
Links
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 title claims abstract description 89
- 102100025573 1-alkyl-2-acetylglycerophosphocholine esterase Human genes 0.000 title claims abstract description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 279
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 claims abstract description 217
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 claims abstract description 217
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 151
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 148
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 71
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 71
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 67
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 66
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 claims description 200
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 179
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 155
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 152
- 229950006799 crisantaspase Drugs 0.000 claims description 96
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 92
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 66
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 51
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 50
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 19
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 11
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 7
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 claims description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- OUCUOMVLTQBZCY-BYPYZUCNSA-N (2s)-1-azaniumylpyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound NN1CCC[C@H]1C(O)=O OUCUOMVLTQBZCY-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- GICIECWTEWJCRE-UHFFFAOYSA-N 3,4,4,7-tetramethyl-2,3-dihydro-1h-naphthalene Chemical compound CC1=CC=C2C(C)(C)C(C)CCC2=C1 GICIECWTEWJCRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108091008717 AR-A Proteins 0.000 claims 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N Abietic-Saeure Natural products C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101100111740 Caenorhabditis elegans bre-5 gene Proteins 0.000 claims 1
- 235000017399 Caesalpinia tinctoria Nutrition 0.000 claims 1
- 241000070928 Calligonum comosum Species 0.000 claims 1
- 241000511343 Chondrostoma nasus Species 0.000 claims 1
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 claims 1
- 244000119298 Emblica officinalis Species 0.000 claims 1
- 235000015489 Emblica officinalis Nutrition 0.000 claims 1
- 241001112584 Euripus nyctelius Species 0.000 claims 1
- 206010065042 Immune reconstitution inflammatory syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 241001446467 Mama Species 0.000 claims 1
- 241001585714 Nola Species 0.000 claims 1
- 240000004072 Panicum sumatrense Species 0.000 claims 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 claims 1
- 240000004760 Pimpinella anisum Species 0.000 claims 1
- 101710180313 Protease 3 Proteins 0.000 claims 1
- 241000269435 Rana <genus> Species 0.000 claims 1
- KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N Rosin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N 0.000 claims 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 claims 1
- 241001575049 Sonia Species 0.000 claims 1
- 241000388430 Tara Species 0.000 claims 1
- 101000959121 Xenopus laevis Peptidyl-alpha-hydroxyglycine alpha-amidating lyase A Proteins 0.000 claims 1
- 238000012053 enzymatic serum creatinine assay Methods 0.000 claims 1
- NYPJDWWKZLNGGM-RPWUZVMVSA-N esfenvalerate Chemical compound C=1C([C@@H](C#N)OC(=O)[C@@H](C(C)C)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 NYPJDWWKZLNGGM-RPWUZVMVSA-N 0.000 claims 1
- RZTAMFZIAATZDJ-UHFFFAOYSA-N felodipine Chemical compound CCOC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC)C1C1=CC=CC(Cl)=C1Cl RZTAMFZIAATZDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 claims 1
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004416 surface enhanced Raman spectroscopy Methods 0.000 claims 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 claims 1
- KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N trans-cinnamyl beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC=CC1=CC=CC=C1 KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 99
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 42
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 41
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 40
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 40
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 30
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract description 29
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 27
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 25
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 abstract description 22
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 abstract description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 16
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 121
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 87
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 76
- DZZCICYRSZASNF-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DZZCICYRSZASNF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 76
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 66
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 63
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 62
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 61
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 57
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 52
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 51
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 51
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 50
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 50
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 47
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 47
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 35
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- 241000588700 Dickeya chrysanthemi Species 0.000 description 30
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 21
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 20
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 20
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 20
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 19
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 17
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 17
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 17
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 15
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 15
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 15
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 15
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 11
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 11
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 10
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 10
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 10
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 10
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 10
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 9
- -1 amino acid units Amines Chemical class 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 9
- 108010073324 Glutaminase Proteins 0.000 description 8
- 102000009127 Glutaminase Human genes 0.000 description 8
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 8
- COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Gly Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 8
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 8
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 7
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 7
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 7
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000008001 rakum palm Nutrition 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- CWEAKSWWKHGTRJ-BQBZGAKWSA-N Ala-Gly-Met Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O CWEAKSWWKHGTRJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 5
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 229940099216 oncaspar Drugs 0.000 description 5
- 108010001564 pegaspargase Proteins 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 4
- LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N Ala-Asp-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- LRPZJPMQGKGHSG-XGEHTFHBSA-N Arg-Ser-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O LRPZJPMQGKGHSG-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 4
- LKIYSIYBKYLKPU-BIIVOSGPSA-N Asp-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O LKIYSIYBKYLKPU-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 4
- IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 4
- XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N Leu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 4
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PPQRKXHCLYCBSP-IHRRRGAJSA-N Leu-Leu-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N PPQRKXHCLYCBSP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N Ser-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- FDALPRWYVKJCLL-PMVVWTBXSA-N Thr-His-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(O)=O FDALPRWYVKJCLL-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 4
- DJSYPCWZPNHQQE-FHWLQOOXSA-N Tyr-Tyr-Gln Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 DJSYPCWZPNHQQE-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 4
- COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N Val-Arg-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 4
- 108010010430 asparagine-proline-alanine Proteins 0.000 description 4
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 description 4
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 4
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 108010016686 methionyl-alanyl-serine Proteins 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 3
- NLOMBWNGESDVJU-GUBZILKMSA-N Ala-Met-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NLOMBWNGESDVJU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N Arg-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 3
- YVTHEZNOKSAWRW-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YVTHEZNOKSAWRW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N Arg-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 3
- PSUXEQYPYZLNER-QXEWZRGKSA-N Arg-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PSUXEQYPYZLNER-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- QEYJFBMTSMLPKZ-ZKWXMUAHSA-N Asn-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QEYJFBMTSMLPKZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N Asp-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- JHPFPROFOAJRFN-IHRRRGAJSA-N Gln-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O JHPFPROFOAJRFN-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Leu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- DWUKOTKSTDWGAE-BQBZGAKWSA-N Gly-Asn-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DWUKOTKSTDWGAE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- OCPPBNKYGYSLOE-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN OCPPBNKYGYSLOE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- NTXIJPDAHXSHNL-ONGXEEELSA-N His-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NTXIJPDAHXSHNL-ONGXEEELSA-N 0.000 description 3
- NBWATNYAUVSAEQ-ZEILLAHLSA-N His-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O NBWATNYAUVSAEQ-ZEILLAHLSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YSPZCHGIWAQVKQ-AVGNSLFASA-N Lys-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN YSPZCHGIWAQVKQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- VZBXCMCHIHEPBL-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN VZBXCMCHIHEPBL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- BVHFFNYBKRTSIU-MEYUZBJRSA-N Phe-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BVHFFNYBKRTSIU-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 3
- HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N Pro-Ala-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N 0.000 description 3
- VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N Pro-Glu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710180958 Putative aminoacrylate hydrolase RutD Proteins 0.000 description 3
- LVVBAKCGXXUHFO-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LVVBAKCGXXUHFO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- RRRRCRYTLZVCEN-HJGDQZAQSA-N Thr-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RRRRCRYTLZVCEN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N Thr-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 3
- UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N Thr-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 3
- GAYLGYUVTDMLKC-UWJYBYFXSA-N Tyr-Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 GAYLGYUVTDMLKC-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 3
- JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N Tyr-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 3
- MJOUSKQHAIARKI-JYJNAYRXSA-N Val-Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MJOUSKQHAIARKI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- QPJSIBAOZBVELU-BPNCWPANSA-N Val-Tyr-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N QPJSIBAOZBVELU-BPNCWPANSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 3
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 125000005500 uronium group Chemical group 0.000 description 3
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 3
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 2
- SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- PXKLCFFSVLKOJM-ACZMJKKPSA-N Ala-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PXKLCFFSVLKOJM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- JDIQCVUDDFENPU-ZKWXMUAHSA-N Ala-His-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CNC=N1 JDIQCVUDDFENPU-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- IYKVSFNGSWTTNZ-GUBZILKMSA-N Ala-Val-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IYKVSFNGSWTTNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- OQPAZKMGCWPERI-GUBZILKMSA-N Arg-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OQPAZKMGCWPERI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- INOIAEUXVVNJKA-XGEHTFHBSA-N Arg-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O INOIAEUXVVNJKA-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N Asn-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- VITDJIPIJZAVGC-VEVYYDQMSA-N Asn-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VITDJIPIJZAVGC-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- LMIWYCWRJVMAIQ-NHCYSSNCSA-N Asn-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LMIWYCWRJVMAIQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- PXLNPFOJZQMXAT-BYULHYEWSA-N Asp-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PXLNPFOJZQMXAT-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N Asp-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N Asp-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WAEDSQFVZJUHLI-BYULHYEWSA-N Asp-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WAEDSQFVZJUHLI-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- ZUNMTUPRQMWMHX-LSJOCFKGSA-N Asp-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ZUNMTUPRQMWMHX-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 2
- 102100023927 Asparagine synthetase [glutamine-hydrolyzing] Human genes 0.000 description 2
- 108010070255 Aspartate-ammonia ligase Proteins 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 2
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- XMPAXPSENRSOSV-RYUDHWBXSA-N Glu-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O XMPAXPSENRSOSV-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N Gly-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- HHRODZSXDXMUHS-LURJTMIESA-N Gly-Met-Gly Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)C[NH3+])C(=O)NCC([O-])=O HHRODZSXDXMUHS-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- DNVDEMWIYLVIQU-RCOVLWMOSA-N Gly-Val-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DNVDEMWIYLVIQU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 description 2
- LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N His-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- LJHGALIOHLRRQN-DCAQKATOSA-N Leu-Ala-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N LJHGALIOHLRRQN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- VCSBGUACOYUIGD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VCSBGUACOYUIGD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- WGNOPSQMIQERPK-GARJFASQSA-N Leu-Asn-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N WGNOPSQMIQERPK-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- WFCKERTZVCQXKH-KBPBESRZSA-N Leu-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O WFCKERTZVCQXKH-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- MYZMQWHPDAYKIE-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MYZMQWHPDAYKIE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- WXHHTBVYQOSYSL-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WXHHTBVYQOSYSL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- CIIJWIAORKTXAH-FJXKBIBVSA-N Met-Thr-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O CIIJWIAORKTXAH-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 2
- IQJMEDDVOGMTKT-SRVKXCTJSA-N Met-Val-Val Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IQJMEDDVOGMTKT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N Phe-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 2
- DNAXXTQSTKOHFO-QEJZJMRPSA-N Phe-Lys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 DNAXXTQSTKOHFO-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 2
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N Ser-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- IAOHCSQDQDWRQU-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IAOHCSQDQDWRQU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 2
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N Thr-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 2
- VGYVVSQFSSKZRJ-OEAJRASXSA-N Thr-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)CC1=CC=CC=C1 VGYVVSQFSSKZRJ-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N Val-Ala-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N Val-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 2
- SZTTYWIUCGSURQ-AUTRQRHGSA-N Val-Glu-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SZTTYWIUCGSURQ-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N Val-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- JAKHAONCJJZVHT-DCAQKATOSA-N Val-Lys-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N JAKHAONCJJZVHT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WMRWZYSRQUORHJ-YDHLFZDLSA-N Val-Phe-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N WMRWZYSRQUORHJ-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 2
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 108010036533 arginylvaline Proteins 0.000 description 2
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 2
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N cyclohexylsulfamic acid Chemical compound OS(=O)(=O)NC1CCCCC1 HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229940073038 elspar Drugs 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000025036 lymphosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000011395 multi-agent chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 2
- LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxy-2-propan-2-ylsulfonylethanimidamide Chemical compound CC(C)S(=O)(=O)CC(N)=NO LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 2
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 2
- 201000006845 reticulosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000029922 reticulum cell sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- AAWZDTNXLSGCEK-LNVDRNJUSA-N (3r,5r)-1,3,4,5-tetrahydroxycyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(O)(C(O)=O)C[C@@H](O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-LNVDRNJUSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 4-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010000890 Acute myelomonocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- SDMAQFGBPOJFOM-GUBZILKMSA-N Ala-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SDMAQFGBPOJFOM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZIBWKCRKNFYTPT-ZKWXMUAHSA-N Ala-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ZIBWKCRKNFYTPT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N Ala-Met-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DCVYRWFAMZFSDA-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DCVYRWFAMZFSDA-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MSWSRLGNLKHDEI-ACZMJKKPSA-N Ala-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MSWSRLGNLKHDEI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N Ala-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- JNJHNBXBGNJESC-KKXDTOCCSA-N Ala-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JNJHNBXBGNJESC-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 1
- NLYYHIKRBRMAJV-AEJSXWLSSA-N Ala-Val-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N NLYYHIKRBRMAJV-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 241001233887 Ania Species 0.000 description 1
- BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N Arg-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KEZVOBAKAXHMOF-GUBZILKMSA-N Arg-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KEZVOBAKAXHMOF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QDXQWFBLUVTOFL-FXQIFTODSA-N Asn-Met-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N QDXQWFBLUVTOFL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HZZIFFOVHLWGCS-KKUMJFAQSA-N Asn-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HZZIFFOVHLWGCS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PLTGTJAZQRGMPP-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC(N)=O PLTGTJAZQRGMPP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- GHODABZPVZMWCE-FXQIFTODSA-N Asp-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GHODABZPVZMWCE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QNIACYURSSCLRP-GUBZILKMSA-N Asp-Lys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QNIACYURSSCLRP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NZWDWXSWUQCNMG-GARJFASQSA-N Asp-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O NZWDWXSWUQCNMG-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- QSFHZPQUAAQHAQ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QSFHZPQUAAQHAQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N Asp-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- 241000201370 Autographa californica nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- PGLIUCLTXOYQMV-UHFFFAOYSA-N Cetirizine hydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C1CN(CCOCC(=O)O)CCN1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=CC=C1 PGLIUCLTXOYQMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000370738 Chlorion Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000029147 Collagen-vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- AAWZDTNXLSGCEK-UHFFFAOYSA-N Cordycepinsaeure Natural products OC1CC(O)(C(O)=O)CC(O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OELDIVRKHTYFNG-WDSKDSINSA-N Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS OELDIVRKHTYFNG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 102100030497 Cytochrome c Human genes 0.000 description 1
- 108010075031 Cytochromes c Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241001633942 Dais Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241001187099 Dickeya Species 0.000 description 1
- 101100234002 Drosophila melanogaster Shal gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001860 Eye Infections Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- LWDGZZGWDMHBOF-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O LWDGZZGWDMHBOF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- UESYBOXFJWJVSB-AVGNSLFASA-N Gln-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UESYBOXFJWJVSB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N Glu-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N Glu-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- BPLNJYHNAJVLRT-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BPLNJYHNAJVLRT-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- PMSDOVISAARGAV-FHWLQOOXSA-N Glu-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 PMSDOVISAARGAV-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N Gly-Ala-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC([O-])=O UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GGEJHJIXRBTJPD-BYPYZUCNSA-N Gly-Asn-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O GGEJHJIXRBTJPD-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N Gly-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C(O)=O ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- RIYIFUFFFBIOEU-KBPBESRZSA-N Gly-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 RIYIFUFFFBIOEU-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- FNXSYBOHALPRHV-ONGXEEELSA-N Gly-Val-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FNXSYBOHALPRHV-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- AWHJQEYGWRKPHE-LSJOCFKGSA-N His-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AWHJQEYGWRKPHE-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N His-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000832643 Homo sapiens Small ubiquitin-related modifier 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N Leu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CN=CN1 CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N Leu-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YRRCOJOXAJNSAX-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YRRCOJOXAJNSAX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 206010024305 Leukaemia monocytic Diseases 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- XFIHDSBIPWEYJJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XFIHDSBIPWEYJJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N Lys-Gly-Glu Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC([O-])=O LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HAUUXTXKJNVIFY-ONGXEEELSA-N Lys-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HAUUXTXKJNVIFY-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MGKFCQFVPKOWOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N MGKFCQFVPKOWOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N Lys-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- QLFAPXUXEBAWEK-NHCYSSNCSA-N Lys-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QLFAPXUXEBAWEK-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 108010036176 Melitten Proteins 0.000 description 1
- IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N Met-Gly-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NLDXSXDCNZIQCN-ULQDDVLXSA-N Met-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)CC1=CC=CC=C1 NLDXSXDCNZIQCN-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N Met-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JEYCTXHKTXCGPB-UHFFFAOYSA-N Methaqualone Chemical compound CC1=CC=CC=C1N1C(=O)C2=CC=CC=C2N=C1C JEYCTXHKTXCGPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033835 Myelomonocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108010079246 OMPA outer membrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010056332 Panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000531155 Pectobacterium Species 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- PEFJUUYFEGBXFA-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 PEFJUUYFEGBXFA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241000233805 Phoenix Species 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- FCCBQBZXIAZNIG-LSJOCFKGSA-N Pro-Ala-His Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O FCCBQBZXIAZNIG-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- BLJMJZOMZRCESA-GUBZILKMSA-N Pro-Met-Asn Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 BLJMJZOMZRCESA-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- AAWZDTNXLSGCEK-ZHQZDSKASA-N Quinic acid Natural products O[C@H]1CC(O)(C(O)=O)C[C@H](O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-ZHQZDSKASA-N 0.000 description 1
- 101150033538 Rala gene Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 244000253911 Saccharomyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000018368 Saccharomyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JPIDMRXXNMIVKY-VZFHVOOUSA-N Ser-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JPIDMRXXNMIVKY-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- COAHUSQNSVFYBW-FXQIFTODSA-N Ser-Asn-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O COAHUSQNSVFYBW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GHPQVUYZQQGEDA-BIIVOSGPSA-N Ser-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O GHPQVUYZQQGEDA-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- RNMRYWZYFHHOEV-CIUDSAMLSA-N Ser-Gln-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RNMRYWZYFHHOEV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SQBLRDDJTUJDMV-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SQBLRDDJTUJDMV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KCNSGAMPBPYUAI-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KCNSGAMPBPYUAI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N Ser-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 description 1
- 102100024535 Small ubiquitin-related modifier 4 Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- WFUAUEQXPVNAEF-ZJDVBMNYSA-N Thr-Arg-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CCCN=C(N)N WFUAUEQXPVNAEF-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- KGKWKSSSQGGYAU-SUSMZKCASA-N Thr-Gln-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KGKWKSSSQGGYAU-SUSMZKCASA-N 0.000 description 1
- JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N Thr-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N Thr-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N Thr-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N Thr-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- PWONLXBUSVIZPH-RHYQMDGZSA-N Thr-Val-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O PWONLXBUSVIZPH-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- NMKJPMCEKQHRPD-IRXDYDNUSA-N Tyr-Gly-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NMKJPMCEKQHRPD-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N Tyr-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- UBTBGUDNDFZLGP-SRVKXCTJSA-N Val-Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N UBTBGUDNDFZLGP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZMDCGGKHRKNWKD-LAEOZQHASA-N Val-Asn-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZMDCGGKHRKNWKD-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N Val-Gly-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- URIRWLJVWHYLET-ONGXEEELSA-N Val-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)C(C)C URIRWLJVWHYLET-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N Val-Lys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- MJFSRZZJQWZHFQ-SRVKXCTJSA-N Val-Met-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N MJFSRZZJQWZHFQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N Val-Pro-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- LTTQCQRTSHJPPL-ZKWXMUAHSA-N Val-Ser-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N LTTQCQRTSHJPPL-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- XNLUVJPMPAZHCY-JYJNAYRXSA-N Val-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 XNLUVJPMPAZHCY-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 241000238584 Vargula Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 1
- WWKWZYPOPJIVGF-UHFFFAOYSA-N [Li].[Li].[Mg] Chemical compound [Li].[Li].[Mg] WWKWZYPOPJIVGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000011912 acute myelomonocytic leukemia M4 Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001508 asparagines Chemical class 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N benzathine Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNCCNCC1=CC=CC=C1 JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N benzotriazole Chemical class C1=CC=C2N[N][N]C2=C1 QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000018805 childhood acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N chloroprocaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1Cl VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002023 chloroprocaine Drugs 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001174 endocardium Anatomy 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N famotidine Chemical compound NC(N)=NC1=NC(CSCCC(N)=NS(N)(=O)=O)=CS1 XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001596 famotidine Drugs 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010019832 glycyl-asparaginyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N glycylvaline Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007235 immunity generation Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229940031154 kluyveromyces marxianus Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 108010057952 lysyl-phenylalanyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229960003194 meglumine Drugs 0.000 description 1
- VDXZNPDIRNWWCW-UHFFFAOYSA-N melitten Chemical compound NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC(C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 VDXZNPDIRNWWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000011034 membrane dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000000409 membrane extraction Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 1
- 201000006894 monocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- 108010091867 peptide P Proteins 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000012026 peptide coupling reagents Substances 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 230000000505 pernicious effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 108010064486 phenylalanyl-leucyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010084572 phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O phosphonium Chemical compound [PH4+] XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- DWSGLSZEOZQMSP-UHFFFAOYSA-N potassium;sodium Chemical compound [Na+].[K+] DWSGLSZEOZQMSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000001273 protein sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- ZHNFLHYOFXQIOW-LPYZJUEESA-N quinine sulfate dihydrate Chemical compound [H+].[H+].O.O.[O-]S([O-])(=O)=O.C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21.C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 ZHNFLHYOFXQIOW-LPYZJUEESA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000009420 retrofitting Methods 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000012306 spectroscopic technique Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M sulfamate Chemical compound NS([O-])(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N tetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000007900 type 1 diabetes mellitus 5 Diseases 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N valinyl-arginine Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
- C12N9/80—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
- C12N9/82—Asparaginase (3.5.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
- C12Y305/01—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in linear amides (3.5.1)
- C12Y305/01001—Asparaginase (3.5.1.1)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
يتعلق الاختراع الحالي ببروتين مُعدل يكون عبارة عن توليفة من (1) L-أَسْباراجيناز L-asparaginase و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات) (poly)peptide(s)، حيث يتكون (البولي)ببتيد (poly)peptide فقط من وحدات حمض أميني amino acid من برولين proline وآلانين alanine. يمكن تكوين البروتين المُعدل بعدد من الطرق، متضمنة الترافق الكيميائي فيما بين L-أَسْباراجيناز L-asparaginase و(البولي)ببتيدات (poly)peptide أو عن طريق التعبير وراثيًا عن البروتين المُعدل كبروتين اندماج. كذلك، يتم هنا توفير أحماض نووية تقوم بتشفير البروتين المُعدل، النواقل و/أو خلايا العائل تشتمل على ذلك، إضافة إلى عمليات لإنتاجها. يتم الكشف عن تركيبات تشتمل على البروتين المُعدل واستخدامها في الطب، تحديدًا في علاج السرطان cancer. في جانب آخر من الاختراع، يمكن اشتقاق L-أَسْباراجيناز L-asparaginase من Erwinia و/أو يكون له تطابق بنسبة على الأقل 85% مع متوالية الحمض الأميني amino acid sequence الخاصة بالمتوالية رقم: 1.
Description
ا-أشباراجيناز مُعدل MODIFIED L-ASPARAGINASE الوصف الكامل
خلفية الاختراع
يتعلق الاختراع Jal ببروتين مُعدل يكون عبارة عن توليفة من )1( ا-أشباراجيناز -]
asparaginase و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات) ((poly)peptide(s) حيث يتكون
(البولي)ببتيد (polypeptide فقط من وحدات حمض أميني 0 87100 من بروثين proline
5 واآلانين ©88010. يمكن تكوين البروتين المُعدل بعدد من الطرق؛ متضمنة الترافق الكيميائي فيما
بين ٠-أشباراجيناز 6 - ا و(البولي)ببتيدات (poly)peptides أو عن طريق التعبير
وراثيًا عن البروتين المُعدل كبروتين اندماج. كذلك؛ يتم هنا توفير أحماض نووية تقوم بتشفير البروتين
المُعدل؛ النواقل و/أو خلايا العائل تشتمل على ذلك؛ إضافة إلى عمليات لإنتاجها. يتم الكشف عن
تركيبات تشتمل على البروتين المُعدل واستخدامها في الطب؛ تحديدًا في علاج السرطان. في جانب 0 آخر من الاختراع؛ يمكن اشتقاق ا-أشباراجيناز من Erwinia و/أو يكون له تطابق بنسبة على
الأقل 9685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1.
لقد تم استخدام البروتينات old نشاط +- أسباراجين أمينو هيدرولاز L-asparagine
@aminohydrolase activity ¢ المعروفة على نحو شائع باعتبارها بروتينات ٠-أشباراجيناز على
نحو ناجح لعلاج لوكيميا أرومة لمفاوية حادة (ALL) Acute Lymphoblastic Leukemia في الأطفال saad سنوات. يعتبر اال هو أكثر الأورام السرطانية الخبيثة68020615 malignant
.(Avramis (2005) Clin.
Pharmacokinet. 44, 367-393) شيوعًا في الأطفال
Hodgkin's لعلاج مرض هودجكين L-asparagine زانيجارابشمأ-٠ استخدام Wal تم 2a
disease ¢ لوكيميا نخاعية acute myelocytic Leukemia sala ؛ لوكيميا وحيدية نخاعية
حادة acute myelomonocytic Leukemia ؛ لوكيميا لمفاوية مزمنة chronic lymphocytic Leukemia 20 « ساركوما لمفاوية lymphosarcoma « ساركوما شبكية reticulosarcoma «
Kotzia (2007) J.
Biotechnol. 127, 657-) melanosarcoma وساركوما ميلانينيّة
9ك sid أن النشاط المضاد للورم الخاص ب ا- أشباراجيناز يكون راجعًا إلى عدم قدرة أو القدرة المخفضة لخلايا خبيثة معينة على تخليق ١-أسباراجين L—asparagine (ld) (Id) . تعتمد هذه LAY الخبيثة على الإمداد خارج الخلوي ب ا- أسباراجين. بالرغم من ذلك؛ يُحفز إنزيم - أشباراجيناز تحلل ا-أسباراجين بالماء إلى حمض أسبارتيك aspartic acid وأمونيا ammonia « وبالتالي يتم استتفاد مجموعات دوارة من ا-أسباراجين وقتل خلايا الورم التي لا يمكنها تنفيذ عملية تخليق البروتين بدون ا-أسباراجين (1d) كان ا-أشباراجيناز من إشرشيا كولاي E.coli أول عقار من إنزيم مستخدم في علاج لوكيميا أرومة لمفاوية (ALL) Acute Lymphoblastic Leukemia sala وقد تم تسويقه باعتباره Elspar® الولايات المتحدة الأمريكية أو باعتباره Kidrolase® وا- أشباراجيناز Medac® 10 في أورويا. لقد تم Lal عزل إنزيمات ا- أسْباراجيناز عن الكائنات الحية الدقيقة الأخرى؛ على سبيل «Jal بروتين ٠-أشباراجيناز من «Erwinia chrysanthemi يُسمى ccrisantaspase الذي تم تسويقه باعتباره Wriston (1985) Meth.
Enzymol. 113, 608-618: ( Erwinase® 2a). (Goward (1992) Bioseparation 2, 335-341 تم أيضًا تحديد إنزيمات ٠-أشباراجيناز من الأنواع الأخرى من <Erwinia متضمنة؛ على سبيل المثال» 3937 Erwinia chrysanthemi 5 )28 الوصول لبنك الجينات 567028مم) 1125 Erwinia chrysanthemi NCPPB (رقم الوصول لبنك الجينات Erwinia carotovora (CAA31239 (رقم الوصول لبنك الجينات 6 هه/ر), والنوع الفرعي artroseptica من Erwinia carotovora (رقم الوصول لبنك الجينات 88567027). يكون لإنزيمات ٠-أشباراجيناز من Erwinia chrysanthemi هذه تطابق متوالية حمض أميني بنسبة حوالي 1698-91 مع بعضها البعضء بينما يكون لإنزيمات ا- 0 أمُباراجيناز من Erwinia carotovora تطابق متوالية حمض أميني بنسبة تقريبًا 1677-75 مع إنزيمات ٠-أشباراجيناز من Kotzia (2007) J.
Biotechnol. ) Erwinia chrysanthemi 657-669 ,127). يكون لإنزيمات ا-أشباراجيناز ذات المنشاً البكتيري إمكانية مولدة للمناعة ومولدة للضد عالية وكثيرًا ما تحث على تفاعلات عكسية تتراوح من Joli مسبب للحساسية متوسط إلى صدمة تََقِبّة في 5 المرضى المصابين بحساسية (1583-1588 ,17 (Wang )2003( Leukemia يكون -L
أشباراجيناز من إشرشيا كولاي E.coli تحديدًا مولدًا للمناعة؛ مع تقارير على وجود أجسام مضادة تكون مضادة لأشباراجيناز بالنسبة إلى ا- أشباراجيناز من إشرشيا كولاي بعد وصول الإعطاء داخل الوريد أو في العضل إلى نسبة عالية تبلغ 9678 في البالغين و9670 في الأطفال (Id) تختلف إنزيمات ٠-أشباراجيناز من إشرشيا كولاي Erwinia chrysanthemi; في خصائص الحركية الدوائية الخاصة بها ويكون لها خواص مولدة للمناعة مميزة؛ على التوالي ) Klug Brit.
J.
Haematol. 115, 983-990 )2001( 810611560). علاوة على ذلك؛ لقد تم إظهار أن الأجسام المضادة التي تطورت بعد علاج باستخدام ا- أشباراجيناز من إشرشيا كولاي لا تتفاعل Gals مع ا- أشباراجيناز من .(Wang (2003) Leukemia 17, 1583-1588( Erwinia ومن ثَم؛ فقد تم استخدام ٠-أشْباراجيناز من Erwinia (crisantaspase) باعتباره العلاج بالخيار 0 الثاني ل ااه في المرضى الذين يتفاعلون مع ا- أشباراجيناز من إشرشيا كولاي ( (2002) Duval .(Blood 15, 2734-2739: Avramis (2005) Clin.
Pharmacokinet. 44, 367-393 في محاولة أخرى لتقليل توليد المناعة المرتبط بإعطاء إنزيمات ا- أسْباراجيناز ميكروبية؛ فقد تم تطوير ا- أشباراجيناز من إشرشيا كولاي تم تعديله باستخدام ميثوكسي-بولي إيثيلين جليكول (MPEG) methoxy-polyethyleneglycol . تمت أولاً الموافقة على ما يُطلق عليه MPEG 5 ا+-أشخباراجيناز ¢ أو إنزيمات معالجة ببولي إيثيلين جليكول polyethyleneglycol « يتم تسويقه باعتباره «(Enzon Inc.) Oncaspar® في الولايات المتحدة الأمريكية للعلاج بالخيار الثاني ل ALL في عام 1994 وقد تمت الموافقة عليه للعلاج بالخيار الأولي ل ALL في الأطفال والبالغين منذ 2006. يعتبر Oncaspar® هو Salli من إشرشيا كولاي قد تم تعديله عند العديد من وحدات 0 اليزين_البنائية باستخدام 5 كيلو دالتون من 07056-مكسينيميديل سكسينات MPEG- (SS-PEG) succinimidyl succinate (البراءة الأمريكية رقم 4,179,337). يعتبر -55 PEG مادة PEG كاشفة خاصة بالجيل الأول تحتوي على رابط إستر غير مستقر unstable ester linkage يكون حساسًا للتحلل بالماء بواسطة الإنزيمات أو عند قيم رقم هيدروجيني قلوي slightly alkaline pH نوعًا ما البراءة الأمريكية رقم 4,670,417. تقلل هذه الخصائص من كل ge 5 الثبات في المعمل وفي جسم الكائن الحي ويمكن أن تُعيق أمان العقار.
علاوة على ذلك, فقد تم إيضاح أن الأجسام المضادة المطورة ضد ا-أشباراجيناز من إشرشيا كولاي سوف تتفاعل تبادليًا مع (Wang (2003) Leukemia 17, 1583-1588( Oncaspar® حتى بالرغم من أن هذه الأجسام المضادة لم تكن متعادلة؛ بيّن هذا الاستنتاج بوضوح الإمكانية العالية لفرط الحساسية التبادلية أو إيقاف التنشيط التبادلي في جسم الكائن الحي. بالفعل؛ في أحد التقارير Je 9641-30 من JULY) الذين تلقوا Jou dalle clay) إيثيلين جليكول polyethyleneglycol من تفاعل مسبب للحساسية (1d) بالإضافة إلى التفاعلات المسببة للحساسية الخارجية؛ تم إيضاح المشكلة الخاصة ب 'فرط الحساسية الهادئة' حديثًا؛ وفقًا لذلك يُطور المرضى أجسامًا مضادة تكون مضادة لأشباراجيناز دون إظهار أي دليل إكلينيكي على تفاعل فرط حساسية )1583-1588 ,17 Leukemia )2003( و0/209/). 0 يمكن أن يؤدي هذا التفاعل إلى تكوين أجسام مضادة متعادلة تجاه ا- أُباراجيناز من إشرشيا كولاي وإنزبمات معالجة ببولي إيثيلين جليكول polyethyleneglycol ؛ بالرغم من ذلك؛ لا يتم تبديل هؤلاء المرضى إلى ا-أشباراجيناز من Erwinia لأنه لا sag إشارات على فرط الحساسية؛ ولهذا فإنهم يتلقون مدة أقصر من العلاج الفعال ( Holcenberg (2004) J.
Pediatr.
Hematol. .(Oncol. 26, 273-274 5 غالبًا ما يتم استخدام العلاج باستخدام ٠-أشباراجيناز من Erwinia chrysanthemi في حالة فرط الحساسية تجاه إنزيمات ا-أسْباراجيناز المشتقة من إشرشيا كولاي. بالرغم من ذلك؛ فقد تمت ملاحظة أنه تكون نسبة تبلغ 9650-30 من المرضى الذين يتلقون ا- أشُباراجيناز من Erwinia إيجابية للجسم المضاد (367-393 ,44 Clin.
Pharmacokinet. ,)2005( 0/180015/). علاوة على ذلك» لأن ا- أشباراجيناز من Erwinia chrysanthemi يكون له jee نصفي للتخلص أقصر من 0 إنزيمات ا- أشباراجيناز من إشرشيا كولاي؛ فإنه يتحتم إعطائه على نحو أكثر تكرارًا (Id) دراسة بواسطة et. al 10/180015 تم ربط أشباراجيناز من Erwinia بخواص الحركية الدوائية الأقل J.
Pediatr.
Hematol.
Oncol. 29, 239-247) ,)2007( 21/080715). لهذاء فقد أصبحت إنزيمات ا- أسْباراجيناز من إشرشيا كولاي والإنزيمات المعالجة ببولي إيثيلين جليكول هي العلاجات بالخيار الأولي المفضلة ل ALL مقارنة ب -أشباراجيناز من Erwinia
لقد تمت معالجة العديد من المواد الصيدلية البيولوجية ببولي إيثيلين جليكول polyethyleneglycol بنجاح وتسويقها لعدة سنوات. بالرغم من ذلك؛ في العديد من الحالات؛ تُظهر المواد الصيدلية البيولوجية المعالجة ببولي إيثيلين جليكول نشاطًا مخفضًا إلى حدٍ كبير مقارنة بالمادة الصيدلية البيولوجية غير المعدلة. في Salli Aa من (Erwinia carotovora فقد تمت ملاحظة أنه المعالجة Jon إيثيلين جليكول خفضت نشاطه في المعمل إلى Kuchumova ( 9657 Gs Biochemistry (Moscow) Supplement Series B: Biomedical )2007( (Chemistry, 1, 230-232 يكون ل ٠-أشباراجيناز من Erwinia carotovora فقط تجانس بنسبة حوالي 97075 مع ٠-أشباراجيناز من .(crisantaspace) Erwinia chrysanthemi بالنسبة ل Oncaspar® يُعرف أيضًا أن نشاطه في المعمل aly تقريبًا 9650 مقارنة ب ا- أشباراجيناز 0 من إشرشيا كولاي غير المعدل. الوصف العام للاختراع ومن oof تتمثل المشكلة التقنية الكائئنة في الاختراع الحالي في توفير وسائل وطرق لعلاج السرطان؛ مثل لوكيميا leukemia أو ورم لمفاوي غير هودجكين non-Hodgkin's lymphoma « 5 أثباراجيناز المعالجة ببولي إيثيلين جليكول . يتم حل المشكلة التقنية عن طريق توفير التجسيدات المتميزة فى عناصر الحماية. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع الحالي ببروتين مُعدل يشتمل على )1( ا- أشباراجيناز و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في جانب مفضل يتعلق الاختراع ببروتين مُعدل يشتمل على (1) ا- 0 أتباراجيناز له تطابق بنسبة على الأقل 9685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. يتعلق الاختراع الحالي» من بين أمور cal بالبنود التالية:
1. بروتين مُعدل يشتمل على )1( ا- أشباراجيناز 5 )2( واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات) (0017/(06010©)5)؛ Cua يتكون (البولي)ببتيد (poly)peptide من 600-20 وحدات حمض أمينى amino acid من برولين proline وآلانين .alanine 2. البروتين المُعدل Uy للبند 1؛ حيث يكون ل ا-أشباراجيناز المذكور تطابق بنسبة على الأقل 685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 3. البروتين المُعدل وفقًا للبند 1 أو 2 حيث يكون ل ا- أشباراجيناز المذكور متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1. 4 البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 3؛ حيث يكون للبروتين المُعدل نشاط أشباراجيناز أو جلوتاميناز أعلى من ذلك الخاص ب ا-أشباراجيناز غير المُعدل. 0 5. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 4؛ حيث يكون للبروتين المُعدل المذكور نشاط استنفاد ا-أسباراجين يكون أعلى بنسبة على الأقل حوالي %20 من ا-أشْباراجيناز غير المُعدل. 6. البروتين المُعدل Gy لأي من البنود من 1 إلى 5؛ حيث يكون ا- أباراجيناز المذكور تترامر. 7. البروتين المُعدل Gy لأي من البنود من 1 إلى 6 الذي يكون Ble عن بروتين مُعدل من —L أشباراجيناز المذكور وبولي cain حيث يتكون البولي ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من 5 برولين وآلانين. 8. البروتين المُعدل وفقًا للبند 7 حيث يتكون البولي ببتيد المذكور من حوالي 100 إلى 600 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين؛ تحديدًا من حوالي 200 إلى حوالي 400 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين. 9. البروتين المُعدل Gy للبند 7 أو 8؛ حيث يتكون البولي ببتيد المذكور من إجمالي يبلغ حوالي 0 200 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين أو إجمالي يبلغ حوالي 400 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين.
0. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 7 إلى 9( حيث تُشكل وحدات البرولين المتبقية المذكورة أكثر من حوالي 9610 وأقل من حوالي 9670 من البولي ببتيد. 1. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 7 إلى 10؛ حيث يشتمل البولي ببتيد المذكور على مجموعة متعددة من أجزاء تكرار الحمض الأميني؛ حيث يتكون جزءٍ التكرار من وحدات برولين وآلانين بنائية وحيث يكون ما لا يزيد عن 6 من وحدات الحمض الأميني البنائية المتتالية متطابقة.
2. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 7 إلى 11؛ حيث يشتمل البولي ببتيد المذكور على أو يتكون من متوالية الحمض الأمينى AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA (المتوالية رقم: 5) أو نسخ مبدلة دائرية أو (أ) عديدي وحدات خاصة بالمتواليات ككل أو أجزاء من المتوالية. 3. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 7 إلى 12؛
0 () حيث يشتمل البولي ببتيد المذكور على أو يتكون من متوالية حمض أميني كما يُعرض في المتوالية رقم: 7 أو 9؛ (ب) حيث يشتمل البولي ببتيد المذكور على أو يتكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي 8600 Nucleic محتوية على متوالية نوكليوتيد nucleotide sequence كما يُعرض في المتوالية رقم: 8 أو 10.
5 14. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 7 إلى 13؛ (أ) حيث يشتمل البروتين المُعدل المذكور على أو يتكون من متوالية حمض أميني amino acid SEQUENCE كما يُعرض في المتوالية رقم: 11 أو 13؛ (ب) حيث يشتمل البروتين المُعدل المذكور على أو يتكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 12 أو 14.
0 15. البروتين المُعدل By لأي من البنود من 7 إلى 14؛ حيث يكون البولي ببتيد المذكور She عن بولي ببتيد ملتف عشوائي.
6. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 7 إلى 15؛ حيث يكون البروتين المُعدل عبارة عن بروتين اندماج من ا- أسْباراجيناز والبولي ببتيد. 7. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 6 الذي يكون عبارة عن بروتين مُعدل من ا-أشباراجيناز وواحد أو أكثر من الببتيد(الببتيدات)» حيث يكون JS عبارة عن ببتيد حل «(P/A-RC 5
حيث تكون (0/8) عبارة عن متوالية حمض أميني تتكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين» حيث RN تكون عبارة عن مجموعة حماية ملحقة بمجموعة الأمينو عند الطرف لاا الخاصة بمتوالية الحمض الأمينى» و حيث RC تكون Ble عن وحدة بنائية لحمض أميني مرتبطة مجموعة الأمينو الخاصة بها
0 بمجموعة الكريوكسي عند الطرف © الخاصة بمتوالية الحمض الأميني؛ حيث يتم ترافق كل ببتيد ب ا-أشباراجيناز عبر رابط أميد متكون من مجموعة الكربوكسي الخاصة بوحدة الحمض الأمينى البنائية عند الطرف © "RC" من الببتيد ومجموعة أمينو 810100 حرة من ا-أشباراجيناز» و حيث لا تكون واحدة على الأقل من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات بهاء عبارة
عن مجموعة »-أمينو عند الطرف لا من ا- أشباراجيناز. 8. البروتين المُعدل وفقًا للبند 17( حيث تتكون متوالية الحمض الأميني المذكورة من إجمالي يبلغ فيما بين 15 و45 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين. 9. البروتين المُعدل وفقًا للبند 17 أو 18( Cun تتكون متوالية الحمض الأميني المذكورة من 20 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين
0 20. البروتين المُعدل Gay للبند 17 أو 18؛ حيث تتكون متوالية الحمض الأميني المذكورة من 40 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين.
— 0 1 — 1. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 20 حيث تُشكل وحدات البرولين المتبقية المذكورة SST من حوالي 9610 وأقل من حوالي 9670 من متوالية الحمض الأميني. 2. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 21؛ حيث تكون متوالية الحمض الأميني المذكورة هي AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA 5 (المتوالية رقم: 5) أو
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA (المتوالية رقم: 15( 3. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 22 حيث RN تكون عبارة عن بيروجلوتامويل أو أسيتيل» و/أو
0 حيث 40 تكون عبارة عن حمض ع- أمينو هكسانويك. 4. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 23؛ حيث تتخذ الببتيدات المكونة في البروتين المُعدل المذكور تشكيل ملتف عشوائي. 5. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 24؛ حيث تكون كل الببتيدات المكونة في البروتين المُعدل المذكور متماثلة.
5 26. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 25؛ حيث تكون واحدة على الأقل من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات Ble cle عن مجموعة ع-أمينو من وحدة ليزين بنائية من ا-أشُباراجيناز. 7. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 26؛ حيث يتم اختيار مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات بهاء من المجموعة المشتملة على مجموعة(مجموعات) ع-أمينو
0 800100 من 4 وحدة (وحدات) بنائية من ا- أشباراجيناز ومجموعة (مجموعات) ع -أمينو s—amino عند الطرف N الخاصة ب ا- أشباراجيناز.
— 1 1 — 8. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 17 إلى 27 حيث يكون ا-أشباراجيناز مكونًا من أربع وحدات فرعية؛ وحيث يتم ترافق من 9 إلى 13 ببتيد كما هو مُعرّف في أي من البنود من 15 إلى 24 مع كل وحدة فرعية من ا-أشباراجيناز. 9. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 28؛ حيث يتسبب البولي ببتيد أو الببتيد المذكور في تولد مناعة مخفض للبروتين المُعدل المذكور.
0. حمض نووي يُشفر البروتين المُعدل Gy لأي من البنود من 1 إلى 16. 1. الحمض النووي Big للبند 30( حيث يتم اختيار الحمض النووي المذكور من المجموعة المكونة من: (أ) الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد الخاصة بالمتوالية رقم: 12 أو 14؛
0 (ب) الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد التي لها تطابق بنسبة على الأقل 9685 مع متوالية النوكليوتيد كما هو مُعرّف في ()؛ و (ج) يكون الحمض النووي متحللاً كنتيجة للشفرة الجينية إلى متوالية النوكليوتيد كما هو مُعرّف في () أو (ب). 2. ناقل مشتمل على الحمض النووي Gy للبند 30 أو 31.
5 33. خلية عائل مشتملة على الحمض النووي وفقًا للبندين 30 أو 31 أو الناقل Gg للبند 32. 4. خلية العائل وفقًا للبند 33( حيث يتم اختيار خلية العائل المذكورة من المجموعة المكونة من Pseudomonas fluorescens EEA 2 وجلوتاميكوم الوَتَدِجّة Corynebacterium glutamicum 5. عملية لتحضير بروتين مُعدل Gay لأي من البنود من 1 إلى 6 أو حمض نووي وفقًا
all 20 30 أو 31. 6. العملية Wg للبند 35« تشتمل على استنبات خلية العائل dg للبند 33 أو 34 وعزل البروتين الشُعدل المذكور عن المزرعة أو من الخلية المذكورة.
— 2 1 — 37 عملية لتحضير بروتين مُعدل كما هو مُعرّف في أي من البنود من 17 إلى 29؛ تشتمل العملية على: (أ) إقران ببتيد منشط له الصيغة (RN—(P/A)-RC-act حيث RC-act تكون عبارة عن صورة منشطة بالكريوكسي من (RC حيث (PJA) 5 RC تكونا كما هو مُعرّف في البروتين المُعدل الذي سيتم تحضيره» وحيث لاج تكون عبارة عن مجموعة حماية ملحقة بمجموعة الأمينو عند الطرف N الخاصة ب (0//8)؛ ب ا- أشباراجيناز للحصول على بروتين مُعدل من ا-أشباراجيناز Chasing حيث RN تكون عبارة عن مجموعة حماية. 8. العملية Gig للبند 37( حيث تكون مجموعة الكريوكسى المنشطة الخاصة بوحدة الحمض الأمينى البنائية RC-act فى الببتيد المنشط عبارة عن مجموعة إستر نشطة. 0 39. تركيبة تشتمل على البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 29 أو البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية وفقًا لأي من البنود من 35 إلى 38. 0 التركيبة وفقًا للبند 39 التي تكون عبارة عن تركيبة صيدلية؛ تشتمل اختياريًا بشكل إضافي على (أ) مادة (مواد) حاملة مقبولة صيدليًا أو سواغ (سواغات) .excipient(s) 1. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 29 أو البروتين المُعدل الذي تم تحضيره 5 بواسطة العملية وفقًا لأي من البنود من 35 إلى 38 أو التركيبة وفقًا للبند 39 أو 40؛ للاستخدام كدواء . 2. البروتين المُعدل Wy لأي من البنود من 1 إلى 29 البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية وفقًا لأي من البنود من 35 إلى 38 أو التركيبة وفقًا للبند 39 أو 40؛ للاستخدام في علاج مرض؛ على سبيل المثال مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ا-أسباراجين في مريض. 0 43. طريقة لعلاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ١-أسباراجين في مريض؛ تشتمل الطريقة المذكورة على إعطاء المربض المذكور مقدار فعال من البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 29؛ البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية وفقًا لأي من البنود من 35 إلى 38 أو تركيبة وفقًا للبندين 39 أو 40.
— 3 1 — 4. البروتين المُعدل للاستخدام Bg للبند 42( أو التركيبة للاستخدام وفقًا للبند 42( أو الطريقة Gy للبند 43 حيث يكون المرض المذكور القابل للعلاج عن طريق استنفاد ا-أسباراجين هو سرطان . 5. البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 29 البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية وفقًا لأي من البنود من 35 إلى 38 أو التركيبة وفقًا للبند 39 أو 40؛ للاستخدام
في علاج السرطان. 6. طريقة لعلاج السرطان تشتمل على إعطاء البروتين المُعدل وفقًا لأي من البنود من 1 إلى 29 البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية وفقًا لأي من البنود من 35 إلى 38؛ أو التركيبة وفقًا للبند 39 أو 40؛ إلى خاضع للعلاج.
0 47. البروتين المُعدل للاستخدام وفقًا للبند 44 أو 45 أو التركيبة للاستخدام Gg للبند 44 أو 45؛ حيث يكون السرطان المذكور عبارة عن سرطان غير صلب non-solid cancer ؛ أو الطريقة Gy للبند 44 أو 46؛ حيث يكون السرطان المذكور عبارة عن سرطان غير صلب. 8. البروتين المُعدل للاستخدام all Bg 47 أو التركيبة للاستخدام وفقًا all 47 حيث السرطان غير الصلب المذكور لوكيميا أو ورم لمفاوي غير هودجكين non-Hodgkin's
lymphoma 5 ؛ أو الطريقة Uy للبند 47؛ حيث يكون السرطان غير الصلب المذكور هو لوكيميا أو ورم لمفاوي غير هودجكين .non-Hodgkin’s lymphoma 9. البروتين المُعدل للاستخدام وفقًا للبند 48 أو التركيبة للاستخدام Gg للبند 48 حيث تكون اللوكيميا المذكورة هى لوكيميا أرومة لمفاوية حادة (ALL) acute lymphoblastic leukemia أو لوكيميا نخاعية ¢(AML) acute myeloid leukemia sia أو الطريقة Gay للبند 48 Cua
0 تكون اللوكيميا المذكورة هى لوكيميا أرومة لمفاوية acute lymphoblastic leukemia sala (ALL) أو لوكيميا نخاعية (AML) sala 0. البروتين المُعدل للإستخدام وفقًا لأي من البنود 42 dd 45 ومن 47 إلى 49؛ أو التركيبة للاستخدام Gg لأي من البنود 42 44 45 ومن 47 إلى 49؛ أو الطريقة وفقًا لأي من البنود
— 4 1 — 3 ومن 46 إلى 49 حيث يُظهر البروتين المُعدل المذكور استجابة مولدة للمناعة أقل في المريض المذكور مقارنة ب -أشباراجيناز غير المُعدل. 1. البروتين المُعدل للإستخدام وفقًا لأي من البنود 42 44 45 ومن 47 إلى 50 أو التركيبة للاستخدام وفقًا لأي من البنود 42 44؛ 45 ومن 47 إلى 50 أو الطريقة وفقًا لأي من البنود 43؛ 44 ومن 46 إلى 50؛ حيث يكون للبروتين المُعدل المذكور عمر نصفي أطول في الدورة
الدموية في جسم الكائن all بعد جرعة فردية مقارنة ب ا-أشباراجيناز غير المُعدل. 2. البروتين المُعدل للاستخدام وفقًا لأي من البنود 42 dd 45 ومن 47 إلى 51 أو التركيبة للاستخدام Gg لأي من البنود 42 44؛ 45 ومن 47 إلى 51 أو الطريقة وفقًا لأي من البنود 3 ومن 46 إلى 51؛ حيث يكون للبروتين المُعدل المذكور قيمة أكبر بعد جرعة فردية
0 مقارنة ب ٠-أمْباراجيناز غير المُعدل. 3. البروتين المُعدل للاستخدام وفقًا لأي من البنود 42 dd 45 ومن 47 إلى 52 أو التركيبة للاستخدام وفقًا لأي من البنود 42 44 45 ومن 47 إلى 52؛ أو الطريقة وفقًا لأي من البنود 43 44 ومن 46 إلى 52؛ حيث يكون المريض المذكور قد عانى من فرط الحساسية مسبقة تجاه ٠-أشباراجيناز من إشرشيا كولاي أو صورة معالجة ببولي إيثيلين جليكول منه.
5 54. البروتين المُعدل للإستخدام وفقًا لأي من البنود 42 44 45 ومن 47 إلى 53 أو التركيبة للاستخدام Gg لأي من البنود 42 44 45 ومن 47 إلى 53 أو الطريقة وفقًا لأي من البنود 43 44 ومن 46 إلى 53؛ حيث يكون المريض المذكور قد عانى من فرط الحساسية مسبقة تجاه ٠-أشباراجيناز من Erwinia 5. البروتين المُعدل للاستخدام وفقًا لأي من البنود 42 44 45 ومن 47 إلى 54 أو التركيبة
0 للاستخدام وفقًا لأي من البنود 42 44؛ 45 ومن 47 إلى 54؛ أو الطريقة وفقًا لأي من البنود 43 44 ومن 46 إلى 54 حيث يشتمل العلاج على إعطاء داخل الوريد للبروتين المُعدل المذكور. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع الحالي ببروتين مُعدل يشتمل على (1) ا- أْباراجيناز لناتج عودة اتحاد جيني له تطابق بنسبة على الأقل 9685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة
بالمتوالية رقم: 1 و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. تنطبق التفسيرات والتعريفات المتوفرة هنا فيما يتعلق بالمصطلحات 'بروتين معدل"؛ "ا-أشباراجيناز» '(بولي)ببتيد (ببتيدات)" وما شابه المتوفرة هنا مع ما يلزم من تبديل أو تعديل. يشير المصطلح "ا-أَشْباراجيناز لناتج sage الاتحاد الجيني" كما يُستخدم هنا إلى صورة ناتج عودة اتحاد جيني من ا- أشباراجيناز لها تطابق بنسبة على الأقل
5 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة ب ا- أشْباراجيناز من Erwinia أصلي. قد يشير المصطلح mild عودة الاتحاد الجيني" إلى ا- أشباراجيناز منتج فيما يتعلق بناتج sage الاتحاد الجيني؛ على سبيل المثال ا-أسْباراجيناز منتج في خلية عائل مشتملة على حمض نووي يُشفر ا- أشباراجيناز .
0 تُظهر البروتينات المُعدلة بشكل إضافي عمر نصفي للبلازما معزز و» من ثم فترة تأثير مطولة مقارنة ب ا- أسْباراجيناز غير المترافق ذي الصلة. يسمح هذا بخفض تكرار الجرعة وبالتالي عبء الآثار الجانبية. يوفر الاختراع Wad عمليات لتحضير البروتينات المُعدلة كما يوصف هنا. في جوانب معينة؛ يتعلق الاختراع ببروتين مُعدل يشتمل على (1) ا-أشباراجيناز له تطابق بنسبة على الأقل 85 86 87 88 89» 90 91 92 93 94 95 96 97( 98 99 أو
5 %100 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (تتكون) (البولي)ببتيد(ببتيدات) فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. يتم إدراك أن المصطلح " متكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين" يعني أنه توجد وحدة برولين واحدة على الأقل ووحدة آلانين واحدة على (BY) أي أنه يتحتم وجود كل من وحدة البرولين الواحدة على الأقل ووحدة الآلانين الواحدة على الأقل. في
0 جانب مفضل؛ يتعلق الاختراع ببروتين مُعدل يشتمل على (1) ا-أشباراجيناز لناتج sage اتحاد جيني محتوي على متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في أحد الجوانب» يكون ا- أشباراجيناز تترامر gl) ا-أشباراجيناز مكون من أربع وحدات فرعية أو مونومرات). تشتمل وحدة فرعية نموذجية واحدة أو يشتمل مونومر نموذجي واحد على متوالية
5 الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1.
في أحد الجوانب»؛ يتسبب (البولي)ببتيد (أي؛ بولي ببتيد أو ببتيد) في تولد مناعة مخفض للبروتين المُعدل الموصوف هناء على سبيل المثال alg مناعة مخفض للبروتين المُعدل مقارنة ب ]- أسشباراجيناز غير المترافق. كما يُعرض في الأمثلة الملحقة؛ اشتمل البروتين PA#1(200)-Crisantaspase على 96109 واشتمل البروتين PA#1(400)-Crisantaspase على 96118 من نشاط الإنزيم مقارنة ب
Crisantaspase غير المعدل؛ انظر المثال 5. يوضح هذا أن اندماج إنزيمات الأشباراجيناز كما يوصف هنا مع البولي ببتيدات لا يؤثر على النشاط الإنزيمي. على نحو Hie للدهشة؛ زاد النشاط مع طول 0/8-بولي ببتيد. بشكل أكثر cages يكون للبروتينات المعدلة المتوفرة هنا نفس النشاط (الإنزيمي) أو نشاط
0 (إنزيمي) مماثل إلى حدٍ كبير مقارنة بأشُباراجيناز غير معدل. قد يتم تقييم النشاط (الإنزيمي) بواسطة تجرية .Nessler يتم توفير تفاصيل تجرية Nessler في الأمثلة الملحقة و/أو يتم الكشف عنها في المجال السابق على سبيل المثال Mashburn (1963) Biochem.
Biophys. Res.
Commun. 12, 0 (المتضمن هنا كمرجع بأكمله). ly على ذلك؛ في أحد الجوانب؛ يكون للبروتينات المعدلة المتوفرة هنا نفس النشاط (ail) أو نشاط (إنزيمي) las إلى حدٍ
p< 5 مقارنة بأسُباراجيناز غير معدل كما هو mie بواسطة تجرية +6ا655ل. يشير المصطلح أشباراجيناز غير معدل" كما يُستخدم هنا إلى Sbload أصليء أي أشباراجيناز يكون غير معدل عن طريق الاندماج/الترافق مع (بولي)ببتيدات كما هو محدد هنا. على سبيل المثال» يكون "أشباراجيناز غير معدل" عبارة عن ا- أشباراجيناز له تطابق بنسبة على الأقل 1685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1. في جانب مفضل؛ يكون
0 ثباراجيناز غير معدل" عبارة عن ا-أشباراجيناز به متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1. في بعض الجوانب؛ يكون للبروتينات المعدلة المتوفرة هنا نشاط (إنزيمي) el من ذلك الخاص ب ا-أشْباراجيناز غير المُعدل. قد يتم تقييم النشاط (الإنزيمي) بواسطة تجرية Nessler على سبيل المثال. يتم توفير تفاصيل تجرية Nessler في الأمثلة الملحقة و/أو يتم الكشف عن في المجال
السابق على سبيل المثال Mashburn (1963) Biochem.
Biophys.
Res.
Commun. 0 ,12 (المتضمن هنا كمرجع بأكمله). ply على ذلك؛ في أحد الجوانب؛ يكون للبروتينات المعدلة المتوفرة هنا نشاط (إنزيمي) أعلى من ذلك الخاص ب ا-أشباراجيناز غير المُعدل كما هو xis بواسطة تجرية Nessler يشير المصطلح "أشباراجيناز غير معدل" كما يُستخدم هنا إلى
أنباراجيناز (al أي أسْباراجيناز يكون غير معدل عن طريق Gz La) مع (بولي)ببتيدات كما هو محدد هنا. على سبيل المثال؛ يكون "أشباراجيناز غير معدل" عبارة عن ا- أشباراجيناز له تطابق بنسبة على الأقل 1685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1. في جانب مفضل؛ يكون "أشباراجيناز غير معدل" عبارة عن ا- أشباراجيناز به متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1. على سبيل المثال؛ يكون للبروتينات المُعدلة نشاط (إنزيمي)
0 يمكن أن يكون أعلى بنسبة على الأقل 965 و/أو ما يصل إلى 9630 (على سبيل المثال على الأقل 9610 9615؛ 9620 25؛ % (أو أكثر) من ذلك الخاص ب ا-أشباراجيناز» تحديدًا أعلى من ذلك الخاص ب ا- أشباراجيناز غير المُعدل؛ تحديدًا كما هو ais بواسطة تجرية Nessler تنطبق التفسيرات السابقة تحديدًا على بروتينات الاندماج المتوفرة هنا (على سبيل المثال بروتين معدل من ا- أشْباراجيناز وبولي cain حيث يتكون البولي ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من
5 برولين وآلانين)؛ إلا أنها ليست قاصرة على ذلك. في بعض الجوانب؛ يكون للبروتينات المُعدلة نشاط أَسْباراجيناز أو نشاط جلوتاميناز أعلى من ذلك الخاص ب ا- أشْباراجيناز غير المُعدل. على سبيل المثال» يمكن أن يكون للبروتينات المُعدلة نشاط أشباراجيناز أو نشاط جلوتاميناز أعلى بنسبة على الأقل 965 و/أو ما يصل إلى 9630 (على سبيل المثال على الأقل 9610 9615؛ 9620 9625؛ (أو أكثر) من ذلك الخاص ب ا-
0 أتباراجيناز» تحديدًا أعلى من ذلك الخاص ب ا- أَسْباراجيناز غير المُعدل؛ تحديدًا كما هو wie بواسطة تجرية .Nessler في بعض التجسيدات؛ قد يتم قياس نشاط الأشباراجيناز أو نشاط الجلوتاميناز بواسطة تجرية Nessler قد يتم تحديد معدل التحلل بالماء للأسباراجين عن Gob قياس الأمونيا المطلقة؛ وقد تتم مقارنة مقدار الأمونيا المطلقة من استخدام البروتينات المُعدلة التي تم الكشف عنها هنا بذلك من استخدام ا-أشباراجيناز أو -ا-أشباراجيناز غير المُعدل. في جوانب
5 إضافية؛ يكون للبروتينات المُعدلة المذكورة نشاط استنفاد 1-أسباراجين ef من ذلك الخاص ب
٠-أشباراجيناز غير المُعدل. على سبيل المثال؛ يكون للبروتينات المُعدلة نشاط استنفاد —L
أسباراجين على الأقل 965 و/أو ما يصل إلى 9630 (على سبيل المثال على الأقل 9610؛
9620؛ 25 % (أو أكثر)) Jef من ذلك الخاص ب ا- أشباراجيناز» تحديدًا أعلى من
ذلك الخاص ب ا- أشباراجيناز غير (Jail) تحديدًا كما هو مُقيّمِ بواسطة تجرية Nessler يتعلق 5 الاختراع أيضًا بتركيبة صيدلية تشتمل على البروتين المُعدل؛ والبروتين المُعدل أو التركيبة الصيدلية
للاستخدام في العلاج؛ أو للاستخدام كدواء؛ أو للاستخدام في الطب.
بشكل عام؛ يمكن الحصول على بروتين مُعدل عن طريق الإقران الكيميائي أو عن طريق الاندماج
الجيني (في Alls الترافق مع بروتين أو ببتيد آخر). يتعلق المصطلح 'بروتين اندماج” كما يُستخدم
هنا بشكل رئيسي ببروتين مُعدل يشتمل على )1( ا1-أشباراجيناز و(2) واحد أو أكثر من البولي
0 ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون البولي ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في هذا السياق؛ يمكن أن يتكون البولي ببتيد من حوالي 200 إلى Jigs 400 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين. يتم عرض متوالية الحمض الأميني النموذجية من هذه البولي ببتيدات في المتوالية رقم: 7 أو 9 إذا تم الحصول على البروتين المُعدل عن Gok الإقران الكيميائي؛ فإنه يشتمل على (1) ا-
5 أشباراجيناز و(2) واحد أو أكثر من الببتيد(الببتيدات)؛ حيث يتكون الببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في هذا السياق؛ يمكن أن يتكون الببتيد من إجمالي يبلغ فيما بين 10 و100 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين» من حوالي 15 إلى حوالي 60 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين» من حوالي 15 إلى 45 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين» على سبيل المثال من حوالي 20 إلى حوالي 40؛ على سبيل المثال؛ 20 وحدة حمض أميني من برولين
0 والانين أو 40 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين. تكون متوالية الحمض الأميني النموذجية من هذه الببتيدات هي AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA (المتوالية رقم: 5) أو AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA (المتوالية رقم: 15(
يمكن استخدام المصطلح "بروتين معدل" كما يُستخدم هنا على نحو تبادلي مع المصطلح CG
5 تحديدًا إذا كان المصطلح 'بروتين معدل" يشير إلى بروتين مُعدل تم الحصول عليه عن طريق
الإقران الكيميائي أو كبروتين اندماج» أي بشكل رئيسي إذا كان يشتمل على )1( ا- أشباراجيناز و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. بالمثل» يمكن استخدام المصطلحات "غير معدل" و"غير مترافق” على نحو تبادلي هنا .
يتعلق الاختراع Load بعملية لتحضير البروتين المُعدل؛ تشتمل على )1( إقران ببتيد منشط له الصيغة (RN—(P/A)-RC-act حيث RC-act تكون عبارة عن صورة منشطة بالكريبوكسي من (RC حيث (PA) 5 RC تكونا كما هو مُعرّف في البروتين المُعدل الذي سيتم تحضيره؛ وحيث RN تكون عبارة عن مجموعة حماية ملحقة بمجموعة الأمينو عند الطرف N الخاصة ب (P/A) ب ا-أشباراجيناز للحصول على بروتين مُعدل من ا-أشباراجيناز وببتيدات حيث RN تكون She
0 عن مجموعة حماية. لقد تم إيضاح في الأمثلة الملحقة (قارن المثال 1؛ الجدول 1) أنه يمكن تحضير البروتين المُعدل باستخدام مجموعة متنوعة من نسب الكتلة الخاصة بالببتيد المنشط والأسشباراجيناز. على سبيل المثال» يمكن استخدام نسب الكتلة البالغة 10: 1 (الببتيد المنشط: الأشباراجيناز)» 7.5: 1 5: 1 أو 3.5: 1. تمت ملاحظة أن النشاط (الإنزيمي) الخاص بالمعدل كان الأعلى؛ إذا تم استخدام
Abdus 15 5: 1 أو أقل (قارن المثال 1( الجدول 2). ومن ثَم؛ قد يكون من المفيد استخدام نسبة كتلة خاصة بالببتيد المنشط: الأشباراجيناز تبلغ 5: 1 أو أقل؛ على سبيل المثال 5: el 4: 1؛ 5 1 أو 3: 1؛ في العملية الموصوفة هنا فيما سبق. يشير المصطلح dad الكتلة" كما يُستخدم هنا إلى نسبة الوزن الجزيئي الخاص بالببتيد المنشط كما هو محدد هنا والخاص بالأشباراجيناز كما هو محدد هنا (على سبيل المثال الأشباراجيناز كما يُعرض في المتوالية رقم: 1
0 ولبروتينات بتطابق بنسبة على الأقل 9685 مع المتوالية رقم: 1). يتم نمطيًا إيضاح "الوزن الجزيئي" هنا باستخدام الوحدة العلمية دالتون. يُعرف بشكل جيد أن وحدة الوزن الجزيئي الخاصة بالأشباراجيناز أو الببتيد كما هو موضح هنا بالدالتون ؛ هي اسم بديل لوحدة الكتلة الذرية الموحدة unified atomic mass unit (نا). ومن a يعتبر وزن جزبئي pn على سبيل المثال» 500 دالتون GIs ل 500 جم/مول. يشير المصطلح "kDa" (كيلو دالتون) إلى 1000 دالتون.
يمكن تحديد الوزن الجزيئي الخاص بالأَسْباراجيناز أو الببتيد باستخدام الطرق المعروفة في المجال؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ قياس الطيف الكتلي (على سبيل (Jal) قياس الطيف الكتلي التأين بالرش الإلكتروني» (ESI-MS أو قياس الطيف الكتلي بالامتزاز/التأين بالليزر المساعد بقالب MALDI- ( matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry (MS 5 الاستشراد الكهريائي بهلام gel electrophoresis على سبيل المثال؛ الاستشراد الكهربائي بهلام من بولي أكريلاميد polyacrylamide باستخدام صوديوم دوديسيل سلفات (SDS-PAGE ( sodium dodecyl sulfate الطرق الهيدروديناميكية hydrodynamic على سبيل المثال» الاستشراب بترشيح هلام/بالاستبعاد gel filtration / size exclusion chromatography على أساس الحجم ؛ (SEC أو الترسيب المتدرج)؛ أو تشتت sonal)
0 الديناميكي dynamic أو الاستاتيكي Je) static سبيل المثال؛ تشتت الضوء متعدد الزواياء (MALS أو يمكن حساب الوزن الجزيئي الخاص بالأشباراجيناز أو الببتيد من متوالية الحمض الأميني المعروفة (والتعديلات التالية للتحوّر المعروفة؛ إذا وجدت) Sabla أو الببتيد. على نحو مفضل؛ يتم تحديد الوزن الجزيئي الخاص بالأسْباراجيناز أو الببتيد باستخدام قياس الطيف الكتلي.
يتعلق الاختراع أيضًا بعملية لتحضير البروتين المُعدل أو حمض نووي يُشفر البروتين المُعدل. في بعض الجوانب؛ تشتمل العملية على إنتاج ا- أشباراجيناز في عائل مختار من المجموعة المشتملة على الخمائر» مثل السكيراء الجعوية 5 (Pichia Pistoris إضافة إلى البكتيرياء الشوٌّيّاتء الفطريات» الطحالب»؛ والكائنات Lal) الدقيقة (gay) متضمنة إشرشيا كولاي Escherichia coli ؛ جنس العصيات Pseudomonas fluorescens aaa hi) « Bacillus sp «
0 جلوتاميكوم الوَتَدِيَّة Corynebacterium glutamicum والعوائل البكتيرية bacterial hosts من الأجناس التالية :
Acinetobacter (Proteus (Serratia و1096065ا68ل28. تكون العوائل الأخرى معروفة بالنسبة لهؤلاء من ذوي المهارة في المجال؛ متضمنة الثُوكازدانيّة البيضاء؛ التي تعبر عن صورة مغايرة من الأشباراجيناز تفتقر إلى نشاط الجلوتاميناز Meena et ( glutaminase-activity cal. (2014) Bioprocess Biosyst.
Eng.
October 2014 Article 5 الذي يتم تضمينه
هنا كمرجع بأكمله)؛ وتلك التي تم الكشف عنها في Savitri et al. (2003) Indian Journal
cof Biotechnology, 2, 184-4 الذي يتم تضمينه هنا كمرجع بأكمله.
يمكن أن يكون البروتين Jad عبارة عن بروتين اندماج يشتمل على (1) ا-أشباراجيناز له
تطابق بنسبة على الأقل 1685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 و(2) واحد أو أكثر من البولي ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون البولي ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من
برولين وآلانين.
قد تُشكل وحدات البرولين المتبقية في البولي ببتيد المتكون فقط من وحدات حمض أميني من
برولين وآلانين أكثر من حوالي 9610 وأقل من حوالي 1670 من البولي ببتيد. بناة على lly
يُفضل أن يكون من 9610 إلى 9670 من إجمالي عدد وحدات الحمض الأميني البنائية في البولي
0 ببتيد عبارة عن وحدات برولين بنائية؛ على نحو أكثر تفضيلاً؛ يكون من 9620 إلى 9650 من إجمالي عدد وحدات الحمض الأميني البنائية المتكونة في البولي ببتيد Ble عن وحدات برولين بنائية؛ وعلى نحو أكثر تفضيلاً Wiad يكون من 9630 إلى 9640 (على سبيل المثال» 9630؛ 5 أو %40( من إجمالي عدد وحدات الحمض الأميني البنائية المتكونة في البولي ببتيد عبارة عن وحدات برولين بنائية.
5 قد يشتمل البولي ببتيد على مجموعة متعددة من أجزاء تكرار الحمض الأميني؛ حيث يتكون جزء التكرار من وحدات برولين وآلانين بنائية وحيث يكون ما لا يزيد عن 6 من وحدات الحمض الأميني البنائية المتتالية متطابقة. تحديدًا؛ قد يشتمل البولي ببتيد على أو يتكون من متوالية الحمض الأميني AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA (المتوالية رقم: 5) أو نسخ مبدلة دائرية أو (أ) عديدي وحدات خاصة بالمتواليات ككل أو أجزاء من المتوالية.
0 على نحو مفضل؛ يشتمل البولي ببتيد على أو يتكون من متوالية الحمض الأميني كما يُعرض في المتوالية رقم: 7 أو 9؛ أو يشتمل البولي ببتيد على أو يتكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي gine على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 8 أو 10.يُفضل هنا أن البروتين المُعدل (أ) يشتمل على أو يتكون من متوالية حمض أميني كما يُعرض في المتوالية رقم: 11 أو 13؛ أو (ب) يشتمل على أو يتكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة
ا
حمض نووي محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 12 أو 14. في أحد
الجوانب؛ يكون البولي ببتيد عبارة عن بولي ببتيد ملتف عشوائي.
في بعض الجوانب؛ يكون للبروتين المُعدل؛ على سبيل المثال بروتين الاندماج؛ نشاط أشباراجيناز
أو جلوتاميناز أعلى من ذلك الخاص ب ا- أشباراجيناز غير المترافق. على سبيل المثال؛ يمكن أن يكون للبروتينات المُعدلة نشاط أَسْباراجيناز أو جلوتاميناز أعلى بنسبة على الأقل 965 و/أو ما
يصل إلى 9630 (على سبيل المثال على الأقل 9610 9615 9620 9625 (أو أكثر) من ذلك
الخاص ب ا-أشباراجيناز غير المُعدل؛ تحديدًا كما هو ts بواسطة تجرية Nessler في جوانب
إضافية؛ يتم ربط ا-أشباراجيناز في البروتين المُعدل؛ على سبيل المثال في بروتين الاندماج؛
تساهميًا بوحدة بنائية طرفية من البولي ببتيد على نحو مباشر بواسطة رابطة أمين؛ و/أو يتم
0 تصنيع بروتين الاندماج على نحو متعلق بناتج عودة الاتحاد الجيني. في جوانب مفضلة؛ يتضمن البروتين المُعدل؛ على سبيل المثال بروتين الاندماج» Und) فيما بين ا- أسْباراجيناز والبولي ببتيد. قد يكون رابط نموذجي عبارة عن وحدة آلانين بنائية من حمض أميني. يتعلق الاختراع أيضًا بتركيبة صيدلية تشتمل على البروتين المُعدل؛ على سبيل المثال بروتين الاندماج؛ أو استخدامه في العلاج؛ أو للاستخدام كدواء؛ أو للاستخدام في الطب.
5 يتعلق الاختراع Lad بحمض نووي يُشفر البروتين المُعدل؛ تحديدًا بروتين اندماج كما هو محدد هنا. على نحو (inde يتم اختيار الحمض النووي من المجموعة المكونة من: (أ) جزيء الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد الخاصة بالمتوالية رقم: 12 أو 14؛ (ب) جزيء الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد التي لها تطابق بنسبة على الأقل 1685 مع متوالية النوكليوتيد كما هو مُعرّف في (أ)؛ و(ج) جزيء الحمض النووي الذي ينحل كنتيجة للشفرة الجينية
0 إلى متوالية النوكليوتيد كما هو مُعرّف في (أ). يتعلق أحد جوانب الاختراع بشكل إضافي بعملية لتحضير بروتين مُعدل كما هو محدد هنا أو حمض نووي كما هو محدد هنا. قد تشتمل العملية على استنبات خلية العائل كما هو محدد هنا وعزل البروتين المُعدل المذكور عن المزرعة أو من الخلية المذكورة. يمكن أن تشتمل العملية لتحضير البروتين المُعدل كما هو محدد هناء تحديدًا بروتين الاندماج؛ على استنبات خلية عائل
5 محولة باستخدام أو مشتملة على ناقل مشتمل على حمض نووي يُشفر البروتين المُعدل؛ تحديدًا
— 3 2 — بروتين الاندماج» في ظل ظروف تتسبب في التعبير وراثيًا عن البروتين المُعدل؛ تحديدًا بروتين الاندماج. في بعض الجوانب؛ يتم اختيار خلية العائل من المجموعة المذكورة فيما سبق. يتعلق الاختراع بشكل إضافي بطريقة لعلاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ا-أسباراجين في مريض؛ تشتمل الطريقة المذكورة على إعطاء المريض المذكور مقدار فعال من البروتين المُعدل كما هو محدد هناء على سبيل المثال بروتين الاندماج. قد يكون المرض القابل للعلاج عن Gob استتفاد ا-أسباراجين هو سرطان. قد يُظهر البروتين المُعدل كما هو محدد هنا استجابة مولدة للمناعة أقل فى المريض مقارنة با-أشباراجيناز غير المترافق؛ قد يكون له عمر نصفى أطول في الدورة الدموية في جسم الكائن الحي بعد جرعة فردية مقارنة ب ا-أسْباراجيناز غير المترافق؛ و/أو قد تكون له قيمة AUC أكبر بعد جرعة فردية مقارنة ب ا-أشباراجيناز (تحديدًا ا- 0 أثشباراجيناز غير المترافق). يمكن مشاهدة أن المشكلة التي سيتم حلها بواسطة الاختراع هي توفير مستحضر ا-أشباراجيناز له: نشاط بيولوجي في المعمل عالي 3 رابط بروتين -معدل ثابت ؛ عمر نصفي Jobat في جسم call الحى ؛ توليد مناعة مخفضة إلى As كبيرء كما يثبت؛ على سبيل المثال» عن طريق خفض أو التخلص من استجابة جسم مضاد ضد مستحضر ا- أشباراجيناز بعد عمليات إعطاء Sia )5( 5 و/أو الفائدة كعلاج بخيار ثان للمرضى الذين طوروا حساسية تجاه العلاجات بالخيار الأول باستخدام» على سبيل المثال» إنزيمات ا-أشباراجيناز مشتقة من غير إشرشيا كولاي. يتم حل هذه المشكلة Gy للاختراع الحالي بواسطة التجسيدات المصورة في عناصر الحماية؛ تحديدًا عن طريق توفير بروتين مُعدل يشتمل على ا-أشباراجيناز وعامل معدل أي (2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين 0 والانين» وعن طريق توفير طرق لتحضيره واستخدامه. في أحد الجوانب؛ يتم هنا وصف ا- أشباراجيناز مُعدل بخصائص دوائية محسنة مقارنة ب ا- أشباراجيناز غير المُعدل بروتين. يشير المصطلح "ا- أسْباراجيناز مُعدل" كما يُستخدم هنا إلى 'بروتين مُعدل يشتمل على (1) —L أشباراجيناز و(2) واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من
وحدات حمض أميني من برولين وآلانين" كما هو محدد وموصوف هنا. في أحد الجوانب الخاصة بالاختراع يتم اشتقاق ا- أَسْباراجيناز من Erwinia له تطابق بنسبة على الأقل 1685 مع الحمض الأميني الخاص بالمتوالية رقم: 1. يعمل ا-أشباراجيناز المُعدل الموصوف cba على سبيل المثال» !- أَْباراجيناز المترافق أو المدمج مع واحد أو أكثر من (بولي)ببتيد(ببتيدات)؛ حيث يتكون (البولي)ببتيد فقط من وحدات حمض
أميني من برولين وآلانين» كعامل علاجي تحديدًا للاستخدام في المرضى الذين أظهروا فرط حساسية (على سبيل المثال» تفاعل مسبب للحساسية أو فرط حساسية هادئة) تجاه العلاج باستخدام ا-أشباراجيناز أو ا- أشْباراجيناز معالج ببولي إيثيلين جليكول من Erwinia و/أو إشرشيا كولاي؛ أو ا- أشْباراجيناز غير المُعدل من Erwinia يعتبر ا-أشباراجيناز المُعدل
0 الموصوف عنا مفيدًا أيضًا كعامل علاجي للاستخدام في المرضى الذين قد عانوا من انتكاسة مرضية؛ على daw المثال» انتكاسة ل ALL وقد تم علاجهم من قبل باستخدام صورة أخرى من الأشباراجيناز. لقد تمت sale} تسمية Erwinia chrysanthemi (المعروف Leal باعتباره Pectobacterium (chrysanthemi ليكون -Dickeya chrysanthemi ومن a يتم استخدام المصطلحات
Pectobacterium chrysanthemi (Erwinia chrysanthemi 5 و Dickeya chrysanthemi على نحو تبادلي هنا . ما لم يتم تعريف ما يُخالف ذلك بوضوح؛ سيتم استيعاب المصطلحات المستخدمة هنا وفقًا للمعنى العادي لها في المجال. كما يُستخدم (ls المصطلح 'متضمن" يعني 'متضمن؛ دون aad وستتضمن المصطلحات
0 المستخدمة في صورة المفرد صورة الجمع؛ والعكس ania ما لم يُمل السياق ما يخالف ذلك. كما يُستخدم cbs ينبغي اعتبار أن المصطلحات dai على 'متضمن"» iad على" أو الصور المغايرة من ذلك تحدد السمات؛ الأعداد» الخطوات أو المكونات المذكورة إلا أنها لا تحول دون إضافة واحدة أو أكثر من السمات الإضافية؛ الأعداد؛ الخطوات؛ المكونات أو مجموعات من ذلك. تنطوي المصطلحات Jade’ على"/'متضمن/”'محتوي على" على المصطلحات 'متكون من"
— 5 2 — و'متكون بشكل أساسي من". ومن ca متى تم استخدام المصطلحات "مشتمل على '/'متضمن"/'محتوي على" هناء فإنه يمكن استبدالها ب 'متكون بشكل أساسي من" أو؛ على نحو 2 . ¢ 2 'متكون من". تعني المصطلحات "مشتمل (grind [eid [fe على" أنه يمكن أن يوجد أي مكوّن إضافي أأو بالمثل؛ سمات؛ أعداد؛ خطوات وما شابه). يعني المصطلح "'متكون من" أنه يمكن ألا يوجد مكوّن إضافي (أو بالمثل سمات؛ hel خطوات وما شابه) . ينبغي اعتبار أن المصطلح 'متكون بشكل أساسي من" أو الصور المغايرة من ذلك عند الاستخدام هنا يُحدد السمات؛ الأعداد؛ الخطوات أو المكونات المذكورة إلا أنه لا يستبعد إضافة واحد أو أكثر من السمات الإضافية؛ الأعداد؛ الخطوات؛ المكونات أو مجموعات من ذلك ولكن فقط إذا لم تغير السمات؛ الأعداد؛ الخطوات؛ المكونات الإضافية أو مجموعات من ذلك على نحو ale الخواص الأساسية والجديدة الخاصة بالمنتج المحمي بعناصر الحماية؛ التركيبة؛ الجهاز أو الطريقة وما شابه. ومن ثَم؛ يعني المصطلح 'متكون بشكل أساسي من" أنه يمكن أن توجد مكونات نوعية إضافية (أو 5 بالمثل السمات؛ الأعداد؛ الخطوات وما شابه)؛ تحديدًا تلك غير المؤثرة Gale على الخواص الأساسية للمنتج؛ التركيبة؛ الجهاز أو الطريقة. بصياغة أخرى؛ يسمح المصطلح 'متكون بشكل أساسي من" (يمكن استخدامه هنا على نحو Jali مع المصطلح "مشتمل بشكل أساسي على")؛ وجود مكونات أخرى في المنتج؛ التركيبة؛ الجهاز أو الطريقة بالإضافة إلى المكونات الملزمة (أو بالمثل السمات؛ الأعداد؛ الخطوات وما شابه)؛ شربطة ألا يتم التأثير Gale على الخواص الأساسية 0 لمنتج: (Sal الجهاز أو الطريقة بواسطة وجود مكونات أخرى. كما يُستخدم cls يشير المصطلح "حوالي" إلى + 9610؛ ما لم تتم الإشارة إلى ما يُخالف ذلك هنا. كما يُستخدم هناء قد تعني أدوات التنكير واحدًا أو أكثر.
— 6 2 — كما يُستخدم هناء يشير المصطلح (age قابل للعلاج عن طريق استنفاد أسباراجين" إلى حالة أو اضطراب حيث الخلايا المتضمنة فى أو المسئولة عن الحالة أو الاضطراب إما تفتقر إلى أو يكون لها قدرة منخفضة على تخليق ا-أسباراجين. يمكن أن يكون استنفاد أو الحرمان من ا-أسباراجين Gas أو كاملاً إلى حدٍ كبير (على سبيل (JE وصولاً إلى مستويات تكون غير قابلة للكشف عنها باستخدام الطرق والوسائل التي تكون معروفة في المجال).
كما يُستخدم (La يشير المصطلح BIA فعال علاجيًا" إلى مقدار بروتين (على سبيل المثال؛ أشباراجيناز أو بروتين معدل منه)؛ مطلوب لإنتاج تأثير علاجي مطلوب. كما يُستخدم هناء المصطلح؛ "!-أشباراجيناز” يمثل إنزيمًا بنشاط ا-أسباراجين أمينو هيدرولاز. قد لا يتضمن النشاط الإنزيمي ل ا- أشْباراجيناز فقط نزع الأميد عن أسباراجين للحصول على حمض
0 أسبارتيك وأمونيا؛ ولكن Wad نزع الأميد عن جلوتامين للحصول على حمض جلوتاميك وأمونيا. يتم تكوين إنزيمات الأشباراجيناز نمطيًا من أربعة مونومرات (بالرغم من أنه قد تم إيضاح البعض بخمسة أو ستة). يمكن أن يكون كل مونومر من حوالي 32.000 إلى حوالي 36.000 دالتون. لقد تم تحديد العديد من بروتينات ا- أَْباراجيناز في المجال؛ عزلها بواسطة الطرق المعروفة للكائنات dad) الدقيقة. (انظرء على سبيل Savitri and Azmi, Indian J. «Jd
(Biotechnol 2 (2003) 184-194 5 المتضمن هنا كمرجع بأكمله). يتم اشتقاق إنزيمات —L أشباراجيناز الأوسع استخدامًا والأكثر إتاحة تجاريًا من إشرشيا كولاي أو من Erwinia chrysanthemi وكلاهما يشترك فى 9650 أو أقل من التجانس الهيكلى. يتعلق ما يلي ب Jabba الذي سيتم استخدامه وفقًا للإختراع. في إطار أنواع Erwinia تم إيضاح تطابق متوالية يبلغ نمطيًا 9677-75 lad بين الإنزيمات المشتقة من Erwinia
«Erwinia carotovora 4 chrysanthemi 0 وتم إيجاد تقريبًا تطابق متوالية بنسبة 90690 Lad بين الأنواع الفرعية المختلفة من Kotzia (2007), Journal of ) Erwinia chrysanthemi (Biotechnology 127, 657-669 المتضمن هنا كمرجع بأكمله). تتضمن بعض من إنزيمات ٠-أشباراجيناز المشتقة من Erwinia التمثيلية؛ على سبيل (Jal تلك المتوفرة فى الجدول 1 فيما
— 2 7 — يلي الذي يكشف عن النسبة المئوية لتطابق المتوالية مع Erwinia Chrysanthemi NCPPB :1066
AASG67028 Erwinia chrysanthemi 3937
CAA31239 Erwinia chrysanthemi NCPPB 1125 567027 Erwinia carotovora من atroseptica لنوع الفرعي يتم تضمين المتواليات الخاصة بإنزيمات ا- أشباراجيناز المشتقة من Erwinia ومدخلات بنك الجينات الخاصة بالجدول 1 هنا كمراجع. تتمثل إنزيمات ا-أشباراجيناز النموذجية المستخدمة في العلاج في ١-أشباراجيناز المعزول من إشرشيا كولاي ومن Erwinia بشكل خاص؛ Erwinia .chrysanthemi قد تكون إنزيمات ا- أسْباراجيناز عبارة عن إنزيمات أصلية معزولة من الكائنات الحية الدقيقة. يمكن أيضًا إنتاجها بواسطة تقنيات إنزيم ناتج عودة الاتحاد الجيني في عملية إنتاج كائنات حية دقيقة مثل إشرشيا كولاي. كأمثلة؛ يمكن أن يكون البروتين المستخدم في البروتين المُعدل الخاص 0 بالاختراع عبارة عن بروتين ناتج عودة اتحاد جيني منتج في سلالة إشرشيا كولاي؛ على نحو مفضل بروتين من (Erwinia تحديدًا Erwinia chrysanthemi منتج في سلالة إشرشيا كولاي . recombinant E. coli strain لناتج عودة اتحاد جيني يمكن تحديد الإنزيمات بواسطة الأنشطة النوعية الخاصة بها. ومن َم يتضمن هذا التعريف كل البولى ببتيدات التى لها النشاط النتوعى المحدد الموجود أيضًا فى الكائنات الحية الأخرى؛ بشكل 5 أكثر تحديدًا فى الكائنات الحية الدقيقة الأخرى. Ge ما يمكن تحديد الإنزيمات ذات الأنشطة المشابهة بواسطة تجميعاتها فى عائلات معينة محددة باعتبارها .COG i PFAM تمثل PFAM
(قاعدة بيانات عائلة البروتين الخاصة بالاصطفافات ونماذج Markov الخفية؛ (pfam.sanfferac. ukl تجميعًا aS من اصطفافات متوالية البروتين. تجعل كل PFAM من الممكن تصور العديد من الاصطفافات؛ انظر نطاقات البروتين؛ تقييم التوزيع Lad بين الكائنات الحية؛ الحصول على وصول إلى قواعد البيانات الأخرى؛ ووصع تصور لهياكل البروتين المعروفة.
يتم الحصول على 0065 Clusters of Orthologous Groups of proteins; vv—) (WW.Nebi.nlm.nih.gov/COG/ عن طريق مقارنة متواليات البروتين من 43 جينومات في متواليات على نحو تام تمثل 30 من سلالات التطور النوعي الرئيسية. يتم تحديد كل COG من
ثلاث سلالات على الأقل؛ مما يسمح بتحديد النطاقات المتحفظة السابقة. تكون وسائل تحديد النسبة المئوية لتطابق المتوالية معروفة جيدًا بالنسبة إلى هؤلاء من ذوي المهارة
0 في المجال؛ وتتضمن تحديدًا برامج (BLAST التي يمكن استخدامها من موقع الويب blast.nebi.olo.nih.gov/Blast.cgi بالمتغيرات الافتراضية الموضحة على موقع الويب. يمكن بعد ذلك استغلال المتواليات التي تم الحصول عليها (على سبيل المثال؛ محاذاتها) باستخدام» على سبيل المثال؛ برنامج (ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html) CLUSTALW بالمتغيرات الافتراضية. باستخدام المراجع المتوفرة على بنك الجينات بالنسبة للجينات المعروفة؛
5 يكون هؤلاء من ذوي المهارة في المجال قادرين على تحديد الجينات المكافئة في الكائنات الحية الأخرى؛ السلالات البكتيرية؛ الخمائرء الفطريات؛ الثدييات؛ النبات؛ إلى غير ذلك. يتم تنفيذ هذا العمل الروتيني على نحو مفيد باستخدام متواليات توافقية يمكن تحديدها عن طريق تنفيذ اصطفافات للمتواليات مع الجينات المشتقة من الكائنات الحية الدقيقة (a) وتخصيص مجسات تنكسية لعمل نسائل من الجين المناظر في كائن حي آخر.
0 سيدرك الشخص ذو المهارة في المجال كيفية اختيار وتصميم البروتينات المحتفظة بشكل أساسي بنشاط ا-أسْباراجيناز الخاص بها. diy أحد أساليب قياس نشاط ا- أشباراجيناز في تجرية Nessler كما يوصف بواسطة Mashburn (1963) Biochem.
Biophys.
Res. Commun. 12, 0 (المتضمن هنا كمرجع بأكمله). في جانب محدد من البروتين المُعدل الخاص بالاختراع» يكون ل ا-أشباراجيناز تجانس أو تطابق
5 متوالية بنسبة على BY) 9685 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1؛ بشكل أكثر
تخصيصًا تجانس أو تطابق متوالية بنسبة على الأقل حوالي 9685 9686 9687 9688 9 %90 9691 9692 9693 9694؛ 20 9695 9696 9697 9698 1699 أو 0 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 كما هو موضح في قائمة المتواليات الملحقة. يتم استخدام المصطلحين "تجانس" و'تطابق المتوالية" على نحو تبادلي هنا.
يعني المصطلح 'مشتمل على المتوالية الخاصة بالمتوالية رقم: 1" (على سبيل المثال إذا كان ل ا- أشباراجيناز تجانس أو تطابق متوالية بنسبة 96100 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1) أن متوالية الحمض الأميني الخاصة بالأسُباراجيناز قد لا تكون قاصرة بحزم على المتوالية رقم: 1 ولكنها قد تحتوي على aly اثنين» AD أريعة؛ خمسة؛ ستة؛ سبعة؛ ثمانية؛ تسعة؛ عشرة أو أكثر من الأحماض الأمينية الإضافية. بصياغة «gal إذا كان ل ا-أمْباراجيناز الذي سيتم
0 استخدامه هنا تجانس أو تطابق متوالية بنسبة 16100 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 يمكن أن يشتمل ا- أشْباراجيناز على أو يتكون من متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1. يعني المصطلح Jedd على" في هذا السياق أن متوالية الحمض الأميني الخاصة ب ا- أشباراجيناز للمتوالية رقم: 1 قد تحتوي على واحد» اثنين» Aan AD خمسة؛ ستة؛ سبعة؛ ثمانية؛ تسعة؛ عشرة أو أكثر من الأحماض الأمينية الإضافية.
5 في جانب بعينه؛ يكون البروتين عبارة عن ا- أشْباراجيناز من Erwinia chrysanthemi مشتمل على أو متكون من المتوالية الخاصة بالمتوالية رقم: 1. في جانب آخرء يكون ا- أسْباراجيناز من Erwinia Chrysanthemi NCPPB 6 (رقم الوصول لبنك الجينات 8832884 ؛ المتضمن هنا كمرجع بأكمله)؛ إما مع أو بدون ببتيدات إشارة و/أو متواليات رائدة. يتم أيضًا تكوين شظايا من ا- أشباراجيناز» على نحو مفضل ا- أَسْباراجيناز الخاص بالمتوالية
0 رقم: 1؛ في إطار تعريف ا-أشباراجيناز المستخدم في البروتين المُعدل الخاص بالاختراع. يعني المصطلح "شظية من أشباراجيناز" (على سبيل المثال شظية من الأشباراجينازمن المتوالية رقم: 1) أن المتوالية الخاصة بالأسْباراجيناز قد تتضمن حمض أميني أقل منه في إنزيمات Sabla الموضحة بأمثلة هنا (على سبيل المثال الأباراجيناز الخاص بالمتوالية رقم: 1) ولكن مع استمرار وجود أحماض أمينية كافية rial نشاط ا-أمينو هيدرولاز. على سبيل المثال؛ تعتبر "شظية
5 أنباراجيناز" شظية تكون عبارة عن/تتكون من على الأقل حوالي 150 أو 200 من الأحماض
الأمينية المتجاورة الخاصة بواحد من إنزيمات Saha) الموضحة بأمثلة هنا (على سبيل المتال الأشباراجيناز الخاص بالمتوالية رقم: 1) (على سبيل المثال حوالي 150 160 170؛ 180« 190 200« 210« 220« 230 240« 250 260 270 280 290 300« 310( 320 321( 322( 323( 324 ¢325 326 من الأحماض الأمينية المتجاورة) و/أو حيث تحتوي الشظية المذكورة على ما يصل إلى 50 حمض أميني محذوف من الطرف N من
الأشباراجيناز المذكور الموضح بأمثلة هنا (على سبيل المثال الأشباراجيناز الخاص بالمتوالية رقم: 1( (على سبيل المثال ما يصل إلى 01 2 3 4 5 6« تق 9 قل 15 20 25 30 0؛ 45 أو 50) و/أو تحتوي على ما يصل إلى ما يصل إلى 75 أو 100 حمض أميني محذوف من الطرف © من الأسُباراجيناز المذكور الموضح بأمثلة هنا (على سبيل المثال
0 الأشباراجيناز الخاص بالمتوالية رقم: 1) (على سبيل المثال ما يصل إلى 1؛ 2 3؛ 4 5 6؛ 7 10 252015 30 35 40 45« 50 ذي 60« 0 15 80« 5ق 0ق 5 أو 100) و/أو تحتوي على الأحماض الأمينية المحذوفة عند كل من الطرف لا والطرف © من الأشباراجيناز المذكور الموضح بأمثلة هنا (على سبيل المثال الأشباراجيناز الخاص بالمتوالية رقم: 1)؛ حيث يمكن أن يبلغ إجمالي عدد الأحماض الأمينية المحذوفة ما يصل إلى 125 أو
5 150 حمض أميني. يكون من المعروف جيدًا في المجال أنه يمكن تعديل بولي ببتيد عن Gob استبدال» hal حذف و/أو إضافة واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية بينما يتم الحفاظ على النشاط الإنزيمي لها. يمكن أن يشير المصطلح 'واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية" في هذا السياق إلى واحد؛ اثنين» ثلاثة؛ dan) خمسة؛ ستة؛ سبعة؛ ثمانية؛ تسعة؛ عشرة أو أكثر من الأحماض الأمينية. على سبيل
0 المثال؛ يعتبر استبدال حمض أميني واحد عند موضع بعينه بواسطة حمض أميني مكافئ كيميائيًا لا يؤثر على الخصائص الوظيفية لبروتين أمرًا شائعًا. قد يتم تحديد الاستبدالات كتبادلات في إطار واحدة من المجموعات التالية: الوحدات البنائية الأليفاتية الصغيرة» غير القطبية أو القطبية على نحو طفيف: Thr Ser Ala Gly «Pro
5 الوحدات البنائية القطبية المشحونة سلبيًا والأميدات الخاصة بها: Gln Glu Asn (Asp
الوحدات البنائية القطبية المشحونة إيجابيًا : Lys (Arg (His الوحدات البنائية الأليفاتية الكبيرة؛ غير القطبية: Cys Val cle Leu (Met الوحدات البنائية العطرية الكبيرة: Trp (Tyr (Phe ومن pd يمكن توقع تغييرات التي تؤدي إلى استبدال وحدة بنائية مشحونة سلبيًا واحدة بأخرى Jie 5 حمض جلوتاميك 800 glutamic بحمض أسبارتيك aspartic acid أو وحدة بنائية مشحونة إيجابيًا واحدة بأخرى die ليزين بأرجنين lysine for arginine لإنتاج منتج مكافئ وظيفيًا. لا تعتبر المواضع حيث يتم تعديل الأحماض الأمينية وعدد الأحماض الأمينية المعرضة للتعديل في متوالية الحمض الأميني محددة بشكل خاص. يكون أحد المتمرسين من ذوي المهارة قادرًا على التعرف على التعديلات التي يمكن إدخالها دون التأثير على نشاط البروتين. على سبيل المثال؛ قد 0 يتوقع ألا تغير التعديلات في جزءِ الطرف لا أو © من بروتين من نشاط بروتين في ظل ظروف معينة. Lad يتعلق بإنزيمات الأشباراجيناز» تحديدًاء فقد تم إجراء الكثير من التمييز» تحديدًا Lad يتعلق بالمتواليات؛ الهياكل؛ والوحدات البنائية المكونة للموقع الحفزي النشط. يوفر هذا إرشادًا فيما يتعلق بالوحدات البنائية التي يمكن تعديلها دون التأثير على نشاط الإنزيم. يكون لكل إنزيمات —L أشباراجيناز المعروفة من مصادر بكتيرية سمات هيكلية مشتركة. تعتبر جميعها تترامرات متجانسة بأريعة مواقع نشطة فيما بين النطاقات عند الطرفين لاا و© الخاصة بمونومرين متجاورين <Aghaipour (2001) Biochemistry 40, 5655-5664) المتضمن هنا كمرجع بأكمله). يكون لها جميعًا درجة عالية من التشابه في الهياكل الثلاثية والرياعية الخاصة بها «Papageorgiou (2008) FEBS J. 275, 4306-4316) المتضمن هنا كمرجع بأكمله). تكون المتواليات الخاصة بالمواقع الحفزية الخاصة بإنزيمات ا-أشباراجيناز متحفظة بشكل كبير 0 فيما بين «Erwinia carotovora Erwinia chrysanthemi وا-أشباراجيناز من إشرشيا كولاي (Id 11( تحتوي الحلقة المرنة للموقع النشط على وحدات الحمض الأميني البنائية 33-14 وأظهر التحليل الهيكلي أن «G1u63 Ser62 10195 (Thrl5 85096 و818120 تلامس المركب الترابطي (Id) لقد استنتج Aghaipour وآخرون تحليلاً مفصلاً للمواقع النشطة الأربعة الخاصة ب ٠-أشباراجيناز من Erwinia chrysanthemi عن طريق فحص الهياكل البلورية
عالية الدقة الخاصة بالإنزيم المعقدة باستخدام الركائز الخاصة بها ( (2001) Aghaipour (Biochemistry 40, 5655-5664 . يوفر Kotzia وآخرون متواليات لإنزيمات ٠-أشباراجيناز من أنواع متعددة وأنواع فرعية من Erwinia و؛ حتى بالرغم من أن البروتينات يكون لها تطابق بنسبة فقط حوالي 9677-75 Lad بين «Erwinia carotovora y Erwinia chrysanthemi يظل لكل منها نشاط ا-أشباراجيناز )657-669 ,127 .(Kotzia (2007) J.
Biotechnol. أجرى Moola وآخرون دراسات لتخطيط القمة اللاصقة الخاصة ب ا- أشباراجيناز من Erwinia chrysanthemi 7 وكانت قادرة على الحفاظ على نشاط الإنزيم حتى بعد تطفير المتواليات المولدة للضد المتنوعة في محاولة لتقليل توليد المناعة للأشباراجيناز ( )1994( Moola J. 302, 921-927 .81000860). في ضوء التمييز الشامل الذي قد تم إجراؤه على إنزيمات 0 1١+-أشباراجيناز» يمكن لأحد ذوي المهارة في المجال أن يُحدد كيفية إعداد شظايا و/أو استبدالات لمتوالية بينما يستمر الحفاظ على نشاط الإنزيم. كما يُستخدم هناء يشير المصطلح "حوالي" يُعدل؛ على سبيل المثال؛ الأبعاد؛ الأحجام؛ مقدار مُكون في تركيبة؛ التركيزات» درجة حرارة العملية؛ زمن العملية؛ الحصائل؛ معدلات التدفق؛ قيم الضغط والقيم المشابهة؛ والنطاقات الخاصة بهاء إلى تغير في المقدار الرقمي الذي يمكن أن 5 يحدث؛ على سبيل المثال» من خلال إجراءات القياس والتعامل النمطية المستخدمة لإعداد المركبات؛ التركيبات؛ نواتج التركيز أو صيغ الاستخدام؛ من خلال الخطأ غير المتعمد في هذه الإجراءات؛ من خلال الاختلافات في التصنيع؛ المصدرء أو تقاء المواد البادئة أو المكونات المستخدمة لتنفيذ الطرق؛ والاعتبارات المشابهة. يشتمل المصطلح "حوالي" أيضًا مقادير تختلف بسبب (Gia على سبيل (JE) تركيبة» صيغة؛ أو مزرعة WIA باستخدام تركيز أو خليط أولي 0 محددء ومقادير تختلف بسبب خلط أو معالجة تركيبة أو صيغة باستخدام تركيز أو خليط أولي محدد. سواء أكانت معدلة بواسطة المصطلح "حوالي" تتضمن عناصر الحماية الملحقة به مكافئات لهذه المقادير. قد يشير المصطلح "حوالي" بشكل إضافي إلى نطاق من القيم تكون مشابهة للقيمة المرجعية المذكورة. في تجسيدات معينة؛ يشير المصطلح Msn" إلى نطاق من القيم تقع في حدود 10 9» 87؛ 6» 5:4» 3< 2 1 بالمائة أو أقل من القيمة المرجعية المذكورة.
في سياق الاختراع الحالي؛ فقد وجد على نحو مثير للدهشة أن الترافق الكيميائي لواحد أو أكثر من الببتيدات المتكونة فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين عبر وحدة حمض أميني بنائية نوعية عند الطرف © (RC) ب ا-أسْباراجيناز يسمح بتوفير بروتين معدل ل ا- أشباراجيناز له نسبة إقران عالية تحديدًا للببتيدات المذكورة لكل جزيء من الأَسْباراجيناز و؛ من ef توليد مناعة مخفضة إلى حدٍ بعيد وعمر نصفي محسن للبلازما. لقد وجد بشكل إضافي أنه يمكن أيضًا تطبيق هذه التقنية الجديدة على ا- أَْباراجيناز دون إعاقة النشاط الحفزي eal الأمر الذي يُعزز بشكل كبير القيمة العلاجية للبروتينات المعدلة المناظرة الموصوفة هنا. في أحد الجوانب؛ يتم هنا وصف بروتين مُعدل يشتمل على (1) ا-أشباراجيناز له تطابق بنسبة على الأقل 85» 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 أو %100 مع متوالية الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 51 )2( واحد أو أكثر من الببتيد(الببتيدات)؛ حيث يتكون الببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في جانب ent يكون البروتين المُعدل عبارة عن بروتين مُعدل من ا- أشباراجيناز وواحد أو أكثر من الببتيد(الببتيدات)» حيث يكون JS عبارة عن ببتيد (RN=(P/A)-RC حيث تكون (PUA) عبارة عن متوالية حمض أميني تتكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين» 5 حيث RN تكون عبارة عن مجموعة حماية ملحقة بمجموعة الأمينو عند الطرف N الخاصة بمتوالية الحمض الأميني؛ وحيث RC تكون عبارة عن وحدة بنائية لحمض أميني مرتبطة مجموعة الأمينو الخاصة بها بمجموعة الكربوكسي عند الطرف © الخاصة بمتوالية الحمض الأميني؛ حيث يتم ترافق كل ببتيد ب ا-أسْباراجيناز عبر رابط أميد متكون من مجموعة الكربوكسي الخاصة بوحدة الحمض الأميني البنائية عند الطرف "RCC من الببتيد ومجموعة أمينو حرة من !-أشباراجيناز 0 وحيث لا تكون واحدة على الأقل من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات بهاء عبارة عن مجموعة sido عند الطرف لا من ا- أشباراجيناز. في جانب cle يحتوي المونومر الخاص بالبروتين المُعدل على عدد من حوالي 350 400؛ 0 500 حمض أميني إلى حوالي 550؛ 600« 650؛ 700 أو 750 حمض أميني بعد التعديل. في جوانب إضافية؛ يحتوي البروتين المُعدل على عدد من حوالي 350 إلى حوالي 750 5 حمض أميني؛ أو من حوالي 500 إلى حوالي 750 حمض أميني.
يكون كل ببتيد متكون تم تكوينه في البروتين المُعدل كما يوصف هنا على حدة عبارة عن ببتيد RN—(P/A)-RC بناءً على ذلك لكل من الببتيدات المكونة في بروتين مُعدل موصوف هناء مجموعة الحماية RN عند الطرف لاا يتم اختيار كل من متوالية الحمض الأميني (0//8)؛ ووحدة الحمض الأميني البنائية عند الطرف RC © على حدة من المعاني ذات الصلة الخاصة بها.
يتحتم أن يكون الببتيدان أو أكثر المتكونان في البروتين المُعدل متماثلين؛ أو قد يكونا مختلفين عند بعضهما/بعضها البعض. في أحد الجوانب؛ تكون كل الببتيدات المكونة في البروتين المُعدل متماثلة. علاوة على ذلك؛ تتخذ الببتيدات المكونة في البروتين المُعدل على نحو مفضل تشكيلاً lle عشوائيًا؛ تحديدًا Lovie يوجد البروتين المُعدل في بيئة مائية (على سبيل المثال؛ محلول مائي أو
0 محلول منظم مائي). يمكن تحديد وجود تشكيل ملتف عشوائي باستخدام الطرق المعروفة في المجال؛ تحديدًا بواسطة تقنيات المنظار الطيفي؛ مثل القياس الطيفي ثنائي اللون الدائري .(CD) circular dichroism يكون الشطر (PA) في البروتين المعدل المترافق كيميائيًا؛ الذي تم تكوينه في الببتيد RN- 6-(0/8)؛ عبارة عن متوالية حمض أميني يمكن أن تتكون من إجمالي يبلغ فيما بين 10
5 1005 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين؛ إجمالي يبلغ من 15 إلى 60 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين» إجمالي يبلغ من 15 إلى 45 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين» على سبيل المثال إجمالي يبلغ من 20 إلى حوالي 40 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين» على سبيل المثال 15 6ل 01817 09 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44« أو 45 وحدة
حمض أميني من برولين وآلانين. في جانب مفضل؛ تتكون متوالية الحمض الأميني المذكورة من 0 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين. في جانب AT مفضل؛ تتكون متوالية الحمض الأميني المذكورة من 40 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين. في الببتيد (RN—(P/A)-RC تبلغ نسبة عدد وحدات برولين البنائية المتكونة في الشطر proline residues comprised in
(P/A) the moiety إلى Maa) عدد وحدات الحمض الأميني البنائية المتكونة في (PIA) على
5 نحو مفضل > 9610 و< 9670؛ على نحو أكثر تفضيلاً > 9620 و< 9650 وعلى نحو أكثر
تفضيلاً Lad > 9625 و< %40. بناءً على ذلك؛ يُفضل أن يكون من 9610 إلى 9670 من إجمالي عدد وحدات الحمض الأميني البنائية في (PIA) عبارة عن وحدات برولين بنائية؛ على نحو أكثر تفضيلاً؛ يكون من 9620 إلى 1650 من إجمالي عدد وحدات الحمض الأميني البنائية المتكونة في (PA) عبارة عن وحدات برولين بنائية؛ وعلى نحو أكثر تفضيلاً Wal يكون من 9625 إلى 9640 (على سبيل المثال» %25 9630 9635 أو %40( من إجمالي عدد وحدات الحمض الأميني البنائية المتكونة في (PIA) عبارة عن وحدات برولين بنائية. علاوة على ذلك؛ يُفضل ألا يحتوي (0//8) على أية وحدات برولين بنائية متتالية (أي؛ لا يحتوي على أية متوالية PP جزئية). في جانب مفضل؛ تكون (PA) عبارة عن متوالية الحمض الأميني AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA (لمتوالية رقم: 5). في جانب AT مفضل؛ تكون (PIA) 0 عبارة عن متوالية الحمض الأميني AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA (المتوالية رقم: 15( قد تكون المجموعة RN في الببتيد RN=(P/A)-RC عبارة عن مجموعة حماية تكون ملحقة بمجموعة الأمينو عند الطرف لا؛ تحديدًا مجموعة 0-أمينو عند الطرف (N من متوالية الحمض 5 الأميني (0//8). يُفضل أن تكون RN عبارة عن بيروجلوتامويل أو أسيتيل. تكون المجموعة RC في الببتيد 146-(0//8)-ل40 عبارة عن وحدة حمض أميني بنائية تكون مرتبطة عبر مجموعة الأمينو الخاصة بها بمجموعة الكربوكسي عند الطرف © الخاصة ب (//0)؛ والتي تشتمل على ذرتي كربون على الأقل فيما بين مجموعة الأمينو الخاصة بها ومجموعة الكربوكسي الخاصة بها. سيتم إدراك أن ذرتي الكربون على الأقل فيما بين مجموعة 0 الأمينو ومجموعة الكريوكسي الخاصة ب RC قد توفرا مسافة من ذرتي كربون على الأقل فيما بين مجموعة الأمينو ومجموعة الكريوكسي الخاصة ب RC (وهو الحال إذاء على سبيل المثال؛ كانت RC عبارة عن حمض «ه-أمينو-63-15 ألكانويك؛ مثل حمض ع-أمينو هكسانوبك). يُفضل أن تكون RC عبارة عن حمض -أمينو هكسانويك. في أحد التجسيدات؛ يكون الببتيد هى Pga-AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA-AhX= COOH 5 (المتوالية رقم: 16) أو
Pga-AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA-AhX- COOH (المتوالية رقم: 17). يعتبر المصطلح "098" اختصارًا ل 'بيروجلوتامويل" أو '"حمض
بيروجلوتاميك". يمثل المصطلح 8" اختصارًا ل "حمض ع-أمينو هكسانويك". كذلك يتم في الأمثلة الملحقة توضيح أنه وجد على نحو مثير للدهشة أن استخدام وحدة حمض أميني بنائية RC عند الطرف © كما هو محدد هناء متضمنة تحديدًا حمض ع-أمينو هكسانويك؛
يسمح بتوفير بروتينات معدلة بنسبة إقران Ale على نحو مفيد للببتيدات المتكونة فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين لكل جزيء من الأشباراجيناز و؛ من كم توليد مناعة مخفضة على نحو مفيد وعمر نصفي محسن للبلازما على نحو مفيد. في البروتينات المُعدلة كما يوصف هناء يمكن ترافق كل ببتيد
RN=(P/A)-RC 0 مع ٠-أشباراجيناز عبر رابط أميد متكون من مجموعة الكربوكسي carboxy الخاصة بوحدة الحمض الأميني البنائية "RC" amino acid residue عند الطرف © من الببتيد ومجموعة أمينو حرة من ا-أمْباراجيناز. قد تكون مجموعة أمينو free amino حرة من !- أشباراجيناز عبارة عن؛ على سبيل (JB مجموعة salar عند الطرف N أو مجموعة أمينو بسلسلة جانبية من ا- أشباراجيناز (على سبيل المثال؛ مجموعة sag من وحدة ليزين بنائية
5 متكونة في ا-أشباراجيناز). إذا كان ا-أسْباراجيناز مكونًا من وحدات فرعية متعددة؛ على سبيل Jal إذا كان ا-أشباراجيناز تترامر؛ قد يوجد العديد من مجموعات gina عند الطرف N (أي؛ واحدة على كل وحدة فرعية). في أحد الجوانب؛ يمكن ترافق من 9 إلى 13 ببتيد كما هو محدد هنا (على سبيل المثال 9 11( 12؛ أو 13 ببتيد) كيميائيًا مع ١-أشباراجيناز (على سبيل
المثال بكل وحدة فرعية/مونومر من ا-أشباراجيناز).
Gy 0 لما سبق؛ في أحد الجوانب لا تكون واحدة على الأقل من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي تكون الببتيدات مترافقة كيميائيًا lens عبارة عن (أي؛ تكون مختلفة عن) مجموعة 0-أمينو عند الطرف N من ا-أشباراجيناز. بناءء على ذلك يُفضل أن تكون واحدة على الأقل من مجموعات الأمينو all التي يتم ترافق الببتيدات بهاء عبارة عن مجموعة أمينو بسلسلة جانبية من ا-أسباراجيناز» ويُفضل تحديدًا أن تكون واحدة على الأقل من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات 5 بهاء عبارة عن مجموعة ع-أمينو من وحدة ليزين بنائية من ا- أشباراجيناز.
علاوة على ذلك؛ يُفضل أن يتم اختيار مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات clr من مجموعة(مجموعات) ع-أمينو من أية وحدة (وحدات) بنائية من ا-أشباراجيناز؛ مجموعة (مجموعات) »©-أمينو عند الطرف لا من ا- أَسْباراجيناز» أو واحدة من الوحدة (الوحدات) الفرعية من ا- أشْباراجيناز» ls توليفة من ذلك. يُفضل تحديدًا أن تكون واحدة من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات بهاء عبارة عن مجموعة 0-أمينو عند الطرف لا؛ بينما تكون كل
من المجموعة (المجموعات) GAY من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات بهاء عبارة عن مجموعة ع-أمينو من وحدة ليزين بنائية من ا-أشباراجيناز. على نحو بديل؛ يُفضل أن تكون كل من مجموعات الأمينو الحرة؛ التي يتم ترافق الببتيدات بهاء Ble عن مجموعة ع-أمينو من وحدة ليزين بنائية من ا- أشباراجيناز.
يتم تكوين البروتينات المُعدلة كما يوصف هنا من ا-أشْباراجيناز وواحد أو أكثر من ببتيدات كما هو محدد هنا. قد يتكون بروتين معدل مناظر» على سبيل المثال» من ا-أشباراجيناز واحد وواحد؛ اثنين» ADE أريعة؛ خمسة؛ ستة؛ سبعة؛ Ala تسعة عشرق 15 20 25 30 35 40« 5. 50 55 (أو أكثر) من الببتيدات التي تكون مترافقة مع ا-أشباراجيناز. قد يكون ا- أشباراجيناز» على سبيل المثال؛ عبارة عن بروتين مونومري أو بروتين مكون من العديد من
5 الوحدات dell على سبيل المثال تترامر. إذا كان ا-أسباراجيناز عبارة عن بروتين مونومري؛ قد يتكون بروتين معدل مناظر» على سبيل المثال» من ا- أشباراجيناز مونومري واحد ومن تسعة إلى ثلاثة عشر (أو أكثر) (على سبيل المثال 9 ¢10 11؛ 12( أو 13)؛ من الببتيدات التي تكون مترافقة مع ا-أشباراجيناز المونومري. يتم عرض متوالية حمض أميني نموذجية من ا- أشباراجيناز مونومري في المتوالية رقم 1. إذا كان ا- أسشباراجيناز عبارة عن بروتين مكون من
0 العديد من الوحدات الفرعية؛ على سبيل المثال من أربع وحدات فرعية (أي؛ إذا كان ا- أسْباراجيناز المذكور Ble عن تترامر)؛ قد يتكون بروتين معدل مناظر؛ على سبيل المثال» من al وحدات فرعية من ا- أَْباراجيناز ومن تسعة إلى ثلاثة عشر (أو أكثر) (على سبيل المثال 9. 10 11؛ 2 أو 13)؛ من الببتيدات كما هو محدد هنا تكون مترافقة مع كل sang فرعية من ا- أشباراجيناز. يتم عرض متوالية حمض أميني نموذجية من وحدة فرعية من ا- أشْباراجيناز في
5 المتوالية رقم 1. (Jil إذا كان ا- أشباراجيناز عبارة عن بروتين مكون من العديد من الوحدات
الفرعية؛ على سبيل المثال من af وحدات فرعية el) إذا كان ا- أشباراجيناز المذكور عبارة عن تترامر)؛ قد يتكون بروتين معدل مناظر؛ على سبيل المثال» من أريع وحدات فرعية من !- lal رمت 31 32 33 34 35 36. 37 38 39 0ك 41 42 43« 44 45 46« 47 48 49« 50 51 52 53 ¢54 55 (أو أكثر) من الببتيدات التي تكون
مترافقة مع تترامر ا- أشباراجيناز. في أحد الجوانب يتعلق الاختراع ببروتين مُعدل به ا- أشباراجيناز والعديد من متواليات الببتيد الملحقة كيميائيًا. في جانب إضافي aly طول متواليات الببتيد من حوالي 10 إلى حوالي 100؛ من حوالي 15 إلى حوالي 60 أو من حوالي 20 إلى حوالي 40. قد يتم ربط الببتيد المتكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين تساهميًا بواحد أو
0 أكثر من الأحماض الأمينية الخاصة ب ا-أشباراجيناز المذكور؛ Jie وحدات ليزين بنائية و/أو وحدة بنائية عند الطرف لا و/أو قد يتم ربط الببتيد المتكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين تساهميًا بعدد على الأقل من حوالي 40 50 60« 70 80 أو 9690 إلى حوالي 0 80 90 أو 16100 من مجموعات الأمينو القابلة للوصول إليها متضمنة مجموعات الأمينو الخاصة بوحدات الليزين البنائية و/أو الوحدة البنائية عند الطرف N على سطح ا-
5 أتباراجيناز. على سبيل المثال؛ قد يكون هناك من حوالي 11 إلى 12 وحدة ليزين بنائية قابلة للوصول إليها لكل ا-أشباراجيناز» ومن حوالي 9 إلى 12 وحدة ليزين تكون مترافقة مع الببتيد المتكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في جوانب إضافية؛ يتم ربط الببتيد المتكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين تساهميًا بعدد من حوالي 20؛ 30؛ 40« 50 أو 9660 إلى حوالي 30 40 50 60» 70 80 أو 9690 من إجمالي وحدات
0 اليزين البنائية الخاصة ب ا-أشباراجيناز المذكور. في تجسيدات إضافية؛ يتم ربط الببتيد المتكون فقط من lang حمض أميني من برولين وآلانين تساهميًا ب ا- أشْباراجيناز عبر رابط. تتضمن الروابط النموذجية الروابط التي تم الكشف عنها في نشرة طلب البراءة الأمريكية رقم 5 التي تم تضمينها هنا بأكملها كمرجع. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يكون للبروتين المُعدل المذكور عمر نصفي يبلغ على الأقل حوالي 5؛ 10؛
5 15012 24 36 48 60« 72( 84 أو 96 ساعة عند جرعة تبلغ حوالي 25 ميكرو جرام
— 9 3 — بروتين/كجم؛ و/أو عمر نصفي أطول في الدورة الدموية في جسم الكائن الحي مقارنة ب ا- أشباراجيناز غير المُعدل. علاوة على ذلك؛ قد يكون للبروتين المُعدل المذكور مساحة أكبر تحت منحنى تركيز العقار فى البلازما-الزمن plasma drug concentration—-time curve (AUC) مقارنة ب ا- أشُباراجيناز.
يمكن تحضير البروتين المُعدل Gy للاختراع الحالي باستخدام الطرق المعروفة في المجال. تحديدًاء يمكن تحضيره باستخدام العملية الموصوفة فيما يلي؛ و/أو Gy ل أو بالتناظر مع الإجراءات الموصوفة فى الأمثلة. يتعلق الاختراع بشكل إضافي بعملية لتحضير بروتين مُعدل كما هو محدد هناء تشتمل العملية على: )0( إقران ببتيد منشط له الصيغة (RN—(P/A)-RC-act حيث RC-act تكون عبارة عن
0 صورة منشطة بالكريوكسي من (RC حيث (PA) 5 RC تكونا كما هو مُعرّف في البروتين المُعدل الذي سيتم تحضيره؛ وحيث RN تكون عبارة عن مجموعة حماية ملحقة بمجموعة الأمينو عند الطرف N الخاصة ب (P/A) ب ا-أشباراجيناز للحصول على بروتين مُعدل من ا- أشباراجيناز ويبتيدات حيث RN تكون عبارة عن مجموعة حماية. قد تكون وحدة الحمض الأميني البنائية RC-act عند الطرف المنشطة بالكريوكسي؛ التي يتم
5 تكوبنها فى الببتيد المنشط» عبارة عن أية وحدة حمض el بنائية (RC كما يوصف وتُحدد هنا فيما يتعلق بالببتيد؛ حيث تكون مجموعة الكريوكسي الخاصة ب RC في صورة مجموعة منشطة بكريوكسي. على نحو مفضل»؛ تكون مجموعة الكربوكسي المنشطة الخاصة بوحدة الحمض الأميني RC-act dst في الببتيد المنشط عبارة عن مجموعة إستر نشطة. إذا كانت مجموعة الكريوكسى المنشطة الخاصة 2 RC-act عبارة عن مجموعة إستر نشطة
cactive ester 20 فغنه يتم اختيارها على نحو مفضل من أية مجموعة من مجموعات الإستر النشطة التالية:
0 0 A N
A =n he o—n, 1 1 0—N 0 رجلا 0 رلا محلب — be ماب N, - © ¢ cl 6 اه ‘ NX ¢ 0 0 0
A Ss A A x == n, ف« أ 0—N
TD 0 0 3 3 NO, 0 0 x _ 0 9 بم 0 Q a= A x a )
CJ مم ع ht م0 ‘ X X=0.8 ¢ N= ‘ رحبا 0 0 0
Jody ز قم ل
O—N / لا TV x - "ع ا JN ‘ 0 ‘ اب cl ‘ = ° لبي" 0 OCH, o o
LC Abn a
A OI روحم ‘ OCH; 0 ‘ 0 5 0 Cl 0 F F 0
Se I doe do “ To NO,
Cl ‘ F F ‘ © NO2 ‘ \ /
— 1 4 — 0 R F 0 ,058 0 0 A له 0 ces 0 <r X 0 cl * \ 0 و : H ‘ X X=ClL, F ‘ F 3 ‘ أو Q لمم Ao ) NC 0 . تكون مجموعة jiu) نشطة مفضلة تحديدًا عبارة عن مجموعة إستر نشطة active ester من 1-هيدروكسي بنزوترايازول (HOB) 1-hydroxybenzotriazole بناءً على ذلك؛ يُفضل تحديدًا أن تكون مجموعة الكريبوكسى المنشطة activated carboxy الخاصة ب RC-act عبارة عن مجموعة بالصيغة التالية: 8 Jey له Se SN i ve es
Ng قد تشتمل العملية بشكل إضافي على؛ قبل الخطوة (أ)؛ خطوة إضافية تتعلق بتحويل ببتيد بالصيغة 0 40-ر(م/ط)-ل4؛ حيث RC و(/) تكونا كما هو مُعرّف في البروتين المُعدل الذي سيتم تحضيره؛ وحيث RN تكون عبارة عن مجموعة حماية ملحقة بمجموعة الأمينو عند الطرف N الخاصة ب (PA) إلى ببتيد PA المنشط. على سبيل المثال؛ من أجل الحصول على ببتيد منشط به مجموعة إستر نشطة من 1-هيدروكسي بنزوترايازول باعتبارها مجموعة الكريوكسى المنشطة الخاصة 2 «RC-act يمكن تنفيذ خطوة 5 تحويل الببتيد إلى الببتيد المنتشط عن طريق تفاعل الببتيد مع ملح من إستر 65163 فوسفونيوم 70 » يورونيوم uronium أو إيمونيوم immonium من 1-هيدروكسي بنزوترايازول (HOBL) 1-hydroxybenzotriazole في وجود قاعدة. يكون ملح مشتق
فوسفونيوم 00050010010077 « يورونيوم uronium أو إيمونيوم immonium من HOBt على نحو مفضل عبارة عن 0- (بنزوترايازول-1-يل)-1؛ 1؛ 3؛ 3-تترا ميثيل يورونيوم تترا فلورو بورات O-(benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate .(TBTU) 5 يمكن تنفيذ خطوة الإقران )1( والخطوة الاختيارية السابقة الخاصة بتحويل ببتيد إلى ببتيد منشط
على سبيل المثال» باستخدام أي من إجراءات إقران الببتيد أو تكوين رابطة أميد amide bond موصوفة Lad سبق نشره؛ على سبيل المثال» في أي من: El-Faham et al., 2011 Chem Rev. 111(11), 6557-6602; Montalbetti et al., 2005 Tetrahedron, 61(46), Klose et al., 1999 Chem.
Commun. 18, 1847-1848; ;10827-10852
Valeur et al., 2007; Carpino et al., 1995 J.
Am.
Chem.
Soc. 117(19), 10 Valeur et al., 2009 Chem.
Soc.
Rev., 38(2), 606-631 ::(5401-5402؛؛ أو Hermanson, 2013 Bioconjugate techniques.
Third edition.
Academic press يتم وصف المواد الكاشفة وظروف التفاعل الملائمة لهذه الإجراءات بشكل إضافي فيما سبق نشره من قبل وفي المراجع الإضافية المذكورة هنا. توجد عمليات الوصف الإضافية في
5 البراءة الأمريكية رقم 8,563,521؛ 9,260,494؛ 5 9,221,882 التي يتم تضمين كل منها كمرجع بأكملها هنا. تكون الإجراءات لإزالة مجموعات الحماية (RN كما يُطلب في الخطوة الاختيارية (ب)؛ معروفة جيدًا في المجال ويتم وصفهاء على سبيل المثال» في Wuts et al., 2012 Greene's Protective Groups in Organic Synthesis.
Fourth Edition.
John Wiley &
Sons 20 و/أو في 2455-2504 ,)109(6 .Isidro-Llobet et al., 2009 Chem.
Rev. ومن ed يمكن تنفيذ الخطوة الاختيارية (ب)؛ على سبيل المثال» كما وصف لمجموعة الحماية المناظرة RN في أي من المراجع المذكورة من قبل. في بعض الجوانب» يتعلق الاختراع ببروتين مُعدل يشتمل على (1) ا-أشباراجيناز له تطابق بنسبة على الأقل 85 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 أو 0 مع متوالية
5 الحمض الأميني الخاصة بالمتوالية رقم: 1 و(2) ويولي ببتيد؛ حيث يتكون البولي ببتيد فقط من
وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في أحد الجوانب؛ يكون البروتين المُعدل عبارة عن بروتين اندماج. قد يكون للبولي ببتيد المتكون فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين طول يبلغ من حوالي 200 إلى حوالي 400 وحدة حمض أميني من برولين وآلانين. بصياغة أخرى قد يتكون البولي ببتيد من حوالي 200 إلى حوالي 400 وحدة حمض أميني من برولين واآلانين. في جانب مفضل؛ يتكون البولي ببتيد من إجمالي يبلغ حوالي 200 (على سبيل المثال
01) وحدة حمض أميني من برولين وآلانين (أي؛ يكون له طول يبلغ حوالي 200 (على سبيل المثال 201) وحدة حمض أميني من برولين وآلانين) أو يتكون البولي ببتيد من إجمالي يبلغ حوالي 400 (على سبيل المثال 401) وحدة حمض أميني من برولين وآلانين (أي؛ يكون له طول يبلغ حوالي 400 (على سبيل المثال 401) وحدة حمض أميني من برولين وآلانين). في بعض
0 -_من التجسيدات المفضلة؛ يشتمل البولي ببتيد على أو يتكون من متوالية حمض أميني كما يُعرض في المتوالية رقم: 7 أو 9؛ أو يشتمل البولي ببتيد على أو يتكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 8 أو 10. في بعض الجوانب؛ يحتوي البروتين المُعدل؛ على نحو مفضل حيث يكون البروتين المُعدل عبارة عن بروتين ez lexi] وكل مونومر على عدد من حوالي 350 400 450؛ 500 حمض أميني إلى
5 حوالي 550 600« 650« 700« 750 أو 1.000 حمض أميني متضمنة المونومر ومتوالية الحمض الأميني 0//8. في جوانب إضافية؛ يحتوي البروتين المُعدل على عدد من حوالي 350 إلى حوالي 800 حمض أميني أو من حوالي 500 إلى حوالي 750 حمض أميني. على سبيل المثال؛ يتضمن البولي ببتيد الببتيدات التي تم تحضيرها في البراءة الأمريكية رقم 9,221,882
0 في جانب مفضلء البروتين المُعدل )1( يشتمل على أو يتكون من متوالية حمض أميني كما يُعرض في المتوالية رقم: 11 أو 13؛ أو (ب) يشتمل على أو يتكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 12 أو 14. تتم هنا دراسة أن البروتين المُعدل يشتمل على (أ) بروتين به متوالية حمض أميني كما يُعرض في المتوالية رقم: 11 أو 13؛ (ب) بروتين كما هو مُعرّف في (أ) حيث يتم حذف» إدراج؛ إضافة أو
5 استبدال من واحد إلى 65 حمض أميني في الأشباراجيناز؛ (ج) بروتين مشفر بواسطة حمض
نووي به متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 12 أو 14؛ (د) بروتين به متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي يقوم بالتهجين في ظل ظروف صارمة بالجديلة المتممة من جزيئات الحمض النووي كما هو مُعرّف في (ج)؛ (ه) بروتين له تطابق بنسبة على الأقل 9685 مع البروتين الخاص بأي واحد من (أ) إلى (د)؛ و(و) بروتين به متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي يكون متحللاً كنتيجة للشفرة الجينية إلى متوالية النوكليوتيد الخاصة بحمض
نووي كما هو مُعرّف في (ج) أو (د). قد يتم تكوين البروتين المُعدل كما هو محدد هنا من al وحدات فرعية؛ Cua يتم اختيار الوحدات الفرعية من المجموعة المكونة من (أ) بروتين به متوالية حمض أميني كما يُعرض في المتوالية رقم: 1؛ (ب) بروتين كما هو مُعرّف في (أ) حيث يتم حذف؛ إدراج؛ إضافة أو استبدال من واحد
0 إلى 65 حمض أميني في الأشباراجيناز؛ (ج) بروتين مشفر بواسطة جزيء حمض نووي به متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 2؛ (د) بروتين به متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي يقوم بالتهجين في ظل ظروف صارمة بالجديلة المتممة من جزيئات الحمض النووي كما هو مُعرّف في (ج)؛ (ه) بروتين له تطابق بنسبة على الأقل 1685 مع البروتين الخاص بأي واحد من (أ) إلى (د)؛ و(و) بروتين به متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي يكون
5 متحللاً كنتيجة للشفرة الجينية إلى متوالية النوكليوتيد الخاصة بحمض نووي كما هو مُعرّف في (ج) أو )9( يتعلق الاختراع بحمض نووي يُشفر البروتين المُعدل كما هو محدد هناء بشكل خاص إذا كان البروتين المُعدل عبارة عن بروتين مُعدل من ا-أشباراجيناز ويولي cai حيث يتكون البولي ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين. في جانب مفضل؛ يكون البروتين المُعدل عبارة
0 عن بروتين اندماج. في جانب مفضل؛ يتم اختيار الحمض النووي من المجموعة المكونة من: (أ) الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد الخاصة بالمتوالية رقم: 12 أو 14؛ (ب) الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد التي لها تطابق بنسبة على الأقل 9685 مع متوالية النوكليوتيد كما هو مُعرّف في (أ)؛ و(ج) يكون الحمض النووي Mate كنتيجة للشفرة الجينية إلى متوالية النوكليوتيد كما هو مُعرّف في (أ).
في جانب إضافي؛ يتعلق الاختراع بمتوالية نوكليوتيد تقوم بتشفير بروتين الاندماج» متضمنة متوالية نوكليوتيد لها تطابق بنسبة على الأقل 85 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 أو 96100 مع متوالية النوكليوتيد المختارة من المجموعة المكونة من المتوالية رقم: 12 أو 14. بينما يشتمل البولي ببتيد المشفر على متوالية حمض أميني متكررة قد 0385 lle عشوائيًا؛ يشتمل الحمض النووي المشفر على نحو مفضل على متواليات نوكليوتيد منخفضة التكرار. بصياغة أخرى؛ يمكن أن يشتمل الحمض النووي على متوالية نوكليوتيد تقوم بتشفير بولي ببتيد غني ب PA حيث تشتمل متوالية النوكليوتيد المشفرة المذكورة على وحدات تكرار نوكليوتيد لها طول أقصى يبلغ 4 15< 16 17« حوالي 20« حوالي 25 حوالي 30« حوالي 35 حوالي 40 حوالي 45 حوالي 50 أو حوالي 55 نوكليوتيد. يمكن أن يكون الحمض النووي منخفض التكرار كما يتم
0 الكشف هنا مفيدًا مقارنة بجزيئات الحمض النووي عالية التكرار. dant يمكن تحسين الثبات الجيني الخاص بجزيئات الحمض النووي منخفضة التكرار التي سيتم استخدامها هنا. في بعض الجوانب؛ تكون متوالية النوكليوتيد عبارة عن متوالية Bad من البروتينات المُعدلة المشتملة على ا-أَْباراجيناز وبولي cate حيث يتكون البولي ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين» على نحو مفضل حيث يكون البروتين المُعدل Ble عن بروتين اندماج؛
5 موصوف هناء Lad عدا أنه تتم إضافة؛ حذف»؛ إدراج أو استبدال واحد أو أكثر من الحمض الأميني؛ شريطة أن يكون لبروتين الاندماج المحتوي على متوالية الحمض الأميني هذه نشاط ا- أشباراجيناز. في جوانب إضافية؛ يتعلق الاختراع بناقل (ناتج عودة الاتحاد الجيني) مشتمل على متوالية النوكليوتيد التي تُشفر البروتين المُعدل المشتمل على ا-أشباراجيناز وبولي ببتيد؛ حيث يتكون
0 اببولي ببتيد فقط من وحدات حمض أميني من برولين وآلانين؛ على نحو مفضل حيث يكون البروتين المُعدل عبارة عن بروتين اندماج؛ كما يوصف هناء حيث يمكن أن يُعبر الناقل وراثيًا عن البروتين المُعدل (على سبيل المثال بروتين الاندماج). في جوانب إضافية؛ يتعلق الاختراع Load بعائل مشتمل على الناقل (ناتج عودة الاتحاد الجيني) الموصوف هنا. قد يكون العائل عبارة عن خمائر؛ مثل السكيراء الجعوية 5 (Pichia Pistoris إضافة إلى البكتيرياء (clad) الفطريات؛
5 الطحالب؛ والكائنات الحية الدقيقة الأخرى» متضمنة إشرشيا كولاي» جنس العصيات؛ ABH
cada جلوتاميكوم الوَتَدِيَّةِ والعوائل البكتيرية من الأجناس التالية «Proteus (Serratia (Acinetobacter و96065ا068ا80. تكون العوائل الأخرى معروفة بالنسبة لهؤلاء من ذوي المهارة في المجال بما في ذلك LICE البيضاء؛ التي تعبر Lily عن صورة مغايرة من الأسباراجيناز تفتقر إلى نشاط الجلوتاميناز ( Meena et al. (2014) Bioprocess Biosyst.
Eng. «October 2014 Article 5 الذي يتم تضمينه هنا كمرجع بأكمله)؛ وتلك التي تم الكشف عنها في
«Savitri et al. (2003) Indian Journal of Biotechnology, 2, 184-194 الذي يتم تضمينه هنا كمرجع بأكمله. يتعلق الاختراع الحالي بناقل مشتمل على الحمض النووي كما يوصف هنا فيما سبق؛ أي حمض نووي يُشفر البروتين المُعدل كما هو محدد هناء تحديدًا بروتين مُعدل من ا- أْباراجيناز وبولي
0 ببتيد؛ حيث يتكون البولي ببتيد فقط من وحدة حمض أميني بنائية من برولين وآلانين» مثل بروتين اندماج. في ils مفضل؛ يتم اختيار الحمض النووي من المجموعة المكونة من: (أ) الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد الخاصة بالمتوالية رقم: 12 أو 14؛ (ب) الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد التي لها تطابق بنسبة على الأقل 9685 مع متوالية النوكليوتيد كما هو مُعرّف في (أ)؛ و(ج) يكون الحمض النووي Slate كنتيجة للشفرة الجينية إلى متوالية
5 النوكليوتيد كما هو مُعرّف في (أ). يتعلق الاختراع بخلية عائل مشتملة على الحمض النووي كما هو محدد هنا أو مشتملة على الناقل كما هو محدد هنا. يتم إدراج العوائل النموذجية المثال Lad سبق. يتعلق الاختراع بشكل إضافي بعملية لتحضير البروتين المُعدل كما يوصف هناء على نحو مفضل بروتين الاندماج؛ أو الحمض النووي الذي يُشفره. يمكن أن تشتمل العملية على استنبات خلية
0 عائل كما هو محدد هنا وعزل البروتين المُعدل المذكور عن المزرعة أو عن الخلية المذكورة. يمكن أن تشتمل العملية على استنبات خلية عائل (على سبيل المثال خلية Bile محولة باستخدام أو خلية عائل مشتملة على الحمض النووي و/أو ناقل مشتمل على متوالية نوكليوتيد تقوم بتشفير البروتين المُعدل (على نحو مفضل بروتين الاندماج) في ظل ظرف يتسبب في التعبير الوراثي عن البروتين المُعدل (على نحو مفضل بروتين الاندماج). يتم إدراج العوائل النموذجية فيما سبق.
يكون العديد من النواقل الملائمة By peo بالنسبة إلى هؤلاء من ذوي المهارة في البيولوجيا الجزيئية. يعتمد اختيار ناقل ملائم على الوظيفة المطلوية؛ بما في ذلك البلازميدات؛ الكوزميدات؛ الفيروسات» البكتيريا الملتهمة والنواقل الأخرى المستخدمة على نحو تقليدي في الهندسة الوراثية. يمكن استخدام الطرق التي تكون معروفة جيدًا بالنسبة إلى هؤلاء من ذوي المهارة في المجال لتكوين البلازميدات المتنوعة؛ «plait على سبيل المثال؛ التقنيات الموصوفة في Sambrook Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor )2012( Laboratory Press تتضمن نواقل البلازميد النمطية؛ على سبيل المثال؛ PQE-12 pUCseries الخاصة (Stratagene) pBluescript «clue Pull سلاسل pET الخاصة بنواقل التعبير الوراثئي (Novagen) أو dambda 9111 (Invitrogen) pCRTOPO «(pJOE 0 سلامل .pTACT1 «pUCPKS pBC2 (pBSMuL pJB861 pBBR1-MCS تتضمن النواقل النمطية المتوافقة مع التعبير الوراثي في خلايا الكائنات الثديية نظام الناقل E- pCAG Kosak-Cherry 027 بد5جا) «(Invitrogen) pCEP4 «(Invitrogen) pREP EBO- (Stratagene) 0565 (Stratagene) pXT1 «(Stratagene) pMClneo pSV2-dhfr (pRSVneo pRSVgpt «pdBPVMMTnheo pBPV-1 «(pSV2neo «plZD35 5 ناقل التعبير الوراثي 1م ل «(Pharmacia) Okayama-Berg cDNA pRc/CMV اطملاناءم GIBCO ( 0500411 «pcDNA3.1 (Invitrogen) pcDNA3 PIRES-EGFP (Clontech) pSIR «pLXIN (Promega) pGEMHE «(BRL (Novagen) Edge Biosystems) pTriEx-Hygro) pEAK-10 «(Clontech) .(Promega) pCINeo 4 الأمثلة غير الحصرية لنواقل البلازميد الملائمة لذ Pichia pastoris comprise 20 على سبيل المثال البلازميدات 0815م SK.pPIC3 5 pPICOK (كلها من .(Invitrogen بشكل عام؛ يمكن أن تحتوي النواقل على واحد أو أكثر من الأصول الخاصة بالنسخ (Ori) ونظمك الوراثة لعمل نسائل أو التعبير الوراثي؛ واحدة أو أكثر من العلامات للاختيار في العائل» على سبيل المثال؛ مقاومة الجسم المضاد؛ وواحدة أو أكثر من مجموعات التعبير الوراثي. تتضمن 5 الأمثلة على الأصول الملائمة الخاصة بالنسخ؛ على سبيل «Jal 60181 كامل الطول؛
الإصدارات المشذبة منها Jie تلك الموجودة على بلازميدات pUC الأصول 5740 الفيروسية و1013 الملتهمة الخاصة بالنسخ. تتضمن الأمثلة غير الحصرية على العلامات القابلة للاختيار أمبيسيلين» كلورامفينيكول؛ تتراسيكلين؛ كاناميسين؛ 01717 (GPE نيوميسين؛ هيجيروميسين؛ بلاستيسيدين أو جينيتيسين. بشكل إضافي؛ يشتمل الناقل المذكور على متوالية منظمة تكون مرتبطة على نحو قابل للتشغيل بمتوالية النوكليوتيد المذكورة أو جزيء الحمض النووي المحدد هنا.
يمكن ربط متوالية(متواليات) التشفير» على سبيل المثال» متوالية النوكليوتيد المذكورة التي تشفر البولي ببتيد؛ المتكونة في الناقل ب (أ) عنصر منظم (عناصر منظمة) للنسخ و/أو بمتواليات تشفير حمض أميني أخرى باستخدام الطرق المؤكدة. تكون هذه المتواليات المنظمة معروفة جيدًا بالنسبة إلى هؤلاء من ذوي المهارة في المجال وتتضمن دون cam المتواليات المنظمة التي تضمن بدء
0 النسخ؛ مواقع الدخول الخاصة بالريبوسوم الداخلية (IRES) internal ribosomal entry sites و؛ اختياريًا؛ العناصر المنظمة التي تضمن إنهاء النسخ وتثبيت النسخة. تشتمل الأمثلة غير الحصرية لهذه المتواليات المنظمة التي تضمن بدء النسخ على العوامل المعززة؛ رامزة بدء تحوّرء عوامل تحسين؛ عوامل عزل و/أو العناصر المنظمة التي تضمن إنهاء النسخ. تتضمن الأمثلة الإضافية متواليات Kozak والمتواليات التداخلية المحاطة بواسطة مواقع المانح والمتقبل لجدل
RNA 5 متواليات الحمض النووي التي تشفر إشارات الإفراز أو اعتمادًا على نظام التعبير الوراثي المستخدم» متواليات الإشارة القادرة على توجيه البروتين المعبر عنه وراثيًا إلى حجيرة خلوية أو إلى وسط استنبات. تتضمن الأمثلة على العوامل المعززة الملائمة دون تحديد؛ العامل المعزز للفيروس المضخم للخلايا (CMV) cytomegalovirus العامل المعزز 51/40؛ العامل المعزز REVI فيروس
0 ساركوما روس Rous sarcome virus ؛ العامل المعزز ل lacZ العامل المعزز ل CSB chicken 8-00 في الدجاج؛ العامل المعزز ل CAG (توليفة من العامل المعزز ل ]-أكتين في الدجاج والعامل المحسن للفيروس المضخم للخلايا مبكرًا المباشر)؛ العامل المعزز لعامل الإطالة البشري cla العامل المعزز 801241 العامل المعزز (GALT العامل المعزز —CaM كيناز» العامل المعزز trp dac أو 86 العامل المعزز dacUV5 العامل العزز 17 أو 15
5 العامل المعزز متعد الأسطح ug dl بولي هيدروزيس النووية Autographa californica
(ACMNPV) أو جلويين إنترون globin intron في خلايا الكائنات الثديية أو WIA الحيوانات الأخرى. يكمن أحد الأمثلة على عامل محسن في؛ على سبيل المثال؛ العامل المحسن 51/40. تتضمن الأمثلة الإضافية غير الحصرية للعناصر/المتواليات المنظمة التي تضمن إنهاء النسخ موقع (SV40 poly-A موقع tk poly—A أو إشارات المعالجة ببولي أدنيل متعدد الأسطح AcMNPV 5
علاوة على ذلك؛ اعتمادًا على نظام التعبير الوراثي؛ قد تتم إضافة المتواليات الرائدة القادرة على توجيه البولي ببتيد إلى حجيرة خلوية أو إفرازه في الوسط إلى أمتوالية التشفير الخاصة بالحمض النووي المتوفر هنا. يتم تجميع المتوالية (المتواليات) الرائدة في إطار مع متواليات التحوير؛ البدء والإنهاء؛ وعلى نحو مفضل؛ تكون متوالية رائدة قادرة على توجيه إفراز البروتين المحور» أو جزء
case 0 إلى الحيز المحيط بالغشاء البلازمي أو إلى الوسط خارج الخلايا. تكون المتواليات الرائدة الملائمة هي؛ على سبيل المثال» متواليات الإشارة الخاصة بفوسفاتاز قلوي بكتيري bacterial alkaline phosphatase (/8)؛ الوحدة الفرعية من سم الكوليرا cholera toxin B (PhoA «OmpA (ENX DsbA )018( subunit 8 الأى Tat 0618 OmpT إزفاء 07 -أرجنين Twin-arginine translocation في إشرشيا كولاي» ومتواليات الإشارة
5 الخاصة بهرمون التمو البقري» مولد الكيمُوترئسين البشري؛ العامل البشري ig—kappa VI البشري؛ الإنسولين البشري؛ الإنترلوكين-2 البشري؛ لوسيفيراز من Metrida أو Vargula مولد التريرسين-2 البشري؛ إينولاز من Kluyveromyces marxianus عامل التزاوج ألفا-1 من «Saccharomyces cerevisiae ميلتين mellitin » أزوروسيدين بشري human
0 وما شابه في الخلايا حقيقة النواة -eukaryotic cells
0 قد تحتوي النواقل أيضًا على متوالية حمض نووي قابلة للتعبير عنها iy إضافية تقوم بالتشفير لواحد أو أكثر من بروتينات الشابرون لتيسير طية تصحيح البروتين facilitate correct .protein folding في بعض الجوانب؛ يكون الناقل الخاص بالاختراع الحالي عبارة عن ناقل تعبير وراثي. يكون ناقل تعبير وراثي قادرًا على توجيه النسخ والتعبير الوراثي لجزيء الحمض النووي الخاص بالاختراع؛
على سبيل المثال؛ الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد التي تُشفر البولي ببتيد ومتوالية النوكليوتيد التي تُشفر أشباراجيناز. قد يتم تصميم جزيئات الحمض النووي و/أو النواقل كما يوصف هنا فيما سبق للإدخال في الخلايا بواسطة؛ على سبيل المثال؛ الطرق غير الكيميائية (التثقيب الكهريائي؛ صوتنة الخلاياء الإصابة بعدوى بصرية؛ النقل الكهربائي للجين؛ التوصيل الهيدروديناميكي أو التحويل طبيعي الحدوث عند
تلامس الخلايا مع جزيء الحمض النووي الخاص بالاختراع)؛ الطرق المعتمدة على الكيمياء كالسيوم فوسفات 00500816 (PEG (DMSO «calcium الجسيمات الدهنية liposomes « ع الا -دكستران DEAE-dextrane « بولي إيثيلين إيمين polyethylenimine « الإصابة بالعدوى النووية nucleofection إلى غير ذلك ؛ الطرق المعتمدة على الجسيمات
0 «(المدفع الجيني؛ الإصابة بالعدوى مغناطيسيًا magnetofection ؛ عدوى الوخز 1008166000 « الطرق المعتمدة على ناقل الخلية الملتهمة أو الفاجميد والطرق الفيروسية. على سبيل (JE قد يتم استخدام نواقل التعبير الوراثي المشتقة من الفيروسات مثل الفيروسات القهقرية retroviruses ؛ فيروس الوقس vaccinia virus ¢ الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي adeno-associated virus ؛ فيروسات الهريس herpes viruses « فيروس
Semliki Forest 5 أو فيروس الورم الحليمي bovine papilloma virus ؛ لتوصيل جزيئات الحمض النووي nucleic acid molecules إلى مجموعة WIA مستهدفة targeted cell .population يتعلق الاختراع الحالي أيضًا بخلية عائل أو عائل غير بشري محولة باستخدام الناقل أو الحمض النووي الموصوف هنا. سيتم إدراك أن المصطلح "خلية عائل أو عائل غير بشري محولة باستخدام
0 اناقل" يتعلق بخلية عائل أو عائل غير بشري تشتمل على الناقل أو الحمض النووي كما يوصف هنا. تكون خلايا العائل للتعبير الوراثي عن البولي ببتيدات معروفة جيدًا في المجال وتشتمل على LAY بدائية النواة إضافة إلى الخلايا حقيقة النواة. تكون أوساط وظروف الاستنبات الملائمة لخلايا العائل الموصوفة فيما سبق معروفة في المجال.
يتضمن "استنبات العائل أو خلية "lal التعبير الوراثي عن البروتين المُعدل؛ بما في ذلك كبروتين اندماج؛ كما هو محدد هنا و/أو البولي ببتيد كما هو محدد هنا و/أو الأشباراجيناز في العائل أو خلية العائل. تشتمل الطرق لعزل البروتين المُعدل و/أو البولي ببتيد كما هو محدد هنا و/أو الأسشباراجيناز على؛ دون تحديد؛ خطوات تنقية مثل استشراب بالألفة le) نحو مفضل باستخدام علامة ترميز للإندماج مثل علامة الترميز || Strep أو علامة الترميز 1156!)؛ ترشيح هلام gel filtration (استشراب بالاستبعاد على أساس الحجم)؛ استشراب بتبادل الأنيون anion exchange chromatography + استشراب بتبادل الكاتيون cation exchange chromatography « استشراب بتفاعل غير لآلف للماء؛ استشراب بسائل عالي الأداء high pressure liquid HPLC ((HPLC)chromatography 0 بطور عكسي؛ ترسيب أو ترسيب مناعي لأمونيوم سلفات .ammonium sulfate تكون هذه الطرق معروفة جيدًا في المجال وقد تم وصفها بشكل عام؛ على سبيل المثال» في 800 Scopes (1994) Protein Purification — Principles Practice, Springer توفر هذه الطرق بولي ببتيدات نقية إلى حدٍ كبير. يكون doll ببتيدات النقية المذكورة تجانس يبلغ؛ على نحو مفضل؛ على الأقل من حوالي 90 إلى 9695 (على أساس 5 البروتين)؛ على نحو أكثر تفضيلاً؛ على JY من حوالي 98 إلى 9699. على النحو الأكثر تفضيلاً؛ تكون هذه البولي ببتيدات النقية ملائمة للاستخدام الصيدلي/التطبيقات الصيدلية. يتم هنا تصوّر أنه يمكن تحضير بروتين مُعدل يشتمل على ا- أشْباراجيناز والبولي ببتيد عن Gob التعبير Gly عن جزيء الحمض النووي المشتمل على متوالية النوكليوتيد التي تُشفر البولي ببتيد ومتوالية الحمض النووي التي تُشفر الأسشباراجيناز. يمكن عزل البروتين المعدل المعبر عنه وراثيًا. 0 على نحو بديل؛ يمكن تحضير البروتين المُعدل عن طريق استنبات/رفع العائل المشتمل على متوالية النوكليوتيد أو جزيء الحمض النووي المشفر للبولي ببتيد المذكور المكون فقط من برولين وآلانين. ومن cd يتم التعبير Why عن الحمض النووي في العائل. يمكن عزل البولي ببتيد المنتج. يمكن ترافق البولي ببتيد المنتج مع الأَُباراجيناز» على سبيل (JO عبر رابطة ببتيد أو رابطة
يمكن استخدام البروتينات المُعدلة الموصوفة هنا في علاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد الأسباراجين. يكون المرض القابل للعلاج عن طريق استنفاد الأسباراجينات على نحو مفضل هو السرطان؛ مثل سرطان غير صلب. على نحو مفضل؛ يكون السرطان غير الصلب هو لوكيميا أو ورم لمفاوي غير هودجكين. تكون اللوكيميا على نحو مفضل هي لوكيميا أرومة لمفاوية حادة (ALL) acute lymphoblastic leukemia 5 أو اللوكيميا التخاعية الحادة acute myeloid .(AML)leukemia على سبيل المثال؛ تكون البروتينات المُعدلة مفيدة في علاج أو تصنيع دواء للاستخدام في علاج لوكيميا أرومة لمفاوية (ALL) Sala في كل من البالغين والأطفال أو اللوكيميا النخاعية (AML) salad) في كل من البالغين والأطفال. تتم دراسة استخدام البروتينات المُعدلة الموصوفة هنا في علاج الحالات الأخرى حيث يُتوقع أن يكون لاستنفاد الأسباراجين تأثير مفيد. 0 تتضمن هذه الحالات؛ إلا أنها ليست قاصرة على ما يلي: الأورام الخبيثة؛ أو أمراض السرطان؛ متضمنة إلا أنها ليست قاصرة على الأورام الخبيثة المتعلقة carly الورم اللمفاوي (NK سرطان البنكرياس pancreatic cancer ؛ مرض هودجكين disease 1009/00:5 ؛ اللوكيميا النخاعية الحادة»؛ اللوكيميا الوحيدية التنخاعية الحادة؛ اللوكيميا اللمفاوية المزمنة. ساركوما لمفاوية lymphosarcoma » ساركوما شبكية reticulosarcoma ¢ وساركوما ميلانينيّة melanosarcoma 5 ؛ والورم اللمفاوي في خلايا 8 الكبير المنتشر Diffuse large B-cell (DLBCL)lymphoma .338 يكون السرطان عبارة عن سرطان صلب؛ على سبيل المثال سرطان الرئة أو سرطان الثدي. تتضمن الأمراض المتعلقة بالدم غير الخبيثة الممثلة التي تستجيب إلى استنفاد الأسباراجين أمراض الدم الناتجة عن الجهاز المناعي؛ على سبيل المثال؛ الأمراض المعدية مثل تلك الناتجة بواسطة عدوى HIV (أي؛ الايدز). تتضمن الأمراض غير المتعلقة بالدم المرتبطة 0 بالاعتماد على الأسباراجين أمراض المناعة الذاتية؛» على سبيل المثال التهاب المفاصل الروماتويدي rheumatoid arthritis « المناعة الذاتية autoimmune ¢ الأمراض الوعائية المتعلقة بالكولاجين collagen vascular diseases ؛ إلى غير ذلك. تتضمن أمراض المناعة الذاتية GAY) التهاب العظام المفصلي -05160 autoimmune diseases include arthritis « متلازمة Issac الصدفية psoriasis ؛ مرض السكر المعتمد على الإنسولين insulin dependent diabetes mellitus 5 ¢ التصلب المتعدد lll « multiple sclerosis Jala ¢ Lal المُصَلب sclerosing panencephalitis ؛ )453 الحمامية الجهازية
systemic lupus erythematosus ؛ الحمى الروماتيزمية rheumatic fever « مرض
الأمعاء الالتهابية inflammatory bowel disease على سبيل (Jud) التهاب القولون
A) الصَغْراوِيٌ gall ؛ Crohn’s disease ومرض كراون Ulcerative colitis التقرحي
« chronic active hepatitis ؛ الالتهاب الكبدي النشط المزمن primary billiary cirrhosis « myasthenia gravis Jul الوهن العضلي » glomerulonephritis التهاب كبيبات الكلى 5
الفقاع الشائّع pemphigus vulgaris ؛ ومرض (Graves يمكن اختبار الخلايا التي يكون
هناك شك في أنها تتسبب في المرض تجاه الاعتماد على الأسباراجين في أية تجربة ملائمة في
المعمل أو في جسم الكائن الحي؛ على سبيل المثال؛ تجرية في المعمل حيث يفتقر وسط النمو إلى
.asparagine الأسباراجين
0 يتعلق الاختراع بشكل إضافي بطريقة لعلاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ا-أسباراجين في مريض» تشتمل الطريقة المذكورة على إعطاء المريض المذكور مقدار فعال من البروتين المُعدل. في بعض من الجوانب المفضلة؛ يكون المرض المذكور القابل للعلاج عن طريق استنفاد —L أسباراجين هو لوكيميا أرومة لمفاوية «(ALL) Acute Lymphoblastic Leukemia sia لوكيميا نخاعية حادة (AML) acute myeloid leukemia أو ورم لمفاوي غير هودجكين. في
15 بعض الجوانب»؛ يكون المرض المذكور القابل للعلاج عن طريق استنفاد 1-أسباراجين هو سرطان Ly في ذلك»؛ إلا أن الأمر ليس قاصرًا على الورم اللمفاوي (NK وسرطان البنكرياس pancreatic cancer في تجسيدات إضافية؛ يُظهر البروتين المُعدل الموصوف هنا استجابة مولدة للمناعة أقل في المريض المذكور مقارنة ب ا-أشباراجيناز الخاص بالبروتين المُعدل المذكور.
0 في بعض الجوانب؛ يكون للبروتين المُعدل الموصوف Lash سبق عمر نصفي أطول في الدورة الدموية في جسم الكائن الحي بعد جرعة فردية مقارنة ب 1-أسْباراجيناز غير المُعدل الخاص بالبروتين المُعدل المذكور. يمكن أن يُقلل البروتين المُعدل الموصوف هنا مستويات ا-أسباراجين في البلازما لفترة زمنية تبلغ على الأقل حوالي 12( 24 48؛ 72؛ 96؛ أو 120 ساعة عند الإعطاء بجرعة تبلغ 5 وحدة/كجم وزن الجسم أو 10 ميكرو جرام/كجم (على أساس محتوى
5 البروتين). يمكن أن يُقلل البروتين المُعدل الموصوف هنا مستويات ا-أسباراجين في البلازما
وصولاً إلى مستويات غير قابلة للكشف عنها لفترة زمنية تبلغ على الأقل حوالي 12( 24 48؛ 72( 96 120, أو 144 ساعة عند الإعطاء بجرعة تبلغ 25 وحدة/كجم من وزن الجسم أو 50 ميكرو جرام/كجم (على أساس محتوى البروتين). يمكن أن يُقلل البروتين المُعدل الموصوف هنا مستويات ا-أسباراجين في البلازما لفترة زمنية تبلغ على JV) حوالي 12 24 48 72 96 120( 144 168( 192 216 أو 240 ساعة عند الإعطاء بجرعة تبلغ 50 وحدة/كجم من وزن الجسم أو 100 ميكرو جرام/كجم (على أساس محتوى البروتين). يمكن أن يُقلل البروتين المُعدل الموصوف هنا مستويات ا- أسباراجين في البلازما وصولاً إلى مستويات غير قابلة للكشف عنها لفترة زمنية تبلغ على الأقل Joa 12 24 48 72 96 120 144 168 192 216 أو 240 ساعة عند الإعطاء بجرعة تتراوح من حوالي 10.000 إلى حوالي 15.000 0 وحدة دولية/م2 (حوالي 30-20 مجم من البروتين/م2). يمكن أن يؤدي البروتين المُعدل الموصوف هنا إلى مستوى مشابه من استتفاد ا-أسباراجين على مدار فترة زمنية le) سبيل المثال» 24( 48؛ أو 72 ساعة) بعد جرعة فردية. يمكن أن يكون للبروتين المُعدل الموصوف هنا 11/2 أطول من ا- أمْباراجيناز غير المعدل المعطى عند جرعة بروتين مكافئة. يمكن أن يكون للبروتين المُعدل الموصوف Lad سبق قيمة 5 0لا أكبر (على سبيل المثال على الأقل 1.5 32 4 5؛ 6« 7 8؛ 9 أو 10 أضعاف) بعد جرعة فردية مقارنة ب ا-أشباراجيناز الخاص بالبروتين غير المعدل المذكور. في بعض الجوانب لا يؤدي البروتين المُعدل الموصوف هنا اإلى لحصول على أية استجابة لجسم مضاد مؤثرة لفترة زمنية معينة بعد إعطاء جرعة فردية؛ على سبيل المثال؛ أكبر من حوالي 1 أسبوع؛ 2 أسبوع؛ 3 أسابيع» 4؛ أسابيع؛ 5 أسابيع؛ 6 أسابيع؛ 7 أسابيع؛ 8 أسابيع؛ 9 أسابيع؛ 0 10 أسابيع؛ 11 أسبوع؛ 12 أسبوع؛ إلى غير ذلك. على سبيل المثال؛ لا يؤدي البروتين المُعدل إلى الحصول على أية استجابة لجسم مضاد مؤثرة لمدة على الأقل 8 أسابيع. في أحد الأمثلة؛ يعني "لا يؤدي إلى الحصول على أية استجابة لجسم مضاد مؤثرة" أنه يتم تحديد الخاضع للعلاج الذي يتلقى البروتين المُعدل في إطار المتغيرات المتعارف عليها في المجال باعتباره سلبي للجسم المضاد. (Say تحديد مستويات الجسم المضاد بواسطة الطرق المعروفة في المجال؛ على سبيل ELISA Judi 5 أو تجارب رنين البلازمون السطحي ( Zalewska-Szewczyk (2009) Clin.
Exp.
Med. 9, 113-116; Avramis (2009) Anticancer Research 29, 299- 2. التي تم تضمين كل منها هنا كمرجع بأكمله). قد يحتوي البروتين المُعدل على أية توليفة من هذه الخصائتص. في بعض الجوانب؛ سيتم إعطاء العلاج باستخدام البروتين المُعدل الموصوف هنا باعتباره علاج بخيار أولي. في جانب AT سيتم إعطاء العلاج باستخدام البروتين المُعدل باعتباره علاج بخيار ثان في المرضىء تحديدًا المرضى المصابين ب ALL حيث قد تطورت إشارات يمكن إدراكها بالحواس متعلقة بالحساسية أو فرط الحساسية؛ متضمنة 'فرط الحساسية الهادئة"؛ بالنسبة لمستحضرات الأشباراجيناز diss (AY) -أشباراجيناز المشتق من إشرشيا كولاي الأصلي أو الصورة المغايرة المعالجة بالبولي إيثيلين جليكول الخاصة به (الإنزيمات المعالجة ببولي إيثيلين 0 جليكول). تتضمن الأمثلة غير الحصرية على الإشارات التي يمكن إدراكها بالحواس المتعلقة بالحساسية أو فرط الحساسية اختبار "إيجابي للجسم المضاد” لإنزيم الأشباراجيناز. في جانب نوعي؛ يتم استخدام البروتين المُعدل في العلاج بالخيار الثاني بعد العلاج باستخدام الإنزيمات المعالجة ببولي إيثيلين جليكول. قد يكون المريض عانى من فرط حساسية مسبقة تجاه ا- أشباراجيناز من إشرشيا كولاي؛ و/أو قد يكون عانى من فرط حساسية مسبقة تجاه ا- أشباراجيناز 5 .من 00/00018. قد يتم اختيار فرط الحساسية من المجموعة المكونة من تفاعل مسبب للحساسية؛ الصَدْمَة (AEN وفرط الحساسية الهادئة. يظل احتمال حدوث انتكاسة في مرضى ALL بعد العلاج باستخدام ا-أشْباراجيناز عاليًاء مع حدوث انتكاسة مبكرة لنسبة تقريبًا 9625-10 من مرضى ALL الأطفال le) سبيل المثال؛ بعض أثناء مرحلة المداومة عند 36-30 شهر بعد الحث) ( Avramis (2005) Clin. (Pharmacokinet. 44, 367-393 0 إذا عانى مريض تم علاجه باستخدام ٠-أشْباراجيناز مشتق من إشرشيا كولاي من انتكاسة؛ يمكن أن يؤدي العلاج التالي باستخدام مستحضرات إشرشيا كولاي إلى تأثير Gg anda لذلك فقد زاد مستحضر إشرشيا كولاي من توليد المناعة أثناء مرات الإعطاء التالية. قد يتم استخدام البروتين المُعدل الموصوف هنا في طريقة لعلاج المرضى المصابين ب ALL في حالة انتكاس الذين تم علاجهم من قبل باستخدام مستحضرات الأشباراجيناز 5 الأخرى؛ تحديدًا هؤلاء الذين تم علاجهم من قبل باستخدام إنزيمات الأشباراجيناز مشتقة من إشرشيا
كولاي. قد تحدث انتكاسة المرض بعد العلاج باستخدام 1- أشباراجيناز من إشرشيا كولاي أو صورة معالجة ببولي إيثيلين جليكول منه. في جانب آخرء يتعلق الاختراع بطريقة لعلاج لوكيميا أرومة لمفاوية حادة تشتمل على إعطاء مربض في حاجة إلى العلاج مقدار فعال علاجيًا من البروتين المُعدل الموصوف Lad سبق. في جانب نوعي؛ سيتم إعطاء العلاج بجرعة تتراوح من حوالي 1500 وحدة دولية/م2 إلى حوالي 0 وحدة دولية/م2؛ نمطيًا من حوالي 10.000 إلى حوالي 15.000 وحدة دولية/م2 (حوالي 30-20 مجم من البروتين/م2)» بجدول يتراوح من حوالي مرتين في الأسبوع إلى حوالي مرة في الشهرء نمطيًا مرة في الأسبوع أو مرة أسبوع بعد الآخر. قد يتم إعطاء البروتين المُعدل الموصوف Lad سبق كعامل فردي (على سبيل المثال» علاج أحادي) أو كجزء من توليفة من 0 عقاقير العلاج الكيميائي؛ بما في ذلك؛ إلا أن الأمر ليس قاصرًا على الجلوكوكورتيكويدات؛ الكورتيكويدات؛ المركبات أو العوامل الأخرى المضادة للسرطان؛ بما في ذلك؛ إلا أن الأمر ليس ald على ميثوتريكسات؛ ديكساميتازون؛ بردنيزون؛ بريدنيزولون؛ فينكريستين؛ سيكلو فوسفاميد؛ وأنثراسيكلين. كمثال؛ سيتم إعطاء المرضى المصابين ب ALL البروتين المُعدل الموصوف فيما سبق كمُكوّن من العلاج الكيميائي متعدد العوامل أثناء 3 مراحل من العلاج الكيميائي متضمنة 5 الحث؛ الاستحصاف أو التكثيف؛ والمداومة. في مثال نوعي؛ لا يتم إعطاء البروتين المُعدل الموصوف فيما سبق مع مقبط أسباراجين سيتقيتاز asparagine synthetase inhibitor le) سبيل المثال» fie الموضحة في 103290/2007؛ التي تم تضمينها هنا بأكملها كمرجع). في مثال نوعي آخرء لا يتم إعطاء البروتين المُعدل الموصوف فيما سبق مع مثبط أسباراجين سينثيتاز ؛ ولكن يتم إعطائه مع عقاقير علاج كيميائي أخرى. يمكن إعطاء البروتين المُعدل 0 الموصوف فيما سبق قبل؛ can أو في نفس الوقت مع مركبات أخرى كجزءِ من نظام علاج كيميائي متعدد العوامل. في تجسيد نوعي؛ تشتمل الطريقة على إعطاء البروتين المُعدل الموصوف Led سبق بمقدار يبلغ حوالي 1 وحدة/كجم إلى حوالي 25 وحدة/كجم (على سبيل المثال» حوالي 32d 4 5؛ 6؛ 7 8 » 10 11+ 12 13 14 15« 16» 17« 18 19» 20« 21 22( 23 24 أو 25 وحدة/كجم) أو مقدار مكافئ له 20 (على سبيل المثال؛ على أساس محتوى البروتين). سوف
تعتمد مقادير البروتين المُعدل التي سيتم توصيلها على العديد من العوامل» على سبيل (Jill ١0 5050 نصف العمر البيولوجي الخاص بالمركب؛ العمرء الحجم» الوزن والحالة الفيزيائية للمريض؛ والمرض أو الاضطراب الذي سيتم علاجه. تكون أهمية هذه العوامل والعوامل الأخرى التي سيتم أخذها بالاعتبار معروفة جيدًا بالنسبة لهؤلاء من ذوي المهارة العادية في المجال. في تجسيدات معينة؛ قد يتراوح مقدار البروتين المعدل الذي سيتم إعطائه من حوالي 10
وحدة دولية لكل sie مربع من المساحة السطحية الخاصة بجسم المريض (IU/M2) إلى 0 وحدة دولية/م2. في جوانب إضافية؛ يتم إعطاء البروتين المُعدل بمقدار مختار من المجموعة المكونة من حوالي 5؛ حوالي 10« وحوالي 25 وحدة/كجم. في جانب نوعي آخرء يتم إعطاء البروتين المُعدل بجرعة تتراوح من حوالي 1.000 وحدة دولية/م2 إلى حوالي 20.000
0 وحدة دولية/م2 Je) سبيل «Jill 1.000 وحدة دولية/م2؛ 2.000 وحدة دولية/م2» 3.000 وحدة دولية/م2» 4.000 وحدة دولية/م2؛ 5.000 وحدة دولية/م2» 6.000 وحدة دولية/م2؛ 0 وحدة دولية/م2» 8.000 وحدة دولية/م2» 9.000 وحدة دولية/م2» 10.000 وحدة دولية/م2 11.000 وحدة دولية/م2» 25 12.000 وحدة دولية/م2» 13.000 وحدة دولية/م2؛ 00 وحدة دولية/م2؛ 15.000 وحدة دولية/م2» 16.000 وحدة دولية/م2؛ 17.000 وحدة
5 دولية/م2؛ 18.000 وحدة دولية/م2» 19.000 وحدة دولية/م2؛ أو 20.000 وحدة دولية/م2). في جانب نوعي AT يتم إعطاء البروتين Jal الموصوف Lad سبق بجرعة تستنفد ا- أسباراجين وصولاً إلى مستويات غير قابلة للكشف عنها باستخدام الطرق والوسائل المعروفة في المجال لفترة تبلغ من حوالي 3 أيام إلى حوالي 10 أيام (على سبيل المثال» 3 4؛ 65 7 8؛ 9. أو 10 أيام) لجرعة فردية.
0 قد يتم إعطاء البروتين المُعدل بجرعة تستنفد ا-أسباراجين وصولاً إلى مستويات غير قابلة للكشف عنها لفترة تبلغ من حوالي 3 أيام إلى حوالي 10 أيام؛ من حوالي 5 أيام إلى 20 cas من حوالي 1 يوم إلى 15 يوم؛ أو من حوالي 2 يوم إلى 30 يوم. قد يتم إعطاء البروتين المُعدل بجرعة تستنفد ا-أسباراجين asparagine وصولاً إلى مستويات غير قابلة للكشف عنها لفترة تبلغ من حوالي 321 4 5 6» 7 8» 9» أو 10 أيام إلى حوالي 5 »6 8 9 10 11 12
5 1413 ¢15 16؛ 17 18 19 أو 20 يوم. قد يتم إعطاء البروتين المُعدل داخل الوريد أو
في العضل. في تجسيدات إضافية؛ قد يتم إعطاء البروتين المُعدل المذكور مرة أو مرتين في الأسبوع؛ أقل من مرة في الأسبوع؛ أو كعلاج أحادي. يتعلق الاختراع الحالي بتركيبة تشتمل على البروتين المُعدل كما هو محدد هنا أو البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية كما يوصف هنا. قد تكون التركيبة عبارة عن تركيبة صيدلية؛
تشتمل اختياريًا بشكل إضافي على (أ) مادة (مواد) حاملة مقبولة صيدليًا أو سواغ (سواغات). يتعلق الاختراع أيضًا بتركيبة صيدلية تشتمل على البروتين المُعدل الموصوف فيما سبق. في جانب نوعي؛ يتم تضمين التركيبة الصيدلية في قنينة في صورة مسحوق مجفف بالتبريد سيُعاد تكوينه باستخدام مذيب؛ مثل إنزيمات ا-أشباراجيناز L-asparaginases الأصلية المتاحة Gl (Gls كان المصدر البكتيري المستخدم لإنتاجه (على سبيل المتال «Elspar® (Kidrolase®
(Erwinase® 0 .8 جانب آخرء تكون التركيبة الصيدلية عبارة عن محلول "جاهز للاستخدام"؛ مثل الإنزيمات المعالجة ببولي إيثيلين جليكول (Oncaspar®) polyethyleneglycol يسمح؛ بشكل إضافي بتعامل ملائم؛ بإعطاء من خلال؛ على سبيل المثال» طرق الإعطاء في العضل؛ داخل الوربد (التسريب و/أو الحقن بجرعة كبيرة)؛ داخل البطينات الدماغية intra—cerebro— ventricular (/107)؛ تحت الجلد .
(Sar 5 إعطاء البروتين المُعدل؛ بما في ذلك التركيبات المشتملة عليه Jo) سبيل المثال؛ تركيبة صيدلية) إلى مريض باستخدام التقنيات القياسية. قد توجد التقنيات والصيغ بشكل عام في Remington’s Pharmaceutical Sciences, 22nd ed., Pharmaceutical Press, )2012( تعتمد صور الجرعة الملائمة؛ جزئيًا؛ على الاستخدام أو طريقة الدخول؛ على سبيل المثال؛ بالفم؛ عبر الأدمة؛ عبر الغشاء المخاطي؛ أو عن طريق الحقن (بغير السبيل المعوي).
0 ينبغي أن تسمح صور الجرعة هذه بوصول العامل العلاجي إلى خلية مستهدفة أو بخلاف ذلك يكون له التأثير العلاجي المطلوب. على سبيل المثال؛ تكون التركيبات الصيدلية المحقونة في تيار الدم على نحو مفضل قابلة للذويان. يمكن صياغة التركيبات الصيدلية By للإختراع كأملاح مقبولة صيدليًا ومعقدات منها. تكون الأملاح المقبولة صيدليًا Ble عن أملاح غير سامة موجودة بالمقادير والتركيزات التي سيتم إعطائها بها. يمكن أن يُيسر تحضير هذه الأملاح الاستخدام
5 الصيدلي عن طريق تغيير الخواص الفيزيائية للمركب بدون منعه من بذل التأثير الفيزيولوجي له.
تتضمن التغييرات المفيدة في الخصائص الفيزيائية خفض نقطة الانصهار لتيسير الإعطاء عبر الغشاء المخاطي وزيادة القابلية للذويان لتيسير إعطاء تركيزات أعلى من العقار. قد يوجد الملح المقبول صيدليًا من بروتين مُعدل كما يوصف هنا في صورة معقد؛ كما سيدرك هؤلاء من العاملين في المجال. تتضمن الأملاح المقبولة صيدليًا أملاح إضافة حمض مثل تلك المحتوية على سلفات sulfate 5 ¢ هيدرو كلوريد hydrochloride ؛ فيومارات fumarate « ماليات maleate « فوسفات phosphate « سلفامات sulfamate « أسيتات acetate » سيترات citrate ¢ لاكتات lactate ¢ طرطرات tartrate ¢ ميثان سلفونات methanesulfonate ؛ إيثان سلفونات 138 ؛ بنزين سلفونات benzenesulfonate « م-تولوين سلفونات -م toluenesulfonate ؛ سيكلو هكسيل سلفامات cyclohexylsulfamate ؛ وكوينات .quinate 10 (Sa الحصول على الأملاح المقبولة صيدليًا من أحماض» متضمنة حمض هيدروكلوريك hydrochloric acid ؛ حمض مالييك maleic acid « حمض سلفريك sulfuric acid « حمض فوسفوربك phosphoric acid « حمض سلفاميك sulfamic acid ¢ حمض أسيتيك acetic acid ؛ حمض سيتريك citric acid ؛ حمض لاكتيك lactic acid ؛ حمض طرطريك tartaric acid 5 ¢ حمض مالونيك acid 01810016 « حمض ميثان سلفونيك methanesulfonic acid « حمض إيثان سلفونيك acid 617806510016 « حمض بنزين سلفونيك benzenesulfonic acid ؛ حمض م-تولوين سلفونيك p—toluenesulfonic acid « حمض سيكلو هكسيل سلفاميك cyclohexylsulfamic acid ¢ حمض فيوماريك fumaric acid ٠ وحمض كوبنيك quinic acid . 0 تتضمن أيضًاً الأملاح المقبولة صيدليًا أملاح إضافة قاعدية Jie تلك المحتوية على بنزاثين 68 ؛ كلورو بروكاين chloroprocaine ؛ كولين choline ؛ داي إيثانول أمين diethanolamine ؛ إيقيلين داي أمين ethylenediamine ¢ ميجلومين meglumine « بروكاين procaine ؛ ألومنيوم aluminum ¢ كالسيوم calcium ¢ ليثيوم lithium ؛ مجنسيوم 0 :؛ بوتاسيوم potassium ؛ صوديوم sodium ¢ أمونيوم ammonium « ألكيل أمين alkylamine ¢ وزنك ZINC ؛ عندما توجد مجموعات وظيفية حمضية؛ Jie حمض
كريوكسيليك أو فينول. على سبيل المثال»؛ انظر Remington’s Pharmaceutical المذكور فيما سبق. يمكن تحضير هذه الأملاح باستخدام القواعد المناظرة الملائمة. يمكن أيضًا تضمين المواد الحاملة و/أو السواغات المقبولة Wana في تركيبة صيدلية وفقًا للاختراع لتيسير إعطاء الأشباراجيناز المحدد. تتضمن الأمثلة على المواد الحاملة الملائمة للاستخدام في 5 تطبيق الاختراع كالسيوم كريونات؛ كالسيوم (laugh مواد سكرية متنوعة مثل لاكتوز lactose ؛
جلوكوز glucose ؛ أو سكروز csucrose أو أنواع من النشاء مشتقات سيليلوز cellulose ؛ جيلاتين» زيوت Als مركبات بولي إيثيلين جليكول؛ ومذيبات متوافقة فيزيولوجيًا. تتضمن الأمثلة على المذيبات المتوافقة فيزيولوجيًا المحاليل المعقمة من الماء للحقن water for injection (WF) محلول ملحي وديكستروز. يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية dg للاختراع بواسطة طرق
0 إعطاء مختلفة؛ تتضمن الإعطاء داخل الوريد؛ داخل الغشاء gill ؛ تحت الجلد؛ في العضل intramuscular ¢ بالفم؛ موضعيًا (عبر (dey) أو عبر الغشاء المخاطي transmucosal 00 مه للإعطاء الجهازي؛ يتم تفضيل الإعطاء بالفم. للإعطاء بالفم؛ على سبيل (Jal) يمكن صياغة المركبات في صور جرعة بالفم تقليدية مثل كبسولات؛ (abl ومستحضرات سائلة Jie أنواع الشراب»؛ أكاسير»؛ ونقاط مركزة. على نحو بديل؛ قد يتم استخدام الحقن (الإعطاء
5 بالسبيل غير المعوي)؛ على سبيل المثال؛ الحقن في العضل؛ داخل الوريد؛ داخل الغشاء البريتوني» وتحت الجلد. للحقن؛ تتم صياغة التركيبات الصيدلية في محاليل سائلة؛ على نحو مفضل في محاليل منظمة أو محاليل متوافقة فيزيولوجيًا؛ مثل محلول ملحي؛ محلول Hank أو محلول Ringer بالإضافة إلى ذلك؛ قد تتم صياغة المركبات في صورة صلبة وإعادة إذابتها أو تعليقها بشكل مباشر قبل الاستخدام. على سبيل JB يمكن إنتاج صور مجففة بالتبريد من
0 البروتين المُعدل. في جانب نوعي؛ يتم إعطاء البروتين المُعدل في العضل. في جانب نوعي مفضل؛ يتم إعطاء البروتين المُعدل داخل intravenously voll . يمكن أيضًا إتمام الإعطاء الجهازي بواسطة وسيلة عبر الغشاء المخاطي أو عبر الأدمة. للإعطاء عبر الغشاء المخاطي أو عبر الأدمة؛ يتم استخدام عوامل اختراق ملائمة للحائل الذي ستنفذ من خلاله في الصياغة. تكون عوامل الاختراق هذه معروفة جيدًا في المجال؛ وتتضمن؛ على سبيل
5 المثال؛ للإعطاء عبر الغشاء المخاطي؛ أملاح الصفراء؛ ومشتقات حمض فُوسيديك fusidic
0 . بالإضافة إلى ذلك؛ قد يتم استخدام منظفات لتيسير النفاذ. قد يكون الإعطاء عبر الغشاء المخاطي؛ على سبيل المثال؛ من خلال أنواع إسبراي عبر الأنف؛ وسائل الاستنشاق (للتوصيل الرئوي)؛ الأقماع عبر المستقيم؛ أو الأقماع عبر المهبل. للإعطاء موضعيًا؛ (So صياغة المركبات في مراهم؛ دهانات؛ أنواع هلام؛ أو كريمات؛ كما يُعرف جيدًا في المجال.
في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع أيضًا باستخدام البروتين المسُعدل كما يوصف هنا في العلاج. قد يكون الاستخدام لعلاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ا-أسباراجين موصوف Lad سبق كطريقة لعلاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد 1-أسباراجين. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بالبروتين المُعدل كما يوصف هنا أو البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية كما يوصف هناء أو التركيبة المشتملة على البروتين المُعدل كما يوصف هناء للاستخدام كدواء / للاستخدام في
0 العلاج / للاستخدام في الطب. في أحد الجوانب؛ يتعلق الاختراع بالبروتين المُعدل كما يوصف هنا أو البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية كما يوصف هناء أو التركيبة المشتملة على البروتين المُعدل كما يوصف cla للاستخدام في علاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ا-أسباراجين في مريض. يتعلق الاختراع الحالي أيضًا باستخدام البروتين المُعدل كما يوصف هنا أو البروتين المُعدل الذي تم
5 تحضيره بواسطة العملية كما يوصف هناء أو التركيبة المشتملة على البروتين المُعدل كما يوصف هنا في تحضير دواء لعلاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ا-أسباراجين في مريض؛ يتعلق الاختراع الحالي Load بطريقة لعلاج مرض قابل للعلاج بواسطة استنفاد ا-أسباراجين في مريض؛ تشتمل الطريقة المذكورة على إعطاء المريض المذكور مقدار فعال من البروتين المُعدل كما يوصف هناء البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية كما يوصف هناء أو تركيبة كما
0 يوصف هنا. على نحو مفضل؛ يكون المرض القابل للعلاج عن طريق استنفاد ا-أسباراجين هو سرطان. في جانب مفضل؛ يتعلق الاختراع بالبروتين المُعدل كما يوصف هنا أو البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية كما يوصف هناء أو التركيبة المشتملة على البروتين المُعدل كما يوصف هنا للاستخدام في علاج السرطان. يتعلق الاختراع الحالي Load باستخدام البروتين المُعدل كما
يوصف هنا أو البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية كما يوصف هناء أو التركيبة
— 2 6 — المشتملة على البروتين المُعدل كما يوصف هنا في تحضير دواء لعلاج السرطان. يتعلق الاختراع الحالي أيضًا بطريقة لعلاج السرطان تشتمل على إعطاء البروتين المُعدل الموصوف هناء البروتين المُعدل الذي تم تحضيره بواسطة العملية الموصوفة هناء أو التركيبة الموصوفة هناء إلى خاضع للعلاج. يُفضل هنا أن يكون الخاضع للعلاج الذي سيتم علاجه هو كائن ثديي؛ تحديدًا إنسان.
قد يكون السرطان عبارة عن سرطان غير صلب؛ على سبيل المثال يكون عبارة عن لوكيميا أو ورم لمفاوي غير هودجكين. على نحو مفضل؛ تكون اللوكيميا المذكورة هي لوكيميا أرومة لمفاوية حادة (ALL) acute lymphoblastic leukemia أو لوكيميا تخاعية acute myeloid sala .(AML) leukemia
قد يُظهر البروتين المُعدل استجابة مولدة للمناعة أقل في المريض مقارنة ب ا- أشْباراجيناز غير المترافق. قد يكون للبروتين المُعدل عمر نصفي أطول في الدورة الدموية في جسم الكائن الحي بعد جرعة فردية مقارنة ب ا-أشباراجيناز غير المترافق. يمكن أن يكون للبروتين المُعدل قيمة AUC أكبر بعد جرعة فردية مقارنة ب ا- أَسْباراجيناز غير المترافق. قد يكون المريض قد عانى من فرط الحساسية مسبقة تجاه ا- أسْباراجيناز من إشرشيا كولاي أو صورة معالجة ببولي إيثيلين جليكول
منه. شرح مختصر للرسومات يتم بشكل إضافي توضيح الاختراع الحالي بالإشارة إلى الأشكال والأمثلة غير الحصرية التالية. تعرض الأشكال: الشكل 1: الكيمياء الخاصة بترافق Crisantaspase مع ببتيدات P/A محمية عند الطرف N يوضح (أ) و(ب) البنى الكيميائية الخاصة بببتيدات P/A (المتوالية رقم: 16 و17؛ متوالية الحمض الأميني المعروضة في المتواليتين رقمي: 5 و15) المحتوي إما على 20 أو 40 من الوحدات البنائية ProfAla (على التوالي)؛ التي تم الحصول عليها بواسطة تخليق ببتيد في الطور
الصلب. من أجل تجنب بلمرة الببتيدات عند التنشيط الكيميائي للطرف ©؛ تمت حماية الطرف N باستخدام وحدة بيروجلوتاميل بنائية N-terminus was protected with pyroglutamyl .(Pga) تم تضمين حمض أمينو هكسانويك (Ahx) Aminohexanoic acid عند الطرف C من الببتيدات للعمل كرابط. (ج) في وجود القاعدة فير الآلفة للنواة NN أيزو بروبيل إيثيل أمين «DIPEA) non-nucleophilic base N,N-diisopropylethylamine قاعدة 9))؛ وباستخدام DMSO كمذيب؛ يتم تنشيط الببتيد P/A المحمي عند الطرف N عند الطرف C منه باستخدام مشتق البنزوترايازول benzotriazol derivative 0- (بنزوترايازول- 1-يل)-لا؛ (N 'لاء 'لا-تترا ميثيل يورونيوم تترا فلورو بورات O—(benzotriazol-1-yl)— (TBTU) N,N,N’ ,N’'-tetramethyluronium tetrafluoroborate يتم استخدام الإستر 0 النشط هيدروكسي بنزوترايازول (HOBt) hydroxybenzotriazol من الببتيد لاحقًا لاشتقاق مجموعات الأمينو مجموعات ع-أمينو الخاصة بوحدات ليزين بنائية أو مجموعة 0-أمينو amino من الطرف لا الخاصة ب Crisantaspase باستخدام الببتيد PJA من خلال تكوين روابط ببتيد أو أيزو ببتيد؛ بينما يتم إطلاق HOBE حر. يتم تنفيذ خطوة الإقران هذه في محلول مائي على سبيل المثال محلول PBS منظم بمحتوى cule عضوي > 9030. قد تتم تنقية البروتين المعدل 5 01158018508586-//0 من ببتيد PJA المتبقي/مادة الإقران الكاشفة عن طريق الديلزة dialysis و/أو الاستشراب على سبيل المثال الاستشراب بتبادل الأيون ion exchange .chromatography Jal 2: الوصول بنسبة إقران Crisantaspase/Pga-P/A(20)~Ahx إلى المستوى الأمثل تم ترافق ناتج sage الاتحاد الجيني Crisantaspase المنتج في إشرشيا كولاي مع ببتيد Pga— P/A#1(20)-Ahx 0 (الشكل 1أ)(المتوالية رقم: 16؛ متوالية الحمض الأميني المعروضة في المتوالية رقم: 5) كما وصف في المثال 1. تم تنويع نسبة الببتيد إلى بروتين فيما بين 3.5 مجم و10 مجم من ببتيد JPA 1 مجم من 0115801850856. تم تحميل الهلام مع 7 ميكرو aha من 0115801850856 من كل تفاعل إقران. بشكل Ala) ¢ تم تطبيق خليط من تفاعلات الإقران بنسب تبلغ من 0.3 إلى 10 مجم من ببتيد لكل مجم من البروتين كعيار قياسي للحجم 5126 (Std) standard 5 يمكن تحديد عدد ببتيدات 0/8 المقترنة عن طريق عد النطاقات في ذلك
السلم بدءًا من Crisantaspase غير المترافق كما هو مميز بعلامة على اليمين. الخانة "كيلو دالتون": .PierceTM Unstained Protein MW Marker (Thermo Fisher Scientific) الشكل 3: تنقية ناتج إقران الببتيد Crisantaspase/Pga-P/A(40)-Ahx عبر استشراب بتبادل الأنيون تم ترافق ناتج sage الاتحاد الجيني Crisantaspase المنتج في إشرشيا كولاي مع الببتيد Pga—
P/A(40)-Ahx (الشكل 1[ب)(المتوالية رقم: 17( متوالية الحمض الأميني المعروضة في المتوالية رقم: 15) كما وصف في المثال 2. بعد Shall في مقابل المحلول المنظم العامل AIX )25 مللي مولار حمض بوربك/011 818 بالرقم الهيدروجيني 9.0 1 مللي مولار (EDTA تم إجراء استشراب بتبادل الأنيون على عمود Source TM 15Q سعة 85 ملليلتر (أ). عن طريق
0 تطبيق تدرج لتركيز (NaCl تمت تصفية البروتين المعدل الخاص بالإنزيم تتابعيًا في ذروة Sala فردية؛ كما تم الكشف بواسطة التتبع بالأشعة فوق البنفسجية عند 280 نانو متر. تمت مراقبة فصل الببتيد غير المقترن المتبقي والمنتجات الثانوية غير البروتينية الأخرى الخاصة بالترافق الكيميائي الخالي من امتصاص الأشعة فوق البنفسجية عند 280 نانو متر بواسطة التتبع بالأشعة فوق البنفسجية عند 225 نانو متر. (ب) SDS-PAGE (Las للبروتين المعدل
Crisantaspase/Pga-P/A(40)-Ahx 5 بعد التنقية بواسطة استشراب بتبادل الأنيون (الخانة 1). تم تطبيق خليط من تفاعلات الإقران بنسب تبلغ من 0.3 إلى 10 مجم من ببتيد لكل مجم من البروتين على الخانة 2 للسماح بتحديد عدد ببتيدات .5/8 المقترنة لكل مونومر 86 . تم تطبيق العلامة PageRulerTM Plus Prestained (Thermo Fisher Scientific) على الخانة SMT
20 الشكل 4: تنقية ناتج إقران الببتيد Crisantaspase/Pga-P/A(20)-Ahx عبر استشراب بتبادل الأنيون تم ترافق ناتج sage الاتحاد الجيني Crisantaspase المنتج في إشرشيا كولاي مع الببتيد Pga— P/A(20)—-Ahx (الشكل 1أ)(المتوالية رقم: 16؛ متوالية الحمض الأميني المعروضة في المتوالية رقم: 5) كما وصف في المثال 3. بعد الديلزة في مقابل المحلول المنظم العامل AIX )25 مللي
مولار حمض بوربك/8011ل8 بالرقم الهيدروجيني 9.0 1 مللي مولار (EDTA تم إجراء استشراب بتبادل الأنيون على عمود SourceTM 15Q سعة 85 ملليلتر (أ). عن طريق تطبيق تدرج لتركيز NaCl تمت تصفية البروتين المعدل الخاص بالإنزيم تتابعيًا في ذروة ala فردية؛ كما تم الكشف بواسطة التتبع بالأشعة فوق البنفسجية عند 280 نانو متر. تم الكشف عن فصل الببتيد غير المقترن المتبقي والمنتجات الثانوية غير البروتينية الأخرى الخاصة بالترافق الكيميائي الخالي من امتصاص الأشعة فوق البنفسجية عند 280 نانو متر بواسطة التتبع بالأشعة فوق البنفسجية عند 225 نانو متر. (ب) تحليل SDS-PAGE للبروتين المعدل Crisantaspase/Pga— «ط/-(0/8)20 بعد التنقية بواسطة استشراب بتبادل الأنيون (الخانة 1). تم تطبيق خليط من تفاعلات الإقران بنسب تبلغ من 0.3 إلى 10 مجم من ببتيد لكل مجم من البروتين على الخانة 2 0 لالسماح بتحديد عدد ببتيدات PIA المقترنة لكل مونومر ©011580185085. تم تطبيق العلامة PageRulerTM Plus Prestained (Thermo Fisher Scientific) على الخانة SM" الشكل 5: عمل نسائل من نواقل التعبير الوراثي لإنتاج Crisantaspase معالج ب PAS في إشرشيا كولاي (أ) خريطة البلازميد الخاصة ب pASKT5-Sapl-Crisantaspase (المتوالية رقم: 4) و(ب) 5 لللمشتق الخاص به pASKT5-PA400-Crisantaspase (المتوالية رقم: 14) بعد إدراج مستمر لمجموعة الجين PA#1c/1D(400) (المتوالية رقم: 10) عبر موقعي تقييد Sapl الموجهين على نحو عكسي. يتم عمل نسائل من الجين الهيكلي للبروتين (الأولي) النشط بيولوجيًا/دوائيًا PA#]1(400)-Crisantaspase (المتوالية رقم: 13) المشتمل على متوالية التوكليوتيد الأقل تكرارًا التي تشفر بولي ببتيد 9/8#1 باستخدام 401 من وحدات الحمض الأميني 0 البنائية والجين الهيكلي ل Crisantaspase إضافة إلى منطقة التشفير متوالية الإشارة Enx البكتيرية (SPENX) في ظل التحكم في النسخ للمعزز/المشغل tet (1610/0). يكون المكون الرئيسي من البلازميد خارج مجموعة التعبير الوراثي المحاطة بواسطة موقعي التقييد Xbal Hindlll متطابقًا مع ذلك الخاص بناقل التعبير الوراثي العام 0851475 ( )1994( Skerra 151:131-5 6606). تم عمل نسائل من بلازميد للتعبير الوراثي عن Crisantaspase
المدمج مع PA#1(200) (المتوالية رقم: 11) بنفس الطريقة باستخدام مجموعة الجين PA#1b(200) (المتوالية رقم: 12). الشكل 6: تحليل SDS-PGE ل Crisantaspase ناتج عودة الاتحاد الجيني المدمج جينيًا مع 0ه أر PA400
() تحليل بروتين الاندماج PA#1(400)-Crisantaspase الناضج (المتوالية رقم 13) بعد الاستخلاص المحيط بالغشاء البلازمي (005)؛ ترسيب أمونيوم سلفات (ASP) واستشراب بتبادل الأنيون (AEX) بواسطة 9610 505-0868. (ب) يُظهر الهلام عينات 5 ميكرو جرام من PA#1(200)-Crisantaspase ناضج منقى (الخانة 1( (المتوالية رقم: 11) أو PA#1(400)-Crisantaspase (الخانة 2) (المتوالية رقم: 13). يتم إيضاح أحجام بروتينات
0 العلامة (M) على اليسار. يبدو بروتين الاندماج ©11580185085©-(0/#1)200 ويروتين الاندماج PA#1(400)-Crisantaspase كروابط متجانسة فردية بحجم جزيئي واضح يبلغ حوالي 105 كيلو دالتون (الخانة 1) أو 200 كيلو دالتون (الخانة 2)؛ على التوالي. بسبب الارتباط الضعيف ب SDS تُظهر بروتينات الاندماج PA بشكل عام أحجامًا أكبر بشكل ملحوظ (Schlapschy (2013) Protein Eng Des Sel. 26:489-501( من؛ على سبيل المثال»
5 الكتلة المحسوية البالغة 51 كيلو دالتون للمونومر PA#1(200)-Crisantaspase أو 67 كيلو دالتون للمونومر 0115811850856 - (400) 1 #خرط. الشكل 7: استشراب بالاستبعاد على أساس الحجم لصور مغايرة من Crisantaspase معالج ب PAS (أ) تراكب لخواص التصفية التتابعية ل Crisantaspase غير المعدل؛ إضافة إلى ل
Crisantaspase 0 المترافق كيميائيًا إما مع الببتيد Pga-P/A(20)-Ahx أو الببتيد Pga— P/A(40)-AhX (الموصوفين في مثالي 3 و2؛ على التوالي) وناتج عودة الاتحاد الجيني 486 المدمج جينيًا إما مع البولي ببتيد PA#1(200) (المتوالية رقم: 7) أو البولي ببتيد PA#1(400) (المتوالية رقم: 9) (الموصوفين في المثال 5). تم تطبيق 150 ميكرو لتر من البروتين المنقى عند تركيز يبلغ 1 مجم/ملليلتر على عمود 10/300 SuperdexTM S200
Jie منظم. تمت مراقبة الامتصاص عند 280 نانو PBS توازن له باستخدام محلول shal تم GL
وتمت معايرة الذروة الخاصة JS شوط استشراب إلى 100 96.
(ب) منحنى المعايرة لمخططات الاستشراب من (أ) باستخدام عمود 5200 Superdex
GL 10/300. تم تخطيط اللوغاريتم الخاص بالوزن الجزيئي الخاص ببروتينات العلامة (ألبومين
5 البيض؛ 43.0 كيلو دالتون؛ ألبومين مصل بقري؛ 66.3 كيلو دالتون؛ كحول ديهيدروجيناز» 150
كيلو دالتون» «Dad 200 كيلو دالتون» صَميم الفيتين» 440 كيلو دالتون) في مقابل أحجام
التصفية التتابعية الخاصة بها (الدوائر السوداء) ومواءمتها بواسطة خط مستقيم. من أحجام
التصفية التتابعية الملاحظة الخاصة ب Crisantaspase التترامري»؛ البروتينات المعدلة للبتيد
1 الخاص به وبروتينات الاندماج لناتج عودة الاتحاد الجيني 9/881 الخاصة به (المريعات 0 السوداء) تم تحديد الأحجام الجزيئية الواضحة الخاصة بها كالتالي. (Crisantaspase 105 كيلو
دالتون (الكتلة الفعلية 140 كيلو دالتون)؛ البروتين المعدل Crisantaspase/Pga—P/A(20)~
Ahx 531 كيلو دالتون (الكتلة الفعلية 228 كيلو دالتون)؛ البروتين المعدل
«Crisantaspase/Pga-P/A(40)-Ahx 820 كيلو دالتون (الكتلة الفعلية 254 كيلو دالتون)؛
08200-00158146 595 كيلو دالتون (الكتلة الفعلية 205 كيلو دالتون)؛ PA400- (Crisantaspase 5 1087 كيلو دالتون (الكتلة الفعلية 269 كيلو دالتون). توضح هذه البيانات
أن كلاً من ببتيدات 0/8 المترافقة كيميائيًا والاندماج الجيني مع البولي ببتيد PAR يمنح حجمًا
هيدروديناميكيًا مكبرًا HES
الشكل 8: تحليل ESI-MS لصور مغايرة من Crisantaspase معالج ب PAS
(أ) تم فك التفاف الطيف 010/2 غير المعالج الذي تم الحصول عليه بواسطة قياس الطيف الكتلي 0 عن طريق التأين بالرش الإلكتروني (ESI-MS) للبروتين المعدل المنقى
Crisantaspase/Pga—-P/A(20)-Ahx الذي تم تحضيره كما وصف في المثال 3 مما أدى
إلى الحصول على الطيف الكتلي (ب). يمكن تعيين أنواع الطيف الملاحظة على نحو لا التباس
فيه ل Crisantaspase المترافق مع من 9 إلى 14 ببتيد (قارن الجدول 3). بالرغم من «ld
تمت ملاحظة الأرى الرئيسية فقط لأنواع البروتين التي بها من 10 إلى 13 ببتيد؛ ما يناظر تحديد سبة إقران الببتيد بواسطة SDS-PAGE (قارن الشكل 4<(« (ج) و(ه) تعرضا أطياف m/z
— 8 6 — غير المعالجة الخاصة ببروتين الاندماج PA200-Crisantaspase ويروتين الاندماج PA4O0O-Crisantaspase الذين تم تحضيرهما في المثال 5. أظهرت الأطياف الكتلية التي تم فك التفافها (د) و(و) كتلاً تبلغ 51164.75 دالتون و67199.17 دالتون؛ على التوالي؛ ما يناظر بدقة تقريبية الكتل المحسوية البالغة 51163.58 دالتون. الشكل 9: متوسط تركيز البلازما SD) +) في مقابل خواص الزمن بعد الحقن بجرعة فردية كبيرة داخل الوريد لفئران ذكور من نوع 60-1 توضح الأشكال نشاط lady فى البلازما لمترافقات PA-crisantaspase بعد الحقن بجرعة فردية كبيرة داخل الوريد لفئران ذكور. الوصف التفصيلي: 0 توضح الأمثلة التالية الاختراع: المثال 1: الوصول بنسبة الإقران إلى المستوى الأمثل لتحضير بيروجلوتامويل -20(0//8)-أمينو هكسانويل -0115301350356 تمت إذابة 4.38 مجم من الببتيد Pga-P/A#1(20)-Ahx (الشكل 1أ؛ ملح (TFA نقاء بنسبة (PSL Peptide Specialty Laboratories, Heidelberg, Germany ¢%98 (المتوالية 5 رقم: 16 متوالية الحمض الأميني المعروضة في المتوالية رقم: 5) في 66.3 ميكرو لتر من .DMSO تم بدء التنشيط الكيميائي للببتيد PIA عبر مجموعة الكريوكسيلات الطرفية الخاصة به عن طريق إضافة 23.7 ميكرو لتر من محلول من 500 Ae مولار 85#م0) TBTU Iris Biotech, Marktredwitz, Germany) ;125700-67-6 في 01/50 و2.7 ميكرو لتر من DIPEA إلى محلول الببتيد وتدويره دواميًا (قارن الشكل 1ج). في هذه الخطوة؛ بلغ تركيز 0 الببتيد 25.8 AL مولار وبلغت النسبة المولارية Lad بين Pga— 5 TBTU (DIPEA 1 :5 #«طظ-(0/8#1)20. بعد 10 دقائق من إجراء حضانة عند 25 درجة Augie تم تخفيف الخليط فى أنابيب Gag Eppendorf للجدول 1.
— 9 6 — محلول من chrysanthemi L 0108 - أسباراجيناز (Crisantaspase) المتوالية ;1:08« ناتج sage الاتحاد الجيني»؛ منتج في إشرشيا كولاي (lot RE-LAP-PS5TD) بتركيز يبلغ 2 مجم/ملليلتر تم تحضير في محلول ملحي منظم بالفوسفات )115 PBS: مللي مولار (NaCl 4 مللي مولار KH2PO4 و16 مللي مولار «(Na2HPO4 الرقم الهيدروجيني 7.4( وتوزبعه بالماصة في كل أنبوب Gag Eppendorf للأحجام المذكورة في الجدول 1. بعد الخلط عن طريق
السحب بالماصة والتدوير الدوامي المتكرر؛ تم السماح بحدوث تفاعل الإقران عند 25 درجة مئوية sad 30 دقيقة. تم إخماد التفاعل عن طريق إضافة جليسين (الرقم الهيدروجيني 8.0 مضبوط باستخدام قاعدة (Tris وصولاً إلى تركيز نهائي يبلغ 250 مللي مولار. الجدول 1: عمليات التخفيف المتسلسل لببتيد P/A المنشط للإقران بالأشباراجيناز
نسبة al المحلول الخام للببتيد [ميكرو DMSO [i [ميكرو [A أشباراجيناز [ميكرو [A 0 مرات 1 صفر 50
5 7.5 5 1 7 66.7 5مرات 21 21 100 5 مرة 1 39 143 يتم عرض تحليل SDS-PAGE للبروتينات المُعدلة في الشكل 2. تناظر النطاقات الفردية البروتينات المعدلة الخاصة بالبروتين المتغيرة بمقدار ببتيد PA مقترن واحد لكلٍ. سمح الاستخدام
0 الإضافي لخليط من تفاعلات الإقران بنسب تبلغ من 0.3 إلى 10 مجم من ببتيد لكل مجم من البروتين بعد النطاقات في سلم متتالي بدءًا من البروتين غير المترافق وبالتالي يمكن تحديد عدد ببتيدات PIA المقترنة على نحو دقيق. تم تحديد كم قيم شدة النطاق على نحو متعلق بقياس
الكثافة باستخدام برنامج Quant 712.2 (TotalLab, Newcastle upon Tyne, UK) وتم حساب متوسط القيم الحسابية الخاصة بعدد الببتيدات المقترنة لكل مونومر Crisantaspase الموزونة لقيم كثافة النطاق الخاصة بها (قارن الجدول 2). أدى 3.5 مجم من ببتيد P/A لكل مجم من Crisantaspase إلى نسبة إقران في النطاق البالغ من 9 إلى 12 من ببتيدات P/A 5 لكل مونومر Crisantaspase (متوسط القيمة: 10.4). أدت زبادة نسبة الكتلة المستخدمة إلى
0 مجم من ببتيد 0/8 لكل مجم من 0115801850856 فقط إلى زيادة طفيفة في نسبة الإقران الناتجة البالغة من 10 إلى 13 من ببتيدات // لكل Crisantaspase (متوسط القيمة 12.0(¢ مما يشير إلى تشبع مجموعات الأمينو القابلة للوصول إليها. تمت تنقية البروتينات المُعدلة بواسطة استشراب بتبادل الأنيون anion exchange
(AEX) chromatography 0 على عمود MonoQ HRS5/S5 (GE Healthcare) باستخدام 25 مللي مولار 8ل١-بورات بالرقم الهيدروجيني 9.0 1 مللي مولار EDTA كمحلول تشغيل منظم وتدرج تركيز NaCl من صفر إلى 1 مولار للتصفية التتابعية للبروتينات. تم تحديد نشاط ا- أشباراجيناز أمينو هيدرولاز الخاص بكل بروتين Crisantaspase معدل عن طريق تفاعل الأمونيا المحررة عبر نشاط ا-أسباراجين الإنزيمي باستخدام Nessler sale الكاشفة. بإيجاز؛ تم
5 خلط 50 ميكرو لتر من محلول الإنزيم مع 20 (Ae مولار من ا-أسباراجين في 100 Ae مولار من محلول منظم بصوديوم بورات بالرقم الهيدروجيني 8.6 محتوي على 9060.015 (وزن/حجم) من ألبومين مصل بقري وإجراء حضانة له لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. تم إيقاف التفاعل عن طريق إضافة 200 ميكرو لتر من مادة Nessler كاشفة (Sigma-Aldrich) تم قباس امتصاص هذا المحلول عند 450 نانو متر. تم حساب النشاط من منحنى معايرة تم الحصول عليه
0 -_من أمونيوم سلفات كمرجع. يتم تلخيص النتائج في الجدول 2. الجدول 2: الأنشطة الإنزيمية الخاصة ب Crisantaspase مترافق مع الببتيد -(8-0/8)20وم بمقادير مختلفة مجم من ببتيد [PA مجم من Crisantaspase مول من "اببتيد/مول من المونومر النشاط النوعي [وحدة/مجم] النشاط النسبي
— 1 7 — ]%[ صفر - 0 +32 100 10.4 202+508 94.1 5 2 22+436 80.7 5 7.5 11.7 21+401 74.3 0 12.0 256 +20 47.4 المثال 2: تحضير بيروجلوتامويل Pyroglutamoyl -ه2/ (40)-أمينو هكسانويل- Crisantaspase تمت إذابة 28 مجم من الببتيد بيروجلوتامويل P/A#1(40)-Ahx— Pyroglutamoyl (المتوالية 0 رقم 17( متوالية الحمض الأميني المعروضة في المتوالية رقم: 15)؛ الشكل 1ب؛ ملح TFA نقاء بنسبة ¢%98 (Almac Group, Craigavon, UK في 1324 ميكرو لتر من DMSO لامائي )¢%99.9 (Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany لتحقيق التنشيط الكيمياتي للببتيد PA عبر مجموعة الكريوكسيلات الطرفية الخاصة به؛ 162 ميكرو لتر من محلول من 0 مللى مولار TBTU (CAS# 125700-67-6; Iris Biotech, Marktredwitz, (Germany 5 في DMSO « بعد الخلط تمت إضافة 14 ميكرو Al من 99.5%( «DIPEA (biotech.
Grade, Sigma-Aldrich تم تدوير الخليط بأكمله دوّاميًا بإيجاز واجراء حضانة له لمدة 20 دقيقة عند 25 درجة مئوية (قارن الشكل 1ج). في هذه الخطوة؛ بلغ تركيز الببتيد 5.41 Al مولار والنسبة المولارية فيما بين Pga-P/A#1(40)—-Ahx 3 TBTU (DIPEA بلغت 10: 0: . 0 تتم خلط 3.5 ملليلتر من محلول 0115801850856 مبرد بالثلج (المتوالية رقم: 2()1 مجم/ملليلتر في (PBS مع محلول الببتيد المنشط (1.5 ملليلتر)؛ مما يؤدي إلى نسبة كتلة فيما بين Pga— P/A#1(40)-Ahx و Crisantaspase تبلغ 5: 1» واجراء حضانة له عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة للسماح بالإقران. باستخدام أنبوب ديلزة غشاء سيليلوز مجدد )50 1/1/0/00 كيلو
دالتون» (Spectrum Laboratories, Los Angeles, CA تمت ديلزة المحلول في مقابل 5 لتر من المحلول المنظم للتشغيل Ale 25) AEX مولار 8ل1-بورات بالرقم الهيدروجيني 9.0 1 مللي مولار (EDTA وتعربضه إلى استشراب بتبادل الأنيون على عمود 16/40 HiScaleTM bas باستخدام راتنج (GE Healthcare) © 15 /50010611. تم توازن العمود باستخدام المحلول المنظم للتشغيل AEX وتمت تصفية بروتين البروتين المعدل تتابعيًا باستخدام ترج تركيز
NaCl مجزاً من صفر إلى 150 مللي مولار في 1 من حجم العمود ومن 150 إلى 1000 مللي مولار في 0.25 من أحجام العمود (الشكل 3). سمح تطبيق ناتج التصفية التتابعية على SDS-PAGE جنبًا إلى جنب مع سلم تم الحصول عليه من خليط من تفاعلات الإقران بنسب تبلغ من 0.3 إلى 10 مجم من الببتيد لكل مجم من البروتين
0 بتحديد نسبة الإقران البالغة 11-9 من ببتيدات PA لكل مونومر Crisantaspase (متوسط القيمة: 10.0) (الشكل 3ب). إن نشاط الإنزيم الخاص بالبروتين المعدل (40)Crisantaspase/PA المحدد باستخدام تجرية Nessler الموصوفة في المثال 1 بلغ 2 من نشاط Crisantaspase غير المعدل الذي تمت تجريته على نحو مساوي. المثال 3: تحضير بيروجلوتامويل-//20(0)-أمينو هكسانويل- 0115301850856
5 تمت إذابة 21 مجم من الببتيد بيروجلوتامويل-*8/-(20) 0/81 (المتوالية رقم 5؛ الشكل 1أ؛ ملح (TFA نقاء بنسبة ¢%98 PSL Peptide Specialty Laboratories, Heidelberg, (Germany في 1376 ميكرو لتر من Sigma-Aldrich, ¢%99.9) ALY DMSO Germany ,18014600060 ). لتحقيق التنشيط الكيميائي للببتيد PA عبر مجموعة الكريوكسيلات الطرفية الخاصة به؛ تمت إضافة 114 ميكرو لتر من محلول من 500 مللي مولار
TBTU (CAS# 125700-67-6; purchased from Iris Biotech, Marktredwitz, 0 Germany) في DMSO و؛ بعد الخلط» 10 ميكرو لتر من 99.5%( biotech. (DIPEA .Grade, Sigma-Aldrich) تم تدوير الخليط بأكمله Gals بإيجاز وإجراء حضانة له لمدة 20 دقيقة عند 25 درجة مئوية (الشكل 1ج). في هذه الخطوة؛ بلغ تركيز الببتيد 7.58 مللي مولار والنسبة المولارية Lad بين Pga—-P/A#1(20)-Ahx 5 TBTU (DIPEA بلغت 5: 5: 1.
تم خلط 3.5 ملليلتر من محلول Crisantaspase مبرد بالثلج (المتوالية رقم: 2()1 مجم/ملليلتر في 085) مع محلول الببتيد المنشط )1.5 ملليلتر)؛ مما أدى إلى نسبة كتلة فيما بين -8وم P/A#1(40)-Ahx و 0115801850856 تبلغ 5: 1 وإجراء حضانة له عند درجة pha الغرفة لمدة 30 دقيقة للسماح بالإقران. باستخدام أنبوب ديلزة غشاء سيليلوز مجدد )50 1/1/0/00 كيلو دالتون» (Spectrum Laboratories, Los Angeles, CA تمت ديلزة المحلول في مقابل 5 لتر من المحلول المنظم للتشغيل Ale 25) AEX مولار 8ل1-بورات بالرقم الهيدروجيني 9.0 1 مللي مولار (EDTA وتعربضه إلى استشراب بتبادل الأنيون على عمود 16/40 HiScaleTM bas باستخدام راتنج (GE Healthcare) © 15 /50010611. تم توازن العمود باستخدام المحلول المنظم للتشغيل AEX وتمت تصفية بروتين البروتين المعدل تتابعيًا باستخدام ترج تركيز NaCl 0 مجزاً من صفر إلى 150 مللي مولار في 1 من حجم العمود ومن 150 إلى 1000 مللي مولار في 0.25 من أحجام العمود (الشكل 4أ). سمح تطبيق ناتج التصفية التتابعية على SDS-PAGE جنبًا إلى جنب مع سلم تم الحصول عليه من خليط من تفاعلات الإقران بنسب تبلغ من 0.3 إلى 10 مجم من الببتيد لكل مجم بروتين» بتحديد نسبة الإقران البالغة 13-10 من ببتيدات PA لكل مونومر Crisantaspase (متوسط 5 القيمة 11.9) (الشكل 4( إن نشاط الإنزيم الخاص بالبروتين المعدل (20)Crisantaspase/PA المحدد باستخدام تجرية Nessler الموصوفة في المثال 1 بلغ 2 من نشاط Crisantaspase غير المعدل الذي تمت تجريته على نحو مساوي. المثال 4: عمل نسائل من بلازميدات التعبير الوراثي الإنتاج المحيط بالغشاء البلازمي ل 6 0 مدمج عند الطرف N مع متواليات PA متنوعة الطول 0 .تم الحصول على شظية DNA تخليقية تُشفر متوالية الحمض الأميني الناضجة من Dickeya L 00 1111/5801 أشباراجيناز (UniProt ID PO6608) من موفر تخليق جين ( Thermo «i$. (Fisher Scientific, Regensburg, Germany شظية الجين هذه (المتوالية رقم: 4) موقع تقييد 409١ متبوعًا بموقع ربط ريبوسوميء متوالية النوكليوتيد التي تُشفر ببتيد الإشارة ENX متبوعة برامزة GCC آلانين؛ متوالية تعرف على Sapl أولى GCTCTTC على الجديلة غير 5 المشفرة؛ مباعد 11-نوكليوتيد» ومتوالية تقييد SP] ثانية في اتجاه مكمل عكسي؛ مع متوالية
التعرف الخاصة به GCTCTTC على الجديلة المشفرة؛ متبوعة برامزة GCC ألانين مرتبطة على نحو مباشر بمتوالية التشفير ل ا- أشباراجيناز ناضج: التي تم اتباعها أخيرًا بموقع تقييد Hindlll تم عمل نسائل من شظية الجين هذه على PASKTS عبر موقعي التقييد المحيطين 7008١ و Hindlll وفقًا للإجراءات القياسية ( Sambrook (2012) Molecular Cloning: A (Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press 5 تم اهتضام البلازميد الناتج (الشكل 15( باستخدام (Sapl الأمر الذي أدى إلى تحرير وليجة DNA )30 زوج 5208( صغيرة محتوية على كل من مواقع التعرف على SAP! ومكون ناقل تم شطره بأطراف ملتصقة 5'- 600/57-0 المتوافقة عند الموضع الذي يقع على نحو مباشر أمام الطرف N الناضج المشفر من ا-أشباراجيناز» Dl على نحو مثالي لإدراج جزيء الحمض النووي منخفض التكرار 0 الذي يُشفر متوالية تكرار حمض أميني غني بالبرولين/الآلانين. بعد Jie شظية الناقل باستخدام طقم استخلاص الهلام Promega Wizard (Promega, Mannheim, Germany) وعملية نزع للفوسفوريل dephosphorylation باستخدام الفوسفاتاز القلوي alkaline phosphatase الحساس (FastAP (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) Gla كلاهما lady لتعليمات المُصتْع؛ تم ريطه مع de gana الجين (200)PA#LD المستأصلة من PXL2- (200)PA#Lb 5 (المتوالية رقم: 8) أو مجموعة الجين 400(0/8#10/15) المستأصلة من (400)pXL2-PA#1c/1b (المتوالية رقم: 10) عبر اهتضام التقييد (Earl تسمح البلازميدات الناتجة (المتوالية رقم: 12 والمتوالية رقم: 14)(الشكل 5ب) بالتعبير الوراثي البكتيري عن بروتينات الاندماج (المتوالية رقم: 11 والمتوالية رقم: 13) المتكونة من متوالية تكرار حمض أميني غني ببرولين/آلانين مدمج مع البروتين النشط بيولوجيًا Crisantaspase (بعد إجراء معالجة في جسم 0 الكائن الحي لببتيد الإشارة 507 عند الإفراز في الغشاء المحيط البلازمي في إشرشيا كولاي). المثال 5: الإنتاج البكتيري والتنقية البكتيرية لبروتينات الاندماج فيما بين إما المتوالية (200)PA#1 أو المتوالية Crisantaspase 5 (400)PA#1 تم إنتاج كل من؛ PA#1(200)-Crisantaspase وبروتين الاندماج PA#1(400)— 6 (لكتلة المحسوية: 51 كيلو دالتون و67 كيلو دالتون؛ على التوالي) عند 25 درجة مثوية في إشرشيا كولاي W310 التي تخفي بلازميد التعبير الوراثي PASKTS5—
PA200-Crisantaspase أو pASKT75-PA400-Crisantaspase (الشكل 25( من JU 4 باستخدام جهاز تخمير سعة 8 لتر له سطح نضد مع وسط معدني من جلوكوز تخليقي مكمل باستخدام 100 مجم/لتر من أمبيسيلين ly ampicillin لإجراء منشور ( Schiweck Proteins 23: 561-565 (1995)). تم الحث على التعبير الوراثي عن جين ناتج عودة الاتحاد الجيني عن طريق إضافة 500 ميكرو جرام/لتر من تتراسيكلين لامائي (-Skerra (1994) loc. cit) anhydrotetracycline بمجرد أن تصل المزرعة إلى 0 = 00550. بعد فترة حث تبلغ 2.5 ساعة؛ تم تجميع الخلايا بواسطة الطرد المركزي وإعادة تعليقها في غضون 10 دقائق في محلول منظم للتجزئة محيط بالغشاء البلازمي مبرد zh )500 مللي مولار سكروز»؛ 1 Ale مولار (EDTA 200 مللي مولار حمض بوريك/8011ل] بالرقم 0 الهيدروجيني 5.0؛ 2 ملليلتر لكل لتر و010550). بعد إضافة 15 le مولار EDTA و250 ميكرو جرام/ملليلتر من ليزوزيم» تم sha) حضانة لمعلق الخلايا لمدة 20 دقيقة على الثلج» shal طرد مركزي له عدة مرات؛ وتم استخلاص المادة الطافية الصافية المحتوية على ناتج sage الاتحاد الجيني بروتين. تمت ديلزة نواتج الاستخلاص المحيطة بالغشاء البلازمي مرتين عند 4 درجة مئوية في مقابل 15 5 لتر من PBS محتوي على 1 مللي مولار EDTA لمدة على الأقل 6 ساعات؛ على التوالي؛ ترشيحها باستخدام غشاء 0.2 ميكرو jie من سيليلوز نيترات GE ( cellulose nitrate (Healthcare وترسيبها عن طريق إضافة أمونيوم سلفات ammonium sulfate (Ph.Eur. grade; Applichem, Darmstadt, Germany) وصولاً إلى تشبع يبلغ 7625 عند 25 درجة مئوية . بعد الطرد المركزي» تمت إزالة المادة الطافية وتمت إعادة تعليق الراسب في 0 المحلول المنظم للتشغيل Me 25) AEX مولار 18١-بورات بالرقم الهيدروجيني 9.0؛ 1 مللي مولار (EDTA وديلزته عند 4 درجة مئوية في مقابل 5 لتر من المحلول المنظم للتشغيل AEX لمدة على الأقل 6 ساعات. تمت تصفية محلول البروتين الذي تمت ديلزته من المادة غير القابلة للذوبان المتبقية بواسطة الطرد المركزي وتعريضه إلى استشراب استخلاصي بتبادل الأنيون باستخدام عمود HiScaleTM سعة 85 ملليلتر (GE Healthcare, Freiburg, Germany) Lee 25 باستخدام راتنج «Source]5Q متصل بنظام جهاز تنقية AktaTM (GE Healthcare,
«Freiburg, Germany) تم إجراء توازن له في المحلول المنظم للتشغيل AEX تمت ديلزة التدفق النافذ الخاص بالعمود المحتوي على البروتين النقي (قارن الشكل 6 و6ب) مرتين في مقابل 5 لتر من PBS تم الحصول على مستحضرات بروتين متجانسة بدون إشارات على التكتل بحصيلة نهائية تبلغ 128 مجم 1 0115301350856-(200) 0/881 و48 مجم ل PA#1(400)-Crisantaspase من جهاز تخمير واحد سعة 8 لترء على التوالي. تم تحديد تركيزات البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانو متر باستخدام معامل انطفاء مسحوب ( Gill (1989) Anal. (Biochem. 182: 319-326 يبلغ 19370 مولار-1 سم-1. تم تحديد أنشطة الإنزيم الخاصة ببروتينات الاندماج باستخدام تجرية Nessler الموصوفة في المثال 1. في هذه الخطوة؛ 0 كان لبروتين الاتدماج PA#1(200)-Crisantaspase نسبة %109 وكان ل -(400) 1 #خرط Crisantaspase نسبة 90118 من نشاط الإنزيم مقارنة ب Crisantaspase غير المعدل الذي تمت تجربته على نحو مساوي. يوضح هذا أن الاندماج عند الطرف Crisantaspase JN مع البولي ببتيدات PA بطول يبلغ على الأقل 401 حمض أميني لا يؤثر على النشاط الإنزيمي. المثال 6: قياس الحجم الهيدروديناميكي لكل من Crisantaspase معالج ب PAS جينيًا وكيميائيً 5 عن طريق ترشيح الهلام التحليلي تم إجراء استشراب بالاستبعاد على أساس الحجم Size exclusion chromatography (SEC) على SuperdexTM S200 increase 10/300 GL (GE Healthcare Europe, Freiburg, Germany) عند معدل تدفق يبلغ 0.5 ملليلتر/دقيقة باستخدام نظام AktaTM Purifier 10 (GE Healthcare) باستخدام PBS (115 مللي مولار (NaCl 4 مللي مولار (KH2PO4 16 مللي مولار ¢Na2HPO4 بالرقم الهيدروجيني 7.4( كمحلول منظم للتشغيل. باستخدام أجهزة تنقية فائقة قابلة للاستخدام مرة واحدة من سيليلوز متجدد )10 MWCO كيلو دالتون؛ (Merck-Millipore, Darmstadt, Germany تم ضبط ناتج sage الاتحاد الجيني Crisantaspase المدمج جينيًا مع البولي ببتيد (200)PA#] أو البولي ببتيد 1 (00)) (الموصوفين في المثال 5) و Crisantaspase المترافق كيميائيًا إما مع الببتيد Pga—P/A(40)-Ahx 5 (الموصوف في المثال 2( أو مع الببتيد Pga—P/A(20)-Ahx
— 7 7 — (الموصوف في المثال 3( على تركيز يبلغ 1 مجم/ملليلتر في 085. تم استخدام عينات 150 ميكرو لتر من إنزيمات dallas ب PAS المركزة ومن Crisantaspase غير معالج ب PAS على نحو فردي على العمود وكانت آثار الاستشراب متراكبة (الشكل 7أ). تمت تصفية كل البروتينات الخمس تتابعيًا في ذرى متجانسة فردية.
ا لمعايرة العمود (الشكل 7ب) تم استخدام 150 ميكرو لتر من خليط ake من البروتينات الكروية التالية (Sigma, Deisenhofen, Germany) في PBS بتركيزات بروتين فيما بين 0.5 مجم/ملليلتر و1.0 مجم/ملليلتر: سيتوكروم © 12.4 كيلو دالتون؛ ألبومين mad) 43.0 كيلو دالتون؛ ألبومين مصل بقري؛ 66.3 كيلو دالتون؛ كحول ديهيدروجيناز» 150 كيلو دالتون؛ —B أميلاز ٠» 0 كيلو دالتون؛ صَميم الفؤيتين» 440 كيلو دالتون؛ ثيروجلوبيولين» 660 كيلو دالتون.
(dais 10 أظهر كل من بروتينات | لاندماج لناتج عودة الاتحاد الجينى حرط ومستحضرات J لإنزيم المترافقة كيميائيًا حجمًا أكبر إلى حدٍ كبير من البروتينات الكروية المناظرة ذات الوزن الجزيئي المماثل. بالحجم المتزايد لشطر (البولي) ببتيد PIA زاد عدم تناسب النسبة المولية للوزن/الحجم الهيدروديناميكي بشكل إضافي. إن زيادة الحجم الواضحة ل PA(200)-Crisantaspase بلغت 1 ضعف بالمقارنة مع Crisantaspase غير المدمج بينما كانت الكتلة الفعلية أكبر فقط
5 بمقدار 1.5 ضعف. إن زيادة الحجم الواضحة ل 0115801850856-(0/2)400 بالمقارنة مع ©0486 غير المدمج بلغت 10.4 ضعف بينما كانت الكتلة الفعلية أكبر فقط بمقدار 9 ضعف. تبين هذه الملاحظة بوضوح Gas هيدروديناميكيًا تمت زيادته يبشكل كبير ممنوح لإنزيم Crisantaspase النشط بيولوجيًا بواسطة مقطع البولى ببتيد la, Pro/Ala لهذا الاختراع. المثال 7: تحليل ESI-MS ل Crisantaspase معالج ب PAS كيميائيًا وجينيًا
0 تتم استخدام 250 ميكرو لتر من البروتين المعدل الكيميائي المنقى من Crisantaspase مع Pga—-P/A(20)-Ahx من المثال 3 ومن بروتيني الاندماج ~PA200 و400/- لناتج sage الاتحاد الجيني من المتال 5 « جميعها عند تركيز يبلغ 1 مجم/ملليلتر 6 على عمود ResourceTM RPC سعة 1 ملليلتر (GE Healthcare, Freiburg, Germany) متصل بنظام جهاز تنفية AktaTM باستخدام 62 حجم/حجم من أسيتو نيتريل « 961 حجم/حجم من
— 8 7 — حمض فورميك كمحلول منظم للتشغيل. تمت تصفية البروتينات تتابعيًا باستخدام تدرج أسيتو نيتريل من 2 % حجم/حجم من أسيتو نيتريل « 1 % حجم/حجم من حمض فورميك إلى 80 96 حجم/حجم من أسيتو نيتريل oe 0 % حجم/إحجم من حمض فورميك على مد ار أحجام عمود 20 . ثم تحليل البروتينات التي تمت تصفيتها تتابعيًا على نحو مباشر عبر قياس الطيف الكتلي ESI على جهاز قياس maXisTM micrOTOF (Bruker Daltonik, Bremen, Germany) باستخدام نمط الأيون الإيجابي. يتم عرض الطيف 71/2 غير المعالج الخاص بالبروتين المعدل الكيميائي Crisantaspase/Pga—P/A(20)-Ahx في الشكل 6أ. يتم توفير الكتل all أظهرها طيف الكتلة الذي تم فك التفافه (الشكل 8ب) في الجدول 3. يطابق توزيع الكتل نسب الإقران المحددة بواسطة SDS-PAGE (Las الموصوف فى المثال 2.
0 يتم عرض الطيف 00/2 غير المعالج الخاص ببروتين الاندماج 011581018580856 -(200) 1[ #خرط لناتج عودة الاتحاد الجيني (المتوالية رقم: 11) في الشكل 8ج. أظهر طيف الكتلة الذي تم فك التفافه كتلة تبلغ 51164.75 دالتون (الشكل 8د)؛ تتطابق بشكل أساسي مع الكتلة المحسوية الخاصة بهذا البروتين (51163.58 دالتون). يتم عرض الطيف m/z غير المعالج الخاص ببروتين الاتدماج PA#1(400)-Crisantaspase لناتج sage الاتحاد الجيني (المتوالية رقم:
5 13) في الشكل 8ه. أظهر الطيف الذي تم فك التفافه (الشكل 8و) كتلة تبلغ 67199.17 دالتون؛ تتطابق بشكل أساسي مع الكتلة المحسوية الخاصة بهذا البروتين )67201.99 دالتون). يبين هذا بوضوح أنه يمكن إنتاج إنزيم Crisantaspase السليم المدمج جينيًا إما مع 58200 أو 0 في إشرشيا كولاي في صورة عالية التجانس. الجدول 3: مقارنة الكتل المحسوية والمقاسة التي تم الكشف عنها في تحضير البروتين المعدل
0 الكيميائي Crisantaspase/Pga-P/A(20)-Ahx نسبة الإقران الكتلة المحسوية الكتلة المقاسة 9 أضعاف 51506.1 51503.9 0 أضعاف 53334.1 53333.2 11 ضعف 55162.1 55161.7
— 9 7 — 2 ضعف 56990.1 56990.1 3ضعف 58818.1 58819.4 4 ضعف 11 60645.48 المتال 8: نشاط الأشباراجيناز تم تحديد إنزيم نشاط ا- أشباراجيناز معالج ب PAS عن طريق تحفيز تحويل ا-أسباراجين إلى
حمض ا-أسبارتيك. يُحرر هذا التفاعل مولاً واحدًا من الأمونيا لكل مول من ا- أسباراجين المحؤل. يتم الكشف عن الأمونيا المطلقة باستخدام Nessler sale كاشفة. في وجود مادة Nessler الكاشفة ستُكوّن الأمونيا معقدًا أصفر اللون قابلاً للخلط بالماء يمكن تحديد كمه بواسطة قياس الامتصاص عند 450 نانو متر ) Mashburn et al. (1963) Biochem.
Biophys.
(Res.
Commun. 12, 50 10 يتم تحديد وحدة واحدة من إنزيم نشاط ا- أشباراجيناز (الوحدة الدولية أو لاا) باعتبارها مقدار الإنزيم الذي يُحفز تحويل ميكرو مول واحد من ا-أسباراجين في الدقيقة. يتم تحديد النشاط =o! للعينات (وحدة دولية/مجم) عن طريق قسمة قيمة نشاط |- أشباراجيناز المعبر عنه بوحدة دولية/ملليلتر على تركيز البروتين المعبر عنه بمجم/ملليلتر. تم قياس AS مونومر البروتين مع المتوالية المعالجة ب PAS
5 يكون قياس نشاط ا- أسْباراجيناز معتمدًا على تجرية نقطة نهاية حيث يتم تخفيف العينة وصولاً إلى تسلسل من تركيزات الإنزيم النهائية التي تم إجراء حضانة لها بعد ذلك عند 37 درجة مئوية في ظل تشبع تركيز ا-أسباراجين لمدة 15 دقيقة. يتم إيقاف التفاعل عن طريق إضافة sale Nessler كاشفة Jig تقدير مقدار الأمونيا المنتجة بواسطة التفاعل استقرائيًا من منحنى معايرة متكون من مقادير معروفة من أمونيوم سلفات مستخدم كعيار قياسي. يتم بعد ذلك إنشاء مخطط
0 تتركيز الإنزيم في مقابل الأمونيا لكل عينة وقسمة ميل المنحنى على زمن التفاعل للحصول على النشاط التوعى بالوحدة الدولية/مجم . يتم توضيح النشاط =i! كوحدة دولية/مجم ودتم إيضاحه Lj لأقرب عدد صحيح. يتم عرض تتائج الاختبار الأولية في الجدول التالي لكل من البروتينات المُعدلة أو بروتينات الاندماج.
نظام التعبير الوراتي عن Crisantaspase نوع البروتين المعدل | لوحة Nessler 1 (وحدة دولية/مجم) لوحة Nessler 2 (وحدة دولية/مجم) لوحة Nessler 3 (وحدة دولية/مجم) Nessler (المتوسط) إشرشيا كولاي PA200-Crisantaspase 626 666 556 616 إشرشيا كولاي Crisantaspase-P/A(20)n 694 732 602 676 إشرشيا كولاي PA400-Crisantaspase 790 748 699 746 إشرشيا كولاي Crisantaspase— P/A(40)n 567 528 490 528 المثتال 9: الحركيات الدوائية
0 تتم Sua خاصية الحركية الدوائية crisantaspase J ناتج عودة الاتحاد الجيني المعبر عنه في إشرشيا كولاي باعتباره بروتين اندماج معالج ب PAS (PA-200) أو المترافق كيميائيًا مع ببتيدات PA (PA-20) بعد إعطاء جرعة حقن فردية كبيرة داخل الوريد إلى فثران 00-1. تمثل فئران 60-1 نموذجًا لفأر معافى.
5 تلقت كل الحيوانات جرعة حقن فردية كبيرة داخل الوريد (IV) single intravenous عبر عرق الذيل الجانبي (10 ملليلتر/كجم) اعتمادًا على وزن الجسم المأخوذ قبل إعطاء الجرعة. تم حساب الجرعات الفردية اعتمادًا على أوزان الجسم الفردية الأحدث لتوفير الجرعة الملائمة. كان أول يوم في إعطاء الجرعات معتمدًا على أوزان الجسم في يوم الدراسة صفر. تمت مراقبة كل الحيوانات للوفاة؛ حالات الشذوذ» وعلامات الألم والضيق مرتين lags مرة في الصباح ومرة بعد الظهيرة.
0 تم إعطاء أشباراجيناز معالج ب PAS كجرعة فردية داخل الوريد من 25 وحدة دولية/كجم من وزن الجسم إلى الفئران. تم إعطاء مجموعات الفئران جرعة عند 25 وحدة دولية/كجم من وزن الجسم
وتم تجميع عينات البلازما عند أزمنة مجدولة لمدة تصل إلى 10 أيام )240 ساعة) بعد إعطاء الجرعة. تم قياس نشاط الأسباراجيناز في بلازما الفأر باستخدام تجربة بيولوجية كيميائية ملائمة كما وصف في الأمثلة السابقة. تم تخطيط متوسط نشاط أشباراجيناز في البلازما (4 (n= في مقابل بيانات الزمن (الأشكال 1) وتم إجراء تحليلات متعلقة بالحركية الدوائية.
تم أخذ عينات دم قبل إعطاء الجرعة وعند تقريبًا 6» 24 (اليوم 1)؛ 48 asl) 2(¢ 51 (اليوم 2(« 54 (ليوم 2(« 60 psd) 168 «(4 asl) 96 «(2 asl) 7(« و240 (اليوم 10) ساعة بعد الجرعة. تم استخدام إجراء تجميع دم من قص في الذيل (قطع طرف الذيل). تم اقتطاع تقريبًا من 1 إلى 2 مم من الطرف البعيد من الذيل لعملية تجميع الدم الأولى؛ تم أخذ كل عمليات تجميع الدم المتتابعة من نفس الموقع عن طريق إزالة قشرة الجرح وتيسير تدفق pall عن طريق نقر الذيل.
0 تم تجميع تقريبًا 100 ميكرو لتر من الدم لكل نقطة زمنية في أنابيب أخذ عينات من نوع K3EDTA (Minivette) مبردة. تم نقل الدم إلى أنابيب ملائمة للطرد المركزي. لعزل البلازماء تم إجراء طرد مركزي لكل العينات في غضون تقريبًا 20 دقيقة من أخذ العينات عند 3.000 dae الجاذبية في مجموعة طرد مركزي مبردة للحفاظ على تقريبًا 4 درجة مئوية لمدة تقريبًا 10 دقائق. بعد الطرد المركزي؛ تم استخلاص أقصى مقدار للبلازما (استهداف 30 ميكرو لتر) ووضعه في
قنينات بلاستيكية. تم تخزين القنينات البلاستيكية عند درجة حرارة من -65 درجة مئوية إلى -85 درجة مئوية حتى الاختبار. تم قياس نشاط الأشباراجيناز باعتباره تركيز الأسُباراجيناز في عينات البلازما كما وصف من قبل et al. (2009) Blood, 114, 2033) 35ال2). تم فقط توضيح المتغيرات المعتمدة على تمييز كاف للطور الختامي للتركيز في مقابل خاصية الزمن (72؛ CL و55/) إذا كانت R2 (مريع
0 معامل الارتباط للانحدار الخطي المستخدم لتقدير ثابت معدل الإزالة الختامية؛ 02) أكبر من 8.. تم جلب بيانات الحركية الدوائية إلى Phoenix WinNonlin v6.4 (Certara /Pharsight) للتحليل. تم تحليل نشاط الأشباراجيناز في البلازما في مقابل بيانات الزمن باستخدام الطرق غير المقسمة إلى أجزاء مع أخذ عينات متفرقة في نموذج إعطاء جرعة حقن كبيرة داخل الوريد. تم ضبط قيم النشاط الأدنى من حد تحديد الكم للتجرية (10 وحدة/لتر)
5 على صفر في العملية الحسابية الخاصة بمتوسطات المجموعة. تم استخدام مستويات الجرعة
— 8 2 —
الاسمية وأزمنة تجميع العينات للعمليات الحسابية. بلغت قيمة Yat المقدرة 50.2 ساعة ل حرم crisantaspase 20 و 17.9 ساعة ل .PA-200 crisantaspase يشير الاختراع الحالي إلى متواليات النوكليوتيد والحمض الأميني التالية: تكون بعض المتواليات المتوفرة هنا متاحة فى قاعدة البيانات NCBI ويمكن استعادتها من
swww.ncbi.nim.nih .gov/sites/entrez?db=gene 5 تتعلق هذه المتواليات أيضًا بالمتواليات المذيلة والمعدلة. يوفر الاختراع الحالي Lad تقنيات وطرق حيث يتم استخدام المتواليات المتجانسة؛ والصور المغايرة من المتواليات الموجزة المتوفرة Lia على نحو مفضل»؛ تكون هذه "الصور المغايرة" هي صور مغايرة جينية. المتوالية رقم 1:
0 متوالية الحمض الأمينى من chrysanthemi L 0101828 -أشباراجيناز. ADKLPNIVILATGGTIAGSAATGTQTTGYKAGALGVDTLINAVPEVKKLANV KGEQFSNMASENMTGDVVLKLSQRVNELLARDDVDGVVITHGTDTVEES
AYFLHLTVKSDKPVVFVAAMRPATAISADGPMNLLEAVRVAGDKQSRGRG
VMVVLNDRIGSARYITKTNASTLDTFKANEEGYLGVIIGNRIYYQNRIDKLHT TRSVFDVRGLTSLPKVDILYGYQDDPEYLYDAAIQHGVKGIVYAGMGAGS 5
VSVRGIAGMRKAMEKGVVVIRSTRTGNGIVPPDEELPGLVSDSLNPAHARI
LLMLALTRTSDPKVIQEYFHTY
المتوالية رقم 2:
متوالية النوكليوتيد all تشفر chrysanthemi L 0108 -أسْباراجيناز GCAGATAAACTGCCGAATATTGTTATTCTGGCAACCGGTGGCACCATT 0 GCAGGTAGCGCAGCAACCGGCACCCAAACCACAGGTTATAAAGCCGG
TGCACTGGGTGTTGATACCCTGATTAATGCAGTTCCGGAAGTTAAAAAA CTGGCCAATGTGAAAGGTGAACAGTTTAGCAATATGGCCAGCGAAAAT
ATGACCGGTGATGTTGTTCTGAAACTGAGCCAGCGTGTTAATGAACTG
CTGGCACGTGATGATGTTGATGGTGTGGTTATTACCCATGGCACCGAT
ACCGTTGAAGAAAGCGCCTATTTTCTGCATCTGACCGTGAAAAGCGAT
AAACCGGTTGTTTTTGTTGCAGCAATGCGTCCGGCAACCGCAATTAGC
GCAGATGGTCCGATGAATCTGCTGGAAGCAGTTCGTGTTGCCGGTGAT 5
AAACAGAGCCGTGGTCGTGGTGTTATGGTTGTTCTGAATGATCGTATT
GGTAGCGCACGCTATATTACCAAAACCAATGCAAGCACCCTGGATACC
TTTAAAGCCAATGAAGAAGGTTATCTGGGCGTTATTATTGGCAATCGCA
TTTATTATCAGAATCGCATTGATAAACTGCATACCACCCGTAGCGTTTIT
GATGTTCGTGGTCTGACCAGCCTGCCGAAAGTTGATATTCTGTATGGC 0
TATCAGGATGATCCGGAATATCTGTATGATGCAGCCATTCAGCATGGT
GTTAAAGGTATTGTGTATGCAGGTATGGGTGCAGGTAGCGTTAGCGTT
CGTGGTATTGCAGGTATGCGTAAAGCAATGGAAAAAGGCGTTGTTGTT
ATTCGTAGCACCCGTACCGGTAATGGTATTGTTCCGCCGGATGAAGAA
CTGCCGGGTCTGGTTAGCGATAGCCTGAATCCGGCACATGCACGTATT 15
CTGCTGATGCTGGCACTGACCCGTACCAGCGATCCGAAAGTGATTCAG
GAATATTTTCATACCTAT
:3 المتوالية رقم 8لا©»0101-أشباراجيناز chrysanthemi L متوالية الحمض الأميني من amy 0 الإشارة: 28-1؛ المزال أثناء عمل التسائقل: 39-29؛ 366-40 أشباراجيناز MFKFKKNFLVGLSAALMSISLFSATASAARRAIVGRSSAADKLPNIVILATG GTIAGSAATGTQTTGYKAGALGVDTLINAVPEVKKLANVKGEQFSNMASE NMTGDVVLKLSQRVNELLARDDVDGVVITHGTDTVEESAYFLHLTVKSDK PVVFVAAMRPATAISADGPMNLLEAVRVAGDKQSRGRGVMVVLNDRIGS
ARYITKTNASTLDTFKANEEGYLGVIIGNRIYYQNRIDKLHTTRSVFDVRGLT
SLPKVDILYGYQDDPEYLYDAAIQHGVKGIVYAGMGAGSVSVRGIAGMRK
AMEKGVVVIRSTRTGNGIVPPDEELPGLVSDSLNPAHARILLMLALTRTSD
PKVIQEYFHTY
4 المتوالية رقم 5 متوالية النوكليوتيد (التخليقية) التي chrysanthemi L ash 8لا01016-أباراجيناز الأأشباراجيناز الناضج المشفر من القاعدة 1140-160 (الأحرف بالخط العريض). ومن ثم؛ تتراوح متوالية نوكليوتيد تقوم بتشفير ا-أشباراجيناز من النوكليوتيدات عند الموضع من 160 إلى 10 .
TCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGTTCAA 0
ATTCAAAAAAAACTTCCTGGTGGGTCTGAGCGCAGCACTGATGAGCAT
TAGCCTGTTTAGCGCAACCGCAAGCGCAGCCAGAAGAGCGATTGTAG
GACGCTCTTCTGCCGCAGATAAACTGCCGAATATTGTTATTCTGGCAAC
CGGTGGCACCATTGCAGGTAGCGCAGCAACCGGCACCCAGACCACCG
GTTATAAAGCCGGTGCACTGGGTGTTGATACCCTGATTAATGCAGTTC 15
CGGAAGTTAAAAAACTGGCCAATGTTAAAGGTGAGCAGTTTAGCAATAT
GGCCAGCGAAAATATGACCGGTGATGTTGTTCTGAAACTGAGCCAGCG
TGTTAATGAACTGCTGGCACGTGATGATGTTGATGGTGTTGTTATTACC
CATGGCACCGATACCGTTGAAGAAAGCGCATATTTTCTGCATCTGACC
GTGAAAAGCGATAAACCGGTTGTTTTTGTTGCAGCAATGCGTCCGGCA 20
ACCGCCATTAGCGCAGATGGTCCGATGAATCTGCTGGAAGCAGTTCGT
GTTGCCGGTGATAAACAGAGCCGTGGTCGTGGTGTTATGGTTGTGCTG
AATGATCGTATTGGTAGCGCACGTTATATTACCAAAACCAATGCAAGCA
CCCTGGATACCTTTAAAGCAAATGAAGAAGGTTATCTGGGCGTCATTAT
-5 8 — TGGCAATCGTATCTATTATCAGAACCGCATCGACAAACTGCATACCACC CGTAGCGTTTTTGATGTTCGTGGTCTGACCAGCCTGCCGAAAGTGGAT ATTCTGTATGGTTATCAGGATGATCCGGAATATCTGTATGATGCAGCAA TTCAGCATGGTGTGAAAGGTATTGTTTATGCAGGTATGGGTGCGGGTA GCGTTAGCGTTCGTGGTATTGCCGGTATGCGTAAAGCAATGGAAAAAG 5 GTGTTGTTGTGATTCGTAGCACCCGTACCGGTAATGGTATTGTTCCGC CTGATGAAGAACTGCCTGGTCTGGTTAGCGATAGCCTGAATCCGGCAC ATGCACGTATTCTGCTGATGCTGGCACTGACCCGTACCAGCGATCCGA AAGTTATTCAAGAATATTTTCATACCTATTAAGCTT 10 المتوالية رقم 5: متوالية الحمض الأميني من الببتيد (20)PA AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA المتوالية رقم 6: متوالية النوكليوتيد التي تشفر الببتيد (ZO)PA GCCGCGCCAGCGGCCCCGGCCCCTGCCGCGCCCGCTGCTCCCGCCC 15 CTGCTGCCCCAGCC المتوالية رقم 7: متوالية الحمض الأميني من البولي ببتيد (200)PA AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA 0 AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
— 8 6 —
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
A
: 8 المتوالية رقم متوالية النوكليوتيد التي تشفر البولي ببتيد (200)PA
GCCGCGCCAGCGGCCCCGGCCCCTGCCGCGCCCGCTGCTCCCGCCC 5
CTGCTGCCCCAGCCGCCGCTCCTGCGGCACCTGCGCCCGCCGCGCC
GGCAGCGCCGGCACCGGCAGCTCCGGCGGCCGCGCCTGCAGCTCCT
GCACCGGCGGCTCCAGCAGCCCCGGCGCCGGCCGCACCTGCGGCG
GCGCCCGCGGCGCCTGCACCCGCAGCGCCTGCGGCACCGGCCCCAG
CAGCCCCTGCCGCCGCACCGGCTGCGCCTGCCCCAGCGGCCCCCGC 0
TGCCCCGGCCCCGGCGGCTCCAGCCGCAGCGCCTGCCGCCCCAGCG
CCCGCAGCACCGGCGGCACCAGCTCCGGCGGCGCCGGCGGCGGCT
CCGGCAGCTCCGGCCCCTGCTGCGCCGGCTGCGCCGGCTCCGGCGG
CCCCTGCGGCGGCTCCGGCCGCACCTGCACCTGCCGCGCCGGCTGC
TCCGGCCCCGGCTGCCCCAGCAGCGGCACCAGCAGCGCCTGCTCCT 5
GCGGCGCCTGCAGCTCCGGCGCCGGCAGCCCCGGCCGCCGCACCC
GCGGCTCCAGCCCCCGCCGCTCCAGCAGCCCCCGCGCCAGCTGCAC
CTGCTGCC
المتوالية رقم 9: 0 - متوالية الحمض الأميني من البولي ببتيد (400)PA AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
A 5 :10 المتوالية رقم (400)PA متوالية النوكليوتيد التي تشفر البولي ببتيد
GCCGCGCCAGCGGCCCCGGCCCCTGCCGLCGLCCLCGLCTGLTCCCGCCC
CTGCTGCCCCAGCCGCCGCTCCTGCGGCACCTGCGCCCGLCCGCGCC
GGCAGCGCCGGCACCGGCAGCTCCGGCGGLCCGCGCCTGCAGCTCCT 0
GCACCGGCGGCTCCAGCAGCCCCGGCGCCGGCCGCACCTGCGGLCG
GCGCCCGCGGCGCCTGCACCCGCAGCGCCTGCGGCACCGGCCCCAG
CAGCCCCTGCCGCCGCACCGGCTGCGCCTGCCCCAGCGGCCCCCGC
TGCCCCGGCCCCGGCGGCTCCAGCCGCAGCGCCTGCCGCCCCAGCG
CCCGCAGCACCGGCGGCACCAGCTCCGGLCGGLCGCCGGLGGLCGGCT 15
CCGGCAGCTCCGGCCCCTGCTGCGCCGGCTGCGCCGGCTCCGGCGG
CCCCTGCGGCGGCTCCGGCCGCACCTGCACCTGCCGLCGLCCGGLCTGC
TCCGGCCCCGGCTGCCCCAGCAGCGGCACCAGCAGCGCCTGCTCCT
GCGGCGCCTGCAGCTCCGGCGCCGGCAGCCCCGGCCGCCGCACCC
GCGGCTCCAGCCCCCGCCGCTCCAGCAGCCCCCGCGCCAGCTGCAC 20
CTGCTGCCGCTCCTGCTGCCCCTGCTCCCGCTGCCCCCGCCGCCCCC
GCCCCAGCTGCCCCCGCTGCCGCACCTGCTGCCCCAGCTCCCGCTGC
CCCAGCCGCGCCGGCCCCCGCAGCTCCAGCCGCGGCACCAGCTGCC
CCAGCTCCAGCGGCGCCTGCTGCCCCGGCCCCCGCGGCACCGGCTG
CCGCGCCCGCAGCTCCAGCGCCTGCTGCACCGGCTGCTCCGGCACC 5
CGCCGCGCCAGCAGCTGCCCCTGCGGCACCAGCTCCTGCTGCCCCC
GCGGCACCTGCACCCGCTGCCCCGGCGGCAGCTCCCGCCGCGCCAG
CCCCTGCAGCTCCTGCTGCACCTGCTCCTGCCGCCCCTGCTGCTGCC
CCTGCTGCTCCAGCCCCTGCAGCACCGGCCGCTCCAGCTCCTGCCGC
TCCTGCCGCTGCGCCCGCTGCTCCAGCCCCAGCTGCGCCAGCAGCTC 5
CTGCACCTGCTGCCCCTGCCGCCGCCCCTGCGGCTCCAGCACCTGCT
GCACCGGCCGCCCCGGCGCCCGCTGCCCCCGCAGCAGCCCCAGCCG
CACCCGCTCCAGCAGCTCCCGCAGCCCCAGCACCCGCAGCACCAGCC
GCC
:11 المتوالية رقم 0 متوالية الحمض الأميني من أشباراجيناز -200(0/8)-بروتين اندماج
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA 5
AADKLPNIVILATGGTIAGSAATGTQTTGYKAGALGVDTLINAVPEVKKLAN
VKGEQFSNMASENMTGDVVLKLSQRVNELLARDDVDGVVITHGTDTVEE
SAYFLHLTVKSDKPVVFVAAMRPATAISADGPMNLLEAVRVAGDKQSRGR
GVMVVLNDRIGSARYITKTNASTLDTFKANEEGYLGVIIGNRIYYQNRIDKL
HTTRSVFDVRGLTSLPKVDILYGYQDDPEYLYDAAIQHGVKGIVYAGMGA 0
GSVSVRGIAGMRKAMEKGVVVIRSTRTGNGIVPPDEELPGLVSDSLNPAH
ARILLMLALTRTSDPKVIQEYFHTY
:12 المتوالية رقم (Xbal/Hindlll) متوالية النوكليوتيد التي تشفر أشباراجيناز -200(0/8)-بروتين اندماج
بروتين الاندماج الناضج (المتوالية رقم 11) المشفر من القاعدة 1710-127 (الأحرف بالخط العريض). ومن a يمكن أن تتراوح متوالية نوكليوتيد تقوم بتشفير بروتين اندماج من النوكليوتيدات عند الموضع من 127 إلى 1710 من المتوالية رقم: 12. بناءً على ذلك؛ يمكن تعريف المصطلح (pig معدل مشتمل على أو متكون من متوالية حمض أميني Bide بواسطة حمض نووي محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 12" كما يُستخدم هنا على نحو أضيق Bl باعتباره 'بروتين معدل مشتمل على أو متكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المواضع من 127 إلى 1710 من المتوالية رقم: 12". TCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGTTCAA ATTCAAAAAAAACTTCCTGGTGGGTCTGAGCGCAGCACTGATGAGCAT 10 TAGCCTGTTTAGCGCAACCGCAAGCGCAGCCGCGCCAGCGGCLCCCG GCCCCTGCCGCGCCCGCTGCTCCCGCCCCTGCTGCCCCAGCCGCCG CTCCTGCGGCACCTGCGCCCGCCGCGCCGGCAGCGCCGGCACCGGC AGCTCCGGCGGCCGCGCCTGCAGCTCCTGCACCGGCGGCTCCAGCA GCCCCGGCGCCGGCCGCACCTGLCGGLCGGLCGCCCGCGGCGCCTGCA 5 CCCGCAGCGCCTGCGGCACCGGCCCCAGCAGCCCCTGCCGCCGCAC CGGCTGCGCCTGCCCCAGCGGCCCCCGLCTGLCCCLCGGLCCCGGLGGe TCCAGCCGCAGCGCCTGCCGCCCCAGCGCCCGCAGCACCGGCGGCA CCAGCTCCGGCGGCGLCCGGCGGCGGCTCCGGCAGCTCCGGCCCCTG CTGCGCCGGCTGCGCCGGCTCCGGCGGCCCCTGLCGGLCGGLCTCCGGC 20 CGCACCTGCACCTGCCGCGCCGGCTGCTCCGGCCCCGGCTGCCCCA GCAGCGGCACCAGCAGCGCCTGCTCCTGCGGCGCCTGCAGCTCCGG CGCCGGCAGCCCCGGCCGCCGCACCCGCGGCTCCAGLCCCCCGLeCae TCCAGCAGCCCCCGCGCCAGCTGCACCTGCTGCCGCAGATAAACTGC CGAATATTGTTATTCTGGCAACCGGTGGCACCATTGCAGGTAGCGCAG 25
CAACCGGCACCCAGACCACCGGTTATAAAGCCGGTGCACTGGGTGTT
GATACCCTGATTAATGCAGTTCCGGAAGTTAAAAAACTGGCCAATGTTA
AAGGTGAGCAGTTTAGCAATATGGCCAGCGAAAATATGACCGGTGATG
TTGTTCTGAAACTGAGCCAGCGTGTTAATGAACTGCTGGCACGTGATG
ATGTTGATGGTGTTGTTATTACCCATGGCACCGATACCGTTGAAGAAAG 5
CGCATATTTTCTGCATCTGACCGTGAAAAGCGATAAACCGGTTGTTTTT
GTTGCAGCAATGCGTCCGGCAACCGCCATTAGCGCAGATGGTCCGAT
GAATCTGCTGGAAGCAGTTCGTGTTGCCGGTGATAAACAGAGCCGTG
GTCGTGGTGTTATGGTTGTGCTGAATGATCGTATTGGTAGCGCACGTT
ATATTACCAAAACCAATGCAAGCACCCTGGATACCTTTAAAGCAAATGA 0
AGAAGGTTATCTGGGCGTCATTATTGGCAATCGTATCTATTATCAGAAC
CGCATCGACAAACTGCATACCACCCGTAGCGTTTTTGATGTTCGTGGT
CTGACCAGCCTGCCGAAAGTGGATATTCTGTATGGTTATCAGGATGAT
CCGGAATATCTGTATGATGCAGCAATTCAGCATGGTGTGAAAGGTATT
GTTTATGCAGGTATGGGTGCGGGTAGCGTTAGCGTTCGTGGTATTGCC 5
GGTATGCGTAAAGCAATGGAAAAAGGTGTTGTTGTGATTCGTAGCACC
CGTACCGGTAATGGTATTGTTCCGCCTGATGAAGAACTGCCTGGTCTG
GTTAGCGATAGCCTGAATCCGGCACATGCACGTATTCTGCTGATGCTG
GCACTGACCCGTACCAGCGATCCGAAAGTTATTCAAGAATATTTTCATA
CCTATTAAGCTT 0 113 المتوالية رقم متوالية الحمض الأميني من أشباراجيناز -400(08)-بروتين اندماج
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA 5
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA
AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAA
PAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA 5
AADKLPNIVILATGGTIAGSAATGTQTTGYKAGALGVDTLINAVPEVKKLAN
VKGEQFSNMASENMTGDVVLKLSQRVNELLARDDVDGVVITHGTDTVEE
SAYFLHLTVKSDKPVVFVAAMRPATAISADGPMNLLEAVRVAGDKQSRGR
GVMVVLNDRIGSARYITKTNASTLDTFKANEEGYLGVIIGNRIYYQNRIDKL
HTTRSVFDVRGLTSLPKVDILYGYQDDPEYLYDAAIQHGVKGIVYAGMGA 0
GSVSVRGIAGMRKAMEKGVVVIRSTRTGNGIVPPDEELPGLVSDSLNPAH
ARILLMLALTRTSDPKVIQEYFHTY
:14 المتوالية رقم متوالية النوكليوتيد التي تشفر أَسْباراجيناز -400(0/8)-بروتين اندماج (Xbal/Hindlll) 5 بروتين الاندماج الناضج (المتوالية رقم 13) المشفر من القاعدة 2184-127 (الأحرف بالخط العريض). ومن a يمكن أن تتراوح متوالية نوكليوتيد تقوم بتشفير بروتين اندماج من النوكليوتيدات عند الموضع من 127 إلى 2184 من المتوالية رقم: 14. بناءً على ذلك؛ يمكن تعريف المصطلح 'بروتين معدل مشتمل على أو متكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي 0 محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المتوالية رقم: 14 كما يُستخدم هنا على نحو أضيق Bl باعتباره 'بروتين معدل مشتمل على أو متكون من متوالية حمض أميني مشفرة بواسطة حمض نووي محتوية على متوالية نوكليوتيد كما يُعرض في المواضع من 127 إلى 2184 من المتوالية رقم: 14".
TCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGTTCAA
ATTCAAAAAAAACTTCCTGGTGGGTCTGAGCGCAGCACTGATGAGCAT
TAGCCTGTTTAGCGCAACCGCAAGCGCAGCCGCGCCAGCGGCCCCG
GCCCCTGCCGCGCCCGCTGCTCCCGCCCCTGCTGCCCCAGCCGLCCG
CTCCTGCGGCACCTGCGCCCGCCGCGCCGGCAGCGCCGGCACCGGL 5
AGCTCCGGCGGCCGCGCCTGCAGCTCCTGCACCGGCGGCTCCAGCA
GCCCCGGCGCCGGCCGCACCTGCGGLCGGLCGLCLCCGCGGCGCCTGCA
CCCGCAGCGCCTGCGGCACCGGCCCCAGCAGCCCCTGCCGCCGCAC
CGGCTGCGCCTGCCCCAGCGGCCCCCGCTGLCLCLCCGGCCCCGGLCGEC
TCCAGCCGCAGCGCCTGCCGCCCCAGCGCCCGCAGCACCGGCGGCA 0
CCAGCTCCGGCGGCGCCGGLCGGCGGCTCCGGCAGCTCCGGCCCCTG
CTGCGCCGGCTGCGCCGGCTCCGGCGGCLCCCTGCGGCGGLCTCCGGL
CGCACCTGCACCTGCCGCGCCGGCTGCTCCGGCCCCGGCTGCCCCA
GCAGCGGCACCAGCAGCGCCTGCTCCTGCGGCGCCTGCAGCTCCGG
CGCCGGCAGCCCCGGCCGCCGCACCCGCGGCTCCAGLCLCLCLCCGLCGL 5
TCCAGCAGCCCCCGCGCCAGCTGCACCTGCTGCCGCTCCTGCTGCCC
CTGCTCCCGCTGCCCCCGCCGCCCCCGCCCCAGCTGCCCCCGLCTGL
CGCACCTGCTGCCCCAGCTCCCGCTGCCCCAGCCGCGLCCGGLCCCC
GCAGCTCCAGCCGCGGCACCAGCTGCCCCAGCTCCAGCGGCGCCTG
CTGCCCCGGCCCCCGCGGCACCGGCTGCCGCGCCCGCAGCTCCAGC 0
GCCTGCTGCACCGGCTGCTCCGGCACCCGCCGCGCCAGCAGCTGCC
CCTGCGGCACCAGCTCCTGCTGCCCCCGCGGCACCTGCACCCGCTGC
CCCGGCGGCAGCTCCCGCCGCGCCAGCCCCTGCAGCTCCTGCTGCA
CCTGCTCCTGCCGCCCCTGCTGCTGCCCCTGCTGCTCCAGCCCCTGC
AGCACCGGCCGCTCCAGCTCCTGCCGCTCCTGCCGCTGCGCCCGCTG 5
CTCCAGCCCCAGCTGCGCCAGCAGCTCCTGCACCTGCTGCCCCTGCC
GCCGCCCCTGCGGCTCCAGCACCTGCTGCACCGGCCGCCCCGGCGC
CCGCTGCCCCCGCAGCAGCCCCAGCCGCACCCGCTCCAGCAGCTCC
CGCAGCCCCAGCACCCGCAGCACCAGCCGCCGCAGATAAACTGCCGA
ATATTGTTATTCTGGCAACCGGTGGCACCATTGCAGGTAGCGCAGCAA
CCGGCACCCAGACCACCGGTTATAAAGCCGGTGCACTGGGTGTTGAT 5
ACCCTGATTAATGCAGTTCCGGAAGTTAAAAAACTGGCCAATGTTAAAG
GTGAGCAGTTTAGCAATATGGCCAGCGAAAATATGACCGGTGATGTTG
TTCTGAAACTGAGCCAGCGTGTTAATGAACTGCTGGCACGTGATGATG
TTGATGGTGTTGTTATTACCCATGGCACCGATACCGTTGAAGAAAGCG
CATATTTTCTGCATCTGACCGTGAAAAGCGATAAACCGGTTGTTTTTGT 0
TGCAGCAATGCGTCCGGCAACCGCCATTAGCGCAGATGGTCCGATGA
ATCTGCTGGAAGCAGTTCGTGTTGCCGGTGATAAACAGAGCCGTGGTC
GTGGTGTTATGGTTGTGCTGAATGATCGTATTGGTAGCGCACGTTATAT
TACCAAAACCAATGCAAGCACCCTGGATACCTTTAAAGCAAATGAAGAA
GGTTATCTGGGCGTCATTATTGGCAATCGTATCTATTATCAGAACCGCA 55
TCGACAAACTGCATACCACCCGTAGCGTTTTTGATGTTCGTGGTCTGA
CCAGCCTGCCGAAAGTGGATATTCTGTATGGTTATCAGGATGATCCGG
AATATCTGTATGATGCAGCAATTCAGCATGGTGTGAAAGGTATTGTTTA
TGCAGGTATGGGTGCGGGTAGCGTTAGCGTTCGTGGTATTGCCGGTA
TGCGTAAAGCAATGGAAAAAGGTGTTGTTGTGATTCGTAGCACCCGTA 20
CCGGTAATGGTATTGTTCCGCCTGATGAAGAACTGCCTGGTCTGGTTA
GCGATAGCCTGAATCCGGCACATGCACGTATTCTGCTGATGCTGGCAC
TGACCCGTACCAGCGATCCGAAAGTTATTCAAGAATATTTTCATACCTA
TTAAGCTT
(40)PA المتوالية رقم 15: متوالية الحمض الأميني من الببتيد 5
— 4 9 — AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA المتوالية رقم 16: الببتيد (20)PA المعدل Pga AAPAAPAPAAPAAPAPAAPA-Ahx-COOH المتوالية رقم 17: الببتيد (40)PA المعدل Pga AAPAAPAPAAPAAPAPAAPAAAPAAPAPAAPAAPAPAAPA-AhXx- 5 COOH يتم تضمين كل المراجع المذكورة هنا يبشكل تام كمرجع . ودتوافر وصف كامل للاختراع J لأن ¢ سيدرك أحد ذوي المهارة في المجال أنه قد يتم تطبيق الاختراع في إطار نطاق واسع ومكافئ من cig hl المتغيرات وما شابه؛ دون التأثير على فحوى ونطاق الاختراع أو أي تجسيد منه.
قائمة المراجع Carpino & ElI-Faham, 1995 Carpino, L.A. & EI-Faham, A. (1995) Tetramethylfluoroformamidinium hexafluorophosphate: a rapid—acting peptide coupling reagent for solution and solid phase peptide synthesis.
J.
Am.
Chem.
Soc. 117(19), 5401- 5 5402. El Faham et al., 2011 El-Faham, A. & Albericio, F. (2011) Peptide coupling reagents, more than .a letter soup.
Chem Rev. 111(11), 6557-6602 0
— 9 5 —
Hermanson, 2013
Hermanson, G.T. (2013) Bioconjugate techniques. Third edition.
Academic press
Isidro—-Llobet, 2009 5
Isidro—Llobet, A., Alvarez, M. & Albericio, F. (2009) Amino acid-protecting .groups. Chem. Rev. 109(6), 2455-2504
Klose et al., 1999
Klose, J., Bienert, M., Mollenkopf, C., Wehle, D., Zhang, C.-W., Carpino, 10
L.A. & Henklein P. (1999) 2-Propanephosphonic acid anhydride (T3P)- mediated segment coupling and head-to-tail cyclization of sterically hindered peptides. Chem. Commun. 18, 1847-1848
Montalbetti et al., 2005 15
Montalbetti, C.A. & Falque, V. (2005) Amide bond formation and peptide .coupling. Tetrahedron, 61(46), 10827-10852
Valeur et al., 2007
Valeur, E. & Bradley, M. (2009) Amide bond formation: beyond the myth 0 .of coupling reagents. Chem. Soc. Rev., 38(2), 606-631
Valeur et al., 2009
Valeur, E. & Bradley, M. (2009) Amide bond formation: beyond the myth .of coupling reagents. Chem. Soc. Rev., 38(2), 606-631
Wuts, 2012
Wuts, P.G. & Greene, T.W. (2012) Greene's Protective Groups in .Organic Synthesis. Fourth Edition. John Wiley & Sons قائمة المتواليات
XL لبروتين GmbH >110<
Jazz Pharmaceuticals Ireland Limited ا-أشْباراجيناز معدل <120>
AA2000 PCT 53 >130<
EP 17 17 7237.9 >150< 21-06-2017 <151>
US 62/523,061 <150> 21-06-2017 <151>
US 15/671,086 <150> 5 07-08-2017 <151> 17 <160>
BiSSAP 1.3 <170> 10 1 <210> 327 <211>
PRT <212>
Dickeya chrysanthemi <213> 15 <220> زانيجارابشأ-١ <223>
1 <400>
Ala Asp Lys Leu Pro Asn lle Val lle Leu Ala Thr Gly Gly Thr lle 10 5 1
Ala Gly Ser Ala Ala Thr Gly Thr Gin Thr Thr Gly Tyr Lys Ala Gly 25 20 5
Ala Leu Gly Val Asp Thr Leu lle Asn Ala Val Pro Glu Val Lys Lys 40 35
Leu Ala Asn Val Lys Gly Glu Gin Phe Ser Asn Met Ala Ser Glu Asn 60 55 50
Met Thr Gly Asp Val Val Leu Lys Leu Ser Gln Arg Val Asn Glu Leu 0 80 75 70 65
Leu Ala Arg Asp Asp Val Asp Gly Val Val lle Thr His Gly Thr Asp 95 90 85
Thr Val Glu Glu Ser Ala Tyr Phe Leu His Leu Thr Val Lys Ser Asp 110 105 100 15
Lys Pro Val Val Phe Val Ala Ala Met Arg Pro Ala Thr Ala lle Ser 125 120 115
Ala Asp Gly Pro Met Asn Leu Leu Glu Ala Val Arg Val Ala Gly Asp 140 135 130
Lys GIn Ser Arg Gly Arg Gly Val Met Val Val Leu Asn Asp Arg lle 160 155 150 145
Gly Ser Ala Arg Tyr lle Thr Lys Thr Asn Ala Ser Thr Leu Asp Thr 175 170 165
Phe Lys Ala Asn Glu Glu Gly Tyr Leu Gly Val lle lle Gly Asn Arg 5 190 185 180 lle Tyr Tyr Gln Asn Arg lle Asp Lys Leu His Thr Thr Arg Ser Val 205 200 195
Phe Asp Val Arg Gly Leu Thr Ser Leu Pro Lys Val Asp lle Leu Tyr 220 215 210 10
Gly Tyr Gin Asp Asp Pro Glu Tyr Leu Tyr Asp Ala Ala lle Gin His 240 235 230 225
Gly Val Lys Gly lle Val Tyr Ala Gly Met Gly Ala Gly Ser Val Ser 255 250 245
Val Arg Gly lle Ala Gly Met Arg Lys Ala Met Glu Lys Gly Val Val 15 270 265 260
Val lle Arg Ser Thr Arg Thr Gly Asn Gly lle Val Pro Pro Asp Glu 285 280 275
Glu Leu Pro Gly Leu Val Ser Asp Ser Leu Asn Pro Ala His Ala Arg
300 295 290 lle Leu Leu Met Leu Ala Leu Thr Arg Thr Ser Asp Pro Lys Val lle 320 315 310 305
Gln Glu Tyr Phe His Thr Tyr 325 5 2 <210> 981 <211>
DNA <212>
Dickeya chrysanthemi <213> 10 <220> زانيجارابشأ-١ <223> 2 <400> 5 gcagataaac tgccgaatat tgttattctg gcaaccggtg gcaccattgc aggtagcgca 60 gcaaccggca cccaaaccac aggttataaa gccggtgcac tgggtgttga taccctgatt 120 aatgcagttc cggaagttaa aaaactggcc aatgtgaaag gtgaacagtt tagcaatatg 180 gccagcgaaa atatgaccgg tgatgttgtt ctgaaactga gccagcegtgt taatgaactg 5 240 ctggcacgtg atgatgttga tggtgtggtt attacccatg gcaccgatac cgttgaagaa 300 agcgcctatt ttctgcatct gaccgtgaaa agcgataaac cggttgtttt tgttgcagca 360 0 atgcgtccgg caaccgcaat tagcgcagat ggtccgatga atctgctgga agcagttcgt 420 gttgccggtg ataaacagag ccgtggtcgt ggtgttatgg tigtictgaa tgatcgtatt 480 5 ggtagcgcac gctatattac caaaaccaat gcaagcaccc tggatacctt taaagccaat 540 gaagaaggtt atctgggcgt tattattggc aatcgcattt attatcagaa tcgcattgat 600 0 aaactgcata ccacccgtag cgtttttgat gttcgtggtc tgaccagcct gccgaaagit 60 gatattctgt atggctatca ggatgatccg gaatatcigt atgatgcagc cattcagcat 720 ggtgttaaag 9181191918 tgcaggtatg ggtgcaggta gcgttagegt tcgtggtatt 780 gcaggtatgc gtaaagcaat ggaaaaaggc gttgttgtta ttcgtagcac ccgtaccggt 840 aatggtattg ttccgccgga tgaagaactg ccgggtetgg ttagcgatag cctgaatccg 900 gcacatgcac gtattctgct gatgctggca ctgacccgta ccagcgatcc gaaagtgatt 960 caggaatatt ttcataccta t 981 3 <210>
366 >211<
PRT <212>
Dickeya chrysanthemi <213> <220> 5 >223< ا-أشباراجيناز مع ببتيد إشارة 3 <400>
Met Phe Lys Phe Lys Lys Asn Phe Leu Val Gly Leu Ser Ala Ala Leu 10 5 1 10
Met Ser lle Ser Leu Phe Ser Ala Thr Ala Ser Ala Ala Arg Arg Ala 25 20 lle Val Gly Arg Ser Ser Ala Ala Asp Lys Leu Pro Asn lle Val lle 40 35
Leu Ala Thr Gly Gly Thr lle Ala Gly Ser Ala Ala Thr Gly Thr GIn 15 60 55 50
Thr Thr Gly Tyr Lys Ala Gly Ala Leu Gly Val Asp Thr Leu lle Asn 80 75 70 65
Ala Val Pro Glu Val Lys Lys Leu Ala Asn Val Lys Gly Glu 60 Phe
95 90 85
Ser Asn Met Ala Ser Glu Asn Met Thr Gly Asp Val Val Leu Lys Leu 110 105 100
Ser GIn Arg Val Asn Glu Leu Leu Ala Arg Asp Asp Val Asp Gly Val 125 120 115 5
Val lle Thr His Gly Thr Asp Thr Val Glu Glu Ser Ala Tyr Phe Leu 140 135 130
His Leu Thr Val Lys Ser Asp Lys Pro Val Val Phe Val Ala Ala Met 160 155 150 145
Arg Pro Ala Thr Ala lle Ser Ala Asp Gly Pro Met Asn Leu Leu Glu 0 175 170 165
Ala Val Arg Val Ala Gly Asp Lys Gln Ser Arg Gly Arg Gly Val Met 190 185 180
Val Val Leu Asn Asp Arg lle Gly Ser Ala Arg Tyr lle Thr Lys Thr 205 200 195 15
Asn Ala Ser Thr Leu Asp Thr Phe Lys Ala Asn Glu Glu Gly Tyr Leu 220 215 210
Gly Val lle lle Gly Asn Arg lle Tyr Tyr Gln Asn Arg lle Asp Lys 240 235 230 225
Leu His Thr Thr Arg Ser Val Phe Asp Val Arg Gly Leu Thr Ser Leu 255 250 245
Pro Lys Val Asp lle Leu Tyr Gly Tyr Gin Asp Asp Pro Glu Tyr Leu 270 265 260
Tyr Asp Ala Ala lle Gin His Gly Val Lys Gly lle Val Tyr Ala Gly 5 285 280 275
Met Gly Ala Gly Ser Val Ser Val Arg Gly lle Ala Gly Met Arg Lys 300 295 290
Ala Met Glu Lys Gly Val Val Val lle Arg Ser Thr Arg Thr Gly Asn 320 315 310 305 10
Gly lle Val Pro Pro Asp Glu Glu Leu Pro Gly Leu Val Ser Asp Ser 335 330 325
Leu Asn Pro Ala His Ala Arg lle Leu Leu Met Leu Ala Leu Thr Arg 350 345 340
Thr Ser Asp Pro Lys Val lle Gln Glu Tyr Phe His Thr Tyr 5 365 360 355 4 <210> 1147 <211>
DNA <212>
Dickeya chrysanthemi <213> <220> زانيجارابخأ-١ <223> 5 4 >400< tctagaaata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgttcaa attcaaaaaa 60 aacttcctgg tgggtctgag cgcagcactg atgagcatta gcctgtttag cgcaaccgca 0 120 agcgcagcca gaagagcgat tgtaggacgc tcttctgccg cagataaact gccgaatatt 180 gttattctgg caaccggtgg caccattgca ggtagcgcag caaccggcac ccagaccacc 240 ggttataaag ccggtgcact gggtgttgat accctgatta atgcagttcc ggaagttaaa 300 aaactggcca atgttaaagg tgagcagttt agcaatatgg ccagcgaaaa tatgaccggt
360 gatgttgtic tgaaactgag ccagcgtgtt aatgaactgc tggcacgtga tgatgttgat 40 ggtgttgtta ttacccatgg caccgatacc gttgaagaaa gcgcatattt tctgcatctg 0 accgtgaaaa gcgataaacc ggttgttttt gttgcagcaa tgcgtccgge aaccgccatt 540 agcgcagatg gtccgatgaa tctgctggaa gcagttcgtg ttgccggtga taaacagage 0
600 cgtggtcgtg gtgttatggt tgtgctgaat gatcgtattg gtagcgcacg ttatattacc 7 660 aaaaccaatg caagcaccct ggataccttt aaagcaaatg aagaaggtta tctgggegtc 5
720 attattggca atcgtatcta ttatcagaac cgcatcgaca aactgcatac cacccgtagc ~~ 780 gtttttgatg ttcgtggtct gaccagcctg ccgaaagtgg atattctgta tggttatcag 840 20 gatgatccgg aatatctgta tgatgcagca attcagcatg gtgtgaaagg tattgtttat 900 gcaggtatgg gtgcgggtag cgttagcegtt cgtggtattg ccggtatgcg taaagcaatg 960 gaaaaaggtg ttgttgtgat tcgtagcacc cgtaccggta atggtattgt tccgectgat 10 gaagaactgc ctggtctggt tagcgatagc ctgaatccgg cacatgcacg tattctgctg 1080 atgctggcac tgacccgtac cagcgatccg aaagttattc aagaatattt tcatacctat 110 taagctt 1147 5 <210> <211~>
PRT <212> متوالية اصطناعية <213>
<220> (20)PA ببتيد <223> 5<400> 5
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 15 10 5 1
Ala Ala Pro Ala 20 6 <210> 60 <211>
DNA <212> متوالية اصطناعية <213> <220> (20)PA ببتيد <223> 6 <400>
0060000039 cggccecggce ccectgecgeg 00-10-16 cecgeccctge tgeccecagee 60 7<210> 5 201 <211>
PRT <212> متوالية اصطناعية <213> <220> 0 (200)PA بولي ببتيد <223> 7 <400>
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 10 5 1 15
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 25 20
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 40 35
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 60 55 50
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 80 75 70 65
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 5 95 90 85
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 110 105 100
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 125 120 115 10
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 140 135 130
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 160 155 150 145
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 5 175 170 165
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 190 185 180
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala
200 195 8 <210> 603 <211>
DNA <212> 5 >213< متوالية اصطناعية >220< >223< بولي ببتيد (200)PA 8 <400> gccgegecag cggccecggce ccectgecgeg ceegetgete cecgeccctge tgeccecagee 60 gccgctectg cggcacctge gececegeecgeg ccggecagege cggcaccgge agetceggeg 5 120 gccgcegcectg cagcetectge accggeggcet ccagcagece cggegecgge cgcacctgeg 180 gcggcegecceg cggegectge accegcageg cetgeggecac cggecccage ageccctgee 240 00000830099 ctgegectge cccageggece ceegetgece cggececgge ggcetccagec 300 5 gcagcgcctg ccgeecccage geccgeagea ccggeggeac cagetccgge ggegecgged 360 gcggctcegg cagctececgge cectgetgeg ceggetgege cggceteecgge ggeceectgeg 0 420 gcggctecegg ccgeacctge acctgecgeg ceggcetgete 00-6600902 tgecccagcea 480 gcggcaccag cagcgcctgce tcetgeggeg cetgecagcetec cggegecgge agcececggcec 540 gccgcacccg cggctccage cccegecgct ccagcagece ccgegecagce tgcacctget 600 20 gcc 603 9<210> 401 <211> 5 PRT <212> >213< متوالية اصطناعية >220< (400)PA any بولي <223> 0 9 <400>
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 10 5 1 Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 15 30 25 20
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 40 35
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala
60 55 50
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 80 75 70 65
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 95 90 85 5
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 110 105 100
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 125 120 115
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 0 140 135 130
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 160 155 150 145
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 175 170 165 15
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 190 185 180
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 205 200 195
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 220 215 210
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 240 235 230 225
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 5 255 250 245
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 270 265 260
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 285 280 275 10
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 300 295 290
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 320 315 310 305
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 5 335 330 325
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 350 345 340
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro
365 360 355
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 380 375 370
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 400 395 390 385 5
Ala <210> 1203 <211> 10
DNA <212> متوالية اصطناعية <213> <220> (400)PA بولي ببتيد <223> 15 10 <400> gccgegecag cggeccecggce cectgecgeg ceegetgete cegeccctge 066608026 60 gccgctectg 010300106 000020002090 ccggecagege cggcaccgge agcetcecggeg 120 gccgcegcectg cagceteectge accggeggcet ccagcagecce cggegecgge cgcacetgeg م
180 gcggcegecceg cggegectge accegecageg cetgeggecac cggecccage ageccctgece 240
00000830099 ctgegectge cccageggece ceegetgece cggececgge ggcetccagec 300 gcagcgcctg ccgeecccage geccgeagea ccggeggeac cagetccgge ggegecgged
360 15 gcggctcegg cagcteecgge cectgetgeg ceggetgege cggeteccgge ggeccectgeg 420 gcggctecegg ccgeacctge acctgecgeg ceggcetgcete 00-6600902 tgeccccageca 0 480 gcggcaccag cagcgcctgce tcetgeggeg cetgecagcetec cggegecgge agcececggcec 540 00000830009 cggctccage ceccegeegcet ccagcagece ccgegecage tgcacctget 5
600 gccgctectg ctgcecctge tcecegetgee 600000-66 cecgecccage 0666060 660 gccgcacctg ctgccccagce teccecgetgee ccageecgege cggececccge agcetccagcee 720 gcggcaccag ctgccccagce tccageggceg ccetgetgece cggeecccecge ggcaccggcet
780 15 gccgegeccg cagctccage gectgetgeca ccggcetgcetc cggcaccecge cgecgcecagcea 840 gctgcceectg cggcaccagce tcectgetgec cececgeggceac ctgcaccege tgececeeggeg 0 900
003800100609 0900020039026 ccetgeagcet cetgetgecac ctgetectge cgeccctget 960 gctgccecctg ctgctccage cectgcagea ccggecgcete cageteectge cgetectgee 5 1020 gctgcgeecg ctgctccage cccagetgeg ccagecagcete ctgcacctge tgeecctgece 1080 gccgceccctg cggctccage acctgcetgeca ccggecgecce cggegececgce tgecceecgea 1140 gcagccccag ccgcacccgce tccagcagct cccgcagecc cagcaccege agcaccagece 1200 15 gcc 1203 11 <210> 20
528 <211>
PRT <212> متوالية اصطناعية <213> <220> 5 )200(0/8- بروتين اندماج أشباراجيناز >223< 11 <400>
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 10 5 1 10
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 25 20
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 40 35
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 5 60 55 50
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 80 75 70 65
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro
95 90 85
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 110 105 100
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 125 120 115 5
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 140 135 130
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 160 155 150 145
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 0 175 170 165
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 190 185 180
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Asp Lys Leu Pro Asn lle 205 200 195 15
Val lle Leu Ala Thr Gly Gly Thr lle Ala Gly Ser Ala Ala Thr Gly 220 215 210
Thr Gln Thr Thr Gly Tyr Lys Ala Gly Ala Leu Gly Val Asp Thr Leu 240 235 230 225 lle Asn Ala Val Pro Glu Val Lys Lys Leu Ala Asn Val Lys Gly Glu 255 250 245
Gln Phe Ser Asn Met Ala Ser Glu Asn Met Thr Gly Asp Val Val Leu 270 265 260
Lys Leu Ser Gin Arg Val Asn Glu Leu Leu Ala Arg Asp Asp Val Asp 5 285 280 275
Gly Val Val lle Thr His Gly Thr Asp Thr Val Glu Glu Ser Ala Tyr 300 295 290
Phe Leu His Leu Thr Val Lys Ser Asp Lys Pro Val Val Phe Val Ala 320 315 310 305 10
Ala Met Arg Pro Ala Thr Ala lle Ser Ala Asp Gly Pro Met Asn Leu 335 330 325
Leu Glu Ala Val Arg Val Ala Gly Asp Lys GIn Ser Arg Gly Arg Gly 350 345 340
Val Met Val Val Leu Asn Asp Arg lle Gly Ser Ala Arg Tyr lle Thr 5 365 360 355
Lys Thr Asn Ala Ser Thr Leu Asp Thr Phe Lys Ala Asn Glu Glu Gly 380 375 370
Tyr Leu Gly Val lle lle Gly Asn Arg lle Tyr Tyr Gln Asn Arg lle
400 395 390 385
Asp Lys Leu His Thr Thr Arg Ser Val Phe Asp Val Arg Gly Leu Thr 415 410 405
Ser Leu Pro Lys Val Asp lle Leu Tyr Gly Tyr Gin Asp Asp Pro Glu 430 425 420 5
Tyr Leu Tyr Asp Ala Ala lle GIn His Gly Val Lys Gly lle Val Tyr 445 440 435
Ala Gly Met Gly Ala Gly Ser Val Ser Val Arg Gly lle Ala Gly Met 460 455 450
Arg Lys Ala Met Glu Lys Gly Val Val Val lle Arg Ser Thr Arg Thr 0 480 475 470 465
Gly Asn Gly lle Val Pro Pro Asp Glu Glu Leu Pro Gly Leu Val Ser 495 490 485
Asp Ser Leu Asn Pro Ala His Ala Arg lle Leu Leu Met Leu Ala Leu 510 505 500 15
Thr Arg Thr Ser Asp Pro Lys Val lle Gln Glu Tyr Phe His Thr Tyr 525 520 515
12 <210> 1717 <211>
DNA <212> متوالية اصطناعية <213> 5 <220> (200)PA- بروتين اندماج أشباراجيناز <223> 12 <400> 10 tctagaaata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgttcaa attcaaaaaa 60 aacttcctgg tgggtctgag cgcagcactg atgagcatta gcctgtttag cgcaaccgca 120 agcgcagcecg 0008300092 cccggceccct gecgegecceg ctgetcecege cectgetgece 180 ccagccgcecg cteectgegge acctgecgece gecgegecgg cagegecgge accggeagcet 240 0
009099009 0001190392 tectgcaccg geggetccag cageccegge 006006-48 300 cctgeggegg cgececgeggce gectgcacce gecagegectg cggcaccgge cccagcagec 5
360 010600000 caccggcetge gectgecceca geggecceceg ctgeceecgge cccggeggcet 420 ccagccgcag cgcctgeecge cccagegece gcagcaccgg cggceaccagce tccggeggeg 480 ccggeggegg ctcecggeage tceggceccect getgegeegg ctgegecgge tcecggeggcec
540 15 cctgeggegg ctecggecge acctgcacct gecgegeecgg ctgetcegge cececggetgece 600 ccagcagcgg caccagcagc gcctgetcct geggegectg cagectccgge gecggecagee 0 660
0090009009 8000900992 tccageccce geecgetccag cagecceecge 08008 720 cctgctgecg cagataaact gccgaatatt gttattctgg caaccggtgg caccattgca 780 5 ggtagcgcag caaccggcac ccagaccacc ggttataaag ccggtgcact gggtgttgat 840 accctgatta atgcagttcc ggaagttaaa aaactggcca atgttaaagg tgagcagttt 900 10 agcaatatgg ccagcgaaaa tatgaccggt gatgttgttc tgaaactgag ccagcgtgtt 960 aatgaactgc tggcacgtga tgatgttgat ggtgttgtta ttacccatgg caccgatacc 1020 15 gttgaagaaa gcgcatattt tctgcatctg accgtgaaaa gcgataaacc ggttgttttt 1080 gttgcagcaa tgcgtccggc aaccgccatt agcgcagatg gtccgatgaa tctgctggaa
1140 20 gcagttcgtg ttgccggtga 133808390392 cgtggtegtg gtgttatggt tgtgctgaat ١00 gatcgtattg gtagcgcacg ttatattacc aaaaccaatg caagcaccct ggataccttt 1260 aaagcaaatg aagaaggtta tctgggcgtc attattggca atcgtatcta ttatcagaac 130 cgcatcgaca aactgcatac cacccgtagce gtttttgatg ttcgtggtct gaccagectg 1380 ccgaaagtgg atattctgta tggttatcag gatgatccgg aatatctgta tgatgcagca 1440 10 attcagcatg gtgtgaaagg tattgtttat gcaggtatgg gtgcgggtag cgttagegtt 10 cgtggtattg ccggtatgcg taaagcaatg gaaaaaggtg ttgttgtgat tcgtagcacc 160 cgtaccggta atggtattgt tccgcctgat gaagaactgce ctggtctggt tagcgatage 160 ctgaatccgg cacatgcacg tattctgctg atgctggcac tgacccgtac cagcgatccg
1680 aaagttattc aagaatattt tcatacctat 38021 1717 13 <210> 5 728 <211>
PRT <212> >213< متوالية اصطناعية 0 >220< <223> بروتين اندماج أشباراجيناز -400(0/8) 13 <400>
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 10 5 1 15
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 25 20
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 40 35
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 60 55 50
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 80 75 70 65
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 5 95 90 85
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 110 105 100
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 125 120 115 10
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 140 135 130
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 160 155 150 145
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 5 175 170 165
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 190 185 180
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro
205 200 195
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 220 215 210
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 240 235 230 225 5
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 255 250 245
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 270 265 260
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 0 285 280 275
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 300 295 290
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 320 315 310 305 15
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 335 330 325
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 350 345 340
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 365 360 355
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala 380 375 370
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 5 400 395 390 385
Ala Ala Asp Lys Leu Pro Asn lle Val lle Leu Ala Thr Gly Gly Thr 415 410 405 lle Ala Gly Ser Ala Ala Thr Gly Thr Gin Thr Thr Gly Tyr Lys Ala 430 425 420 10
Gly Ala Leu Gly Val Asp Thr Leu lle Asn Ala Val Pro Glu Val Lys 445 440 435
Lys Leu Ala Asn Val Lys Gly Glu 60 Phe Ser Asn Met Ala Ser Glu 460 455 450
Asn Met Thr Gly Asp Val Val Leu Lys Leu Ser GIn Arg Val Asn Glu 5 480 475 470 465
Leu Leu Ala Arg Asp Asp Val Asp Gly Val Val lle Thr His Gly Thr 495 490 485
Asp Thr Val Glu Glu Ser Ala Tyr Phe Leu His Leu Thr Val Lys Ser
510 505 500
Asp Lys Pro Val Val Phe Val Ala Ala Met Arg Pro Ala Thr Ala lle 525 520 515
Ser Ala Asp Gly Pro Met Asn Leu Leu Glu Ala Val Arg Val Ala Gly 540 535 530 5
Asp Lys GIn Ser Arg Gly Arg Gly Val Met Val Val Leu Asn Asp Arg 560 555 550 545 lle Gly Ser Ala Arg Tyr lle Thr Lys Thr Asn Ala Ser Thr Leu Asp 575 570 565
Thr Phe Lys Ala Asn Glu Glu Gly Tyr Leu Gly Val lle lle Gly Asn 10 590 585 580
Arg lle Tyr Tyr Gln Asn Arg lle Asp Lys Leu His Thr Thr Arg Ser 605 600 595
Val Phe Asp Val Arg Gly Leu Thr Ser Leu Pro Lys Val Asp lle Leu 620 615 610 15
Tyr Gly Tyr ماك Asp Asp Pro Glu Tyr Leu Tyr Asp Ala Ala lle Gin 640 635 630 625
His Gly Val Lys Gly lle Val Tyr Ala Gly Met Gly Ala Gly Ser Val 655 650 645
Ser Val Arg Gly lle Ala Gly Met Arg Lys Ala Met Glu Lys Gly Val 670 665 660
Val Val lle Arg Ser Thr Arg Thr Gly Asn Gly lle Val Pro Pro Asp 685 680 675
Glu Glu Leu Pro Gly Leu Val Ser Asp Ser Leu Asn Pro Ala His Ala 5 700 695 690
Arg lle Leu Leu Met Leu Ala Leu Thr Arg Thr Ser Asp Pro Lys Val 720 715 710 705 lle Gin Glu Tyr Phe His Thr Tyr 725 10 14 <210> 2317 <211>
DNA <212> متوالية اصطناعية <213> 5 <220> (400)PA- بروتين اندماج أشباراجيناز <223>
14 >400< tctagaaata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgttcaa attcaaaaaa 60 aacttcctgg tgggtctgag cgcagcactg atgagcatta gcctgtttag cgcaaccgca 120 5 agcgcagcecg 0008300092 cccggceccct gecgegecceg ctgetcecege cectgetgece 180 ccagccgcecg ctectgegge acctgecgece gecgegecgg cagegecgge accggeaget 10 240 ccggeggceceg cgcectgecagce tectgcaccg geggetccag cageccegge geecggecgcea 300 cctgeggegg cgececgeggce gectgcacce gecagegectg cggcaccgge cccagcagcec 360 010600000 caccggcetge gectgecceca geggecceceg ctgeceecgge cccggeggcet 420 20 ccagccgcag 000110006 0680002666 00-80080206909 cggceaccagce tccggeggeg 480 ccggeggegg 160909020302 106000662 getgegeegg ctgegecgge 1600-0026 540 5 cctgeggegg ctecggecge 3001003-02 gecgegeecgg ctgetcegge 600-1026 600 ccagcagcgg caccagcagc gcctgetect geggegectg cagetccgge gecggecagee 0 660 0090009009 cacccgegge tccageccce geecgetccag cagecceecge gecagetgea 720 cctgetgecg ctectgetge 001001666 getgeecceceg cecgececeecge 6080-10-6 780 cccgcetgecg cacctgetge 0680012666 getgeecccag cecgegecggce ceccegeagct 840 20
0890090909 300390106 00830010668 geggegectg ctgeceecgge 008 900 ccggcetgecg 000000392 tccagegect getgcaccgg ctgectcecgge accecgecgeg 960 5 ccagcagctg cccectgegge accagctect getgececceg cggecacctge accecgetgece 1020 ccggeggceag ctcecegecge gecagceccct gecagcetectg ctgcacctge tectgecegee 0 1080 cctgcetgetg ceectgetge tccagecect gcagcaccgg cegcetccage teectgeeget 1140 cctgecgetg cgeccgetge tccageccca getgecgecag cagcetectge acctgetgece 1200 010600000 ceectgegge tccageacct getgcaccgg ccgececegge gecegetgece 1260 20
600039039 ccccagecgce 306000-1-608 gecagcetceceg cagecccage 48 1320 ccagccgcecg cagataaact gccgaatatt gttattctgg caaccggtgg 60648 1380 5 ggtagcgcag caaccggcac ccagaccacc ggdttataaag ccggtgcact gggtgttgat 1440 accctgatta atgcagttcc ggaagttaaa aaactggcca atgttaaagg tgagcagttt 10 1500 agcaatatgg ccagcgaaaa tatgaccggt gatgttgttc tgaaactgag ccagcgtgtt 1560 aatgaactgc tggcacgtga tgatgttgat ggtgttgtta ttacccatgg caccgatacc 1620 gttgaagaaa gcgcatattt tctgcatctg accgtgaaaa gcgataaacc ggttgttttt 1680 gttgcagcaa tgcgtccggc aaccgccatt agcgcagatg gtccgatgaa tctgctggaa 0 1740 gcagttcgtg ttgccggtga taaacagagc cgtggtcgtg gtgttatggt tgtgctgaat 1800 gatcgtattg gtagcgcacg ttatattacc aaaaccaatg caagcaccct ggataccttt 1860 aaagcaaatg aagaaggtta tctgggcgtc attattggca atcgtatcta ttatcagaac 1920 cgcatcgaca aactgcatac cacccgtagce gtttttgatg ttcgtggtct gaccagectg 1980 ccgaaagtgg atattctgta tggttatcag gatgatccgg aatatctgta tgatgcagca 2040 10 attcagcatg gtgtgaaagg tattgtttat gcaggtatgg gtgcgggtag cgttagegtt 0 cgtggtattg ccggtatgcg taaagcaatg gaaaaaggtg ttgttgtgat tcgtagcacc 160 cgtaccggta atggtattgt tccgcctgat gaagaactge ctggtctggt tagcgatage 220 ctgaatccgg cacatgcacg tattctgctg atgctggcac tgacccgtac cagcgatccg
2280 aaagttattc aagaatattt tcatacctat 38021 2317 15 <210> 5 40 <211>
PRT <212> >213< متوالية اصطناعية >220< (40)PA ببتيد <223> <400>
Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro 15 10 5 1 15
Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 25 20
Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala 35
>210< 16 >211< 22 PRT <212> >213< متوالية اصطناعية >220< >223< ببتيد (20)PA معدل >220< >221< صورة مغايرة >222< 1 Xaa = Pga <223> (حمض بيروجلوتاميك) >220< >221< صورة مغايرة >222< 22 Xaa = Ahx <223> (حمض 6-أمينو هكسانوبك)
16 >400<
Xaa Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala 10 5 1
Pro Ala Ala Pro Ala Xaa 5 17 <210> 42 <211>
PRT <212> 0 >213< متوالية اصطناعية >220< >223< ببتيد (40)PA معدل 15 >220< >221< صورة مغايرة >222< 1 Xaa = Pga <223> (حمض بيروجلوتاميك)
>220< >221< صورة مغايرة >222< 42 Xaa = Ahx <223> (حمض 6-أمينو هكسانوبك) 17 <400>
Xaa Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala 10 5 1
Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro 25 20 10
Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Xaa . 40 35
Claims (1)
- عناصر الحماية 1- بروتين اندماج مُعدل modified fusion protein ؛ حيث يشتمل البروتين المُعدل على ا- أشباراجيناز L-asparaginase وواحد أو أكثر من البولي بيبتيدات؛ ويشتمل على: )1( ٠-أمشباراجيناز 6 ه-ا| يشتمل على متوالية الحمض الأميني amino acid 486 لمتوالية برقم تعربفي: 1 و (2) واحد أو أكثر من بولي ببتيدات polypeptides ؛ حيث يتضمن الواحد أو SEY من بولي ببتيدات polypeptides متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم تعريفي 47 9. 2- بروتين الاندماج المُعدل modified fusion protein وفقًا لعنصر الحماية 1؛ Cua يتألف ٠-أشباراجيناز L—asparaginase من متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم: 1. 3- بروتين الاندماج المُعدل Gg modified fusion protein لعنصر الحماية 1؛ حيث يتكون البولي ببتيد polypeptides الواحد أو الأكثر من 200 إلى 600 وحدة بنائية لحمض أميني من 5 برولين proline ولأنالين .alanine 4- بروتين الاندماج المُعدل dy modified fusion protein لعنصر الحماية 3؛ Cua يتألف الواحد أو الأكثر من البولي ببتيدات 00708601085 من 200 إلى 400 وحدة بنائية للحمض الأميني من برولين ومن ألانين؛ وتتألف الوحدات البنائية لحمض أميني لبرولين مما يزيد عن 9610 0 وأقل من 9670 من البولي ببتيد polypeptides . 5- بروتين الاندماج المُعدل jail Gis modified fusion protein الحماية 3؛ حيث يتضمن واحد على الأقل من البولي ببتيد polypeptides الواحد أو الأكثر متوالية حمض amino ud acid sequence للمتوالية برقم: JT6- بروتين الاندماج السُعدل lg modified fusion protein لعنصر الحماية 3 حيث يتضمن واحد على الأقل من البولي ببتيد polypeptides الواحد أو الأكثر متوالية حمض amino ud acid sequence للمتوالية برقم: 9. 7- بروتين الاندماج المُعدل Gy modified fusion protein لعنصر الحماية 3؛ حيث يتضمنبروتين الاندماج متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم 11. 8- بروتين الاندماج المُعدل jail Gis modified fusion protein الحماية 3؛ حيث يتضمن بروتين الاندماج متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم 13.9- بروتين الاندماج السُعدل lg modified fusion protein لعنصر الحماية 3 حيث يتضمن ٠-أسباراجنياز L-asparaginase متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم 1 ويتألف البولي polypeptides any من متوالية الحمض الأميني amino acid Lgl sequence برقم 7 أو 9.0- بروتين الاندماج المُعدل dy modified fusion protein لعنصر الحماية 1؛ حيث يتألف واحد على الأقل من البولي ببتيد polypeptides أو الأكثر من متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم 7.0 11- بروتين الاندماج المُعدل Gig modified fusion protein لعنصر الحماية 1؛ حيث يتألف واحد على الأقل من البولي ببتيد polypeptides أو الأكثر من متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم 9. 2- بروتين الاندماج المُعدل modified fusion protein وفقًا لعنصر الحماية 3( حيث يتكون ٠-أشباراجيناز L-asparaginase من أربع وحدات فرعية.3- بروتين الاندماج المُعدل Gg modified fusion protein لعنصر الحماية 3 حيث يتألف بروتين الاندماج من متوالية الحمض الأميني amino acid sequence للمتوالية برقم 11 أو 13. 14- تركيبة صيد لانية تشتمل على بروتين ا لاندماج المعدل ad لعنصر الحماية 1 ومادة واحدة أو أكثر من مواد حاملة صيدلانية of سواغات .excipients~ ا + x 3 wd ~ 3 dat oo ا وو يذ >< Ye oa . FE a ; 1 : 1 0 اد ال {PS Aen ا ءا 5 Spe RO a po Yo. الشاصة بالبروتين ghost عبر مجموعانك NN المحمية عند الطرف PIR مع ينثيدات Oy isantaspase BUS قيمياء 1 1 0 ل Sm a 0 Er - od Coa de on PE Cle § ![ vu bs ؟ :هه 4 ة # : ! LY م ؟ 88 84 8 4 2 © !؟ © 5 g Reni nF لي oN IR RL AC RAR IA LN RRR A LN LB AN LR ER we BI a فى ال ا ل iY . 6 كحي Na eR م 8 اي اح So o - IN SR لخلا لحل ا لحف ا NB eee AN ب اليل حي بيه يح ليح ليوك اليك اوح ال اح الجا ا لاا ل :ىج TE YY ا ا ا هه اي لوه TE ا حت ee Qos Wo Yo ogy rg or YG ؟ Nog Mog or Fg doy a FoR 5 Yow og ga dp A Fa جة| Ak Ae dk Hw Na aR Bw dR An Bn AR | مم Am Poa Ah ايها ? 2 Neer SOW oN ¥ i oO as SO » 5 ام 3 > ¥ 0 : v : ~ vr : SOT Rw E90 os 94 0% ¥ 4 ow oY ow + يم “© ا © جة or Wd row oF م cen LN اح الى SX الك we a aX A SAN LR A a الك الى ل 2 ف الي ال 3 EE NE > ملي اا ا مب اك ا ال Nang شا يي اله حلي ل ل SL pg Br BA AN 0 :د Ra FRG Fg od ؟ 5# RS RONG oF Ys FY og Low oad “لج #ة . ’ ’ Tas Yau Aw AW fx ah an Sey ملم لك الس جم Sw Al Aw Tea AW Fy حلم Si لض A I oa fe” يح weg trie ys ا ان بيجن ا 5 1 > م + م . + | 0. PA بك a د 1 ب 3 i HE & iio 5 8 دج 8 ؟ 8 اخ تخ« دا ow Bon on © 3 h a een Nt peri, NRL oR RES NR SS SN ALON A RL LR WSL ال الث dL ع i § sie ne NN Ww 8 Sting Ng Fae % 7 6 حا ¥ > vw “x Nod مي Ng Rr Nag Hg Sr Bo Ny NL & 8 *« & 8 ؛ 5 YF bay & FF & 8 bow ov boa vd Sh Fa Mg NM AR عت Sl Be Rx AR Br Am AR انيد ay dn am = لا SEN 8 EEN ل ال حا د ا “ oo يح 7 : 8 Ota sta مم 3 { § ON مات © 2 ممست >I ~. Woo S Asana ~ a if Ng tiegd a: - الي 7 ga RN “i LIRA 7 BT يخ نسلا { ال Ney § WEEE ee Hy Hid, a Fa PASTA ب Y + of i Se & x eet WNL a > نه لحي راح امي ا 5 ا مي 5 a ¥ 0# 8 يا 7 لم لفق as ; 3 } Se Ne 0 i EA ملم فيه Sy المي ما اي ل ARR TEA AR . 3 3 0 ا i “3 Coa إلا ل اجا SES يحي د خا Po HUB RE Ga ola PEROT مترأفل NATشكل ' نسبة إقرار J Crisanta ACH) المستوى الأمثل RE 4 yf 1 1 NR 1 [ نقيت ا 0 الشكل ؟: الوصول Crisantaspase/Pga-P/AQ0)-Ahx J 8) dads الى 2 md ال AF 17 1 لشكل ؟: J بنسبة إفران ga-P/AQO)-Ahx 0 0 : :8 ind مجم من PA a / مجم من Crisaniaspase : نسية: سجم من يليد PA مجم من 713327135856 ! ل ا اس ا سق { 3 a 3% ل الا لتخا العا انق 3 2 1 ha 0 انعيار انكياسي 3 8 ا كيلو شرن ss rE ETT saa ادا 1 ER RE EE ل RRR EE SR ae A a : ل Ae SEEN aE EE Shaan A ey 1 ا ا RE 0 ا ay SOR AR SaaS a SSR ا Si REE. 1 ET a Raa RRR Ne Sal Eo no 4d BE Re 5 VE ا ا SERS edness VF ا ا La rail ١ نعف RO RE ER SRE ع ا ا ا ho 0 ل ل EE EE ER RE sonia 3 نّ" EE RN SER NE ١ ع A ا by العا ان اا RR 3 EY RRR A we = ا انه ا § عاق SEER a : Nas ws ٠» سد 5م35 iA عات TRUER eR RN NER Ye = 1 1 ل EAR SR cw bie? ¥ ا ل He تج ما ل ا 0 ل ا ا Grime Les TR oe اجا م ا ا A a SN ٍ ا INR Raa بعال ا ا ل لح م د ا ا aaa > adit 3 ا a SEEEASE ORO a of Er EEE Re lal Salama Rn CRE a > ee 0 ا ل ل ¥ 3 ل ا ا EEE 0 RE Edn dat بيد a he ل ا i a oy ل 1 eee SRNR CS ES Sore Ee - He 4 ,£9 0 ل ل ل ER RRR a rn CRE EEE ¥ شف a Ta RR ل CREE 0 ١ eRe RE pe Raa ا a Rn SEER Sia:شق .ا GA ا ل SLE eh ERNE SE GSE CER I ES SE ST Hoe ee ل ae SCENE OY EE RN aR Ne Or 5 ل ا 8 ا ل HERR 8 8 0 oe 0 2 . Cnn ا RE ا الا بس FO : 0 ل ل ل ل i Dt a ل ل RR RI ل ل. aided . end ov a a ie امح FA ERA EE ~ JR Sd Bx wy ما ا hey Ww 4 RAE اب plat عير Crisantaspase Pra 4 )40( AR allt SLA ناتج dan oF الشكل. oR Ft se يتيائل الأثيون *: { Ea دام EE SST Sy EAE; a ph) i i 3 go 3 CA RE 3 q i لحي يري AZAD : 8 = 3 @ AN An 3 } i انيت RHSR go av ad Er = بخ اج بك oS So i aes PARE : د x i alll 3 x ; > 85 £8 if : i ig ب" FR : : ا Roee ب Liat 4 8 i I AN 3 3 £3 ابه ب 1 ا ا اقم امعء# الى +3, § Poa oF + &3 3 = I i TOW Poros 8 ae ; i EE ii { 8 'ْ I ع de سير * 3 fox Fy 4 2% 3 > : Pons *؟ ؟ ؟ #3 bs = i PA. : £3 i 5 wow 3 Pod For oR io ++ + الج Ba ب 0 +8 3 م ج 4 3 Yow Toi 1# 3 } x ¥ 0 ow, 3 Fao ewe =, w 8 Posy 1 85 id af Eee 3, i : boar Ad iy i os 4 i i PAR, Bid $i 3 i § ا ؟ %¢ 3 > k i ع * 8 اا و : i J Pos i 3 dd Rosin sd gwen iw 2 x cf § § youd } id 3 § 3 53 § 3 i SEY ار A 3 3 3 : 3 ل + 1 i WHY yb 3 Fe ¥ 3 L 33 i + : 3 3 i 3 3 1 Yo PG 3 1 i § % $1 عن § i oF 1 08 a. اس ا N38 ل « i 3 1 اب A <: aE 3 3 الغ ف[ مشر ANN RNR سال الما اسه اا ما ا ا يش Yaw Se Yi oe CE, اج لأا 1 fue} 3 5 يبي * SB كير WM 3 * - ST ara ea. SEE FRx oa a La ERR SRY a im 8 SRE Nh ie at EEA Na IN na العاف Ys LL eee ا ال 0 A ا لاا NR SRE AERC EEN ER es Cadet ا : اف مه ا + ا ل الوا : ' AE eos 0 ا SRE EGER ا fa سس ا ed 2 Win oem Ae AR NE I لمكي يح ادي ميد > an oy 0 لاا ee عاق * ا 0 Tea eR RE الت امع 1 SEE ا ل 7 هج NNN اا Sm Sb haR Ee i EL مط سه 4 ا ا 0 ب ا ل ا * ل ال كي ريك تدلوو تي ا م Tho Alaa ENEونا تج امع لمعو داه ورت عبن اسشراب Aly 88 الشكل + تلقية ناتج إقران يتبادل الأنيون Box SS Seng ¥en ا “5 عبس R280 \ 1 ا تس 25م اس 3 xX wold Yee 3 Foor 3 is 8 3 : i 3 3 ِ =o NAGY § i si Sr i § 4 i t i 4 ! 11 8 § Uh “a, | £1 lig fh i 3 3 33 1 3 over << 8 0 00 Co 3 ا 8 < id Pond 3 J =) vob Eg 010 ; ; = ; \ $d Std boil vee 2 2 % Nola + 32 J Lrg 1 fol oy بسر msn جع 3 3 = id § ; i of I 10 8 ب 3و 5 3 3 i 3 EN 3% 3 3 8 $s Hh oe i io & بي i i i Fri & i PF §r bd i > 1 ا لمعل 0 أل 8# 1 الل : الي ل ا en ب 3 i § 3 i % i oF 3 3X Te ead gg 3 : Pog dr م $f = 1 0 1 ل § 3 i : { 3 ¥ { ب ا ب x ذا ال 1 3 امي :ٍ ~~ دا = ب Seti Stned ا ا ا ا ا ا ا اا RAR Ra مستي صر Fc Yaa YES Ted XR Fax *#ء faa 0 fie] الحجم ot Gath كبلر AM 3 ¥ AA X's - a Tn LL NR San LL Nn La CL ds kos} “ EE an Nh a TE iw اا # wes د es الت ٠ : eee EE ee clic a — ا a TN لمي سس ee yoo LN + EEE Ea RE NRE LL ee soe 0 ee ead AE ee dai ¥ EE ا ل 1 ال ا a sda ا . Lo eerie Naa ا اع ؟ اEE coat BRE HS Hie RA جا ا it in ET weer se 3 الشثل *: عمل نسائل من نوافل التعبير الورائي 20 Crisnntaspase ماماو از في lad كولاي با أ افق ف BRE 5 i 3 cn ed بخ a, RE مين اا UES اق مي ااا ص Rh or Tn RN REE 4 8 :2 امس اجون اين ا الال اص ا ما ١ اح اا tet oN ب WE Rp NCR EE م a Ne لاع ا 3 SSE on ين الما ا Fo ب :0 8 0 اا VE Fé LES ا RS Ro 8 4 1 . Ta &d Ve & SRELERA0 0 VU مومس Ne با أمجعامياة 0 a معسم فا تا Ni Shuantasess: 0 {oR TE N LES امير مرت RX SN { pASKTS-Bapt iE 8 ! RASKIR-SALOD } 8 م د ل ايض لال CE © لخ Cad 0" IR مخ Crisantaspase if 8 ANN PE 0 0 بر ريج جم رحن وز مجم 88 2 WL ب 5 016 أل i سما وام عد ليا fold خا نا يخ ار B/W Sa ا 5 Rn FE A RLS & # : ع د با Ha rg, AX Wy 548 y دجا © ay By eo ARE الي ا الج اما لير د كت حا Nt Hindi ان بي ان ا RE NH SONNE aارق0 Te ™ 3 0 3 1, * 0 1 y 7 نانج عودة الاتحاد الجيني المدمج جينيًا مع Crisantaspase ل 5 ,' > ££ REE HEIN Be NE ea Ste POE الا ا 3 ase 8195-01 تجليل : J + PASHO ¢ PANG 2 اللاي Ew 3d BREN ang wi, doit يسن MOPRE ASP بي 7 العم ١00+ A Cans ba IH} 3 : ee EA SB al : se £5 Le GA AS اا Ea Eo a an 0 ل م 8 ا RR ay . ARERR TEES 8] ae HS ا ا RR Ra 8 0 Ea Ro ase ESE اس nN haa : ل اا ا ا ما 8 Fama SEE BRR SEE a Ft ل eae The 8 اا اا Na a ا : Cia % ¥ » اام ا عل ER Ra. ١ اا ل ا ا ا EEE RRs ¥ “a oa + ل لاض 0 pa SR SINR RR 2 Ya a aa ae ل ل ا EER a. 0 TT I 0 المج aa Saini EEE ERR Nada Ga TT EN ا Ra re Shae i a sel Ya I ا ا ا 0 ON eee RR ERR : 1 > So SR ا 0 1 SERIE RE EET NEE ا ل ل للا ا ا 0 ss 0 ا Ci ل ل ا ل ل الا لأسا نت ا ل ل ا ل ل ل : ا ا Soma re Ta Na ss a i FU NNN Sma Toh ا EEE EE a ا 8 Tra a EERE Ea es a Ea ل NN En EE En an SRE PP ow a aaa Pomme : ا ل a a Shia A Toma aePAS plas Crivantaspase مغايرة من peal الشكل ا استشراب بالاستبعاد على أساس الحجم { Yoox خم 3 0 & K . A ! * VOR AA ——crsentaspase 1 4 711 أ:: : 4 1 0] سه Crisantaspase- PAR, ¢ 13 3d LL Ce ؟ ; ط ا مخ 11 [ Crisantaspase PARE أ : HIE I 1 + © | : ' >< د : 1 0B eee PAI-Crisantaspase { ع : fF : 1: ٍ : sw ا pF .ء 1+ be PAGG-Oricantaspass } ; g Ye} yb rnd { = !ا 1 be 1 f i 1 : 3 3 ti bi i رح $i 4 iol 1 2 8 Cf % + ¥ > 3 أ( ]ا ل Lo 3 Poa uo 4 § 3 i 3 + 1 3 § ¥ ed } 3 } i 3 i vb 7 3 أ \ ا ١ + ل ! ; 1 3 : 5 i 3 : \ + ا \ / § oF A cf No A سار fremont ge Tn sooner م مم جم مس a سبي يمدي 3 & & د + 3 ¥ ye v4 ta [3a] حجم التصفية التتابعية ين سسسب وجي مدي >> بمج ِ يمسيو ¥ . بجممم مجممميب 1 ليخ> . اير bmg PALOO-Crisantaspase 53, pen = Crisantaspase-FAT0 ~ Tog wg Crisantasoase-PAC20)n : > So Bw he كثر $e 3 PADO-Crisantaspase a, قيلي لفرت 3A . No SRS ] أ . ¥ ا 0 3 يقي بون TI ese 7 ح١١ d Crisaniagspase TR, 3 : oy كيلو دالثون 55 ~~ *؛ كيلو دالثون Ta A 3 % $4 3% LE 1 ve £3 Joba] حجم التصفية التتابعيةالشكل + Abad كز رض لصور مثايرة مث 3 3 ا ال تسو يلي or & Spade ifs RES CE JW ميل إن مقايرة من Crisantaspase معالج PAS, الحا رحبا انيلا > : الات سن ل AAA re ; ماس SA BEE 3 ْ : الشدة i i ْ 3 ? 3 3: . . 3 واي % ied : 3 Bidar 3% Fak ‘ | ¥ : 3 23% 3 HARE 8 : 3 ARERR 3 i i 3 | 3 Na ; M3 SINR. : 3 es (338s { 33% 3 ERIN } : + 8 1 Haan 0 ' ٍْ ا 8 FIRIERRRGARNE | 2 i HE Na. N RR 3 REINER SERN 3 Rana 3 AR Ra ; > إٍْ 3 3 ٍْ 5 ّ SEERA SHINEER 3 ْ ا ا : 3 Yor TE * ١ ل مج RRR HEE BR i 3 ma “NEE i 3 i SE TEER i ا RAY TENE 3 3 \ 3 اذ © EN TEES 3 i IRR IRIE LV 3 yg \ x SR IR 4 8 : 8 : 3 Ba Bik § : : 1 SE 3 8 1 : ٍْ ْ ل + + ع ¥ i Ra FREY 1 TREE 3 : i 8 85145 8 8 3 ER FIA N § § i { 1 3 ا Yel 5 3 a HIER REI إٍْ 8 8 i 3 ® 3 8 2 SR 1 : 1 : 8 TEMAS 1 5 i قلي Teeed AR 5 ٍ ّ : ٍِ : LH 0 ٍ : ٍ ا § : : 3 الا Eg Ny ® 3 3 3 6 : ٍِْ 0 ا 3 RRR t SR ¥ $F 8 3 Tow BEE RE Wha : v > Xa i we Bk, i : i ا RRR 2 RRR 1 : 1 اج الحا § NA RENAE 5 1 لالتلا لول للا حال جات اح ل i = = . د الاح حم ججح جحو جح اه جه EEE 3 + THs 2 Thaw Tex Thy EE لي بخ 7 Sento ns لسر t » 5 $Y بيخ تخ tag 3 ل x $ 5 > ¢ اتح انا ا ااا ااا ا ا ا حا يه ee - 18 0 \ او اتويت واي وي Ne ييا يا يني تيا RAE ERR AE EAA EE ER EAA ER ييا ياي ييا يي ييا TERA HER ARATE ATE RAAT IA ¥ AA SAAR A NARA AAA جحي Ix A NAA AA A ERE Nr Np OR TO FRU VEX ; i 3 * ; 3 لهاي 8 2 i The tod WAR. EES TH : | إٍْ : 8 i 3 : Po | : i : 3 i 3 ¥ { : 3 :ْ 1 3 i : i ْ ا N : i 3 1 3 3 3 : } 3 i 3 3 3 & : 10 < 3 3 5-3 ; 3 ْ 5 3 i 3 5 : ل i 3] RS i 20 ; : 8 }3 ; v + 8 8 ; { اللججع i sere إٍْ 8 8 : ّ - ا wl إٍْ 8 IE : i a : ع BS Won : { iE RRAALY Tove : i id 8 ; : < 5 : ٍ 80 0 : i i § § pe 8 t : : } Rs 2S 1 3 ; Xd i 3 vod 5 : | i 1 2 5 1 iH 2 “كل “بعك 0 x h i 1 1 : i § § : 3 : 5 i : 5 1 3 ¥ : ; ؟ 5 3 3 : : : § }1 ا“ 6 : i : 8 8 $i 8 1 i : 1 3 ay x 1 i : i y > i. : asia vans : !1 اا i wn a3 Lo . : : ; v BF 8 + § § i i i 1% i i 0 يد : i di ا "0 Lo. 8 3 ا pA By : لقاع سا يدي ان Hoi & § 8 aa #8 5 8 ٠ ليحي ججح اج حب تج اليا أ Had : 1 RR 1 8 ّ اا ا اج يقح ا ا LF ennai ل i a ب" a : ل ا ل + a i ٍ الثون NR oe X AA erin ا ل مشر 1 د لا ا“ جح ب x يُ ٍ AIRS مج ارده دن مج fexxadH ا د« TA Saad) ¥ & %¥~ الشدة NN AN AR KR KAA ARRAS احا اك ا ا لاح احج اا حل حا حا حل لا لاا اا اا A A A A A تا ع ل عا "١ 3 سج god i Xx 3 i u - i i ا i 3 i § ods i TaW ¥ i 0 3 }2 ¥ < i 3 y 8 i 3 i } x i i 3 a » i 3 i i : 3 3 Rw 4 :8 3 3 3 3 3 3 2 3 i i 3 . § 3 tx 3 i 3 3 : 3 8 8 3 ii 3 i } 3 i +1 3 i 3 aR 3 3 }3 3 i 11% 3 i 3% i ¥ $1 3 i i it i i i 5 ¥ i 3 ARN 3 3 3 3 Tad ¥ 3 3 1 i 3 55503 + i § FoR IRIE} 3 IIe Od i + IRIS + i 3 3 SHAR Yd 3 i EININ Io. 3 3 1 ا : FIER 3 3 3 جد ةا ل لمكي 5د 8 3 AN EIR 33 iE 3 x ¥ 3 3 IEE $F + 3 لج + 3 i HEE iIRIN IE Se BLE 8 i i A EW INR BITTE NY x 3 i N : 8 3} د الاج د د م A 3 BAR III ERIT REE 3 i oF BRE SIRE REE ANY : 3 : i 3 INR REED ER 8 3 ا اج i NRE ا CR ا : يج مج مين ما اماج د ا : 1 ا SRL : 1 ل 4 a i اه ا a ااا نا متا مواد الا ا لج لمي اتج أي أي أ ا ا RRR 0 RR ee an sad ا أ TAINAN 5 TREN Rk 5 A RA 1 جحت حل يدا وااو اا سنن AAA AA AA ا وا سه ا ا ل تقل 8 1 ا ا AE % \ : راج TE dex TW هاي يال & Tre, RN TN جمد ل الشكل م +FS NR 3 الجا اتا اما AA 1 ا 3 3 :3 i : : 4ج بن EY 3 Tow 3] FELL VINE § 3 3 3 3 i § § i i 3 3 i } i i ¥ ad i i ؟ 8 3 i i i 3 i i ¥ ¥ i 3 ¥ 8 ا \ w® 8 ¥ i ما 3 i 0 : i 3 i 1 ¥ 3 3 x i 3 i 3 3 1,87 i FR i i i 1 i ¥ i 3 > 3 3 : i Red i 3 x i i { 3 3 x 3 ; 3 x 4 8 i يع 1 i 3 8 i i 0 3 i 3X 3 8 i Lek . 1 ل ES A ا أ لأا ات يح bee fae اجا خخ لل لحا تأي لق لا نش لما لتو ا pg col Sis a 3 : ا 4 fn Sx Ry ER Poway Bove اع هركا ا 0 a ل fo SH i 5 2 44الس 5 8 هه ااا جا اياك ا ا لك ااا اا A تحت جات شا سج 1 8 3 Ny 23 + 3 { 3 5 1 \ 3 \ A 3 3 3 i 3 : freed 1 i :ا i i 3 3a i i 1d 3 3 i i 5 3 £3 3 3 i RE i 4 * Tee xd} 88 2 i Nai § 3 1 i الع وخ 14333 NAR 23 ا 1 Re RAR IE a ARTA A Ae IY 3 3 3 ا RORAANNN AE I I i : RR A JANTIL RS Wid 3 ] Yoo NRE i IRENE ¥ 5 ا * 3 i :8 ا : SRR OANA TER EE 2 3 x3: i 3 ا ER AE 2 2 ال ا أ ا اج ANA RE AY BY ] 3 } i : ل XR 0 i + ا ا ا 88 : ا RA I RE 8 ; IES 555555 t 1 3 1 لل + iN BER NER RNR Tea a 3 TRRRR DBA, $ & i ا لا DE RN + i ا NER 43 RRR 3h i بايا SEAR RRR TORR Bnd د S23 NSS hea Ao Xo . i vo RENDER RR aa cco A da dia AAA AA AAA EAA AAA PAA AAA A ERR PR A rene لمانالا انها ته حا سا 555 تلقل م YES بيج* X20 We Years YER. .ج*ة0| Fo VR Teas i 4 ا © A 3 RNR: ¥ 4 إن اا يتا وي ا ما عا ااا ات ا wha i i ¥ + ُ ا 8 3 TARA, ge i 4 i i : 8 8 i i 3 Ey > 3 re : ! i 1,83 3 : i i i i 3 3 3 3 3 3 3 i 3 Yond { 3 } \ 3 3 3 1 i 0 i i } 3 i 3 1 a1 8 i 3 8 8+ 3 ¥ § ; i i { i : 3 RN 3 i i 4 i # i i ٍ ل i . ف كلا أ أي تل ماه تاج جه وخ م ححا تح جره م لاا احج ممتي Tone fe xpos 2 & x Xx : ne ea لج 8“ oN 3 اا د SE 0 % : * x 2 ¥ الل يان TFs جاع وا ةا ايا اواج Fd مدا اماف + 3الشكل ؟ yi ااا 8 3 الا :ا 8 0 ed 0 i. . a ah Cab + 3s ل 8 ع متوسط تركيز البلازما SD) م في مقابل خواص الزمن بعد الحقن بجرعة فردية كبيرةٌ 8ج J دو كت an X Sook = داخل الوريد J لكور من نوع CD-1 مادا erry > PAD Bag AF BAAD Crisantagpase © : Fe ’ 3 ’ Me & A Yared Ny « مسمسلا 3 3 wu N Ree 3 اللخ ا x YN “i 4 wig Je 7 | ال Was 4 5 بلمستسشسيسسبسس سس لا 3 > omy Tn :؛ ١ +1 صل Rox $5 ال الزمن (بالساعاث)الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية Swed Authority for intallentual Property pW RE .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < Ne ge ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام TEE ببح ةا Nase eg + Ed - 2 - 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها of سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ٠. ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب 101١ .| لريا 1*١ uo ؛ المملكة | لعربية | لسعودية SAIP@SAIP.GOV.SA
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762523061P | 2017-06-21 | 2017-06-21 | |
| EP17177237.9A EP3418383A1 (en) | 2017-06-21 | 2017-06-21 | Modified l-asparaginase |
| US15/671,086 US10174302B1 (en) | 2017-06-21 | 2017-08-07 | Modified L-asparaginase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA519410870B1 true SA519410870B1 (ar) | 2023-03-06 |
Family
ID=64737515
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA522433360A SA522433360B1 (ar) | 2017-06-21 | 2019-12-21 | L-أَسْباراجيناز مُعدل |
| SA519410870A SA519410870B1 (ar) | 2017-06-21 | 2019-12-21 | أَسْباراجيناز مُعدل l- |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA522433360A SA522433360B1 (ar) | 2017-06-21 | 2019-12-21 | L-أَسْباراجيناز مُعدل |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP4180525A1 (ar) |
| JP (2) | JP2020528743A (ar) |
| KR (1) | KR102727396B1 (ar) |
| CN (1) | CN111315878B (ar) |
| AU (1) | AU2018287145B2 (ar) |
| BR (1) | BR112019027479A2 (ar) |
| CA (1) | CA3068100A1 (ar) |
| DK (1) | DK3642340T3 (ar) |
| ES (1) | ES2979314T3 (ar) |
| FI (1) | FI3642340T3 (ar) |
| IL (1) | IL271504B2 (ar) |
| MX (2) | MX2019015502A (ar) |
| SA (2) | SA522433360B1 (ar) |
| SG (1) | SG11201912625QA (ar) |
| WO (1) | WO2018234492A1 (ar) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3919623A1 (en) | 2015-12-22 | 2021-12-08 | XL-protein GmbH | Nucleic acids encoding repetitive amino acid sequences rich in proline and alanine residues that have low repetitive nucleotide sequences |
| US12186296B1 (en) | 2016-07-22 | 2025-01-07 | Flamel Ireland Limited | Modified release gamma-hydroxybutyrate formulations having improved pharmacokinetics |
| US11504347B1 (en) | 2016-07-22 | 2022-11-22 | Flamel Ireland Limited | Modified release gamma-hydroxybutyrate formulations having improved pharmacokinetics |
| UY37341A (es) | 2016-07-22 | 2017-11-30 | Flamel Ireland Ltd | Formulaciones de gamma-hidroxibutirato de liberación modificada con farmacocinética mejorada |
| US11602512B1 (en) | 2016-07-22 | 2023-03-14 | Flamel Ireland Limited | Modified release gamma-hydroxybutyrate formulations having improved pharmacokinetics |
| US11986451B1 (en) | 2016-07-22 | 2024-05-21 | Flamel Ireland Limited | Modified release gamma-hydroxybutyrate formulations having improved pharmacokinetics |
| US11602513B1 (en) | 2016-07-22 | 2023-03-14 | Flamel Ireland Limited | Modified release gamma-hydroxybutyrate formulations having improved pharmacokinetics |
| US20200354706A1 (en) * | 2017-11-22 | 2020-11-12 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Novel recombinant botulinum toxin with increased duration of effect |
| WO2020178695A1 (en) | 2019-03-01 | 2020-09-10 | Flamel Ireland Limited | Gamma-hydroxybutyrate compositions having improved pharmacokinetics in the fed state |
| CA3179177A1 (en) * | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd. | Methods of purifying charge-shielded fusion proteins |
| WO2022211829A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd. | Dosing of recombinant l-asparaginase |
| US11779557B1 (en) | 2022-02-07 | 2023-10-10 | Flamel Ireland Limited | Modified release gamma-hydroxybutyrate formulations having improved pharmacokinetics |
| US11583510B1 (en) | 2022-02-07 | 2023-02-21 | Flamel Ireland Limited | Methods of administering gamma hydroxybutyrate formulations after a high-fat meal |
| EP4554613A2 (en) | 2022-07-14 | 2025-05-21 | Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd. | Combination therapies involving l-asparaginase |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| DE3675588D1 (de) | 1985-06-19 | 1990-12-20 | Ajinomoto Kk | Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist. |
| GB8519753D0 (en) * | 1985-08-06 | 1985-09-11 | Health Lab Service Board | Production of 1-asparaginase |
| US7985548B2 (en) | 2006-03-03 | 2011-07-26 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Materials and methods directed to asparagine synthetase and asparaginase therapies |
| DK2851424T3 (en) * | 2007-03-09 | 2017-01-16 | Novozymes As | asparaginases |
| ES2422007T3 (es) | 2007-06-21 | 2013-09-06 | Univ Muenchen Tech | Proteínas activas biológicas que tienen estabilidad aumentada in vivo y/o in vitro |
| WO2011003633A1 (en) * | 2009-07-06 | 2011-01-13 | Alize Pharma Ii | Pegylated l-asparaginase |
| US9221882B2 (en) | 2010-05-21 | 2015-12-29 | Technische Universitat Munchen | Biosynthetic proline/alanine random coil polypeptides and their uses |
| SG10201700340WA (en) | 2012-02-27 | 2017-03-30 | Amunix Operating Inc | Xten conjugate compositions and methods of making same |
-
2018
- 2018-06-21 EP EP22204187.3A patent/EP4180525A1/en active Pending
- 2018-06-21 BR BR112019027479-0A patent/BR112019027479A2/pt unknown
- 2018-06-21 FI FIEP18731853.0T patent/FI3642340T3/fi active
- 2018-06-21 SG SG11201912625QA patent/SG11201912625QA/en unknown
- 2018-06-21 CN CN201880054251.4A patent/CN111315878B/zh active Active
- 2018-06-21 IL IL271504A patent/IL271504B2/en unknown
- 2018-06-21 ES ES18731853T patent/ES2979314T3/es active Active
- 2018-06-21 JP JP2019571042A patent/JP2020528743A/ja active Pending
- 2018-06-21 KR KR1020207002029A patent/KR102727396B1/ko active Active
- 2018-06-21 EP EP18731853.0A patent/EP3642340B1/en active Active
- 2018-06-21 DK DK18731853.0T patent/DK3642340T3/da active
- 2018-06-21 AU AU2018287145A patent/AU2018287145B2/en active Active
- 2018-06-21 MX MX2019015502A patent/MX2019015502A/es unknown
- 2018-06-21 CA CA3068100A patent/CA3068100A1/en active Pending
- 2018-06-21 WO PCT/EP2018/066647 patent/WO2018234492A1/en active Application Filing
-
2019
- 2019-12-18 MX MX2024015050A patent/MX2024015050A/es unknown
- 2019-12-21 SA SA522433360A patent/SA522433360B1/ar unknown
- 2019-12-21 SA SA519410870A patent/SA519410870B1/ar unknown
-
2023
- 2023-02-28 JP JP2023030460A patent/JP2023081915A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2018287145B2 (en) | 2024-04-18 |
| WO2018234492A1 (en) | 2018-12-27 |
| EP4180525A1 (en) | 2023-05-17 |
| IL271504B1 (en) | 2024-01-01 |
| IL271504B2 (en) | 2024-05-01 |
| CN111315878A (zh) | 2020-06-19 |
| IL271504A (en) | 2020-02-27 |
| AU2018287145A1 (en) | 2020-02-06 |
| DK3642340T3 (da) | 2024-06-03 |
| RU2020101972A3 (ar) | 2021-11-09 |
| SA522433360B1 (ar) | 2024-06-23 |
| MX2024015050A (es) | 2025-01-09 |
| JP2023081915A (ja) | 2023-06-13 |
| FI3642340T3 (fi) | 2024-06-18 |
| MX2019015502A (es) | 2020-07-28 |
| CN111315878B (zh) | 2024-04-26 |
| KR102727396B1 (ko) | 2024-11-08 |
| EP3642340A1 (en) | 2020-04-29 |
| RU2020101972A (ru) | 2021-07-21 |
| KR20200030065A (ko) | 2020-03-19 |
| JP2020528743A (ja) | 2020-10-01 |
| CA3068100A1 (en) | 2018-12-27 |
| ES2979314T3 (es) | 2024-09-25 |
| EP3642340B1 (en) | 2024-03-20 |
| SG11201912625QA (en) | 2020-01-30 |
| BR112019027479A2 (pt) | 2020-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SA519410870B1 (ar) | أَسْباراجيناز مُعدل l- | |
| US11802279B2 (en) | Modified L-asparaginase | |
| US11548923B2 (en) | Peptide compositions and methods of use thereof for disrupting TEAD interactions | |
| EP3418383A1 (en) | Modified l-asparaginase | |
| ES2968802T3 (es) | Células T transfectadas y receptores de células T para su uso en inmunoterapia contra el cáncer | |
| KR102139844B1 (ko) | 암 표적화 치료용 알부민-결합 아르기닌 데이미나제를 포함하는 약제학적 조성물 | |
| JP2016008217A (ja) | 細胞透過のための過剰に荷電されたタンパク質 | |
| WO2013130684A1 (en) | Xten-folate conjugate compositions and methods of making same | |
| AU2020200990A1 (en) | Identification of MHC class I phospho-peptide antigens from breast cancer utilizing SHLA technology and complementary enrichment strategies | |
| US8715676B2 (en) | Production and uses of type I ribosome inactivating proteins | |
| CN103805621B (zh) | 靶向性抗肿瘤融合蛋白质lpo的新型制备工艺 | |
| EP2928915A1 (en) | Fgf-10 complexes | |
| CN104693300B (zh) | 改良型聚乙二醇化重组人干扰素α2b | |
| Shrivastava et al. | Plasmodium falciparum FIKK9. 1 is a monomeric serine–threonine protein kinase with features to exploit as a drug target. | |
| RU2775696C2 (ru) | Модифицированная l-аспарагиназа | |
| EP3741850A1 (en) | Polypeptide with asparaginase activity, expression cassette, expression vector, host cell, pharmaceutical composition, methods for producing a polypeptide with asparaginase activity and for preventing or treating cancer, and use of a polypeptide | |
| HK40029594B (en) | Modified l-asparaginase | |
| HK40029594A (en) | Modified l-asparaginase | |
| BR102018076595A2 (pt) | polipeptídeo com atividade asparaginase, polinucleotídeo, cassete de expressão, vetor de expressão, célula hospedeira, composição farmacêutica, métodos para produzir um polipeptídeo com atividade asparaginase e para prevenir ou tratar neoplasias, e, uso de um polipeptídeo | |
| Rolfes | Apoptosis and cell cycle regulation in a basal model system: insights from the placozoan Trichoplax adhaerens | |
| Saad et al. | Salivary flow, sodium renal excretion, urinary volume and arterial blood pressure induced by pilocarpine: influence of nitric oxide |