[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

SA517381676B1 - Pd-1 أجسام مضادة ضد وطرق استخدامها - Google Patents

Pd-1 أجسام مضادة ضد وطرق استخدامها Download PDF

Info

Publication number
SA517381676B1
SA517381676B1 SA517381676A SA517381676A SA517381676B1 SA 517381676 B1 SA517381676 B1 SA 517381676B1 SA 517381676 A SA517381676 A SA 517381676A SA 517381676 A SA517381676 A SA 517381676A SA 517381676 B1 SA517381676 B1 SA 517381676B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
antibody
cancer
amino acid
antibodies
definition
Prior art date
Application number
SA517381676A
Other languages
English (en)
Inventor
راجبال أرفيند
يوسف سوسن
أوت يوس كارين
كيم تشو هيلين
هو وايزين
نوبيا أبديتش ياسمينا
Original Assignee
رينات نيوروساينس كوربوريشن
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by رينات نيوروساينس كوربوريشن filed Critical رينات نيوروساينس كوربوريشن
Publication of SA517381676B1 publication Critical patent/SA517381676B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

يوفر الاختراع الحالي أجسام مضادة معارضة التي ترتبط مع بروتين موت خلية مبرمج 1 (programmed cell death protein 1) (PD-1) وطرق استخدامها. يمكن استخدام أجسام مضادة ضد PD-1 بمفردها علاجيا أو في اتحاد مع علاجات أخرى لمعالجة سرطان وأمراض أخرى. شكل 1( أ)

Description

‏أجسام مضادة ضد 00-1 وطرق استخدامها‎
ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF ‏الوصف الكامل‎ خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة؛ ‎Ollie‏ أجسام مضادة كاملة الطول التي تريط -0]م 1. يتعلق الاختراع إضافيا بتركيبات تشمل أجسام مضادة مع ‎(PD-1‏ وطرق استخدام أجسام ‎alias‏ ضد 10-1 كدواء. تتعلق تجسيدات معينة بطرق استخدام أجسام مضادة ضد ‎PD-1‏ للمعالجة؛ منع و/أو تشخيصض أمراض متعددة؛ بما فى ذلك مرض فرط ا لانقسام » مثلا السرطان . إن 00-1 هو مستقبل عبر الغشاء من النوع الأول 55-50 كيلو دالتون الذي تم تعريفه بصورة أصلية في خط خلية ‎T‏ تخضع لاستماته يحثها التنشيط. يظهر 00-1 على خلايا 1 خلايا 8؛ وخلايا بلعمة كبيرة. المركبات الترابطية لأجل 60-1 هي 00-12 ‎PD- (B7-DC)‏ 1 (87-111) أعضاء عائلة 87. إن ‎PD-1‏ هو عضو من العائلة الفائقة للجلوبيولين المناعي ‎(Ig) (immunoglobulin)‏ الذي يحتوي على مجال يشبه ‎V‏ وا فردي في منطقة خارج الخلية. يحتوي مجال سيتوبلازمي 10-1 على اثنين من ‎tyrosines‏ مع معظم ‎tyrosine‏ القريب للغشاء ‎VAYEEL)‏ في ‎PD-1‏ ‏فأري) الواقع داخل وحدة تكرار تثبيطية معتمدة على ‎tyrosine‏ المستقبل المناعي -101070100) ‎.(ITIM) receptor tyrosine—based inhibitory motif)‏ يشير وجود ‎ITIM‏ على ‎PD-1‏ 5 إلى أن الجزيء هذا يعمل على تخفيف إرسال إشارة مستقبل مولد ضد عن طريق استخدام ‎phosphatases‏ سيتويلازمية. تشترك بروتينات 00-1 البشري والفأري فى حوالى 760 حمض أميني متطابق مع الحفاظ على أربعة مواقع ‎N-glycosylation‏ محتملة؛ ومتخلفات التي تحدد المجال /١-0ا.‏ يتم الحفاظ أيضا على ‎TIM‏ فى منطقة السيتوبلازمي ووحدة تكرار تشبه ‎ITIM‏ ‎ll‏ تحيط ‎tyrosine‏ طرفى 08100 بين ‎orthologues‏ البشرية والفأرية.
العلاج المناعي للسرطان ينطوي تقليديا على طرق معقدة باستخدام خلايا وتحضيرات فردية ومستهلكة للوقت. ‎clas‏ إن العلاج المناعي للسرطان المعتمد على جسم مضاد أحادي النسخ المعتمد على انقطاع الإشارات الكابحة التي يتم توصيلها إلى النظام المناعي التلاؤمي تبين أنه واعد في الطب السريري خلال ‎dae)‏ العلاج المناعي النظامي المتوفر تجاريا. مع ذلك؛ هناك حاجة مستمرة في الفن للحصول على علاجات أكثر أمانا وأكثر فعالية للسرطان. الوصف العام للاختراع تتوافر أجسام مضادة التي تتفاعل بينيا بصورة انتقائية مع 00-1. يتضح أن الأجسام المضادة ضد 00-1 المعينة فعالة في الجسم الحي لمنع و/أو لعلاج السرطان. بصورة مميزة؛ الأجسام المضادة ‎aca‏ 00-1 المتوافر هنا تربط 00-1 بشري؛ 338 سينومولجس؛ وفأر. بصورة 0 مفيدة أيضاء تكون الأجسام المضادة ضد 00-1 المتوافرة هنا فعالة في الجسم الحي لإثارة انقسام ‎Jaks‏ ‏تتوافر هنا أجسام مضادة معارضة معزولة التي ترتبط بصفة خاصة مع 50-1 ومنع أو خفض التأثير الحيوي من 00-1. في بعض التجسيدات؛ قد يكون الجسم المضاد المعارض عبارة عن جسم مضاد بشري»؛ مكتسب السمة البشرية؛ أو خيمري. يتعلق الاختراع المبين هنا بأجسام مضادة التي ترتبط مع ‎PD-1‏ ‏في أحد الجوانب؛ يوفر الاختراع جسم مضاد معارض معزول الذي يرتبط بصفة خاصة مع ‎(PD-1‏ حيث يشتمل الجسم المضاد على منطقة متغيرة لسلسلة ثقيلة 00810 ‎(heavy‏ ‎(VH) variable region)‏ تشمل منطقة تحديد تكميلية ‎VH‏ واحدة ‎(complementarity‏ ‎determining region one)‏ (41ا00) ‎CDR2‏ 1ا/اء 4 ‎VH CDR3‏ من ‎VH‏ لها ترتيب حمض أميني منتقى من المجموعة المتكونة من تعريف الترتيب رقم: 3؛ تعريف الترتيب رقم: 4؛ تعريف الترتيب رقم: 5؛ وتعريف الترتيب رقم: 6؛ ومنطقة متغيرة لسلسلة خفيفة ‎(light chain‏ ‎(VL) variable region)‏ تشمل ‎VL CDR3 4 «VL CDR2 VL CDRI1‏ من الا لها ترتيب حمض أميني منتقى من المجموعة المتكونة من تعريف الترتيب رقم: 2؛ تعريف الترتيب رقم: 7؛ تعريف الترتيب رقم: 8؛ وتعريف الترتيب رقم: 9.
في بعض التجسيدات؛ تشتمل المنطقة ‎VH‏ على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 3؛ 4؛ 5؛ أو 6؛ أو شكل متباين مع بدائل حمض أميني تحفظية واحدة أو عديدة في متخلفات لا تكون ضمن ‎CDR‏ و/أو تشتمل منطقة ‎VL‏ على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 2 7 8؛ أو ‎<Q‏ أو شكل متباين من ذلك مع بدائل حمض أميني تحفظية واحدة أو عديدة في أحماض أمينية لا تكون ضمن 0014. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على سلسلة خفيفة مشتملة على الترتيب الموضح في تعريف الترتيب رقم: 9 و/أو سلسلة ثقيلة مشتملة على الترتيب الموضح في تعريف الترتيب رقم: 29 أو 38. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على منطقة ‎VH‏ التي تنتج بواسطة ناقل الإظهار مع ‎ATCC‏ رقم تسجيل 121183-/01. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على منطقة 0 الا التي تنتج بواسطة ناقل الإظهار مع ‎ATCC‏ رقم تسجيل ‎PTA-121182‏ ‏في جانب آخرء يوفر الاختراع جسم مضاد معزول الذي يرتبط بصفة خاصة مع 00-1 حيث يشتمل الجسم المضاد على 6041 ‎VH‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: 13؛ ¢14 أو 15( ‎VH CDR2‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: 16« 17« 24« 25« 28 35( أو 36 ‎VH CDR3‏ مشتملة على ترتيب الحمض 5 الأميني من تعريف الترتيب رقم: 18« 23« 26؛ أو 37 0141© ‎VL‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: 10« 22« 30؛ أو 32 ‎VL CDR2‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: 11 20 أو 33 ‎VL CDR35‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: 12( 21 31؛ أو 34. في بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد عبارة عن جسم مضاد بشري؛ جسم مضاد 0 مكتسب السمة البشرية؛ أو جسم مضاد خيمري. في بعض التجسيدات؛ الجسم المضاد هو جسم مضاد أحادي النسخ. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على منطقة ثابتة. في بعض التجسيدات؛ الجسم المضاد هو النوع الفرعي 61و 62وا ‎IgG2Aa‏ 63و 64وا ‎IgG4Ab‏ ‎١646‏ 52280 64واء 52280 ‎(IgG4Ab‏ و5228 0646| البشري. في بعض 5 التجسيدات؛ الجسم المضاد هو من النوع المماثئل ‎١064‏ وبشمل مفصلة ثابتة؛ مثلا 52281.
في جانب ‎AT‏ » يوفر ‎١‏ لاختراع جسم مضاد معزول الذي يرتبط بصفة خاصة مع ‎PD-1‏ ‏وبتنافس مع و/أو يرتبط مع نفس الإبيتوب 00-1 كالأجسام المضادة الموصوفة هنا. في بعض التجسيدات؛ الجسم المضاد ضد 00-1 المتوافر هنا يعزز إفراز ‎IFNy‏ و/أو ‎TNF‏ من ‎TWA‏ ‏5 فى بعض التجسيدات؛ الجسم المضاد ‎aca‏ 00-1 المتوافر هنا يعزز انقسام خلايا 1. في بعض التجسيدات؛ الجسم المضاد ضد 50-1 المتوافر هنا يثبط نمو الورم. في بعض التجسيدات؛ الجسم المضاد ضد 00-1 المتوافر هنا يربط 00-1 بشري ‎PD- |‏ فأري . في جانب آخرء يوفر الاختراع تركيبة دوائية تشمل كمية فعالة علاجيا لجسم مضاد ‎PD-‏ ‏0 1 1 كما هو موصوف هنا ومادة حاملة مقبولة دوائيا . في جانب آخرء يوفر الاختراع عديد نيكلوتيد معزول مشتمل على ترتيب نيكلوتيد يشفر جسم مضاد 10-1 كالموصوف هنا. في جانب ‎AT‏ يوفر الاختراع ناقل مشتمل على عديد نيكلوتيد. في جانب آخرء يوفر الاختراع خلية عائل معزولة التي تنتج تخليقيا جسم مضاد ‎PD-1‏ ‏5 1 كما هو موصوف هنا . في جانب ‎AT‏ 13 يوفر ‎f‏ لاختراع طريقة إنتاج جسم مضاد معارض ضد 1 ‎PD-‏ تشمل الطريقة: زراعة خط خلية الذي ينتج تخليقيا الجسم المضاد الموصوف هنا تحت شروط حيث ينتج الجسم المضاد؛ واسترجاع الجسم المضاد. في جانب ‎AT‏ 13 يوفر ‎f‏ لاختراع طريقة إنتاج جسم مضاد معارض ضد 1 ‎PD-‏ تشمل 0 الطريقة: زراعة خط خلية مشتمل على حمض نووي يشفر جسم مضاد يشمل سلسلة ثقيلة مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 29 أو 38 وسلسلة خفيفة مشتملة
على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 39 تحت شروط حيث ينتج الجسم المضاد ؛ واسترجاع الجسم المضاد. في بعض التجسيدات؛ تشفر السلاسل الثقيلة والخفيفة على نواقل منفصلة. في تجسيدات أخرى» تشفر السلاسل الثقيلة والخفيفة على نفس الناقل.
في جانب ‎jig AT‏ الاختراع طريقة لمعالجة حالة في كائن تشمل إعطاء كائن بحاجة لذلك كمية مؤثرة من التركيبة الدوائية الموصوفة هنا. في بعض التجسيدات؛ الحالة هي مرض السرطان. في بعض التجسيدات؛ ينتقى السرطان من المجموعة المتكونة من سرطان معدي؛ ساركوماء لمفوماء ‎(Lass!‏ سرطان الرأس والرقبة؛ سرطان صعتري»؛ سرطان ظهاري؛ سرطان لعابي؛ سرطان ‎ASH‏ سرطان المعدة؛ سرطان الغدة الدرقية؛ سرطان ‎(Al‏ سرطان المبيض؛
0 سرطان الثدي؛ سرطان ‎(bling ll‏ سرطان المرئ؛ سرطان البنكرياس؛ ورم دبقي؛ لوكيميا؛ ورم نقوي متعدد؛ كارسينوما خلية كلوية؛ سرطان المثانة؛ سرطان عنق الرحم؛ كارسينوما مشيمية؛ سرطان القولون؛ سرطان الفم؛ سرطان الجلد؛ وميلانوما. في بعض التجسيدات؛ الكائن هو مريض بالغ معالج مسبقا من ميلانوما انبثاثية أو متقدمة موضعيا؛ سرطان رقبة ورأس لخلية حرشفية ‎«(SCHNC) (squamous cell head and neck cancer)‏ كارسيتوما مبيض» ساركوماء أو
5 تراجع أو معاندة لمفومة ‎Hodgkin‏ تقليدية ‎.(cHL) (classic Hodgkin’s Lymphoma)‏ في بعض التجسيدات؛ قد يكون السرطان معاند للبلاتنيوم و/أو مقاوم للبلاتنيوم؛ مثلا سرطان مبيض معاند و/أو مقاوم للبلاتنيوم» سرطان ثدي معاند و/أو مقاوم للبلاتنيوم» أو سرطان رئة معاند و/أو مقاوم للبلاتنيوم. في بعض التجسيدات؛ يعطى جسم مضاد ضد 10-1 عند جرعة حوالي 0.5 مجم/ كجم؛ حوالي 1 مجم/ كجم؛ حوالي 3 مجم/ كجم أو حوالي 10 مجم/ كجم. في بعض
0 التجسيدات؛ يعطى الجسم المضاد ضد 00-1 مرة واحدة كل 7 14( 21؛ أو 28 يوم. في بعض التجسيدات؛ يعطى الجسم المضاد ضد 50-1 في الوريد أو تحت الجلد.
في جانب آخرء يوفر الاختراع طريقة تثبيط نمو ورم أو تقدم في كائن يعاني من ورم؛ تشمل إعطاء إلى الكائن كمية مؤثرة من التركيبة الدوائية كما هو موصوف هنا. في جانب آخرء يوفر الاختراع طريقة تثبيط أو منع انبثاثات ‎WIS‏ سرطانية في كائن» تشمل 5 إعطاء كائن بحاجة لذلك كمية مؤثرة من التركيبة الدوائية كما هو موصوف هنا.
في جانب ‎«AT‏ يوفر الاختراع طريقة تحث تراجع ورم في كائن لديه ورم يظهر ‎PD-1‏ ‏تشمل إعطاء الكائن كمية مؤثرة من التركيبة الدوائية كما هو موصوف هنا. في بعض التجسيدات؛ يمكن إعطاء الجسم المضاد عن غير الطريق المعوي في كائن. في بعض التجسيدات؛ الكائن هو بشري. في بعض التجسيدات؛ قد تشمل إضافيا الطريقة إعطاء كمية مؤثرة من عامل علاجي ثاني. في بعض التجسيدات؛ العامل العلاجي الثاني ¢ على سبيل المثال 120010 ‎«palbociclib‏ ‏جسم مضاد ضد 04ا07؛ جسم مضاد ضد 4-188؛ أو جسم مضاد 00-1 ثاني. يتوافر أيضا استخدام أي أجسام مضادة لمعارض ضد 50-1 المتوافرة هنا في تصنيع دواء لمعالجة سرطان أو من أجل تثبيط تقدم أو نمو ورم في كائن بحاجة لذلك. في بعض التجسيدات؛ 0 يخفض جسم مضاد معارض ضد 00-1 إكساب الوزن في الكائن. يتوافر ‎Lad‏ أجسام مضادة لمعارض ضد 00-1 للاستخدام في معالجة سرطان لتثبيط تقدم أو نمو ورم في كائن بحاجة لذلك. في بعض التجسيدات؛ السرطان هوء؛ على سبيل المثال؛ بدون تحديد» سرطان معدي؛ ساركوما؛ لمفومة؛ لمفومة ‎(HOAGKIN‏ لوكيميا؛ سرطان الرأس والرقبة؛ سرطان ‎(Gina‏ سرطان ظهاري؛ سرطان لعابي» سرطان ‎alll‏ سرطان المعدة؛ سرطان الغدة الدرقية؛ 5 سرطان الرئة (بما في ذلك؛ على سبيل المثال؛ كارسينوما لخلية رئة غير صغيرة)؛ سرطان المبيض؛ سرطان الثدي»؛ سرطان ‎lig pall‏ سرطان المرئ» سرطان البنكرياس» ورم دبقي» لوكيميا» ورم نقوي متعدد؛ كارسينوما خلية كلوية؛ سرطان المثانة؛ سرطان عنق الرحم؛ كارسينوما مشيمية؛ سرطان القولون؛ سرطان الفم؛ سرطان الجلد؛ وميلانوما. في جانب ‎AT‏ ¢ يوفر الكشف الحالي طريقة لحث استمناع أو تأثير علاجي للقاح من أجل 0 معالجة سرطان في كائن ثديي؛ تحديدا بشري؛ حيث تشمل الطريقة إعطاء الكائن الثديي الذي يتلقى اللقاح كمية مؤثرة من جسم مضاد معارض ضد 50-1 المتوافر عن طريق الكشف الحالي. في جانب ‎AT‏ يوفر الكشف الحالي طريقة لمعالجة سرطان في كائن ثديي؛ تحديدا بشري؛ حيث تشمل الطريقة إعطاء الكائن الثديي (1) كمية مؤثرة من لقاح قادر على حث استجابة مناعية ضد خلايا السرطان و(2) كمية مؤثرة من جسم مضاد معارض ضد 20-1 المتوافر عن ‎Gob‏ ‏5 الكشف الحالي.
شرح مختصر للرسومات الشكل 1( يصور رسم بياني يلخص وزن جسم لفئران معالجة مع جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ ‏الشكل 1(ب) يصور رسم بياني يلخص وزن جسم لفئران معالجة مع جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ ‏الشكل 1(ج) يصور رسم بياني يلخص وزن جسم لفئران معالجة مع جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ ‏الشكل 1(د) يصور رسم بياني يلخص وزن جسم لفئران معالجة مع جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ ‏10 الشكل 1(ه) يصور رسم بياني يلخص وزن جسم ‎OAR‏ معالجة مع جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ ‏الشكل 2(ا) يصور رسم بياني يلخص 5050 من أجل ارتباط جسم مضاد ضد ‎PD-1‏ ‏مع ‎DA‏ 1 نشطة بشرية أولية. الشكل 2(ب) يصور رسم بياني يلخص 5050 من أجل ارتباط جسم ‎alias‏ ضد ‎PD-1‏ ‏5 مع خلايا 1 نشطة سينومولجس أولية. الشكل 3 يصور رسم بياني بالأعمدة يلخص انقسام خلايا ‎T‏ 0004 منشطة مزروعة معالجة كما يلي (أ) لا يوجد جسم مضاد؛ (ب) مقارن نوع ‎tiles‏ (ج) 50112.1؛ )3( ‎(C1‏ (ه) ‎(C2‏ ‏)5( 3©؛ (ز) ‎tmAbl‏ (ح) ألطظ؛ (ط) ‎tmAb4‏ (ى) كططهم؛ )&( 6طهمم؛ ‎(J)‏ 7حطمهه؛ (م) 9ه؛ (ن) 010(؛ (س) ‎tmAbl1‏ (ع) 8014؛ (ف) ‎tMADLS‏ (ص) 16طخ. الشكل 4 يصور رسم بياني بالأعمدة يلخص انقسام خلايا ‎T‏ 0008 منشطة مزروعة معالجة كما يلي (أ) لا يوجد جسم مضاد؛ (ب) مقارن نوع ‎tiles‏ (ج) 50112.1؛ )3( ‎(C1‏ (ه) ‎(C2‏ ‏)5( 3©؛ (ز) ‎tmAbl‏ (ح) ألطظ؛ (ط) ‎tmAb4‏ (ى) كططهم؛ )&( 6طهمم؛ ‎(J)‏ 7حطمهه؛ (م) 9ه؛ (ن) 010(؛ (س) ‎tmAbl1‏ (ع) 8014؛ (ف) ‎tMADLS‏ (ص) 16طخ. الوصف التفصيلي:
‏الموضح هنا أجسام مضادة ترتبط بصفة خاصة مع 00-1. تتوافر طريقة لصنع أجسام‎ ‏تركيبات مشتملة على تلك الأجسام المضادة وطرق استخدام تلك الأجسام‎ (PD-1 ‏مضادة ضد‎ ‏ويمكن استخدامها في‎ cag ‏المضادة كدواء. يمكن استخدام أجسام مضادة ضد 50-1 لتثبيط تقدم‎ ‏منع و/أو معالجة سرطان و/أو أمراض أخرى.‎ ‏التقنيات العامة‎ 5 ‏إن ممارسة الاختراع الحالي سوف تستعمل؛ إذا لم يحدد خلاف ذلك؛ تقنيات تقليدية للحيوية‎ ‏أحياء الخلية؛ الكيمياء الحيوية وعلم‎ ale ‏الأحياء المجهرية؛‎ ale ‏الجزيئية (متضمنة تقنيات تخليقية)؛‎ ‏بالكامل في الأدبيات؛ مثل:‎ dag pie ‏المناعة؛ وذلك ضمن مهارة الفن. إن هذه التقنيات‎
Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 10 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A
Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell
Culture (RI. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue
Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, 15 eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic
Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C.
Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M.
Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis 20 et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999);
Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988- 1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. 5
‎Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory‏ ‎manual (E.
Harlow and D.
Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press,‏ ‎The Antibodies (M.
Zanetti and J.D.
Capra, eds., Harwood‏ ;)1999 ‎Academic Publishers, 1995).‏ التعريفات يجب فهم المصطلحات التالية؛ ما لم يحدد خلاف ذلك؛ على أن لها المعاني التالية: يشير المصطلح "جزيء معزول ‎molecule)‏ 15018160)" إلى جزيء (حيث يكون الجزيء هوء على سبيل المثال؛ عديد ببتيد؛ عديد نيكلوتيد؛ أو جسم مضاد) الذي يكون استنادا إلى أصلها أو مصدر اشتقاق (1) غير مصاحب للمكونات المصاحبة طبيعيا له والتي تلازمه في حالته الأصلية؛ (2) يكون خالي 0 جوهريا من الجزيئات الأخرى من نفس المصدر مثلاء أنواع» خلية تم إظهارهاء مكتبة؛ إلخ» (3) يعبر ‎aie‏ بخلية من أنواع مختلفة؛ أو (4) لا يظهر طبيعيا. لذلك» فإن الجزيء الذي يكون مخلق كيميائيا؛ أو يظهر في نظام خلوي مختلف عن النظام الذي ‎La‏ منه طبيعياء يكون 'معزول ‎(isolated)‏ من مكوناته المصاحبة له طبيعيا. قد يكون الجزيء ‎Lad‏ خالي جوهريا من المكونات المصاحبة له طبيعيا بواسطة العزل؛ باستخدام تقنيات تنقية معروفة جيدا في الفن. يمكن اختبار تجانس أو نقاء 5 الجزيء عن طريق عدد من الوسائل المعروفة جيدا في الفن. على سبيل ‎(JOA‏ يمكن اختبار نقاء عينة عديد ببتيد باستخدام تحلل كهربي هلام ‎polyacrylamide‏ وتبقع الهلام لتصوير عديد ببتيد باستخدام تقنيات معروفة جيدا في الفن. لأغراض معينة؛ قد يتوفر انحلال أعلى باستخدام تحليل ‎HPLC‏ أو وسائل أخرى معروفة جيدا في الفن للتنقية. إن "جسم مضاد ‎"(antibody)‏ هو جزيء جلوبيولين مناعي ‎(immunoglobulin)‏ قادر 0 على الارتباط الخاص مع هدف؛ مثل ‎carbohydrate‏ عديد نيكلوتيد؛ الليبيد؛ عديد ببتيد؛ إلخ؛ خلال موقع إدراك ‎alse‏ ضد واحد على الأقل» موضوع في المنطقة المتغيرة من جزيء الجلوبيولين المناعي. حسب الاستخدام هناء لا يشتمل المصطلح على أجسام مضادة أحادية النسخ أو متعددة النسخ سليمة فقط» لكن أيضاء ما لم يحدد خلاف ذلك؛ أي بروتين ارتباط مولد ضد منه الذي يتنافس مع جسم مضاد سليم من أجل ارتباط خاص؛ بروتينات التحام تشمل بروتين ارتباط ‎Age‏ ضدء وأي 5 ميئة معدلة أخرى من جزيء الجلوبيولين المناعي التي تشمل موقع إدراك مولد ضد. تتضمن أقسام
ارتباط مولد ‎cam‏ على سبيل ‎(FV (Fd (F(ab’)2 Fab’ Fab (Jia‏ أجسام مضادة لمجال ‎lic (dAbS)‏ أجسام مضادة من سمكة قرش وفصيلة الجمال)؛ شدف تتضمن مناطق تحديد تكميلية ‎(CDRs)‏ أجسام مضادة لشدفة متغيرة سلسلة فردية ‎(single chain variable fragment‏ ‎(scFv) antibodies)‏ أجسام كبيرة؛ أجسام صغيرة؛ أجسام داخلية؛ أجسام ثنائية؛ أجسام ثلاثية؛ أجسام رباعية؛ ‎(bis—SCFV 5 V-NAR‏ وعديد ببتيدات تحتوي على الأقل على قسم من جلوبيولين مناعي كافي لمنح ارتباط مولد ضد خاص إلى عديد ببتيد. يتضمن الجسم المضاد جسم مضاد من أي صنف؛ مثل ‎(IGG‏ هواء أو 4/ا9ا ‎Sl)‏ صنف فرعي من ذلك)؛ وليس هناك حاجة ‎oY‏ يكون الجسم المضاد من أي صنف خاص. اعتمادا على ترتيب الحمض الأميني للجسم المضاد للمنطقة الثابتة لسلاسله الثقيلة؛ يمكن تحديد الجلوبيولينات المناعية إلى أصناف مختلفة. هناك خمس أصناف
0 رئيسية من الجلوبيولينات المناعية: ‎(IgA‏ ناوا ‎(IgM 5 (IgG (IGE‏ والعديد منها قد يقسم إضافيا إلى أصناف فرعية (نظائر)؛ مثلا 961ا ‎IgA] 964 (IgG3 (IgG2‏ و982ا. تسمى المناطق الثابتة للسلسلة الثقيلة المقابلة للأصناف المختلفة من الجلوبيولينات المناعية ‎«delta «alpha‏ ‎«gamma «epsilon‏ ولا70؛ على الترتيب. تكون بناءات الوحدة الفرعية والهيئات ثلاثية الأبعاد من أجل الأصناف المختلفة من الجلوبيولينات المناعية معروفة جيدا.
تشير 'منطقة متغيرة ‎"(variable region)‏ من جسم مضاد إلى المنطقة المتغيرة من جسم مضاد سلسلة خفيفة أو المنطقة المتغيرة من جسم مضاد سلسلة ثقيلة؛ سواء بمفردها أو في اتحاد. كما هو معروف في ‎(oll)‏ فإن المناطق المتغيرة لكل من السلاسل الثقيلة والخفيفة تتكون كل منها من 4 مناطق إطار ‎(FRs) (framework regions)‏ متصلة بواسطة ثلاث مناطق محددة للتكملة ‎(CDRs)‏ معروفة أيضا بأنها مناطق مفرطة ‎pull‏ وتساهم في تكوين موقع ارتباط مولد ضد
لأجسام مضادة. إذا كانت الأشكال المتباينة من منطقة متغيرة تابعة مرغوية؛ تحديدا مع استبدال متخلفات حمض أميني خارج منطقة ‎CDR‏ (أي؛ في منطقة الإطار)؛ يمكن تحديد استبدال حمض أميني ملائم؛ يفضل؛ استبدال حمض أميني تحفظي؛ بمقارنة المنطقة المتغيرة التابعة مع المناطق المتغيرة من الأجسام المضادة الأخرى والتي تتضمن ترتيبات ‎CORI‏ و0042 في نفس فئة مقبولة كمنطقة متغيرة تابعة
(Chothia and Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987). 5
في تجسيدات معينة؛ يتم إزالة خط محدد لأجل ‎CDR‏ وتحديد متخلفات تشمل موقع الارتباط
لجسم مضاد بإذابة بناء الجسم المضاد و/أو إذابة بناء معقد مركب ترابطي- جسم مضاد. في تجسيدات معينة؛ يمكن إجراء ذلك بالعديد من التقنيات المعروفة للمهرة في الفن؛ مثل تحليل بلوري أشعة ‎4X‏ تجسيدات معينة؛ يمكن استعمال العديد من طرق التحليل لتحديد أو تقريب مناطق ‎.CDR‏ في تجسيدات معينة؛ يمكن استعمال العديد من طرق التحليل لتحديد أو تقريب مناطق ‎.CDR 5‏ إن أمثلة على تلك الطرق تتضمن؛ بدون تحديد؛ تحديد ‎(Kabat‏ تحديد 000118؛ تحديد ‎(ADM‏ تحديد ‎Jail‏ وتحديد توافقي. يكون تحديد ‎Kabat‏ هو معيار لترقيم المتخلفات في الجسم المضاد وستخدم نموذجيا لتحديد مناطق ‎.CDR‏ انظن ‎Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214- lis‏ 8. يكون تحديد ‎Chothia‏ مشابه لتحديد ‎(Kabat‏ لكن تحديد ‎Chothia‏ يستخدم في مواضع مناطق 0 حلقة بنائية معينة. ‎Ole lal‏ ‎Chothia et al., 1986, J.
Mol.
Biol., 196: 901-17; Chothia et al., 1989,‏ ‎Nature, 342: 877-83.‏ يستخدم تعريف ‎ADM‏ مجموعة متكاملة لبرنامج حاسوب ناتج بواسطة ‎Oxford Molecular‏ ‎Group‏ يشكل بنية جسم مضاد. انظرء مثلاء ‎Martin et al., 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272; “AbM™ A 15‏ ‎Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies,” Oxford,‏ ‎UK; Oxford Molecular, Ltd.‏ إن تعريف ‎ADM‏ يحدد نماذج البناء الثالثي للجسم المضاد من الترتيب الأولي باستخدام اتحاد من قواعد البيانات المعروفة وطرق ابتدائية مع الجسم المضاد مثل تلك الموصوفة في ‎Samudrala et al., 1999, “Ab Initio Protein Structure Prediction Using a 20‏ ‎Combined Hierarchical Approach,” in PROTEINS, Structure, Function and‏ ‎Genetics Suppl., 3:194-198.‏ يعتمد تعريف الاتصال على تحليل بناءات بلورة المعقد المتاح. انظر؛ مثلاء ‎MacCallum et‏ ‎J.
Mol.
Biol., 5:732-45‏ ,1996 ,.81. بطريقة ‎«gal‏ يشار ‎ad]‏ هنا ‎Jie‏ "تعريف توافقي ‎"(conformational definition) 5‏ من ‎«CDRs‏ يمكن تحديد مواضع ‎CDRs‏ كمتخلفات تتيح تساهمات ‎enthalpic‏ مع ارتباط مولد ضد. انظر؛ ‎Makabe et al., 2008, Journal Jia‏
‎Biological Chemistry, 283:1156-6‏ آه. لا تزال هناك تعريفات حدودية لأجل ‎CDR‏ ‏أخرى لا تقع ضمن نطاق الطرق المذكورة أعلاه؛ لكنها سوف تتراكب مع هذا مع قسم على الأقل من ‎(Kabat CDRs‏ على الرغم من أنها قد تقصر أو تطول في ضوء التكهنات أو الاكتشافات ‎dual‏ بأن المتخلفات المعينة أو مجموعات المتخلفات لا تؤثر بصورة واضحة على ربط ‎Age‏ ‏5 الضد. كما هو مستخدم هناء تشير ‎CDR‏ إلى ‎CDRs‏ محددة بأي من الطرق المعروفة في الفن؛ متضمنة اتحادات من الطرق. قد تستعمل الطرق المستخدمة هنا ‎CDRS‏ محددة طبقا لأي من هذه الطرق. لأي تجسيد معين يتضمن أكثر من ‎CDR‏ واحد؛ قد تحدد ‎CDRS‏ طبقا لأي من تحديدات
‎«Chothia «Kabat‏ تمدد» ‎¢ADM‏ اتصال» و/أو توافقية. كما هو معروف في ‎all‏ تشير 'منطقة ‎"(constant region) dnt‏ لجسم مضاد إلى 0 المنطقة الثابتة لسلسلة خفيفة جسم مضاد أو المنطقة الثابتة لسلسلة ‎AL‏ جسم مضاد؛ إما بمفردها
‏أو في اتحاد. حسب الاستخدام هناء يشير "جسم مضاد أحادي النسخ ‎"(monoclonal antibody)‏ إلى جسم مضاد ناتج من مجموعة أجسام مضادة متجانسة جوهرياء أي؛ أن الأجسام المضادة الفردية المشتملة على المجموعة تكون متماثلة ما عدا الطفرات طبيعية الحدوث التي قد توجد بكميات ثانوية. إن الأجسام المضادة أحادية النسخ تكون خاصة بصورة عالية؛ موجهة ضد موقع مولد للمضاد فردي. إضافة ‎cll‏ على العكس من مستحضرات جسم مضاد عديد النسخ؛ التي تتضمن نموذجيا أجسام مضادة مختلفة موجهة ضد محددات (إبيتويات) مختلفة؛ فإن كل جسم مضاد أحادي النسخ يكون موجه ضد محدد فردي على مولد المضاد. إن المادة المعدلة "أحادية النسخ ‎"(monoclonal‏ تشير إلى سمة الجسم المضاد حسب الحصول عليه من مجموعة أجسام مضادة متجانسة جوهرباء ولا 0 يجب تقيدها بأن يتطلب إنتاج جسم مضاد بأي طريقة خاصة. على سبيل المثال؛ تحضر الأجسام المضادة أحادية النسخ المستخدمة طبقا للاختراع الحالي بطريقة الورم الهجين الموصوفة أولا بواسطة ‎«Kohler and Milstein, 1975, Nature 5‏ أو يمكن تحضيرها بطرق ‎DNA‏ تخليقية مثل الموصوفة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 4816567. يمكن أيضا عزل الأجسام المضادة أحادية النسخ من مكتبات بلعم متولدة باستخدام التقنيات الموصوفة في ‎McCafferty et al.,‏ ‎Nature 348:552-554 5‏ ,1990( على سبيل المثال. حسب الاستخدام هناء يشير جسم مضاد ‎usd’‏ السمة البشرية ‎(humanized)‏ إلى أشكال من أجسام مضادة ‎Oe)‏ فأرية) غير بشرية
عبارة عن جلوبيولينات مناعية خيمربة ‎(Chimeric)‏ سلاسل جلوبيولين مناعية؛ أو شدف من ذلك (مثل ‎F(@b')2 Fab’ Fab (Fv‏ أو ترتيبات ربط مولد ضد أخرى للأجسام المضادة) التي تحتوي على ترتيب أدنى مشتق من جلوبيولين مناعي غير بشري. يفضل؛ أن تكون الأجسام المضادة مكتسبة السمة البشرية عبارة عن جلوبيولينات مناعية بشرية (جسم مضاد مستقبل) التي تستبدل فيها متخلفات من ‎CDR‏ للمستقبل بمتخلفات من ‎CDR‏ من نوع غير بشري (جسم مضاد مانح) مثل فأر؛ ‎(a‏ ‏أو أرنب لها الخصوصية؛ الانجذابية؛ والقدرة المطلوية. قد يشتمل الجسم المضاد مكتسب السمة البشرية على متخلفات توجد سواء في جسم مضاد مستقبل أو في ‎dels CDR‏ أو ترتيبات إطارء لكن تتضمن لتكرير إضافي وأداء جسم مضاد أمثل. يعني "جسم مضاد بشري ‎"(human antibody)‏ جسم مضاد له ترتيب حمض أميني 0 مطابق لذلك لجسم مضاد ناتج بواسطة بشري و/أو مصنع باستخدام أي من التقنيات لتحضير الأجسام المضادة البشرية المعلنة هنا. يستثنى هذا التعريف للجسم المضاد البشري بصفة خاصة جسم مضاد مكتسب السمة البشرية يشمل متخلفات ارتباط مولد ضد غير بشري. يشير المصطلح "جسم مضاد خيمري ‎"(chimeric antibody)‏ إلى أجسام مضادة التي فيها تشتق ترتيبات المنطقة المتغيرة من أحد الأجناس وتشتق ترتيبات المنطقة الثابتة من أجناس 5 أخرى؛ مثل جسم مضاد فيه ترتيبات المنطقة المتغيرة مشتقة من جسم مضاد فأري وترتيبات المنطقة الثابتة مشتقة من جسم مضاد بشري. يشير المصطلح ‎(Epitope) sind’‏ إلى قسم من الجزيء يمكن إدراكه وارتباطه بأي جسم مضاد عند منطقة ارتباط ‎alge‏ ضد لجسم مضاد واحدة أو أكثر. تتكون الإبيتويات ‎Bale‏ من تجميع سطح لجزيئات ‎Jie‏ أحماض أمينية أو سلاسل جانبية لسكر ولها خواص بنائية ثلاثية الأبعاد نوعية 0 بالإضافة إلى خواص شحن معينة. في بعض التجسيدات؛ قد يكون الإبيتوب هو إبيتوب بروتين. قد يكون إبيتوب البروتين خطي أو توافقي. في الإبيتوب الخطي؛ تظهر كل نقاط التفاعل البيني بين البروتين وجزيء التفاعل البيني (مثلا جسم مضاد) خطيا على طول ترتيب الحمض الأميني الأولي من البروتين. يشتمل "إبيتوب غير خطي ‎"(nonlinear epitope)‏ أو إبيتوب توافقي ‎"(conformational epitope)‏ على عديد ببتيدات غير مجاورة (أو أحماض أمينية) داخل بروتين مولد للضد الذي يرتبط مع جسم مضاد يخص الإبيتوب. إن المصطلح ‎Age gl‏ للضد ‎"(antigenic epitope)‏ كما هو مستخدم هناء يحدد كقسم من مولد ضد يرتبط معه جسم مضاد
بصفة خاصة كما تحدد بأي من الطرق المعروفة في الفن؛ على سبيل ‎(JB‏ بواسطة اختبارات مناعية تقليدية. بمجرد تحديد إبيتوب مرغوب على مولد ضد؛ يكون من الممكن توليد أجسام مضادة لهذا الإبيتوب؛ ‎Ole‏ باستخدام التقنيات الموصوفة في المواصفة الحالية. بطريقة بديلة؛ أثناء عملية ‎(ais)‏ فإن توليد وتمييز أجسام مضادة قد يظهر معلومات حول الإبيتويات المرغوية. من هذه المعلومات؛ يكون من الممكن حجب الأجسام المضادة تنافسيا من الارتباط مع نفس الإبيتوب. إن طريق لتحقيق هذا هي إجراء دراسات تنافس وتنافس عابر لإيجاد أجسام مضادة تتنافس أو تتنافس بصورة عابرة مع بعضها البعض للارتباط مع ‎Mie (PD-1‏ أجسام مضادة تتنافس للارتباط مع ‎alge‏ ضد. كما هو مستخدم ‎(ls‏ يشير المصطلح 00-17" إلى أي شكل من 00-1 وأشكال متباينة 0 .من ذلك التي تحتفظ بجزء على الأقل من نشاط 00-1. ما لم يشار إليها بشكل مختلف؛ مثلا عن طريق الإشارة الخاصة إلى 00-1 بشري؛ يتضمن 00-1 جميع أنواع الثشييات من ترتيب 0-1م الأصلي؛ مثلا بشري؛ كلبي؛ سنوري؛ فرسي؛ ويقري. وجد 00-1 بشري تمثيلي واحد على أنه ‎Uniprot‏ رقم تسجيل 15116 (تعريف الترتيب رقم: 1). يشير المصطلح 'معضد 8900150)' إلى المادة التي تعزز (أي؛ تحث؛ تسبب؛ تعزز؛ أو 5 تزيد) النشاط الحيوي أو تأثير الجزيء الآخر. يتضمن المصطلح معضد المواد التي تريبط مستقبل؛ مثلا جسم ‎(alias‏ والمواد التي تعزز وظيفة المستقبل بدون الارتباط به ‎Sle)‏ عن طريق تنشيط بروتين مصاحب). يشير المصطلح 'معارض ‎'(antagonist)‏ أو 'مثبط ‎(inhibitor)‏ إلى مادة تمنع؛ ‎(Gad‏ ‏تبط تتعادل؛ أو تخفض النشاط الحيوي أو تأثير جزيء آخرء مثلا مستقبل. يشير المصطلح "جسم مضاد معارض ‎"(antagonist antibody)‏ إلى جسم مضاد يرتبط مع هدف ومنع أو خفض التأثير الحيوي للهدف. في بعض التجسيدات؛ يشير المصطلح إلى جسم مضاد يمنع الهدف؛ ‎lie‏ مستقبل 00-1 المرتبط معه لأداء الوظيفة الحيوية. كما هو مستخدم هناء فإن “جسم مضاد معارض ضد 10-1 ‎(anti- 20-1 antagonist‏ ‎"antibody)‏ يشير إلى جسم مضاد قادر على تثبيط نشاط حيوي 00-1 و/أو العرض (الأعراض) 5 اللاحق الذي يتسبب فيه بصورة غير مباشرة 60-1. تشتمل أجسام مضادة معارضة ضد ‎PD-1‏ ‏على أجسام مضادة تعوق؛ تعارض؛ تكبح أو تخفض (لأي درجة موجودة بشكل ملحوظ) النشاط
الحيوي لأجل 00-1؛ متضمنة الأعراض اللاحقة التي يتسبب فيها بصورة غير مباشرة ‎PD-1‏ ‎Mis‏ ارتباط ‎L1‏ -00 وإرسال إشارة ‎cdi‏ ارتباط 00-12 وإرسال إشارة لاحقة؛ تثبيط انقسام خلية آء؛ تثبيط تنشيط خلية ‎oT‏ تثبيط إفراز ‎IFN‏ تثبيط إفراز ‎IL-2‏ تثبيط إفراز ‎(TNF‏ حث ‎dL-10‏ ‏وتثبيط استجابات مناعية مضادة للورم. لأغراض الاختراع الحالي؛ من المفهوم بوضوح أن المصطلح "جسم مضاد معارض ضد 10-1" (يسمى بالتبادل "جسم مضاد 10-1 ‎pastas‏ "جسم مضاد ضد 00-1 معارض" أو "جسم مضاد معارض 00-1) مشتملا كل المصطلحات؛ ‎(stall‏ ‏وحالات الوظيفية والسمات المحددة سابقا حيث يكون 00-1 ذاته؛ هو نشاط حيوي من أجل -00م 1 أو ‎(miss (Jas‏ أو تُعادل عواقب النشاط الحيوي بصورة جوهرية بأي درجة ذات أهمية. في بعض التجسيدات؛ فإن الجسم المضاد ضد 50-1 المعارض يريط 00-1 وزيادة تنظيم استجابة
0 مناعية مضادة للورم. إن أمثلة على أجسام مضادة معارضة ضد 00-1 تتوافر هنا. إن المصطلحات "عديد ببتيد ‎(polypeptide)‏ "أوليجويبتيد ‎(oligopeptide)‏ "ببتيد ‎(peptide)‏ و'بروتين (00016(0)" المستخدمة بصورة تبادلية هنا تشير إلى سلاسل أحماض أمينية بأي طول. قد تكون السلسلة خطية أو متفرعة؛ وقد تشمل أحماض أمينية معدلة؛ و/أو قد تكون متقطعة بواسطة أحماض غير أمينية. تشمل المصطلحات أيضا سلسلة حمض أميني تم تعديلها 5 طبيعيا أو عن طريق التداخل؛ ‎Sle‏ تكوين رابطة ‎dipidation «glycosylation disulfide‏ ‎(phosphorylation acetylation‏ أو أي تعديل أو معالجة أخرى؛ مثل الاقتران مع مكون تعليم ‎component)‏ 100ا©180). يتضمن التعريف ‎lie (liad‏ عديد ببتيدات تحتوي على واحدة أو أكثر من مماثلات لحمض أميني (متضمنة؛ ‎lie‏ أحماض أمينية غير طبيعية؛ إلخ)؛ بالإضافة إلى تعديلات أخرى معروفة في الفن. من المفهوم أن عديد الببتيدات يمكن تواجدها كسلاسل وحيدة
‎(single chains) 0‏ أو كسلاسل متلازمة ‎.(associated chains)‏ كما هو معروف في الفن؛ فإن "عديد نيكلوتيد" أو "حمض نووي" المستخدمان هنا بصورة تبادلية؛ يشيران إلى سلاسل نيكلوتيدات بأي طول؛ وتتضمن ‎RNA DNA‏ قد تكون النيكلوتيدات هي ‎cribonucleotides «deoxyribonucleotides‏ نيكلوتيدات أو قواعد ‎(bases)‏ معدلة؛ و/أو مماثلاتهاء أو أي مادة خاضعة (50058818) يمكن دمجها في سلسلة بواسطة ‎polymerase‏ ‎DNA 5‏ أو ‎polymerase‏ هلا. إن عديد نيكلوتيد قد يشمل نيكلوتيدات معدلة؛ ‎Jie‏ نيكلوتيدات ‎Methylated‏ ومماثلاتها. عند وجوده؛ فإن التعديل لبناء النيكلوتيد يمكن أن يتم قبل أو بعد تجميع
السلسلة. يمكن أن يكون ترتيب النيكلوتيدات متقطع بواسطة مكونات غير نيكلوتيدية. يمكن أن يكون
عديد النيكلوتيد معدلا إضافيا بعد البلمرة ‎(polymerization)‏ مثلا بالاقتران مع مكون تعليم. تتضمن أنواع أخرى من التعديلات؛ ‎Sle‏ "أغطية طرفية ‎(caps)‏ استبدال واحدة أو أكثر من نيكلوتيدات طبيعية الحدوث مع مثيل؛ تعديلات بين النيكلوتيد مثل؛ تلك مع وصلات غير مشحونة
(مثل ‎«phosphoamidates ~~ «phosphotriesters methyl phosphonates‏ ‎ccarbamates‏ لإلخ) ومع وصلات مشحونة ‎«phosphorothioates Ji)‏ ‎cphosphorodithioates‏ إلخ)؛ تلك المحتوية على أشطر متدلية ‎¢(pendant moieties)‏ مثلء؛ بروتينات ‎«foxins «nucleases lis)‏ أجسام مضادة؛ ببتيدات ‎«poly-L-lysine «sla‏ =(«
تلك مع مواد مقحمة ‎psoralen acridine (lie) (intercalators)‏ إلخ)؛ تلك التي تحتوي على
0 مواد كلابية ‎Sic) (chelators)‏ فلزات ‎(metals)‏ فلزات مشعة نشطة ‎«(radioactive metals)‏ 07+ فلزات تأكسدية ‎metals)‏ 00021/6)؛ إلخ)؛ تلك التي تحتوي على ‎calkylators‏ تلك مع وصلات معدلة ‎(Mis)‏ أحماض نووية ‎calpha anomeric‏ إلخ)؛ بالإضافة إلى أشكال غير معدلة
من عديد نيكلوتيد (عديد نيكلوتيدات). إضافيا؛ يمكن استبدال أي من مجموعات ‎Ydroxyl‏ الموجودة
طبيعيا في السكريات ‎Sls (sugars)‏ بواسطة مجموعات ‎phosphonate‏ مجموعات فوسفات؛
5 محمية بمجموعة حماية قياسية؛ أو منشطة لتحضير وصلات إضافية لأجل نيكلوتيدات إضافية؛ أو قد تقترن مع دعامات صلبة (0115م5000 ‎«(SOND‏ إن المجموعة ‎OH‏ الطرفية '5 و'3 يمكن أن تكون 90000 أو مستبدلة مع ‎amines‏ أو أشطر مجموعة تغطية عضوية ‎(organic‏ ‎capping group moieties)‏ بها من 1 إلى 20 ذرة كريون. يمكن ‎Lal‏ اشتقاق ‎hydroxyls‏ ‏الأخرى إلى مجموعات حماية قياسية. يمكن ‎Load‏ أن يحتوي عديد النيكلوتيدات على أشكال ‎Ailes‏
0 ا لسكريات ‎ribose‏ أو ‎deoxyribose‏ المعروفة ‎dale‏ في ‎(oll‏ متضمنة؛ ‎«2’-O-methyl- Jie‏ ‎(2’-O-allyl‏ -27-00020 أو ‎2’-azido-ribose‏ مماثلات ‎Ku‏ كربوكسيلية؛ سكريات ‎alpha—‏ أو ‎cbeta—anomeric‏ سكريات ‎dyxoses i xyloses arabinose i. epimeric‏ سكريات ‎pyranose‏ سكريات ‎sedoheptuloses furanose‏ مماثلات غير دائرية ومماثلات ‎nucleoside‏ غير قاعدي مثل ‎methyl riboside‏ يمكن استبدال واحدة أو أكثر من وصلات
‎phosphodiester 25‏ بمجموعات وصل بديلة. تتضمن مجموعات الوصل البديلة هذه؛ بدون تحديد؛ تجسيدات مستبدل ‎Led‏ فوسفات بواسطة ‎(O)NR2 «P(S)S (“dithioate™) (P(O)S(“thioate”)‏
‎CO «P(O)OR’ (P(O)R ((“amidate”)‏ أو ‎(“formacetal”)‏ 2 ؛ فيها كل من ‎ol‏ ع على حدة هو ‎١١‏ أو ‎alkyl‏ مستبدل ‎of‏ غير مستبدل ‎C)‏ 1-20( يحتوي اختياريا على وصلة ‎ether‏ ‏(-0-) اردق ‎cycloalkenyl «cycloalkyl alkenyl‏ أو الا0ا88. ليست هناك ‎dala‏ لتكون كل الوصلات في عديد النيكلوتيد متماثلة. ينطبق الوصف السابق على كل عديد النيكلوتيدات المشار إليها ‎cla‏ متضمنة ‎.DNA RNA‏
حسب الاستخدام ‎cla‏ جسم مضاد ‎"(interacts with) Jolin’‏ مع 10-1 عندما يكون ثابت تفكك الاتزان مساويا أو أقل من 20 نانوجزيئي جرامي» يفضل أقل من حوالي 6 نانوجزيئي جرامي؛ يفضل أكثر أقل من حوالي 1 نانوجزيئي جرامي, الأكثر تفضيلا أقل من حوالي 0.2
نانوجزيئي جرامي؛ حسب القياس بالطريقة المعلنة هنا في المثال 7.
إن جسم مضاد ‎ag)‏ بصورة مفضلة ‎"(preferentially binds)‏ أو 'يرتبط بصفة خاصة ‎"(specifically binds)‏ (مستخدم بصورة تبادلية هنا) مع إبيتوب يفهم المصطلح جيدا في الفنء وطرق لتحديد ارتباط خاص أو ارتباط بصورة مفضلة ليكون معروف جيدا في الفن. يقال أن الجزيء يظهر ‎Lali)"‏ خاص ‎"(specific binding)‏ أو "ارتباط مفضل ‎"(preferential binding)‏ إذا تفاعل أو ارتبط بصورة متكررة أكثر» بصورة سريعة ‎AST‏ ¢ مع فترة زمنية أكبر و/أو مع انجذابية أكبر
5 مع خلية أو مادة خاصة أكثر منه مع خلايا أو مواد بديلة. إن جسم مضاد ‎fy‏ بصفة خاصة ‎"(specifically binds)‏ أو بصورة مفضلة ‎"(preferentially binds)‏ مع هدف إذا كان يرتبط مع انجذابية أكبرء شراهة؛ سرعة أكبر» و/أو مع فترة زمنية أطول مع ارتباطه مع مواد أخرى. على سبيل ‎(Jad)‏ فإن جسم مضاد يرتبط بصفة خاصة أو بصورة مفضلة مع إبيتوب 00-1 هو جسم مضاد يريط هذا الإبيتوب مع انجذابية ‎ST‏ شراهة ‎ST‏ سرعة ‎«ST‏ و/أو مع فترة زمنية أطول
من ارتباطه مع إبيتويات 00-1 أخرى أو إبيتويات غير ‎PD-1‏ من المفهوم أيضا من قراءة هذا التعريف أنه؛ على سبيل المثال؛ قد يرتبط جسم مضاد (أو شطر أو إبيتوب) بصفة خاصة أو بصورة مفضلة مع هدف أول وقد يرتبط أو لا يرتبط بصفة خاصة أو بصورة مفضلة مع هدف ثان. حسب ‎cell‏ فإن "الارتباط الخاص ‎"(specific binding)‏ أو "الارتباط المفضل ‎(preferential‏ ‎"binding)‏ لا يتطلب بالضرورة (برخم أنه قد يتضمن) ارتباط حصري. بصفة عامة؛ ليس بالضرورة؛
5 أن الإشارة إلى الارتباط تعني ارتباط مفضل.
حسب الاستخدام هناء يشير 'نقي جوهريا ‎"(substantially pure)‏ إلى مادة لها نقاء 750
على الأقل؛ (أي؛ خالية من الملوثات)؛ يفضل ‎«ST‏ لها نقاء 790 على الأقل؛ يفضل ‎ST‏ لها نقاء 795 على ‎(J)‏ أيضا يفضل أكثرء لها نقاء 798 على الأقل» وأكثر تفضيلا» لها ‎oli‏ 799 على الأقل. تتضمن "خلية عائل ‎(host cell)‏ خلية منفردة أو مزرعة خلية التي تكون مستقبلة أو أصبحت مستقبلة لوسط ناقل (أوساط ناقلة) لدمج إدخالات عديد نيكلوتيد. تتضمن خلايا عائل نسل ‎(Progeny)‏ خلية عائل فردية؛ وقد لا يكون النسل بالضرورة مماثلا ‎LIS‏ (في الشكل أو في مكمل ‎DNA‏ الجينومي) للخلية الأم الأصلية بسبب طفرة طبيعية؛ عرضية؛ أو متداولة. تتضمن خلية عائل خلايا مستقبلة لحامل الجين من ‎BLD‏ في الجسم ‎all‏ مع عديد نيكلوتيد (عديد نيكلوتيدات) من هذا الاختراع.
كما هو معروف في الفن؛ يستخدم المصطلح 'منطقة ‎"(Fe region) Fe‏ لتحديد منطقة طرفية-© من سلسلة ثقيلة لجلوبيولين مناعي. قد تكون "المنطقة ‎"(Fc region) Fe‏ هي منطقة ‎Fc‏ ‏لها ترتيب أصلي أو منطقة ‎Fe‏ لشكل متباين. برغم أن حدود المنطقة ‎Fo‏ من سلسلة ثقيلة لجلوبيولين ‎elie‏ لابد أن تكون مختلفة؛ فإن منطقة ‎Fe‏ سلسلة ثقيلة 196 بشري تتحدد عادة بأنها ممتدة من متخلف حمض أميني عند الموضع ‎«Cys226‏ أو من ‎Pro230‏ إلى نهاية ‎carboxyl‏ من ذلك.
5 إن ترقيم المتخلفات في المنطقة © هو ذلك المؤشر القائمة الأوروبية مثلما في ‎Kabat‏ ‎Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.‏ ‎Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991.‏ إن المنطقة ‎Fe‏ من جلوبيولين مناعي تشمل عامة اثنين من مجالات ثابتة ‎«(constant domains)‏ 2 و0113. كما هو معروف في الفن» يمكن أن توجد منطقة © في شكل دايمر أو مونومري.
حسب الاستخدام في ‎«ll‏ فإن 'مستقبل ‎"(Fe receptor) Fc‏ و ‎“FER”‏ يصف مستقبل يرتبط مع المنطقة ‎Fe‏ من الجسم المضاد. إن ‎FER‏ المفضل هو ‎FER‏ بشري له ترتيب أصلي. علاوة على ذلك؛ فإن ‎FOR‏ مفضل هو مستقبل يريط جسم مضاد 196 (مستقبل ‎(Gamma‏ ويتضمن مستقبلات من الأنواع الفرعية ‎(FeyRIN (FoyRI‏ وا|ال:075؛ متضمنا الأشكال المتباينة ‎allelic‏ ‏والأشكال المجدولة تبادليا من هذه المستقبلات. تتضمن مستقبلات ال074: ‎FOYRIIA‏ (مستقبل
5 تشيط ‎receptor)‏ 80078009)') و8ال4/(©- ‎Jia)‏ تثبيط ‎«("(inhibiting receptor)‏ التي لها ترتيبات حمض أميني متشابهة التي تختلف أساسيا في مجالاتها السيتويلازمية ‎(cytoplasmic)‏
إن ‎FCRs‏ مشروحة في: ‎Ravetch and Kinet, 1991, Ann.
Rev.
Immunol., 9:457-92; Capel et al.,‏ ‎Immunomethods, 4:25-34; and de Haas et al., 1995, J.
Lab.
Clin.‏ ,1994 ‎Med., 126:330-41.‏ يتضمن أيضا ‎“FER”‏ مستقبل حديث الولادة؛ ‎(FERN‏ المسئول عن انتقال ‎19Gs‏ من الأم إلى الجنين ‎(Guyer et al., 1976, J.
Immunol., 117:587; and Kim et al., 1994, J.‏ ‎Immunol., 24:249).‏ إن المصطلح 'يتنافس ‎(compete)‏ حسب الاستخدام هنا بالنسبة لجسم مضاد؛ يعني أن جسم مضاد أول» أو قسم ارتباط مولد ضد ‎edie‏ يرتبط مع الإبيتوب بطريقة تشابه بدرجة كافية ارتباط 0 جسم مضاد ثان؛ أو قسم ارتباط مولد ضد منه؛ بحيث إن نتيجة ارتباط الجسم المضاد الأول مع الإبيتوب المتماثل ‎(cognate)‏ الخاص به تقل بدرجة يمكن الكشف عنها في وجود الجسم المضاد الثاني مقارنة بارتباط الجسم المضاد الأول في غياب الجسم المضاد الثاني. إن البديل» حيث أن ارتباط الجسم المضاد الثاني مع الإبيتوب الخاص به يقل أيضا بصورة يمكن الكشف عنها في وجود الجسم المضاد الأول؛ يمكن أن يكون هو الحال برغم عدم الحاجة لذلك. بمعنى أن؛ الجسم المضاد 5 الأول يمكن أن يثبط ارتباط الجسم المضاد الثاني مع الإبيتوب الخاص به بدون أن يثبط الجسم المضاد الثاني ارتباط الجسم المضاد الأول مع الإبيتوب الخاص به. على أية حال؛ عندما يثبط كل جسم مضاد بدرجة يمكن الكشف عنها ارتباط الجسم المضاد الآخر مع الإبيتوب أو المركب الترابطي ‎ileal‏ له سواء كان بنفس الدرجة؛ بدرجة أكبر أو أقل؛ يقال إن الأجسام المضادة 'تتنافس بصورة متبادلة (©01055-00170©1)' مع بعضها البعض لارتباط الإبيتوب (الإبيتويات) الخاصة بها. يشمل 0 الاختراع الحالي كل من الأجسام المضادة التنافسية ومتبادلة التنافس ‎(competing and cross—‏ ‎antibodies)‏ 0007061009. بغض النظر عن الآلية التي يحدث بها ذلك التنافس أو التنافس المتبادل (مثلا؛ الإعاقة التجسيمية ‎(steric hindrance)‏ التغير التركيبي ‎(conformational‏ ‎cchange)‏ أو الارتباط مع إبيتوب مشترك؛ أو قسم من ذلك)؛ فإن الصانع الماهر سوف يدرك؛ اعتمادا على التعاليم المتوافرة هناء أن الأجسام المضادة تلك التنافسية و/أو متبادلة التنافس مشتملة 5 ويمكن أن تكون مفيدة للطرق المعلنة هنا.
إن 'منطقة ‎Fe‏ وظيفية ‎"(functional Fc region)‏ لها وظيفة مستجيب واحدة على الأقل لمنطقة ‎Fo‏ لها ترتيب أصلي. تتضمن 'وظائف مستجيب ‎(effector functions)‏ تمثيلية ريط ‎¢Clq‏ سمية خلوية ‎(Cytotoxicity)‏ معتمدة على مكمل؛ ريط مستقبل ‎(FC‏ سمية خلوية يسبيها بصورة غير مباشرة خلية تعتمد على جسم مضاد؛ بلعمة خلوية؛ خفض مستوى تنظيم مستقبلات سطح خلية (مثلا مستقبل خلية 8)؛ إلخ. إن تلك الوظائف للمستجيب تتطلب عامة اتحاد المنطقة ‎Fe‏ مع مجال ربط (مثلا مجال متغير جسم مضاد) ويمكن تحديدها باختبارات عديدة معروفة في
الفن لتقييم تلك الوظائف للمستجيب للجسم المضاد. تشمل 'منطقة ‎Fe‏ لها ترتيب أصلي ‎"(native sequence Fc region)‏ ترتيب حمض أميني مماثل لترتيب حمض أميني من منطقة ‎FC‏ موجودة في الطبيعة. ‎Jodi‏ 'منطقة ‎Fe‏ متباينة
‎"(variant Fo region) 0‏ ترتيب حمض أميني يختلف عن ذلك لمنطقة ‎Fe‏ أولية الترتيب بفعل تعديل حمض أميني واحد على الأقل؛ تحتفظ ‎Load‏ بوظيفة مستجيب واحدة على الأقل للمنطقة ‎Fo‏ أولية الترتيب. بصورة مفضلة؛ فإن المنطقة ‎Fe‏ المتباينة بها استبدال حمض أميني واحد على الأقل مقارنة بمنطقة ‎Fo‏ أولية الترتيب أو بمنطقة © من عديد ببتيد أصلي؛ مثلا من حوالي 1 إلى حوالي 10 استبدالات حمض أميني؛ ويفضل؛ من حوالي 1 إلى حوالي 5 استبدالات حمض أميني في منطقة
‏5 ©© أولية الترتيب أو في المنطقة ‎Fo‏ لأجل عديد ببتيد الأصلي. إن المنطقة ‎Fe‏ المتباينة سوف يكون لها هنا بصورة مفضلة تماثل ترتيب حوالي 780 على الأقل مع منطقة ‎Fo‏ أولية الترتيب و/أو مع منطقة ‎FC‏ من عديد ببتيد أصلي؛ والأكثر تفضيلا؛ تماثل ترتيب حوالي 790 على الأقل معهماء يفضل أكثرء تماثل ترتيب حوالي 5 على ‎«JY‏ حوالي 6 على ‎«JY‏ حوالي 797 على الأقل» حوالي 798 على الأقل؛ حوالي 799 على الأقل معهما.
‏20 حسب الاستخدام ‎cls‏ فإن 'معالجة ‎(treatment)‏ هي أسلوب للحصول على نتائج إكلينيكية مفيدة أو مطلوية. لأغراض هذا الاختراع» تتضمن نتائج إكلينيكية مفيدة أو مطلوية؛ لكن بدون تحديد؛ واحدة أو أكثر مما يلي: خفض انقسام خلايا سرطانية أو أرومية (أو تدمير)؛ تثبيط انبثاثات خلايا أرومية؛ انكماش أو خفض مقاس الورم؛ هدأة ‎(Ua pull‏ خفض الأعراض الناتجة عن السرطان؛ زبادة جودة الحياة لهؤلاء الذين يعانون من السرطان» خفض جرعة الأدوية الأخرى المطلوية لمعالجة
‏5 السرطان؛ تأخير تقدم السرطان؛ شفاء سرطان؛ و/أو إطالة البقاء على قيد الحياة لمرضى تعاني من السرطان.
إن 'تحسين ‎"(@meliorating)‏ يعني تقليل أو تحسن واحد أو أكثر من الأعراض مقارنة بعدم إعطاء جسم ‎alias‏ معارض ‎aca‏ 00-1. يتضمن "التحسين ‎(ameliorating)‏ أيضا تقصير
أمد أو تقليل المدة الزمنية للعرض. حسب الاستخدام هناء فإن "جرعة مؤثرة ‎(effective dosage)‏ أو "كمية مؤثرة ‎"(effective amount) 5‏ من ‎(drug) ke‏ مركب (600000000)؛ أو تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ هي كمية كافية لتؤدي إلى أي واحدة أو أكثر من النتائج المفيدة أو المرغوية. في جوانب محددة ‎«JST‏ فإن كمية مؤثرة تمنع» تخفف أو تحسن ‎abel‏ مرض؛ و/أو تطيل البقاء على قيد الحياة للكائن المطلوب معالجته. للاستخدام الوقائي؛ تتضمن النتائج المفيدة أو المرغوية إزالة أو تقليل خطورة؛ تقليل شدة؛ أو تأخير بداية المرض» متضمنا أعراض 0 المرض الكيميائية الحيوية؛ النسيجية و/أو السلوكية؛ مضاعفاته والأنماط الظاهرية المرضية الوسطية التي تظهر أثناء تطور المرض. للاستخدام العلاجي؛ تتضمن النتائج المفيدة أو المرغوية نتائج إكلينيكية مثل تقليل عرض واحد أو أكثر من مرض؛ على سبيل المثال» سرطان يتضمن؛ على سبيل المثال بدون تحديد؛ سرطان معدي؛ ساركوما؛ لمفوماء لمفوما ‎(Hodgkin‏ لوكيمياء سرطان الرأس والرقبة؛ سرطان رأس ورقبة لخلية حرشفية؛ سرطان صعتري» سرطان ظهاري؛ سرطان لعابي؛ سرطان الكبد؛ سرطان المعدة؛ سرطان الغدة الدرقية؛ سرطان الرئة؛ سرطان المبيض؛ سرطان الثدي؛ سرطان البروستاتاء سرطان المرئ؛ سرطان البنكرياس» ورم دبقي؛ لوكيميا؛ ورم نقوي متعدد؛ كارسينوما خلية كلوية؛ سرطان المثانة؛ سرطان عنق الرحم؛ كارسينوما مشيمية؛ سرطان القولون» سرطان الفم؛ سرطان الجلد؛ وميلانوماء تقليل جرعة أدوية أخرى مطلوبة لعلاج المرض» تعزيز تأثير دواء ‎AT‏ ‏و/أو تأخير تطور السرطان في المرضى. يمكن إعطاء جرعة مؤثرة في واحدة أو أكثر من مرات 0 الإعطاء. لأغراض هذا الاختراع» فإن جرعة مؤثرة من عقار» مركب؛ أو تركيبة دوائية هي كمية كافية لتحقيق معالجة وقائية أو علاجية سواء بصورة مباشرة أو بصورة غير مباشرة. كما هو مفهوم في السياق الإكلينيكي» فإن جرعة مؤثرة من ‎lie‏ مركب؛ أو تركيبة دوائية قد تتحقق أو لا تتحقق في اتحاد مع ‎lie‏ مركب؛ أو تركيبة دوائية آخريين. لذلك؛ يأخذ في الاعتبار "الجرعة المؤثرة ‎"(effective dosage)‏ سياق إعطاء واحد أو أكثر من العوامل العلاجية؛ ويأخذ في الاعتبار عامل 5 فردي يعطى بكمية مؤثرة إذا أمكن؛ تحقيق نتيجة مرغوية؛ في اتحاد مع واحد أو أكثر من عوامل
أخرى .
إن "الفرد ‎(individual)‏ "الكائن 505600)" هو كائن ثديي؛ يفضل ‎SS‏ بشري. تتضمن الثدييات أيضاء بدون تحديد؛ حيوانات المزارع (مثلاء ‎Ry‏ خنازير» خيول» فراخ» إلخ)؛ حيوانات الرياضة؛ الحيوانات المدللة؛ الحيوانات الرئيسة؛ الخيول؛ الكلاب؛ القطط الفئران والجرذان. حسب الاستخدام هناء فإن ‎"(Vector) JIU‏ يعني بنية؛ قادرة على توصيل؛ و؛ ‎(had‏ ‏5 إظهار؛ واحد أو أكثر من الجين (الجينات) أو الترتيب (الترتيبات) الهام في خلية عائل. تتضمن أمثلة على النواقل» لكن بدون تحديد؛ نواقل فيروسية»؛ نواقل إظهار ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ مجردة؛ بلازميد ‎«(plasmid)‏ نواقل ‎cosmid‏ أو بلعم؛ نواقل إظهار ‎RNA DNA‏ ملازمة لعوامل تكثيف كاتيونية؛ نواقل إظهار ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ مكبسلة في أجسام ليبيد ‎(liposomes)‏ وخلايا ‎ald‏ سوية النواة ‎(eukaryotic cells)‏ مثل ‎WIA‏ منتجة. ‏10 حسب الاستخدام هناء فإن "ترتيب تحكم في الإظهار ‎(expression control‏ ‎"SEQUENCE)‏ يعني ترتيب حمض نووي يباشر نسخ الحمض النووي. يمكن أن يكون ترتيب التحكم في الإظهار هو ترتيب محث؛ مثل محث بنائي أو قابل للحث؛ أو ترتيب معزز. إن ترتيب التحكم في الإظهار يكون متصل تشغيليا بترتيب الحمض النووي المراد نسخه. ‏حسب الاستخدام ‎(ld‏ يتضمن 'مادة حاملة مقبولة دوائيا ‎(pharmaceutically‏ ‎"acceptable carrier) 5‏ أو 'مادة مسوغة مقبولة دوائيا ‎(pharmaceutical acceptable‏ ‎'excipient)‏ أي مادة؛ عند الاتحاد مع مقوم نشط ‎mans ¢(active ingredient)‏ للمقوم الاحتفاظط بنشاطه الحيوي وتكون مكون غير متفاعل مع الجهاز المناعي للكائن. تتضمن الأمثلة؛ لكن بدون تحديد؛ أي من المواد الحاملة الدوائية القياسية ‎Jie‏ محلول ملحي ثابت الأس الهيدروجيني بواسطة فوسفات؛ ‎cole‏ مستحلبات ‎(@MUISIONS)‏ مثل مستحلب زيت/ ‎cole‏ وأنواع مختلفة من عوامل البلل ‎(Wetting agents) 0‏ إن مواد التخفيف ‎(diluents)‏ المفضلة لإعطاء رذاذ هوائي أو إعطاء عن غير الطريق المعوي هي محلول ملحي تابت الأس الهيدروجيني فوسفات ‎(PBS)‏ أو محلول ملحي عادي )70.9( تصاغ التركيبات المشتملة على تلك المواد الحاملة بطرق تقليدية معروفة جيداء انظرء على سبيل المثال؛ ‎Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack‏ ‎Publishing Co., Easton, PA, 1990; and Remington, The Science and 25
Practice of Pharmacy 20st Ed. Mack Publishing, 2000.
يشير المصطلح ‎KON"‏ حسب الاستخدام هناء إلى ثابت المعدل لارتباط الجسم المضاد مع مولد ضد. بصفة خاصة؛ تقاس ثوابت المعدل ‎(Koff g kon)‏ وثوابت تفكك الاتزان باستخدام شدف أجسام مضادة كاملة الطول و/أو جسم مضاد ‎Fab‏ (أي؛ غير متكافئ ‎.PD-1 5 ((univalent)‏
يشير المصطلح " آ01"؛ حسب الاستخدام ‎cls‏ إلى ثابت المعدل لتفكك جسم مضاد عن
معقد جسم مضاد/ مولد ضد.
يشير المصطلح ‎CKD‏ حسب الاستخدام هناء إلى ثابت تفكك الاتزان لتفاعل بيني جسم مضاد- ‎Age‏ ضد.
بالإشارة إلى المصطلح "حوالي ‎"(about‏ لقيمة أو لمعيار هنا يتضمن (كما يوصف) تجسيدات موجهة للقيمة أو المعيار بحد ذاته. على سبيل ‎Jal‏ إن الوصف المشير إلى "حوالي ‎X‏
0 يتضمن وصف لأجل ‎XT‏ يشمل المدى العددي من الأعداد المحددة للمدى.
المصطلح ‎jad‏ خلية مستجيب مناعية ‎'(immune-effector-cell enhancer)‏ أو ‎"(IEC enhancer) IEC jad‏ يشير إلى ‎sale‏ قادرة على ‎aby‏ أو تعزيز عدد؛ ‎(Basa‏ أو وظيفة نوع واحد أو أكثر من خلايا المستجيب المناعية لكائن ثديي. الأمثلة على خلايا المستجيب المناعية تتضمن خلايا ‎T‏ 006 عصارية خلوية؛ ‎١ WIA‏ 0104؛ خلايا ‎NK‏ وخلايا 8.
المصطلح ‎sald"‏ ضابطة للمناعة ‎"(immune modulator)‏ يشير إلى ‎sale‏ قادرة على تبديل ‎(Mia)‏ تثبيط خفض؛ زيادة؛ تعزيز أو إثارة) استجابة مناعية (كما هو محدد هنا) أو عمل أي مكون لجهاز المناعة الأصلي؛ الخلطي أو الخلوي لكائن ثديي عائل. هكذاء فإن المصطلح 'مادة ضابطة للمناعة" يشتمل "معزز خلية مستجيب مناعية ‎(immune-effector—cell enhancer)‏ كما تحدد هنا و'مثبط خلية كابحة للمناعة ‎"(immune-suppressive—cell inhibitor)‏ كما تحدد هناء
0 بالإضافة إلى مادة تؤثر على مكونات أخرى لجهاز مناعة الكائن الثدبي.
المصطلح "استجابة مناعية ‎"(immune response)‏ يشير إلى أي استجابة يمكن الكشف عنها لمادة محددة (مثل مولد ضد أو مولد مناعة) بواسطة جهاز المناعة لحيوان ثديي عائل؛ الاستجابات المناعية الأصلية ‎Mie)‏ تنشيط اندفاع إرسال إشارة مستقبل اا10)؛ الاستجابات المناعية التي تتسبب فيها الخلية بصورة غير مباشرة (مثلا؛ الاستجابات تتسبب فيها بصورة غير مباشرة خلايا
‎TT 5‏ مثل ‎T WIS‏ تخص مولد ضد؛ وخلايا غير خاصة من جهاز المناعة)؛ واستجابات مناعية خلطية ‎Ol)‏ الاستجابات التي تتسبب فيها بصورة غير مباشرة خلايا 8؛ مثل توليد وإفراز أجسام
مضادة في البلازماء النسيج الليمفاوي؛ و/أو موائع النسيج).
المصطلح "استمناع ‎(immunogenic)‏ يشير إلى قدرة المادة على التسبب في؛ إحداث؛ إثارة؛ أو حث استجابة مناعية؛ أو لتحسين؛ تعزيز» زيادة أو ‎Ala)‏ استجابة مناعية موجودة مسبقاء ضد ‎alge‏ ضد محدد؛ سواء بمفردها أو عندما تتصل مع ‎Bale‏ حاملة؛ في وجود أو غياب مادة
مساعدة.
المصطلح 'مثبط خلية كابحة للمناعة ‎'(immune-suppressive—cell inhibitor)‏ أو ‎inhibitor) 156 Lai!‏ 156)" يشير إلى ‎sale‏ قادرة على خفض أو كبح عدد أو وظيفة خلايا كابحة للمناعة في كائن ثديي. الأمثلة على الخلايا الكابحة للمناعة تتضمن ‎T WR‏ تنظيمية ‎regs”)‏ آ*)؛ خلايا كابحة مشتقة من النخاع؛ ويلاعم مصاحبة للورم.
المصطلح "إعطاء داخل الأدمة ‎(intradermal administration)‏ أو 'يعطى في الأدمة ‎(administered intradermally)‏ في سياق إعطاء مادة؛ إلى كائن ثديي متضمنا البشري؛ يشير إلى توصيل المادة في طبقة باطن الجلد من جلد كائن ثديي. جلد الكائن الثديي يتكون من طبقة الأدمة؛ طبقة باطن الجلدء وطبقة تحت الجلد. الأدمة هي الطبقة الخارجية للجلد. باطن الجلد؛ التي هي طبقة الجلد الوسطى؛ تحتوي على نهايات عصبية؛ غدد تعرق وغدد زبتية ‎Clipe (Rad)‏
5 شعرية؛ وأوعية دموية. تصنع الطبقة تحت الجلد من دهن ونسيج ضام يأوي أوعية دموية وأعصاب أكبر. على العكس من ذلك؛ يشير "إعطاء تحت الجلد ‎"(subcutaneous administration)‏ إلى إعطاء مادة في طبقة تحت الجلد و"الإعطاء الموضعي ‎"(topical administration)‏ يشير إلى إعطاء مادة على سطح الجلد.
المصطلح "اضطراب ورمي ‎(neoplastic disorder)‏ يشير إلى حالة تنقسم فيها ‎WAN‏
0 بمعدل عالي شاذ وغير متحكم ‎cad‏ يتخطى المعدل ويكون غير متوافق مع معدل الأنسجة الطبيعية المحيطة. إنه عادة ما يسبب آفة أو تكتل صلب يعرف على أنه 'ورم ‎(tumor)‏ هذا المصطلح يضم الاضطرابات الورمية الحميدة والخبيثة. المصطلح "اضطراب ورمي خبيث ‎(malignant‏ ‎(Neoplastic disorder)‏ الذي يستخدم بالتبادل مع المصطلح "سرطان ‎"(cancer)‏ في الكشف الحالي» يشير إلى اضطراب ورمي يتميز بقدرة خلايا الورم على الانتشار إلى أماكن أخرى في الجسم
5 (لمعروف ‎al‏ "الانبثاث (01618518515)). المصطلح "اضطراب ورمي حميد ‎(benign‏ ‎"neoplastic disorder)‏ يشير إلى اضطراب ورمي تفتقد فيه ‎LIA‏ الورم القدرة على الانبثاث.
المصطلح 'يمنع ‎(preventing)‏ أو ‎(prevent) aud‏ يشير إلى (أ) الحفاظ على حدوث الاضطراب أو (ب) تأخير بداية الاضطراب أو بداية أعراض الاضطراب. المصطلح ‎Age’‏ ضد مصاحب للورم ‎"(tumor-associated antigen)‏ أو ‎"TAA"‏ يشير إلى مولد ضد يظهر بصفة خاصة بواسطة خلايا الورم أو يظهر بتكرار أعلى أو كثافة أعلى بواسطة خلايا الورم عنه بواسطة الخلايا غير الورمية من نفس نوع النسيج. قد تكون مولدات الضد المصاحبة للورم عبارة عن مولدات ضد لم تظهر طبيعيا بواسطة العائل؛ قد تكون طفرية؛ مشذبة؛ متجمعة؛ أو مظاهر شاذة أخرى للجزيئات الظاهرة طبيعيا بواسطة العائل؛ قد تكون متماثلة مع الجزيئات الظاهرة طبيعيا لكنها تظهر عند مستويات عالية شاذة؛ أو قد تظهر في حالة أو وسط شاذ. مولدات الضد المصاحبة للورم قد تكون؛ على سبيل المثال؛ بروتينات أو شُدف ‎carbohydrates «gy‏ معقد؛ ‎chaptens (gangliosides 0‏ أحماض نووية؛ أو أي اتحاد من هذه أو جزيئات بيولوجية أخرى. المصطلح 'لقاح (78006006)" يشير إلى تركيبة استمناع للإعطاء إلى كائن ثديي لإحداث استجابة مناعية ضد مولد ضد محدد في كائن ثديي. يحتوي اللقاح نموذجيا على عامل (يعرف على أنه 'مولد ‎aca‏ (8019860)" أو ‎Mod‏ للمناعة (11107100098©0)" الذي يشابه؛ أو يشتق من؛ هدف الاستجابة المناعية؛ مثلا ‎LDA‏ ورم أو ‎(AIS‏ متعضي دقيق مسببه للمرض. يراد من اللقاح معالجة 5 ورم؛ ‎(lays Die‏ يحتوي نموذجيا على ‎alge‏ ضد الذي يشتق من ‎TAA‏ الموجود على الورم المستهدف ويكون قادر على حث التوليد المناعي مقابل ‎TAA‏ على الورم المستهدف. يشير المصطلح "نظام علاج ‎ele‏ يعتمد على لقاح ‎(vaccine-based‏ ‎"immunotherapy regimen)‏ إلى نظام علاجي فيه يعطى اللقاح في اتحاد مع مادة ضابطة مناعية واحدة أو أكثر. قد يعطى اللقاح والمواد الضابطة للمناعة معا في صياغة فردية أو إعطاء 0 منفصل. من المفهوم أيضا توافر وصف التجسيدات هنا بالعبارة 'تشتمل على ‎(comprising)‏ ‏تجسيدات مشابهة أخرى توصف في المصطلحات "تتكون من ‎"(consisting of)‏ و/أو 'تتكون أساسيا من ‎.(consisting essentially of)‏ عند وصف الجوانب أو التجسيدات من الاختراع بالمصطلح من مجموعة ‎Markush‏ أو 5 تجمعات أخرى من البدائل» فإن الاختراع الحالي لا يتضمن فقط المجموعة الكاملة المدرجة بالكامل؛ لكن كل عضو في المجموعة بصورة مفردة وكل مجموعات فرعية متاحة من المجموعة الأساسية؛
ولكن أيضا المجموعة الأساسية بدون واحد أو أكثر من أعضاء المجموعة. يصور أيضا الاختراع الحالي استبعاد واضح لواحد أو أكثر من أي من أعضاء المجموعة في الاختراع المحدد. ما لم يتحدد بخلاف ذلك؛ يكون لكل المصطلحات التقنية والعلمية المستخدمة هنا نفس المعنى التقليدي المفهوم عن طريق الماهر التقليدي في الفن الذي ينتمي إليه هذا الاختراع. في حالة التعارض؛ تسود المواصفة الحالية؛ بما في ذلك التعريفات. خلال هذه المواصفة وعناصر الحماية؛ من المفهوم أن ‎dads‏ أو أشكالها المتباينة ‎Jie‏ 'يشتمل على" أو 'مشتمل على" يتضمن العدد الصحيح المذكور أو مجموعة من الأعداد الصحيحة لكن ليس استبعاد أي عدد صحيح آخر أو مجموعة من الأعداد الصحيحة. ما لم يطلب بخلاف ذلك في السياق؛ تتضمن المصطلحات المفردة الجمع وتتضمن مصطلحات الجمع المفرد. أي مثال (أمثلة) تالي للمصطلح ‎Da‏ أو "على سبيل 0 المثال" لا يعتبر حصريا أو مقيدا. توصف هنا مواد وطرق تمثيلية» على الرغم من أنه يمكن ‎Lad‏ استخدام طرق ومواد مماثلة أو مكافئة لتلك الموصوفة هنا في الممارسة العملية أو اختبار الاختراع الحالي. لا تحد المواد؛ الطرق؛ والأمثلة الموضحة هنا من الاختراع. أجسام مضادة معارضة ضد ‎PD-1‏ ‏15 يتوافر هنا أجسام مضادة معارضة ضد 50-1 التي تعوق؛ تكبح أو تخفض (متضمنا خفض كبير) نشاط حيوي 00-1؛ متضمن الأحداث اللاحقة التي يتسبب فيها بصورة غير مباشرة 00-1. يُظهر جسم مضاد معارض ‎aca‏ 00-1 أي ميزة أو أكثر من المميزات التالية: (أ) الارتباط مع 00-1 وإعاقة أحداث إرسال الإشارة اللاحقة؛ (ب) إعاقة ارتباط ‎PD-L1‏ مع 0-1©؛ (ج) زيادة تنظيم استجابة مناعية يتسبب فيها بصورة غير مباشرة خلية 1 ؛ (د) استثارة إفراز ‎{IFNy‏ (ه) 0 استثارة إفراز ‎TNF‏ و(و) زيادة انقسام خلية آ؛ و(ز) خفض تنبيغ إشارة تثبيطي خلال ‎PD-1‏ ‏لأغراض هذا الاختراع» يفضل أن يتفاعل الجسم المضاد مع 00-1 بطريقة تثبط وظيفة إرسال إشارة 00-1. في بعض التجسيدات؛ يربط جسم مضاد معارض ضد 00-1 بصفة خاصة 00-1 الرئيسي. قد تشتمل الأجسام المضادة المفيدة في الاختراع الحالي على أجسام مضادة أحادية النسخ؛ 5 أجسام مضادة عديدة ‎ul)‏ شدف جسم مضاد ‎Fc Fv (F(ab”)2 Fab’ (Fab lic)‏ إلخ)؛
— 8 2 — أجسام مضادة خيمرية؛ أجسام مضادة ثنائية الخصوصية»؛ أجسام مضادة مقترنة متغايرة؛ سلسلة فردية ‎(ScFv)‏ « طفرات منهاء بروتينات التحام تشمل قسم جسم مضاد (مثلاء جسم مضاد مجال) ‘ أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية؛ وأي هيئة معدلة أخرى من جزيء جلوبيولين مناعي تشتمل على موقع إدراك مولد ضد من النوعية المطلوية؛» متضمنة أشكال متباينة ‎glycosylation‏ من الأجسام المضادة؛ أشكال متباينة ترتيب لحمض أميني من أجسام مضادة؛ وأجسام مضادة معدلة تساهمية التكافؤ. قد تكون الأجسام المضادة فأر؛ جرذء بشري؛ أو أي أصل آخر (متضمن أجسام مضادة خيمرية أو مكتسبة السمة البشرية). فى بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد المعارض ‎aa‏ 00-1 هو جسم مضاد أحادي النسخ. في بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد هو جسم ‎alias‏ بشري أو مكتسب السمة البشرية. قد تصنع الأجسام المضادة المعارضة ضد 00-1 بأي طريقة معروفة في الفن. تكون التقنيات العامة لإنتاج أجسام مضادة لبشري ولفأر معروفة في الفن و/أو موصوفة هنا. يمكن تحديد الأجسام المضادة المعارضة ضد 00-1 أو تمييزها باستخدام طرق معروفة فى الفن؛ بينما يتحدد و/أو يقاس خفض؛ تخفيف حدة؛ أو تعادل نشاط حيوي 000-1. فى بعض التجسيدات؛ يتحدد الجسم المضاد المعارض ضد 0100-1 بتحضين عامل مرشح مع 00-1 ومراقبة 5 ارتباط و/أو الانخفاض أو التعادل المصاحب للنشاط الحيوي 060-1. يجرى اختبار الارتباط مع؛ ‎Oli‏ عديد ببتيد (عديد ببتيدات) 00-1 منقى؛ أو مع خلايا تظهر طبيعيا ‎lie)‏ سلالات متنوعة)؛ أو تنقل عدوى لإظهار؛ عديد ببتيد ‎ane)‏ ببتيدات) 000-1. في أحد التجسيدات؛ يكون اختبار الارتباط هو اختبار ارتباط تنافسي؛ حيث يتم تقييم قدرة الجسم المضاد المرشح على التنافس مع جسم مضاد معارض ضد 00-1 معروف لارتباط 00-1. يجرى الاختبار في أشكال متعددة؛ متضمنة هيئة ‎ELISA‏ في بعض التجسيدات؛ يتحدد جسم مضاد معارض ضد 10-1 بتحضين جسم مضاد مرشح مع 00-1 ومراقبة الارتباط. باتباع التحديد المبدئي؛ يتأكد إضافيا نشاط جسم مضاد معارض ضد 00-1 مرشح وينقى باختبارات حيوية ؛ معروفة لاختبار ا لأنشطة الحيوية المستهدفة. في ‎a‏ التجسيد ‎el‏ يستخدم اختبار خلية فى المعمل لتمبيز إضافيا جسم مضاد معارض ‎PD-1 ax‏ مرشح . على سبيل المثال » ‎(pana‏ ‏5 جسم مضاد مرشح مع خلايا ‎T‏ بشرية ‎cdg‏ ويضاف ‎(PD-L1‏ ويراقب إفراز ‎AFNy‏ بطريقة بديلة؛ تستخدم الاختبارات الحيوية لتصفية المرشحات مباشرة.
تُظهر أجسام مضادة معارضة ضد 00-1 من الاختراع ميزة أو أكثر من المميزات التالية: (أ) الارتباط مع 00-1 وإعاقة أحداث إرسال الإشارة اللاحقة؛ (ب) إعاقة ارتباط ‎PD-L1‏ مع -0م 1؛ (ج) زيادة تنظيم استجابة مناعية يتسبب فيها بصورة غير مباشرة خلية 7؛ (د) استثارة إفراز ‎IFNy‏ (ه) استثارة إفراز 7لا1؛ و(و) زيادة انقسام خلية آ؛ (ز) خفض تنبيغ إشارة تثبيطي خلال ‎¢PD-1 5‏ و(ح) إعاقة ارتباط ‎PD-L2‏ مع 00-1. يفضل أن يكون للأجسام المضادة ضد ‎PD-1‏ ‏سمتين أو ‎ST‏ من هذه السمات. يفضل ‎«ST‏ أن يكون للأجسام المضادة ثلاث سمات أو أكثر من هذه السمات. يفضل أكثر؛ أن يكون للأجسام المضادة ‎af‏ سمات أو أكثر من هذه السمات. يفضل ‎«i‏ أن يكون للأجسام المضادة خمس سمات أو أكثر من هذه السمات. يفضل ‎SST‏ أن يكون للأجسام المضادة ست سمات أو أكثر من هذه السمات. يفضل ‎«ST‏ أن يكون للأجسام المضادة 0 سبع سمات أو أكثر من هذه السمات. يفضل أكثر؛ أن يكون للأجسام المضادة جميع السمات الثمانية. قد تتميز الأجسام المضادة المعارضة ضد 00-1 باستخدام الطرق المعروفة جيدا في الفن. على سبيل المثال؛ تكون إحدى الطرق لتحديد الإبيتوب المرتبط معه؛ أو 'تخطيط الإبيتوب”. هناك العديد من الطرق المعروفة في الفن لتخطيط وتمييز موقع الإبيتوبات على ‎«lip ull‏ متضمنا حل البناء البلوري لمعقد ‎ge‏ ضد- جسم ‎cline‏ اختبارات تنافس» اختبارات إظهار شدفة جين» واختبارات تعتمد على ببتيد تخليقي؛ كما هو موصوف؛ على سبيل المثال؛ في الفصل 11 من ‎Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring‏ ‎Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999.‏ في مثال إضافي؛ يمكن استخدام تخطيط الإبيتوب لتحديد الترتيب الذي يرتبط معه جسم مضاد 0 معارض ضد 00-1. يكون تخطيط الإبيتوب متاح تجاريا من مصادر متنوعة؛ على سبيل المثال؛ ‎Pepscan Systems (Edelhertweg 15, 8219 PH Lelystad, The Netherlands).‏ قد يكون الإبيتوب هو إبيتوب ‎(hd‏ أي؛ متضمن تمدد فردي من الأحماض الأمينية؛ أو إبيتوب تكويني متشكل بواسطة تفاعل بيني ثلاثي الأبعاد من الأحماض الأمينية والتي لا تكون بالضرورة موجودة في التمدد الفردي. يمكن عزل ببتيدات لها أطوال مختلفة ‎lia)‏ على الأقل طول أحماض 5 أمينية من 6-4) أو مخلقة ‎Ol)‏ تخليقيا) وتستخدم لاختبارات الارتباط مع جسم مضاد معارض
— 0 3 — ضد ‎.PD-1‏ في مثال ‎«AT‏ يمكن تحديد الإبيتوب الذي يرتبط ‎dae‏ جسم مضاد معارض ضد ‎PD—‏ ‏1 في فحص نظامى باستخدام ببتيدات متراكبة مشتقة من ترتيب 00-1 وتحديد ارتباط جسم مضاد معارض ضد 000-1. طبقا لاختبارات إظهار شدفة جين؛ تتم تجزئة إطار قراءة مفتوح يشفر -210 1 سواء عشوائيا أو بواسطة أبنية جينية معينة وتتحدد تفاعلية الشدف الظاهرة من 00-1 مع الجسم المضاد المختبر. قد يتم إنتاج شدف الجينء على سبيل المثال» بواسطة ‎PCR‏ ثم نسخها وترجمتها إلى بروتين في المعمل؛ في وجود أحماض أمينية نشطة إشعاعيا. يتحدد ‎Many‏ ارتباط الجسم المضاد مع شدف 00-1 المعلمة النشطة إشعاعيا بواسطة الترسيب المناعي والتحلل الكهربي لهلام. يمكن ‎Lad‏ تحديد إبيتويات معينة باستخدام مكتبات كبيرة من ترتيبات ببتيد عشوائية معروضة على سطح جسيمات بلعمة (مكتبات بلعمة) أو خميرة (عرض خميرة). بطريقة بديلة؛ يمكن اختبار مكتبة محددة 0 من شدف ببتيد متراكبة للارتباط مع جسم مضاد الاختبار في اختبارات ارتباط بسيطة. في أمثلة إضافية؛ يمكن إجراء توليد طفرة لمولد ضد؛ تجارب تبادل مجال وتوليد طفرة فحص ‎alanine‏ لتحديد المتخلفات المطلوية؛ الكافية؛ و/أو الضرورية لارتباط الإبيتوب. على سبيل المثال» يمكن إجراء تجارب توليد طفرة فحص ‎alanine‏ باستخدام 10-1 طفري ‎Cus‏ تم استبدال متخلفات متنوعة من عديد ببتيد ‎PD-1‏ مع ‎.alanine‏ بواسطة تقييم ارتباط جسم مضاد مع ‎PD-1‏ طفريء يمكن تقييم
5 أهمية متخلفات 00-1 معينة مع ارتباط جسم مضاد. إن طريقة أخرى يمكن استخدامها لتمييز جسم مضاد معارض ضد 00-1 تكون لاستخدام اختبارات تنافس مع أجسام مضادة أخرى معروفة للارتباط مع نفس مولد الضد؛ أي؛ شدف متنوعة من ‎(PD-1‏ لتحديد إذا كان الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 يرتبط مع نفس الإبيتوب كأجسام مضادة أخرى. تكون اختبارات تنافس معروفة جيدا لهؤلاء المهرة في الفن؛ بما في ذلك هيئة ‎(ELISA‏ ‏20 إن انجذابية الارتباط ‎(KD)‏ لجسم مضاد معارض ضد 00-1 مع 00-1 تكون حوالي 1 إلى حوالي 200 نانو جزيئي جرامي. في بعض التجسيدات؛ تكون انجذابية الارتباط أي من حوالي 200 نانو جزيثي جرامي» حوالي 100 نانو جزيئي ‎(aha‏ حوالي 50 نانو ‎ea‏ ‎(ala‏ حوالي 10 نانو جزيئي جرامي؛ حوالي 1 نانو جزيئي جرامي؛ حوالي 500 بيكو جزيئي ‎los (ala‏ 100 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 60 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 50 بيكو جزيئي 5 جرامي؛ ‎dos‏ 20 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 15 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 10 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 5 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 2 بيكو جزيئي جرامي؛ أو حوالي 1 بيكو ‎Gn‏
— 1 3 — جرامي. في بعض التجسيدات؛ تكون انجذابية الارتباط أقل من أي من حوالي 250 نانو جزيئي جرامي» حوالي 200 نانو جزيثي جرامي» حوالي 100 نانو جزيثي ‎(aba‏ حوالي 50 نانو ‎ea‏ ‎(ala‏ حوالي 10 نانو جزيئي جرامي؛ حوالي 1 نانو جزيئي جرامي؛ حوالي 500 بيكو جزيئي ‎los (ala‏ 100 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 50 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 20 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 10 بيكو جزيئي جرامي؛ حوالي 5 بيكو جزيئي جرامي؛ أو حوالي 2 بيكو جزيئي جرامي. طبقا لذلك» يوفر الاختراع أي مما يلي؛ أو التركيبات (متضمنة تركيبات دوائية) تشمل جسم مضاد له ترتيب سلسلة خفيفة جزئية وترتيب سلسلة ثقيلة جزئية كما هو موجود في الجدول 1؛ أو أشكال متباينة منه. في الجدول 1؛ تكون الترتيبات الموضع تحتها خط هي ترتيبات 0014. في 0 جدول 1؛ يشير ‎KD‏ إلى انجذابية لأجل 00-1 بشري كما هو مقاس باستخدام رنين بلازمون سطح عند 25"مئوية؛ مالم يحدد خلاف ذلك. جدول 1: ترتيبات مناطق متغيرة من أجسام مضادة معارضة ضد 0-1م ‎KD‏ (نانو ‎MAD‏ ا سلسلة خفيفة سلسلة ثقيلة جزيثى جرامي) ‎DIVMTQSPDSLAVSLG‏ ‎QVQLVQSGAEVKKPGAS‏ ‎ERATINCKSSQSLWDS‏ ‎VKVSCKASGYTFTSYWIN‏ ‎GNQKNFLTWYQQKPG‏ ‎WVRQAPGQGLEWMGNI‏ ‎QPPKLLIYWTSTRESG‏ ‎YPGSSLTNYNEKFKNRV‏ ‎VPDRFSGSGSGTDFTL‏ ‎TMTRDTSTSTVYMELSSL mAbI‏ | 64.24 ‎TISSLQAEDVAVYYCQ‏ ‎RSEDTAVYYCARLLTGTF‏ ‎NDYFYPLTFGGGTKVE‏ ‎AYWGQGTLVTVSS‏ ‎IK‏ ‏) (تعريف الترتيب رقم: 3( (تعريف الترتيب رقم: 2(
— 3 2 —
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
YPGSSLTNYNEKFKNRV
VPDRFSGSGSGTDFTL
2.22 TMTRDTSTSTVYMELSSL mAD2
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLLTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(تعريف الترتيب رقم: 3( (تعريف الترتيب رقم: 7) ‎DIVMTQSPDSLAVSLG‏
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
YPGSSLTNYNEKFKNRV
VPDRFSGSGSGTDFTL
1.43 TMTRDTSTSTVYMELSSL MAD3
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLLTGTF
NDYFYPHTFGGGTKV
AYWGQGTLVTVSS
EIK
(تعريف الترتيب رقم: 3( (تعريف الترتيب رقم: 8(
— 3 3 —
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
TNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSTRESG
‎YPGSSLTNYNEKFKNRV‏ 89 (عند ‎VPDRFSGSGSGTDFTL | raps ‎TMTRDTSTSTVYMELSSL‏ 7مثوية) ‎TISSLQAEDVAVYYCQ‏ - ‎RSEDTAVYYCARLLTGTF ‎NDYFYPLTFGGGTKVE ‎AYWGQGTLVTVSS ‎IK ‏(تعريف الترتيب رقم: 3( (تعريف الترتيب رقم: 9) ‎DIVMTQSPDSLAVSLG‏ ‎QVQLVQSGAEVKKPGAS ‎ERATINCKSSQSLWDS ‎VKVSCKASGYTFTSYWIN ‎GNQKNFLTWYQQKPG ‎WVRQAPGQGLEWMGNI ‎QPPKLLIYWTSTRESG ‎YPGSSLTNYNEKFKNRV ‎VPDRFSGSGSGTDFTL ‎12.82 TMTRDTSTSTVYMELSSL mAb ‎TISSLQAEDVAVYYCQ ‎RSEDTAVYYCARLSTGTF ‎NDYFYPLTFGGGTKVE ‎AYWGQGTLVTVSS ‎IK ‏(تعريف الترتيب رقم: 4( (تعريف الترتيب رقم: 2)
— 3 4 —
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
YPGSSLTNYNEKFKNRV
VPDRFSGSGSGTDFTL
1.16 TMTRDTSTSTVYMELSSL MADG
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLSTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(تعريف الترتيب رقم: 4( (تعريف الترتيب رقم: 7) ‎DIVMTQSPDSLAVSLG‏
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
YPGSSLTNYNEKFKNRV
VPDRFSGSGSGTDFTL
0-73 TMTRDTSTSTVYMELSSL MAT
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLSTGTF
NDYFYPHTFGGGTKV
AYWGQGTLVTVSS
EIK
(تعريف الترتيب رقم: 4( (تعريف الترتيب رقم: 8(
— 3 5 —
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
TNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSTRESG
YPGSSLTNYNEKFKNRV
VPDRFSGSGSGTDFTL
17.35 TMTRDTSTSTVYMELSSL mAbS
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLSTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(تعريف الترتيب رقم: 4( (تعريف الترتيب رقم: 9) ‎DIVMTQSPDSLAVSLG‏
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSTRESG
YPGSSITNYNEKFKNRVT
VPDRFSGSGSGTDFTL
13.54 MTRDTSTSTVYMELSSL MAD
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLTTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(تعريف الترتيب رقم: 5( (تعريف الترتيب رقم: 2)
— 3 6 —
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
YPGSSITNYNEKFKNRVT AB
0.98 VPDRFSGSGSGTDFTL
MTRDTSTSTVYMELSSL 0
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLTTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(5 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ )7 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
YPGSSITNYNEKFKNRVT ADI
0.93 VPDRFSGSGSGTDFTL
MTRDTSTSTVYMELSSL 1
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLTTGTF
NDYFYPHTFGGGTKV
AYWGQGTLVTVSS
EIK
(5 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ (8 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎
— 3 7 —
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
TNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSTRESG
YPGSSITNYNEKFKNRVT AB
17.27 VPDRFSGSGSGTDFTL
MTRDTSTSTVYMELSSL 2
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLTTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(5 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ )9 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSTRESG
WPGSSLTNYNEKFKNRV ADI
5.87 VPDRFSGSGSGTDFTL
TMTRDTSTSTVYMELSSL 3
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLLTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(6 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ )2 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎
— 3 8 —
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
WPGSSLTNYNEKFKNRV AB
VPDRFSGSGSGTDFTL
TMTRDTSTSTVYMELSSL 4
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLLTGTF
NDYFYPLTFGGGTKVE
AYWGQGTLVTVSS
IK
(6 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ )7 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎
DIVMTQSPDSLAVSLG
QVQLVQSGAEVKKPGAS
ERATINCKSSQSLWDS
VKVSCKASGYTFTSYWIN
GNQKNFLTWYQQKPG
WVRQAPGQGLEWMGNI
QPPKLLIYWTSYRESG
WPGSSLTNYNEKFKNRV ADI
0.49 VPDRFSGSGSGTDFTL
TMTRDTSTSTVYMELSSL 5
TISSLQAEDVAVYYCQ
RSEDTAVYYCARLLTGTF
NDYFYPHTFGGGTKV
AYWGQGTLVTVSS
EIK
(6 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ (8 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎
— 9 3 — ‎DIVMTQSPDSLAVSLG‏ ‎QVQLVQSGAEVKKPGAS‏ ‎ERATINCKSSQSLWDS‏ ‎VKVSCKASGYTFTSYWIN‏ ‎TNQKNFLTWYQQKPG‏ ‎WVRQAPGQGLEWMGNI‏ ‎QPPKLLIYWTSTRESG‏ ‎WPGSSLTNYNEKFKNRYV mAb]‏ ‎VPDRFSGSGSGTDFTL‏ 7.51 ‎TMTRDTSTSTVYMELSSL 6‏ ‎TISSLQAEDVAVYYCQ‏ ‎RSEDTAVYYCARLLTGTF‏ ‎NDYFYPLTFGGGTKVE‏ ‎AYWGQGTLVTVSS‏ ‎IK‏ ‏إ: : (تعريف الترتيب رقم: 6( (تعريف الترتيب رقم: 9) يوفر الاختراع أيضا أقسام ‎CDR‏ من أجسام مضادة إلى 00-1. يكون تحديد مناطق ‎CDR‏ ‏معروف جيدا للماهر في الفن. من المفهوم أنه في بعض التجسيدات؛ يمكن اتحاد ‎CDRs‏ من ‎Chothia CDR 4 Kabat‏ (يسمى أيضا "00548 متحدة" أو ‎CDRS’‏ ممتدة'). بطريقة ‎(Al‏ ‏يشار إليه هنا مثل "تحديد تكويني" من ‎«CDRs‏ يمكن تحديد مواضع ‎CDRs‏ كمتخلفات تصنع تساهمات ‎enthalpic‏ لريط مولد الضد. ‎«dail‏ مثلاء ‎Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166.‏ ‎logue‏ تتضمن ‎CDRS"‏ تكوينية" مواضع المادة المتخلفة في مناطق ‎Vernier yj Kabat CDRs‏ ‎All‏ تكون مقيدة بالترتيب للحفاظ على بناء حلقة ملائم للجسم المضاد لربط مولد ضد معين. إن تحديد ‎CDRs‏ تكوينية يكون معروف جيدا للماهر في الفن. في بعض التجسيدات؛ تكون ‎CDRs‏ ‏0 هى ‎.Kabat CDRs‏ فى تجسيدات أخرى» تكون ‎CDRs‏ هى ‎.Chothia CDRs‏ فى تجسيدات أخرى ¢ تكون ‎CDRs‏ هى ‎AbM (sx.
CDRs‏ تكوينية أو اتصال. بطريقة ‎Gal‏ 6 فى تجسيدات مع أكثر من ‎CDR‏ واحد؛ قد تكون ‎CDRs‏ هي أي من ‎«Chothia (Kabat CDRs‏ ممتدة 17 تكوينية؛ اتصال أو اتحاد من ذلك. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على ثلاث ‎CDRs‏ من أي من المناطق 5 المتغيرة سلسلة ثقيلة الموضحة في جدول 1. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على ثلاث ‎CDRs‏ من أي واحدة من المناطق المتغيرة سلسلة خفيفة الموضحة في جدول 1. في بعض
— 0 4 — التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على ثلاث ‎CDRs‏ من أي واحدة من المناطق المتغيرة السلسلة الثقيلة الموضحة في جدول 1 وثلاث ‎CDRS‏ من أي واحدة من المناطق المتغيرة السلسلة الخفيفة الموضحة في جدول 1. يوفر الجدول 2 أمثلة على ترتيبات ‎CDR‏ من أجسام مضادة معارضة ‎aca‏ 50-1 المتوفرة هنا. جدول 2: أجسام مضادة معارضة ضد 00-1 ‎(MAbs)‏ وترتيبات ‎CDR‏ ارتباط- مولد ضد الخاصة بها طبقا إلى ‎Kabat‏ (تحته ‎Chothia 5 (ba‏ (خط ثخين) ‎CDR3 CDR2 CDR1 |‏ ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSTRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب ) (تعريف الترتيب رقم: 11) ‎١‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) ‎NIYPGSSLTNYNEK‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN mAb1‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و17) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب ) (تعريف الترتيب رقم: 20) ‎١‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) ‎NIYPGSSLTNYNEK‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN mADb2‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و17)
_ 1 4 _ ‎QNDYFYPHT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب ‎say | |‏ رقم: 20) (تعريف الترتيب رقم: 10( رقم: 21( ‎NIYPGSSLTNYNEK mADb3‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و17) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSTNQK‏ ‎WTSTRES‏ ‎NFLT | |‏ (تعريف الترتيب لتعريف الترتيب رقم: 011 (تعريف الترتيب رقم: 22( رقم: 2 0 ‎NIYPGSSLTNYNEK mAb4‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و17) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSTRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب ‎٠-٠ |‏ (تعريف الترتيب رقم: 11) (تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) ‎NIYPGSSLTNYNEK mADbS‏ ‎LSTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 23( و17)
_ 2 4 _ ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب ‎say | |‏ رقم: 20) (تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) ‎NIYPGSSLTNYNEK mMADG‏ ‎LSTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 23( و17) ‎QNDYFYPHT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب 0000 لتعريف الترتيب رقم: 20) (تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 21( ‎NIYPGSSLTNYNEK mAb7‏ ‎LSTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 23( و17) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSTNQK‏ ‎WTSTRES‏ ‎NFLT | |‏ (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب رقم: 11) (تعريف الترتيب رقم: 22( رقم: 2 1( طم ‎NIYPGSSLTNYNEK‏ ‎LSTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 16 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 23( و17)
— 3 4 — ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSTRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب : (تعريف الترتيب رقم: 11) (تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) 9م ‎NIYPGSSITNYNEKF‏ ‎LTTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎KN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 24 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 26( و25) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب لتعريف الترتيب رقم: 20) (تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) ‎mAb]‏ ‎NIYPGSSITNYNEKF‏ ‎LTTGTFAY GYTFTSYWIN 0‏ ‎KN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 24 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 26( و25) ‎QNDYFYPHT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب : (تعريف الترتيب رقم: 20) (تعريف الترتيب رقم: 10( رقم: 21( ‎mAb]‏ ‎NIYPGSSITNYNEKF‏ ‎LTTGTFAY GYTFTSYWIN 1‏ ‎KN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 24 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 26( و25)
‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSTNQK‏ ‎WTSTRES‏ ‎NFLT | |‏ (تعريف الترتيب الترتيب رقم: 11) (تعريف الترتيب رقم: 22( رقم: 2 0 ‎mAb]‏ ‎NIYPGSSITNYNEKF‏ ‎LTTGTFAY GYTFTSYWIN 2‏ ‎KN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 24 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 26( و25) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSTRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب 0-0 ريف الترتيب رم 01 ‎١‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) ‎mAb]‏ ‎NIWPGSSLTNYNEK‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN 3‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 27 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و28) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب رقم: 20) (تعريف الترتيب رقم: 10) رقم: 12) ‎mAb]‏ ‎NIWPGSSLTNYNEK‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN 4‏ ‎FKN‏ ‏'! | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 27 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و28)
— 5 4 — ‎QNDYFYPHT KSSQSLWDSGNQ‏ ‎WTSYRES‏ ‎KNFLT | |‏ (تعريف الترتيب ) (تعريف الترتيب رقم: 20) ‎١‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 10( رقم: 21( 1طمم ‎NIWPGSSLTNYNEK‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN 5‏ ‎FKN‏ ‏" | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 27 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و28) ‎QNDYFYPLT KSSQSLWDSTNQK‏ ‎WTSTRES‏ ‎NFLT‏ ‏(تعريف الترتيب ) (تعريف الترتيب رقم: 11) (تعريف الترتيب رقم: 22( رقم: 2 1( ‎NIWPGSSLTNYNEK mAb]‏ ‎LLTGTFAY GYTFTSYWIN‏ ‎FKN 6‏ " | (تعريف الترتيب أرقام: 13 : (تعريف الترتيب (تعريف الترتيب أرقام: 27 (بالكامل)؛ 14 و15) رقم: 18( و28) في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على ثلاث ‎CDRs‏ سلسلة خفيفة وثلاث ‎CDRs‏ سلسلة ثقيلة من الجدول 2. يتوافر في جدول 3 اصطفاف ‎CDRs‏ لسلسلة خفيفة من أجسام مضادة ‎aca‏ 00-1. تظهر المتخلفات المتغيرة بخط تخين. يتوافر فى الصف الأخير من الجدول 3 ترتيبات ‎CDR‏ سلسلة خفيفة متعاقبة. جدول 3: اصطفاف ‎CDRs‏ سلسلة خفيفة ضد ‎PD-1‏
‏ا الترتيب الترتيب‎ | بيترتلا‎ mAb . | VL CDR3 . . VL CDR1 ‏رقم: 02 ارقم: رقم:‎ 1
QNDYFY WTST KSSQSLWDSG
12 11 10 9
PLT RES NQKNFLT
13 6 2
QNDYFY WTSY KSSQSLWDSG
12 20 10 «10
PLT RES NQKNFLT
14 73
QNDYFY WTSY KSSQSLWDSG
21 20 10 11
PHT RES NQKNFLT
«8 «4
QNDYFY WTST KSSQSLWDST
12 11 22 12
PLT RES NQKNFLT
16
QNDYSY WTST KSSQSLLDSG 17 31 11 30
PLT RES NQKNFLT
‎QNDY‏ ‎X1YP WTSX KSSQSLX1DS‏ ‎X2T, 1RES, X2NQKNFLT,‏ حيث 1)ل هو ‎JW‏ 32 حيث 61 | ‎3B‏ احيث أن 1 |34 اء و2 هو 6 أو هو 1 أو هو | أو ‎S‏ ‎T‏ ل و2 هو ا أو ‎H‏ ‏يتوافر في جدول 4 اصطفاف ‎CDRs‏ لسلسلة ثقيلة من أجسام مضادة ضد ‎.PD-1‏ تظهر المتخلفات المتغيرة بخط تخين. يتوافر فى الصف الأخير من الجدول 4 ترتيبات ‎CDR‏ سلسلة ثقيلة جدول 4: اصطفاف ‎CDRs‏ سلسلة ثقيلة ضد ‎PD-1‏ ‏تعريف تعريف تعريف ‎VH VH‏ ‎mAb‏ الترتيب | ‎VH CDR2‏ الترتيب الترتيب ‎CDR3 CDR1‏ رقم: رقم: رقم: ‎LLTGT NIYPGSSLTNYN GYTFTS‏ 4-1 13 17 18 ‎FAY EKFKN YWIN‏ ‎LSTGT NIYPGSSLTNYN GYTFTS‏ 8-5 13 17 23 ‎FAY EKFKN YWIN‏ ‎LTTGT NIYPGSSITNYN GYTFTS‏ 12-9 13 25 26 ‎FAY EKFKN YWIN‏ ‎LLTGT NIWPGSSLTNY GYTFTS‏ 16-13 13 28 18 ‎FAY NEKFKN YWIN‏
‎VH VH‏ ‎mAb‏ الترتيب | ‎VH CDR2‏ الترتيب الترتيب ‎CDR3 ) ) CDR1‏ رقم: ‎fe‏ رقم: ‎EEE EE‏ 17 13 35 18 ‎FAY EKFKN YWIN‏ ‎LXITG NIX1PGSSX2TN‏ ‎TFAY, YNEKFKN,‏ ‎GYTFTS‏ ‎VWIN‏ 13 حيث 1ل هو 7 أو 36 حيث ‎37١ x1‏ االاء و2 هو ‎dL‏ هو ا أو أو 5 5 في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على ثلاث ‎CDRs‏ سلسلة خفيفة من الجدول 3 وثلاث ‎CDRs‏ سلسلة ثقيلة من الجدول 4. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على سلسلة ثقيلة ‎ALIS‏ الطول؛ مع أو بدون ‎lysine‏ طرفي ©؛ و/أو سلسلة خفيفة كاملة الطول من جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ 00/07 أو ‎.MADLS‏ يوضح أدناه ترتيب الحمض الأميني من سلسلة ‎ali‏ كاملة الطول 00/07 (تعريف الترتيب رقم: 29): ‎QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWM‏ ‎GNIYPGSSLTNYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR‏ ‎LSTGTFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKD‏ ‎YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY 0‏ ‎TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL‏ ‎MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTY‏ ‎RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYT‏
‎LPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS‏ ‎DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 29( يوضح أدناه ترتيب الحمض الأميني من سلسلة ثقيلة كاملة الطول 00/7 بدون ‎lysine‏ ‏5 طرفي © (تعريف الترتيب رقم: 38): ‎QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWM‏ ‎GNIYPGSSLTNYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR‏ ‎LSTGTFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKD‏ ‎YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY‏ ‎TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTL 0‏ ‎MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTY‏ ‎RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYT‏ ‎LPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS‏ ‎DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG‏ ‏5 (تعريف الترتيب رقم: 38( يوضح أدناه ترتيب الحمض الأميني من سلسلة خفيفة ‎ALIS‏ الطول 01/07 (تعريف الترتيب رقم: 39): ‎DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLWDSGNQKNFLTWYQQKPGQP‏ ‎PKLLIYWTSYRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYF‏ ‎YPHTFGGGTKVEIKRGTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE 0‏ ‎AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY‏ ‎ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: 39( يوفر الاختراع ‎Lad‏ طرق توليد؛ انتقاء» وصنع أجسام مضادة معارضة ضد 600-1. يمكن
— 0 5 — صنع ا لأجسام المضادة من هذا الاختراع بالإجراءات المعروفة في الفن. في بعض التجسيدات؛ يمكن صنع الأجسام المضادة تخليقيا ويتم إظهارها باستخدام أي طريقة معروفة في الفن. في بعض التجسيدات؛ يمكن تحضير وانتقاء أجسام مضادة بتقنية عرض بلعم. ‎Ohl‏ على سبيل المثال» براءة الاختراع الأمريكية أرقام 2 ا5580717؛ 5733743؛ و6265150؛ و1994 ,12:433-455 ‎Winter et al., Annu.
Rev.
Immunol.‏ بطريقة ‎«dha‏ يمكن استخدام تقنية عرض بلعم )1990 ,348:552-553 ‎(McCafferty et al., Nature‏ لإنتاج أجسام مضادة بشرية وشدف جسم مضاد فى المعمل مجموعات مخزنة من جين مجال متغير جلوييولين مناعي ‎(V)‏ من ‎Cail‏ منعدمي المناعة. طبقا لهذه التقنية تنسخ جينات مجال ‎V‏ جسم مضاد في إطار إلى سواء جين بروتين مغلف رئيسي أو ثانوي من بكتيريا خيطية؛ مثل 1/413 أو ‎fd 1 0‏ وتعرض كشدف جسم مضاد وظيفية على سطح جسيم البلعم ‎٠‏ بسبب أن الجسيم الخيطي يحتوي على نسخة ‎DNA‏ شريط فردي من جينوم بلعم؛ فإن الانتقاءات اعتمادا على الخواص الوظيفية للجسم المضاد ينتج عنها أيضا انتقاء جين يشفر الجسم المضاد الذي يظهر تلك الخواص. لذلك؛ ‎Slag‏ ‏البلعم بعض خواص الخلية 8 هذه. يمكن عرض البلعم في تشكيلة من الأشكال؛ للمراجعة ‎bl‏ ‏مثلاء ‎Johnson, Kevin 5. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural 15‏ ‎Biology 3:564-571, 1993.‏ يمكن استخدام مصادر متعددة لأجزاء جين- ‎V‏ لعرض البلعم. ‎Clackson et al., Nature 352:624-628, 1991,‏ تعزل مصفوفة معكوسة لأجسام مضادة ضد ‎OXAZOIONE‏ من مكتبة تكوينية عشوائية صغيرة من 0 جينات ‎V‏ مشتقة من طحال فأر مناعى. يمكن إنشاء قائمة جينات ‎١/‏ من مانحين بشريين ويمكن عزل الأجسام المضادة لمصفوفة معكوسة من مولدات ضد (متضمنة مولدات ضد بذاتها) أساسيا ‎Mark et al., J.
Mol.
Biol. 222:581-597, 1991, or Griffith et al., EMBO J.‏ 1993 ,12:725-734 فى استجابة مناعية طبيعية ¢ تقوم جينات جسم مضاد بتراكم طفرات بمعدل مرتفع (طفرة جسدية
مرتفعة). تمنح بعض هذه التغيرات المدخلة انجذابية أعلى؛ وتنسخ بصورة مفضلة خلايا 8 التي تعرض جلوبيولين مناعي سطح عالي الانجذابية وتتباين أثناء تحدي مولد الضد اللاحق. قد تحاكى هذه العملية الطبيعية باستعمال تقنيات معروفة مثل "خلط سلسلة" ‎(Marks et al., Bio/Technol.‏ )1992 ,10:779-783. في هذه الطريقة؛ يمكن تحسين انجذابية أجسام مضادة بشرية أولية" ناتجة بعرض بلعم بواسطة الاستبدال المتعاقب لجينات منطقة ‎V‏ سلسلة خفيفة وثقيلة مع قوائم أشكال متباينة طبيعيا الحدوث (قوائم) من جينات مجال ‎V‏ ناتجة من مانحين منعدمي المناعة. تتيح هذه التقنية إنتاج أجسام مضادة وشدف جسم مضاد مع انجذابيات في نطاق بيكو جزيئي جرامي- نانو جزيئي جرامي. تم وصف استراتيجية لصنع قوائم جسم مضاد بلعم كبير جدا (تعرف أيضا "أساس كل المكتبات") بواسطة ‎Waterhouse et al., Nucl.
Acids Res. 21:2265-2266, 1993 0‏ يمكن أيضا استخدام خلط جين لتوجيه أجسام مضادة بشرية من أجسام مضادة لقارض؛ حيث يكون للجسم المضاد البشري انجذابيات وخواص مشابه لجسم مضاد قارض بادئ. طبقا لهذه الطريقة؛ التي يشار إليها أيضا "دمغ الإبيتوب”؛ يستبدل جين مجال ‎V‏ سلسلة خفيفة أو ثقيلة من أجسام مضادة لقارض ناتجة بتقنية عرض بلعم مع قائمة جينات مجال ‎V‏ بشري؛ لخلق هجائن بشري- قارض. إن 5 اتتقاء مولد ضد ينتج ‎die‏ عزل مناطق متغيرة بشرية قادرة على إعادة تخزين ‎alge‏ ارتباط ‎Age‏ ضد وظيفي» أي؛ تحكم الإبيتوب (يدمغ) في اختيار الشريك. عند تكرار العملية من أجل استبدال ‎Jae‏ ‎V‏ قارض المتبقي؛ نحصل على جسم مضاد بشري (انظر منشور ‎PCT‏ الطلب الدولي رقم 3 .بخلاف اكتساب ‎dew‏ بشرية تقليدية لأجسام مضادة قارض عن طريق رقعة ‎(CDR‏ ‏توفر هذه التقنية أجسام مضادة بشرية بالكامل؛ والتي ليس لها إطار عمل أو متخلفات ‎CDR‏ من 0 مصدر قارض. في بعض التجسيدات؛ يمكن صنع الأجسام المضادة باستخدام تقنية ورم هجين. من المنصوص عليه أن أي كائن ثديي متضمنا آدميين أو جسم مضاد ينتج خلايا ‎die‏ يمكن معالجته ليعمل كأساس لإنتاج كائنات ‎(dus‏ متضمنة خطوط خلية هجينة؛ بشرية. إن طريقة وبرنامج تحصين الحيوان العائل تكون عموما في تنفيذ الأسس والتقنيات التقليدية لتحفيز وإنتاج الجسم المضاد؛ كما 5 هو موصوف هنا إضافيا. ‎(badge‏ يلقح الحيوان العائل في البريتون؛ في العضل؛ فمويا؛ تحت ‎ala‏ في باطن القدم؛ و/أو في الغمد بكمية من مولد مناعي؛ متضمنة كما هو موصوف هنا.
يمكن تحضير أورام هجينة من خلايا ورم نخاعي وخلايا ليمفاوية مكتسبة سمة الخلود باستخدام تقنية تهجين خلية جسدية عامة من ‎Kohler, 8. and Milstein, C., 1975, Nature 256:495-497 or as modified by‏ ‎Buck, D.
W., et al., In Vitro, 18:377-381, 1982.‏ يمكن استخدام خطوط ورم نخاعي متاحة؛ متضمنة بدون تحديد ‎X63-Ag8.653‏ وتلك من ‎Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, Calif., USA‏ في التهجين. عموماء تتضمن التقنية التحام خلايا ورم نخاعي وخلايا ليمفاوية باستخدام ‎Jie fusogen‏ ‎polyethylene glycol‏ أو بطريقة كهربية معروفة جيدا للمهرة في الفن. بعد الالتحام؛ تتفصل الخلايا من وسط الالتحام وتنمو في وسط نمو ‎(ie «JES‏ وسط ‎hypoxanthine—‏ ‎caminopterin-thymidine (HAT) 0‏ لإزالة خلايا أصلية غير مهجنة. يمكن استخدام أي من الأوساط الموصوفة هناء مدعمة مع أو بدون ‎chan‏ لزراعة ورم هجين يفرز أجسام مضادة أحادية النسخ. كبديل آخر لتقنية التحام خلية؛ يمكن استخدام خلايا 8 مكتسبة سمة الخلود ‎EBV‏ لإنتاج أجسام مضادة أحادية النسخ 00-1 من الاختراع الحالي. تتمدد الأورام الهجينة أو خلايا 8 مكتسبة سمة الخلود أخرى وتنسخ ‎(be‏ عند الرغبة؛ وتختبر المواد الطافية لأجل نشاط جين مناعي مضاد 5 بإجراءات اختبارات مناعية تقليدية ‎Ole)‏ اختبار مناعي إشعاعي؛ اختبار مناعي إنزيم؛ أو اختبار مناعي استشعاعي). تتضمن الأورام الهجينة التي يمكن استخدامها كمصدر لأجسام مضادة كل مشتقات؛ خلايا نسل من أورام هجينة أصلية تنتج أجسام مضادة أحادية النسخ معينة لأجل 00-1 أو قسم منه. قد تنمو أورام هجينة تنتج تلك الأجسام المضادة في المعمل أو في الجسم الحي باستخدام 0 إجراءات معروفة. يمكن عزل الأجسام المضادة أحادية النسخ من وسط الزراعة أو موائع الجسم؛ بإجراءات ‎dan‏ جلوبيولين مناعي تقليدية ‎Jie‏ ترسيب ‎cammonium sulfate‏ تحلل كهربي هلام؛ عملية ديلزة» تحليل كروماتوجرافي» وترشيح فائق؛ عند الرغبة. يمكن إزالة النشاط غير المرغوب فيه؛ إذا وجد؛ على سبيل المثال» بتحضير فوق مواد الامتزاز المصنوعة من جين مناعي مصاحب للطور الصلب وتصفية أو إطلاق الأجسام المضادة المرغوية من الجين المناعي. إن تحصين حيوان عائل مع عديد ببتيد ‎(PD-1‏ أو شدفة تحتوي على ترتيب حمض أميني المستهدف مقترن مع بروتين محصن في الأنواع ‎Dall‏ تحصينهاء ‎Mie‏ 0728010 دموي رخو مستدق؛ مصل ألبومين؛
‎thyroglobulin‏ بقري؛ أو مثبط ‎trypsin‏ فول الصويا باستخدام عامل مشتق أو ثنائي الوظيفية؛ على سبيل المثال؛ ‎maleimidobenzoyl sulfosuccinimide ester‏ (اقتران خلال متخلفات ‎N-hydroxysuccinimide «(cysteine‏ (خلال متخلفات ‎«glutaraldehyde «(lysine‏ ‎<SOCI2 succinic anhydride‏ أو ‎(RIN=C=NR‏ حيث يكون ‎R‏ و ‎R1‏ هما مجموعات ‎alkyl‏ ‏5 مختلفة؛ يمكن أن ينتج مجموعة من الأجسام المضادة (مثلاء أجسام مضادة أحادية النسخ). عند الرغبة؛ قد يتم ترتيب جسم مضاد معارض ضد 00-1 (أحادي النسخ أو متعدد النسخ) الهام ثم يتم نسخ ترتيب عديد نيكلوتيد إلى الناقل للإظهار أو الإكثار. يمكن استبقاء ترتيب يشفر الجسم المضاد الهام في الناقل في خلية عائل ويمكن بعدئذ تمدد خلية العائل وتجميدها للاستخدام المستقبلي. إن إنتاج أجسام مضادة أحادية النسخ مخلقة في مزرعة خلية يمكن إجراؤه خلال نسخ 0 جينات جسم مضاد من الخلية 8 بطرق معروفة في الفن. انظر؛ ‎Ole‏ ‎Tiller et al., 2008, J.
Immunol.
Methods 329, 112; US Patent No.‏ .7,314,622 في بعض التجسيدات؛ يمكن استخدام ترتيب عديد نيكلوتيد للمعالجة الجينية إلى 'إكساب السمة البشرية" للجسم المضاد أو لتحسين الانجذابية؛ أو خواص أخرى للجسم المضاد. يمكن أيضا تخصيص الجسم المضاد للاستخدام؛ على سبيل المثال؛ في ‎(DISH‏ القطط» الحيوانات الرئيسة؛ الخيول والبقر. في بعض التجسيدات؛ يمكن الحصول على أجسام مضادة بشرية كاملة باستخدام ‎Ob‏ ‏متاحة تجاريا تم معالجتها هندسيا لإظهار بروتينات جلوبيولين مناعي بشري معين. يمكن ‎Lad‏ ‏استخدام حيوانات معدلة وراثيا مصممة لإنتاج استجابة مناعية مرغوية أكثر ‎lie)‏ أجسام مضادة 0 بشربة ‎(ALIS‏ أو استجابة مناعية أكثر شدة لتوليد أجسام مضادة بشرية أو مكتسبة السمة البشرية. إن أمثلة على هذه التقنية هي ‎Xenomouse™‏ من ‎Abgenix, Inc. (Fremont, CA)‏ ‎HUMAb—Mouse®‏ و ‎TC Mouse™‏ من ‎.Medarex, Inc. (Princeton, NJ)‏ يمكن صنع الأجسام المضادة بصورة تخليقية بواسطة أولا عزل الأجسام المضادة والجسم المضاد الذي ينتج خلايا من حيوانات العائل؛ الحصول على ترتيب جين؛ واستخدام ترتيب الجين لإظهار جسم مضاد مخلق في خلايا العائل ‎lie)‏ خلايا 0110). إن طريقة أخرى يمكن استخدامها هي لإظهار ترتيب الجسم المضاد في النباتات ‎(Jie)‏ التبغ) أو لبن معدل وراثيا. تم توضيح طرق
لإظهار أجسام مضادة مخلقة في نباتات أو لبن. انظرء على سبيل المثال؛ ‎Peeters, et al.
Vaccine 19:2756, 2001; Lonberg, N. and D.
Huszar Int.‏ ‎Rev.
Immunol 13:65, 1995; and Pollock, et al., J Immunol Methods‏ .1999 ,231:147 إن طرق لصنع مشتقات أجسام مضادة؛ ‎Ole‏ مجال؛ سلسلة فردية؛ إلخ تكون معروفة في الفن. إن اختبارات ‎dele‏ وتقنيات تصنيف مقياس ‎GAS‏ الخلية ‎(fio‏ تصنيف خلية منشطة فلوروسينية ‎(FACS) (fluorescence activated cell sorting)‏ يمكن أيضا استعمالها لعزل أجسام مضادة تخص ‎PD-1‏ ‏إن ‎DNA‏ يشفر أجسام مضادة أحادية النسخ يعزل ويرتب باستخدام إجراءات تقليدية ‎lie)‏ ‏0 باستخدام مجسات ‎oligonucleotide‏ تكون قادرة على ربط خاص ‎clad‏ تشفر سلاسل ‎Ad‏ ‏وخفيفة لأجسام مضادة أحادية النسخ). تعمل ‎WIA‏ ورم هجين كمصدر مفضل من ‎DNA‏ هذا. بمجرد العزل» يمكن وضع ‎DNA‏ في نواقل إظهار (مثلا نواقل الإظهار الموضحة في منشور ‎PCT‏ ‏الطلب الدولي رقم 87/04462)؛ ‎lly‏ تنقل العدوى بعدئذ إلى خلايا عائل مثل خلايا ‎E. coli‏ خلايا ‎COS‏ قرد؛ خلايا مبيض هامستر صيني ‎(CHO)‏ أو ‎WA‏ ورم نخاعي لا تنتج بطريقة 5 أخرى بروتين جلوبيولين مناعي؛ للحصول على تخليق أجسام مضادة أحادية النسخ في خلايا عائل مخلقة. انظرء ‎Mie‏ منشور 507 رقم الطلب الدولي 87/04462. يمكن أيضا تعديل ‎DNA‏ على سبيل المثال» باستبدال ترتيب تشفير لمجالات ثابتة سلسلة خفيفة وثقيلة بشرية بدلا من ترتيبات فأرية متجانسة» 1984 ,81:6851 ‎«Morrison et al., Proc.
Nat.
Acad.
Sci.‏ أو بالارتباط مشترك التكافؤ لأجل جلوبيولين مناعي يشفر ترتيب كل أو بعض ترتيبات التشفير لأجل عديد ببتيد 0 جلوبيولين غير مناعي. بهذه الطريقة؛ تحضر أجسام مضادة "خيمرية" أو 'هجينة" بحيث يكون لها هنا خاصية ارتباط لجسم مضاد أحادي النسخ ‎PD-1‏ ‏يمكن إنتاج شدف جسم مضاد بواسطة تحلل بروتيني أو تحلل آخر للأجسام المضادة؛ بطرق تخليق (أي؛ عديد ببتيدات فردية أو التحام) كما هو موصوف أعلاه أو بواسطة تخليق كيميائي. تكون عديد ببتيدات من الأجسام المضادة؛ بصفة خاصة عديد ببتيدات قصيرة تصل إلى حوالي 50 5 حمض أميني؛ مصنعة تقليديا بتخليق كيميائي. تكون طرق تخليق كيميائي معروفة في الفن ومتاحة تجاريا. على سبيل ‎(Jal)‏ قد ينتج جسم مضاد بواسطة جهاز تخليق عديد ببتيد آلي يستعمل طريقة
طور صلب. انظر أيضاء براءة الاختراع الأمريكية أرقام 5807715؛ 4816567؛ و6331415. في بعض التجسيدات؛ يشتمل عديد النيكلوتيد على ترتيب يشفر مناطق متغيرة سلسلة ثقيلة و/أو سلسلة خفيفة لجسم مضاد ‎«mAb2 (MAD]‏ دتطقص ‎«mAbS «mAb4‏ وطمقص ‎«MADb7‏ ‎mAblQ mAb9 mAbS‏ 1اطحخص ‎«mAb15 mAbl4 mAb13 (mAbl12‏ أو ‎.MADIG 5‏ يمكن الحفاظ على ترتيب يشفر الجسم المضاد الهام في ناقل في خلية عائل ويمكن أن تتمدد خلية العائل وتتجمد للاستخدام المستقبلي. توصف بصورة إضافية هنا النواقل (متضمنة نواقل الإظهار) وخلايا العائل. يتضمن الاختراع تجسيدات طفرة انجذابية. على سبيل المثال؛ يمكن إنتاج أجسام مضادة لطفرة انجذابية بإجراءات معروفة في الفن ‎Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783: Barbas et al., 1994, Proc 0‏ ‎Nat.
Acad.
Sci, USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-‏ ‎Yelton et al., 1995, J.
Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al.,‏ ;155 ‎J.
Immunol., 154(7):3310-9; Hawkins et al., 1992, J.
Mol.
Biol.,‏ ,1995 ;226:889-896 ومنشور ‎PCT‏ رقم الطلب الدولي 2004/058184. يمكن استخدام الطرق التالية لضبط انجذابية الجسم المضاد ولتمييز 004. إن أحد طرق تمييز ‎CDR‏ من جسم مضاد و/أو تغيير (مثلا تحسين) انجذابية الارتباط لأجل عديد ببتيد؛ ‎ie‏ ‏جسم مضاد؛ يسمى 'تولد طفرة فحص مكتبة". بصفة عامة؛ تعمل تولد طفرة فحص مكتبة كما يلي. يستبدل موضع حمض أميني واحد أو أكثر في ‎CDR‏ مع اثنين أو أكثر (مثلا 3 4 5 6؛ 7 0 8 9 10 ¢11 12 13 14« ¢15 16« 17 18 19؛ أو 20) أحماض أمينية باستخدام طرق تمييز في الفن. إن هذا يولد مكتبات صغيرة من النسخ (في بعض التجسيدات؛ يتحلل بذلك واحد لكل موضع حمض أميني)؛ كل مع تعقيد عضوين أو أكثر (إذا تم استبدال اثنين أو أكثر من الأحماض الأمينية عند كل موضع). بصفة عامة؛ تتضمن المكتبة أيضا نسخة تشمل حمض أميني أصلي (غير مستبدل). إن عدد صغير من النسخ؛ ‎(and Mie‏ تقريبا 80-20 نسخة (اعتمادا على 5 معقدية المكتبة)» من كل مكتبة لانجذابية الارتباط إلى عديد الببتيد المستهدف (أو هدف ارتباط
آخر)؛ وتتحدد مرشحات مع ارتباط متزايد؛ ‎ald‏ منخفض؛ أو بدون ارتباط. تكون طرق لتحديد انجذابية الارتباط معروفة جيدا في الفن. يمكن تحديد انجذابية الارتباط باستخدام؛ على سبيل المثال؛ تحليل رنين بلازمون سطح ‎«Biacore™‏ والذي يكشف عن الاختلافات في انجذابية الارتباط لتقريبا ضعفين أو أكثرء؛ ‎«Kinexa® Biosensor‏ اختبارات تقارب وميض؛ ‎ELISA‏ اختبار مناعي ‎(ORIGEN® 5‏ إخماد استشعاعي؛ نقل استشعاعي» و/أو عرض خميرة. يمكن أيضا فحص انجذابية الارتباط باستخدام اختبار حيوي مناسب. يكون ‎Biacore™‏ مفيد بصفة خاصة عندما يبدأ بالفعل الجسم المضاد بالارتباط مع انجذابية عالية نسبياء على سبيل المثال ‎Loi KD‏ 10 نانو جزيئي جرامي أو أقل. في بعض التجسيدات؛ يستبدل كل موضع حمض أميني في ‎CDR‏ (في بعض التجسيدات؛ 0 واحد كل مرة) مع كل 20 حمض أميني طبيعي باستخدام طرق توليد طفرة معروفة في الفن (يوصف بعضها هنا). إن هذا ‎alg‏ مكتبات صغيرة من النسخ (في بعض التجسيدات؛ واحد لكل موضع حمض أميني محلل)؛ كل مع معقدية 20 عضو (إذا تم استبدال كل 20 حمض أميني عند كل موضع). في بعض التجسيدات؛ تشتمل المكتبة المرغوب فحصها استبدالات في موضعين أو أكثر؛ والتي قد تكون في نفس ‎CDR‏ أو في اثنين أو أكثر ‎CDRs‏ لذلك؛ قد تشتمل المكتبة على استبدالات في موضعين أو أكثر في ‎CDR‏ واحد. قد تشتمل المكتبة على استبدال في موضعين أو أكثر ‎.CDRs‏ قد تشتمل المكتبة على استبدال في 3 4؛ 5؛ أو أكثر مواضع؛ توجد المواضع المذكورة في اثنين؛ ثلاث؛ ‎cal‏ خمس؛ أو ست ‎CDRS‏ يمكن تحضير الاستبدال باستخدام كودونات فائضة منخفضة. انظرء ‎Shia‏ جدول 2 من 137(1):109-18 ‎et al., 1993, Gene‏ أصالق8. قد يكون ‎CDR‏ هو منطقة متغيرة سلسلة ثقيلة ‎CDR3 (VH)‏ و/أو منطقة متغيرة سلسلة 0 خفيفة ‎.CDR3 (VL)‏ قد يكون ‎CDR‏ واحد أو أكثر من 06081 0/1 ‎«VH CDR2‏ ‎CDR3‏ لال ‎VL CDR2 VL CDR1‏ و/أو ‎.VL CDR3‏ قد يكون ‎CDR‏ هو ‎«Kabat CDR‏ ‎CDR «Chothia CDR‏ متمدد؛ ‎CDR «AbM CDR‏ اتصال؛ أو 0014 تكويني. قد يتم ترتيب المرشحات مع ارتباط ‎(puns‏ بذلك تتحدد طفرة استبدال ‎CDR‏ التي تنتج انجذابية محسنة (تسمى أيضا استبدال ‎(mad‏ يمكن أن تكون المرشحات المرتبطة أيضا مرتبة؛ 5 بذلك تحدد استبدال ‎CDR‏ الذي يحتفظ بالارتباط. ‎(Sa‏ إجراء دورات متعددة من الفحص. على سبيل المثال؛ تكون مرشحات (يشمل كل منها
استبدال حمض أميني عند موضع واحد أو أكثر من ‎CDR‏ واحد أو أكثر) مع ارتباط محسن نافعة أيضا لتصميم مكتبة ثانية تحتوي على الأقل على حمض أميني أصلي ومستبدل عند كل موضع ‎CDR‏ محسن (أي؛ موضع حمض أميني في ‎CDR‏ الذي عنده توضح طفرة استبدال ارتباط محسن). يناقشن تحضير» وفحص أو انتقاء هذه المكتبة إضافيا أدناه.
توفر أيضا تولد طفرة فحص مكتبة طريقة لتمييز ‎«CDR‏ بحيث يوفر ‎Lad‏ معدل تكرار النسخ مع ارتباط محسن؛ نفس الارتباط ارتباط منخفض؛ أو عدم الارتباط معلومات تتعلق بأهمية كل موضع حمض أميني لقابلية ثبات معقد مولد ضد- جسم مضاد. على سبيل المثال؛ إذا كان موضع ‎CDR‏ يستبقي ارتباط عند تغيير كل 20 حمض أميني؛ يتحدد هذا الموضع كموضع غير مرجح طلبه لريط مولد ضد. على النقيض؛ إذا كان موضع ‎CDR‏ يستبقى ارتباط بنسبة مثوية صغيرة
0 فقط من الاستبدالات؛ يتحدد هذا الموضع بموضع هام لوظيفة ‎LCDR‏ لذلك؛ فإن طرق تولد طفرة فحص مكتبة تولد معلومات تتعلق بمواضع في ‎CDRS‏ قد تتغير إلى العديد من الأحماض الأمينية المختلفة (متضمنة كل 20 حمض أميني)؛ ومواضع في 0045 لا يمكنها التغير أو يمكنها فقط التغير إلى أحماض أمينية قليلة.
قد تتحد مرشحات مع انجذابية محسنة في مكتبة ثانية؛ التي تتضمن حمض أميني محسن؛
5 حمض أميني أصلي عند هذا الموضع؛ وقد تتضمن إضافيا استبدالات إضافية عند هذا الموضع؛ اعتمادا على معقدية المكتبة المرغوية؛ أو تسمح باستخدام الفحص أو طريقة الانتقاء المرغوية. إضافة لهذاء عند الرغبة؛ قد يكون موضع الحمض الأميني المجاور عشوائيا إلى اثنين أو أكثر من الأحماض الأمينية على الأقل. إن عشوائية الأحماض الأمينية المجاورة قد تسمح بمرونة تكوين إضافية في ‎CDR‏ طفرة؛ والذي بدوره؛ يسمح أو يتيح إدخال عدد أكبر من طفرات محسنة. قد تشتمل المكتبة
0 أيضا على استبدال عند مواضع لا تظهر انجذابية محسنة في الدورة الأولى من الفحص.
تفحص المكتبة الثانية أو تنتقى لأجل أعضاء مكتبة مع انجذابية ربط محسنة و/أو متغيرة باستخدام أي طريقة معروفة في الفن؛ متضمنة فحص باستخدام تحليل مجس حيوي ‎Kinexa™‏ ‏وانتقاء باستخدام أي طريقة معروفة في ‎cold Gall‏ متضمنة عرض بلعم عرض ‎ed‏ وعرض ‎ribosome‏
من أجل إظهار أجسام مضادة ضد 00-1 من الاختراع الحالي؛ فإن شدف ‎DNA‏ تشفر مناطق ‎VL 5 VH‏ يمكن الحصول عليها أولا باستخدام أي من الطرق الموصوفة أعلاه. إن تعديلات
— 8 5 — متعددة؛ مثلا طفرات؛ ‎ccligia‏ و/أو إضافات يمكن إدخالها إلى ترتيبات ‎DNA‏ باستخدام طرق قياسية معروفة لهؤلاء المهرة في الفن. على سبيل ‎(JO‏ يمكن إجراء ‎Ag‏ طفرة باستخدام طرق قياسية؛ ‎Jie‏ تولد طفرة يتسبب فيها بصورة غير مباشرة ‎Cua (PCR‏ تندمج عديد النيكلوتيدات الطفرية في مواد أولية ‎PCR‏ بحيث يحتوي منتج ‎PCR‏ على الطفرات المرغوية أو تولد طفرة موجه لموقع.
يشتمل الاختراع على تعديلات للمناطق المتغيرة الموضحة في جدول 1 5 ‎CDRS‏ الموضحة
في الجداول 2؛ 3 أو 4. على سبيل المثال؛ يتضمن الاختراع أجسام مضادة تشمل مناطق متغيرة مكافئة وظيفيا 5 ‎CDRs‏ لا تؤثر بدرجة ملحوظة على خواصها وأشكالها المتباينة التي لها نشاط و/أو انجذابية منخفضة أو معززة. على سبيل المثال» قد تحدث طفرة لترتيب حمض أمينى للحصول على
0 جسم مضاد له انجذابية الارتباط المرغوية إلى 000-1. إن تعديل عديد ببتيدات هو ممارسة روتينية في الفن ولا حاجة لوصفها هنا بالتفصيل. إن أمثلة عديد الببتيدات المعدلة تتضمن عديد ببتيدات مع استبدالات تحفظية لمتخلفات حمض أمينى؛ واحدة أو أكثر من المحذوفات أو الإضافات من الأحماض الأمينية التي لا تغير بصورة ضارة بدرجة كبيرة النشاط الوظيفي؛ أو تزيد (تعزز) انجذابية عديد ببتيد لمركبه الترابطي؛ أو استخدام مماثلات كيميائية.
إن إقحامات ترتيب حمض أميني تتضمن اندماجات طرفية - أميني و/أو ‎carboxyl‏ تتراوح فى الطول من متخلف واحد إلى عديد ببتيدات تحتوي على 100 متخلف أو أكثرء بالإضافة إلى إقحامات داخل الترتيب لمتخلفات حمض أمينى فردية أو متعددة. إن الأمثتلة على الإقحامات الطرفية تتضمن جسم مضاد مع متخلف ‎methionyl‏ طرفي-لا أو الجسم المضاد المندمج مع علامة الإبيتوب. إن ‎Jal‏ متباينة إقحامية أخرى لجزيء الجسم المضاد تتضمن الاندماج مع النهاية-ل!
0 أو ‎C=‏ من الجسم المضاد لإنزيم أو عديد ببتيد مما يزيد عمر النصف للجسم المضاد في الدورة الدموية.
إن الأشكال المتباينة للاستبدال لها على الأقل متخلف حمض أميني واحد في جزيء الجسم المضاد تمت إزالته وتم إقحام متخلف مختلف بدلا منه. إن المواقع الأكثر أهمية لتكوين طفري استبدالي تتضمن المناطق مفرطة التغير؛ لكن تتوقع ‎Wad‏ تغيرات الإطار. توضح في جدول 5
5 الاستبدالات التحفظية تحت عنوان "الاستبدالات التحفظية ‎substitutions)‏ 0005611/8117/6)". إذا
أدت تلك الاستبدالات إلى تغير فى النشاط ‎(gual)‏ فهناك عندئذ مزيد من التغييرات الجوهرية؛ تسمى
'استبدالات تمثيلية ‎"(exemplary substitutions)‏ في جدول 5؛ أو كما هو موصوف إضافيا أدناه بالإشارة إلى أنواع حمض أميني؛ يمكن إدخالها ويتم فحص المنتجات. جدول 5: استبدالات حمض أميني ‎NC‏ بال ‎cc‏
— 0 6 — ‎Ser «Thr Phe ¢Trp Tyr (Y)‏ ‎Val (V)‏ واب ‎Norleucine Ala tPhe Met sLeu‏ تجرى تعديلات جوهرية في الخواص الحيوية للجسم المضاد باتتقاء استبدالات تختلف بدرجة كبيرة في تأثيرها على استبقاء (أ) بناء الهيكل الأساسي لأجل عديد ببتيد في منطقة الاستبدال» ‎Ole‏ ‏كشكل صفحة أو حلزوني؛ (ب) شحنة أو صادة للماء للجزيء عند الموقع المستهدف؛ أو (ج) كتلة السلسلة الجانبية. تقسم متخلفات طبيعية الوجود إلى مجموعات على أساس خواص السلسلة الجانبية المشتركة: (1) غير قطبية: ‎Val (Ala «Met «Norleucine‏ ناعهاء ‎tlle‏ ‏)2( قطبية بدون شحنة: ‎¢GIn (Asn (Thr Ser (Cys‏ )3( حمضية (سالبة الشحنة): ‎¢Glu (Asp‏ )4( قاعدية (موجبة الشحنة): ‎(Arg Lys‏ (5) متخلفات تؤثر على اتجاه السلسلة: ‎¢Pro (Gly‏ و )6( أروماتية: ‎His Phe (Tyr (Trp‏ تجرى استبدالات غير تحفظية باستبدال عضو من نوع واحد من هذه الأنواع مع نوع آخر . إن أحد أنواع الاستبدال» على سبيل المثال؛ الذي يصنع لتغير ‎cysteines‏ واحدة أو أكثر في الجسم المضاد؛ والذي قد يتفاعل ‎(Libs‏ مع متخلف ‎lie OAT‏ بدون تحديد» ‎alanine‏ أو 5 5©006. على سبيل ‎(Jal‏ قد يكون استبدال لأجل ‎cysteine‏ غير سليم. قد يجرى الاستبدال في ‎CDR‏ أو منطقة إطار من مجال متغير أو في منطقة ثابتة لجسم مضاد. في بعض التجسيدات؛ يكون ‎cysteine‏ سليم. إن أي متخلف ‎cysteine‏ غير داخل في استبقاء الشكل الملائم للجسم
المضاد يمكن أيضا استبداله؛ عامة مع ‎serine‏ لتحسين الثبات التأكسدي للجزيء ومنع الاتصال المتقاطع الشاذ. بصورة عكسية؛ يمكن إضافة رابطة (روابط) ‎cysteine‏ إلى الجسم المضاد لتحسين ثباته؛ تحديدا عندما يكون الجسم المضاد هو شدفة جسم مضاد ‎Jie‏ شدفة ‎FV‏ ‏قد تكون الأجسام المضادة أيضا معدلة؛ مثلا في مجالات متغيرة لسلسلة ‎AL‏ و/أو خفيفة؛ مثلاء؛ لتعديل خواص ربط جسم مضاد. إن التغييرات في المنطقة المتغيرة يمكن أن تغير انجذابية و/أو خصوصية الارتباط. في بعض التجسيدات؛ لا يجرى أكثر من 1 إلى 5 استبدالات أحماض أمينية تحفظية ضمن مجال ‎.CDR‏ في تجسيدات أخرى؛ لا يجري أكثر من 1 إلى 3 استبدالات أحماض أمينية تحفظية ضمن مجال ‎(CDR‏ على سبيل المثال؛ قد تحدث طفرة في واحدة أو أكثر من مناطق ‎CDR‏ لزبادة أو خفض ‎KD‏ لجسم ‎alias‏ لأجل ‎(PD=1‏ لزبادة أو خفض ‎ckoff‏ أو ‎ded 0‏ خواص ارتباط الجسم المضاد. تكون تقنيات تولد طفري متوجه لموقع معروفة جيدا في الفن. انظنء مثا ‎.Sambrook et al. and Ausubel et al., supra‏ يمكن حدوث تعديل أو طفرة في منطقة إطار أو منطقة ثابتة لزيادة عمر النصف لجسم مضاد ضد 00-1. انظر؛ ‎«Dia‏ منشور ‎PCT‏ رقم الطلب الدولي 00/09560. يمكن ‎Lad‏ حدوث طفرة في منطقة إطار أو منطقة ثابتة لتغيير التولد المناعي للجسم المضاد؛ لتوفير موقع للارتباط 5 مشترك التكافؤ أو غير مشترك التكافؤ لجزيء آخرء أو لتغيير تلك الخواص لتثبيت كامل؛ ريط ‎FOR‏ ‏وتسمم خلوي يتسبب فيه بصورة غير مباشرة خلية معتمدة على جسم مضاد. في بعض التجسيدات؛ لا يجرى أكثر من 1 إلى 5 استبدالات حمض أميني تحفظية داخل منطقة الإطار أو المنطقة الثابتة. في تجسيدات أخرى؛ لا يجرى أكثر من 1 إلى 3 استبدالات حمض أميني تحفظية داخل منطقة الإطار أو المنطقة الثابتة. طبقا للاختراع؛ قد يكون للجسم المضاد الوحيد طفرات في واحد أو أكثر 0 .من ‎CDRs‏ أو مناطق إطار من المجال المتغير أو في المنطقة الثابتة. إن التعديلات تتضمن أيضا عديد ببتيدات ‎glycosylated‏ وغير ‎«glycosylated‏ ‏بالإضافة إلى عديد ببتيدات مع تعديلات أخرى لاحقة للترجمة مثل» ‎glycosylation‏ مع سكريات مختلفة؛ ‎cacetylation‏ وفوسفوريلية. تكون الأجسام المضادة ‎glycosylated‏ عند مواضع محفوظة في مناطقها الثابتة:
— 2 6 — ‎(Jefferis and Lund, 1997, Chem.
Immunol. 65:111-128; Wright and‏ ‎Morrison, 1997, TibTECH 15:26-32).‏ إن السلاسل الجانبية ‎oligosaccharide‏ للجلوبيولينات المناعية تؤثر على وظيفة البروتين: ‎(Boyd et al., 1996, Mol.
Immunol. 32:1311-1318; Wittwe and Howard,‏ ‎Biochem. 29:4175-4180) 5‏ ,1990 والتفاعل البيني بين الجزيئات بين أقسام بروتين السكرء والذي يمكن أن يؤثر على الشكل والسطح ثلاثي الأبعاد المقدم لأجل بروتين السكر: ‎(Jefferis and Lund, supra; Wyss and Wagner, 1996, Current Opin.‏ ‎Biotech. 7:409-416).‏ 10 .قد تعمل ‎Oligosaccharides‏ أيضا على استهداف بروتين سكر محدد لجزيئات معينة اعتمادا على بناءات الإدراك الخاصة. لقد تقرر أيضا أن ‎glycosylation‏ لأجل الأجسام المضادة ‎ig‏ ‏على السمية الخلوية للخلية المعتمدة على جسم مضاد (8000©0). بصفة محددة؛ لقد تقرر أن الأجسام المضادة الناتجة عن طريق ‎CHO WIA‏ مع إظهار ينظمه ‎tetracycline‏ من أجل اا ‎glycosyltransferase «(GnTIIl) 3(1,4)-N-acetylglucosaminyltransferase‏ المحفز لتكوين ‎GIENAC‏ منصف» لها نشاط ‎(ak ADCC‏ ‎(Umana et al., 1999, Nature Biotech. 17:176-180).‏ إن ‎glycosylation‏ للأجسام المضادة تكون نموذجيا سواء متصلة مع لا أو متصلة مع ©0. تشير متصلة مع لا إلى إرفاق شطر الكريوهيدرات مع السلسلة الجانبية لمتخلف ‎.asparagine‏ إن ترتيبات الببتيد ‎Sl‏ وهى ‎asparagine—-X- «asparagine—-X-serine‏ ‎«threonine 0‏ و ‎X Cus casparagine-X-cysteine‏ هو أي حمض أميني ماعدا ‎proline‏ ‏هي ترتيبات الإدراك للإرفاق الإنزيمي لشطر الكربوهيدرات مع السلسلة الجانبية لأجل ‎asparagine‏ هكذاء فإن وجود أي من هذه الترتيبات لببتيد ثلاثي في عديد ببتيد يخلق موقع ‎glycosylation‏ محتمل. تشير ‎glycosylation‏ المتصلة مع © إلى إرفاق واحد من السكريات
‎«galactose (N-acetylgalactosamine‏ أو 086 مع ‎<hydroxyamino acid‏ الأكثر شيوعا ‎serine‏ أو ‎cthreonine‏ برغم أنه يمكن ‎Lead‏ استخدام ‎5-hydroxyproline‏ أو -5 ‎.hydroxylysine‏ ‏إن إضافة مواقع ‎glycosylation‏ إلى الجسم المضاد تتحقق بصورة ملائمة بتغيير ترتيب حمض أميني بحيث يحتوي على واحد أو أكثر من ترتيبات الببتيد الثلاثي الموصوفة أعلاه (لمواقع ‎glycosylation‏ متصلة ‎(Nae‏ يمكن أيضا إجراء التغيير بإضافة؛ أو استبدال بواسطة»؛ واحد أو أكثر من متخلفات ‎serine‏ أو ‎threonine‏ إلى ترتيب الجسم المضاد الأصلي (لمواقع 07 متصلة مع 0). إن نمط ‎glycosylation‏ للأجسام المضادة يمكن أيضا تغييره بدون تغيير ترتيب 0 النيكلوتيد الأساسي. تعتمد ‎glycosylation‏ بدرجة كبيرة على خلية العائل المستخدمة لإظهار الجسم المضاد. ‎Lay‏ أن نوع الخلية المستخدمة لإظهار بروتينات السكر التخليقية؛ ‎Ole‏ الأجسام المضادة؛ كعلاجات ممكنة نادرا ما تكون الخلية الأصلية؛ فمن الممكن أن نتوقع حدوث اختلافات في نمط ‎glycosylation‏ للأجسام المضادة؛ انظر مثلا: ‎Hse et al., 1997, J.
Biol.
Chem. 272:9062-9070.‏ بالإضافة إلى اختيار خلايا عائل؛ فإن العوامل التي تؤثر على ‎glycosylation‏ أثناء الإنتاج التخليقي للأجسام المضادة تتضمن نسق النموء صياغة الوسطء كثافة المزرعة؛ الأكسدة؛ الأس الهيدروجيني؛ برامج التنقية؛ إلخ. تم اقتراح طرق متنوعة لتغيير ‎glycosylation Jas‏ المتحقق في كائن متعضي عائل محدد تتضمن إدخال أو إظهار زائد لإنزيمات معينة داخلة في إنتاج 011905800081106 (براءات الاختراع الأمريكية أرقام: 5047335« 5510261؛ 0 5278299). إن ‎(glycosylation‏ أو أنواع معينة من ‎cglycosylation‏ يمكن إزالتها إنزيميا من بروتين السكرء على سبيل المثال؛ باستخدام ‎«(Endo H) endoglycosidase H‏ -لا ‎«endoglycosidase F2 (endoglycosidase F1 (glycosidase F‏ ‎.endoglycosidase 3‏ إضافة لذلك؛ فإن خلية العائل التخليقية يمكن معالجتها هندسيا لكي
تكون معيبة في معالجة أنواع معينة من ‎polysaccharides‏ تعرف ‎lus‏ في ‎Gall‏ هذه التقنيات وأخرى مشابهة. تتضمن طرق أخرى للتعديل استخدام تقنيات اقتران معروفة في الفن؛ تتضمن؛ لكن بدون تحديد؛ وسائل إنزيمية؛ استبدال تأكسدي واستخدام عوامل كلابية. يمكن استخدام التعديلات؛ ‎Ole‏ ‏5 لإرفاق علامات للاختبار المناعي. يصنع عديد ببتيدات مُعدّلة باستخدام إجراءات مقررة في الفن ‎(Sag‏ فحصها باستخدام اختبارات قياسية معروفة في ‎(Call‏ بعضها موصوف أدناه وفي الأمثلة. في بعض التجسيدات؛ قد يكون ‎Fe‏ هو ‎19G2‏ بشري أو 0964| بشري. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على منطقة ثابتة من 1064 تشمل الطفرات التالية: ‎:(Armour et al., 2003, Molecular Immunology 40 585-593)‏ ‎E233F234L235 0‏ إلى ‎(IgG4AC) P233V234A235‏ فيها يكون الترقيم بالإشارة إلى ‎19G4‏ ‏من النوع البري. في تجسيد ‎AT‏ أيضاء يكون ‎Fe‏ هو ‎19G4‏ بشري ‎E233F234L235‏ إلى مع حذف ‎(I9G4Ab)‏ 6236. في بعض التجسيدات يكون ‎FC‏ هو أي ‎Fo‏ 964 بشري ‎(IgG4)‏ 6485وا أو ‎(I9G4AC‏ يحتوي على طفرة تثبيت مفصلة 5228 إلى ‎.(Aalberse et al., 2002, Immunology 105, 9-19) 8‏ في تجسيدات أخرى؛ قد 5 يكون ‎FC‏ هو 1962 بشري يحتوي على الطفرة ‎A330P331‏ إلى 53305331 ‎«(I9G2Aa)‏ ‏فيها يتم ترقيم متخلفات الحمض الأميني بالإشارة إلى ترتيب ‎19G2‏ من النوع البري. .ل ‎Eur.‏ ‎.Immunol., 1999, 29:2613-4‏ في بعض التجسيدات؛ فإن الجسم المضاد يشمل منطقة ثابتة معدلة؛ لها انجذابية ارتباط زائدة أو منخفضة لمستقبل ‎Fo gamma‏ بشري؛ خاملة مناعيا أو خاملة جزئيا؛ ‎Ole‏ لا ‎Gand‏ ‏0 تتحلل يتسبب فيه بصورة غير مباشرة مكمل» لا تثير سمية خلوية تتسبب فيها بصورة غير مباشرة خلية تعتمد على جسم مضاد ‎((ADCC)‏ أو لا ‎Lin‏ خلايا دبقية صغيرة ‎¢(microglia)‏ أو لها نشاطات منخفضة (مقارنة مع الجسم المضاد غير المُعدّل) في أي واحدة أو أكثر مما يلي: إحداث تحلل يتسبب فيه بصورة غير مباشرة مكمل؛ إثارة ‎AADCC‏ أو تنشيط ‎WIA‏ دبقية صغيرة. إن التعديلات المختلفة للمنطقة الثابتة يمكن استخدامها لتحقيق مستوى أمثل و/أو اتحاد ‎dial‏ من ‎Cally 5‏ المستجيب. انظرء على سبيل المثال:
— 6 5 —
Morgan et al., Immunology 86:319-324, 1995; Lund et al., J.
Immunology 157:4963-9 157:4963-4969, 1996; ١050916 et al., J.
Immunology 164:4178-4184, 2000; Tao et al., J. Immunology 143: ‎and Jefferis et al., Inmunological Reviews 163:59-76,‏ ;1989 ,2595-2601 5 .1998 فى بعض التجسيدات؛ تُعدّل المنطقة الثابتة كما هو موصوف فى: ‎Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624;‏ طلب ‎PCT‏ الدولي رقم: 990/058572. في بعض التجسيدات؛ يمكن تعديل المنطقة الثابتة لجسم مضاد لتجنب التفاعل البيني مع ‏0 مستقبل ‎Fe gamma‏ والمكمل وأنظمة مناعية. توصف في الطلب الدولي رقم: 99/58572 تقنيات لتحضير هذه الأجسام المضادة. على سبيل المثال؛ قد تعالج هندسيا المنطقة الثابتة لتشبه بصورة أكثر مناطق ثابتة بشرية لتجنب استجابة مناعية إذا تم استخدام الجسم المضاد في التجارب السريرية والمعالجات في البشريين. انظرء ‎Sle‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم: 5997867 و5866692. ‏15 فى بعض التجسيدات الأخرى» تكون المنطقة الثابتة ‎aglycosylated‏ من أجل ‎dais glycosylation‏ مع لا. في بعض التجسيدات» تكون المنطقة الثابتة ‎aglycosylated‏ ‏من أجل 007 متصلة مع ‎N‏ عن طريق تطفير متخلف إرفاق ‎oligosaccharide‏ ‏و/أو متخلفات إحاطة التى تكون ‎eda‏ من ترتيب إدراك ‎N-glycosylation‏ فى المنطقة الثابتة. على سبيل المثال فإنه يمكن تطفير ‎N297‏ بموقع ‎N-glycosylation‏ إلى مثلاء ‎QA‏ ما أو ‎.١ 0‏ انظر: ‎Tao et al., J. Immunology 143: 2595-2601, 1989; and Jefferis et al.,‏ ‎Immunological Reviews 163:59-76, 1998.‏
في بعض التجسيدات» تكون المنطقة الثابتة ‎aglycosylated‏ من أجل ‎glycosylation‏ متصلة مع ‎WN‏ تكون المنطقة الثابتة ‎aglycosylated‏ من أجل 007 متصلة مع ‎N‏ إنزيميا (مثلا إزالة كربوهيدرات عن طريق إنزيم ‎(PNGase‏ أو عن طريق الإظهار في خلية عائل ناقصة 7/0057/18101ا0.
إن تعديلات الجسم المضاد الأخرى تتضمن أجسام مضادة مُعدّلة كما هو موصوف في منشور الطلب الدولي ‎PCT‏ رقم: 99/58572. إن هذه الأجسام المضادة تشتمل؛ بالإضافة إلى مجال الارتباط الموجه عند الجزيء المستهدف؛ على مجال مستجيب له ترتيب حمض أميني مماثل جوهريا لكل أو ‎gal‏ من منطقة ثابتة من سلسلة ‎ALE‏ لجلوبيولين مناعي بشري. تكون هذه الأجسام المضادة قادرة على ربط الجزيء المستهدف بدون حدوث تحلل معتمد على مكمل جوهري؛
0 أو إبادة للمستهدف تتسبب فيها بصورة غير مباشرة خلية. في بعض التجسيدات؛ يكون المجال المستجيب قادر على ريط ‎FERN‏ و/أو 0ال0©74 بصفة خاصة. تعتمد هذه نموذجيا على مجالات خيمرية مشتقة من اثنين أو أكثر من مجالات 0112 لسلسلة ثقيلة لجلوبيولين مناعي بشري. إن الأجسام المضادة المُعدّلة بهذه الطريقة تكون مناسبة تحديدا للاستخدام في علاج جسم ‎alias‏ مزمن» لتفادي تفاعلات التهابية وتفاعلات ‎Gal‏ ضارة لعلاج الجسم المضاد التقليدي.
في بعض التجسيدات؛ يشمل الجسم المضاد منطقة ثابتة معدلة لها انجذابية ارتباط زائدة من أجل ‎FERN‏ و/أو عمر نصف مصل زائد مقارنة مع الجسم المضاد غير المعدل.
في عملية معروفة تسمى "التخطيط الجرثومي” ‎'germiining”‏ يمكن أن تطفر أحماض أمينية معينة في ترتيبات ‎VH‏ وا/ا لتتطابق مع تلك الموجودة طبيعيا في ترتيبات ‎VL VH‏ في ‎Lal‏ الجرثومي. على ‎dag‏ الخصوص؛ يمكن أن تطفر ترتيبات الحمض الأميني لمناطق الإطار
0 في ترتيبات ‎VH‏ وا/ا لتتطابق مع ترتيبات الخط الجرثومي للتقليل من خطر الاستمناع عند إعطاء الجسم المضاد. تعتبر ترتيبات ‎DNA‏ خط جرثومي لجينات ‎VL 5 VH‏ بشرية معروفة في الفن (انظر على سبيل المثال؛ قاعدة بيانات ترتيب خط جرثومي بشري '0856/؛ انظر أيضا: ‎Kabat, E.
A., et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological‏ ‎Interest, Fifth Edition, U.S.
Department of Health and Human Services,‏
NIH Publication No. 91-3242: Tomlinson et al., 1992, J.
Mol.
Biol. 227:776-7968: and Cox et al., 1994, Eur.
J.
Immunol. 24:827-836).
إن نوع آخر من استبدال حمض أميني الذي يمكن إجراؤه هو إزالة المواقع المحللة للبروتين المحتملة في الجسم المضاد. يمكن أن تحدث هذه المواقع في ‎CDR‏ أو منطقة إطار من مجال
متغير أو في المنطقة الثابتة من جسم مضاد. قد يقلل استبدال متخلفات ‎cysteine‏ وإزالة المواقع
المحللة للبروتين من خطر عدم التجانس في منتج الجسم المضاد وبالتالي يزيد من تجانسه. إن نوع آخر من استبدال حمض أميني هو القضاء على أزواج ‎casparagine—glycine‏ التي تشكل مواقع إزالة ‎amide‏ محتملة؛ عن طريق تبديل واحد من المتخلفات أو كليهما. في مثال ‎AT‏ يمكن انشقاق ‎Lysine‏ الطرفي © من السلسلة الثقيلة لجسم مضاد ضد 0100-1 من الاختراع. في
0 تجسيدات مختلفة من الاختراع» يمكن أن تتضمن اختياريا السلاسل الثقيلة والخفيفة من الأجسام المضادة ‎PD-1 aca‏ ترتيب إشارة.
بمجرد الحصول على شدف من ‎DNA‏ مشفرة لقطع ‎VH‏ وا/ا من الاختراع الحالي؛ يمكن إضافيا معالجة شدف ‎DNA‏ عن طريق تقنيات ‎DNA‏ تخليقية قياسية؛ على سبيل المثال لتحويل جينات المنطقة المتغيرة إلى جينات سلسلة جسم مضاد كاملة الطول؛ إلى جينات شدفة من ‎Fab‏
5 أو إلى جين ‎.SCFV‏ في هذه المعالجات؛ تتصل تشغيليا شدفة ‎DNA‏ تشفر الا أو ‎VH‏ مع شدفة ‎DNA‏ أخرى تشفر بروتين ‎Jie «AT‏ منطقة ثابتة لجسم مضاد أو وصلة مرنة. يقصد من المصطلح "متصل تشغيليا" ‎operatively linked”‏ كما مستخدم في هذا السياق؛ أن يعني أن اثنين من شدف ‎DNA‏ تنضم بحيث تبقى ترتيبات الحمض الأميني المشفرة بواسطة اثنين من الشدف ‎DNA‏ في الإطار.
يمكن تحويل ‎DNA‏ المعزول الذي يشفر المنطقة ‎VH‏ إلى جين سلسلة ثقيلة كاملة الطول عن طريق التوصيل تشغيليا ‎DNA‏ يشفر ‎VH‏ مع جزيء 8لا( آخر يشفر مناطق ثابتة لسلسلة تقيلة ‎CH2 (CHI)‏ و0113). تعتبر ترتيبات جينات المنطقة الثابتة لسلسلة تقيلة بشرية معروفة في الفن؛ انظر على سبيل المثال:
‎Kabat, E.
A., et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological‏ ‎Interest, Fifth Edition, U.S.
Department of Health and Human Services,‏ ‎NIH Publication No. 91-3242‏ ويمكن الحصول على شدف من ‎DNA‏ تشمل هذه المناطق بواسطة تضخيم ‎PCR‏ قياسي. يمكن أن تكون المنطقة الثابتة لسلسلة ثقيلة هي منطقة ثابتة ‎IgG2 IgG]‏ 963وا 94وا ‎IgA‏ ‎IgM (IgE‏ أو 0اواء لكن يفضل أكثر منطقة ثابتة ‎IgG]‏ أو 0962ا. يمكن أن يكون ترتيب المنطقة الثابتة ‎19G‏ أي من ‎alleles‏ أو الأنماط الخيفية ‎(allotypes)‏ المختلفة المعروف حدوثها ضمن أفراد مختلفين» مثل ‎«GM(1)‏ (600)2؛ (60)3؛ و(60)17. تمثل هذه الأنماط الخيفية حدوث استبدال حمض أميني طبيعي الوجود في المناطق الثابتة 961ا. من أجل جين سلسلة ثقيلة 0 ا لشدفة ‎(Fab‏ يتصل تشغيليا ‎DNA‏ الذي يشفر ‎VH‏ مع جزيء ‎AT DNA‏ يشفر فقط المنطقة الثابتة للسلسلة الثقيلة 0111. قد يتم اشتقاق المنطقة الثابتة للسلسلة الثقيلة ‎CHI‏ من أي من جيتات السلسلة الثقيلة. يمكن تحويل ‎DNA‏ المعزول الذي يشفر المنطقة ‎VL‏ إلى جين سلسلة خفيفة كاملة الطول (بالإضافة إلى جين سلسلة خفيفة ‎(Fab‏ بواسطة التوصيل تشغيليا لأجل ‎DNA‏ الذي يشفر ‎VL‏ ‏5 مع جزيء ‎AT DNA‏ يشفر المنطقة الثابتة للسلسلة الخفيفة. ‎(CL‏ تعتبر ترتيبات جينات المنطقة الثابتة لسلسلة خفيفة بشرية معروفة في الفن؛ انظر على سبيل المثال: ‎Kabat, E.
A., et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological‏ ‎Interest, Fifth Edition, U.S.
Department of Health and Human Services,‏ ‎NIH Publication No. 91-3242‏ ويمكن الحصول على شدف من ‎DNA‏ تشمل هذه المناطق بواسطة تضخيم ‎PCR‏ قياسي. يمكن أن تكون المنطقة الثابتة للسلسلة الخفيفة منطقة ثابتة ‎kappa‏ أو ‎lambda‏ قد تكون المنطقة الثابتة ‎kappa‏ أي من ‎alleles‏ المختلفة المعروف حدوثها ضمن أفراد مختلفين» ‎dnv(1) die‏ (07/)2اء و(107/)3. ‎Sa‏ اشتقاق المنطقة الثابتة ‎lambda‏ من أي من الثلاثة جينات ‎Jambda‏
لتخليق جين ‎SCFV‏ يتم التوصيل تشغيليا شدف ‎DNA‏ التي تشفر ‎VL VH‏ مع شدفة أخرى تشفر وصلة مرنة بحيث ‎(Sa‏ إظهار ترتيبات ‎VH‏ وا/ا كبروتين سلسلة فردية متجاور»؛ مع مناطق ‎VH 5 VL‏ المنضمة بواسطة الوصلة المرنة؛ انظر على سبيل المثال:
Bird et al., 1988, Science 242:423-426: Huston et al., 1988, Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., 1990, Nature 5 348:552-554. إن مثال على ببتيد توصيل ‎(GGGGS)3‏ (تعريف الترتيب رقم: 19( الذي ‎Lay‏ جسر حوالي نانومتر بين الطرف 0810077 من منطقة متغيرة واحدة والطرف الأميني من المنطقة المتغيرة الأخرى. تتعين وتستخدم وصلات من ترتيبات ‎(Bird et al., 1988, supra) al‏ في المقابل ‎oS 0‏ تعديل الوصلات من أجل وظائف إضافية؛ مثلا إرفاق عقاقير أو إرفاق مع دعامات صلبة. قد يكون الجسم المضاد لسلسلة فردية أحادي ‎«all‏ إذا تم استخدام ‎VH‏ وا/ا واحد ‎edad‏ ثنائي التكافؤء إذا تم استخدام اثنين من ‎VL VH‏ أو متعدد التكافؤء إذا تم استخدام أكثر من اثنين من ‎VH‏ وا/ا. يمكن توليد أجسام مضادة ثنائية الخصوصية أو متعددة ‎BSH‏ ترتبط بصفة خاصة ‏مع 00-1 ومع جزيء آخر. يمكن إنتاج أشكال متباينة للسلسلة الفردية سواء تخليقيا أو صناعيا. 5 بالنسبة للإنتاج الصناعي لأجل ‎SCFV‏ يمكن استخدام جهاز تخليق آلي. بالنسبة للإنتاج التخليقي ‏لأجل ‎CFV‏ يمكن إدخال بلازميد مناسب يحتوي على عديد نيكلوتيد الذي يشفر 507 إلى خلية ‏عائل مناسبة» سواء حقيقية النواة. مثل خميرة» نبات» حشرة أو ‎WIA‏ ثديية؛ أو بدائية النواة. ‎ia‏ ‎coli‏ .. يمكن صنع عديد نيكلوتيدات التي تشفر 5057 ذو الأهمية بواسطة تعديلات روتينية ‏مثل ريط عديد نيكلوتيدات. يمكن عزل 507 الناتج باستخدام تقنيات تنقية بروتين قياسية معروفة 0 في الفن. ‏تتضمن ‎lead‏ أشكال أخرى للأجسام المضادة بسلسلة فردية؛ ‎Mie‏ دايابودات. تكون ‏الدايابودات هي أجسام مضادة ثنائية ‎SASH‏ ثنائية الخصوصية حيث يظهر ‎VL VH‏ على ‏سلسلة عديد ببتيد فردية؛ لكن تستخدم وصلة قصيرة جدا لتتيح الازدواج بين مجالين على نفس ‏السلسلة؛ بذلك تجبر المجالات على الازدواج مع مجالات تكميلية من سلسلة أخرى وتخليق موقعين 5 ارتباط مولد ‎ca‏ انظر ‎Sie‏
— 0 7 — ‎Holliger, P., et al., 1993, Proc.
Natl.
Acad Sci.
USA 90:6444-6448,;‏ ‎Poljak, R.
J., et al., 1994, Structure 2:1121-1123.‏ ‎Jax‏ أيضا أجسام مضادة مقترنة متغايرة؛ تشمل جسمين مضادين متصلين تساهميا؛ في نطاق الاختراع. تم استخدام هذه الأجسام المضادة لاستهداف خلايا نظام مناعي لخلايا غير مرغوب فيها (براءة الاختراع الأمريكية رقم 4676980)؛ ولمعالجة عدوى ‎HIV‏ (منشور الطلب الدولي ‎PCT‏ لأرقام: 91/00360 و92/200373؛ براءة الاختراع الأوروبية رقم: 03089). قد تصنع أجسام مضادة مقترنة متغايرة باستخدام أي طرق اتصال عابر مناسبة. تكون عوامل وتقنيات الاتصال العابر المناسبة معروفة جيدا في الفن» وتوصف في براءة الاختراع الأمريكية رقم: 0. تحضر أيضا أجسام مضادة خميرية أو هجينة فى المعمل باستخدام طرق معروفة من كيمياء بروتين تخليقية؛» متضمنة عوامل الاتصال العابر. على سبيل المثال » يمكن بناء توكسينات مناعية باستخدام تفاعل متبادل ‎disulfide‏ أو بتشكيل رابطة +0110616. إن أمثلة على عوامل كاشفة مناسبة لهذا الغرض تتضمن ‎iminothiolate‏ و ‎.methyl-4-mercaptobutyrimidate‏ ‏يشتمل الاختراع أيضا على بروتينات التحام تشتمل على واحدة أو أكثر من الشدف أو مناطق من الأجسام المضادة المكتشفة هنا. في بعض التجسيدات؛ قد يصنع جسم مضاد للالتحام الذي يشمل كل أو قسم من جسم مضاد ضد 00-1 من الاختراع متصل مع عديد ببتيد آخر. في تجسيد ‎AT‏ ¢ تتصل المجالات المتغيرة فقط من الجسم المضاد ضد 10-1 مع عديد الببتيد. في تجسيد آخر؛ يتصل المجال ‎VH‏ من جسم مضاد ضد 00-1 مع عديد ببتيد أول؛ بينما يتصل المجال ‎VL‏ من جسم مضاد ضد 10-1 مع عديد ببتيد ثان الذي يتحد مع عديد الببتيد الأول 0 بأسلوب حيث تتفاعل بينيا المجالات ‎VL 5 VH‏ مع بعضها البعض لتشكيل موقع ارتباط ‎alge‏ ضد. في تجسيد مفضل آخرء ينفصل المجال ‎VH‏ من المجال ‎VL‏ عن طريق وصلة بحيث قد تتفاعل بينيا المجالات ‎VL VH‏ مع بعضها البعض . ‎Yaa‏ يتصل الجسم المضاد ‎VH day VL‏ مع عديد الببتيد محل الدراسة. إضافة لذلك؛ يمكن تخليق أجسام مضادة للالتحام يتصل فيها اثنين (أو أكثر) من الأجسام المضادة بسلسلة فردية مع بعضهما البعض. هذا مفيد إذا رغب في تخليق جسم
مضاد ثنائي التكافؤ أو متعدد التكافؤ على سلسلة عديد ببتيد فردية أو إذا رغب في تخليق جسم مضاد ثنائي الخصوصية.
في بعض التجسيدات؛ يتوافر عديد ببتيد للالتحام يشمل على الأقل 10 أحماض أمينية متجاورة من منطقة السلسلة الخففية المتغيرة الموضحة في تعريف الترتيب أرقام: 2« 7 8؛ أو 9
و/أو على الأقل 10 أحماض أمينية من منطقة السلسلة الثقيلة المتغيرة الموضحة في تعريف
الترتيب أرقام: 3 4 5؛ أو 6. في تجسيدات أخرى؛ يتوافر عديد ببتيد للالتحام يشمل على الأقل حوالي 10( على الأقل حوالي 15 على الأقل حوالي 20؛ على الأقل حوالي 25؛ أو على ‎JN‏ ‏حوالي 30 حمض أميني متجاور من منطقة السلسلة الخفيفة المتغيرة و/أو على الأقل حوالي 10؛ على الأقل حوالي 15( على الأقل حوالي 20 على الأقل حوالي 25؛ أو على الأقل حوالي 30
0 حمض أميني متجاور من منطقة السلسلة الثقيلة المتغيرة. في تجسيد آخرء يشمل عديد الببتيد للالتحام على منطقة متغيرة لسلسلة خفيفة و/أو منطقة متغيرة لسلسلة ثقيلة. كما هو موضح في أي من أزواج الترتيب المنتقاة من بين تعريفات الترتيب أرقام: 2 23598358357 و4» 7و4 8 و4 9و4 2 و5 7و5 8 و5 9و5 2 و6» 7و6؛ 8 و6؛ و9 و6. في تجسيدات أخرى ‎clad‏ يشمل عديد الببتيد للالتحام واحدة أو أكثر من ‎.CDR(S)‏ في تجسيدات
5 أخرى أيضاء يشتمل عديد ببتيد الالتحام على ‎VH CDR3‏ و/أو ‎WL CDR3‏ لأغراض هذا الاختراع» يحتوي بروتين التحام على واحد أو أكثر من الأجسام المضادة وترتيب حمض أميني آخر لا يرفق معه في الجزيء الأصلي؛ على سبيل المثال؛ ترتيب متغاير أو ترتيب متجانس من منطقة أخرى. تتضمن ترتيبات متغايرة ‎liad‏ لكن بدون تحديد ‎(tag) Gale‏ مثلا ملحق ‎FLAG‏ أو ملحق 60115. تعرف جيدا في الفن الملحقات.
‎(Kay 20‏ تخليق عديد ببتيد للالتحام بطرق معروفة في ‎Gall‏ على سبيل ‎(Jaa‏ صناعيا أو تخليقيا. نموذجيا؛ تصنع بروتينات الالتحام من هذا الاختراع بتحضير وإظهار عديد نيكلوتيد يشفرهم باستخدام طرق تخليقية موصوفة هناء برغم أنه يمكن تحضيرهم أيضا بوسائل أخرى معروفة في ‎il‏ ¢ متضمنة؛ ‎lie‏ التصنيع الكيميائي.
‏في تجسيدات أخرى؛ يمكن تحضير أجسام مضادة معدلة أخرى باستخدام جزيئات حمض نووي تشفر جسم مضاد ضد 00-1. على سبيل المثال» يمكن تحضير "أجسام ‎"Kappa‏
(Il et al., 1997, Protein Eng. 10:949-57(, “Minibodies” (Martin et al., 1994, EMBO J. 13:5303-9), “Diabodies” (Holliger et al., supra), or “Janusins” (Traunecker et al., 1991, EMBO J. 10:3655-3659 and
‎Traunecker et al., 1992, Int.
J.
Cancer (Suppl.) 7:51-52)‏ باستخدام تقنيات حيوية ‎de‏ قياسية باتباع تعاليم المواصفة. على سبيل ‎(JU)‏ يمكن تحضير أجسام مضادة ثنائية الخصوصية؛ أجسام مضادة أحادية النسخ التي لها خواص ارتباط لمولدين مضاد مختلفين على الأقل؛ باستخدام الأجسام المضادة المعلن عنها هنا. تعرف في ‎Gall‏ طرق لتصنيع أجسام مضادة ثنائية الخصوصية ‎ia ¢ ail)‏ ‎(Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210‏ على سبيل المثال» يمكن ‎zl‏ ‏10 أجسام مضادة ثنائية الخصوصية أو شدف ارتباط مولد ضد عن طريق التحام أورام هجينة أو اتصال ‎Fab, cand‏ انظرء مثلاء ‎Songsivilai & Lachmann, 1990, Clin.
Exp.
Immunol. 79:315-321‏ ‎Kostelny et al., 1992, J.
Immunol. 148:1547-1553.‏ تقليدياء يعتمد الإنتاج التخليقي للأجسام المضادة ثنائية الخصوصية على الإظهار المشترك لزوجين 5 سلسلة ثقيلة -سلسلة خفيفة لجلوبيولين مناعي؛ مع سلسلتين ثقيلتين لهما خواص مختلفة ‎(Milstein and Cuello, 1983, Nature 305, 537-539)‏ إضافة لذلك؛ قد تتشكل أجسام مضادة ثنائية الخصوصية على أنها "دايابودات" أو ‎."Janusing”‏ في بعض التجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد ثنائي الخصوصية مع إبيتويين مختلفين من 00-1. في بعض التجسيدات؛ تحضر الأجسام المضادة المعدلة الموصوفة أعلاه باستخدام واحد أو أكثر من المجالات المتغيرة 0 أو مناطق ‎CDR‏ من جسم مضاد ضد 00-1 متوفر هنا. طبقا لأحد أساليب صنع أجسام مضادة ثنائية الخصوصية؛ تلتحم مجالات متغيرة لجسم مضاد مع خصوصيات الارتباط المرغوية (مواقع اتحاد جسم مضاد- مولد ضد) مع ترتيبات منطقة ثابتة لجلوبيولين مناعي. يفضل أن يكون الالتحام مع منطقة ثابتة بسلسلة ثقيلة لجلوبيولين مناعي؛ تشمل ‎gia‏ على الأقل من المفصلة؛ مناطق ‎CH2‏ و0113. يفضل أن يكون لها منطقة
ثابتة بالسلسلة الثقيلة الأولى (0111)؛ تحتوي على الموقع الضروري لارتباط سلسلة خفيفة؛ موجودة في واحد على الأقل من الالتحامات. يتم إقحام ‎DNAS‏ تشفر التحامات سلسلة ثقيلة لجلوبيولين مناعي و» عند الرغبة؛ سلسلة خفيفة لجلوبيولين مناعي؛ في نواقل الإظهار المنفصلة؛ ويتم نقل العدوى بصورة مشتركة إلى كائن متعضي عائل مناسب. إن هذا يوفر مرونة كبيرة في ضبط
المقادير المشتركة لشدف عديد الببتيد الثلاثة في التجسيدات عندما توفر النسب غير متساوية من سلاسل عديد الببتيد ‎ADE‏ المستخدمة في البنية الإنتاجيات المثلى. من الممكن؛ مع هذاء إقحام ترتيبات التشفير لسلسلتين أو لكل سلاسل عديد الببتيد الثلاثة في ناقل إظهار واحد عندما يؤدي إظهار سلسلتين من عديد ببتيد على الأقل بنسب متساوية إلى إنتاجيات عالية أو عندما لا يكون للنسب أهمية محددة.
في أحد الأساليب؛ تتكون الأجسام المضادة ثنائية الخصوصية من سلسلة ‎ALE‏ لجلوبيولين مناعي هجين مع خصوصية ارتباط أولى في ذراع ‎only‏ وزوج سلسلة خفيفة- سلسلة ثقيلة لجلوبيولين مناعي هجين (توفير خصوصية ارتباط ثانية) في الذراع الآخر. هذا البناء غير المتماثل؛ مع سلسلة خفيفة لجلوبيولين مناعي في نصف واحد فقط من الجزيء ثنائي الخصوصية؛ يُسهل فصل المركب ثنائي الخصوصية المرغوب عن اتحادات سلسلة الجلوبيولين المناعي غير
5 مرغوية. يوصف هذا الأسلوب في منشور الطلب الدولي ‎PCT‏ رقم: 94/04690.
يوفر هذا الاختراع أيضا تركيبات تشمل أجسام مضادة متقارنة (على سبيل ‎Jal)‏ متصلة) مع عامل يُسهل الاقتران مع دعامة صلبة (مثلا ‎biotin‏ أو 81/010). من أجل التبسيط؛ تتم الإشارة بصفة عامة إلى أجسام مضادة مع الفهم أن هذه الطرق تنطبق على أي من تجسيدات معارض و/أو ارتباط 00-1 موصوفة هنا. يشير التقارن عموما إلى اتصال هذه المكونات كما
0 هو موصوف هنا. يمكن تحقيق الاتصال (الذي يثبت هذه المكونات بصفة عامة في ترابط قريب على الأقل من أجل الإعطاء) بأي عدد من الطرق. على سبيل المثال؛ يمكن إجراء تفاعل مباشر بين عامل وجسم مضاد عندما يمتلك كل منهما بديل قادر على التفاعل مع الآخر. على سبيل المتال» يمكن أن تكون مجموعة محبة للنواة. متل مجموعة أمينية أو ‎sulfhydryl‏ على أحد الجوانب تكون قادرة على التفاعل مع مجموعة تحتوي على ‎«carbonyl‏ مثل ‎anhydride‏ أو
‎cacid halide‏ أو مع ‎alkyl de gene‏ تحتوي على مجموعة تاركة جيدة ‎(halide Os)‏ على الجانب الآخر. يمكن ربط الأجسام المضادة مع العديد من المواد الحاملة المختلفة. يمكن أن تكون المواد الحاملة نشطة و/أو خاملة. إن أمثلة على مواد حاملة معروفة جيدا تتضمن ‎«polypropylene‏
‎camylases «nylon «dextran (polyethylene «polystyrene 5‏ زجاج؛ ‎celluloses‏ ‏طبيعية ومُعدلة» ‎magnetite y agaroses «polyacrylamides‏ قد تكون طبيعة المادة الحاملة سواء قابلة للذويان أو غير ‎ALE‏ للذوبان لأغراض الاختراع. يعرف هؤلاء المهرة في الفن مواد حاملة
‏مناسبة أخرى لريط أجسام مضادة؛ أو يكونوا قادرين على التحقق منهاء باستخدام تجارب روتينية. في بعض التجسيدات؛ تشتمل المادة الحاملة على شطر يستهدف الرئة؛ القلب؛ أو صمام بالقلب. 10 قد يتصل جسم مضاد أو عديد ببتيد من هذا الاختراع مع عامل تعليم مثلا جزيء استشعاع» جزيء نشط إشعاعيا أو أي علامات أخرى معروفة في الفن. تعرف في الفن علامات يمكن أن توفر بصفة عامة (سواء بصورة مباشرة أو غير مباشرة) إشارة. عديد نيكلوتيدات» نواقل» وخلايا عائل يوفر الاختراع أيضا عديد نيكلوتيدات تشفر أي من الأجسام المضادة؛ تتضمن شُدف جسم مضاد وأجسام مضادة معدلة موصوفة هناء على سبيل المثال؛ أجسام مضادة لها وظيفة مستجيب ضعيفة. في جانب آخر» يوفر الاختراع طريقة لصنع أي من عديد النيكلوتيدات الموصوفة هنا. قد تصنع عديد النيكلوتيدات ويتم إظهارها بواسطة إجراءات معروفة في الفن. طبقا لهذاء يوفر الاختراع عديد نيكلوتيدات أو تركيبات؛ تتضمن تركيبات دوائية؛ تشمل عديد نيكلوتيدات؛ تشفر أي مما يلي: الأجسام المضادة ‎(mAb2 imAb1‏ ذتطقطص جطمصسص خططص وطمقص 7 طمص ‎«MAb‏ ‏0 9مقخص ‎imAbll imAb10‏ 12طمص ‎(mAb13‏ 14[طمصس ‎«mAb16 «<mAbl5‏ ‎MADLT 4‏ أو أي شدفة أو ‎gia‏ من ذلك له القدرة على معارضة ‎PD-1‏ ‏عديد النيكلوتيدات التي تكمل أي من هذه الترتيبات تدخل أيضا في الاختراع الحالي. قد تكون عديد النيكلوتيدات فردية الجديلة (تشفر أو مضادة للإحساس) أو مزدوجة الجديلة؛ وقد تكون جزيئات ‎DNA‏ (جينومية؛ ‎cDNA‏ أو تخليقية) أو جزيئات ‎[RNA‏ تتضمن جزيئات ‎RNA‏ جزيئات
1048 التي تحتوي على ‎introns‏ وتقابل جزيء ‎DNA‏ بطريقة واحد- إلى - ‎candy‏ وجزيئات ‎mRNA‏ التي لا تحتوي على ‎infrons‏ قد توجد ترتيبات تشفيرية أو غير تشفيرية إضافية؛ لكن ليست هناك ‎dala‏ لذلك؛ في عديد نيكلوتيد من الاختراع الحالي؛ وقد يكون عديد النيكلوتيد؛ برغم عدم الحاجة إلى ذلك؛ متصلا مع جزيئات أخرى و/أو مواد تدعيم أخرى.
قد تشتمل عديد النيكلوتيدات على ترتيب أصلي (أي؛ ترتيب داخلي ‎Lal‏ يشفر جسم مضاد أو شُدفة ‎(die‏ أو قد تشتمل على شكل متباين من ذلك الترتيب. إن الأشكال المتباينة لأجل عديد النيكلوتيد تحتوي على واحد أو أكثر من الاستبدالات؛ الإضافات؛ الإزالات و/أو الإقحامات بحيث لا تقل التفاعلية المناعية لعديد الببتيد المشفرء بالنسبة إلى جزيء أصلي متفاعل مناعيا. إن التأثير على التفاعلية المناعية لعديد الببتيد المشفر يمكن تحديده بصفة عامة كما هو موصوف
0 هنا. يفضل أن تظهر الأشكال المتباينة تماثل بنسبة حوالي 770 على الأقل؛ يفضل ‎«SH‏ تماثل بنسبة حوالي 780 على الأقل؛ أيضا يفضل أكثر؛ تماثل بنسبة حوالي 790 على الأقل؛ والأكثر تفضيلا؛ ‎ili‏ بنسبة حوالي 795 على الأقل مع ترتيب عديد نيكلوتيد الذي يشفر جسم مضاد أصلي أو شدفة منه.
يذكر أن اثنين من ترتيبات عديد النيكلوتيد أو عديد الببتيد "'متماثلان" إذا كان ترتيب عديد
5 النيكلوتيدات أو الأحماض الأمينية في الترتيبين هو نفسه عند الاصطفاف لأقصى تقابل كما هو موصوف أدناه. تجرى مقارنات بين ترتيبين نموذجيا بمقارنة الترتيبات خلال نافذة مقارنة لتحديد ومقارنة المناطق الموضعية لتحديد تشابه الترتيب. "نافذة مقارنة ‎window)‏ 0017108115017)'"حسب الاستخدام هناء تشير إلى قطعة من حوالي 20 موضع متجاور على ‎sale (J‏ 30 إلى حوالي 5. أو 40 إلى حوالي 50؛ يمكن فيها مقارنة ترتيب مع ترتيب مرجعي له نفس العدد من
0 المواضع المتجاورة بعد اصطفاف الترتيبين بصورة مثالية.
يمكن إجراء اصطفاف أمثل للترتيبات للمقارنة باستخدام برنامج ‎١/169/190©‏ في ‎Lasergene® suite of bioinformatics software (DNASTAR®, Inc., Madison,‏ ‎(WI)‏ باستخدام معايير افتراضية. يجسد هذا البرنامج برامج اصطفاف عديدة موصوفة في المراجع التالية:
‎Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins -‏ ‎Matrices for detecting distant relationships.
In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of‏ ‎Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research‏ ‎Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J.,‏ ‎Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 5‏ ,1990 ‎Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA;‏ ‎Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W.‏ ‎and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb.‏ ‎Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol.
Biol.
Evol. 4:406-425;‏ ‎Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the 10‏ ‎Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San‏ ‎Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc.
Natl.
Acad.‏ ‎Sci.
USA 80:726-730.‏ بصورة مفضلة؛ تتحدد 'النسبة المئوية لتماثل الترتيب ‎(percentage of sequence‏ ‎identity) 5‏ بمقارنة ترتيبين مصطفين بصورة مثلى عبر نافذة مقارنة مكونة من 20 موضع على ‎Cus (JY)‏ قد يشتمل قسم من ترتيب عديد نيكلوتيد أو عديد ببتيد في نافذة المقارنة على إضافات أو حذوفات (أي»؛ فجوات) بمقدار 720 أو أقل» ‎sale‏ 5 إلى 715؛ أو 10 إلى £12 مقارنة بالترتيبات المرجعية (التي لا تشمل إضافات أو حذوفات) من أجل الاصطفاف الأمثل للترتيبين. تحسب النسبة المئوية بتحديد عدد المواضع التي توجد عندها قواعد الحمض النووي المتماثلة أو 0 متخلف الحمض الأميني في كلا الترتيبين لينتج عدد المواضع المطابقة؛ بقسمة عدد المواضع المطابقة على العدد ‎ASH‏ للمواضع في الترتيب المرجعي (أي؛ مقاس النافذة) وضرب الناتج ‎X‏ ‏0 لتنتج النسبة المئوية لتماثل الترتيب. قد تكون الأشكال المتباينة أيضاء أو بطريقة بديلة؛ متماثلة جوهريا مع جين أصلي؛ أو قسم أو مكمل من ذلك. الأشكال المتباينة تلك لعديد النيكلوتيد قادرة على التهجين تحت شروط
— 7 7- متوسطة الصرامة لترتيب ‎DNA‏ طبيعي الوجود المشفر للجسم المضاد الأصلى ‎gl)‏ ترتيب تكميلي). "الشروط متوسطة الصرامة ‎"(moderately stringent conditions)‏ المناسبة تتضمن غسل مسبق في محلول ‎SSC‏ 5 مرات» ‎EDTA 70.5 SDS‏ 1 مللي جزيئي جرامي (أس هيدروجيني 8 تهجين عند 50 "مثوية إلى 5مثوية؛ ‎«lye 5 SSC‏ طوال الليل؛ يلي ذلك الغسل مرتين عند 65"مئوية لمدة 20 دقيقة مع كل من مرتين» 0.5 مرة و0.2 مرة ‎SSC‏ يحتوي على ‎SDS‏ 20.1 حسب الاستخدام ‎cla‏ فإن ‎dag pi"‏ عالية الصرامة ‎"(highly stringent conditions)‏ أو 'شروط صارمة بدرجة عالية ‎"(high stringency conditions)‏ هي تلك ‎All‏ : )1( تستعمل قوة 0 أيونية منخفضة ودرجة حرارة عالية للغسيل» مثلا ‎sodium chloride‏ 0.015 جزيئى جرامي/ ‎ds 0.0015 sodium citrate‏ جرامي/ ‎sodium dodecyl sulfate‏ 70.1 عند 45°50 )2( استعمال أثناء التهجين عامل متغير الطبيعة؛ مثل ‎formamide‏ مثلا 56 750 (حجم/ حجم) مع ‎JY)‏ مصل بقري 70.1[ ‎Ficoll‏ 70.1/ ‎polyvinylpyrrolidone‏ 70.1/ مثبت أس هيدروجيني ‎sodium phosphate‏ 50 مللي 5 جزيئي جرامي عند أس هيدروجيني 6.5 مع ‎sodium chloride‏ 750 مللي جزيئي جرامي؛ ‎sodium citrate‏ 75 مللى جزيئي جرامي عند 42*مئوية؛ أو )3( استعمال ‎formamide‏ ‏0؛ 5 مرات ‎NaCl) SSC‏ 0.75 جزيئي جرامي» ‎sodium citrate‏ 0.075 جزيئي جرامي)؛ ‎sodium phosphate‏ 50 مللى ‎sha a‏ (أس هيدروجيني 6.8)) ‎sodium‏ ‎pyrophosphate‏ 70.1؛ محلول ‎Denhardt‏ 5 مرات» ‎DNA‏ سائل منوي لسالمون معالج 0 بالموجات الصوتية )50 ميكروجرام/ ملليلتر)» ‎SDS‏ 70.1؛ 5 ‎dextran sulfate‏ 710 عند 2مئثوية؛ مع دورات ‎Jud‏ عند 42"مئوية في 0.2 مرة ‎[sodium chloride) SSC‏ ‎(sodium citrate‏ و ‎formamide‏ 750 عند 55"مئوية؛ ‎Lig‏ ذلك غسيل ‎Je‏ الصرامة يتكون من 0.1 مرة ‎SSC‏ يحتوي على ‎EDTA‏ عند 55"مثئوية. سيدرك الصانع الماهر كيفية ضبط درجة الحرارة؛ القوة الأيونية؛ إلخ» حسب الضرورة للتكيف مع العوامل ‎die‏ طول المسبار» إلخ.
سيدرك أصحاب المهارة العادية في الفن أنه؛ نتيجة لانحلال الشفرة الجينية؛ هناك العديد من ترتيبات النيكلوتيد تشفر عديد ببتيد حسب الوصف هنا. تحمل بعض من عديد النيكلوتيدات هذه تجانس أقل مع ترتيب النيكلوتيد لأي جين أصلي. برغم ذلك؛ يكون عديد النيكلوتيدات التي تتنوع نتيجة الاختلافات في استخدام الكودون متوقعة بصفة خاصة في الاختراع الحالي. ‎(Lila)‏ ‏5 فإن الأنواع الخيفية من الجينات المشتملة على ترتيبات عديد نيكلوتيد المتوافرة هنا تكون ضمن نطاق الاختراع الحالي. إن الأنواع الخيفية هي جينات داخلية ‎Land)‏ متبدلة نتيجة لواحدة أو أكثر من الطفرات؛ مثلا حذوفات؛ إضافات و/أو استبدالات للنيكلوتيدات. قد يكون لأجل ‎MRNA‏ ‏والبروتين الناتجان؛ لكن بدون ‎dala‏ لذلك؛ بناء أو وظيفة متبدلة. يمكن تحديد الأنواع الخيفية باستخدام تقنيات قياسية (مثل تهجين؛ التضخيم و/أو مقارنة ترتيب قاعدة بيانات).
10 يمكن الحصول على عديد نيكلوتيدات من هذا الاختراع باستخدام التصنيع الكيميائي» طرق تخليقية؛ أو ‎PCR‏ إن طرق تصنيع عديد نيكلوتيد كيميائي معروفة جيدا في الفن ولا ‎dala‏ ‏لوصفها هنا بالتفصيل. يمكن لأحد المهرة في الفن استخدام الترتيبات المتوافرة هنا وأداة تصنيع ‎DNA‏ تجارية لإنتاج ترتيب ‎DNA‏ مرغوب.
لتحضير عديد نيكلوتيدات باستخدام طرق تخليقية؛ يمكن إقحام عديد نيكلوتيد يشمل ترتيب
مطلوب في ناقل مناسب؛ ويمكن إدخال الناقل بدوره في خلية عائل مناسبة للنسخ والتضخيم؛ كما هو متناول إضافيا هنا. يمكن إقحام عديد النيكلوتيدات في خلايا عائل بأي وسيلة من الوسائل المعروفة في الفن. تتحول الخلايا بإدخال عديد نيكلوتيد خارجي المنشاً بإمتصاص مباشرء إلتقام؛ نقل العدوى؛ ‎Foil‏ أو التثقيب الكهربي. بمجرد الدخول؛ يمكن استبقاء عديد النيكلوتيد الخارجي ‎Ladd)‏ داخل الخلية كناقل غير متكامل (مثلا بلازميد) أو يتكامل في جينوم خلية العائل. يمكن
0 عزل عديد النيكلوتيد المضخم من خلية العائل بطرق معروفة جيدا في الفن. انظر مثلا ‎.Sambrook et al., 1989‏
بطريقة بديلة. يسمح ‎PCR‏ بإعادة إنتاج ترتيبات ‎.DNA‏ تكنولوجيا ‎PCR‏ معروفة جيدا في ‎oll‏ وتوصف في براءات الاختراع الأمريكية أرقام: 4683195 4800159« 4754065 و4683202؛ بالإضافة إلى
‎PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al. eds., Birkauswer‏ ‎Press, Boston, 1994.‏ يمكن الحصول على ‎RNA‏ باستخدام ‎DNA‏ المعزول في ناقل ملاثم وإقحامه في خلية عائل مناسبة. عندما يتم نسخ الخلية ويتم استنساخ ‎DNA‏ إلى ‎(RNA‏ عندئذ يمكن ‎RNA Jie‏ باستخدام طرق معروفة جيدا للمهرة في ‎coll‏ كما هو مذكور مسبقا في ‎Sambrook‏ وآخرين؛ 9. أعلاه؛ على سبيل المثال. يمكن إنشاء نواقل نسخ مناسبة طبقا لتقنيات قياسية؛ أو يمكن انتقائهم من عدد كبير من نواقل النسخ المتوافرة في الفن. برغم أن ناقل النسخ المنتقى يمكن أن يختلف طبقا لخلية العائل المعني استخدامها» فإن نواقل النسخ المفيدة ستكون لها بصفة عامة القدرة على النسخ الذاتي؛ قد 0 تتمتلك هدف واحد لنيوكلاز داخلي لنطاق محدد؛ و/أو قد تحمل جينات ‎AVA‏ يمكن استخدامها في انتقاء نسخ تحتوي على الناقل. إن الأمثلة المناسبة تتضمن بلازميدات وفيروسات بكتيرية؛ مثلا ‎Bluescript 00619 pUC18‏ (مثلا ‎(PBS SK+‏ ومشتقاتك 00018 00019 814322م 9 1-ا00؛ ‎DNAs (RP4 (pCR1‏ ملتهمة؛ ونواقل مكوكية متل ‎pSA3‏ و2128م. إن هذه النواقل ونواقل نسخ عديدة أخرى تكون متوافرة من بائعين تجاريين ‎BioRad Jie‏ ‎Invitrogen 4 (Strategene 5‏ تتوفر نواقل الإظهار إضافيا. إن نواقل الإظهار بصفة ‎dele‏ هي بناءات عديد نيكلوتيد قابلة للنسخ تحتوي على عديد نيكلوتيد طبقا للاختراع. من المفهوم ضمنيا أن ناقل الإظهار يجب أن يكون قابلا للنسخ في خلايا العائل سواء ‎episomes (Jie‏ أو كجزءِ متكامل من ‎DNA‏ ‏الكروموسومي. إن نواقل الإظهار المناسبة تتضمن لكن بدون تحديد بلازميدات؛ نواقل فيروسية؛ 0 متضمنة فيروسات غدية؛ فيروسات مصاحبة لغدة؛ فيروسات ارتجاعية؛ ‎ccosmids‏ وناقل (نواقل) إظهار مبينة في منشور ‎PCT‏ الدولي رقم: 87/04462. مكونات الناقل قد تتضمن بصفة عامة؛ لكن بدون تحديد؛ واحد أو ‎ST‏ مما يلي: ترتيب إشارة؛ مصدر نسغ؛ واحد أو ‎AST‏ من جينات معلمة؛ عناصر مناسبة للتحكم في النسخ ‎Jia)‏ معززات؛ محثات ومُنهي). للإظهار (أي؛ الترجمة)؛ هناك عادة ‎Lad‏ حاجة لواحد أو أكثر من عناصر التحكم في الترجمة؛ مثل مواقع ربط ‎ribosome 25‏ مواقع بداية ترجمة؛ وكودونات إيقاف.
يمكن إدخال النواقل المحتوية على عديد نيكلوتيدات الهامة في خلية العائل بأي عدد من الوسائل الملائمة؛ متضمنة التثقيب الكهربي»؛ نقل العدوى باستعمال ‎«calcium chloride‏ ‎(DEAE-dextran (calcium phosphate rubidium chloride‏ أو مواد أخرى؛ قصف مقذوف دقيق؛ حقن مادة جينية في الخلية عن طريق جسيم ليبيد؛ وعدوى (مثلا؛ عندما يكون الناقل هو عامل مُعدي مثل فيروس جدري البقر). سوف يعتمد خيار إدخال نواقل أو عديد نيكلوتيدات دائما على سمات خلية العائل. يوفر الاختراع ‎Lad‏ خلايا عائل تشمل أي من عديد النيكلوتيدات الموصوفة هنا. يمكن استخدام أي خلايا عائل قادرة على إظهار ‎DNAS‏ مغايرة بصورة مفرطة بغرض ‎Jie‏ الجينات المشفرة للجسم المضاد؛ عديد ‎cain‏ أو بروتين هام. الأمثلة غير الحصرية لخلايا عائل ثديية 0 تتضمن لكن بدون تحديد خلايا ‎.CHO 5 (Hela «COS‏ انظر أيضا منشور ‎PCT‏ الدولي رقم: ‎ . 2‏ خلايا العائل غير الثديية المناسبة تتضمن بدائيات النواة ‎coli (ic)‏ .5 أو .8 ‎(subtilis‏ وخميرة (مثل ‎¢S. pombe 5. cerevisae‏ أو ‎.(K. lactis‏ بصورة مفضلة؛ تُظهر خلايا العائل ‎cDNAs‏ عند مستوى أعلى بحوالي 5 أضعاف؛ يفضل أكثرء أعلى بحوالي 10 أضعاف؛ ‎Lad‏ يفضل أكثر؛ أعلى بحوالي 20 ضعف من ذلك للجسم المضاد أو البروتين الهام 5 الداخلي المنشاً المقابل؛ إذا ‎can‏ في خلايا العائل. يتم فحص خلايا العائل لتحديد الارتباط الخاص مع 00-1 أو مجال 00-1 باختبار مناعي أو ‎[FACS‏ يمكن تحديد خلية تظهر بدرجة زائدة الجسم المضاد أو البروتين الهام. ‎(Sa‏ استخدام ناقل إظهار للإظهار المباشر لجسم مضاد معارض ضد 000-1. يكون الماهر في الفن على دراية بإعطاء نواقل إظهار للحصول على إظهار بروتين خارجي المنشاً في 0 الجسم الحي. ‎Ole ¢ Jail‏ براءات الاختراع الأمريكية أرقام: 6436908؛ 6413942؛ و6376471. إعطاء نواقل الإظهار يتضمن الإعطاء الموضعي أو الجهازي؛ متضمنا الحقن؛ الإعطاء الفموي؛ إعطاء بمسدس حقن جسيمات أو إعطاء بقسطرة؛ وإعطاء موضعي. في تجسيد آخرء يعطى ناقل الإظهار مباشرة إلى عقدة عصبية أو جذع سيمبثاوي؛ أو في شريان تاجي؛ الأذين؛ البطين» أو غلاف القلب.
— 1 8 — يمكن أيضا استخدام توصيل مستهدف لتركيبات علاجية تحتوي على ناقل إظهار» أو عديد نيكلوتيدات جينية فرعية. توصف تفنيات توصيل ‎DNA‏ يتسبب فيها مستقبل بصورة غير مباشرة في؛ على سبيل ‎(Jal‏ ‎Findeis et al., Trends Biotechnol., 1993, 11:202; Chiou et al., Gene‏ ‎Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer, J.A. 5‏ ‎Wolff, ed., 1994; Wu et al., J.
Biol.
Chem., 1988, 263:621; Wu et al., J.‏ ‎Biol.
Chem., 1994, 269:542; Zenke et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA,‏ ‎Wu et al., J.
Biol.
Chem., 1991, 266:338.‏ ;87:3655 ,1990 تعطى تركيبات ‎Ladle‏ تحتوي على عديد نيكلوتيد في نطاق من حوالي 100 نانو جرام إلى حوالي 200 مجم من ‎DNA‏ للإعطاء ‎gra gall‏ في بروتوكول علاج جين. يمكن ‎La‏ استخدام نطاقات تركيز من حوالي 500 نانوجرام إلى حوالي 50 ‎came‏ حوالي 1 ميكروجرام إلى 2 مجم؛ حوالي 5 ميكروجرام إلى حوالي 500 ميكروجرام؛ وحوالي 20 ميكروجرام إلى حوالي 100 ميكروجرام من ‎DNA‏ أثناء بروتوكول علاج جين. يمكن أيضا توصيل عديد النيكلوتيدات وعديد الببتيدات العلاجية باستخدام نواقل لتوصيل جين. قد يكون ناقل توصيل الجين من مصدر فيروسي أو غير فيروسي انظر بصفة عامة؛ ‎Jolly, Cancer Gene Therapy, 1994, 1:51; Kimura, Human Gene Therapy,‏ ‎Connelly, Human Gene Therapy, 1995, 1:185; and Kaplitt,‏ ;5:845 ,1994 ‎Nature Genetics, 1994, 6:148.‏ يمكن حث إظهار الترتيبات المشفرة هذه باستخدام كائنات ثديية داخلية ‎Lind)‏ أو معززات مغايرة. 0 إظهار الترتيب المشفر قد يكون سواء بنيوي أو تنظيمي. تعرف جيدا في الفن النواقل المعتمدة على فيروس لتوصيل عديد نيكلوتيد مرغوب وإظهاره في خلية مرغوية في الفن. تتضمن النواقل المعتمدة على فيروس التمثيلية؛ لكن بدون تحديد؛ فيروسات ارتجاعية مخلقة (انظر؛ ‎Sie‏ منشورات طلب ‎PCT‏ الدولية أرقام: 90/07936؛ 2 93/25698؟؛ ¢93/25234 93/11230؛ ¢93/10218 91/02805؛ براءات
الاختراع الأمريكية أرقام: 5219740 و4777127؛ براءة الاختراع البربطانية رقم: 2200651؛ ويراءة الاختراع الأوروبية رقم: 0345242(« نواقل تعتمد على ‎Oli) alphavirus‏ نواقل فيروس ‎«Sindbis‏ فيروس غابة ‎VR-67) Semliki‏ 8706؛ ‎(ATCC VR-1247‏ فيروس ‎ROSS‏ ‎(ATCC VR-1246 «ATCC VR-373) River‏ وفيروس التهاب دماغ الخيلي
‎ATCC ¢ATCC VR 1249 «ATCC VR-1250 ¢tATCC VR-923) Venezuelan 5‏ ‎o(VR-532‏ ونواقل فيروس مصاحب لغدة ‎(AAV)‏ (انظر ‎lia‏ منشورات طلب ‎PCT‏ الدولية أرقام: 94/12649» 93/03769؛ 93/19191؛ 94/28938؛ 95/11984 و95/00655). يمكن أيضا استعمال إعطاء ‎DNA‏ متصل مع فيروسات غدة مقتولة كما هو موصوف في ‎.Curiel, Hum.
Gene Ther., 1992, 7‏
‏10 يمكن أيضا استعمال طرق ونواقل توصيل غير فيروسية؛ متضمنة؛ لكن بدون تحديد؛ ‎DNA‏ متكثف 0070810016 متصل أو غير متصل مع فيروس غدة مقتول بمفرده ‎hail)‏ مثلا ‎DNA ¢(Curiel, Hum.
Gene Ther., 1992, 3:147‏ متصل مع مركب ترابطي (انظرء ‎¢(Wu, J.
Biol.
Chem., 1989, 264:16985 ie‏ خلايا نواقل توصيل خلية حقيقية النواة (انظر» مثلا» براءة الاختراع الأمريكية رقم $5814482 منشورات طلب ‎PCT‏ الدولية أرقام:
‏5 95/07994؛ 96/17072؛ 95/30763؛ و97/42338) وتعادل شحنة نووية أو التحام مع أغشية خلية. يمكن أيضا استعمال ‎DNA‏ مجرد. توصف طرق إدخال ‎DNA‏ مجرد تمثيلية في منشور ‎PCT alla‏ الدولي رقم: 90/11092 وبراءة الاختراع الأمريكية رقم: 5580859. توصف جسيمات ليبيد يمكن أن تعمل كتواقل توصيل جين في براءة الاختراع الأمريكية رقم: 5422120؛ منشورات ‎PCT (alla‏ الدولية أرقام: 95/13796؛ 94/23697؛ 91/14445؛ وبراءة الاختراع
‏0 الأوروبية رقم: 0524968. توصف طرق إضافية في: ‎Philip, Mol.
Cell Biol., 1994, 14:2411, and in Woffendin, Proc.
Natl.
Acad.‏ ‎Sci., 1994, ©‏
‏التركييبات
يوفر الاختراع ‎Lad‏ تركيبات دوائية تشتمل على كمية مؤثرة من الجسم المضاد ضد ‎PD-‏ ‏1 كما هو موصوف هنا. الأمثلة على تلك التركيبات؛ بالإضافة إلى كيفية صياغتهاء تكون موصوفة أيضا هنا. في بعض التجسيدات؛ تشتمل التركيبة على واحد أو أكثر من الأجسام المضادة ضد 00-1. في تجسيدات أخرى؛ فإن الجسم المضاد ضد 00-1 يدرك 00-1. في تجسيدات أخرى ؛ يكون الجسم المضاد ضد 10-1 هو جسم مضاد بشري. في تجسيدات أخرىء يكون الجسم المضاد ضد 0100-1 هو جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد ‎aca‏ 00-1 على منطقة ثابتة قادرة على إثارة استجابة مناعية مرغوية؛ ‎Jie‏ ‏تحلل يتسبب فيه بصورة غير مباشرة جسم مضاد أو ©80006. في تجسيدات أخرى؛ يشتمل الجسم المضاد ضد 00-1 على منطقة ثابتة لا تثير استجابة مناعية غير مرغوية أو غير مطلوية؛ مثل 0 تحلل يتسبب فيه بصورة غير مباشرة جسم مضاد أو ‎.ADCC‏ في تجسيدات أخرى؛ يشتمل الجسم المضاد ضد 00-1 على واحدة أو أكثر من ‎CDR(S)‏ من الجسم المضاد (مثل 1 2 3 4؛ 5< أو؛ في بعض التجسيدات؛ كل ‎CDRs‏ الستة). يكون من المفهوم أن التركيبات يمكن أن تشمل أكثر من جسم مضاد ضد 00-1 واحد (على سبيل المثال؛ خليط من الأجسام المضادة ضد 00-1 التي تدرك إبيتويات مختلفة من 5 00-1). تشتمل تركيبات تمثيلية أخرى على أكثر من جسم مضاد ضد 00-1 واحد يدرك نفس الإبيتوب (الإبيتوبات)؛ أو أنواع مختلفة من الأجسام المضادة ضد 00-1 التي ترتبط مع إبيتوبات مختلفة من 00-1. في بعض التجسيدات؛ تشتمل التركيبة على خليط من أجسام مضادة ضد 00-1 تدرك أشكال متباينة مختلفة من ‎PD-1‏ ‏يمكن أن تشتمل إضافيا التركيبات المستخدمة في الاختراع الحالي على مواد حاملة؛ مواد 0 مسوغة؛ أو مواد مثبتة مقبولة دوائيا: ‎(Remington: The Science and practice of Pharmacy 20st Ed., 2000,‏ ‎Lippincott Williams and Wilkins, Ed.
K.
E.
Hoover),‏ في شكل صياغات مجفدة أو محاليل مائية. المواد الحاملة؛ المواد المسوغة؛ أو ‎algal‏ المثبتة المقبولة تكون غير سامة لمتعاطيها عند الجرعات والتركيزات؛ وقد تشمل مثبتات أس هيدروجيني
‎Jie‏ فوسفات» ‎(Citrate‏ وأحماض عضوية أخرى؛ مضادات أكسدة تتضمن ‎ascorbic acid‏ ‎¢methionine 4‏ مواد حافظة (مثل ‎toctadecyldimethylbenzyl ammonium chloride‏ ‎¢benzethonium chloride benzalkonium chloride ¢thexamethonium chloride‏ ‎alkyl parabens ¢benzyl alcohol i butyl «phenol‏ مثل ‎propyl i methyl‏ ‎¢(m-cresol 4 ¢3—pentanol ¢cyclohexanol ¢resorcinol ¢catechol ¢paraben 5‏ عديد ببتيدات منخفضة الوزن الجزيئي (أقل من حوالي 10 متخلفات)؛ بروتينات؛ ‎JY) Jie‏ مصل؛ جيلاتين؛ أو جلوبيولينات مناعية؛ بوليمرات محبة للماء مثل ‎¢polyvinylpyrrolidone‏ أحماض أمينية ‎i «arginine histidine asparagine «glutamine «glycine (fic‏ عصنكلرا؛ ‎carbohydrates «disaccharides (monosaccharides‏ أخرى تتضمن جلوكوزء ‎mannose 0‏ أو ‎dextrans‏ عوامل كلابية مثل ‎¢EDTA‏ سكريات مثل ‎«mannitol sucrose‏ ‎trehalose‏ أو ا8010110؛ أيونات معاكسة تشكل ملح مثل الصوديوم؛ معقدات فلز (مثلاء معقدات بروتين ‎(Zn‏ و/أو منشطات سطح غير أيونية متل ‎PLURONICS™ TWEEN™‏ أو ‎(PEG) polyethylene glycol‏ توصف هنا إضافيا مواد مسوغة مقبولة دوائيا. يمكن أيضا استخدام جسم مضاد ضد 00-1 وتركيبات منه في تقارن مع؛ أو يتم إعطاؤها بصورة منفصلة؛ متزامنة؛ أو على التوالي مع ‎alse‏ أخرى تعمل على حث و/أو تكميل تأثير العوامل. يوفر الاختراع أيضا تركيبات» تتضمن تركيبات دوائية؛ تشمل أي من عديد النيكلوتيدات من الاختراع. في بعض التجسيدات؛ تشتمل التركيبة على ناقل إظهار يشمل عديد نيكلوتيد يشفر الجسم المضاد كما هو موصوف هنا. في تجسيدات ‎«al‏ تشتمل التركيبة على ناقل إظهار يشمل ‎ane 0‏ نيكلوتيد يشفر أي من الأجسام المضادة الموصوفة هنا. طرق لمنع أو معالجة حالات يتسبب فيها بصورة غير مباشرة ‎PD-1‏ ‏تكون الأجسام المضادة ومتقارنات الجسم المضاد من الاختراع الحالي مفيدة في تطبيقات عديدة تتضمن» لكن بدون تحديد؛ طرق معالجة علاجية وطرق معالجة تشخيصية.
في أحد الجوانب؛ يوفر الاختراع طريقة لعلاج سرطان. في بعض التجسيدات تشتمل طريقة علاج سرطان في كائن إعطاء الكائن المحتاج إلى ذلك كمية فعالة من تركيبة (على سبيل المثال؛ تركيبة دوائية) تشمل أي من الأجسام المضادة 00-1 كما هو موصوف هنا. كما هو مستخدم ‎Lia‏ لكن بدون تحديد سرطان مثانة؛ سرطان ثدي؛ سرطان عنق الرحم؛ كارسينوما مشيمائية؛
سرطان قولون»؛ سرطان المريء؛ سرطان معدي» ورم أرومي دبقي» ورم دبقي» ورم بالدماغ؛ سرطان الرأس والرقبة؛ سرطان الكلى؛ سرطان ‎el‏ سرطان فموي؛ سرطان المبيض؛ سرطان البنكرياس؛ سرطان ‎cling pall‏ سرطان الكبد؛ سرطان الرحم؛ سرطان العظم؛ سرطان الدم؛ ورم لمفاوي»؛ ساركوما؛ سرطان دم؛ سرطان درقي؛ سرطان صعتري؛ سرطان عين؛ وسرطان جلد. في بعض التجسيدات؛ تتوافر طريقة لتثبيط نمو أو تقدم الورم في كائن؛ تشمل إعطاء الكائن المحتاج
0 إلى ذلك كمية فعالة من تركيبة تشمل أجسام مضادة 00-1 أو متقارنات جسم مضاد 00-1 كما هو موصوف هنا. في بعض التجسيدات؛ يكون الورم هو ورم يظهر ‎PD-LT‏ في تجسيدات ‎coal‏ لا يظهر الورم ‎PD-LT‏ في تجسيدات أخرى؛ تتوافر طريقة لتثبيط انبثتاث خلايا سرطان في كائن؛ تشمل إعطاء الكائن المحتاج إلى ذلك كمية فعالة من تركيبة تشمل أي من الأجسام المضادة 00-1 كما هو موصوف هنا. في تجسيدات أخرى؛ تتوافر طريقة لحث تراجع ورم في
5 كائن؛ تشمل إعطاء الكائن المحتاج إلى هذا كمية فعالة من تركيبة تشمل أي من الأجسام المضادة 0]0-1 كما هو موصوف هنا.
في جانب آخرء تتوافر طريقة لاكتشاف؛ تشخيص؛ و/أو مراقبة سرطان. على سبيل المثال؛ يمكن تعليم الأجسام المضادة 00-1 كما هو موصوف هنا مع شطر قابل للاكتشاف ‎Jie‏ ‏عامل تصوير وعلامة مادة خاضعة مع إنزيم. يمكن أيضا استخدام الأجسام المضادة كما هو
0 موصوف هنا للاختبارات التشخيصية في الجسم الحي؛ مثل التصوير في الجسم الحي ‎Ole)‏ ‎PET‏ أو ‎(SPECT‏ أو عامل كاشف للتبقيع.
في بعض التجسيدات؛ تشتمل الطرق الموصوفة هنا ‎Lilia)‏ على خطوة لعلاج كائن مع شكل إضافي للعلاج. في بعض التجسيدات؛ يكون الشكل الإضافي للعلاج هو علاج إضافي مضاد للسرطان يتضمن؛ لكن بدون تحديد» علاج كيماوي» ‎aba (eld)‏ علاج هرموني؛ 5 و/أو علاج مناعي إضافي.
بالنسبة لكل الطرق الموصوفة هناء تتضمن الإشارة إلى أجسام مضادة معارضة ضد 00-1 لأيضا تركيبات تشمل واحد أو أكثر من العوامل الإضافية. قد تشمل تلك التركيبات إضافيا مواد مسوغة مناسبة؛ مثلا مواد مسوغة مقبولة دوائيا تتضمن مثبتات الأس الهيدروجيني؛ التي تكون معروفة جيدا في الفن. يمكن استخدام الاختراع الحالي بمفرده أو في اتحاد مع طرق معالجة أخرى. يمكن إعطاء الجسم المضاد المعارض ‎aca‏ 00-1 إلى كائن بواسطة أية طريقة مناسبة. يجب أن يتضح للماهر في الفن أن الأمثلة الموصوفة هنا لا يقصد بها التحديد لكن لتوضح التقنيات المتاحة. طبقا لهذاء في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 إلى كائن طبقا لطرق معروفة؛ مثلا إعطاء في الوريد؛ على سبيل ‎(JB‏ كبلعة أو 0 بالتشريب المستمر خلال فترة زمنية؛ بالإعطاء في العضل؛ في الغشاء ‎gun)‏ في النخاع الشوكي؛ عبر الأدمة؛ تحت الجلد؛ في المفصل؛ تحت اللسان؛ داخل الغشاء الزليلي» عن ‎Gob‏ ‏النفخ» داخل القراب»؛ ‎(Liga‏ عن طريق الاستنشاق أو موضعيا. قد يكون الإعطاء جهازيا» على سبيل المثال؛ الإعطاء في الوريد؛ أو موضعيا. تعتبر أجهزة الترذيذ المتاحة تجاريا من أجل الصياغات السائلة» بما في ذلك ‎Heal‏ ترذيذ نفاثة وأجهزة ترذيذ فوق صوتية مفيدة للإعطاء. يمكن 5 ترذيذ الصياغات السائلة مباشرة ويمكن ترذيذ المسحوق المجفد بعد ‎Bale]‏ التكوين. بصورة تبادلية؛ يمكن رش الجسم المضاد المعارض ضد 0100-1 ‎Wiss‏ باستخدام صياغة ‎fluorocarbon‏ وجهاز استنشاق جرعة معايرة؛ أو استنشاقه كمسحوق مجفد ومطحون. في بعض التجسيدات؛ يُعطى الجسم المضاد المعارض ضد 50-1 بواسطة تقنيات توصيل موضعية مستهدفة أو خاصة بموقع. تتضمن أمثلة على تقنيات التوصيل الموضعية 0 المستهدفة أو الخاصة بموقع مصادر مستودع متعددة مدخرة قابلة للازدراع من الجسم المضاد المعارض ضد 50-1 أو قسطرات توصيل موضعية»؛ مثل قسطرات تسريب» قسطرات مستقرة؛ أو قسطرات ‎byl‏ رقعات تخليقية؛ تغليفات خارجية» وصلات تحويل ودعامات أو أدوات قابلة للازدراع أخرى؛ مواد ‎dlls‏ خاصة بموقع؛ حقن مباشرء أو تطبيق مباشر. انظرء على سبيل المثال المنشور الطلب الدولي ‎PTC‏ رقم: 2000/53211 وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 5981568.
يمكن استخدام صياغات متعددة لجسم مضاد معاريض ضد 00-1 من أجل الإعطاء. في بعض التجسيدات؛ قد يُعطى الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 بدون إضافات. في بعض التجسيدات؛ قد يوجد الجسم المضاد المعاريض ضد 00-1 ومادة مسوغة مقبولة دوائيا في صياغات متعددة. تُعرف المواد المسوغة المقبولة دوائيا في الفن؛ وتكون مواد خاملة نسبيا تسهل إعطاء مادة فعالة فارماكولوجيا. على سبيل المثال؛ يمكن أن تعطي المادة المسوغة شكل أو تماسك؛ أو تعمل كمادة مخففة. تتضمن المواد المسوغة المناسبة ولكن ليس على سبيل الحصر عوامل تثبيت» عوامل ترطيب واستحلاب؛ أملاح لتنويع الأوزموزية؛ عوامل كبسلة؛ مثبتات أس هيدروجيني؛ ومحثات للنفاذ إلى الجلد. تُذكر المواد المسوغة بالإضافة إلى الصياغات لتوصيل العقار عن غير الطريق المعوي أو عن الطريق المعوي في ‎Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.
Mack 10‏ ‎Publishing, 2000.‏ في بعض التجسيدات؛ تصاغ هذه العوامل للإعطاء بالحقن (على سبيل المثال؛ في الغشاء البريتوني؛ في الوريد؛ تحت الجلد؛ في العضل؛ إلخ). وفقا لذلك؛ يمكن أن تتحد هذه العوامل مع أوساط ناقلة مقبولة دوائيا ‎Jia‏ محلول ملحي؛ محلول ‎(Ringer‏ محلول ‎cdextrose‏ إلخ. سوف 5 يعتمد نظام التجريع المحدد؛ أي؛ الجرعة؛ التوقيت والتكرار» على الشخص المحدد والتاريخ الطبي لهذا الشخص. يمكن إعطاء جسم مضاد معارض ضد 00-1 باستخدام أي طريقة مناسبة؛ متضمنة الحقن ‎lia)‏ في الغشاء البربتوني؛ في الوريد؛ تحت الجلد؛ في العضل؛ إلخ). ‎Load (Say‏ إعطاء أجسام مضادة ضد 00-1 موضعيا أو بالاستنشاق؛ كما هو موصوف هنا. بصفة عامة؛ لأجل 0 إعطاء أجسام مضادة ضد 00-1 فإن جرعة مقترحة أوليا تكون تقريبا 2 مجم/ كجم. لغرض الاختراع الحالي؛ قد تتراوح جرعة يومية نموذجية أي من حوالي 3 ميكروجرام/ كجم إلى 30 ميكروجرام/ كجم إلى 300 ميكروجرام/ كجم إلى 3 مجم/ كجم؛ إلى 30 مجم/ كجم؛ إلى 100 مجم/ كجم أو أكثر؛ اعتمادا على العوامل المذكورة ‎ode‏ على سبيل المثال؛ يمكن استخدام جرعة تقريبا 1 مجم/ ‎cpa‏ تقريبا 2.5 مجم/ كجم؛ تقريبا 5 مجم/ ‎pa‏ تقريبا 10 مجم/ كجم وتقريبا 5 25 مجم/ كجم. من أجل إعطاءات متكررة لعدة أيام أو ‎5ST‏ ¢ اعتمادا على الحالة؛ تستمر المعالجة
— 8 8 — حتى يظهر الإخماد المرغوب للأعراض أو حتى تتحقق مستويات علاجية ‎AAS‏ على سبيل المثال» حتى خفض أعراض السرطان. يكون من السهل مراقبة تقدم هذا العلاج بواسطة تقنيات واختبارات تقليدية. قد يتغير نظام التجريع (متضمنا جسم مضاد معارض ضد 50-1 المستخدم) عبر الوقت.
لغرض الاختراع الحالي» سوف تعتمد جرعة ملائمة من جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ ‏على الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 (أو تركيبات منه) المستخدم؛ نوع وشدة الأعراض المراد علاجهاء ما إذا كان العامل يعطى لأغراض وقائية أو علاجية؛ العلاج السابق» تاريخ ‎a all‏ المرضي و لاستجابة للعامل؛ معدل تخلص ‎a all‏ من العامل المعطى وتقدير الطبيب المعالج. نموذجيا سوف يعطي الطبيب جسم مضاد معارض ضد 00-1 حتى الوصول إلى
0 الجرعة التي تحقق النتائج المرغوية. قد تتغير الجرعة و/أو معدل التكرار خلال مسار المعالجة. سوف تساهم الاعتبارات التجريبية؛ مثلا عمر ‎(Chall‏ بصفة عامة فى تحديد الجرعة. على سبيل المثال» يمكن استخدام أجسام مضادة متوافقة مع نظام مناعة بشرية؛ ‎Jie‏ أجسام مضادة مكتسبة السمة البشرية أو أجسام مضادة بشرية كاملة؛ لتطويل عمر النصف للجسم المضاد ولمنع الهجوم على الجسم المضاد بواسطة نظام المناعة للعائل. قد يتحدد معدل تكرار الإعطاء ويضبط خلال
5 1 مسار العلاج؛ ويكون ‎Lo gas‏ 13 لكن ليس بالضرورة 13 بالاعتماد على معالجة و/أو كبح و/أو تخفيف حدة و/أو تأخير الأعراض. بصورة بديلة؛ قد يكون استمرار الإطلاق الممتد للصياغات لأجسام مضادة معارضة ضد 00-1 ملائما. تكون الصياغات والأجهزة المتنوعة لتحقيق الإطلاق الممتد معروفة في الفن.
في أحد التجسيدات؛ قد تتحدد جرعات الجسم المضاد المعارض تجريبيا في الأفراد الذين 0 تتم إعطاؤهم جسم مضاد معارض واحد أو أكثر. يعطى الأفراد جرعات تدريجية من جسم مضاد معارض ‎.PD- 1 Ja‏ لتقييم الفعالية؛ يمكن اتباع مؤشر للمرض . إن إعطاء جسم مضاد معارض ضد 00-1 طبقا للطريقة في الاختراع الحالي قد يكون مستمر أو متقطع؛ اعتماداء على سبيل المثال؛ على الحالة الجسدية للمتلقي؛ وما إذا كان غرض الإعطاء ‎ade‏ أو وقائي؛ وعوامل أخرى معروفة للممارسين المهرة. إن إعطاء جسم مضاد
معارض ضد 50-1 قد يكون مستمر أساسيا لمدة زمنية تم اختيارها مسبقا أو قد يكون في تسلسل جرعات متباعدة.
في بعض التجسيدات؛ يمكن أن يتواجد أكثر من جسم مضاد معارض ضد 50-1 واحد. يمكن أن يوجد على الأقل واحد؛ على الأقل اثنين» على الأقل ثلاثة. على الأقل ‎cal‏ على الأقل
خمسة أجسام مضادة معارضة مختلفة؛ أو أكثر. بصفة عامة؛ قد يكون للأجسام المضادة
المعارضة ضد 00-1 تلك نشاطات تكميلية ليس لها تأثير ضار على بعضها البعض. يمكن أيضا استخدام جسم مضاد معارض ضد 00-1 بالتقارن مع أجسام مضادة ‎gal‏ و/أو علاجات أخرى. يمكن أيضا استخدام جسم مضاد معارض ضد 00-1 بالتقارن مع عوامل أخرى تعمل على حث و/أو تكميل تأثيرات العوامل.
في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء جسم مضاد معارض ضد 0100-1 في اتحاد مع إعطاء عامل علاجي إضافي واحد أو أكثر. تتضمن هذه؛ بدون تحديد؛ إعطاء عامل علاجي كيماوي؛ لقاح؛ علاج يعتمد على خلية ‎(CAR-T‏ علاج إشعاعي؛ علاج بالسيتوكين؛ لقاح؛ جسم مضاد ثنائي الخصوصية ضد 00-1 مثبط لمسارات كابحة للمناعة أخرى؛ مثبطات لتكون الأوعية الحديثة؛. منشط خلية آ؛ مثبط لمسار أيضي؛ مثبط ‎MTOR‏ مثبط لمسار ‎adenosine‏ مثبط
5 كيناز ‎tyrosine‏ يتضمن لكن بدون تحديد ‎cinlyta‏ مقبطات ‎¢sunitinib y ALK‏ متبط ‎«BRAF‏ ‎sale‏ معدلة للتخلق المتوالي؛ مثبطات أو عامل استنفاد ‎Treg WIA‏ و/أو خلايا كابحة مشتقة من النخاع؛ مثبط ‎(JAK‏ مثبط ‎(STAT‏ مثبط كيناز معتمد على ‎cyclin‏ عامل علاجي حيوي (تتضمن لكن بدون تحديد أجسام مضادة ‎«Her2/neu (EGFR (VEGFR (VEGF‏ مستقبلات عامل ‎(OX-40 (CTLA-4 (CD-40L (CD40 CD20 «Al sai‏ 4-188
0 و1605)؛ عامل مولد للمناعة (على سبيل المثال؛ خلايا سرطانية مخففة؛ مولدات ضد ‎(ays‏ ‏خلايا تمثل مولد ضد مثل خلايا شجيربة منبضة مع مولد ضد مشتق من ورم أو أحماض نووية؛ سيتوكينات مستثيرة للمناعة ‎le)‏ سبيل المثال» 2-ااء ‎(GM-CSF FNa2‏ وخلايا منقول إليها العدوى مع جينات تشفر سيتوكينات مستثيرة للمناعة مثل ‎GM-CSF‏ لكن بدون تحديد). الأمثلة على العوامل الكيماوية العلاجية تتضمن عوامل ألكلة ‎thiotepa (fie‏ improsulfan «busulfan ‏مثل‎ alkyl sulfonates ¢cyclosphosphamide ; 5
«meturedopa 810000106 260200008 ‏متل‎ aziridines ¢piposulfan ‏و‎ ‎«altretamine ‏تتضمن‎ methylamelamines ‏و‎ ethylenimines ¢uredopa trietylenephosphoramide «triethylenemelamine ‏(خاصة‎ acetogenins strimethylolomelamine 4 triethylenethiophosphoramide ‏الممائل التخليقي)؛‎ topotecan ‏(يتضمن‎ camptothecin ¢(bullatacinone bullatacin 5 «adozelesin ‏(يتضمن مماثلات التخليقية‎ 00-1065 ¢callystatin <bryostatin cryptophycin ‏وى‎ cryptophycin 1 ‏(تحديدا‎ cryptophycins ¢(bizelesin ‏و‎ carzelesin ¢(CBI-TMI ‏و‎ KW-2189 ‏(يتضمن المماثلات التخليقية؛‎ duocarmycin ¢dolastatin ¢(8 ‏حبوب خردل نيتروجين‎ ¢spongistatin ¢sarcodictyin ¢pancratistatin ¢eleutherobin «estramustine (cholophosphamide (chlornaphazine (chlorambucil ‏مثل‎ 0 «mechlorethamine oxide hydrochloride :mechlorethamine ifosfamide ‏خردل‎ «trofosfamide (prednimustine (phenesterine <novembichin (melphalan (domustine (fotemustine (chlorozotocin (carmustine (fis nitrosureas ¢uracil ‏(مثلا‎ enediyne ‏المضادات الحيوية‎ Jie ‏مضادات حيوية‎ cranimustine animustine «calicheamicin phill 4 calicheamicin gammall ‏بصفة خاصة‎ ccalicheamicin 5 ‘Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994) ‏انظرء على سبيل المثالء‎ ¢cclodronate is «bisphosphonates ¢«dynemicin A ‏تتضمن‎ cdynemicin chromomophores ‏و‎ neocarzinostatin chromophore ‏بالإضافة إلى‎ cesperamicin «actinomycin .aclacinomysins ‏لبروتين ملون ذو صلة)‎ enediyne ‏مضاد حيوي‎ «carabicin (cactinomycin (bleomycins (azaserine authramycin 20 «daunorubicin «dactinomycin «chromomycins ccarzinophilin «caminomycin ‏(تتضمن‎ doxorubicin «6-diazo—5-oxo-L-norleucine «detorubicin 2-pyrrolino— «cyanomorpholino—doxorubicin «morpholino—doxorubicin «pegylated liposomal doxorubicin «(deoxydoxorubicin 4 «doxorubicin
Jie mitomycins ¢marcellomycin cdarubicin (esorubicin (epirubicin 5 «peplomycin (olivomycins (nogalamycin ¢mycophenolic acid imitomycin C
«streptonigrin 0001001610 (quelamycin (puromycin ¢potfiromycin
Jie ‏مضاد للأيض‎ ¢zorubicin 210051810 «ubenimex ctubercidin (streptozocin «denopterin ‏مثل‎ folic acid ‏مماثلات‎ ¢(5-FU) 5-fluorouracil ‏و‎ methotrexate 6- fludarabine ‏متل‎ purine ‏مماثلات‎ strimetrexate (pteropterin «methotrexate
Jis pyrimidine ‏مماثلات‎ sthioguanine cthiamiprine «mercaptopurine 5 «cytarabine (carmofur (6—azauridine 828010106 «ancitabine
Jis androgens ¢floxuridine (enocitabine doxifluridine «dideoxyuridine «mepitiostane (epitiostanol «dromostanolone propionate (calusterone (rilostane «mitotane (aminoglutethimide is adrenals ‏مضاد‎ stestolactone taldophosphamide glycoside ¢aceglatone ¢frolinic acid i folic acid ‏عياض‎ 0 ¢tbisantrene ¢bestrabucil tamsacrine ¢eniluracil taminolevulinic acid elliptinium ¢elformithine ¢diaziquone ¢demecolcine ¢defofamine ¢edatraxate ¢dlentinan ¢<hydroxyurea ¢gallium nitrate ¢etoglucid ¢epothilone acetate ¢mitoguazone ¢ansamitocins ; maytansine (fi. maytansinoids ¢lonidamine ¢pirarubicin ¢phenamet ¢pentostatin ¢nitracrine ¢mopidamol ¢mitoxantrone 15 ¢procarbazine ¢2—-ethylhydrazide ¢podophyllinic acid ¢losoxantrone stenuazonic acid ¢spirogermanium ¢sizofuran ¢rhizoxin ¢razoxane
T-2 ‏(خاصة‎ trichothecenes ¢2, 2,2" -trichlorotriethylamine ¢triaziquone tvindesine turethan ¢(anguidine g roridin A «verracurin A «toxin ¢pipobroman ¢mitolactol ¢mitobronitol stmannomustine ¢dacarbazine 20 «taxoids thiotepa ¢cyclophosphamide ¢(“Ara-C”) arabinoside tgacytosine 6- «gemcitabine ¢chlorambucil <doxetaxel y paclitaxel ‏على سبيل المثال‎ cisplatin ‏مثل‎ platinum ‏مماثلات‎ ¢methotrexate «mercaptopurine ¢thioguanine tifosfamide ¢(VP-16) etoposide ¢platinum ¢vinblastine ¢carboplatin 4 sedatrexate ¢teniposide ¢novantrone ¢vinorelbine ¢vincristine ¢mitoxantrone 5 topoisomerase ¢«CPT-11 ¢ibandronate ¢xeloda ¢aminopterin «daunomycin
¢retinoic acid Ji retinoids ¢(DMFO) difluoromethylornithine «RFS 2000 ‏متبط‎ ‏وأملاح؛ أحماض أو مشتقات مقبولة دوائيا من أي مما ذكر أعلاه. توجد أيضا‎ scapecitabine ‏عوامل مضادة للهرمونات تعمل على تنظيم أو تثبيط عمل الهرمون على أورام مثلا مواد معدلة‎ ‏على سبيل المثال؛‎ cell ‏بما في‎ «(SERMs) estrogens ‏انتقائي ومضاد‎ estrogen ‏لمستقبل‎ ‎trioxifene (4—hydroxytamoxifen (droloxifene (raloxifene tamoxifen 5 ‏مثبطات‎ ¢(Fareston) toremifene ‏و‎ conapristone (LY117018 <keoxifene ‏الإنزيم» التي تنظم إنتاج 651009810 في غدد الكظرية؛ على‎ aromatase ‏تثبط‎ 6 «megestrol acetate .aminoglutethimide «4(5)-imidazoles ‏سبيل المثالء‎ tanastrozole 4 «letrozole (vorozole (fadrozole (formestane (exemestane leuprolide (bicalutamide <nilutamide (flutamide (i. androgens ilacs 0 ‏وأملاح؛ أحماض أو مشتقات مقبولة دوائيا من أي مما ذكر أعلاه.‎ tgoserelin ‏في بعض التجسيدات؛ يتم استخدام جسم مضاد معارض ضد 00-1 في تقارن مع واحد‎ ‏أو أكثر من العوامل العلاجية الأخرى المستهدفة مادة ضابطة لنقطة فحص مناعية؛ على سبيل‎
B7- «B7-H3 (LAG-3 (CTLA-4 (PD-L1 (PD-1 ‏بدون تحديدء عامل يستهدف‎ JE «B7-2 ‏7-1ق‎ « B7-H2 «B7-H8 B7-H6 ‏كنا-7ق‎ 7-0 (PD-L2) (H4 5 «CD226 «CD58 «CD48 (CD86 «CD80 «CD47 002 (TIGIT (COS-L (COS «TIM4 (TIM-3 (TIM1 0160 BTLA 2B4 LAIR] (CD112 «CD155 «4-1BB CD27 «CD70 «GITRL (GITR (OX40L OX40 VISTA (PD-H1) «HVEM (LIGHT CD30L «CD30 «CD40L «CD40 ‏قث انل ماك‎ «4-BBL
SLAMF4 SLAMF3 (CD229) SLAMF2 (CD48) «SLAM (SLAMF1, CD150) 20 «SLAMCF7 (CS1) SLAMF6 (NTB-A) SLAMF5 (CD84) «(2B4, CD244) «CEACAM1 (CD66a) «CD28 SLAMF9 (CD2F) «SLAMF8 (BLAME) «CEACAMS (CEACAMT (CEACAM6 (CEACAMS (CEACAM4 (CEACAM3
CEACAMI1- (PSG1-11 «CEACAM1-15 «CEACAM1-3AS CEACAM3C2
CD39- ‏مسار‎ «CCR2 (TDO (IDO (CEACAM1-4L «CEACAM1-4S 401 5
‎«CCRS5 (CCR8 (CCR4 (CXCR2 (TIKs «(BTKs ((A2AR) 0073-68‏ مسار ‎VEGF‏ 057-1؛ أو ‎sale‏ ضابطة لاستجابة مناعية فطرية. في بعض التجسيدات؛ يتم استخدام جسم مضاد معارض ضد 50-1 في تقارن مع؛ على سبيل المثال؛ جسم مضاد معارض ضد 000-11؛ على سبيل المثال» ‎(MDX-1105) BMS-936559‏ و/010013280/ا؛ وجسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ على سبيل المثالء ‎«pembrolizumab nivolumab‏
‎¢pidilizumab‏ جسم مضاد معارض ضد 0118-4 على سبيل المثال ‎tipilimumab‏ جسم مضاد معارض ضد ‎LAG-3‏ مثل 81/5-986016 9 ‎(IMPT01‏ جسم مضاد معارض ضد ‎¢TIM=3‏ جسم مضاد معارض ضد 87-113 مثل ‎tMGA2T]‏ جسم مضاد معارض ضد ‎(VISTA‏ جسم مضاد معارض ضد ‎(TIGIT‏ جسم مضاد معارض ضد ‎(CD28‏ جسم مضاد ضد
‏0 0080؛ جسم مضاد ضد 1086)؛ جسم مضاد معارض ضد 87-114؛ جسم مضاد معارض ضد 005))؛ جسم مضاد معارض ضد 01028؛ مادة معدلة لاستجابة مناعية فطرية (على سبيل المثال» ‎(TLRs‏ 4ا4ا؛ ‎(NKG2A‏ ومثبط 00ا. في بعض التجسيدات؛ يستخدم الجسم المضاد المعارض ضد 10-1 في تقارن مع معضد 4-188 ‎¢((CD137)‏ على سبيل ‎(Jd‏ - ]م 66 أو ‎.BMS-663513‏ في بعض التجسيدات؛ يستخدم الجسم المضاد المعارض
‏5 ضد 0-1 في تقارن مع معضد 0740؛ على سبيل المثال جسم مضاد معضد ضد 076-40. في بعض التجسيدات؛ يستخدم الجسم المضاد المعارض ضد 7010-1 في ‎PW‏ مع معضد ‎«GITR‏ على سبيل المثال؛ جسم مضاد معضد ضد ‎(GITR‏ على سبيل المثال بدون تحديد؛ 8. في بعض التجسيدات؛ يستخدم جسم مضاد معارض ضد 10-1 في تقارن مع متبط 0ا. في بعض التجسيدات؛ يستخدم جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ في تقارن مع علاج
‏0 سيتوكين؛ على سبيل المثال بدون تحديد»؛ ‎١-15‏ 1-+05؛ 1057-1 إلخ.
‏في بعض التجسيدات؛ يستخدم جسم مضاد معارض ضد 50-1 في تقارن مع واحد أو أكثر من الأجسام المضادة الأخرى العلاجية؛ على سبيل المثال بدون تحديد؛ جسم مضاد يستهدف ‎«CD52 «CD40 CD22 «CD19‏ أو ‎.CCR4‏ ‏في بعض التجسيدات؛ قد يستمر علاج بالجسم المضاد ضد 00-1 أو يتبع معالجة 5 أخرى بعامل بفواصل زمنية تتراوح من دقائق إلى أسابيع. في تجسيدات حيث يتم إعطاء العوامل
الأخرى و/أو البروتينات أو عديد النيكلوتيدات بصورة منفصلة؛ قد نضمن بصفة عامة عدم انقضاء فترة كبيرة بين كل توصيل» بحيث لايزال العامل والتركيبة من الاختراع الحالي قادرين على إعطاء تأثير متحد على نحو مفيد للكائن. في تلك الحالات؛ يكون من المتوقع أنه من الممكن إعطاء كلتا المادتين المعدلتين خلال حوالي 24-12 ساعة لكل منهما و؛ يفضل ‎«ST‏ خلال حوالي 12-6 ساعة لكل منهما. في بعض الحالات؛ قد يكون من المرغوب تمديد الفترة الزمنية للإعطاء بدرجة كبيرة؛ مع هذاء تنقضي ‎sae‏ أيام (2؛ 3؛ 4؛ 5؛ 6 أو 7) إلى ‎se‏ أسابيع (1؛ 2 3 4؛ 5؛ 6؛ 7 أو 8) بين الإعطاءات الخاصة. في بعض التجسيدات؛ تشتمل تركيبة جسم مضاد معارض ضد 10-1 على عامل ثاني ينتقى من 1201010 ‎«cyclophosphamide (gemcitabine (palbociclib‏ ‎oxaliplatin «folinic acid (FOLFOX «fluorouracil 10‏ طنصناصق ‎«sunitinib malate‏ ‎rituximab bevacizumab <tofacitinib‏ و ‎traztuzumab‏ ‏في بعض التجسيدات؛ تتحد تركيبة الجسم المضاد ضد 10-1 مع نظام معالجة يشمل إضافيا علاج تقليدي ينتقى من المجموعة المتكونة من: ‎dala‏ علاج إشعاعي» علاج كيماوي؛ علاج مستهدف؛ علاج ‎(elie‏ علاج هرموني؛ تثبيط تكوين الأوعية الحديثة ورعاية مخففة. 5 استخدام أجسام مضاد 10-1 في أنظمة علاج مناعي يعتمد على لقاح للسرطان في بعض التجسيدات المحددة؛ يوفر الكشف الحالي طريقة لحث التولد المناعي أو التأثير العلاجي للقاح لمعالجة سرطان في كائن ثديي» تحديدا بشري»؛ تشتمل تلك الطريقة على إعطاء الكائن الثدي المتلقي للقاح كمية فعالة من جسم مضاد معارض ضد 00-1 متوافر بواسطة الكشف الحالي. في بعض التجسيدات المحددة الأخرى؛ يوفر الكشف الحالي طريقة لعلاج سرطان 0 في كائن ثديي»؛ تحديدا بشري»؛ تشتمل تلك الطريقة على إعطاء الكائن الثديي (1) كمية فعالة من لقاح قادرة على إحداث استجابة مناعية ضد خلايا السرطان و(2) كمية فعالة من جسم مضاد معارض ضد 00-1 متوافر بواسطة الكشف الحالي. تتم الإشارة إجمالا إلى طريقة علاج اضطراب ورمي في كائن ثديي وطريقة تعزيز التولد المناعي أو التأثير العلاجي للقاح لمعالجة اضطراب ورمي في ‎AIS‏ ثديي موصوفين هنا أعلاه على أنهما "أنظمة علاج مناعي تعتمد على
لقاح للسرطان ‎'(vaccine-based immunotherapy regimens for cancer)‏ (أو ‎VBIR'‏ ‏للسرطان"). ‏في ‎VBIR‏ للسرطان؛ قد يكون اللقاح في أي شكل أو صياغات؛ ‎Mie‏ )1( لقاحات تعتمد على خلية؛ (2) لقاحات وحدة فرعية؛ (3) لقاحات تعتمد على بروتين؛ (4) لقاحات تعتمد على ببتيد؛ أو (5) لقاحات تعتمد على حمض نووي (مثلا لقاحات تعتمد على ‎DNA‏ لقاحات تعتمد على ‎(RNA‏ لقاحات تعتمد على بلازميد؛ او لقاحات تعتمد على ناقل فيروسي). قد يكون ‎VBIR‏ للسرطان المتوافر بواسطة الكشف الحالي قابل للتطبيق على أي نوع من السرطانات. أمثلة على السرطانات الخاصة تتضمن: سرطان رئة خللية صغيرة؛ سرطان رئة لخلية غير صغيرة؛ ورم دبقي؛ سرطان معدي؛ سرطان معوي معدي؛ سرطان كلوي؛ سرطان بالمبيض؛ 0 سرطان بالكبد؛ سرطان القولون والمستقيم؛ سرطان بطاني رحمي؛ سرطان كلى؛ سرطان بروستاتة؛ سرطان الغدة الدرقية؛ ورم أرومي عصبي؛ سرطان بتكرياس» ورم دبقي متعدد الأشكال» سرطان عنق الرحم؛ سرطان المثانة؛ سرطان الثدي؛ وسرطان الرأس والرقبة. اللقاحات المعدة لعلاج السرطانات تحتوي نموذجيا على ‎alge‏ ضد (في شكل ببتيد؛ بروتين» مكون خلية؛ خلية ‎ALS‏ أو جزيء حمض نووي يشفر مولد ضد يعتمد على ببتيد) قادر 5 على إحداث استجابة مناعية ضد ‎TAA‏ محدد ظاهر على أو بواسطة ‎WA‏ الورم المستهدف. يعرف العديد من ‎TAAS‏ في الفن. إن أمثلة ‎TAAs‏ المعروفة تتضمن: ‎(PSCA (PSA‏ ‎PSMA‏ لسرطان البروستاتة؛ ‎(Ep—CAM (MUC-1 (CEA‏ أي محقم ‎«K-ras‏ ‎TERT 4‏ لسرطان القولون والمستقيم؛ ‎«Survivin «mesothelin p53 (Muc—1 (CEA‏ ‎NY-ESO-1‏ لسرطان ‎EGF-R (CEA (TERT (WT-1 514 (Muc-1 ¢ andl‏ ‎MAGE-A3 5 20‏ لسرطان رئة خلية غير صغيرة؛ 514 لكارسينوما خلية كلوية؛ 5 ‎«Muc—1‏ ‎CEA 5 (TERT Annexin A2 (K-Ras (mesothelin‏ لسرطان بنكرياس. في بعض التجسيدات المحددة؛ ينتقى اللقاح المستخدم في ‎VBIR‏ للسرطان المتوافر بواسطة الكشف الحالي من المجموعة المتكونة من:
— 6 9 — )1( لقاح قادر على إحداث استجابة ‎die lie‏ ضد ‎TAA‏ ينتقى من ‎(PSMA (PSCA (PSA‏ ‎(EGF-R mesothelin (TERT (MUC-1 CEA‏ أر ‎tMAGE-A3‏ ‏)2( لقاح يحتوي على مولد ضد ببتيد مشتق من ‎TAA‏ ينتقى من ‎(PSMA (PSCA (PSA‏ ‎(CEA‏ 1حعوناال ‎tMAGE-A3 4 (EGF-R «mesothelin (TERT‏ و (3) لفاح يحتوي على جزيء حمض نووي يشفر مولد ضد ببتيد؛ حيث يشتق مولد ضد الببتيد من ‎TAA‏ ينتقى من ‎(CEA (PSMA (PSCA (PSA‏ 1-وناال ‎«mesothelin (TERT‏ ‎.MAGE-A3 4 (EGF-R‏ في تجسيدات محددة أخرى أيضاء يحتوي اللقاح على جزيء حمض نووي يشفر واحد أو أكثر من عديد الببتيدات المولدة للمناعة المشتقة من ‎(PSA‏ واحد أو أكثر من عديد ببتيدات ‎alge‏ ‏0 للمناعة مشتقة من ‎(PSCA‏ أو واحد أو ‎JST‏ من عديد الببتيدات المولدة للمناعة المشتقة من ‎PSMA‏ ‏في تجسيد خاص 3 يتم انتقاء جزيء الحمض النووي من المجموعة المتكونة من : (1) جزيء حمض نووي يشفر عديد ببتيد مولد للمناعة يشتق من ‎PSMA‏ البشري من تعريف الترتيب رقم: 2 5 (2) جزيء حمض نووي يشفر عديد ببتيد مولد للمناعة يشمل الأحماض الأمينية 750-15 من تعريف الترتيب رقم: 42؛ )3( جزيء حمض نووي يشمل ترتيب النيكلوتيد من تعريف الترتيب رقم: 43؛ أو شكل متباين منحل من ذلك؛ )4( جزيء حمض نووي يشمل ترتيب النيكلوتيد من تعريف الترتيب رقم: 44؛ أو شكل متباين منحل من ذلك؛ (5) جزيء حمض نووي يشمل ترتيب النيكلوتيد من تعريف الترتيب رقم: 45؛ أو شكل متباين منحل من ذلك؛
— 7 9 — )6( جزيء حمض نووي يشمل ترتيب النيكلوتيد من تعريف الترتيب رقم: 46؛ أو شكل متباين منحل من ذلك؛ (7) جزيء حمض نووي يشفر عديد ببتيد مولد للمناعة يشتق من ‎PSA‏ البشري من تعريف الترتيب رقم: 47« (8) جزيء حمض نووي يشفر عديد ببتيد مولد للمناعة يشمل الأحماض الأمينية 261-25 من تعريف الترتيب رقم: 47؛ )9( جزيء حمض نووي يشفر عديد ببتيد مولد للمناعة يشتق من ‎PSCA‏ البشري من تعريف الترتيب رقم: 8؛ )10( جزيء حمض نووي يشفر (1) عديد ببتيد مولد للمناعة مشتق من ‎PSMA‏ بشري من 0 تعريف الترتيب رقم: 42 )2( عديد ببتيد مولد للمناعة يشتق من ‎PSA‏ البشري من تعريف الترتيب )108 47؛ و(3) عديد ببتيد مولد للمناعة يشتق من ‎PSCA‏ من تعريف الترتيب رقم: 48؛ و (11) جزيء حمض نووي يشفر (1) عديد ببتيد مولد للمناعة يشمل الأحماض الأمينية 750-15 من تعريف الترتيب رقم: 42؛ (2) عديد ببتيد مولد للمناعة يشمل الأحماض الأمينية 261-25 5 .من تعريف الترتيب رقم: 47؛ و(3) عديد ببتيد مولد للمناعة من تعريف الترتيب رقم: 48 قد تكون جزيئات الحمض النووي المشفرة لواحد أو أكثر من عديد الببتيدات المولدة للمناعة المشتقة من مولدات ضد مصاحبة للبروستاتة في شكل بلازميدات أو نواقل. مثال لهذا البلازميد هو بناء الحمض النووي من تعريف الترتيب رقم: 46 (المشار إليه كبلازميد 458). يتم ذكر ترتيب النيكلوتيد لناقل يظهر عديد ببتيد مولد للمناعة مشتق من ‎PSMA‏ بشري في تعريف الترتيب 0 رقم: 44 (المشار إليه كناقل ‎L(ADCOBW‏ يتم ذكر ترتيب النيكلوتيد لناقل يظهر عديد ببتيد مولد للمناعة يشتق من ‎PSMA‏ بشري؛ عديد ببتيد ‎alge‏ للمناعة يشتق من ‎PSA‏ بشري؛ وعديد ببتيد مولد للمناعة يشتق من ‎PSCA‏ بشري في تعريف الترتيب رقم: 45 وناقل ‎PSMA‏ بشري (ناقل ‎L(ADCO8W-734‏ يتم الكشف عن عديد ببتيدات مولدة للمناعة متنوعة مشتقة من ‎(PSMA‏ ‎gin PSCA 5 (PSA‏ بناءات حمض نووي (تتضمن بلازميدات ونواقل) تشفر عديد الببتيدات
المولدة للمناعة هذه؛ وطرق لتحضير عديد الببتيدات المولدة للمناعة وبناءات الحمض النووي؛ ‎Le‏ ‏في ذلك بلازميد 458؛ وناقل ‎AACOBW‏ و734-//800681؛ في منشورات الطلبات الدولية رقم: 2013/164754 و2015/063647؛ كل منهما يندمج هنا كمرجع بالكامل. في أحد الجوانب؛ يوفر الاختراع جسم مضاد معارض معزول يرتبط بصفة خاصة مع 00-1؛ حيث يشتمل الجسم المضاد على منطقة متغيرة لسلسلة ثقيلة ‎(VH)‏ تشمل منطقة تحديد تكميلية ‎VH‏ واحدة ‎VH CDR3 5 «VH 6052 (CDR)‏ لأجل ‎VH‏ لها ترتيب حمض أميني ينتقى من المجموعة المتكونة من تعريف الترتيب رقم: 3؛ تعريف الترتيب رقم: 4؛ تعريف الترتيب رقم: 5؛ وتعريف الترتيب رقم: 6؛ ومنطقة متغيرة لسلسلة خفيفة ‎VL VL CDR1 Jedi (VL)‏ ‎VL CDR3 5 <CDR2‏ من ‎VL‏ لها ترتيب حمض أميني ينتقى من المجموعة المتكونة من تعريف 0 الترتيب رقم: 2؛ تعريف الترتيب رقم: 7؛ تعريف الترتيب رقم: 8؛ وتعريف الترتيب رقم: 9. قد تستخدم أجسام مضادة معارضة ضد 00-1 في الكشف الحالي في ‎VBIR‏ للسرطان. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 على منطقة ‎VH‏ و/أو منطقة ‎VL‏ حيث تشتمل المنطقة ‎VH‏ على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريفات الترتيب أرقام: 3 أو 6؛ أو شكل متباين مع واحد أو أكثر من استبدالات الحمض الأميني التحفظية في 5 متخلفات ليست ضمن ‎«CDR‏ وحيث تشتمل المنطقة ‎VL‏ على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 2( 7 8؛ أو 9؛ أو شكل متباين مع واحد أو أكثر من استبدالات الحمض الأميني في الأحماض الأمينية ليست ضمن ‎.ODR‏ في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على سلسلة خفيفة تشمل الترتيب الموضح في تعريف الترتيب رقم: 39 و/أو سلسلة ثقيلة تشمل الترتيب الموضح في تعريف الترتيب رقم: 29 أو 38. في بعض التجسيدات المحددة؛ 0 يشتمل الجسم المضاد على منطقة ‎VH‏ ناتجة بواسطة ناقل الإظهار مع ‎ATCC Accession‏ ‎.No. 018-53‏ في بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد على منطقة ‎VL‏ ناتجة بواسطة ناقل الإظهار مع ‎ATCC Accession No.
PTA-121182‏ قد يشتمل ‎VBIR‏ للسرطان المتوافر بواسطة الكشف الحالي على واحدة أو أكثر من المواد المعدلة للمناعة الأخرى (بالإضافة إلى الجسم المضاد المعارض 00-1 المتوافر بواسطة الكشف 5 الحالي). قد تكون المواد المعدلة للمناعة الأخرى ‎Ble‏ عن محث خلية مستجيب للمناعة ‎Gad)‏
ISC ‏أو متبط‎ IEC ‏قد يتم استخدام المحث‎ ("ISC Laid) ‏أو مثبط خلية كابح للمناعة‎ ("IEC ‏الإضافي‎ IEC ‏للسرطان. قد يتم أيضا استخدام المحث‎ VBIR ‏الإضافي بمفرده أو في اتحاد مع‎ ‏للسرطان.‎ VBIR ‏ومثبط 150 الإضافي معا في اتحاد مع‎ ‏تتضمن مثبطات كيناز بروتين» متبطات‎ SIC ‏الأمثلة على فئات مثبطات‎ «(PDES) 5 ‏من النوع‎ phosphodiesterase ‏متبطات‎ ((COX-2) cyclooxygenase-2 5 rofecoxib ‏و‎ celecoxib ‏تتضمن‎ COX-2 ‏الأمثلة على متبطات‎ DNA ‏والوصلات المتقاطعة‎ «sildenafil <mirodenafil dodenafil cavanafil ‏تتضمن‎ PDES ‏الأمثلة على متبطات‎ ‏هو‎ DNA ‏مثال على الوصلات المتقاطعة‎ .zaprinast 4 cudenafil «vardenafil tadalafil "(protein kinase inhibitor) ‏يشير المصطلح 'مثبط كيناز بروتين‎ cyclophosphamide ‏إلى أي مادة تعمل كمثبط انتقائي أو غير انتقائي لكيناز البروتين. أمثلة على مثبطات كيناز‎ 0 «AZD 2171 <Lapatinib ‏للسرطان تتضمن‎ VBIR ‏البروتين الخاصة المناسبة للاستخدام في‎ «Quercetin (PD 169316 (NSC-154020 «Indirubin—-3'-oxime (ET180CH 3
Aloisine (Adaphostin (5-lodotubercidin ‏ناا‎ 1839 (Triciribine (Roscovitine
ARRY- (Arctigenin (Apigenin (API-2 (Aminogenistein (Alsterpaullone
AZD 2171 AY-22989 Axitinib (AG-013736) «334543 5 «Edelfosine (DRB (DMPQ (Chelerythrine (CCI-779 (Bisindolylmaleimide IX
H- )201839( Gefitinib Fasudil «Erlotinib Erbstatin ‏ممائل‎ (ENMD-981693 «Hydroxyfasudil ¢(HA-1100 HA-1077 (HA-1004 (HA-100 «H-89 H-8 (7
LY- «LY294002 (Luteolin (LFM-A13 (KY12420 (KN-62 <Kenpaullone «(NSC-231634 (NSC-226080 «MLN608 (ML-9 (Mallotoxin 294002 0
PD (Oxindole ١ <Olomoucine (NU6102 (NSC-680410 (NSC-664704 «PP1 (PKI (Picropodophyllin (Piceatannol «Phloridzin PD 98059 «153035 «Purvalanol A (PTK787/ZK-222584 PTK787/ZK222584 PP2 «SB203580 «SB202190 «Raottlerin ‏مكل‎ 31-8220 «(Rapamycin (Rapamune «SU1498 «STI-571 «Staurosporine SP600125 «SL327 (Sirolimus 5
‎(Semaxanib) «SU5416 «SU4312‏ 5416لا 6656لا 6668لا5؛ متبط ‎«SYK‏ ‎«Tyrphostin AG 825 (Tyrphostin AG 490 (Tyrphostin AG 1024 (TCN (TBB‏ ‎ZM 280003 (Y-27632 (Wortmannin (W-7 UQ126 (Tyrphostin AG 957‏ ‎«sunitinib malate (SUTENT; SU11248) «gefitinib (Iressa.RTM.) 252868‏ ‎dapatinib (GW572016; GW2016) erlotinib (TARCEVA; OSI-1774) 5‏ ‎vatalanib «semaxinib (SU5416) «canertinib (Cl 1033)‏ ‎imatinib ¢sorafenib (BAY 43-9006) «(PTK787/ZK222584)‏ ‎deflunomide (SU101) «dasatinib (BMS-354825) «(Gleevec.RTM.; 511571(‏ ‎.nilotinib 4 <vandetanib (ZACTIMA; ZD6474)‏ 10 في بعض التجسيدات؛ تكون مثبط كيناز التيروسين هو ‎sunitinib malate‏ ‎«Sorafenib tosylate‏ أى ‎.Axitinib‏ إن ‎<Sunitinib malate‏ المسوق بواسطة ‎Pfizer Inc.‏ تحت الاسم التجاري ‎SUTENT‏ يتم وصفه كيميائيا على أنه ‎hydroxy- «butanedioic acid‏ ‎¢(2S)- «‏ مركب مع ‎N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(Z)—-(5-fluoro—-1,2-dihydro—‏ ‎2-oxo-3H-indol-3-ylidine)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-‏ ‎carboxamide 5‏ )1:1( يتم وصف المركب؛ تخليقه؛ ومتعددات أشكاله المحددة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 6573293. تم إقرار ‎Sunitinib malate‏ في الولايات المتحدة الأمريكية لمعالجة ورم سدوي معوي معدي» كارسينوما خلية كلوية متقدمة؛ وأورام الجهاز العصبي الهرموني للبنكرياس متقدمة ومتمايزة جيدا في مرضى لديهم مرض منتشر أو متقدم موضعيا غير قابل للاستئصال. الجرعة المقترحة من ‎malate‏ 50011015 لمعالجة ورم سدوي معدي معوي ‎(GIST)‏ ‏0 وكارسينوما خلية كلوية متقدمة ‎(RCC)‏ للبشريين هي 50 مجم تؤخذ فمويا مرة واحدة يوميا؛ في جدول علاجي مدته 4 أسابيع من المعالجة يليه أسبوعين بدون علاج (جدول علاجي 2/4). تكون الجرعة الموصى بها من ‎sunitinib malate‏ لمعالجة أورام الجهاز العصبي الهرموني للبنكرياس هي 37.5 مجم تؤخذ فمويا مرة واحدة يوميا. في ‎VIBR‏ للسرطان» قد يعطى ‎sunitinib malate‏ فمويا في جرعة فردية أو جرعات متعددة. نموذجيا؛ يتم توصيل ‎sunitinib malate‏ في جرعات متعاقبة أسبوعية لمدة أسبوعين» ثلاثة أسابيع؛ وأربعة أسابيع أو أكثر تليها فترة 'بدون علاج ‎(off)‏
تصل إلى ‎Joa‏ أسبوع أو أسبوعين؛ أو أكثر حيث لا يتم توصيل ‎.sunitinib malate‏ في أحد التجسيدات؛ يتم توصيل الجرعات لمدة حوالي 4 أسابيع؛ مع فترة بدون علاج لأسبوعين. تكون الكمية المؤثرة من ‎malate‏ 5001000 المعطاة فموبا إلى بشري نموذجيا أقل من 40 مجم لكل شخص يومياء على سبيل المثال» 37.5( 31.25؛ 25 ¢18.75 12.5 أو 6.25 مجم لكل شخص يوميا. في بعض التجسيدات»؛ يعطى فمويا ‎malate‏ 50010010 في نطاق من 1 مجم -25 مجم لكل شخص يوميا. في بعض من التجسيدات الأخرى؛ يعطى فمويا ‎sunitinib malate‏ في نطاق من 6.25 ¢12.5 أو 18.75 مجم لكل شخص/ الجرعة. هناك أنظمة تجريع وتغيرات أخرى متوقعة؛ وسوف تتحدد من خلال إرشادات الطبيب المعالج. يكون لأجل ‎«Sorafenib tosylate‏ المتاح تجاريا تحت المسمى التجاري ‎(NEXAVAR‏ ‏0 الاسم الكيميائي ‎4-(4-{3-[4-Chloro-3~(trifluoromethyl)‏ ‎.phenyl]ureido}phenoxy)-N-methylpyrid-ine—-2-carboxamide‏ لقد تم قبوله في الولايات المتحدة الأمريكية لمعالجة سرطان الكلية الأولي (كارسينوما خلية كلوية متقدمة) وسرطان كبد أولي متقدم (كارسينوما خلايا الكبد). تكون الجرعة اليومية الموصى بها هي 400 مجم تؤخذ فمويا مرتين يوميا. في ‎VBIR‏ للسرطان المتوافر بواسطة الكشف الحالي» تكون نموذجيا الكمية 5 المؤثرة من ‎tosylate‏ 501818010 المعطاة فمويا أقل من 400 مجم لكل شخص يوميا. في بعض التجسيدات»؛ تكون الكمية المؤثرة من ‎sorafenib tosylate‏ المعطاة فمويا في نطاق من 10- 0 مجم لكل شخص يوميا. في بعض من التجسيدات الأخرى؛ تتراوح الكمية المؤثرة من ‎sorafenib tosylate‏ المعطاة فمويا بين 200-10 مجم لكل شخص يومياء مثلا 10« 20؛ 60« 80؛ 100 120 140 160 180؛ أو 200 مجم لكل شخص يوميا. يكون لأجل 88010 المتاح تجاريا تحت المسمى التجاري ‎INLYTA‏ الاسم الكيميائي ‎(N-Methyl-2—[3—((E)-2-pyridin—2-yl-vinyl)-1H-indazol-6-ylsulfanyl]-‏ ‎.benzamide‏ 231 تم قبوله لمعالجة كارسينوما خلية كلوية متقدمة بعد فشل علاج جهازي سابق واحد. تكون الجرعة البادئة هي 5 مجم فمويا مرتين يوميا. يمكن عمل تعديلات للجرعة اعتمادا على أمان الفرد وقابليته للتحمل. في ‎VBIR‏ للسرطان الذي يوفره الكشف الحالي؛ تكون نموذجيا 5 الكمية المؤثرة من ‎axitinib‏ المعطاة فمويا أقل من 5 مجم مرتين يوميا. في بعض من التجسيدات
الأخرى» تتراوح الكمية المؤثرة من 8708010 المعطاة معويا بين 5-1 مجم مرتين يوميا. في بعض التجسيدات الأخرى؛ تتراوح الكمية المؤثرة من ‎AXitinib‏ المعطاة فمويا بين 1؛ 2؛ 3؛ 4 أو 5 مجم مرتين يوميا. تشتمل أمثلة لمحثات ‎[EC‏ التي قد يتم استخدامها في ‎VBIR‏ للسرطان المتوافرة بواسطة الكشف الحالي على معضدات ‎(TNFR‏ معارضات 011-4؛ معضدات ‎(TLR‏ معارضات 00-1 أخرى (مثلا ‎CT-011 5 BMS-936558‏ جسم مضاد ضد 00-1)؛ ومعارضات مركب ترابطي 1 لبروتين 1 للموت المبرمج للخلية ‎(PD-L1)‏ (مثلا 81/5-936559)؛ معارضات جين 3 لتنشيط خلية ليمفاوية ‎(LAGS)‏ ومعارضات جزيء 3 محتوي على مجال 0 وجلوبيولين مناعي لخلية ‎(TIM=3) T‏ أمثلة على معضدات ‎TNFR‏ تتضمن معضدات ‎GITR (BMS-663513 Mis) 4-188 «OX40 0‏ (مثلا ‎((TRX518‏ و06040. توصف هنا أدناه بالتفصيل أمثلة لمعضدات 0040 خاصة. في تجسيدات أخرى معينة؛ تكون المادة المعدلة للمناعة الإضافية هي جسم مضاد معضد ضد 0040. قد يكون الجسم المضاد عبارة عن جسم مضاد بشري؛ مكتسب السمة البشربة أو خميري بشري جزئيا ضد 0040. أمثلة للأجسام المضادة أحادية النسخ ضد 0040 الخاصة 5 تتضمن جسم مضاد أحادي النسغ ‎(G28-5‏ 89طم ‎EA-5‏ أو 52©66,؛ 5 ‎.CP870893‏ ‏في تجسيد خاص؛ يكون الجسم المضاد المعضد ضد 0040 عبارة عن 00870893 أو ‎.dacetuzumab (SGN-40)‏ إن ‎CP-870,893‏ عبارة عن جسم مضاد أحادي النسخ ‎CD40‏ معضد بشري بالكامل الذي قد تم التحري عنه إكلينيكيا كعلاج مضاد للورم. يتم الكشف عن بناء وتحضير ‎CP870,893 0‏ في الطلب الدولي رقم: 2003041070, فيه يعرف الجسم المضاد 3 كجسم مضاد ”21.4.1". تذكر ترتيبات الحمض الأميني للسلسلة الثقيلة والسلسلة الخفيفة من ‎CP=870,893‏ في تعريف الترتيب رقم: 46 وتعريف الترتيب رقم: 48؛ على التوالي؛ وكذلك في جدول 7 في الطلب الدولي رقم: 2003040170. في التجارب الإكلينيكية؛ يعطى 00870,893 بالتشريب في الوريد بجرعات متراوحة عموما من 0.25-0.05 مجم/ كجم 5 لكل تشريب. في ‎VBIR‏ للسرطان الذي يوفره الكشف الحالي؛ يمكن إعطاء 00-870,893 في
الأدمة؛ تحت ‎calall‏ أو موضعيا. تكون عموما الكمية المؤثرة من 00870893 المراد إعطاؤها في النظام ‎dale‏ أقل من 0.2 مجم/ كجم؛ نموذجيا تتراوح من 0.01 مجم-0.15 مجم/ كجم؛ أو 0.1-5 مجم/ كجم. ‎Dacetuzumab‏ (المعروف أيضا بالمركب 560-40 أو 05206؛ ‎CAS‏ رقم -88 486-59-9) هو جسم مضاد معضد ضد ‎CD40‏ آخر قد تم التحري عنه في التجارب الإكلينيكية للأورام الليمفاوية بطيئة الشفاء» الأورام الليمفاوية لخلية 8 كبيرة منتشرة وأورام قيتامينية متعددة. في ‎VBIR‏ للسرطان المتوافر بواسطة الكشف الحالي؛ قد يتم إعطاء ‎dacetuzumab‏ في الأدمة؛ تحت الجلد؛ أو موضعيا. تكون عموما الكمية المؤثرة من ‎dacetuzumab‏ المراد إعطائها أقل من 16 مجم/ كجم؛ نموذجيا في نطاق من 0.2 مجم-14 مجم/ ‎(aa‏ أو 8-0.5 مجم/ 0 كجم؛ أو 5-1 مجم/ كجم. في تجسيدات أخرى ‎(lad‏ تكون ‎sald)‏ المعدلة للمناعة الإضافية هي معارض ضد ‎.CTLA-4‏ ‏أمثلة على معارض ضد 0110-4 مناسب تتضمن أجسام مضادة ضد 0118-4 (مثلا أجسام مضادة ضد 6118-4 بشرية؛ أجسام مضادة ضد 6118-4 فأرية؛ أجسام مضادة ضد ‎dni CTLA-4 5‏ أجسام مضادة ضد 6110-4 مكتسبة السمة البشرية؛ أجسام مضادة ضد 0118-4 أحادية النسخ؛ أجسام مضادة ضد 6118-4 عديدة النسخ؛ أجسام مضادة ضد 0118-4 خيمرية؛ أجسام مضادة لمجال ضد 011-4)؛ ومثبطات ‎CTLA-4‏ تعضد المسار المستثير المشترك. في بعض التجسيدات؛ يكون متبط ‎CTLA=4‏ عبارة عن ‎Ipilimumab‏ أو ‎.Tremelimumab‏ ‎Ipilimumab 20‏ (المسوق أيضا على أنه ‎¢YERVOY‏ المعروف أيضا كأنه ‎MEX-010‏ ‏أو 002-101 أو بواسطة 477202-00-9 ‎CAS Registry No.‏ الخاص به) يتم الكشف ‎aie‏ كجسم مضاد 10001 في منشور ‎PCT‏ الدولي رقم 01/14424؛ المندمج هنا كمرجع بأكمله ولكل الأغراض. تتوافر أمثلة لتركيبة دوائية مشتملة على ‎Ipilimumab‏ في منشور الطلب الدولي ‎PCT‏ رقم: 2007/67959. تمت الموافقة على ‎Ipilimumab‏ في الولايات المتحدة الأمريكية
لمعالجة ورم قيتاميني غير قابل للاستئصال أو منتشر. في الطرق التي يوفرها الاختراع الحالي؛ يعطى ‎Ipilimumab‏ داخل الجلد أو تحت الجلد. تتراوح نموذجيا الكمية المؤثرة من ‎Ipilimumab‏ ‏المراد إعطائه مكانيا من 200-5 مجم/ جرعة لكل شخص. في بعض التجسيدات؛ تتراوح الكمية المؤثرة من ‎Ipilimumab‏ من 150-10 مجم/ الجرعة لكل شخص في كل جرعة. في بعض التجسيدات المحددة؛ تكون الكمية المؤثرة من ‎Ipilimumab‏ حوالي 10؛ 25؛ 75؛ 100 125؛ 150< 175< أو 200 مجم/ الجرعة لكل شخص. يكون ‎Tremelimumab‏ (المعروف أيضا كأنه 00-675,206) عبارة عن جسم مضاد أحادي النسخ ‎I9G2‏ آدمي كامل وله رقم 745013-59-6 ‎number‏ 0/5. يتم الكشف عن ‎Tremelimumab‏ كجسم مضاد 11.2.1 في براءة الاختراع الأمريكية 6682736؛ المندمجة 0 هنا كمرجع بالكامل ولجميع الأغراض. في ‎VBIR‏ للسرطان المتوافر بواسطة الاختراع الحالي؛ قد يتم إعطاء ‎Tremelimumab‏ في الوريد؛ داخل الأدمة؛ أو تحت الجلد. تتراوح نموذجيا الكمية المؤثرة من ‎Tremelimumab‏ في الأدمة أو تحت الجلد من 200-5 مجم/ الجرعة لكل شخص. في بعض التجسيدات؛ تتراوح الكمية المؤثرة من ‎Tremelimumab‏ من 150-10 مجم/ الجرعة لكل شخص في كل جرعة. في بعض من التجسيدات المحددة؛ تكون الكمية المؤثرة من ‎Tremelimumab 5‏ حوالي 0 25« 50< 715 100 125 150 175 أو 200 مجم/ جرعة لكل شخص. في تجسيدات أخرى ‎clad‏ تكون المادة المعدلة للمناعة الإضافية هي مستقبل يشبه ‎Toll‏ ‎(TLR)‏ يشير مصطلح ‎sand’‏ مستقبل شبيه ‎toll‏ أو '"معضد ‎TLR‏ مركب يعمل كمعضد لمستقبل ‎(TLR) Toll and‏ يشتمل هذا على معضدات 141 ‎«TLR4 (TLR3 (TLR2‏ ‎(TLR6 (TLR5 0‏ بعال فعا فعا1ء 11410 و1111 أو اتحاد من ذلك. إن معضدات ‎TLR‏ النافعة في الطريقة من الاختراع الحالي تتضمن كل من الجزيئات العضوية الصغيرة والجزيئات ‎dig)‏ الكبيرة. أمثلة على معضدات ‎TLR‏ صغيرة الجزيء تتضمن 328 --80100-ك4 ‎«alpha,2- trimethyl-IH-imidazo[4,5—-c]qumolin—I-ethanol‏ ‎N-(2-{2-[4—-amino-2-(2-methoxyethyl)-IH-imidazo[4,5-c]quinolin—I-‏ ‎I~(2~amino-2- yllethoxy—}ethyl)-N-methylmorpholine-4-carboxamide 5‏
‎(-١ 1-1 10820]4,5-0[01100110-4-2068‏ - الاط1 100/0028 ع)-2 - (الامردم الاطاعد ‎N-‏ ‎[4-(4—-amino-2-ethyl-IH-imidazo[4,5- c]quinolin—I-yl)b-‏ ‎N-[4—-(4—amino-2-propyl-IH-imidazo[4,5- .utylJmethanesulfonamide‏ ‎.imiquimod 4 cc]quinolin-I-yl)butyljme- thanesulfonamide‏ بعض معضدات ‎TLR‏ ‏5 النافعة تحديدا في الطرق أو النظام المتوافر بواسطة الكشف الحالي في المقالة: ‎Folkert Steinhagen, et al.: TLR-based immune adjuvants.
Vaccine 9‏ .3341-3355 :)2011( فى بعض التجسيدات؛ تكون معارضات ‎TLR‏ هى معارضات 1149 ؛ تحديدا ‎CpG oligonucleotides‏ (أو ‎.(CpG.ODN‏ إن ‎CpG oligonucleotide‏ هو جزيء حمض 0 نووي قصير محتوي على ‎cytosine‏ يليه ‎guanine‏ متصل بواسطة رابطة فوسفات فيها تكون حلقة ‎pyrimidine‏ من ‎cytosine‏ غير 016117/18160. إن أمثلة ‎CpG oligonucleotides‏ المحددة المفيدة فى الطرق التى يوفرها الكشف الحالى تتضمن: ‎«CpG 7909) 5' 1061061111610611116106113'‏ تعريف الترتيب رقم: 49)؛ '1061061111106616011113 5 )24555 ©م0)؛ تعريف الترتيب رقم: 50)؛ و ‎«CpG 10103( 5 TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT3' 5‏ تعريف الترتيب رقم: 51). ‎al‏ جرىي عمل تحريات مكثفة على ‎«CpGT7909‏ فردي الجديلة من 24 وحدة مخلقة؛ لمعالجة السرطان كعلاج أحادي وفي اتحاد مع عوامل علاجية كيماوية؛ وكذلك مادة مساعدة للقاحات ضد السرطان وأمراض مُعدية. في الطرق التي يوفرها الكشف الحالي؛ قد يعطى 0067909 بالحقن في العضل أو بأي طرق مناسبة أخرى. للاستخدام مع لقاح معتمد على حمض نووي؛ ‎Jie‏ لقاح ‎(DNA 20‏ قد يصاغ ‎CpG‏ بصورة مشتركة مع اللقفاح فى صياغة فردية ويعطى بالحقن فى العضل مقترنا مع التثقيب الكهربي. تتراوح نموذجيا الكمية الفعالة من 0067909 بالإعطاء فى العضل»؛ في الأدمة؛ أو تحت الجلد من 10 ميكروجرام/ الجرعة- 10 مجم/ الجرعة. في بعض التجسيدات؛ تتراوح الكمية الفعالة من 0067909 من 0.05 مجم-14 مجم/ الجرعة. في بعض التجسيدات المحددة؛ تكون الكمية الفعالة من 00657909 هي حوالي 0.05« 0.1 0.2 0.3 ¢0.4 0.5
‎[ans 1‏ الجرعة. قد تعطى ‎CpG oligonucleotides‏ الأخرى؛ متضمنة 24555 ‎CpG‏ ‏و10103 ‎«CpG‏ بطريقة مشابهة ومستويات جرعة مشابهة. في ‎VBIR‏ للسرطان؛ قد يتم إعطاء المعارض ضد ‎(PD=1‏ اللقاح؛ والمواد المعدلة للمناعة الإضافية سواء في وقت واحد أو بالتعاقب. في بعض التجسيدات؛ يعطى لقاح على التوالي بالنسبة إلى الجسم المضاد المعاريض ضد ‎PDT‏ لكن في نفس الوقت ‎lie)‏ في خليط) بالنسبة
لواحدة أو أكثر من المواد المعدلة للمناعة. في الحالات التي يتم فيها إعطاء لقاح حمض نووي في اتحاد مع ‎(CPG‏ قد يتم احتواء اللقاح ‎CpG‏ في صياغة فردية ‎aig‏ إعطائهما معا بواسطة أية طريقة مناسبة. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء لقاح الحمض النووي و0065 في صياغة مشتركة (خليط) بالحقن داخل العضل في اتحاد مع التثقيب الكهربي.
0 الصياغات
يتم تحضير الصياغات العلاجية للجسم المضاد المعارض ضد 50-1 المستخدم طبقا
للاختراع الحالي للتخزين بواسطة خلط جسم مضاد له الدرجة المطلوية من النقاء مع مواد حاملة؛ مواد مسوغة»؛ أو مواد مثبتة اختيارية مقبولة دوائيا: ‎(Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.
Mack‏
‎Publishing, 2000), 15‏ في شكل صياغات مجفدة أو محاليل مائية. المواد الحاملة؛ المواد المسوغة؛ أو ‎algal‏ المثبتة المقبولة تكون غير سامة لمتعاطيها عند الجرعات والتركيزات المستعملة؛ وقد تشمل مثبتات أس هيدروجيني مثل ‎citrate cling‏ وأحماض عضوية أخرى؛ أملاح مثل كلوريد الصوديوم؛ مضادات أكسدة تتضمن ‎ascorbic acid‏ و 1610100106؛ مواد حافظة (مثل
‎thexamethonium chloride ¢octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride 20 benzyl 4 butyl (phenol ¢benzethonium chloride benzalkonium chloride sresorcinol ¢catechol «propyl paraben 4 methyl ‏مثل‎ alkyl parabens ¢alcohol ‏(أقل‎ all ‏ا3-0601800؛ وا01-0650)؛ عديد ببتيدات منخفضة الوزن‎ ¢cyclohexanol ‏مصل؛ جيلاتين؛ أو جلوبيولينات مناعية؛ بوليمرات‎ JY) Jie ‏من حوالي 10 متخلفات)؛ بروتينات؛‎
محبة للماء ‎¢polyvinylpyrrolidone (ie‏ أحماض أمينية ‎«glutamine (glycine Ji‏ ‎«arginine histidine asparagine‏ أى ‎«disaccharides «monosaccharides ¢lysine‏ ‎carbohydrates‏ أخرى تتضمن جلوكوز» ‎cmannose‏ أو ‎¢dextrans‏ عوامل كلابية ‎Jie‏ ‎(EDTA‏ سكريات مثل ‎trehalose (mannitol «sucrose‏ أو ‎¢sorbitol‏ أيونات معاكسة تشكل ملح مثل الصوديوم؛ معقدات فلز (مثلاء معقدات بروتين ‎(ZN‏ و/أو منشطات سطح غير أيونية متل ‎PLURONICS™ TWEEN™‏ أو ‎.(PEG) polyethylene glycol‏ تُحضر جسيمات ليبيد تحتوي على الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 بواسطة طرق معروفة في الفن؛ كما هو موصوف في ‎Eppstein, et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 82:3688-3692 (1985);‏ ‎Hwang, et al., Proc.
Natl Acad.
Sci.
USA 77:4030-4034 (1980); 10‏ وبراءات الاختراع الأمريكية أرقام: 4485045 5 14544545 يتم الكشف عن جسيمات ليبيد ذات زمن دوران مُحسن في براءة الاختراع الأمريكية رقم: 5013556. تحديدا يمكن توليد جسيمات ليبيد مفيدة بواسطة طريقة تبخير الطور المعكوس مع تركيبة ليبيد تشمل ‎«phosphatidylcholine‏ ‏كوليسترول ‎phosphatidylethanolamine g‏ مشتق من ‎(PEG-derivatized PEG‏ ‎.(PEG-PE) phosphatidylethanolamine) 5‏ 3018 جسيمات ليبيد خلال مرشحات لها مقاس مسام محدد لإنتاج جسيمات ليبيد لها القطر المرغوب. قد تحتجز المقومات النشطة أيضا في كبسولات مجهرية محضرة؛ على سبيل المثال؛ بواسطة تقنيات تقوصر أو بلمرة سطح بيني؛ على سبيل المثال» ‎hydroxymethylcellulose‏ أو كبسولات مجهرية جيلاتينية وكبسولات مجهرية ‎«poly—(methylmethacrylate)‏ على التوالي؛ 0 في أنظمة توصيل عقار غروانية ‎(Jia)‏ جسيمات ‎cad‏ كريات ‎JY)‏ مجهرية؛ مستحلبات ‎cid‏ جسيمات نانو وكبسولات نانو) أو في مستحلبات كبيرة. يُكشف عن هذه التقنيات في ‎Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20st Ed.
Mack‏ ‎.Publishing (2000)‏
يمكن تحضير مستحضرات مستمرة الإطلاق. تتضمن أمثلة مناسبة للمستحضرات مستمرة الإطلاق قوالب شبه منفذة لبوليمرات صلبة كارهة للماء تحتوي على الجسم المضاد؛ تكون هذه القوالب في شكل مواد مجسمة؛ مثلاء أغشية؛ أو كبسولات مجهرية. تتضمن أمثلة على القوالب مستمرة الإطلاق ‎polyesters‏ هلامات مائية ‎Ae)‏ سبيل المثال؛ ‎poly(2-hydroxyethyl-‏ ‎«methacrylate) 5‏ أو ‎polylactides «(poly(vinylalcohol)‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم: 3773919(« بوليمرات تساهمية ‎ethyl-L-glutamate 5 L—glutamic acid Ja¥‏ 7 ‎ethylene-vinyl acetate‏ غير قابل للانحلال؛ بوليمرات تساهمية لأجل ‎lactic acid—‏ ‎glycolic acid‏ قابل للانحلال مثل ‎LUPRON DEPOT TM‏ (كريات مجهرية قابلة للحقن متكونة من بوليمر تساهمي ‎«(leuprolide 38061816 lactic acid—glycolic acid‏ ‎acetate isobutyrate 0‏ عكواوناى 5 ‎.poly-D—(-)-3-hydroxybutyric acid‏ يجب أن تكون الصياغات المراد استخدامها للإعطاء في الجسم الحي معقمة. يتحقق هذا بسهولة عن طريق؛ على سبيل ‎(JE‏ الترشيح خلال أغشية ترشيح معقمة. توضع التركيبات العلاجية للجسم المضاد المعارض ضد 00-1 بشكل عام في حاوية لها منفذ وصول معقم؛ على سبيل المثال» كيس محلول وربدي أو قارورة لها سدادة قابلة ‎ll‏ بواسطة إبرة معدة للحقن تحت الجلد. قد تتواجد التركيبات طبقا للاختراع الحالي في أشكال جرعة وحدة مثل أقراص»؛ حبوب؛ كبسولات؛ مساحيق؛ حبيبات؛ محاليل أو معلقات؛ أو تحاميل؛ من أجل الإعطاء الفموي؛ عن غير الطريق المعوي أو الشرجي؛ أو الإعطاء بالاستنشاق أو النفخ. من أجل تحضير تركيبات صلبة مثل ‎cal BY)‏ يُخلط المقوم النشط الأساسي مع مادة 0 حاملة دوائية؛ متل؛ مقومات صنع أقراص تقليدية ‎Jie‏ نشا الذرقء ‎sucrose dactose‏ ‎dicalcium phosphate (magnesium stearate (stearic acid «talc «sorbitol‏ أو أصماخ؛ ومواد تخفيف دوائية أخرى» ‎colo cia‏ لتشكيل تركيبة صياغة مسبقة صلبة تحتوي على خليط متجانس من مركب الاختراع الحالي؛ أو ملح مقبول دوائيا غير سام منه. عند الإشارة إلى تركيبات الصياغة المسبقة هذه على أنها متجانسة؛ يُقصد بهذا أن المقوم النشط يُشتت بانتظام في 5 التركيبة بحيث يكون من السهل تقسيم التركيبة فرعيا إلى أشكال جرعة وحدة فعالة بصورة متساوية
مثل أقراص؛ حبوب وكبسولات. ثقسم فرعيا تركيبة الصياغة المسبقة الصلبة بعد ذلك إلى أشكال جرعة وحدة من النوع الموصوف أعلاه تحتوي من 0.1 إلى 500 مجم تقريبا من المقوم النشط من الاختراع الحالي. يمكن تغليف أقراص أو حبوب التركيبة الجديدة أو تركيبها بطريقة أخرى لتوفير شكل جرعة يمنح ميزة التأثير الممتد. على سبيل ‎Jal)‏ يمكن أن يتضمن القرص أو الحبة مكون جرعة داخلي ومكون جرعة خارجي؛ يكون الأخير في شكل مغلف أكثر من الأول. يمكن فصل المكونين بواسطة طبقة معوية تعمل على مقاومة التفتيت في المعدة وتسمح بمرور المكون الداخلي بشكل سليم في الإثنا عشر أو تؤخر إطلاقه. يمكن استخدام تشكيلة من المواد من أجل الطبقات المعوية أو مواد التغليف المعوية؛ تتضمن هذه المواد عدد من الأحماض البوليمرية وخلطات من الأحماض البوليمرية مع هذه المواد مثل ‎cetyl alcohol (shellac‏ و ‎.cellulose acetate‏
تتضمن عوامل نشطة السطح مناسبة؛ بالتحديد» عوامل غير أيونية؛ مثل ‎polyoxyethylenesorbitans‏ (مثلاء ‎TweenTM‏ 20 40 60« 80 أو 85( 5 ‎sorbitans‏ ‏أخرى (مثلاء ‎SpanTM‏ 20 40 60« 80 أو 85). سوف تتضمن تركيبات لها عامل نشط لسطح بطريقة ملائمة بين 0.05 و75 عامل نشط السطح؛ ويمكن أن يكون بين 0.1 و72.5. سيتم إدراك إمكانية إضافة مقومات أخرى» على سبيل المثال ‎mannitol‏ أو أوساط ناقلة مقبولة
5 دوائيا ‎(gal‏ عند الضرورة.
قد يتم تحضير مستحلبات مناسبة باستخدام مستحلبات دهنية متاحة تجاريا؛ ‎Jie‏ ‎Lipofundin TM <InfonutrolTM (LiposynTM «Intralipid TM‏ و ‎LipiphysanTM‏ ,3 يُذاب المقوم النشط سواء في تركيبة مستحلب مخلوطة مسبقا أو بصورة متبادلة قد يُذاب في ‎C2)‏ ‎Sli)‏ زيت فول الصوياء ‎cu‏ العصفر؛ زيت بذر القطن؛ ‎cy‏ السمسم؛ زيت ذرة؛ زيت اللوز)
0 ومستحلب متشكل عند الخلط مع ليبيد فسفوري ‎Ole)‏ ليبيدات فسفورية بالبيض» ليبيدات فسفورية بفول الصويا أو ‎lecithin‏ فول صويا) وماء . سيتم إدراك إمكانية إضافة مقومات أخرى؛ على سبيل المثال ‎glycerol‏ أو جلوكوزء لضبط تواتر المستحلب. سوف تحتوي المستحلبات المناسبة نموذجيا على ما يصل إلى 720 زبت؛ على سبيل المثال؛ بين 5 و720. يمكن أن يتضمن المستحلب الدهني قطيرات دهنية بين 0.1 و1 ميكرومتر؛ تحديدا 0.1 و0.5 ميكرومتر؛ وله أس هيدروجيني
5 في نطاق من 5.5 إلى 8
قد تكون تركيبات المستحلب هي تلك المحضرة عن طريق خلط جسم مضاد معارض ضد 00-1 مع ‎Intralipid TM‏ أو مكوناته ‎cu)‏ فول صوباء ليبيدات فسفورية بالبيض» ‎glycerol‏ ‎(sles‏ ‏تتضمن تركيبات للاستنشاق أو النفخ محاليل ومعلقات في مذيبات مائية أو عضوية؛ أو خلطات منها مقبولة دوائياء ومساحيق. قد تحتوي التركيبات السائلة أو الصلبة على مواد مسوغة مقبولة دوائيا مناسبة كما هو محدد أعلاه. في بعض التجسيدات؛ تُعطى التركيبات بواسطة الطريقة التنفسية عن طريق الفم أو الأنف لتأثير موضعي أو جهازي. قد 335 التركيبات في مذيبات مقبولة دوائيا معقمة بصورة مفضلة بواسطة استخدام غازات. قد تُستنشق المحاليل المُرذذة مباشرةً من ‎lal‏ ‏الترذيذ أو يمكن اتصال أداة الترذيذ مع قناع للوجه؛ خيمة أو آلة استنشاق ضغط موجب متقطع. 0 يمكن إعطاء تركيبات محلول؛ معلق أو مسحوق؛ يُفضل عن طريق الفم أو عن طريق الأنف؛ من أدوات توصل الصياغة بأسلوب مناسب. المجموعات يوفر الاختراع أيضا مجموعات تشمل أي أو كل الأجسام المضادة الموصوفة هنا. تتضمن مجموعات الاختراع حاوية واحدة أو أكثر تشتمل على جسم مضاد معارض ضد ‎PD-1‏ موصوف 5 هنا وتعليمات للاستخدام طبقا لأي من طرق الاختراع الموصوفة هنا. بصفة عامة؛ تشتمل هذه التعليمات على وصف إعطاء الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 للمعالجات العلاجية الموصوفة أعلاه. في بعض التجسيدات؛ تتوافر مجموعات لإنتاج وحدة إعطاء جرعة فردية. في تجسيدات معينة؛ قد تحتوي المجموعة على كل من حاوية ‎(ol‏ بها بروتين جاف وحاوية ثانية بها مستحضر مائي. في تجسيدات معينة؛ تتضمن المجموعات حواقن ‎Shae‏ مسبقا فردية وعديدة 0 الحجرات ‎Oli)‏ حواقن سائلة وحواقن مجفدة). في بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد بشري. في بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية. في بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد أحادي النسخ. الإرشادات الخاصة باستخدام جسم مضاد ضد ‎PD-1‏ ‏تتضمن بصفة ‎dale‏ معلومات متعلقة بالجرعة؛ برنامج التجريع؛ وطريقة إعطاء المعالجة المعنية.
قد تكون الحاويات عبارة عن جرعات وحدة؛ عبوات سائبة ‎OM)‏ عبوات متعددة الجرعة) أو جرعات وحدة فرعية. الإرشادات المتوافرة في مجموعات الاختراع هي إرشادات مكتوية نموذجيا على ملصق أو نشرة داخلية في العبوة ‎lie)‏ صفحة ورقية موجودة في المجموعة)؛ لكن الإرشادات التي يمكن قراءتها بماكينة ‎Ole)‏ إرشادات محملة على قرص تخزين مغناطيسي أو بصري) تكون مقبولة أيضا. تكون مجموعات هذا الاختراع في عبوات مناسبة. تتضمن العبوات المناسبة؛ لكن بدون ‎cans‏ قارورات» زجاجات؛ مرطبانات»؛ عبوة مرنة ‎lie)‏ أكياس ‎Mylar‏ أو بلاستيك مانعة للتسرب)؛ إلخ. من المتوقع أيضا عبوات للاستخدام في اتحاد مع أداة خاصة؛ مثل أداة استنشاق؛ أداة إعطاء للأنف (مثلاء مرذذ) أو أداة تشريب مثل مضخة صغيرة. قد يكون للمجموعة منفذ 0 1 وصول معقم (مثلا » قد تكون الحاوية كيس محلول للإعطاء في الوريد أو قارورة لها سدادة يمكن ثقبها بإبرة حقن تحت الأدمة). قد يكون للحاوية أيضا منفذ وصول معقم (على سبيل المثال قد تكون الحاوية ‎Ble‏ عن كيس محلول للإعطاء في الوريد أو قارورة لها سدادة يمكن تقبها بإبرة حقن تحت الأدمة). يكون عامل نشط واحد على الأقل في التركيبة هو جسم مضاد ضد 00-1 من الاختراع. قد تشمل الحاوية إضافيا عامل ثان نشط دوائيا. قد توفر المجموعات اختياريا مكونات إضافية ‎Jie‏ مثبتات أس هيدروجيني ومعلومات تفسيرية. بصورة طبيعية؛ تشمل المجموعة حاوية وملصق أو نشرة (نشرات) عبوة داخلية على أو بمصاحبة الحاوية. الإيداعات البيولوجية يتم إيداع مواد تمثيلية من الاختراع الحالي في:
American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, 0
Va. 20110-2209, USA, on April 29, 2014. ‏هو عديد‎ ATCC Accession No. PTA-121182 ‏الذي له‎ msb7-LC ‏يكون الناقل‎ ‏الذي له‎ mab7-HC ‏نيكلوتيد يشفر المنطقة المتغيرة للسلسلة الخفيفة 01/87 ويكون الناقل‎
‎ATCC Accession No. 10-3‏ هو عديد نيكلوتيد يشفر المنطقة المتغيرة للسلسلة الثقيلة 0057. تجرى الإيداعات بموجب بنود: ‎Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of‏ ‎Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure and Regulations‏ ‎thereunder (Budapest Treaty). 5‏ هذا يؤكد بقاء المزرعة حية للإيداع لمدة 30 سنة من تاريخ الإيداع. سوف يكون الإيداع متاحا بواسطة ‎ATCC‏ بموجب المصطلحات من ‎Budapest Treaty‏ وخاضع للاتفاق بين شركة ‎(ATCC 4 Pfizer‏ وهذا يضمن الإتاحة الدائمة وغير المقيدة لنسل مزرعة الإيداع للعامة عند إصدار براءة الاختراع الأمريكية المتصلة بالموضوع أو عند الإعلان للجمهور عن أي طلب براءة 0 اختراع أمريكية أو أجنبية؛ أيهما يصدر ‎sl‏ ويضمن إتاحة النسل للجهة المحددة من مكتب براءات الاختراع والعلامات التجارية الأمريكية المستحقة لذلك طبقا إلى 122 § ‎U.S.C.‏ 35 وقواعد المفوض التابعة لها (المتضمنة 1.14 5 ‎C.F.R.‏ 37 مع الإشارة بوجه خاص إلى ‎OG‏ 880 638( وافق المتنازل له عن الطلب الحالى أنه إذا وجب موت أو فقدت ‎of‏ تلفت مزرعة ‎gall‏ ‏5 المودعة عند زراعتها تحت شروط مناسبة؛ سوف يتم على الفور إحلال المواد بغيرها عند إخطاره بذلك. لا تعتبر إتاحة المادة المودعة ترخيص لممارسة الاختراع بالمخالفة للحقوق الممنوحة بموجب سلطة أي حكومة طبقا لقوانين براءة الاختراع الخاصة بها. تُعرض الأمثلة التالية لأغراض توضيحية ‎dah‏ ولا يقصد بها حصر نطاق الاختراع الحالي بأي شكل. في الواقع» سوف تصبح تعديلات متنوعة للاختراع بالإضافة إلى تلك المعروضة 0 والموصوفة هنا واضحة لههؤلاء المهرة في الفن من الوصف المذكور سابقا والواقع ضمن نطاق عناصر الحماية اللاحقة. الأمثلة: مثال 1: تأثير الجسم المضاد ضد 00-1 على إفراز ‎TNF 5 IFN=y‏
يوضح هذا المثال تأثير الجسم المضاد ضد 00-1 على إفراز ‎TNF 5 IFN=y‏ اختبار تفاعل خلية لمفاوية مختلط ‎.(MLR) (mixed lymphocyte reaction)‏ يتم تنشيط خلية 1 بشربة أولية معزولة من الدم كله (بنك دم ‎(Stanford University‏ بواسطة خلايا ‎(DC) (dendritic cells) dyad‏ خيفية تُظهر مستويات عالية من ‎PD-L1‏ ‏5 و2ا-00)؛ التي تم تباينها مسبقاً باستخدام 4-اا 5 ‎GM-CSF‏ من ‎DA‏ نقوية +0014. في هذه الدراسة؛ تُستخدم الأجسام المضادة التالية: مقارن نوع مماثل (مثبت بمفصلة ‎kappa‏ 64وا)؛ جسم مضاد ‎C1‏ معارض ضد ‎(PD-1‏ جسم مضاد ‎C2‏ معارض ضد ‎(PD-1‏ جسم مضاد ‎C3‏ ‏معارض ضد 0-1 5112.1 (جسم مضاد ضد 00-1 بشري ضد فأر من ‎BD‏ ‎Kappa «Biosciences‏ 1061 نوع ممائل فأر)؛ 4-/ طمدصص ‎(mAb15-G4‏ -طظم ‎=G4) MAb] S-AAA AAA 0‏ منبت بمفصلة 064 ؛ ‎IgG] =AAA‏ طافرة لا يريط ‎(FeyR‏ ‏يتم اختبار الأجسام المضادة عند التركيزات التالية: صفرء 0.1 1 أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر). بالنسبة لاختبار ‎(MLR‏ تُحضن المزارع باختبار أو جسم مضاد ‎lie‏ في أطباق لها 96 عين بثلاث نسخ بنسب 10:1 ‎Guindy TWA DC‏ في محضن رطب عند 37 "مئوية مع 75 من 002. تُحصد المواد الطافية في اليوم 5 وثقاس سيتوكين باستخدام مصفوفة خرزات بالقياس الخلوي ‎(CBA) (cytometric beads array)‏ باستخدام مجموعة ‎Human Soluble‏ ‎(BD Biosciences, cat #558265) Protein Flex Set System‏ طبقاً لبروتوكول الصانع مع الحلالات البشرية التالية: ‎TNF «(BD Biosciences, cat #558269) IFNy‏ ‎(BD Biosciences, cat #558273)‏ باختصارء يتم غسل أطباق المرشح التي لها 96 عين ‎(Millipore, cat #MSBVN1250)‏ مع ‎Wash Buffer‏ (صياغة مخصصة من ‎BD‏ ‎(Biosciences 20‏ وتُشفط بواسطة مشعب شفط. يتم تخفيف المعايير التي توفرها المجموعة والعينات في ‎Assay Diluent‏ (صياغة مخصصة من ‎(BD Biosciences‏ وتُضاف إلى الأطباق مع ‎Capture Beads‏ (خرزات الالتقاط هي خرزات مغلفة بأجسام مضادة لبروتين معين قابل للذويان مغلف باستشعاع مميز). يتم خلط الأطباق لمدة 5 دقائق عند 500 دورة في الدقيقة باستخدام رجاج ‎(ad‏ ويتم تحضينها لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. يتم إضافة عامل كاشف 5 للكشف (أجسام مضادة متقارنة مع ‎phycoerythrin (PE)‏ التي يوفرها ‎(K‏ إلى الأطباق ويتم
خلط الأطباق لمدة 5 دقائق. يتم تحضين الأطباق لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة. ثم يتم غسلها بواسطة مثبت أس هيدروجيني للغسل لمدة 5 دقائق ودتم الحصول على العينات على المنصات ‎Fortessa‏ (ا5. يتم تحليل البيانات باستخدام ‎FCAP Array v3 (BD)‏ يتم توضيح نتائج اختبار ‎MLR‏ في الجداول ‎(D6‏ و(ب) أدناه. يوضح جدول 6(أ) مستويات ‎IFNy‏ ‏5 (البيكوجرام/ ملليلتر)؛ ويوضح جدول 6(ب) مستويات ‎TNF‏ (بالبيكوجرام/ ملليلتر). يتم عرض البيانات كمتوسط + ‎S.E.M‏ للثلاث نسخ الحيوية. تمثل العينات تجرية ‎MLR‏ واحدة. جدول 6)(: إفراز ‎IFNy‏ ‏مستويات ‎IFNy‏ (بيكوجرام/ ملليلتر) الجسم تركيز الجسم المضاد (ميكروجرام/ ملليلتر) المضاد مقارن .1190 173.4 4 .3693 |.1033 .3525 744.6 نوع 3760 598 735 262 972 879 655 76 ممائل 1 | .1190 |173.4 |.3443 |749.9 |.6196 |576.9 |.7111 | .2619 2.1 5981 735 495 05 637 022 465 065 ‎mAb‏ ‏.1190 173.4 .4728 .8893 | 365.1 | .7790 | .1700 -15 2.035 598 735 295 595 25 95 012 ‎G4‏ ‎mAb‏ ‏.1190 | 173.4 .8567 | .2085 | 11876 .1259 | 11794 1827.1 -7 598 735 203 826 .86 788 .82 243 ‎G4‏ mADb 2022.1 9048.1 1907. 10177] 1006. 10978 | 173.4 | 1190. 7- 583 097 027 68. 925 78. 735 598
AAA mADb 1797. 8644. | 2109. | 7083. | 1332. 9068. 173.4] 1190. 15- 077 313 455 987 045 905 735 598
AAA
1907. | 7523. | 338.8 | 6992. | 583.5] 5891. 173.4] 1190.
Cl 073 7 9 53 7 74 735 598 3124.1 4295. | 195.3 8121. 52.36١ 3433. 173.4] 1190.
C2 257 95 15 305 606 687 735 598 2332. 8282.1 143.0 11650] 529.4 | 9698. | 173.4 | 1190.
C3 598 735 06 7 .97 25 573 477 جدول 6(ب): إفراز ‎TNF‏ مستويات ‎TNF‏ (بيكوجرام/ ملليلتر) الجسم تركيز الجسم المضاد (ميكروجرام/ ملليلتر) المضاد مك عه جه جه مقارن 371.3 | 17.01 407.4 |49.58 |486.7 14.42 501.1 5.033 نو 2 233 197 133 195 167 418 7 334 ممائل
7.836| 799.3 35.72 667.0 60.43| 571.1|17.01| 371.3| EH1 955| 033 991| 033 963| 233| 197| 233] 1 mAb 9.143 | 798.8 | 45.63 | 686.3 | 56.75 743.1 | 17.01 | 3 15- 657| 533] 348 21 547| 167 197 3
G4 mAb 16.04 | 930.6] 21.19] 793.0 ( 33.35| 730.4) 17.01 | 371.3 7- 937| 233| 9 5| 488 7( 197 233
G4 mAb 17.37] 798.6 | 32.32| 773.3] 58.01 795.1 | 17.01 | 371.3 7- 746 8| 587 21 784 133 197 3
AAA mAb 37.82 731.3 | 43.04 | 869.4 | 34.20 803.8 17.01 [ 371.3 15- 11 31 225| 867 2 7( 197 233
AAA
36.03 | 650.6 55.78 | 809.1 58.65 | 641.5( 17.01 | 371.3
Cl 128 | 467| 437| 767 366| 533 197 233 49.44 | T72.5| 22.06 | 769.6 | 35.53 724.9] 17.01 | 3
C2 021| 367| 726| 367| 936| 133| 197| 233 49.58 | 744.0 21.44 642.2 39.12 692.1 | 17.01 | 371.3
C3 307| 067] 117 5] 236| 067 197 233 تؤدي معالجة خلايا ‎T‏ المنشطة مع الأجسام المضادة المعارضة ضد 00-1 إلى مستويات ‎IFNy‏ متزايدة بالمقارنة مع مقارن نوع مماثل (جدول 6لأ)). على سبيل المثال» تؤدي المعالجة مع 0.1 ميكروجرام/ ملليلتر 008015-64 3 ‎MADT-G4‏ إلى مستوى ‎IFNy‏ بمقدار
4728.295 + 2.035 بيكوجرام/ ملليلتر و 8567.203 + 2085.826 بيكوجرام/ ‎alll‏ على التوالي. تؤدي المعالجة مع 1 ميكروجرام/ ملليلتر ‎MADTS-G4‏ و 7107-6564 إلى مستوى ‎IFNy‏ بمقدار 8893.595 + 365.125 بيكوجرام/ ملليلتر و11876.86 + 1259.788 بيكوجرام/ ‎«bile‏ على التوالي. تؤدي المعالجة مع 10 ميكروجرام/ ملليلتر 0115-64
و64©-00507 إلى مستوى ‎IFNy‏ بمقدار 7790.95 + 1700.012 بيكوجرام/ ملليلتر و11794.82 + 1827.243 بيكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي. على العكس؛ تؤدي المعالجة مع 1 1 أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من مقارن نوع مماثل إلى مستويات ‎IFNy‏ بمقدار 3760 + 2 بيكوجرام/ ملليلتر» 3693.972 + 1033.879 بيكوجرام/ ملليلتر» 3525.655 + 744.676 بيكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي.
تؤدي معالجة خلايا آ المُنشطة مع أجسام مضادة معارضة ضد 00-1 إلى مستويات ‎TNF‏ متزايدة بالمقارنة مع مقارن نوع مماثل (جدول 6(ب)). على سبيل المثال؛ تؤدي المعالجة مع 0.1 ميكروجرام/ ملليلتر ‎MAD15-G4‏ أو 001807-64 إلى مستوى ‎TNF‏ بمقدار 743.1167 + 56.75547 بيكوجرام/ ملليلتر و730.47 + 33.35488 بيكوجرام/ ملليلتر على التوالي. تؤدي المعالجة مع 1 ميكروجرام/ ملليلتر 0015-54 و ‎MADT-G4‏ إلى مستوى
‎TNF 5‏ بمقدار 686.32 + 45.63348 بيكوجرام/ ملليلتر و793.05 + 21.19019 بيكوجرام/ ملليلتر» على التوالي. تؤدي المعالجة مع 10 ميكروجرام/ ملليلتر ‎MAb7-G4 3 mAb15-G4‏ إلى مستوى ‎TNF‏ بمقدار 798.853 + 9.14366 بيكوجرام/ ملليلتر و 930.623 + 4 بيكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي. على العكس؛ تؤدي المعالجة مع 0.1؛ 1؛ أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من مقارن نوع مماثل إلى مستويات ‎TNF‏ بمقدار 407.4133 +
‏0 49.58195 بيكوجرام/ ملليلتر» 486.7167 + 4.4241 بيكوجرام/ ملليلتر» و501.17 + 4.. بيكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي.
‏توضح هذه النتائج أن الأجسام المضادة 00/57 و008015 ‎aca‏ 00-1 تثير إفراز ‎TNF 5 IFNy‏ من خلايا 7 على الأقل أو أفضل من الأجسام المضادة 01؛ 02؛ و03 ضد ‎.PD-1‏
تُجرى دراسة ‎MLR‏ ثانية لاختبار تأثير تركيزات الجسم المضاد الأقل على تنشيط خلية 1. يتم تنشيط خلية ‎T‏ بشرية أولية معزولة من الدم كله حسب الوصف أعلاه. يتم اختبار الأجسام المضادة التالية في الدراسة الثانية: ‎(EH12.1 (C1 (G4) (mAb15 (G4) (MADT (G4)‏ ومقارن نوع ‎Silas‏ 64. يتم اختبار الأجسام المضادة عند التركيزات التالية: ¢0.0001 0.001« 0.01< 0.1 1 و10 ميكروجرام/ ملليلتر. يُجرى اختبار ‎MLR‏ حسب الوصف أعلاه. يتم تلخيص النتائج في الجداول 1)7( و7(ب) أدناه. جدول 7)(: إفراز ‎IFNy‏ ‏الجسم مستويات ‎IFNy‏ (بيكوجرام/ ملليلتر) المضاد | تركيز الجسم المضاد (ميكروجرام/ ملليلتر) ْ - | ْ . 2 7153.376 | 1074.37 | 1667.96 | 1867.96 2501.29 مقارن 19 7+ + + + 3+ نوع مماثل 489-482 | 291.609 | 324.203 | 144.728 | 282.746 | 770.182 8 2 1 6 1 9 ‎9914.05١ 4726.87 | 4384.47 ١ 2284.15 0‏ |15110.1 ‎EH12.‏ 7+ 3+ 7+ + + 9+ 1 417.566 | 408.121 | 396.145 | 1201.68 | 1188.06 | 1864.17 9 5 1 8 4 6 1774.38 + 2804.01 | 4148.12 | 6883.11 | 9598.41 |10283.2 ‎Cl‏ ‏290.605 7+ 3+ 3+ 3+ 4+ 9
‎1480.16١ 194.246 | 7‏ 617.476 1008.531 7 6 8 2 3 ‎11928.8١ 7082.66 | 5067.52 3062.09 | 7‏ 11862.1 ‎+١ mAb7‏ + 3+ 7 1+ 3+ ‎(G4)‏ | 720.993 | 370.279 | 111.490 | 1336.08 | 1457.72 800.586 1 1 3 2 3 1410.75 | 4734.49 3 ا10992.1 1678.27 5416+ ‎mAb]‏ 8+ + 7+ 3+ + = 1054.07 ‎(G4)‏ 5 7 | 322.208 1320.49 | 1008.53 233.82 5 4 7 9 3 جدول 7(ب): إفراز ‎TNF‏ ‏مستويات ‎TEN‏ (بيكوجرام/ ملليلتر) الجسم تركيز الجسم المضاد (ميكروجرام/ ملليلتر) المضاد 282.928 68 338.110 | 331.008 452.713 310.914 مقارن 7+ + 7+ + نوع 3+ 4+ » 56.7726 81.0912 | 46.8838 | 31.3555 تل | 62.85 21.7811 6 2 5 9 ‎EH12.‏ 687.373 | 859.036 6 | 1950.73 752.87+ 744.98+ 1 3+ 7+ 7+ +
32.8130 | 29.0956 | 89.3586 131.365 | 227.997 | 155.209 3 7 8 9 8 444.786 | 465.093 | 1045.45 | 997.606 | 895.726 446.98+ 7+ 3+ + 7+ 7+ ‎Cl‏ 26.8921 59.0321 | 65.7504 | 146.901 | 79.1784 | 60.9202 1 6 4 8 6 2 394.423 7 1583.52 227.6+ 452.65+ 1419.88 ‎mAb7‏ 3+ 7+ + + ‎s‏ 50.6343 30.6433 5 ‎(G4)‏ 30.4700 174.782 | 267.213 6 5 108.711 4 1 494.796 | 489.233 1143.54 | 1109.06 £593.34 | 811.16+ ‎mAb1‏ 7+ 3+ + 3+ 56 65.8762 | 89.5023 ‎(G4)‏ 3 | 48.1810 | 30.6330 136.395 | 57.7023 2 8 5 2 4 2 تؤدي معالجة خلايا ‎T‏ المنشطة مع الأجسام المضادة المعارضة ضد 00-1 إلى مستويات ‎IFNy‏ متزايدة بالمقارنة مع مقارن نوع مماثل (جدول 7لا)). في المزارع بدون جسم مضاد؛ تكون مستويات ‎IFNy‏ هي 901.453 + 216.472 بيكوجرام/ ملليلتر. في مزارع بها 0.0001« 0.001« 0.01 0.1« 1« أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من أجسام مضادة لمقارن نوع 5 مماثل»؛ تكون مستويات ‎IFNy‏ هي 558.9629 + 489.4828 بيكوجرام/ ملليلتر» 753.3767 + 291.6092 بيكوجرام/ ملليلتر» 1074.37 + 324.2031 بيكوجرام/ ملليلتر» 1667.96 + 6 بيكوجرام/ ملليلتر» 1867.96 + 282.7461 بيكوجرام/ ‎jill‏ « 2501.293 + 9 بييكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي. على ‎call‏ في المزارع المعالجة مع 0.0001 0.001 0.01 0.1< 1 أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من ‎(G4)‏ 01/87؛ تكون مستويات ‎IFNy‏
هي 2082.07 + 720.9931 بيكوجرام/ ملليلتر» 3062.09 + 370.2791 بيكوجرام/ ملليلتر» 5067.823 + 111.4903 بيكوجرام/ ملليلتر» 7082.667 + 1336.082 بيكوجرام/ ملليلتر» 11928.81 + 1457.723 بيكوجرام/ ملليلتر» 11862.13 + 800.586 بيكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي. في المزارع المعالجة مع 0.0001 0.001« 0.01؛ 0.1؛ 1 أو 10
ميكروجرام/ ملليلتر من ‎(G4)‏ 01/015 تكون مستويات ‎IFNy‏ هي 1678.27 + 233.82 بيكوجرام/ ملليلتر» 1410.758 + 439.9474 بيكوجرام/ ملليلتر» 4734.49 + 322.2087 بيكوجرام/ ملليلتر» 5416 + 1054.075 بيكوجرام/ ملليلتر» 9140.337 + 1320.499 بيكوجرام/ ملليلتر» و 10992.13 + 1008.533 بيكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي.
تؤدي معالجة خلايا آ المُنشطة مع أجسام مضادة معارضة ضد 00-1 إلى مستويات
‎TNF 0‏ متزايدة بالمقارنة مع مقارن نوع مماثل (جدول 7(ب)). في المزارع بدون جسم مضاد؛ تكون
‏مستوى ‎TNF‏ 365.523 + 84.6607 بيكوجرام/ ملليلتر. في المزارع المُعالجة مع 0.0001؛
‏0.001« 0.01< 0.1< 1 أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من جسم مضاد لمقارن نوع مماثل؛ تكون
‏مستويات ‎TNF‏ هي 452.7133 + 62.85 بيكوجرام/ ملليلتر» 282.9287 + 56.77266
‏بيكوجرام/ ملليلتر» 310.9144 + 21.7811 بيكوجرام/ ملليلتر» 358.948 + 81.09122 5 بيكوجرام/ ملليلتر» 338.1107 + 46.88385 بيكوجرام/ ملليلتر» و331.008 + 31.35559
‏بيكوجرام/ ‎jill‏ على التوالي. على ‎all‏ في المزارع المُعالجة مع 0.0001« 0.001؛
‏0.01< 0.1 ¢1 أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من ‎(G4)‏ 0557 تكون مستويات ‎TNF‏ هي
‏227.6 + 50.63436 بيكوجرام/ ملليلتر» 394.4233 + 30.47005« 452.65 +
‏5 بيكوجرام/ ملليلتر» 1089.377 + 174.7824 بيكوجرام/ ملليلتر» 1583.52 + 0 267.2131 بيكوجرام/ ملليلتر» و1419.88 + 108.711 بيكوجرام/ ملليلتر؛ على التوالي. في
‏مزارع بها 0.0001« 0.001؛ 0.01؛ 0.1 1؛ أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من 00015
‏(64)؛ تكون مستويات ‎TNF‏ هي 494.7967 + 48.1810 بيكوجرام/ ملليلتر 489.2333 +
‏2 بيكوجرام/ ملليلتر» 593.34 + 65.87622 بيكوجرام/ ملليلتر» 811.16 +
‏8 بيكوجرام/ ملليلتر» 1143.54 + 136.3954 بيكوجرام/ ملليلتر؛ و 1109.063 + 5 57.70232 بيكوجرام/ ملليلتر» على التوالي.
توضح هذه النتائج أن الأجسام المضادة 00/07 و01015 ‎aa‏ 00-1 تعيق إرسال إشارة 00-1 وتعزز إفراز ‎TNF 5 IFNy‏ من خلايا 1 البشرية الأولية. مثال 2: تأثير الأجسام المضادة ‎aca‏ 50-1 على انقسام خلية ‎T‏ ‏يوضح هذا المثال تأثير الأجسام المضادة ضد 00-1 على انقسام خلية 1. في هذه الدراسة»؛ يُقاس انقسام خلية ‎T‏ في اختبار ‎MLR‏ حيث تتم زراعة خلايا 1 في وجود أجسام مضادة لمقارن نوع ‎Silas‏ أو معارضة ضد ‎PD-1‏ ‏من بنك دم ‎(Stanford University‏ بواسطة خلايا شجيرية ‎(DC)‏ خيفية تُظهر مستويات عالية من 00-11 3 ‎(PD-L2‏ التي تم تباينها مسبقاً باستخدام 4-اا ‎GM-CSF;‏ من ‎WIA‏ نقوية ‎.CD14+ 0‏ ويتم إجراء تجريتين. في التجرية الأولى» تُجرى مقارنة 0057 (مثبت بمفصلة ‎kappa‏ 64وا) ‎MAD15‏ ‏(مثبت بمفصلة ‎kappa‏ 964ا)؛ 01؛ 1112.1 ومقارن نوع مماثل. في التجرية الثانية؛ تُجرى مقارنة النسخ 0/57 008015 02؛ 1112.1 ومقارن نوع ‎Bilas‏ في كلتا التجربتين» تضاف الأجسام المضادة عند التركيزات التالية: صفرء 0.0001؛ 0.001؛ 0.01؛ 0.1؛ 1 و10 5 ميكروجرام/ ملليلتر. بالنسبة لكلتا التجربتين؛ يتم تحضين المزارع مع جسم مضاد في أطباق لها 96 عين بثلاث نسخ بنسب 10:1 06: ‎TAA‏ وتُحضن في محضن رطب عند 37"مئوية مع 75 من ‎.CO2‏ في اليوم 5 يتم إدخال نبضات على المزارع لمدة 18 ساعة مع 1 ميكروكيورس لكل عين من ثيميدين-[311] ‎([3H]-thymidine)‏ قبل الحصاد. ثم تُحصد الأطباق على أوراق مرشح 0 خاصة ‎(Perkin Elmer) DNA‏ باستخدام ‎.(Tomtec Life Sciences) Harvester96‏ تُغطى المرشحات المُعلمة إشعاعيا بسائل وميض ‎Diy (Perkin Elmer) beta‏ في لوحات عداد ‎(Perkin Elmer) Microbeta®‏ يُجرى تحليل اندماج ثيميدين بالعدذات في الدقيقة ‎(counts‏ ‎(CPM) per minute)‏ تتضح النتائج كمتوسط من ثلاث نسخ + ‎SEM‏
جدول 08( 8 المضاد مقارن نو- ‎mAb7 EH12.1 < [elas ae)‏ 5ه 1ه مماثل ملليلتر) .183419 183419 | .183419 3+ 3 183419.3+ | 3+ 3+ صفر 4049.93 |4049.932 4049.932 | 4049.93 | 4049.93 2 2 2 .217278 205190+ .211881 3 - | 226145+ | 7+ 3+ 0.0001 7769.19 7769.199 |9610.045 |24472.7 9 10119.4 6 .212198 3+ 23 2+ 2+ | 3+ + 0.001 13904.6 13904.69 11885.7 | 36451.7 9 15199.75 9 .175973 .219167 232600+ 3+ 3 265654.3+ | 3+ 0.01 26403.7 10177.5 |10177.52 |12087.89 | 8928.69 8 2 1
المضاد مقارن نو- ‎mAb7 EH12.1 < [elas ae)‏ 5ه 1ه ممائل ملليلتر) .192495 257924+ | .278997 3+ 7 264057.7+ 0.1 3 : 3376.66 16825.3 |16825.35 | 10339.94 9 18441.4
.210104 .276141 276531+ 7+ 210104.7+ | 298696.7+ 3+ 1 3855.77 11484.2 |11484.23 |6164.177 18516.9 9 3 7 .206281 .286260 | .264223 7+ 77 301293+ | 7+ 7+
16001.3 |16001.33 |6313.417 |11483.2 | 9809.79 3 2 2 جدول 8(ب) المضاد مقارن نو- ‎C2 mAb15 mAb7 | 1 < [elas ae)‏ ممائل ملليلتر)
+229959 | +229959 | +229959 | +229959 + ‏صفر‎ ‎27771.7١ 5794.112| 27771.7| 27771.7| 5794.11 2 258428. 258069.7 | 241112.7| 280415.3 299107 +3 + + + + 0.0001 36794.2 23962.19 | 40486.56 | 14101.94 3193
267117.7 +272289 | 277197 +233184 | +260183 + + 29320.0 0.001 28899.06 | 24634.25 16388.83 4 17518 324891. | 278072. 381936.3 365625.3 +317377 +3 +3 + + 0.01 31915.29 3396.22 | 32671.6 31901.57 30171.07 9 2 342131. | 268939. 381110.7 | 360226.3 | 380054.3 +3 +7 + + + 0.1 19839.8 | 12332.0 16996.97 | 1802.69 | 9774.328 8 6
241164 | .388757 392256.7 + 7+ 421229+ | 401219+ 1 * 13776.8 | 15684.3 27865.13 | 1816.754 15341.19 1 7 .231897 408098+ | 372889.7 | 323441.3 | 391925.3 7+ > > > 10 2022173 25865.9 4 14826.49 |64476.55 46054.82
تؤدي ‎dallas‏ خلايا ‎T‏ المُنشطة مع الأجسام المضادة المعارضة ضد 00-1 عند تركيزات 0.01 ميكروجرام/ ملليلتر أو أكثر إلى انقسام خلية ‎T‏ متزايد بصورة ملحوظة بالمقارنة مع مقارن نوع مماثل (الجداول 8() و8(ب)). على سبيل ‎JEL‏ تؤدي المعالجة مع 0.01« 0.1« 1« أو 10 ميك روجرام/ ملليلتر من 5 07ل إلى معدلات اندماج ثيميدين بمقدار 365625.3 + 30171.07 ‎«CPM‏ 380054.3 ‎«CPM 15341.19 + 392256.7 «CPM 9774.328 +‏ و372889.7 + 14826.49 ‎CPM‏ على التوالي(جدول 8(ب)). تؤدي المعالجة مع 0.01« 0.1« 1« أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من 008015-64 و57 إلى معدلات اندماج ثيميدين بمقدار 317377 + ‎«CPM 27865.13 + 421229 «CPM 1802.69 + 360226.3 (CPM 31915.29‏ ‎«CPM 64476.55 + 323441.35 0‏ على التوالي (جدول 8(ب)). على العكس؛ تؤدي المعالجة مع 0.01« 0.1؛ 1؛ أو 10 ميكروجرام/ ملليلتر من مقارن نوع مماثل إلى معدلات اندماج ثيميدين بمقدار 278072.3 + 32671.62 ‎«CPM‏ 268939.7 + 12332.06 ‎(CPM 25865.95 + 231897.7 5 «CPM 13776.81 + 241164 «CPM‏ على التوالي (جدول 8(ب)). توضح هذه النتائج أن الأجسام المضادة 00/07 و01015 ‎aa‏ 00-1 تعيق إرسال إشارة 00-1 وتعزز انقسام خلايا 1 البشرية الأولية.
مثال 3: تأثير الأجسام المضادة ضد 00-1 في نموذج فأر ‎GVHD‏ ‏يوضح هذا المثال تأثير الأجسام المضادة ضد 00-1 على انقسام خلية 1 وفقدان وزن جسم في نموذج فأر مصاب بمرض ‎dad)‏ مقابل عائل ‎(graft versus host disease)‏ ‎.(GVHD)‏ ‏5 تُستخدم ‎Gf‏ خالية من سلسلة ‎gamma‏ لمستقبل ‎(NSG) NOD-scid—IL-2‏ في هذه الدراسة لاختبار تأثيرات الأجسام المضادة المعارضة ضد 00-1 على انقسام خلية آ في الجسم الحي. بسبب افتقار فئران 56ل لخلايا ‎T‏ وخلايا 8 واحتوائها على خلايا ‎NK‏ ضعيفة؛ يحدث ترقيع ‎Me‏ للخلايا البشرية بسهولة. عند ترقيع ‎PBMCS‏ بشرية في هذه ‎(ol‏ يحدث انقسام خلية ‎T‏ بشرية وبحث ‎(GVHD‏ يتضمن ‎GVHD‏ الحيز النقوي للعائل والخلايا البشرية أيضا. قد 0 يُلاحظ انقسام كبير للخلايا اللمفاوية البشرية في ‎pall‏ في مراحل مبكرة يتبعه ارتشاح عالي لهذه الخلايا في أعضاء الفأر؛ مثل ‎cal‏ الطحال؛ الكلى؛ الأمعاء؛ إلخ مما يؤدي إلى فقدان في وزن جسم الفئران بالإضافة إلى جروح في الجلد؛ انحناء في الظهر؛ ثم الوفاة. تعتمد الخطورة في النماذج على ‎PBMCs‏ المائحة؛ وقد تختلف بين المانحات. في هذه الدراسة؛ تُستخدم الأجسام المضادة المعارضة ضد 20-1 التالية: ‎MADT‏ (مثبت بمفصلة 1064 بشري أو ‎(AAA‏ 008015 (مثبت بمفصلة ‎(C1 «(yi 19G4‏ 02؛ و63. بالنسبة للمقارن السالب؛ يُستخدم جسم مضاد مثبت بمفصلة 10964 بشري من نوع مماثل. تُعزل 05 بشرية أولية من الدم كله (بنك دم ‎(Stanford University‏ باستخدام مستوى متدرج ا1060. تُحقن 7410 ‎PBMCs‏ بشرية في فتران ‎NSG‏ (إناث بعمر 8 أسابيع؛ ‎Jackson‏ ‎(Laboratories‏ في اليوم صفرء وزع الفئران عشوائيا على أساس وزن الجسم وتحقن ‎PBMCs‏ ‏0 داخل الوريد. بالنسبة للتجارب 4-1؛ في اليوم 2 واليوم 8؛ تُعطى الأجسام المضادة داخل الغشاء البريتوني عند 10 مجم/ كجم. بالنسبة للتجربة 5؛ في اليوم 2 واليوم 8؛ تُعطى الأجسام المضادة داخل الغشاء البريتوني عند 1 مجم/ كجم. يُِلخص جدول 9 الأجسام المضادة المستخدمة في كل تجرية. جدول 9: الأجسام المضادة المستخدمة في التجارب 5-1
مقارن نوع ‎Silas‏ | مقارن نوع مماثل | مقارن نوع مماثل | مقارن نوع ‎las‏ | مقارن نوع ممائل يُقاس وزن الجسم بشكل دوري. يتم تلخيص النتائج في الأشكال 1(()- 1(ه). يحدث نزف للفتران بشكل دوري لتقييم انقسام خلية 1. تُسرع المعالجة مع الجسم المضاد ضد 0100-1 مسار المرض حسب القياس بمعدل فقدان وزن الجسم. بالمقارنة مع الفئران المقارنة؛ يحدث فقدان وزن سريع في جسم الفئران المعالجة مع الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 (الأشكال 1 (()- 1)#(( (النسخة 11130؛ ‎(BD Biosciences‏ يتم تلخيص نتائج قياس التدفق الخلوي أدناه في جدول 0. يكون انقسام خلية ‎T‏ أعلى في الفثران المعالجة مع الجسم المضاد المعارض ضد 00-1 منه في الفئران المعالجة مع مقارن النوع ‎ileal)‏ يدل 0045 ذو النسبة المئوية الأعلى على مستوى 0 اتقسام ‎ef‏ لخلايا 6045 وبالتالي ‎GVHD‏ أكثر خطورة. في التجرية 1؛ تكون النسبة المئوية ‎LAT‏ الدم الموجبة 0045© هي 763.86 في الفئران المقارنة (جدول 10). على العكس؛ تكون النسبة المئوية لخلايا الدم الموجبة ‎CD45‏ في الفتئران المعالجة مع الجسم المضاد 0007 008015 ‎«C1‏ أو ‎mAb7-AA‏ ضد 00-1 هي 380.34 177.62 777.26 776.95 على التوالي (جدول 10). جدول 10: انقسام خلية 1 حسب القياس بوجود ‎«CD45‏ حيوانات مُعالجة
0 تع تع ‎SE‏ |5.8920437 | 2.802588 |5.6080745 ا4.488262 | 3.9371168 7 ‎oe‏
متوس 63.4 82.7156 79.8 78.6 ‎L‏ ‎SE‏ ‏4.480513 |1.182785 | 2.012461 | 2.678152 ‎M‏ ‏التجرية 3: خلايا موجبة 705 في الدم في اليوم 12 الأجسام المضادة (10 مجم/ ملليلتر) ‎oo‏ ‏متوس ‏66.66 80.98 77.62 80.66 ‎L‏ ‎SE‏ ‏4.875269 | 2.63638 5.608075 3.880013 ‎M‏ ‏التجرية 4: خلايا موجبة 705 في الدم في اليوم 12 0 ض = ض - ّ! ,| ‎I> ١‏ مار ّ ا oo ‏ت-‎ ‎L ‎SE ‎mAb7 mAb7 ‏مجم/‎ 10) | [eae 1) ‏مقارن‎ ‏كجم) كجم)‎ ‏ت-‎
متوس 69.2 80.78 84.62 ‎L‏ ‎SE‏ ‏1.887127 2.668895 | 3.723305 ‎M‏ ‏باختصار؛ يحدث فقدان أسرع في وزن في جسم الفئران المعالجة مع الجسم المضاد ضد ‎PD-1‏ وانقسام خلية 1 متزايد بالمقارنة مع الفثران المعالجة مع مقارن النوع الممائل. توضح هذه النتائج أن المعالجة مع الجسم المضاد ضد 50-1 تُثير انقسام خلايا آ البشرية في الجسم الحي. مثال 4: ارتباط الأجسام المضادة ضد 60-1 يوضح هذا المثال ارتباط الجسم المضاد ضد 1 ‎PD-‏ على خلايا ‎T‏ بشرية مُنشطة وخلايا قرد سينومولجس ‎.(cyno) (cynomolgus monkey)‏ تُعزل خلايا ‎T‏ البشرية الأولية من ‎PBMCs‏ (بنك دم ‎(Stanford University‏ باستخدام مجموعة ‎Jie‏ خلية ‎PAN T‏ بشرية ‎Wg‏ لبروتوكول الصانع -130-096 ‎(Miltenyi Biotec;‏ (353. يتم شراء ‎PBMCs‏ سينومولجس من (8101601807810011/1)؛ وتُعزل خلايا ‎PAN T‏ 0 باستخدام مجموعة ‎Jie‏ خلية 1 ‎PAN‏ من كائنات رئيسة غير بشرية وفقا لبروتوكول الصانع ‎(Miltenyi Biotec; 130-091-993)‏ يتم تنشيط خلايا ‎T‏ بشرية لمدة 3 أيام بواسطة ‎T-Activator CD3/CD28‏ بشري ‎DYNABEADS™‏ من أجل تمدد وتنشيط الخلايا ‎Technologies ; 11131D)‏ 8آنا). تكون نسبة الخرزات إلى الخلية المستخدمة 1:1 خرزة: خلية ‎oT‏ على التوالي. يتم تنشيط ‎T WA‏ سينومولجس لمدة 3 أيام باستخدام مجموعة ‎Cell Activation/Expansio 5‏ 1؛ كائنات رئيسة غير بشرية وفقا لبروتوكول الصائع ‎(Miltenyi‏ ‏)130-092-919 :810166. تكون نسبة الخرزات إلى الخلايا المستخدمة 1:1 خرزة: ‎Tas‏ ‏على التوالي. بعد 3 ‎(all‏ يتم حصد المزارع وفصل الخرزات من خلية ‎T‏ المُنشطة باستخدام قوة مغناطيسية. تُغسل الخلايا وتُحضن بواسطة مثبت أس هيدروجيني ‎FACS‏ (يتضمن 72 ‎(FBS‏ ‏ومثبط ارتباط مستقبل ‎Fe‏ بشري (16-9161-73 ‎.(Affymetrix eBioscience cat. no.‏
بالنسبة للقرود السينومولجس؛ تستخدم الخلايا عامل كاشف ‎Fc Block‏ ‎(BD Biosciences cat. no. 564765)‏ تُحضن الخلايا لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة ثم تُبقع بلون يُميز الخلايا الحية من الميتة باستثناء الخلايا الميتة (مجموعة
‎LIVE/DEAD® Fixable Blue Dead Cell Stain‏ للإثارة بالأشعة فوق البنفسجية؛ كتالوج
‏5 رقم: ‎(A10346‏ لمدة 5 دقائق أخرى. نُضاف أجسام مضادة ضد 00-1 ‎(and)‏ تركيزات النسخ ضد 00-1 على خلية بنسب تخفيف تسلسلية 3:1 بدءا من 10 ميكروجرام/ ملليلتر- صفر ميكروجرام/ ملليلتر) وتُستخدم 6010*1 خلية في كل تفاعل بإجمالي 100 ملليلتر وتُحضن الخلايا على الثلج لمدة 30 دقيقة. تُغسل الخلايا بعد ذلك بمثبت أس هيدروجيني ‎FACS‏ لإزالة
‏الأجسام المضادة الأولية الفائضة وتحضن مع ضد بشري ‎(AffiniPure F(ab")2 Fragment‏
‎Donkey Anti-Human IgG (H+L) 0‏ ثانوي متقارن مع ألوفيكوسيانين ‎(Allophycocyanin)‏ ‎(cat. no. 709-136-149 ¢(APC)‏ تبقع الخلايا لمدة 30 دقيقة على الثلج. تُغسل الخلايا وتُحفظ على الثلج حتى تُجرى القراءة باستخدام ‎(BD «BD LSRFortessa Cell Analyzer‏ ‎Biosciences, cat. no. 647465)‏ يتم تحليل البيانات باستخدام برنامج ‎FlowJo™‏ يتم
‏تلخيص النتائج في الأشكال 2(ا) و2(ب).
‏15 يوضح شكل 2(ا) 5050 مُقاس لأجل ارتباط الجسم المضاد ضد 00-1 مع الخلايا البشرية المُنشطة؛ ويوضح شكل 2(ب) 5050 مُقاس لأجل ارتباط الجسم المضاد ‎aca‏ 0-1م مع خلايا سينومولجس المُنشطة. تريط الأجسام المضادة 00857 3 ‎C1‏ ضد 00-1 خلايا 1 المُنشطة مع 5650 مشابه (الأشكال 2() و2(ج)). مثال 5: تثبيط ارتباط 0-11 بواسطة جسم مضاد ضد ‎PD-1‏
‏20 يوضح هذا المثال تثبيط ارتباط المركب الترابطي 10-1 ‎(PD-L1)‏ بواسطة جسم مضاد ضد ‎PD-1‏
‏تُعزل خلايا ‎T‏ البشرية الأولية من ‎PBMCs‏ (بنك دم ‎(Stanford University‏ باستخدام مجموعة ‎Jie‏ خلية ‎PAN T‏ بشرية ‎Wg‏ لبروتوكول الصانع -130-096 ‎(Miltenyi Biotec;‏ (353. يتم شراء ‎PBMCs‏ قرد سينومولجس من ‎¢(BioreclamationlVT)‏ ويتم عزل ‎WIA‏
آ ‎PAN‏ باستخدام مجموعة ‎Jie‏ خلية 1 ‎PAN‏ من كائنات رئيسة غير بشرية وفقا لبروتوكول الصانع )130-091-993 ‎(Miltenyi Biotec;‏ يتم تنشيط خلايا 1 البشرية ‎sad‏ 3 أيام بواسطة ‎Activator CD3/CD28‏ -1 بشري ‎DYNABEADS™‏ (من أجل تمدد وتنشيط ‎(s&s. (Life Technologies; 11131D «Lal‏ نسبة الخرزات إلى الخلايا المستخدمة 1:1؛ على التوالي. يتم تنشيط ‎T WDA‏ سينومولجس لمدة 3 أيام باستخدام مجموعة ‎Cell‏ 1 ‎(Activation/Expansion‏ كائنات رئيسة غير بشرية وفقا لبروتوكول الصانع ‎(Miltenyi‏ ‎Biotec; 130-092-919)‏ تكون نسبة الخرزات إلى الخلايا المستخدمة 1:1؛ على التوالي. بعد 3 ‎call‏ يتم حصد المزارع وفصل الخرزات من خلية ‎T‏ المُنشطة باستخدام قوة مغناطيسية. تُغسل الخلايا وتُحضن بواسطة مثبت أس هيدروجيني ‎FACS‏ (يتضمن 72 ‎(FBS‏ ومثبط ارتباط 0 مستقبل ‎Fo‏ بشري (16-9161-73 ‎(Affymetrix eBioscience; cat. no.‏ . بالنسبة للقرود السينومولجس؛ تستخدم الخلايا العامل الكاشف ‎Fc Block‏ ‎(BD Biosciences; cat. no. 564765)‏ تُحضن الخلايا لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة ثم ‎abd‏ بلون يُميز ‎WAN‏ الحية من الميتة لاستثناء ‎WAY‏ الميتة (مجموعة ‎LIVE/DEAD® Fixable Blue Dead Cell Stain‏ للإثارة بالأشعة فوق البنفسجية؛ كتالوج 5 رقم: ‎(A10346‏ لمدة 5 دقائق أخرى. يتم تحضين ‎Fo‏ 00-11 بشري تخليقي ‎(R&D‏ ‎Systems, cat. no. 156-87(‏ أو مثبت أس هيدروجيني بمفرده مع الخلايا عند 10 نانوجرام/ ملليلتر. يتم تحضين كل مركب ترابطي بصورة منفصلة ثم يتم تحضينهم على الثلج لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك يتم غسل الخلايا وتحضينها مع أجسام مضادة ضد 00-1 (يتم تحضين تركيزات نسخ ضد 00-1 على خلية بنسب تخفيف تسلسلية 3:1 بدءا من 1 ميكروجرام/ ملليلتر- صفر 0 ميكروجرام/ ملليلتر) وتُستخدم 6010*1 خلية في كل تفاعل بإجمالي 100 ملليلتر وتُحضن الخلايا على الثلج لمدة 30 دقيقة. تُغسل الخلايا بمثبت أس هيدروجيني ‎FACS‏ لإزالة الأجسام المضادة الأولية الفائضة وتُحضن مع ‎KAPPA‏ ضد بشري متقارن مع ألوفيكوسيانين ‎(APC)‏ ‎Technologies; cat. no.
MH10515)‏ عآنا). تبقع الخلايا ‎sad‏ 30 دقيقة على الثلج ثم ‎Jus‏ وتُحفظ على الثلج حتى تُجرى القراءة باستخدام ‎«BD LSRFortessa Cell Analyzer‏ ‎(BD Biosciences, cat. no. 647465( 5‏ يتم تحليل البيانات باستخدام برنامج ‎FlowJo™‏ ‏ونُحسب متوسط شدة الاستشعاع ‎(MFI) (Mean fluoresce intensity)‏ والمتوسطات الهندسية
‎(Geo.M) (geometrical means)‏ لتبقيع ‎APC‏ على خلايا حية ببرنامج ‎FlowJo™‏ . بعد حساب المتوسط الهندسي؛ تُحسب 1050 باستخدام برنامج ‎.GraphPD Prism‏ يتم تلخيص النتائج في الأشكال 11 و12 أدناه. جدول 11: إعاقة نشاط ضد ‎PD-1‏ لارتباط 000-11 مع 0100-1 على خلايا آ بشرية > هداع جدول 112 إعاقة نشاط ضد 00-1 لارتباط 010-11 مع 0100-1 على خلايا ‎١1‏ سينومولجس
(ميكرومتر/ ملليلتر)
توضح هذه النتائج أن الأجسام المضادة 01807 3 ‎C1‏ ضد 00-1 تُثبط ارتباط ‎PD-L1‏ ‏مع ‎T LDA‏ بشرية وسينومولجس مع ‎IC50‏ مشابه. مثال 6: تأثير الجسم المضاد ضد 00-1 على انقسام خلية 1
يوضح هذا المثال تأثير الجسم المضاد ضد 00-1 على انقسام خلية 1.
يتم تنشيط ‎CD4‏ و0008 ‎(AllCells, LLC)‏ لمدة يومين مع ‎Activator‏ ‎T -CD3/CD28‏ بشري ‎DYNABEADS™‏ (أو تمدد وتنشيط الخلية ‎(Life Technologies; 11131D)‏ تكون نسبة الخرزات إلى الخلية 1:1؛ على التوالي ‎Gal‏
00-1. في اليوم 2؛ تُحصد المزارع وتُفصل الخرزات من خلية ‎T‏ المنشطة باستخدام قوة مغناطيسية. يتم تنشيط الخلايا على خلايا شجيرية ‎jell‏ 00-11 وتُحضن الخلايا مع نسخ ضد 00-1 مختلفة عند 1 ميكروجرام/ ملليلتر في أطباق لها 96 عين بثلاث نسخ بنسب 10:1 ‎andy TWA :DC‏ في محضن رطب عند 37"مئوية مع 75 من 002. في اليوم 3؛ يتم إدخال نبضات على المزارع لمدة 18 ساعة مع 1 ميكروكيورس لكل عين من ثيميدين-[311] قبل الحصاد. ثم تُحصد الأطباق على أوراق مرشح خاصة ‎(PerkinElmer) DNA‏ باستخدام ‎.(Tomtec Life Sciences) Harvester96‏ تُغطى المرشحات المُعلمة إشعاعيا بسائل وميض ‎[Jip (Perkin Elmer) beta‏ في لوحات ‎(Perkin Elmer) Microbeta® alae‏ يُجرى تحليل اندماج ثيميدين كعدّات في الدقيقة ‎(CPM)‏ تتضح النتائج كمتوسط من ثلاث نسخ + ‎SEM‏ في 0 الأشكال 3 و4. مثال 7: تحديد حركية وانجذابية تفاعل بيني لأجل 00-1 بشري؛ سينومولجس وفأر مع أجسام مضادة ضد 10-1 مكتسبة السمة البشرية يوضح هذا المثال ارتباط الأجسام المضادة ضد 00-1 مع 00-1 بشري؛ سينومولجس أو فأر. تُجرى تحليل للتفاعل البيني كله على حساسات حيوية خالية من العلامات عند ‎L525‏ ‏مالم يُذكر خلاف ذلك. تُستخدم حساسات حيوية لرنين بلازمون سطحي ‎(ProteOn—-XPR™‏ ‎from BioRad™ and Biacore 2000™ and Biacore T200™ from GE Life‏ ‎Sciences)‏ لدراسة ‎PD-1‏ بشري وقرد سينومولجس وُستخدم حساس حيوي لقياس تداخل طبقة حيوية ‎(Octet-Red384, Fortebio/Pall Life Sciences)‏ لدراسة 00-1 فأر. تُجرى 0 تجارب ‎ProteOn‏ في ‎PBS‏ أس هيدروجيني 7.4 + 70.01 من مثبت أس هيدروجيني للتشغيل ‎(PBST)‏ 10/660-20. تُجرى تجارب ‎Biacore‏ في 10 مللي جزيئي جرامي ‎Hepes‏ أس هيدروجيني 7.4 150 ‎Ae‏ جزيئي جرامي ‎(HBST+) 70.05 (NaCl‏ 10/660-20 وتُجرى تجارب ‎Octet‏ في ‎HBST+‏ مع 1 ‎[aha‏ لتر ‎BSA‏ تُجرى معالجة بيانات ‎ProteOn‏ في برنامج ‎(ProteOn Manager‏ تُعالج بيانات ‎Biacore‏ في 818617/8181010؛ وتُضبط بيانات ‎Octet‏ ‏5 بشكل بسيط إلى صفر في برنامج التحكم. تعتبر بيانات ‎SPR‏ ذات مرجعية مزدوجة ‎(Myszka,‏
‎J Mol 480090111 2(5):279-284)‏ ,1999 وتتناسب عالميا مع نموذج ‎Langmuir‏ بسيط لتحديد ثابت تفكك التوازن؛ ‎(KD‏ من نسبة ثوابت المعدل الحركي ‎[kd =KD)‏ 8). تحليل تركيز بدون معايرة ‎(CFCA) (Calibration—free concentration analysis)‏ يتم بشكل تجريبي تحديد التركيز النشط لمونومر ‎(hPD=1)‏ 0100-1 بشري ‎(Sino‏
‎Biologicals, cat. no. 10377-HO8H) 5‏ للاستخدام كحلالة في التجارب الحركية مع ‎19Gs‏ ‏ثابت باستخدام اختبار ‎CFCA‏ على "12007 ‎Biacore‏ مجهز برقاقة حساس ‎.CM5‏ من أجل تحضير الأسطح لهذه التجارب» يقترن مقدار كبير (تقريبا 12000 وحدة استجابة) من 00/015 4 (أو في بعض التجارب؛ جسم مضاد 2-1961 منافس) مع ‎amine‏ على خلية تدفق 2( مع ترك خلية تدفق 1 فارغة (منشط ومُعاق” فقط بدون أي 96ا) لتوفير سطح مرجعي.
‏0 تُحقن عينات 0000-1 عند تركيزات رمزية 0.1؛ ¢1 و10 ميكروجرام/ ملليلتر لمدة 36 ثانية عند معدلات تدفق منخفضة (5 ميكرولتر/ دقيقة) وعالية (100 ميكرولتر/ دقيقة). تتولد الأسطح مع خليط من 1:2 حجم/ حجم من مثبت أس هيدروجيني للتصفية 196 ‎Pierce‏ (أس هيدروجيني ‎Jia 48‏ جرامي ‎(NaCl‏ يُجرى تحليل البيانات بأداة ‎CFCA‏ في البرنامج 1200 لاستنتاج قيمة نشاط واضحة للحلالة ‎¢hPD-1‏ المستخدمة لتصحيح تركيز البروتين "الرمزي ‎"(nominal)‏
‏5 الخاص بهاء حسب التحديد عن طريق الامتصاص عند 280 نانومتر مع معامل إخماد مناسب؛ بتركيز بروتين 'نشط ‎(active)‏ توجد بعض المجموعات نشطة بنسبة 732؛ بينما تكون الأخرى نشطة بنسبة 100 7.
‏تحليل حركي لارتباط ‎(hPD-1)‏ 00-1 بغري مع ‎«C2 «C1 mAb15 MADT‏ 3؛ و04؛ ‎MAbs‏ مقترن مع ‎amine‏
‏20 يُستخدم ‎ProteOn-XPR36‏ مجهز برقاقات ‎(BioRad™, GLC (ulus‏ ‎cHercules, CA)‏ لتحديد حركيات وانجذابية ارتباط مونومر 1010-1 مع مجموعة من ‎MADS‏ ‏ضد 0000-1 مقترن مع ‎(C45 C3 «C2 C1 015 (mAb7) amine‏ مثبت أس هيدروجيني للتشغيل ‎PBST‏ يتم تحضير الأسطح لهذه التجارب في ثلاث خطوات؛ )1( يتم تنشيط قنوات المركب الترابطي بحد أدنى لمدة دقيقتين باستخدام خليط مُحضر حديثا من العوامل
الكاشفة للتنشيط عند 0.8 مللي جزيئي جرامي ‎EDC‏ نهائي 0.25 مللي جزيئي جرامي 5010-5 في الماء؛ (2) تقترن ‎IgGs‏ لمدة ثلاث دقائق عند 15 ميكروجرام/ ملليلتر في 10 ‎le‏ جزيئي جرامي من أسيتات الصوديوم ‎(sodium acetate)‏ أس هيدروجيني 4.5؛ و(3) يتم إعاقة إسترات تفاعلية فائضة لمدة ثلاث دقائق مع 1 جزيئي جرامي إيثانولامين ‎(ethanolamine)‏ ‏5 110 أس هيدروجيني 8.5. تتراوح المستويات النهائية لأجل 96ا مقترن من 400 وحدة استجابة إلى 1157 وحدة استجابة. يُحقن مونومر 7010-1 بنسق حركي على دفعة واحدة ‎(Bravman‏ ‎al., 2006, Anal Biochem 358(2):281-288)‏ ]© مع قنوات "الحلالة ‎'(analyte)‏ ‏كسلسلة تخفيف بمقدار ثلاثة أضعاف مع تركيزات 'نشطة' عالية بقيمة 30.44 أو 36 نانو جزيئي جرامي؛ على أساس التجرية. تكون أزمنة الترابط والتفكك 3 دقائق و20 دقيقة؛ على التوالي وتُحقن 0 جميع الحلالات في دورتي ارتباط. تتولد الأسطح مع خليط من 1:2 حجم/ حجم من مثبت أس هيدروجيني للتصفية ‎Pierce ١96‏ (أس هيدروجيني 2.8): 4 جزيئى ‎NaCl ha‏ جدول 13: التحليل الحركي لارتباط مومونر 1010-1 مع ‎IgGs‏ مقترن مع ‎amine‏ ‎ka‏ (1/ جزيئي | ‎kd‏ (1/ ‎KD‏ (بيكوجزيني جرامي) ‎IgG‏ جرامي ثانية) ‎X‏ ثانية) ‎X‏ ‏, عند 25 "مثوية 5410 4-0 ‎=N) 96> 94> 4.45 4.53 mAb7 4‏ 2) ‎=N) 1217 943 5.89 ,5.25| 4.84 ,5.57 C4 higG1‏ 2(
‎kd | Juss /1( ka‏ (1/ ‎KD‏ (بيكوجزيئي جرامي) ‎IgG‏ جرامي ثانية) * | ثانية) ‎x‏ ‎١‏ عند 25 "مثوية 5410 4-0 ‎=N) 687 502 | 5.73 ,5.57 | 8.34 11.1‏ 2) التفاعلات البينية لمونومر 7000-1 مع ‎MALT‏ و0015 لم تُظهر تدهور مرئي في استجابة الارتباط في طور التفكك المسموح به؛ لذلك يوضع الحد الأعلى على ‎KD kd ad‏ الخاصة بهم؛ وفقا مع ‎(Katsamba et al, 2008, Anal ")596 rule) 75 sad‏ ‎Biochem 352(2):208-221)‏ التي تم تطبيقها على حد أعلى على قيم ‎KD kd‏ الخاصة بهم. يشير ‎=N‏ 2 إلى تجريتين مستقلتين على رقاقات مختلفة. تفاعل تبادلي لأجل 00/7 و0015 مع 00-1 قرد سينومولجس يتم تحديد حركيات ارتباط شدف ‎Fab‏ تخليقية منقاة (00/07 5 ‎(MADb15‏ مع ‎hPD-1-‏ ‎(R&D systems cat. no. 1086PD) hFcl‏ و ‎cynoPD-1-hFcl‏ (مُحضر داخليا) باستخدام ™2000 ‎Biacore‏ مجهز برقاقة حساس ‎CMY‏ ومثبت أس هيدروجيني للتشغيل ‎HBST+ | 0‏ يقترن جسم مضاد ضد 16 متعدد النسخ مع ‎amine‏ برقاقة ونُستخدم لالتقاط ما يقرب من 90 وحدة استجابة من ‎hPD-1-hFcl‏ و125 وحدة استجابة ‎cynoPD-1-hFcl‏ ‏على ‎DA‏ تدفق 352 مع ترك خلية تدفق 1 فارغة (سطح التقاط ضد ‎AFC‏ مجرد) لتوفير قناة مرجعية. تُحقن ‎Fabs‏ تخليقية منقاة لمدة دقيقتين كحلالة عند صفرء 10؛ و100 نانوجزيئى جرامي من بروتينات التحام 00-1-0501 ملتقطة حديثا؛ مع السماح بزمن تفكك ‎sad‏ 15 دقيقة. 5 تتولد أسطح الالتقاط باستخدام 75 مللي جزيئي جرامي من حمض الفسفوريك ‎(phosphoric‏ ‎(iad; acid)‏ عينات ‎MADT Fab‏ في دورتي ارتباط. تكون جميع المعقدات ‎Fab/PD-1‏
مستقرة جداء بحيث لا تُظهر أي من التفاعلات البينية أي تدهور ‎Je‏ فى استجابات الارتباط الخاصة بهم في زمن التفكك المسموح به؛ لذلك يتم تطبيق 'قاعدة 75" ‎(Katsamba et al,‏ جدول 14: تحديد انجذابية ‎Fabs‏ من ‎MADLS s MADT‏ تجاه بروتينات التحام -1010-1 ‎cynoPD-1-hFcl 0-61 5‏ ‎ka‏ (1/ جزيئي ‎KD /1( kd* ١‏ (بيكوجزيئي ‎١ ADS‏ على ‎BEN‏ | جرامي ثانية) ‎X (Aol |X‏ جرامي) عند 510 10*-5 5 مثوية ‎hPD-1-| mAb7‏ 5.67 >5.7 >101 ‎hFcl Fab‏ ‎PD-1-‏ ‎mAb7‏ ‎hFcl‏ 5.26 >5.7 >108 ‎Fab‏ ‏سينومولجس ‎hPD-1-| 5‏ 9.16 >5.7 >62 ‎hFcl Fab‏ ‎PD-1-‏ ‎mAb15‏ ‎hFcl‏ 8.24 >5.7 >69 ‎Fab‏ ‏سينومولجس ‏تبعية درجة حرارة اتذجابية ارتباط ‎hPD-1‏ تجاه ‎«mADb7 imADb15‏ و3 يُستخدم "12007 8180016 مجهز برقاقة حساس ‎CM4‏ لتحديد حركيات وانجذابيات ارتباط المونومر 0000-1 مع مجموعة من ‎livia‏ 1064 (00015؛ 007 و03) ملتقطة عند مستويات منخفضة بواسطة جسم مضاد ضد 76 متعدد النسخ مقترن مع ‎amine‏ يتم التقاط ‎mAbs 0‏ 010964 عند 10 ميكروجرام/ ملليلتر على ‎WIA‏ تدفق فردية؛ مع ترك خلية تدفق 1 فارغة
للعمل كسطح مرجعي (سطح التقاط مجرد ( . يُحفن 1 ‎hPD-‏ عند تركيزات نشطة بمقدار صفر 0 1 و00 1 نانوجزيئي جرامي لمدة ثلاث دقائق مما يسمح بطور تفكك مدته 18 ‎Ady‏ تتولد أسطح ‎f‏ لالتقاط مع 5 7 مللي جزيني جرامي من ‎aan‏ الفسفوريك بعد كل دورة ارتباط. جدول 15: تحليل حركية لارتباط مونومر 1050-1 كحلالة مع جزيئات 01964 ملتقطة ضد ‎hFc 5‏ درجة ‎KD /1) ka‏ 4 على ‎kd‏ )1/ الحرارة ‎١‏ جزيئي جرامي (نانوجزيئي رقاقة ثانية) )25°25 |( جرامي) ‎x 1.71 x 3.49‏ ‎mAb15‏ 25 0.49 5*10 10*-4 ‎x 3.73 x 4‏ ‎mAb15‏ 37 0.54 5110 4-710 ‎x 1.73 x 2.37‏ ‎mAb7‏ 25 0.73 5110 4-710 ‎x 3.63 x 4.28‏ ‎mAb7‏ 37 0.85 5110 4-710 ‎x 2.25 x 2.14‏ ‎C3‏ 25 10.5 5110 3-410 ‎x 1.56 x 9.70‏ ‎C3‏ 37 16.1 5*10 2-10 تفاعل تبادلي لأجل 00857 مع 00-1 فأر
يُستخدم ‎Octet-Red384‏ مجهز بأطراف حساس ‎streptavidin‏ لتحديد ما إذا كان
00-1 فأر يرتبط مع ‎.MADT‏ يتم اختيار هيئة اختبار ميل للشره لزيادة حساسية كشف الاختبار. تُغطى الحساسات بواسطة ‎kappa‏ ضد بشري معالج بالبيوتين متعدد النسخ وتُستخدم ‎LEY‏ ‎de sans‏ من ‎aca MADS‏ 1700-1 لأجل ‎higG4‏ (00857؛ ‎«C1‏ 02؛ و03) عند 10
ميكروجرام/ ملليلتر؛ يُجرى التقاط كل ‎MAD‏ على ثمانية حساسات. كمقارن موجب؛ تُغطى ثمانية حساسات ‎streptavidin‏ بواسطة 43ل معالج بالبيوتين (6810501607085)؛ جسم مضاد ‎PD-1‏ ‎Ala‏ فأر . يتعرض كل حساس مغطى بواسطة ‎mAb‏ للحلالات التالية؛ مثبت أس هيدروجينى « 1 ميكروجزيئي جرامي من 00-1-0150 فأر لمواقع الارتباط 1 ميكروجزيئي جرامي من ‎hPD-1-‏ ‎FC‏ لمواقع الارتباط (مقارن موجب) أو 1 ميكروجزيئي جرامي من 16114-056 لمواقع الارتباط
0 (قارن سالب). جميع بروتينات التحام ‎Fe‏ التخليقية من أنظمة 4810. بالتالي يتم اختبار كل تفاعل بينى حلالة/ ‎MAD‏ على حساسات مزدوجة.
الأجسام المضادة ‎(C1‏ 02؛ و3© ضد 00-1 لا ‎Jas‏ 00-1-1501 فأر (البيانات غير موضحة). الجسم المضاد 0107 ضد 00-1 يريط 00-1-5701 فأر بصورة ضعيفة (البيانات غير موضحة). جميع الأجسام المضادة ضد 00-1 المختبرة ترتبط مع ‎hPD-1-‏
‎.hFC 5‏ توضح هذه النتائج أن 0007 يكون متفاعل تبادليا بصورة ضعيفة مع 50-1 فأر بينما لا تكون 01؛ 02؛ و63 متفاعلة تبادليا مع 00-1 فأر. مثال 8: معالجة السرطان بأجسام مضادة ضد ‎PD-1‏
‏يوضح هذا المثال ‎gall‏ استخدام الأجسام المضادة ضد 00-1 الخاصة بالاختراع الحالي لعلاج السرطان.
‏20 يُجرى انتقاء المرضى المصابين بسرطان القولون والمستقيم الانبثاثي القابل للقياس؛ المثبت هستولوجيا غير مُعالج مسبقاء للمعالجة بجسم مضاد ضد ‎PD-1‏ يتم تخصيص المرضى لمجموعة من مجموعتي المعالجة: علاج كيميائي بالإضافة إلى علاج وهمي أو علاج كيميائي بالإضافة إلى ‎.MADT‏ تُستخدم خوارزمية توزيع عشوائي ديناميكي لتحقيق توازن بشكل عام وفي كل فئة من الفئات التالية: مركز دراسة؛ حالة أداء ‎ECOG‏ خط قاعدي (صفر مقابل = 1)؛
موقع مرض أولي (القولون مقابل المستقيم)؛ وعدد من المواقع الانبثاثية (1 مقابل > 1). يُعطى العلاج الكيميائي أسبوعيا لمدة أول 6 أسابيع من كل دورة مدتها 8 أسابيع. يستمر العلاج الكيميائي حتى اكتمال الدراسة )96 أسبوع) أو تقدم المرض. يُعطى ‎MADT‏ بمقدار 5 ‎[ane‏ كجم أو علاج وهمي كل أسبوعين. المرضى الذين يتناولون 00/807 الذين أظهروا استجابة كاملة مثبتة أو تعرضوا لسمية مرفوضة كنتيجة للمعالجة بالعلاج الكيميائي يُسمح لهم بوقف العلاج الكيميائي واستمرار تناول 0187 بمفرده كمعالجة أولي. المرضى الذين تم توزيعهم عشوائيا إلى مجموعة 057 قد يتناولون 00/7 كمكون لمعالجة ثانية. بعد اكتمال الدراسة؛ تُجرى متابعة المرضى من حيث السلامة وأي معالجة لاحقة كل 4 شهور حتى الموت؛ وقف المتابعة؛ أو نهاية الدراسة. سيخضع المرضى لتقييم حالة الورم في البداية وعند اكتمال كل دورة مدتها 8 أسابيع 0 باستخدام تقنيات تصوير إشعاعي مناسبة؛ نموذجيا فحص ‎CT‏ حلزوني. سيتم تحديد استجابة أو تقدم الورم بواسطة باحث وبرامج إشعاعية مستقلة ‎(IRF) (independent radiology facility)‏ باستخدام ‎Response Evaluation Criteria in Solid Tumors.
Therasse et al.‏ )2000( سيُجرى تقييم ‎IRF‏ بدون معرفة تعيين المعالجة أو تقييم الباحث. بالإضافة إلى ذلك؛ سيكمل المرضى ‎Functional Assessment of Cancer Therapy—Colorectal‏ ‎«(FACT-C), Version 4 5‏ أداة تم التحقق من صحتها لتقييم جودة الحياة ‎(quality of life)‏ ‎(QOL)‏ في مرضى سرطان القولون والمستقيم؛ في البداية وقبل كل دورة معالجة حتى تقدم المرض. ‎Ward et al. (1999) Qual.
Life Res. 8: 181-195.‏ يتم تقييم الأمان من تقارير الحالات السلبية؛ نتائج الاختبارات المعملية؛ وقياسات العلامة 0 الحيوية. يتم تصنيف الحالات السلبية والنتائج المعملية غير الطبيعية باستخدام ‎National‏ ‎Cancer Institute Common Toxicity Criteria (NCI-CTC), Version 2‏ تتضمن إجراءات الأمان المحددة سابقا ‎af‏ حالات سلبية ذات أهمية خاصة (فرط ضغط الدم؛ بيلة بروتينية؛ تجلط ونزف).
الإجراء الناتج الأولي هو مدة البقاء على قيد الحياة بشكل عام. يتضمن الإجراء الناتج الثانوي: بقاء على قيد الحياة بدون تقدم»؛ معدل استجابة موضوعية (كامل وجزئي)؛ مدة الاستجابة؛ والتغيير في درجة ‎FACT-C QOL‏ تتحدد مدة البقاء على الحياة على أنها الزمن من التوزيع العشوائي إلى الوفاة. بالنسبة للمرضى على قيد الحياة في زمن التحليل» ستخضع مدة البقاء على قيد الحياة للمراقبة في تاريخ آخر اتصال. يتحدد البقاء على الحياة بدون تقدم على أنه الزمن من التوزيع العشوائي إلى وقت سابق من تقدم المرض أو الوفاة أثناء الدراسة؛ المعروف بأنه الوفاة بأي سبب خلال 30 يوم من آخر جرعة من العقار أو العلاج ‎Slash‏ الخاص بالدراسة. بالنسبة للمرضى على قيد الحياة بدون تقدم للمرض في وقت التحليل» سيخضع البقاء على قيد الحياة بدون تقدم للمراقبة عند ‎HAT‏ تقييم للورم؛ أو اليوم 1 (اليوم الأول من المعالجة الخاصة بالدراسة) إذا لم يتم إجراء تقييم لاحق. في تحليل الاستجابة الموضوعية؛ يتم تصنيف المرضى بدون تقييمات للورم على أنهم غير مستجيبين. ‎acing‏ تقدم الورم وتحليلات الاستجابة على تقييمات ‎IRF‏ يتم تحليل التغيير في جودة الحياة على أنه الزمن الذي يمر حتى حدوث تدهور في ‎((TDQ) QOL‏ المحدد بأنه طول الفترة الزمنية من التوزيع العشوائي إلى أقرب نقطة 3 2 8 ينخفض من البداية في تحديد الدرجات الفرعية لأجل ‎(CCS) FACT-C‏ الخاص بسرطان القولون؛ تقدم المرض؛ أو 5 الوفاة أثناء الدراسة. سيتم أيضا تحديد ‎TDQ‏ من أجل ©-ا10 (مجموع ‎(CCS‏ السلامة الجسدية والوظيفية) وإجمالي ‎FACT-C‏ للتغييرات من البداية. مثال 9: معالجة السرطان بأجسام مضادة ضد ‎PD-1‏ ‏يوضح هذا المثال استخدام الأجسام المضادة ‎aca‏ 00-1 الخاصة بالاختراع الحالي لعلاج السرطان. الدراسة في هذا المثال هي طور 1؛ معلومة الطرفين؛ متعددة ‎Sail‏ متعددة الجرعات؛ زيادة للجرعة»؛ آمنة؛ ‎(PK‏ ودراسة ‎PD‏ لجسم مضاد ‎MADT‏ أحادي النسخ ضد 50-1 مُعطى داخل الوريد لمرضى بالغين مُعالجين مسبقا يعانون من ميلانوما انبثاثية أو متقدمة ‎(Lage‏ ‏سرطان رقبة ورأس لخلية حرشفية ‎((SCHNC)‏ كارسينوما مبيض؛ ساركوماء أو تراجع أو معاندة لمفومة ‎Hodgkin‏ تقليدية (41ا6). يتم تلخيص بروتوكول الدراسة أدناه في جدول 16.
جدول 16: ذراع 1: ‎MADT‏ 0.5 مجم/ كجم عقار ‎IV‏ 007 كل 21 ذراع 1: ‎MADT‏ 1 مجم/ كجم كل | ‎IV Jie‏ 07 كل 21 ذراع 1: ‎MADT‏ 3 مجم/ كجم كل | ‎IV Jie‏ 07 كل 21 1 يوم يوم ذراع 1: ‎[ane 10 MADT‏ كجم كل | عقار ‎IV‏ 07 كل 21 معايير الاختيار: -تشخيص هيستولوجي أو سيتولوجي لميلانوما انبثاثية أو متقدمة موضعيا ‎«SCCHN ٠‏ سرطان ‎‘Rate‏ ساركوما أو ‎cHL‏ متراجعة أو معاندة: -يجب أن يتلقى المريض 1 على الأقل وما لا يزيد عن 5 قبل خطوط العلاج لمرض متكرر أو انبثاثي؛ بما في ذلك معايير الرعاية وعلاجات الفحص. إصابة واحدة على الأقل يمكن قياسها كما تحدد بواسطة ‎RECIST‏ الإصدار 1.1؛ أو (بالنسبة إلى ‎RECIST (HL‏ الإصدار 1.1؛ أو (بالنسبة إلى ‎(CHL‏ جرح واحد شديد ‎(Deauvilled/5)‏ على الأقل بطول > 1.5 سم يمكن قياسه بالتصوير مقطعي بالانبعاث البوزيتروني ‎(FDG PET) fluordeoxyglucose‏ كما تحدد بواسطة ‎Response Criteria for Malignant Lymphoma‏ الذي لم يسبق إشعاعه مسبقا. - بالنسبة 0 لتمدد الجزء 1(ب) وجميع مجموعات الجزء 2: وافق المريض على الخضوع لمعالجة مسبقة وعلى خزعة معالجة. - المعايير الملاثئمة لاستقصاء وظيفة الكلى؛ الكبد؛ نخاع العظم- انبثاثات السحايا الرقيقة أو المخ النشط. - ميلانوما عينية- مرض مناعي ذاتي نشطء معروف أو مشتبه به. يُسمح بتسجيل المرضى الذين يعانون من البهاق؛ داء السكري من نوع 1؛ قصور درقية متخلف بسبب حالة مناعة ذاتية تتطلب استبدال هرمون فقط» صدفية لا تتطلب معالجة نظامية؛ أو حالات غير 5 متوقع تكرارها في غياب مثير خارجي. تشخيص نقص مناعي سابق أو زراعة أعضاء يتطلب
علاج كابح للمناعة؛ -بالنسبة للجزء 2: قبل المعالجة بجسم مضاد 1 00 أو 11 ‎PD‏ - تاريخ ‎AE‏ يتدخل فيه مناعة بدرجة > 3 ‎Ly)‏ في ذلك ارتفاعات 851/ ‎ALT‏ تعتبر عقار ذو صلة وعرض إطلاق سيتوكين ( يتعلق بعلاج تعديل مناعي سابق ‎ie)‏ مثبطات نقطة فحص مناعية؛ عوامل مثيرة بصورة مشتركة؛ إلخ) ويتطلب علاج كابح للمناعة. ‎(Objective Response Rate)‏ في البداية وكل ستة أسابيع حتى يصل تقدم المرض أو السمية المرفوضة إلى 24 شهر. مثال 9: النشاط المعارض للأجسام المضادة ‎aca‏ 00-1 في خلايا 1 أولية بشرية وقرد سينومولجس
يوضح هذا المثال نشاط الأجسام المضادة ضد 00-1 في خلايا 1 أولية بشرية وقرد سينومولجس.
في هذه الدراسة؛ يتم فحص النشاطات المعارضة للجسم المضاد 007 ضد ‎PD-1‏ ‏أحادي النسخ في المعمل باستخدام تفاعل خلية لمفاوية مختلط ‎(MLR)‏ يتم ‎Jie‏ خلايا ‎WNT‏ ‏من الخلايا وحيدة النواة في الدم المحيطي ‎(peripheral blood mononuclear cells)‏
‎—(PBMCs) 15‏ من بشري وقرد سينومولجس. بعد التعرض إلى ‎«mAb7‏ يتم تقييم أنقسام الخلية وإفراز سيتوكين في المعمل تحت شروط تنشيط مختلفة باستخدام ‎MLR‏ من ‎dal‏ بشري وقرد سينومولجس واختبار إطلاق سيتوكين باستخدام دم قرد سينومولجس منشط مع مولد ضد فائق من سم معوي عنقودي 8 ‎(SEB) (Staphylococcal enterotoxin)‏ الطرق:
‏0 الخلايا اللمفاوية ‎T‏ البشرية
‏يتم شراء غلالة شهباء بشرية من ‎«(Stanford, CA) Stanford Blood Center‏ مخففة مع محلول ملحي ثابت ‎f‏ لأس الهيدروجيني فوسفات ‎(PBS)‏ ودتم وضعها على ‎Ficoll‏ من أجل عزل ‎.PBMCs‏ يتم ‎hu-PBMCs Jue‏ 4 مرات مع ‎PBS‏ وتُعزل الخلايا اللمفاوية ‎T‏
باستخدام مجموعة عزل خلية ‎add Pan T‏ بشري مع انتقاء سالب حسب الوصف في بروتوكول الصانع ‎.(Miltenyi Biotec, San Diego, CA)‏ الخلايا اللمفاوية آ لقرد سينومولجس يتم شراء ‎PBMCs‏ حديثة من قرد سينومولجس من ‎Bioreclamation IVT (New‏ ‎York, NY) 5‏ وتُغسل مرتين مع 085. تُعزل الخلايا اللمفاوية 1 باستخدام كائنات رئيسة غير بشرية خاصة بمجموعة عزل خلية ‎pan T‏ مع انتقاء سالب حسب الوصف في بروتوكول الصانع ‎.(Miltenyi Biotec, San Diego, CA)‏ توليد ‎WIA‏ شجيرية بشرية تُظهر مستويات عالية من ‎PD-L1‏ ‏يتم شراء غلالة شهباء بشرية من ‎«(Stanford, CA) Stanford Blood Center‏ 0 مخففة مع ‎PBS‏ وبتم وضعها على ‎Ficoll‏ من أجل ‎hu-PBMCs Jie‏ يتم غسل ‎hu-PBMCs‏ 4 مرات مع ‎PBS‏ وتُعزل مجموعة من الخلايا الأحادية المتمايزة 14 ‎CD14+)‏ ‏مرات مع وتعزل مجموعة من ‎x DAA‏ يزة بروتوكول الصائع ‎AS. (Miltenyi Biotec, San Diego, CA)‏ الخلايا بعد ذلك عند 5 * 0 خلية/ ملليلتر في وسط 1640 ‎Roswell Park Memorial Institute (RPMI)‏ كامل مدعم مع 710 من مصل بقري جنيني ‎(FBS) (fetal bovine serum)‏ لمدة 7 أيام . ‎ac Xi‏ المزارع مع ‎IL-4‏ بشري تخليقي ‎(th—)‏ )1000 وحدة/ ملليلتر) ‎(R&D Systems,‏ ‎Minneapolis, MN)‏ ومع عاما إثارة مستعمرة ملتهمة ‎(GM-CSF) rh-granulocyte—‏ ‎(rh-GMCSF)‏ (500 وحدة/ ملليلتر) ‎(R&D Systems, Minneapolis, MN)‏ فى الأيام صفر 2 و5. تُحصدء ‎PRES:‏ وتعد ‎DCs‏ غير ناضجة في اليوم ‎J‏ يتم اختبار عينة من كل 0 مستحضر لإظهار 000-11 باستخدام ‎r-=phycoerythrin (RPE)‏ مُعلم مع ‎hu-PD-L1‏ ‎(eBioscience/Affymatrix, San Diego, CA)‏ بواسطة قياس التدفق الخلوي باستخدام جهاز تحليل ‎.(BD Biosciences, San Jose, CA) LSRFortessa™‏ توليد خلايا شجيرية لقرد سينومولجس تُظهر مستويات عالية من ‎PD-L1‏
يتم شراء ‎PBMCs‏ حديثة لقرد سينومولجس من ‎Bioreclamation IVT‏ ‎(New York, NY)‏ وتُغسل مرتين مع 085. يتم عزل الخلايا الأحادية +6014 باستخدام مجموعة ‎Jie‏ خلية ‎CD14‏ تخص كائنات رئيسة غير بشرية مع انتقاء موجب حسب الوصف في بروتوكول الصائع ‎-(Miltenyi Biotech, San Diego, CA)‏ تُبذر ‎LIAN‏ بعد ذلك عند 5 * 5410 خلية/ ملليلتر في وسط 1640 ‎RPMI‏ كامل مدعم مع 710 ‎FBS‏ لمدة 7 أيام. تُدعم الخلايا مع ‎rhiL-4‏ )1000 وحدة/ ملليلتر) ‎(R&D Systems, Minneapolis)‏ ‎rh-GMCSF‏ )500 وحدة/ ملليلتر) ‎(R&D Systems, Minneapolis, MN)‏ في الأيام صفرء 2 و5. تُحصد؛ تُغسل؛ وتعد ‎DCs‏ غير ناضجة؛ في اليوم 7. يتم اختبار عينة من كل مستحضر لإظهار 000-11 باستخدام 10-11 ضد ‎hu‏ مُعلم مع ‎RPE‏ ‎(eBioscience/Affymatrix, San Diego, CA) 0‏ بواسطة قياس التدفق الخلوي باستخدام جهاز تحليل ‎.(BD Biosciences, San Jose, CA) LSRFortessa™‏ توليد نسخ خلية بروتين استشعاعي أخضر ‎JeKo—1-Luc‏ تُظهر مستويات عالية من ‎PD-L1‏ ‏بشري ‏يتم شراء خط خلية 160-1عل (لمفومة خلية قشرية) من ‎American Type Culture‏ ‎(ATCC, Manassas, VA) Collection 15‏ يتم إنتاج خط خلية ‎JeKo-1-luc-2A-GFP‏ ‏عند ‎(South San Francisco, CA) Pfizer‏ بواسطة عملية تنبيغ تستخدم جسيمات فيروسية بطيئة تُظهر ‎luciferase‏ يراعة ‎(IUC2A)‏ بشكل فردي وبروتين استشعاعي أخضر ‎(green‏ ‎(GFP) fluorescent protein)‏ من خلال نظام ‎bicistronic‏ مع علامة ‎blasticidin‏ ‎x 1 <LVP323 (AMSBIO)‏ جسيمات107 لكل 200 ميكرولتر) وفقا لبروتوكول الصانع. تور خلايا 8/60-1ل وتُخفف إلى 1 ‎x‏ 6010 خلية/ ملليلتر في ‎RPMI‏ مع 720 من وسط 5. تضاف الجسيمات الفيروسية البطيئة إلى الخلايا المخففة بنسبة 50 ميكرولتر من الفيروس لكل 0.5 ملليلتر من الخلايا. لتوليد خط خلايا ‎JeKo-1‏ يُظهر ‎chu-PD-L1‏ يتم تخليق ‎cDNA‏ 00-00-11 خصيصا ونسخه إلى ناقل إظهار عام ‎(PCDNA3.1)‏ عن طريق ‎Life‏ ‎Diego, CA) Technologies‏ 580). يتم إنتاج خط خلية +06-6©1ا-6160-1ل يُظهر ‎hu-PDL-1 5‏ بشكل مستقر عند ‎(South San Francisco, CA) Pfizer‏ عن طريق التثقيب
الكهربائي باستخدام نظام ‎(Lonza, Walkersville, MD) Amaxa® Nucleofector‏ و/ا ‎Kit‏ ‏مستخدم وفقا لبروتوكول الصانع ‎Walkersville, MD)‏ ,0128ا). بعدئذ تنمو الخلايا في وجود 0 ميكروجرام/ ملليلتر ‎hygromycin‏ لمدة أسبوعين ثم تنتقى بواسطة تصنيف خلية باستخدام مصنف خلية || ‎.(BD Biosciences, San Jose, CA) BD FACSAria™‏ يُجريى تصنيف
الخلايا مع نسخة الجسم المضاد ‎(Affymetrix /eBioscience, hu-PD-L1 ax MIH-1‏ ‎San Diego, CA)‏ المُعلمة ‎Bile‏ بعلامة ‎(APC)‏ 001700/07ال8. تتمدد وتُختبر النسخ الموجبة لإظهار ‎PD-L1‏ عالي باستخدام قياس التدفق الخلوي ‎(LSRFortessa™ analyzer,‏ ‎.BD Biosciences, San Jose, CA)‏ تنتقى النسخ المتولدة من خلايا فردية مصنفة ومحتوية على مستويات عالية من إظهار ‎PD-L1‏
0 توليد الأجسام المضادة يتم توليد 00/7 في خلايا ‎(Pharmaceutical Sciences, Pfizer Inc, CHO‏
‎Saint Louis, MO)‏ باستخدام مادة ‎Good Laboratory Practices (GLP)‏ (رقم المجموعة 110005717 5) وتتوافر في 20 مللي جزيئي جرامي من ‎<histidine‏ 85 مجم/ ملليلتر ‎sucrose‏ 0.2 مجم/ ملليلتر 5010816-580ا00» 0.05 مجم/ ملليلتر ‎disodium‏
‎(EDTA 5‏ مثبت أس هيدروجيني 5.5. يُقاس السم الداخلي بمقدار > 0.01 وحدة أوروبية/ مجم.
‏الجسم المضاد المقارن المستخدم في جميع الاختبارات في المعمل هو فيروس هريس ضد بقري مستنسخ في إطار 0664-1165 (الإطار ذاته ‎Jie‏ 1/57). يتولد الجسم المضاد المقارن عند ‎(South San Francisco, CA) Pfizer‏ رقم المجموعة: 4945؛ مع > 0.3 وحدة أوروبية/ مجم من سم داخلي.
‏20 يتم توليد جسمين مضادين ضد ‎hu=PD-1‏ من الترتيبات المنشورة في براءات الاختراع السابقة ‎ais‏ إظهارها في إطار 064-116 الذي يشبه الإطار المستخدم لأجل ‎MABT‏ يتم توليد الأجسام المضادة عند ‎(South San Francisco, CA) Pfizer‏ وبتم تعيينها على أنها مقارن موجب 1 ومقارن موجب 2 (رقم المجموعة 5053 و4255؛ على التوالي). يكون السم الداخلي المفقاس بمقدار > 0.13 وحدة ‎[dig ysl‏ مجم و< 0.056 وحدة أوروبية/ مجم؛ على التوالي.
اختبار بشري باستخدام ‎WA‏ شجيرية تُظهر مستويات عالية من ‎PD-L1‏ ‏تم اقتباس البروتوكول من 2004 ‎Kruisbeek et al,‏ مع بعض التعديلات. تُحصد ‎hu-DCs‏ أولية متمايزة في اليوم 7 وبتم التحقق منها بواسطة قياس التدفق الخلوي لمستويات عالية من إظهار 00-11 وإشارات استثارية بصورة مشتركة لتنشيط خلية 7؛ حيث تتضمن العلامات ‎CD80‏ و1086 (تم شراء الأجسام المضادة من ‎BD Bioscience, San Jose,‏ ‎(CA‏ يتم عد الخلايا وتعريضها للإشعاع عند 3000 وحدة إشعاع (رادات) باستخدام آلة أشعة ‎(Radsource, Brentwood, TN) RS2000 x‏ لمنع ‎DCs‏ من إفراز سيتوكينات ولجعلها تعمل فقط كداعم عرض ‎AG‏ للخلايا 1. بالتالي؛ يُحث ناتج الاختبار فقط بخلايا 1. في اليوم 7 تُحصد خلايا ‎hu-T‏ المعزولة حديثا من مانحات خيفية. توضع خلايا ‎T‏ في أطباق مع ‎DCs‏ ‏0 المعرضة للإشعاع بنسبة 1:10 (يتم تحديد شروط اختبار مثلى بمقدار 2 ‎x‏ 54+10 خلية 1 محضنة مع 2 ” 4410 ‎DCs‏ في 200 ميكرولتر من المزارع) في وجود تركيزات 00/7 مختلفة؛ أجسام مضادة مقارنة سالبة وموجبة؛ أو وسط فقط (لتقييم تفاعل خط البداية). توضع جميع الحالات في أطباق مسطحة القاع مُعالجة في مزرعة أنسجة لها 96 عين ‎(Fisher‏ ‎.Scientific Pittsburg, PA)‏ تُزرع الخلايا باستخدام وسط 72717015 بدون ‎(Lonza, (hae‏ ‎Walkersville, MD) 5‏ لمنع تغير المصل البشري بين التجارب. يتم تحضين المزارع عند 17مثوية مع 75 002 لمدة 5 أيام. في اليوم 5؛ تُجمع المواد الطافية وثقاس تركيزات السيتوكين باستخدا ‎dé‏ خرزات بالقاس الخلوى ‎BD Biosciences, San Jose, CA) (CBA)‏ باستخدام مصفوفة خرزات بالقياس الخلووٍ ( ‎(CA «San Jose (BD Biosceinces (LSRFortessa™‏ ونُجرى تحليل البيانات باستخدام ‎.(BD Biosceinces, San Jose, CA) BD FCAP Array Software Version 3.0 20‏ يُقاس الانقسام في مزارع مماثلة عن طريق إضافة 1 ميكروكيورس من ثيميدين مُعاير مع ‎(Perkin Elmer, Waltham, MA) 3H methyl‏ إلى كل عينة وتُحضن إضافيا لمدة 16 إلى ساعة. تُحصد المزارع بعد ذلك على مرشحات اندماج حمض الديوكسى ريبونووي ‎«(Perkin Elmer, Waltham, MA) (DNA) (deoxyribonucleic acid)‏ واندماج ثيميدين
مُعاير يوفر مؤشر لانقسام خلية مُقاس بالعدّات لكل دقيقة ‎(cpm)‏ باستخدام ‎MicroBeta2‏ ‎.(Perkin Elmer, Waltham, MA) Machine‏ اختبار بشري باستخدام خط خلية يُظهر ‎JeKol-PD-L1‏ ‏يُجرى هذا الاختبار باستخدام نسبة 1:5 لخلايا آ إلى خط خلية ‎JeKo-1-PD-L1‏ ‏5 المستخدم بحيث توفر هذه النسبة طريقة أكثر مثالية لتوقف إفراز سيتوكين في اليوم 5. بالتالي؛ تُحضن كل عين مع 2 ‎X‏ 5410 خلية ‎T‏ مع 4 ‎x‏ 4410 160-1-00-11عل. في اليوم 5 يُجرى تجميع المواد الطافية وثقاس تركيزات سيتوكين باستخدام ‎(BD Biosciences, CBA‏ ‎San Jose, CA)‏ وفقا لبروتوكول الصانع. يُظهر خط الخلية كمية بسيطة جدا من الجزيئات الاستثارية بصورة مشتركة ‎CD80)‏ و00086)؛ وبالتالي؛ يكون الانقسام ‎ual)‏ طفيف جدا بعد 0 المعالجة بالجسم المضاد. على العكس» يكون إفراز سيتوكين» بما فيه 2-اا؛ قوي مما يسمح بقياس إفراز سيتوكين بعد معالجة ‎MADT‏ وليس انقسام خلية 1. اختبار قرد سينومولجس باستخدام خلايا شجيرية تُظهر مستويات ‎dle‏ من ‎PD-L1‏ ‏تُحصد ‎DCS‏ المتمايزة في اليوم 7 وبتم التحقق منها بواسطة قياس التدفق الخلوي (باستخدام جهاز تحليل ‎(CA San Jose (BD Biosceinces (LSRFortessa™‏ لإظهار ‎Je 000-11 5‏ وإشارات استثارية بصورة مشتركة ضرورية لتنشيط خلية ‎¢T‏ حيث تتضمن العلامات ‎CD80‏ و1086 (الأجسام المضادة من ‎.(BD Bioscience, San Jose, CA‏ يتم عد الخلايا وتعريضها للإشعاع عند 3000 راد باستخدام آلة أشعة ‎RS2000 X‏ ‎Brentwood, TN)‏ ,480500106)). تُحصد خلايا ‎T‏ لقرد سينومولجس معزولة حديثا من مائحات خيفية. توضع ‎WIA‏ آ في أطباق مع ‎DOS‏ مُعرضة للإشعاع باستخدام نسبة 1:10 خلايا ‎T‏ إلى ‎DCs‏ (اختبار ‎Jil‏ عند تحضين 2 ‎X‏ 5410 خلية ‎T‏ مع 2 ‎x‏ 4810 005 في 0 ميكرولتر من مزرعة) في وجود تركيزات ‎MADT‏ مختلفة؛ أجسام مضادة مقارنة سالبة وموجبة؛ أو وسط فقط لتقييم تفاعل خط البداية. توضع جميع الشروط في أطباق مسطحة القاع مُعالجة في مزرعة أنسجة لها 96 عين ‎(Fisher Scientific Pittsburg, PA)‏ تُزرع الخلايا باستخدام وسط 22-7/1/015 بدون مصل ‎(Lonza, Walkersville, MD)‏ لمنع تغير المصل
البشري بين التجارب . يتم تحضين المزارع عند 7مثوية مع 5 0602 ‎Bal‏ 5 أيام. في اليوم 5 تُجمع المواد الطافية وثقاس تركيزات السيتوكين باستخدام ‎(BD Biosciences, San CBA‏ ‎Jose , CA)‏ وفقا لبروتوكول الصانع. يتم الحصول على البيانات باستخدام قياس التدفق الخلوي (جهاز تحليل ‎(CA San Jose (BD Biosceinces (LSRFortessa™‏ ونُجرى تحليل البيانات باستخدام 3.0 ‎BD FCAP Array Software Version‏ ‎(BD Biosceinces, San Jose, CA)‏ في نفس الوقت وفي مزارع مشابهة؛ يضاف 1 ميكروكيورس من ثيميدين مُعاير مع ‎(Perkin Elmer, Waltham, MA) 3H methyl‏ إلى كل عينة؛ تُزرع الخلايا إضافيا لمدة 6 1 إلى 8 1 ‎del‏ لقياس ‎f‏ لاتقسام . تُحصد المزارع على مرشحات اندماج ‎lig (Perkin Elmer, Waltham, MA) (Glass Printed filtermate A) DNA‏ اندماج تيميدين مُعاير؛ يوفر مؤشر لانقسام خلية؛ بالعذات لكل ‎cpm dads‏ باستخدام ‎.(Perkin Elmer, Waltham, MA) MicroBeta2 Machine‏ إطلاق سيتوكين من دم 38 سينومولجس مُحث بإثارة مولد ضد فائق (سم معوي عنقودي ‎(B‏ ‏يتم تجميع دم كامل من قرد سينومولجس؛ يُقسم 225 ميكرولتر من الدم بكميات متساوية إلى أطباق لها 96 عين مُعالجة بمزرعة أنسجة ‎(Fisher Scientific, Pittsburg, PA)‏ 5 تُحضن العينات مرتين عند 37"مئوية في 75 0602 في وجود ‎MADT‏ أو جسم مضاد مقارن سالب متطابق مع نوع مماثل عند تركيزات تتراوح من 0.1 إلى 100 ميكروجرام/ ملليلتر. بعد ساعة من إضافة الجسم المضادء ‎HE‏ العينات مع 0.1 ميكروجرام/ ملليلتر ‎SEB‏ ‎(Toxic Technologies, Sarasota, FL)‏ وتُحضن المزارع ‎sad‏ 3 أيام. في اليوم 3؛ تُحصد؛ تُجمع؛ وتُجمد البلازما عند -80"مثوية. ثقاس تركيزات /دلاعاء 2-ااء 5 ‎TNF-g‏ في عينات 0 مصل 403% مرتين وفقا لبروتوكول الصانع باستخدام أطباق اختبار مناعي ‎(Meso MSD‏ ‎Scale Diagnostics, Rockville, MD)‏ وقاريء ‎MSD‏ (طراز 1200) مع برنامج ‎MSD‏ ‎Discovery Workbench‏ (إصدار 4.0.12). يتم تسجيل الوسائل في المرتين. النتائج نشاط ‎MADT‏ المعارض على خلايا 1 الأولية البشرية
عند تنشيط خلايا ‎T‏ الأولية البشرية في ‎MLR‏ مع ‎hu-DCs‏ خيفية تُظهر انقسام خلية ‎T‏ ‏متزايد ‎(ule) 07 (PD L1‏ بواسطة اندماج ثيميدين مُعاير) وتنشيط خلية ‎ulin) T‏ بواسطة إفراز سيتوكين معزز للالتهاب) بطريقة تعتمد على الجرعة. تؤدي معالجة خلايا ‎T‏ مع 00/07 )10 ميكروجرام/ ملليلتر) إلى زيادة في انقسام خلية ‎T‏ تصل إلى 2.5 ضعف أكثر من المعالجة بجسم مضاد مقارن سالب (10 ميكروجرام/ ملليلتر). تزيد مستويات ‎TNF-a 5 IFN-y‏ إلى 8 و5 أضعاف؛ على التوالي؛ بالمقارنة مع الجسم المضاد المقارن السالب. زيادة ‎IFNy‏ تفوق زيادة ‎TNF-a‏ لم يُكتشف إظهار 2-اا في هذه المزارع. عند تنشيط خلايا ‎T‏ الأولية البشرية في ا باستخدام خط خلية الورم 000-11 1 ‎WAS JeKo‏ تُعرض مولد ضد خيفي؛ يحث 7ه زيادة تعتمد على الجرعة لإفراز ‎IFN=y‏ (تصل إلى 2.5 ضعف)؛ 1807-08 (تصل إلى 0 2 ضعف)؛ و2-اا (تصل إلى 5 أضعاف) بالمقارنة مع الجسم المضاد المقارن السالب. تأثير ‎٠7‏ في هذا الاختبار يشبه البيانات الناتجة مع الجسمين المضادين المقارنين الموجبين. لم بلاحظ انقسام خلية آ متزايد تحت هذه الشروط. يكون انقسام الخلية ضئيل مع إشارة ضعيفة متوفرة بواسطة ‎CD86 5 CD80‏ بالمقارنة مع ‎MLR‏ الناتج بصورة غير مباشرة عن طريق ‎DCs‏ ‏أولية. لا يتم اكتشاف ‎IL-10‏ 4حااء 17/8-اا و6-اا لأنه ضئيل في جميع الاختبارات 5 الموصوفة أعلاه. نشاط ‎MADT‏ المعارض على خلايا آ الأولية لقرد سينومولجس انجذابية ارتباط ‎(MADT‏ عندما يكون في المحلول» مع ‎hU=PD-1‏ وقرد سينومولجس ‎PD-1‏ تكون متشابهة جدا في اختبار الاستبعاد الحركي ‎(kinetic exclusion assay)‏ ‎—KD) (KinExA)‏ 23 5 28 بيكوجزيئي جرامي لأجل 00-1 بشري 385 سينومولجس؛ على 0 ااتوالي). يكون 050 من 00/807 على الخلايا التي تُظهر 00-1 بشري و00-1 قرد سينومولجس متشابه أيضا. في اختبار وظيفي ‎MLR‏ يستخدم خلايا 1 و0005 معزولة من قرود سينومولجس مختلفة؛ ‎MADT‏ يحث انقسام وتنشيط خلية ‎T‏ بطريقة تعتمد على الجرعة (مقاسة بواسطة اندماج ثيميدين مُعاير). يُلاحظ هذا التأثير أيضا مع المقارن الموجب (جسم مضاد 1 وجسم مضاد 2) وليس مع الجسم المضاد المقارن السالب. يُحسن ‎MADT‏ إفراز السيتوكين أيضا 5 (ي؛ ‎IFN-y‏ و»-لا1»؛ يصل إلى 5 أضعاف و3 أضعاف)؛ بالمقارنة مع المعالجة بجسم
مضاد مقارن سالب. لم يُكتشف إظهار 2-اا في هذه المزارع. في اختبار إطلاق سيتوكين مختلف باستخدام دم قرد سينومولجس كامل مستثار مع 0.1 ميكروجرام/ ملليلتر من مولد ضد فائق ‎SEB‏ ‎sl‏ 3 أيام» 0007 ‎Cay‏ (0.1- 100 ميكروجرام/ ملليلتر) إفراز ‎(IFN-y‏ 2حالء 5 ‎TNF-c‏ ‏أكبر عند المقارنة مع الجسم المضاد المقارن السالب.
تُستخدم دراسات ‎past MLR‏ إعدادات في المعمل تشبه ‎diy‏ مجهرية لورم عند تنشيط خلايا ‎T‏ وإظهار مستويات عالية من 00-1 في وجود ‎DCS‏ خيفية أو خلايا ورم تُظهر ‎.PD-L1‏ يُثبط التفاعل البينيى ‎PD-1/PD-L1‏ انقسام خلية ‎T‏ إضافي ‎(Daly‏ سيتوكين. إضافة الأجسام المضادة ضد 00-1 في تلك ‎MLRSs‏ تُجدد تنشيط خلية ‎T‏ وانقسام متزايد وإفراز ‎COS hu‏ خصوصا بحااعلء من أجل إعاقة محور ‎.PD-1/ PD-L1‏
يُسرع ‎MADT‏ انقسام وإفراز ‎IL-2 5 (TNF-a (IFN=y‏ عن طريق خلايا 1 بشرية عند زراعته مع خلايا خيفية تُظهر مستويات عالية من ‎DCs) PD-L1‏ أو خط خلية ‎JeKo 1 PD-‏ 1). على العكس»؛ الجسم المضاد المقارن السالب؛ والذي ثبت أنه يشبه الوسط فقط؛ لا يُحسن هذه التأثيرات. بالمثل» ‎MADT‏ يُحسن انقسام خلية 1 ‎IFN=y‏ وإفراز ‎TNF-a‏ في نظام ‎MLR‏ ‏لقرد سينومولجس؛ بالإضافة إلى إطلاق سيتوكين مُحسن من دم قرد سينومولجس كامل باستخدام
‎Aa A ga SEB 15‏ فائق.
‏توضح هذه النتائج أن الجسم المضاد ‎MADT‏ ضد 00-1 يُحسن انقسام خلية 1 وإفراز سيتوكين معزز للالتهاب يتضمن ‎(IFN—-y)‏ 01811800-98-0008 عامل تتكرز ورم ‎alpha‏ ‎«(TNF-a‏ و2-(اا) ‎interleukin‏ تلاحظ هذه النشاطات في ‎LDA‏ 1 أولية بشرية ولقرد سينومولجس.
‏20 مثال 10: تأثير الأجسام المضادة ضد 00-1 في مرض ‎dad)‏ مقابل عائل
‏يوضح هذا المثال تأثير الأجسام المضادة ضد 00-1 على تنشيط وتمدد خلايا 1 في الجسم الحي باستخدام نموذج ‎xeno-aGVHD‏ في فثران ‎NSG‏ منقولة مع ‎hu-PBMCs‏
‏في هذه الدراسة؛ يُدرس تأثير الجسم المضاد 00/07 ضد 0100-1 على تنشيط وتمدد خلايا 1 في الجسم ‎all‏ في نموذج مرض ‎dad)‏ مقابل عائل حاد دخيل (867110) في ‎Obi‏
غير سمينة مريضة بمرض السكر ‎(NOD) (non-obese diabetic)‏ نقص مناعي مشترك شديد ‎(SCID) (severe—combined immunodeficiency)‏ ناقصة ‎gamma‏ مستقبل ‎(NSG) (IL2rynull) (interleukin 2 receptor gamma null) interleukin 2‏ باستخدام خلايا وحيدة النواة في الدم المحيطي ‎(PBMCs) hu‏
يتم شراء فئران إناث ‎NSG‏ منقوصة المناعة (5 لكل مجموعة) تتراوح أعمارهم بين 8 إلى أسابيع (الاسم الرسمي؛ ‎(Cg-Prkdcescidll2rgtm1Wjl/SzJ (NOD‏ من ‎Jackson‏ ‎(Bar Harbor, ME) Laboratory‏ توضع جميع الحيوانات في مأوى في منشأة خالية من مسبب المرض عند ‎(South San Francisco, CA) Pfizer‏ وفقا إلى ‎Institutional‏ ‎Animal Care and Use Committee (IACUC)‏
10 يتم شراء غلالة شهباء بشرية من ‎«(Standord, CA) Stanford Blood Center‏ مخففة مع محلول ملحي ثابت الأس الهيدروجيني فوسفات ‎(PBS)‏ ويتم وضعها على ‎Ficoll‏ من أجل ‎.PBMCs Jie‏ يتم غسل ‎PBMCs‏ مرتين مع 085. تتحلل خلايا الدم الحمراء ‎(Red‏ ‎(RBCs) blood cells)‏ باستخدام مثبت أس هيدروحيني للانحلال أمونيوم- كلوريد- بوتاسيوم ‎(ACK) (@ammonium-—chloride—potassium)‏ كما هو مبين في بروتوكول الصانع ‎(Life‏ ‎Technologies; San Diego, CA) 5‏ بعد انحلال ‎(RBC‏ تُغسل ‎WIA‏ مرة أخرى وتُخفف في ‎PBS‏ عند 5 ‎x‏ 7410 خلية لكل ملليلتر. لحث 800-8671100 تُحقن ‎Jala NSG (li‏ الوريد عن طريق وريد ذيل مع ‎.hu-PBMCs‏ يتلقى كل فأر 1 ‎x‏ 7410 خلية في 200 ميكرولتر من ‎-PBS‏ في جميع التجارب» توزن الفئران 3 مرات أسبوعيا ‎ily‏ من حيث ظهور أعراض تشبه 600-8617110 با فيها فقدان الوزن وضعية ‎colin)‏ الفراء المنفوش, قلة الحركة؛ وفي بعض الحالات؛ إسهال. ثقتل الفئران بعد فقد 720 من وزن الجسم أو فقد 1 ‎fon‏ يوم لمدة يومين؛ تُسجل هذه النقطة الزمنية على أنها زمن البقاء على قيد الحياة. يتم توليد ‎(MADT‏ جسم مضاد مقارن سالب؛ وأجسام مضادة مقارنة موجبة حسب الوصف أعلاه في مثال 9.
تُعالج فئران ‎NSG‏ بأجسام مضادة مقارنة سالبة؛ أجسام مضادة مقارنة موجبة؛ أو 7 .)؛ عند نطاق جرعات بين 10-0.1 ملليجرام لكل كيلوجرام ‎(milligrams per‏ ‎(Mg/kg)) kilograms)‏ مجم/ كجم) . تُعطى الأجسام المضادة للفئران باستخدام الوسط الناقل المناسب في اليوم 2 واليوم 8 بعد انتقال 00-081/0. طريقة إعطاء الجسم المضاد عبر الغشاء البربتوني ‎.(ip) (intraperitoneal)‏ يُحصد الدم المحيط؛ الطحال؛ والكبد من الفئران المزدرعة مع 011-081/05. يتم تحضير معلقات خلية فردية من كل عضو كما يلي: يُجمع الدم المحيطي وتُحلل ‎RBCs‏ باستخدام مثبت أس هيدروحيني للانحلال ‎ACK‏ وتغسل مع 085. يتجانس الطحال والكبد ميكانيكيا باستخدام الجزء الخلفي من مكبس المحقنة لنقع الخلايا في مرشح سعته ‎TO‏ ميكروجزيئي جرامي وتُغسل مرة 0 واحدة مع 5. تُحلل ‎RBCs‏ وتُغسل الخلايا مرتين أخرتين وتُنقع ‎Bye‏ أخرى في مرشح سعته 70 ميكروجزيئي جرامي. في هذه المرحلة؛ تكون خلايا الطحال جاهزة. لعزل كريات الدم البيضاء من الكبد؛ توضع معلقات الخلية الفردية في طبقات باستخدام مستوى متدرج ‎Percoll‏ عند 730 إلى 780 ‎(Percoll® Plus, GE Healthcare Bio—-Sciences, Pittsburgh, PA)‏ وتخضع للطرد المركزي عالي السرعة. تُحصد ‎WIA‏ الدم البيضاء من الطبقة المتوسطة وتُغسل 5 مرتين مع ‎PBS‏ يتم عد جميع معلقات الخلية الفردية ويُستخدم 1 ‎X‏ 6410 خلية من كل ‎Lue‏ ‏من أجل تصنيف خلية منشطة فلوروسينية ‎(FACS)‏ لاختبارات إفراز سيتوكين بشري؛ تنضب خلايا +6045 للفأر باستخدام مجموعة ‎Jie‏ خلية ‎CD45‏ تخص فأر عن طريق الانتقاء الموجب؛ حسب الوصف في بروتوكول الصائنع ‎«(Miltenyi Biotec, San Diego, CA)‏ لضمان أن إفراز السيتوكين من ‎WIA‏ مناعية بشرية فقط. يتم عد ‎(LAY‏ ويُستخدم 1 ‎x‏ 6410 خلية من كل عينة في كل اختبار. يتم الحصول على معلقات خلية فردية من الدم المحيطي؛ الطحال» والكبد من ‎Ob‏ ‎.xeno-aGvHD‏ يتم تحضين إجمالي 1 ‎X‏ 6410 خلية لكل عينة لمدة 30 ‎dad‏ عند 4"مئوية تحت الحماية من الضوءٍ مع خليط من أجسام مضادة أحادية النسخ مناسبة معلمة استشعاعيا في مثبت أس هيدروجيني ‎FACS‏ يتضمن 1 ‎PBS x‏ يحتوي على 72 من مصل بقري جنيني ‎(FBS) 5‏ ثم تُغسل الخلايا مع مثبت أس هيدروجيني 5 . من أجل التبقيع داخل الخلايا
لبروتين 67 ‎(KI6T) Kiel‏ لقياس خلايا الانقسام)؛ يتم تثبيت الخلايا بعد تبقيع السطح باستخدام ‎Intracellular Fixation & Permeabilization Buffer Set‏ ‎(Affymetrix/eBioscience, San Diego, CA)‏ وفقا لبروتوكول الصانع. يُجرى التبقيع داخل الخلايا ‎sad‏ 30 دقيقة عند 4"مئوية في الظلام. في نهاية التبقيع؛ تُغسل العينات وتخضع لقياس التدفق الخلوي متعدد اللون باستخدام جهاز تحليل ‎(BD BD LSR Fortessa™ all‏ ‎.Biosciences, San Jose, CA)‏ تُجرى تحليلات البيانات باستخدام برنامج ‎FlowJo‏ ‎.(FLOWJO LLC, Ashland, OR)‏ الأجسام المضادة المستخدمة في الاتحادات المختلفة لتمييز جزيئات سطح ‎WAN‏ هي: ‎Ameyan i Pacific Blue (PB)‏ ضد ‎hu-CD45‏ ‎CD45-Brilliant Violet (BV)-711‏ ضد ‎ji‏ « ضد ‎<hu-CD3-PerCPCy5.5‏ ‎phycoerythrin—Cy7 (PE-Cy7) 0‏ أو ‎BV-786‏ ضد 0-008 ‎fluorescein‏ ‎isothiocyanate (FITC)‏ أو ‎BV-650‏ ضد 00-004 ‎BV-786‏ (نسخة ‎(EH12.1‏ أو ‎PE‏ ضد ‎PE hu-PD-1‏ (النسخة ‎(MIH-4‏ أو ‎FITC‏ ضد ‎<hu-PD-1‏ ‎allophycocyanin (APC)‏ ضد ‎hu-Ki67‏ (جميع الأجسام المضادة من ‎BD‏ ‎«(CA «San Jose (Biosciences‏ ضد ‎(PE-Affymatrix-eBioscience, hu-PD-L1‏ ‎San Diego, CA) 5‏ وصبغة تفاعلية استشعاعية زرقاء للتبقيع الذي يُميز الخلايا الحية من الميتة ‎.(Life Technologies, Grand Island, NY)‏ معلقات الخلية الفردية من مجموعة غنية ‎CD45‏ بشرية من الطحال ‎ally‏ يتم الحصول عليها من ‎fi‏ 600-8671100 (بعد نضوب 0045 فأري). يتم تحضين إجمالي 1 ‎x‏ 6410 خلية لكل عينة في أطباق مسطحة القاع مُعالجة في مزرعة أنسجة لها 96 ‎(Fisher (pe‏ ‎Scientific; Pittsburg, PA) 0‏ في وسط ‎X-Vivo‏ سعته 200 ميكرولتر. تُترك الخلايا غير مستثارة أو مستثارة مع أسيتات ميريستات فوريول ‎(PMA) (phorbol myristate acetate)‏ نانوجرام/ ملليلتر و(1000) ‎ionomycin‏ 125 نانوجرام/ ملليلتر؛ ‎Aas‏ الاستثارة المنخفضة أو ‎PMA‏ 50 نانوجرام/ ملليلتر 5 ‎ionomycin‏ 1 ميكروجرام/ ملليلتر كحالة الاستثارة المرتفعة (الناتج كل منه من ‎.(Sigma-Aldrich , Saint Louis, MO‏ تُحضن المزارع لمدة © ساعات 5 عند 37"مثوية في 75 002 لضمان أقصى إفراز سيتوكين. تُجمع المواد الطافية وثقاس تركيزات
سيتوكين البشرية باستخدام مصفوفة خرزات بالقياس الخلوي ‎(CBA)‏ خاصة بسيتوكينات بشرية ‎(BD Biosciences, San Jose, CA)‏ وفقا لبروتوكول الصانع. يتم الحصول على البيانات باستخدام قياس التدفق الخلوي (جهاز تحليل ‎San BD Biosceinces (LSRFortessa™‏ ‎(CA Jose‏ ونُجرى تحليل البيانات باستخدام 3.0 ‎FCAP Array™ Software Version‏ ‎(BD Biosciences, San Jose, CA) 5‏ يتم شراء مجموعات مصفوفة خرزة ‎IFN-y‏ -ناتاء ‎chu-TNF-q‏ و2-اا-نا من ‎(San Jose, CA) BD Biosciences‏ وتم تأكيد أنها لا تتفاعل تبادليا مع السيتوكينات الفأرية. تتضمن جميع التحليلات مقارنة الوسائل باستخدام اختبار ‎t‏ لعينة مستقلة أى ‎ANOVA‏ ‏ثنائي الاتجاه باستخدام ‎.(Graphpad Software, San Diego, CA) Graphpad Prism‏ 0 تعتبر قيم م < 0.05 ذات دلالة احصائيا. يتم تصوير بيانات الترقيع في الأشكال كتركيزات متوسطة تتضمن الخطأً المعياري للمتوسط ‎.(sem) (standard error of the mean)‏ ‎dallas‏ الفئران منقوصة المناعة ‎NSG‏ بالجسم المضاد 00/807 ضد 00-1 تُسرع فقدان وزن الجسم (جدول 17) وتحث إشارات الأمراض الأخرى التي تتم ملاحظتها في هذا النموذج؛ مثل وضعية الانحناء» الفراء المنفوش؛ قلة الحركة؛ وفي بعض ‎Vall‏ إسهال. في هذا النموذج؛ يتوقع أن يكون فقدان وزن الجسم سريع بين اليوم 20 واليوم 30 بعد الانتقال ‎lia hail)‏ ‎(Schroeder and DiPersio, 2011‏ بسبب المعالجة مع ‎MADT‏ والمقارنات الموجبة 1 و2 التي تسرع أعراض ‎xeno-aGVHD‏ يجب قتل الفئران في نقاط زمنية مبكرة ويمكن ألا يتم الحصول على منحنى البقاء على قيد الحياة؛ بالتالي؛ يعتبر فقدان وزن الجسم هو قياس الناتج الأولي. في التجربة الأولى؛ تُعالج الفتران مع 0.1؛ 1؛ و10 مجم/ كجم من ‎MADT‏ أو جسم 0 مضاد مقارن سالب عند 10 مجم/ كجم. في جدول 17( يُحسب فقدان وزن الجسم عن ‎Gob‏ ‏تسوية اختلافات وزن الجسم بين المجموعات المُعالجة في اليوم 23 بالنسبة لليوم صفر. تشير القيم إلى متوسط 5 فتران لكل مجموعة + ‎SEM‏ ‏جدول 17
زن ‎١‏ زن أ زن الجسم الرقم ف : مجموعات وزب لجسم ورب لجسم وز الح فقدان وزن لكل المعالجة : اله اليوم ‎fon 23 asl 14 asdl | ia‏ لجسم مقارن سالب 20.68 + 20.88 + / ‎mAb‏ 22 + 0.36 5 صفر / ‎10M‏ =[ | 0.36 1.11 كجم ‎:mAb7‏ 10 20.78 + 6 + 4 + 715 مجم/ كجم 0.36 0.57 0.86 ‎21.52١ [axe 1 :mAb7‏ + 6 + ]177+ 5 حاف كجم 0.36 0.5 0.8 ‎:mAb7‏ 0.1 20.5 + 19.78 + 2 + 5 717.95 مجم/ كجم 0.78 1.38 1.95 تُعالج الفتران بالأجسام المضادة المشار إليها في اليوم 2 واليوم 8 بعد انتقال ‎hu—‏ ‎PBMC‏ حين يصبح فقدان وزن الجسم ظاهرا في المجموعة المقارنة في اليوم 23؛ يتم اكتشاف فقدان وزن الجسم وتقدم المرض في ‎(HB‏ فردية من جميع المجموعات المُعالجة بالجسم المضاد 7 ضد 00-1 بدءا من اليوم 11-10 بعد انتقال 11-081/05. في ‎WS‏ المجموعتين 5 المُعالجتين مع 1 مجم/ كجم و10 مجم/ كجم يصبح فقدان وزن الجسم ذو دلالة بين الأيام 14 إلى 23؛ عند المقارنة مع المجموعة المُعالجة بالمقارن السالب ‎>p)‏ 0.0001). في اليوم 23؛ يتم اكتشاف 715 من فقدان الوزن في المجموعات المُعالجة مع 1 مجم/ كجم و10 مجم/ كجم و77.9 من فقدان الوزن في المجموعة المُعالجة مع 0.1 مجم/ كجم (جدول 7 1( . تُظهر تحليلات ‎FACS‏ للدم المحيطيء الكبد؛ والطحال زيادة في النسبة المئوية للخلايا 0 الموجبة 00-0045 وخلايا ‎T‏ الموجبة 1710-0003 في المجموعة المُعالجة مع ‎MADT‏ مقابل المجموعة المقارنة. توضح البيانات التمثيلية من الطحال أيضا زيادة في عدّات خلية 1 الموجبة
00-8 وعدّات خلية ‎T‏ الموجبة ‎hu-CD4‏ (لكن إلى حد أقل) في ‎MADT‏ مقابل مجموعة ‎dallas‏ الجسم المضاد المقارن السالب. ‎Baad‏ أيضا ‎sab)‏ مشابهة في عدّات خلية 10-1 في الكبد والدم. لتقييم ما إذا كانت الزيادة في خلايا 1 ترجع إلى إعاقة نشاط 00-1 من خلال ارتباط 7 مع ‎LDA‏ 1 بشرية؛ بقع خلايا 1 مع جسم مضاد تجاري لأجل 50-1 (النسخة
‎(EH12.1 5‏ الذي ينافس ارتباط ‎.MADT‏ لا تُظهر الخلايا اللمفاوية المُعالجة مع ‎MADT‏ من جميع الأعضاء (التي تم تحليلها بواسطة ‎(FACS‏ ارتباط مع 51112.1. لتأكيد أن خلايا 1 المُعالجة مع ‎MADT‏ لا تزال تُظهر 00-1 ‎aid‏ خلايا ‎T‏ بنسخة ضد 10-000-1 مختلفة (النسخة ‎(MIH4‏ تتنافس جزئيا مع 00/07 للارتباط مع خلايا 1. تُظهر النتائج أن خلايا 1 المُعالجة مع 00/57 تريط 1/1114 جزئيا؛ بالتالي؛ تشير إلى أن 00-1 يظهر على خلايا 1
‏0 المُعالجة وإلى وضوح إعاقة نشاط 00-1 بواسطة 00/07 (البيانات غير موضحة؛ تظل في تسجيلات ‎Pfizer‏ الداخلية). لا ُلاحظ تغييرات يمكن اكتشافها لإظهار ‎hu=PD-L1‏ في الطحال» على خلايا ‎T‏ (10-003 موجب)؛ أو على خلايا ‎T‏ غير ‎hu-CD3) hu‏ سالب). يرتفع 6:67 علامة لانقسام الخلية اللمفاوية؛ في الخلايا الموجبة 10-0003 من المجموعة المُعالجة مع 07-0681591 مقابل المجموعة المُعالجة مع المقارن السلبي في مجموعة
‏5 المحكمين الوسطى للطحال. ثلاحظ نتائج مشابهة في الدم والكبد.
‏لفحص تأثيرات 00/07 على إطلاق سيتوكين أثناء 900-26171100 يتم ‎Jie‏ الخلايا الموجبة ‎hu-CD45‏ (من الكبد والطحال) ‎Lilia]‏ من الخلايا الموجبة 0045 لفأر. تُعالج هذه الخلايا اللمفاوية بعد ذلك مع خليط من ‎PMA‏ و010/ا100000 (في 2 من التركيزات: منخفضة مقابل مرتفعة) أو تُترك بدون معالجة لمدة 8 ساعات عند 37"مثوية. يُقاس إفراز سيتوكين في
‏0 المواد الطافية بواسطة ‎CBA‏ (جدول 18). لا يتم الحصول على سيتوكينات يمكن اكتشافها بدون استثارة (جدول 18). بعد المعالجة مع 0057 ترتنع ‎hu-TNF-q 5 chu-IL-2 chu-IFN-y‏ في الخلايا اللمفاوية البشرية المعزولة من أحياز الطحال والكبد للفأر بالمقارنة مع المجموعات المقارنة. تحت شروط استثارة ضعيفة خارج الجسم الحي؛ خلايا ‎T‏ المُعالجة مع 0/7 تُزيد إفراز ‎hu—IFN-y‏ إلى مستويات أعلى بصورة كبيرة من تلك التي في خلايا ‎T‏ المعزولة من المجموعة
‏5 المقارنة السالبة ‎>p)‏ 0.05). تحت شروط استثارة قوية خارج الجسم الحي؛ يتم حث جميع
السيتوكينات في جميع المجموعات لكنها تزداد إضافيا في خلايا 7 المُعالجة مع ‎MADT‏ بالمقارنة مع ‎T LIS‏ المعزولة من المقارنات السالبة. يوضح جدول 18 البيانات المُجمعة من 5 ‎OB‏ ‏مختلفة في كل مجموعة. في جدول 18( ‎>p** 0.05 >p*‏ 0.01 في اختبار ) غير مزدوج يقارن ‎mAb7‏ مقابل المجموعة المقارنة السالبة؛ ‎=aGvHD‏ مرض رقعة مقابل عائل حاد ¢ ‎=Hu‏ ‏د بشري؛ ‎=N ¢lonomycin =Ino ¢Interleukin-2 =IL-2 ¢Interferon gamma =IFN-y‏ عدد؛ ‎=ns‏ ليس له دلالة؛ ‎=P‏ قيمة ©؛ ‎=PMA‏ أسيتات ميريستات فوربول؛ 111570 عامل تنكرز ورم 81018؛ ‎=Xeno‏ خارجي المنشاً. جدول 18 شروط معالجة في الجسم الحي خلية | استثارة لمفاوية ‎١‏ خار <- ‎Alaa‏ ‏= سيتوكين يي ‎Hu‏ الجسم ‎Hu‏ مقارن سالب ات ‎oe‏ الحي ‎N mAb7‏ | اختبار ‎t‏ ‏بيكوجرا ‎mAb‏ ‏عضو | ‎PMA)‏ بكوجام غير ‎Able /‏ 0 مجم/ كجم معزول ‎(ono‏ 0 0 1 مجم/ كجم مزدوج (نانوجرام/ ملليلتر) ‎as‏ . . 1 + 59.4 43.41+163.9 5 7 0.05 مركم ا الطحا )10/ 863.4+2599.96 ‎>p*‏ ‏ثائ ‎ha‏ 111.99 5 ‎J‏ نوجرام/ 5 0.01 ملليلتر) ‎BE 5.20+19.41| 776.26+783.1‏
840.2+1813.98 ‏الطحا‎ ‎5 1.40+14.26 6 J
BE 2.55¢9.92 | 60.455
TNF- ‏الطحا‎ ‎5 2.51+14.1 | 209.73+368.81 0
J
556.942931.26 | 178.8+3838.65 ‏الكبد‎ ‎8 4
IFN-y ‏الطحا‎ ‎5| 141.242523.9| 204.11
J
1240.+4565.26 | 809.2+7759.44 ‏قوى‎ ‎5 ١ ‏الكبد‎ ‎8 4 100/50)
IL-2 1834.413204.5 | 141+16735.57 ‏نانوجرام/‎ 0١ ‏الطحا‎ ‎5 ٍ 3 7 ‏ملليلتر)‎ J >p** 5| 188.2+758.1| 150.82+1611.9 ‏الكبد‎ ‎0.01 INE 0 ‏الطحا‎ ‎5١ 281.3622311.7 ١ 224.2+2842.6
J
BE 0.96+4.6 1.2543.1 ‏لا يوجد‎
IFN—y . ‏الطحا‎ ‎5 1.16+4.86 0.97+3.94 ‏(صفر/‎ ‏ل أ|صفر‎
نانوجرام/ 0.14£3.9 0.41+4.66 ‎BE‏ ‏ملليلتر) ‏الطحا ‎IL-2‏ ‏0.77£3.23 0.55+4.39 5 ‎J‏ ‎TNF-‏ ‏الكبد 0.09£0.1 0.2+0.3 5 0 الطحا 0.15+4 0.37 5 ‎J‏ ‏توضح هذه النتائج أن ‎XeN0-aGVHD dallas‏ مع الجسم المضاد 00/07 ضد ‎PD-1‏ ‏شرع تطور ‎xeno—aGvHD‏ في فتران ‎(NSG‏ حسب القياس عن طريق فقدان وزن الجسم انقسام خلية ‎oT‏ وافراز سيتوكين المتزايد ‎Lo‏ في ذلك ‎interferon-gamma (IFN—y)‏ و(2-اا) ‎.nterleukin-2‏ ‏5 مثال 11: تحديد خصائص الأجسام المضادة ضد 0-1م يوضح هذا المثال انجذابية ارتباط نوعية؛ ونشاط إعاقة المركب الترابطي للجسم المضاد 7 ضد 00-1 على الخلايا التي تُظهر مستقبل سطح ‎PD-1‏ ‏يتولد 0707 الجسم المضاد المقارن السالب؛ والأجسام المضادة المقارنة الموجبة حسب الوصف أعلاه في مثال 9. يتم شراء نسخة الجسم المضاد 1112.1 ضد 00-1- 00 الأولي المُعلم مع ‎phycoerythrin (PE)‏ أو 786-/81) ‎Brilliant Violet‏ وأجسام مضادة مقارنة لنوع ممائل مُعلمة بنفس الصبغات من ‎(BD Biosciences (San Jose, CA)‏ يتم شراء جسم مضاد مقارن لنوع ممائل ‎Ja IgG‏ هامستر ونسخة ‎J43‏ ضد 1 ‎PD-‏ فأر ‎PE-alak‏ من ‎.(San Diego, CA) 1/01611/680506 6‏ يتم الحصول على ‎hu-PD-L2‏ ‎(CD273)‏ مُعالج بالبيوتين 5 ‎hu-PD-L1‏ مُعالج بالبيوتين من ‎(Newark, DE)‏ ‎.ACRO Biosystems 5‏ يتم شراء 000-11 3 ‎PD-L2‏ لقرد سينومولجس من ‎Creative‏ ‎(Shirley, NY) BioMart® Recombinant Proteins‏ وتعلم كل منهما داخليا مع ‎Alexa‏
‎Fluor® 647dye‏ باستخدام مجموعة تعليم بروتين 647 ‎Alexa Fluor®‏ ‎(Life Technologies, San Diego,CA)‏ وفقا لتعليمات بروتوكول الصانع. يتم اختبار ‎PD-‏ ‎PD-L2 5 1‏ لقرد سينومولجس لأجل الارتباط مع خط الخلية الذي يُظهر 50-1 لقرد سينومولجس. يتم شراء ملحقات 00-11-70 لجرذ وفأر (منطقة ‎Fe‏ من بشري عند طرف ‎(C‏ ‏5 من ‎.(Shirley, NY) Creative BioMart® Recombinant Proteins‏ يتحقق اكتشاف ‎PD-L2 3 010-11‏ مُعالج بالبيوتين باستخدام ‎allophycocyanin i streptavidin PE‏ ‎.(Affymetrix/eBiosciense, San Diego, CA) (APC)‏ يتحقق ‎alas)‏ 00-11 لجرذ أو فأر باستخدام 196 ‎affiniPure F(ab’),‏ ضد بشري لحمار يخص شدفة ‎Fc gamma (Foy)‏ مُعلم مع ‎APC‏ ‎.(Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc, West Grove, PA) 10‏ نواقل نقل عدوى عابرة يتم شراء بلازميد إظهار ‎Hu-PD-1‏ (في ناقل ‎(PCMV6-Entry‏ من ‎OriGene‏ ‎Technologies, Inc (Rockville, MD), Catalog No RC210364/Accession No‏ ‎.NM_005018‏ ‏15 يتم شراء بلازميد إظهار 00-1 فأر (في ‎(PCMVG-Entry Jit‏ من ‎OriGene‏ ‎Technologies, Inc (Rockville, MD), Catalog No MR227347 [Accession No‏ ‎.NM_008798‏ يتم تخليق وتحسين الكودون الذي يخص ‎PD-1‏ 33 سينومولجس عن طريق ‎Technologies (San Diego, CA)‏ عآناء رقم المجموعة: 1482149[ ‎Accession No‏ ‎(EF443145‏ يتم نسخه في بلازميد إظهار يعتمد على فيروس مضخم للخلايا ‎(CMV)‏ من ‎Pfizer 0‏ خاص ‎«(San Francisco, CA)‏ مع ترتيب إشارة إفرازي ‎kappa‏ فأر يضيف ملحق ‎FLAG‏ طرفي © إلى الطرف ‎.C‏ ‏يتم تخليق ‎deoxyribonucleic acid (DNA)‏ 00-1 فأر خصيصا وفقا للترتيب من ‎Accession No NM (001106927‏ ونسخه في مواقع ‎BamHI-Notl‏ لناقل الإظهار
‎pEF1V5-His‏ من ‎LifeTechnologies (San Diego, CA)‏ رقم المجموعة: 1598305. نواقل إظهار ‎PD-1‏ لنقل عدوى مستقر يتم تخليق ‎HU-PD-1 DNA‏ خصيصا وفقا للترتيب من 0ل ‎Accession‏ ‎NM_005018‏ ونسخه في مواقع ‎BamHI-Notl‏ لناقل إظهار 8 ‎PEF1V5-His‏ من ‎¢InVitroGen 5‏ رقم المجموعة: 513478. يتم تخليق ‎DNA‏ 0100-1 لقرد سينومولجس خصيصا وفقا إلى ‎Accession‏ ‎No 5‏ ونسخه في مواقع ‎BamHI-Notl‏ لناقل الإظهار 8 ‎PEF1VS-His‏ من ‎InVitroGen‏ رقم المجموعة: 1482149. يتم تخليق ‎DNA‏ 00-1 فأر خصيصا ‎is‏ إلى ‎Accession No NM_008798‏ 0 ونسخه في مواقع ‎BamHI-Notl‏ لناقل الإظهار 8 ‎pEF1V5-His‏ من ‎«InVitroGen‏ رقم المجموعة: 1513476. يتم تخليق جميع النواقل ونسخها في ناقل الإظهار 8 ‎pPEF1V5-His‏ من ‎InVitroGen‏ ‏عن طريق ‎Diego, CA) Life Technologies‏ 58). تحتوي جميع النواقل على ترتيب ‎PD-1‏ الكامل الذي يتضمن مجال خارج الخلية؛ مجال ‎coli‏ ومجال عصاري خلوي . تشفر جميع النواقل ملحق إبيتوب ‎V5-6His‏ عند الطرف ‎C‏ من ‎٠. PD-1‏ يوجد جين مقاومة ‎neomycin‏ في كل ‎Jib‏ من لأجل الإفراز باستخدام مضادات حيوية سلفات 6418. يتم شراء خلايا ‎HEK-293T‏ من ‎American Type Culture Collection‏ ‎«(ATCC®, Manassas, VA)‏ وتُحفظ ‎LDA‏ فى وسط ‎Dulbecco’s Modified Eagle’s‏ ‎(Corning CellGro, (DMEM) (Dulbecco’s Modified Eagle’s medium) 0‏ ‎Manassas, VA)‏ مكمل مع 710 من مصل بقري جنيني ‎x15 (FBS)‏ ‎(Pen/Strep) Penicillin/Streptomycin‏ وتنمو فى 76 من ثانى أكسيد الكريون ‎(CO2)‏ ‏عند 37"مثوية. قبل يوم واحد من نقل ‎(ggaall‏ تُعرض الخلايا للتريبسين وتوضع في 4 * 6410 خلية لكل قارورة 175 ‎(Fisher Scientific, Pittsburg, PA)‏ في يوم نقل العدوى؛ يتم إضافيا
تحضين وسط النمو المدفاً مسبقا والخالي من المضادات الحيوية البديل للوسط القديم والخلايا لمدة ساعتين عند 37"مئوية في 76 002. يضاف ناقل إظهار أو ناقل خالي )10 ميكروجرام) إلى مليلتر من وسط ‎(Life Technologies, San Diego, CA) OptiMEM‏ يُضاف بعدئذ عامل كاشف 2000 ‎Lipofectamine‏ )20 ميكرولتر) ‎(Life Technologies, San‏ ‎Diego, CA) 5‏ إلى 1.5 ملليلتر أخرى من ‎LOpiMEM‏ بعد ذلك يتم خلط ‎OptiMEM‏ بلازميد وأنابيب ‎Jig las Lipofectamine OptiMEM‏ تحضينهم عند درجة حرارة الغرفة ‎sad‏ 25 دقيقة. يُضاف بعد ذلك خليط ‎OptiIMEM‏ بالتنقيط إلى قارورة الزراعة المناسبة؛ وتُترك القارورة طوال الليل عند 37"مئوية في 76 002. في اليوم التالي؛ يُزال الوسط من القارورة ونُستبدل بوسط نمو كامل. بعد ثمان وأربعين ساعة )48( ساعة من نقل العدوى؛ تُحصد الخلايا باستخدام ‎«(Life Technologies, San Diego, CA) StemPro-Accutase 0‏ مما يسمح ‎djl‏ الخلايا برفق من سطح المزرعة بدون التأثير على إظهار السطح 00-1. تخضع الخلايا بعد ذلك إلى ارتباط جسم مضاد وتحليلات تصنيف خلية منشطة فلوروسينية ‎(FACS)‏ ‏نقل عدوى مستقر باستخدام خط خلية ‎Jurkat‏ ‏يُستخدم خط الخلية ‎«Jurkat‏ (النسخة ‎«Manassas (ATCC® (E6-1-TIB-152™‏ ‎(VA 15‏ ليُظهر بصورة مستقرة 0100-1 ‎hu‏ وقرد سينومولجس. تتولد خطوط الخلية باستخدام التثقيب الكهريائي بواسطة نظام ناقل عدوى نووي ‎Walkersville, MD) Amaxa‏ ,10028). يُجرى نقل العدوى عند ‎(San Francisco, CA) Pfizer‏ باستخدام ‎Kit ١/‏ حسب تعليمات بروتوكول الصانع ‎Jaga .(Lonza, Walkersville, MD‏ الخلايا في وسط تمق ‎Roswell Park‏ ‎Memorial Institute (RPMI)-1640‏ مدعم مع 710 ‎FBS‏ و1 ‎L-glutamine x‏ ‎(LifeTechnologies, San Diego, CA) 0‏ عند 37 "مئوية في 05 عند كثافة بين 0.3 إلى 1 * 6010 خلية/ ملليلتر. بالنسبة لكل ناقل من النواقل» يُستخدم 2 ميكروجرام/ ملليلتر لنقل العدوى إلى 2 ‎x‏ 6410 خلية. بعد نقل العدوى؛ تنمو الخلايا في وجود سلفات 418 )600 (ميكروجرام/ ملليلتر) لمدة أسبوعين من أجل الانتقاء والحفاظ على الخلايا منقولة العدوى بصورة مستقرة. لمنع التلوت على المدى الطويل؛ يضاف 1 ‎Pen/Strep x‏ إلى الوسط. تنتقى نسخ خلية 5 فردية عن طريق زراعة الخلايا في تخفيف بنسبة 200:1 (خلية واحدة في 200 ميكرولتر من
وسط كامل ‎pede‏ مع مضادات حيوية سلفات 6418). لانتقاء نسخ تُظهر 00-1 ‎hu‏ أو قرد سينومولجس عالي؛ تُستخدم نسخة 1112.1 ضد 100-00-1 مُعلمة مع ‎PE‏ في اختبارات قياس التدفق الخلوي. تُجمع العينات باستخدام جهاز تحليل ‎BD LSRFortessa™ dda‏ ‎.(BD Biosciences, San Jose, CA)‏ تُحسب تحليلات البيانات ومتوسط شدة الاستشعاع ‎(MFI) 5‏ باستخدام برنامج ‎(FLOWJO LLC, Ashland, OR) Flowjo‏ يتم اختيار خطوط الخلايا لها ‎MFI‏ عالي من أجل تطور الاختبار. تُحصد خلايا ‎HEK-293T‏ منقولة العدوى مع تواقل 00-1 ‎chu‏ قرد سينومولجس» فأر أو جرذ؛ أو نواقل خالية بعد 48 ساعة من نقل العدوى. قبل الارتباط مع 0007 يتم اختبار الخلايا من كل نقل عدوى خاص مع أجسام مضادة أو مركبات ترابطية تجارية لضمان أن مستقبل 0 00-1 المناسب يظهر بصورة عالية على سطح الخلية. بالنسبة للبشري والقرد السينومولجس؛ يُستخدم جسم ‎alias‏ (نسخة ‎aca (EH12.1‏ 00-1 تجاري لتفاعل تبادلي. بالنسبة للفأر؛ يُستخدم جسم مضاد (نسخة 43ل) 00-1 ضد فأر. بالنسبة ‎call‏ يُستخدم مركب ‎aly‏ 000-11 جرذ (في حين لا يوجد جسم مضاد ضد 00-1 لتفاعل تبادلي فأر متاح تجاريا). بعد تأكيد إظهار ‎cilia PD-1‏ يتم ‎(WAN So‏ وتحضين 2 ‎X‏ 54+10 خلية مع خليط ‎hu-Fc Receptor‏ ‎Binding Inhibitor Functional 5‏ (إعاقة مستقبل ‎Fe—y‏ عند 1 ميكروجرام/ 1 ‎x‏ 6410 خلية؛ ‎(Affymetrix/eBiosciense, San Diego, CA‏ لمدة 20 دقيقة ونُضاف صبغة تفاعلية استشعاعية زرقاء؛ مستخدمة للتبقيع الذي يُميز الخلايا الحية من الميتة؛ إلى الخليط ‎(Life‏ ‎Technologies, San Diego, CA)‏ تضاف تخفيفات تسلسلية لجسم مضاد /7طظمدم أو مقارن سالب (1- 0.00001 ميكروجرام/ ملليلتر) إلى خلطات الخلية ثم يُسمح بالتحضين على الثلج 0 المدة ساعة. تُغسل الخلايا بعد ذلك ويُضاف ‎19G‏ شدفة ‎affiniPure F(ab'),‏ ضد بشري لحمار مُعلم مع ‎Fey (APC‏ خاص (تخفيف بنسبة 100:1) ‎(Jackson ImmunoResearch‏ ‎Laboratories Inc, West Grove, PA)‏ إلى الخليط ‎aang‏ ذلك تُحضن الخلايا على الثلج ‎sad‏ 30 دقيقة أخرى. يتم الحصول على البيانات على جهاز تحليل خلية ‎BD‏ ‎«(BD Biosciences, San Jose, CA) LSRFortessa™‏ ودتم تحليلها باستخدام برنامج ‎.(FLOWJO LLC, Ashland, OR) Flowjo 5‏
يتم توليد نسخ خلية ‎Jurkat‏ مستقرة منقولة العدوى مع سواء مستقبل 00-1 ‎chu=‏ قرد سينومولجسء أو فأر. يتم اختيار نسخ الخلية 00-1 من أجل هذه الاختبارات من كل من الكميات المشابهة من مستقبلات 00-1 التي تُظهر الأنواع (-400000 مستقبل/ خلية؛ يتم تحديد كمية المستقبلات مسبقا أثناء توليد خطوط الخلية). بعد تأكيد إظهار 50-1 مناسب؛ يتم عد ‎(WAM‏ وتحضين 2 ‎x‏ 54+10 خلية مع ‎Receptor Binding Inhibitor‏ 6 ]-ناط
‎Functional Grade‏ (إعاقة مستقبل (-0- عند 1 ميكروجرام/ 1 ‎x‏ 6410 خلية؛ ‎(Affymetrix/eBiosciense, San Diego, CA‏ لمدة 20 دقيقة ونُضاف صبغة تفاعلية استشعاعية زرقاء؛ مستخدمة للتبقيع الذي يُميز الخلايا الحية من الميتة؛ إلى الخليط ‎(Life‏ ‎San Diego, CA)‏ ,180000109165 . تضاف تخفيفات تسلسلية (3:1) من 0107 مقارن
‏0 موجب 1 مقارن موجب 2؛ أو جسم مضاد مقارن سالب (باستخدام إطار 964ا) إلى خليط الخلية ثم يُسمح بالتحضين على الثلج لمدة ساعة. تُغسل الخلايا بعد ذلك ويُضاف ‎19G‏ شدفة ‎affiniPure F(ab’),‏ ضد بشري لحمار مُعلم مع ‎Foy (APC‏ خاص (تخفيف بنسبة 100:1) ‎(Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc, West Grove, PA)‏ إلى الخليط وبعد ذلك يُسمح بالتحضين على الثلج ‎sad‏ 30 دقيقة أخرى. يتم الحصول على البيانات على
‏5 جهاز تحليل خلية ‎.(BD Biosciences, San Jose, CA) BD LSRFortessa™‏ تُجرى التحليلات باستخدام برنامج ‎(FLOWJO LLC, Ashland, OR) Flowjo‏ وتُحسب المتوسطات الهندسية. تُحسب قيم ‎EC50‏ باستخدام ‎Graph Pad Prism‏ (معضد لوغاريتم مقابل الاستجابة [الارتباطا]).
‏يتم توليد خلايا آ المنشطة التي تُظهر مستويات عالية من مستقبلات 00-1. يتأكد
‏0 إظهار 00-1 المناسب لخلايا 1؛ الناتجة من كل نوع؛ باستخدام عوامل كاشفة تجارية (النسخة 1 ضد ‎hu-PD-1‏ لقرد سينومولجس وشري»؛ نسخة 00-1 ضد فأر 43ل لأجل ‎PD-‏ ‎Jl 1‏ و00-11 جرذ لأجل 00-1 جرذ). يتم ‎Se‏ الخلايا وتحضين 1 * 6410 خلية مع ‎hu—‏ ‎Fc Receptor Binding Inhibitor Functional Grade‏ (إعاقة مستقبل ‎Fe—y‏ عند 1 ميكروجرام/ 1 ‎x‏ 6410 خلية؛ ‎(Affymetrix/eBiosciense, San Diego, CA‏ لمدة 20
‏25 دقيقة وتُضاف صبغة تفاعلية استشعاعية ) ‎cold)‏ مستخدمة للتبقيع الذي يُميز الخلايا الحية من
الميتة؛ إلى الخليط ‎.(Life Technologies, San Diego, CA)‏ تُضاف تخفيفات تسلسلية لأجل ‎MADT‏ (تخفيف بنسبة 3:1) إلى خليط الخلية ‎mands‏ بالتحضين على الثلج لمدة ساعة. تُغسل الخلايا بعد ذلك قبل إضافة جسم مضاد ثانويي يخص ‎19G (Foy‏ شدفة ‎affiniPure‏ ‎F(ab’),‏ ضد بشري لحمار مُعلم مع ‎APC‏ (تخفيف بنسبة 100:1) ‎(Jackson‏
‎«{mmunoResearch Laboratories Inc, West Grove, PA) 5‏ وشسمح بتحضين الخلايا على الثلج لمدة 30 دقيقة. يتم الحصول على البيانات على جهاز تحليل خلية ‎BD‏ ‎.(BD Biosciences, San Jose, CA) LSRFortessa™‏ تُجرى التحليلات باستخدام برنامج ‎.(FLOWJO LLC, Ashland, OR) Flowjo‏ تُعدٌ المتوسطات الهندسية وتحسب قيم 00ح باستخدام ‎Graph Pad Prism‏ (معضد لوغاريتم مقابل الاستجابة [الارتباطا).
‏10 يتم اختيار نسخ خلية ‎Jurkat‏ مستقرة تُظهر مستويات عالية من 100-00-1 لأجل الاختبار. عشرون (20) ميكروجرام/ ملليلتر من سواء ‎hU=PD-L1‏ مُعالج بالبيوتين أو ‎hu=‏ ‏00-2 مُعالج بالبيوتين يُشبع جميع مستقبلات 10-1 على خط الخلية (بعد ترقب اختبارات معايرة الارتباط). بالتالي؛ يتم اختيار هذا التركيز على أنه التركيز الأمثل في الدراسة. تُحضن خلايا ‎Jurkat‏ التي تُظهر 110-00-1 )2 ‎x‏ 5410) مع ‎hu-Fc Receptor Binding‏
‎Inhibitor Functional Grade 5‏ (إعاقة مستقبل (-0- عند 1 ميكروجرام/ 1 ‎x‏ 6410 خلية؛ ‎(Affymetrix/eBiosciense, San Diego, CA‏ لمدة 20 دقيقة ونُضاف صبغة تفاعلية استشعاعية زرقاء»؛ مستخدمة للتبقيع الذي يُميز الخلايا الحية من الميتة؛ إلى الخليط أيضا ‎Technologies, San Diego, CA)‏ عأنا). يضاف ‎hu-PD-L1‏ مُعالج بالبيوتين أو ‎hu-‏ ‏00-2 مُعالج بالبيوتين إلى الخلايا عند 20 ميكروجرام/ ملليلتر» يليه مباشرةً إضافة تخفيفات
‏0 تسلسلية لأجل 0/07 مقارن موجب 1( مقارن موجب 2؛ أو أجسام مضادة مقارنة سالبة (جميعها في هيكل 1064 وينسب تخفيفات تسلسلية 3:1). يُسمح بتحضين الخلايا على الثلج لمدة ساعة. تُغسل الخلايا بعد ذلك ويُضاف ‎PE Streptavidin‏ (تخفيف بنسبة 100:1) ‎(Affymetrix/eBiosciense, San Diego, CA)‏ ونُسمح بتحضين الخلايا على الثلج لمدة 0 دقيقة. يتم الحصول على البيانات على جهاز تحليل خلية ‎BD LSRFortessa™‏
‎(FLOWJO Flowjo ‏وبتم تحليلها باستخدام برنامج‎ (BD Biosciences, San Jose, CA) 25
‎LLC, Ashland, OR)‏ وتحسب المتوسطات الهندسية. تحسب قيم 1050 باستخدام ‎Graph‏ ‎Pad Prism‏ (مثبط لوغاريتم مقابل الاستجابة [الارتباطا). ‎Jah‏ العدوى لخلايا ‎Jurkat‏ بصورة مستقرة مع مستويات عالية من مستقبلات 00-1 ‎hu‏ ‏أو قرد سينومولجس. يتم اختيار خلايا تُظهر مستقبلات 50-1 لقرد سينومولجس (-400000
مستقبل/ خلية) من أجل هذا الاختبار. يتم اختبار ارتباط 000-11 و00-12 لقرد سينومولجس باستخدام هذه الخلايا وتوضح النتائج أن 20 ميكروجرام/ ملليلتر من ‎PD-L1‏ و00-12 قرد سينومولجس كافية لتشبع جميع مستقبلات 0100-1 على أساس المتوسط الهندسي المُختبر للتركيزات المختلفة )50 نانوجرام/ ملليلتر- 50 ميكروجرام/ ملليلتر) لهذه المركبات الترابطية عند ارتباطها مع خط الخلية. يتم تحضين خلايا ‎Jurkat‏ تُظهر 00-1 لقرد سينومولجس (2 ‎x‏
0 5410) مع ‎00-٠6 Receptor Binding Inhibitor Functional Grade‏ (إعاقة مستقبل ‎Foy‏ عند 1 ميكروجرام/ 1 ‎x‏ 6410 خلية ‎(Affymetrix/eBiosciense, San Diego, CA‏ ‎sad‏ 20 دقيقة وتُضاف صبغة تفاعلية استشعاعية زرقاء؛ مستخدمة للتبقيع الذي يُميز الخلايا الحية من الميتة؛ إلى الخليط ‎Technologies, San Diego, CA)‏ 116ا). يضاف ‎PD-L2‏ ‏لقرد سينومولجس 647 ‎Alexa——Fluor®-‏ أو 00-11 لقرد سينومولجس ‎Alexa—Fluor®-‏ ‏5 647 إلى الخلايا عند 20 ميكروجرام/ ملليلتر ‎Bile‏ يليه تركيزات مختلفة لأجل 17 مقارن موجب 1؛ مقارن موجب 2( أو أجسام مضادة مقارنة سالبة (باستخدام هيكل 964ا؛ بنسبة تخفيف تسلسلية 3:1). يُسمح بعد ذلك بتحضين ‎LIAN‏ على الثلج لمدة ساعة. بعد الغسل؛ يتم الحصول على البيانات على جهاز تحليل خلية ‎BD LSRFortessa™‏ ‎.(BD Biosciences, San Jose, CA)‏ تُجرى تحليلات البيانات باستخدام برنامج ‎Flowjo‏ ‎(FLOWJO LLC, Ashland, OR) 0‏ وتُحسب المتوسطات الهندسية. تُحسب ‎IC50 a‏ باستخدام ‎Graph Pad Prism‏ (مثبط لوغاريتم مقابل الاستجابة [الارتباط]). يتم تخفيف غلالة شهباء بشرية؛ تم شراؤها من ‎Stanford Blood Center‏ ‎CA)‏ ,51800010)؛ مع ‎PBS‏ ويتم وضعها على ‎Ficoll‏ في أطباق من أجل عزل ‎PBMCs‏ ‎PBMCs Jus‏ 4 مرات مع 5. تُحلل ‎RBCs‏ باستخدام مثبت أس هيدروجيني للحلالة ‎ACK‏ ‏25 حسب التعليمات في بروتوكول الصانع ‎(Life Technologies, San Diego, CA)‏ بعد تحلل
‎(RBC‏ تغسل ‎LIAN‏ مرة أخرى وتُخفف في 085 عند 5 ‎x‏ 7410 خلية لكل ملليلتر. يتم عد نصف ‎PBMCs‏ وتجميدها في وسط تجميد )790 ‎FBS‏ مع 710 داي ميثيل سلفوكسيد ‎([DMSQO] (dimethyl sulfoxide)‏ وتخضع الخلايا المتبقية لتنقية خلية 1 . من ‎PBMCs‏ المتبقية؛ تُعزل الخلايا اللمفاوية ‎T‏ باستخدام مجموعة ‎Jie‏ خلية ‎Pan T‏ تخص ‎hu‏ مع الانتقاء السالب حسب الوصف في بروتوكول الصانع ‎(Miltenyi Biotec, San‏ ‎.Diego, CA)‏ بالنسبة لاختبار ‎ADCC‏ يتم عدّ خلايا ‎T‏ المعزولة حديثا ‎LAY)‏ المستهدفة)؛ وتُزرع 1 ‎x‏ 6110 خلية 1 لكل ملليلتر في وسط 15 72-7170 بدون مصل ‎(Lonza, Walkersville,‏ ‎MD)‏ وتُستثار باستخدام خرزات مغلفة مع ضد ‎CD3‏ وضد ‎CD28‏ (منشط 1 بشري ‎CD3/CD28 Dynabeads® 0‏ لتنشيط وتمدد خلية آ) ‎(Life Technologies, San‏ ‎Diego, CA)‏ و100 وحدة/ ملليلتر من 2-ا١-(00)‏ بشري تخليقي ‎(R&D Systems,‏ ‎Minneapolis, MN)‏ تُحضن المزارع عند 37"مئوية في 75 002 لمدة 72 ساعة. عندما يصل تنشيط ‎dds‏ 1 إلى النقطة الزمنية 48 ساعة؛ ‎old‏ تُعدٌ؛ ثم تُتثار ‎PBMCs‏ (خلايا مستجيبة مشتقة من نفس المانح) مع 2-اا-20 (50 وحدة/ ملليلتر إلى 5 ‎fads 6410 x‏ ملليلتر 5 من المزرعة) لمدة إجمالي 18 إلى 24 ساعة في وسط ‎RPMI=1640‏ كامل مع 710 ‎FBS‏ ‏في يوم الاختبار» يتم ‎So‏ واختبار نوعي الخلايا بواسطة قياس التدفق الحيوي لضمان التنشيط المناسب. بالنسبة لخلايا 7؛ يتم فحص إظهار 00-1 ‎le‏ وبالنسبة إلى ‎(PBMCs‏ يتم فحص إظهار مستوى المستقبلات ‎—[FcyR] Ill) CD64 5 (CD32 «CD16‏ مستقبل ‎Fc-gamma‏ ‏01 و(ب)]» ‎(FeyRI FeyRlla‏ على التوالي) الذي يتسبب في ‎ADCC‏ بصورة غير مباشرة. توضع الخلايا بنسبة مستجيب إلى مستهدف 1:5 (حيث تكون هذه النسبة المثلى) في أطباق مسطحة القاع مُعالجة في مزرعة أنسجة لها 96 عين ‎(Fisher Scientific, Pittsburg, PA)‏ بعد إضافة الأجسام المضادة: ‎MADT‏ (إطارات 1064 و961ا)؛ والأجسام المضادة المقارنة الموجبة. تُختبر جميع الأجسام المضادة عند تركيزات 0.01 إلى 100 ميكروجرام/ ملليلتر (بنسبة تخفيفات تسلسلية 10:1). تُضاف مقارنات الاختبار؛ بما فيها الخلايا المستهدفة ‎(had‏ لتقييم أقصى 5 تحللء ‎WAN‏ المستجيبة فقط؛» والمستجيب إلى المستهدف بنسبة 1:5 بدون إضافة جسم مضاد.
تُحضن أطباق الاختبار عند 37"مئوية في 75 002 لمدة 4 ساعات. يتم تحليل البيانات باستخدام اختبار ‎CytoTox 96®Non-Radioactive Cytotoxicity Assay‏ ‎(Promega US, Madison, WI‏ حسب تعليمات بروتوكول الصانع. يقيس الاختبار كميا بصورة مستقلة ‎lactate dehydrogenase (LDH)‏ والإنزيم العصاري الخلوي الذي يطلق عند تحلل الخلايا. ثقاس النسبة المثوية (7) لسمية الخلايا على أنها = 100 ‎x‏ (إطلاق ‎LDH‏ تجرببي
[00490]/ أقصى إطلاق ‎LDH‏ [00490]). يُحسب أقصى إطلاق ‎LDH‏ عند تحلل الخلية المستهدفة بمفردها (خلية 1) كيميائيا للحصول على أقصى معدل قتل. يتم تقييم قدرة رطمم للارتباط مع ‎«hu PD-1‏ قرد سينومولجس»؛ فأر 6 وجرذ باستخدام اختبارات ارتباط على أساس خلية بقياس التدفق الخلوي ‎(FACS)‏ التى تحث بشكل عابر خط 0 الخلية ‎HEK-293T‏ منقول العدوى» ‎T WIA‏ المنشطة الأولية؛ وخلايا ‎Jurkat‏ منقولة العدوى يبشكل مستقر مع 1 ‎hu-PD-‏ أو 1 ‎PD-‏ لقرد سينومولجس وفأر . يرتبط ‎mAb7‏ مع كل من ‎hu-PD-1‏ و 00-1 لقرد سينومولجس له انجذابية عالية ‎jelly‏ قيم 050 مشابهة لهذين النوعين (ترتيب الحمض الأميني لهذه الأشكال المماثلة هي الأكثر مماثلة للأنواع التي تم تحليلها). يتم تلخيص البيانات في جداول 19؛ 20؛ و21. يتم تحقيق الارتباط مع 50-1 فأر فقط عند 5 تركيز عالي لأجل 00807 الذي ليس له صلة بالموضوع من الناحية البيولوجية ‎(Sas‏ أن يرجع إلى عملية النضوج إلى الانجذابية. لم يتم اكتشاف ارتباط 00807 لأجل 00-1 جرذ عند استخدام ‎LDA‏ منقولة العدوى أو خلايا ‎T‏ أولية منشطة (جدول 19). جدول 19: ارتباط 017 على ‎DA‏ 1 أولية أصلية ومنشطة عن طريق ‎FACS‏ ‎mAbT |‏ (ارتباط!) مقارن سلبي (ارتباط7) 9 + 9.68 + 5 + 5 + خلايا ‎T‏ بشرية 0.59 4.82 1.65 0.59
1 + 5 + خلايا ‎AT‏ : : ‎T Wa‏ لقرد 0.89 84.35 + 0.38 7 + سينومولجس 0.75 0.47 4.63 + 0.93 + 0.68 + خلايا ‎aT‏ 0.62 4.14 + 1.87 0.07 0.10 3.82 + 0.82 + 4.36 + خلايا 7 لجرذ 1.72 4 + 0.05 | 0.16 0.34 جدول 20: ارتباط ‎MADT‏ مع خلايا 1 أولية منشطة ناتجة تُظهر 00-1 من بشري وقرد سينومولجس فرديين ‎(EC50)‏ ‏خلايا 1 بشرية خلايا ‎T‏ لقرد سينومولجس فردي (بيكوجزيئي جرامي) (بيكوجزيئي جرامي) } | ' ‎i | 0 7 |‏ 51.04 + 5.07 | 85.34 + 11.73 في جدول 20 كل رقم يمثل قيم 5050 لارتباط ‎MADT‏ مع مانح مختلف. الصف السفلي يمثل المتوسط + ‎sem‏ 56107- متوسط الخطاً المعياري. جدول 21: ارتباط 00/7 مع خطوط خلية ‎Jurkat‏ منقولة العدوى بصورة مستقرة مع ‎PD-1‏ ‏بشري أو 00-1 قرد سينومولجس ‎(EC50)‏
‎[Jurkat‏ 1-ناظ ‎PD-1 [Jurkat‏ لقرد ‎mAD (IgG4)‏ (رقم التكرار بشري (بيكوجزيئي سينومولجس (بيكوجزيئي جرامي) جرامي) 62.84 181.3 2 66.61 263.8 ‎mAb7‏ ‏64.725 + *متوسط + ‎sem‏ 222.55 + 41.3 1.89 54.52 265.2 ‎mAb 1‏ مقارن 2 57.6 267.2 موجب ‎266.2١ 1.55 + 56.01‏ +1 181.6 380.4 ‎mAb 2‏ مقارن 2 179.6 375.9 موجب 6 -*1 |2.5+378.15 في جدول 21؛ كل رقم يمثل ‎ad‏ 5050 لارتباط ‎MADT‏ في تجرية واحدة. * يشير إلى المتوسط + 8600. ‎=MAD (IgG4)‏ جسم مضاد أحادي النسخ مع إطار 964ا؛ 00-1- موت مبرمج-1؛ ‎=sem‏ متوسط الخطأً المعياري. يتم فحص ارتباط ‎mAb7‏ مع كل من 1 ‎hu PD-‏ وقرد سينومولجس باستخدام أنظمة اختبار مختلفة تعتمد على خلية مختلفة. جد في جميع الأنظمة أن الارتباط له انجذابية ونوعية عالية في النوعين. باستخدام خطوط الخلية منقولة العدوى بشكل عابر ‎HEK-293T‏ التي تُظهر إما إلى الحد ‎hu 00-1 sy)‏ أو قرد سينومولجس؛ يُظهر 101807 أنماط ارتباط مشابهة حسب تعليمات ‎MFI‏ لا يُلاحظ ارتباط في خط الخلية الأصلي منقول العدوى مع ناقل خالي (وسط ناقل).
يتم تحديد قيم 5050 لارتباط ‎MADT‏ مع ‎WIA‏ 1 أولية ‎hu‏ وقرد سينومولجس منشطة بعد 72 ساعة من التنشيط؛ عندما يكون إظهار 10-1 على سطح الخلية وحيوية الخلية بشكل أمثل (جدول 19). تُحسب قيم 5050 لمانحين مختلفين من كل نوع (جدول 20). في كل من خلايا ‎hu T‏ وقرد سينومولجس المنشطة؛ يتم الحصول على ‎ad‏ 050 منخفضة وؤجد أن قيم ‎EC50 5‏ متقارية بين التوعين» 51.04 + 5.07 بيكوجزيئي ‎aha‏ و85.34 + 11.73 بيكوجزيئي جرامي؛ على التوالي (المتوسط + متوسط الخطأً المعياري [5600]). لا يُلاحظ ارتباط مع الجسم المضاد المقارن السالب أعلى من قيم خط البداية. يُستخدم خط الخلية ‎T‏ 81»انال؛ الذي يُظهر مستقبلات 70-000-1 بحد أدنى؛ لتوليد
خطوط خلية 700-00-1 منقول العدويى بصورة مستقرة» 00-1 قرد سينومولجس و00-1 فأر.
0 تُنسخ خطوط الخلية ‎bed‏ وتنتقى النسخ التي تُظهر مستويات عالية من مستقبلات ‎hu-PD-1‏ ‏و00-1 قرد سينومولجس (يتم الحصول على أعلى إظهار لأجل ~400000 مستقبل 60-1 لكل خلية). في هذا النظام؛ يُظهر ‎MADT‏ انجذابية عالية لمستقبلات 110-00-1 3 ‎PD=1‏ قرد سينومولجس. تتشابه قيم 5050 للنوعين مع بيانات خلية ‎T‏ الأولية المنشطة (جدول 21)؛ 0 - 64.725 + 1.89 لأجل ‎hu-PD-1‏ و222.55 + 41.3 لأجل 00-1 قرد
سينومولجس. تكون قيم 5050 للخلايا التي تُظهر 00-1 38 سينومولجس أكثر تغيرا من قيم ‎ECS0‏ البشرية بين الدورتين التجريبيتين. تكون بيانات النوعين مشابهة للبيانات الناتجة مع الأجسام المضادة المقارنة الموجبة المستخدمة في أي تكرار معين (جدول 21). لا يُظهر الجسم المضاد المقارن السلبي ارتباط أعلى من قيم خط البداية في أي من التكرارات التجريبية. يتم فحص قدرة ‎MADT‏ على إعاقة المركبات الترابطية 00-11 و00-12 من التفاعل البيني مع المستقبل
0 00-1 في خط خلية ‎Jurkat‏ منقول العدوى من 00-1 (يُظهر إما ‎hu-PD-1‏ أو 00-1 لقرد سينومولجس). في هذا الاختبار» تُحضن الخلايا مع مركبات ترابطية مُعلمة عند تركيزات تشبع بعد التحضين مع ‎MADT‏ غير مُعلم عند تركيزات مختلفة. كما هو موضح في جدول 22 ‎MAD7‏ ‏يُثبط المركبات الترابطية 00-11 و00-12 من الارتباط مع المستقبل 00-1 بطريقة تعتمد على الجرعة. الأجسام المضادة المقارنة الموجبة لأجل 00-1 تُظهر تثبيط متقارب. يعتبر ‎IC50‏
من ‎MAD‏ متماثل بين 00-1 ‎hu‏ وقرد سينومولجس )880.15 + 289.85 و1058 +
4 لأجل ‎hu-PD-L1‏ و2ا-00 ‎chu-‏ على التوالي؛ و942.9 + 110.1 و839 + لأجل 00-11 قرد سينومولجس و00-12 قرد سينومولجس؛ على التوالي). يتوافر ملخص لقيم ‎1C50‏ في جدول 22. في جدول 22؛ كل رقم ‎Jia‏ قيم 1050 لأجل 117 في تجرية واحدة. * يشير إلى المتوسط + 5607؛ + يشير إلى عدد التكرار في الأقواس؛ ‎MAb‏ ‏5 (964ا)- جسم مضاد أحادي النسخ مع إطار 964ا؛ 00-1- موت مبرمج-1؛ ‎=PD-L1‏ ‏موت مبرمج- مركب ترابطي 1؛ ‎=PD-L2‏ موت مبرمج- مركب ترابطي 2؛ ‎=sem‏ متوسط الخطأ المعياري. جدول 22: تركيزات تثبيطية )1050( بيكوجزيئي جرامي) لإعاقة نشاط ارتباط 00-1 بشري أو 00-1 قرد سينومولجس مع 00-11 و00-12 باستخدام نظام خط خلية ‎Jurkat‏ منقول 0 العدوى بصورة مستقرة 00-1 لقرد سينومولجس/ ‎PD-1‏ بشري/ ‎Jurkat‏ ‎Jurkat‏ ‎mAb‏ إعاقة نشاط إعاقة ‎Lalds‏ | إعاقة نشاط إعاقة نشاط ‎PD-1/PD-| PD-1/PD- PD-1/PD- (Il9G4)‏ ‎PD-1/PD-L2‏ ‎L2 L1 L1‏ ‎mAb7‏ ‏590.3 703.2 832.8 749.5 1%( 2#( 1170 1414 1053 928.5 *متوسط + 5 + 9 + 8 + 355.4 9 + 89.5 ‎sem‏ 289.85 110.1 1022 1226 1286 1316
00-1 لقرد سينومولجس/ ‎PD-1‏ بشري/ ‎Jurkat‏ ‎Jurkat 1‏ ‎mAb‏ إعاقة نشاط إعاقة نشاط إعاقة نشاط إعاقة نشاط ‎PD-1/PD-| PD-1/PD- PD-1/PD- (19G4)‏ ‎PD-1/PD-L2‏ ‎L2 L1 L1‏ )2( 811.1 861.8 1289 *متوسط + 825.5 + 1073.9 + 1302.5 + 207.45+1081.55 ‎sem‏ 196.5 212.1 13.5 ‎C2‏ ‏1715 1972 1809 1961 *)1( )2( 1597 1560 1881 2111 *متوسط + ‎2036١ 36 + 1845 206 £ 1766 | 59 + 1656‏ +75 ‎sem‏ ‏يُظهر ‎MADT‏ ارتباط ضعيف للمكون المكمل 1؛ مكون فرعي ‎.CD64 4, (Clq) q‏ تعتبر 19© و6064 (لأجل إطار ‎(19G4‏ بدائل قوية للسمية الخلوية التي تعتمد على مكمل ‎(CDC) (complement dependent cytotoxicity)‏ ونانلا على التوالي. للتحقق إضافيا من نقص قدرة ‎MADT‏ على حث قتل خلايا ‎AT‏ المعمل؛ ‎(gad‏ اختبار ‎ADCC‏ مع خلايا 1 المنشطة (الخلايا المستهدفة) التي تُظهر مستويات عالية من مستقبلات 00-1 5 ‎PBMCs‏ ‏(خلايا مستجيبة) التي تُظهر مستويات عالية من مستقبلات ‎Foy‏ تنتقى الخلايا من مانحين سليمين. يُظهر ‎MADT‏ (في إطار 964 الأصلي) نشاط ‎ADCC‏ أدنى في كلا المانحين. يكون نقص نشاط ‎ADCC‏ وفقا للنشاط الذي يُظهره الجسم المضاد المقارن الموجب ضد 00-1 في
الإطار ‎19G4‏ ويكون كل منهم مشابه للجسم المضاد 0964| المقارن السالب. عند تقييم ‎MADT)‏ ‏أو الجسم المضاد ضد 50-1 المقارن الموجب) ضد 00-1 في الإطار 0661| البشري؛ الذي يُعرف لحث ‎ADCC‏ أقوى؛ يصل ‎Call ADCC‏ مع ضد 00-1 4 أضعاف أعلى منه عندما يكون الجسم المضاد في الإطار 964ا. يُحسب أقصى إطلاق ‎LDH‏ عند تحلل ‎WAY‏ المستهدفة بمفردها (خلايا آ) كيميائيا للحصول على أقصى معدل قتل (يُقدر القتل بنسبة 7100 من التحلل لكل ‎mile‏ وفقا لحساب الاختبار). تحلل خلية ‎T‏ باستخدام الإطار 061| يقابل ‎PD-1 (sie‏ على خلايا ‎T‏ المنشطة (يكون إظهار وتحلل 00-1 للمانح 1 أعلى منهم في المانح 2)؛ مع تأكيد دقة الاختبار. توضح هذه النتائج أن الجسم المضاد 017 ضد 00-1 يرتبط بانجذابية عالية مع 0 مستقبلات 00-1 ‎hu‏ وقرد سينومولجس التي تظهر على ‎WAY‏ مع قيم 5050 تتراوح بين 46 إلى 270 بيكوجزيئي جرامي؛ اعتمادا على نظام الاختبار. لا يرتبط ‎MADT‏ مع الخلايا التي تُظهر 00-1 فأر أو مع 00-1 جرذ بتركيزات فسيولوجية. ‎MADT‏ يُعيق المركبات الترابطية ‎PD-L2 5 00-1‏ من التفاعل البيني مع مستقبلات 00-1 لسطح الخلية؛ تتراوح قيم ‎١050‏ ‏من 500 إلى 1000 بيكوجزيئي جرامي مع الإشارة إلى وظيفتها المعارضة العالية في إعاقة وظيفة 5 00-1 المحثة بواسطة ارتباط المركب الترابطي. لا يُثِير 00/57 في إطار ‎19G4‏ الخاص به؛ سمية خلوية ‎Link‏ بجسم مضاد متسقة مع خصائص الجسم المضاد بحد أدنى. مثال 12: تحديد خصائص ارتباط الجسم المضاد 00/07 ضد 2000-1 مع ‎«FCRN (PD-1‏ ‎C1Q 5 0/5‏ باستخدام حساسات حيوية بدون علامة § ‎ELISA‏ ‏يوضح هذا المثال انجذابيات ارتباط 0107 في المعمل تجاه 00-1 منقى تخليقي من 0 أنواع متنوعة متعلقة بدراسات السمية باستخدام حساسات حيوية ‎JSPR‏ تُختبر أيضا قدرة المنطقة © من ‎mAb7‏ على ارتباط ‎FERN 3 FCGRs‏ بواسطة ‎SPR‏ لتأكيد أنها نُظهر خصائص متسقة مع خصائص المقارن الذي يطابق النوع المماثل. بواسطة ‎(ELISA‏ يتم اختبار 00/7 والمقارن الذي يطابق النوع المماثل للارتباط مع 610 بشري. تُختبر أيضا قدرة ‎MADT‏ على إعاقة التفاعل البيني للارتباط لأجل 00-1 مع المركب الترابطي الخاص به؛ ‎(PD-L2 3 PD-L1‏ 5 بواسطة حساسات حيوية بدون علامة لدعم آلية العمل.
تُجرى جميع تجارب الحركية والانجذابية عند 25"مئوية في محلول ملحي ثابت الأس الهيدروجيني فوسفات ‎Tween 20 70.01 + (PBS)‏ من مثبت الأس الهيدروجيني للتشغيل؛ ما لم يُذكر خلاف ذلك. ‎(gad‏ دراسات الحركية على حساس حيوي ‎SPR ProteOn XPR36‏ مجهز برقاقات ‎NLC‏ (مغلفة مع ‎.(BioRad, Hercules, CA) (neutravidin‏ يُستخدم 0001600 أيضا لتحديد التركيزات النشطة لحلالات 710-00-1 و00-1 لقرد سينومولجس عن طريق المعايرة مقابل ‎MADT‏ كمعيار مرجعي. تشير تركيزات حلالات البروتين المستخدمة هنا إلى قيم 'نشطة" أو 'رمزية". يتم تحديد التركيز النشط لمستقبل ‎Fc gamma‏ بشري | ‎«((hu-FCGR)‏ ‏مستقبل ‎Fe‏ بشري حديث الولادة ‎(hu-FcRn)‏ (رقم المجموعة: ‎((R3091‏ ومستقبل ‎Fe‏ قرد سينومولجس حديث الولادة (قرد سينومولجس- ‎(FERN‏ (رقم المجموعة: ‎(JOR‏ باستخدام تجارب 0 تحليل تركيز بدون معايرة ‎(CFCA)‏ على 1200 ‎Biacore‏ مجهز برقاقات حساس ‎CMS‏ ‎(GE Life Sciences, Marlborough, MA)‏ تُستخدم جميع الحلالات الأخرى بتركيزها الرمزي كما هو محدد عن طريق امتصاص الضوء عند 280 نانومتر مع معامل إخماد مناسب. يتم تحديد انجذابيات المحلول عند درجة حرارة الغرفة؛ 23 "مئوية تقريباء باستخدام أداة ‎KINEXA‏ ‏0 أو 3200 مجهزة بمعيان ذاتي ‎ou. (Sapidyne)‏ تعليم الأجسام المضادة الثانوية للكشف 5 مع 650 ‎(Pierce Biotechnology, Grand Island, NY.) DyLight‏ وفقا لتعليمات الصانع. تُجرى عمليات معالجة بالبيوتين مع جلوبولين مناعي © (96ا) بنسبة متساوية الجزيئات الجرامية للوصلة: ‎IgG‏ باستخدام ‎(Pierce EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin‏ ‎Biotechnology Grand Island, NY)‏ وفقا لتعليمات الصانع. مالم يُذكر خلاف ذلك؛ يتم تجديد 0965| ثابتة مع مجموعة من ‎Pierce’‏ ملح" تشمل 1:2 حجم/ حجم من خليط مثبت أس 0 ميدروجيني للتصفية ‎Pierce ١96‏ (أس هيدروجيني 2.8)/ 4 جزيئي جرامي من كلوريد الصوديوم ‎.(NaCl)‏ ‏يتم تحديد التفاعلات البينية لارتباط ‎hu-PD-1‏ و 0100-1 قرد سينومولجس (كل من المونومرات المُلحقة مع ‎(His‏ تجاه 01/57 في محلول باستخدام طريقة ‎KINEXA‏ في مثبت أس هيدروجيني للتشغيل من ‎Tween 20 70.01 + PBS‏ ومثبت أس هيدروجيني لعينة من ‎PBS‏ ‎Tween 20 70.01 + 5‏ + 1 جم/ لتر من زلال مصل بقري ‎(bovine serum albumin)‏
(/85). يُستخدم صيغتين مختلفتين للاختبار. في صيغة الاختبار الأولى؛ تتم معايرة 00/7 بتركيز ثابت من 000-00-1 )200 400« أو 0 بيكوجزيئي جرامي رمزي) وُسمح بوصول العينات إلى التوازن. ‎hu-PD-1 Lal‏ حر على خرزات ‎polymethylmethacrylate‏ ‎(PMMA)‏ المغلفة (بالامتزاز) مع جسم مضاد ‎MADT‏ أحادي النسخ ضد 110-00-1 (مُحضر داخليا تحت شروط غير ‎Good Laboratory Practices (GLP)‏ [المجموعة رقم: ‎.([R5432‏ ‏بعد ذلك يتم اكتشاف 000-10-1 الملتقط على الخرزات مع 0.5 ميكروجرام/ ملليلتر من ‎MAb‏ ‏ضد ‎His‏ مُعلم مع ‎(R&D Systems, Minneapolis, MN) Dylight‏ في صيغة الاختبار ‎stil‏ تتم معايرة 710-00-1 أو 00-1 قرد سينومولجس بتركيز ثابت من 01857 )20 50« 0 أو 500 بيكوجزيئي جرامي) ويُسمح بتوازن هذه الخلطات. يتم التقاط 00/07 حر على 0 خرزات ‎PMMA‏ الممتزة مع 1699.116 ‎MAD‏ ضد ‎MADT‏ فأر ضد نمط ذاتي لأداة إعاقة يرتبط بصورة خاصة مع ‎MADT‏ حر وليس ‎MADT‏ مشبع مع 010-1. بعد ذلك يتم اكتشاف ‎mAb7‏ الملتقط على الخرزات مع ‎(H + L)‏ ضد 000-196 ماعز مُعلم مع ‎Dylight‏ ‎.(Jackson ImmunoResearch Inc, West Grove, PA)‏ يتم تحضير جميع المعايرات كسلسلة تخفيف بمقدار ضعفين لها 12 عضو تُغير تركيز موقع الارتباط الرمزي الأعلى ليقع 5 ضمن نطاق 1 نانو جزيئي جرامي إلى 10 نانوجزيئي جرامي؛ اعتمادا على التجرية. يُسمح للعينات بالتوازن لمدة تصل إلى 48 ساعة وتُضبط أحجام الحقن لكل ‎dyad‏ لإعطاء إشارة إجمالية تقع في نطاق 0.7 حجم إلى 1.9 حجم. تُحقن جميع العينات في دورتين. يتم عالميا تحليل البيانات وصولاً إلى 4 تجارب مستقلة لكل تفاعل بيني باستخدام أداة منحنى لا في برنامج التحليل وتتناسب مع نموذج ‎due‏ ثنائي الجزيء بسيط حيث يُستخدم تركيز ‎MADT‏ على أنه التركيز 0 المرجعي. يُسجل التحليل العالمي أفضل قيم ملاءمة (وفاصل ثقة بنسبة 795) لأجل ‎KD‏ وتركيز موقع ارتباط 10-1 النشط الواضح. انجذابيات ارتباط ‎hu-PD-1‏ و ‎PD-1‏ 38 سينومولجس تجاه 00807 في محلول لا يمكن تمييزها من بعضها البعض عند دراستها باستخدام اختبار ‎(KINEXA‏ يتم تحديد قيم ثابت تفكك التوازن الواضح ‎(KD)‏ عند 23"مئوية لتكون 17 بيكوجزيئي جرامي أو 23 بيكوجزيئي 5 جزمي لأجل 000-00-1 (عند دراستها في توجهات اختبار مقابلة) و28 بيكوجزيئي جرامي لأجل
10-1 قرد سينومولجس؛ لا يمكن تمييز هذه القيم الثلاث احصائيا من بعضها البعض. تم اختصار هذه االقيم بواسطة قياسات حساس حيوي لرنين بلازمون سطح ‎(SPR)‏ الذي أنتج قيم ‎KD‏ بمقدار 42 بيكوجزيئي جرامي لأجل 100-00-1 و69 بيكوجزيئي جرامي لأجل 50-1 قرد سينومولجس عند 25"مئوية؛ و109 بيكوجزيئي جرامي لأجل 170-00-1 و115 بيكوجزيئي جرامي لأجل 00-1 قرد سينومولجس عند 37 "منوية. 01/07 يربط 00-1 فأر بقيمة ‎KD‏ ‏بمقدار 0.9 بيكوجزيئي جرامي ولم يتم اكتشاف ارتباط تجاه 00-1 جرذ عند الاختبار عند 0.5 بيكوجزيئي جرامي مع التحليل الحركي 5014. تُستخدم حساسات حيوية بدون علامة لتوضيح أن 7ه يعيق 00-1-ن0 من الارتباط مع مركباته الترابطية الطبيعية؛ المركب الترابطي للموت المبرمج البشري 1 (70-00-11) والمركب الترابطي للموت المبرمج البشري 2 (00-00-12). 0 يُستخدم ‎SPR‏ إضافيا لتأكيد أن 00/07 يريط نطاق من مستقبلات ‎gamma‏ قابلة لتبلور شدفة ‎(fragment crystallizable gamma receptors) (Fc) (fragment crystallizable)‏ ‎(FCGR)‏ ومستقبل ‎Fe‏ من حديث ولادة ‎(FERN)‏ من نوعين بشري وقرد سينومولجس مع نفس النوعية والحركية كمقارن يطابق نوع مماثل. بواسطة ‎(ELISA‏ يُظهر ‎MADT‏ ارتباط ضعيف مع المكون المكمل 1؛ مكون فرعي 0 ‎(Clq)‏ بالاتساق مع سلوك المقارن المطابق لنوع ‎clas‏ ‏5 بصورة شاملة؛ يريط 0007 كل من ‎hu-PD-1‏ و 00-1 قرد سينومولجس مع نوعية وانجذابية ارتباط عالية لكنه له انجذابية منخفضة تجاه 00-1 فأر وارتباط ضعيف تجاه 00-1 جرذ. جدول 23 يلخص بيانات الحركية والانجذابية الناتجة لتحليل التفاعل البيني لأجل 00/57 و00-1 من أنواع مختلفة. 00807 يريط 010-00-1 و00-1 قرد سينومولجس مع انجذابيات واضحة لا يمكن تمييزها احصائيا عند قياس هذه التفاعلات البينية في محلول عند 23 "مثوية 0 باستخدام طريقة ‎(KINEXA‏ وتكون ‎KD ad‏ الواضحة هي 17 بيكوجزيئي جرامي و23 بيكوجزيئي جرامي لأجل ‎hu-PD-1‏ (عند دراستها في توجهات اختبار مقابلة) و28 بيكوجزيئي جرامي لأجل 00-1 قرد سينومولجس. تؤكد القياسات الحركية المجراة بواسطة ‎SPR‏ قيم ‎(KINEXA‏ التي تعطي قيم ‎KD‏ واضحة عند 25 "مئوية بقيمة 42 + 11 بيكوجزيئي جرامي ‎=n)‏ 10( لأجل ‎hu=‏ ‏00-1 و69 + 24 بيكوجزيئي جرامي ‎=n)‏ 10( لأجل 00-1 قرد سينومولجس. تُظهر قياسات 5 508 عند 37 "مئوية انجذابيات أضعف بمقدار ضعفين من تلك عند 25"مئوية؛ ويتم تحديد قيم ‎KD‏ عند 37"مئوية لتكون 109 + 8 بيكوجزيئي جرامي ‎=n)‏ 15( لأجل ‎hu-PD-1‏ و115 +
بيكوجزيئي جرامي ‎=n)‏ 8) لأجل 00-1 قرد سينومولجس. ‎MADT‏ يريط 00-1 فأر مع ‎KD‏ واضح بمقدار 0.9 + 0.1 ميكروجزيئي جرامي ‎=n)‏ 5) عند القياس عند 25 "مئوية بواسطة ‎«SPR‏ مما يقابل انجذابية أضعف بمقدار 20000 ضعف من تلك لأجل 00-00-1. لم يتم اكتشاف ارتباط لأجل 00-1 لجرذ عند الاختبار عند 0.5 ميكروجزيئي جرامي عند 25 "مئوية 5 بواسطة ‎SPR‏ على الرغم من تأكيد نشاط بروتينات 00-1 جرذ بواسطة ارتباطهم الواضح مع المقارنات الموجبة؛ 00-11 فأر 5 ‎PD-L2‏ فأر. تمثل قيم ‎KD‏ لقياسات ‎KINEXA‏ الأكثر ملاءمة 5 795 من فاصل الثقة للتحليل العالمي للتجارب المستقلة ‎(N‏ بينما قيم قياسات ‎SPR‏ ‏تمثل المتوسط + الانحراف المعياري للتجارب المستقلة ‎n‏ على رقاقة حساس ‎.ProteOn NLC‏ فى جدول 23 ‎h‏ أو ‎=hu‏ بشري؛ ‎=Ka‏ ثابت معدل ارتباط؛ ‎=kd‏ ثابت معدل تفكك؛ ‎=KD‏ ثابت 0 تفكك توازن؛ ‎=KINEXA‏ اختبار الاستبعاد الحركي؛ ‎=MAD‏ جسم مضاد أحادي النسخ؛ ‎=Ms‏ ‏جزيئي جرامي لكل ثانية؛ ‎=n‏ عدد؛ ‎=ND‏ غير محدد؛ ‎=PD~-1‏ موت مبرمج-1؛ 8= ثانية؛ ‎=SPR‏ رنين بلازمون سطح؛ ‎=Temp‏ درجة الحرارة؛ * يُدرس التفاعل البيني لأجل 01807 مع 001-10-1 فى توجهين اختبار متقابلين حسب الوصف فى 2012 ‎Bee et al,‏ جدول 23: ملخص ثوابت الانجذابية والحركية الناتجة للتفاعلات البينية لأجل 06801591 ‎PF‏ ‏5 مع 00-1 بشري؛ 00-1 2 سينومولجس؛ و50-1 فأر. درجة ‎KD‏ ‎ka‏ )1 جزيئي : الحرارة االطريقة ‎kd PD-1|‏ (1/ ثانية) (بيكوجزيئي جرامي ثانية) ‎١‏ ‏(مئوية) جرامي) بشري 23 )28- ‎ND ND mAb) | KinExA 23‏ 3 18( مُعاير) * 7 - ‎KINEXA 23‏ | بشري ‎ND ND‏ 3 12(
درجة ‎KD‏ ‎ka‏ (1/ جزيئي ‎shal‏ | الطريقة ‎١ (ast /1( kd PD-1|‏ (بيكوجزيئي جرامي ثانية) ا ("منوية) جرامي) ‎PD-1)‏ ‏مُعاير) * ‎x )0.4 +1.8)| )0.6 + 4.2(‏ ‎SPR 25‏ ابشري 2 +11 ]10 ‎x‏ 5410 5-0 ‎x (1.2 £8.5)| x (2+ 8.4(‏ | 109+ ‎SPR 37‏ ابشري 15 5510 5-0 28 قرد سينومولجس 8 (34- ‎ND ND KinExA 23‏ 4 ‎PD-1)‏ 23( مُعاير) قرد (4.3 + 1.4) | (2.9 + 0.4( ‎x‏ ‎SPR 25‏ 9 + 24 10 سينومولجس | ‎x‏ 5410 10*-5 قرد )9.8 +1.1) ا|(115|)0.07+1.12 + ‎SPR 37‏ سينومولجس ‎x 5410 x ١‏ 10"-4 15 ‎5.2١ » )0.5 <6‏ + 0.4)" (1+9 ‎SPR 25‏ فأر ) ( ) ) ( 5 ‎x 3-0 30‏ 510 يوضح جدول 24 أن نوعية وحركيات الارتباط لأجل 007 على نطاق مستقبلات ‎Fe‏ ‏بما ‎FCGRs (led‏ و ‎FCRN‏ من بشري وقرد سينومولجس تلخص تلك القيم المتوقعة بمقارن النوع ‎ileal‏ الذي يطابق نوع مماثل» 964ا-000. على سبيل المثال؛ 01/87 يريط ‎hu-FCGRI‏ ‏بقيمة 0ا>ا واضحة (متوسط + انحراف معياري) عند 25"مئوية بمقدار 146 + 42 بيكوجزيئي
جرامي ‎=n)‏ 14) بالمقارنة مع 177 + 71 بيكوجزيئي جرامي ‎=n)‏ 4) لمقارن النوع ‎led)‏ ‏تتميز جميع التفاعلات البينية الأخرى بانجذابيات ضعيفة (قيم ‎KD‏ - 1 ميكروجزيئي جرامي أو أعلى). يُجرى التحليل الحركي على رقاقة ‎ProteOn NLC‏ عند أس هيدروجيني 7.4 لأجل ‎FCGR‏ وأس هيدروجينى 5.9 لأجل ‎.FCRN‏ فى جدول 24 ‎=CD‏ مجموعة من التمايز؛ ‎=cy‏ ‏5 قرد سينومولجس؛ ‎=FCGR‏ مستقبل ‎=FcRn ¢Fc gamma‏ مستقبل ‎Fe‏ لحديث الولادة؛ ‎=hu‏ ‏بشري؛ ‎=ka‏ ثابت معدل الارتباط؛ ‎=Kd‏ ثابت معدل التفكك؛ ‎=KD‏ ثابت تفكك التوازن؛ ‎“Ms‏ ‎aha Aus‏ لكل ثانية؛ ‎=n‏ عدد؛ 5- ثانية. جدول 24 ‎x )1.7 + 9.1( =ka‏ ‎x (0.3 + 1( ka‏ 6410 0 (1/ جزيئي جرامي : (1/ جزيئي جرامي ثانية) ثانية) ‎x )0.4 + 1.8( =kd‏ ‎x (0.3 + 1.3) =kd | hu-FCGRI (hu-CD64)‏ 3-0 )1/ ثانية) 3-0 )1/ ثانية) ‎=KD‏ 177 + 71 بيكوجزيثى ‎=KD‏ 146 + 42 بيكوجزيئي ‎١‏ ‏جرامي ‎=n)‏ 4) جرامي ‎=n)‏ 14) ‎hu-FCGRIla (hu-‏ 6 ميكروجزيئي جرامي 9 ميكروجزيئي جرامي ‎CD32a) 131‏ ‎hu-FCGRIla (hu-‏ 8 ميكروجزيئي جرامي 4 ميكروجزيئي جرامي ‎CD32a) 131‏ -ناط) ‎hu-FCGRIIb‏ ‏1 ميكروجزيئي جرامي 7 ميكروجزيئي جرامي ‎CD32b)‏
‎hu-FCGRIlla (hu-‏ يرتبط بالكاد عند 5 يرتبط بالكاد عند 5 ‎CDl16a) 158F‏ ميك روجزيئي جرامي ميكروجزيئي جرامي ‎hu-FCGRIlla (hu-‏ يرتبط بالكاد عند 1 يرتبط بالكاد عند 1 ‎CDl16a) 158V‏ ميك روجزيئي جرامي ميكروجزيئي جرامي ‎jas Sie 0.06 + 0.82‏ ‎hu-FcRn‏ 0.93 ميكروجزيئي جرامي ) جرامي )3( 6 + 0.5 ميكروجزيثى ‎FCGRIla‏ قرد سينومولجس | 2.4 ميكروجزيئي جرامي جرامي ‎=n)‏ 3) ‎42R‏ 0681112 قرد 32 + 0.1 ميكروجزيئى 7 ميكروجزيئي جرامي سينومولجس جرامي ‎=n)‏ 3( ‎FCGRIlla 428‏ قرد 9 + 0.2 ميكروجزيئى 6 ميكروجزيئي جرامي سينومولجس جرامي ‎=n)‏ 3( 7 + 0.04 ميكروجزيئي 0 قرد سينومولجس 1 ميكروجزيئي جرامي جرامي ‎=n)‏ 3) بالإضافة إلى ذلك» ‎MADT‏ بالكاد يريط 010 بواسطة ‎(ELISA‏ بالاتساق مع سلوك المقارن المتطابق مع نوع مماثل» ‎hu-1gG4‏ (البيانات غير موضحة). ويكون ارتباطه أقل من الارتباط المنخفض للجلوبولين المناعي البشري ‎(hu-1gG2) G2‏ على العكسء المقارنات الموجبة» ‎hu-IgG]‏ والجلويولين المناعى البشري ‎o(hu-1gG3) G3‏ تعطى إشارات ارتباط عالية. باستخدام ‎SPR‏ والحساسات الحيوية ‎Octet‏ وصيغ اختبار مختلفة (خلط مسبق وصيغ اختبار ساندوتش تقليدية)» يتضح أن ‎MADT‏ يعيق ارتباط 100-00-1 مع مركباته الترابطية الطبيعية؛ ‎hu=PD-L2 5 hu-PD-L1‏ .
توضح هذه البيانات أن 01/7 يرتبط مع انجذابية عالية ونوعية عالية تجاه 500-00-1. عند القياس في محلول عن 5123 باستخدام طريقة ‎KINEXA‏ 01807 يريط ‎hu-PD-1‏ ‎PD-1‏ قرد سينومولجس مع قيم ‎KD‏ واضحة لا يمكن تمييزها احصائيا بمقدار 17 بيكوجزيئي جرامي و23 بيكوجزيئي جرامي لأجل 700-00-1 (عند دراستها في توجهات اختبار بديلة) و28
بيكوجزيئي جرامي لأجل 00-1 قرد سينومولجس. يُظهر ‎MADT‏ انجذابية أضعف بمقدار 0 ضعف إلى 00-1 فأر ‎KD)‏ واضح بمقدار 0.9 ميكروجزيئي ‎aba‏ عند 25 "مئوية بواسطة ‎(SPR‏ ولا يُظهر ارتباط يمكن اكتشافه مع 00-1 جرذ عند الاختبار عند 0.5 ميكروجزيئي جرامي. يرتبط ‎MADT‏ والمقارن الذي يطابق النوع المماتل 710-19654 مع نوعية وحركية مشابهة عند الاختبار مقابل مجموعة من مستقبلات ‎FCs hu—‏ قرد سينومولجس؛ عند
0 القياس عند 25 "مئوية بواسطة ‎SPR‏ 00/57 يربط 70-0610 مع إشارة ضعيفة عند الاختبار بواسطة ‎(ELISA‏ بالاتساق مع مقارنات النوع ‎lead)‏ 964ا-00؛ ويكون ارتباطه منخفض عن ارتباط 00-10962. يتضح أن ‎MALT‏ يعيق 100-00-1 من الارتباط مع مركباته الترابطية الطبيعية؛ 10-00-11 و00-00-12. مثال 13: معالجة اتحاد مع جسم مضاد ضد 10-1 وجسم مضاد ضد ‎OX40‏
يوضح هذا المثال تأثيرات المعالجة مع جسم مضاد ضد 50-1 في اتحاد مع جسم مضاد ضد 07640 في نموذج فأر لسرطان القولون.
لهذه الدراسة؛ يتم تلقيح فتران إناث ل/65786 (عمرها 6- 8 أسابيع) تحت الجلد مع ورم قولون فأري ‎MC-38‏ (كارسينوما غدية من الدرجة 3) عند 5 ‎x‏ 5410 خلية/ فأر. في اليوم 10؛ يتم توزيع الفئران عشوائيا وتبدأ المعالجة عند 10 مجم/ كجم من 0900-1 ضد فأر و1 مجم/ كجم
من 07-40 ضد فأر. تُعطى المعالجة داخل الغشاء البربتوني في الأيام 10؛ 12 و14 للجسم المضاد ضد ‎OX40‏ )1 مجم/ كجم)؛ وفي الأيام 10 12؛ 14 17؛ 23؛ و25 للجسم المضاد ضد 00-1 )10 مجم/ كجم). يُقاس حجم الورم مرتين في الأسبوع. تنتهي الدراسة في اليوم 34. تُجرى التحليلات الإحصائية باستخدام ‎Anova‏ ثنائي الاتجاه لمقارنة المتوسطات بين كل مجموعتين عند نقطة زمنية واحدة. يتم تلخيص النتائج في جدول 25. في جدول 25؛ تشير القيم 5 إلى حجم الورم عند متوسط اليوم المشار إليه لأجل 8 فتئران لكل مجموعة + (متوسط الخطأ
المعياري) 5607؛ ‎=N‏ العدد لكل مجموعة؛ ‎=MM2‏ ملليمتر مكعب. يتضمن مقارن النوع الممائل النوع المماثل المناسب لكل جسم مضاد عند 1 مجم/ كجم لأجل ضد ‎OX40‏ و10 مجم/ كجم لأجل ضد ‎PD-1‏ ‏جدول 25 . حجم الورم في فثران تحمل ‎MC38‏ بعد المعالجة مع جسم مضاد ضد 1 ‎PD-‏ وجسم مضاد ضد ‎OX40‏ ‎re > 5 0‏ 7 من فئران المعالجة الووم مقارن نوع 7 + 832/4 + 8 + 6 + صفر/ ممائل 1.9 139 2224 279 2 + 9 + ضد ‎PD-1‏ |67+ 8 540 + 125 صفر 7 63.2 169 7 + 302 + 370 + 720 + 1.5 64.1 77.2 145 ضد ‎PD-1‏ ‏7 + 255 + + ضد 0 + 38 3 +90 25م 7.4 51.2 00 بدءا من اليوم 24؛ كل المجموعات المُعالجة بالجسم المضاد ضد 90-1 و/أو الجسم المضاد ضد 016-40 تُظهر أحجام ورم أصغر بشكل ملحوظ عند المقارنة مع المجموعة المقارنة (جدول 25). في اليوم 24 تُظهر المجموعة المُعالجة بالاتحاد (الجسم المضاد ضد ‎PD-1‏ ‏والجسم المضاد ضد ‎(OX-40‏ دلالة لأجل م > 0.0001 عند المقارنة مع المجموعة المقارنة 0 لنوع ‎(flea‏ بينما تُظهر كل معالجة فردية بجسم مضاد دلالة م > 0.01 عند المقارنة مع
المجموعة المقارنة. في اليوم 34؛ تُظهر جميع المجموعات المُعالجة دلالة م < 0.0001 عند المقارنة مع المجموعة المقارنة. في اليوم 34 تُظهر المجموعات المُعالجة بالاتحاد اختلافات عند المقارنة مع المجموعة المُعالجة بالجسم المضاد ضد 00-1 بمفرده أو المجموعة المُعالجة بالجسم المضاد ضد 076-40 بمفرده. توضح هذه النتائج أن المعالجة مع الجسم المضاد ضد ‎PD-1‏ ‏5 والجسم المضاد ضد 072-40 تُظهر نمو ورم عند المقارنة مع المعالجة مع كل جسم مضاد بمفرده. مثال 14: تأثير اللقاح على إظهار 00-1 على خلايا 1 منشطة يوضح هذا المثال تأثير اللقاح المعتمد على ‎DNA‏ الذي يُظهر مولد ضد لغشاء يخص بروستاتا بشري ‎(PSMA) (Prostate Specific Membrane Antigen)‏ على إظهار ‎PD-1‏ ‏10 على خلايا ‎CD3+CDA T‏ (جدول 26( 5 ‎CD3+CD8‏ (جدول 27( في وجود الجسم المضاد أحادي النسخ ‎tremelimumab‏ ضد 4هها1© (مثبط نقطة فحص). إجراءات الدراسة في الجسم الحي. تُستخدم ثلاث مجموعات من قرود ماكاك سينومولجس صينية ‎=N)‏ 8/ مجموعة) في الدراسة. تُحقن الحيوانات في المجموعات 1 و2 داخل العضل بلقاح يحتوي على ناقل فيروس غدي 80068 (تعريف الترتيب رقم: 44) يشفر الأحماض الأمينية 15- 750 لأجل ‎PSMA‏ بشري (عند جرعة إجمالية ‎VP‏ 2811) بينما لا تتلقى الحيوانات في المجموعة 3 أي تلقيح. يتوافر الترتيب الكامل لناقل الفيروس الغدي 080068 في تعريف الترتيب رقم: 44. بالإضافة إلى ذلك؛ مباشرةً بعد التلقيح؛ تُعالج الحيوانات في المجموعة 2 مع 50 مجم من الجسم المضاد أحادي النسخ ‎tremelimumab‏ سابق ضد 04/ا1© عن طريق حقنات تحت الجلد. تُجمع عينات من الدم بالكامل من كل حيوان قبل ‎(Pre)‏ وعد التلقيح في الأيام 9 15 0 و29 وبتم تحليلها من حيث تكرار خلايا ‎CD3+CD4 T‏ و003+008 التي تُظهر 50-1 عن طريق قياس التدفق الخلوي. التنميط الظاهري لخلايا ‎CD3+CD4 T‏ و008. يُجرى تنميط ظاهري لمجموعات خلايا الدم البيضاء عن طريق إجراء تحليل تدفق خلوي متعدد اللون على الدم الكامل المُجمع حديثا. باختصارء يُبقع الدم الكامل لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة مع مجموعة من الأجسام
المضادة تحتوي على ‎CD3-V500‏ (نسخة 5034-2)؛ ‎CD4-BV60S‏ (نسخة ‎«(L200‏ «(Biolegend (EH12.2H7 ‏(نسخة‎ PD1-AF488 ‏(نسخة 41ا5)‎ CD8-APC.H7
CD69- «(Novus (11E3 ‏(نسخة‎ Lag3-PE.Cy7 (MIH] ‏(نسخة‎ 0011-1 ‎PE. Texas Red‏ (سخة 101.553 ‎TIM3-APC (Beckman Coulter‏ (نسخة ‎CD20-PE.Cy5.5 «(R&D Systems 344823 5‏ (سخة 2117 ‎«(eBioscience‏ ‎CD56- «(3G8 ‏(نسخة‎ CD16-PE.Cy5 ((M5SE2 ‏(سخة‎ CD14-AF700 ‎CD11c-PE 5 ((B159 4a.) PerCP.Cy5.5‏ (نسخة ‎L(SHCOL3‏ يتم شراء جميع الأجسام ‏المضادة من ‎BD‏ مالم يشار إلى خلاف ذلك. تُعالج العينات مع مثبت أس هيدروجيني للتحلل ‎RBC‏ (0ا8)؛ وتم غسلهاء وخلطها مع 50 ملليلتر من خرزات ‎do‏ سائلة ‎(BD)‏ ويتم الحصول ‏0 عليها على ‎Fortessa (BD)‏ 4ا5ا. يتم تحليل البيانات باستخدام ‎FlowJo‏ ‎(Tree Star Inc, USA) ‏تُعرض في جدول 26 نتائج إظهار 00-1 على خلايا ‎CD3+CD4 T‏ وفي جدول 27 تُعرض ‎mil‏ إظهار 10-1 على ‎.CD3+CD8 T WIA‏ بلاحظ حث 0100-1 بعد اليوم 9 من التلقيح وبتم تحليله إلى المستويات المُلاحظة في الحيوانات الأصلية (المجموعة 3) في اليوم 29 ‏5 بعد التلقيح. تشير هذه النتائج إلى ناقل اللقاح المُعطى معا مع الجسم المضاد ضد 61104 قد يؤدي إلى إظهار ‎PD-1‏ على خلايا ‎CD4 T‏ +0003 و0108 في الكائنات الرئيسة غير البشرية. جدول 26: حركيات إظهار ‎PD-1‏ على ‎T WA‏ 0103+604 فى قرود ماكاك سينومولجس ‏النقط ‎ZPD-1+ CD3+CD4 T Wa‏ فردية فى إجمالى ‎CD3+CD4 T Wa‏ 0 المجمو الزمن اعة |1 39 ]3 4 5 7 ية ‎12.66 10.9 12.4 12.9 12.4 8.27 7 16 1 ١ ‏سابقة‎ ‎49 3 81 35 41 5 3
10.3] 12.1] ‏اوعد‎ 13.2] 5.94| 7.79| 11.3 9.757 2 75 12] 59 9 3 50 83 9.94 ١ 7.57 7 3 3 7 7 12.7| 11.7] 10.6| 20.6١ 18.8] 11.9| 11.7 8-2 1 ‏ادو‎ 66| 23] 57 61] 77 2 4 28.3١ 27.4١ 34.5| 25.9 27.5 38.51 29.0 ‏اليوم‎ ‎22.07 2 781 35] 68| ‏ا2»‎ 16] 93| o1 9 13.2] 10.1] 18.60 3 05| 01 8 10.4| 8.76] 13.6| 15.7 10.3 9.82 8.27 14.87 1 07 3 09] 42 02 17.5| 16.6] 27.7١ 20.9١ 15.6] 18.1| 14.5 16.42 ‏اليوم‎ ‎2 ‎83| 12] 78| 27 67 38| 78 1 15 10.8 | 10.6 16.87 3 781 07 8 11.1| 10.5] 9.57| 14.4١ 14.0| 8.41 14.81 9.39 1 16| 24 6| 36| 51 2 9 ‏اليوم‎ ‎13.8] 14.1] 26.3| 20.9] 8.29] 12. 0.2 09 29 2 68| 26| 88| 89 30 71] 09 4
58 9.09 |14.1 ‎IEEE‏ ‏جدول 27: حركيات إظهار ‎PD-1‏ على خلايا ‎CD3+CD8 T‏ في قرود ماكاك سينومولجس خلايا ‎PD-1+ CD3+CD8 T‏ 7 فردية في إجمالي خلايا الزمنية 5 ب ةك أ نك نك نا دنم انا لقن هذ نا نا ‎I‏ ا ا ا ‎I‏ ‏ب لسن ل ب ا له ادي لقن أذ ‎ES‏ ل ا ا ا ‎I‏ ‏له اق نهنا نهذ اهنا اق اننا اا ‎de‏ نا نه ل كا نت و ل ل اف رس ‎[ee]‏ مثال 15: تأثير الجسم المضاد ضد 90-1 على استجابة خلية آ التي تخص مولد ضد مُحثة بواسطة لقاح يُظهر ‎PSMA‏ بشري
يوضح هذا المثال تأثير الأجسام المضادة ضد 001 على استجابات خلية ‎T‏ 604 ‎IFNy‏ و608 ‎IFNy‏ المُحثة بلقاح يحتوي على ناقل فيروس غدي 0668م يُظهر ‎PSMA‏ ‏بشري في قرود ماكاك سينومولجس. اختبار تبقيع سيتوكين داخل الخلايا ‎.(ICS) (Intracellular Cytokine Staining)‏
باختصار؛ يتم تحضين ‎PBMCS‏ من حيوانات فردية بصورة مشتركة مع مجموعات من ببتيدات من 15 وحدة مكتبة ببتيد تتداخل بواسطة 11 حمض أميني يمد الترتيب الكامل للمولد الضد المعين؛ كل ببتيد عند 2 ميكروجرام/ ملليلتر. تُحضن الأطباق ‎saad‏ - 16 ساعة عند 37 "مئوية؛ 5 . ثبقع الخلايا بعد ذلك لاكتشاف إظهار ‎IFNy‏ داخل الخلية من خلايا ‎T‏ +6082 وبتم تثبيتها. يتم الحصول على الخلايا على مقياس تدفق خلوي. تُجرى تسوية تكرار الاستجابة إلى عدد
0 خلايا 7 +608 ‎IFNy‏ لكل مليون خلية 1 +008؛ مع طرح الاستجابات في عيون مقارن داي ميثيل سلفوكسيد؛ لا يحتوي على ببتيد. تعرض الاستجابات التي تخص مولد الضد في الجداول مجموع الاستجابات للمجموعات المقابلة من الببتيد التي تخص مولد الضد.
إجراءات الدراسة في الجسم ‎all‏ باختصار؛ ‎iad‏ خمس مجموعات من قرود ماكاك سينومولجس صينية ‎=N)‏ 8/ مجموعة) داخل العضل مع لقاح يحتوي على فيروس غدي 0068م
5 (تعريف الترتيب رقم: 44) يشفر الحمض الأميني 15- 750 من ‎PSMA‏ بشري ‎(hPSMA)‏ ‏عند إجمالي جرعة ‎VP‏ 2611. يلي التلقيح في المجموعات 2؛ 4 و5 مباشرةً حقنات تحت الجلد بمقدار 50 مجم من الجسم المضاد أحادي النسخ ‎tremelimumab‏ ضد 4ها1 © و/أو الجسم المضاد أحادي النسخ 0007 ضد 00-1 معطاة تحت الجلد (المجموعات 3 و4) أو داخل الوريد (المجموعة 5) عند 10 مجم/ كجم. تُعزل ‎PBMCs‏ من كل حيوان وتخضع لاختبار
‎ICCS 0‏ لقياس استجابات خلايا ‎T‏ 608 (اليوم 29( أو ‎IFNy CD4‏ تخص ‎PSMA‏ بشري (اليوم 9 أو اليوم 29). تتوافر ترتيبات الحمض الأميني لأجل ‎PSAM‏ بشري مكتمل الطول في تعريف الترتيب رقم: 42. يتوافر ترتيب ناقل الفيروس الغدي 80068 الذي يُظهر أحماض أمينية 5- 750 من ‎PSMA‏ بشري في تعريف الترتيب رقم: 44.
النتائج. تُعرض النتائج في الجداول 29؛ 30؛ و31. توضح البيانات أن كل من ضد ‎CTLA4‏ وضد 00-1 قد يُزيد بصورة فردية تكرار استجابات خلية ‎IFNy 604 T‏ و0608 ‎IFNy‏ المحثة باللقاح. جدول 28: معلومات ترتيب ببتيد لمجموعات ببتيد المستخدمة فى اختبارات ‎ICCS 4 ELISpot‏ لحث استجابات خلية ‎IFNy T‏ التى تخص مولد الضد. مولد مجموعات مكتبة ببتيد الضد 5 ببتيد بمقدار 15 وحدة تسلسلية؛ تتداخل بواسطة 11 حمض أمينى» يغطى ‎١ ١ PSMA‏ ترتيب بروتين ‎hPSMA‏ بالكامل مكتمل الطول (ترتيب حمض أميني: 750-1( بشري مُختبر كثلاث مجموعات منفصلة. جدول 29: استجابات خلية 7 008 ‎dak IFNy‏ باللقاح في اليوم 9 عيار خلية 7 608 ‎IFNy‏ يخص ‎hPSMA‏ فردي مثبط طريقة | (خلايا ‎/IFNy+CD8‏ خلايا 7 008 166 مضبويلة أ ألمت ‎J‏ ~ مثبطات ‎١‏ . وسط ‎(we | ag | (5 |‏ وعة انقطة الهند 7 الفحص سي 4 3 9 7ق غير |10 14 +67 10 |50 92.9 1 لا يوجد 1 1 ]1 متاح |72 3 |22 5 |3 |1
‎tremeli‏ اغير ا72 |35 |42 |60 |95 93 |197)25 2 86 5 امتاح |78 |6 3 09 4 5 ‎T|11‏ ‏2
عيار خلية ‎IFNy CD8 T‏ يخص ‎hPSMA‏ فردي مثبط طريقة (خلايا ‎JIFNy+CD8‏ خلايا ‎CDS ١‏ 166« مضبوطة المت الم< مثبطات } . وسط لمجم |( ( ‎MAB‏ اسابقا) وعة نقطة الهند 7 الفحص سي 3 4 3 4 7ق تحت ا20 |65 31 ‎44١‏ ا13 |40 +76 | 157148 ‎mAb7 3‏ الجلد ‎O| 38+ 37+ 77١‏ 2 |63 91 7 (5 ‎tremeli‏ 40 ‎b‏ تحت | 22 |66 |11 ]68 |93 ]19 69 | 223 ‎muma 4‏ 34 ‎١ asl‏ 2 7 99 |79 +3 59 5101 ‎mAb7‏ 9 ‎tremeli‏ 20 ‎b‏ داخل ‎10١‏ ]17 | 23 | 48 +74 46 | 105 ‎muma 5‏ 1 94 الوريد 37 |35 +71 9 35 2113 ‎mAb7‏ 7 جدول 30: استجابات خلية ‎das IFNy CD4 T‏ باللقاح في اليوم 9 عيار خلية ‎IFNy CD4 T‏ يخص ‎hPSMA‏ فردي المت مشط طريقة (خلايا 4 ‎/IFNy+‏ خلايا ‎«1e6 CD4 ١‏ المد ْ ‎١‏ ماله وسط لمجم (مثبطات) | ‎MAB‏ | مضبوطة سابقا) وعة الهند نقطة الفحص | 7 سي قت تق
غير 1 لا يوجد 1 1 1 1 1 1 1 1 1 متاح 11 ‎tremelimu‏ | غير 66 | 25 27 32 17 15 2 1 91 1 ‎mab‏ متاح 5 9 1 6 7 |4 4 تحت | 17 45 ]19 ]19 19 15 12 ‎mAb7 3‏ 1 الجلد | 4 7 3 4 2 9 5 ‎tremelimu‏ ‏تحت | 19 43 ]17 | 73 | 13 | 18 | 47 | 40 ‎mab 4‏ 1 الجلد ‎١‏ 55 5 64 |6 07 ]52 ]1 1 ‎mAb7‏ + ‎tremelimu‏ ‎Jah‏ | 85 |15 | 13 ]11 ]16 |70 ]49 ]10 10 ‎mab 5‏ الوريد | 8 67 | 98 02 31 5 38 ]29 | 24 ‎mAb7‏ + جدول 31: استجابات خلية ‎IFNy CD4 T‏ مُحثة باللقاح في اليوم 29 عيار خلية ‎IFNy CD4 T‏ يخص ‎hPSMA‏ فردي المت مقط طريقة (خلايا 4 ‎/IFNy+‏ خلايا ‎«1e6 CD4 ١‏ ‎١ ١ A‏ ااا وسط لمجم (مثبطات) | ‎MAB‏ | مضبوطة سابقا) وعة الهند نقطة الفحص | 7 سي اق تق غير 50 ‎24١‏ +5014 1 لا يوجد 1 1 1 1 24 متاح 6 6 3 4
‎tremelimu‏ اغير |17 10 28 86 |66 |26 37 23 2 63 ‎mab‏ متاح ‎5١‏ 1 ]45 ا7 2 5 |2 ‎Of‏ ‏تحت | 12 14 23 ‎mAb7 3‏ 1 1 1 97 ]1 121 ‎alll‏ 9 5 0 ‎tremelimu‏ ‏تحت | 81 |10 |52 ]31 ]16 |10 |11 ]13 371 ‎mab 4‏ الجلد 6 ا7 |7 |5 8 84 )5131 7 ‎mAb7‏ + ‎tremelimu‏ ‎dah mab 5‏ | 33 |14 |55 36 |22 |36 11 | 24 |46 ‎OF 9] 96| 2] wl‏ 1 1 64 |8 |8 ‎mAb7‏ + مثال 16: تأثير الأجسام المضادة ضد 00-1 على استجابات خلية 7 ‎Ziad) IFNy‏ بلقاح يُظهر بصورة مشتركة مولد ضد لغشاء ‎ado‏ بروستاتا بشري ‎Ala A ge 13 (PS MA)‏ لخلية جذعية للبروستاتا ‎«(PSCA) (Prostate Stem Cell Antigen)‏ ومولد ضد يخص البروستاتا ‎(PSA) (Prostate Specific Antigen)‏ إجراءات الدراسة في الجسم الحى. باختصارء تُستخدم ثلاث مجموعات من 8 35 ماكاك سينومولجس صينية ‎=N)‏ 4/ مجموعة) في الدراسة. تُحقن الحيوانات في مجموعة 1 داخل العضل بوسط ناقل. تُعطى الحيوانات في مجموعة 2 الجسم المضاد أحادي النسخ 00/07 ضد ‎PD-1‏ ‏تحت الجلد عند 20 مجم/ كجم. تُعالج الحيوانات في مجموعة 3 بلقاح يحتوي على ناقل فيروس غدي 0068م يُظهر بصورة مشتركة ثلاث مولدات ضد مرتبطة ببروستاتا بشرية ‎PSMA)‏ ‎(PSA; PSCA 0‏ (ناقل 734-//800681)؛ عند ‎Ja)‏ جرعة ‎VP‏ 6611؛ يليه مباشرةً حقنات تحت الجلد بمقدار 150 مجم من الجسم المضاد 1607600700185 ضد ‎CTLAG‏ والجسم المضاد أحادي النسخ 00/07 ضد 00-1 عند 20 مجم/ كجم. بعد ثمانية وعشرون يوما من الحقنات؛ تُدعم الحيوانات بوسط ‎Jil‏ (المجموعة 1)؛ جسم مضاد أحادي النسخ 0007 ضد
00-1 تحت الجلد عند 20 مجم/ كجم (المجموعة 2) أو بلازميد ‎DNA‏ (بلازميد 458( يُظهر
ثلاث مولدات ضد لسرطان بروستاتا بشرية ‎(PSA 3 PSCA (PSMA)‏ يتم توصيلها بالتثقيب
الكهربائي يليه مباشرةً حقنات تحت الجلد بمقدار 150 مجم من جسم مضاد أحادي النسخ ضد
‎CTLAY‏ وضد 00-1 عند 20 ‎fans‏ كجم (المجموعة 3). بعد ثلاثة وأربعون يوما من الحقنات الأساسية ‎JY)‏ ¢ تُعزل ‎PBMCs‏ من كل حيوان وتخضع لاختبارات ‎(ELISPOT‏ لقياس
‎PSA 5 (PSCA (PSMA ‏التي تخص‎ IFNy T ‏استجابات خلية‎
‏يتوافر الترتيب الكامل للناقل ‎AACO8W-T734‏ المستخدم في الدراسة في تعريف الترتيب
‏رقم: 45 من الكشف الحالي وفي تعريف الترتيب رقم: 63 من منشور الطلب الدولي رقم:
‏7 ر. يوصف أيضا بناء الناقل ‎AdCOBW-T734‏ في الطلب الدولي رقم:
‏0 2015/063647, الذي يُدمج الكشف الخاص به هنا بالمرجع. يشتمل كل من الناقل 4-/006810م والبلازميد 458 على (1) ترتيب نيكلوتيد يشفر الأحماض الأمينية 750-15 من ‎PSMA‏ بشري له الترتيب من تعريف الترتيب رقم: 42 (2) ترتيب نيكلوتيد يشفر الأحماض الأمينية 261-25 من ‎PSA‏ بشري له الترتيب من تعريف الترتيب رقم: 47؛ و(3) ترتيب نيكلوتيد يشفر 50/8 بشري مكتمل الطول من تعريف الترتيب رقم: 48.
‏15 اختبار ‎IFNy ELISPOT‏ باختصار؛ يتم تحضين خلايا وحيدة النواة من دم محيطي ‎(PBMCs)‏ من حيوانات فردية بصورة مشتركة بنسختين مع مجموعات من ببتيدات من مكتبة ببتيد بمقدار 15 وحدة تتداخل بواسطة 11 حمض أميني يمد الترتيب الكامل للمولد الضد الخاص؛ كل ببتيد عند 2 ميكروجرام/ ملليلتر. تُحضن الأطباق لمدة تقريبا 16 ساعة عند 37 "مئوية» 75 2) ثم تُغسل ويتم تطويرهاء حسب تعليمات الصانع. يُجرى عدّ عدد الخلايا التي تشكل بقعة
‎(SFC) (spot forming cells) IFNy 0‏ بوسطة قاريء .011. يُحسب متوسط النسختين وتُطرح استجابة عيون المقارن السالب التي لا تحتوي على ببتيد. تُجرى بعدئذ تسوية عدّات ‎SFC‏ لوصف الاستجابة لكل ‎PBMCs‏ 166. تعرض الاستجابات التي تخص مولد الضد في الجداول مجموع الاستجابات لمجموعات الببتيد التي تخص مولد الضد المقابلة.
‏النتائج. توضح نتائج ‎(ELISPOL‏ المعروضة في جدول 33؛ أن الحيوانات التي تتلقى 5 اللقاح مع الجسم المضاد ضد 00-1 والجسم المضاد ضد 61184 تحت الجلد تُظهر زيادة قوية
فى استجابة خلايا 1 ‎IFNy‏ لمولد ضد لسرطان بروستاتا واحد على الأقل؛ بينما لا توجد استجابات خلية 1 ‎IFNy‏ لمولدات الضد في مجموعة الوسط الناقل (المجموعة 1) أو المجموعة المعطاة جسم مضاد ضد 1 ‎PD-‏ فقط (المجموعة 2( . جدول 32: معلومات ترتيب ببتيد لمجموعات ببتيد المستخدمة في اختبارات ‎ICCS 5 ELISpot‏ لحث استجابات خلية ‎All IFNy T‏ تخص مولد الضد. مولد مجموعات مكتبة ببتيد الضد 5 ببتيد بمقدار 15 وحدة تسلسلية؛ تتداخل بواسطة 11 حمض أميني؛ تغطي ‎PSMA‏ | ترتيب بروتين ‎PSMA‏ بالكامل مكتمل الطول (ترتيب حمض أميني: 750-1) مُختبر كثلاث مجموعات منفصلة. 8 ببتيد بمقدار 15 وحدة تسلسلية؛ تتداخل بواسطة 11 حمض أميني؛ تغطي ‎١. PSCA‏ ترتيب بروتين ‎PSCA‏ بالكامل مكتمل الطول (ترتيب حمض أميني: 123-1) مُختبر كمجموعة واحدة منفصلة. 62 ببتيد بمقدار 15 وحدة تسلسلية؛ تتداخل بواسطة 11 حمض أميني؛ تغطي ‎PSA‏ ا ترتيب بروتين ‎PSA‏ بالكامل مكتمل الطول (ترتيب حمض أميني: 246-1) مُختبر كمجموعة واحدة منفصلة. جدول 33: تأثير الجسم المضاد ضد 00-1 على استجابات خلية ‎IFNy ELISpot T‏ التي ‎add‏ مولد ضد ‎Hall‏ بلقا ‎z‏ في قرود ماكاك سينومولجس .
‏فردي‎ IFNy ELISpot T ‏عيار خلية‎ 8 on ‏المجموعة | اللقا‎ ‏مضبوطة‎ SFC/1e6 PBMCs) 5 A ‏نقطة‎ C ‏سابقا)‎ ‏غير‎ ‎EEE ‎C ‏متا‎ ‏غير‎ ‎0 EE
C ‏متا‎ ‎tremelimumab ‎3224 | 2441 1263 | 1360 + 3 + mAb7 ‏غير‎ ‏عم‎
C ‏متا‎ ‏غير‎ ‏ل‎ IEEE
C ‏متا‎ ‎tremelimumab ‎416 488 18 91 + 3 + mAb7 ‏غير‎ ‎EEE ‎C ‏متا‎ ‎PSA ‏غير‎ ‎IEEE ‎C ‏متا‎
عيار خلية 1 ‎IFNy ELISpot‏ فردي المجموعة | اللقا ‎SFC/1e6 PBMC‏ مضبوطة ج نقطة اله للإستثارة (5 ‎/1e6‏ مضبوه سابقا) ‎tremelimumab‏ ‏3 + 404 ]1267[ 527 512 ‎mAb7‏ + القيم في الأقواس تمثل الاستجابات حيث يكون تكرار اختبار واحد على الأقل أعلى من الحد الأعلى للتحديد الكمي للاختبار ‎SFC/1e6 PBMC)‏ 1333). يتم تحويل قيم 550/166 0 على الرغم من وصف التعاليم المبينة بالإشارة إلى التطبيقات؛ الطرق؛ المجموعات؛ والتركيبات المختلفة؛ سيتم إدراك أنه يمكن عمل تغييرات وتعديلات مختلفة بدون الحيود عن التعاليم هنا والاختراع المدعى به أدناه. توافرت الأمثلة المذكورة لتوضيح التعاليم المبينة بشكل أفضل ولا يُقصد بها تقييد مجال التعاليم المقدمة هنا. في حين تم وصف التعاليم الحالية فيما يخص هذه التجسيدات التمثيلية؛ سيفهم الحرفي الماهر بسهولة أنه يمكن عمل العديد من التغيرات والتعديلات لهذه التجسيدات التمثيلية بدون تجريب لا داعي له. جميع هذه التغييرات والتعديلات في مجال التعاليم الحالية. جميع المراجع المذكورة هناء بما فيها براءات الاختراع» طلبات براءات الاختراع» الأوراق؛ ‎eas‏ إلخ» والمراجع المذكورة هناء إلى الحد الذي لم تكن هي بالفعل؛ مدمجة هنا بالمرجع 0 بأكملها. في ‎dlls‏ اختلاف أو تعارض واحد أو أكثر من الأدبيات والمواد المشابهة المدمجة مع هذا الطلب 3 بما في ذلك لكن ليس على سبيل الحصر المصطلحات ‎dd yall‏ 3 استخدام المصطلحات؛ التقنيات الموصوفة؛ إلخ؛ فهذا الطلب يقوم بدور التحكم. تُفصل المواصفة والأمثلة المذكورة بعض التجسيدات الخاصة للاختراع وتصف أفضل وضع تصوره المخترعون. على الرغم من ذلك؛ سيتم إدراك أنه بغض النظر عن وضوح التفاصيل
التي سبق ذكرها في النص»؛ فإنه يمكن تطبيق الاختراع بطرق عدة وأنه يجب تفسير الاختراع وفقاً لعناصر الحماية الملحقة وأي مكافئات لها. قائمة الترتيب ‎.RINAT NEUROSCIENCE CORP >110<‏
>120< أجسام مضادة ضد 00-1 وطرق استخدامها <130> 072121
0 >150< براءة الاختراع الأمريكية 62/089658 <151> 2014-12-9 <150> براءة الاختراع الأمريكية 62/242750 <151> 2015-10-16
<150> براءة الاختراع الأمريكية 62/251973 <151> 2015-11-6 >160< 51
‏ملتمعتوط‎ version 3.5 >170< 1 <210> 288 <211> 5
PRT <212> ‏الإنسان العاقل‎ <213> 1 <400>
Trp Val Val Pro Trp Pro Ala GIn Pro lle Gin Met 10
Gln Leu Val Ala 5 1
Pro Ser Asp Leu Phe Trp Gly Pro Arg Trp Gly Leu
Trp Pro Arg Asp 15 20
Val Val Leu Leu Ala Pro Ser Phe Thr Pro Pro Asn
Asp Gly Glu Thr 35 20
Ser Thr Asn Ser Phe Ser Cys Thr Phe Thr Ala Asn
Val Phe Ser Glu 60 55 50
Thr Gin Asn Ser Pro Ser Met Arg Tyr Trp Asn Leu 5
Ala Leu Lys Asp 75 70 65 80
Asp GIn Gly Pro ‏ماو‎ Ser Arg Asp Glu Pro Phe Ala
Arg Phe Arg Cys 10 90 85 95
Met His Phe Asp Arg Gly Asn Pro Leu GIn Thr Val
Arg Val Val Ser 105 100 15 110
Gly Cys Leu Tyr Thr Gly Ser Asp Asn Arg Arg Ala
Leu Ser lle Ala 120 115 125 20
Ala Arg Leu Ser Glu Lys lle Gin Ala Lys Pro Ala
Val Arg Leu Glu
140 135 130
Pro His Ala Thr Pro Val Glu Ala Arg Arg Glu Thr
Pro Ser Pro Ser 155 150 145 5 160
Gly Val Val Leu Thr Gin Phe GIn Gly Ala Pro Arg
Gly Gly Val Val 170 165 175 10
Leu Val Trp Val Leu Leu Val Leu Ser Gly Leu Leu
Cys lle Val Ala 185 180 190
Arg Arg Ala Gly lle Thr Gly Arg Ala Ala Arg Ser 15
Pro GIn Gly Thr 200 195 205
Ser Phe Val Pro Val Ala Ser Pro Asp Glu Lys Leu
Gly Tyr Asp Val 20 220 215 210
Glu Pro Thr Lys Glu Arg Trp GIn Phe Asp Leu Glu
Pro Val Pro Pro 235 230 225 240
Val le Thr Ala Tyr Glu Thr Gin Glu Pro Val Cys 5
Gly Ser Pro Phe 250 245 255
Ala Ser Gly Arg Arg Ala Pro Ser Ser Thr Gly Met
Arg Pro Gly Asp 10 265 260 270
Cys His Gly Asp Glu Pro Arg Leu Pro GIn Ala Ser
Leu Pro Trp Ser 280 275 15 285 2 <210> 113 <211>
PRT <212> 20 ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213>
<220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 2 >400< 5
Ala Leu Ser Asp Pro Ser GIn Thr Met Val lle Asp
Gly Leu Ser Val 5 1
Ser GIn Ser Ser Lys Cys Asn lle Thr Ala Arg Glu 10
Ser Asp Trp Leu 20
Gn Gin Tyr Trp Thr Leu Phe Asn Lys GIn Asn Gly
Gin Gly Pro Lys 15 35
Arg Thr Ser Thr Trp Tyr lle Leu Leu Lys Pro Pro
Val Gly Ser Glu 60 55 50 20
Asp Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Phe Arg Asp Pro
Thr Leu Thr Phe 75 70 65 80
Tyr Val Ala Val Asp Glu Ala GIn Leu Ser Ser lle 5
Asn 0 Cys Tyr 90 85 95
Thr Gly Gly Gly Phe Thr Leu Pro Tyr Phe Tyr Asp lle Glu Val Lys 10 105 100 110
Lys 3 <210> 117 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعى‎ <213> <220>
‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 3 <400>
Lys Val Glu Ala Gly Ser GIn Val Leu GIn Val Gin
Ala Gly Pro Lys 5 5 1
Thr Tyr Gly Ser Ala Lys Cys Ser Val Lys Val Ser
Tyr Ser Thr Phe 20 10
Gy Gin Gly Pro Ala Gin Arg Val Trp Asn lle Trp
Met Trp Glu Leu 35 15
Tyr Asn Thr Leu Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn Gly
Phe Lys Glu Asn 60 55 50
Thr Ser Thr Asp Arg Thr Met Thr Val Arg Asn Lys 20
Tyr Val Thr Ser
75 70 65 80
Ala Thr Asp Glu Ser Arg Leu Ser Ser Leu Glu Met
Cys Tyr Tyr Val 90 85 5 95
Gly Trp Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Leu Leu Arg Ala
Leu Thr Gly 0 105 100 110 10
Ser Ser Val Thr Val 115 4 <210> 117 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220>
‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 4 <400>
Lys Val Glu Ala Gly Ser GIn Val Leu GIn Val Gin
Ala Gly Pro Lys 5 5 1
Thr Tyr Gly Ser Ala Lys Cys Ser Val Lys Val Ser
Tyr Ser Thr Phe 20 10
Gy Gin Gly Pro Ala Gin Arg Val Trp Asn lle Trp
Met Trp Glu Leu 35 15
Tyr Asn Thr Leu Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn Gly
Phe Lys Glu Asn 60 55 50
Thr Ser Thr Asp Arg Thr Met Thr Val Arg Asn Lys 20
Tyr Val Thr Ser
75 70 65 80
Ala Thr Asp Glu Ser Arg Leu Ser Ser Leu Glu Met
Cys Tyr Tyr Val 90 85 5 95
Gly Trp Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Ser Leu Arg Ala
Leu Thr Gly 0 105 100 110 10
Ser Ser Val Thr Val 115 15 <210> 117 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220>
‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> >400<
Lys Val Glu Ala Gly Ser GIn Val Leu GIn Val Gin
Ala Gly Pro Lys 5 5 1
Thr Tyr Gly Ser Ala Lys Cys Ser Val Lys Val Ser
Tyr Ser Thr Phe 20 10
Gy Gin Gly Pro Ala Gin Arg Val Trp Asn lle Trp
Met Trp Glu Leu 35 15
Tyr Asn Thr lle Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn Gly
Phe Lys Glu Asn 60 55 50
Thr Ser Thr Asp Arg Thr Met Thr Val Arg Asn Lys 20
Tyr Val Thr Ser
75 70 65 80
Ala Thr Asp Glu Ser Arg Leu Ser Ser Leu Glu Met
Cys Tyr Tyr Val 90 85 5 95
Gly Trp Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Thr Leu Arg Ala
Leu Thr Gly 0 105 100 110 10
Ser Ser Val Thr Val 115 6 <210> 117 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220>
‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 6 <400>
Lys Val Glu Ala Gly Ser GIn Val Leu GIn Val Gin
Ala Gly Pro Lys 5 5 1
Thr Tyr Gly Ser Ala Lys Cys Ser Val Lys Val Ser
Tyr Ser Thr Phe 20 10
Gy Gin Gly Pro Ala Gin Arg Val Trp Asn lle Trp
Met Trp Glu Leu 35 15
Tyr Asn Thr Leu Ser Ser Gly Pro Trp lle Asn Gly
Phe Lys Glu Asn 60 55 50
Thr Ser Thr Asp Arg Thr Met Thr Val Arg Asn Lys 20
Tyr Val Thr Ser
75 70 65 80
Ala Thr Asp Glu Ser Arg Leu Ser Ser Leu Glu Met
Cys Tyr Tyr Val 90 85 5 95
Gly Trp Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Leu Leu Arg Ala
Leu Thr Gly 0 105 100 110 10
Ser Ser Val Thr Val 115 7 <210> 113 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220>
‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 7 <400>
Ala Leu Ser Asp Pro Ser GIn Thr Met Val lle Asp
Gly Leu Ser Val 5 5 1
Ser GIn Ser Ser Lys Cys Asn lle Thr Ala Arg Glu
Ser Asp Trp Leu 20 10
Gn Gin Tyr Trp Thr Leu Phe Asn Lys GIn Asn Gly
Gln Gly Pro Lys 35 15
Arg Tyr Ser Thr Trp Tyr lle Leu Leu Lys Pro Pro
Val Gly Ser Glu 60 55 50
Asp Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Phe Arg Asp Pro 20
Thr Leu Thr Phe
75 70 65 80
Tyr Val Ala Val Asp Glu Ala 60 Leu Ser Ser lle
Asn GIn Cys Tyr 90 85 5 95
Thr Gly Gly Gly Phe Thr Leu Pro Tyr Phe Tyr Asp lle Glu Val Lys 105 100 110 10
Lys 8 <210> 113 <211> 15
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة‎ <223> 0
8 <400>
Ala Leu Ser Asp Pro Ser GIn Thr Met Val lle Asp
Gly Leu Ser Val 5 1 5
Ser GIn Ser Ser Lys Cys Asn lle Thr Ala Arg Glu
Ser Asp Trp Leu 20
Gin Gin Tyr Trp Thr Leu Phe Asn Lys GIn Asn Gly 10
Gln Gly Pro Lys 35
Arg Tyr Ser Thr Trp Tyr lle Leu Leu Lys Pro Pro
Val Gly Ser Glu 15 60 55 50
Asp Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Phe Arg Asp Pro
Thr Leu Thr Phe 75 70 65 0 80
Tyr Val Ala Val Asp Glu Ala Gin Leu Ser Ser lle
Asn 0 Cys Tyr 90 85 95
Thr Gly Gly Gly Phe Thr His Pro Tyr Phe Tyr Asp 5 lle Glu Val Lys 105 100 110
Lys 9 <210> 113 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> 5 <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 9 >400< 20
Ala Leu Ser Asp Pro Ser GIn Thr Met Val lle Asp
Gly Leu Ser Val 5 1
Ser GIn Ser Ser Lys Cys Asn lle Thr Ala Arg Glu 5
Ser Asp Trp Leu 20
Gn Gin Tyr Trp Thr Leu Phe Asn Lys GIn Asn Thr
Gin Gly Pro Lys 10 35
Arg Thr Ser Thr Trp Tyr lle Leu Leu Lys Pro Pro
Val Gly Ser Glu 60 55 50 15
Asp Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Phe Arg Asp Pro
Thr Leu Thr Phe 75 70 65 80 20
Tyr Val Ala Val Asp Glu Ala 60 Leu Ser Ser lle
Asn 0 Cys Tyr
90 85 95
Thr Gly Gly Gly Phe Thr Leu Pro Tyr Phe Tyr Asp lle Glu Val Lys 105 100 5 110
Lys <210> 10 17 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> 5 ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 10 <400>
Gln Asn Gly Ser Asp Trp Leu Ser GIn Ser Ser Lys
Leu Phe Asn Lys 20
10 5 1 15
Thr 11 <210> 7 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 11 <400>
Ser Glu Arg Thr Ser Thr Trp 15 5 1 12 <210> 20
9 >211<
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> 5 ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 12 <400>
Thr Leu Pro Tyr Phe Tyr Asp Asn 0 10 1 13 <210> <211> 15
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220>
‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 13 >400<
Asn lle Trp Tyr Ser Thr Phe Thr Tyr Gly 5 1 14 <210> 7<211> 0
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة‎ <223> 5 14 >400<
Tyr Ser Thr Phe Thr Tyr Gly
<210> 5<211> 5
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> 0 >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة >400< 15 ‎Asn lle Trp Tyr Ser‏ 5 1 15 16 <210> 6 <211>
PRT <212> 0
>213< ترتيب ‎١‏ صطناعي >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية 16 <400>
Leu Ser Ser Gly Pro Tyr 5 1 17 <210> 17 <211>
PRT <212> 5 >213< ترتيب اصطناعي >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية
17 <400>
Asn Tyr Asn Thr Leu Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn
Lys Phe Lys Glu 5 1 5
Asn 18 <210> 8 <211> 10
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة‎ <223> 5 18 <400>
Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Leu Leu
19 <210> 15>211< 5
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> ‏وصلة تخليقية‎ <223> 10 19 <400>
Gy Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
Ser Gly Gly 5 1 15 <210> 7 <211>
PRT <212> 0
>213< ترتيب ‎١‏ صطناعي >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية
>400< 20 ‎Ser Glu Arg Tyr Ser Thr Trp‏ 1 5
>210< 21 >211< 9 ‎PRT <212>‏ 5 >213< ترتيب اصطناعي >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية
21 <400>
Thr His Pro Tyr Phe Tyr Asp Asn Gin 1 5 22 <210> 17 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> 10 <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 22 >400< 5
Gln Asn Thr Ser Asp Trp Leu Ser GIn Ser Ser Lys
Leu Phe Asn Lys 5 1
Thr 23 <210> 8 <211> 5
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة‎ <223> 0 23 <400>
Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Ser Leu 1 15 24 <210> 6 <211>
PRT <212> 20
>213< ترتيب ‎١‏ صطناعي >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية 24 <400> lle Ser Ser Gly Pro Tyr 5 1 <210> 17 <211>
PRT <212> 5 >213< ترتيب اصطناعي >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية
25 >400<
Asn Tyr Asn Thr lle Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn
Lys Phe Lys Glu 5 1 5
Asn 26 <210> 8 <211> 10
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة‎ <223> 5 26 >400<
Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Thr Leu
27 <210> 6 <211> 5
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> 0 >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة >400< 27 ‎Leu Ser Ser Gly Pro Trp‏ 5 1 15 28 <210> 17 <211>
PRT <212> 0
‏ترتيب اصطناعي‎ >213< <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 28 <400>
Asn Tyr Asn Thr Leu Ser Ser Gly Pro Trp lle Asn
Lys Phe Lys Glu 5 1 10
Asn 29 <210> 444 <211> 15
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 0
29 <400>
Lys Val Glu Ala Gly Ser GIn Val Leu GIn Val Gin
Ala Gly Pro Lys 5 1 5
Thr Tyr Gly Ser Ala Lys Cys Ser Val Lys Val Ser
Tyr Ser Thr Phe 20 10
Gy Gin Gly Pro Ala Gin Arg Val Trp Asn lle Trp
Met Trp Glu Leu 35
Tyr Asn Thr Leu Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn Gly 15
Phe Lys Glu Asn 60 55 50
Thr Ser Thr Asp Arg Thr Met Thr Val Arg Asn Lys
Tyr Val Thr Ser 20 75 70 65 80
Ala Thr Asp Glu Ser Arg Leu Ser Ser Leu Glu Met
Cys Tyr Tyr Val 90 85 95
Gly Trp Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Ser Leu Arg Ala 5
Leu Thr Gly 0 105 100 110
Ser Pro Gly Lys Thr Ser Ala Ser Ser Val Thr Val
Leu Pro Phe Val 10 120 115 125
Ala Thr Ser Glu Ser Thr Ser Arg Ser Cys Pro Ala
Cys Gly Leu Ala 140 135 130 15
Val Thr Val Pro Glu Pro Phe Tyr Asp Lys Val Leu
Ser Asn Trp Ser 155 150 145 160 20
Ala Pro Phe Thr His Val Gly Ser Thr Leu Ala Gly
Ser GIn Leu Val
170 165 175
Val Thr Val Val Ser Ser Leu Ser Tyr Leu Gly Ser
Ser Ser Ser Pro 185 180 5 190
His Asp Val Asn Cys Thr Tyr Thr Lys Thr Gly Leu
Asn Ser Pro Lys 200 195 205 10
Gly Tyr Lys Ser Glu Val Arg Lys Asp Val Lys Thr
Pro Cys Pro Pro 220 215 210
Ser Pro Gly Gly Leu Phe Glu Pro Ala Pro Cys Pro 15
Phe Leu Phe Val 235 230 225 240
Arg Ser le Met Leu Thr Asp Lys Pro Lys Pro Pro
Val Glu Pro Thr 20 250 245 255
Pro Asp Glu GIn Ser Val Asp Val Val Val Cys Thr
Phe GIn Val Glu 265 260 270
Ala Asn His Val Glu Val Gly Asp Val Tyr Trp Asn 5
Pro Lys Thr Lys 280 275 285
Val Val Arg Tyr Thr Ser Asn Phe Glin Glu Glu Arg
Thr Leu Val Ser 10 300 295 290
Tyr Glu Lys Gly Asn Leu Trp Asp GIn His Leu Val
Val Lys Cys Lys 315 310 305 15 320
Thr Lys Glu lle Ser Ser Pro Leu Gly Lys Asn Ser
Ala Lys Ser lle 330 325 335 20
Leu Thr Tyr Val Gin Pro Glu Arg Pro Gin Gly Lys
Gin Ser Pro Pro
345 340 350
Cys Thr Leu Ser Val GIn Asn Lys Thr Met Glu Glu
Gly Lys Val Leu 360 355 5 365
Ser Glu Trp Glu Val Ala lle Asp Ser Pro Tyr Phe
Pro GIn Gly Asn 380 375 370
Asp Leu Val Pro Pro Thr Thr Lys Tyr Asn Asn Glu
Ser Gly Asp Ser 395 390 385 400
Ser Lys Asp Val Thr Leu Arg Ser Tyr Leu Phe Phe 15
Glu GIn Trp Arg 410 405 415
Ala Glu His Met Val Ser Cys Ser Phe Val Asn Gly
His Asn His Leu 20 425 420 430
Lys Gly Leu Ser Leu Ser Leu Ser Lys GIn Thr Tyr 440 435 30 <210> 17 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 30 >400<
Gin Asn Gly Ser Asp Leu Leu Ser GIn Ser Ser Lys 15
Leu Phe Asn Lys 10 5 1
Thr
31 <210> 9 <211>
PRT <212> ‏صطناعي‎ J ‏ترتيب‎ <213> 5 >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية 31 <400> 10
Thr Leu Pro Tyr Ser Tyr Asp Asn 0 1 32 <210> 17 <211>
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213>
<220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> <220> 5 ‏شكل متباين‎ >221< (7)..(7) <222>
Leu of Trp ‏هو‎ Xaa <223> <220> 10 ‏شكل متباين‎ <221> (10)..(10) <222>
Thr ‏أو‎ Gly ‏هو‎ Xaa <223> 32 <400> 15
Gln Asn Xaa Ser Asp Xaa Leu Ser GIn Ser Ser Lys
Leu Phe Asn Lys 5 1
Thr 33 <210> 7<211> 5
PRT <212> ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> 0 >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة >220< >221< شكل متباين >222< (4(..)4)
Tyr ‏أو‎ Thr ‏هو‎ Xaa <223> 5 33 <400>
Ser Glu Arg Xaa Ser Thr Trp
34 >210< 9>211< 5
‎PRT <212>‏ >213< ترتيب اصطناعي >220<
‏0 >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة >220< >221< شكل متباين >222< )5(--)5(
‎Xaa <223> 5‏ هو ‎Phe‏ أو ‎Ser‏ ‏>220< ‏>221< شكل متباين >222< )8)..(8(
His of Leu ‏هر‎ Xaa <223> 34 <400>
Thr Xaa Pro Tyr Xaa Tyr Asp Asn 0 5 1 <210> 17 <211> 10
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعى‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشربة‎ <223> 5 35 <400>
Asn Tyr Asn Thr Ser Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn
Lys Phe Lys Glu
10 5 1 15
Asn >210< 36 >211< 17 ‎PRT <212>‏ >213< ترتيب اصطناعي >220< <223> ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية >220< 5 >221< شكل متباين >222< ()..(2) ‎Xaa <223>‏ هو ‎Tyr‏ أو ‎Trp‏ ‏>220<
‏شكل متباين‎ <221> (8)..(8) <222>
Ser ‏أو‎ (le (Leu ‏هر‎ Xaa <223> 36 <400> 5
Asn Tyr Asn Thr Xaa Ser Ser Gly Pro Xaa lle Asn
Lys Phe Lys Glu 5 1
Asn 0 37 <210> 8 <211>
PRT <212> 15 ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223>
>220< >221< شكل متباين >222< )2)..(2( ‎Xaa <223>‏ هو ‎Leu‏ أو ‎Ser‏ ‏5 37 <400>
Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Xaa Leu 1 38 <210> 443 <211>
PRT <212> 5 >213< ترتيب اصطناعي >220< >223< ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية
38 <400>
Lys Val Glu Ala Gly Ser GIn Val Leu GIn Val Gin
Ala Gly Pro Lys 5 1 5
Thr Tyr Gly Ser Ala Lys Cys Ser Val Lys Val Ser
Tyr Ser Thr Phe 20
Gy Gin Gly Pro Ala Gin Arg Val Trp Asn lle Trp 10
Met Trp Glu Leu 35
Tyr Asn Thr Leu Ser Ser Gly Pro Tyr lle Asn Gly
Phe Lys Glu Asn 15 60 55 50
Thr Ser Thr Asp Arg Thr Met Thr Val Arg Asn Lys
Tyr Val Thr Ser 75 70 65 0 80
Ala Thr Asp Glu Ser Arg Leu Ser Ser Leu Glu Met
Cys Tyr Tyr Val 90 85 95
Gly Trp Tyr Ala Phe Thr Gly Thr Ser Leu Arg Ala 5
Leu Thr Gly 0 105 100 110
Ser Pro Gly Lys Thr Ser Ala Ser Ser Val Thr Val
Leu Pro Phe Val 10 120 115 125
Ala Thr Ser Glu Ser Thr Ser Arg Ser Cys Pro Ala
Cys Gly Leu Ala 140 135 130 15
Val Thr Val Pro Glu Pro Phe Tyr Asp Lys Val Leu
Ser Asn Trp Ser 155 150 145 160 20
Ala Pro Phe Thr His Val Gly Ser Thr Leu Ala Gly
Ser GIn Leu Val
170 165 175
Val Thr Val Val Ser Ser Leu Ser Tyr Leu Gly Ser
Ser Ser Ser Pro 185 180 5 190
His Asp Val Asn Cys Thr Tyr Thr Lys Thr Gly Leu
Asn Ser Pro Lys 200 195 205 10
Gly Tyr Lys Ser Glu Val Arg Lys Asp Val Lys Thr
Pro Cys Pro Pro 220 215 210
Ser Pro Gly Gly Leu Phe Glu Pro Ala Pro Cys Pro 15
Phe Leu Phe Val 235 230 225 240
Arg Ser le Met Leu Thr Asp Lys Pro Lys Pro Pro
Val Glu Pro Thr 20 250 245 255
Pro Asp Glu GIn Ser Val Asp Val Val Val Cys Thr
Phe GIn Val Glu 265 260 270
Ala Asn His Val Glu Val Gly Asp Val Tyr Trp Asn 5
Pro Lys Thr Lys 280 275 285
Val Val Arg Tyr Thr Ser Asn Phe Glin Glu Glu Arg
Thr Leu Val Ser 10 300 295 290
Tyr Glu Lys Gly Asn Leu Trp Asp GIn His Leu Val
Val Lys Cys Lys 315 310 305 15 320
Thr Lys Glu lle Ser Ser Pro Leu Gly Lys Asn Ser
Ala Lys Ser lle 330 325 335 20
Leu Thr Tyr Val Gin Pro Glu Arg Pro Gin Gly Lys
Gin Ser Pro Pro
345 340 350
Cys Thr Leu Ser Val GIn Asn Lys Thr Met Glu Glu
Gly Lys Val Leu 360 355 5 365
Ser Glu Trp Glu Val Ala lle Asp Ser Pro Tyr Phe
Pro GIn Gly Asn 380 375 370
Asp Leu Val Pro Pro Thr Thr Lys Tyr Asn Asn Glu
Ser Gly Asp Ser 395 390 385 400
Ser Lys Asp Val Thr Leu Arg Ser Tyr Leu Phe Phe 15
Glu GIn Trp Arg 410 405 415
Ala Glu His Met Val Ser Cys Ser Phe Val Asn Gly
His Asn His Leu 20 425 420 430
Gly Leu Ser Leu Ser Leu Ser Lys GIn Thr Tyr 440 435 39 <210> 221 <211>
PRT <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏ترتيب جسم مضاد مكتسب للسمة البشرية‎ <223> 39 <400>
Ala Leu Ser Asp Pro Ser GIn Thr Met Val lle Asp 15
Gly Leu Ser Val 10 5 1
Ser GIn Ser Ser Lys Cys Asn lle Thr Ala Arg Glu
Ser Asp Trp Leu 20
25 20 30
Gn Gin Tyr Trp Thr Leu Phe Asn Lys ©0 Asn Gly
Gln Gly Pro Lys 40 35 5 45
Arg Tyr Ser Thr Trp Tyr lle Leu Leu Lys Pro Pro
Val Gly Ser Glu 60 55 50
Asp Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Phe Arg Asp Pro
Thr Leu Thr Phe 75 70 65 80
Tyr Val Ala Val Asp Glu Ala GIn Leu Ser Ser lle 15
Asn 0 Cys Tyr 90 85 95
Thr Gly Gly Gly Phe Thr His Pro Tyr Phe Tyr Asp lle Glu Val Lys 20 105 100 110 lle Phe Val Ser Pro Ala Ala Val Thr Gly Arg Lys
Ser Pro Pro Phe 120 115 125
Val Val Ser Ala Thr Gly Ser Lys Leu GIn Glu Asp 5
Asn Leu Leu Cys 140 135 130
Lys Trp GIn Val Lys Ala Glu Arg Pro Tyr Phe Asn
Ala Asn Asp Val 10 155 150 145 160
Glu Thr Val Ser Glu Gin Ser Asn Gly Ser GIn Leu
Lys Ser Asp Gin 170 165 15 175
Leu Thr Leu Thr Ser Ser Leu Ser Tyr Thr Ser Asp
Asp Ala Lys Ser 185 180 190 20
Thr Val Glu Cys Ala Tyr Val Lys His Lys Glu Tyr
Leu Gly GIn His
200 195 205
Glu Gly Arg Asn Phe Ser Lys Thr Val Pro Ser Ser
Cys 220 215 210 5 40 <210> 351 <211>
DNA <212> 10 ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220>
MADb7 ‏منطقة متغيرة سلسلة تقيلة‎ DNA ‏ترتيب‎ <223> >400< cgtgaaagtg caggagccag gtgaagaaac cggcgccgaa tggtgcagag 800106806 60 tcaattgggt tcttactgga tacctttacc catccggcta agttgtaagg 120 gaggcaggca 20 gactaactac gctctagctt atctatcccg gatgggaaat gcctggaatg cctggccagg 180 caccgtgtac ctagcacctc acccgggaca cgtgaccatg ttaagaatcg aatgaaaagt 240 ccgcctgagt 3013119106 accgccgtct gagcgaggac cctcectgeg atggagetgt 5 300 351 a ccgtctecctc acactggtca gggacagggt ttgcctactg accgggacct 41 <210> 339 <211> 0
DNA <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220>
MAb7 ‏منطقة متغيرة سلسلة خفيفة‎ DNA ‏ترتيب‎ <223> 5 41 >400< gcctgggaga ctggcagtca tcccgatagc tgactcagtc gacatcgtga 60 gcgggccacc tttcctgacc atcagaagaa gacagtggta gtcgctgtgg aaagctcgca ataaactgca 120 ctcatatcgg tctactggac aagctgctga ccagccaccc agaagcctgg tggtaccagce 180 cacactgacc gtacggactt agtggcagcg attctctgga tgcccgacag gagtccgggg 5S 240 ctacttttat gccagaacga gtttattact ggacgtggct tgcaagctga atatccagtc 300 339 gagatcaaa taccaaggtc tcggaggcgg cctcacactt 42 <210> 750 <211>
PRT <212> ‏الإنسان العاقل‎ <213> 42 >400<
Val Ala Ser Asp Thr Glu His Leu Leu Asn Trp Met
Arg Ala Thr Ala 10 5 1 15 20
Leu Val Leu Ala Gly Ala Cys Leu Trp Arg Pro Arg
Phe Gly Gly Ala 20
Lys lle Phe Trp Gly Phe Leu Phe Gly Leu Leu Phe 5
Glu Asn Ser Ser 35
Ala Lys Met Asn His Lys Pro Thr lle Asn Thr Ala
Glu Asp Leu Phe 10 60 55 50
Asn Tyr Leu Phe Lys Lys lle Asn Glu Ala Lys Leu lle GIn Thr Phe 75 70 65 5 80
Leu Gin Phe Asn GIn Glu Thr Gly Ala Leu His Pro lle Gin Lys Ala 90 85 95 20
Val Ser Asp Leu Gly Phe Glu Lys Trp GIn Ser Gin
His Ala Leu Glu
105 100 110
His Thr Lys Asn Pro Tyr Ser Leu Leu Val Asp Tyr lle Tyr Asn Pro 120 115 5 125
Asn Phe lle Glu Asn Gly Asp Glu Asn lle lle Ser
Phe Leu Ser Thr 140 135 130
Asp Ser Val Asn Glu Tyr Gly Pro Pro Pro Pro Glu
Pro Pro Val lle 155 150 145 160
Gly Glu Pro Met Gly ‏ماو‎ Pro Ser Phe Ala Ser Phe 15
Tyr Val Leu Asp 170 165 175
Leu Lys Phe Phe Asp Glu Thr Arg Ala Tyr Asn Val
Met Asp Arg Glu 20 185 180 190
Arg Ala lle Val lle Lys Gly Ser Cys Asn lle Lys
Val Lys Gly Tyr 200 195 205
Ala Leu GIn Ala Asn Lys Val Lys Asn Gly Arg Phe 5
Gly Lys Ala Gly 220 215 210
Ala Phe Tyr Asp Ala Pro Asp Ser Tyr Leu lle Val
Lys Val Gly Pro 10 235 230 225 240
Gy Gly Gly Pro Leu Asn Trp Gly Asp Pro Tyr Ser
Gly Arg GIn Val 250 245 15 255
Leu Pro Asp Gly Ala Gly Asn Leu Asn Leu lle Asn
Tyr Gly Pro Thr 265 260 270 20
Ala lle Gly Arg Arg Tyr Ala Tyr Glu Asn Ala Pro
Gly Val Ala Glu
280 275 285
Tyr Tyr Gly lle Pro His Val Pro lle Ser Pro Leu
Lys GIn Ala Asp 300 295 290 5
Asp Pro Pro Ala Ser Gly Gly Met Lys Glu Leu Leu
Arg Trp Ser Ser 315 310 305 320 10
Gly Pro Gly Val Asn Tyr Pro Val Lys Leu Ser Gly
Asn Gly Thr Phe 330 325 335
Ser His lle His Met Lys Val Lys GIn Thr Ser Phe 15
Val Glu Asn Thr 345 340 350
Gly Arg Leu Thr Gly lle Val Asn Tyr lle Arg Thr
Pro Glu Val Ala 20 360 355 365
Ser Asp Arg His Gly Gly Leu lle Val Tyr Arg Asp
Gly Phe Val Trp 380 375 370
His Val Val Ala Ala Gly Ser Gln Pro Asp lle Gly 5
Arg Val lle Glu 395 390 385 400
Pro Arg Trp Gly Glu Lys Lys Leu Thr Gly Phe Ser lle Thr Arg Arg 10 410 405 415
Leu Gly Phe Glu Glu Ala Asp Trp Ser Ala Phe Leu
Thr Ser Gly Leu 425 420 15 430
Glu GIn Leu Leu Arg Ser Asn Glu Glu Ala Trp Glu
Ala Val Gly Arg 440 435 445 20
Tyr Asn Gly Glu lle Ser Ser Asp Ala Asn lle Tyr
Val Arg Leu Thr
460 455 450
Asn His Val Leu Ser Tyr Met Leu Pro Thr Cys Asp
Glu Lys Thr Leu 475 470 465 5 480
Ser Lys Gly Glu Phe Gly Glu Asp Pro Ser Lys Leu
Ser Glu Tyr Leu 490 485 495 10
Gly Ser Phe Glu Pro Ser Pro Ser Lys Lys Thr Trp lle Arg Pro Met 505 500 510
Phe Val Glu Phe Asp Asn Gly Ser Gly Leu Lys Ser 15
Leu Arg GIn Phe 520 515 525
Asn Lys Thr Tyr Arg Ala Arg Gly Ser Ala lle Gly
Asn Thr Glu Trp 20 540 535 530
Tyr Val Ser His Tyr Leu Pro Tyr Gly Ser Phe Lys
Glu Tyr Thr Glu 555 550 545 560
Tyr Lys Phe Met Pro Asp Tyr Phe Lys Glu Val Leu 5
Val Thr Leu His 570 565 575
Ala Leu Glu Phe Val Met Gly Gly Arg Val Gln Ala
Val lle Ser Asn 10 585 580 590
Leu Val Val Ala Tyr Asp Arg Cys Asp Phe Pro Leu
Ala Tyr Lys Arg 600 595 15 605
Gln Pro His Lys Met Ser lle Ser Tyr lle Lys Asp
Thr Lys Met Glu 620 615 610
Val Ala Ser Phe Leu Ser Asp Phe Ser Val Ser Tyr
Thr Phe Asn Lys
65 630 625 640
Asp GIn Leu Arg Glu Ser Phe Lys Ser Ala lle Glu
Ser Lys Asp Phe 650 645 5 655
Leu Gin Asp Asn Met Met Arg Leu Val lle Pro Asn
Glu Leu Phe Met 665 660 670 10
Arg Asp Pro Leu Gly Leu Pro Asp lle Phe Ala Arg
Arg Tyr Phe Pro 680 675 685
Tyr Lys Asn His Ser Ser Pro Ala Tyr lle Val His 15
Ser Glu Gly Ala 700 695 690
Glu lle Asp Phe Leu Ala Asp Tyr lle Gly Pro Phe
Asp Val Lys Ser 20 715 710 705 720 le Gin Arg Lys Val Glu Gly Trp Ala Lys Ser Pro
Ala Ala Val Tyr 730 725 735
Glu Ser Leu Thr Glu Ala Ala Ala Gin Val Thr Phe 5
Ala Val 745 740 750 43 <210> 10 2217 <211>
DNA <212> ‏ترتيب اصطناعى‎ <213> <220> 5 ‏بنية تخليقية‎ <223> 43 >400< ggctggcgge ctctggtget tgtgetggeg cagatggcetg 6803800066 atggctagceg 60 20 cctccaacga ttcatcaagt gttcggctgg tgggcttcct 11666 120 ggccaccaac gaatatcaag tgaaggccga ctggacgagc gaaggccttt agcacaacat atcaccccca 180 gaacttccag gcaccgagca cacctggccg ccagatcccc acaacttcac aagttectgt 5 240 ggaactggcc tggactccgt gagttcggcc ccagtggaaa agatccagtc ctggccaage 300 ctccatcatc ccaactacat aagacccacc ctaccccaac tgctgctgtc cactacgacg 360 10 cccaggctac agcccccacc tccctgttcg cttcaacacc gcaacgaaat aacgaggacg 420 catgcccgag gtccacaagg tccgcecttca gcccccattc ccgacatcgt gagaacgtgt 480 tcttcaagct accgaggact ctacgccagg tgtacgtgaa ggcgacctgg 15 540 ggaacgcgac gittcaggggc acggcaaggt atcgccagat caagatcgtg actgctccgg atgaagatca 600 ctccgacccc tgatcctgta gccaagggeg gctggetggg agaacgccca aacaaagtga 660 20 gatggaacct taccccgacg cgtgaagtcc tcgccccagg gccgactact 720 gccaggcggce gcgaccccct 3820909-19 cctgaacctg ggggcaacat ggagtgcaga 780 gaccccagga cctgccctet aggecgtggg ggaatcgecg ctacagaaga acgagtacgc tacccagcca 840 gatgggcggce tgctggaaaa gcccagaaac ctactacgac accccatcgg atcccagtge 5 900 cgtgggccca tgccctacaa tccctgaagg ttggagaggc ccgactcctc tccgecccac 960 acatccactc gtgaagatgc cacccagaaa (caacttctc ggcttcaccg 1020 caccaacgaa 10 cgacagatac ccgtggaacc ctgagaggcg gatcggcacc tctacaacgt gtgaccagga 1080 acagtctggc gcatcgaccc gtgttcggcg ggacagcetgg gcggccacag 908129 1140 gggatggcgc tgaagaaaga ttcggaaccc cgtgeggtcc tgcacgagat gecgetgtgg 5 1200 gctgggatcc aattcggcect gacgccgagg cgccagetgg — ccatcetgtt cccagaagga 1260 ctacatcaac gcggcgtcgc ctgcaggaac ctccaggcetg ccgaggaaaa accgagtggg 1320 20 cctgatgtac actgcacccc ctgagggtgg caactacacc ccatcgaggg gccgactcct 1380 acgagggctt aagtcccccg caaagagctg acaacctgac tccctggtge 1440 cgagggcaag catgcccagg agttctccgg ccatcccccg caagaagtcc agtcctggac tcectgtacg 1500 gggaatcgcc tccagaggct gaggtgttct caacgactic tgggctccgg atctccaage 5S 1560 ataccccctg agttctccgg gagacaaaca caagaactgg ccagatacac tccggcaggg 1620 catgttcaag tctacgaccc gtggaaaagt ctacgagctg tgtacgaaac taccactccg 1680 10 caactccatc tcgagctggc ggcatggtgt agtccgcgga ccgtggccca taccacctga 1740 cgacaaaatc ggaagtacgc gtggtgctga agactacgcc tcgactgcag gtgctgecct 1800 cttcgactcc actccgtgtc atgaagacct cccccaggaa ccatgaagca tactccatct 15 1860 gaggctgcag agttcagcga atcgcctcca tttcaccgag ccgtgaagaa ctgttctceg 1920 gatgttcctg acgaccagct aggatgatga aatcgtgctg agtccaaccc gacttcgaca 1980 20 gcacgtgatc ccttctacag ccagacagac cctgggcctg tcatcgaccc gaaagggcect 2040 ctacgatgcc tccccggcat ggcgagtcct caaatacgcc cctcccacaa tacgccccat 2100 ggggcgaagt tccaaggcct ggtggacccc tcgagtccaa ctgttcgaca 2160 gaagaggcaa ggtggcc ccctgtccga getgccgaaa agtgcaagcc ccgcecttcac atctacgtgg 5S 2217 44 <210> 33562 <211>
DNA <212> 10 ‏صطناعي‎ ١ ‏ترتيب‎ <213> <220> ‏بنية تخليقية‎ <223> 44 >400< gaggcgtttg atatgcaaat gtgcgcgtta caaacttttt taatatacct ccatcttcaa 60 gaccgttagg agggatgagc tgattggtcg ggaagggcgg aatttgggga 120 8 20 gcaagttctc gagccagttt ttgcgaggag 91319309100 gtgacgtttt 180 gtgggaaaag gctctctgac attttcccge gaaatactca tttgaacacg cgaggtgtgg tgacgtcaaa 240 cgcgaaaact gccattttcg gtgaaaacgg gcggatgcaa gtgttictgg aggaaatgag 5S 300 tatttgccga cagggaggag gcgtttatgg gagtaatttc gtgaaaatct gaatgaggaa 360 ttcacctaaa taccgtgttt gggtttcgat gattacgtgg gactttgacc gggccgagta 420 10 caattacggg taatagtaat tttactactg gtccggtgtt cggtgtcaaa 048 480 taaatggccc taacttacgg ccgcgttaca atatggagtt catagcccat 1 540 atgttcccat ataatgacgt attgacgtca 83600000066 ccgecccaacg gectggetga 5 600 ggtaaactgc gagtatttac tcaatgggtg tccattgacg atagggactt agtaacgcca 660 acgtcaatga ccccctattg gccaagtacg tgtatcatat gtacatcaag ccacttggca 720 20 ttcctacttg ttatgggact gtacatgacc attatgccca cccgectgge cggtaaatgg 780 ggcagtacat atgcggtttt taccatggtg tcatcgctat tacgtattag gcagtacatc 840 ccattgacgt agtctccacc gggatttcca ttgactcacg ggatagcggt caatgggegt 900 gtaacaactc ccaaaatgtc acgggacttt accaaaatca ttgttttggc caatgggagt 5 960 taagcagagc gaggtctata tgtacggtgg gcggtaggcg acgcaaatgg cgccccattg 1020 aaccgtcaga gagtttagtg cagtgataga atctccctat agtgatagag tgtccctatc 1080 10 ctgtgtgctg ccccagatgg gcgccagacg accatggcta taccgcgatc tccgctaggg 1140 tggttcatca cctgttcggc tgctgggcett 0000166 getggetgge gegcetetggt 1200 tttctggacg catgaaggcc ccaagcacaa aacatcaccc cgaggccacc agtcctccaa 5 1260 ccccacctgg cacccagatc tgtacaactt aagaagticc cgagaatatc agctgaaggce 1320 aaagagttcg gtcccagtgg agcagatcca cagctggcca gcagaacttc ccggcaccga 1380 20 gtcctacccc acgtgetget geccactacg cgtggaactg gcectggacte 1440 aacaagaccc acctccctgt aatcttcaac acggcaacga atcaacgagg catctccatc accccaacta 1500 ttctccgect cgtgccccca tgtccgacat tacgagaacg acccccaggce tcgagccccce 1560 gaactacgcc 1991913091 gagggcgacc aggcatgccc tcagtccaca 5 1620 aggaccgagg gtgatcgcca cggcaagatc tcaactgctc gacatgaaga gctggaacgc acttcttcaa 1680 ccagctggct tgaagaacgc ggcaacaaag ggtgttcagg gatacggcaa 1740 ggggccaagg 10 tcctaccccg aggcegtgaag 3010006066 cccgecgact gtactccgac gegtgatect 1800 ctgaacggcg catcctgaac agaggggcaa ggcggagtgc cctgccaggc acggatggaa 1860 cgcctacaga ccaacgagta ggatacccag cctgacccca ctggcgacce 5 1920 agaggaatcg cggctactac tgcaccccat tctatcccag gggcctgcce ccgaggcecegt 1980 gacgcccaga ggctccctga ctcttggaga cacccgactc ggctccgccc aaagatgggce aactgetgga 2040 20 ctccacccag ccggcaactt ccaggcttca caacgtgggc aggtgcccta 2100 aaagtgaaga accctgagag cgtgatcggc ggatctacaa gaagtgacca ctccaccaac tgcacatcca 2160 tgggtgttcg cagggacagc tgggcggcca tacgtgatcc acccgacaga gcgccgtgga 2220 tccttcggaa gatcgtgecgg tggtgcacga ggcgeccgcetg cccacagtct gecggecatcga 5 2280 tgggacgccg gttcgccagc ggaccatcct cgccccagaa agagggatgg ccctgaagaa 2340 ctgctgcagg aaactccagg gggccgagga tccaccgagt cctgctggga aggaattcgg 2400 10 accctgaggg gggcaactac cctccatcga aacgccgact cgcctacatc 88000090291 2460 ctgaagtccc gaccaaagag tgcacaacct tactccctgg ccccctgatg tggactgcac 2520 tccccatcce gaccaagaag acgagtcctg aagtcectgt cttcgaggge ccgacgaggg 15 2580 ttcgaggtgt cggcaacgac agctgggctc aggatctcca cggcatgccc ccgagttcte 2640 caccaagaac gggccagata gcctccggca gctgggaatc tcttccagag 2700 tgggagacaa 20 ctggtggaaa aacctacgag ccgtgtacga ctgtaccact cggatacccc acaagttctc 2760 ccaagtccgc tgaccgtggc aagtaccacc ccccatgttc agttctacga 2820 ggaggcatgg gcegtggtge cagagactac ccttcgactg 3160100196 ggccaactcc tgttcgagcet 2880 gcacccccag ftctccatgaa atctactcca cgccgacaaa tgaggaagta 5S 2940 gaaatgaaga gagatcgcct gaatttcacc 0838 tccetgttct gtccttcgac cctactecgt 3000 ctgaggatga cccaatcgtg acaagtccaa caggacttcg cgagaggctg ccaagttcag 3060 10 ctgccagaca ccccctgggce ccttcatcga ctggaaaggg — gctgatgttc tgaacgacca 3120 gccggcgagt caacaaatac catcctccca atctacgccc caggcacgtg gacccttcta 3180 ccctccaagg caaggtggac acatcgagtc gccctgttcg catctacgat ccttcccegg 5 3240 gccgctgeccg cacagtgcaa tggccgectt caaatctacg agtgaagagg cctggggcga 3300 ataatcagcc aaatctgatc ctcgagattt tgaatcgcac cgaggtggcc aaaccctgtc 3360 20 000103806 cccacacctc taaaaaacct ttacttgctt tgtagaggtt ataccacatt 3420 tataatggtt tattgcagct ttaacttgtt attgttgttg aatgaatgca tgaaacataa 3480 ctgcattcta atttttttca caaataaagc acaaatttca caatagcatc acaaataaag 3540 catgtggctt ggccaccgta cttatatgct atcaatgtat gtccaaactc gttgtggttt 5 3600 tgcaatatgc catgaccagg agcacaatgt cccgagticg caagccctgg cccatgcteg 3660 tatgtgaagg caacctgaat cctaccagtg atgttcatgc ccgccgagge atctggggte 3720 10 gacatgaatg gggggtgttt tgagcctgac atgtccagag gcccgatgcc tgctgctgga 3780 gcctgcgagt caggtgccga aatccaagac agatatgatg gaagattctg tggaggtgtg 3840 gacctgcgac tgtgacggag tgtgtgtgga ttccagcccg gcatgccagg gcggagggaa 15 3900 gaagaatctg ttccagcggg cggagttcgg tgcaccggga ggtgttgccc ccgatcattt 3960 aataactgaa tgagggccag aggacctgca ggggcggggg — gtagtgttct actagagtga 4020 20 cggctccttt tgagcggaag tgcagcagca ttctgtgtgt ~~ atctgtgctt 4080 89 cagaatgtga gggagtgcgt cctcctgggc gggcegtctce ttatctgacg tattcagcce 4140 ctgacctatg ctcttcaacc agcccgecgaa cggcccgtge ggtggacggce tgggatccac 4200 tctgccgcca agctgectgca ctgccgecge ttggacgcag — ctettecgtcg caaccctgag 5 4260 gccaactcga cactctggtg gctactacgg atgggcgccg cggaatggcc gcgccegtgeg 4320 atggcccagc gttgctgctg aggagaagct agcctgaacg taatcccgec gttccaccaa 4380 10 ctgcaggagc ggtggctcag tgacccagca ctgggcgagc gacccagcgc tcgaggcectt 4440 taaataaacg aatgaatcaa ccaaataaaa acggtgaaat cgcggttgcc agacgcggge 4500 gcgcgceggta ttgatttttc ~~ gaatctttat cacagagtct ttgattttaa gagacggttg 15 4560 ggacccggta atcttttcca cacccggtgg gatcattgag caccggtctc ggccctggac 4620 ggaggtagct tcccgggggt catgagcccg ggtacatggg tggatgttga gaggtgggcet 4680 20 acccagtcat gttgtaaatc cgggggtggt gcctcgtget ccattgcagg 4740 agcaggggcg gcagcccttt atggccacgg gaggagactg tatctttgag tgttgcacaa cagggcatgg 4800 agatgaggtg atgcgggggg ggagggatgc tgttgagctg tttacaaatc ggtgtaggtg 4860 tggggttcat agatcccgec gttaccgcce gattggcgat tggatcttga catctiggee 5 4920 catgcaactt gggaatttat ggtgcacttg cggtgtatcc accaccagca gttgtgcagg 4980 tttccatgca ccgcccaggt gectttgtge atttggcgac gcgtgaaaga ggaagggaag 5040 10 cgtttcgggg tgggcaaaga ggcggcggcec tgggcccgtg atgatggcga ctcatccatg 5100 taatgaattt taggccattt gaggtcatca ggtcctgggt tcatagttgt gtcggacaca 5160 cgtagttccc atcccggggg ggtaccctcg gggggacaaa gtgccggactggggeggagg 15 5220 ccacctgcgg gggatcatgt ctcggagggg aggcetttgag tgcatctccec ctcacagatc 5280 gcaagttccg tgggccgaaa ggagatgagc ccggggcggg aacacggttt ggcgataaag 5340 20 ccggctgcag accccgatga gccgtagatg 3060091000 gacttgecge gagcagetgg 5400 cctcgttcat aggggggcca ctcccggagg agctgecgtc 8090993030362 0 5460 ctcccecccag aggaggcegcet cagttccgeec 160260036 acgtgcatgt 816120606 5520 cggccatggg ttgagtccgt tttcagcgge aggcgaagtt tcctggageg ggataggage 5S 5580 tgatgtgctc cagagctcgg caggcggtcc gcaagagttic agggtttgtt 9 5640 tgggacggct tttcgcgggt gacctcctcg cgatccagca tacggcatct 5700 gcgggagtag 10 tcgcagegtc ccttccaggg agggtccggt cagcgcagec gatgggegtc ggcaccagac 5760 gcttgcgagg cgggctgggc gggtgcgege cacggtgaag tggtctccgt cgcgtcaggg 5820 ctgcgegtcg gatcggcgec aaccgctcce getggtcgaa ggctcatccg gtgegettca 5 5880 gcctttggcg cggecgegtg ttgagcgect gagttcgtag aattgaccat gccaggtagce 5940 ggagggactt gcgggacaga ctgcccgcag ctttggaagt cggagcttac 6000 gagggcgtag 20 gtgggcgcag ccgcgccgca gcgtaggegt ggactcgggg cgaggaagac agcettggggg 6060 aaccagtttc cggggtcaaa 120992199 ccaggtgagg actccacgag acggtctcge 6120 tccccgetgg tgagetegtg ttggtctcca tttcttacct ttttgatgcg ccgcecgttct 6180 ctcgagcggt tgggccggtc accgacttta gtccccgtag ggctgtcegt gtgacaaaga 5 6240 ccgggtccag agacgaaagc gcccactccg 0300380666 cctectegta gtgecgeggt 6300 cgggtccacc tgtccaccag tagcggtcgt gtgggacggg aggaggccac gccagcacga 6360 10 gattggcttg ccaggaaggt tcgtccacat catgtccccc tatgcaaaca 9 6420 tgcgggtcee tataaaaggg gccggggggg gggggtccecg ccacgtgacc taagtgtagg 6480 gggtaggtat ccagctgttg tccaggagcg cggatcgctg cactgtcttc tgctegteet 15 6540 cagtttctag ctcaggttgt gacctcggca aggcgggcat tccctctcga 6600 aaacgaggag catctggtca gcccctcgtc cctttcaaga ggcggagatg tgacggtgcc gatttgatat 6660 20 ggcgttggag agccgtagag gtggcgaagg gtcgagcettg tctttttgtt gaaaagacga 6720
16019000 tgtcggegceg tttttttcct catggtctgg cgatggagcg aggagcttgg 6780 gacggtggtc attcggggaa acgcacttcc ctcgcgcgec gctgcacgta gcgatgttga 6840 gaggtccaca gcagggtgat ccccgattat gacctgccag gcacgattct agcetcgtcgg 5S 6900 gcccttgcge agaggcegtcc ttagtccagec caggggcetca cctcgecgeg ctggtggceca 6960 atcgatggtg gggggtcggc acctcgtcgg gtccagcatg ggggcagggg gagcagaagg 7020 10 atcgtccagg aagtggccag tagctgatgg ggggtcaaag gcaggaggtc aagatgccgg 7080 cgtgccccag gactgagggg cgctcgtagg ggccagegeg attcgcgcac gcagcttgec 7140 tgtcgtagac atgccgcaga ggaggcgtac gggtaagcgc ggcatgggat 15 7200 gtagaggggc cgcggatgcet cagcgcccece ggtggggtag tgccgatgta tcctcgagga 7260 ggcgegeacg gcgactgggc ccaggttggt agccccggge gggggcgagg gctcgtgcga tagtcataca 7320 20 gatggtgggc agttggagga atggcatgcg ctggcggaaa ggtagacgat 200206 7380 agtcgcggat agtccgaccg ggcgtggggce tgttgaagtg ctttggaaga 7440 gaagtgggcg agcgcagtag ggacgtccag gcggtgacta gacgagctcg gcagcttgge taggagtctt 7500 cagctcgcegg tttgtttcca agctgtccct gtcatacttg cctggatgat tcgagggtct 5 7560 gtcctgatct gggggaaccc tactcttcga gtccttccag actcttcgeg ttgagaagga 7620 gcagcccttc tgtaggcgca ttgacggcect gtagaactgg agcectagcat gcacggtaag 7680 10 aggtgtgcgt ttgcgcaggg ctgggcggcc gggcegtaggc tccacgggga 7740 gagggcgaaa gcagcccccc cgatatcgtc tgcttgaagt gaggaactgg ccatgacctt gtgtccctga 7800 ggttgggcaa ttgtaggcgg cgtgcgcettc getggaagtc tgctcccaga 5 7860 agcgaaagta tgcgagtgat ggcataaagt gcccgcgegg agaggatctt 8 7920 gcggaaaggt gtcgaagccg gcacgatctc tgggcggcga gttgatgacc cggeceggtt tggggcacct 7980 20 gacgtggggc gacggccctt acgaatcgcg gtagagttcc ggcccacgat ttgatgttgt 8040 ctgctcgagc tgagcccgtg tcggggtcgc ggtgagcetcg gctectcgta 38 8100 tccagagatc aggaaggaag gttggcgcgg cgagatgggg gcccagtcgg 8160 cacggccagg tttttcgggg cgacggccat aactgctgcc gtactgacgg gacggtcccg geggtttgca 5S 8220 ctggagggcg cccatttgag tgccagcgat ggggtccccg agaaggtgcg gtgacgcagt 8280 cagcatgaag gtttcatgac tccccggaga gagccggtcg cgagctcgac agatcgaggg 8340 10 gtaggtgagg tttccacatc caggtgtagg ggaccccatc gcttgccgaa gggacgagct 8400 ctgccaccaa actggatctc atggggaaga atgcgagccg cggtgcgagg aagagccttt 8460 cgaacactcg gacggcgcgc tagaaatgcc gtgatggaag ggctgttgat ttggaggaat 15 8520 cacgtgctgc gcacgggatg tcgcaacgct gccacagtgc tatacaagcg tgcttgtgtt 8580 tcgtggcgcc ggaagtggag aatttcagtg tttgacgagg cctgagtticc acgagctgta 8640 20 ctcgatggtg cctettctge tcggectgge gtegtggtgg getgtactac tgcatctegt 8700
090909396 gtccagacct cgggaggcag 03802666000 38 5760 8 cggagtcagg tgagacgctg tccagggtcc gccggagcetg gggcgcgcag gcgaggacga 8820 tttccagggc tgcaggagtt gcggttgact gcggecggege tcagtgggca 5 8880 gcgcgggagyg ttgcagggtc cgtcgatggc ttggtggcga caccgcgcca acttgatctc 91 8940 tgggcggctg cgtttcttct caccgtccce ggggtgtgac ccgtgeccect 9000 gggcgacggg 10 cgcgecgggce ggcgaggacg tagaagcggc cttccatggt ggeggtgect 9060 09 ggtaggttct gccgegegeg geacgtcgge 99099208999 cggaggcagg 6 9120 tcctggatct acggttgacg cgacgacgcg ctggcgtgag ccggagaaga ggtactgcge ‏م‎ ‎9180 ‎agttcgacag cctgaaagag tgagtttgaa acgggacccg ggtgaaggcc gacgcctctg 9240 tcgcccgagt ctcttgcacg gccgcaggat acggecggecct ggtatcgttg aatcaatcte 9300 20 aggtctccgc ctcctettga gctcgatctc gtcatgaact ggcgatctcg 48 9360 agctgcgaga gcggcccatg cgttggagat gccgcgaggt ctccacggtg ggeccggegeg 9420 tcgggatcgc cacgacgccc ggctgtagac ttccagacgc gcccgectcg aggcegttcat 9480 accgcgtagt gcgcgtgaag gctccacgtg gcgaggttga gaccacctgg gggcgegecat 5S 9540 gtgctcggtg tggtggcgat tagttgagcg ctggtagagg tgcagaggcg 9600 acgaagaaat aaacgttcca cagcgcctcc tgacgtcgcc ggcatctcge gcggecggage acatgatcca 9660 10 gagacggtca gttgcgcgcc aaaactggga gcgaagttga aaagtccacg tggcctcgta 9720 cgctcgaagg gcgcacctcg cgatggtggc atgagctcgg cagaagacgg 861601066 9780 tctacttcct taacatctct cctectccac tcctettctt ttcctccact cccccgggag 5 9840 ccggcggege gectgegtcg 9999989999 8919919968 89 9900 acgggcagac gtgacggcgc catggtctcg gccggegtcg gtctcgecge gegcetcgatg ggtcgatgaa 9960 20 tggccggggg catctccagg cgccgecgceg agcgtgaaga gcggggccge geccgtecte 10020 cccgtaggga tatcaattgc cgatgcatct 3809090202193 gggcagggag 9066601 10080 tgaaaaccgc ccacgggatc gtctcgagat ggacctgagc ctccgcgcaa 10140 tgaacgaagg gggtcatgtt 11-1006 tgagcacggt caaggtaggc gtcgcagtcg cttcgagcca 5 10200 gttctgagac gaaataggcg tgatgaagtt atgctgctgg ggggcgggeg ggttgggage 10260 cgcagacggt ttgctggatg tgggcccggc accaggtctt ggcgaggage ggcggatggt 10320 10 tcctgcatga cttgtagtag tggccaggtc tcctgacacc ccaggegtgg cggccatgec 10380 catgcgcgtg cgcggecegtg 01200600 99000860166 gecgcetccac 10440 agcccgaagce atggcttgct ctcggcgagg cgacgacgecg gccaggtcgg ctggacgagce cgegetgggg 15 10500 taggctccgg gaagcggtgg caaagtcgac tggaagtcat gagggtggtc ggatctgggt 10560 tggcccggac gacggtctgg cggaccagtt ttggccatga gtaggagcag — tgttgatggt 10620 20 tagtcgttgc gtcgaagatg aggcgcgegt aggcgcgagt gtggtacttg gcacgagctc 10680 cggtagagcg cggcggctgg ggaagtgcgg tagccgatga caggtactgg aggtgcgcac 10740 cggtggtagc gagcatggtg cgaggtcctc 0606009920 ggtggegggg gccatcgete 10800 cgcgggaact ggtggaggcg cggcggeggt caggtgatgc cctggacatc cgtagatgta 5 10860 ggcacggtct gttcatggtg gcaggaagta ttgcgcagcg gttccagatg cgcggacgceg 10920 agcggtcagc caaaaacgaa tctatacggg tcgtggatgc gcgcgecgcag ggcccgtgag 10980 10 taccccggtt gctgcgegtg aacgggttgg aggctaagcg cgtggectgg ggctcgacte 11040 gtctcgaccc tggcactccc aacgtggtat agccgcagcet atcaggcetgg cgaatctcga 11100 tttttggagg ~~ ttgcaacttt gcgggtegtt ggatacggag caaccctcca aagcctgcac 15 11160 ccgtagtctg tggctcgcetg ccgaccgecga cggaaagegg ctagtaagcg ccggatgaga 11220 cggattccge cgaggecgge 0606609090 cgttgeggtg gccagggttg gagaagaatce 11280 20 cgacttctcc catagccagc tccaagaccc ccccgtegtt ggegtggetg ggctaacgag 11340
000130106 80810081 1011119 tittgtttty cgagcccctc agttacggag 11400 ccggcegcttc ccctccacag aacaacagcc 016080002 cccccaccac ggcagatgceg 11460 agcggggctg ggecgecgtg cgaccgecge cttccagecca ccagcagcaa tgccccegee 5 11520 cgcctggggg ggggcetggeg aagagggcga ctggecttgg tgatcaccag gacagagtta 11580 gaggcctacg ggacgctcgc agatgaaaag ccgcgcgtgc 09080600086 cgtcgtcgee 11640 10 atgcgcgegg gecccgaggag gcggcgagga agagacagga gaacctgtic tgcccaagca 11700 gtgctgaggg ccgaaagagg gcggcctgga gagctgcggce cgcggggegg cccggtteca 11760 cacgtggccg cgecgegegeg ggatcagccc gagctgacgg cgaggcggac acgaggattt 5 11820 ttccaaaaat ggagagcaac ccgtgaagga tacgagcaga ggtcacggcg cggccaacct 11880 ggcctgatgc ggtgaccctg cgcgcgagga accctgatcg ccacgtgcgc ccttcaacaa 11940 20 ctgacggcgc cagcaagccg agaaccccac (gccatcgtgc cctgctggag acctgtggga 12000 gcgctgctga gttcagggag acaacgaagc catagtcggg 991909100380 agctgttect 12060 cagagcatcg gaacattctg tggacctggt cgctggctcc gececcgaggge atatcaccga 12120 ttctcggtgc ggccatcaac agaagctggc ccgetgtccg gegegggetg tggtgcagga 5 12180 cccatagaca cccgtacgtg tctacaagac gctaggaaga caagtactac tgagtttggg 12240 accctgagcg gaaagtgctg gcatgaccct ttttacatgc gatcgacggg aggaggtgaa 12300 10 ggtgagcgcc tgcaccgtgc aacgacagga ggtgtaccgc acgatctggg 12360 6 ggccctgacc 91-1968900 ctgatgcata cgaccaggag gcgagctgag 12420 8 100039066 cggacctgca gacatgggcg gagctacttt ccgaggggga 5 12480 89 cgatgaggtg aagaggtgga ccctacgtag ggcggcagga ccttggaggce 12540 gacgaggagg tagatgcaac gtatttttgc tggcgcgacc ggaagactga gcgagtacct 12600 aacaacagcc 20 ttaactcctc ccgtccggeca gcagagccag gggeggcegcet cccgcgatge acctectgat 12660 acgacccgca 811909-19 tgcaacgcat acccaggcca ggacgattgg 12720 accccgaagc tggtgccectc ctggaggecg ctcggccatc ccaaccggcet cagccccagg ctttagacag 12780 aacgcgctgg ggccatcgtg agaaggtcct cccacgcacg gcgctccaac 5 12840 tggagaacaa gcgtggeccg ctgctggagc gtacaacgcg ccggcectggt ggcgacgagg ggccatcege 12900 tgcgcgaggc gtgaccgacg ggaccgcatg agaccaacct accaacgtgc ctacaacagc 12960 10 tggcgctgaa ggatccatgg gtccaacctg tccaccgcga cgcgagecggt cgtggcccag 13020 acaccaactt caggaggact gccccggggc ccgccaacgt agcacccagc — cgccttecte 13080 accagtccgg agcgaggtgt ggtgccccag tggtgaccga ctgcgectga catcagcgee 5 13140 tgagccaggc accgtgaacc gggcttgcag ccagtcgcca 1260308 gccggactac 13200 gcgcgacggt gtcggggacc gcaggccccg tgtggggegt ttgcagggec 6 13260 20 ccttcacgga ctggtggccc gctgetgetg actcgecgect ctgacgccga gtcgagcectg 13320 attaacctgt gggctacctg actcgtacct atcaaccgca 800000806 13380 accgcgaggce tgagccgecge atcacccacg ctaccaggag acgagcagac gcgcacgtgg catcggccag 13440 tgaccaaccg aactttttgc agccaccctg gcaacctgga gacgacccgg cctgggccag ‏م‎ ‎13500 ‎tcctgcgtta gaggagcgca cagcaccgag agtacgcget atcccgccce gtcgcagaag 13560 gcgecgegcet gccaccccca gcaggagggg tgttcctgat agegtgggec cgtgcagcag 13620 10 cgttcatcaa agcaaccgcc catgtacgcc tggagcccag gcgcgcaaca cgacatgacc 13680 tcaccaacgc tctgactatt cgccatgaac atcgggcggc gactacttgc taaactgatg 13740 acgacatgcc acgggcgagt ggggtictac tcccgecgec ccccactgge catcctgaat 15 13800 0006000366 agcegtgttet tgtggacage tgtgggacga gacgggttcc cgaccccaat 13860 cgtcctcgge gaccgacgcc ggaaggcagce tgtggaagaa gagcgcccct gggtgctaac 13920 20 ctttcccgag gccgccagtc ggtgcccgag ctgeccgegge cgcgagggtg gctgtcecgge 13980 ggcaggatca cagcgagctg gtatccgcag 10-1133068 cttgcccttc 14040 060600009 agacccgagc ctcgctgttg acttgaatga gaagaggagt cttgctggge 14100 gggagaagaa agacgtatgc agccgctgga ggacaagatg aaagcctggt aacgggatag cttccccaat 5 14160 acgagccggg gcagggggcc cccgggegtc agggacgatc gcaggagcac 14220 gcagcgccgce aggactccgc tgggacgatg gggacagatg acaggcagcg cggtggcacg ccgtaaacgc 14280 10 acctgcgccc ccgttcgetc gagtggtaac acttgggtgg 800901011090 cgacgacagce 14340 aaggccatgg gatactcacc gaaaataaat aagagaaacc cgcatgatgt ccgtatcggg 14400 gaggcgtgcg 1 gttgttgtat cttctetgtt ~~ gcgttegttt cgaccagegt 15 14460 agcaggcgat agcgtgatgc ctcgtacgag 00160166 tacccggagg 14520 ggcggeggceg gcctacggag ggtacctggec gtgcccccge ggcetecttac cccecgetgga gcgatgcage 14580 20 ccggttgtac acgataccac gcacccttgt ctcggagcetg gcattcgtta gggcggaaca 14640 accagaacga tcgctgaact ggacatcgcc acaagtcggc ctggtggaca 14700 ccacagcaac cggaggccag ttcaccccca gaacaatgac ccgtggtgca ‏8ه‎ ‎14760 cacccagacc aaaccatcat ggccagctga gcggtggggc acgagcgctc atcaactttg 5 14820 gcacaccaac gatggtctcc aggcgcgggt aacaagttca catgtacagc tgaacgagtt atgcccaacg 14880 ggatgagctg atggtagtca gaggattatg gacagtgaca ccaatggggt cgcaagaccc 14940 10 catgaccatc tctcggtgac gaaggcaact tgagctgccc gggtggaatt aagtatgaat 15000 tggggcggca tacttggcgg catcgacaat acaacgccat gacctgatga 15060 gaacggggtg ctgggacccec tcaggctggg actaggaact gaagttcgac acatcggegt ctggagageg 5 15120 cgatattgtc ~~ ctttccatcc accaacgagg cggggtgtac tggtcatgcc gtgaccgagc 15180 gctgggcatt tcagcaacct gagagccgecc ggacttcacc getgeggggt ttgetgececg 15240 20 acgaggatct cagatcatgt ggaaggcttc agcccttcca cgcaagaggce 15300 6 tgcagcagct gcaaggagga tatgagaaaa tgtcgacgcc cgctcctgga aacatccecg 15360 ttttgcaagc ggggcgataa accgaggtca taccgcctct cagccgtagc gaagcaactg 15420 cattcagccg gtaagatagt gaaaccgaaa cgaggcggct tggcagcggce geccgcagcag ‏م‎ ‎15480 ‎cggacaagat aacgtactac caggagctac atagcaagaa gtggagaagg 15540 aaacaccgcc gcgctectgg agaagggegt ggcgaccccg ctacaactat ggtacctagc taccgcagcet 15600 10 gtcgctgccec aagtctactg ggcgtggage cgtcacctge ccacctcgga acgcetgctca 15660 ctacccggtg aagttagcaa tccacgcgtc 86016002 aagacccggt gacatgatge 15720 ggccgtctac tcaacgagca aagagcttct cgtctactcc agctcctgee gtgggegeeg 15 15780 tcaaccgctt acgcacgtct cacctcgcett tgcgegcectt tcgcagcagce 15840 ccccgagaac cgttcctgct tcagtgaaaa attaccaccg cgcgcccacc tccgecccgec cagatecteg 15900 20 gcgcgtgacc ggggagtcca agcagtatcc gecgetgecge acgggaccct ctcacagatc 15960 catagtcgcg aggccctggg tacgtctaca 800100606 6803820060 gttactgacg 16020 cagtaataac tcatctcgcc atgtccattc cacctictaa tctcgagccg ccgegegtee 16080 acgctccacg gcgctcgcca atgtacggag gcccagcaag gcectgcgege accggttggg 5 16140 ggggcgcecct 0000166-61 cgggceacttc tgecgegtgeg caacacccceg 16200 88000006 tggtggccga atcgaccagg cgacgacgtg gcaccaccgt gtgcggtcge 16260 cgcgcgcaac 10 cgtggtggcc tcatcgacag gtggacgccg cgtctccacc 006000066 tacacccccg 16320 gcatcgcccg cggeggegge cgeccaagage ggtacgcccg gacgecgcegece 16380 gcggcaccgg gggccaggcg ttgctgcgca ggcgecgagec ccatgcgege agcaccceeg 5 16440 cacgggacgc ccagcgecgg gcttcaggeg cagacgegeg tcagggcggce 8000608106 16500 caggacccgg tgtcccgeee atcgccagca ggcageggec ccacggegge agacgcgegg 16560 9 20 860000066 09606091900 9910100000 066060866 99910000208 aacgtgtact 16620 aggaggatgt 0039090900 gttgatgtgt acttcgcgat gaagatgttc cctcgcactt 16680 tacggccctg gcectgagatc aggtcatcgc gagatgctcc attcaaggaa ccaagcgcaa 16740 ggtcaaaaag aaatcaagcg aagccccgcaggaggaaaga cggtggtgaa 5 16800 gacaaaaagg cgagttcgcc agtttgtgcg ggattggtgg tgatgtggac aagaagaaag 16860 6000696 accgtggtct acccggcacc cggtgctgag aaggtgcaac gcgcgggegg gcgtgcagtg 16920 10 gtgtacgggg ctacgacgag ccaagcgctc ggcaccgcett 080000166 tcacgceccgg 16980 gittgcttac gcctgggcga gcggecgage tctggagcag 1 17040 ggcaagcgca ggaccacggc ccatccecget gaggeggtgt accgaaggaa gecgttcege 15 17100 aaccccacgce cgccgggggt cgeggegecg tgetgecgac ttgcagcagg 066010366 cgagcctcaa 17160 gatggtgccc ccatgcagct ctgtacccca gggcgaggat tcaagcgcga 17220 aagcgccaga 20 cgtgcagccc tggacccgga accatgaagg cgtgctggag agctggaaga 17280 gaggtcaagg atcaagattc gaccgtggac tgggcgtgca 0606090909266 caagcaggtg tgcggceccat 17340 agcaccatgg gcccagcacc ccatgatcaa cagaccgagc catggaaacg ccacggagcc 17400 cgcaagtacg aagaccccgg ctcctagtcg atgccatcgg ggatccctgg aggtgcagac 5S 17460 ttccatcatc cgctgcatcc cccaactacg cctgctgatg gecgeggecag 17520 cccacgeegg ccgccgecge ataccagcag taccgcggtc cacgcgcettc gctaccgegg 17580 aagaccacca 10 tgccgceectg 3800300606 accgecgetg ccgtcgecge ctcgecgecg 17640 gtgcggagag ccgagcatcg gcgctaccac tgccgecgege cctctgacce cggecgegeca tgtaccgecg 17700 ttcgcgttcc acatgccgcc aatggccctc tttgcagatc tttcgectge ccatttaaac 15 17760 acgggatgcg ctggcgggga ccgtagaagg gaaaaccgcg taccgaggaa cattacgggce 17820 gcttcctgee ttggggggag cagcaagegg ggcgcgcecat caccggeggce tcgccaccac 17880 20 cttccgtggc cccggceattg cggggcgatc ccgcggcgat cccatcatcg cgcegctgate 17940 aaaccaatgg atcttgtaat acttggaaac actgagacac tctcagcgcc 99106890026 18000 atcaattttt gatggaagac ttcgtagaca gtgatgtgtt tcctggtcct actctgacge 18060 gacatcggca cacctggagc cgttcatggg ggcacgcgge tccgcgacac cgtcectgge 5S 18120 cttaagaatt ctggagcggg ggagcagtct gccttcaatt gaacggggge ccagccaact 18180 cagcaccaca aggcgtggaa tatggcagca gcttaaaacc tcgggtccac 18240 gggcaggcgc 10 ctcgectcgg ggtcgatggg agcagaaggt cagaacttcc gctgaaagag tgagggataa 18300 gcggcagatc aggccgtgca ctggccaacc ggtggtggac gcatcaacgg 18360 aacagccgcc gagctgcctc ggtggaggag agatgccgca ggctcegtgg gecgeccgec tggacceggt 15 18420 ctgctgacgc ggaggagacg gccccgatge aagcgacccc gecggggcgag ccctggacaa 18480 gggtctgccc cggtgaaact tacgaggagg gccgccceccg acacggacga 18540 accacgcggc 20 ctggacttgc gcccgcgacc aacccgaaaa ggggtgctga cctggccacc ccatcgegcec 18600 gtggccgtgg cctgeccgeecg 1090138006 ccctctacag 00166006 01268 18660 actctgaaca ctggcagagc ctcatgcgaa accgcccgcec acccgggggce cccgegegceg 18720 acctaccgta ctgctattaa agcgccgeccg cagagtgtga tctgggagtg gcatcgtggg 5 18780 tgtccaccag ccgccgccge tattatgtcg tgtgtgtatg — tgcttgtctg gcegcttaact 18840 gatgctgccc ccaccccatc tgcaagatgg gtcgccgagt gaagaggcgc aaggaggagt 18900 10 tccgggtctg agtacctgag gacgcttcgg cgccggacag acatgcacat cagtgggegt 18960 taggaacccc ggaacaagtt ttcagtctgg agacacctac cccgcgccac gtgcagtttg 19020 gctgegettc agecggcetgac gaccgecagec tgtgaccacc ccacgcacga acggtggege 15 19080 gctggccgtg tgcgctacac tcgtacaaag caacacctac accgcgagga gtgcccgtgg 19140 cgtgctggat acatccgcgg acctactttg catggccagc gcgtgctgga ggcgacaacc 19200 20 acagtctggc accgcctaca ctactccgge gcttcaaacc cggggcccta 19260 ccccaaggga aaactgccac gccgatggtg gacatataaa cttgtcagtg gcacccaaca 19320 agaaaaaacc tattcaactt caaaagatgg attaacatca cgtgcagggc gaaatgcacc tatacatatg 19380 tgaacctcaa cctatcagcc gcagataaaa gccaatctac ccgatgatca ggaactgaca 5 19440 aggcagagct aaaagtatgg ggtactgatg tgacatcact ctgaatggca gtgggtgatg 19500 tactaataaa ttgccaagcc tatggttctt gaagccttgt ataccaaaat cttaagcctg 19560 10 tgacatagac ctaaagaata acaggcacta gaaaacagga aggcaaatgt gaaggaggtc 19620 aattgttttg tagctccaga gctgctggcc aagtgcggct ttgacaacag — atggctttct 19680 ttgtatacaa gatacccata ggaaactcca atgtggatit tatactgaaa 15 19740 agcaggcaca acctaactac tgcccaacag cagcaagcca taatttgggt gctcttctat gatgacagca 19800 caatatgggg acagcactgg atgtactaca tatcgggctc gagacaactt attggtttca 19860 20 acttgcaaga gctgtggttg tcagctgaat gtcaggcttc gtgctggecg 19920 cagaaacacc tttcagtatg gaacccggta 199919308 gcttgactct accagcetctt gagctgtect 19980 tcatggtgtg ttattgaaaa gatgtgcgca ctatgatcct cggtggacag tggaatcagg 20040 agatacttat ttggcagaac ctggatgctg ttgtttccct ttcccaacta gaggatgaac 5 20100 cagtgtcaat ccaaagatga accacatgga aactgatcaa aggctaatgg cagggaatta 20160 aaatcaacat ttcgccatgg gggtaatcca agataggcaa gatgctaatg 20220 ccaagccaac 10 ttacaagtac tgcccgactc gccctgtacc cgccaacgtg acttcctcta ctgtggagga 20280 acgattacat accaacacct gcccaccaac atgttaccct acgccggceca 20340 9 gtcgctggat gggcgcegetg atcaacatcg ggactcctac cctecgetggt gtggtggege 5 20400 ctaccgctcc cggggcetgcg caccgcaatg cttcaaccac acgtgaaccc cccatggaca 20460 gaaatttttc aggtgcccca ttccacatcc ctacgtgccc gcaacgggeg atgctcctgg 20520 20 cttccgcaag acgagtggaa tcctacacct cctgcccggg gcectectget gecatcaaga 20580
0999001-66 tgcgcacgga ggcaacgacc gagctccctc tgatcctgca gacgtcaaca 20640 ccatggcgca accttcttcc cctctacgcc ccagcatcaa — atctccttca 20700 caacacggcc cgactacctc agtccttcaa accaacgacc gcgcaacgac aggccatget tccacgctcg 5 20760 catctccatc ccaacgtgcc gccaacgcca ccccatcccg acatgctcta tcggcggeca 20820 cgcgtctcaa tggtccttca cttccgegge actgggccge ccctcgegea 20880 gaccaaggag 10 catcccctac actcgggetc tacttcgtct gttcgacccc tgggetccgg acgcecctcge 20940 cttcgactcc tctccatcac ttcaagaagg caaccacacc ccttctacct ctcgacggcea 21000 aatcaagcgc acgagttcga ctgacgccca cgaccggcetc ggccecggcaa tecgtcaget 15 21060 ctggttcctg tgaccaagga cagtgcaaca caacgtggcc gcgagggcta accgtcgacg 21120 cgagggctac tctacgtgcc taccagggct caacatcggc tggcccacta gtccagatge 21180 20 ggtggtggac tgagccgcca ttccagccca cttccgcaac — tgtactcctt aaggaccgcea 21240 caactcgggc accagcacaa 83000100061 ccaggccgtc acaaggacta gaggtcaact 21300 caactacccc 018060002 809000306 800810606 acctcgegec ttegtcggcet 21360 cctctgcgac agaaaaagtt agcgtcaccc cgccgtcacc tcggcaagag tacccgctca 5 21420 gctcaccgac ccatgggcgc aacttcatgt cttctccagc ggcgcatccc agggtcatgt 21480 tttcgaagtc tagacatgaa gcccacgcgc tgccaactcc acatgctcta ctcggccaga 21540 10 cgtcgtccga 389101008 001-129 ccttctctat atgagtccac gaccccatgg 21600 cttctcggeec tgcgcacccec gecgtctacc cgtcatcgag cccaccgegg gtgcaccagce 21660 tccggcgage ggecgeggge tgcaagccat tcttgcttct ccacctaagc ggtaacgcca 5 21720 ggcaccttcg ctacttcctg gectgcgggec cgcgacctgg ggccatcatc aggagctcag 21780 gtcaacacgg ctgcgccatc acaagctggc atggccccgc cccgggattc ataagcgctt 21840 20 cgctcgaaca ctggaacccg tggcecttcge gagcactggec gaccgggggc ccggccgcega 21900 atctaccagt cctcaagcag cggacgagcg 99962 cttcgacccc cctgctacct 21960 tgcgtcaccc cgaggaccgce ccctggccac 0600083000 gggcectgetg tcgagtacga 22020 ctettetget cgectgeggg cgegetcgge gtgcagggtc cacccagacc tggaaaagtc 5 22080 catggacaag ccgaccgccc gtgcactggc gcacgcecttc gcatgttect 22140 aaccccacca gccccaggtg tgctccagtc cccaacggca gacgggggtg tgaacttgcet 22200 gaacccaccc 10 tactttcgct ccactccgec tcctcaactc ctctaccgcet ccaggaggeg tgcgcecgcaa 22260 gacatgtaaa catgaatcaa ccttcgaccg aaggccaccg gcgcatcgag cccaccgcge 22320 atgcatctga catgttacac acagcacttt f{ctttaataa atgttaaatg ccgtgtgtgt 15 22380 ggcatggccc gccgggtctc aaagggttct ttagaaatcg — gatgatttat 22440 gcgggcaggg agtttgggca ggggatcagc acttgaactc ttggccagcc gaactggtac acacgttgcg 22500 20 cagttgcagg gcttccgegt tcggtccacaggggaaggag gcggggtgte 22560 020268 cgggagttgc 91-1192000 tgggacccgc aaatcgcagt ggagatcttg ggtcgggege 22620 ctcgccagca gtgcttcacg tcagggccgg tggaacacca gttgcagcac ggtacacggg 22680 gttggccatc ggtcctcgge tccacgtcga ggtgatgctc ccgtcgegtc 5 22140 09 ttgcaatcgc gggcttgtgg gcacgcaccc cccatggtgg 09-0061 tcatcttgca 22800 tacatggcct catccccggg ggtcggegtt atctgggect gatcagcatc agtgcagggg 22860 10 ggctccctcg gcetgggectt ctgaacgect ctccaattge tcatgaaagce 22920 8 0009109106 090003066 aactggttgg cttgctagag ccccgcagga 22980 acgcagcagc gtgatcttgg gcggttctgg tgcgccccca tgcaccacge gttggccage gegegtegtt 15 23040 tccatctcga gctcgccaca geccgttctc agcgegeget gttetecttc ccecggteggg 23100 ccctcggect ccgcagcettg cgtgcaggca atggtggtcc cttctggatc tcatgtgcete 23160 20 tgggcgatct ccagttcttg cggtgcactc agcgcgcacc gtgcagccac cggtgcaccce 23220 agggtcttgt catggtggtc agcggcccat ccctgcagga gtgcacgaag gggaatgcgce 23280 tggcagatgc gatgtacagg gctcctcgtt atgccgcggt ggtcagcgga tgctagtgaa 23340 tcggtctcca ggctttcagg gctggaagtt tcgggcatca ctcgecctge ggcggtacac 5 23400 cttctcccag tttccatacc atagtcatga gtccatcagc cgcggtagceg 23460 gccgagacga gccagggggt agcagccgeg tcttageget ttcaccatca catagggttc tgggcaggct 23520 10 ctcggtgatc tgccgtcctt aagctccget cagggtctca cgcetectegte 23580 cgcaccgggg tcgctgtcct tetttcgtcec cctecggectg gccagctect geccacggec ggtagcetgaa 23640 tttcttcttg tcttgcgggg acatgcettgg ctgcaggacc ggctgacgtc 15 23700 ggcggcageg actactatct ctcgctcacc agcgcgagttggcgaggggg tgttggagat gcggcggaga 23760 tctcttcggg ggtaggtatg gccacgcgge ttggtccgag 1101016 23820 ggcagaggcg 20 cttccgegtt 19039306066 gcggatgget 00003600 gctctcgecg gaggcgacgg 23880 attgtgttct gcggcecggec 0301:0166 0001-1082 ctcccggegg 00999020 23940 tctgccccca aacctcgcca agccatcgecc atggagactc aacaacaagc 09 24000 cccagccccg cgeccccgecg aaagcttaac cagcagaatg gaagcagcag ccgecgacga 5 24060 gagattgacc ggaatccatc aagagatgga ccagacatgc cgcggccgtc ccacctccga 24120 tcacaagaag agtgcgcttt aggagctggc gagcacgagg gacgcccgeg tgggctatgt 24180 10 gctgggctcg gcagagtcag cagagaatga gagcaggaag agaacagcca agatacacca 24240 aagcatctgg cgcgctcatc ggggggagga cacctgagcg cgactacctc agcatgacgg 24300 cccctcageg caccgaggtg tgctcgaccg aaggatgcge caccatcgtc cccggcagge 15 24360 006003896 gecgegegtg 30010112616 tacgagttga 806000966 tggaggagct 24420 gtcttcgcgg cttctacccg cgcgectcaa gagcccaacc tggcacctgc gccagcccaa 24480 20 cccgtctcct ccaaaagatc ttttcaagaa taccacatct cctggccacc tgcccgaggce 24540 gcccgectac gggtceccgge ttttcaacct geccgacgece ccgcacccge 00200638 24600 gggtctgggc agatcttcga gaggttccca ctecttggaa ctgatatcge 24660 agcgacgaga agcgccctgg tgagcaccac gaggagagca caaggagaag gaacgctctg ctcgggecge 5 24720 gagctgaccc acgcacggtc cggtgctcaa gcgcggcetgg aggcgacaac tcgagttgga 247780 atggaccagg gagcgcggtc ccaaagtcat aacctgcccc cccggcetctg — atttcgecta 24840 10 tccgaggagg catgcaagac aggacgaggg cccatctccg gcgcgegtcg tgctcatcaa 24900 gctagtcccc gggtcctaat cccggtgget gagcagetgg ggtcagcgac 0688006201 24960 gtggagctgg cctggtgacc tggccgtggt aaactcatga agagcggcgc agagtttgga 15 25020 gagaacctgc caaggtcgag agaccctgcg gccgacgegg ©0006 agtgcectgceg 25080 gtggagctga gatctccaac aggcctgcaa 10106006 caggcacggg — actacctctt 25140 20 aacgtgctgc cctggggcag acgagaaccg ggcatcttgc ctcctacatg ccaacctggt 25200 tacctctacc cgactgcgtc actacatccg 02060909029 02020090030 acaccaccct 25260 gtgtctggag tgtggcagca ggcatgggcg ctggcagacg tctgccacac 25320 gagcagaacc gggttcgacg tctgtggacc acctcaaggg ctgcagaaga ctgcaagctc tgaaagagct 5 25380 aggctgacgc cgagcgcctc tcattttccc ctggccgacc cgectcggac agcgcaccac 25440 cgctctttca gcaaaacttt aaagcatgtt tttatgagcc cctgcccgac tgcgcaacgg 25500 10 gacttcgtgc gctgccctcg cctgectcege ctgecccgecca ctccggaate tcctcgaacg 25560 ctgcgectgg ctgctacctg tgtggagcca 006000006 ccgecgagtge cgcetgacctt 25620 ggcctgctcg cagecggecgag tcgaggacgt tcggacgtga ggcctaccac ccaactacct 5 25680 cctggectge cgcaccgcetc ctctgcacge ccgcetgcaac agtgccactg 25740 8800000896 agggcccagc tcgagttgca atcggcacct gacccagatc tgctgagcga 25800 gaaggcgagg 20 gcctacttgc gtggacctcg ccccggggcet ctgaaactca caaggggggt gttcagecge 25860 gaccaatccc gtitctacgag tcgagatcag taccatccct gcccgaggac 06880101 25920 ctggcccaat gggggcgatc tcatcaccca tcggectgcg ggccgagcetg atccgceccaa 25980 ggggtctacc aaagggccgc tcttgctgaa cgccaagaat ccagaaatcc tgcaagccat 5S 26040 ccaggatgcc ccggcttccc gagctcaacc gaccggtgag tcgaccccca 26100 ccgaggaaac aggaagactg gaggatttgg gccgcccgtg aagtggagct aagaagctga 26160 ggagaacagc 10 gcactcaggc gactgggaca gatggaggaaaggaggagga agtcaggcag 26220 agaggaggac aggaggaggt gaggaggcag ggaagacgag acagtctgga agcctgcaag 26280 ggaagaagca taccatctcc gcagcacgga gagaaagcaa ctcggegggg gaccgtcgtc geccgecgeca 15 26340 acgattcccg acgagaccgg agtagatggg tcgaccacac ggggtcccgc gctcegggte 26400 acaagtcctg cggcagggat taagaaggag cccagaccgg aaccccacca 26460 gcgggggceac 20 acatctcctt tgcgggggca cttgcaggcc tcgtctcctg aaaaacgcca 26520 860009096 ctaccgtcac 10100318 ccccgcaaca ggtgaacttt tccaccgcgg tacctgctct 26580 cagaaaaaga gcagcagcag ccaagaagag cctactactt ctccacagcc 26640 ccagcagaaa ctgaggatcg agcaggtgga cagcggcggc agaaaatcca accagcagcet 5 26700 cggcgaacga ccatcttcca accctctatg gatctttccc tgaggaaccg acccgggagce geccggcegceaa 26760 gctcgctcac cgtictctge agtcaagaac aggaactgaa gggcaggagc gcagagtcgg 26820 10 cgcactctcg ccaacttcagagagcgaaga ctgtatcaca ccgcagtigt 26880 aggacgccga ccgcccagtc tagcccgcgec tcttaaagag gcgcgctcac aacaagtact — ggctctette 26940 ccacccatca ctagccgect gcccttcgee cgtcacctgt gcgggaatta gcagaaaaag 15 27000 atgggcctgg ccagccccag tgtggagcta acgcecttaca agagattccc tcatgagcaa 27060 gctcagcgcc gcatgaattg tactccaccc cgcccaggac ccgecggtge 27120 8 20 gaacagtcag gatactccta accgaaacca atccgcgccc ggtgaatgac tgatctcacg 27180 gccctggtgt 100006090066 8316000938 aatcacctca 800000006 cgcetcaccgce 27240 gccgaagtcc agacgcccag tacttccgcg acgaccgtac tccccagccc accaggaaat 27300 caccgccccg cctgtgtegt gecggegecac cagetggegg ctcaggtgtc agcetgactaa 5 27360 acagctcaac gcagaggcac gtgatccggg aaagcggctg ctcagggtat 27420 gacgaggtgg tcggggagat actcgccgga gagtcttcca cgacctgacg gctgggtctg tgagctcttc 27480 10 cagccccget ttegtectcg ctttggagag gcecgtcctga gectcgtcag 61086 27540 tacttcaacc tccctcggtc aggagttcac cagttcgtgg cggceactctc cgggtggceat 27600 gacgccatca cccgaacttc acgagttcat cactacccgg ctccceccgge ccttetcegg 15 27660 ctagctcggc cgcagctgac cccatggtgg gattgaatgt ggacggctac gcgagtcggt 27720 gccgagtttg tcgggatctc 0010011-06 000001166 ggaccactge ttcgacacct 27780 20 cggatcgtcg ccacggagtg agggcccggc gagcaccctc gctgcccgag — cctactttga 27840 atcctggtcg ccagcgtccg ggatcttcag cacctgcettc cctcgactce tcgaaggggg 27900 cccggectge ctgcaaccac tgtactgcat cttctgactc aggacagacc agcgcgagcea 27960 cagcgactac aagctgagat agtataataa ctgtgtactg ttgttgtctg atgaaagtct 5 28020 tgttcttcac aaccagtctt tgaatccatc cgtgtgttcc tccggacttc 28080 cgggaacgag gltccagggc tcacctggct aagaagtacc taagccccac agctccagtg accgagctcc 28140 10 cggccctgee tcctgectgag aacgacggag ccactgcgac ccgttgtcaa tcccecgatcg 28200 cctcceccggg tccaaccctt ctccagcetct cagaagcaag tttccacccg 38001821 28260 gaataccaca acctgatccc cacaccttcc accctgccat gcegtctcggg acctatcagt 15 28320 tcgctaggcc aacgccaccg aacctccacc caaccaaact ccgctactaa gcgtcgcetce 28380 tcccegcetat cgacccatgc cgagccacag actatgaggc cccatattag acaatacatg 28440 20 aacgtcaacg ggccaacaac ctgacccact gcggagatga aatctaaccg tagttacttc 28500 cttcgcattc actcgcccaa cggagcageg ggcecgcegcect ggacatggac 6010161 28560 caccagtgca ggtggccatc tgcaggatgc gtcaaggagc ggagagagcc gccagcagca 28620 actccaaacg ctacgaggtc ccaagatctc gtgaaacagg cttctgectg agagaggcat 5 28680 ctggtcggag gttcacctgc agcgccagaa ctecctgcage ctecctacgag accatcgect 28740 cactgctcct ggggtgcatc gcgataccaa cagcagtctg cgtcatcacc tcaaccccat 28800 10 cgcgacctcc ctgcggcectc tcaagaccct cacactctga cgactgegtc gcgactccce 28860 tgatgatttt atcatattga tgaaataaag ccttatccag ctaatcaccc tccccatgaa 28920 gatgatttga caatcatatt aataaagata tttgatttga aaaataatca acagaaataa 15 28980 ctgtccatgt taccaggtct tgaaatctga atcacttact aaaataaaga gtttaacaaa 29040 gtactgcagg cccagctctg ctccectett caccacttca tttctgecaa 29100 0٠09 20 tcaatcttca 010101666 0138816 ctgaagggga cctccacacg ctgcaaactt 29160 tcgaccccgt gatgatgact cgtccgggtg ccaaaaagcg tatcagatgt ttttatcttc 29220 ccttcgtctc atcaaccccc cgtgcccttc acgcaccgac gatgcagaca ctacccctac 29280 ccgacccegt ctgcgactgg ggtgttgtcc agcccctggg ttccaagaga ttcagatgga 5 29340 tcgattcctc ggggtggacc gectgggagag tcaccctcaa aacggggaaa caccaccaag 29400 tttccaacaa cctctcagtt ggccgecgec cggccaccaa atctccaaca gggaaaactc 29460 10 tatccttaca gatggaaaat ttacactaaa atcacccctt cttaacatgg caccatttcc 29520 ctttaggttt aacacactag aagcattcta tactgagaac ccattaaata agtttctcca 29580 ctccacttac cagttagtct cttggcagta gtggctctgc ttaggactcc tggatcaggt 15 29640 ttacaacagg ggtttgcatg cttagacaga taaagcttac gatggaaaca atttgatact 29700 atggagccat aaatttgaag taaaggttta taagctgggc gaaagcaaca agatgcaatt 29760 20 caggtgttga agtacagaaa tggaagcagt ggttagagtt attggaaatg agcaaccaac 29820 gtacaggagc agctttgaca atctggcctt ttaaacttgg ccaatccaag tgatgcttac 29880 ctgatccatc tggacaacac actcacttty aagacgataa ggtaacaaag cataatggct 29940 tgactaaatg acactttgct tgcaaaacta cagaaaatga caaatactcg accaaactgt 5 30000 acctaaaccc ggaagtggaa cttagttgta ctgtgtcagt atactggcca tggtagtcaa 30060 acggtgttct tttgatgcaa gtttctacgt gtgctcaggt accgtaagca cattactgge 30120 10 atagcataga aggcagggag ctgggggtat taaaaaaata cattctacac tttaacagaa 30180 atccaaagtc ttaaaagctt catgcccaat ctgtaggatt tataccaatg tggcactcca 30240 gagatgtttc tacatgaatg agggcaagta ataatatagt actactaaaa acaaagtict 15 30300 gtacatattc gacagcaaca tggtactgat taaccctcaa ctictcacta aaaacctatg 30360 ttggggctaa ggagcaacat aagctatgtt ggactaatgg tcatacacct aatgtcattt 30420 20 tgcatgccaa tatcccaccc atgaacactg tcgcccaaga ttctcataca ctcttatacc 30480 aagttcaagt 3381388818 ctgaaacaca ggaacaaact cccactctgt 0160086 30540 accctcccag ttittcctcc cgagcagtta ttacaggatt ttcaacagtt gttttattga 30600 gccattggtg acatctgaat acagccttga ctcccccecge acaccaccct gacatggaat 5 30660 tctcgggtcg agcgagccag acagtttcag cacgttccac ttttggtctc atggacatgc 30720 caacagctga cctcacagct cgcatctgca cgggcactcc tgaaaccctc gtcagggaga 30780 10 cggcggtggg agcagaagag atctggaaga gatcacggtt cggtggtcgg ggattgtect 30840 agcagtcgct caggccccge ggtgtcgcat atcggecggt cgcgaacggg 381886 30900 tccctcagca gtccagggac gggggtccgg ctgetgectca ctccgtcaag gecgecgeeg 15 30960 cgcatgcgga ggcgcagcag tggtgcggcg atcagtcgtc ggccctcage tgatgcccac 31020 aacagtccat caggtigttc acagaaccac tacgtgcaac gtcgctgcag tctcgctcag 31080 20 tggccgtcgt gctacccacg cgggaaggat aaactcatcg gctccagccg agttcaacac 31140 acgtacatga cacgctgccc ccctccagaa aagtggtgcc caggtaaatc accagatcct 31200 tggttgaaca catcaccctc cccggtacca ttcaccacct catgtggcgg tetecttggg 31260 gccatgcagce cgccccgece gggcecageac cggaaccaca gatgatcctg tgcagccceg 5 31320 ccgtggatca ccgctcgtac ggaggaccca caatggcaat cgggtcccgg gaagagaccce 31380 catctcttca tatgctcatg agcacaggca atgttggcac gaacaagtct tctgggagct 31440 10 tcttgcagga cacggggaac tatcccaggg gtcaaaacca ctcctcgggg gcactctcaa 31500 tacattgtgc gcacagaact ggcaatcctc cgcagaacag cagcgaaccc 31560 atggacaggg tcggtctcct 30209099916 ccaccagaga gggtgatect aggcagcace tatcgcaatc 15 31620 gatcgtgttc ggacgcggct ggtgatggcg ggccgatacg taagggggcc 8809 31680 gcagaacctg acttgctgta acattttcgt ttgctttcgg catgatgcag gcgaccgtgt 31740 20 ctcggtgttg gcttggaacg cggtctcgge tcgecggegg tgcacaccga gtccgggege 31800 aggagtgatg ctagggcctc tgcagcagat tctcagaccg acagccactc aaattgtaaa 31860 ccgtggaatg acatcgacca ggctctgatc catgcctgat aagatcccat 31920 ggccagaccce gggagggaag gtgacggcgg ttgggtttcg tgcaattttg agccagatga 5 31980 aacaggaaga atcgcggaga caaaatgaag cggagtactt caaacggtct acttttaatc accatgatta 32040 ggtgatacgg ccaggtcaaa aaaataacag gtgttggtgg cgcccccget tggcacctct 32100 10 cgcgcacatc aaagcctcca ggcttccage gttccacggt ttctcgagat 32160 cagaaacaag ctcctgcacc tcatgttaca tcctcaatca ~~ gttctctaat aagcgggagg acaatagcga 32220 ctgaggtaaa gaactagttc tgaatgattc tttccagcct aattttcatt atccccagat 15 32280 tcttaagcac ccaccggcat agagcgccct gagctcgcge ccatgataaa tccaagccag 32340 cagcagattg ggttcacctg ttctgctcct ttccaagata accctcataa 32400 acaagcggaa 20 aagtactctt caataactgt cctccctcag tccctgaget tctgeccgecga tatcaaaatc 32460 aataagatta gaccaccagg ttagccatag tccgaaattt tcatatcctc 32520 gggcaagcca ctgctataag aaatgcaaga gagcattgcc cctccccagt aaaccgaagt cagtacagat 32580 cccaggcaat cagaaaatcg gataactgga atatcttcca agacccggtg catgctgget 5 32640 tcgggaacaa gtttagagcc ccaggtggac gaaaaatcct atcaacaaaa ttttaagaaa 32700 tgtagaaaaa ttagctgatc gcatggttag gtgcgttcca aatgcaagcg cgatgaagta 32760 10 gltctctcca tgggtaaatc ggcgaacagg atgctagcct acattaaacc acaaaaatga 32820 ctatgattga aaaattgtcg gaccctcgta tctccggecge ggccacgggg gcaccaggcea 32880 gatgaataca gattcgacaa cggcgtgaat tcccggtggc agagagacgt aaaccatcac 15 32940 taaggcacta gaggaagcaa aaaagcgccc gcgagtgaaa attggcgtcc cccccggaac 33000 aaattctcag atgaagcaca tgccatgcgg agcaaagcga tctcaagtcc caatgctcag 33060 20 gatccctcca caaagccccc gcacaggcag ctccectcct aatgtaatta gtgcgtacaa 33120 agcagcacac cttaccgagc gcgtccatag caaagcctca ggtacacata 33180 aacaggcgca tatatagccc ctctgctcaa tccacccget ctctaacctg aaaggctgag agagtcagag 33240 gccaaataat aaaaataccc gccaaagtct tgacgtaaag agatctacac 5 33300 cacacacgcc ctcaaacgcc cgcgcacttc caaaaaaata gtgacacact ccagaaaccg cagcacacgc 33360 tttcaaattc aaaacacgac ctacgtcatc ggttcccacg gtcatttccg caaaactgcc 33420 10 ctcagccaat tcgcccgtct cccctaacgg acccgccccg taaaaacgtc cgtcgaccgt 33480 acaaaaagftt attaacgcgc tcatttgcat ttcaaacacc catccccaaa 80000609 33540 33562 gg tattgatgat tgaggtatat 15 45 <210> 34803 <211>
DNA <212> ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> 20
<220> ‏بنية تخليقية‎ <223> >400< gaggcgtttg atatgcaaat gtgcgcgtta caaacttttt taatatacct ccatcttcaa 5 60 gaccgttagg agggatgagc tgattggtcg ggaagggcgg aatttgggga 120 8 gcaagttctc gagccagttt ttgcgaggag 91319309100 gtgacgtttt 180 gtgggaaaag 10 gctctctgac attttcccge gaaatactca tttgaacacg cgaggtgtgg tgacgtcaaa 240 cgcgaaaact gccattittcg gtgaaaacgg gcggatgcaa gtgtttctgg aggaaatgag 300 tatttgccga cagggaggag gcgtttatgg gagtaatttc gtgaaaatct gaatgaggaa 15 360 ttcacctaaa taccgtgttt gggtttcgat gattacgtgg gactttgacc gggccgagta 420 caattacggg taatagtaat tttactactg gtccggtgtt cggtgtcaaa 048 480 20 taaatggccc taacttacgg ccgcgttaca atatggagtt catagcccat 1 540 atgttcccat ataatgacgt attgacgtca 3060000606 ccgecccaacg gcectggetga 600 ggtaaactgc gagtatttac tcaatgggtg tccattgacg atagggactt agtaacgcca 5 660 acgtcaatga ccccctattg gccaagtacg tgtatcatat gtacatcaag ccacttggca 720 ttcctacttg ttatgggact gtacatgacc attatgccca cccgectgge cggtaaatgg 780 10 ggcagtacat atgcggtttt taccatggtg tcatcgctat tacgtattag gcagtacatc 840 ccattgacgt agtctccacc gggatttcca ttgactcacg ggatagcggt caatgggegt 900 gtaacaactc ccaaaatgtc acgggacttt accaaaatca ttgttttggc caatgggagt 5 960 taagcagagc gaggtctata tgtacggtgg gcggtaggcg acgcaaatgg cgccccattg 1020 aaccgtcaga gagtttagtg cagtgataga atctccctat agtgatagag tgtccctatc 1080 20 aagcactcac ggagtgcgaa tcggagggtg gctagcatcg taccaacatg tccgctaggg 1140 gtgctggtcc 09191909390 03800090090 gectcgegeg 099661909016 08 1200 atcctcttgg taagtccgtg gcatcagaaa 0900900006030 ggtgttgact acccgcagtg 1260 agccactcct gttccaagtg ctggacaggt cccgaagata ccigtttcac ggagacattc 5 1320 ctttctgcgg tgaagaaccg atgagcctgc actgtacgac tcccgceatec 1380 ccaggggacg ggccgagcetc tctcggaacc ctgcttcgge cgatttgatg actcatcaca 1440 accgacgcag 10 tacgcatcgg taccacttgt ctgctctcgg acgcaagagc ggacctccet tgaaggtcat 1500 tgcgtggatc aaagctgcag tgaccccgaa gaagaattcc catcgagccg gatggggctc 1560 actaagttca acaaaaggtc aagtgcatcc gtgtgcgcgc ttcgaatgac tgcacgtgat 15 1620 ttccggcgac aatcgacctg accggcggaa cggaaggtgg tgctgtgcge 1680 06 ccgtgcgege gggatcagaa tcactagctg ctgcagggca caacggtgtg cactcgtgtg 1740 20 attaaagata ccgcaaatgg tggtgcacta tacacgaagg gccctcgctc ttccggageg 1800 ggagatgtcg attgacctgt ggggttcatt tccgaaggta aaaccctgga ccatcgtcge 1860 gctggactcg gctcctgatg tgctgctgge agcaaagcag aggacccgct aagaaaaccce 1920 tcgaatgagg ggcccaagtc actcgtgcaa ctgctctgtt tggaaccgcc cgcetgcagee 5 1980 gcacggatcc atgctggact tcggagaaca tgcacccagc agtggaaaac actgtttgca 2040 gtggacgata attgaactgc aagggtgctc gtgatctcca cctgctgacc gcgcetgtcgg 2100 10 ctttgcaacg cgacacggat tcacttgttg aagaagaata ctacgtggga gccaggacta 2160 ccggecctgg ggccctgett ccgcecattet cagccagcag gcacgcecctg cgtccggagce 2220 gatctgctga cctgaacttt gatcccagac ggccagctcg ctggggtccg ggttgetget 15 2280 agaccgcggt tagcgctcgc gcccaatggc agcaacccag cgatgtggaa aactggcagg 2340 tttcttttcg ~~ tttgctcgge gtggcttett gtcctggegg aggggegetc ggcetgtgtge 2400 20 cccgaagcac ccaatatcac aacgaagcta caaatcgtca gatggttcat 2460 09 ttcacccaga cctctacaac ttaagaagtt gctgagaaca 10138909019380 138 2520 cagagccagt taagcagatc ttcagttggc gagcagaact ggcgggcact tcccacattt 2580 ctgagctacc cgatgtgctg tggcgcatta tccgtcgagc cggcectggac ggaaggaatt 5 2640 gaaatcttta ggacggaaac ttatcaatga tatatctcga tcatccgaac ctaataagac 2700 atcgtgcctc cgtgtcagat gatacgagaa ccaccgcctg cttcgagccg 830800160 2760 10 gtgaactacg cctggtgtac ccgaagggga cagggaatgc cttctcgcecec cgttectcgge 2820 gatcaattgc gggatatgaa aagttggagc ggacttictic caaggaccga 2880 agcggaaaga gcacagttgg ggtgaagaat gcggcaacaa aaagtgttcc ccgctacgge tcgtcatcge 5 2940 cctggcgtga ctacttcgct atcctgccga ctctactcgg gggcgtcatc caggcgcecaa 3000 aatatcctga gcagagggga gaggaggggt aatctgccag tgatggttgg aatcctacce 3060 20 tacgcgtaca ggccaacgaa cgggttaccc ccacttactc tgccggtgac acctgaacgg 3120 attggttact ggtccatccg cgtccatccec gtcggactge 000038066 99600001 3180 tcgtcatgga ccctccggac gaggcagecge gaaaagatgg gaagctcctc acgacgccca 3240 ttcagcactc cactggaaat gacccggatt tacaacgtgg gaaggtgcca gaggctcget 5 3300 aacgtcatcg caggatctac acgaagtcac cactccacta gatgcacatt aaaaagtgaa 3360 caccgggata cctcggtgga gctacgtgat gaaccggacc gggagcggtg gaaccctccg 3420 10 gaaatcgtca cgtcgtccat cgggcgcagec gatcctcaat cggaggaatc 1 3480 ctgttcgcct acgcactatt ggcgccctag aaggaggget tactcttaag ggtcctttgg 3540 gaaaactccc atgggctgag gcagcaccga ggtctgctcg cgaagaattt cgtgggatge 5 3600 ctcatccatc tcaatgccga gtggcgtaca agaacgcgga gcctgctcca 3660 gaaggaaact ctgaccaaag cgtgcacaac tgtactcgct actccactga ggtggactgc acacgctgcg 3720 20 tggaccaaga gtacgagtcg gaaaatcgct ggattcgagg cccagacgaa aactcaaatc 3780 tcaggaaatg aaagctcgga cgcggatctc agcgggatgc cccggagttc agagcccatc 3840 tacacgaaaa aagggctcgg ttgcgtcggg aggctgggaa gttctttcag atttcgaagt 3900 gaaacttacg ctcggtgtat cgctgtacca tcgggatacc taacaagtic actgggaaac 5 3960 gcccaagtga cctgactgtg ttaagtacca gatcctatgt gaaattctac aactggtgga 4020 tgccgcgact gccattcgat caattgtgct ttggccaatt ggtgttcgag gaggcggaat 4080 10 aatcagcatg aaatctactc tacgcagaca gctgagaaag acgccgtggt 4140 aagcacccac aagaacttca ctccgcggtg actccctctt gtctccttcg aacctactca aagagatgaa 4200 aatccgatcg tgacaaatcc ttcaagattt tcggagcgcc gagcaaattc ccgagatcge 5 4260 gatccactgg ggccttcatc ttctcgaacg cagctcatgt gatgaatgac tcctccgceat 4320 cataacaagt gccctcgtcg tgatctacgc taccgccacg ccggecgttt gacttccgga 4380 20 tccaaggtgg cgacattgag acgcattgtt ggtatctacg gagcttcccg atgctggaga 4440 tttaccgtcc cgtggcggcc gccaaatcta 0380103806 agcectggggt atccgtccaa 4500 ctagataaga gcctaagctt cttgactcga agcgaggtgg agaaaccttg aggcggcage 4560 ttgtagaggt cataccacat cataatcagc gataactgat accggatcta tatccgatcc 5 4620 aaatgaatgc ctgaaacata ccccctgaac tcccacacct ttaaaaaacc tttacttgct 4680 gcaatagcat tacaaataaa ttataatggt ttattgcagc gttaacttgt aattgttgtt 4740 10 tgtccaaact agttgtggtt actgcattct catttttttc acaaataaag cacaaatttc 4800 gcaagccctg tcccatgctc acatgtggct tggccaccgt tcttatatgc catcaatgta 4860 catctggggt gtgcaatatg tcatgaccag gagcacaatg gcccgagttc 15 4920 cccgecgagg agcccgatgc gtgctgctgg ttatgtgaag gcaacctgaa ccctaccagt 19 4980 ggaagattct gtggaggtgt tgacatgaat cgggggtgtt gtgagcctga catgtccaga 5040 20 agcatgccag tgcggaggga agcctgcgag ccaggtgccg gaatccaaga gagatatgat 5100 tggtgttgcc cccgatcatt ggacctgcga 810901032690908 090010101900 gttccagece 5160 agtagtgttc gactagagtg ggaagaatct gttccagcgg acggagttcg ctgcaccggg 5220 tttctgtgtg aatctgtgct gaataactga atgagggcca gaggacctge tggggegggg 5S 5280 cttatctgac gtattcagcc tgagggaggg gcggctectt atgagcggaa ttgcagcagc 5340 cggtggacgg atgggatcca tcagaatgtg cgggagtgcg ccctectggg ggggcegtete 5400 10 gctcttcgtc gcaaccctga cctgacctat actcttcaac 802000008 ccggcececgtg 5460 gcggaatggc agcgccgtgc atctgccgec cagcetgetge getgecgecg 900868 5520 ataatcccgc agttccacca ggccaactcg gcactctggt ggctactacg catgggegee 15 5580 tgacccagcg ctcgaggcct gatggcccag — tgttgctgct gaggagaagce cagcctgaac 5640 ccgeggttge cagacgcggg gctgcaggag aggtggctca ctgacccage cctgggcegag 5700 20 gttgatttta ggagacggtt ataaataaac aaatgaatca tccaaataaa cacggtgaaa 5760 ccaccggtct aggccctgga 000606001 titgattttt tgaatcttta acacagagtc 5820 ttggatgttg agaggtgggc aggacccggt gaftcttttcc gcacccggtg cgatcattga 5880 ggcctcgtge tccattgcag tggaggtage gtcccggggg gcatgagecce aggtacatgg 5 5940 gtgttgcaca gcagggcatg tagcaggggc cacccagtca tgttgtaaat tcgggggtgg 6000 gtttacaaat tggtgtaggt ggcagccctt gatggccacg ggaggagact — atatctttga 6060 10 ctggatcttg gcatcttggc gagatgaggt catgcggggg gggagggatg ctgttgagcet 6120 tgttgtgcag ctggggttca cagatcccgc tgttaccgcc agattggcga 6180 gaccaccagc tggaagggaa tcatgcaact ggggaattta cggtgcactt acggtgtatc 15 6240 ggcgtgaaag gatgatggcg actcatccat ttttccatgc cccgcccagg cgcctitgtg 8 6300 atcatagttg ggtcggacac acgtttcggg ctgggcaaag gggcggcggce atgggcccgt 6360 20 ggtgccggac tggggcggag ttaatgaatt ataggccatt tgaggtcatc tggtcctggg 6420 ctgcatctcc cctcacagat gcgtagttcc gatcccgggg aggtaccctc tgggggacaa 6480 gaacacggtt gggcgataaa tccacctgcg ggggatcatg gctcggaggg caggctttga 6540 ggacttgccg ggagcagctg agcaagtticc ctgggccgaa gggagatgag tccggggegg 5S 6600 ggtggtagtt accggctgca gaccccgatg ggccgtagat cagccggtgg 6660 gagggagaga cacgtgcatg tcatctcgcg acctcgttca gaggggggcec cctcccggag cagcetgecgt 6720 10 ctcctggagce gggataggag tctccceccca caggaggege ccagttccge ttetcgegcea 6780 gagggtttgt gcattttgga tcggccatgg cttgagtccg ttttcagcgg gaggcgaagt 6840 tcgatccagc ctacggcatc gtgatgtgct ccagagctcg ccaggcggtc tgcaagagtt 5 6900 cgatgggcgt gggcaccaga tgcgggagta ttgggacggc gtttcgcggg agacctecte 6960 gtggtctccg ccgcegtcagg gtcgcagegt tecttccagg cagggtccgg ccagcgcagce 7020 20 aggctcatcc ggtgcgcettc cgcttgcgag ccgggetggg 09900026000 tcacggtgaa 7080 caattgacca ggccaggtag 0109000016 081200006 aaaccgctcc 8 7140 011093830 gcggagctta ggcectttgge tcggecgegt 0908000-66 80148 7200 gagcttgggg tgagggcgta aggagggact ggcgggacag tctgccecgca 5S 7260 gcgaggaaga cactccacga gacggtctcg agtgggcgca tccgcgeccge 9000080000 cggactcggg 7320 tttttgatgc 090090162 aaaccagttt tcggggtcaa gtcgggetgg gccaggtgag 7380 10 aggctgtccg ggtgacaaag gtccccgetg atgagcetcgt tttggtctcc 011826 7440 tcctectegt tgtgecgegg cctcgagegg atgggecggt gaccgacttt tgtcecccgta 7500 ggccagcacg cccgggtcca gagacgaaag cgcccactcc agaggaaccc 5 7560 aaggaggcca gtatgcaaac ctittccagg gcgggtccac ttgtccacca gtagcggtcg cgtgggacgg 7620 gccacgtgac gtaagtgtag tgattggctt tccaggaagg ctcgtccaca acatgtccce 7680 20 tcactgtctt ctgctcgtcc gtgcgggtcc gtataaaagg ggccgggggg cgggggtecce 7740 ttccctctcg ggggtaggta gecagcetgtt gtccaggage ccggatcgcet 7800 aaggcgggca ttgacggtgc ggatttgata gaaacgagga tcagtttcta actcaggttg tgacctcggce 7860 atctttttgt agaaaagacg ccatctggtc agcccctegt gectttcaag cggcggagat 5 7920 gcgatggagc gaggagcttg gggcgttgga gagccgtaga ggtggcgaag tgtcgagcett 7980 agctgcacgt ggcgatgttg gcetecttgge ttgtcggege gtttttttcc gcatggtctg 8040 10 ggcacgattc cagctcgtcg agacggtggt cattcgggga cacgcacttc actcgcgegce 8100 acctcgccge actggtggcc tgaggtccac tgcagggtga gccccgatta tgacctgcca 8160 cgagcagaag cgcccttgcg cagaggcegtc attagtccag gcaggggetc ‏5ط‎ ‎8220 gggggcaggg gaagatgccg catcgatggt ggggggtcgg gacctcgtcg ggtccagcat 8280 ggcaggaggt cattcgcgca ggcagcttgc gatcgtccag gaagtggcca gtagctgatg cggggtcaaa 8340 20 tgggtaagcg gggcatggga gcgtgcccca ggactgaggg gcgctcgtag cggccagcege 8400 atgccgatgt ctcctcgagg cgtagagggg atgtcgtaga catgccgcag cggaggcegta 8460 agctcgtgcg gtagtcatac tggcgcgcac ccgcggatgc gcagcgcccc aggtggggta 8520 cggtagacga cttttcggcg tgcgactggg cccaggttgg gagcceccggg agggggcgag 5S 8580 atgttgaagt cctttggaag agatggtggg gagttggagg aatggcatgc tctggcggaa 8640 tgcagcttgg gtaggagtct tgaagtgggc gagtcgcgga cagtccgacc gggegtgggag 8700 10 tcctggatga gtcgagggtc gagcgcagta aggacgtcca ggcggtgact cgacgagctc 8760 aactcttcgc gttgagaagg acagctcgcg tittgtttcc 0800191666 tgtcatactt 8820 gagcctagca tgcacggtaa cgtcctgatc agggggaacc gtactcttcg ggtccttcca 5 8880 ctccacgggg agcagccctt ttgtaggcgc gttgacggcc tgtagaactg 8940 agggcgtagg accatgacct agtgtccctg tgagggcgaa gaggtgtgcg cttgcgcagg cctgggegge 9000 20 agctggaagt ctgctcccag cgcagccccc tcgatatcgt gtgcttgaag tgaggaactg 9060 aagaggatct 3808100110 aagcgaaagt gggttgggca cttgtaggcg ccgtgegett 9120 tcggcceggt ttggggcacc tgcggaaagg ttgcgagtga gggcataaag tgcccgegeg 9180 tggcccacga gttgatgttg cgtcgaagcc agcacgatct ctgggcggeg tgttgatgac 5 9240 agctcctcgt ~~ cagtttcttg tgacgtgggg ggacggccct cacgaatcgc tgtagagttc 9300 cgcccagtcg gctgctcgag ctgageccgt gtcggggtcg aggtgagcte 9360 9 10 agacggtccc 09909091106 ccacggccag gtccagagatgaggaaggaa ggttggcgceg 9420 tagaaggtgc ggtgacgcag ttttttcggg ccgacggcca gaactgctge ggtactgacg 9480 gcgagctcga gagatcgagg gctggagggc tcccatttga gtgccagcga gggggtcecee 15 9540 tgcttgccga ggggacgagce ccagcatgaa agtttcatga gtccccggag cgagccggte 9600 tcggtgcgag gaagagcctt cgtaggtgag gtttccacat ccaggtgtag aggaccccat 9660 20 tggctgttga attggaggaa cctgccacca aactggatct gatggggaag gatgcgagcec 9720 ttatacaagc gtgcttgtgt ccgaacactc cgacggcgcg gtagaaatgc tgtgatggaa 9780 acctgagttc cacgagctgt gcacgtgctg tgcacgggat ctcgcaacgc ggccacagtg 9840 tgctgtacta ctgcatctcg gtcgtggcge gggaagtgga gaatttcagt ctttgacgag 5 9900 ggtcatgctg cctcgatggt ccctcettctg gtcggectgg ‏هه‎ ‎9960 8608000096 agcgaggacg cgggtcggag tcggcgcgag ggtccagacc gcgggaggcea 10020 48 10 gtcagtgggc gcggagtcag ctgagacgct gtccagggtc ggccggagcet 100580 9 tacttgatct gtccagatgg cgcgcgggag ttttccaggg ttgcaggagt 06091036 10140 tggggtgtga 009106066 cttgcagggt acgtcgatgg attggtggeg ccaccgegee 5 10200 tcttccatgg gggcggtgec ggggcgacgg ttgggeggcet ccgtttcttc 080090166 10260 ggctcgggge cggcagggge gegegecggg cggcgaggac ttagaagegg 10320 ccggaggcag 20 tggtactgcg gggtaggttc cgccgegege ggcacgtcgg gggcggcagg 10380 cccggagaag tgacgcctct gtcctggatc gacggttgac gcgacgacgc actggcgtga 10440 gggtgaaggc cggtatcgtt gaatcaatct gagttcgaca acctgaaaga gtgagtttga cacgggaccc 10500 aggcgatctc ttgtcctggt gtcgcccgag tetcttgcac tgccgcagga gacggeggee 5S 10560 gctccacggt cggccggege aaggtctccg cctectettg tgctcgatct ggtcatgaac 10620 tgcccgectc aaggcgttca gagctgcgag tgcggceccat tcgttggaga ggccgcgagg 10680 10 tgaccacctg cgggcgcgca ctcgggatcg ccacgacgcc cggctgtaga gttccagacg 10740 gctggtagag ttgcagaggc gaccgcgtag ggcgcgtgaa agctccacgt 9 10800 tacatgatcc gacgaagaaa tgtgctcggt gtggtggcga gtagttgage 15 10860 49 aaaagtccac atggcctcgt caaacgttcc ccagcgcectc ctgacgtcgc cggcatctcg 10920 aactcctcct cgagacggtc agttgcgcgc aaaaactggg ggcgaagttg 10980 ccagaagacg 20 gttcctccac gecccecggga gcgcetcgaag cgcgcacctc gcgatggtgg gatgagcetceg 11040 gcagtggtgg tcctcaggceg ttctacttcc ctaacatctc tcctcctcca ttcctettct 11100 agcgctcgat cggtcgatga cacgggcaga 90090609020 ggcctgegtc cgggggaggg 11160 cgcccgtect ggtgacggeg gceatggtctc cgecggegtc ggtctcgeeg 5 11220 9 gggtccecegt 919-0909990 gcatctccag acgccgecge 80-9 11280 tgggcaggga aggacctgag actccgcgca ccccgtaggg 1181688110 acgatgcatc gagggcgcetg 11340 10 agtcgcagtc gcttcgagcc ctgaacgaag ctgaaaaccg tccacgggat cgtctcgaga 11400 tggttgggag cgggtcatgt tttcttctgg ctgagcacgg gcaaggtagg 11460 cggggcgggce cggcggatgg ggtictgaga tgaaataggc gtgatgaagt gatgctgetg 15 11520 tggcgaggag cccaggegtg tcggccatgc gcgcagacgg cttgctggat ttgggcccgg caccaggtcet 11580 cgggcacctc agccgctcca gtcctgcatg ccttgtagta ctggccaggt gtcctgacac 11640 20 gctggacgag ccgcgcetggg gagecccgaag dcatgegegt gecgeggecgt ctectcgecce 11700 tgagggtggt tggatctggg 9819901106 gctcggcgag gcgacgacgc cgccaggtcg 11760 tgtaggagca gtgttgatgg gtaggctccg cgaagcggtg tcaaagtcga ctggaagtca 11820 cgtggtactt cgcacgagct gtggcccgga tgacggtctg acggaccagt gttggccatg 5S 11880 ccaggtactg caggtgcgca gtagtcgttg tgtcgaagat taggcgcgcg gaggcgcgag 11940 cggtggcggg ggccatcget gecggtagage gcggcggctg aggaagtgecg gtagccgatg 12000 10 acctggacat ccgtagatgt gcggtggtag cgagcatggt gcgaggtcct ggegecgggce 12060 ggttccagat tcgcggacgc gcgcgggaac tggtggaggce ccggecggegg ccaggtgatg 12120 tggcccgtga gggcacggtc agttcatggt ggcaggaagt gttgcgcage 5 12180 ggcgcgegcea ccgtggecctg cggctcgact aagcggtcag gcaaaaacga ctctatacgg gtcgtggatg 12240 aatcaggctg tcgaatctcg gtaccccggt ggctgcgegt gaacgggttg gaggctaagce 12300 20 ccaaccctcc caagcctgca cgtctcgacc ttggcactcc taacgtggta gagccgcage 12360 actagtaagc gccggatgag ttttttggag ~~ tttgcaactt ggcgggtcgt aggatacgga 12420 cgccagggtt ggagaagaat gccgtagtct atggctcget geccgaccgeg gcggaaagceg 12480 gggcgtggcet cggctaacga ccggattccg tcgaggecgg gtgcceecggt gegttgeggt 5 12540 gcgagcccct cagttacgga ccgacttctc ccatagccag ttccaagacc gccccgtegt 12600 gcccccacca cggcagatge tcccgtactg gccagatgca gtttgttttt cttttgtttt 12660 10 ctgccceege gecggegett cccctccaca caacaacage ccctccaccg 12720 cccagcagca atgatcacca ggacagagtt gagcggggct cggccgccgt acgaccgeccg acttccagcec 12780 gegtegtege gegectgggg aggggetgge gaagagggeg getggecttg 5 12840 8 agaacctgtt gtgcccaagc cgaggcctac gggacgctcg cagatgaaaa 600 12900 gcecggttcec gatgcgegeg agecccgagga agecggcgagg cagagacaggd 12960 acgcggggcy 20 tcgaggcgga gacgaggatt ggtgctgagg accgaaagag cgcggcctgg ggagcetgegg 13020 tggtcacggc gcggccaacc gcacgtggec 60000020“ gggatcagec cgagctgacg 13080 accacgtgcg 10103308 cttccaaaaaaggagagcaa accgtgaagg gtacgagcag 13140 acctgctgga cacctgtggg gggcctgatg aggtgaccct gcgcgecgagg caccctgatc 5 13200 tggtggtgca cagctgticc gctgacggcg ccagcaagcc cagaacccca ggccategtg 13260 aatatcaccg ggcgctgctg cgttcaggga gacaacgaag gcatagtcgg 13320 agcccgaggg 10 agcgcgggcet gtggtgcagg gcagagcatc tgaacattct ctggacctgg ccgcetggcete 13380 gcaagtacta ctgagtttgg cttctcggtg cggccatcaa gagaagctgg gccgcetgtce 13440 agatcgacgg aaggaggtga gcccatagac ccccgtacgt atctacaaga cgctaggaag 15 13500 gggtgtaccg gacgatctgg gaccctgagc tgaaagtgct cgcatgaccc | gttttacatg 13560 cgcgagctga cagcaggcgg cggtgagcgc atgcaccgtg caacgacagg 13620 gcgaccagga 20 agagctactt accgaggggg cggggcecggg gggccctgac agtctgcage 010810081 13680 gccttggagg cagccgecgg actggcagcc gcggacctge tgacatggge 13740 cggcggeagg tggaagactg ggcgagtacc ggacgaggag acgatgaggt gaagaggtgg accctacgta 13800 tcccgecgatg cacctcctga caacaacagce ctagatgcaa cgtatttttg atggcgcgac 5 13860 cggacgattg attaactcct gccgtccgge tgcagagcca 00020020“ 13920 gacccaggcc 01130303 aaccccgaag gacgacccgc tcatggcgcet atgcaacgca 13980 gcagccccag 10 ccccacgcac cgcgctccaa gtggtgcect cctggaggec tctcggccat gccaaccgge 14040 aggccatccg gtggagaaca gaacgcgctg tggccatcgt gagaaggtcc 141000 49 caccaacgtg gctacaacag cgcgtggccc gctgctggag tgtacaacgc gecggectgg 5 14160 ccgtggeccca gtgcgcgagg ggtgaccgac tggaccgcat cagaccaacc 14220 9 acgccttcct gtggcgctga gggatccatg agtccaacct ttccaccgceg 14280 cagcacccag 20 cctgegectg tcatcagcge tacaccaact ccaggaggac tgccccgggg cccgccaacg 14340 cttcttccag ggccggacta taccagtccg gagcgaggtg aggtgcccca atggtgaccg 14400 cttgcagggc ctttcaagaa ctgagccagg gaccgtgaac agggcttgca accagtcgcc 14460 gctgacgecg tgtcgagcect cgegcgacgg ggtcggggac tgcaggecce ctgtggggeg 5 14520 catcaaccgc acagcggcag cccttcacgg 9219919066 tgetgetget aactcgegcec 14580 ggcgcacgtg ccatcggcca taccgcgagg gattaacctg tgggctacct aactcgtace 14640 10 ccctgggceca gtgagccgcg gatcacccac cctaccagga gacgagcaga 14700 ggacgacccg gatcccgccc ggtcgcagaa ctgaccaacc — gaacttttty aagccaccct ggcaacctgg 14760 gagcgtgggc acgtgcagca atcctgegtt ggaggagege tcagcaccga cagtacgcge 5 14820 tcgacatgac agcgccgecge ggccaccccc tgcaggaggg ©1638 14880 cgcgcgcaac ggactacttg ataaactgat ccgttcatca cagcaaccgc gcatgtacgc atggagccca 14940 20 tccccactgg ccatcctgaa ttcaccaacg ctctgactat ccgccatgaa catcgggegg 15000 tgacgggttc ccgaccccaa tacgacatgc cacgggcgag cggggticta ctccegeege 15060 cgggtgctaa tccccccgac cagcegtgtic atgtggacag ctgtgggacg 15120 cgagcgcccce ccgcgagggt cgcetgtccgg ccgtectcgg cgaccgacge aggaaggcag ttgtggaaga 5S 15180 ctcgctgaac 000106000 cctttcccga ggccgeccagt cggtgecccga getgeecgegg 15240 gcttgctggg acgcgececge gggcaggatc gcagcgagcet agtatccgcea 15300 cgaagaggag 10 taacgggata acttccccaa cgggagaaga gagacccgag actcgctgtt tacttgaatg 15360 cagggacgat cgcaggagca aagacgtatg gagccgctgg tggacaagat gaaagcctgg 15420 ccggtggcac cccgtaaacg ggcagcgecg cacgagecgg cgcagggggce ccccgggegt 15 15480 cagcgtgttg ccgacgacag gaggactccg gtgggacgat ggggacagat gacaggcagc 15540 gcgcatgatg cccgtatcgg 8601000066 cccgttcget ggagtggtaa gacttgggtg 15600 20 tgcgttegtt gcgaccagecg caaggccatg tgatactcac cgaaaataaa taagagaaac 15660
001601-60-16 gtacccggag tgaggcegtge ‏38م‎ tgttgttgta tcttctetgt 15720 cccecgetgg ggcgatgcag tggcggeggce cagcaggcga gagcegtgatg cctcgtacga 15780 agcattcgtt ggggcggaac cgcctacgga cggtacctgg cgtgccceccg aggcetectta 5 15840 aacaagtcgg cctggtggac cccggttgta tacgatacca ggcacccttg actcggagct 15900 accgtggtgc cttcctgacc accacagcaa taccagaacg ctcgctgaac cggacatcgce 15960 10 gacgagcgct catcaacttt gcacccagac acggaggcca cttcaccccc agaacaatga 16020 gtgaacgagt catgcccaac tgcacaccaa aaaaccatca cggccagctg cgcggtgggg 16080 cccaatgggg ccgcaagacc tgatggtctc aaggcgcggg caacaagttc tcatgtacag 5 16140 tgggtggaat gaagtatgaa aggatgagct gatggtagtc agaggattat tgacagtgac 16200 cgacctgatg ccatgaccat ttctcggtga cgaaggcaac ttgagctgcc 16260 aacaacgcca 20 gacatcggcg gctggagagc agaacggggt gtggggcggc ttacttggcg tcatcgacaa 16320 ctggtcatgc cgtgaccgag gctgggaccc ttcaggctgg cactaggaac tgaagttcga 16380 ggctgcgggg cttgctgccc ccgatattgt gctttccatc caccaacgag ccggggtgta 16440 cagcccttcc tcgcaagagg tgctgggcat ctcagcaacc cgagagccgc tggacttcac 5S 16500 gcgctectgg caacatccce tggagggggg tacgaggatc ccagatcatg aggaaggctt 16560 gcagccgtag tgaagcaact atgcagcagc agcaaggagg ctatgagaaa atgtcgacgc 16620 10 gtggcagcgg cgccgcagca attttgcaag aggggcgata taccgaggtc ctaccgcecte 16680 ggtggagaag tcattcagcc agtaagatag tgaaaccgaa ccgaggcggc 16740 gatagcaaga tggtacctag ctaccgcagc taaacaccgc ccggacaaga caacgtacta acaggagcta 15 16800 accacctcgg gacgctgctc tgcgcetectg gagaagggeg tggcgacccc cctacaacta 16860 cgacatgatg ggtcgctgcc caagtctact cggcgtggag acgtcacctg 16920 caagacccgg 20 gagctcctge ggtgggcgcc actacccggt caagttagca ctccacgegt tcaccttecg 16980 ctgcgegect ctcgcagcag aggccgtcta ttcaacgagc caagagcettc ccgtetacte 17040 gtccgececcge ccagatcctc tccccgagaa ttcaaccgcet tacgcacgtc tcacctcgcet 17100 tctcacagat acgttcctgec gtcagtgaaa cattaccacc ccgcgcccac 5 17160 cacgggaccc cgttactgac agcgcgtgac cggggagtcc cagcagtatc tgccgcetgeg 17220 gccagacgcc ctctcgagcc gccgcgegtc gcatagtcge aaggcecctgg ctacgtctac gcacctgecce 17280 10 ggcctgcgcg caccggttgg ccagtaataa ctcatctcgc aatgtccatt 0080018 17340 gtgcgegtge gcaacacccc aacgctccac ggcgctcgec gatgtacgga cgcccagcaa 17400 cgtgcggtcg tcaagggcecg tggggcgecc 000001666 gegggeactt 15 17460 cgcaccaccg ctacaccccc acgcgcgcaa gtggtggecg gatcgaccag tcgacgacgt 17520 000009096 091300006 cgacgcgecge gcgtggtgge gtcatcgaca 910030006 ©0001-6686 17580 20 gccatgcgeg gagcacccce ggecggcecaccg cgcatcgecc ccggeggegg gecgccaagag 17640 ctcagggcgg cagggccatg gcacgggacg 3000-6800 02-10-02 000060806 17700 gagacgcgcg gcaggacccg gccagegecg ggcttcagge ccagacgegce 17760 gccacggegg tgggtgcgcg gaacgtgtac cgcggcgagg atgtcccgec catcgccage cggcagegge 5S 17820 tgaagatgtt ccctcgcact 010806006066 gtgccegtge cggtgtgege acgccgcecac 17880 aattcaagga tccaagcgca gaggaggatg tcccagcggc tgttgatgtg cacttcgcga 17940 10 gcggtggtga ctacggccct cgcectgagat caggtcatcg agagatgctc 18000 aggaggaaag gtgatgtgga gaagaagaaa ggacaaaaag gggtcaaaaa aaaatcaagc aaagccccgc 18060 cgcgtgcagt cccccggegg gecgagticge gagtttgtge cggattggtg 5 18120 ggcgegggceg gcgagcgcetc ttcacgcccg caccgtggtc gacccggcac ccggtgctga gaaggtgcaa 18180 ttctggagca gatgatgata ggtgtacggg cctacgacga tccaagcgct cggcaccgcet 18240 20 agccgttccg cggcaagcge - agtttgcetta cgectgggeg ggcggecgag 18300 caccgaagga agcccgtgac ccgagcctca caaccccacg tggaccacgg 68126602 agaggeggtg 18360 ttcaagcgcg gcgececggggg ccgeggegec gtgetgeccga 09 18420 agggcgagga acgtgctgga aagctggaag caagcgccag tgatggtgcc accatgcagc tctgtaccce 5 18480 tcaagcaggt gtgcggccca cgaggtcaag acgtgcagcc gtggacccgg gaccatgaag 18540 ccatggaaac cccacggagc catcaagatt agaccgtgga ctgggcegtgc ggcccecggge 18600 10 cggatccctg gaggtgcaga cagcaccatg agcccagcac cccatgatca gcagaccgag 18660 gcctgctgat ggcgecggecca gcgcaagtac gaagaccccg gctcctagtc 081060819 18720 gcacgcgctt ggctaccgcg ccccacgecg — cttccatcat gegcetgcatc geccaactac 15 18780 gccgtcgeecg actcgecgec caagaccacc 06002600060 cataccagca ctaccgeggt 18840 gtgtaccgcc ggtgcggaga ctgccgecct gcaaccacce 8600000 18900 geggecgege 20 ctttcgcctg gccatttaaa cccgagcatc cgcgctacca ctgccgegeg acctctgacce 18960 ctaccgagga ccattacggg cttcgegtic cacatgccgc 8810060861 ©0881 19020 gtcgccacca aacgggatgc gctggcgggg gccgtagaag agaaaaccgc 19080 ccaccggegg ccccatcatc ccgegetgat ggcttcetge gttgggggga tcagcaageg cggcgegeca S 19140 ctctcagcgc cggtgcaggc gcettecegtgg 0000031 tcggggegat gececgeggega 19200 ctcctggtcc gactctgacg taaaccaatg catcttgtaa cacttggaaa cactgagaca 19260 10 ctccgcgaca tcgtccctgg 08108381011 agatggaaga tttcgtagac tgtgatgtgt 19320 accagccaac cgacatcggc gcacctggag ccgttcatgg cggcacgegg 19380 tgaacggggg cgcttaaaac ttcgggtcca gcttaagaat tctggagcgg tggagcagtc cgcecttcaat 15 19440 ctgagggata agggcaggcg acagcaccac aaggcgtgga ctatggcagc 19500 agctgaaaga gggatggtgga ggcatcaacg gctcgectcg tggtcgatgg cagcagaagg gcagaacttc 19560 20 tgccgececge ctggacccgg caacagccgc agcggcagat caggccgtgc cctggccaac 19620 cccctggaca ggagctgect aggtggagga 913938106006 cggcteegtg 196580 8 8000000006 cacacggacg gctgctgacg cggaggagac 0660600310 gaagcgacce 19740 ccctggeccac cccatcgege caccacgegg 919012-10-66 geggtgaaac gtacgaggag 5 19800 agccttcccg 0100160666 cctggacttg agcccgecgac aaacccgaaa cggggtgetg 19860 gccecgegege 9919000910 ccctgecgec gtggctaage cccctetaca 19920 "9 10 gtctgggagt agcatcgtgg cactctgaac actggcagag cctcatgcga caccgceccgce 19980 ttgcttgtct agcgcttaac aacctaccgt gctgctatta aagcgccgec gcagagtgtg 20040 gaaggaggag ctgtccacca gccgccgecg — gtattatgtc gtgtgtgtat 5 201000 09 tacatgcaca ccagtgggcg cgatgctgcc gccaccccat ttgcaagatg cgtcgccgag 20160 ggtgcagttt gtccgggtct gagtacctga ggacgcttcg tcgccggaca 20220 gcccgegceca 20 cacggtggcg ttaggaaccc gggaacaagt cttcagtctg cagacaccta 20280 cccacgcacg
011960609109 cgcetgegcett cagcggetga 036000806 atgtgaccac 20340 gaccgcgagg cgcgtgectgg gggcgacaac cgcetggecgt gtgcgctaca ctcgtacaaa acaacaccta 20400 agcttcaaac tcggggccct gcegtgectgga gacatccgecg — cacctacttt acatggccag 5S 20460 acttgtcagt agcacccaac cccccaaggg aacagtctgg caccgcctac cctactcegg 20520 ggaaatgcac ctatacatat cagaaaaaac gaaactgcca agccgatggt ggacatataa 20580 10 accgatgatc tggaactgac gtattcaact acaaaagatg cattaacatc ccgtgcaggg 20640 gctgaatggc agtgggtgat ctgaacctca acctatcagc cgcagataaa agccaatcta 20700 gataccaaaa f{cttaagcct gaggcagagc gaaaagtatg tggtactgat atgacatcac 15 20760 caggcaaatg agaaggaggt ctactaataa tttgccaagc ttatggttct tgaagccttg 20820 tttgacaaca catggctttc atgacataga actaaagaat aacaggcact tgaaaacagg 20880 20 aatgtggatt gtatactgaa aaattgtttt ctagctccag tgctgctggc gaagtgcgge 20940 agctcttcta agatgacagc aagcaggcac attgtataca agatacccat tggaaactcc 21000 agagacaact cattggtttc gacctaacta atgcccaaca tcagcaagcc ttaatttggg 21060 ggtcaggctt ggtgctggcc gcaatatggg aacagcactg catgtactac ttatcggget 5 21120 taccagctct cgagctgtcc acagaaacac gacttgcaag tgctgtggtt ctcagctgaa 21180 gcggtggaca gtggaatcag — atttcagtat agaacccggt tctgggtgac tgcttgactc 21240 10 cttcccaact ggaggatgaa atcatggtgt attattgaaa tgatgtgcgc gctatgatcc 21300 aaggctaatg tcagggaatt cagatactta gttggcagaa tctggatgct attgtttcce 21360 tgatgctaat acagtgtcaa accaaagatg aaccacatgg gaactgatca 15 21420 gagataggca aacttcctct cctgtggagg tccaagccaa gaaatcaaca attcgccatg agggtaatcc 21480 aatgttaccc cacgccggcec cttacaagta ctgcccgact ggcecctgtac acgccaacgt 21540 20 ccctegetgg ggtggtggeg tgaacggecg tacgattaca caccaacacc tgcccaccaa 21600 aacgtgaacc tcccatggac ggtcgctgga ggggcgcgct catcaacatc tggactccta 21660 catgctcctg gctaccgcetc gcggggcetge ccaccgcaat ccttcaacca 21720 ggcaacgggc agcctcctge cgccatcaag agaaattttt caggtgccce cttccacatc gctacgtgee 5 21780 atgatcctgc ggacgtcaac acttccgcaa tacgagtgga gtcctacacc tcctgeeccgg 21840 accagcatca 0810160116 acggggcectc ctgcgcacgg cggcaacgac 80800166 21900 10 gaggccatgc ctccacgctc acaacacggc cccatggcgc — caccttcttc acctctacge 21960 aacatgctct ctcggcggcec acgactacct cagtccttica caccaacgac tgcgcaacga 22020 aactgggccg cccctcgege ccatctccat accaacgtge ggccaacgec accccatcce 15 22080 ctgggctccg gacgccctcg agaccaagga acgcgtctca ctggtccttc ccttcecgegg 22140 accttctacc cctcgacggc ccatccccta tactcggget —ctacttcgtc ggttcgacce 22200 20 tggcccggca ctccgtcage ccttcgactc gtctccatca cttcaagaag tcaaccacac 22260 ggcgagggct caccgtcgac aaatcaagcg aacgagticg cctgacgccc acgaccggct 22320 ctggcccact ggtccagatg actggttcct atgaccaagg ccagtgcaac 8688001096 22380 atgtactcct caaggaccgc ccgagggcta ttctacgtgc ctaccagggc acaacatcgg 5 22440 tacaaggact cgaggtcaac aggtggtgga atgagccgcc 1100680066 11838 22500 tacctcgcgc cttcgtcgge acaactcggg taccagcaca 806010006 accaggccegt 22560 10 atcggcaaga ctacccgctc ccaactaccc ccctaccceg ccagggceccag ccaccatgceg 22620 tggcgcatcc cagggtcatg tcctctgcga cagaaaaagt cagcgtcacc gcgccgtcac 22680 aacatgctct cctcggccag cgctcaccga tccatgggcg caacttcatg ccttctccag 15 22740 gatgagtcca cgaccccatg atttcgaagt ctagacatga cgcccacgcg atgccaactc 22800 ccccaccgceg agtgcaccag acgtcgtccg gaagtetteg tgttgtcttc ~~ ccctictcta 22860 20 accacctaag cggtaacgcc ccttctcgge ctgcgcaccc ggccgtctac gcegtcatcga 22920 gggccatcat caggagctca ctccggcgag 109-60200909 ttgcaagcca ctcttgcttc 22980 tcccgggatt gataagcgct gggcaccttc cctacttcct ggetgecggge ccgcegacctg 23040 gceggeecgeg cgtcaacacg cctgegecat cacaagetgg catggcceceg 5 23100 89 tcttcgaccc acctgctacc gcgctcgaac cctggaaccc ctggecttcg cgagcactgg 23160 agggcctgct ttcgagtacg gatctaccag gcctcaagca tcggacgagc cttcgggttc 23220 10 ctggaaaagt ctgcgtcacc ccgaggaccg gccctggecca 0606600806 23280 ccacccagac tgcacgcctt tgcatgttcc gctcttctge ccgectgegg ccgegetcgg cgtgcagggat 23340 tgacgggggt atgaacttgc gaaccccacc ccatggacaa cccgaccgcc cgtgcactgg 5 23400 ctgcgeccgeca ggaacccacc cgccccaggt atgctccagt gcccaacgge 23460 accaggaggc cgcgcatcga tcccaccgcg ctactttcge cccactccge ttcctcaact gctctaccge 23520 20 tatgttaaat accgtgtgtg agacatgtaa gcatgaatca gccttcgacc gaaggccacc 23580 tttagaaatc agatgattta catgcatctg tcatgttaca aacagcactt 328 23640 ggaactggta gacacgttgc cgcgggcagg cggcatggcc tgccgggtct gaaagggttc 23700 agcggggtgt cagtttgggce cggggatcag cacttgaact cttggccage 5S 23760 cggggaagga cggagatctt aggtcgggcg ggcgcccage tcagttgcag agcttccgeg gtcggtccac 23820 ggttgcagca cggtacacgg gcgggagttg cgttctgcge ttgggacccg gaaatcgcag 23880 10 cggtgatgct accgtcgegt gctcgccage ggtgcttcac atcagggccg ctggaacacc 23940 aggtctgcct gtcatcttgc cccgaagggg cgttggccat aggtcctcgg ctccacgteg 24000 ggatcagcat cagtgcaggg gttgcaatcg cgggcttgtg ggcacgcacc tcccatggtg 5 24060 cctccaattg ttcatgaaag gtacatggcc tcatccccgg tggtcggegt catctgggee 24120 acttgctaga accccgcagg ggtgaagaag tggctccctc tgctgggect cctgaacgcec 24180 20 tgttggccag cgcgcgtegt cacgcagcag cggcegtcgtg gtggcgcacc gaactggttg 24240 ggttctcctt gcccggtcgg ggtgatcttg agceggttctg ctgecgececee ctgcaccacg 24300 ccttctggat atcatgtgct atccatctcg cgctcgccac tgcccegttct cagegegege 24360 cgtgcagcca tcggtgcacc gccctcggec accgecagcett ccgtgcagge catggtggtc 5 24420 cgtgcacgaa tgggaatgcg gtgggcgatc cccagttctt ccggtgcact cagcgcgcac 24480 aggtcagcgg ttgctagtga cagggtcttg tcatggtggt aagcggccca gccctgcagg 24540 10 cctcgeectg cggcggtaca gtggcagatg tgatgtacag tgctectcgt 38102009 24600 ggtccatcag acgcggtagc gtcggtctcc tggcetttcag agctggaagt ctcgggceatc 24660 tcatagggtt atgggcaggc ggccgagacg ccttctccca atttccatac catagtcatg 15 24720 ccagggtctc tcgctctcgt ggccaggggg tagcagccgc atcttagcge cttcaccate 247780 gggtagctga ccgcaccggg tctcggtgat ttgccgtcct 3880012006 24840 agcccacggc 20 cctgcaggac tggctgacgt ctcgctgtcc gtetttegtc tcctcggect cgeccagcetee 24900 atgttggaga ggcggcggag 90909000396 gittcttctt gtcttgcggg cacatgcttg 24960 cttggtccga tcttcctctt cactactatc tctcgctcac gagcgcgagt tggcgagggg 25020 ggctctcgee ggaggecgacg gggcagaggce gtetettcgg cggtaggtat ggccacgegg 5 25080 gctcccggeg tcgggggtge ccttececgegt tggcagagec 0000031006 06060861 25140 tcctagggag cattgtgttc cgcggecgge tgacttcctc gegcetctgac 25200 gaacaacaag 10 accgccgacg 3110600066 880010066 806081606 catggagact 25260 agaagcagca acgcggccgt gccacctccg 006083066066 002606606066 gaaagcttaa gcagcagaat 25320 tgacgcccge ctgggctatg cgagattgac aggaatccat caagagatgg cccagacatg 5 25380 gagatacacc ttcacaagaa cagtgcgctt gaggagctgg ggagcacgag 25440 aagaacagcc gcgactacct gagcatgacg ggctgggctc agcagagtca gcagagaatg agagcaggaa 25500 20 ccaccatcgt gcccggcagg caagcatctg acgcgctcatgggggggagg ccacctgage 25560 tcagccgecge gtggaggagc gcccctcage gcaccgaggt ctgctcgacc caaggatgeg 25620 atggcacctg cgccagccca gccccccaag cgccgegegt — aacctcttct ctacgagttg 25680 ccctggeccac gtgcccgagg ggtcttcgeg acttctaccec ccgegcectca cgageccaac 5 25740 tgccgcgecca ccccgtictcc accaaaagat tttttcaaga ctaccacatc 25800 accgcacccg cctccttgga cctgatatcg cgcccgecta tgggtcccgg 11168806 cgecgacgee 25860 10 cgaacgctct actcgggccg cagcgacgag agggtctggg aagatcttcg agaggttcece 25920 gtcgagttgg cagcgccctg atgagcacca ggaggagagc gcaaggagaa 25980 aaggcgacaa acccggctct catttcgcect cgagctgacc aacgcacggt gcggtgctca cgegeggetg 15 26040 agcgcgcgtc gtgctcatca catggaccag tgagcgcggt cccaaagtca gaacctgccc 26100 tggtcagcga ggcaagcccg ctccgaggag gcatgcaaga gaggacgagg gcccatctec 26160 20 cagagtttgg tgctagtccc tgggtcctaa gcccggtgge cgagcagcetg 26220 aagagcggcg
00000101 gagtgcctge cgtggagetg tcctggtgac atggccgtgg caaactcatg 26280 tcaggcacgg cactacctct ggagaacctg gcaaggtcga gagaccctgc cgccgacgceg 26340 tctcctacat accaacctgg cgtggagctg agatctccaa caggcectgca gttegtgege 5 26400 tgcgcgggga cacaccaccc gaacgtgctg gcctggggca cacgagaacc gggcatcttg 26460 cctggcagac ctctgccaca ctacctctac gcgactgcgt gactacatcc 0066009206 26520 10 tctgcaagct ctgaaagagc ggagcagaac agtgtctgga gtgtggcagc gggcatgggce 26580 ccgcctcgga gagcgcacca cgggttcgac gtctgtggac aacctcaagg cctgcagaag 26640 gcctgeeccga ctgecgcaacg caggcetgacg ccgagecgect ctcattttce cctggecgac 15 26700 gctccggaat atcctcgaac tcgctctttc tgcaaaactt caaagcatgt ctttatgage 26760 tccgcgagtg ccgctgacct ggacttcgtg cgcetgecctc acctgectcecg cctgececgee 26820 20 tggcctacca gccaactacc gctgecgectg actgctacct 191008006 6606909 26880 gccgetgcaa gagtgccact gggcectgetc tcagcggcga atcgaggacg ctcggacgtg 26940 agacccagat ctgctgagcg caacccccag ccctggectg ccgcaccgcet cctetgcacg 27000 ggttcagccg cgaaggcgag aagggcccag ttcgagttge catcggcacc 5 271060 "9 tgcccgagga cgcaagttcg ggcectacttg tgtggacctc accccgggge tctgaaactc 27120 aggccgagct catccgccca ggaccaatcc ggttctacga ttcgagatca ctaccatcce 27180 10 tccagaaatc ttgcaagcca cctggcccaa agggggcgat gtcatcaccc gtcggectge 27240 agaccggtga ctcgaccccc cggggtctac aaaagggccg ‏دواو‎ ccgccaagaa 27300 caagaagctg cccgaggaaa cccaggatgc cccggcttcc ggagctcaac 5 27360 aaagtggagc cagtcaggca gggagaacag gaggaagact ggaggatttg tgccgcccgt 27420 gaggaggagg gacagtctgg cagcctgcaa cagaggagga agcactcagg agactgggac agatggagga 27480 20 agaccgtcgt agccgecgece tggaagaagc gaggaggagg ggaggaggca aggaagacga 27540 cggggtcccg cgctcecgggt ataccatctc agcagcacgg ggagaaagca cctcggeggg 27600 gaaccccacc gacgattccc gacgagaccg cagtagatgg ctcgaccaca 27660 acccagaccg atcgtctcct caaaaacgec ggcgggggca tacaagtcct gcggcaggga gtaagaagga 5S 27720 ttccaccgcg ctacctgctc tcacccggcg 3380816160 ctgeggggge gcttgcagge 27780 ccctactact cctccacagc actaccgtca atcttgcatt tccccgcaac gggtgaactt 27840 10 tagaaaatcc aaccagcagc accagcagaa gcagaaaaag ggcagcagca tccaagaaga 27900 8000090908 gcggcgaacg actgaggatc cagcaggtgg acagcggegg 277960 aacccgggag agcagagtcg (gccatcttcc caccctctat ggatctttcc ctgaggaacc 5 28020 ggggcaggag tctgtatcac cccgcagttg cgctcgctca ccgttectctg aagtcaagaa caggaactga 28080 caacaagtac aggctctctt gaggacgccg gcgcactctc accaacttca aagagcgaag 28140 20 ggcgggaatt cgcagaaaaa cccgcccagt gtagcccgcg ctcttaaaga tgcgcgcetca 28200 aagagattcc atcatgagca tccacccatc 0130000066 tgcccttcge acgtcacctg 28260 gccgecggtg gatgggectg accagcccca atgtggagcet cacgcecttac 28320 8 gggtgaatga atgatctcac cgggcccgecg ggctcagcge cgcatgaatt ctactccacc 5 28380 ccacgccccg gcgctcaccg agaacagtca agatactcct caccgaaacc catccgegec 28440 ttccccagec taccaggaaa cgccctggtg attggcccgec aatccgegta caatcaccte 28500 10 actcaggtgt cagctgacta ggccgaagtc gagacgccca ctacttccgc cacgaccgta 28560 taaagcggct gctcagggta tcaccgcccc ccctgtgtcg ggcggegeca ccagcetggeg 28620 cgctgggtct gtgagctctt cgacgaggtg cacagctcaa ggcagaggca ggtgatccgg 5 28680 cgcctcgtca tcttccttca atcggggaga aactcgeccgg ggagtettcec gecgacctgac 28740 tcggcactct tcgggtggca gcagccccge gttcgtcctc actttggaga ggcecgtectg 28800 20 gctcccecegg cccttctceg ctacttcaac ctccctecggt gaggagttca ccagttegtg 28860 tggacggcta agcgagtcgg cgacgccatc tcccgaactt gacgagttca ccactacccg 28920 tggaccactg cttcgacacc cctagctcgg gcgcagctga tcccatggtg cgattgaatg 28980 agctgcccga gectacttty cgccgagttt ctcgggatct cgetgettcg ccgecgette 5 29040 gcctcgactc gtcgaagggg gcggatcgtc cccacggagt 800026600 ggagcaccct 29100 gagcgcgagc gatcctggtc gccagegtcc cggatcttca ccacctgcett 29160 aaggacagac 10 tttgttgtct catgaaagtc ccccggectg tctgcaacca ctgtactgca cctictgact 29220 ccgtgtgttc ctccggactt tcagcgacta aaagctgaga gagtataata gcetgtgtact 29280 cagctccagt gaccgagctc ccgggaacga ttgttcttca caaccagtct ctgaatccat 15 29340 gecgttgtca ctccecgatc tgttccaggg ctcacctgge caagaagtac gtaagcccca 29400 ttttccaccc caaccttact gcggccctge 00-10-1983 caacgacgga accactgcga 29460 20 tgcgtctcgg gacctatcag tcctcccecgg ttccaaccct gcetccagcetc gcagaagcaa 29520 cccgctacta agcgtcgctc cgaataccac cacctgatcc tcacaccttc gaccctgcca 29580 gcccatatta cacaatacat gtcgctaggc caacgccacc taacctccac acaaccaaac 29640 caatctaacc ttagttactt ctccccgecta gcgacccatg ccgagccaca gactatgagg 5 29700 tggacatgga gaccttctcc caacgtcaac tggccaacaa actgacccac ggcggagatg 29760 cgccagcagc acttcgcatt gactcgccca tcggagcagc cggccgecgcec 29820 aggagagagc 10 tcttctgcct aagagaggca ccaccagtgc cggtggccat ctgcaggatg cgtcaaggag 29880 tctcctacga gaccatcgcc cactccaaac cctacgaggt gccaagatct ggtgaaacag 29940 tcgtcatcac gtcaacccca cctggtcgga agttcacctg cagcgccaga gctcctgcag 5 30000 ccgactgcgt tgcgactccc ccactgctcc aggggtgcat ggcgatacca ccagcagtct 30060 actaatcacc ctccccatga ccgcgacctc tctgecggect atcaagaccc ccacactctg 30120 20 aaaaataatc tacagaaata atgatgattt gatcatattg gtgaaataaa cccttatcca 30180 agtttaacaa tgatgatttg acaatcatat aaataaagat atttgatttg 30240 aaaaataaag acaccacttc ttttctgcca tctgtccatg ataccaggtc ttgaaatctg aatcacttac 30300 tcctccacac gctgcaaact gccececggegg ggtactgcag tcccagetct actcecectet 5 30360 ctatcagatg attttatctt ctcaatcttc cctcctgtcc atgtcaaatt gctgaagggg 30420 cgatgcagac tctaccccta ttcgaccccg ggatgatgac gcgtccgggt tccaaaaage 30480 10 attccaagag cttcagatgg cccttcgtct catcaacccc ccgtgccctt aacgcaccga 30540 tcaccaccaa gccgaccccg cctgcgactg gggtgttgtc aagcccctgg 30600 gaacggggaa catctccaac cgggaaaact ctcgattcct gggggtggac agctgggaga atcaccctca 5 30660 ccttaacatg acaccatttc ttttccaaca ccctctcagt aggccgecge acggccacca 30720 accattaaat aagtttctcc ttatccttac agatggaaaa tttacactaa gatcacccct 30780 20 tttaggactc ttggatcagg gctttaggtt aaacacacta caagcattct atactgagaa 30840 tgatggaaac catttgatac tctccactta acagttagtc ccttggcagt cgtggcetctg 30900 tgaaagcaac gagatgcaat gttacaacag aggtttgcat ccttagacag ataaagctta 30960 cattggaaat tagcaaccaa gatggagcca aaaatttgaa ctaaaggttt ataagctggg 5S 31020 cccaatccaa atgatgctta acaggtgttg tagtacagaa ttggaagcag gggttagagt 31080 tggtaacaaa ccataatggc agtacaggag tagctttgac gatctggect gttaaacttg 31140 10 tcaaatactc caccaaactg cctgatccat gtggacaaca aactcacttt gaagacgata 31200 aatactggcc gtggtagtca ttgactaaat aacactttgc atgcaaaact gcagaaaatg 31260 caccgtaagc ccattactgg aacctaaacc aggaagtgga tcttagttgt actgtgtcag 5 31320 acattctaca fttttaacaga aacggtgttc 031008 tgtttctacg agtgctcagg 31380 atataccaat atggcactcc gatagcatag taggcaggga actgggggta ctaaaaaaat 31440 20 tactactaaa cacaaagtic tatccaaagt tttaaaagct tcatgcccaa gctgtaggat 31500 gcttctcact caaaacctat ggagatgttt atacatgaat tagggcaagt aataatatag 31560 ttcatacacc caatgtcatt agtacatatt tgacagcaac atggtactga ataaccctca 31620 cttctcatac acftcttatac tttggggcta tggagcaaca gaagctatgt tggactaatg 5 31680 ccccactctg 300010608 ctgcatgcca gtatcccacc aatgaacact atcgcccaag 31740 attcaacagt tgttttattg aaagttcaag aaaataaaat tctgaaacac tggaacaaac 31800 10 tacaccaccc ggacatggaa caccctccca atttttcctc tcgagcagtt tttacaggat 31860 cttttggtct gatggacatg tgccattggt aacatctgaa cacagccttg 16666009 31920 atgaaaccct ggtcagggag gtctcgggtc gagcgagcca cacagtttca ccacgttcca 5 31980 tcggtggtcg aggattgtcc tcaacagctg acctcacagc ccgcatctgc ccgggcactc 32040 gaatcatagt gcggcggtgg aagcagaaga tatctggaag ggatcacggt 32100 9 20 gctccgtcaa tgccgecgec cagcagtcge tcaggccccg 10991016008 gatcggecgg 32160 cggccctcag atgatgccca ctccctcage ggtccaggga agggggtccg getgetgcete 32220 ggtcgctgca atctcgctca gcgcatgcgg gggcgcagca ctggtgecgge catcagtegt 32280 cgctccagecc tagttcaaca caacagtcca ccaggtigtt cacagaacca gtacgtgcaa 5 32340 tcaggtaaat taccagatcc gtggccgtcg tgctacccac gcgggaagga gaaactcatc 32400 gcatgtggcg atctccttgg cacgtacatg acacgctgcc cccctccaga caagtggtge 32460 10 ggatgatcct atgcagcccc ctggttgaac acatcaccct tcccggtacc gttcaccace 32520 ccgggtcceg cgaagagacc cgccatgcag ccgccccgec agggecagea gcggaaccac 32580 tgaacaagtc atctgggagc cccgtggatc accgctcgta tggaggaccc gcaatggcaa 5 32640 actcctcggg agcactctca gcatctcttc atatgctcat cagcacaggc tatgttggca 32700 acagcgaacc ctcttgcagg gcacggggaa atatcccagg ggtcaaaacc 32760 ccgcagaaca 20 gtatcgcaat catggacagg ttacattgtg cgcacagaac gggcaatcct 32820 caggcagcac tcacagcgtg ctcggtctcc aagcgcgggt tccaccagag cgggtgatec 32880 gtaagggggc tcatgatgca cgcgaccgtg tgatcgtgtt gggacgcggc gggtgatggc cggccgatac 32940 ctgcacaccg ggtccgggeg agcagaacct tacttgetgt gacattttcg gttgetttcg 5 33000 aacagccact gaaattgtaa gctcggtgtt cgcttggaac gcggtctcgg atcgccggceg 33060 tcatgcctga gaagatccca caggagtgat tctagggcect gtgcagcaga ctctcagacc 33120 10 atgcaatttt cagccagatg gggccagacc accgtggaat cacatcgacc tggctctgat 33180 aacttttaat aaccatgatt gaacaggaagggggagggaa ggtgacggcg gttgggtttc 33240 tcgccecececge atggcacctc gatcgcggag tcaaaatgaa tcggagtact ccaaacggtc 5 33300 tgttccacgg gttctcgaga aggtgatacg gccaggtcaa gaaaataaca tgtgttggtg 33360 gacaatagcg ccagaaacaa acgcgcacat caaagcctcc tggcttccag 33420 aaagcgggag 20 taattttcat catccccaga actcctgcac atcatgttac ttcctcaatc ggtictctaa 33480 gccatgataa atccaagcca cctgaggtaa cgaactagtt ttgaatgatt 68026 33540 attccaagat caccctcata ttcttaagca tccaccggca cagagcgccc agagctcgeg 33600 ctctgccgecg atatcaaaat gacaagcgga gcagcagatt tggttcacct attctgetce 5 33660 ctccgaaatt ttcatatcct taagtactct gcaataactg 101000108 atccctgagce 33720 taaaccgaag acagtacaga agggcaagcc gaataagatt ggaccaccag tttagccata 33780 10 tagacccggt gcatgctggc actgctataa caaatgcaag tgagcattgc tcctccccag 33840 aatcaacaaa tttttaagaa gcccaggcaa acagaaaatc agataactgg gatatcttcc 33900 aaatgcaagc acgatgaagt ctcgggaaca cgtttagagc tccaggtgga agaaaaatcc 15 33960 aacattaaac aacaaaaatg ctgtagaaaa gttagctgat agcatggtta 091000126 34020 agcaccaggc cgttctctcc gtgggtaaat tggcgaacag 8100138026 34080 aggccacggg 20 aaaaccatca 0013810810 aaaaattgtc cgaccctcgt gtctccggeg 34140 cagagagacg cattggcgtc acccccggaa agatgaatac tgattcgaca 0909091038 09 34200 gtctcaagtc acaatgctca ataaggcact cgaggaagca aaaaagcgcc cgcgagtgaa 34260 aaatgtaatt ggtgcgtaca 388810168 gatgaagcac atgccatgcg cagcaaagcg 5 34320 acaaagcctc aggtacacat cgatccctcc 0088800666 tgcacaggca actcccctce 34380 aagagtcaga caacaggcgc cagcagcaca Jcttaccgag agcgtccata 34440 8 10 ctgacgtaaa cagatctaca atatatagcc tctctgctca 91606860006 gctctaacct 34500 ccagcacacg tcacacacgc cgccaaataa taaaaatacc ggccaaagtc 34560 cccagaaacc cgtcatttcc ccaaaactgc cctcaaacgc acgcgcactt tcaaaaaaat ggtgacacac 15 34620 ttaaaaacgt ccgtcgaccg ctttcaaatt caaaacacga gctacgtcat gggttcccac 34680 gcatccccaa tcagcgcccc tctcagccaa gtcgeccgtc geccctaacg cacccgcccce 34740 20 ttattgatga ttgaggtata cacaaaaagt tattaacgcg 008121068 attcaaacac 34800
34803 tgg 46 <210> 7182 <211>
DNA <212> 5 ‏ترتيب اصطناعي‎ <213> <220> ‏بنية تخليقية‎ <223> 46 >400< aaactcatcg ctgattagaa ttaaccaatt ttacaaccaa tctgccagtg ggcgtaatgc 60 tttttgaaaa caataccata tcaggattat tttattcata gaaactgcaa agcatcaaat 120 15 ggcaagatcc tccataggat ccgaggcagt agaaaactca gtaatgaagg agccgtttct 180 tttcccctcg aacctattaa acatcaatac gactcgtcca ctgcgattcc tggtatcggt 240 cggtgagaat cgactgaatc ccatgagtga tgagaaatca ggttatcaag tcaaaaataa 300 acgctcgtca gccagccatt tgttcaacag tttccagact tatgcatttc ggcaaaagct 360 attgcgcctg ~~ ttcattcgtg caaaccgtta tcgcatcaac tcaaaatcac 5 4208 tcaaatgcaa caaacaggaa aggacaatta cgctgttaaa aatacgcgat 480 89 taatacctgg gatattcttc cctgaatcag aatattttca gcgcatcaac aacactgcca 540 10 agtacggata catcatcagg agtaaccatg cgcagtggtg tcccggggat 88021 600 gaccatctca agtttagtct tccgtcagcc aggcataaat tggtcggaag aaatgcttga 660 tggcgcatcg gaaacaactc ccatgtttca gctacctttg cattggcaac tctgtaacat 5 720 gcgagcccat cgacattatc cctgattgcc gattgtcgca acaatcgata ggcttcccat 780 gcaagacgtt gcggcctcga gaatttaatc atccatgttg ataaatcagc ttatacccat 840 20 agacaggtcg ttatgtaagc gtattactgt aacacccctt tatggctcat tcccgttgaa 900 tacatttata tcataatatg tgtatctata ttgcatacgt ctattggcca acaatattgg 960 tattaatagt attgactagt gacattgatt ccgccatgtt tccaatatga ttggctcatg 1020 acataactta gttccgcegtt catatatgga gttcatagcc ggggtcatta aatcaattac 5 1080 tcaataatga cccattgacg acgacccccg tgaccgccca cccgcectgge cggtaaatgg 1140 gtggagtatt acgtcaatgg ctttccattg ccaataggga catagtaacg cgtatgttcc 1200 10 ccgcccccta tatgccaagt aagtgtatca gcagtacatc tgcccacttg tacggtaaac 1260 accttacggg ccagtacatg ggcattatgc tggcccgect tgacggtaaa ttgacgtcaa 1320 gtgatgcggt tattaccatg tagtcatcgc atctacgtat ttggcagtac actttcctac 5 1380 ccaagtctcc acggggattt ggtttgactc cgtggatagc caccaatggg tttggcagta 1440 tttccaaaat tcaacgggac ggcaccaaaa agtttgtttt cgtcaatggg accccattga 1500 20 tgggaggtct gcgtgtacgg tgggcggtag ttgacgcaaa ccccgcccecg 138 1560 ccacgctgtt gagacgccat agatcgcctg gtgaaccgtc agctcgttta atataagcag 1620 cggtgcattg cggccgggaa ccagcectccg cgggaccgat tagaagacac ttgacctcca 1680 gcaggtatgt atctcagcaa caccgtccgg aagagtgact tccccgtgec gaacgecggat 5 1740 ggacgctgtg gggatttgag caagactcca cttccccagt gtgggectgg actctccagg 1800 caggtcagga gactatcttc cctcaaccct cttttgcttg ttacatgtac 00006 1860 10 cagtaaaccc agttcaggaa tggtggctcc attttcctgc aggggtctgt tcccagagtc 1920 accctgtgac aggactgggg aatctccgcg acatctcgtc attgectctc tgctccgaat 1980 cctggcaggt cattcccaac gtgcgagaag gaggctggga agcattgtgg gaacatgget 15 2040 cccagtgggt ctggtgcacc cggcggtgtt gggcagtctg tctcgtggca gcettgtggec 2100 ggcacagctt ttgctgggtc aagcgtgatc tcaggaacaa gcccactgca cctcacagcet 2160 20 cacacccgct cacagcttcc tcaggtcagc gccaggtatt gaagacacag gtttcatcct 2220 ggtgatgact cctcaggcca agaatcgatt agcctcctga ctacgatatg 2280 ccagccacga aggtcatgga gatgctgtga cgagctcacg cagagcctgc ctccgectgt cctcatgcetg 2340 ggggcagcat gcctcagget cacctgctac cactggggac caggagccag cctgcccacc 5 2400 atgttatttc gtggacctcc acttcagtgt ccccaaagaa gagticttga tgaaccagag 2460 tgtgtgctgg aagttcatgc gaaggtgacc ttcaccctca tgtgcgcaag caatgacgtg 2520 10 ttgtctgtaa gggggcccac gggtgattct gcacctgctc gggggcaaaa acgctggaca 2580 tgtgccctge cagtgaacca cgtcatgggg caaggtatca tggtgtgctt 2640 ccgaaaggcc tcgtggccaa aaggacacca gaagtggatc tgcattaccg accaaggtgg ttccctgtac 5 2700 gatgtcgaag gacctgtgga gttcattatt gaaggtaggg ccccggatce 2760 aaaacccagg tgcagccagg ggcttggccc gttgatggca tgcttgcect aaggcetgtge acccgctage 2820 20 gcctgcaggt aacgaggact ccaggtgagc cctgcaaagc ctgtgctact cactgecctg 2880 cagttggcct cgcatccgeg ctggaccgcg gggagcagtg acccagcetgg ggagaactgce 2940 aggactacta gatgactcac gaactgcgtg gctgcagcett atcagcaaag cctgaccgtc 3000 tgcaacgcca caccgacttg cgtgctgtga aagaacatca cgtgggcaag 5 3060 gcggggcecca tgctgctctg gcactcggec getgetcect 068160106 ccggetgecg tgecctgeag 3120 tggcaggcga ctgctgaaac gaactttgat cccagaccct cagctaggat gggacccggce 3180 10 tgtgcgcetgg ccgegetgge cgecgegecge caatggcaag aacccaggcec tgtggaaagce 3240 ggotttataaa ctcttcgggt cctcggctte gcettetttct ctggcgggtg 0719 3300 ttttggatga atgaaagcat aaagcataat acattactcc gaagctacta atcctccaat 15 3360 cacatttagc acacagatac atataatttt agaagttctt gagaacatca attgaaagct 3420 aagaatttgg tcccagtgga gcaaattcaa agcttgcaaa caaaactttc aggaacagaa 3480 20 ataagactca tcctacccaa tgtcctgttg cacattatga gttgagctgg cctggattct 3540 catcattatt attttcaaca tggaaatgag ttaatgaaga atctcaataa tcccaactac 3600 tcagtgcttt gtaccacctt ttcggatatt atgaaaatgt cctccaggat tgaaccacct 3660 aactatgcac agtgtatgtt agggcgatct ggaatgccag ctctcctcaa 5 3720 gaactgaaga taattgccag gggaaaattg caattgctct acatgaaaat ttggaacggg — cttctttaaa 3780 cagctggcag taaaaatgcc gaaataaggt gttttcagag atatgggaaa 3840 gggccaaagg 10 cctatccaga ggggtgaagt ctttgctcct ctgctgacta tactccgacc agtcattcte 3900 tgaatggtgc atcctaaatc gcgtggaaat gtggtgtcca cttecctggag tggttggaat 3960 gtggaattgc gcttataggc aaatgaatat gttacccagc ctcacaccag aggagaccct 15 4020 atgcacagaa ggatactatg tcatccaatt gtattcctgt ggtcttccaa 801 4080 gaagtctcaa agctggagag accagatagc gctcagcacc aaaatgggtg gctcctagaa 4140 20 aagtcaagat tctacacaaa tggaaacttt ctggctttac aatgttggac agtgccctac 4200 ctctcagagg gtgataggta aatttacaat aagtgacaag tctaccaatg gcacatccac 4260 ggatgtttgg cgggactcat gggaggtcac atgtcattct ccagacagat agcagtggaa 4320 gctttggaac attgtgagga 191031938 gagcagctgt cctcagagtg tggtattgac 5 4380 tttgcaagct aacaatttty gacctagaag gaagggtgga actgaaaaag 4440 gggatgcaga tccttcaaga aattcaagac ggcagaggag ctactgagtg cttcttggtt agaatttggt 4500 10 ctctgagagt ggaaactaca atctatagaa atgctgactc gcttatatta gcgtggegtg 4560 tgaaaagccc acaaaagagc acacaaccta acagcttggt ccgctgatgt tgattgtaca 4620 gtccticcce actaaaaaaa tgaaagttgg — aatctcttta tttgaaggca tgatgaagge 15 4680 ttgaggtgtt ggaaatgatt attgggatct ggataagcaa ggcatgccca agagttcagt 4740 actaaaaatt agcacggtat cttcaggcag cttggaattg cttccaacga 4800 gggaaacaaa 20 tggtggaaaa acatatgagt tgtctatgaa tgtatcacag ggctatccac caaattcagc 4860 gagggatggt caggttcgag cactgtggcc aatatcacct ccaatgttta gttttatgat 4920 ctgtagtttt cgagattatg ttttgattgt tagtgctccc gccaattcca gtttgagctg 4980 catccacagg 1121810338 tctacagtat gctgacaaaa aagaaagtat 5 5040 aaatgaagac aaattgcttc aattttacag tgcagtaaag cacttttttc tcatttgatt atacagtgta 5100 taagaatgat ccaatagtat caaaagcaac aggactttga gagagactcc caagttcagt 5160 10 taccagacag ccattagggt atttattgat tggaaagagc ctcatgtttc gaatgatcaa 5220 caggggagtc aacaagtatg aagcagccac tctatgctcc aggcatgtca gcctttttat 5280 cttccaaggc aaagtggacc tattgaaagc ctctgtttga atttatgatg attcccagga 5 5340 cagctgcaga acagtgcagg tgcagccttc agatttatgt gtgaagagac ctggggagaa 5400 tggggttatt aacaaaaaga gccctaacaa aaagatctgg gaagtagcct gactttgagt 5460 20 gatcatattg attgccacaa gttgggggac gtaattggaa catgggttac ccctaaactt 5520 gattggaaag caggcctatt ttcctgtaaa tttagaaaac caaacactgt tacaaaagat 5580 tgtggatatc atttacacaa ttgctgctcc cttttgggcet gattgtgggt tatgtcaaag 5640 ttctcgccaa ggctttcact aagctaaaca gcatgtatac gcctttgtat ctgecttaat 5 5700 cccegttget tgaaccttta aaacagtaca ctttctaagt cttacaaggce 5760 cggcaacggc gccataggcc ctggggcttg cccccactgg gctgacgcaa ccaagtgttt ctggtetgtg 5820 10 gaactcctag ccatactgcg ctctgccgat 10100016 gcgtggaacc atcagcgcat 5880 aattctgtcg aggaactgac caaagctcat cggtctggag tgctcgcagc 001 5940 tctgccaaaa tctttttccc ctacgtatga 109110031 gaaatataca tcctctcgeg 15 6000 aggaaattta tggctaataa atctgacttc ccccttgagc catcatgaag attatgggga 6060 aattctgcat actcggaagg tgtgtctctc tggaattttt aatagtgtgt ttttcattgc 6120 20 16000166 ttgggegcetc ggtttgegta ggggagagge gccaacgege taatgaatcg 6180 agctcactca gagcggtatc cggctgcggc ctcggtegtt actcgetgeg tcgcetcactg 6240 catgtgagca caggaaagaa ggggataacg cacagaatca tacggttatc aaggcggtaa 6300 tttccatagg tgctggegtt aaggccgegt gaaccgtaaa aaaaggccag aaaggccage 5 6360 gtcagaggtg cgacgctcaa tcacaaaaat ctgacgagca ctccgecccce 6420 gcgaaacccg ctctcetgtt ccctecgtgeg cctggaagcet 000901112666 aaagatacca acaggactat 6480 10 cgtggcgcett cttcgggaag gectttctcc atacctgtcc cgcttaccgg ccgaccctge 6540 caagctgggc tcgttcgetc tcggtgtagg gtatctcagt cacgcetgtag tctcatagcet 6600 ctatcgtctt tatccggtaa cgctgcgect tcagcccgac aacccceegt tgtgtgcacg 5 6660 taacaggatt cagccactgg ccactggcag cgacttatcg cggtaagaca gagtccaacc 6720 taactacggc agtggtggcc gagttcttga cggtgctaca ggtatgtagg agcagagcga 6780 20 cttcggaaaa agccagttac gctctgctga tggtatctgc gaacagtatt tacactagaa 6840 tttttttgtt gtagcggtgg accaccgctg cggcaaacaa gctcttgatc agagttggta 6900 gatcttttct aagatccttt ggatctcaag cagaaaaaaa agattacgcg tgcaagcagc 6960 catgagatta ggattttggt tcacgttaag gaacgaaaac acgctcagtg acggggtctg 5S 7020 atcaatctaa gaagttttaa aattaaaaat gatcctitta tcttcaccta tcaaaaagga 7080 ggcacctatc taatcagtga taccaatgct gtctgacagt agtaaacttg agtatatatg 7140 10 7182 tc gttgcctgac ttcatccata gtctatttcg tcagcgatct 47 <210> 261 <211>
PRT <212> 15 ‏الإنسان العاقل‎ <213> 47 >400<
Val Ser Leu Thr Leu Phe Val Val Pro Val Trp Met
Gly lle Trp Thr 20
5 1
Gly Gly Val lle Arg Ser Leu lle Leu Pro Ala Ala
Glu Cys Glu Trp 20 5
Ser Ala Val Leu Val GIn Trp Pro 60 Ser His Lys
Ala Arg Gly Arg 35 10
Val Trp GIn Pro His Val Leu Val Gly Gly Cys Val
Ala Ala Thr Leu 60 55 50
Gly Leu Leu lle Val Ser Lys Asn Arg lle Cys His 15
Leu Ser His Arg 75 70 65 80
Val GIn Phe Val GIn Gly Thr Asp Glu Pro His Phe
Phe Ser His Ser 20 90 85 95
Asn Lys Leu Leu Ser Met Asp Tyr Leu Pro His Pro
Arg Leu Phe Arg 105 100 110
Leu Leu Met Leu Asp His Ser Ser Asp Asp Gly Pro 5
Glu Ser Leu Arg 120 115 125
Asp Met Val Lys Val Ala Asp Thr Leu Glu Ala Pro
Gin Thr Pro Leu 10 140 135 130
Gly Ser Ala Tyr Cys Thr Thr Gly Leu Ala Pro Glu lle Ser Gly Trp 155 150 145 5 160
Gln Leu Lys Lys Pro Thr Leu Phe Glu Glu Pro Glu
Leu Asp Val Cys 170 165 175 20
His Val GIn Ala Cys Val Asp Asn Ser lle Val His
Val Lys GIn Pro
185 180 190
Gly Thr Trp Arg Gly Ala Cys Leu Met Phe Lys Thr
Thr Ser Lys Gly 200 195 5 205
Asn Cys Val Leu Pro Gly Gly Ser Asp Gly Ser Cys
Gln Leu Val Gly 220 215 210
Leu Ala Cys Pro Glu Ser Gly Trp Ser Thr lle Gly
Pro Arg Glu Pro 235 230 225 240
Trp Lys Arg Tyr His Val Val Lys Thr Tyr Leu Ser 15
Thr Asp Lys lle 250 245 255
Pro Asn Ala Val lle 260
48 <210> 123 <211>
PRT <212> ‏الإنسان العاقل‎ <213> 5 48 >400<
Gly Ala Met Leu Leu Ala Leu Leu Val Ala Lys Met
Gin Leu Ala Leu 5 1 10
Ala Lys Cys Ser Tyr Cys Leu Leu Ala Thr Gly Pro
Asn Ser Val Gin 20 15
Leu Gin Thr Cys Asn Glu Val GIn Leu Cys Asp Glu
Cys GIn Glu Gly 35
Thr Leu Leu Gly Val Ala Arg lle Arg Ala Thr Trp 20
Lys Ser lle Val
60 55 50
Asp GIn Ser Asp Asp Val Cys Asn Leu Ser Cys Gly
Gly Val Tyr Tyr 75 70 65 5 80
Cys Leu Asp Thr Asp Cys Cys Thr lle Asn Lys Lys
Gly Ser Ala Asn 90 85 95 10
Ala Leu lle Ala Ala Ala Pro GIn Leu Ala His Ala
Ala Pro Leu Leu 105 100 110
Leu Gin Gly Pro Gly Trp Leu Leu Leu Gly Leu 15 120 115 49 <210> 20 24 <211>
‎DNA <212>‏ >213< ترتيب اصطناعي >220< >223< بنية تخليقية <400> 49 1و1و1 | ‎ gtegttttgt‏ اوه 24 >210< 50 >211< 21 ‎DNA <212>‏ >213< ترتيب اصطناعي 5 >220< 72> بنية تخليقية <400> 50 ‎t tcggtgcttt tcgtegtttt‏ 21
51 >210< 21 >211<
DNA <212> ‏صطناعي‎ f ‏ترتيب‎ <213> 5 >220< <223> بنية تخليقية 51 <400> 10 21 t tcggtcgttt tcgtegtttt

Claims (1)

  1. عناصر الحماية
    1- جسم مضاد معارض معزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ يرتبط ‎diay‏ خاصة مع ‎PD-1‏ ويشمل:
    منطقة متغيرة لسلسلة ثقيلة ‎Jodi (VH)‏ منطقة تحديد تكميلية ‎VH‏ واحدة ‎¢((CDR1)‏ ‎VH CDR3 5 «VH CDR2‏ من ‎VH‏ لها ترتيب الحمض الأميني المنتقى من المجموعة المتكونة
    من تعريف الترتيب رقم: 3؛ تعريف الترتيب رقم: 4؛ تعريف الترتيب رقم: 5؛ وتعريف الترتيب
    رقم: 6؛ و
    منطقة متغيرة لسلسلة خفيفة (ا/ا) تشمل 00041 ‎VL CDR3 4 «VL CDR2 VL‏ من الا لها ترتيب الحمض الأميني المنتقى من المجموعة المتكونة من تعريف الترتيب رقم: 2؛ تعريف الترتيب رقم: 7؛ تعريف الترتيب رقم: 8؛ وتعريف الترتيب رقم: 9.
    0 2- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية 1 حيث يشتمل الجسم المضاد على 6011 ‎VH‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: 13 14 أو 15( ‎VH CDR2‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: ¢16 17« 24 25« 27« 28« أو 35( ‎VH CDR3‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: ¢18 23 أو 26« 6041 ‎VL‏ مشتملة على ترتيب
    5 الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 10« 22 أو 30 ‎VL CDR2‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 11 أو 20؛ و6053 ‎VL‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 12؛ 21 أو 31 .
    3- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية 1 حيث يشتمل الجسم المضاد على ‎VH‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف
    0 الترتيب رقم: 3 4؛ 5؛ أو 6.
    4- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية 3 حيث يشتمل الجسم المضاد على أ/ا مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 2( 7 8؛ أو 9.
    5- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية
    5 1 حيث يشتمل الجسم المضاد على ‎VH‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف
    الترتيب رقم: 3 4 5؛ أو 6 وا/ا مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 2( 7 8؛ أو 9. 6- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية 1 حيث يشتمل الجسم المضاد على سلسلة ثقيلة تشمل ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 29 أو 38 وسلسلة خفيفة تشمل ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 39. 7- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية
    1. حيث يشتمل الجسم المضاد على منطقة ثابتة. 8- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية 0 7 حيث يكون للجسم المضاد نظير ينتقى من المجموعة المتكونة من 62واء 628واء 64وا J1gG4Ac ‏و5228‎ 1gG4Ab 5226 ‏مفكقولا 5228 4قوا‎ (gG4Ab 9- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ من عنصر الحماية 19G4 52280 ‏حيث تكون المنطقة الثابتة هي‎ TF 0- الجسم المضاد المعارض المعزول ‎(isolated antagonist antibody)‏ عنصر الحماية 5 1 حيث يحدد كل ‎CDR‏ من الجسم المضاد طبقا لتعريف ‎(Kabat‏ تعريف ‎Chothia‏ أو اتحاد من
    .CDR ‏من‎ Chothia ‏وتعريف‎ Kabat ‏تعريف‎ 1- جسم مضاد ضد 10-1 معزول؛ حيث يشتمل الجسم المضاد على 01041 ‎VH‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: ¢13 ‎VH CDR2‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني من تعريف الترتيب رقم: 17؛ 60143 ‎VH‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح 0 في تعريف الترتيب رقم: 23« 60141 ‎VL‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 10 0142© ‎VL‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 20 ‎VL CDR3‏ مشتملة على ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 21 2- الجسم المضاد المعزول من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 حيث يعزز الجسم 5 المضاد إفراز ‎IFNy‏ و/أو ‎TNF‏ من خلايا 1. 3- الجسم المضاد المعزول من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 حيث يعزز الجسم
    المضاد انقسام خلايا 1.
    4- الجسم المضاد المعزول من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11؛ حيث يثبط الجسم
    المضاد نمو الورم.
    5- الجسم المضاد المعزول من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11؛ حيث يربط الجسم المضاد 00-1 بشري و 00-1 فأري.
    6- الجسم المضاد المعزول من عنصر الحماية 15؛ حيث يريط الجسم المضاد 00-1 بشري
    بانجذابية قدرها 0.73 نانوجزيئي جرامي عند 25 "مئوية مقاسة بواسطة رئين بلازمون سطح.
    7- خط خلية معزول ‎(isolated cell line)‏ ينتج الجسم المضاد من أي واحد من عناصر الحماية
    1 إلى 11.
    0 18- حمض نووي معزول ‎(isolated nucleic acid)‏ يشفر الجسم المضاد من أي واحد من
    عناصر الحماية 1 إلى 11.
    9- ناقل ‎Joly (recombinant expression vector) lic lela)‏ الحمض النووي ‎(Nucleic acid)‏ من عنصر الحماية 18
    0- خلية ‎(host cell) Jile‏ تشمل ناقل الإظهار من عنصر الحماية 19
    5 21- ورم هجين ‎(hybridoma)‏ قادر على إنتاج الجسم المضاد من أي ‎daly‏ من عناصر الحماية 1 إلى 11.
    2- طريقة إنتاج جسم مضاد معارض ضد 00-1 تشتمل الطريقة على: زراعة خط خلية الذي ينتج بصورة تخليقية الجسم المضاد من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 تحت شروط حيث يتم إنتاج الجسم المضاد؛ ويتم استعادة الجسم المضاد.
    0 23- طريقة إنتاج جسم مضاد معارض ضد 010-1؛ تشتمل الطريقة على: زراعة خط خلية يشمل حمض نووي ‎(nucleic acid)‏ يشفر جسم مضاد مشتمل على سلسلة ‎Abd‏ تشمل ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 29 أو 38 وسلسلة خفيفة تشمل ترتيب الحمض الأميني الموضح في تعريف الترتيب رقم: 39 تحت شروط ‎Cus‏ يتم إنتاج الجسم المضاد؛ ويتم استعادة الجسم المضاد.
    5 24- الطريقة من عنصر الحماية 23؛ حيث يتم تشفير السلاسل الثقيلة والخفيفة للجسم المضاد على الأوساط الناقلة المنفصلة.
    5- الطريقة من عنصر الحماية 23؛ حيث يتم تشفير السلاسل الثقيلة والخفيفة للجسم المضاد على نفس الوسط الناقل. 6- تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ تشمل الجسم المضاد من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 ومادة حاملة مقبولة دوائيا ‎(pharmaceutically acceptable‏
    .carrier) 5 7- مجموعة لمعالجة سرطان تشمل تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ من عنصر الحماية 26. 8- الجسم المضاد ضد 00-1 من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11( أو تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ من عنصر الحماية 26 للإستخدام في معالجة السرطان في 0 فرد في احتياج لهذا تشمل إعطاء كمية مؤثرة من الجسم المضاد ضد 00-1 إلى الفرد بحيث يتم ‏تخفيف عرض واحد أو أكثر مصاحب للسرطان في الفرد. ‏9- الجسم المضاد ضد 00-1 من عنصر الحماية 28 للإستخدام في ‎dallas‏ السرطان في فرد؛ ‏حيث ينتقى السرطان من المجموعة المتكونة من سرطان معدي؛ ساركوماء لمفوماء لمفوما ‎Hodgkin‏ لوكيمياء سرطان الرأس ‎dilly‏ سرطان الرأس والرقبة لخلية حرشفية؛ سرطان صعتري؛ سرطان ظهاري؛ سرطان لعابي؛» سرطان ‎ASH‏ سرطان المعدة؛ سرطان الغدة الدرقية» سرطان الرئة؛ ‏سرطان المبيض»؛ سرطان الثدي؛ سرطان ‎(Bliss pull‏ سرطان المرئ؛ سرطان البنكرياس؛ ورم دبقي؛ ‏لوكيميا؛ ورم نقوي متعدد؛ كارسينوما خلية كلوية؛ سرطان المثانة؛ سرطان عنق الرحم؛ كارسينوما ‏مشيمية؛ سرطان القولون؛ سرطان الفم؛ سرطان الجلد؛ وميلانوما. ‏0- الجسم المضاد ضد 00-1 من عنصر الحماية 28 للإستخدام في ‎dallas‏ السرطان في فرد؛ 0 حيث الفرد هو مريض بالغ معالج مسبقا من ميلانوما انبثاثية أو متقدمة موضعيا؛ سرطان رقبة ورأس ‏لخلية حرشفية ‎((SCHNC) (squamous cell head and neck cancer)‏ كارسينوما مبيضء ‏ساركوماء أو لمفومة ‎Hodgkin‏ تقليدية ‎(CHL) (classic Hodgkin's Lymphoma)‏ معاندة أو ‏متراجعة. ‏1- الجسم المضاد ضد 00-1 من عنصر الحماية 28 للإستخدام في ‎dallas‏ السرطان في فرد؛ 5 حيث يعطى الجسم المضاد ضد 10-1 عند جرعة حوالي 0.5 مجم/ كجم»؛ حوالي 1 مجم/ كجم؛ ‏حوالي 3 مجم/ كجم؛ أو حوالي 10 مجم/ كجم.
    2- الجسم المضاد ضد 10-1 من عنصر الحماية 28 للإستخدام في معالجة السرطان في 08( حيث يعطى الجسم المضاد ضد 00-1 مرة واحدة كل 7 14( 21؛ أو 28 يوم. 3- الجسم المضاد ضد 10-1 من عنصر الحماية 28 للإستخدام في معالجة السرطان في 28( حيث يعطى الجسم المضاد ضد 50-1 في الوريد أو تحت الجلد. 55 34- الجسم المضاد ضد 10-1 من عنصر الحماية 28 للإستخدام في معالجة السرطان في 28( حيث تشتمل الطريقة إضافيا على إعطاء كمية مؤثرة من عامل علاجي ثاني. 5- الجسم المضاد ضد 10-1 من عنصر الحماية 34 للإستخدام في معالجة السرطان في 28( حيث ينتقى العامل العلاجي الثاني من المجموعة المتكونة من جسم مضاد ضد 84ا1)؛ جسم مضاد ضد 4-188؛ معارض ‎PD-1‏ ثاني؛ جسم مضاد ضد ‎(PD-L1‏ جسم مضاد ضد 110/3 0 جسم مضاد ضد ‎(LAGS‏ جسم مضاد ضد ‎(TIGIT‏ جسم مضاد ضد 076440؛ جسم مضاد ضد ‎6١1‏ ؛ مثبط ‎ALK Li tyrosine kinase‏ 6- الجسم المضاد ضد 10-1 من عنصر الحماية 35 للإستخدام في معالجة السرطان في 28( حيث يكون مقبط ‎tyrosine kinase‏ عبارة عن ‎axitinib‏ أى ‎.palbociclib‏ ‏7- الجسم المضاد ضد 10-1 من عنصر الحماية 35 للإستخدام في معالجة السرطان في 28( حيث ‎ALK Lidl‏ هو ‎sunitinib‏ أو ‎.crizotinib‏ ‏8- جسم مضاد ضد 00-1 من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 أو التركيبة الدوائية من عنصر الحماية 26 للإستخدام من أجل معالجة سرطان في كائن بحاجة لذلك؛ تشمل الطريقة إعطاء كائن (1) كمية مؤثرة من جسم مضاد ضد 00-1 من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 أو تركيبة دوائية ‎(Pharmaceutical composition)‏ من عنصر الحماية 26؛ و )2( كمية مؤثرة من لقاح قادر على حث استجابة مناعية ضد خلايا السرطان. 9- جسم مضاد ضد 00-1 من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 أو التركيبة الدوائية من عنصر الحماية 26 للإستخدام من أجل حث استمناع أو تأثير علاجي للقاح يعطى إلى كائن من أجل معالجة سرطان؛ يشمل إعطاء الكائن الذي يتلقى اللقاح كمية مؤثرة من جسم مضاد ضد -00م 1 من أي واحد من عناصر الحماية 1 إلى 11 أو تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical‏ ‎composition) 5‏ من عنصر الحماية 26. 0- جسم المضاد ضد 00-1 من عنصر الحماية 38 أو 39 للإستخدام في معالجة السرطان
    في فرد؛ حيث ينتفى السرطان من المجموعة المتكونة من سرطان ثدي؛ سرطان معدي؛ سرطان كبد؛ سرطان رئة؛ سرطان مبيض؛ سرطان بنكرياس؛ سرطان ‎(Bling yy‏ وسرطان قولون ومستقيم. 1- جسم المضاد ضد 00-1 من عنصر الحماية 38 أو 39 للإستخدام في معالجة السرطان في ‎cad‏ تشمل إضافيا إعطاء كائن كمية مؤثرة من مادة ضابطة مناعية أخرى واحدة أو أكثر. 42- جسم المضاد ضد 00-1 من عنصر الحماية 41 للإستخدام في معالجة السرطان في فرد؛ حيث تنتقى المواد الضابطة المناعية الأخرى من المجموعة المتكونة من مثبط مستقبل ‎kinase‏ ‏بروتين» معارض 011-4؛ معضد ‎«CD40‏ ومعضد 119.
    0 ‏©-مقارن‎ ‏رفم‎ -© mABTS fy ‏با ا ب‎ mAL7-AAA] Your 3 ‏م ا‎ 34 PR ‏ينا‎ od ‏جب‎ ‎3 Pitesti CT ‏ا‎ ‏حصي‎ FAP i 3 ay JN x JN 0" 1 ‏نا‎ ITT REIL.
    T 7 a J I « ‏ا‎ 0 ‏سيب ال‎ OT TREE TT So 2 ٠ “8.1 1 J = RN JN Jha te ‏ف ف ا‎ 2. ‏أيام ما بعد الازدراع‎ )أ(١ ‏شكل‎
    مز مفارن ‎Ts ny‏ ‎mALIS‏ ‎MALT -©-‏ اي اال ال ‎TY oi‏ 2 ب ‎Toe {he AN‏ 2 جاجد عله سا ذا قلا ا لأ ‎MER‏ 3 ره 2 ‎LTT YE‏ ~ ‎١‏ دتو ‎R!‏ ‏= 2 "> ىا اه ‎H H §‏ : 1" * 1 ‎i 5 Lg ¥ x‏ * 3 صقر أيام مأ يعد | لازدراع ‎(ro‏
    ‎OMe‏ ل ‎MAD 15‏ ‎MADT7-@-‏ ادا ا ‎ww‏ "0 هون د ‎OOO‏ << + ا ل ص يا 3 ‎vo] BE A + ٠. 1 : T‏ 1 ‎$a | ad:‏ ‎T 1 by |‏ لب 3 ‎k kd ¥ * v 2 $ ٠‏ صفر } أيام ما بعد الازدراع شكل ١(ج)‏ -(- مفارن ‎‘oo‏ ‏خاب ‎MAL 1S‏ ري اطي ‎Rr‏ 3 الدج << ان ‎i‏ ‎x , 2 . mALT‏ حي 02 ‎T‏ © 8 10 ال و انا سا ايا اي ا ‎Gites. XL‏ نا | 4 ‎SS‏ 1
    ‎NN. i .‏ 3 & ذل إْ ب ‎Yoo hy 3 3 :‏ ‎v 5 N 0‏ * و ‎he ١‏ أيام ما بعد الازدراع شكل )3(
    م مقارن
    ‎١ 7‏ مجم/ كجم
    ‎8 ames Ya A
    ‎To “¥ ‏جم 0 كجم‎ HE ‏بطق‎ = " a ‏ا‎ pr =" 1 T T LRN » ‏يا ال اتاد‎ (LN . BE vg OO = ‏أ‎ ¥ 1 = a ‏يب‎ L 1 0 | ha A to ) = Too i ‏زر‎ ‎4 Yo he ho Saas ٠ ‏ل‎ Ta ‏أيام ما بعد الازدراع‎ )ه(١ ‏شكل‎ mAD7 XY Oa Foy C 1 Veo - ‏ع‎ ‎3 ‏مشو‎ ‎3 CY ‏و‎ 0 1 ‏و و‎ ae ‏م ض‎ >“ 8 © ‏ام‎ ' ‏الم‎ - . : SE ; (RIN Ay, Ty, ‘ 1. € yy Say ‏جرامي)‎ (Sing Soe) ‏تركيز الأجسام المضادة‎ (hr ‏شكل‎ mAb7 C1 3 #* * Xx ‏الله‎ ‎= | 0 ٠١ 1 | ‏سل م‎ d ‏ض 7 , | ض‎
    1 ‏.2ه‎ Ka 9| Yl BY ww wr we ~ Si HE FAY ‏ذا‎ we ie = Aad ‘ ey « fa 3 + ¥. 3 R ‏الب‎ ٠ ‏تركيز ا لأجسام المضادة (ميكروجزيني جرامي)‎ (7 ‏شكل‎
    اج يدج ‎FR‏ + ‎a 3‏ ‎Sx a aad‏ ‎Soe ow ved‏ ‎T‏ | = ‎q‏ : ~ شيم : ملع : $3 ‎yo 2. ١‏ ينها ‎PRE‏ ‎x 08 2‏ ‎ml E 3 ¥‏ * 83 :1 ‎x a x‏ + 3 ® ‎i‏ د ‎N i 5 H‏ : ‎EH] > ¥ HS k i‏ : ‎N x 4 ¥ k 3‏ 5 ‎i H ; i‏ 0 3 د ‎x‏ 3 3 ‎b H k 3 eee‏ 3 2 ‎i k M :‏ 3 5 ‎hy 3 ¥ k 3‏ ¥ ‎hy 3 & 1 3 k 3‏ ¥ ‎hy 3 hy ¥ 3 k 3‏ ¥ ‎hy 3 hy ¥ 3 k 3‏ ¥ ‎x‏ > ‎H § § : ; i‏ 0 0 ‎H i § i 3 i‏ 8 : + ‎H ‘ : ; i‏ ابيب 3 ¥ ‎A N‏ * + ‎i N i H 0 i‏ ‎N 3 by i 3 3 k i‏ % ‎N 3 by i 3 3 k i‏ % ‎i 3 i N : : i‏ : ‎i i i 3 : : i‏ 8 : ‎H by : k i‏ 3 5 ‎N i 3 3} N : E ¥‏ : ‎N i 3 H N 3 E i‏ : ‎i‏ ل : ‎N EH by H by‏ : ‎i by H by : k i‏ : ‎N i H 0 N i ; i‏ : ‎Vogl Hou od : i‏ : ‎ra § 1 8 i i 3 : [ 1 i‏ ‎ver i ¥ 3 1 ُ H i 0 1 3 H 0 H i : H‏ !
    } . . . + - ‎Fr‏ - : [ 123 - : 8 ; 29 <> و9 [ج© #8 ‎ #«‏ !| « [ز ‎a bode +# # hi‏ & § ‎ToC‏
    اج و و ات ‎x a‏ تددج ‎rs‏ ‎POE BE IE A +‏ + $ ‎at o 3 Foon‏ 3
    1 . ‎Tose a 3‏ 3 ‎pe H‏ 3 ‎bing fein 1‏ ‎i 3 Coed‏ ‎rms‏ مجم 3 ‎x‏ 4 1 لب ط 1 ‎H‏ ¥ ‎i — H nts 3‏ ‎i 0 8 i‏ اج و ءلا 3 8 "0 3 1 ‎t) 3} § by‏ ‎ty 3} § by‏ ‎by‏ § }3 ) ‎t) 3} § by‏ ‎ty 3} § by‏ ‎t) 3} § by‏ ‎ty 3} § by‏ ‎t) 3} § by‏ ‎by‏ § }3 1 ‎i 1‏ 1 1 ‎i 1 i i‏ 3 3 8 8 ل تلش سامش همه - ‎IR TU‏ 1 1 مس ملسي ‎EI.‏ “دج ‎You‏ ‎H i i ? 1 1 H 1 i i i t i H !‏ : ‎OF N > k 0 1 1 :ٍ ~ -‏ با ~ : ~ 1 ‎a bode ff & ht [ K mn op oq 1‏ ‎o ; i‏ ‎s‏ 3 ‎so Cs‏
    لاله الهيلة السعودية الملضية الفكرية ا ‎Sued Authority for intallentual Property‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § 8 ‎Ss o‏ + < م ‎SNE‏ اج > عي كي الج ‎TE I UN BE Ca‏ ‎a‏ ةا ‎ww‏ جيثة > ‎Ld Ed H Ed - 2 Ld‏ وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. ‎Ad‏ ‏صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > فهذا ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ v=‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA517381676A 2014-12-09 2017-06-06 Pd-1 أجسام مضادة ضد وطرق استخدامها SA517381676B1 (ar)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462089658P 2014-12-09 2014-12-09
US201562242750P 2015-10-16 2015-10-16
US201562251973P 2015-11-06 2015-11-06

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA517381676B1 true SA517381676B1 (ar) 2021-08-12

Family

ID=54849669

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA517381676A SA517381676B1 (ar) 2014-12-09 2017-06-06 Pd-1 أجسام مضادة ضد وطرق استخدامها

Country Status (26)

Country Link
US (4) US10155037B2 (ar)
EP (2) EP4166572A1 (ar)
JP (1) JP6552621B2 (ar)
KR (1) KR102012113B1 (ar)
CN (1) CN107207593B (ar)
AU (2) AU2015359003B2 (ar)
CA (1) CA2914087A1 (ar)
CO (1) CO2017005738A2 (ar)
DK (1) DK3230319T3 (ar)
ES (1) ES2929721T3 (ar)
HK (1) HK1244492A1 (ar)
HR (1) HRP20221226T1 (ar)
HU (1) HUE060165T2 (ar)
IL (1) IL252280B2 (ar)
MX (1) MX2017007537A (ar)
MY (1) MY193404A (ar)
NZ (1) NZ731735A (ar)
PE (1) PE20171180A1 (ar)
PH (1) PH12017500994A1 (ar)
PL (1) PL3230319T3 (ar)
PT (1) PT3230319T (ar)
RU (1) RU2701797C2 (ar)
SA (1) SA517381676B1 (ar)
SG (1) SG11201703950PA (ar)
TW (1) TWI595006B (ar)
WO (1) WO2016092419A1 (ar)

Families Citing this family (253)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112012030625A2 (pt) 2010-06-03 2017-06-27 Pharmacyclics Inc uso de inibidores de tirosina quinase de bruton (btk)
JP6105578B2 (ja) 2011-07-21 2017-03-29 トレロ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 複素環式プロテインキナーゼ阻害剤
MX2015001081A (es) 2012-07-24 2015-10-14 Pharmacyclics Inc Mutaciones asociadas a resistencia a inhibidores de la tirosina cinasa de bruton (btk).
PT3199552T (pt) * 2012-11-20 2020-03-25 Sanofi Sa Anticorpos anti-ceacam5 e suas utilizações
WO2015048312A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
UA119659C2 (uk) 2013-12-12 2019-07-25 Шанхай Хенжуй Фармасьютикал Ко., Лтд. Антитіло до pd-1, його антигензв'язуючий фрагмент та їхнє медичне застосування
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
ES2899457T3 (es) 2014-02-04 2022-03-11 Pfizer Combinación de un antagonista de PD-1 y un inhibidor de VEGFR para tratar el cáncer
WO2015143400A1 (en) 2014-03-20 2015-09-24 Pharmacyclics, Inc. Phospholipase c gamma 2 and resistance associated mutations
JP6588461B2 (ja) 2014-03-31 2019-10-09 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗血管新生剤及びｏｘ４０結合アゴニストを含む併用療法
LT3148579T (lt) 2014-05-28 2021-05-25 Agenus Inc. Anti-gitr antikūnai ir jų panaudojimo būdai
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
MX2017003227A (es) 2014-09-13 2017-12-04 Novartis Ag Terapias de combinacion de inhibidores de alk.
TWI595006B (zh) * 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
US11352642B2 (en) 2015-01-09 2022-06-07 Etubics Corporation Methods and compositions for combination immunotherapy
MA41414A (fr) * 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
SG11201706918YA (en) 2015-02-26 2017-09-28 Merck Patent Gmbh Pd-1 / pd-l1 inhibitors for the treatment of cancer
MA41866A (fr) 2015-03-31 2018-02-06 Massachusetts Gen Hospital Molécules à auto-assemblage pour l'administration ciblée de médicaments
WO2016172249A1 (en) * 2015-04-20 2016-10-27 Etubics Corporation Methods and compositions for combination immunotherapy
EP3461337A1 (en) 2015-05-06 2019-04-03 Snipr Technologies Limited Altering microbial populations & modifying microbiota
CN108137686B (zh) 2015-05-07 2022-06-17 阿吉纳斯公司 抗ox40抗体及其使用方法
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
US10869924B2 (en) 2015-06-16 2020-12-22 Merck Patent Gmbh PD-L1 antagonist combination treatments
MX2018000621A (es) 2015-07-13 2018-05-11 Cytomx Therapeutics Inc Anticuerpos anti-pd-1, anticuerpos anti-pd-1 activables, y metodos de uso de los mismos.
AU2016293674B2 (en) 2015-07-16 2019-11-21 Bioxcel Therapeutics, Inc. A novel approach for treatment of cancer using immunomodulation
CR20220194A (es) 2015-07-30 2022-06-16 Macrogenics Inc Moléculas de unión a pd-1 y métodos de uso de las mismas
CA2993432A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Agenus Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
EP3355920A4 (en) 2015-09-29 2019-05-15 Celgene Corporation PD-1 BINDING PROTEINS AND METHOD OF USE THEREOF
RU2746409C1 (ru) * 2015-10-02 2021-04-13 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к pd1 и способы их применения
KR20180053674A (ko) 2015-10-02 2018-05-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 공자극 tnf 수용체에 특이적인 이중특이성 항체
US12030942B2 (en) 2015-10-02 2024-07-09 Les Laboratoires Servier Anti-PD-1 antibodies and compositions
CR20180161A (es) 2015-10-02 2018-05-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos para pd1 y tim3
CR20180234A (es) 2015-11-03 2018-09-11 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen especificamente a pd-1 y sus usos
US11447557B2 (en) 2015-12-02 2022-09-20 Agenus Inc. Antibodies and methods of use thereof
WO2017096026A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated pd-1 and methods of use thereof
KR102424513B1 (ko) 2015-12-14 2022-07-25 마크로제닉스, 인크. Pd-1 및 ctla-4과의 면역반응성을 가진 이중특이적 분자, 및 이것의 사용 방법
CU20180088A7 (es) 2016-02-17 2019-05-03 Novartis Ag Anticuerpos anti tgfbeta 2
WO2017165125A1 (en) * 2016-03-24 2017-09-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Use of a pd-1 antagonist and an anti-ccr2 antibody in the treatment of cancer
TW202307002A (zh) 2016-05-18 2023-02-16 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 抗lag3抗體分子、其製造方法及其用於癌症治療之用途
KR102366813B1 (ko) 2016-05-27 2022-02-24 아게누스 인코포레이티드 항-tim-3 항체 및 이의 사용 방법
GB201609811D0 (en) 2016-06-05 2016-07-20 Snipr Technologies Ltd Methods, cells, systems, arrays, RNA and kits
US11472856B2 (en) 2016-06-13 2022-10-18 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
CA3026474A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
RU2656181C1 (ru) * 2016-07-13 2018-05-31 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Анти-pd-1-антитела, способ их получения и способ применения
EP3487883B1 (en) 2016-07-20 2023-01-04 Stcube, Inc. Methods of cancer treatment and therapy using a combination of antibodies that bind glycosylated pd-l1
WO2018027524A1 (en) * 2016-08-09 2018-02-15 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibody formulation
US11364304B2 (en) 2016-08-25 2022-06-21 Northwestern University Crosslinked micellar spherical nucleic acids
KR102391338B1 (ko) * 2016-09-16 2022-04-26 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항-pd-1 항체
CN109789206A (zh) * 2016-09-16 2019-05-21 生态有限公司 抗体和检查点抑制剂的组合疗法
AU2017329024A1 (en) 2016-09-19 2019-03-21 Celgene Corporation Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins
US10766958B2 (en) 2016-09-19 2020-09-08 Celgene Corporation Methods of treating vitiligo using PD-1 binding antibodies
RU2757316C2 (ru) 2016-09-21 2021-10-13 СиСТОНЕ ФАРМАСЬЮТИКАЛС Новые моноклональные антитела к белку программируемой смерти 1(pd-1)
MX2019003755A (es) 2016-10-06 2019-08-12 Pfizer Regimen de dosificacion de avelumab para el tratamiento de cancer.
SG10201912663YA (en) 2016-10-11 2020-03-30 Agenus Inc Anti-lag-3 antibodies and methods of use thereof
AU2017359467A1 (en) 2016-11-09 2019-05-02 Agenus Inc. Anti-OX40 antibodies, anti-GITR antibodies, and methods of use thereof
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
CN110214153B (zh) * 2016-11-18 2024-03-29 法国施维雅药厂 抗pd-1抗体及组合物
KR102603681B1 (ko) 2016-12-07 2023-11-17 아게누스 인코포레이티드 항체 및 이의 사용방법
JP7252627B2 (ja) * 2016-12-15 2023-04-05 デューク ユニバーシティ 制御性ｂ１０細胞を枯渇させる抗体および方法並びに免疫チェックポイント阻害剤との併用における使用
EP3559044A4 (en) * 2016-12-23 2020-12-02 REMD Biotherapeutics, Inc. IMMUNOTHERAPY USING ANTIBODIES THAT BINDING PROGRAMMED CELL DEATH 1 (PD-1)
CN113480530A (zh) 2016-12-26 2021-10-08 阿里根公司 芳香烃受体调节剂
KR102536145B1 (ko) 2017-01-20 2023-05-30 타유 후아시아 바이오테크 메디컬 그룹 컴퍼니 리미티드 항-pd-1 항체 및 이의 용도
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
US20200237874A1 (en) 2017-01-20 2020-07-30 Novartis Ag Combination therapy for the treatment of cancer
TWI788321B (zh) 2017-01-20 2023-01-01 美商健臻公司 骨靶向抗體
EP3571227A1 (en) 2017-01-20 2019-11-27 Sanofi Anti-tgf-beta antibodies and their use
KR20190115053A (ko) 2017-02-10 2019-10-10 노파르티스 아게 1-(4-아미노-5-브로모-6-(1h-피라졸-1-일)피리미딘-2-일)-1h-피라졸-4-올 및 암 치료에 있어서의 이의 용도
CN110325209A (zh) 2017-02-24 2019-10-11 宏观基因有限公司 能够结合cd137和肿瘤抗原的双特异性结合分子及其用途
KR20240144261A (ko) 2017-02-28 2024-10-02 사노피 치료적 rna
WO2018162944A1 (en) * 2017-03-04 2018-09-13 Shenzhen Runshin Bioscience Recombinant antibodies to programmed death 1 (pd-1) and uses therefor
RU2758723C2 (ru) * 2017-03-27 2021-11-01 Нэшнл Юниверсити Корпорейшн Хоккайдо Юниверсити Анти-pd-l1 антитело для детекции pd-l1
AU2018246252A1 (en) * 2017-03-29 2019-09-19 Celgene Corporation Formulations comprising PD-1 binding proteins and methods of making thereof
CN110573180B (zh) 2017-03-29 2021-08-17 盐野义制药株式会社 癌症治疗用药物组合物
SG11201909205YA (en) 2017-04-03 2019-11-28 Hoffmann La Roche Immunoconjugates of an anti-pd-1 antibody with a mutant il-2 or with il-15
US20200248183A1 (en) * 2017-04-03 2020-08-06 Subbarao Nallagatla Tlr9-targeted spherical nucleic acids having potent antitumor activity
UA128451C2 (uk) 2017-04-05 2024-07-17 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з pd1 і lag3
SG10201912941PA (en) 2017-04-05 2020-02-27 Symphogen As Combination therapies targeting pd-1, tim-3, and lag-3
JOP20190222A1 (ar) * 2017-04-11 2019-09-24 Zymeworks Inc الأجسام المضادة ثنائية النوعية المضادة لـ pd-l1 والمضادة لـ tim-3
WO2018201090A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Exicure, Inc. Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
US11433131B2 (en) 2017-05-11 2022-09-06 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (SNAs)
AR111760A1 (es) 2017-05-19 2019-08-14 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de tumores sólidos mediante administración intratumoral
JOP20190279A1 (ar) 2017-05-31 2019-11-28 Novartis Ag الصور البلورية من 5-برومو -2، 6-داي (1h-بيرازول -1-يل) بيريميدين -4- أمين وأملاح جديدة
MX2019014577A (es) 2017-06-05 2020-07-29 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen especificamente a pd-1 y metodos de uso.
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
MA49457A (fr) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis Ag Molécules d'anticorps se liant à cd73 et leurs utilisations
TW201904993A (zh) 2017-06-22 2019-02-01 瑞士商諾華公司 IL-1β 結合抗體之用途
US20200172628A1 (en) 2017-06-22 2020-06-04 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CN111050791A (zh) 2017-06-27 2020-04-21 诺华股份有限公司 用于抗tim-3抗体的给药方案及其用途
EP3421494A1 (en) 2017-06-29 2019-01-02 Sanofi Use of isatuximab in combination with an anti-pd-1 antibody
SG11202000197PA (en) 2017-07-11 2020-02-27 Pfizer Immunogenic compositions comprising cea muc1 and tert
US20200172617A1 (en) 2017-07-20 2020-06-04 Novartis Ag Dosage regimens of anti-lag-3 antibodies and uses thereof
US11498966B2 (en) 2017-08-09 2022-11-15 Orionis Biosciences Inc. PD-1 and PD-L1 binding agents
CN118909118A (zh) * 2017-09-07 2024-11-08 奥古斯塔大学研究所公司 程序性细胞死亡蛋白1抗体
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
CA3078806A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Merck Patent Gmbh Combination of a parp inhibitor and a pd-1 axis binding antagonist
EP4177270B1 (en) 2017-10-18 2024-07-31 Forty Seven, Inc. Anti-cd47 agent-based ovarian cancer therapy
US20210047416A1 (en) * 2017-10-18 2021-02-18 Forty Seven, Inc. Treatment of ovarian cancer with anti-cd47 and anti-pd-l1
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
AU2018365800A1 (en) * 2017-11-08 2020-04-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for treating cancer using RHOA dominant negative forms
WO2019094265A1 (en) * 2017-11-10 2019-05-16 Armo Biosciences, Inc. Pd1 polypeptide binding molecules
RU2754131C1 (ru) 2017-11-14 2021-08-27 Пфайзер Инк. Комбинированная терапия ингибитором ezh2
MX2020004756A (es) 2017-11-16 2020-08-20 Novartis Ag Terapias de combinacion.
CN109793892B (zh) * 2017-11-16 2022-07-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗pd-1抗体在制备治疗食管癌的药物中的用途
CN111587249A (zh) 2017-11-20 2020-08-25 阿里根公司 吲哚化合物及其用途
CA3083949A1 (en) 2017-11-30 2020-06-06 Novartis Ag Bcma-targeting chimeric antigen receptor, and uses thereof
WO2019109238A1 (en) * 2017-12-05 2019-06-13 Lyvgen Biopharma Co., Ltd. Anti-cd137 antibodies and uses thereof
TW201938165A (zh) 2017-12-18 2019-10-01 美商輝瑞股份有限公司 治療癌症的方法及組合療法
TW201930591A (zh) 2018-01-08 2019-08-01 瑞士商諾華公司 用於與嵌合抗原受體療法併用之免疫增強rna
WO2019152660A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
EP3752203A1 (en) 2018-02-13 2020-12-23 Novartis AG Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
WO2019161536A1 (en) * 2018-02-23 2019-08-29 Eucure (Beijing) Biopharma Co. , Ltd Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
TWI776024B (zh) 2018-02-28 2022-09-01 美商輝瑞大藥廠 Il-15變體及其用途
CN111565738B (zh) * 2018-02-28 2023-12-26 圆祥生技股份有限公司 结合检查点阻碍物作为目标治疗的双功能性蛋白质
JP7312188B2 (ja) * 2018-03-07 2023-07-20 ファイザー・インク 抗ｐｄ－１抗体組成物
CN108434452A (zh) * 2018-03-13 2018-08-24 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 一种将pd-1抗体和jmjd6联合用于制备抗癌药物的应用
US10760075B2 (en) 2018-04-30 2020-09-01 Snipr Biome Aps Treating and preventing microbial infections
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
JP7054573B2 (ja) * 2018-04-15 2022-04-14 イムヴィラ・カンパニー・リミテッド Ｐｄ－１結合抗体及びその用途
MX2020011684A (es) 2018-05-04 2020-12-10 Merck Patent Gmbh Inhibicion combinada de pd-1/pd-l1, tgfbeta y dna-pk para el tratamiento del cancer.
TWI816396B (zh) 2018-05-23 2023-09-21 美商輝瑞大藥廠 特異性針對gucy2c之抗體及其用途
PL3797121T3 (pl) 2018-05-23 2024-09-23 Pfizer Inc. Przeciwciała swoiste dla CD3 i ich zastosowania
TW202015726A (zh) 2018-05-30 2020-05-01 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CU20200089A7 (es) 2018-06-01 2021-07-02 Novartis Ag Moléculas de unión contra bcma
US20210221908A1 (en) * 2018-06-03 2021-07-22 Lamkap Bio Beta Ltd. Bispecific antibodies against ceacam5 and cd47
US11192877B2 (en) 2018-07-10 2021-12-07 Novartis Ag 3-(5-hydroxy-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
WO2020015722A1 (en) * 2018-07-19 2020-01-23 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anti-pd-1 antibodies, dosages and uses thereof
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
TWI803682B (zh) 2018-08-20 2023-06-01 美商輝瑞股份有限公司 抗－ｇｄｆ１５抗體、組成物及使用方法
AU2019324170A1 (en) 2018-08-23 2021-02-18 Seagen, Inc. Anti-TIGIT antibodies
WO2020041655A1 (en) 2018-08-24 2020-02-27 Sanofi Therapeutic rna for solid tumor cancers
WO2020044252A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Novartis Ag Dosage regimes for anti-m-csf antibodies and uses thereof
WO2020049534A1 (en) 2018-09-07 2020-03-12 Novartis Ag Sting agonist and combination therapy thereof for the treatment of cancer
MX2021002690A (es) 2018-09-07 2021-05-12 Pfizer Anticuerpos anti-avb8 y composiciones y usos de los mismos.
KR20210066837A (ko) 2018-09-26 2021-06-07 메르크 파텐트 게엠베하 암 치료를 위한 pd-1 안타고니스트, atr 억제제 및 백금화제의 조합
JP2022504905A (ja) 2018-10-16 2022-01-13 ノバルティス アーゲー 標的化療法に対する応答を予測するためのバイオマーカーとしての単独の又は免疫マーカーと組み合わせた腫瘍突然変異負荷
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
CN113301961A (zh) * 2018-11-01 2021-08-24 默克专利有限公司 给予抗tim-3抗体的方法
WO2020095184A1 (en) 2018-11-05 2020-05-14 Pfizer Inc. Combinations for treating cancer
US20210386826A1 (en) 2018-11-05 2021-12-16 Pfizer Inc. Combination for Treating Cancer
TW202038943A (zh) 2018-11-19 2020-11-01 美商雅里俊公司 治療癌症之方法
AU2019382505A1 (en) 2018-11-19 2021-05-27 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Anti-PD-1 antibodies and uses thereof
WO2020117988A1 (en) 2018-12-04 2020-06-11 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Cdk9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
EP3666905A1 (en) 2018-12-11 2020-06-17 Sanofi E. coli positive for pks island as marker of positive response to anti-pd1 therapy in colorectal cancer
CN113195538B (zh) * 2018-12-12 2023-03-14 上海药明生物技术有限公司 抗tim-3抗体及其用途
MX2021007392A (es) 2018-12-20 2021-08-24 Novartis Ag Regimen de dosificacion y combinacion farmaceutica que comprende derivados de 3-(1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.
EP3897613A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Novartis AG Use of il-1beta binding antibodies
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
US20220370606A1 (en) 2018-12-21 2022-11-24 Pfizer Inc. Combination Treatments Of Cancer Comprising A TLR Agonist
EP3898675A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Novartis AG Use of il-1 beta antibodies in the treatment or prevention of myelodysplastic syndrome
CN111349162A (zh) * 2018-12-21 2020-06-30 神州细胞工程有限公司 人源化抗pd-1抗体及其用途
WO2020127965A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
KR20210108422A (ko) 2018-12-21 2021-09-02 노파르티스 아게 IL-1β 결합 항체의 용도
WO2020135415A1 (zh) * 2018-12-24 2020-07-02 正大天晴药业集团股份有限公司 抗pd-l1单克隆抗体治疗癌症的用途
WO2020140088A1 (en) * 2018-12-27 2020-07-02 Gigagen, Inc. Anti-pd-1 binding proteins and methods of use thereof
TW202038994A (zh) 2019-01-14 2020-11-01 美商醫格耐免疫治療公司 重組痘瘡病毒及其使用方法
TWI850316B (zh) 2019-01-21 2024-08-01 法商賽諾菲公司 用於晚期實性瘤癌症之治療性rna及抗pd1抗體
CN113395967A (zh) 2019-02-12 2021-09-14 诺华股份有限公司 包含tno155和pd-1抑制剂的药物组合
WO2020167990A1 (en) 2019-02-12 2020-08-20 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Formulations comprising heterocyclic protein kinase inhibitors
WO2020165730A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ignite Immunotherapy, Inc. Recombinant vaccinia virus and methods of use thereof
EA202192019A1 (ru) 2019-02-15 2021-11-02 Новартис Аг Производные 3-(1-оксо-5-(пиперидин-4-ил)изоиндолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона и пути их применения
CA3123519A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
JP7547360B2 (ja) 2019-03-22 2024-09-09 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド Ｐｋｍ２モジュレーターを含む組成物およびそれを使用する処置の方法
MX2021012543A (es) 2019-04-15 2021-12-10 Ariagen Inc Compuestos de indoles quirales y su uso.
US20220213193A1 (en) 2019-05-06 2022-07-07 Brown University Bispecific antibodies against chi3l1 and pd1 with enhanced t cell-mediated cytotoxic effects on tumor cells
CN111973739B (zh) * 2019-05-23 2024-02-13 正大天晴药业集团股份有限公司 抗pd-l1单克隆抗体治疗癌症的用途
AU2020281535A1 (en) 2019-05-24 2022-01-27 Merck Patent Gmbh Combination therapies using CDK inhibitors
JP2022537703A (ja) * 2019-07-03 2022-08-29 オックスフォード バイオセラピューティックス リミテッド 抗体および使用方法
WO2021003417A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Tyrosine kinase non-receptor 1 (tnk1) inhibitors and uses thereof
EP3998081A4 (en) 2019-07-05 2023-07-12 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. TREATMENT OF BLOOD CANCER WITH PD-1/CD3 DUAL SPECIFICITY PROTEIN
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
US20220332825A1 (en) 2019-08-08 2022-10-20 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Bispecific protein
WO2021053559A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 Novartis Ag Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
KR20220066334A (ko) 2019-09-22 2022-05-24 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Lag-3 길항제 요법에 대한 정량적 공간 프로파일링
CN114728946A (zh) 2019-09-25 2022-07-08 辉瑞公司 Sting (干扰素基因刺激剂)的多杂环调节剂
CN114786680A (zh) 2019-10-21 2022-07-22 诺华股份有限公司 Tim-3抑制剂及其用途
US20240301053A1 (en) 2019-10-21 2024-09-12 Novartis Ag Combination therapies with venetoclax and tim-3 inhibitors
KR20220093349A (ko) 2019-11-08 2022-07-05 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 흑색종에 대한 lag-3 길항제 요법
WO2021102343A1 (en) 2019-11-22 2021-05-27 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Solid dose pharmaceutical composition
CN115380041A (zh) 2019-12-12 2022-11-22 伊格奈特免疫疗法公司 变体溶瘤痘苗病毒及其使用方法
EP4077387A1 (en) 2019-12-17 2022-10-26 Pfizer Inc. Antibodies specific for cd47, pd-l1, and uses thereof
CN114845720A (zh) 2019-12-18 2022-08-02 辉瑞公司 使用prmt5抑制剂的每日一次癌症治疗规则
EP4077389A1 (en) 2019-12-20 2022-10-26 Novartis AG Combination of anti tim-3 antibody mbg453 and anti tgf-beta antibody nis793, with or without decitabine or the anti pd-1 antibody spartalizumab, for treating myelofibrosis and myelodysplastic syndrome
CA3167002A1 (en) 2020-01-09 2021-07-15 Pfizer Inc. Recombinant vaccinia virus
TW202140037A (zh) 2020-01-17 2021-11-01 瑞士商諾華公司 組合療法
EP4110341A2 (en) 2020-02-28 2023-01-04 Novartis AG A triple pharmaceutical combination comprising dabrafenib, an erk inhibitor and a raf inhibitor
CN115529816A (zh) 2020-03-03 2022-12-27 阵列生物制药公司 使用(R)-N-(3-氟-4-((3-((1-羟基丙-2-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3-(4-氟苯基)-1-异丙基-2,4-二氧-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-甲酰胺治疗癌症的方法
EP4118105A2 (en) 2020-03-09 2023-01-18 Pfizer Inc. Cd80-fc fusion protein and uses thereof
AU2021260982B2 (en) 2020-04-21 2024-03-28 Novartis Ag Dosing regimen for treating a disease modulated by CSF-1R
JP2023524854A (ja) 2020-05-13 2023-06-13 ファイザー・インク がんを処置するための方法、治療、および使用
CN111607565A (zh) * 2020-06-04 2020-09-01 河南大学 一种北平顶猴t细胞的体外扩增方法
AR122644A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Onxeo Nuevas moléculas de ácido nucleico conjugado y sus usos
MX2022015852A (es) 2020-06-23 2023-01-24 Novartis Ag Regimen de dosificacion que comprende derivados de 3-(1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.
WO2022003554A1 (en) 2020-07-01 2022-01-06 Pfizer Inc. Biomarkers for pd-1 axis binding antagonist therapy
AU2021306613A1 (en) 2020-07-07 2023-02-02 BioNTech SE Therapeutic RNA for HPV-positive cancer
WO2022009157A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Novartis Ag Lhc165 and spartalizumab combinations for treating solid tumors
IL299873A (en) 2020-07-14 2023-03-01 Pfizer Recombinant VACCINIA virus
AU2021308586A1 (en) 2020-07-17 2023-03-02 Pfizer Inc. Therapeutic antibodies and their uses
JP2023536164A (ja) 2020-08-03 2023-08-23 ノバルティス アーゲー ヘテロアリール置換３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン誘導体及びその使用
JP2023540255A (ja) 2020-08-28 2023-09-22 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 肝細胞癌のためのｌａｇ－３アンタゴニスト療法
WO2022043558A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
JP2023540795A (ja) 2020-09-14 2023-09-26 ファイザー・インク がんを処置するための方法、治療、および使用
MX2023004493A (es) 2020-10-23 2023-05-10 Bristol Myers Squibb Co Terapia de agonista del gen-3 de activacion del linfocito (lag-3) para cancer de pulmon.
JP2023548529A (ja) 2020-11-06 2023-11-17 ノバルティス アーゲー Ｃｄ１９結合分子及びその使用
US20220168293A1 (en) 2020-12-02 2022-06-02 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
WO2022130206A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Pfizer Inc. TGFβr1 INHIBITOR COMBINATION THERAPIES
US11883432B2 (en) 2020-12-18 2024-01-30 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022153161A1 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Pfizer Inc. Treatment of cancer using a prmt5 inhibitor
US20240141060A1 (en) 2021-01-29 2024-05-02 Novartis Ag Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof
EP4308935A1 (en) 2021-03-18 2024-01-24 Novartis AG Biomarkers for cancer and methods of use thereof
US11964978B2 (en) 2021-03-18 2024-04-23 Pfizer Inc. Modulators of STING (stimulator of interferon genes)
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
EP4313127A1 (en) 2021-03-29 2024-02-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
MX2023012060A (es) 2021-04-13 2024-01-22 Nuvalent Inc Heterociclos con sustitucion amino para tratar canceres con mutaciones de egfr.
US20240228659A1 (en) 2021-04-14 2024-07-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method to improve nk cells cytotoxicity
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
CN117337300A (zh) * 2021-05-21 2024-01-02 百奥泰生物制药股份有限公司 抗pd-1抗体的应用
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
AU2022294100A1 (en) 2021-06-18 2024-02-01 Genzyme Corporation Anti-tgf-beta antibody formulations and their use
WO2023274275A1 (zh) * 2021-07-01 2023-01-05 天津立博美华基因科技有限责任公司 药物组合及其用途
CA3225254A1 (en) 2021-07-13 2023-01-19 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
WO2023057882A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Pfizer Inc. Combinations of azalactam compounds with a pd-1 axis binding antagonist for the treatment of cancer
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
CA3224890A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
WO2023079430A1 (en) 2021-11-02 2023-05-11 Pfizer Inc. Methods of treating mitochondrial myopathies using anti-gdf15 antibodies
WO2023079428A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Pfizer Inc. Combination therapies using tlr7/8 agonist
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
CA3240096A1 (en) 2021-11-12 2023-05-19 Novartis Ag Combination therapy for treating lung cancer
WO2023111203A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
MX2024010310A (es) 2022-02-25 2024-08-28 Bristol Myers Squibb Co Terapia de combinacion para carcinoma colorrectal.
IL315265A (en) 2022-03-03 2024-10-01 Pfizer Multiple antibodies and their uses
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023218320A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Pfizer Inc. Anti-lymphotoxin beta receptor antibodies and methods of use thereof
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2023242769A1 (en) 2022-06-17 2023-12-21 Pfizer Inc. Il-12 variants, anti-pd1 antibodies, fusion proteins, and uses thereof
GB202209518D0 (en) 2022-06-29 2022-08-10 Snipr Biome Aps Treating & preventing E coli infections
WO2024115725A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 BioNTech SE Multispecific antibody against cd40 and cd137 in combination therapy with anti-pd1 ab and chemotherapy
WO2024126457A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Astellas Pharma Europe Bv Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and immune checkpoint inhibitors
WO2024137776A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for lung cancer
WO2024160721A1 (en) 2023-01-30 2024-08-08 Kymab Limited Antibodies

Family Cites Families (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4754065A (en) 1984-12-18 1988-06-28 Cetus Corporation Precursor to nucleic acid probe
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4777127A (en) 1985-09-30 1988-10-11 Labsystems Oy Human retrovirus-related products and methods of diagnosing and treating conditions associated with said retrovirus
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
GB8702816D0 (en) 1987-02-07 1987-03-11 Al Sumidaie A M K Obtaining retrovirus-containing fraction
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5422120A (en) 1988-05-30 1995-06-06 Depotech Corporation Heterovesicular liposomes
AP129A (en) 1988-06-03 1991-04-17 Smithkline Biologicals S A Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
EP0832980B1 (en) 1989-01-23 2002-06-19 Chiron Corporation Recombinant therapies for infection and hyperproliferative disorders
US6673776B1 (en) 1989-03-21 2004-01-06 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate, mammal, fish, bird or human
ATE165516T1 (de) 1989-03-21 1998-05-15 Vical Inc Expression von exogenen polynukleotidsequenzen in wirbeltieren
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
WO1991000360A1 (en) 1989-06-29 1991-01-10 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
EP0845537A1 (en) 1989-08-18 1998-06-03 Chiron Corporation Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
ZA911974B (en) 1990-03-21 1994-08-22 Res Dev Foundation Heterovesicular liposomes
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
KR0149181B1 (ko) 1990-06-29 1998-08-17 데이비드 알, 맥지 형질전환된 미생물에 의한 멜라닌의 제조방법
US5278299A (en) 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
CA2102511A1 (en) 1991-05-14 1992-11-15 Paul J. Higgins Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
ES2197145T3 (es) 1991-08-20 2004-01-01 The Government Of The Usa As Represented By The Secretary Of The Deptm. Of Health And Human Services Transferencia de genes mediada por adenovirus al gastrointestinal.
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
AU665025B2 (en) 1991-09-23 1995-12-14 Cambridge Antibody Technology Limited Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
WO1993010218A1 (en) 1991-11-14 1993-05-27 The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Vectors including foreign genes and negative selective markers
AU3144193A (en) 1991-11-21 1993-06-15 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
GB9125623D0 (en) 1991-12-02 1992-01-29 Dynal As Cell modification
FR2688514A1 (fr) 1992-03-16 1993-09-17 Centre Nat Rech Scient Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
EP0650370A4 (en) 1992-06-08 1995-11-22 Univ California METHODS AND COMPOSITIONS TARGETED ON SPECIFIC TISSUES.
EP0644946A4 (en) 1992-06-10 1997-03-12 Us Health VECTOR PARTICLES RESISTANT TO HUMAN SERUM INACTIVATION.
GB2269175A (en) 1992-07-31 1994-02-02 Imperial College Retroviral vectors
CA2140280A1 (en) 1992-08-17 1994-03-03 Avi J. Ashkenazi Bispecific immunoadhesins
EP0905253A3 (en) 1992-12-03 2000-11-02 Genzyme Corporation Adenoviral vector deleted of all E4-ORF except ORF6
US5981568A (en) 1993-01-28 1999-11-09 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
ES2188612T3 (es) 1993-04-22 2003-07-01 Skyepharma Inc Liposomas multivesiculares de ciclodextrina para encapsular compuestos farmacologicos y metodos para su uso.
AU687829B2 (en) 1993-06-24 1998-03-05 Advec, Inc. Adenovirus vectors for gene therapy
US6015686A (en) 1993-09-15 2000-01-18 Chiron Viagene, Inc. Eukaryotic layered vector initiation systems
ES2328424T3 (es) 1993-09-15 2009-11-12 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Vectores de alfavirus recombinantes.
PT797676E (pt) 1993-10-25 2006-05-31 Canji Inc Vector adenoviral recombinante e metodos de utilizacao
JP3002702B2 (ja) 1993-11-16 2000-01-24 スカイファーム インコーポレーテッド 活性物質の制御放出を有する小胞
CA2143491C (en) 1994-03-01 2011-02-22 Yasumasa Ishida A novel peptide related to human programmed cell death and dna encoding it
US6436908B1 (en) 1995-05-30 2002-08-20 Duke University Use of exogenous β-adrenergic receptor and β-adrenergic receptor kinase gene constructs to enhance myocardial function
CA2158977A1 (en) 1994-05-09 1995-11-10 James G. Respess Retroviral vectors having a reduced recombination rate
WO1996017072A2 (en) 1994-11-30 1996-06-06 Chiron Viagene, Inc. Recombinant alphavirus vectors
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
WO1997042338A1 (en) 1996-05-06 1997-11-13 Chiron Corporation Crossless retroviral vectors
US6376471B1 (en) 1997-10-10 2002-04-23 Johns Hopkins University Gene delivery compositions and methods
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US20020142374A1 (en) 1998-08-17 2002-10-03 Michael Gallo Generation of modified molecules with increased serum half-lives
EE05627B1 (et) 1998-12-23 2013-02-15 Pfizer Inc. CTLA-4 vastased inimese monoklonaalsed antikehad
AU3734900A (en) 1999-03-09 2000-09-28 University Of Southern California Method of promoting myocyte proliferation and myocardial tissue repair
DK1210428T3 (en) 1999-08-23 2015-06-15 Dana Farber Cancer Inst Inc PD-1, a receptor for B7-4 AND USE THEREOF
DK1212422T3 (da) 1999-08-24 2007-07-02 Medarex Inc Humane CTLA-4-antistoffer og anvendelserne deraf
AU2001239770B2 (en) 2000-02-15 2006-01-05 Pharmacia & Upjohn Company Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
DK2206517T3 (da) 2002-07-03 2023-11-06 Ono Pharmaceutical Co Immunpotentierende sammensætninger omfattende af anti-PD-L1-antistoffer
EP1576014B1 (en) 2002-12-23 2011-06-29 Wyeth LLC Antibodies against pd-1 and uses thereof
NZ540730A (en) 2002-12-24 2010-09-30 Rinat Neuroscience Corp Anti-NGF antibodies and methods using same
EP2270051B1 (en) 2003-01-23 2019-05-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Antibody specific for human PD-1 and CD3
EP1871417B1 (en) 2005-04-15 2013-09-11 Precision Biologics, Inc. Recombinant monoclonal antibodies and corresponding antigens for colon and pancreatic cancers
CA3151350A1 (en) 2005-05-09 2006-11-16 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
AU2006321593B2 (en) 2005-12-07 2012-10-04 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. CTLA-4 antibody dosage escalation regimens
EP1963371A2 (en) * 2005-12-08 2008-09-03 Medarex Inc. Human monoclonal antibodies to o8e
BRPI0720724A2 (pt) * 2006-12-27 2014-04-01 Univ Emory Composições e métodos para o tratamento de infecções e tumores
SI2170959T1 (sl) 2007-06-18 2014-04-30 Merck Sharp & Dohme B.V. Protitelesa proti receptorjem pd-1 za humano programirano smrt
NZ583576A (en) * 2007-09-25 2012-06-29 Abbott Lab Octahydropentalene compounds as chemokine receptor antagonists
ES2545609T3 (es) 2008-08-25 2015-09-14 Amplimmune, Inc. Composiciones de antagonistas de PD-1 y métodos de uso
KR101814408B1 (ko) * 2008-09-26 2018-01-04 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 인간 항-ｐｄ-１, ｐｄ-ｌ１, 및 ｐｄ-ｌ2 항체 및 그의 용도
WO2011110604A1 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Pd-1 antibody
RS57114B1 (sr) * 2010-03-31 2018-06-29 Boehringer Ingelheim Int Anti-cd40 antitela
AR081434A1 (es) * 2010-06-10 2012-08-29 Lilly Co Eli Anticuerpo del peptido relacionado con el gen calcitonina (cgrp), composicion farmaceutica que lo comprende, uso de dicho anticuerpo para preparar un medicamento util para tratar dolor de osteoartritis o migranas y fragmento de union a antigeno de dicho anticuerpo
EP2638061B1 (en) * 2010-11-11 2015-04-22 The University of Hong Kong Soluble pd-1 variants, fusion constructs, and uses thereof
US9220776B2 (en) 2011-03-31 2015-12-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of antibodies to human programmed death receptor PD-1 and related treatments
WO2012145493A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Amplimmune, Inc. Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1
RU2609651C2 (ru) 2012-05-04 2017-02-02 Пфайзер Инк. Простатоассоциированные антигены и иммунотерапевтические схемы на основе вакцин
EP2970473B1 (en) * 2013-03-14 2017-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Combination of dr5 agonist and anti-pd-1 antagonist and methods of use
AU2014259719B2 (en) * 2013-05-02 2019-10-03 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (PD-1)
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
EP3054975A4 (en) 2013-10-11 2017-06-28 Sloan-Kettering Institute for Cancer Research Methods and compositions for regulatory t-cell ablation
PT3062815T (pt) 2013-11-01 2019-03-27 Pfizer Vetores para expressão de antigénios associados à próstata
EP3527587A1 (en) 2013-12-17 2019-08-21 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-l1 binding antagonists
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
TWI595006B (zh) * 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
MX2018000621A (es) * 2015-07-13 2018-05-11 Cytomx Therapeutics Inc Anticuerpos anti-pd-1, anticuerpos anti-pd-1 activables, y metodos de uso de los mismos.

Also Published As

Publication number Publication date
MX2017007537A (es) 2017-10-31
US20200368349A1 (en) 2020-11-26
NZ731735A (en) 2020-04-24
CN107207593B (zh) 2021-06-22
RU2701797C2 (ru) 2019-10-01
PL3230319T3 (pl) 2023-01-16
RU2017118225A3 (ar) 2019-01-11
JP6552621B2 (ja) 2019-07-31
PE20171180A1 (es) 2017-08-22
CO2017005738A2 (es) 2017-10-31
TWI595006B (zh) 2017-08-11
HRP20221226T1 (hr) 2022-12-09
PH12017500994A1 (en) 2017-12-18
IL252280A0 (en) 2017-07-31
EP4166572A1 (en) 2023-04-19
BR112017010762A2 (pt) 2018-02-27
US11338035B2 (en) 2022-05-24
IL252280B2 (en) 2023-06-01
CA2914087A1 (en) 2016-06-09
TW201630936A (zh) 2016-09-01
EP3230319A1 (en) 2017-10-18
US20190083612A1 (en) 2019-03-21
WO2016092419A1 (en) 2016-06-16
HUE060165T2 (hu) 2023-02-28
ES2929721T3 (es) 2022-12-01
US10660953B2 (en) 2020-05-26
EP3230319B8 (en) 2022-10-12
AU2015359003A1 (en) 2017-06-08
PT3230319T (pt) 2022-11-02
AU2019200003A1 (en) 2019-01-24
HK1244492A1 (zh) 2018-08-10
KR20170086662A (ko) 2017-07-26
AU2015359003B2 (en) 2019-01-17
JP2018503365A (ja) 2018-02-08
US20220249657A1 (en) 2022-08-11
US10155037B2 (en) 2018-12-18
MY193404A (en) 2022-10-11
DK3230319T3 (da) 2022-10-17
SG11201703950PA (en) 2017-06-29
RU2017118225A (ru) 2019-01-11
EP3230319B1 (en) 2022-09-07
CN107207593A (zh) 2017-09-26
US20160159905A1 (en) 2016-06-09
KR102012113B1 (ko) 2019-08-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA517381676B1 (ar) Pd-1 أجسام مضادة ضد وطرق استخدامها
RU2742241C2 (ru) Антитела к icos
RU2730665C2 (ru) Связывающие молекулы, специфичные в отношении CD73, и пути их применения
JP6847037B2 (ja) 抗ｃｄ７３抗体とａ２ａ受容体阻害薬とを含む併用治療薬及びその使用
KR20210013165A (ko) GUCY2c에 특이적인 항체 및 이의 용도
KR20180133399A (ko) 인간 폴리오바이러스 수용체(ｐｖｒ)에 특이적인 항체
US20220396627A1 (en) Anti-siglec-9 compositions and methods for modulating myeloid cell inflammatory phenotypes and uses thereof
WO2016133059A1 (ja) Ｆｓｔｌ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤およびその併用剤
JP2021052804A (ja) ケモカイン受容体ｃｃｒ４を標的にするキメラ抗原受容体（ｃａｒ）およびその使用
US20220396632A1 (en) Anti-psgl-1 compositions and methods for modulating myeloid cell infalmmatory phenotypes and uses thereof
US20220251233A1 (en) Anti-cd53 compositions and methods for modulating myeloid cell inflammatory phenotypes and uses thereof
US20220363752A1 (en) Anti-lrrc25 compositions and methods for modulating myeloid cell inflammatory phenotypes and uses thereof
US20220363766A1 (en) Compositions and methods for treating cytotoxic t cell resistant tumors
BR112017010762B1 (pt) Anticorpo antagonista anti-pd-1, composição farmacêutica, kit, seus usos e método de produção de um anticorpo antagonista anti-pd-1