RU2800287C1 - Антибактериальная композиция грамицидина с, способ ее получения и применения - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности и касается новых лекарственных средств на основе грамицидина C. Антибактериальный комплекс состоит из 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина, грамицидина С или его фармацевтически приемлемой соли (в пересчете на грамицидин С), цетилпиридиния хлорида или его моногидрата (в пересчете на цетилпиридиния хлорид) в массовом соотношении 6-100:3:1. Антибактериальная композиция для приготовления раствора для местного или наружного применения выполнена в форме таблетки и содержит в качестве активного начала указанный антибактериальный комплекс и в качестве вспомогательных компонентов маннитол, кросповидон, сорбитол, аспартам и полиэтиленгликоль 4000. Компоненты используются в заявленных количествах. В другом воплощении, представлен способ получения указанной композиции. Указанную композицию применяют для получения антибактериального средства местного или наружного действия в виде водного раствора. Использование группы изобретений обеспечивает получение новой стабильной антибактериальной композиции на основе комплекса грамицидина С, имеющего улучшенную растворимость, а также повысить эффективность антибактериального воздействия при сведении к минимуму токсического действия на организм и микробиоту человека. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.

Description

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности и касается новых лекарственных средств на основе грамицидина C.

Предшествующий уровень техники

Одной из востребованной и эффективной терапии больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями полости рта является использование топических лекарственных средств, при котором сводится к минимуму токсическое действие на организм и микробиоту человека (Карнеева О.В., Дайхес Н.А., Поляков Д.П. Протоколы диагностики и лечения острых тонзиллофарингитов // Русский медицинский журнал. 2015. № 6. С. 307-311).

Пациентам с инфекционно-воспалительными заболеваниями глотки рекомендуют назначение препаратов Граммидин^® нео или Граммидин® с анестетиком нео (Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Мокоян Ж.Т. Место топических антимикробных лекарственных средств в фармакотерапии инфекционно-воспалительных заболеваний глотки. РМЖ. 2017; 23:1739-1743). Активными веществами препарата Граммидин^® нео являются грамицидин С и цетилпиридиния хлорид.

Грамицидин С был впервые получен в СССР в 1942 г. Он представляет собой циклический декапептид, включающий по два остатка аминокислот: L-валина, L-орнитина, L-лейцина, D-фенилаланина и L-пролина. Грамицидин С оказывает антибактериальное действие в отношении широкого спектра грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Известны технические решения, в которых грамицидин С находится в твердой форме, лекарственные препараты с ним выпускаются в виде таблеток для рассасывания. (Патенты РФ №№ 2213558, 2160088, 2590980). Однако грамицидин С практически не растворяется в воде, что снижает его биодоступность, поэтому предложены различные способы повышения его растворимости.

Известна фармацевтическая субстанция на основе грамицидина С, циклодекстрина и хитозана, в которой грамицидин С инкапсулирован в циклодекстрин с последующим образованием полиэлектролитного комплекса с хитозаном (Патент РФ № 2733715). Компоненты находятся в следующих соотношениях в % масс.: грамицидин С (1-31,25), циклодекстрина (2-62,5) и хитозана (6,25-97). Фармацевтическая субстанция имеет пролонгированное действие и повышенную растворимость за счет возможной инкапсуляции наиболее гидрофобной части D-фенилаланина в молекуле грамицидина С. При этом технический эффект, на который направлено данное техническое решение, заключается в расширении средств данного назначения, а точные данные о повышении растворимости не приводятся.

В другой работе показано, что при сравнении химических сдвигов грамицидина С, циклодекстрина и их совместного комплекса, было обнаружено значительное изменение химического значения с 7,91 до 7,69 для протонов аминогруппы L-орнитина в молекуле грамицидина С в комплексе с циклодекстрином (Дранников А. А., Ватлин И. С., Трусова М. Е., Ди Мартино А., Кривощеков С. В., Гурьев А. М., Белоусов М. В. Исследование влияния способа получения комплексов включения грамицидина С и β-циклодекстрина на их технологические показатели. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2022; 11(2) С. 102-108. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2022-11-2-102-108).

Циклодекстрины являются производными крахмала и широко используются в фармацевтической промышленности благодаря своей специфической структуре с полостью, подходящей для включения других молекул. Это специфическое свойство циклодекстринов широко применяется в фармации для изменения высвобождения лекарственного вещества, маскировки негативных органолептических свойств, а также β для улучшения его растворимости в воде (Патент РФ №2099354). Однако циклодекстрины, как природные, такие как α, β, γ, так и различные синтетические производные, такие как гидроксипропилпроизводные β, γ и метилированные β-циклодекстрины, сульфобутиловые эфиры β-циклодекстрина и т.д., отличающиеся по структуре, соответственно, по свойствам и применению, не обеспечивают равнозначное улучшение необходимых свойств для разных фармацевтически активных субстанций.

В частности, было обнаружено, что комплексообразование грамицидина C с β-циклодекстрином увеличивает растворимость лекарственного средства в воде и обеспечивает длительное высвобождение грамицидина C при рН = 4,3 в течение по меньшей мере 48 ч. Однако при более высоком уровне рН высвобождение практически отсутствовало (Drannikov, А. А. (2020). Influence of gramicidin S and [beta]-cyclodextrin complexation techniques on the drug release. Химия и химическая технология в XXI веке: материалы XXI Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых имени выдающихся химиков Л. П. Кулёва и Н. М. Кижнера, посвященной 110-летию со дня рождения профессора А. Г. Стромберга, 21-24 сентября 2020 г., Томский политехнический университет, С. 525-526.).

Недостатком комплекса грамицидина C с β-циклодекстрином является отсутствие высвобождения грамицидина С при pH выше 4,3, что делает его неприменимым практически для всех физиологических сред, в том числе при его растворении в обычной воде с нейтральным pH для полоскания горла.

Известны жидкие лекарственные формы на основе грамицидина С и цетилпиридиния хлорида (патенты РФ №№ 2627423, 2749902). Данные композиции включают в своем составе этанол, что существенно ограничивает их использование водителям автотранспорта, беременным и другим категориям граждан.

Наиболее близким по составу к заявляемой антибактериальной композиции является лекарственный препарат Граммидин^® нео в виде таблеток для рассасывания, обладающий антибактериальным действием, состав которого принят в качестве прототипа (https://www.vidal.ru/drugs/grammidin_neo_20563).

Граммидин^® нео имеет следующий состав веществ в композиции:

грамицидин С дигидрохлорид - 3,20 мг (в пересчете на грамицидин С - 3 мг);

цетилпиридиния хлорида моногидрат - 1,05 мг (в пересчете на цетилпиридиния хлорид - 1 мг);

кремния диоксид коллоидный - 5 мг;

тальк - 60 мг;

ацесульфам калия - 15 мг;

ароматизатор мятный - 25 мг;

сорбитол - 1065,75 мг;

магния стеарат - 25 мг.

Общая масса таблетки составляет 1200 мг.

Данный препарат нашел широкое применение в медицинской практике для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний полости рта и глотки, ангины, фарингита, тонзиллита, пародонтоза, гингивита и стоматита. Граммидин^® нео является комбинированным лекарственным средством, уменьшающим воспаление, оказывающим противомикробное действие, смягчающим неприятные ощущения в горле, облегчающим глотание, при рассасывании вызывает гиперсаливацию, что способствует механическому очищению полости рта и глотки от микроорганизмов.

Настоящее изобретение в отличие от прототипа представляет собой таблетки для приготовления раствора для местного и наружного применения. Замена таблеток для рассасывания на раствор для полоскания рассматривается в качестве эффективной с медицинской и экономической точек зрения превентивной меры при инфекциях верхних дыхательных путей (Sakai M., Shimbo T., Omata K. et al.; Great Cold Investigators-I. Cost-effectiveness of gargling for the prevention of upper respiratory tract infections. BMC Health Serv. Res. 2008; 8: P. 258). При ирригационных процедурах возникает значительная площадь контакта раствора со слизистой оболочкой, создаются благоприятные условия для лучшего местного воздействия (Е.В. Носуля. Полоскание в комплексном лечении тонзиллофарингитов. Терапевтический архив 10, 2014, с. 128-131). При полоскании более эффективно происходит очищение за счет дыхательных движений жидкостью в полости рта, интенсивность которых регулируются самим больным. Также расширяется диапазон применения раствора, который можно применять не только для полоскания горла, но у целей наружного применения в качестве местного антибактериального средства.

Сложностью получения такого раствора является практически отсутствие растворимости грамицидина С в воде. Решением данной проблемы могло бы стать повышение растворимости грамицидина С в воде c pH 5,5 и более.

Задачей заявляемого технического решения является разработка антибактериального комплекса грамицидина С с улучшенной растворимостью и новой стабильной антибактериальной композиции в виде таблеток для приготовления раствора для местного или наружного применения на его основе.

Задача решается тем, что добиться повышенной растворимости грамицидина С в воде удалось включением в матрицу 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина грамицидина С или его фармацевтически приемлемой соли и цетилпиридиния хлорида или его моногидрата, который является поверхностно-активным веществом. Такое сочетание трех компонентов в виде заявленного комплекса грамицидина С позволило повысить его растворимость до степени, достаточной для приготовления эффективного антибактериального раствора для местного или наружного применения.

Грамицидин С и его фармацевтически приемлемые соли оказывают выраженное противомикробное действие в отношении возбудителей инфекционных заболеваний полости рта и глотки. Грамицидин С может использоваться в виде фармацевтически приемлемых солей, например, таких как гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, фосфаты, бензоаты, лактаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, малонаты, салицилаты и др. (RU 2749902 C2). В качестве предпочтительной соли может быть указана соль, представляющая собой дигидрохлорид.

Цетилпиридиния хлорид (цетилпиридиния хлорид моногидрат) - антисептик из группы четвертичных аммониевых оснований, обладает вариабельной противогрибковой активностью, бактерицидным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, эффективен в отношении некоторых вирусов. Цетилпиридиния хлорид оказывает дезинфицирующее действие на слизистую оболочку.

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин представляет собой циклический олигосахарид, молекулы которого по своей форме напоминают тор или полый внутри усеченный конус. Внутри тора гидроксильных групп нет, поэтому внутренняя полость является гидрофобной, а внешняя оболочка - гидрофильной. Неожиданно выбор данного циклодекстрина в сочетании с цетилпиридиния хлоридом позволил преодолеть проблемы связанные с зависимостью растворимости грамицидина С от рН.

Антибактериальный комплекс согласно настоящему изобретению включает 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина, грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль (в пересчете на грамицидин С), цетилпиридиния хлорид или его моногидрат (в пересчете на цетилпиридиния хлорид) в массовых соотношениях 6-100:3:1. Предпочтительное соотношение составляет 25:3:1.

Антибактериальная фармацевтическая композиция, выполненная в виде таблетки для приготовления раствора для местного или наружного применения, включает указанный комплекс и набор фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

Более подробно, антибактериальная фармацевтическая композиция, выполненная в виде таблетки для приготовления раствора для местного или наружного применения, имеет следующий состав:

антибактериальный комплекс 10,00-104,00 мг

маннитол - 230,0-270,0 мг

кросповидон - 30,0-36,0 мг

сорбитол - 29,0-35,0 мг

аспартам - 6,0-10,0 мг;

полиэтиленгликоль 4000 -3,0-5,0 мг.

Таблетки могут дополнительно включать, по крайней мере, один ароматизатор, предпочтительно в количестве - 6-13 мг. Например, по крайней мере, один ароматизатор может быть выбран из группы: малиновый, клубничный, абрикосовый, мятный, грушевый, яблочный, лимонный, коричный и т.п.

Еще одним объектом изобретения является способ получения заявляемой антибактериальной композиции, который проводится в несколько стадий.

На первой стадии берут необходимые навески цетилпиридиния хлорида (или его моногидрата) и 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина, добавляют воду, перемешивают до образования прозрачного раствора, добавляют к нему грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль, перемешивают в течение 40-50 минут до получения прозрачного или слабо опалесцирующего раствора, замораживают полученный раствор и проводят лиофильное высушивание. Образуется комплекс из грамицидина С, цетилпиридиния хлорида и 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина. На данной стадии важен порядок добавления реагентов.

На второй стадии смешивают полученный комплекс с указанными в составе вспомогательными веществами, перемешивают путем встряхивания и далее прессуют в таблетки, предназначенные для получения раствора для местного или наружного применения.

Еще одним объектом изобретения является применение заявляемой антибактериальной композиции как местного или наружного антибактериального средства, заключающееся в растворении антибактериальной композиции в воде и применении раствора по необходимому назначению: ополаскивании горла, протирании мест, требующих дезинфекции и т.п. Полученный раствор может быть использован, например, при ангинах, фарингите, тонзиллите, пародонтозе, гингивите, стоматите и т.п.

Технический результат изобретения заключается в создании новой стабильной антибактериальной композиции для приготовления раствора для местного и наружного применения на основе комплекса грамицидина С, имеющего улучшенную растворимость, что расширяет арсенал доступных антибактериальных лекарственных средств для наружного применения, в уменьшении количества необходимых вспомогательных веществ более чем в 3 раза, в новом способе получения антибактериальной композиции, в применении антибактериальной композиции в виде раствора, которой позволяет обработать значительную площадь слизистой оболочки и наружных поверхностей, без излишнего эффекта саливации, более эффективно очищать полость рта за счет дыхательных движений, интенсивность которых регулируются самим больным, свести к минимуму токсическое действие на организм и микробиоту человека за счет отсутствия приема раствора внутрь организма.

Была изучена стабильность заявляемой антибактериальной композиции в тесте ускоренного хранения, при температуре 40±2°С и относительной влажности воздуха 75±5% в трех видах упаковки: стрип из пленки буфлен (PAP/PE/ALU/PE), стрип из пленки ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ, блистеры белые (PVC/ALU). Показано, что в пленке буфлен (PAP/PE/ALU/PE) и пленке ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ заявляемая фармацевтическая композиция выдерживает данный тест в течение 6 мес. без потери активных компонентов, что соответствует двум годам хранения в обычных условиях (Таблица 2).

Была изучена антибактериальная активность заявляемой антибактериальной композиции in vitro. Было установлено, что заявляемая фармацевтическая обладает антимикробной активностью в отношении всех исследованных штаммов Streptococcus pneumoniaе и Staphylococcus aureus. Вспомогательные вещества в составе композиции не препятствовали высвобождению действующих веществ грамицидина С и цетилпиридиния хлорида и не влияли на их бактерицидное действие. Полученные значения МПК и МБК, в подавляющем большинстве случаев различающиеся не более, чем в 4 раза для разных штаммов (Таблица 3), демонстрируют наличие у антибактериальной композиции высокой бактерицидной активности в отношении типичных возбудителей инфекционно-воспалительной патологии ЛОР-органов и, в частности, патологии ротоглотки, что позволяет эффективно ее применять в клинической практике для местного и наружного применения.

Использованные приборы:

- весы лабораторные электронные AR 2140, AdventurerTM (Швейцария) и AUW-220D (Shimadzu, Япония);

- установка для получения воды очищенной УВО-0,2 (Россия);

- система получения воды Simplicity Water Purification System (Millipore, США);

- климатическая камера СМ 5/100-80 ТВО (ООО «СМ Климат», Россия);

- лабораторный идентификатор процесса распадаемости (ЗАО «Фармаген», Россия);

- настольный лабораторный пресс Korsch тип eko (Erweka, Германия);

- блистерная машина TOP BLISTER (Farmalabor Srl, Италия);

- автоматическая блистерная машина DPP-150 Al-plastic automatic blister packing machine, Zhejiang Jiangnan Pharmaceutical Machinery Co. (Китай).

- ручной импульсный аппарат CNT-200 (запайщик пакетов) (CAS Corporation, Корея);

- хроматограф высокого давления LC-20 Prominence (Shimadzu, Япония) с диодно-матричным детектором и колонкой Gemini C6-Phenyl 4,6х250 мм (размер частиц сорбента 5 мкм) (Phenomenex, США) с предколонкой размером 3,0 мм, заполненной тем же сорбентом;

- лиофильная сушилка ЛС-1000; ООО «Проинтех», Россия. Скорость сушки не менее 100 г/ч. Температура конденсатора -50°С, мощность 6 кг льда. Рабочее давление в вакуумной камере сушилки 6,67 Па (5·10-2 мм рт. ст.);

- холодильник Electrolux ENA38933W, температура морозильного отделения -22°С.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, но не ограничивается ими.

Пример 1. Составы антибактериальной композиции.

Состав 1.

грамицидин С- 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

Состав 2.

грамицидина С дигидрохлорид- 3,2 мг (в пересчете на грамицидин 3,0 мг);

цетилпиридиния хлорида моногидрат - 1,05 мг (в пересчете на цетилпиридиния хлорид 1,0 мг);

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг

Состав 3.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

маннитол - 256,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 4.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 6 мг.

маннитол - 256,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «груша» - 6 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 5.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 100 мг.

маннитол - 256,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 6.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

маннитол - 256,75 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг.

Состав 7.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

маннитол - 260,0 мг;

кросповидон -35,0 мг;

аспартам - 10 мг

полиэтиленгликоль 4000 - 5,0 мг.

Состав 8.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 15 мг.

маннитол - 252 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 30 мг;

аспартам (Е951) - 6 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 9.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 10 мг.

маннитол - 241,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Пример 2. Получение заявляемой антибактериальной композиции.

На весах отвешивают 0,213 г цетилпиридиния хлорида и 5,088 г 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина помещают в стакан вместимостью 50 мл, добавляют 7,3 мл воды. Стакан ставят на магнитную мешалку и перемешивают до получения прозрачного раствора. Затем в полученный раствор добавляют 0,639 г грамицидина С и перемешивают до получения прозрачного или слабо опалесцирующего раствора в течение 40-50 мин. Полученный раствор переносят в морозильную камеру и замораживают при -22°С. Замороженный раствор затем лиофильно высушивают. Полученный комплекс измельчают в фарфоровой ступке и просеивают через сито (0,5 мм). К полученному комплексу последовательно добавляют 53,71 г брикетированного маннитола; 0,8356 г измельченного и просеянного ПЭГ 4000; 6,897 г кросповидона; 6,688 г сорбитола; по 1,6772 г аспартама и ароматизатора «зеленое яблоко» и 1,045 г ароматизатора «корица», перемешивают путем встряхивания 5-20 мин. Порядок действий будет аналогичным для других соотношений компонентов. Потеря массы при просеивании порядка 1%. Полученную композицию прессуют в таблетки для приготовления раствора для местного и наружного применения. Получают фармацевтическую композицию, соответствующую Составу 3 Примера 1. Сравнение с прототипом показано в таблице 1.

Составы 1,2,4-9 готовили аналогичным образом, добавляя компоненты фармацевтической композиции в указанных в Примере 1 пропорциях не изменяя порядок их смешивания. Для приготовления каждой композиции цетилпиридиния хлорид брался в количестве 0,2-0,3 г, грамицидина С - в 3 раза больше по массе. Остальные компоненты после приготовления антибактериального комплекса добавлялись в соответствии с указанными составами в Примере 1.

Растворимость грамицидина С определяли следующим образом. Готовили насыщенный раствор из антибактериальной композиции (Составы 1-9 Примера 1) добавляя избыток грамицидина С и заявляемой композиции, чтобы через 30 мин после перемешивания на магнитной мешалке оставался видимый осадок, фильтровали от осадка через фильтр с размерами пор 0,22 мкм и в полученном растворе количественно методом ВЭЖХ определяли содержание грамицидина С по методике в соответствии с описанием примера 3. Было обнаружено, что для разных составов композиций после их растворения в воде содержание в ней грамицидина С в 8 и более раз выше в сравнении с раствором грамицидина С.

Были получены варианты таблеток с массой 370 мг или другой массой, которые могут ограничиться лишь доступным набором форм для таблеточного пресса. Таблетки распадались менее чем за 3 мин в тесте распадаемости в соответствии с ГФ ХIV ОФС.1.4.2.00013.15.

Пример 3. Определение стабильности антибактериальной композиции.

С целью оценки более отдаленных химических эффектов и оценки влияния на стабильность ГЛФ кратковременных отклонений от условий естественного хранения («ускоренное старение») произведена закладка опытных образцов таблеток заявляемой антибактериальной композиции (по 20 таблеток на точку) в трех видах первичной упаковки для хранения при температуре 40±2°С и относительной влажности 75±5%. Образцы анализировали через 22 дня, 45 суток, 3 и 6 месяцев.

Испытание проводили в соответствии со стандартной методикой «Стабильность и сроки годности лекарственных средств в соответствии с ГФ ХIV ОФС.1.1.0009.18.

Количественный анализ содержания компонентов выполнен на хроматографе высокого давления фирмы Shimadzu с диодно-матричным детектором и колонкой Gemini C6-Phenyl 4,6×250 мм (размер частиц сорбента 5 мкм) и предколонкой (3 мм) заполненной тем же сорбентом (Phenomenex, США) в градиентном режиме элюирования смесью 0,1 М раствора однозамещенного фосфата натрия с рН3,0 (подвижная фаза А) и метанола (подвижная фаза Б), скорость подачи элюента 1 мл/мин, дозируемый объем проб 20 мкл, длина волны детектирования 220 нм; температура термостата колонок комнатная.

Таблетки антибактериальной композиции составов 1-9 Примера 1 были упакованы в два вида упаковки: материал комбинированный Буфлен (состав материала: PAP/PE/ALU/PE); материал комбинированный ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ.

Результаты изучения стабильности антибактериальной композиции в условиях «ускоренного старения» в трех видах упаковки при температуре 40±2°С и относительной влажности 75±5% представлены в Таблице 2 (Состав 3). Полученные результаты свидетельствуют о стабильности ГЛФ в каждой из упаковок. Содержания действующих веществ при ускоренном хранении антибактериальной композиции Составов 1, 2, 4-9 Примера 1 отличались не более чем на 10% от Состава 3.

Пример 4. Определение антибактериальной активности заявляемой антибактериальной композиции.

Для подтверждения антибактериальных свойств заявляемой антибактериальной композиции (Состав 3, Пример 1) в сравнении с грамицидином С и цетилпиридиния хлоридом были использованы штаммы микроорганизмов, являющиеся возбудителями инфекций ЛОР-органов. Одними из основных возбудителей инфекций ЛОР-органов, считаются Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus. В исследовании использовали штаммы клинических изолятов с охарактеризованной антибактериальной резистентностью различной степени широты:

Эталонный штамм - Streptococcus pneumoniaе ATCC 6303;

Клинические изоляты - Streptococcus pneumoniae 711/58 серотип 4, Streptococcus pneumoniaе 7670 серотип 13, Streptococcus pneumoniaе 7779 серотип 13, Streptococcus pneumoniaе 1068 серотип 19 А, Streptococcus pneumoniaе 8074 серотип 6 ABCD;

Эталонный штамм - Staphylococcus aureus ATCC 6538-Р;

Клинические изоляты - Staphylococcus aureus 758 (MRSA), Staphylococcus aureus 952 (MSSA), Staphylococcus aureus 402 (MRSA), Staphylococcus aureus 299 (MRSA), Staphylococcus aureus 176 (MRSA).

Определение антимикробной активности тестируемых объектах проводили методом микроразведений в планшетах с определением основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибактериальных препаратов - величины минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Приготовленные рабочие растворы тестируемых объектов (итоговая концентрация по действующему веществу от 256 мкг/мл до 1 мкг/мл) вносили в 96-луночные планшеты. В каждую лунку, содержащую необходимое количество раствора исследуемого объекта, добавляли инокулюм штамма микроорганизма в заданной концентрации. В качестве положительного контроля использовали лунки, содержащие питательную среду инокулированную микроорганизмом, в качестве отрицательного контроля использовали лунки с питательной средой.

После добавления всех агентов планшеты закрывали крышками и инкубировали в термостате. Через 19 ч после инкубации результаты учитывали визуально в проходящем свете, при достаточном росте тест-микроорганизма, то есть при явном помутнении или изменении цвета питательной среды. Минимальной подавляющей концентрации исследуемых объектов соответствовала лунка с наименьшей концентрацией исследуемых объектов без признаков видимого роста тест-микроорганизмов (прозрачный бульон или цвет среды не изменился).

После определения МПК были сделаны высевы со всех лунок без признаков видимого роста на чашки Петри с плотной питательной средой для определения МБК. Минимальная бактерицидная концентрация - это минимальная концентрация антибиотика в питательной среде, при которой проявляется его бактерицидное действие по отношению к возбудителю. За МБК принимают концентрацию, обеспечивающую гибель 99,99% клеток микробной популяции.

Результаты определения антибактериальной активности представлены в Таблице 3. По результатам проведенного исследования установлено, что фармацевтическая композиция обладает антимикробной активностью в отношении всех исследованных штаммов Streptococcus pneumoniaе и Staphylococcus aureus. Наличие вспомогательных веществ в антибактериальной композиции не препятствовали высвобождению действующих веществ Грамицидина С и Цетилпиридиния и не влияли на их бактерицидное действие. Полученные значения МПК и МБК, в подавляющем большинстве случаев различающиеся не более чем в 4 раза, демонстрируют наличие у антибактериальной композиции высокой бактерицидной активности в отношении типичных возбудителей инфекционно-воспалительной патологии ЛОР-органов и, в частности, патологии ротоглотки, что позволяет эффективно ее применять в клинической практике.

Таблица 1. Состав вспомогательных веществ заявляемой антибактериальной композиции и сравнение с прототипом
№	Заявляемая фармацевтическая композиция (состав 3)	Масса, мг	Прототип «Граммидин® нео»	Масса, мг
1	Маннитол	256,75	кремния диоксид коллоидный	5
2	Кросповидон	33	тальк	60
3	Сорбитол	32	ацесульфам калия	15
4	2-гидроксипропил-β-циклодекстрин	25	ароматизатор мятный	25
5	аспартам (Е951)	8	сорбитол	1065,75
6	ароматизатор «зеленое яблоко»	8	магния стеарат	25
7	ароматизатор «корица»	5
8	полиэтиленгликоль 4000	4

Таблица 2. Данные стабильности антибактериальной композиции (Состав 3 Пример 1) в тесте ускоренного хранения (40оС, 75% влажности). Вид упаковки 1 - стрип из пленки буфлен (PAP/PE/ALU/PE); 2 - стрип из пленки ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ
Вид упаковки	Срок хранения, сут
	0	22	45	90	180
	Содержание действующих веществ, исходные значения грамицидин С - 3 мг; цетилпиридиния хлорид - 1 мг; допускается разброс значений ±10%
1	2,94±0,05 1,14±0,02	3,12±0,07 1,11±0,03	3,07±0,02 0,96±0,01	3,10±0,01 1,09±0,03	2,99±0,06 1,15±0,03
2	2,94±0,05 1,14±0,02	3,01±0,04 1,04±0,02	3,09±0,05 0,98±0,02	3,07±0,09 1,08±0,05	3,04±0,01 1,15±0,00

Таблица 3. Антибактериальная активность заявляемой антибактериальной композиции в сравнении с грамицидином С и цетилпиридиния хлоридом
№ п/п	Тест микроорганизм	Грамицидин С		Цетилпиридиния хлорид		Фармацевтическая композиция
		МПК	МБК	МПК	МБК	МПК	МБК
	Streptococcus pneumoniaе ATCC 6303	4	8	8	8	4	4
	Streptococcus pneumonia 711/58 серотип 4	16	16	16	32	8	16
	Streptococcus pneumonia 1068	4	4	16	16	4	4
	Streptococcus pneumonia 7670	4	4	8	16	4	4
	Streptococcus pneumonia 7779	4	4	8	16	4	4
	Streptococcus pneumonia 8074	4	4	8	16	4	4
	Staphylococcus aureus ATCC 6538-P	2	2	2	2	2	2
	Staphylococcus aureus 176	4	8	2	8	4	8
	Staphylococcus aureus 299	4	8	4	4	4	8
	Staphylococcus aureus 402	2	8	2	4	2	4
	Staphylococcus aureus 758	2	2	2	4	2	2
	Staphylococcus aureus 952	2	8	2	2	2	4

Claims (12)

1. Антибактериальный комплекс, характеризующийся тем, что состоит из 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина, грамицидина С или его фармацевтически приемлемой соли (в пересчете на грамицидин С), цетилпиридиния хлорида или его моногидрата (в пересчете на цетилпиридиния хлорид) в массовом соотношении 6-100:3:1.

2. Антибактериальный комплекс по п. 1, характеризующийся тем, что массовое соотношение компонентов составляет 25:3:1.

3. Антибактериальная композиция для приготовления раствора для местного или наружного применения, характеризующаяся тем, что она выполнена в форме таблетки, содержащей антибактериальный комплекс по п. 1 в качестве активного начала и маннитол, кросповидон, сорбитол, аспартам, полиэтиленгликоль 4000 в качестве вспомогательных компонентов при следующем содержании компонентов:

антибактериальный комплекс - 10,0-104,0 мг;

маннитол – 230,0-270,0 мг;

кросповидон – 30,0-36,0 мг;

сорбитол – 29,0-35,0 мг;

аспартам – 6,0-10,0 мг;

полиэтиленгликоль 4000 – 3,0-5,0 мг.

4. Антибактериальная композиция по п. 3, характеризующаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве вспомогательных веществ, по крайней мере один ароматизатор.

5. Способ получения антибактериальной композиции для приготовления раствора для местного или наружного применения по п. 3 или 4, характеризующийся тем, что получают антибактериальный комплекс по п. 1 путем растворения цетилпиридиния хлорида или его моногидрата и 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина в воде, перемешивания до прозрачного раствора, добавления к раствору грамицидина С или его фармацевтически приемлемой соли, перемешивания в течение 40-50 мин до получения прозрачного или слабо опалесцирующего раствора, замораживания раствора, лиофильного высушивания с последующим добавлением к полученному комплексу вспомогательных веществ, перемешиванием и таблетированием.

6. Применение композиции по п. 3 для получения антибактериального средства местного или наружного действия в виде водного раствора.