[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

RU2762328C2 - Ультраяркие димерные или полимерные красители - Google Patents

Ультраяркие димерные или полимерные красители Download PDF

Info

Publication number
RU2762328C2
RU2762328C2 RU2018137690A RU2018137690A RU2762328C2 RU 2762328 C2 RU2762328 C2 RU 2762328C2 RU 2018137690 A RU2018137690 A RU 2018137690A RU 2018137690 A RU2018137690 A RU 2018137690A RU 2762328 C2 RU2762328 C2 RU 2762328C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
compound according
independently
occurrence
compound
integer
Prior art date
Application number
RU2018137690A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2018137690A3 (ru
RU2018137690A (ru
Inventor
Трейси МЭТРИ
Шарат СИНГХ
Майкл ВАНБРУНТ
Original Assignee
Сони Корпорейшн
Сони Корпорейшн Оф Америка
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сони Корпорейшн, Сони Корпорейшн Оф Америка filed Critical Сони Корпорейшн
Publication of RU2018137690A publication Critical patent/RU2018137690A/ru
Publication of RU2018137690A3 publication Critical patent/RU2018137690A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2762328C2 publication Critical patent/RU2762328C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2404—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2408—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of hydroxyalkyl compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B69/00—Dyes not provided for by a single group of this subclass
    • C09B69/10—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds
    • C09B69/109—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds containing other specific dyes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C215/00—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C215/68—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and hydroxy groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/091—Esters of phosphoric acids with hydroxyalkyl compounds with further substituents on alkyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/48—Phosphonous acids [RP(OH)2] including [RHP(=O)(OH)]; Thiophosphonous acids including [RP(SH)2], [RHP(=S)(SH)]; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/572—Five-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B69/00—Dyes not provided for by a single group of this subclass
    • C09B69/10—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B69/00—Dyes not provided for by a single group of this subclass
    • C09B69/10—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds
    • C09B69/101—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds containing an anthracene dye
    • C09B69/102—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds containing an anthracene dye containing a perylene dye
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B69/00—Dyes not provided for by a single group of this subclass
    • C09B69/10—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds
    • C09B69/103—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds containing a diaryl- or triarylmethane dye
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединению, имеющему структуру (I), применяемому в качестве флуоресцентного или цветного красителя, к соединению для его получения, к композиции для детектированию биомолекулы, содержащей соединение формулы I, к применению соединения формулы I в аналитическом методе детекции биомолекулы, к способу получения соединения формулы I, а также к способам окрашивания образца, визуальной детекции биомолекулы и мечения биомолекулы с использованием соединения формулы I
Figure 00000186
(I)
В формуле I R1, R2, R3, R4, R5, L1, L2, L3, L4, M, m и n являются такими, как определено в формуле изобретения. 10 н. и 52 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 3 пр.

Description

Область техники
Настоящее изобретение в целом относится к димерным и полимерным флуоресцентным или цветным красителям, и к способам их получения и использования в различных аналитических методах.
Описание предшествующего уровня техники
Известно, что флуоресцентные и/или цветные красители особенно подходят для применений, в которых желателен высокочувствительный детектирующий реагент. Красители, которые способны предпочтительно метить конкретный ингредиент или компонент в образце, дают возможность исследователю определять присутствие, количество и/или локализацию этого конкретного ингредиента или компонента. Кроме того, можно осуществлять мониторинг специфических систем в отношении их пространственного и временного распределения в различных средах.
Флуоресцентные и колориметрические методы чрезвычайно распространены в химии и биологии. Эти методы дают полезную информацию о наличии, структуре, расстоянии, ориентации, комплексообразовании и/или локализации для биомолекул. Кроме того, методы с разрешением по времени все чаще используются в измерениях динамики и кинетики. В результате, разработано много стратегий флуоресцентного или цветного мечения биомолекул, таких как нуклеиновые кислоты и белки. Поскольку анализ биомолекул обычно происходит в водной среде, основное внимание уделяется разработке и использованию водорастворимых красителей.
Желательно использовать интенсивно флуоресцентные или цветные красители, поскольку использование таких красителей увеличивает отношение сигнал/шум и дает другие связанные с ними преимущества. В связи с этим, предпринимались попытки увеличить сигнал от известных флуоресцентных и/или цветных фрагментов. Например, димерные и полимерные соединения, содержащие два или более флуоресцентных и/или цветных фрагмента, были получены в ожидании того, что такие соединения будут давать более яркие красители. Однако в результате внутримолекулярного тушения флуоресценции известные димерные и полимерные красители не достигли желаемого увеличения яркости.
Таким образом, в данной области техники существует потребность в водорастворимых красителях, имеющих повышенную молярную яркость. В идеальном варианте, такие красители и биомаркеры должны быть интенсивно окрашенными или флуоресцентными и должны быть доступными в широком диапазоне цветов и при различных длинах волн флуоресценции. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность и обеспечивает дополнительные связанные с ним преимущества.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Вкратце, варианты осуществления настоящего изобретения в целом относятся к соединениям, подходящим для использования в качестве водорастворимых, флуоресцентных и/или цветных красителей и/или зондов, которые дают возможность визуальной детекции молекул аналита, таких как биомолекулы, а также к реагентам для их получения. Также описаны способы визуальной детекции молекул аналита с использованием красителей.
Водорастворимые, флуоресцентные или цветные красители вариантов осуществления изобретения являются интенсивно окрашенными и/или флуоресцентными и могут быть легко обнаружены при визуальном исследовании или другими способами. В некоторых вариантах осуществления соединения могут наблюдаться без предшествующего облучения или химической или ферментативной активации. С помощью соответствующего выбора красителя, как описано в данном документе, могут быть получены визуально детектируемые молекулы аналита различных цветов.
В одном варианте осуществления предложены соединения, имеющие следующую структуру (I):
Figure 00000001
(I)
или их стереоизомер, таутомер или соль, где R1, R2, R3, R4, R5, L1, L2, L3, L4, M, m и n являются такими, как определено в настоящем описании. Соединения структуры (I) находят применение в ряде областей, включая использование в качестве флуоресцентных и/или цветных красителей в различных аналитических методах.
В другом варианте осуществления предложен способ окрашивания образца, причем способ включает добавление в указанный образец соединения структуры (I) в количестве, достаточном для получения оптического отклика, когда указанный образец облучают с соответствующей длиной волны.
В еще одних вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает способ визуальной детекции молекулы аналита, включающий:
(a) обеспечение соединения (I); и
(b) детектирование соединения по его визуальным свойствам.
Другие раскрываемые способы включают способ визуальной детекции биомолекулы, причем способ включает:
(а) смешивание соединения структуры (I) с одной или несколькими биомолекулами; и
(b) детектирование соединения по его визуальным свойствам.
Другие варианты осуществления относятся к композиции, содержащей соединение структуры (I) и одну или несколько биомолекул. Также предложено использование таких композиций в аналитических методах для детектирования одной или нескольких биомолекул.
В некоторых других вариантах осуществления предложено соединение структуры (II):
Figure 00000002
(II)
или его стереоизомер, соль или таутомер, где R1, R2, R3, R4, R5, L1a, L2, L3, L4, A, G, m и n являются такими, как определено в данном описании. Соединения структуры (II) находят применение в ряде областей, включая использование в качестве интермедиатов для получения флуоресцентных и/или цветных красителей структуры (I).
В еще одних вариантах осуществления предложен способ мечения молекулы аналита, включающий:
(а) смешивание соединения структуры (II), где R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, с молекулой аналита;
(b) образование конъюгата соединения и молекулы аналита; и
(c) взаимодействие конъюгата с соединением формулы M-L1b-G', благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь в результате реакции G и G', где R2, R3, Q, G и M-L1b-G' являются такими, как определено в данном описании.
В некоторых других вариантах осуществления предложен способ мечения молекулы аналита, включающий:
(а) смешивание соединения структуры (II), где R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, с соединением формулы M-L1b-G', благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь путем реакции G и G'; и
(b) взаимодействие продукта стадии (a) с молекулой аналита, в результате чего образуется конъюгат продукта стадии (a) и молекулы аналита, где R2, R3, Q, G и M-L1b-G' являются такими, как определено в данном описании.
В еще одних вариантах осуществления предложен способ получения соединения структуры (I), включающий: смешивание соединения структуры (II) с соединением формулы M-L1b-G', благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь путем реакции G и G', где G и M-L1b-G' являются такими, как определено в данном описании.
Эти и другие аспекты изобретения станут очевидными при обращении к следующему ниже подробному описанию.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фигурах одинаковые ссылочные позиции обозначают аналогичные элементы. Размеры и относительные положения элементов на фигурах необязательно приводятся в масштабе, и некоторые из этих элементов произвольно увеличены и расположены для улучшения читаемости фигуры. Кроме того, конкретные формы элементов в том виде, в котором они изображены, не предназначены для передачи какой-либо информации относительно фактической формы конкретных элементов, и были выбраны исключительно для облегчения распознавания на фигурах.
На фиг.1 представлены спектры флуоресценции для 3-мерных, 5-мерных и 10-мерных соединений кумариновых красителей.
На фиг.2 представлены спектры флуоресценции для 3-мерных, 5-мерных и 10-мерных соединений флуоресцеиновых красителей.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В следующем ниже описании некоторые конкретные подробности изложены для обеспечения полного понимания различных вариантов осуществления изобретения. Однако специалисту в данной области будет понятно, что изобретение может быть осуществлено и без этих подробностей.
Если из контекста не следует иное, во всем описании и формуле настоящего изобретения слово «содержать» и его варианты, такие как «содержит» и «содержащий», должны быть истолкованы в широком, охватывающем смысле, т.е. как «включающие без ограничения».
Ссылка во всем данном описании на «один вариант осуществления» или «вариант осуществления» означает, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные в связи с вариантом осуществления, включены по меньшей мере в один из вариантов осуществления по настоящему изобретению. Соответственно, фразы «в одном варианте осуществления» или «в варианте осуществления», присутствующие в различных местах данного описания, не обязательно относятся все к одному и тому же варианту осуществления. Кроме того, конкретные признаки, структуры или характеристики могут быть объединены любым подходящим образом в одном или нескольких вариантах осуществления.
«Амино» относится к группе -NH2.
«Карбокси» относится к группе -CO2H.
«Циано» относится к группе -CN.
«Формил» относится к группе -C(=O)H.
«Гидрокси» или «гидроксил» относится к группе -OH.
«Имино» относится к группе =NH.
«Нитро» относится к группе -NO2.
«Оксо» относится к группе-заместителю =O.
«Сульфгидрил» относится к группе -SH.
«Тиоксо» относится к группе =S.
«Алкил» относится к группе с прямой или разветвленной углеводородной цепью, состоящей исключительно из атомов углерода и водорода, не содержащей ненасыщенности, имеющей от 1 до 12 атомов углерода (C1-C12 алкил), от 1 до 8 атомов углерода (C1-C8 алкил) или от 1 до 6 атомов углерода (C1-C6 алкил), и которая присоединена к остальной части молекулы одинарной связью, как например, метил, этил, н-пропил, 1-метилэтил (изопропил), н-бутил, н-пентил, 1,1-диметилэтил (т-бутил), 3-метилгексил, 2-метилгексил, и тому подобное. Если в данном описании специально не указано иное, алкильные группы являются необязательно замещенными.
«Алкилен» или «алкиленовая цепь» относится к линейной или разветвленной двухвалентной углеводородной цепи, связывающей остальную часть молекулы с радикальной группой, состоящей исключительно из углерода и водорода, не содержащей ненасыщенности и имеющей от 1 до 12 атомов углерода, как например, метилен, этилен, пропилен, н-бутилен, этенилен, пропенилен, н-бутенилен, пропинилен, н-бутинилен и тому подобное. Алкиленовая цепь присоединена к остальной части молекулы через одинарную связь и к радикальной группе через одинарную связь. Местами присоединения алкиленовой цепи к остальной части молекулы и к радикальной группе могут быть один атом углерода или любые два атома углерода внутри цепи. Если в данном описании специально не указано иное, алкилен является необязательно замещенным.
«Алкенилен» или «алкениленовая цепь» относится к линейной или разветвленной двухвалентной углеводородной цепи, связывающей остальную часть молекулы с радикальной группой, состоящей исключительно из углерода и водорода, содержащей по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь и имеющей от 2 до 12 атомов углерода, как например, этенилен, пропенилен, н-бутенилен и тому подобное. Алкениленовая цепь присоединена к остальной части молекулы через одинарную связь и к радикальной группе через двойную связь или одинарную связь. Местами присоединения алкениленовой цепи к остальной части молекулы и к радикальной группе могут быть один атом углерода или любые два атома углерода внутри цепи. Если в данном описании специально не указано иное, алкенилен является необязательно замещенным.
«Алкинилен» или «алкиниленовая цепь» относится к линейной или разветвленной двухвалентной углеводородной цепи, связывающей остальную часть молекулы с радикальной группой, состоящей исключительно из углерода и водорода, содержащей по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь и имеющей от 2 до 12 атомов углерода, как например, этенилен, пропенилен, н-бутенилен и тому подобное. Алкиниленовая цепь присоединена к остальной части молекулы через одинарную связь и к радикальной группе через двойную связь или одинарную связь. Местами присоединения алкиниленовой цепи к остальной части молекулы и к радикальной группе могут быть один атом углерода или любые два атома углерода внутри цепи. Если в данном описании специально не указано иное, алкинилен является необязательно замещенным.
«Простой алкилэфир» относится к любой алкильной группе, определенной выше, в которой по меньшей мере одна углерод-углеродная связь заменена углерод-кислородной связью. Углерод-кислородная связь может находиться на терминальном конце (как в алкоксигруппе) или же углерод-кислородная связь может быть внутренней (т.е. С-О-С). Простые алкилэфиры включают по меньшей мере одну углерод-кислородную связь, но могут включать более одной. Например, полиэтиленгликоль (PEG) входит в значение простого алкилэфира. Если в данном описании специально не указано иное, простая алкилэфирная группа является необязательно замещенной. Например, в некоторых вариантах осуществления простой алкилэфир замещен спиртом или -OP(=Ra)(Rb)Rc, где каждый из Ra, Rb и Rc является таким, как определено для соединений структуры (I).
«Алкокси» относится к группе формулы -ORa, где Ra представляет собой алкильную группу, как определено выше, содержащую от 1 до 12 атомов углерода. Если в данном описании специально не указано иное, алкоксигруппа является необязательно замещенной.
«Гетероалкилен» относится к алкиленовой группе, как определено выше, содержащей по меньшей мере один гетероатом (например, N, O, P или S) внутри алкиленовой цепи или на конце алкиленовой цепи. В некоторых вариантах осуществления гетероатом находится внутри алкиленовой цепи (т.е. гетероалкилен содержит по меньшей мере одну связь углерод-гетероатом-углерод). В других вариантах осуществления гетероатом находится на конце алкилена и, таким образом, служит для присоединения алкилена к остальной части молекулы (например, M1-H-A-М2, где M1 и М2 представляют собой части молекулы, H представляет собой гетероатом, и А представляет собой алкилен). Если в данном описании специально не указано иное, гетероалкиленовая группа является необязательно замещенной. Приводимая в качестве примера гетероалкиленовая линкерная группа показана ниже:
Figure 00000003
«C-линкер»
Мультимеры указанного выше С-линкера включены в различные варианты осуществления гетероалкиленовых линкеров.
«Гетероалкенилен» представляет собой гетероалкилен, как определено выше, содержащий по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Если в данном описании специально не указано иное, гетероалкениленовая группа является необязательно замещенной.
«Гетероалкинилен» представляет собой гетероалкилен, содержащий по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь. Если в данном описании специально не указано иное, гетероалкиниленовая группа является необязательно замещенной.
Выражение «гетероатомный» по отношению к «гетероатомному линкеру» относится к линкерной группе, состоящей из одного или более гетероатомов. Приводимые в качестве примера гетероатомные линкеры включают одиночные атомы, выбранные из группы, состоящей из O, N, P и S, и несколько гетероатомов, например, линкер, имеющий формулу -P(O-)(=O)O- или -OP(O-)(=O)O-, и мультимеры и их сочетания.
«Фосфат» относится к группе -OP(=O)(Ra)Rb, где Ra представляет собой ОН, О- или ORc; и Rb представляет собой ОН, О-, ORc, тиофосфатную группу или дополнительную фосфатную группу, где Rc представляет собой противоион (например, Na+ и тому подобное).
«Фосфоалкил» относится к группе -OP(=O)(Ra)Rb, где Ra представляет собой ОН, О- или ORc; и Rb представляет собой -Оалкил, при этом Rc представляет собой противоион (например, Na+ и тому подобное). Если в данном описании специально не указано иное, фосфоалкильная группа является необязательно замещенной. Например, в некоторых вариантах осуществления -Оалкильный фрагмент в фосфоалкильной группе необязательно замещен одним или несколькими из гидроксила, амино, сульфгидрила, фосфата, тиофосфата, фосфоалкила, тиофосфоалкила, простого фосфоалкилэфира или простого тиофосфоалкилэфира.
«Простой фосфоалкилэфир» относится к группе -OP(=O)(Ra)Rb, где Ra представляет собой ОН, О- или ORc; и Rb представляет собой простой -Оалкилэфир, при этом Rc представляет собой противоион (например, Na+ и тому подобное). Если в данном описании специально не указано иное, простая фосфоалкилэфирная группа является необязательно замещенной. Например, в некоторых вариантах осуществления -Оалкилэфирный фрагмент в простой фосфоалкилэфирной группе необязательно замещен одним или несколькими из гидроксила, амино, сульфгидрила, фосфата, тиофосфата, фосфоалкила, тиофосфоалкила, простого фосфоалкилэфира или простого тиофосфоалкилэфира.
«Тиофосфат» относится к группе -OP(=Ra)(Rb)Rc, где Ra представляет собой О или S, Rb представляет собой OH, O-, S-, ORd или SRd; и Rс представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd, SRd, фосфатную группу или дополнительную тиофосфатную группу, где Rd представляет собой противоион (например, Na+ и тому подобное) и при условии, что: i) Ra представляет собой S; ii) Rb представляет собой S- или SRd; iii) Rc представляет собой SH, S- или SRd; или iv) сочетание i), ii) и/или iii).
«Тиофосфоалкил» относится к группе -OP(=Ra)(Rb)Rc, где Ra представляет собой О или S, Rb представляет собой OH, O-, S-, ORd или SRd; и Rc представляет собой -Оалкил, при этом Rd представляет собой противоион (например, Na+ и тому подобное), и при условии, что: i) Ra представляет собой S; ii) Rb представляет собой S- или SRd; или iii) Ra представляет собой S, и Rb представляет собой S- или SRd. Если в данном описании специально не указано иное, тиофосфоалкильная группа является необязательно замещенной. Например, в некоторых вариантах осуществления -Оалкильный фрагмент в тиофосфоалкильной группе необязательно замещен одним или несколькими из гидроксила, амино, сульфгидрила, фосфата, тиофосфата, фосфоалкила, тиофосфоалкила, простого фосфоалкилэфира или простого тиофосфоалкилэфира.
«Простой тиофосфоалкилэфир» относится к группе -OP(=Ra)(Rb)Rc, где Ra представляет собой О или S, Rb представляет собой OH, O-, S-, ORd или SRd; и Rc представляет собой простой -Оалкилэфир, при этом Rd представляет собой противоион (например, Na+ и тому подобное), и при условии, что: i) Ra представляет собой S; ii) Rb представляет собой S- или SRd; или iii) Ra представляет собой S, и Rb представляет собой S- или SRd. Если в данном описании специально не указано иное, простая тиофосфоалкилэфирная группа является необязательно замещенной. Например, в некоторых вариантах осуществления -Оалкилэфирный фрагмент в тиофосфоалкильной группе необязательно замещен одним или несколькими из гидроксила, амино, сульфгидрила, фосфата, тиофосфата, фосфоалкила, тиофосфоалкила, простого фосфоалкилэфира или простого тиофосфоалкилэфира.
«Карбоциклический» относится к стабильному 3-18-членному ароматическому или неароматическому кольцу, содержащему от 3 до 18 атомов углерода. Если в данном описании специально не указано иное, карбоциклическое кольцо может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической кольцевой системой, которая может включать в себя конденсированные или мостиковые кольцевые системы и может быть частично или полностью насыщенной. Неароматические карбоциклильные радикалы включают циклоалкил, тогда как ароматические карбоциклильные радикалы включают арил. Если в данном описании специально не указано иное, карбоциклическая группа является необязательно замещенной.
«Циклоалкил» относится к стабильному неароматическому моноциклическому или полициклическому карбоциклическому кольцу, которое может включать в себя конденсированные или мостиковые кольцевые системы, имеющие от 3 до 15 атомов углерода, предпочтительно имеющие от 3 до 10 атомов углерода, и которое является насыщенным или ненасыщенным и присоединено к остальной части молекулы одинарной связью. Моноциклические циклоалкилы включают, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил. Полициклические циклоалкилы включают, например, адамантил, норборнил, декалинил, 7,7-диметилбицикло[2.2.1]гептанил и тому подобное. Если в данном описании специально не указано иное, циклоалкильная группа является необязательно замещенной.
«Арил» относится к кольцевой системе, содержащей по меньшей мере одно карбоциклическое ароматическое кольцо. В некоторых вариантах осуществления арил содержит от 6 до 18 атомов углерода. Арильное кольцо может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической кольцевой системой, которая может включать в себя конденсированные или мостиковые кольцевые системы. Арилы включают, без ограничения, арилы, полученные из ацеантрилена, аценафтилена, ацефенантрилена, антрацена, азулена, бензола, хризена, флуорантена, флуорена, ассим-индацена, симм-индацена, индана, индена, нафталина, феналена, фенантрена, плейадена, пирена и трифенилена. Если в данном описании специально не указано иное, арильная группа является необязательно замещенной.
«Гетероциклический» относится к стабильному 3-18-членному ароматическому или неароматическому кольцу, содержащему от 1 до 12 атомов углерода и от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы. Если в данном описании специально не указано иное, гетероциклическое кольцо может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической кольцевой системой, которая может включать в себя конденсированные или мостиковые кольцевые системы; и атомы азота, углерода или серы в гетероциклическом кольце могут быть необязательно окислены; атом азота может быть необязательно кватернизирован; и гетероциклическое кольцо может быть частично или полностью насыщенным. Примеры ароматических гетероциклических колец перечислены ниже в определении гетероарилов (т.е. гетероарил является подгруппой гетероциклических колец). Примеры неароматических гетероциклических колец включают, без ограничения, диоксоланил, тиенил[1,3]дитианил, декагидроизохинолил, имидазолинил, имидазолидинил, изотиазолидинил, изоксазолидинил, морфолинил, октагидроиндолил, октагидроизоиндолил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, оксазолидинил, пиперидинил, пиперазинил, 4-пиперидонил, пирролидинил, пиразолидинил, пиразолопиримидинил, хинуклидинил, тиазолидинил, тетрагидрофурил, триоксанил, тритианил, триазинанил, тетрагидропиранил, тиоморфолинил, тиаморфолинил, 1-оксотиоморфолинил, и 1,1-диоксотиоморфолинил. Если в данном описании специально не указано иное, гетероциклическая группа является необязательно замещенной.
«Гетероарил» относится к 5-14-членной кольцевой системе, содержащей от 1 до 13 атомов углерода, от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы, и по меньшей мере одно ароматическое кольцо. Для целей некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения, гетероарильный радикал может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической кольцевой системой, которая может включать в себя конденсированные или мостиковые кольцевые системы; и атомы азота, углерода или серы в гетероарильном радикале могут быть необязательно окислены; атом азота может быть необязательно кватернизирован. Примеры включают, без ограничения, азепинил, акридинил, бензимидазолил, бензтиазолил, бензиндолил, бензодиоксолил, бензофуранил, бензоксазолил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензо[b][1,4]диоксепинил, 1,4-бензодиоксанил, бензонафтофуранил, бензоксазолил, бензодиоксолил, бензодиоксинил, бензопиранил, бензопиранонил, бензофуранил, бензофуранонил, бензотиенил (бензотиофенил), бензотриазолил, бензo[4,6]имидазо[1,2-a]пиридинил, бензоксазолинонил, бензимидазолтионил, карбазолил, циннолинил, дибензофуранил, дибензотиофенил, фуранил, фуранонил, изотиазолил, имидазолил, индазолил, индолил, индазолил, изоиндолил, индолинил, изоиндолинил, изохинолил, индолизинил, изоксазолил, нафтиридинил, оксадиазолил, 2-оксоазепинил, оксазолил, оксиранил, 1-оксидопиридинил, 1-оксидопиримидинил, 1-оксидопиразинил, 1-оксидопиридазинил, 1-фенил 1H-пирролил, феназинил, фенотиазинил, феноксазинил, фталазинил, птеридинил, птеридинонил, пуринил, пирролил, пиразолил, пиридинил, пиридинонил, пиразинил, пиримидинил, пиримидинонил, пиридазинил, пирролил, пиридо[2,3-д]пиримидинонил, хиназолинил, хиназолинонил, хиноксалинил, хиноксалинонил, хинолинил, изохинолинил, тетрагидрохинолинил, тиазолил, тиадиазолил, тиено[3,2-д]пиримидин-4-онил, тиено[2,3-д]пиримидин-4-онил, триазолил, тетразолил, триазинил, и тиофенил (т.е. тиенил). Если в данном описании специально не указано иное, гетероарильная группа является необязательно замещенной.
«Конденсированный» относится к кольцевой системе, содержащей, по меньшей мере, два кольца, при этом два кольца имеют по меньшей мере один общий кольцевой атом, например, два общих кольцевых атома. Когда конденсированное кольцо представляет собой гетероциклильное кольцо или гетероарильное кольцо, общим кольцевым атомом (атомами) может быть углерод или азот. Конденсированные кольца включают бициклические, трициклические, тетрациклические и тому подобное.
Термин «замещенный», используемый в настоящем документе, означает любую из вышеуказанных групп (например, алкил, алкилен, алкенилен, алкинилен, гетероалкилен, гетероалкенилен, гетероалкинилен, алкокси, простой алкилэфир, фосфоалкил, простой фосфоалкилэфир, тиофосфоалкил, простой тиофосфоалкилэфир, карбоциклик, циклоалкил, арил, гетероциклик и/или гетероарил), в которой по меньшей мере один атом водорода (например, 1, 2, 3 или все атомы водорода) заменен связью с неводородными атомами, такими как, без ограничения: атом галогена, такой как F, Cl, Br и I; атом кислорода в группах, таких как гидроксильные группы, алкоксигруппы и сложноэфирные группы; атом серы в группах, таких как тиольные группы, тиоалкильные группы, сульфоновые группы, сульфонильные группы и сульфоксидные группы; атом азота в группах, таких как амины, амиды, алкиламины, диалкиламины, ариламины, алкилариламины, диариламины, N-оксиды, имиды и енамины; атом кремния в группах, таких как триалкилсилильные группы, диалкиларилсилильные группы, алкилдиарилсилильные группы и триарилсилильные группы; и другие гетероатомы в различных других группах. «Замещенный» также означает любую из указанных выше групп, в которых один или более атомов водорода заменены связью более высокого порядка (например, двойной или тройной связью) с гетероатомом, таким как кислород в оксо, карбонильной, карбоксильной и сложноэфирной группах; и азот в таких группах, как имины, оксимы, гидразоны и нитрилы. Например, «замещенный» включает любую из перечисленных выше групп, в которой один или более атомов водорода заменены на NRgRh, NRgC(=O)Rh, NRgC(=O)NRgRh, NRgC(=O)ORh, NRgSO2Rh, OC(=O)NRgRh, ORg, SRg, SORg, SO2Rg, OSO2Rg, SO2ORg, =NSO2Rg и SO2NRgRh. «Замещенный» также означает любую из указанных выше групп, в которых один или более атомов водорода заменены на C(=O)Rg, C(=O)ORg, C(=O)NRgRh, CH2SO2Rg, CH2SO2NRgRh. В приведенном выше описании Rg и Rh являются одинаковыми или различными и независимо друг от друга представляют водород, алкил, алкокси, алкиламино, тиоалкил, арил, аралкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, галогеналкил, гетероциклил, N-гетероциклил, гетероциклилалкил, гетероарил, N-гетероарил и/или гетероарилалкил. «Замещенный» также означает любую из указанных выше групп, в которых один или более атомов водорода заменены связью с амино, циано, гидроксильной, имино, нитро, оксо, тиоксо, галогеновой, алкильной, алкокси, алкиламино, тиоалкильной, арильной, аралкильной, циклоалкильной, циклоалкилалкильной, галогеналкильной, гетероциклильной, N-гетероциклильной, гетероциклилалкильной, гетероарильной, N-гетероарильной и/или гетероарилалкильной группой. В дополнение к этому, каждый из перечисленных выше заместителей также может быть необязательно замещен одним или более из указанных выше заместителей.
«Конъюгирование» относится к перекрыванию одной р-орбитали с другой р-орбиталью через промежуточную сигма-связь. Конъюгирование может происходить в циклических или ациклических соединениях. «Степень конъюгирования» относится к перекрыванию по меньшей мере одной р-орбитали с другой р-орбиталью через промежуточную сигма-связь. Например, 1,3-бутадиен имеет одну степень конъюгирования, тогда как бензол и другие ароматические соединения обычно имеют несколько степеней конъюгирования. Флуоресцентные и цветные соединения обычно имеют по меньшей мере одну степень конъюгирования.
«Флуоресцентный» относится к молекуле, которая способна поглощать свет определенной частоты и излучать свет другой частоты. Флуоресценция хорошо известна специалистам в данной области техники.
«Цветной» относится к молекуле, которая поглощает свет в цветном спектре (т.е. красном, желтом, синем и тому подобное).
«Линкер» относится к непрерывной цепи по меньшей мере одного атома, такого как углерод, кислород, азот, сера, фосфор и их сочетания, которая соединяет часть молекулы с другой частью этой же самой молекулы или с другой молекулой, фрагментом или твердым носителем (например, микрочастицей). Линкеры могут соединять молекулу с помощью ковалентной связи или других механизмов взаимодействий, таких как образование ионных или водородных связей.
Термин «биомолекула» относится к любому из множества биологических материалов, включая нуклеиновые кислоты, углеводы, аминокислоты, полипептиды, гликопротеины, гормоны, аптамеры и их смеси. Более конкретно, этот термин включает, без ограничения, РНК, ДНК, олигонуклеотиды, модифицированные или дериватизированные нуклеотиды, ферменты, рецепторы, прионы, лиганды рецепторов (включая гормоны), антитела, антигены и токсины, а также бактерии, вирусы, клетки крови и клетки тканей. Визуально детектируемые биомолекулы по изобретению (например, соединения структуры (I), имеющие связанную с ними биомолекулу) получают, как описано далее, путем контактирования биомолекулы с соединением, имеющим реакционноспособную группу, которая позволяет присоединять биомолекулу к соединению через любой доступный атом или функциональную группу, такую как, амино, гидрокси, карбоксильная или сульфгидрильная группа на биомолекуле.
«Реакционноспособная группа» представляет собой фрагмент, способный реагировать со вторыми реакционноспособными группами (например, «комплементарной реакционноспособной группой») с образованием одной или более ковалентных связей, например, путем реакции замещения, окисления, восстановления, присоединения или циклоприсоединения. Приводимые в качестве примера реакционноспособные группы приводятся в таблице 1, и включают, например, нуклеофилы, электрофилы, диены, диенофилы, альдегид, оксим, гидразон, алкин, амин, азид, ацилазид, ацилгалогенид, нитрил, нитрон, сульфгидрил, дисульфид, сульфонилгалогенид, изотиоцианат, сложный имидоэфир, активированный сложный эфир, кетон, α,β-ненасыщенный карбонил, алкен, малеимид, α-галогенимид, эпоксид, азиридин, тетразин, тетразол, фосфин, биотин, тииран и тому подобное.
Термины «видимый» и «визуально детектируемый» используются в настоящем документе для обозначения веществ, которые можно наблюдать при визуальном исследовании, без предшествующего облучения или химической или ферментативной активации. Такие визуально детектируемые вещества поглощают и излучают свет в области спектра в диапазоне от примерно 300 нм до примерно 900 нм. Предпочтительно такие вещества интенсивно окрашены, предпочтительно имеют молярный коэффициент экстинкции по меньшей мере примерно 40000, более предпочтительно по меньшей мере примерно 50000, еще более предпочтительно по меньшей мере примерно 60000, даже еще более предпочтительно по меньшей мере примерно 70000, и наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 80000 М-1 см-1. Соединения по изобретению могут быть детектированы путем наблюдения невооруженным глазом или с помощью оптического детектирующего устройства, включая, без ограничения, абсорбционные спектрофотометры, просвечивающие микроскопы, цифровые камеры и сканеры. Визуально детектируемые вещества не ограничиваются веществами, которые излучают и/или поглощают свет в видимом спектре. Вещества, которые излучают и/или поглощают свет в ультрафиолетовой (УФ) области (от примерно 10 нм до примерно 400 нм), инфракрасной (ИК) области (от примерно 700 нм до примерно 1 мм), и вещества, излучающие и/или поглощающие в других областях электромагнитного спектра, также входят в объем термина «визуально детектируемые» вещества.
Для целей вариантов осуществления изобретения термин «фотостабильный видимый краситель» относится к химическому фрагменту, который является визуально детектируемым, как определено выше, и не подвергается существенному изменению или разложению под воздействием света. Предпочтительно, фотостабильный видимый краситель не проявляет существенного обесцвечивания или разложения после воздействия света в течение, по меньшей мере, одного часа. Более предпочтительно, видимый краситель стабилен после воздействия света в течение по меньшей мере 12 ч, еще более предпочтительно по меньшей мере 24 ч, еще более предпочтительно по меньшей мере одной недели и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, одного месяца. Неограничивающие примеры фотостабильных видимых красителей, подходящих для использования в соединениях и способах изобретения, включают азокрасители, тиоиндиговые красители, хинакридоновые пигменты, диоксазин, фталоцианин, перинон, дикетопирролопиррол, хинофталон и триарилкарбоний.
Используемый в настоящем документе термин «производное перилена» подразумевает включение любого замещенного перилена, который является визуально детектируемым. Однако этот термин не предполагает включения самого перилена. Термины «производное антрацена», «производное нафталина» и «производное пирена» используются аналогично. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления производное (например, производное перилена, пирена, антрацена или нафталина) представляет собой имидное, бисимидное или гидразаимидное производное перилена, антрацена, нафталина или пирена.
Визуально детектируемые молекулы различных вариантов осуществления изобретения подходят для широкого спектра аналитических применений, таких как биохимические и биомедицинские применения, в которых необходимо определить присутствие, локализацию или количество конкретного аналита (например, биомолекулы). В связи с этим, в другом аспекте изобретение предлагает способ визуальной детекции биомолекулы, включающий: (а) обеспечение биологической системы с визуально детектируемой биомолекулой, содержащей соединение структуры (I), связанное с биомолекулой; и (b) детектирование биомолекулы по ее видимым свойствам. Для целей изобретения фраза «детектирование биомолекулы по ее видимым свойствам» означает, что биомолекула, без облучения или химической или ферментативной активации, наблюдается невооруженным глазом, или с помощью оптического детектирующего устройства, включая, без ограничения, абсорбционные спектрофотометры, просвечивающие микроскопы, цифровые камеры и сканеры. Денситометр может использоваться для количественной оценки присутствующей визуально детектируемой биомолекулы. Например, относительное количество биомолекулы в двух образцах можно определить путем измерения относительной оптической плотности. Если известна стехиометрия молекул красителя на одну биомолекулу и известен коэффициент экстинкции молекулы красителя, тогда абсолютная концентрация биомолекулы также может быть определена по измерению оптической плотности. Используемый в настоящем документе термин «биологическая система» используется для обозначения любого раствора или смеси, содержащих одну или несколько биомолекул в дополнение к визуально детектируемой биомолекуле. Неограничивающие примеры таких биологических систем включают клетки, клеточные экстракты, образцы тканей, электрофоретические гели, смеси для анализа и реакционные смеси для гибридизации.
«Твердый носитель» относится к любому твердому субстрату, известному в данной области техники для твердофазного носителя молекул, например, «микрочастица» относится к любому из ряда мелких частиц, пригодных для присоединения к соединениям изобретения, включая, без ограничения, стеклянные гранулы, магнитные гранулы, полимерные гранулы, неполимерные гранулы и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления изобретения микрочастицы включают полистирольные гранулы.
«Фрагмент спаривания оснований» относится к гетероциклическому фрагменту, способному к гибридизации с комплементарным гетероциклическим фрагментом посредством водородных связей (например, спаривание оснований по Уотсону-Крику). Фрагменты спаривания оснований включают основания природного и не природного происхождения. Неограничивающие примеры фрагментов спаривания оснований представляют собой основания РНК и ДНК, такие как аденозин, гуанозин, тимидин, цитозин и уридин, и их аналоги.
Также подразумевается, что варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, охватывают все соединения структуры (I) или (II), которые являются изотопно-меченными путем замещения одного или более атомов на атом, имеющий другую атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые могут быть включены в описанные соединения, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора, хлора и йода, такие как 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I и 125I, соответственно.
Изотопно-меченные соединения структуры (I), (II) обычно могут быть получены традиционными методами, известными специалистам в данной области техники, или способами, аналогичными описанным ниже способам, и в следующих примерах с использованием соответствующего изотопно-меченного реагента вместо немеченного реагента, применявшегося ранее.
«Стабильное соединение» и «стабильная структура» означают соединение, которое является достаточно прочным, чтобы выдерживать выделение из реакционной смеси до пригодной к использованию степени чистоты и для включения в эффективный терапевтический препарат.
«Необязательный» или «необязательно» означает, что описываемое далее событие или обстоятельства могут происходить или могут и не происходить, и что описание включает примеры, где указанное событие или обстоятельство происходит, и примеры, где оно не происходит. Например, «необязательно замещенный алкил» означает, что алкильная группа может быть или может и не быть замещена, и что описание включает в себя как замещенные алкильные группы, так и алкильные группы, не имеющие замещения.
«Соль» включает как кислотно-, так и основно-аддитивные соли.
«Кислотно-аддитивная соль» относится к таким солям, которые образованы с неорганическими кислотами, такими как, без ограничения, соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное; и органическими кислотами, такими как, без ограничения, уксусная кислота, 2,2-дихлоруксусная кислота, адипиновая кислота, альгиновая кислота, аскорбиновая кислота, аспарагиновая кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, 4-ацетамидобензойная кислота, камфорная кислота, камфоро-10-сульфоновая кислота, каприновая кислота, капроновая кислота, каприловая кислота, угольная кислота, коричная кислота, лимонная кислота, цикламовая кислота, додецилсерная кислота, этан-1,2-дисульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, галактаровая кислота, гентизиновая кислота, глюкогептоновая кислота, глюконовая кислота, глюкуроновая кислота, глутаминовая кислота, глутаровая кислота, 2-оксоглутаровая кислота, глицерофосфорная кислота, гликолевая кислота, гиппуровая кислота, изомасляная кислота, молочная кислота, лактобионовая кислота, лауриновая кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, муциновая кислота, нафталин-1,5-дисульфоновая кислота, нафталин-2-сульфоновая кислота, 1-гидрокси-2-нафтойная кислота, никотиновая кислота, олеиновая кислота, оротовая кислота, щавелевая кислота, пальмитиновая кислота, памовая кислота, пропионовая кислота, пироглутаминовая кислота, пировиноградная кислота, салициловая кислота, 4-аминосалициловая кислота, себациновая кислота, стеариновая кислота, янтарная кислота, винная кислота, тиоциановая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, трифторуксусная кислота, ундециленовая кислота, и тому подобное.
«Основно-аддитивная соль» относится к солям, которые получены добавлением неорганического основания или органического основания к свободной кислоте. Соли, полученные из неорганических оснований, включают, без ограничения, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца, алюминия, и тому подобные. Соли, полученные из органических оснований, включают, без ограничения, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, в том числе природных замещенных аминов, циклических аминов и основных ионообменных смол, таких как аммиак, изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, диэтаноламин, этаноламин, динол, 2-диметиламиноэтанол, 2-диэтиламиноэтанол, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, бенетамин, бензатин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, триэтаноламин, трометамин, пурины, пиперазин, пиперидин, N-этилпиперидин, полиаминные смолы, и тому подобное. Особенно предпочтительными органическими основаниями являются изопропиламин, диэтиламин, этаноламин, триметиламин, дициклогексиламин, холин и кофеин.
Кристаллизация может приводить к получению сольватов соединений, описанных в настоящей заявке. Варианты осуществления настоящего изобретения включают все сольваты описанных соединений. Используемый в настоящем документе термин «сольват» относится к комплексу, который содержит одну или несколько молекул соединения по изобретению вместе с одной или несколькими молекулами растворителя. Растворителем может быть вода, и в этом случае сольват может представлять собой гидрат. В качестве альтернативы, растворителем может быть органический растворитель. Таким образом, соединения настоящего изобретения могут существовать в виде гидрата, включая моногидрат, дигидрат, полугидрат, полуторагидрат, тригидрат, тетрагидрат и тому подобное, а также в виде соответствующих сольватированных форм. Соединения по изобретению могут быть истинными сольватами, тогда как в других случаях соединения по изобретению могут просто сохранять дополнительную воду или другой растворитель, или быть смесью воды и некоторого количества дополнительного растворителя.
Варианты осуществления соединений по изобретению (например, соединений структуры I или II) или их солей, таутомеров или сольватов могут включать один или несколько асимметричных центров и могут, таким образом, образовывать энантиомеры, диастереомеры и другие стереоизомерные формы, которые могут быть определены в терминах абсолютной стереохимии как (R)- или (S)-, или как (D)- или (L)- для аминокислот. Варианты осуществления настоящего изобретения предполагают включение всех таких возможных изомеров, а также их рацемических и оптически чистых форм. Оптически активные (+) и (-), (R)- и (S)-, или (D)- и (L)-изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов, или выделены с помощью традиционных методов, например, хроматографии и фракционной кристаллизации. Традиционные методы получения/выделения отдельных энантиомеров включают хиральный синтез из подходящего оптически чистого предшественника или разделение рацемата (или рацемата соли или производного) используя, например, хиральную жидкостную хроматографию высокого давления (HPLC, ВЭЖХ). Когда описанные здесь соединения содержат олефиновые двойные связи или другие центры геометрической асимметрии, и если не указано иное, подразумевается, что соединения включают как Е, так и Z геометрические изомеры. Аналогичным образом, также подразумевается, что должны быть включены все таутомерные формы.
«Стереоизомер» относится к соединению, состоящему из тех же атомов, связанных такими же связями, но имеющему другие трехмерные структуры, которые не являются взаимозаменяемыми. Настоящее изобретение предусматривает разные стереоизомеры и их смеси и включает «энантиомеры», что относится к двум стереоизомерам, молекулы которых являются несовместимыми при наложении зеркальными изображениями друг друга.
«Таутомер» относится к протонному сдвигу от одного атома молекулы к другому атому этой же самой молекулы. Настоящее изобретение включает таутомеры любых указанных соединений. Различные таутомерные формы соединений могут быть легко получены специалистами в данной области.
Используемые здесь химические названия и структурные схемы являются модифицированной формой номенклатурной системы IUPAC, полученными при помощи программного обеспечения ACD/Name Version 9.07 и/или программы присваивания названий ChemDraw Ultra Version 11.0 (CambridgeSoft). Также используются общепринятые названия, известные специалистам в данной области техники.
Как отмечалось выше, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предложены соединения, подходящие в качестве флуоресцентных и/или цветных красителей в различных аналитических методах. В других вариантах осуществления предложены соединения, подходящие в качестве синтетических интермедиатов для получения соединений, используемых в качестве флуоресцентных и/или цветных красителей. В общих чертах варианты осуществления настоящего изобретения относятся к димерам и более высокомолекулярным полимерам флуоресцентных и/или цветных фрагментов. Флуоресцентные и/или цветные фрагменты связаны фосфорсодержащей связью. Не желая быть связанными теорией, полагают, что линкер способствует сохранению достаточного пространственного расстояния между флуоресцентными и/или цветными фрагментами, благодаря чему внутримолекулярное тушение уменьшается и/или полностью исчезает, что приводит к образованию соединения красителя, имеющего высокую молярную «яркость» (например, высокую флуоресцентную эмиссию).
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления соединения имеют следующую структуру (А):
Figure 00000004
(A)
где L представляет собой фосфорсодержащую связь, достаточную для поддержания пространственного разделения между одной или более (например, каждой) М-группой, благодаря чему внутримолекулярное тушение уменьшается или полностью исчезает, и R1, R2, R3, L1, L2, L3 и n являются такими, как определено для структуры (I).
В других вариантах осуществления предложено соединение, имеющее следующую структуру (I):
Figure 00000001
(I)
или его стереоизомер, соль или таутомер, где:
M в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, имеющий две или более двойные углерод-углеродные связи и по меньшей мере одну степень конъюгирования;
L1 в каждом случае независимо представляет собой линкер, содержащий функциональную группу, способную к образованию путем реакции двух комплементарных реакционноспособных групп;
L2 и L3 в каждом случае независимо представляют собой необязательный алкиленовый, алкениленовый, алкиниленовый, гетероалкиленовый, гетероалкениленовый, гетероалкиниленовый или гетероатомный линкер;
L4 в каждом случае независимо представляет собой алкиленовый, алкениленовый, алкиниленовый, гетероалкиленовый, гетероалкениленовый или гетероалкиниленовый линкер;
R1 в каждом случае независимо представляет собой H, алкил или алкокси;
каждый из R2 и R3 независимо представляет собой H, OH, SH, алкил, алкокси, простой алкилэфир, -OP(=Ra)(Rb)Rc, Q, линкер, содержащий ковалентную связь с Q, линкер, содержащий ковалентную связь с молекулой аналита, линкер, содержащий ковалентную связь с твердым носителем, или линкер, содержащий ковалентную связь с другим соединением структуры (I), где: Ra представляет собой O или S; Rb представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd или SRd; Rc представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd, SRd, алкил, алкокси, простой алкилэфир, простой алкоксиалкилэфир, фосфат, тиофосфат, фосфоалкил, тиофосфоалкил, простой фосфоалкилэфир или простой тиофосфоалкилэфир; и Rd представляет собой противоион;
R4 в каждом случае независимо представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd или SRd;
R5 в каждом случае независимо представляет собой оксо, тиоксо или отсутствует;
Q в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с молекулой аналита, твердым носителем или комплементарной реакционноспособной группой Q';
m в каждом случае независимо представляет собой целое число, равное нулю или большее; и
n является целым числом, равным единице или большим.
В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное единице или большее. В других вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное двум или большее. В еще одних вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное трем или большее. В еще одних вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное четырем или большее. В еще одних вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное пяти или большее.
Различные линкеры и заместители (например, M, Q, R1, R2, R3, Rc L1, L2, L3 и L4) в соединении структуры (I) необязательно замещены еще одним заместителем. Например, в некоторых вариантах осуществления необязательный заместитель выбирают, чтобы оптимизировать растворимость в воде или другое свойство соединения структуры (I). В некоторых вариантах осуществления, каждый алкил, алкокси, простой алкилэфир, простой алкоксиалкилэфир, фосфоалкил, тиофосфоалкил, простой фосфоалкилэфир и простой тиофосфоалкилэфир в соединении структуры (I) необязательно замещен еще одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из гидроксила, алкокси, простого алкилэфира, простого алкоксиалкилэфира, сульфгидрила, амино, алкиламино, карбоксила, фосфата, тиофосфата, фосфоалкила, тиофосфоалкила, простого фосфоалкилэфира и простого тиофосфоалкилэфира.
Линкер L1 может использоваться в качестве места присоединения фрагмента M к остальной части соединения. Например, в некоторых вариантах осуществления получают синтетический предшественник соединения структуры (I), и фрагмент М присоединяют к синтетическому предшественнику с использованием любого числа простых способов, известных в данной области техники, например, способов, называемых «клик-химия» («click-chemistry»). C этой целью может быть использована любая реакция, которая является быстрой и по существу необратимой, для присоединения М к синтетическому предшественнику с образованием соединения структуры (I). Приводимые в качестве примера реакции включают катализируемую медью реакцию азида и алкина с образованием триазола (реакция Хьюсгена 1,3-диполярного циклоприсоединения), реакцию диена и диенофила (Дильса-Альдера), нитрон-алкиновое циклоприсоединение, облегченное напряжением, реакцию напряженного алкена с азидом, тетразином или тетразолом, [3+2]-циклоприсоединение алкена и азида, реакцию Дильса-Альдера алкена и тетразина с обратными электронными требованиями, фотореакцию алкена и тетразола и различные реакции замещения, такие как замещение удаляемой группы путем нуклеофильной атаки на электрофильный атом. В некоторых вариантах осуществления реакция с образованием L1 может осуществляться в водной среде.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления L1 представляет собой функциональную группу, которая является продуктом одной из приведенных выше «клик-реакций». В разных вариантах осуществления, для по меньшей мере одного случая L1, функциональная группа может быть образована путем реакции функциональной группы, представляющей собой альдегид, оксим, гидразон, алкин, амин, азид, ацилазид, ацилгалогенид, нитрил, нитрон, сульфгидрил, дисульфид, сульфонилгалогенид, изотиоцианат, сложный имидоэфир, активированный сложный эфир, кетон, α,β-ненасыщенный карбонил, алкен, малеимид, α-галогенимид, эпоксид, азиридин, тетразин, тетразол, фосфин, биотин или тииран, с комплементарной реакционноспособной группой.
В других вариантах осуществления, для по меньшей мере одного случая L1, функциональная группа может быть образована реакцией алкина и азида.
В дополнительных вариантах осуществления, для по меньшей мере одного случая L1, функциональная группа включает алкеновую, сложноэфирную, амидную, группу сложного тиоэфира, дисульфидную, карбоциклическую, гетероциклическую или гетероарильную группу. В некоторых более специфичных вариантах осуществления, для по меньшей мере одного случая L1, L1 представляет собой линкер, содержащий триазолильную функциональную группу.
В еще одних вариантах осуществления, для по меньшей мере одного случая L1, L1-M имеет следующую структуру:
Figure 00000005
где каждый из L1a и L1b независимо представляет собой необязательный линкер.
В других вариантах осуществления, для по меньшей мере одного случая L1, L1-M имеет следующую структуру:
Figure 00000006
где каждый из L1a и L1b независимо представляет собой необязательный линкер.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления соединение имеет следующую структуру (IA):
Figure 00000007
(IA)
где:
L1a и L1b в каждом случае независимо представляют собой необязательные линкеры; и
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6.
В различных вариантах осуществления соединение имеет следующую структуру (IB):
Figure 00000008
(IB)
где:
L1a и L1b в каждом случае независимо представляют собой необязательные линкеры; и
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6.
В изложенных выше различных вариантах осуществления, L1a или L1b, или оба из них отсутствуют. В других вариантах осуществления, L1a или L1b, или оба из них присутствуют.
В некоторых вариантах осуществления каждый из L1a и L1b, если присутствуют, независимо представляют собой алкилен или гетероалкилен. Например, в некоторых вариантах осуществления, L1a и L1b, если присутствуют, независимо имеют одну из следующих структур:
Figure 00000009
;
Figure 00000010
или
Figure 00000011
.
В дополнительных вариантах осуществления, L2, L3 и L4 в каждом случае независимо представляют собой C1-C6 алкилен, C2-C6 алкенилен или C2-C6 алкинилен. В других вариантах осуществления L4 в каждом случае независимо представляет собой C1-C6 алкилен, C2-C6 алкенилен или C2-C6 алкинилен. Например, в некоторых вариантах осуществления соединение имеет следующую структуру (IС):
Figure 00000012
(IC)
где:
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6; и
y в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 6.
В некоторых вариантах осуществления структуры (IC), L1 в каждом случае независимо содержит триазолильную функциональную группу. В других вариантах осуществления (IС) y равно 2 для каждого целочисленного значения m.
В некоторых вариантах осуществления соединения структуры (IC), x3 и x4 равны 2 в каждом случае. В других вариантах осуществления каждый из x1, x2, x5 и x6 равен 1 в каждом случае. В других вариантах осуществления каждый из x2 и x4 равен 0, и x3 равен 1.
В еще одних вариантах осуществления любого из приведенных выше соединений структуры (I), R4 в каждом случае независимо представляет собой OH, O- или ORd. Следует отметить, что «ORd» и «SRd» используются для обозначения O- и S-, ассоциированных с катионом. Например, фосфатная группа динатриевой соли может быть представлена как:
Figure 00000013
,
где Rd является натрием (Na+).
В других вариантах осуществления любого из соединений структуры (I), R5 в каждом случае представляет собой оксо.
В еще одних вариантах осуществления соединение имеет одну из следующих структур (ID) или (IE):
Figure 00000014
или
(ID)
Figure 00000015
.
(IE)
В некоторых специфичных вариантах осуществления (ID) и (IE), L1 в каждом случае независимо содержит триазолильную функциональную группу.
В некоторых других вариантах осуществления любого из перечисленных выше соединений, R1 представляет собой Н.
В других различных вариантах осуществления каждый из R2 и R3 независимо представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc. В некоторых других вариантах осуществления R2 или R3 представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc, и другой из R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q.
В еще одних вариантах осуществления Q в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с молекулой аналита или твердым носителем. В других вариантах осуществления Q в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с комплементарной реакционноспособной группой Q'. Например, в некоторых вариантах осуществления Q' присутствует в другом соединении структуры (I) (например, в положении R2 или R3), и Q и Q' содержат комплементарные реакционноспособные группы, благодаря чему реакция соединения структуры (I) и другого соединения структуры (I) приводит к ковалентно связанному димеру соединения структуры (I). Мультимерные соединения структуры (I) также могут быть получены аналогичным образом и включены в объем вариантов осуществления изобретения.
Тип Q-группы и возможность присоединения Q-группы к остальной части соединения структуры (I) не имеет ограничений, при условии, что Q содержит фрагмент, имеющий соответствующую реакционную способность для образования желаемой связи.
В некоторых вариантах осуществления Q представляет собой фрагмент, который не подвержен гидролизу в водных условиях, но является достаточно реакционноспособным для образования связи с соответствующей группой на молекуле аналита или твердом носителе (например, амина, азида или алкина).
Некоторые варианты осуществления соединений структуры (I) включают Q-группы, обычно используемые в области биоконъюгирования. Например, в некоторых вариантах осуществления Q содержит нуклеофильную реакционноспособную группу, электрофильную реакционноспособную группу или реакционноспособную группу циклоприсоединения. В некоторых более специфичных вариантах осуществления Q содержит сульфгидрильную, дисульфидную, активированную сложноэфирную, изотиоцианатную, азидную, алкиновую, алкеновую, диеновую, диенофильную, галогенангидридную, сульфонилгалогенидную, фосфиновую, α-галогенамидную, биотиновую, амино или малеимидную функциональную группу. В некоторых вариантах осуществления, активированный сложный эфир представляет собой N-сукцинимидный сложный эфир, сложный имидоэфир или сложный полифторфенильный эфир. В других вариантах осуществления алкин представляет собой алкилазид или ацилазид.
Приводимые в качестве примера Q-фрагменты представлены в таблице I ниже.
Таблица 1. Примеры Q-фрагментов
Структура Класс
Figure 00000016
 сульфгидрил
Figure 00000017
 изотиоцианат
Figure 00000018
 сложный имидоэфир
Figure 00000019
 ацилазид
Figure 00000020
 активированный сложный эфир
Figure 00000021
 активированный сложный эфир
Figure 00000022
 активированный сложный эфир
Figure 00000023
 активированный сложный эфир
Figure 00000024
 активированный сложный эфир
Figure 00000025
 активированный сложный эфир
Figure 00000026
 сульфонилгалогенид
Figure 00000027
 малеимид
Figure 00000028
 малеимид
Figure 00000029
 α-галогенимид
Figure 00000030
 дисульфид
Figure 00000031
 фосфин
Figure 00000032
 азид
Figure 00000033
 алкин
Figure 00000034
 биотин
Figure 00000035
 диен
Figure 00000036
 алкен/диенофил
Figure 00000037
 алкен/диенофил
-NH2 амино
Следует отметить, что в некоторых вариантах осуществления, в которых Q представляет собой SH, SH-фрагмент будет иметь тенденцию образовывать дисульфидные связи с другой сульфгидрильной группой на другом соединении структуры (I). Соответственно, некоторые варианты осуществления включают соединения структуры (I), которые находятся в форме дисульфидных димеров, причем дисульфидная связь получена из SH Q-групп.
В некоторых других вариантах осуществления один из R2 или R3 представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc, и другой из R2 или R3 представляет собой линкер, содержащий ковалентную связь с молекулой аналита, или линкер, содержащий ковалентную связь с твердым носителем. Например, в некоторых вариантах осуществления молекула аналита представляет собой нуклеиновую кислоту, аминокислоту или ее полимер. В других вариантах осуществления молекула аналита представляет собой фермент, рецептор, лиганд рецептора, антитело, гликопротеин, аптамер или прион. В еще одних вариантах осуществления твердый носитель представляет собой полимерную гранулу или неполимерную гранулу.
Значение m представляет собой другую переменную, которая может быть выбрана на основе желаемой интенсивности флуоресценции и/или цвета. В некоторых вариантах осуществления m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 10, от 3 до 10 или от 7 до 9. В других вариантах осуществления m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 5, например 1, 2, 3, 4 или 5. В других вариантах осуществления m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 5 до 10, например, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В других вариантах осуществления m в каждом случае представляет собой целое число, равное единице или большее. Например, в некоторых вариантах осуществления m в каждом случае представляет собой целое число, равное двум или более, или трем или более.
Интенсивность флуоресценции также можно регулировать путем выбора различных значений n. В некоторых вариантах осуществления n является целым числом от 1 до 100. В других вариантах осуществления n является целым числом от 1 до 10. В некоторых вариантах осуществления n равно 1.
М выбирают на основе желаемых оптических свойств, например, на основе желаемого цвета и/или длины волны флуоресцентного излучения. В некоторых вариантах осуществления М является одинаковым в каждом случае; однако важно отметить, что в каждом случае M не обязательно должно быть тем же самым M, и некоторые варианты осуществления включают соединения, в которых М не является одинаковым в каждом случае. Например, в некоторых вариантах осуществления каждое M не является одинаковым, и различные М-фрагменты выбирают таким образом, чтобы они имели поглощение и/или эмиссию для использования в методах резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET). Например, в таких вариантах осуществления различные М-фрагменты выбираются таким образом, что поглощение излучения на одной длине волны вызывает эмиссию излучения на другой длине волны по механизму FRET. Приводимые в качестве примера M-фрагменты могут быть подходящим образом выбраны специалистом исходя из желаемого конечного использования. Приводимые в качестве примера М-фрагменты для FRET-методов включают красители флуоресцеин и 5-TAMRA (сложный сукцинимидиловый эфир 5-карбокситетраметилродамина).
M может быть присоединен к остальной части молекулы из любого положения (т.е. атома) на M. Специалисту в данной области будет известен способ присоединения M к остальной части молекулы. Примеры способов включают «клик-реакции», описанные в настоящей заявке.
В некоторых вариантах осуществления М представляет собой флуоресцентный или цветной фрагмент. Может использоваться любой флуоресцентный и/или цветной фрагмент, например, известные в области техники и обычно используемые в колориметрических, УФ- и/или флуоресцентных анализах. Примеры M-фрагментов, которые могут использоваться в разных вариантах осуществления изобретения включают, без ограничения: производные ксантена (например, флуоресцеин, родамин, Oregon Green, эозин или Texas Red); производные цианина (например, цианин, индокарбоцианин, оксакарбоцианин, тиакарбоцианин или мероцианин); производные скварена и замещенные в кольце скварены, включая красители Seta, SeTau и Square; и производные нафталина (например, дансилированные и продановые производные); производные кумарина; производные оксадиазола (например, пиридилоксазол, нитробензоксадиазол или бензоксадиазол); производные антрацена (например, антрахиноны, включая DRAQ5, DRAQ7 и CyTRAK Orange); производные пирена, такие как каскадный синий; производные оксазина (например, Nile red, Nile blue, крезиловый фиолетовый, оксазин 170); производные акридина (например, профлавин, акридиновый оранжевый, акридиновый желтый); производные арилметина: аурамин, кристаллический фиолетовый, малахитовый зеленый; и производные тетрапиррола (например, порфин, фталоцианин или билирубин). Другие примеры М-фрагментов включают: цианиновые красители, ксантатные красители (например, Hex, Vic, Nedd, Joe или Tet); Yakima Yellow; красители Redmond Red; Tamra; Texas Red и Alexa Fluor®.
В еще одних вариантах осуществления любого из перечисленного выше, M содержит три или более арильных или гетероарильных кольца или их сочетания, например, четыре или более арильных или гетероарильных кольца, или их сочетания, или даже пять или более арильных или гетероарильных колец, или их сочетания. В некоторых вариантах осуществления М содержит шесть арильных или гетероарильных колец или их сочетания. В других вариантах осуществления кольца конденсированы. Например, в некоторых вариантах осуществления М содержит три или более конденсированных кольца, четыре или более конденсированных кольца, пять или более конденсированных колец или даже шесть или более конденсированных колец.
В некоторых вариантах осуществления М является циклическим. Например, в некоторых вариантах осуществления М является карбоциклическим. В другом варианте осуществления М является гетероциклическим. В еще одних приведенных выше вариантах осуществления М в каждом случае независимо содержит арильный фрагмент. В некоторых из этих вариантов осуществления арильный фрагмент является полициклическим. В других более специфичных примерах арильный фрагмент представляет собой конденсированный полициклический арильный фрагмент, например, который может содержать по меньшей мере 3, по меньшей мере 4 или даже более 4 арильных колец.
В других вариантах осуществления любого из приведенных выше соединений структуры (I), M в каждом случае независимо содержит, по меньшей мере, один гетероатом. Например, в некоторых вариантах осуществления гетероатом представляет собой азот, кислород или серу.
В еще одних вариантах осуществления любого из указанного выше, М в каждом случае независимо содержит по меньшей мере один заместитель. Например, в некоторых вариантах осуществления заместитель представляет собой фтор-, хлор-, бром-, йод-, амино, алкиламино, ариламино, гидрокси, сульфгидрильную, алкокси, арилокси, фенильную, арильную, метильную, этильную, пропильную, бутильную, изопропильную, трет-бутильную, карбокси, сульфонатную, амидную или формильную группу.
В некоторых даже еще более специфичных вариантах осуществления приведенного выше, M в каждом случае независимо представляет собой диметиламиностильбеновый, хинакридоновый, фторфенилдиметил-BODIPY-, his-фторфенил-BODIPY-, акридиновый, терриленовый, гексафенильный, порфириновый, бензопиреновый, (фторфенил-диметил-дифторбор-диаза-индацен)фенильный, (бис-фторфенил-дифторбор-диаза-индацен)фенильный, кватерфенильный, бибензотиазольный, тербензотиазольный, бинафтильный, биантрацильный, сквареновый, скварилиевый, 9,10-этинилантраценовый или тернафтильный фрагмент. В других вариантах осуществления M в каждом случае независимо представляет собой п-терфенил, перилен, азобензол, феназин, фенантролин, акридин, тиоксантрен, хризен, рубрен, коронен, цианин, периленимид, или периленамид или их производное.В еще одних вариантах осуществления M в каждом случае независимо представляет собой краситель кумарин, краситель резоруфин, краситель на основе дифторида дипиррометенбора, краситель бипиридил рутения, краситель с переносом энергии, краситель тиазоловый оранжевый, полиметиновый или N-арил-1,8-нафталимидный краситель.
В еще одних вариантах осуществления любого из указанного выше, М в каждом случае является одинаковым. В других вариантах осуществления каждое M является различным. В еще одних вариантах осуществления одно или более М являются одинаковыми, и одно или более М являются различными.
В некоторых вариантах осуществления М представляет собой пирен, перилен, периленмоноимид или 6-FAM, или их производное. В некоторых других вариантах осуществления М имеет одну из следующих структур:
Figure 00000038
;
Figure 00000039
;
Figure 00000040
;
Figure 00000041
;
Figure 00000042
;
Figure 00000043
или
Figure 00000044
.
В некоторых специфичных вариантах осуществления соединение структуры (I) представляет собой соединение, выбранное из таблицы 2.
Таблица 2. Примеры соединений структуры I
Наименование Структура
I-1
Figure 00000045
I-2
Figure 00000046
I-3
Figure 00000047
I-4
Figure 00000048
I-5
Figure 00000049
I-6
Figure 00000050
I-7
Figure 00000051
I-8
Figure 00000052
I-9
Figure 00000053
I-10
Figure 00000054
I-11
Figure 00000055
I-12
Figure 00000056
I-13
Figure 00000057
I-14
Figure 00000058
I-15
Figure 00000059
I-16
Figure 00000060
I-17
Figure 00000061
I-18
Figure 00000062
I-19
Figure 00000063
I-20
Figure 00000064
I-21
Figure 00000065
I-22
Figure 00000066
I-23
Figure 00000067
I-24
Figure 00000068
I-25
Figure 00000069
I-26
Figure 00000070
I-27
Figure 00000071
I-28
Figure 00000072
I-29
Figure 00000073
I-30
Figure 00000074
I-31
Figure 00000075
I-32
Figure 00000076
I-33
Figure 00000077
I-34
Figure 00000078
I-35
Figure 00000079
I-36
Figure 00000080
I-37
Figure 00000081
I-38
Figure 00000082
Как используется в таблице 2 и во всей заявке, F, E и Y относятся к флуоресцеиновым, периленовым и пиреновым фрагментам, соответственно, и имеют следующие структуры:
Figure 00000083
(F);
Figure 00000084
(Е) и
Figure 00000085
(Y)
L1 в соединениях таблицы 2 является таким, как определено в данном описании для любого соединения структуры (I). В некоторых специфичных вариантах осуществления, L1 в соединениях таблицы 1 представляет собой фрагмент, содержащий триазолильную группу, причем триазолильная группа образована реакцией алкина и азида.
Описанные здесь соединения красителей являются «регулируемыми», это означает, что при правильном выборе переменных в любом из перечисленных выше соединений, специалист в данной области может получить соединение, имеющее желаемую и/или предварительно заданную молярную флуоресценцию (молярную яркость). Регулируемость соединений позволяет пользователю легко получить соединения, имеющие желаемую флуоресценцию и/или цвет, для использования в конкретном анализе или для идентификации конкретного интересующего аналита. Хотя все переменные могут оказывать влияние на молярную флуоресценцию соединений, считается, что правильный выбор M, m и n играет важную роль в молярной флуоресценции соединений. Соответственно, в одном варианте осуществления предложен способ получения соединения, имеющего желаемую молярную флуоресценцию, причем способ включает выбор М-фрагмента, имеющего известную флуоресценцию, получение соединения структуры (I), содержащего M-фрагмент, и выбор соответствующих переменных для m и n для достижения желаемой молярной флуоресценции.
Молярная флуоресценция в некоторых вариантах осуществления может быть выражена через кратное увеличение или уменьшение по сравнению с флуоресцентной эмиссией исходного флуорофора (например, мономера). В некоторых вариантах осуществления молярная флуоресценция настоящих соединений составляет 1,1×, 1,5×, 2×, 3×, 4×, 5×, 6×, 7×, 8×, 9×, 10× или даже выше относительно исходного флуорофора. Различные варианты осуществления включают получение соединений, имеющих желаемое кратное увеличение во флуоресценции относительно исходного флуорофора путем правильного выбора m и n.
Для простоты иллюстрации различные соединения, содержащие фосфорные фрагменты (например, фосфат и тому подобное), изображены в анионном состоянии (например, OPO(OH)O-, -OPO3 2-). Специалисту в данной области будет понятно, что заряд зависит от рН, и незаряженные (например, протонированные или солевые, например, натриевые или другие катионные) формы также включены в объем вариантов осуществления изобретения.
Композиции, содержащие любое из указанных выше соединений и одну или более молекул аналита (например, биомолекул), предложены в различных других вариантах осуществления. В некоторых вариантах осуществления также предусмотрено использование таких композиций в аналитических методах для детектирования одной или более молекул аналита.
В еще одних вариантах осуществления соединения могут использоваться в различных аналитических методах. Например, в некоторых вариантах осуществления изобретение предлагает способ окрашивания образца, причем способ включает добавление к указанному образцу соединения структуры (I), например, где один из R2 или R3 представляет собой линкер, содержащий ковалентную связь с молекулой аналита (например, биомолекулой) или микрочастицей, и другой из R2 или R3 представляет собой H, OH, алкил, алкокси, простой алкилэфир или -OP(=Ra)(Rb)Rc, в количестве, достаточном для получения оптического отклика, когда указанный образец облучают с соответствующей длиной волны.
В некоторых вариантах осуществления приведенных выше способов R2 представляет собой линкер, содержащий ковалентную связь с молекулой аналита, такой как биомолекула. Например, такой как нуклеиновая кислота, аминокислота или ее полимер (например, полинуклеотид или полипептид). В еще одних вариантах осуществления биомолекула представляет собой фермент, рецептор, лиганд рецептора, антитело, гликопротеин, аптамер или прион.
В еще одних вариантах осуществления приведенного выше способа R2 представляет собой линкер, содержащий ковалентную связь с твердым носителем, таким как микрочастица. Например, в некоторых вариантах осуществления изобретения микрочастица представляет собой полимерную гранулу или неполимерную гранулу.
В еще одних вариантах осуществления указанный оптический отклик представляет собой флуоресцентный отклик.
В других вариантах осуществления указанный образец содержит клетки, и некоторые варианты осуществления также включают наблюдение указанных клеток с помощью проточной цитометрии.
В еще одних вариантах осуществления способ дополнительно включает в себя дифференцирование флуоресцентного отклика от отклика второго флуорофора, имеющего детектируемо отличающиеся оптические свойства.
В других вариантах осуществления изобретение предлагает способ визуальной детекции молекулы аналита, такой как биомолекула, включающий:
(a) обеспечение соединения структуры (I), например, в котором один из R2 или R3 представляет собой линкер, содержащий ковалентную связь с молекулой аналита, и другой из R2 или R3 представляет собой H, OH, алкил, алкокси, простой алкилэфир или -OP(=Ra)(Rb)Rc; и
(b) детектирование соединения по его визуальным свойствам.
В некоторых вариантах осуществления молекула аналита представляет собой нуклеиновую кислоту, аминокислоту или ее полимер (например, полинуклеотид или полипептид). В еще одних вариантах осуществления молекула аналита представляет собой фермент, рецептор, лиганд рецептора, антитело, гликопротеин, аптамер или прион.
В других вариантах осуществления предложен способ визуальной детекции молекулы аналита, такой как биомолекула, причем способ включает в себя:
(а) смешивание любого из указанных выше соединений с одной или несколькими молекулами аналита; и
(b) детектирование соединения по его визуальным свойствам.
В других вариантах осуществления предложен способ визуальной детекции молекулы аналита, причем способ включает в себя:
(а) смешивание соединения по п.1 формулы изобретения, где R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, с молекулой аналита;
(b) образование конъюгата соединения и молекулы аналита; и
(с) детектирование конъюгата по его визуальным свойствам.
В некоторых других вариантах осуществления соединения структуры (I) могут быть использованы в различных целях для анализа клеток. Например, с помощью проточной цитометрии эти соединения могут использоваться для отделения мертвых клеток от жизнеспособных, оценки здоровья клеток (например, некротическая/ранняя апоптотическая/поздняя апоптотическая/живая клетка), отслеживания плоидности и митоза в течение клеточного цикла и определения различных состояний пролиферации клеток. Не ограничиваясь конкретной теорией, предполагается, что варианты осуществления соединений структуры (I) преимущественно связываются с положительно заряженными фрагментами. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления соединения могут использоваться в способах определения присутствия неинтактных клеток, например, некротических клеток. Например, присутствие некротических клеток можно определить путем смешивания образца, содержащего клетки, с соединением структуры (I), и анализа смеси проточной цитометрией. Соединение структуры (I) связывается с некротическими клетками, и, соответственно, его присутствие обнаруживается в условиях проточной цитометрии. В отличие от других окрашивающих реагентов, требующих, чтобы реакционноспособная аминогруппа связывалась с некротическими клетками, варианты осуществления способов окрашивания с использованием соединений структуры (I) не требуют не содержащего белка инкубационного буфера, и таким образом, данные способы являются более эффективными для осуществления, чем соответствующие известные способы.
В разных других вариантах осуществления, соединения могут быть использованы в родственных способах для определения присутствия положительно заряженных фрагментов в интактных или неинтактных клетках, апоптотических тел, деполяризованных мембран и/или проницаемых мембран.
В дополнение к указанным выше способам, варианты осуществления соединений структуры (I) находят применение в различных дисциплинах и способах, включая, без ограничения: визуализацию в эндоскопических процедурах для идентификации раковых и других тканей; идентификацию некротической ткани путем преимущественного связывания соединений с мертвыми клетками; одноклеточные и/или одномолекулярные аналитические методы, например, детекция полинуклеотидов с малой амплификацией или без нее; визуализацию рака, например, путем конъюгирования соединения структуры (I) с антителом или сахаром, или другим фрагментом, который предпочтительно связывает раковые клетки; визуализацию в хирургических процедурах; связывание гистонов для идентификации различных заболеваний; доставку лекарственного средства, например, путем замены М-фрагмента в соединении структуры (I) активным лекарственным фрагментом; и/или в контрастных веществах при лечении зубов и других процедурах, например, при предпочтительном связывании соединения структуры (I) с различной флорой и/или организмами.
Подразумевается, что любой вариант осуществления соединений структуры (I), как описано выше, и любой конкретный выбор, описанный здесь для переменных R1, R2, R3, R4, R5, L1, L2, L3, L4, M, m и/или n в соединениях структуры (I), как описано выше, может быть независимо объединен с другими вариантами осуществления и/или переменными соединений структуры (I) для получения вариантов осуществления изобретения, не описанных специально выше. Кроме того, в случае, если список вариантов выбора указывается для какой-либо конкретной переменной R1, R2, R3, R4, R5, L1, L2, L3, L4, M, m и/или n в конкретном варианте осуществления и/или пункте формулы изобретения, подразумевается, что каждый индивидуальный выбор может быть исключен из конкретного варианта осуществления и/или пункта формулы изобретения, и что оставшийся список вариантов выбора будет считаться находящимся в пределах объема изобретения.
Подразумевается, что в настоящем описании комбинации заместителей и/или переменных отображенной формулы допустимы только в том случае, если такие комбинации приводят к образованию стабильных соединений.
Специалистам в данной области также будет понятно, что в описанном здесь способе функциональные группы соединений-интермедиатов могут нуждаться в защите подходящими защитными группами. Такие функциональные группы включают гидрокси, амино, меркапто и карбоновую кислоту. Подходящие защитные группы для гидрокси включают триалкилсилил или диарилалкилсилил (например, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил или триметилсилил), тетрагидропиранил, бензил и тому подобное. Подходящие защитные группы для амино, амидино и гуанидино включают трет-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил и тому подобное. Подходящие защитные группы для меркапто включают C(O) Rʺ (где Rʺ представляет собой алкил, арил или арилалкил), п-метоксибензил, тритил и тому подобное. Подходящие защитные группы для карбоновой кислоты включают алкиловые, ариловые или аралкиловые сложные эфиры. Защитные группы могут быть добавлены или удалены в соответствии со стандартными методами, которые известны специалистам в данной области техники и описаны в данном документе. Использование защитных групп подробно описано в публикации Green, T.W. и P.G.M. Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis (1999), 3rd Ed., Wiley. Как понятно специалисту в данной области, защитная группа может также представлять собой полимерную смолу, такую как смола Ванга, смола Ринка или 2-хлортритилхлоридная смола.
Кроме того, все соединения по изобретению, которые существуют в форме свободного основания или кислоты, могут быть превращены в их соли путем обработки подходящим неорганическим или органическим основанием или кислотой способами, известными специалисту. Соли соединений по изобретению могут быть превращены в форму их свободного основания или кислоты с помощью стандартных методов.
Следующие ниже схемы реакций иллюстрируют примеры способов получения соединений данного изобретения. Понятно, что специалист в данной области может получить эти соединения аналогичными способами или путем комбинирования других способов, известных специалисту. Предполагается также, что специалист в данной области сможет получить способом, аналогичным описанному ниже, другие соединения структуры (I), конкретно не проиллюстрированные ниже, используя соответствующие исходные компоненты и изменяя по мере необходимости параметры синтеза. Как правило, исходные компоненты могут быть получены из таких источников, как Sigma Aldrich, Lancaster Synthesis, Inc., Maybridge, Matrix Scientific, TCI и Fluorochem USA, и т.д., или синтезированы согласно источникам, известным специалистам в данной области техники (см., например, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition (Wiley, December 2000)), или получены, как описано в данном изобретении.
Схема реакции I
Figure 00000086
Схема реакции I иллюстрирует пример способа получения интермедиатов, подходящих для получения соединений структуры (I). Как показано на схеме реакции I, где R1, L1, L2, L3, G и M являются такими, как определено выше, и R2 и R3 являются такими, как определено выше, или являются их защищенными вариантами, соединение структуры a, которое может быть приобретено или получено хорошо известными методами, вступает в реакцию с M-G' с образованием соединений структуры b. Здесь G и G' представляют собой функциональные группы, имеющие дополнительную реакционную способность (т.е. функциональные группы, которые реагируют с образованием ковалентной связи). G' может быть присоединена к М как боковая группа или может быть частью основной цепи M. G может быть любым числом функциональных групп, описанных в данном документе, таких как алкин, и G' может быть любым числом функциональных групп, таких как, например, азид.
Соединение структуры (I) может быть получено из структуры b по реакции в хорошо известных условиях автоматизированного синтеза ДНК с фосфорамидитным соединением, имеющим следующую структуру (с):
Figure 00000087
,
(c)
где L независимо представляет собой необязательный линкер, за которой следует реакция с другим соединением структуры b. Мультимерные соединения структуры (I) получают путем реакции желаемого числа соединений структуры b последовательно с соответствующим фосфорамидитным реагентом в условиях синтеза ДНК.
В качестве альтернативы, соединения структуры (I) получают сначала путем синтеза димерного или олигомерного соединения, имеющего следующую структуру d, при типичных условиях синтеза ДНК:
Figure 00000088
(d)
где G, L1a, L2, L3, R1, R2, R3 и n являются такими, как определено в данном описании для соединений структуры (II), и затем проводят реакцию соединения структуры d с M-L1b-G', где M, L1b и G' определены здесь для соединений структуры (II) и родственных способов.
Способы синтеза ДНК хорошо известны в данной области техники. Вкратце, две спиртовые группы, например R2 и R3 в интермедиатах b или d выше, функционализируют с помощью диметокситритильной (DMT) группы и 2-цианоэтил-N,N-диизопропиламинофосфорамидитной группы, соответственно. Фосфорамидитная группа связывается со спиртовой группой, как правило, в присутствии активатора, такого как тетразол, с последующим окислением атома фосфора йодом. Диметокситритильная группа может быть удалена с помощью кислоты (например, хлоруксусной кислоты), оставляя открытым свободный спирт, который может взаимодействовать с фосфорамидитной группой. 2-цианоэтильная группа может быть удалена после олигомеризации путем обработки водным раствором аммиака.
Получение фосфорамидитов, используемых в способах олигомеризации, также хорошо известно в данной области. Например, первичный спирт (например, R3) может быть защищен как DMT-группа по реакции с DMT-Cl. Вторичный спирт (например, R2) затем функционализируют в качестве фосфорамидита реакцией с соответствующим реагентом, таким как 2-цианоэтил-N,N-диизопропилхлорофосфорамидит. Способы получения фосфорамидитов и их олигомеризации хорошо известны в данной области и описаны более подробно в примерах.
Соединения структуры (I) получают олигомеризацией интермедиата b в соответствии с хорошо известным фосфорамидитным методом химического синтеза, описанным выше. Желаемое число m и n повторяющихся звеньев включается в молекулу путем повторения фосфорамидитного присоединения желаемое число раз. Следует отметить, что соединения структуры (II), описанные ниже, могут быть получены аналогичными способами.
В различных других вариантах осуществления предложены соединения, подходящие для получения соединений структуры (I). Соединения могут быть получены, как описано выше, в форме мономера, димера и/или олигомера, и после этого М-фрагмент ковалентно присоединяется к соединению путем любого числа методик синтеза (например, описанных выше «клик-реакций»), с образованием соединения структуры (I). Соответственно, в различных вариантах осуществления предложено соединение, имеющее следующую структуру (II):
Figure 00000002
(II)
или его стереоизомер, соль или таутомер, где:
G в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с комплементарной реакционноспособной группой;
L1a, L2 и L3 в каждом случае независимо представляют собой необязательный алкиленовый, алкениленовый, алкиниленовый, гетероалкиленовый, гетероалкениленовый, гетероалкиниленовый или гетероатомный линкер;
L4 в каждом случае независимо представляет собой алкиленовый, алкениленовый, алкиниленовый, гетероалкиленовый, гетероалкениленовый или гетероалкиниленовый линкер;
R1 в каждом случае независимо представляет собой H, алкил или алкокси;
каждый из R2 и R3 независимо представляет собой H, OH, SH, алкил, алкокси, простой алкилэфир, -OP(=Ra)(Rb)Rc, Q, линкер, содержащий ковалентную связь с Q, линкер, содержащий ковалентную связь с молекулой аналита, линкер, содержащий ковалентную связь с твердым носителем, или линкер, содержащий ковалентную связь с другим соединением структуры (II), где: Ra представляет собой O или S; Rb представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd или SRd; Rc представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd, SRd, алкил, алкокси, простой алкилэфир, простой алкоксиалкилэфир, фосфат, тиофосфат, фосфоалкил, тиофосфоалкил, простой фосфоалкилэфир или простой тиофосфоалкилэфир; и Rd представляет собой противоион;
R4 в каждом случае независимо представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd или SRd;
R5 в каждом случае независимо представляет собой оксо, тиоксо или отсутствует;
Q в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с молекулой аналита, твердым носителем или комплементарной реакционноспособной группой Q';
m в каждом случае независимо представляет собой целое число, равное нулю или большее; и
n является целым числом, равным единице или большим.
В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное единице или большее. В других вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное двум или большее. В еще одних вариантах осуществления, по меньшей мере в одном случае, m представляет собой целое число, равное трем или большее.
G-фрагмент в соединении структуры (II) может быть выбран из любого фрагмента, содержащего группу, имеющую группу с подходящей реакционной способностью для образования ковалентной связи с комплементарной группой на М-фрагменте. В иллюстративных вариантах осуществления G фрагмент может быть выбран из любого из описанных в данном документе Q-фрагментов, включая конкретные примеры, приведенные в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления G в каждом случае независимо содержит фрагмент, подходящий для реакций, включающих: катализируемую медью реакцию азида и алкина с образованием триазола (реакция Хьюсгена 1,3-диполярного циклоприсоединения), реакцию диена и диенофила (Дильса-Альдера), нитрон-алкиновое циклоприсоединение, облегченное напряжением, реакцию напряженного алкена с азидом, тетразином или тетразолом, [3+2]-циклоприсоединение алкена и азида, реакцию Дильса-Альдера алкена и тетразина с обратными электронными требованиями, фотореакцию алкена и тетразола и различные реакции замещения, такие как замещение удаляемой группы путем нуклеофильной атаки на электрофильный атом.
В некоторых вариантах осуществления G в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий функциональную группу, представляющую собой альдегид, оксим, гидразон, алкин, амин, азид, ацилазид, ацилгалогенид, нитрил, нитрон, сульфгидрил, дисульфид, сульфонилгалогенид, изотиоцианат, сложный имидоэфир, активированный сложный эфир, кетон, α,β-ненасыщенный карбонил, алкен, малеимид, α-галогенимид, эпоксид, азиридин, тетразин, тетразол, фосфин, биотин или тииран.
В других вариантах осуществления G включает в каждом случае независимо алкиновую или азидную группу. В разных вариантах осуществления G в каждом случае независимо включает реакционноспособную группу, способную образовывать функциональную группу, содержащую алкен, сложный эфир, амид, сложный тиоэфир, дисульфид, карбоциклическую, гетероциклическую или гетероарильную группу после реакции с комплементарной реакционноспособной группой. Например, в некоторых вариантах осуществления гетероарил представляет собой триазолил.
В некоторых вариантах осуществления соединение имеет следующую структуру (IIA):
Figure 00000089
(IIA)
где:
L1a и L1b в каждом случае независимо представляют собой необязательные линкеры; и
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6.
В некоторых специфичных вариантах осуществления (II) и (IIа), каждый L1a отсутствует. В других вариантах осуществления каждый L1a присутствует. Например, в некоторых вариантах осуществления L1a в каждом случае независимо представляет собой гетероалкилен. В других вариантах осуществления L1a имеет следующую структуру:
Figure 00000090
.
В разных других вариантах осуществления соединения структуры (II), L2, L3, L4 в каждом случае независимо представляют собой C1-C6 алкилен, C2-C6 алкенилен или C2-C6 алкинилен. В некоторых других вариантах осуществления, L4 в каждом случае независимо представляет собой C1-C6 алкилен, C2-C6 алкенилен или C2-C6 алкинилен.
В других вариантах осуществления соединение имеет следующую структуру (IIВ):
Figure 00000091
(IIB)
где:
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6; и
y является целым числом от 1 до 6.
В любом другом из приведенных выше вариантов осуществления соединения (II) G в каждом случае независимо представляет собой
Figure 00000092
или
Figure 00000093
.
В разных вариантах осуществления соединения структуры (IIа), x3 и x4 равны 2 в каждом случае. В других вариантах осуществления каждый из x1, x2, x5 и x6 равен 1 в каждом случае. В других вариантах осуществления, y равно 2 для каждого целочисленного значения m.
В других вариантах осуществления, R4 в каждом случае независимо представляет собой OH, O- или ORd, и в других вариантах осуществления R5 представляет собой в каждом случае оксо.
В некоторых других вариантах осуществления соединение имеет одну из следующих структур (ID) или (IE):
Figure 00000094
или
(IID)
Figure 00000095
.
(IIE)
В некоторых вариантах осуществления любого из приведенных выше соединений структуры (II) G в каждом случае независимо представляет собой
Figure 00000092
или
Figure 00000093
.
В некоторых других вариантах осуществления любого из перечисленных выше соединений структуры (II), R1 представляет собой H.
В других различных вариантах осуществления соединений структуры (II), каждый из R2 и R3 независимо представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc. В некоторых других вариантах осуществления R2 или R3 представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc, и другой из R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q.
В еще одних вариантах осуществления соединений структуры (II) Q в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с молекулой аналита или твердым носителем. В других вариантах осуществления Q в каждом случае независимо представляет собой фрагмент, содержащий реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с комплементарной реакционноспособной группой Q'. Например, в некоторых вариантах осуществления Q' присутствует в другом соединении структуры (II) (например, в положении R2 или R3), и Q и Q' содержат комплементарные реакционноспособные группы, благодаря чему реакция соединения структуры (II) и другого соединения структуры (II) приводит к ковалентно связанному димеру соединения структуры (II). Мультимерные соединения структуры (II) также могут быть получены аналогичным образом и включены в объем вариантов осуществления изобретения.
Тип Q-группы и возможность присоединения Q-группы к остальной части соединения структуры (II) не имеет ограничений, при условии, что Q содержит фрагмент, имеющий соответствующую реакционную способность для образования желаемой связи.
В некоторых вариантах осуществления соединений структуры (II), Q представляет собой фрагмент, который не подвержен гидролизу в водных условиях, но является достаточно реакционноспособным для образования связи с соответствующей группой на молекуле аналита или твердом носителе (например, амина, азида или алкина).
Некоторые варианты осуществления соединений структуры (II) включают Q-группы, обычно используемые в области биоконъюгирования. Например, в некоторых вариантах осуществления Q содержит нуклеофильную реакционноспособную группу, электрофильную реакционноспособную группу или реакционноспособную группу циклоприсоединения. В некоторых более специфичных вариантах осуществления Q содержит сульфгидрильную, дисульфидную, активированную сложноэфирную, изотиоцианатную, азидную, алкиновую, алкеновую, диеновую, диенофильную, галогенангидридную, сульфонилгалогенидную, фосфиновую, α-галогенамидную, биотиновую, амино или малеимидную функциональную группу. В некоторых вариантах осуществления, активированный сложный эфир представляет собой N-сукцинимидный сложный эфир, сложный имидоэфир или сложный полифторфенильный эфир. В других вариантах осуществления алкин представляет собой алкилазид или ацилазид.
Приводимые в качестве примера Q-фрагменты для соединений структуры (II) приведены в таблице I выше.
Как и в случае соединений структуры (I), в некоторых вариантах осуществления соединений структуры (II), где Q представляет собой SH, SH-фрагмент будет иметь тенденцию образовывать дисульфидные связи с другой сульфгидрильной группой на другом соединении структуры (II). Соответственно, некоторые варианты осуществления включают соединения структуры (II), которые находятся в форме дисульфидных димеров, причем дисульфидная связь получена из SH Q-групп.
В некоторых других вариантах осуществления соединений структуры (II) один из R2 или R3 представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc, и другой из R2 или R3 представляет собой линкер, содержащий ковалентную связь с молекулой аналита, или линкер, содержащий ковалентную связь с твердым носителем. Например, в некоторых вариантах осуществления молекула аналита представляет собой нуклеиновую кислоту, аминокислоту или ее полимер. В других вариантах осуществления молекула аналита представляет собой фермент, рецептор, лиганд рецептора, антитело, гликопротеин, аптамер или прион. В еще одних вариантах осуществления твердый носитель представляет собой полимерную гранулу или неполимерную гранулу.
В других вариантах осуществления соединений структуры (II) m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 10, от 3 до 10 или от 7 до 9. В других вариантах осуществления m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 5. В других вариантах осуществления m в каждом случае представляет собой целое число, равное единице или большее. Например, в некоторых вариантах осуществления m в каждом случае представляет собой целое число, равное двум или более, или трем или более.
В еще одних вариантах осуществления соединений структуры (II) n является целым числом от 1 до 100. Например, в некоторых вариантах осуществления n является целым числом от 1 до 10.
В других вариантах осуществления соединение структуры (II) выбирают из таблицы 3.
Таблица 3. Примеры соединений структуры (II)
Наименование Структура
II-1
Figure 00000096
II-2
Figure 00000097
II-3
Figure 00000098
II-4
Figure 00000099
II-5
Figure 00000100
II-6
Figure 00000101
II-7
Figure 00000102
II-8
Figure 00000103
II-9
Figure 00000104
II-10
Figure 00000105
II-11
Figure 00000106
II-12
Figure 00000107
II-13
Figure 00000108
II-14
Figure 00000109
II-15
Figure 00000110
II-16
Figure 00000111
II-17
Figure 00000112
II-18
Figure 00000113
II-19
Figure 00000114
II-20
Figure 00000109
II-21
Figure 00000115
II-22
Figure 00000116
Соединения структуры (II) могут использоваться в различных способах, например, в вариантах осуществления предложен способ мечения молекулы аналита, причем способ включает:
(а) смешивание любого из описанных соединений структуры (I), где R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, с молекулой аналита;
(b) образование конъюгата соединения и молекулы аналита; и
(c) взаимодействие конъюгата с соединением формулы M-L1b-G', благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь по реакции по меньшей мере одного G и по меньшей мере одного G',
где:
M представляет собой фрагмент, имеющий две или более двойные углерод-углеродные связи и по меньшей мере одну степень конъюгирования;
L1b представляет собой необязательный алкиленовый, гетероалкиленовый или гетероатомный линкер; и
G' представляет собой реакционноспособную группу, комплементарную G.
Другой вариант осуществления представляет собой способ мечения молекулы аналита, причем способ включает:
(а) смешивание любого из соединений структуры (II), описанных здесь, где R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, с соединением формулы M-L1b-G', благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь путем реакции G и G'; и
(b) взаимодействие продукта стадии (a) с молекулой аналита, в результате чего образуется конъюгат продукта стадии (a) и молекулы аналита,
где:
M представляет собой фрагмент, имеющий две или более двойные углерод-углеродные связи и по меньшей мере одну степень конъюгирования;
L1b представляет собой необязательный алкиленовый, гетероалкиленовый или гетероатомный линкер; и
G' представляет собой реакционноспособную группу, комплементарную G.
Кроме того, как отмечалось выше, соединение структуры (II) можно использовать для получения соединений структуры (I). Соответственно, в одном варианте осуществления предложен способ получения соединения структуры (I), включающий смешивание соединения структуры (II) с соединением формулы M-L1b-G', благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь путем реакции G и G'; где:
M представляет собой фрагмент, имеющий две или более двойные углерод-углеродные связи и по меньшей мере одну степень конъюгирования;
L1b представляет собой необязательный алкиленовый, гетероалкиленовый или гетероатомный линкер; и
G' представляет собой реакционноспособную группу, комплементарную G.
Следующие примеры приведены с целью иллюстрации, а не ограничения.
ПРИМЕРЫ
Общие методы
Спектры 1H-ЯМР получали на спектрометре JEOL при 400 МГц. 1H спектры соотносили с ТМС. Анализ ВЭЖХ с обращенной фазой проводили с использованием системы ВЭЖХ Waters Acquity с колонкой Acquity BEH-C18 2,1 мм × 50 мм, поддерживаемой при 45°С. Масс-спектральный анализ проводили в системе Waters/Micromass Quattro Micro MS/MS (в режиме «MS only») с использованием программного обеспечения для сбора данных MassLynx 4.1. Подвижная фаза, используемая для ЖХ/МС, представляла собой 100 мМ 1,1,1,3,3,3-гексафтор-2-пропанол (HFIP) в 8,6 мМ триэтиламине (TEA), pH 8. Фосфорамидиты и молекулы предшественников также анализировали с использованием системы ВЭЖХ Waters Acquity с колонкой Acquity BEH-C18 2,1 мм × 50 мм, поддерживаемой при 45°С, применяя градиент подвижной фазы ацетонитрил/вода. Молекулярные массы для мономерных интермедиатов были получены с использованием ионизации, усиленной инфузионным введением катиона тропилия, на системе Waters/Micromass Quattro Micro MS/MS (в режиме «MS only»). Эксклюзионную хроматографию (SEC) проводили с использованием аналитической колонки Superdex 200 5/150 GL. Использовали изократическое элюирование PBS-буфером со скоростью потока 0,25 мл/мин, с суммарным временем анализа 17,5 мин. Детектирование осуществляли при 494 нм, 405 нм, 280 нм и 260 нм. Фракции продуктов собирали вручную, объединяли в течение последовательных циклов. Лиофилизировали и восстанавливали в 100 мкл воды. Измерения оптической плотности проводили на спектрофотометре Nanodrop 2000, Thermo Scientific. Измерения флуоресценции осуществляли на флуороспектрометре Nanodrop 3300, Thermo Scientific.
Все реакции проводили в высушенной в сушильном шкафу стеклянной посуде в атмосфере азота, если не указано иное. Коммерчески доступные реагенты для синтеза ДНК приобретали у Glen Research (Sterling, VA). Безводный пиридин, толуол, дихлорметан, диизопропилэтиламин, триэтиламин, уксусную кислоту, пиридин и ТГФ приобретали у Aldrich. Все другие химические реагенты приобретали у Aldrich или TCI и использовали в исходном виде, без дополнительной очистки.
Твердофазный синтез
Все соединения структуры (I) синтезировали на ДНК-синтезаторе ABI 394, используя стандартные методики фосфорамидитного присоединения. Цикл сборки цепей для синтеза олигонуклеотидных фосфорамидитов был следующим: (i) детритилирование, 3% трихлоруксусная кислота в дихлорметане, 1 мин; (ii) присоединение, 0,1 М фосфорамидит и 0,45 М тетразол в ацетонитриле, 10 мин; (iii) кэппирование, 0,5 М уксусный ангидрид в ТГФ/лутидине, 1/1 об./об., 15 с; (iv) окисление, 0,1 М йод в смеси ТГФ/пиридин/вода, 10/10/1 об./об./об., 30 с.
После осуществления химических стадий в цикле следовала промывка ацетонитрилом и продувка сухим аргоном в течение 0,2 -0,4 мин. Отщепление от носителя и удаление основания и фосфороамидитных защитных групп осуществляли обработкой аммиаком в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем соединения анализировали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, как описано выше.
Соединения синтезировались на ДНК/РНК-синтезаторе 394 Applied Biosystems или на GE AKTÄ 10 OligoPilot в масштабе 1 мкмоль или 10 мкмоль и имели 3'-фосфатную группу. Соединения синтезировали непосредственно на CPG-гранулах или на твердом полистирольном носителе. Соединения синтезировали в 3'-5' направлении с использованием стандартных методов твердофазного синтеза ДНК. В методах присоединения использовались стандартные условия синтеза с β-цианоэтилфосфорамидитом. Все фосфорамидитные мономеры растворяли в смеси ацетонитрил/дихлорметан (0,1 М растворы) и добавляли друг за другом, используя следующие циклы синтеза: 1) удаление 5'-диметокситритильной защитной группы дихлоруксусной кислотой в толуоле, 2) присоединение следующего фосфорамидита с активатором в ацетонитриле, 3) окисление с использованием смеси йод/пиридин/вода, и 4) кэппирование уксусным ангидридом/1-метилимидазолом/ацетонитрилом. Удлиняемый алкин (соединение 9 или Glen Research 10-1992) фосфорамидит (100 мг) растворяли в безводном ацетонитриле (700 мкл) и дихлорметане (300 мкл). В колбу добавляли несколько молекулярных сит и помещали в атмосферу аргона. Использовали секвенатор, как описано выше. Цикл синтеза повторяли до тех пор, пока не была собрана 5'-олигофторозидная конструкция. По окончании сборки цепи монометокситритильную (ММТ) группу или диметокситритильную (DMT) группу удаляли с помощью дихлоруксусной кислоты в дихлорметане или дихлоруксусной кислоты в толуоле. Соединения отщепляли от твердого носителя с использованием концентрированного водного гидроксида аммония при комнатной температуре в течение 2-4 ч. Продукт концентрировали под вакуумом, и колонку Sephadex G-25 использовали для выделения основного продукта. Анализ проводили ОФ-ВЭЖХ методом в сочетании с использованием масс-спектрометра для определения молекулярной массы.
ПРИМЕР 1
Получение азидосоединения флуоресцеина (FAM)
Figure 00000117
В 250 мл круглодонную колбу с магнитной мешалкой и капельной воронкой помещали FAM-NHS сложный эфир 2 (2,24 г). В колбу добавляли дихлорметан (35 мл), начинали перемешивание, колбу помещали в атмосферу азота и охлаждали на льду. В отдельном химическом стакане 2-(2-аминоэтокси)этанол (420 мкл) растворяли в дихлорметане (35 мл), метаноле (7 мл) и триэтиламине (1,5 мл) и полученный раствор загружали в капельную воронку. Раствор амина добавляли по каплям к сложному NHS-эфиру в течение 30 мин. Конечный раствор перемешивали в течение 1 ч при 0°С, колбу извлекали из бани со льдом и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле. Фракции продукта анализировали с помощью ТСХ и ЖХ/МС и объединяли с получением 1,6 г (72%).
В 250 мл круглодонную колбу с магнитной мешалкой помещали FAM-спирт 3 (1,5 г) и хлороформ (25 мл). К этому раствору добавляли пиридин (470 мкл) и п-толуолсульфонилхлорид (691 мг). Смесь перемешивали в течение 24 ч, после чего ТСХ указывала на то, что реакция была неполной, добавляли дополнительный п-толуолсульфонилхлорид (1,4 г) и пиридин (1,5 мл) и смесь перемешивали в течение дополнительных 24 ч. ТСХ реакционной смеси после 48 ч показывала, что реакция была завершена. Смесь выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия (200 мл) и дихлорметана (100 мл) в экстракционной воронке и разделяли. Органический слой сохраняли и водный слой экстрагировали дихлорметаном (100 мл) еще два раза. Органические слои объединяли и сушили сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле. Фракции продукта идентифицировали с помощью ТСХ и объединяли с получением желаемого тозилата 4 (1,8 г).
В 200 мл круглодонную колбу с магнитной мешалкой помещали FAM-тозилат 4 (1,8 г) и добавляли ДМФА (15 мл), и смесь перемешивали для осуществления растворения. К смеси добавляли азид натрия (830 мг) и смесь нагревали до 50°С и перемешивали в течение ночи. Смесь выливали в 100 мМ лимонную кислоту (150 мл) и этилацетат (150 мл) в экстракционной воронке. Слои разделяли и органический слой сохраняли. Водный слой экстрагировали этилацетатом еще два раза. Органические слои объединяли и сушили над сульфатом натрия. Раствор фильтровали и концентрировали путем ротационного выпаривания. Неочищенное масло очищали хроматографией на силикагеле, фракции продукта идентифицировали с помощью ТСХ и объединяли. Продукт концентрировали под вакуумом с получением целевого FAM-азида 5 в виде оранжевого твердого вещества (0,82 г). ЖХМС показал соответствие целевому продукту.
ПРИМЕР 2
Синтез алкин фосфорамидита
Figure 00000118
В 500 мл круглодонную колбу, снабженную капельной воронкой и магнитной мешалкой, помещали пропаргилхлорформиат (1,3 мл) в дихлорметане (75 мл). Колбу продували азотом. В отдельный химический стакан помещали аминоспирт 6 (2,0 г) в дихлорметане (60 мл), метаноле (10 мл) и триэтиламине (1,4 мл). В капельную воронку загружали раствор аминоспирта и добавляли по каплям в течение 30 мин. Колбу перемешивали в течение 2 ч, после чего ТСХ указывала на то, что реакция была завершена. Реакционную смесь концентрировали на роторном испарителе и далее сушили под высоким вакуумом и использовали непосредственно на следующей стадии.
В 500 мл круглодонную колбу с магнитной мешалкой помещали карбамат 7 (~3,1 г). В колбу добавляли пиридин (270 мл) и начинали перемешивание. После растворения карбамата раствор помещали на лед и перемешивали в течение 15 мин в атмосфере азота. Диметокситритилхлорид (5,9 г) добавляли в колбу с помощью насыпной воронки одной порцией. Колбу повторно продували азотом и перемешивали при 0°C в течение 1 ч. Колбу извлекали со льда и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли метанол (10 мл) и смесь перемешивали в течение 10 мин. Смесь концентрировали на роторном испарителе и очищали хроматографией на силикагеле. Фракцию продукта определяли с помощью ТСХ, объединяли и концентрировали до конечного масла с получением монозащищенного диола 8 (3,3 г).
В 100 мл круглодонную колбу с магнитной мешалкой помещали монозащищенный диол 8 (500 мг) и дихлорметан (5 мл). Смесь перемешивали до растворения исходного материала. Диизопропилэтиламин (600 мг) и 2-цианоэтил-N,N-диизопропилхлорфосфорамидит (440 мг) добавляли по каплям, одновременно в разных шприцах. Смесь перемешивали в течение 1 ч, после чего ТСХ указывала на то, что реакция была завершена. Материал выливали в раствор бикарбоната натрия, экстрагировали дихлорметаном. Органический слой сушили сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением масла. Дополнительную очистку осуществляли хроматографией на силикагеле, с использованием дихлорметана с 5% триэтиламином. Фракции продукта идентифицировали с помощью ТСХ, объединяли и концентрировали. Конечный продукт выделяли в виде прозрачного масла (670 мг).
ПРИМЕР 3
Получение и характеристика олигомерных красителей
3-, 5- и 10-мерные полиалкиновые олигомеры получали из фосфорамидита примера 2. Репрезентативный 3-мерный краситель получали следующим образом.
В 500 мкл микроцентрифужную пробирку помещали раствор фосфатного буфера (31,5 мкл, 150 мМ, pH=7,4). К этому добавляли раствор азида кумарина (22,5 мкл, 10 мМ в ДМСО) и раствор полиалкина (7,5 мкл, 1 мМ в воде). В отдельную 200 мкл микроцентрифужную пробирку помещали раствор сульфата меди (3,0 мкл, 50 мМ), раствор трис-(3-гидроксипропилтриазолилметил) амина (THPTA, 3,0 мкл, 100 мМ) и раствор аскорбата натрия (7,5 мкл, 100 мМ). Раствор меди перемешивали и все содержимое добавляли в пробирку с азидом кумарина/полиалкином. Реакционную смесь перемешивали и оставляли для инкубации в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляли водой (75 мкл) и очищали с помощью эксклюзионной хроматографии (Superdex 200 5/150 GL, изократическое элюирование PBS, 0,25 мл/мин, детектирование при 405 нМ и 260 нМ).
3-, 5- и 10-мерные красители с кумариновым или флуоресцеиновым фрагментом получали аналогичным образом.
Спектры флуоресценции кумарин- и флуоресцеинсодержащих соединений были определены и представлены на фиг.1 и фиг.2, соответственно. Данные показывают увеличение флуоресценции с увеличением числа алкиновых реакционноспособных центров, что указывает на то, что азид связывается с алкином с образованием соединения структуры (I).
Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, иностранные патенты, заявки на иностранные патенты и непатентные публикации, упомянутые в данном описании, включены в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, в той степени, в которой это не противоречит настоящему описанию.
Исходя из вышеизложенного, понятно, что хотя конкретные варианты осуществления изобретения были описаны в данном документе для целей иллюстрации, возможно внесение различных модификаций, без отклонения от сущности и объема изобретения. Соответственно, изобретение ничем не ограничено, кроме прилагаемой формулы изобретения.

Claims (196)

1. Соединение, имеющее следующую структуру (I):
Figure 00000119
(I)
где:
M в каждом случае независимо представляет собой флуоресцентную или цветную группу, содержащую три или более колец, выбранных из С6-С18 арильных и С1-С13 гетероарильных, имеющих от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из N, О и S, колец;
L1 в каждом случае независимо представляет собой линкер, содержащий триазолильную функциональную группу;
L2 и L3 в каждом случае независимо представляют собой необязательный С1-С12 алкиленовый, С2-С12 алкениленовый, С2-С12 алкиниленовый, С1-С12 гетероалкиленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, С2-С12 гетероалкениленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, или С2-С12 гетероалкиниленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, линкер;
L4 в каждом случае независимо представляет собой С1-С12 алкиленовый, С2-С12 алкениленовый, С2-С12 алкиниленовый, С1-С12 гетероалкиленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, С2-С12 гетероалкениленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, или С2-С12 гетероалкиниленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, линкер;
R1 в каждом случае независимо представляет собой H, С1-С12 алкил или С1-С12 алкокси;
каждый из R2 и R3 независимо представляет собой H, OH, SH, С1-С12 алкил, С1-С12 алкокси, С1-С12 простой алкилэфир, -OP(=Ra)(Rb)Rc, Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, где: Ra представляет собой O или S; Rb представляет собой OH, SH, ORd или SRd; Rc представляет собой OH, SH, O-, S-, ORd, SRd, С1-С12 алкил, С1-С12 алкокси, С1-С12 простой алкилэфир, простой (С1-С12)алкокси(С1-С12)алкилэфир, фосфат, тиофосфат, фосфо(С1-С12)алкил, тиофосфо(С1-С12)алкил, простой фосфо(С1-С12)алкилэфир или простой тиофосфо(С1-С12)алкилэфир; и Rd представляет собой противоион щелочного металла;
R4 в каждом случае независимо представляет собой OH, SH, ORd или SRd;
R5 в каждом случае независимо представляет собой оксо, тиоксо или отсутствует;
Q в каждом случае независимо представляет собой
Figure 00000120
Figure 00000121
m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 10; и
n является целым числом от 1 до 100.
2. Соединение по п.1, в котором для по меньшей мере одного случая L1 L1-M имеет следующую структуру:
Figure 00000122
где каждый из L1a и L1b независимо представляет собой необязательный линкер.
3. Соединение по п.1, в котором для по меньшей мере одного случая L1 L1-M имеет следующую структуру:
Figure 00000123
где каждый из L1a и L1b независимо представляет собой необязательный линкер.
4. Соединение по п.1, в котором соединение имеет следующую структуру (IА):
Figure 00000124
(IA)
где:
L1a и L1b в каждом случае независимо представляют собой необязательные линкеры; и
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6.
5. Соединение по п.1, в котором соединение имеет следующую структуру (IB):
Figure 00000125
(IB)
где:
L1a и L1b в каждом случае независимо представляют собой необязательные линкеры; и
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6.
6. Соединение по любому из пп.2-5, в котором L1a, или L1b, или и то и другое отсутствует.
7. Соединение по любому из пп.2-5, в котором L1a, или L1b, или и то и другое присутствует.
8. Соединение по п.7, в котором каждый из L1a и L1b, если присутствует, независимо представляет собой С1-С12 алкилен или С1-С12 гетероалкилен, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S.
9. Соединение по п.8, в котором L1a и L1b, если присутствуют, независимо имеют одну из следующих структур:
Figure 00000126
;
Figure 00000127
или
Figure 00000128
.
10. Соединение по любому из пп.1-9, в котором L4 в каждом случае независимо представляет собой C1-C6 алкилен, C2-C6 алкенилен или C2-C6 алкинилен.
11. Соединение по п.10, в котором соединение имеет следующую структуру (IC):
Figure 00000129
(IC)
где:
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6; и
y в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 6.
12. Соединение по п.11, в котором y равно 2 для каждого целочисленного значения m.
13. Соединение по любому из пп.11, 12, в котором каждый из x1, x2, x3 и x4 равен 1 в каждом случае.
14. Соединение по любому из пп.11, 12, в котором каждый из x2 и x4 равен 0 в каждом случае и x3 равен 1.
15. Соединение по любому из пп.1-14, в котором R4 в каждом случае независимо представляет собой OH или ORd.
16. Соединение по любому из пп.1-15, в котором R5 в каждом случае представляет собой оксо.
17. Соединение по п.1, в котором соединение имеет одну из следующих структур (ID) или (IE):
Figure 00000130
или
(ID)
Figure 00000131
.
(IE)
18. Соединение по любому из пп.1-17, в котором R1 представляет собой Н.
19. Соединение по любому из пп.1-18, в котором каждый из R2 и R3 независимо представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc.
20. Соединение по любому из пп.1-19, в котором один из R2 или R3 представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc и другой из R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q.
21. Соединение по любому из пп.1-20, в котором m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 3 до 10.
22. Соединение по любому из пп.1-20, в котором m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 7 до 9.
23. Соединение по любому из пп.1-22, в котором n является целым числом от 1 до 10.
24. Соединение по любому из пп.1-23, в котором M в каждом случае независимо представляет собой группу, содержащую четыре или более С6-С18 арильных или С1-С13 гетероарильных кольца, имеющих от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из N, О и S.
25. Соединение по п.1, в котором M является флуоресцентным.
26. Соединение по любому из пп.1-25, в котором M в каждом случае независимо содержит конденсированную полициклическую арильную группу, содержащую по меньшей мере 4 конденсированных кольца.
27. Соединение по любому из пп.1-26, в котором М в каждом случае независимо представляет собой диметиламиностильбеновую, хинакридоновую, фторфенилдиметил-BODIPY-, his-фторфенил-BODIPY-, акридиновую, терриленовую, гексафенильную, порфириновую, бензопиреновую, (фторфенил-диметил-дифторбор-диаза-индацен)фенильную, (бис-фторфенил-дифторбор-диаза-индацен)фенильную, кватерфенильную, бибензотиазольную, тербензотиазольную, бинафтильную, биантрацильную, сквареновую, скварилиевую, 9,10-этинилантраценовую или тернафтильную группу.
28. Соединение по любому из пп.1-26, в котором М в каждом случае независимо представляет собой п-терфенил, перилен, азобензол, феназин, фенантролин, акридин, тиоксантрен, хризен, рубрен, коронен, цианин, периленимид, или периленамид, или их производное.
29. Соединение по любому из пп.1-26, в котором М в каждом случае независимо представляет собой краситель кумарин, краситель резоруфин, краситель на основе дифторида дипиррометенбора, краситель бипиридил рутения, краситель с переносом энергии, краситель тиазоловый оранжевый, полиметиновый или N-арил-1,8-нафталимидный краситель.
30. Соединение по любому из пп.1-26, в котором М в каждом случае независимо представляет собой пирен, перилен, периленмоноимид, или 6-FAM, или их производное.
31. Соединение по любому из пп.1-26, в котором M в каждом случае независимо имеет одну из следующих структур:
Figure 00000132
;
Figure 00000133
;
Figure 00000134
;
Figure 00000135
;
Figure 00000136
;
Figure 00000137
или
Figure 00000138
.
32. Соединение, имеющее одну из следующих структур, представленных в состоянии аниона:
Figure 00000139
;
Figure 00000140
;
Figure 00000141
;
Figure 00000142
;
Figure 00000143
;
Figure 00000144
;
Figure 00000145
;
Figure 00000146
;
Figure 00000147
;
Figure 00000148
;
Figure 00000149
;
Figure 00000150
;
Figure 00000151
;
Figure 00000152
;
Figure 00000153
;
Figure 00000154
;
Figure 00000155
;
Figure 00000156
;
Figure 00000157
;
Figure 00000158
;
Figure 00000159
;
Figure 00000160
;
Figure 00000161
;
Figure 00000162
;
Figure 00000163
;
Figure 00000164
;
Figure 00000165
;
Figure 00000166
;
Figure 00000167
;
Figure 00000168
;
Figure 00000169
;
Figure 00000170
;
Figure 00000171
;
Figure 00000172
;
Figure 00000173
;
Figure 00000174
;
Figure 00000175
;
Figure 00000176
;
где F имеет следующую структуру:
Figure 00000177
,
где E имеет следующую структуру:
Figure 00000178
,
где Y имеет следующую структуру:
Figure 00000179
, и
L1 в каждом случае независимо включает триазолильную функциональную группу.
33. Способ окрашивания образца, включающего клетки, включающий добавление к указанному образцу соединения по любому из пп.1-32 в количестве, достаточном для получения оптического отклика, когда указанный образец облучают с соответствующей длиной волны.
34. Способ по п.33, в котором указанный оптический отклик представляет собой флуоресцентный отклик.
35. Способ по п.33, также включающий наблюдение указанных клеток с помощью проточной цитометрии.
36. Способ по п.33, также включающий дифференцирование флуоресцентного отклика от отклика второго флуорофора, имеющего детектируемо отличающиеся оптические свойства.
37. Способ визуальной детекции биомолекулы, причем способ включает в себя:
(а) смешивание соединения по п.1 с биомолекулой;
(b) образование конъюгата соединения по п.1 и биомолекулы; и
(с) детектирование соединения по п.1 в конъюгате по его визуальным свойствам.
38. Композиция для детектирования одной или более биомолекул, содержащая соединение по любому из пп.1-32.
39. Применение композиции по п.38 в аналитическом методе для детекции одной или более биомолекул.
40. Соединение, имеющее следующую структуру (II):
Figure 00000180
(II)
или его соль, где:
G в каждом случае независимо представляет собой алкиновую или азидную группу;
L1a, L2 и L3 в каждом случае независимо представляют собой необязательный С1-С12 алкиленовый, С2-С12 алкениленовый, С2-С12 алкиниленовый, С1-С12 гетероалкиленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, С2-С12 гетероалкениленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, или С2-С12 гетероалкиниленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, линкер;
L4 в каждом случае независимо представляет собой С1-С12 алкиленовый, С2-С12 алкениленовый, С2-С12 алкиниленовый, С1-С12 гетероалкиленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, С2-С12 гетероалкениленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, или С2-С12 гетероалкиниленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, линкер;
R1 в каждом случае независимо представляет собой H, С1-С12 алкил или С1-С12 алкокси;
каждый из R2 и R3 независимо представляет собой H, OH, SH, С1-С12 алкил, С1-С12 алкокси, простой С1-С12 алкилэфир, -OP(=Ra)(Rb)Rc, Q, где: Ra представляет собой O или S; Rb представляет собой OH, SH, ORd или SRd; Rc представляет собой OH, SH, ORd, SRd, С1-С12 алкил, С1-С12 алкокси, простой С1-С12 алкилэфир, простой (С1-С12)алкокси(С1-С12)алкилэфир, фосфат, тиофосфат, фосфо(С1-С12)алкил, тиофосфо(С1-С12)алкил, простой фосфо(С1-С12)алкилэфир или простой тиофосфо(С1-С12)алкилэфир; и Rd представляет собой противоион щелочного метала;
R4 в каждом случае независимо представляет собой OH, SH, ORd или SRd;
R5 в каждом случае независимо представляет собой оксо, тиоксо или отсутствует;
Q в каждом случае независимо представляет собой
Figure 00000120
Figure 00000181
;
m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 1 до 10; и
n является целым числом от 1 до 100.
41. Соединение по п.40, в котором соединение имеет следующую структуру (IIA):
Figure 00000182
(IIA)
где:
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6.
42. Соединение по любому из пп.40, 41, в котором каждый L1a отсутствует.
43. Соединение по любому из пп.40-42, в котором каждый L1a присутствует.
44. Соединение по п.43, в котором L1a в каждом случае независимо представляет собой С1-С12 гетероалкилен, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S.
45. Соединение по п.44, в котором L1a имеет следующую структуру:
Figure 00000128
.
46. Соединение по любому из пп.40-45, в котором L4 в каждом случае независимо представляет собой C1-C6 алкилен, C2-C6 алкенилен или C2-C6 алкинилен.
47. Соединение по п.40, в котором соединение имеет следующую структуру (IIВ):
Figure 00000183
(IIB)
где:
x1, x2, x3 и x4 в каждом случае независимо представляют собой целое число от 0 до 6; и
y является целым числом от 1 до 6.
48. Соединение по любому из п.47, в котором y равно 2 для каждого целочисленного значения m.
49. Соединение по любому из пп.47, 48, в котором каждый из x1, x2, x3 и x4 равен 1 в каждом случае.
50. Соединение по любому из пп.47, 48, в котором каждый из x2 и x4 равен 0 в каждом случае и x3 равен 1.
51. Соединение по любому из пп.40-50, в котором R4 в каждом случае независимо представляет собой OH или ORd.
52. Соединение по любому из пп.40-51, в котором R5 в каждом случае представляет собой оксо.
53. Соединение по п.40, в котором соединение имеет одну из следующих структур (ID) или (IE):
Figure 00000184
или
(IID)
Figure 00000185
.
(IIE)
54. Соединение по любому из пп.40-53, в котором R1 представляет собой Н.
55. Соединение по любому из пп.40-54, в котором каждый из R2 и R3 независимо представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc.
56. Соединение по любому из пп.40-54, в котором один из R2 или R3 представляет собой OH или -OP(=Ra)(Rb)Rc и другой из R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q.
57. Соединение по любому из пп.40-56, в котором m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 3 до 10.
58. Соединение по любому из пп.40-56, в котором m в каждом случае независимо представляет собой целое число от 7 до 9.
59. Соединение по любому из пп.40-58, в котором n является целым числом от 1 до 10.
60. Способ мечения биомолекулы, включающий:
(а) смешивание соединения по п.40, где R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, с биомолекулой;
(b) образование конъюгата соединения по п.40 и биомолекулы; и
(c) взаимодействие конъюгата с соединением формулы M-L1b-G′, благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь по реакции по меньшей мере одного G и по меньшей мере одного G′,
где:
M представляет собой флуоресцентную или цветную группу, содержащую три или более колец, выбранных из С6-С18 арильных и С1-С13 гетероарильных, имеющих от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из N, О и S, колец;
L1b представляет собой необязательный С1-С12 алкиленовый или С1-С12 гетероалкиленовый, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S, линкер; и
G' представляет собой реакционноспособную группу, комплементарную G.
61. Способ мечения биомолекулы, включающий:
(а) смешивание соединения по п.40, где R2 или R3 представляет собой Q или линкер, содержащий ковалентную связь с Q, с соединением формулы M-L1b-G′, благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь путем реакции G и G′; и
(b) взаимодействие продукта стадии (a) с биомолекулой, в результате чего образуется конъюгат продукта стадии (a) и биомолекулы,
где:
M представляет собой флуоресцентную или цветную группу, содержащую три или более колец, выбранных из С6-С18 арильных и С1-С13 гетероарильных, имеющих от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из N, О и S, колец;
L1b представляет собой необязательный С1-С12 алкиленовый или С1-С12 гетероалкиленовый линкер; и
G' представляет собой реакционноспособную группу, комплементарную G.
62. Способ получения соединения по п.1, причем способ включает смешивание соединения по п.40 с соединением формулы M-L1b-G′, благодаря чему образуется по меньшей мере одна ковалентная связь путем реакции G и G′, где:
M представляет собой флуоресцентную или цветную группу, содержащую три или более колец, выбранных из С6-С18 арильных и С1-С13 гетероарильных, имеющих от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из N, О и S, колец;
L1b представляет собой необязательный С1-С12 алкиленовый или С1-С12 гетероалкиленовый линкер, имеющий один или более гетероатомов, выбранных из N, О, Р и S; и
G' представляет собой реакционноспособную группу, комплементарную G.
RU2018137690A 2016-04-01 2017-03-31 Ультраяркие димерные или полимерные красители RU2762328C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662317192P 2016-04-01 2016-04-01
US62/317,192 2016-04-01
PCT/US2017/025530 WO2017173355A1 (en) 2016-04-01 2017-03-31 Ultra bright dimeric or polymeric dyes

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018137690A RU2018137690A (ru) 2020-05-12
RU2018137690A3 RU2018137690A3 (ru) 2020-07-08
RU2762328C2 true RU2762328C2 (ru) 2021-12-17

Family

ID=58609995

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018137690A RU2762328C2 (ru) 2016-04-01 2017-03-31 Ультраяркие димерные или полимерные красители

Country Status (10)

Country Link
US (3) US11142647B2 (ru)
EP (1) EP3436529A1 (ru)
JP (1) JP7049113B2 (ru)
KR (2) KR20230066652A (ru)
CN (2) CN114806218A (ru)
AU (1) AU2017240154B2 (ru)
BR (1) BR112018070164B1 (ru)
CA (2) CA3018564C (ru)
RU (1) RU2762328C2 (ru)
WO (1) WO2017173355A1 (ru)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101847748B1 (ko) 2013-08-22 2018-04-10 소니 주식회사 수용성 형광 또는 유색 염료 및 그의 사용 방법
EP3262022A4 (en) 2015-02-26 2018-08-15 Sony Corporation Phenylethynylnaphthalene dyes and methods for their use
US11827661B2 (en) 2015-02-26 2023-11-28 Sony Group Corporation Water soluble fluorescent or colored dyes comprising conjugating groups
WO2016183185A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Sony Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes
RU2762328C2 (ru) 2016-04-01 2021-12-17 Сони Корпорейшн Ультраяркие димерные или полимерные красители
US11434377B2 (en) 2016-04-01 2022-09-06 Sony Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes with rigid spacing groups
KR20180133890A (ko) * 2016-04-06 2018-12-17 소니 주식회사 스페이싱 링커 그룹을 포함하는 초고명도 이량체성 또는 중합체성 염료
WO2017197014A2 (en) 2016-05-10 2017-11-16 Sony Corporation Compositions comprising a polymeric dye and a cyclodextrin and uses thereof
US11370922B2 (en) 2016-05-10 2022-06-28 Sony Corporation Ultra bright polymeric dyes with peptide backbones
WO2017197144A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Sony Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes
JP7068191B2 (ja) 2016-06-06 2022-05-16 ソニーグループ株式会社 蛍光または有色レポーター基を含むイオン性ポリマー
US12018159B2 (en) 2016-07-29 2024-06-25 Sony Group Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes and methods for preparation of the same
US11674901B2 (en) 2017-06-16 2023-06-13 Duke University Resonator networks for improved label detection, computation, analyte sensing, and tunable random number generation
EP3691690B1 (en) 2017-10-05 2024-08-14 Sony Group Corporation Programmable polymeric drugs
JP2021503450A (ja) 2017-11-16 2021-02-12 ソニー株式会社 プログラム可能なポリマー薬
CN111565757A (zh) * 2018-01-12 2020-08-21 索尼公司 包含生物活性化合物的磷酸烷基聚合物
JP2021510696A (ja) 2018-01-12 2021-04-30 ソニー株式会社 生物学的に活性な化合物を含む剛性間隔基を有するポリマー
WO2019182765A1 (en) 2018-03-19 2019-09-26 Sony Corporation Use of divalent metals for enhancement of fluorescent signals
US20210032474A1 (en) 2018-03-21 2021-02-04 Sony Corporation Polymeric tandem dyes with linker groups
EP3775052B1 (en) 2018-03-30 2024-06-05 Becton, Dickinson and Company Water-soluble polymeric dyes having pendant chromophores
CN112313242A (zh) 2018-06-27 2021-02-02 索尼公司 具有含脱氧核糖的连接体基团的聚合物染料
JP2021531372A (ja) * 2018-07-13 2021-11-18 ソニーグループ株式会社 オルガノホスフェート単位を含む主鎖を有するポリマー色素
JP7239904B2 (ja) 2019-09-26 2023-03-15 ソニーグループ株式会社 リンカー基を有するポリマータンデム色素
JP2022549014A (ja) 2019-09-30 2022-11-22 ソニーグループ株式会社 ヌクレオチドプローブ
US20240092820A1 (en) 2020-11-25 2024-03-21 Sony Group Corporation Polymer dyes
JP2023552448A (ja) 2020-12-07 2023-12-15 ソニーグループ株式会社 二量体色素又はポリマー色素における輝度を増強するためのスペーシングリンカー基の設計
WO2023242662A2 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Sony Group Corporation Polymeric tandem dyes with spacing linker groups
WO2023242661A2 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Sony Group Corporation Polymeric tandem dyes with spacing linker groups

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1121931A1 (ru) * 1983-01-10 1988-04-15 Институт Биологической Химии Ан Бсср Конъюгаты тиреоидных гормонов с альбумином дл выработки антител к тиреоидным гормонам у животных
WO2015027176A1 (en) * 2013-08-22 2015-02-26 Sony Corporation Water soluble fluorescent or colored dyes and methods for their use

Family Cites Families (158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4450305A (en) 1982-10-25 1984-05-22 American Cyanamid Company Poly(ethyleneoxy)-substituted-9,10-bis(phenylethynyl)anthracenes
US4476229A (en) 1982-11-08 1984-10-09 Abbott Laboratories Substituted carboxyfluoresceins
EP0355864A3 (en) 1984-03-15 1991-09-18 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Method of quantitatively measuring an oxidative substance by using triphenyl methane type leuco compounds as coloring matter
JPH0665677B2 (ja) 1985-03-09 1994-08-24 三菱化成株式会社 リン脂質類似構造を有するジオ−ルおよびその製造方法
US5268486A (en) 1986-04-18 1993-12-07 Carnegie-Mellon Unversity Method for labeling and detecting materials employing arylsulfonate cyanine dyes
US5053054A (en) 1988-09-12 1991-10-01 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and reagents for staining intracellular components
US5318894A (en) 1990-01-30 1994-06-07 Miles Inc. Composition, device and method of assaying for peroxidatively active substances
US6365730B1 (en) 1990-06-19 2002-04-02 Gene Shears Pty. Limited DNA-Armed ribozymes and minizymes
JPH04282391A (ja) 1991-03-08 1992-10-07 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd エタノールアミン誘導体およびその製造法
EP0605655B1 (en) 1991-09-16 1997-05-07 Molecular Probes, Inc. Dimers of unsymmetrical cyanine dyes
ES2159282T3 (es) 1991-11-07 2001-10-01 Nanotronics Inc Hibridacion de polinucleotidos conjugados con cromoforas y fluoroforos con el fin de generar sistemas de transferencia de energia de donador a donador.
DE69434649T2 (de) 1993-07-13 2007-02-22 Abbott Laboratories, Abbott Park Durch fluoreszierenden polymer markierte konjugate und zwischenprodukte
US6171859B1 (en) 1994-03-30 2001-01-09 Mitokor Method of targeting conjugate molecules to mitochondria
US5994143A (en) 1996-02-01 1999-11-30 Abbott Laboratories Polymeric fluorophores enhanced by moieties providing a hydrophobic and conformationally restrictive microenvironment
US6218108B1 (en) 1997-05-16 2001-04-17 Research Corporation Technologies, Inc. Nucleoside analogs with polycyclic aromatic groups attached, methods of synthesis and uses therefor
DE19633268A1 (de) 1996-08-19 1998-02-26 Hoechst Ag Polymere Gallensäure-Resorptionsinhibitoren mit gleichzeitiger Gallensäure-Adsorberwirkung
JP2001511128A (ja) 1997-01-28 2001-08-07 ファルマシア・アンド・アップジョン・カンパニー 水不溶性ポルフィリンの脂質錯体の凍結乾燥物
US6893868B2 (en) 1997-02-20 2005-05-17 Onco Immunin, Inc. Homo-doubly labeled compositions for the detection of enzyme activity in biological samples
US5986030A (en) 1997-04-15 1999-11-16 Nalco Chemical Company Fluorescent water soluble polymers
DE19717904A1 (de) 1997-04-23 1998-10-29 Diagnostikforschung Inst Säurelabile und enzymatisch spaltbare Farbstoffkonstrukte zur Diagnostik mit Nahinfrarotlicht und zur Therapie
JP3078793B2 (ja) 1998-04-30 2000-08-21 株式会社分子バイオホトニクス研究所 ロタキサン構造を有する色素、ラベル化剤、およびラベル化方法
US6716452B1 (en) 2000-08-22 2004-04-06 New River Pharmaceuticals Inc. Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
US7060708B2 (en) 1999-03-10 2006-06-13 New River Pharmaceuticals Inc. Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
US6627400B1 (en) 1999-04-30 2003-09-30 Aclara Biosciences, Inc. Multiplexed measurement of membrane protein populations
US6514700B1 (en) 1999-04-30 2003-02-04 Aclara Biosciences, Inc. Nucleic acid detection using degradation of a tagged sequence
AU5935300A (en) 1999-07-22 2001-02-13 Nalco Chemical Company Fluorescent water-soluble polymers
US6479650B1 (en) 1999-12-14 2002-11-12 Research Corporation Technologies, Inc. Fluorescent nucleoside analogs and combinatorial fluorophore arrays comprising same
US20020012947A1 (en) 2000-03-14 2002-01-31 Bevers Susan Ann Biomarkers for the labeling, visual detection and quantification of biomolecules
EP1301625B1 (en) 2000-03-28 2010-11-03 Nanosphere, Inc. Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor
EP1301626A4 (en) 2000-05-08 2004-06-02 Qtl Biosystems Llc IMPROVEMENTS TO THE QTL-POLYMER FLUORESCENT BIODETECTION APPROACH
WO2001091725A2 (en) 2000-05-31 2001-12-06 Univ Johns Hopkins Biologically useful polyphosphates
US20020099013A1 (en) 2000-11-14 2002-07-25 Thomas Piccariello Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
AU8911101A (en) 2000-09-11 2002-03-26 Univ Columbia Combinatorial fluorescence energy transfer tags and uses thereof
CA2424454C (en) 2000-09-19 2010-07-20 Li-Cor, Inc. Cyanine dyes
US6448407B1 (en) 2000-11-01 2002-09-10 Pe Corporation (Ny) Atropisomers of asymmetric xanthene fluorescent dyes and methods of DNA sequencing and fragment analysis
US8394813B2 (en) 2000-11-14 2013-03-12 Shire Llc Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
GB2372256A (en) 2001-02-14 2002-08-21 Kalibrant Ltd Detectable entity comprising a plurality of detectable units releasably connected together by stimulus-cleavable linkers for use in fluorescence detection
US6743905B2 (en) 2001-04-16 2004-06-01 Applera Corporation Mobility-modified nucleobase polymers and methods of using same
US8323903B2 (en) 2001-10-12 2012-12-04 Life Technologies Corporation Antibody complexes and methods for immunolabeling
JP3813890B2 (ja) 2002-03-22 2006-08-23 富士写真フイルム株式会社 ３層レジストプロセス用中間層材料組成物及びそれを用いたパターン形成方法
US20040086914A1 (en) 2002-07-12 2004-05-06 Affymetrix, Inc. Nucleic acid labeling methods
AU2003262833A1 (en) 2002-08-23 2004-03-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent glycosides and methods for their use
AU2003304043A1 (en) 2002-08-26 2004-11-04 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for detection and analysis of polynucleotides using light harvesting multichromophores
US20040138467A1 (en) 2002-11-26 2004-07-15 French Roger Harquail Aromatic and aromatic/heteroaromatic molecular structures with controllable electron conducting properties
US7759459B2 (en) 2003-01-10 2010-07-20 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Fluorescent assays for protein kinases
US7238792B2 (en) 2003-03-18 2007-07-03 Washington State University Research Foundation Foldable polymers as probes
US7172907B2 (en) 2003-03-21 2007-02-06 Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. Cyanine dye labelling reagents with meso-substitution
AU2004265159B2 (en) 2003-08-14 2010-08-19 Cellectis Amino acid sequences facilitating penetration of a substance of interest into cells and/or cell nuclei
WO2005051967A2 (en) 2003-11-19 2005-06-09 Allelogic Biosciences Corp. Oligonucleotides labeled with a plurality of fluorophores
AU2003296419A1 (en) 2003-12-09 2005-07-21 Molecular Probes, Inc. Pyrenyloxysulfonic acid fluorescent agents
CA2562685C (en) 2004-04-27 2013-09-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety
US20060035302A1 (en) 2004-06-21 2006-02-16 Applera Corporation Kinase substrates with multiple phosphorylation sites
EP1781675B1 (en) * 2004-08-13 2014-03-26 Epoch Biosciences, Inc. Phosphonate fluorescent dyes and conjugates
US8586718B2 (en) 2004-09-14 2013-11-19 Applied Biosystems, Llc Multi-chromophoric quencher constructs for use in high sensitivity energy transfer probes
US8153706B2 (en) 2004-10-25 2012-04-10 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Polymeric colorants having pigment and dye components and corresponding ink compositions
PL1655317T3 (pl) 2004-11-09 2007-10-31 Ipagsa Ind Sl Termoreaktywne polimery absorbujące promieniowanie podczerwone i ich zastosowanie w termoczułej litograficznej płycie drukarskiej
EP2502946B1 (en) 2005-01-10 2017-10-04 The Regents of The University of California Cationic conjugated polymers suitable for strand-specific polynucleiotide detection in homogeneous and solid state assays
JP2008535945A (ja) 2005-03-09 2008-09-04 セファイド 極性色素
US8227621B2 (en) 2005-06-30 2012-07-24 Li-Cor, Inc. Cyanine dyes and methods of use
EP1928822B1 (en) 2005-09-26 2013-02-27 Life Technologies Corporation Violet laser excitable dyes and their method of use
JP4837743B2 (ja) 2005-11-18 2011-12-14 アメリカ合衆国 修飾カルジオリピンおよびその使用法
JP5410760B2 (ja) 2005-12-12 2014-02-05 チバ ホールディング インコーポレーテッド 半導体素子、化合物、半導体素子の半導体層及び薄膜トランジスタ素子を作製する方法
US20070148094A1 (en) 2005-12-22 2007-06-28 Uzgiris Egidijus E Polymeric imaging agents and medical imaging methods
WO2007094135A1 (ja) 2006-02-15 2007-08-23 Gifu University オリゴヌクレオチド誘導体及びその利用
ES2369608T3 (es) 2006-04-13 2011-12-02 Midatech Ltd. Nanopartículas que contienen tres ligandos diferentes para proporcionar respuestas inmunitarias frente a agentes infecciosos.
EP2054770A2 (en) 2006-08-12 2009-05-06 STX Aprilis, Inc. Sensitizer dyes for photoacid generating systems using short visible wavelengths
CN101523631B (zh) 2006-10-12 2010-09-22 出光兴产株式会社 有机薄膜晶体管元件以及有机薄膜发光晶体管
WO2008076524A2 (en) 2006-10-27 2008-06-26 Life Technologies Corporation Fluorogenic ph sensitive dyes and their method of use
US8053588B2 (en) 2007-03-07 2011-11-08 Kabushiki Kaisha Toyota Chuo Kenkyusho Organosilane compound and organosilica obtained therefrom
US9556210B2 (en) 2007-04-23 2017-01-31 Sabag-Rfa Ltd. System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
US9156865B2 (en) 2007-04-23 2015-10-13 Deliversir Ltd System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
WO2008129548A2 (en) 2007-04-23 2008-10-30 Segev Laboratories Limited A system for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
EP2155805A2 (en) 2007-05-11 2010-02-24 Basf Se Polymeric dyes
EP2014698A1 (en) 2007-07-12 2009-01-14 Crystax Pharmaceuticals S.L. Polymers and their use as fluorescent labels
TWI409280B (zh) 2007-07-31 2013-09-21 American Dye Source Inc 聚合物染料、塗覆層組合物及熱微影印刷板
GB2456298A (en) 2008-01-07 2009-07-15 Anthony Ian Newman Electroluminescent materials comprising oxidation resistant fluorenes
CN101970541B (zh) 2008-03-10 2013-12-04 国立大学法人东京大学 包含非荷电性亲水性嵌段以及侧链的一部分引入了疏水性基团的阳离子性聚氨基酸嵌段的共聚物、及其使用
EP2268654B1 (en) 2008-04-21 2017-01-25 The Regents Of The University Of California Selective high-affinity polydentate ligands and methods of making such
KR101041446B1 (ko) 2008-07-21 2011-06-14 부산대학교 산학협력단 공액고분자 2단계 ｆｒｅｔ 시스템 및 바이오센서
WO2010026957A1 (ja) 2008-09-03 2010-03-11 国立大学法人 富山大学 水溶性ロタキサン型蛍光色素および蛍光性有機分子
EP2366785B1 (en) 2008-11-14 2013-01-16 Japan Science And Technology Agency Oligonucleotide derivative, labeling agent, and use of the labeling agent
US8852883B2 (en) 2008-11-20 2014-10-07 Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno Rapid FRET-based diagnosis of bacterial pathogens
WO2010068862A2 (en) 2008-12-12 2010-06-17 University Of Massachusetts Zwitterionic polymers with therapeutic moieties
JP6059533B2 (ja) 2009-11-09 2017-01-11 ユニバーシティ オブ ワシントン センター フォー コマーシャライゼーション 官能化発色性ポリマードットおよびその生物共役体
US9400273B1 (en) 2009-12-09 2016-07-26 Life Technologies Corporation 7-hydroxycoumarin-based cell-tracking reagents
WO2011088193A2 (en) 2010-01-13 2011-07-21 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Fluorophore chelated lanthanide luminiscent probes with improved quantum efficiency
US8473222B2 (en) 2010-03-11 2013-06-25 Glumetrics, Inc. Measurement devices and methods for measuring analyte concentration incorporating temperature and pH correction
CA2794307A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US9995679B2 (en) 2010-05-25 2018-06-12 Carnegie Mellon University Targeted probes of cellular physiology
WO2012005310A1 (ja) 2010-07-08 2012-01-12 旭硝子株式会社 含フッ素芳香族化合物、有機半導体材料および有機薄膜デバイス
WO2012039741A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Novel block copolymer and micelle compositions and methods of use thereof
EP3536695A1 (en) 2010-12-13 2019-09-11 QuiaPEG Pharmaceuticals AB Functionalized polymers
WO2012086857A1 (ko) 2010-12-21 2012-06-28 (주)파낙스이엠 광역학 진단 또는 치료를 위한 결합체 및 이의 제조방법
CN102174078A (zh) 2011-01-10 2011-09-07 中国药科大学 肿瘤细胞选择性穿膜肽的应用
CA2857493C (en) 2011-07-15 2019-06-11 Glumetrics, Inc. Combinations of fluorphores and pyridinium boronic acid quenchers for use in analyte sensors
EP2750712A2 (en) 2011-08-31 2014-07-09 Mallinckrodt LLC Nanoparticle peg modification with h-phosphonates
US20130059343A1 (en) 2011-09-06 2013-03-07 Li-Cor, Inc. Nucleotide derivatives
US9085761B1 (en) * 2012-06-14 2015-07-21 Affymetrix, Inc. Methods and compositions for amplification of nucleic acids
DK2895607T3 (da) 2012-09-12 2021-05-25 Quark Pharmaceuticals Inc Dobbeltstrengede oligonukleotidmolekyler til ddit4 og fremgangsmåder til anvendelse deraf
US20150258217A1 (en) 2012-10-04 2015-09-17 The General Hospital Corporation Methods of Synthesizing and Using Peg-Like Fluorochromes
EP2908864B1 (en) 2012-10-22 2019-12-11 Sabag-Rfa Ltd. Phosphate compounds for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
WO2014102803A1 (en) 2012-12-31 2014-07-03 Yeda Research And Development Co. Ltd. Molecular sensor and methods of use thereof
US9545447B2 (en) 2013-01-04 2017-01-17 The Texas A&M University System Polymer-drug systems
WO2014159392A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bromodomain binding reagents and uses thereof
CN105073761B (zh) 2013-03-15 2020-10-20 文森医学公司 用于体外和体内成像和检测的取代的硅杂蒽阳离子红至近红外荧光染料
WO2014147642A1 (en) 2013-03-19 2014-09-25 Council Of Scientific & Industrial Research Substituted fluoranthene-7-carbonitriles as fluorescent dyes for cell imaging applications
CN103319378B (zh) 2013-06-27 2015-06-10 中国科学院宁波材料技术与工程研究所 两性离子有机小分子太阳能电池阴极界面材料及其制法和用途
KR101572901B1 (ko) 2013-07-12 2015-12-15 부산대학교 산학협력단 2-단계 fret를 이용한 공액고분자 전해질 및 압타머 프로브 기반 표적 물질의 검출 방법 및 형광 센서
US10406246B2 (en) 2013-10-17 2019-09-10 Deutsches Kresbsforschungszentrum Double-labeled probe for molecular imaging and use thereof
WO2015068697A1 (ja) 2013-11-11 2015-05-14 オリンパスメディカルシステムズ株式会社 処置システム
CN105829427A (zh) 2013-12-06 2016-08-03 蒙诺苏尔有限公司 用于水溶性膜的荧光示踪剂、相关方法和相关物品
CN105874012B (zh) 2014-01-16 2018-06-15 索尼公司 水溶性荧光染料或有色染料
JP6374172B2 (ja) 2014-01-31 2018-08-15 富士フイルム株式会社 着色組成物、およびこれを用いた硬化膜、カラーフィルタ、パターン形成方法、カラーフィルタの製造方法、固体撮像素子、画像表示装置ならびに染料多量体
CN104072727A (zh) 2014-06-23 2014-10-01 华南理工大学 一种含磷脂酰胆碱基的2,7-芴的共轭聚合物及其制备方法与应用
US10617670B2 (en) 2014-10-10 2020-04-14 Pfizer Inc. Synergistic auristatin combinations
WO2016077625A1 (en) 2014-11-12 2016-05-19 Stayton Patrick S Stabilized polymeric carriers for therapeutic agent delivery
CA2967077A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 Angiochem Inc. Conjugates including an antibody moiety, a polypeptide that traverses the blood-brain barrier, and a cytotoxin
US11827661B2 (en) 2015-02-26 2023-11-28 Sony Group Corporation Water soluble fluorescent or colored dyes comprising conjugating groups
EP3262022A4 (en) 2015-02-26 2018-08-15 Sony Corporation Phenylethynylnaphthalene dyes and methods for their use
JP7390778B2 (ja) 2015-03-12 2023-12-06 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー ポリマーｂｏｄｉｐｙ色素およびそれを使用する方法
WO2016183185A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 Sony Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes
US9670318B2 (en) 2015-05-28 2017-06-06 Miltenyi Biotec Gmbh Bright fluorochromes based on multimerization of fluorescent dyes
WO2017003639A2 (en) 2015-06-02 2017-01-05 University Of Washington Free-standing non-fouling polymers, their compositions, and related monomers
WO2017089890A1 (en) 2015-11-25 2017-06-01 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
AU2016364431B2 (en) 2015-12-04 2020-08-27 Zenyaku Kogyo Co., Ltd. Anti-IL-17 aptamer having improved retention in blood
US9913992B2 (en) 2015-12-22 2018-03-13 Colgate-Palmolive Company Oral treatment device
JP2017124994A (ja) 2016-01-15 2017-07-20 靖彦 中村 癌治療及び癌再発防止のための装置並びにポルフィリン類含有製剤
US11434377B2 (en) 2016-04-01 2022-09-06 Sony Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes with rigid spacing groups
RU2762328C2 (ru) 2016-04-01 2021-12-17 Сони Корпорейшн Ультраяркие димерные или полимерные красители
KR20180133890A (ko) 2016-04-06 2018-12-17 소니 주식회사 스페이싱 링커 그룹을 포함하는 초고명도 이량체성 또는 중합체성 염료
US11370922B2 (en) 2016-05-10 2022-06-28 Sony Corporation Ultra bright polymeric dyes with peptide backbones
WO2017197014A2 (en) 2016-05-10 2017-11-16 Sony Corporation Compositions comprising a polymeric dye and a cyclodextrin and uses thereof
WO2017197144A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Sony Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes
JP7068191B2 (ja) 2016-06-06 2022-05-16 ソニーグループ株式会社 蛍光または有色レポーター基を含むイオン性ポリマー
US12018159B2 (en) 2016-07-29 2024-06-25 Sony Group Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes and methods for preparation of the same
JP7216638B2 (ja) 2016-09-01 2023-02-01 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 増強された蛍光のための組成物および方法
GB2554666B (en) 2016-09-30 2019-12-18 Sumitomo Chemical Co Composite Particle
CN106589005B (zh) 2016-11-01 2019-08-06 北京擎科生物科技有限公司 一种荧光信号放大探针中间体、荧光探针及其制备方法
CN110462623B (zh) 2017-02-27 2023-10-10 英万齐股份有限公司 用于基于角色的计算机安全配置的系统和方法
EP3691690B1 (en) 2017-10-05 2024-08-14 Sony Group Corporation Programmable polymeric drugs
JP7403744B2 (ja) 2017-10-05 2023-12-25 ソニーグループ株式会社 プログラマブルな樹枝状薬物
JP2021503450A (ja) 2017-11-16 2021-02-12 ソニー株式会社 プログラム可能なポリマー薬
WO2019118714A1 (en) 2017-12-13 2019-06-20 Sony Corporation Ionic polymers comprising biologically active compounds
EP3727463A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
JP2021510696A (ja) 2018-01-12 2021-04-30 ソニー株式会社 生物学的に活性な化合物を含む剛性間隔基を有するポリマー
WO2019140227A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Sony Corporation Phosphoalkyl ribose polymers comprising biologically active compounds
CN111565757A (zh) 2018-01-12 2020-08-21 索尼公司 包含生物活性化合物的磷酸烷基聚合物
WO2019182765A1 (en) 2018-03-19 2019-09-26 Sony Corporation Use of divalent metals for enhancement of fluorescent signals
US20210032474A1 (en) 2018-03-21 2021-02-04 Sony Corporation Polymeric tandem dyes with linker groups
CN112313242A (zh) 2018-06-27 2021-02-02 索尼公司 具有含脱氧核糖的连接体基团的聚合物染料
JP2021531372A (ja) 2018-07-13 2021-11-18 ソニーグループ株式会社 オルガノホスフェート単位を含む主鎖を有するポリマー色素
KR102606247B1 (ko) 2018-07-30 2023-11-27 삼성전자주식회사 도전성 핀의 적어도 일부를 지지하기 위한 지지 부분을 포함하는 커넥터 및 이를 포함하는 전자 장치
CN114430738A (zh) 2019-04-11 2022-05-03 索尼集团公司 可编程的聚合药物
WO2020210694A1 (en) 2019-04-11 2020-10-15 Sony Corporation Programmable polymeric drugs
WO2020210692A1 (en) 2019-04-11 2020-10-15 Sony Corporation Programmable polymeric drugs
WO2020219959A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Magenta Therapeutics, Inc. Anti-cd45 antibody drug conjugates and uses thereof
JP7239904B2 (ja) 2019-09-26 2023-03-15 ソニーグループ株式会社 リンカー基を有するポリマータンデム色素
JP2022549014A (ja) 2019-09-30 2022-11-22 ソニーグループ株式会社 ヌクレオチドプローブ

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1121931A1 (ru) * 1983-01-10 1988-04-15 Институт Биологической Химии Ан Бсср Конъюгаты тиреоидных гормонов с альбумином дл выработки антител к тиреоидным гормонам у животных
WO2015027176A1 (en) * 2013-08-22 2015-02-26 Sony Corporation Water soluble fluorescent or colored dyes and methods for their use

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chekalin M.A. et al., "Technology of organic dyes and intermediates", Textbook for technical schools, - 2nd ed., revised 1980, L. Chemistry, 472 pages. *
Sam Lee et al, "Monitoring the hydrophobic interactions of internally pyrene-labelled polyrthylene oxides in water by fluorescence spectroscopy", Macromolecules, 1998, vol. 31, N 26, 9193-9200. *
Чекалин М.А. и др., "Технология органических красителей и промежуточных продуктов", Учебное пособие для техникумов, - 2-е изд., переработанное 1980, Л. Химия, 472 стр. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114806218A (zh) 2022-07-29
US11981820B2 (en) 2024-05-14
AU2017240154B2 (en) 2021-08-12
RU2018137690A3 (ru) 2020-07-08
BR112018070164B1 (pt) 2022-09-27
RU2018137690A (ru) 2020-05-12
JP7049113B2 (ja) 2022-04-06
US11142647B2 (en) 2021-10-12
JP2019516807A (ja) 2019-06-20
CN107580618A (zh) 2018-01-12
KR20180132501A (ko) 2018-12-12
CA3231845A1 (en) 2017-10-05
AU2017240154A1 (en) 2018-10-11
KR102530707B1 (ko) 2023-05-11
WO2017173355A1 (en) 2017-10-05
KR20230066652A (ko) 2023-05-16
CA3018564A1 (en) 2017-10-05
BR112018070164A2 (pt) 2019-01-29
EP3436529A1 (en) 2019-02-06
US20240287314A1 (en) 2024-08-29
US20190016898A1 (en) 2019-01-17
US20210395530A1 (en) 2021-12-23
CA3018564C (en) 2024-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2762328C2 (ru) Ультраяркие димерные или полимерные красители
JP7515786B2 (ja) リンカー基を有するポリマータンデム色素
JP7239904B2 (ja) リンカー基を有するポリマータンデム色素
JP7071286B2 (ja) 超明色ダイマーまたはポリマー染料
JP7312929B2 (ja) 超明色二量体またはポリマー色素およびその調製のための方法
CN109415574B (zh) 具有刚性间隔基团的超亮二聚体或聚合物染料
CN112399996A (zh) 具有包含有机磷酸酯单元的主链的聚合的染料
JP2024127887A (ja) デオキシリボースを含むリンカー基を有するポリマー色素
JP2019523787A (ja) 蛍光または有色レポーター基を含むイオン性ポリマー
JP7580689B2 (ja) デオキシリボースを含むリンカー基を有するポリマー色素