RU2670488C2 - Новые проникающие в клетку пептиды - Google Patents
Новые проникающие в клетку пептиды Download PDFInfo
- Publication number
- RU2670488C2 RU2670488C2 RU2015113378A RU2015113378A RU2670488C2 RU 2670488 C2 RU2670488 C2 RU 2670488C2 RU 2015113378 A RU2015113378 A RU 2015113378A RU 2015113378 A RU2015113378 A RU 2015113378A RU 2670488 C2 RU2670488 C2 RU 2670488C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cell
- peptide
- complex
- penetrating
- mammalian cell
- Prior art date
Links
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 title abstract description 72
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 title abstract description 72
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 252
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 100
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 69
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 21
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 169
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 100
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 75
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 68
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 58
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 57
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 52
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 52
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 52
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 44
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 26
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 claims description 23
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 18
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 16
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims description 16
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 claims description 14
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 11
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims 9
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 58
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 46
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 44
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 39
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 35
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 33
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 30
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 241000283070 Equus zebra Species 0.000 description 19
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 18
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 18
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 15
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 15
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 14
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 14
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 14
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 13
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 11
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 11
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 11
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 11
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 11
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 11
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 10
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 10
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 10
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 10
- -1 lysine or arginine Chemical class 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 9
- YHVHQZYJGWGAKN-ZUWUZHNASA-N (3s,6s,9r,12s)-6-(4-aminobutyl)-12-benzyl-9-(1h-indol-3-ylmethyl)-3-[(1r)-1-phenylmethoxyethyl]-1,4,7,10,13-pentazacycloicosane-2,5,8,11,14-pentone Chemical compound O([C@H](C)[C@H]1C(NCCCCCCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1)=O)CC1=CC=CC=C1 YHVHQZYJGWGAKN-ZUWUZHNASA-N 0.000 description 8
- 101150117862 CPP1 gene Proteins 0.000 description 8
- 101100007583 Entamoeba histolytica CPP2 gene Proteins 0.000 description 8
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 8
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 6
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 6
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 6
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 6
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 6
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 5
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 5
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- 208000022555 Genital disease Diseases 0.000 description 4
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 4
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 4
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- WTFXARWRTYJXII-UHFFFAOYSA-N iron(2+);iron(3+);oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[Fe+2].[Fe+3].[Fe+3] WTFXARWRTYJXII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 4
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 208000004429 Bacillary Dysentery Diseases 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 3
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 3
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 108700002563 poly ICLC Proteins 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 201000005113 shigellosis Diseases 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 88755TAZ87 Chemical compound NCC(=O)CCC(O)=O ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 2
- 208000004881 Amebiasis Diseases 0.000 description 2
- 206010001980 Amoebiasis Diseases 0.000 description 2
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 2
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 2
- 208000006448 Buruli Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 208000023081 Buruli ulcer disease Diseases 0.000 description 2
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 2
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 2
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 2
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 2
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 2
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 2
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 2
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 2
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 2
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 2
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 2
- 241001502974 Human gammaherpesvirus 8 Species 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 206010023927 Lassa fever Diseases 0.000 description 2
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 2
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 2
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 2
- 241000187917 Mycobacterium ulcerans Species 0.000 description 2
- 206010066289 Mycobacterium ulcerans infection Diseases 0.000 description 2
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 2
- 239000012648 POLY-ICLC Substances 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 206010040550 Shigella infections Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076818 TEV protease Proteins 0.000 description 2
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 2
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 2
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 229960002749 aminolevulinic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000011122 anti-angiogenic therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 2
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000000688 enterotoxigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 201000010284 hepatitis E Diseases 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 201000001371 inclusion conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 230000007903 penetration ability Effects 0.000 description 2
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940115270 poly iclc Drugs 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 201000004409 schistosomiasis Diseases 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 2
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 206010044325 trachoma Diseases 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 2
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 2
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 1
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine Chemical group C1CSCN1 OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 101150009389 BZLF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000759568 Corixa Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 208000000307 Crimean Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 201000003075 Crimean-Congo hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108091027757 Deoxyribozyme Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 208000030820 Ebola disease Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- 206010017915 Gastroenteritis shigella Diseases 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 208000000932 Marburg Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011013 Marburg hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 108700011066 PreScission Protease Proteins 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000705 Rift Valley Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000694414 Sapindus saponaria Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000282485 Vulpes vulpes Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 150000002251 gadolinium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N hydrazine Chemical group NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 1
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 210000005061 intracellular organelle Anatomy 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- GSSMIHQEWAQUPM-AOLPDKKJSA-N ovalbumin peptide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CN=CN1 GSSMIHQEWAQUPM-AOLPDKKJSA-N 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical group 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 108010043655 penetratin Proteins 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000013823 prenylation Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229950010550 resiquimod Drugs 0.000 description 1
- BXNMTOQRYBFHNZ-UHFFFAOYSA-N resiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C(N(C(COCC)=N3)CC(C)(C)O)C3=C(N)N=C21 BXNMTOQRYBFHNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000020374 simple syrup Nutrition 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/01—DNA viruses
- C07K14/03—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus
- C07K14/05—Epstein-Barr virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/77—Ovalbumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16211—Lymphocryptovirus, e.g. human herpesvirus 4, Epstein-Barr Virus
- C12N2710/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
- C12N2760/18522—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к проникающим в клетку пептидам, и может быть использовано в медицине путем доставки терапевтической карго-молекулы в клетку млекопитающего. Пептид состоит из фрагмента в 15-30 аминокислот участка, продолжающегося от остатка 170 до остатка 220 SEQ ID NO: 23, и содержит Ser (S) в положении, эквивалентном положению 189 SEQ ID NO: 23. Изобретение обеспечивает эффективную доставку терапевтических пептидных эпитопов патогена или опухоли в клетки млекопитающих. 21 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 5 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение имеет отношение к новым проникающим в клетку пептидам, предназначенным для практического использования в биологии и медицине в качестве средства для клеточной доставки.
Уровень техники
Цитоплазматическая мембрана эукариотических клеток представляет собой строго контролируемый барьер, защищающий клетку от нерегулируемого вхождения биоактивных молекул. Для перемещения через плазматическую мембрану не являющихся эндогенными для клетки низкомолекулярных, белковых или других лекарственных средств на основе макромолекул может использоваться естественная система транспортировки или прямая диффузия через липидный бислой. Однако, во многих случаях, оба способа вхождения являются неэффективными для экзогенных молекул.
За последнее десятилетие проникающие в клетку пептиды (СРР) превратились в перспективные векторы для доставки различных терапевтических средств, включая белки, до их мишеней. СРР представляют собой пептидные последовательности, облегчающие эффективное перемещение белков через биологические мембраны независимо от транспортеров или специфических рецепторов. Кроме того, СРР дают преимущество экономически эффективного производства. После открытия 20 лет назад свойства перемещения через мембрану трансактивирующего регуляторного белка вируса иммунодефицита человека (HIV ТАТ) было идентифицировано несколько СРР, включая пенетратин (гомеодомен Antennapedia), VP22 (вирус простого герпеса) и синтетический полиаргинин (polyR). Перспектива создания новых вакцин связана с карго-молекулами, соединенными с СРР.
Недавно было показано, что основная лейциновая молния транскрипционного активатора ZEBRA вируса Эпштейна-Барр проникает через внешнюю мембрану живых клеток и накапливается в ядрах лимфоцитов. Конкретнее, было продемонстрировано, что минимальный участок ZEBRA, необходимый для проникающей способности трансактиватора ZEBRA вируса Эпштейна-Барр, охватывает участок от остатка 170 до 220 остатка ZEBRA и что оба, и ДНК-связывающий домен и домен димеризации, содержащиеся в этой области, необходимы для проникающей способности (Rothe et al. 2010, J. Biological Chemistry 285(26): 20224-20232).
Считается, что у многих СРР имеются недостатки, в случае их использования в качестве носителей для доставки карго-молекул в клетку. Например, они могут вызывать некоторые серьезные побочные эффекты в клетке, такие как цитоплазматическая «утечка» вследствие разрушения мембраны или нарушения нормального функционирования мембранных белков, или могут вызывать токсические эффекты в клетках и/или иммуногенные эффекты. Кроме того, некоторые СРР могут быстро разрушаться в цитоплазме или остаются заключенными в эндосомах, чтобы затем подвергнуться расщеплению в лизосомах. Более того, некоторые СРР не могут высвобождать карго-молекулу или не имеют широкого спектра для адресации или высвобождения карго-молекулы.
Поэтому, по-прежнему существует необходимость в усовершенствованном носителе, способном доставлять самые разные карго-молекулы в клетку, который демонстрирует высокую эффективность поглощения карго-молекулы, а также низкую токсичность. Применительно к вакцинам, также было бы целесообразно, чтобы носитель (средство доставки) не ограничивался только одним путем интернализации карго-молекулы и мог бы доставляться и в цитозоль и эндосомы для презентации антигена. Настоящее изобретение решает эту проблему, предоставляя СРР, которые обеспечивают эффективную доставку и презентацию, например, антигенных детерминант на клеточной поверхности антиген-презентирующих клеток. Таким образом, СРР изобретения используются в качестве носителей для доставки самых разных карго-молекул, таких как полипептиды и белки, полисахариды, липиды или их комбинации, а также нуклеиновых кислот, низкомолекулярных лекарственных препаратов и визуализирующих средств.
Раскрытие изобретения
Первый аспект изобретения представлен проникающим в клетку пептидом, характеризующимся тем, что:
a) длина аминокислотной последовательности указанного пептида составляет в целом от 15 до 30 аминокислот; и
b) указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую фрагмент участка, продолжающегося от 170 остатка до 220 остатка ZEBRA, в которой необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот может быть заменено, удалено и/или добавлено, при условии сохранения проникающей способности указанного пептида;
или вариант указанного пептида, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, одну консервативно замещенную аминокислоту по сравнению с указанной аминокислотной последовательностью пептида.
Второй аспект изобретения имеет отношение к комплексу, содержащему указанный проникающий в клетку пептид и карго-молекулу.
Третий аспект изобретения имеет отношение к полинуклеотидам, кодирующим указанный проникающий в клетку пептид или указанный комплекс, а также векторам, содержащим такие полинуклеотиды.
Четвертый аспект изобретения относится к клеткам-хозяевам, экспрессирующим проникающий в клетку пептид или комплекс, описанный выше, а также способам получения таких клеток.
Пятый аспект изобретения имеет отношение к клеткам, нагруженным комплексом, описанным выше.
Шестой аспект изобретения касается композиций, содержащих: (i) проникающий в клетку пептид изобретения, (ii) комплекс изобретения, (iii) нуклеиновую кислоту изобретения, (iv) вектор изобретения, (v) клетку-хозяина изобретения или (vi) клетки, нагруженные комплексом согласно изобретению.
Седьмой аспект изобретения, касается упомянутых выше композиций, предназначенных для использования в качестве медикаментов или в качестве визуализирующих или диагностических композиций.
Восьмой аспект изобретения представляет собой состоящий из частей набор, содержащий, по меньшей мере, одно из следующего:
(a) проникающий в клетку пептид согласно изобретению;
(b) комплекс согласно изобретению;
(c) нуклеиновую кислоту согласно изобретению;
(d) вектор согласно изобретению;
(e) клетку-хозяина согласно изобретению;
(f) клетку, нагруженную комплексом согласно изобретению.
Девятый аспект изобретения предоставляет способ доставки карго-молекулы в клетку in vitro, включающий стадию установления контакта указанной клетки с проникающим в клетку пептидом согласно изобретению и указанной карго-молекулой.
Другие признаки и преимущества изобретения станут понятны из следующего далее подробного описания.
Описание чертежей
Фигура 1 показывает результаты ограниченного МНС класса I представления после загрузки в дендритные клетки гибридных полипептидов CPP1-OVA и CPP2-OVA. Дендритные клетки, происходящие из костного мозга, в течение 4 часов нагружали 0.3 мкМ соответствующих CPPs-OVA гибридных полипептидов и выдерживали в течение ночи с LPS. После 5 дневной совместной инкубации со спленоцитами, полученными от TCR трансгенных мышей ОТ1, соответствующее ограниченное МНС представление эпитопа класса I OVA было оценено посредством CFSE разбавления пролиферирующих OVA-специфических Т-клеток. Отрицательные контроли или только с Т-клетками (А) или с Т-клетками, совместно инкубированными со зрелыми дендритными клетками костного мозга, которые не были активированы гибридными полипептидами (В); положительные контроли с Т-клетками инкубированными или с пептидами (С) или с пептидами, активированными дендритными клетками полученными из зрелого костного мозга (D); CPP1-OVA (Е); CPP2-OVA (F).
Фигура 2 показывает поликлональный иммунный ответ после вакцинации мышей гибридными полипептидами, содержащими СРР1 или СРР2 и карго в виде пептида овальбумина. Мышей вакцинировали два раза подкожно с интервалом 14 дней 20 мкг каждого CPPs-OVA гибридного полипептида и 100 мкг анти-CD40, 50 мкг поли-IC вводили внутримышечно через 10 дней после буст-инъекции, мышей забивали, а спленоциты окрашивали мультимером и анти-CD8. Отрицательный контроль PBS (А); CPP1-OVA (В); CPP2-OVA (С).
Подробное описание изобретения
Термин "проникающие в клетку пептиды (проникающие пептиды)" ("СРР") в большинстве случаев используется для обозначения коротких пептидов, которые способны транспортировать различные типы карго-молекул через плазматическую мембрану, и, таким образом, способствовать поглощению клеткой различных молекулярных «грузов» (от наноразмерных частиц до небольших химических молекул, макромолекул и больших фрагментов ДНК). "Карго-молекула" (молекула-груз) связана с проникающим пептидом или посредством химических ковалентных связей или посредством нековалентных взаимодействий. Проникающие пептиды, как правило, имеют аминокислотный состав с высоким относительным количеством положительно заряженных аминокислот, таких как лизин или аргинин, или имеют последовательность, которая содержит изменяющийся набор полярных/заряженных аминокислот и неполярных, гидрофобных аминокислот. Эти два типа структур известны под названием поликатионные или амфипатические, соответственно. Проникающие пептиды имеют разные размеры, последовательности и заряды аминокислот, однако все СРР имеют общее свойство, заключающееся в способности «проходить» через плазматическую мембрану и способствовать доставке различных молекулярных «грузов» в цитоплазму или органеллы клетки. В настоящее время, теории СРР-транслокации различают три основных механизма входа: прямое проникновение в мембрану, вход, опосредованный эндоцитозом, и перемещение за счет образования временной структуры. Трансдукция (перенос) СРР - это область происходящих в настоящее время исследований. Проникающие пептиды находят много вариантов применения в медицине в качестве средств доставки лекарств для лечения различных болезней, включая ингибирование рака и вирусных болезней, а также в качестве контрастных веществ для мечения и визуализации клетки.
В данном документе "карго-молекула" обозначает молекулу, связанную с проникающим пептидом путем ковалентного или нековалентного связывания, клеточная интернализация которой облегчается или обеспечивается наличием указанного проникающего пептида. В настоящем изобретении "карго-молекулы" включают пептиды, белки, полисахариды, липиды, их комбинации, включая липопротеины и гликолипиды, нуклеиновые кислоты (например, ДНК, миРНК, кшРНК, антисмысловые олигонуклеотиды, ловушки ДНК, плазмиды), низкомолекулярные лекарственные средства (например, циклоспорин А, паклитаксел, доксорубицин, метотрексат, 5-аминолевулиновая кислота), визуализирующие вещества (например, флюорофор, квантовые точки (QDs), радиоактивные индикаторы, хелаты металлов, такие как низкомолекулярные хелатные соединения гадолиния (Gd3+), суперпарамагнитная окись железа (SPIO)). Следует понимать, что в том случае, когда карго-молекула является пептидом, полипептидом или белком, она может содержать один или более пептидов, полипептидов или белков, связанных вместе. Кроме того, когда карго-молекула является нуклеиновой кислотой, указанная нуклеиновая кислота может содержать одну или более нуклеиновых кислот, причем каждая кодирует один пептид или полипептид. Также карго-молекула может быть комбинацией белка, липида и/или полисахарида, включая липопротеины и гликолипиды.
Термины "пептид", "полипептид", "белок (протеин)" и варианты этих терминов относятся к пептиду, олигопептиду, олигомеру или белку, включая гибридный белок, соответственно, содержащему, по меньшей мере, две аминокислоты, соединенные друг с другом нормальной или модифицированной пептидной связью, такой как, например, в случаях изостерических пептидов. Эти термины в данном документе также включают "пептидомиметики", которые определяются как аналоги пептидов, содержащие непептидные структурные элементы и способные подражать биологическому действию(ям) природного исходного пептида или противодействовать биологическому действию(ям) природного исходного пептида. Пептидомиметик утрачивает классические свойства пептида, такие как ферментативно неустойчивые пептидные связи. Пептид или полипептид может состоять из аминокислот, отличных от 20 аминокислот, определенных генетическим кодом. Он может состоять из L-аминокислот и/или D-аминокислот. Пептид или полипептид может в равной мере состоять из аминокислот, модифицированных в результате естественных процессов, таких как процессы пост-трансляционного созревания, или в результате химических процессов, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. Такие модификации подробно изложены в литературе. Эти модификации могут содержаться в любом месте в полипептиде: в остове пептида, в аминокислотной цепи или даже на карбокси-конце или амино-конце. Пептид или полипептид может быть разветвленным после убиквитинирования или может быть циклическим с разветвлением или без него. Этот тип модификации может являться результатом естественных или искусственных пост-трансляционных процессов, которые хорошо известны специалисту в данной области техники. Например, модификации пептида или полипептида могут включать ацетилирование, ацилирование, ADP-рибозилирование, амидирование, ковалентное связывание нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное связывание липида или липидного производного, ковалентное связывание фосфатидилинозитола, ковалентное или нековалентное перекрестное связывание, циклизацию, образование дисульфидной связи, деметилирование, гликозилирование, включая пегилирование, гидроксилирование, йодирование, метилирование, миристиорилирование, окисление, протеолитические процессы, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, сенелоилирование, сульфатацию, добавление аминокислоты, например, аргинина, или убиквитинирование. Такие модификации подробно описаны в литературе (Proteins Structure and Molecular Properties (1993) 2nd Ed., T. Ε. Creighton, New York; Post-translational Covalent Modifications of Proteins (1983) В. C. Johnson, Ed., Academic Press, New York; Seifter et al. (1990) Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors, Meth. Enzymol. 182: 626-646 and Rattan et al., (1992) Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging, Ann NY Acad Sci, 663: 48-62).
Термины "клеточная интернализация" карго-молекулы, связанной с проникающим пептидом, в большинстве случаев означает транспорт карго-молекулы через плазматическую мембрану и таким образом вход карго-молекулы в клетку. В зависимости от конкретного случая карго-молекула может затем высвобождаться в цитоплазму, направляться во внутриклеточную органеллу или впоследствии презентироваться на клеточной поверхности.
Термин "ZEBRA" (также известный как Zta, Ζ, ЕВ1 или BZLF1), как правило, означает лейциновую «молнию» (bZIP) активатора транскрипции вируса Эпштейна-Барр (EBV). Минимальный домен ZEBRA, который демонстрирует свойства проникания, был идентифицирован, как участок, охватывающий от 170 остатка до 220 остатка ZEBRA. Аминокислотная последовательность ZEBRA раскрывается под учетным номером NCBI YP_401673 и содержит 245 аминокислот, представленных в SEQ ID NO: 23.
Термин "эпитоп", также известный как "антигенная детерминанта", представляет собой часть антигена, которая распознается иммунной системой, в частности, антителами, В-клетками или Т-клетками. В настоящей заявке термин "эпитоп" главным образом используется для обозначения Т-клеточных эпитопов, которые представлены на поверхности антиген-презентирующей клетки, где они связываются с главным комплексом гистосовместимости (МНС). Т-клеточные эпитопы, презентируемые молекулами МНС класса I, как правило, но не исключительно, представляют собой пептиды, длиной 8-11 аминокислот, тогда как молекулы МНС класса II представляют более длинные пептиды, обычно, но не исключительно, длиной 12-25 аминокислот.
Термин "CD4+ эпитоп" или "CD4+-ограниченный эпитоп" в данном описании обозначает эпитоп, распознаваемый CD4+ Т-клеткой, при этом указанный эпитоп состоит из антигенного фрагмента, находящегося (лежащего) в бороздке молекулы МНС класса II.
Термин "CD8+ эпитоп" или "CD8+-ограниченный эпитоп" в данном описании обозначает эпитоп, распознаваемый CD8+ Т-клеткой, при этом указанный эпитоп состоит из антигенного фрагмента, лежащего в бороздке молекулы МНС класса I.
Термин "презентация эпитопа в отношении МНС класса I" относится к CD8+ эпитопу, лежащему в бороздке молекулы МНС класса I на поверхности клетки.
Термины "презентация эпитопа в отношении МНС класса II" относится к CD8+ эпитопу, лежащему в бороздке молекулы МНС класса II на поверхности клетки.
Термины "презентация эпитопа в отношении CDI" относится к липидному эпитопу, лежащему в бороздке молекулы кластера дифференцировки 1 на поверхности клетки.
"МНС класса I" означает один из двух основных классов молекул главного комплекса гистосовместимости. Молекулы МНС класса I (также называемые "МНС I") обнаруживаются в организме на каждой клетке с ядром. Функция МНС класса I состоит в том, чтобы показывать эпитоп цитотоксическим клеткам (CTL). У людей молекулы МНС класса I состоят из двух полипептидных цепей, α- и β2-микроглобулина (b2m). Только α цепь является полиморфной и кодируется HLA геном, тогда как b2m субъединица не является полиморфной и кодируется геном Beta-2 микроглобулина.
"МНС класса II" означает другой основной класс молекул главного комплекса гистосовместимости. Молекулы МНС класса II (также известные как "МНС II") обнаруживаются только на некоторых специализированных типах клеток, включая, макрофаги, дендритные клетки и В-клетки, которые все относятся к антиген-презентирующим клеткам (APC).
"Опухолевый эпитоп" в данном документе означает эпитоп опухоль-ассоциированного антигена или опухоль-специфического антигена. Например, опухолевые эпитопы включают эпитопы глиомы.
"Эпитоп патогена" в данном документе означает эпитоп антигенного белка, антигенного полисахарида, антигенного липида, антигенного липопротеина или антигенного гликолипида патогена, включая вирусы, бактерии, грибы, простейших и многоклеточных паразитов. Антигенные протеины, полисахариды, липиды, липопротеины или гликолипиды патогенов включают в данном описании белки, полисахариды, липиды, липопротеины и гликолипиды, соответственно, патогенов, отвечающих за болезни, которые могут быть мишенью вакцинации, включая, например, амебиаз, сибирскую язву, язву Бурули (Mycobacterium ulcerans), диарею, связанную с Caliciviruses, диарею, вызванную Campylobacter, рак шейки матки (Human papillomavirus), генитальные заболевания, вызванные Chlamydia trachomatis, холеру, конго-крымскую геморрагическую лихорадку, лихорадку Денге, дифтерию, геморрагическую лихорадку Эбола, энтеротоксигенную диарею, вызванную Escherichia coli (ЕТЕС), рак желудка (Helicobacter pylori), гонорею, болезни, связанные со стрептококком группы А, болезни, связанные со стрептококком группы В, пневмонию и инвазивную болезнь, вызванную Haemophilus influenzae В, гепатит А, гепатит В, гепатит С, диарею при гепатите Е, генитальные язвы, вызванные вирусом Herpes simplex 2 типа, ВИЧ/СПИД, анкилостомидоз, грипп, японский энцефалит, лихорадку Ласса, лейшманиоз, лептоспироз, рак печени (Гепатит В), рак печени (Гепатит С), болезнь Лайма, малярию, геморрагическую лихорадку Марбург, краснуху, свинку, назофаренгиальный рак (вирус Эпштейна-Барр), менингит, вызванный менингококком Neisseria meningitidis, пневмонию, связанную с парагриппом, коклюш, чуму, полиомиелит, бешенство, пневмонию, вызванную респираторным синцитиальным вирусом (RSV), лихорадку долины Рифт, диарею, вызванную ротавирусом, коревую краснуху, шистосомоз, тяжелый острый респираторный синдром (SARS), шигеллез (бактериальная дизентерия), оспу, болезни, связанные с золотистым стафилококком, рак желудка (Helicobacter pylori), пневмонию и инвазионные болезни, вызванные стрептококком, столбняк, клещевой энцефалит, трахому, туберкулез, туляремию, брюшной тиф, болезнь, связанную с вирусом Западного Нила, желтую лихорадку.
Термин "малые ингибирующие нуклеиновые кислоты" (миНК) относится к коротким нуклеиновым кислотам, которые используются при распознавании целевых мРНК, причем их понижающая регуляция основывается на антисмысловом действии. Этот термин включает антисмысловые нуклеотиды, каталитические нуклеиновые кислоты, такие как рибозимы и дезоксирибозимы, а также малые интерферирующие РНК (миРНК).
Термин "миРНК" относится к малым интерферирующим РНК, которые представляют собой одноцепочечные или двухцепочечные РНК (около 19-23 нуклеотидов), способные «выключить» или подавить желаемую мРНК из гена-мишени. Искусственные миРНК могут быть синтезированы химическим путем, как олигонуклеотиды, или могут быть клонированы в плазмидный или вирусный вектор (аденовирус, ретровирус или лентивирус) в виде коротких шпилечных РНК (кшРНК) с целью получения временной или стабильной трансфекции в любом типе клеток (Martin et al., 2007, Ann. Rev. Genomics Hum. Genet., 8: 81-108; Kolfschoten et al, 2007, Nat. Clin. Pract. Endocrinol. Metab., 3(12): 827-34; Huang et al, 2008, Expert. Opin. Ther. Targets, 12(5), 637-645).
При использовании в описании "лечение" и тому подобное, как правило, означает получение желательного фармакологического и физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим, если иметь в виду предотвращение или частичное предотвращение болезни, симптома или состояния, и/или может быть терапевтическим, если иметь в виду частичное или полное излечение болезни, состояния, симптома или неблагоприятного воздействия, приписываемого болезни. Термин "лечение" при использовании в описании включает любое лечение болезни у млекопитающего, в частности, человека, и включает: (а) предотвращение появления болезни у субъекта, который может быть предрасположен к болезни, но у которого болезнь еще не была диагностирована, такое как раннее профилактическое бессимптомное вмешательство; (b) ингибирование болезни, т.е., задержку развития болезни; или облегчение болезни, т.е. вызывание регрессии болезни и/или ее симптомов или таких состояний, как улучшение или восстановление повреждения. В частности, способы, варианты использования, составы и композиции согласно изобретению являются пригодными для лечения рака или инфекционных болезней и/или для предотвращения прогрессирования рака до запущенной или метастатической стадии у пациентов с раком на ранней стадии, таким образом, улучшение стадии рака. В случаях применительно к раку, предотвращение болезни или нарушения включает предотвращение появления или развития рака у индивидуума, находящегося в группе риска относительно развития указанного рака, например, в связи с прошлым случаем возникновения указанного рака в круге родственников индивидуума, и предотвращение инфицирования патогенами, способствующими развитию опухолей, такими как, например, вирус Эпштейна-Барр (EBV), вирус папилломы человека (HPV), вирус гепатита В (HBV), вирус гепатита С (HCV), вирус герпеса человека 8 (HHV8), вирус Т-клеточного лейкоза человека типа 1 (HTLV-1), полиомавирус осязательной клетки Меркеля (MCV) и Helicobacter pylori. Кроме того, термины "предотвращение/лечение" рака включают стабилизацию уже диагностированного рака у индивидуума. "Стабилизация" означает предотвращение прогрессирования рака до запущенной или метастатической стадии у пациентов с раком на ранней стадии.
Использованный в описании термин "субъект" относится к млекопитающим. Например, млекопитающие, рассматриваемые настоящим изобретением, включают человека, приматов, домашних животных, таких как крупный рогатый скот, овцы, свиньи, лошади, лабораторные грызуны и тому подобные.
Использованный в описании термин "эффективное количество" относится к количеству, по меньшей мере, одного проникающего в клетку пептида, комплекса, содержащего указанный проникающий в клетку пептид и карго-молекулу, клеток, нагруженных указанным комплексом, состава или фармацевтической композиции согласно изобретению, которое вызывает биологический или медицинский ответ в ткани, системе, у нужного животного или человека. В одном варианте осуществления эффективное количество является "терапевтически эффективным количеством", т.е. количеством, необходимым для облегчения симптомов болезни или состояния, которое подвергается лечению. В другом варианте осуществления эффективное количество является "профилактически эффективным количеством", т.е. количеством, необходимым для профилактики симптомов болезни или состояния, которое подвергается лечению. Термин также включает количество активного полипептида, достаточное для уменьшения прогрессирования болезни, а именно, для уменьшения или ингибирования роста опухоли или инфекции, и вследствие этого получения нужного ответа, в частности, такой ответ может быть иммунным ответом, направленным против эпитопов, содержащихся в карго-молекуле (т.е. "ингибирующим эффективным количеством").
"Эффективность" лечения согласно изобретению поддается измерению на основании изменений в ходе болезни в ответ на применение способа согласно изобретению. Например, эффективность лечения рака может быть измерена по уменьшению объема опухоли, и/или увеличению времени выживаемости без прогрессирования, и/или уменьшению риска рецидива после удаления первичного рака. Конкретнее, что касается лечения рака с помощью иммунотерапии, оценкой эффективности может служить спектр клинических примеров противоопухолевого ответа в отношении иммунотерапевтических средств за счет использования нового критерия, связанного с иммунным ответом (irRC), который основан на Критерии оценки ответа солидных опухолей (RECIST) и критериях Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) (J. Natl. Cancer Inst. 2010, 102(18): 1388-1397). Эффективность предотвращения инфекционной болезни в конечном итоге оценивается эпидемиологическими исследованиями в человеческих популяциях, которая часто коррелирует с титрами нейтрализующих антител в сыворотке и индукцией многофункциональных патоген-специфических Т-клеточных ответов. Доклиническая оценка может включать устойчивость к инфекции после заражения инфекционным патогеном. Лечение инфекционной болезни измеряется ингибированием роста патогена или уничтожением патогена (и, таким образом, невозможностью обнаружения патогена), коррелируя с патоген-специфическими антителам и/или Т-клеточными иммунными ответами.
Термин "фармацевтическая композиция" относится к препаратам, которые находятся в форме, обеспечивающей несомненную эффективность активного ингредиента(ов), обладающего биологической активностью, и не содержащей дополнительный компонент, который может быть токсичным для субъектов, которым вводится указанная композиция. А.
Проникающие в клетку пептиды и комплексы согласно изобретению
Первый аспект изобретения имеет отношение к проникающему в клетку пептиду, характеризующемуся тем, что:
a) длина аминокислотной последовательности указанного пептида составляет в целом 15-30 аминокислот, например, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 аминокислот всего; и
b) указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую фрагмент минимального домена ZEBRA, при этом указанный минимальный домен продолжается от остатка 170 до остатка 220 ZEBRA (SEQ ID NO: 23), в которой необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот может быть заменено, удалено и/или добавлено, при условии сохранения проникающей способности указанного пептида;
или вариант указанного пептида, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, одну консервативно замещенную аминокислоту по сравнению с указанной аминокислотной последовательностью пептида.
Способность проникать в клетку или интернализация проникающего в клетку пептида или комплекса, содержащего указанный проникающий в клетку пептид согласно изобретению, может быть проверена с помощью стандартных способов, известных специалистам в данной области техники, включая проточную цитометрию или флуоресцентную микроскопию живых или фиксированных клеток, иммуногистохимический анализ клеток, трансфектированных указанным пептидом или комплексом, и вестерн-блоттинга.
В предпочтительном варианте осуществления варианты или фрагменты проникающего пептида согласно изобретению дополнительно сохраняют способность указанного пептида презентировать белковую карго-молекулу, такую как эпитоп, на поверхности клетки, такой как антиген-презентирующая клетка, в контексте молекул МНС класса I и/или МНС класса II.
Способность проникающего в клетку пептида или комплекса, содержащего проникающий в клетку пептид, презентировать белковую карго-молекулу, такую как эпитоп, на поверхности клетки в контексте молекул МНС класса I и/или МНС класса II может быть проверена с помощью стандартных способов, известных специалистам в данной области техники, включая способность стимулировать пролиферацию и/или функцию МНС-ограниченных CD4+ или CD8+ Τ клеток, обладающих специфичностью в отношении этих эпитопов.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению не является SEQ ID NO: 13.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению не является SEQ ID NO: 14.
В другом отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению содержит Cys (С), замещенный Ser (S), в эквивалентном положении 189 относительно ZEBRA аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23.
В одном варианте осуществления изобретение имеет отношение к проникающему в клетку пептиду, отличающемуся тем, что:
a) указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 15 и не более, чем 30 аминокислот в длину; и
b) указанный пептид, имеет аминокислотную последовательность, содержащую:
(i) SEQ ID NO: 1, или
(ii) аминокислотную последовательность, идентичную SEQ ID NO: 1, за исключением того, что 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот заменяется, удаляется и/или добавляется, при условии сохранения проникающей способности указанного пептида;
или варианту указанного пептида, содержащему аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, одну консервативно замещенную аминокислоту по сравнению с указанной аминокислотной последовательностью пептида.
Согласно одному аспекту изобретения проникающий в клетку пептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, одну консервативно замещенную аминокислоту по сравнению с исходной последовательностью, означая, что данный остаток аминокислоты замещается остатком, имеющим сходные физиохимические характеристики.
Как правило, замена одной или более аминокислот, присутствующих в исходной аминокислотной последовательности должна быть сделана консервативно. Примеры консервативных замен включают замены одного алифатического остатка на другой, такого как Ile, VaI, Leu или Ala на другой, или замену одного полярного остатка на другой, такую как между Lys и Arg; Glu и Asp; или Gln и Asn. Хорошо известны другие подобные консервативные замены, например, замены целых участков, имеющих сходные гидрофобные свойства (Kyte and Doolittle, 1982, J. Mol. Biol. 157(1): 105-132). Замены одной или более L-аминокислот одной или более D-аминокислотами следует рассматривать как консервативные замены в контексте настоящего изобретения. Примеры аминокислотных замен представлены в таблице 1 ниже:
Таким образом, в другом аспекте проникающий в клетку пептид согласно изобретению отличается тем, что:
a) указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, длиной, по меньшей мере, 15, и не более чем 30 аминокислот; и
b) указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую SEQ ID NO: 6, причем 0, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот заменяется, удаляется и/или добавляется, при условии сохранения способности проникать в клетку у указанного пептида, в которой
Χ1 представляет собой K, R или Η
Х2 представляет собой R, K или Η
Х3 представляет собой Y, W или F
Х4 представляет собой K, R или H
Х5 представляет собой N или Q
Х6 представляет собой R, K или H
Х7 представляет собой V, I, M, L, F или А
Х8 представляет собой А, V, L, I или G
Х9 представляет собой S или Τ
Х10 представляет собой R, K или Η
Х11 представляет собой K, R или H
Х13 представляет собой R, K или H
X14 представляет собой А, V, L, I или G
Х15 представляет собой K, R или H
X16 представляет собой F, L, V, I, Y, W или M
Х17 представляет собой K, R или Н.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Χ1 представляет собой K.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х2 представляет собой R.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х3 представляет собой Υ.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х4 представляет собой K.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х5 представляет собой N.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х6 представляет собой R.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х7 представляет собой V.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х8 представляет собой А.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х9 представляет собой S.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х10 представляет собой R.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х11 представляет собой K.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х13 представляет собой R.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х14 представляет собой А.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Χ15 представляет собой K.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой X16 представляет собой F.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, в которой Х17 представляет собой K.
В отдельном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению представляет собой определенную выше последовательность SEQ ID NO: 6, при этом аминокислота в положении, эквивалентном положению 12 относительно SEQ ID NO: 6, является Ser (S).
В более конкретном аспекте указанный проникающий в клетку пептид содержит аминокислотную последовательность, содержащую SEQ ID NO: 7, в которой
Χ1 представляет собой K или R
Х2 представляет собой R или K
Х3 представляет собой Y, W, или F
Х4 представляет собой K или R
Х5 представляет собой N или Q
Х6 представляет собой R или K
Х7 представляет собой V, I, M или L
X8 представляет собой А или G
Х9 представляет собой S или Τ
Х10 представляет собой R или K
Х11 представляет собой K или R
Х13 представляет собой R или K
Х14 представляет собой А или G
Χ15 представляет собой K или R
X16 представляет собой F, Y или W
Х17 представляет собой K или R.
В частности, проникающий в клетку пептид согласно изобретению имеет аминокислотную последовательность, содержащую или состоящую из SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
В другом варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению имеет аминокислотную последовательность, содержащую или состоящую из SEQ ID NO: 1.
В другом варианте осуществления изобретение имеет отношение к проникающему в клетку пептиду, содержащему или состоящему из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8.
В другом отдельном варианте осуществления указанный проникающий в клетку пептид содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.
В другом варианте осуществления изобретение имеет отношение к проникающему в клетку пептиду, содержащему или состоящему из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.
Специалисту ясно, что первичная аминокислотная последовательность проникающего в клетку пептида изобретения может быть дополнительно пост-трансляционно модифицирована, например, путем гликозилирования или фосфорилирования, без отклонения от сущности изобретения.
В дополнительном варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению необязательно дополнительно содержит, в дополнение к его аминокислотной последовательности, как описано выше, что-либо из числа или любую комбинацию из:
(i) клеточного сигнала внутриядерной локализации (NLS). Такие сигналы хорошо известны специалисту и описаны в Nair et al. (2003, Nucleic Acids Res. 31(1): 397-399)
(ii) направленный (нацеленный) пептид, включая опухолевые хоминг-пептиды, например, такие, которые описаны в Kapoor et al. (2012, PLoS ONE 7(4): e35187) и перечисленные в-http://crdd.osdd.net/raghava/tumorhope/general.php?
В другом варианте осуществления проникающий в клетку пептид согласно изобретению связан с карго-молекулой и способствует клеточной интернализации указанной карго-молекулы.
Таким образом, другой аспект изобретения имеет отношение к комплексу, содержащему проникающий в клетку пептид согласно изобретению и карго-молекулу.
Карго-молекула может быть связана или с С-концевой частью или с N-концевой частью проникающего пептида согласно изобретению.
В отдельном варианте осуществления карго-молекула, которая связана с проникающим пептидом согласно изобретению или которая содержится в комплексе согласно изобретению может быть выбрана из группы, состоящей из: (i) пептида, полипептида или протеина, (ii) полисахарида, (iii) липида, (iv) липопротеина, (v) гликолипида, (vi) нуклеиновой кислоты, (vii) низкомолекулярного лекарственного средства или токсина и (viii) визуализирующего или контрастного вещества.
Понятно, что карго-молекула может содержать более чем один пептид, полипептид или протеин, более чем один полисахарид, более чем один липид, более чем один липопротеин, более чем один гликолипид, более чем одну нуклеиновую кислоту, более чем одно низкомолекулярное лекарственное средство или токсин, более чем одно визуализирующее или контрастное вещество или их комбинацию.
В дополнительном варианте осуществления карго-молекулу, которая связана с проникающим пептидом согласно изобретению или которая содержится в комплексе согласно изобретению выбирают из числа эпитопов патогенов и/или опухолевых эпитопов.
Один вариант осуществления касается комплекса, содержащего проникающий в клетку пептид согласно изобретению и карго-молекулу, при этом указанная карго-молекула является пептидом, полипептидом или белком.
Примеры карго-молекул пептидного, полипептидного или белкового происхождения, пригодные в изобретении, включают эпитопы, антитела, фрагменты антител, терапевтические белки, факторы транскрипции, трансактиваторы и пептиды-ловушки. Например, карго-молекула может содержать CD4+ эпитоп(ы) и/или CD8+ эпитопы, соответствующие антигенной детерминанте(ам) опухоль-ассоциированного антигена, опухоль-специфического антигена или антигенного белка патогена. CD4+ эпитопы, содержащиеся в полипептиде изобретения, в большинстве случаев и предпочтительно состоят примерно из 12-25 аминокислот. Они могут также состоять примерно из 8-25 аминокислот или примерно из 6-100 аминокислот. CD8+ эпитопы, содержащиеся в полипептиде изобретения, как правило, и предпочтительно, состоят примерно из 8-11 аминокислот. Они также могут состоять примерно из 8-15 аминокислот или примерно из 6-100 аминокислот.
В отдельном варианте осуществления комплекс согласно изобретению содержит карго-молекулу, выбранную из эпитопов, антител, фрагментов антител, терапевтических белков, факторов транскрипции, трансактиваторов и пептидов-ловушек.
В более конкретном варианте осуществления комплекс согласно изобретению включает карго-молекулу, содержащую один или более эпитопов, которые могут быть опухолевыми эпитопами и/или эпитопами патогенов, как определено в описании.
В отдельном варианте осуществления комплекс согласно изобретению включает карго-молекулу, содержащую эпитоп(ы) опухоль-ассоциированного антигена, опухоль-специфический антиген и/или антигенный белок патогена, включая антигенный белок вируса, бактерии, грибка, простейшего и многоклеточного паразита.
В отдельной иллюстрации изобретения указанные эпитопы презентируются на клеточной поверхности в контексте МНС класса I и/или МНС класса II.
Примеры карго-молекул в пределах категории пептида, полипептида или протеина включают комбинацию нескольких эпитопов глиомы, таких как, эпитопы, описанные в Novellino et al. (2005, Cancer Immunol Immunother, 54(3): 187-207), Vigneron et al. (2013, Cancer Immun. 13:15).
В другом аспекте изобретения все указанные эпитопы глиомы не являются связанными с тем же самым проникающим пептидом, который мог бы образовать единый комплекс согласно изобретению, но являются связанными, или по отдельности или группами, по меньшей мере, из 2 эпитопов, с независимыми проникающими пептидами согласно изобретению, образуя, по меньшей мере, 2 отдельных комплекса согласно изобретению.
В предпочтительном варианте осуществления комплекс согласно изобретению содержит проникающий в клетку пептид и эпитопы и обеспечивает транспорт и презентирование указанных эпитопов на клеточной поверхности антиген-презентирующих клеток в контексте МНС класса I и МНС класса II, и, таким образом, может использоваться для вакцинации и иммунотерапии.
В отдельном аспекте комплекс согласно изобретению содержит спейсер или линкер, который является неиммунологической расщепляемой молекулой, связывающей проникающий в клетку пептид и карго-молекулу, и/или связывающей последовательные эпитопы, содержащиеся в пептидной, полипептидной или белковой карго-молекуле, и/или связывающей последовательные карго-молекулы, и/или располагается на С-концевой части карго-молекулы.
Указанный спейсер может быть пептидным или непептидным, связь между двумя компонентами комплекса согласно изобретению может быть ковалентной связью или нековалентной связью.
Пептидный спейсер, например, может состоять примерно из 1, 2, 3, 4,·5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот. Аминокислотная последовательность пептидного спейсера может быть идентичной последовательности N-концевой или С-концевой фланкирующей области карго-молекулы или эпитопа указанной карго-молекулы. Альтернативно, пептидный спейсер может состоять из искусственных аминокислотных последовательностей, таких как аминокислотная последовательность, возникающая в результате консервативных аминокислотных замен указанных природных фланкирующих областей, или последовательностей известных сайтов расщепления протеазами, таких как сайт-мишень энтерокиназы (аминокислотная последовательность DDDK, SEQ ID NO: 15), сайт-мишень фактора Ха (аминокислотная последовательность IEDGR, SEQ ID NO: 16), сайт-мишень тромбина (аминокислотная последовательность LVPRGS, SEQ ID NO: 17), сайт-мишень протеазы TEV (аминокислотная последовательность ENLYFQG, SEQ ID NO: 18), сайт-мишень PreScission протеазы (аминокислотная последовательность LEVLFQGP, SEQ ID NO: 19), поликатионные аминокислоты, например, поли K, сайт-мишень фурина (аминокислотная последовательность RX(R/K)R, SEQ ID NO: 20). В отдельном варианте осуществления пептидный спейсер не содержит остатков Cys (С).
Непептидный спейсер может включать сложные эфиры, сложные тиоэфиры или дисульфиды.
В отдельном аспекте комплекс согласно изобретению содержит спейсер или линкер, в частности, пептидный спейсер, размещенный между последовательностью проникающего пептида и пептидной, полипептидной или белковой карго-молекулой. Этот пептидный спейсер может быть выбран специалистом в данной области так, чтобы он мог быть «отрезан» клеточным аппаратом сразу после того, как комплекс, содержащий проникающий в клетку пептид и карго-молекулу, интернализуется, таким образом, освобождая карго-молекулу от проникающего пептида в клетке, органелле или на клеточной поверхности.
В более конкретном аспекте указанный спейсер, соединяющий проникающий в клетку пептид и пептидную, полипептидную или белковую карго-молекулу, или смежный эпитоп пептидной, полипептидной или белковой карго-молекулы, может состоять примерно из 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот, которые соответствуют примерно 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотам фланкирующей области указанной карго-молекулы или смежного эпитопа.
В том случае, когда карго-молекула содержит несколько эпитопов, специалисту в данной области техники понятно, что каждый из эпитопов, содержащихся в комплексе изобретения может быть или непосредственно связан с другим или связан через спейсеры или линкеры, такие как пептидный спейсер, состоящий из нескольких аминокислот. Альтернативно, в том случае, когда карго-молекула содержит несколько эпитопов, также возможно, что некоторые эпитопы, содержащиеся в комплексе изобретения, являются непосредственно связанными друг с другом, или некоторые другие эпитопы связываются через спейсеры или линкеры, такие как пептидный спейсер, состоящий из нескольких аминокислот.
В отдельном аспекте изобретения два последовательных эпитопа, содержащиеся в пептидной, полипептидной или белковой карго-молекуле изобретения, являются связанными друг с другом спейсерами, состоящими из природных фланкирующих областей указанных эпитопов. Согласно одному варианту осуществления спейсер, использованный для соединения первого эпитопа со вторым эпитопом, состоит примерно из 8 аминокислот, соответствующих примерно 4 аминокислотам N-концевой или С-концевой фланкирующей области первого эпитопа, за которыми следует примерно 4 аминокислоты N-концевой или С-концевой фланкирующей области второго эпитопа. В примере настоящего изобретения спейсер, использованный для соединения первого эпитопа ("эпитоп 1") со вторым эпитопом ("эпитоп 2"), состоит примерно из 8 аминокислот в соответствии с любой возможной комбинацией в пределах: от 0 фланкирующих аминокислот эпитопа 1 и 8 фланкирующих аминокислот эпитопа 2 до 8 фланкирующих аминокислот эпитопа 1 и 0 фланкирующих аминокислот эпитопа 2, т.е. включая 1 фланкирующую аминокислоту эпитопа 1 и 7 фланкирующих аминокислот эпитопа 2, 2 фланкирующих аминокислоты эпитопа 1 и 6 фланкирующих аминокислот эпитопа 2, 3 фланкирующих аминокислоты эпитопа 1 и 5 фланкирующих аминокислот эпитопа 2, 4 фланкирующих аминокислоты эпитопа 1 и 4 фланкирующих аминокислоты эпитопа 2, 5 фланкирующих аминокислот эпитопа 1 и 3 фланкирующих аминокислоты эпитопа 2, 6 фланкирующих аминокислот эпитопа 1 и 2 фланкирующих аминокислоты эпитопа 2, 7 фланкирующих аминокислот эпитопа 1 и 1 фланкирующую аминокислоту эпитопа 2, 8 фланкирующих аминокислот эпитопа 1 и 0 фланкирующих аминокислот эпитопа 2. Следует понимать, что общее количество 8 аминокислот, составляющих спейсер, соединяющий два последовательных эпитопа, не является абсолютным значением, и спейсер также может состоять в целом, например, из 3 аминокислот, 4 аминокислот, 5 аминокислот, 6 аминокислот, 7 аминокислот, 9 аминокислот или 10 аминокислот. Аналогично, равноценные комбинации, как упомянуто выше, также являются иллюстрацией изобретения в ситуации, когда спейсер имеет меньше или больше, чем 8 аминокислот.
В другой конкретной иллюстрации настоящего изобретения спейсер, использованный для соединения первого эпитопа ("эпитоп 1") со вторым эпитопом ("эпитоп 2"), состоит примерно из 4 аминокислот, например, 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот. Конкретнее, указанная аминокислотная последовательность спейсера может соответствовать 4 аминокислотам N-концевой или С-концевой фланкирующей области эпитопа 1 или эпитопа 2.
Описанный выше спейсер может также располагаться на С-концевой части последнего эпитопа, содержащегося в карго-молекуле.
Примеры пептидного спейсера включают, например, аминокислотные последовательности EQLE (SEQ ID NO: 11) или TEWT (SEQ ID NO: 12), или любые их консервативные замены.
Другой вариант осуществления касается комплекса, содержащего проникающий в клетку пептид согласно изобретению и карго-молекулу, при этом указанная карго-молекула представляет собой полисахарид, липид, липопротеин и/или гликолипид, в частности, эпитоп полисахарида, липида, липопротеина и/или гликолипид а, который может быть эпитопом патогена, как определено в описании.
В отдельном примере, комплекс согласно изобретению содержит карго-молекулу, содержащую эпитоп(ы) полисахарида, липида, липопротеина и/или гликолипида антигена патогена, включая вирусные, бактериальные, грибковые антигены и антигены простейших и многоклеточных паразитов.
В отдельном примере изобретения указанные эпитопы будут презентироваться на клеточной поверхности в контексте МНС класса I и/или МНС класса II.
В другом примере изобретения указанные липидные эпитопы будут презентироваться на клеточной поверхности в контексте CD1 (кластер дифференцировки 1).
Другой вариант осуществления предоставляет комплекс, содержащий проникающий в клетку пептид согласно изобретению и карго-молекулу, при этом указанная карго-молекула представляет собой низкомолекулярное лекарственное средство или токсин.
Примеры карго-молекул в пределах категории низкомолекулярных лекарственных средств или токсинов, пригодных в изобретении, включают циклоспорин А, паклитаксел, доксорубицин, метотрексат, 5-аминолевулиновую кислоту, дифтерийный токсин, сунитиниб и молекулы, рассмотренные в De wit Amer (2010, Neuro Oncol, 12(3): 304-16).
Другой вариант осуществления предоставляет комплекс, содержащий проникающий в клетку пептид согласно изобретению и карго-молекулу, при этом указанная карго-молекула представляет собой визуализирующее или контрастное вещество.
Примеры карго-молекул в пределах категории визуализирующих или контрастных веществ, пригодных в изобретении, включают флюорофоры, квантовые точки (QDs), хелаты металлов, такие как низкомолекулярные хелатные соединения гадолиния (Gd3+), суперпарамагнитную окись железа (SPIO), радиоактивные индикаторы.
Другой вариант осуществления предоставляет комплекс, содержащий проникающий в клетку пептид согласно изобретению и карго-молекулу, при этом карго-молекула является нуклеиновой кислотой.
Примеры нуклеиновокислотных карго-молекул, пригодных в изобретении включают ДНК, РНК, миРНК, кшРНК, антисмысловые олигонуклеотиды, ДНК-ловушку, плазмиды, микроРНК.
Другой вариант осуществления предоставляет комплекс, содержащий проникающий в клетку пептид согласно изобретению и карго-молекулу, при этом карго-молекула является нуклеиновой кислотой, кодирующей пептид, полипептид или протеин, в частности, кодирующей пептид, полипептид или протеин, содержащий эпитопы.
Примеры карго-молекул в пределах категории нуклеиновых кислот включают нуклеиновую кислоту, кодирующую пептидную, полипептидную или белковую карго-молекулу согласно изобретению. Конкретным примером является нуклеиновая кислота, кодирующая эпитопы, содержащиеся в пептидной, полипептидной или белковой карго-молекуле согласно изобретению. Другим примером является нуклеиновая кислота, кодирующая комбинацию нескольких эпитопов глиомы, например, описанных в Reardon et al (2013, Expert Rev Vaccines, 12(6): 597-615).
В другом предпочтительном варианте осуществления комплекс согласно изобретению содержит проникающий в клетку пептид и нуклеиновую кислоту, кодирующую эпитопы, и обеспечивает возможность транспорта указанной нуклеиновой кислоты в клетку. Затем внедренная (трансдуцированная) нуклеиновая кислота может транскрибироваться и транслироваться с целью продуцирования указанных эпитопов в клетке, которые в свою очередь презентируются на клеточной поверхности антиген-презентирующих клеток в контексте МНС класса I и МНС класса II. Поэтому такой комплекс полезен для вакцинации и иммунотерапии.
В одном варианте осуществления изобретения карго-молекула может быть ковалентно или нековалентно связана с проникающим пептидом согласно изобретению, включая связь посредством пептидного спейсера, описанного выше.
Методы соединения проникающего пептида согласно изобретению и карго-молекулы широко освещены в литературе и могут зависеть от природы карго-молекулы. Например, связывание карго-молекулы и проникающего пептида может обеспечиваться расщепляемыми дисульфидными связями, полученными с помощью полного ступенчатого твердофазного синтеза или путем жидкофазного или твердофазного соединения фрагментов, устойчивой амидной, тиазолидиновой, оксимовой и гидразиновой связью, дисульфидной связью, устойчивой тиомалеимидной связью, пептидной связью (включая пептидные связи между аминокислотами гибридного белка), или электростатическими или гидрофобными взаимодействиями.
Полинуклеотиды, кодирующие пептидные и белковые комплексы согласно изобретению
Другой аспект изобретения имеет отношение к полинуклеотидам, кодирующим проникающий в клетку пептид или комплекс, содержащий пептидную, полипептидную или белковую карго-молекулу согласно изобретению.
В одном варианте осуществления изобретение имеет отношение к нуклеиновой кислоте, кодирующей проникающий в клетку пептид согласно изобретению или кодирующей комплекс, содержащий указанный проникающий в клетку пептид, ковалентно связанный с пептидной, полипептидной или белковой карго-молекулой, возможно посредством пептидного спейсера(ов), как описано в данном документе.
В дополнительном варианте осуществления изобретение имеет отношение к нуклеиновой кислоте, кодирующей проникающий в клетку пептид согласно изобретению или комплекс, кодирующий указанный проникающий в клетку пептид, ковалентно связанный с пептидом, полипептидом или белковой карго-молекулой, содержащей по меньшей мере, один эпитоп, возможно посредством пептидного спейсера(ов), как описано в данном документе.
В еще одном дополнительном варианте осуществления изобретение имеет отношение к нуклеиновой кислоте, кодирующей пептидную, полипептидную или белковую карго-молекулу согласно изобретению, содержащую, по меньшей мере, один эпитоп.
Получение и очистка проникающего пептида или комплексов согласно изобретению
Другой аспект изобретения предоставляет рекомбинантный вектор, содержащий полинуклеотид согласно изобретению.
Могут быть использованы многочисленные системы экспрессии, включая без ограничения, хромосомы, эписомы и полученные из вирусов. Конкретнее, используемые рекомбинантные векторы могут быть получены из бактериальных плазмид, транспозонов, эписом дрожжей, перемещающихся встроенных элементов, элементов хромосом дрожжей, вирусов, таких как бакуловирус, папиллома вирус, такой как V40, вирусы осповакцины, аденовирусы, лисьи поксвирусы, вирусы псевдобешенства, ретровирусы.
Эти рекомбинантные векторы в равной степени могут быть производными космиды или фагмиды. Нуклеотидная последовательность может быть вставлена в рекомбинантный вектор экспрессии с помощью хорошо известных специалистам в данной области техники методов, например, таких, которые описаны в MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Sambrook et al., 4th Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2001.
Рекомбинантный вектор может включать нуклеотидные последовательности, которые контролируют регуляцию экспрессии полинуклеотида, а также нуклеотидные последовательности, обеспечивающие экспрессию и транскрипцию полинуклеотида изобретения и трансляцию полипептида изобретения, эти последовательности выбирают в соответствии с используемыми клетками-хозяевами.
Таким образом, например, соответствующий сигнал секреции может быть интегрирован в рекомбинантный вектор так, что полипептид, кодированный полинуклеотидом изобретения, будет направляться к просвету эндоплазматического ретикулума, по направлению к периплазматическому пространству, на мембрану или по направлению к внеклеточному пространству. Выбор соответствующего сигнала секреции может облегчить последующую очистку белка.
В дополнительном варианте осуществления предоставляется клетка-хозяин, содержащая рекомбинантный вектор согласно изобретению.
Введение рекомбинантного вектора в клетку-хозяина может осуществляться с помощью хорошо известных специалистам в данной области методов, например, описанных в BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Davis et al., 2nd ed., McGraw-Hill Professional Publishing, 1995, and MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, выше, таких как кальций-фосфатная трансфекция, трансфекция DEAE декстраном, трансфекция, микроинъекция, трансфекция посредством катионных липидов, электропорация, трансдукция или инфекция.
Клетка-хозяин может представлять собой, например, бактериальную клетку, такую как Е.coli, клетки грибов, такие как дрожжевые клетки и клетки Aspergillus, Streptomyces, клетки насекомых, клетки яичника китайского хомячка (СНО), линия мышиных клеток С127, линия клеток ВНК сирийского хомяка, клетки первичной почки человека 293 (HEK 293).
Клетка-хозяин может использоваться, например, для экспрессии полипептида изобретения. После очистки стандартными способами полипептид изобретения может использоваться в способе, описанном далее.
Дополнительным вариантом осуществления изобретения является предоставление способа получения проникающего пептида согласно изобретению или комплекса, содержащего указанный проникающий в клетку пептид, ковалентно связанный с пептидной, полипептидной или белковой карго-молекулой согласно изобретению, включающего культивирование упомянутой выше клетки-хозяина в культуральной среде и отделение указанного проникающего пептида или комплекса из культуральной среды или отделение указанного проникающего пептида или комплекса из лизата клеток-хозяев после лизиса клеток-хозяев.
В другом варианте осуществления проникающие пептиды и комплексы согласно изобретению могут быть получены методами синтетической химии, такими как твердофазный синтез пептидов. Очистка этих пептидов может осуществляться любыми методами, известными в данной области техники, предназначенными для очистки протеина/пептида. Типичные методы включают ионообменную хроматографию, хроматографию гидрофобного взаимодействия и иммуноаффинный метод.
Дополнительным вариантом осуществления изобретения является предоставление способа получения проникающего пептида согласно изобретению, содержащего химически синтезированный и очищенный указанный пептид.
Другим дополнительным вариантом осуществления изобретения является предоставление способа получения комплекса согласно изобретению, содержащего проникающий в клетку пептид, ковалентно связанный с пептидной, полипептидной или белковой карго-молекулой, как определено в данном документе, при этом способ включает химический синтез и очистку полипептида, аминокислотная последовательность которого содержит аминокислотную последовательность указанного проникающего пептида и аминокислотную последовательность указанной пептидной, полипептидной или белковой карго-молекулы.
В другом варианте осуществления способ согласно изобретению включает синтез проникающего пептида и карго-молекулы по отдельности, и или смешивание очищенных пептида и карго-молекулы или ковалентное связывание указанного пептида и карго-молекулы.
Клетки, нагруженные комплексами согласно изобретению
Другой аспект изобретения имеет отношение к клеткам, нагруженным комплексом согласно изобретению. В отдельном варианте осуществления клетки являются клетками, полученными от пациента, которого предполагается лечить.
В дополнительном варианте осуществления клетки являются клетками иммунной системы, такими как антиген-презентирующие клетки или стволовые клетки, такие как нейтральные стволовые клетки.
В одном варианте осуществления предоставляются антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом согласно изобретению.
В отдельном варианте осуществления антиген-презентирующие клетки выбирают из числа дендритных клеток, макрофагов и В-клеток. Предпочтительными являются дендритные клетки, в частности дендритные клетки (обычные и плазмоцитоидные), полученные от пациента, которого предполагается лечить.
Методы получения антиген-презентирующих клеток, в частности, дендритных клеток пациента, хорошо известны специалистам. Они включают сбор моноцитов или гематопоэтических стволовых клеток из костного мозга, пуповинной крови или периферической крови. Они также включают использование эмбриональных стволовых клеток (ES) и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPS). Антиген-презентирующие клетки, в частности дендритные клетки или их предшественники, могут быть обогащены методами, включающими элютриацию и отделение с использованием магнитного микроносителя, которые могут затрагивать накопление CD14+ клеток-предшественников.
Методы «загрузки» комплекса изобретения в клетки, в частности в упомянутые выше антиген-презентирующие клетки, и дальнейшая подготовка таких клеток до введения пациенту известны специалисту в данной области техники. Получение дендритных клеток может включать их культивирование или дифференцировку с использованием цитокинов, которые могут включать GM-CSF и IL-4. Также могут использоваться линии дендритных клеток. Загрузка комплекса изобретения в клетки, в частности в дендритные клетки, может включать совместную инкубацию культуры клеток с комплексом изобретения, пользуясь присущими свойствами проникающего пептида изобретения (т.е. его способностью к интернализации). Дальнейшее культивирование загруженных таким образом дендритных клеток с целью индуцировать эффективное созревание может включать добавление цитокинов, включая IL-1β, IL-6, TNFα, PGE2, IFNα, и адьювантов, которые могут включать поли-IC, поли-ICLC (т.е. комплекс синтеза карбоксиметилцеллюлозы, полиинозиновой-полицитидиловой кислоты и поли-L-лизиновой двухцепочечной РНК), и других агонистов TLR (toll-подобные рецепторы) и NLR (рецепторы, подобные нуклеотид-связывающему олигомеризационному домену).
Следующий аспект касается визуализации клеток, служащих для клеточной терапии, таких как стволовые клетки, дендритные клетки, Т-клетки или натуральные киллеры, нагруженных комплексом согласно изобретению, при этом карго-молекула является визуализирующим веществом.
Кроме того, целью изобретения является предоставление способа получения клеток, в частности, антиген-презентирующих клеток, нагруженных упомянутым выше комплексом согласно изобретению, включающего трансдукцию указанных клеток комплексом изобретения, культивирование указанных клеток в культуральной среде и отделение указанных клеток от культуральной среды.
В отдельном варианте осуществления клетки нагружаются комплексом(ами), содержащим карго-молекулу, при этом указанную карго-молекулу выбирают из числа (i) пептида, полипептида или протеина или (ii) нуклеиновой кислоты.
В другом варианте осуществления изобретения клетки нагружаются комплексом(ами), содержащим эпитопы согласно изобретению, причем указанные эпитопы презентируются на клеточной поверхности в контекстах МНС класса I и МНС класса II.
Композиции и наборы согласно изобретению
Изобретение предоставляет композиции, содержащие, по меньшей мере, один компонент, выбранный из числа:
(i) проникающего в клетку пептида изобретения,
(ii) комплекса изобретения,
(iii) нуклеиновой кислоты изобретения,
(iv) вектора изобретения,
(v) клеток-хозяев изобретения, и
(vi) клеток, нагруженных комплексом согласно изобретению.
В отдельном варианте осуществления композиция изобретения содержит более чем один из компонентов по пунктам (i)-(vi).
В одном примере изобретения композиция содержит, по меньшей мере, два разных пептида по пункту (i), по меньшей мере, два разных комплекса по пункту (ii), по меньшей мере, две разных нуклеиновых кислоты по пункту (iii), по меньшей мере, два разных вектора по пункту (iv), по меньшей мере, две разных клетки-хозяина по пункту (v) и/или по меньшей мере, две разные клетки по пункту (vi).
В другом примере композиция изобретения содержит, по меньшей мере, два разных комплекса и/или, по меньшей мере, две разные нуклеиновые кислоты согласно изобретению.
В частности, композиция изобретения может содержать более, чем один комплекс согласно изобретению, например, по меньшей мере, два комплекса, при этом каждый комплекс содержит одну или более карго-молекул, и при этом указанные карго-молекулы различаются между комплексами.
В одном примере композиция изобретения содержит, по меньшей мере, 2 комплекса, при этом каждый комплекс содержит один или более эпитопов, и при этом указанные эпитопы различаются между комплексами.
В другом примере композиция изобретения содержит, по меньшей мере, 2 комплекса, при этом каждый комплекс содержит одну или более нуклеиновую кислоту, кодирующую один или более эпитопов, и при этом указанные нуклеиновые кислоты различаются между комплексами.
Настоящее изобретение также предоставляет комплекс или клетки, нагруженные указанным комплексом, как описано в документе, предназначенные для использования в качестве медикамента, в частности, в качестве вакцины.
В отдельном варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет комплекс или клетки, нагруженные указанным комплексом, как описано в документе, предназначенные для использования при лечении болезней или нарушений, включая рак, инфекционные болезни, аутоиммунные нарушения и отторжение трансплантата.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет комплекс или клетки, нагруженные указанным комплексом, как описано в документе, предназначенные для использования в качестве визуализирующей или диагностической композиции.
Изобретение также предоставляет визуализирующую композицию или диагностическую композицию, содержащую комплекс согласно изобретению или клетки, нагруженные указанным комплексом, как описано в документе.
Изобретение предоставляет фармацевтические композиции, в частности, вакцинные композиции, и способы лечения субъекта, предпочтительно, млекопитающего, и наиболее предпочтительно человека, который подвержен действию или страдает от болезни, и в частности, нарушения, которое можно лечить с помощью иммунотерапии, такого как рак, инфекционные болезни, аутоиммунные нарушения и отторжение трансплантата.
Фармацевтические композиции, в частности, вакцинные композиции, согласно изобретению могут быть введены в виде фармацевтического состава, содержащего проникающий в клетку пептид или комплекс согласно изобретению в любой описанной здесь форме.
Фармацевтические композиции, в частности вакцинные композиции, согласно изобретению также могут быть введены в виде фармацевтического состава, содержащего антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом согласно изобретению, в любой форме, описанной в данном документе.
Композиции согласно изобретению в сочетании с обычно используемым адьювантом (вспомогательным веществом), иммуномодулирующим веществом, носителем, разбавителем или эксципиентом могут быть заключены в стандартную лекарственную форму и могут использоваться в виде твердых лекарственных форм, предназначенных для перорального применения, таких как таблетки или наполненные капсулы, или в виде жидкостей, таких как растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры или капсулы, наполненные теми же самыми компонентами, или в форме стерильных растворов для инъекций, предназначенных для парентерального введения (включая подкожное и внутрикожное введение) с помощью инъекций или длительных вливаний. Составы для инъекций, как правило, изготавливаются на основе стерильного солевого раствора для инъекций или фосфатно-буферного солевого раствора или других инъецируемых носителей, известных в данной области. Такие фармацевтические композиции и их стандартные лекарственные формы могут содержать ингредиенты в обычных соотношениях, с добавлением или без добавления дополнительных активных соединений или компонентов, при этом такие стандартные лекарственные формы могут содержать любое подходящее эффективное количество активного ингредиента в соответствии с предполагаемым ежедневным диапазоном доз.
Примеры подходящих адъювантов и/или иммуномодулирующих веществ включают MPL® (Corixa), минералы на основе алюминия, включая соединения алюминия (в общем называемые квасцами), ASO1-4, MF59, фосфат кальция, липосомы, иском, полиинозиновую:полицитидиловую кислоту (поли-IC), включая ее стабилизированную форму поли-ICLC (Hiltonol), CpG олигодезоксинуклеотиды, гранулоцитарно-макрофагально колониестимулирующий фактор (GM-CSF), липополисахарид (LPS), монтанид, полилактид-ко-гликолид (PLG), флагеллин, сапонины мыльного дерева (QS21), амино-алкильные глюкозамидные соединения (например, RC529), двухкомпонентные антибактериальные пептиды с синтетическими олигодезоксинуклеотидами (например, IC31), имиквимод, резиквимод, иммуностимулирующие последовательности (ISS), монофосфорил-липид A (MPLA), липопептид, стимулирующий фибробласты (FSL1), и анти-CD40 антитела.
Композиции изобретения могут быть жидкими композициями, включая, но не ограничиваясь этим, водные или масляные суспензии, растворы, эмульсии, сиропы и эликсиры. Композиции также могут быть созданы в виде сухого продукта, предназначенного для восстановления водой или другим подходящим разбавителем перед применением. Подобные жидкие препараты могут содержать вспомогательные вещества, включая, но не ограничиваясь этим, суспендирующие вещества, эмульгирующие вещества, неводные наполнители и консервирующие вещества. Суспендирующие вещества включают, но не ограничиваются этим, сорбитовый сироп, метилцеллюлозу, глюкозу/сахарный сироп, желатин, гидроксиэтилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, алюминиево-стеариновый гель и гидрогенезированные пищевые жиры. Эмульгирующие вещества включают, но не ограничиваются этим, лецитин, сорбитанмоноолеат и гуммиарабик. Консервирующие вещества включают, но не ограничиваются этим, метил или пропил р-гидроксибензоат и сорбиновую кислоту. Диспергирующие или увлажняющие вещества включают, но не ограничиваются этим, поли(этиленгликоль), глицерин, бычий сывороточный альбумин, Твин ®, Span®.
Композиции изобретения также могут быть созданы в виде депо-препарата, который может быть введен посредством имплантации или внутримышечной инъекции.
Твердые композиции этого изобретения могут иметь форму таблеток или пастилок, созданных обычным образом. Например, таблетки и капсулы, предназначенные для перорального приема, могут содержать общепринятые эксципиенты, включая, но не ограничиваясь этим, связывающие вещества, наполнители, смазывающие вещества, дезинтегрирующие вещества и увлажняющие вещества. Связывающие вещества включают, но не ограничиваются этим, сироп, гуммиарабик, желатин, сорбитол, трагакантовую камедь, крахмальную слизь и поливинилпирролидон. Наполнители включают, но не ограничиваются этим, лактозу, сахар, микрокристаллическую целлюлозу, кукурузный крахмал, фосфат кальция и сорбитол. Смазывающие вещества включают, но не ограничиваются этим, стеарат магния, стеариновую кислоту, тальк, полиэтиленгликоль и двуокись кремния. Дезинтегрирующие вещества включают, но не ограничиваются этим, картофельный крахмал и натрия крахмал гликолят. Увлажняющие вещества включают, но не ограничиваются этим, натрий лаурил сульфат. Таблетки могут быть покрыты в соответствии с известными в данной области техники способами.
Соединения этого изобретения также могут быть введены в формах с замедленным высвобождением или в виде систем доставки лекарств с замедленным высвобождением.
Согласно отдельному варианту осуществления композиции согласно изобретению предназначаются для подкожного применения.
В другом отдельном аспекте композиции согласно изобретению приспособлены для доставки путем повторяющегося введения.
Дополнительные материалы, а также методы изготовления композиции и тому подобное изложены в 5 части работы Remington's "The Science and Practice of Pharmacy", 22nd Edition, 2012, University of the Sciences in Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, включенной в данное описание путем отсылки.
Другим аспектом изобретения является предоставление способа приготовления фармацевтической композиции согласно изобретению, включающего стадию смешивания проникающего пептида или комплекса согласно изобретению или клеток, в частности антиген-презентирующих клеток, нагруженных комплексом согласно изобретению, и фармацевтически приемлемого носителя.
Комплекс согласно изобретению, клетки, в частности, антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом согласно изобретению, композиции согласно изобретению или способ согласно изобретению используются для предотвращения и/или лечения болезни или нарушения, в частности тех, которые можно лечить или предотвратить, используя иммунотерапию, таких как рак и инфекционные болезни.
В другом аспекте изобретение предоставляет визуализирующие или диагностические композиции. Еще один аспект касается способов доставки визуализирующего вещества и способов диагностирования болезни или нарушения у субъекта, предпочтительно млекопитающего, и наиболее предпочтительно человека, предположительно страдающего от болезни, и в частности, рака, инфекционной болезни, аутоиммунного нарушения и отторжения трансплантата.
Описанные в данном документе композиции и способы введения фармацевтических композиций также подходят для визуализирующих или диагностических композиций согласно изобретению.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение также имеет отношение к состоящему из частей набору, содержащему, по меньшей мере, что-либо из числа:
(a) проникающий в клетку пептид согласно изобретению;
(b) комплекс согласно изобретению;
(c) нуклеиновая кислота согласно изобретению;
(d) вектор согласно изобретению;
(e) клетка-хозяин согласно изобретению;
(f) клетка, нагруженная комплексом согласно изобретению.
В отдельном варианте осуществления состоящий из частей набор изобретения содержит более чем один компонент по пунктам (а)-(f).
В одном примере изобретения состоящий из частей набор содержит, по меньшей мере, два разных пептида по пункту (а), по меньшей мере, два разных комплекса по пункту (b), по меньшей мере, две разных нуклеиновых кислоты по пункту (с), по меньшей мере, два разных вектора по пункту (d), по меньшей мере, две разных клетки-хозяина по пункту (е), и/или, по меньшей мере, две разных клетки по пункту (f).
В другом примере; состоящий из частей набор изобретения содержит, по меньшей мере, два разных комплекса и/или, по меньшей мере, две разные нуклеиновые кислоты согласно изобретению.
В частности, состоящий из частей набор изобретения может содержать более, чем один комплекс согласно изобретению, например, по меньшей мере, два комплекса, при этом каждый комплекс содержит одну или более карго-молекул, и при этом указанные карго-молекулы различаются между комплексами.
В одном примере, состоящий из частей набор изобретения содержит, по меньшей мере, 2 комплекса, при этом каждый комплекс содержит один или более эпитопов, и при этом указанные эпитопы различаются между комплексами.
В другом примере состоящий из частей набор изобретения содержит, по меньшей мере, 2 комплекса, при этом каждый комплекс содержит одну или более нуклеиновых кислот, кодирующих один или более эпитопов, и при этом указанные нуклеиновые кислоты различаются между комплексами.
Различные компоненты состоящего из частей набора могут быть упакованы в один или более контейнеров. Вышеупомянутые компоненты могут предоставляться в лиофилизированной или сухой форме или растворенными в подходящем буфере. Набор также может содержать дополнительные реагенты, включая, например, консервирующие вещества, ростовые среды и/или буферы для хранения и/или восстановления вышеуказанных компонентов, промывающие растворы и тому подобное. В другом варианте осуществления состоящий из частей набор согласно изобретению также содержит инструкции по применению.
Другим аспектом изобретения является прививочный набор, предназначенный для лечения, предотвращения или стабилизации рака или инфекционных болезней, содержащий фармацевтическую композицию согласно изобретению и инструкции в отношении применения указанной фармацевтической композиции.
В отдельном варианте осуществления композиции и/или состоящий из частей набор согласно изобретению предназначаются для применения в методах визуализации.
В другом варианте осуществления композиции и/или состоящий из частей набор согласно изобретению предназначаются для диагностирования болезни или нарушения, как упоминается по ходу настоящей заявки.
Применение и способы согласно изобретению
Один аспект изобретения обеспечивает способ доставки карго-молекулы в клетку in vitro, включающий стадию установления контакта указанной клетки с проникающим пептидом согласно изобретению и указанной карго-молекулой.
В - отдельном аспекте способ изобретения, направленный на доставку карго-молекулы в клетку in vitro, включает стадии:
a) образования комплекса между проникающим пептидом согласно изобретению и карго-молекулой, которая должна быть доставлена в клетку, и
b) установления контакта указанной клетки с комплексом, образованным на стадии а).
Другой аспект изобретения предоставляет in vitro способ доставки и презентирования эпитопов карго-молекулы на поверхности клетки в контексте МНС класса I и/или МНС класса II, включающий стадию установления контакта указанной клетки с проникающим пептидом согласно изобретению и указанной карго-молекулой.
В другом аспекте изобретение обеспечивает применение любого из числа: (i) комплекса изобретения, (ii) клеток, таких как антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом изобретения, для приготовления медикамента, предназначенного для предотвращения, лечения или стабилизации таких болезней или нарушений, которые можно лечить с помощью иммунотерапии, включая рак, инфекционные болезни, аутоиммунные нарушения и отторжение трансплантата.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения предоставляется комплекс согласно изобретению, содержащий проникающий в клетку пептид и эпитопы, обеспечивающий возможность транспорта и презентирования указанных эпитопов на клеточной поверхности антиген-презентирующих клеток в контексте МНС класса I и/или МНС класса II, предназначенный для использования при вакцинации и/или иммунотерапии.
Согласно другому аспекту изобретение предоставляет способ предотвращения, лечения или подавления таких болезней или нарушений, которые можно лечить с помощью иммунотерапии, включая рак, инфекционные болезни, аутоиммунные нарушения и отторжение трансплантата, при этом указанный способ включает введение чего-либо из числа: (i) комплекса изобретения, (ii) клеток, таких как антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом изобретения, или (iii) фармацевтической композиции по пункту (i)-(ii) указанному субъекту.
Согласно другому варианту осуществления предоставляется способ индуцирования или улучшения иммунного ответа у субъекта против одного или нескольких эпитопов, зависящего от CD4+ хелперных Т-клеток и/или CD8+ цитотоксических Т-клеток, при этом указанный способ включает введение указанному субъекту чего-либо из числа: (i) комплекса изобретения, включающего карго-молекулу, содержащую один или несколько эпитопов, (ii) клеток, таких как антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом изобретения, или (iii) фармацевтической композиции по пункту (i)-(ii).
Иммунный ответ, зависящий от CD4+ и/или CD8+ ответа, может быть оценен по воспалительному ответу, ответу провоспалительных цитокинов, включая увеличение экспрессии одного или более из числа мРНК IFN-γ, TNF-α и IL-2, или белка относительно уровня до введения соединений изобретения. Ответ также может быть определен по увеличению частоты или абсолютного количества антиген-специфических Т-клеток после введения соединений изобретения, измерен посредством окрашивания мультимера HLA-пептида, с помощью метода иммуноферментных пятен ELISPOT и реакций гиперчувствительности замедленного типа. Кроме того, ответ может быть опосредованно измерен по увеличению антиген-специфических антител в сыворотке, которые зависят от антиген-специфических Т-хелперных клеток.
Согласно другому варианту осуществления предоставляется способ индуцирования или улучшения иммунного ответа у субъекта против одного или нескольких эпитопов, ограниченных многочисленными молекулами МНС класса I и/или многочисленными молекулами МНС класса II, при этом указанный способ включает введение указанному субъекту чего-либо из числа: (i) комплекса изобретения, включающего карго-молекулу, содержащую один или несколько эпитопов, (ii) клеток, таких как антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом изобретения, или (iii) фармацевтической композиции по пункту (i)-(ii).
Способ индуцирования или улучшения иммунного ответа у субъекта против нескольких эпитопов, ограниченных многочисленными молекулами МНС класса I и/или многочисленными молекулами МНС класса II, может быть оценен по ответу цитокинов, включая увеличение экспрессии одного или более из числа мРНК IFN-γ, TNF-α и IL-2, или белка относительно уровня до введения соединений изобретения после in vitro стимуляции Т-клеток специальными пептидами, связанными с отдельными молекулами МНС класса I и класса II на антиген-презентирующих клетках. Ограничение различными молекулами МНС также может быть подтверждено путем использования антиген-презентирующих клеток, экспрессирующих различные МНС молекулы, или использования МНС блокирующих антител. Также может быть проведена оценка по увеличению частоты или абсолютного количества антиген-специфических Т-клеток после введения соединений изобретения путем окрашивания мультимеров HLA-пептид, собранных с отдельными МНС молекулами.
В предпочтительном аспекте способов индуцирования или улучшения иммунного ответа против одного или нескольких эпитопов согласно изобретению иммунный ответ направлен против одного или нескольких эпитопов опухоль-ассоциированного антигена, например, такой комбинации эпитопов глиомы, которая описана в Novellino et al. (2005, Cancer Immunol Immunother, 54(3): 187-207) and Vigneron et al. (2013, Cancer Immun. 13:15).
В другом предпочтительном аспекте иммунный ответ направлен против нескольких эпитопов антигенного белка патогена.
В отдельном аспекте способов согласно изобретению указанные способы являются способами индуцирования или улучшения иммунного ответа у субъекта против одного или нескольких эпитопов, ограниченных молекулами МНС класса I и/или молекулами МНС класса II.
В другом аспекте изобретение обеспечивает применение чего-либо из числа: (i) комплекса изобретения, (ii) клеток, таких как антиген-презентируюшие клетки, нагруженные комплексом изобретения, для приготовления визуализирующей композиции, предназначенной для методов визуализации, или для приготовления диагностической композиции, предназначенной для постановки диагноза болезни или нарушения, соответственно. Болезни или нарушения, которые могут быть диагностированы с помощью изобретения, включают такие, которые можно лечить с помощью иммунотерапии, например, рак, инфекционные болезни, аутоиммунные нарушения и отторжение трансплантата.
Согласно другому аспекту изобретение предоставляет способ визуализии, при этом указанный способ включает использование, in vitro, ex vivo или in vivo, любого из числа: (i) комплекса изобретения, (ii) клеток, таких как антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом изобретения, или (iii) фармацевтической композиции по пунктам (i)-(ii).
Согласно следующему аспекту изобретение предоставляет способ диагностирования болезни или нарушения у субъекта, при этом указанный способ включает введение любого из числа: (i) комплекса изобретения, (ii) клеток, таких как антиген-презентирующие клетки, нагруженные комплексом изобретения, или (iii) фармацевтической композиции по пунктам (i)-(ii), указанному субъекту или в образец указанного субъекта ex vivo.
В отдельном варианте осуществления способы применения изобретения включают введение комплекса согласно изобретению.
В другом варианте осуществления способы применения изобретения включают введение более чем одного комплекса, клеток или фармацевтической композиции согласно изобретению.
В одном примере применения способов изобретения, по меньшей мере, 2 комплекса используются или вводятся, при этом каждый комплекс содержит одну или более карго-молекул, а указанные карго-молекулы различаются между комплексами.
В другом примере применения способов изобретения, по меньшей мере, 2 комплекса используются или вводятся, при этом каждый комплекс содержит один или более эпитопов, и при этом указанные эпитопы различаются между комплексами.
В еще одном примере применения способов изобретения, по меньшей мере, 2 комплекса используются или вводятся, при этом каждый комплекс содержит одну или более нуклеиновых кислот, кодирующих один или более эпитопов, и при этом указанные нуклеиновые кислоты различаются между комплексами.
Примеры видов рака, подходящих для применения способов изобретения, включают рак мозга, рак предстательной железы, рак молочной железы, рак яичника, рак пищевода, рак легких, рак печени, рак почки, меланому, карциному кишечника, карциному легких, плоскоклеточную карциному головы и шеи, хронический миелоидный лейкоз, колоректальную карциному, карциному желудка, карциному эндометрия, миелоидный лейкоз, плоскоклеточную карциному легких, острый лимфобластный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, рак мочевого пузыря, промиелоцитарный лейкоз, немелкоклеточную карциному легких, саркому.
Рак может представлять собой солидную опухоль, рак крови или рак лимфатической системы. Рак может быть доброкачественным или метастатическим.
Примеры инфекционных болезней, подходящих для применения способов изобретения включают болезни, вызванные вирусами, бактериями, грибами, простейшими и многоклеточными паразитами. Эти болезни включают, например, амебиаз, сибирскую язву, язву Бурули (Mycobacterium ulcerans), диарею, связанную с Caliciviruses, диарея, вызванную Campylobacter, рак шейки матки (Human papillomavirus), генитальные заболевания, вызванные Chlamydia trachomatis, холеру, конго-крымская геморрагическую лихорадку, лихорадку Денге, дифтерию, геморрагическую лихорадку Эбола, энтеротоксигенную диарею, вызванную Escherichia coli (ЕТЕС), рак желудка (Helicobacter pylori), гонорею, болезни, связанные со стрептококком группы А, болезни, связанные со стрептококком группы В, пневмонию и инвазивную болезнь, вызванную Haemophilus influenzae В, гепатит А, гепатит В, гепатит С, диарею при гепатите Е, генитальные язвы, вызванные вирусом Herpes simplex 2 типа, ВИЧ/СПИД, анкилостомидоз, грипп, японский энцефалит, лихорадку Ласса, лейшманиоз, лептоспироз, рак печени (Гепатит В), рак печени (Гепатит С), болезнь Лайма, малярию, геморрагическую лихорадку Марбург, краснуху, свинку, назофаренгиальный рак (вирус Эпштейна-Барр), менингит, вызванный менингококком Neisseria meningitidis, пневмонию, связанную с парагриппом, коклюш, чуму, полиомиелит, бешенство, пневмонию, вызванную респираторным синцитиальным вирусом (RSV), лихорадку долины Рифт, диарею, вызванную ротавирусом, коревую краснуху, шистосомоз, тяжелый острый респираторный синдром (SARS), шигеллез (бактериальная дизентерия), оспу, болезни, связанные с золотистым стафилококком, рак желудка (Helicobacter pylori), пневмонии и инвазионные болезни, вызванные стрептококком, столбняк, клещевой энцефалит, трахому, туберкулез, туляремию, брюшной тиф, болезнь, связанную с вирусом Западного Нила, желтую лихорадку.
В другом варианте осуществления способа изобретения клетки согласно изобретению являются антиген-презентирующими клетками, в частности, дендритными клетками, конкретнее дендритными клетками, полученными от субъекта, которого предполагается лечить.
Как правило, при лечении рака терапевтически эффективная доза полипептида согласно изобретению составляет примерно от 0.1 мг до 2 мг на инъекцию или примерно от мкмоль до 1 ммоль на инъекцию.
Как правило, при лечении рака терапевтически эффективная доза антиген-презентирующих клеток, нагруженных полипептидом согласно изобретению, составляет примерно от 0.2 миллионов клеток до 2 миллионов клеток на инъекцию.
Вводимая индивидууму дозировка, как в виде одной, так и в виде нескольких доз, будет варьировать в зависимости от целого ряда факторов, включая фармакокинетические свойства, состояние и характеристики пациента (пол, возраст, вес тела, состояние здоровья, размер), выраженности симптомов, сопутствующих видов лечения, периодичности лечения и желательного эффекта.
Способ введения
Соединения, составы, в частности вакцинные составы, и их композиции согласно этому изобретению могут вводиться любым способом, включая пероральное, парентеральное, внутривенное, ректальное введение или их сочетание. Парентеральное введение включает, но не ограничивается этим, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, подкожное, внутрикожное и внутримышечное. Композиции этого изобретения также могут быть введены местно, внутрь опухоли, интраназально или интранодально. Композиции этого изобретения также могут быть введены в виде имплантата, который обеспечивает медленное высвобождение композиций, а также медленное контролируемое внутривенное вливание.
Предпочтительно, соединения, композиции, в частности, вакцинные композиции, и их сочетания согласно изобретению вводятся подкожно.
В одном варианте осуществления введение комплекса, антиген-презентирующих клеток и композиций изобретения требует несколько последовательных инъекций. Таким образом, введение может повторяться, по меньшей мере, два раза, один раз в качестве первичной иммунизации и позже в качестве бустер-инъекции.
В отдельном варианте осуществления изобретения вакцинная композиция может вводиться повторно или в течение длительного времени. Вакцинная композиция может вводиться повторно или в течение периода, по меньшей мере, 1, 2, 3 или 4 недель; 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 или 12 месяцев; или 2, 3, 4 или 5 лет.
В другом варианте осуществления проникающий в клетку пептид и карго-молекула, образующие комплекс согласно изобретению, содержатся в отдельных композициях, которые смешиваются непосредственно перед введением или которые одновременно вводятся нуждающемуся в этом субъекту.
Комбинация
Согласно дополнительному варианту осуществления введение фармацевтических композиций при использовании способов согласно изобретению осуществляется отдельно или в сочетании с сопутствующим средством, подходящим для лечения и/или стабилизации болезни или нарушения, которое предполагается лечить или подавить.
Например, в случае лечения, предотвращения или стабилизации рака введение фармацевтических композиций при использовании способов согласно изобретению осуществляется в сочетании с химиотерапевтическими средствами, обычно применяемыми при борьбе с солидными опухолями, и средствами контроля за формированием метастазов или какой-либо другой молекулой, запускающей запрограммированную гибель клетки, например, средство для совместного применения выбирают из членов семейства некроза опухоли, включая, но без ограничения, Fas-лиганд и индуцирующий апоптоз лиганд (TRAIL), связанный с фактором некроза опухоли (TNF). Согласно дополнительному варианту осуществления введение фармацевтических композиций при использовании способов согласно изобретению может проводиться одновременно с рентгенотерапией.
Изобретение включает введение комплекса изобретения, клетки, нагруженной комплексом изобретения, или фармацевтической композиции согласно изобретению, при этом введение субъекту осуществляется до, одновременно или последовательно с другими терапевтическими режимами или совместными средствами, подходящими для лечения и/или стабилизации рака и/или предотвращения рецидива рака (например, несколько схем лекарственного лечения), в терапевтически эффективном количестве. Указанный комплекс, клетка или фармацевтическая композиция, которая вводится одновременно с сопутствующим средством, может быть введена в той же самой или другой композиции(ях) и тем же самым или другим способом(ами) введения.
Указанные иные терапевтические режимы или совместные средства могут быть выбраны из группы, состоящей из рентгенотерапии, химиотерапии, хирургического вмешательства, таргетной терапии (включая небольшие молекулы, пептиды и моноклональные антитела) и анти-ангиогенной терапии. Анти-ангиогенная терапия определяется в описании, как введение средства, которое прямо или опосредованно нацеливается на сосудистую систему опухоли.
Согласно одному варианту осуществления предоставляется фармацевтическая композиция, содержащая комплекс изобретения или клетку изобретения, в частности антиген-презентирующую клетку изобретения, в комбинации, по меньшей мере, с одним совместным средством, подходящим для лечения и/или стабилизации рака и/или предотвращения рецидива рака, и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель.
Согласно другому варианту осуществления изобретения соединения согласно изобретению и их фармацевтические композиции могут вводиться после хирургического вмешательства, связанного с удалением солидных опухолей, в качестве профилактики рецидива и/или метастазирования.
Согласно следующему варианту введение визуализирующей или диагностической композиции при применении способов согласно изобретению может проводиться отдельно или в комбинации со средством, пригодным для визуализации и/или диагностирования предполагаемой болезни или нарушения.
Пациенты
В зависимости от терапевтического эффекта карго-молекулы изобретение может применяться в отношении любого пациента, восприимчивого к или страдающего от какой-либо болезни или нарушения, которое может быть предотвращено, вылечено или уменьшено действием указанной карго-молекулы. В том случае, когда карго-молекула содержит эпитопы, терапевтическим эффектом указанной карго-молекулы может быть возбуждение иммунного ответа, направленного против указанных эпитопов, в частности, ответ, который зависит от CD4+ хелперных Т-клеток и/или CD8+ цитотоксических Т-клеток, и/или который ограничивается молекулами МНС класса I и/или молекулами МНС класса П.
В одном варианте осуществления пациенты согласно изобретению являются пациентами, восприимчивыми к или страдающими от рака, например, рака мозга, толстой кишки, рака головы и шеи или от рака шейки матки.
В отдельном варианте осуществления пациенты согласно изобретению являются пациентами, страдающими от рака мозга, включая глиому.
В отдельном варианте осуществления пациенты согласно изобретению подвергаются хирургическому удалению опухоли.
В другом варианте осуществления пациенты согласно изобретению являются пациентами, восприимчивыми к или страдающими от инфекционной болезни.
Приведенные в тексте ссылки полностью включаются в описание путем отсылки, объем настоящего изобретения не ограничиваются описанными в документе отдельными вариантами осуществления, которые предоставляются в качестве иллюстраций конкретных аспектов изобретения, причем функционально равноценные способы и компоненты включаются в объем изобретения. Безусловно, различные модификации изобретения, дополнительные относительно показанных и описанных в этом документе, станут понятны специалистам в данной области на основании вышеизложенного описания и прилагаемых чертежей. Такие модификации подпадают под действие прилагаемых пунктов формулы изобретения.
Следующие примеры описанного изобретения представлены для наглядности, но не для ограничения.
Примеры
Следующие примеры были выполнены с целью подтверждения эффективности некоторых фрагментов ZEBRA в качестве проникающих в клетку пептидов для доставки пептидов и белков в клетку и индуцирования иммунного ответа in vivo.
Следующие аббревиатуры соответственно обозначают:
ак (аминокислота), ч (час), мкл (микролитр), мкМ (микромолярный), мМ (миллимолярный), мг (миллиграмм), мин (минут), CFSE (карбоксифлуоресцеин сукцинимидил сложный эфир), ДК (дендритные клетки)
Пример 1: Получение гибридных полипептидов, содержащих СРР1 или СРР2 настоящего изобретения и карго-пептид овальбумин
Путем химического синтеза были получены два СРР и два гибридных полипептида, соответствующих конструкциям 1 и 2, которые включали, соответственно, один из СРР, происходящих от ZEBRA, и иммунодоминантный CD8+ Т-клеточный эпитоп овальбумина.
Аминокислотная последовательность этих СРР и гибридные полипептиды имели следующий вид:
СРР1: (всего 17 аминокислот)
СРР2: (всего 30 аминокислот)
Эпитоп овальбумина CD8 (всего 8 аминокислот)
Комплекс 1: Конструкция 1: содержащая СРР1, соединенный с эпитопом овальбумина CD8 (всего 33 аминокислоты)
Комплекс 2: Конструкция 2: содержащая СРР2, соединенный с эпитопом овальбумина CD8 (всего 46 аминокислот)
Пример 2: Доставка и ограниченное МНС класса I презентирование после загрузки CPP1-OVA или CPP2-OVA гибридных полипептидов согласно изобретению в дендритные клетки
Сначала возможность поглощения СРР1 и СРР2 антиген-презентирующими клетками вместе с процессированием и презентированием эпитопа овальбумина была протестирована in vitro. Каждая из конструкций 1 и 2 была добавлена в культуры дендритных клеток, полученных из костного мозга, которые потом «дозревали» в течение ночи в присутствии липополисахарида (LPS). Затем процессирование и презентирование эпитопа овальбумина на молекулах МНС класса I устанавливали в функциональном исследовании путем совместного культивирования дендритных клеток с овальбумин-специфическими CD8+ Т-клетками, полученными из селезенок ОТ1 трансгенных мышей.
ΟΤΙ CD8+ Т-клетки предварительно метили флуоресцентным красителем CFSE, который служит в качестве индикатора антиген-специфической пролиферации, поскольку он разбавляется при каждом клеточном делении. Через 5 дней совместной инкубации CD8+ ΟΤ1 Т-клеток и дендритных клеток, нагруженных каждой из конструкций 1 и 2, пролиферацию оценивали с помощью проточной цитометрии (Фигура 1).
Полипептиды, соответствующие конструкциям 1 и 2 были способны индуцировать сравнимую пролиферацию ОТ1 Т-клеток (93-96% Т-клеток пролиферировали, исходя из CFSE разбавления). Более того, жизнеспособность клеток в культурах также была сходной (69-75%). Наблюдалась сходная пролиферация, а жизнеспособность превосходила положительные контрольные культуры, в которые был добавлен синтетический пептид, соответствующий минимальному Т-клеточному эпитопу (SIINFEKL) (Фигуры 1С, 1D). Пролиферация также была овальбумин-специфической, так как незначительное количество жизнеспособных ОТ1 Т-клеток было обнаружено после отдельного культивирования или совместного культивирования с дендритными клетками без антигена (Фигуры 1А, 1В).
Пример 3: Вакцинация мышей гибридными полипептидами CPP1-OVA или CPP2-OVA настоящего изобретения
Способность полипептидов, соответствующих конструкциям 1 и 2, стимулировать антиген-специфические CD8+ Т-клетки в более строгих условиях была протестирована in vivo по протоколу вакцинации (Фигура 2). Для того, чтобы вызвать ответ in vivo, полипептид вакцины должен поглощаться естественным образом присутствующими у инъецируемого животного антиген-презентирующими клетками, а стимуляция поликлональных Т-клеток должна быть высокоэффективной в том случае, если овальбумин-специфические Т-клетки подлежат обнаружению ex vivo. В этих экспериментах результаты получали с помощью проточной цитометрии спленоцитов, используя мультимеры МНС-пептид для обнаружения овальбумин-специфических CD8+ Т-клеток.
После всего лишь 2 вакцинаций повышенная доля овальбумин-специфических CD8+ Т-клеток была обнаружена у двух вакцинированных групп (0.37-1.14% CD8+ Т-клеток были мультимер-положительными по сравнению с 0.18% у мышей, вакцинированных PBS (отрицательный контроль)). Пептид, соответствующий конструкции 2, был особенно эффективным in vivo, так как он активировал свыше 1% овальбумин-специфических CD8+ Т-клеток.
Заключение: В общем, эти данные подтверждают функциональные возможности СРР 1 и 2 в качестве проникающих в клетку пептидов. Данные также подтверждают, что полипептиды, соответствующие конструкциям 1 и конструкциям 2, которые содержат каждый из этих двух СРР, соответственно, и Т-клеточный эпитоп овальбумина, могут поглощаться дендритными клетками, и что карго-молекула (т.е. Т-клеточный эпитоп, содержащийся в конструкции) перекрестно презентируется CD8+ Т-клеткам in vitro и в контексте in vivo вакцинации.
Пример 4: Эксперимент по трансдукции IN VITRO разных CPP-OVA гибридных полипептидов изобретения
Была исследована трансдукция (перенос) в клетки при использовании различных CPP-OVA гибридных полипептидов, содержащих СРР1, СРР2, СРР8 или СРР 10. Каждый из этих СРР, соединенный с иммунодоминантным CD8+ Т-клеточным эпитопом овальбумина, был получен путем химического синтеза и помечен флуоресцеином. 5.105 клеток инкубировали в течение 2 час при 37°С с 0.9 мкМ различных гибридных полипептидов. Тестируемыми клетками были человеческие лимфоидные клетки K562, мышиные лимфоидные клетки EL4, клетки астроцитомы человека U251 и клетки астроцитомы мыши GL261. Клетки промыли в кислотном буфере для удаления всех мембран-связанных пептидов, для оценки жизнеспособности клеток использовали окрашивание Live-Dead Yellow. Анализ проводили с помощью проточной цитометрии. Индекс флуоресценции показывает уровень флуоресценции выше природной аутофлуоресценции клеток. Индекс флуоресценции - это отношение среднего значения индекса флуоресценции, измеренного с помощью проточной цитометрии между клетками как таковыми и клетками, нагруженными CPP-OVA гибридными полипептидами.
Результаты представлены в таблице 2.
В общем, не наблюдалось токсического эффекта CPP-OVA гибридных полипептидов. Кроме того, эти результаты продемонстрировали, что все протестированные СРР могут проникать в клетки человеческого или мышиного происхождения со сходной эффективностью.
Пример 5: IN VIVO вакцинация мышей различными CPP-OVA гибридными полипептидами изобретения
Эксперимент был проведен, как описано в Примере 3.
От четырех до восьми мышей на группу дважды подкожно вакцинировали с 14-дневным интервалом гибридными полипептидами (10 нмоль), содержащими один из СРР, указанных в таблице 2, соединенный с эпитопом овальбумина CD8+ (SEQ ID NO: 3), фланкированным спейсерами SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 на N-концевой и С-концевой части CD8+ эпитопа, соответственно. Каждый CPP-OVA гибридный полипептид вводили в PBS с 100 мкг анти-CD40. 50 мкг поли-IC вводили внутримышечно через 7 дней после второй вакцинации. Иммунный ответ контролировали по крови с использованием окрашивания Pentamer, а затем проточной цитометрии.
Результаты представлены в таблице 3 в виде кратного увеличения CPP-OVA гибридного полипептида относительно исходного, содержащего СРР 14 SEQ ID NO: 22. Как видно из таблицы 2, все исследованные CPP-OVA гибридные полипептиды имели более высокий иммуногенный потенциал. по, сравнению с исходным гибридным полипептидом, содержащим СРР 14, за исключением другого исходного гибридного полипептида, содержащего СРР7 SEQ ID NO: 21, который принимается в качестве отрицательного контроля и который имеет более низкий иммуногенный потенциал по сравнению с исходным гибридным полипептидом, содержащим СРР 14.
СРР7 представляет собой фрагмент Zebra длиной 8 аминокислот, продолжающийся от положения 178 до 185 Zebra.
СРР14 представляет собой фрагмент Zebra длиной 42 аминокислоты, продолжающийся от положения 178 до 219 Zebra.
Заключение: Взятые вместе, результаты Примеров 4 и 5 показывают, что различные СРР изобретения могут проникать в клетки человеческого и мышиного происхождения, и что карго-молекула, которую несут такие СРР, перекрестно-презентируется CD8+ Т-клеткам, т.е. индуцирует иммунный ответ, специфический в отношении транспортируемой карго-молекулы и, таким образом, может применяться для вакцинации и иммунотерапии.
Список последовательностей
СРР1: (всего 17 аминокислот)
СРР2: (всего 30 аминокислот)
Эпитоп овальбумина CD8 (всего 8 аминокислот)
CPPs-OVA гибридные полипептиды:
Конструкция 1: содержащая СРР1, соединенный с эпитопом овальбумина CD8 (всего 33 аминокислоты)
Конструкция 2: содержащая СРР2, соединенный с эпитопом овальбумина CD8 (всего 46 аминокислот)
Искусственная последовательность
X1 представляет собой K, R или Н
Х2 представляет собой R, K или Н
Х3 представляет собой Y, W или F
Х4 представляет собой K, R или Н
Х5 представляет собой N или Q
Х6 представляет собой R, K или Н
Х7 представляет собой V, I, М, L, F или А
Х8 представляет собой А, V, L, I или G
Х9 представляет собой S или Т
Х10 представляет собой R, K или Н
Х11 представляет собой K, R или Н
Х13 представляет собой R, K или Н
Х14 представляет собой А, V, L, I или G
Х15 представляет собой K, R или Н
X16 представляет собой F, L, V, I, Y, W или М
Х17 представляет собой K, R или Н
Искусственная последовательность
X1 представляет собой K или R
Х2 представляет собой R или K
Х3 представляет собой Y, W или F
Х4 представляет собой K или R
Х5 представляет собой N или Q
Х6 представляет собой R или K
Х7 представляет собой V, I, М или L
X8 представляет собой А или G
Х9 представляет собой S или Т
Х10 представляет собой R или K
Х11 представляет собой K или R
Х13 представляет собой R или K
Х14 представляет собой А или G
Х15 представляет собой K или R
X16 представляет собой F, Y или W
Х17 представляет собой K или R
СРР8: (всего 15 аминокислот)
СРР10: (всего 19 аминокислот)
СРР11: (всего 25 аминокислот)
Спейсеры (Искусственные последовательности)
Искусственная последовательность (всего 21 аминокислот)
Искусственная последовательность (всего 21 аминокислот)
Сайт-мишень энтерокиназы
Сайт-мишень фактора Ха
Сайт-мишень тромбина
Сайт-мишень протеазы TEV
Сайт-мишень протеазы PreScission
Сайт-мишень фурина
Х2 представляет собой любую аминокислоту
Х3 представляет собой R или K
СРР7 (8 всего аминокислот)
СРР14 (всего 42 аминокислоты)
ZEBRA аминокислотная последовательность (природная последовательность вируса Эпштейна-Барр (EBV)) (YP_401673)
Claims (47)
1. Проникающий в клетку млекопитающего пептид, состоящий из фрагмента в 15-30 аминокислот участка, продолжающегося от остатка 170 до остатка 220 SEQ ID NO: 23, и характеризующийся тем, что указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую Ser (S) в положении, эквивалентном положению 189 SEQ ID NO: 23.
2. Проникающий в клетку млекопитающего пептид по п. 1, характеризующийся тем, что указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую или состоящую из SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
3. Проникающий в клетку млекопитающего комплекс, содержащий:
(1) проникающий в клетку млекопитающего пептид, состоящий из фрагмента в 15-30 аминокислот участка, продолжающегося от остатка 170 до остатка 220 SEQ ID NO: 23, и характеризующийся тем, что указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую Ser (S) в положении, эквивалентном положению 189 SEQ ID NO: 23, и
(2) пептидную или полипептидную карго-молекулу, где указанная карго-молекула содержит эпитоп(ы) патогена, которые связаны между собой с помощью ковалентной связи.
4. Проникающий в клетку млекопитающего комплекс, содержащий:
(1) проникающий в клетку млекопитающего пептид, состоящий из фрагмента в 15-30 аминокислот участка, продолжающегося от остатка 170 до остатка 220 SEQ ID NO: 23, и характеризующийся тем, что указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую Ser (S) в положении, эквивалентном положению 189 SEQ ID NO: 23, и
(2) пептидную или полипептидную карго-молекулу, где указанная карго-молекула содержит опухолевый(ые) эпитоп(ы), которые связаны между собой с помощью ковалентной связи.
5. Комплекс по п. 3 или 4, характеризующийся тем, что указанный проникающий в клетку млекопитающего пептид способствует презентации эпитопа(ов) указанной карго-молекулы на поверхности клетки млекопитающего в контексте МНС класса I и/или МНС класса II.
6. Нуклеиновая кислота, кодирующая проникающий в клетку млекопитающего пептид, состоящий из фрагмента в 15-30 аминокислот участка, продолжающегося от остатка 170 до остатка 220 SEQ ID NO: 23, и характеризующийся тем, что указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую Ser (S) в положении, эквивалентном положению 189 SEQ ID NO: 23.
7. Нуклеиновая кислота, кодирующая аминокислотный комплекс, содержащий проникающий в клетку млекопитающего пептид, ковалентно связанный с пептидной или полипептидной карго-молекулой, содержащей эпитоп(ы) патогена, где указанный проникающий в клетку млекопитающего пептид состоит из фрагмента в 15-30 аминокислот участка, продолжающегося от остатка 170 до остатка 220 SEQ ID NO: 23, и характеризуется тем, что указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую Ser (S) в положении, эквивалентном положению 189.
8. Нуклеиновая кислота, кодирующая аминокислотный комплекс, содержащий проникающий в клетку млекопитающего пептид, ковалентно связанный с пептидной или полипептидной карго-молекулой, содержащей опухолевый(ые) эпитоп(ы), где указанный проникающий в клетку млекопитающего пептид состоит из фрагмента в 15-30 аминокислот участка, продолжающегося от остатка 170 до остатка 220 SEQ ID NO: 23, и характеризуется тем, что указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, содержащую Ser (S) в положении, эквивалентном положению 189.
9. Вектор для экспрессии проникающего в клетку млекопитающего пептида по п. 1, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 6, где вектор включает нуклеотидные последовательности, которые контролируют регуляцию экспрессии указанной нуклеиновой кислоты.
10. Вектор для экспрессии проникающего в клетку млекопитающего комплекса по п. 3, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 7, где вектор включает нуклеотидные последовательности, которые контролируют регуляцию экспрессии указанной нуклеиновой кислоты.
11. Вектор для экспрессии проникающего в клетку млекопитающего комплекса по п. 4, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 8, где вектор включает нуклеотидные последовательности, которые контролируют регуляцию экспрессии указанной нуклеиновой кислоты.
12. Клетка-хозяин, представляющая собой клетку млекопитающего, для экспрессии проникающего в клетку млекопитающего пептида по п. 1, содержащая вектор по п. 9, где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
13. Клетка-хозяин, представляющая собой клетку млекопитающего, для экспрессии проникающего в клетку млекопитающего комплекса по п. 3 и содержащая вектор по п. 10, где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
14. Клетка-хозяин, представляющая собой клетку млекопитающего, для экспрессии проникающего в клетку млекопитающего комплекса по п. 4 и содержащая вектор по п. 11, где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
15. Антиген-презентирующая клетка млекопитающего для вызова иммунного ответа на карго-молекулу в комплексе, нагруженная in vitro комплексом по п. 3, где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
16. Антиген-презентирующая клетка млекопитающего для вызова иммунного ответа на карго-молекулу в комплексе, нагруженная in vitro комплексом по п. 4, где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
17. Композиция для предотвращения или лечения рака, содержащая эффективное количество по меньшей мере чего-либо из:
(a) комплекса по п. 4;
(b) нуклеиновой кислоты, кодирующей комплекс из (а);
(c) вектора для экспрессии, содержащего нуклеиновую кислоту из (b);
(d) выделенной клетки-хозяина, представляющей собой клетку млекопитающего, содержащей вектор из (с);
(е) выделенной антиген-презентирующей клетки млекопитающего, нагруженной комплексом из (а),
где указанные клетки не является клетками человеческого эмбриона.
18. Композиция для предотвращения или лечения инфекционных болезней, содержащая эффективное количество по меньшей мере чего-либо из:
(а) комплекса по п. 3;
(б) нуклеиновой кислоты, кодирующей комплекс из (а);
(c) вектора для экспрессии, содержащего нуклеиновую кислоту из (b);
(d) выделенной клетки-хозяина, представляющей собой клетку млекопитающего, содержащей вектор из (с);
(e) выделенной антиген-презентирующей клетки млекопитающего, нагруженной комплексом из (а),
где указанные клетки не являются клетками человеческого эмбриона.
19. Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения рака, содержащая:
(a) эффективное количество по меньшей мере одного проникающего в клетку комплекса по п. 4, и
(b) фармацевтически приемлемый носитель, где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
20. Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения инфекционных болезней, содержащая:
(a) эффективное количество по меньшей мере одного проникающего в клетку комплекса по п. 3, и
(b) фармацевтически приемлемый носитель, где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
21. Фармацевтическая композиция по п. 19 или по п. 20, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит по меньшей мере два разных комплекса.
22. Способ предотвращения или лечения рака, включающий введение комплекса по п. 4 субъекту, нуждающемуся в этом.
23. Способ предотвращения или лечения инфекционных болезней, включающий введение комплекса по п. 3 субъекту, нуждающемуся в этом.
24. Способ доставки карго-молекулы в клетку in vitro, включающий стадии:
а) образования комплекса между проникающим в клетку млекопитающего пептидом по п. 1 и пептидной или полипептидной карго-молекулой, предназначенной для доставки в клетку млекопитающего, которые связаны между собой с помощью ковалентной связи, и
б) приведение указанной клетки млекопитающего в контакт с комплексом, образованным на стадии а),
где указанная клетка не является клеткой человеческого эмбриона.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261700432P | 2012-09-13 | 2012-09-13 | |
EP12184311.4 | 2012-09-13 | ||
EP12184311 | 2012-09-13 | ||
US61/700,432 | 2012-09-13 | ||
PCT/IB2013/058497 WO2014041505A1 (en) | 2012-09-13 | 2013-09-12 | Cell penetrating peptides |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015113378A RU2015113378A (ru) | 2016-11-10 |
RU2670488C2 true RU2670488C2 (ru) | 2018-10-23 |
Family
ID=46826380
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015113378A RU2670488C2 (ru) | 2012-09-13 | 2013-09-12 | Новые проникающие в клетку пептиды |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9657064B2 (ru) |
EP (1) | EP2895499B1 (ru) |
JP (1) | JP6306593B2 (ru) |
KR (1) | KR101861416B1 (ru) |
CN (1) | CN104736553B (ru) |
AU (1) | AU2013316679B2 (ru) |
CA (1) | CA2884677C (ru) |
RU (1) | RU2670488C2 (ru) |
WO (1) | WO2014041505A1 (ru) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9187534B2 (en) * | 2011-03-11 | 2015-11-17 | Universite De Geneve | Multi-epitopic vaccine |
RU2721423C2 (ru) * | 2013-08-07 | 2020-05-19 | Йеда Ресеарч Энд Девелопмент Ко. Лтд. | Пептиды, способные реактивировать мутанты р53 |
WO2015162285A1 (en) * | 2014-04-25 | 2015-10-29 | Phi Pharma Sa | C6s specific transporter molecules |
KR101835554B1 (ko) | 2014-06-24 | 2018-04-19 | 서울대학교 산학협력단 | C/ebp를 포함하는 유도성 t 조절세포 분화촉진 또는 안정화 조성물 및 방법 |
US10316061B2 (en) | 2014-10-02 | 2019-06-11 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Synthesis of cell penetrating peptides for drug delivery and stem cell applications |
TWI623322B (zh) * | 2014-12-10 | 2018-05-11 | 華西亞生醫有限公司 | 用於免疫作用中有效抗體生產的新穎蛋白質結構 |
WO2016146143A1 (en) * | 2015-03-16 | 2016-09-22 | Amal Therapeutics Sa | Cell penetrating peptides and complexes comprising the same |
PT3429618T (pt) * | 2016-03-16 | 2024-04-02 | Amal Therapeutics Sa | Combinação de um modulador de ponto de controlo imunitário e um complexo que compreende um péptido de penetração celular, uma carga e um agonistra peptídico de tlr para utilização em medicina |
WO2017176081A1 (ko) * | 2016-04-07 | 2017-10-12 | (주)네오리젠바이오텍 | 세포 투과 펩티드 |
KR101799805B1 (ko) * | 2016-04-07 | 2017-11-21 | (주)네오리젠바이오텍 | 세포 투과 펩티드 |
EP3515476B1 (en) * | 2016-09-21 | 2024-05-22 | Amal Therapeutics SA | Fusion comprising a cell penetrating peptide, a multiepitope and a tlr peptide agonist for treatment of cancer |
CN106544351B (zh) * | 2016-12-08 | 2019-09-10 | 江苏省农业科学院 | CRISPR-Cas9体外敲除耐药基因mcr-1的方法及其专用细胞穿透肽 |
EP3360891B1 (en) | 2017-02-14 | 2022-03-30 | Karlsruher Institut für Technologie | Cell penetrating peptides of human origin |
WO2018156892A1 (en) | 2017-02-23 | 2018-08-30 | Adrx, Inc. | Peptide inhibitors of transcription factor aggregation |
WO2018226992A1 (en) | 2017-06-07 | 2018-12-13 | Adrx, Inc. | Tau aggregation inhibitors |
AU2018318319A1 (en) | 2017-08-18 | 2020-02-20 | Adrx, Inc. | Tau aggregation peptide inhibitors |
CN108070025B (zh) * | 2017-10-24 | 2019-11-19 | 中山大学附属口腔医院 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
WO2021135647A1 (zh) * | 2019-12-31 | 2021-07-08 | 厦门大学 | 用于胞内递送分子的多聚化递送系统 |
WO2022079175A1 (en) | 2020-10-14 | 2022-04-21 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination of a sting agonist and a complex comprising a cell penetrating peptide, a cargo and a tlr peptide agonist |
FR3143031A1 (fr) * | 2022-12-08 | 2024-06-14 | Université Grenoble Alpes | Nouveaux peptides et leur utilisation en tant que transporteurs pour l’internalisation de molécules d’intérêt dans des cellules cibles |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999059615A1 (en) * | 1998-05-20 | 1999-11-25 | Trimeris, Inc. | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties |
US6337180B1 (en) * | 1995-01-04 | 2002-01-08 | L'universite Joseph Fourier | Peptide reagent enabling a primary Epstein-Barr virus infection to be detected by testing for the corresponding antibodies, and method for using this reagent |
WO2005087797A1 (en) * | 2004-03-09 | 2005-09-22 | Microbia, Inc. | Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders |
EA006850B1 (ru) * | 2001-07-26 | 2006-04-28 | Иституто Супериоре Ди Санита' | Применение биологически активного тат вич-1, его фрагментов или производных для нацеливания на антигенпредставляющие клетки, и/или их активации, и/ или для доставки карго-молекул для профилактической или терапевтической вакцинации, и/или для лечения других заболеваний |
WO2011036211A1 (en) * | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Polypeptides and nucleic acids for treating erbb2-dependent cancers |
WO2011135222A2 (fr) * | 2010-04-26 | 2011-11-03 | Universite Joseph Fourier | Utilisation de peptides comme transporteurs destines a l'internalisation de molecules d'interet dans des cellules cibles |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6479055B1 (en) * | 1993-06-07 | 2002-11-12 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including respiratory syncytial virus transmission |
US6750008B1 (en) | 1999-07-09 | 2004-06-15 | Trimeris, Inc. | Methods and compositions for inhibition of membrane fusion-associated events, including HIV transmission |
US20060222656A1 (en) | 2005-04-01 | 2006-10-05 | University Of Maryland, Baltimore | MAGE-A3/HPV 16 peptide vaccines for head and neck cancer |
GB0519303D0 (en) * | 2005-09-21 | 2005-11-02 | Oxford Biomedica Ltd | Chemo-immunotherapy method |
WO2011101332A1 (en) | 2010-02-16 | 2011-08-25 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | Compositions based on the fibronectin extracellular domain a for the treatment of melanoma |
JP2013536240A (ja) | 2010-08-24 | 2013-09-19 | ユニヴァーシティ オヴ ピッツバーグ オヴ ザ コモンウェルス システム オヴ ハイアー エデュケーション | インターロイキン−13受容体α2ペプチド脳がんワクチン |
US9187534B2 (en) | 2011-03-11 | 2015-11-17 | Universite De Geneve | Multi-epitopic vaccine |
-
2013
- 2013-09-12 JP JP2015531671A patent/JP6306593B2/ja active Active
- 2013-09-12 AU AU2013316679A patent/AU2013316679B2/en active Active
- 2013-09-12 RU RU2015113378A patent/RU2670488C2/ru active
- 2013-09-12 US US14/427,459 patent/US9657064B2/en active Active
- 2013-09-12 CN CN201380047957.5A patent/CN104736553B/zh active Active
- 2013-09-12 WO PCT/IB2013/058497 patent/WO2014041505A1/en active Application Filing
- 2013-09-12 CA CA2884677A patent/CA2884677C/en active Active
- 2013-09-12 KR KR1020157007460A patent/KR101861416B1/ko active IP Right Grant
- 2013-09-12 EP EP13795574.6A patent/EP2895499B1/en active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6337180B1 (en) * | 1995-01-04 | 2002-01-08 | L'universite Joseph Fourier | Peptide reagent enabling a primary Epstein-Barr virus infection to be detected by testing for the corresponding antibodies, and method for using this reagent |
WO1999059615A1 (en) * | 1998-05-20 | 1999-11-25 | Trimeris, Inc. | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties |
EA006850B1 (ru) * | 2001-07-26 | 2006-04-28 | Иституто Супериоре Ди Санита' | Применение биологически активного тат вич-1, его фрагментов или производных для нацеливания на антигенпредставляющие клетки, и/или их активации, и/ или для доставки карго-молекул для профилактической или терапевтической вакцинации, и/или для лечения других заболеваний |
WO2005087797A1 (en) * | 2004-03-09 | 2005-09-22 | Microbia, Inc. | Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders |
WO2011036211A1 (en) * | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Polypeptides and nucleic acids for treating erbb2-dependent cancers |
WO2011135222A2 (fr) * | 2010-04-26 | 2011-11-03 | Universite Joseph Fourier | Utilisation de peptides comme transporteurs destines a l'internalisation de molecules d'interet dans des cellules cibles |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US9657064B2 (en) | 2017-05-23 |
US20150239938A1 (en) | 2015-08-27 |
EP2895499A1 (en) | 2015-07-22 |
CN104736553B (zh) | 2018-10-19 |
KR101861416B1 (ko) | 2018-05-25 |
AU2013316679A1 (en) | 2015-03-12 |
JP2016501829A (ja) | 2016-01-21 |
EP2895499B1 (en) | 2019-04-10 |
CA2884677C (en) | 2020-06-23 |
WO2014041505A1 (en) | 2014-03-20 |
AU2013316679B2 (en) | 2017-12-14 |
CN104736553A (zh) | 2015-06-24 |
CA2884677A1 (en) | 2014-03-20 |
RU2015113378A (ru) | 2016-11-10 |
JP6306593B2 (ja) | 2018-04-04 |
KR20150107708A (ko) | 2015-09-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2670488C2 (ru) | Новые проникающие в клетку пептиды | |
JP7190528B2 (ja) | 神経膠芽腫を治療するための細胞透過性ペプチド、カーゴ、及びtlrペプチドアゴニストを含む新規複合体 | |
JP7346291B2 (ja) | 癌を治療するための細胞透過性ペプチド、マルチエピトープ、及びtlrペプチドアゴニストを含む融合体 | |
US20120231030A1 (en) | Multi-epitopic vaccine | |
Barati et al. | Immunogenicity and antitumor activity of the superlytic λF7 phage nanoparticles displaying a HER2/neu-derived peptide AE37 in a tumor model of BALB/c mice | |
CA2702154A1 (en) | A method of transfection and compositions therefor | |
EP4304638A1 (en) | Uses of amphiphiles in immune cell therapy and compositions therefor | |
WO2013006050A1 (en) | Peptides inducing or enhancing an immune response against prostate-specific membrane protein (PSMA) | |
EP4228681A1 (en) | Combination of a sting agonist and a complex comprising a cell penetrating peptide, a cargo and a tlr peptide agonist | |
ES2734561T3 (es) | Péptidos de penetración celular | |
CN109069599A (zh) | 针对癌症的基于ptp的疫苗 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HE9A | Changing address for correspondence with an applicant |