RU2501565C2 - Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения - Google Patents
Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2501565C2 RU2501565C2 RU2011100104/15A RU2011100104A RU2501565C2 RU 2501565 C2 RU2501565 C2 RU 2501565C2 RU 2011100104/15 A RU2011100104/15 A RU 2011100104/15A RU 2011100104 A RU2011100104 A RU 2011100104A RU 2501565 C2 RU2501565 C2 RU 2501565C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- somatostatin
- amino acid
- acid sequence
- dairy cows
- Prior art date
Links
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 title claims abstract description 94
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 title claims abstract description 94
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 title claims abstract description 85
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 title claims abstract description 68
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 title claims abstract description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 14
- 230000002950 deficient Effects 0.000 title description 10
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 title description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 78
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 55
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 55
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 30
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims abstract description 26
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims abstract description 26
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 25
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims abstract description 19
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims abstract description 11
- 235000020997 lean meat Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 40
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 36
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 claims description 6
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 claims description 5
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 claims description 4
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 4
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 4
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 4
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 claims description 3
- 108020002494 acetyltransferase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000005421 acetyltransferase Human genes 0.000 claims description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 26
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 26
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 22
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 21
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 16
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 16
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- 244000309466 calf Species 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 10
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 10
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 8
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 8
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 8
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 8
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 6
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 6
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N aebsf Chemical compound NCCC1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000487 histidyl group Chemical class [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 4
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 208000018756 Variant Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 208000005881 bovine spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 235000021051 daily weight gain Nutrition 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000003673 groundwater Substances 0.000 description 2
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010036625 somatosin Proteins 0.000 description 2
- NHXLMOGPVYXJNR-UHFFFAOYSA-N srif Chemical compound N1C(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(NC(=O)CNC(=O)C(C)N)CSSCC(C(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 description 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108050001286 Somatostatin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000011096 Somatostatin receptor Human genes 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 241001464837 Viridiplantae Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001253 acrylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011013 endotoxin removal Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011124 ex vivo culture Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- -1 glycine amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 238000009578 growth hormone therapy Methods 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010254 physiological adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002684 recombinant hormone Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013077 target material Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/655—Somatostatins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/60—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for weanlings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/31—Somatostatins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
- C12N9/1033—Chloramphenicol O-acetyltransferase (2.3.1.28)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
- C12Y203/01—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
- C12Y203/01028—Chloramphenicol O-acetyltransferase (2.3.1.28)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Birds (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Группа изобретений раскрывает химерные полипептиды, иммуногенные композиции на их основе, а также способы повышения продукции молока и постного мяса, включающие вакцинацию указанными пептидами. Химерные полипептиды обладают иммуногенностью соматостатина и включают аминокислотную последовательность соматостатина-14, связанную с существенно неактивным и укороченным полипептидом хлорамфеникол ацетилтрансферазы, где соматостатин-14 является связанным с неактивной хлорамфеникол ацетилтрансферазой с помощью спейсера. Данные пептиды обладают улучшенной иммуногенностью, что позволяет применять их в меньших дозах при лечении коров и сельскохозяйственных животных. 8 н. и 3 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к химерным полипептидам на основе соматостатина, полинуклеотидам, которые используются для кодирования этих полипептидов, средствам для изоляции и получения таких полипептидов и к их применению. Настоящее изобретение также относится к новым адъювантам и композициям для иммунизации, предназначенным для повышения иммуногенности, например, к химерным полипептидам на основе соматостатина в соответствии с изобретением, а также к другим подобным антигенам.
Предпосылки создания изобретения
Соматостатин (также известный как фактор, тормозящий выделение гормона роста или GHIH) представляет собой пептидный гормон, который вырабатывается в гипоталамусе, а также и в некоторых органах пищеварительной системы. Соматостатин в общем случае является вовлеченным в регуляцию эндокринной системы путем взаимодействия со слитыми с G-белком рецепторами соматостатина. Этот сигнальный каскад на основе соматостатина приводит к возникновению ряда воздействий, которые распространяются в организме.
В соответствии с аспектами настоящего изобретения соматостатин является известным как такой, который ингибирует высвобождение гормона роста и тиреотропного гормона из передней доли гипофиза. (Patel YC и Srikant CB, Somatostatin and its receptors Adv Mol Cell Endocrinol, 1999. 3 43-73). Другие гормоны, которые ингибируются с помощью соматостатина, включают инсулин, глюкагон, секретин, гастрин, пепсин, малетин и тому подобные. (Patel YC и Srikant CB Somatostatin and its receptors Adv Mol Cell Endocrinol, 1999. 3 43-73). Способность соматостатина регулировать достаточно большое количество факторов/гормонов, необходимых для роста и усвоения пищи, сделало соматостатин центральной мишенью для контроля роста животных в области животноводства, то есть, ингибирование соматостатина приводит к получению повышенных уровней гормона роста, который присутствует у животного, представляющего интерес, и, таким образом, приводит к получению животных с повышенной способностью к выработке молока, для обеспечения больших количеств мяса и т.п.
В частности, иммунизация животных соматостатином была признанной в качестве средства для нейтрализации соматостатина у животного, представляющего интерес, и удаляет, таким образом, нормальное ингибиторное влияние соматостатина на различные аспекты продуктивности животных, например, выработку молока у коров молочных пород. Reichlin S., ред., 1987, Somatostatin, Basic and Clinical Status, Plenum Press, New York (стр.3-50, 121-136, 146-156, 169-182, 221-228, 267-274) Spencer G.S., 1985, Hormonal systems regulating growth, review, Livestock Production Science, 12, 31-46. Является важным, что такие процедуры иммунизации на основе соматостатина позволяют избежать непосредственного воздействия анаболических гормонов, например, гормона роста и подобных ему у животного и дают возможность осуществлять незначительные изменения концентрации эндогенных анаболических факторов и, таким образом, обеспечивают получение экологически чистых продуктов.
Соматостатин является известным как такой, который обладает коротким периодом полураспада в крови. Для того чтобы повысить иммунологические эффекты соматостатина, были усовершенствованы прописи для иммунизации с целью увеличения периода полураспада белков путем конъюгации соматостатина с целевыми белками носителями. Такие конъюгированные белки соматостатина были сконструированы для того, чтобы обеспечить более высокие значения периода полураспада и повышенную антигенность в крови, и таким образом, имеют повышенную выгоду (в частности, в отношении затрат на получение соматостатина). Например, химерные белки соматостатина раскрываются в патенте США №6,316,004 (и соответствующем европейском патенте ЕР 0645454), где различные конъюгированные белки, содержащие соматостатин, были продемонстрированы как такие, которые обладают повышенной иммуногенностью и функцией в отношении продуктивности сельскохозяйственных животных по сравнению с другими традиционными процедурами иммунизации или процедурами, которые основываются на введении анаболического гормона.
Однако для улучшения общей продуктивности и временного охвата в области животноводства являются необходимыми композиции с более низкой дозой, а также процедуры для иммунизации, обеспечивающие более высокую антигенность. Настоящее изобретение является направленным на обеспечение таких более антигенных и функционально активных соединений, композиций и процедур для иммунизации на основе соматостатина.
С этой целью и обеспечивается настоящее раскрытие.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает новые полипептиды и полинуклеотиды, которые их кодируют, обладающие улучшенной иммуногенностью соматостатина. Полипептиды в соответствии с изобретением включают соматостатин-14, слитый с существенно инактивированным белком хлорамфеникол ацетилтрансферазы посредством функционально оптимизированного линкера. Химерные полипептиды в соответствии с изобретением обеспечивают высокоэффективные и недорогие материалы для применения в области животноводства, как описывается более подробно ниже. Воплощения в соответствии с изобретением включают последовательности аминокислот и последовательности нуклеиновой кислоты, как определено в SEQ ID NO: 1-14.
Настоящее изобретение также обеспечивает процедуры получения и очистки для создания химерных полипептидов в соответствии с изобретением в свободном от эндотоксина и высокофункциональном состоянии. Свободные от эндотоксина полипептиды обеспечивают существенное и неожиданное преимущество для применения у некоторых животных, представляющих интерес, где незначительные количества эндотоксина, которые типично предполагаются как благоприятные для стимуляции иммунного ответа, фактически приводят к значительному функциональному недостатку. Это, в частности, касается случая, когда полипептиды в соответствии с изобретением используются для иммунизации при выведении и выращивании коров молочных пород в США. Кроме того, поскольку химерныеполипептиды в соответствии с изобретением демонстрируют улучшенную функцию по сравнению с традиционными материалами, более низкие дозы и меньшее их количество используются для иммуниации животных, которые представляют интерес. Такое снижение требуемых количеств также обеспечивает получаемое в результате снижение уровня эндотоксина в вакцинах в соответствии с изобретением. Комбинация изоляции в свободном от эндотоксина состоянии и используемых меньших количеств химерных полипептидов в соответствии с изобретением позволяет использовать в данной заявке существенно свободные от эндотоксина вакцины.
Изобретение также обеспечивает адъювантные композиции, обладющие улучшенной функцией и безопасностью по сравнению с традиционными адъювантными материалами. Адъюванты, описанные в данной заявке, не содержат материалов, имеющих происхождение от животных, и являются свободными от большинства известных химических канцерогенов, например, бензола и других подобных материалов. Адъювантные композиции, описанные в данной заявке, подтвердили свою пригодность как неожиданно эффективные при стимуляции иммунного ответа, когда являются соединенными с целевыми антигенами.
Изобретение также обеспечивает вакцины, содержащие химерные полипептиды в соответствии с изобретением в сочетании с адъювантными композициями в соответствии с изобретением. Вакцины, описанные в данной заявке, используются для индукции иммунного ответа у вакцинированных млекопитающих и птиц, например, у сельскохозяйственных животных, которые представляют интерес. Типичные сельскохозяйственные животные для применения в данной заявке включают: коров молочных пород, свиней, овец, коз, индюков, кролей и телят. В некоторых аспектах полипептиды в соответствии с изобретением получают и очищают с низким содержанием или при отсутствии ассоциированного эндотоксина. Эти вакцины были оптимизированными для того, чтобы стимулировать безопасные и улучшенные иммуногенные реакции у животного, представляющего интерес.
Изобретение также включает способы вакцинации животных, которые представляют интерес, а также птиц, при использовании вакцин в соответствии с изобретением. Типичные способы обеспечиваются для вакцинации коров молочных пород для повышения продукции молока безопасным (как для животного, так и для конечного пользователя), эффективным с точки зрения материальных затрат и пригодным способом. Другие типичные способы включают вакцинацию поросят, овец, индюков, коз, кролей или телят для повышения продукции мяса (и, в частности, нежирного мяса) у животного, представляющего интерес, безопасным и эффективным с точки зрения материальных затрат способом.
Эти и различные другие характеристики и преимущества в соответствии с изобретением будет понятными из приведенного ниже подробного описания и обзора приложенных пунктов формулы
Краткое описание фигур
Фигура 1 представляет собой схематическую иллюстрацию pET30b CatSom плазмиды в соответствии с воплощением настоящего изобретения. Плазмида включает маркер устойчивости к канамицину, Lac оператор, Т7 промотор, кодирующую последовательность CAT, все в соответствии с воплощениями изобретения, также являются включенными линкерный участок в соответствии с изобретение и кодирующий участок соматостатина в соответствии с изобретение.
Фигура 2 представляет собой иллюстрацию окрашенного SDS-ПАГЭ, демонстрирующего полоску 28 кДа, соответствующую спрогнозированному размеру оптимизированного по кодонам, полипептида на основе дефектной CAT и соматостатина в соответствии с изобретением. Дорожка 1 представляет собой LB + IPTG, восстанавливающмй. Дорожка 2 представляет собой LB, восстанавливающий, Дорожка 3 представляет собой LB + IPTG и Дорожка 4 представляет собой LB.
Фигуры 3А и 3В представляют собой таблицы, демонстрирующие продукцию молока в литрах в сутки у вакцинированного (при использовании вакцины, как описано в Примерах) и у контрольного молочного скота (BSY). Каждая корова имеет специфический идентификационный номер, как представлено в каждой таблице.
Идентификация последовательностей и идентификаторы последовательностей
SEQ ID NO: 1 AGCKNFFWKTFTSC
SEQ ID NO 1a GCTGGCTGCAAGAATTTCTTCTGGAAGACTTTCACA TCCTGT
SEQ ID NO: 2 (Hisl92 → Gly, His 193 → Gly):
Подробное описание изобретения
Воплощения в соответствии с настоящим изобретением обеспечивают химерные полипептиды и конструкции нуклеиновых кислот, которые их кодируют, обладающие улучшенной иммуногенностью соматостатина. Воплощения данной заявки включают способы для получения химерного белка, а также способы применения химерного белка для повышения определенной продуктивности сельскохозяйственных животных, представляющих интерес, и, в частности, для повышения продукции молока у коров молочных пород и продукции мяса у крупного рогатого скота, свиней, овец, кролей, коз, телят и т.д.
Воплощения в соответствии с настоящим изобретением также включают новые адъюванты для применения с химерными белками в соответствии с изобретением для повышенной иммуногенности у животных, которые представляют интерес, повышенной безопасности для вакцинированных животных, которые представляют интерес, и улучшенной безопасности для потребителей животных, которые представляют интерес, то есть, потребителей вакцинированного животного или потребителей продукта, полученного от вакцинированного животного.
В одном аспекте изобретение обеспечивает химерный белок соматостатина, сконструированный для повышенной иммуногенности соматостатина. Химерный белок соматостатина воплощения включает аминокислотную последовательность соматостатина-14, связанную с помощью линкерной последовательности с существенно инактивированным укороченным белком хлорамфеникол ацетилтрансферазы (CAT). В некоторых случаях линкер (также в данной заявке упоминается как спейсер) является оптимизированным для улучшения продукции химерного полипептида в целевых хозяйских клетках. В других случая также обеспечиваются способы получения и изоляции таких повышенных количеств химерного белка в существенно свободном от эндотоксина состоянии.
В другом аспекте изобретение обеспечивает новые адъювантные композиции (которые не содержат каких-либо белков животного происхождения или химических агентов, подобных бензолу) и вакцины, которые содержат химерные белки соматостатина в соответствии с изобретением. Воплощения включают непредвиденно эффективные композиции адъювант/химерный белок соматостатина (типично существенно свободный от эндотоксина), то есть, новые вакцины, композиции для индукции антигенности у вакцинированных сельскохозяйственных животных, которые представляют интерес. В некоторых воплощениях представляющие интерес сельскохозяйственные животные представляют собой коров молочных пород, телят, свиней, коз и т.д. Следует отметить, что поскольку адъюванты в соответствии с настоящим изобретением являются описанными в комбинации с химерными белками соматостатина в соответствии с настоящей заявкой, предусматривается, что адъюванты в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться с другими вакцинами у различных животных, которые представляют интерес, например, у людей, свиней, собак, котов и т.д.
В других аспектах обеспечиваются способы для вакцинации животных, которые представляют интерес, при использовании в виде нескольких или одной дозы новой вакцины для получения повышенной продуктивности и, в частности, повышенной продукции молока у коров молочных пород и других подобных сельскохозяйственных животных. Эти улучшенные процедуры дозирования (меньшее количество вакцинаций и более низкая концентрация химерного соматостатина) обеспечивают длительную эффективность и снижение затрат, которые при использовании в молочной промышленности представляют значительный прогресс в достижении производительности сельскохозяйственных животных. Кроме того, способы, описанные в данной заявке, позволяют избежать применения терапии на основе рекомбинантного гормона роста, что представляет собой задачу охрану здоровья, то есть, как по отношению к представляющим интерес сельскохозяйственным животным, так и к конечному потребителю и окружающей среды, где выделение рекомбинантного гормона роста осуществляется в грунтовые воды.
Определения
Следующие определения обеспечиваются для того, чтобы способствовать пониманию некоторых терминов, которые часто встречаются в данной заявке и не подразумеваются для ограничения объема настоящего раскрытия.
Термин "аминокислота" относится к любой из двадцати существующих в природе аминокислот, а также к любой модифицированной аминокислотной последовательности. Модификации включать природные процессы, такие, как посттрансляционный процессинг, или могут включать химические модификации, которые являются известными в области техники. Модификации включают, но без ограничения: фосфорилирование, убиквитинизацию, ацетилирование, амидирование, гликозилирование, ковалентное присоединение флавина, АДФ-рибозилирование, перекрестное связывание, иодирование, метилирование и тому подобное.
Термины "химерный полипептид" или "слитый белок" относятся к первому полипептиду, содержащему присоединенный второй, гетерологичный полипептид, так, что первый и второй полипептиды экспрессируются в рамке. Часто два полипептида могут быть соединенными с помощью линкерного или спейсерного сегмента для оптимизиции экспрессии и функции химерного(ых) полипептида(ов) в соответствии с изобретением.
Термин "эндотоксин" относится к токсинам, ассоциированным с клеточными стенками грамнегативных бактерий. В некоторых случаях токсины представляют собой липополисахаридные компоненты бактериальных мембран, компоненты внешней мембраны клеточной стенки грамнегативных бактерий.
Термин "хозяйская клетка" или "хозяйские клетки" относятся к клеткам, адаптированным к культуре ex vivo. Является характерным, что хозяйские клетки, которые обсуждаются в данной заявке, являются способными к экспрессии химерных белков в соответствии с изобретением. Примеры приемлемых хозяйских клеток, полезных в аспектах в соответствии с изобретением, включают, но без ограничения, клетки бактерий, дрожжей, насекомых и млекопитающих. Специфические примеры таких клеток включают SF9 клетки насекомых (Summers и Smith, 1987, Texas Agriculture Experiment Station Bulletin, стр.1555), клетки E.coli (BL21 (DE3), Novagen), дрожжи (Pichia pastoris, Invitrogen) и клетки печени человека (Нер G2 (АТСС НВ8065).
Термин "последовательность нуклеиновой кислоты" относится к порядку последовательности дезоксирибонуклеотидов в цепочке дезоксирибонуклеиновой кислоты. Порядок этих дезоксирибонуклеотидов определяет порядок аминокислот в полипептидной цепи. Последовательность дезоксирибонуклеотидов кодирует аминокислотную последовательность.
Термины "белок", пептид" и "полипептид" используются попеременно для обозначения аминокислотного полимера или набора двух или более взаимодействующих или связанных аминокислотных полимеров.
Термин "существенно" относится к "большой степени," например, существенно удаленный означает, что по крайней мере, 75%, более типично, по крайней мере, 80%, 85%, 90%, 95% и наиболее типично, 96%, 97%, 98%, 99% целевого материала является удаленным; существенно неактивный означает, что, по крайней мере, 75%, более типично, 80%, 85%, 90%, 95% и наиболее типично, 96% 97%, 98%, 99% фермента является инактивированным. Как таковой термин существенно неактивный CAT фермент представляет собой такой, который обладает 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 96%, 97%, 98%, 99% или 100% удаленной активности. (CAT активность может быть определена при использовании известных функциональных анализов, например, связывания н-бутирил кофермента А с радиоактивно меченным хлорамфениколом и последующее измерение с помощью жидкостно-сцинтилляционного измерения активности (LCS); путем определения количества радиоактивной метки, перенесенной с 14Сацетил СоА на хлорамфеникол с помощью тонкослойной хроматографии (смотри Molecular Cloning: A Laboratory Model, третье изд., J Sambrook и DW Russell, 2001. Cold Spring Harbor Press) или с помощью других известных или подобных им анализов).
Термин "вектор" используется в отношении молекул нуклеиновой кислоты, которые переносят сегмент(ы) ДНК с одной клетки на другую клетку. Термин "переносчик" иногда используется попеременно с термином "вектор". Два обычных вида векторов представляют собой плазмиды и вирусные векторы.
Соматостатин
Рядом исследований было показано, что животные, иммунизированные с помощью соматостатина, имеют среднее суточное увеличение массы, которое составляет 10-20%, снижение потребности организма в пище 9% и 11% увеличение эффективности усвоения пищи. Животные, иммунизированные с помощью соматостатина, и также их приплод, имеют правильные пропорции, а распределение веса животных между мышцами, костями и жиром является таким же, что и у контрольных животных (смотри Reichlin, 1987). Таким образом, иммунизация с помощью соматостатина обеспечивает полезный и безопасный путь повышения продуктивности животных. Это является особенно важным при сравнение с применением рекомбинантного гормона роста, использование которого поднимает проблему повышенного содержания гормона в молоке или мясе, полученном от обработанных животных, или безопасности для самих животных, или накопления гормона в экосистеме, в частности, водоснабжения с использованием грунтовых вод.
Соматостатин-14 представляет собой биологически активный тетрадекапептид, который вырабатывается гипоталамусом и желудочно-кишечным трактом. Аминокислотная последовательность тетрадекапептида является следующей:
AGCKNFFWKTFTSC (SEQ ID NO: 1). Последовательность соматостатина-14 является высококонсервативной среди млекопитающих (Lin XW и др. Evolution of neuroendocrine peptide systems: gonadotropin-releasing hormon and somatostatin. Comp Biochem Physiol С Pharmacol Toxicol Endocrinol. 1998 119(3): 375-88.) Тетрадекапептид кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты GCTGGCTGCAAGAATTTCTTCTGGAAGACTTTCACATCCTGT (SEQ ID NO: 1a) (следует отметить, что могут использоваться другие последовательности нуклеиновой кислоты для кодирования SEQ ID NO: 1, однако, SEQ ID NO: 1a обеспечивается с целью иллюстрации).
Соматостатин-14 является известным как такой, который обладает сильным ингибиторным эффектом на большое количество гормонов, вовлеченных в рост и усвоение пищи у животных. Как было описано ранее в патенте США №6,316,004 (введен в данную заявку в качестве ссылки для всех целей), соматостатин-14 и химерные варианты соматостатина могут использоваться в иммунизации животных для повышения суточной прибавки веса, а там, где это является применимым, продукции молока. Такие процедуры иммунизации осуществляют с традиционными адъювантами и не применяют материалы на основе соматостатина в соответствии с изобретением. Следует отметить, что обработка животных, которые представляют интерес, с помощью антител к соматостатину зарекомендовала себя как излишне дорогая и функционально не эффективная, что, таким образом, исключило непосредственную обработку с помощью антител как непрактичную. Muromtsev G.S., и др., 1990, Basics of agricultural biotechnology, Agropromizdat, Moscow, стр.102-106. Один аспект в соответствии с настоящим изобретением основывается на идее, что антитела к соматостатину, сформированные при использовании композиции и способов, описанных в данной заявке, аттенуируют, но полностью не устраняют в основном ингибирующее действие соматостатина у животных, представляющих интерес. Этот процесс обеспечивает естественное и пропорциональное увеличение роста и продуктивности у иммунизированных животных, которые представляют интерес.
Как таковые аспекты в соответствии с настоящим изобретением способствуют иммунизации на основе соматостатина путем обеспечение высокоиммуногенных материалов для применения при иммунизации животных, которые представляют интерес. Такие соединения для иммунизации на основе соматостатина были оптимизированы для экспрессии и антигенности. В некоторых воплощениях соматостатин-14 экспрессируется в виде оптимизированного по кодонам химерного полипептида дефектная CAT - соматостатин. Эти материалы обеспечивают неожиданное улучшение по сравнению с другими вакцинами для иммунизации.
Новые оптимизированные по кодонам конструкции дефектная CAT - соматостатин
Один аспект в соответствии с изобретением обеспечивает изолированные молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют химерные белки, обладающие оптимизированной иммуногенной активностью соматостатина. В частности, воплощения в соответствии с изобретением включают новые конструкции нуклеиновых кислот, которые кодируют CAT слитые белки, обладающие иммуногенной активностью по отношению к соматостатину. Такие полипептиды были идентифицированы для оптимальной функциональной активности в процедурах иммунизации.
В одном воплощении конструкция, которая схематически представлена на Фигуре 1, обеспечивается для кодирования химерных полипептидов в соответствии с изобретением. Конструкции нуклеиновых кислот в соответствии с изобретением в общем случае кодируют неактивный CAT фермент без 10 С-терминальных аминокислот и включают одну или две аминокислоты, заменяющие гистидин. Существенная инактивация CAT дает возможность устранить вредные реакции на CAT у инъецируемого животного, представляющего интерес (и, таким образом, устранить резистентность к CAT). Следует отметить, что хлорамфеникол представляет собой традиционно используемый антибиотик в животноводстве, и устойчивость к хлорамфениколу у крупного рогато скота будет вредной для безопасности вакцинированных животных при использовании материалов в соответствии с изобретением. Как таковые конструкции, содержащие инактивированную CAT, обладают иммуногенностью CAT при отсутствии вредных побочных эффектов развития устойчивости у вакцинированных животных (проблематичный вопрос безопасности для животных).
Фермент CAT подвергают инактивации путем удаления группы имидазола His193 (His195 в каноническом CATIII варианте, смотри Lewendon и др., ниже). В другом воплощении фермент CAT инактивируют путем удаления групп имидазола как His193, так и соседнего His192 (соответственно, His195 и His194 для CATIII). Удаление существенной для His193 (His195 в CATIII) группы имидазола из активного сайта CAT и замена его аланином, глицином или другими подобными аминокислотами приводит к существенной инактивации CAT фермента (Lewendon А и др. (1994). Replacement of catalytic histidine-195 of chloramphenocol acetyl transferase: evidence for a general base role for glutamate. Biochemistry. 33(7): 1944-50.). В заключение, воплощения данной заявки могут также включать инактивацию CAT фермента путем удаления только группы имидазола His192 (His 194 для САТ111). Что касается His193, то замена может осуществляться с помощью аланина, глицина и других подобных аминокислот. В некоторых аспектах одна или более замененных аминокислот гистидна кодируются нуклеиновыми кислотами, которые размещаются в положениях 574-576 и 577-579 последовательности SEQ ID NO: 2 (соответствует номерам аминокислот 192 и 193 в последовательности SEQ ID NO: 3). В некоторых воплощениях последовательности нуклеиновой кислоты в соответствии с изобретением включают SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6. Химерные белки в соответствии с изобретением, которые включают конструкции с замещенным гистидином, описанные в данной заявке, обеспечивают высокоиммуногенные белки с небольшой или с отсутствующей CAT активностью, значительное усовершенствование по сравнению с существующим уровнем техники. Существенно инактивированный CAT фермент воплощения присоединяют к полипептиду соматостатина в соответствии с изобретением. Такое присоединение может осуществляться непосредственно или с помощью линкера (как более полно описано ниже).
Инактивация целевых сайтов (His192 и/или His193) может быть выполнена при использовании любого количества известных квалифицированному специалисту в данной области техники процедур, включая сайт-направленный мутагенез и соединение синтетических генов. В одном воплощении последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует гистидин в положении 193, модифицируют для кодирования аланина, глицина или других подобных аминокислот. В другом воплощении последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует гистидин в положении 192, модифицируют для кодирования аланина, глицина или других подобных аминокислот. Типичная комбинация замен для положений 192 и 193 химерного полипептидна включает: аланин, аланин; аланин, глицин; глицин, аланин; и глицин, глицин.
Воплощения в соответствии с настоящим изобретением также включают аминокислотные последовательности для дефектных по CAT полипептидов в соответствии с изобретением, включая аминокислотную последовательность, содержащую SEQ ID NO: 7, 8 и 3 (соответствует his → gly в положении 193, his → ala в положении 193, и his → gly в положениях 192 и 193).
Как показано на Фигуре 1, существенно неактивный фермент CAT может связываться с соматостатином-14 с помощью спейсера различной длины. Спейсер является необходимым для обеспечения презентации кодированного соматостатина на общей поверхности. Воплощения спейсера данной заявки обеспечивают для оптимальной резистентности к протеазам и для оптимальной демонстрации эпитопов, их включения в химерные полипептиды в соответствии с изобретением продемонстрировали неожиданное улучшение по сравнению с конструкциями, содержащими линкерную(ые) последовательность(и) настоящего изобретения.
Воплощения спейсера, таким образом, были оптимизированы по длине и составу для обеспечения экспрессии дефектной CAT - соматостатина в различных микроорганизмах, и, в частности, в Е.coli. Оригинальные конструкции, как описывается в патенте США №6,316,004, включают спейсер, содержащий редкие кодоны Е.coli, и требуют для коэкспрессии редких тРНК из второй или хелперной плазмиды. Воплощения спейсера, описанные в данной заявке, удаляют эти редкие кодоны Е.coli и, таким образом, удаляют необходимость во второй хелперной плазмиде, что представляет собой усовершенствование по сравнению с предыдущей технологией.
В типичном воплощении спейсер имеет последовательность нуклеиновой кислоты tgggaactgcaccgttctggtccacgcccgcgccctcgcccacgtccggaattcatg (SEQ ID NO: 9). Один пример спейсера в соответствии с изобретением имеет аминокислотную последовательность welhrsgprprprprpefm (SEQ ID NO: 10). Типичная аминокислотая последовательность для спейсера в соответствии с изобретением представляет собой welhrsgp(rp)nefm, где n>1 (SEQ ID NO: 11). Как отмечалось выше, такие новые спейсерные последовательности обеспечивают улучшенную резистентность к протеазам (тем самым позволяя повысить продукцию по сравнению с конструкциями, раскрытыми в патенте США №6,316,004), и обеспечивают оптимальное воздейстие соматостатина-14. Комбинация соматостатина-14, присоединенного к существенно инактивированному ферменту CAT (конструкции, замещенные гистидином) с помощью линкеров с оптимальной конфигурацией, которые демонстрируют неожиданное и удивительное усовершенствование по сравнению с другими традиционными материалами, при использовании для иммунизации животных, которые представляют интерес, с целью достижения улучшенной продуктивности.
Хотя и не такие, которые являются оптимальными по своей функции, но другие линкерные последовательности вариабельной длины могут использоваться для соединения соматостатина-14 с существенно инактивированным ферментом CAT. Кроме того, является очевидным, что непосредственное слияние соматостатина-14 с существенно инактивированным ферментом CAT может также использоваться в данной заявке и рассматривается как такое, которое входит в объем настоящего изобретения.
Векторы и хозяйские клетки
Настоящее изобретение также относится к векторам, включающим полинуклеотидные молекулы в соответствии с изобретением, а также к хозяйским клеткам, трансформированным с помощью таких векторов. Любая из полинуклеотидных молекул в соответствии с изобретением может присоединяться к вектору, который обычно включает селективный маркер и источник репликации, для размножения хозяина, который представляет интерес. Хозяйские клетки являются генетически сконструированными для включения этих векторов и, таким образом, экспрессируют полипептиды в соответствии с изобретением. В общем случае, векторы, описанные в данной заявке, включают полинуклеотидные молекулы в соответствии с изобретением, оперативно связанные с приемлемыми последовательностями для регуляции транскрипции или трансляции, такими, как те, что используются в микробных хозяйских клетках или вирусах. Примеры регуляторных последовательностей включают транскрипционные промоторы, операторы, или энхансеры, рибосомальные сайты связывания мРНК и приемлемые последовательности, которые контролируют транскрипцию и трансляцию. Нуклеотидные последовательности являются оперативно связанными, когда регуляторные последовательности, описанные в данной заявке, являются функционально связанными с полинуклеотидами, кодирующими химерные полипептиды в соответствии с изобретением.
Типичные векторы включают плазмиды, дрожжевые челночные векторы, бакуловирус, инактивированный аденовирус и подобные им. В одном воплощении вектор представляет собой модифицированную pET30b CatSom плазмиду (смотри Фигуру 1). Целевые хозяйские клетки для применения в данной заявке включают бактериального хозяина, например, Е.coli, дрожжи, SF-9 клетки насекомых, клетки млекопитающих, клетки растений и тому подобное.
В одном воплощении регуляторные последовательности включают Т71ас, CAT, Trp или Т5 промотор для экспрессии химерных полипептидов в соответствии с изобретением в Е.coli или других подобных бактериях. Такие регуляторные последовательности являются известными в области техники и используются при приемлемых и известных условиях.
В том случае, когда для экспрессии используются генерически модифицированные клетки зеленых растений, могут использоваться системы подобные тем, что разработаны Planet Biotechnology и другие.
Были сконструированы различные плазмиды в соответствии с изобретением для экспрессии химерных полипептидов в соответствии с изобретением при использовании целевых регуляторных последовательностей. Иллюстративные плазмиды могут включать Т71ас промотор (смотри Фигуру 1).
Хозяйские клетки для экспрессии целевых химерных полипептидов включают прокариот, дрожжи и клетки высших эукариотических организмов. Иллюстративные прокариотические хозяева включают бактерии родов Escherichia, Bacillus и Salmonella, а также родов Pseudomonas и Streptomyces. В типичном воплощении хозяйская клетка является таковой рода Escherichia и может представлять собой Escherichia coli (Е.coli). Как показано в примерах, приведенных ниже, конструкции в соответствии с изобретением обеспечивают оптимальную экспрессию соматостатина - дефектной CAT при различных условиях. Такие конструкции являются особенно эффективными для экспрессии в прокариотических хозяевах и, в частности, в бактериях рода Escherichia. Следует также отметить, что могут использоваться разнообразные растительные системы экспрессии в контексте настоящего изобретения, типично при использовании Agrobacterium tumefaciens.
Очистка свободных от эндотоксина слитых белков
Аспекты в соответствии с настоящим изобретением включают применение свободного от эндотоксина, оптимизированного по кодонам соматостатина, слитого с дефектной CAT для использования при вакцинации животных и, в частности, для вакцинации сельскохозяйственных животных, которых разводят в Соединенных Штатах. Свободные от эндотоксина материалы являются особенно важными для разведения и выращивания крупного рогатого скота и в Соединенных Штатах (смотри, например, Drackley, JK 2004. Physiological adaptations in transition dairy cows. стр.74-87 in Proc. Minnesota Dairy Herd Health Conf., St Paul, MN. University of Minnesota, St. Paul).
В одном воплощении химерные иммуногенные белки, включающие соматостатин, в соответствии с изобретением получают путем трансформации целевых клеток с помощью приемлемых содержащих соматостатин векторов. Как отмечалось выше, векторы для применения в данной заявке включают известные плазмидные и векторные системы, приемлемые для экспрессии в выбранных хозяйских клетках.
В одном аспекте в соответствии с изобретением химерные иммуногенные, содержащие соматостатин белки экспрессируются в целевых хозяйских клетках. Экспрессию химерного белка осуществляют при использовании целевой регуляторной последовательности. В некоторых аспектах химерные полипептиды были оптимизированы (в частности, в отношении спейсерной последовательности, раскрытой в данной заявке) для экспрессии в Е.coli.
Химерный белок может подвергаться очистке в соответствии с известными технологиями очистки белка, включая, например, лизис при использовании лизоцима, дифференциальное центрифугирование телец включения, хроматографии на молекулярных ситах и подобных им. Процедуры рефолдинга могут осуществляться в хлориде гуанидина и мочевине при щелочном значении рН, после чего осуществляют диализ и лиофилизацию.
В одном воплощении клетки Е.coli подвергают трансформации при использовании плазмиды, содержащей оптимизированный по кодонам CAT-дефектный соматостатин - pET30b CatSom; при этом pET30b CatSom содержит приемлемые для Е.coli основные регуляторные последовательности для экспрессии. В некоторых случаях осуществление ферментации этих клеток в объеме приблизительно 10 литров обеспечивает получение, по крайней мере, 500 грамм и в некоторых случаях 600 грамм общей биомассы, что дает выход, составляющий 4-6 грамм общего белка. С помощью окрашивания серебром и Кумасси голубым было показано, что вплоть до половины белка может представлять собой химерныйбелок (смотри Пример 2 и Фигуру 2).
В некоторых воплощениях, описанных в данной заявке, химерный белок в соответствии с изобретением очищают из трансформированных хозяйских клеток в существенно свободном от эндотоксина состоянии. Выявление того факта, что эндотоксин и, в частности, многократное воздействие эндотоксина, у некоторых животных и, в частности, у коров молочных пород, приводит к получению животных с существенной патологией (мастит и эндотоксиновый шок у выведенных и выращиваемых в Соединенных Штатах коров молочныхпород), представляло собой неожиданный и удивительный результат, полученный изобретателями в соответствии с настоящей заявкой.. Выявление этого факта привело к попытке удалить или снизить количество дозы эндотоксин или количество вакцинаций у коров молочных пород. Следует отметить, что этот основанный на эндотоксине эффект значительно меньше реализуется при разведении и выращивание молочных коров в России и других странах, поскольку молочный крупный рогатый скот имеет происхождение от различных пород коров. Holstein Association, 1 Holstein Place, Brattleboro, Vermont 05302-0808. Выявление этого у молочных коров в Соединенных Штатах является в общем случае противоположным ожиданию того, что если вакцина будет включать некоторое низкое количество эндотоксина, то это поможет максимально повысить иммунный ответ у животных, как это происходит в случает коров молочных пород при вакцинации соматостатином на рынках некоторых других европейских стран (смотри патент США №6,316,004).
Как таковые некоторые воплощения, описанные в данной заявке, являются направленными на получение существенно свободных от эндотоксина химерных белков для применения в вакцина, и, в частности, для применения в вакцинах, используемых в животноводстве и используемых в животноводстве в Соединенных Штатах. В некоторых воплощениях уровни эндотоксина находятся на уровне 1 ед. эндотоксина/мл или ниже, а в других воплощениях уровни эндотоксина являются существенно устраненными, то есть, химерные полипептиды в соответствии с изобретением являются существенно свободными от эндотоксина.
В одном воплощении извлеченный из лизированных хозяйских клеток IB многократно промывают при использовании промывочного раствора, свободного от эндотоксина, то есть, свободной от эндотоксина воды или раствора. Восстановленный IP осадок может подвергаться необязательному промыванию до тех пор, пока уровни эндотоксина не станут ниже значения приблизительно 1 ед. эндотоксина/мл (анализы эндотоксина можно осуществлять при использовании одного или более известных анализов, включая коммерчески доступные аналитические наборы от МР Biochemicals, Charles River, и т.п.). В некоторых воплощениях промывочный раствор является свободным от эндотоксина и включает один или более ингибитор(ов) протеолиза белка например, фенилметансульфонилфторид (PMSF), 4-(2-аминоэтил)-бензолсульфонилфторид (AEBSF), и т.п.В некоторых воплощениях промывочный раствор представляет собой забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), содержащий ингибиторно эффективные количества PMSF, AEBSF или комбинации PMSF и AEBSF.
В некоторых аспектах существенно свободные от эндотоксина образцы могут подвергаться обработке с помощью раствора для разворачивания белка со значением рН 12,5, который содержит мочевину, и подвергаться повторной сборке в растворе для сборки белка, имеющем сниженную молярность мочевины, с аргинином, глицерином и/или сахарозой. Концентрацию очищенного химерного белка подвергают модификации в интервале от 1 до 3 мг/мл и типично приблизительно от 1,4 до 1,8 мг/мл. В некоторых случаях существенно свободный от эндотоксина химерный белок обеспечивают для вакцинных композиций при концентрации приблизительно от 1,5 до 5 мг/2 мл дозы и более типично, от 2,0 до 3,5 мг/2 мл дозы.
Другие процедуры по удалению эндотоксина предполагаются как такие, которые входят в объем настоящего изобретения и могут включать, например, коммерчески доступные ионообменные колонки для удаления эндотоксина, гидрофобные колонки и т.п. (смотри, например, Mustang Е или G колонки (Millipore)).
Усиливающий иммунный ответ адъювант
Воплощения в соответствии с изобретением обеспечивают новые адъюванты для улучшенной индукции гуморального иммунитета. Эти адъюванты обеспечивают значительное повышение по сравнению с традиционными материалами для индукции гуморального иммунитета. Адъюванты, описанные в данной заявке, могут использоваться во многих вакцинах, но представлены в примерах в применении с полипептидами в соответствии с изобретением для вакцинации коров молочных пород, свиней или телят.
Является важным, что компоненты адъювантов, описанных в данной заявке, имеют не животное происхождение, устраняя, таким образом, потенциальную перекрестную контаминацию вакцинированных животных с потенциально загрязненными компонентами адъюванта. Например, воплощения, описанные в данной заявке, могут использовать Твин 80, не содержащий веществ животного происхождения. Это является особенно важным тогда, когда животное, представляющее интерес, представляет собой молочную корову, по причине беспокойства по поводу губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) или других подобных заболеваний крупного рогатого скота. Следует отметить, что эти беспокойства являются в равной степени применимыми для лечения человека, где адъювант, имеющий не животное происхождение, обеспечивает значительное преимущество безопасности. Кроме того, воплощения адъюванта, описанные в данной заявке, являются свободными от бензола и других подобных канцерогенных соединений. Эти воплощения обеспечивают преимущество безопасности, которое является недоступным для большинства традиционных адъювантных соединений. Например, воплощения, описанные в данной заявке, могут использовать Carbopol® 974P или полициклическую кислоту, свободную от бензола.
В одном воплощении иммунологический адъювант включает эмульсию масло-вводе в комбинации с выбранными антигенами, смешанными в эмульсионном премиксе. Иллюстративные эмульсии масло-в-воде для применения в данной заявке включают комбинации минерального масла, Твин 80, Span 85 и целевые полимеры (свободная от бензола полиакриловая кислота). В некоторых случаях целевой полимер является выбранным из группы, состоящей из гомополимера Карбомера типа В. Типичные эмульсии масло-вода включают от приблизительно 8-10% минерального масла (об./об.), от 0,003 до 0,004% Твина 80 (об./об.), от 0,007 до 0,008 Span 85 (об./об.) и от 0,04 до 0,06% полимера (вес./об.).
Иллюстративные эмульсионные премиксы в соответствии с изобретением состоят из полимера с высоким молекулярным весом, поверхностно-активного агента и эмульгатора в приблизительно 50% масляно-водной основе. Полимеры с высоким молекулярным весом для применения в данной заявке включают акриловые кислоты, перекрестно связанные с аллиловыми этерами пентаэритритола. В некоторых случаях полимеры с высоким молекулярным весом имеют RVT вязкость Брукфильда от приблизительно 29000 до 40000, например, Карбопол® 974P (Noveon, Inc).
Способ получения оптимизированного иммунного ответа у коров молочных пород или других сельскохозяйственных животных, представляющих интерес
В соответствии с композициями и способами настоящего изобретения иммуногенные композиции, описанные в данной заявке (свободные от эндотоксина, оптимизированные по кодонам, САТ-дефектные конструкции соматостатина) объединяют с новыми адъювантами, как описано выше, для обеспечения вакцин в соответствии с изобретением. В одном воплощении свободные от эндотоксина, оптимизированные по кодонам, CAT дефектные конструкции соматостатина вводятся при общей дозе 2,98 мг/2 мл (где от 5% до 25% составляет адъювант (об./об.), более типично от 10% до 20% составляет адъювант и, наиболее типично, приблизительно 20% составляет адъювант). Следует отметить, что другие традиционные адъюванты также предполагаются в рамках настоящего изобретения и могут использоваться с оптимизированными по кодонам, САТ-дефектными конструкциями соматостатина в соответствии с изобретением, однако оптимальные результаты были показаны тогда, когда новые адъюванты, описанные в данной заявке, используются в таком диапазоне.
Задача новых конструкций соматостатина и адъюванта заключается в повышении продуктивности животных, представляющих интерес, типично, сельскохозяйственных животных и, более типично, коров молочных пород, телят, овец, свиней или коз.
Препарат вводится внутримышечно или подкожно, предпочтительно менее 12 раз, более предпочтительно менее 6 раз, и в некоторых случаях только один раз. Тогда, когда требуется более одной инъекции у животных, которые представляют интерес, интервал, составляющий от 14 до 28 дней перед следующей инъекцией является типичным. Как отмечалось выше, воплощения, описанные в данной заявке, дают возможность избежать применения обработки с помощью рекомбинантного гормона у животных, которые представляют интерес, основное преимущество в области животноводства (рекомбинантный гормон роста был ассоциирован с ранним наступлением половой зрелости у девочек и различными проблемами окружающей среды, связанные с тем, что органические удобрения от обработанного крупного рогатого скота могут неблагоприятным образом влиять как на поверхностную окружающую среду, так и на грунтовые воды).
Стерильные композиции в соответствии с изобретением могут вводиться с помощью подкожной или внутримышечной инъекции. Типичные сайты введения представляют собой шею или хвост животного, представляющего интерес, хотя могут использоваться и другие сайты. Следует отметить, что сайт должен использоваться так, чтобы побочные реакции не препятствовали способности животного двигаться, есть, пить и т.п.
Как отмечалось выше, вакцины, описанные в данной заявке, типично в свободном от эндотоксина состоянии, при использовании новых адъювантов, описанных в данной заявке, обеспечивают значительное повышение продукции мяса и молока у коров молочных пород, крупного рогатого скота, свиней и т.п. Однако такие обработки не сопровождаются повышением потребления корма.
ПРИМЕРЫ
Приведенные ниже примеры обеспечиваются только для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения объема в соответствии с изобретением.
Пример 1: Конструирование слитого белка дефектный CAT - соматостатин
Данный пример иллюстрирует продукцию слитого белка CAT-дефектного соматостатина в соответствии с воплощениями настоящего изобретения. Осуществляли сайт-направленный мутагенез на плазмиде pET30b-Cat-Som для замены His192 и His193 остатками глицина (после модификации: Gly192 и Gly193). Инактивация His193 (и His192) остатков устраняла способность фермента CAT принимать протоны, обеспечивая, таким образом, полную инактивацию CAT.
Спейсер в той же плазмиде pET30b-Cat-Som (имеющей замену(ы) His) был оптимизирован по кодонам для экспрессии с помощью Е.coli при отсутствии совместно экспрессируемых молекул тРНК.
Модифицированная конструкция нуклеиновой кислоты CAT-дефектного соматостатиа является представленной как SEQ ID NO: 12. Последовательность слитого белка САТ-дефектного соматостатин является раскрытой как SEQ ID NO: 13, по сравнению с немодифицированным слитым белком САТ-соматостатин (SEQ ID NO: 14).
Пример 2: Слитый белок САТ-дефектного соматостатина может экспрессироваться на высоком уровне
Оптимизированную по кодонам конструкцию САТ-дефектного соматостатина, как описано в Примере 1, использовали для экспрессии слитого белка в клетках BL21(DE3). Трансформированные клетки выращивали в среде LB и индуцировали с помощью 0,4 мМ IPTG в течение приблизительно трех часов. Один миллилитр клеток из культуры с оптической плотностью OD 0,7 осаждали и нагревали при 70°С в течение 10 минут в 100 мкл SDS буфера для образцов. Образец объемом 40 мкл клеточного экстракта загружали на каждую дорожку SDS ПАГЭ.
Как показано на Фигуре 2, полоса 28 кДа, соответствующая предсказанному размеру оптимизированного по кодонам слитого белка САТ-дефектного соматостатина, была видимой в дорожках 1 (LB + IPTG, восстанавливающий) и 3 (LB + IPTG) после индукции с помощью IPTG. Никакой экспрессии не наблюдали в дорожках 2 (LB, восстанавливающий) и 4 (LB). Как и ожидалось, не было различия в размерах белка при осуществлении разгонки при стандартных условиях и восстанавливающих условиях.
Пример 3: Вакцина, содержащая свободный от эндотоксина, оптимизированный по кодонам САТ-дефектный оматостатин
Иллюстративная вакцина в соответствии с настоящим изобретением:
| a. JH 14 (Адъювант) минеральное масло - 50% (об./об.) Твин 80 - 0,1694% (об./об.) Span 85-0,1915% (об./об.) Карбопол 974NP - 0,125% (вес./об.) |
24 мл |
| b. Повторно собранный белок в соответствии с изобретением (2,96 мг/мл) - смотри Пример 2 | 95,6 мл |
| с. Забуференный фосфатом физ. раствор | 35,6 мл |
| d. Антибактериальный/противогрибковый агент | 0,36 моля 120 мл |
Пример 4: Свободные от эндотоксина химерные пептиды/адъюванты обеспечивают повышенную продукцию молока
Идентифицировали случайный пул коров молочных пород (Holstein Crosses - выведенные и выращенные в США), каждый из них состоял из коров через 31-65 дней после отела (третья - пятая лактация). Каждую корову подвергали анализу и определяли как такую, которая имеет оптимальное состояние здоровья, с помощью ветеринара.
Средний вес коров в исследовании составлял приблизительно от 1000 до 1200 фунтов. Шесть коров в периоде лактации обрабатывали 1,96 мг химерного белка/2 мл дозы в JH14. Альтернативно, 9 коров в периоде лактации обеспечивали при использовании традиционной обработки с помощью pBST. Изучение обработок и молочной продуктивности при исследовании молочной продуктивности осуществляли
в большом масштабе на молочном заводе.
Вакцинации проводили в день 0. Анти-SST сывороточные антитела и сывороточные уровни IGF-1 подвергали анализу в течение 4 недель. Молочную продуктивность и общее состояние здоровья животных определяли в соответствии с регулярным расписанием.
Шесть коров, которые были вакцинированы при использовании композиции в соответствии с изобретением, описанным в данной заявке, имели нормальный внешний вид, при отсутствии реакции на эндотоксин и отказа от приема корма. Все шесть коров имели позитивный серологический ответ на SST со средним значением титра 1:14. Молочная продуктивность шести коров, полученная при использовании только одной вакцинации (смотри Фиг.3А), продемонстрировала среднее значение выхода молока 23,7%.
Девять коров, обработанных при использовании традиционных инъекций pBST, в дни 0 и 14 продемонстрировали среднее значение молочной продуктивности 2% (смотри Фиг.3 В).
Данные этого примера показывают значительное повышение эффективности при использовании свободных от эндотоксина конструкций в комбинации с адъювантами в соответствии с изобретением у коров молочных пород. Эти результаты являются значительно улучшенными в отношении состояния здоровья и продуктивности животных по сравнению с коровами, которым дважды вводили pBST.
Пример 5: Свободные от эндотоксина химерные пептиды/адъюванты обеспечивают повышение мясной продуктивности у поросят подвергнутых обработке свиноматок
Идентифицировали случайный пул свиноматок приблизительно, по крайней мере, за 35-36 дней до опороса. Каждую свиноматку подвергали исследованию и определяли оптимальное состояние здоровья с помощью ветеринара. Беременных свиноматок подвергали иммунизации дважды при использовании вакцины в соответствии с изобретением (смотри Пример 3), один раз за 35-36 дней до родов и один раз за 8 дней до родов. Контрольную группу беременных свиноматок поддерживали с целью сравнения (при отсутствии вакцинации и при использовании вакцинации с помощью стерильного физиологического раствора).
Родившиеся поросята из вакцинированной группы будут иметь более высокую выживаемость и будут обладать большим средним размером. Повышение среднего размера поросят повышает процент выживаемости, поскольку большие поросята с меньшей вероятностью будут отталкиваться от молочной железы свиноматки. Подвергнутые обработке и контрольные поросята подвергались взвешиванию в день 21, день 30 и день 75. Вакцинации в соответствии с настоящим изобретением будут повышать дневную прибавку веса в среднем на 35% в течение периода времени 75 дней.
Важно отметить, что выживаемость поросят и вес увеличиваются при использовании вакцины в соответствии с настоящим изобретением при отсутствии рекомбинантного гормона роста. Это представляет собой значительное усовершенствование по сравнению с гормональной терапией.
Пример 6: Свободные от эндотоксина химерные пептиды/адъюванты обеспечивают повышенную продукцию мяса у подвергнутых обработке телят
Случайный пул телят в возрасте от одного до трех месяцев идентифицировали и подвергали обработке с помощью композиции в соответствии с изобретением. Повышение веса в течение периода времени примерно 10 месяцев подвергали мониторингу и сравнивали с контрольной группой, которую обрабатывали таким же образом, что и инъекционную группу, за исключением того, что в первом случае использовали инъекции в соответствии с изобретением. Каждого теленка подвергали исследованию и определяли на оптимальное состояние здоровья с помощью ветеринара в течение всего периода обработки.
Инъекции для группы вакцинации осуществляли в неделю 0, через 4 и 8 недель (три общие вакцинации). Вакцинации будут обеспечиваться подкожно или внутримышечно в область шеи при использовании 18-21 размера сс иголки. Также обеспечивали бустер-инъекции (4 бустер-инъекции, 3 бустер-инъекции или без бустер-инъекций). Вакцинные инъекции включали 2 мг/2 мл химерного полипептида. Химерный полипептид получали так, как описано в данной заявке, заменяя оба остатка гистидина в CAT аминокислотами глицина в соответствии с изобретением и при оптимизации линкера так, как описывается в SEQ ID NO: 3.
Каждого из вакцинированных и контрольных телят взвешивали, принимая во внимание исходный вес. Ожидается, что вакцинированные в соответствии с изобретением животные будут демонстрировать прибавку веса по сравнению с контрольными животными, которая составляет от 15 до 40%. Такое повышение среднего веса для подвергнутых обработке телят демонстрирует значительное преимущество по сравнению с отсутствием обработки.
Является важным отметить, что полученное от обработанных телят мясо не содержит рекомбинантного гормона роста.
Несмотря на то, что изобретение было специфически продемонстрировано и описано со ссылкой на ряд воплощений, специалисту в данной области техники будет понятным, что могут быть внесены изменения в форму и детали различных воплощений, раскрытых в данной заявке, при отсутствии отступления от духа и объема настоящего изобретения, и различные воплощения, раскрытые в данной заявке, не предназначены для того, чтобы служить ограничением пунктов формулы изобретения.
Claims (11)
1. Химерный полипептид, обладающий иммуногенностью соматостатина и включающий аминокислотную последовательность соматостатина-14, которая представлена в SEQ ID NO: 1, связанную с существенно неактивным и укороченным полипептидом хлорамфеникол ацетилтрансферазы, имеющим последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, где соматостатин-14 связан с неактивной хлорамфеникол ацетилтрансферазой с помощью последовательности спейсера, выбранной из SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 11.
2. Химерный полипептид по п.1, имеющий аминокислотную последовательность, которая характеризуется по крайней мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 13.
3. Химерный полипептид по п.1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13.
4. Иммуногенная композиция, включающая химерный полипептид по п.1 вместе с фармацевтически приемлемым адъювантом в количестве, эффективном для того, чтобы вызвать иммунный ответ.
5. Иммуногенная композиция, включающая химерный полипептид по п.1 вместе с адъювантом, где адъювант включает эмульсию масло-в-воде, смешанную с эмульсионным премиксом, где эмульсия масло-в-воде включает минеральное масло, Твин 80, Span 85 и один или более полимеров, и где эмульсионный премикс включает полимер с высоким молекулярным весом, поверхностно-активный агент и эмульгатор в масляно-водной основе.
6. Способ повышения продукции молока у коров молочных пород, включающий:
вакцинацию коров молочных пород с помощью одной или более доз иммуногенной композиции, содержащей химерный полипептид по п.1;
и фармацевтически приемлемый адъювант в количестве, эффективном для
того, чтобы вызвать иммуногенный ответ, и
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция молока коровами молочных пород будет повышаться по сравнению с продукцией молока теми же коровами при отсутствии вакцинации.
вакцинацию коров молочных пород с помощью одной или более доз иммуногенной композиции, содержащей химерный полипептид по п.1;
и фармацевтически приемлемый адъювант в количестве, эффективном для
того, чтобы вызвать иммуногенный ответ, и
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция молока коровами молочных пород будет повышаться по сравнению с продукцией молока теми же коровами при отсутствии вакцинации.
7. Способ по п.6, в котором корову молочной породы вакцинируют с помощью одной дозы композиции.
8. Способ повышения продукции молока у коров молочных пород, включающий вакцинацию коров молочных пород с помощью одной или более доз композиции по п.5;
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция молока коровами молочных пород будет повышаться по сравнению с продукцией молока теми же коровами при отсутствии вакцинации.
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция молока коровами молочных пород будет повышаться по сравнению с продукцией молока теми же коровами при отсутствии вакцинации.
9. Способ повышения продукции постного мяса фермерского поголовья скота, включающий вакцинацию фермерского поголовья скота с помощью одной или более доз иммуногенной композиции, содержащей химерный полипептид, включающий аминокислотную последовательность соматостатина-14, которая представлена в SEQ ID NO: 1, связанную с существенно неактивным и укороченным полипептидом хлорамфеникол ацетилтрансферазы, имеющим последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, где соматостатин-14 связан с неактивной хлорамфеникол ацетилтрансферазой с помощью спейсера и фармацевтически приемлемый адъювант в количестве, эффективном для того, чтобы вызвать иммуногенный ответ;
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция постного мяса животным будет повышаться по сравнению с продукцией постного мяса теми же животными при отсутствии вакцинации.
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция постного мяса животным будет повышаться по сравнению с продукцией постного мяса теми же животными при отсутствии вакцинации.
10. Химерный полипептид, обладающий иммуногенностью соматостатина и включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, которая состоит из SEQ ID NO: 3, 7 и 8, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1; где спейсер, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 11, связан с аминокислотными последовательностями.
11. Способ повышения продукции молока у коров молочных пород, включающий вакцинацию коров молочных пород с помощью одной или более доз иммуногенной композиции, содержащей химерный полипептид, включающий аминокислотную последовательность соматостатина-14, которая представлена в SEQ ID NO: 1, связанную с существенно неактивным и укороченным полипептидом хлорамфеникол ацетилтрансферазы, имеющим последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, где соматостатин-14 связан с неактивной хлорамфеникол ацетилтрансферазой с помощью последовательности спейсера, и фармацевтически приемлемый адъювант в количестве, эффективном для того, чтобы вызвать иммуногенный ответ, и
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция молока коровами молочных пород будет повышаться по сравнению с продукцией молока теми же коровами при отсутствии вакцинации.
предоставление периода времени, по крайней мере, десять дней, в течение которых продукция молока коровами молочных пород будет повышаться по сравнению с продукцией молока теми же коровами при отсутствии вакцинации.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011100104/15A RU2501565C2 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011100104/15A RU2501565C2 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения |
| PCT/US2008/068195 WO2009157926A1 (en) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | Chloramphenicol acetyl transferase (cat)-defective somatostatin fusion protein and uses thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011100104A RU2011100104A (ru) | 2012-07-20 |
| RU2501565C2 true RU2501565C2 (ru) | 2013-12-20 |
Family
ID=41444809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011100104/15A RU2501565C2 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7722881B2 (ru) |
| EP (1) | EP2303314B1 (ru) |
| JP (1) | JP5506792B2 (ru) |
| KR (1) | KR101555731B1 (ru) |
| CN (1) | CN102105163B (ru) |
| AU (1) | AU2008358353B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0822826A2 (ru) |
| CA (1) | CA2728734A1 (ru) |
| DK (1) | DK2303314T3 (ru) |
| ES (1) | ES2445403T3 (ru) |
| IL (1) | IL209792A (ru) |
| MX (1) | MX2010014082A (ru) |
| NZ (1) | NZ590011A (ru) |
| RU (1) | RU2501565C2 (ru) |
| WO (1) | WO2009157926A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201009125B (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2519051C2 (ru) | 2008-06-25 | 2014-06-10 | Брааш Биотех Ллк | Композиции и способы для улучшенной иммуногенности соматостатина в лечении дефицита гормона роста и инсулиноподобного фактора роста |
| RU2501565C2 (ru) | 2008-06-25 | 2013-12-20 | Брааш Биотех Ллк | Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения |
| US20150173333A1 (en) * | 2012-06-26 | 2015-06-25 | Biovalence Sdn. Bhd. | Rapid specific pathogen free animal |
| KR102066768B1 (ko) | 2012-11-08 | 2020-01-15 | 피 파르마 에스에이 | C4s 프로테오글리칸 특이적 트랜스포터 분자 |
| RU2526571C1 (ru) * | 2013-04-08 | 2014-08-27 | Сергей Михайлович Юдин | Инъекционный препарат для повышения спермопродукции человека и способ его применения |
| WO2016029013A2 (en) | 2014-08-21 | 2016-02-25 | Braasch Biotech Llc | Methods for improving immunological response in vaccinated animals |
| WO2021024020A1 (en) | 2019-08-06 | 2021-02-11 | Astellas Pharma Inc. | Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2034457C1 (ru) * | 1993-06-22 | 1995-05-10 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Ветек" | Способ повышения продуктивности сельскохозяйственных животных и препарат для его осуществления |
| US6316004B1 (en) * | 1993-06-22 | 2001-11-13 | T. Tikhonenko | Chimeric somatostatin containing protein and encoding DNA, plasmids of expression, method for preparing chimeric protein, strain-producers, immunogenic composition, method for increasing the productivity of farm animals |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4342832A (en) | 1979-07-05 | 1982-08-03 | Genentech, Inc. | Method of constructing a replicable cloning vehicle having quasi-synthetic genes |
| US4446235A (en) | 1982-03-22 | 1984-05-01 | Genentech, Inc. | Method for cloning human growth hormone varient genes |
| JP2602968B2 (ja) | 1987-11-04 | 1997-04-23 | カリフォルニア バイオテクノロジー インコーポレイテッド | 肺胞の界面活性タンパク類 |
| US6025368A (en) | 1997-02-25 | 2000-02-15 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating the symptoms of chronic stress-related disorders using IGF |
| US20070048860A1 (en) | 1997-10-10 | 2007-03-01 | The Government Of The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Carcinoembryonic antigen (CEA) peptides |
| PL213561B1 (pl) | 2004-01-09 | 2013-03-29 | Inst Biotechnologii I Antybiotykow | Sposób otrzymywania plazmidu, plazmid oraz zastosowania |
| US7998930B2 (en) | 2004-11-04 | 2011-08-16 | Hanall Biopharma Co., Ltd. | Modified growth hormones |
| ZA200711123B (en) | 2005-06-27 | 2009-08-26 | Biovail Lab Int Srl | Modified-release formulations of a bupropion salt |
| RU2519051C2 (ru) | 2008-06-25 | 2014-06-10 | Брааш Биотех Ллк | Композиции и способы для улучшенной иммуногенности соматостатина в лечении дефицита гормона роста и инсулиноподобного фактора роста |
| RU2501565C2 (ru) | 2008-06-25 | 2013-12-20 | Брааш Биотех Ллк | Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения |
-
2008
- 2008-06-25 RU RU2011100104/15A patent/RU2501565C2/ru active
- 2008-06-25 NZ NZ590011A patent/NZ590011A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-06-25 ES ES08771936.5T patent/ES2445403T3/es active Active
- 2008-06-25 CA CA2728734A patent/CA2728734A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-25 EP EP08771936.5A patent/EP2303314B1/en not_active Not-in-force
- 2008-06-25 CN CN200880130533.4A patent/CN102105163B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-06-25 DK DK08771936.5T patent/DK2303314T3/da active
- 2008-06-25 AU AU2008358353A patent/AU2008358353B2/en not_active Ceased
- 2008-06-25 JP JP2011516244A patent/JP5506792B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-06-25 BR BRPI0822826-4A patent/BRPI0822826A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2008-06-25 WO PCT/US2008/068195 patent/WO2009157926A1/en active Application Filing
- 2008-06-25 KR KR1020107029180A patent/KR101555731B1/ko active IP Right Grant
- 2008-06-25 MX MX2010014082A patent/MX2010014082A/es active IP Right Grant
- 2008-08-26 US US12/198,579 patent/US7722881B2/en active Active
-
2010
- 2010-02-10 US US12/703,631 patent/US7943143B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-12-06 IL IL209792A patent/IL209792A/en active IP Right Grant
- 2010-12-20 ZA ZA2010/09125A patent/ZA201009125B/en unknown
-
2011
- 2011-03-23 US US13/069,592 patent/US8367073B2/en active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2034457C1 (ru) * | 1993-06-22 | 1995-05-10 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Ветек" | Способ повышения продуктивности сельскохозяйственных животных и препарат для его осуществления |
| US6316004B1 (en) * | 1993-06-22 | 2001-11-13 | T. Tikhonenko | Chimeric somatostatin containing protein and encoding DNA, plasmids of expression, method for preparing chimeric protein, strain-producers, immunogenic composition, method for increasing the productivity of farm animals |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SZCZEPANOWSKI et al. The 120 592 bp IncF plasmid pRSB107 isolated from a sewage-treatment plantencodes nine different antibiotic-resistance determinants, twoiron-acquisition systems and other putative virulence-associated functions. Microbiology (Mosc.) 151:1095-1111 (2005). NUCLEOTIDE SEQUENCE. SZCZEPANOWSKI et al. The 120 592 bp IncF plasmid pRSB107 isolated from a sewage-treatment plantencodes nine different antibiotic-resistance determinants, twoiron-acquisition systems and other putative virulence-associated functions. Microbiology (Mosc.) 151:1095-1111 (2005). NUCLEOTIDE SEQUENCE. Vallenet D. et al., Comparative analysis of Acinetobacters: three genomes for three lifestyles. PLoS ONE 3:E1805-E1805 (2008). NUCLEOTIDE SEQUENCE. LEWENDON A. and SHAW W.V. The PKa of the catalytic histidine residue of chloramphenicol acetyltransferase, Biochem. J. (1993) 290, pp.15-19. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2008358353B2 (en) | 2013-11-07 |
| EP2303314B1 (en) | 2013-12-11 |
| KR101555731B1 (ko) | 2015-09-25 |
| US20100136037A1 (en) | 2010-06-03 |
| CA2728734A1 (en) | 2009-12-30 |
| CN102105163B (zh) | 2014-12-10 |
| ZA201009125B (en) | 2012-06-27 |
| RU2011100104A (ru) | 2012-07-20 |
| EP2303314A1 (en) | 2011-04-06 |
| AU2008358353A1 (en) | 2009-12-30 |
| EP2303314A4 (en) | 2012-07-18 |
| DK2303314T3 (da) | 2014-01-13 |
| JP5506792B2 (ja) | 2014-05-28 |
| US20120076806A1 (en) | 2012-03-29 |
| NZ590011A (en) | 2012-09-28 |
| US7943143B2 (en) | 2011-05-17 |
| IL209792A0 (en) | 2011-02-28 |
| US8367073B2 (en) | 2013-02-05 |
| US7722881B2 (en) | 2010-05-25 |
| KR20110039517A (ko) | 2011-04-19 |
| MX2010014082A (es) | 2011-04-07 |
| JP2011525914A (ja) | 2011-09-29 |
| US20090324629A1 (en) | 2009-12-31 |
| ES2445403T3 (es) | 2014-03-03 |
| WO2009157926A1 (en) | 2009-12-30 |
| BRPI0822826A2 (pt) | 2015-07-07 |
| IL209792A (en) | 2012-12-31 |
| CN102105163A (zh) | 2011-06-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KNOX | Development of vaccines against gastrointestinal nematodes | |
| RU2501565C2 (ru) | Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения | |
| JP5627581B2 (ja) | ソマトスタチン免疫原性増進のための組成物および方法 | |
| JP2013006862A (ja) | 免疫原性ｌｈｒｈ組成物およびそれに関する方法 | |
| WO2010050903A1 (en) | Chimeric flagellins for vaccines | |
| CN1187200A (zh) | 一种改良肽,免疫原性组合物和疫苗或医用制剂,一种针对激素lhrh免疫动物的方法,lhrh串联重复肽类似物及其作为疫苗的用途 | |
| TW201803590A (zh) | 包含免疫刺激性及抗原性多肽的酵母菌疫苗載體以及其使用方法 | |
| US11400151B2 (en) | Methods for improving immunological response in vaccinated animals | |
| JP2021127334A (ja) | 乳房炎の処置及び／又は予防のための組成物 | |
| RU2614115C1 (ru) | Рекомбинантный соматостатинсодержащий белок, способ его получения, инъекционный препарат для повышения мясной и молочной продуктивности сельскохозяйственных животных, а также способ использования препарата | |
| KR100499925B1 (ko) | 살모넬라증에 대한 면역을 유발하는 살모넬라 유래 특이단백질, 이를 코딩하는 유전자, 전기 단백질을 함유하는주사제 및 경구용 제제 | |
| JP2014033665A (ja) | ブリ細菌性溶血性黄疸の病原体抗原ポリペプチド、及びこれを含む水産用ワクチン |