[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

RU2489423C2 - Водорастворимые аналоги сс-1065 и их конъюгаты - Google Patents

Водорастворимые аналоги сс-1065 и их конъюгаты Download PDF

Info

Publication number
RU2489423C2
RU2489423C2 RU2008135440/04A RU2008135440A RU2489423C2 RU 2489423 C2 RU2489423 C2 RU 2489423C2 RU 2008135440/04 A RU2008135440/04 A RU 2008135440/04A RU 2008135440 A RU2008135440 A RU 2008135440A RU 2489423 C2 RU2489423 C2 RU 2489423C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
compound
fragment
another embodiment
isomer
formula
Prior art date
Application number
RU2008135440/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2008135440A (ru
Inventor
Патрик Хенри БЕСКЕР
ГРОТ Франсискус Маринус Хендрикус ДЕ
Лутц Ф. ТИТЦЕ
Феликс МАЙОР
Йоханнес Альбертус Фредерикус ЙОСТЕН
Хенри Йоханнес СПЕЙКЕР
Original Assignee
Синтарга Б.В.
Георг-Аугуст-Универзитет Геттинген Штифтунг Эффентлихен Рехтс (Оне Берайх Хуманмедицин)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Синтарга Б.В., Георг-Аугуст-Универзитет Геттинген Штифтунг Эффентлихен Рехтс (Оне Берайх Хуманмедицин) filed Critical Синтарга Б.В.
Publication of RU2008135440A publication Critical patent/RU2008135440A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2489423C2 publication Critical patent/RU2489423C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • C07D209/58—[b]- or [c]-condensed
    • C07D209/60—Naphtho [b] pyrroles; Hydrogenated naphtho [b] pyrroles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/02—Heterocyclic radicals containing only nitrogen as ring hetero atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новым соединениям формулы I:
Figure 00000123
или его фармацевтически приемлемым солям, где значения R1, R2, R3, R3', R4, R4', X2, X1, X3, X4, X5, R6, R7, R5', R6', R7', R14', R8, R9, R10, R11a, b, c приведены в пункте 1 формулы. Соединения проявляют противоопухолевую активность и могут быть использованы для получения фармацевтической композиции для лечения опухоли у млекопитающего. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 18 ил., 1 табл., 52 пр.

Description

ОБЛАСТЬ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новым аналогам DNA-связывающего алкилирующего агента CC-1065 и к их конъюгатам. Кроме того, настоящее изобретение относится к промежуточным соединениям для получения указанных агентов и их конъюгатов. Указанные конъюгаты созданы для того, чтобы выделять свои (многократно) полезные агенты после одной или более из стадий активации и/или со скоростью и в промежуток времени, контролируемый конъюгатом, для селективной доставки и/или управляемого выделения одного или более из указанных алкилирующих DNA агентов. Указанные агенты, конъюгаты и промежуточные соединения можно использовать для лечения заболеваний, которые характеризуются нежелательной (клеточной) пролиферацией. В качестве примера указанные агенты и указанные конъюгаты настоящего изобретения можно использовать для лечения опухолей.
ПРЕДПОСЫЛКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Дуокармицины, первые выделенные из культурального бульона вида Streptomyces, являются родоначальниками членов семейства противоопухолевых антибиотиков, которые также включают CC-1065. Указанные чрезвычайно эффективные агенты, как указывают, черпают свою биологическую активность из способности к последовательно-селективному алкилированию DNA по N3 аденину во второстепенных желобках, что инициирует каскад событий, который заканчивается механизмом гибели апоптотических клеток1. Хотя CC-1065 демонстрируют весьма эффективную цитотоксичность, их нельзя использовать в больницах из-за серьезной задержанной гепатотоксичности.2 Указанные наблюдения привели к разработке синтетических аналогов CC-1065 (См. CC-1065 производные, например, Aristoff et al., J. Org. Chan. 1992, 57, 6234; Boger et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996, 6, 2207; Boger et al., Chem. Rev. 1997, 97, 787; Milbank et al., J. Med. Chem. 1999, 42, 649; Atwell et al., J. Med. Chem. 1999, 42, 3400; Wang et al., J. Med. Chem. 2000, 43, 1541; Boger et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 2021; Parrish et al., Bioorg. Med. Chem. 2003, 11, 3815; Daniell et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 111; Tichenor et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 15683; Purnell et al., Bioorg. Med. Chem. 2006, 16, 5677; EP 0154445; WO 88/04659; WO 90/02746; WO 97/12862; WO 97/32850; WO 97/45411; WO 98/52925; WO 99/19298; WO 01/83482; WO 02/067937; WO 02/067930; WO 02/068412; WO 03/022806; WO 2004/101767 и WO 2006/043839), которые обычно демонстрируют аналогичную цитотоксичность, но пониженную гепатотоксичность. Кроме того, однако, указанные производные не обладают достаточной селективностью в отношении опухолевых клеток, так как селективность указанных агентов и цитотоксических агентов вообще в значительной степени основана на различиях в скорости пролиферации опухолевых клеток и нормальных клеток, и поэтому они также воздействуют на здоровые клетки, которые демонстрируют высокую скорость пролиферации. Обычно это приводит к серьезным побочным эффектам. Концентрации лекарств, которые могли бы полностью уничтожить опухоль, невозможно достичь из-за ограничивающих дозы побочных эффектов, таких как токсичность в отношении желудочно-кишечного тракта и костного мозга. Кроме того, опухоли могут вырабатывать устойчивость в отношении противораковых агентов после пролонгированного лечения. При современной разработке лекарств одной из основных целей следует признать обеспечение возможности направлять цитотоксические лекарства к месту локализации опухоли.
Один из обещающих подходов к достижению селективности в отношении опухолевых клеток или опухолевых тканей состоит в использовании существования связанных с опухолью антигенов, рецепторов и других восприимчивых фрагментов, которые могут служить мишенью. Такую мишень можно настроить или она может до некоторой степени специфически присутствовать в опухолевой ткани или в расположенной в тесной близости ткани, такой как неоваскулярная ткань, по отношению к другим тканям, чтобы достичь эффективного нацеливания на мишень. Было идентифицировано и обосновано множество мишеней, и был разработан ряд способов идентификации и обоснования мишеней3.
Путем присоединения лиганда, например, антитела или фрагмента антитела, для такого связанного с опухолью антигена, рецептора, или другого восприимчивого агента, указанный агент может быть селективно направлен на опухолевые ткани.
Другой обещающий подход к достижению селективности в отношении опухолевых клеток или опухолевых тканей состоит в использовании связанных с опухолью ферментов. Относительно высокий уровень опухолеспецифических ферментов может превращать фармакологически неактивное пролекарство, которое состоит из ферментного субстрата, прямо или косвенно связанного с токсическим лекарством, в соответствующее лекарство вблизи или внутри опухоли. Используя такую концепцию, высокие концентрации токсического противоракового агента можно селективно создать в сайте опухоли. Все опухолевые клетки можно уничтожить, если доза достаточно велика, что может уменьшить развитие устойчивых к лекарству опухолевых клеток.
Ферменты также были транспортированы в близость или внутрь мишеневых клеток или мишеневых тканей с помощью, например, пролекарственной терапии с использованием управляемого антителом фермента (ADEPT)4, пролекарственной терапии с использованием управляемого полимером фермента (PDEPT) или пролекарственной терапии с использованием управляемого макромолекулой фермента (MDEPT)5, пролекарственной терапии с использованием управляемого вирусом фермента (VDEPT)6 или пролекарственной терапии с использованием управляемого геном фермента (GDEPT)7. Используя ADEPT, например, нетоксичное пролекарство превращают в цитотоксическое соединение на поверхности мишеневой клетки за счет конъюгата антитело-фермент, который был предварительно нацелен на поверхность указанной клетки.
Еще один обещающий подход к достижению селективности в отношении опухолевых клеток или опухолевых тканей состоит в использовании эффекта повышенной проницаемости и удерживания (EPR эффект). За счет указанного EPR эффекта макромолекулы пассивно накапливаются в твердой опухоли вследствие нарушенной патологии ангиогенной опухолевой сосудистой сети с ее непрерывным эндотелием, приводящей к гиперпроницаемости для крупных макромолекул и к отсутствию эффекта лимфатического дренажа опухоли.8
Присоединяя терапевтический агент непосредственно или косвенно к макромолекуле, указанный агент можно селективно направить на опухолевую ткань.
Помимо эффективного нацеливания на мишень, другим критерием успешного применения направляемых конъюгатов цитотоксических агентов в терапии опухолей является то, что один или более из агентов эффективно выделяется из конъюгата. Следующий важный критерий состоит в том, что конъюгат является не токсичным или обладает лишь очень слабой токсичностью, тогда как сам по себе цитотоксический агент демонстрирует высокий уровень цитотоксичности. Еще одним важным критерием является то, что указанный конъюгат должен обладать соответствующими фармакологическими свойствами, такими как достаточная стабильность в циркуляции, слабая тенденция к агрегации и хорошая водорастворимость. Некоторые конъюгаты CC-1065 и их производные были раскрыты (см. для производных конъюгатов CC-1065, например, Suzawa et al., Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2175; Jeffrey et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 1344; Wang et al., Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 7854; WO 91/16324; WO 94/04535; WO 95/31971; US 5475092; US 5585499; US 5646298; WO 97/07097; WO 97/44000; US 5739350; WO 98/11101; WO 98/25898; US 5843937; US 5846545; WO 02/059122; WO 02/30894; WO 03/086318; WO 2005/103040; WO 2005/112919; WO 2006/002895; и WO 2006/110476). Указанные конъюгаты не обладают всеми перечисленными выше благоприятными свойствами. В качестве иллюстративного примера были раскрыты гликозидные конъюгаты seco CC-1065 аналогов (аналогов, в которых циклопропильное кольцо как присутствующее в CC-1065, "раскрыто"), которые можно активировать в сайте повреждения, используя ADEPT подход.9 Различие в цитотоксичности между указанными конъюгатами и соответствующими лекарственными средствами (коэффициент цитотоксичности, здесь определенный как
ИК50, конъюгат/ИК50,исходное лекарственное средство) было, однако, относительно невелико, и сами seco CC-1065 аналоги не демонстрировали исключительно высокую цитотоксичность. Повышение коэффициента цитотоксичности осуществляли за счет создания гликозидных конъюгатов к seco CC-1065 производных с вторичной отщепляемой группой.10 Хотя указанные конъюгаты демонстрировали высокий коэффициент цитотоксичности, их фармакологические свойства не были оптимальными. Например, они обладали плохой водорастворимостью, как следствие, присущее липофильной природе CC-1065 класса соединений.
Соответственно, безусловно существует необходимость в конъюгатах CC-1065 производных, которые демонстрировали бы высокий коэффициент цитотоксичности, содержали бы CC-1065 производные, которые обладали бы эффективной цитотоксичностью и благоприятными фармакологическими свойствами и эффективно выделяли бы CC-1065 производные.
КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение удовлетворяет вышеуказанным требованиям, предлагая соединения формул (I) или (II):
Figure 00000001
или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, где
R1 выбирают из галогена и OSO2Ru, где Ru выбирают из необязательно замещенного C1-6алкила, C1-6пергалогеноалкила, бензила и фенила;
R2 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8 алкила;
R3, R3', R4 и R4' независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-8 алкила, где
два или более из R2, R3, R3', R4 и R4' необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных карбоциклов или гетероциклов;
X2 выбирают из O, C(R14)(R14') и NR14', где R14 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила и где R14' может отсутствовать или может быть выбран из H и необязательно
замещенного C1-8алкила или ацила;
каждый R5, R5', R6, R6', R7 и R7' независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, Rk, SRk, S(О)Rk, S(О)2Rk, S(О)ORk, S(О)2ORk, OS(О)Rk, OS(О)2Rk, OS(О)ORk, OS(О)2ORk, ORk, NHRk, N(Rk)RL, +N(Rk)(RL)Rm, P(О)(ORk)(ORL), OP(О)(ORk)(ORL), SiRkRLRm, С(О)Rk, С(О)ORk, С(О)N(RL)Rk, OC(О)Rk, OC(О)ORk, OC(О)N(Rk)RL, N(RL)С(О)Rk, N(RL)С(О)ORk и N(RL)С(О)N(Rm)Rk, где Rk, RL и Rm независимо выбирают из H и необязательно замещенного С1-4алкила, С1-4гетероалкила, C3-7циклоалкила, C3-7гетероциклоалкила, C4-12арила или C4-12гетероарила, причем два или более из Rk, RL и Rm необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов,
и/или R5 + R5' и/или R6 + R6' и/или R7 + R7' независимо представляют =О, =S, или =NR12, где R12 выбран из H и необязательно замещенного C1-6алкила,
и/или R5' и R6', и/или R6' и R7', и/или R7' и R14' отсутствуют, что означает, что двойная связь присутствует между атомами, к которым присоединены R5' и R6', и/или R6' и R7', и/или R7' и R14', соответственно,
два или более из R5, R5', R6, R6', R7, R7', R14 и R14' необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов;
X1 выбирают из O, S, и NR13, где R13 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила;
X3 выбирают из O, S, и NR15, где R15 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила,
или -X3- представляет -X3a и X3b-, где X3a соединен с атомом углерода, к которому присоединен X4 и X3b присоединен к фенильному кольцу в орто-положении к R10, где X3a независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила и X3b выбирают из той же самой группы заместителей, что и R8;
X4 выбирают из N и CR16, где R16 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила;
X5 выбирают из O, S, и NR17, где R17 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила;
R8, R9, R10 и R11 каждый независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, RX, SRx, S(О)Rx, S(О)2Rx, S(О)ORx, S(О)2ORx, OS(О)Rx, OS(О)2Rx, OS(О)ORx, OS(О)2ORx, ORx, NHRX, N(Rx)Ry, +N(Rx)(Ry)Rz, P(О)(ORx)(ORy), OP(О)(ORx)(ORy), SiRxRyRz, С(О)Rx, С(О)ORx, С(О)N(Ry)Rx, OC(О)Rx, OC(О)ORx, OC(О)N(Rx)Ry, N(Ry)С(О)Rx, N(Ry)С(О)ORx, N(Ry)С(О)N(Rz)Rx, и водорастворимой группы, где Rx, Ry и Rz независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-15алкила, С1-15гетероалкила, C3-15циклоалкила, C3-15гетероциклоалкила, C4-15арила или C4-15гетероарила, один или более необязательных заместителей в Rx, Ry и Rz необязательно представляет водорастворимую группу, и два или более из Rx, Ry и Rz необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов, и по меньшей мере, один из R8, R9, R10 и R11 включает, по меньшей мере, одну водорастворимую группу, два или более из R8, R9, R10, R11, или X3b необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов;
a и b независимо выбирают из 0 и 1;
c выбирают из 0, 1 и 2;
при условии, что в соединении формулы (I), по меньшей мере, один из R2, R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет водород.
В другом аспекте рассматриваемое изобретение относится к соединению формулы (III):
Figure 00000002
или его фармацевтически приемлемой соли или его сольвату,
где V2 или отсутствует или представляет функциональный фрагмент;
каждый L2 независимо отсутствует или представляет связывающую группу, которая связывает V2 с L или с V1 или Y, если L отсутствует;
каждый L независимо отсутствует или представляет связывающую группу, которая связывает L2 или V2, если L2 отсутствует, с одним или более из V1 и/или Y;
каждый V1 независимо представляет H или условно-отщепляемый или условно-трансформируемый фрагмент, который может быть отщеплен или трансформирован в результате химического, фотохимического, физического, биологического или ферментативного процесса;
каждый Y независимо отсутствует или представляет самоуничтожающуюся спейсерную систему, которая состоит из 1 или более из самоуничтожающихся спейсеров и связана с V1, необязательно L, и одним или более из Z;
каждый p и q являются числами, представляющими степень разветвленности и каждый независимо является положительным целым числом;
z представляет положительное целое число, равное или меньше, чем полное число точек присоединения к Z в одном или более из V1-Y фрагментов;
каждый Z независимо представляет соединение формулы (I) или (II), как определено выше, где один или более из X1, R6, R7, R8, R9, R10 и R11 может необязательно, кроме того, быть замещен заместителем формулы (V):
Figure 00000003
где каждый V2', L2', L', V1', Y', Z', p', q' и z' имеет значения, указанные для V2, L2, L, V1 , Y, Z, p, q и z, где один или более из заместителей формулы (V) независимо соединен с одним или более из X1, R6, R7, R8, R9, R10 и R11 через Y' или V1', если Y' отсутствует,
каждый Z соединен с Y или V1, если Y отсутствует, или через X1 или через атом в R6, R7, R8, R9, R10 или R11;
при условии, что, по меньшей мере, один из одного или более из V1 и одного или более из V1' не представляет H.
Отмечается, что z не означает степень полимеризации; при этом z не указывает на то, что число фрагментов Z соединены один с другим.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (IV):
Figure 00000004
или его фармацевтически приемлемой соли или его сольвату, где
RM представляет реакционноспособный фрагмент и L, V1, Y, Z, p и z имеют указанные выше значения, за исключением того, что L теперь связывает RM с одним или более из V1 и/или Y, и V1, Y, и Z могут содержать защитные группы и один или более из V2'-L2' фрагментов, необязательно присутствующих в Z, как указано выше, может необязательно и независимо быть заменен RM', который представляет собой реакционноспособный фрагмент, и где, если в (IV) присутствует более одного реакционноспособного фрагмента, указанные реакционноспособные фрагменты одинаковы или различны. Указанные конъюгаты линкер-агент могут быть (или могут не быть) рассматриваемы как промежуточные соединения для соединений формулы (III).
Кроме того, настоящее изобретение относится к содержащим циклопропильное кольцо аналогам соединений формул (I) и (II), которые образованы в результате перегруппировки и сопутствующего удаления H-R1 из соответствующих seco соединений формул (I) и (II) (фиг.1). Считают, что указанные содержащие циклопропильное кольцо аналоги являются активными соединениями, которые, как считают, образуются из соединений формул (I) и (II) in vivo в результате указанной перегруппировки.
Настоящее изобретение относится к энантиомерно чистым и/или диастереоизомерно чистым соединениям формул (I)-(IV), также как и к энантиомерным и/или диастереоизомерным смесям соединений формул (I)-(IV).
Неожиданно было обнаружено, что соединения формулы (III) демонстрируют высокий показатель цитотоксичности, и кроме того, было показано, что родственные соединения формул (I) и (II) обладают высокой цитотоксичностью и более высокой растворимостью в воде, чем известные ранее аналогичные соединения. Указанные свойства делают соединения формулы (III) весьма подходящими для целей доставки лекарственных средств, включая такие применения, как доставка лекарственных средств к мишени и контролируемое выделение лекарств.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ
Фиг.1 иллюстрирует перегруппировку seco соединения в содержащее циклопропил соединение.
Фиг.2 иллюстрирует получение некоторых агентов путем присоединения алкилирующего DNA фрагмента и связывающего DNA фрагмента.
Фиг.3 иллюстрирует получение некоторых β-галактопиранозных конъюгатов настоящего изобретения.
Фиг.4 иллюстрирует получение связывающего DNA соединения 13.
Фиг.5 иллюстрирует получение связывающего DNA соединения 19.
Фиг.6 иллюстрирует получение связывающего DNA соединения 27.
Фиг.7 иллюстрирует получение связывающего DNA соединения 30.
Фиг.8 иллюстрирует получение соединений 37-39 из связывающего DNA соединения 41.
Фиг.9 иллюстрирует синтез агента 45.
Фиг.10 иллюстрирует синтез агента 33.
Фиг.11 иллюстрирует получение конъюгата 36.
Фиг.12 иллюстрирует синтез конъюгатов линкер-агент 47a-f.
Фиг.13 иллюстрирует синтез конъюгатов линкер-агент 48c-d.
Фиг.14 иллюстрирует получение конъюгатов линкер-агент 50a-c.
Фиг.15 иллюстрирует синтез активированных линкеров 57-60.
Фиг.16 иллюстрирует in vitro цитотоксичность конъюгатов 8a и 8a' в отношении клеточной линии человеческой карциномы легких А549.
Фиг.17 представляет схему лечения для in vivo эксперимента по схеме ADEPT.
Фиг.18 иллюстрирует объем опухолей у подвергавшейся лечению и у контрольной мыши в ADEPT in vivo эксперименте.
ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗБРЕТЕНИЯ
Представленное далее подробное описание приводится для более полного понимания настоящего изобретения.
Описания
Если нет других указаний, все использованные здесь технические и синтетические термины обычно имеют те же самые значения, которые обычно подразумевают специалисты в данной области.
Термин "антитело", в том смысле, как здесь использован, относится к полной длины молекуле иммуноглобулина, к иммунологически активной части полной длины молекулы иммуноглобулина, или к производному полной длины молекулы иммуноглобулина или его активной части, т.е. к молекуле, которая содержит связывающий антиген сайт, который иммуноспецифически связывает антиген представляющей интерес мишени или ее части, причем такие мишени включают, но ими не ограничиваются, опухолевые клетки. Иммуноглобулин может быть любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, и IgY), класса (например, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, и IgA2), или подкласса молекул иммуноглобулина. Иммуноглобулин можно получить из любых видов, например, людей, грызунов (например, мышей, крыс или хомяков), обезьян, овец, кроликов, коз, морских свинок, камелидов, лошадей, коров или кур, но предпочтительно, иммуноглобулин имеет человеческое, мышиное или кроличье происхождение. Антитела, которые можно использовать в рассматриваемом изобретении, включают, но ими не ограничиваются, моноклональные, поликлональные, биспецифические, человеческие, гуманизованные или химерические антитела, одноцепочечные антитела, Fv фрагменты, Fab фрагменты, F(ab') фрагменты, F(ab')2 фрагменты, фрагменты, полученные с использованием библиотеки Fab экспрессируемых последовательностей, анти-идиотипические антитела, CDR, и эпитопсвязывающие фрагменты любых из вышеперечисленных, которые иммуноспецифически связываются с представляющим интерес антигеном.
Термин "отщепляемая группа" относится к группе, которая может быть замещена другой группой. Такие отщепляемые группы хорошо известны специалистам, и примеры включают, но ими не ограничиваются, галогениды (фториды, хлориды, бромиды, иодиды), сульфонаты (например, метансульфонат, пара-толуолсульфонат и трифторметансульфонат), сукцинимид-N-оксид, пара-нитрофеноксид, пентафторфеноксид, тетрафторфеноксид, карбоксилат и алкоксикарбоксилат.
Термин "водорастворимая группа" относится к функциональной группе, которая хорошо сольватируется в водной среде и которая придает повышенную растворимость в воде соединению, к которому она присоединена. Примеры водорастворимых групп включают, но ими не ограничиваются, спирты и полиспирты, линейные или циклические сахариды, первичные, вторичные, третичные или четвертичные амины и полиамины, сульфатные группы, карбоксилатные группы, фосфатные группы, фосфонатные группы, аскорбатные группы, гликоли, включая полиэтиленгликоли и полиэфиры.
Термин "замещенный", если его используют как прилагательное к терминам "алкил", "гетероалкил", "циклоалкил", "гетероциклоалкил", "арил", "гетероарил", и т.п., указывает на то, что указанная "алкильная", "гетероалкильная", "циклоалкильная", "гетероциклоалкильная", "арильная" или "гетероарильная" группа содержит один или более из заместителей, которые включают, но ими не ограничиваются, OH, =О, =S, =NRh, =N-ORh, SH, NH2, NO2, NO, N3, CF3, CN, OCN, SCN, NCO, NCS, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галоген, Rh, SRh, S(О)Rh, S(О)ORh, S(О)2Rh, S(О)2ORh, OS(О)Rh, OS(О)ORh, OS(О)2Rh, OS(О)2ORh, OP(O)(ORh)(ORi), P(О)(ORh)(ORi), ORh, NHRi, N(Rh)Ri, +N(Rh)(Ri)Rj, Si(Rh)(Ri)(Rj), С(О)Rh, С(О)ORh, С(О)N(Ri)Rh, OC(О)Rh, OC(О)ORh, OC(О)N(Rh)Ri, N(Ri)С(О)Rh, N(Ri)С(О)ORh, N(Ri)С(О)N(Rj)Rh, и тио производные этих заместителей, или протонированные, или депротонированные формы любого из этих заместителей, где Rh, Ri и Rj независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-15алкила, C1-15гетероалкила, C3-15циклоалкила, C3-15гетероциклоалкила, C4-15арила или C4-15гетероарила или их комбинаций, причем два или более из Rh, Ri и Rj могут быть необязательно соединены с образованием одного или более из карбоциклов или гетероциклов.
Термин "арил", в том смысле, как здесь использован, относится к карбоциклическому ароматическому заместителю, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе. Примеры арильных групп включают, но ими не ограничиваются, фенил, нафтил и антраценил.
Термин "гетероарил", в том смысле, как здесь использован, относится к карбоциклическому ароматическому заместителю, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе, где, по меньшей мере, один атом углерода в одном из колец заменяют гетероатомом. Примеры гетероарильных групп включают, но ими не ограничиваются, пиридинил, фуранил, пирролил, триазолил, пиразолил, имидазолил, тиофенил, индолил, бензофуранил, бензимидазолил, индазолил, бензотриазолил, бензизоксазолил и хинолинил.
Термин "алкил", в том смысле, как здесь использован, относится к линейному или разветвленному, насыщенному или ненасыщенному углеводородному заместителю. Примеры алкильных групп включают, но ими не ограничиваются, метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, октил, децил, изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил, 2-метилбутил, винил, аллил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутиленил, 1-пентенил, и 2-пентенил.
Термин "гетероалкил", в том смысле, как здесь использован, относится к линейному или разветвленному, насыщенному или ненасыщенному углеводородному заместителю, в котором, по меньшей мере, один атом углерода заменен гетероатомом. Примеры включают, но ими не ограничиваются, метилоксиметил, этилоксиметил, метилоксиэтил, этилоксиэтил, метиламинометил, диметиламинометил, метиламиноэтил, диметиламиноэтил, метилтиометил, этилтиометил, этилтиоэтил и метилтиоэтил.
Термин "циклоалкил", в том смысле, как здесь использован, относится к насыщенному или ненасыщенному неароматическому карбоциклическому заместителю, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе. Примеры включают, но ими не ограничиваются, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклопентадиенил, циклогексенил, циклогексил, 1,3-циклогексадиенил, декалинил, и 1,4-циклогексадиенил.
Термин "гетероциклоалкил" в том смысле, как здесь использован, относится к насыщенному или ненасыщенному неароматическому циклическому углеводородному заместителю, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе, где, по меньшей мере, один атом углерода в одном из колец заменен гетероатомом. Примеры включают, но ими не ограничиваются, тетрагидрофуранил, пирролидинил, пиперидинил, 1,4-диоксанил, декагидрохинолинил, пиперазинил, оксазолидинил и морфолинил.
Окончание "-илен" в противоположность к "-ил", например, в "алкилен" в противоположность к "алкил" указывает, что указанный в качестве примера "алкилен" представляет двухвалентный фрагмент, соединенный с одним или двумя другими фрагментами через две ковалентные простые связи или через одну двойную связь в противоположность варианту, когда одновалентная группа соединена с одним фрагментом через одну ковалентную простую связь, как в указанном в качестве примера "алкиле". Термин "алкилен" поэтому относится к неразветвленному или разветвленному, насыщенному или ненасыщенному углеводородному фрагменту; термин "гетероалкилен" в том смысле, как здесь использован, относится к неразветвленному или разветвленному, насыщенному или ненасыщенному углеводородному фрагменту, в котором, по меньшей мере, один атом углерода заменен гетероатомом; термин "арилен" в том смысле, как здесь использован, относится к углеводородному ароматическому фрагменту, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе; термин "гетероарилен" в том смысле, как здесь использован, относится к углеводородному ароматическому фрагменту, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе, где по меньшей мере, один атом углерода в одном из колец заменен гетероатомом; термин "циклоалкилен" в том смысле, как здесь использован, относится к насыщенному или ненасыщенному неароматическому карбоциклическому фрагменту, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе; термин "гетероциклоалкилен" в том смысле, как здесь использован, относится к насыщенному или ненасыщенному неароматическому циклическому углеводородному фрагменту, который может состоять из одного кольца, или двух, или более колец, конденсированных вместе, где, по меньшей мере, один атом углерода в одном из колец заменен гетероатомом. Примеры двухвалентных фрагментов включают те примеры, которые приведены здесь для одновалентных групп, в которых удален один атом углерода.
Приставка "поли" в терминах "полиалкилен", "полигетероалкилен", "полиарилен", "полигетероарилен", полициклоалкилен", "полигетероциклоалкилен" и т.п., указывает на то, что два или более из таких "-илен" фрагментов, например, алкиленовых фрагментов, соединены вместе с образованием разветвленного или неразветвленного мультивалентного фрагмента, содержащего один или более из сайтов присоединения для соседних фрагментов.
Некоторые соединения настоящего изобретения обладают хиральными центрами или двойными связями; смеси энантиомерных, диастереомерных и геометрических двух или более изомеров, в любом сочетании, также как индивидуальные изомеры включены в объем настоящего изобретения.
Соединения настоящего изобретения могут также характеризоваться не природными соотношениями атомных изотопов у одного или более из атомов, которые составляют такие соединения. Подразумевается, что все изотопные варианты указанных соединений настоящего изобретения независимо от того, являются ли они радиоактивными или нет, включены в объем настоящего изобретения.
Фраза "фармацевтически активная соль" в том смысле, как здесь использована, относится к фармацевтически приемлемой, органической или неорганической соли соединения настоящего изобретения. Для соединения, содержащего одну или более из основных групп, например, аминогруппу, можно образовать соль присоединения кислоты. Для соединения, содержащего одну или более из кислотных групп, например, группу карбоновой кислоты, можно образовать соль присоединения основания. Для соединения, содержащего, и кислотные, и основные группы, можно образовать, кроме того, цвиттерионы в виде солей. В тех случаях, когда атомы с несколькими зарядами составляют часть фармацевтически приемлемой соли, она может иметь множество противоионов.
Фраза "фармацевтически приемлемый сольват" относится к ассоциации одной или более из молекул растворителя с соединением настоящего изобретения. Примеры растворителей, которые образуют фармацевтически приемлемые сольваты, включают, но ими не ограничиваются, воду, изопропиловый спирт, этанол, метанол, ДМСО, этилацетат и уксусную кислоту.
Термин "конъюгат" здесь и далее относится к соединению формулы (III).
Термин "конъюгат линкер-агент" здесь и далее относится к соединению формулы (IV).
Термин "агент" здесь и далее относится к соединениям формул (I), (II), (VII), (VIII), (I') или (II').
Термин "направляющий к мишени фрагмент" относится к любой молекуле, которая специфически связывается или реакционно ассоциируется, или комплексуется с фрагментом, специфически или в относительном избытке присутствующем на или вблизи мишеневого сайта, на, в или вблизи мишеневой клетки, или в (в близости) мишеневой ткани или в мишеневом органе, например, в рецепторе, рецепторном комплексе, субстрате, антигенной детерминанте или другом рецептивном фрагменте, или к молекуле, которая может направлять указанный конъюгат к указанному мишеневому сайту, используя другие механизмы, за счет своей природы, например, за счет EPR эффекта. Примеры направляющего к мишени фрагмента включают, но ими не ограничиваются, аптамер, антитело или фрагмент антитела, полимер, дендример, лектин, биологический респонсивный модификатор, фермент, витамин, фактор роста, стероид, сахарный остаток, олигосахаридный остаток, белок-носитель и гормон или любую их комбинацию.
Фраза "фрагмент, который улучшает фармакокинетические свойства соединения", относится к фрагменту, который изменяет фармакокинетические свойства соединения настоящего изобретения таким образом, что может быть достигнут улучшенный терапевтический эффект. Указанный фрагмент может, например, повысить водорастворимость, увеличить время циркуляции или снизить иммуногенность.
Термин "связывающая группа" относится к структурному элементу соединения, который связывает один структурный элемент указанного соединения с одним или более из других структурных элементов указанного того же самого соединения.
Фразу "число, представляющее степень разветвленности" используют для обозначения того, что число подстрочного индекса, следующее за закрывающейся скобкой, показывает, как много единиц фрагмента, представленного внутри скобок, непосредственно присоединено к фрагменту, расположенному сразу слева от соответствующей открывающейся скобки. Например, A-(B)b, где b является числом, представляющим степень разветвленности, означает, что каждая из b единиц B непосредственно присоединена к A. Это, в свою очередь, означает, что если b=2, формула сокращается до B-A-B.
Фразу "число, представляющее степень полимеризации" используют для обозначения того, что подстрочный индекс, следующий за закрывающейся скобкой, показывает, как много единиц фрагмента, представленного внутри скобок, соединены друг с другом.
Например, -(B)b, где b обозначает число, представляющее степень полимеризации, означает, что если b=2, формула сокращается до A-B-B.
Термин "спейсер однократного выделения" относится к самоуничтожающемуся спейсеру, который может выделить один фрагмент после самоуничтожения.
Термин "спейсер многократного выделения" относится к самоуничтожающемуся спейсеру, который может выделить два или более компонента после повторного самоуничтожения.
Термин "электронно каскадный спейсер" относится к самоуничтожающемуся спейсеру, или разветвленному или неразветвленному, который может самоуничтожаться в результате одного или более из 1,2+2n электронных каскадных уничтожений (n≥1).
Термин "ω-амино аминокарбонильный циклизационный спейсер" относится к самоуничтожающемуся спейсеру, который может уничтожаться в результате циклизационного процесса при образовании циклического производного мочевины.
Термин "спейсерная система" относится к одному спейсерному фрагменту, или к двум, или более из одинаковых или различных спейсерных фрагментов, соединенных вместе. Спейсерная система может быть разветвленной или неразветвленной и может содержать один или более из сайтов присоединения для Z, также как для V1 и необязательно для L.
В указанном документе и в формуле изобретения глаголы "включать", "иметь", "содержать" и их объединенные варианты используют в их нелимитирующем смысле, который подразумевает, что предметы, последующие или предшествующие глаголу, включены, но предметы, упомянутые не конкретно, не исключены. Кроме того, ссылки на элемент с неопределенным артиклем "a" или "an" не исключают возможности того, что присутствует более чем один элемент, если только из контекста конкретно не следует, что существует один и только один из элементов. Неопределенный артикль "a" или "an" таким образом означает "по меньшей мере, один".
В общих структурах на протяжении рассматриваемого описания и в пунктах формулы изобретения буквы используют для определения структурных элементов. Некоторые из этих букв могут совпадать с обозначением атома, такого как C, N, O, P, K, B, F, S, U, V, W, I и Y. Во избежание недоразумений, следует различать обозначения структурных элементов и атомов.
Если присутствует одно или более из прилагательных и/или определяющих выражений у существительного, которое является a) первым в списке существительных или b) которое находится в любом месте в середине списка существительных, указанное существительное и прилагательное вместе предваряются словом "и", прилагательное относится не только к указанному существительному, но и ко всем следующим существительным отдельно, если только в контексте нет других указаний. Это, например, означает, что фраза "необязательно замещенный С1-4 алкил, С1-4гетероалкил, C3-7циклоалкил, или C3-7гетероциклоалкил" следует читать как "необязательно замещенный С1-4алкил, необязательно замещенный С1-4гетероалкил, необязательно замещенный C3-7циклоалкил или необязательно замещенный C3-7гетероциклоалкил".
На протяжении всего описания и в формуле изобретения представлены изображения молекулярных структур или их частей. Как обычно, на таких изображениях связи между атомами представлены линиями, в некоторых случаях, для обозначения стереохимии, жирными, или пунктирными, или клинообразными линиями. Обычно линия, оканчивающаяся в пространство ("свободный" конец), т.е. с одного конца отсутствует другая линия или конкретный атом, соединенный с ней, представляет CH3 группу. Это справедливо для рисунков, представляющих соединения, в соответствии с рассматриваемым изобретением. Для таких структур, представляющих структурный элемент соединения в соответствии с рассматриваемым изобретением, линия, оканчивающаяся в пространстве, может указывать на положение присоединения другого структурного элемента указанного соединения. Это обозначается волнистой линией, перпендикулярной и к пересекающей "свободную" линию в большинстве рисунков.
Кроме того, указанные структуры или их части были изображены с учетом допущения, что структуры считывают слева направо, что означает, например, что на рисунках соединений формулы (III) V2 всегда расположен слева (если присутствует) и Z всегда расположен справа у таких структур.
В описании использованы следующие сокращения и они имеют указанные определения: Aloc: аллилоксикарбонил; Asc: аскорбат; Boc=трет-бутилоксикарбонил; DCC=N,N'-дициклогексилкарбодиимид; DIPEA: диизопропилэтиламин; DME: 1,2-диметоксиэтан; DMF=N,N-диметилформамид; Fmoc=9-флуоренилметилоксикарбонил; HOBt: 1-гидроксибензотриазол; HOSu=N-гидроксисукцинимид; NMM: N-метилморфолин; PABA=пара-аминобензиловый спирт; PBS: солевой раствор, буферированный фосфатом; PNP=пара-нитрофеноксид; PNPC1=пара-нитрофенилхлорформиат; PNP2O=бис(пара-нитрофенил)карбонат; SCID: тяжелый осложненный иммунодефицит; TFA: трифторуксусная кислота; THF: тетрагидрофуран.
Агенты, конъюгаты линкер-агент и конъюгаты
В настоящем изобретении предложены новые агенты, которые можно классифицировать как принадлежащие к классу связывающих DNA алкилирующих агентов CC-1065 и дуокармицинов. Кроме того, рассматриваемое изобретение относится к новым конъюгатам указанных агентов и к конъюгатам линкер-агент, которые могут или не могут служить в качестве промежуточных соединений для получения указанных конъюгатов.
Предполагают, что указанные агенты настоящего изобретения можно использовать для лечения заболеваний, которые характеризуются нежелательной (клеточной) пролиферацией. Например, агент настоящего изобретения можно использовать для лечения опухоли, рака, аутоиммунного заболевания или инфекционного заболевания.
Предполагают, что указанные конъюгаты настоящего изобретения в одном аспекте должны быть применимы для направления агентов формул (I) и (II) к специфическому мишеневому сайту, где указанный конъюгат может быть превращен в один или более из агентов или его можно индуцировать для превращения в один или более из указанных агентов. Настоящее изобретение может, кроме того, найти применение в (неспецифическом) контролируемом выделении одного или более из указанных агентов из конъюгата, с целью, например, улучшения фармакокинетических свойств.
Неожиданно было обнаружено, что соединения формулы (III) демонстрируют высокий коэффициент цитотоксичности, и, кроме того, было показано, что родственные соединения формул (I) и (II) являются высоко цитотоксичными и лучше растворяются в воде, чем известные ранее аналогичные соединения. Не связываясь с какой-либо теорией, можно предположить, что объяснением высокого коэффициента цитотоксичности может быть присутствие водорастворимой группы у такого агента в комбинации с несколько экранированным углеродом, к которому присоединена отщепляемая группа. Повышенная водорастворимость агента может привести к тому, что соединение сможет легче достигать свою (внутриклеточную) мишень и, таким образом, повысить свою цитотоксичность после выделения из конъюгата, хотя это также может уменьшить агрегацию конъюгата и уменьшить побочные эффекты конъюгата, связанные с преждевременным выделением агента из конъюгата, так как высвобожденный агент может оказаться менее эффективным в проникновении в (не мишеневые) клетки благодаря своей повышенной полярности. Стерические затруднения могут уменьшить прямое алкилирование биомолекул конъюгатом и не-DNA алкилирование агентом, тем самым снижая аспецифическую (цито)токсичность. Таким образом, инвентивная концепция объединения водорастворимости и стерического экранирования в соединениях формул (I) и (II) может привести к получению агентов, которые лучше растворяются в воде и более селективны и обладают повышенным коэффициентом цитотоксичности для конъюгатов настоящего изобретения.
Агенты
В одном аспекте в рассматриваемом изобретении предложено соединение формулы (I) или (II):
Figure 00000005
или его фармацевтически приемлемая соль, или сольват, где
R1 выбирают из галогена и OSO2Ru, где Ru выбирают из необязательно замещенного C1-6алкила, C1-6пергалогеналкила, бензила и фенила;
R2 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила;
R3, R3', R4 и R4' независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила, где два или более из R2, R3, R3', R4 и R4' необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных карбоциклов или гетероциклов;
X2 выбирают из O, C(R14)(R14') и NR14', где R14 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила и где R14' может отсутствовать или может быть выбран из H и необязательно
замещенного C1-8алкила или ацила;
каждый из R5, R5', R6, R6', R7 и R7' независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, Rk, SRk, S(О)Rk, S(О)2Rk, S(О)ORk, S(О)2ORk, OS(О)Rk, OS(О)2Rk, OS(О)ORk, OS(О)2ORk, ORk, NHRk, N(Rk)RL, +N(Rk)(RL)Rm, P(О)(ORk)(ORL), OP(О)(ORk)(ORL), SiRkRLRm, С(О)Rk, С(О)ORk, С(О)N(RL)Rk, OC(О)Rk, OC(О)ORk, OC(О)N(Rk)RL, N(RL)С(О)Rk, N(RL)С(О)ORk и N(RL)С(О)N(Rm)Rk, где Rk, RL и Rm независимо выбирают из H и необязательно замещенного С1-4алкила, С1-4гетероалкила, C3-7циклоалкила, C3-7гетероциклоалкила, C4-12арила или C4-12гетероарила, причем два или более из Rk, RL и Rm необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов,
и/или R5 + R5' и/или R6 + R6' и/или R7 + R7' независимо представляют =О, =S, или =NR12, где R12 выбирают из H и необязательно замещенного C1-6алкила,
и/или R5' и R6', и/или R6' и R7', и/или R7' и R14' отсутствуют, что означает, что двойная связь присутствует между атомами, к которым присоединены R5' и R6', и/или R6' и R7', и/или R7' и R14', соответственно,
два или более из R5, R5', R6, R6', R7, R7', R14 и R14' необязательно соединены с образованием одного или более из необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов;
X1 выбирают из O, S, и NR13, где R13 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила;
X3 выбирают из O, S, и NR15, где R15 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила,
или -X3- представляет -X3a и X3b-, где X3a соединен с атомом углерода, к которому присоединен X4 и X3b присоединен к фенильному кольцу в орто-положении к R10, где X3a независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила и X3b выбирают из той же самой группы заместителей, что и R8;
X4 выбирают из N и CR16, где R16 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила;
X5 выбирают из O, S, и NR17, где R17 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила;
R8, R9, R10 и R11 каждый независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, RX, SRx, S(О)Rx, S(О)2Rx, S(О)ORx, S(О)2ORx, OS(О)Rx, OS(О)2Rx, OS(О)ORx, OS(О)2ORx, ORx, NHRX, N(Rx)Ry, +N(Rx)(Ry)Rz, P(О)(ORx)(ORy), OP(О)(ORx)(ORy), SiRxRyRz, С(О)Rx, С(О)ORx, С(О)N(Ry)Rx, OC(О)Rx, OC(О)ORx, OC(О)N(Rx)Ry, N(Ry)С(О)Rx, N(Ry)С(О)ORx, N(Ry)С(О)N(Rz)Rx, и водорастворимой группы, где Rx, Ry и Rz независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-15алкила, С1-15гетероалкила, C3-15циклоалкила, C3-15гетероциклоалкила, C4-15арила или C4-15гетероарила, одного или более из необязательных заместителей в Rx, Ry и Rz необязательно представляют водорастворимую группу, и два или более из Rx, Ry и Rz необязательно соединены с образованием одного или более из необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов, и по меньшей мере, один из R8, R9, R10 и R11 включает, по меньшей мере, одну водорастворимую группу, два или более из R8, R9, R10, R11, или X3b необязательно соединены с образованием одного или более из необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов;
a и b независимо выбирают из 0 и 1;
c выбирают из 0, 1 и 2;
при условии, что в соединении формулы (I), по меньшей мере, один из R2, R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет водород.
Следует понимать, что настоящее изобретение относится к энантиомерно чистым и/или диастереомерно чистым соединениям формул (I) и (II), также как к энантиомерным и/или диастереоизомерным смесям соединений формул (I) и (II).
Рассмотрения эффектов заместителей в соединениях формул (I) и (II) и в их содержащих циклопропил аналогах, представленные в рассматриваемом документе, представлены без допущения конкретного механизма действия соединений формул (I) и (II) и их содержащих циклопропил-аналогов.
R1 в соединениях формул (I) или (II) представляет отщепляемую группу. В одном варианте настоящего изобретения отщепляемая группа R1 в соединениях формул (I) или (II) представляет галогенид. В другом варианте R1 выбирают из хлорида (Cl), бромида (Br) и иодида (I). В еще одном варианте R1 представляет хлорид (Cl). В еще одном варианте R1 представляет бромид (Br). Варьируя отщепляемую группу R1, можно регулировать алкилирующую активность seco агентов и влиять на скорость трансформации seco агента в содержащий циклопропил агент. Если способность отщепляться группы R1 слишком велика, это может привести к тому, что seco агент станет также алкилирующим агентом, что может уменьшить коэффициент цитотоксичности конъюгатов соединений формул (I) и (II), так как указанный агент может быть способен алкилировать, при этом все еще оставаясь связанным в конъюгате. С другой стороны, если R1 представляет слишком плохо отщепляемую группу, seco агент не сможет обеспечить замыкание с образованием содержащего циклопропил агента, который, как считают, является активным элементом, который может уменьшить его цитотоксичность и, наиболее вероятно, уменьшить коэффициент цитотоксичности.
Другим средством регулирования алкилирующей активности seco агентов и их содержащих циклопропил производных может быть некоторое экранирование углерода, к которому присоединена отщепляемая группа, или по которому может осуществляться нуклеофильная атака, за счет выбора, по меньшей мере, одного из присутствующих R2, R3, R3', R4, R4', R5 и R5', которые отличаются от водорода. Экранирование указанного углерода может уменьшить специфическое алкилирование соединениями формул (I) и (II) и их содержащими циклопропил аналогами и также их конъюгатами. Хотя введение стерических затруднений может также повлиять на степень алкилирования DNA, и может оказаться разумным предположить, что аспецифическое алкилирование может быть затронуто относительно сильнее, чем алкилирование DNA, так как последнее происходит, по-видимому, после того, как агент идеально расположен для нуклеофильной атаки, будучи связан с второстепенным желобком DNA. Углерод, к которому присоединен R1 в соединении формулы (II), и который является вторичным атомом углерода, уже до некоторой степени экранирован по сравнению с углеродом, к которому присоединен R1 в соединении формулы (I), если R2 представляет H. В этом отношении соединение формулы (II) можно сравнить с соединением формулы (I), в котором R2 отличается от водорода. Дальнейшее экранирование можно, однако, осуществить за счет выбора одного или более из R3, R3', R4, R4', R5 и R5', которые должны отличаться от водорода.
В одном варианте R2 в соединении формулы (I) представляет необязательно замещенный C1-8алкил. В другом варианте R2 представляет необязательно замещенный линейный C1-8алкил. В другом варианте R2 представляет незамещенный линейный C1-8алкил. В другом варианте R2 представляет метил.
Альтернативно или одновременно стерическое экранирование углерода, к которому присоединен R1, можно ввести, выбирая один или более из R3, R3', R4 и R4' отличающиеся от водорода. В одном варианте R3, R3', R4 и R4' каждый представляет H. В другом варианте R3 и R3' оба представляют Н. В другом варианте R4 и R4' оба представляют Н. В другом варианте один из R3 и R3' представляет C1-8алкил, тогда как другой представляет H. В другом варианте один из R4 и R4' представляет C1-8алкил, тогда как другой представляет H. В другом варианте один из R3 и R3' представляет C1-8алкил и один из R4 и R4' представляет C1-8алкил, тогда как другие представляют H. В другом варианте оба R3 и R3' независимо выбирают из C1-8алкила. В другом варианте оба R4 и R4' независимо выбирают из C1-8алкила. В другом варианте R2 представляет H и один из R3, R3', R4 и R4' выбирают из C1-8алкила. В другом варианте R2 представляет H и один из R3, R3', R4 и R4' выбирают из метила. В другом варианте R2 представляет H и два из R3, R3', R4 и R4' независимо выбирают из C1-8алкила. В еще одном варианте R2 представляет H и два из R3, R3', R4 и R4' представляют метил.
На алкилирующую активность соединений формул (I) или (II) или их циклопропилсодержащих аналогов может также влиять природа X1. Природа X1 может влиять на скорость, с которой и на условия, при которых осуществляется замыкание кольца seco агентов с образованием циклопропильных аналогов и/или на скорость, с которой циклопропильные кольца раскрываются в результате нуклеофильной атаки DNA, и таким образом влияет на характер алкилирования. В одном варианте X1 представляет O.
Заместители R5, R5', R6, R6', R7, R7', и X2, также как и размер кольца (колец), соединенных с левой стороной кольца, содержащего X1, могут, например, каждый независимо или два, или более, взятые вместе, влиять на фармакокинетические свойства агента, влиять на водорастворимость, влиять на характер агрегации, влиять на процесс алкилирования DNA, или влиять на прочность связывания DNA. Кроме того, особенно R5 и R5' могут также влиять на степень экранирования углерода, при которой может иметь место нуклеофильная атака. В одном варианте R5 и R5' оба представляют Н. В другом варианте, по меньшей мере, один из R5 и R5' не представляет водород. В другом варианте R5 не представляет водород. В другом варианте R2 представляет водород и, по меньшей мере, один из R5 или R5' не представляют водород. В еще одном варианте R5 выбирают из нитро, галогена, амино, гидрокси и необязательно замещенного алкиламино, алкилкарбониламино, алкоксикарбониламино, алкилокси, алкилкарбонилокси, алкиламинокарбонилокси, или С1-4алкила. В еще одном варианте R5 представляет необязательно замещенный линейный С1-4алкил. В другом варианте R5 представляет незамещенный линейный С1-4алкил. В другом варианте R5 представляет метил.
Хотя скорость алкилирования и эффективность соединений, похожих на соединения формул (I) и (II), можно регулировать различными способами, в одном из аспектов настоящего изобретения этого достигают, вводя пространственное экранирование, выбирая для соединения формулы (I), по меньшей мере, один из присутствующих R2, R3, R3', R4, R4', R5 и R5' отличающимся от водорода и для соединения формулы (II) необязательно одного или более из присутствующих R2, R3, R3', R4, R4', R5 и R5' отличающимся от водорода.
В одном аспекте настоящего изобретения соединения формул (I) и (II) можно представить соединениями формул (Ia) и (IIa), соответственно:
Figure 00000006
В одном варианте R6 и R7 в (Ia) и (IIa), оба, представляют Н.
В другом аспекте настоящего изобретения соединения формул (I) и (II) можно представить соединениями формул (Ib) и (IIb), соответственно:
Figure 00000007
В одном варианте X2 в (Ib) или (IIb) представляет N.
В одном варианте X2 в (Ib) или (IIb) представляет CH.
В одном варианте R5, R6 и R7 в (Ib) или (IIb) каждый представляет H.
В одном варианте R5, R6 и R7 в (Ib) или (IIb) каждый представляет H и X2 представляет CH.
В другом варианте R5 и R7 в (Ib) или (IIb) каждый представляет H и R6 представляет CO2Me.
В другом варианте R5 и R7 в (Ib) или (IIb) каждый представляет H и R6 представляет OMe.
В другом варианте R5 и R7 в (Ib) или (IIb) каждый представляет H и R6 представляет CN.
В еще одном варианте R5 в (Ib) или (IIb) выбирают из нитро, галогена, амино, гидрокси и необязательно замещенного алкиламино, алкилкарбониламино, алкоксикарбониламино, алкилокси, алкилкарбонилокси, алкиламинокарбонилокси или С1-4алкила. В еще одном варианте R5 в (Ib) или (IIb) представляет необязательно замещенный линейный С1-4алкил. В другом варианте R5 в (Ib) или (IIb) представляет незамещенный линейный С1-4алкил. В другом варианте R5 в (Ib) или (IIb) представляет метил.
В еще одном аспекте соединения формул (I) и (II) можно представить соединениями формул (Ic) и (IIc), соответственно:
Figure 00000008
В одном варианте X2 в (Ic) или (IIc) представляет NH.
В другом варианте R6 и R7 в (Ic) или (IIc) представляют H и CO2CH3, соответственно, и X2 представляет NH.
В другом варианте R7 и R6 в (Ic) или (IIc) представляют H и CO2CH3, соответственно, и X2 представляет NH.
В другом варианте R6 в (Ic) или (IIc) представляет CH3 и X2 представляет NH.
В еще одном аспекте соединения формул (I) и (II) можно представить соединениями формул (Id) и (IId), соответственно:
Figure 00000009
В одном варианте X2 в (Id) или (IId) представляет NH.
В одном варианте R6 и R6' в (Id) или (IId) вместе представляют =О.
В другом варианте R7 и R7' в (Id) или (IId) представляют CO2CH3 и CH3, соответственно.
В другом варианте в соединениях формулы (Id) или (IId), X2 представляет NH, R6 и R6' вместе представляют =О, и R7 и R7' представляют CO2CH3 и CH3, соответственно.
В одном варианте X3 представляет NH.
В другом варианте X3 представляет O.
В одном варианте X4 представляет CH.
В одном варианте X5 представляет О.
Водорастворимую группу представляет группа, которая придает повышенную растворимость соединениям формул (I) и (II) по сравнению с известными ранее аналогичными соединениями. Такая группа может также предотвратить или уменьшить агрегацию соединений настоящего изобретения или уменьшить побочные эффекты. Примеры водорастворимых групп включают, но ими не ограничиваются, -NH2, -NH-, -NHRa, -NRa-, -N(Ra)(Rb), -+N(Ra)(Rb)-, -+N(Ra)(Rb)(Rc), -COOH, -COORa, -OP(О)(OH)2, -OP(О)(OH)O-, -OP(О)(ORa)O-, -OP(О)(OH)ORa, -OP(О)(ORb)ORa, -P(О)(OH)2, -P(О)(OH)O-, -P(О)(ORa)OH, -P(О)(ORa)O-, -P(О)(ORa)(ORb), -OS(O)2OH, -OS(О)2О-, -OS(О)2ORa, -S(О)2OH, -S(О)2О-, -S(О)2ORa, -OS(О)OH, -OS(О)O-, -OS(O)ORa, -S(О)OH, -S(О)O-, -OS(O)-, -S(О)ORa, -OS(О)2-, -OS(О)2Ra, -S(О)2-, -S(О)2Ra, -OS(О)Ra, -S(O)- -S(О)Ra, -OH, -SH, -(OCH2CH2)vOH, -(OCH2CH2)V'O-, -(OCH2CH2)v'ORa, сахарный фрагмент, олигосахаридный фрагмент и олигопептидный фрагмент, или их протонированную, или депротонированную форму, и кроме того, любую их комбинацию, где Ra, Rb и Rc независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-3 алкила, где два или более из Ra, Rb и Rc необязательно соединены с образованием одного или более из карбоциклов или гетероциклов, и v' представляет целое число, выбранное из 1-100. Водорастворимая группа может находиться в любом положении внутри R8, R9, R10 и/или R11 или может целиком составлять R8, R9, R10 или R11 фрагмент. Водорастворимая группа может, например, быть расположена в любом внутреннем положении, может быть частью основной цепи, частью кольцевой структуры, может быть функциональной группой, подвешенной к основной цепи или кольцу, или может находиться в положении, в котором R8, R9, R10 или R11 заместитель присоединен к остальной части молекулы.
В одном варианте один из R8, R9, R10 и R11 содержит водорастворимую группу.
В другом варианте один из R8, R9 и R10 содержит водорастворимую группу.
В еще одном варианте R8 содержит водорастворимую группу.
В еще одном варианте R9 содержит водорастворимую группу.
В еще одном варианте R10 содержит водорастворимую группу.
В одном варианте водорастворимую группу представляет группа карбоновой кислоты.
В другом варианте водорастворимую группу представляет аминогруппа.
В еще одном варианте водорастворимую группу представляет первичная аминогруппа.
В другом варианте водорастворимую группу представляет вторичная аминогруппа.
В другом варианте водорастворимую группу представляет третичная аминогруппа.
В другом варианте водорастворимую группу представляет четвертичная аминогруппа.
В одном варианте водорастворимую группу представляет диметиламиногруппа.
В другом варианте водорастворимую группу представляет морфолиногруппа.
В еще одном варианте водорастворимую группу представляет группа l-метилпиперидин-4-ила.
В еще одном варианте водорастворимую группу представляет метиламиногруппа.
В еще одном варианте водорастворимую группу представляет группа пиперидин-4-ила.
В еще одном варианте водорастворимую группу представляет амино (NH2) группа.
В еще одном варианте водорастворимую группу представляет N-метил-N-(карбоксиметил)аминогруппа.
В еще одном варианте, водорастворимую группу представляет N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)аминогруппа.
В еще одном варианте водорастворимой группой не является эфирная группа (-O-, -ORa), независимо от того, является ли она олигоэфирной или полиэфирной группой.
В еще одном варианте водорастворимую группу не представляет амидная группа, независимо от того, является ли она олигопептидной или полипептидной группой.
В еще одном варианте водорастворимую группу не представляет первичная, вторичная или третичная аминогруппа, азот которой непосредственно соединен (и таким образом конъюгирован) с ароматическим фрагментом, или вторичная, или третичная аминогруппа является частью ароматического фрагмента, где атом азота является атомом в ароматической кольцевой системе.
В еще одном варианте водорастворимую группу не представляет гидроксильная группа, соединенная с ароматической кольцевой системой.
В одном варианте R8, R9, R10, или R11 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O-, и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте R8, R9, или R10 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O-, и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте R8 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O-, и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте R9 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O-, и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте R10 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O-, и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В одном варианте R8, R9, R10 или R11 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси и 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино.
В другом варианте R8, R9 или R10 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси и 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино.
В другом варианте R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси и 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино.
В одном варианте R8 представляет 2-(морфолин-4-ил)этокси.
В другом варианте R8 представляет (1-метилпиперидин-4-ил)метокси.
В еще одном варианте R8 представляет 2-(N,N-диметиламино)этокси.
В еще одном варианте R8 представляет 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино.
В еще одном варианте R9 представляет 2-(N,N-диметиламино)этокси.
В еще одном варианте R10 представляет 2-(N,N-диметиламино)этокси.
В другом варианте R8, R9, R10 или R11 выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R8, R9, R10 или R11 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R8, R9, или R10 выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси, и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R8 выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N- диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R9 выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси, и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R10 выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R8 представляет 2-(метиламино)этокси.
В еще одном варианте R8 представляет 2-аминоэтокси.
В еще одном варианте R8 представляет 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси.
В еще одном варианте R8 представляет 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
Если один из R8, R9, R10 или R11 содержит водорастворимую группу, другие заместители могут, каждый, независимо представлять или водород, или заместитель, содержащий другую водорастворимую группу или заместитель, не содержащий водорастворимую группу.
В одном варианте R9, R10 и R11, каждый, представляет водород.
В одном варианте R8 содержит водорастворимую группу и R9, R10 и R11, каждый, представляет водород.
В другом варианте R8 содержит водорастворимую группу и R9 представляет метокси.
В другом варианте R9 представляет метокси и R10 и R11, каждый, представляет водород.
В другом варианте R8 содержит водорастворимую группу и R9 представляет метокси и R10 и R11, каждый, представляет водород.
В следующем варианте R8 представляет 2-(N,N-диметиламино)этокси, R9 представляет метокси и R10 и R11 каждый представляет водород.
В другом варианте R9 или R10 представляют заместитель, содержащий водорастворимую группу, и R8 не представляет водород.
В другом варианте R9 представляет заместитель, содержащий водорастворимую группу, и R8 не представляет водород.
В другом варианте R10 представляет заместитель, содержащий водорастворимую группу, и R8 не представляет водород.
В другом варианте R8 выбирают из
Figure 00000010
где X33 выбирают из O, S и NR15, где R15 имеет указанные выше значения, Ra и Rb имеют указанные выше значения, и NRaRb соединен с фенильным кольцом через любой из атомов углерода 1-4.
В другом варианте NRaRb соединен с фенильным кольцом через атомы углерода 2 или 4.
R8 может также быть заместителем формулы:
Figure 00000011
где X3', X4', Xs', R8', R9', R10' и R11' имеют указанные выше значения для X3, X4, Xs, R8, R9, R10 и R11, соответственно, за исключением того, что R8', R9', R10' и R11' не должны содержать водорастворимую группу, если другая водорастворимая группа уже присутствует в R8, R9, R10 или R11 и где R8" может быть выбран из H и необязательно замещенного C1-5алкила или C1-5гетероалкила и необязательно соединен с R9 или R11 с образованием необязательно замещенного алифатического или ароматического гетероцикла.
В одном варианте R8 или R8" и R11 и/или R8' и R11' могут быть соединены с образованием вместе со связывающими атомами необязательно замещенного дигидропиррола.
Соединения формул (I) и (II) в качестве одного из преимуществ обладают повышенной водорастворимостью по сравнению с известными ранее аналогичными соединениями. Присутствие, например, группы карбоновой кислоты или вторичной алифатической аминогруппы может значительно повысить водорастворимость. В то же самое время такая группа может воспрепятствовать проникновению соединений формул (I) или (II) через биологический барьер, особенно если наличествует неполярный барьер, такой как клеточная мембрана. Это может оказаться преимуществом, особенно если соединение формулы (I) или (II) доставляют в мишеневую клетку, используя конъюгирование с направляющим к мишени фрагментом до того, как он выделится из конъюгата. Если соединение формулы (I) или (II) преждевременно выделяется из конъюгата, например, при циркуляции, оно может оказаться неспособным или очень мало способным проникать в (не мишеневые) клетки аспецифически, так как его способность к мембранным транслокациям может быть ослаблена. Это может привести к повышению селективности, и поэтому к уменьшению побочных эффектов.
В одном варианте R2 не представляет водород.
В другом варианте R2 представляет H и, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H.
В другом варианте R2 представляет H, X1 представляет O, и, по меньшей мере, один из R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, и по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет О, и по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, Xs представляет O, X3 представляет NR15, и по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CH, X5 представляет O, X3 представляет NH, и по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8, R9, R10, или R11 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8, R9, или R10 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R9 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R10 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8, R9, R10, или R11 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8, R9, или R10 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, Xs представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X4 представляет CR16, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X4 представляет CR16, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H, R10 и R11 оба представляют Н и R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте в соединениях формул (Ib) или (IIb) R2 представляет H, X1 представляет O, X2 представляет CR14, X4 представляет CR16, X5 представляет O, X3 представляет NR15, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H, R10 и R11, оба, представляют Н, R9 выбирают из H и OMe и R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте R2 представляет H, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R8 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте R2 представляет H, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H и R9 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте R2 представляет H, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H, и R10 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В другом варианте R2 представляет H, по меньшей мере, один из присутствующих R3, R3', R4, R4', R5 и R5' не представляет H, и R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В одном варианте R5 не представляет NO2.
В другом варианте, по меньшей мере, один из заместителей R1, R2, R3, R3', R4, R4', R5, R5', R6, R6', R7, R7', R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 и R17 содержит или является фрагментом COOH.
В другом варианте, по меньшей мере, один из заместителей R1, R2, R3, R3', R4, R4', R5, R5', R6, R6', R7, R7', R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 и R17 содержит или является фрагментом COOH, и если существует всего один COOH фрагмент и указанный COOH фрагмент содержится в R8, R9, R10 или R11, существует, по меньшей мере, другая водорастворимая группа, присутствующая в R8, R9, R10 или R11.
В другом варианте, по меньшей мере, один из заместителей R8, R9, R10 и R11 содержит или является фрагментом COOH.
В другом варианте, по меньшей мере, один из заместителей R8, R9, R10 и R11 содержит или является фрагментом COOH и существует, по меньшей мере, другая водорастворимая группа, присутствующая в R8, R9, R10 или R11.
В другом варианте, по меньшей мере, одна из водорастворимых групп в R8, R9, R10 и R11 представляет алифатический фрагмент вторичного амина, который не конъюгирован с ароматическим фрагментом или карбонильной группой.
В еще одном варианте R8 выбирают из
Figure 00000012
В еще одном варианте, по меньшей мере, одна из водорастворимых групп в R8, R9, R10 и R11 представляет алифатический фрагмент вторичного амина, который не конъюгирован с ароматическим фрагментом или карбонильной группой и, по меньшей мере, один из заместителей R1, R2, R3, R3', R4, R4', R5, R5', R6, R6', R7, R7', R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 и R17 содержит или является фрагментом COOH.
В еще одном варианте, по меньшей мере, одна из водорастворимых групп в R8, R9, R10 и R11 представляет алифатический фрагмент вторичного амина, который не конъюгирован с ароматическим фрагментом или карбонильной группой и, по меньшей мере, один из заместителей R8, R9, R10 и R11 содержит или является фрагментом COOH.
В еще одном варианте, по меньшей мере, один из заместителей R8, R9, R10 и R11 содержит COOH фрагмент и алифатический фрагмент вторичного амина, который не конъюгирован с ароматическим фрагментом или карбонильной группой.
В одном варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой (Ib1):
Figure 00000013
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров, где R8a представляет заместитель, содержащий водорастворимую группу и R9a представляет H или необязательно замещенный C1-15алкокси.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой (Ib2):
Figure 00000014
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров, где R8a' представляет заместитель, содержащий водорастворимую группу, и R9a' представляет H или необязательно замещенный C1-15алкокси.
В одном варианте настоящее изобретение относится к соединениям формул (Ib1) или (Ib2), где R8a или R8a', соответственно, выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(О)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O- и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила, причем последний необязательно замещен COOH или COOR300, где R300 представляет С1-4алкил.
В одном варианте настоящее изобретение относится к соединениям формул (Ib1) или (Ib2), где R8a или R8a', соответственно, выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси, и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте настоящее изобретение относится к соединению формулы (Ib1), где R8a выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси.
В другом варианте настоящее изобретение относится к соединению формулы (Ib1) где R8a выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси и R9a представляет H.
В другом варианте настоящее изобретение относится к соединению формулы (Ib1), где R8a выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси,
2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси и R9a представляет метокси.
В одном варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000015
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров, где R1a представляет хлор (Cl) или бром (Br), R2a и R5b представляют метил и H, соответственно, или H и метил, соответственно, R8d выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси и R9d выбирают из H и метокси.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000016
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000017
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000018
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000019
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В еще одном варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000020
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В еще одном варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000021
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В еще одном варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000022
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В еще одном варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000023
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой (Ib3):
Figure 00000024
или его (1R) изомером или смесью двух изомеров, где R5a имеют указанные выше значения для R5, за исключением того, что он не может представлять водород.
В одном варианте R5a в соединении формулы (Ib3) выбирают из нитро, галогена, амино, гидрокси, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного алкилкарбониламино, необязательно замещенного алкоксикарбониламино, необязательно замещенного алкилокси, необязательно замещенного алкилкарбонилокси, необязательно замещенного алкиламинокарбонилокси и необязательно замещенного С1-4алкила. В еще одном варианте R5a в соединении формулы (Ib3) представляет необязательно замещенный линейный С1-4алкил. В другом варианте R5a в соединении формулы (Ib3) представляет незамещенный линейный С1-4алкил. В другом варианте R5a в соединении формулы (Ib3) представляет метил.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой (Ib3-1):
Figure 00000025
или его (1R) изомером, или смесью двух изомеров, где каждый R100a независимо представляет метил, карбоксиметил, 2-метокси-2-оксоэтил или водород.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено формулой:
Figure 00000026
или его (1R) изомером, или смесью двух изомеров.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формул (I') или (II'):
Figure 00000027
где все заместители имеют указанные выше значения для соединений формул (I) и (II). Предполагают, что соединения формул (I) и (II) должны превращаться in vivo в соединения (I') и (II'), соответственно, с сопутствующим удалением H-R1, что схематически представлено на фиг.1 для соединения формулы (I).
Поэтому настоящее изобретение относится к соединениям формул (I') или (II'), причем указанные соединения содержат циклопропильную группу, которая образована в результате перегруппировки и сопутствующего удаления H-R1 из соединений формул (I) или (II).
Следует понимать, что в рассматриваемом описании и формуле изобретения при упоминании соединений формул (I) или (II) также включена ссылка на соединения формул (I') или (II'), соответственно, если только речь не идет о структурных частях (I) и (II), которые не присутствуют в (I') и (II'), или если в контексте не имеются другие указания. Аналогично, если имеется ссылка на структурную часть (фрагмент), конъюгат линкер-агент, или конъюгат формулы (I) или (II), они включают ссылки на аналогичные структурные части (фрагменты), конъюгаты линкер-агент, или конъюгаты формул (I') или (II'), соответственно, если только речь не идет о структурных частях соединений (I) и (II), не присутствующих в (I') и (II') или если в контексте имеются другие указания.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формул (VII) или (VIII):
Figure 00000028
или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам, где
R1 выбирают из галогена и OSO2Ru, где Ru выбирают из необязательно замещенного C1-6алкила, C1-6пергалогеналкила, бензила и фенила;
R2 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила;
R3, R3', R4 и R4' независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила, где два или более из R2, R3, R3', R4 и R4' необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных карбоциклов или гетероциклов;
X2 выбирают из O, C(R14)(R14'), и NR14', где R14 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила и где R14' может отсутствовать или может быть выбран из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила;
каждый R5, R5', R6, R6', R7 и R7' независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, Rk, SRk, S(О)Rk, S(О)2Rk, S(О)ORk, S(О)20Rk, OS(O)Rk, OS(О)2Rk, OS(О)ORk, OS(О)2ORk, ORk, NHRk, N(Rk)RL, +N(Rk)(RL)Rm, P(О)(ORk)(ORL), OP(О)(ORk)(ORL), SiRkRLRm, С(О)Rk, С(О)ORk, С(О)N(RL)Rk, OC(О)Rk, OC(О)ORk, OC(О)N(Rk)RL, N(RL)С(О)Rk, N(RL)С(О)ORk, и N(RL)С(О)N(Rm)Rk, где Rk, RL и Rm независимо выбирают из H и необязательно замещенного С1-4алкила, С1-4гетероалкила, C3-7циклоалкила, C3-7гетероциклоалкила, C4-12арила, или C4-12гетероарила, где два или более из Rk, RL и Rm необязательно соединены с образованием одного или более из необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов,
и/или R5 + R5', и/или R6 + R6', и/или R7 + R7' независимо представляют =О, =S, или =NR12, причем R12 выбирают из H и необязательно замещенного C1-6алкила,
и/или R5' и R6', и/или R6' и R7', и/или R7' и R14' отсутствуют, что означает, что двойная связь присутствует между атомамами, к которым присоединены R5' и R6', и/или R6' и R7', и/или R7' и R14', соответственно, причем два или более из R5, R5', R6, R6', R7, R7', R14 и R14' необязательно соединены с образованием одного или более из необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов;
X1 выбирают из O, S, и NR13, где R13 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила;
X3 выбирают из O, S, и NR15, где R15 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила,
или -X3- представляет -X3a и X3b-, где X3a соединен атомом углерода, к которому присоединен X4 и X3b соединен с фенильным кольцом в орто-положении к R10, где X3a независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила и X3b выбирают из той же самой группы заместителей, что и R8;
X4 выбирают из N и CR16, где R16 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила;
X5 выбирают из O, S, и NR17, где R17 выбирают из H и необязательно замещенного C1-8алкила или ацила;
R8, R9, R10 и R11 каждый независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, RX, SRx, S(О)Rx, S(О)2Rx, S(О)ORx, S(О)2ORx, OS(О)Rx, OS(О)2Rx, OS(О)ORx, OS(О)2ORx, ORx, NHRX, N(Rx)Ry, +N(Rx)(Ry)Rz, P(О)(ORx)(ORy), OP(О)(ORx)(ORy), SiRxRyRZ, С(О)Rx, С(О)ORx, С(О)N(Ry)Rx, OC(О)Rx, OC(О)ORx, OC(О)N(Rx)Ry, N(Ry)С(О)Rx, N(Ry)С(О)ORx, N(Ry)С(О)N(Rz)Rx, и водорастворимой группы, где Rx, Ry и RZ независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-15алкила, C1-15гетероалкила, C3-15циклоалкила, C3-15гетероциклоалкила, C4-15арила, или C4-15гетероарила, причем один или более необязательных заместителей в Rx, Ry и Rz необязательно представляют водорастворимую группу, и два или более из RX Ry и Rz необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов, и по меньшей мере, один из R8, R9, R10 и R11 включает, по меньшей мере, одну водорастворимую группу, два или более из R8, R9, R10, R11, или X3b необязательно соединены с образованием одного или более из необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов;
a и b независимо выбирают из 0 и 1;
c выбирают из 0, 1 и 2;
при условии, что
a) по меньшей мере, один из заместителей R1, R2, R3, R3', R4, R4', R5, R5', R6, R6', R7, R7', R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 и R17 содержит или является фрагментом COOH, и если присутствует только один COOH фрагмент и указанный COOH фрагмент содержится в R8, R9, R10 или R11, существует, по меньшей мере, другая водорастворимая группа, присутствующая в R8, R9, R10 или R11, и/или
b) по меньшей мере, одна из водорастворимых групп в R8, R9, R10 и R11 представляет алифатический фрагмент вторичного амина, который не конъюгирован с ароматическим фрагментом или карбонильной группой и/или
c) R8 выбирают из
Figure 00000029
и/или
d) R9 представляет OMe и R8 представляет OCH2CH2N(CH3)2.
Соединения формул (VII) и (VIII) обладают водорастворимостью, которая выше, чем водорастворимость аналогичных соединений, известных ранее. Конъюгаты соединений формул (VII) и (VIII) могут поэтому обладать улучшенными свойствами по сравнению с конъюгатам аналогичных соединений, известных ранее. Конъюгаты формул (VII) и (VIII) могут, например, обладать повышенной водорастворимостью, могут демонстрировать меньшую способность к агрегации, и демонстрировать меньше побочных эффектов, так как преждевременное выделение соединений формул (VII) или (VIII) из таких конъюгатов до того, как такой конъюгат проникает в мишеневую клетку, высвобождает соединение, которое менее эффективно проникает в клетки, включая не мишеневые клетки, из-за его повышенной полярности по сравнению с соединениями, у которых нет водорастворимой группы. Необязательное присутствие группы карбоновой кислоты или вторичной алифатической аминогруппы в соединениях формул (VII) или (VIII), кроме того, обеспечивает удобную (дополнительную) возможность для получения конъюгатов.
Следует заметить, что предполагаемые свойства и варианты, предложенные для вышеуказанных соединений формул (I) и (II), также применимы к соединениям формул (VII) и (VIII), если только они не касаются структурных частей соединений (I) и (II), которые не присутствуют в (VII) и (VIII), или в контексте нет других указаний. Поэтому необходимо понимать, что в рассматриваемом описании и формуле изобретения, когда речь идет о соединениях формул (I) или (II), они включают ссылки на соединения формул (VII) или (VIII), соответственно, если только речь не идет о структурных частях соединений (I) и (II), которые не присутствуют в (VII) и (VIII), или в контексте нет других указаний. Аналогично если речь идет о структурной части (фрагменте), конъюгате линкер-агент или конъюгатах формул (I) или (II), они включают ссылки на аналогичные структурные части (фрагменты), конъюгаты линкер-агент или конъюгаты формул (VII) или (VII), соответственно, если только речь не идет о структурных частях (I) и (II), которые не присутствуют в (VII) и (VIII) или в контексте нет других указаний. Аналогично если ссылаются на соединения формул (I') или (II'), следует понимать, что они включают ссылки на содержащие циклопропил аналоги соединений (VII) или (VIII), если только речь не идет о структурных частях (I') и (II'), не присутствующих в содержащих циклопропил аналогах (VII) и (VIII) или в контексте нет других указаний.
Конъюгаты и конъюгаты линкер-агент
В другом аспекте настоящее изобретение относится к конъюгатам соединений формул (I) или (II), которые могут превратиться in vivo в соединения формул (I) или (II) в одну или более стадий, соответственно. Указанные конъюгаты могут благоприятно влиять на фармакокинетические свойства и другие характеристики соединений формул (I) или (II). В одном варианте настоящее изобретение относится к конъюгату, включающему соединение формулы (I) или (II), конъюгированное с, по меньшей мере, одним профрагментом, т.е. фрагментом, который может быть удален in vivo с выделением соединений формул (I) или (II). В другом варианте настоящее изобретение относится к конъюгату, включающему соединение формулы (I) или (II), конъюгированное с одним профрагментом.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы (III):
Figure 00000030
или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвату, где
V2 или отсутствует, или представляет функциональный фрагмент;
каждый L2 независимо отсутствует или представляет связывающую группу, связывающую V2 с L или с V1, или Y, если L отсутствует;
каждый L независимо отсутствует или представляет связывающую группу, связывающую L2 или V2, если L2 отсутствует, с одним или более из V1 и/или Y;
каждый V1 независимо представляет H или условно-отщепляемый, или условно-трансформируемый фрагмент, который можно отщепить или трансформировать, используя химический, фотохимический, физический, биологический или ферментативный процесс.
каждый Y независимо отсутствует или представляет самоуничтожающуюся спейсерную систему, которая состоит из 1 или более из самоуничтожающихся спейсеров и связана с V1, необязательно L, и одним или более из Z;
каждый p и q представляет числа, представляющие степень разветвленности, и каждый независимо представляет положительное целое число;
z представляет положительное целое число, равное или меньше, чем полное число сайтов присоединения для Z в одном или более из V1-Y фрагментов;
каждый Z представляет независимо соединение формулы (I) или (II), как указано выше, где один или более из X1, R6, R7, R8, R9, R10 и R11 может необязательно, кроме того, быть замещен заместителем формулы (V):
Figure 00000031
где каждый V2', L2', L', V1', Y', Z', p', q' и z' имеет указанные выше значения для V2, L2, L, V1, Y, Z, p, q, и z, причем один или более из заместителей формулы (V) независимо соединен с одним или более из X1, R6, R7, R8, R9, R10 и R11 через Y' или V1', если Y' отсутствует,
каждый Z соединен c Y или V1, если Y отсутствует, или через X1, или через атом в R6, R7, R8, R9, R10 или R11;
при условии, что, по меньшей мере, один из одного или более из V1 и одного или более из V1' не представляет H.
Следует понимать из формулы (III), что L может быть соединен или с V1 и/или с Y. Если L соединен с Y, это означает, что оба V1 и L, также как один или более из Z, соединены с Y. Если Y отсутствует, L должен быть соединен с V1; L не может быть непосредственно соединен с Z.
V2(-L2-L(-V'-Y)p)q(Z)z-1 и один или более из V2' (-L2'-L'(-V1'-Y')P')q'(Z')z'-1 фрагментов, соединенных с соединением формулы (I) или (II), в рассматриваемом описании именуют профрагментами.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (IV):
Figure 00000032
или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвату, где
RM представляет реакционноспособный фрагмент и L, V1, Y, Z, p и z имеют указанные выше значения, за исключением того, что L теперь связывает RM с одним или более из V1 и/или Y, и V1, Y и Z могут содержать защитные группы и один или более из V2'-L2' фрагментов, необязательно присутствующих в Z, как указано выше, может необязательно и независимо быть заменен RM', который представляет реакционноспособный фрагмент, и где, если присутствует более одного реакционноспособного фрагмента в (IV), реакционноспособные фрагменты одинаковы или различны. Указанные конъюгаты линкер-агент можно или нельзя рассматривать как промежуточные соединения для соединения формулы (III).
RM-L(-V1-Y)p(Z)z-1 и один или более из RM'-L'(-V1'-Y')P'(Z')z'-1 фрагментов, соединенных с соединением формулы (I) или (II) в рассматриваемом описании, именуют как профрагменты.
Следует понимать, что рассматриваемое изобретение относится к энантиомерно чистым и/или диастереоизомерно чистым соединениям формул (III) и (IV) так же, как и к энантиомерным и/или диастереоизомерным смесям соединений формул (III) и (IV).
Если один или более из Y и/или V1 фрагментов в соединениях формул (III) или (IV) содержит сайты присоединения для Z, которые не присоединены к Z, например как результат неполной реакции присоединения в процессе синтеза, считают, что указанные сайты присоединения присоединены вместо этого к H, OH или к отщепляемой группе. Если все из указанных сайтов присоединения соединены с Z, тогда z равно числу указанных сайтов присоединения; иначе, z оказывается меньше. Соединения настоящего изобретения могут существовать в виде смеси, где каждый компонент смеси имеет различные значения z. Например, соединения могут существовать в виде смеси двух отдельных соединений, причем у одного соединения z=4, а у другого соединения z=3. Кроме того, для конкретного значения z соединений могут существовать в виде смеси изомеров, так как Z может быть соединен с различными наборами сайтов присоединения в одном или более из Y и/или V1 фрагментов.
Для ясности, если имеется ссылка на соединение одного первого фрагмента с другими фрагментами в формулах (III) или (IV), обычно упоминаются только те другие указанные фрагменты, которые непосредственно следуют за указанным первым фрагментом в формулах (III) или (IV). Следует понимать, что если один из указанных других фрагментов отсутствует, указанный первый фрагмент на деле соединен с фрагментом, который является первым присутствующим, если только нет других указаний. Например, если указано, что "V1 отщепляют из Y", эта фраза в действительности означает, что "V1 отщепляют из Y, или из Z, если Y отсутствует", и тогда ее следует читать как "V1 отщепляют из Z", если речь идет о соединении, в котором Y отсутствует.
В соединениях формул (III) или (IV), соединения формул (I) или (II) могут быть конъюгированы с профрагментом за счет его водорастворимой группы. В таком случае водорастворимая группа может вносить меньший вклад в водорастворимость соединений формул (III) или (IV), но может снова вносить вклад в водорастворимость Z после удаления указанного профрагмента.
В указанном документе, всюду, где бы ни упоминались V2, L2, L, V1, Y, Z, RM, p, q или z, необходимо понимать, что то же самое применимо к каждому из V2', L2', L', V1', Y', Z', RM', p', q' или z', соответственно.
V1 фрагмент
В соединениях формул (III) или (IV) V1 фрагмент может представлять группу, которая условно отщепляема или трансформируема. Другими словами, она сконструирована так, чтобы быть трансформированной и/или отщепляемой из Y под действием химических, фотохимических, физических, биологических или фенментативных процессов после того, как попадает в некоторые условия. Такими условиями могут быть, например, помещение соединения настоящего изобретения в водную среду, что приводит к гидролизу V1, или помещение соединения настоящего изобретения в среду, которая содержит фермент, который распознает и отщепляет V1, или помещение соединения настоящего изобретения в восстанавливающие условия, что приводит к восстановлению и/или удалению V1, или приведение соединения настоящего изобретения в контакт с радиацией, например, под действием УФ излучения, что приводит к трансформации и/или отщеплению, или нагревание соединения настоящего изобретения, что приводит к трансформации и/или отщеплению, или помещение соединения настоящего изобретения в условия пониженного давления, что приводит к трансформации, например, к гетероциклоприсоединению, и/или отщеплению, или помещение соединения настоящего изобретения в условия повышенного или высокого давления, что приводит к трансформации и/или отщеплению. Такие условия могут возникнуть после введения соединения настоящего изобретения животному, например, млекопитающему, например человеку: указанные условия могут возникнуть, если соединение локализовано, например, в конкретном органе, ткани, клетке, субклеточной мишени или микробной мишени, например, в присутствии внешних факторов (например, мишенеспецифических ферментов или при гипоксии) или при применении внешних факторов (например, под действием радиации, магнитных полей) или указанные условия могут встретиться уже сразу после введения (например, под действием убиквитарных ферментов).
Обычно трансформация V1 прямо или косвенно приводит к отщеплению V1 из Y. Соединение настоящего изобретения может содержать более чем один V1 фрагмент на профрагмент (p и/или q>1). Указанные V1 фрагменты могут или могут не быть одинаковыми или могут требовать или могут не требовать одинаковых условий для трансформации и/или отщепления.
В одном аспекте настоящего изобретения конъюгат используют для нацеливания одного или более из фрагментов Z на мишеневые клетки. В этом случае V1 фрагмент может, например, содержать молекулу субстрата, которая отщепляется под действием фермента, присутствующего в близости к мишеневым клеткам или внутри мишеневых клеток, например, опухолевых клеток. V1 может, например, содержать субстрат, который отшепляется под действием фермента, присутствующего в повышенных количествах в близости от или внутри мишеневых клеток по сравнению с другими частями тела, или под действием фермента, который присутствует только вблизи от или внутри мишеневых клеток.
Важно осознавать, что если специфичность мишеневых клеток достигается только на основании селективной трансформации и/или отщепления указанного V1 в мишеневом сайте, условия, вызывающие отщепление, должны быть предпочтительно, по меньшей мере, до некоторой степени, специфическими для мишеневых клеток, тогда как присутствие других мишенеспецифических фрагментов в соединении настоящего изобретения, например в V2 фрагменте, снижает или снимает это требование. Например, если V2 вызывает селективную интернализацию в мишеневые клетки, фермент, также присутствующий в других клетках, может трансформировать и/или отщеплять V1. В одном варианте трансформация и/или отщепление V1 происходит внутриклеточно. В другом варианте трансформация и/или отщепление V1 происходит внеклеточно.
В одном варианте V1 содержит ди-, три-, тетра- или олигопептид, который состоит из аминокислотной последовательности, распознаваемой протеолитическим ферментом, например плазмином, катепсином, катепсином B, простатоспецифическим антигеном (PSA), активатором плазминогена типа урокиназы (u-PA) или членом семейства матриксных металлопротеиназ, присутствующим в близости или внутри мишеневых клеток, например, опухолевых клеток. В одном варианте V1 представляет пептид. В другом варианте V1 представляет дипептид. В другом варианте V1 представляет трипептид. В другом варианте V1 представляет тетрапептид. В еще одном варианте V1 представляет пептидомиметик.
В другом варианте V1 содержит β-глюкуронид, который распознается β-глюкуронидазой, присутствующей вблизи или внутри опухолевых клеток.
В одном варианте V1 содержит субстрат для фермента.
В одном варианте V1 содержит субстрат для внеклеточного фермента.
В другом варианте V1 содержит субстрат для внутриклеточного фермента.
В еще одном варианте V1 содержит субстрат для лизосомального фермента.
В еще одном варианте V1 содержит субстрат для плазмина серинпротеазы.
В еще одном варианте V1 содержит субстрат для одного или более из катепсинов, например, катепсина B.
В еще одном варианте V1 содержит субстрат для галактозидазы.
Если V1 отщепляют внеклеточно, один или более из Z фрагментов может быть выделен внеклеточно.
Это может обеспечить преимущество в том, что указанные Z фрагменты не только способны влиять на клетку (клетки), непосредственно окружающие сайт активации (например, мишенепозитивные клетки), но также клетки, находящиеся на некотором отдалении от сайта активации (например, мишененегативные клетки) благодаря диффузии (эффект наблюдателя).
Фермент, который отщепляет V1, может также быть транспортирован вблизи или внутрь мишеневых клеток или мишеневой ткани с помощью, например, пролекарственной терапии с использованием направляемого антителом фермента (ADEPT), пролекарственной терапии с использованием направляемого полимером фермента (PDEPT) или пролекарственной терапии с использованием направляемого макромолекулой фермента (MDEPT), пролекарственной терапии с использованием направляемого вирусом фермента (VDEPT) или пролекарственной терапии с использованием направляемого геном фермента (GDEPT).
В одном варианте трансформация и/или отщепление V1 происходит за счет фермента, связанного с антителом.
И снова в другом варианте V1 содержит фрагмент, например нитро(гетеро)ароматический фрагмент, который может быть трансформирован и/или отщеплен путем восстановления в условиях гипоксии или путем восстановления с использованием нитроредуктазы. После восстановления нитрогруппы и отщепления образовавшегося фрагмента удаление спейсерной системы Y, если она присутствует, приводит к выделению одного или более из фрагментов Z.
В одном варианте рассматриваемое изобретение относится к соединению, в котором V1 представляет моносахарид, дисахарид или олигосахарид из гексоз или пентоз или гептоз, которые могут также быть включены в группу дезоксисахаров или аминосахаров и принадлежат к D-ряду или L-ряду и в дисахаридах или олигосахаридах одинаковы или различны. Такой V1 обычно отщепляется гликозидазой.
В другом варианте V1 имеет формулу C(ORa')Rb'CHRc'Rd', где Ra' представляет гидроксизащитную группу, необязательно замещенную C1-8алкильную группу, которая необязательно образует кольцо с R5, R5', R6, R6', R7, R7', R14 или R14', или моносахаридный, дисахаридный или олигосахаридный остаток, необязательно замещенный метильной группой, гидроксиметильной группой и/или радикалом формулы -NRe'Rf', где Re' и Rf' одинаковы или различны и их выбирают из водорода, C1-6алкила или аминозащитной группы и где гидроксигруппы сахаридных остатков необязательно защищены; Rb', Rc' и Rd' независимо выбирают из водорода, необязательно замещенного C1-8алкила или C1-8циклоалкила, или группы формулы -NRe'Rf', где Re' и Rf' имеют указанные выше значения.
В одном варианте рассматриваемое изобретение относится к конъюгату, в котором V1 представляет дипептидный, трипептидный, тетрапептидный или олигопептидный фрагмент, состоящий из природных L аминокислот, не природных D аминокислот или синтетических аминокислот, или пептидомиметиков, или любых их комбинаций.
В другом варианте рассматриваемое изобретение относится к соединению, в котором V1 включает трипептид. Трипептид может быть связан через свой C-конец с Y. В одном варианте остаток C-концевой аминокислоты трипептида выбирают из аргинина, цитруллина и лизина, причем остаток средней аминокислоты трипептида выбирают из аланина, валина, лейцина, изолейцина, метионина, фенилаланина, циклогексилглицина, триптофана и пролина, остаток N-концевой аминокислоты трипептида выбирают из любых природных или не природных аминокислот.
В другом варианте рассматриваемое изобретение относится к соединению, в котором V1 включает дипептид. Дипептид может быть связан через свой C-конец с Y. В одном варианте остаток C-терминальной аминокислоты дипептида выбирают из аланина, аргинина, цитруллина, и лизина и остаток N-концевой аминокислоты дипептида выбирают из любых природных или не природных аминокислот.
В одном варианте, если α-аминогруппа N-концевой аминокислоты V1 не соединена с L, указанная аминокислота может быть функционализирована подходящей блокирующей группой, соединенной с α-аминогруппой, или может быть не природной аминокислотой, так что предотвращается нежелательное преждевременное разложение V1 под действием, например, убиквитарных ферментов или экзопептидаз.
В следующем варианте V1 выбирают из D-аланилфенилаланиллизина, D-валиллейциллизина, D-аланиллейциллизина, D-валилфенилаланиллизина, D-валилтриптофаниллизина, D-аланилтриптофаниллизина, аланилфенилаланиллизина, валиллейциллизина, аланиллейциллизина, валилфенилаланиллизина, валилтриптофаниллизина, аланилтриптофаниллизина, D-аланилфенилаланилцитруллина, D-валиллейцилцитруллина, D-аланиллейцилцитруллина, D-валилфенилаланилцитруллина, D-валилтриптофанилцитруллина, D-аланилтриптофанилцитруллина, аланилфенилаланилцитруллина, валиллейцилцитруллина, аланиллейцилцитруллина, валилфенилаланилцитруллина, валилтриптофанилцитруллина и аланилтриптофанилцитруллина.
В еще одном варианте V1 выбирают из фенилаланиллизина, валиллизина, валилаланина, D-фенилаланилфенилаланиллизина, фенилаланилфенилаланиллизина, глицилфенилаланиллизина, аланиллизина, валилцитруллина, N-метилвалилцитруллина, фенилаланилцитруллина, изолейцилцитруллина, триптофаниллизина, триптофанилцитруллина, фенилаланиларгинина, фенилаланилаланина, глицилфенилаланиллейцилглицина, аланиллейцилаланиллейцина, аланиларгиниларгинина, фенилаланил-N9-тозиларгинина, фенилаланил-N9-нитроаргинина, лейциллизина, лейцилцитруллина и фенилаланил-O-бензоилтреонина.
В следующем варианте V1 выбирают из фенилаланиллизина, валиллизина и валилцитруллина.
Поэтому в одном варианте настоящее изобретение относится к соединению, в котором V1 содержит субстрат, который может быть расщеплен протеолитическим ферментом, плазмином, катепсином, катепсином B, β-глюкуронидазой, галактозидазой, простатоспецифическим антигеном (PSA), активатором плазминогена типа урокиназы (u-PA), членом семейства матриксных металлопротеиназ, или ферментом, локализованным с помощью направленной ферментативной пролекарственной терапии, такой как ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, или PDEPT, или если V1 содержит фрагмент, который можно отщепить или трансформировать, используя восстановление в условиях гипоксии или используя восстановление нитроредуктазой.
В другом аспекте настоящего изобретения конъюгат настоящего изобретения используют для (также) улучшения (фармакокинетических) свойств Z. Если нет необходимости в селективном удалении профрагмента у мишеневого сайта, V1 указанного профрагмента может быть, например, группой или может содержать группу, которая отщепляется убиквитарными ферментами, например, сложными эфиразами, которые присутствуют в циркулирующих или внутриклеточных ферментах, таких как, например, протеазы и фосфатазы, за счет pH-контролируемой внутримолекулярной циклизации, или за счет гидролиза, катализируемого кислотой, основанием, или гидролиза без катализатора, или V1 может быть, например, или может содержать дисульфид или образовывать дисульфид с соседним фрагментом. Поэтому V1 может необязательно вместе с соединяющим атомом (атомами) L и/или Y, например, образовывать карбонатную, карбаматную, карбамидную, сложноэфирную, амидную, иминную, гидразоновую, оксимную, дисульфидную, ацетальную или кетальную группу. Это означает, что V1, необязательно вместе с соединяющим атомом (атомами) L и/или Y, может, например, также представлять -OC(O)-, -С(О)O-, -OC(О)O-, -OC(О)N(Rd)-, -N(Rd)С(О)-, -С(О)N(Rd)-, -N(Rd)С(О)O-, -N(Rd)С(О)N(Re)-, -C(O)-, -OC(Rd)(Re)-, -OC(Rd)(Re)О-, -OC(Rd)(Re)O-, -C(Rd)(Re)-, -S-, -S-S-, -C=, =С-, -N=, =N-, -С=N-, -N=C-, -O-N=, =N-O-, -C=N-O-, -O-N=C-, -N(Rf)-N=, =N-N(Rf)-, -N(Rf)-N=C- или -C=N-N(Rf)-, где Rd, Re и Rf независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-10алкила или арила, причем два или более из Rd, Re и Rf соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов.
Если V1 или V1-Y представляют целый профрагмент, или L соединен с Y и не с V1, V1 можно, в этом случае выбрать, например, из Rg-[О(RnO)P(О)]pp-, Rg-С(О)-, Rg-OC(О)- и Rg-N(Rn)С(О)-, где pp выбирают из 1-3 и каждый Rg и Rn независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-15алкила, C1-15гетероалкила, C1-15циклоалкила, C1-15гетероциклоалкила, C4-15арила, или C4-15гетероарила, Rg и Rn необязательно соединены с образованием необязательно замещенного карбоцикла или гетероцикла.
В одном варианте V1 выбирают из фосфоно, фениламинокарбонила, 4-(пиперидино)пиперидинокарбонила, пиперазинокарбонила и 4-метилпиперазинокарбонила.
Следует заметить, что V1, или в форме моно-, ди- или олигосахаридных фрагментов, или в форме ди-, три-, тетра- или олигопептидов, или в любой другой форме, может содержать защитные группы. Соединения настоящего изобретения, включающие такие защищенные V1, могут не выделять никаких Z фрагментов, если их помещают в условия, при которых трансформируется и/или отщепляется соответствующий незащищенный V1. Однако, если удалить защитные группы у таких соединений, они будут выделять один или более из Z фрагментов, если их помещают в соответствующие условия. Соединения, включающие такие защищенные V1, также попадают в объем настоящего изобретения. Особенно вышесказанное можно предвидеть для соединений формулы (IV). Подходящие защитные группы для функциональной группы, в частности для аминокислоты, хорошо известны химикам-органикам, и их можно найти, например, в T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1981.
Соединения формул (III) и (IV) в конечном счете созданы для выделения соединений формул (I) или (II), или соединений формул (I') или (II'), после трансформирования и/или отщепления одного или более из V1 и V1' фрагментов. Выделение соединений формул (I) или (II), соединений формул (I') или (II'), или их производных, из конъюгата настоящего изобретения через другой механизм, однако, не исключено из настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения соединение формулы (III) представляет промежуточные соединения для получения соединений формул (I) или (II) или другого соединения формулы (III). В этом случае, например, V2, L2, L и Y отсутствуют, p, q, и z все представляют 1, и V1 фрагмент может быть защитной группой. Может существовать, а может не существовать одно или более из V2'(-L2'-L'(-V1'-Y')p')q'(Z')z'-1 фрагментов, в которых V2', L2', L' и Y' могут отсутствовать, а могут присутствовать, и p', q', и z', все, могут или не могут представлять 1. В одном варианте соединение формулы (III) представляет соединения формул (I) или (II), к которым присоединен V1 фрагмент. В другом варианте соединение формулы (III) представляет формулы (I) или (II), к которым присоединен V1 фрагмент и V2'(-L2'-L'(-Vl'-Y')P')q'(Z')z'-1 фрагмент. В еще одном варианте соединение формулы (III) представляет соединения формул (I) или (II), к которым присоединены V1 фрагмент и V1' фрагмент.
В одном варианте V1 не представляет защитную группу.
В другом варианте V2, L2, L и Y отсутствуют, и p, q, и z все представляют 1.
В следующем варианте V1 представляет химически удаляемую группу.
В еще следующем варианте V1 представляет химически удаляемую группу, соединенную с Z через X1.
В еще другом варианте V1 представляет бензильную группу, соединенную с Z через X1.
В одном варианте V1 соединен с L через более чем одну функциональную группу на V1.
В одном варианте V1 соединен с L через одну функциональную группу на V1.
В одном варианте V1 соединен с L через функциональную группу в боковой цепи одной из природных или не природных аминокислот V1.
В другом варианте N-концевая аминокислота V1 соединена через ее α-аминогруппу с L.
Самоуничтожающаяся спейсерная система Y
Самоуничтожающаяся спейсерная система Y, если присутствует, связывает V1 и необязательно L с одним или более из фрагментов Z.
Самоуничтожающаяся спейсерная система Y может быть встроена в конъюгат настоящего изобретения чтобы, например, улучшить свойства Z или конъюгата в целом, чтобы обеспечить подходящие присоединяющиеся химические соединения, и/или для создания пространства между V1 и Z.
Соединение настоящего изобретения может содержать более чем одну спейсерную систему Y на профрагмент. Указанные фрагменты Y могут быть одинаковы или различны.
После отщепления или трансформации V1, левая сторона Y может стать разблокированной, что приведет к возможному выделению одного или более из фрагментов Z. Самоуничтожающиеся спейсерные системы могут, например, быть теми, что перечислены в WO 02/083180 и WO 2004/043493, которые включены сюда для ссылки во всей полноте, так же, как и другие самоуничтожающиеся спейсеры, известные специалистам в данной области.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, в которых Y выбирают из
(W-)W(X-)X(A-)S
(W-)w(X-)xC((A)s-)r или
(W-)w(X-)xC(D((A)s-)d)r или
(W-)w(X-)xC(D(E((A)s-)e)d)r или
(W-)w(X-)xC(D(E(F((A)s-)f)e)d)r
где
W и X, каждый, представляет 1,2+2n электронный каскадный спейсер (n≥1) однократного выделения, причем они могут быть одинаковы или различны;
А представляет ω-амино аминокарбонильный циклизационный спейсер, который образует циклическое производное мочевины после циклизации;
C, D, E и F, каждый, представляет самоуничтожающийся спейсер или спейсерную систему многократного выделения, которые после активации могут максимально выделять r, d, e и f группы, соответственно;
s представляет 0 или 1;
r, d, e и f представляют числа, представляющие степень разветвленности;
w и x представляют числа, представляющие степень полимеризации;
r, d, e и f независимо представляют целые числа от 2 (включительно) до 24 (включительно);
w и x независимо представляют целые числа от 0 (включительно) до 5 (включительно).
В следующем аспекте настоящего изобретения самоуничтожающиеся спейсерные системы многократного выделения C, D, E и F независимо выбирают из фрагментов формулы:
Figure 00000033
где
B выбирают из NR21, O и S;
P представляет C(R22)(R23)Q-(W-)W(X-)X;
Q отсутствует или представляет -O-CO-;
W и X, каждый, представляет 1,2+2n электронный каскадный спейсер (n≥1) однократного выделения, причем они могут быть одинаковы или различны;
G, H, I, J, K, L, M, N и O независимо выбирают из фрагментов формул:
Figure 00000034
G, J и M можно, кроме того, выбирать из группы P и водорода при условии, что если два из G, J и M представляют водород, оставшаяся группа должна быть
Figure 00000035
или
Figure 00000036
и в то же самое время быть конъюгированной с
Figure 00000037
R21 выбирают из H и необязательно замещенного C1-6 алкила;
R22, R23, R24 и R25 независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, RX, SRX, S(О)Rx, S(О)2Rx, S(О)ORx, S(О)2ORx, OS(О)Rx, OS(О)2Rx, OS(О)ORx, OS(О)2ORX, ORx, NHRX, N(RX)RX 1, +N(Rx)(Rx l)Rx 2, P(О)(ORx)(ORx 1), OP(О)(ORx)(ORx 1), С(О)Rx, С(О)ORx, C(O)N(Rx 1)Rx, OC(О)Rx, OC(О)ORx, OC(О)N(Rx)Rx 1, N(Rx 1)С(О)Rx, N(Rx 1)С(О)ORx и N(Rx 1)С(О)N(Rx 2)Rx, где RX, RX 1 и RX 2 независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-6алкила, C1-6гетероалкила, C3-20циклоалкила, C3-20гетероциклоалкила, C4-20арила или C4-20гетероарила, причем RX, Rx1 и RX 2 необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов, причем два или более из заместителей R21, R22, R23, R24 и R25 необязательно соединены друг с другом с образованием одного или более из алифатических или ароматических циклических структур;
g, h, i, j, k, l, m, n, o, h', g', k', j', n', m' представляют числа, представляющие степень разветвленности, и независимо представляют 0, 1 или 2 при условиях, что
если G = водород или P, g, h, i, h', и g' все равны 0;
если J = водород или P, j, k, 1, k', и j' все равны 0;
если M = водород или P, m, n, o, n', и m1 все равны 0;
если G, H, I, J, K, L, M, N, или O представляют
Figure 00000038
тогда g+g'=1, h+h'=1, i=1, j+j'=1, k+k'=1, l=1 , m+m'=1, n+n'=1, или o=1, соответственно;
если G, H, I, J, K, L, M, N, или O представляют
Figure 00000039
тогда g+g'=2, h+h'=2, i=2, j+j'=2, k+k'=2, l=2, m+m'=2, n+n'=2, или o=1, соответственно;
если g'=0 и G не представляет водород или P, тогда h, h', и i равны 0 и g>0;
если g=0 и G не представляет водород или P, тогда g'>0;
если g'>0 и h'=0, тогда i=0 и h>0;
если g'>0 и h=0, тогда h'>0 и i>0;
если j'=0 и J не представляет водород или P, тогда k, k', и l равны 0 и j>0;
если j=0 и J не представляет водород или P, тогда j'>0;
если j'>0 и k=0, тогда l=0 и k>0;
если j'>0 и k=0, тогда k'>0 и l>0;
если m'=0 и M не представляет водород или P, тогда n, n', и o равны 0 и m>0;
если m=0 и M не представляет водород или P, тогда m'>0;
если m'>0 и n'=0, тогда o=0 и n>0;
если m'>0 и n=0, тогда n'>0 и o>0;
w и x представляют числа полимеризации и независимо являются целыми числами от 0 (включительно) до 5 (включительно).
В соответствии со следующим вариантом настоящего изобретения 1,2+2n электронные каскадные спейсеры W и X независимо выбирают из фрагментов следующей формулы:
Figure 00000040
где
Q' = -R30C=CR31-, S, O, NR31, -R31C=N-, или -N=CR31-;
B = NR32, O, S;
P = C(R28)(R29)Q;
R26, R27, B, и (T-)t(T'-)t'(T"-)t"P соединены с Ca, Cb, Cc и Cd таким образом, что B и (T-)t(T'-)t'(T"-)t"P соединены с двумя прилегающими атомами углерода или с Ca и Cd;
Q отсутствует или представляет -O-CO-;
t, t' и t" являются числами, представляющими степень полимеризации, и независимо являются целыми числами от 0 (включительно) до 5 (включительно);
T, T' и T" независимо выбирают из фрагментов формул:
Figure 00000041
R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33 и R34 независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, RX, SRx, S(О)Rx, S(О)2Rx, S(О)ORx, S(О)2ORx, OS(О)Rx, OS(О)2Rx, OS(О)ORx, OS(О)2ORx, ORx, NHRX, N(RX)RX 1, +N(RX)(RX 1)RX 2, P(О)(ORx)(ORx 1), OP(О)(ORx)(ORx 1), С(О)RX, С(О)ORx, С(О)N(Rx 1)Rx, OC(О)Rx, OC(О)ORx, OC(О)N(Rx)Rx 1, N(Rx 1)С(О)Rx, N(Rx')С(О)ORx, и N(Rx 1)С(О)N(Rx 2)Rx, где RX, RX 1 и Rx 2 независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-6алкила, C1-6гетероалкила, C3-20циклоалкила, C3-20гетероциклоалкила, C4-20арила, или C4-20гетероарила, Rx, Rx 1, и Rx 2 необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов, причем два или более из заместителей R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, или R34 необязательно соединены друг с другом с образованием одной или более из алифатических или ароматических циклических структур.
В приведенных выше формулах Q может быть O-CO, но он также может отсутствовать. Например, сообщалось, что соединение с бензилэфирной связью между самоуничтожающимся спейсером и группой, которая отщепляется, оксикарбонильная функция отсутствует (Q отсутствует), претерпевает самоуничтожение 11.
В соответствии со следующим вариантом настоящего изобретения ω-амино аминокарбонильный циклизационный уничтожающийся спейсер A представляет фрагмент формулы:
Figure 00000042
где
a представляет целое число 0 или 1;
b представляет целое число 0 или 1;
c представляет целое число 0 или 1, при условии, что
a+b+c=2 или 3;
R35 и R36 независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-6алкила;
R37, R38, R39, R40, R41 и R42 независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, С(О)NH2, С(О)H, С(О)OH, галогена, RX, SRx, S(О)Rx, S(О)2Rx, S(О)ORx, S(О)2ORx, OS(О)Rx, OS(О)2Rx, OS(О)ORx, OS(О)2ORx, ORx, NHRX, N(Rx)Rx 1, +N(RX)(Rx 1)Rx 2, P(О)(ORx)(ORx 1), OP(О)(ORx)(ORx 1), С(О)Rx, С(О)ORx, С(О)N(Rx 1)Rx, OC(О)Rx, OC(О)ORx, OC(О)N(Rx)Rx 1, N(Rx 1)С(О)Rx, N(Rx 1)С(О)ORx, и N(Rx 1)С(О)N(Rx 2)Rx, где RX, RX 1 и Rx 2 независимо выбирают из H и необязательно замещенного C1-6алкила, C1-6гетероалкила, C3-20циклоалкила, C3-20гетероциклоалкила, C4-20арила, или C4-20гетероарила, Rx, Rx 1 и Rx 2 необязательно соединены с образованием одного или более необязательно замещенных алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов и R35, R36, R37, R38, R39, R40, R41 и R42 необязательно представляют часть одной или более необязательно замещенных алифатических или ароматических циклических структур, причем два или более из заместителей R35, R36, R37, R38, R39, R40, R41 или R42 необязательно соединены друг с другом с образованием одного или более из алифатических или ароматических карбоциклов или гетероциклов.
В одном варианте настоящее изобретение относится к соединению, где X1 представляет O и Y соединен с X1 через ω-амино аминокарбонильный циклизационный спейсер, составляющий часть Y. В одном варианте спейсерную систему Y выбирают из
Figure 00000043
В другом варианте спейсерная система Y представляет
Figure 00000044
В другом варианте спейсерная система Y представляет
Figure 00000045
Другие примеры самоуничтожающихся спейсеров включают, но ими не ограничиваются, спейсеры, которые могут претерпевать циклизацию, такие как необязательно замещенные амиды 4-аминомасляной кислоты, соответствующим образом замещенные бицикло[2.2.1] и бицикло[2.2.2] кольцевые системы и амиды 2-аминофенилпропионовой кислоты и "триметил-lock" циклизационные спейсеры13. Глициновый спейсер, в котором аминсодержащая отщепляемая группа присоединена в α-положении, представляет другой полезный спейсер для соединений настоящего изобретения.14
В конъюгатах настоящего изобретения спейсерная система Y может быть соединена с более чем одним V1 фрагментом. В таком случае трансформация и/или отщепление одного из указанных V1 фрагментов может стимулировать выделение одного или более из Z фрагментов. Если V1 фрагменты, которые трансформируются или отщепляются в различных условиях, соединены с одним и тем же Y, выделение одного или более из Z фрагментов может происходить, если конъюгат настоящего изобретения оказывается в одном из нескольких различных условий. Альтернативно, можно использовать спейсерную систему Y, которая требует, чтобы ее стимулировали дважды или даже несколько раз для самоуничтожения. Примером такого самоуничтожающегося спейсера является бициновый спейсер.15 Если такой спейсер используют в комбинации с отличающимся, селективно отщепляемым V1 фрагментом, соединенным с указанным спейсером, селективность выделения Z можно повысить, так как окажется необходимым совпадение двух различных условий, прежде чем произойдет выделение Z.
Связывающая группа L
Связывающая группа L связывает один или более из V1 и/или Y фрагментов с L2 или RM. Синтез может оказаться более простым, если L соединен с V1 и соединение может оказаться менее подверженным преждевременному разложению. Присоединение L к Y может иметь то преимущество, что трансформировать и/или отщеплять V1 окажется проще. Другим резоном присоединения L к Y может быть, например, то, что (часть) Y остается связанной с L после отщепления V1, что предотвращает выделение реакционноспособных мелких молекул, или что соединение демонстрирует улучшенные (фармакокинетические) свойства растворимости или способности к агрегации. L может быть связью, соединяющей V1 или Y напрямую или с L2 или с RM. В другом аспекте, однако, L представляет связывающую группу, которая функционально связывает или разделяет один или более из фрагментов V'/Y и L2 или RM фрагмент. В соединении формулы (IV), пространственное разделение может сделать реакционноспособный фрагмент RM более доступным для реакционного партнера, например, если функциональный фрагмент присоединен. В соединении формулы (III), пространственное разделение может обеспечить лучшую доступность V1, так как V2 далее удаляют, что, особенно в случае ферментативного отщепления или трансформации V1, может повысить скорость, с которой происходит трансформация и/или отщепление V1. Связывающая группа L может быть водорастворимым фрагментом или может содержать один или более из водорастворимых фрагментов, таких, чтобы L привнес свой вклад в водорастворимость соединений формул (III) или (IV). L может также представлять фрагмент или содержать один или более из фрагментов, которые уменьшают агрегацию соединений формул (III) или (IV), который может быть или может не быть фрагменом/фрагментами, который(е) также повышает (повышают) водорастворимость соединений формул (III) или (IV). Связывающая группа L должна содержать подходящие функциональные группы с обоих своих концов, чтобы обеспечить селективное соединение одного или более из V1 и/или Y фрагментов и L2 или RM.
В одном аспекте L фрагмент представляет линейный, разветвленный или дендритный фрагмент, так что он может необязательно быть соединен с более чем одним V1 и/или Y фрагментом. Разветвление может располагаться через одну или более из циклических структур или у одного или более из атомов разветвленности, которыми могут быть, например, углерод, азот, кремний или фосфор.
Число разветвлений в L, которые соединены с V1 и/или Y, необязательно должно равняться полному числу разветвлений, так как в реакции присоединения к V1/Y не все разветвленности могут присоединиться к V1 и/или Y фрагментам из-за неполного химического превращения. Это означает, что L может содержать разветвленности, которые не присоединены к V1 или Y, но вместо этого заканчиваются, например, функциональной группой, H, OH или отщепляемой группой.
Поэтому если L является разветвленным, соединения настоящего изобретения могут существовать в виде смеси, где каждый компонент смеси имеет отличное значение p. Например, соединение может существовать в виде смеси двух отдельных соединений, где у одного соединения величина p=2, и у другого соединения величина p=3. Кроме того, при данном значении p, соединение может существовать в виде смеси изомеров, так как V1/Y могут быть связаны с различными наборами разветвлений у L.
В одном варианте L представляет связь.
В другом варианте L представляет линейный линкер.
В другом варианте L представляет линейный линкер, встроенный в результате реакции циклоприсоединения между молекулой, содержащей азидную группу, и молекулой, содержащей ацетиленовую группу.
В другом варианте L представляет разветвленный линкер.
В другом варианте L представляет дендритный линкер. Дендритная структура может быть, например, встроена в результате реакций циклоприсоединения между молекулами, содержащими азидную группу, и молекулами, содержащими ацетиленовую группу.
В одном варианте p представляет 1.
В других вариантах p представляет 2, или 3, или 4, или 6, или 8, или 9.
В другом варианте L представлено формулой:
Figure 00000046
где
X81 и X82 каждый независимо представляет O, NR85 или S;
каждый X83 и X84 независимо представляет O, NR86 или S;
каждый х81, х82, х83 и х84 независимо представляют 0 или 1;
p" представляет число, представляющее степень разветвленности, и является целым числом, выбранным из 1 (включительно) до 128 (включительно);
p'" представляет число, представляющее степень разветвленности, и является целым числом, которое выбирают из 0 (включительно) до 127 (включительно);
p"+p'"≤128;
Каждый DD независимо представляет H, OH или отщепляемую группу;
R80 отсутствует или представляет или дендритный, или разветвленный, или неразветвленный фрагмент, который выбирают из необязательно замещенного алкилена или полиалкилена, необязательно замещенного гетероалкилена или полигетероалкилена, необязательно замещенного арилена или полиарилена, необязательно замещенного гетероарилена или полигетероарилена, необязательно замещенного циклоалкилена или полициклоалкилена, необязательно замещенного гетероциклоалкилена или полигетероциклоалкилена, -(CH2CH2O)v-, -алкилен-(CH2CH2O)v-, -(CH2CH2O)v-алкилен-, -алкилен-(CH2CH2O)v-алкилен-, -гетероалкилен-(CH2CH2O)v-, -(CH2CH2O)v-гетероалкилен-, -гетероалкилен-(CH2CH2O)v-алкилен-, -гетероалкилен-(CH2CH2O)v-гетероалкилен-, -алкилен-(CH2CH2O)v-гетероалкилен-, дендритной структуры и олигопептида, или любой комбинации двух или более из вышеперечисленных;
R85 и R86 независимо выбирают из H и C1-8алкила;
v выбирают из 1 (включительно) до 500 (включительно).
Например, L может быть выбран из необязательно замещенного C1-10алкилена, C1-10алкиленкарбонила, C1-12алкиленоксикарбонила, C1-12карбонилалкилена, C1-12карбонилалкиленоксикарбонила и (CH2CH2O)v-карбонила.
В одном варианте L выбирают из
Figure 00000047
Реакционно-способный фрагмент RM и связывающая группа L2
Реакционно-способный фрагмент RM в соединении формулы (IV) соединен со связывающей группой L и способен реагировать с соответствующей функциональной группой у реакционного партнера.
В одном варианте настоящего изобретения реакционно-способный фрагмент RM сконструирован так, чтобы он мог реагировать с функциональной группой фрагмента V2, что приводит к образованию соединения формулы (III). В указанной реакции фрагмент RM трансформируется во фрагмент L2. В другом варианте реакционноспособный фрагмент RM сконструирован так, чтобы он мог реагировать с комплементарным фрагментом in situ, например, in vivo, в результате чего образуется соединение, которое может или не может быть соединением формулы (III).
В одном аспекте настоящего изобретения реакционно-способный фрагмент RM содержит электрофильную группу, которая реагирует с нуклеофильной группой реакционного партнера, например V2, например, группа тиола, аминогруппа или гидроксигруппа.
В другом аспекте настоящего изобретения реакционно-способный фрагмент RM содержит нуклеофильную группу, которая реагирует с электрофильной группой реакционного партнера, например V2, например, альдегидная группа. В другом аспекте настоящего изобретения реакционноспособный фрагмент RM содержит фрагмент партнера циклоприсоединения, например, алкен, диен, 1,3-диполь или 1,3-диполярофил, который реагирует с соответствующим комплементарным фрагментом партнера циклоприсоединения, например V2, например, диеном, алкеном, 1,3-диполярофилом или 1,3-диполем.
В другом аспекте настоящего изобретения реакционноспособный фрагмент RM содержит группу, которая может быть соединена с соответствующей комплементарной группой реакционного партнера, например V2, в условиях, использующих металлический катализатор, биокатализатор или фермент-катализатор, например, с использованием палладиевого катализатора.
В одном аспекте настоящего изобретения реакционноспособный фрагмент RM представляет, без ограничений,
Figure 00000048
где
X8 выбирают из -Cl, -Br, -I, -F, -OH, -O-N-сукцинимида, -O-(4-нитрофенил), -O-пентафторфенила, -O-тетрафторфенила, -O-С(О)-R50 и -O-С(О)-OR50;
X9 выбирают из -Cl, -Br, -I, -O-мезила, -O-трифлила и -O-тозила;
R50 представляет C1-10алкил или арил.
В одном варианте фрагмент RM выбирают из
Figure 00000049
что обеспечивает его способность реагировать с группой тиола реакционного партнера, например фрагмента V2.
В одном варианте фрагмент RM представляет
Figure 00000050
что обеспечивает его способность реагировать с группой тиола реакционного партнера, например фрагмента V2 .
В другом варианте фрагмент RM выбирают из
Figure 00000051
что обеспечивает его способность реагировать с аминогруппой, например, первичной или вторичной аминогруппой реакционного партнера, например фрагмента V2.
В другом варианте фрагмент RM выбирают из
Figure 00000052
что обеспечивает его способность реагировать с альдегидной группой реакционного партнера, например фрагмента V2.
Связывающая группа L2 в соединениях формулы (III) представляет остаток от RM после того, как реакционноспособный фрагмент RM прореагировал с V2. Указанная группа затем связывает фрагмент V2 с L. Группа, которая остается, может быть связью. Обычно, однако, L2 представляет связывающую группу. Если соединение формулы (III) образуется иначе, чем через соединение формулы (IV), L2 не должен представлять остаток RM, но может представлять аналогичные или такие же самые фрагменты и, кроме того, может быть выбран из, например, необязательно замещенного C1-6алкилена, C1-6гетероалкилена, C3-7циклоалкилена, C3-7гетероциклоалкилена, C5-10арилена и C5-10гетероарилена.
В одном варианте фрагмент L2 представляет связь.
В другом варианте фрагмент L2 представляет, без ограничений,
Figure 00000053
В следующем варианте фрагмент L2 представляет
Figure 00000054
Фрагмент V2
Фрагмент V2 представляет функциональный фрагмент, что означает, что он добавляет дополнительную функциональность соединению настоящего изобретения.
В одном варианте V2 представляет направляющий к цели фрагмент. В другом варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который улучшает фармакокинетические свойства соединения настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который вызывает накопление соединений настоящего изобретения у мишеневого сайта. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который улучшает водорастворимость соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который повышает гидрофобность соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который уменьшает транссудацию соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который уменьшает выделение соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который снижает иммуногенность соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который увеличивает время циркуляции соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который увеличивает способность соединений настоящего изобретения преодолевать биологический барьер, например, мембрану, стенку клетки или гематоэнцефалический барьер. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который повышает способность к усвоению соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который вызывает агрегацию соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который уменьшает агрегацию соединений настоящего изобретения. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который заставляет соединения настоящего изобретения образовывать мицеллы или липосомы. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который вызывает комплексообразование соединений настоящего изобретения с другими молекулами, например биомолекулами. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет полинуклеотидный фрагмент, который образует комплекс с комплементарной нуклеотидной последовательностью, например RNA или DNA. В еще одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который обеспечивает возможность соединению настоящего изобретения связываться, ассоциироваться, взаимодействовать или образовывать комплекс с другим фрагментом, например (функционализированной) поверхностью или твердым носителем.
В другом варианте V2 демонстрирует две или более различные функции.
В одном аспекте настоящего изобретения фрагмент V2 включает в свой объем любой фрагмент, который связывает или реактивно ассоциируется, или образует комплекс с рецептором, рецепторным комплексом, антигеном, или другим рецептивным фрагментом, ассоциированным с популяцией рассматриваемых мишеневых клеток. V2 может быть любой молекулой, которая связывается с фрагментом популяции клеток, образует комплекс с фрагментом популяции клеток, или реагирует с фрагментом популяции клеток, которые могут быть терапевтически или иначе биологически модифицированы. Действие V2 фрагмента сводится к доставке одного или более из фрагментов Z к конкретной популяции мишеневых клеток, с которыми V2 реагирует или с которыми V2 связывается. Такие V2 фрагменты включают, но ими не ограничиваются, аптамеры, полной длины антитела и фрагменты антител, лектины, биологически респонсивные модификаторы, ферменты, витамины, факторы роста, стероиды, питательные вещества, остатки сахаров, остатки олигосахаридов, гормоны и любые их производные, или любые их комбинации. После связывания, реакционного ассоциирования или комплексообразования соединения настоящего изобретения могут или могут не быть интернализованы. Если происходит интернализация, трансформация и/или отщепление V1 предпочтительно происходит внутри мишеневой клетки.
Подходящий неиммунореакционно-способный белок, полипептид, или пептидные фрагменты V2 включают, но ими не ограничиваются, трансферрин, эпидермальный фактор роста ("EGF"), бомбезин, гастрин и его производные, особенно те, которые содержат тетрапептидную последовательность Trp-Met-Asp-Phe-NH2, пептид, выделяющий гастрин, фактор роста, полученный из тромбоцитов, IL-2, IL-6, трансформирующие факторы роста ("TGF"), такие как TGF-α и TGF-P, опухолевые факторы роста, вакцинные факторы роста ("VGF"), инсулин и инсулиноподобные факторы роста I и II, лектины и апопротеин из липопротеинов низкой плотности.
Подходящие фрагменты поликлональных антител V2 представляют собой гетерогенные популяции молекул антител. Для получения поликлональных антител к представляющим интерес антигенам можно использовать различные процедуры, хорошо известные специалистам.
Подходящие фрагменты моноклональных антител V2 представляют собой гомогенные популяции антител к конкретному антигену (например, антигену раковых клеток). Моноклональное антитело (mAb) к представляющему интерес антигену можно получить, используя любые известные специалистам методики, которые обеспечат получение молекул моноклонального антитела.
Подходящие фрагменты моноклональных антител V2 включают, но ими не ограничиваются, человеческие моноклональные антитела, гуманизованные моноклональные антитела или химерические человеческие-мышиные (или других видов) моноклональные антитела. Человеческие моноклональные антитела можно получить, используя любые бесчисленные известные специалистам методы.
V2 фрагмент может также быть биспецифическим антителом. Способы получения биспецифических антител известны специалистам.
V2 фрагмент может быть функционально активным фрагментом, производным или аналогом антитела, которое иммуноспецифически связывается с антигенами на мишеневых клетках, например антигенами раковых клеток. В этой связи термин "функционально активный" означает, что фрагмент, производное или аналог способен выявлять анти-анти-идиотипические антитела, которые распознают тот же самый антиген, что распознает антитело, из которого получен фрагмент, производное, или аналог.
Другие подходящие V2 фрагменты включают фрагменты антител, включая, но ими не ограничиваясь, F(ab')2 фрагменты, которые содержат вариабельный участок, постоянный участок легкой цепи и CH1 домен тяжелой цепи, который можно получить, используя пепсиновый перевар молекул антител и Fab фрагментов, которые можно создать, уменьшая дисульфидные мостики F(ab')2 фрагментов. Другими подходящими V2 фрагментами являются димеры тяжелых цепей и легких цепей антител, или любые их минимальные фрагменты, такие как Fvs или одноцепочечные антитела (SCA), доменные антитела, антикалины, аффитела, нанотела, или любые другие молекулы с такой же, аналогичной или сравнимой специфичностью, что и антитело.
Кроме того, рекомбинантные антитела, такие как химерические и гуманизованные моноклональные антитела, содержащие как человеческие, так и не человеческие участки, которые можно создать, используя стандартные рекомбинантные DNA методики, представляют собой полезные V2 фрагменты. Химерическое антитело представляет собой молекулу, в которой различные участки получены от различных видов животных, такие как те, что содержат вариабельный участок, полученный из мышиного моноклонального и человеческого иммуноглобулинового постоянного участка. Гуманизованные антитела представляют собой молекулы антител, полученные из не человеческих видов, содержащие один или более из определяющих комплементарность участков (CDR) из не человеческих видов и скелетный участок из человеческой молекулы иммуноглобулина.
Полностью человеческие антитела особенно предпочтительны в качестве V2 фрагментов. Такие антитела можно, например, получить, используя трансгенных мышей, которые не способны экспрессировать эндогенные гены тяжелых и легких цепей иммуноглобулина, но которые могут экспрессировать человеческие гены тяжелых и легких цепей. В других вариантах V2 фрагмент представляет собой гибридный белок антитела, или его функционально активный фрагмент или его производное, например, такой, в котором антитело гибридизовано через ковалентную связь (например, пептидную связь), или по N-концу или по C-концу с аминокислотной последовательностью другого белка (или его части, предпочтительно, по меньшей мере, 10, 20 или 50 аминокислотной части белка), который не представляет антитело. Предпочтительно, чтобы антитело или его фрагмент были ковалентно связаны с другим белком по N-концу постоянного домена.
Антитела V2 фрагментов включают аналоги и производные, которые модифицированы, например, за счет ковалентного присоединения любого типа молекулы, если только такое ковалентное присоединение позволяет антителу сохранять его связывающую антиген иммуноспецифичность. Например, но этим не ограничиваясь, производные и аналоги антител включают такие, которые были далее модифицированы, например, путем гликозилирования, ацетилирования, путем обработки полиэтиленгликолем, дисульфидного восстановления, фосфилирования, амидирования, получения производных с известными защитными или блокирующими группами, протеолитического расщепления, связывания с другим белком, и т.д. Кроме того, аналог или производное могут содержать одну или более из не природных аминокислот.
Антитела V2 фрагментов включают антитела, содержащие модификации (например, замещения (например, цистеин на серин), делеции, или добавления в аминокислотных остатках, которые взаимодействуют с Fc рецепторами. В частности, они включают антитела, содержащие модификации в аминокислотных остатках, которые идентифицированы как участвующие во взаимодействиях между Fc доменом и FcRn рецептором. Могут также быть введены модификации, чтобы было возможно присоединение антитела к конъюгатам линкер-агент в конкретном положении на антителе.
В специфическом варианте антитело, иммуноспецифическое в отношении антигена рака или опухоли, используют в качестве V2 фрагмента в соответствии с соединениями, композициями и способами настоящего изобретения. Антитела, иммуноспецифические в отношении антигена раковых клеток, можно получить коммерчески или получить способами, известными специалистам в данной области, например, в области химического синтеза или в области рекомбинантных экспрессионных технологий. Нуклеотидные последовательности, кодирующие антитела, иммуноспецифические в отношении антигена раковых клеток, можно получить, например, из базы данных GenBank или аналогичной базы данных, из коммерческих или других источников, литературных публикаций или путем рутинного клонирования и секвенирования.
Примеры антител, доступных для лечения рака, включают, но ими не ограничиваются, HERCEPTIN (трастузумаб, Genentech, CA), который является гуманизованным анти-HER2 моноклональным антителом для лечения пациентов с метастатическим раком молочной железы; RITUXAN (ритуксимаб; Genentech, CA), который представляет собой химерическое анти-CD20 моноклональное антитело для лечения пациентов с не-Ходжкинской лимфомой; OvaRex (ореговомаб; AltaRex Corporation, MA), который представляет собой мышиное антитело для лечения рака яичников; Panorex (эдреколомаб; Glaxo Wellcome, NC), который представляет собой IgG2a антитело для лечения рака прямой кишки; IMC-BEC2 (митумомаб; ImClone Systems, NY), который представляет собой мышиное IgG антитело для лечения рака легких; 1MC-C225 (эрбитукс; Imclone Systems, NY), который представляет собой химерическое IgG антитело для лечения рака головы и шеи; Vitaxin (медиммун, MD), который представляет собой гуманизованное антитело для лечения саркомы; Campath I/H (алемтузумаб, Leukosite, MA), который представляет собой гуманизованное IgG1 антитело для лечения хронической лимфотической лейкемии (CLL); SGN-70 (Seattle Genetics, WA), который представляет собой гуманизованное анти-CD70 антитело для лечения гематологических злокачественных заболеваний; Smart MI95 (Protein Design Labs, CA), который представляет собой гуманизованное IgG антитело для лечения острой миелоидной лейкемии (AML); LymphoCide (эпратузумаб, Immunomedics, NJ), который представляет собой гуманизованное IgG антитело для лечения не-Ходжкинской лимфомы; SGN-33 (Seattle Genetics, WA), который представляет собой гуманизованное анти-CD33 антитело для лечения острой миелоидной лейкемии; Smart ID 10 (Protein Design Labs, CA), который представляет собой гуманизованное антитело для лечения не-Ходжкинской лимфомы; Oncolym (Techniclone, CA), который представляет собой мышиное антитело для лечения не Ходжкинской лимфомы; Allomune (BioTransplant, CA), который представляет собой гуманизованное анти-CD2 mAb для лечения болезни Ходжкина или для лечения не-Ходжкинской лимфомы; анти-VEGF (Genentech, CA), который представляет собой гуманизованное антитело для лечения рака легких или рака прямой кишки; SGN-40 (Seattle Genetics, WA) который представляет собой гуманизованное анти-CD40 антитело для лечения множественной миеломы; SGN-30 (Seattle Genetics, WA), который представляет собой химерическое анти-CD30 антитело для лечения болезни Ходжкина; CEAcide (Immunomedics, NJ), который представляет собой гуманизованное анти-CEA антитело для лечения рака прямой кишки; IMC-1C11 (ImClone Systems, NJ), который представляет собой анти-KDR химерическое антитело для лечения рака прямой кишки, раков легких и меланомы; и Cetuximab (ImClone Systems, NJ), который представляет собой анти-EGFR химерическое антитело для лечения позитивных раков эпидермального фактора роста.
Другие антитела, которые можно использовать для лечения раковых заболеваний, включают, но ими не ограничиваются, антитела против следующих антигенов: CA125, CA15-3, CA19-9, L6, Lewis Y, Lewis X, альфа фетопротеин, CA 242, плацентарная щелочная фосфатаза, простатоспецифический антиген, простатическая кислотная фосфатаза, рецепторы эпидермальных факторов роста, HER2, EGFR, VEGF, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, рецептор анти-трансферрина, p97, MUC1-KLH, MUC18, PSMA, CTLA4, CEA, gpl00, MART1, PSA, IL-2 рецептор, CD2, CD4, CD20, CD30, CD52, CD56, CD74, CD33, CD22, HLA-DR, HLA-DR10, человеческий хориальный гонадотропин, CD38, CD40, CD70, муцин, P21, MPG, и Neu онкогенный продукт. Многие другие интернализованные и не интернализованные антитела, которые связываются со связанными с опухолью антигенами, можно использовать в настоящем изобретении, причем некоторые из них приведены в обзоре16.
В некоторых вариантах антитело представляет собой анти-ядерное антитело или антитело, которое может связываться с рецептором или рецепторным комплексом, экспрессируемым на мишеневой клетке. Указанный рецептор или рецепторный комплекс может включать член суперсемейства гена иммуноглобулина, интегрин, рецептор хемокина, член суперсемейства рецепторов TNF, рецептор цитокина, основной белок гистосовместимости, комплементарный контрольный белок или лектин.
В другом специфическом варианте антитело, иммуноспецифическое в отношении антигена, связанного с аутоиммунным заболеванием, используют как V2 фрагмент в соответствии с соединениями, композициями и способами настоящего изобретения.
В другом специфическом варианте антитело, иммуноспецифическое в отношении вирусного или микробного антигена, используют как V2 фрагмент в соответствии с соединениями, композициями и способами настоящего изобретения. В том смысле, как здесь использован, термин "вирусный антиген" включает, но ими не ограничивается, любой вирусный пептид или полипептидный белок, который способен вызвать иммунную реакцию. В том смысле, как здесь использован, термин "микробный антиген" включает, но ими не ограничивается, любой микробный пептид, полипептид, белок, сахарид, полисахарид или липид, которые способны вызвать иммунную реакцию.
Новые антитела непрерывно открывают и создают, и в настоящем изобретении предложено, что указанные новые антитела могут быть также включены в соединения настоящего изобретения.
V2 может реагировать с реакционноспособным фрагментом RM через, например, гетероатом у V2. Гетероатомы, которые могут присутствовать на V2, включают, без ограничений, серу (в одном варианте из сульфгидрильной группы), кислород (в одном варианте из карбоксильной или гидроксильной группы) и азот (в одном варианте из первичной или вторичной аминогруппы). V2 может также реагировать через, например, атом углерода (в одном варианте из карбонильной группы). Указанные атомы могут присутствовать на V2 в V2's природном состоянии, например в природно встречающемся антителе, или может быть введено в V2 в результате химической модификации.
Свободные сульфгидрильные группы можно создать в антителах или фрагментах антител, восстанавливая антитело (фрагмент) восстанавливающим агентом, таким как дитиотреитол (DTT) или трис(2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP). В таком случае можно получить модифицированные антитела, которые могут содержать от 1 до около 20 сульфгидрильных групп, но обычно от около 1 и до около 9 сульфгидрильных групп.
Альтернативно, V2 может содержать одну или более из углеводородных групп, которые могут быть химически модифицированы так, чтобы содержать одну или более из сульфгидрильных групп. В качестве другой альтернативы сульфгидрильные группы можно создать в результате реакции аминогрупп, например из фрагментов лизина, на V2, используя 2-иминотиолан (реагент Траута) или другой реагент, генерирующий сульфгидрил.
В одном варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, связывающий рецептор.
В другом варианте V2 фрагмент представляет антитело или фрагмент антитела.
В другом варианте V2 фрагмент представляет моноклональное антитело или его фрагмент.
В одном варианте V2 содержит одну или более из сульфгидрильных групп и V2 реагирует с одним или более из RM фрагментов соединений формулы (IV) через один или более из атомов серы указанных сульфгидрильных групп с образованием соединения формулы (III).
В еще одном варианте V2 содержит дисульфидные связи, которые можно химически восстановить до сульфгидрильных групп (две на каждую дисульфидную связь), которые затем можно подвергнуть взаимодействию с одним или более из реакционноспособных фрагментов RM.
В другом варианте V2 содержит от около 1 до около 3 сульфгидрильных групп, которые могут реагировать с одним или более из реакционноспособных фрагментов RM.
В другом варианте V2 содержит от около 3 до около 5 сульфгидрильных групп, которые могут реагировать с одним или более из реакционноспособных фрагментов RM.
В другом варианте V2 содержит от около 7 до около 9 сульфгидрильных групп, которые могут реагировать с одним или более из реакционноспособных фрагментов RM.
В другом варианте V2 может содержать одну или более из углеводородных групп, которые можно химически модифицировать до получения одной или более из сульфгидрильных групп. V2 реагирует с RM фрагментами через один или более из атомов серы указанных сульфгидрильных групп.
В другом варианте V2 может содержать одну или более из групп лизина, которые могут быть химически модифицированы так, чтобы содержать одну или более из сульфгидрильных групп, которые могут реагировать с одним или более из реакционноспособных фрагментов RM.
Реакционно-способные фрагменты, которые могут реагировать с сульфгидрильной группой, включают, но ими не ограничиваются, карбамоилгалогенид, ацилгалогенид, α-галогенацетамид, галогенометилкетон, винилсульфон, малеимид и 2-дисульфанилпиридин.
В еще одном варианте V2 может содержать одну или более из углеводородных групп, которые могут быть окислены до получения одной или более из альдегидных групп. Соответствующий альдегид (альдегиды) может затем реагировать с одним или более из реакционноспособных фрагментов RM. Реакционноспособные фрагменты, которые могут реагировать с карбонильной группой на V2, включают, но ими не ограничиваются, гидразин, гидразид, амин, и гидроксиламин.
В еще одном варианте V2 может содержать одну или более из аминогрупп, например, из остатков лизина, которые могут реагировать с одним или более из реакционноспособных фрагментов RM. Реакционноспособные фрагменты, которые могут реагировать с аминогруппой, включают, но ими не ограничиваются, карбамоилгалогенид, α-галогеноацетамид, ацилгалогенид, альдегид, изоцианат и изотиоцианат.
Конъюгат формулы (III) может существовать в виде смеси, где каждый компонент смеси имеет различные q значения. Например, соединение может существовать в виде смеси двух отдельных соединений, одного соединения, в котором q=3 и другого соединения, в котором q=4. Анализируя соединение формулы (III), становится понятно, что q может быть (округленно) средним числом из L2-L(-V1-Y-)p(Z)z/q единиц на V2 фрагмент. Кроме того, для данного q, соединение может существовать в виде смеси изомеров, так как q L2-L(-V1-Y-)p(Z)z/q фрагменты могут быть соединены с различными наборами функциональных групп у V2. Следует заметить, что число Z фрагментов в каждой единице может равняться z/q, только если все единицы одинаковы и/или содержат то же самое число Z фрагментов.
В одном варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q принимает значения от около 1 до около 20.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q принимает значения от около 1 до около 9.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q принимает значения от около 1 до около 3.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q равно около 2.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q принимает значения от около 3 до около 5.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q равно около 4.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q принимает значения от около 7 до около 9.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом серы, и q равно около 8.
В одном варианте соединение формулы (III) существует в виде смеси отдельных соединений.
В одном варианте соединение формулы (III) существует в виде смеси отдельных соединений, где q для трех соединений представляет 1, 2 и 3, соответственно.
В одном варианте соединение формулы (III) существует в виде смеси отдельных соединений, где q для трех соединений представляет 3, 4 и 5, соответственно.
В одном варианте соединение формулы (III) существует в виде смеси отдельных соединений, где q для трех соединений представляет 5, 6 и 7, соответственно.
В одном варианте соединение формулы (III) существует в виде смеси отдельных соединений, где q для трех соединений представляет 7, 8 и 9, соответственно.
В другом варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом азота.
В еще одном варианте V2 фрагмент соединен с L2 через атом углерода.
В другом аспекте настоящего изобретения V2 фрагмент включает любой фрагмент, который вызывает накопление соединений настоящего изобретения у мишеневого сайта или в близости к нему за счет механизма, который отличается от связывания или реакционного ассоциирования или комплексообразования с рецептором, антигеном, или другим рецептивным фрагментом, связанным с рассматриваемым мишеневым сайтом, например, популяцией мишеневых клеток. Одним из способов достижения указанной цели является использование, например, крупных макромолекул, таких как V2 фрагмент, который направляется к ткани твердой опухоли за счет эффектов повышенной проницаемости и удерживания (EPR). Рингсдорф сообщает об использовании полимеров для направления противоопухолевых агентов к опухоли.17 За счет указанного EPR эффекта, макромолекулы пассивно накапливаются в твердой опухоли как следствие неорганизованной патологии ангиогенной опухолевой сосудистой сети с ее прерывистым эндотелием, приводящей к гиперпроницаемости для крупных макромолекул, и отсутствию эффективного опухолевого лимфатического дренажа.
V2 фрагмент может быть, например, разветвленным или неразветвленным полимером, таким как, например, поли[N-(2-гидроксипропил)метакриламид] (HPMA), поли(2-гидроксиэтилметакрилат) (HEMA), полиглутаминовая кислота или поли-L-глутаминовая кислота (PG), карбоксиметилдекстран (CMDex), полиацеталь, хитозан, полипептид, олигоэтиленгликоль или полиэтиленгликоль (PEG), или сополимер, такой как HPMA сополимер, сополимер HPMA-метакриловая кислота, сополимер HEMA-метакриловая кислота, CMDex сополимер, сополимер β-циклодекстрина, сополимер PEG или сополимер поли(молочной и гликолевой) кислот18. В указанном документе как полимер, так и сополимер именуют как полимер.
Полимер может быть соединен с L2 через любую подходящую функциональную группу, которая может быть расположена с одного или с обоих концов полимера, что означает, что q в конъюгате принимает значения 1-2, или альтернативно, функциональные группы могут (также) быть расположены на группах-подвесках у полимера так, что L соединен (также) с полимером через указанные группы-подвески, причем значения q обычно находятся в интервале от 1 до около 1000.
Необязательно, полимер может также содержать дополнительную направляющую к мишени группу, которая может связываться или реактивно ассоциироваться или образовывать комплекс с рецептивным фрагментом, например, антителом или производным антитела, связанным с полимером или через подвешенную группу, или концевую группу, так, что достигается улучшенное нацеливание на мишеневый сайт.
Альтернативно, V2 фрагмент может быть дендримером или белком, или фрагментом белка, например, альбумином, который не обладает свойством нацеливания, за исключением его способности накапливаться у мишеневого сайта из-за своего размера или молекулярного веса.
В одном варианте V2 фрагмент представляет полимер.
В другом варианте V2 фрагмент представляет полимер, и q принимает значения от 1 до около 1000.
В других вариантах V2 фрагмент представляет полимер, и q принимает значения от 1 до около 500, или 400, или 300, или 200, или 100, или менее 100.
В другом варианте V2 фрагмент представляет полимер, и q принимает значения от 1 до 2.
В специфическом варианте V2 фрагмент представляет олигоэтиленгликоль или полиэтиленгликоль или их производные.
В другом варианте V2 фрагмент представляет дендример, белок или фрагмент белка.
В другом варианте V2 фрагмент представляет фрагмент, который способен транспортировать конъюгат через биологический барьер, например, клеточную мембрану, или с предварительным связыванием, ассоциированием или комплексообразованием с рецептором или рецепторным комплексом, или без этого.
В одном варианте V2 фрагмент представляет Tat пептид или производное, или его фрагмент, или его аналог, или его фрагмент, который обладает аналогичными свойствами трансмембранной доставки. В другом варианте V2 фрагмент представляет белок или фрагмент белка, антитело или фрагмент антитела, рецептор-связывания или фрагмент пептидного вектора, или полимерный, или дендритный фрагмент, или любую их комбинацию, к которым присоединен Tat пептид или его производное, фрагмент, или аналог, или фрагмент, который обладает аналогичными свойствами трансмембранной доставки.
Таким образом, в одном аспекте настоящего изобретения фрагмент V2 представляет направляющий к мишени фрагмент и его, например, выбирают из группы, состоящей из белка или фрагмента белка, или антитела, или фрагмента антитела, рецептора-связывания или фрагмента пептидного вектора, и полимерного или дендритного фрагмента, или любой их комбинации.
В другом аспекте настоящего изобретения V2 фрагмент представляет фрагмент, который улучшает фармакокинетические свойства конъюгата настоящего изобретения. Например, фрагмент V2 может быть выбран таким образом, чтобы повысить водорастворимость конъюгата (еще больше). Этого можно достичь, выбирая такой V2, который является гидрофильным фрагментом. Альтернативно, V2 фрагмент можно использовать, например, для увеличения времени пребывания соединения в циркуляции, для снижения транссудации и выделения, для уменьшения агрегации и/или для уменьшения иммуногенности соединения. Этого можно, например, достичь, выбирая такой V2, который являлся бы полиэтиленгликолем или олигоэтиленгликолем, или их производным. Если фрагмент V2 представляет фрагмент, который улучшает фармакокинетические свойства соединения настоящего изобретения, V1 представляет фрагмент, который может быть отщеплен или трансформирован аспецифически, и не присутствуют V1' и V2' фрагменты, соединение само служит улучшению (фармакокинетических) свойств одного или более из Z фрагментов.
В одном варианте V2 представляет фрагмент, который улучшает фармакокинетические свойства и V1 представляет фрагмент, который может быть отщеплен или трансформирован специфически.
В другом варианте V2 представляет олигоэтиленгликоль или полиэтиленгликоль или их производное, и V1 представляет фрагмент, который может быть отщеплен или трансформирован специфически.
В одном варианте V2 представляет фрагмент, который улучшает фармакокинетические свойства, и V1 представляет фрагмент, который может быть отщеплен или трансформирован аспецифически.
В другом варианте V2 представляет олигоэтиленгликоль или полиэтиленгликоль или их производное, и V1 представляет фрагмент, который может быть отщеплен или трансформирован аспецифически.
В другом варианте V2 представляет олигоэтиленгликоль или полиэтиленгликоль или их производное, и V1 представляет фрагмент, который может быть отщеплен убиквитарными ферментами.
В другом варианте V2 представляет олигоэтиленгликоль или полиэтиленгликоль или их производное, и V1 представляет гидролизуемый фрагмент.
В одном аспекте настоящего изобретения V2 фрагмент представлен формулой (VI):
Figure 00000055
где V2*, L2*, L*, V1*, Y*, p*, q* и z* имеют указанные выше значения для V2, L2, L, V1, Y, p, q и z, как определено в описании, за исключением того, что Y* соединен с L2. Следует заметить, что z* в действительности равняется q. Если соединение формулы (III) содержит V2 фрагмент, представленный формулой (VI), тогда один или более из L2 фрагментов соединен с Y*. Следует понимать, что в рассматриваемом документе, каждый раз, как упоминаются V2, L2, L, V1, Y, p, q или z, то же самое можно применить к каждому из V2*, L2*, L*, V1*, Y*, p*, q* или z*, соответственно.
Использование V2 фрагмента формулы (VI) в конъюгате формулы (III) подразумевает, что два условно-отщепляемые или условно-трансформируемые фрагмента могут присутствовать в одном и том же профрагменте, и поэтому два отдельных отщепления/трансформации могут потребоваться для полного удаления профрагмента. Указанное требование о том, чтобы были удовлетворены два различных условия, прежде чем выделится один или более из Z, может благоприятно влиять на свойства конъюгата. Например, это может повысить направляющую эффективность конъюгата. Два акта трансформации/отщепления могут происходить в различных внеклеточных/внутриклеточных положениях. В этом случае можно использовать фрагмент, который должен быть удален в процессе второго отщепления или, как следствие, второй трансформации, чтобы обеспечить транспорт Z из первого внеклеточного или внутриклеточного положения во второе внеклеточное или внутриклеточное положение.
Должно быть понятно, что V2 фрагмент формулы (VI) можно использовать не только в конъюгатах соединений формул (I) или (II), но его можно использовать в аналогичных конъюгатах с другими терапевтическими агентами, диагностическими фрагментами, и т.п.
Следует понимать, что функциональный фрагмент V2 может иметь несколько объединенных функциональных свойств. Например, V2 может быть фрагментом, который улучшает фармакокинетические свойства соединения настоящего изобретения и в то же самое время является направляющим к мишени фрагментом или содержит указанный фрагмент.
Конъюгаты настоящего изобретения могут содержать один или более из профрагментов. Указанные профрагменты могут быть одинаковыми или различными. Присутствие двух или более профрагментов может благоприятно влиять на свойства конъюгата. Например, это может повысить водорастворимость и/или увеличить направляющую эффективность конъюгата. В одном варианте, если присутствуют два или более из профрагментов, указанные профрагменты отличаются друг от друга. Два или более из различающихся профрагментов могут обладать различными функциями и могут быть удалены при различных условиях и в различных внеклеточных/внутриклеточных положениях.
В одном варианте присутствует один профрагмент, связанный с Z.
В другом варианте присутствует один профрагмент, связанный с Z через X1.
В другом варианте присутствуют два профрагмента, связанные с Z.
В другом варианте присутствуют два профрагмента, связанные с Z, один из которых соединен через X1.
В еще одном варианте присутствуют три профрагмента, связанные с Z.
В еще одном варианте присутствуют три профрагмента, связанные с Z, один из которых соединен через Х1.
В одном варианте соединение формулы (III) представлено соединением формулы (III-1) или (III-2):
Figure 00000056
В другом варианте соединение формулы (III) представлено соединением формулы (III-3) или (III-4):
Figure 00000057
Figure 00000058
где Y' соединен с атомом, который является частью R8, R9, R10 или R11.
В одном варианте p представляет целое число от 1 (включительно) до 128 (включительно). В другом варианте q представляет целое число от 1 (включительно) до 1000 (включительно). В других вариантах p представляет целое число от 1 (включительно) до 64 (включительно), или 32 (включительно), или 16 (включительно), или 8 (включительно), или 4 (включительно), или 2 (включительно). В других вариантах q представляет целое число от 1 (включительно) до 500 (включительно), или 400 (включительно), или 300 (включительно), или 200 (включительно), или 100 (включительно), или 16 (включительно), или 8 (включительно), или 6 (включительно), или 4 (включительно) или 2 (включительно).
В одном варианте, если более чем 1 профрагмент соединен с первым Z и в одном из профрагментов присутствует более одного сайта присоединения для Z фрагментов, тогда другой из указанных профрагментов, соединенных с указанным первым Z, содержит один сайт присоединения для Z фрагмента.
В одном варианте соединение формулы (III) представлено как
Figure 00000059
В одном варианте p в соединении формулы (IIIa) представлен 1.
В другом варианте в соединении формулы (IIIa) p представлен 1 и z равно q.
В другом варианте соединение формулы (IIIa) представлено как
Figure 00000060
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров, где R1a представляет хлор (Cl) или бром (Br), (AA)aa выбирают из валилцитруллина, валиллизина, фенилаланиллизина, аланилфенилаланиллизина и D-аланилфенилаланиллизина, ss представляет 1 или 2, R2a и R5b представляют метил и H, соответственно, или H и метил, соответственно, R8d выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси, R9d выбирают из H и метокси, LL выбирают из
Figure 00000061
qq принимает значения от 1 до около 20, rr и rr', каждый, независимо принимает значения от 1 до около 4, и Ab представляет антитело или его фрагмент или его производное.
В одном варианте соединение формулы (III) представлено как
Figure 00000062
В одном варианте p* в соединении формулы (IIIa*) представляет 1.
В другом варианте в соединении формулы (IIIa*) p* представляет 1 и z* равно q*.
В другом варианте соединение формулы (III) представлено как
Figure 00000063
В одном варианте p в соединении формулы (IIIb) представляет 1.
В одном варианте соединение формулы (III) представлено как
Figure 00000064
В одном варианте p* в соединении формулы (IIIb*) представляет 1.
В другом варианте в соединении формулы (IIIb*) p* представляет 1 и z* равно q*.
В другом варианте V1 в соединении формулы (IIIb*) представляет отщепляемый ферментом субстрат. В еще одном варианте V1 может быть отщеплен внутриклеточным ферментом. В другом варианте V1 представляет необязательно замещенную диалкиламинокарбонильную группу, где две алкильные группы могут быть одинаковыми или различными, и необязательно могут быть соединены друг с другом с образованием необязательно замещенного карбоцикла или гетероцикла. В еще одном варианте V1 представляет пиперазинокарбонил. В другом варианте соединение формулы (IIIb*) представлено как
Figure 00000065
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров, где R1a представляет хлор (Cl) или бром (Br), (AA)aa выбирают из валилцитруллина, валиллизина, фенилаланиллизина, аланилфенилаланиллизина, и D-аланилфенилаланиллизина, ss представляет 1 или 2, R2a и R5b представляют метил и H, соответственно, или H и метил, соответственно, R8d выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино, (пиперидин-4-ил)метокси, 2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси, и 2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси, R9d выбирают из H и метокси, LL выбирают из
Figure 00000066
qq принимает значения от 1 до около 20, rr и rr' каждый независимо принимает значения в интервале от 1 до около 4, и Ab представляет антитело или его фрагмент или его производное.
В другом варианте соединение формулы (III) представлено как
Figure 00000067
В еще одном варианте соединение формулы (III) представлено как
Figure 00000068
В одном варианте соединение формулы (IIId) представлено как
Figure 00000069
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров, где R1a представляет хлор (Cl) или бром (Br), (AA)aa выбирают из валилцитруллина, валиллизина, фенилаланиллизина, аланилфенилаланиллизина, и D-аланилфенилаланиллизина, ss представляет 1 или 2, R2a и R5b представляют метил и H, соответственно, или H и метил, соответственно, R8e выбирают из 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино и (пиперидин-4-ил)метокси, в котором карбонил, соединенный с R8e присоединен к атому азота в R8e, R9d выбирают из H и метокси, LL выбирают из
Figure 00000070
qq' принимает значения от 1 до около 20, rr и rr1, каждый, независимо принимает значения в интервале от 1 до около 4, и Ab представляет антитело или его фрагмент или его производное.
В одном варианте рассматриваемое изобретение относится к соединению формулы (IIIdl) или (IIId2):
Figure 00000071
где V1 представляет моносахарид, дисахарид или олигосахарид из гексоз, или пентоз, или гептоз, которые могут также быть включены в группу дезоксисахаров или аминосахаров и принадлежать к D-ряду или L-ряду и в дисахаридах или олигосахаридах являются идентичными или различными, или где V1 имеет формулу -C(ORa')Rb'CHRc'Rd', где Ra', Rb', Rc' и Rd' имеют указанные выше значения.
В одном варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000072
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров, где R8c выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси и 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино и R9c выбирают из H и OCH3.
В более специфическом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000073
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом более специфическом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000074
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом более специфическом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000075
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом более специфическом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000076
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом более специфическом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000077
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В одном варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000078
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000079
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000080
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000081
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000082
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000083
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000085
или его (1R,10S) изомером, его (1R,10R) изомером, его (1S,10S) изомером, или смесью двух или более из указанных изомеров.
В другом варианте соединение настоящего изобретения представлено как
Figure 00000086
или его (1R) изомером или смесью двух изомеров.
Синтез, in vitro цитотоксичность и биологическая оценка соединений настоящего изобретения
Как более подробно раскрыто далее, соединения формул (I), (II) и (III), также как и соединения формулы (IV), можно удобно получить способом, который частично аналогичен способам получения соединений, раскрытых, например, в WO 01/83448, DE 4415463, WO 2004/043493 и WO 02/083180.
В одном из вариантов соединения формул (I) или (II) используют для получения соединения формулы (III). В другом варианте соединения формул (I) или (II) используют для получения соединения формулы (IV). В другом варианте соединение формулы (IV) используют для получения соединения формулы (III). В другом варианте соединение формулы (III), где V1 представляет защитную группу, используют для получения другого соединения формулы (III), где V1 представляет in vivo удаляемый фрагмент.
Некоторые связывающие DNA фрагменты, содержащие водорастворимую группу, были получены с хорошими выходами. На фиг.4 раскрыт синтез связывающего DNA соединения 13, содержащего 5-(2-(морфолин-4-ил)этокси) группу. 4-нитрофенол 9 алкилируют 4-(2-хлорэтил)морфолином, получая соединение 10. В результате восстановления нитрогруппы до получения соединения 11 и последующего индольного синтеза Фишера получают индол 12. После омыления в итоге получают соединение 13 с 37% полным выходом.
На фиг.5 раскрыт синтез связывающего DNA соединения 19. Исходя из альдегида 14, в результате алкилирования получают соединение 15, и последующая альдольная конденсация приводит к получению азида 16. После замыкания кольца получают индол 17, который омыляют до соединения 18. Замещение хлорида диметиламином приводит к получению соединения 19 с 50% полным выходом.
На фиг.6 раскрыт синтез связывающего DNA соединения 27, исходя из этилизонипекотата (20). В результате метилирования получают соединение 21, после чего следует восстановление сложноэфирной группы до получения соединения 22. Его присоединяют к 1-хлор-4-нитробензолу (23), получая соединение 24. Восстановление нитрогруппы дает соединение 25. Индольный синтез Фишера приводит к соединению 26; последующее омыление дает соединение 27 с 40% полным выходом.
Получение связывающего DNA соединения 30 представлено на фиг.7. Исходя из сложного эфира 28, восстановление нитрогруппы и последующее присоединение N,N-диметилглицина дает соединение 29. Омыление сложноэфирной группы дает в итоге соединение 30 с 68% выходом.
На фиг.8 представлено получение связывающего DNA соединения 41 и его использование для получения Boc-защищенного связывающего DNA соединения 37, связывающего DNA соединения 38, и трет-бутил-защищенного связывающего DNA соединения 39.
На фиг.2 представлено частичное удаление защитных групп дважды защищенного алкилирующего DNA соединения 1, с последующим присоединением аминогруппы со связывающими DNA соединениями 2, 13, 19, 27, 30, 37, 38 и 39, соответственно. Это приводит к получению защищенных соединений 3a-h, защитные группы у которых удаляют, получая агенты 4a-h.
На фиг.9 представлен синтез агента 45 из соединения 44 и связывающего DNA соединения 2 в соответствии со схемой, аналогичной схеме для получения агентов 4a-h. Соединение 44 получают аналогично получению соединения 110, используя в качестве исходного материала o-толуальдегид вместо бензальдегида.
Аналогично, на фиг.10 представлен синтез агента 33. Исходя из соединения 31, в результате частичного удаления защитных групп с последующим присоединением к связывающему DNA соединению 2, получают соединение 32. После удаления защитных групп получают агент 33.
На фиг.3 представлен синтез нескольких конъюгатов галактозы. Исходя из алкилирующих фрагментов 5 с частично удаленными защитными группами, присоединяя О-(2,3,4,6-тетра-O-ацетил-α-D-галактопиранозил)трихлорацетимидат (6), с последующим удалением защитных групп и присоединением связывающего DNA фрагмента, получают защищенные конъюгаты 7a-e. Синтез конъюгатов 7b и 7d требует дополнительной стадии восстановления с использованием PtO2·H2O/H2. Окончательное удаление защитных групп приводит к получению конъюгатов галактозы (1S,10R)-8a-e/(1R,10S)-8a'.
Аналогично, на фиг.11 представлен синтез конъюгата 36. Исходя из соединения 34, в результате присоединения соединения 6, удаления защитных групп и присоединения DNA связывающего 2, получают соединения (1S,10R)-35/(1R,l0S)-35', которые превращают в соединения 36/36', используя метанолиз.
На фиг.12 представлен синтез конъюгатов линкер-агент 47a-47f. Исходя из агента 4a, в результате активации фенольной гидроксильной группы, присоединения Boc-защищенного N,N'-диметилэтилендиамина или пиперазина и удаления защитных групп аминогруппы получают соединения 46a и 46b. В результате реакции присоединения активированных пара-нитрофенилкарбонатом линкерных конструкций 57a, 57b и 58 получают соединения 47a-47d и защищенные соединения 47e-47f. Соединения 47e-47f получают в результате последующего удаления защитных групп, катализируемого палладием. Активированные линкерные конструкции получают в соответствии со схемой, представленной на фиг.15. Короче, реакции присоединения соединения 51a и цитруллина или соединения 51b и Boc-защищенного лизина дают соединение 52a или соединение 52b, соответственно. Присоединение пара-аминобензилового спирта к соединению 52a дает соединение 53, которое превращают в соединения 57a и 57b, удаляя защитные группы пиперидином, осуществляя реакцию присоединения соединений 55 и 56, соответственно, и активируя гидроксильные группы бис(пара-нитрофенил)карбонатом. Замена Boc-группы на Aloc группу в 52b с последующим присоединением пара-аминобензилового спирта дает соединение 54, которое превращают в соединение 58 аналогично превращению соединения 53 в 57b. Соединения 59b и 60 получают из соединений 57b и 58, присоединяя пара-аминобензиловый спирт и активируя гидроксильную группу. Соединение 59a получают в 5 стадий из соединения 53.
На фиг.13 раскрыт синтез конъюгатов линкер-агент 48c и 48d из 47c и 47d, соответственно, с помощью катализируемой Cu(I) реакции с содержащим малеимид ацетиленом.
На фиг.14 раскрыт синтез конъюгатов линкер-агент 50a-50c, исходя из соединения 49. Соединение 49 получают из соединения 5, вводя вначале метилпиперазиновый фрагмент аналогично способу, представленному на фиг.12, с последующим присоединением к связывающему DNA соединению 37 в соответствии со схемой, представленной на фиг.2. Удаление защитных групп у соединения 49 с последующим присоединением к активированным пара-нитрофенилкарбонатом линкерным конструкциям 59a, 59b и 60, приводит к получению соединений 50a-50b и защищенного соединения 50c. Соединение 50c получают после последующего удаления защитных групп, катализируемого палладием. Соединения 47e, 47f, 50b и 50c можно превратить в соединения, аналогичные соединению 48c, используя катализируемое Cu(I) циклоприсоединение к ацетилену 40. Конъюгаты (1S,10R)-8a и (1R,10S)-8a' тестируют в in vitro анализе на цитотоксичность против клеточной линии карциномы легких A549 (фиг.16). Смесь диастереомеров (1S,10R)-8a и (1R,10S)-8a' демонстрирует ИК50 против A549 клеток 7900 нМ в отсутствие фермента β-D-галактозидазы, тогда как ИК50 в присутствии указанного фермента составляет 1,2 нМ. Это означает, что коэффициент цитотоксичности, ИК50 в отсутствие фермента, деленное на ИК50 в присутствии фермента, составляет 6583. Конъюгат (1S,10R)-8a демонстрирует ИК50 в отсутствие фермента 3600, тогда как ИК50 снижается до 0,75 нМ в присутствии фермента β-D-галактозидазы, и коэффициент цитотоксичности принимает значение 4800. Конъюгаты 8b-e тестируют в той же самой клеточной линии, и было показано, что их коэффициент цитотоксичности аналогичен или существенно выше, чем коэффициенты, о которых сообщалось ранее (см. ссылку 10), причем агенты 4b-e демонстрируют наномолярную или субнаномолярную активность.
Соединение (+)-8a оценивают в модели ортотопической опухоли молочной железы SCID на мышах, используя концепцию ADEPT. Самок мышей штамма SCID инокулируют клетками 1×106 MDA-MB-231 (эстроген-независимая клеточная линия человеческих раковых клеток молочной железы), суспендированными в 25 мкл стерильной PBS в the mammary fad pat 4го комплекса молочной железы. Опухоли предоставляют расти, и ADEPT терапию начинают после того, как объем опухоли достигает детектируемых размеров. Мышей обрабатывают в соответствии со схемой лечения, представленной на фиг.17, и проводят два цикла обработки моноклональным анти-человеческим урокиназным плазминогенным активаторным рецептором (uPAR) антителом, конъюгированным с β-галактозидазой, uPAR*β-Gal, в PBS с последующими тремя инъекциями конъюгата (+)-8a в 1% растворе ДМСО/NaCl. Контрольным группам вводят или антитело-фермент и 1% раствор ДМСО/NaCl (антитело-фермент одна группа), PBS и конъюгат (конъюгат одна группа), или PBS и 1% раствор ДМСО/NaCl (контрольная группа). После одного цикла обработки средний объем первичных опухолей у ADEPT-обработанных мышей достигает 0,23±0,07 см3, тогда как средний объем первичных опухолей у обработанных носителем мышей составляет 0,27±0,10 см3. После двух циклов обработки было обнаружено, что средние объемы составляют 0,33±0,13 см3 и 0,52±0,29 см3 для ADEPT-обработанной группы и для контрольной группы, соответственно (фиг.18). Ингибирующий эффект для концепции ADEPT на скорость роста опухоли оказывается несколько более выраженным после второго цикла терапии. Повышенный ингибирующий эффект на рост опухоли наблюдается у мышей с относительно небольшими опухолями к моменту начала терапии (данные не представлены). Кроме того, опухоли, обработанные по способу ADEPT терапии, демонстрируют более некротические ткани внутри опухоли, чем ткани опухолей у мышей, обработанных носителем. Обработка или отдельно uPAR*β-Gal, или одним только конъюгатом, не демонстрирует никакого ингибирующего эффекта на рост опухоли по сравнению с контролем - носителем. ADEPT хорошо переносится всеми животными. Общее состояние животных в день умерщвления было аналогично состоянию мышей, которым вводили только носитель. Параметры крови у мышей, подвергнутых терапии, не отличались от параметров контрольных животных.
Эквивалентный in vivo эксперимент осуществляют в модели на сингенных мышах, используя клетки лимфомы A20 и анти-CD19 моноклональное антитело. В соответствии с той же самой процедурой обработки, которая раскрыта выше, лимфомы, подвергнутые ADEPT терапии, продемонстрировали ингибирование роста опухолей.
Применение, методы и композиции
В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению соединений формул (I) или (II) для получения соединения формулы (III).
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (IV) для получения соединения формулы (III).
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению соединений формул (I) или (II) для получения соединения формулы (IV).
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (III), где V1 представляет защитную группу, для получения другого соединения формулы (III), где V1 представляет in vivo удаляемый фрагмент.
В еще одном аспекте рассматриваемое изобретение относится к применению любого из определенных выше соединений для приготовления фармацевтической композиции для лечения нуждающегося в этом млекопитающего. В одном варианте рассматриваемое изобретение относится к применению любого из определенных выше соединений для приготовления фармацевтической композиции для лечения опухоли у млекопитающего.
Рассматриваемое изобретение также относится к любому определенному выше соединению как лекарственному средству, или активному компоненту, или активному веществу в лекарственном средстве.
В следующем аспекте рассматриваемое изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, содержащей определенное выше соединение, для получения твердой или жидкой композиции для введения орально, наружно или путем инъекций. Такой способ или процесс, по меньшей мере, включает стадию перемешивания соединения с фармацевтически приемлемым носителем.
В одном варианте соединение настоящего изобретения применяют для лечения заболевания, характеризующегося нежелательной пролиферацией. В другом варианте соединение настоящего изобретения применяют для лечения заболевания, характеризующегося нежелательной клеточной пролиферацией. В другом варианте соединение настоящего изобретения применяют для лечения опухоли. В еще одном варианте соединение настоящего изобретения применяют для лечения воспалительного заболевания. В еще одном варианте соединение настоящего изобретения применяют для лечения аутоиммунного заболевания. В еще одном варианте соединение настоящего изобретения применяют для лечения бактериальной или микробной инфекции.
В следующем варианте настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, заболевание которого характеризуется нежелательной (клеточной) пролиферацией, соединением настоящего изобретения. В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения опухоли у млекопитающего соединением настоящего изобретения. В еще одном варианте настоящее изобретение относится к способу лечения воспалительного заболевания у млекопитающего соединением настоящего изобретения. В еще одном варианте настоящее изобретение относится к способу лечения аутоиммунного заболевания у млекопитающего соединением настоящего изобретения. В еще одном варианте настоящее изобретение относится к способу лечения бактериальной или микробной инфекции соединением настоящего изобретения.
В следующем варианте рассматриваемое изобретение относится к способу лечения нуждающегося в этом млекопитающего, причем указанный способ включает введение млекопитающему фармацевтической композиции, включающей соединение настоящего изобретения, в терапевтически эффективной дозе.
В одном варианте рассматриваемое изобретение относится к способу лечения или предупреждения опухоли у млекопитающего, причем указанный способ включает введение млекопитающему фармацевтической композиции, включающей соединение настоящего изобретения, в терапевтически эффективной дозе.
В другом варианте рассматриваемое изобретение относится к способу лечения или предупреждения воспалительного заболевания у млекопитающего, причем указанный способ включает введение млекопитающему фармацевтической композиции, включающей соединение настоящего изобретения, в терапевтически эффективной дозе.
В другом варианте рассматриваемое изобретение относится к способу лечения или предупреждения аутоиммунного заболевания у млекопитающего, причем указанный способ включает введение млекопитающему фармацевтической композиции, включающей соединение настоящего изобретения в терапевтически эффективной дозе.
В другом варианте рассматриваемое изобретение относится к способу лечения или предупреждения бактериальной или микробной инфекции у млекопитающего, причем указанный способ включает введение млекопитающему фармацевтической композиции, включающей соединение настоящего изобретения в терапевтически эффективной дозе.
Рассматриваемое изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим соединения настоящего изобретения, как определено выше. Соединение настоящего изобретения можно вводить в очищенной форме вместе с фармацевтическим носителем в виде фармацевтической композиции. Предпочтительная форма зависит от предполагаемого способа введения и терапевтического применения. Фармацевтический носитель может быть любым совместимым нетоксичным веществом, пригодным для доставки соединения настоящего изобретения пациенту. Фармацевтически приемлемые носители хорошо известны специалистам и включают, например, водные растворы, такие как (стерильная) вода или физиологически буферированный солевой раствор или носители, такие как гликоли, глицерин, масла, такие как оливковое масло, или органические сложные эфиры для инъекций, спирт, жиры, воски и инертные твердые вещества. Фармацевтически приемлемые носители могут далее содержать физиологически приемлемые соединения, которые действуют, например, как стабилизаторы или повышают абсорбцию соединений настоящего изобретения. Такие физиологически приемлемые соединения включают, например, углеводороды, такие как глюкоза, сахароза или декстраны, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или глутатион, хелатирующие агенты, низкомолекулярные белки или другие стабилизаторы или эксципиенты. Специалистам должно быть известно, что выбор фармацевтически приемлемого носителя, включая физиологически приемлемое соединение, зависит, например, от способа введения композиции. Фармацевтически приемлемые адъюванты, буферирующие агенты, диспергирующие агенты, и т.п., также могут быть включены в фармацевтические композиции.
Для орального введения активный ингредиент можно вводить в твердых дозовых формах, таких как капсулы, таблетки и порошки, или в жидких дозовых формах, таких как эликсиры, сиропы и суспензии.
Активный компонент (компоненты) могут быть заключены в желатиновые капсулы вместе с неактивными ингредиентами и порошковыми носителями, такими как глюкоза, лактоза, сахароза, маннит, крахмал, целлюлоза или производные целлюлозы, стеарат магния, стеариновая кислота, натрийсахарин, тальк, карбонат магния и т.п. Примеры дополнительных неактивных ингредиентов, которые можно добавлять для достижения желательного цвета, вкуса, стабильности, буферирующей способности, дисперсности или других известных желательных характеристик, включают красный оксид железа, силикагель, натрийлаурилсульфат, диоксид титана, съедобные белые чернила и т.п. Аналогичные разбавители можно использовать для получения прессованных таблеток. Как таблетки, так и капсулы можно приготовить в виде продуктов с замедленным выделением для достижения непрерывного выделения лекарственного средства в течение часов. Прессованные таблетки могут быть покрыты сахаром или покрыты пленкой, чтобы замаскировать любой неприятный вкус и защитить таблетки от атмосферных воздействий, или они могут быть с желудочным покрытием для селективного распада в желудочно-кишечном тракте. Жидкие дозовые формы для орального введения могут содержать красящие и вкусовые агенты для улучшения приема их пациентом.
Соединения настоящего изобретения предпочтительно, однако, вводить парентерально. Препараты соединения настоящего изобретения для парентерального введения должны быть стерильными. Стерилизация легко осуществляется путем фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны, необязательно до или после лиофилизации и восстановления. Парентеральный способ введения соединений настоящего изобретения осуществляется в соответствии с, например, инъекцией или вливанием внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, интраартериально или в пораженный участок. Соединения настоящего изобретения можно вводить непрерывно путем вливаний или путем болюсных инъекций. Типичная композиция для внутривенного вливания должна содержать вплоть до от 100 до 500 мл стерильного 0,9% NaCl или 5% глюкозы, необязательно дополненных 20% раствором альбумина, и от 1 мг до 10 г соединения настоящего изобретения, в зависимости от конкретного типа соединения настоящего изобретения и требуемого режима введения доз. Способы получения композиций для парентерального введения хорошо известны специалистам и раскрыты более подробно в различных источниках, включая, например, Remington's Pharmaceutical Science19.
Рассматриваемое изобретение иллюстрируется далее следующими примерами. Указанные примеры служат только иллюстративным целям и никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
rac-{(1,10)-Анти-5-бензилокси-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1-(10-хлорэтил)-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индол} (rac-3a)
Рацемическое соединение 1 (100 мг, 228 мкмоль) суспендируют в 4M HCl/EtOAc и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрируют и сушат в вакууме в течение 1 часа. Остаток растворяют в ДМФ (10 мл). Раствор охлаждают до 0ºC и добавляют EDC·HCl (131 мг, 684 мкмоль, 3,0 эквив.) и соединение 2 (82,0 мг, 288 мкмоль, 1,3 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов, разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 и экстрагируют этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2C12/MeOH=10:1) получают рацемическое соединение 3 в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (81 мг, 143 мкмоль, 63%).
1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,65 (д, J=6,8 Гц, 3H, 11-CH3), 2,37 (c, 6H, NMe2), 2,78 (т, J=5,8 Гц, 2H, 2″-H2), 3,96-4,03 (м, 1H, 1-H), 4,12 (т, J=5,8 Гц, 2H, 1″-H2), 4,51-4,66 (м, 2H, 2-Ha, 10-H), 4,88 (мс, 1H, 2-Hb), 5,29 (мс, 2H, OCH2Ph), 7,06 (д, J=2,3 Гц, 1H, 3′-H), 7,07 (дд, J=8,5, 2,4 Гц, 1H, 6′-H), 7,15 (д, J=2,4 Гц, 1H, 4′-H), 7,31-7,46, 7,50-7,57 (м, 8H, 7-H, 7′-H, 8-H, 5×Ph-H), 7,71 (д, J=8,3 Гц, 1H, 9-H), 8,17 (сушир., 1H, 4-H), 8,36 (д, J=8,5 Гц, 1H, 6-H), 9,51 (сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, CDCl3): δ=24,0 (11-CH3), 46,0 (NMe2), 47,6 (C-1), 53,7 (C-2), 58,5 (C-2″), 59,9 (C-10), 66,6 (C-1″), 70,3 (OCH2Ph), 98,2 (C-4), 103,5 (C-4'), 105,9 (C-3'), 112,7 (C-7′), 117,2 (C-6', C-5a), 122,6, 123,7, 123,7, 123,9 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 127,5, 127,6, 128,0, 128,2, 128,6 (C-3a′, C-8,5×Bn-CH), 130,0, 130,8, 131,3 (C-2′, C-7a′, C-9a), 136,8 (Bn-C), 142,4 (C-3a), 153,9 (C-5'), 155,6 (C-5), 160,4 (C=O);
MC (EI, 70 eV): m/z (%) = 567,4 (1) [M]+, 531,5 (5) [M-Cl]+; C34H34ClN3O3 (568,11): рассчитано 567,2289, найдено 567,2289 (EI-HRMS).
Пример 2
rac-{(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индол гидрохлорид} (rac-4a)
Рацемическое соединение 3a (200 мг, 352 мкмоль) растворяют в смеси 4M HCl/этилацетат (15 мл) и перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Раствор концентрируют. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем суспендируют в ТГФ (15 мл). Затем добавляют при комнатной температуре 10% палладий на активированном угле (75 мг) и аммонийформиат (25% водный раствор, 0,75 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при 40ºC и фильтруют через целит, который тщательно промывают метанолом (200 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 5:1, 1% конц. HCl), получая rac-4a виде порошка зелено-желтого цвета (146 мг, 284 мкмоль 81%).
1H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=1,62 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 2,84 (c, 6H, NMe2), 3,51 (т, J=5,0 Гц, 2H, 2″-H2), 4,16 (мс, 1H, 1-H), 4,39 (т, J=5,0 Гц, 2H, 1″-H2), 4,57 (мс, 1H, 2-Ha), 4,66-4,80 (м, 2H, 2-Hb, 10-H), 6,99 (дд, J=8,9, 2,4 Гц, 1H, 6′-H), 7,16 (д, J=1,6 Гц, 1H, 3'-H), 7,25 (д, J=2,4 Гц, 1H, 4′-H), 7,35 (т, J=7,6 Гц, 1H, 7-H), 7,44 (д, J=8,9 Гц, 1H, 7′-H), 7,50 (т, J=7,6 Гц, 1H, 8-H), 7,88 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 7,96 (сушир., 1H, 4-H), 8,13 (д, J=8,4 Гц, 1H, 6-H), 10,39 (c, 1H, OH), 10,87 (сушир., 1H, NH+), 11,64 (сущир., 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 42,7 (NMe2), 45,8 (C-1), 52,1 (C-2), 55,4 (C-2"), 61,5 (C-10), 63,0 (C-1″), 100,3 (C-4), 104,0 (C-4′), 105,2 (C-3′), 113,2 (C-7′), 115,5, 115,8 (C-6', C-5a), 122,1, 122,8, 122,9, 123,1 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 126,9, 127,4 (C-3a′, C-8), 129,8, 131,3, 131,9 (C-2′, C-7a′, C-9a), 142,1 (C-3a), 152,0 (C-5'), 153,8 (C-5), 159,8 (C=O);
MC (ESI): m/z (%) = 478,4 (100) [M-Cl+H]+; C27H29Cl2N3O3 (514,44): рассчитано 478,1892, найдено 478,1892, [M-Cl]+ (ESI-HRMS).
Пример 3
[(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-2,3,4,6-тетра-O-ацетил-β-D-галактопиранозид ((+)-7a/(-)-7a')
Раствор rac-5 (381 мг, 1,10 ммоль) в сухом CH2C12 (50 мл) и молекулярные сита 4Ǻ (1,5 г) перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После добавления О-(2,3,4,6-тетра-O-ацетил-α-D-галактопиранозил)трихлорацетимидата (6) (564 мг, 1,15 ммоль, 1,05 эквив.), полученную смесь охлаждают до -10ºC, и медленно добавляют раствор BF3·OEt2 (69,0 мкл, 548 мкмоль, 0,5 эквив.) в сухом CH2C12 (5,5 мл). Через 3 часа при -10ºC добавляют дополнительную порцию BF3·OEt2 (0,42 мл, 3,29 ммоль, 3,0 эквив.) в сухом CH2C12 (5,0 мл) и полученную смесь нагревают до комнатной температуры. Через 5 часов полученный раствор отделяют от молекулярных сит, молекулярные сита тщательно промывают CH2C12 (2×20 мл), и объединенные органические части концентрируют в вакууме. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем растворяют в сухом ДМФ (60 мл). Раствор охлаждают до 0ºC, и добавляют EDC·HCl (630 мг, 3,29 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 2 (468 мг, 1,64 ммоль, 1,5 эквив.). Через 20 часов при комнатной температуре реакционную смесь разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл), и затем экстрагируют этилацетатом (4×100 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2C12/MeOH = 10:1) получают смесь диастереомеров 7a и 7a' в виде твердого вещества желтого цвета (475 мг, 588 мкмоль, 54%). MC (ESI): m/z (%) = 1637 (52) [2M+Na]+, 830,3 (66) [M+Na]+, 808,3 (100) [M+H]+.
Пример 4
[(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индол-5-ил]-β-D-галактопиранозид ((+)-8a/(-)-8a')
К раствору 7a/7a' (473 мг, 585 мкмоль) в сухом MeOH (20 мл) добавляют NaOMe в метаноле (0,22 мл примерно 5,4M раствора, 1,17 ммоль, 2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов и разбавляют водой (5 мл). Добавляют ионообменную смолу (Amberlite-IR 120) до тех пор, пока рН раствора не достигает нейтральных значений. Раствор концентрируют в вакууме и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH =1:1), получая смесь 8a и 8a' в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (307 мг, 480 мкмоль, 82%).
1H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6): δ=1,65 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 2,24 (c, 6H, NMe2), 2,66 (т, J=5,7 Гц, 2H, 2″-H2), 3,41-3,73 (м, 4H, 2″′-H*, 4″′-H*, 6″′-H2), 3,75-3,86 (м, 2H, 3″′-H*, 5″′-H*), 4,07 (т, J=5,7 Гц, 2H, 1″-H2), 4,21-4,28 (м, 1H, 1-H), 4,49-4,67 (м, 3H, 2×OH, 2-Ha), 4,68-5,00 (м, 4H, 1″′-H, 2-Hb, 10-H, OH), 5,30 (сушир., 1H, OH), 6,92 (дд, J=8,8, 2,4 Гц, 1H, 6′-H), 7,13-7,20 (м, 2H, 3′-H, 4′-H), 7,38-7,45 (м, 2H, 7-H, 7′-H), 7,57 (мс, 1H, 8-H), 7,96 (мс, 1H, 9-H), 8,23 (сушир., 1H, 4-H), 8,32-8,38 (м, 1H, 6-H), 11,62 (сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (150 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 45,5 (NMe2), 45,9/46,0 (C-1), 52,1 (2 сигнала)(C-2), 57,8 (C-2"), 59,7/59,8 (C-6″′), 61,3 (2 сигнала)(C-10), 66,3 (C-1"), 67,6/67,7, 70,5/70,6, 73,2 (2 сигнала), 75,2 (2 сигнала)(C-2"', C-3"', C-4″′, C-5″′), 101,9 (C-4), 102,1/102,3 (C-1″′), 103,3 (2 сигнала)(C-4′), 105,4 (C-3′), 113,2 (C-7′), 115,9 (2 сигнала)(C-6′), 118,9 (2 сигнала)(C-5a), 122,90, 123,0, 123,3/123,4, 123,6/123,6 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 127,3 (C-8), 127,5 (C-3a′), 129,5 (2 сигнала), 130,9, 131,7 (2 сигнала)(C-2′, C-7a′, C-9a), 141,9/142,0 (C-3a), 153,0 (2 сигнала)(C-5′), 153,6 (2 сигнала)(C-5), 160,1/160,2 (C=O);
MC (ESI): m/z (%)= 1301,0 (100) [2M+2H]+, 662,3 (82) [M+Na]+, 640,3 (76) [M+H]+; C33H38C1N3O8 (640,12): рассчитано 640,2420, найдено 640,2420, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Оба диастереомера получают отдельно в соответствии с аналогичными процедурами, исходя из (+)-5 и (-)-5, соответственно.
Пример 5
4-[2-(4-Нитрофенокси)этил]морфолин (10)
Раствор KOH (3,3 г, 58 ммоль) в EtOH (15 мл) добавляют по каплям к раствору 4-нитрофенола (9) (7,0 г, 50 ммоль) в EtOH (10 мл). После перемешивания в течение 30 минут при комнатной температуре соль собирают фильтрованием, промывают холодным EtOH и сушат в вакууме, получая калиевую соль соединения 9 в виде твердого вещества желтого цвета (7,1 г, 40 ммоль). Полученную соль (7,1 г, 40 ммоль) растворяют в толуоле (100 мл), добавляют раствор 4-(2-хлорэтил)морфолина (6,5 г, 43 ммоль) в толуоле (100 мл), и полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 24 час. После охлаждения до комнатной температуры полученный осадок выделяют фильтрованием, тщательно промывают толуолом и полученный фильтрат концентрируют в вакууме, получая соединение 10 в виде твердого вещества светло-желтого цвета (7,2 г, 57% полный выход), которое используют на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=2,54-2,64 (м, 4H, 3-H2, 5-H2), 2,84 (т, J=5,5 Гц, 2H, 1′-H2), 3,69-3,78 (м, 4H, 2-H2, 6-H2), 4,20 (т, J=5,5 Гц, 2H, 2'-H2), 6,92-7,01 (м, 2H, 2"-H, 6"-H), 8,16-8,25 (м, 2H, 3"-H, 5"-H) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=54,1 (C-3, C-5), 57,3 (C-1′), 66,7 (C-2′), 66,9 (C-2, C-6), 114,5 (C-2″, C-6″), 125,9 (C-3″, C-5″), 141,6 (C-4″), 163,7 (C-1″) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 252 (8) [M]+, 100 (100) [M-CH2OC6H4-NO2]+.
Пример 6
4-(2-(Морфолин-4-ил)этокси)фениламин (11)
Раствор соединения 10 (6,00 г, 23,8 ммоль) в 95% EtOH (40 мл) гидрируют над Pd/C (10%, 350 мг) при 58 пси H2 в течение 1 часа при комнатной температуре. Образовавшийся твердый продукт удаляют фильтрованием через целит, который тщательно промывают EtOH (100 мл) и MeOH (50 мл); полученный фильтрат концентрируют в вакууме, получая соединение 11 (5,29 г, количественно) в виде красновато-коричневого масла, которое используют на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=2,57 (мс, 4H, 3″-H2, 5″-H2), 2,76 (т, J=5,8 Гц, 2H, 2′-H2), 3,40 (сушир., 2H, NH2), 3,73 (мс, 4H, 2″-H2, 6″-H2), 4,03 (т, J=5,8 Гц, 2H, 1′-H2), 6,59-6,66 (м, 2H, 2-H, 6-H), 6,71-6,78 (м, 2H, 3-H, 5-H) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=54,0 (C-3″, C-5″), 57,7 (C-2′), 66,3 (C-1′), 66,8 (C-2″, C-6″), 115,7 (C-3, C-5), 116,2 (C-2, C-6), 140,2 (C-1), 151,7 (C-4) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 222 (17) [M]+, 100 (100) [M-CH2OC6H4-NH2]+.
Пример 7
Этиловый эфир 5-(2-(морфолин-4-ил)этокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (12)
Перемешиваемый раствор 4-(2-(морфолин-4-ил)этокси)фениламина (11) (4,00 г, 18,0 ммоль) в воде (38 мл) и концентрированную HCl (12 мл) обрабатывают по каплям при 0ºC раствором NaNO2 (1,36 г, 19,8 ммоль) в воде (3,8 мл), и полученную смесь перемешивают в течение 30 минут при 0ºC (раствор A). Этил 2-метилацетоацетат (2,75 мл, 18,9 ммоль) добавляют по каплям к суспензии NaOAc (15,3 г) в EtOH (29 мл) при 0ºC. После перемешивания в течение 30 минут при этой температуре добавляют лед (18 г) (раствор B). Затем раствор A добавляют к раствору B, перенося канюлю при 0ºC, полученную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение еще 2,5 часа. После этого реакционную смесь подщелачивают, медленно добавляя насыщенный водный раствор Na2CO3 при 0ºC, и экстрагируют CH2Cl2 (3×200 мл). Объединенные органические слои промывают водой (300 мл), сушат (MgSO4) и растворитель удаляют в вакууме. Остаток затем растворяют в абсолютном EtOH (15 мл), обрабатывают свежеприготовленным насыщенным раствором HCl в абсолютном EtOH (15 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 40 минут. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток разделяют между водой (50 мл) и CH2Cl2 (100 мл). Водный слой подщелачивают, используя насыщенный водный раствор Na2CO3, и экстрагируют CH2Cl2 (3×100 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (200 мл), сушат (MgS04) и концентрируют в вакууме. В результате кристаллизации из iPr2O и обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH, 20:1) остатка. После выпаривания маточного раствора получают соединение 12 (4,07 г, 71% полный выход) в виде твердого вещества желтого цвета.
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,41 (т, J=7,1 Гц, 3H, OCH2CH3), 2,61 (мс, 4H, 3″-H2, 5″-H2), 2,84 (т, J=5,7 Гц, 2H, 2′-H2), 3,76 (мс, 4H, 2″-H2, 6″-H2), 4,15 (т, J=5,7 Гц, 2H, 1′-H2), 4,40 (кв, J=7,1 Гц, 2H, OCH2CH3), 6,99 (дд, J=9,0, 2,4 Гц, 1H, 6-H), 7,08 (д, J=2,4 Гц, 1H, 4-H), 7,13 (д, J=1,3 Гц, 1H, 3-H), 7,30 (д, J=9,0 Гц, 1H, 7-H), 9,13 (сушир., 1H, NH) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=14,4 (OCH2CH3), 54,1 (C-3″, C-5″), 57,7 (C-2′), 60,9 (OCH2CH3), 66,2 (C-1′), 66,9 (C-2″, C-6″), 103,7 (C-4), 108,1 (C-3), 112,7 (C-7), 117,3 (C-6), 127,7, 127,9 (C-2, C-3a), 132,3 (C-7a), 153,7 (C-5), 162,0 (C=O) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 318 (14) [M]+, 100 (100) [CH2N(CH2)4О]+; C17H22N2O4 (318,37): рассчитано C 64,13, Н 6,97; найдено C 63,85, Н 7,12.
Пример 8
Гидрохлорид 5-(2-(морфолин-4-ил)этокси)-1H-индол-2-карбоновой кислоты (13)
Суспензию эфира соединения 12 (1,02 г, 3,20 ммоль) в MeOH (8 мл) обрабатывают раствором NaOH (150 мг, 3,75 ммоль) в воде (4 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов. После охлаждения до комнатной температуры рН раствора доводят до pH 6, используя 1M HCl, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в MeOH, добавляют по каплям 1M HCl и образовавшийся осадок собирают фильтрованием, получая соединение 13 (727 мг, 70%) в виде твердого вещества коричневого цвета. Очистка остатка, полученного при выпаривании маточного раствора с помощью колоночной фильтрации на силикагеле (MeOH, 1% конц. HCl), дает вторую порцию соединения 13 (232 мг, 22%).
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=3,07-3,61 (м, 6H, 2′-H2, 3″-H2, 5″-H2), 3,76-4,06 (м, 4H, 2″-H2, 6″-H2), 4,43 (т, J=5,0 Гц, 2H, 1′-H2), 6,98 (дд, J=8,9, 2,3 Гц, 1H, 6-H), 7,01 (д, J=1,8 Гц, 1H, 3-H), 7,20 (д, J=2,3 Гц, 1H, 4-H), 7,37 (д, J=8,9 Гц, 1H, 7-H), 11,39 (сушир., 1H, NH+), 11,65 (c, 1H, NH), 12,85 (сушир., 1H, CO2H) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, ДМСО-d6): δ=51,6 (C-3″, C-5″), 54,9 (C-2′), 62,8 (C-1′), 63,1 (C-2″, C-6″), 103,9 (C-4), 106,9 (C-3), 113,5 (C-7), 115,9 (C-6), 127,0 (C-2), 129,0 (C-3a), 133,0 (C-7a), 152,0 (C-5), 162,6 (C=O) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 290 (6) [M-Cl]+, 100 (100) [CH2N(CH2)4О]+; C15H19ClN2O4 (326,78): рассчитано C 55,13, Н 5,86; найдено C 54,96, Н 5,81.
Пример 9
(+)-{(1,10)-Анти-5-бензилокси-3-[(5-(2-(морфолин-4-ил)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1-(10-хлорэтил)-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол} ((+)-3b)
(+)-1 (150 мг, 342 мкмоль) суспендируют в смеси 4M HCl/этилацетат (14 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Полученную смесь затем концентрируют и сушат в вакууме в течение 1 часа. Остаток растворяют в ДМФ (10 мл), раствор охлаждают до 0ºC, и добавляют EDC·HCl (197 мг, 1,03 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 13 (146 мг, 445 мкмоль, 1,3 эквив.). Через 21 час при комнатной температуре добавляют этилацетат (50 мл) воду (50 мл) и насыщенный водный раствор NaHCO3 (50 мл), и полученную смесь экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои сушат солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2C12/MeOH = 30:1) получают (+)-3b в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета (156 мг, 256 мкмоль, 75%).
1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,62 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 2,61 (мс, 4H, 3″′-H2, 5″′-H2), 2,83 (т, J=5,8 Гц, 2H, 2″-H2), 3,76 (мс, 4H, 2″′-H2, 6″′-H2), 3,89-3,98 (м, 1H, 1-H), 4,15 (т, J=5,8 Гц, 2H, 1″-H2), 4,47-4,61 (м, 2H, 2-Ha, 10-H), 4,85 (мс, 1H, 2-Hb), 5,25 (мс, 2H, OCH2Ph), 6,94-7,02 (м, 2H, 3′-H, 6′-H), 7,12 (д, J=2,3 Гц, 1H, 4′-H), 7,29-7,57 (м, 8H, 7-H, 7′-H, 8-H, 5×Ph-H), 7,68 (д, J=8,2 Гц, 1H, 9-H), 8,19 (сушир., 1H, 4-H), 8,34 (д, J=8,2 Гц, 1H, 6-H), 9,88 (сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, CDCl3): δ=24,0 (11-CH3), 47,5 (C-1), 53,6 (C-2), 54,1 (C-3″′, C-5″′), 57,8 (C-2″), 59,9 (C-10), 66,3 (C-1″), 66,9 (C-2″′, C-6″′), 70,3 (OCH2Ph), 98,2 (C-4), 103,7 (C-4′), 105,8 (C-3′), 112,8 (C-7′), 117,0, 117,2 (C-6′, C-5a), 122,6 (C-9), 123,7, 123,7, 123,9 (C-6, C-7, C-9b), 127,4, 127,6, 127,9, 128,1, 128,5 (C-3a′, C-8, 5×Bn-CH), 130,0, 130,8, 131,5 (C-2′, C-7a′, C-9a), 136,7 (Bn-C), 142,4 (C-3a), 153,7 (C-5′), 155,6 (C-5), 160,5 (C=O);
MC (EI, 70 eV): m/z (%) = 609,2 (1) [M]+, 573,1 (3) [M-Cl-H]+, 100,0 (100) [CH2(CH2)4О]+. C36H36CIN3O4 (610,14): рассчитано 609,2394, найдено 609,2394 (EI-HRMS).
Пример 10
(+)-{(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(морфолин-4-ил)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индолгидрохлорид} ((+)-4b)
Раствор (+)-3b (80 мг, 131 мкмоль) в смеси 4M HCl/этилацетат (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Полученную смесь затем концентрируют и сушат в вакууме в течение 1 часа. Остаток суспендируют в ТГФ (8 мл), добавляют 10% палладий на активированном угле (28 мг) и аммонийформиат (25% водный раствор, 0,28 мл). Реакционную смесь перемешивают при 40ºC в течение 1 часа и затем фильтруют через целит, который промывают метанолом (150 мл). Полученный фильтрат концентрируют, и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2C12/MeOH = 5:1, 0,1% конц. HCl), получая (+)-4b в виде твердого вещества желтого цвета (67 мг, 120 мкмоль, 92%).
1H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=1,62 (д, J=6,5 Гц, 3H, 11-CH3), 3,14-3,63 (м, 6H, 2″-H2, 3″′-H2, 5″′-H2), 3,83-4,03 (м, 4H, 2″′-H2, 6″′-H2), 4,12-4,21 (м, 1H, 1-H), 4,41-4,64 (м, 3H, 1″-H2, 2-Ha), 4,64-4,82 (м, 2H, 2-Hb, 10-H), 7,00 (дд, J=9,0, 1,8 Гц, 1H, 6'-H), 7,16 (сушир., 1H, 3′-H), 7,25 (мс, 1H, 4′-H), 7,35 (мс, 1H, 7-H), 7,41-7,55 (м, 2H, 7′-H, 8-H), 7,88 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 7,98 (сушир., 1H, 4-H), 8,14 (д, J=8,3 Гц, 1H, 6-H), 10,42 (c, 1H, OH), 11,65 (c, 1H, NH), 11,93 (сушир., 1H, NH+); 13C-ЯМР (75 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 45,9 (C-1), 51,6 (C-3″′, C-5″′), 52,1 (C-2), 54,9 (C-2″), 61,5 (C-10), 62,8 (C-1″), 63,0 (C-2″′, C-6″′), 100,4 (C-4), 104,0 (C-4′), 105,2 (C-3′), 113,2 (C-7′), 115,6, 115,9 (C-6′, C-5a), 122,2 (C-9b), 122,8, 122,9, 123,1 (C-6, C-7, C-9), 126,9 (C-8), 127,4 (C-3a′), 129,8, 131,3, 131,9 (C-2′, C-7a′, C-9a), 142,1 (C-3a), 151,9 (C-5′), 153,9 (C-5), 159,8 (C=O);
MC (ESI): m/z (%) = 520,1 (100) [M-Cl]+; C29H31Cl2N3O4 (556,48): рассчитано 520,2003, найдено 520,1998, [M-C1]+ (ESI-HRMS).
Пример 11
[(+)-(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-3-[(5-(2-(морфолин-4-ил)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-2,3,4,6-тетра-О-ацетил-β-D-галактопиранозид ((+)-7b)
Раствор (+)-5 (142 мг, 408 мкмоль) в сухом CH2C12 (18 мл) и молекулярные сита 4Ǻ (0,8 г) перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После добавления О-(2,3,4,6-тетра-О-ацетил-β-D-галактопиранозил)трихлорацетимидата (6) (207 мг, 0,420 ммоль, 1,03 эквив.), полученную смесь охлаждают до -10ºC и медленно добавляют раствор BF3·OEt2 (26 мкл, 205 мкмоль, 0,5 эквив.) в сухом CH2C12 (2,0 мл). Через 4 часа при -10ºC добавляют дополнительную порцию BF3·OEt2 (0,155 мл, 1,22 ммоль, 3,0 эквив.) в сухом CH2C12 (1,9 мл), и полученную смесь нагревают до комнатной температуры. Через 5 часов раствор отделяют от молекулярных сит, молекулярные сита тщательно промывают CH2Cl2 (2×10 мл) и объединенные органические части концентрируют в вакууме. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем растворяют в сухом ДМФ (19 мл). Раствор охлаждают до 0ºC, и добавляют EDC·HCl (235 мг, 1,23 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 13 (200 мг, 0,612 ммоль, 1,5 эквив.). Через 20 часов при комнатной температуре реакционную смесь разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл) и затем экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 10:1) получают N-оксид (+)-7b в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета (142 мг, 164 мкмоль, 40%).
К раствору N-оксида (67 мг, 77 мкмоль) в сухом этаноле (15 мл) добавляют PtO2·H2O (6 мг, 21 мкмоль, 0,3 эквив.). Затем через реакционную смесь барботируют водород в течение 5 часов. Реакционную смесь фильтруют через целит и указанный целит тщательно промывают метанолом (50 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 10:1), получая (+)-7b в виде твердого вещества желтого цвета (53 мг, 62 мкмоль, 81%). C43H48ClN3O13 (850,31): рассчитано 850,2954, найдено 850,2948, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 12
[(+)-(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-3-[(5-(2-(морфолин-4-ил)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-β-D-галактопиранозид ((+)-8b)
К раствору соединения 7a (51 мг, 60 мкмоль) в сухом MeOH (6 мл) добавляют NaOMe в метаноле (22 мкл примерно 5,4M раствора, 120 мкмоль, 2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут и разбавляют водой (2 мл) и метанолом (2 мл). Добавляют ионообменную смолу (Amberlite-IR 120) до тех пор, пока рН раствора не достигает нейтральных значений. Смолу удаляют и промывают метанолом (10 мл). Объединенные органические части концентрируют в вакууме и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (градиент: CH2Cl2/MeOH = 10:1 // CH2Cl2/MeOH = 4:1). Полученное твердое вещество промывают пентаном (4×15 мл), получая соединение 8b в виде твердого вещества желтого цвета (37 мг, 54 мкмоль, 90%).
1H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6): δ=1,65 (д, J=6,6 Гц, 3H, 11-CH3), 2,48-2,52 (м, 4H, 3″′-H2, 5″′-H2), 2,73 (т, J=5,8 Гц, 2H, 2"-H2), 3,45-3,70 (м, 8H, 2″′-H2, 6″′-H2, 3″″-H, 5″″-H, 6″″-H2), 3,76-3,85 (м, 2H, 2″″-H, 4″″-H), 4,11 (т, J=5,8 Гц, 2H, 1″-H2), 4,25 (мс, 1H, 1-H), 4,52-4,65 (м, 3H, 2-Ha, 2×OH), 4,72-4,79 (м, 1H, 2-Hb), 4,79-4,88 (м, 2H, 10-H, OH), 4,92 (мс, 1H, 1″′-H), 5,30 (сушир., 1H, OH), 6,92 (дд, J=8,9, 2,4 Гц, 1H, 6′-H), 7,14-7,20 (м, 2H, 3′-H, 4′-H), 7,40 (д, J=8,8 Гц, 1H, 7′-H), 7,43 (мс, 1H, 7-H), 7,57 (мс, 1H, 8-H), 7,96 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 8,22 (сушир., 1H, 4-H), 8,36 (д, J=8,5 Гц, 1H, 6-H), 11,63 (c, 1H, NH); 13C-ЯМР (150 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 46,0 (C-1), 52,1 (C-2), 53,6 (C-3″′, C-5″′), 57,1 (C-2″), 59,5 (C-6″″), 61,3 (C-10), 65,9 (C-1″), 66,2 (C-2″′, C-6″′), 67,5 (C-4″″), 70,6 (C-2″″), 73,2 (C-3″″), 75,1 (C-5″″), 101,9 (C-4), 102,3 (C-1″″), 103,4 (C-4′), 105,4 (C-3′), 113,2 (C-7′), 115,9 (C-6′), 118,9 (C-5a), 122,9, 123,0, 123,4, 123,7 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 127,3, 127,5 (C-3a′, C-8), 129,5, 130,9, 131,7 (C-2′, C-7a′, C-9a), 142,0 (C-3a), 152,9 (C-5′), 153,6 (C-5), 160,1 (C=O);
MC (ESI): m/z (%) = 1385,1 (13) [2M+Na]+, 704,3 (100) [M+Na]+, 682,3 (32) [M+H]+; C35H40ClN3O9 (682,16): рассчитано 682,2531, найдено 682,2526, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 13
3-(2-Хлорэтокси)-4-метоксибензальдегид (15)
Смесь 3-гидрокси-4-метоксибензальдегида (14) (10,0 г, 65,7 ммоль), K2CO3 (45,4 г, 329 ммоль), 1,2-дихлорэтана (104 мл, 1,31 моль) и ДМФ (300 мл) перемешивают при 65-70ºC в течение 16 часов. После охлаждения 1,2-дихлорэтан удаляют при пониженном давлении, оставшуюся взвесь выливают на лед и полученную смесь экстрагируют Et2O (3×250 мл) и EtOAc (4×250 мл). Объединенные органические слои промывают водой (4×400 мл) и солевым раствором (2×400 мл), сушат (MgSO4) и растворитель удаляют в вакууме. В результате кристаллизации из смеси EtOAc/гексан получают соединение 15 (11,9 г, 84%) в виде бесцветных иголок.
1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=3,88 (т, J=6,1 Гц, 2H, 2′-H2), 3,97 (c, 3H, OMe), 4,35 (т, J=6,1 Гц, 2H, 1′-H2), 7,01 (д, J=8,1 Гц, 1H, 5-H), 7,43 (д, J=1,8 Гц, 1H, 2-H), 7,51 (дд, J=8,1, 1,8 Гц, 1H, 6-H), 9,86 (c, 1H, CHO) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=41,5 (C-2′), 56,2 (OMe), 68,9 (C-1′), 111,0, 111,3 (C-2, C-5), 127,4 (C-6), 129,9 (C-1), 148,1 (C-3), 154,9 (C-4), 190,7 (CHO) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 214 (100) [M]+, 151 (57) [M-(CH2)2Cl]+; C10H11ClO3 (214,65): рассчитано C 55,96, Н 5,17; найдено C 56,04, Н 4,97.
Пример 14
Метиловый эфир 2-азидо-3-[3-(2-хлорэтокси)-4-метоксифенил]акриловой кислоты (16)
NaN3 (22,2 г, 341 ммоль) медленно добавляют к раствору метилхлорацетата (20,0 мл, 227 ммоль) в ДМСО (100 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 24 часов, добавляют воду (150 мл), и полученную смесь экстрагируют Et2O (3×100 мл). Объединенные органические фракции сушат (MgSO4) и концентрируют в вакууме до 50 мл. Затем добавляют раствор альдегида 15 (5,37 г, 25,0 ммоль) в MeOH (50 мл), и полученную смесь охлаждают до -30ºC. Затем реакционную смесь обрабатывают смесью 5,4M NaOMe/MeOH (35,0 мл, 189 ммоль) в течение 30 минут при -30ºC, нагревают до 0ºC и разбавляют MeOH (50 мл). После перемешивания в течение 16 часов при 0ºC, добавляют воду (200 мл) и полученную смесь экстрагируют CH2Cl2 (3×200 мл). Объединенные органические фракции промывают солевым раствором (200 мл), сушат (MgSO4) и растворитель удаляют в вакууме, получая соединение 16 (6,84 г, 88% из 15) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета, которое используют на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=3,84 (т, J=6,1 Гц, 2H, 2″-H2), 3,87, 3,88 (2×c, 6H, OMe, CO2Me), 4,29 (т, J=6,1 Гц, 2H, 1"-H2), 6,83 (c, 1H, 1′-H), 6,87 (д, J=8,5 Гц, 1H, 5-H), 7,36 (дд, J=8,5, 2,1 Гц, 1H, 6-H), 7,53 (д, J=2,1 Гц, 1H, 2-H) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=41,6 (C-2″), 52,8 (CO2Me), 56,0 (OMe), 69,3 (C-1″), 111,5 (C-2), 116,2 (C-5), 123,4 (C-2′), 125,4, 126,0, 126,2 (C-1, C-1′, C-6), 147,1, 150,9 (C-3, C-4), 164,1 (C=O) м.д.
Пример 15
Метиловый эфир 5-(2-хлорэтокси)-6-метокси-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (17)
Раствор соединения 16 (6,81 г, 21,8 ммоль) в толуоле (200 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 4 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрируют в вакууме. Образовавшийся осадок выделяют фильтрованием и сушат в вакууме, получая соединение 17 (4,48 г, 72%) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета.
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=3,82, 3,84 (2×c, 6H, OMe, CO2Me), 3,93 (т, J=5,3 Гц, 2H, 2′-H2), 4,21 (т, J=5,3 Гц, 2H, 1′-H2), 6,92 (c, 1H, 7-H), 7,02 (д, J=1,5 Гц, 1H, 3-H), 7,15 (c, 1H, 4-H), 11,62 (сушир., 1H, NH) м.д. - 13C ЯМР (50,3 МГц, ДМСО-d6): δ=42,9 (C-2′), 51,3 (CO2Me), 55,5 (OMe), 69,4 (C-1′), 94,8 (C-7), 105,6 (C-4), 107,9 (C-3), 119,7 (C-3a), 125,4 (C-2), 133,2 (C-7a), 144,1 (C-5), 149,8 (C-6), 161,4 (C=O) м.д.
MC (70 tV, EI): m/z (%) = 283(100) [M]+, 220 (50) [M-(CH2)2Cl]+ - C13H14ClNO4 (283,71): рассчитано C 55,04, Н 4,97, найдено C 54,86, Н 5,06.
Пример 16
5-(2-Хлорэтокси)-6-метокси-1H-индол-2-карбоновая кислота (18)
Суспензию сложного эфира 17 (2,00 г, 7,05 ммоль), Cs2CO3 (3,45 г, 10,6 ммоль), 95% EtOH (40 мл) и воду (20 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 8 час. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляют в вакууме, остаток обрабатывают водой (50 мл) и полученный раствор подкисляют 2M HCl. Образовавшийся осадок выделяют фильтрованием, промывают водой (100 мл) и сушат в вакууме, получая соединение 18 (1,80 г, 95%) в виде твердого вещества бежевого цвета.
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=3,81 (c, 3H, OMe), 3,93 (т, J=5,3 Гц, 2H, 2′-H2), 4,21 (т, J=5,3 Гц, 2H, 1′-H2), 6,91 (c, 1H, 7-H), 6,96 (д, J=2,1 Гц, 1H, 3-H), 7,15 (c, 1H, 4-H), 11,44 (сушир., 1H, NH), 12,57 (сушир., 1H, CO2H) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, ДМСО-d6): δ=43,0 (C-2′), 55,6 (OMe), 69,5 (C-1′), 94,9 (C-7), 105,8 (C-4), 107,5 (C-3), 119,8 (C-3a), 126,8 (C-2), 133,0 (C-7a), 143,9 (C-5), 149,5 (C-6), 162,4 (C=O) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 269 (100) [M]+, 206 (58) [M-(CH2)2Cl]+; C12H12ClNO4 (269,68): рассчитано C 53,44, Н 4,49, найдено C 53,54, Н 4,29.
Пример 17
Гидрохлорид 5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)-6-метокси-lH-индол-2-карбоновой кислоты (19)
Смесь кислоты 18 (300 мг, 1,11 ммоль), 40% водного раствора Me2NH (2,81 мл, 22,2 ммоль), Na2CO3 (295 мг, 2,78 ммоль) и воды (20 мл) перемешивают при 100ºC в течение 1,5 часа. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в воде (15 мл) и полученный раствор подкисляют, используя 2M HCl. Затем раствор выпаривают досуха, и полученный сырой продукт очищают, используя колоночную хроматографию на силикагеле (MeOH/CH2Cl2, 10:1, 1% конц. HCl), получая твердое вещество зеленого цвета, которое растворяют в воде. Нерастворимый силикагель удаляют фильтрованием, воду удаляют при пониженном давлении и остаток сушат в вакууме, получая соединение 19 (343 мг, 98%) в виде твердого вещества серо-зеленого цвета.
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=2,87 (c, 6H, NMe2), 3,49 (т, J=5,0 Гц, 2H, 2′-H2), 3,82 (c, 3H, OMe), 4,34 (т, J=5,0 Гц, 2H, 1′-H2), 6,94 (c, 1H, 7-H), 6,97 (д, J=1,8 Гц, 1H, 3-H), 7,23 (c, 1H, 4-H), 10,99 (сушир., 1H, NH+), 11,50 (сушир. 1H, NH), 12,60 (сушир., 1H, CO2H) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, ДМСО-d6): δ=42,7 (NMe2), 55,2 (C-2′), 55,6 (OMe), 64,5 (C-1′), 94,8 (C-7), 106,2 (C-4), 107,5 (C-3), 119,7 (C-3a), 127,0 (C-2), 133,2 (C-7a), 143,4 (C-5), 149,4 (C-6), 162,4 (C=O) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 278 (7) [M-HCl]+, 58 (100) [CH2NMe2]+; C14H19C1N2O4 (314,76): рассчитано 278,1267 [M-HCl]+, найдено 278,1267.
Пример 18
(+)-{(1,10)-Анти-5-бензилокси-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)-6-метоксииндол-2-ил)карбонил]-1-(10-хлорэтил)-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол} ((+)-3c)
(+)-1 (150 мг, 342 мкмоль) суспендируют в смеси 4M HCl/EtOAc и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час. Реакционную смесь концентрируют и сушат в вакууме в течение 1,5 часа. Остаток растворяют в ДМФ (10 мл). Раствор охлаждают до 0ºC и добавляют EDC·HCl (197 мг, 1,03 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 19 (140 мг, 445 мкмоль, 1,3 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 часов, разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл) и экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2C12/MeOH = 10:1) получают соединение (+)-3c в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета (134 мг, 224 мкмоль, 66%).
1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,60 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 2,35 (c, 6H, NMe2), 2,80 (т, J=6,1 Гц, 2H, 2″-H2), 3,28 (c, 3H, OCH3), 3,89-3,98 (м, 1H, 1-H), 4,09 (т, J=6,1 Гц, 2H, 1"-H2), 4,48-4,65 (м, 2H, 2-Ha, 10-H), 4,78-4,88 (м, 1H, 2-Hb), 5,26 (мс, 2H, OCH2Ph), 6,71 (c, 1H, 7'-H), 6,98 (д, J=1,5 Гц, 1H, 3'-H), 7,07 (c, 1H, 4′-H), 7,22-7,43, 7,45-7,56 (2×м, 7H, 7-H, 8-H, 5×Ph-H), 7,67 (д, J=8,2 Гц, 1H, 9-H), 8,35 (д, J=8,3 Гц, 1H, 6-H), 8,39 (сушир., 1H, 4-H), 10,68 (сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, CDCl3): δ=23,8 (11-CH3), 45,8 (NMe2), 47,4 (C-1), 53,5 (C-2), 55,2 (OCH3), 58,0 (C-2″), 59,7 (C-10), 67,4 (C-1″), 70,4 (OCH2Ph), 93,9 (C-7′), 98,5 (C-4), 104,8 (C-4′), 106,5 (C-3′), 117,3 (C-5a), 120,5 (C-3a′), 122,4 (C-9), 123,5, 123,6, 123,9 (C-6, C-7, C-9b), 127,5 (2 сигнала), 127,9, 128,5, (C-8, 5×Bn-CH), 128,7, 129,9, 132,3 (C-2′, C-7a′, C-9a), 136,6 (Bn-C), 142,7 (C-3a), 145,0 (C-5'), 150,4 (C-6′), 155,5 (C-5), 160,5 (C=O);
MCS (ESI): m/z (%) = 1217,0 (19) [2M+Na]+, 598,2 (100) [M+H]+; C35H36ClN3O4 (598,13): рассчитано 598,2473, найдено 598,2467, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 19
(+)-{(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)-6-метоксииндол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индолгидрохлорид} ((+)-4c)
Соединение (+)-3c (80 мг, 134 мкмоль) растворяют в смеси
4M HCl/этилацетат (15 мл) и перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Раствор концентрируют. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем суспендируют в ТГФ (8 мл). Затем добавляют 10% палладий на активированном угле (29 мг) и аммонийформиат (25% водный раствор, 0,29 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 минут при 40ºC и фильтруют через целит, который тщательно промывают метанолом (150 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме, и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 5:1, 0,1% конц. HCl), получая соединение (+)-4c в виде порошка зелено-желтого цвета (63 мг, 116 мкмоль, 86%).
1H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=1,63 (д, J=6,6 Гц, 3H, 11-CH3), 2,89 (c, 6H, NMe2), 3,51 (мс, 2H, 2″-H2), 3,84 (c, 3H, OCH3), 4,11-4,20 (мс, 1H, 1-H), 4,39 (мс, 2H, 1″-H2), 4,50-4,82 (м, 3H, 2-H2, 10-H), 7,04 (c, 1H, 7′-H), 7,14 (д, J=1,5 Гц, 1H, 3′-H), 7,30 (c, 1H, 4′-H), 7,34 (мс, 1H, 7-H), 7,50 (мс, 1H, 8-H), 7,87 (д, J=8,2 Гц, 1H, 9-H), 7,99 (c, 1H, 4-H), 8,13 (д, J=8,2 Гц, 1H, 6-H), 10,40 (c, 1H, OH), 11,18 (сушир., 1H, NH+), 11,51 (сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 42,8 (NMe2), 45,9 (C-1), 52,1 (C-2), 55,3 (C-2″), 55,6 (OCH3), 61,5 (C-10), 64,6 (C-1″), 94,7 (C-7′), 100,4 (C-4), 105,9 (C-3′), 106,6 (C-4′), 115,6 (C-5a), 120,1 (C-3a′), 122,1 (C-9b), 122,7, 122,8 (C-7, C-9), 123,1 (C-6), 126,9 (C-8), 129,4, 129,8 (C-2′, C-9a), 132,3 (C-7a′), 142,3 (C-3a), 143,4 (C-5′), 149,3 (C-6′), 153,8 (C-5), 159,7 (C=O);
MCS (ESI): m/z (%) = 508,2 (100) [M-Cl]+; C28H31Cl2N3O4 (544,47): рассчитано 508,2003, найдено 508,1998, [M-C1]+ (ESI-HRMS).
Пример 20
[(+)-(1S,10R)-1-(10-Хлорэтил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)-6-метоксииндол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индол-5-ил]-2,3,4,6-тетра-О-ацетил-β-D-галактопиранозид ((+)-7c)
Раствор (+)-5 (106 мг, 305 мкмоль) в сухом CH2Cl2 (14 мл) и молекулярные сита 4Ǻ (0,8 г) перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После добавления О-(2,3,4,6-тетра-О-ацетил-α-D-галактопиранозил)трихлорацетимидата (6) (155 мг, 314 мкмоль, 1,03 эквив.) полученную смесь охлаждают до -10ºC и медленно добавляют раствор BF3·OEt2 (19 мкл, 152 мкмоль, 0,5 эквив.) в сухом CH2Cl2 (1,5 мл). Через 4 часа при -10ºC добавляют дополнительную порцию BF3·OEt2 (116 мкл, 914 мкмоль, 3,0 эквив.) в сухом CH2Cl2 (1,4 мл), и полученную смесь нагревают до комнатной температуры. Через 5 часов полученный раствор отделяют от молекулярных сит, молекулярные сита тщательно промывают CH2Cl2 (2×10 мл), и объединенные органические части концентрируют в вакууме. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем растворяют в сухом ДМФ (14 мл). Раствор охлаждают до 0ºC, и добавляют EDC·HCl (175 мг, 914 мкмоль, 3,0 эквив.) и соединение 19 (144 мг, 457 мкмоль, 1,5 эквив.). Через 22 часа при комнатной температуре реакционную смесь разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл) и затем экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. После обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 10:1) получают соединение (+)-7c в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета (128 мг, 153 мкмоль, 50%). C42H48ClN3O13 (838,30): рассчитано 838,2957, найдено 838,2948, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 21
[(+)-(1S,10R)-1-(10-Хлорэтил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)этокси)-6-метоксииндол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индол-5-ил]-β-D-галактопиранозид ((+)-8c)
К раствору соединения (+)-7c (125 мг, 149 мкмоль) в сухом MeOH (7 мл) добавляют NaOMe в метаноле (55 мкл примерно 5,4M раствора, 298 мкмоль, 2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут и разбавляют метанолом (9 мл) и водой (5 мл). Ионообменную смолу (Amberlite-IR 120) добавляют до тех пор, пока рН раствора не достигает нейтральных значений. Раствор концентрируют в вакууме, и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 1:1), получая соединение (+)-8c в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (86 мг, 128 мкмоль, 86%).
1H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6): δ=1,66 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 2,25 (c, 6H, NMe2), 2,66 (т, J=6,0 Гц, 2H, 2″-H2), 3,47 (мс, 1H, 3″′-H), 3,53-3,59 (м, 2H, 5″′-H, 6″′-Ha), 3,67 (мс, 1-H, 6″′-Hb), 3,77-3,83 (м, 5H, 2″′-H, 4″′-H, OCH3), 4,05 (т, J=6,0 Гц, 2H, 1″-H2), 4,24 (мс, 1H, 1-H), 4,54-4,77 (м, 4H, 2×OH, 2-H2), 4,82 (мс, 1H, 10-H), 4,85-4,99 (м, 2H, 1″′-H, OH), 5,32 (сушир., 1H, OH), 6,98 (c, 1H, 7'-H), 7,14 (сушир., 1H, 3′-H), 7,18 (c, 1H, 4′-H), 7,42 (т, J=7,7 Гц, 1H, 7-H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 1H, 8-H), 7,95 (д, J=8,6 Гц, 1H, 9-H), 8,23 (сушир., 1H, 4-H), 8,35 (д, J=8,6 Гц, 1H, 6-H), 11,48 (c, 1H, NH); 13C-ЯМР (150 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 45,6 (NMe2), 46,0 (C-1), 52,0 (C-2), 55,6 (OCH3), 57,8 (C-2″), 59,6 (C-6″′), 61,3 (C-10), 67,2 (C-1″), 67,5 (C-4″′), 70,6 (C-2″′), 73,3 (C-3″′), 75,2 (C-5″′), 94,7 (C-7′), 101,9 (C-4), 102,3 (C-1″′), 104,7 (C-4′), 106,1 (C-3′), 118,6 (C-5a), 120,3 (C-3a′), 122,8 (C-9), 122,9 (C-9b), 123,4 (C-6), 123,5 (C-7), 127,2 (C-8), 128,9, 129,5 (C-2′, C-9a), 131,8 (C-7a′), 142,2 (C-3a), 144,6 (C-5′), 149,4 (C-6'), 153,6 (C-5), 160,1 (C=O);
MC (ESI): m/z (%) = 670,3 (100) [M+H]+; C34H40ClN3O9 (670,15): рассчитано 670,2531. найдено 670,2526, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 22
Этиловый эфир 1-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты (21)
Этил изонипекотат (20) (5,00 г, 31,8 ммоль) растворяют в смеси лед-ледяная уксусная кислота (3,80 г, 63,6 ммоль) и воды (11 мл). Затем добавляют 37% водный раствор формальдегида (2,85 мл, 38,2 ммоль) и реакционную смесь гидрируют над Pd/C (10%, 338 мг) при 58 пси H2 в течение 3,5 часа при комнатной температуре. Твердую часть удаляют фильтрованием через целит, который тщательно промывают водой (50 мл), и полученный фильтрат доводят до pH 11, используя 1 M NaOH при охлаждении. Полученный раствор экстрагируют Et2O (5×100 мл), объединенные органические фракции сушат (MgSO4) и растворитель удаляют при пониженном давлении, получая соединение 21 (5,44 г, количественно) в виде бесцветной жидкости, которую используют на следующей стадии без дальнейшей очистки.
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,25 (т, J=7,1 Гц, 3H, OCH2CH3), 1,69-2,06 (м, 6H, 2-Hax, 3-H2, 5-H2, 6-Hax), 2,18-2,32 (м, 1H, 4-H), 2,27 (c, 3H, NMe), 2,75-2,87 (м, 2H, 2-Heq, 6-Heq), 4,13 (кв, J=7,1 Гц, 2H, OCH2CH3) м.д. - 13C ЯМР (75,5 МГц, CDCl3): δ=14,1 (OCH2CH3), 28,2 (C-3, C-5), 40,5 (C-4), 46,3 (NMe), 54,9 (C-2, C-6), 60,2 (OCH2CH3), 175,0 (C=O) м.д.
MC (70 eV, EI): m/z (%)= 171 (31) [M]+, 142 (59) [M-CH2CH3]+, 126 (40) [M-OCH2CH3]+, 98 (56) [M-CO2Et]+. -C9H17NO2 (171,24).
Пример 23
(1-Метилпиперидин-4-ил)метанол (22)
Раствор сложного эфира 21 (10,1 г, 59,0 ммоль) в Et2O
(40 мл) добавляют по каплям к суспензии LiAlH4 (2,46 г, 64,9 ммоль) в Et2O (200 мл) при 0ºC. Затем реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и затем перемешивают в течение 4 часов при этой температуре. Медленно добавляют воду (10 мл) и перемешивание продолжают в течение еще 30 мин. Образовавшийся белый осадок выделяют фильтрованием и тщательно промывают Et2O (250 мл). После удаления растворителя при пониженном давлении полученное масло очищают перегонкой (температура кипения 108ºC, 14 мбар), получая спирт 22 (6,40 г, 84%) в виде бесцветного масла. - Rf = 0,53 (CH2Cl2/MeOH, 5:1, 5% NEt3, PMA: темно-синий).
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,28 (дкв, J=12,2, 3,7 Гц, 2H, 3-Hax, 5-Hax), 1,38-1,55 (м, 1H, 4-H), 1,68-1,79 (м, 2H, 3-Heq, 5-Heq), 1,93 (дт, J=11,8, 2,3 Гц, 2H, 2-Hax, 6-Hax), 2,26 (c, 3H, NMe), 2,82-2,92 (м, 2H, 2-Heq, 6-Heq), 3,12 (сушир., 1H, OH), 3,46 (д, J=6,4 Гц, 2H, CH2OH) м.д. - 13C ЯМР (75,5 МГц, CDCl3): δ=28,8 (C-3, C-5), 37,9 (C-4), 46,3 (NMe), 55,5 (C-2, C-6), 67,4 (CH2OH) м.д.
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 129 (55) [M]+, 128 (100) [M-H]+, 112 (10) [M-OH]+, 98 (21) [M-CH2OH]+. - C7H15NO (129,20).
Пример 24
1-Метил-4-(4-нитрофеноксиметил)пиперидин (24)
Смесь 1-хлор-4-нитробензола (23) (2,37 г, 15,0 ммоль), спирта 22 (1,94 г, 15,0 ммоль) и ДМСО (25 мл) обрабатывают порциями NaH (60% в минеральном масле, 660 мг, 16,5 ммоль) при 40ºC. Полученную смесь перемешивают при 70ºC в течение 3 часов, выливают в воду (150 мл) и экстрагируют Et2O (5×100 мл). Объединенные органические фракции промывают водой (250 мл) и солевым раствором (250 мл), сушат (MgSO4) и растворитель удаляют в вакууме. Полученный твердый продукт перекристаллизовывают из Et2O, получая соединение 24 (3,12 г, 83%) в виде иголок желтого цвета.
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,36-1,56 (м, 2H, 3-Hax, 5-Hax), 1,75-1,91 (м, 3H, 3-Heq, 4-H, 5-Heq), 1,98 (дт, J=11,9, 1,9 Гц, 2H, 2-Hax, 6-Hax), 2,30 (c, 3H, NMe), 2,85-2,98 (м, 2H, 2-Heq, 6-Heq), 3,90 (д, J=5,8 Гц, 2H, OCH2), 6,94 (мс, 2H, 2'-H, 6'-H), 8,19 (мс, 2H, 3'-H, 5'-H) м.д. - 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=28,9 (C-3, C-5), 35,1 (C-4), 46,4 (NMe), 55,3 (C-2, C-6), 73,3 (OCH2), 114,3 (C-2′, C-6′), 125,8 (C-3′, C-5′), 141,3 (C-4′), 164,1 (C-1′) м.д.-
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 250 (79) [M]+, 249 (100) [M-H]+. - C13H18N2O3 (250,29): рассчитано C 62,38, Н 7,25; найдено C 62,25, Н 7,40.
Пример 25
4-((1-Метилпиперидин-4-ил)метокси)фениламин (25)
Раствор l-метил-4-(4-нитрофеноксиметил)пиперидина (24) (1,0 г, 4,0 ммоль), MeOH (20 мл), и концентрированной HCl (1 мл) гидрируют над Pd/C (10%, 100 мг) при 58 пси H2 в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем твердую часть удаляют фильтрованием через целит, который тщательно промывают MeOH (200 мл), и полученный фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в воде (50 мл) и полученный раствор доводят до pH 10 насыщенным водным раствором NaHCO3 и 2M NaOH. Полученную смесь экстрагируют CH2C12 (3×100 мл), сушат (MgSO4) и растворитель удаляют в вакууме. В результате очистки, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH, 10:1, 2% NEt3), получают соединение 25 (0,72 г, 82%) в виде твердого вещества красновато коричневого цвета.
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,31-1,48 (м, 2H, 3′-Hax, 5′-Hax), 1,66-1,89 (м, 3H, 3′-Heq, 4′-H, 5′-Heq), 1,96 (дт, J=11,9, 2,3 Гц, 2H, 2′-Hax, 6′-Hax), 2,28 (c, 3H, NMe), 2,84-2,93 (м, 2H, 2′-Heq, 6′-Heq), 3,41 (сушир., 2H, NH2), 3,73 (д, J=6,4 Гц, 2H, OCH2), 6,60-6,67 (м, 2H, 3-H, 5-H), 6,70-6,76 (м, 2H, 2-H, 6-H) м.д. -13C ЯМР (75,5 МГц, CDCl3): δ=29,1 (C-3′, C-5′), 35,3 (C-4′), 46,4 (NMe), 55,4 (C-2′, C-6′), 73,2 (OCH2), 115,4 (C-3, C-5), 116,3 (C-2, C-6), 139,8 (C-1), 152,2 (C-4) м.д.
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 220 (3) [M]+, 112 (100) [C7H14N]+. -C13H20N2O (220,31): рассчитано C 70,87, Н 9.15; найдено C 70,50, Н 8,94.
Пример 26
Этиловый эфир 5-((1-метилпиперидин-4-ил)метокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (26)
К перемешиваемому раствору 4-((1-метилпиперидин-4-ил)метокси)фениламина (25) (2,00 г, 9,08 ммоль) в воде (19 мл) и концентрированной HCl (6 мл) добавляют по каплям раствор NaNO2 (689 мг, 9,99 ммоль) в воде (2 мл) при 0ºC, и перемешивание продолжают в течение 50 минут при 0ºC (раствор A). Этил 2-метилацетоацетат (1,39 мл, 9,53 ммоль) добавляют по каплям к перемешиваемой суспензии NaOAc (7,8 г) в EtOH (15 мл) при 0ºC, и перемешивание продолжают в течение 30 минут при этой температуре; затем добавляют лед (9 г) (раствор B). Раствор A добавляют к раствору B, перенося канюлю при 0ºC, и полученную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры. Через 2,5 часа реакционную смесь подщелачивают, медленно добавляя насыщенный водный раствор Na2CO3 при 0ºC и экстрагируют CH2Cl2 (3×100 мл). Объединенные органические слои промывают водой (200 мл), сушат (MgSO4) и растворитель удаляют в вакууме. Остаток затем растворяют в абсолютном EtOH (10 мл), обрабатывают свежеприготовленным насыщенным раствором HCl в абсолютном EtOH (10 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 50 мин. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток разделяют между водой (50 мл) и CH2Cl2 (100 мл). Водный слой подщелачивают, используя насыщенный водный раствор Na2CO3, и экстрагируют CH2Cl2 (3×100 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (200 мл), сушат (MgSO4) и концентрируют в вакууме. Очистка с помощью кристаллизации из iPr2O и колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH, 30:1, 2% NEt3) остатка, полученного после выпаривания маточного раствора, приводит к получению соединения 26 (2,06 г, 72% полный выход) в виде твердого вещества желтого цвета
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,36-1,54 (м, 5H, OCH2CH3, 3′-Hax, 5′-Hax), 1,73-2,06 (м, 5H, 2′-Hax, 3′-Heq, 4′-H, 5′-Heq, 6′-Hax), 2,30 (c, 3H, NMe), 2,87-2,97 (м, 2H, 2′-Heq, 6′-Heq), 3,83 (д, J=6,2 Гц, 2H, ArOCH2), 4,40 (кв, J=7,2 Гц, 2H, OCH2CH3), 6,98 (дд, J=8,9, 2,4 Гц, 1H, 6-H), 7,05 (д, J=2,0 Гц, 1H, 3-H), 7,12 (мс, 1H, 4-H), 7,30 (д, J=8,9 Гц, 1H, 7-H), 9,11 (сушир., 1H, NH) м.д. - 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=14,4 (OCH2CH3), 29,2 (C-3′, C-5′), 35,3 (C-4′), 46,4 (NMe), 55,5 (C-2′, C-6′), 60,9 (OCH2CH3), 73,2 (ArOCH2), 103,4 (C-4), 108,1 (C-3), 112,7 (C-7), 117,2 (C-6), 127,8 (C-2, C-3a), 132,2 (C-7a), 154,1 (C-5), 162,0 (C=O) м.д.
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 316 (6) [M]+, 112 (100) [C7H14N]+. - C18H24N2O3 (316,39): рассчитано C 68,33, Н 7,65; найдено C 68,03, Н 7,84.
Пример 27
Гидрохлорид 5-((1-метилпиперидин-4-ил)метокси)-lH-индол-2-карбоновой кислоты (27)
Суспензию сложного эфира 26 (1,00 г, 3,16 ммоль) в MeOH (8 мл) обрабатывают раствором NaOH (155 мг, 3,88 ммоль) в воде (4 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 3,5 часа. После охлаждения до комнатной температуры раствор доводят до pH 6, используя 2M HCl, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в MeOH, 2M HCl добавляют по каплям и образовавшийся осадок собирают фильтрованием, получая соединение 27 (712 мг, 69%) в виде твердого вещества коричневого цвета. Остаток, полученный после выпаривания маточного раствора, очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH, 6:1, 1% конц. HCl), получая вторую порцию соединения 27 (226 мг, 22%).
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=1,56-1,77 (м, 2H, 3′-Hax, 5′-Hax), 1,89-2,09 (м, 3H, 3′-Heq, 4′-H, 5′-Heq), 2,69 (c, 3H, NMe), 2,87-3,05 (м, 2H, 2′-Hax, 6′-Hax) 3,24-3,48 (м, 2H, 2′-Heq, 6′-Heq), 3,79-3,92 (м, 2H, ArOCH2), 6,90 (дд, J=9,0, 2,2 Гц, 1H, 6-H), 6,98 (д, J=1,7 Гц, 1H, 3-H), 7,12 (д, J=2,2 Гц, 1H, 4-H), 7,34 (д, J=9,0 Гц, 1H, 7-H), 10,84 (сушир., 1H, NH+), 11,59 (c, 1H, NH), 12,74 (сушир., 1H, CO2H) м.д.- 13C ЯМР (75,5 МГц, ДМСО-d6): δ=25,8 (C-3′, C-5′), 32,8 (C-4′), 42,5 (NMe), 52,8 (C-2′, C-6′), 71,6 (OCH2), 103,4 (C-4), 106,8 (C-3), 113,3 (C-7), 116,0 (C-6), 127,1 (C-2), 128,7 (C-3a), 132,6 (C-7a), 152,9 (C-5), 162,5 (C=O) м.д.
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 288 (14) [M-HCl]+, 112 (100) [C7H14N]+. - C16H21ClN2O3 (324,80): рассчитано 288,1474 [M-HCl]+; найдено 288,1474.
Пример 28
(+)-{(1,10)-Анти-5-бензилокси-3-[(5-((1-метилпиперидин-4-ил)метокси)индол-2-ил)карбонил]-1-(10-хлорэтил)-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол}((+)-3d)
Соединение (+)-1 (150 мг, 342 мкмоль) суспендируют в 4M HCl/EtOAc и перемешивают при комнатной температуре в течение 3,5 часа. Реакционную смесь концентрируют и сушат в вакууме в течение 1 часа. Остаток растворяют в ДМФ (10 мл). Раствор охлаждают до 0ºC и добавляют EDC·HCl (197 мг, 1,03 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 27 (144 мг, 445 мкмоль, 1,3 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 23 часов, разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл) и экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 10:1) получают (+)-3d в виде твердого вещества кремового цвета (158 мг, 260 мкмоль, 76%).
1H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=1,32-1,51 (м, 2H, 3″′-Hax, 5″′-Hax), 1,63 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 1,71-1,88 (м, 3H, 3″′-Heq, 4″′-H, 5″′-Heq), 2,07-2,22 (м, 2H, 2″′-Hax, 6″′-Hax), 2,30 (c, 3H, NCH3), 2,85-3,01 (м, 2H, 2″′-Heq, 6″′-Heq), 3,85 (д, J=5,7 Гц, 2H, 1″-H2), 4,16-4,27 (м, 1H, 1-H), 4,56-4,86 (м, 3H, 2-H2, 10-H), 5,30 (мс, 2H, OCH2Ph), 6,93 (д, J=8,9, 2,3 Гц, 1H, 6′-H), 7,13-7,20 (м, 2H, 3′-H, 4′-H), 7,32-7,49, 7,51-7,62 (2×м, 8H, 7-H, 7′-H, 8-H, 5×Ph-H), 7,96 (д, J=8,3 Гц, 1H, 9-H), 8,12 (сушир., 1H, 4-H), 8,23 (д, J=8,4 Гц, 1H, 6-H), 11,62 (сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, ДМСО-d6): δ=23,3 (11-CH3), 27,8 (C-3″′, C-5″′), 34,2 (C-4″′), 45,1 (NCH3), 45,9 (C-1), 52,0 (C-2), 54,3 (C-2″′, C-6″′), 61,3 (C-10), 69,6 (OCH2Ph), 72,3 (C-1″), 98,4 (C-4), 103,4 (C-4′), 105,3 (C-3′), 113,1 (C-7′), 115,8 (C-6′), 117,5 (C-5a), 122,6 (2 сигнала), 123,0, 123,7 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 127,3, 127,4, 127,5, 127,8, 128,4 (C-3a′, C-8,5×Bn-CH), 129,6, 130,9, 131,6 (C-2′, C-7a′, C-9a), 136,8 (Bn-C), 142,1 (C-3a), 153,1 (C-5′), 154,2 (C-5), 160,1 (C=O);
MC (EI, 70 eV): m/z (%) = 607,0 (4) [M]+, 571,0 (23) [M-Cl-H]+; C37H38ClN3O3 (608,17): рассчитано 608,2680, найдено 608,2675, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 29
(+)-{(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-((1-метилпиперидин-4-ил)метокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индолгидрохлорид} ((+)-4d)
Соединение (+)-3d (90 мг, 148 мкмоль) растворяют в смеси 4M HCl/этилацетат (15 мл) и перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Раствор концентрируют. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем суспендируют в ТГФ (9 мл). Затем добавляют при комнатной температуре 10% палладий на активированном угле (32 мг) и аммонийформиат (25% водный раствор, 0,32 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 75 минут при 40ºC и фильтруют через целит, который тщательно промывают метанолом (150 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 5:l, 0,1% конц. HCl), получая (+)-4d в виде твердого вещества желтого цвета (67 мг, 121 мкмоль, 82%).
1H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=1,60 (д, J=6,5 Гц, 3H, 11-CH3), 1,64-1,82 (м, 2H, 3″′-Hax, 5″′-Hax), 1,87-2,09 (м, 3H, 3″′-Heq, 4″′-H, 5″′-Heq), 2,67 (c, 3H, NCH3), 2,85-3,04 (м, 2H, 2″′-Hax, 6″′-Hax), 3,26-3,45 (м, 2H, 2″′-Heq, 6″′-Heq), 3,85 (мс, 2H, 1″-H2), 4,14 (мс, 1H, 1-H), 4,47-4,79 (м, 3H, 2-H2, 10-H), 6,91 (мс, 1H, 6'-H), 7,11, 7,16 (2×сушир., 2H, 3′-H, 4′-H), 7,28-7,44 (м, 2H, 7-H, 7′-H), 7,48 (мс, 1H, 8-H), 7,86 (д, J=8,3 Гц, 1H, 9-H), 7,96 (сушир., 1H, 4-H), 8,12 (д, J=8,3 Гц, 1H, 6-H), 10,43 (c, 1H, OH), 10,97 (сушир., 1H, NH+), 11,59 (c, 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, ДМСО-de): δ=23,4 (11-CH3), 25,8 (C-3″′, C-5″′), 32,8 (C-4″′), 42,5 (NCH3), 45,8 (C-1), 52,1 (C-2), 52,8 (C-2″′, C-6″′), 61,5 (C-10), 71,7 (C-1″), 100,4 (C-4), 103,6, 105,2 (C-3′, C-4′), 113,1 (C-7′), 115,6, 115,8 (C-6′, C-5a), 122,2, 122,8, 122,9, 123,1 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 126,9 (C-8), 127,5 (C-3a′), 129,8, 131,1, 131,7 (C-2′, C-7a′, C-9a), 142,1 (C-3a), 152,9 (C-5′), 153,9 (C-5), 159,8 (C=O);
MC (ESI): m/z (%) = 518,0 (100) [M-Cl]+; C30H33Cl2N3O3 (554,51): рассчитано 518,2210, найдено 518,2205, [M-Cl]+ (ESI-HRMS).
Пример 30
[(+)-(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-3-[(5-((1-метилпиперидин-4-ил)метокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-2,3,4,6-тетра-О-ацетил-β-D-галактопиранозид ((+)-7d)
Раствор (+)-5 (134 мг, 385 мкмоль) в сухом CH2Cl2 (17 мл) и молекулярные сита 4Ǻ (0,8 г) перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После добавления О-(2,3,4,6-тетра-О-ацетил-α-D-галактопиранозил)трихлорацетимидата (6) (196 мг, 398 мкмоль, 1,03 эквив.), полученную смесь охлаждают до -10ºC и медленно добавляют раствор BF3·OEt2 (25 мкл, 197 мкмоль, 0,5 эквив.) в сухом CH2C12 (1,9 мл). Через 4 часа при -10ºC, добавляют дополнительную порцию BF3·OEt2 (0,146 мл, 1,15 ммоль, 3,0 эквив.) в сухом CH2Cl2 (1,8 мл), и полученную смесь нагревают до комнатной температуры. Через 5 часов раствор отделяют от молекулярных сит, молекулярные сита тщательно промывают CH2Cl2 (2×10 мл), и объединенные органические части концентрируют в вакууме. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем растворяют в сухом ДМФ (18 мл). Раствор охлаждают до 0ºC, и добавляют EDC·HCl (222 мг, 1,16 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 27 (188 мг, 0,579 ммоль, 1,5 эквив.). Через 22 часа при комнатной температуре реакционную смесь разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл) и затем экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (градиент: CH2Cl2/MeOH = 10:1 // CH2Cl2/MeOH = 5:1) получают (+)-7d (65 мг, 77 мкмоль, 20%) и его N-оксид (110 мг, 127 мкмоль, 33%), оба в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета.
К раствору N-оксида (40 мг, 46 мкмоль) в сухом этаноле (6 мл), добавляют PtO2·H2O (6 мг, 21 мкмоль, 0,5 эквив.). Затем через реакционную смесь барботируют водород в течение 16 час. Реакционную смесь фильтруют через целит, и целит тщательно промывают метанолом (50 мл) и этанолом (100 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме, и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 10:1), получая (+)-7d в виде твердого вещества желтого цвета (24 мг, 28 мкмоль, 61%). C44H50ClN3O12 (848,33): рассчитано 848,3161, найдено 848,3156, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 31
[(+)-(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-3-[(5-((1-метилпиперидин-4-ил)метокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-β-D-галактопиранозид ((+)-8d)
К раствору соединения 7d (74 мг, 87 мкмоль) в сухом MeOH (6 мл) добавляют NaOMe в метаноле (32 мкл примерно 5,4 M раствора, 173 мкмоль, 2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут и разбавляют водой (2 мл) и метанолом (2 мл). Ионообменную смолу (Amberlite-IR 120) добавляют до тех пор, пока рН раствора не принимает нейтрального значения. Смолу удаляют и промывают метанолом (10 мл). Объединенные органические части концентрируют в вакууме, и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (градиент: CH2Cl2/MeOH = 5:1 // CH2C12/MeOH = 7:1, 0,5% NEt3 // CH2Cl2/MeOH = 5:1, 0,5% NEt3). Полученный твердый продукт промывают пентаном (5×15 мл), получая соединение 8d в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (53 мг, 78 мкмоль, 90%).
1H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6, 100ºC): δ=1,40-1,50 (м, 2H, 3″′-Hax, 5″′-Hax), 1,65 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 1,77-1,86 (м, 3H, 3″′-Heq, 4″′-H, 5″′-Heq), 2,14 (мс, 2H, 2″′-Hax, 6″′-Hax), 2,29 (c, 3H, NCH3), 2,87-2,93 (м, 2H, 2″′-Heq, 6″′-Heq), 3,15 (сушир., H2O, 4×OH), 3,47-3,51, 3,52-3,56, 3,60-3,64, 3,68-3,73 (4×м, 4H, 3″″-H, 5″″-H, 6″″-H2), 3,81-3,92 (м, 4H, 1″-H2, 2″″-H, 4″″-H), 4,22 (мс, 1H, 1-H), 4,63-4,73 (м, 2H, 2-H2), 4,81 (мс, 1H, 10-H), 4,92 (д, J=7,6 Гц, 1H, 1″″-H), 6,93 (мс, 1H, 6′-H), 7,09, 7,18 (2×сушир., 2H, 3′-H, 4′-H), 7,40-7,45 (м, 2H, 7-H, 7'-H), 7,56 (мс, 1H, 8-H), 7,93 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 8,17 (сушир., 1H, 4-H), 8,37 (д, J=8,6 Гц, 1H, 6-H), 11,31 (c, 1H, NH); 13C-ЯМР (150 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 28,1 (C-3″′, C-5″′), 34,5 (C-4″′), 45,5 (NCH3), 46,0 (C-1), 52,1 (C-2), 54,5 (C-2″′, C-6″′), 59,6 (C-6″″), 61,3 (C-10), 67,5 (C-4″″), 70,6 (C-2″″), 72,5 (C-1″), 73,3 (C-3″″), 75,2 (C-5″″), 101,9 (C-4), 102,3 (C-1″″), 103,4 (C-4′), 105,4 (C-3′), 113,2 (C-7′), 115,8 (C-6′), 118,9 (C-5a), 122,9, 123,0, 123,4, 123,7 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 127,3, 127,5 (C-3a′, C-8), 129,5, 130,9, 131,7 (C-2′, C-7a′, C-9a), 142,0 (C-3a), 153,2 (C-5′), 153,6 (C-5), 160,2 (C=O);
МС (ESI): m/z (%) = 702,3 (12) [M+Na]+, 680,3 (100) [M+H]+; C36H42C1N3O8 (680,19): рассчитано 680,2739, найдено 680,2733, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 32
Этиловый эфир 5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)-lH-индол-2-карбоновой кислоты (29)
Раствор этилового эфира 5-нитро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (28) (750 мг, 3,20 ммоль) в EtOAc (125 мл) гидрируют над Pd/C (10%, 300 мг) при 60 пси H2 в течение 5 часов при комнатной температуре. Затем твердую часть удаляют фильтрованием через целит, который тщательно промывают CH2Cl2 (400 мл) и MeOH (400 мл), и полученный фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в ДМФ (30 мл) и раствор охлаждают до 0ºC. Добавляют EDC·HCl (1,84 г, 9,60 ммоль) и гидрохлорид N,N-диметилглицина (670 мг, 4,80 ммоль), и реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры. После перемешивания в течение 21 часа при этой температуре раствор разбавляют EtOAc (100 мл) и водой (100 мл). Полученную смесь доводят pH 9 насыщенным водным раствором NaHCO3 и экстрагируют EtOAc (4×150 мл). Объединенные органические фракции промывают водой (4×200 мл) и солевым раствором (300 мл), сушат (MgSO4) и растворитель удаляют в вакууме. В результате очистки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH, 10:1) получают соединение 29 (626 мг, 68% полный выход) в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета.
1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,42 (т, J=7,1 Гц, 3H, OCH2CH3), 2,40 (c, 6H, NMe2), 3,11 (c, 2H, 1′-H2), 4,41 (кв, J=7,1 Гц, 2H, OCH2CH3), 7,18 (д, J=1,8 Гц, 1H, 3-H), 7,36 (д, J=8,8 Гц, 1H, 7-H), 7,43 (дд, J=8,8, 1,8 Гц, 1H, 6-H), 8,04 (сушир., 1H, 4-H), 9,04 (сушир., 1H, NH), 9,13 (сушир., 1H, NH) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, CDCl3): δ=14,3 (OCH2CH3), 46,0 (NMe2), 61,0 (OCH2CH3), 63,6 (C-1′), 108,5 (C-3), 112,2, 112,8 (C-4, C-7), 119,2 (C-6), 127,5, 128,2 (C-2, C-3a), 131,1 (C-5), 134,1 (C-7a), 162,0 (NHCO), 168,6 (CO2Et) м.д.;
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 289 (25) [M]+, 58 (100) [CH2NMe2]+; C15H19N3O3 (289,33): рассчитано 289,1426, найдено 289,1426.
Пример 33
Гидрохлорид 5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)-1H-индол-2-карбоновой кислоты (30)
Смесь сложного эфира 29 (0,200 г, 0,691 ммоль), ТГФ (6 мл), MeOH (2 мл), и воды (2 мл) обрабатывают LiOH·H2O (0,035 г, 0,830 ммоль) и перемешивают при 60ºC в течение 4 часов. После этого растворитель удаляют в вакууме и остаток растворяют в воде. Полученный раствор подкисляют 2M HCl, затем воду выпаривают при пониженном давлении и остаток помещают в смесь ацетон/EtOH (1:1). Оставшийся осадок (LiCl) выделяют фильтрованием и полученный фильтрат концентрируют при пониженном давлении. В результате очистки сырого продукта с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH, 5:1, 0,5% конц. HCl) получают кислоту 30 (0,205 г, количественно) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета .
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=2,89 (c, 6H, NMe2), 4,16 (c, 2H, 1′-H2), 7,07 (д, J=2,1 Гц, 1H, 3-H), 7,38-7,46 (м, 2H, 6-H, 7-H), 8,01 (сушир., 1H, 4-H), 10,11 (сушир., 1H, NH″′), 10,80 (сушир., 1H, NH), 11,74 (сушир., 1H, NH), 12,90 (сушир., 1H, CO2H) м.д.; 13C ЯМР (50,3 МГц, ДМСО-d6): δ=43,1 (NMe2), 57,8 (C-1′), 107,3 (C-3), 112,1, 112,6 (C-4, C-7), 118,4 (C-6), 126,6, 129,2 (C-2, C-3a), 130,9 (C-5), 134,4 (C-7a), 162,4, 162,5 (2×C=О) м.д.
MC (70 eV, EI): m/z (%) = 261 (7) [M-HCl]+, 58 (100) [C3H8N]+; C13H16ClN3C3 (297,74): рассчитано 261,1113 [M-HCl]+, найдено 261,1113.
Пример 34
(+)-{(1,10)-анти-5-бензилокси-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)индол-2-ил)карбонил]-1-(10-хлорэтил)-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол} ((+)-3e)
Соединение (+)-1 (150 мг, 342 мкмоль) суспендируют в 4M HCl/EtOAc (14 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 3,5 часа. Реакционную смесь концентрируют и сушат в вакууме в течение 1 часа. Остаток растворяют в ДМФ (10 мл). Раствор охлаждают до 0ºC и добавляют EDC·HCl (197 мг, 1,03 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 30 (133 мг, 445 мкмоль, 1,3 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл), и экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 30:1) получают (+)-3e в виде пены бледно-зеленого цвета (155 мг, 267 мкмоль, 78%).
1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=1,63 (д, J=6,8 Гц, 3H, 11-CH3), 2,39 (c, 6H, NMe2), 3,11 (c, 2H, 1″-H2), 3,88-4,02 (м, 1H, 1-H), 4,47-4,63 (м, 2H, 2-Ha, 10-H), 4,84 (дд, J=10,8, 1,5 Гц, 1H, 2-Hb), 5,24 (мс, 2H, OCH3Ph), 7,06 (д, J=1,4 Гц, 1H, 3′-H), 7,20 (дд, J=8,8, 1,9 Гц, 1H, 6′-H), 7,28-7,56 (м, 8H, 7-H, 7′-H, 8-H, 5×Ph-H), 7,68 (д, J=8,2 Гц, 1H, 9-H), 8,13-8,28 (м, 2H, 4-H, 4′-H), 8,35 (д, J=8,3 Гц, 1H, 6-H), 9,11 (c, 1H, NH), 10,03 (c, 1H, NH); 13C-ЯМР (75 МГц, CDCl3): δ=23,9 (11-CH3), 46,0 (NMe2), 47,4 (C-l), 53,5 (C-2), 59,9 (C-10), 63,6 (C-1″), 70,3 (OCH2Ph), 98,2 (C-4), 106,4 (C-3′), 12,1 (C-7′), 112,6 (C-4′), 117,3 (C-5a), 118,8 (C-6′), 122,5 (C-9), 123,7, 123,8, 123,9 (C-6, C-7, C-9b), 127,4, 127,6, 127,9, 128,0, 128,5 (C-3a′), C-8, 5×Bn-CH), 129,9 (C-5′), 131,1, 131,2, 133,2 (C-2′, C-7a′, C-9a), 136,7 (Bn-C), 142,3 (C-3a), 155,5 (C-5), 160,4 (C=O), 168,6 (C=O);
MC(EI, 70 eV): m/z (%) = 580,0 (10) [M]+, 544,0 (7) [M-Cl-Н]+; C34H33ClN4O3 (581,10): рассчитано 580,2319, найдено 581,2314, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 35
(+)-{(1,10)-Анти-1-(10-хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индолгидрохлорид} ((+)-4e)
Соединение (+)-3e (80 мг, 138 мкмоль) растворяют в смеси 4M HCl/этилацетат (10 мл) и перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Раствор концентрируют. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем суспендируют в ТГФ (8 мл). Затем добавляют 10% палладий на активированном угле (30 мг) и аммонийформиат (25% водный раствор, 0,30 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают в течение 40 минут при 40ºC и фильтруют через целит, который тщательно промывают метанолом (150 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (MeOH, 0,1% конц. HCl). Полученный продукт затем растворяют в небольшом количестве CH2Cl2/MeOH, 0,1% конц. HCl. Раствор фильтруют и полученный фильтрат концентрируют, получая (+)-4e в виде твердого вещества зеленого цвета (78 мг, 152 мкмоль, 86%).
1H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ=1,63 (д, J=6,3 Гц, 3H, 11-CH3), 2,90 (c, 6H, NMe2), 4,11-4,25 (м, 3H, 1-H, 1″-H2), 4,53-4,64 (м, 1H, 2-Ha), 4,65-4,81 (м, 2H, 2-Hb, 10-H), 7,21-7,55 (м, 5H, 3′-H, 6′-H, 7-H, 7′-H, 8-H), 7,88 (д, J=8,3 Гц, 1H, 9-H), 7,99 (сушир., 1H, 4-H), 8,07-8,19 (м, 2H, 4′-H, 6-H), 10,30 (сушир., 1H, OH), 10,43, 11,03, 11,73 (3×c, 3H, 2×NH, NH+); 13C-ЯМР (75 МГц, ДМСО-d6): δ=23,3 (11-CH3), 43,1 (NMe2), 45,8 (C-1), 52,1 (C-2), 57,9 (C-1″), 61,5 (C-10), 100,3 (C-4), 105,6 (C-3′), 112,1, 112,3 (C-4′, C-7′), 115,9 (C-5a), 118,0 (C-6′), 122,2, 122,9 (2 сигнала), 123,1 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 126,9, 127,0 (C-3a′, C-8), 129,7, 130,8, 131,4, 133,3 (C-2′, C-5′, C-7a′, C-9a), 142,1 (C-3a), 153,8 (C-5), 159,7 (C=O), 162,4 (C=O);
MC (ESI): m/z (%) = 981,0 (11) [2M+H]+, 491,1 (100) [M-Cl]+; C27H28Cl2N4O3 (527,44): рассчитано 491,1850, найдено 491,1844, [M-Cl]+ (ESI-HRMS).
Пример 36
[(+)-(1S,10R)-1-(10-Хлорэтил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-2,3,4,6-тетра-О-ацетил-β-D-галактопиранозид ((+)-7e)
Раствор (+)-5 (137 мг, 394 мкмоль) в сухом CH2Cl2 (17 мл) и молекулярные сита 4Ǻ (0,8 г) перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После добавления O-(2,3,4,6-тетра-О-ацетил-α-D-галактопиранозил)трихлорацетимидата (6) (200 мг, 406 мкмоль, 1,03 эквив.), полученную смесь охлаждают до -10ºC и медленно добавляют раствор BF3·OEt2 (25 мкл, 197 мкмоль, 0,5 эквив.) в сухом CH2Cl2 (1,9 мл). Через 4 часа при -10ºC, добавляют дополнительную порцию BF3·OEt2 (150 мкл, 1,18 ммоль, 3,0 эквив.) в сухом CH2Cl2 (1,8 мл), и полученную смесь нагревают до комнатной температуры. Через 5 часов раствор отделяют от молекулярных сит, молекулярные сита тщательно промывают CH2Cl2 (2×10 мл) и объединенные органические части концентрируют в вакууме. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем растворяют в сухом ДМФ (18 мл). Раствор охлаждают до 0ºC, и добавляют EDC·HCl (227 мг, 1,18 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 30 (176 мг, 591 мкмоль, 1,5 эквив.). Через 21 час при комнатной температуре реакционную смесь разбавляют этилацетатом (50 мл), водой (50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл), и затем экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 25:1) получают (+)-7e в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета (155 мг, 189 мкмоль, 48%). C41H45ClN4O12 (821,27): рассчитано 821,2801, найдено 821,2795. [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 37
[(+)-(1S,10R)-1-(10-Хлорэтил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-β-D-галактопиранозид ((+)-8e)
К раствору (+)-7e (142 мг, 173 мкмоль) в сухом MeOH (6 мл) добавляют NaOMe в метаноле (64 мкл примерно 5,4M раствора, 346 мкмоль, 2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут и разбавляют метанолом (2 мл) и водой (2 мл). Ионообменную смолу (Amberlite-IR 120) добавляют до тех пор, пока рН раствора не принимает нейтральные значения. Смолу отделяют от раствора и промывают метанолом (10 мл). Объединенные органические фракции концентрируют в вакууме и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (градиент: CH2Cl2/MeOH = 7:1 // CH2Cl2/MeOH = 3:1). Сырой продукт промывают пентаном (5×15 мл), что дает (+)-8e в виде твердого вещества желтого цвета (93 мг, 142 мкмоль, 82%).
1H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6): δ=1,65 (д, J=6,7 Гц, 3H, 11-CH3), 2,31 (c, 6H, NMe2), 3,08 (c, 2H, 1″-H2), 3,45-3,52 (м, 1H, 3″′-H), 3,53-3,61 (м, 2H, 5″′-H, 6″′-Ha), 3,64-3,71 (м, 1H, 6″′-Hb), 3,77-3,85 (м, 2H, 2″′-H, 4″′-H), 4,25 (мс, 1H, 1-H), 4,55-4,66 (м, 3H, 2-Ha, 2×OH), 4,72-,4,90 (м, 3H, 2-Hb, 10-H, OH), 4,93 (мс, 1H, 1″′-H), 5,31 (сушир., 1H, OH), 7,25 (сушир., 1H, 3′-H), 7,37-7,46 (м, 3H, 6′-H, 7′-H, 7-H), 7,57 (мс, 1H, 8-H), 7,96 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 8,13 (сушир., 1H, 4′-H), 8,24 (сушир., 1H, 4-H), 8,36 (д, J=8,6 Гц, 1H, 6-H), 9,60 (c, 1H, NH), 11,70 (c, 1H, NH); 13C-ЯМР (150 МГц, ДМСО-d6): δ=23,4 (11-CH3), 45,3 (NMe2), 46,0 (C-1), 52,1 (C-2), 59,6 (C-6″′), 61,4 (C-10), 63,2 (C-1″), 67,5 (C-4″′), 70,6 (C-2″′), 73,3 (C-3″′), 75,2 (C-5″′), 101,9 (C-4), 102,3 (C-1″′), 105,8 (C-3′), 112,1 (C-4′), 112,2 (C-7′), 118,6 (C-6′), 119,0 (C-5a), 122,9, 123,1, 123,4, 123,7 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 127,1 (C-3a′), 127,3 (C-8), 129,5, 131,1, 131,5, 133,3 (C-2′, C-5′, C-7a′, C-9a), 142,0 (C-3a), 153,6 (C-5), 160,1 (C=O), 168,2 (C=O);
MC (ESI): m/z (%) = 653,2 (100) [M+H]+; C33H37ClN4O8 (653,12): рассчитано 653,2378, найдено 653,2373, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 38
5-Бензилокси-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)индол-2-ил)карбонил]-1-(10-хлорметил)-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индол} (rac-32)
Соединение rac-31 (300 мг, 708 мкмоль) суспендируют в смеси 4M HCl/EtOAc (30 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрируют и сушат в вакууме в течение 2 часов. Остаток растворяют в ДМФ (25 мл). Раствор охлаждают до 0ºC и добавляют EDC·HCl (407 мг, 2,12 ммоль, 3,0 эквив.) и соединение 2 (302 мг, 1,06 ммоль, 1,5 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 часа, разбавляют этилацетатом (100 мл), водой (100 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (100 мл) и экстрагируют этилацетатом (3×200 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×200 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 10:1) получают rac-32 в виде твердого вещества желто-коричневого цвета (229 мг, 413 мкмоль, 58%).
1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ=2,37 (c, 6H, NMe2), 2,78 (т, J=5,7 Гц, 2H, 2″-H2), 3,44 (т, J=10,9 Гц, 1H, 10-Ha), 3,95 (дд, J=11,2, 2,9 Гц, 1H, 10-Hb), 4,04-4,15 (м, 3H, 1-H, 1″-H2), 4,58-4,67 (м, 1H, 2-Ha), 4,78 (дд, J=11,0, 1,6 Гц, 1H, 2-Hb) 5,25 (мс, 2H, OCH2Ph), 6,97-7,03 (м, 2H, 3′-H, 6′-H), 7,11 (д, J=2,3 Гц, 1H, 4′-H), 7,28-7,43, 7,46-7,57 (2×м, 8H, 7-H, 7′-H, 8-H, 5×Ph-H), 7,69 (д, J=8,3 Гц, 1H, 9-H), 8,19 (сушир., 1H, 4-H), 8,34 (д, J=8,3 Гц, 1H, 6-H), 9,75 (сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (50 МГц, CDCl3): δ=43,1 (C-1), 45,8 (NMe2), 46,0 (C-10), 55,2 (C-2), 58,3 (C-2″), 66,4 (C-1″), 70,3 (OCH2Ph), 98,3 (C-4), 103,5 (C-4′), 106,1 (C-3′), 112,7 (C-7′*), 116,4 (C-5a), 117,3 (C-6′*), 122,1, 123,6, 123,7, 124,1 (C-6, C-7, C-9, C-9b), 127,6, 127,8, 128,0, 128,2, 128,5 (C-3a′, C-8,5×Bn-CH), 129,7, 130,5, 131,4 (C-2′, C-7a′, C-9a), 136,7 (Bn-C), 142,1 (C-3a), 153,8 (C-5′), 155,8 (C-5), 160,7 (C=O);
MC (EI,70 eV): m/z (%)= 553,3 (33) [M]+, 517,3 (7) [M-Cl]+; C33H32ClN3O3 (554,08): рассчитано 553,2132, найдено 553,2132 (EI-HRMS).
Пример 39
1-(10-Хлорметил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индолгидрохлорид} (rac-33)
Соединение rac-32 (100 мг, 180 мкмоль) растворяют в смеси 4M HCl/этилацетат (10 мл) и перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Раствор концентрируют. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем суспендируют в ТГФ (15 мл). Затем добавляют 10% палладий на активированном угле (38 мг) и аммонийформиат (25% водный раствор, 0,38 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают в течение 4 часов при 40ºC и фильтруют через целит, который тщательно промывают метанолом (300 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме, и остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 5:1, 0,1% конц. HCl), получая rac-33 в виде твердого вещества желтого цвета (73 мг, 146 мкмоль, 81%).
1H-ЯМР (300 МГц, MeOH-d4): δ=2,98 (c, 6H, NMe2), 3,51-3,65 (м, 3H, 2″-H2, 10-Ha), 3,93 (дд, J=11,2, 3,0 Гц, 1H, 10-Hb), 4,03-4,13 (м, 1H, 1-H), 4,32 (т, J=4,8 Гц, 2H, 1″-H2), 4,52-4,66 (м, 2H, 2-H2), 6,99-7,06 (м, 2H, 3′-H, 6′-H), 7,24 (д, J=2,4 Гц, 1H, 4′-H), 7,33 (т, J=7,6 Гц, 1H, 7-H), 7,43 (д, J=8,9 Гц, 1H, 7′-H), 7,49 (т, J=7,6 Гц, 1H, 8-H), 7,72 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 7,81 (сушир., 1H, 4-H), 8,18 (д, J=8,4 Гц, 1H, 6-H); 13C-ЯМР (75 МГц, MeOH-d4): δ=43,5 (C-1), 43,9 (NMe2), 47,5 (C-10), 56,8 (C-2), 57,8 (C-2″), 63,7 (C-1″), 101,4 (C-4), 105,2 (C-4′), 107,2 (C-3′), 114,2 (C-7′), 117,1, 117,2 (C-5a, C-6), 123,5 (C-9), 124,3, 124,5, 124,6 (C-6, C-7, C-9a), 128,6 (C-8), 129,2, 131,5, 132,5, 133,9 (C-2, C-3a′, C-7a, C-9b), 143,1 (C-3a), 153,8 (C-5′), 155,8 (C-5), 162,6 (CO);
MC (ESI): m/z (%) = 928,9 (35) [2M-2Cl]+, 464,2 (100) [M-Cl]+; C26H27Cl2N3O3 (500,42): рассчитано 464,1741, найдено 464,1736, [M-Cl]+ (ESI-HRMS).
Пример 40
[1-(10-Хлорметил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3Н-бенз[e]индол-5-ил]-2,3,4,6-тетра-O-ацетил-β-D-галактопиранозид (35/35')
Раствор rac-34 (136 мг, 407 мкмоль) в сухом CH2Cl2 (18 мл) и молекулярные сита 4Ǻ (0,8 г) перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После добавления О-(2,3,4,6-тетра-О-ацетил-α-D-галактопиранозил)трихлорацетимидата (6) (211 мг, 428 мкмоль, 1,05 эквив.), полученную смесь охлаждают до -10ºC и медленно добавляют раствор BF3·OEt2 (26 мкл, 205 ммоль, 0,5 эквив.) в сухом CH2Cl2 (2,1 мл). Через 4 часа при -10ºC, добавляют дополнительную порцию BF3·OEt2 (155 мкл, 1,22 ммоль, 3,0 эквив.) в сухом CH2Cl2 (1,8 мл), и полученную смесь нагревают до комнатной температуры. Через 5 часов раствор отделяют от молекулярных сит, молекулярные сита тщательно промывают CH2Cl2 (2×10 мл) и объединенные органические части концентрируют в вакууме. Остаток сушат в вакууме в течение 1 часа и затем растворяют в сухом ДМФ (19 мл). Раствор охлаждают до 0ºC, и добавляют EDC.HCl (234 мг, 1,22 ммоль, 3,0 эквив.) и 2 (174 мг, 611 мкмоль, 1,5 эквив.). Через 20 часов при комнатной температуре, реакционную смесь разбавляют этилацетатом (25 мл), водой (25 мл), и насыщенным водным раствором NaHCO3 (25 мл), и затем экстрагируют этилацетатом (4×50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (4×100 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. В результате обработки с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 10:1) получают смесь обоих диастереоизомеров 35 и 35' в виде твердого вещества желтого цвета (173 мг, 218 мкмоль, 54%).
(-)-35: C40H44ClN3O12 (794,24): рассчитано 794,2692, найдено 794,2686, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 41
[1-(10-Хлорметил)-3-[(5-(2-(N,N-диметиламино)ацетиламино)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индол-5-ил]-β-D-галактопиранозид (36/36')
К раствору 35/35' (170 мг, 214 мкмоль) в сухом MeOH (9 мл) добавляют NaOMe в метаноле (79 мкл примерно 5,4M раствора, 428 мкмоль, 2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов и разбавляют метанолом (2 мл) и водой (2 мл). Ионообменную смолу (Amberlite-IR 120) добавляют до тех пор, пока рН раствора не достигает нейтрального значения. Смолу отделяют от раствора и промывают метанолом (10 мл). Объединенные органические фракции концентрируют в вакууме и остаток очищают, с помощью колоночной хроматографии (CH2Cl2/MeOH = 1:1), получая диастереоизомеры 36/36' в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (94 мг, 150 мкмоль, 70%).
1H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6): δ=2,24 (c, 6H, NMe2), 2,66 (т, J=5,9 Гц, 2H, 2″-H2), 3,35-3,86 (м, 6H, 2″′-H, 3″′-H, 4″′-H, 5″′-H, 6″′-H2), 3,89-3,95 (м, 1H, 10-Ha), 4,02-4,09 (м, 3H, 1″-H2, 10-Hb), 4,25-4,32 (м, 1H, 1-H), 4,53-4,63 (м, 3H, 2-H2, OH), 4,71-4,97 (м, 3H, 1″′-H, 2×OH), 5,27-5,36 (м, 1H, OH), 6,91 (дд, J=8,9, 2,3 Гц, 1H, 6′-H), 7,06-7,11 (м, 1H, 3′-H), 7,17-7,19 (м, 1H, 4′-H), 7,38-7,45 (м, 2H, 7-H, 7′-H), 7,57 (мс, 1H, 8-H), 7,91 (д, J=8,6 Гц, 1H, 9-H), 7,98-8,28 (м, 1H, 4-H), 8,33, 8,35 (2×д, J=8,6 Гц, 1H, 6-H), 11,62, 11,64 (2×сушир., 1H, NH); 13C-ЯМР (150 МГц, ДМСО-d6): δ=41,0/41,2 (C-1), 45,5 (NMe2), 47,5 (C-10), 54,9/55,0 (C-2), 57,8 (C-2″), 59,6/59,7 (C-6″′), 66,3 (C-1″), 67,5/67,7, 70,4/70,5, 73,2 (2 сигнала), 75,2 (C-2″′, C-3″′, C-4″′, C-5″′), 101,8 (C-4), 102,1/102,3 (C-1″′), 103,2/103,3 (C-4′), 105,2/105,3 (C-3′), 113,1/113,2 (C-7′), 115,8/115,9 (C-6′), 117,9/118,0 (C-5a), 122,70 (C-9), 122,9/123,0 (C-9b), 123,3/123,4 (C-6), 123,7/123,8 (C-7), 127,5 (C-3a′, C-8), 129,5 (2 сигнала) (C-9a), 130,9 (2 сигнала), 131,6/131,7 (C-2′, C-7a′), 142,1 (C-3a), 153,0 (2 сигнала) (C-5′), 153,7 (2 сигнала) (C-5), 160,3 (2 сигнала) (C=O);
MC (ESI): m/z (%)= 1252,0 (11) [2M+2H]+, 626,4 (100) [M+H]+; C32H36ClN3O8 (626,10): рассчитано 626,2269, найдено 626,2264, [M+H]+ (ESI-HRMS).
Пример 42
(1S,10R)-1-(10-Хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(N-метиламино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индолгидрохлорид (4f)
Соединение 3f (12 мг, 18,3 мкмоль) растворяют в ТГФ (2 мл). Затем добавляют 10% палладий на активированном угле (4 мг) и аммонийформиат (25% водный раствор, 40 мкл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при 45ºC и фильтруют через целит, который тщательно промывают метанолом (3×5 мл). Полученный фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в 4н HCl в этилацетате (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, после чего реакционную смесь концентрируют. Этилацетат добавляют к остатку и суспензию концентрируют. Остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 5:1, 0,1% конц. HCl), получая соединение 4f (5,6 мг, 11,2 мкмоль, 61%) в виде твердого вещества бледно-зеленого цвета.
1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3/CD3OD): δ=1,65 (д, 3H, 10-CH3), 2,81 (c, 3H, N-CH3), 3,45 (т, 2H, 2″-H), 4,03 (м, 1H, 1-H), 4,38 (т, 2H, 1″-H), 4,59-4,65 (м, 2H, 10-H, 2-H), 4,79 (д, 1H, 2-H), 7,07 (д, 1H, 6′-H), 7,09 (c, 1H, 3′-H), 7,24 (c, 1H, 4′-H), 7,38 (т, 1H, 7-H), 7,47 (д, 1H, 7′-H), 7,52 (т, 1H, 8-H), 7,75 (д, 1H, 9-H), 7,79 (ушир.с, 1H, 4-H), 8,23 (д, 1H, 6-H).
Пример 43
(1S,10R)-1-(10-Хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(N-метил-N-(карбоксиметил)амино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индолгидрохлорид (4g)
Соединение 4g получают из соединения 3g в соответствии с процедурой, приведенной для превращения соединения 3f в 4f. Соединение 4g получают в виде твердого вещества бледно-зеленого цвета с 50% выходом.
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ=1,61 (м, 3H, 10-CH3), 2,93 (c, 3H, NCH3), 3,14-3,18 (м, 2H, OCH2CH2N), 3,61 (c, 2H, CH2CO2H), 3,82 (м, 1H, 1-H), 4,17-4,74 (м, 5H, OCH2CH2N, 2×2-H, 10-H), 6,93-8,12 (м, 9H, 6′-H, 3′-H, 4′-H, 7′-H, 7-H, 8-H, 9-H, 4-H, 6-H), 10,42 (c, 1H, NH), 11,67 (c, 1H, OH);
MC (ESI): m/z = 522 [M+H]+, 1043 [2M+H]+.
Пример 44
(1S,10R)-1-(10-Хлорэтил)-5-гидрокси-3-[(5-(2-(N-метил-N-(2-метокси-2-оксоэтил)амино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индолгидрохлорид (4h)
Соединение 4h получают из соединения 3h в соответствии с процедурой, приведенной для превращения соединения 3a в 4a за исключением того, что опускают стадию подкисления с помощью HCl в этилацетате. Соединение 4h получают в виде твердого вещества бледно-зеленого цвета с 87% выходом.
1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3/CD3OD): δ=1,57 (д, 3H, 10-CH3), 2,67 (c, 3H, NCH3), 3,21 (т, 2H, OCH2CH2N), 3,65 (c, 2H, CH2CO2Me), 3,70 (c, 3H, OCH3), 3,82 (м, 1H, 1-H), 4,15 (т, 2H, OCH2CH2N), 4,38 (м, 1H, 2-H), 4,48 (м, 1H, 10-H), 4,70 (м, 1H, 2-H), 6,85-6,90 (м, 2H, 6′-H, 3′-H), 7,06 (д, 1H, 4′-H), 7,27-7,38 (м, 2H, 7′-H, 7-H), 7,46 (м, 1H, 8-H), 7,60 (д, 1H, 9-H), 7,89 (ушир.с, 1H, 4-H), 8,28 (д, 1H, 6-H), 10,21 (c, 1H, NH);
MC (ESI): m/z = 536 [M+H]+, 1093 [2M+Na]+.
Пример 45
(1S)-1-Хлорметил-5-гидрокси-3-[(5-(2-(2-(N,N-диметилаамино)этокси)индол-2-ил)карбонил]-9-метил-1,2-дигидро-3H-бенз[e]индолгидрохлорид (45)
Соединение 45 получают из соединения 44 в соответствии с процедурой, приведенной для превращения соединения 4a из соединения 1. Соединение 45 получают в виде твердого вещества бледно-зеленого цвета в 4-стадии с выходом 20%.
1H-ЯМР (300 МГц, CD3OD): δ=2,78 (c, 3H, 9-CH3), 2,98 (c, 6H, N(CH3)2), 3,25 (т, 1H, 2-H), 3,58 (т, 2H, 2″-H), 3,68 (д, 1H, 2-H), 4,25 (дд, 1H, 1-H), 4,33 (т, 2H, 1″-H), 4,50 (т, 1H, 10-H), 4,64 (д, 1H, 10-H), 7,00-7,08 и 7,18-7,31 (2×м, 5H, 7-H, 3′-H, 4′-H, 6′-H, 7′-H), 7,43 (д, 1H, 8-H), 7,85 (c, 1H, 4-H), 8,11 (д, 1H, 6-H);
MC (ESI): m/z = 478 [M+H]+.
Пример 46
Соединение 46a
Соединение (+)-4a (36 мг, 71 мкмоль) суспендируют в ацетонитриле (10 мл) и полученную смесь охлаждают до 0ºC. Добавляют пара-нитрофенилхлорформиат (28,4 мг, 0,141 ммоль) и DIPEA (58,3 мкл, 0,353 ммоль), и реакционную смесь нагревают до комнатной температуры. Через 1 час реакционную смесь концентрируют досуха. Остаток промывают толуолом (2×5 мл) и сушат в вакууме. Остаток растворяют в ацетонитриле (10 мл) и добавляют N-Boc-N,N'-диметилэтилендиамин (133 мг, 0,706 ммоль). Через 1 час реакционную смесь концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в дихлорметане; раствор промывают водой, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют. Сырой остаток растворяют в TFA. Через 30 минут реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая сырое соединение 46a количественно в виде не совсем белого твердого вещества.
Соединение 46b: Соединение 46b получают из соединения (+)-4a в соответствии со способом для получения соединения 46a, за исключением того, что N-Boc-пиперазин используют вместо N-Boc-N,N'-диметилэтилендиамина. Соединение 46b получают количественно в виде не совсем белого твердого вещества.
Пример 47
Общий способ получения 47a-47f из 46a/46b
Раствор сырого соединения 46a или 46b (71 мкмоль) в ДМФ (1 мл) охлаждают до 0ºC. Добавляют активированный пара-нитрофенилкарбонатом линкер 57a, 57b, или 58 (0,142 ммоль) и DIPEA (29 мкл, 0,177 ммоль), и температура реакции затем повышается до комнатной температуры. Через 1 час реакционную смесь концентрируют досуха. Остаток очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 5:1), получая продукт в виде не совсем белого твердого вещества. Соединения 47e и 47f получают из их Aloe-защищенных аналогов, растворяя в дихлорметане и добавляя Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.) и морфолин (10 эквив.). Через 1 час реакционную смесь концентрируют, остаток растворяют в дихлорметане, и раствор подкисляют (pH 3) трифторуксусной кислотой. Раствор концентрируют и остаток очищают, используя препаративную ВЭЖХ (ацетонитрил/водный раствор аммонийформиата), получая продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Соединение 47a: 38% выход; 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3/CD3OD): δ=0,94 (д, J=6,4 Гц, 6H, Hval), 1,26-135 (м, 2H, 2×Hcapr), 1,49-1,74 (м, 10H, 10-CH3, 7×Hcit/Hcapr), 1,87 (м, 1H, Hcit), 2,06 (м, 1H, Hval), 2,26 (т, J=7,6 Гц, 2H, CH2C(O)), 2,49 (c, 6H, N(CH3)2), 2,90-3,22 (м, 10H, NCH2,cit, 2×NCH3, OCH2CH2N), 3,46-3,83 (м, 6H, NCH2CH2N, CH2,capr), 4,09 (м, 1H, 1-H), 4,15-4,21 (м, 3H, OCH2CH2N, α-Hval), 4,53-4,69 (м, 3H, 2a-H, 10-H, α-Hcit), 4,86 (м, 1H, 2b-H), 5,06-5,14 (м, 2H, CH2OC(O)), 6,72 (c, 2H, CH=CH), 7,00-7,06 (м, 2H, 6′-H, 3′-H), 7,17 (м, 1H, 4′-H), 7,23-7,61 и 7,79-7,93 (м, 9H, 7′-H, 7-H, 8-H, 6-H, 9-H, 4×HAr,PABA), 8,22 (ушир.с, 1H, 4-H).
Соединение 47b: 72% выход; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3/CD3OD, TFA соль): δ=0,94 (д, J=6,8 Гц, 3H, CH3,val), 0,95 (д, J=6,8 Гц, 3H, CH3,val), 1,28-1,34 (м, 2H, 2×Hcapr), 1,50-1,77 (м, 10H, 10-CH3, 7×Hcit/Hcapr), 1,89 (м, 1H, Hcit), 2,05 (м, 1H, Hval), 2,25 (т, J=7,6 Гц, 2H, CH2C(O)), 2,98 (c, 6H, N(CH3)2), 3,09-3,25 (м, 2H, NCH2,cit), 3,50 (т, J=7,6 Гц, 2H, CH2,capr), 3,54 (м, 2H, OCH2CH2N), 3,57-3,71 (м, 6H, Hпиперазин), 3,78-3,91 (м, 2H, Hпиперазин), 4,05 (м, 1H, 1-H), 4,16 (д, J=7,6 Гц, 1H, α-Hval), 4,40 (м, 2H, OCH2CH2N), 4,54-4,65 (м, 3H, 2a-H, 10-H, α-Hcit), 4,85 (дд, 1H, 2b-H), 5,13 (c, 2H, CH2OC(O)), 6,70 (c, 2H, CH=CH), 6,98 (дд, J=2,4 Гц, J=9,2 Гц, 1H, 6′-H), 7,03 (c, 1H, 3′-H), 7,17 (д, J=2,4 Гц, 1H, 4′-H), 7,34 (д, 2H, HAr,PABA), 7,41 (д, J=9,2 Гц, 1H, 7′-H), 7,45 (т, J=7,2 Гц, 1H, 7-H), 7,52 (т, J=7,2 Гц, 1H, 8-H), 7,61 (д, J=8,4 Гц, 2H, HAr,PABA), 7,77 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 7,87 (д, J=8,0 Гц, 1H, 6-H), 8,25 (ушир.с, 1H, 4-H).
Соединение 47c: 64% выход; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3/CD3OD): δ=0,94 (д, J=6,7 Гц, 3H, CH3,val), 0,98 (д, J=6,7 Гц, 3H, CH3,val), 1,48-1,60 (м, 2H, Hcit), 1,65-1,78 (м, 3H, 10-CH3, Hcit), 1,89 (м, 1H, Hcit), 2,10 (м, 1H, Hval), 2,65 (c, 6H, N(CH3)2), 2,95-3,40 (м, 12H, 2×H3CNC(O), 2×Hcit, CH2N3, CH2NMe2), 3,50-4,10 (м, 10H, CH2OCH2, NCH2CH2N, α-Hval, 1-H), 4,18-4,30 (м, 4H, OCH2CH2N, CH2CH2OC(O)), 4,53-4,68 (м, 3H, 2a-H, 10-H, α-Hcit), 4,80 (м, 1H, 2b-H), 5,05-5,18 (м, 2H, CH2OC(O)), 6,94-7,04 (м, 2H, 6′-H, 3′-H), 7,16 (ушир.с, 1H, 4'-H), 7,20-7,95 (м, 9H, 4×HAr,PABA, 7-H, 7-H, 8-H, 9-H, 6-H), 8,23 (ушир.с, 1H, 4-H).
Соединение 47d: 85% выход; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3/CD3OD, TFA соль): δ=0,95 (д, J=6,8 Гц, 3H, CH3,val), 0,99 (д, J=6,8 Гц, 3H, CH3,val), 1,50-1,67 (м, 2H, Hcit), 1,69 (д, J=6,9 Гц, 3H, 10-CH3), 1,73 (м, 1H, Hcit), 1,92 (м, 1H, Hcit), 2,12 (м, 1H, Hval), 2,94 (c, 6H, N(CH3)2), 3,10-3,28 (м, 2H, Hcit), 3,40 (т, J=5,0 Гц, 2H, CH2N3), 3,50 (ушир.т, 2H, OCH2CH2N), 3,56-3,74 (м, 10H, 6×Hпиперазин, CH2OCH2), 3,80-3,94 (м, 2H, Hпиперазин), 4,01 (м, 1H, 1-H), 4,11 (м, 1H, a-Hval), 4,24 (м, 2H, CH2CH2OC(O)), 4,36 (т, J=4,9 Гц, 2H, OCH2CH2N), 4,54-4,72 (м, 3H, 2a-H, 10-H, α-Hcit), 4,86 (д, 1H, 2b-H), 5,15 (c, 2H, CH2OC(O)), 7,03 (дд, J=2,4 Гц, J=8,9 Гц, 1H, 6′-H), 7,07 (д, J=0,7 Гц, 1H, 3′-H), 7,21 (д, J=2,2 Гц, 1H, 4′-H), 7,36 (д, J=8,6 Гц, 2H, HAr,PABA), 7,46 (д, J=8,9 Гц, 1H, 7′-H), 7,48 (т, 1H, 7-H), 7,58 (т, J=6,8 Гц, 1H, 8-H), 7,62 (д, J=8,7 Гц, 2H, HAr,PABA), 7,83 (д, J=8,4 Гц, 1H, 9-H), 7,88 (д, J=8,7 Гц, 1H, 6-H), 8,23 (ушир.с, 1H, 4-H).
Соединение 47e: 63% выход; MC (ESI): m/z = 587 [M+H]2+, 1173 [M+H]+, 1195 [M+Na]+.
Соединение 47f: 84% выход; 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3/CD3OD): δ=1,33-1,48 (м, 2H, Hlys), 1,60-1,79 (м, 6H, 3×Hlys, 10-CH3), 1,87 (м, 1H, Hlys), 2,53 (c, 6H, N(CH3)2), 2,83-3,05 (м, 5H, CH2NH2, OCH2CH2N, Hphe), 3,13 (дд, J=6,0 Гц, J=14,1 Гц, 1H, Hphe), 3,35 (м, 1H, CH2N3), 3,52-3,75 (м, 10H, 6×Hпиперазин, CH2OCH2), 3,75-3,98 (ушир.с, 2H, Hпиперазин), 4,02 (ушир.д, 1H, 1-H), 4,09-4,23 (м, 4H, CH2CH2OC(O), OCH2CH2N), 4,41 (т, 1H, α-Hphe), 4,47 (дд, 1H, α-Hlys), 4,52-4,68 (м, 2H, 2a-H, 10-H), 4,82 (д, J=10,5 Гц, 1H, 2b-H), 5,15 (c, 2H, CH2OC(O)), 6,99 (дд, 1H, 6′-H), 7,01 (ушир.с, 1H, 3′-H), 7,15 (м, 1H, 4′-H), 7,20 (ушир.с, 1H, Hфенил), 7,36 (д, 2H, HAr,PABA), 7,44 (т, J=7,7 Гц, 1H, 7-H), 7,52 (т, J=7,5 Гц, 1H, 8-H), 7,60 (д, J=8,5 Гц, 2H, HAr,PABA), 7,75 (д, J=8,0 Гц, 1H, 9-H), 7,86 (д, J=7,9 Гц, 1H, 6-H), 8,28 (ушир.с, 1H, 4-H).
Пример 48
Общий способ получения соединений 48c-48d из 47c-47d: Раствор соединения 47c или 47d (25 мкмоль), аскорбата натрия (3,0 мг, 15 мкмоль), соединения 40 (10,1 мг, 38 мкмоль), и CuSO4 (1,9 мг, 7,5 мкмоль) в смеси ТГФ/вода перемешивают при комнатной температуре. За ходом реакции следят с помощью ВЭЖХ. После завершения реакции реакционную смесь разбавляют смесью ТГФ/вода, и продукт очищают, используя препаративную ВЭЖХ (ацетонитрил/водный раствор аммонийформиата), получая продукт в виде не совсем белого твердого вещества после сушки вымораживанием.
Соединение 48c: 31% выход; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3/CD3OD, TFA соль): δ=0,98 (м, 6H, Hval), 1,26-135 (м, 2H, 2×Hcapr), 1,49-1,61 (м, 2H, Hcit), 1,62-1,75 (м, 4H, 10-CH3, Hcit), 1,89 (м, 1H, Hcit), 2,13 (м, 1H, Hval), 2,93-3,25 (м, 13H, N(CH3)2, 2×NCH3, CH2,cit), 3,50 -4,88 (м, 30H, 2×OCH2CH2O, 3×OCH2CH2N, NCH2CH2N, HNCH2, α-Hval, α-Hcit, 2a-H, 2b-H, 1-H, 10-H), 5,02-5,20 (м, 2H, C6H4CH2OC(O)), 6,74 (c, 2H, HC=CH), 6,94-8,25 (м, 14H, 6′-H, 3′-H, 4′-H, 7-H, 8-H, 7′-H, 4×HAr,PABA, 9-H, 6-H, Hтриазол, 4-H).
Соединение 48d: 48% выход; 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3/CD3OD): δ=0,92 (д, J=6,9 Гц, 3H, Hval), 0,95 (д, J=6,8 Гц, 3H, Hval), 1,46-1,58 (м, 2H, Hcit), 1,64 (д, J=6,8 Гц, 3H, 10-CH3), 1,70 (м, 1H, Hcit), 1,87 (м, 1H, Hcit), 2,09 (м, 1H, Hval), 2,50 (ушир.с, 6H, N(CH3)2), 2,97 (ушир.с, 2H, CH2NMe2), 3,09 (м, 1H, Hcit), 3,18 (м, 1H, Hcit), 3,52-3,72 и 3,78-3,90 и 3,95 и 4,04-4,24 и 4,35 и 4,48-4,70 (м, 33H, 2×OCH2CH2O, 2×NCH2CH2O, OCH2CH2NMe2, 8×Hпиперазин, α-Hval, α-Hcit, 2a-H, 1-H, 10-H, HNCH2), 4,82 (д, 1H, 2b-H), 5,11 (c, 2H, C6H4CH2OC(O)), 6,69 (c, 2H, HC=CH), 6,96-7,04 (м, 2H, 6′-H, 3′-H), 7,15 (ушир.с, 1H, 4′-H), 7,32 (д, J=8,5 Гц, 2H, HAr,PABA), 7,37-7,45 (м, 2H, 7′-H, 7-H), 7,53 (т, 1H, 8-H), 7,57 (д, J=8,4 Гц, 2H, HAr,PABA), 7,78-7,85 (м, 3H, 6-H, 9-H, Hтриазол), 8,21 (ушир.с, 1H, 4-H).
Пример 49
Общий способ получения соединений 50a-50c из соединения 49
Раствор соединения 49 (78 мг, 0,11 ммоль) в 4н HCl в этилацетате (15 мл) перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют и остаток суспендируют в этилацетате (15 мл). Полученную смесь концентрируют, остаток сушат в вакууме в течение 1 часа. Остаток растворяют в ДМФ (2 мл) и раствор охлаждают до 0ºC. Добавляют активированный пара-нитрофенилкарбонатом линкер 59a, 59b, или 60 (0,12 ммоль) и триэтиламин (38 мкл, 0,272 ммоль) и реакционную смесь затем нагревают до комнатной температуры. Через 1,5 часа реакционную смесь концентрируют в вакууме и сырой продукт очищают, используя колоночную хроматографию (CH2Cl2/MeOH = 9:1), получая продукт в виде не совсем белого твердого вещества. Соединение 50c получают из его Aloc-защищенного аналога в соответствии со способом, использованным для получения соединений 47e и 47f.
Соединение 50a: 44% выход; 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3/CD3OD, TFA соль): δ=0,92 (д, J=6,7 Гц, 3H, Hval), 0,93 (д, J=6,7 Гц, 3H, Hval), 1,24-134 (м, 2H, 2×Hcapr), 1,48-1,75 (м, 10H, 10-CH3, 7×Hcit/Hcapr), 1,86 (м, 1H, Hcit), 2,06 (м, 1H, Hvai), 2,23 (т, J=7,4 Гц, 2H, CH2C(O)), 2,91 (c, 1H, NCH3), 3,06 (c, 3H, H3CNC(O)), 3,08-3,20 (м, 2H, NCH2,cit), 3,24-3,42 (м, 4H, Hпиперазин), 3,47 (т, 2H, CH2,capr), 3,60-4,25 (м, 10H, 1-H, OCH2CH2N, OCH2CH2N, α-Hval, 4×Hпиперазин), 4,49-4,67 (м, 3H, 2a-H, 10-H, α-Hcit), 4,83 (м, 1H, 2b-H), 5,05-5,13 (м, 4H, 2×CH2OC(O)), 6,68 (c, 2H, CH=CH), 6,88-7,59 (м, 14H, 6′-H, 3′-H, 4′-H, 7′-H, 7-H, 8-H, 8×HAr,PABA), 7,79 (д, J=8,2 Гц, 1H, 9-H), 7,85 (д, J=8,0 Гц, 1H, 6-H), 8,25 (ушир.с, 1H, 4-H).
Соединение 50b: 74% выход; 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3/CD3OD): δ=0,93 (д, J=6,8 Гц, 3H, Hval), 0,97 (д, J=6,8 Гц, 3H, Hval), 1,49-1,61 (м, 2H, Hcit), 1,63 (д, J=6,7 Гц, 3H, 10-CH3), 1,72 (м, 1H, Hcit), 1,90 (м, 1H, Hcit), 2,11 (м, 1H, Hval), 2,41 (c, 3H, N(CH3)), 2,53-2,67 (м, 4H, Hпиперазин), 3,07 (c, 3H, H3CNC(O)), 3,09 (м, 1H, Hcit), 3,21 (м, 1H, Hcit), 3,36 (м, 2H, CH2N3), 3,59-3,72 (м, 8H, CH2OCH2, OCH2CH2N, 2×Hпиперазин), 3,90 (м, 2H,Hпиперазин), 3,97 (м, 1H, 1-H), 4,02 (д, J=6,2 Гц, 1H, α-Hval), 4,08-4,27 (м, 4H, CH2CH2OC(O), OCH2CH2N), 4,50-4,62 (м, 3H, 2a-H, 10-H, α-Hcit), 4,75 (дд, 1H, 2b-H), 5,07-5,13 (м, 4H, 2×CH2OC(O)), 6,88 (м, 1H, 6′-H), 6,97 (м, 1H, 3′-H), 7,06 и 7,11 (2×ушир.с, 1H, 4′-H), 7,25-7,38 и 7,40 -7,61 (2×м, 11H, 7-H, 8-H, 7′-H, 8×HAr,PABA), 7,73 (д, J=8,3 Гц, 1-H, 9-H), 7,86 (д, J=8,1 Гц, 1H, 6-H), 8,28 (ушир.с, 1H, 4-H).
Пример 50
Конъюгирование конъюгата линкер-агент 47a с Herceptin антителом
Herceptin антитело (40 мг) обрабатывают 1,5 молярными эквивалентами дитиотреитола (DTT) в 0,025 M борате натрия pH 8, 0,025M NaCl, 1 мМ DTPA в течение 2 часов при 37ºC. Избыток DTT удаляют, используя колонку Sephadex G-25 (0,025M борат натрия pH 8, 0,025M NaCl, 1 мМ DTPA). Определение тиола реагентом Эллмана показывает, что присутствуют приблизительно три тиольные группы на Herceptin. Соединение 47a (1,13 мг, 1,1 эквив./SH группу) растворяют в примерно 100 мкл ДМСО, и добавляют по каплям к раствору восстановленного Herceptin в реакционном буфере (0,025M борат натрия pH 8, 0,025M NaCl, 1 мМ DTPA). Полученную смесь инкубируют в течение 30 минут при 4ºC. Избыток соединения 47a удаляют, используя гель-фильтрацию (G-25, PBS). Концентрацию белка и содержание лекарства определяют с помощью спектрального анализа на 280 и 320 нм, соответственно. Было обнаружено, что в среднем 2,5 единиц лекарственного средства конъюгировано на Herceptin. Используя FPLC с исключением по размерам не обнаружили следов агрегации конъюгата антитело-лекарственное средство.
Пример 51
In vitro цитотоксичность соединений (+)-8a-e и (+)-4a-e
Клейкие клетки линии A549 высевают в тройном экземпляре в 6 мультилуночных планшетах в концентрациях 102, 103, 104 и 105 клеток на лунку. Культуральную среду удаляют через 24 часа и клетки промывают в инкубационной среде Ultraculture (UC, не содержащая сыворотки специальная среда, поставляемая BioWhittalcer Europe, Verviers, Belgium). Затем осуществляют инкубирование с соединениями (+)-8a-e и (+)-4a-e в Ultraculture среде в различных концентрациях в течение 24 часов. Все вещества используют как свежеприготовленные растворы в ДМСО (Merck, Darmstadt, Germany), разбавленные инкубационной средой до конечной концентрации 1% ДМСО в лунках. После 24 часов экспонирования тестовые вещества удаляют и клетки промывают свежей средой. Культивирование осуществляют при 37ºC и 7,5% CO2 на воздухе в течение 12 дней. Среду удаляют, и клоны сушат и окрашивают метиленовым синим Лоффера (Merck, Darmstadt, Germany). Затем их подсчитывают макроскопически.
Величины ИК50 основаны на относительной скорости образования клонов, что определяют в соответствии со следующей формулой: относительная скорость образования клонов [%]=100×(число клонов, подсчитанное после экспонирования)/(число клонов, определенное в контроле).
Высвобождение лекарственных средств из их гликозидных пролекарств достигается при добавлении 4,0 Ед·мл-1 β-D-галактозидазы (EC 3.2.1.23, Grade X, поставщик Sigma Germany, Deisenhofen, Germany) к клеткам во время инкубирования с веществами. Величины ИК50 представлены далее в таблице.
Соединение Добавление β-D-галактозидазы ИК50 [нМ] QIC50
(+)-8a - 3,6×103 4800
(+)-8a + 0,75
(+)-4a - 0,75
(+)-8b - 1,5×103 600
(+)-8b + 2,5
(+)-4b - 3,7
(+)-8c - 9,4×102 4300
(+)-8c + 0,22
(+)-4c - 0,20
(+)-8d - 8,3×102 1100
(+)-8d + 0,75
(+)-4d - 0,80
(+)-8e   7,7×103 1300
(+)-8e   5,9
(+)-4e   3,8
Пример 52
In vivo оценка соединения (+)-8a в ортотопической модели рака молочной железы у SCID мышей, с использованием концепции ADEPT
Перед имплантацией опухолевых клеток самок мышей штамма SCID анестезируют внутрибрюшинными инъекциями 75 мг/кг кетамингидрохлорида с 15 мг/кг ксилазина. 1×106 MDA-MB-231 клеток (эстроген-независимая человеческая клеточная линия рака молочной железы) суспендируют в 25 мкл стерильного буферированного фосфатом солевого раствора (PBS) и затем имплантируют в mammary fad pat 4го комплекса молочной железы. После имплантации мышей ежедневно осматривают, определяя потерю веса, общее состояние и образование опухоли. На 21 день животных произвольно распределяют в группы по 5-12 мышей (контроль, только антитело-фермент, только пролекарство, и ADEPT терапия). На 22 и 30 день мышам вводят внутривенно PBS (контрольная группа и группа только пролекарство) или 50 мкг моноклонального анти-человеческий рецептор активатора урокиназного плазминогена (uPAR) антитела, конъюгированного с β-галактозидазой uPAR*β-Gal, в PBS (группы только антитело-фермент, ADEPT терапия). В дни 24, 26, 28, 32, 34 и 36 мышам внутривенно вводят 1% ДМСО/NaCl раствор (группы контроль, только антитело-фермент) или 104 мкг (+)-8a в 1% ДМСО/NaCl растворе (группы только пролекарство, ADEPT терапия). Мышей умерщвляют на 38 день, и опухоли иссекают, взвешивают, помещают в буферированный фосфатом 4% формалин на 16 часов при комнатной температуре и заключают в парафин. Получают срезы тканей (2,5 мкм), окрашивают гематоксилином и эозином (H & E), и исследуют с помощью обычного микроскопа. Для иммуногистохимии, срезы по 2,5 мкм фиксированных формалином и заключенных в парафин тканей помещают на стекла, парафин удаляют ксилолом и регидратируют в разбавлениях этанол/вода. Слайды для Ki67 окрашивания предварительно обрабатывают, кипятя в микроволновой печи (5×5 мин) в цитратном буфере (pH 6,0) для восстановления антигена. Эндогенные пероксидазы инактивируют, обрабатывая 3% перекисью водорода в течение 10 минут. Затем добавляют Tris-буферированный 10% раствор кроличьей сыворотки (Dako, Hamburg, Germany, No. X 0902) для блокирования связывания неспецифического белка, и предметные стекла инкубируют с мышиным анти-человеческим Ki67 (Dianova, Hamburg, Germany, No. dia 505) в течение 60 минут (2 мкг/мл) с последующим экспонированием биотинилированному кроличьему анти-мышиному F(ab')2-фрагменту (Dako, No. E 0413, 16,8 мкг/мл) в течение 30 минут. Затем срезы инкубируют с авидин-пероксидазным раствором (Dako, No. P 364), окрашивают аминоэтилкарбазолом (раствор AEC субстрата, Sigma), промывают в воде, и наконец осуществляют контрастное окрашивание гематоксилином. Среднее число Ki67 позитивных ядер подсчитывают в трех самых клеточных полях в опухолях, содержащих субъективно наивысшие плотности митотических фигур, и определяют соотношение полного количества ядер, окрашенных Н & E в тех же площадях.
Размер опухоли определяют как конкретные временные точки во время эксперимента терапии (дни 21, 29 и 38) с плоскопанельным объемным прототипом компьютерного томографа (fpVCT GE Global Research, Niskayuna NY, US). Мышей анестезируют парами изофлурана в концентрации 0,8-1% на протяжении сессии получения изображений, центрируют на fpVCT оси вращения подставки и помещают перпендикулярно z-оси системы таким образом, чтобы обеспечить возможность сканирования всего тела мыши за один поворот. Контрастную среду, 150 мкл Isovist® 300 (Schering, Berlin, Germany), вводят внутривенно за 20 секунд до сканирования. Все совокупности результатов были получены по одной и той же схеме: 1000 снимков за вращение, 8 секунд время вращения, 360 использованных детекторных рядов, 80 кВольт, и 100 мА. Для реконструкции изображений используют модифицированный алгоритм Feldkamp, получая набор изотопных объемных результатов с высоким разрешением (512×512 матрица, разрешение около 200 мкм)
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Boger, D.L.; Johnson, D.S.; Wrasidlo, W. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1994, 4, 631-636.
2. McGovren, J.P., Clarke, G.L., Pratt, E.A., DeKoning, T.F. J. Antibiot. 1984, 37, 63-70.
3. Carter, P.; Smith, L.; Ryan, M. Endocr.-Relat. Cancer 2004, 11, 659-687.
4. Bagshawe, K.D. Drug Dev. Res. 1995, 34, 220-230.
5. Melton, R.; Connors, T.; Knox, R.J. S.T.P. Pharma Sciences, 1999, 13-33.
6. Huber, B.E.; Richards, C.A.; Krenitsky, T.A. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 8039-8043.
7. Bagshawe, K.D.; Springer, C.J.; Searle, F.; Antoniw, P.; Sharma, S.K.; Melton, R.G.; Sherwood, R.F. Br. J. Cancer, 1988, 58, 700-703.
8. Duncan, R. Nat. Rev. Drug Discov. 2003, 2, 347-360.
9. Tietze, L.F.; Lieb, M.; Herzig, T.; Haunert, F.; Schuberth, I. Bioorg. Med. Chem. 2001, 9, 1929-1939.
10. Tietze, L.F., Herzig, T.; Fecher, A.; Haunert, F., Schuberth, I. ChemBioChem 2001, 758-765.
11. Toki, B.E.; Cerveny, C.G.; Wahl, A.F.; Senter, P.D. J. Org. Chem., 2002, 67, 1866-1872.
12. See for some recently disclosed cyclization spacers for example WO 2005/079398, WO 2005/105154, and WO 2006/012527.
13. Greenwald, R.B., Choe, Y.H., McGuire, J., Conover, C.D. Adv. Drug Delivery Rev. 2003, 55, 217-250.
14. Kingsbury, W.D.; Boehm; J.C.; Mehta, R.J.; Grappel, S.F.; Gilvarg, C. J. Med. Chem., 1984, 27, 1447-1451.
15. Greenwald, R.B.; Zhao, H.; Yang, K.; Reddy, P.; Martinez, A. J. Med. Chem. 2004, 47, 726-734.
16. (a) Franke, A.E.; Sievers, E.L.; and Scheinberg, D.A. Cancer Biother. Radiopharm. 2000, 15, 459-476.
(b) Murray, J.L. Semin. Oncol. 2000, 27, 2564-2570 (c) Breitling, F., and Dubel, S., Recombinant Antibodies, John Wiley and Sons, New York, 1998.
17. Ringsdorf, H. J. Polym. Sci., Polym. Symp. 1975, 51, 135-153.
18. Elvira, C; Gallardo, A.; San Roman, J.; Cifuentes, A. Molecules 2005, 10, 114-125.
19. Remington's Pharmaceutical Science (15th ed., Mack Publishing, Easton, PA, 1980) (incorporated by reference in its entirety for all purposes).

Claims (16)

1. Соединение формулы (I)
Figure 00000087

или его фармацевтически приемлемая соль, где
R1 представляет собой галоген;
R2 выбирают из H и C1-8алкила;
R3 и R3' отсутствуют и R4 и R4' представляют собой H;
X2 представляет собой C(R14)(R14'), где R14 означает H и где R14' отсутствует;
R5 выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, CF3, CN, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, галогена, Rk, SRk, S(O)Rk, S(O)2Rk, ORk, NHRk, N(Rk)RL, +N(Rk)(RL)Rm, C(O)Rk, C(O)ORk, C(O)N(RL)Rk, OC(O)Rk, OC(O)ORk, OC(O)N(Rk)RL, N(RL)C(O)Rk, N(RL)C(O)ORk и N(RL)C(O)N(Rm)Rk, где Rk, RL и Rm независимо выбирают из H и C1-4алкила, C3-7циклоалкила или C4-12арила;
R6 и R7 каждый означает H;
R5', R6', R7' и R14' отсутствуют, что означает, что двойная связь присутствует между атомами, к которым присоединены R5' и R6', и R7' и R14' соответственно, или
R5 и R6 соединены с образованием кольца;
X1 означает O;
X3 означает NR15, где R15 означает H,
X4 означает CR16, где R16 означает H;
X5 означает O;
R8, R9, R10 и R11 каждый независимо выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, CF3, CN, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, галогена, Rx, SRx, S(O)Rx, S(O)2Rx, S(O)ORx, S(O)2ORx, OS(O)ORx, OS(O)2ORx, ORx, NHRx, N(Rx)Ry, +N(Rx)(Ry)Rz, P(O)(ORx)(ORy), OP(O)(ORx)(ORy), C(O)Rx, C(O)ORx, C(O)N(Ry)Rx, OC(O)Rx, OC(O)ORx, OC(O)N(Rx)Ry, N(Ry)C(O)Rx, N(Ry)C(O)ORx и N(Ry)C(O)N(Rz)Rx, где Rx, Ry и Rz независимо выбирают из H, C1-15алкила, C1-15гетероалкила, C3-15циклоалкила, C3-15гетероциклоалкила, C4-15арила или C4-15гетероарила,
и по меньшей мере, один из R8 и R9 выбирают из -O-C1-6алкилен-N(R100)2, -NC(O)-C1-5алкилен-N(R100)2, (1-(R100)пиперидин-4-ил)-C1-5алкилен-O-, и (морфолин-4-ил)-C1-8алкилен-O-, где каждый R100 независимо выбирают из H и C1-3алкила;
a равно 0;
b равно 1;
c равно 1;
при условии, что в соединении формулы (I), по меньшей мере, один из R2 и R5 не представляет водород.
2. Соединение по п.1, где R2 представляет C1-8алкил.
3. Соединение по п.2, где R2 представляет метил.
4. Соединение по п.1, где R5 не представляет водород.
5. Соединение по п.1, где R8 или R9 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино и (пиперидин-4-ил)метокси.
6. Соединение по п.5, где R8 выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино и (пиперидин-4-ил)метокси.
7. Соединение по п.1, где R9 представляет метокси и R10 и R11 каждый представляет водород.
8. Соединение по п.1, которое представляет
Figure 00000088

или его (1R, 10S) изомер, его (1R, 10R) изомер, его (1S, 10S) изомер, или смесь двух или более из указанных изомеров, где R1a представляет хлор (Cl) или бром (Br), R2a и R5b представляют метил и Н соответственно, или Н и метил соответственно, R8d выбирают из 2-(морфолин-4-ил)этокси, (1-метилпиперидин-4-ил)метокси, 2-(N,N-диметиламино)этокси, 2-(N,N-диметиламино)ацетиламино, 2-(метиламино)этокси, 2-(метиламино)ацетиламино, 2-аминоэтокси, 2-аминоацетиламино и (пиперидин-4-ил)метокси, и R9d выбирают из H и метокси.
9. Соединение по п.1, которое представляет
Figure 00000089

Figure 00000090

или (1R, 10S) изомер, (1R, 10R) изомер, или (1S, 10S) изомер одного из них, или смесь двух или более из указанных изомеров, или который представляет
Figure 00000091

или его (1R) изомер или смесь двух указанных изомеров.
10. Соединение формулы (IIIa)
Figure 00000092

или его фармацевтически приемлемая соль, где
V2 представляет собой антитело или фрагмент антитела;
L2 представляет собой фрагмент следующей структуры:
Figure 00000093

L выбирают из
Figure 00000094
Figure 00000095

Figure 00000096
Figure 00000097

Figure 00000098
Figure 00000099

Figure 00000100
Figure 00000101

V1 представляет собой пептид
Y представляет собой комбинацию РАВА (п-аминобензиловый спирт) спейсера и бисаминового циклизационного спейсера, предпочтительно следующей структуры:
Figure 00000102

где R37-R40 выбирают из H, OH, SH, NH2, N3, NO2, CF3, CN, C(O)NH2, С(O)H, С(O)OH, галогена и Rk, где Rk выбирают из H и C1-4-алкила;
и где бисаминовый циклизационный спейсер может представлять собой ω-амино аминокарбонильный циклизационный уничтожающийся спейсер следующей структуры:
Figure 00000103

где c=0; R35 и R36 представляют собой CH3, или R35+R36 означают -CH2-CH2-, и R37-R40 означают H;
Z представляет собой соединение, определенное в п.1;
p=1
q=z
- q представляет собой целое от 1 до 8 включительно;
или формулы (IIId):
V1-Z
где V1 представляет собой моносахарид, дисахарид или олигосахарид, состоящий из гексоз или пентоз или гептоз, которые могут также быть включены в группу дезоксисахаров или аминосахаров и принадлежать к D-ряду или L-ряду, и в дисахаридах или олигосахаридах являются или идентичными или различными, или где V1 представлен формулой C(ORa')Rb'CHRc'Rd', где Ra' представляет гидроксизащитную группу, C1-8алкильную группу, которая необязательно образует кольцо с R5, R5', R6, R6', R7, R7', R14 или R14', или моносахаридный, дисахаридный или олигосахаридный остаток, необязательно замещенный метильной группой, гидроксиметильной группой, и/или радикалом формулы -NRe'Rf', где Re' и Rf' одинаковы или различны и выбраны из водорода, C1-8алкила или аминозащитной группы, и где гидроксигруппы сахаридных остатков необязательно защищены; Rb', Rc' и Rd' независимо выбирают из водорода, C1-8алкила или C1-3циклоалкила, или группы формулы -NRe'Rf', где Re' и Rf' имеют указанные выше значения; Z представляет собой соединение формулы (I), определенное в п.1;
или его терапевтически приемлемая соль.
11. Соединение по п.10, где V1 представляет дипептидный, трипептидный, тетрапептидный или олигопептидный фрагмент, состоящий из природных L аминокислот, не природных D аминокислот, или синтетических аминокислот или пептидомиметиков, или любых их комбинаций.
12. Соединение по п.10, которое представляет собой
Figure 00000104

или (1R,10S) изомер, (1R,10R) изомер, (1S,10S) изомер одного из них, или смесь двух или более из указанных изомеров, или который представляет
Figure 00000105

или его (1R) изомер или смесь двух изомеров.
13. Соединение по п.10, которое представляет собой
Figure 00000106

или (1R,10S) изомер, (1R,10R) изомер или (1S,10S) изомер одного из них, или смесь двух или более из указанных изомеров.
14. Соединение формулы (IV)
Figure 00000107

или его фармацевтически приемлемая соль, где RM представляет реакционноспособный фрагмент, выбранный из
Figure 00000108
или
Figure 00000109
или
Figure 00000110
или
Figure 00000111
или
Figure 00000112
или
Figure 00000113
или
Figure 00000114
или
Figure 00000115
или
Figure 00000116
или
Figure 00000117
или
Figure 00000118
или
Figure 00000119
или
Figure 00000120
или
Figure 00000121
или
Figure 00000122

где
X8 выбирают из -Cl, -Br, -I, -F, -OH, -O-N-сукцинимида, -O-(4-нитрофенил), -O-пентафторфенила, -O-тетрафторфенила, -O-C(O)-R50 и -O-С(O)-OR50;
X9 выбирают из -Cl, -Br, -I, -O-мезила, -O-трифлила и -O-тозила;
R50 представляет C1-C10алкил или арил;
L, V1, Y, Z, p и z имеют указанные в п.13 значения, за исключением того, что L теперь связывает RM с одним или более из V1 и/или Y, и V1, Y и Z могут содержать защитные группы и один или более из V2'-L2' фрагментов, необязательно присутствующих в Z, как указано выше, может необязательно и независимо быть замещен RM', который представляет собой реакционноспособный фрагмент, и, если в (IV) присутствует более одного реакционноспособного фрагмента, указанные реакционноспособные фрагменты одинаковы или различны.
15. Применение соединения по пп.1, 10 или 14 для приготовления фармацевтической композиции для лечения опухоли у млекопитающего.
16. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая соединение по пп.1, 10 или 14 и фармацевтически приемлемый носитель.
RU2008135440/04A 2006-02-02 2007-02-02 Водорастворимые аналоги сс-1065 и их конъюгаты RU2489423C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NLPCT/NL2006/050020 2006-02-02
NL2006050020 2006-02-02
PCT/NL2007/050043 WO2007089149A2 (en) 2006-02-02 2007-02-02 Water-soluble cc-1065 analogs and their conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2008135440A RU2008135440A (ru) 2010-03-10
RU2489423C2 true RU2489423C2 (ru) 2013-08-10

Family

ID=38227758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008135440/04A RU2489423C2 (ru) 2006-02-02 2007-02-02 Водорастворимые аналоги сс-1065 и их конъюгаты

Country Status (11)

Country Link
US (1) US8940784B2 (ru)
EP (1) EP1994000B1 (ru)
JP (2) JP5346589B2 (ru)
KR (1) KR20080114709A (ru)
CN (1) CN101415679A (ru)
AU (1) AU2007210377B2 (ru)
BR (1) BRPI0707426A2 (ru)
CA (1) CA2641899A1 (ru)
MX (1) MX2008009956A (ru)
RU (1) RU2489423C2 (ru)
WO (1) WO2007089149A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11299724B2 (en) 2016-07-14 2022-04-12 Limited Liability Company Biochemical Agent Fusion protein, polynucleotide, genetic construct, producer, preparation for regeneration of cartilage

Families Citing this family (133)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2335728A1 (en) 2001-05-11 2011-06-22 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Specific binding proteins and uses thereof
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US20110313230A1 (en) 2001-05-11 2011-12-22 Terrance Grant Johns Specific binding proteins and uses thereof
US7087600B2 (en) 2001-05-31 2006-08-08 Medarex, Inc. Peptidyl prodrugs and linkers and stabilizers useful therefor
RU2402548C2 (ru) 2004-05-19 2010-10-27 Медарекс, Инк. Химические линкеры и их конъюгаты
US8124738B2 (en) 2005-09-26 2012-02-28 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to CD70
US7838542B2 (en) * 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
MX338185B (es) 2007-01-25 2016-04-05 Dana Farber Cancer Inst Inc Uso de anticuerpos anti-egfr en el tratamiento de enfermedad mediada por egfr mutante.
CA2678514A1 (en) 2007-02-21 2008-08-28 Medarex, Inc. Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
WO2008115404A1 (en) 2007-03-15 2008-09-25 Ludwing Institute For Cancer Research Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations
US9901567B2 (en) 2007-08-01 2018-02-27 Syntarga B.V. Substituted CC-1065 analogs and their conjugates
ES2433379T3 (es) * 2007-08-01 2013-12-10 Syntarga B.V. Análogos de CC-1065 sustituidos y sus conjugados
CN101896503B (zh) 2007-08-14 2018-05-22 路德维格癌症研究所有限公司 靶向egf受体的单克隆抗体175及其衍生物和用途
CA2700860C (en) 2007-10-01 2016-07-19 Jonathan A. Terrett Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
EP2344478B1 (en) * 2008-11-03 2017-09-27 Syntarga B.V. Cc-1065 analogs and their conjugates
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US20110076232A1 (en) 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
DE102009051438A1 (de) 2009-10-30 2011-05-05 Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Fluoreszenzfarbstoffe
DE102009051799B4 (de) 2009-11-03 2021-07-01 Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Bifunktionale Prodrugs und Drugs
HUE050508T2 (hu) 2010-04-21 2020-12-28 Syntarga Bv CC-1065 analógok és bifunkcionális linkerek konjugátumai
CA2800769C (en) 2010-05-27 2021-11-02 Genmab A/S Monoclonal antibodies against her2 epitope
CA3051311A1 (en) 2010-05-27 2011-12-01 Genmab A/S Monoclonal antibodies against her2
PL2582728T3 (pl) 2010-06-15 2018-01-31 Genmab As Koniugaty ludzkie przeciwciało-lek przeciwko czynnikowi tkankowemu
WO2012016227A2 (en) 2010-07-29 2012-02-02 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
WO2012045085A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Anti-rori antibodies
WO2012088441A1 (en) * 2010-12-23 2012-06-28 Alkermes, Inc. Multi- api loading prodrugs
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
DK2668210T3 (da) 2011-01-26 2020-08-24 Celldex Therapeutics Inc Anti-kit antistoffer og anvendelser deraf
CA2832387A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Genmab A/S Bispecifc antibodies against her2
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
AU2012323287B2 (en) 2011-10-10 2018-02-01 Xencor, Inc. A method for purifying antibodies
ES2929759T3 (es) 2012-04-05 2022-12-01 Nerviano Medical Sciences Srl Nuevos agentes alquilantes
US9561290B2 (en) * 2012-04-05 2017-02-07 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Functionalized thieno-indole derivatives for the treatment of cancer
JP6262209B2 (ja) * 2012-05-07 2018-01-17 日東電工株式会社 リンカーを有するポリマー結合体
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
AU2013285355A1 (en) 2012-07-06 2015-01-29 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
BR112015001459B1 (pt) 2012-07-25 2023-02-14 Celldex Therapeutics, Inc Anticorpo isolado ou fragmento do mesmo, conjugado, usos dos mesmos, composição farmacêutica, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, célula isolada, kit, método in vitro para inibir atividade da kit, método para produzir um anticorpo
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
EA201500741A1 (ru) 2013-01-10 2016-01-29 Генмаб Б.В. ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ IGG1 ЧЕЛОВЕКА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CN105051069B (zh) 2013-01-14 2019-12-10 Xencor股份有限公司 新型异二聚体蛋白
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US9738722B2 (en) 2013-01-15 2017-08-22 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP2970486B1 (en) 2013-03-15 2018-05-16 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
AU2014232501C1 (en) 2013-03-15 2021-04-22 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
ES2738657T3 (es) * 2013-09-25 2020-01-24 Nerviano Medical Sciences Srl Derivados de tieno[2,3-e]indol como nuevos antitumorales
PE20160561A1 (es) 2013-10-11 2016-06-03 Oxford Biotherapeutics Ltd Anticuerpos conjugados contra ly75 para el tratamiento de cancer
CA2934030A1 (en) * 2013-10-15 2015-04-23 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
EP3069735B1 (en) 2014-01-10 2018-03-14 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Duocarmycin adcs for use in the treatment of bladder cancer
KR20160099725A (ko) 2014-01-10 2016-08-22 신톤 바이오파머슈티칼즈 비.브이. 자궁내막암의 치료에서 사용하기 위한 듀오카르마이신 adc
US10266606B2 (en) 2014-01-10 2019-04-23 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Method for purifying Cys-linked antibody-drug conjugates
UA119167C2 (uk) 2014-03-28 2019-05-10 Зенкор, Інк. Біспецифічне антитіло, яке зв'язується з cd38 та cd3
DK3160513T3 (da) 2014-06-30 2020-04-06 Glykos Finland Oy Saccharidderivat af en toksisk payload og antistofkonjugater deraf
MX370807B (es) 2014-07-11 2020-01-08 Genmab As Anticuerpos que se unen a axl.
CA2956178A1 (en) 2014-07-24 2016-01-28 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
US10011657B2 (en) 2014-10-31 2018-07-03 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-CS1 antibodies and antibody drug conjugates
SG11201704274QA (en) 2014-11-26 2017-06-29 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
HUE055115T2 (hu) 2014-11-26 2021-10-28 Xencor Inc CD3-at és CD20-at kötõ heterodimer antitestek
CA2969689A1 (en) * 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Quaternary amine compounds and antibody-drug conjugates thereof
KR20170093943A (ko) 2014-12-09 2017-08-16 애브비 인코포레이티드 낮은 세포 투과성을 갖는 bcl xl 억제 화합물 및 이를 포함하는 항체 약물 접합체
EP3230283A1 (en) 2014-12-09 2017-10-18 AbbVie Inc. Bcl-xl inhibitory compounds and antibody drug conjugates including the same
CA2969908A1 (en) 2014-12-09 2016-06-16 Abbvie Inc. Antibody drug conjugates with cell permeable bcl-xl inhibitors
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
WO2016141387A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
KR20180033523A (ko) 2015-07-10 2018-04-03 젠맵 에이/에스 암 치료를 위한 axl-특이적 항체-약물 접합체
DE102016105449A1 (de) 2015-10-29 2017-05-04 Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Bifunktionale Prodrugs
JP6412906B2 (ja) 2015-11-03 2018-10-24 財團法人工業技術研究院Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ 化合物、リンカー−薬物およびリガンド−薬物複合体
EP3383909B1 (en) 2015-11-30 2020-06-17 AbbVie Inc. Anti-human lrrc15 antibody drug conjugates and methods for their use
WO2017095808A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 Abbvie Inc. ANTI-huLRRC15 ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS FOR THEIR USE
CN108699136B (zh) 2015-12-07 2022-03-18 Xencor股份有限公司 结合cd3和psma的异二聚抗体
WO2017197045A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Movassaghi Mohammad Convergent and enantioselective total synthesis of communesin analogs
BR112018073574A2 (pt) 2016-05-17 2019-03-19 Abbvie Biotherapeutics Inc. conjugados de anticorpo-fármaco anti-cmet e métodos para a sua utilização
JP2019521975A (ja) 2016-06-08 2019-08-08 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
US20200338209A1 (en) 2016-06-08 2020-10-29 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN109563167A (zh) 2016-06-08 2019-04-02 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
WO2017214458A2 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
JP2019524651A (ja) 2016-06-08 2019-09-05 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ９８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
BR112018075651A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados anticorpo fármaco
JP2019521106A (ja) 2016-06-08 2019-07-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
RU2764651C2 (ru) 2016-06-08 2022-01-19 Эббви Инк. Антитела к в7-н3 и конъюгаты антитела и лекарственного средства
JP2019521114A (ja) 2016-06-08 2019-07-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
EP4257613A3 (en) 2016-06-14 2023-12-13 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
CN109715663B (zh) 2016-06-28 2022-11-25 Xencor股份有限公司 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
SG11201903302UA (en) 2016-10-14 2019-05-30 Xencor Inc Bispecific heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ralpha fc-fusion proteins and pd-1 antibody fragments
CA3041988A1 (en) 2016-11-01 2018-05-11 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
US11084863B2 (en) 2017-06-30 2021-08-10 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15 IL-15alpha and antigen binding domains
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
JP2021502100A (ja) 2017-11-08 2021-01-28 ゼンコア インコーポレイテッド 新規抗ｐｄ−１配列を用いた二重特異性および単一特異性抗体
CN111655718A (zh) 2017-12-19 2020-09-11 Xencor股份有限公司 经过工程化的il-2 fc融合蛋白
WO2019145455A1 (en) 2018-01-24 2019-08-01 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
EP3773911A2 (en) 2018-04-04 2021-02-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
MX2020010910A (es) 2018-04-18 2021-02-09 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas dirigidas a pd-1 que contienen proteinas de fusion il-15 / il-15ra fc y dominios de union al antigeno pd-1 y usos de los mismos.
EP3781598A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
CU20200089A7 (es) 2018-06-01 2021-07-02 Novartis Ag Moléculas de unión contra bcma
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
KR20210028204A (ko) 2018-07-02 2021-03-11 암젠 인크 항-steap1 항원 결합 단백질
MA53822A (fr) 2018-10-03 2021-08-11 Xencor Inc Protéines de fusion fc hétérodimères d'il -12
CA3132185A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
US12037378B2 (en) 2019-05-21 2024-07-16 Novartis Ag Variant CD58 domains and uses thereof
JOP20210309A1 (ar) 2019-05-21 2023-01-30 Novartis Ag جزيئات ربط بـ cd19 واستخدامتها
US11535634B2 (en) 2019-06-05 2022-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
EP4087657A1 (en) 2020-01-08 2022-11-16 Synthis Therapeutics, Inc. Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof
KR20210097601A (ko) * 2020-01-30 2021-08-09 (주)에임드바이오 벤조셀레노펜계 화합물, 이를 포함하는 약학적 조성물 및 항체-약물 결합체
CN115315446A (zh) 2020-03-06 2022-11-08 Go医疗股份有限公司 抗糖-cd44抗体及其用途
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
IL300666A (en) 2020-08-19 2023-04-01 Xencor Inc ANTI–CD28 COMPOSITIONS
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2022182415A1 (en) 2021-02-24 2022-09-01 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
WO2022187591A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
US11739144B2 (en) 2021-03-09 2023-08-29 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CLDN6
WO2022192586A1 (en) 2021-03-10 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3
EP4346882A1 (en) 2021-05-26 2024-04-10 Oxford BioTherapeutics Ltd Pharmaceutical combination comprising an anti-cd205 antibody and an immune checkpoint inhibitor
EP4380604A1 (en) 2021-08-05 2024-06-12 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
CN118355031A (zh) 2021-09-03 2024-07-16 Go医疗股份有限公司 抗糖-lamp1抗体及其用途
JP2024536722A (ja) 2021-09-03 2024-10-08 ジーオー セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗グリコｃｍｅｔ抗体およびその使用
EP4433170A1 (en) 2021-11-18 2024-09-25 Oxford BioTherapeutics Ltd Pharmaceutical combinations
GB202300668D0 (en) * 2023-01-17 2023-03-01 Univ Bradford Cancer treating compounds

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1238907A (en) * 1984-02-21 1988-07-05 Robert C. Kelly 1,2,8,8a-tetrahydrocyclopropa¬c|pyrrolo(3,2-e)- indol-4(5h)-ones and related compounds
JPH0784377B2 (ja) * 1984-04-10 1995-09-13 花王株式会社 弱酸性入浴剤
JP2562935B2 (ja) * 1988-04-28 1996-12-11 明治製菓株式会社 抗腫瘍性物質ｓｆ２５８２誘導体
AU648313B2 (en) * 1990-04-25 1994-04-21 Pharmacia & Upjohn Company Novel CC-1065 analogs
JP2612649B2 (ja) * 1990-07-26 1997-05-21 協和醗酵工業株式会社 Ｄｃ−８９誘導体
EP0563475B1 (en) * 1992-03-25 2000-05-31 Immunogen Inc Cell binding agent conjugates of derivatives of CC-1065
GB9516943D0 (en) * 1995-08-18 1995-10-18 Cancer Soc Auckland Div Nz Inc Novel cyclopropylindoles and their secoprecursors,and their use as prodrugs
US5843937A (en) * 1996-05-23 1998-12-01 Panorama Research, Inc. DNA-binding indole derivatives, their prodrugs and immunoconjugates as anticancer agents
ES2253786T3 (es) * 1996-09-12 2006-06-01 Auckland Uniservices Limited Compuestos de ciclopropilindola y su uso como precursores de medicamentos.
GB9909612D0 (en) 1999-04-26 1999-06-23 Cancer Res Campaign Tech N-protected amines and their use as prodrugs
US7214685B2 (en) * 2000-05-02 2007-05-08 Lutz F. Tietze Prodrugs for a selective cancer therapy
ATE361750T1 (de) * 2001-02-22 2007-06-15 Univ London Pharmacy Indoline und tetrahydro-chinoline als prodrugs zur tumorbehandlung
US7087600B2 (en) * 2001-05-31 2006-08-08 Medarex, Inc. Peptidyl prodrugs and linkers and stabilizers useful therefor
TWI367096B (en) * 2003-01-27 2012-07-01 Endocyte Inc Vitamin-receptor binding drug delivery conjugates and pharmaceutical compositions
MXPA06013413A (es) * 2004-05-19 2007-01-23 Medarex Inc Enlazadores quimicos y conjugados de los mismos.
CA2569679A1 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Novartis Ag Conjugates of antibody and duoarmycin derivatives as antitumor agents
NZ536107A (en) * 2004-10-22 2007-06-29 Auckland Uniservices Ltd Nitrobenzindoles and their use in cancer therapy

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Eur. J. Org. Chem. 2002, 1634-1645. Chem. Biochem. 2001, v.2, n.10, p.758-765. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11299724B2 (en) 2016-07-14 2022-04-12 Limited Liability Company Biochemical Agent Fusion protein, polynucleotide, genetic construct, producer, preparation for regeneration of cartilage

Also Published As

Publication number Publication date
JP2009525322A (ja) 2009-07-09
CA2641899A1 (en) 2007-08-09
US20090318668A1 (en) 2009-12-24
BRPI0707426A2 (pt) 2011-05-03
MX2008009956A (es) 2008-12-12
AU2007210377A1 (en) 2007-08-09
RU2008135440A (ru) 2010-03-10
JP5346589B2 (ja) 2013-11-20
KR20080114709A (ko) 2008-12-31
EP1994000B1 (en) 2017-08-23
JP2013227326A (ja) 2013-11-07
US8940784B2 (en) 2015-01-27
AU2007210377B2 (en) 2012-08-09
WO2007089149A2 (en) 2007-08-09
WO2007089149A3 (en) 2007-09-27
EP1994000A2 (en) 2008-11-26
CN101415679A (zh) 2009-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2489423C2 (ru) Водорастворимые аналоги сс-1065 и их конъюгаты
EP2173739B1 (en) Substituted cc-1065 analogs and their conjugates
EP2560645B1 (en) Conjugates of cc-1065 analogs and bifunctional linkers
RU2628069C2 (ru) Новые аналоги сс-1065 и их конъюгаты
AU2006277117A1 (en) Triazole-containing releasable linkers and conjugates comprising the same
US9901567B2 (en) Substituted CC-1065 analogs and their conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200203