RU2447076C1 - Способ получения топотекана - Google Patents
Способ получения топотекана Download PDFInfo
- Publication number
- RU2447076C1 RU2447076C1 RU2010150491/04A RU2010150491A RU2447076C1 RU 2447076 C1 RU2447076 C1 RU 2447076C1 RU 2010150491/04 A RU2010150491/04 A RU 2010150491/04A RU 2010150491 A RU2010150491 A RU 2010150491A RU 2447076 C1 RU2447076 C1 RU 2447076C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- camptothecin
- hydroxy
- topotecan
- dimethylamino
- tetrahydro
- Prior art date
Links
- NMWZXSHCCMKSTQ-IBGZPJMESA-N CN(C)Cc(c(cc1CN23)c(cc4)nc1C2=CC([C@@H](C(OC1)=O)O)=C1C3=O)c4O Chemical compound CN(C)Cc(c(cc1CN23)c(cc4)nc1C2=CC([C@@H](C(OC1)=O)O)=C1C3=O)c4O NMWZXSHCCMKSTQ-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу получения топотекана - цитостатического препарата из группы камптотецинов, который используется в качестве ингибитора топоизомеразы I
Способ включает: а) восстановление камптотецина (1) до 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) при помощи 2,6-диметил-3,5-дикарбметокси-1,4-дигидропиридина (2) в присутствии трифторуксусной кислоты в среде хлороформа при 60°C; б) окисление 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) диацетатом иодбензола (4) до 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) в среде уксусная кислота-вода при 20-25°C; в) получение 9-[(диметиламино)метил] 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (7) взаимодействием 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) с бис(диметиламино)метаном (6) в среде уксусной кислоты при 20-25°C; г) выделение топотекана - гидрохлорида 9-[(диметиламино)метил] 10-гидрокси-20(S)-камптотецина кристаллизацией из ацетона. Предлагаемое изобретение позволяет получить целевой продукт простым способом с достаточно высоким выходом. 4 пр.
Description
Изобретение относится к области органической и фармацевтической химии, конкретно к способу получения топотекана формулы:
ИЮПАК: (S)-10-[(диметиламино)метил]-4-этил-4,9-дигидрокси-1Н-пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b] хинолин-3,14[4Н,12Н]-диона в виде гидрохлорида.
Фундаментальная стадия процессов репликации и транскрипции клеточной ДНК связана с разделением спиральных цепей ДНК. Эукариотические ДНК-цепи, организованные в хроматин хромосомными белками, являются конформационно ограниченными, так что эти цепи не могут разворачиваться без помощи изменяющих топологию ферментов. Такими ферментами являются топоизомеразы.
В эукариотических клетках существуют два класса топоизомераз: топоизомераза типа I и топоизомераза типа II. Обе топоизамеразы типа I и типа II играют важную роль в репликации, транскрипции и рекомбинации ДНК. Обычно ингибирование топоизомеразы I было главной целью онкологических, противоопухолевых, антивирусных агентов и т.д. Ингибирование топоизомеразы II является главной мишенью важных коммерческих онколитических агентов (например, этопозида, доксорубицина и митоксантрона).
Примеры соединений, ингибирующих класс ДНК-топоизомеразы I, включают камптотецин и его производные. Камптотецин является цитотоксическим алкалоидом, продуцируемым в растениях, таких как Camptotheca accuminata, произрастающие в Китае, и Nothapodytesfoetida, произрастающие в Индии. Примеры производных-аналогов камптотецина включают топотекан, иринотекан и 9-аминокамптотецин.
Топотекан - это цитостатический препарат из группы камптотецинов. Топотекан - водорастворимый аналог камптотецина. Он является ингибитором топоизомеразы I.
Топотекан связывается с комплексом топоизомераза I-ДНК и предотвращает повторное сшивание нитей ДНК. Цитотоксичность топотекана обусловлена повреждением удвоенной нити ДНК, образующейся в процессе ее синтеза. При этом ферменты, участвующие в репликации, взаимодействуют с тройным комплексом, сформированным топотеканом, топоизомеразой I и ДНК. Клинические испытания показали, что топотекан демонстрирует эффективность против нескольких солидных раковых опухолей, в частности рака яичника, рака пищевода и немелкоклеточного рака легкого у людей.
В патенте США №5004758 [1] описан синтез топотекана, моногидрохлорида (S)-10-[(диметилэтиламино)метил]-4-этил-4,9-дигидрокси-1Н-пирано[3'14':6,7]индолизино[1,2b]хинолин-3,14(4Н,12Н)диона (также известный как 9-диметиламинометил-10-гидроксикамптотецин).
Описываемый в этом патенте топотекан - водорастворимый аналог камптотецина (S-изомер) получают следующим образом:
а) получают (20S) 9-диметиламинометил-10-гидроксикамптотецин в виде ацетатной соли взаимодействием 10-гидроксикамптотецина с водным раствором диметиламина в присутствии уксусной кислоты и водного раствора формальдегида;
б) растворяют продукт, полученный на стадии (а) в 0,1 N соляной кислоты.
Из патента США №6660861 [2] известен другой способ получения топотекана с использованием дихлорметана:
а) 10-гидрокси-20(S)-камптотецин растворяют в органическом растворителе (толуол, метиленхлорид, ацетонитрил, диметилформамид, смеси их) и добавляют диметиламин и дихлорметан в присутствии катализатора (карбонат калия, карбонат натрия) при 25-45°C;
б) полученный продукт переводят в гидрохлорид и кристаллизуют.
Из патента США №2007149783 [3] известен способ получения топотекана включающий:
а) гидрогенизацией камптотецина получают тетрагидрокамптотецин в присутствии оксида платины как катализатора гидрирования;
б) окисляют полученный тетрагидрокамтотецин до 10-гидроксикамптотецина при помощи иодозобензола диацетата;
в) взаимодействием 10-гидроксикамптотецина с диметиламином и формальдегидом в присутствии уксусной кислоты получают ацетат топотекана;
г) полученный продукт растворяют в соляной кислоте.
Выделяют кристаллизацией топотекан в виде моногидрохлорида.
Задачей данного изобретения является разработка простого, пригодного для полупромышленного использования способа получения топотекана.
Из существующих методов получения топотекана полный синтез, описанный в литературе, является очень трудоемким и дорогостоящим. Метод получения из природного сырья проще, но включает стадию восстановления водородом под давлением на катализаторе оксида платины, что удорожает процесс.
Попытка воспроизведения этого процесса показала, что требуемый 1,2,6,7-тетрагидрокамптотецин образуется с низким выходом (35%) и массой побочных продуктов, от которых трудно избавиться.
В связи с этим нами предложено в качестве восстановителя использовать производные 1,4-дигидропиридина.
Использование 1,4-дигидропиридинов в качестве восстановителей описано в литературе на ряде примеров [4, 5]. Применение этого дешевого реагента для восстановления камптотецина в 1,2,6,7-тетрагидрокамптотецин позволило получить требуемый промежуточный продукт синтеза топотекана с высокой селективностью и выходом без использования катализаторов, водорода и автоклава при атмосферном давлении. Предлагаемая нами общая схема синтеза топотекана включает следующие стадии:
а) восстановление камптотецина (1) до 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) при помощи 2,6-диметил-3,5-дикарбметокси-1,4-дигидропиридина (2) в присутствии трифторуксусной кислоты в среде хлороформа при 60°C;
б) окисление 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) иодозобензол диацетатом (4) до 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) в среде уксусная кислота-вода при 20-25°C;
в) получение 9-[(диметиламино)метил]10-гидрокси-20(S)-камптотецина (7) взаимодействием 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) с бис(диметиламино)метаном (6) в среде уксусной кислоты при 20-25°C;
г) выделение топотекана - гидрохлорида 9-[(диметиламино)метил]10-гидрокси-20(S)-камптотецина кристаллизацией из ацетона.
После стадии а) осуществляют отделение фильтрованием гидрохлорида 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина, получение свободного основания 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3), а после окисления осуществляют фильтрование 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5).
Таким образом, суть заявленного способа заключается в следующем.
Осуществляют реакцию камптотецина (1) с 1,4-дигидропиридином, например 2,6-диметил-3,5-дикарбметокси-1,4-дигидропиридином (2), в присутствии каталитических количеств кислоты Брёнстеда (Bronsted acids), например трифторуксусной, в среде хлороформа при нагревании до кипения под аргоном. Раствор полученного 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) обрабатывают диоксановым раствором хлористого водорода для осаждения солянокислого 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина, который отделяют фильтрованием. После фильтрования полученную соль переводят в свободное основание при помощи водного раствора бикарбоната натрия, экстрагируя полученное вещество подходящим растворителем, например хлористым метиленом.
Раствор упаривают, а остаток повторно растворяют в смеси равных количеств уксусной кислоты и воды. К полученному раствору добавляют иодозобензол диацетат (4) при комнатной температуре и интенсивном перемешивании. После часовой выдержки выпавший осадок фильтруют и промывают на фильтре смесью уксусной кислоты и воды, затем диэтиловым эфиром.
Полученный таким образом 10-гидрокси-20(S)-камптотецин (5) вводят в реакцию с бис(диметиламино)метаном (6) в среде уксусной кислоты. После часовой выдержки реакционную массу упаривают и остаток растворяют воде. Нерастворимые примеси отфильтровывают, а в полученный водный раствор 9-[(диметиламино)метил]10-гидрокси-20(S)-камптотецина (7) ацетата добавляют небольшое количество соляной кислоты и повторно упаривают до появления первых кристаллов, после чего смесь разбавляют десятикратным количеством ацетона и помещают в холод для более полного выпадения топотекана. Выпавшие кристаллы фильтруют, сушат. Полученный продукт представляет собой желтое кристаллическое вещество с содержанием основного вещества более 90% по данным ВЭЖХ.
Экспериментальная часть
Пример 1. Получение 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина гидрохлорида
В колбу емкостью 300 мл, снабженную обратным холодильником, помещают 3,5 г (0,01 моль) камптотецина (1), 7 г (0,031 моль) 2,6-диметил-3,5-дикарбметокси-1,4-дигидропиридина (2), 150 мл хлороформа и 0,1 мл трифторуксусной кислоты. Продувают аргоном и доводят до кипения при перемешивании. Первоначальная суспензия гомогенизируется примерно через 20 мин. Реакционную массу оставляют при перемешивании и кипении под аргоном на 18 часов. 0,7 г (0,003 моль) дигидропиридина в виде суспензии в 10 мл хлороформа добавляют в реакционную смесь и продолжают кипятить в течение 3 часов. Колбу охлаждают льдом и постепенно приливают 50 мл. 12% раствора хлористого водорода в диоксане. Смесь переносят на 1 час в холодильник для более полного осаждения гидрохлорида 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3). Выпавший осадок отделяют центрифугированием, промывают 2 раза по 50 мл ацетона. Сушат под вакуумом, получают 3,44 г (88%) гидрохлорида 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3). MS-ESI: 353[М+Н]+.
Пример 2. Получение свободного основания 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3)
3,44 г мелкоизмельченной соли гидрохлорида 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) перемешивают с 200 мл хлористого метилена и 30 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия до исчезновения осадка. Смесь делят в делительной воронке, промывая два раза по 30 мл хлористого метилена.
Объединенные экстракты сушат сульфатом натрия и упаривают на роторном испарителе. Масса остатка в колбе 3,36 г.
Пример 3. Получение 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5)
К полученному на предыдущей стадии свободному основанию 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) m=3,36 г приливают смесь предварительно дегазированных под вакуумом 17 мл уксусной кислоты и 17 мл воды. При перемешивании добавляют 5,6 г (0,0174 моль) диацетата иодбензола (4), смесь слегка разогревается, в какой-то момент становясь гомогенной. Цвет смеси меняется от зеленого до желто-коричневого и из нее начинает выпадать осадок продукта 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5). Через 15 мин добавляют еще 2 г (0,0062 моль) диацетата иодбензола. Дают выдержку 1 час и смесь центрифугируют, промывают два раза смесью 20 мл уксусной кислоты, 20 мл воды и 100 мл эфира. Осадок 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) сушат m=2,43 г.
1H ЯМР (ДМСО-d6) δ 0,88 (t, 3H, J=7 Hz), 1,86 (q, 2H, J=7 Hz), 5,20 (s, 2H), 5,4 (s, 2H), 6,0-6,75 (ws, 2H), 7,26 (s, 2H), 7,42 (d, 1H, J=9 Hz), 7,99 (d, 1H, J=9 Hz), 8,41 (s, 1H). MS-ESI: 365 [M+H]+.
Пример 4. Получение гидрохлорида 9-[(диметиламино)метил]10-гидрокси-20(S)-камптотецина (7)
К суспензии 2,43 г (0,0067 моль) 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) в 66 мл. уксусной кислоты добавляют 1,3 г (0,0127 моль) бис(диметиламино)метана (6).
Смесь перемешивают в течение 18 часов при комнатной температуре. Упаривают на роторном испарителе до сухого остатка, заливают 100 мл воды, добавляют 1 мл конц. соляной кислоты и перемешивают в течение получаса. Полученную суспензию фильтруют от нерастворимых примесей и упаривают на роторном испарителе до начала появления кристаллов (объем примерно 10 мл). Полученный насыщенный раствор разбавляют 100 мл ацетона. Через некоторое время из смеси начинает кристаллизоваться гидрохлорид 9-[(диметиламино)метил]10-гидрокси-20(S)-камптотецина (7).
Для полноты выпадения смесь помещают в холодильник на несколько часов. Вещество фильтруют, сушат. Получают 2,69 г желтых кристаллов. По данным ВЭЖХ чистота продукта составляет более 90%.
1H ЯМР (ДМСО-d6) δ 0,88 (t, 3H, J=6,5 Hz), 1,87 (q, 2H, J=6,5 Hz), 2,83 (d, 6H, J=4,7 Hz), 4,73 (d, 2H, J=5,4 Hz), 5,26 (s, 2H), 5,42 (s, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,72 (d, 1H, J=9,4 Hz), 8,17 (d, 1H, J=9,4 Hz), 8,97 (s, 1H), 9,8 (ws, 1H). MS-ESI: 422 [М+Н]+, 377 [М-N(Ме)2]+.
Анализ чистоты синтезированных полупродуктов и топотекана проводили методом ВЭЖХ на хроматографе фирмы Shimadzu. Колонка: Grom-Sil 12J ODS-4HE, 5 µm, 250*4,6 mm. Условия:
Элюент А - Фосфатный буфер.
Элюент В - Ацетонитрил.
Схема градиента: % В 20-60-70-70. Время (мин) 0-10-15-30.
Как видно из вышеприведенных примеров, описанный способ пригоден для получения гидрохлорида 9-[(диметиламино)метил]10-гидрокси-20(S)-камптотецина (7) с достаточно высоким выходом в полупромышленном масштабе. Кроме того, восстановление с использованием дигидропиридинов, получаемых по реакции Ганча из доступных и дешевых исходных реактивов, не требует работы с высоким давлением и дорогостоящими катализаторами.
Источники информации
1) Patent No.: US 5004758
Date of Patent: 02.04.1991
Inventors: Jeffrey C.Boehm, Sidney M.Hecht, Kenneth G.Holden, Randall K.Johnson, William D.Kingsbury.
2) Patent No.: US 6,660,861 B1
Date of Patent: Dec. 9, 2003
Inventors: Satish Chander Puri, Geeta Handa, Kanaya Lai Dhar, Om Parkash Suri, Ghulam Nabi Qazi.
3) Patent No.: US 2007/0149783A1
Date of Patent: Jun. 28, 2007
Inventors: Venkata Raghavendra Acharyulu Palle, Sekhar Munaswamy Nariyam, Lankeshwara Rao Matti.
4) Magnus Rueping, Cegiz Azap, Erli Sugiono, Thomas Theissmann. Synlett2005, No. 15, p. 2367-2369.
5) Magnus Rueping, Thomas Theissmann, Andrey P. Antonchick. Synlett 2006, No. 7, p. 1071-1074.
Claims (1)
- Способ получения топотекана
включающий:
а) восстановление камптотецина (1) до 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) при помощи 2,6-диметил-3,5-дикарбметокси-1,4-дигидропиридина (2) в присутствии трифторуксусной кислоты в среде хлороформа при 60°C;
б) окисление 1,2,6,7-тетрагидро-20(S)-камптотецина (3) диацетатом иодбензола (4) до 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) в среде уксусная кислота-вода при 20-25°C;
в) получение 9-[(диметиламино)метил] 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (7) взаимодействием 10-гидрокси-20(S)-камптотецина (5) с бис(диметиламино)метаном (6) в среде уксусной кислоты при 20-25°C;
г) выделение топотекана - гидрохлорида 9-[(диметиламино)метил]10-гидрокси-20(S)-камптотецина кристаллизацией из ацетона.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010150491/04A RU2447076C1 (ru) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | Способ получения топотекана |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010150491/04A RU2447076C1 (ru) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | Способ получения топотекана |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2447076C1 true RU2447076C1 (ru) | 2012-04-10 |
Family
ID=46031637
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010150491/04A RU2447076C1 (ru) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | Способ получения топотекана |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2447076C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103923073A (zh) * | 2014-04-16 | 2014-07-16 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | 葛根素衍生物的制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0321122A2 (en) * | 1987-12-01 | 1989-06-21 | Smithkline Beecham Corporation | Water soluble camptothecin analogs |
| EP1608660B1 (en) * | 2003-03-31 | 2007-10-10 | Council of Scientific and Industrial Research | Process for preparing topotecan from 10-hydroxy-4-(s) camptothecin |
| US7547785B2 (en) * | 2005-12-26 | 2009-06-16 | Dr. Reddy's Laboratories Limited | Process for preparing topotecan |
-
2010
- 2010-12-09 RU RU2010150491/04A patent/RU2447076C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0321122A2 (en) * | 1987-12-01 | 1989-06-21 | Smithkline Beecham Corporation | Water soluble camptothecin analogs |
| EP1608660B1 (en) * | 2003-03-31 | 2007-10-10 | Council of Scientific and Industrial Research | Process for preparing topotecan from 10-hydroxy-4-(s) camptothecin |
| US7547785B2 (en) * | 2005-12-26 | 2009-06-16 | Dr. Reddy's Laboratories Limited | Process for preparing topotecan |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Li Mingzong et al, 7-Cycloalkylcamptothecin derivatives: Preparation and biological evaluation. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2009, 19(15), 4107-4109. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103923073A (zh) * | 2014-04-16 | 2014-07-16 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | 葛根素衍生物的制备方法 |
| CN103923073B (zh) * | 2014-04-16 | 2016-06-29 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | 葛根素衍生物的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK288073B6 (sk) | Method of synthesizing campothecin-relating compounds | |
| HUT70024A (en) | Process for preparing water soluble camptothecin analogs | |
| EP1846412B1 (en) | Process for the manufacturing of 7-ethyl-10-hydroxy camptothecin | |
| CN111875517A (zh) | 用于合成喜树碱衍生物的中间体及其制备方法和用途 | |
| Rao et al. | Catalyst-free one-pot domino reactions for selective synthesis of functionalized 2, 8-oxazabicyclo [3.3. 1]-nonanes and 5 H-indeno [1, 2-b] pyridin-5-ones | |
| Liu et al. | A rapid and efficient access to renieramycin-type alkaloids featuring a temperature-dependent stereoselective cyclization | |
| CN106831792B (zh) | 一种PARP抑制剂Rucaparib中间体的制备方法 | |
| RU2447076C1 (ru) | Способ получения топотекана | |
| KR101127814B1 (ko) | 신규의 중간체 및 이를 이용한 실데나필 또는 그의 염의 제조방법 | |
| RU2387656C2 (ru) | Способ получения гидробромида галантамина | |
| CN103936759A (zh) | （3aS,6aR）-1,3-二苄基-四氢-4H-噻吩并[3,4-d]咪唑-2,4-（1H）-二酮的简便制备方法 | |
| DK3030567T3 (en) | A process for the synthesis of irinotecan | |
| Kumar et al. | Synthesis of New Pyrano [2′, 3′: 5, 6] chromeno [4, 3‐b] quinolin‐4‐ones via Aza‐Diels Alder Reaction | |
| EP2189461B1 (en) | Crystalline irinotecan hydrochloride and methods for the preparation thereof | |
| CN101906103A (zh) | 四氢-β-咔啉化合物合成方法的改进 | |
| CN107382898B (zh) | 一种基于anpz含能母体结构的含能材料及其合成方法 | |
| CN108218882B (zh) | 一种吡喃并[2,3-b]喹啉衍生物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用 | |
| JP4477510B2 (ja) | １０−ヒドロキシ−４−（ｓ）カンプトテンシンからトポテカンを調製する方法 | |
| JPS5951288A (ja) | 新規な９−ニトロカンプトテシン及びその製造法 | |
| CN101084221B (zh) | 喜树碱的立体有择法和晶型 | |
| CN115611901B (zh) | 一种氮杂䓬类化合物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用 | |
| CN110922355A (zh) | 一种尼可地尔的制备方法 | |
| RU2417995C1 (ru) | Способ получения 3-(2-замещенных-1,3-оксазол-4-ил)пиридин-2(1н)-онов | |
| EP1631571B1 (en) | Novel intermediate for the preparation of therapeutically active imidazopyridines | |
| JP4467884B2 (ja) | ２０（ｓ）−カンプトテシンの精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| PD4A | Correction of name of patent owner |