PT2209789E - Inibidores de ns5b de vhc de indolbenzazepina condensados com ciclopropilo - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"INIBIDORES DE NS5B DE VHC DE INDOLBENZAZEPINA CONDENSADOS COM CICLOPROPILO"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 0 vírus da hepatite C (VHC) é um importante patogénio humano, estima-se que infecta a 170 milhões de pessoas a nível mundial - quase cinco vezes o número infectado pelo vírus da imunodeficiência humana tipo I. Uma fracção substancial destes indivíduos infectados com VHC desenvolve doença hepática progressiva grave, incluindo cirrose e carcinoma hepatocelular (Lauer, G. M.; Walker, B. D. N. Engl. J. Med. 2001, 345, 41-52). VHC é um vírus de ARN de cadeia positiva. Com base numa comparação da sequência de aminoácidos deduzida e da extensa similaridade na região 5' não traduzida, VHC tinha sido classificado como um género separado na família Flaviviridae. Todos os membros da família Flaviviridae têm viriões encapsulados que contêm um genoma de ARN de cadeia positiva que codifica todas as proteínas especificas do vírus conhecidas via a tradução de uma única grelha de leitura aberta e não interrompida.

Heterogeneidade considerável existe dentro da sequência de nucleótidos e aminoácidos codificada ao longo do genoma de VHC. Pelo menos seis genótipos principais foram caracterizados, e mais de 50 subtipos foram descritos. Os principais genótipos de VHC diferem na sua distribuição a nível mundial, e o significado clinico da heterogeneidade génica de VHC permanece por esclarecer apesar de numerosos estudos do possível efeito de genótipos na patogénese e terapêutica. O genoma do ARN de cadeia simples de VHC tem aproximadamente 9.500 nucleótidos de comprimento e tem uma única grelha de leitura aberta (ORF) que codifica uma única grande poliproteína de aproximadamente 3.000 aminoácidos. 2

Em células infectadas, esta poliproteína é cortada em vários lugares por proteases celulares e virais para produzir as proteínas estruturais e não estruturais (NS) . No caso de VHC, a geração de proteínas não estruturais maturas (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A e NS5B) é efectuada por duas proteases virais. Acredita-se que a primeira é uma metaloprotease e cliva na união NS2-NS3; a segunda é uma serina protease contida dentro da região N-terminal de NS3 (também conhecida como protease NS3) e medeia todas as clivagens subsequentes a jusante da extremidade 3' de NS3, tanto em cis, no local de clivagem NS3-NS4A como em trans, para os locais NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B restantes. A proteína NS4A parece ter várias funções, actuando como um co-factor para a protease NS3 e possivelmente ajudando na localização de membrana de NS3 e outros componentes de replicase virai. A complexa formação da proteína NS3 com NS4A parece necessária para os eventos de processamento, incrementando a eficiência proteolítica de todos estes locais. A proteína NS3 também exibe actividades de nucleósido trifosfatase e ARN helicase. NS5B (também conhecida como VHC polimerase) é uma ARN polimerase dependente de ARN que está envolvida na replicação de VHC. A proteína NS5B de VHC é descrita em "Structural Analysis of the Hepatite C Vírus RNA Polymerase in Complex with Ribonucleotides (Bressanelli; S. et al. , Journal of Virology 2002, 3482-3492/ e Defrancesco e Rice, Clinics in Liver Disease 2003, 7, 211-242.

Os documentos US 2008/0146537, WO 2007/136982, WO 2008/112473 e US 2007/0060565 revelam compostos de indolbenzazepina condensados com ciclopropilo que têm actividade contra o vírus da hepatite C e são portanto úteis no tratamento de infecções por VHC.

Actualmente, a terapêutica para VHC mais eficaz utiliza uma combinação de interferão alfa e ribavirina, o que leva a eficácia prolongada em 40 % dos pacientes 3 (Poynard, T. et al. , Lancet 1998, 352, 1426-1432). Resultados clínicos recentes demonstram que o interferão alfa peguilado é superior ao interferão alfa não modificado como monoterapêut ica (Zeuzem, S. et al. , N. Engl. J. Med. 2000, 343, 1666-1672). No entanto, mesmo com regimes terapêuticos experimentais que incluem combinações de interferão alfa peguilado e ribavirina, uma fracção substancial dos pacientes não têm uma redução prolongada na carga virai. Desta maneira, existe uma clara e importante necessidade de desenvolver agentes terapêuticos eficazes para o tratamento de infecção por VHC.

BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Um aspecto da invenção é um composto da fórmula I

em que R1, R2, R3 e R4 sao de modo a dar os seguintes compostos:

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ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Uma forma de realização da invenção são os compostos das seguintes fórmulas:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Uma forma de realização adicional da invenção são os compostos das seguintes fórmulas: 8

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ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. 9

Outro aspecto da invenção é um composto da fórmula I de acordo com a seguinte estereoquimica. °>vRÍ

Outro aspecto da invenção é um composto da fórmula I de acordo com a seguinte estereoquimica.

A menos que se especifique o contrário, estes termos têm os seguintes significados. "Alquilo" significa um grupo alquilo linear ou ramificado composto de 1 a 6 carbonos. "Alquenilo" significa um grupo alquilo linear ou ramificado composto de 2 a 6 carbonos com pelo menos uma ligação dupla. "Cicloalquilo" significa um sistema de anel monociclico composto de 3 a 7 carbonos. "Hidroxialquilo", "alcoxi" e outros termos com uma porção alquilo substituída incluem isómeros lineares e ramificados compostos de 1 a 6 átomos de carbono para a porção alquilo. "Haloalquilo" e "haloalcoxi" incluem todos os isómeros halogenados de alquilo monohalo substituído a alquilo perhalo substituído. "Arilo" inclui substituintes aromáticos carbocíclicos e heterocíclicos. Os termos entre parênteses e entre vários parênteses destinam-se a esclarecer as relações de ligação para aqueles peritos na especialidade. Por exemplo, um termo tal como ((R)alquilo) significa um substituinte alquilo substituído ainda com o substituinte R. quais os A invenção inclui todas as formas de sal farmaceuticamente aceitável dos compostos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são aqueles nos 10 contra-iões não contribuem significativamente à actividade fisiológica ou toxicidade dos compostos e desta maneira funcionam como equivalentes farmacológicos. Estes sais podem ser feitos de acordo com técnicas orgânicas comuns utilizando reagentes disponíveis comercialmente. Algumas formas de sal aniónico incluem acetato, acistrato, besilato, brometo, camsilato, cloreto, citrato, fumarato, glucouronato, bromidrato, cloridrato, iodidrato, iodeto, lactato, maleato, mesilato, nitrato, pamoato, fosfato, succinato, sulfato, tartrato, tosilato e xinofoato. Algumas formas de sal catiónico incluem amónio, alumínio, benzatina, bismuto, cálcio, colina, dietilamina, dietanolamina, lítio, magnésio, meglumina, 4-fenilciclohexilamina, piperazina, potássio, sódio, trometamina e zinco.

Alguns dos compostos da invenção possuem átomos de carbono assimétricos (veja-se, por exemplo, as estruturas a seguir). A invenção inclui todas as formas estereoisoméricas, incluindo enantiómeros e diastereómeros bem como misturas de estereoisómeros tais como racematos. Alguns estereoisómeros podem ser feitos utilizando métodos conhecidos na técnica. As misturas estereoisoméricas dos compostos e intermediários relacionados podem ser separados em isómeros individuais de acordo com métodos conhecidos comummente na técnica. A utilização de cunhas ou tracejados nas ilustrações de estruturas moleculares nos seguintes esquemas e quadros destina-se somente para indicar a estereoquimica relativa, e não deve ser interpretado como implicando atribuições estereoquímicas absolutas.

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Os compostos podem ser feitos por meio de métodos conhecidos na técnica incluindo aqueles descritos a seguir. Alguns reagentes e intermediários são conhecidos na técnica. Outros reagentes e intermediários podem ser feitos por meio de métodos conhecidos na técnica utilizando materiais disponíveis facilmente. As variáveis (por exemplo, substituintes "R" numerados) utilizadas para descrever a síntese dos compostos destina-se somente a ilustrar como elaborar e não devem ser confundidos com variáveis utilizadas nas reivindicações ou em outras secções da descrição. As abreviaturas utilizadas dentro dos esquemas de reacção geralmente têm as convenções utilizadas na técnica. 2-Bromo-3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxilato de metilo pode ser hidrolisado a ácido 2-bromo-3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxílico (veja-se Esquema 1). Este composto pode ser condensado com uma variedade de sulfonilureias, utilizando, por exemplo, 1,1'-carbonildiimidazol em combinação com 1,8- diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno em THF anidro. As acilsulfamidas resultantes podem ser submetidas a reacções de acoplamento conhecidas com uma diversidade de ácidos ou ésteres borónicos 2-formilo, utilizando por exemplo, condições de acoplamento de Suzuki, para proporcionar intermediários hemiaminais cíclicos do tipo ilustrado. Estes compostos podem ser convertidos em derivados de indolbenzazepinas por meio de tratamento com 2-(dimetoxifosforil)acrilato de metilo sob a influência de carbonato de césio em DMF por meio de reacções de Michael e Horner Emmons consecutivas.

Os derivados de éster ciclopropílico condensados relacionados podem ser gerados por meio de métodos conhecidos na técnica, incluindo tratamento dos ésteres indolbenzazepina com iodeto de trimetil sulfoxónio sob condições fortemente básicas em DMSO. A porção de éster alifático residual dos ciclopropanos condensados 12 resultantes pode ser hidrolisada e os produtos ácidos podem ser condensados com uma variedade de piperazinas com ponte de alquilo. Por exemplo, tetrafluoroborato de 0-(lH-benzotriazol-l-il)- N, N, N ' ,N '-tetrametilurónio e diisopropiletilamina em DMSO podem dar piperazina carboxamidas com ponte de alquilo.

Esquema 1

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As piperazinas N-protegidas podem também ser acopladas aos ácidos de indolbenzazepina intermediários e as piperazina carboxamidas resultantes podem ser desprotegidas utilizando métodos conhecidos na técnica e derivatizadas utilizando uma variedade de protocolos sintéticos, alguns exemplos ilustrativos dos quais se mostram a seguir (veja-se Esquema 2).

Esquema 2

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Um intermediário útil para a síntese de alguns compostos da invenção envolve a preparação do éster terc-butílico de indolbenzazepina mostrado no Esquema 3.

Esquema 3

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Esta metodologia envolve a hidrólise catalisada com base do éster metálico de indol mostrado, seguido pela sua reacção com cloreto de tionilo e butóxido terciário de potássio, ou alquilação com carbonato de prata e brometos de butilo terciários. 0 composto resultante pode ser transformado utilizando química análoga a aquela delineada previamente para proporcionar o éster misturado indolbenzazepinas mostrado acima.

Estes intermediários são úteis num procedimento alternativo que pode ser utilizado para a preparação de acilsulfamida e acilsulfonamida com ponte de alquil piperazinas, como é mostrado no Esquema 4. A 15 ciclopropanação de um intermediário éster t-butilico indolbenzazepina e a clivagem subsequente do grupo éster t-butílico pode gerar o ácido que pode ser acoplado a uma diversidade de sulfonamidas e sulfonilureias. A hidrólise subsequente dá o ácido alifático relacionado, o qual pode ser acoplado com uma diversidade de piperazinas com ponte de alquilo. Por exemplo, tetrafluoroborato de 0-(lH-benzotriazol-l-il)-Ν,Ν,Ν',N'-tetrametilurónio e diisopropiletilamina em DMSO podem dar as piperazina carboxamidas com ponte de alquilo.

Esquema 4

Existem alguns exemplos como misturas estereoisoméricas. A invenção abrange todos os estereoisómeros dos compostos. Os métodos para fraccionar misturas estereoisoméricas são bem conhecidos na técnica, e incluem, mas não estão limitados a: cromatografia de fluido supercrítico (SFC) quiral preparativa e cromatografia 16 16 exemplo líquida de alta eficiência (HPLC) quiral. Um utilizando esta abordagem é mostrada no Esquema 5.

Esquema 5

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Um método adicional para conseguir estas separações envolve a preparação de misturas de diastereómeros que podem ser separados utilizando uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Um exemplo desta abordagem é mostrada a seguir (Esquema 6).

Esquema 6 17

Diastereómeros separados por meio de HPLC de £ase reversa

Algumas amidas diastereoméricas podem ser separadas utilizando HPLC de fase inversa. Depois da hidrólise, os ácidos opticamente activos resultantes podem ser acoplados com derivados de piperazina com pontes (Esquema 6). Por exemplo, tetrafluoroborato de 0-(ΙΗ-benzotriazol- 1-il) Ν,Ν,Ν',Ν'- tetrametilurónio e diisopropiletilamina em DMSO podem ser utilizados para dar piperazina carboxamidas com ponte de alquilo. Outros métodos de acoplamento de amina de ácido padrão também podem ser utilizados para dar carboxamidas opticamente activas.

Esquema 6 18

para produzir intermediários e compostos.

Esquema 7

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19 Esquema 8

Métodos Biológicos

Os compostos demonstraram actividade contra NS5B de 20 VHC como é determinado nos seguintes ensaios de RdRp de VHC.

Clonagem, expressão e purificação de VHC N35B RdRp. O ADNc que codifica a proteína NS5B de VHC, genótipo lb, foi clonado no vector de expressão pET21a. A proteína foi expressa com um truncamento C-terminal de 18 aminoácidos para incrementar a solubilidade. A linha de células competente de E. coli BL21(DE3) foi utilizada para a expressão da proteína. As culturas foram crescidas a 37 °C durante ~ 4 horas até que as culturas alcançassem uma densidade óptica de 2,0 a 600 nm. As culturas foram arrefecidas a 20 °C e induzidss com 1 mM de IPTG. Adicionou-se ampicilina fresca até uma concentração final de 50 pg/ml e as células foram crescidas durante a noite a 20 °C.

Os sedimentos celulares (3L) foram lisados para purificação para produzir 15-24 mgs de NS5B purificado. O tampão de lise consistiu em 20 mM de tris-HCl, pH 7, 4, 500 mM de NaCl, 0,5 % de triton X-100, 1 mM de DTT, 1 mM de EDTA, 20 % de glicerol, 0,5 mg/ml de lisozima, 10 mM de MgCl2, 15 ug/ml de desoxirribonuclease I e comprimidos inibidores de protease Complete TM (Roche). Depois da adição deste tampão de lise, os sedimentos celulares congelados foram ressuspensos utilizando um homogeneizador de tecidos. Para reduzir a viscosidade da amostra, alíquotas de lisado foram sonicados em gelo utilizando uma microponta fixada a um sonicador Branson. 0 lisado sonicado foi centrifugado a 100.000 xg durante 1 hora a 4 °C e foi filtrado através de uma unidade de filtro de 0,2 μπι (Corning). A proteína foi purificada utilizando duas etapas de cromatografia sequenciais: heparina sefarose CL-6B e polyU sefarose 4B (Pharmacia). Os tampões para cromatografia eram idênticos ao tampão de lise mas não continham lisozima, desoxirribonuclease I, MgCl2 ou inibidor de protease e a 21 concentração de NaCl do tampão foi ajustada de acordo com os requerimentos para carregar a proteína na coluna. Cada coluna foi eluída com um gradiente de NaCl o qual variou em tamanho de 5-50 volumes de coluna dependendo do tipo de coluna. Depois da etapa de cromatografia final, a pureza resultante da enzima é >90 % com base na análise SDS-PAGE. A enzima foi feita em alíquotas e armazenada a -80 °C.

Ensaio de enzima VHC NS5B RdRp padrão. Os ensaios de fenótipo lb de RdRp de VHC foram executados num volume final de 60 μΐ em placas de 96 poços (Corning 3600) . O tampão de ensaio está composto de 20 mM de Hepes, pH 7,5, 2,5 mM de KC1, 2,5 mM de MgC12, 1 mM de DTT, 1,6 U de inibidor de RNAse (Promega NS515), 0,01 mg/ml de BSA (Sigma B6917), e 2 % de glicerol. Todos os compostos foram diluídos em série (3 vezes) em DMSO e diluídos mais em água de tal maneira que a concentração final de DMSO no ensaio era de 2 %. A enzima de genótipo lb de RdRp de VHC utiliza-se a uma concentração final de 28 nM. Um molde polyA foi utilizado a 6 nM, e um iniciador oligo-dT12 biotinilado foi utilizado a uma concentração final de 180 nM. O molde foi obtido comercialmente (Amersham 27-4110). O iniciador biotinilado foi preparado por meio de Sigma Genosys. 3H-UTP foi utilizada a 0,6 pCi (0,29 μΜ de UTP total). As reacções foram iniciadas por meio da adição de enzima, incubadas a 30 °C durante 60 minutos e interrompidas ao adicionar 25 μΐ de 50 mM de EDTA que continha esferas SPA (4 pg/pl, Amersham RPNQ 0007). As placas foram lidas num Packard Top Count NXT depois de >1 hora de incubação a temperatura ambiente.

Ensaio de enzima RdRp NS5B VHC modificado. Um ensaio de enzima modificado foi levado a cabo essencialmente como foi descrito para o ensaio de enzima padrão excepto pelo seguinte: o iniciador oligo dT12 biotinilado foi pré-capturado em esferas SPA recobertas com estreptavidina ao misturar iniciador e esferas em tampão de ensaio e incubar 22 a temperatura ambiente durante uma hora. 0 iniciador não unido foi removido depois de centrifugação. As esferas unidas ao iniciador foram ressuspensas em 20 mM de tampão Hepes, pH 7,5 e utilizadas no ensaio a concentrações finais de 20 nM de iniciador e 0,67 μρ/μΐ de esferas. Ordem de adição no ensaio: enzima (1,75 nM) foi adicionada a composto diluído seguida pela adição de uma mistura de molde (0,36 nM) , 3H-UTP (0,6 μΟί, 0,29 μΜ) , e esferas unidas a iniciador, para iniciar a reacção; as concentrações dadas são finais. As reacções deixaram-se proceder durante 4 horas a 30 °C.

Os valores IC50 para os compostos foram determinados utilizando sete [I] diferentes. Os valores IC5o foram calculados a partir da inibição utilizando a fórmula y = A+( (B-A)/(1+( (C/x D) ) ) .

Preparação de Ensaio FRET. O ensaio de rastreio FRET de VHC foi levado a cabo em placas de cultura de células de 96 poços. 0 péptido FRET (Anaspec, Inc.) (Taliani et al., Anal. Biochem. 1996, 240, 60-67) contém um dador de fluorescência, EDANS, cerca de uma extremidade do péptido e um receptor, DABCYL, cerca da outra extremidade. A fluorescência do péptido é inactivada por meio de transferência de energia por ressonância intermolecular (RET) entre o dador e o receptor, mas como a protease NS3 cliva o péptido os produtos são libertados da inactivação com RET e a fluorescência do dador torna-se aparente. O reagente de ensaio foi feito como se segue: 5X de reagente de lise de cultura de células de Luciferase de células de Promega (n° E153A) diluído a IX com dH20, NaCl adicionado a 150 mM final, o péptido FRET diluído a 20 μΜ final a partir de uma solução de 2 mM.

Para preparar placas, as células do replicão de VHC, com ou sem um gene repórter de luciferase de Renilla, foram tripsinizadas e plaqueadas numa placa de 96 poços com compostos de teste titulados adicionados em colunas 3 a 12; 23 as colunas 1 e 2 continham um composto de controlo (inibidor de controlo de VHC), e a fila inferior continha células com DMSO somente. As placas foram depois colocadas num incubador de CO2 a 37 °C.

Ensaios. Depois da adição dos compostos de teste descritos acima (Preparação de Ensaio FRET), em vários momentos a placa foi retirada e solução azul Alamar (Trek Diagnostics, n° 00-100) foi adicionada para medir a toxicidade celular. Depois da leitura num instrumento Cytoflour 4000 (PE Biosystems), as placas foram enxaguadas com PBS e em seguida foram utilizadas para o ensaio FRET por meio da adição de 30 ul do reagente de ensaios de péptidos FRET descrito acima (Preparação de Ensaio FRET) por poço. A placa foi colocada depois no instrumento Cytoflour 4000 o qual tinha sido estabelecido a 340 excitação/490 emissão, modo automático durante até 20 ciclos e a placa foi lida num modo cinético. Tipicamente, a relação sinal a ruido utilizando uma análise de critério depois das leituras foi de pelo menos três vezes. Como alternativa, depois da leitura com azul de Alamar, as placas foram enxaguadas com PBS, em seguida utilizadas para Sistema de Ensaio de Luciferase utilizando o Promega Dual-Glo ou o ensaio de Substrato de Células vivas EnduRen de Promega. A análise dos compostos foi levada a cabo por meio de quantificação da inibição do replicão de VHC relativa e os valores de citotoxicidade relativa. Para calcular os valores de citotoxicidade, os sinais de fluorescência de azul Alamar médio dos poços de controlo foram estabelecidos como 100 % não tóxico. Os sinais individuais em cada um dos poços de teste de compostos foram divididos depois entre o sinal de controlo médio e foram multiplicados por 100 % para determinar a citotoxicidade percentual. Para calcular os valores de inibição do replicão de VHC, um valor de fundo médio foi obtido dos dois poços que continham a 24 quantidade mais alta de inibidor de controlo de VHC ao final do período de ensaio. Estes números foram similares aos obtidos de células Huh-7 naives. Os números anteriores foram depois subtraídos do sinal médio obtido dos poços de controlo e este número foi utilizado como 100 % de actividade. Os sinais individuais em cada um dos poços de teste de compostos foram depois divididos entre os valores de controlo médios depois da subtracção do fundo e multiplicados por 100 % para determinar a actividade percentual. Os valores EC50 foram calculados como a concentração que causou uma redução de 50 % em actividade FRET ou luciferase. Os dois números gerados para a placa de composto, citotoxicidade percentual e actividade percentual, foram utilizados para determinar compostos de interesse para análise adicional.

Dados representativos para os compostos relatam-se no Quadro 1.

Quadro 1

Estrutura IC5o ec50 B B B B 25 (continuação)

Estrutura ICso EC50 ^ Quiral >3- B B yM B B B B •X B B / σνΛχ^, B B j£ B B \9 fl ΓΛ B B 26 (continuação)

Estrutura IC50 EC50 £ B B B B B B ^.•Vvvb d TT T B B r-"' o& ^aVvvb B T jf ΊΓ B B B E * Quiral fc.rcs*-· sv* I. / 1 Cf«' B B 27 (continuação)

Estrutura IC50 ECso Quiral B B ^ ^Qu i r a 1 B B B B B B > B B B B A >0,5 μΜ; B 0,001 μΜ - 0,5 μΜ; C <0,02 μΜ mas um valor exacto não foi determinado; D> 0,04 μΜ; mas um valor exacto não foi determinado, D >0,11 μΜ; mas um valor exacto não foi determinado.

Composições Farmacêuticas e Métodos de Tratamento

Os compostos demonstram a actividade contra NS5B de VHC e podem ser úteis para tratar VHC e infecção por VHC. 28

Portanto, outro aspecto da invenção é uma composição que compreende um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

Outro aspecto da invenção é uma composição que compreende ainda um composto que tem actividade anti-VHC.

Outro aspecto da invenção é uma composição em que o composto que tem actividade anti-VHC é um interferão. Outro aspecto da invenção é quando o interferão é seleccionado de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão de consenso, interferão alfa 2A e interferão linfoblastóide tau.

Outro aspecto da invenção é uma composição em que o composto que tem actividade anti-VHC é uma ciclosporina. Outro aspecto da invenção é quando a ciclosporina é ciclosporina A.

Outro aspecto da invenção é uma composição em que o composto que tem actividade anti-VHC é seleccionado do grupo que consiste em interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que aumenta o desenvolvimento de uma resposta a células T auxiliares tipo I, ARN de interferência, ARN antissenso, Imiqimod, ribavirina, um inibidor de inosina 5'-monofosfato desidrogenase, amantadina e rimantadina.

Outro aspecto da invenção é uma composição em que o composto que tem actividade anti-VHC é efectivo para inibir a função de um alvo seleccionado de metaloprotease VHC, serina protease de VHC, VHC polimerase, VHC helicase, proteína NS4B de VHC, entrada de VHC, montagem de VHC, saída de VHC, proteína NS5A de VHC, IMPDH e um análogo nucleósido para o tratamento de infecção por VHC.

Outro aspecto da invenção é uma composição que compreende um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um veículo farmaceuticamente aceitável, um interferão e ribavirina. 29

Outro aspecto da invenção é um composto da invenção para utilização num método de inibição da função do replicão de VHC que compreende colocar em contacto o replicão de VHC com um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Outro aspecto da invenção é um composto da invenção para utilização num método de inibição da função da proteína NS5B de VHC que compreende colocar em contacto a proteína NS5B de VHC com um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Outro aspecto da invenção é um composto da invenção para utilização num método de tratamento de uma infecção por VHC num paciente, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em outra forma de realização o composto é eficaz para inibir a função do replicão de VHC. Em outra forma de realização o composto é eficaz para inibir a função da proteína NS5B de VHC.

Outro aspecto da invenção é um composto da invenção para utilização num método de tratamento de uma infecção por VHC num paciente, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conjuntamente com (antes de, depois ou concorrentemente) outro composto que tem actividade anti-VHC.

Outro aspecto da invenção é o método em que o outro composto que tem actividade anti-VHC é um interferão.

Outro aspecto da invenção é o método em que o interferão é seleccionado de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão de consenso, interferão alfa 2A e interferão linfoblastóide tau.

Outro aspecto da invenção é um método em que o outro composto que tem actividade anti-VHC é uma ciclosporina.

Outro aspecto da invenção é o método em que a 30 ciclosporina é ciclosporina A.

Outro aspecto da invenção é o método em que o outro composto que tem actividade anti-VHC é seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que incrementa o desenvolvimento de uma resposta a células T auxiliares tipo I, ARN de interferência, ARN antissenso, Imiqimod, ribavirina, um inibidor de inosina 5'-monofosfato desidrogenase, amantadina e rimantadina.

Outro aspecto da invenção é o método em que o outro composto que tem actividade anti-VHC é eficaz para inibir a função de um alvo seleccionado do grupo que consiste em metaloprotease de VHC, serina protease de VHC, polimerase de VHC, helicase de VHC, proteína NS4B de VHC, entrada de VHC, montagem de VHC, saída de VHC, proteína NS5A de VHC, IMPDH e um análogo de nucleótido para o tratamento de uma infecção por VHC.

Outro aspecto da invenção é o método em que o outro composto que tem actividade anti-VHC é eficaz para inibir a função do alvo no ciclo de vida de VHC que não é a proteína NS5B de VHC. "Terapeuticamente eficaz" significa a quantidade de agente requerida para proporcionar um benefício significativo para o paciente de acordo com o que é entendido pelos médicos no campo da hepatite e infecção por VHC. "Paciente" significa uma pessoa infectada com o vírus de VHC e adequada para terapêutica de acordo com o que é entendido pelos médicos no campo de hepatite e infecção por VHC. "Tratamento", "terapêutica", "regime", "infecção por VHC" e termos relacionados utilizam-se de acordo com o que é entendido pelos médicos no campo da hepatite e infecção por VHC.

Os compostos desta invenção são dados geralmente como composições farmacêuticas compreendidas de uma quantidade 31 terapeuticamente eficaz de um composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável e um veiculo farmaceuticamente aceitável e podem conter excipientes convencionais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é aquela que é requerida para proporcionar um beneficio significativo para o paciente. Os veiculoes farmaceuticamente aceitáveis são aqueles veiculoes conhecidos convencionalmente que têm perfis de segurança aceitáveis. As composições abrangem todas as formas sólidas e líquidas comuns incluindo cápsulas, comprimidos, pastilhas e pós bem como suspensões líquidas, xaropes, elixires e soluções. As composições são feitas utilizando técnicas de formulação comuns, e excipientes convencionais (tais como agentes aglutinantes e humectantes) e veículos (tais como água e álcoois) utilizam-se geralmente para composições.

As composições sólidas são formuladas normalmente em unidades de dose e as composições que proporcionam aproximadamente 1 a 1.000 mg do ingrediente activo por dose são preferidas. Alguns exemplos de dose são 1 mg, 10 mg, 100 mg, 250 mg, 500 mg e 1.000 mg. Geralmente, outros agentes estarão presentes numa escala única similar aos agentes dessa classe utilizados clinicamente. Tipicamente, isto é 0,25-1.000 mg/unidade.

As composições líquidas normalmente estão em intervalos de dose única. Geralmente, a composição líquida estará num intervalo de dose única de 1-100 mg/ml. Alguns exemplos de dose são 1 mg/ml, 10 mg/ml, 25 mg/ml, 50 mg/ml e 100 mg/ml. Geralmente, outros agentes estarão presentes num intervalo único similar aos agentes dessa classe utilizados clinicamente. Tipicamente, isto é 1-100 mg/ml. A invenção abrange todos os modos de administração convencionais; preferem-se os métodos orais e parenterais. Geralmente, o regime de dosagem será similar a outros agentes utilizados clinicamente. Tipicamente, a dose diária será de 1-100 mg/kg de peso corporal ao dia. Geralmente, é 32 requerido mais composto oralmente e menos parentericamente. 0 regime de dosagem especifico, no entanto, será determinado por um médico utilizando julgamento médico sensato. A invenção abrange também métodos em que o composto é dado em terapêutica de combinação. Isto é, o composto pode ser utilizado conjuntamente com, mas separadamente de, outros agentes úteis para tratar hepatite e infecção por VHC. Nestes métodos de combinação, o composto geralmente será dado numa dose diária de 1-100 mg/kg de peso corporal diariamente conjuntamente com outros agentes. Os outros agentes geralmente serão dados nas quantidades utilizadas terapeuticamente. O regime de dosagem especifico, no entanto, será determinado por um médico utilizando um julgamento médico sensato.

Alguns exemplos dos compostos adequados para as composições e métodos são listados no Quadro 2.

Quadro 2

Nome comercial Tipo de inibidor ou alvo Empresa de origem Omega IFN IFN-ω Intarcia Therapeutics BILN-2 0 61 Inibidor de serina protease Boehringer Ingelheim Pharma KG. Ingelheim, Alemanha Summetrel Antiviral Endo Pharmaceuticals Holdings Inc., Chadds Ford, PA Roferon A IFN-a2a F. Hoffmann-A Roche LTD, Basel, Suiça Pegasys e Ribavirin IFN-a2a/ribavirina Peguilado F. Hoffmann-A Roche LTD, Basel, Suiça CellCept VHC IgG imunossupressor F. Hoffmann-A Roche LTD, Basel, Suiça 33

Wellferon IFN-anl linfoblastóide GlaxoSmithKline pie, Uxbridge, Reino Unido Albuferon-a lFN-a2b albumina Human Genome Sciences Inc., Rockville, MD Levovirin Ribavirina ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA IDN-6556 Inibidor de caspase Idun Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA IP-501 Antifibrótico Indevus Pharmaceuticals Inc., Lexington, MA Actimmune INF- γ InterMune Inc., Brisbane, CA Infergen A IFN alfacon-1 InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA ISI 14803 Antissenso ISE Pharmaceuticals Inc., Carlsbad, CA/Elan Pharmaceuticals Inc., Nova Iorque, NY JTK-003 Inibidor de RdRp Japan Tobacco Inc., Tokyo, Japão Pegasys e Ceplene Modulador de IFN-a2a/imune Peguilado Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA Ceplene Imunomodulador Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA Civacir VHC IgG imunossupressor Nabi Biopharmaceuticals Inc., Boca Raton, FL Intron A e Zadaxin IFN-a2b/al- timosina RegeeRx Biopharmiceutical s Inc., Bethesda, MD/SciClone 34

Pharmaceuticals Inc. , San Mateo, CA Levovirin Inibidor IMPDH Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA Viramidina Pró-fármaco de Ribavirina Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA Heptazyme Ribozima Ribozyme Pharmaceuticals Inc., Boulder, CO Intron A IFN-a2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ PEG-Intron Peguilado IFN- a2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Rebetron IFN-a2b/ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Ribavirina Ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ PEG- Intron /Ribavirina IFN-a2b/ribavirina Peguilado Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ Zadaz im Modulador imune SciClone Pharmaceuticals Inc., San Mateo, CA Rebif IFN-βla Serono, Geneva, Suíça IFN-β e EMZ701 IFN-β e EMZ701 Transition Therapeutics Inc., Ontario, Canadá Batabulin (T67) Inibidor de β-tubulina Tularik Inc., Sul de San Francisco, CA 35

Merimepodib (VX-497) Inibidor de IMPDH Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA Telaprevir (VX-950. LY-570310) Inibidor de NS3 serina protease Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA/Eli Lilly e Co. Inc., Indianápolis, IN Ommiferon IFN-oí natural Viragen Inc., Plantation, FL XTL-6865 (XTL-002) Anticorpo monoclonal XTL Biopharmaceuticals Ltd., Rehovot Isreal HCV-796 Inibidor de NS5B replicase Wyeth/Viropharma NM-283 Inibidor de NS5B replicase Idenix/Novartis GL-59728 Inibidor de NS5B replicase Gene Labs/Novartis GL-60667 Inibidor de NS5B replicase Gene Labs/Novartis 2'C MeA Inibidor de NS5B replicase Gilead PSI 6130 Inibidor de NS5B replicase Roche R1626 Inibidor de NS5B replicase Roche SCH 503034 Inibidor de serina protease Shering Plough NIM811 Inibidor de ciclofilina Novartis Suvus Azul de metileno Bioenvision Multiferon IFN de longa duração Viragen/Valentis Actilon (CPG10101) Agonista de TLR9 Coley Interferon-β Inteferão-p-la Serono Zadaxin Imunomodulador Sciclone 36

Compostos de Pirazolopirimidina e sais do documento W0-2005047288, 26 de Maio de 2005 Inibidores de VHC Arrow Therapeutics Ltd. 2'C Metil adenosina Inibidor de NS5B replicase Merck GS-9132 (ACH-806) Inibidor de VHC Achillion/Gilead

DESCRIÇÃO DAS FORMAS DE REALIZAÇAO ESPECÍFICAS A menos que se especifique o contrário, os dados de LCMS analíticos sobre os seguintes intermediários e exemplos foram adquiridos utilizando as seguintes colunas e condiçoes. Tempo de detenção: tempo de gradiente + 1 minuto; concentração de partida: 0 % de B a menos que se indique 0 contrário; eluente A: 5 % de CH3CN/95 % de H20 com 10 mM de NH4OAc (para colunas A, D e E) ; 10 % de

MeOH/90 % de H2O com 0,1 % de TFA (para colunas B e C) ; eluente B: 95 % de CH3CN/5 % de H2O com 10 mM de NH4OAC (para colunas A, D e E); 90 % de MeOH/10 % de H20 com 0,1 % de TFA (para colunas B e C) ; coluna A: Phenomenex 10 μ 4,6x50 mm C18; coluna B: Phenomenex C18 10 μ 3,0x50 mm; coluna C: Phenomenex 4,6 x 50 mm C18 lOvi; coluna D: Phenomenex Lina C18 5 μ 3,0x50 mm; coluna E: Phenomenex 5 μ 4,6x50 mm Cl8.

Como um artefacto do software de gráficos, algumas estruturas têm átomos de azoto que faltam.

Intermediário 1

O

éster metílico. Ácido lH-indol-6-carboxílico, 2-bromo-3-ciclohexil-, Tribrometo de piridínio recentemente 37 recristalizado (recristalização a partir de AcOH quente (5 ml por 1 g), enxaguado com AcOH frio e seco sob alto vácuo em KOH) foi adicionada em porções (durante 10 minutos) a uma solução em agitação de 3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxilato de metilo (60 g, 233 mmol) (preparado utilizando os procedimentos descritos no documento WO2004/065367) em CHC13/THF (1:1, 1,25 L) a 2 °C. A solução de reacção foi agitada a 0-5 °C durante 2,5 horas, e foi lavada com NaHS03 aquoso saturado (1 L) , HC1 IN (1 L) e salmoura (1 L) . A camada orgânica foi seca (MgSC^) e foi concentrada. O óleo vermelho resultante foi eluído com Et20 e foi concentrado. 0 sólido rosa resultante foi dissolvido em Et2<0 (200 ml), foi tratado com hexanos (300 ml) e foi concentrado parcialmente. Os sólidos foram colhidos por filtração e enxaguados com hexanos. O licor-mãe foi concentrado até a secura e o procedimento foi repetido. Os sólidos foram combinados para produzir ácido 1H- indol-6-carboxílico, 2-bromo-3-ciclohexil-, éster metílico (64 g, 190 mmol, 82 %) como um sólido rosa esponjoso, o qual foi utilizado sem purificação adicional. 1HRMN (300 MHz, CDC13) δ 8, 47 (s 1, 1H) , 8,03 (d, J = 1, 4 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 1,4, 8,8 Hz, 1H) , 7,69 (d, J = 8, 8 Hz, 1H), 3,92 (s , 3H), 2, 82 (tt, J = : 3,7, 11, 7 Hz, 1H), 1, 98- 1,72 (m, 7H) , 1,50- 1,27 (m, 3H) . 13C RMN (75 MHz, CDC13) δ 16 8,2, 135,6, 130, 2, 123,1, , 120 ,8, 120,3, 118,7 , 112,8, 110,7, 52,1, 37, 0 , 32, 2(2) , 27, 0(2), 26, 1, LCMS: m/e 334 (Μ-ΗΓ, tempo de retenção 3,34 min, coluna A, gradiente 4 minutos.

Ácido lH-indol-6-carboxílico, 2-bromo-3-ciclohexil-. Uma solução de 2-bromo-3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxilato 38 de metilo (20 g, 60 mmol) e LiOH (3,8 g, 160 mmol) em Me0H/THF/H20 (1:1:1, 300 ml) foi aquecido a 90 °C durante 2 horas. A mistura de reacção foi arrefecida num banho de gelo/H20, neutralizada com HC1 1M (-160 ml) foi diluida com H20 (250 ml) e foi agitada durante 1 hora a temperatura ambiente. Os precipitados foram colhidos por precipitação, enxaguados com H20 e foram secos para produzir ácido 1H-indol- 6-carboxílico, 2-bromo-3-ciclohexil- (quant.) o qual foi utilizado sem purificação adicional.

Um procedimento alternativo que pode ser utilizado para proporcionar ácido lH-indol-6-carboxílico, 2-bromo-3-ciclohexil- é descrito a seguir:

Uma solução de 2-bromo-3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxilato de metilo (117 g, 349 mmol) e LÍOH.H2O (26,4 g, 629 mmol) em Me0H/THF/H20 (1:1:1, 1,8 L) foi aquecida a refluxo durante 3 horas. A mistura de reacção foi arrefecida num banho de gelo/H20 a ~2 °C, neutralizada com HC1 1M ( -650 ml) (adicionado a uma velocidade tal que a temperatura não exceda 5 °C) , foi diluida com H20 (1L) e agitada enquanto se aquecia à temperatura ambiente. Os precipitados foram colhidos por filtração e enxaguados com H20 e foram secos para produzir o solvato mono THF de ácido lH-indol-6- carboxilico, 2-bromo-3-ciclohexil- (135,5 g, 345 mmol, 99 %) como um sólido amarelo, o qual foi utilizado sem purificação adicional. 1HRMN (300 MHz, CDC13) δ 11, 01 (s 1, 1H) , 8, 77 (s, 1H) , 8, 07 (d, J = 1,5 Hz , 1H), 7, 82 (dd, J = 1,5, 8, 8 Hz, 1H) , 7, 72 (d, J = 8,8 Hz , 1H), 3, 84- 3,74 (m , 4H) , 2, 89 (m, 1H) , 1,98- 1, 72 (m, 11H) , 1, 50- 1,24 (m, 3H) . 13C RMN (75 MHz , CDC13) δ 172,7, 135,5, 13 0,7 , 122, 3, 120,9 (2) , 118, 8, 113, 3, 111,1, 6 7,9(2) , 37,0, 32,2(2), 27, 0(2), 26, 1, 25,5(2). LCMS: m/e 320 (Μ-ΗΓ, tempo de retenção 2,21 minutos, coluna A, gradiente de 4 minutos .

Intermediário 3 39 V h3c-n' Ή

ΙΗ-indol -6- carboxamida, 2 -bromo -3-ciclohexil-N-[(dimetilamino)sulfonil]-. 1,1'-carbonildiimidazol (1,17 g, 7,2 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de ácido 2-bromo- 3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxílico (2,03 g, 6,3 mmol) em THF (6 ml) a 22 °C. A evolução de CO2 foi instantânea e quando desacelerou a solução foi aquecida a 50 °C durante 1 hora e em seguida foi arrefecida a 22 °C. Adicionou-se N,N- dimetilsulfamida (0,94 g, 7,56 mmol) seguida pela adição gota a gota de uma solução de DBU (1,34 g, 8,8 mmol) em THF (4 ml). Continuou-se a agitação durante 24 horas. A mistura foi dividida entre acetato de etilo e HC1 diluído. A camada de acetato de etilo foi lavada com água seguida por salmoura e foi seca sobre Na2S04. O extracto foi concentrado até a secura para deixar o produto do título como uma espuma friável amarela pálida (2,0 g, 74 %, >90 % de pureza, estimado a partir de RMN) . 1H RMN (300 MHz, DMS0-D6) δ ppm 1,28- 1,49 (m, 3H) 1,59- 2,04 (m, 7H) 2,74- 2,82 (m, 1H) 2,88 (s, 6 H) 7,57 (dd, J = 8,42, 1,46

Hz, 1 H) 7,74 (d, J = 8,78 Hz, 1 H) 7,91 (s, 1 H) 11,71 (s, 1 H) 12,08 (s, 1 H).

Um método alternativo para a preparação de 1H-indol-6-carboxamida, 2-bromo-3-ciclohexil-N- [(dimetilamino)sulfonil]- é descrito a seguir. A um balão de fundo redondo de quatro tubuladuras e de 1 litro equipado com um agitador mecânico, um controlador de temperatura, uma entrada de N2 e um condensador, sob N2, adicionou-se ácido 2-bromo-3-ciclohexil-lií-indol-6-

carboxilico e THF seco (300 ml) . Depois de agitar durante 10 minutos, foi adicionada em porções CDI (5 0,3 g, 0,31 mol) . A mistura de reacção foi aquecida depois a 50 °C 40 durante 2 horas. Depois de arrefecer a 30 °C, foi adicionada N,N-dimetilaminosulfonamida (41,7 g, 0,336 mol) porção a porção seguido pela adição de DBU (54,1 ml, 0,362 mol) gota a gota durante um período de 1 hora. A mistura de reacção foi agitada depois a temperatura ambiente durante 20 horas. 0 solvente foi removido a vácuo e o resíduo foi dividido entre EtOAc e HC1 IN (1:1, 2 L). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (500 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1,5 L) e secas em MgS04. A solução foi concentrada e filtrada a vácuo para dar o produto bruto (111,0 g). O produto bruto foi suspenso em EtOAc (400 ml) a 60 °C. À suspensão adicionou-se heptano (2 L) lentamente. A suspensão resultante foi agitada e foi arrefecida a 0 °C. Depois foi filtrada. 0 bolo de filtração foi enxaguado com uma pequena quantidade de heptano e seco em ar a vácuo em habitáculo durante 2 dias, o produto foi colhido como um sólido branco (92,0 g, 83 %). 1H RMN (MeOD, 300 MHz) δ 7,89 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,55 (dd, J = 8,4 e 1,8

Hz, 1H), 3,01 (s, 6H), 2,73- 2,95 (m, 1H), 1,81- 2,05 (m, 8H), 1,39- 1,50 (m, 2H); m/z 429 (M+H)+.

Intermediário 4

lH-indol -6- carboxamida, 3-ciclohexil -N-[(dimetilamino)sulfonil]-2- (2-formil-4-metoxifenil)-. Uma mistura da 2-bromo-3-ciclohexil-N-[(dimetilamino)sulfonil]-lH-indol-6-carboxamida (4,28 g, 0,01 mol), ácido 4-metoxi-2- formilfenilborónico (2,7 g, 0,015 mol), 2-diciclohexilfosfino-2'-6'-dimetoxi-bifenilo (41 mg, 0,0001 mol), acetato de paládio (11,2 mg), e carbonato de potássio finamente moldo (4,24 g, 0,02 mol) em tolueno (30 ml) foi agitada sob refluxo e sob azoto durante 30 minutos, tempo 41 depois do qual a análise LC/MS mostrou que a reacção estava completa. A mistura de reacção foi eluida depois com acetato de etilo e água, e em seguida foi acidificada com um excesso de HC1 diluído. A camada de acetato de etilo foi colhida depois e lavada com HC1 diluído, água e salmoura. A solução orgânica foi seca depois (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada para dar uma goma. A goma foi diluída com hexanos (250 ml) e acetato de etilo (25 ml), e a mistura foi agitada durante 20 horas a 22 °C tempo durante o qual o produto se transformou num sólido granulado amarelo brilhante (4,8 g) o qual foi utilizado directamente sem purificação adicional.

Um procedimento alternativo para a preparação de 1H-indol-6-carboxamida, 3 -ciclohexil-N-[(dimetilamino)sulfonil]-2-(2-formil-4-metoxifenil)- é proporcionado a seguir: A uma solução em suspensão de 2-bromo-3- ciclohexil-N-[(dimetilamino)sulfonil]-indol-6-carboxamida (54,0 g, 26 mmol), ácido 4-metoxi-2-formilfenilborónico (2 9,5 g, 164 mmol) e LiCl (13,3 g, 315 mmol) em EtOH/tolueno (1:1, 1 L) adicionou-se uma solução de Na2C03 (40, 1 g, 379 mmol) em água (380 ml). A mistura de reacção foi agitada durante 10 minutos e depois foi adicionado Pd(PPh3)4 (11,3 g, 10,0 mmol) . A solução de reacção foi enxaguada com azoto e foi aquecida a 70 °C (monitorização interna) durante a noite e em seguida foi arrefecida a temperatura ambiente. A reacção foi diluída com EtOAc (1 L) e EtOH (100 ml), foi lavada cuidadosamente com HC1 IN aquoso (1 L) e salmoura (500 ml), foi seca (MgS04), filtrada e concentrada. Os sólidos residuais foram agitados com Et20 (600 ml) durante 1 hora e foram colhidos por filtração para produzir lH-indol-6-carboxamida, 3-ciclohexil-N- [(dimetilamino), sulfonil] -2-(2 — formil-4-metoxifenil)- (5 2,8 g, 109 mmol, 87 %) como um pó amarelo que foi utilizado sem purificação adicional. 1HRMN (300 MHz, d6-DMSO) δ 11,66 (s, 1H) , 8,17 (s, 1H) , 42 7, 75 (d , J = 8,4 Hz, 1H) , 7 ,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,59 (dd, J = 1, 4, 8,4 Hz, 1H) , 7 ,23- 7,16 (m, 2h; 1, 7,08 (dd, J = 2,6 f 8,4 Hz, 1H) t 6 f 54 (d, J = 8,8 H z, 1H), 3,86 (s , 3H) , 3,22- 3 , 08 (m, 1H) , 2, 91 (s, 6H), 2,00 - 1,74 (m, 7H), 1,60- 1,38 (m , 3H ) . 13C RMN (75 MH 2 2, CDC13) δ 165,7 , 158,8, 47,2, 139,1 f 134, 3, 132 , 0, 123,4, 122,0, 119,2, 118,2, 114,8, 112,3 f 110, 4, 109 ,8, 79, 6, 45,9, 37, 2(2), 1 5 4,7, 32 ,0(2), 25,9(2), 24,9. LCMS: m/e 482 (M-H)-, tempo de retenção 2,56 minutos, coluna A, gradiente de 4 minutos.

Intermediário 5

6H-isoindolo[2,1-a]indol-3-carboxamida, 11-ciclohexil-N- [(dimetilamino)sulfonil]-6-etoxi-8-metoxi-. A um balão de fundo redondo de quatro tubuladuras e 5 L equipado com um controlador de temperatura, um condensador, uma entrada de N2 e um agitador mecânico, carregou-se tolueno (900 ml), EtOH (900 ml), 2-bromo-3-ciclohexil-N- (N,N-dimetilsulfamoil)-1H- indol-6-carboxamida (90 g, 0,21 mol), ácido- 2-formil-4- metoxifenilborónico (49,2 g, 0,273 mol) e LiCl (22,1 g, 0,525 mol). A solução resultante foi borbulhada com N2 durante 15 minutos. Adicionou-se uma solução de Na2C03 (66, 8 g, 0,63 mol) em H20 (675 ml) e a mistura de reacção foi borbulhada com N2 durante outros (10 minutos). Adicionou-se Pd(PPh3)4 (7,0 g, 6,3 mmol) e a mistura de reacção foi aquecida a 70 °C durante 20 horas. Depois de arrefecer a 35 °C, adicionou-se lentamente uma solução de HC1 IN (1,5 L). A mistura resultante foi transferida a um funil separador de 6 L e foi extraida com EtOAc (2X 1,5 L) . Os extractos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (2 L), secos em MgS04, filtrados e 43 concentrados a vácuo para dar um sólido amarelo, o qual se triturou com 20 % de EtOAc em hexano (450 ml, 50 °C a 0 °C) para dar 3-ciclohexil-N- (N,N- dimetilsulfamoil)-2-(2-formil-4-metoxifenil)-lH-indol-6- carboxamida (65,9 g) como um sólido amarelo. Pureza por HPLC, 98 %. O licor-mãe da trituração foi concentrado a vácuo. O resíduo foi levado a refluxo com EtOH (50 ml) durante 3 horas. A solução foi arrefecida depois a 0 °C. Os precipitados foram filtrados e lavados com TBME (5 °C) (20 ml) arrefecido. O bolo de filtração foi seco em ar a vácuo em alojamento para dar a quantidade adicional do composto do título como um sólido branco (1 6,0 g). Pureza por HPLC, 99 o, o « . XH RMN (CDC13 , 300 MHz) δ 8 LO (s, 1H), 7, 96 (s, 1H) , 7, 73 (d, J = 8 ,4 Hz, 1H), 7 ,67 (d, J = = 8,4 Hz , 1H) , 7, 45 (dd, J = 8,4 e 1,4 Hz, 1H), 7, 09 (d , J = 2,2 Hz , 1H) , 6,98 (dd, J = = 8,4 e 2, 2 Hz, 1H), , 6,50 (s, 1H) , 3,86 (s, 3H) , 3, 05 (s, 6H) , 2 ,92- • 3,13 (m, 3H) , 1, 85- 1,93 (m, 7H) , 1, 40- 1, 42 (m, 3H) , 1 , 05 (t, J = 7, 1 Hz , 3H), m/z 512 (M+H)+

Intermediário 6

lH-indol-6-carboxamida, 3-ciclohexil-N- [(dimetilamino)sulfonil]-2-(2-formil-4-metoxifenil)-. 1Ι οί cl ohexil-N- (N,N-dimetilsulfamoil)-6-etoxi-8-metoxi-6H-isoindol[2,1-a]indol-3-carboxamida foi dissolvida em THF (75 ml). À solução adicionou-se uma solução de HC1 2N (300 ml) . A mistura foi agitada vigorosamente sob N2 a temperatura ambiente durante 16 horas. A suspensão resultante foi filtrada e lavada com TBME (2X30 ml) frio. O bolo de filtração foi seco em ar a vácuo durante a noite para dar o composto do título como um sólido amarelo. Pureza de HPLC, 99 %. 1R RMN (DMSO-d6, 300 MHz) δ 11,65 (s, 44 1H) , 8, 16 (s, 1H) , 7,76 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7 ,73 (d, J = 5,9 Hz, 1H) , 7,58 (dd, J = 8, 5 e 1, 5 Hz, 1H), 7, 17- 7,20 (m, 2H) , 7,08 (dd, J = 8,5 e 1 ,4 Hz, 1H), 6,55 (d, J = = 8,6 Hz, 1H) , 3,86 (s, 3H), 3,14- 3,18 (: m, 1H), 2, 91 (s, 6H) , 1, 75 - 1 ,99 (m, 7H) , , 1,48- 1,60 (m, 3H ); m/z 484 (M+H)+.

Acido 7H-indolo[2,1-a]benzazepin-6-carboxílico, 13-ciclohexil-10-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil] -3-metoxi-, éster metílico. Uma mistura de 3-ciclohexil-N-(N,N- dimetilsulfamoil)-2-(2-formil-4-metoxifenil)-1H- indol-6- carboxamida (4,8 g, 0, 01 mol) , 2- (dimetoxifosforil)acrilato de metilo (9, 7 g, 0,02 mol) e carbonato de césio (7,1 g , 0, 02 mol) em DMF (28 ml) foi agitada durante 20 horas a uma temperatura de banho de óleo de 55 °C. A mistura foi deitada em água e ! gelo e foi tornada ácida com HC1 diluido para precipitar o produto bruto. O sólido foi colhido, filtrado e submetido a cromatografia por vaporização em SiCq (110 g) utilizando uma solução de acetato de etilo e cloreto de metileno (1:10) que continha ácido acético a 2 %. As fracções homogéneas foram combinadas e evaporadas para dar o composto do titulo como um sólido amarelo pálido (3,9 g, 71 % de rendimento). MS: 552 (Μ = H+).

Um procedimento alternativo para a preparação de ácido 7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6-carboxílico, 13- ciclohexil-10-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-3-metoxi-, éster metílico é proporcionado a seguir.

Uma solução de 11-ciclohexil-N- [(dimetilamino)sulfonil]-6-hidroxi-8-metoxi-6H- 45 isoindolo[2,1- a] indol-3-carboxamida (hemiaminal cíclico) (6 3,0 g, 130 mmol), 2-(dimetoxifosforil)acrilato de metilo (60 g, 261 mmol), carbonato de césio (106 g, 326 mmol) em DMF (400 ml) foi aquecida a 60 °C (temperatura do banho) durante 4,5 horas. Adicionaram-se 2-(dimetoxifosforil)acrilato de metilo (15 g, 65 mmol) e carbonato de césio (2 1,2 g, 65 mmol) adicionais e a reacção foi aquecida a 60 °C durante a noite e depois foi arrefecida à temperatura ambiente. A mistura de reacção em agitação foi diluída com H2O (1 L) , neutralizada lentamente com HC1 aquoso IN (800 ml), foi agitada 3 horas, e depois os precipitados foram colhidos por filtração. Os sólidos foram triturados com Et20 (800 ml) e foram secos para produzir ácido metil 7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6-carboxílico, 13-ciclohexil-l0-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-3-metoxi-, éster metilico (70,2 g, 127 mmol, 98 %) como um sólido amarelo o qual foi utilizado sem purificação adicional. 1HRMN (300 Z, CDC13) δ 8,67 (s, 1H), 8,09 (s, 1H) ÁO 00 r- (d, J = OO II r 1H) , 7, 80 (s, 1H), 7 , 50 (d, J = 8,4 1 Hz, 1H), 7, 42 (d, J 8, 8 Hz , 1H), 7,08 (dd, J = 2,6, 8, 8 Hz , 1H), 6 , 98 (d , J = 6 Hz, 1H) , 5,75- 5,51 (m, 1H) , 4, 29- 4,01 (m, r 1H) , 3, 89 r 3H) , 3, ,82 (s, 3H), 3,05 (s, 6H) , 2 ,87- 2,73 (m, 1H) , 11 - 1 ,12 (m, 10H). LCMS :: m/ e 550 (M-H)-, tempo de retenção 3,21 minutos, coluna A, gradiente de 4 minutos. Intermediário 8

Ácido cicloprop[d]indolo [ 2,1-a]benzazepina-la (2H) -carboxílico, 8-ciclohexil-5-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll- 46 metoxi-, éster metálico, (+ Adicionou-se DMSO (5 ml) a uma mistura de iodeto de trimetilsulfoxónio (199 mg, 0,906 mmol) e NaH (38 mg em dispersão em óleo ao 60 %, 0,953 mmol) num balão de fundo redondo. A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 0,5 horas. Depois adicionou-se ácido 7H-indolo[2,1-a] [2] benzazepin-6-carboxílico, 13-ciclohexil-10- [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-3- (metoxi)-, éster metílico (125 mg, 0,227 mmol) e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 3 horas, e em seguida a 50 °C durante 3 horas mais. A reacção foi arrefecida depois rapidamente com água e foi acidificada com solução de HC1 IN. O produto bruto foi precipitado depois como um sólido amarelo claro que foi colhido por filtração e seco ao ar (106 mg, 83 % de rendimento). Depois 6 mg deste material foram purificados por meio de HPLC preparativa para dar o composto do titulo como um sólido amarelo claro (1,8 mg). MS m/z 566 (MH+) , tempo de retenção: 3,850 min. 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,28 (m, 0, 36 H) 1,19- 2,20 (m, , 1 1 ,64 H) 2,70- - 3, ,02 (m, 2 H) 3, 03 (s f 2, 16 H) 3, 05 (s, 3 , 84 H ) 3, 49 (d, J = 15,26 Hz, 0, 64 H) 3, 54 (s, 1,92 H) 3,83 (s, 1 .,08 H) 3,91 (s , 3 H ) 4, 08 (d, J = 15 , 26 Hz, 0, 36 H) 5, 29 (d , J = 15,26 Hz, 0,36 H) 5, 5 0 ( d, J = 14,9 5 HZ, 0,6 4 H) 6,98- 7,06 (m, 1 H) 7, 16 (d, J = : 2, 44 Hz r 0,36 H) 7, 23 (d, J = 2, 44 H z, 0,64 H) 7,30 (d, J = : 8, 55 Hz r 0,64 : H) 7 ,34 (d, J = 8,55 Hz, 0, 36 H) 7, 56 (dd, , J = 8, 55 , 1, 53 Hz, 0, 64 H) 7,63 (dd , J = 8, 55, 1,53 Hz, 0, 36 H) 7, 88 (d, J = 8 , 55 Hz, 0,64 H) 7 ,91 (d, J = = 8,55 Hz, 0, 36 H) 8, 12 (s, 0,36 H) 8,33 (d, J = 1 ,53 Hz, 0,6 4 H) . É proporcionado < a seguir um procedimento alternativo para a preparação dos compostos do titulo. A um balão de fundo redondo de 1 L, quatro tubuladuras e seco com chama equipado com um agitador mecânico, entrada para N2 e um termómetro, sob N2, carregaram-se hidreto de sódio (95 %) (3,09 g, 12 9,2 mmol) e DMF seca (200 ml). Com 47 agitação vigorosa, adicionou-se em porções iodeto de trimetilsulfoxónio (3 2,5 g, 14 7,3 mmol), tempo durante o qual a temperatura foi elevada a 30 °C. Depois de agitar durante 30 minutos, foi adicionada rapidamente uma solução de ácido 7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6-carboxilico, 13-ciclohexil-10-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-3-(metoxi)-, éster metilico (33,8 g, 61,3 mmol) em DMF seca (70 ml). A mistura de reacção foi agitada abaixo de 30 °C durante 30 minutos e em seguida foi deitada numa solução gelada de HC1 IN (130 ml) em H20 (2 L) em porções. Depois de que a solução resultante foi agitada mecanicamente durante 1 hora, os precipitados foram filtrados e o bolo de filtração foi lavado com H20 (100 ml). O bolo de filtração foi dividido entre EtOAc e HC1 0,5 N (1:1, 4 L) . A fase orgânica foi separada, lavada com H20 (1 L) e salmoura (1 L) , seca em MgSCq, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (150 ml), e a solução foi filtrada através de uma almofada de sílica gel (300 g em hexano) e enxaguada com 50 % de EtOAc em hexano (5 L) . O filtrado foi concentrado a vácuo para dar um sólido ligeiramente amarelo o qual se triturou com 10 % de EtOAc em TBME (220 ml) de 50 °C a 0 °C para dar ácido cicloprop[d]indolo[2,1-a][2] benzazepina-la (2H)- carboxílico, 8- ciclohexil-5- [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b- dihidro-11-metoxi-, éster metilico, (+/-)- como um sólido branco (2 6,1 g, 75 % de rendimento). Pureza por HPLC, 100 %. 1H RMN (DMS0-d6, 300 MHz) δ 11,61 (s, 1H) , 8,47 (s, 0,5H), 8,25 (s, 0,5H) , 7,81- 7,88 (m, 1H) , 7, 57- 7, 63 (m, 1H) , 7,23- 7.29 (m, 2H), 7,01- 7,07 (m, 1H) , 5,43 (d, J = 15,0 Hz, 0,5H), 5,22 (d, J-15 Hz, 0,5H), 4,04 (dd, J-l 5,4 e 6,6 Hz, 0, 5H) , 3,83 (s, 3H), 3,75 (s, 1H) , 3,08- 3, 47 (m, 0,5H), 3.29 (s, 3H), 2, 73- 2,92 (m, 8H) , 1,11- 1,99 (m, 10,5H) , 0,20 (m, 0,5H); m/z 566 (M+H)+.

Intermediário 9 48

Ácido cicloprop [d]indolo[2,1-a] benzazepina-la (2H) - carboxilico, 8-ciclohexil-5- [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi-, éster metílico, Uma amostra de (+/-) ácido cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la(2H)-carboxilico, 8-ciclohexil-5-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b- dihidro-11-metoxi- éster metilico foi dissolvido em EtOH/CHsCN 1/1 + 0,5 % de DEA a uma concentração de 50 mg/ml. [A adição de DEA assegura que o composto permaneça em solução durante o processo de injecção]. Esta solução foi injectada depois num SFC preparativo Thar SFC-350 sob as condições mostradas a seguir.

Condições preparativas em Thar SFC-350: Coluna:

Chiralcel OJ-H 5x25 cm; fase móvel; 25 % de MeOH/CH3CN (1/1) em C02; pressão (bares): 100; velocidade de fluxo (ml/min): 240; concentração da solução (mg/ml): 50; quantidade de injecção (mi): 4,5-5; tempo de ciclo (min/inj): 6,5-7; temperatura (°C): 45; saída (g/hr): -2; comprimento de onda do detector (nm): 254.

De 371,4 g de material de partida racémico, um total de 177,3 g do segundo isómero de eluição (-) desejado foram obtidos, que continha ~1 Meq de dietilamina. Este material foi purificado utilizando o seguinte procedimento. A mistura (24,7 g) dissolvida em diclorometano (800 ml) foi lavada sequencialmente com: HC1 0,5 N (1 x 400 ml, 1 x 240 ml), H2O (2x240 ml), e salmoura (2 x 240 ml). A camada orgânica foi seca depois (Na2S04 anidro), foi filtrada e evaporada para dar 22,33 g de ácido (cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la(2H)- 49 carboxílico, 8-ciclohexil-5- [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi-, éster metílico, (-)- como um sólido amarelo (92 % de recuperação). HPLC1 > 99 % (tempo de retenção 2,38 min); LC/MS (ES + ) 56 6,51 (M+H, 100); [a] D25c-194,640 (c 1,03, MeOH) . Análise calculada para C30H35N3O6S* 0,33H2O: C, 63,04; H, 6,29; N, 7,35; S, 5,61; H20, 1,04. Encontrado: C, 63,07; H, 6,01; N, 7,24; S, 5,58; H20, 1, 03. A RMN mostra a ausência de Et2NH. O EE deste material foi determinado como > 99 % utilizando o seguinte procedimento de HPLC analítico.

Condições analíticas para a determinação de ee em Thar analítica SFC. Coluna analítica: Chiralcel OJ (.46x25 cm, 10 μΐ); pressão BPR: 100 bares; temperatura: 35 °C; velocidade de fluxo: 3,0 ml/min; fase móvel: 15 % de MeOH/CH3CN (1/1) em C02; comprimento de onda de detector: 254 nm; tempo de retenção (min): 4, 6,5.

Intermediário 10

Ácido cicloprop [d] indolo [2,1-a] [2]benzazepina- la(2H) - carboxílico, 8-ciclohexil-5- [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi-, (-)-. A uma solução de ácido (-)cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la(2H)-carboxílico, 8-ciclohexil-5- [ [[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1, 12b- dihidro-11-metoxi-, éster metilico (2 2,33 g, 3 9,5 mmol) em MeOH (300 ml) adicionaram-se NaOH IN (120 ml) lentamente durante 20 minutos, enquanto se mantinha a temperatura de reacção <30 °C. A mistura foi agitada depois a temperatura ambiente 50 sob N2 durante 18 horas. A HPLC indicou que a reacção estava completa. À solução de reacção adicionou-se HC1 IN (130 ml). Em seguida de completar a adição, o pH da mistura de reacção foi de aproximadamente 2. O metanol e a mistura de reacção foram evaporados. Adicionou-se água (300 ml) à mistura a qual foi extraída depois com CH2C12 (1x600 ml, 1x200 ml). Os extractos combinados foram lavados com H20 (2x300 ml), salmoura (2x300 ml), secos (Na2S04) e evaporados para dar 20,82 g (96 % de rendimento) do composto do título como um sólido amarelo. Condições de coluna de HPLC: Phenomenoex Synergi Polar-RP 4 um 4,6 x 50 mm; UV: 22 0 nm; tempo de gradiente: 4 min; velocidade de fluxo: 4 ml/min, 75-100 % de B; solvente A: 10 % de MeOH/90 % de H20 com 0,2 % de H3PO4, solvente B: 90 % de MeOH/10 % de H20 com 0,2 % de H3P04. HPLC>99 % (tempo de retenção 1,80 min) LC/MS (ES + ) 552,25 (M+H, 100); [cx] D25c-166,990 (c 1,00,

MeOH) . Análise GC: CH2C12 4,94 %; análise calculada para C29H33N306S* 0,16 H20* 0,35 CH2C12: C, 6 0,37; H, 5,87; N, 7,20; S, 5,49; H20, 0, 49; CH2C12, 5,02. Encontrado: C, 5 9,95; H, 5,89; N, 7,03; S, 5,38; H20, 0,47; CH2C12, 4,94. Intermediário 11

Ácido cicloprop [d] indolo [2,1-a] [2]benzazepina-la(2H) - carboxílico, 8-ciclohexil-5-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi-, (+/-). A uma solução de ácido (+/-) cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la(2H)-carboxílico, 8- ciclohexil-5-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b- dihidro-11-metoxi-, éster meti lico (100 mg, 0,177 mmol) em mistura de THF/metanol (2,0 ml/ 2,0 ml), 51 adicionou-se solução de NaOH 2N (1,0 ml) . A mistura de reacção foi aquecida a 90 °C sob condições de microondas durante 5 min. Depois foi concentrada, foi acidificada com solução de HC1 IN e foi extraída com acetato de etilo (2X20 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa para dar o produto desejado como um sólido amarelo claro (59 mg, 60 % de rendimento) . MS m/z 552 (MH+) , tempo de retenção: 3,850 minutos. 1H RMN (3 00 MHz, MeOD) δ ppm 0,25 (m , o, 38 H) 1, 14- 2, 22 (m, 11, 62 H) 2, 69 - 2, 98 (m, 2 H) 3, 02 (s, 2, 28 H) 3, 02 (s, 3,72 : H) 3, 41 (d, J = 1 5,00 Hz, o, 62 H) 3, 88 (s, 3 H) 4, 01 (d, , J = 1 5, 00 Hz, 0, 38 H) 5, 26 (d, J = : 1 5, 00 1 Hz, 0, 38 H) 5, 45 (d, J = 14 ,64 Hz, 0,62 H) 6, , 94 - 7, 02 (m , 1 H) 7, 13 (d, J = = 2, 56 Hz, 0,38 H) 7, 21 (d, J = 2,20 H z, 0,6; 2 H) 7 , 25 (d, J = = 8, 42 Hz, 0,62 h; ) 7,30 (d r J = 8, 78 Hz c ), 38 H ) 7 , 53 (dd, , J = 8, 42 , 1, 46 Hz, 0, , 62 h; 1 . 7,61 (dd, j = 8 ,60, : 1,65 Hz, o, 38 H) 7 , 85 (d, J = 8 ,42 H z, 0,62 H ) 7 ,89 (d, J = 8,42 Hz, 0, 38 H) 8 ,10 (S, 0,38 H) 8, 28 (d, J : = 1 , 46 Hz, 0 , 62 H) .

Intermediário 12

Cicloprop [d] indolo [2,1 — a] [2]benzazepina-la, 5 (2 H) dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5-[(dimetilamino)sulfonil]-1,12b- dihidro-Nla- [(2 R, 3S) -3-hidroxi-4, 7, 7- trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-11-metoxi-, (laR)- [parcial]-. TBTU (437 mg, 1,36 mmol) e DIPEA (0,95 ml, 5,436 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido (+/-) cicloprop[d]indolo [2,1-a] [2] benzazepina-la(2H)- carboxílico, 8- ciclohexil-5- 52 [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b- dihidro-11-metoxi- (500 mg, 0,906 mmol) em DMSO (2 0,0 ml). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos. Depois adicionou-se (2S, 3R)-3-amino-1,7,7-trimetilbiciclo[2.2.1]heptan-2-ol (280 mg, 1,36 mmol) e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reacção foi extinta com água e foi acidificada com solução de HC1 IN. Separou-se um sólido castanho que foi colhido por filtração. Este material foi fraccionado depois por meio de HPLC preparativa sob as seguintes condições. Coluna: Waters Sunfire 19 mm x 100 mm; solvente A: 10 % de CH3CN-90 % de H20- 0,1 % de TF A; solvente B: 90 % de CH3CN-10 % de H20-0,1 % de TFA; programa: inicio com 65 % de solvente B, tempo de retenção inicial durante 5 minutos, em seguida incrementar gradualmente a 90 % de solvente B em 30 minutos com velocidade de fluxo de 25 ml/min. Carga: 50-60 mg/execução.

Cicloprop[d]indolo[2,1-a] [2]benzazepina-la,5(2H)-dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5-[(dimetilamino)sulfonil]-1,12b- dihidro-Nla [(2R, 3S) -3-hidroxi-4, 7,7-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il] -11-metoxi-, (laR)-[parcial]- elui antes que cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la,5(2H) -dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5-[(dimetilamino) sulfonil] -1,12b-dihidro-Nla- [(2R, 3S) -3-hidroxi- 4,7,7-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-11-metoxi-, (laS)-[parcial] - sob as condições de HPLC descritas acima. 0 produto obtido como um sólido amarelo claro, 230 mg, 36 % de rendimento). MS m/703 (MH+) , tempo de retenção: 3,936 minutos. 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,14- 0,24 (m, 2,64 H) 0,51 (s, 2,46 H) 0,72- 2,21 (m, 20,9 H) 2,49 (m, 0,18 H) 2,62 (m, 0,82 H) 2,85 (m, 0,18 H) 2,96 (m, 0,82 H) 3,03 (s, 6H) 3,39 (m, 0,82 H) 3,49- 3,58 (m, 1,64 H) 3,71- 3,80 (m, 0,36 H) 3,90 (s, 3H) 4,17 (d, J = 1 4,65 Hz, 0,18 H) 5,06 (d, J = 1 4,65 Hz, 0,18 H) 5,37 (d, J = 14,95 Hz, 0,82 H) 53 6,73 (d, J = 5, 49 Hz , 0,82 H) r- 1 00 05 (m, 1 H) 7, 08 (d, J = 4,58 Hz, 0,18 H) 7, 10 (d, J- 2,44 Hz, 0,18 H) 7, 21 (d, J = 2,44 Hz, 0, 82 H) 7,31 (d, J = 8,55 Hz, 0,82 H) 7, 34 (d, J = 8,55 Hz, 0,18 H) 7, 59- - 7, 64 (m, 1 H) 7, 87- 7, 93 (m , 1 Η) 7,99 (s, 0,18 Η) 8,09 (d, J = 1,22 Hz, 0,82 H) . Intermediário 13

Cicloprop [d] indolo [2,1-a] [2]benzazepina-la,5 (2H) - dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5 -[(dimetilamino)sulfonil]-1,12b- dihidro-Nla- [(2R,3S) -3-hidroxi-4, 7, 7-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-11-metoxi-, (laS)-[parcial]-. TBTU (437 mg, 1,36 mmol) e DIPEA (0,95 ml, 5,436 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido (+/-) cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la(2H)-carboxilico, 8- ciclohexil-5-[[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi- (500 mg, 0,906 mmol) em DMSO (20,0 ml). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos. Depois adicionou-se (2S,3R)-3-amino-1,7,7- trimetilbiciclo[2.2.1]heptan-2-ol (280 mg, 1,36 mmol), e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reacção foi extinta com água e em seguida foi acidificada com solução HC1 IN. Separou-se um sólido cor castanho que foi colhido por filtração. Este material foi fraccionado "depois por meio de HPLC preparativa sob as seguintes condições: coluna: Waters Sunfire 19 mmxlOO mm; solvente A: 10 % de CH3CN-90 % de H20- 0,1 % de TF A; solvente B: 90 % de CH3CN-10 % de H2O-0,ll de TFA; programa: começar com 65 % de solvente B, manter tempo de retenção inicial durante 5 54 minutos, depois incrementar gradualmente a 90 % de solvente B em 30 minutos com velocidade de fluxo de 25 ml/min. Carga: 50- 60 mg/execução.

Cicloprop[d]indolo[2,1-a]benzazepina-la,5(2H)-dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5-[(dimetilamino)sulfonil]- 1,12b- dihidro-Nla- [(2r, 3S) -3-hidroxi-4, 7, 7- trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-11-metoxi-, (laS)-

[parcial] - elui depois de cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la,5 (2H)-dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5-[(dimetilamino) sulfonil] -1,12b-dihidro-Nla- [(2R, 3S) -3-hidroxi- 4, 7, 7-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-11-metoxi-, (laR) - [parcial ] - sob as condições de HPLC descritas acima.

Produto obtido como um sólido amarelo claro, 215 mg, 34 % de rendimento). MS m/703(MH+), tempo de retenção: 4, 038 min. 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,20 (m, 0,38 H) 0,75 (s, 1,86 H) 0,76 (s, 1,86 H) 0,84 (s, 1,86 H) 0,85 (s, 1,14 H) 0,89- 2,18 (m, 1 8,9 H) 2,52 (m, 0,38 H) 2,70 (m, 0,62 H) 2,85 (m, 0,38 H) 2,97 (m, 0,62 H) 3,03 (s, 2,28 H) 3,04 (s, 3,72 H) 3,33- 3,39 (m, 0,62 H) 3,43- 3,51 (m, 1,24 H) 3,73- 3,77 (m, 0,38 H) 3,78- 3,84 (m, 0,38 H) 3,90 (s, 1,86 H) 3,90 (s, 1,14 H) 4,14 (d, J = 14,65 Hz, 0,38 H) 5,11 (d, J = : 14, 65 Hz, 0 ,38 H) 5, 44 (d, J = 15,26 Hz, o, 62 H) 6,68 (d, J = 4,88 Hz, 0,62 H) 6 ,96- 7, 03 (m, 1 H) 7, 07 (d, J = 5, 19 Hz, 0,38 H) 7,12 (d, J = 2,44 Hz, 0,38 H) 7, 23 (d, J- 2 , 14 Hz, 0,62 H) 7,27 (d, J = 8,54 Hz, 0, 62 H) 7, 33 (d, J = 8,54 Hz, 0,38 H) 7,55 (dd, J = 8, . 39, 1,68 Hz, 0, 62 H) 7,62 (dd, J = = 8,55, 1 .,53 Hz, 0, 38 H) 7,87 (d, J = 8, 54 Hz, 0,62 H) 7, 91 (d, J = 8,55 Hz, 0 ,38 H) 8,08 (d, J = 1, 22 Hz, 0,38 H) 8, 10 (d, J = 1,22 Hz, 0 ,62 H). Intermediário 14 55

Ácido cicloprop [d] indolo [2,1 — a] [ 2]benzazepina- la(2H) - carboxílico, 8-ciclohexil-5- [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi-, Solução de NaOH 10 N (2,0 ml, 20 mmol) e 4 ml de água foram adicionados a uma solução de cicloprop[d]indolo[2,1 — a] [2]benzazepina-la,5(2H)-dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5- [(dimetilamino) sulfonil] - I, 12b-dihidro-Nla- [(2r,3S)-3-hidroxi-4,7,7- trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-11- metoxi-, (laR)- [parcial]-(160 mg, 0,228 mmol) em THF/MeOH (7 ml/7 ml). A mistura de reacção foi aquecida a 120 °C sob condições de microondas durante 1 hora. Depois foi concentrada, foi acidificada com solução de HC1 concentrado e foi extraída com acetato de etilo dois vezes (2X30 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgSCU) , filtradas e concentradas a vácuo até um óleo laranja. O produto bruto foi purificado depois por meio de uma coluna de HPLC preparativa para dar o produto como um sólido amarelo claro (80 mg, 64 % de rendimento). Rotação específica média-

130,85°; solvente MeOH; comprimento de onda 589 nm; célula de 50 cm. MS m/552 (MH+) , tempo de retenção: 3,760 min. 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,27 (m, 0,38 H) 1,14- 2,22 (m, II, 62 H) 2,76 (m, 0,38 H) 2, 80- 2,92 (m, 1 H) 2,92- 3,09 (m, 6,62 H) 3,45 (d, J = 14,95 Hz, 0,62 H) 3,90 (s, 1,86 H) 3,91 (s, 1,14 H) 4,04 (d, J = 15,26 Hz, 0,38 H) 5,28 (d, J = 15,26 Hz, 0,38 H) 5,47 (d, J = 15,26 Hz, 0,62 H) 6,95- 7,05 (m, 1 H) 7,15 (d, J = 2,75 Hz, 0,38 H) 7,23 (d, J = 1,83 Hz, 0,62 H) 7,28 (d, J = 8,55 Hz, 0,62 H) 7,33 (d, J = 56 8, 54 Hz, o, 38 H) 7, 54 (dd , J = CÁ 00 00 1, 68 Hz, o, 62H) 7, 63 (dd, J = 8, 55, 1, 53 Hz, 0, 38 H) 7, 86 (d, J = 8, 55 Hz, o, 62 H) 7, 91 (d, J = 8 , 55 Hz , o ,38 H) 8, 11 (d, , J = 1, 22 Hz, o, 62 H) 8, 29 (d, J = 1 , 22 Hz , 0 ,38 H) • Intermediár io 15

Ácido cicloprop [d] indolo [2,1-a] [2] benzazepina- la(2H) - carboxílico, 8-ciclohexil-5- [[[(dimetilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi-, (+)-. Solução de NaOH 10 N (1,8 ml, 18 mmol) e 4 ml de água foram adicionados a uma solução de cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la,5(2H)-dicarboxamida, 8-ciclohexil-N5- [(dimetilamino) sulfonil] -1,12b-dihidro-Nla- [(2R,3S)-3-hidroxi-4,7,7- trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-11- metoxi-, (as)- [parcial]-(130 mg, 0,185 mmol) em bTHF/MeOH (7 ml/7 ml). A mistura de reacção foi aquecida a 120 °C sob condições de microondas durante 1 hora. Foi concentrada, acidificada com solução de HC1 concentrada e foi extraida com acetato de etilo dois vezes (2X30 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgSOO , filtradas e concentradas a vácuo para dar um óleo alaranjado. O produto bruto foi purificado depois por meio de coluna de HPLC preparativa para dar o produto como um sólido amarelo claro (68 mg, 67 % de rendimento). Rotação especifica média + 174,73°; solvente MeOH; comprimento de onda 589 nm; 50 cm de célula MS m/552 (MH+) , tempo de retenção: 3,773 min. 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 0,27 (m, 0,38 H) 1,14- 2,22 (m, 11,62 H) 2,76 (m, 0,38 H) 2,80- 2,92 (m, 1 H) 2,92- 3,09 (m, 6,62 H) 3,45 (d, J = 14,95 Hz, 0,62 H) 3,90 (s, 1,86 H) 3,91 (s, 1,14 H) 57 4, 04 (d, J = = 15, 26 Hz, 0 ,3! 3 H ) 5, 28 (d, r J = 1 5,26 Hz, o, 38 H) 5 r 47 (d, J = 15,26 Hz f 0,6: 2 H) 6 ,95- - 7, , 05 (m, 1 H) 7, 15 (d, j = 2,75 Hz, 0,38 H) 7, 23 (d, J = 1 , 83 Hz, 0,62 H) 7, 28 (d, j = 8,55 Hz, 0,62 H) 7, 33 (d, J = 8 ,54 Hz, 0,38 H) 7, 54 (dd, J = = 8,: 39, 1,68 Hz, 0, ,62 H) 7, 63 (dd , J = 8,55, 1, 53 Hz, 0 ,38 H) 7, 86 (d, J = 8, 55 Hz, o, 62 H) 7, 91 (d, J = 8, 55 Hz, 0 ,38 H) 8, 11 (d, J = 1, 22 Hz, 0, 62 H) 8,29 (d, J = 1, 22

Hz, 0,38 Η). Intermediário 16

Ácido lH-indol-6-carboxílico, 2-bromo-3-ciclohexil-, éster 1,1-dimetílico. A uma solução mecanicamente agitada de ácido 2-bromo-3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxílico (80 g, 0,24 m) em dicloridrato de metileno seco (1,2 L) e THF (100 ml) adicionaram-se crivos moleculares activados (4A, 80 g) e carbonato de prata (275 g, 0,99 m). A mistura de reacção foi arrefecida a 0 °C e adicionou-se gota a gota brometo de t-butilo (142 g, 1,04 m) . A mistura foi agitada durante a noite a temperatura ambiente e foi monitorizada por meio de TLC (hexano-acetato de etilo 80:20, Rf (produto) = 0,7). Se ficasse sem converter qualquer bromoácido 10 % adicionais de carbonato de prata eram adicionados e continuava-se a agitar durante 2-4 horas mais. Depois da conclusão, a mistura de reacção foi filtrada através de leito fino de Celite. O filtrado foi lavado com cloreto de metileno (500 ml). Os filtrados combinados foram concentrados a vácuo, e o produto bruto obtido desta maneira foi purificado por meio de cromatografia em sílica gel: (230-400 mesh), eluído com um gradiente de acetato de etilo em éter de petróleo 0-2 %). Fracções homogéneas foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar 80 g (85 %) do composto do 58 título. HPLC: 90,1 % (RT = 6,56 min), coluna: C18 BDS, (50X 4,6 mm), fase móvel: gradiente de 0,1 % de TFA em água: ACN (30—>100—>30), velocidade de fluxo 0,8 ml/min. LCMS: 99,8 % (RT = 4,44 min), coluna: Geneis, C18 50X 4,6 mm fase móvel: gradiente de 0,1 % de ácido fórmico em água: ACN ( 70—>95—>70 ) , velocidade de fluxo: 0,8 ml/min; M-l = 376,5; 1ti RMN CDC13 ) (400 MHz) δ 1,37- 1, 40 (m, 3H, hexilo ciclohexílico ), 1,62 (s, 9H, t-Bu), 1,80- 1,94 (dois conjuntos de m, 3H, & 4H respectivamente, parte hexilo ciclohexílica 1 0 r- 7, 75 (m, 2H, indol-H4&5), 8,04 (s, 1H, indol-H7) , 8,52 (s, 1H, indol- NH) .

Ácido lH-indol-6-carboxílico, 3-ciclohexil-2- (2-formil-4-metoxifenil)-, éster 1,1-dimetílico. 2-Bromo-3-ciclohexil-lH-indol-6-carboxilato de terc-butilo (72 g, 0,19 m) foi dissolvido numa mistura de 1:1 de tolueno e etanol (720 ml) e foi desgaseifiçado. Depois adicionou-se LiCl (23,9 g, 0,51 m), seguido por carbonato de sódio (720 ml, solução 1,0 M desgaseifiçada em separado), e Pd-tetrakis (13,1 g, 0,011 m) . Depois de agitar durante 0,25 horas, adicionou-se ácido 2- formil-4-metoxifenilborónico (41,1 g, 0,22 m) e a mistura de reacção foi aquecida a 85 °C durante 4 horas. A reacção foi monitorizada depois por meio de TLC (hexano-acetato de etilo 80:20, Rf (produto) = 0,55) . Em seguida da conclusão, a mistura de reacção foi arrefecida à temperatura ambiente e foi adicionada água (1,0 L) seguida por acetato de etilo (1,0 L) . A camada orgânica foi lavada com salmoura, e foi seca e foi concentrada a vácuo para dar o composto do título como um sólido amarelo. Rendimento 75 g (74 %). HPLC: 99,7 % (RT = 59 6,30 min), coluna: C18 BDS (4,6X50 mm), SC-307, fase móvel: gradiente de 0,1 % de TFA em água: ACN (3 0—>10 0—>3 0) , velocidade de fluxo 0,8 ml/min. LCMS:98,0 % (RT = 5,28 min), coluna: Geneis, C18 (50X 4,6 mm), fase móvel:

gradiente de 0,1 % de ácido fórmico em água: ACN (70—>95—>70) , velocidade de fluxo: 0,8 ml/min; Μ- 1 432,2; RMN (DMS0-d6) ( 400 MHz) δ 1, 40- 1, 48 (m, 3H, hexilo ciclico - benzilico), 3,84 (s, 3H, 0CH3), 6,55 (d, J = 4 Hz, 1H, H2' arilico) , 7, 06 (d, 1H, H3' arilico) , 7, 08 (s, 1H, Ηβ' arilico) , 7,23 (d, 1H, indol -H5), 7,53 (d, J = 8 Hz, 1H, 1H, indol-H4) , 7, 70-CHO) . 7, 75 (m, 2H, NH+indol-Hv) , 8, 06 (s,

Intermediário 18

Ácido 7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6,10-dicarboxilico, 13-ciclohexil-, (1,1-dimetiletil), éster 6-metilico . 3-Ciclohexil-2-(2-formil-4-metoxifenil)-1H-indoΙό- carboxilato de terc-butilo (62,5 g, 0,144 m) foi dissolvido em DMF seca (1,2 L) e agitada mecanicamente. Carbonato de césio (84 g, 0,17 m) e 2-(dimetoxifosforil)acrilato de metilo (65-70 % de GC puro, 56,2 g, 0,18 m) foram adicionados depois e a mistura de reacção foi aquecida a 65 °C durante 4 horas, e a reacção foi monitorizada por meio de TLC (hexano-acetato de etilo 80:20, Rf (produto) = 0,7). Depois da conclusão, a mistura foi arrefecida à temperatura ambiente, em seguida foi inactivada com água (1,0 L). Uma solução amarela foi precipitada, a qual se colheu por filtração e foi seca ao ar. Este material foi suspenso depois em metanol, filtrado 60 e seco a vácuo para dar o produto como um pó amarelo (70 g, 90 %) . HPLC: 99,1 % (RT = 6,45 min) , coluna: Cl 8 BDS (4,6X50 mm), fase móvel: gradiente de 0,1 % de TFA em água: ACN (3 0—>10 0—>30) , velocidade de fluxo 0,8 ml/min. LCMS : 100 % (RT = 7,00 min), coluna: Geneis, C18 (50X 4,6 mm) (fase móvel: gradiente de 0,1 % de ácido fórmico em água: ACN (70—>95—>70) , velocidade de fluxo: 0,8 ml/min; M+l = 502,2; ΧΗ RMN (CDC13) (400 MHz) δ 1,10- 1,30 (m, 3H, hexilo ciclico) , 1,64 (s, 9H, t-Bu), 1, 77- 2, 07 (m, 7H, parte de hexilo ciclohexílico) , 2,80 (m, 1H, CH de hexilo ciclohexilico-benzilico) , 3,84 (s, 3H, OCH3) , 3,93 (s, 3H, COOCH3) , 4,15 & 5,65 (dois picos 1, cada 1H, CH2 alilico), 6,95 (s, 1H, h6· arilico), 7, 01 (c 1, 1H, H2, arilico ) , 7 , 53 (d, J = 8 H z, 1H, H3' arili co) , 7,70 (d, J = 4 Hz, 1H, indol-Hs) , 7, , 84 (s+d, 2H, H+ indol -H4 olefi nico), 8 ,24 (s, 1H, indol-H7) 13 r C RMN (CDCI3) (100 ,0 MHz) δ 166,92, 165, 71, 158, 96, 142, 28, 136,47, 13, 50, 134,61, 132,43, 132, 01, 129, 73, 124, 78, 124,68, 120, ,33, 119,39, 119,04, 115, 62, 115, 05, 111, 27, 80,27, 55, 49, . 52, 50, 39,09 , 36,81, 33, 40, 28,38, 27,15, 26,28.

Intermediário 19

O O

U-OMe r\ OHIe Ácido 2-propenóico, 2-(dimetoxifosfinil)-, éster metilico. A um balão de fundo redondo de quatro tubuladuras e 5 L equipado com um agitador mecânico, um condensador, um controlador de temperatura e uma entrada de N2, carregaram-se paraformaldeido (40,5 g, 1,35 mol), MeOH (2 L) e piperidina (2 ml) . A mistura de reacção foi aquecida a refluxo sob N2 durante 3 horas. Depois de arrefecer a 50 °C, foi adicionada 2-(dimetoxifosforil)acetato (150 g, 0,824 mol) numa porção. A mistura de reacção continuou-se a levar a refluxo durante 18 horas. Depois de arrefecer à temperatura ambiente, a solução de reacção foi concentrada 61 a vácuo para dar um óleo incolor transparente. 0 óleo anterior foi dissolvido em tolueno seco (1 L) num balão de fundo redondo de quatro tubuladuras e 3 L equipado com um controlador de temperatura, uma entrada de N2, um agitador magnético e um aparelho Dean- Stark. À solução adicionou-se TsOH.H20 (5,2 g). A mistura de reacção foi levada a refluxo depois azeotropicamente para remover metanol durante 18 horas. Depois de arrefecer à temperatura ambiente, a solução foi concentrada a vácuo para dar um óleo amarelo que se destilou a vácuo a 150-155 °C/ 0,2 mmHg para dar o produto como um óleo incolor (135,0 g). Pureza, 90 % a base de 1H RMN. 1R RMN (CDC13, 300 MHz) δ 7,0 (dd, J = 42,4 e 1,5 Hz, 1H), 6,73 (dd, J = 20,5 e 1,8 Hz, 1H) , 3,80 (s, 6H), 3,76 (s, 3H).

Intermediário 20

Ácido cicloprop [d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la, 5 (2H)-dicarboxílico, 8-ciclohexil-l,12b-dihidro-ll-metoxi-, 5-(1,1-dimetiletil), éster la-metilico, (+/-). Hidreto de sódio (96 mg, 4 mmol) foi adicionado a uma suspensão agitada de cloreto de trimetilsulfoxónio (567 mg, 4,4 mmol) em DMSO anidro (10 ml) sob azoto. A mistura resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 30-45 minutos e em seguida ácido 7H- indolo[2,1-a] [2]benzazepin-6,10-dicarboxílico, 13-ciclohexil- 3-metoxi-, 10-(1,1-dimetiletil), éster 6-metílico (1,0, 2 mmol) concentrado adicionou-se em porções pequenas. A suspensão foi diluída com DMSO (5 ml) e foi aquecida a 50 °C durante 3-4 horas. A mistura de reacção foi deixada arrefecer à temperatura ambiente e foi adicionada água. Separou-se um sólido, o 62 qual foi colhido por filtração e lavado com água e em seguida foi seca ao ar durante a noite para dar 1,15 g de produto bruto. Este material foi purificado por meio de cromatografia em coluna por vaporização (sílica gel, 3 % de MeOH em DCM) para proporcionar o composto do título puro (0,96 g) : LC/MS: Tempo de retenção 3,816 min; m/e 516 (MH+) . 1H RMN (400 MHz, CDC13) : Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter-conversão, de acordo com o que evidencia o espectro de RMN do composto. O seguinte procedimento é um exemplo de um método para levar a cabo a resolução de ácido cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la,5(2H)-dicarboxílico racémico, 8- ciclohexil-1,12b-dihidro-ll-metoxi-, 5- (1,1- dimetiletil), éster la-metílico, (+/-). Uma amostra de ácido cicloprop[d]indolo[2,1 — a] [2]benzazepina-la,5(2H)-dicarboxílico, 8-ciclohexil-l,12b-dihidro-ll-metoxi-, 5- (1,1-dimetiletil), éster la-metilico, (+/-)- foi dissolvido numa mistura de isopropanol e acetonitrilo (8:2) para dar uma concentração final de 20 mg/ml. Esta mistura foi injectada num sistema de cromatografia SFC quiral preparativa utilizando as seguintes condições: Coluna Chiralcel OJ-H, 4,6 x 250 mm, 5 um; fase móvel: 8 % de MeOH em CO2; temperatura: 35 °C; velocidade de fluxo: 2 ml/min durante 16 min; monitorizado por UV @ 260 nm; injecção: 5 pL de -20,0 mg/ml em IPA:ACN (8:2).

Intermediário 21

Ácido cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-la, 5(2H)-dicarboxílico, 8-ciclohexil-l,12b-dihidro-ll-metoxi-, éster la-metílico, ( + /-). TFA (5 ml) foi adicionada a uma 63 solução de ácido (+/-)-8-ciclohexil-l,la,2,12b-tetrahidro-11-metoxi- la-(metoxicarbonil)-cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5- carboxílico, éster terc-butílico (515 mg, 1 mmol) em DCM anidro (10 ml). A solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante aproximadamente 8 a 12 horas. A reacção foi evaporada depois até a secura para dar o composto do titulo (0,47 g, 100 %). LC/MS: tempo de retenção 2,245 min; m/e 460 (MH+) . RMN (400 MHz, CDC13) :

Do espectro de RMN do composto, observou-se que o produto existia como uma mistura de rotámeros de interconversão.

Intermediário 22

la(2H) - carboxílico, 8-ciclohexil-l,12b-dihidro-ll-metoxi-5- [[[(metilamino)sulfonil]amino]carbonil]-, éster metílico. Uma solução de ácido 8-ciclohexil-l,la,2,12b-tetrahidro-11- metoxi-la-(metoxicarbonil)-cicloprop[d]indolo[2,1- a] [2] benzazepin-5-carboxílico (140 mg, 0,31 mmol) e CDI (64 mg, 0,40 mmol) em THF (3 ml) foi agitada durante 1 hora a 6 0 °C. Adicionaram-se N-met ilsulf amida (68 mg, 0,62 mmol) e DBU (71,6 mg, 0,47 mmol) e a mistura foi agitada a 60 °C durante a noite. A reacção foi deitada depois em água gelada, foi acidificada com ácido clorídrico diluído e foi extraída em acetato de etilo. Os extractos foram lavados sequencialmente com ácido clorídrico diluído (0,1 N), e salmoura, e em seguida foram secos (sulfato de sódio anidro), filtrados e evaporados para proporcionar o composto do título como um sólido castanho. ESI-MS m/e 552 (MH+) . Este material foi utilizado 64 sem purificação adicional. Intermediário 23

Ácido cicloprop[d]indolo [2,1-a] [2]benzazepina-la(2H) carboxilico, 8-ciclohexil-l,12b-dihidro-ll-metoxi-5-[[[(metilamino)sulfonil]amino]carbonil] Ácido cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la(2H) -carboxilico, 8-ciclohexil-5- [[[(metilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro- 11-metoxi-, éster metilico foi dissolvido em THF, mistura de MeOH (2 ml, 2 ml). 2,5 M de NaOH (aq.) (1,2 ml, 3 mmol) em seguida foram adicionados e a reacção foi agitada a 22 °C durante 2 horas. A solução foi neutralizada depois com HC1 1M (aquoso) (3 ml) e foi concentrada para remover os solventes orgânicos. 0 resíduo foi suspenso com H20 e os sólidos foram colhidos por filtração, lavados com H20 e secos para produzir o composto do título (160 mg, 0,30 mmol) . ESI-MS m/e 538 (MH+) . Este material foi utilizado sem purificação adicional.

Intermediário 24

Acido cicloprop [d] indolo [2,1-a] [2]benzazepina-la(2H) - carboxilico, 8-ciclohexil-5-[[[(benzilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro- 11- 65 (metoxi)-12-(metoxi)-, éster metílico, (+/-)-. Uma solução de ácido (+ /-) 8 - ciclohexil-1,la,2, 12b- tetrahidro-11-metoxi-la-(metoxicarbonil)- cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxílico (200 mg, 0,44 mmol) e CDI (92 mg, 0,57 mmol) em THF (5 ml) foi agitada durante 1 hora a 60 °C. Depois foram adicionados N-benzilsulfamida (164 mg, 0,88 mmol) e DBU (100 mg, 0,66 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 60 °C durante a noite. A reacção foi deitada depois em água gelada, foi acidificada com ácido clorídrico diluído e extraída em acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com ácido clorídrico (0,1 N) , salmoura e seca (sulfato de sódio) e evaporada a vácuo para proporcionar o composto do título como um sólido castanho. ESI-MS m/e 628 (MH+) . 65 Intermediário

Acido cicloprop [d] indolo [2,1-a] [2]benzazepina- la(2H) - carboxilico, 8-ciclohexil-l,12b-dihidro-ll-metoxi-5- [[[(fenilmetil)amino]sulfonil]amino]carbonil]-, (+/-)-. O composto do título foi preparado utilizando um procedimento similar a aquele descrito para o ácido cicloprop[d]indolo[2,1- a] [2]benzazepina-la(2H)- carboxilico, 8-ciclohexil-5- [[[(metilamino)sulfonil]amino]carbonil]-1,12b-dihidro-ll-metoxi-cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepina-la(2H)-carboxílico iniciando a partir de ácido (+/-) 8-ciclohexil-1,la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-la-(metoxicarbonil)-cicloprp[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxílico. ESI-MS m/e 613 (MH+), 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 1,22- 2,20 (m, 13 H) 3,27- 3,31 (m, 1H) 3,47 (d, J = 14,95 Hz, 0,6 H) 3,92 66 (d, J = 2,44 Hz, 3 H) 4,04 (d, 0,4 H) 4,31 (d, J = 2,75 Hz, 2 H) 5,24 (d, 0,4 H) 5,48 (d, 0,6 H) 7,02 (d, 1 H) 7,17 (d, J = 2,75 Hz, 1 H) 7,19- 7,35 (m, 5 H) 7,39 (t, J = 7,48 Hz, 2 H) 7,45- 7,52 (m, 1 H) 7,80 (d, J = 1,53 Hz, 0,4 H) 7,85 (dd, J = 8. 3 9, 6, 87 Hz, 1 H) 8,22 (d, J = 1,53 Hz, 0,6 H) .

Intermediário 27

3,8-Diazabiciclo[3.2.1 ] octano, 3-metil-8-(fenilmetil)-. Cloridrato de cis-l-benzil-2,5-bis(clorometil)pirrolidina (37,5 g, 0,13 mol) (preparado como foi descrito no pedido de patente PCT publicado W0200232902) foi suspenso em CH3CN (900 ml) num balão de fundo redondo de 5 L e 3 tubuladuras equipado com agitador mecânico, condensador de refluxo e termómetro. A suspensão agitada foi aquecida a 50 °C, adicionou-se NaHCCb (97 g, 1,1 mol), e a suspensão foi aquecida a 70 °C. Adicionou-se Nal (50 g, 0,33 mol) e foi agitada a 70 °C durante 5 minutos, ponto no qual se fixou um funil de adição acima do condensador. Ao funil de adição adicionaram-se 48 ml de MeNH2 aquoso a 40 % (0,55 mol) em 850 ml de CH3CN, e esta solução foi adicionada gota a gota (a velocidade de adição foi mantida entre 10-15 ml/min). A adição foi completada depois de 75 minutos, ponto no qual a reacção foi arrefecida à temperatura ambiente, os sólidos foram filtrados, e o solvente foi concentrado a -800 ml. A reacção foi deitada em EtOAc (800 ml) e lavada com NaOH IN (2x100 ml) . A fase aquosa foi extraída de novo com EtOAc (2x100 ml), as fases orgânicas combinadas foram secas em Na2S04 e concentradas. 0 residuo resultante foi introduzido em silica gel (620 g) e foi eluido com 2,8 % de MeOH/0,4 % de NH4OH concentrado em CHCI3 (6 L totais). As fracções puras foram colhidas de 2 L a 4 L. A concentração produziu 67 8,76 g (32 % de rendimento) do composto do título como um óleo castanho. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ ppm 1,79- 1,87 (m, 2 H) 1,92- 1,99 (m, 2 H) 2,23 (s, 3 H) 2,27- 2,37 (m, 2 H) 2,54- 2,63 (m, 2 H) 3,10 (s, 2 H) 3,52 (s, 2 H) 7,20- 7,26 (m, 1 H) 7,30 (t, J = 7,30 Hz, 2 H) 7, 36- 7, 42 (m, 2 H) . Método LC: solvente A = 10 % de MeOH/90 % de H2O/0,l % de TFA, solvente B = 90 % de MeOH/10 % de H20/ 0,1 % de TFA, início %B = 0 %, final % B = 100, velocidade de fluxo = 4 ml/min, tempo de gradiente = 2 min, tempo de execução = 3 minutos, coluna: Phenomenex-Luna 10 pm C18 50 mmx 3,0 mm, tempo de retenção = 0,23 min; MS: (ES+) m/z (M+H)+ = 217,3. 6,1 g adicionais de fracções misturadas foram obtidas da coluna (>80 % puras por meio de integração por 1H RMN). Intermediário 28 HN ^

*2HCI 3,8-Diazabiciclo[3.2.1]octano, 3-metil-, dicloridrato. N-metil-N-benzilbiciclodiamina (14,22 g, 65,7 mmol) foi dissolvida em 650 ml de metanol e 17 ml de ácido clorídrico aquoso 12M foram adicionados. A solução foi colocada numa garrafa Parr de 2L sob azoto e foram adicionados à reacção 3,66 g de hidróxido de paládio a 20 % em carbono. A mistura foi colocada num agitador Parr sob 4,22 kg/cm2 (60 psig) de hidrogénio durante 17 horas. A reacção foi julgada completa por meio de análise TLC (placa de sílica gel eluída com uma solução de 10 partes em volume de amónia 2M em metanol dissolvida em 90 partes em volume de clorofórmio). A reacção foi filtrada através de um plug de celite, o qual foi enxaguado depois sequencialmente com água e metanol. Os filtrados combinados foram concentrados a vácuo e foram adicionados metanol e benzeno até que se obtivesse uma solução homogénea. Depois foram adicionados 75 ml de ácido clorídrico 2,0M em éter dietílico. Removeram-se os resíduos voláteis na solução de produto a vácuo. Um sólido amarelo 68 pálido foi obtido eventualmente por meio da destilação azeotrópica repetida de água a partir da solução de produto utilizando uma mistura de metanol/benzeno. 0 produto sólido, 3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano foi seco a vácuo durante a noite para obter 11,98 g (91 %) de um sólido higroscópico. 0 produto foi removido do balão e engarrafado numa bolsa sob azoto devido à sua natureza higroscópica. *H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,96- 2,14 (m, 2 H) 2,34 (d, J = 8,24 Hz, 2 H) 2,66 (s, 3 H) 3,46 (d, J = 11,90 Hz, 2 H) 3,58 (S, 3 H, contém H20) 4,17 (s, 2 H) 9,92 (s, 1 H) 10,21 (s, 1 H) 11,39 (s, 1 H) ; 13C RMN (126 MHz, DMSO-D6) δ ppm 24,04 (s, 1 C) 43,49 (s, 1 C) 52,50 (s, 1 C) 54, 47 (s, 1 C) .

Intermediários 29 e 30

Ácido 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3 -carboxilico, éster fenilmetilico e 3-(fenilmetil)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano. Trietilamina (1,44 ml, 10,363 mmol) foram adicionados a uma solução de 8- boc-3,8-diaza-biciclo[3.2.1]octano (2,0 g, 9,421 mmol) em CH2CI2 (20 ml), foi adicionado cloroformiato de benzilo (1,46 ml, 10,363 mmol) gota a gota a 0 °C e a mistura de reacção foi agitada a 0 °C durante 0,5 horas, depois foi deixada aquecer à temperatura ambiente e continuou-se a enxaguar durante 3 dias. A mistura de reacção foi extinta depois com água e acidificada com solução de HC1 IN. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada para dar um óleo espesso incolor como o produto bruto. 70 mg deste material foram dissolvidos depois em 1,2-dicloroetano (2 ml) e foi adicionada TFA (0,5 ml). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. 0 solvente e TFA foram evaporados depois para dar uma mistura dos dois compostos do titulo como um 69 óleo espesso incolor. Intermediário 31 69

Procedimento geral para produzir sulfonamidas. Uma mistura de ácido (1 equivalente) e carbonildiimidazol (1,5 equivalentes) em THF anidro foi aquecida a 50 °C durante 30 minutos e foi deixada arrefecer à temperatura ambiente. Depois foram adicionados consecutivamente 1 equivalente quer seja de sulfamida (R = NR2) ou sulfonamida (R = alquilo ou arilo) e DBU (2 equivalentes). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Depois do tratamento aquoso e ácido, produto bruto isolado foi purificada por meio de HPLC preparativa para dar os intermediários do titulo.

Intermediário 32

metilicos hidrolisados utilizando NaOH IN ácidos. Ésteres em THF-MeOH.

OMe

Procedimento geral para produzir amidas para alguns exemplos. Os derivados de ácido (1 equivalente) foram 70 combinados com a amina correspondente (1,2 equivalente), trietilamina (2-3 equivalentes) e TBTU (1,3 equivalentes) em DMF anidro e agitada a temperatura ambiente durante 1-2 horas até a conclusão do acoplamento de amida. Os produtos brutos isolados foram purificados por meio de HPLC preparativa para proporcionar as amidas desejadas.

Compostos adicionais

Compostos adicionais podem ser feitos utilizando as seguintes vias.

cu ,P

A um RBF de 250 ml equipado com uma barra de agitação adicionou-se bromociclobutano (3,49 ml, 37,0 mmol) e 70 ml de éter dietilico. O balão foi arrefecido a -78 °C (banho de acetona/gelo seco). A esta solução adicionou-se depois, por meio de uma seringa, 2,0 eq. De uma solução 1,7 M de terc-butil litio (43,6 ml, 74,1 mmol). A mistura foi agitada durante 60 minutos, em seguida foi acanulada num balão de 500 ml que continha cloreto de sulfurilo (6,00 ml, 74,1 mmol) em 30 ml de éter dietilico a -78 °C. A suspensão foi aquecida à temperatura ambiente durante a noite. A mistura branca foi diluída com 40 ml de éter dietilico, foi filtrada e reservada. Um RBF de 500 ml e 3 tubuladuras equipado com uma barra de agitação e THF seco (10 ml) foi arrefecido a -65 °C com a ajuda de um banho de gelo seco/isopropanol e amónia gasosa foi borbulhada lentamente no balão. Cloreto de ciclobutanossulfonilo sintetizado previamente (5,2 g, 33,6 mmol) foi goteado depois por meio de uma seringa (mistura bruta em -200 ml de éter/THF) . O borbulhação de gás amónia continuou-se durante 5 minutos adicionais. A mistura foi mantida a -65 °C durante 4 horas e em seguida foi deixada aquecer lentamente à temperatura ambiente. A mistura de reacção foi filtrada e lavada com 100 ml de THF. 0 solvente foi evaporado para dar 2,1 g da sulfonamida desejada (46 % de rendimento) como um sólido

71 oleoso amarelo pálido. 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6): 1,81- 1,89 (m, 2 H), 2,16- 2,22 (m, 2 H), 2,23- 2,31 H) , 3,66- 3,74 (m, 1 H), 6,68 (s, 2 H) . nh2 s*0 tf 0 XH RMN (500 MHz, DMSO-D6) : δ ppm 0,94 (m, 3 H) (m, 3 H), 1,30- 1,45 (m, 1 H) , 1,90 (m, 1 H) , 2,76 H) , 6,59 (s, 2 H) . ,.nh2 !b XH RMN (500 MHz, DMSO-D6): δ ppm 1,02 (d, J = 6, 6 H), 2,11 (m, 1 H), 2,86 (d, J = 6,22 Hz, 2 H) , 6,71 H) . O II S-NH2 II c O δ ppm(m, 2

XH RMN (500 MHz, DMSO-D6): δ ppm 1,51- 1,66 (m, 1,86 (m, 4 H), 3,37 (m, 1 H), 6,65 (s, 2 H). NH2

XH RMN (500 MHz, DMSO-D6) : δ ppm 4,24 (m, 2 H) (s, 2 H) .

, 1,20 (m, 1 95 Hz, (s, 2 4 H) , , 7, 46 (m, XH RMN (500 MHz, DMSO-D6) : δ 2 H), 7,01 (s, 2 H). ppm 2,70 (m, 2H) 3,20

XH RMN (500 MHz, DMSO-D6): δ ppm 1,07- 1,17 (m, 1,22- 1,38 (m, 4H), 1,62 (m, 1 H), 1,78 (m, 2H) , 2,05 H), 2,68- 2,77 (m, 1 H), 6,57 (s, 2 H). 1 H),(m, 2 72 y§-m2 ’ ο ΧΗ RMN (300 ΜΗζ, DMSO-D6): δ ppm 1,22 (d, J = 6,59 Hz, 6 Η), 3,00 (m, 1H), 6,59 (s, 2 H).

10- ((sec-Butilsulfonil)carbamoil)-13-ciclohexil-3-metoxi-7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6-carboxilato de metilo. Num balão de fundo redondo de 100 ml (RBF) adicionou-se ácido carboxilico (575 mg, 1,291 mmol) e 1,1'-carbonildiimidazol (460 mg, 2,84 mmol) em THF (15 ml) para dar uma solução amarela. A mistura foi agitada a temperatura ambiente sob azoto durante 1 hora e em seguida foi aquecida a 70 °C num banho de óleo durante 90 minutos. A mistura foi arrefecida e adicionou-se sec-butil sulfonamida (921 mg, 6,71 mmol) em 4 ml de THF juntamente com DBU concentrado (0,389 ml, 2,58 mmol). O RBF foi retornado ao banho de óleo e aquecido durante a noite a 70 °C. A mistura de reacção foi transferida a um funil separador, foi diluída com 100 ml de DCM, lavada x3 com 100 ml de HC1 0,5 M, em seguida com 100 ml de H2O, e finalmente NaCl saturado. A mistura orgânica foi seca em MgS04, filtrada e concentrada para dar 713 mgs da acilsulfonamida 2 desejada como um sólido amarelo (96 % de rendimento) a qual foi colocada a vácuo durante a noite. Dados de LC foram registados num cromatógrafo líquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna 10 μ, C18, 4,6x30 mm, utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 5 ml/min, um gradiente de 100 % de 73 solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 2 minutos, um tempo de retenção de 1 minuto e um tempo de análise de 3 minutos, em que o solvente A foi 10 % de MeOH/90 % de H20/ 0,1 % de ácido trifluoroacético e o solvente B foi 10 % de H2O/90 % de MeOH/0,1 % de ácido trif luoroacético. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray. 1H RMN (500 MHz, CD30D): δ ppm 0, 84 - 0,9 2 (m, 3 H) , 1, 03 (t, J = 7 , 32 Hz, , 3 H) , 1, 23 (m, 1 H) , 1, 28- 1, 44 (m, 7H) , 1, 58 (m, 1 H) , 1, 72 (m, 2 H) , 1, 85 (m, 1 H) , 1,95 - 2, 07 ( m, 3 H ) , 2,: 17 (m, 1 H) , 2, 78 (m, 1 H) , 3, 69 (m, 2 H) , 3,83 - 3 ,91 (m , 3 H) , 7, , 02 (s, 1 H) , 7, 11 (m, 1 H) , 7, 47 (d, J = 7, 63 Hz, 1 H) , 7, 74 (m, 3 H) , 8, 25 (s, 1 H) . LC/MS: m/ z 56. 5, 22 t Rf 2, 192 min., 97 ',5 o o de pureza.

5-((sec-Butilsulfonil)carbamoil)-8-ciclohexil-ll-metoxi-1,12b-dihidro ciclopropa[d]indolo[2,1-a] [2]benzazepina-la(2H) -carboxilato de metilo. A 63,1 mgs de 95 % de NaH em 5 ml de DMF seca num RBF de 100 ml adicionaram-se 629 mgs de iodeto de triraetilsulfoxónio a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente sob azoto durante 30 minutos. Adicionou-se uma solução do intermediário 9 (em 7 ml de DMF) por meio de uma seringa e a reacção foi agitada durante 15-20 minutos. A mistura de reacção foi extinta a 0 °C com um banho de gelo, foi adicionada 1 ml de HC1 1M seguidos por 60 ml de água gelada. A mistura heterogénea foi agitada durante 30 minutos. A mistura foi filtrada e o sólido amarelo foi lavado com água gelada. O sólido foi colhido em 2 % de 74 metanol/DCM e purificado utilizando uma Biotage Horizon MPLC utilizando uma coluna 40+M com um gradiente de solvente de 2 % de metanol/DCM a 10 % de metanol/DCM. Foram obtidos 450 mgs (62 % de rendimento) do composto como um sólido amarelo depois da evaporação do solvente. Os dados de LC foram registados num cromatógrafo liquido Shimadzu LC- 10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna 10 μ, C18, 4,6x30 mm, utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 5 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 2 minutos, um tempo de retenção de 1 minuto, e um tempo de análise de 3 minutos, em que o solvente A foi 10 % de MeOH/90 % de H20/ 0,1 % de ácido trifluoroacético e solvente B foi 10 % de H2O/90 % de MeOH/0,1 % de ácido trifluoroacético. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de ele ctr ospray . 1H RMN (30 0 MHz, CD30D): δ ppm 0, 19 (m, o, 35 H) , 1, 03- 1, 14 (m, 3 H) , 1,19- 1,3 14 (m, 2 , 65 H) , 1, 43 (m, 5 H) , 1, 55- 1, 6 6 (m, 2 H) , 1,74 (m r 2 H), 1, 89- 1, 94 (m, 2 H) , 1, 99- 2, 14 (m, 3 H) , 2,64- 2, 95 (m, 2 H) ', 3 , 35 • (d , J = 15, 00 Hz, 0, 65 H) , 3, 48 (m, 2 H ) , 3 ,67- 3 ,81 (m, 2 H) , 3, 85 (s, 3 H) , 3 ,90 - 3, 98 (m , 0,35 H) r 5, 17 (m, 0, 35 H) , 5, 36 (m, 0, 65 H) , 6 ,91- 6 ,98 (m, 1 H) r 7, 09 (m, o, 35 H) , 7, 16 (m, 0, 65 H) , 7, 19- 7, 27 (m, 1 H ) , 7 ,52- 7 , 65 (m, 1 H) , 7, 83 (m, 1 H) , 8 ,09 (s, 0 i, 35 H) , 8, , 29 (s, 0, 65 H) . LC/MS : m ./z 579 ,31 , Rf 2 ,16 7 min, 95 , 2 % de pureza.

75 8-Ciclohexil-5-((ciclohexilsulfonil)carbamoil)-11-metoxi-1,12b-dihidrociclopropa[d] indolo [2,1- a][2]benzazepina-la(2H) -carboxilato de metilo. 1H RMN (300 MHz, CD30D) : δ ppm 0,23 (m, 0,35 H), 1,14- 1,53 (m, 10 H) , 1,60 - 1, 79 (m, 3 H) , 1,91 (m, 3 H) , 2, . 09 (m, 1, 65 H) , 2 , 18 (m, 3 H) , 2, 81- 2,98 (m, 3 H) , 3,41 - 3 , 46 (m , o, 65 H) , 3 , 50 (m, 2 H) , 3 , 71- - 3,79 (m, 2 H) , 3, 88 (s, 3 H) , 3, 99- 4 ,04 (m, 0, 35 H) , 5, 25 (m, 0,35 H) , 5, 45 (m , o ,65 H) , 6, , 97- 7 , 02 (m, 1 H) , 7 ,13 (m, 0 ,35 H), 7 ,21 (m, 0, 65 H) , 7, 26- 7 , 32 (m, 1 H) , 7 , 55- - 7,65 (m, 1 H) , 7, 85- 7, 92 (m, 1 H) , 8 , 11 (s, 0, 35 H) , 8, 32 (s, 0,65 H) . LC/MS: m/: z 605,42, Rf 2, 223 min. f 99 , 2 % de pureza.

8-Ciclohexil-5-((ciclopentilsulfonil)carbamoil)-11-metoxi-1,12b-dihidrociclo propa [d]indolo[2,1- a][2]benzazepina-la(2H) -carboxilato de metilo. 1H RMN (300 MHz, CD30D): δ ppm 0, 23 (m, 0,35 Η), 1 ,27 (m , 2 ,65 H) , 1, 39 (m, 2 H) , 1,60- - 1, 79 (m, 7 H) , 1,91- 2,19 (m, 8 H) , 2,67- 2,97 (m, 2 H) , 3,47 ( [m, 0,65 H) , 3,50 (m, , 3 H) , , 3 ,78- 3, 87 (m, 3 H) , 4,10 (m, 0 ,35 H) , 4, 29 (m, 1 H) , 5, 22 (m, 0, 35 H) , 5 ,43 (m, 0 ,65 H) , 6,98- - 7, 02 (m, 1 H) , 7, 14 (m, 0, 35 H) , 7 ,21 (m, 0, 65 H) , 7,26- 7,32 (m, 1 H) , 7 , 55 - 7 , 65 (m, 1 H) , 7 , 85- 7,91 (m, 1 H) , 8 ,10 (s, 0, 35 H) , 8, 32 (s, 0, 65 H) . LC/MS : m/ z 591, 33 , Rf 2, 200 min. , 100 o 0 de ] pureza. 76

8-Ciclohexil-ll-metoxi-5-(((3,3,3-trifluoropropil)sulfonil)carbamoil)-1,12b-dihidrociclopropa[d]indolo[2,1 — a] [2]benzazepina-la(2H)-carboxilato de metilo. 1H RMN (300 MHZ, CD30D): δ ppm 0,19 (Itl 7 0 , 35 H) , i , 25 (m , 1 ,65 H) , 1,41 (m, 2 H) r 1,65 (m 7 1H) , 1, 76 (m, 2 H) , 1, 94 (m, 2 H) , 2,04 l ;m , 1 H) , 2 ,61- 2, 84 (m, 6 H) , 2, 88- • 2, 96 (m, 1 H) , 3, 35- 3,40 (m , o, 65 H) , 3, 48 (m, 2 H) , 3, 80 (m, 2 H) , 3, 86 (m, 3 H) , 3 ,89 - 3, 98 (m, 0, 35 H) , 5, 18 (m, 0 , 35 H) , 5 ,38 (m, 0,65 H) r 6, 96- 7, 01 (m, 1 H) , 7, 13 (m, 0 , 35 H) , 7 ,20 (m, 0,65 H) r 7, 24- 7, 30 (m, 1 H) , 7, 58- 7, 69 (m, 1 H) , 7, 84- 7, 9 0 (m, 1 H) , 8, 13 (s, 0, 35 H) , 8, 34 (s, 0, 65 H) . . LC/MS: m/z 619,32 t Rf 2, 188 min • r 99 ,5 % de pureza. 8-Ciclohexi1-1l-metoxi-5- (((2,2,2- trifluoroetil)sulfonil)carbamoil)-1,12b-dihidro ciclopropa[d]indolo [ 2,1-a] [2]benzazepina-la(2H) - carboxilato de metilo. 1H RMN (300 MHz, CD30D): δ ppm 0,13 (m, o, . 35 H) , 1, 18 (m, 1, 65 H) , 1, 38 (m, 2 H) , 1, r 57- 1, 62 (m, 2 H) , 1, 73 (m, 2 H) , 1, 87 (m, 2 H) , 1, 96- 2, 05 (m, 1 H) , 2, .60- 2, 90 (m, 1, 35 H) , 3, 17- 3, 22 (m, 0, 65 H) , 3, 45 (m, 2 H) , 3, 74 (m, 1 H) , 3, 84 (m, 2 H) , 4, 04- 4, 10 (m, 3 H) , 4, . 38- 4, 53 (m, 2 H) , 5, 06 (m, 0, , 35 H) , 5, 18 (m, 0, 65

77 Η), 6,90- 6,96 (m, 1 Η), 7,06 (m, 0,35 Η), 7,13 (m, 0,65 Η), 7,16- 7,22 (m, 1 Η), 7,63 (m, 0,65 Η), 7, 70- 7, 80 (m, 1,35 Η), 8,14 (s, 0,35 Η), 8,33 (s, 0,65 Η). LC/MS: m/z 605,29, Rf 2,178 min., 96,5 % de pureza.

8 -Ciclohex il-5- -((isobutilsulfonil) carbamoil -)- 11- metoxi -1,12b -di' hidr< ociclopropa[d]indolo [2,1- a] [2 ]benzazepina-la (2H) -carboxilato de met i lo. 1H RMN (3 00 MHz, CD30D): δ ppm 0,17 (m, 0,35 H), 1,09 (m, 6 H) , 1, 22 (m, 1, 65 H) , 1, 38 (m, 2 Η), 1,49- 1,60 (m, 1 H) , 1 , 73 (m, 2 H) , 1, 87 (m, 2 H) , 1,96- 2,05 (m, 2 H ), 2, 15- 2, , 39 (m, 1 H) , 2, 61- 2, 87 (m, 2 H) , 2,96 (d, J = 6,22 HZ, 2 H) , 3, 19 (m, 2 H) , 3 , 43 (m, 2 H), 3,70 (m, 2 H) , 3, 84 i [m, 2 H ) , 5, 06 - 5,11 ( m, 1 H) , 6,90- 6,95 (m, 1 ] H), 7 , 05- 7 ,11 (m, 1 H) , 7, 16- 7, 23 (m, 1 H) , 7, 67-782 (m, 2 H)( 8, 20 (s, 0, 35 H) , 8, 39 (s, , 0 , 65 H) . LC/MS: m/z 579 ,30, Rf 2,: 190 min • r 96,2 % de pureza.

Procedimento geral para a transformação de ésteres da fórmula I em amidas correspondentes. Num balão de fundo redondo de 100 ml foram adicionados hidróxido de sódio 1 N (3 equiv., 1,583 ml, 1,583 mmol) e éster com ponte 1 (1 equiv., 0,528 mmol) em metanol (4,00 ml) e THF (4,00 ml) para dar uma solução amarela. A mistura foi agitada durante 3 horas a temperatura ambiente. Depois foram adicionados 3 equivalentes de HC1 IN, o produto foi diluído com acetato de etilo e em seguida foi extraído, lavado com salmoura e seco em MgSCq. A filtração e evaporação subsequente dos materiais voláteis deram os ácidos carboxílicos 2 num rendimento quase quantitativo. A uma solução de 0,10 mmol de ácido carboxílico 2 em 1 ml de N,N-dimetilformamida (DMF) anidra num frasco de 2 bocas equipado com uma tampa 78 de rosca recoberta com Teflon™ foram adicionados 0,3 mmol (3 eq. ) de tetrafluoroborato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,1, 3,3- tetrametilurónio (TBTU) em 1,0 ml de DMF anidra seguido pela adição de 0,2 mmol (2 eq.) da amina 3 em 1,0 ml de DMF anidra e 0,4 mmol de N, N-diisopropilet ilamina concentrada. A reacção foi agitada num misturador VWR Vortex- Genie 2 durante a noite a temperatura ambiente. Os volumes de reacção foram reduzidos depois num Savant Speedvac e os produtos brutos foram colhidos em 1,2 ml de metanol e foram purificados utilizando uma HPLC preparativa Shimadzu utilizando metanol/água e tampão de 0,1 % de ácido trifluoroacético com uma coluna Phenomenex Luna, C18, 30 mm x 100 mm, coluna de 10 μπι a um gradiente de 40-100 % B e uma velocidade de fluxo de 40 ml/min durante 10 minutos com uma retenção de 5-10 minutos, para dar as carboxamidas 4 como sólidos amorfos amarelos (65 %-70 % de rendimento). Os dados de LC/MS depois da purificação foram obtidos numa Shimadzu analytical LC/Micromass Platform LC (ESI+) a 220 nm utilizando o seguinte conjunto de condições: coluna I (Phenomenex 10 um C18, 4,6 x 30 mm), sistema de solvente I (gradiente de 0-100 % de B em que B = 90 % de metanol grau HPLC/ 0,1 % de ácido trif luoroacético/10 % de água grau HPLC) , em 2 minutos com uma retenção de 1 minuto a uma velocidade de fluxo de 5 ml/minuto.

8-Ciclohexil-l1-metoxi-la- ((3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-N-((2,2,2-trifluoroetil)sulfonil)-1,la,2,12b- tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1 — a] [2]benzazepin-5- 79 carboxamida. 1H RMN (300 MHz, CD30D): δ ppm 0,16 (m , o ,20 H) , 1,22 - 1,37 (m, 2,80 H), 1, 45 (m, 3 H) , 1,62 (m, 1 H) r 1, 78 (m, 3 H) , 1 ,92 - 2 ,21 (m, 5 H) , 2,52- 2,69 (m, 1 H) r 2, 81 (m, 3 H) , 2, 94 (m, 2 h; l , 3,16 (m, 1 H) , 3,39 (m, 2 H) r 3,51 - 3, 65 (m, 2 H) , 3, 85- 3,92 (m, 3 H) , 4, 15- 4,37 (m r 1 H) , 4,66 (m, 3 H) , 5 ,10 (m, 1 H), 6,97 - 7, 05 (m, 1 H) , 7 ,15 (d, J = 1, 83 Hz, 0, 20 H) , 7, 19 (d, J = 1,83 Hz , o, 80 H) r 7,30 (d, J = 8, 42 Hz , 1 H) , 7,53- 7,62 (m, 1 H) , 7, 89 (d r j = 8, 42 Hz, 1 H) r 7,99- 8,08 (m, 1 H) . LC/MS: m/ z 6 9 9, 35, Rf 1,810 min., 98,0 % de pureza. ((3-metil-3,8-( (3,3,3- [2]benzazepin-5- -N- 8-Ciclohexil-l1-metoxi-la-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil) trifluoropropil)sulfonil)-1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a] carboxamida. 1H RMN (300 MHz, CD30D): δ ppm 0 , 14 (m , 0,20 H) r 1, 19 - 1,33 (m, : 2,80 H) , 1,42 (m, 3 H) , 1, 60 (m, 1 H) r 1, 76 (m, 3 H) , 2, 00 (m, 5 H) , 2, 54 (m, 1 H) , 2, .65 (m, 1 H) r 2, 72 - 2, 86 (m, 5 H) , 2,87 - 3,01 (m, 2 H) , 3, .30 )- 3 , 44 (m, 2 H) r 3,49 - 3,63 (m, 2 H) , 3 ,78- 3,89 (m. , 5 H) , 4 ,17 - 4,29 (m r 1 H) , 4,64 (m, 1 H) , 5 ,07 (m, 1 H) , 6, 96 - 7, , 03 (m, 1 H) r 7, 13 (d, J = 2, 56 Hz r 0,20 H) , 7 , 17 (d r J = 2, 56 Hz r o, 80 H) , 7,28 (d, J = 8,42 Hz, 1 H), 7, 54 (d J = 8, 42 Hz r 0, 80 H) , 7,59 (d, J = 8, 42 Hz, 0,20 H) , 7, 83 - 7, ,90 (m, 1 H), 7,97 (s, 0,80 H), 8,07 (s, 0,20 H), LC/MS: m/z 713,36,

Rf 1,822 min., 98,7 % de pureza.

80

Ν- (sec-Butilsulfonil)-8-ciclohexil-l1-metoxi-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-1, la, 2, 12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5- carboxamida. 1H RMN (300 MHz, CD30D): δ ppm 0 ,17 (m , 0,20 -P 00 0 1 1 = 7, 50 Hz , 3 H), 1,19- 1,34 (m, 1, 80 H) , 1,38- 1,53 (m, 6 H) , 1,70 (m, 5 H), 2,08 (m, 5 H), 2, 40 (m, 1 H), 2,67 (m, 1 H) , 2,82 (m, 3 H), 2,94 (m, 3 H) , 3, 27 (m, 1 H) r 3,32 - 3,46 (m, 2 H), 3,49- - 3 ,65 (m, , 2 H) , 3, 74 (m, 1 H) , 3, 84- 3,92 (m, 3 H ), 4,21 (m , 1 H) , 4 ,65 (m, 1 H) , 5, 10 (m, 1 H) , 6,97- 7, 05 (m, 1 H), 7, 14- 7, 20 (m, 1 H) , 7, 30 (m, 1 H) , 7,55 (m, 1 H), 7,87- 7, 92 (m, 1 H) , 7, 97- 8, 05 (m, 1 H) . LC/MS: m/ z 673,32, Rf 1, 820 min., 98 !,2 O, o de pureza.

Isómero A e isómero B foram obtidos a partir da separação quiral por SFC de (laR, 12bS) -N- (sec- butilsulfonil)-8-ciclohexil-ll-metoxi-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-1, la, 2, 12 b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxamida a qual foi preparada a partir do éster etílico quiral. Condições de separação SFC: coluna: ChiralPak AD-H, 30 x 250 mm, 5 pm; fase móvel: 25 % de álcool isopropílico/75 % de C02; pressão: 100 bares; temperatura: 35 °C; velocidade de fluxo: 70 ml/min; UV: 260 nm; injecção: 2 ml (~5 mg/ml em 9:1 de IPA:ACN); colecção: isómero A (pico 1) 35,0-41,5 min; isómero B (pico 2) 43,5- 52,5 min., isómero A. HPLC analítica foi levada a cabo utilizando o instrumento Shimadzu-VP com detecção UV a 254 nm e 256 nm. Método de HPLC analítico: solvente A = 5 % de MeCN-95 % de H20- 0,1 % de TFA, solvente B = 95 % de MeCN-5 81 % de H20- 0,1 % de TFA, % % de início de B = 10, % de B final = 100, tempo de gradiente = 10 min, velocidade de fluxo = 1 ml/min, coluna: Waters Sunfire C- 18, 4,6x150 mm, 3,5 uM, Rt = 7,86 min. A LC/MS foram levadas a cabo utilizando o instrumento Shimadzu-VP com detecção UV a 220 nm e Waters Micromass. Método de HPLC: Solvente A = 10 % de MeOH-90 % de H20- 0,1 % de TFA, solvente B = 90 % de MeOH-10 % de H20- 0,1 % de TFA, % inicial de B = 0, % final de B = 100, tempo de gradiente = 2 min, velocidade de fluxo = 5 ml/min, coluna: Xterra MS C18 S73,0 x 50 mm; (ES + ) m/z (M+H) + = 673,56, HPLC Rt = 1,637 min. Método de HPLC: solvente A = 5 % de MeCN-95 % de H2O-10 mM de NH4OAc, solvente B = 95 % de MeCN-5 % de H2O-10 mM de NH4OAc, % inicial de B = 0, % final de B = 100, tempo de gradiente = 2 minutos, velocidade de fluxo = 5 ml/min, coluna: Phenomenex Lina C18 5 um 3,0x50mm; (ES + ) m/z (M+H)+ = 673,54, HPLC Rt = 1,255 min. Rotação óptica: - 74,75°, (3,21 mg/ml de MeOH, 589 nm, célula de 50 mm).

Isómero B. HPLC analíticas foram levadas a cabo utilizando o instrumento Shimadzu-VP com detecção UV a 254 nm e 256 nm. Método de HPLC analítico: solvente A = 5 % de MeCN 95 % de H20, 0,1 % de TFA; solvente B = 95 % de MeCN, 5 % de H20, 0,1 % de TFA, % inicial de B = 10, % final de B = 100, tempo de gradiente = 10 min, velocidade de fluxo = 1 ml/min, coluna: Waters Sunfire C-18, 4,6x150 mm, 3,5 uM, Rt = 8,35 min. As LC/MS foram levadas a cabo utilizando o instrumento Shimadzu-VP com detecção UV a 220 nm e Waters Micromass. Método de HPLC: Solvente A = 10 % de MeOH, 90 % de H20, 0,1 % de TFA, solvente B = 90 % de MeOH, 10 % de H20, 01 % de TFA, % de início B = 0, % final de B = 100, tempo de gradiente = 2 min, velocidade de fluxo = 5 ml/min, coluna: Xterra MS C18 S73,0 x 50 mm; (ES + ) m/z (M+H)+ = 673,53, HPLC Rt = 1,650 min. Método HPLC: solvente A = 5 % de MeCN, 95 % de H20, 10 mM de NH40Ac, solvente B = 95 % de MeCN, 5 % de H20, 10 mM de NH40Ac, % inicial de B = 0, % 82 final de B = 100, tempo de gradiente = 2 min, velocidade de fluxo = 5 ml/mn, coluna: Phenomenex Lina C18 5 um 3,0 x 50 mm; (ES+) m/z (M+H) + = 673,54, HPLC Rt = 1,263 min. Rotação óptica: 75,36°, (3,29 mg/ml MeOH, 589 mm, célula de 5 0 mm) .

Exemplo de referência

13-Ciclohexil-3-metoxi-6-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)7H-indolo[2,1- a] [2]benzazepin-10-carboxilato de terc-butilo. HATU /680 mg, 1,8 mmol) foi adicionada a uma solução de ácido 10-(terc-butoxicarbonil)-13-ciclohexil-3-metoxi-7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6-carboxílico (670 mg, 1,37 mmol) e 3-metil- 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano sal di HC1 (560 mg, 2,81 mmol) em DMF (6 ml) e TE A (1,2 ml, 8,2 mmol) e a reacção foi agitada durante 30 minutos (completa por meio de LCMS) . A mistura de reacção foi diluida com água (-35 ml) (formou-se precipitado) e agitada. 0 precipitado foi colhido por filtração, foi enxaguado com água e seco sob alto vácuo a 55 °C para produzir 13-ciclohexil-3-metoxi-6-((-metil-3,8- diazabiciclo [3.2.1] oct-8-il) carbonil) -7H-indolo [2,1- a] [2]benzazepin-10-carboxilato de terc-butilo (775 mg, 1,30 mmol, 95 % de rendimento) como um sólido amarelo claro. O material foi utilizado sem purificação adiciona 1. XH RMN (30i 0 MHz, CDC13 ) δ ppm 1 ,14- 3,95 (m, 24H), 1, 59 (s, 9H) , 3 ,86 (s , 3 H) , 4 ,21- 5 , 26 (m, 2 H) , 6,82 (s, 1H), 6,88 (d, J = 2, 6 Hz, 1 H) , 7, 01 (dd , J = 8,8, 2,6 Hz, 1 H), 7,47 (d, J = 8, ,8 Hz, 1H) , 7, 66 (dd , J = 8,4, 1,1 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8 ,4 Hz, 1 H) , 8, 02 ( :s 1, 1H) . Tempo de : retenção de LC-MS: 3,72 min ; m/ z 596 (MH+) Os dados de LC foram registados num cromatógrafo liquido 83

Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna 10 μ C183,0x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 5 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min, e um tempo de análise de 5 minutos em que o solvente A foi 10 % de MeOH/90 % de H2O/ 0,1 % de ácido trifluoroacético e solvente B foi 10 % de H2O/90 % de MeOH/0,1 % de ácido trif luoroacético. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray.

Exemplo de referência

Trifluoroacetato de ácido 13-ciclohexil-3-metoxi-6-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-7H-indolo [2,1-a] [2]benzozepin-10-carboxilico. 13-Ciclohexil- 3- metoxi-6-((3-meti1-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-)-7íí-indolo [2,1-a] [2] benzazepin-10- il) carbonil) -7íí-indolo carboxilato de terc-butilo (300 mg, 0,504 mmol) foi dissolvido em DCE (5 ml) e em seguida TFA (700 μΐ, 9,09 mmol) foram adicionados (a reacção tornou-se verde) e a reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 1 h (~ 70 % de conversão por LCMS). Adicionou-se mais TFA (700 μΐ, 9,09 mmol) e a reacção foi agitada 1 hora (completa por LCMS). A mistura de reacção foi concentrada num evaporador giratório, foi diluída com éter dietílico e foi concentrada de novo duas vezes para produzir trifluoroacetato de ácido 13-ciclohexil-3- metoxi-6-((3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)- 7H-indolo[2,1-a] [2]benzazepin-10-carboxílico (362 mg, 0,55 mmol, quant.) 84 como um sólido amarelo escuro. Utilizado sem purificação adicional. 1H RMN (3 00 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,06- 2,13 (m, 21H), 2,68- 2, 86 (m, 1H), 3,36- 3,50 (m, 2H) , 3,90 (s, 3H) , 4,11- 5,35 (m, 2 H), 7,14 (s, 1H), 7,18- 7,28 (m, 2H), 7,53 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 8,4, 1,1 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,21 (s 1, 1H), 9,55 (s 1, 1H). Tempo de retenção LC-MS: 3,72 min; m/z 596 (MH+) . Tempo de retenção LC-MS: 2,50 min; 538 m/z (MH-) . Os dados de LC foram registados num cromatógrafo liquido e Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna 10 μ C184,6x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 5 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 minutos, um tempo de retenção de 1 min, e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 5 % de acetonitrilo/95 % de H2O/10 mM de acetato de amónio e o solvente B foi 5 % de H20/95 % de acetonitrilo/10 mM de acetato de amónio. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma de Micromass para LC em modo de electrospray.

Exemplo de referência

8-Ciclohexil-ll-metoxi-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-1,1a,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a] [2]benzazepin-5- carboxilato de terc-butilo. Iodeto de trimetilsulfoxónio (375 mg, 1,69 mmol) foi adicionado em três porções a uma suspensão em agitação de uma dispersão de NaH a 60 % (68 mg, 1,7 mmol) em DMSO (1,5 ml) (ocorreu formação de 85 espuma) . A mistura de reacção foi agitada 20 minutos e em seguida uma solução de 13-ciclohexil-3-metoxi-6-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct- 8-il)carbonil)-7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-10-carboxilato de terc-butilo (438 mg, 0,735 mmol) em DMSO (2,5 ml) foi adicionada e a reacção foi agitada durante 1 hora (sem produto desejado por LCMS). A mistura de reacção foi aquecida a 90 °C durante 3 horas (completa por meio de LCMS), foi arrefecida à temperatura ambiente, foi extinta com HC1 aquosa 0,25 M (20 ml), e foi extraída com EtOAc (2x 20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 ml), secas (MgS04) , filtradas e concentradas para produzir 72009-057 como um óleo alaranjado. O óleo foi utilizado sem purificação adicional como material de partida na preparação de trifluoroacetato de ácido 8-ciclohexil-ll-metoxi-la-((3-metil- 3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8- il)carbonil)-1,la,2,12b- tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1— a][2]benzazepin-5- carboxílico. 0 composto foi isolado como uma mistura de enantiómeros. Tempo de retenção LC-MS: 3,68 min; m/z 610 (MH+) . Os dados de LC foram registados num cromatógrafo líquido Shumadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna 10 μ C183,0x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 5 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 minuto e um tempo de análise de 5 minutos em que o solvente A foi 10 % de MeOH/90 % de H20/ 0,1 % de ácido trifluoroacético e o solvente B foi 10 % de H2O/90 % de MeOH/0,1 % de ácido trif luoroacético. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray.

Exemplo de referência 86

Trifluoroacetato de ácido 8-ciclohexil-ll-metoxi-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo [2,1-a] [2]benzazepin- 5-carboxílico. Material de partida (448 mg, 0, 735 mmol) foi dissolvido em DCE (6 ml) e em seguida foi adicionada TFA (1,5 ml, 19 mmol (a reacção tornou-se vermelho escuro) e a reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas (completa por LCMS). A reacção foi concentrada num evaporador giratório, foi diluída duas vezes com éter dietílico e concentrada de novo até um óleo alaranjado. 0 resíduo foi suspenso com éter dietílico e os sólidos (360 mg de sólido amarelo) foram colhidos por filtração e enxaguados com hexanos. Os sólidos de adição (52 mg de um sólido amarelo) foram colhidos do filtrado e enxaguados com hexanos. Os sólidos combinados mostraram ser trifluoroacetato de ácido 8- ciclohexil-11-metoxi-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1] oct- 8-il)carbonil)- 1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1— a] [2]benzazepin-5-carboxílico (412 mg, 0,62 mmol, 84 %). 0 composto foi isolado como uma mistura de enantiómeros e apresenta-se como uma mistura 1:5 de rotámeros ou isómeros átropos. Para isómero principal: 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ ppm 0,81- ] .,01 (m, 2H) , 1, 13- 2,65 (m, 18H) , 2,62 (s, 3H) , 2,69 - 3,70 (m, 2H), 3,60 (d, J = 15, 4 Hz, 1H) , 3, 87 (s, 3H) , 4,36- 5,30 (m, 3H), 6,95 (dd, J = 8,8, 2,2 Hz, 1H) , 7, 09 (d, j = 2, 2 Hz, 1H), 7,2 8 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7, 75 (d, J = 8, 4 Hz, . 1H), 7,86 (d, . J = 8, 4 Hz, 1H) , 8, 08 (s, 1H) . Tempo de retenção LC- -MS : 3,24 min; 554 m/ z (MH+) . Os dados de LC foram registados num cromatógrafo líquido 87

Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu C183,0x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 5 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 10 % de MeOH/90 % de H20/ 0,1 % de ácido trifluoroacético e o solvente B foi 10 % de H2O/90 % de MeOH/0,1 % de ácido trif luoroacético. Os dados de MS foram determinados mostrando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray.

8-Ciclohexil-l1-metoxi-la- ((3-metil-3,8- diazabiciclo [3.2.1]oct-8-il)carbonil)-N- (propilsulfonil)- 1,1a,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2, 1-a] [2]benzazepin- 5-carboxamida. CDI (21,3 mg, 0,131 mmol) foi adicionada a uma solução em agitação de trifluoroacetato de ácido 8-ciclohexil-ll-metoxi-la-((3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct- 8-il)carbonil)-1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1- a] [2]benzazepin-5-carboxílico (56 mg, 0,10 mmol)) em THF (0,5 ml) e a mistura de reacção foi aquecida a 60 °C durante 1,5 horas. A reacção foi arrefecida à temperatura ambiente e adicionou-se propan-l-sulfonamida (16 mg, 0,13 mmol) e em seguida DBU (0,025 ml, 0,15 mmol, como uma solução ao 205 em THF). A reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 1 hora e adicionou-se mais DBU (- 0, 025 ml) . A reacção foi agitada durante 2 horas a temperatura ambiente, aquecida a 60 °C durante 1 hora, e agitada a temperatura ambiente. 88

Adicionaram-se mais DBU (0,025 ml) e propan-l-sulfonamida (16,20 mg, 0,131 mmol) à mistura de reacção e continuou-se a agitar a temperatura ambiente durante 3 dias. A reacção foi diluida com EtOAc (2 ml) e lavada com HC1 1M (2 ml) . A camada orgânica foi concentrada até a secura com uma corrente de azoto, dissolvida em MeOH (1,5 ml), filtrada e purificada por meio de HPLC preparativa (CH3CN/H20 com 10 mM de NH40AC) para produzir 8-ciclohexil-ll-metoxi-la-((3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-N-

(propilsulfonil)-1,la,2,12b-tetrahidroclopropa[d] indolo[2,1-a][2]benzazepin-5- carboxamida (9,0 mg, 0,014 mmol, 14 % de rendimento) como um sólido amarelo. O composto foi isolado como uma mistura de enantiómeros e apresenta-se como uma mistura de 1:2 rotámeros ou isómeros átropos. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm - 0,37- - 0, 20 (m, 0,33 H), 0,24- 0,29 (m, 0,33H), 0, 89- 3,03 (m, 31,33H), 3,54- 3,64 (m, 2H), 3,89 (s, 2H), 3,90 (s, 1H), 4,04- 4,67 (m, 1H) , 4, 74 (d, j = : 14, 7 Hz, 0 , 33H) r 5 ,19 (d, , J = 15 ,0 Hz, 0, 67H: ), 6,93 (dd, J = 8,6, 2, 4 Hz, 0, 33H) , 6 , 96 (dd, J = 8 , 6, 2, 4 Hz, 0,67H), 7, 00 (d, J = 2, , 4 Hz, 0, 33H) , 7, 12 (d, J = 2 , 4 Hz , 0,6 7H), 7, r 29 (d, J = 8 , 6 Hz, 0, 67H) , 7, 30 (d, J = 8 , 6 Hz , 0,33H), 7, r 55 (d, J = 8 ,2 Hz, 0, 33H) , 7, 64 (d 1, J = = 8,2 Hz, 0,67 H ), 7,87 (d, j = 8,2 H z, 0 ,6 7H), OO 8 (d, J = 8,2 Hz, 0 ,33H), 7,98 (s , 1H) . Tempo de retenção LC-MS: 3,13 min; 659 m/z (MH+) . Os dados de LC foram registados num cromatógrafo liquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu C183,0x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 5 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 10 % de MeOH/90 % de H2O/0,l % de ácido trif luoroacético e o solvente B foi 10 % de 89 Η2Ο/90 % de MeOH/0,1 % de ácido trifluoroacético. Os dados de MS foram determinados mostrando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray.

Exemplo de referência

Ácido 13-ciclohexil-10-(metoxicarbonil) -7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6-carboxílico. Hidróxido de tetrabut ilamónio (9,1 ml, solução a 40 % em água) foi adicionada gota a gota a uma solução arrefecida (0 °C, banho de gelo) que continha 13-ciclohexil-7H-indolo[2,1-a][2]benzazepin-6,10-dicarboxilato de dimetilo e THF (463 ml) . A solução foi mantida com arrefecimento contínuo durante 5 min e depois foi concentrada até um volume de aproximadamente 50 ml. A solução resultante foi diluída com acetato de etilo (250 ml), foi lavada com HC1 aquoso (0,5 N, 3 x 150 ml), foi lavada com salmoura (150 ml), seca (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada para dar um sólido amarelo. LCMS: tempo de retenção: 1,698 min. Os dados de LC foram registados num cromatógrafo líquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu C18,4 6x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 4 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 5 % de CH3CN/95 % de H2O/10 mM de acetato de amónio e o solvente B foi 5 % de H2O/95 % de CH3CN/10 mM de acetato de amónio. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass 90 para LC em modo de electrospray: m/ z 416 (MH + ) . ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO- D6) Ô ppm: 12,97 (s, 1 H) , 8,17 (m, 1 H) , 7, 91 (m, 2 H), 7,63 (m, 5 h; ) , 5,56 (s, 1 H ), 4,51 (m, 1 H) , 3, 89 (m, 3 H) , 2, 80 (m, i h; 1, 1,99 (m, 6 H ), 1,30 (m, 4 H) .

Exemplo de referência

13-Ciclohexil-6-((3-metil-3,8- diazabiciclo [3.2.1]oct-8-il)carbonil)-7H-indolo [2,1- a][2]benzazepin-10-carboxilato de metilo. TBTU (115 mg, 0,361 mmol) foi adicionada a temperatura ambiente, numa porção, a uma solução que continha ácido 13-ciclohexil-10- (metoxi carbonil) -7H-indolo[2,1-a] [2]benzazepin-6-carboxílico (100 mg, 0,241 mmol), DIEA (0,17 ml, 0,964 mmol), dicloridrato de 3-metil- 3,8-diaza-biciclo[3.2.1]octano (115 mg, 0,289 mmol) e DMF (2,4 ml). A solução foi mantida durante 18 horas e foi concentrada. O resíduo resultante foi carregado com diclorometano (30 ml), lavado com água (4 x 15 ml), foi lavado com salmoura (15 ml), seco (sulfato de magnésio), filtrado e concentrado para dar um sólido amarelo que foi utilizado sem purificação adicional na seguinte etapa. LCMS: tempo de retenção: 2,272 minutos. Os dados de LC foram registados num cromatógrafo líquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu C18,4 6x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 4 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 5 % de CH3CN/95 % de 91 Η2Ο/ΙΟ mM de acetato de amónio e o solvente B foi 5 % de H2O/95 % de CH3CN/10 mM de acetato de amónio. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray: m/z 524 (MH*) . XH RMN Bruto (300 MHz, CDCI3) δ ppm: 8,19 (s, 1 H), 7,92 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,77 (dd, J = 8, 78 Hz, , J- 1,46 Hz, 1H), 7,61 (m, 1 H) , 7, 49 (m, 3 H), 6,96 (s, 1 H), 5,2 (s, 1 H) , 4, 41 (s, 1 H) , 2,81 (m, 4 H), 2,51 (s, 1H ), 1,95 (m, 15 H) , 1,29 (m, 11 H), 0,76 (m, 2 H). Exemplo de referência

8-ciclohexil-la-((3-metil-3,8- diazabiciclo [3.2.1]oct-8-ll)carbonil)-1,la,2,12b- tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxilato de metilo. Hidreto de sódio (dispersão a 60 %, 573 mg, 14,3 mmol) foi adicionado a temperatura ambiente a uma suspensão agitada que continha iodeto de trimetilsulfoxónio (3,15 g, 14,3 mmol) em DMSO anidro (6,9 ml) sob azoto. A mistura resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 1 hora. 13-Ciclohexil-6-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8- il)carbonil)-7H- indolo[2,1-a][2]benzazepin-10-carboxilato de metilo (1,5 g, 2,86 mmol) foi adicionado depois em porções pequenas. A suspensão foi diluída com DMSO (2 ml) e em seguida foi aquecida com agitação a 90 °C durante 1,5 horas. A mistura de reacção foi deixada arrefecer à temperatura ambiente e foi adicionada água (1 ml) . A mistura foi deitada em água (40 ml) e extraída com acetato de etilo (3x50 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 ml), secas (sulfato de magnésio), filtradas e concentradas 92 para dar um sólido amarelo o qual foi utilizado sem purificação adicional. LCMS: tempo de retenção: 2,238 min. Os dados de LC foram registados num cromatógrafo liquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu 0184,6x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 22 0 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 4 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 5 % de CH3CN/95 % de H2O/10 mM de acetato de amónio e o solvente B foi 5 % de H20/95 % de CH3CN/IO mM de acetato de amónio. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray: m/z 538 (MH+) .

Exemplo de referência

Ácido 8-ciclohexil-la- ((3-metil-3,8- diazabiciclo [3.2.1]oct-8-il)carbonil)-1,la,2,12 b- tetrahidroclopropa[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxílico. Tribrometo de boro (1,0 M em CH2C12, 9,6 ml) foi adicionada gota a gota a uma solução arrefecida (-20 °C, gelo seco/acetona) que continha 8-ciclohexil-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct- 8-il)arbonil)-1,la,2,12b-tetrahidroclorpropa[d]indolo[2,1- a][2]benzazepin-5- carboxilato de metilo e diclorometano (17 ml). A mistura foi agitada com arrefecimento continuo durante 10 min, foi retirada do arrefecimento e agitada a temperatura ambiente durante 1,5 horas. A solução foi arrefecida de novo (0 °C, banho de gelo) e foi extinta com água (2 ml) . A mistura 93 resultante foi eluída com acetato de etilo (50 ml) seguida pela adição lenta de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 ml), e agitada durante 30 minutos. A mistura bifásica resultante foi dividida, a camada orgânica foi lavada com água (3xl0mL), foi lavada com salmoura (10 ml), seca (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada para dar um sólido amarelo. LCMS: tempo de retenção: 2,187 min. Os dados de LC foram registados num cromatógrafo liquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu 0184,6x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 4 ml/min; um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 5 % de CH3CN/95 % de H2O/10 mM de acetato de amónio e o solvente B foi 5 % de Η20/95 % de CH3CN/IO mM de acetato de amónio. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray: m/z 524 (MH+) .

(laR,12bS)-8-ciclohexil-N- (isopropilsulfonil)-la- ((3-meti1-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)-1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1— a][2]benzazepin- 5-carboxamida e (laS,12bR)-8-ciclohexil-N-(isopropilsulfonil)-la- ((3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)- 1,la,2,12b- tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin- 5- carboxamida. EDCI (275 mg, 1,43 mmol) foram adicionados a temperatura ambiente, numa porção, a uma solução que 94 continha ácido 8-ciclohexil-la-((3-metil-3,8- diazabiciclo[3,2,1]oct-8-il)carbonil)-1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxílico (500 mg, 0,955 mmol), DMAP (58 mg, 0,477 mmol), 2-isopropilsulfonamida (176 mg, 1,43 mmol) e diclorometano (9,5 ml). A solução foi mantida a temperatura ambiente durante 24 horas, foi diluída com diclorometano adicional (50 ml), foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2x20 ml), foi lavada com água (20 ml), seca (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada. O resíduo alaranjado resultante foi purificado por meio de HPLC de fase inversa preparativa para dar um sólido amarelo como um sal TFA. LCMS: tempo de retenção: 2,380 min. Os dados de LC foram registados num cromatógrafo líquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu C184,6x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 22 0 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 4 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente A/100 % de solvente B, um tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 5 % de CH3CN/95 % de H2O/10 mM de acetato de amónio e o solvente B foi 5 % de H20/95 % de CH3CN/IO mM de acetato de amónio. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray: m/z 629 (MH+) . Os enantiómeros foram separados utilizando HPLC quiral numa coluna ChiralPak AS-H, 5 mícron, 4,6 x 250 mm (12 % de MeOH/88 % de C02 fase móvel). Tempos de retenção: 12,60 min e 19,05 min. RMN (300 MHz, MeOD) δ ppm 8,01 (m, 2H) , 7,65 (m, 2 H) , 7,47 (m, 3H) 5, 09 (m, 1H) , 4,70 (s, 1H) , 4,26 (m, 1H), 3,97 (m, 1H) 3, 70 (m, 1H) , 3,56 (m, 0 . 5H) , 3,44 (t, 2H) , 3,30 (m 0, 5H) , 3, 20- 2,55 (série de multipletos sobrepostos, 6H) 2,53- 1,7 (série de multipletos sobrepostos, 11H), 1,6-0 (série de multipletos sobrepostos, 12H). 95

(laR,12bS)-8-ciclohexil-N- (dimetilsulfamoil)-la- ((3-metil-3, 8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)- 1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa [d]indolo[2,1- a][2]benzazepin-5- carboxamida e (laS,12bR)-8-ciclohexil-N-(dimetilsulfamoil)-la- ((3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct-8-il)carbonil)- 1,la,2,12b- tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin- 5- carboxamida. Estes compostos foram preparados a partir de ácido 8-ciclohexil-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8- il)carbonil)-1,la,2,12b- tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1- a][2]benzazepin-5- carboxílico sob condições similares a aquelas descritas para (laR,12bS)-8-ciclohexil-N-(isopropilsulfonil)-la-((3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-8- il)carbonil)- 1,la,2,12b-tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1— a][2]benzazepin-5-carboxamida e (laS,12bR)-8-ciclohexil-N-(isopropilsulfonil)-la-((3-meti1-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct-8- il)carbonil)-1,la,2,12b- de solvente B, um tetrahidrociclopropa[d]indolo[2,1- a] [2]benzazepin-5-carboxamida. 0 resíduo amarelo resultante foi purificado por meio de HPLC de fase inversa preparativa para dar um sólido amarelo como um sal TFA. LCMS: tempo de retenção: 2,746 min. Os dados de LC foram registados num cromatógrafo líquido Shimadzu LC-10AS equipado com uma coluna Phenomenex-Luna lOu 0184,6x50 mm utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis a um comprimento de onda de detector de 220 nM. As condições de eluição utilizaram uma velocidade de fluxo de 4 ml/min, um gradiente de 100 % de solvente A/0 % de solvente B a 0 % de solvente Ά/100 % 96 tempo de gradiente de 4 min, um tempo de retenção de 1 min e um tempo de análise de 5 min em que o solvente A foi 5 % de CH3CN/95 % de H2O/10 mM de acetato de amónio e o solvente B foi 5 % de H20/95 % de CH3CN/IO mM de acetato de amónio. Os dados de MS foram determinados utilizando uma plataforma Micromass para LC em modo de electrospray: m/z 630 (MH+) . Os enantiómeros foram separados utilizando HPLC quiral numa coluna ChiralPak AS-H, 5 micron, 4,6x250 mm (12 % de MeOH/88 % de C02 fase móvel) . Tempos de retenção: 13,16 min e 20,63 min. Todos os compostos e exemplos seguintes foram analisados por meio do seguinte método de LC. Coluna: PHENOMENNEX-LUNA 3,0x50 mm S10; fase móvel: (A) 10:90 metanol-água; (B) 90:10 de metanol- água; tampão: 0,1 % de TFA; intervalo de gradiente: 0- 100 % de B; tempo de gradiente: 2 min; velocidade de fluxo 4 ml/min; tempo de análise: 3 min; detecção: detector 1: UV a 220 nm; detector 2: MS (ESI+). 96

F O

Tioacetato de potássio concentrado (1,371 g, 12,00 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-l,l-dif luoroetano (1,45 g, 10,00 mmol) em DMF (6 ml) e a mistura foi agitada durante a noite. 0 produto foi extraído com éter (2X25 ml), lavado com água, salmoura e seco (Na2S04). A evaporação do éter deu o intermediário, HCF2CH2SCOCH3 (1,18 g, 84,3 %) como um óleo castanho claro o qual foi dissolvido em DCM (10 ml) e misturado com água (10 ml) . Gás cloro foi borbulhado numa solução de duas fases arrefecidas e agitadas (0 °C) de HCF2CH2SCOCH3 (1,18 g) até que uma cor verde permanente ficasse persistente e se mantivesse durante 1-2 horas. A camada de DCM foi separada e lavada com 10 % de NaHS03, água, salmoura e seca (MgS04) . A evaporação de DCM deu o intermediário HCF2CH2S02C1 (1,13 g) como um óleo amarelo claro o qual foi tratado com NH3 anidro (0,5 M em dioxano, 40 ml) a 0 °C 97 durante 1 hora. NH4C1 precipitado foi filtrado através de um plug de silica gel e em seguida o filtrado foi evaporado até a secura para dar 2,2-difluoroetansulfonamida como um óleo amarelo claro (736 mg) . 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-D) δ ppm - 2,04 (s 1, 2H), 3,78 (m, 2H), 5,23 (m, 1H).

(+/-)8-Ciclohexil-N-(2,2-difluoroetilsulfonil)-1,la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-la-(3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carbonil)cicloprop [d[indolo [2,1 - a] [2]benzazepin-5-carboxamida. CDI concentrado (24,60 mg, 0,152 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de ácido-amida (56 mg, 0,101 mmol) em THF anidro (1 ml) e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 30 minutos e foi deixada arrefecer à temperatura ambiente. Depois foram adicionados consecutivamente 2,2-difluoroetansulfonamida (29,4 mg, 0,202 mmol) e DBU (0,046 ml, 0,303 mmol) e a mistura foi sonicada 2-3 horas. Rxn foi extinta com metanol (1 ml) e acidificada com poucas gotas de TFA e foi purificada por meio de HPLC preparativa de fase inversa para dar o produto e isolou-se em forma de sal mono TFA como um sólido bege. LC/MS: tempo de retenção: 2,861 min; m/e 681 (MH+) . Observou-se que o produto existia como rotámeros de interconversão por meio de 1H RMN (501 0 MHz, CLOROFÓRMIO- -D) δ ppm 1, 12- 1,3: L (m, J = 4,27 Hz, 3 H), 1,32- 1,55 (m, 4 H), 1,63- 1 ,87 (m, 3 H) , 1, 87- 2, 11 (m, 5 H) , 2 , 14- 2 ,34 (m, 1 H) , 2, 34- 2,90 (m, 8 H) , 2,91· - 3,06 (m, 2 H) , 3, . 35- 3,54 (m, 1 h; i, 3 ,56- 3 ,70 (m, J = = 14, 95 Hz, 1 H) , 3,83- 3,9 5 (m, 3 H), 3 ,93- - 4, 14 (m, 1 H) , 4,14 - 4,34 (m, 1 H), 4 ,36- - 4,64 (m, 1 H) , 5, 11- 5,3C i (m, 1 H) , 6,11- 6,41 (m, 1 H) , 6,94- - 7, 02 (m, J = 8 :, 39, 2,59 Hz, 1 H), 98 98 7, 08- 7, 15 (m, J = 2,44 Hz, 1 H) , 7,27- 7, 33 (m, 1 H) , 7, 56- 7, 72 (m, 1 H) , 7, 89- 7, 97 (m, J = 8,55 Hz, 1 H), 7, 99- 8, 08 (m, 1 H) .

ΝΗ2

Uma solução de cloreto de metansulfonilo (1,714 ml, 22,00 mmol) em DCM (5 ml) foi adicionada gota a gota a uma solução fria e agitada (0 °C) de 3-fluoropropan-l-ol (1,562 g, 20 mmol) e TEA (3,35 ml, 24,00 mmol) em DCM (20 ml). A mistura foi agitada a 0-5 °C durante ~2 h e foi lavada com água, NaHC03 saturado, água, salmoura e seca (MgS04). A evaporação de DCM deu metanossulfonato de 3-fluoropropilo como um óleo incolor (2,92 g, 93,6 %) . Tioacetato de potássio concentrado (2,74 g, 24,00 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de metanossulfonato de 3- fluoropropilo (2,9 g) em DMSO (20 ml) e a mistura foi agitada durante a noite. 0 produto foi extraído com éter (2X25 ml), foi lavada com água, salmoura e foi seca (MgS04) . A evaporação do éter deu etantioato de S-3-f luoropropilo como um óleo castanho claro. Gás cloro foi borbulhado numa solução de duas fases agitada fria (-10 °C) de etantioato de S-3- fluoropropilo (1,0 g, 7,34 mmol) em DCM (5 ml) e água (5,00 ml) até que surgisse uma cor verde em fase aquosa e se mantivesse durante 1-2 horas. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída de novo com DCM (2X10 ml). Os extractos de DCM combinados foram lavados com 10 % de solução de NaHS03, água, salmoura e foram secos (MgS04). A evaporação de DCM deu o intermediário, cloreto de 3-fluoropropan-l-sulfonilo como um óleo castanho claro (405 mg, 34 %) o qual foi tratado com solução de NH3 anidra (10 ml, 0,5M em dioxano) e agitada durante 30-45 min. NH4C1 precipitado foi filtrado e o filtrado foi evaporado até a secura para dar 3-fluoropropan-l-sulfonamida como um óleo castanho claro (265 mg). 99 /

( + /-)- 8 -Ciclohexil-N-(3 -fluoropropilsulfonil)- 1, la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-a - (3-metil-3, 8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8 carbonil)cicloprop[d[indolo[2,1- a] [2]benzazepin-5- carboxamida. CDI Concentrada (24,60 mg, 0,152 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de ácido-amida (56 mg, 0,101 mmol) em THF anidro (1 ml) e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 30 minutos e foi deixada arrefecer à temperatura ambiente. Depois foram adicionados consecutivamente 3-fluoropropan-l-sulfonamida (28,6 mg, 0, 202 mmol) e DBU (0,046 ml, 0,303 mmol) e a mistura foi sonicada 2-3 horas. Rxn foi extinta com metanol (1 ml) e foi acidificada com poucas gotas de TFA e foi purificada por meio de HPLC de fase inversa preparativa para dar o produto e foi isolado em forma de sal mono TFA como um sólido bege. LC/MS: tempo de retenção: 2,835 min; m/e 677 (MH+) . Observou-se que o produto existia como rotámeros de interconversão por meio de 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-D) δ ppm 0,13- 0,37 (m, 1 H) , 1, 08- 1,31 (m, 2 ), 1,31- - 1,61 (m, 4 H), 1,70- - 1,86 (m, 2 H) , 1, 86- 2,11 (m, 6 H) , 2,13- 2, 36 (m, 3 H), 2,38- 2,68 (m, , 1 H) , 2,69- • 3,01 (m, 3 H), 3, 03 - 3,34 (m , J = 68,99 Hz, , 1 H) , 3,35- - 3,84 (m, 7 H), u> 00 1 3,95 (m, 3 H), 3,95- 4,: L2 (m, 1 H) , 4, 44- 4, 57 (m, J = 5,2 0, 5,20, 5 ,20 Hz , 2 H) , , 4 , 58- • 4,72 (m, J = 5 ,2 9, , 5,29 Hz, 2 H), 5,03 - 5,30 (m, 1 H ), 6 ,91- 7, 02 (m, 1 H) , 7, 08- 7, 15 (m, J = 2, 27 Hz, 1 H), 7, 27- 7,35 (m, 1 H), 7, 52- - 7,69 (m, J = 31,98 H z, 1 H ), 7,85- 7, 97 (m, J = 7,93, 7, 93 Hz, 1 H), 8 ,04- 8,13 (m, 1 : H) . 100

(-) - 8-Ciclohexil -N- ((2S, 6R) -propan-2-sulfonil) -1,la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-la-(3-metil-3, 8- diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carbonil)cicloprop[d]indolo [2,1- a] [2]benzazepin-5-carboxamida. A uma mistura de ácido-amida (341 mg, 0,62 mmol) e 3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano, 2HC1 (148 mg, 0,743 mmol) em diclorometano (5 ml) adicionou-se TEA (0,259 ml, 1,858 mmol) e HBTU (282 mg, 0,743 mmol). A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. Foi diluída com EtOAc (150 ml) e lavada com solução aquosa de NaHC03 0,3 M (2x10 ml), água, salmoura, seca (MgS04), foi removido o solvente e foi purificada por meio de uma coluna Biotage 25M (MeOH/DCM:0 a 25 %). A colecção foi dissolvida em 100 ml de EtOAc e lavada com HC1 aquoso (3x20 ml, 0,1M), solução 0,3 M de NaHC03, salmoura, foi seca (MgS04), o solvente foi removido para dar o produto como um sólido amarelo (0,280 g, 68 %) . Tempo de retenção LC-MS: 3,105; MS m/z (M+H) 659. Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter- conversão por meio de 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 1 ,37 (10 H, m), 2, 37 (15 H, m ), 3 ,76 (8 H, m) , 3,88 (3 H, m ) , 4,36 (2 H, m) , 5,06 d H, m) , 6,97 d H, m) , 7,17 d H, d, J = 1,76 Hz) , 7,27 d H, m) , 7,55 d H, d, J = 8, 56 Hz ) , 7, 85 (1 H, m) , 7,98 d H, 1 s . ) . 101

8-Ciclohexil-N- (metilsulfonil)-1,la,2,12b- tetrahidro-11-metoxi-la-(3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]octan- 8-

carbonil)cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxamida. Etapa 1: O racemato foi separado utilizando uma coluna ChiralCel OJ-H (15 % de EtOH/85 % de C02) para dar enantiómeros opticamente puros. Etapa 2: Hidrolisou-se um enantiómero para dar o ácido correspondente: Tempo de retenção LC-MS: 3,426; MS m/z (M+H) 523. Etapa 3: O derivado de amida foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 2,913; MS m/z (M+H) 631. Observou-se que o

produto existia como rotámeros de inter-conversão. 1H RMN (41 30 MHZ, CLOROFÓRMIO- •d) δ ppm 1,36 (6 H, m) , 1,7- 3, 2 (16 H, m) , 3,48 (2 H, m) , 3, 43 (3 H, s), 3, 67 (2 H, m), 3, 91 (3 H, m) Có LO (2 H, m) , 5, 24 d H, m), 6, 96 d H, m), 7, 12 (1 H, d, J = 2, 52 Hz), 7 ,2 7 (1 H, m) , 7,( 52 d H, m) , 7, 90 (1 H, ra ), 8,22 (1 Η, 1 s .)

( + /-)-8-Ciclohexil-N- (2,2-dimetilpropan-1-sulfonil)-1,la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-la- (3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carbonil)-cicloprop [d] indolo 102 [2,1- a][2]benzazepin-5-carboxamida. O material de partida foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,263 min; MS m/z (M+H) 687. Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter- conversão. 1H RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1, 21 (9 H, s) , i ,41 (5 ' H, m) , i , 99 (11 H, m), 2,40- 4,50 (1 4 H, m) , 3, . 89 (3 H, s) , 5, . 17 d H, m ), 6,97 (1 H, m), 7, 11 d H, d, J = 2, 44 Hz) , 7, ,30 d H, m) , 7,51 (1 H, s 1), 7, 89 d H, d, J = 7, 93 Hz) , 8, . 07 d H, m)

( + /-)- 8-Ciclohexil-N-ciclobutanossulfonil-1,la, 2,12b-tetrahidro-11-metoxi-la-(3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carbonil)cicloprop [d]indolo [2,1-a] [2]benzazepin-5- carboxamida. O produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,138 min; MS m/z (M+H) 671. Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter- conversão. 1H RMN (40 0 MHz, CLOROFÓRMIO- D) δ ppm 1, 3 7 (7 H , m) , 2,01 (10 H, m) , 2 , 63 (14 H, m) , 3, 46 d H, d) r 3,62 d H, d, J = 15 ,11 Hz) r 3,89 (3 H, s) , 4, 59 (2 H, m) r 5, 18 d H, m) , 6,97 d H, m) , 7, 11 d H, d, J = = 2 , 52 Hz ) , 7,29 (1 H , m) , 7,62 d H, m ), 7 ,89 d H, m) , 8, , 05 d H, s) . 103

( + /-)-8-Ciclohexil-N-ciclopentansulfonil-1,la, 2, 12b-tetrahidro-11-metoxi-la-(3-metil-3, 8- diazabiciclo[3.2.1]octan- 8- carbonil)cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxamida. O produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,190 min; MS m/z (M+H) 685.

( + /-)-8-Ciclohexil-N-ciclohexanossulfonil-1, la, 2, 12b-tetrahidro-11-metoxi-la-(3-metil-3,8-diazabiciclo [3.2.1]octan- 8-carbonil) ciclopropan[d]indolo[2,1- a][2]benzazepin-5-carboxamida. 0 produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,261 min; MS m/z (M+H) 699.

Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter-conversão. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,61 (22

H, m) , 2, 86 (12 H, m) , 3, 48 (1 H, m) , , 3 , 63 d H, d, J = 15 ,11 Hz) , 3 , 74 (1 H, m) , 3, 89 (3 H, s) , 4 KD LO (2 H, m) , 5, 24 (1 H, m! ) , 6 ,98 d H, m) , 7, . 11 (1 H, d, J = = 2, 27 Hz), 7, 30 (1 H, m! ), 7 ,60 d H, m) , 7, . 90 (1 H, m) , 8, 08 (1 H, s D 104

( + /-) - 8-Ciclohexil-N-2-metilpropan-1-sulfonil- 1,la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-la-(3-metil-3,8-diazabiciclo [3.2.1] octan-8-carbonil) cidoprop [d] indolo [2,1- a] [2]benzazepin-5-carboxamida. O produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,210 min; MS m/z (M+H) 673. Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter-conversão. 1H RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm

1, 14 (6 H, m) , 1, 32 (3 H, m) , 1, 46 (4 H, m) , 1, 62 (1 H, m) , 1, 80 (3 H, m) , 2, 07 (8 H, m) , 2,33 (2 H, m) , 2, 68 (1 H, m) , 2, 95 (5 H, m) , 3, 33 (3 H, r m) , 3,49 (2 H , m ), 3 ,66 (1 H , d, J = 15, 26 Hz) , 3, 89 (3 H, s) , 4,21 d H, m) , 4, 65 (1 H, m) , 5, 15 (0 H, d, J = = 1 4,9 5 1 3z) , 7, 02 d H, dd , J = 8 , 55 r 2, 44 Hz ) , 7, 18 (0 H, d, J = 1,83 Hz) , 7, 32 d H, d, J 8,55 Hz ) , 7, 58 (0 H, m ) , 7,í 51 d H, - m) , 7,1 99 (0 H, s D

(+/-)-8-Ciclohexil-N- (2-metilpropan-2-sulfonil)- 1,1a, 2,12b-tetrahidro-l1-metoxi-la- (3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carbonil)-cicloprop[d]indolo [2,1- a] [2]benzazepin-5-carboxamida. O produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e purificado adicionalmente por meio de TLC preparativa. Tempo de 105 retenção LC-MS: 3,226 min; MS m/z (M+H) 685.

(+/-)-8-Ciclohexil-N-(butanossulfonil)-1,la,2,12b-tetrahidro-11-metoxi-la-(3-metil-3,8- diazabiciclo[3.2.1]octan- 8- carbonil)cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxamida. O produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,245 min; MS m/z (M+H) 673. Observou-se

que o produto existia como rotámeros de inter-conversão. 1H RMN (400 MHz r CLOROFÓRMIO- -d) δ ppm 0,94 (3 H, t, J = 7, 30 Hz) r 1,24 (2 H , m) 1,46 ( :6 h r m) , 1,90 (14 H, m) , 2, 72 (4 H, rrf ), 3, 02 (2 H, m) , 3,41 (1 H , m) , 3,62 (3 H, m) , 3, 88 (3 H, s; ) , 4, 39 (2 H, m) , 5,18 (1 H , m) 03 00 d H, m) , 7, 11 d H, d , J = = 2, 52 Hz ) , 7,30 d H, m) , 7,62 d H, m) , 7, 90 d H, rrf ), 8, 05 d H, s)

(+/-)-8-Ciclohexil-N-[(+/-)- (trifluorometansulfonil)]-1,la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-la- (3-meti1-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8- carbonil)cicloprop[d]indolo[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxamida. O produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de 106 retenção LC-MS: 3,203 min; MS m/z (M+H) 685. Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter-conversão. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,34 (5 H, m), 2,05 (8 H, m), 3,02 (12 H, m), 3,59 (1 H, d, J = 15,11 Hz), 3,89 (3 H, s), 4,51 (2 H, m), 5,16 (1 H, m), 6,98 (1 H, m), 7,11 (1 H, d, J = 2,27 Hz), 7,29 (1 H, d, J = 8,56 Hz), 7,58 (1 H, m), 7,86 (1 H, m), 8,05 (1 H, s 1).

(+/-)-8-Ciclohexil-N-(pentano-3 -sulfonil)-1,la,2,12b-tetrahidro-11-metoxi-la-(3-metil-3,8- diazabiciclo [3.2.1]octan-8-carbonil)cicloprop[d]indolo[2,1 - a] [2]benzazepin-5-carboxamida. O produto foi purificado por meio de HPLC preparativa e foi isolado como um sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,250 min; MS m/z (M+H) 687. Observou-se que o produto existia como rotámeros de inter-conversão. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,39 (37 H, m), 2,84 (2 H, m), 3,28 (p H, s 1), 3,59 (0 H, m), 3,73 (0 H, m) , 3,89 (3 H, m) , 4,23 (2 H, m) , 5,18 (p Η, 1 s.), 6,99 (1 H, m) 7,11 (1 Η, 1 s.), 7,25 (1 H, m) , 7,69 (0 Η, 1 s.), 7,86 (2 Η, 1 s.).

8-Ciclohexil-N-(ciclopropilsulfonil)-1,la,2,12b-tetrahidro-11-metoxi-la-(3-metil-3,8- 8 107 8 107 [2]benzazepin-5- diazabiciclo[3.2.1]octan-carbonil)cicloprop[d]indolo[2,1-a] carboxamida. Etapa 1: O material de partida racémico foi separado em enantiómeros opticamente puros por meio da utilização de uma coluna ChiralPak AS-H, 30x250 mm, 5 μπι (15 % de EtOH/85 % de C02) para dar enantiómero (-) (primeiro pico) e enantiómero (+) (segundo pico). Etapa 2: A uma solução de um isómero (0,397 g, 0,706 mmol) em THF (4 ml) e MeOH (4 ml) adicionou-se NaOH IN (2 ml, 2,000 mmol). A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. Foi diluida com EtOAc, lavada com HC1 frio (IN), salmoura, seca (MgS04) e removeu-se o solvente a vácuo para dar o composto ácido-amida como um sólido amarelo (0,387 g, 100 %) . Tempo de retenção LC-MS: 3,473 min; MS m/z (M+H) 549. Etapa 3: A diamida foi purificada e isolada como sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 2,991 min; MS m/z (M+H) 657.

8-Ciclohexil-N-ciclobutanossulfonil-1,la,2,12b-tetrahidro-ll-metoxi-la-(3-metil-3,8-diazabiciclo[3.2.1] octan- 8-carbonil)cicloprop[d]indol[2,1-a][2]benzazepin-5-carboxamida. Etapa 1: A uma suspensão do composto diéster (0,63 g, 1,189 mmol) em DCM (1 ml) adicionou-se TFA (1 ml, 12,98 mmol), foi agitada a temperatura durante 2,5 horas, os solventes foram removidos a vácuo para dar o composto monoácido como um sólido castanho escuro. Tempo de retenção LC- MS: 3,686; MS m/z (M+H) 474. Etapa 2: A uma mistura do composto monoácido (100 mg, 0,211 mmol), ciclobutanossulfonamida (57,1 mg, 0,422 mmol), DMAP (103 mg, 0,845 mmol) e cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3- 108 etilcarbodiimida (60,7 mg, 0,317 mmol) num frasco adicionou-se DCM (1 ml) . A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite e foi purificada por meio de uma coluna Biotage 25S (MeOH/DCM: 0 a 25 %) para dar o composto amida-éster como um sólido amarelo (0,086 g, 68 %) . Tempo de retenção LC-MS: 3,528; MS m/z (M+H) 591. Etapa 3: A uma solução deste composto (86 mg, 0,146 mmol) em THF (2 ml) e MeOH (1 ml) adicionou-se NaOH IN (1 ml, 1,0 mmol). A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h. Foi diluída com EtOAc, foi lavada com HC1 frio (IN), salmoura, foi seca (MgS04) , e o solvente foi removido a vácuo para dar monoácido como um sólido castanho. Tempo de retenção LC-MS: 3,463; MS m/z (M+H) 563. Etapa 4: A diamida foi purificada por meio de HPLC preparativa e isolada como sal TFA. Tempo de retenção LC-MS: 3,128; MS m/z (M+H) 671.

Claims (7)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto seleccionado do grupo que consiste em

OM» 2

3

4

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, 1,

2. Um composto de acordo com a reivindicação seleccionado do grupo que consiste em

V

3. Um composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado do grupo que consiste em 5 e

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. 6

4. Uma composição que compreende o composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

5. A composição de acordo com a reivindicação 4, que compreende ainda pelo menos um composto adicional que tem benefícios terapêuticos contra o VHC, em que o composto é seleccionado do grupo que consiste em interferões, ciclosporinas, interleucinas, inibidores da metaloprotease de VHC, inibidores da serina protease de VHC, inibidores da polimerase de VHC, inibidores da helicase de VHC, inibidores da proteína NS4B de VHC, inibidores da entrada de VHC, inibidores da montagem de VHC, inibidores da saída de VHC, inibidores da proteína NS5A de VHC, inibidores da proteína NS5B de VHC e inibidores de replicão de VHC.

5 e ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

6. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 para utilização no tratamento de infecção por hepatite C.

7. 0 composto de acordo com a reivindicação 6, que compreende ainda pelo menos um composto adicional que tem benefícios terapêuticos contra VHC, em que o composto é seleccionado do grupo que consiste em interferões, ciclosporinas, interleucinas, inibidores da metaloprotease de VHC, inibidores da serina protease de VHC, inibidores da polimerase de VHC, inibidores da helicase de VHC, inibidores da proteína NS4B de VHC, inibidores da entrada de VHC, inibidores da montagem de VHC, inibidores da saída de VHC, inibidores da proteína NS5A de VHC, inibidores da proteína NS5B de VHC e inibidores de replicão de VHC.