PT2099797E - Compostos e composições como inibidores de proteína-quinase - Google Patents

Description

ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

DESCRIÇÃO "Compostos e composições como inibidores de proteína-quinase" Campo do invento 0 invento proporciona uma nova classe de compostos, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos e compostos para utilização para tratar ou evitar doenças associadas com actividade de quinase anómala ou desregulada, nomeadamente doenças que envolvem activação anómala das quinases Abl, Bcr-Abl, BMX, BTK, CHK2, b-RAF, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRp, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e TrkB.

Antecedentes do invento

As proteína-quinases representam uma vasta familia de proteínas, que desempenham um papel central na regulação de uma grande variedade de processos celulares e manutenção do controlo da função celular. Uma lista parcial e não limitativa destas quinases inclui: tirosina-quinases receptoras tais como quinase receptora de factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF-R), receptor do factor de crescimento de nervos, trkB, Met e receptor do factor de crescimento de fibroblastos, FGFR3; tirosina-quinases não receptoras tal como Abl e a quinase de fusão BCR-Abl, Lck, Csk, Fes, Bmx e c-src; e serina/treonina-quinases tal como as quinases b-RAF, c-RAF, sgk, MAP (e.g., MKK4, MKK6, etc.) e SAPTC2a, 5ΑΡΚ2β e SAPK3.

Connolli et al (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol. 7, N.° 18, p. 2415-2420, 1997) descrevem estudos de estrutura-actividade de pirido[2,3-d]pirimidinas inibidoras de tirosina-quinases, das tirosina-quinases PDGFr, bFGFr e c-Src. W096/15128 divulga 6-arilpirido(2,3-d)pirimidinas e naftiridinas para utilização como inibidores da proteína tirosina-quinase e o tratamento de proliferação celular em condições tais como aterosclerose, restenose e psoríase. 2 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ WO01/55147 divulga pirido[2,3-d]pirimidino-2,7-diaminas inibidoras de quinases. WO2005/034869 divulga a sintese de uma série de naftiridinas substituídas com fenilo para utilização como inibidores de quinases.

Observou-se actividade de quinase aberrante em muitos estados de doença incluindo doenças proliferativas benignas e malignas assim como doenças resultantes de activação desadequada dos sistemas imunitário e nervoso.

Os novos compostos do presente invento inibem a actividade de uma ou mais proteína-quinases e espera-se que sejam consequentemente úteis no tratamento de doenças associadas a quinases.

SUMARIO DO INVENTO

Num aspecto, o presente invento proporciona compostos de fórmula I:

I em que: Y é seleccionado de N e C;

Ri é seleccionado de hidrogénio e -NR7R8; em que R7 é seleccionado de hidrogénio e Ci_6alquilo; R8 é seleccionado de hidrogénio, Ci_6alquilo, -X1NR9R9, -X1OR10, C6-ioaril-Co-4alquilo,

Ci-ioheteroaril-Co-4alquilo, C3-i2CÍcloalquil-Co-4alquilo e C3-8heterocicloalquil-Co-4alquilo; em que X7 é Ci-4alquileno; cada Rg é seleccionado independentemente de hidrogénio e Ci-6alquilo; Rio é C6-ioaril-Ci-4alquilo; em que os referidos arilo, heteroarilo, cicloalquilo ou heterocicloalquilo de Rg estão opcionalmente substituídos com 1 a 3 radicais seleccionados independentemente de hidroxilo, Ci-6alquilo, Ci_6alquilo com substituintes hidroxilo, -S(0)o-2R9r -NR9S (O) 0-2NR9R9, -C (0)NR9R9, -OX2NR9R9 e C3-8heterocicloalquilo 3 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ opcionalmente substituído com -NR9R9; em que X2 é seleccionado de uma ligação e Ci-4alquileno; e cada R9 é seleccionado independentemente de hidrogénio e Ci-6alquilo; R2 é seleccionado de NR9C(0)R9, NR9C(0)Rn, NR9C (0) X2NR9R9 e -NRgC (0) X2NR9Rn; em que X2 e Rg são tal como anteriormente descrito e Rn é seleccionado de Ce-ioaril-Cmalquilo e C3-i2cicloalquilo; em que qualquer arilo ou cicloalquilo de Rn é opcionalmente substituído com Cmoalquilo, C2-i0alcenilo, Ci-ioalcoxilo, Cmoalcoxilo e Ci-ioalquilo substituído com halogéneo; R3 e R4 são seleccionados independentemente de hidrogénio, halogéneo e Ci-6alquilo; ou R2 e R4, conjuntamente com os átomos aos quais R2 e R4 estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 5 membros contendo um heteroátomo ou grupo seleccionado de - NR9-, -O- e -S-; em que R9 é seleccionado de hidrogénio e Ci-6alquilo; R5 é Cmalquilo substituído com halogéneo; Rê é seleccionado de hidrogénio e Cmoheteroarilo; em que qualquer heteroarilo de R6 é opcionalmente substituído por 1 a 3 radicais Ci-6alquilo; e os sais e solvatos (e.g. hidratos) farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos.

Num segundo aspecto, 0 presente invento proporciona uma composição farmacêutica que contém um composto de fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, misturado com um ou mais excipientes adequados.

Num terceiro aspecto, 0 presente invento proporciona os compostos para utilização num método para tratar uma doença num animal no qual a inibição de actividade de quinase, nomeadamente actividade de Abl, Bcr-Abl, BMX, BTK, CHK2, b-RAF, c-RAP, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRp, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e/ou TrkB, pode evitar, inibir ou melhorar a patologia e/ou sintomatologia das doenças.

Num quarto aspecto, 0 presente invento proporciona a utilização de um composto de fórmula I no fabrico de um medicamento para tratar uma doença num animal no qual a 4 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ actividade de quinase, nomeadamente actividade de Abl, Bcr-Abl, BMX, BTK, CHK2, b-RAF, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRp, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, ΞΑΡΚ2β, SAPK3, SGK, Tie2 e/ou TrkB, contribui para a patologia e/ou sintomatologia da doença. DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO Definições "Alquilo" como um grupo e como um elemento estrutural de outros grupos, por exemplo aquilo substituído com halogéneo e alcoxilo, pode ser de cadeia linear ou ramificada. Ci-4-alcoxilo inclui, metoxilo, etoxilo e semelhantes. Alquilo substituído com halogéneo inclui trifluorometilo, pentafluoroetilo e semelhantes. "Arilo" significa um conjunto de anel aromático monocíclico ou fundido bicíclico contendo seis a dez átomos de carbono de anel. Por exemplo, arilo pode ser fenilo ou naftilo, preferentemente fenilo. "Arileno" significa um radical bivalente derivado de um grupo arilo. "Heteroarilo" é tal como definido para arilo anteriormente em que um ou mais dos membros do anel é um heteroátomo. Por exemplo Ci-ioheteroarilo, tal como utilizado neste pedido, inclui piridilo, indolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinolinilo, benzofuranilo, benzopiranilo, benzotiopiranilo, benzo[1,3]dioxole, imidazolilo, benzoimidazolilo, pirimidinilo, furanilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, tienilo, etc. "Cicloalquilo" significa um conjunto de anel policíclico saturado ou parcialmente insaturado, monocíclico, bicíclico fundido ou policíclico em ponte contendo o número indicado de átomos de anel. Por exemplo, C3-iocicloalquilo inclui ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, etc. "Heterocicloalquilo" significa cicloalquilo, tal como definido neste pedido, desde que um ou mais dos carbonos do anel indicados sejam substituídos por uma parte seleccionada de -O-, -N=, -NMR-, —C(O)—, -S-, -S(O)- ou -S(0)2-, em que R é 5 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ hidrogénio, Ci-4alquilo ou um grupo protector de azoto. Por exemplo, C3-8heterocicloalquilo, tal como utilizado neste pedido para descrever compostos do invento, inclui morfolino, pirrolidinilo, pirrolidinil-2-ona, piperazinilo, piperidinilo, piperidinilona, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]dec-8-ilo, etc. "Halogéneo" (ou halo) representa preferentemente cloro ou flúor, mas pode também ser bromo ou iodo. "Painel de quinases" é uma lista de quinases compreendendo Abl (T315I), JAK2, JAK3, ALK, JNKlal, ALK4, KDR, Aurora-A, Lck,

Blk, MAPK1, Bmx, MAPKAP-K2, BRK, MEK1, CaMKII(rato), Met, CDKl/ciclinaB, p70S6K, CHK2, PAK2, CK1, PDGFRa, CK2, PDK1, c-kit, Pim-2, c-RAF, PKA(h), CSK, PKBa, cSrc, PKCa, DYRK2, Plk3, EGFR, ROCK-1, Fes, Ron, FGFR3, Ros, Flt3, SAPK2a, Fms, SGK, Fyn, SIK, GSK3p, Syk, IGF-1R, Tie-2, ΙΚΚβ, TrKB, IR, WNK3, IRAK4, ZAP-70, ITK, AMPK(rato), LIMKl, Rsk2, Axl, LKBl, ΞΑΡΚ2β, BrSK2, Lyn (h) , SAPK3, BTK, MAPKAP-K3. SAPK4, CaMKIV, MARKl, Snk, CDK2/ciclinaA, MINK, SRPKl, CDK3/ciclinaE, MKK4(m), TAK1, CDK5/p25, MIKK6(h), TBK1, CDK6/cyclinD3, MLCK,

TrkA, CDK7/ciclinaH/MATl, MRC^, TSSK1, CHK1, MSK1, Yes, CKld, MST2, ZIPK, c-Kit (D816V), MuSK, DAPK2, NEK2, DDR2, NEK6, DMPK, PAK4, DRAK1, PAR-1Ba, EphAl, ΡϋΰΡΒβ, EphA2, Pim-1, EphA5, ΡΚΒβ, EphB2, ΡΚΟβΙ, EphB4, PKC5, FGFR1, PKCr|, FGFR2, PKC0, FGFR4, PKD2, Fgr, ΡΚΰΙβ, Fltl, PRK2, Hck, PYK2, HIPK2, Ret, IKKa, RIPK2, IRR, ROCK-11(humana), JNK2a2, Rse, JNK3, Rskl(h), PI3 Κγ, Pl3 Κδ e Ρΐ3-Κβ. Rastreiam-se os compostos do invento contra o painel de quinases (de tipo selvagem e/ou sua mutação) e inibem a actividade de pelo menos um dos referidos membros do painel. "Formas mutantes de BCR-Abl" significa alterações de aminoácidos simples ou múltiplas relativamente à sequência de tipo selvagem. As mutações em BCR-ABL têm com efeito a ruptura dos pontos de contacto críticos entre proteína e inibidor (por exemplo, Gleevec e semelhantes) e mais frequentemente, induzem uma transição de um estado inactivo para um estado activo, i.e. para uma conformação à qual BCR-ABL e Gleevec não são capazes de se ligar. A partir de análises de amostras clínicas, revelou-se que o reportório de mutações associadas com o fenótipo resistente tem aumentado lenta mas inexoravelmente ao longo do tempo. A localização das mutações 6 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ parece acumular-se em quatro regiões principais. Um grupo de mutações (G250E, Q252R, I253F/H, E255K/V) inclui aminoácidos que formam uma ansa de ligação de fosfato para ATP (também conhecida como ansa P). Um segundo grupo (V289A, F311L, T315I, F317L) ocorre no local de ligação de Gleevec e interage directamente com o inibidor através de ligações de hidrogénio ou interacções de Van der Waals. O terceiro grupo de mutações (M351T, E355G) acumula-se em grande proximidade ao domínio catalítico. O quarto grupo de mutações (H396R/P) localiza-se na ansa de activação, cuja conformação é o interruptor molecular que controla activação/inactivação de quinase. As mutações pontuais de BCR-ABL associadas a resistência a

Gleevec detectada em doentes de LMC e LLA, incluem: M224V, L248V, G250E, G250R, Q252R, Q252H, I253H, I253F, E255K, E255V, D276G, T277A, V289A, F311L, T3151, T315N, F317L, M343T, M315T, E355G, F359V, F359A, V3791, F382L, L387M, L387F, H396P, H396R, A397P, S417I, E459K e F486S (as posições dos aminoácidos, indicadas pelo código de uma letra, são as da sequência

GenBank, número de acesso AAB60394 e correspondem a ABL tipo la; Martinelli et al., Haematologica/The Hematology Journal, 2005, Abril; 90-4). Salvo indicação em contrário para este invento, Bcr-Abl refere-se às formas de tipo selvagem e mutante da enzima. "Tratar" e "tratamento" referem-se a um método de aliviar ou mitigar uma doença e/ou os seus sintomas correspondentes.

Descrição das concretizações preferidas O presente invento proporciona compostos, composições e compostos para utilização no tratamento de doença relacionada com quinase, nomeadamente doenças relacionadas com quinase Abl, Bcr-Abl, BMX, BTK, CHK2, b-RAF, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRP, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e TrkB. Por exemplo, podem tratar-se leucemia e outras doenças proliferativas relacionadas com BCR-Abl através de inibição das formas de tipo selvagem e mutantes de Bcr-Abl.

Numa concretização, em referência a compostos de fórmula I, são compostos de fórmula Ia: 7 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

la nos quais: R2 é seleccionado de NR9C(0)R9, NR9C(0)Rn, NR9C (O) X2NR9R9 e -NR9C (O) X2NR9Rn; em que X2 é seleccionado de uma ligação e Ci-4alquileno; cada R9 é seleccionado independentemente de hidrogénio e Ci-6alquilo; Rn é seleccionado de C6-ioaril-Ci-4alquilo e Cs-ncicloalquilo; em que qualquer arilo ou cicloalquilo de Rn é opcionalmente substituído com

Cmoalquilo, C2-ioalcenilo, Cmoalcoxilo e Cmoalquilo substituído com halogéneo; R3 e R4 são seleccionados independentemente de hidrogénio, halogéneo e Cmalquilo; e R5 é Cmalquilo substituído com halogéneo.

Noutras concretizações são compostos de fórmula Ia nos quais R2 é seleccionado de -NHC(0)Rn, -NHC (O) NHC (CH3) 3 e -NHC (O) CH2N (CH3) 2; em que Rn é fenilo opcionalmente substituído com trifluorometilo.

Os compostos preferidos de fórmula Ia são seleccionados de N-[3-(2-(3-trifluorometil)benzoílamino[1,6]naftiridin-3-il)-2,4-diclorofenil]-3-trifluorometilbenzamida; N-{2,4-dicloro-3-[2-(3-fenilureido)-[1,6]naftiridin-3-il]fenil}-3-trifluoro-metilbenzamida; N-{3-[2-(3-terc-butilureido)[1,6]naftiridin-3-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida; e N-{2,4- dicloro-3-[2-(2-dimetilaminoacetilamino)-[1,6]naftiridin-3-il]fenil}-3-trifluorometilbenzamida.

Noutra concretização são compostos de fórmula Ib:

nos quais: 8 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Ri é seleccionado de -NR7Rs; em que R7 é seleccionado de hidrogénio e Ci-6alquilo; Rs é seleccionado de hidrogénio, Ci-6alquilo, C6-ioaril-Co-4alquilo e C3-8heterocicloalquil-Co-4alquilo; em que os referidos arilo ou heterocicloalquilo de Re estão opcionalmente substituídos com -OX2NR9R9: em que X2 é seleccionado de uma ligação e Ci-4alquileno; e cada Rg é seleccionado independentemente de hidrogénio e Ci-6alquilo; R2 é -NR9C (O) X2NR9R9; em que X2 e Rg são como anteriormente descrito; R3 e R4 são halogéneo; e R5 é Ci-6alquilo substituído com halogéneo.

Noutra concretização, relativamente a compostos de fórmula Ib, Ri é seleccionado de amino, etilamino; R2 é -NHC (O) NHC (CH3) 3; R3 e R4 são cloro; e R5 é trifluorometilo .

Os compostos preferidos de fórmula Ib são seleccionados de: N-{3-[2-amino-7-(3-terc-butilureido)pirido[2,3—d]pirimidin- 6—i1]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida; N-{3-[7 - (3-terc-butilureido)-2-etilaminopirido[2,3-d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida; N-{3-[7-(3-terc- butilureido) -2-(2-morfolin-4-iletilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-nifluorometilbenzamida; e N—(3—{7— (3-terc-butilureido)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)fenilamino]-pirido[2,3-d]pirimidin-6-il}-2,4-diclorofenil)-3-trifluoro-metilbenzamida.

Noutra concretização são compostos de fórmula Ic:

lc nos quais: Y é seleccionado de N e C; Z é seleccionado de NRg, O e S; em que R9 é seleccionado de hidrogénio e Ci-6alquilo; R3 é halogéneo; 9 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ R.5 é Ci-6alquilo substituído com halogéneo; e R6 é seleccionado de hidrogénio e Ci-ioheteroarilo.

Noutra concretização, relativamente a compostos de fórmula Ic, Y é C; Zé seleccionado de O e NH; R3 é cloro; R5 é trifluorometilo e Rí é hidrogénio.

Detalham-se compostos preferidos adicionais do invento nos Exemplos e Tabela I, seguidamente.

Farmacologia e utilidade

Os compostos do invento modulam a actividade de quinases e como tal são úteis para tratar doenças nas quais as quinasse contribuem para a patologia e/ou sintomatologia da doença. Os exemplos de quinases que são inibidas pelos compostos e composições aqui descritos e contra as quais os métodos aqui descritos são úteis incluem, entre outras, Abl, Bcr-Abl (formas de tipo selvagem e mutantes), BMX, BTK, CHK2, b-RAF, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKoí, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRP, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e TrkB. A tirosina-quinase Abelson (i.e. Abl, c-Abl) está envolvida na regulação do ciclo celular, na resposta celular a stress genotóxico e na transmissão de informação sobre o ambiente celular através de sinalização de integrina. Globalmente, parece que a proteína Abl desempenha um papel complexo como módulo celular que integra sinais de diferentes fontes extracelulares e intracelulares e que influencia decisões no que diz respeito ao ciclo celular e à apoptose. A tirosina-quinase Abelson inclui subtipos derivados tal como a fusão quimérica (oncoproteína) BCR-Abl com actividade de tirosina-quinase desregulada ou a v-Abl. A BCR-Abl é crítica na patogénese de 95% das leucemias mielogénicas crónicas (LMC) e 10% das leucemias linfocíticas agudas. O STI-571 (Gleevec) é um inibidor da tirosina-quinase BCR-Abl oncogénica e é utilizado no tratamento de leucemia mielóide crónica (LMC). Contudo, alguns doentes no estágio de crise blástica da LMC são resistentes a STI-571 devido a mutações na quinase BCR-Abl. Até à data relataram-se mais de 22 mutações, sendo as mais comuns G250E, E255V, T315I, F317L e M351T. 10 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Os compostos do presente invento inibem quinase abl, especialmente quinase v-abl. Os compostos do presente invento também inibem quinase BCR-Abl de tipo selvagem e mutações de quinase BCR-Abl e são portanto adequados para o tratamento de cancro positivo para Bcr-abl e doenças tumorais tais como leucemias (especialmente leucemia mielóide crónica e leucemia linfoblástica aguda, na qual os mecanismos de acção apoptóticos se encontram especialmente presentes) e também apresenta efeitos no subgrupo de células estaminais de leucemia assim como potencial para a purificação destas células in vitro após remoção das referidas células (por exemplo, remoção de medula óssea) e reimplante das células após a eliminação de células de cancro nelas presentes (por exemplo, reimplante de células de medula óssea purificadas). A via de sinalização Ras-Raf-MEK-ERK medeia resposta celular a sinais de crescimento. Ras está mutada para uma forma oncogénica em aproximadamente 15% dos cancros humanos. A familia Raf pertence às serina/treonina-proteina-quinases e inclui três membros, A-Raf, B-Raf e c-Raf (ou Raf-1). O motivo principal para Raf ser um alvo de fármacos é a relação de Raf como efector de Ras a jusante. Contudo, dados recentes sugerem que B-Raf pode ter um papel proeminente na formação de determinados tumores sem que seja necessário um alelo de Ras activado (Nature 417, 949 - 954 (01 Jul 2002). Nomeadamente, detectaram-se mutações B-Raf numa grande percentagem de melanomas malignos.

Os tratamentos médicos existentes para melanoma estão limitados ao nível da sua eficácia, especialmente para melanomas de estágio tardio. Os compostos do presente invento também inibem processos celulares envolvendo quinase b-Raf, proporcionando uma nova oportunidade terapêutica para tratamento de cancros humanos, especialmente para melanoma.

Os compostos do presente invento também inibem processos celulares envolvendo quinase c-Raf. A c-Raf é activada pelo oncogene ras, que é mutado num elevado número de cancros humanos. Assim, a inibição da actividade de quinase de c-Raf pode proporcionar uma forma de evitar crescimento tumoral mediado por ras [Campbell, S. L., Oncogene, 17, 1395 (1998)]. 11 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ Ο PDGF (factor de crescimento derivado de plaquetas) é um factor de crescimento de ocorrência muito comum, que desempenha um papel importante tanto no crescimento normal como na proliferação patológica de células, tal como é observado em carcinogénese e em doenças dos vasos sanguineos de células do músculo liso, por exemplo em aterosclerose e trombose. Os compostos do invento podem inibir a actividade do receptor de PDGF (PDGFR) e são consequentemente adequados para o tratamento de doenças tumorais tais como gliomas, sarcomas, tumores da próstata e tumores do cólon, da mama e dos ovários.

Os compostos do presente invento podem ser utilizados não apenas como substâncias inibidoras de tumores, por exemplo em cancro de células pequenas do pulmão, mas também como um agente para tratar doenças proliferativas não malignas, tais como aterosclerose, trombose, psoriase, esclerodermia e fibrose, assim como para a protecção de células estaminais, por exemplo para combater o efeito hemotóxico de agentes quimioterapêuticos, tal como 5-fluorouracilo e em asma. Os compostos do invento podem ser especialmente utilizados para o tratamento de doenças, que respondem a uma inibição de quinase receptora de PDGF.

Os compostos do presente invento apresentam efeitos úteis no tratamento de doenças resultantes de transplante, por exemplo, transplante alogénico, especialmente rejeição de tecidos, tal como nomeadamente bronquiolite obliterante (BO), i.e. uma rejeição crónica de transplantes de pulmão alogénicos. Contrariamente a doentes sem BO, os doentes com BO apresentam muitas vezes uma concentração elevada de PDGF no lavado broncoalveolar.

Os compostos da presente invento também são eficazes em doenças associadas com migração e proliferação de células do músculo liso vascular (nas quais PDGF e PDGF-R muitas vezes também desempenham um papel), tal como restenose e aterosclerose. Estes efeitos e as suas consequências para a migração ou proliferação de células do músculo liso vascular in vitro e in vivo podem ser demonstrados por administração dos compostos do presente invento e também por investigação do 12 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ seu efeito sobre o espessamento da íntima vascular após lesões mecânicas in vivo. A família trk de receptores de neurotrofinas (trkA, trkB, trkC) promove a sobrevivência, crescimento e diferenciação dos tecidos neuronais e não neuronais. A proteína TrkB é expressa em células do tipo neuroendócrino no cólon e no intestino delgado, nas células alfa do pâncreas, nos monócitos e macrófagos dos gânglios linfáticos e do baço e nas camadas granulares da epiderme (Shibaiama e Koizumi, 1996) . A expressão da proteína TrkB tem sido associada com uma evolução desfavorável dos tumores de Wilms e de neuroblastomas. TkrB é, aliás, expressa nas células cancerosas da próstata mas não em células normais. A via de sinalização a jusante dos receptores trk envolve a cascata de activação de MAPK através de Shc, Ras activada, genes ERK-1 e ERK-2 e a via de transdução PLC-gamal (Sugimoto et ai., 2001). A quinase c-Src transmite sinais oncogénicos de muitos receptores. Por exemplo, a sobre-expressão de EGFR ou HER2/neu em tumores leva à activação constitutiva de c-src, que é característica da célula maligna mas está ausente da célula normal. Por outro lado, ratinhos deficientes na expressão de c-src apresentam um fenótipo osteopetrótico, indicativo de uma participação primordial de c-src na função osteoclástica e um possível envolvimento em doenças relacionadas.

Bmx é uma quinase da família Tec e é uma proteína tirosina-quinase não receptora, que controla a proliferação de células de cancro do epitélio mamário.

Demonstrou-se que o receptor 3 do factor de crescimento de fibroblastos exercia um efeito regulador negativo sobre o crescimento do osso e uma inibição da proliferação de condrócitos. A displasia tanatofórica é causada por diferentes mutações no receptor 3 do factor de crescimento de fibroblastos e uma das mutações, TDII FGFR3, tem uma actividade constitutiva de tirosina-quinase que activa o factor de transcrição Statl levando à expressão de um inibidor de ciclo celular, paragem de crescimento e desenvolvimento ósseo anómalo (Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292). FGFR3 é também muitas vezes expresso em cancros do tipo mieloma 13 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ múltiplo. Os inibidores da actividade de FGFR3 são úteis no tratamento de doenças auto-imunitárias ou inflamatórias mediadas por células T incluindo, entre outras, artrite reumatóide (AR), artrite de colagénio II, esclerose múltipla (EM) , lúpus eritematoso sistémico (LES), psoriase, diabetes juvenil, doença de Sjogren, doença da tiróide, sarcoidose, uveite auto-imune, doença inflamatória do intestino (doença de Crohn e colite ulcerativa), doença celíaca e miastenia grave. A actividade de soro e quinase regulada por glucocorticóides (SGK) correlaciona-se com perturbações da actividade de canais iónicos, nomeadamente, os canais de sódio e/ou potássio e os compostos do invento podem ser úteis para tratar hipertensão.

Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 e P. Lin (1998) PNAS 95, 8829-8834, demonstraram uma inibição de crescimento tumoral e vascularização e também uma diminuição das metástases do pulmão durante infecções adenovíricas ou durante injecções do domínio extracelular de Tie-2 (Tek) em modelos de xenoenxerto de tumor da mama e melanoma. Os inibidores de Tie2 podem ser utilizados em situações nas quais a neovascularização ocorre inadequadamente (i.e. em retinopatia diabética, inflamação crónica, psoriase, sarcoma de Kaposi, neovascularização crónica devida a degenerescência macular, artrite reumatóide, hemangioma infantil e cancros). A Lck desempenha um papel na sinalização de células T. Os ratinhos que não apresentam o gene Lck têm uma capacidade diminuída de desenvolver timócitos. A função de Lck como um activador positivo de sinalização de células T sugere que os inibidores de Lck podem ser úteis para tratar doenças auto-imunes tal como artrite reumatóide.

As JNK, conjuntamente com outras MAPK, têm sido implicadas num papel de mediação de resposta celular a cancro, agregação de plaquetas induzida por trombina, doenças de imunodeficiência, doenças auto-imunes, morte celular, alergias, osteoporose e doença cardíaca. Os alvos terapêuticos relacionados com activação da via JNK incluem leucemia mielogénica crónica (LMC), artrite reumatóide, asma, osteoartrite, isquemia, cancro e doenças neurodegenerativas. 14 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Em resultado da importância da activação de JNK associada a doença de figado ou a episódios de isquemia hepática, os compostos do invento podem também ser úteis para tratar várias doenças hepáticas. Também foi relatado um papel para JNK em doença cardiovascular tal como enfarte do miocárdio ou insuficiência cardíaca congestiva, assim como foi demonstrado que JNK medeia respostas hipertróficas a diferentes formas de stress cardíaco. Demonstrou-se que a cascata JNK também desempenha um papel na activação de células T incluindo activação do promotor IL-2. Assim, os inibidores de JNK podem ter valor terapêutico para alterar as respostas imunitárias patológicas. Estabeleceu-se também um papel para activação JNK em vários cancros sugerindo uma utilização potencial de inibidores de JNK em cancros. Por exemplo, a JNK activada constitutivamente está associada a tumorigénese mediada por HTLV-1 [Oncogene 13:135-42 (1996)]. A JNK pode desempenhar um papel no sarcoma de Kaposi (SK). Outros efeitos proliferativos de outras citoquinas implicadas em proliferação de SK, tal como factor de crescimento endotelial vascular (VEGF), il-6 e TNFa, podem também ser mediados por JNK. Além disso, a regulação do gene c-jun em células transformadas com p210 BCR-ABL corresponde a actividade de JNK sugerindo um papel para inibidores JNK no tratamento para leucemia mielogénica crónica (LMC) [Blood 92:2450-60 (1998)].

Pensa-se que determinadas condições proliferativas anómalas estejam associadas com expressão de raf e pensa-se, consequentemente, que sejam sensíveis à inibição da expressão de raf. Os níveis de expressão anomalamente elevados da proteína raf estão também implicados na transformação e proliferação anómala de células. Também se pensa que estas condições de proliferação anómala sejam sensíveis à inibição da expressão de raf. Por exemplo, pensa-se que a expressão da proteína c-raf desempenha um papel na proliferação anómala de células já que foi relatado que 60% de todas as linhas celulares de carcinoma de pulmão expressam níveis invulgarmente elevados de ARNm e proteína c-raf. Exemplos adicionais de condições proliferativas anómalas são doenças hiperproliferativas tais como cancros, tumores, hiperplasia, fibrose pulmonar, angiogénese, psoríase, aterosclerose e proliferação de células do músculo liso nos vasos sanguíneos, tal como estenose ou restenose após angioplastia. A via de 15 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ sinalização celular da qual raf faz parte tem também sido implicada em doenças inflamatórias caracterizadas por proliferação de células T (activação e crescimento de células T), tal como rejeição de enxerto de tecido, choque endotóxico e nefrite glomerular, por exemplo.

As proteina-quinases activadas por stress (SAPK) são uma família de proteina-quinases que representam a penúltima etapa das vias de transdução de sinal que resultam em activação do factor de transcrição c-jun e expressão de genes regulados por c-jun. Nomeadamente, c-jun está envolvida na transcrição de genes que codificam proteínas envolvidas na reparação de ADN que se danifica durante agressões genotóxicas. Assim, os agentes que inibem actividade SAPK na célula evitam a reparação de ADN e sensibilizam a célula relativamente a agentes que induzem danos ao ADN ou inibem a síntese do ADN e induzem apoptose de uma célula ou que inibem proliferação celular.

As proteina-quinases activadas por mitogénio (MAPK) são membros de vias de transdução de sinal conservadas que activam factores de transcrição, factores de tradução e outras moléculas alvo em resposta a vários sinais extracelulares. As MAPS são activadas por fosforilação num motivo de fosforilação duplo com a sequência Thr-X-Tyr por proteína-quinase-quinases activadas por mitogénios (MKK). Em eucariotas superiores, o papel fisiológico da sinalização de MAPK tem sido correlacionado com eventos celulares tais como proliferação, oncogénese, desenvolvimento e diferenciação. Assim, a capacidade de regular a transdução de sinal através destas vias (nomeadamente através de MKK4 e MKK6) poderia levar ao desenvolvimento de tratamentos e terapias preventivas de doenças humanas associadas com sinalização de MAPK tais como doenças inflamatórias, doenças auto-imunes e cancro. A família de proteina-quinases ribossómicas S6 humanas consiste em pelo menos 8 membros (RSKI, RSK2, RSK3, RSK4, MSK1, MSK2, p70S6K e p70S6 Kb). A proteína ribossómica proteína-quinase S6 desempenha importantes funções pleotrópicas de entre as quais um papel principal na regulação de tradução de ARNm durante biossíntese de proteínas (Eur. J. Biochem Novembro de 2000; 267(21): 6321-30; Exp Cell Res. Nov. 16 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 25, 1999; 253 (1):100-9, Mol Cell Endocrinol. 25 de Maio de 1999;151 (1-2):65-77). A fosforilação da proteína ribossómica S6 por p70S6 tem sido também implicada na regulação da motilidade celular (Immunol. Cell Biol. Agosto de 2000;78 (4) :447-51) e crescimento celular (Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 2000;65:101-27) e portanto pode ser importante em metástase de tumor, na resposta imunitária e na reparação de tecidos assim como noutras doenças.

As SAPK (também denominadas "quinases terminais N de jun" ou "JNK") são uma família de proteína-quinases que representam a penúltima etapa nas vias de transdução de sinal que resultam em activação do factor de transcrição c-jun e expressão de genes regulados por c-jun. Nomeadamente, c-jun está envolvido na transcrição de genes que codificam proteínas envolvidas na reparação de ADN que é danificado devido a agressões genotóxicas. Os agentes que inibem actividade de SAPK numa célula evitam reparação de ADN e sensibilizam a célula para as modalidades terapêuticas de cancro que actuam por indução de danos do ADN. A BTK desempenha um papel em doenças auto-imunes e/ou inflamatórias tais como lúpus eritematoso sistémico (LES), artrite reumatóide, vasculites múltiplas, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), miastenia grave e asma. Devido ao papel da BTK na activação de células B, os inibidores de BTK são úteis como inibidores de actividade patogénica mediada por células B, tal como produção de auto-anticorpos e são úteis para o tratamento de linfoma de células B e leucemia. A CHK2 é um membro da família de quinases de ponto de verificação de serina/treonina-proteína-quinases e está envolvida num mecanismo utilizado para vigilância de danos do ADN, tais como danos causados por mutagénios ambientais e espécies reactivas de oxigénio endógenas. Consequentemente, está implicada como um supressor de tumores e alvo para terapia de cancro. A CSK influencia o potencial metastático das células de cancro, nomeadamente cancro de cólon. 17 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ A Fes é uma proteína-tirosina-quinase não receptora que tem sido implicada em várias vias de transdução de sinal de citoquinas assim como na diferenciação de células mielóides. A Fes é também uma componente chave na maquinaria de diferenciação de granulócitos. A actividade de tirosina-quinase do receptor Flt3 está implicada em leucemias e sindrome mielodisplásica. Em aproximadamente 25% da LMA as células de leucemia expressam uma forma constitutivamente activa de tirosina-quinase FLT3 auto-fosforilada (p) à superfície celular. A actividade de p-FLT3 confere vantagens de crescimento e sobrevivência às células de leucemia. Os doentes com leucemia aguda, cujas células de leucemia expressam actividade de quinase p-FLT3, têm um resultado clínico globalmente fraco. A inibição da actividade de quinase p-FLT3 induz apoptose (morte celular programada) das células de leucemia.

Os inibidores de iKKa e ΐκκβ (1 e 2) são factores terapêuticos para doenças que incluem artrite reumatóide, rejeição de transplantes, doença intestinal inflamatória, osteoartrite, asma, doença pulmonar obstrutiva crónica, aterosclerose, psoríase, esclerose múltipla, AVC, lúpus eritematoso sistémico, doença de Alzheimer, isquemia cerebral, traumatismo craniano, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, hemorragia subaracnóidea ou outras doenças associadas com produção excessiva de mediadores inflamatórios no cérebro e sistema nervoso central.) A Met está associada com a maioria dos tipos principais de cancros humanos e a sua expressão está muitas vezes correlacionada com prognóstico fraco e metástases. Os inibidores de Met são agentes terapêuticos para doenças que incluem cancros tais como cancro de pulmão, CPCNP (cancro do pulmão de células não pequenas), cancro ósseo, cancro pancreático, cancro de pele, cancro da cabeça e do pescoço, melanoma cutâneo ou intra-ocular, cancro do útero, cancro do ovário, cancro rectal, cancro da região anal, cancro do estômago, cancro do cólon, cancro da mama, tumores ginecológicos (e.g., sarcomas uterinos, carcinoma das trompas de Falópio, carcinoma do endométrio, carcinoma cervical, carcinoma da vagina ou carcinoma da vulva), doença de Hodgkin, 18 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ cancro do esófago, cancro do intestino delgado, cancro do sistema endócrino (e.g., cancro da tiróide, paratiróide ou glândulas supra-renais), sarcomas dos tecidos moles, cancro da uretra, cancro do pénis, cancro da próstata, leucemia crónica ou aguda, tumores sólidos da infância, linfomas linfociticos, cancro da bexiga, cancro do rim ou do uréter (e. g., carcinoma das células renais, carcinoma da pélvis renal), malignidade pediátrica, neoplasias do sistema nervoso central (e. g., linfoma primário do SNC, tumores do eixo espinal, glioma do tronco cerebral ou adenomas pituitários), cancros do sangue tal como leucemia mielóide aguda, leucemia mielóide crónica, etc., esófago de Barrett (sindrome pré-maligno), doença cutânea neoplásica, psoriase, micoses fungóides e hipertrofia benigna da próstata, doenças relacionadas com diabetes tal como retinopatia diabética, isquemia da retina e neovascularização da retina, cirrose hepática; doença cardiovascular tal como aterosclerose, doença imunológica tal como doença auto-imune e doença renal. Preferentemente, a doença é cancro tal como leucemia mielóide aguda e cancro colorrectal. A quinase 2 relacionada com Nima (Nek2) é uma proteína-quinase regulada pelo ciclo celular com actividade máxima no inicio da mitose e que se localiza no centrossoma. Estudos funcionais implicaram Nek2 na regulação da separação do centrossoma e formação do fuso. A proteína Nek2 sofre um aumento de duas a cinco vezes em linhas celulares derivadas de uma gama de tumores humanos incluindo os tumores cervicais, dos ovários, da próstata e nomeadamente de mama.

As doenças mediadas por p70S6K incluem, entre outras, doenças proliferativas tal como cancro e esclerose tuberosa.

De acordo com o anteriormente enunciado, o presente invento proporciona adicionalmente compostos para utilização em evitar ou tratar qualquer das doenças anteriormente descritas num indivíduo com necessidade de tal tratamento, cujo método compreende administrar ao referido indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz (consultar, "Administração e composições farmacêuticas", seguidamente) de um composto de fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Para qualquer das utilizações anteriormente enunciadas, a dosagem 19 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ requerida variará dependendo do modo de administração, da doença especifica a ser tratada e do efeito pretendido.

Administração e composições farmacêuticas

De um modo geral, os compostos do invento serão administradas em quantidades terapeuticamente eficazes através de qualquer dos modos habituais e aceitáveis na especialidade, quer por si só, quer em combinação com um ou mais agentes terapêuticos. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode variar largamente dependendo da gravidade da doença, da idade e saúde relativa do indivíduo, da potência do composto utilizado e de outros factores. De um modo geral, indica-se que se obtêm resultados satisfatórios sistemicamente a dosagens diárias de cerca de 0,03 a 2,5mg/kg de peso corporal. Uma dosagem diária indicada em mamíferos maiores, e.g. humanos, está na gama de cerca de 0,5 mg a cerca de 100 mg, convenientemente administrada, e.g. em doses divididas até quatro vezes por dia ou em forma retardada. As doses unitárias adequadas para administração oral incluem desde cerca de 1 a 50 mg de ingrediente activo.

Os compostos do invento podem ser administrados como composições farmacêuticas por qualquer via convencional, em particular entérica, e.g., oral, e.g., na forma de comprimidos ou cápsulas ou parentericamente, e.g., na forma de soluções ou suspensões injectáveis, topicamente, e.g., na forma de loções, géis, unguentos ou cremes ou numa forma nasal ou de supositórios. As composições farmacêuticas compreendendo um composto do presente invento em forma livre ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável em associação com pelo menos um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável podem ser fabricadas de um modo convencional por métodos de mistura, granulação ou revestimento. Por exemplo, as composições orais podem ser comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo o ingrediente activo conjuntamente com a) diluentes, e.g., lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrificantes, e.g., sílica, talco, ácido esteárico, o seu sal de magnésio ou de cálcio e/ou polietilenoglicol; para comprimidos também c) aglutinantes, e.g., aluminossilicato de magnésio, pasta de amido, gelatina, goma adragante, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio e 20 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ ou polivinilpirrolidona; caso pretendido d) desintegrantes, e.g., amidos, ágar-ágar, ácido alginico ou o seu sal de sódio ou misturas efervescentes; e/ou e) absorventes, corantes, aromas e adoçantes. As composições injectáveis podem ser soluções ou suspensões aquosas isotónicas e podem preparar-se supositórios a partir de emulsões ou suspensões gordas. As composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, tal como agentes conservantes, de estabilização, molhantes ou emulsionantes, promotores de solução, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões. Além disso, estas podem também conter outras substâncias de valor terapêutico. As formulações adequadas para aplicação transdérmica incluem uma quantidade eficaz de um composto do presente invento com um transportador. Um transportador pode incluir solventes absorvíveis aceitáveis farmacologicamente para ajudar na passagem através da pele do hospedeiro. Por exemplo, os dispositivos transdérmicos são na forma de uma ligadura compreendendo um membro de suporte, um reservatório contendo o composto opcionalmente com transportadores, opcionalmente uma barreira de controlo de fluxo para entregar o composto à pele do hospedeiro a uma taxa controlada e predeterminada ao longo de um período de tempo prolongado e meios para fixar o dispositivo à pele. Podem também utilizar-se formulações transdérmicas em matriz. As formulações adequadas para aplicação tópica, e.g., na pele e olhos, são preferentemente soluções aquosas, unguentos, cremes ou géis bem conhecidos na especialidade. Estes podem conter solubilizantes, estabilizadores, agentes de melhoria de tonicidade, tampões e conservantes.

Os compostos do invento podem ser administrados em quantidades terapeuticamente eficazes em combinação com um ou mais agentes terapêuticos (combinações farmacêuticas). Por exemplo, podem ocorrer efeitos sinérgicos com outras substâncias imunomoduladoras ou anti-inflamatórias, por exemplo quando utilizados em combinação com ciclosporina, rapamicina ou ascomicina ou seus análogos imunossupressores, por exemplo, ciclosporina A (CsA), ciclosporina G, FK-506, rapamicina ou compostos comparáveis, corticosteróides, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexato, brequinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato mofetil, 15-desoxispergualina, anticorpos imunossupressores, 21 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ especialmente anticorpos monoclonais para receptores de leucócitos, por exemplo MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58 ou seus ligandos ou outros compostos imunomoduladores, tal como CTLA41 g. Em que os compostos do invento são administrados em conjunto com outras terapias, sendo que as dosagens dos compostos co-administrados obviamente variarão dependendo do tipo de co-fármaco utilizado, do fármaco especifico utilizado ou da doença a ser tratada, etc. O invento também proporciona combinações farmacêuticas, e.g. um kit, compreendendo a) um primeiro agente que é um composto do invento tal como aqui divulgado, na forma livre ou na forma de um sal aceitável farmaceuticamente e b) pelo menos um co-agente. O kit pode compreender instruções para a sua administração.

As expressões "co-administração" ou "administração combinada" ou semelhantes tal como aqui utilizadas pretendem abranger administração de agentes terapêuticos seleccionados a um único doente e pretende-se que incluam regimes de tratamento nos quais os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo. A expressão "combinação farmacêutica" tal como aqui utilizada significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais que um ingrediente activo e inclui tanto combinações fixas como não fixas dos ingredientes activos. A expressão "combinação fixa" significa que os ingredientes activos, e.g. um composto de fórmula I e um co-agente, são ambos administrados a um doente simultaneamente na forma de uma entidade ou dosagem únicas. A expressão "combinação não fixa", significa que os ingredientes activos, e.g. um composto de fórmula I e um co-agente, são ambos administrados a um doente como entidades separadas de forma simultânea, concomitante ou sequencial sem limites temporais específicos, em que tal administração proporciona níveis terapeuticamente eficazes dos 2 compostos no corpo do doente. Este último aspecto também se aplica a terapia em cocktail, e.g. a administração de 3 ou mais ingredientes activos. 22 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Processos para produzir compostos do invento

Descrevem-se processos para a preparação de compostos do invento. Nas reacções descritas pode ser necessário proteger grupos funcionais reactivos, por exemplo grupos hidroxilo, amino, imino, tio ou carboxilo, quando estes se pretendem no produto final para evitar a sua participação não desejada nas reacções. Podem utilizar-se grupos protectores convencionais de acordo com a prática comum, por exemplo, consultar T.W. Greene e P.G.M. Wuts em "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991.

Podem preparar-se compostos de fórmula 1, em que Ri é -NR7R8, por um procedimento tal como no esquema reaccional I seguinte:

Em que Y, Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são como definido no Sumário do invento. Pode sintetizar-se um composto de fórmula I por reacção de um composto de fórmula 2 e de um composto de fórmula 3. A reacção ocorre numa gama de temperaturas entre cerca de 110°C e cerca de 150°C e pode levar até cerca de 1 hora para se completar.

Os compostos de fórmula I, em que m é 1, podem ser preparados por um procedimento tal como no esquema reaccional lia seguinte: 23 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Esquema reaccional lia

)

Em que m, Y, Rlr R2, R3, R4, R5, R6, R7 e Re são como definido no Sumário do invento. Pode sintetizar-se um composto de fórmula I por reacção de um composto de fórmula 4 e de um composto de fórmula 5 na presença de um solvente adequado (por exemplo, diclorometano e semelhantes). A reacção ocorre numa gama de temperaturas entre cerca de 10°C e cerca de 50°C e pode levar até cerca de 24 horas para se completar.

Encontram-se nos exemplos seguintes, exemplos detalhados de síntese de um composto de fórmula I.

Processos adicionais para preparar compostos do invento

Pode preparar-se um composto do invento na forma de um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável por reacção da forma de base livre do composto com um ácido inorgânico ou orgânico farmaceuticamente aceitável. Alternativamente, pode preparar-se um sal de adição de base farmaceuticamente aceitável de um composto do invento por reacção da forma de ácido livre do composto com uma base inorgânica ou orgânica farmaceuticamente aceitável. 24 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Alternativamente, as formas de sal dos compostos do invento podem ser preparadas utilizando sais dos materiais de partida ou intermediários.

Podem preparar-se as formas de ácido livre ou base livre dos compostos do invento a partir do sal de adição de base ou do sal de adição de ácido correspondente, respectivamente. Por exemplo, pode converter-se um composto do invento sob a forma de sal de adição de ácido na base livre correspondente por tratamento com uma base adequada (e.g., solução de amoníaco, hidróxido de sódio e semelhantes). Pode converter-se um composto do invento sob a forma de sal de adição de base no ácido livre correspondente por tratamento com um ácido adequado (e.g., ácido clorídrico, etc.).

Podem preparar-se os compostos do invento na forma não oxidada a partir de N-óxidos de compostos do invento por tratamento com um agente redutor (e.g., enxofre, dióxido de enxofre, trifenilfosfina, boro-hidreto de lítio, boro-hidreto de sódio, tricloreto de fósforo, tribrometo de fósforo ou semelhantes) num solvente orgânico inerte adequado (e.g. acetonitrilo, etanol, dioxano aquoso ou semelhantes) de 0 a 80°C.

Podem preparar-se derivados pro-fármacos dos compostos do invento por métodos conhecidos de um perito comum da especialidade (e.g., para detalhes adicionais consultar Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985) . Por exemplo, podem preparar-se pro-fármacos adequados por reacção de um composto do invento não derivatizado com um agente de carbamilação adequado (e.g., 1,1-aciloxialquilcarbanocloridato, para-nitrofenilcarbonato, ou semelhantes).

Podem preparar-se derivados protegidos dos compostos do invento por métodos conhecidos dos peritos comuns da especialidade. Pode encontrar-se uma descrição detalhada de técnicas aplicáveis para a criação de grupos protectores e sua remoção em T.W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3a edição, John Wiley and Sons, Inc., 1999. 25 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Podem preparar-se convenientemente compostos do presente invento ou formados durante o processo do invento, como solvatos (e.g., hidratos) . Os hidratos de compostos do presente invento podem ser preparados convenientemente por recristalização com uma mistura de água/solvente orgânico, utilizando solventes orgânicos tais como dioxina, tetra-hidrofurano ou metanol.

Podem preparar-se compostos do invento como os seus estereoisómeros individuais por reacção de uma mistura racémica do composto com um agente resolvente activo opticamente para formar um par de compostos diastereoisoméricos, separando os diastereoisómeros e recuperando os enantiómeros opticamente puros. Enquanto a resolução de enantiómeros pode ser efectuada utilizando derivados diastereoisoméricos covalentes dos compostos do invento, são preferidos complexos dissociáveis (e.g., sais diastereoisoméricos cristalinos). Os diastereoisómeros têm propriedades fisicas diferentes (e.g., pontos de fusão, pontos de ebulição, solubilidades, reactividade, etc.) e podem ser facilmente separados tomando partido destas diferenças. Os diastereoisómeros podem ser separados por cromatografia ou, de preferência, por técnicas de separação/resolução baseadas em diferenças de solubilidade. Recupera-se então o enantiómero opticamente puro, conjuntamente com o agente resolvente, por quaisquer meios práticos que não resultem em racemização. Pode encontrar-se uma descrição mais detalhada das técnicas aplicáveis à resolução de estereoisómeros de compostos a partir da sua mistura racémica em Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981.

Em resumo, os compostos de fórmula I podem ser preparados por um processo que envolve: (a) o do esquema reaccional I, lia; e (b) opcionalmente, converter um composto do invento num sal farmaceuticamente aceitável; (c) opcionalmente, converter uma forma salina de um composto do invento numa forma não salina; 26 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ (d) opcionalmente, converter uma forma não oxidada de um composto do invento num N-óxido farmaceuticamente aceitável; (e) opcionalmente, converter uma forma N-óxido de um composto do invento na sua forma não oxidada; (f) opcionalmente, resolver um isómero individual de um composto do invento a partir de uma mistura de isómeros; (g) opcionalmente, converter um composto não derivatizado do invento num derivado pro-fármaco farmaceuticamente aceitável; e (h) opcionalmente, converter um derivado pro-fármaco de um composto do invento na sua forma não derivatizada.

Nos casos em que a produção dos materiais em causa não está particularmente descrita, os compostos são conhecidos ou podem ser preparados por métodos análogos conhecidos na especialidade ou como divulgado nos exemplos em seguida no presente documento.

Um perito na especialidade considerará que as transformações anteriores são apenas representativas de métodos para a preparação dos compostos do presente invento e que podem ser utilizados similarmente outros métodos bem conhecidos.

Exemplos O presente invento é exemplificado adicionalmente, mas não limitado, pelos seguintes exemplos que ilustram a preparação de compostos de fórmula 1 de acordo com o invento.

Exemplo 1 N—{3— [2— (3-terc-butilureido)-[1,6]naftiridin-3-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida

H 27 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Etapa A: Preparação de 3-amino(2,β-diclorofenil)acetonitrilo ci

NH A uma solução em suspensão de 2,6-dicloronitroacetonitrilo (2,00 g, 8,66 mmol) em EtOH (100 mL) adiciona-se uma solução de Sn(II)Cl2 (5,75 g, 30,30 mmol) em HC1 (conc. 20 mL) a 75°C. Após agitação durante 30 minutos a 75°C, dilui-se a mistura com EtOAc e neutraliza-se com K2CO3 até um pH de 8. Lava-se a camada orgânica com K2CO3 concentrado, solução salina e seca-se, filtra-se e concentra-se para obter o produto impuro. O produto impuro é purificado por recristalização com CH2Cl2/EtOAc/Hexano para obter o intermediário pretendido como um sólido: RMN de 400 MHz (CDC13) δ 7,14 (d, 1H), 6,73 (d, 1H), 4,19 (s, largo, 2H) , 3,97 (s, 2H) ; MS m/z 202, 10 (M+1) .

Etapa B: Preparação de 3-(3-amino-2,6-diclorofenil)- [1,6]naftiridin-2-ilamina

Adiciona-se sódio (256 mg, 15,46 mmol) a 2-etoxietanol (25 mL) a 0°C e agita-se a mistura à temperatura ambiente até se tornar uma solução limpida. Adicionam-se 3-amino-2,6-diclorofenil)acetonitrilo (3,16 g, 15,72 mmol) e 4-aminopiridino-3-carbaldeído (1,60 g, 13,10 mmol) à solução anterior e aquece-se a 140°C durante 4 horas. Dilui-se a mistura reaccional com EtOAc (150 ml) e lava-se com K2CO3 saturado e solução salina. Seca-se a camada orgânica, filtra-se e concentra-se para obter o produto impuro. Por purificação em coluna de silica gel "flash" com eluição com gradiente de CH2C12 (100%) até CH2Cl2/MeOH (NH3 2 N) (93/7%) obtém-se 0 intermediário pretendido como um sólido: RMN de 1H 400 MHz (DMSO) δ 8,91 (s, 1H) , 8,42 (d, 1H) , 7,88 (s, 1H) , 7,34 (d, 1H), 7,26 (d, 1H), 6,89 (d, 1H), 6,61 (s, largo, 2H), 5, 67 (s, 2H) . 28 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Etapa C: Preparação de N-[3-(2-aminoquinolin-3-il)-2,4- diclorofenil)-3-trifluorometilbenzamida

A uma solução de 3-(3-amino-2,6-diclorofenil)- [1.6] naftiridin-2-ilamina (2,0 g, 6,554 mmol) em diclorometano (400,0 mL) adiciona-se cloreto de 3-(trifluorometil)benzoílo (4,78 g, 22,94 mmol). Seguidamente, agita-se a mistura durante 24 horas à temperatura ambiente, dilui-se com EtOAc e lava-se com K2CO3 saturado, solução salina e água. Seca-se a camada orgânica, filtra-se e concentra-se para obter o produto impuro, que é purificado em coluna de sílica gel "flash" com eluição com gradiente de CH2CI2 (100%) até CH2Cl2/MeOH (NH3 2 N) (95/5) para obter o produto como um sólido: RMN de 1H 400 MHz (CDCI3) δ 8,97 (s, 1H) , 8,61 (d, 1H) , 8,57 (d, 1H) , 8,52 (s, 1H) , 8,20 (s, 1H) , 8,06 (d, 1H) , 7,86 (d, 1H) , 7,85 (s, 1H) , 7,68 (t, 1H), 7,58 (d, 1H) , 7,51 (d, 3H) , 5,25 (s, 2H) ; MS m/z 478,10 (M+1) .

Etapa D: Preparação de N-{3-[2-(3-terc-butilureido)- [1.6] naftiridin-3-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida.

A uma solução de N-[3-(2-aminoquinolin-3-il)-2,4-diclorofenil]-3-trifluorometilbenzamida (100,0 mg, 0,210 mmol) em DMF (4,0 mL) adiciona-se NaH (60%, 10,9 mg, 0,273 mmol) à temperatura ambiente. Após agitação da mistura durante 30 minutos à temperatura ambiente, adiciona-se isocianato de terc-butilo (24,9 mg, 0,252 mmol) e agita-se a mistura durante 6 horas. Dilui-se a mistura reaccional com EtOAc e lava-se com K2CO3 saturado, solução salina e água. Seca-se a camada orgânica, filtra-se e concentra-se para obter o produto impuro, que é purificado em coluna de sílica gel "flash" com eluição com gradiente de CH2C12 (100%) até CH2Cl2/MeOH (NH3 2 N) (95/5) para obter o produto final como um sólido: RMN de 29 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 400 ΜΗζ (CDC13) δ 9,97 (s, 1Η) , 9,56 (s, 1Η) , 8,80 (m, 2Η) , 8,44 (s, 1Η) , 8,26 (s, 1Η) , 8,24 (s, 1Η) , 8,12 (d, 1Η) , 7,94 (m, 2Η) , 7,37 (t, 1Η) , 7,67 (d, 1Η) ; MS m/z 577,70 (Μ+1) .

Exemplo 2 Ν-[3-(2-benzoilamino-[1,6]naftiridin-3-il)-2,4-diclorofenil]-3-trifluorometilbenzamida

Utilizou-se o mesmo procedimento da preparação de N—[3— (2— aminoquinolin-3-il)-2,4-diclorofenil]-3-trifluorometilbenzamida na etapa C. O produto pretendido é obtido como um sólido: RMN de ΧΗ 400 MHz (CDC13) δ 8,72 (s, 1 H) . 8,58 (d, 1H) , 8,40 (s, 1H) , 8,11 (m, 2H), 8,01 (s, 1H), 7,99 (s, 1H) , 7,78 (d, 1H), 7,65 (m, 3H) , 7,51 (m, 2H) , 7,45 (m, 2H) ; MS m/z 650,10 (M+1) .

Exemplo 3 N-{2,4-dicloro-3-[2-(2-dimetilaminoacetilamino)-[1,6]naftiridin^ 3-il]fenil}-3-trifluorometilbenzamida

Utilizou-se o mesmo procedimento da preparação de N—[3— (2 — aminoquinolin-3-il)-2,4-diclorofenil]-3-trifluorometilbenzamida na etapa C. O produto pretendido foi obtido como um sólido: RMN de 400 MHz (CD3OD) δ 9,18 (s, 1H) , 8,63 (d, 1H) , 8,42 (s, 1H), 8,20 (s, 1H) , 8,17 (d, 1H), 7,95 (d, 1H) , 7,91-7,83 (m, 2H), 7, 69-7, 65 (m, 2H) , 3,13 (s largo, 2H) , 2,15 (s, 6H) ; MS m/z 562,10 (M+1) . 30 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Exemplo 4 N-{2,4-dicloro-3-[2-(3-fenilureido)-[l,6]naftiridin-3-il]-fenil}-3-trifluorometilbenzamida

Utilizou-se o mesmo procedimento da preparação de N-{3-[2-(3-terc-butilureido)-[l,6]naftiridin-3-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida na etapa D. O produto pretendido foi obtido como um sólido: RMN de 1H 400 MHz (CD3OD) δ 9,48 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,54 (s, 1H) , 8,27-8,10 (m, 3H) , 8,00 (d, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,78 -7,75(m, 2H), 7,69 (dd, 2H), 7,42-7,37 (m, 3H); MS m/z 596,10 (M + 1).

Esquema 2

31 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Exemplo 5 Ν-{3- [2-amino-7- (3-terc-butilureido)pirido[2,3-d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida

Etapa A: Preparação de N-[3-(7-amino-2-metilsulfanilpirido-[2,3-d]pirimidin-6-il)-2,4-diclorofenil]-3-trifluorometilbenzamida

A uma solução de 6-(3-amino-2,6-diclorofenil)-2-metilsulfanilpirido[2,3-d]pirimidin-7-ilamina (600 mg, 1,7 mmol) em diclorometano (60 ml) adiciona-se cloreto de 3-trifluorometilbenzoílo (1,76 g, 8,5 mmol) lentamente a 0°C num banho de gelo. Leva-se então a reacção até à temperatura ambiente e agita-se à temperatura ambiente durante 18 horas. Lava-se a mistura reaccional com K2CO3 a 10% e solução salina. Seca-se a camada orgânica com MgS04. O produto impuro é purificado em coluna de sílica gel "flash" com eluição com CH2Cl2/MeOH (NH3 7 N) (v/v:98/2) para obter o produto pretendido como um sólido amarelo claro.

Etapa B: Preparação de N-{3-[7-(3-terc-butilureido)-2-meti1sulfanilpirido[2,3-d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida

A A uma solução de N-[3-(7-amino-2-metilsulfanilpirido[2,3-d]-pirimidin-6-il)-2,4-diclorofenil]-3-trifluorometilbenzamida (700 mg, 1,34 mmol) em DMF seco (10 ml) a 0°C adiciona-se NaH (suspensão em óleo a 60%, 64 mg, 1,6 mmol) lentamente. 32 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Agita-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 30 minutos e seguidamente adiciona-se à mistura reaccional isocianato de t-butilo (0,19 ml), 1,6 mmol). Agita-se a reacção à temperatura ambiente durante 5 horas. Dilui-se a mistura reaccional em 100 ml de água, extrai-se com 80 ml de acetato de etilo três vezes. Combina-se a fase orgânica e lava-se com solução salina, seca-se com Na2S04. O produto impuro é purificado por coluna de sílica gel "flash" para obter o composto pretendido como um sólido amarelo claro.

Etapa C: Preparação de N-{3-[7-(3-terc-butil-ureido)-2- metanossulfonil-pirido[2,3—d]pirimidin-6-il]-2,4-dicloro-fenil}-3-trifluorometil-benzamida

Λ A uma solução de N-{3-[7-(3-terc-butilureido)-2-metilsulfanilpirido[2,3—d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trif luorometilbenzamida (700 mg, 1,12 mmol) em 100 ml de diclorometano adiciona-se ácido 3-cloroperoxibenzóico (77%, 3,1 g, 3,4 mmol). Agita-se a reacção à temperatura ambiente durante 3 horas. Lava-se a mistura reaccional com 100 ml de NaHC03 a 10% e solução salina. Seca-se a fase orgânica com MgS04. Purifica-se o produto impuro por coluna de sílica gel "flash" com eluição com acetato de etilo a 30% em hexano para obter o composto pretendido (622 mg, rendimento de 84%) como um sólido amarelo.

Etapa D: Preparação de N-{3-[2-amino-7-(3-terc-butilureido)-pirido[2,3—d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida

A A uma solução de N-{3-[7-(3-terc-butilureido)-2-metanossulfonilpirido[2,3—d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida (80 mg, 0,12 mmol) em metanol (5 ml) 33 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ adiciona-se amoníaco (solução em metanol, 20 ml, 0,14 mmol) e DIEA (41 μΐ, 0,24 mmol). Agita-se a reacção a 80°C durante 4 horas. Remove-se o metanol num evaporador rotativo e purifica-se o composto impuro por RP-HPLC para obter o composto pretendido como um sólido branco: RMN de 1E 400 MHz (DMSO) δ 10,46 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,23 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 8,00 (s, 1H), 7,96 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7,76 (m, 3H), 7,68 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,48 (s, 2H), 1,32 (s, 9H); MS m/z 592,2 (M+1) .

Exemplo 6 N-{3-[7-(3-terc-butilureido)-2-etilaminopirido[2,3—d]-pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida

A

Este composto é preparado utilizando um procedimento semelhante ao descrito anteriormente, excepto na etapa D em que se utiliza etilamina em vez de amoníaco. O composto pretendido é obtido como um sólido branco: RMN de 1H 400 MHz (DMSO) δ 10,48 (s, 1H) , 8,89 (s, 1H) , 8,28 (s, 1H) , 8,22 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 8,00 (s, 1H), 7,94 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,76 (m, 3H), 7,68 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 3,84 (s, 1H), 3,36 (m, 2H), 1,31 (s, 9H), 1,14 (t, 2H, J = 6, 8 Hz); MS m/z 620,2 (M+1) .

Exemplo 7 N-{3-[7-(3-terc-butilureido)-2-(3-morfolin-4-ilpropilamino)-pirido[2,3-d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida

A

Este composto é preparado utilizando um procedimento semelhante ao descrito anteriormente excepto que, na etapa D, 34 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ se utilizou 3-morfolin-4-il-propilamina em vez de amoníaco. O composto pretendido é obtido como um sólido branco: RMN de 1H 400 MHz (DMSO) δ 10,59 (s, 1H), 8,40 (s, 1H) , 8,37 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 8,11 (s, 1H), 8,09 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,96 (m, 1H), 7,87 (t, 3H, J = 8,0 Hz), 7,77 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,70 (m, 4H), 3,53 (m, 4H) , 3,26 (m, 2H) , 2,09 (m, 2H) , 1,46 (s, 9H) ; MS m/z 719,2 (M+1) .

Exemplo 8 N-(3-{7-(3-terc-butilureidol-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)fenilamino]-pirido[2,3-d]pirimidin-6-il}-2,4-diclorofenil)-3-trifluoro-metilbenzamida

Este composto é preparado utilizando um procedimento semelhante ao descrito anteriormente excepto que, na etapa D, se utilizou o seguinte procedimento. A uma solução de N-{3-[7-(3-terc-butilureido)-2-metanossulfonilpirido[2,3-d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida (50 mg, 0,08 mmol) em DMF (2 ml) adiciona-se ácido p-toluenossulfónico (15 mg, 0,08 mmol) e 4-(2-dietilaminoetoxi) fenilamina (21 mg, 0,1 mmol). Agita-se a reacção a 80°C durante 4 horas. Purifica-se o produto impuro por RP-HPLC para obter o composto pretendido como um sólido amarelo: RMN de 1H 400 MHz (DMSO) δ 10,46 (s, 1H), 10,09 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 9,05 (s, 1H) , 8,28 (s, 1H), 8,24 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 8,05 (m, 2H), 7,95 (m, 3H), 7,76 (m, 3H), 7,67 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 4,24 (t, 2H, J = 4,6 Hz); 3,45 (m, 2H) , 3,15 (m, 4H) , 1,39 (s, 9H) , 1,18 (t, 6H, J = 7,2 Hz); MS m/z 783, 3 (M+1) . 35 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Esquema 3

Exemplo 9 Ν- (4-cloro-ll-oxa-7,10-diazabenzo[b]fluoren-l-il)-3- trifluorometilbenzamida

F

F

F

Etapa A: Preparação de 4-cloro-l-nitro-ll-oxa-7,10-diazabenzo-[b]flúor

Aquece-se uma solução de 2- (2,6-dicloro-3-nitrofenil)-N-(3-formilpiridin-4-il)acetamida (0,40 g, 1,13 mmol) e K2CO3 (390 mg, 2,83 mmol) em DMF (9,0 mL) durante 17 minutos a 110°C. Dilui-se a mistura reaccional com EtOAc e lava-se com K2CO3 saturado e água. Seca-se a camada orgânica, filtra-se e concentra-se para obter o produto impuro. Por purificação em coluna de sílica gel "flash" com eluição com gradiente de CH2CI2 (100%) até CH2Cl2/MeOH (99/1%) obteve-se o intermediário pretendido como um sólido: RMN de 1H 400 MHz (DMSO) δ 9,81 (s, 1H), 9,73 (s, 1H), 8,94 (d, 1H), 8,56 (d, 1H) , 8,12 (d, 1H), 7,92 (d, 1H) . MS m/z 300,15 (M+1) . 36 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Etapa A' : Reacção alternativa para preparar 4-cloro-l-nitro-ll-oxa-7,10-diazabenzo[b]flúor

Segue-se o procedimento da etapa A, excepto pela substituição de 2-(2,6-dicloro-3-nitrofenil)-N-(3-formil-piridin-4-il)acetamida por 3-(2-cloro-5-nitrofenil)-1H- [1.6] naftiridin-2-ona na etapa A e prepara-se o mesmo composto como um sólido.

Etapa A": Preparação de 10-cloro-7-nitro-6H-indolo[2,3—b]- [1.6] naftiridina.

u o

Segue-se o procedimento da etapa A, excepto pela substituição de 2-(2,6-dicloro-3-nitrofenil)-N-(3-formil-piridin-4-il)acetamida por 3-(2-cloro-5-nitrofenil)- [1,6]naftiridin-2-ilamina na etapa A e prepara-se o composto pretendido como um sólido: MS m/z 299, 20 (M+1) .

Etapa B: Preparação de 4-cloro-ll-oxa-7,10-diazabenzo[b]-fluoren-l-ilamina

ΝΗ2 A uma solução em suspensão de 4-cloro-l-nitro-ll-oxa-7,10-diazabenzo [b]flúor (300 mg, 1,0 mmol) em EtOH (4,0 mL) adiciona-se uma solução de Sn(II)Cl2 (759 mg, 4,0 mmol) em HCl (conc. 4,0 mL) a 75°C. Após agitação durante uma hora a 75°C, dilui-se a mistura com EtOAc e neutraliza-se com K2CO3 até um pH de 8. Lava-se a camada orgânica com K2CO3 saturado, solução salina e seca-se, filtra-se e concentra-se para obter o produto impuro. Por purificação em coluna de sílica gel "flash" com eluição com gradiente de CH2C12 (100%) até CH2Cl2/MeOH (NH3 2N) (98/2%) obteve-se o intermediário pretendido como um sólido: MS m/z 202, 10 (M+1) . 37 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ

Etapa C: Preparação de N-(4-cloro-ll-oxa-7,10-diazabenzo[b]-fluoren-l-il)-3-trifluorometil-benzamida

A uma solução de 4-cloro-ll-oxa-7,10-diazabenzo[b]fluoren-1-ilamina (35 mg, 0,13 mmol) em diclorometano (2,0 mL) adiciona-se cloreto de 3-(trifluorometil)benzoílo (54,2 mg, 0,26 mmol). Seguidamente, agita-se a mistura durante 24 horas à temperatura ambiente, dilui-se com EtOAc e lava-se com K2C03 saturado, solução salina e água. Seca-se a camada orgânica, filtra-se e concentra-se para obter o produto impuro, que é purificado por coluna de silica gel "flash" com eluição com gradiente de CH2CI2 (100%) até CfhCWMeOH (98/2) para obter o produto como um sólido: RMN de 1H 4 00 MHz (DMSO) δ 10,85 (s, 1H), 9,53 (s, 1H), 9,37 (s, 1H) , 8,63 (d, 1H) , 8,24 (s, 1H) , 8,19 (d, 1H) , 7,87 (d, 1H) , 7,77 (d, 1H) , 7,72 (d, 1H) , 7,67 (t, 1H), 7,48 (d, 1H); MS m/z 442,85 (M+1) .

Ensaios

Ensaiam-se os compostos do presente invento para medir a sua capacidade de inibir selectivamente a proliferação celular de células 32D que expressam BCR-Abl (32D-p2lO) comparativamente às células 32D parentais. Os compostos que inibem selectivamente a proliferação destas células transformadas com BCR-Abl são ensaiados para actividade antiproliferativa em células Ba/F3 que expressam as formas de tipo selvagem ou mutante de Bcr-abl. Além disso, ensaiam-se os compostos para medir a sua capacidade de inibir as quinases FGFR3, b-RAF, Abl, BMX, BTK, CHK2, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRa, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e TrkB.

Inibição de proliferação celular dependente de BCR-Abl (método de alto rendimento) A linha celular murina utilizada é a linha celular progenitora hemopoiética 32D transformada com ADNc de BCR-Abl (32D-p210). Estas células são mantidas em RPMI/soro fetal de 38 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ vitelo a 10% (RPMI/FCS) suplementado com penicilina a 50 pg/mL, estreptomicina a 50 pg/mL e L-glutamina 200 mM. Mantêm-se células 32D não transformadas de forma semelhante com a adição de 15% de meio condicionado WEHI como uma fonte de IL3.

Plaqueiam-se 50 pl de uma suspensão de células 32D ou 32D-p210 em microplacas de 384 poços Greiner (pretas) a uma densidade de 5000 células por poço. Adicionam-se 50 nl do composto de ensaio (solução mãe 1 mM em DMSO) a cada poço (inclui-se STI571 como um controlo positivo). Incubam-se as células durante 72 horas a 37°C, C02 a 5%. Adiciona-se 10 pl de uma solução de azul de Alamar a 60% (Tek diagnostics) a cada poço e incubam-se as células durante 24 horas adicionais. A intensidade de fluorescência (excitação a 530 nm, emissão a 580 nm) é quantificada utilizando um sistema Acquest™ (Molecular Devices).

Inibição de proliferação celular dependente de BCR-Abl

Plaqueiam-se células 32D-p210 em placas TC de 96 poços a uma densidade de 15 000 células por poço. Adiciona-se 50 pL de diluições em série de duas vezes do composto de ensaio (Cmax é 40 pM) a cada poço (inclui-se STI571 como um controlo positivo). Após incubação das células durante 48 horas a 37°C, C02 a 5%, adiciona-se 15 pL de MTT (Promega) a cada poço e incubam-se as células durante 5 horas adicionais.

Quantifica-se espectrofotometricamente a densidade óptica a 570 nm e determinam-se os valores de IC50, a concentração de composto necessário para 50% de inibição, a partir da curva de resposta a dose.

Efeito na distribuição do ciclo celular

Plaqueiam-se células 32D e 32D-p210 para placas TC de 6 poços a 2,5xl06 células por poço em 5 ml de meio e adiciona-se o composto de ensaio a 1 ou 10 pM (inclui-se STI571 como um controlo) . As células são então incubadas durante 24 ou 48 horas a 37°C, C02 a 5%. Lava-se 2 ml de suspensão celular com PBS, fixa-se em EtOH a 70% durante 1 hora e trata-se com PBS/EDTA/ARNase A durante 30 minutos. Adiciona-se iodeto de propidio (Cf = 10 pg/ml) e quantifica-se a intensidade de 39 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ fluorescência por citometria de fluxo no sistema FACScalibur™ (BD Biosciences). Os compostos de ensaio do presente invento demonstram um efeito apoptótico nas células 32D-p210 mas não induzem apoptose nas células 32D parentais.

Efeito de autofosforilação de BCR-Abl celular

Quantifica-se a autofosforilação de BCR-Abl com Elisa de captura utilizando um anticorpo especifico de captura c-abl e um anticorpo anti-fosfotirosina. Plaqueiam-se células 32D-p210 em placas TC de 96 poços a 2xl05 células por poço em 50 pL de meio. Adiciona-se 50 pL de diluições em série de duas vezes dos compostos de ensaio (Cmax é 10 pM) a cada poço (inclui-se STI571 como um controlo positivo). Incubam-se as células durante 90 minutos a 37°C, CO2 a 5%. As células são então tratadas durante 1 hora em gelo com 150 pL de tampão de lise (Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, EDTA 5 mM, EGTA 1 mM e NP-40 a 1%) contendo inibidores de protease e fosfatase. Adiciona-se 50 pL de lisado celular a "optiplates" de 96 poços previamente revestidas com anticorpo especifico anti-abl e bloqueia-se. Incubam-se as placas durante 4 horas a 4°C. Após lavagem com tampão TBS-Tween 20, adiciona-se 50 pL de anticorpo anti-fosfotirosina conjugado a fosfatase alcalina e incuba-se a placa adicionalmente durante a noite a 4°C. Após lavagem com tampão TBS-Tween 20, adiciona-se 90 pL de um substrato luminescente e quantifica-se a luminescência utilizando 0 sistema Acquest™ (Molecular Devices). Os compostos de ensaio do invento que inibem a proliferação de células que expressam BCR-Abl, inibem a autofosforilação celular de BCR-Abl de uma forma dependente da dose.

Efeito na proliferação de células que expressam formas mutantes de Bcr-abl

Ensaiam-se os compostos do invento para o seu efeito antiproliferativo nas células Ba/F3 que expressam as formas de tipo selvagem ou as formas mutantes de BCR-Abl (G250E, E255V, T315I, F317L, M351T) que conferem resistência ou menor sensibilidade a STI571. O efeito antiproliferativo destes compostos nas células que expressam BCR-Abl mutante e nas células não transformadas foi ensaiado a 10, 3,3, 1,1 e 0,37 pM, tal como descrito anteriormente (em meio isento de 40 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ IL3). Determinaram-se os valores de IC50 dos compostos isentos de toxicidade nas células não transformadas a partir das curvas de resposta a dose obtidas, tal como descrito anteriormente. FGFR3 (Ensaio enzimático) O ensaio de actividade de quinase com FGFR3 purificado (Upstate) é efectuado num volume final de 10 yL contendo enzima a 0,25 yg/mL em tampão de quinase (Tris-HCl 30 mM pH 7,5, MgCl2 15 mM, MnCl2 4,5 mM, Na3V04 15 yM e BSA a 50 yg/mL) e substratos (biotina-poli-EY(Glu, Tyr) 5 yg/mL (CIS-US, Inc.) e ATP 3 yM). Preparam-se duas soluções: a primeira solução de 5 yl contém a enzima FGFR3 em tampão de quinase e foi primeiramente adicionada a placas ProxiPlate® (Perkin-Elmer) em formato 384 seguido por adição de 50 nL dos compostos dissolvidos em DMSO, seguidamente adiciona-se a cada poço 5 yl da segunda solução que contém o substrato (poli-EY) e ATP em tampão de quinase. Incubam-se as reacções à temperatura ambiente durante uma hora, param-se por adição de 10 yL de mistura de detecção HTRF, que contém Tris-HCl 30 mM pH 7,5, KF 0,5 M, ETDA 50 mM, BSA a 0,2 mg/mL, estreptavidina-XL665 (CIS-US, Inc.) a 15 yg/mL e anticorpo anti-fosfotirosina conjugado a criptato (CIS-US, Inc.) a 150 ng/mL. Após uma hora de incubação à temperatura ambiente para permitir a interacção estreptavidina-biotina, lêem-se os sinais de fluorescência resolvida no tempo em Analyst GT (Molecular Devices Corp.). Calculam-se os valores de IC50 por análise de regressão linear da percentagem de inibição de cada composto a 12 concentrações (diluição 1:3 de 50 yM a 0,28 nM) . Neste ensaio, os compostos do invento têm valores de IC50 na gama de 10 nM a 2 yM. FGFR3 (Ensaio celular)

Ensaiam-se os compostos do invento para a sua capacidade de inibir a proliferação de células Ba/F3-TEL-FGFR3 transformadas, que dependem da actividade de quinase celular de FGFR3. Cultivam-se Ba/F3-TEL-FGFR3 até 800 000 células/mL em suspensão, com RPMI 1640 suplementado com soro fetal bovino a 10% como o meio de cultura. Colocam-se as células numa placa de formato 384 poços a 5000 células/poço em 50 yL de meio de cultura. Dissolvem-se os compostos do invento e diluem-se em 41 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ dimetilsulfóxido (DMSO). Preparam-se doze pontos de diluições em série 1:3 em DMSO para criar um gradiente de concentrações tipicamente na gama de 10 mM a 0,05 μΜ. Adicionam-se as células com 50 nL dos compostos diluídos e incubam-se durante 48 horas num incubador de culturas celulares. Adiciona-se às células, a uma concentração final de 10%, AlamarBlue® (TREK Diagnostic Systems), que pode ser utilizado para monitorizar o ambiente redutor criado pelas células em proliferação. Após quatro horas adicionais de incubação num incubador de cultura celular a 37°C, quantificam-se os sinais de fluorescência de AlamarBlue® reduzido (excitação a 530 nm, emissão a 580 nm) em Analyst GT (Molecular Devices Corp.). Calculam-se os valores de IC5o por análise de regressão linear da percentagem de inibição de cada composto a 12 concentrações. FLT3 e PDGFRp (Ensaio celular)

Os efeitos dos compostos do invento na actividade celular de FLT3 e PDGFRp são estudados utilizando métodos idênticos aos descritos anteriormente para a actividade celular de FGFR3, excepto que em vez de se utilizar Ba/F3-TEL-FGFR3, utiliza-se Ba/F3-FLT3-ITD e Ba/F3-Tel-PDGFRP, respectivamente. b-Raf - ensaio enzimático

Ensaiam-se os compostos do invento para a sua capacidade de inibir a actividade de b-Raf. O ensaio é efectuado em placas MaxiSorp de 384 poços (NUNC) com paredes pretas e fundo transparente. Dilui-se o substrato, ΙκΒα, em DPBS (1:750) e adiciona-se 15 μΐ a cada poço. Incubam-se as placas a 4°C durante a noite e lavam-se 3 vezes com TBST (Tris 25 mM, pH 8,0, NaCl 150 mM e Tween-20 a 0,05%) utilizando o lavador de placas EMBLA. Bloqueiam-se as placas com Superblock (15 μΐ/poço) durante 3 horas à temperatura ambiente, lavam-se 3 vezes com TBST e secam-se com ligeiras pancadas. Adiciona-se tampão de ensaio contendo ATP 20 μΜ (10 μΐ) a cada poço seguido por 100 nl ou 500 nl de composto. Dilui-se B-Raf em tampão de ensaio (1 μΐ para 25 μΐ) e adiciona-se 10 μΐ de b-Raf diluído a cada poço (0,4 pg/poço). Incubam-se as placas à temperatura ambiente durante 2,5 horas. Pára-se a reacção de quinase por lavagem das placas 6 vezes com TBST. Dilui-se anticorpo phosph-ΙκΒα (Ser32/36) em Superblock (1:10 000) e 42 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ adiciona-se 15 μΐ a cada poço. Incubam-se as placas a 4°C durante a noite e lava-se 6 vezes com TBST. Dilui-se IgG de cabra anti-ratinho conjugado a AP em Superblock (1:1 500) e adiciona-se 15 μΐ a cada poço. Incubam-se as placas à temperatura ambiente durante 1 hora e lava-se 6 vezes com TBST. Adiciona-se a cada poço 15 μΐ de substrato fluorescente Attophos AP (Promega) e incubam-se as placas à temperatura ambiente durante 15 minutos. Lêem-se as placas em Acquest ou Analyst GT utilizando um programa de intensidade de fluorescência (excitação 455 nm, emissão 580 nm). b-Raf - ensaio celular

Ensaiam-se os compostos do invento em células A375 para a sua capacidade de inibir fosforilação de MEK. A linha celular A375 (ATCC) é derivada de um doente de melanoma humano e tem uma mutação V599E no gene B-Raf. Os niveis de MEK fosforilado são elevados devido à mutação de B-Raf. Incubam-se células A375 subconfluentes a confluentes com os compostos durante 2 horas a 37°C, em meio isento de soro. Lavam-se então as células uma vez com PBS frio e lisam-se com o tampão de lise contendo Triton X100 a 1%. Após centrifugação, sujeitam-se os sobrenadantes a SDS-PAGE e seguidamente transferem-se para membranas de nitrocelulose. As membranas são então sujeitas a hibridação de "Western" com anticorpo anti-fosfo-MEK (ser217/221) (Cell Signaling). A quantidade de MEK fosforilado é monitorizada pela densidade das bandas fosfo-MEK nas membranas de nitrocelulose. "KinaseProfiler™" da Upstate - ensaio radioenzimático de ligação a filtro

Os compostos do invento são avaliados para a sua capacidade de inibir membros individuais do painel quinase. Os compostos são ensaiados em duplicado a uma concentração final de 10 μΜ seguindo este protocolo genérico. Note-se que a composição do tampão de quinase e dos substratos varia para as diferentes quinases incluídas no painel "KinaseProfiler™" da Upstate. Mistura-se tampão de quinase (2,5 pL, lOx - contendo MnCl2 quando necessário), quinase activa (0,001-0,01 unidades; 2,5 pL) , péptido especifico ou poli(Glu4-Tyr) (5-500 μΜ ou 0,1 mg/ml) em tampão de quinase e tampão de quinase (50 μΜ; 43 ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 5 pL) num tubo "eppendorf" em gelo. Adiciona-se uma mistura de Mg/ATP (MgCÍ2 10 pL; 67,5 (ou 33,75) mM, ATP 450 (ou 225) μΜ e [γ-32Ρ]-ATP 1 pCi/pl (3000 Ci/mmol)) e a reacção é incubada a cerca de 30°C durante cerca de 10 minutos. Colocam-se manchas da mistura reaccional (20 pL) em quadrados de 2 cm x 2 cm de papel P81 (fosfocelulose, para substratos peptídicos carregados positivamente) ou Whatman N.° 1 (para o substrato peptidico poli(Glu4-Tyr)). Lavam-se os quadrados de ensaio 4 vezes, durante 5 minutos cada, com ácido fosfórico 0,75% e lavam-se uma vez com acetona durante 5 minutos. Transferem-se os quadrados de ensaio para um frasquinho de cintilação, adiciona-se 5 ml de mistura de cintilação e quantifica-se a incorporação de P (cpm) no substrato peptidico com um contador de cintilações Beckman. Calcula-se a percentagem de inibição para cada reacção.

Os compostos de fórmula I, na sua forma livre ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, apresentam propriedades farmacológicas valiosas, por exemplo, tal como indicado pelos ensaios in vitro descritos neste pedido. Por exemplo, os compostos de fórmula I apresentam de preferência um IC50 na gama de 1 x IO'10 a 1 x 10'5 M, de preferência inferior a 500 nM, 250 nM, 100 nM e 50n M para BCR-Abl de tipo selvagem e para os mutantes G250B, E255V, T315I, F317L e M351T de BCR-Abl. Os compostos de fórmula I apresentam, de preferência, a uma concentração de 10 pM, uma percentagem de inibição superior a 50%, de preferência superior a cerca de 70%, contra quinases Abl, BMX, BTK, CHK2, b-RAF, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRp, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e/ou TrkB.

Deve considerar-se que os exemplos e concretizações aqui descritas são a titulo meramente ilustrativo.

Lisboa, 2010-12-28

Claims (12)

1. ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 1/5 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I:

   no qual: Y é seleccionado de N e C; Ri é seleccionado de hidrogénio e -NR7Rs; em que R7 é seleccionado de hidrogénio e Ci-6alquilo; r8 é seleccionado de hidrogénio, Cmalquilo, -X1NR9R9, -XioRnn C6-ioaril-Co-4alquilo, Ci-i0-heteroaril-Co-4alquilo, C3-i2CÍcloalquil-Co-4alquilo e C3_8heterocicloalquil-Co-4alquilo; em que Xi é Ci_4alquileno; cada R9 é seleccionado independentemente de hidrogénio e Ci-6alquilo; Rio é Ce-ioaril-Cmalquilo; em que o referido arilo, heteroarilo, cicloalquilo ou heterocicloalquilo de Rs está opcionalmente substituído com 1 a 3 radicais seleccionados independentemente de hidroxilo, Ci-6alquilo, Ci-6alquilo substituído com hidroxilo, -S (O) 0-2R9, -NRgS (0) 0-2NR9R9, -C(0)NR9R9, -OX2NR9R9 e C3-8heterocicloalquilo opcionalmente substituído com NR9R9; em que X2 é seleccionado de uma ligação e Ci-4alquileno; e cada R9 é seleccionado independentemente de hidrogénio e Cmalquilo; R2 é seleccionado de NR9C(0)R9, NR9C(0)Rn, NR9C (O) X2NR9R9 e -NR9C(0)X2NR9Rn; em que X2 e R9 são tais como descritos anteriormente e Rn é seleccionado de Cê-ioaril-Cmalquilo e C3-i2cicloalquilo; em que qualquer arilo ou cicloalquilo de Rn está opcionalmente substituído com Cmoalquilo, C2-ioalcenilo, Ci-ioalcoxilo e Cmoalquilo substituído com halogéneo; R3 e R4 são seleccionados independentemente de hidrogénio, halogéneo e Ci_6alquilo; ou R2 e R4, conjuntamente com os átomos a que se ligam R2 e R4, formam um anel heterocicloalquilo de 5 membros contendo um heteroátomo ou grupo seleccionado de NR9-, -O- e -S-; em que R9 é seleccionado de hidrogénio e Cmalquilo; R5 é Cmalquilo substituído com halogéneo; ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 2/5 R.6 é seleccionado de hidrogénio e Ci-ioheteroarilo; em que qualquer heteroarilo de R6 está opcionalmente substituído por 1 a 3 radicais Ci-6alquilo; e seus sais, hidratos e solvatos farmaceuticamente aceitáveis.
2. 2. Composto da reivindicação 1 de fórmula Ia:

   Ia no qual: R2 é seleccionado de NRgC(0)R9, NRgC(0)Rn, NRgC (O) X2NR9R9 e -NRgC (O) x2nr9Rii; em que X2 é seleccionado de uma ligação e Ci-4alquileno; cada R9 é seleccionado independentemente de hidrogénio e Ci-6alquilo; Rn é seleccionado de C6-ioaril-Ci-4alquilo e C3-i2CÍcloalquilo, em que qualquer arilo ou cicloalquilo de Rn está opcionalmente substituído com Ci-ioalquilo, C2-ioalcenilo, Ci-ioalcoxilo e Cmoalquilo substituído com halogéneo; R3 e R4 são seleccionados independentemente de hidrogénio, halogéneo e Cmalquilo; R5 é Ci-6alquilo substituído com halogéneo.
3. 3. Composto da reivindicação 2 em que: R2 é seleccionado de -NHC(0)Rn, -NHC (O)NHC (CH3) 3 e NHC (O) CH2N (CH3) 2; em que Rn é fenilo opcionalmente substituído com trifluorometilo.
4. 4. Composto da reivindicação 3 seleccionado de N-[3-(2-(3- trifluorometil)benzoílamino[1,6]naftiridin-3-il)-2,4-dicloro-fenil]-3-trifluorometilbenzamida; N-{2,4-dicloro-3-[2- (3- fenilureido)-[1,6]naftiridin-3-il]fenil}-3-trifluorometil-benzamida; N-{3-[2-(3-terc-butilureido)-[1,6]naftiridin-3-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida; e N-{2,4-dicloro-3-[2-(2-dimetilaminoacetilamino)-[1,6]naftiridin-3-il]fenil}-3-trifluorometilbenzamida. ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 3/5
5. 5. Composto da reivindicação 1 de fórmula Ib:

   no qual: Ri é seleccionado de -NR7R8; em que R7 é seleccionado de hidrogénio e Ci-6alquilo; R8 é seleccionado de hidrogénio, Ci-6alquilo, C6-ioaril-Co-4alquilo e C3-8heterocicloalquil-Co-4alquilo; em que o referido arilo ou heterocicloalquilo de R8 está opcionalmente substituído com -OX2NR9R9; em que X2 é seleccionado de uma ligação e Ci-4alquileno; e cada Rg é seleccionado independentemente de hidrogénio e Ci-6alquilo; R2 é -NR9C (0) X2NR9R9; em que X2 e Rg são tal como descritos acima; R3 e R4 são halogéneo; e Rs é Ci-6alquilo substituído com halogéneo.
6. 6. Composto da reivindicação 5 em que Ri é seleccionado de amino e etilamino; R2 é -NHC (0) NHC (CH3) 3; R3 e R4 são cloro; e R5 é trifluorometilo.
7. 7. Composto da reivindicação 1 seleccionado de: N-{3-[2- amino-7-(3-terc-butilureido)pirido[2,3-d]pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida; N-{3-[7-(3-terc- butilureido) -2-etilaminopirido[2,3-d]pirimidin-6-il] - 2, 4-diclorofenil}-3-trifluoxometilbenzamida; N-{3-[7-(3-terc- butilureido) -2-(2-morfolin-4-iletilamino)pirido[2,3-d]-pirimidin-6-il]-2,4-diclorofenil}-3-trifluorometilbenzamida; e N- (3—{7— (3-terc-butilureido)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)fenil-amino]pirido[2,3-d]pirimidin-6-il}-2,4-diclorofenil)-3-trifluorometilbenzamida . ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 4/5

   no qual: Υ é seleccionado de Ν e C; Z é seleccionado de NRg, O e S; em que Rg é seleccionado de hidrogénio e Ci-6alquilo; R3 é halogéneo; R5 é Ci-6alquilo substituído com halogéneo; e R6 é seleccionado de hidrogénio e Ci-ioheteroarilo.
8. 9. Composto da reivindicação 8 em que Y é C; Zé seleccionado de O e NH; R3 é cloro; Rs é trifluorometilo e Rí é hidrogénio.
9. 10. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 9 em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
10. 11. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 9 para tratar uma doença num animal no qual a inibição de actividade de quinase pode prevenir, inibir ou melhorar a patologia e/ou a sintomatologia da doença.
11. 12. Composto para utilização em terapia da reivindicação 11 no qual a quinase é seleccionada de Abl, Bcr-Abl, BMX, BTK, CHK2, b-RAF, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRp, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e TrkB.
12. 13. Utilização de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 9 no fabrico de um medicamento para tratar uma doença num animal no qual a actividade de quinase de Abl, ΕΡ 2 099 797/ΡΤ 5/5 Bcr-Abl, ΒΜΧ, ΒΤΚ, CHK2, b-RAF, c-RAF, CSK, c-SRC, Fes, FGFR3, Flt3, ΙΚΚα, ΙΚΚβ, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, MST2, NEK2, p70S6K, PDGFRp, PKA, PKBa, PKD2, Rskl, SAPK2a, SAPK2p, SAPK3, SGK, Tie2 e TrkB contribui para a patologia e/ou a sintomatologia da doença. Lisboa, 2010-12-28