KR20240106818A - 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 자운영(Astragalus sinicus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 화장료 조성물, (a) 자운영 잎과 줄기를 선별하는 단계; (b) 선별 한 부위를 건조후 70% 에탄올에 15시간 동안 침지하는 단계; (c) 침지 후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 단계; (d) 상기 추출물을 농축 및 냉각하는 단계; (e) 냉각한 추출물을 분말형태의 추출물로 수득하는 단계를 포함하는 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법 및 이렇게 제조된 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 의약외품 조성물에 관한 것이다
본 발명의 조성물은 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 것으로, 상기 추출물은 피부에 적용시 안전하면서도, 콜라겐(Collagen) 합성 증가 효능과 콜라겐분해효소(MMP-1) 억제 효능이 높고, UVB 광보호 작용을 통해 피부보호 용도로 활용될 수 있다

Description

자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 {Cosmetic composition containing extract of Astragalus sinicus as an active ingredient}

본 발명은 자운영(Astragalus sinicus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 화장료 조성물, (a) 자운영 잎과 줄기를 선별하는 단계; (b) 선별 한 부위를 건조후 70% 에탄올에 15시간 동안 침지하는 단계; (c) 침지 후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 단계; (d) 상기 추출물을 농축 및 냉각하는 단계; (e) 냉각한 추출물을 분말형태의 추출물로 수득하는 단계를 포함하는 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법 및 이렇게 제조된 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 의약외품 조성물에 관한 것이다

피부노화는 자연히 발생하는 내인성 노화와 외부 요인에 의해 일어나는 외인성 노화로 구분된다. 내인성 노화의 요인은 주로 유전적인 요인을 말하며 피부 세포 및 조직의 구조와 변화를 결정한다. 외인성 노화의 요인은 외부에서 유래된 요인으로 영양부족, 햇빛, 환경오염 등이 속하며 얼마든지 예방 가능하고 피할 수 있는 요인이다.

이러한 요인으로 인해 피부 노화가 진행됨으로서 피부가 건조해지고 거칠어지며 주름 생성, 색소 침착 및 수분 부족 현상 등이 일어나게 된다. 따라서 피부 미용에 대한 관심이 높아지며 특히 피부 노화에 대한 관심과 노화를 늦추기 위한 시도들이 행하여지고 있다.

예를 들어 주름이 형성되는 원인은 자연적 노화에 의한 주름의 생성과 자외선 노출(광노화)에 의한 주름의 생성으로 크게 나눌 수 있다. 자연적 노화와 광노화에 의한 피부변화와 관련되어 발견되는 공통적인 현상은 진피 내의 주 구성단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형, 진피의 기질인 히아루론산의 감소에 의한 피부 탄력 감소이다. 특히 지금까지의 연구결과에 의하면 진피 내 주 단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형이 주름의 생성 및 피부의 탄력저하에 직접적으로 관여하는 것으로 알려져 있다. 피부 주름의 시작은 진피의 노화에서부터 진행되고 탄력섬유인 엘라스틴의 구조가 변화되어 피부는 늘어지면서 주름이 생기게 되며, 진피의 콜라겐과 다른 결합조직 성분을 분해시키는 MMPs(matrix metalloproteinase) 활성 증가로 인해 콜라겐 합성이 저해되어 주름이 증가한다는 연구가 많이 진행되고 있다.

최근에는 라이프 스타일의 변화와 웰빙에 대한 관심과 더불어, 웰빙에 대한 수요가 점차 증가하고 있는 추세이다. 이에 피부 미용 분야에 있어서도 수요자들의 관심이 높아지고 있으며, 관련 피부 개선 제품의 개발도 다양하게 이루어지고 있으나, 그 효능에 대한 실제 소비자들의 신뢰도는 그다지 높지 않은 상황이다. 또한, 최근 자연주의 바람이 불면서 천연 재료로 만든 제품에 대한 선호도가 높아지고 있어, 천연 재료를 이용하는 기술을 기반으로 하는, 화장품 시장이 급격히 증가하고 있는 추세이다. 천연 재료를 이용하여 화장품을 제조하면 천연 재료가 갖는 유효성분의 흡수율과 안전성을 높일 수 있는 장점이 있다.

이러한 피부 노화에 대한 문제점을 해결하기 위한 다양한 화장료 조성물이 연구되고 있고 콜라겐 합성 촉진 물질에 대한 관심이 높아졌으나, 종래에 알려진 콜라겐 합성 촉진 물질은 피부 적용시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나 효과가 미미하여 실질적으로 피부 주름 개선 효과를 기대할 수 없었다. 따라서, 기존의 콜라겐 합성 촉진 물질보다 생체에 안전하고 효과가 높은 천연물을 이용한 새로운 물질의 개발이 절실히 요구되고 있다.

본 발명은 본 발명은 자운영(Astragalus sinicus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 화장료 조성물에 관한 것이다

본 발명은 (a) 자운영 잎과 줄기를 선별하는 단계; (b) 선별 한 부위를 건조후 70% 에탄올에 15시간 동안 침지하는 단계; (c) 침지 후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 단계; (d) 상기 추출물을 농축 및 냉각하는 단계; (e) 냉각한 추출물을 분말형태의 추출물로 수득하는 단계를 포함하는 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명은 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 의약외품 조성물에 관한 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 천연 소재인 자운영 잎과 줄기를 70% 에탄올 통해 추출한 추출물이 피부에 적용시 안전하면서도, 엘라스타제(Elastase) 억제 효능과 콜라겐분해효소(MMP-1) 억제 효능이 높고, UVB 광보호 효능이 있음을 발견하고, 이를 유효성분으로 포함하는 안정화된 제형으로 개발하여 피부 보호용 조성물에 활용하고자한 기술사상에 기초한 것으로, 이의 효능은 본 발명자들에 의하여 최초로 규명된 것이다.

"자운영(Astragalus sinicus)"은 콩과 황기속의 여러해살이풀로 연화초?홍화채?쇄미제?야화생이라고도 하며 중국이 원산지이고 한국 각지에서 널리 재배되고 있다. 예전 남부 지방에서 질소비료 등 화학비료가 귀하던 시절에 논에 모내기하기 전까지 길러서 갈아엎어 비료 대신 거름으로 이용했었고 이렇게 재배하던 것이 현재까지 자생하고 있다. 자운영은 뿌리에 뿌리혹이 잘 발달되어 질소동화작용 이 활발하므로 거름으로 많이 사용되었다.

자운영의 줄기는 뿌리에서 나와 땅 위를 기어가면서 뻗어나간다. 잎은 깃꼴 겹잎으로 어긋나며, 밑 부분에는 막질이며 끝이 뾰족한 1쌍의 턱잎이 있다. 작은 잎은 얇고 부드러우며 끝이 조금 오목한 타원형이다. 자운영의 꽃은 4～5월에 붉은 빛을 띤 자주색으로 길이 10～20cm의 꽃줄기 끝에 7～10개가 산형으로 달리며 꽃 받침은 5개의 톱니가 있고 수술은 10개 중 9개가 서로 달라붙어있다. 이때 각각의 꽃은 길이 1cm 정도이며, 꽃차례 전체는 지름이 3cm 정도이다. 열매는 끝이 부리 모양으로 뾰족한 원통 모양의 삭과로, 몇 개씩 방사상으로 모여 달리며, 익으면 검게 되는데 속에는 둥근 엷은 황색 씨가 2～5개 들어 있다.

본 발명에서 용어 "추출물"은 목적하는 물질을 다양한 용매에 침지한 다음, 상온, 저온 또는 가온 상태에서 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다.

상기 추출물은 천연, 잡종, 변종식물로부터 제한없이 추출될 수 있으며, 물(정제수), C1 내지 C6의 알코올 및 이들의 혼합용매를 이용하여 추출하여 수득될 수 있다. 또한, 상기 추출물을 수득하기 위한 방법은 본 발명의 자운영 추출물을 수득할 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로는 상기 자운영, 자운영 잎과 줄기 등을 상기 용매에 침지하고 상온에서 추출하는 냉침추출법, 가열추출법, 초음파를 가하여 추출하는 초음파추출법, 환류 냉각기를 이용한 환류추출법 등의 방법을 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 자운영 잎과 줄기의 추출물일 수 있고, 구체적으로 70% 에탄올을 통해 얻은 추출물일 수 있으며, 보다 구체적으로, 상온에서 70% 에탄올로 15시간 동안 침지후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 것일 수 있으며, 상기 추출물은 동결건조를 통해 분말형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 실시예에서는, 자운영 추출물을 잎과 줄기 부위가 다른 부위에 비해 유효성분 함량이 높은 것을 확인하였고 상온에서 70% 에탄올로 15시간 동안 침지후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 방법이 수율과 유효성분 함량 모두 다른 추출방법보다 높은 것을 확인하였다.

이를 통해, 본 발명의 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 추출물이 다른 부위나 다른 조건으로 제조하는 것보다 우수함을 확인하였다.

본 발명의 “피부 보호용 제형”은 자운영 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 50 중량%(w/w)로 포함할 수 있고, 구체적으로 0.001 내지 5 중량%(w/w)로 포함할 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 피부접착용 패치, 피부접착용 겔, 파우더, 연고, 페이스트, 젤, 서스펜션, 에멀젼, 스프레이, 미용액 또는 캡슐로 제형화되는 것일 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.

본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 이용될 수 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

한편, 본 발명의 제형이 캡슐인 경우에는, 알지네이트(alginate) 캡슐, 아가(agar) 캡슐, 젤라틴(gelatin) 캡슐, 왁스(wax)류 캡슐, 또는 이중 캡슐의 형태로 제형화될 수 있으며, 특별히 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 피부 제형은 자운영 고온 및 가압 열수 추출물 이외에 통상적으로 이용되는 보조제, 예컨대 친수성 또는 친지성 겔화제, 친수성 또는 친지성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 및 염료 등을 포함할 수 있다.

본 발명은 (a) 자운영 잎과 줄기를 선별하는 단계; (b) 선별 한 부위를 건조후 70% 에탄올에 15시간 동안 침지하는 단계; (c) 침지 후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 단계; (d) 상기 추출물을 농축 및 냉각하는 단계; (e) 냉각한 추출물을 분말형태의 추출물로 수득하는 단계를 포함하는 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 본 발명은 (a) 자운영 잎과 줄기를 선별하는 단계; (b) 선별 한 부위를 건조후 70% 에탄올에 15시간 동안 침지하는 단계; (c) 침지 후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 단계; (d) 상기 추출물을 농축 및 냉각하는 단계; (e) 냉각한 추출물을 분말형태의 추출물로 수득하는 단계를 포함하는 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 자운영 잎과 줄기의 추출물일 수 있고, 구체적으로 70% 에탄올을 통해 얻은 추출물일 수 있으며, 보다 구체적으로, 상온에서 70% 에탄올로 15시간 동안 침지후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 것일 수 있으며, 상기 추출물은 동결건조를 통해 분말형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이때 용어, “자운영”, “에탄올”, “추출물” 및 “피부 보호”는 상기에서 서술한 바와 같다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 자운영 추출물을 포함하는 제형을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부 개선 방법을 제공한다.

이때 용어, “자운영”, “에탄올”, “추출물” 및 “피부 보호”는 상기에서 서술한 바와 같다.

본 발명에서 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 개체에게 본 발명의 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달하여 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 상기 투여는 피부에 도포하는 것을 포함할 수 있으며, 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로, 본 발명의 조성물이 피부 개선 효과가 있는 특성상, 상기 조성물의 투여 경로는 피부에 도포하여 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 매일 또는 간헐적으로 투여해도 좋고, 1일당 투여 횟수는 1회 또는 2~3회로 나누어 투여하는 것이 가능하다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 미백을 위하여 단독으로, 또는 다른 물질과 병용하여 사용할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명에서 "개체"는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적으로, 인간을 포함하거나 포함하지 않는 포유동물일 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.

이때 용어, “자운영”, “에탄올”, “추출물” 및 “피부 보호”는 상기에서 서술한 바와 같다.

본 발명에서 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 대한민국 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함 된다.

본 발명의 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 폼, 비누, 마스크, 연고제, 크림, 로션, 에센스 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 형태로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 본 발명은 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 본 발명의 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 자운영 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 보호 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학용 조성물을 제공한다.

본 발명에서 용어 "예방"이란, 본 발명의 조성물이 피부보호 관련 질환 의 발생을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 용어 "치료"는 본 발명의 약학 조성물이 피부보호 관련 질환의 증상을 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에서 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 생물체를 자극하지 않고 본 발명 조성물의 피부보호 관련 질환 증상의 예방 또는 치료 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제형화되는 조성물에 있어서 허용되는 약학적 담체로는, 멸균, 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 하나 이상의 성분을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.

또한, 본 발명의 약학적으로 허용가능한 담체는 비자연적 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 단일 또는 다중 투여될 수 있다.

본 발명에서 용어 "약학적으로 유효가능한 양"은 의학적 예방 또는 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 예방 또는 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 체중, 건강, 성 별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명의 자운영 추출물은 자운영 잎과 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 것으로, 상기 추출물은 피부에 적용시 안전하면서도, 콜라겐 합성 증가효과와 콜라겐분해효소(MMP-1) 억제 효능이 높고, UVB 광보호 작용을 통해 피부보호 용도로 활용될 수 있다

도 1은 여러 가지 추출조건별 세포 독성조사에 관한 것이다.
도 2는 여러 가지 추출조건별 DPPH 산화 억제능 조사에 관한 것이다.
도 3은 여러 가지 추출조건별 콜라겐 합성 효과 조사에 관한 것이다.
도 4는 자운영 추출물의 콜라겐분해효소 저해효능을 나타내는 그래프이다.
도 5는 인간진피섬유아세포에서 자운영 추출물의 UVB 광노화에 대한 보호효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 자운영 추출물을 함유하는 제형의 가혹 및 가속조건에 따른 유효성분인 아스트라갈린 ?t량의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 7은 자운영 추출물을 함유하는 제형의 Turbiacan 분석을 통한 안정성조사에 관한 것이다.
도 8은 자운영 추출물의 피부투과 흡수율에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다.

자운영 잎과 줄기 건조물 약 100g을 아래와 같은 3가지 방법으로 추출후 동결건조하여 아래와 같은 추출수율을 확인함. 추출수율은 열수추출, 70%EtOH, 100%EtOH 순으로 높게 나타남(표 1).

상기 각 추출 시료 중에 유효성분인 아스트라갈린 함량을 분석한 결과, 아래 표2와 같이 70% 에탄올이 가장 높았다.

상기 실시예 2에서 아스트라갈린 함량이 높았던 70% 에탄올 추출방법의 수율을 향상시키기 위해 70% 에탄올로 상온에서 15시간 침지후 80℃에서 6시간 동안을 수행하였고 생육기간 및 부위별 추출수율을 비교하였다. 표 3은 자운영 씨를 함평에서 1년간 생육하여 얻은 잎과 줄기를 추출한 결과이고, 자운영 오창은 생육기간 4개월된 잎과 줄기를 사용하여 얻은 결과이다. 함평의 1년간 생육한 자운영으로부터 자운영 꽃 부위를 추출하였다. 표 3에서처럼 1년 이상의 잎과 줄기의 수율이 가장 높았으며, 15시간 침지후 추출시 실시예 1에서 15%정도인 수율이 30% 정도로 2배 가까이 높은 결과를 얻었다.

부위별로 유효성분 아스트라갈린 함량을 측정한 결과 표 4와 같이 줄기, 잎사귀, 뿌리 순서로 건조 원물 분포가 많은 ASE HS 추출물이 줄기, 뿌리, 잎사귀 순으로 건조 원물 분포가 많은 ASE HP보다 유효성분 함량이 높게 나타났고 꽃이나 씨에서는 아스트라갈린이 거의 없는 것으로 나타났다.

상기 실시예 1 ~ 4의 결과를 종합하여 1년된 아스트라갈린 잎과 줄기 중 뿌리부위를 제외한 건조 원물을 70% 에탄올로 상온에서 15시간 침지 후 80℃에서 6시간 동안 추출하였다. 공정성을 위해 3번 반복하여 수행한 결과 표 5와 같이 수율 30%로 앞에 일치하는 결과를 얻었고, 유효성분인 아스트라갈린과 오노닌 함량을 분석한 결과, 아래 표6과 같이 아스트라갈린 함량이 0.22% 정도로 줄기, 잎 부위를 사용할 경우 높은 것으로 나타났다.

실시예 1의 자운영 열수추출물과 100% 에탄올 추출물, 그리고 상기 실시예 4의 70% 에탄올 자운영 추출물들을 사람의 섬유아세포 (human dermal fibroblast)에서의 세포독성시험을 조사하였다. 도 1과 같이 추출물을 여러 가지 농도로 처리한 결과 70% 에탄올 추출물과 100% 에탄올 추출물의 1000 ug/mL까지 독성이 없음을 확인하였고 열수추출물에서는 독성이 나타남을 확인하였다.

상기 실시예 5에서 독성이 나타난 열수 추출물을 제외하고 70%와 100% 에탄올 추출물들을 DPPH radical 소거능을 통하여 물질의 항산화 효과를 다양한 농도로 희석하여 항산화 활성 효과를 측정하였다. 도2와 같이 자운영 조건별 추출물들의 농도에 의존적으로 항산화 활성 효과가 증가하였고 70% 에탄올 추출물의 높은 항산화 효과를 확인하였고 양성대조군인 아스코빅 산 (ascorbic acid) 보다 더 높은 항산화 활성을 확인하였다(대조군과 실험군 사이의 평균값의 차이는 one-way analysis of variance(ANOVA) 방법으로 분석하였으며, 유의성의 수준은 *P<0.05, **P<0.01로 표시하였음).

피부 세포의 결합조직을 구성하는 성분 중 피부 건조 중량의 90%를 차지하고 있는 단백질인 콜라겐의 합성 효과를 조사하였다. 실시예 5에서 독성이 나타난 열수추출물을 제외하고 70%와 100% 에탄올 추출물을 다양한 농도로 처리한 후 real time PCR의 발현을 통하여 콜라겐 생성을 확인하였다. 그 결과 도 3에서와 같이 70% 에탄올 자운영 추출물 높은 콜라겐 합성증가 효과를 확인하였고, 양성대조군인 TGF-β보다 훨씬 높은 우수한 주름개선 효과를 나타냈다. (모든 실험은 3회 반복으로 수행하였으며 평균값과 표준표차로 표기하였음(대조군과 실험군 사이의 평균값의 차이는 one-way analysis of variance(ANOVA) 방법으로 분석하였으며, 유의성의 수준은 *P<0.05, **P<0.01로 표시하였음).

상기 실시예 6과 7에서 항산화효과와 콜라겐합성효과가 높았던 70% 에탄올 자운영 추출물의 콜라겐 분해효소인 콜라게나제(MMP-1) 활성 억해 효과 및 UVB 조사 후 항노화 효과도 함께 확인하였다. 도 4(A)에서처럼 자운열 추출물은 collagen을 분해하는 콜라게나제(MMP-1) mRNA 발현을 모든농도(125-800 μg/mL)에서 유의성있게 억제하였고, 도4(B)UVB 10 mJ/cm2 조사군에 의해 증가된 MMP-1 mRNA 발현량은 자운영 추출물 농도 의존적으로 유의성있게 억제함으로써 콜라겐을 분해하는 콜라게나제(MMP-1) mRNA 발현량을 감소시킴으로써 콜라겐을 유지 또는 증가시킬 수 있어 주름개선 효과는 물론 항노화 효과가 있음을 의미함

상기 실시예 6과 7에서 항산화효과와 콜라겐합성효과가 높았던 70% 에탄올 자운영 추출물의 항노화효과를 senescence beta-galactosidase(SA-β-gal) staining assay 방법으로 SA-β-gal 활성 억제 효과로 확인하였다. 도 5(A)에서처럼 UVB를 조사하지 않은 자연 노화를 유도한 HDF 세포에 자운영 추출물은 모든농도(125-800 μg/mL)에서 SA-β-gal 활성을 농도 의존적으로 84.9%까지 크게 억제시켰으며, 도 5(B)에서 처럼 UVB 노출에 의해 광노화가 유도된 HDF 세포를 ASE 실험농도범위 125-800 μg/mL 모두에서 SA-β-gal의 활성을 유의성 있게 감소시킴으로써 켰음 70% 에탄올 자운영 추출물의 항노화효과와 광독성 보호 효능을 확인하였다.

피부 광독성은 피부의 주름,검버섯,색소 침착 및 염증 등을 일으키며, UVB는 광독성을 유발하는 것으로 알려져있으며 실시예 8과 9의 결과를 통해 70% 에탄올 자운영 추출물의 항노화효과와 광독성 보호 효능을 확인하였다.

상기 실시예 4의 70% 에탄올 자운영 추출물을 포함하는 안정화 제형을 제조하고(표 7), 이의 안정성을 조사하기 위하여 안정성 검사를 실시하였다.

보다 구체적으로, 식품의약품안전처(KFDA)의 안정성시험 가이드라인에 따라 가혹/가속안정성 및 제형/지표물질 안정도를 검사하였으며, Turbiscan 분석기기를 활용한 제형 안정도를 조사하였다.

또한, 표 8에서 볼 수 있듯이, 식약처의 안정성시험 가이드라인에 따라 가속/가혹조건에서 pH 및 비중의 변화가 없이 자운영 추출물이 제형에 영향을 주지 않는 것을 확인하였다.

또한, 도 6에서 볼 수 있듯이, 식약처의 안정성시험 가이드라인에 따라 가속/가혹조건에서 자운영 추출물의 유효성분인 아스트라갈린 함량이 변화없이 안정화되었음을 확인하였다.

또한, 도 7에서 볼 수 있듯이, Turbiacan 분석을 통한 자운영 추출물 함유제형이 상온에서 14일간 관측에서 안정성이 유지됨을 볼 수 있으며 이는 육안 대비 최대 200배 민감도를 바탕으로 예상할 때, 1000일 후까지 안정함을 확인하였다.

이를 통해, 본 발명의 자운영 추출물을 포함하는 제형의 안정성을 확인하였다.

본 발명의 자운영 추출물을 포함하는 안정화 제형의 피부투과 흡수율을 조사하였다.

보다 구체적으로, 식품의약품안전처(KFDA)의 피부투과도시험 가이드라인에 따라 Franz cell 분석방법을 활용하여 유효성분인 아스트라갈린 함량을 분석함으로써 본 발명의 자운영 추출물을 포함하는 안정화 제형의 피부투과 흡수율을 조사한 결과, 도 8에서처럼 조직에 침투하거나 투과한 흡수된 양은 전체 회수량 대비 76.45%로써 이를 통해, 본 발명의 자운영 추출물을 포함하는 제형의 피부투과 흡수 우수성을 확인하였다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (6)

1. 자운영(Astragalus sinicus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 화장료 조성물
2. 제1항에 있어서, 상기 피부 보호는 콜라겐 합성 증가로 인한 것인, 화장료 조성물
3. 제1항에 있어서, 상기 피부 보호는 콜라겐 분해효소의 활성 저해로 인한 것인, 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 피부 보호는 광보호 효과로 인한 것인, 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서, 조성물은 (a) 자운영 잎과 줄기를 선별하는 단계; (b) 선별 한 부위를 건조후 70% 에탄올에 15시간 동안 침지하는 단계; (c) 침지 후 80℃에서 6시간 동안 추출하는 단계; (d) 상기 추출물을 농축 및 냉각하는 단계; (e) 냉각한 추출물을 분말형태의 추출물로 수득하는 단계를 포함하는 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법
6. 자운영(Astragalus sinicus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 의약외품 조성물