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KR20230118149A - 항-pd-l1 면역접합체, 및 그의 용도 - Google Patents

항-pd-l1 면역접합체, 및 그의 용도 Download PDF

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KR20230118149A
KR20230118149A KR1020237022941A KR20237022941A KR20230118149A KR 20230118149 A KR20230118149 A KR 20230118149A KR 1020237022941 A KR1020237022941 A KR 1020237022941A KR 20237022941 A KR20237022941 A KR 20237022941A KR 20230118149 A KR20230118149 A KR 20230118149A
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KR
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seq
alkyldiyl
immunoconjugate
cancer
antibody
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KR1020237022941A
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English (en)
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셸리 에린 애커먼
마이클 엔. 알론소
데이비드 도르난
마르친 코와네츠
로마스 쿠디르카
아서 리
윌리엄 말레트
브라이언 사피나
매튜 조우
Original Assignee
볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Abstract

본 발명은 접합에 의해 하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 유도체에 연결된 항-PD-L1 항체를 포함하는 화학식 I의 면역접합체를 제공한다. 본 발명은 또한 반응성 작용기를 포함하는 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 유도체 중간체 조성물을 제공한다. 이러한 중간체 조성물은 링커 또는 연결 모이어티를 통한 면역접합체의 형성에 적합한 기질이다. 본 발명은 추가로 면역접합체로 암을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

항-PD-L1 면역접합체, 및 그의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 정규 출원은 2020년 12월 11일에 출원된 미국 가출원 제63/124,396호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이 출원은 전체 내용이 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 서식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 2021년 12월 6일에 생성된 해당 ASCII 사본의 이름은 17019_013WO1_SL.txt이며 크기는 244,809바이트이다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 하나 이상의 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀 분자에 접합된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다.
접근하기 어려운 종양에 도달하고/하거나 암 환자 및 기타 대상체를 위한 치료 옵션을 확장하기 위해서는 항체 및 면역 보조제의 전달을 위한 새로운 조성물 및 방법이 필요하다. 본 발명은 이러한 조성물 및 방법을 제공한다.
발명의 요약
본 발명은 일반적으로 하나 이상의 8-사이실-2-아미노벤즈아제핀 유도체에 접합에 의해 연결된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 반응성 작용기를 포함하는 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀 유도체 중간체 조성물에 관한 것이다. 이러한 중간체 조성물은 항체가 하기 화학식을 갖는 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 (CycBz) 모이어티에 링커 L에 의해 공유 결합될 수 있는 면역접합체의 형성에 적합한 기질이다:
여기서 Cyc는 페닐디일, 헤테로사이클릴디일 및 헤테로아릴디일로부터 선택되며; R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착된다. R1-4 및 X1-4 치환기는 본원에서 정의된다.
본 발명은 또한 질병, 특히 암의 치료에 있어서 이러한 면역접합체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은 하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티에 공유적으로 부착된 링커에 공유적으로 부착된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체이다.
본 발명의 또 다른 양태는 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물이다.
본 발명의 또 다른 측면은 하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티에 접합에 의해 연결된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료를 위한, 하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티에 접합에 의해 연결된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체의 용도이다.
본 발명의 또 다른 측면은 하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티를 항-PD-L1 항체와 접합시켜 면역접합체를 제조하는 방법이다.
도 1a-d는 PD-L1 유형 A 결합제 1-42의 중쇄 및 경쇄 CDR을 보여준다.
도 2a-d는 PD-L1 유형 A 결합제 1-42의 제1 (HFW1), 제2 (HFW2), 제3 (HFW3), 및 제4 (HFW4) 중쇄 프레임워크 영역 폴리펩티드를 보여준다.
도 3a-d는 PD-L1 유형 A 결합제 1-42의 제1 (LFW1), 제2 (LFW2), 제3 (LFW3), 및 제4 (LFW4) 경쇄 프레임워크 영역 폴리펩티드를 보여준다.
도 4a-d는 PD-L1 유형 A 결합제 1-42의 중쇄 가변 영역 (VH)을 보여준다.
도 4e-g는 PD-L1 유형 A 결합제 1-42의 경쇄 가변 영역 (VL)을 보여준다.
도 5a-b는 PD-L1 유형 B 결합제 1-21의 중쇄 및 경쇄 CDR을 나타낸다.
도 6a-b는 PD-L1 유형 B 결합제 1-21의 제1 (HFW1), 제2 (HFW2), 제3 (HFW3), 및 제4 (HFW4) 중쇄 프레임워크 영역 폴리펩티드를 보여준다.
도 7a-b는 PD-L1 유형 B 결합제 1-21의 제1 (LFW1), 제2 (LFW2), 제3 (LFW3), 및 제4 (LFW4) 경쇄 프레임워크 영역 폴리펩티드를 보여준다.
도 8a-b는 PD-L1 유형 B 결합제 1-21의 중쇄 가변 영역 (VH)을 보여준다.
도 8c-d는 PD-L1 유형 B 결합제 1-21의 경쇄 가변 영역 (VL)을 보여준다.
도 9a는 동계 MB49 종양 모델에서 면역접합체 PD-L1 IC-51 대 비접합 항-PD-L1 항체의 효능을 비교한 치료 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 생체내 연구의 그래프를 보여준다. 큰 (~200mm3) 동계 MB49 종양이 있는 마우스는 CycBzL-24 (표 2b)를 포함하는, 표 3b의 면역접합체 IC-51, CycBzL-24를 포함하는 래트 IgG2b 아이소타입 대조군 면역접합체, 비접합 항-PD-L1, 및 비접합 IgG2b 아이소타입 항체로 10mg/kg IP, Q3Dx4 (그룹당 n=6)로 치료하였다.
도 9b는 MB49 종양 세포의 이식 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 생체내 연구의 그래프를 보여주어, 재도전 연구에서 면역학적 기억을 평가한다. 도 9a의 연구에서 표 3b의 면역접합체 PD-L1 IC-51 치료 이후 MB49 종양의 완전한 퇴행을 경험한 6마리의 모든 마우스는 종양 청소 후 약 1 개월 (최종 용량 후 약 7주)에 MB49 종양 세포로 재도전되었다.
도 10a는 CycBzL-24 (표 2b)를 포함하는, 표 3b의 면역접합체 IC-51, CycBzL-24를 포함하는 래트 IgG2b 아이소타입 대조군 면역접합체, 비접합 항-PD-L1, 및 비접합 IgG2b 아이소타입 항체로 5mg/kg IP, Q3Dx4로 모체 동계 MB49 종양을 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 10b는 CycBzL-24 (표 2b)를 포함하는, 표 3b의 면역접합체 IC-51, CycBzL-24를 포함하는 래트 IgG2b 아이소타입 대조군 면역접합체, 비접합 항-PD-L1, 및 비접합 IgG2b 아이소타입 항체로 5mg/kg IP, Q3Dx4로 종양 세포에서 PD-L1 발현이 결여된 PD-L1 녹아웃 (PD-L1 KO) 동계 MB49 종양을 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 그래프를 보여준다.
이제 본 발명의 특정 구현예를 상세히 참조할 것이며, 그 예는 첨부된 구조 및 화학식에 예시되어 있다. 본 발명은 열거된 구현예와 관련하여 설명될 것이지만, 그것들은 본 발명을 그러한 구현예로 제한하도록 의도된 것이 아님이 이해될 것이다. 반대로, 본 발명은 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 수정 및 등가물을 포함하도록 의도된다.
당업자는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 등가인 많은 방법 및 재료를 인식할 것이다. 본 발명은 기술된 방법 및 재료에 제한되는 것은 아니다.
정의
용어 "면역접합체" 또는 "면역-자극 항체 접합체"는 링커를 통해 보조제 모이어티에 공유 결합된 항체 작제물을 지칭한다. 용어 "보조제"는 보조제에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다.
"보조제 모이어티"는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, 링커를 통해 항체 작제물에 공유 결합된 보조제를 지칭한다. 보조제 모이어티는 항체 작제물에 결합되어 있는 동안, 또는 대상체에게 면역접합체를 투여한 후 항체 작제물로부터 절단 (예를 들어, 효소적 절단)된 후에 면역 반응을 유발할 수 있다.
"보조제"는 보조제에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다.
"톨-유사 수용체" 및 "TLR"이라는 용어는 병원체 관련 분자 패턴을 인식하고 선천 면역의 핵심 신호 요소로 작용하는 고도로 보존된 포유동물 단백질 패밀리의 임의의 구성원을 지칭한다. TLR 폴리펩티드는 류신이 풍부한 반복을 갖는 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 TLR 신호전달에 관여하는 세포내 도메인을 포함하는 특징적인 구조를 공유한다.
용어 "톨-유사 수용체 7" 및 "TLR7"은 공개적으로 이용가능한 TLR7 서열, 예를 들어, 인간 TLR7 폴리펩티드의 경우 GenBank 수탁 번호 AAZ99026, 또는 뮤린 TLR7 폴리펩티드의 경우 GenBank 수탁 번호 AAK62676에 대해 적어도 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 공유하는 핵산 또는 폴리펩티드를 지칭한다.
용어 "톨-유사 수용체 8" 및 "TLR8"은 공개적으로 이용가능한 TLR7 서열, 예를 들어, 인간 TLR8 폴리펩티드의 경우 GenBank 등록 번호 AAZ95441, 또는 뮤린 TLR8 폴리펩티드의 경우 GenBank 등록 번호 AAK62677에 대해 적어도 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 공유하는 핵산 또는 폴리펩티드를 지칭한다.
"TLR 작용제"는 TLR 신호전달을 유도하기 위해 TLR (예를 들어, TLR7 및/또는 TLR8)에 직접 또는 간접적으로 결합하는 물질이다. TLR 신호 전달에서 감지 가능한 차이는 작용제가 TLR을 자극하거나 활성화한다는 것을 나타낼 수 있다. 신호 차이는 예를 들어, 표적 유전자의 발현, 신호 전달 성분의 인산화, 핵 인자-κB (NF-κB)와 같은 하류 요소의 세포내 국소화, 특정 구성요소 (예컨대, IL-1 수용체 관련 키나제 (IRAK))와 다른 단백질 또는 세포내 구조의 회합, 또는 키나제 (예컨대, 미토겐 활성화 단백질 키나제 (MAPK))와 같은 구성요소의 생화학적 활성에서의 변화로 나타날 수 있다.
"항체"는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편으로부터의 항원 결합 영역 (상보성 결정 영역 (CDR) 포함)을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "항체"는 구체적으로, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 단일클론 항체 (전장 단일클론 항체 포함), 다중클론 항체, 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함한다. 예시적인 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 이황화 결합에 의해 연결된 하나의 "경쇄" (약 25 kDa)와 하나의 "중쇄" (약 50 내지 70 kDa)를 갖는 두 개의 동일한 폴리펩티드 사슬쌍으로 구성된다. 각 사슬은 면역글로불린 도메인이라고 하는 구조적 도메인으로 구성된다. 이들 도메인은 크기 및 기능에 따라 다양한 범주, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄 상의 가변 도메인 또는 영역 (각각 VL 및 VH) 및 경쇄 및 중쇄 상의 불변 도메인 또는 영역 (각각 CL 및 CH)으로 분류된다. 각 사슬의 N 말단은 주로 항원 인식, 즉 항원 결합 도메인을 담당하는 파라토프(paratope)라고 하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 이는 차례로 면역글로불린 클래스인 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 정의한다. IgG 항체는 4개의 펩티드 사슬로 구성된 약 150 kDa의 큰 분자이다. IgG 항체는 약 50 kDa의 동일한 클래스 γ 중쇄 2개와 약 25 kDa의 동일한 경쇄 2개를 함유하므로 사량체 4차 구조이다. 2개의 중쇄는 서로 연결되어 있고, 또한 각각 이황화 결합에 의해 경쇄에 연결되어 있다. 생성된 사량체는 2개의 동일한 반쪽을 가지며 함께 Y형 모양을 형성한다. 포크의 각 끝은 동일한 항원 결합 도메인을 함유한다. 인간에는 4개의 IgG 서브클래스 (IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)가 있으며, 혈청 내 존재도 순으로 명명된다 (즉, IgG1이 가장 풍부함). 전형적으로, 항체의 항원 결합 도메인은 암 세포에 대한 결합의 특이성 및 친화도에서 가장 중요할 것이다.
"항체 작제물"은 (i) 항원 결합 도메인 및 (ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 또는 융합 단백질을 지칭한다.
일부 구현예에서, 결합제는 단독으로 또는 함께 항원-결합 작제물을 구성하는 다른 성분과 함께 항체의 적어도 항원-결합 영역을 포함하는 작제물인 항원-결합 항체 "단편"이다. 예를 들어, (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편, (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편, (iii) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (iv) 온화한 환원 조건을 사용하여 F(ab')2 단편의 이황화 가교를 파괴함으로써 생성되는 Fab' 단편, (v) 이황화 안정화된 Fv 단편 (dsFv), 및 (vi) 2개의 도메인이 단일 폴리펩티드 사슬로 합성될 수 있도록 하는 합성 링커에 의해 연결된 Fv 단편의 2개 도메인 (즉, VL 및 VH)으로 구성된 1가 분자인 단일 사슬 Fv (scFv)를 포함하여 많은 상이한 유형의 항체 "단편"이 당업계에 공지되어 있다.
항체 또는 항체 단편은 더 큰 작제물, 예를 들어, 항체 단편의 추가 영역에 대한 접합체 또는 융합 작제물의 일부일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 Fc 영역에 융합될 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 단편 (예를 들어, Fab 또는 scFv)은 예를 들어, 막횡단 도메인 (선택적으로 개재 링커 또는 "줄기" (예를 들어, 힌지 영역)와 함께) 및 선택적 세포간 신호전달 도메인에 융합함으로써 키메라 항원 수용체 또는 키메라 T-세포 수용체의 일부가 될 수 있다.
"에피토프"는 항원 결합 도메인이 결합하는 (즉, 항원 결합 도메인의 파라토프에서) 항원의 임의의 항원 결정자 또는 에피토프 결정자를 의미한다. 항원 결정자는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹들로 구성되며 일반적으로 특정 3차원 구조적 특성과 특정 전하 특성을 가지고 있다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 지칭한다. Fc 수용체에는 (1) IgG에 결합하는 FcγR, (2) IgA에 결합하는 FcαR, (3) IgE에 결합하는 FcεR의 3가지 주요 부류가 있다. FcγR 패밀리에는 FcγI (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16A) 및 FcγRIIIB (CD16B)와 같은 여러 구성원이 포함된다. Fcγ 수용체는 IgG에 대한 친화도가 다르며 또한 IgG 서브클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)에 대한 친화도도 다르다.
본원에서 언급된 바와 같은 핵산 또는 아미노산 서열 "동일성"은 관심 핵산 또는 아미노산 서열을 참조 핵산 또는 아미노산 서열과 비교함으로써 결정될 수 있다. 동일성 퍼센트는 최적으로 정렬된 관심 서열과 참조 서열 사이에 똑같은 (즉, 동일한) 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 수를 가장 긴 서열의 길이 (즉, 관심 서열 또는 참조 서열 중 더 긴 것의 길이)로 나눈 것이다. 사용 가능한 소프트웨어 프로그램을 사용하여 서열 정렬 및 동일성 퍼센트 계산을 수행할 수 있다. 이러한 프로그램의 예로는 CLUSTAL-W, T-Coffee 및 ALIGN (핵산 및 아미노산 서열의 정렬용), BLAST 프로그램 (예를 들어, BLAST 2.1, BL2SEQ, BLASTp, BLASTn 등) 및 FASTA 프로그램 (예를 들어, FASTA3x, FASTM 및 SSEARCH) (서열 정렬 및 서열 유사성 검색용)이 있다. 서열 정렬 알고리즘은 또한 예를 들어, Altschul 등, J. Molecular Biol., 215(3): 403-410 (1990), Beigert 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009), Durbin 등, eds., Biological Sequence Analysis: Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, UK (2009), Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005), Altschul 등, Nucleic Acids Res., 25(17): 3389-3402 (1997), 및 Gusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge UK (1997))에 기재되어 있다. 서열의 동일성 퍼센트(%)는 또한 예를 들어, 100 x [(동일한 위치)/min(TGA, TGB)]로 계산할 수 있고, 여기서 TGA 및 TGB는 TGA와 TGB를 최소화하는 정렬에서 펩티드 서열 A와 B에서 잔기 수와 내부 갭 위치의 합이다. 예를 들어, Russell 등, J. Mol Biol., 244: 332-350 (1994) 참조.
결합제는 항원 결합 부위를 함께 형성하는 Ig 중쇄 및 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함한다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 각각은 프레임워크 영역에 의해 연결된 3개의 상보성 결정 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3)을 포함하는 폴리펩티드이다. 결합제는 Ig 중쇄 및 경쇄를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 유형의 결합제 중 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 결합제는 항체, 항원-결합 항체 "단편", 또는 T-세포 수용체일 수 있다.
"바이오시밀러"는 예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙과 같이 PD-L1-표적화 항체에 유사한 활성 성질을 갖는 승인된 항체 작제물을 지칭한다
"바이오베터(Biobetter)"는 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙과 같이 이전에 승인된 항체 작제물의 개선체인, 승인된 항체 작제물을 지칭한다. 바이오베터는 이전에 승인된 항체 작제물에 대해 하나 이상의 변형 (예를 들어, 변경된 글리칸 프로필 또는 고유한 에피토프)을 가질 수 있다. 바이오베터는 기존 바이오의약품과 같은 계열의 재조합 단백질 약물이지만 동일하지 않고; 오리지널(original)보다 우수하다. 바이오베터는 독점적인 신약도, 약물의 제네릭 버전도 아니다. 바이오시밀러 및 바이오베터는 모두 생물학적제제의 변형이다. 전자가 원 개발자(originator)의 유사 사본인 반면, 후자는 효능, 안전성, 내약성 또는 투여 요법의 측면에서 개선되었다.
"아미노산"은 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질에 포함될 수 있는 임의의 단량체 단위를 의미한다. 아미노산에는 천연 발생 α-아미노산 및 이들의 입체 이성질체, 뿐만 아니라 비천연 (비천연 발생) 아미노산 및 이들의 입체 이성질체가 포함된다. 주어진 아미노산의 "입체 이성질체"는 동일한 분자식 및 분자내 결합을 갖지만 결합 및 원자의 3차원 배열이 상이한 이성질체 (예를 들어, L-아미노산 및 상응하는 D-아미노산)를 지칭한다. 아미노산은 글리코실화 (예를 들어, N-연결 글리칸, O-연결 글리칸, 포스포글리칸, C-연결 글리칸, 또는 글리피케이션) 또는 탈글리코실화될 수 있다. 아미노산은 일반적으로 알려진 세 글자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에서 권장하는 한 글자 기호로 본 명세서에서 언급될 수 있다.
천연 발생 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화된 아미노산과 나중에 변형되는 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 천연 발생 α-아미노산은 알라닌 (Ala), 시스테인 (Cys), 아스파르트산 (Asp), 글루탐산 (Glu), 페닐알라닌 (Phe), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 아르기닌 (Arg), 라이신 (Lys), 류신 (Leu), 메티오닌 (Met), 아스파라긴 (Asn), 프롤린 (Pro), 글루타민 (Gln), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 발린 (Val), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 천연 발생 α-아미노산의 입체 이성질체는 D-알라닌 (D-Ala), D-시스테인 (D-Cys), D-아스파라긴산 (D-Asp), D-글루탐산 (D-Glu), D-페닐알라닌 (D-Phe), D-히스티딘 (D-His), D-이소류신 (D-Ile), D-아르기닌 (D-Arg), D-라이신 (D-Lys), D-류신 (D-Leu), D-메티오닌 (D-Met), D-아스파라긴 (D-Asn), D-프롤린 (D-Pro), D-글루타민 (D-Gln), D-세린 (D-Ser), D-트레오닌 (D-Thr), D-발린 (D-Val), D-트립토판 (D-Trp), D-티로신 (D-Tyr), 및 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
천연 발생 아미노산에는 시트룰린 (Cit)과 같은 번역 후 변형에 의해 단백질에서 형성된 것들이 포함된다.
비천연 (비-천연 발생) 아미노산은 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 L- 또는 D-배치 중 하나의 아미노산 유사체, 아미노산 모방체, 합성 아미노산, N-치환된 글리신, 및 N-메틸 아미노산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, "아미노산 유사체"는 천연 발생 아미노산 (즉, 수소에 결합된 탄소, 카르복실기, 아미노기)과 동일한 기본 화학 구조를 갖지만 변형된 측쇄기 또는 변형된 펩티드 골격을 갖는 비천연 아미노산, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드 및 메티오닌 메틸 설포늄일 수 있다. "아미노산 모방체"는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 다른 구조를 갖지만 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 지칭한다.
"링커"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합하는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체 작제물에 보조제 모이어티를 공유 결합하는 역할을 할 수 있다.
"연결 모이어티"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합하는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체에 보조제 모이어티를 공유 결합하는 역할을 할 수 있다. 연결 모이어티를 단백질 및 기타 물질에 연결하는 데 유용한 결합은 아미드, 아민, 에스테르, 카르바메이트, 우레아, 티오에테르, 티오카르바메이트, 티오카르보네이트, 및 티오우레아를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"2가"는 2개의 작용기를 연결하기 위한 2개의 부착점을 함유하는 화학적 모이어티를 지칭하고; 다가 연결 모이어티는 추가 작용기를 연결하기 위한 추가 부착점을 가질 수 있다. 2가 라디칼은 접미사 "디일"로 표시될 수 있다. 예를 들어, 2가 연결 모이어티는 2가 폴리(에틸렌 글리콜), 2가 사이클로알킬, 2가 헤테로사이클로알킬, 2가 아릴 및 2가 헤테로아릴기와 같은 2가 폴리머 모이어티를 포함한다. "2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기"는 분자 또는 물질에서 2개의 모이어티를 공유 연결하기 위한 2개의 부착점을 갖는 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기를 지칭한다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
물결선 ("")은 특정 화학 모이어티의 부착점을 나타낸다. 특정 화학 모이어티에 2개의 물결선이 존재하는 경우, 화학 모이어티는 양방향으로, 즉 왼쪽에서 오른쪽으로 또는 오른쪽에서 왼쪽으로 읽을 때 사용될 수 있음을 이해해야 한다.
"알킬"은 표시된 탄소 원자 수를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형 포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알킬은 예를 들어 1에서 12까지의 임의의 수의 탄소를 포함할 수 있습니다. 알킬 기의 예는 메틸 (Me, -CH3), 에틸 (Et, -CH2CH3), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸 (-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸 (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸 (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-헵틸, 1-옥틸, 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. "치환된 알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알킬디일"은 2가 알킬 라디칼을 지칭한다. 알킬디일 기의 예는 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), 프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알킬디일 기는 또한 "알킬렌" 기로 지칭될 수 있다.
"알케닐"은 표시된 탄소 원자 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합, sp2를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형, 불포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알케닐은 2개 내지 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 알케닐 기는 "시스" 및 "트랜스" 배향, 또는 대안적으로 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼이다. 그 예는 에틸레닐 또는 비닐 (-CH=CH2), 알릴 (-CH2CH=CH2), 부테닐, 펜테닐, 및 그의 이성질체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알케닐 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 알케닐" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소 (=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어들 "알케닐렌" 또는 "알케닐디일"은 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 그 예는 에틸레닐렌 또는 비닐렌 (-CH=CH-), 알릴 (-CH2CH=CH-), 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"알키닐"은 표시된 탄소 원자 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합 sp를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형, 불포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알키닐은 2개 내지 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 예를 들어, C2-C6 알키닐은 에티닐 (-C≡CH), 프로피닐 (프로파르길, -CH2C≡CH), 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 및 그의 이성질체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알키닐 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 알키닐" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소 (=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알키닐렌" 또는 "알키닐디일"은 2가 알키닐 라디칼을 지칭한다.
용어들 "카보사이클", "카보사이클릴", "카보사이클릭 고리" 및 "사이클로알킬"은 3 내지 12개의 고리 원자, 또는 표시된 원자의 수를 함유하는 포화 또는 부분 불포화, 모노사이클릭, 융합된 바이사이클릭, 또는 가교된 폴리사이클릭 고리 어셈블리를 지칭한다. 포화 모노사이클릭 카르보사이클릭 고리는 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 및 사이클로옥틸을 포함한다. 포화 바이사이클릭 및 폴리사이클릭 카르보사이클릭 고리는 예를 들어, 노르보르난, [2.2.2]바이사이클로옥탄, 데카하이드로나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 카르보사이클릭기는 또한 고리에 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 갖고 부분적으로 불포화될 수 있다. 부분적으로 불포화된 대표적인 카르보사이클릭기는 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 사이클로헥사디엔 (1,3- 및 1,4-이성질체), 사이클로헵텐, 사이클로헵타디엔, 사이클로옥텐, 사이클로옥타디엔 (1,3-, 1,4- 및 1,5-이성질체), 노르보르넨 및 노르보르나디엔을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "사이클로알킬디일"은 2가 사이클로알킬 라디칼을 지칭한다.
"아릴"은 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도된 6 내지 20개의 탄소 원자 (C6-C20)의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 아릴기는 모노사이클릭이거나, 융합되어 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 기를 형성하거나 결합에 의해 연결되어 바이아릴 기를 형성할 수 있다. 대표적인 아릴기는 페닐, 나프틸 및 바이페닐을 포함한다. 다른 아릴기는 메틸렌 연결 기를 갖는 벤질을 포함한다. 일부 아릴기는 페닐, 나프틸 또는 바이페닐과 같이 6 내지 12개의 고리 구성원을 갖는다. 다른 아릴기는 페닐 또는 나프틸과 같이 6 내지 10개의 고리 구성원을 갖는다.
용어들 "아릴렌" 또는 "아릴디일"은 방향족 고리 시스템의 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 6 내지 20개의 탄소 원자 (C6-C20)의 2가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴디일 기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 아릴디일은 포화된, 부분적으로 불포화된 고리, 또는 방향족 카보사이클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 바이사이클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴디일 기는 벤젠 (페닐디일), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐렌, 인데닐렌, 인다닐렌, 1,2-디하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 등으로부터 유로된 라이칼을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 아릴디일 기는 또한 "아릴렌"으로 지칭되고, 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 치환된다.
용어들 "헤테로사이클," "헤테로사이클릴" 및 "헤테로사이클릭 고리"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며 적어도 하나의 고리 원자가 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 헤테로원자이고 나머지 고리 원자는 C인 3 내지 약 20개의 고리 원자의 포화된 또는 부분적으로 불포화된 (즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카보사이클릭 라디칼을 지칭하고, 하나 이상의 고리 원자는 선택적으로 아래에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다. 헤테로사이클은 3 내지 7개의 고리 구성원 (2 내지 6개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자)를 갖는 모노사이클 또는 7 내지 10개의 고리 구성원 (4 내지 9개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자)을 갖는 바이사이클, 예를 들어: 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 시스템일 수 있다. 헤테로사이클은 문헌 [Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), particularly Chapters 1, 3, 4, 6, 7, 및 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950, 현재까지), 특히 Volumes 13, 14, 16, 19, 및 28; 및 J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566]에 기재되어 있다. "헤테로사이클릴"은 또한 헤테로사이클 라디칼이 포화된, 부분적으로 불포화된 고리, 또는 방향족 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리와 융합된 라디칼을 포함한다. 헤테로사이클릭 고리의 예는 모폴린-4-일, 피페리딘-1-일, 피페라지닐, 피페라진-4-일-2-온, 피페라진-4-일-3-온, 피롤리딘-1-일, 티오모폴린-4-일, S-디옥소티오모폴린-4-일, 아조칸-1-일, 아제티딘-1-일, 옥타하이드로피리도[1,2-a]피라진-2-일, [1,4]디아제판-1-일, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 디하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에닐, 테트라하이드로피라닐, 디하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 피페리디노, 모폴리노, 티오모폴리노, 티옥사닐, 호모피페라지닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥소라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티올라닐, 디하이드로피라닐, 디하이드로티에닐, 디하이드로푸라닐, 피라졸리디닐이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵타닐, 아자바이사이클로[2.2.2]헥사닐, 3H-인돌릴 퀴놀리지닐 및 N-피리딜 우레아를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티는 또한 이 정의의 범위 내에 포함된다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티의 예는 아자스피로[2.5]옥타닐 및 아자스피로[2.4]헵타닐을 포함한다. 2개 고리 원자가 옥소 (=O) 모이어티로 치환된 헤테로사이클릭 기의 예는 피리미디노닐 및 1,1-디옥소-티오모폴리닐이다. 본원의 헤테로사이클 기는 선택적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
용어 "헤테로사이클릴디일"은 적어도 하나의 고리 원자는 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자 C인 3 내지 약 20개의 고리 원자의 2가, 포화된 또는 부분적으로 불포화된 (즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카보사이클릭 라디칼을 지칭하고, 하나 이상의 고리 원자는 선택적으로 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다. 5-원 및 6-원 헤테로사이클릴디일의 예는 모폴리닐디일, 피페리디닐디일, 피페라지닐디일, 피롤리디닐디일, 디옥사닐디일, 티오모폴리닐디일, 및 S-디옥소티오모폴리닐디일을 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 5-, 6-, 또는 7-원 고리의 1가 방향족 라디칼을 지칭하고, 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 20개의 원자의 융합 고리계 (이의 적어도 하나는 방향족임)를 포함한다. 헤테로아릴 기의 예는 피리디닐 (예를 들어, 2-하이드록시피리디닐 포함), 이미다졸릴, 이미다조피리디닐, 피리미디닐 (예를 들어, 4-하이드록시피리미디닐 포함), 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 퓨릴, 티에닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐, 및 푸로피리디닐이다. 헤테로아릴 기는 선택적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
용어 "헤테로아릴디일"은 5-, 6-, 또는 7-원 고리의 2가 방향족 라디칼을 지칭하고, 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 20 원자의 융합 고리계 (이의 적어도 하나는 방향족임)를 포함한다. 5-원 및 6-원 헤테로아릴디일의 예는 피리딜디일, 이미다졸릴디일, 피리미딜디일, 피라졸릴디일, 트리아졸릴디일, 피라지닐디일, 테트라졸릴디일, 퓨릴디일, 티에닐디일, 이속사졸릴디일디일, 티아졸릴디일, 옥사디아졸릴디일, 옥사졸릴디일, 이소티아졸릴디일, 및 피롤릴디일을 포함한다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 가능한 경우 결합된 탄소(탄소-연결) 또는 질소(질소-연결)일 수 있다. 비제한적인 예로서, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5, 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5, 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5, 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5, 또는 6, 푸란, 테트라하이드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 위치 2, 3, 4, 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4, 또는 5, 이속사졸, 피라졸, 또는 이소티아졸의 위치 3, 4, 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3, 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8에서 결합된다.
비제한적인 예로서, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 파이롤리딘, 2-파리롤린, 3-파리롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌, 또는 이소인돌린의 위치 2, 모폴린의 위치 4, 및 카바졸, 또는 β-카볼린의 위치 9에서 결합된다.
그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서 용어 "할로" 및 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다.
그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서 용어 "카보닐"은 C(=O) 또는 -C(=O)-, 즉 산소에 이중 결합되고 카보닐을 가지고 있는 모이어티에서 다른 두 기에 결합된 탄소 원자를 나타낸다.
본원에 사용된 "4차 암모늄 염"이라는 문구는 알킬 치환기 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 부틸과 같은 C1-C4 알킬)로 4차화된 3차 아민을 지칭한다.
"치료하다", "치료" 및 "치료하는"이라는 용어는 저감; 경감; 증상을 감소시키거나 증상, 부상, 병리 또는 병태를 환자가 더 견딜 수 있게 만드는 것; 증상 진행 속도 감소; 증상 또는 병태의 빈도 또는 기간 감소; 또는 일부 상황에서는 증상의 발병의 예방과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 포함하여, 부상, 병리, 병태 (예를 들어, 암), 또는 증상 (예를 들어, 인지 장애)의 치료 또는 개선의 임의의 성공 표시를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은 예를 들어, 신체 검사의 결과를 포함하는 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 기반으로 할 수 있다.
용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 세포 증식에 대한 제어의 유의미한 상실을 특징으로 하는 비정상적인 성장 표현형을 나타내도록 자율적이고 조절되지 않은 성장을 나타내는 세포를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 본 발명의 맥락에서 검출, 분석 및/또는 치료를 위한 관심 세포는 암 세포 (예를 들어, 암에 걸린 개체의 암 세포), 악성 암 세포, 전-전이성 암 세포, 전이성 암 세포, 및 비-전이성 암 세포를 포함한다. 거의 모든 조직의 암이 알려져 있다. "암 부담"이라는 어구는 대상체에서 암 세포의 양 또는 암 부피를 지칭한다. 이에 따라 암 부담을 감소시키는 것은 대상체에서 암 세포의 수 또는 암 세포 부피를 감소시키는 것을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "암 세포"는 암 세포 (예를 들어, 개체가 치료될 수 있는, 예를 들어, 암에 걸린 개체로부터 단리될 수 있는 임의의 암)이거나 암 세포로부터 유래된 임의의 세포, 예를 들어, 암 세포의 클론을 지칭한다. 예를 들어, 암 세포는 확립된 암 세포주로부터 유래할 수 있고, 암에 걸린 개체로부터 단리된 1차 세포일 수 있고, 암에 걸린 개체로부터 단리된 1차 세포로부터의 자손 세포 등일 수 있다. 일부 구현예에서, 이 용어는 또한 암 세포의 일부, 예를 들어, 세포내 부분, 세포막 부분, 또는 암 세포의 세포 용해물을 지칭할 수 있다. 암종, 육종, 교모세포종, 흑색종, 림프종 및 골수종과 같은 고형 종양, 및 백혈병과 같은 순환성 암을 비롯한 많은 유형의 암이 당업자에게 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "암"은 고형 종양 암 (예를 들어, 피부, 폐, 전립선, 유방, 위, 방광, 결장, 난소, 췌장, 신장, 간, 교모세포종, 수모세포종, 평활근육종, 두경부 편평 세포 암종, 흑색종 및 신경내분비) 및 액체 암 (예를 들어, 혈액암); 암종; 연조직 종양; 육종; 기형종; 흑색종; 백혈병; 림프종; 및 최소 잔류 질환을 포함하는 뇌암 및 원발성 및 전이성 종양을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 형태의 암을 포함한다.
암의 "병리"에는 환자의 복지를 손상시키는 모든 현상이 포함된다. 여기에는 비정상적이거나 통제할 수 없는 세포 성장, 전이, 인접 세포의 정상적인 기능 방해, 비정상적인 수준의 사이토카인 또는 기타 분비 산물의 방출, 염증 또는 면역 반응의 억제 또는 악화, 신생물, 전암, 악성 종양 및 림프절과 같은 주변 또는 원거리 조직이나 기관의 침습이 포함되나 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 사용되는 "암 재발" 및 "종양 재발"이라는 문구 및 이들의 문법적 변형은 암 진단 후 신생물 또는 암성 세포의 추가 성장을 지칭한다. 특히, 암 조직에 추가적인 암 세포 증식이 일어나면 재발이 일어날 수 있다. 유사하게 "종양 퍼짐(tumor spread)"은 종양의 세포가 국소 또는 원거리 조직 및 기관으로 퍼질 때 발생하므로 종양 퍼짐은 종양 전이를 포함한다. "종양 침습"은 종양 성장이 국부적으로 퍼져 정상 기관 기능의 압박, 파괴 또는 방지에 의해 관련 조직의 기능을 손상시킬 때 발생한다.
본 명세서에서 용어 "전이"는 원래의 암성 종양의 장기와 직접적으로 연결되지 않은 장기 또는 신체 부위에서의 암성 종양의 성장을 지칭한다. 전이는 원래 암성 종양의 기관에 직접 연결되지 않은 기관 또는 신체 부위에 검출할 수 없는 양의 암 세포가 존재하는 것인 미세전이를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 전이는 또한 암 세포가 원래 종양 부위에서 이탈하고 암 세포가 신체의 다른 부분으로 이동 및/또는 침습하는 것과 같은 과정의 여러 단계로 정의될 수 있다.
"유효량" 및 "치료 유효량"이라는 어구는 투여되어 치료 효과를 생성하는 면역접합체와 같은 물질의 용량 또는 양을 지칭한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 따라 다르며 공지된 기술을 사용하여 당업자가 확인할 수 있다 (예를 들어, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition (McGraw-Hill, 2006); 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, (Pharmaceutical Press, London, 2012) 참조). 암의 경우, 면역접합체의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고; 종양 크기를 줄일 수 있고; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제 (즉, 어느 정도 느리게, 바람직하게는 중지)할 수 있고; 종양 전이를 억제 (즉, 어느 정도 느리게, 바람직하게는 중지)할 수 있고; 종양 성장을 어느 정도 억제할 수 있고/있거나; 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 면역접합체가 기존 암 세포의 성장을 방지하고/하거나 죽일 수 있는 한, 이는 세포증식억제 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료의 경우 효능은 예를 들어, 질환 진행까지의 시간 (TTP)을 평가하고/하거나 반응률 (RR)을 결정하여 측정할 수 있다
"수혜자", "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용되며 진단, 치료, 또는 요법이 바람직한 임의의 포유동물 대상체 (예를 들어, 인간)를 나타낸다. 치료 목적의 "포유동물"이라 함은 인간, 가축 및 농장동물, 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 낙타 등의 동물원, 스포츠 또는 애완 동물 등을 비롯한, 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 포유동물은 인간이다.
본 발명의 맥락에서 "상승적 보조제" 또는 "상승적 조합"이라는 어구는 수용체 작용제, 사이토카인 및 보조제 폴리펩티드와 같은 2개의 면역 조절제의 조합을 포함하며, 이는 단독 투여되는 것에 비해 조합으로 면역에 대한 상승적 효과를 이끌어낸다. 특히, 본원에 개시된 면역접합체는 청구된 보조제 및 항체 작제물의 상승적 조합을 포함한다. 투여 시 이러한 상승적 조합은, 예를 들어, 항체 작제물 또는 보조제가 다른 모이어티의 부재 하에 투여되는 경우에 비해 면역에 대한 더 큰 효과를 유도한다. 또한, 항체 작제물 또는 보조제가 단독으로 투여될 때와 비교하여 감소된 양의 면역접합체가 투여될 수 있다 (면역접합체의 일부로서 투여된 항체 작제물의 총 수 또는 보조제의 총 수로 측정됨).
본원에 사용된 용어 "투여하는"은 비경구, 정맥내, 복강내, 근육내, 종양내, 병변내, 비강내, 또는 피하 투여, 경구 투여, 좌약으로서의 투여, 국소 접촉, 경막내 투여, 또는 서방성 장치, 예를 들어, 미니 삼투압 펌프의 대상에의 착상을 지칭한다.
수치를 수식하기 위해 본 명세서에서 사용된 용어 "약" 및 "대략"은 수치를 둘러싸는 가까운 범위를 나타낸다. 따라서, "X"가 값이면, "약 X" 또는 "대략 X"는 0.9X 내지 1.1X, 예를 들어, 0.95X 내지 1.05X 또는 0.99X 내지 1.01X의 값을 나타낸다. "약 X" 또는 "대략 X"에 대한 언급은 구체적으로 적어도 X, 0.95X, 0.96X, 0.97X, 0.98X, 0.99X, 1.01X, 1.02X, 1.03X, 1.04X, 및 1.05X 값을 나타낸다. 따라서 "약 X" 및 "대략 X"는 예를 들어, "0.98X"의 청구 제한에 대한 서면 설명 지원을 교시하고 제공하기 위한 것이다.
PD-L1 항체
예시적 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 PD-L1을 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
프로그램된 사멸-리간드 1 (PD-L1, 분화 클러스터 274, CD274, B7-동족체 1 또는 B7-H1)은 B7 단백질 수퍼패밀리에 속하며, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1, PDCD1, 분화 클러스터 279, 또는 CD279)의 리간드이다. PD-L1은 또한 B7.1 (CD80)과 상호작용할 수 있으며, 이러한 상호작용은 T 세포 프라이밍을 억제하는 것으로 여겨진다. PD-L1/PD-1 축은 적응 면역 반응을 억제하는데 큰 역할을 한다. 보다 구체적으로, PD-L1과 이의 수용체인 PD-1의 결합이 T 세포의 활성화 및 증식을 억제시키는 신호를 전달하는 것으로 여겨진다. PD-L1에 결합하고 리간드가 PD-1 수용체에 결합하는 것을 방지하는 제제는 이 면역억압을 방지하므로, 암이나 감염의 치료와 같이 원하는 경우 면역 반응을 강화할 수 있다. PD-L1/PD-1 경로는 자가면역 예방에도 기여하고; 그러므로, PD-L1에 대한 효능적 제제 또는 면역 억제 페이로드를 전달하는 제제는 자가면역 질환의 치료에서 도움이 될 수 있다.
아테졸리주맙 (TECENTRIQ™), 더발루맙 (IMFINZI™), 아벨루맙 (BAAVENCIO™)을 포함하여, PD-L1을 표적으로 하는 여러 항체는 암의 치료를 위하여 개발되었다. 그럼에도 불구하고, PD-L1을 높은 친화력으로 결합시키고 PD-L1/PD-1 신호전달을 효과적으로 방지하는 제제, 그리고 PD-L1 발현 세포에 치료적 페이로드를 전달할 수 있는 제제를 포함하여, 새로운 PD-L1 결합제가 계속 필요하다. 또한, 자가면역 장애 및 감염을 치료하기 위한 새로운 PD-L1 결합제가 필요하다.
하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티에 공유 부착되는 링커에 공유 부착된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체를 세포, 또는 세포를 포함하는 포유동물에 투여하는 것을 포함하는, PD-L1을 발현하는 세포에 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 유도체 페이로드를 전달하는 방법이 제공된다.
포유동물에게 그것의 PD-L1 면역접합체를 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 면역 반응을 향상시키거나 감소시키거나 억제하는 방법, 및 PD-L1 억제에 반응하는 포유동물에서 질환, 장애, 또는 병태를 치료하는 방법이 또한 제공된다.
본 발명은 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하는 PD-L1 결합제를 제공한다.
PD-L1 결합제는 PD-L1을 특이적으로 결합시킨다. 제제의 결합 특이성은 PD-L1 발현 세포를 표적으로 삼아, 예를 들어, 이러한 세포에 치료적 페이로드를 전달할 수 있게 한다.
일부 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A 또는 유형 B)는 인간 PD-L1, 예를 들어, 서열번호: 307을 포함하는 단백질에 결합한다. 하지만, 임의의 PD-L1 동족체 또는 이원체에 결합하는 결합제가 또한 포함된다. 일부 구현예에서, PD-L1 단백질은 서열번호: 307에 적어도 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 인간 PD-L1 및 시노몰구스 PD-L1; 또는 인간, 시노몰구스 및 마우스 PD-L1을 결합시킨다.
MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET 서열번호: 307
일부 구현예에서, PD-L1 결합제는 PD-L1이 그의 수용체인 PD-1에 결합하는 것을 실질적으로 억제하거나 방지하지 않고 PD-L1을 결합시킨다. 하지만, 다른 구현예에서, PD-L1 결합제는 항체가 (예를 들면, 치료적 목적을 위하여) PD-L1/PD-1 신호전달을 억제시키는데 사용될 수 있도록, PD-L1의 그의 수용체인 PD-1에 대한 결합을 완전히 또는 부분적으로 차단 (억제 또는 방지)할 수 있다.
항체 또는 항원-결합 항체 단편은 PD-L1에 대하여 단일특이적일 수 있거나, 이중특이적 또는 다중특이적일 수 있다. 예를 들어, 2가 또는 다가 항체 또는 항체 단편에서, 동일한 항원의 상이한 에피토프를 표적화하거나 상이한 항원을 표적화하는 결합 도메인은 상이할 수 있다. 다가 결합 작제물의 작제 방법은 당업계에 알려진다. 이중특이적 및 다중특이적 항체는 당업계에 알려진다. 게다가, 동일한 폴리펩티드 쇄에서 VH와 VL 사이 짝짓기를 허용하기에 너무 짧은 펩티드 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 각각 포함하여, 이로써 상이한 VH-VL 폴리펩티드 쇄에서 상보적 도메인들 사이 짝짓기를 구동시켜 2, 3, 또는 4개의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 다량체성 분자를 생성하는 폴리펩티드 쇄의 이량체, 삼량체, 또는 사량체인 디아바디, 트리아바디, 또는 테트라바디가 제공될 수 있다. 또한, 2개의 상이한 가변 도메인을 가진 작은 scFv 단편인 bis-scFv 단편은 생성되어 2개의 상이한 에피토프를 결합시킬 수 있는 이중특이적 bis-scFv 단편을 생산할 수 있다. Fab 이량체 (Fab2) 및 Fab 삼량체 (Fab3)는 유전적 조작 방법을 사용하여 생산되어 Fab 단편에 기초한 다중특이적 작제물을 창작할 수 있다.
PD-L1 결합제는 또한 항체 접합체일 수 있다. 이와 관련하여, PD-L1 결합제는 (1) 항체, 대체 스캐폴드, 또는 이들의 단편, 및 (2) 단백질 또는 비단백질 모이어티의 접합체일 수 있다. 예를 들어, PD-L1 결합제는 펩티드, 형광성 분자, 화학요법제 또는 기타 세포독성 페이로드, 면역 활성화 또는 면역억압성 제제에 접합될 수 있다.
PD-L1-결합제는 인간 항체, 비인간 항체, 인간화된 항체, 또는 키메라 항체, 또는 상응하는 항체 단편일 수 있거나, 그로부터 수득될 수 있다. "키메라" 항체는 인간 불변 영역 및 비인간 가변 영역을 전형적으로 포함하는 항체 또는 이의 단편이다. "인간화된" 항체는 인간 항체 스캐폴드를 전형적으로 포함하지만 적어도 하나의 CDR (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 모두 6개의 CDR)내 비인간 기원 아미노산 또는 서열을 가진 단일클론 항체이다.
PD-L1 결합제 - 유형 A
면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하는 PD-L1 결합제가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 서열번호: 223-264 중 임의의 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR; 및 서열번호: 265-306 중 임의의 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역 또는 적어도 그들의 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 서열번호: 223-264 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드, 및 서열번호: 265-306 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함한다. 더욱 다른 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A), 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 1-23 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열번호: 24-57 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열번호: 58-95 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 96-128 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열번호: 129-151 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열번호: 152-155 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)을 포함한다. PD-L1 결합제, 그의 개별 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 핵산; 핵산을 포함하는 벡터 및 세포; 그리고 결합제 또는 핵산을 포함하는 조성물이 또한 제공된다.
게다가, 일부 구현예에서, 본원에 제공된 PD-L1 결합제 (유형 A)는 세포 표면에서 PD-L1에 결합시 PD-L1 또는 PD-L1/PD-L1 결합제 복합체의 세포 내재화를 야기시킨다. 임의의 특정한 이론 또는 작용 기전에 의해 구속됨의 바램 없이, 이 구현예에 따른 PD-L1 결합제가 결합시 PD-L1 내재화를 야기시키고, 내재화 동안 PD-L1에 여전히 결합되어, PD-L1과 결합제의 내재화를 초래한다는 것으로 여겨진다. PD-L1 및 결합된 PD-L1 결합제의 세포성 내재화는 임의의 적합한 방법, 예컨대 세포 표면에서의 지속성에 대한 검정 및/또는 내재화된 항체의 검출에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합제는 세포 표면에서 PD-L1을 결합시키는 PD-L1 결합제의 적어도 약 25% (예를 들면, 적어도 약 35%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 90%)가 내재화되도록 충분히 강하게 내재화한다 (예를 들면, 표면 지속성 검정을 사용하여, 검정의 시작시 세포 표면에서 PD-L1에 결합된 PD-L1 결합제 분자의 약 75% 이하, 약 65% 이하, 약 50% 이하, 약 25% 이하 또는 약 10% 이하는 검정의 종료시 여전히 결합된다).
한 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 서열번호: 223-264 중 임의의 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 서열번호: 223-264에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그들의 CDR; 및/또는 서열번호: 265-306 중 임의의 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 서열번호: 265-306에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그들의 CDR을 포함한다.
추가 예시로서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 다음을 포함할 수 있다:
(1) 서열번호: 223의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 265의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(2) 서열번호: 224의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 266의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(3) 서열번호: 225의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 267의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(4) 서열번호: 226의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 268의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(5) 서열번호: 227의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 269의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(6) 서열번호: 228의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 270의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(7) 서열번호: 229의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 271의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(8) 서열번호: 230의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 272의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(9) 서열번호: 231의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 273의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(10) 서열번호: 232의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 274의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(11) 서열번호: 233의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 275의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(12) 서열번호: 234의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 276의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(13) 서열번호: 235의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 277의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(14) 서열번호: 236의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 278의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(15) 서열번호: 237의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 279의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(16) 서열번호: 238의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 280의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(17) 서열번호: 239의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 281의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(18) 서열번호: 240의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 282의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(19) 서열번호: 241의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 283의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(20) 서열번호: 242의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 284의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(21) 서열번호: 243의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 285의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(22) 서열번호: 244의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 286의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(23) 서열번호: 245의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 287의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(24) 서열번호: 246의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 288의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(25) 서열번호: 247의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 289의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(26) 서열번호: 248의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 290의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(27) 서열번호: 249의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 291의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(28) 서열번호: 250의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 292의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(29) 서열번호: 251의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 293의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(30) 서열번호: 252의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 294의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(31) 서열번호: 253의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 295의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(32) 서열번호: 254의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 296의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(33) 서열번호: 255의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 297의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(34) 서열번호: 256의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 298의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(35) 서열번호: 257의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 299의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(36) 서열번호: 258의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 300, 또는 적어도 그들의 CDR의 면역글로불린 경쇄 가변 영역;
(37) 서열번호: 259의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 301의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(38) 서열번호: 260의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 302의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(39) 서열번호: 261의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 303의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(40) 서열번호: 262의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 304의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(41) 서열번호: 263의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 305의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(42) 서열번호: 264의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 306의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR; 및/또는
(43) 도 4a-d의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및/또는 도 4e-g의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR.
주어진 중쇄 또는 경쇄 Ig 서열의 CDR은 다양한 알려진 Ig 넘버링 체계 (예를 들면, 카밧, 초티아, 마르틴 (향상된 초티아), IGMT, AbM) 중 임의의 것에 따라 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 하기 CDR:
서열번호: 1-23 중 임의의 하나 또는 서열번호: 1-23에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1;
서열번호: 24-57 중 임의의 하나 또는 서열번호: 24-57에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2; 및
서열번호: 58-95 중 임의의 하나 또는 서열번호: 58-95에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3 중 하나 이상을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는
서열번호: 96-128 중 임의의 하나 또는 서열번호: 96-128에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1;
서열번호: 129-151 중 임의의 하나 또는 서열번호: 129-151에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2; 및
서열번호: 152-155 중 임의의 하나 또는 서열번호: 152-155에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함한다.
특정한 구현예에서, 결합제 (유형 A)는 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드를 포함하고, 여기서:
(1) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 1을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 24를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 58을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 96을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 152를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(2) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 25를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 59를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 97을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 153을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(3) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 3을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 26을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 60을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 98을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 154를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(4) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 4를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 27을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 61을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 99를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 130을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(5) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 5를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 28을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 62를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 100을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 153을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(6) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 6을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 29를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 63을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 101을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 131을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 156을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(7) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 7을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 30을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 64를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 102를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 132를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 157을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(8) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 31을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 65를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 103을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 133을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(9) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 8을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 32를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 66을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 104를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 134를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 158을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(10) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 9를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 33을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 67을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 97을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 135를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 159를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(11) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 7을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 34를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 64를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 102를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 132를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 160을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(12) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 10을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 35를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 68을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 105를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 136을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 161을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(13) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 25를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 69를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 106을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 162를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(14) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 11을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 36을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 70을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 107을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 163을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(15) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 12를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 37을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 71을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 108을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 137을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 164를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(16) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 1을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 38을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 72를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 109를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 138을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(17) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 13을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 39를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 73을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 98을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(18) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 40을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 74를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 110을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 137을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 166을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(19) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 14를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 41을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 75를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 111을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(20) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 15를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 42를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 74를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 97을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 139를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 152를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(21) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 14를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 43을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 76을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 112를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 137을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(22) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 16을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 44를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 77을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 113을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 140을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(23) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 9를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 45를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 78을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 114를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 141을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(24) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 17을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 46을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 79를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 98을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(25) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 9를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 25를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 80을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 115를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 142를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(26) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 17을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 41을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 81을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 116을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 143을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 167을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(27) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 7을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 47을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 82를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 117을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 144를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(28) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 41을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 83을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 118을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 131을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 168을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(29) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 18을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 48을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 84를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 119를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 145를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(30) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 19를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 49를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 85를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 120을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 146을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(31) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 50을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 86을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 121을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 147을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 169를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(32) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 51을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 87을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 122를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 137을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(33) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 20을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 44를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 88을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 123을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 148을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 170을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(34) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 3을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 52를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 60을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 98을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 171을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(35) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 53을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 89를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 97을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 147을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 172를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(36) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 21을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 38을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 90을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 109를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 150을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(37) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 22를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 41을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 91을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 124를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 151을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 173을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(38) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 54를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 92를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 126을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 129를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 165를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(39) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 2를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 55를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 93을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 97을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 149를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 174를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(40) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 23을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 56을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 94를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 125를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 142를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 175를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(41) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 14를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 43을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 76을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 127을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 137을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 176을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(42) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 3을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 57을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 95를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 128을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 137을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 155를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(43) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 경쇄 폴리펩티드는 PD-L1 유형 A 결합제 1-42의 도 1a-d에 열거된 CDR의 임의의 조합을 포함한다.
특정한 구현예에서, 결합제는 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 경쇄 폴리펩티드는 각각 도 2a-d 및 도 3a-d에 열거된 프레임워크 영역의 임의의 조합을 포함한다.
PD-L1-결합제 - 유형 B
면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하는 PD-L1 결합제 (유형 B)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 B)는 서열번호: 430-450 중 임의의 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR; 및 서열번호: 451-471 중 임의의 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, PD-L1 결합제는 서열번호: 430-450 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드, 및 서열번호: 451-471 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함한다. 더욱 다른 구현예에서, PD-L1 결합제, 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 308-321 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열번호: 322-338 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열번호: 339-359 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 360-374 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열번호: 131 및 375-386 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열번호: 387-398 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)을 포함한다. PD-L1 결합제, 또는 이의 개별 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 핵산; 핵산을 포함하는 벡터 및 세포; 및 결합제 또는 핵산을 포함하는 조성물이 또한 제공된다.
한 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 B)는 서열번호: 430-450 중 임의의 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 서열번호: 430-450에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그들의 CDR; 및/또는 서열번호: 451-471 중 임의의 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 서열번호: 451-471에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그들의 CDR을 포함한다.
추가 예시로써, PD-L1 결합제 (유형 B)는 다음을 포함할 수 있다:
(1) 서열번호: 430의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 451의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(2) 서열번호: 430의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 451의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(3) 서열번호: 431의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 452의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(4) 서열번호: 432의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 453의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(5) 서열번호: 433의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 454의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(6) 서열번호: 434의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 455의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(7) 서열번호: 435의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 456의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(8) 서열번호: 436의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 457의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(9) 서열번호: 437의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 458의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(10) 서열번호: 438의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 459의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(11) 서열번호: 439의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 460의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(12) 서열번호: 440의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 461의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(13) 서열번호: 441의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 462의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(14) 서열번호: 442의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 463의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(15) 서열번호: 443의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 464의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(16) 서열번호: 444의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 465의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(17) 서열번호: 445의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 466의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(18) 서열번호: 446의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 467의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(19) 서열번호: 447의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 468의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(20) 서열번호: 448의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 469의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR; 및/또는
(21) 서열번호: 449의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 470의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR;
(22) 서열번호: 450의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR, 및/또는 서열번호: 471의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR; 및/또는
(23) 도 8a-b의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및/또는 도 8c-d의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그들의 CDR.
주어진 중쇄 또는 경쇄 Ig 서열의 CDR은 다양한 알려진 Ig 넘버링 체계 (예를 들면, 카밧, 초티아, 마르틴 (향상된 초티아), IGMT, AbM) 중 임의의 것에 따라 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, PD-L1 결합제는 하기 CDR:
서열번호: 308-321 중 임의의 하나 또는 서열번호: 308-321에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1;
서열번호: 322-338 중 임의의 하나 또는 서열번호: 322-338에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2; 및
서열번호: 339-359 중 임의의 하나 또는 서열번호: 339-359에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3 중 하나 이상을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는
서열번호: 360-374 중 임의의 하나 또는 서열번호: 360-374에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1;
서열번호: 375-386 중 임의의 하나 또는 서열번호: 375-386에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2; 및
서열번호: 387-398 중 임의의 하나 또는 서열번호: 387-398에 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함한다.
특정한 구현예에서, 결합제는 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드를 포함하고, 여기서:
(1) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 308을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 322를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 339를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 360을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 375를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 387을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(2) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 309를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 323을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 340을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 361을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 376을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 388을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(3) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 310을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 324를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 341을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 360을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 375를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 387을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(4) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 311을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 325를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 342를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 362를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 377을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 389를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(5) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 312를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 326을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 343을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 360을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 378을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 387을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(6) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 313을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 327을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 344를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 363을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 379를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 390을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(7) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 314를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 327을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 345를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 364를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 380을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 391을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(8) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 312를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 328을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 346을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 365를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 375를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 387을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(9) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 314를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 329를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 347을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 366을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 375를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 389를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(10) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 309를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 330을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 348을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 360을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 381을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 392를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(11) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 309를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 327을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 349를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 367을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 382를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 389를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(12) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 309를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 322를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 350을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 360을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 383을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 387을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(13) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 315를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 323을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 351을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 368을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 375를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 393을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(14) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 316을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 331을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 352를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 365를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 375를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 389를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(15) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 317을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 332를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 353을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 369를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 384를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 394를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(16) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 318을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 333을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 354를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 370을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 379를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 395를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(17) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 310을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 334를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 355를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 371을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 375를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 387을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(18) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 310을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 335를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 356을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 360을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 385를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 396을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(19) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 319를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 336을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 357을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 372를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 386을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 397을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(20) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 320을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 337을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 358을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 373을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 379를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 398을 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(21) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 서열번호: 321을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR1, 서열번호: 338을 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호: 359를 포함하거나 이로 이루어지는 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 서열번호: 374를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR1, 서열번호: 379를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호: 389를 포함하거나 이로 이루어지는 LCDR3을 포함하고/거나;
(22) 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 경쇄 폴리펩티드는 도 5a-b (유형 B)에 열거된 CDR의 임의의 조합을 포함한다.
특정한 구현예에서, 결합제는 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩티드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 중쇄 폴리펩티드 및 경쇄 폴리펩티드는 각각 도 6a-b 및/또는 도 7a-b (유형 B)에 열거된 프레임워크 영역의 임의의 조합을 포함한다.
본 발명의 면역접합체는 PD-L1을 표적화, 결합, 또는 인식하는 항체를 포함한다. 본 발명의 구현예의 범위에는 본원에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 기능적 변이체가 포함된다. 본원에 사용된 용어 "기능적 변이체"는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 실질적으로 또는 상당한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물을 지칭하며, 이 기능적 변이체는 항체 작제물 또는 그것의 변이체인 항원 결합 도메인의 생물학적 활성을 보유한다. 기능적 변이체는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 유사한 정도, 동일한 정도, 또는 더 높은 정도로 PD-L1로 발현하는 표적 세포를 인식하는 능력을 보유하는 본원에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인 (모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인)의 변이체를 포함한다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 관련하여, 기능적 변이체는 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 아미노산 서열이 예를 들어, 적어도 약 30%, 약 50%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상 동일하다.
기능적 변이체는 예를 들어, 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 기능적 변이체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이 경우, 비보존적 아미노산 치환이 기능적 변이체의 생물학적 활성을 방해하거나 저해하지 않는 것이 바람직하다. 비보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 향상시켜, 기능적 변이체의 생물학적 활성이 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 비교하여 증가될 수 있다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 Fc 조작된 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 조절된 결합을 초래하는 Fc 영역 내의 돌연변이는 하기 돌연변이: SD (S239D), SDIE (S239D/I332E), SE (S267E), SELF (S267E/L328F), SDIE (S239D/I332E), SDIEAL (S239D/I332E/A330L), GA (G236A), ALIE (A330L/I332E), GASDALIE (G236A/S239D/A330L/I332E), V9 (G237D/P238D/P271G/A330R), 및 V11 (G237D/P238D/H268D/P271G/A330R) 중 하나 이상, 및/또는 다음 아미노산: E345R, E233, G237, P238, H268, P271, L328 및 A330에서 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. Fc 수용체 결합을 조절하기 위한 추가의 Fc 영역 변형은 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2016/0145350 및 미국 특허 7,416,726 및 5,624,821에 기재되어 있으며, 이들은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 아푸코실화와 같은 글리칸 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제의 Fc 영역은 천연의 비변형된 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다.
본 발명의 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 치환은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환이다. 보존적 아미노산 치환은 당업계에 공지되어 있으며, 특정 물리적 및/또는 화학적 특성을 갖는 하나의 아미노산이 동일하거나 유사한 화학적 또는 물리적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 교환되는 아미노산 치환을 포함한다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 산성/음으로 하전된 다른 극성 아미노산 (예를 들어, Asp 또는 Glu)으로 치환된 산성/음으로 하전된 극성 아미노산, 비극성 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 비극성 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Cys, Val 등), 염기성/양으로 하전된 다른 극성 아미노산으로 치환된 염기성/양으로 하전된 극성 아미노산 (예를 들어, Lys, His, Arg 등), 극성 측쇄가 있는 다른 비하전 아미노산으로 치환된 극성 측쇄가 있는 비하전 아미노산 (예를 들어, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr 등), 베타 분지된 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 베타 분지된 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, Ile, Thr, Val), 또는 방향족 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 방향족 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, His, Phe, Trp 및 Tyr) 등일 수 있다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 다른 성분, 예를 들어, 다른 아미노산이 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인 기능적 변이체의 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않도록 본원에 기재된 특정 아미노산 서열 또는 서열들로 본질적으로 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 함유하고, 여기서 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체(예를 들어, 적어도 2개의 보조제 모이어티에 접합된 항체)는 Fc 영역 내의 돌연변이가 결여된 고유 항체와 비교하여 하나 이상의 Fc 수용체 (예를 들어, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a), 및/또는 FcγRIIIB (CD16b))에 대한 조절된 결합 (예를 들어, 증가된 결합 또는 감소된 결합)을 초래하는 Fc 영역에서 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 감소시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 Fc 영역 내의 돌연변이가 결여된 고유 항체와 비교하여 FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A), 및/또는 FcRγIIIA (CD16a)에 대한 동일한 결합을 유지하거나 증가된 결합을 가지면서 FcγRIIB에 대한 항체의 결합을 감소시키는 항체의 Fc 영역에서 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 증가시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형을 함유한다.
일부 구현예에서, 조절된 결합은 항체의 천연 Fc 영역에 비해 항체의 Fc 영역에서의 돌연변이에 의해 제공된다. 돌연변이는 CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이들의 조합에 있을 수 있다. "천연 Fc 영역"은 "야생형 Fc 영역"과 동의어이며 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일하거나 천연 항체 (예를 들어, 세툭시맙)에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역, 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역, 뿐만 아니라 그의 자연 발생 변이체를 포함한다. 천연 서열 Fc는 Fc의 다양한 동종이형을 포함한다 (Jefferis 등, (2009) mAbs, 1(4):332-338).
일부 구현예에서, 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 조절된 결합을 초래하는 Fc 영역 내 돌연변이는 다음 돌연변이: SD (S239D), SDIE (S239D/I332E), SE (S267E), SELF (S267E/L328F), SDIE (S239D/I332E), SDIEAL (S239D/I332E/A330L), GA (G236A), ALIE (A330L/I332E), GASDALIE (G236A/S239D/A330L/I332E), V9 (G237D/P238D/P271G/A330R), 및 V11 (G237D/P238D/H268D/P271G/A330R) 중 하나 이상, 및/또는 하기 아미노산: E233, G237, P238, H268, P271, L328 및 A330에서 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. Fc 수용체 결합을 조절하기 위한 추가의 Fc 영역 변형은 예를 들어, US 2016/0145350, US 7416726 및 US 5624821에 기재되어 있으며, 이들은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
일부 구현예에서, 면역접합체의 항체의 Fc 영역은 천연의 비변형된 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다.
인간 면역글로불린은 각 중쇄의 Cγ2 도메인에 있는 Asn297 잔기에서 글리코실화된다. 이 N-연결된 올리고당은 핵심 헵타사카라이드, N-아세틸글루코사민4만노스3 (GlcNAc4Man3)으로 구성된다. 엔도글리코시다제 또는 PNGase F를 사용한 헵타사카라이드의 제거는 항체 Fc 영역의 형태적 변화를 유도하는 것으로 알려져 있으며, 이는 활성화 FcγR에 대한 항체 결합 친화도를 현저히 감소시키고 효과기 기능을 감소시킬 수 있다. 핵심 헵타사카라이드는 종종 갈락토스, 이등분 GlcNAc, 푸코스 또는 시알산으로 장식되어 있으며, 이는 활성화 및 억제 FcγR에 대한 Fc 결합에 차등적으로 영향을 미친다. 또한, α2,6-시알화는 생체내 항염증 활성을 향상시키는 반면, 탈푸코실화(defucosylation)는 FcγRIIIa 결합을 개선하고 항체 의존성 세포독성 및 항체 의존성 포식작용을 10배 증가시킨다는 것이 입증되었다. 따라서 특정 글리코실화 패턴을 사용하여 염증 효과기 기능을 제어할 수 있다.
일부 구현예에서, 글리코실화 패턴을 변경하기 위한 변형은 돌연변이이다. 예를 들어, 돌연변이는 Asn297에서의 치환일 수 있다. 일부 구현예에서, Asn297은 글루타민(N297Q)으로 돌연변이된다. FcγR-조절 신호전달을 조절하는 항체로 면역 반응을 제어하는 방법은 예를 들어 US 7416726, US 2007/0014795 및 US 2008/0286819에 기재되어 있으며, 이들은 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
일부 구현예에서, 면역접합체의 항체는 비-자연 발생 글리코실화 패턴을 갖는 조작된 Fab 영역을 함유하도록 변형된다. 예를 들어, 하이브리도마는 증가된 FcRγIIIa 결합 및 효과기 기능을 가능하게 하는 특이적 돌연변이를 갖는 비푸코실화된 mAb, 탈시알릴화된 mAb 또는 탈글리코실화된 Fc를 분비하도록 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체의 항체는 비푸코실화되도록 조작된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체의 전체 Fc 영역은 상이한 Fc 영역으로 교환되어, 항체의 Fab 영역이 비천연 Fc 영역에 접합된다. 예를 들어, 일반적으로 IgG1 Fc 영역을 포함하는 세툭시맙의 Fab 영역은 IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgA에 접합될 수 있거나; 일반적으로 IgG4 Fc 영역을 포함하는 니볼루맙의 Fab 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgA1 또는 IgG2에 접합될 수 있다. 일부 구현예에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 기재된 Fc 도메인의 안정성을 조절하는 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 IgG4 Fc 내의 S228P 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 FcR에 대한 Fc 결합을 조절하는 본원에 기재된 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 천연 비-변형된 항체와 비교할 때 그의 항원에 대한 항체의 Fab 영역의 결합을 변경하지 않는다. 다른 구현예에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 천연 비-변형된 항체와 비교할 때 그의 항원에 대한 항체의 Fab 영역의 결합을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 항체 작제물은 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 항체 작제물은 항체이다. 특정 구현예에서, 항체 작제물은 융합 단백질이다. 항원 결합 도메인은 단일쇄 가변 영역 단편 (scFv)일 수 있다. 합성 펩티드를 통해 항체 경쇄의 V 도메인에 연결된 항체 중쇄의 가변 (V) 도메인을 포함하는 절단된 Fab 단편인 단일쇄 가변 영역 단편 (scFv)은 일상적인 재조합 DNA 기술 기법을 사용하여 생성할 수 있다. 유사하게, 이황화물-안정화된 가변 영역 단편 (dsFv)은 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 항-PD-L1 항체의 항원 결합 도메인의 하나 이상의 가변 영역(예를 들어, 2개의 가변 영역)을 포함할 수 있고, 각각의 가변 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 함유하고, 여기서 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 구현예에서, Fc 영역은 TGFβ1에 결합할 수 있는 형질전환 성장 인자 베타 1 (TGFβ1) 수용체, 또는 그의 단편을 포함함으로써 변형된다. 예를 들어, 수용체는 TGFβ 수용체 II (TGFβRII)일 수 있다. 일부 구현예에서, TGFβ 수용체는 인간 TGFβ 수용체이다. 일부 구현예에서, IgG는 그 전체가 본 명세서에 포함된 US 9676863에 기재된 대로 TGFβRII 세포외 도메인 (ECD)에 대한 C-말단 융합을 갖는다. "Fc 링커"는 IgG를 TGFβRII 세포외 도메인에 부착하는 데 사용될 수 있다. Fc 링커는 표적에 대한 결합 특이성을 유지하면서 분자의 적절한 3차원 폴딩을 허용하는 짧고 유연한 펩티드일 수 있다. 일부 구현예에서, TGFβ 수용체의 N-말단은 (Fc 링커가 있거나 없는) 항체 작제물의 Fc에 융합된다. 일부 구현예에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단은 (Fc 링커가 있거나 없는) TGFβ 수용체에 융합된다. 일부 구현예에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단 라이신 잔기는 알라닌으로 돌연변이된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 글리코실화된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 조작된 시스테인이 접합에 이용가능하지만, 면역글로불린 접힘 및 조립을 교란시키거나 항원 결합 및 효과기 기능을 변경하지 않는 부위에서 시스테인 치환을 통해 항체에 대한 보조제, 표지 또는 약물 모이어티의 부위-특이적 접합을 제공하는 시스테인-조작된 항체이다 (Junutula, 등, 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan 등 (2009) Blood 114(13):2721-2729; 및 이들 각각은 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함되는 하기 특허: US 7521541, US 7723485, US 2012/0121615, WO 2009/052249). "시스테인 조작된 항체" 또는 "시스테인 조작된 항체 변이체"는 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 항체이다. 시스테인-조작된 항체는 균일한 화학량론 (예를 들어, 단일 조작된 시스테인 부위를 갖는 항체에서 항체당 최대 2개의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티)을 갖는 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물로서 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 보조제 모이어티에 접합될 수 있다.
일부 구현예에서, 표 3의 면역접합체를 제조하기 위해 사용된 시스테인-조작된 항체는 경쇄의 149-라이신 부위 (LC K149C)에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다. 다른 구현예에서, 시스테인-조작된 항체는 중쇄의 118-알라닌 부위 (EU 넘버링) (HC A118C)에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다. 이 부위는 대안적으로 순차적 넘버링으로는 121 또는 Kabat 넘버링으로는 114로 번호가 매겨진다. 다른 구현예에서, 시스테인-조작된 항체는 Kabat 넘버링에 따라 G64C 또는 R142C에서 경쇄에, 또는 Kabat 넘버링에 따라 D101C, V184C 또는 T205C에서 중쇄에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다.
8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀 보조제 화합물
본 발명의 면역접합체는 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 보조제 모이어티를 포함한다. 본원에 기재된 보조제 모이어티는 면역 반응을 유발하는 화합물 (즉, 면역자극제)이다. 일반적으로, 본원에 기재된 보조제 모이어티는 TLR 작용제이다. TLR은 척추동물에서 선천적 면역 반응의 시작을 담당하는 I형 막횡단 단백질이다. TLR은 박테리아, 바이러스 및 곰팡이의 다양한 병원체 관련 분자 패턴을 인식하고 침입 병원체에 대한 1차 방어선 역할을 한다. TLR은 세포 발현과 이들이 시작하는 신호 전달 경로의 차이로 인해 중복되지만 뚜렷히 구별되는 생물학적 반응을 이끌어낸다. 일단 결합되면 (예를 들어, 자연 자극 또는 합성 TLR 작용제에 의해), TLR은 어댑터 단백질 골수성 분화 1차 반응 유전자 88 (MyD88) 및 IL-1 수용체 관련 키나제 (IRAK)의 동원을 통해 핵 인자 κB (NF-κB)의 활성화로 이어지는 신호 전달 캐스케이드를 시작한다. IRAK의 인산화는 TNF-수용체 관련 인자 6 (TRAF6)의 동원으로 이어져 NF-κB 억제제 I-κB의 인산화를 초래한다. 그 결과, NF-κB는 세포 핵으로 들어가 프로모터가 사이토카인과 같은 NF-κB 결합 부위를 포함하는 유전자의 전사를 시작한다. TLR 신호 전달에 대한 추가 조절 모드에는 TNF 수용체 관련 인자 6 (TRAF6)의 어댑터 유도 인터페론 β (TRIF) 의존성 유도를 함유하는 TIR 도메인과 TRIF 및 TRAF3를 통한 MyD88 독립 경로의 활성화가 포함되어 인터페론 반응 인자 3 (IRF3)의 인산화를 유도한다. 유사하게, MyD88 의존성 경로는 또한 IRF5 및 IRF7을 포함한 여러 IRF 계열 구성원을 활성화하는 반면 TRIF 의존성 경로는 NF-κB 경로도 활성화한다.
전형적으로, 본원에 기재된 보조제 모이어티는 TLR7 및/또는 TLR8 작용제이다. TLR7 및 TLR8은 모두 단핵구 및 수지상 세포에서 발현된다. 인간에서 TLR7은 형질세포양 수지상 세포 (pDC) 및 B 세포에서도 발현된다. TLR8은 골수 기원의 세포, 즉 단핵구, 과립구 및 골수 수지상 세포에서 주로 발현된다. TLR7 및 TLR8은 바이러스 침입에 대응하는 수단으로서, 세포 내 "외부" 단일 가닥 RNA의 존재를 감지할 수 있다. TLR8 발현 세포를 TLR8 작용제로 처리하면 높은 수준의 IL-12, IFN-γ, IL-1, TNF-α, IL-6 및 기타 염증성 사이토카인이 생성될 수 있다. 유사하게, TLR7 작용제로 pDC와 같은 TLR7 발현 세포를 자극하면 높은 수준의 IFN-α 및 기타 염증성 사이토카인이 생성될 수 있다. TLR7/TLR8 결합 및 결과적인 사이토카인 생성은 수지상 세포 및 기타 항원 제시 세포를 활성화하여 다양한 선천성 및 후천성 면역 반응 메커니즘을 구동하여 종양 파괴를 유발할 수 있다.
본 발명의 예시적인 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀 화합물 (CycBz)을 표 1a 및 1b에 나타낸다. 각 화합물은 합성되었고, 정제되었고, 질량 분광법으로 특성화되었으며 표시된 질량을 갖는 것으로 나타난다.
추가의 실험적 절차를 실시예에서 찾는다. 인간 TLR7 또는 인간 TLR8을 발현하는 HEK293 NFKB 리포터 세포에 대한 활성을 실시예 202에 따라 측정하였다. 표 1a 및 1b의 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀 화합물은 암 및 다른 장애를 치료하기 유용한 치료석 활성을 예측할 수 있는, TLR8 작용제 선택성의 놀랍고도 예상치 못한 특성을 입증한다.
8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물
본 발명의 면역접합체는 항-PD-L1 항체와 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물, CycBzL의 접합에 의해 제조된다. 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물은 링커 단위에 공유적으로 부착된 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 (Cyc) 모이어티를 포함한다. 링커 단위는 면역접합체의 안정성, 투과성, 용해도 및 기타 약동학, 안전성 및 효능 특성에 영향을 미치는 작용기 및 하위단위를 포함한다. 링커 단위는 항체의 반응성 작용기와 반응하는, 즉 접합하는 반응성 작용기를 포함한다. 예를 들어, 항체의 라이신 측쇄 아미노와 같은 친핵성 기는 CycBz-링커 화합물의 친전자성 반응성 작용기와 반응하여 면역접합체를 형성한다. 또한, 예를 들어, 항체의 시스테인 티올은 Hx-링커 화합물의 말레이미드 또는 브로모아세트아미드 기와 반응하여 면역접합체를 형성한다.
CycBz-링커 화합물에 적합한 친전자성 반응성 작용기는 N-하이드록시석신이미딜 (NHS) 에스테르 및 N-하이드록시설포석신이미딜 (설포-NHS) 에스테르 (아민 반응성); 카르보디이미드 (아민 및 카르복실 반응성); 하이드록시메틸 포스핀 (아민 반응성); 말레이미드 (티올 반응성); N-요오도아세트아미드와 같은 할로겐화 아세트아미드 (티올 반응성); 아릴 아지드 (1차 아민 반응성); 플루오르화 아릴 아지드 (탄소-수소 (C-H) 삽입을 통한 반응성); 펜타플루오로페닐 (PFP) 에스테르 (아민 반응성); 테트라플루오로페닐 (TFP) 에스테르 (아민 반응성); 이미도에스테르 (아민 반응성); 이소시아네이트 (하이드록실 반응성); 비닐 설폰 (티올, 아민 및 하이드록실 반응성); 피리딜 이황화물 (티올 반응성); 및 벤조페논 유도체 (C-H 결합 삽입을 통한 반응성)를 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다. 추가 시약은 Hermanson, Bioconjugate Techniques 2nd Edition, Academic Press, 2008에 기술된 것들을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 면역접합체의 설계, 제조 및 사용에 대한 한계 및 어려움에 대한 해결책을 제공한다. 일부 링커는 혈류에서 불안정하여 표적 세포에서 내재화되기 전에 허용할 수 없는 양의 보조제/약물을 방출할 수 있다 (Khot, A. 등 (2015) Bioanalysis 7(13):1633-1648). 다른 링커는 혈류에서 안정성을 제공할 수 있지만 세포내 방출 효과에서는 부정적인 영향을 받을 수 있다. 원하는 세포내 방출을 제공하는 링커는 일반적으로 혈류에서 불량한 안정성을 갖는다. 달리 말하면, 혈류 안정성과 세포내 방출은 일반적으로 반비례한다. 또한, 표준 접합 과정에서 항체에 부하된 보조제/약물 모이어티의 양, 즉 약물 부하, 접합 반응에서 형성되는 응집체의 양, 및 얻을 수 있는 최종 정제된 접합체의 수율은 상호 관련된다. 예를 들어, 응집체 형성은 일반적으로 항체에 접합된 보조제/약물 모이어티 및 이의 유도체의 당량 수와 양의 상관관계가 있다. 높은 약물 부하 하에서, 형성된 응집체는 치료 용도를 위해 제거되어야 한다. 결과적으로, 약물 부하 매개 응집체 형성은 면역접합체 수율을 감소시키고 공정 규모 확대를 어렵게 만들 수 있다.
예시적인 구현예는 화학식 II의 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물을 포함한다:
식 중 Cyc는 페닐디일, 헤테로사이클릴디일 및 헤테로아릴디일로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 하기로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 독립적으로 및 선택적으로 치환되고
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C12 알킬디일)-OR5;
-(C3-C12 카보사이클릴);
-(C3-C12 카보사이클릴)-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
-(C6-C20 아릴);
-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C2-C20 헤테로사이클릴);
-(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴);
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C20 헤테로아릴)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-*;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-C(=O)N(R5)2;
-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
-C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-N(R5)2;
-N(R5)-*;
-N(R5)C(=O)R5;
-N(R5)C(=O)-*;
-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-N(R5)C(=O)N(R5)-*;
-N(R5)CO2R5;
-NR5C(=NR5a)N(R5)2;
-NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)R5;
-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
-N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-O-C(=O)N(R5)2;
-O-C(=O)N(R5)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
X1, X2, X3, 및 X4는 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R5는 독립적으로 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내고, 그리고 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고:
Q-C(=O)-PEG-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
Q-C(=O)-PEG-O-;
Q-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-; 및
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
R6는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
PEG는 화학식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 가지며; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
Gluc는 화학식 을 가지며;
PEP는 화학식 을 가지며
여기서 AA는 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄, 또는 AA 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되고, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
Cyc는 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 하기 구조 를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 선택적으로 치환되고:
R7는 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)-, 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R8는 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬, 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, 여기서 R9는 H, C1-C12 알킬, 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고, 또는 2개의 R9 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
y는 2 내지 12의 정수이고;
z는 0 또는 1이고;
Q는 N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 말레이미드, 및 페녹시로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환되고;
알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일 카보사이클릴, 카보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적이고 선택적으로 치환된다.
화학식 II의 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 하기로부터 선택된 것을 포함한다:
화학식 II의 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 하나 이상의 F로 치환된 페녹시인 것을 포함한다.
화학식 II의 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시인 것을 포함한다.
8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 (CycBzL) 화합물의 예시적인 구현예는 표 2a 및 2b로부터 선택된다. 각 화합물은 합성되었고, 정제되었고, 질량 분광법으로 특성화되었으며 표시된 질량을 갖는 것으로 나타난다. 추가의 실험적 절차를 실시예에서 찾는다. 표 2a 및 2b의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물은 암 및 다른 장애를 치료하기 위한 유용한 치료 활성을 예측할 수 있는 TLR8 작용제 선택성의 놀랍고 예상치 못한 특성을 입증한다. 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 중간체, 표 2의 화학식 II 화합물은 실시예 201의 방법에 의해 항체와의 접합에 사용되어 표 3a 및 3b의 면역접합체를 형성한다.
PD-L1 면역접합체
면역-자극 항체 접합체, 즉 면역접합체는 TLR7/8 작용제를 종양으로 유도하여 종양-침윤 골수 세포를 활성화시키고 광범위한 선천적 및 적응성 항종양 면역 반응을 개시한다 (Ackerman, 등, (2021) Nature Cancer 2:18-33.
PD-L1은 항종양 T 세포 반응을 조절하는 면역 체크포인트, 막관통 단백질이고 종양 세포 뿐만 아니라 많은 종양 유형에 걸쳐 종양-침윤 면역 세포에서 발현된다. 면역-자극 항체 접합체 (ISAC)는 면역 자극제에 접합된 종양-표적 항체로 이루어지며 전신 투여 이후 종양 세포에 대한 선천적 및 적응 면역 시스템을 활성화하도록 설계된다. PD-L1-표적 TLR7/8 면역접합체는 전임상 종양 모델에서 항-PD-L1 치료에 비해 개선된 항종양 반응을 유도하는 강력한 골수 세포 활성화를 유발한다.
항-PD-L1 항체의 패널을 파지 디스플레이 스크린을 통해서 확인한 후 PD-L1 결합 친화도 및 특이성, PD-L1/PD-1 차단, 골수 세포에 의한 항체-의존성 세포 식균작용 (ADCP), 및 항종양 효능에 대하여 테스트하였다. 항-PD-L1 항체는 골수 이펙터 세포 및 중간 내지 강한 시험관내 PD-L1/PD-1 차단에 의한 강력한 ADCP를 유도하였다. 선택된 항체는 생체내 동계 MC38-hPD-L1 종양의 성장을 억제시켜, 효율적인 면역 체크포인트 차단을 확인하였다.
특정 항체를 링커에 의해 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 (CycBz) TLR7/8 작용제에 접합시켰고, 생성된 PD-L1 면역접합체를 시험관내 골수 세포 활성화 그리고 동계 및 이종이식 종양에 대한 생체내 효능 (실시예 203)에 대하여 평가하였다. 특정 PD-L1 면역접합체는 IL-12p70, IFNa, 및 TNFa와 같은 사이토카인의 분비 증가로 측정된 경우에, PD-L1-발현 종양 세포와 공동-배양된 때 골수 세포의 강력한, 표적-의존성 활성화를 유도하였다. 골수 활성화는 인간 종양에서 관찰된 PD-L1 발현의 범위 내에 있는 다양한 수준의 내인성 PD-L1 발현을 갖는 종양 세포와의 공동-배양 이후 관찰되었다. 전신적으로 투여된 대리 PD-L1 면역접합체는 마우스에서 내약성이 우수하였고 항-PD-L1 항체보다 개선된 항종양 효능을 나타냈으며, 동계 (예를 들면 MB49, MC38-hPD-L1) 뿐만 아니라 이종이식 (예를 들면 HCC1954-hPD-L1) 종양 모델에서 흔히 관찰된 상당한 종양 성장 지연 또는 완전 반응을 나타냈다. 이들 데이터는 세 가지 작용 메커니즘: TLR-매개 골수 세포 활성화, 면역 체크포인트 억제를 통한 T 세포 활성화 뿐만 아니라 ADCP을 단일 분자로 조합하여 PD-L1/PD-1 억제의 효능을 개선할 수 있는 다기능적 치료제로서의 PD-L1-표적 면역접합체의 잠재력을 입증한다.
도 9a는 동계 MB49 종양 모델에서 표 3b의 면역접합체 PD-L1 IC-51 대 비접합 항-PD-L1 항체의 효능을 비교한 치료 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 생체내 연구의 그래프를 보여준다. 큰 (~200mm3) 동계 MB49 종양이 있는 마우스를 CycBzL-24 (표 2b)를 포함하는, 표 3b의 면역접합체 IC-51, CycBzL-24를 포함하는 래트 IgG2b 아이소폼 대조군 면역접합체, 비접합 항-PD-L1, 및 비접합 IgG2b 아이소타입 항체로 10mg/kg 복강내 (IP), Q3Dx4 (그룹당 n=6)로 치료하였다. 항-mPD-L1 면역접합체 IC-51로의 치료는 비접합 항-PD-L1에 비해 향상된 항종양 효능 및 6마리 동물 모두에서 완전 반응 (CR)을 초래하였다.
도 9b는 재도전 연구에서 면역학적 기억을 평가하는, MB49 종양 세포의 이식 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 생체내 연구의 그래프를 보여준다. 도 9a의 연구에서 표 3b의 면역접합체 PD-L1 IC-51 치료 이후 MB49 종양의 완전한 퇴행을 경험한 6마리의 모든 마우스는 종양 청소 후 약 1 개월 (최종 용량 후 약 7 주)에 MB49 종양 세포로 재도전되었다. 이전에 완치된 마우스 중 어느 것도 종양이 발생하지 않은 반면, 모든 나이브 마우스 (n=5)는 항-PD-L1 면역접합체 IC-51로 치료 이후 면역학적 기억의 발생을 암시하였다.
도 10a는 CycBzL-24 (표 2b)를 포함하는, 표 3b의 면역접합체 IC-51, CycBzL-24를 포함하는 래트 IgG2b 아이소타입 대조군 면역접합체, 비접합 항-PD-L1, 및 비접합 IgG2b 아이소타입 항체로 모체 동계 MB49 종양을 5mg/kg IP, Q3Dx4로 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 10b는 CycBzL-24 (표 2b)를 포함하는, 표 3b의 면역접합체 IC-51, CycBzL-24를 포함하는 래트 IgG2b 아이소타입 대조군 면역접합체, 비접합 항-PD-L1, 및 비접합 IgG2b 아이소타입 항체로 종양 세포에서 PD-L1 발현이 결여된 PD-L1 녹아웃 (PD-L1 KO) 동계 MB49 종양을 5mg/kg IP, Q3Dx4로 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 부피의 그래프를 보여준다.
PD-L1 IC-51로 치료는 종양 세포에서 PD-L1 발현의 부재 하에서 조차 개선된 항종양 효능을 초래하여, 본 발명의 면역접합체가 면역 세포에서 PD-L1을 통해서 항종양 반응을 유도할 수 있음을 입증한다.
면역접합체의 예시적인 구현예는 링커에 의해 하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 (CycBz) 모이어티에 공유 부착되고 하기 화학식 I 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는 항-PD-L1 항체를 포함한다:
식 중:
Ab는 PD-L1을 결합시키는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물이고;
p는 1 내지 8의 정수이고;
CycBz는 하기 화학식을 갖는 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티이고:
Cyc는 페닐디일, 헤테로사이클릴디일 및 헤테로아릴디일로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 하기로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 독립적으로 및 선택적으로 치환되고
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C12 알킬디일)-OR5;
-(C3-C12 카보사이클릴);
-(C3-C12 카보사이클릴)-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
-(C6-C20 아릴);
-(C6-C20 아릴)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C2-C20 헤테로사이클릴);
-(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴);
-(C1-C20 헤테로아릴)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C20 헤테로아릴)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-*;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-C(=O)N(R5)2;
-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
-C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-N(R5)2;
-N(R5)-*;
-N(R5)C(=O)R5;
-N(R5)C(=O)-*;
-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-N(R5)C(=O)N(R5)-*;
-N(R5)CO2R5;
-NR5C(=NR5a)N(R5)2;
-NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)R5;
-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
-N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-O-C(=O)N(R5)2;
-O-C(=O)N(R5)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
X1, X2, X3, 및 X4는 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R5는 독립적으로 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내고, 그리고 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고:
-C(=O)-PEG-;
-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
-C(=O)-PEG-O-;
-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-; 및
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
R6는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
PEG는 하기 화학식을 가지며: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
Gluc는 화학식 을 가지며;
PEP는 화학식 을 가지며,
여기서 AA는 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄, 또는 AA 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되고, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
Cyc는 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 구조 를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 선택적으로 치환되고:
R7는 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)-, 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R8는 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬, 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, 여기서 R9는 H, C1-C12 알킬, 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고, 또는 2개의 R9 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
y는 2 내지 12의 정수이고;
z는 0 또는 1이고; 그리고
알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일, 카보사이클릴, 카보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적이고 선택적으로 치환된다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙, 및, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2는 결합이고, 그리고 R2는 C1-C8 알킬인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X1은 결합이고, R1은 H인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2는 C1-C8 알킬이고, R3은 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu), -OCH2CH2NHCO2(사이클로부틸), 및 -CH2CH2CH2NHCO2(사이클로부틸)로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 각각은 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -CH2CH2CF3, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 각각은 -CH2CH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -OCH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X3-R3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
및 .
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X4는 결합이고, R4는 H인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R1은 L에 부착되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 또는 R3은 L에 부착되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X3-R3-L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
여기서 물결선은 N에 대한 부착점을 나타낸다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R4는 C1-C12 알킬인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R4는 -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*이고; 여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 항체의 시스테인 티올에 부착되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEG에 대해, m은 1 또는 2이고, 그리고 n은 2 내지 10의 정수인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEG에 대해, n은 10인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 디펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되거나; 또는 AA1 및 AA2는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2는 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEP는 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
식중 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택된다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고 PEP는 트리펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고 PEP는 테트라펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 하기인 것을 포함한다:
AA1은 Abu, Ala, 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA2는 Nle(O-Bzl), Oic 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA3은 Ala 및 Met(O)2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
AA4는 Oic, Arg(NO2), Bpa, 및 Nle(O-Bzl)로 이루어진 군으로부터 선택됨.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고 PEP는 Ala-Pro-Val, Asn-Pro-Val, Ala-Ala-Val, Ala-Ala-Pro-Ala (서열번호: 473), Ala-Ala-Pro-Val (서열번호: 474), 및 Ala-Ala-Pro-Nva (서열번호: 475)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고 PEP는 하기 구조로부터 선택되는 것을 포함한다:
및
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 하기 구조로부터 선택되는 것을 포함한다:
여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
하기 화학식 Ia를 갖는 화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예:
화학식 Ia의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X4는 결합이고 R4는 H인 것을 포함한다.
화학식 Ia의 면역접합체의 예시적인 구현예는 Cyc는 피리딜디일, 피리미딜디일, 피라졸릴디일, 피페라지닐디일, 피페리디닐디일, 및 피라지닐디일로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 포함한다.
화학식 Ia의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2 및 X3은 각각 결합이고, R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 Ia의 면역접합체의 예시적인 구현예는 하기 화학식 Ib-Ii로부터 선택된다:
및
화학식 Ia의 면역접합체의 예시적인 구현예는 하기 화학식 Ij-In으로부터 선택된다:
및
화학식 Ia의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2 및 X3 각각은 결합이고, R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 Ia의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2 및 X3 각각은 결합이고, R2는 C1-C8 알킬이고, R3은 -O-(C1-C12 알킬) 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 선택되는 것을 포함한다.
본 발명은 화학식 I 구현예의 모든 합리적인 조합 및 특징의 순열을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 면역접합체 화합물은 면역자극 활성을 갖는 것들을 포함한다. 본 발명의 항체-약물 접합체는 종양 조직에 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀 약물의 유효 용량을 선택적으로 전달함으로써, 비접합 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀에 비해 치료 지수 ("치료 창(therapeutic window)")를 증가시키면서 더 큰 선택성 (즉, 더 낮은 유효 용량)을 달성할 수 있다.
약물 부하는 화학식 I의 면역접합체에서 항체당 Cyc 모이어티의 수인 p로 표시된다. 약물 (CycBz) 부하는 항체당 1 내지 약 8개의 약물 모이어티 (D) 범위일 수 있다. 화학식 I의 면역접합체는 1 내지 약 8의 범위의 약물 모이어티와 접합된 항체의 혼합물 또는 집합을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체에 접합될 수 있는 약물 모이어티의 수는 라이신 및 시스테인과 같이 반응성 또는 이용 가능한 아미노산 측쇄 잔기의 수로 제한된다. 일부 구현예에서, 유리 시스테인 잔기가 본원에 기재된 방법에 의해 항체 아미노산 서열 내로 도입된다. 그러한 측면에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8일 수 있고, 이들의 범위, 예컨대 1 내지 8 또는 2 내지 5일 수 있다. 임의의 이러한 측면에서, p 및 n은 동일하다 (즉, p = n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8, 또는 그 사이의 일부 범위). 화학식 I의 예시적인 면역접합체는 1, 2, 3, 또는 4개의 조작된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다 (Lyon, R. 등 (2012) Methods in Enzym. 502:123-138). 일부 구현예에서, 하나 이상의 유리 시스테인 잔기가 항체에 이미 존재하여 조작을 사용하지 않고 사슬내 이황화 결합을 형성하고, 이 경우 기존의 유리 시스테인 잔기를 사용하여 항체를 약물에 접합시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 생성하기 위해 항체의 접합 전에 환원 조건에 노출된다.
일부 면역접합체의 경우, p는 항체의 부착 부위 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 부착이 시스테인 티올인 경우, 본원에 기재된 특정 예시적인 구현예에서, 항체는 약물이 부착될 수 있는, 단 하나 또는 제한된 수의 시스테인 티올 기를 가질 수 있거나, 단 하나 또는 제한된 수의 충분히 반응성인 티올기를 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 항체에서 하나 이상의 라이신 아미노기가 이용가능하고 화학식 II의 CycBz-링커 화합물과의 접합에 반응성일 수 있다. 특정 구현예에서, 더 높은 약물 부하, 예를 들어, p > 5는 특정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성 또는 세포 투과성의 손실을 유발할 수 있다. 특정 구현예에서, 면역접합체에 대한 평균 약물 부하 범위는 1 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 또는 약 3 내지 약 5이다. 특정 구현예에서, 항체는 라이신 또는 시스테인과 같은 반응성 친핵성 기를 나타내기 위해 변성 조건에 적용된다.
면역접합체의 부하 (약물/항체 비율)은 예를 들어, (i) 항체에 대한 CycBz-링커 중간체 화합물의 몰 과량을 제한하고, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하고, (iii) 최적화된 항체 반응성을 위한 환원성 변성 조건을 부분적으로 또는 제한함으로써 다양한 방식으로 제어될 수 있다.
항체의 하나 이상의 친핵성 기가 약물과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 항체에 부착된 하나 이상의 약물 모이어티의 분포를 갖는 면역접합체 화합물의 혼합물임을 이해해야 한다. 항체당 약물의 평균 수는 항체에 특이적이고 약물에 대해 특이적인 이중 ELISA 항체 검정에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별 면역접합체 분자는 혼합물에서 질량 분광법으로 확인하고 HPLC, 예를 들어, 소수성 상호작용 크로마토그래피로 분리할 수 있다 (예를 들어, McDonagh 등 (2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett 등 (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., 등 "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., 등 "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004 참조). 특정 구현예에서, 단일 부하 값을 갖는 균질한 면역접합체는 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 표 3a 및 3b 면역접합체로부터 선택된다. 시험관내 면역접합체 활성의 평가는 실시예 203의 방법에 따라 실행된다.
면역접합체의 조성물
본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 복수의 면역접합체 및 임의로 그를 위한 담체, 예를 들어, 제약상 또는 약리학상 허용되는 담체를 포함하는 조성물, 예를 들어, 제약상 또는 약리학상 허용되는 조성물 또는 제제를 제공한다. 면역접합체는 조성물에서 동일하거나 상이할 수 있다. 즉, 조성물은 항체 작제물의 동일한 위치에 연결된 동일한 수의 CycBz 보조제를 갖는 면역접합체 및/또는 항체 작제물의 상이한 위치에 연결된 동일한 수의 보조제를 가지거나, 항체 작제물 상의 동일한 위치에 연결된 상이한 수의 보조제를 가지거나, 항체 작제물의 상이한 위치에 연결된 상이한 수의 보조제를 갖는 면역접합체를 포함할 수 있다.
예시적인 구현예에서, 면역접합 화합물을 포함하는 조성물은 면역접합 화합물의 혼합물을 포함하고, 여기서 면역접합 화합물의 혼합물에서 항체당 평균 약물 (Hx) 부하는 약 2 내지 약 5이다.
본 발명의 면역접합체의 조성물은 항체 작제물에 대한 평균 보조제의 비(DAR)가 약 0.4 내지 약 10일 수 있다. 당업자는 항체 작제물에 접합된 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀 보조제의 수가 본 발명의 여러 면역접합체를 포함하는 조성물에서 면역접합체마다 다를 수 있으며, 따라서 항체 작제물 (예를 들어, 항체)에 대한 보조제 비는 평균으로서 측정될 수 있고, 이는 항체에 대한 약물 비 (DAR)로 지칭될 수 있다. 항체 작제물 (예를 들어, 항체)에 대한 보조제 비는 임의의 적합한 수단에 의해 평가될 수 있으며, 이들 중 다수는 당업계에 공지되어 있다.
접합 반응으로부터 면역접합체의 제조에서 항체당 보조제 모이어티의 평균 수 (DAR)는 질량 분석, ELISA 검정, 및 HPLC와 같은 통상적인 수단에 의해 특성화될 수 있다. p와 관련하여 조성물에서 면역접합체의 정량적 분포 또한 결정될 수 있다. 일부 경우에, p가 다른 약물 부하를 갖는 면역접합체로부터 특정 값인 균질 면역접합체의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 약제학상 또는 약리학상 허용되는 부형제를 추가로 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 IV 투여 또는 장기의 체강 또는 내강으로의 투여와 같은 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 대안적으로, 면역접합체는 종양내 주사될 수 있다. 주사용 조성물은 일반적으로 약제학상 허용되는 담체에 용해된 면역접합체의 용액을 포함할 것이다. 사용할 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물 및 염화나트륨과 같은 하나 이상의 염의 등장성 용액, 예를 들어, 링거 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이러한 목적으로 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 비롯한 임의의 부드러운 고정 오일을 사용할 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산도 마찬가지로 주사제의 제조에 사용될 수 있다. 이들 조성물은 바람직하게는 멸균되고 일반적으로 바람직하지 않은 물질이 없다. 이들 조성물은 통상적이고 잘 알려진 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제, 예를 들어, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 젖산나트륨 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약제학상 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다
조성물은 임의의 적합한 농도의 면역접합체를 함유할 수 있다. 조성물 중 면역접합체의 농도는 광범위하게 변할 수 있고, 선택된 특정 투여 방식 및 환자의 필요에 따라 주로 유체 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택될 것이다. 특정 구현예에서, 주사용 용액 제제 중 면역접합체의 농도는 약 0.1% (w/w) 내지 약 10% (w/w) 범위일 것이다.
면역접합체를 이용한 암 치료 방법
본 발명은 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 치료 유효량의 본원에 기재된 면역접합체 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 조성물로서)를 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 앓고 있고 암에 대한 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 표 3으로부터 선택된 면역접합체 (IC)의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 면역접합체는 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 과증식성 질환 또는 장애를 치료하는데 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 예시적인 과증식성 장애는 양성 또는 악성 고형 종양 및 백혈병 및 림프성 악성종양과 같은 혈액학적 장애를 포함한다.
또 다른 측면에서, 약제로서 사용하기 위한 면역접합체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은 개체에게 유효량의 면역접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 면역접합체를 제공한다. 하나의 이러한 구현예에서, 방법은 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 유효량의 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 의약의 제조(manufacture) 또는 제조(preparation)에서의 면역접합체의 용도를 제공한다. 한 구현예에서, 의약은 암 치료를 위한 것이며, 이 방법은 암에 걸린 개체에게 유효량의 의약을 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 이러한 구현예에서, 방법은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 유효량의 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
암종은 상피 조직에서 발생하는 악성 종양이다. 상피 세포는 신체의 외부 표면을 덮고 내부 공동을 감싸며 선 조직의 라이닝을 형성한다. 암종의 예에는 선암 (유방, 췌장, 폐, 전립선, 위, 위식도 접합부, 및 결장의 암과 같은 선 (분비) 세포에서 시작하는 암) 부신피질 암종; 간세포 암; 신세포 암종; 난소 암종; 제자리(in situ) 암종; 도관 암종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 이행 세포 암종; 결장 암종; 비인두 암종; 다안 낭포성 신세포 암종; 귀리 세포 암종; 대세포 폐 암종; 소세포 폐 암종; 비-소세포 폐 암종 등을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다. 암종은 전립선, 췌장, 결장, 뇌 (보통 이차 전이로), 폐, 유방, 및 피부에서 발견될 수 있다. 일부 구현예에서, 비-소세포 폐 암종을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙 또는, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다.
연조직 종양은 결합 조직에서 유래하는 매우 다양한 희귀 종양군이다. 연조직 종양의 예에는 폐포 연부 육종; 혈관종 섬유성 조직구종; 연골근산화 섬유종; 골격 연골육종; 골격외 점액성 연골육종; 투명 세포 육종; 이형성 작은 원형 세포 종양; 피부섬유육종 돌기; 자궁내막 기질 종양; 유윙 육종; 섬유종증 (데스모이드(Desmoid)); 유아 섬유육종; 위장관 기질 종양; 뼈 거대 세포 종양; 건활막 거대 세포 종양; 염증성 근섬유모세포 종양; 자궁 평활근종; 평활근육종; 지방모세포종; 전형적인 지방종; 방추 세포 또는 다형성 지방종; 비정형 지방종; 연골 지방종; 잘 분화된 지방육종; 점액질/원형 세포 지방육종; 다형성 지방육종; 점액질 악성 섬유성 조직구종; 고급 악성 섬유성 조직구종; 점액섬유육종; 악성 말초 신경초 종양; 중피종; 신경 모세포종; 골연골종; 골육종; 원시 신경외배엽 종양; 폐포 횡문근육종; 배아 횡문근육종; 양성 또는 악성 신경초종; 활액 육종; 에반의 종양(Evan's tumor); 결절성 근막염; 데스모이드형 섬유종증; 고립성 섬유성 종양; 피부섬유육종 원충 (DFSP); 혈관육종; 상피성 혈관내피종; 건활막 거대 세포 종양 (TGCT); 색소성 융모 결절성 활막염 (PVNS); 섬유성 이형성증; 점액섬유육종; 섬유육종; 활액 육종; 악성 말초 신경초 종양; 신경섬유종; 연조직의 다형성 선종; 및 섬유아세포, 근섬유아세포, 조직구, 혈관 세포/내피 세포, 및 신경초 세포로부터 유래된 신생물을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
육종은 뼈에서, 또는 연골, 지방, 근육, 혈관, 섬유 조직 또는 기타 결합 또는 지지 조직을 포함한 신체의 연조직과 같은 중간엽 기원의 세포에서 발생하는 드문 유형의 암이다. 다양한 유형의 육종은 암이 형성되는 위치에 따라 다르다. 예를 들어, 골육종은 뼈에, 지방육종은 지방에, 횡문근육종은 근육에 발생한다. 육종의 예에는 피부 종양; 육종 보트리오이데스; 연골육종; 유윙 육종; 악성 혈관내피종; 악성 신경초종; 골육종; 및 연조직 육종 (예: 폐포 연부 육종; 혈관육종; 낭포 육종 엽상체 피부섬유육종 원충 (DFSP); 데스모이드 종양; 결합조직형성 소원형세포종양; 상피 세포 육종; 골격외 연골육종; 골격외 골육종; 섬유육종; 위장관 기질 종양 (GIST); 혈관주위세포종; 혈관육종(hemangiosarcoma) (더 일반적으로 "혈관육종(angiosarcoma)"이라고 함), 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 악성 말초신경초종양 (MPNST), 신경섬유육종, 활액육종, 및 미분화 다형성 육종)을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
기형종은 예를 들어, 모발, 근육 및 뼈를 포함한 여러 다른 유형의 조직을 포함할 수 있는 생식 세포 종양의 한 유형이다 (예를 들어, 내배엽, 중배엽 및 외배엽의 세 가지 생식층의 일부 및/또는 모두에서 유래된 조직을 포함할 수 있음). 기형종은 여성의 난소, 남성의 고환, 어린이의 꼬리뼈에서 가장 흔하게 발생한다.
흑색종은 멜라닌 세포 (멜라닌 색소를 만드는 세포)에서 시작되는 암의 한 형태이다. 흑색종은 점 (피부 흑색종)에서 시작될 수 있지만 눈이나 장과 같은 다른 색소 조직에서도 시작할 수 있다.
메르켈 세포 암종은 일반적으로 얼굴, 머리 또는 목에 살색 또는 청적색 결절로 나타나는 드문 유형의 피부암이다. 메르켈 세포 암종은 피부의 신경 내분비 암종이라고도 한다. 일부 구현예에서, 메르켈 세포 암종을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 메르켈 세포 암종은 투여가 일어날 때 전이되었다.
백혈병은 골수와 같은 혈액 형성 조직에서 시작하여 많은 수의 비정상 혈액 세포가 생성되어 혈류로 들어가는 암이다. 예를 들어, 백혈병은 정상적으로 혈류에서 성숙하는 골수 유래 세포에서 발생할 수 있다. 백혈병은 질환이 얼마나 빨리 발병하고 진행되는지 (예를 들어, 급성 대 만성) 및 영향을 받는 백혈구 유형 (예를 들어, 골수성 대 림프성)에 따라 명명된다. 골수성 백혈병은 골수성(myelogenous) 또는 골수모세포성(myeloblastic) 백혈병이라고도 한다. 림프성 백혈병은 림프모구성 또는 림프구성 백혈병이라고도 한다. 림프절 백혈병 세포가 림프절에 모여서 부어오를 수 있다. 백혈병의 예에는 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL)이 포함되지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
림프종은 면역 체계의 세포에서 시작되는 암이다. 예를 들어, 림프종은 림프계에서 정상적으로 성숙하는 골수 유래 세포에서 발생할 수 있다. 림프종에는 두 가지 기본 범주가 있다. 림프종의 한 범주는 리드-스턴버그(Reed-Sternberg) 세포라고 하는 세포 유형의 존재로 표시되는 호지킨 림프종 (HL)이다. 현재 6개의 인정된 HL 유형이 있다. 호지킨 림프종의 예로는 결절성 경화증 고전적 호지킨 림프종 (CHL), 혼합 세포성 CHL, 림프구 고갈 CHL, 림프구 풍부 CHL, 및 결절성 림프구 우세 HL이 있다.
림프종의 다른 범주는 비호지킨 림프종 (NHL)으로, 면역계 세포의 크고 다양한 암 군을 포함한다. 비호지킨 림프종은 추가로 무통성 (느린 성장) 과정이 있는 암과 공격적 (빠르게 성장하는) 과정이 있는 암으로 나눌 수 있다. 현재 61개의 인정된 NHL 유형이 있다. 비호지킨 림프종의 예에는 AIDS 관련 림프종, 역형성 대세포 림프종, 혈관면역모세포 림프종, 아세포 NK 세포 림프종, 버킷 림프종, 버킷 유사 림프종 (소형 비절단 세포 림프종), 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종, 피부 T-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종, 장병증형 T-세포 림프종, 여포성 림프종, 간비장 감마 델타 T-세포 림프종, T-세포 백혈병, 림프모구 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 비강 T-세포 림프종, 소아 림프종, 말초 T-세포 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 형질전환 림프종, 치료 관련 T-세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다.
뇌암에는 뇌 조직의 모든 암이 포함된다. 뇌암의 예는 신경교종 (예를 들어, 교모세포종, 성상세포종, 희소돌기아교종, 뇌실막종 등), 수막종, 뇌하수체 선종, 및 전정 신경초종, 원시 신경외배엽 종양 (수모세포종)을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 면역접합체는 단독으로 또는 요법에서 다른 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역접합체는 화학요법제와 같은 적어도 하나의 추가 치료제와 공동 투여될 수 있다. 이러한 병용 요법은 병용 투여 (2개 이상의 치료제가 동일하거나 별도의 제형에 포함되는 경우) 및 개별 투여를 포함하며, 이 경우 면역접합체의 투여는 추가 치료제 및/또는 보조제의 투여 전, 동시 및/또는 후에 일어날 수 있다. 면역접합체는 또한 방사선 요법과 함께 사용할 수 있다.
본 발명의 면역접합체 (및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 국소 치료가 필요한 경우 병변내 투여가 가능하다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여가 포함된다. 투여는 임의의 적절한 경로, 예를 들어, 부분적으로는 투여가 단기인지 만성인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
면역접합체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러, 및 이들의 바이오베터에 사용되는 투여 요법과 같은 임의의 적합한 투여 요법을 사용하여 임의의 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 예를 들어, 방법은 대상체에게 약 100 ng/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량을 제공하도록 면역접합체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역접합체 용량은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 100 μg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 100, 200, 300, 400, 또는 500 μg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 또한 특정 접합체 뿐만 아니라 치료되는 암의 유형 및 중증도에 따라 이러한 범위를 벗어날 수 있다. 투여 빈도는 주 1회 투여 내지 다중 투여, 또는 더 빈번한 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 1개월에 약 1회 내지 1주에 약 5회 투여된다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 주 1회 투여된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 암을 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 치료 유효량의 면역접합체 (예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 조성물로서)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 예방될 특정 암에 취약하다.
본 발명의 일부 구현예는 상기 기재된 바와 같은 암을 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 암은 유방암이다. 유방암은 유방의 다양한 부위에서 발생할 수 있으며, 다양한 상이한 유형의 유방암이 특성화되었다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 제자리 도관 암종; 침윤성 도관 암종 (예를 들어, 관상 암종, 수질 암종, 점액성 암종, 유두 암종, 또는 유방의 낭상 암종); 제자리 소엽 암종; 침윤성 소엽 암종; 염증성 유방암; 및 삼중 음성 (에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 과잉의 HER2 단백질에 대한 테스트 음성) 유방암과 같은 다른 형태의 유방암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 유방암을 치료하는 방법은 PD-L1, 또는 PD-L1을 과발현하는 종양에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 이의 아벨루맙)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 TLR7 및/또는 TLR8에 의해 유도된 전염증 반응에 민감하다.
일부 구현예에서, 치료 유효량의 면역접합체는 자궁경부암, 자궁내막 암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 식도암, 방광암, 요로암, 요상피 암종, 폐암, 비-소세포 폐암, 메르켈 세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암, 또는 유방암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여된다. 메르켈 세포 암종 암은 전이성 메르켈 세포 암종일 수 있다. 유방암은 삼중 음성 유방암일 수 있다. 식도암은 위식도 접합부 선암종일 수 있다.
실시예
실시예 L-9 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 1-(1-((3-(2-아미노-4-(에톡시(프로필)카르바모일)-3H-벤조[b]아제핀-8-일)페닐)설포닐)아제티딘-3-일)-3-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-2-아자헥사트리아콘탄-36-오에이트, CycBzL-9의 합성
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[3-[2-아미노-4-[에톡시(프로필)카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]페닐]설포닐아제티딘-3-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, CycBzL-9b의 제조
DMF (2 mL) 중 2-아미노-8-[3-[3-(아미노메틸)아제티딘-1-일]설포닐페닐]-N-에톡시-N-프로필-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복스아미드, CycBzL-9a (270 mg, 431 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 Et3N (131 mg, 1.29 mmol, 180 uL, 3 eq) 및 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐)3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(3-tert-부톡시-3-옥소)-프로폭시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TFP-PEG10-CO2H (329 mg, 431 umol, 1 eq)를 첨가한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 35%-57%,8분)로 정제하여 CycBzL-9b (270 mg, 243 umol, 56.45% 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[3-[2-아미노-4-[에톡시(프로필)카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]페닐]설포닐아제티딘-3-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-9c의 제조
CH3CN (2 mL) 및 H2O (2 mL) 중 CycBzL-9b (270 mg, 243 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (222 mg, 1.95 mmol, 144 uL, 8 eq)를 첨가한 다음, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고 잔류물을 물 (10 mL)로 희석한 다음 수상의 pH는 NaHCO3의 수용액을 점진적으로 첨가하여 약 ~5로 조정하였고 DCM:i-PrOH=3:1 (10 mL x 3)로 추출하였고, 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um;이동상: [물(0.2%FA)-ACN];B%: 20%-50%,8분)로 정제하여 CycBzL-9c (50 mg, 47.52 umol, 19.51% 수율)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ8.16-8.09 (m, 2H), 7.94-7.79 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.73-7.62 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 3.97 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.86 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.79-3.69 (m, 4H), 3.66-3.49 (m, 40H), 3.32 (s, 2H), 3.18 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.71-2.61 (m, 1H), 2.48 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.30 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.78 (sxt, J = 7.2 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.01 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
CycBzL-9의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 CycBzL-9c (50 mg, 72 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (95 mg, 503 umol, 8 eq) 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 하이드로클로라이드, EDCI, CAS Reg. No. 1892-57-5 (140 mg, 700 umol, 10 eq)를 첨가한 다음 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 HPLC로 정제하여 CycBzL-9 (0.046 g, 0.038 mmol, 53%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1200.50 (계산됨); LC/MS [M+H] 1200.80 (관찰됨).
실시예 L-10 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-아미노-4-[에톡시(프로필)카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피라졸-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠술폰산, CycBzL-10의 합성
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3],2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, CycBzL-10a의 제조
THF (15 mL) 중 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (1 g, 5.15 mmol, 1 eq)의 용액에 PPh3 (1.35 g, 5.15 mmol, 1 eq) 및 DEAD (0.89 g, 5.15 mmol, 0.94 mL, 1 eq)를 0℃에서 첨가하였고 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-하이드록시에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (3.02 g, 5.15 mmol, 1 eq)를 첨가한 다음 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 20 mL로 희석하고 EtOAc (50 mL * 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL * 3)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물은 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1 내지 에틸 아세테이트: MeOH = 10:1)로 정제하여 CycBzL-10a (3.5 g, 4.59 mmol, 89.04% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-아미노-4-[에톡시(프로필)카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피라졸-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, CycBzL-10b의 제조
CycBzL-10a (625 mg, 819 umol, 2.5 eq), 2-아미노-8-브로모-N-에톡시-N-프로필-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복스아미드 (120 mg, 328 umol, 1 eq), 물 (0.3 mL) 중 Na2CO3 (69.5 mg, 655 umol, 2 eq)의 용액 및 DMF (3 mL) 중 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 디클로라이드, Pd(dppf)Cl2 (23.9 mg, 32.8 umol, 0.1 eq)의 혼합물을 탈기시킨 다음 5시간 동안 N2 하에서 120℃로 가열시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 컬럼: Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 35%-65%,10분)로 정제하여 CycBzL-10b (300 mg, 290 umol, 88.4% 수율, TFA)를 황색 고체로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-아미노-4-[에톡시(프로필) 카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피라졸-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-10c의 제조
물 (3 mL) 및 MeCN (0.5 mL) 중 CycBzL-10b (300 mg, 325 umol, 1 eq)의 용액에 HCl (12 M, 407 uL, 15 eq)을 첨가한 다음, 80 ℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 CycBzL-10c (200 mg, 222 umol, 68.1% 수율, HCl)를 무색 오일로서 얻었다.
CycBzL-10의 제조
DCM (1 mL) 및 DMA (1 mL) 중 CycBzL-10c (80.0 mg, 88.7 umol, 1 eq, HCl) 및 나트륨;2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (119 mg, 443 umol, 5 eq)의 용액에 EDCI (84.9 mg, 443 umol, 5 eq)를 첨가한 다음, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,8분)로 정제하여 CycBzL-10 (30 mg, 24.8 umol, 28.01% 수율, TFA)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 8.20 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.65-7.61 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55-7.52 (m, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.36 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.96 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.89-3.82 (m, 4H), 3.74 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.63-3.52 (m, 36H), 3.42 (s, 2H), 2.95 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.76 (sxt, J = 7.2 Hz, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.99 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1094.4 (계산됨); LC/MS [M+H] 1094.3 (관찰됨).
실시예 L-11 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[에톡시(프로필) 카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠술폰산, CycBzL-11의 합성
5-브로모-2-(브로모메틸)피리미딘, CycBzL-11b의 제조
THF (10 mL) 중 (5-브로모피리미딘-2-일)메탄올, CycBzL-11a (300 mg, 1.59 mmol, 1.0 eq)의 용액에 PPh3 (499 mg, 1.90 mmol, 1.2 eq) 및 CBr4 (631 mg, 1.90 mmol, 1.2 eq)를 1 부분으로 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고 수상을 에틸 아세테이트 (10 mL*3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (컬럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 8/1)로 정제하여 CycBzL-11b (290 mg, 1.15 mmol, 72.4% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.81 (s, 2H), 4.59 (s, 2H).
tert-부틸 N-[(5-브로모피리미딘-2-일)메틸]-N-tert-부톡시카르보닐-카르바메이트, CycBzL-11c의 제조
DMF (3 mL) 중 CycBzL-11b (290 mg, 1.15 mmol, 1.0 eq) 및 tert-부틸 N-tert-부톡시카르보닐카르바메이트 (250 mg, 1.15 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 Cs2CO3 (562 mg, 1.73 mmol, 1.5 eq)을 부분적으로 20℃에서 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 물 (5 mL)을 첨가하고 수상을 에틸 아세테이트 (5 mL*3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (5 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (컬럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 5/1)로 정제하여 CycBzL-11c (350 mg, 901 umol, 78.3% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.74 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 1.48 (s, 18H).
tert-부틸 N-[[5-[2-아미노-4-[에톡시(프로필)카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸]-N-tert-부톡시카르보닐-카르바메이트, CycBzL-11d의 제조
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 CycBzL-11c (184 mg, 473 umol, 1.0 eq) 및 2-아미노-N-에톡시-N-프로필-8-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복사미드 (195 mg, 474 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2 (19.3 mg, 23.7 umol, 0.05 eq) 및 K2CO3 (163 mg, 1.18 mmol, 2.5 eq)을 1 부분으로 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 탈기시키고 2시간 동안 N2 하에 90℃로 가열시켰다. 디옥산 (10 mL)을 진공에서 제거하고 물 (20 mL)을 첨가하고 수상을 에틸 아세테이트 (10 mL*3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (컬럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 0/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=10/1)로 정제하여 CycBzL-11d (280 mg, 470.83 umol, 99.35% 수율)를 회색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ9.08 (s, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.59 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 7.38 (s, 1H), 5.08 (s, 2H), 3.98 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.83-1.75 (m, 2H), 1.47 (s, 18H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
2-아미노-8-[2-(아미노메틸)피리미딘-5-일]-N-에톡시-N-프로필-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복스아미드, CycBzL-11e의 제조
EtOAc (5 mL) 중 CycBzL-11d (20.0 mg, 33.6 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 8.41 uL, 1.0 eq)를 1 부분으로 20℃에서 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 1%-30%,8분)로 정제하여 CycBzL-11e (6.2 mg, 9.84 umol, 29.2% 수율, 98.8% 순도, 2TFA)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ9.22 (s, 2H), 7.82 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79-7.75 (m, 2H), 7.47 (s, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.00 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.46 (s, 2H), 1.85-1.77 (m, 2H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 395.2 (계산됨); LC/MS [M+H] 395.1 (관찰됨).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[에톡시(프로필)카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-11f의 제조
DMF (0.5 mL) 중 CycBzL-11e (70 mg, 149 umol, 1.0 eq, 2HCl) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (127 mg, 179 umol, 1.2 eq)의 혼합물에 DIEA (77.4 mg, 599 umol, 104 uL, 4.0 eq)를 1 부분으로 25℃에서 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 80*40mm*3 um;이동상: [물(0.04%HCl)-ACN];B%: 12%-39%,5.5분)로 정제하여 CycBzL-11f (50.0 mg, 53.4 umol, 35.7% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ9.14 (s, 2H), 7.86-7.81 (m, 1H), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.48 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.00 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.85-3.71 (m, 8H), 3.69-3.58 (m, 38H), 3.47 (s, 2H), 2.62 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.55 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.85-1.76 (m, 2H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
CycBzL-11의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 CycBzL-11f (60 mg, 61.7 umol, 1.0 eq, HCl) 및 (2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-페닐)설포닐옥시나트륨 (99.3 mg, 370 umol, 6.0 eq)의 혼합물에 EDCI (71.0 mg, 370 umol, 6.0 eq)를 1 부분으로 25℃에서 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-45%,8분)로 정제하여 CycBzL-11 (38.0 mg, 30.5 umol, 49.3% 수율, 93.3% 순도)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ9.11 (s, 2H), 7.83-7.79 (m, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.76-7.71 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.00 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.85-3.75 (m, 5H), 3.70-3.57 (m, 38H), 3.47 (s, 2H), 2.99 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 4 Hz, 2H), 1.85-1.75 (m, 2H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1163.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 1163.3 (관찰됨).
실시예 L-12 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[2-(사이클로부톡시- 카르보닐아미노)에톡시-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠술폰산, CycBzL-12의 합성
사이클로부틸 N-[2-[[2-아미노-8-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸] 피리미딘-5-일]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르보닐]-프로필-아미노]옥시에틸]카르바메이트, CycBz-15b의 제조
DCM (4 mL) 및 DMA (2 mL) 중 2-아미노-8-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]피리미딘-5-일]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복실산, CycBz-15a (250 mg, 611 umol, 1.0 eq) 및 사이클로부틸 N-[2-(프로필아미노-옥시)에틸]카르바메이트 (201 mg, 794 umol, 1.3 eq, HCl)의 혼합물에 EDCI (468 mg, 2.44 mmol, 4.0 eq)를 1 부분으로 25℃에서 N2 하에 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. DCM (4 mL)을 진공에서 제거하고, 물 (10 mL)을 첨가하고 수상을 에틸 아세테이트 (10 mL*3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (5 mL*2)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (컬럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 0/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=10/1)로 정제하여 CycBz-15b (190 mg, 313 umol, 51.2% 수율)를 갈색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ9.08 (s, 2H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58-7.52 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 4.74-4.67 (m, 2H), 4.54 (s, 2H), 3.96 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.33 (s, 2H), 2.20 (dd, J = 2.8, 5.2 Hz, 2H), 1.94-1.86 (m, 2H), 1.82-1.75 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.38 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 1.01 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
사이클로부틸 N-[2-[[2-아미노-8-[2-(아미노메틸)피리미딘-5-일]-3H-1- 벤즈아제핀-4-카르보닐]-프로필-아미노]옥시에틸]카르바메이트, CycBz-15의 제조
DCM (5 mL) 중 CycBz-15b (190 mg, 313 umol, 1.0 eq)의 용액에 CF3COOH (535 mg, 4.69 mmol, 347 uL, 15 eq)를 1 부분으로 25℃에서 N2 하에 첨가한 다음, 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. DCM (5 mL)을 진공에서 제거하고 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고, 수상을 MTBE (5 mL*4)로 추출하여 과잉의 TFA를 제거한 다음, 수상을 동결-건조시켜 CycBz-15 (130 mg, 169 umol, 54.1% 수율, 95.7% 순도, 2TFA)를 갈색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 9.21 (s, 2H), 7.85-7.76 (m, 3H), 7.49 (s, 1H), 4.66 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 3.96 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H), 3.31 (s, 2H), 2.20-2.10 (m, 2H), 1.91-1.83 (m, 2H), 1.81-1.74 (m, 2H), 1.70-1.60 (m, 1H), 1.57-1.47 (m, 1H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 508.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 508.1 (관찰됨).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[2-(사이클로부톡시카르보닐아미노)에톡시--프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-12a의 제조
DMF (1.5 mL) 중 CycBz-15 (105 mg, 181 umol, 1.0 eq, 2HCl) 및 Et3N (73.2 mg, 723 umol, 100 uL, 4.0 eq)의 혼합물에 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,4,5,6-펜타플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, PFP-PEG10-CO2H (131 mg, 181 umol, 1.0 eq)를 0℃에서 N2 하에 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음 또 다른 0.5시간 동안 25℃ 가열시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 물 (5 mL)로 희석하고 수상을 에틸 아세테이트 (3 mL*2)로 추출하고-폐기한 다음, 수상을 DCM/iPrOH=3/1 (5 mL*3)로 추가 추출하고, 조합된 유기상을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켜 CycBzL-12a (100 mg, 95.4 umol, 52.7% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
CycBzL-12의 제조
DCM (1 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 CycBzL-12a (100 mg, 95.4 umol, 1.0 eq) 및 (2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-페닐)설포닐옥시 나트륨 (128 mg, 477 umol, 5.0 eq)의 혼합물에 EDCI (91.4 mg, 477 umol, 5.0 eq)를 1 부분으로 25℃에서 N2 하에 첨가한 다음, 25 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-35%,8분)로 정제하여 CycBzL-12 (35.1 mg, 25.6 umol, 26.9% 수율, 93.3% 순도)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ9.12 (s, 2H), 7.84-7.77 (m, 3H), 7.52 (s, 1H), 4.75-4.67 (m, 3H), 3.99 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.82 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.70-3.57 (m, 38H), 3.45 (s, 2H), 3.01-2.97 (m, 2H), 2.62 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.24-2.14 (m, 2H), 1.96-1.86 (m, 2H), 1.84-1.75 (m, 2H), 1.73-1.61 (m, 1H), 1.59-1.49 (m, 1H), 1.01 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1276.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1276.6 (관찰됨).
실시예 L-13 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[3-(사이클로부톡시카르보닐아미노)프로필-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠술폰산, CycBzL-13의 합성
사이클로부틸 N-[3-[[2-아미노-8-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸] 피리미딘-5-일]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르보닐]-프로필-아미노]프로필], CycBz-14의 제조
DMF (4 mL) 중 2-아미노-8-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]피리미딘-5-일]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복실산, CycBz-14a (0.25 g, 611 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 Et3N (185 mg, 1.83 mmol, 255 uL, 3.0 eq), 사이클로부틸 N-[3-(프로필아미노)프로필]카르바메이트 (170 mg, 678 umol, 1.11 eq, HCl) 및 헥사플루오로포스페이트 아자벤조트리아졸 테트라메틸 우로늄, HATU (232 mg, 611 umol, 1.0 eq)를 1 부분으로 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (컬럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 3/1)로 정제하여 CycBz-14 (0.28 g, 462 umol, 75.71% 수율)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.04 (s, 2H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.84-4.84 (m, 1H), 4.64 (s, 4H), 3.54-3.47 (m, 2H), 3.46-3.39 (m, 2H), 3.30 (m, 2H), 3.22-3.07 (m, 2H), 2.32-2.28 (m, 2H), 2.10-2.00 (m, 2H), 1.88-1.79 (m, 3H), 1.75-1.60 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 0.90 (s, 3H). LC/MS [M+H] 606.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 606.2 (관찰됨).
사이클로부틸 N-[3-[[2-아미노-8-[2-(아미노메틸)피리미딘-5-일]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르보닐]-프로필-아미노]프로필]카르바메이트, CycBz-13의 제조
CH3CN (3 mL) 및 H2O (1 mL) 중 CycBz-14 (0.26 g, 429 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TFA (489 mg, 4.29 mmol, 318 uL, 10 .0 eq)를 1 부분으로 25℃에서 첨가한 다음 80 ℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 농축하고 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고 혼합물을 MTBE(10 mL x 2)로 추출하여 과잉의 TFA를 제거하였다. 수층을 동결-건조시켜 CycBz-13 (0.2 g, 323 umol, 75.20% 수율, TFA)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.21 (s, 2H), 7.84-7.71 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 4.85-4.85 (m, 1H), 4.47 (s, 2H), 3.54 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.37 (s, 2H), 3.15 (d, J = 15.6 Hz, 2H), 2.30-2.25 (m, 2H), 2.08-2.00 (m, 2H), 1.89-1.66 (m, 6H), 1.01-0.88 (m, 3H). LC/MS [M+H] 506.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 506.2 (관찰됨).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[3-(사이클로부톡시카르보닐아미노)프로필-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-13a의 제조
THF (3 mL) 중 CycBz-13 (0.1 g, 161 umol, 1.0 eq, TFA)의 혼합물에 Et3N (48.9 mg, 484 umol, 67.4 uL, 3.0 eq) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, TFP-PEG10-CO2H (114 mg, 161 umol, 1.0 eq)를 1 부분으로 0℃에서 첨가한 다음 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물의 pH를 TFA로 0℃에서 5-6 조정하였다. 그 다음 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 MTBE (10 mL x 3)로 세정하였다. 그 다음 수층을 DCM:i-PrOH=3:1(20 mL x 3)로 추가 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 CycBz-13a (0.15 g, 129 umol, 80.11% 수율, TFA)를 황색 오일로서 얻었다.
CycBzL-13의 제조
DCM (3 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 CycBz-13a (0.15 g, 129 umol, 1.0 eq, TFA) 혼합물에 나트륨;2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (139 mg, 517 umol, 4.0 eq) 및 EDCI (149 mg, 776 umol, 6.0 eq)를 1 부분으로 25℃에서 첨가한 다음 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 여과하였다. 그 다음 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-40%,8분)로 정제하여 CycBzL-13 (75.3 mg, 59.1 umol, 45.71% 수율) 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.09 (s, 2H), 7.82-7.67 (m, 3H), 7.11 (s, 1H), 4.86-4.82 (m, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.86 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.66-3.48 (m, 40H), 3.38 (s, 2H), 3.22-3.06 (m, 2H), 2.97 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.64-2.58(m, 2H), 2.32-2.25 (m, 2H), 2.09-1.95 (m, 2H), 1.91-1.80 (m, 3H), 1.75-1.61 (m, 3H), 0.93 (s, 3H). LC/MS [M+H] 1274.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1274.3 (관찰됨).
실시예 L-14 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[2-(디메틸카르바모일아미노)에톡시-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠술폰산, CycBzL-14의 합성
tert-부틸 ((5-(2-아미노-4-((2-(3,3-디메틸우레이도)에톡시)(프로필)카르바모일)-3H-벤조[b]아제핀-8-일)피리미딘-2-일)메틸)카르바메이트, CycBzL-14a의 제조
DCM (3 mL) 및 DMA (1 mL) 중 2-아미노-8-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]피리미딘-5-일]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복실산, CycBz-14a (250 mg, 611 umol, 1 eq) 및 1,1-디메틸-3-[2-(프로필아미노옥시)에틸]우레아 (165 mg, 733 umol, 1.2 eq, HCl)의 혼합물에 EDCI (468 mg, 2.44 mmol, 4 eq)를 첨가하고, 25 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시켜 DCM을 제거하고, 잔류물을 물 (10mL)로 희석하고, 혼합물의 pH를 aq Na2CO3으로 ~8로 조정하였다. 수상을 에틸 아세테이트 (10 mL*4)로 추출하였다. 조합된 유기상을 염수 (20 mL*1)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (컬럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 0/1,에틸 아세테이트 /메탄올=1/0,3/1)로 정제하여 CycBzL-14a (260 mg, 447.75 umol, 73.33% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
2-아미노-8-[2-(아미노메틸)피리미딘-5-일]-N-[2-(디메틸카르바모일아미노)에톡시]-N-프로필-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복사미드, CycBzL-14b의 제조
EtOAc (3.00 mL) 중 CycBzL-14a (130 mg, 224 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 3.00 mL, 53.60 eq)를 첨가한 다음, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 CycBzL-14b (115 mg, 207.77 umol, 92.81% 수율, 2HCl)를 밝은 적색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.22 (s, 2H), 7.86-7.80 (m, 2H), 7.80-7.74 (m, 1H), 7.50 (s, 1H), 4.48 (s, 2H), 3.97 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 2.74 (s, 6H), 1.83-1.73 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 481.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 481.1 (관찰됨).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[2-(디메틸카르바모일아미노)에톡시-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-14c의 제조
DMF (1.00 mL) 중 CycBzL-14b (65.0 mg, 117 umol, 1 eq, 2HCl)의 용액에 Et3N (48.0 mg, 470 umol, 4 eq) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (83.0 mg, 117 umol, 1 eq)을 첨가한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 혼합물의 pH를 점진적으로 TFA를 첨가하여 약 6으로 조정하고 MTBE (10 mL)로 추출하고-폐기하였고, 수성을 DCM:i-PrOH = 3:1 (20 mL x 3)로 추가 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 CycBzL-14c (95 mg, 93.03 umol, 79.22% 수율)를 밝은 황색 오일로서 얻었다.
CycBzL-14의 제조
DCM (2.00 mL) 및 DMA (0.10 mL) 중 CycBzL-14c (90.0 mg, 88.1 umol, 1 eq) 및 (2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-페닐)설포닐옥시나트륨 (95.0 mg, 353 umol, 4 eq)의 용액에 EDCI (68.0 mg, 353 umol, 4 eq)를 첨가하고, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 여과하였다. 잔류물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 5%-35%,8분)로 정제하여 CycBzL-14 (51 mg, 37.41 umol, 42.45% 수율, TFA)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.10 (s, 2H), 7.83-7.70 (m, 3H), 7.48 (s, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.97 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.86 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.78-3.74 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 36H), 3.45 (s, 2H), 3.37-3.34 (m, 2H), 2.97 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.74 (s, 6H), 2.60 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.83-1.72 (m, 1H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1249.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1249.6 (관찰됨).
실시예 L-15 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[[5-[2-아미노-4-[3-(사이클로부톡시카르보닐아미노)프로필-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]-3-피리딜]설포닐]아제티딘-3-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠술폰산, CycBzL-15의 합성
에틸 2-아미노-8-(5-((3-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸) 아제티딘-1-일)설포닐)피리딘-3-일)-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복실레이트, CycBz-32b의 제조
디옥산 (50 mL) 및 H2O (5 mL) 중 tert-부틸 N-[[1-[[5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3-피리딜]설포닐]아제티딘-3-일]메틸]카르바메이트, CycBz-32a (5 g, 11.0 mmol, 1 eq) 및 에틸 2-아미노-8-브로모-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복실레이트 (3.41 g, 11.0 mmol, 1 eq)의 용액에 K2CO3 (3.05 g, 22.1 mmol, 2 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (403 mg, 551 umol, 0.05 eq)를 25℃에서 N2 하에 첨가한 다음, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 CycBz-32b를 얻어 이를 CH3CN으로 25℃에서 15분 동안 분쇄하여 CycBz-32b (5.5 g, 9.90 mmol, 89.75% 수율)를 회색 고체로서 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ9.29 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.04-6.85 (m, 3H), 4.25 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.82 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.58-3.52(m, 2H), 2.99-2.85 (m, 4H), 2.56-2.51 (m, 1H), 1.35-1.30 (m, 12H).
2-아미노-8-(5-((3-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)아제티딘-1-일)설포닐)피리딘-3-일)-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복실산, CycBz-32c의 제조
MeOH (40 mL) 및 H2O (5 mL) 중 CycBz-32b (3.2 g, 5.76 mmol, 1 eq)의 용액에 LiOH.H2O (725 mg, 17.3 mmol, 3 eq)를 첨가한 다음, 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 EtOH를 제거하였다. 혼합물의 pH를 HCl (12 M)로 0℃에서 약 5로 조정한 다음 여과하고, 필터 케이크를 감압 하에서 건조시켜 미정제 생성물을 제공하고 이를 CH3CN으로 25℃에서 20분 동안 분쇄하여 CycBz-32c (2.7 g, 5.12 mmol, 88.86% 수율)를 회색 고체로서 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ9.34 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.98-7.92 (m, 2H), 7.89-7.83 (m, 2H), 3.83 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.59-3.49 (m, 4H), 2.90 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.56-2.54 (m, 1H), 1.30 (s, 9H).
사이클로부틸 N-[3-[[2-아미노-8-[5-[3-[(tert-부톡시카르보닐아미노) 메틸]아제티딘-1-일]설포닐-3-피리딜]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르보닐]-프로필-아미노]프로필]카르바메이트, CycBz-32d의 제조
DMF (10.0 mL) 중 CycBz-32c (400 mg, 758 umol, 1 eq)의 용액에 HATU (317 mg, 834 umol, 1.1 eq), DIEA (490 mg, 3.79 mmol, 660 uL, 5 eq) 및 사이클로부틸 N-[3-(프로필아미노)프로필]카르바메이트 (380 mg, 1.52 mmol, 2 eq, HCl)를 첨가하고, 25 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (20 mL x 3)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO®; 1 g SepaFlash® Silica Flash Column, 용리제 0~30% 에틸 아세테이트/MeOH @ 35 mL/분)로 정제하여 CycBz-32d (340 mg, 469.69 umol, 61.95% 수율)를 밝은 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.95 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.42 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58-7.50 (m, 2H), 7.49-7.43 (m, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.85-4.76 (m, 1H), 3.90 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.64-3.56 (m, 2H), 3.54-3.48 (m, 2H), 3.47-3.39 (m, 2H), 3.32 (br s, 2H), 3.22-3.02 (m, 4H), 2.70-2.57 (m, 1H), 2.35-2.01 (m, 4H), 1.90-1.80 (m, 2H), 1.77-1.47 (m, 4H), 1.37 (s, 9H), 1.05-0.76 (m, 3H).
사이클로부틸 N-[3-[[2-아미노-8-[5-[3-(아미노메틸)아제티딘-1-일]설포닐-3-피리딜]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르보닐]-프로필-아미노]프로필]카르바메이트, CycBz-32의 제조
CH3CN (2.00 mL) 및 H2O (1.00 mL) 중 CycBz-32d (340 mg, 470 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (428 mg, 3.76 mmol, 278 uL, 8 eq)를 첨가한 다음, 80 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 여과하였다. 잔류물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 100*40mm*5 um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 5%-35%,8분)로 정제하여 CycBz-32 (400 mg, 470 umol, 99.98% 수율, 2TFA)를 밝은 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.24 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 9.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.88-7.71 (m, 3H), 7.13 (br s, 1H), 4.85-4.80 (m, 1H), 4.03 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.73 (dd, J = 5.6, 8.4 Hz, 2H), 3.59-3.43 (m, 4H), 3.38 (br s, 2H), 3.12 (br d, J = 7.6 Hz, 4H), 2.83-2.73 (m, 1H), 2.37-2.12 (m, 2H), 2.00-2.10 (m, 4H), 1.78-1.43 (m, 4H), 1.05-0.83 (m, 3H). LC/MS [M+H] 624.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 624.2 (관찰됨).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[[5-[2-아미노-4-[3-(사이클로부톡시카르보닐아미노)프로필-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]-3-피리딜]설포닐]아제티딘-3-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-15a의 제조
THF (2.00 mL) 중 CycBz-32 (200 mg, 235 umol, 1 eq, 2TFA)의 용액에 Et3N (71.0 mg, 704 umol, 98.0 uL, 3 eq) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (166 mg, 235 umol, 1 eq)을 첨가한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 물 (10 mL)로 희석하고 혼합물의 pH를 TFA를 점진적으로 첨가하여 ~6 조정하고 MTBE (10 mL)로 추출하고-폐기하였고, 수상을 DCM:i-PrOH=3:1 (20 mL x 3)로 추가 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 CycBzL-15a (210 mg, 180.36 umol, 76.81% 수율)를 밝은 황색 오일로서 얻었다.
CycBzL-15의 제조
DCM (4.00 mL) 및 DMA (0.20 mL) 중 CycBzL-15a (210 mg, 180 umol, 1 eq) 및 2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠술폰산 (178 mg, 721 umol, 4 eq)의 용액에 EDCI (138 mg, 721 umol, 4 eq)를 첨가한 다음, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 여과하였다. 잔류물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um;이동상: [물(0.2%FA)-ACN];B%: 15%-40%,8분)로 정제하여 CycBzL-15 (98 mg, 68.13 umol, 37.77% 수율, FA)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ9.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.48 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.91-7.67 (m, 3H), 7.13 (s, 1H), 4.85-4.80 (m, 1H), 3.93 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.86 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.66-3.55 (m, 40H), 3.54-3.48 (m, 4H), 3.40 (br s, 2H), 3.25-3.08 (m, 4H), 2.97 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.79-2.68 (m, 1H), 2.29 (br t, J = 6.0 Hz, 3H), 1.93-1.80 (m, 3H), 1.77-1.52 (m, 4H), 1.01-0.88 (m, 3H). LC/MS [M+H] 1392.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1392.3 (관찰됨).
실시예 L-16 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[2-(사이클로부틸카르바모일아미노)에톡시-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠술폰산, CycBzL-16의 합성
tert-부틸 ((5-(2-아미노-4-((2-(3-사이클로부틸우레이도)에톡시)(프로필)카르바모일)-3H-벤조[b]아제핀-8-일)피리미딘-2-일)메틸)카르바메이트, CycBzL-16b의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (2 mL) 중 2-아미노-8-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸] 피리미딘-5-일]-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복실산, CycBzL-16a (250 mg, 611 umol, 1 eq) 1-사이클로부틸-3-[2-(프로필아미노옥시)에틸]우레아 (231 mg, 916 umol, 1.5 eq, HCl)의 용액에 EDCI (351 mg, 1.83 mmol, 3 eq)를 첨가하고, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 DCM을 제거하였다. 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL * 3)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 염수 (20 mL * 2)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1 내지 에틸 아세테이트: MeOH = 5:1)로 정제하여 CycBzL-16b (230 mg, 380 umol, 62.1% 수율)를 갈색 고체로서 얻었다.
2-아미노-8-[2-(아미노메틸)피리미딘-5-일]-N-[2-(사이클로부틸카르바모일아미노)에톡시]-N-프로필-3H-1-벤즈아제핀-4-카르복사미드, CycBzL-16c의 제조
물 (2 mL) 및 MeCN (2 mL) 중 CycBzL-16b (230 mg, 0.38 mmol, 1 eq)의 용액에 TFA (432 mg, 3.79 mmol, 0.28 mL, 10 eq)를 첨가한 다음, 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 물 (2 mL)로 희석하고 MTBE (3mL * 3)로 추출하고-폐기하였고, 수상을 감압 하에서 농축시켜 CycBzL-16c (230 mg, 371 umol, 97.8% 수율, TFA)를 갈색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.21 (s, 2H), 7.84-7.73 (m, 3H), 7.47 (s, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.01-3.89 (m, 3H), 3.75 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.44 (s, 2H), 3.33 (br s, 2H), 2.19-2.10 (m, 2H), 1.81-1.68 (m, 4H), 1.64-1.55 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 507.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 507.2 (관찰됨).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-아미노-4-[2-(사이클로부틸 카르바모일아미노)에톡시-프로필-카르바모일]-3H-1-벤즈아제핀-8-일]피리미딘-2-일]메틸아미노]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, CycBzL-16d의 제조
THF (1 mL) 중 CycBzL-16c (100 mg, 136 umol, 1 eq, 2TFA) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, TFP-PEG10-CO2H (96.2 mg, 0.14 mmol, 1 eq)의 용액에 Et3N (41.3 mg, 0.41 mmol, 56.8 uL, 3 eq)을 첨가한 다음, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물의 pH를 TFA로 0℃에서 약 6으로 조정하고, EtOAc (5 mL 3회)로 추출고-폐기하였고, 수성을 DCM/i-PrOH (10 mL * 3, 3/1)로 추가 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 미정제 생성물 CycBzL-16d (120 mg, 115 umol, 84.2% 수율)를 황색 오일로서 얻었고 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다.
CycBzL-16의 제조
DMA (0.5 mL) 및 DCM (1.5 mL) 중 CycBzL-16d (70 mg, 66.9 umol, 1 eq) 및 나트륨;2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (71.7 mg, 267 umol, 4 eq)의 용액에 EDCI (51.3 mg, 267 umol, 4 eq)를 첨가하고, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-35%,8분)로 정제하였다. 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-35%,8분)로 정제하여 HxBzL-13 (20 mg, 13.3 umol, 19.9% 수율, 2TFA)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.09 (s, 2H), 7.80-7.71 (m, 3H), 7.47 (s, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.95 (br t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.86 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.75 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.68-3.57 (m, 38H), 3.45 (s, 2H), 2.97 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.15 (br d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.83-1.68 (m, 4H), 1.64-1.52 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1275.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1275.2 (관찰됨).
실시예 L-18 2-아미노-8-(2-(38-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-3,37-디옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-2,36-디아자옥타트리아콘틸)피리미딘-5-일)-N-에톡시-N-프로필-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복사미드, CycBzL-18의 합성
2-아미노-8-(2-(아미노메틸)피리미딘-5-일)-N-에톡시-N-프로필-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복사미드, CycBzL-18a (0.0283 g, 0.072 mmol, 1 eq.) 및 1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-3-아자헥사트리아콘탄-36-오산, CycBzL-18b (0.0478 g, 0.072 mmol, 1 eq.)를 디메틸포름아미드, DMF에 용해하였다. 디이소프로필에틸아민, DIPEA (0.075 mol, 0.43 mmol, 6 eq.), 이어서 ((7-아자벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트), PyAOP, CAS Reg. No. 156311-83-0 (0.091 g, 0.18 mmol, 2.4 eq.)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반한 다음, 농축하고 RP-HPLC로 정제하여 CycBzL-18 (0.0346 g, 0.033 mmol, 46%)을 얻었다. LC/MS [M+H] 1043.53 (계산됨); LC/MS [M+H] 1043.84 (관찰됨).
실시예 L-20 2-아미노-8-(2-((1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30-노나옥사-3-아자도트리아콘탄-32-일)카르바모일)피리미딘-5-일)-N-에톡시-N-프로필-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복사미드, CycBzL-20의 합성
2-아미노-8-(2-((29-아미노-3,6,9,12,15,18,21,24,27-노나옥사노나코실)카르바모일)피리미딘-5-일)-N-에톡시-N-프로필-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복사미드, CycBzL-20b의 제조
DMF (0.5 ml) 중 5-(2-아미노-4-(에톡시(프로필)카르바모일)-3H-벤조[b]아제핀-8-일)피리미딘-2-카르복실산, CycBzL-20a (0.0106 g, 0.026 mmol, 1 eq) 및 tert-부틸 (29-아미노-3,6,9,12,15,18,21,24,27-노나옥사노나코실)카르바메이트 (0.014 g, 0.026 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민, TEA (36 μl, 0.26 mmol, 10 eq), 이어서 (7-아자벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트, PyAOP, CAS Reg. No. 156311-83-0 (0.013 g, 0.026 mmol, 1 eq)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하고 LC/MS로 모니터링하였다. 반응을 농축하고 prep-HPLC로 정제하여 tert-부틸 (1-(5-(2-아미노-4-(에톡시(프로필)카르바모일)-3H-벤조[b]아제핀-8-일)피리미딘-2-일)-1-옥소-5,8,11,14,17,20,23,26,29-노나옥사-2-아자헨트리아콘탄-31-일)카르바메이트를 얻었고, 이것을 그 다음 TFA에 용해하고 농축시켜 CycBzL-20b (17.1 mg, 0.020 mmol, 77%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 848.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 848.8 (관찰됨).
CycBzL-20의 제조
DMF (0.5 ml) 중 CycBzL-20b (17.1 mg, 0.020 mmol, 1.33 eq)의 용액에 TEA (28 μl, 0.20 mmol, 13.3 eq) 이어서 N-(α-말레이미도아세톡시)숙신이미드 에스테르 (3.8 mg, 0.015 mmol, 1 eq)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하고 LC/MS로 모니터링한 다음, 농축하고 prep-HPLC로 정제하여 CycBzL-20 (8.5 mg, 0.0086 mmol, 57%)을 얻었다. LC/MS [M+H] 985.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 985.6 (관찰됨).
실시예 L-23 1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-3-아자펜타트리콘탄-35-일(2-((2-아미노-N-프로필-8-(피리미딘-5-일)-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복사미도)옥시)에틸)카르바메이트, CycBzL-23의 합성
2-아미노-N-(2-아미노에톡시)-N-프로필-8-(피리미딘-5-일)-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복사미드, CycBzL-23b의 제조
tert-부틸 (2-((2-아미노-N-프로필-8-(피리미딘-5-일)-3H-벤조[b]아제핀-4-카르복사미도)옥시)에틸)카르바메이트, CycBzL-23a (5.1 mg, 0.011 mmol, 1 eq)를 100 μl TFA에 현탁시켰다. 30분 후, 용액을 농축시켜 CycBzL-23b를 TFA 염으로서 얻었다 (7.4 mg, 0.012 mmol, 100%). LC/MS [M+H] 381.2 (계산됨); LC/MS [M+H] 381.3 (관찰됨).
CycBzL-23의 제조
DMF (0.5 ml) 중 CycBzL-23b (7.4 mg, 0.012 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (13.5 μl, 0.097 mmol, 8 eq) 및 1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-3-아자펜타트리콘탄-35-일 (4-니트로페닐) 카보네이트, Mal-PEG10-PNC (15.6 mg, 0.019 mmol, 1.6 eq)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 교반하고 LC/MS로 모니터링하였다. 아민 출발 물질의 소모시, 반응을 농축하고 prep-HPLC로 정제하여 CycBzL-23을 얻었다. LC/MS [M+H] 1045.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1045.8 (관찰됨).
실시예 201 면역접합체 (IC)의 제조
라이신-접합 면역접합체를 제조하기 위해, 항체는 G-25 SEPHADEXTM 탈염 컬럼 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 또는 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼 (Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 pH 8.3에서 100 mM 붕산, 50 mM 염화나트륨, 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산을 함유하는 접합 완충액으로 완충액 교환된다. 그 다음 완충액을 사용하여 용출액을 각각 약 1-10 mg/ml의 농도로 조정한 다음 멸균 여과한다. 항체를 20-30℃로 예열하고 5 내지 20 mM의 농도로 디메틸술폭사이드 (DMSO) 또는 디메틸아세트아미드 (DMA)에 용해된 화학식 II의 8-사이클릴-2-아미노벤즈아제핀-링커 (CycBzL) 화합물인 테트라플루오로페닐 (TFP) 또는 설포닉 테트라플루오로페닐 (설포TFP) 에스테르의 2 내지 20 (예를 들어, 7 내지 10) 몰 당량과 빠르게 혼합한다. 반응을 30℃에서 약 16시간 동안 진행되도록 하고 면역접합체 (IC)는 pH 7.2의 인산염 완충 식염수 (PBS)에서 평형화된 2개의 연속적인 G-25 탈염 컬럼 또는 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼을 실행하여 반응물로부터 분리되어 표 3a 및 3b의 면역접합체 (IC)를 제공한다. 보조제-항체 비율 (DAR)은 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분석기 (Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-class (Waters Corporation, Milford, MA)에서 C4 역상 컬럼을 사용하여 액체 크로마토그래피 질량 분석기 분석에 의해 결정된다.
시스테인-접합 면역접합체를 제조하기 위해, 항체는 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼 (Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 PBS, pH 7.2를 2 mM EDTA와 함유하는 접합 완충액으로 완충액 교환된다. 쇄간 디술피드는 2-4 몰 과잉의 트리스 (2-카르복시에틸) 포스핀 (TCEP) 또는 디티오트레이톨 (DTT)을 사용하여 37℃에서 30분 - 2시간 동안 환원된다. 과잉의 TCEP 또는 DTT는 접합 완충액으로 사전-평형화된 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 제거하였다. 완충액-교환 항체의 농도는 접합 완충액을 사용하여 대략 5 내지 20 mg/ml로 조정되고 멸균-여과되었다. 말레이미드-CycBzL 화합물은 어느 한쪽 디메틸술폭시드 (DMSO) 또는 디메틸아세트아미드 (DMA)에 5 내지 20 mM의 농도로 용해되었다. 접합을 위해, 항체는 10 내지 20 몰 당량의 말레이미드-HxBzL과 혼합된다. 일부 경우에, 추가의 DMA 또는 DMSO 최대 20% (v/v)는 첨가되어 접합 완충액에서 말레이미드-CycBzL의 용해도를 개선하였다. 반응은 대략 30분 내지 4시간 동안 20℃에서 진행하게 된다. 생성된 접합체는 2개의 연속 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 미반응된 말레이미드-CycBzL로부터 정제된다. 컬럼은 인산염-완충 식염수 (PBS), pH 7.2로 사전-평형화된다. 보조제 대 항체 비율 (DAR)은 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분석기 (Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-class (Waters Corporation, Milford, MA)에서 C4 역상 컬럼을 사용하는 액체 크로마토그래피 질량 분석법 분석으로 추정된다.
접합을 위해, 항체는 항체의 안정성 또는 항원 결합 특이성에 부정적인 영향을 미치지 않는 당업계에 공지된 수성 완충 시스템에 용해될 수 있다. 인산염 완충 식염수를 사용할 수 있다. CycBzL 화합물은 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매를 포함하는 용매계에 용해된다. 일부 이러한 양태에서, CycBzL은 pH 8의 Tris 완충액 (예를 들어, 50 mM Tris)에서 약 5 mM, 약 10 mM, 약 20 mM, 약 30 mM, 약 40 mM 또는 약 50 mM, 및 약 5 mM 내지 약 50 mM 또는 약 10 mM 내지 약 30 mM과 같은 범위의 농도로 용해된다. 일부 측면에서, 8-Het-2-아미노벤즈아제핀-링커 중간체는 DMSO(디메틸설폭사이드), DMA(디메틸아세트아미드), 아세토니트릴, 또는 다른 적합한 쌍극성 비양성자성 용매에 용해된다.
대안적으로 접합 반응에서, 등가 과량의 CycBzL 용액을 희석하고 항체 용액과 조합할 수 있다. CycBzL 용액은 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매 및 적어도 하나의 극성 양성자성 용매로 적합하게 희석될 수 있으며, 그 예로는 물, 메탄올, 에탄올, n-프로판올 및 아세트산을 포함한다. 항체에 대한 8-Het-2-아미노벤즈아제핀-링커 중간체의 몰 당량은 약 1.5:1, 약 3:1, 약 5:1, 약 10:1, 약 15:1, 또는 약 20:1, 및 약 1.5:1 내지 약 20:1 약 1.5:1 내지 약 15:1, 약 1.5:1 내지 약 10:1, 약 3:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 15:1 또는 약 5:1 내지 약 10:1과 같은 범위일 수 있다. 반응은 LC-MS와 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 완료에 대해 적절하게 모니터링될 수 있다. 접합 반응은 전형적으로 약 1시간 내지 약 16시간 범위에서 완료된다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물에 시약을 첨가하여 반응을 켄칭할 수 있다. 항체 티올기가 8-Het-2-아미노벤즈아제핀-링커 중간체의 말레이미드와 같은 티올 반응성 기와 반응하는 경우, 미반응 항체 티올 기가 캡핑 시약과 반응할 수 있다. 적절한 캡핑 시약의 예는 에틸말레이미드이다.
접합 후, 면역접합체를 정제하고, 예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크로마토포커싱, 한외여과, 원심 한외여과, 접선 흐름 여과, 및 이들의 조합과 같은, 그러나 이들로 제한되지 않는 당업계에 공지된 정제 방법에 의해 접합되지 않은 반응물 및/또는 접합체 응집체로부터 분리할 수 있다. 예를 들어, 정제는 면역접합체를, 예컨대 20 mM 석신산나트륨, pH 5에서 희석하는 것이 선행될 수 있다. 희석된 용액을 양이온 교환 컬럼에 적용한 후, 예를 들어, 적어도 10개의 컬럼 부피의 20 mM 석신산나트륨, pH 5로 세척한다. 접합체는 PBS와 같은 완충액으로 적절히 용출될 수 있다.
실시예 202 HEK 리포터 분석
인간 TLR7 또는 인간 TLR8을 발현하는 HEK293 리포터 세포는 Invivogen에서 구입했으며 세포 증식 및 실험을 위해 판매자 프로토콜을 따랐다. 간략하게, 세포는 10% FBS, 제오신(Zeocin) 및 블라스티시딘(Blasticidin)이 보충된 DMEM 중 5% CO2에서 80-85% 합류까지 성장시켰다. 그 다음 세포를 HEK 검출 배지 및 면역자극 분자를 함유하는 기질과 함께 4x104세포/웰로 96-웰의 평평한 플레이트에 접종하였다. 620-655 nm 파장에서 플레이트 판독기를 사용하여 활성을 측정하였다.
실시예 203 시험관내 면역접합체 활성의 평가
이 실시예는 본 발명의 면역접합체가 면역 활성화를 유도하는데 효과적이며, 따라서 암 치료에 유용하다는 것을 보여준다.
a) 인간 항원 제시 세포의 단리: 인간 골수 항원 제시 세포 (APC)는 CD14, CD16, CD40, CD86, CD123 및 HLA-DR에 대한 단일클론 항체를 함유하는 ROSETTESEPTTM 인간 단핵구 풍부화 칵테일 (Stem Cell Technologies, 밴쿠버, 캐나다)을 사용하여 밀도 구배 원심분리에 의해 건강한 헌혈자 (Stanford Blood Center, Palo Alto, California)로부터 얻은 인간 말초 혈액으로부터 음성으로 선택되었다. 미성숙 APC는 CD14, CD16, CD40, CD86, CD123, 및 HLA-DR에 대한 단일클론 항체를 함유하는 CD16 고갈 없이 EASYSEPTM 인간 단핵구 풍부화 키트 (Stem Cell Technologies)를 사용하여 음성 선택을 통해 >90% 순도로 후에 정제되었다.
b) 골수 APC 활성화 검정: 2 x 105 APC는 10% FBS, 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL (밀리리터당 마이크로그램) 스트렙토마이신, 2mM L-글루타민, 피루브산나트륨, 비필수 아미노산, 및 표시된 경우, 다양한 농도의 비접합 (네이키드) 항체 및 본 발명의 면역접합체 (상기 실시예에 따라 제조됨)로 보충된 IMDM (Lonza)인 이스코브의 변형된 둘베코 배지를 함유하는 96-웰 플레이트 (Corning, Corning, NY)에서 인큐베이션된다. 무세포 상청액은 ELISA를 통해 18시간 후에 분석되어 염증유발 반응의 판독값으로 TNFα 분비를 측정한다.
c) PBMC 활성화 검정: 밀도 구배 원심분리에 의해 건강한 헌혈자 (Stanford Blood Center, Palo Alto, California)로부터 얻은 인간 말초 혈액으로부터 인간 말초 혈액 단핵 세포는 단리되었다. PBMC는 CEA-발현 종양 세포 (예를 들면 MKN-45, HPAF-II)와의 공동-배양에서 96-웰 플레이트 (Corning, Corning, NY)에 10:1 이펙터 대 표적 세포 비율로 인큐베이션되었다. 세포는 다양한 농도의 비접합 (네이키드) 항체 및 본 발명의 면역접합체 (상기 실시예에 따라 제조됨)로 자극되었다. 무세포 상청액은 제조사의 지침에 따라 LegendPlex™ 키트 (BioLegend®, San Diego, CA)를 사용하여 사이토카인 비드 어레이로 분석되었다.
d) 인간 종래의 수지상 세포의 단리: 밀도 구배 원심분리에 의해 건강한 혈액 공여자(Stanford Blood Center, Palo Alto, California)로부터 얻은 인간 말초 혈액으로부터 인간 종래의 수지상 세포(cDC)를 음성으로 선택하였다. 간략하게, 먼저 ROSETTESEPTM 인간 CD3 고갈 칵테일(Stem Cell Technologies, Vancouver, Canada)을 사용하여 세포를 풍부화하여 세포 준비로부터 T 세포를 제거한다. 그 다음 cDC는 EASYSEPTM 인간 골수성 DC 풍부화 키트(Stem Cell Technologies)를 사용하여 음성 선택을 통해 추가로 풍부화된다.
e) cDC 활성화 검정: 8 x 104 APC를 10:1 효과기(cDC) 대 표적(종양 세포) 비율로 ISAC 표적 항원을 발현하는 종양 세포와 공동 배양하였다. 10% FBS 및 지시된 경우 다양한 농도의 표시된 본 발명의 면역접합체(상기 실시예에 따라 제조된 바와 같음)가 보충된 RPMI-1640 배지를 함유하는 96-웰 플레이트(Corning, Corning, NY)에서 세포를 인큐베이션하였다. 약 18시간의 밤새 인큐베이션 후, 무세포 상청액을 수집하고 BioLegend LEGENDPLEX 사이토카인 비드 어레이를 사용하여 사이토카인 분비(TNFα 포함)에 대해 분석하였다.
골수성 세포 유형의 활성화는 상이한 골수성 집단이 활용되는 기재된 검정 외에 다양한 스크린 검정을 사용하여 측정될 수 있다. 이들은 하기를 포함할 수 있다: 건강한 공여자 혈액에서 단리된 단핵구, M-CSF 분화 대식세포, GM-CSF 분화 대식세포, GM-CSF+IL-4 단핵구 유래 수지상 세포, 건강한 공여자 혈액에서 단리된 종래의 수지상 세포(cDC), 및 면역억제 상태로 분극화된 골수 세포(골수 유래 억제 세포 또는 MDSC라고도 함). MDSC 분극화 세포의 예는 M2a MΦ (IL4/IL13), M2c MΦ (IL10/TGFb), GM-CSF/IL6 MDSC 및 종양 교육 단핵구(TEM)와 같은 면역억제 상태로 분화된 단핵구를 포함한다. TEM 분화는 종양 조건화 배지(예를 들어 786.O, MDA-MB-231, HCC1954)를 사용하여 수행될 수 있다. 원발성 종양 연관 골수 세포는 또한 해리된 종양 세포 현탁액에 존재하는 일차 세포를 포함할 수 있다(Discovery Life Sciences).
기재된 골수 세포 집단의 활성화 평가는 면역접합체가 항체의 CDR 영역을 통해 결합할 수 있는 관심 항원을 발현하는 세포와의 공동 배양 또는 단일 배양으로 수행될 수 있다. 18 내지 48시간 동안 인큐베이션한 후, 활성화는 유동 세포측정을 사용하는 세포 표면 공동자극 분자의 상향조절에 의해 또는 분비된 염증유발 사이토카인의 측정에 의해 평가될 수 있다. 사이토카인 측정을 위해, 무세포 상청액을 수확하고 유동 세포측정을 사용하여 사이토카인 비드 어레이(예: Biolegend의 LegendPlex)로 분석한다.
본 명세서에 인용된 간행물, 특허 출원, 및 특허를 포함한 모든 참고 문헌은 각 참고 문헌이 개별적으로 그리고 구체적으로 참고로 인용되는 것으로 표시되고 그 전체가 여기에 기재된 것처럼 동일한 정도로 참고로 인용된다.
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Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 459 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 459 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 460 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 460 Asp Ile Gln Met 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1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 464 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 464 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 465 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 465 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Phe Thr Thr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 466 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 466 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Met Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 467 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 467 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly 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Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Trp Asn Ala Pro Lys Leu Met Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Asn Thr Gln Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 470 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 470 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Gln Tyr Pro Ser 85 90 95 His Phe Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 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Claims (62)

  1. 링커에 의해 하나 이상의 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티에 공유 부착된 항체를 포함하고 하기 화학식 I 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는 면역접합체:

    식 중:
    Ab는 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물이고;
    p는 1 내지 8의 정수이고;
    CycBz는 하기 화학식을 갖는 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀 모이어티이고:

    Cyc는 페닐디일, 헤테로사이클릴디일 및 헤테로아릴디일로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 하기로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 독립적으로 및 선택적으로 치환되고
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C12 알킬디일)-OR5;
    -(C3-C12 카보사이클릴);
    -(C3-C12 카보사이클릴)-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
    -(C6-C20 아릴);
    -(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C2-C20 헤테로사이클릴);
    -(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴);
    -(C1-C20 헤테로아릴)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-*;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)N(R5)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -N(R5)2;
    -N(R5)-*;
    -N(R5)C(=O)R5;
    -N(R5)C(=O)-*;
    -N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -N(R5)C(=O)N(R5)-*;
    -N(R5)CO2R5;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)2;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
    -NR5C(=NR5a)R5;
    -N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
    -N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -O-C(=O)N(R5)2;
    -O-C(=O)N(R5)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
    또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    X1, X2, X3, 및 X4는 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 2개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내고, 그리고 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
    L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고:
    -C(=O)-PEG-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
    -C(=O)-PEG-O-;
    -C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    -C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    -C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)Gluc-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-; 및
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    R6는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    PEG는 식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 가지며; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
    Gluc는 화학식 을 가지며;
    PEP는 화학식 을 가지며,
    여기서 AA는 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄, 또는 AA 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되고, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
    Cyc는 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 구조: 를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 선택적으로 치환되고:
    R7는 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)-, 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R8는 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬, 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, 여기서 R9는 H, C1-C12 알킬, 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고, 또는 2개의 R9 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    y는 2 내지 12의 정수이고;
    z는 0 또는 1이고; 그리고
    알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일, 카보사이클릴, 카보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 그리고 선택적으로 치환됨.
  2. 제1항에 있어서, 항체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  3. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 A PD-L1 항체이고 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하고, 여기서:
    면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 1-23 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열번호: 24-57 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열번호: 58-95 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)을 포함하거나;
    면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 96-128 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열번호: 129-151 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열번호: 152-155 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)을 포함하고;
    서열은 도 1-4로부터의 것인, 면역접합체.
  4. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 A PD-L1 항체이고 서열번호: 223-264 중 임의의 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 또는 적어도 그들의 CDR; 및 서열번호: 265-306 중 임의의 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역 또는 적어도 그들의 CDR을 포함하고;
    서열은 도 1-4로부터의 것인, 면역접합체.
  5. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 A PD-L1 항체이고 서열번호: 223-264 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드, 및 서열번호: 265-306 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하고;
    서열은 도 1-4로부터의 것인, 면역접합체.
  6. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 A PD-L1 항체이고 도 1a-d의 PD-L1 결합제의 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 폴리펩티드, 또는 적어도 그들의 CDR을 포함하는, 면역접합체.
  7. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 B PD-L1 항체이고 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하고, 여기서:
    면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 1-14 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열번호: 15-31 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열번호: 32-52 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)을 포함하거나;
    면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 53-67 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열번호: 68-79 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열번호: 80-91 중 임의의 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)을 포함하고;
    서열은 도 5-8로부터의 것인, 면역접합체.
  8. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 B PD-L1 항체이고 서열번호: 123-143 중 임의의 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 또는 적어도 그들의 CDR; 및 서열번호: 144-164 중 임의의 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역 또는 적어도 그들의 CDR을 포함하고;
    서열은 도 5-8로부터의 것인, 면역접합체.
  9. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 B PD-L1 항체이고 서열번호: 123-143 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드, 및 서열번호: 144-164 중 임의의 하나에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하고;
    서열은 도 5-8로부터의 것인, 면역접합체.
  10. 제1항에 있어서, 항체 작제물은 유형 B PD-L1 항체이고 도 5a-b의 PD-L1 결합제의 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 폴리펩티드, 또는 적어도 그들의 CDR을 포함하는, 면역접합체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, X1은 결합이고, R1은 H인, 면역접합체.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, X2는 결합이고, R2는 C1-C8 알킬인, 면역접합체.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  14. 제13항에 있어서, R2는 C1-C8 알킬이고 R3은 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5인, 면역접합체.
  15. 제14항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu), -OCH2CH2NHCO2(사이클로부틸), 및 -CH2CH2CH2NHCO2(사이클로부틸)로부터 선택되는, 면역접합체.
  16. 제13항에 있어서, R2 및 R3 각각은 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -OCH2CF3, -CH2CH2CF3, -OCH2CH2OH, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는, 면역접합체.
  17. 제16항에 있어서, R2 및 R3 각각은 -CH2CH2CH3인, 면역접합체.
  18. 제16항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -OCH2CH3인, 면역접합체.
  19. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, X3-R3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체:

    및 .
  20. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, X4는 결합이고, R4는 H인, 면역접합체.
  21. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 L에 부착되는, 면역접합체.
  22. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R2 또는 R3은 L에 부착되는, 면역접합체.
  23. 제22항에 있어서, X3-R3-L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체:


    여기서 물결선은 N에 대한 부착점을 나타낸다.
  24. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 C1-C12 알킬인, 면역접합체.
  25. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*이고; 여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는, 면역접합체.
  26. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인, 면역접합체.
  27. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 항체의 시스테인 티올에 부착되는, 면역접합체.
  28. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, PEG에 대해, m은 1 또는 2이고, n은 2 내지 10의 정수인, 면역접합체.
  29. 제28항에 있어서, n은 10인, 면역접합체.
  30. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고 PEP는 디펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
  31. 제30항에 있어서, AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되거나; 또는 AA1 및 AA2는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는, 면역접합체.
  32. 제30항에 있어서, AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인, 면역접합체.
  33. 제30항에 있어서, AA1 및 AA2는 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  34. 제30항에 있어서, PEP는 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:

    식 중 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택됨.
  35. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고 PEP는 트리펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
  36. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고 PEP는 테트라펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
  37. 제36항에 있어서,
    AA1은 Abu, Ala, 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    AA2는 Nle(O-Bzl), Oic 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    AA3은 Ala 및 Met(O)2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    AA4는 Oic, Arg(NO2), Bpa, 및 Nle(O-Bzl)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  38. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고 PEP는 Ala-Pro-Val, Asn-Pro-Val, Ala-Ala-Val, Ala-Ala-Pro-Ala (서열번호: 473), Ala-Ala-Pro-Val (서열번호: 474), 및 Ala-Ala-Pro-Nva (서열번호: 475)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  39. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고 PEP는 하기 구조로부터 선택되는, 면역접합체:

    및
  40. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, L은 하기 구조로부터 선택되는, 면역접합체:

    여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
  41. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 Ia를 갖는, 면역접합체:
  42. 제41항에 있어서, X4는 결합이고 R4는 H인, 면역접합체.
  43. 제41항에 있어서, Cyc는 피리딜디일, 피리미딜디일, 피라졸릴디일, 피페라지닐디일, 피페리디닐디일, 및 피라지닐디일로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  44. 제41항에 있어서, X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  45. 제41항에 있어서, X2는 O인, 면역접합체.
  46. 제41항에 있어서, 하기 화학식 Ib-Ii로부터 선택된, 면역접합체:

    및
    .
  47. 제41항에 있어서, 하기 화학식 Ij-In으로부터 선택된, 면역접합체:

    및
    .
  48. 제41항에 있어서, X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  49. 제41항에 있어서, X2 및 X3 각각은 결합이고, R2는 C1-C8 알킬이고, 그리고 R3은 -O-(C1-C12 알킬) 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  50. 표 2a 및 2b로부터 선택된 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물.
  51. 항 PD-L1 항체와 표 2a 및 2b로부터 선택된 8-Cyc-2-아미노벤즈아제핀-링커 화합물과의 접합에 의해 제조된, 면역접합체.
  52. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 치료 유효량 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 비히클, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  53. 암의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법에 있어서, 암은 방광암, 요로암, 요상피 암종, 폐암, 비-소세포 폐암, 메르켈 세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암, 및 유방암으로부터 선택되는, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 암은 TLR7 및/또는 TLR8 효능작용에 의해 유도된 염증유발 반응에 민감한 것인, 방법.
  55. 제53항에 있어서, 암은 PD-L1 발현 암인, 방법.
  56. 제53항에 있어서, 유방암은 삼중-음성 유방암인, 방법.
  57. 제53항에 있어서, 메르켈 세포 암종 암은 전이성 메르켈 세포 암종인, 방법.
  58. 제53항에 있어서, 암은 위식도 접합부 선암종인, 방법.
  59. 제53항에 있어서, 면역접합체는 환자에게 정맥내로, 종양내로, 또는 피하로 투여되는, 방법.
  60. 제53항에 있어서, 면역접합체는 환자에게 약 0.01 내지 20 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는, 방법.
  61. 암을 치료하기 위한 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 용도에 있어서, 암은 자궁경부암, 자궁내막 암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 식도암, 방광암, 요로암, 요상피 암종, 폐암, 비-소세포 폐암, 메르켈 세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암, 및 유방암으로부터 선택되는, 용도.
  62. 제1항의 화학식 I의 면역접합체의 제조 방법으로서, 표 2a 및 2b의 8-Cyc-2-아미노-티에노아제핀-링커 화합물은 항 PD-L1 항체와 접합되는, 방법.
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