KR20230068357A - 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 혼합한 혼합 추출물이 에스트로겐 활성을 가지고, 부작용 없이 에스트로겐 수용체 효능제(estrogen receptor agonist)로 작용하는 것을 확인함으로써, 본 발명의 혼합 추출물을 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 갱년기 증상을 예방 및 치료하기 위한 여성호르몬 대체요법에 유용하게 이용할 수 있다.
Description
본 발명은 꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 추출물, 당귀(Angelica sinensis) 추출물 및 지골피(Lycii Radicis Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
여성은 폐경 전후 10년, 보통 45세에서 55세 사이에 갱년기 증상이 서서히 시작되며, 이로 인해 신체적 및 정신적 어려움을 겪고 있다. 건강보험심사평가원의 통계에 따르면, 2013년 기준 갱년기 증상으로 내원하는 환자가 약 43만 명에 이르며, 여성의 사회진출이 활발해지면서 스트레스, 흡연, 음주 비율 증가 등의 영향으로 인해 갱년기 증상의 발현 시기가 점차 낮아지고 있어, 여성의 갱년기 증상에 대한 관리가 필요한 실정이다.
갱년기란 내분비 증후군의 일종으로 난소기능의 전반적이고 점진적인 노화로 인한 여성호르몬, 즉 에스트로겐의 감소로 인해 생리적 기능 및 성기능이 감소 내지 소실되는 과도기를 말한다. 이러한 갱년기의 증상으로는 안면홍조, 빈맥, 발한 또는 두통과 같은 혈관성 변화에 의한 증상이 있고, 근육통, 관절통 및 요통과 같은 근골격계 변화에 의한 증상이 있으며, 빈뇨 또는 요실금과 같은 비뇨생식기 변화에 의한 증상이 있고, 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴 및 현기증과 같은 뇌신경계 변화에 의한 증상이 있으며, 이 외에도 시력감퇴 및 피부와 모발이 변화되는 증상들이 발생되며, 호르몬 변화로 인한 골다공증이나 심혈관계 질환 등 여성의 건강에 치명적인 질환이 발생할 수 있다.
따라서 중년 여성들의 신체적, 정신적 건강 및 삶의 질을 개선하기 위하여 갱년기 증상을 개선할 수 있는 치료제의 개발이 요구되었으며, 이러한 갱년기 증상의 개선을 위해 호르몬 대체요법 및 비스테로이드계 제제 등의 약물들이 개발된 바 있다. 그러나 이들 약물의 경우 대부분이 두통 및 체중증가 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있으며, 특히, 에스트로겐 대체요법의 경우에도 인위적으로 체내에 호르몬을 투여하는 것이기 때문에 이에 대한 거부반응과 함께 자궁출혈, 뇌졸중, 심장발작, 유방암 및 자궁암의 발생 위험이 증가할 수 있는 것으로 알려져 있다.
이와 같은 문제점들 때문에 식품이나 첨가물의 형태로 섭취하는 자연적인 방법으로 에스트로겐 요법을 대체하고자 하는 관심이 높아지고 있으며, 부작용이 없으면서도 갱년기의 증상을 완화하는 효과가 우수한 새로운 갱년기 증상 치료제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
한편, 에스트로겐(estrogen)은 세포 수의 증가와 분화를 포함하는 다양한 생물학적 작용을 한다. 에스트로겐의 생물학적 작용들은 핵 수용체 슈퍼패밀리(superfamily)에 속하는 두 개의 에스트로겐 수용체 알파(ERα; estrogen receptorα)와 에스트로겐 수용체 베타(ERβ)를 통하여 그 활성을 발휘한다. 에스트로겐 수용체의 작용메커니즘은 에스트로겐과 세포 내 에스트로겐 수용체들과의 결합으로 수용체들의 이합체(dimer)를 형성하고 이들이 표적 유전자(target gene)의 프로모터(promoters)에 위치한 특정한 에스트로겐 반응서열(estrogen response elements, EREs)과 결합함으로써 표적 유전자의 발현을 조절한다. 두 개의 에스트로겐 수용체는 서로 다른 조직분포 패턴, 리간드 결합력을 가지므로 이러한 차이는 다른 조직에서 에스트로겐 수용체의 효능제(agonists)와 길항제(antagonists)의 서로 다른 선택적 역할을 가능하게 한다. 아울러, 에스트로겐 수용체에 작용하는 물질들은 폐경기여성의 호르몬 대체요법과 생식기암의 화학요법제 개발을 위한 표적으로 활용되고 있다. 따라서, 인체에 부작용이 적은 천연물을 대상으로 에스트로겐 수용체를 활성화시키는 천연물을 발굴한다면, 여성 갱년기 증상 치료 및 예방에 유용하게 사용될 수 있으므로, 관련 연구가 꾸준히 진행되고 있는 실정이다.
이에, 인체에 안전한 천연물 유래 여성 갱년기 증상 치료 복합제를 개발하기 위해 노력한 결과, 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 혼합한 혼합 추출물이 에스트로겐 활성을 가지고 부작용 없이 에스트로겐 수용체 효능제(estrogen receptor agonist)로 작용함을 확인하여, 상기 혼합 추출물을 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 갱년기 증상을 예방 및 치료하기 위한 여성호르몬 대체요법제로 이용할 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 추출물, 당귀(Angelica sinensis) 추출물 및 지골피(Lycii Radicis Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 추출물, 당귀(Angelica sinensis) 추출물 및 지골피(Lycii Radicis Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 혼합한 혼합 추출물은 에스트로겐 활성을 가지고 부작용 없이 에스트로겐 수용체 효능제(estrogen receptor agonist)로 작용하므로, 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 갱년기 증상을 예방 및 치료하기 위한 여성호르몬 대체요법에 이용될 수 있다.
도 1은 에스트로겐 수용체-양성 유방암 세포주 MCF-7에 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물, 지골피 추출물, 또는 본 발명의 실시예에 따라 우수한 효과를 나타내는 혼합비율로 혼합하여 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 처리한 후 ER-매개 전사활성을 비교하여 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 시너지 효과를 확인한 도이다.
도 2는 에스트로겐 수용체-양성 유방암 세포주 MCF-7에 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물, 지골피 추출물, 또는 본 발명의 실시예에 따라 우수한 효과를 나타내는 혼합비율로 혼합하여 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 처리한 후 세포 증식률을 비교하여 본 발명의 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 에스트로겐 유사 활성 시너지 효과를 확인한 도이다.
도 3은 자궁내막암 선암세포주 Ishikawa에 본 발명의 실시예에 따라 우수한 효과를 나타내는 혼합비율로 혼합하여 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 농도별로 처리한 후 ER-매개 전사활성을 비교하여 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 자궁증식 부작용 유무를 확인한 도이다.
도 2는 에스트로겐 수용체-양성 유방암 세포주 MCF-7에 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물, 지골피 추출물, 또는 본 발명의 실시예에 따라 우수한 효과를 나타내는 혼합비율로 혼합하여 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 처리한 후 세포 증식률을 비교하여 본 발명의 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 에스트로겐 유사 활성 시너지 효과를 확인한 도이다.
도 3은 자궁내막암 선암세포주 Ishikawa에 본 발명의 실시예에 따라 우수한 효과를 나타내는 혼합비율로 혼합하여 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 농도별로 처리한 후 ER-매개 전사활성을 비교하여 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 자궁증식 부작용 유무를 확인한 도이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 추출물, 당귀(Angelica sinensis) 추출물 및 지골피(Lycii Radicis Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 유효성분인 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물 각각은 하기의 단계들을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 각각에 추출용매를 가하여 추출하는 단계; 및
2) 단계1)의 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물 각각을 여과하는 단계.
본 발명에서, 상기 단계 1)의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피는 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다. 또한 상기 꾸지뽕 및 당귀의 꽃, 가지, 줄기, 잎, 열매, 지상부, 뿌리줄기, 뿌리 또는 이들의 조합을 사용할 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 지골피는 구기자나무(Lycium chinense Miller) 또는 기타 동속 식물의 뿌리 껍질을 말린 약재인 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C1 내지 C2의 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하고, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 초음파추출, 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 세척하고 잘 건조된 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 분량의 1 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 2 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 보다 바람직하다. 추출 온도는 20 내지 110℃인 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10분 내지 72시간이 바람직하며, 20분 내지 48시간이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에서, 상기 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물은 각각의 추출물을 제조한 후 혼합할 수 있으나, 꾸지뽕, 당귀 및 지골피를 혼합한 후 이의 추출물을 수득하는 형태로 제조되는 것도 가능하다.
본 발명에서, 상기 단계 2)를 거친 후 하기의 단계들을 추가적으로 포함할 수 있다:
3) 단계 2)의 여과물 각각을 감압 농축하는 단계; 및
4) 단계 3)의 농축물 각각을 건조하는 단계.
본 발명에서, 상기 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명에서, 꾸지뽕, 당귀 및 지골피를 혼합한 후 이의 추출물을 수득하고, 이를 감압 농축 및 건조시키는 단계를 거칠 수 있다.
본 발명에서, 상기 조성물은 꾸지뽕 추출물：당귀 추출물：지골피 추출물을 1：1 내지 1000：1 내지 500의 중량비로 함유할 수 있고, 보다 구체적으로 1：300 내지 800：50 내지 400의 중량비로 함유할 수 있으며, 보다 더 구체적으로 1：400 내지 750：100 내지 300의 중량비로 함유할 수 있다.
본 발명에서, 상기 여성 갱년기 증상이란, 난소의 노화로 인하여 에스트로겐의 분비가 감소됨에 따라 폐경을 전후로 걸쳐 여성에게 나타나는 증상 및 질환을 총칭하는 것으로, 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 또는 골다공증일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서, 상기 조성물은 에스트로겐 활성을 갖고, 에스트로겐 수용체(estrogen receptor; ER) 효능제(agonist) 활성을 나타내어, 여성 갱년기 증상 치료 효과를 갖는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 제조하고, 상기 추출물을 특정한 혼합 비율로 혼합하여 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 추출물을 제조하였다.
또한, 본 발명자들은 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 에스트로겐 수용체-양성 유방암 세포주 MCF-7에 처리하여 ER-매개 전사활성 정도를 측정한 결과, 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 추출물 각각을 처리한 경우에 비해 꾸지뽕 추출물：당귀 추출물：지골피 추출물을 1：400 내지 750：100 내지 300의 혼합 비율로 혼합한 경우 추출물 각각의 ER-매개 전사활성의 합보다 그 활성이 증가하여 시너지 효과를 나타냄을 확인하였다(도 1 참조).
또한, 본 발명자들은 상기 혼합 추출물을 에스트로겐 수용체-양성 유방암 세포주 MCF-7에 처리하여 세포 생존율을 측정한 결과, 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 추출물 각각을 처리한 세포 생존율의 합과 비교하여 상기 혼합 추출물을 처리한 세포 생존율이 증가하여 시너지 효과를 나타냄을 확인하였다(도 2 참조).
아울러, 본 발명자들은 상기 혼합 추출물을 자궁내막암 선암세포주 Ishikawa에 농도별로 투여하고 ER-매개 전사활성 정도를 측정한 결과, 투여 유무에 따른 ER-매개 전사활성 정도가 유방암 세포주 MCF-7의 전사활동 결과와 비교하여 현저히 적으므로, ER 효능제의 부작용 중 하나인 자궁증식 증상이 거의 없음을 확인하였다(도 3 참조).
따라서 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물이 에스트로겐 활성을 가지고, 부작용 없이 ER 효능제로서의 활성을 나타내므로, 본 발명의 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 갱년기 증상을 예방 또는 치료하기 위한 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하며, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 혼합생약재에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol), 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다. 또한, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 환자의 연령, 성별 및 증상의 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 kg당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 1000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 500 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
상기 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물, 지골피 추출물, 이들의 혼합 비율, 여성 갱년기 증상에 대해서는 상기 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 대한 설명과 동일한 바, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 건강기능식품의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
한편, 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물이 에스트로겐 활성을 가지고, 부작용 없이 ER 효능제로서의 활성을 나타내므로, 본 발명의 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 혼합한 혼합 추출물을 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 갱년기 증상을 예방 또는 개선하기 위한 건강기능식품의 유효성분으로 유용하게 사용할 수 있다.
본 발명의 3종의 추출물은 식품학적으로 허용된 담체와 혼합하여 식품 조성물로서 제공될 수 있다.
본 발명의 3종의 추출물을 식품 또는 음료 첨가물로 사용할 경우, 상기 3종의 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 3종의 추출물의 혼합양은 그의 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우, 상기 3종의 추출물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에, 장기간 복용이 가능하다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다.
상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿류, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다. 음료수로 제형화할 경우에 상기 3종의 추출물 이외에 첨가되는 액체 성분으로는 이제 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드(예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제[타우마린, 스테비아 추출물(예, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 향미제(예, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 무기질(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 꾸지뽕(
Cudrania tricuspidata
) 추출물의 제조
수득한 꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 열매를 영하 20℃에서 완전히 냉동시키고, 동결건조기를 이용하여 건조한 뒤 분쇄기로 분쇄하였다. 상기 꾸지뽕 열매 동결건조 분말 2 g에 10 ㎖의 70% 메탄올을 가한 후 15분 동안 초음파 추출하였다. 초음파 추출한 꾸지뽕 추출물은 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 분리하고 0.45 ㎛ PTFE-syringe filter로 여과하여 사용하였다.
<실시예 2> 당귀(
Angelica sinensis
) 추출물의 제조
수득한 당귀(Angelica sinensis) 뿌리를 영하 20℃에서 완전히 냉동시키고, 동결건조기를 이용하여 건조한 뒤 분쇄기로 분쇄하였다. 상기 당귀 뿌리 동결건조 분말 2 g에 10 ㎖의 70% 메탄올을 가한 후 15분 동안 초음파 추출하였다. 초음파 추출한 꾸지뽕 추출물은 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 분리하고 0.45 ㎛ PTFE-syringe filter로 여과하여 사용하였다.
<실시예 3> 지골피(
Lycii Radicis Cortex
) 추출물의 제조
수득한 지골피(Lycii Radicis Cortex)를 영하 20℃에서 완전히 냉동시키고, 동결건조기를 이용하여 건조한 뒤 분쇄기로 분쇄하였다. 상기 지골피 동결건조 분말 2 g에 10 ㎖의 70% 메탄올을 가한 후 15분 동안 초음파 추출하였다. 초음파 추출한 꾸지뽕 추출물은 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 분리하고 0.45 ㎛ PTFE-syringe filter로 여과하여 사용하였다.
<실시예 4> 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 제조
상기 <실시예 1>에서 제조한 꾸지뽕 추출물, <실시예 2>에서 제조한 당귀 추출물 및 <실시예 3>에서 제조한 지골피 추출물을 하기 [표 1]의 조성으로 혼합하여 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 제조하였다.
| 실시예 | 추출물 혼합 조성(㎍/㎖) | 추출물 혼합 비율 | ||
| 꾸지뽕 | 당귀 | 지골피 | 꾸지뽕：당귀：지골피 | |
| 4 | 3 | 2000 | 500 | 0.0015：1：0.25 |
<실험예 1> 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 에스트로겐 수용체(estrogen receptor; ER) 효능제(agonist) 활성 확인
에스트로겐의 생물학적 작용은 에스트로겐이 리간드로서 에스트로겐 수용체(estrogen receptor; ER)와 결합에 의해 매개되고, 상기 ER은 전사 인자로 작용하여 ERE(estrogen response element)에 결합하므로, ERE 리포터, 즉 ER-반응성 루시퍼라제를 이용하여 ER-매개 전사 활성을 확인함으로써 치료제의 효과를 모니터링할 수 있는 것으로 알려져 있다. 따라서 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물이 ER 효능제로 작용하여 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 갱년기 증상을 개선할 수 있는지 알아보기 위하여, ERE-루시퍼라제를 포함하는 플라스미드로 형질감염한 세포에 특정 혼합 비율로 혼합하여 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 처리한 후 ER-매개 전사활성 정도를 측정하였다.
구체적으로, American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입한 에스트로겐 수용체-양성 유방암 세포주 MCF-7은 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’ medium) 배지에 비-필수 아미노산(non-essential amino acids), 항생제/항진균제(antibiotics/antimycotics), 피루브산나트륨(sodium pyruvate) 및 10% 소태아혈청(fetal bovine serum)을 첨가한 용액을 기본배지로 하여 세포를 배양하였다. 평균 일주일에 1회 계대배양(subculture)하였다. 세포 접종(Cell seeding)을 하기 48~60 시간(2~3일) 전 혈청을 덱스트론-차콜(dextran-charcoal)로 3회 처리한 stripped serum을 함유하고, 페놀-레드(phenol-red)가 없는 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)으로 제조된 배지를 이용하여 세포를 배양하였다. 이 배지는 루시퍼라제 활성평가(luciferase assay)가 끝나는 시점까지 계속 사용하였다. 상기 배지를 사용하는 이유는 페놀-레드 자체의 에스트로겐 특성과 혈청에 다량 포함되어 있는 호르몬 및 성장인자 등에 의한 에스트로겐 수용체 상호작용에 의한 결과를 배제하기 위함이다.
그 다음, 상기 배양한 유방암 세포주 MCF-7을 24-웰 플레이트(well plate)에 형질감염 하루 전에 접종(105 cells/well)한 다음, ERE-luciferase plasmid DNA(0.25 ㎍/well)를 Lipofectamine 2000 transfection reagent(Invitrogen)을 이용하여 상기 유방암 세포주에 형질감염하였다.
비교군으로 <실시예 1>에서 제조한 꾸지뽕 추출물, <실시예 2>에서 제조한 당귀 추출물 및 <실시예 3>에서 제조한 지골피 추출물을 사용하였고, 실험군으로 상기 <실시예 4>에서 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 사용하였으며, 추출물 각각은 200 ㎍/㎖의 농도에서 실험을 진행하였다. 한편, 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 세포에 처리하고, 24시간을 더 배양한 후 루시퍼라제 활성평가(luciferase assay)를 수행하였으며, 상기 루시퍼라제 활성평가는 배지를 제거한 후 세포를 차가운 PBS로 2회 세척한 후, 1X passive lysis buffer(Promega)로 세포수용성물질(lysate)을 추출하였고, 50 ㎕의 세포수용성물질에 50 ㎕ luciferase assay reagent (luciferase의 기질이 되는 luciferin과 효소반응에 적당한 완충액을 포함하는 용액, Promega)를 혼합한 후, 발생한 luminescence 세기를 SpectraMax M5e(Molecular Device)를 이용하여 측정하였다. 또한, 비교군 각각의 ER-매개 전사활성 정도의 합 대비 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물 처리군의 ER-매개 전사활성 정도의 %증가값(%Increase)을 다음의 수학식을 이용하여 계산하였다: %Increase=[(꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물 처리군의 ER-매개 전사활성 정도 - 비교군 각각의 ER-매개 전사활성 정도의 합)/비교군 각각의 ER-매개 전사활성 정도의 합]×100.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 혼합 추출물 처리군의 %증가값이 21.2%로, 혼합 추출물에 포함된 농도와 동일한 농도로 처리한 꾸지뽕 추출물 처리군, 당귀 추출물 처리군 및 지골피 추출물 처리군 각각의 ER-매개 전사활성 정도의 합보다 혼합 추출물 처리군의 ER-매개 전사 활성 정도가 현저히 증가함을 확인하였다(도 1).
상기 결과를 통해 본 발명의 혼합 추출물은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 모두 포함하여 ER 효능제로서 시너지 효과를 나타냄을 확인하였다.
<실험예 2> 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 에스트로겐 유사 활성 확인
에스트로겐 활성은 에스트로겐 수용체(estrogen receptor; ER)가 내재적으로 발현되어 있는 세포를 증식시키는 것으로 알려져 있다. 따라서 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물이 에스트로겐과 유사한 작용을 할 수 있는지 알아보기 위하여, 유방암 세포주 MCF-7에 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 처리한 후 세포 증식 정도를 측정하였다.
구체적으로, American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입한 유방암 세포주 MCF-7을 24-웰 플레이트(well plate)에 접종(seeding)한 다음 24시간 동안 배양한 후 대조군에는 디메틸설폭사이드(dimethylsulfoxide, DMSO), 비교군에는 <실시예 1>에서 제조한 꾸지뽕 추출물, <실시예 2>에서 제조한 당귀 추출물 및 <실시예 3>에서 제조한 지골피 추출물을 사용하였으며, 실험군에는 상기 <실시예 4>에서 제조한 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 사용하였고, 추출물 각각은 200 ㎍/㎖의 농도에서 실험을 진행하였다. 그다음 접종 후 1, 3, 5일 차에 각각의 추출물을 세포에 처리하고, 7일차에 생존해있는 세포의 숫자를 정량하기 위하여 세포증식반응 측정법(MTT assay)을 수행하였으며, 상기 세포증식반응 측정법은 MTT, 3-(4, 5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide, yellow tetrazole 0.5 ㎎/㎖를 웰(well) 당 10 ㎕씩 분주하여 넣은 다음 2시간 후 배지를 제거하고, DMSO 100 ㎕를 넣은 후 blue formazan crystal을 녹인 뒤 595 ㎚에서 SpectraMax M5e(Molecular Device)를 이용하여 측정하였다. 또한, 비교군 각각의 세포 생존 정도의 합 대비 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물 처리군의 MCF-7 세포 증식의 %증가값(%Increase)을 다음의 수학식을 이용하여 계산하였다: %Increase=[(꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물 처리군의 MCF-7 세포 증식 정도 - 비교군 각각의 MCF-7 세포 증식 정도의 합)/비교군 각각의 MCF-7 세포 증식 정도의 합]×100.
그 결과, 도 2에서 나타낸 바와 같이, 혼합 추출물 처리군의 %증가값이 31.5%로, 혼합 추출물에 포함된 농도와 동일한 농도로 처리한 꾸지뽕 추출물 처리군, 당귀 추출물 처리군 및 지골피 추출물 처리군 각각의 세포 증식 정도의 합보다 혼합 추출물 처리군의 세포 증식 정도가 현저히 증가함을 확인하였다(도 2).
상기 결과를 통해 본 발명의 혼합 추출물은 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 모두 포함하여 에스트로겐 유사 활성에 시너지 효과를 나타냄을 확인하였다.
<실험예 3> 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물의 안전성 확인
에스트로겐 활성은 자궁내막세포 증식 등의 메커니즘과 직간접적인 연관성이 있는 것으로 알려져 있고, 이에 자궁증식 증상이 에스트로겐류 화합물의 부작용 중 하나로 인식되어 있다. 따라서, 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물이 인체 적용에 있어 안전한지 알아보기 위하여, 자궁내막암 선암 세포주 이시카와(Ishikawa)에 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 투여한 후 자궁 증식 정도를 측정하였다.
구체적으로, American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입한 유방암 세포주 MCF-7 및 자궁내막암 선암 세포주 Ishikawa를 24-웰 플레이트(well plate)에 접종(seeding)하고 24시간 배양한 후 ERE(estrogen response element) 플라스미드(plasmid) 유전자를 형질주입(transfection)시켰다. 그다음 <실시예 4>의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물 시료를 각각 125, 250, 500 및 1000 ㎍로 첨가하였고, 24시간을 더 배양한 후 루시퍼라제 활성평가(luciferase assay)를 수행하였다. 상기 루시퍼라제 활성평가는 배지를 제거한 후 세포를 차가운 PBS로 2회 세척한 후, 1X passive lysis buffer(Promega)로 세포수용성물질(lysate)을 추출하였고, 50 ㎕의 세포수용성물질에 50 ㎕ luciferase assay reagent (luciferase의 기질이 되는 luciferin과 효소반응에 적당한 완충액을 포함하는 용액, Promega)를 혼합한 후, 발생한 luminescence 세기를 SpectraMax M5e(Molecular Device)를 이용하여 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 자궁내막암 선암세포 Ishikawa의 전사활성 정도는 농도별로 증가하였으나, 그 증가 정도가 유방암 세포주 MCF-7의 전사활성의 결과와 비교하여 약 11배 낮은 것을 확인하였다(도 3).
상기 결과를 통해 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물이 ER 효능제로서 자궁 증식의 부작용이 없고 안전함을 확인하였다.
따라서 상기 <실험예 1> 내지 <실험예 3>의 결과를 통해 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물이 에스트로겐 활성을 갖고 부작용 없이 ER 효능제로 작용함을 확인하였으므로, 본 발명의 꾸지뽕, 당귀 및 지골피 혼합 추출물을 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 갱년기 증상을 예방 및 치료하기 위한 여성호르몬 대체요법에 이용할 수 있다.
이하, 본 발명에 따른 각 제제의 제조예를 예시한다. 하기 제조예는 본 발명의 실시에 대한 이해를 돕기 위한 것이지 본 발명에 따른 제형의 제조방법이 하기 제조예로 한정되는 것을 의미하지 않는다.
<제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 혼합 추출물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 혼합 추출물 100 mg
미결정셀룰로오스 100 mg
유당 100 mg
전분글리콘산 나트륨 18 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 혼합 추출물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
본 발명의 혼합 추출물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5> 과립의 제조
본 발명의 혼합 추출물 150 mg
대두 추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 2> 식품의 제조
<2-1> 과자 및 분식의 제조
본 발명의 혼합 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
<2-2> 유제품의 제조
본 발명의 혼합 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-3> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 혼합 추출물을 진공 농축기에서 감압 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 SBE의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
본 발명의 꾸지뽕 추출물 또는 이의 효소 가수분해물 건조분말(3 중량부),
영지(0.5 중량부), 및 지황(0.5 중량부)
<제조예 3> 음료의 제조
본 발명의 혼합 추출물 1000 mg
구연산 1000 mg
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강식품 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Claims (16)
- 꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 추출물, 당귀(Angelica sinensis) 추출물 및 지골피(Lycii Radicis Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 꾸지뽕 및 당귀 추출물은 꽃, 가지, 줄기, 잎, 열매, 지상부, 뿌리줄기 및 뿌리 중 선택된 어느 하나 이상의 추출물인 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 꾸지뽕 추출물：당귀 추출물：지골피 추출물을 1：1 내지 1000：1 내지 500의 중량비로 함유하는 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 꾸지뽕 추출물：당귀 추출물：지골피 추출물을 1：300 내지 800：50 내지 400의 중량비로 함유하는 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 여성 갱년기 증상은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 에스트로겐 수용체(estrogen receptor) 효능제(agonist)인 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 에스트로겐 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 제10항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 제10항에 있어서, 상기 꾸지뽕 및 당귀 추출물은 꽃, 가지, 줄기, 잎, 열매, 지상부, 뿌리줄기 및 뿌리 중 선택된 어느 하나 이상의 추출물인 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 제10항에 있어서, 상기 조성물은 꾸지뽕 추출물：당귀 추출물：지골피 추출물을 1：1 내지 1000：1 내지 500의 중량비로 함유하는 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 제10항에 있어서, 상기 여성 갱년기 증상은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 꾸지뽕 추출물, 당귀 추출물 및 지골피 추출물을 유효성분으로 함유하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 제15항에 있어서, 상기 여성 갱년기 증상은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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2022
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