KR20200136721A - 동충하초 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
동충하초 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 에스트로겐 활성이 입증되고, 여성 갱년기 유도 동물 모델에서 여성 갱년기에 의해 유도된 체중 증가, 식이 증가, 체지방 및 복부 지방을 감소하여, 여성 갱년기 증상 및 여성 갱년기 증상과 동반되는 비만을 예방 또는 개선에 우수한 효과가 있다.
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Description
본 발명은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
여성의 갱년기는 40~50 대에 나타나며, 난소의 노화로 인한 에스트로겐 즉, 여성 호르몬의 분비 감소에 기인하며, 폐경을 전후로 약 2~10 년에 걸쳐 나타난다.
여성의 갱년기에 의한 증상은 다섯 가지 분류로 구분되며, 구체적으로 첫째 혈관성 변화에 의한 증상으로 안면홍조, 빈맥, 발한, 두통이 있고, 둘째 근골격계 변화에 의한 증상으로 근육통, 관절통, 요통이 있으며, 셋째 비뇨생식기 변화에 의한 증상으로 빈뇨, 뇨실금이 있고, 넷째 뇌신경계 변화에 의한 증상으로 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴, 현기증이 있으며, 다섯째 일반적 변화에 의한 증상으로 시력 감퇴, 피부 및 모발의 변화가 있다.
상기 여성 갱년기 증상들은 정도의 차이는 있으나, 폐경 전·후 여성의 약 80%가 경험하고 있다. 무엇보다도 주목할 만한 사실은 갱년기를 거치면서 여성의 생명에 영향을 미치는 중요한 변화가 장기간에 걸쳐 발생하는데 그것은 골다공증과 심혈관계 질환의 발생 위험성 증가이다. 이러한 여성 갱년기 증상들을 고려해 볼 때 갱년기 증후군이 중년 여성들의 신체적, 정신적 건강 및 삶의 질적인 면에서 지대한 영향을 미침을 알 수 있다. 따라서, 이를 치료할 수 있는 방법이 절대적으로 필요하다.
종래에는 여성의 갱년기 증상을 치료하기 위하여, 호르몬 대체요법, 비스테로이드계 제제 및 골다공증 치료를 위한 약물 치료법 등이 개발되었고, 이중에서 지금까지 가장 효과적으로 알려진 방법은 호르몬 대체요법이다.
「호르몬 대체요법」은 폐경 여성에서 여성 호르몬의 결핍으로 인하여 나타나는 증상을 경감시키기 위하여 여성 호르몬을 투여하는 치료법을 의미한다. 여성 호르몬을 단독으로 투여하는 경우 자궁내막 증식이 발생할 수 있어 보통 황체호르몬을 병합 투여한다.
그러나, 호르몬 대체요법의 경우, 5~10 년 이상 장기적으로 시행 시 암 (유방암, 자궁내막암 등) 발병 가능성에 대한 논쟁이 있고, 두통, 체중 증가 또는 심혈관 질환 발생 등의 부작용이 있으며, 인위적인 호르몬 투여에 대한 반감 및 월경 재개 가능성 등으로 인하여 많은 국내 여성들이 호르몬 요법에 대해 거부감을 가지고 있다. 이러한 점들을 고려해 볼 때, 여성 갱년기 증상에 대한 치료의 필요성은 느끼나, 갱년기 여성들의 상당수가 통원 치료나 투약에는 소극적일 것으로 추측된다.
2018년 기준, 우리나라 여성의 평균수명이 84세임을 고려해 볼 때, 생애의 약 1/3 이상이 폐경 후의 삶이며, 대략 4백 50만명의 여성이 폐경기 여성에 해당하므로, 일반 갱년기 여성들을 대상으로 안전하고 복용이 편리한 여성 갱년기 증상을 개선할 수 있는 치료용 성분의 개발이 절실히 요구되고 있다.
한편, 대부분의 갱년기 여성은 폐경 전 여성보다 허리둘레, 수축기 혈압, 맥압, 총 콜레스테롤, 저밀도 지단백 콜레스테롤 및 중성지방이 높다고 보고되고 있다. 특히, 갱년기 여성들은 여성 호르몬의 변화에 의해 대사적 변화가 많이 나타나는 시기이며, 특히 이 시기의 갱년기 여성들은 체지방이 증가하여 비만에 노출될 위험이 크다. 중년 여성들의 비만은 관상동맥, 심장질환, 뇌졸중, 당뇨병, 고혈압 등의 사망률을 증가시키는 성인병의 발병과 매우 관련이 높은 시기이다.
이처럼 갱년기의 여성들은 각종 성인병 등의 발병과 관련이 높은 비만에 노출될 위험 또한 크며, 여성 갱년기 증상뿐만 아니라, 함께 동반되는 비만을 개선하기 위한 노력이 필요하다.
이러한 배경 하에, 본 발명의 발명자들은 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료제를 연구하던 중, 동충하초 농축액이 여성 호르몬의 변화에 따라 발생하는 여성 갱년기 증상의 예방 또는 치료가 가능하며, 여성 갱년기에 의해 유도된 비만을 개선시키는 효과를 나타내어, 여성 갱년기 증상 및 여성 갱년기에 의해 유도된 비만의 예방 및 치료에 유용하게 사용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 여성 갱년기 증상의 예방 또는 치료에 대한 연구의 필요성을 인지하고 여성 갱년기 증상을 예방 또는 치료할 수 있는 천연 물질에 대한 연구의 목적을 달성하고자 하였다.
구체적으로, 본 발명의 발명자들은 여성 갱년기 증상에 대한 치료가 높은 성분을 탐색하던 중, 코디세핀(Cordycepin)을 함유하는 동충하초가 여성 갱년기 증상 및 여성 갱년기에 의해 유도된 비만을 개선하는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 여성 호르몬인 에스트로겐 활성이 있어 여성 호르몬 저감으로 인한 여성 갱년기 증상을 예방 또는 치료할 수 있음을 확인하였고, 또한, 여성 갱년기 유도 동물 모델에서 체중 증가 억제, 복부 지방 감량 및 혈중 지질 개선 효과가 있음을 확인함으로써, 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 여성 갱년기에 의해 유도되는 비만을 억제하는 효과가 우수하다는 것을 확인하였다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.
동충하초(
Cordyceps militaris
) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
최근 부작용이 없는 여성 갱년기 증상의 예방 또는 치료제에 대한 연구의 필요성이 지속적으로 대두되고 있다.
구체적으로, 여성 갱년기 치료제로 에스트로겐을 투여하는 호르몬 대체요법이 가장 효과적인 방법으로 알려져 있으나, 장기간 약물을 사용하면 자궁내막암, 유방암, 고혈압, 혈전증, 당뇨계 결석 등을 일으킬 수 있으며, 출혈과 난소 과잉자극 등의 부작용으로 인하여 의사의 처방 없이는 복용할 수 없다는 문제점이 있다.
그러나, 아직까지 여성 갱년기 증상에 효과적으로 예방 또는 치료 효과를 나타내는 천연 물질에 대한 연구가 미비한 실정이다. 본 발명자들은 연구가 전무한 동충하초 농축액을 활용해 여성 갱년기 증상의 예방 또는 치료 효과를 확인한 결과, 본 발명의 약학적 조성물은 천연 물질인 “동충하초 농축액”을 유효성분으로 포함하기 때문에, 에스트로겐 주입 시의 부작용이 나타나지 않으며, 여성 호르몬인 에스트로겐 활성이 있어 여성 호르몬 저감으로 인한 여성 갱년기 증상을 예방 또는 치료할 수 있으면서도 여성 갱년기 유도 동물 모델에서 체중 증가 억제, 복부 지방 감량 및 혈중 지질 개선 효과가 있음을 확인하였다.
본 명세서에 있어서, 용어 「동충하초(Cordyceps militaris)」는, 사상균의 일종으로 곤충에 기생하며, 숙주인 곤충을 죽이고 곤봉 모양 또는 줄 모양 등의 자실체를 낸다. 자실체는 머리·줄기의 2부분으로 이루어 지며, 머리부분은 공 모양, 양 끝이 뾰족한 원기둥 모양, 주걱 모양 등으로 불룩해지며, 그 표면 또는 표피 아래에 여러 개의 자낭각을 이룬다. 동충하초(Cordyceps militaris)는 한방에서는 약용버섯으로 이용되며, 약용버섯으로 한국, 일본, 중국, 네팔 등에 분포되어 있다. 동충하초(Cordyceps militaris)는 인삼, 녹용과 더불어 중국의 3대 보약 중의 하나로 불로장생 및 강장의 비약으로 알려져 있으며, 기능성 지표물질인 코디세핀이 다량 존재하고 면역력 증강, 노화억제, 피로회복과 같은 효능이 있는 것으로 보고 되어 있다. 또한, 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 항염증 및 림프종, 백혈병, 방광암 등 항암활성과 면역력 조절 및 강화 효과가 있다고 보고되었다.
본 명세서에 있어서, 용어 「농축액」은, 음용 가능한 액체로 희석되어 음료를 제공할 수 있거나 소비되기 전에 음식 제품에 첨가되는 액체 조성물을 지칭하는 것으로서, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 농축 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다.
본 명세서에 있어서, 용어 「유효 성분」은 내재된 약리작용에 의해 그 조성물의 효능 효과를 직접 또는 간접적으로 발현한다고 기대되는 물질 또는 물질군(약리학적 활성성분 등이 밝혀지지 않은 생약 등을 포함한다)으로서 주성분을 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서에 있어서, 용어 「여성 갱년기 증상」은, 노화에 따른 난소 기능 저화 및 여성 호르몬 저하로 인해 신체에 나타나는 모든 증상을 의미한다. 상기 여성 갱년기 증상은 주로, 혈중 지질 장애, 골밀도 감소, 체지방 증가, 복부 비만, 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질 염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통, 골다공증으로 나타날 수 있으나, 특히, 여성 갱년기 증상은 비만과 동반되는 체중 증가, 체지방 증가 및 복부 지방 증가를 의미한다.
본 명세서에 있어서, 용어 「예방」은, 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여로 여성 갱년기 증상을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.
본 명세서에 있어서, 용어 「치료」는, 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여로 여성 갱년기때 나타나는 증상이 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올 용매 하에 추출하여 제조될 수 있다.
본 명세서에 있어서, 용어 「탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올」은, 물을 함유하지 않은 저급 알코올로써, 예컨대 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 용어 「탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올」은, 물과 혼합된 저급 알코올로 예컨대 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올과 물의 혼합용매이며, 구체적으로는 물과 에탄올의 혼합용매일 수 있고, 이때 물과 에탄올의 혼합 비율은 물과 에탄올을 7 : 3 내지 3 : 7 부피 비율로 혼합한 30%(v/v) 내지 70%(v/v) 에탄올 수용액일 수 있고, 구체적으로는 물과 에탄올을 5 : 5 부피 비율로 혼합한 50%(v/v) 에탄올 수용액 일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 코디세핀(codycepin)을 함유하며, 상기 코디세핀(codycepin)의 함량은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 총 중량에 대해 0.02 내지 10 중량%일 수 있고, 구체적으로는 0.1 내지 5 중량%이거나, 0.2 내지 2 중량%의 높은 함량으로 함유할 수 있다.
본 명세서에 있어서, 용어 「코디세핀(codycepin)」은, 동충하초에 함유된 항세균, 항진균, 항바이러스 효과, 혈소판응집 억제 효과 및 면역증강을 통한 항암 효과 등이 알려진 생리활성물질 중 하나로, 3-deoxyadenosine 계통의 천연화합물이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 여성 갱년기 증상은 여성 호르몬 감소로 인한 것일 수 있다.
본 명세서에 있어서, 용어 「여성 호르몬」은, 난소에서 분비되는 호르몬으로, 난포호르몬(FSH)인 에스트로겐(estrogen)과 황체호르몬(LH)인 프로게스테론(progesteron)을 의미할 수 있으며, 구체적으로 에스트로겐을 의미한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 여성 갱년기 증상은 혈중 지질 장애, 골밀도 감소, 체지방 증가, 복부 비만, 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질 염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통, 골다공증 또는 그의 조합일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 (S1) 동충하초(Cordyceps militaris)와 제1 추출 용매를 혼합하고 추출하여 1차 추출액을 수득하는 제1차 추출 단계 및 상기 제1차 추출 단계를 거친 동충하초(Cordyceps militaris) 고형물과 제2 추출 용매를 혼합하고 추출하여 2차 추출액을 수득하는 제2차 추출 단계에 의해 수득될 수 있다.
상기 제1 추출 용매는 동충하초(Cordyceps militaris)를 세척하여 이물질을 제거하고, 건조를 통해 수분을 제거한 후, 건조된 동충하초(Cordyceps militaris)와 혼합되는 추출 용매를 의미한다. 상기 제1 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올 용매일 수 있으며, 상기 기재된 내용과 동일하게 적용이 가능하다.
상기 제1차 추출 단계는 건조된 동충하초(Cordyceps militaris)와 제1 추출 용매를 혼합하는 것으로, 동충하초(Cordyceps militaris)의 kg당 5L 내지 20L의 제1 추출 용매가 혼합될 수 있으며, 구체적으로는 동충하초(Cordyceps militaris) 20 kg에는 50L 내지 400L의 제1 추출 용매가 혼합될 수 있고, 구체적으로는 동충하초(Cordyceps militaris) 20 kg에는 100L 내지 300L의 제1 추출 용매가 혼합될 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 제1차 추출 단계는 동충하초(Cordyceps militaris)와 제1 추출 용매가 혼합된 상태로 24 시간 내지 120 시간 동안 추출할 수 있고, 구체적으로는 48 시간 내지 96 시간 동안 추출할 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 1차 추출액은 상기 제1차 추출 단계를 거치고 분리된 액상의 용액을의미한다.
상기 제2 추출 용매는 상기 제1차 추출 단계를 거친 고상의 동충하초(Cordyceps militaris) 고형물과 혼합되는 추출 용매를 의미한다. 상기 제2 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올 용매일 수 있으며, 상기 기재된 내용과 동일하게 적용이 가능하다.
상기 제2차 추출 단계는 상기 제1차 추출 단계를 거친 고상의 동충하초(Cordyceps militaris) 고형물과 제2 추출 용매를 혼합하는 것으로, 동충하초(Cordyceps militaris)의 kg당 1L 내지 4L의 제2 추출 용매가 혼합될 수 있고, 구체적으로 동충하초(Cordyceps militaris) 20 kg에는 20L 내지 80L의 제2 추출 용매가 혼합될 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 제2차 추출 단계는 동충하초(Cordyceps militaris) 고형물과 제2 추출 용매가 혼합된 상태로 1 시간 내지 10 시간 동안 추출할 수 있고, 구체적으로는 2 시간 내지 6 시간 동안 추출할 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 2차 추출액은 제2차 추출 단계를 거치고 분리된 액상의 용액을 의미한다.
본 발명에 따른 조성물의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 추출하는 방법은 열수 추출, 침지 추출, 초음파 추출, 진탕 추출, 속실렛(Soxhelt) 추출 또는 환류 추출을 이용할 수 있으며, 구체적으로는 물과 에탄올 혼합한 50% 에탄올을 이용한 진탕 추출일 수 있고, 이에 한정되지 않는다. 추출 횟수는 1회 내지 5회 일 수 있고, 구체적으로는 1회 내지 3회 일 수 있으며 이에 한정되는 것은 아니다. 추출 시간은 1 시간 내지 120 시간일 수 있고, 구체적으로는 3 시간 내지 96 시간 동안 추출을 수행할 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 추출 온도는 20℃ 내지 40℃일 수 있고, 구체적으로는 25℃ 내지 35℃일 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 추출 용매의 양은 동충하초(Cordyceps militaris) 건조 중량의 1 내지 20 배로 한다. 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 포함하는 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 중량% 내지 95 중량%의 함량을 가진다.
본 발명에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 하기 단계를 더 포함하여 수득하는 것일 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 상기 제1차 추출 단계 및 제2차 추출 단계 이후에 (S2) 상기 1차 추출액 및 상기 2차 추출액을 규조토 여과보조제를 사용하여 감압 여과하여 여과액을 수득하는 여과 단계 및 (S3) 상기 여과액을 감압 농축하여 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 수득하는 농축 단계로 수득될 수 있다.
상기 여과는 당업계의 통상의 방법에 따라 용액을 여과하거나 원심분리를 통해 여액 또는 상등액을 수득할 수 있다. 상기 농축은 바람직하게 감압 농축이며, 감압 농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 이러한 농축에 의해 액상 또는 분말 형태로 동충하초 농축액을 추출한다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 함유하고, 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화될 수 있다.
본 명세서에 있어서, 용어 「약학적으로 허용 가능한」은, 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.
본 명세서에 있어서, 용어 「약학적으로 허용 가능한 담체」는, 전형적으로 약학적 조성물의 액체 또는 비액체 기초를 포함한다. 만약 약학적 조성물이 액체 형태로 제공된다면, 담체는 전형적으로 피로겐 없는 물; 등장성 식염수 또는 버퍼(수용성) 용액, 예를 들어 인산염, 구연산 등 버퍼 용액이다. 주사 버퍼는 특정한 기준 매질(Reference media)에 고장성, 등장성 또는 저장성 기준일 수 있어, 즉 버퍼는 특정한 기준 매질에 높은, 같은 또는 낮은 염 함량을 가질 수 있으며, 바람직하게는, 삼투압 또는 다른 농도 효과에 의한 세포 손상을 유도하지 않는, 앞서 언급된 염의 상기 이러한 농도가 사용될 수 있다. 기준 매질은 혈액, 림프, 세포질 액상, 또는 다른 체액, 또는 예를 들어 일반적인 버퍼 또는 액체로써 "생체 외" 방법에 기준 매질로 사용될 수 있는 체액과 같은, 예를 들어 "생체 내" 방법에서 발생하는 액체이다. 이러한 일반적 버퍼 또는 액체는 통상의 기술자에게 알려져 있다.
상기 약학적으로 허용가능한 담체는 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들, 예컨대 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제, 기타 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 액상제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제 또는 엑스제의 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여(예를 들어, 도포 또는 정맥 내, 피하, 복강 내 주사)할 수 있다.
본 명세서에 있어서, 용어 「경구 투여」는 병리학적 증상을 호전하기 위한 약제를 입으로 주입하는 방법이며, 본 명세서에 있어서, 용어 「비경구투여」는 입으로 투여하는 것을 제외한 피하, 근육내, 정맥, 튜브를 이용한 복강내로 투여하는 방법을 의미한다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캡슐제, 환제 등이 포함된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액상제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 멸균된 수용액, 액상제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 점안제, 안연고제, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 안연고제, 점안제, 파스타제 또는 카타플 라스마제의 약제학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 국소 투여의 조성물은 임상적 처방에 따라 무수형 또는 수성형일 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1~99.9 중량부 포함될 수 있으며, 구체적으로는 0.1~50 중량부를 포함할 수 있고, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 환자의 연령, 성별 및 비만의 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 40 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 20 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다.
투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 조성물은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
동충하초(
Cordyceps militaris
) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물
본 발명은 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물은 체중감소 억제 효과, 에스트로겐 수용체 활성화 등을 통해서 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료에 우수한 효과를 보인다. 또한, 경구 투여를 통해서도 우수한 작용 효과를 보여 복약 순응도가 매우 높다.
본 명세서에 있어서, 용어 「개선」은, 본 발명에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 포함하는 약학적 조성물을 투여하거나 섭취하여 여성 갱년기에 나타나는 모든 나쁜 상태를 좋게 하는 행위를 의미한다.
본 발명의 식품 조성물은 건강 기능 식품으로서 사용될 수 있다. 본 명세서에서 용어 「건강 기능 식품」 이라 함은, 건강 기능 식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, 본 명세서에서 용어 「인체에 유용한 기능성」이라 함은, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 건강 기능 식품 또는 건강 기능 음료 첨가물로 사용할 경우, 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 그대로 첨가하거나 통상의 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안정청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 “식품 첨가물 공전”에 기재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다. 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 혼합량은 그의 사용목적(예방, 건강 또는 개선, 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우, 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에, 장기간 복용이 가능하다.
본 발명의 식품 조성물은 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있으며, 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿류, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등에 사용될 수 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 환 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다. 상기 기재한 것 외에도 모든 식품 형태일 수 있다.
음료수로 제형화할 경우에 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 이외에 첨가되는 액체 성분으로는 이에 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드(예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 이외에도 감미제로서 천연 감미제[타우마린, 스테비아 추출물(예, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 감미제(예, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
다른 실시양태로서, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 점증제, pH 조절제, 안정화제, 보존제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
다른 실시양태로서, 본 발명의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 포함된 제품은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제 또는 음료일 수 있다.
여성 갱년기 증상의 예방, 개선 또는 치료방법
본 발명은 치료학적으로 유효한 양의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 치료가 필요한 대상체에게 투여하여 여성 갱년기 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에서 용어 「치료가 필요한 대상체」는, 인간을 위시한 포유동물을 의미하고, 용어 「투여」는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미한다. 용어 「치료학적으로 유효한 양」은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 활성 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다.
여성 갱년기 증상의 치료를 위한 약제학적 제제를 제조하는 데 상기 동충하초(
Cordyceps militaris
) 농축액을 사용하는 용도
본 발명은 여성 갱년기 증상의 치료를 위한 약제학적 제제를 제조하는 데 상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 사용하는 용도를 제공한다. 본 발명의 용도는 여성 갱년기 증상을 에방, 개선 또는 치료하여 여성 갱년기 증상의 치료를 위한 약제학적 제제를 제조하는 데 이용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물, 식품 조성물, 치료방법 및 용도에서 언급된 사항은 서로 모순되지 않는 한 동일하게 적용된다.
본 발명의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 에스트로겐 활성이 입증되고, 여성 갱년기 유도 동물 모델에서 여성 갱년기에 의해 유도된 체중 증가, 식이 증가, 체지방 및 복부 지방을 감소하여, 여성 갱년기 증상 및 여성 갱년기 증상과 동반되는 비만을 예방 또는 개선에 우수한 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 에스트로겐 자극으로 증식하는 MCF-7 세포에 처리함에 따라 세포 증식 여부를 확인함으로써, 에스트로겐 유사 활성을 확인한 그래프이다.
도 2는 퀸즈원정(Queens One Tab)을 에스트로겐 자극으로 증식하는 MCF-7 세포에 처리함에 따라 세포 증식 여부를 확인함으로써 에스트로겐 유사 활성을 확인한 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른, 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 에스트로겐 수용체 반응을 확인하기 위한, ERα 및 인산화 ERα(pERα)의 발현을 측정한 웨스턴 블럿 결과를 나타내는 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 체중 감소 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 식이 섭취 변화를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 지방 함량(%) 변화를 나타내는 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 전신을 이중 에너지 X-선 흡수법(dual energy X-ray absorptiometry)으로 촬영한 사진으로 파랑, 노랑, 빨강 순서로 저밀도, 중밀도, 고밀도 지방을 의미한다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 혈청 지질 조성의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 2는 퀸즈원정(Queens One Tab)을 에스트로겐 자극으로 증식하는 MCF-7 세포에 처리함에 따라 세포 증식 여부를 확인함으로써 에스트로겐 유사 활성을 확인한 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른, 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 에스트로겐 수용체 반응을 확인하기 위한, ERα 및 인산화 ERα(pERα)의 발현을 측정한 웨스턴 블럿 결과를 나타내는 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 체중 감소 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 식이 섭취 변화를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 지방 함량(%) 변화를 나타내는 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 전신을 이중 에너지 X-선 흡수법(dual energy X-ray absorptiometry)으로 촬영한 사진으로 파랑, 노랑, 빨강 순서로 저밀도, 중밀도, 고밀도 지방을 의미한다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른, 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 혈청 지질 조성의 변화를 나타내는 그래프이다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.
본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예, 제조예를 제시한다. 하기의 실시예, 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 실시예에서 사용되는 동충하초는 대한민국 주식회사 머쉬텍에서 구입하였으며, 이하에서 언급된 시약 및 용매 등은 특별한 언급이 없는 한 Sigma-Aldrich사로부터 구입하였다.
본 발명에서 상온은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미이며, 특별한 언급이 없는 한 20℃ 내지는 30℃ 범위의 일반적인 실험실 온도를 뜻한다.
실시예
실시예 1: 동충하초(
Cordyceps militaris
) 농축액의 제조
동충하초(Cordyceps militaris) 20 kg을 추출조에 투입하였다. 추출조에 제1 추출 용매인 50%(v/v)의 에탄올 수용액 200L를 첨가한 후, 상온에서 72 시간 동안 1차 추출하였다.
이후, 추출조에서 액상의 용액을 분리하고, 남은 동충하초(Cordyceps militaris) 고형물이 있는 추출조에 제2 추출 용매인 50%(v/v)의 에탄올 수용액 44L를 추가로 첨가하고 4 시간 동안 2차 추출하였다.
1차 추출액과 2차 추출액을 혼합하여 규조토 여과보조제를 사용하여 감압 여과하여 여과액을 수득하였다.
여과액을 65 brix 이상까지 30 mmHg 조건에서 감압 농축하여 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 수득하였다.
-수득량: 1.67 kg
-수율: 8.4%
-코디세핀 함량: 0.976%
측정방법
<방법 1> 동충하초(
Cordyceps militaris
) 농축액에 함유된 코디세핀 함량 측정
상기 실시예 1의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액에 함유된 코디세핀의 함량을 측정하기 위해, 하기 조건으로 HPLC 분석을 수행하였다.
약 100 mg의 상기 실시예 1의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 10 mL 용량 플라스크에 넣고 교반기로 교반하면서 5 mL 증류수에 용해하였다. 그 후 5 mL 에탄올을 추가하여 흔들어 섞은 다음, 20분간 초음파로 진탕하였다. 액을 식힌 후 약 1 mL을 취하여 1.5 mL EP tube에 옮겨 담고 13,000 RPM에서 5분간 원심분리하여 상등액을 검액으로 사용하였다. 20.0 mg 코디세핀을 50% 에탄올에 용해한 후, 100 mL로 정용하는 방식으로 여러 차례로 희석하여 5~ 50 μg/mL의 농도범위에서 검량용 표준용액을 조제하였다. 검액 및 표준액 10ul를 하기 표 1 조건에 따라 액체크로마토그래피를 이용하여 코디세핀의 함량을 측정하였다.
코디세핀의 함량은 검액과 표준액의 농도 및 피크 면적으로부터 검량선을 구하고, 여기에 코디세핀의 피크 면적을 대입하여 코디세핀 농도를 계산하였다. 코디세핀 함량 (%)를 계산하는 식은 하기와 같다.
[식 1]
코디세핀 (C10H13N5O3)함량 (%)=(CS/WS)ⅹfⅹP
-CS; 농축액에 함유된 코디세핀의 농도(mg/mL)
-WS; 칭량한 농축액의 양(mg)
-f; 희석 배수
-P; 코디세핀 표준품의 함량 (%/100)
[표 1]
<방법 2> 동충하초(
Cordyceps militaris
) 농축액의 당도 평가
상기 실시예 1의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 65 brix 이상임을 확인하기 위해 당도측정기(refractometer)에 적량을 넣어 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 당도를 평가하였다.
<방법 3> MCF-7 세포의 세포 증식 평가
실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 에스트로겐 활성 여부를 세포 단계에서 평가하기 위해, 여성 호르몬인 에스트로겐에 대한 증식 활성이 있는 MCF-7(Michigan Cancer Foundation-7) 세포를 이용하였다.
MCF-7 세포는 10% dextran-coated charcoal-stripped FBS가 포함되어 있는 Phenol red-free RPMI1640배지(Gibco)에서 배양하였다. MCF-7 세포를 6 well plate에 3×105 cells/well의 농도로 분주한 후 37℃ 5% CO2 조건에서 배양하고, 24시간 후에 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 5, 10, 25 μg/mL 로 처리하였다. 에스트로겐 활성 효과를 비교하기 위한 양성 대조군으로 에스트로겐 활성 효과가 입증된 퀸즈원정 (경진제약사)을 처리하였다. 아무것도 처리되지 않은 상태의 세포 수 대비 각 시료를 처리한 후의 세포 수를 측정하여 세포 증식 비율(단위: %)을 측정하였다.
또한, 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 에스트로겐 자극으로 증식하는 MCF-7 세포에 처리함에 따라 세포 증식 여부를 확인함으로써, 에스트로겐 유사 활성임을 확인하기 위해 MCF-7 세포에 에스트로겐 수용체의 길항제 (antagonist)인 ICI 182,780 1 μM을 각각의 농도의 시료와 동시에 처리하여 세포 증식의 변화를 측정하였다.
<방법 4> MCF-7 세포의 에스트로겐 수용체 활성 평가
실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 처리된 MCF-7 세포에서 에스트로겐 수용체의 변화를 확인하기 위해, 웨스턴 블럿으로 ERα(Estrogen receptor alpha)의 인산화 정도를 확인하였다.
구체적으로, MCF-7세포는 10% fetalbovine serum(FBS, Gibco), penicillin G(100 μg/mL), streptomycin sulfate(100 μg/mL)이 포함되어 있는 RPMI1640 배지(Gibco)에서 37℃온도와 5% CO2가 공급되는 습윤한 조건으로 배양하고, 동충하초 농축액을 처리하였다.
1시간 배양 후 1X RIPA buffer (Tech&innovation)를 이용하여 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질을 BCA (Bicinchoninic acid, Sigma) 정량법을 이용하여 total 단백질을 정량한 후 SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel)을 이용하여 분리하였고, 분리된 단백질을 PVDF membrane (Immobilon-P membrane, Merck Millipore)에 이동시킨 후 항체을 반응시켰다. 실험에 사용된 1차 항체는 ERα (1:2000, cell signaling), phospho-ERα (ser118) (1:2000, cell signaling), GAPDH(1:5000, cell signaling)를 사용하였고, 2차 항체는 horseradish peroxidase가 부착된 anti-mouse 항체(1:3000, cell signaling) 및 anti-rabbit 항체(1:3000, cell signaling)를 사용하였다. 밴드는 SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate (Thermo Scientific) 와 fusion solo (VILBER LOURMAT)를 이용하여 ERα, pERα 및 GAPDH의 발현양을 측정하였다.
<방법 5> 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델 제작 및 투여방법
(1) 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델 제작
본 발명의 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 여성 갱년기 증상 개선 효과를 확인하기 위해, 여성 갱년기 증상이 유도된 동물 모델을 제작하였다.
실험에 사용된 동물은 랫드 7 주령 암컷을 사용하였으며, 수술을 실시하지 않은 정상군, 난소를 절제하지 않고 개복수술을 진행한 군(sham), 난소를 수술로 절제한 난소절제군으로 평균 체중이 동일하게 랫드를 분류하였다. 상기 방법을 통해 랫드의 난소를 절제함으로써 여성 갱년기 증상이 유도된 랫드를 준비하였다.
(2) 투여방법
실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 난소절제군에게 37.5, 75, 150 mg/kg 용량으로 1일 1회 식이 투여하였고, 이를 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군으로 명명하였다.
효과의 비교를 위해, 음성 대조군으로 난소절제군에 증류수(DW)를 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 대신에 투여하였고, 이를 증류수 투여군으로 명명하였다. 또한, 양성 대조군으로 난소절제군에 β-estradiol를 0.01 mg/kg을 1일 1회 식이 투여하였고, 이를 β-estradiol 투여군으로 명명하였다.
<방법 6> 지방량 측정
실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 여성 갱년기 증상 유도 동물모델에서 지방량 변화를 측정하기 위해, 각 실험군 랫드의 전신을 INALYZER(MEDIKORS)를 이용하여 이중 에너지 X 선 흡수법(the dual energy X-ray absorptiometry)으로 체지방을 분석하였다.
<방법 7> 혈청 지질 조성 변화
실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 여성 갱년기 증상 유도 동물모델에서 혈청 지질 조성에 끼치는 영향을 평가하기 위해, 각 실험군 랫드로부터 혈액을 채취하고, Accute TBA-40FR kit(Toshiba Medical Systems Co., Japan)를 이용하여 제조사의 프로토콜에 따라 트리글리세라이드(TG), 총 콜레스테롤(CHOL), 고밀도 지질 단백질(HDL) 및 저밀도 지질 단백질(LDL)의 혈중 함량을 측정하였다.
실험예
실험예 1: 에스트로겐 활성 평가
(1) MCF-7 세포의 세포 증식 평가
상기 방법 3에 따라 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 5, 10 및 25 μg/mL 로 처리하였을 때, 각각 107.9%, 126.1% 및 135.7% 로 농도가 증가함에 따라 세포 증식 효과가 향상되는 것을 확인하였고, ICI 182,780를 동시에 처리한 경우 세포 증식이 억제되었다 (도 1 참조).
또한, 양성 대조군인 퀸즈원정을 25, 50 및 100 μg/mL로 처리하였을 때, 각각 111.2%, 118.5%, 124.8%로 세포가 증식되는 것을 확인하였고, ICI 182,780를 동시에 처리한 경우 세포 증식이 억제되었다 (도 2 참조).
상기의 결과를 통해 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 투여함에 따라 에스트로겐 자극으로 증식하는 MCF-7 세포가 증식함으로써 에스트로겐 유사 활성을 확인하였다. 또한, 에스트로겐 수용체의 길항체인 ICI 182,780와 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 동시에 처리하였을 때, 세포 증식이 억제되는 것을 보아, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 에스트로겐 수용체와 작용하는 에스트로겐 유사 활성이 있다는 것을 입증하였다.
특히, 기존의 여성 갱년기 치료제인 퀸즈원정은 25 μg/mL 농도에서 MCF-7가 11.2% 증가되는 반면, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 25 μg/mL의 농도에서 MCF-7 세포가 35.7%로 퀸즈원정에 3배 이상 향상됨을 확인함으로써, 상기의 결과를 통해 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 기존의 여성 갱년기 치료제보다 에스트로겐 유사 활성이 우수하다는 것을 입증하였다.
(2) MCF-7 세포의 에스트로겐 수용체 활성 평가
<방법 4>에 따라 MCF-7 세포에 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 10, 25 μg/mL를 처리하고, 에스트로겐 수용체인 ERα 와 ERα의 인산화 형태인 pERα의 발현 정도를 웨스턴 블럿으로 확인하였다 (도 3 참조).
ERα(Estrogen receptor alpha)는 에스트로겐에 반응하는 핵 수용체로서 MCF-7 세포에서는 에스트로겐 자극에 의해 인산화 되어 세포 증식과 같은 신호 전달을 조절하게 된다. 즉, 인산화된 ERα(pERα)이 발현된다는 것은 ERα이 에스트로겐과 동등한 자극을 받았다는 것을 의미한다.
도 3을 참고하면, 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 처리하였을 때, pERα이 발현되는 것을 확인하였으며, 상기의 결과를 통해 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 에스트로겐 수용체에 반응한다는 것을 입증하였다.
즉, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 에스트로겐 활성이 있기 때문에 여성 호르몬 저감으로 인한 여성 갱년기 증상을 치료 및 개선하는 효과가 있음을 입증하였다.
실험예 2: 여성 갱년기 증상 유도 동물 모델에서의 효과
(1) 체중 및 식이 변화
실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 여성 갱년기 증상 유도 동물모델에서 비만 유도 현상을 확인하기 위해, 8주 후 각각의 실험군의 체중 및 식이 변화를 상기 <방법 5>에 따라 측정하였다.
[표 2]
상기 표 2 및 도 4를 참고하면, 난소가 절제되어 여성 갱년기가 유도된 난소절제군은 난소를 절제하지 않고 개복수술만 진행한 군 (sham)에 비해 체중이 증가되는 것을 확인함으로써, 난소가 제거됨에 따라 유도되는 여성 갱년기 증상인 비만이 유도되었다는 것을 알 수 있다. 그러나, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군 (37.5, 75 및 150 mg/kg)에서 난소절제군에 비해 체중 증가가 억제되는 것을 확인하였다. 특히, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군 (150 mg/kg) 은 양성 대조군인 β-estradiol 투여군 보다 약 46%의 체중 증가 억제 효과가 나타났다.
또한, 각 실험군의 8주에 식이 섭취량을 측정하였다 (도 5 참조). 구체적으로, 난소절제군에서 난소를 절제하지 않고 개복수술만 진행한 군 (sham)에 비해 식이 섭취량이 증가함을 확인하였다. 그리고, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군에서 난소절제군에 비해 식이 섭취가 감소하였다.
상기 결과를 통해, 난소를 제거함으로 인해 여성 갱년기 증상이 유도된 랫드는 체중이 증가하고, 식이 섭취가 증가하여 비만이 유도되었으나, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군에서는 체중 증가가 억제되고 랫드의 비만 유도가 억제되었음을 확인하였다. 즉, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 여성 갱년기에 의해 유도되는 비만을 예방 및 개선하는 효과가 있다는 것을 입증하였다.
(2) 지방량 측정
상기 <방법 6>에 따라 실험하였을 때, 난소절제군의 전체 지방 및 복부 지방이 난소 비 절재 랫드에 비해 증가하여 여성 갱년기 증상인 비만이 유도된 것을 확인하였다. 그러나, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군(37.5, 75 및 150 mg/kg)에서는 전체 지방량이 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 투여량에 따라 감소하는 것을 확인하였다. 특히, 복부 지방은 β-estradiol 투여군에서는 큰 변화가 없었으나, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군 (150 mg/kg)에서는 지방량이 현저히 감소하는 것을 확인하였다(도 6 참조). 이러한 결과를 통해 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 복부 비만 개선에 우수한 효과가 있음을 입증하였다.
또한, 각 실험군의 랫드 전신 사진을 확인하면, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액의 투여량이 증가할수록 난소 비 절재 랫드와 유사한 형태로 변하는 것을 확인하였다(도 7 참조). 즉, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 여성 갱년기로 유도된 비만에 의한 외형 변화를 억제한다는 것을 입증하였다.
(3) 혈청 지질 조성 변화
상기 <방법 6>에 따라 각 실험군의 혈청 지질 조성의 변화를 측정하였다.
[표 3]
표 3 및 도 8을 참고하면, 난소절제군의 트리글리세라이드 및 LDL 수치가 난소 비 절제 랫드에 비해 증가하였다. 그러나, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군 (37.5, 75 및 150 mg/kg)에서는 트리글리세라이드 및 LDL 수치가 감소하였음을 확인하였다. 또한, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액 투여군 (37.5, 75 및 150 mg/kg)에서는 HDL 수치가 증가하고, 콜레스테롤 수치가 감소하였음을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 비만 및 혈관장애를 유도하는 트리글리세라이드 및 LDL 수치가 난소 절제로 인한 여성 갱년기에 의해 증가되었으나, 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액이 트리글리세라이드 및 LDL 수치의 향상을 억제하는 것을 입증하였다. 즉, 상기 결과들은 실시예 1에 따른 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 여성 갱년기에 의해 유도되는 비만 및 혈관장애 증상을 예방 및 치료하는 효과가 있음을 입증하였다.
제조예
<제조예 1> 정제의 제조
[표 4]
상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제조예 2> 캡슐제의 제조
[표 5]
상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제조예 3> 액상제의 제조
[표 6]
상기의 성분을 통상의 액상제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100 ㎖의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액상제를 제조하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (11)
- 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 동충하초를 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올 용매를 추출 용매로 추출된 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 동충하초를 30%(v/v) 내지 70%(v/v)의 에탄올 수용액으로 추출된 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 코디세핀의 함량이 0.02 내지 20%(w/w)인 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 여성 갱년기 증상은 여성 호르몬 감소로 인한 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 여성 갱년기 증상은 혈중 지질 장애, 골밀도 감소, 체지방 증가, 복부 비만, 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질 염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통, 골다공증 또는 그의 조합인 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 하기 단계에 의해 수득되는 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
(S1) 동충하초(Cordyceps militaris)를 제1 추출 용매를 혼합하고 추출하여 1차 추출액을 수득하는 제1차 추출 단계 및 상기 제1차 추출 단계를 거친 동충하초(Cordyceps militaris) 고형물과 제2 추출 용매를 혼합하고 추출하여 2차 추출액을 수득하는 제2차 추출 단계. - 제7항에 있어서,
상기 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액은 하기 단계를 더 포함하여 수득하는 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
(S2) 상기 1차 추출액 및 상기 2차 추출액을 규조토 여과보조제를 사용하여 감압 여과하여 여과액을 수득하는 여과 단계 및
(S3) 상기 여과액을 감압 농축하여 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 수득하는 농축 단계. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 액상제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 또는 엑스제의 형태인 것인 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 동충하초(Cordyceps militaris) 농축액을 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 증상 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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