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KR20220103921A - 암을 치료하기 위한 dkk-1 길항제의 용도 - Google Patents

암을 치료하기 위한 dkk-1 길항제의 용도 Download PDF

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KR20220103921A
KR20220103921A KR1020227012391A KR20227012391A KR20220103921A KR 20220103921 A KR20220103921 A KR 20220103921A KR 1020227012391 A KR1020227012391 A KR 1020227012391A KR 20227012391 A KR20227012391 A KR 20227012391A KR 20220103921 A KR20220103921 A KR 20220103921A
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KR
South Korea
Prior art keywords
ser
cancer
seq
gly
leu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
KR1020227012391A
Other languages
English (en)
Inventor
마이클 에이치. 카게이
기리시 소말라 나익
신시아 에이. 시라드
Original Assignee
리프 테라퓨틱스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 리프 테라퓨틱스 인코포레이티드 filed Critical 리프 테라퓨틱스 인코포레이티드
Publication of KR20220103921A publication Critical patent/KR20220103921A/ko
Pending legal-status Critical Current

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Abstract

대상체의 암 샘플에서 DKK1 발현 H-스코어 또는 양성%를 결정하는 단계; 및 사전결정된 값 이상의 DKK1 발현 H-스코어 또는 양성%를 갖는 것으로 결정된 대상체에 DKK1 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.

Description

암을 치료하기 위한 DKK-1 길항제의 용도
관련 출원
본 출원은 2019년 9월 19일에 출원된 미국 가출원 제62/902,857호의 출원일 이익을 청구한다. 상기 출원의 전체 교시가 본원에 참조로 포함된다.
암은 제어되지 않거나 이상조절되는 세포 증식, 감소된 세포 분화, 주변 조직을 침습하는 부적절한 능력, 및/또는 이소성 부위에서 새로운 성장을 확립하는 능력을 특징으로 하는 세포성 장애이다. 관여되는 특정 암에 따라, 암에 대한 치료에는 수술, 방사선치료법, 화학치료법 또는 이들 치료의 조합이 관여될 수 있다. 2018년에 미국에서 1,735,350건의 새로운 암이 진단될 것이고 604,640명이 암으로 사망할 것으로 추정된다. 이와 같이, 암 치료에서의 상당한 진보에도 불구하고, 암을 갖는 환자에 대해 새롭고 개선된 치료에 대한 필요성이 계속 존재하고 있다.
예시적 구현예에서, 본 발명은 대상체의 암 샘플에서 H-스코어 또는 양성%에 의해 DKK1 발현을 결정하는 단계; 및 사전결정된 값을 초과하는 DKK1 발현 H-스코어 또는 양성%를 갖는 것으로 결정된 대상체에 제1량의 DKK1 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이다.
상기는 유사한 참조 문자가 상이한 도면에 걸쳐 동일한 부분을 나타내는 첨부 도면에서 예시된 바와 같이, 본 발명의 예시적 구현예의 하기 보다 상세한 설명으로부터 자명할 것이다. 도면은 반드시 축적에 맞는 것은 아니며, 대신에 본 발명의 구현예를 예시하며 강조가 이루어졌다.
도 1은 실시예 1에서 기재된 바와 같이, 조합되어, RNAscope에 의한 DKK1 H-스코어의 풀링 분석에서 사용된 134명의 환자를 포함하는, 환자 하위군을 나타내는 모식적 다이어그램이다.
도 2는 3개 그래프의 중첩이며, 각각의 그래프는, 일수의 함수로서 무진행 생존(PFS, 확률로 측정됨)의, 이의 DKK1 H-스코어에 의한 134명의 환자의 삼분위를 나타낸다.
도 3은 이의 DKK1 H-스코어 삼분위뿐만 아니라 암의 유형 및 치료제(들)에 의해 정의되는 환자의 하위군에 의해 분리되는, 134명의 환자 풀의 위험비(HR)를 나타내는 표 및 그래프이다.
도 4는 DKK1 H-스코어의 함수로서 표준화된 Log-순위 통계(본원에서 기재됨)의 그래프이다.
도 5는 2개의 그래프의 중첩이며, 각각의 그래프는 시간의 함수로서 환자 하위군의 PFS(확률로 표현됨)을 나타낸다.
도 6은 이의 최적 DKK1 H-스코어뿐만 아니라 암의 유형 및 치료제(들)에 의해 정의되는 환자의 하위군에 의해 분리되는, 134명의 환자 풀의 위험비(HR)를 나타내는 표 및 그래프이다.
도 7은 최적 컷포인트가 가장 잘 조정된 위험비(HR)를 가짐을 실증하는 상이한 컷포인트의 비교의 그래픽 표시이다.
도 8은 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 EEC/EOC 환자 하위군의 시간의 함수로서 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다.
도 9는 EEC/EOC 환자 하위-하위군에 대한 HR을 나타내는 표 및 그래프이다.
도 10은 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 GEJ/GC/EC 환자의 시간의 함수로서 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다.
도 11은 GEJ/GC/EC 환자 하위군에 대한 HR을 나타내는 표 및 그래프이다.
도 12는 DKN-01/항-PD-1 치료법을 수여받는 25명의 평가 가능한 GEJ/GC IO-나이브 환자에서 병소 크기의 최대 감소%를 나타내는 막대 그래프이다.
도 13은 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 DKN-01/항-PD-1 치료법을 수여받는 IO-나이브 GEJ/GC 환자 하위군의 시간의 함수로서 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다.
도 14a는 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 컷오프값으로 상위 삼분위의 하한 경계를 사용하는 양성% 계측을 사용하여 계산된, GEJ/GC/EC 환자의 시간의 함수로서 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다.
도 14b는 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 "최적" 컷오프값을 사용하는 양성% 계측을 사용하여 계산된, GEJ/GC/EC 환자의 시간의 함수로서 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다.
도 15는 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 DKN-01/항-PD-1 치료법을 수여받는 IO-나이브 GEJ/GC 환자 하위군의 시간의 함수로서 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다.
도 16a 및 도 16b는 본원에서 기재된 바와 같이 치료받은 위/GEJ IO-불응성 환자의 H-스코어(a) 또는 양성% 값(b)을 나타내는 산란도이다.
본 발명의 예시적 구현예의 설명이 뒤따른다.
본원에서 인용되는 모든 특허, 공개된 출원 및 참고문헌의 교시는 이의 전문이 참조로 포함된다.
본 발명을 이의 예시적 구현예를 참조하여 구체적으로 나타내고 기재하였으나, 당업자에게는 첨부되는 청구범위에 의해 포괄되는 본 발명의 범위로부터 벗어나지 않고 그 안에서 형태 및 세부사항의 다양한 변화가 만들어질 수 있음이 이해될 것이다.
식도위암은 본원에서 식도암 및 위(위의) 암(GC)으로 나타낸다.
본원에서 사용되는 "식도암"(EC)은 식도뿐만 아니라 위-식도 접합부(GEJ)의 암을 나타낸다. 당분야에서 일반적으로 사용되는 식도암은 식도 편평 상피 세포 암종(ESCC) 및 식도 선암종(EAC)을 포함한다. 일반적으로, ESCC는 기관의 대략 상부 2/3에서 식도에 라이닝되는 편평 상피 세포에서 유래되는 암을 나타낸다. EAC는 전형적으로 식도의 하부 1/3에서, 편평 상피 세포 영역을 대체하는(예컨대, 바레트 식도에서), 샘 세포에서 유래되는 암을 나타낸다. 이와 같이, 본원에서 사용되는 식도 선암종은 식도뿐 아니라 위-식도 접합부의 선암종을 나타낸다.
일부 구현예에서, 식도 선암종은 재발성이거나, 전이성이거나, 둘 다이다. 하나의 구현예에서, 재발성 식도 선암종은 종양 성장의 원발 부위에서 재발성일 수 있다(예컨대, 재발성 종양 성장이 동일한 부위에서 일어남). 또 다른 구현예에서, 재발성 식도 선암종은 종양 성장의 원발 부위와 상이한 부위에서 재발성일 수 있다(예컨대, 종양이 전이되었음). 추가 구현예에서, 재발성 식도 선암종은 종양 성장의 원발 부위 및 원발 부위와 상이한 부위 둘 다에서 재발성일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "재발성" 및 "재발된"은 상호 교환적으로 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같은, "위암"은 위의 암을 나타낸다. 위암의 특정 유형이 "위 선암종"이다. 선암종은 샘 기원, 샘 특징, 또는 둘 다를 갖는 상피 조직의 신생물로 정의되는 유형의 암성 종양이다.
위암은 세계적으로 암-관련 사망의 4번째로 많은 원인이며, 주로 대부분의 환자가 진행된 질환을 나타내므로, 서구 국가에서 근치하기 어려운 채 남아있다. 위는 위식도 접합부에서 시작되어 십이지장에서 끝난다. 조직학적으로, 위 악성물의 90% 내지 95%는 선암종이다. 근치 치료법에는 가장 일반적으로는 림프절절제술이 동반되는, 전체 또는 부분 위절제술인 수술적 절제가 관여된다. 절제 가능한 위암을 갖는 환자의 전체 5년 생존율은 10% 내지 30% 범위이다.
본원에서 사용된 바와 같은, "부인과 암"은 자궁내막의 암(자궁내막암) 및 난소의 암(난소암)을 지칭한다. 자궁은 자궁내막으로 불리는 특정 조직으로 라이닝되어 있다. 상기 라이닝에서 암이 성장하는 경우 자궁내막암으로 불린다. 자궁의 대부분의 암은 자궁내막암이다. 소정 구현예에서, 자궁내막암은 상피 자궁내막암(EEC)이다. 또 다른 구현예에서, 난소암은 상피 난소암(EOC)이다.
본원에서 사용된 바와 같은, "담도암"은 담도의 암을 나타낸다. 담도암은 "쓸개관암종" 또는 담낭암으로 불리며 담관(간으로부터 담즙을 수송하는 관)에서 생긴다. 쓸개관암종은 암이 담관에서 생기는 위치에 기반하여 상이한 유형으로 분류된다: 간내 쓸개관암종은 간 내 담관의 일부에서 생기며 때때로 간암의 한 유형으로 분류되고; 폐문 쓸개관암종은 간 바로 밖의 담관에서 생긴다. 상기 유형은 또한 폐문주위 쓸개관암종으로 불리며; 원위 쓸개관암종은 소장에서 가장 가까운 담관 부분에서 생긴다. 담낭암은 담낭에서 생긴다.
예시적 구현예에서, 대상체는 적어도 하나의(예컨대 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 등의) 사전 치료 요법에 비관용성이다. 예를 들어, 대상체는 사전 치료 요법에 대한 유해 반응을 경험하였고 치료는 종료되었다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 적어도 하나의 사전 치료 요법에 불응성이다(예컨대, 대상체가 더 이상 치료 요법에 반응하지 않았음). 다른 구현예에서, 대상체는 적어도 하나의 사전 치료 요법에 비반응성이다. 다양한 구현예에서, 대상체는 적절한 바에 따라, 적어도 하나의 사전 치료 요법에 대해 본원에서 기재된 실패의 조합을 경험하였다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 "면역종양학-나이브"(IO 나이브)이다.
추가 구현예에서, 당분야에 알려진 하나 이상의 다양한 표준 mRNA 또는 단백질 검출 방법, 예컨대, 원위치 혼성화 또는 면역조직화학에 의해 결정되는, DKK1을 발현하는 식도위, 부인과, 및 담도 종양. 이러한 종양의 예에는 식도 선암종 또는 위 선암종이 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같은, "컷포인트" 또는 "컷포인트 값"은, "컷포인트" 초과 발현 측정(H-스코어 또는 양성%)을 갖는 하위군의 환자에 DKK1 억제제(예컨대 DKN-01)가 투여되는 경우, 이들 환자가 "컷포인트" 값 미만인 이의 발현 측정을 갖는 환자 하위군에 비해 무진행 생존(PFS)의 통계적으로 유의미한 개선을 나타내도록 하는, DKK1 발현의 측정(예를 들어, 종양 세포에서, 아래에서 논의된 바와 같이, H-스코어 값 또는 "양성%" 값)을 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같은, "최적 DKK1 발현"은, H-스코어 값으로 표현되건 양성% 값으로 표현되건("최적 H-스코어", "최적 양성%," 또는 간단히 "최적 컷포인트") "표준화된 Log-순위 통계"의 절대값이 그 최대값에 도달하는 DKK1의 발현 측정(H-스코어 값 또는 양성% 값)을 나타내며, 여기서 "표준화된 Log-순위 통계"는 아래에서 개략된 바와 같이 계산된다.
X1,..., Xn 범위의 고정된 컷포인트 μ에 대한 Log 순위 통계는 하기와 같이 T μ 에 의해 정의된다:
Figure pct00001
식 중, 관찰 i에 대한 log-순위 스코어(a)는 하기에 의해 주어진다:
Figure pct00002
식 중,
Figure pct00003
는 이전에 또는 시간 Zj에 사망했거나 검열된 관찰 횟수이다.
Figure pct00004
　및
Figure pct00005
는 각각 사건까지의 시간에 대한 벡터 및 검열 표시인자이다. long-순위 통계 T μ 의 표준화는 하기와 같이 정의된 S μ 으로 이어진다:
Figure pct00006
식 중 귀무 가설 하의 T μ 의 예상값(E)은 하기에 의해 주어지며:
Figure pct00007
분산은 하기에 의해 주어지고:
Figure pct00008
Figure pct00009
는 X의 실험적 분포 함수를 표시한다. 본 발명자들은 가능한 컷포인트를 X의 사전-정의된 샘플 분위
Figure pct00010
에 따른 간격
Figure pct00011
로 제한한다.
Figure pct00012
및
Figure pct00013
로서, 여기서
Figure pct00014
및
Figure pct00015
이다. μ에 의해 결정된 두 군에서의 샘플 크기는
Figure pct00016
및
Figure pct00017
이다.
표준화된 통계(log-순위)
Figure pct00018
의 최대 절대값은 컷포인트 추정인자를 정의하며, 이는 관찰의 분리를 최대화한다. 상기 정의를 사용하여, 최대로 선택된 log-순위 통계는 하기와 같이 정의된다:
Figure pct00019
전체 세부사항에 대해서는 문헌[Torsten Hothorn and Berthold Lausen. "On the exact distribution of maximally selected rank statistics. Computational Statistics & Data Analysis, 43(2): 121-137, June 2003]을 참조한다. 상기 참고문헌의 교시는 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다.
최대 알고리즘 구현은 maxstat(R)에서 기재되며 이에 따라서 패키지 "maxstat"가 상기 분석을 위해 사용되었다. URL https://CRAN.R-project.org/package=maxstat에서 확인되는 문헌[Torsten Hothorn (2017). maxstat: Maximally Selected Rank Statistics. R package version 0.7-25]을 참고한다.
소정 구현예에서, DKN-01-기반 치료법으로 치료받은 암 환자는 H-스코어 값이 최적 컷포인트 초과인 경우 DKK1 H-스코어 "고"로 그룹화되고 최적 컷포인트 미만의 H-스코어를 가진 환자는 DKK1 "저"로 그룹화되었다. 최적 컷포인트는 이들 두 군 간 관찰의 분리를 최대화한다.
본원에서 사용되는 어구 "사전결정된 값 초과"는 값의 백분율(예컨대, "상위 삼분위")을 나타내는 경우 "사전결정된 값 이상", 및 선택된 수치값, 예컨대 "최적 DKK1 발현 H-스코어"를 나타내는 경우 "사전결정된 값 초과"를 의미한다.
H-스코어 및 양성% 값
관심 유전자 산물의 발현, 예컨대 DKK1의 발현 수준은 면역조직화학 방법 또는 원위치 혼성화 기법에 의해 평가될 수 있다. 발현 수준의 편리한 반정량적 측정은 연산 양성% 값의 계산(DKK-1 RNA 검출 시약에 의해 염색된 세포%) 또는 종양 샘플에 대한 H-스코어(또는 "histo" 스코어) 할당이다. H-스코어에 있어서, 염색 강도(0, 1+, 2+, 또는 3+)는 고정된 필드에서 각각의 세포에 대해 결정된다. 이어서 H-스코어는 우세 염색 강도에 기반할 수 있거나, 보다 복잡하게는, 나타난 각각의 강도 수준에 대한 개별 백분율의 합을 포함할 수 있다. 하나의 방법에 의하면, 각각의 염색 강도 수준에서의 세포 백분율이 계산되며, 마지막으로, H-스코어가 하기 공식을 사용하여 할당된다:
H-스코어 = [1 Х (1+ 세포%) + 2 Х (2+ 세포%) + 3 Х (3+ 세포%)]
0 내지 300 범위의 최종 스코어는 주어진 종양 샘플에서 더 높은 염색 강도 또는 양에 더 많은 가중치를 부여한다. 이어서 샘플은 특정 구별 역치에 기반하여 양성 또는 음성으로 고려될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Hirsch FR, Varella-Garcia M, Bunn PA Jr, et al: Epidermal growth factor receptor in non-small-cell lung carcinomas: Correlation between gene copy number and protein expression and impact on prognosis. J Clin Oncol 21:3798-3807, 2003; 및 John T, Liu G, Tsao M-S: Overview of molecular testing in non-small-cell lung cancer: Mutational analysis, gene copy number, protein expression and other biomarkers of EGFR for the prediction of response to tyrosine kinase inhibitors. Oncogene 28:S14-S23, 2009]을 참고한다. 이들 참고문헌의 관련 교시는 본원에 참조로 포함된다.
다양한 구현예에서, H-스코어(예컨대, H-스코어의 사전결정된 값)는 1 내지 300, 예를 들어, 20 내지 100, 또는 20 내지 50일 수 있다. H-스코어의 예시적인 사전결정된 값은 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 및 100이다. 대안적인 예시적 구현예에서, H-스코어의 사전결정된 값은 10 이상, 20 이상, 30 이상, 40 이상, 50 이상, 60 이상, 70 이상, 80 이상, 또는 90 이상이다. 소정 구현예에서, H-스코어의 사전결정된 값은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 103, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 또는 300이다.
대안적인 구현예에서, DKK1 발현의 측정은 DKK1에 대해 양성으로 염색되는 종양 세포의 분율값(양성%)일 수 있다. 먼저 세포의 도트수에 기반하여 염색량(0, 1+, 2+, 또는 3+)이 고정된 필드에서 각각의 종양 세포에 대해 결정된다. 모든 신생물 세포가 "양성"으로 할당된 후(예컨대 RNAscope 원위치 혼성화에 대해 단일 염색 도트를 검출하여), 염색을 갖는 총 신생물 세포를 합산하고 신생물 세포의 총 수로 나누어 양성 종양 세포의 백분율이 결정된다. 양성%는 0 내지 100의 범위일 수 있다.
다양한 구현예에서, 양성% 값(예컨대, 양성%의 사전결정된 값)은 15% 내지 50%, 예를 들어 20% 내지 40%, 또는 20% 내지 25%일 수 있다. 양성%의 예시적인 사전결정된 값은 15% 이상, 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 또는 50% 이상이다. 소정 구현예에서, 양성%의 사전결정된 값은 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%이다.
RNAscope 분석
샘플의 H-스코어를 연산하는 방법 중 하나는 예를 들어, URL https://acdbio.com/에 기재된 바와 같이, Advanced Cell Diagnostics, Inc.에 의해 개발되고 시판되는 RNAscope® 원위치 혼성화 기법이다. 상기 기법은 혼성화 탐침 인지체로부터 관심 mRNA로의 광학 신호에 의존한다. 신호는 명시야 또는 에피형광 현미경에 의해 검출될 수 있다. 이 기법은 단일 분자의 검출을 허용한다. 예를 들어, 문헌[RNAscope: A Novel In Situ RNA Analysis Platform for Formalin-Fixed Paraffin-Embedded Tissues. Wang F,Flanagan J, Su N, Wang LC, Bui S, Nielson A, Wu X, Vo HT, Ma XJ, Luo Y (2012). J of Mol Diagnostics, 14(1):22-29]을 참고한다.
바이오마커를 검출하는 대안적 방법
RNAscope® 기법에 부가하여, 바이오마커, 예컨대, 유전자 산물 발현의 수준, 예컨대 DKK1 발현 수준을 검출하는 대안적 방법이 사용될 수 있다.
조직 절편의 면역조직화학(IHC) 염색은 샘플에서 단백질의 존재를 평가하거나 검출하는 신뢰할 수 있는 방법으로 나타났다. 면역조직화학 기법은 일반적으로 발색 또는 형광 방법에 의해, 원위치에서 세포성 항원을 탐침분석하고 가시화하는 항체를 이용한다. 따라서, 각각의 마커에 대해 특이적인 항체 또는 항혈청, 일부 구현예에서, 폴리클로날 항혈청, 및 일부 구현예에서, 모노클로날 항체가 발현을 검출하기 위해 사용된다. 아래에서 더 상세히 논의되는 바와 같이, 항체는, 예를 들어, 방사활성 표지, 형광 표지, 합텐 표지, 예컨대 바이오틴, 또는 효소, 예컨대 홀스 래디쉬 퍼옥시다제 또는 알칼리성 포스파타제로 항체 자체의 직접적 표지화에 의해 검출될 수 있다. 대안적으로, 표지되지 않은 일차 항체가 일차 항체에 대해 특이적인 항혈청, 폴리클로날 항혈청 또는 모노클로날 항체를 포함하는, 표지된 이차 항체와 함께 사용된다. 면역조직화학 프로토콜 및 키트는 당분야에 잘 알려져 있고 시판된다.
IHC의 2개의 일반적인 방법: 직접적 및 간접적 검정이 이용 가능하다. 첫 번째 검정에 따르면, 표적 항원에 대한 항체의 결합은 직접적으로 결정된다. 상기 직접적 검정은 표지화된 시약, 예컨대 형광 태그 또는 효소-표지 일차 항체를 사용하며, 이는 추가 항체 상호작용없이 가시화될 수 있다. 전형적인 간접적 검정에서, 콘주게이션되지 않은 일차 항체는 항원에 결합한 후 표지된 이차 항체가 일차 항체에 결합한다. 이차 항체가 효소적 표지에 콘주게이션되는 경우, 발색 또는 형광 기질이 첨가되어 항원의 가시화를 제공한다. 몇몇 이차 항체는 일차 항체 상의 상이한 에피토프와 반응할 수 있으므로, 신호 증폭이 일어난다.
면역조직화학을 위해 사용되는 일차 및/또는 이차 항체는 전형적으로 검출 가능한 모이어티로 표지될 것이다. 일반적으로 하기 분류로 그룹화될 수 있는 여러 표지가 이용 가능하다:
(a) 방사선동위원소, 예컨대 35S, 14C, 125I, 3H, 및 131I. 항체는, 예를 들어 문헌[Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, Coligen et al, Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs. (1991)]에 기재된 기법을 사용하여 방사선동위원소로 표지될 수 있고 방사활성은 신틸레이션 카운팅을 사용하여 측정될 수 있다.
(b) 콜로이드성 금 입자.
(c) 비제한적으로 희토류 킬레이트(유로퓸 킬레이트), 텍사스 레드(Texas Red), 로다민, 플루오레신, 단실, 리싸민(Lissamine), 움벨리페론, 피코크리테린, 피코시아닌, 또는 상업적으로 이용 가능한 형광단, 예컨대 SPECTRUM ORANGE® 및 SPECTRUM GREEN® 및/또는 임의의 상기 중 하나 이상의 유도체가 포함되는 형광 표지. 형광 표지는, 예를 들어 상기 문헌[Current Protocols in Immunology]에 개시된 기법을 사용하여 항체에 콘주게이션될 수 있다. 형광은 형광측정계를 사용하여 정량될 수 있다.
(d) 다양한 효소-기질 표지가 이용 가능하며 미국 특허 제4,275,149호는 이들 중 일부의 리뷰를 제공한다. 효소는 일반적으로 다양한 기법을 사용하여 측정될 수 있는 발색 기질의 화학적 변경을 촉매한다. 예를 들어, 효소는 기질에서의 색상 변화를 촉매할 수 있고, 이는 분광측정학적으로 측정될 수 있다. 대안적으로, 효소는 기질의 형광 또는 화학발광을 변경할 수 있다. 형광 변화를 정량하는 기법은 상술되어 있다. 화학발광 기재는 화학 반응에 의해 전자적으로 여기된 후 빛을 방출할 수 있고 이는 (예를 들어, 화학발광측정계를 사용하여) 측정되거나, 에너지를 형광 수신체로 공여할 수 있다. 효소적 표지의 예에는 루시퍼라제(예컨대, 초파리 루시퍼라제 및 박테리아 루시퍼라제; 미국 특허 제4,737,456호), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 말레이트 탈수소효소, 우레아제, 퍼옥시다제, 예컨대 홀스래디쉬 퍼옥시다제(HRPO), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 당류 옥시다제(예컨대, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 탈수소효소), 헤테로사이클릭 옥시다제(예컨대 유리카제 및 잔틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제, 마이크로퍼옥시다제 등이 포함된다. 항체에 효소를 콘주게이션하는 기법은 문헌[O'Sullivan et al. Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (ed. J. Langone & H. Van Vunakis), Academic press, New York, 73: 147-166 (1981)]에 기재되어 있다.
효소-기질 조합의 예에는, 예를 들어 하기가 포함된다:
(i) 홀스래디쉬 퍼옥시다제(HRPO)와 기질로서의 하이드로겐 퍼옥시다제로, 여기서 하이드로겐 퍼옥시다제는 염료 전구체[예컨대, 오르토페닐렌 디아민(OPD) 또는 3,3',5,5'-테트라메틸 벤지딘 하이드로클로라이드(TMB)]를 산화시킨다. 3,3-디아미노벤지딘(DAB)이 또한 HRP-표지 항체를 가시화하기 위해 사용될 수 있다;
(ii) 알칼리성 포스파타제(AP)와 발색 기질로서의 파라-니트로페닐 포스페이트; 및
(iii) β-D-갈락토시다제(β-D-Gal)와 발색 기질(예컨대, p-니트로페닐-β-D-갈락토시다제) 또는 형광 기질(예컨대, 4-메틸움벨리페닐^-D-갈락토시다제).
여러 다른 효소-기질 조합이 당업자에게 이용 가능하다. 이들의 일반적 리뷰에 대해서는, 미국 특허 제4,275,149호 및 제4,318,980호를 참고한다.
때때로, 표지는 항체로 간접적으로 콘주게이션된다. 당업자는 이를 달성하기 위한 다양한 기법을 인지할 것이다. 예를 들어, 항체는 바이오틴으로 콘주게이션될 수 있고 상기 언급된 4개의 광범위한 분류의 표지 중 임의의 것이 애비딘으로 콘주게이션될 수 있거나, 또는 반대일 수 있다. 바이오틴은 애비딘에 선택적으로 결합하고 이에 따라, 표지가 상기 간접적 방식으로 항체로 콘주게이션될 수 있다. 대안적으로, 항체를 이용한 표지의 간접적 콘주게이션을 달성하기 위해, 항체는 작은 합텐으로 콘주게이션되며 상기 언급된 상이한 유형의 표지 중 하나가 항-합텐 항체로 콘주게이션된다. 따라서, 항체를 이용한 표지의 간접적 콘주게이션이 달성될 수 있다.
당업자에게 알려진 표준 샘플 제조 절차 이외에, IHC 전에, 동안 또는 후에 조직 절편의 추가 처리가 요망될 수 있다. 예를 들어, 에피토프 회수 방법, 예컨대 시트레이트 완충액 중 조직 샘플의 가열이 수행될 수 있다[예컨대, 문헌[Leong et al. Appl. Immunohistochem. 4(3):201 (1996)] 참고].
임의의 차단 단계 후, 조직 절편은 일차 항체가 조직 샘플 중 표적 단백질 항원에 결합하도록 하는 충분한 시간 동안 및 적합한 조건 하에 일차 항체에 노출된다. 이를 달성하기 위한 적절한 조건은 일상적 실험에 의해 결정될 수 있다.
샘플에 대한 항체의 결합 정도는 상기 논의된 검출 가능한 표지 중 어느 하나를 사용하여 결정된다. 바람직하게는, 표지는 발색 기질, 예컨대 3,3'-디아미노벤지딘 발색원의 화학적 변경을 촉매하는 효소적 표지(예컨대 HRPO)이다. 바람직하게는 효소적 표지는 일차 항체에 특이적으로 결합하는 항체에 콘주게이션된다(예컨대 일차 항체는 토끼 폴리클로날 항체이며 이차 항체는 염소 항-토끼 항체임).
이렇게 제조된 시편은 실장되고 커버슬립처리될 수 있다. 이어서 슬라이드 평가가, 예를 들어, 현미경을 사용하여 결정된다.
IHC는 이전 또는 이후, 형태적 염색과 조합될 수 있다. 탈파라핀화 후, 슬라이드 상에 실장된 절편은 평가를 위해 형태적 염색으로 염색될 수 있다. 사용될 형태적 염색은 조직 절편의 정확한 형태적 평가를 제공한다. 절편은 그 각각이 상이한 세포 성분을 구별되게 염색하는 하나 이상의 염료로 염색될 수 있다. 하나의 구현예에서, 헤마톡실린은 슬라이드의 세포 핵을 염색하기 위해 사용된다. 헤마톡실린은 널리 이용 가능하다. 적합한 헤마톡실린의 일례는 헤마톡실린 II(Ventana)이다. 더 밝은 파란색 핵이 요망되는 경우, 청색화 시약이 헤마톡실린 염색 후 사용될 수 있다. 당업자는 슬라이드가 염료 중에 유지되는 기간을 증가시키거나 감소시킴으로써 염색이 주어진 조직에 대해 최적화될 수 있음을 이해할 것이다.
슬라이드 제조 및 IHC 처리를 위해 자동화된 시스템이 상업적으로 이용 가능하다. Ventana® BenchMark XT 시스템은 이러한 자동화된 시스템의 일례이다. 염색 후, 조직 절편은 표준 현미경 기법에 의해 분석될 수 있다. 일반적으로, 병리학자 등은 비정상 또는 정상 세포 또는 특정 세포 유형의 존재에 대해 조직을 평가하고 관심 세포 유형의 위치를 제공한다. 따라서, 예를 들어, 병리학자 등은 슬라이드를 검토하고 정상 세포(예컨대 정상 폐 세포) 및 비정상 세포(예컨대 비정상 또는 신생물 폐 세포)를 확인할 것이다. 관심 세포의 위치를 정의하는 임의의 수단이 사용될 수 있다(예컨대, X-Y 축 상 좌표).
비제한적으로 핵산 검출 방법(비제한적으로 PCR, 시퀀싱, rtPCT, RNA-seq, 마이크로어레이 분석, SAGE, Mass ARRAY 기법 및 FISH가 포함됨) 및 단백질 검출 방법(비제한적으로 질량 분광측정, 웨스턴 블로팅이 포함됨)이 포함되는, 바이오마커 검출을 위한 다른 기법이 당분야에 알려져 있다. c-met 유전자의 증폭 검출은 당업자에게 알려진 소정 기법을 사용하여 달성된다. 예를 들어, 비교 게놈 혼성화가 염색체 위치의 함수로서 DNA 서열 카피수 맵을 생성하기 위해 사용될 수 있다. 예컨대, 문헌[Kallioniemi et al. (1992) Science 258:818-821]을 참고한다. c-met 유전자의 증폭은 또한, 예컨대 c-met 유전자에 특이적인 탐침을 사용하는 서던 혼성화에 의해 또는 실시간 정량적 PCR에 의해 검출될 수 있다. 소정 구현예에서, c-met 유전자의 증폭 검출은, 예를 들어, c-met 유전자와 혼성화하는 탐침을 사용하여, c-met 유전자의 카피수를 직접 평가함으로써 달성된다. 예를 들어, FISH 검정이 수행될 수 있다. 소정 구현예에서, c-met 유전자의 증폭 검출은, 예를 들어 c-met 유전자 외부에 놓이지만 c-met 유전자와 공동-증폭되는 염색체 영역의 카피수를 평가하여, c-met 유전자의 카피수를 간접적으로 평가함으로써 달성된다. 바이오마커 발현은 또한 생체내 진단 검정을 사용하여, 예컨대 검출될 분자에 결합하고 검출 가능한 표지(예컨대 방사활성 동위원소)로 태그화되는 분자(예컨대 항체)를 투여하고 표지의 국재화에 대해 환자를 외부 스캔함으로써 평가될 수 있다.
DKK1 항체
DKK1 항체는 이전에 기재되었다(예컨대, 이의 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,148,498호 및 제7,446,181호 참고). 본원에 개시되는 DKK1 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 22에 나타낸 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함하는 인간 DKK1에 결합하는 인간 조작 항체에 관한 것이다. 본 발명의 DKK1 항체는 여러 바람직한 특성을 보유하는 치료적으로 유용한 DKK1 길항제이다. 예를 들어, DKK1 항체는 알칼리성 포스파타제, 마커 또는 골모세포 활성의 DKK1 매개 억제를 차단할뿐만 아니라 다양한 유형의 암(예컨대, 비-소세포 폐암)을 치료한다.
천연 존재하는 바와 같은 전장 항체는 디설파이드 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 면역글로불린 분자이다. 각 사슬의 아미노 말단부에는 내부에 함유된 상보성 결정 영역(CDR)을 통해 항원 인식에 주로 관여하는 약 100개~110개 아미노산의 가변 영역이 포함된다. 각 사슬의 카복시-말단부는 효과기 기능에 주로 관여하는 불변 영역을 정의한다.
CDR에는 틀 영역("FR")으로 명명되는, 보다 보존된 영역이 산재되어 있다. 각각의 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)은 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 아미노-말단부터 카복시-말단으로 배열되는, 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어진다. 경쇄의 3개 CDR은 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"으로 불리며, 중쇄의 3개 CDR은 "HCDR1, HCDR2 및 HCDR3"으로 불린다. CDR은 항원과 특이적 상호작용을 형성하는 대부분의 잔기를 함유한다. LCVR 및 HCVR 영역 내 CDR 아미노산 잔기의 넘버링 및 배치는 널리 알려진 Kabat 넘버링 관례에 따른다.
경쇄는 카파 또는 람다로 분류되며, 당분야에 알려진 바와 같은 특정 불변 영역을 특징으로 한다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되며, 항체 이소형은 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE로 정의한다. IgG 항체는 서브클래스, 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4로 추가 구분될 수 있다. 각각의 중쇄 유형은 당분야에 널리 알려진 서열을 갖는 특정 불변 영역을 특징으로 한다.
본원에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체"(Mab)는, 예를 들어, 임의의 진핵, 원핵 또는 파지 클론을 포함하는 단일 카피 또는 클론으로부터 유래되며, 이것이 제조되는 방법으로부터 유래되는 것이 아닌 항체를 나타낸다. 본 발명의 Mab은 바람직하게는 동종성 집단 또는 실질적으로 동종성 집단으로 존재한다. 완전 Mab은 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 함유한다.
달리 특정되지 않는 한, 용어 "DKK1 항체"는 전장 항체뿐만 아니라 DKK1 항체의 항원 결합 단편 둘 모두를 포괄한다.
이러한 모노클로날 항체의 "항원-결합 단편"에는, 예를 들어, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 및 단일쇄 Fv 단편뿐만 아니라 DKN-01 CDR을 이용할 수 있는 이중특이적 및/또는 다가 항체가 포함된다. 모노클로날 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 예컨대 CDR-그래프팅 또는 이러한 기술의 조합 또는 당분야에 알려진 다른 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 마우스는 인간 DKK1 또는 이의 단편으로 면역화될 수 있고, 생성 항체가 회수되고 정제될 수 있으며, 이들이 본원에 개시되는 항체 화합물과 유사하거나 동일한 결합 및 기능적 특성을 보유하는지 여부의 결정은 당분야에 알려진 방법에 의해 평가될 수 있다. 항원 결합 단편은 또한 통상적 방법에 의해 제조될 수 있다. 항체 및 항원 결합 단편의 제조 및 정제 방법은 당분야에 널리 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 5-8 and 15, ISBN 0-87969-314-2]에서 확인될 수 있다.
본원에 개시되는 모노클로날 DKK1 항체는 비-인간 항체로부터 유래되는 CDR 주변이 실질적으로 인간인 또는 전체 인간인 틀 영역을 포함하도록 조작된다. 이러한 인간 조작 항체의 "항원 결합 단편"에는, 예를 들어, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편 및 단일쇄 Fv 단편이 포함된다. "틀 영역" 또는 "틀 서열"은 임의의 하나의 틀 영역 1 내지 4를 나타낸다. 본원에 개시되는 항체에 의해 포괄되는 인간 조작 항체 및 이의 항원 결합 단편에는 임의의 하나 이상의 틀 영역 1 내지 4가 실질적으로 또는 전체 인간인 분자, 즉 개별의 실질적으로 또는 전체 인간인 틀 영역 1 내지 4의 임의의 가능한 조합이 존재하는 분자가 포함된다. 예를 들어, 여기에는 틀 영역 1 및 틀 영역 2, 틀 영역 1 및 틀 영역 3, 틀 영역 1, 2 및 3 등이 실질적으로 또는 전체 인간인 분자가 포함된다. 실질적으로 인간인 틀은 알려진 인간 생식계열 틀 서열과 적어도 약 80% 서열 동일성을 갖는 것들이다. 바람직하게는, 실질적으로 인간인 틀은 알려진 인간 생식계열 틀 서열과 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 99% 서열 동일성을 갖는다.
유사한 기능적 특성을 나타내는 본원에 개시되는 것들에 부가하여 인간 조작 항체는 몇몇 상이한 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 본원에 개시되는 특이적 항체 화합물은 추가적인 항체 화합물을 제조하기 위한 주형 또는 모체 항체 화합물로서 사용될 수 있다. 하나의 접근에서, 모체 항체 화합물 CDR은 모체 항체 화합물 틀과 높은 서열 동일성을 갖는 인간 틀 내로 그래프팅된다. 새로운 틀의 서열 동일성은 일반적으로 모체 항체 화합물에서 대응하는 틀의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99% 동일할 것이다. 상기 그래프팅은 모체 항체의 결합 친화도 대비 결합 친화도의 감소를 일으킬 수 있다. 이러한 경우, 틀은 문헌[Queen et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2869]에 의해 개시되는 특정 기준에 기반하여 소정 위치에서 모체 틀로 역-돌연변이될 수 있다. 마우스 항체의 인간화에 유용한 방법을 설명하는 추가 참고문헌에는 미국 특허 제4,816,397호; 제5,225,539호 및 제5,693,761호; 문헌[Levitt (1983) J. Mol. Biol. 168:595-620]에 기재되는 컴퓨터 프로그램 ABMOD 및 ENCAD; 및 Winter 및 공동 연구자의 방법(Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; 및 Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536)이 포함된다. 역-돌연변이를 위해 고려해야 하는 잔기의 확인 방법은 당분야에 알려져 있다(예컨대, 미국 특허 제8,148,498호 참고).
본원에서 기재된 치료 방법에서 투여되는 DKK1 항체는 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고 HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO:1의 아미노 서열을 갖고, HCDR1은 SEQ ID NO:4의 아미노 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NO:5의 아미노 서열을 갖는다.
하나의 구현예에서, DKK1 항체는 SEQ ID NO: 1의 아미노 서열을 갖는 LCDR1, SEQ ID NO: 2의 아미노 서열을 갖는 LCDR2, SEQ ID NO: 3의 아미노 서열을 갖는 LCDR3, SEQ ID NO: 4의 아미노 서열을 갖는 HCDR1, SEQ ID NO: 5의 아미노 서열을 갖는 HCDR2 및 SEQ ID NO: 6의 아미노 서열을 갖는 HCDR3을 포함한다.
또 다른 구현예에서, DKK1 항체는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함한다. 특정 구현예에서, LCVR은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하며 HCVR은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함한다.
추가 구현예에서, DKK1 항체는 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 갖는 중쇄(HC) 및 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 갖는 경쇄(LC)를 포함한다. SEQ ID NO: 17 및 SEQ ID NO: 18의 HC 및 LC 아미노산 서열을 각각 포함하는 DKK1 항체 또는 이의 항원 결합-단편은 본원에서 DKN-01로 불린다. 특히, DKN-01은 분자식/실험식 C6394 H9810 N1698 O2012 S42 및 분자량 144015달톤(온전한 형태)을 갖는다.
소정 구현예에서, 본원에 개시되는 DKK1 항체는 이의 단편의, SEQ ID NO: 22에 나타낸 서열을 포함하는 인간 DKK1에 대한 중화 활성을 갖는 IgG4 항체이다. 예를 들어, 정준 Wnt 신호전달은 골모세포 분화 및 활성을 위해 중요하다. BMP-4와 조합된 Wnt-3a는 다능성 마우스 C2C12 세포가 골모세포 활성 마커인 알칼리성 포스파타제("AP")의 측정 가능한 종결점을 가지며 골모세포로 분화하도록 유도한다. 정준 Wnt 신호전달의 억제제인 DKK1은 분화 및 AP의 제조를 억제한다. 중화 DKK1 항체는 AP의 DKK1-매개 억제를 방지한다. DKK1 억제 활성을 차단하는 항체는 AP 활성의 손실을 방지한다(미국 특허 제8,148,498호 참고). 특정 구현예에서, 중화 활성을 보유하는 DKK1 항체는 DKN-01이며, 이는 IgG4 항체이다.
본원에 개시되는 DKK1 항체는 미국 특허 제8,148,498호에 기재된 바와 같이, DKK1(예컨대, 인간 DKK1, SEQ ID NO: 22)에 대해 높은 친화도(Kd)를 보유한다. 예를 들어, 본 발명의 DKK1 항체는 37℃에서 0.5×10-12 M 내지 3.0×10-11 M의 Kd를 보유한다.
펨브롤리주맙
펨브롤리주맙은 프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 수용체에 대한 고 특이성 결합을 갖는 강력한 인간화 IgG4 mAb이며, 이에 따라 프로그래밍된 세포사 리간드 1(PD-L1) 및 프로그래밍된 세포사 리간드 2(PD-L2)와의 그 상호작용을 억제한다. 전임상 시험관내 데이터에 기반하여, 펨브롤리주맙은 PD-1에 대해 고 친화도이고 강력한 수용체 차단 활성을 갖는다. 펨브롤리주맙은 허용 가능한 전임상 안전성 프로필을 가지며 진행된 악성물에 대한 IV 면역치료법으로서 임상 개발 중이다. 그 상표명 키트루다(Keytruda™)로 알려진, 펨브롤리주맙은 여러 적응증에 걸친 환자 치료에 대해 권고된다. 또한, 펨브롤리주맙은 식도암을 포함하는 위장관암을 갖는 환자에서 연구되고 있다. 예비이기는 하지만, 식도암을 가진 환자에서 유망한 발견이 나타났다(Bilgin et al. Targeting the PD-1 pathway: a new hope for gastrointestinal cancers. Curr Med Res Opin. 2017;33(4):749-759.; Iams et al. Neoadjuvant Treatment for Locally Invasive Esophageal Cancer. World J Surg. 2017 Mar 7 [Epub ahead of print]; Chau et al. Interim safety and clinical activity in patients (pts) with advanced gastric or gastroesophageal junction (G/GEJ) adenocarcinoma from a multicohort phase 1 study of ramucirumab (R) plus pembrolizumab (P). J Clin Oncol. 35, 2017 (suppl 4S; abstract 102)). 2017년 5월에 펨브롤리주맙은 조직 유형 또는 종양 부위를 참작하지 않고 소정의 유전적 특성을 갖는 임의의 절제 불가능한 또는 전이성 고형 종양에 대해 승인되었다. 2017년 9월에, 펨브롤리주맙은 그 종양이 PD-L1을 발현하는 재발성 국소 진행된 또는 전이성, 위 또는 위식도 접합부 선암종을 갖는 환자에서 위암을 치료하기 위해 승인되었다.
종종 미세위성 불안정성을 초래하는, DNA 미스매치 보수를 유도하는 돌연변이를 갖는 종양은, 종양 항원으로 작용할 수 있는 여러 돌연변이된 단백질을 생성하는 경향이 있다; 펨브롤리주맙은 자가-체크포인트 시스템이 제거를 차단하는 것을 방지하여, 면역계에 의한 임의의 이러한 종양의 제거를 촉진하는 것으로 나타난다.
본원에서 사용되는 용어 "탁산"에는 파클리탁셀, 도세탁셀, 카르바지탁셀, 및 항신생물 특성을 보유하는 이의 유도체가 포함된다. 예를 들어, "파클리탁셀"에는 천연 유래 및 화학적으로 합성된 파클리탁셀이 모두 포함된다. 파클리탁셀은 TAXOL®로 판매된다. 본원에서 기재된 본 발명에서 사용하기 적합한 유도체화된 파클리탁셀에는 탈산소화된 파클리탁셀 화합물, 예컨대 미국 특허 제5,440,056호에 기재된 것들, 알부민-결합 파클리탁셀(ABRAXANE), DHA-파클리탁셀, 및 PG-파클리탁셀이 포함된다. 파클리탁셀 및 이의 유도체에 대한 화학식은 당분야에 알려져 있고 기재되어 있다. 다른 탁산 화합물은 문헌["Synthesis and Anticancer Activity of Taxol other Derivatives," D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry, vol. 26, entitled "New Trends in Natural Products Chemistry" (1986), Atta-ur-Rabman, P. W. le Quesne, Eds. (Elvesier, Amsterdam 1986), pp. 219-235]에 개시되어 있다. 또한, 예를 들어, 미국 특허 제5,569,729호; 제5,565,478호; 제5,530,020호; 제5,527,924호; 제5,508,447호; 제5,489,589호; 제5,488,116호; 제5,484,809호; 제5,478,854호; 제5,478,736호; 제5,475,120호; 제5,468,769호; 제5,461,169호; 제5,440,057호; 제5,422,364호; 제5,411,984호; 제5,405,972호; 및 제5,296,506호를 참고한다. 용어 "도세탁셀"에는 천연 유래 및 화학적으로 합성된 화합물 도세탁셀이 모두 포함된다. 도세탁셀은 TAXOTERE®로 판매된다.
투여 방식
본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위해 DKK1 항체 및 DKK1 항체와의 조합으로 사용되는 다른 치료제(예컨대, 펨브롤리주맙, 파클리탁셀, 시스플라틴, 젬시타빈 등)는 비경구, 경구, 경피, 설하, 협측, 직장, 비강내, 기관지내 또는 폐내 투여를 위해 제형화될 수 있다.
비경구 투여를 위해, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 주사 또는 주입, 예를 들어, 정맥내, 근육내 또는 피하 주사 또는 주입을 위해 또는 볼루스 용량 및/또는 주입(예컨대, 연속 주입)으로의 투여를 위해 제형화될 수 있다. 선택적으로 다른 제형화 제제, 예컨대 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유하는 유성 또는 수성 비히클 중 현탁액, 용액 또는 에멀젼이 사용될 수 있다.
경구 투여를 위해, 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 예컨대 결합제(예컨대, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필메틸셀룰로스); 충전제(예컨대, 락토스, 미정질 셀룰로스 또는 칼슘 포스페이트); 윤활제(예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 활석 또는 실리카); 붕해제(예컨대, 나트륨 전분 글리콜레이트); 또는 수화제(예컨대, 나트륨 라우릴 설페이트)와 함께 통상적인 수단에 의해 제조되는 정제 또는 캡슐 형태일 수 있다. 요망되는 경우, 정제는 적합한 방법을 사용하여 코팅될 수 있다. 경구 투여용 액체 조제물은 용액, 시럽 또는 현탁액 형태일 수 있다. 액체 조제물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제, 예컨대 현탁화제(예컨대, 소르비톨 시럽, 메틸 셀룰로스 또는 수소화된 식용 지방); 유화제(예컨대, 레시틴 또는 아카시아); 비수성 비히클(예컨대, 아몬드 오일, 유성 에스테르 또는 에틸 알코올); 및 보존제(예컨대, 메틸 또는 프로필 p-하이드록시 벤조에이트 또는 소르브산)와 함께 통상적 수단에 의해 제조될 수 있다.
협측 투여를 위해, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 통상적 방식으로 제형화된 정제 또는 로젠지 형태일 수 있다.
직장 투여를 위해, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 좌약 형태일 수 있다.
설하 투여를 위해, 정제는 통상적 방식으로 제형화될 수 있다.
비강내, 기관지내 또는 폐내 투여를 위해, 통상적 제형이 채택될 수 있다.
추가로, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 서방성 조제물로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 화합물은 활성 제제 화합물에 서방성 및/또는 제어 방출 특성을 제공하는 적합한 중합체 또는 소수성 물질로 제형화될 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 화합물은, 예를 들어, 주사에 의해 마이크로입자 형태로 또는 삽입에 의해 웨이퍼 또는 디스크 형태로 투여될 수 있다. 제어 방출 약물 조제물의 다양한 제형화 방법은 당분야에 알려져 있다.
본원에서 기재된 방법을 실시하는 데 유용한 화합물(예컨대, 단독으로 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합된 DKK1 항체), 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 본 발명의 하나 이상의 화합물(또는 이의 약제학적 염)을 포함하는 조성물의 투여는 연속, 시간당, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 2일 1회, 1주 2회, 1주 1회, 2주 1회, 1개월 1회, 또는 2개월 이상 1회, 또는 일부 다른 간헐적 투약 요법일 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 하나 이상의 화합물(또는 이의 약제학적 염)을 포함하는 조성물의 투여의 예에는 말초 투여가 포함된다. 말초 투여의 예에는 경구, 피하, 복강내, 근육내, 정맥내, 직장, 경피 또는 비강내 투여 형태가 포함된다.
본원에서 사용되는 말초 투여에는 두개내 투여를 제외하는, 본 발명의 화합물 또는 화합물을 포함하는 조성물의 모든 투여 형태가 포함된다. 말초 투여의 예에는 비제한적으로 경구, 비경구(예컨대, 근육내, 복강내, 정맥내 또는 피하 주사, 연장 방출, 서방성 임플란트, 데팟 등), 비강, 질, 직장, 설하 또는 경피 패치 적용을 포함하는 국소 투여 경로 등이 포함된다.
조합 치료법
본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 DKK1 항체 및 하나 이상의 제2 치료제(예컨대, 펨브롤리주맙, 파클리탁셀, 시스플라틴, 젬시타빈 등)는 비경구, 경구, 경피, 설하, 협측, 직장, 비강내, 기관지내 또는 폐내 투여를 위해 별도로 또는 조합되어 제형화될 수 있다.
본원에서 개시된 DKK1 항체는 펨브롤리주맙와의 조합으로 식도위암(예컨대 식도암 또는 위 선암종)의 치료를 위해 사용될 수 있다. 이러한 조합 투여는 DKK1 항체 및 펨브롤리주맙을 포함하는 단일 투여량 형태에 의할 수 있고, 이러한 단일 투여량 형태에는 정제, 캡슐, 스프레이, 흡입 분말, 주사액 등이 포함된다. 조합 투여는 단일 투여량 형태에 부가하여 추가적인 추가 제제(예컨대, 화학치료제)를 포함할 수 있다. 대안적으로, 조합 투여는 하나의 투여량 형태는 DKK1 항체를 포함하고 다른 하나의 투여량 형태는 제2량의 펨브롤리주맙을 포함하는, 2개의 상이한 투여량 형태의 투여에 의할 수 있다. 이 경우에서, 투여량 형태는 동일하거나 상이할 수 있다. 조합 치료법을 제한하고자 하지 않고, 하기 내용은 채택될 수 있는 소정 조합 치료법을 예시한다. 요구되는 제2량의 펨브롤리주맙 이외의 추가적인 화학치료제가 본원에 기재되는 방법에서 채택될 수 있음이 이해된다.
제2량의 펨브롤리주맙은 DKK1 항체의 투여 전에, 이와 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 따라서, DKK1 항체 및 펨브롤리주맙은 단일 제형물로 함께 투여될 수 있거나 별도 제형물로, 예컨대 동시에 또는 순차적으로 또는 둘 모두로 투여될 수 있다. 예를 들어, DKK1 항체 및 펨브롤리주맙이 별도 조성물로 순차적으로 투여되는 경우, DKK1 항체는 펨브롤리주맙 전에 또는 후에 투여될 수 있다. DKK1 항체 및 제2량의 펨브롤리주맙의 투여 사이의 시기는 당업자에 의해 용이하게 결정될 것이다. 소정 구현예에서, DKK1 항체는 펨브롤리주맙에 선행하거나 그 직후 또는 당업자에 의해 적절한 것으로 간주되는 일부 시기 후일 수 있다.
또한, DKK1 항체 및 제2량의 펨브롤리주맙은 유사한 투여 일정으로 투여될 수도 있고 그렇게 투여되지 않을 수도 있다. 예를 들어, DKK1 항체 및 펨브롤리주맙은 DKK1 항체가 펨브롤리주맙보다 더 큰 빈도로 또는 그 반대로 투여되도록 하는 상이한 반감기를 갖고/갖거나 상이한 시간-척도 상에서 작용할 수 있다. 예를 들어, DKK1 항체 및 펨브롤리주맙은 같은 날 함께(예컨대, 단일 투여량으로 또는 순차적으로) 투여된 후, 설정된 일수 후 화학치료제만(또는 상이한 화학치료제)의 투여가 뒤따를 수 있다. 치료제의 투여 사이의 일수는 각 약물의 안전성, 약동학 및 약력학에 따라 적절히 결정될 수 있다. DKK1 항체 또는 펨브롤리주맙은 급성으로 또는 만성으로 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, DKN-01 및 펨브롤리주맙의 조합 치료를 위한 치료 기간은 환자가 조합 치료법으로부터 임의의 임상적 이익을 획득하지 않는 것으로 결정될 때까지 반복될 수 있는 21일 주기이다. 예를 들어, 환자는 약 1주기부터 약 30주기(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 7, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30)까지의 치료를 거칠 수 있다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 부인과 암에 대해 치료받고 있다. 치료는 본원에서 기재된 임상 시험 후, DKK1 항체, 예컨대 DKN-01, 및 파클리탁셀의 조합 투여를 포함한다.
본원에서 사용되는 "유효량"은 표적 장애를 치료적으로 또는 예방적으로 치료하기 충분한 치료제 또는 치료제 조합의 양을 나타낸다. 유효량은 환자의 연령, 성별 및 체중, 환자의 현재 의학적 상태 및 치료받고 있는 식도암 또는 위암의 성질에 의존할 것이다. 당업자는 이들 및 다른 요인에 따라 적절한 투여량을 결정할 수 있을 것이다.
예시적 구현예에서, 이를 필요로 하는 대상체는 단일치료법을 수여받으므로(즉, 제1량의 제1 치료제가 투여되고 있음), 제1량의 제1 치료제가 유효량이다. 또 다른 예시적 구현예에서, 이를 필요로 하는 대상체는 조합 치료법을 수여받고 있으므로, 예컨대 제1량의 제1 치료제 및 제2량의 제2 치료제를 수여받으므로, 제1량 및 제2량 조합이 유효량이다. 추가 구현예에서, 조합 치료법은 제3량의 제3 치료제를 채택할 수 있으므로, 제1량, 제2량, 및 제3량 조합이 유효량이다.
유효량은 제1량의 DKK1 항체(또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 용매화물) 및 제2량의 펨브롤리주맙을 공동투여함으로써 본 발명의 방법 또는 조성물에서 달성될 수 있다. 하나의 구현예에서, DKK1 항체 및 펨브롤리주맙은 각각의 유효량으로(예컨대, 각각 단독으로 투여되는 경우 치료적으로 유효할 양으로) 각각 투여된다. 또 다른 구현예에서, DKK1 항체 및 펨브롤리주맙은 각각, 단독으로 치료 효과를 제공하지 않는 양(치료-미만 용량)으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, DKK1 항체는 유효량으로 투여될 수 있는 반면, 펨브롤리주맙은 치료-미만 용량으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, DKK1 항체는 치료-미만 용량으로 투여될 수 있는 반면, 펨브롤리주맙은 유효량으로 투여된다.
DKK1 항체에 대한 투여 당 적합한 용량에는 약 15 ㎎, 약 20 ㎎, 약 30 ㎎, 약 40 ㎎, 약 50 ㎎, 약 100 ㎎, 약 150 ㎎, 약 200 ㎎, 약 300 ㎎, 약 400 ㎎, 약 500 ㎎, 약 600 ㎎, 약 625 ㎎, 약 650 ㎎, 약 675 ㎎, 약 700 ㎎, 약 725 ㎎, 약 750 ㎎, 약 775 ㎎, 약 800 ㎎, 약 825 ㎎, 약 850 ㎎, 약 875 ㎎, 약 900 ㎎, 약 925 ㎎, 약 950 ㎎, 약 975 ㎎, 약 1000 ㎎, 약 1025 ㎎, 약 1050 ㎎, 약 1075 ㎎, 약 1100 ㎎, 약 1125 ㎎, 약 1150 ㎎, 약 1175 ㎎, 약 1200 ㎎, 약 1225 ㎎, 약 1250 ㎎, 약 1275 ㎎, 약 1300 ㎎, 약 1325 ㎎, 약 1350 ㎎, 약 1375 ㎎, 약 1400 ㎎, 약 1425 ㎎, 약 1450 ㎎, 약 1475 ㎎, 약 1500 ㎎, 약 1525 ㎎, 약 1550 ㎎, 약 1575 ㎎, 약 1600 ㎎, 약 1625 ㎎, 약 1650 ㎎, 약 1675 ㎎, 약 1700 ㎎, 약 1725 ㎎, 약 1750 ㎎, 약 1775 ㎎, 약 1800 ㎎, 약 1825 ㎎, 약 1850 ㎎, 약 1875 ㎎, 약 1900 ㎎, 약 1925 ㎎, 약 1950 ㎎, 약 1975 ㎎, 약 2000 ㎎, 약 2025 ㎎, 약 2050 ㎎, 약 2075 ㎎, 약 2100 ㎎, 약 2125 ㎎, 약 2150 ㎎, 약 2175 ㎎, 약 2200 ㎎, 약 2225 ㎎, 약 2250 ㎎, 약 2275 ㎎, 약 2300 ㎎, 약 2325 ㎎, 약 2350 ㎎, 약 2375 ㎎, 약 2400 ㎎, 약 2425 ㎎, 약 2450 ㎎, 약 2475 ㎎, 약 2500 ㎎, 약 2525 ㎎, 약 2550 ㎎, 약 2575 ㎎, 약 2600 ㎎ 또는 약 3,000 ㎎ 이상의 용량이 포함된다. 각각의 적합한 용량은 당업자에 의해 적절한 것으로 간주되는 시기에 걸쳐 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 적합한 용량은 약 30분 내지 최대 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간 또는 약 8시간의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, DKK1 항체(예컨대, DKN-01)에 대한 적합한 용량은 약 50 ㎎ 내지 약 300 ㎎(예컨대 50 ㎎, 75 ㎎, 100 ㎎, 125 ㎎, 150 ㎎, 175 ㎎, 200 ㎎, 225 ㎎, 250 ㎎, 275 ㎎ 또는 300 ㎎)일 수 있다. 선택된 용량은 약 30분 내지 약 2시간의 기간에 걸쳐 정맥내 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, DKK1 항체에 대한 적합한 용량은 약 30분 및 최대 약 2시간의 기간에 걸쳐 투여되는 약 150 ㎎일 수 있다. DKK1 항체에 대한 또 다른 적합한 용량은 약 30분 및 최대 약 2시간의 기간에 걸쳐 투여되는 약 300 ㎎일 수 있다. 열거된 기간에 걸친 이들 용량의 투여는 정맥내 경로를 사용하여 달성될 수 있다.
펨브롤리주맙에 대한 투여 당 적합한 용량은 표지 상에서 확인되는 권장 투약에 기반하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 펨브롤리주맙의 투여 당 적합한 용량은 적어도 30분 기간에 걸쳐 정맥내로 약 50 ㎎ 내지 약 200 ㎎이다. 상기 투여는 3주마다 반복될 수 있다. 특정 구현예에서, 투여 당 적합한 용량은 정맥내 투여를 사용하여 30분 주입 기간에 걸쳐 약 200 ㎎이다. 상기 투여는 3주마다 반복될 수 있다. 펨브롤리주맙의 다른 적합한 용량에는 2 ㎎/㎏ Q3W(3주마다), 10 ㎎/㎏ Q3W(3주마다), 및 10 ㎎/㎏ Q2W(2주마다)가 포함된다. 특정 구현예에서, 펨브롤리주맙의 용량은 정맥내로 200 ㎎이다. 하나의 양태에서, 200 ㎎은 30분에 걸쳐 투여된다.
탁산(예컨대, 파클리탁셀)에 대한 투여 당 적합한 용량은 표지 상에서 확인되는 권장 투약에 기반하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 파클리탁셀의 투여 당 적합한 용량은 약 200 ㎎/㎡ 내지 약 20 ㎎/㎡이다. 특정 구현예에서, 파클리탁셀의 용량은 80 ㎎/㎡이다. 탁산(예컨대, 파클리탁셀)은 정맥내로 투여될 수 있다. 정맥내 투여는 약 1시간에 걸칠 수 있다.
젬시타빈에 대한 투여 당 적합한 용량은 표지 상에서 확인되는 권장 투약에 기반하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 젬시타빈의 투여 당 적합한 용량은 약 2000 ㎎/㎡ 내지 약 500 ㎎/㎡이다. 특정 구현예에서, 젬시타빈의 용량은 1000 ㎎/㎡이다.
시스플라틴에 대한 투여 당 적합한 용량은 표지 상에서 확인되는 권장 투약에 기반하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 시스플라틴의 투여 당 적합한 용량은 약 10 ㎎/㎡ 내지 약 40 ㎎/㎡이다. 특정 구현예에서, 시스플라틴의 용량은 20 ㎎/㎡이다.
본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 포유류, 바람직하게는 인간을 나타내지만, 또한 수의과적 치료를 필요로 하는 동물, 예컨대 반려 동물(예컨대, 개, 고양이 등), 농장 동물(예컨대, 소, 양, 돼지, 말 등) 및 실험실 동물(예컨대, 래트, 마우스, 기니아픽 등)을 의미할 수 있다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 특정 구현예에서, 대상체는 항-PD-1/PD-L1 모노클로날 항체(예컨대, 펨브롤리주맙, 니볼루맙 아테졸리수마그, 두르발루맙 또는 아벨루맙)로 이전에 치료받았고 대상체의 질환은 이러한 사전 치료에 불응성이다.
본원에서 사용되는 "치료"에는 식도암 또는 위 선암종에 관련된 임상 적응증 진행의, 부분적으로 또는 실질적으로의, 지연, 억제 또는 방지의 달성이 포함된다. 예를 들어, "치료"에는, 예를 들어, 전산화 단층촬영(CT) 스캔, 자기 공명 조영(MRI), 흉부 x-선 및 CT/양전자 방출 단층촬영(CT/PET) 스캔을 포함하는, 당분야에 알려진 표준 조영 방법에 의해 검출되고 당분야에 알려진 가이드라인 및 방법에 따라 평가되는, 종양 성장의 감소 또는 추가 성장의 방지가 포함된다. 예를 들어, 치료에 대한 반응은 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST)(개정된 RECIST 가이드라인 버전 1.1; 문헌[Eisenhauer et al., Eur.. J. Cancer 45(2):228-47, 2009] 참고)을 통해 평가될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, "치료"는 RECIST 가이드라인에 따라 모든 표적 병소의 소실로서 정의되는 완전 반응(CR) 또는 기준선 합계 지름을 참조하여 취해지는, 표적 병소 지름의 합계에서의 적어도 30% 감소로서 정의되는 부분 반응(PR)을 나타낸다. 치료에 대한 종양 반응을 평가하기 위한 다른 수단에는 종양 마커의 평가 및 수행 상태의 평가(예컨대, 크레아티닌 제거율의 평가; 문헌[Cockcroft and Gault, Nephron. 16:31-41, 1976] 참고)가 포함된다.
약학 조성물
DKK1 항체 및 펨브롤리주맙은 투여에 적합한 약학 조성물 내로 포함될 수 있다. 이러한 조성물은 전형적으로 임의의 조합의 항체 또는 펨브롤리주맙, 또는 하나 이상의 추가 화학치료제, 그리고 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본원에서 사용되는 언어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 약학적 투여와 상용성인, 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장성 제제 및 흡수 지연제 등을 포함하려는 것이다. 약학 활성 성분을 위한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당분야에 널리 알려져 있다. 임의의 통상적 매질 또는 제제는 활성 화합물과 비상용성인 범위까지를 제외하고, 조성물에서 이의 사용이 고려된다.
본 발명의 약학 조성물은 그 의도되는 투여 경로와 상용성으로 제형화된다. 투여 경로의 예에는 비경구, 예컨대, 정맥내, 피내, 피하, 경구(예컨대, 흡입), 경피(국소), 경점막 및 직장 투여가 포함된다. 비경구, 피내 또는 피하 적용을 위해 사용되는 용액 또는 현탁액에는 하기 성분: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수 용액, 신전유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항균제, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 나트륨 바이설파이트; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 긴장성 조정을 위한 제제, 예컨대 나트륨 클로라이드 또는 덱스트로스가 포함될 수 있다. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염화수소산 또는 나트륨 하이드록사이드로 조정될 수 있다. 비경구 조제물은 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 주사기 또는 다회 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
주사제 용도에 적합한 약학 조성물에는 멸균 수용액(수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 주사제 용액 또는 분산액의 체외 제조를 위한 멸균 분말이 포함된다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체에는 생리 식염수, 정균수, Cremophor EL(TM)(BASF, Parsippany, N.J.) 또는 인산염 완충 식염수(PBS)가 포함된다. 모든 경우에서, 조성물은 멸균이어야 하며, 용이한 주사성이 존재하는 정도까지 유체여야 한다. 이는 제조 및 보관 조건 하에 안정해야 하며, 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에테일렌 글리콜 등) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에서, 등장성 제제, 예를 들어, 당, 폴리알코올, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 나트륨 클로라이드를 조성물에 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사제 조성물의 연장된 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시켜 일으킬 수 있다.
멸균 주사제 용액은 요구되는 바와 같이, 요구되는 양의 활성 화합물(예컨대, 단독으로 또는 펨브롤리주맙과 조합된 DKK1 항체, 파클리탁셀과 조합된 DKK1 항체, 젬시타빈 및 시스플라틴과 조합된 DKK1 항체)을 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매에 혼입한 후 여과 멸균하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 활성 화합물을 포함시켜 제조된다. 멸균 주사제 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 이의 사전 멸균-여과 용액으로부터 활성 성분 + 임의의 추가적인 요망되는 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동 건조이다.
경구 조성물에는 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체가 포함된다. 이들은 젤라틴 캡슐에 봉입되거나 정제로 압축될 수 있다. 경구 치료제 투여의 목적을 위해, 활성 화합물은 부형제와 함께 포함되고 정제, 트로키 또는 캡슐 형태로 사용될 수 있다. 경구 조성물은 또한 구강세척제로서 사용하기 위해 유체 담체를 사용하여 제조될 수 있고, 여기서 유체 담체 중 화합물은 경구 적용되고 가글로 헹궈지고 배출되거나 삼켜진다. 약제학적으로 상용성인 결합제, 및/또는 아주반트 물질이 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로키 등은 유사한 성질의 임의의 하기 성분 또는 화합물: 결합제, 예컨대 미정질 셀룰로스, 트래거캔스 고무 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대 전분 또는 락토스, 붕해제, 예컨대 알긴산, 프리모겔(Primogel) 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로테스(Sterotes); 활택제, 예컨대 콜로이드성 실리콘 디옥사이드; 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린; 또는 풍미제, 예컨대 박하, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 풍미제를 함유할 수 있다.
흡입에 의한 투여를 위해, 화합물은 적합한 추진제, 예컨대 이산화탄소와 같은 기체를 함유하는 가압 용기 또는 분배기 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 전달된다.
전신 투여는 또한 경점막 또는 경피 수단에 의할 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 투과될 장벽에 적절한 침투제가 제형물에서 사용된다. 이러한 침투제는 당분야에 일반적으로 알려져 있으며, 예를 들어, 경점막 투여를 위해, 세제, 담즙산 염 및 푸시딘산-유도체가 포함된다. 경점막 투여는 비강 스프레이 또는 좌약의 사용을 통해 달성될 수 있다.
경피 투여를 위해, 활성 화합물은 당분야에서 일반적으로 알려진 연고, 고약, 겔 또는 크림으로 제형화된다.
화합물은 또한 직장 전달을 위한 좌약(예컨대, 통상적인 좌약 기재, 예컨대 코코아 버터 및 다른 글리세라이드와 함께) 또는 체류 하제 형태로 제조될 수 있다.
하나의 구현예에서, 활성 화합물은 화합물을 신체로부터의 빠른 제거에 대해 보호할 담체와 함께, 예컨대 임플란트 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형으로 제조된다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 다중무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르소에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 당업자에게 자명할 것이다. 물질은 또한 Alza Corporation 및 Nova Pharmaceuticals, Inc.로부터 상업적으로 수득될 수 있다. 리포좀 현탁액(바이러스 항원에 대한 모노클로날 항체로 감염된 세포에 표적화된 리포좀 포함)이 또한 약제학적으로 허용 가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 당업자에게 알려진, 예를 들어, 미국 특허 제4,522,811호에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다.
특히 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여량 단위 형태로 경구 또는 비경구 조성물을 제형화하는 것이 유리하다. 본원에서 사용되는 투여량 단위 형태는 치료받을 대상체에 대한 단위 투여량으로서 적합한 물리적 개별 단위를 나타낸다; 각각의 단위는 요구되는 약학 담체와 함께 요망되는 치료 효과를 생성하기 위해 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여량 단위 형태에 대한 사양은 활성 화합물의 고유 특징 및 달성될 특정 치료 효과 그리고 개인의 치료를 위해 이러한 활성 화합물의 화합 분야에 내재적인 한계에 의해 지정되며 이에 직접 의존한다.
서열
하기는 본원에서 기재된 다양한 예시적 구현예의 실시에서 채택될 수 있는 DKN-01 항체의 서열이다.
LCDR1
His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His(SEQ ID NO: 1)
LCDR2
Tyr Xaa Arg Gln Ser Xaa Gln(SEQ ID NO: 2)
식 중, 위치 2에서의 Xaa는 Gly 또는 Ala이고; 위치 6에서의 Xaa는 Ile 또는 Glu이다.
LCDR3
Gln Gln Ser Xaa Ser Trp Pro Leu His(SEQ ID NO: 3)
식 중, 위치 4에서의 Xaa는 Glu 또는 Ala이다.
HCDR1
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser(SEQ ID NO: 4)
HCDR2
Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys(SEQ ID NO: 5)
HCDR3
Pro Gly Tyr Xaa Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile(SEQ ID NO: 6)
식 중, 위치 4에서의 Xaa는 His 또는 Asn이다.
LCVR
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Xaa Arg Gln Ser Xaa Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Xaa Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO: 7)
식 중, 위치 51에서의 Xaa는 Gly 또는 Ala이며; 위치 55에서의 Xaa는 Ile 또는 Glu이고 위치 92에서의 Xaa는 Glu 또는 Ala이다.
HCVR
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Gly Tyr Xaa Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO: 8)
식 중, 위치 102에서의 Xaa는 His 또는 Asn이다.
LCVR
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Gly Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Glu Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO: 9)
HCVR
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Gly Tyr His Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO: 10)
LCVR
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Glu Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO: 11)
HCVR
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Gly Tyr Asn Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO: 12)
LCVR
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Gly Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO: 13)
LCVR
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Arg Gln Ser Glu Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO: 14)
HC
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Gly Tyr His Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly(SEQ ID NO: 15)
LC
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Gly Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Glu Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys(SEQ ID NO: 16)
HC
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Gly Tyr Asn Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly(SEQ ID NO: 17)
LC
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Glu Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys(SEQ ID NO: 18)
HC
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Gly Tyr His Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly(SEQ ID NO: 19)
LC
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Gly Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys(SEQ ID NO: 20)
LC
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Arg Gln Ser Glu Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys(SEQ ID NO: 21)
인간 DKK1 아미노산 서열
Thr Leu Asn Ser Val Leu Asn Ser Asn Ala Ile Lys Asn Leu Pro Pro Pro Leu Gly Gly Ala Ala Gly His Pro Gly Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Gly Ile Leu Tyr Pro Gly Gly Asn Lys Tyr Gln Thr Ile Asp Asn Tyr Gln Pro Tyr Pro Cys Ala Glu Asp Glu Glu Cys Gly Thr Asp Glu Tyr Cys Ala Ser Pro Thr Arg Gly Gly Asp Ala Gly Val Gln Ile Cys Leu Ala Cys Arg Lys Arg Arg Lys Arg Cys Met Arg His Ala Met Cys Cys Pro Gly Asn Tyr Cys Lys Asn Gly Ile Cys Val Ser Ser Asp Gln Asn His Phe Arg Gly Glu Ile Glu Glu Thr Ile Thr Glu Ser Phe Gly Asn Asp His Ser Thr Leu Asp Gly Tyr Ser Arg Arg Thr Thr Leu Ser Ser Lys Met Tyr His Thr Lys Gly Gln Glu Gly Ser Val Cys Leu Arg Ser Ser Asp Cys Ala Ser Gly Leu Cys Cys Ala Arg His Phe Trp Ser Lys Ile Cys Lys Pro Val Leu Lys Glu Gly Gln Val Cys Thr Lys His Arg Arg Lys Gly Ser His Gly Leu Glu Ile Phe Gln Arg Cys Tyr Cys Gly Glu Gly Leu Ser Cys Arg Ile Gln Lys Asp His His Gln Ala Ser Asn Ser Ser Arg Leu His Thr Cys Gln Arg His(SEQ ID NO: 22)
예시
임상 시험의 기재
아래에서 상세히 논의되는 데이터는 3개의 별도 임상 시험으로부터 생성되었다. 3개의 별도 임상 시험은 치료받는 암 유형에 의해 차별화된다. 3개의 임상 시험은 식도위암, 부인과 암 및 담도암의 치료에 대한 것이었다. 각각의 연구에서, 단독으로 또는 적어도 하나의 다른 추가 치료제와의 조합으로, 150 ㎎의 DKN-01을 수여받은 2명의 환자를 제외하고, 환자에 300 ㎎의 DKN-01을 투여하였다. 각각의 연구는 아래에서 상세히 논의된다.
식도위암
대상체: 조직학적으로 확인된 재발성 또는 전이성 식도 또는 위식도 접합부(GEJ) 또는 위 선암종을 가진 남성 및 여성 환자.
치료 요법:
a) 조합 치료법-DKN-01 및 파클리탁셀, 28-일 주기: 표준 임상 관례에 따라 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 1시간에 걸쳐 IV 투여되는 파클리탁셀과 함께, 300 ㎎의 DKN-01을 단속 없이 각 주기의 제1일 및 제15일에 최소 30분 및 최대 2시간에 걸쳐 IV로 투여하였다. DKN-01을 먼저, 이어서 파클리탁셀을 투여하였다. DKN-01의 용량은 300 ㎎이었다. 파클리탁셀의 용량은 80 ㎎/㎡이었다.
b) 조합 치료법-DKN-01 및 펨브롤리주맙, 21-일 주기: 표준 임상 관례에 따라 각 주기의 제1일에 30분에 걸쳐 IV 투여되는 펨브롤리주맙과 함께, 300 ㎎의 DKN-01을 단속 없이 각 주기의 제1일 및 제15일에 최소 30분 및 최대 2시간에 걸쳐 IV로 투여하였다. 2명의 환자는 150 ㎎ DKN-01을 수여받았다. DKN-01을 먼저, 이어서 펨브롤리주맙을 투여하였다.
c) 단일치료법-DKN-01, 28-일 주기: 300 ㎎의 DKN-01을 각 주기의 제1일 및 제15일에 최소 30분 및 최대 2시간에 걸쳐 IV로 투여하였다.
환자의 연구 참여 지속기간에는 스크리닝 기간, 치료 기간(상기 주지된 바와 같은 21-일 주기 또는 28-일 주기) 및 추적 기간이 포함된다. 추적 기간에 있어서, 방문은 연구 치료의 마지막 용량 후 30일 내에 일정을 잡았다. 환자는 신체 검사, 동시 투약 검토, ECOG PS, 활력 징후, 임상 안전성 실험실 시험, 혈청 임신 시험, 12-극 ECG, 고형 종양 측정을 가졌고 상기 방문에서 방사선학적 평가를 수행한다. 약동학 및 약력학 평가를 위한 단회 혈액 샘플을 무작위 샘플로 채취하였다. 연구 치료 중단 후 장기 추적에서, 진행성 질환을 갖지 않는 환자는 RECIST v1.1 가이드라인을 사용하여 질환 진행, 사망 전까지, 또는 연구 중단 전까지 종양 반응에 대한 평가를 포함하는 일상적 임상 관례에 따라 12주마다 계속 모니터링된다.
유효성 평가:
조합 치료법의 항종양 활성을 하기와 같이 평가하였다.
각각의 환자를 종양 측정을 위해 하기 방사선학적 시험 중 하나 이상에 의해 평가하였다:
· 전산화 단층촬영(CT) 스캔
· MRI
· 흉부 x-선
· CT/양전자 방출 단층촬영(CT/PET) 스캔(타당한 경우마다, 연구 전반에 걸쳐 사용될 바람직한 조영 방식은 CT/PET 스캔임).
고형 종양(들)의 기준선 방사선학적 평가를 수행하였고 주기 3의 시작 전에 그리고 이후 홀수 주기마다 반복하여 RECIST v. 1.1(개정된 RECIST 가이드라인 버전 1.1; Eisenhauer et al. 2009)을 사용해서 종양 반응 및 진행에 대해 평가하였다. DKN-01 및 펨브롤리주맙의 조합 치료법을 수여받는 환자에 있어서, 일부 경우 면역-관련 반응 기준(iRECIST)을 사용하여 종양 반응 및 진행을 평가하였다(Seymour L, Bogaerts J, Perrone A, et al. iRECIST: Guidelines for resonse criteria for use in trials testing immunotherapeutics. Lancet Oncol 2017;18(3):e143-e152 참고).
표적 병소의 평가를 RECIST v. 1.1에 따라 하기와 같이 특성규명하였다:
완전 반응(CR): 모든 표적 병소의 소실. 임의의 병리적 림프절(표적이건 표적이 아니건)은 단축에서 10 mm 미만으로의 감소를 가져야 한다. 종양 마커 결과는 표준화되어야 한다.
부분 반응(PR): 기준선 합 지름을 참조로 하여, 표적 병소의 합 지름에서 적어도 30% 감소.
진행성 질환(PD): 연구에서 최소합을 참조로 하여(기준선 합이 최소인 경우 이를 포함함), 표적 병소의 지름 합의 적어도 20% 증가. 상대 증가 20%에 부가하여, 합은 또한 적어도 5 ㎜의 절대 증가를 보여야 한다. 하나 이상의 새로운 병소의 출현도 진행으로 간주된다.
안정한 질환(SD): 연구가 진행중인 동안 최소 합 지름을 참조로 하여, PR로 간주되는 충분한 수축도, PD로 간주되는 충분한 증가도 없음.
평가 불가능함(NE): 표적 병소의 불완전한 방사선학적 평가가 수행되는 경우 또는 기준선으로부터 측정 방법에 변화가 존재하는 경우(NE는 또한 수행되지 않음/누락됨을 나타낼 수 있음).
부인과 암
대상체: 상피 자궁내막암(EEC) 및 상피 난소암(EOC)을 갖는 여성 환자. EEC를 갖는 환자는 이전에 치료받은 EEC 재발의 조직학적 확진(재발에 대해 원발 수술 시편 또는 생검에 의해)을 가져야 한다. EOC를 가진 환자는 재발성 백금-내성/불응성 EOC 암, 원발 복강암, 또는 나팔관암의 조직학적 확진(재발에 대해 원발 수술 시편 또는 생검에 의해)을 가져야 한다(즉, 완료 6개월 내의 질환 재발 또는 백금-기반 화학치료법 동안의 진행).
치료 요법:
a) DKN-01 단일치료법-28 일 주기: 28-일 주기의 제1일 및 제15일에 300 ㎎ DKN-01. DKN-01을 최대 30분 및 최대 2시간에 걸쳐 정맥내로 투여하였다.
b) 조합 치료법-DKN-01 및 파클리탁셀, 28-일 주기: 300 ㎎의 DKN-01 및 80 ㎎/㎡. 300 ㎎의 DKN-01을 28일 주기의 제1일 및 제15일에 최소 30분 및 최대 2시간에 걸쳐 정맥내로 투여하였다. 파클리탁셀을 표준 임상 관례에 따라 각각의 28일 주기의 제1일, 제8일 및 제15일에 1시간에 걸쳐 정맥내로 투여하였다. DKN-01을 먼저, 이어서 파클리탁셀을 별도 주입으로 각 주기의 제1일 및 제15일에 투여하였다.
환자의 연구 참여 지속기간에는 스크리닝 기간, 치료 기간 및 추적 기간이 포함된다. 추적 기간에 있어서, 방문은 치료 기간에서 마지막 치료 투여 후 30일 내에 일정을 잡았다. 치료 중단 및 진행성 질환의 방사선학적 보고 후, 모든 환자는 사망, 동의 철회, 추적 소실, 또는 연구 중단 전까지 생존에 대해 생존 추적 단계로서 추적될 것이다. 생존 추적은 치료 방문 종료 후 매년 4회(3개월마다) 일어날 것이다.
유효성 평가:
각각의 연구에 대한 일차 유효성 종결점은 고형 종양에서의 반응 평가 기준, 버전 1.1(RECIST 1.1)(Eisenhauer EA, Therasse P, Bogaerts J. et al. New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer. 2009;45(2):228-247. ORR is the best overall response [BOR] of complete response [CR] + partial response [PR])을 사용하여 평가된 바와 같은 객관적 반응률(ORR)이었다.
각각의 연구에서 이차 유효성 종결점은 하기와 같았다:
a) RECIST 1.1. ODCR을 사용하여 평가된 바와 같은 객관적 질환 제어율(ODCR). OCDR은 CR + PR + 안정[SD] > 6주이다(CR=완전 반응 및 PR=부분 반응);
b) 첫 번째 연구 약물 용량부터 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 정의되는, OS(전체 생존);
c) 첫 번째 연구 약물 용량부터 RECIST 1.1을 사용하여 결정된 바와 같은 첫 번째 방사선학적으로-보고된 진행성 질환(PD) 또는 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 정의되는, PF(무진행 생존).
d) 첫 번째 연구 약물 용량부터 RECIST 1.1을 사용하여 결정된 바와 같은 첫 번째 방사선학적으로-보고된 진행성 질환일까지의 시간으로 정의되는, TTP;
e) 최초 반응(≥PR)부터 방사선학적으로-보고된 PD 또는 사망 전까지의 시간으로 정의되는, DoR(반응의 지속기간); PD는 RECIST 1.1을 사용하여 정의된다;
f) 최초 CR부터 방사선학적으로-보고된 PD 또는 사망 전까지의 시간으로 정의되는, DoCR(완전 반응의 지속기간); PD는 RECIST 1.1을 사용하여 정의된다;
g) CR, PR 또는 SD의 첫 번째 종양 평가 시간부터 RECIST 1.1을 사용하여 결정된 바와 같은, PD 시간까지 또는 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 정의되는, DoCB(임상적 이익의 지속기간); 및
h) 첫 번째 연구 약물 용량으로부터 PD, 독성, 및 사망을 포함하는, 임의의 원인으로 인한 DKN-01의 중단일까지의 시간으로 정의되는, TTTF.
담도암
대상체: 절제 불가능하고, 국소 진행되거나 전이성인 질환의 임상적 및/또는 방사선학적 증거를 갖는, 간내 또는 간외 담도계 또는 담낭에 원발성인 조직학적으로 또는 세포학적으로 보고된 암종을 갖는 남성 및 여성 환자.
치료 요법: 조합 치료법-DKN-01, 젬시타빈 및 시스플라틴, 21-일 주기: 300 ㎎의 DKN-01을 단속 없이 21일 주기의 제1일 및 제8일에 최소 30분 및 최대 2시간에 걸쳐 IV 투여하였다. 제1일 및 제8일에, 표준 임상 관례에 따라 시스플라틴 및 젬시타빈을 IV 주입을 통해 투여하였다. 25 ㎎/㎡의 시스플라틴을 투여하고 1000 ㎎/㎡의 젬시타빈을 투여한다.
환자의 연구 참여의 지속기간에는 스크리닝 기간, 21일 주기로 구성되는 치료 기간 및 치료-후 기간이 포함된다. 치료 기간의 종료 후 환자는 임상 관례에 따라(환자가 진행성 질환과 관련되지 않은 이유로 연구 약물을 중단하는 경우) 및 사망 또는 연구 중단 전까지 생존에 대해 진료소 방문 또는 전화를 통해 추적된다. 보고된 질환 진행이 없이 연구 치료를 중단하는 환자는 질환 진행, 사망 전까지, 또는 연구 중단 전까지 RECIST 기준을 사용하여 반응에 대해 계속 평가된다.
유효성 평가:
진행된 고형 악성물을 갖는 환자에서 측정 가능한 질환의 결정을 허용하는 표준 케어 방사선학적 조영(예컨대, 전산화 단층촬영[CT], 자기 공명 조영[MRI]). 고형 종양의 기준선 방사선학적 평가를 수행하였고 주기 3 시작 전에 및 이후 홀수 주기마다 반복하여(주기 시작 3일 내에), RECIST 기준을 사용하여 종양 반응을 평가하였다. 환자는 방사선학적 평가에 대한 균일성을 제공하기 위해 연구 전반에 걸쳐(기준선에서 및 후속 평가에서) 사용되는 동일한 방사선학적 조영 방식을 가져야 한다. 반응이 주지되는 경우, 반응을 확인하기 위해 최소 4주 후 추적 방사선학적 평가가 요구된다.
치료에 대한 임상 반응은 고형 종양에 대한 RECIST 1.1 기준에 기반하였다. 하기 평가를 수행할 것이다: 첫 번째 및 최고 반응까지의 시간, 객관적 반응률(ORR), 무진행 생존(PFS), 반응의 지속기간(DoR, 및 전체 생존(OS).
실시예
실시예 1: H-스코어 및 양성% 값의 RNAscope®-기반 결정
본원에서 기재된 분석에서 채택되는 H-스코어는 하기와 같이 수득하였다.
Leica Biosystems BOND RX 플랫폼(LS) 상에서 2.5 LS 또는 2.5 LSx Red 시약 키트(ACD)를 사용하여 싱글-플렉스 자동화 RNAscope 검정을 수행하였다. 여기에 표적 회수(Leica 에피토프 회수 완충액 2를 사용하여 95℃에서 15분) 및 40℃에서 15분 동안의 프로테아제 III 처리를 포함하는 사전처리가 뒤따랐다. 이어서 탐침을 42℃에서 2 h 동안 혼성화한 후 RNAscope 특이적 증폭을 수행하였다. 이어서 Bond Polymer Refine Red 검출 키트를 사용하여 발색 검출을 수행하였다. RNAscope 탐침 설계는 이전에 기재되었다. 하기 ACD RNAscope 탐침을 본 연구에서 사용하였다: Hs-DKK1(cat. 421418), Hs-PPIB(cat. 313908) 및 dapB(cat. 312038). 헤마톡실린을 사용하여 Leica 기기 상에서 슬라이드를 역염색하고 역염색의 청색화를 오프라인으로 수행하였다. 염색은 점상 빨간색 도트로 관찰되었다. 슬라이드를 40x 대물렌즈로 Leica로부터 AT2 스캐너를 사용하여 이미지화하였다.
중등도 발현되는 하우스키핑 유전자 PPIB에 특이적인 탐침으로 RNA 온전성에 대해 및 박테리아 dapB RNA에 특이적인 탐침으로 배경에 대해 각각의 샘플을 품질 제어하였다. 대조군 탐침에 대해 반정량적 스코어링 기준을 적용하여 RNA 온전성 및 배경 염색을 평가하였다. ACD에서 자격을 갖춘 과학자가 시각적(수동) 스코어링을 수행하였다. 0~4의 스코어를 하기에 기반하여 각각의 제어 탐침에 할당하였다:
· 스코어 0 = 염색 없음 또는 1개 도트/10개 세포 미만
· 스코어 1 = 1개 도트/세포 내지 3개 도트/세포
· 스코어 2 = 4개 도트/세포 내지 9개 도트/세포, 도트 클러스터가 없거나 거의 없음
· 스코어 3 = 10개 도트/세포 내지 15개 도트/세포 및/또는 10% 미만의 도트가 클러스터에 있음
· 스코어 4 = 15개 초과의 도트/세포 및/또는 10% 초과의 도트가 클러스터에 있음
하기 기준이 충족되는 경우 샘플을 품질 제어(QC) 통과로 간주하였다: 1) PPIB 스코어는 2 이상으로, 샘플에 걸쳐 상대적으로 균일한 양성 제어 신호를 가져서 RNA 온전성을 시사하였다. 2) dapB 스코어는 1 미만으로, 최소 배경 신호를 시사하였다.
DKK1 염색된 생검 슬라이드로부터 스캐닝된 슬라이드 이미지를 수의학 병리학자가 검토하고 QuPath 오픈소스 형태계측 분석 프로그램을 사용하여 분석하였다(Bankhead, P. et al. QuPath: Open source software for digital pathology image analysis. Sci Rep 7, 16878, doi:10.1038/s41598-017-17204-5 (2017), 본원에 참조로 포함됨). 신생물을 함유하는 조직의 영역(들)을 관심 영역(ROI)으로 확인하였다. DKK1 mRNA 발현 수준을 하기와 같이 계산하였다.
각각의 신생물 세포에 대한 DKK1 mRNA 발현을 하기 빈(bin)으로 할당하였다:
· 빈-0 = 0개 도트/세포
· 빈-1 = 1개 도트/세포 내지 3개 도트/세포
· 빈-2 = 4개 도트/세포 내지 9개 도트/세포
· 빈-3 = 10개+ 도트/세포
H-스코어 결정을 위해, 모든 신생물 세포에 스코어를 할당한 후, 빈-0, 빈-1, 빈-2, 또는 빈-3에 스코어링되는 백분율을 사용하여 H-스코어를 계산하였다:
H-스코어 = (빈-3% x 3) + (빈-2% x 2) + (빈-1% x 1) + (빈-0% x 0)
상기 계산에 의해, H-스코어는 0 내지 300 범위일 수 있다.
양성% 결정을 위해, 모든 신생물 세포에 스코어를 할당한 후, 양성 종양 세포의 백분율을 염색된 총 신생물 세포를 더하여 결정하였다. 이는 (빈-1 + 빈-2 + 빈-3)을 더하고 신생물 세포의 총 수(빈-0 + 빈-1 + 빈-2 + 빈-3)로 나누거나 "양성"으로 할당된 모든 세포를 계수하고(예컨대, 적어도 하나의 단일 염색 도트를 검출하여) 상기 수를 신생물 세포의 총수로 나누어 수행할 수 있었다. 양성%는 0 내지 100 범위일 수 있다.
H-스코어 결정을 위해, QuPath 소프트웨어가 종양 세포를 확인할 수 없는 경우, 상술된 바와 동일한 H-스코어 공식을 사용하여 빈-1, 빈-2 및 빈-3에서의 세포 백분율을 추정함으로써 슬라이드를 수동 분석하였다.
양성% 결정을 위해, QuPath 소프트웨어가 종양 세포를 확인할 수 없는 경우, 빈-1, 빈-2 및 빈-3에서의 세포 백분율을 추정함으로써 슬라이드를 수동 분석하였다. 빈-1, 빈-2 및 빈-3에서의 추정 세포 백분율을 더하여 양성%를 계산하였다.
실시예 2: DKK1 발현 H-스코어 및 임상 결과가 상관관계를 가짐
1. 상위 삼분위에 속하는 H-스코어를 갖는 환자가 더 긴 무진행 생존을 가짐
본 연구에서, 다양한 적응증 및 추가 조합에 걸쳐 300 ㎎의 DKN-01로 치료받은 총 134명의 환자로부터 RNAscope 데이터를 수집하였다. 데이터를 상술된 임상 연구에 기반하여 수득하였다. 간략하게, 연구 P102에는 식도위암을 앓는 67명의 환자(평가된 종양 DKK1 mRNA 발현을 가짐)가 관여되었고, 그 중 57명의 환자는 DKN-01/키트루다의 조합에 의해 치료받았다. 이들 57명의 환자 중, 31명의 환자는 위식도 접합부 암으로 진단되었고 면역치료법-나이브였다(즉, 키트루다 또는 다른 항-PD-1/항-PD-L1 항체에 의해 이전에 치료받은 적 없었음). 연구 P204에는 부인과 암을 앓는 54명의 환자(평가된 종양 DKK1 mRNA 발현을 가짐)가 관여되었다: 32명의 환자는 자궁내막암(EEC/상피 자궁내막암)으로 진단되었고 22명의 환자는 난소암(EOC/상피 난소암)으로 진단되었다. 연구 P103에는 담도암(쓸개관암종)을 앓는 13명의 환자가 관여되었다.
본 연구에서 분석된 134명의 환자의 하위군을 도 1에서 그래픽으로 나타낸다.
전체 134명의 환자 풀의 통계 분석은 상위 삼분위에 속하는 H-스코어를 갖는 환자가 하위-삼분위 또는 중위-삼분위 군에 속하는 DKK1 H-스코어를 갖는 환자에 비해 더 긴 무진행 생존을 가짐을 나타냈다. 이들 결과를 도 2에 그래프로 나타낸다.
위험비(HR, "방사선학적 진행" 또는 임의의 이유로 인한 "사망" 사건을 가질 위험)를 또한 각각의 삼분위에 대해서 뿐만 아니라 암 유형 및 치료제(들)에 대해 조정된 환자 하위군에 대해 연산하였다. 결과를 도 3에 그래프로 나타낸다. 알 수 있듯이, 상위-삼분위에 속하는 DKK1 H-스코어를 갖는 환자는 일반적으로 및 암 유형 및 치료제(들)에 대해 조정된 경우 모두, 하위 삼분위에 비해 통계적으로 유의미하게 더 긴 PFS를 가졌다(최우측 열의 수치는 참조 하위군, 즉 DKK1 H-스코어에 기반한 환자의 하위 삼분위에 대한 각각의 하위군의 HR의 비교 P-값을 나타냄).
2. 최적 컷오프 초과의 H-스코어를 갖는 환자가 더 긴 무진행 생존을 가졌음
"최적 컷포인트" 초과의 H-스코어를 갖는 하위군의 환자에 DKK1 억제제(예컨대 DKN-01)가 투여되는 경우, 이들 환자가 "최적 컷포인트" 값 이하에서 이의 H-스코어를 갖는 환자 하위군에 비해 무진행 생존(PFS)의 통계적으로 유의미한 개선을 나타내도록 하는, 최적 컷포인트(본원에서 "최적 DKK1 발현 H-스코어"로 나타냄)가 암 환자군의 DKK1 H-스코어에 관해 존재함이 추가 실증되었다.
첫 번째 경우, 상술된 134명의 암 환자 풀을 본원에서 상술된 바와 같은 표준화된 Log-순위 통계를 사용하여 분석하였다.
생존 결과(PFS)와 가장 유의미한 상관관계에 대응하는 DKK1 H-스코어 값이 존재함이 발견되었다. DKK1 H-스코어 값 38이 풀링된 군에 대해 수득되었다. 상기 DKK1 H-스코어 값은 표준화된 log-순위 통계의 최대값에 대응하며, 더 긴 PFS와 가장 유의미하게 연관되는 전체 풀의 2개 하위군 간 컷포인트이다.
표준화된 log-순위 통계의 상기 최대값의 존재를 도 4에 그래프로 예시한다.
"최적 스코어" 초과의 DKK1 H-스코어를 갖는 환자의 DKN-01 치료의 바람직한 임상 결과(더 긴 PFS)가 도 5에서 추가 예시된다. 도 5는 2개 그래프의 중첩이다. 각각의 그래프는 PFS(확률로 표현됨)를 시간의 함수로 나타낸다. 하나의 그래프는 "최적" 스코어 38을 초과하는 DKK1 H-스코어를 갖는 환자 하위군을, 그리고 다른 그래프는 다른, 즉 "최적" 스코어 이하의 환자 하위군을 나타낸다.
위험비(HR, "방사선학적 진행" 또는 임의의 이유로 인한 "사망" 사건을 가질 위험)를 또한 "최적" 스코어 이하의 H-스코어를 갖는 환자 하위군에 비해 "최적" 스코어 초과의 H-스코어를 갖는 환자군에 대해 연산하였다. 암 유형 및 치료제(들)에 대해 조정된 환자 하위군에 대한 HR을 또한 연산하였다. 결과를 도 6에 그래프로 나타낸다. 알 수 있듯이, "최적" 스코어 초과의 DKK1 H-스코어를 갖는 환자는 암 유형 및 치료제(들)에 대해 조정된 경우, 최적 스코어 이하의 환자에 비해 통계적으로 유의미하게 더 낮은 HR을 가졌다(최우측 열의 수치는 참조 하위군, 즉 DKK1 H-스코어가 "최적" 스코어 이하인 환자 하위군에 대한 각각의 하위군의 HR의 비교 P-값을 나타냄).
상이한 컷포인트의 비교는 최적 컷포인트가 가장 잘 조정된 위험비(HR)를 가짐을 실증한다. 결과를 도 7에 그래프로 나타낸다. 알 수 있듯이, "최적 컷포인트" 초과의 H-스코어에 의해 정의되는 하위군은 상위 삼분위 또는 상위 사분위에 의해 정의되는 하위군에 비해 가장 잘 조정된 HR을 가졌다. 오른쪽 열은 HR 값을 나타내고 95% 신뢰도 구간을 제공한다.
3. 최적 컷포인트 값이 상이한 암에 대해 유사함
요법 및 암 유형에 대한 조정 후에도, 상이한 암에 의해 정의되는 환자 하위군 상에서 통계적 분석이 수행되는 경우, 유사한 값의 "최적 컷포인트"가 도출됨이 발견되었다.
구체적으로, 38 초과의 DKK1 H-스코어가 EEC/EOC에서 더 긴 PFS와 연관됨이 발견되었다. 결과를 도 8 및 도 9에 그래프로 나타낸다. 도 8은 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 EEC/EOC 환자 하위군의 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다. 하나의 하위군은 최적 컷포인트 초과의 DKK1 H-스코어를 가지며, 다른 하위군은 상기 최적 컷포인트 이하이다. 도 9는 EEC/EOC 환자의 하위-하위군에 대한 HR을 나타내는 표 및 그래프를 나타낸다. 알 수 있듯이, 3개의 조정된 하위군에 대한 HR 값은 유사하다. 오른쪽 열은 HR 값을 나타내고 95% 신뢰도 구간을 제공한다.
추가 연구에서, "최적 컷포인트" 값 38을 초과하는 DKK1 H-스코어가 GEJ/GC/EC 환자에서 더 긴 PFS와 연관됨이 발견되었다. 데이터를 DKN-01 단일치료법, 또는 DKN-01 및 키트루다 또는 파클리탁셀의 조합 치료법을 수여받는 67명의 식도위암 환자에 대해 풀링하였다. 결과를 도 10 및 도 11에 그래프로 나타낸다.
도 10은 2개의 중첩된 그래프를 나타내며, 각각 GEJ/GC/EC 환자 하위군의 PFS(확률로 표현됨)를 나타낸다. 하나의 하위군은 최적 컷포인트 38를 초과하는 DKK1 H-스코어를 가지며, 다른 하위군은 상기 최적 컷포인트 이하이다. 도 11은 도 10을 참조하여 논의된 바와 같은, 동일한 GEJ/GC/EC 환자 하위-하위군에 대한 HR을 나타내는 표 및 그래프를 나타낸다. 알 수 있듯이, "최적 컷포인트" 초과의 H-스코어에 의해 정의되는 하위군은 암 유형 및 치료제에 대해 조정된 경우 최적 컷포인트 이하의 환자에 비해 통계적으로 유의미하게 더 낮은 HR을 가졌다. 오른쪽 열은 HR 값을 나타내고 95% 신뢰도 구간을 제공한다.
4. 상위 삼분위에 속하는 H-스코어를 갖는 GEJ/위암 환자가 DKN-01 및 항-PD-1 항체로 치료받는 경우 더 긴 무진행 생존을 가짐
추가 연구에서, 도 10 및 11에 관해 상술된 환자 중, 31명 환자의 하위군(이 중 25명이 평가 가능했음)을 선택하였다. 이들 환자는 위-식도 접합부 암 또는 위암을 앓았고 면역치료법으로 치료받은 적 없었다(소위, "IO-나이브 환자"). 도 12에 나타낸 막대 그래프는, 부분 반응을 나타낸 환자가 상위 삼분위에 속하는 DKK1 H-스코어(여기서는, H-스코어 35 이상)를 가진 반면, 진행성 질환을 나타낸 대부분의 환자는 상위 삼분위 미만의 DKK1 H-스코어를 가졌음을 시사한다.
31명 환자 하위군의 무진행 생존 확률(PFS) 분석은 DKK1 H-스코어의 상위 삼분위(H-스코어 35 이상)에 속하는 환자의 중앙값 PFS가 상위 삼분위 미만의 DKK1 H-스코어를 갖는 환자(5.9주)에 비해 22.2주로 통계적으로 유의미하게 더 길다는 것을 시사하였다. 상기 분석 결과를 도 13에 나타낸다.
실시예 3: DKK1 염색 양성% 값 및 임상 결과 상관화
추가 연구에서, 도 1에 관해 기재된 바와 같이, DKN-01 단일치료법 또는 DKN-01 300 ㎎ 및 제2 제제의 조합을 수여받는 69명의 식도위암(EGC) 환자(+ DKN-01 150 ㎎ 및 펨브롤리주맙을 수여받는 2명의 추가 환자)의 RNAscope 데이터를 분석하였다.
환자의 PFS를 양성% 측정을 사용하여 결정하였다. 더 높은 백분율의 DKK1에 대해 양성인 종양 세포 염색을 갖는 EGC 환자는 증가된 PFS를 나타내는 것으로 발견되었다. 구체적으로, 환자의 상위 삼분위("DKK1 고", RNAscope에 의해, 적어도 26%의 종양 세포가 DKK1 양성으로 염색된 환자)는　11.6주의 중앙값 생존을 가진 반면, 상위 삼분위 미만인 환자는 6.0주의 중앙값 생존을 가졌고, Log 순위(Mantel-Cox) 시험에 의한 p-값 = 0.08이었다. 상기 분석 결과(컷오프 값 26%, 상위 삼분위에 대응함)를 도 14a에 그래프로 나타낸다.
동일한 69명의 환자에 대한 "최적" 컷오프 값을 또한 계산하였고 PFS 그래프를 생성하였다.
간략하게, 모든 잠재적 컷포인트(가장 많을 경우 분석에서의 샘플 수와 같음)에 대한 log-순위 통계를 먼저 계산하였다. 컷포인트를 선택하기 위해 문헌[Hothorn and Lausen (Science Direct Working Paper No S1574-0358(04)70152-5, 5 Mar 2018, https://papers.ssrn.com/sol3/papers.cfm?abstract_id=3133711에서 이용 가능함)]에서 기재된 방법을 적용하였다. 귀무 가설(H0: 생존은 연속 변수에서 컷 포인트에 의해 정의되는 군에서의 멤버십과 독립적임, 여기서 양성%는 양성임) 하에 log-순위 통계의 정확한 분포를 사용하여 p-값의 상한 경계를 연산함으로써 이를 수행하였다.
여기서, 양성% 측정에 의한 최적 컷오프 값은 23%였다. DKK1-고 환자(양성% 23% 이상)에 대한 중앙값 생존은 11주였고(95%CI 6.000~28.286), DKK1-저 환자(양성% 23% 미만)에 대한 중앙값 생존은 6주였다(95%CI 5.857~8.714). P-값 = 0.116. PFS 그래프를 도 14b에 나타낸다.
추가 연구에서, 도 13에 관해 상기 논의된 바와 동일한 환자 하위군(31명의 위(G)/위식도 접합부(GEJ) 환자)을 DKK1 발현에 대해 양성% 값을 사용하여 분석하였다. 결과를 도 15에 나타낸다. 더 높은 백분율의 DKK1에 대해 양성인 종양 세포 염색을 갖는 G/GEJ IO-나이브 환자는 증가된 PFS를 나타냄이 발견되었다. 구체적으로, 양성% 값의 상위 삼분위(적어도 20%의 종양 세포가 RNAscope에 의해 DKK1에 대해 양성으로 염색됨)의 환자는 상위 삼분위 밖의 환자에 대한 6.1주 대비, 22.1주의 중앙값 생존을 나타냈다(Log 순위(Mantel-Cox) 시험에 의한 p-값 = 0.017).
실시예 4
추가 연구에서, 위/GEJ IO-불응성 환자(즉, 이전에 면역치료법으로 치료받은 환자)를 앓는 환자의 하위군을 분석하였다. 5명의 환자를 펨브롤루지맙과 조합된 DKN-01로 치료하였다(4명의 환자는 300 ㎎ DKN-01로 및 1명은 150 ㎎ DKN-01로). 분석 결과를 도 16a(H-스코어에 대해) 및 도 16b(양성% 값에 대해)에 나타낸다. 알 수 있듯이, 5명 중 3명의 환자는 안정한 질환(SD)을 가졌고, 2명의 환자는 진행성 질환(PD)을 가졌다. SD를 가진 모든 환자는 PD 환자보다 높은 H-스코어 또는 양성% 값을 가졌다. SD 환자의 최저 H-스코어는 59였고 SD 환자의 최저 양성% 값은 33%였다.
본원에서 인용되는 모든 특허, 공개된 출원 및 참고문헌의 교시는 이의 전문이 참조로 포함된다.
본 발명을 이의 예시적 구현예를 참조하여 구체적으로 나타내고 기재하였으나, 당업자에게는 첨부되는 청구범위에 의해 포괄되는 본 발명의 범위에서 벗어나지 않고 형태 및 세부사항의 다양한 변화가 이루어질 수 있음이 이해될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> LEAP THERAPEUTICS, INC. <120> METHODS OF TREATING CANCER USING DKK-1 INHIBITORS <130> DCQ-00625 <140> PCT/US2020/051550 <141> 2020-09-18 <150> 62/902,857 <151> 2019-09-19 <160> 22 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser Leu His 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> /replace="Ala" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="Glu" <220> <221> SITE <222> (1)..(7) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 2 Tyr Gly Arg Gln Ser Ile Gln 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial 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100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 17 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Gly Tyr Asn Asn Tyr Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 18 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 18 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 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Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 20 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 20 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Gly Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu 85 90 95 His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 21 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 21 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Arg Gln Ser Glu Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu 85 90 95 His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 22 <211> 235 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 22 Thr Leu Asn Ser Val Leu Asn Ser Asn Ala Ile Lys Asn Leu Pro Pro 1 5 10 15 Pro Leu Gly Gly Ala Ala Gly His Pro Gly Ser Ala Val Ser Ala Ala 20 25 30 Pro Gly Ile Leu Tyr Pro Gly Gly Asn Lys Tyr Gln Thr Ile Asp Asn 35 40 45 Tyr Gln Pro Tyr Pro Cys Ala Glu Asp Glu Glu Cys Gly Thr Asp Glu 50 55 60 Tyr Cys Ala Ser Pro Thr 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Claims (68)

  1. 대상체의 암 샘플에서 DKK1 발현 H-스코어를 결정하는 단계; 및
    사전결정된 값 초과의 DKK1 발현 H-스코어를 갖는 것으로 결정된 대상체에 제1량의 DKK1 억제제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 사전결정된 값이 최적 DKK1 발현 H-스코어인, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 사전결정된 값이 암을 앓는 대상체의 샘플에서 DKK1 발현 H-스코어의 상위 삼분위의 하한 경계인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 식도위암, 부인과 암, 또는 쓸개관암종으로부터 선택되는, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 암이 식도암, 위식도 접합부 암, 위암, 상피 자궁내막 암, 상피 난소암, 또는 쓸개관암종으로부터 선택되는, 방법.
  6. 제4항에 있어서, 환자가 면역치료법-나이브이고 식도위암을 앓는, 방법.
  7. 제4항에 있어서, 환자가 위식도암 또는 위암을 앓는, 방법.
  8. 제5항에 있어서, 암이 식도위암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 식도위암이고 사전결정된 값이 식도위암을 앓는 대상체의 샘플에서 DKK1 발현 H-스코어의 상위 삼분위의 하한 경계이거나,
    암이 부인과 암이고 사전결정된 값이 부인과 암을 앓는 대상체의 샘플에서 DKK1 발현 H-스코어의 상위 삼분위의 하한 경계인, 방법.
  10. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 식도위암이고 사전결정된 값이 38의 최적 컷오프 값이거나,
    암이 부인과 암이고 사전결정된 값이 38의 최적 컷오프 값이거나,
    암이 쓸개관암종이고 사전결정된 값이 38의 최적 컷오프 값인, 방법.
  11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 위/GEJ 암이고, 사전결정된 값이 35인, 방법.
  12. 제11항에 있어서, 대상체가 IO-나이브인, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, DKK1 억제제가 DKK1 항체 또는 이의 항원 결합-단편인, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, DKK1 항체 또는 이의 항원 결합-단편이 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하며, LCVR은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고 HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 1의 아미노 서열을 갖고, LCDR2는 SEQ ID NO: 2의 아미노 서열을 갖고, LCDR3은 SEQ ID NO: 3의 아미노 서열을 갖고, HCDR1은 SEQ ID NO: 4의 아미노 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NO: 5의 아미노 서열을 갖고, HCDR3은 SEQ ID NO: 6의 아미노 서열을 갖는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, LCVR이 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, HCVR이 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, (i) SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (ii) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iii) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iv) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  17. 제16항에 있어서, LCVR이 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하며 HCVR이 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  18. 제17항에 있어서, DKK1 항체가 a) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, b) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 d) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로 구성되는 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  19. 제18항에 있어서, DKK1 항체가 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간인, 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 제2량의 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 제2 치료제가 탁산인, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 제2 제제가 파클리탁셀인, 방법.
  24. 제21항에 있어서, 암이 부인과 암이고 제2 치료제가 파클리탁셀인, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 암이 상피 자궁내막암 또는 상피 난소암이고, DKK1 길항제가 DKN-01 항체이고, 제2 치료제가 파클리탁셀인, 방법.
  26. 제21항에 있어서, 대상체에 제3량의 제3 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 제2 치료제가 젬시타빈이고 제3 치료제가 시스플라틴인, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 암이 담도암인, 방법.
  29. 대상체의 암 샘플에서 DKK1 발현 양성% 값을 결정하는 단계; 및
    사전결정된 값 이상의 DKK1 발현 양성% 값을 갖는 것으로 결정된 대상체에 제1량의 DKK1 억제제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 사전결정된 값이 DKK1 발현 양성% 값의 최적 값인, 방법.
  31. 제29항에 있어서, 사전결정된 값이 암을 앓는 대상체의 샘플에서 DKK1 발현 양성% 값의 상위 삼분위의 하한 경계인, 방법.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 식도위암, 부인과 암, 또는 쓸개관암종으로부터 선택되는, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 암이 식도암, 위-식도 접합부 암, 위암, 상피 자궁내막암, 상피 난소암, 또는 쓸개관암종으로부터 선택되는, 방법.
  34. 제32항에 있어서, 환자가 면역치료법-나이브이고 식도위암을 앓는, 방법.
  35. 제32항에 있어서, 환자가 위식도암 또는 위암을 앓는, 방법.
  36. 제32항에 있어서, 암이 식도위암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  37. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 식도위암이고 사전결정된 값이 식도위암을 앓는 대상체의 샘플에서 DKK1 발현 양성% 값의 상위 삼분위의 하한 경계이거나,
    암이 부인과 암이고 사전결정된 값이 부인과 암을 앓는 대상체의 샘플에서 DKK1 발현 양성% 값의 상위 삼분위의 하한 경계인, 방법.
  38. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 식도위암이고 사전결정된 값이 26%인, 방법.
  39. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 GC/GEJ이고 사전결정된 값이 20%인, 방법.
  40. 제39항에 있어서, 대상체가 IO-나이브인, 방법.
  41. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, DKK1 억제제가 DKK1 항체 또는 이의 항원 결합-단편인, 방법.
  42. 제29항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, DKK1 항체 또는 이의 항원 결합-단편이 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하며, LCVR은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고 HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 1의 아미노 서열을 갖고, LCDR2는 SEQ ID NO: 2의 아미노 서열을 갖고, LCDR3은 SEQ ID NO: 3의 아미노 서열을 갖고, HCDR1은 SEQ ID NO: 4의 아미노 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NO: 5의 아미노 서열을 갖고, HCDR3은 SEQ ID NO: 6의 아미노 서열을 갖는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, LCVR이 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하며, HCVR이 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, LCVR 및 HCVR이 (i) SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (ii) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iii) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iv) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  45. 제44항에 있어서, LCVR이 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하며 HCVR이 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  46. 제45항에 있어서, DKK1 항체가 a) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, b) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 d) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로 구성되는 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  47. 제46항에 있어서, DKK1 항체가 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  48. 제29항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간인, 방법.
  49. 제29항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 제2량의 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  50. 제49항에 있어서, 제2 치료제가 탁산인, 방법.
  51. 제50항에 있어서, 제2 제제가 파클리탁셀인, 방법.
  52. 제49항에 있어서, 암이 부인과 암이며 제2 치료제가 파클리탁셀인, 방법.
  53. 제52항에 있어서, 암이 상피 자궁내막암 또는 상피 난소암이며, DKK1 길항제가 DKN-01 항체이고, 제2 치료제가 파클리탁셀인, 방법.
  54. 제50항에 있어서, 대상체에 제3량의 제3 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  55. 제54항에 있어서, 제2 치료제가 젬시타빈이고 제3 치료제가 시스플라틴인, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 암이 담도암인, 방법.
  57. 제4항에 있어서, 암이 위/GEJ 암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  58. 제4항에 있어서, 암이 위암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  59. 제4항에 있어서, 암이 GEJ 암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  60. 제57항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 사전결정된 값이 59인, 방법.
  61. 제32항에 있어서, 암이 위/GEJ 암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  62. 제32항에 있어서, 암이 위암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  63. 제32항에 있어서, 암이 GEJ 암이고 하나 이상의 면역치료제에 대해 불응성인, 방법.
  64. 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 사전결정된 값이 33%인, 방법.
  65. 제30항에 있어서, 암이 식도위암(EGC)이고 사전결정된 값이 23%의 최적 컷오프 값인, 방법.
  66. 대상체의 암 샘플에서 DKK1 발현 H-스코어를 결정하는 단계; 및
    30 이상의 DKK1 발현 H-스코어를 갖는 것으로 결정된 대상체에 제1량의 DKK1 억제제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  67. 제66항에 있어서, 대상체가 35 이상의 DKK-1 H-스코어를 갖는 것으로 결정되는, 방법.
  68. 제66항 또는 제67항에 있어서, 암이 GEJ/GC인, 방법.
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