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KR20220062500A - 항-cd39 항체 조성물 및 방법 - Google Patents

항-cd39 항체 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20220062500A
KR20220062500A KR1020227006558A KR20227006558A KR20220062500A KR 20220062500 A KR20220062500 A KR 20220062500A KR 1020227006558 A KR1020227006558 A KR 1020227006558A KR 20227006558 A KR20227006558 A KR 20227006558A KR 20220062500 A KR20220062500 A KR 20220062500A
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KR
South Korea
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amino acid
acid sequence
seq
antibody
cancer
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KR1020227006558A
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스콧 샤펠
앤드류 레이크
마이클 워렌
오스틴 둘락
에릭 데버루
파멜라 엠. 홀랜드
타우퀴어 자이디
매튜 라우쉬
비앙카 프린츠
넬스 피. 닐슨
소니아 다스
알리슨 엠. 오닐
Original Assignee
서피스 온콜로지, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

본 발명은 항-CD39 항체 조성물 및 암 치료에서의 그의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 단리된 항 CD-39 항체가 제공된다. 이러한 단리된 항-CD39 항체는 인간 CD39에 결합하고, 여기서 항체는 임의로 완전한 인간이거나 인간화된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에 있어서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키는 방법을 제공한다.

Description

항-CD39 항체 조성물 및 방법
본 출원은 2019년 9월 16일에 출원된 미국 가출원 번호 62/901,153, 2019년 9월 18일에 출원된 미국 가출원 번호 62/902,285, 2019년 11월 7일에 출원된 62/932,249, 2019년 11월 15일에 출원된 미국 가출원 번호 62/935,969, 2020년 2월 12일에 출원된 미국 가출원 번호 62/975,519, 2020년 3월 31일에 출원된 미국 가출원 번호 63/003,191 및 2020년 9월 8일에 출원된 미국 가출원 번호 63/075,567에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이들 모두는 그 전체가 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하고 그 전체가 참고로 여기에 포함된다. 상기 ASCII 사본은 2020년 9월 9일에 생성되었고, 그의 명칭은 2020-09-09_01219-0005-00-PCT_ST25.txt이며 크기는 1,641,716바이트이다.
발명의 분야
항-CD39 항체뿐만 아니라 항-종양 면역 반응을 향상, 증가 및 지속시키고, 종양 미세환경에서 세포외 아데노신의 양을 감소시키고, 암을 치료하는데 있어서의 그의 용도가 제공된다.
면역계는 억제 경로를 통해 작용하여 암세포가 자라는 것을 방지한다. 암은 면역 세포에 의한 인식 및 제거를 피하고 질환이 진행되도록 하기 위해 다양한 메커니즘을 사용하여 면역 억제 경로를 파괴한다. 면역 요법은 거부 유형 과정을 직접 자극하거나 억제 경로를 차단하여 환자의 면역 체계를 수정하여 암과 싸운다.
아데노신은 면역계의 항종양 반응을 방해하는 종양 미세환경(TME) 내의 면역조절 대사산물이다. 일부 암에서는 세포외 아데노신이 축적되어 T 세포, 수지상 세포(DC) 및 자연 살해(NK) 세포를 비롯한 면역 세포의 기능을 억제하여 항종양 면역 억제에 기여하고 종양 성장을 지원한다.
엑토뉴클레오티다아제 CD39는 세포외 아데노신 트리포스페이트(ATP) 및 아데노신 디포스페이트(ADP)를 가수분해하여 아데노신 모노포스페이트(AMP)를 생성하고, 이는 CD73에 의해 아데노신으로 전환된다. 세포외 아데노신은 면역 세포의 아데노신 수용체에 결합하여 면역 체계를 억제한다. CD39의 과발현은 특정 유형의 암 환자에서 불량한 예후와 관련이 있다. TME 내에서 아데노신 경로는 아데노신으로의 ATP의 세포외 전환 및 면역 세포의 A2A/A2B 아데노신 수용체를 통한 아데노신의 신호전달을 지칭한다. 정상적인 조건에서 CD39는 면역억제성 아데노신과 면역자극성 ATP의 세포외 수준 균형을 유지하기 위해 작동한다. 건강한 조직에서 ATP는 CD39에 의한 빠른 분해와 CD73에 의한 아데노신으로의 전환으로 인해 세포외 환경에서 거의 검출되지 않는다. 암을 비롯한 세포 스트레스 조건에서 세포외 ATP 수치가 크게 상승하여 높은 수치의 아데노신이 발생하여 면역계에 의한 종양 인식과 항종양 반응을 억제하는 역할을 한다.
신규 암 치료법의 개발에 대한 충족되지 않은 요구가 계속 존재한다. 다양한 암을 보다 효과적으로 퇴치하기 위해서는 기존 치료법 및 치료 요법과의 새로운 조합도 필요하다.
I. 요약
일부 실시양태에서, 단리된 항-CD39 항체가 제공된다. 이러한 단리된 항-CD39 항체는 인간 CD39에 결합하며, 여기서 항체는 임의로 완전한 인간이거나 인간화된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는 단리된 항체를 제공한다:
(a) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 301의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 302의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 303의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 304의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 305의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 306의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 401의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 402의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 403의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 404의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 405의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 406의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 502의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 503의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 504의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 505의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 601의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 602의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 603의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 604의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 605의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 606의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 701의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 702의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 703의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 704의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 705의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 706의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 801의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 802의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 803의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 804의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 805의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 806의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 902의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 904의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 905의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 906의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 1001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 1002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 1003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 1004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 1005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 1006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 2001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 2003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 2004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 2005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 2006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 3001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 3002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 3004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 3005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 3006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 4001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 4002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 4003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 4005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 4006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 5001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 5002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 5003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 5004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 5006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 6001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 6002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 6003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 6004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 6005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 7001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 7002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 7003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 7004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 7005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 7006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 8001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 8002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 8003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 8004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 8005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 8006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 9001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 9002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 9003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 9004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 9005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 9006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 10001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 10002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 10003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 10004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 10005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 10006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 20001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 20002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 20003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 20004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 20005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 20006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(a) 서열 번호 30001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 30002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 30003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 30004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 30005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 30006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3.
일부 실시양태에서, 항체는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서:
VH는 서열 번호 12의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 112의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 118의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 212의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 218의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 312의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 318의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 412의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 418의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 512의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 518의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 612의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 618의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 712의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 718의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 812의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 818의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 912의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 918의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 1012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 1018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 2012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 2018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 3012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 3018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 4012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 4018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 5012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 5018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 6012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 6018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 7012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 7018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 8012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 8018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 9012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호: 9018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 10012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 10018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 20012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 20018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
VH는 서열 번호 30012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 30018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다.
일부 실시양태에서, 항체는 본원에 기재된 바와 같은 6개의 CDR (HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3), 및 본원에 기재된 VH 및/또는 VL 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 VH 및/또는 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH 및/또는 VL 서열은 본원에 기재된 아미노산 서열과 100% 동일하지 않다. 일부 실시양태에서, 항체는 본원에 기재된 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열, 및 CDR 서열 외부에 있는 VH 및/또는 VL 서열 내의 서열 변이를 포함한다. 이러한 실시양태에서, VH 및/또는 VL 서열의 서열 변이는 VH 및/또는 VL의 하나 이상의 프레임워크 영역 내에 있다.
일부 실시양태에서, 항체는 본원에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는100% 동일한 VH 및/또는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH 및/또는 VL 서열은 본원에 기재된 아미노산과 100% 동일하지 않다. 이러한 실시양태에서, VH 및/또는 VL 서열의 서열 변이는 달리 명시되지 않는 한 CDR 서열 내부 및/또는 외부에 있다.
일부 실시양태에서, 항체는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서:
VH는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 312의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 318의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 412의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 418의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 512의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 518의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 612의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 618의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 712의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 718의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 812의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 818의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 912의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 918의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 1012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 1018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 2012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 2018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 3012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 3018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 4012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 4018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 5012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 5018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 6012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 6018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 7012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 7018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 8012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 8018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 9012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 9018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 10012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 10018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 20012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 20018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH는 서열 번호 30012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 30018의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 클론 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22 또는 그의 CD39 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 클론 22이다.
일부 실시양태에서, 항체는 단일클론 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 완전한 인간 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체 단편이고, 여기서 항체 단편은 CD39에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 Fab, Fab', Fv, scFv 또는 (Fab')2로부터 선택된 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체이다. 일부 실시양태에서, 단리된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 돌연변이 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이 IgG4 불변 영역은 EU 넘버링에 따른 넘버링 Ser228에서의 치환, Leu235에서의 치환, Asn297에서의 치환, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이 IgG4 중쇄 불변 영역은 S228P 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 번호 40002의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 번호 40003의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 카파 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체 및 약제학상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.
일부 실시양태에서, 항체는 CD39에 결합하고 이를 억제한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 CD39의 효소 활성을 감소 또는 억제한다. 일부 실시양태에서, 항체는 재조합 CD39 및/또는 막-결합된 인간 CD39에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 10nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 CD39에 결합한다. 일부 실시양태에서, 인간 CD39에 대한 결합에 대한 KD는 약 1.11 nM이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 CD39 및 사이노몰구스 원숭이 CD39에 결합하지만 마우스 CD39 또는 래트 CD39에는 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 CD39에 의한 세포외 아데노신 트리포스페이트(eATP) 또는 세포외 아데노신 디포스페이트(eADP)의 세포외 아데노신 모노포스페이트(eAMP)로의 전환을 억제하거나 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 eATP의 양을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 세포외 아데노신의 양을 감소(reduce) 또는 감소(decrease)시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 eATP의 면역자극 수준을 유지, 증가 또는 향상시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 조직의 종양 미세환경에서 인간 CD39를 길항한다. 일부 실시양태에서, 항체는 사이노몰구스 CD39와 교차 반응한다. 일부 실시양태에서, 항체는 림프구의 증식을 증가시키거나 증진시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 종양에서 대식세포 침윤을 증가 또는 향상시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 CD39에 결합하고 정상 또는 암 조직 내에서 CD39를 억제한다. 일부 실시양태에서, 조직은 자궁, 자궁경부, 폐, 전립선, 유방, 머리, 목, 결장 또는 난소에 있다. 일부 실시양태에서, 조직은 자궁에 있다. 일부 실시양태에서, 자궁 내에서 항체는 자궁근층에서 CD39를 억제한다.
일부 실시양태에서, 조직에서 CD39 활성을 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 항체는 (a) 서열 번호 30001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 30002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 30003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 30004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 30005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 30006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조직에서 CD39 활성을 억제하는 항체는 서열 30012의 가변 중쇄 및 서열 30018의 가변 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조직에서 CD39 활성을 억제하는 항체는 서열 번호 30019의 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조직에서 CD39 활성을 억제하는 항체는 30021의 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조직에서 CD39 활성을 억제하는 항체는 서열 30019의 중쇄 및 30021의 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조직에서 CD39 활성을 억제하는 항체는 클론 22이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 종양을 갖는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항-종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법을 제공하며, 여기서 투여는 투여 전의 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 eATP 및 eADP의 세포외 아데노신으로의 CD39-매개된 전환을 예방하는 방법을 제공하며, 여기서 투여는 조직의 종양 미세환경 내의 세포외 아데노신 수준을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39 활성을 억제하는 방법을 제공하며, 여기서 투여는 종양 세포에 대한 면역 반응을 개시하는 능력을 개선한다.
일부 실시양태에서, 암은 암종, 림프종, 모세포종, 육종 또는 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 암은 편평세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연조직 육종, 비-소세포 폐암(편평세포 비-소세포 폐암 포함), 폐 선암종, 폐의 편평상피암, 복막암, 간세포암, 위장관암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종(heptoma), 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘암종, 신장암, 신세포암종, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관암종, 담낭암종, 위암, 흑색종 또는 각종 두경부암 (두경부 편평세포암 포함)이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위암이다. 일부 실시양태에서, 암은 전립선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 자궁내막암이다. 일부 실시양태에서, 암은 비-소세포성 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 난소암이다.
일부 실시양태에서, 암은 진행성이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발된다. 일부 실시양태에서, 암은 불응성이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성이다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행된 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서 암은 불응성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성 및/또는 재발성 및/또는 불응성 및/또는 전이성 고형 종양이다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체는 표준 요법 동안 또는 이후에 질환 진행을 경험하였다. 일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체는 표준 요법에 대해 불내성이었다. 일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체는 조사자의 판단에 기초하여 그들에게 이용가능한 적절한 치료법이 없다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 제2 요법을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 방사선요법, 수술 또는 제2 제제의 투여이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 화학요법, 옵소닌화제, 또는 조절 T 세포 고갈제의 투여이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 표적화된 항암 요법, 종양용해 약물, 세포독성제, 면역-기반 요법, 사이토카인, 공동자극 분자의 활성제, 억제 분자의 억제제, 백신, 또는 세포 면역요법, 또는 이들의 조합이다. 일부 이러한 실시양태에서, 제2 요법은 PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3의 길항제, 아데노신 A2A 수용체 (A2AR) 길항제, 아데노신 A2B 수용체 (A2BR) 길항제, 이중 A2AR/A2BR 길항제, CD40 억제제, CD73 억제제, 키메라 항원 수용체 (CAR) 세포 요법, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 PD-1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 PD-L1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CTLA-4의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 Lag-3의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 TIM-3의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 아데노신 A2AR 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 아데노신 A2BR 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 A2AR/A2BR 이중 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CD40 억제제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CD73 억제제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 키메라 항원 수용체 (CAR) 세포 요법이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 TIGIT, CD112R 또는 CD96의 길항제, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 TIGIT의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CD112R의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CD96의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 PVRL1, PVRL2, PVRL3, PVRL4, 또는 CD155의 길항제, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 PVRL1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 PVRL2의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 PVRL3의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 PVRL4의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CD155의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CD47의 길항제, 또는 사이토카인 IL-27의 길항제, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 제2 작용제는 전염증성 사이토카인, 전염증성 사이토카인의 작용제 또는 사이토카인 융합체 (예를 들어, NKTR-214, IL-15 작용제)이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 CD47의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 IL-27의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 STING 작용제이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 추가 요법은 안트라사이클린이다. 일부 실시양태에서, 안트라사이클린은 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신 및 발루비신으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안트라사이클린은 독소루비신이다. 일부 실시양태에서, 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 젬시타빈 및 파클리탁셀 (알부민 결합 파클리탁셀 포함)이다. 일부 실시양태에서, 제2 요법은 펨브롤리주맙이다. 다른 실시양태에서, 제2 요법은 A2AR 길항제, A2BR 길항제, 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD47의 길항제이다. 일부 실시양태에서, CD47의 길항제는 항-CD47 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-CD47 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 40004의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 40005의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD47 항체는 (a) 서열 번호 40006의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 40007의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 40008의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 40009의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 40010의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 40011의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 본원에서 암 요법의 삼중 조합으로도 지칭되는, CD39 항체, 제2 요법, 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, 화학요법제 및 PD-1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, 화학요법제 및 PD-L1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, 아데노신 축을 표적화하는 작용제 (예를 들어, CD73 억제제 또는 A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제), 및 PD-1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, 아데노신 축을 표적화하는 작용제 (예를 들어, CD73 억제제 또는 A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제), 및 PD-L1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, CD73 억제제 및 PD-1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, CD73 억제제 및 PD-L1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제 및 PD-1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제 및 PD-L1의 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, 아데노신 축을 표적화하는 작용제 (예를 들어, CD73 억제제 또는 A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제), 및 화학요법제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, CD73 억제제 및 화학요법제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 요법의 삼중 조합은 항-CD39 항체, A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제, 및 화학요법제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 항종양 면역 반응을 향상, 및/또는 증가 및/또는 지속하고/거나 암을 치료하기 위한 본원에 기재된 항체 또는 조성물의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 항-종양 면역 반응을 향상 및/또는 증가 및/또는 지속, 및/또는 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본원에 기재된 항체 또는 조성물의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체를 인코딩하는 핵산을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 본원에 개시된 항체를 생산하는 방법을 제공하며, 숙주 세포는 항체가 발현되는 조건 하에 배양된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항체를 정제하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체 또는 조성물, 본원에 개시된 항체를 인코딩하는 핵산, 본원에 개시된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 키트를 제공한다.
본 개시내용의 예시적인 실시양태는 다음을 포함한다:
실시양태 1. 인간 CD39에 결합하는 단리된 항-CD39 항체로서, 항체가 임의로 완전한 인간이거나 인간화되는 것인, 항체.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 상기 단리된 항체가:
i) (a) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
ii) (a) 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
iii) (a) 서열 번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
iv) (a) 서열 번호 301의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 302의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 303의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 304의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 305의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 306의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
v) (a) 서열 번호 401의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 402의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 403의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 404의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 405의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 406의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
vi) (a) 서열 번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 502의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 503의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 504의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 505의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
vii) (a) 서열 번호 601의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 602의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 603의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 604의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 605의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 606의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
viii) (a) 서열 번호 701의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 702의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 703의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 704의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 705의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 706의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
ix) (a) 서열 번호 801의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 802의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 803의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 804의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 805의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 806의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
x) (a) 서열 번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 902의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 904의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 905의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 906의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xi) (a) 서열 번호 1001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 1002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 1003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 1004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 1005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 1006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xii) (a) 서열 번호 2001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 2003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 2004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 2005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 2006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xiii) (a) 서열 번호 3001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 3002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 3004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 3005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 3006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xiv) (a) 서열 번호 4001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 4002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 4003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 4005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 4006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xv) (a) 서열 번호 5001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 5002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 5003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 5004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 5006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xvi) (a) 서열 번호 6001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 6002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 6003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 6004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 6005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xvii) (a) 서열 번호 7001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 7002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 7003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 7004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 7005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 7006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xviii) (a) 서열 번호 8001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 8002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 8003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 8004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 8005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 8006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xix) (a) 서열 번호 9001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 9002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 9003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 9004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 9005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 9006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xx) (a) 서열 번호 10001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 10002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 10003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 10004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 10005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 10006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xxi) (a) 서열 번호 20001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 20002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 20003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 20004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 20005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 20006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
xxii) (a) 서열 번호 30001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 30002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 30003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 30004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 30005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 30006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 단리된 항체.
실시양태 3. 제1항에 있어서, 항체가 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서:
i) VH는 서열 번호 12의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
ii) VH는 서열 번호 112의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 118의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
iii) VH는 서열 번호 212의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 218의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
iv) VH는 서열 번호 312의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 318의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
v) VH는 서열 번호 412의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 418의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
vi) VH는 서열 번호 512의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 518의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
vii) VH는 서열 번호 612의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 618의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
viii) VH는 서열 번호 712의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 718의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
ix) VH는 서열 번호 812의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 818의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
x) VH는 서열 번호 912의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 918의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
xi) VH는 서열 번호 1012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 1018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
xii) VH는 서열 번호 2012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 2018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xiii) VH는 서열 번호 3012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 3018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xiv) VH는 서열 번호 4012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 4018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xv) VH는 서열 번호 5012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 5018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xvi) VH는 서열 번호 6012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 6018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xvii) VH는 서열 번호 7012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 7018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xviii) VH는 서열 번호 8012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 8018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xix) VH는 서열 번호 9012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 9018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xx) VH는 서열 번호 10012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 10018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
xxi) VH는 서열 번호 20012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 20018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
xxii) VH는 서열 번호 30012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 30018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한, 단리된 항체.
실시양태 4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 항체가 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서:
i) VH는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ii) VH는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iii) VH는 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
iv) VH는 서열 번호 312의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 318의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
v) VH는 서열 번호 412의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 418의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
vi) VH는 서열 번호 512의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 518의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
vii) VH는 서열 번호 612의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 618의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
viii) VH는 서열 번호 712의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 718의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
ix) VH는 서열 번호 812의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 818의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
x) VH는 서열 번호 912의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 918의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xi) VH는 서열 번호 1012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 1018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xii) VH는 서열 번호 2012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 2018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xiii) VH는 서열 번호 3012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 3018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xiv) VH는 서열 번호 4012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 4018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xv) VH는 서열 번호 5012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 5018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xvi) VH는 서열 번호 6012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 6018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xvii) VH는 서열 번호 7012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 7018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xviii) VH는 서열 번호 8012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 8018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xix) VH는 서열 번호 9012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 9018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xx) VH는 서열 번호 10012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 10018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xxi) VH는 서열 번호 20012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 20018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
xxii) VH는 서열 번호 30012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 30018의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
실시양태 5. 선행 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 항체가 단일클론 항체인, 단리된 항체.
실시양태 6. 선행 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 항체가 전장 항체이거나 항체 단편, 임의로 Fab, Fab', Fv, scFv 또는 (Fab')2인, 단리된 항체.
실시양태 7. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 항체가 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 Fc 영역을 포함하고, 여기서 항체가 임의로 인간 IgG1 중쇄 불변 영역, 인간 IgG4 중쇄 불변 영역, 또는 돌연변이 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서 돌연변이 인간 IgG4 중쇄 불변 영역은 임의로 EU 넘버링에 따른 넘버링 Ser228에서의 치환, Leu235에서의 치환, Asn297에서의 치환, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 돌연변이, 또는 EU 넘버링에 따른 넘버링 S228P 치환 및 L235E 치환을 포함하거나, 또는 여기서 항체가 서열 40002 또는 서열 40003의 중쇄 불변 영역을 포함하고/하거나 항체가 임의로 인간 카파 경쇄를 포함하는, 단리된 항체.
실시양태 8. 실시양태 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 항체가
(i) CD39에 결합하고 이를 억제하며, 임의로 여기서 항체는 정상 또는 암 조직 내 CD39에 결합하고 CD39를 억제하고, 임의로 여기서 조직은 자궁, 자궁경부, 폐, 전립선, 유방, 머리, 목, 결장 또는 난소에 있으며, 임의로 여기서 조직은 자궁에 있고, 임의로 자궁 내에서 항체는 자궁근층에서 CD39를 억제하고;
(ii) 인간 CD39의 효소 활성을 억제하거나 감소시키고;
(iii) 재조합 인간 CD39 및/또는 막-결합된 인간 CD39에 결합하고;
(iv) 10nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 CD39에 결합하고;
(v) 약 1.11nM의 KD로 인간 CD39에 결합하고;
(vi) 인간 CD39 및 사이노몰구스 원숭이 CD39에는 결합하지만 마우스 CD39 또는 래트 CD39에는 결합하지 않고;
(vii) 인간 CD39에 의한 세포외 아데노신 트리포스페이트(eATP) 또는 세포외 아데노신 디포스페이트(eADP)의 세포외 아데노신 모노포스페이트(eAMP)로의 전환을 억제하거나 감소시키고;
(viii) eATP 수준을 증가시키거나 향상시키고;
(ix) 세포외 아데노신의 수준을 감소(decrease)시키거나 감소(reduce)시키고;
(x) eATP의 면역자극 수준을 유지, 증가 또는 향상시키고;
(xi) 조직의 종양 미세환경에서 인간 CD39를 길항하고;
(xii) 사이노몰구스 CD39와 교차 반응하고;
(xiii) 림프구의 증식을 증가 또는 향상시키고;
(xiv) 종양에서 대식세포 침윤을 증가 또는 향상시키거나; 또는
(xv) 종양 조직에서 CD39의 활성 또는 양을 감소시키는, 단리된 항체.
실시양태 9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나의 항체 및 약제학상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물로서, 여기서 조성물은 임의로 옵소닌화제, 조절 T 세포 고갈제, 화학요법 및/또는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3, A2AR, A2BR, 이중 A2AR/A2BR, CD40 또는 CD73의 길항제, 및/또는 TIGIT, CD112R 또는 CD96의 길항제, 및/또는 PVRL1, PVRL2, PVRL3, PVRL4 또는 CD155의 길항제, 및/또는 CD47, 또는 IL-27의 길항제, 및/또는 STING의 작용제, 및/또는 CAR 세포 요법을 포함하고, 임의로 여기서 길항제는 항체인, 제약 조성물.
실시양태 10. 조직에서 CD39의 양 또는 활성의 감소, 대상체에서 항종양 면역 반응의 향상, 증가 및/또는 지속, 및/또는 투여가 투여 전의 활성 또는 양과 비교하여 인간 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키는 대상체의 조직에서 CD39의 억제에 사용하기 위한, 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나의 단리된 항체 또는 실시양태 9의 제약 조성물.
실시양태 11. 암이 임의로 암종, 림프종, 모세포종, 육종 또는 백혈병이거나, 또는 암이 임의로 편평세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연조직 육종, 비-소세포 폐암(편평세포 비-소세포 폐암 포함), 폐의 선암종, 폐의 편평상피암, 복막암, 간세포암, 위장관암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종(heptoma), 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘암종, 신장암, 신세포암종, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관암종, 담낭암종, 위암, 흑색종 또는 각종 두경부암 (두경부 편평세포암 포함)이고/거나, 암이 진행성 및/또는 재발성 및/또는 불응성, 및/또는 전이성이고/거나 여기서 암이 진행성 고형 종양, 및/또는 재발성 고형 종양, 및/또는 불응성 고형 종양, 및/또는 전이성 고형 종양인, 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나의 단리된 항체 또는 실시양태 9의 제약 조성물.
실시양태 12. 실시양태 10 또는 11의 용도를 위한 단리된 항체 또는 제약 조성물로서, 상기 용도는 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 임의로 방사선요법, 수술 또는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3, A2AR, A2BR, A2AR/A2BR, CD40, CD73, TIGIT, CD112R, CD96, PVRL1, PVRL2, PVRL3, PVRL4, CD155, CD47 또는 IL-27의 길항제, STING의 작용제, CAR 세포 요법, 또는 이의 조합의 투여이고, 임의로 여기서 길항제가 항체인, 단리된 항체 또는 제약 조성물.
실시양태 13. 실시양태 10 또는 11의 용도를 위한 단리된 항체 또는 제약 조성물로서, 상기 용도는 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD47의 길항제이고, 임의로 여기서 CD47의 길항제는 항-CD47 항체이고, 임의로 항-CD47 항체는:
a) 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 40004의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 40005의 아미노산 서열을 포함하고/거나;
b) (a) 서열 번호 40006의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 40007의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 40008의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 40009의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 40010의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 40011의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 단리된 항체 또는 제약 조성물.
실시양태 14. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나의 항체를 인코딩하는 핵산.
실시양태 15. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
실시양태 16. 실시양태 15의 숙주 세포를 항체가 발현되는 조건 하에 배양하는 단계를 포함하고, 임의로 항체를 정제하는 단계를 추가로 포함하는, 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나의 항체를 생산하는 방법.
도 1a, 1b, 1c 및 1d는 대조군 IgG1 항체와 비교하여 SK-MEL-28 세포 (도 1a 및 1b) 및 MOLP-8 세포 (도 1c 및 d)에 결합하는 항-CD39 항체의 능력을 2가지 농도에서 도시한다.
도 2a, 2b, 2c 및 2d는 대조군 IgG1 항체와 비교하여 SK-MEL-28 세포 (도 2a 및 2b) 및 MOLP-8 세포 (도 2c 및 2d)에서 CD39의 효소 활성을 억제하는 항-CD39 항체의 능력을 도시한다.
도 3a, 3b 및 3c는 대조군 IgG1 항체와 비교하여 SK-MEL-28 세포 (도 3c) 및 MOLP-8 세포 (도 3a 및 3b)에서 CD39의 효소 활성을 억제하는 항-CD39 항체의 능력을 용량 범위에 걸쳐 도시한다.
도 4a, 4b, 4c 및 4d는 대조군 IgG1 항체와 비교하여 단핵구 (도 4a 및 4b) 및 B 세포 (도 4c 및 4d)에서 CD39의 효소 활성을 억제하는 항-CD39 항체의 능력을 용량 범위에 걸쳐 도시한다.
도 5a 및 5b는 항-CD39 항체에 대한 친화도 측정치를 보여준다.
도 6a 및 6b는 나이브 (도 6a) 및 친화도 성숙 (도 6b) 항체에 대한 농도 범위를 사용한 처리에 반응하여 인간 PBMC로부터 CD4+ T 세포의 증식을 증가시키는 항-CD39의 능력을 보여준다.
도 7a 및 7b는 마우스에서 MOLP-8 이종이식 모델을 클론 22로 처리하면 종양 성장 억제를 유도한다는 것을 보여주고, 클론 22의 혈장 수준 및 퍼센트(%) 표적 점유율(TO) (도 7a) 및 종양 부피 (도 7b)를 도시한다.
도 8a, 8b, 8c 및 8d는 유세포분석 (도 8a) 및 면역조직화학 염색 (도 8b 및 도 8c)에 의해 입증된 바와 같이 마우스에서 MOLP-8 이종이식편 모델을 클론 22로 처리하면 종양에서 대식세포 침윤의 증가를 초래하고 종양 부피를 감소시킨다 (도 8d)는 것을 보여준다.
도 9a 및 9b는 처리된 마우스로부터의 MOLP-8 종양에서 CD39 효소 활성을 억제하는 클론 22의 능력을 보여준다.
도 10은 각 용량 그룹: 비히클, 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg의 클론 22에서 3마리의 다른 동물로부터 CD39 ATPase 검정 염색 후 사이노몰구스 원숭이로부터 자궁 조직의 염색된 조각을 보여준다.
도 11은 마우스에서 H520 이종이식 모델에서 상승된 전신 아데노신 수준을 감소시키는 클론 22의 능력을 보여준다.
도 12a, 12b, 12c, 12d 및 12e는 용량 의존적 방식으로 단핵구 (도 12a) 및 B 세포 (도 12b)에 결합하는 클론 22를 나타낸다. 퍼센트(%) 표적 점유율 (TO)은 단핵구 (도 12c) 및 B 세포 (도 12d)에 대한 최대 점유율 대조군으로서 클론 22의 포화 "스파이크"와 클론 22의 용량 적정을 비교하여 계산되었다. 클론 22로 전처리된 전혈을 RBC 용해시키고 ATP 가수분해의 억제율(%)을 계산하였다 (도 12e).
도 13a, 13b, 13c, 13d, 및 13e는 클론 22에 대한 결합 데이터를 나타낸다. 클론 22에 결합하는 재조합 인간 CD39 (도 13a), 클론 22에 결합하는 마우스 CD39 (도 13b), Duha59에 결합하는 마우스 CD39 (도 13c), 클론 22에 결합하는 래트 CD39 (도 13d), 및 클론 22에 결합하는 사이노몰구스 원숭이 CD39 (도 13e)의 결합 센서그램. 각 추적은 기준 추적에서 뺀 재조합 CD39 분석물의 농도 증가를 나타낸다. 실선은 분석물 및 리간드 (재조합 CD39: 클론 22 또는 Duha59)의 1:1 결합 모델 (의사 1차 동역학)의 전체 피팅을 나타낸다. 수직 점선은 각각 재조합 CD39 분석물에 대한 결합 및 해리의 시작을 나타낸다.
도 14는 CT26 마우스 모델에서 뮤린 항-PD-1 항체와 조합된 뮤린 항-CD39 항체의 협력 활성을 보여준다.
도 15는 ATP 및 클론 22로 처리된 PMBC로부터의 CD4+ CD39+ 세포의 삼중 양성 세포 (PD1, TIM3, Lag3)의 증가된 백분율을 나타낸다.
도 16은 인간 폐암의 H520 이종이식 모델에서 클론 22와 파클리탁셀의 조합 효과를 나타낸다
도 17은 CT26 마우스 모델에서 종양 침윤 림프구: CD8+ T 세포 (도 17a), CD4+ T 세포 (도 17b), 및 T 조절 세포 (도 17c)에 대한 뮤린 항-CD39 항체의 효과, 및 종양 부피에 대한 효과 (도 17d)를 나타낸다.
도 18은 췌관 선암종의 인간 종양 생검 모델에서 클론 22 단독 및 젬시타빈과의 조합의 효과를 보여준다.
도 19는 인간 다발성 골수종의 MOLP-8 뮤린 모델에서 종양 부피 (도 19a) 및 생존 (도 19b)에 대한 클론 22 단독, 또는 항-CD47 항체 단독, 또는 클론 22와 항-CD47 항체의 조합의 효과를 보여준다.
도 20은 이소형 대조군 항체, 항-뮤린 CD39 항체, 항-뮤린 PD-1 항체 및 항-뮤린 CD39 항체와 항-뮤린 PD-1 항체 둘다의 조합으로 처리된 마우스의 복합 분석으로부터 CT26 마우스의 TME에서 면역 세포의 단일 세포 RNA 시퀀싱(scRNAseq)의 결과를 보여준다. 세포 유형은 면역 마커의 차등 발현을 기반으로 클러스터링된다. X 및 Y 축은 scRNAseq 분석을 수행하기 위해 적용된 차원 축소 알고리즘인 UMAP (Uniform Manifold Approximation Projections)를 보여준다. X 및 Y 좌표는 각 세포 사이의 거리를 표시하여 특정 표현형에 매핑된 세포 클러스터를 보여준다.
도 21a 내지 c는 항-뮤린 PD-1 항체 단독으로 또는 항-뮤린 CD39 항체와 조합하여 처리된 CT26 마우스의 TME에서 증가된 림프구 침윤을 보여준다. 도 21a는 이소형 대조군 항체와 비교하여 이소형 및 항-PD1 항체 처리된 집단에서 세포의 CD8+ 클러스터 내 및 세포의 림프구 클러스터 내에서 CD45+ 세포의 빈도 증가를 나타낸다. 도 21b는 미처리 CT26 마우스, 또는 이소형 대조군 항체 ("그룹 1 Iso"), 항-뮤린 CD39 ("그룹 2 CD39"), 항-뮤린 PD-1 ("그룹 3 PD-1"), 또는 항-뮤린 CD39 + 항-뮤린 PD-1 ("그룹 4 콤보")로 처리된 CT26 마우스 또는 CT26 마우스들에서 면역조직화학(IHC)으로 확인된 mm2 당 CD8+ 세포의 수를 보여준다. 도 21c는 항-뮤린 PD-1 (하부 이미지) 또는 이소형 대조군 항체 (상부 이미지)로 처리된 CT26 마우스로부터 단리된 종양 샘플의 대표적인 IHC 이미지를 보여준다.
도 22는 scRNAseq 분석을 사용하여 항-뮤린 CD39 항체 또는 이소형 대조군 항체로 처리된 CT26 마우스의 TME에 침투하는 면역 세포 유형의 빈도를 나타낸다. 각 세포 유형 클러스터의 빈도는 이소형 대조군에 대한 평균 배수 변화에 대한 배수 변화로 표시된다.
도 23a 내지 b는 항-CD39 항체 처리 ("CD39 TX") 후 종양 관련 대식세포에서 IFNγ-반응 유전자의 상향조절을 보여준다. 종양 관련 대식세포는 F4/80 항원 발현을 기반으로 하는 scRNAseq 데이터세트에서 확인되었다. GSEA (Gene Set Enrichment Analysis) 및 주요 유전자 세트 (잘 정의된 생물학적 상태를 입증하기 위해 GSEA의 여러 유전자 세트의 집합에 의해 파생됨, 월드와이드웹 gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/collections.jsp#H 참조)를 사용하여 차등 발현 분석을 수행하여 항-뮤린 CD39 그룹 대 이소형 대조군에서 더 많이 발현되는 유전자의 순위를 매긴다. 농축 점수 (ES)에 기초한 상위 농축 유전자는 상향조절된 IFNγ 반응과 관련이 있었다 (도 23a). P-값 = 0.0. FDR q-값 = 0.005. UMAP 차원 감소를 사용하여 세포를 클러스터링하여 대략 20개의 별개의 집단을 생성하였다 (도 23b).
도 24는 이소형 대조군 항체, 항-뮤린 CD39 항체 ("CD39"), 항-뮤린 PD-1 항체 ("PD1"), 또는 항-뮤린 CD39 항체 + 항-뮤린 PD-1 항체 ("콤보")를 사용한 처리를 따르는 종양 관련 대식세포에서 IFNγ 시그니처에 대한 점수를 보여준다. 종양 관련 대식세포는 F4/80 항원 발현을 기반으로 하는 scRNAseq 데이터세트에서 확인되었다. IFNγ 시그니처에 대한 점수는 F4/80 발현을 기반으로 대식세포로 확인된 세포 클러스터에서 IFNγ 시그니처 유전자의 평균 발현을 취함으로써 계산되었다.
도 25는 scRNAseq 분석을 사용하여, 이소형 대조군 항체, 항-뮤린 CD39 ("CD39"), 항-뮤린 PD-1 ("PD1"), 또는 항-뮤린 CD39 + 항-뮤린 PD-1 ("콤보")로 처리된 CT26 마우스의 TME에 침투하는 세포 유형의 빈도를 보여준다. 각 세포 유형 클러스터의 빈도는 이소형 대조군에 대한 평균 배수 변화에 대한 배수 변화로 표시된다.
II. 정의
본 출원에서 "또는"의 사용은 달리 명시되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 여러 종속항의 맥락에서 "또는"의 사용은 하나 이상의 선행 독립 또는 종속항을 대안적으로만 다시 지칭하는 것이다. "포함하는(comprising)", "포함하는(including)" 및 "갖는"이라는 용어는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용될 수 있다.
용어 "CD39"는 ENTPD1 유전자에 의해 인간에서 인코딩되는 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스폴리드롤라제 1 폴리펩티드를 지칭한다. CD39의 다른 이름에는 ENTPD1, E-NTPDase1, 분화 클러스터 39, ATPDase, NTPDase-1 및 SPG64가 포함된다. CD39는 세포외 뉴클레오시드 트리포스페이트(NTP, 예를 들어, 아데노신 트리포스페이트 또는 ATP) 및 뉴클레오시드 디포스페이트(NDP, 예를 들어, 아데노신 디포스페이트 또는 ADP)의 γ- 및 β-포스페이트 잔기의 가수분해를 촉매하여 이들 분자를 뉴클레오시드 모노포스페이트(NMP; 예를 들어, 아데노신 모노포스페이트 또는 AMP) 유도체로 변환한다. CD39의 예시적인 아미노산 서열은 NCBI 참조 서열: NP_001767.3에 있다.
"친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총계의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원 (예를 들어, 항체 및 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것을 포함하여 당업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 예시 및 예시적 실시양태는 하기에 기재되어 있다.
"친화도 성숙" 항체는 그러한 변경을 보유하지 않는 모 항체와 비교하여 하나 이상의 초가변 영역 (HVR)에서 하나 이상의 변경이 있는 항체를 말하며, 이러한 변경은 임의로 항원에 대한 항체의 친화도의 개선을 초래한다.
본원에 사용된 용어 "길항제"는 표적 분자의 억제제를 지칭하고 본원에서 용어 "억제제"와 동의어로 사용될 수 있다. 길항제는 항체 (예를 들어, 단일클론 항체, 다중클론 항체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, 및 항체 단편), 리간드, 융합 단백질, 소분자, 다가 제제, 및 기타 길항제/억제제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며 원하는 항원 결합 활성을 나내는 한, 단일클론 항체, 다중클론 항체, 다중특이성 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 포함한다.
"항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일쇄 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
둘 이상의 분자 사이의 상호작용의 맥락에서 용어 "차단"은 2개 이상의 분자 사이의 상기 상호작용의 억제 또는 예방을 지칭하기 위해 본원에서 사용되며, 여기서 둘 이상의 분자 사이의 상호작용의 억제 또는 예방은 적어도 하나의 조건에서 완전하거나 거의 완전하다. "거의 완전한" 억제는 약 70 내지 99.9%의 억제율이고 "완전한" 억제는 100%이다. 예를 들어, 분자가 특정 농도에서 용량 의존 방식으로 그러한 상호작용을 완전히 또는 거의 완전히 억제하는 경우 분자는 둘 이상의 다른 분자 사이의 상호작용을 "차단"한다고 한다.
용어 "암"은 비정상적으로 높은 수준의 증식 및 성장을 나타내는 세포 그룹을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 암은 양성 (양성 종양이라고도 함), 전암성 또는 악성일 수 있다. 암세포는 고형암 세포 또는 백혈병 암세포일 수 있다. 용어 "종양"은 암을 포함하는 세포 또는 세포들을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 용어 "종양 성장"은 암의 크기 또는 정도의 상응하는 증가를 초래하는 암을 포함하는 세포 또는 세포들에 의한 증식 또는 성장을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 종으로부터 유래되는 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.
항체의 "부류"는 그의 중쇄가 소유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 항체에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5가지 주요 부류가 있으며, 이들 중 몇 가지는 하위 부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 더 나눌 수 있다. 면역글로불린의 다른 부류에 해당하는 중쇄 불변 도메인을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라고 한다.
하나 이상의 추가 치료제와 "조합한" 투여는 임의의 순서로 동시(simultaneous) (동시(concurrent)) 및 연속 (순차) 투여를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포 기능을 억제 또는 방지하고/하거나 세포 사멸 또는 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 세포독성제는 방사성 동위원소 (예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학요법제 또는 약물 (예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알칼로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포사이드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 기타 삽입제); 성장 억제제; 핵산분해효소와 같은 효소 및 이의 단편; 항생제; 그의 단편 및/또는 변이체를 포함하는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소와 같은 독소; 및 하기에 개시되는 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
"이펙터 기능"은 항체 이소형에 따라 변하는, 항체의 Fc 영역에 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 다음을 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성 (ADCC); 식균 작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화.
작용제, 예를 들어, 제약 제형의 "유효량"은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226, 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르복실-말단까지 연장된다. 그러나 Fc 영역의 C-말단 라이신 (Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다 (이 단락의 넘버링은 Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991에 기술된 바와 같이 EU 인덱스라고도 하는 EU 넘버링 시스템에 따름).
"프레임워크", "프레임워크 영역" 또는 "FR"은 초가변 영역 (HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인 (FR1, FR2, FR3, FR4)으로 구성된다. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH (또는 VL)에서 하기 서열로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
용어 "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본원에서 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 여기에서 상호교환적으로 사용된다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되며 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭하며, 이러한 세포의 자손을 포함한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하고, 이는 계대 수에 관계없이 1차 형질전환된 세포 및 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량이 모세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으며 돌연변이를 포함할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본원에 포함된다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나 인간 항체 레퍼토리 또는 기타 인간 항체 인코딩 서열을 이용하는 비인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 구체적으로 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체를 항원에 결합시키는 데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄 (각각 VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3개의 초가변 영역 (HVR)을 포함한다. (예를 들어, Kindt 등 Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., 91쪽 (2007) 참조) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적인 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, Portolano 등, J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson 등, Nature 352:624-628(1991) 참조.
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 이루어진다. 일반적으로, 서열의 하위군은 Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3에서와 같은 하위군이다. 일부 실시양태에서, VL의 경우, 하위군은 Kabat 등의 상기 문헌에서와 같이 하위군 카파 I이다. 일부 실시양태에서, VH의 경우, 하위군은 Kabat 등의 상기 문헌에서와 같이 하위군 III이다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열이 초가변성 ("상보성 결정 영역" 또는 "CDR")이고/거나 구조적으로 정의된 루프 ("초가변 루프")를 형성하고/거나 항원-접촉 잔기 ("항원 접촉")를 함유하는 항체 가변 도메인의 영역 각각을 지칭한다. 일반적으로 항체는 VH에 3개 (H1, H2, H3) 및 VL에 3개 (L1, L2, L3)의 6개의 HVR을 포함한다.
"면역접합체"는 세포독성제를 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체이다.
"개체" 또는 "대상체"은 포유동물이다. 포유류에는 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간, 및 원숭이와 같은 비인간 영장류), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.
"인터페론 감마 반응" 또는 "IFNγ 반응" 또는 "IFN-γ 반응"의 증가는 사이토카인 IFNγ와 관련된 활성의 임의의 증가를 지칭하고, 예를 들어, IFNγ 단백질 (예를 들어, TME에 존재, 세포에서 분비, 또는 세포 내에서 검출)의 증가, 세포에서 IFNγ 유전자 발현의 증가 (예를 들어, mRNA 수준 측정에 의해), IFNγ와 관련된 유전자의 유전자 발현 증가 (예를 들어, mRNA 수준 측정) (예를 들어, IFNγ와 관련된 유전자는 예를 들어 표 3에 열거된 유전자를 포함함)를 포함한다. 증가는 예를 들어 처리되지 않은 개체의 샘플과 비교했을 때, 요법의 투여 후 개체의 샘플에서 검출될 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 제1 또는 제2 요법만 투여한 후의 개체로부터의 샘플과 비교하여, 제1 및 제2 요법의 투여 후 개체로부터의 샘플에서 증가가 검출될 수 있다.
면역 세포 (예를 들어, 선천성 면역 세포)의 "침윤"은 위치 (예를 들어, 종양 미세환경)에서 검출된 면역 세포의 수의 증가를 지칭한다. 침윤은 예를 들어 처리되지 않은 개체의 샘플과 비교하여 요법의 투여 후 개체의 샘플에서 면역 세포의 수를 (예를 들어, 세포 유형별로) 측정함으로써 검출될 수 있다. 일부 실시양태에서, 침윤은 예를 들어, 제1 또는 제2 요법만 투여한 후 개체로부터의 샘플과 비교하여, 예를 들어, 제1 또는 제2 요법의 투여 후 개체로부터의 샘플에서 면역 세포의 양을 (예를 들어, 세포 유형별로) 측정함으로써 검출될 수 있다. 표준 기술은 예를 들어 종양 미세환경에서 단리된 세포의 유세포분석, 면역 세포 마커의 차등적 발현을 위해 종양 미세환경에서 단리된 세포의 유전자 발현 측정, 또는 종양 샘플의 면역조직화학 염색을 포함하는 면역 세포의 침윤을 검출하는 데 사용될 수 있다.
"단리된" 항체는 그의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)로 확인된 바와 같이, 95% 초과 또는 99%의 순도로 정제된다. 항체 순도 평가 방법의 검토는 예를 들어 Flatman 등, J. Chromatogr. B 848:79-87(2007) 참조.
본원에 사용된 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉, 예를 들어, 일반적으로 소량으로 존재하는 변이체인, 자연적으로 발생하는 돌연변이를 포함하거나 단일클론 항체 제제의 생산 동안 발생하는 가능한 변이체 항체를 제외하고, 집단을 포함하는 개별 항체는 동일하고/거나 동일 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정인자 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 다중클론 항체 제제와 대조적으로, 단일클론 항체 제제의 각 단일클론 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 지시된다. 따라서, 수식어 "단일클론"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내며 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자좌 전부 또는 일부를 함유하는 트랜스제닉 동물을 활용하는 방법을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 방법에 의해 만들어지고, 이러한 방법 및 단일클론 항체를 제조하는 다른 예시적인 방법은 본원에 기술되어 있다.
"네이키드 항체"는 이종 모이어티 (예를 들어, 세포독성 모이어티) 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 네이키드 항체는 제약 제형에 존재할 수 있다.
"천연 항체"는 다양한 구조를 갖는 천연 발생 면역글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 이황화 결합된 2개의 동일한 경쇄와 2개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N-말단에서 C-말단까지, 각 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VH)을 갖고, 그 뒤에 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2 및 CH3)이 뒤따른다. 유사하게, N-말단에서 C-말단까지, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VL)을 갖고, 그 뒤에 불변 경쇄 (CL) 도메인이 뒤따른다. 항체의 경쇄는 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 카파(κ) 및 람다(λ)라고 하는 두 가지 유형 중 하나로 지정될 수 있다.
참조 폴리펩타이드 서열에 대한 "퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성"은 필요에 따라 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고 간격을 도입한 후, 참조 폴리펩타이드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율로 정의되며, 서열 동일성의 일부로서 보존적 치환을 고려하지 않는다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열을 정렬하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 그러나, 본 명세서의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에서 제작했고, 소스 코드는 U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559에 사용자 문서와 함께 제출되어 미국 저작권 등록 번호 TXU510087로 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 캘리포니아 사우스 샌프란시스코에 있는 Genentech, Inc.에서 공개적으로 사용 가능하거나 소스 코드에서 컴파일될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함한 UNIX 운영 체제에서 사용하도록 컴파일해야 한다. 모든 서열 비교 매개변수는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 변경되지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교에 사용되는 상황에서, 주어진 아미노산 서열 B에 대한(to), 그에 대한(with), 또는 그에 대한(against) 주어진 아미노산 서열 A의 % 아미노산 서열 동일성 (대안적으로, 주어진 아미노산 서열 B에 대한(to), 그에 대한(with), 또는 그에 대한(against) 특정 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 표현할 수 있음)은 다음과 같이 계산된다:
100 곱하기 분수 X/Y
여기서 X는 A와 B의 해당 프로그램의 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 일치로 점수가 매겨진 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B에 있는 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않고, B에 대한 A의 % 아미노산 서열 동일성은 A에 대한 B의 % 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것이다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 직전 단락에 기재된 바와 같이 수득된다.
"제약 제형" 또는 "제약 조성물"이라는 용어는 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태이고, 제형이 투여될 대상에게 허용할 수 없을 정도로 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약제학상 허용되는 담체"는 대상체에게 무독성인, 활성 성분 이외의 제약 제형 또는 조성물의 성분을 지칭한다. 약제학상 허용되는 담체는 버퍼, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "불응성"은 선행 치료에 반응하지 않은 암을 지칭한다. 불응성 암은 선행 치료, 예를 들어 면역 종양학 또는 면역요법 약물, 예를 들어 차단 CTLA-4 또는 PD-1 항체를 사용한 선행 치료에 대해 부적절한 반응을 나타내거나 부분 반응을 나타내거나 진행한 암을 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 본질적으로 불응성이거나 내성인 (예를 들어, PD-1 경로 길항제에 대해 불응성), 선행 치료에 대해 불응성이거나 내성이거나, 내성 또는 불응성 상태가 획득된다. 본원에 사용된 용어 "재발성"은 대상체에서 암의 재발을 지칭한다. 본 명세서에서 "전이성"이라는 용어는 암이 신체의 원발 부위에서 다른 부위로 퍼지는 것과 같이 암이 시작된 위치에서 위치가 변경된 암세포를 의미한다. 본원에 사용된 용어 "진행성"은 치료로 치유되거나 조절될 것 같지 않은 암을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 이의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적 경과를 변경하려는 시도에서 임상적 개입을 지칭하고 예방을 위해 또는 임상 병리학 과정에서 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과에는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상 완화, 질병의 직간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 예방, 질병 진행 속도 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 관해(remission) 또는 개선된 예후가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개시된 항체는 질병의 발달을 지연시키거나 질병의 진행을 늦추기 위해 사용된다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 연결된 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 이 용어에는 자가 복제 핵산 구조로서의 벡터와 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 통합된 벡터가 포함된다. 특정 벡터는 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
III. 조성물 및 방법
항-CD39 항체, 기재된 항체를 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법이 제공된다.
A. 예시적인 항-CD39 항체
하기 서열 표는 본원에 개시되고 청구된 항체의 특정 실시양태의 서열을 제공한다.
특정 실시양태에서, CD39에 결합하는 단리된 항체가 제공된다.
CD39에 특이적으로 결합하는 단리된 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, 항체는 인간 CD39에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항체는 CD39에 결합하고 이를 억제한다. 일부 실시양태에서, 인간 CD39의 효소 활성을 감소 또는 억제하는 항-CD39 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 재조합 CD39 및/또는 막-결합된 인간 CD39에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 10nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 CD39에 결합한다. 일부 실시양태에서, 인간 CD39에 대한 결합에 대한 KD는 약 1.11 nM이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 CD39 및 사이노몰구스 원숭이 CD39에 결합하지만 마우스 CD39 또는 래트 CD39에는 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 인간 CD39에 의한 세포외 아데노신 트리포스페이트(eATP) 또는 세포외 아데노신 디포스페이트(eADP)의 세포외 아데노신 모노포스페이트(eAMP)으로의 전환을 억제하거나 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 eATP의 양을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 세포외 아데노신의 양을 감소(reduce) 또는 감소(decrease)시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 eATP의 면역자극 수준을 유지, 증가 또는 향상시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 조직의 종양 미세환경에서 인간 CD39를 길항한다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 사이노몰구스 CD39와 교차 반응한다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 림프구의 증식을 증가시키거나 향상시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체는 종양에서 대식세포 침윤을 증가 또는 향상시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 CD39에 결합하고 정상 또는 암 조직 내에서 CD39를 억제한다. 일부 실시양태에서, 조직은 자궁, 자궁경부, 폐, 전립선, 유방, 머리, 목, 결장 또는 난소에 있다. 일부 실시양태에서, 조직은 자궁에 있다. 일부 실시양태에서, 자궁 내에서 항체는 자궁근층에서 CD39를 억제한다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체 (즉, 항체 클론 번호 1 내지 22)의 VH CDR1, CDR2 및/또는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역("VH")을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VH CDR1, CDR2 및/또는 CDR3을 포함하는 VH 및 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH CDR1, CDR2 및/또는 CDR3을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VL CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3을 포함하는 VL을 포함하고, 임의로 VH 및 VL CDR은 동일한 항체 클론으로부터 유래한다.
일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체가 제공된다:
(a) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(b) 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(c) 서열 번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(d) 서열 번호 301의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 302의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 303의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 304의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 305의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 306의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(e) 서열 번호 401의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 402의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 403의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 404의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 405의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 406의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(f) 서열 번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 502의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 503의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 504의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 505의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(g) 서열 번호 601의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 602의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 603의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 604의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 605의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 606의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(h) 서열 번호 701의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 702의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 703의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 704의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 705의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 706의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(i) 서열 번호 801의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 802의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 803의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 804의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 805의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 806의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(j) (a) 서열 번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 902의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 904의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 905의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 906의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(k) (a) 서열 번호 1001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 1002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 1003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 1004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 1005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 1006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(l) (a) 서열 번호 2001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 2003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 2004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 2005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 2006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(m) (a) 서열 번호 3001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 3002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 3004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 3005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 3006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(n) (a) 서열 번호 4001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 4002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 4003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 4005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 4006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(o) (a) 서열 번호 5001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 5002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 5003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 5004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 5006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(p) (a) 서열 번호 6001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 6002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 6003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 6004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 6005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(q) (a) 서열 번호 7001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 7002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 7003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 7004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 7005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 7006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(r) (a) 서열 번호 8001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 8002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 8003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 8004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 8005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 8006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(s) (a) 서열 번호 9001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 9002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 9003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 9004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 9005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 9006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(t) (a) 서열 번호 10001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 10002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 10003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 10004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 10005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 10006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(u) (a) 서열 번호 20001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 20002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 20003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 20004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 20005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 20006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
(v) (a) 서열 번호 30001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 30002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 30003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 30004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 30005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 30006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, CD39 항체는 다음을 포함할 수 있다:
(a) 항체 클론 번호 1의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 1의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(b) 항체 클론 번호 2의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 2의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(c) 항체 클론 번호 3의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 3의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(d) 항체 클론 번호 4의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 4의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(e) 항체 클론 번호 5의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 5의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(f) 항체 클론 번호 6의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 6의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(g) 항체 클론 번호 7의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 7의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(h) 항체 클론 번호 8의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 8의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(i) 항체 클론 번호 9의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 9의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(j) 항체 클론 번호 10의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 10의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(k) 항체 클론 번호 11의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 11의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(l) 항체 클론 번호 12의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 12의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(m) 항체 클론 번호 13의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 13의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(n) 항체 클론 번호 14의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 14의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(o) 항체 클론 번호 15의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 15의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(p) 항체 클론 번호 16의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 16의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(q) 항체 클론 번호 17의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 17의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(r) 항체 클론 번호 18의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 18의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(s) 항체 클론 번호 19의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 19의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(t) 항체 클론 번호 20의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 20의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(u) 항체 클론 번호 21의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 21의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL; 또는
(v) 항체 클론 번호 22의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 22의 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 VL.
하기 서열 표는 특정 개시된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 제공한다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시양태에서, CD39 항체는 상보성 결정 영역(CDR) 외부에 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예를 들어 CDR 외부의 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 보존적 치환을 갖는, 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH를 포함하지만 상보성 결정 영역(CDR) 외부에 1, 2, 3, 4 또는 5개의 복귀 치환을 갖는다.
일부 실시양태에서, CD39 항체는 VH 서열의 프레임워크 영역에 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적 치환을 갖는, 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, VH 서열의 프레임워크 영역에서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 복귀 치환을 갖는, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH를 포함한다.
일부 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 기재된 임의의 CD39 항체의 VH 및 VL CDR을 포함하고, 여기서 각각의 CDR은 0, 1, 2 또는 3개의 아미노산 추가, 치환(예를 들어, 보존적 치환) 또는 결실을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VH CDR의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, 본원에 제공된 임의 CD39 항체의 VH와 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체의 VH는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적 치환과 같은 VH 서열의 프레임워크 영역에서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환으로 인해 서열 표에 제시된 VH 서열과 상이하다. 특정 실시양태에서, 항체의 VH는 VH 서열의 프레임워크 영역에서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 복귀 치환으로 인해 서열 표에 제시된 VH 서열과 상이하다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH를 포함한다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VL CDR의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VL의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체의 VL은 VL 서열의 프레임워크 영역에서의 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적 치환으로 인해 서열 표에 제시된 VL 서열과 상이하다. 특정 실시양태에서, 항체의 VL은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 복귀 치환으로 인해 서열 표에 제시된 VL 서열과 상이하다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VL의 아미노산 서열로 구성된 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VL의 아미노산 서열로 구성된 VL을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하고 본원에 제공된 임의의 동일한 CD39 항체의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정한 이들 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하고, 임의로 여기서 VH 및 VL은 동일한 항체 클론 번호로부터 유래한다.
특정 실시양태에서, 항체의 VH는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH이지만 VH 서열의 프레임워크 영역에 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적 치환이 있는 것이고, VL은 상기 목록의 동일한 항체 중 어느 하나의 것이다. 그러나, 특정 실시양태에서, 항체의 VH는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH이지만 VH 서열의 프레임워크 영역에서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환을 갖는다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH 및 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 VL을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VH CDR의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 뿐만 아니라 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VL CDR의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 또한 각각 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 상응하는 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체의 VH 및 VL은 서열의 프레임워크 영역에서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적 치환, 또는 예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개의 복귀 치환으로 인해 서열 표에 제시된 VH 및 VL 서열과 상이하다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 VH 및 VL의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 각각 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 VH 및 VL의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 VL을 포함한다.
CD39 항체는 다음을 포함할 수 있다:
(a) 항체 클론 번호 1의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 1의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(b) 항체 클론 번호 2의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 2의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(c) 항체 클론 번호 3의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 3의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(d) 항체 클론 번호 4의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 4의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(e) 항체 클론 번호 5의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 5의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(f) 항체 클론 번호 6의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 6의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(g) 항체 클론 번호 7의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 7의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(h) 항체 클론 번호 8의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 8의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(i) 항체 클론 번호 9의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 9의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(j) 항체 클론 번호 10의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 10의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(k) 항체 클론 번호 11의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 11의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(l) 항체 클론 번호 12의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 12의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(m) 항체 클론 번호 13의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 13의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(n) 항체 클론 번호 14의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 14의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(o) 항체 클론 번호 15의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 15의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(p) 항체 클론 번호 16의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 16의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(q) 항체 클론 번호 17의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 17의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(r) 항체 클론 번호 18의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 18의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(s) 항체 클론 번호 19의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 19의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(t) 항체 클론 번호 20의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 20의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(u) 항체 클론 번호 21의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 21의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(v) 항체 클론 번호 22의 VH의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 항체 클론 번호 22의 VL의 아미노산 서열을 포함하는 VL.
CD39 항체는 다음을 포함할 수 있다:
(a) 항체 클론 번호 1의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 1의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 1의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(b) 항체 클론 번호 2의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 2의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 2의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(c) 항체 클론 번호 3의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 3의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 3의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(d) 항체 클론 번호 4의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 4의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 4의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(e) 항체 클론 번호 5의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 5의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 5의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(f) 항체 클론 번호 6의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 6의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 6의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(g) 항체 클론 번호 7의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 7의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 7의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(h) 항체 클론 번호 8의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 8의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 8의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(i) 항체 클론 번호 9의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 9의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 9의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(j) 항체 클론 번호 10의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 10의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 10의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(k) 항체 클론 번호 11의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 11의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 11의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(l) 항체 클론 번호 12의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 12의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 12의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(m) 항체 클론 번호 13의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 13의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 13의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(n) 항체 클론 번호 14의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 14의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 14의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(o) 항체 클론 번호 15의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 15의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 15의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(p) 항체 클론 번호 16의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 16의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 16의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(q) 항체 클론 번호 17의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 17의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 17의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(r) 항체 클론 번호 18의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 18의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 18의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(s) 항체 클론 번호 19의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 19의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 19의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(t) 항체 클론 번호 20의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 20의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 20의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(u) 항체 클론 번호 21의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 21의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 21의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열; 또는
(v) 항체 클론 번호 22의 VH의 VH CDR을 포함하는 VH, 및 항체 클론 번호 22의 VL CDR을 포함하는 VL, 및 항체 클론 번호 22의 VH 및 VL과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 아미노산 서열.
일부 상기 실시양태에서, VH 및/또는 VL은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적 치환의 존재에 의해 각 종의 서열과는 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, VH는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 복귀 치환을 포함할 수 있다.
CD39 항체는 다음을 포함할 수 있다:
(a) 항체 클론 번호 1의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 1의 VL로 구성된 VL; 또는
(b) 항체 클론 번호 2의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 2의 VL로 구성된 VL; 또는
(c) 항체 클론 번호 3의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 3의 VL로 구성된 VL; 또는
(d) 항체 클론 번호 4의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 4의 VL로 구성된 VL; 또는
(e) 항체 클론 번호 5의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 5의 VL로 구성된 VL; 또는
(f) 항체 클론 번호 6의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 6의 VL로 구성된 VL; 또는
(g) 항체 클론 번호 7의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 7의 VL로 구성된 VL; 또는
(h) 항체 클론 번호 8의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 8의 VL로 구성된 VL; 또는
(i) 항체 클론 번호 9의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 9의 VL로 구성된 VL; 또는
(j) 항체 클론 번호 10의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 10의 VL로 구성된 VL; 또는
(k) 항체 클론 번호 11의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 11의 VL로 구성된 VL; 또는
(l) 항체 클론 번호 12의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 12의 VL로 구성된 VL; 또는
(m) 항체 클론 번호 13의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 13의 VL로 구성된 VL; 또는
(n) 항체 클론 번호 14의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 14의 VL로 구성된 VL; 또는
(o) 항체 클론 번호 15의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 15의 VL로 구성된 VL; 또는
(p) 항체 클론 번호 16의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 16의 VL로 구성된 VL; 또는
(q) 항체 클론 번호 17의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 17의 VL로 구성된 VL; 또는
(r) 항체 클론 번호 18의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 18의 VL로 구성된 VL; 또는
(s) 항체 클론 번호 19의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 19의 VL로 구성된 VL; 또는
(t) 항체 클론 번호 20의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 20의 VL로 구성된 VL; 또는
(u) 항체 클론 번호 21의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 21의 VL로 구성된 VL; 또는
(v) 항체 클론 번호 22의 VH의 아미노산 서열로 구성된 VH 및 항체 클론 번호 22의 VL로 구성된 VL.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 상기 및 본원의 다른 곳, 예컨대 서열 표에 기재된 항체의 가변 영역 및/또는 가변 영역 CDR 1 내지 3 중 임의의 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, CD39 항체는 하기 섹션에 기재된 바와 같은 IgG 항체, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체 또는 그의 변형된 형태이다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 이펙터 기능을 갖고, 일부 실시양태에서 불변 영역은 이펙터가 없다.
특정 실시양태에서, CD39 항체는 본원에 제공된 임의의 CD39 항체의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD39 항체는 항체 클론 번호 1 내지 22 중 어느 하나의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, CD39 항체는 다음을 포함할 수 있다:
(a) 항체 클론 번호 1의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 1의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(b) 항체 클론 번호 2의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 2의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(c) 항체 클론 번호 3의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 3의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(d) 항체 클론 번호 4의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 4의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(e) 항체 클론 번호 5의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 5의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(f) 항체 클론 번호 6의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 6의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(g) 항체 클론 번호 7의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 7의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(h) 항체 클론 번호 8의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 8의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(i) 항체 클론 번호 9의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 9의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(j) 항체 클론 번호 10의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 10의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(k) 항체 클론 번호 11의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 11의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(l) 항체 클론 번호 12의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(m) 항체 클론 번호 13의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 13의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(n) 항체 클론 번호 14의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 14의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(o) 항체 클론 번호 15의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 15의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(p) 항체 클론 번호 16의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 16의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(q) 항체 클론 번호 17의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 17의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(r) 항체 클론 번호 18의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 18의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(s) 항체 클론 번호 19의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 19의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(t) 항체 클론 번호 20의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 20의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(u) 항체 클론 번호 21의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 21의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(v) 항체 클론 번호 22의 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 항체 클론 번호 22의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
CD39 항체는 다음을 포함할 수 있다:
(a) 항체 클론 번호 1의 HC의 HC CDR을 포함하는 중쇄(HC) 및 항체 클론 번호 1의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 1의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(b) 항체 클론 번호 2의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC, 및 항체 클론 번호 2의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 2의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(c) 항체 클론 번호 3의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 3의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 3의 HC 및 LC와 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(d) 항체 클론 번호 4의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 4의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 4의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(e) 항체 클론 번호 5의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 5의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 5의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(f) 항체 클론 번호 6의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 6의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 6의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(g) 항체 클론 번호 7의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 7의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 7의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(h) 항체 클론 번호 8의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 8의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 8의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(i) 항체 클론 번호 9의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 9의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 9의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(j) 항체 클론 번호 10의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 10의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 10의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(k) 항체 클론 번호 11의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 11의 LC CDR을 포함하는 LC, 및 항체 클론 번호 11의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(l) 항체 클론 번호 12의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 12의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 12의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(m) 항체 클론 번호 13의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 13의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 13의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(n) 항체 클론 번호 14의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 14의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 14의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(o) 항체 클론 번호 15의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC, 및 항체 클론 번호 15의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 15의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(p) 항체 클론 번호 16의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 16의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 16의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(q) 항체 클론 번호 17의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 17의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 17의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(r) 항체 클론 번호 18의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 18의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 18의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(s) 항체 클론 번호 19의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 19의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 19의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(t) 항체 클론 번호 20의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 20의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 20의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(u) 항체 클론 번호 21의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 21의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 21의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열; 또는
(v) 항체 클론 번호 22의 HC의 HC CDR을 포함하는 HC 및 항체 클론 번호 22의 LC CDR을 포함하는 경쇄(LC), 및 항체 클론 번호 22의 HC 및 LC와 각각 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 HC 및 LC 아미노산 서열.
일부 상기 실시양태에서, HC 및/또는 LC는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적 치환의 존재에 의해 각각의 종의 서열과 상이할 수 있다. 상기 실시양태 중 일부에서, HC 및/또는 LC는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 복귀 치환의 존재에 의해 각각의 종의 서열과 상이할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기에 기재된 기타 단편을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 항체 단편에 대한 검토는 Hudson 등 Nat. Med. 9:129-134(2003)을 참조. scFv 단편에 대한 검토는, 예를 들어, Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994) 참조; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458 참조. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab')2 단편에 대한 논의는 미국 특허 번호 5,869,046 참조.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson 등, Nat. Med. 9:129-134(2003); 및 Hollinger 등, Proc. Natl. Acd. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993) 참조. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 Hudson 등, Nat. Med. 9:129-134(2003)에 기술되어 있다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (Domantis, Inc., Waltham, MA; 예를 들어, 미국 특허 번호 6,248,516 B1 참조).
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 온전한 항체의 단백질분해 소화뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 대장균 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
1. 다중특이적 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어, 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 CD39에 대한 것이고 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 CD39에 대한 것이고 다른 하나는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3, A2AR, A2BR, 이중 A2AR/A2BR, CD40, CD73, TIGIT, CD112R, CD96, PVRL1, PVRL2, PVRL3, PVRL4, CD155, STING, CD47 및 IL-27의 하나 (이중특이적인 경우) 또는 그 이상 (다중특이적인 경우)으로부터 독립적으로 선택된 것에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD39의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 CD39를 발현하는 세포에 세포독성제를 국소화하는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로 제조할 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술에는 상이한 특이성 (Milstein 및 Cuello, Nature 305:537(1983)), WO 93/ 08829, 및 Traunecker 등, EMBO J. 10: 3655 (1991) 참조), 및 "노브-인-홀(knob-in-hole)" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 참조)을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 동시-발현이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 다중-특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 만들기 위한 정전기 조정 효과를 조작 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편의 가교 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980 및 Brennan 등, Science, 229:81 (1985) 참조); 이중특이적 항체를 생산하기 위해 류신 지퍼를 사용 (예를 들어, Kostelny 등, J. Immunol., 148(5):1547-1553(1992) 참조); 이중특이적 항체 단편을 만들기 위한 "디아바디" 기술 사용 (예를 들어, Hollinger 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) 참조); 및 단일쇄 Fv(sFv) 이량체 사용 (예를 들어, Gruber 등, J. Immunol., 152:5368 (1994) 참조); 및 예를 들어 Tutt 등 J. Immunol. 147: 60(1991)에 기재된 삼중특이적 항체를 제조함으로써 만들 수 있다.
"옥토퍼스 항체"를 비롯한 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).
본원의 항체 또는 단편은 또한 CD39 뿐만 아니라 또 다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 F항체(Fantibody)" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어, US 2008/0069820 참조).
2. 항체 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 작제물이 원하는 특성, 예를 들어 항원 결합을 보유한다면, 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 최종 작제물에 도달하도록 만들어질 수 있다.
3. 치환, 삽입 및 결실 변이체
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발에 대한 관심 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "예시적 치환"과 함께 표 1에 제시되어 있다. 아미노산 치환은 관심 항체, 및 원하는 활성, 예를 들어 유지/향상된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝된 생성물에 도입할 수 있다.
Figure pct00001
아미노산은 일반적인 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르로이신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 치환은 이러한 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류로 교환하는 것을 수반한다.
예를 들어, 항체 친화도를 개선하기 위해 HVR에서 변경 (예를 들어, 치환)이 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟", 즉, 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 인코딩된 잔기 (예를 들어, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008) 참조), 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에서 이루어질 수 있고, 생성된 변이체 VH 또는 VL은 결합 친화도에 대해 시험된다. 2차 라이브러리에서의 구성 및 재선택에 의한 친화도 성숙은 예를 들어, Hoogenboom 등 In Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien 등, ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))에 기술되어 있다. 친화도 성숙의 일부 실시양태에서, 성숙을 위해 선택된 가변 유전자에 다양한 방법 (예를 들어, 오류가 발생하기 쉬운 PCR, 사슬 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 유발) 중 하나에 의해 다양성이 도입된다. 그런 다음 2차 라이브러리가 생성된다. 그런 다음 라이브러리를 스크리닝하여 원하는 친화도를 가진 항체 변이체를 식별한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 여러 HVR 잔기 (예를 들어, 한 번에 4 내지 6개 잔기)를 무작위화하는 HVR 지향 접근 방식을 포함한다. 항원 결합에 관여하는 HVR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히 CDR-H3 및 CDR-L3이 표적이 되는 경우가 많다.
특정 실시양태에서, 이러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 치환, 삽입 또는 결실은 하나 이상의 HVR 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들어, 본원에 제공된 보존적 치환)이 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 예를 들어 HVR의 항원 접촉 잔기 외부에 있을 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인을 위한 유용한 방법은 Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 지칭된다. 이 방법에서, 표적 잔기의 잔기 또는 그룹 (예를 들어, arg, asp, his, lys 및 glu와 같은 하전된 잔기)이 확인되고 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 결정할 수 있다. 추가 치환은 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위한 항원-항체 복합체의 결정 구조. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체는 원하는 특성을 포함하는지 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1개 잔기에서 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 폴리펩티드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합을 포함한다.
4. 당화 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 추가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 전형적으로 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 일반적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-연결에 의해 부착되는 분지형 바이안테너성 올리고당을 포함한다. 예를 들어, Wright 등 TIBTECH 15:26-32(1997) 참조. 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노오스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토오스 및 시알산 뿐만 아니라 바이안테너리 올리고당 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 항체에서 올리고당류의 변형이 이루어질 수 있다.
일부 실시양태에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어, WO 2008/077546에 기술된 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분석기에 의해 측정된 Asn 297에 부착된 모든 당구조 (예를 들어, 복합, 하이브리드 및 고 만노오스 구조)의 합과 비교하여 Asn297에서 당 사슬 내의 푸코스의 평균 양을 계산함으로써 결정된다. Asn297은 Fc 영역의 약 297번 위치에 위치한 아스파라긴 잔기 (Fc 영역 잔기의 EU 넘버링)를 지칭하지만; Asn297은 또한 항체의 사소한 서열 변이로 인해 위치 297의 상류 또는 하류 약 ± 3개 아미노산, 즉 위치 294와 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) 참조. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 간행물의 예는 다음을 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki등 J. Mol. Biol. 336:1239-1249(2004); Yamane-Ohnuki 등 Biotech. Bioeng. 87: 614(2004). 탈푸코실화된 항체를 생성할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka 등 Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams 등, 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주, 예를 들어 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, Yamane-Ohnuki 등 Biotech. Bioeng. 87: 614(2004), Kanda, Y. 등, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688(2006), 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.
항체 변이체는 예를 들어, 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테나리 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된, 이등분 올리고당과 함께 추가로 제공된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예는 예를 들어 WO 2003/011878 (Jean-Mairet 등); 미국 특허 번호6,602,684 (Umana 등); 및 US 2005/0123546 (Umana 등)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고당에 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는 예를 들어 WO 1997/30087 (Patel 등); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.
5. Fc 영역 변이체
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역 내로 도입되어 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 생체내 항체의 반감기가 중요하지만 특정 이펙터 기능 (예를 들어, 보체 및 ADCC)는 불필요하거나 유해한, 적용에 바람직한 후보가 되도록하는 전부가 아닌 이펙터 기능의 일부를 보유한 항체 변이체를 고려한다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 검정은 항체에 FcγR 결합이 결여되어 있지만 (따라서 ADCC 활성이 결여될 가능성이 있음) FcRn 결합 능력은 유지하는지 확인하기 위해 수행될 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포에 대한 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492(1991)의 464페이지 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예는 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들어, Hellstrom, I. 등 Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063(1986) 참조) 및 Hellstrom, I 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502(1985); 5,821,337 (Bruggemann, M. 등, J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987) 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비방사성 검정 방법이 사용될 수 있다 (예를 들어, 유세포분석을 위한 ACTITM 비방사성 세포독성 검정 (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; 및 CytoTox 96® 비방사성 세포독성 검정 (Promega, Madison, WI). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포에는 말초혈액 단핵세포 (PBMC) 및 자연살해 (NK) 세포가 포함된다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들어 Clynes 등 Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다. 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인하기 위해 C1q 결합 검정을 수행할 수도 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA 참조. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다 (예를 들어, Gazzano-Santoro 등, J. Immunol. Methods 202:163(1996), Cragg, MS 등, Blood 101:1045-1052(2003) 및 Cragg, MS and M .J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004) 참조). FcRn 결합 및 생체내 청소율/반감기 측정은 또한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행할 수 있다 (예를 들어, Petkova, SB 등, Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006) 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 항체를 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 비롯해 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환된 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).
FcR에 대한 결합이 개선되거나 감소된 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields 등, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001) 참조)
특정 실시양태에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334에서의 치환 (잔기의 EU 넘버링)을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,194,551, WO99/51642, 및 Idusogie 등 J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)에 기재된 바와 같이 변경된 (즉, 개선되거나 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 초래하는 변경이 Fc 영역에서 이루어진다.
증가된 반감기를 갖고 태아로의 모체 IgG의 전달을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn) (Guyer 등, J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim 등, J. Immunol. 24:249 (1994))에 대한 개선된 결합을 갖는 항체가 US2005/0014934A1 (Hinton 등)에 기재되어 있다. 이러한 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 252, 254, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,371,826)된 것을 포함한다. 또한 Fc 영역 변이체의 다른 예에 관해서는 Duncan & Winter, Nature 322:738-40(1988); 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351 참조.
일부 실시양태에서, 항체가 서열 표에 따라 제공되고, 여기서 이소형은 인간 IgG1이다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 표에 따라 제공되고, 여기서 이소형은 인간 IgG4이다. 일부 실시양태에서, 항체가 서열 표에 따라 제공되고, 여기서 이소형은 인간 IgG4이고, 여기서 세린 228에서 프롤린으로의 단일 돌연변이가 존재한다 (S228P). 일부 실시양태에서, 항체가 서열 표에 따라 제공되고, 여기서 이소형은 인간 IgG4이고, 여기서 세린 228에서 프롤린으로 (S228P) 및 류신 235에서 글루타메이트로 (L235E)의 2개의 돌연변이가 존재한다. S228P 돌연변이는 문헌에서 위치 228에서 발생한다. S→P 돌연변이는 위치 229의 클론 21 및 22에서 발생하지만 여기에서는 여전히 S228P로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 번호 40002의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 번호 40003의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
6. 시스테인 조작된 항체 변이체
특정 실시양태에서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "티오M항체"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 실시양태에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 기는 항체의 접근가능한 부위에 위치되고, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 항체를 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티와 같은 다른 모이어티에 접합하여 면역접합체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 하기 잔기 중 임의의 하나 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (Kabat 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
7. 항체 유도체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 당업계에 공지되어 있고 쉽게 입수 가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/무수말레산 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드가 물에 대한 안정성으로 인해 제조상 이점이 있을 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있으며, 하나 이상의 중합체가 부착된 경우 동일하거나 다른 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 정의된 조건 하에서 치료에 사용될 것인지 여부 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는 고려 사항을 기반으로 결정될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 항체 및 비단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (Kam 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장일 수 있고, 일반 세포에 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질성 부분에 인접한 세포가 사멸되는 온도로 비단백질성 부분을 가열하는 파장을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
B. 재조합 방법
항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD39 항체를 인코딩하는 단리된 핵산(들)이 제공된다. 이러한 핵산(들)은 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 인코딩할 수 있다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산(들)을 포함하는 하나 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산(들)을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 이러한 한 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이들로 형질전환되었다). 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵생물, 예를 들어, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프성 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 제조하는 방법이 제공되고, 여기서 상기 방법은 상기 제공된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하고 임의로 항체를 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수하는 단계를 포함한다.
항-CD39 항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산(들)은 단리되고 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입된다. 이러한 핵산(들)은 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 통상적인 절차를 사용하여 쉽게 단리되고 서열결정될 수 있다.
항체-인코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199 및 5,840,523을 참조. (또한 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (BKC Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254 참조, 대장균에서 항체 단편의 발현을 기술함) 발현 후, 항체는 가용성 분획으로 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 추가하여, 사상 진균 또는 효모와 같은 진핵 미생물은 글리코실화 경로가 "인간화"되어 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생산을 초래하는 진균 및 효모 균주를 포함하는 항체-인코딩 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li 등, Nat. Biotech. 24:210-215(2006) 참조.
글리코실화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히 열대거세미나방(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 확인되었다.
식물 세포 배양물 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 PLANTIBODIESTM 기술 설명) 참조.
척추동물 세포도 숙주로 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예를 들어, Graham 등, J. Gen Virol. 36:59 (1977)에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 아기 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251(1980)에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부암 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예를 들어 Mather 등, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포: 및 FS4 세포이다. 기타 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268(2003)를 참조.
C. 면역접합체
본 발명은 또한 하나 이상의 다른 치료제 또는 방사성 동위원소에 접합된 본원의 항-CD39 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 면역접합체는 방사성 원자에 접합되어 방사성접합체를 형성하는 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소를 방사성 접합체 생산에 사용할 수 있다. 예로는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소가 포함된다. 방사성접합체가 검출에 사용되는 경우, 신티그래픽 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어, tc99m 또는 I123, 또는 핵자기공명(NMR) 영상 (자기공명영상, mri라고도 함)을 위한 스핀 라벨, 예컨대, 요오드-123 다시(again), 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
항체의 접합체는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대, 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데하이드 (예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물 (예컨대, 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물 (예컨대, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)과 같은 다양한 이관능성 커플링제를 사용하여 만들 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 Vitetta 등, Science 238:1098 (1987)에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 항체에 대한 방사성뉴클레오타이드의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다. WO94/11026 참조. 링커는 세포에서 세포독성 약물의 방출을 촉진하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정 링커, 펩티다제-민감성 링커, 광-불안정 링커, 디메틸 링커 또는 이황화물-함유 링커 (Chari 등, Cancer Res. 52:127-131 (1992); 미국 특허 번호 5,208,020)가 사용될 수 있다.
본원의 면역접합체 또는 ADC는 상업적으로 입수가능한 (예를 들어, 미국 일리노이주 록포드 소재의 Pierce Biotechnology, Inc.로부터) BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)를 포함하나 이에 제한되지 않는 가교제 시약으로 제조된 이러한 접합체를 명시적으로 고려하지만 이에 제한되지는 않는다.
D. 제약 제형 및 조성물
본원에 기재된 바와 같은 항-CD39 항체의 제약 제형 또는 조성물은 원하는 순도를 갖는 이러한 항체를 하나 이상의 임의의 약제학상 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합함으로써 동결건조 제형 또는 수용액 형태로 제조된다. 약제학상 허용되는 담체, 희석제 및 부형제는 일반적으로 사용되는 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 멸균수, 인산염, 구연산염, 및 기타 유기산과 같은 버퍼; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류, 및 포도당, 만노오스, 또는 덱스트린을 포함한 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염 형성 카운터-이온; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 예시적인 약제학상 허용되는 담체는 간질 약물 분산제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 추가로 포함한다. rHuPH20을 포함하는 특정 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 설명되어 있다. 한 측면에서, sHASEGP는 콘드로이티나제와 같은 하나 이상의 추가 글리코사미노글리카나제와 조합된다.
예시적인 동결건조 항체 제형은 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있다. 수성 항체 제형은 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제형은 히스티딘-아세테이트 버퍼를 포함한다.
본원의 제형 또는 조성물은 또한 치료되는 특정 적응증에 필요한 활성 성분을 하나 이상, 바람직하게는 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 활성 성분을 함유할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
활성 성분은 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼으로, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 개시되어 있다.
지속 방출 제제가 제조될 수 있다. 지속 방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여에 사용되는 제형 또는 조성물은 일반적으로 멸균 상태이다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
E. 치료 방법
본원에 제공된 임의의 항-CD39 항체를 치료 방법에 사용할 수 있다. 전체에 걸쳐 "항체"가 논의되는 경우, 이는 항체를 포함하는 조성물 또한 포함된다는 것이 또한 이해되어야 한다.
한 측면에서, 의약으로 사용하기 위한 항-CD39 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속하는데 사용하기 위한 항-CD39 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 종양은 암성이다. 일부 실시양태에서, 암 치료에 사용하기 위한 항-CD39 항체가 제공된다.
추가 측면에서, 본 발명은 의약의 제조(manufacture) 또는 제조(preparation)에서의 항-CD39 항체의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 의약은 종양을 가진 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속하는데 사용하기 위한 것이다. 일부 실시양태에서, 종양은 암성이다. 일부 실시양태에서, 의약은 암을 치료하기 위한 것이다.
추가 측면에서, 본 발명은 CD39의 효소 활성을 감소시키거나 억제하는 것이 바람직한 질환 및/또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 종양을 가진 대상체에서 항-종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 종양은 암성이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
일부 측면에서, 본 발명은 CD39 단백질 관련 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 완화시키는 방법; 또는 항-CD39 항체 또는 CD39 단백질 관련 질환 또는 장애 (예컨대, 본원에 기재된 임의의 질환 또는 장애, 예를 들어 암)의 하나 이상의 증상을 완화하기 위한 항-CD39 항체를 포함하는 의약을 제공한다. 일부 측면에서, 본 발명은 CD39 단백질 관련 질환 또는 장애의 증상의 수 또는 하나 이상의 증상의 중증도를 감소시키는 방법; 또는 항-CD39 항체 또는 CD39 단백질 관련 질환 또는 장애 (예컨대, 본원에 기재된 임의의 질환 또는 장애, 예를 들어, 암)의 증상의 수 또는 하나 이상의 증상의 중증도를 감소시키는 항-CD39 항체를 포함하는 의약을 제공한다. 특정 실시양태에서, CD39 단백질 관련 질환 또는 장애의 증상은 종양이고, 감소는 종양 크기의 감소, 종양의 성장 실패, 또는 종양의 제거이다.
본원에 기재된 항체는 예를 들어 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 유효량의 본원에 기재된 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 대상체에서 적어도 하나의 종양의 성장을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전의 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 eATP 및 eADP의 세포외 아데노신으로의 CD39-매개된 전환을 예방하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 조직의 종양 미세환경 내 세포외 아데노신 수준을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39 활성을 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 종양 세포에 대한 면역 반응을 일으키는 능력을 향상시킨다.
대상체가 치료되도록 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. CD39 항체는 단독으로 사용할 수 있다. 대안적으로, CD39 항체는 하기에 추가로 기재된 바와 같이 다른 요법 또는 제제와 함께 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체의 투여에 의해 암에 걸린 대상체를 치료하는 방법은 종양 미세환경 내로 선천성 면역 세포의 침윤을 초래한다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포의 침윤은 예를 들어 치료되지 않은 개체로부터의 샘플과 비교하여 요법의 투여 후 개체로부터의 샘플에서 더 크다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포의 침윤은 PD-1의 길항제 (예를 들어, 항-PD-1 항체)의 투여로부터의 선천성 면역 세포의 침윤보다 더 크다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 골수 세포이다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 종양 관련 대식세포이다. 일부 실시양태에서, 종양 관련 대식세포는 F4/80 항원 발현에 대해 양성이다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 NK 세포이다.
암은 고형 종양 또는 혈액 악성종양 (예를 들어, 액체 종양)이 있는 암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성이다. 일부 실시양태에서, 암은 불응성이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성이다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서 암은 불응성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성, 재발성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성, 불응성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성, 전이성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성, 불응성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성, 전이성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 불응성, 전이성 종양이다. 일부 실시양태에서, 종양은 진행성, 재발성, 불응성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성, 재발성, 전이성 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 진행성, 불응성, 전이성 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성, 불응성, 전이성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 종양은 진행성, 재발성, 불응성, 전이성 고형 종양이다.
치료를 위한 암의 비제한적인 예는 편평세포 암종, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 편평 비-소세포 폐암(NSCLC), 비편평 NSCLC, 신경교종, 위장관암, 신장암(renal cancer) (예를 들어, 투명 세포 암종), 난소암, 간암(liver cancer), 결장직장암, 자궁내막암, 신장암(kidney cancer) (예를 들어, 신장 세포 암종(RCC)), 전립선암 (예를 들어, 호르몬 불응성 전립선 선암종), 갑상선암, 신경모세포종, 췌장 암, 교모세포종 (다형성 교모세포종), 자궁경부암, 위암(stomach cancer), 방광암, 간암(hepatoma), 유방암, 결장암종, 두경부암 (또는 암종), 위암(gastric cancer), 생식 세포 종양, 소아 육종, 부비동 자연 살해자, 흑색종 (예를 들어, 전이성 악성 흑색종, 예컨대 피부 또는 안내 악성 흑색종), 골암, 피부암, 자궁암, 항문 부위의 암, 고환암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질암종, 외음암종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아 고형종양, 요관암, 신우암, 중추신경계(CNS) 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌암, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평세포암, T 세포 림프종, 석면에 의해 유도된 암을 포함한 환경적으로 유발된 암, 바이러스 관련 암 또는 바이러스 기원의 암 (예를 들어, 인유두종 바이러스 (HPV 관련 또는 기원 종양) 및 두 가지 주요 혈액 세포 계통, 즉 골수성 세포주 (과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포 및 비만 세포를 생성함) 또는 림프성 세포주 (B, T, NK 및 형질 세포를 생성함)으로부터 유래한 혈액 악성종양, 예컨대 모든 유형의 백혈병, 림프종 및 골수종, 예를 들어 급성, 만성, 림프구성 및/또는 골수성 백혈병, 예를 들어 급성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 및 만성 골수성 백혈병(CML), 미분화 AML (MO), 골수아구성 백혈병 (M1), 골수아구성 백혈병 (M2; 세포 성숙이 있음), 전골수구성 백혈병 (M3 또는 M3 변이체 [M3V]), 골수단구성 백혈병 (M4 또는 호산구 증가증이 있는 M4 변이체 [M4E]), 단핵구 백혈병 (M5), 적혈구 백혈병 (M6), 거핵모구성 백혈병 (M7), 단리된 과립구 육종, 및 클로로마; 림프종, 예를 들어 호지킨 림프종 (HL), 비호지킨 림프종 (NHL), B 세포 혈액 악성종양, 예를 들어 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 림프형질세포 림프종, 단세포성 B 세포 림프종, 점막 관련 림프 조직 (MALT) 림프종, 역형성(예를 들어, Ki 1+) 대세포 림프종, 성인 T 세포 림프종/백혈병, 외투 세포 림프종, 혈관 면역모세포 T 세포 림프종, 혈관 중심 림프종, 장 T 세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 전구체 T- 림프모구 림프종, T-림프모구; 및 림프종/백혈병 (T-Lbly/T-ALL), 말초 T 세포 림프종, 림프모구성 림프종, 이식 후 림프증식성 장애, 진조직구성 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 원발성 삼출성 림프종, B 세포 림프종, 림프모구 림프종 (LBL ), 림프계의 조혈 종양, 급성 림프모구 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, 미만성 조직구 림프종 (DHL), 면역모세포 대세포 림프종, 전구 B-림프모구 림프종, 피부 T 세포 림프종 (CTLC) (균상 식육종 또는 세자리 증후군이라고도 함), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증이 있는 림프형질세포양 림프종 (LPL); 골수종, 예를 들어 IgG 골수종, 경쇄 골수종, 비분비성 골수종, 아열성 골수종 (무휴성 골수종이라고도 함), 고립성 형질세포종, 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 털세포 림프종; 골수 계통의 조혈 종양, 섬유육종 및 횡문근육종을 포함하는 중간엽 기원의 종양; 정액종, 기형암종, 성상세포종, 신경초종을 포함하는 중추 및 말초 신경계의 종양; 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종을 포함하는 중간엽 기원의 종양; 및 흑색종, 색소성 건피증, 각막극세포종, 정액종, 갑상선 여포암 및 기형암종, 림프계 계통의 조혈 종양, 예를 들어, 소세포 및 대뇌 세포 유형을 포함하여, 예를 들어 T-전림프구성 백혈병(T-PLL)과 같은 T 세포 장애를 포함하나 이에 제한되지 않는, T 세포 및 B 세포 종양을 비롯한 기타 종양; T 세포 유형의 거대 과립 림프구 백혈병(LGL); a/d T-NHL 간비장 림프종; 말초/흉선후 T 세포 림프종 (다형성 및 면역모세포 아형); 혈관 중심성 (비강) T 세포 림프종; 두경부암, 신장암, 직장암, 갑상선암; 급성 골수성 림프종, 뿐만 아니라 상기 암의 임의의 조합을 포함한다. 본원에 기술된 방법은 전이성 암, 및/또는 절제 불가능한 암, 및/또는 재발성(relapsed) 암, 및/또는 불응성 암, 및/또는 진행성 암, 및/또는 재발성(recurrent) 암의 치료에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 방법은 췌장암의 치료에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 방법은 위암의 치료에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 방법은 전립선암의 치료에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 방법은 자궁내막암의 치료에 사용될 수 있다. 본원에 기술된 방법은 비-소세포성 폐암의 치료에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 방법은 결장직장암의 치료에 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 방법은 난소암의 치료에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 선행 치료, 예를 들어 면역종양학 또는 면역요법 약물을 사용한 선행 치료에 대해 부적절한 반응을 나타내거나 진행한 암을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 암은 본질적으로 불응성이거나 내성인 (예를 들어, PD-1 경로 길항제에 대해 불응성), 선행 치료에 대해 불응성이거나 내성이거나, 내성 또는 불응성 상태가 획득된다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체는 제1 요법에 반응하지 않거나 충분히 반응하지 않는 대상체, 또는 치료, 예를 들어 항-PD-1 경로 길항제 치료 후 질환 진행이 있는 대상체에게 단독으로 또는 다른 요법과 조합하여 (예를 들어, 항-PD-1 경로 길항제 요법과 함께) 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 면역종양제, 예를 들어 PD-1 경로 길항제를 이전에 받은 적이 없는 (즉, 치료를 받은 적이 없는) 대상체에게 투여된다.
F. 조합
항-CD39 항체는 단독으로 또는 다른 치료제 (또한 때때로 본원에서 제2 요법으로 지칭됨)와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 항-CD39 항체는 적어도 하나의 추가 치료제 (예를 들어, 제2 요법을 투여하는 것을 추가로 포함하거나, 제2 요법 및 제3 요법을 투여하는 것 (암 요법의 삼중 조합)을 추가로 포함함)와 조합하여 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 추가의 독립적인 억제 경로 또는 그의 조합을 표적화하는 것은 단독요법을 넘어 추가로 증진된 면역 세포 활성화를 유도할 가능성이 있다.
일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전의 활성 또는 양과 비교하여 조직 내의 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키고, 상기 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 활성 또는 투여 전의 양과 비교하여 조직 내의 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키고, 상기 방법은 제2 요법 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 PD-1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항-종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 PD-1의 길항제 및 제3 요법을 투영하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 PD-1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 PD-1의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39 총량을 감소시키고, 상기 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 PD-1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 PD-1의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 PD-L1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항-종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공하고, 여기서 방법은 PD-L1의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 것을 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 PD-L1의 길항제이다 . 일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 PD-L1의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 PD-L1의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 PD-L1의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD73의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 CD73의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD73의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 CD73의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD73의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 CD73의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 A2AR 길항제, A2BR 길항제, 또는 이중 A2AR/A2B 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 A2AR 길항제, A2BR 길항제, 또는 이중 A2AR/A2B 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 A2AR 길항제, A2BR 길항제 또는 이중 A2AR/A2B 길항제이다. 일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 A2AR 길항제, A2BR 길항제, 또는 이중 A2AR/A2B 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 A2AR 길항제, A2BR 길항제, 또는 이중 A2AR/A2B 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 A2AR 길항제, A2BR 길항제, 또는 이중 A2AR/A2B 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD47의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 CD47의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD47의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 CD47의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CD47의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 CD39 활성 또는 조직 내의 CD39 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 CD47의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CTLA4의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 종양을 가진 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키기 위한 방법이 제공되고, 여기서 방법은 CTLA4의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CTLA4의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 항-CD39 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 방법은 CTLA4의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키고, 상기 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 CTLA4의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체를 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법이 제공되고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39 총량을 감소시키고, 여기서 방법은 CTLA4의 길항제 및 제3 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 화학요법제, 옵소닌화제, 조절 T 세포 ("Treg") 고갈제, CD39 이외의 표적의 길항제, 또는 CD39 이외의 표적의 작용제이다. 특정 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 본원에 기재된 화학요법제 또는 임의의 공지된 화학요법제이다. 일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 옵소닌화제이고, 여기서 옵소닌화제는 암 또는 종양 세포를 표적으로 하는 항-CD39 항체 이외의 항체이다. 일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 본원에 기재된 Treg 고갈제 또는 임의의 공지된 Treg 고갈제이다. 일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 CD39 이외의 표적의 길항제이다. 일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 CD39 이외의 표적의 작용제이다.
일부 예에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 독립적인 억제 경로, 예를 들어 PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3, A2AR, A2BR, CD40 또는 CD73을 포함하는 경로를 표적으로 한다. 일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3, A2AR, A2BR, CD40 또는 CD73 중 하나 이상을 길항한다. 일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 아데노신 축을 표적화하는 제제이다. 일부 실시양태에서, 아데노신 축을 표적화하는 제제는 CD73 억제제이다. 일부 실시양태에서, 아데노신 축을 표적화하는 제제는 A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제이다. 본원에 기재된 병용 요법에 사용하기에 적합한 길항제는 리간드, 항체 (예를 들어, 단일클론 항체 및 이중특이적 항체), 및 다가 제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 길항제는 융합 단백질, 예를 들어 AMP-244와 같은 Fc 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, PD-1 길항제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체이다.
일부 실시양태에서, 방법은 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 제2 요법은 PD-1의 길항제 (예를 들어, 항-PD-1 항체)의 투여이다. 일부 실시양태에서, 방법은 종양 미세환경에서 인터페론 감마 (IFN-γ) 반응의 증가를 초래한다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 반응의 증가는 PD-1의 길항제의 단독 투여로부터의 IFN-γ 반응보다 더 크다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 반응의 증가는 PD-1 길항제의 투여를 받지 않은 대상체로부터의 IFN-γ 반응보다 더 크다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 반응의 증가는 종양 미세환경에서 종양 관련 대식세포에서 인터페론 감마 (IFN-γ) 관련 유전자의 상향조절이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 반응의 증가는 종양 미세환경에서 IFN-γ 단백질 양의 증가이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 반응의 증가는 종양 미세환경으로부터 단리된 세포에서 IFN-γ 유전자 발현의 증가이다.
일부 실시양태에서, 항-CD39 항체 및 PD-1의 길항제 (예를 들어, 항-PD-1 항체)로 암에 걸린 대상체를 치료하는 방법은 선천성 면역 세포가 종양 미세환경으로 침윤되게 한다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포의 침윤은 PD-1의 길항제의 단독 투여로부터의 선천성 면역 세포의 침윤보다 더 크다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포의 침윤은 PD-1의 길항제의 투여를 받지 않은 대상체로부터의 선천성 면역 세포의 침윤보다 더 크다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 골수 세포이다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 종양 관련 대식세포이다. 일부 실시양태에서, 종양 관련 대식세포는 F4/80 항원 발현에 대해 양성이다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 NK 세포이다.
예시적인 항-PD-1 항체는 니볼루맙 (BMS-936558) 또는 WO 2006/121168에 기재된 항체 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 7D3, 5F4 및 4A11 중 하나의 가변 영역 또는 CDR을 포함하는 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 WO2012/145493에 기재된 MK-3475 (펨브롤리주맙); WO 2012/145493에 기재된 AMP-514; PDR001; BGB-A317 (티슬레리주맙) 및 BGB-108; WO2016106159에 기재된 바와 같은 244C8 및 388D4; REGN2810; 피딜리주맙; TSR-042; PF-06801591; 또는 AMP-224이다. 추가로 공지된 PD-1 항체 및 기타 PD-1 억제제는 WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335, WO 2011/066389, WO 2011/161699, WO 2012/145493, 미국 특허 번호 7,635,757 및 8,217,149, 및 미국 특허 공개 번호 2009/0317368에 기재된 것들을 포함한다. WO2013/173223에 개시된 임의의 항-PD-1 항체가 또한 사용될 수 있다. 이들 항체 중 하나로서 PD-1 상의 동일한 에피토프와 결합 및/또는 이에 결합하기 위해 경쟁하는 항-PD-1 항체 또한 병용 치료에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 병용 요법에 유용한 항-PD-L1 항체는 BMS-936559 (WO 2007/005874 및 미국 특허 번호 7,943,743에서 12A4로 지칭됨), 또는 PCT 공개 WO 07/005874 및 미국 특허 번호 7,943,743에 기재된 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7 및 13G4의 가변 영역 또는 CDR을 포함하는 항체이다. 특정 실시양태에서 항-PD-L1 항체는 MEDI4736 (두르발루맙 및 항-B7-H1로도 공지됨), MPDL3280A (아테졸리주맙 및 RG7446으로도 공지됨), MSB0010718C (아벨루맙으로도 공지됨; WO2013/79174) FAZ053, MDX1105, 또는 rHigM12B7이다. WO2013/173223, WO2011/066389, WO2012/145493, 미국 특허 번호 7,635,757 및 8,217,149 및 미국 공개 번호 2009/145493에 개시된 임의의 항-PD-L1 항체 또한 사용할 수 있다. 이들 항체 중 임의의 것과 동일한 에피토프와 경쟁하고/하거나 이에 결합하는 항-PD-L1 항체 또한 병용 치료에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 CTLA-4 길항제, 예를 들어 항-CTLA-4 항체와 함께 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-CTLA-4 항체는 Yervoy® (이필리무맙 또는 항체 10D1, PCT 공개 WO 01/14424에 기술됨), 트레멜리무맙 (이전에는 티실리무맙, CP-675,206), 단일클론 또는 하기 간행물: WO 98/42752; WO 00/37504; 미국 특허 번호 6,207,156; Hurwitz 등 (1998) Pro. Natl. Acd. Sci. USA 95(17): 10067-10071; Camacho등 (2004) J. Clin. Oncology 22(145): 항체 트랙트(tract) 번호 2505 (항체 CP-675206); 및 Mokyr 등 (1998) Cancer Res. 58:5301-5304 중 임의의 것에 기재된 항-CTLA-4 항체의 군으로부터 선택된 항체이다. WO2013/173223에 개시된 임의의 항-CTLA-4 항체 또한 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 LAG-3 (또한 본원에서 및 다른 사람들에 의해 LAG3으로 지칭됨) 길항제와 조합하여 사용된다. 일부 실시양태에서, LAG-3 억제제는 LAG525, BMS-986016, 및 TSR-033으로 구성된 군으로부터 선택된다. 항-LAG3 항체의 예는 미국 특허 공개 번호 US2011/0150892, WO10/19570 및 WO2014/008218에 기재된 항체 25F7, 26H10, 25E3, 8B7, 11F2 또는 17E5의 가변 영역 또는 CDR을 포함하는 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 BMS-986016이다. 사용될 수 있는 기술분야에서 인정된 다른 항-LAG-3 항체는 US 2011/007023, WO08/132601, 및 WO09/44273에 기재된 IMP731 및 IMP-321을 포함한다. 이들 항체 중 임의의 것과 경쟁하고/하거나 동일한 에피토프에 결합하는 항-LAG-3 항체 또한 병용 치료에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 아데노신 A2AR 길항제, A2BR 길항제 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제와 조합하여 사용된다. A2AR, A2BR 및 이중 A2AR/A2BR 길항제의 예는 Hodgson 등, (2009) J Pharmacol Exp Ther 330(1):294-303에 기재되어 있고 그 전체가 참고로 여기에 포함되는 프렐라데난트(Preladenant)/SCH 420814 (Merck/Schering, CAS 등록 번호: 377727-87-2); US Pat. 9,133,197에 기재되어 있고 그 전체가 참고로 여기에 포함되는 ST-4206 (Leadiant Biosciences); KW-6356 (Kyowa Hakko Kogyo), 토자데난트(Tozadenant)/SYN-115 (Acorda), LeWitt 등, (2008) Ann Neurol 63(3):295-302에 기재되어 있으며, 그 전체가 참고로 여기에 포함되는 이스트라데필린(Istradefylline)/KW-6002 (Kyowa Hakko Kogyo, CAS 등록 번호: 155270-99-8); 테오필린 (CAS 등록 번호: 58-55-9), NIR178 (Novartis); AB928 (Arcus Biosciences), GBV-2034 (Globavir), 비파데난트(Vipadenant) (Redox/Juno), WO2011/095625에 기재되어 있고 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 AZD4635/HTL-1071 (AstraZeneca/Heptares); WO 2009/156737에 기재되어 있고 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함되는 CPI-444/V81444 (Corvus/Genentech); US 8,796,284 및 WO 2017/025918에 기재되어 있고 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 PBF509 (Palobiofarma/Novartis); 모두 전문이 본원에 참고로 포함되는 US8114845, US9029393, US20170015758, 또는 US20160129108에 기술된 A2AR 길항제; 및 ATL-444, MSX-3, SCH-58261, SCH-412,348, SCH-442,416, VER-6623, VER-6947, VER-7835, CGS-15943 또는 ZM-241,385를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 아데노신 A2BR 길항제와 조합하여 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 이중 A2AR/A2BR 길항제와 조합하여 사용된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 CD40 억제제와 조합하여 사용된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 아데노신 축을 표적화하는 제제 (예를 들어, CD73 억제제 또는 A2AR/A2BR 길항제)와 조합하여 사용된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 CD73 억제제와 조합하여 사용된다. CD73 억제제의 예는 MEDI9447 (Medimmune), BMS-986179 (Bristol Meyers Squibb), 또는 그 전체가 참조로 본원에 포함되는 US2018/0009899 (Corvus)에 기술되어 있는 것과 같이, CD73에 결합하는, AB421 (Arcus), CD73 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 같은 소분자 CD73 억제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CD39 항체는 TIM-3 억제제와 조합하여 사용된다. TIM-3 억제제의 예로는 MGB453 (Novartis), TSR-022 (Tesaro) 또는 LY3321367 (Eli Lilly)이 있다. 본원에 기재된 병용 요법에 사용하기에 적합한 길항제는 리간드, 항체 (예를 들어, 단일클론 항체 및 이중특이적 항체), 및 다가 제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 추가 치료제는 키메라 항원 수용체(CAR) 세포 요법이다. 일부 실시양태에서, CAR 세포 요법은 CTL019이다.
일부 실시양태에서, PVR 유전자 패밀리의 구성원은 종양 세포에서 상향조절되고 고유한 종양 촉진 특성을 나타낼 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 제2 요법은 TIGIT, CD112R, CD96, PVRL1, PVRL2, PVRL3, PVRL4 및 CD155의 길항제 중 하나 이상으로부터 선택된다. 본원에 기재된 병용 요법에 사용하기에 적합한 길항제는 리간드, 항체 (예를 들어, 단일클론 항체 및 이중특이적 항체), 및 다가 제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
STING 작용제는 선천성 면역 세포 활성화를 유도하여 증가된 T 세포 프라이밍 및 종양 미세환경으로의 면역 세포 동원을 유발한다. CD39와 조합하여 STING 작용제를 표적화하면 T 세포 및 NK 세포 동원 및 활성화가 훨씬 더 증가할 가능성이 있다.
증가된 항-CD47 항체 매개 식균작용은 대식세포에 의한 암 유래 항원의 T 세포로의 제시를 증가시킬 수 있다. 항-CD47 항체와 본원에서 제공되는 항-CD39 항체와 같은 항-CD39 항체를 사용한 병용 치료는 암 항원 특이적 T 세포 반응을 향상시킬 기회를 제공하고 본원에 완전히 포함된다.
일부 실시양태에서, 추가 치료제 또는 제2 요법 또는 제3 요법은 CD47의 길항제이다. 일부 실시양태에서, CD47의 길항제는 항-CD47 항체이다. 항-CD47 항체는 서열 번호 40004 (야생형 인간 IgG4 불변을 포함하는 중쇄) 및 서열 번호 40005 (경쇄)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-CD47 항체는 (a) 서열 번호 40006의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 40007의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 40008의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 40009의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 40010의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 40011의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 9,803,016 (예를 들어, 서열 번호 24 및 26) 참조.
본원의 항체는 또한 다른 요법, 예를 들어 수술, 화학요법, 방사선 요법, 또는 생물학적 제제, 예컨대 또 다른 치료 항체의 투여 전에, 실질적으로 동시에, 또는 그 후에 제공될 수 있다. 예를 들어, 2가지 요법이 투여되거나 암 요법의 삼중 조합이 투여되는 일부 실시양태에서, 요법은 그들 자신의 투여 일정에 따라 동시에, 연속적으로 및/또는 상이한 시점에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 수술, 화학요법 및 방사선 요법, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 요법 후에 재발되거나 진행되었다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 CD39 항체는 미세전이가 존재할 수 있는 위험이 있을 때 및/또는 재발 위험을 감소시키기 위해 보조 요법으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학요법제는 본원에 기재된 항-CD39 항체와 조합하여 사용된다. 예시적인 화학요법제는 안트라사이클린 (예를 들어, 독소루비신, 이다루비신, 다우노루비신, 시타라빈, 에피루비신, 발루비신 및 미톡산트론) (예를 들어, Minotti 등, (2004) Pharmacol Rev 56(2):185-229 참조), 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 토포테칸; 하이캄틴(Hycamtin), 캄토테신, 에토포사이드) (예를 들어, Pommier 등, (2010) Chem Biol 17(5):421-433 참조; 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함됨), 블레오마이신 (Kimura 등, (1972) Cancer 29(1):58-60), 젬시타빈 (Plunkett 등, (1995) Semin Oncol 22(4 Suppl 11):3-10), 플라틴 (예를 들어, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 사트라플라틴, 피코플라틴) (Kelland (2007) Nat Rev Cancer 7(8):573-584), 탁산 (예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, 아브락산) (Abal 등, (2003) Curr Cancer Drug Targets 3(3):193-203) (탁산의 알부민 결합 버전 (예를 들어, 알부민 결합 파클리탁셀) 포함, DNA 알킬화제 (예를 들어, 사이클로포스파미드, 벤다무스틴) (Leoni 등, (2008) Clin Cancer Res 14(1):309-317), CHOP (사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드, 빈크리스틴 및 프레드니손의 약물 조합) (Dunleavy (2014) Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2014(1):107-112), 및 플루오로우라실 및 이의 유도체 (그 전체가 참조로 본원에 포함되는 Alvarez 등, (2012) Expert Opin Ther Pat 22(2):107-123)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 화학요법제는 면역원성 세포 사멸(ICD)을 유도한다. 일부 실시양태에서, ICD를 유도하는 제제는 안트라사이클린이다. 일부 실시양태에서, 안트라사이클린은 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신 및 발루비신으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안트라사이클린은 독소루비신이다. 일부 실시양태에서, ICD를 유도하는 제제는 백금 유도체이다. 일부 실시양태에서, 백금 유도체는 옥살리플라틴, 카보플라틴 및 시스플라틴으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 백금 유도체는 옥살리플라틴이다.
본 발명의 조성물과의 조합 및/또는 공동-투여에 적합한 기타 화학요법제는 예를 들어 탁솔, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키신, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시안트란신디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 퓨로마이신 및 이들의 유사체 또는 동족체를 포함한다. 추가 제제에는 예를 들어 항대사물질 (예를 들어, 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카바진), 알킬화제 (예를 들어, 메클로레타민, 티오TEPA, 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴 (BSNU), 로무스틴 (CCNU), 사이클로포스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 시스-디클로르디아민 백금(II) (DDP), 프로카바진, 알트레타민, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 사트라플라틴, 또는 트리플라틴 테트라니트레이트), 안트라사이클린 (예를 들어, 다우노루비신 (이전에는 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제 (예를 들어, 닥티노마이신 (이전에는 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신 (AMC)), 및 항유사분열제 (예를 들어, 빈크리스틴 및 빈블라스틴) 및 테모졸로미드를 포함한다.
암의 치료를 위해, 조합은 화학요법제, 성장 억제제, 유전자 요법 백신과 같은 항암 백신, 항혈관신생제, 및/또는 항종양 조성물과 같은 하나 이상의 추가의 항암제와 함께 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항염증 약물, 예를 들어 스테로이드 또는 비스테로이드성 항염증 약물 (NSAID)이 조합과 함께 투여될 수 있다. 본원에 기술된 CD39 항체와 함께 또는 치료 전에 비정상적인 증식 세포를 정지시키는 것이 바람직한 경우, 호르몬 및 스테로이드 (합성 유사체 포함), 예컨대 17a-에티닐에스트라디올, 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 프레드니손, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메게스테롤아세테이트, 메틸프레드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 하이드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론아세테이트, 류프롤라이드, 플루타미드, 토레미펜, ZOLADEX®도 대상자에게 투여될 수 있다. 본원에 기재된 방법 또는 조성물을 사용할 때, 항모방제와 같은 임상 환경에서 종양 성장 또는 전이의 조절에 사용되는 다른 제제도 원하는 대로 투여될 수 있다.
상기 언급된 이러한 조합 요법은 조합 투여 (2개 또는 3개 이상의 치료제가 동일하거나 별도의 제형 또는 조성물에 포함되는 경우), 및 개별 투여를 포함하고, 이 경우 항-CD39 항체의 투여는 추가 치료제 또는 치료제들의 투여 전에, 동시에 및/또는 후에 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-CD39 항체의 투여 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 1개월 이내에, 또는 약 1, 2 또는 3주 내에, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 이내에 발생한다.
항-CD39 항체 (및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 국소 치료가 필요한 경우 병변내 투여가 가능하다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여가 포함된다. 투여는 임의의 적절한 경로, 예를 들어 부분적으로는 투여가 단기인지 만성인지에 따라 정맥 주사 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 일시 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
항-CD39 항체 (및 2차 항체 요법)는 우수한 의료 관행과 일치하는 방식으로 제형화, 투여(dosed) 및 투여(administered)될 수 있다. 이 맥락에서 고려해야 할 요소에는 치료 중인 특정 장애, 치료 중인 특정 포유동물, 개별 대상체의 임상 상태, 장애의 원인, 제제 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 및 의료 종사자에게 알려진 기타 요인이 포함된다. 본원에 사용된 "분할 투여량"은 단일 단위 투여량 또는 총 1일 투여량을 2회 이상의 투여량으로 나눈 것, 예를 들어 단일 단위 투여량을 2회 이상의 투여이다. 항체는 "분할 용량"으로 투여될 수 있다.
항체는 그럴 필요는 없지만, 임의로 문제의 장애를 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 제제와 함께 제형화된다. 이러한 기타 제제의 유효량은 제형 또는 조성물에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 기타 요인에 따라 달라진다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 경험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량 및 임의의 경로에 의해 사용된다. 일부 실시양태에서, 항체는 즉시 방출을 위한 제형으로 제공되고 다른 제제는 연장 방출을 위해 제형화되거나 그 반대도 마찬가지이다.
G. 제조품
또 다른 측면에서, 상기 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기, 및 용기 위 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기에는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 용기는 그 자체로 또는 병태의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유하고 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백이거나 피하 주사 바늘에 의해 관통 가능한 마개가 있는 바이알일 수 있다). 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 그 조성물이 선택한 병태를 치료하는 데 사용됨을 나타낸다. 더욱이, 제조 물품은 (a) 항-CD39 항체를 포함하는 조성물이 내부에 함유된 제1 용기; 및 (b) 추가의 세포독성제 또는 다른 치료제를 포함하는 조성물이 내부에 함유된 제2 용기를 포함할 수 있다. 이 실시양태에서의 제조 물품은 조성물이 특정 병태를 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 제조 물품은 약제학상 허용되는 버퍼, 예컨대 정균 주사용수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 버퍼, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하여 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 재료를 추가로 포함할 수 있다.
임의의 상기 제조 물품은 항-CD39 항체 대신에 또는 이에 더하여 면역접합체를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
IV. 실시예
실시예 1. 항-CD39 항체 생성
CD39 항원 (재조합 CD39; R&D systems 카탈로그 번호 4397-EN)을 Pierce 사의 EZ-Link Sulfo-NHS-비오틴화 키트를 사용하여 바이오틴화했다. 염소 F(ab')2 항-인간 카파-FITC (LC-FITC), ExtrAvidin-PE (EA-PE) 및 스트렙타비딘-AF633 (SA-633)은 각각 Southern Biotech, Sigma, 및 Molecular Probes 사에서 입수했다. 스트렙타비딘 MicroBeads 및 MACS LC 분리 컬럼은 Miltenyi Biotec 사에서 구입했다. 염소 항-인간 IgG-PE (인간-PE)는 Southern Biotech 사에서 입수했다.
1차 발견.
각각 ~109개의 다양성을 갖는 8개의 나이브 인간 합성 효모 라이브러리가 이전에 설명된 바와 같이 전파되었다 (예를 들어, Y. Xu 등, Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool. PEDS 26.10, 663-70 (2013); WO2009036379; WO2010105256; 및 WO2012009568을 참조). 처음 2번의 라운드의 선별을 위해, 앞서 설명한 대로 Miltenyi MACS 시스템을 활용한 자기 비드 분류 기법이 수행되었다 (예를 들어, Siegel 등, High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library." J Immunol Methods 286(1-2), 141-153 (2004) 참조). 간단히 말해서, 효모 세포 (~1010 세포/라이브러리)를 세척 버퍼 (인산염 완충 식염수 (PBS)/0.1% 소 혈청 알부민 (BSA))에서 30℃에서 15분 동안 10 nM 비오틴화된 Fc-융합 항원 1.5 ml와 함께 인큐베이션했다. 40 ml의 빙냉 세척 버퍼으로 1회 세척한 후, 세포 펠렛을 20 mL의 세척 버퍼에 재현탁시키고, Sreptavidin MicroBeads (500 μl)를 효모에 첨가하고 4℃에서 15분 동안 인큐베이션했다. 다음으로, 효모를 펠릿화하고 20 mL의 세척 버퍼에 재현탁하고 Miltenyi LS 컬럼에 로딩했다. 20 mL를 로딩한 후, 컬럼을 3 mL 세척 버퍼로 3회 세척하였다. 그런 다음 자기장에서 컬럼을 제거하고 효모를 5 mL의 성장 배지로 용출한 다음 밤새 성장시켰다. 다음 라운드의 선별은 유세포분석을 사용하여 수행되었다. 대략 2×107 효모를 펠렛화하고, 세척 버퍼로 3회 세척하고, 평형 조건에서 감소하는 농도의 비오틴화 항원 (200 내지 5 nM)과 함께 또는 다중-특이성 고갈 시약(PSR)과 함께 30℃에서 배양하여 선별물에서 비특이적 항체를 제거한다. PSR 고갈을 위해 라이브러리를 앞서 설명한 대로 비오티닐화된 PSR 시약의 1:10 희석액과 함께 인큐베이션했다 (예를 들어, Y. Xu 등, Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool. PEDS 26.10, 663-70 (2013) 참조). 그런 다음 효모를 세척 버퍼로 2회 세척하고 LC-FITC (1:100 희석), 및 SA-633 (1:500 희석) 또는 EAPE (1:50 희석) 이차 시약 중 하나로 4℃에서 15분 동안 염색하였다. 세척 버퍼로 2회 세척한 후, 세포 펠렛을 0.3 mL 세척 버퍼에 재현탁하고 여과기 캡이 있는 분류 튜브로 옮겼다.
FACS ARIA 분류기 (BD Biosciences)를 사용하여 분류를 수행하고 원하는 특성을 갖는 항체를 선택하기 위해 분류 게이트를 결정했다. 원하는 모든 특성을 가진 집단이 얻어질 때까지 선별 라운드를 반복했다. 최종 선별 라운드 후, 효모를 플레이팅하고 특성화를 위해 개별 콜로니를 선택했다.
경쇄 배치 셔플.
항체의 추가 발견 및 개선을 위해 1차 발견 단계 동안 경쇄 다양화 프로토콜을 사용했다.
경쇄 배치 다양화 프로토콜: 나이브 선별 산출물로부터의 중쇄를 PCR을 통해 효모로부터 추출하고 5 x 106의 다양성을 갖는 경쇄 라이브러리로 형질전환시켰다. 나이브 발견에서 설명된 바와 같이 MACS 한 라운드 및 FACS 세 라운드로 선별을 수행했다. 다른 FACS 라운드에서 라이브러리는 PSR 결합, 및 항원 적정에 의한 친화도 압력에 대해 조사되었다. 원하는 특성을 가진 집단을 얻기 위해 분류를 수행했다.
항체 친화도 성숙
항체의 친화도 성숙은 하기 기재된 바와 같이 중쇄 가변 영역에 다양성을 도입함으로써 수행하였다.
CDRH1 및 CDRH2 선별: 단일 항체의 CDRH3은 1 x 108의 다양성의 CDRH1 및 CDRH2 변이체를 갖는 미리 만들어진 라이브러리로 재조합되었고 선별은 나이브 발견에 기술된 바와 같이 MACS의 한 라운드 및 FACS의 세 라운드로 수행되었다. 다른 FACS 라운드에서 라이브러리는 PSR 결합, 마우스 교차 반응성 및 적정에 의한 친화도 압력 또는 부모 IgG보다 친화도가 더 높은 결합제를 풍부하게 하도록 항원을 부모 Fab 또는 부모 IgG와 사전-복합체화함으로 인한 친화도 압력에 대해 조사되었다. 원하는 특성을 가진 집단을 얻기 위해 분류를 수행했다.
항체 생산 및 정제
효모 클론을 포화 상태로 성장시킨 다음 진탕하면서 30℃에서 48시간 동안 유도하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠렛화하고 상청액을 정제를 위해 수확하였다. IgG를 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하고 아세트산, pH 2.0으로 용출하였다. Fab 단편은 파파인 소화에 의해 생성되었고 KappaSelect (GE Healthcare LifeSciences)를 통해 정제했다.
클론 1 내지 20은 IgG1 항체이다 (인간 IgG1 불변 영역의 서열은 서열 번호 40000으로 표시됨). 클론 21 내지 22는 단일 점 돌연변이 S228P가 있는 IgG4 항체이다 (S228P 돌연변이가 있는 인간 IgG4 불변 영역의 서열은 서열 번호 40002로 표시됨). 클론 22는 VH FR4에서의 단일 아미노산 (클론 21에서 K, 클론 22에서 R)이 클론 21과 다르다. 일반적으로, 서열 번호 40002 (S228P 돌연변이), 서열 번호 40003 (S228P 및 L235E), 서열 번호 40000 (IgG1 야생형) 및 서열 번호 40001 (IgG4 야생형)의 중불변 영역을 사용하는 항체는 클론 번호 및 -A, -B, -C 및 -D로 각각 지칭될 수도 있다. 일반적으로, 본원에 기재된 모든 예시된 항체는 인간 카파 경쇄를 포함한다.
클론 21의 중쇄 및 경쇄 단백질 서열은 각각 서열 20019 및 20021로 표시된다. 클론 21의 중쇄 및 경쇄 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 20020 및 20022로 표시된다.
클론 22의 중쇄 및 경쇄 단백질 서열은 각각 서열 번호 30019 및 30021로 표시된다. 클론 22의 중쇄 및 경쇄 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 30020 및 30022로 표시된다.
실시예 2. 인간 암세포에 결합하는 항-CD39 항체
세포에 대한 항-CD39 항체의 상대적 결합 정도를 결정하기 위해, 도 1a, 1b, 1c, 1d 에 나타낸 바와 같이, MOLP-8 또는 SK-MEL-28 세포를 2가지 농도의 형광 표지된 항-CD39 항체 또는 대조군 IgG1 항체로 처리하였다. 세포에 대한 결합 정도를 결정하고 평균 형광 강도(MFI)로 표현하였다. 세포를 FACS 버퍼 (2 mM EDTA, 2% FBS)으로 세척하고 원심분리에 의해 펠렛화하였다. 세포를 형광단 Alexa Fluor 488 (AF488)로 직접 표지된 항-CD39 또는 대조군 IgG1 항체의 용량을 함유하는 FACS 버퍼에 재현탁시키고 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음 세포를 FACS 버퍼으로 2회 세척한 후 4% 파라포름알데하이드(PFA)에 고정하고 FACS 버퍼에 재현탁하고 FACS Canto II 분석기 (BD Biosciences)에서 분석했다.
도 1a (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 1b (친화도 성숙 항체)에 도시된 바와 같이, SK-MEL-28 세포에 결합된다. 도 1c (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 1d (친화도 성숙 항체)에 도시된 바와 같이, MOLP-8 세포에 결합된다.
실시예 3. 항-CD39 항체는 악성 및 면역 세포에 대한 CD39 활성을 억제한다
악성 세포주 및 1차 면역 세포에 대한 CD39의 효소 활성을 억제하는 항-CD39 항체의 능력을 말라카이트 그린 포스페이트 검정을 사용하여 측정하였다. 간단히 말해서, 세포를 항-CD39 항체 또는 대조군 항체 및 25 μM ATP로 60분 동안 처리하였다. ATP로부터의 무기 인산염의 방출은 말라카이트 그린 포스페이트 검정 키트 (Enzo Life Sciences, 카탈로그 #BML-AK111)를 사용하여 측정되었다. 정규화된 억제 백분율(% INH)은 100% 억제를 나타내는 '시간 제로 대조군'과 0% INH를 나타내는 '항체 없음 대조군'을 사용하여 결정되었다. '시간 제로 대조군'은 인산염이 생성되지 않고 CD39가 완전히 억제되는 조건을 모방하기 위해 반응이 즉시 중단되는 모든 시약이 포함된 웰이다. '항체 없음 대조군'은 모든 시약과 세포가 추가되지만 항체는 존재하지 않는 웰이다. 이 웰은 최대량의 인산염이 방출되고 CD39의 억제가 없는 조건을 모방한다. 억제율을 결정하려면: '항체 없음 대조군' 값을 검정 값에서 빼고 '시간 제로 대조군' 값에서 차감한 '항체 없음 대조군' 값으로 나눈다. 결과 값에 100을 곱하여 백분율 값을 제공한다. MOLP-8 (인간 다발성 골수종 세포주), SK-MEL-28, 1차 인간 B 세포 (전혈에서 단리됨) 또는 1차 인간 단핵구 (전혈에서 단리됨)가 이 검정에 사용되었다.
도 2a (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 2b (친화도 성숙 항체)에 나타낸 바와 같이, SK-MEL-28 세포를 10 μg/mL의 항-CD39 항체 또는 대조군 IgG1 항체로 처리하면 도시한 바와 같이 CD39 효소 활성이 억제되었다.
도 2c (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 2d (최적화된 항체)에 나타낸 바와 같이, MOLP-8 세포를 10 μg/mL의 항-CD39 항체 또는 대조군 IgG1 항체로 처리하면 도시한 바와 같이 CD39 효소 활성이 억제되었다.
도 3a (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 3b (친화도 성숙 항체)에 나타낸 바와 같이, ATP의 존재 하에 도시한 바와 같이 다양한 농도의 항-CD39 항체 또는 대조군 IgG1 항체 (DNP-C)로 MOLP-8 세포를 처리하면 테스트된 모든 항-CD39 항체에 의해 CD39 활성의 용량 의존적 억제가 초래된다. CD39 활성의 억제는 방출된 무기 인산염의 정도에 의해 결정되었고 억제율 (% INH)로 표시되었다.
도 3c (세린 228에서 프롤린으로 단일 돌연변이 (S228P)가 있는 친화도 성숙 항체 IgG4, 지정 클론 16-A, 14-A 및 13-A)에 나타낸 바와 같이, ATP의 존재 하에 도시된 바와 같이 다양한 농도의 항-CD39 항체 또는 세린 228에서 프롤린(S228P)으로의 동일한 단일 돌연변이를 포함하는 대조군 IgG4 항체 (DNP.41)로 SK-MEL-28 세포를 처리하면 CD39 활성의 용량 의존적 억제를 초래하였다. CD39 활성의 억제는 방출된 무기 인산염의 정도에 의해 결정되었고 억제율 (% INH)로 표시되었다.
도 4a (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 4b (친화도 성숙 항체)에 나타낸 바와 같이, ATP의 존재 하에 도시된 바와 같이 다양한 농도의 항-CD39 항체 또는 대조군 IgG1 항체 (DNP-C)를 사용하여 전혈에서 단리된 1차 인간 단핵구를 처리하면 CD39 활성의 용량 의존적 억제를 초래하였다. CD39 활성의 억제는 방출된 무기 인산염의 정도에 의해 결정되었으며 억제율 (% INH)로 표시되었다.
도 4c (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 4d (친화도 성숙 항체)에 나타낸 바와 같이, ATP의 존재 하에 도시된 바와 같이 다양한 농도의 항-CD39 항체 또는 대조군 IgG1 항체 (DNP-C)를 사용하여 전혈에서 분리된 1차 인간 B 세포의 처리하면 CD39 활성의 용량 의존적 억제를 초래하였다. CD39 활성의 억제는 방출된 무기 인산염의 정도에 의해 결정되었고 억제율 (% INH)로 표시되었다.
종합하면, 이들 결과는 항-CD39 항체를 사용한 악성 및 1차 면역 세포의 처리가 CD39 효소 활성을 억제함을 입증한다.
실시예 4. 항-CD39 항체의 결합 친화도
특정 항-CD39 항체 (클론 1 내지 20)의 결합 친화도는 일반적으로 앞서 기재된 것과 같이 ForteBio Octet RED384 (Pall Forte Bio Corporation, Menlo Park, CA)를 사용하여 이들의 동역학 상수 (ka, kd, KD)를 측정함으로써 결정되었다 (Estep 등 (2013) Mabs 5(2):270-278, 그 전체가 본원에 참조로 포함됨).
간단히 말해서, ForteBio 친화도 측정은 IgG를 AHQ 센서에 온라인으로 로딩함으로써 수행되었다. 센서를 30분 동안 검정 버퍼에서 오프라인으로 평형화한 다음 기준선 설정을 위해 60초 동안 온라인으로 모니터링했다. 로드된 IgG가 있는 센서를 3분 동안 100 nM 항원에 노출시킨 후, 오프-레이트 측정을 위해 3분 동안 검정 버퍼로 옮겼다. 모든 동역학은 1:1 결합 모델을 사용하여 분석되었다. 막관통 도메인이 결여된 캐리어 없는 인간 CD39-His를 항원으로 사용하였다 (R&D Systems Cat: 4397-EN-010).
평형 친화도 측정을 이전에 설명된 대로 수행했다 (Estep 등, (2013) Mabs 5(2):270-278). 용액 평형 적정(SET)은 10 내지 100 pM에서 일정하게 유지된 항원을 갖는 PBS + 0.1% IgG-없는 BSA (PBSF)에서 수행되었고 5 내지 100 nM (실험적 조건은 샘플에 따라 다름)에서 시작하여 항체를 3- 내지 5-배 연속 희석하여 인큐베이션했다. 항체 (PBS 중 20 nM)를 4℃에서 밤새 또는 실온에서 30분 동안 표준 결합 MSD-ECL 플레이트에 코팅했다. 그런 다음 플레이트를 700 rpm에서 진탕하면서 30분 동안 차단한 다음 세척 버퍼 (PBSF + 0.05% Tween 20)로 3회 세척했다. SET 샘플을 적용하고 700 rpm에서 진탕하면서 150초 동안 플레이트 상에서 인큐베이션한 후 1회 세척하였다. 플레이트에 포획된 항원은 PBSF에서 250 ng/mL 설포태그 표지된 스트렙타비딘으로 플레이트 상에서 3분 동안 인큐베이션하여 검출하였다. 플레이트를 세척 버퍼로 3회 세척한 다음 계면활성제가 포함된 1x 판독 버퍼 T를 사용하여 MSD Sector Imager 2400 기기에서 판독했다. 유리 항원 퍼센트는 Graphpad Prism에서 적정 항체의 함수로 플롯팅하고 KD를 추출하기 위해 2차 방정식에 적용한다. 처리량을 향상시키기 위해 SET 샘플 준비를 포함하여 MSD-SET 실험 전반에 걸쳐 액체 처리 로봇이 사용되었다. 막관통 도메인이 결여된 캐리어 없는 인간 CD39-His는 비오틴화되어 항원으로 사용되었다 (R&D Systems Cat: 4397-EN-010). 항-CD39 항체에 대한 Fortebio 및 MSD 친화도 측정값은 도 5에 제공된다.
다음으로, 두 표면에서 반사된 백색광의 간섭 패턴을 분석하는 광학 분석 기술을 이용하는 무표지 기술인 생물층 간섭계(BLI) 검정을 사용하여 재조합 인간, 마우스, 래트 및 사이노몰구스 원숭이 CD39에 대한 클론 22의 결합 및 해리를 평가했다. 바이오센서에 결합된 분자 수의 변화는 실시간으로 측정되는 간섭 패턴을 이동시킨다. 전류 분석은 2개의 다른 바이오센서 구성을 사용하여 인간, 마우스, 래트 및 사이노몰구스 원숭이로부터 클론 22에 대한 재조합 CD39의 결합 친화도를 결정했다.
첫 번째 구성에서, 항-인간 면역글로불린 G (IgG) 단편 결정화 가능한 (Fc) 포획 (AHC) 바이오센서를 사용하여 먼저 1 μg/mL의 클론 22를 리간드로서 8개의 바이오센서에 포획한 후, 분석물로서 인간, 래트 또는 사이노몰구스 원숭이로부터의 재조합 CD39의 0 내지 5 μg/mL의 결합 (600초) 및 해리 (900초)를 측정했다. 양성 대조군 항체는 래트 IgG이고 AHC 바이오센서에 결합하지 않기 때문에 제2 구성이 재조합 마우스 CD39 결합 분석을 위해 필요했다. 클론 22에 결합하는 재조합 마우스 CD39를 이 제2 구성으로 분석하여 양성 대조군 항체와의 직접 비교를 달성했다. 아민 반응성 2세대 (AR2G: Amine Reactive Second-Generation) 바이오센서를 사용하여 96-웰 플레이트 형식에서 단백질의 1차 아민을 8개의 바이오센서 상에 가교시켜 바이오센서 표면에 20 μg/mL의 클론 22 또는 Duha59 양성 대조군 항체 (리간드)를 먼저 결합시켰다. 이어서, 재조합 마우스 CD39 (분석물)의 결합 (600초) 및 해리 (1200초)를 두 항체 모두에 대해 0 내지 5.0 μg/mL의 농도 범위에서 측정하였다. AR2G 바이오센서 구성에는 항체를 바이오센서에 결합하기 위한 최적 조건 (pH 5.0 또는 6.0)을 결정하기 위한 전제 조건 부하 정찰 실험이 포함되었다. 클론 22 및 Duha59 양성 대조군 항체 모두의 로딩을 위한 최적 pH는 pH 6.0이었다. 두 구성 모두에서 결합 상수 (ka) 및 해리 상수 (kd)를 결정하고 분석물의 결합이 관찰된 각 항체에 대해 KD를 계산했다 (인간 및 사이노몰구스 원숭이 둘 다로부터의 재조합 CD39와 클론 22 및 재조합 마우스 CD39와 Duha59 양성 대조군 항체). 결합이 관찰되지 않은 상호작용에 대한 동역학 결합 매개변수는 결정되지 않았다 (마우스 및 래트 둘 다로부터의 재조합 CD39와 클론 22).
0 내지 1.25 μg/mL 범위의 농도에서 재조합 인간, 마우스, 래트 및 사이노몰구스 원숭이 CD39와 인간, 래트 및 사이노몰구스 원숭이의 경우 1.0 μg/mL 및 마우스의 경우 20 μg/mL 농도의 클론 22와의 결합 및 해리 결과가 도 13a 내지 e에 도시되어 있다. 최종 결합 동역학 매개변수 (KD, ka 및 kd)는 데이터에 대한 모델 적합성의 양호를 입증하는 결합 모델 적합 매개변수 (R2 및 χ2)와 함께 표 2에 표시된다. 2.5 및 5.0 μg/mL의 더 높은 분석물 농도 (인간 및 사이노몰구스 원숭이 재조합 CD39의 경우 각각 35.7 및 71.4 nM)는 1:1 결합 상호작용 (0.4 내지 1.11 nM)에 대한 KD보다 훨씬 높았으며 클론 22와의 결합 상호작용을 나타내지 않는 비특이적 효과를 나타냈다. 따라서 이러한 더 높은 분석물 농도는 KD 계산에 포함하지 않았다.
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재조합 인간 및 사이노몰구스 원숭이 CD39 둘 다 클론 22에 대한 KD (각각 1.11 및 0.41 nM)로 측정한 바와 같이 강한 결합 친화도를 나타냈다. 재조합 마우스 및 래트 CD39는 클론 22에 결합하지 않았으며, 이는 결합 센서그램에 대해 관찰된 반응 없음으로 표시된다 (도 13b 및 도 13d). 결과적으로 재조합 래트 또는 마우스 CD39에 대한 결합 동역학 매개변수는 결정되지 않았다. 재조합 마우스 CD39는 Duha59 양성 대조군 항체에 대한 KD (1.09 nM)로 측정한 바와 같이 우수한 결합 친화도를 보여주었다.
도 13a 내지 13e에 도시된 바와 같이, 클론 22는 재조합 인간 CD39 (rhCD39)에 대한 KD (KD = 1.11 nM)에 의해 측정된 바와 같이 강한 결합 친화도를 갖는다. 마우스, 래트 및 사이노몰구스 원숭이에 대한 종 교차 반응성 분석은 클론 22가 재조합 사이노몰구스 원숭이 CD39 (KD = 0.41 nM)에 대해서도 높은 친화도를 갖지만 재조합 마우스 또는 래트 CD39에 결합하지 않는 것으로 나타났다.
실시예 5: 항-CD39 항체는 CD4+ T 세포 증식을 증가시킨다
CD4+ T 세포에 대한 항-CD39 항체를 사용한 처리의 효과를 결정하기 위해, 지시된 바와 같이 여러 농도의 항-CD39 항체 또는 대조군 IgG1 항체 (DNP-C)을 사용한 처리에 대한 시험관내 CD4+ T 세포의 증식량을 결정하였다. 인간 공여자 혈액에서 갓 나온 PBMC의 CD4+ 세포를 96-웰 플레이트에 접종하기 전에 세포 트레이스 바이올렛 염색으로 염색했다. 세포를 250 μM ATP, 항-CD3/CD28 비드와 함께 인큐베이션하여 지시된 바와 같이 3일 동안 T-세포, 및 항-CD39 또는 대조군 IgG1 항체를 자극하고 각 항체 처리에 대한 증식 지수를 세포에 남아있는 세포 트레이스 바이올렛의 양을 측정함으로써 유세포분석으로 정량화했다. T 세포 계통을 확인하기 위해 세포를 또한 CD4에 대해 염색하였다. 도 6a (친화도 성숙 이전 항체) 및 도 6b (친화도 성숙 항체)에 나타낸 바와 같이, ATP에 반응하는 CD4+ T-세포의 증식 지수는 항-CD39 항체의 존재 하에 증가된다.
실시예 6: 항-CD39 항체를 사용한 처리는 마우스의 MOLP-8 이종이식 모델에서 종양 성장 억제를 유도한다
SCID 마우스에 MOLP-8 종양 세포를 피하 주사하였다. 14일에, 마우스 (n=10 내지 11마리 마우스/그룹)를 10 mg/kg 클론 22로 복강내 1회 처리하였다. 표시된 시점에서 클론 22의 혈장 수준을 ELISA에 의해 결정하였다 (도 7a). 종양을 단일 세포 현탁액으로 해리하고, 분할하고, 1 mg/mL 클론 22 및 AF647-IgG4 (클론 22를 검출하기 위해 형광 표지된 항-IgG4 항체)로 투여하거나 AF647-IgG4로 직접 염색하였다. 퍼센트(%) 표적 점유율 (TO)은 유세포분석을 사용하여 계산되었다. 표시된 시점에서 AF647-IgG4로 처리된 세포로부터의 % TO (평균 ± SEM)를 도 7a에 나타내었다. 5 내지 7주령 암컷 SCID 마우스에 MOLP-8 종양 세포를 오른쪽 옆구리에 피하 주사하고 종양의 평균 부피가 약 100 mm3에 도달했을 때 4개의 처리 그룹으로 무작위 배정하였다. 그룹 (n= 10 내지 11마리 마우스/그룹)은 세린 228에서 프롤린으로 단일 점 돌연변이가 있는 30 mg/kg 대조군 IgG4 항체 (DNP.41) 또는 3, 10 또는 30 mg/kg 클론 22로 3주 동안 주 2회씩 IP 처리되었다. 일주일에 두 번 캘리퍼를 사용하여 종양을 2차원으로 측정하고 종양 부피를 계산했다. 데이터는 도 7b에서 평균 ± SEM으로 나타내었다.
실시예 7: 항-CD39 항체는 처리된 MOLP-8 이종이식 마우스로부터 종양에서 대식세포 침윤을 증가시키고 종양 부피를 감소시킨다
5 내지 7주령 암컷 SCID 마우스에 오른쪽 옆구리에 1 × 107 MOLP-8 종양 세포를 피하 주사하고 종양이 대략 100 mm3의 평균 부피에 도달할 때 2개의 처리 그룹으로 무작위 배정하였다. 그룹 (n = 10 내지 11마리 마우스/그룹)은 세린 228에서 프롤린으로 단일 점 돌연변이가 있는 20 mg/kg 대조군 IgG4 항체 (DNP.41) 또는 20 mg/kg 클론 22 또는 60 mg/kg 클론 22로 2주 동안 주 2회 IP 처리되었다. 5 내지 7마리 동물에서 종양 샘플을 14일째 연구 종료 시 수집하고 콜라게나제 및 기계적 분해를 사용하여 단일 종양 세포 현탁액으로 해리하거나 포르말린으로 고정하였다. 해리된 종양 세포를 4℃에서 30분 동안 마우스 항체 칵테일 (항-CD45-BV421, 항-CD11b-BV711 및 항-F4/80-AF488)로 염색하고 유세포분석으로 분석했다. CD11b 및 F4/80 이중 양성인 CD45+ 세포의 백분율은 대식세포로 게이트되었다. 도 8a에 도시된 데이터는 단리된 CD45+ 세포의 평균 ± SEM에서 대식세포의 총 백분율이다. 통계는 양측 독립표본 t-검정(2-tailed unpaired t-test)으로 계산하였다 (* p < 0.05). 고정된 샘플은 뮤린 F4/80에 대해 염색되었고 퍼센트 양성 픽셀 (평균 ± SEM) 알고리즘을 사용하여 도 8b에 도시된 바와 같이 정량화하였다. 상이한 처리군으로부터의 샘플 이미지가 도 8c에 도시되어 있다. 도 8d에 나타낸 바와 같이, 60 mg/kg의 클론 22로 처리된 마우스는 이소형 대조군과 비교하여 종양 부피가 감소하였다.
실시예 8: 항-CD39 항체는 처리된 마우스로부터의 MOLP-8 종양에서 CD39 효소 활성을 억제한다
5 내지 7주령 암컷 SCID 마우스에 MOLP-8 종양 세포를 주사하고 종양 접종 14일 후에 4개의 그룹, 처리한 3개의 시점 그룹 및 처리하지 않은 1개의 대조 그룹으로 나누었다. 마우스를 10 mg/kg 클론 22의 단일 용량으로 IP 처리했다 (n = 2마리 마우스/그룹). 마우스를 안락사시키고 클론 22로 처리한 지 4, 24 및 72시간 후에 종양 샘플을 수집하였다. 종양 샘플을 OCT에 포매하고 CD39 ATPase 검정을 도 9a에 도시된 저온 유지 조직 절편에 대해 수행하였다. 강한 염색은 높은 CD39 ATPase 활성을 나타낸다. QuPath 소프트웨어 (v0.1.2)를 사용하여 MOLP-8 종양 샘플에서 제자리 CD39 효소 분석 활성을 정량화했다. ROI는 신호 (예를 들어, 쥐 혈관계) 및 상당한 조직 품질 인공물 (예를 들어, 조직 접힘)이 있는 영역에 대한 뮤린 CD39 효소 기여를 제외하고 최소화하기 위해 수동으로 정의되었다. 퍼센트 양성 픽셀 알고리즘이 사용되었다. 상이한 처리군으로부터 얻은 샘플 이미지 및 퍼센트 양성 픽셀 (평균 ± SEM)이 도 9b에 도시되어 있다.
실시예 9: 항-CD39 항체는 처리된 사이노몰구스 원숭이의 자궁 조직에서 CD39 효소 활성을 억제한다
사이노몰구스 원숭이를 비히클, 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg 클론 22 (각 용량 그룹에서 3마리의 상이한 동물)로 처리하였다. 도 10에 도시된 바와 같이, 슬라이드는 각 용량 그룹의 3마리의 다른 동물로부터 CD39 ATPase 검정 염색 (ATP 염색 용액, 15분) 후 자궁 조직을 스캔한 것이다. 자궁 조직 섹션 내의 다양한 해부학적 구획을 구별하고 다른 조직 영역에서 클론 22에 의한 CD39 ATPase 활성 및 효소 억제의 차등 정도를 강조하기 위해 이미지에 주석을 달았다.
실시예 10: 항-CD39 항체는 마우스에서 H520 이종이식 모델에서 상승된 전신 아데노신 수준을 감소시킨다
8 내지 12주령 암컷 Ncr nu/nu 마우스에 오른쪽 옆구리에 1 x 107 H520 종양 세포를 피하 주사하고 종양이 대략 100 mm3의 평균 부피에 도달할 때 3개의 처리 그룹으로 무작위 분배하였다. 그룹 (n = 10마리 마우스/그룹)을 30 mg/kg 대조군 IgG4 항체 S228P (DNP.41) 또는 15 또는 30 mg/kg의 클론 22로 주 2회 IP 처리했다. 종양이 없는 추가 마우스 그룹 (n = 5)을 추가하여 아데노신의 기준선 수준을 결정했다. 평가 가능한 동물의 혈액 샘플을 연구 10일째에 수집하고 (종양 없음, n = 5, 30 mg/kg 대조군 IgG4 항체 S228P (DNP.41), n = 8, 15 mg/kg 클론 22, n = 10, 및 30 mg/kg 클론 22, n = 9), 그 후 혈장을 단리하고 LC-MS/MS를 사용하여 아데노신 수준에 대해 분석했다. 데이터는 도 11에서 혈장 아데노신 수준의 평균 ± SEM으로 나타낸다. 통계는 양측 독립표본 t-검정으로 계산하였다 (* p < 0.05).
실시예 11: 항-CD39 항체 클론 22는 전혈에서 CD39에 결합한다
CD14 및 CD19 양성 세포에 대한 클론 22의 CD39 결합 능력을 결정하기 위해 전혈 검정을 수행하였다. 결합 정도는 포화 용량의 클론 22에 대한 적정에 의해 결정된다. CD14 및 CD19 양성 세포는 CD39의 높은 선천적 발현으로 인해 선택되었다. 200 μL 전혈 (WB; Research Blood Components)을 v-바닥 폴리프로필렌 플레이트에 분취했다. 클론 22의 총 300 μL의 WB에 대해 연속 희석의 첫 번째 웰에 추가 100 μL를 추가했다. 클론 22를 첫 번째 웰의 WB 300 μL에 스파이크하여 200 μg/ml의 최종 농도를 달성했다. WB에서 클론 22의 1:3 연속 희석은 플레이트 전체에 걸쳐 연속적으로 웰에서 웰로 100 μL의 혈액을 옮김으로써 표시된 대로 플레이트 전체에 걸쳐 수행되었다. 클론 22를 연속 적정하여 실온에서 60분 동안 인큐베이션한 후, "최대 점유" 대조군으로 사용할 샘플의 모든 웰에 200 μg/ml의 클론 22 스파이크를 첨가했다. 이것은 때때로 '스파이크' 웰이라고도 한다. 스파이크 웰이 인큐베이션되도록 전체 플레이트를 추가 60분 동안 실온에서 추가로 인큐베이션하였다. 그런 다음 모든 웰에 200 μL의 ACK 용해 버퍼 (Life Technologies 카탈로그 번호 A10492-01)을 혼합하면서 받았다. 플레이트를 실온에서 5분 동안 인큐베이션하고, 2000 rpm에서 5분 동안 회전시킨 다음, 적혈구 분획을 용해하고 플레이트 밖으로 튕겨냈다. 모든 웰에 새로운 200 μL의 ACK 용해 버퍼를 혼합 첨가하고 즉시 2000 rpm에서 5분 동안 회전시켰다. 세척 단계로서 200 μL의 PBS를 웰에 혼합 첨가하고 즉시 1500 rpm에서 5분 동안 회전시켰다. 100 μL의 PBS를 사용하여 모든 샘플을 재현탁하고 이를 96웰 폴리스티렌 u 바닥 플레이트로 옮겼다. 100 μL의 인간 TruStain FcXTM (BioLegend 카탈로그 번호 422302)를 1:50 희석으로 모든 웰에 추가했다. 플레이트를 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. FITC 항-인간 CD14 (BioLegend 카탈로그 번호 367166), Brilliant Violet 421TM 항-인간 CD19 (BioLegend 카탈로그 번호 302234) 및 마우스 항-인간 IgG4-pFc'-PE (Southern Biotech 카탈로그 번호 9190-09)의 용액을 PBS에서 준비했다. 항-CD14 및 항-CD19를 1:100으로 희석하였다. 항-인간 IgG4를 1:250으로 희석하였다. 100 마이크로리터의 항-CD14, 항-CD19 및 항-IgG4 용액을 모든 웰에 첨가하였다. 유사한 방식으로 항-CD14, 항-CD19 및 항-IgG4의 개별 유동 염색을 위해 추가 웰을 제조하였다. 유동 항체를 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 즉시 1500 rpm에서 5분 동안 회전시켰다. 125 μL의 FACS 버퍼를 모든 웰에 추가했다. Fortessa X20 유세포분석기 시스템에서 세포를 분석했다. 수용체 점유율 (RO) 값은 [%RO = 샘플 geo-MFI/스파이크 geo-MFI]로 계산되었다.
도 12a 내지 d는 클론 22가 합리적인 신호창을 갖는 용량 의존 방식으로 전혈의 단핵구 (도 12a) 및 B 세포 (도 12b)에 결합함을 보여준다. 표적 점유율 (TO)은 단핵구 (도 12c) 및 B 세포 (도 12d)에서 최대 점유율 대조군으로서 클론 22의 포화 "스파이크"와 클론 22의 용량 적정을 비교하여 쉽게 계산되었다.
별도로, 전혈 세포를 클론 22로 1시간 동안 전처리하였다. 전혈을 RBC 분해시킨 후 25 μM ATP를 첨가하여 ATP 가수분해를 관찰하였다. 남은 ATP는 CellTiterGloTM를 사용하여 정량화되었다. 낮은 억제 대조군 (0%)은 ATP 없음으로 설정되었다. 높은 억제 대조군 (100%)은 포화된 양의 클론 22로 설정되었다. 억제율(%)은 도 12e에 도시된 바와 같이 샘플 대 높은 억제 대조군의 비율로 계산되었다.
실시예 12: 뮤린 항-CD39는 뮤린 CT26 모델에서 항-PD1과 조합하여 협력 활성을 나타낸다
BALB/C 마우스에 CT26 세포를 피하 주사하였다. 종양이 약 80 mm3에 도달했을 때, 마우스 (n=16 내지 18마리 마우스/그룹)를 이소형 대조군, 20 mg/kg 항-뮤린 CD39, 10 mg/kg 항-뮤린 PD-1, 또는 항-뮤린 CD39 및 항-뮤린 PD-1로 3주 동안 주 2회씩 복강 내 처리되었다. 도 14는 처리 그룹에 대한 생존 분석 곡선을 나타낸다 (*p<0.05).
실시예 13: ATP 및 클론 22로 처리된 CD4+ CD39+ 세포의 증가된 삼중 양성 세포 (PD1, TIM3, Lag3)
웰당 100,000개 세포의 단일 공여자 PBMC를 웰당 100,000개 다이나비드와 함께 공동 인큐베이션했다. 비드 시 500 μM ATP, 500 μM ATP + 10 μg/mL 클론 22로 처리하거나 ATP를 추가하지 않았다. 세포를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 5일 동안 인큐베이션시켰다. 세포는 CD4-BV421, CD8-BV711, CD39-FITC, PD1-PE, TIM3-APC 및 Lag3-PE/Cy7 세포 마커를 사용하여 유세포측정 게이팅에 의해 분석되었다. 분석은 CD4+ CD39+ 게이트에서 세 가지 마커 (PD1, TIM3 및 Lag3) 모두에 대해 양성인 세포의 백분율(%)로 정량화되었다. 결과를 도 15에 나타내었다.
실시예 14: 인간 폐암의 H520 이종이식 모델에서 항-CD39 항체 및 파클리탁셀의 조합 효과
고형 종양 모델에서 CD39를 다른 표준 치료 화학요법제와 조합하는 항종양 효과(들)를 결정하기 위해, 파클리탁셀과 조합된 항-CD39 항체의 항종양 활성을 피하 이종이식편 H520, 흉선 누드(NCr nu/nu) 마우스의 인간 폐암 모델에서 평가하였다. 간단히 말해서, 8 내지 12주령 NCr nu/nu 마우스 (Charles River Labs)를 오른쪽 옆구리에 피하 주사로 Matrigel (1:1)과 혼합된 PBS 0.1 mL 중 1x107 H520 종양 세포를 접종하고 종양이 약 60 내지 90 mm3의 평균 부피에 도달했을 때 4개의 처리 그룹으로 무작위 배정했다. 그룹 (각각 n = 10 내지 15마리 마우스)은 이소형 대조군 (DNP.41), 클론 22 단독 (600 μg 또는 30 mg/kg)으로 4주 동안 주 2회씩, 또는 파클리탁셀과 함께 복강 내(i.p) 처리되었다. 파클리탁셀은 19일째부터 5회 용량에 대해 격일(qod) 10 mg/kg 및 4회 용량에 대해 20 mg/kg qod의 용량으로 정맥내(iv) 투여되었다. 시험된 모든 항체는 PBS (Gibco)에서 제형화되었다. 파클리탁셀 스톡 용액은 5% 에탄올: 5% 덱스트로스 중 5% 크렘포 EL로 제조되었다. 항종양 활성은 부분적으로 버니어 캘리퍼를 사용하여 종양 크기 (길이 및 너비)를 측정함으로써 결정되었고 종양 부피는 다음 공식을 사용하여 계산되었다: (L*W*W)/2. 체중 (데이터는 나타내지 않음) 및 종양 부피를 68일까지 매주 3회 측정하였다. 1800 mm3의 종양 부피에 도달했을 때 동물을 종결시켰다. 전체 생존을 측정하기 위해 Kaplan Meier 생존 곡선을 플로팅했다. 생존 분석을 위해 대조군 및 단일 제제 단독 처리 군과 비교하여 각 그룹에 대한 통계적 유의성을 테스트하기 위해 로그 순위 테스트를 수행했다 (p < 0.005).
처리된 마우스의 생존 곡선을 도 16에 나타내었다. 이들 데이터는 파클리탁셀과 조합된 항-CD39 항체 클론 22를 사용한 처리가 항-CD39 항체 또는 파클리탁셀 단독 처리와 비교시 종양 부피를 더 큰 정도로 감소시키고 생존을 유의하게 개선하는 유의한 조합 항-종양 효과를 초래함을 나타낸다. 모든 시험 항체 (항-CD39 및 파클리탁셀)를 조합하여 처리하면 이소형 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 항종양 효능을 갖는 것이 입증되었다 (p < 0.05).
실시예 15: 뮤린 CT26 모델에서 종양 침윤 림프구에 대한 뮤린 항-CD39의 효과
CT26 결장직장 종양을 보유하는 BALB/C 마우스에 20 mg/kg 뮤린 항-CD39 항체를 BIW로 3회 (11일째) 투여한 후 종양을 제거하고 흐름 분석을 위해 해리시켰다. CD45+ 세포는 종양 침윤 림프구(TIL) 집단을 식별하기 위해 다음 마커를 표적으로 하는 항체로 염색되었다: CD3, CD4, CD8, CD25, CD27, CD39, CD45, F4/80, NKp46, FOXP3 및 CD279. 흐름 분석은 FlowjoV10을 사용하여 수행되었다. 효과는 CD8+ T 세포 (도 17a), CD4+ T 세포 (도 17b) 및 Treg (도 17c)에 대해 제시된다. 이소형 대조군과 비교하여 종양 부피에 대한 효과는 도 17d에 제시되어 있다.
실시예 16: 인간 PDAC 종양 생검 모델에서 항-CD39 항체 및 젬시타빈의 조합 효과
8명의 췌관 선암종 (PDAC) 환자로부터 종양 생검을 취하고 각각 4개의 상이한 샘플로 나누었다. 각 종양 생검에서 얻은 4개의 샘플을 4가지 다른 조건을 사용하여 처리했다: 1) 비히클 + 이소형 대조군, 2) 젬시타빈 + 이소형 대조군, 3) 비히클 + 클론 22, 및 4) 젬시타빈 + 클론 22. 24시간 후 상청액에 대해 ATP 수준을 테스트했다. ATP 수준은 도 18에 나타낸 바와 같이 단독요법으로서 또는 젬시타빈과 조합하여 투여될 때 클론 22에 노출된 그룹에서 증가하였다.
실시예 17: 인간 다발성 골수종의 MOLP-8 뮤린 모델에서 항-CD39 및 항-CD47 항체 차단의 상승 효과
CD39 및 CD47을 모두 차단하는 항종양 효과(들)를 결정하기 위해, 항-CD47 항체 (서열 번호 40004 (야생형 인간 IgG4 불변을 포함하는 중쇄); 서열 번호 40005 (경쇄))와 조합한 항-CD39 항체, 클론 22의 항종양 활성을 중증 복합 면역결핍 (SCID) 마우스의 피하 이종이식편 MOLP-8, 인간 다발성 골수종 모델에서 평가하였다. 생존을 향상시키는 조합의 능력도 결정되었다. 간단히 말해서, 6 내지 8주령 SCID 마우스 (Charles River Labs)를 Matrigel (1:1)과 혼합한 PBS 0.1 mL 중 1x107 MOLP-8 종양 세포를 오른쪽 옆구리에 피하 주사하여 접종하고 종양이 약 100 mm3의 평균 부피에 도달할 때 4개의 처리 그룹으로 무작위 배정하였다. 그룹 (각각 n = 10마리 마우스)은 이소형 대조군 (단일클론 인간 IgG4 (IgG4-A)), 클론 22 단독 (400 μg 또는 20 mg/kg)으로 3주 동안 주 2회, 항- CD47 항체 단독 (60 μg 또는 3 mg/kg)으로 3주 동안 주 1회, 또는 단일 요법과 동일한 일정으로 클론 22와 항-CD47 항체를 함께 투여하여 복강내(ip) 처리하였다. 시험한 모든 항체는 PBS (Gibco)에서 제형화되었다. 항종양 활성은 부분적으로 버니어 캘리퍼스를 사용하여 종양 크기 (길이 및 너비)를 측정함으로써 결정되었고 종양 부피는 다음 공식을 사용하여 계산되었다: (L*W*W)/2. 체중 (데이터는 표시되지 않음) 및 종양 부피는 18일까지 매주 2회 결정되었다. 종양 부피 분석의 경우, 대조군과 비교하여 각 그룹에 대한 통계적 유의성을 테스트하기 위해 일원 Anova 분석을 수행했다 (p < 0.005). 생존 분석을 위해, 종양 부피가 1000 mm3에 도달하거나 종양이 괴사될 때 18일 후에 마우스를 안락사시켰다. 생존 통계는 Kaplan Meier 곡선을 사용하여 분석하고 유의성은 로그 순위 (Mantel-cox) 검정을 사용하여 계산했다 (p < 0.005).
처리된 마우스의 평균 종양 부피 및 생존율은 각각 도 19a 및 도 19b에 제시되어 있다. 이러한 데이터는 항-CD39 항체, 클론 22를 항-CD47 항체와 조합하여 치료하면 상승적인 항-종양 효과를 초래하여 어느 하나의 항체를 단일 요법으로 사용한 치료와 비교할 때 종양 부피를 감소시키고 마우스 생존을 더 크게 증가시킨다는 것을 나타낸다. 단독으로 또는 조합하여 모든 시험 항체를 사용한 치료는 이소형 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 항종양 효능을 입증했다 (p < 0.005). 어떤 그룹에서도 체중에 대한 부작용이 관찰되지 않았다 (데이터는 표시되지 않음).
실시예 18: 뮤린 CT26 종양 모델에서 종양 미세환경에 대한 뮤린 항-CD39 및 항-PD1의 효과
종양 미세환경(TME)에서 면역 세포에 대한 항-CD39 단독 및 항-PD-1 와 조합한 치료의 효과를 CT26 뮤린 종양 모델에서 평가하였다.
CT26 종양을 보유하는 BALB/C 마우스를 이소형 대조군 항체 (400 μg), 항-뮤린 CD39 항체 (400 μg), 항-뮤린 PD-1 항체 (200 μg), 또는 항-뮤린 CD39 (400 μg) 및 항-뮤린 PD-1 (200 μg) 항체의 조합의 3가지 용량으로 처리하고 9일째 종양을 수확하였다; n=그룹당 10. 종양을 각 마우스에서 추출하고 Miltenyi Biotec 젠틀 MACS 해리기 (월드와이드 웹 miltenyibiotec.com/US-en/products/gentlemacs-dissociator.html#gref 참조)를 사용하여 콜라게나제 및 DNAse 처리의 조합으로 효소적으로 해리했다. 원심 분리 후 파편과 죽은 세포를 제거했다. 세포를 Dulbecco의 변형된 독수리 배지(DMEM)에 재현탁했다. 종양의 면역 세포를 CD45+ 자기 비드를 사용하여 강화하고 자기 기둥에 포획했다.
표준 10X 게놈 3' mRNA 프로토콜을 사용하여 처리된 마우스의 TME로부터 단리된 면역 세포를 평가하기 위해 단일 세포 RNA 시퀀싱 (scRNA seq) 실험을 수행하였다. 간단히 말해서, 겔 비드 에멀젼 (GEM)은 세포 샘플이 오일 및 PCR/바코드 시약과 함께 제어된 방식으로 있는 10X 미세유체 칩 상에 생성되어 단일 세포, 올리고뉴클레오티드 바코드 및 이후 PCR 단계를 위한 화학을 포함하는 액적을 생성했다. 이 액적의 세포는 용해되고 RNA는 바코드 및 폴리 A 캡처 올리고뉴클레오티드 (10X 게놈 크롬 단일 세포 3' 시약 키트, CG000183 Rev C)로 태그되었다. 샘플은 Illumina NextSeq500 기기를 사용하여 시퀀싱되었다.
scRNAseq 결과로부터, 개별 세포로부터의 데이터를 면역 세포 마커의 차등 발현에 기초하여 면역 세포 유형의 클러스터에 할당하였다 (도 20). 주요 세포 유형 클러스터는 림프구/NK, 대식세포/골수 및 CD45 음성 세포였다. scRNAseq의 클러스터링 결과는 다운스트림 분석을 위해 TME에서 세포 유형의 적절한 분리를 제공했다.
이소형 대조군 항체로 처리된 마우스와 비교하여 항-PD1로 처리된 마우스에서 TME로부터의 세포의 CD8+ 및 림프구 클러스터 내의 CD45+ 세포의 빈도 증가가 관찰되었으며 (도 21a), 이는 항-PD1가 TME에서 림프구 침윤을 증가시킴을 나타낸다. 이들 데이터와 일치하게, 항-PD1으로 처리된 마우스로부터의 종양은 면역조직화학 염색에 의한 CD8 + T 세포 밀도에서 증가를 나타내었다 (도 21b 및 도 21c). 종양 샘플을 표준 포르말린 고정 파라핀 포매 (FFPE) 조직 방법을 사용하여 처리하고 5마이크론으로 절단했다. 면역조직화학 염색은 라이카 본드 자동 염색기 (Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL)를 사용하여 1:50 희석으로 마우스 특이적 래트 단일클론 항-CD8 항체 (클론 4SM15, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)로 수행했다. 염색된 슬라이드는 Aperio Versa 스캐너 (Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL)를 사용하여 디지털 방식으로 스캔되었다. CD8+ T 세포의 밀도를 얻기 위해 HALO 소프트웨어 제품군 버전 3.0.311.228 (Indica Labs, Albuquerque, NM)의 다중 IHC 모듈을 사용하여 정량적 이미지 분석을 수행했다.
scRNAseq 분석의 결과는 이소형 대조군 항체로 처리된 마우스와 비교하여 항-CD39로 처리된 마우스에서 골수 및 NK 세포의 배수 변화의 증가를 보여주었으며 (도 22), 이는 항-CD39를 사용한 처리가 TME에서 선천성 세포의 침투를 증가시켰음을 나타낸다. 활성화 시 ATP의 방출을 유도할 수 있는 P2X7 수용체를 발현하는 세포 집단이 처리에 반응하는 것으로 관찰되었다.
항-CD39를 사용한 치료는 또한 종양 관련 대식세포에서 인터페론 감마 (IFNγ)-반응 유전자를 상향조절하는 것으로 밝혀졌다. 대식세포는 F4/80 항원 발현을 기반으로 하는 scRNAseq 데이터세트에서 세포의 하위 집합으로 확인되었다. 차등 발현 분석을 수행하여 이소형 대조군에 비해 항-CD39로 처리된 마우스의 TME에서 발현된 유전자 세트가 보다 고도로 발현되었음을 확인했다. 상위 농축 유전자는 상향조절된 IFNγ 반응과 관련이 있었으며 (도 23a), 이는 항-CD39 처리 후에 면역 반응이 발생했거나 발생하고 있음을 입증한다. 모든 샘플의 데이터는 Suerat 버전 3을 사용하여 통합되었다. 그런 다음 UMAP 차원 감소를 사용하여 세포를 클러스터링하여 대략 20개의 별개의 세포 클러스터를 식별했다 (도 23b). 도 23의 플롯은 다음 코드를 사용하여 전체 데이터 세트에서 생성되었다:
data <- RunUMAP(data, reduction = "pca", dims = 1:significant_PC, verbose = FALSE)
UMAP_coloredby_cluster <- DimPlot(data, reduction = "umap", label = TRUE)
UMAP_coloredby_cluster
하기 표 3은 각 세포 클러스터에서 가장 가변적인 유전자를 나타낸다.
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
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Figure pct00008
Figure pct00009
IFNγ 반응을 처리 그룹에 걸쳐 추가로 평가하였다. 각 처리 그룹에 대해 F4/80 항원 발현을 기반으로 종양 관련 대식세포를 확인했다. IFNγ 시그니처에 대한 점수는 F4/80 발현을 기반으로, 대식세포로 확인된 세포 클러스터에서 IFNγ 시그니처 유전자의 평균 발현을 취함으로써 계산되었다. 항-뮤린 CD39와 항-뮤린 PD-1의 조합을 사용한 치료는 항-뮤린 CD39 또는 항-뮤린 PD-1 단독에 의해 관찰된 반응과 비교하여 IFNγ 반응의 증가를 나타내었다 (도 24). 이들 데이터는 항-CD39 치료가 항-PD1 반응을 증가시킨다는 것을 나타내었다.
항-PD1-유도된 TME 효과에 대한 항-CD39의 기능적 효과를 TME의 세포 유형에 걸쳐 추가로 평가하였다. 항-CD39 및 항-PD1 처리의 조합은 수지상 세포 및 림프구 침윤물에서 항-PD1-유도된 TME 효과를 가장 강하게 변형시키는 것으로 관찰되었다 (도 25).
전술한 발명이 이해의 명확성을 위해 예시 및 예를 통해 일부 상세하게 설명되었지만, 설명 및 예는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 여기에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전체가 참조로 명시적으로 포함된다.
V. 서열 표
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SEQUENCE LISTING <110> SURFACE ONCOLOGY, INC. <120> ANTI-CD39 ANTIBODY COMPOSITIONS AND METHODS <130> 01219-0005-00PCT <150> US 62/901,153 <151> 2019-09-16 <150> US 62/902,285 <151> 2019-09-18 <150> US 62/932,249 <151> 2019-11-07 <150> US 62/935,969 <151> 2019-11-15 <150> US 62/975,519 <151> 2020-02-12 <150> US 63/003,191 <151> 2020-03-31 <150> US 63/075,567 <151> 2020-09-08 <160> 40011 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VH CDR1 <400> 1 Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VH CDR2 <400> 2 Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VH CDR3 <400> 3 Ala Arg Glu Ala Gly Tyr Tyr Arg Tyr Arg Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VL CDR1 <400> 4 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<220> <223> Synthetic: Clone: 1;VH FR4 <400> 10 Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VH DNA <400> 11 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagaagcc 300 ggatactacc gctaccgata cttcgaccta tgggggagag gtaccttggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 12 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VH Protein <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ala Gly Tyr Tyr Arg Tyr Arg Tyr Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 13 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VL FR1 <400> 13 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VL FR2 <400> 14 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 15 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone: 1;VL FR3 <400> 15 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 <210> 40003 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..( 326) <223> Human IgG4 Constant Region (S228P) (L235E) (terminal K absent) <400> 40003 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 <210> 40004 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 heavy chain <400> 40004 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Val Ser Ile Arg Ser Ile 20 25 30 Asn Trp Trp Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Ile Ala Val Thr Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 40005 <211> 212 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 light chain <400> 40005 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Phe Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser 100 105 110 Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala 115 120 125 Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 130 135 140 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser 145 150 155 160 Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr 165 170 175 Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys 180 185 190 Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn 195 200 205 Arg Gly Glu Cys 210 <210> 40006 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 VH CDR1 <400> 40006 Ser Ile Asn Trp Trp Asn 1 5 <210> 40007 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 VH CDR2 <400> 40007 Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 40008 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 VH CDR3 <400> 40008 Asp Gly Gly Ile Ala Val Thr Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 15 <210> 40009 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 VL CDR1 <400> 40009 Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 40010 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 VL CDR2 <400> 40010 Gly Ala Phe Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 40011 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-CD47 VL CDR3 <400> 40011 Gln Gln Arg Ser Asp Trp Phe Thr 1 5

Claims (92)

  1. 다음을 포함하는 단리된 항체:
    i) (a) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    ii) (a) 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    iii) (a) 서열 번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    iv) (a) 서열 번호 301의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 302의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 303의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 304의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 305의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 306의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    v) (a) 서열 번호 401의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 402의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 403의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 404의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 405의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 406의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    vi) (a) 서열 번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 502의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 503의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 504의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 505의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 506의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    vii) (a) 서열 번호 601의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 602의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 603의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 604의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 605의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 606의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    viii) (a) 서열 번호 701의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 702의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 703의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 704의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 705의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 706의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    ix) (a) 서열 번호 801의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 802의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 803의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 804의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 805의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 806의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    x) (a) 서열 번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 902의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 904의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 905의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 906의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xi) (a) 서열 번호 1001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 1002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 1003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 1004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 1005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 1006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xii) (a) 서열 번호 2001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 2002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 2003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 2004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 2005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 2006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xiii) (a) 서열 번호 3001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 3002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 3003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 3004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 3005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 3006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xiv) (a) 서열 번호 4001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 4002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 4003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 4004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 4005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 4006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xv) (a) 서열 번호 5001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 5002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 5003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 5004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 5005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 5006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xvi) (a) 서열 번호 6001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 6002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 6003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 6004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 6005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 6006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xvii) (a) 서열 번호 7001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 7002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 7003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 7004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 7005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 7006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xviii) (a) 서열 번호 8001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 8002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 8003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 8004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 8005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 8006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xix) (a) 서열 번호 9001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 9002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 9003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 9004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 9005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 9006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xx) (a) 서열 번호 10001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 10002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 10003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 10004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 10005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 10006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xxi) (a) 서열 번호 20001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 20002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 20003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 20004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 20005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 20006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는
    xxii) (a) 서열 번호 30001의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 30002의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 30003의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 30004의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 30005의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호: 30006의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체가 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서:
    i) VH는 서열 번호 12의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    ii) VH는 서열 번호 112의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 118의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    iii) VH는 서열 번호 212의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 218의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    iv) VH는 서열 번호 312의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 318의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    v) VH는 서열 번호 412의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 418의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
    vi) VH는 서열 번호 512의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 518의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    vii) VH는 서열 번호 612의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 618의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    viii) VH는 서열 번호 712의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 718의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
    ix) VH는 서열 번호 812의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 818의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    x) VH는 서열 번호 912의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 918의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xi) VH는 서열 번호 1012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 1018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
    xii) VH는 서열 번호 2012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 2018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xiii) VH는 서열 번호 3012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 3018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xiv) VH는 서열 번호 4012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 4018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xv) VH는 서열 번호 5012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 5018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xvi) VH는 서열 번호 6012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 6018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xvii) VH는 서열 번호 7012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 7018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xviii) VH는 서열 번호 8012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 8018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xix) VH는 서열 번호 9012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 9018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xx) VH는 서열 번호 10012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 10018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하거나; 또는
    xxi) VH는 서열 번호 20012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 20018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나; 또는
    xxii) VH는 서열 번호 30012의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, VL은 서열 번호 30018의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한,
    단리된 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체가 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 여기서:
    i) VH는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    ii) VH는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    iii) VH는 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    iv) VH는 서열 번호 312의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 318의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    v) VH는 서열 번호 412의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 418의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    vi) VH는 서열 번호 512의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 518의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    vii) VH는 서열 번호 612의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 618의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    viii) VH는 서열 번호 712의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 718의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    ix) VH는 서열 번호 812의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 818의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    x) VH는 서열 번호 912의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 918의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xi) VH는 서열 번호 1012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 1018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xii) VH는 서열 번호 2012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 2018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xiii) VH는 서열 번호 3012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 3018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xiv) VH는 서열 번호 4012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 4018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xv) VH는 서열 번호 5012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 5018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xvi) VH는 서열 번호 6012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 6018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xvii) VH는 서열 번호 7012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 7018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xviii) VH는 서열 번호 8012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 8018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xix) VH는 서열 번호 9012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 9018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xx) VH는 서열 번호 10012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 10018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xxi) VH는 서열 번호 20012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 20018의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    xxii) VH는 서열 번호 30012의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 30018의 아미노산 서열을 포함하는,
    단리된 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 클론 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 또는 그의 CD39 결합 단편인, 단리된 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 단일클론 항체인, 단리된 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 항체 단편이고, 여기서 항체 단편이 CD39에 결합하는, 단리된 항체.
  7. 제6항에 있어서, 상기 단편이 Fab, Fab', Fv, scFv 또는 (Fab')2인, 단리된 항체.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 전장 항체인, 단리된 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 Fc 영역이 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4를 포함하는, 단리된 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  12. 제11항에 있어서, 상기 항체가 돌연변이 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  13. 제12항에 있어서, 상기 돌연변이 IgG4 중쇄 불변 영역이 EU 넘버링에 따른 넘버링 Ser228에서의 치환, Leu235에서의 치환, Asn297에서의 치환, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는, 단리된 항체.
  14. 제12항에 있어서, 상기 돌연변이 IgG4 중쇄 불변 영역이 S228P 치환을 포함하는, 단리된 항체.
  15. 제1항 내지 제9항 및 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 40002의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  16. 제1항 내지 제9항 및 제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 40003의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  17. 서열 30018의 경쇄 가변 영역 및 서열 30012의 중쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항체.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 카파 경쇄를 포함하는, 단리된 항체.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 CD39에 결합하고 이를 억제하는, 단리된 항체.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 정상 또는 암 조직 내에서 CD39에 결합하고 CD39를 억제하는, 단리된 항체.
  21. 제20항에 있어서, 상기 조직이 자궁, 자궁경부, 폐, 전립선, 유방, 머리, 목, 결장 또는 난소에 있는 것인, 단리된 항체.
  22. 제21항에 있어서, 상기 조직이 자궁에 있는 것인, 단리된 항체.
  23. 제22항에 있어서, 자궁 내에서 상기 항체가 자궁근층에서 CD39를 억제하는 것인, 단리된 항체.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 항체의 인간화 또는 완전한 인간 버전.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체 및 약제학상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
  26. 제25항에 있어서, PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3, A2AR, A2BR, 이중 A2AR/A2BR, CD40 또는 CD73의 길항제, 및/또는 TIGIT, CD112R 또는 CD96의 길항제, 및/또는 PVRL1, PVRL2, PVRL3, PVRL4 또는 CD155의 길항제, 및/또는 CD47 또는 IL-27의 길항제, 및/또는 STING의 작용제, 및/또는 CAR 세포 요법을 추가로 포함하는, 조성물.
  27. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체 또는 제25항 또는 제26항의 조성물을, 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항종양 면역 반응을 향상, 증가 및/또는 지속시키는 방법.
  28. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체 또는 제25항 또는 제26항의 조성물을 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  29. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체 또는 제25항 또는 제26항의 조성물을 암에 걸린 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 투여는 투여 전 활성 또는 양과 비교하여 조직에서 CD39 활성 또는 CD39의 총량을 감소시키는, 암에 걸린 대상체의 조직에서 CD39를 억제하는 방법.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 상기 암이 진행성인, 방법.
  31. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 재발성인, 방법.
  32. 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 불응성인, 방법.
  33. 제28항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 전이성인, 방법.
  34. 제28항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 진행성 고형 종양인, 방법.
  35. 제28항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 재발성 고형 종양인, 방법.
  36. 제28항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 불응성 고형 종양인, 방법.
  37. 제28항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 전이성 고형 종양인, 방법.
  38. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 암종, 림프종, 모세포종, 육종 또는 백혈병인, 방법.
  39. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 췌장암인, 방법.
  40. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 위암인, 방법.
  41. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 전립선암인, 방법.
  42. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 자궁내막암인, 방법.
  43. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 비-소세포 폐암인, 방법.
  44. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 결장직장암인, 방법.
  45. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 난소암인, 방법.
  46. 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 편평세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연조직 육종, 비-소세포 폐암 (편평세포 비-소세포 폐암 포함), 폐 선암종, 폐의 편평상피암, 복막암, 간세포암, 위장관암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종(heptoma), 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘암종, 신장암, 신세포암종, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관암종, 담낭암종, 위암, 흑색종 또는 각종 두경부암 (두경부 편평세포암 포함)인, 방법.
  47. 제27항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 제2 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  48. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 방사선 요법 또는 수술인, 방법.
  49. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 화학요법, 옵소닌화제, 또는 조절 T 세포 고갈제의 투여인, 방법.
  50. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 PD-1, PD-L1, CTLA-4, Lag-3, TIM-3, A2AR, A2BR, 이중 A2AR/A2BR, CD40 또는 CD73의 길항제의 투여인, 방법.
  51. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 TIGIT, CD112R 또는 CD96의 길항제의 투여인, 방법.
  52. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 PVRL1, PVRL2, PVRL3, PVRL4, 또는 CD155의 길항제의 투여인, 방법.
  53. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 CD47의 길항제의 투여인, 방법.
  54. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 IL-27의 길항제의 투여인, 방법.
  55. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 CD73의 길항제의 투여인, 방법.
  56. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 A2AR의 길항제의 투여인, 방법.
  57. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 A2BR의 길항제의 투여인, 방법.
  58. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 이중 A2AR/A2BR 길항제의 투여인, 방법.
  59. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 STING 작용제의 투여인, 방법.
  60. 제50항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 길항제가 항체인, 방법.
  61. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는 핵산.
  62. 제61항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  63. 제62항의 숙주 세포를 항체가 발현되는 조건 하에 배양하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체를 생산하는 방법.
  64. 제63항에 있어서, 상기 항체를 정제하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  65. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체, 제25항 또는 제26항의 조성물, 제61항의 핵산, 제62항의 숙주 세포, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 키트.
  66. 제2항 또는 제3항에 있어서, 인간 CD39에 대한 결합의 KD가 약 1.11nM인, 항체.
  67. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 항체가 인간 CD39 및 사이노몰구스 원숭이 CD39에는 결합하지만 마우스 CD39 또는 래트 CD39에는 결합하지 않는, 항체.
  68. 제53항에 있어서, 상기 CD47의 길항제가 항-CD47 항체인, 방법.
  69. 제68항에 있어서, 상기 항-CD47 항체가 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 40004의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 40005의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  70. 제68항에 있어서, 상기 항-CD47 항체가 (a) 서열 번호 40006의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (b) 서열 번호 40007의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (c) 서열 번호 40008의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (d) 서열 번호 40009의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (e) 서열 번호 40010의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 (f) 서열 번호 40011의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 방법.
  71. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 젬시타빈 및 알부민 결합 파클리탁셀인, 방법.
  72. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 펨브롤리주맙인, 방법.
  73. 제27항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 암 요법의 삼중 조합을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 상기 암 요법의 삼중 조합이 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체, 화학요법제, 및 PD-1의 길항제 또는 PD-L1의 길항제를 포함하는 것인, 방법.
  75. 제73항에 있어서, 상기 암 요법의 삼중 조합이 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체, 화학요법제, 및 아데노신 축을 표적화하는 제제를 포함하는 것인, 방법.
  76. 제73항에 있어서, 상기 암 요법의 삼중 조합이 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 항체, PD-1의 길항제 또는 PD-L1의 길항제, 및 아데노신 축을 표적화하는 제제를 포함하는 것인, 방법.
  77. 제75항 또는 제76항에 있어서, 상기 아데노신 축을 표적화하는 제제가 CD73 억제제인, 방법.
  78. 제75항 또는 제76항에 있어서, 상기 아데노신 축을 표적화하는 제제가 A2AR 길항제, A2BR 길항제, 또는 이중 A2AR/A2B 길항제인, 방법.
  79. 제47항에 있어서, 상기 제2 요법이 PD-1의 길항제의 투여인, 방법.
  80. 제79항에 있어서, 상기 PD-1의 길항제가 항-PD-1 항체인, 방법.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서, 상기 방법이 종양 미세환경에서 인터페론 감마 (IFN-γ) 반응의 증가를 초래하는, 방법.
  82. 제81항에 있어서, IFN-γ 반응의 증가가 PD-1의 길항제의 단독 투여로부터의 IFN-γ 반응보다 더 큰 것인, 방법.
  83. 제81항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IFN-γ 반응이 종양 미세환경 내의 종양 관련 대식세포에서 인터페론 감마 (IFN-γ) 관련 유전자의 상향조절인, 방법.
  84. 제79항 또는 제80항에 있어서, 상기 방법이 종양 미세환경 내로의 선천성 면역 세포의 침윤을 초래하는 것인, 방법.
  85. 제84항에 있어서, 상기 선천성 면역 세포가 골수 세포인, 방법.
  86. 제84항에 있어서, 상기 선천성 면역 세포가 대식세포인, 방법.
  87. 제84항에 있어서, 상기 선천성 면역 세포가 NK 세포인, 방법.
  88. 제84항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선천성 면역 세포의 침윤이 PD-1의 길항제 또는 항-PD-1 항체의 단독 투여로부터의 선천성 면역 세포의 침윤보다 더 큰 것인, 방법.
  89. 제27항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 종양 미세환경 내로 선천성 면역 세포의 침윤을 초래하는 것인, 방법.
  90. 제89항에 있어서, 상기 선천성 면역 세포가 골수 세포인, 방법.
  91. 제89항에 있어서, 상기 선천성 면역 세포가 대식세포인, 방법.
  92. 제89항에 있어서, 상기 선천성 면역 세포가 NK 세포인, 방법.
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