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KR20210151780A - 글리코폴리시알화된 치료 단백질 사용 방법 - Google Patents

글리코폴리시알화된 치료 단백질 사용 방법 Download PDF

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KR20210151780A
KR20210151780A KR1020217027231A KR20217027231A KR20210151780A KR 20210151780 A KR20210151780 A KR 20210151780A KR 1020217027231 A KR1020217027231 A KR 1020217027231A KR 20217027231 A KR20217027231 A KR 20217027231A KR 20210151780 A KR20210151780 A KR 20210151780A
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KR
South Korea
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growth factor
psa
protein
factor
conjugate
Prior art date
Application number
KR1020217027231A
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English (en)
Inventor
커티스 록신
Original Assignee
제네틱 바이오사이언시스, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 제네틱 바이오사이언시스, 인코포레이티드 filed Critical 제네틱 바이오사이언시스, 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 폴리시알산(PSA)과 접합된 신규 단백질 및 화합물을 제공한다. 또한, 이러한 화합물의 사용방법 및 다양한 질병 및 장애의 치료방법을 제공한다. 본 발명에서 제공하는 신규 화합물은 개선된 약력학적 및/또는 약동학적 특성, 개선된 효과 및 기타 바람직한 특성을 갖는다.

Description

글리코폴리시알화된 치료 단백질 사용 방법
[0001] 본 출원은 2019년 2월 4일 출원된 미국 가출원번호 62/801,013의 우선권을 주장한다. 상기의 출원의 내용은 참조로서 본 출원에 포함된다.
[0002] 본 발명은 수용성 폴리머와 접합된 단백질 또는 다른 생물학적 화합물에 관한 것이고, 특히 PSA와 같은 수용성 폴리머와 접합시키는 것으로 얻은 신규 단백질(예: 당단백질) 접합체에 관한 것이다. 또한 본 발명은 본 명세서에 기술된 신규 접합 단백질 및 화합물 그리고 제제의 사용 및 이들을 사용하는 치료 방법에 관한 것이기도 하다.
[0003] 페길화(PEGylation) 또는 폴리시알화(polysialylation) 같은 것에 의한 폴리펩타이드 약물의 접합은 혈액 순환 중 분해로부터 약물을 보호하고 그리고 따라서 그의 약역학(pharmacodynamic) 및 약동학 프로파일(pharmacokinetic profiles)을 향상시킨다(Harris and Chess, Nat Rev Drug Discov.2003;2:214-21; S. Jain, D. Hreczuk-Hirst, P. Laing and G. Gregoriadis, Drug Delivery Systems and Sciences, 4 (No 1): 3-9, 2004). 시알산(N-아세틸뉴라민산으로도 불림) 및 폴리시알산은 동물 조직에 널리 분포되어있고 그리고 식물 및 진균부터 효모 그리고 박테리아까지 다른 종에서는 보다 적게, 주로 당단백질 및 강글리오사이드에서 발견된다. 본 명세서에서 사용된 약어 "PSA"는 용어 "폴리시알산(polysialic acid)"을 의미한다. 유사하게 본 명세서에 사용된 용어 "mPSA"는 용어 "변형(modified) 폴리시알산"을 의미한다.
[0004] PSA는 N-아세틸뉴라민산의 폴리머(일반적으로 호모폴리머)로 이루어진다. 2차 아미노기(secondary amino group)는 보통 아세틸기를 갖지만, 대신에 글리콜릴기를 가질 수도 있다. 수산기 상의 가능한 치환체는 아세틸기, 락틸기, 에틸기, 활상기, 및 인산기를 포함한다.
[0005] PSA 및 mPSA는 일반적으로 2,8- 또는 2,9- 글리코사이드 연쇄 또는 이들의 조합(예: 2,8- 및 2,9- 글리코사이드 연쇄)으로 연결된 N-아세틸뉴라민산 모이어티를 포함하여 구성된 선형 폴리머를 포함한다. 특히 바람직한 PSA 및 mPSA에서 글리코사이드 연쇄는 α-2,8이다. 그러한 PSA 및 mPSA는 편리하게 콜리민산으로부터 유래되고, 그리고 본 명세서에서 "CA" 및 "mCA"로 지칭된다. 일반적인 PSA 및 mPSA는 적어도 2, 바람직하게는 적어도 5, 더 바람직하게는 적어도 10 그리고 가장 바람직하게는 적어도 20 N-아세틸뉴라민산 모이어티를 포함한다. 따라서 이들은 5 내지 500의 N-아세틸뉴라민산 모이어티, 바람직하게는 10 내지 300의 N-아세틸뉴라민산 모이어티를 포함할 수 있다. PSA 및 CA는 상이한 당 모이어티를 포함하는 폴리머일 수 있다. 이들은 코폴리머일 수 있다. PSA 및 CA는 바람직하게는 N-아세틸뉴라민산 외에 당 모이어티가 본질적으로 없다. PSA 및 CA는 바람직하게는 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95% 그리고 가장 바람직하게는 적어도 98%의 N-아세틸뉴라민산 모이어티를 포함한다.
[0006] N-아세틸뉴라민산 외에 당을 포함하는 PSA 및 CA(예를 들어 mPSA 및 mCA)에 있어서 이들은 곳은 바람직하게는 폴리머 사슬의 한쪽 또는 양쪽 끝에 위치한다. 그러한 "그 외"의 모이어티는, 예를 들어, 산화 또는 환원으로 말단 N-아세틸뉴라민산 모이어티로부터 유래된 모이어티일 수 있다. 예를 들어 비환원 말단 N-아세틸뉴라민산 유닛(unit)이 과아이오딘산나트륨과의 반응으로 알데히드기로 전환되는 mPSA 및/또는 mCA가 만들어질 수 있다(WO-A-0187922 참조). 대안적으로는 예를 들어 mPSA 및 mCA가 활용될 수 있고, 이에서는 인근의(vicinal) 디올기를 알데히드기로 전환하기 위해 산화되는 인근 디올기를 형성하기 위해 환원 말단(reducing terminal) N-아세틸뉴라민산 유닛에 있는 고리를 환원하여 열기 위해 환원 말단 N-아세틸뉴라민산 유닛을 환원시킨다(WO 2005/016974 참조).
[0007] 수용성 폴리머 및 단백질(예: 치료 단백질) 사이에 공유 연쇄를 형성하는 것에 의한 접합체의 조제는 다양한 화학 방법으로 실행될 수 있다. PSA를 단백질에 결합시키는 한 접근법은 단백질의 탄수화물 모이어티를 통한 폴리머의 접합이다. 단백질에 있는 탄수화물의 인근 수산기(OH)는 활성 알데히드기를 형성하기 위해 과아이오딘산나트륨(NaIO4)으로 용이하게 산화될 수 있다(Rothfus and Smith, J Biol Chem 1963; 238:1402-10; van Lenten and Ashwell, J Biol Chem 1971;246:1889-94). 그 뒤에 상기 폴리머는, 예를 들어 활성 하이드라지드기(hydrazide group)를 함유하는 시약을 사용하는 것으로 상기 탄수화물의 알데히드기에 결합될 수 있다(Wilchek M and Bayer EA, Methods Enzymol 1987;138:429-42). 더 최근 기술은 옥심 연쇄를 형성하기 위해 알데히드와 반응하는 아미노옥시기를 함유하는 시약을 사용하는 것이다(WO 96/40662, WO2008/025856).
[0008] 수용성 폴리머를 치료 단백질에 접합시키는 데에 사용 가능한 방법들에도 불구하고, 화합물의 약역학 및/또는 약동학 성질을 향상시키기 위해 다양한 탄수화물 함유 단백질 및 화합물에 수용성 폴리머를 접합시키기 위한 물질 및 방법을 개발할 필요가 남아있다. 또한 유익한 성질을 갖고 있는지 확인하기 위해 PSA 또는 mPSA와 접합된 넓은 범위의 약물을 개발하고 그리고 시험할 거대한 충족되지 않은 필요성이 남아있다. 이 명세서에서는 PSA 또는 mPSA와 접합된 많은 특정 화합물을 제공하고 그리고 시험하는 것으로 이 부족함을 해결한다.
[0009] 본 발명은 수용성 폴리머와 접합된 화합물(예: 단백질), 특히 PSA 또는 mPSA와 접합된 신규 화합물을 제공하고 그리고 그러한 화합물을 사용하는 방법을 제공한다.
[0010] 본 명세서에 제공되는 신규 화합물은 바람직하게는 향상된 약역학 및/또는 약동학 성질 그리고 다른 바람직한 성질을 갖는다. 본 명세서에 제공되는 화합물은 일반적으로 단백질이고, 더 일반적으로는 혈액 응고 단백질 외에 당단백질이다.
[0011] 사용된 바람직한 비제한적인 수용성 폴리머는 PSA 또는 mPSA이고, 이는 본 명세서의 구체예에 관해 본 명세서에서 간단하게 PSA로 지칭된다. 사용된 수용성 폴리머는 또한 폴리에틸렌글리콜(PEG), 분지(branched) PEG, PEG 유도체, CA, mCA, 하이드록시에틸 셀룰로스(HEC), 덱스트린, 폴리옥사졸린, 탄수화물, 다당류, 플루란, 키토산, 히알루론산, 황산 콘드로이틴, 황산 데르마탄, 녹말, 덱스트란, 카르복시메틸-덱스트란, 폴리알킬렌 산화물(PAO), 폴리알킬렌 글리콜(PAG), 폴리프로필렌 글리콜(PPG) 폴리옥사졸린, 폴리아크릴로일모폴린, 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리카복실레이트, 폴리바이닐피롤리돈, 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린, 폴리에틸렌-말레인산 무수물(polyethylene-co-maleic acid anhydride), 폴리스티렌-말레인산 무수물(polystyrene-co-maleic acid anhydride), 폴리(1-하이드록시메틸에틸렌 하이드록시메틸포말(hydroxymethylformal))(PHF), 2-메타크릴옥시-2'-에틸트리메틸암모늄포스페이트(MPC)일 수도 있지만 이들에 제한되지는 않는다.
[0012] 하기의 실시예에서 기술되는 본 발명의 다른 구체예에서는 수용성 폴리머가 폴리시알산(PSA) 또는 변형 폴리시알산(mPSA)이다. 상기 PSA 또는 mPSA는 350Da 내지 120,000Da, 500Da 내지 100,000Da, 1000Da 내지 80,000Da, 1500Da 내지 60,000Da, 2,000Da 내지 45,000Da 또는 3,000Da 내지 35,000Da의 분자량 범위를 가질 수 있다. 상기 PSA 또는 mPSA는 콜로민산 또는 변형 콜로민산일 수 있다. 상기 PSA 또는 mPSA는 일반적으로 약 2-500 또는 10-300 시알산 유닛으로 구성되지만, 다른 수의 시알산 유닛도 예상된다. 본 명세서에는 화합물의 약역학 및/또는 약동학 성질을 향상시키기 위해 다양한 탄수화물 함유 화합물에 수용성 폴리머를 접합시키기 위한 물질 및 방법 또한 기술된다. 본 명세서에 기술된 화합물은 본 명세서에 기술된 다양한 방법으로 조제될 수 있다. 비제한적인 예시는 접합을 허용하는 조건 하에 수용성 폴리머를 산화된 탄수화물 모이어티에 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 수용성 폴리머는 아미노옥시기를 포함하고 그리고 산화된 탄수화물 모이어티 및 상기 수용성 폴리머 상의 아미노옥시기 사이에 옥심 연쇄가 형성되거나, 또는 상기 수용성 폴리머가 하이드라지드기를 함유하고 그리고 산화된 탄수화물 모이어티 및 상기 수용성 폴리머 상의 하이드라지드기 사이에 하이드라존 연쇄가 형성된다. 상기 수용성 폴리머는 수용성 폴리머의 말단 시알산 유닛 상에 알데히드기를 형성하기 위해 산화되고, 뒤이어 산화된 수용성 폴리머를 아미노옥시 링커와 반응시킬 수도 있다. 따라서 특정 구체예에서는 수용성 폴리머가 활성화된 아미노옥시 링커와 산화된 수용성 폴리머를 반응시키는 것으로 조제되고, 상기 링커는 동종양기능(homobifunctional) 또는 이종양기능(heterobifunctional) 링커이다. 상기 동종양기능 링커는 NH2[OCH2CH2]nONH2의 일반식을 가질 수 있고, 상기에서 n=1-50, 바람직하게는 1-11, 더 바람직하게는 1-6이다. 다른 적합한 링커는 본 명세서에 참조로서 포함된 Jain et al.의 "비혈액응고 단백질의 글리코폴리시알화(Glycopolysialylation of non-blood coagulation proteins)"라는 명칭의 WO2011/012850에 더 상세히 기술되어 있다.
[0013] 본 명세서에 제공되는 수용성 폴리머에 접합되는 특정 신규 화합물을 생산하기 위해 사용되는 방법의 또 다른 비제한적인 예시는 수용성 폴리머의 말단 유닛 상에, 예를 들어 PSA 또는 mPSA의 말단 시알산 유닛 상에 알데히드기를 형성하기 위해 수용성 폴리머를 산화시키는 단계, 그리고 산화된 수용성 폴리머와 아미노옥시 링커를 반응시키는 단계를 포함한다. 산화된 수용성 폴리머와 하이드라지드 링커를 반응시키는 것으로 수용성 폴리머(예: PSA 또는 mPSA) 상에 하이드라지드기가 형성되는 특정 신규 화합물이 형성될 수 있다. 상기 하이드라지드 링커는 적합하게 아디프산 하이드라지드 또는 하이드라진일 수 있다. 특정 신규 화합물은 접합된 화합물(예: 단백줄)에서 옥심 또는 하이드라존 연쇄를 환원시키는 것으로 형성될 수 있다. 본 명세서에 기술된 다른 신규 화합물들은 전체 내용이 본 명세서에 참조로서 포함된 USSN 10/276,552, USSN 10/568,111, USSN 11/660,128, USSN 11/816,823, USSN 12/375,012, USSN 12/843,284, US 6,166,687, US 8,217,154, 및 US 9,795,683에 상세하게 기술된 연쇄 및 링커로 조제될 수 있다.
[0014] 본 명세서에서 사용된 바와 같이 "생물학적 활성(biologically active) 유도체" 또는 "생물학적 활성 변종"은 결합 성질, 및/또는 펩타이드 백본(peptidic backbone) 또는 기본 폴리머 유닛(polymeric unit)과 같은 동일한 구조적 기초(structural basis)와 같이, 분자와 실질적으로 동일한 기능 및/또는 생물학적 성질을 갖는 상기 분자의 어느 유도체 또는 변종을 포함한다.
[0015] 용어 "유전자 발현 장애(gene expression disorder)"는 알려진 단일 유전자의 돌연변이에 의해 야기되고 그리고 RNA 치료적 접근법의 후보인 많은 유전 질환을 의미한다. 낭성섬유증, 혈우병 등과 같은 단일 유전자 돌연변이에 의해 야기되는 장애은 특정 특성이 자손에게서 나타날 수 있는 가능성에 대하여 우성 또는 열성일 수 있다. 우성 대립유전자는 오직 한 카피(copy)의 대립유전자를 갖는 개체(individual)에서 표현형(phenotype)을 발현하는 반면, 열성 대립유전자는 발현하기 위해서 부모 각각으로부터 하나씩, 두 카피를 가져야만 한다. 그에 반해 다유전자 장애(polygenic disorders)는 둘 이상의 유전자에 의해 야기되고 그리고 질병 각자의 발현은 흔히 유창(fluent)하고 그리고 환경 요인과 연관된다. 다유전자 장애의 예로는 고혈압, 콜레스트롤 수준 상승, 암, 신경변성질환, 정신질환 등이 있다. 또한 이들의 경우에는 이 유전자들 중 하나 이상을 나타내는 치료 RNA가 상기 환자들에게 유익할 수 있다. 그리고 유전 질환은 부모의 유전자로부터 물려받아야만 하는 것이 아니라 새로운 돌연변이에 의해 야기된 것일 수도 있다. 또한 이들의 경우에는 올바른 유전자 서열을 나타내는 치료 RNA가 환자들에게 유익할 수 있다. 그 외에 유전자 발현 장애는 고혈압, 콜레스트롤 수치 상승, 암, 신경변성질환, 정신질환, 낭성섬유증, 혈우병(또는 다른 혈액 응고 질환), 정신분열병, 조울증, 주요우울증, 파킨슨병, 알츠하이머병 및 자폐 스펙트럼 장애와 같은 신경 정신병, 백색증, 앙겔만 증후군, 강직척추염, 아페르 증후군, 샤르코 마리 투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease), 선천성 부신과다 형성증, 낭성섬유증, 다운증후군, 연골무형성증, 알파-1 항트립신 결핍증, 항인지질항체 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐증, 보통염색체 우성 다낭성 신장 질환, 샤르코 마리 투스 질환, 묘성 증후군, 크론병, 낭성섬유증, 더컴병, 듀안 증후군, 듀시엔형 근이영양증, 응고인자 V 레이든 혈전증(Factor V Leiden Thrombophilia), 가족성 고콜레스트롤혈증, 가족성 지중해열, 유약 X 증후군, 고셔병, 혈색소증, 전전뇌증(holoprosencephaly), 헌팅톤 병, 선천대사장애, 클라인펠터 증후군, 마르판 증후군, 메틸말론산증, 근긴장성 이영양증, 신경섬유종증, 누난 증후군, 골형성부전증, 파킨슨병, 페닐케톤뇨증, 폴란드 기형(Poland anomaly), 포르피린증, 유전조로증, 망막색소변성증, 중증 복합 면역결핍, 낫적혈구병, 척수근육위축, 테이-삭스병, 지중해빈혈증, 트리메틸아민뇨증, 터너 증후군, 구개심장안면증후군(velocardiofacial syndrome) 및 윌슨병을 포함한다. 각자의 유전자 및 그의 표현형의 설명과 함께 현재 22,993개의 인간 유전자 및 유전질환의 항목이 있는 온라인 카탈로그는 ONIM(Online Mendelian Inheritance in Man) 웹페이지(http://omim.org)에 있고, 각각의 서열은 Uniprot 데이터베이스(http://www.uniprot.org)에 있다.
[0016] 구체예들은 유전자 발현 장애를 치료하는 방법을 포함한다. 상기 방법은 유효량의 PSA-핵산 접합체를 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. PSA 접합체는 이중가닥 RNA, 단일가닥 RNA 또는 소간섭 RNA(siRNA)로부터 선택되는 RNA 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide)에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함할 수 있다. 대안적으로 상기 PSA 접합체는 절단 가능한(cleavable) 링커 모이어티를 통해 RNA 올리고뉴클레오타이드에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함할 수 있다. 다른 구체예에서 PSA 분자는 선택적으로 링커를 통해 RNA 3‘ 말단 염기(terminal base)에서 적어도 하나의 RNA 분자와 접합된다. 대안적으로 PSA 접합체는 RNA 올리고뉴클레오타이드에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함할 수 있고, 상기 RNA 올리고뉴클레오타이드는 폴리펩타이드 또는 그의 보체(complementary) 서열을 부호화(coding)하기 위한 부호화 영역을 포함하고, 상기 폴리펩타이드는 VEGF, 아포지단백 B, 디스트로핀의 엑손 51, 트랜스티레틴, CEP290 c.2991+1655A>G 돌연변이, KRAS, 보체 5(C5) 단백질, EphA2, CTGF, TRPV1, LDHA, TGF-β1, Cox-2, KRAS G12D, P53, 카스파제-2, 항트롬빈, FANCA, 응고인자 VIII, 응고인자 IX, ANK1, PIG-A, UROD, 아데노신 디아미네이스, JAK3, RAG1/2, 아르테미스(Artemis), IL7R-α, IL-2Rγ, T 세포 표면 당단백질 CD3 델타 사슬, CD3.엡실론, CDKN2, NF1, NF2, LIM 키네이스, 엘라스틴, ALDP, CFTR, 헵시딘, ABCA3, 계면활성 단백질 B, ADAMTS13, 알파.1-항트립신 또는 GAA이다.
[0017] 용어 "질환(ailment)" 또는 "질병(disease)"은 어느 즉각적인 외상에 의한 것이 아닌 사람의 부분적 또는 전체 구조 또는 기능에 부정적으로 영향을 미치는 특정한 비정상적 상태를 의미한다. 질병은 흔히 구체적인 증상 및 징후와 연관된 질환인 것으로 알려져 있다. 질병은 병원체와 같은 외부적인 요인 또는 내부 기능장애에 의해 야기될 수 있다. 예를 들어 면역체계의 내부 기능장애는 다양한 형태의 면역결핍, 과민증, 알레르기 및 자가면역질환을 포함하는 다양한 상이한 질병을 초래할 수 있다.
[0018] "유사체", "변종", 또는 "유도체"는, 비록 특정 경우에는 상이한 정도(differing degree)로라도, 자연적으로 발생하는 분자와 실질적으로 유사한 구조 및 동일한 생물학적 활성을 갖는 화합물이다. 예를 들어 폴리펩타이드 변종은 기준(reference) 폴리펩타이드와 실질적으로 동일한 구조를 공유하고 그리고 동일한 생물학적 활성을 갖는 폴리펩타이드를 의미한다. 변종 또는 유사체는 다음을 수반하는 하나 이상의 돌연변이에 근거하여 상기 유사체가 유래된 자연적으로 발생하는 폴리펩타이드에 비해 아미노산 서열의 구성요소가 상이하다: (i) 폴리펩타이드의 하나 이상의 말단 및/또는 자연적으로 발생하는 폴리펩타이드 서열의 하나 이상의 내부 영역(예: 단편)에서 하나 이상의 아미노산 잔기 결손, (ii) 폴리펩타이드의 하나 이상의 말단 및/또는 자연적으로 발생하는 폴리펩타이드 서열의 하나 이상의 내부 영역에서 하나 이상의 아미노산 삽입 또는 추가(일반적으로 폴리펩타이드의 말단에서는 "추가" 또는 융합, 자연적으로 발생하는 폴리펩타이드의 내부 영역에서는 "삽입") 또는 (iii) 자연적으로 발생하는 폴리펩타이드 서열에서 하나 이상의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환. 예시로서 "유도체"는, 예를 들어 화학적으로, 변형된 기준 폴리펩타이드와 동일한 또는 실질적으로 유사한 구조를 공유하는 폴리펩타이드를 의미한다.
[0019] 변종 또는 유사체 폴리펩타이드는 삽입 변종을 포함하고, 이에서는 하나 이상의 아미노산 잔기가 본 발명의 단백질 아미노산 서열에 추가된다. 삽입물은 상기 단백질의 한쪽 또는 양쪽 말단에 위치할 수 있고, 그리고/또는 단백질 아미노산 서열의 내부 영역 내에 배치될 수도 있다. 한쪽 또는 양쪽 말단에 추가적인 잔기를 갖는 삽입 변종은, 예를 들어, 융합 단백질 및 아미노산 태그 또는 그 외 아미노산 라벨을 포함하는 단백질을 포함한다. 한 관점에서 단백질 분자는 선택적으로, 특히 상기 분자가 대장균과 같은 박테리아 세포에서 재조합으로 발현될 때, N 말단 메티오닌(Met)을 함유한다.
[0020] 결손 변종에서는 본 명세서에 기술된 바와 같이 단백질 또는 폴리펩타이드에 있는 하나 이상의 아미노산 잔기가 제거된다. 결손은 단백질 또는 폴리펩타이드의 한쪽 또는 양쪽 말단에서 영향을 줄 수 있고, 그리고/또는 단백질 아미노산 서열 내의 하나 이상의 잔기의 제거와 함께일 수 있다. 따라서 결손 변종은 단백질 또는 폴리펩타이드 서열의 단편을 포함한다.
[0021] 치환 변종에서는 단백질 또는 폴리펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기가 제거된 후 다른 잔기로 대체된다. 한 관점에서 치환은 본질적으로 보존적이고 그리고 이 유형의 보존적 치환은 당업계에 잘 알려져 있다. 대안적으로 본 발명은 비보존적인 치환 또한 포괄한다. 예시적인 보존적 치환은 본 명세서에 참조로서 포함된 Lehninger, [Biochemistry, 2nd Edition; Worth Publishers, Inc., New York (1975), pp.71-77]에 기술된다.
[0022] 혈액응고 단백질 외에 당단백질과 같은 탄수화물 함유 화합물의 약학적 그리고 면역학적 성질은 화학적 변형 및 수용성 폴리머, 특히 PEG 또는 PSA 또는 mPSA와의 접합으로 향상될 수 있다. 결과적으로 야기되는 접합체의 성질은 일반적으로 폴리머의 구조 및 크기에 의해 크게 좌우된다. 따라서 보통 뚜렷한(defined) 그리고 좁은 크기 분포를 갖는 폴리머가 선호된다. 특정한 실시예에 사용된 PSA 및 mPSA는 좁은 크기 분포를 갖는 최종 PSA 제제를 결과적으로 야기하는 방식으로 정제될 수 있다.
당단백질 및 그 외 단백질 표적
[0023] 본 명세서에 기술된 바와 같이, 다음을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는 혈액응고 단백질 외에 당단백질이 대체로 본 발명에서 고려된다: 인터류킨과 같은 사이토카인, 알파-, 베타-, 및 감마-인터페론, 과립구 집락자극인자를 포함하는 집락자극인자, 섬유모세포 성장인자, 혈소판 유래 성장인자, 포스포리페이스 활성 단백질(phospholipase-activating protein: PUP), 인슐린, 렉틴 및 리신과 같은 식물성 단백질, 종양 괴사인자 및 관련 대립유전자, 종양 괴사인자의 가용성 형태, 인터류킨 수용체 및 인터류킨 수용체의 가용성 형태, 성장인자, 조직 성장인자, TGFa 또는 TGFb 및 표피 성장인자와 같은 전환 성장인자, 호르몬, 소마토메딘, 색소성 호르몬(pigmentary hormones), 시상하부 방출 인자, 항이뇨 호르몬, 프로락틴, 융모생식샘 자극 호르몬, 난포 자극 호르몬, 옥신토모듈린 및 옥신토모듈린 유사 펩타이드, 갑상샘 자극 호르몬, 조직 플라스미노겐 활성인자, 및 IgG, IgE, IgM, IgA, 및 IgD와 같은 면역글로불린, 단클론 항체, 에리트로포이에틴(EPO), 혈액응고 단백질 외에 혈액인자, 갈락토시데이스, α-갈락토시데이스, β-갈락토시데이스, DNA 분해효소, 피투인(fetuin), 이들의 단편, 그리고 상기의 단백질 또는 그의 단편과 함께 일반적으로 치료 당단백질을 포함하는 어느 융합단백질.
[0024] 본 명세서에 제공된 많은 특정 구체예에서 다양한 조절 및 신호전달 경로에 수반되는 단백질, 폴리펩타이드 및 펩타이드는 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 접합된다. 특정 구체예에서 신규 단백질-PSA 접합체를 만드는 데에 사용되는 단백질, 펩타이드, 및 그 외 화합물은 다음으로부터 선택된다: 제9인자(FIX), 제8인자(FVIII), 제7a인자(FVIIa), 폰 빌레브란트 인자(VWF), 제5인자(FV), 제10인자(FX), 제11인자(FXI), 제12인자(FXII), 트롬빈(FII), 트롬보모듈린(및 유사체, 예를 들어 솔루린(Solulin)), 단백질 C, 단백질 S, tPA, PAI-1, 조직 인자(TF), ADAMTS 13 프로테아제, IL-1 알파, IL-1 β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-11, 집락자극인자-1(CSF-1), M-CSF, SCF, GM-CSF, 과립구 집락자극인자(G-CSF), EPO, 인터페론-알파(IFN-알파), 공통(consensus) 인터페론, IFN-β, IFN-감마, IFN-오메가, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-31, IL-32 알파, IL-33, 트롬보포이에틴(TPO), Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, 엔지오포이에틴(angiopoietin) 유사 폴리펩타이드 1(ANGPTL1), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 2(ANGPTL2), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 3(ANGPTL3), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 4(ANGPTL4), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 5(ANGPTL5), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 6(ANGPTL6), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 7(ANGPTL7), 비트로넥틴, 혈관 내피세포 성장인자(VEGF), 엔지오제닌(angiogenin), 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 골형성 단백질(bone morphogenetic protein)-1, 골형성 단백질-2, 골형성 단백질-3, 골형성 단백질-4, 골형성 단백질-5, 골형성 단백질-6, 골형성 단백질-7, 골형성 단백질-8, 골형성 단백질-9, 골형성 단백질-10, 골형성 단백질-11, 골형성 단백질-12, 골형성 단백질-13, 골형성 단백질-14, 골형성 단백질-15, 골형성 단백질 수용체 IA, 골형성 단백질 수용체 IB, 골형성 단백질 수용체 II, 뇌유래 신경영양 인자(brain derived neurotrophic factor), 카디오트로핀(cardiotrophin)-1, 섬모 신경영양 인자(ciliary neurotrophic factor), 섬모 신경영양 인자 수용체, 크립토(cripto), 크립틱(cryptic), 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 1(cytokine-induced neutrophil chemotactic factor 1), 사이토카인 유발 호중구, 화학주성 인자 2α, 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 2β, β 내피세포 증식인자, 엔도텔린 1, 표피 성장인자, 에피젠(epigen), 에피레귤린(epiregulin), 상피 유래 호중구 유인물질(epithelial-derived neutrophil attractant), 섬유모세포 성장인자 4, 섬유모세포 성장인자 5, 섬유모세포 성장인자 6, 섬유모세포 성장인자 7, 섬유모세포 성장인자 8, 섬유모세포 성장인자 8b, 섬유모세포 성장인자 8c, 섬유모세포 성장인자 9, 섬유모세포 성장인자 10, 섬유모세포 성장인자 11, 섬유모세포 성장인자 12, 섬유모세포 성장인자 13, 섬유모세포 성장인자 16, 섬유모세포 성장인자 17, 섬유모세포 성장인자 19, 섬유모세포 성장인자 20, 섬유모세포 성장인자 21, 섬유모세포 성장인자 산성, 섬유모세포 성장인자 염기성, 아교세포주 유래(glial cell line-derived) 신경영양 인자 수용체 α1, 아교세포주 유래 신경영양 인자 수용체 α2, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질 α, 성장 관련 단백질 β, 성장 관련 단백질 .감마., 헤파린 결합 표피 성장인자, 간세포 성장인자, 간세포 성장인자 수용체, 간종 유래(hepatoma-derived) 성장인자, 인슐린 유사 성장인자 I, 인슐린 유사 성장인자 수용체, 인슐린 유사 성장인자 II, 인슐린 유사 성장인자 결합 단백질, 각질세포 성장인자, 백혈병 억제 인자, 백혈병 억제 인자 수용체 α, 엔도모르핀(1&2), 뉴로펩타이드, 신경 성장인자, 신경 성장인자 수용체, 뉴로포이에틴, 뉴로트로핀-3, 뉴로트로핀-4, 온코스탄틴 M(OSM), 태반 성장인자, 태반 성장인자 2, 혈소판 유래 내피세포 성장인자, 혈소판 유래 성장인자, 혈소판 유래 성장인자 A 사슬, 혈소판 유래 성장인자 AA, 혈소판 유래 성장인자 AB, 혈소판 유래 성장인자 B 사슬, 혈소판 유래 성장인자 BB, 혈소판 유래 성장인자 수용체 α, 혈소판 유래 성장인자 수용체 β, 프리β(pre-β) 세포 성장 자극인자, 줄기세포 인자(SCF), 줄기세포 인자 수용체, TNF, TNF0, TNF1, TNF2, 전환 성장인자 α, 전환 성장인자 β, 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β1.2, 전환 성장인자 β2, 전환 성장인자 β3, 전환 성장인자 β5, 잠재 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β 결합 단백질 I, 전환 성장인자 β 결합 단백질 II, 전환 성장인자 β 결합 단백질 III, 흉선 기질 림프포이에틴(thymic stromal lymphopoietin: TSLP), 종양 괴사인자 수용체 I형, 종양 괴사인자 수용체 II형, 우로키네이스형(urokinase-type) 플라스미노겐 활성인자, 포스포리페이스 활성 단백질(PUP), 인슐린, 렉틴 리신, 프로락틴, 융모생식샘 자극 호르몬, 난포 자극 호르몬, 갑상샘 자극 호르몬, 조직 플라스미노겐 활성인자, IgG, IgE, IgM, IgA, 및 IgD, α-갈락토시데이스, β-갈락토시데이스, DNA 분해효소, 피투인, 황체형성 호르몬, 에스트로겐, 인슐린, 알부민, 지질단백질, 태아단백질, 트랜스페린, 트롬보포이에틴, 우로키네이스, 인테그린, 트롬빈, 트롬보모듈린, 렙틴, 아달리무맙(adalimumab), 데노스맙(denosumab), 또는 에타너셉트(etanercept). 이들 단백질 및 이 화합물들을 만들기 위한 특정한 방법은 본 명세서에 참조로서 포함된 '옥심 연쇄를 위한 구핵 촉매(Nucleophilic catalyst for oxime linkage)'란 발명의 명칭의 US 9,731,024에 더 상세하게 기술된다.
[0025] 특정 구체예에서 신규 단백질-PSA 접합체를 만드는 데에 사용되는 단백질, 펩타이드, 및 그 외 화합물은 다음으로부터 선택된다: 제9인자(FIX), 제8인자(FVIII), 제7a인자(FVIIa), 폰 빌레브란트 인자(VWF), 제5인자(FV), 제10인자(FX), 제11인자(FXI), 제12인자(FXII), 트롬빈(FII), 단백질 C, 단백질 S, tPA, PAI-1, 조직 인자(TF), ADAMTS 13 프로테아제, IL-1 알파, IL-1 β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-11, 집락자극인자-1(CSF-1), M-CSF, SCF, GM-CSF, 과립구 집락자극인자(G-CSF), EPO, 인터페론-알파(IFN-알파), 공통 인터페론, IFN-β, IFN-감마, IFN-오메가, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-31, IL-32 알파, IL-33, 트롬보포이에틴(TPO), Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 1(ANGPTL1), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 2(ANGPTL2), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 3(ANGPTL3), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 4(ANGPTL4), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 5(ANGPTL5), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 6(ANGPTL6), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 7(ANGPTL7), 비트로넥틴, 혈관 내피세포 성장인자(VEGF), 엔지오제닌, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 골형성 단백질-1, 골형성 단백질-2, 골형성 단백질-3, 골형성 단백질-4, 골형성 단백질-5, 골형성 단백질-6, 골형성 단백질-7, 골형성 단백질-8, 골형성 단백질-9, 골형성 단백질-10, 골형성 단백질-11, 골형성 단백질-12, 골형성 단백질-13, 골형성 단백질-14, 골형성 단백질-15, 골형성 단백질 수용체 IA, 골형성 단백질 수용체 IB, 골형성 단백질 수용체 II, 뇌유래 신경영양 인자, 카디오트로핀-1, 섬모 신경영양 인자, 섬모 신경영양 인자 수용체, 크립토, 크립틱, 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 1, 사이토카인 유발 호중구, 화학주성 인자 2α, 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 2β, β 내피세포 증식인자, 엔도텔린 1, 표피 성장인자, 에피젠, 에피레귤린, 상피 유래 호중구 유인물질, 섬유모세포 성장인자 4, 섬유모세포 성장인자 5, 섬유모세포 성장인자 6, 섬유모세포 성장인자 7, 섬유모세포 성장인자 8, 섬유모세포 성장인자 8b, 섬유모세포 성장인자 8c, 섬유모세포 성장인자 9, 섬유모세포 성장인자 10, 섬유모세포 성장인자 11, 섬유모세포 성장인자 12, 섬유모세포 성장인자 13, 섬유모세포 성장인자 16, 섬유모세포 성장인자 17, 섬유모세포 성장인자 19, 섬유모세포 성장인자 20, 섬유모세포 성장인자 21, 섬유모세포 성장인자 산성, 섬유모세포 성장인자 염기성, 아교세포주 유래 신경영양 인자 수용체 α1, 아교세포주 유래 신경영양 인자 수용체 α2, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질 α, 성장 관련 단백질 β, 성장 관련 단백질 .감마., 헤파린 결합 표피 성장인자, 간세포 성장인자, 간세포 성장인자 수용체, 간종 유래 성장인자, 인슐린 유사 성장인자 I, 인슐린 유사 성장인자 수용체, 인슐린 유사 성장인자 II, 인슐린 유사 성장인자 결합 단백질, 각질세포 성장인자, 백혈병 억제 인자, 백혈병 억제 인자 수용체 α, 신경 성장인자, 신경 성장인자 수용체, 뉴로포이에틴, 뉴로트로핀-3, 뉴로트로핀-4, 온코스탄틴 M(OSM), 태반 성장인자, 태반 성장인자 2, 혈소판 유래 내피세포 성장인자, 혈소판 유래 성장인자, 혈소판 유래 성장인자 A 사슬, 혈소판 유래 성장인자 AA, 혈소판 유래 성장인자 AB, 혈소판 유래 성장인자 B 사슬, 혈소판 유래 성장인자 BB, 혈소판 유래 성장인자 수용체 α, 혈소판 유래 성장인자 수용체 β, 프리β 세포 성장 자극인자, 줄기세포 인자(SCF), 줄기세포 인자 수용체, TNF, TNF0, TNF1, TNF2, 전환 성장인자 α, 전환 성장인자 β, 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β1.2, 전환 성장인자 β2, 전환 성장인자 β3, 전환 성장인자 β5, 잠재 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β 결합 단백질 I, 전환 성장인자 β 결합 단백질 II, 전환 성장인자 β 결합 단백질 III, 흉선 기질 림프포이에틴(TSLP), 종양 괴사인자 수용체 I형, 종양 괴사인자 수용체 II형, 우로키네이스형 플라스미노겐 활성인자, 포스포리페이스 활성 단백질(PUP), 인슐린, 렉틴 리신, 프로락틴, 융모생식샘 자극 호르몬, 난포 자극 호르몬, 갑상샘 자극 호르몬, 조직 플라스미노겐 활성인자, IgG, IgE, IgM, IgA, 및 IgD, α-갈락토시데이스, β-갈락토시데이스, DNA 분해효소(예: DNA 분해효소 I(DNAse I)), 피투인, 황체형성 호르몬, 에스트로겐, 인슐린, 알부민, 지질단백질, 태아단백질, 트랜스페린, 트롬보포이에틴, 우로키네이스, 인테그린, 트롬빈, 트롬보모듈린, 렙틴, 휴미라(Humira)(아달리무맙), 프롤리아(Prolia)(데노스맙), 또는 이들의 생물학적 활성 단편, 유도체 또는 변종. 이들 단백질 및 이 화합물들을 만들기 위한 특정한 방법은 본 명세서에 참조로서 포함된 '수용성 지방산 유도체를 단백질에 접합시키기 위한 물질 및 방법(Materials and methods for conjugating a water soluble fatty acid derivative to a protein)'이란 발명의 명칭의 20120190096으로 공개된 미국 특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0026] 특정 구체예에서 신규 단백질-PSA 접합체를 만드는 데에 사용되는 단백질, 펩타이드, 및 그 외 화합물은 다음으로부터 선택된다: 아스파라기나제, 암독소비르(amdoxovir)(DAPD), 안타이드(antide), 베카플러민, 칼시토닌, 사이아노비린(cyanovirin), 데닐류킨 디피티톡스(denileukin diftitox), 에리트로포이에틴(EPO), EPO 작용제(예: 길이는 약 10-40 아미노산이고 그리고 WO 96/40749에 기술된 특정한 핵심 서열을 포함하는 펩타이드), 도르나제 알파(dornase alpha), 적혈구생성 자극 단백질(NESP), 제5인자, 제7인자, 제7a인자(FVIIa), 제8인자(FVIII), 제9인자(FIX), 제10인자(FX), 제12인자, 제13인자, 폰 빌레브란트 인자(VWF)와 같은 응고인자, 세레데이즈(ceredase), 세레자임(cerezyme), 알파-글루코시데이스, 콜라겐, 사이클로스포린, 알파 디펜신, β 디펜신, 엑센딘-4(exendin-4), 과립구 집락자극인자(G-CSF), 트롬보포이에틴(TPO), 알파-1 프로티네이스 억제제, 엘카토닌, 과립구 대식세포 집락자극인자(GMCSF), 피브리노겐(fibrinogen), 필그라스팀(filgrastim), 성장 호르몬, 인간 성장 호르몬(hGH), 성장 호르몬 분비 호르몬(GHRH), GRO-β, GRO-β 항체, 골형성 단백질-2, 골형성 단백질-6과 같은 골형성 단백질, OP-1, 산성 섬유모세포 성장인자, 염기성 섬유모세포 성장인자, CD-40 리간드, 헤파린, 인간 혈청 알부민, 저분자량 헤파린(LMWH), 인터페론 알파, 인터페론 β, 인터페론 감마, 인터페론 오메가, 인터페론 타우, 공통 인터페론과 같은 인터페론, 인터류킨-1 수용체, 인터류킨-2, 인터류킨-2 융합단백질, 인터류킨-1 수용체 작용제, 인터류킨-3, 인터류킨-4, 인터류킨-4 수용체, 인터류킨-6, 인터류킨-8, 인터류킨-12, 인터류킨-13 수용체, 인터류킨-17 수용체와 같은 인터류킨 및 인터류킨 수용체, 락토페린 및 락토페린 단편, 황체형성 호르몬 분비 호르몬(LHRH), 인슐린, 프로인슐린(pro-insulin), 인슐린 유사체(예: 미국 특허번호 제5,922,675호에 기술된 모노아실화된(mono-acylated) 인슐린), 아밀린(amylin), C 펩타이드, 소마토스타틴, 옥트레오티드(octreotide)를 포함하는 소마토스타틴 유사체, 바소프레신, 난포 자극 호르몬(FSH), 인플루엔자 백신, 인슐린 유사 성장인자(IGF), 인슐린트로핀(insulintropin), 대식세포 집락자극인자(M-CSF), 알테플라제(alteplase), 우로키네이스, 레테플라제(reteplase), 스트렙토키네이스(streptokinase), 파미테플라제(pamiteplase), 라노테플라제(lanoteplase), 및 테네테플라제(teneteplase)와 같은 플라스미노겐 활성인자, 신경 성장인자(NGF), 오스테오프로테제린(osteoprotegerin), 혈소판 유래 성장인자, 조직 성장인자, 전환 성장인자-1, 혈관 내피세포 성장인자, 백혈병 억제 인자, 각질세포 성장인자(KGF), 아교세포 성장인자(GGF), T 세포 수용체, CD 분자/항원, 종양 괴사인자(TNF), 단핵구 화학주성 단백질-1, 내피세포 성장인자. 부갑상선 호르몬(PTH), 글루카곤 유사 펩타이드, 소마토트로핀, 티모신 알파 1, 티모신 알파 1 I1b/I11a 억제제, 티모신 β 10, 티모신 β 9, 티모신 β 4, 알파-1 항트립신, 포스포디에스테라제(PDE) 화합물, VLA-4(very late antigen-4), VLA-4 억제제, 비스포스포네이트(bisphosponates), 호흡기세포 융합바이러스 항체, 낭포성 섬유증 막횡단 조절(CFTR) 유전자, 디옥시리보뉴클레이스(DNA 분해효소), 살균성/투과성 증가 단백질(BPI), 및 항CMV 항체. 예시적인 단클론 항체는 에타너셉트(IgG1의 Fc 부분에 연결된 인간 75kD TNF 수용체의 세포외 리간드 결합 부분으로 이루어지는 이합체의 융합단백질), 압식시맙(abciximab), 아펠리오모맙(afeliomomab), 바실릭시맙(basiliximab), 다클리주맙(daclizumab), 인플릭시맙(infliximab), 이브리투모맙 타이욱세탄(ibritumomab tiuexetan), 미투모맙(mitumomab), 무로모납(muromonab)-CD3, 아이오딘 131 토시투모맙(tositumomab) 접합체, 올리주맙(olizumab), 리툭시맙(rituximab), 및 트라스투주맙(trastuzumab)(허셉틴)을 포함한다. 이 단백질들 및 이 화합물들을 만들기 위한 방법은 본 명세서에 참조로서 포함된 '다중팔 폴리머 전구약물(Multi-arm polymer prodrugs)'이란 발명의 명칭의 US2018021444로 공개된 미국 특허출원에 더 상세하게 기술된다. 신규 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 사용된 것들의 예시는 재조합 인간 EPO(rhEPO)와 같은 에리트로포이에틴(EPO), 재조합 인간 G-CSF(rhG- CSF) 같은 G-CSF와 같은 집락자극인자(CSF), 재조합 인간 IFN 알파 또는 IFN β(rhIFN 알파 또는 rhIFN β) 같은 IFN 알파 및 IFN β와 같은 알파-인터페론(IFN 알파), β-인터페론(IFN β) 또는 감마-인터페론(IFN 감마), 인터류킨(예를 들어 재조합 인간 IL-2 또는 IL-3(rhIL-2 또는 rhIL-3) 같은 IL-2 또는 IL-3과 같은 IL-1 내지 IL-18), 제7인자, 제8인자, 제9인자 같은 혈액응고 인자 II-XIII와 같은 혈청 단백질, 알파1-항트립신(A1AT), 활성화 단백질 C(APC), 인간 조직 플라스미노겐 활성인자(hTPA)와 같은 조직형(tissue-type) 플라스미노겐 활성인자(tPA)와 같은 플라스미노센 활성인자, 재조합 인간 AT III(rhAT III)와 같은 AT III, 마이오글로빈, 소혈청 알부민(BSA)과 같은 알부민, 내피세포 성장인자(EGF), 혈소판 성장인자(PDGF), 섬유모세포 성장인자(FGF), 뇌유래 성장인자(BDGF), 신경 성장인자(NGF), B 세포 성장인자(BCGF), 뇌유래 신경영양 성장인자(BDNF)와 같은 성장인자, 섬모 신경영양 인자(CNTF), TGF 알파 또는 TGF β와 같은 전환 성장인자, BMP(골형성 단백질), 인간 성장 호르몬과 같은 성장 호르몬, TNF 알파 또는 TNF β와 같은 종양 괴사인자, 소마토스타틴, 소마토트로핀, 소마토메딘, 헤모글로빈, 인슐린, 고나도트로핀(gonadotropin), 멜라닌세포 자극 호르몬(알파-MSH), 트립토렐린, 항이뇨호르몬(ADH 및 옥시톡신에 더하여, 분비 호르몬 및 분비 억제 호르몬)과 같은 시상하부 호르몬, 부갑상선 호르몬, 티록신, 타이로트로핀, 타이로리베린(thyroliberin)과 같은 갑상선 호르몬, 프로락틴, 칼시토닌, 글루카곤, 글루카곤 유사 펩타이드(GLP-1, GLP-2 등), 엑센딘-4 및 엑스텐다타이드(Extendatide)와 같은 엑센딘, 렙틴, 바소프레신, 가스트린, 세크레틴(secretin), 인테그린, 당단백질 호르몬(예: LH, FSH 등), 멜라노사이드(melanoside) 자극 호르몬, apo-B, apo-E, apo-La와 같은 지질단백질 및 아포지질단백질(apo-lipoproteins), IgG, IgE, IgM, IgA, IgD 및 이들의 단편과 같은 면역글로불린, 히루딘, 조직 경로 적제제, 렉틴 또는 리신과 같은 식물성 단백질, 봉독(bee-venom), 뱀독, 면역독소, 항원 E, 알파-프로티네이스 억제제, 돼지풀 알레르기항원, 멜라닌, 올리고라이신(oligolysine) 단백질, RGD 단백질 또는 선택적으로 이 단백질들 중 하나와 일치하는 수용체, 또는 이 단백질들 및 수용체들 중 어느 하나의 기능 유도체 또는 단편을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 바람직한 효소는 예를 들어 탄수화물 특이 효소, 단백질 분해효소, 산화효소, 산화환원효소, 트랜스페라제, 하이드롤레이스, 라이에이스, 아이소머레이스(isomerase), 키네이스 및 라이게이스이다. 구체적인 비제한적인 예시로는 아스파라기나제, 아르기나아제, 아르기닌 디아미네이즈(arginin deaminase), 아데노신 디아미네이즈, 글루타미나제, 글루타미나제-아스파라기나제, 페닐알라닌, 트립토파나제(tryptophanase), 티로시네이즈, 수퍼옥사이드 디스뮤테이스(SOD), 엔도톡시네이스(endotoxinase), 카탈레이스, 페록시다아제, 칼리크레인, 트립신, 키모트립신, 엘라스테이스, 서몰리신(thermolysin), 리파아제, 우리카제(uricase), 아데노신 디포스파타아제, 퓨린 뉴클레오사이드 포스포릴레이스, 빌리루빈 옥시데이스, 글루코스 옥시데이스, 글루코스, 글루코네이트 옥시데이스, 갈락토시데이스, 글루코세레브로시데이스(glucocerebrosidase), 글루큐로니데이스(glucuronidase), 히알우로니다제, 조직 인자(tissue factor), 스트렙토키네이스, 우로키네이스, MAP-키네이스, DNA 분해효소(예: DNA 분해효소 I), RNA 분해효소, 락토페린 및 이들의 기능 유도체 또는 단편이 있다. 이 단백질들 및 이 화합물들을 만들기 위한 특정한 방법은 본 명세서에 참조로서 포함된 '환원적 아민화로 조제된 하이드록시알킬 녹말 및 단백질의 접합체(Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination)'란 발명의 명칭의 미국 특허 공개번호 제2007134197호로 공개된 미국 특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0027] 또 다른 관점에서는 항체-약물-PSA 접합체를 만들기 위해 항체-약물 접합체가 접합된다. 이 항체들 및 이 화합물들을 만들기 위한 특정한 방법은 본 명세서에 참조로서 포함된 '항체-약물 접합체 및 이를 사용하는 치료 방법(Antibody-drug conjugates and therapeutic methods using the same)'란 발명의 명칭의 WO2018002902로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다. 이 구체예들에서 하나의 적합한 항체-약물 접합체는 링커 분자에 공유결합으로 결합된 항체를 포함하고, 이는 결과적으로 HIV 외피(envelope) 당단백질에 결합 가능한 하나 이상의 약물에 공유결합으로 결합된다. 접합체를 만들기에 적합한 다른 항체는 CD4 결합 부위에 HIV 외피 당단백질을 결합시키는 것이다. 접합체를 만들기에 적합한 다른 항체는 gp120-gp41 경계면(interface)에서 HIV 외피 당단백질에 결합되는 것이다. 그러한 항체는 미국특허 공개번호 제20150361160호, 미국특허 공개번호 제20160022803호, 및 미국특허 공개번호 제20150152167호에 상세하게 기술된 8ANC195, 35022, 및 PGT151로부터 선택된 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 접합체를 만들기에 적합한 또 다른 항체는 미국특허 공개번호 제20160009789호, PCT 출원 공개번호 WO2013070776, 미국특허 공개번호 제20150158934호, 미국특허 공개번호 제20120269821호에 상세하게 기술된 4E10, 10E8, 2F5 및 Z13e1을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는 gp41 막 근위 외부 영역(membrane-proximal external region: MPER)에 결합하는 것이다. 다른 항체 접합체를 만들기 위한 HIV 외피 당단백질과의 결합에 사용되는 예시적인 항체는 VRC01, VRC07, VRC07-523, 3BNC117, NIH45-46, PGV04, b12, CH31, 및 CH103을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. VRC07-523의 예시는 J. Virol, 88(21): pp. 12669-12682 (Nov. 2014)에 개시되었다. 3BNC1 17의 예시는 미국특허 공개번호 제20140212458호에 개시되었다. NIH45-46의 예시는 미국특허 공개번호 제20150274813호에 개시되었다. PGV04의 예시는 미국특허 공개번호 제20130251726호에 개시되었다. b12의 예시는 미국특허 공개번호 제20160009789호에 개시되었다. CH31의 예시는 미국특허 공개번호 제20130251726호에 개시되었다. CH103의 예시는 미국특허 공개번호 제20140212458호에 개시되었다.
[0028] 다른 항체 접합체를 만들기 위한 HIV 외피 당단백질과의 결합에 사용되는 예시적인 항체는 참조로서 본 명세서에 포함된 WO201210657, WO2016196975, 미국특허번호 제8,637,036호, 미국특허 공개번호 제2014/0322163호, WO 2016196975 및 WO2017/79479에 상세하게 기술된 2G12, 2F5, 3BC176, 3BNC60, 3BNC1 17, 4E10, 8ANC131, 8ANC195, 10E8, 10-1074, 12A12, 35022, b12, B2530, CH01-04, CH103, CH31, HJ16, M66.6, N6, N6-LS, NIH45-46, PG9, PG16, PGDM1400, PGT121, PGT128, PGT135, PGT141 -PGT145, PGT151, PGV04, VRC01, VRC01-LS, VRC07, VRC07-523, VRC07-LS, 및 Z13, 그리고 바람직하게는 VRC01, VRC01-LS, N6, N6-LS, VRC07 및 VRC07-523을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다.
[0029] 다른 관점에서 항체-약물 접합체는 항-axl(anti-axl) 항체 PSA 접합체를 만들기 위해 접합된다. 이 구체예들에서 항-axl 항체는 AXL 단백질의 세포외 부분 상의 에피토프를 결합시키는 것이고, 이는 UFO 또는 JTK11, 포유류의 TAM 수용체 티로신 키나아제(RTK)의 아과(subfamily)의 일부인 분자량 104-140kDa의 894 아미노산 단백질로 지칭되기도 한다. 이 항체들 및 이 화합물들을 만들기 위한 특정한 방법은 본 명세서에 참조로서 포함된 '항-axl 항체에 근거한 항체 약물 접합체를 위한 새로운 투여 요법(New dosage regimens for antibody drug conjugates based on anti-axl antibodies)'이란 발명의 명칭의 WO2018007592로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0030] 다른 관점에서 단백질-PSA 접합체는 다수의 세포 표면 마커(cell surface markers) 및 그의 리간드에 대해 만들어진다. 예를 들어 암세포는 다음을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는 세포 표면 마커 및/또는 리간드 중 적어도 하나에서 발현되는 것으로 보고되었다: 카보닉 안하이드라제 IX, 알파-태아단백, 알파-액티닌-4, A3(A33 항체에 대해 특이적인 항원), ART-4, B7, Ba-733, BAGE, BrE3-항원, CA125, CAMEL, CAP-1, CASP-8/m, CCCL19, CCCL21, CD1, CDla, CD2, CD3, CD4, CDS, CD8, CDl-lA, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD29, CD30,CD32b, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD45, CD46, CD54, CD55, CD59, CD64, CD66a-e, CD67, CD70, CD74, CD79a, CD80, CD83, CD95, CD126, CD133, CD138, CD147, CD154, CDC27, CDK-4/m, CDK 2A, CXCR4, CXCR7, CXCL12, HIF-l-알파, 결장 특이 항원-p(colon-specific antigen-p: CSAp), CEA(CEACAM5), CEACAM6, c-met, DAM, EGFR, EGFRvIII, EGP-1, EGP-2, ELF2-M, Ep-CAM,Flt-1, Flt-3, 엽산 수용체, G250 항원, GAGE, GROB, HLA-DR, HM1.24, 인간 융모성 생식선 자극호르몬(HCG) 및 그의 서브유닛, HER2/neu, HMGB-1, 저산소증 유도인자(HIF-1), HSP70-2M, HST-2 또는 1a, IGF-1R, IFN-감마, IFN-알파, IFN-β, IL-2, IL-4R, IL-6R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-6, IL-8, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL- 25, 인슐린 유사 성장인자-1(IGF-1), KC4-항원, KS-1-항원, KS1-4, Le-Y, LDR/FUT, 대식세포 유주 억제인자(MIF), MAGE, MAGE-3, MART-1, MART-2, NY-ESO-1, TRAG-3, mCRP, MCP-1, MIP-1A, MIP-1B, MIF, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5, MUM-1/2, MUM-3, NCA66, NCA95, NCA90, 췌장암 뮤신(pancreatic cancer mucin), 태반 성장인자, p53, PLAGL2, 전립선 산성 포스파타제(prostatic acid phosphatase), PSA, PRAME, PSMA, P1GF, ILGF, ILGF-1R, IL-6, IL-25, RS5, RANTES, T101, SAGE, S100, 서바이빈(survivin), 서바이빈-2B, TAC, TAG-72, 테나신, TRAIL 수용체, TNF-알파, Tn-항원, 톰슨-프리덴라이히 항원, 종양 괴사 항원, VEGFR, ED-B 피브로넥틴, WT-1, 17-lA-항원, 보체인자 C3, C3a, C3b, C5a, C5, 혈관형성 마커(angiogenesis marker), bcl-2, bcl-6, Kras, cMET, 종양유전자 마커 및 종양유전자 생성물(예: Sensi, et al, Clin. Cancer Res.12 (2006) 5023-5032; Parmiani, et al, J. Immunol.178 (2007) 1975-1979; Novellino, et al, Cancer Immunol. Immunother.54 (2005) 187-207 참조). 본 명세서에 보고된 방법으로 얻은 접합체는, 예를 들어, 종양학적 질병(oncologic disease), 심장혈관계 질병, 전염병, 염증성 질환, 자가면역 질환, 대사(예: 내분비) 질환, 또는 신경(예: 신경변성) 질환의 치료를 위한 약의 조제에 사용될 수 있다. 이 질병들의 예시적인 비제한적 예로는 알츠하이머병, 비호지킨 림프종, B 세포 급성 및 만성 림프 백혈병, 버킷 림프종, 호지킨 림프종, 털세포 백혈병, 급성 및 만성 골수성 백혈병, T 세포 림프종 및 백혈병, 다발골수종, 신경아교종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 암종(예를 들어 구강, 위장관, 결장, 위, 폐관(pulmonary tract), 폐, 유방, 난소, 전립선, 자궁, 자궁내막, 자궁경부, 방광, 췌장, 뼈, 간, 담낭, 신장, 피부, 및 고환의 암종), 흑색종, 육종, 신경아교종, 및 피부암, 급성 특발 혈소판 감소성 자반증, 만성 특발 혈소판 감소성 자반증, 피부근염, 시덴함 무도병, 중증 근무력증, 전신 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 류마티스성 열, 다분비선 증후군, 수포성 유천포창, 진성 당뇨병, 헤노흐-쇤라인 자반증, 연쇄구균 감염 후 신장염(post-streptococcal nephritis), 결절 홍반, 타카야수 동맥염, 애디슨병, 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 사르코이드증, 궤양성 대장염, 다형 홍반, IgA 신장병증, 결절성 다발동맥염, 강직척추염, 굿파스처 증후군(Goodpasture's syndrome), 폐색성 혈전 혈관염, 쇼그렌 증후군, 원발성 담즙성 경화증, 하시모토 갑상선염, 갑상선 중독증, 피부경화증, 만성 활동 간염, 다발근육염/피부근육염, 다발연골염, 심상성 천포창, 베게너 육아종증, 막성 신장병증, 근위축성 측색 경화증, 척수매독, 거세포 동맥염/다발근육통증, 악성빈혈, 급속 진행성 사구체신염, 건선, 또는 섬유화 폐포염(fibrosing alveolitis)이 있다. 이 단백질들은 본 명세서에 참조로서 포함된 '소르테이스를 사용하는 효소 매개 폴리펩타이드 접합을 위한 신규 방법(Novel methods for enzyme mediated polypeptide conjugation using sortase)'이란 발명의 명칭의 WO2016096741로 공개된 PCT 출원에 상세하게 기술된다.
[0031] 다른 관점에서 항메소텔린 항체-PSA 접합체는 PSA와 접합시키기 위해 메소텔린에 반응하는 항체를 사용하여 만들어진다. 이 구체예들에서는 PSA 접합체를 만드는 데에 사용되는 항체가 다른 세포외 항원에 의해 은폐(masked)되지 않은 메소텔린의 에피토프를 인식하는 것이 바람직하다. 이 구체예들의 다른 관점에서 상기 항체-PSA 접합체는 췌장암, 난소암, 중피종 및 폐암과 같은 암으 치료 방법에서 사용된다. 이 단백질들은 본 명세서에 참조로서 포함된 '항메소텔린 항체 및 그의 용도(Anti-mesothelin antibodies and uses thereof)'란 발명의 명칭의 US 20150259433으로 공개된 미국 특허출원에 상세하게 기술된다.
[0032] 다른 관점에서는 효소 PSA 접합체를 만들기 위해 효소가 접합된다. 이 구체예들에서 PSA 접합체를 조제하는 데에 사용될 적합한 효소는 메탈로프로티네이스(metalloproteinase), 서브틸레이스(subtilase), 또는 리페이스(lipase), 트라이아실글리세롤 리페이스, 서브틸레이스, 메탈로프로티네이스, 콜린에스터레이스(cholinesterase), 아세틸콜린에스터레이스, 뷰틸콜린에스터레이스, 트립신, 서브틸리신(subtilisin), 서몰리신, 또는 CT, 콜린에스터레이스, 아세틸콜린에스터레이스, 뷰티릴콜린에스터레이스, 서브틸레이스, 서브틸리신, 서몰리신, 리페이스, 트라이아실글리세롤 리페이스, 메탈로프로티네이스, 키모트립신, -키모트립신, 또는 트립신을 포함하는 에스터레이스 그룹(esterase group)의 효소, 키모트립신-pDMAEMA(CT-pDMAEMA) 접합체, 메탈로프로티네이스-pOEGMA 접합체, 서몰리신-pOEGMA 접합체, 서브틸리신-이온성 액체(ionic liquid) 폴리머 접합체, 서브틸레이스-이온성 액체 폴리머 접합체, 또는 리페이스-pDMAA 접합체를 포함하는 에스터레이스-폴리머 접합체와 같은 효소 폴리머 접합체를 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 이 구체예들에서 효소-폴리머 접합체에 의해 촉매된(catalyzed) 화학 반응은, 예를 들어, 에스테르 교환 반응, 가수분해 반응, 거울상 이성질 선택적(enantioselective) 반응, 산화환원 반응, 산화환원 반응, 응축 반응, 폴리에스테르 합성 반응, 또는 펩타이드 합성 반응, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있다. 이 단백질들은 본 명세서에 참조로서 포함된 '비수성 효소-폴리머 접합체 용액 및 관련 방법(Non-aqueous enzyme-polymer conjugate solutions and related methods)'이란 발명의 명칭의 WO 2016130677로 공개된 PCT 출원에 상세하게 기술된다.
[0033] 다른 관점에서는 리간드-약물-PSA 접합체를 만들기 위해 리간드-약물 접합체가 접합된다. 이 구체예들에서 신규 PSA 접합체는 항체-약물 접합체로 만들어진다. 이 구체예들은 PSA 항체 접합체의 제조 및 용도를 포함하고, 여기에서 항체는 세포독성 제제와 같은 약물에 연결되도록 변형된다. 본 발명의 항체-약물 접합체를 위해 사용될 수 있는 구체적인 항체는 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 같은 항HER2 단클론 항체, 리툭시맙, 오파투무맙, 토시투모맙 및 이브리투모맙과 같은 항CD20 단클론 항체, 오레고보맙과 같은 항CA125 단클론 항체, 에드레콜로맙(edrecolomab)과 같은 항EpCAM(17-A1) 단클론 항체, 세툭시맙, 파니투무맙 및 니모투주맙과 같은 항EGFR 단클론 항체, 브렌툭시맙과 같은 항CD30 단클론 항체, 젬투주맙 및 huMy9-6과 같은 항CD33 단클론 항체, 에타라시주맙과 같은 항혈관(anti-vascular) 인테그린 알파-v β-3 단클론 항체, 5 알렘투주맙과 같은 항CD52 단클론 항체, 에프라투주맙과 같은 항CD22 단클론 항체, 라베투주맙과 같은 항CEA 단클론 항체, 비바투주맙과 같은 항CD44v6 단클론 항체, 시브로투주맙(sibrotuzumab)과 같은 항FAP 단클론 항체, huB4와 같은 항CD19 단클론 항체, huC242와 같은 항CanAg 단클론 항체, huN901과 같은 항CD56 단클론 항체, 다라투무맙과 같은 항CD38 단클론 항체, DS6과 같은 항CA6 단클론 항체 10, 식수투무맙(cixutumumab) 및 3B7과 같은 항IGF-IR 단클론 항체, CNTO 95와 같은 항인테그린 단클론 항체, 및 B-B4과 같은 항신데칸-1 단클론 항체를 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 특정 구체예에서는 IFN-a, IFN-f3, 및 IFN-y와 같은 인터페론, 트랜스페린, 표피 성장인자(EGF) 및 EGF 유사 도메인, 가스트린 분비 펩타이드(GRP), 혈소판 유래 성장인자(PDGF), 전환 성장인자(TGF), 우두(vaccinia) 성장인자(VGF), IGF-1 및 IGF-2와 같은 인슐린 및 인슐린 유사 성장인자(IGF), 갑상샘 자극 호르몬 분비 호르몬(TRH), 멜라닌세포 자극 30 호르몬(MSH), 스테로이드 호르몬(예를 들어 에스트로겐 및 안드로겐), 및 소마토스타틴과 같은 기타 적합한 호르몬을 포함하지만 이들에 제한되지 않는 리간드-약물 접합체를 위해 세포 결합 리간드로서 사용될 수 있는 항체 외에 결합 단백질; IL-2, IL-3, IL-4, 및 IL-6과 같은 림포카인; G-CSF, M-CSF 및 GM-CSF와 같은 집락자극인자(CSF); 봄베신; 가스트린; 및 엽산을 포함한다. PSA 접합체를 만들기 위해 사용된 이 항체들 또는 결합 단백질 접합체들은 본 명세서에 참조로서 포함된 '신규 친수성 링커 및 그의 리간드-약물 접합체(Novel hydrophilic linkers and ligand-drug conjugates thereof)'란 발명의 명칭의 WO2016147031로 공개된 PCT 출원에 상세하게 기술된다.
[0034] 다른 관점에서는 신규 항체 접합체를 제공하기 위해 PSA와 더 접합되는 항체 접합체를 만들기 위해 항체 접합체가 접합된다. 이 관점에 따른 구체예에서 PSA 접합체를 만드는 데에 사용되는 항체의 일반적인 예는 아브식시맙(abciximab), 리툭시맙, 바실릭시맙(basiliximab), 팔리비주맙, 인플릭시맙, 트라스투주맙, 알렘투주맙, 아달리무맙, 토시투모맙-1131, 세툭시맙, 이브리툭시맙 튜세탄(ibrituximab tiuxetan), 오말리주맙, 베바시주맙, 나탈리주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 에쿨리주맙, 서톨리주맙 페골, 골리무맙, 카나키누맙, 카투막소맙(catumaxomab), 우스테키누맙, 토실리주맙, 오파투무맙, 데노수맙, 벨리무맙, 이필리무맙 및 브렌툭시맙을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. PSA 접합체를 만들기 위해 사용된 이 항체들 또는 결합 단백질 접합체들은 본 명세서에 참조로서 포함된 'CD30 종양을 표적하기 위해 향상된 치료 지수를 가진 항체 접합체 및 항체 접합체의 치료 지수를 향상시키기 위한 방법(Antibody-conjugates with improved therapeutic index for targeting cd30 tumours and method for improving therapeutic index of antibody-conjugates)'이란 발명의 명칭의 WO2017137457로 공개된 PCT 출원에 상세하게 기술된다.
[0035] 다른 관점에서는 신규 항체 접합체를 제공하기 위해 항체-리파마이신(rifamycin) 접합체가 더 접합된다. PSA 접합체를 만들기 위해 사용된 이 항체들 또는 결합 단백질 접합체들은 본 명세서에 참조로서 포함된 '항체-리파마이신 접합체의 조제를 위한 절차(Process for the preparation of an antibody-rifamycin conjugate)'란 발명의 명칭의 WO2017152083로 공개된 PCT 출원에 상세하게 기술된다.
[0036] 특정 구체예에서는 항TIM3 접합체를 형성하기 위해 T 세포 Ig-1 및 뮤신 도메인 함유 분자 3(T cell Ig- and mucin-domain-containing molecule-3: Tim-3)에 반응하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 PSA와 접합된다. 뮤신 도메인 함유 분자 3(Tim-3)에 적합한 항체는 본 명세서에 참조로서 포함된 US2018016336에 기술된다. 다른 관점에서는 항TIM3/PSA 항체 접합체가 치료 방법에서 사용된다. 한 구체예에서 항TIM3/PSA 항체 접합체는 인간 T 세포 면역글로불린 및 뮤신 도메인 함유 3(TIM3)에 결합되고, 가용성 인간 TIM3에 결합되고, 박막 결합(membrane bound) 인간 TIM3에 결합되고, 그리고 T 세포 활성화를 유발하거나 증강시킨다. 다른 관점에서는 만들어진 항체 접합체가 방광암, 유방암, 자궁/자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 췌장암, 직장결장암, 대장암, 신장암, 두경부암, 폐암, 위암, 생식세포암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 중추신경계의 신생물, 림프종, 백혈병, 골수종, 육종, 및 바이러스 관련 암을 포함하는 종양 및 암의 성장을 억제하는 방법에서 사용된다.
[0037] 특정 구체예에서 단백질 트롬보스폰딘 1형 도메인 함유 7A(Thrombospondin Type-1 Domain-containing 7A: THSD7A)에 반응하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 항THSD7A 접합체를 형성한다. THSD7A에 적합한 항체는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017167770에 기술된다. 다른 관점에서는 만들어진 항체 접합체가 신장암, 전립선암, 갑상선암, 방광암, 식도암, 대장암 및 유방암을 포함하는 종양 및 암의 성장을 억제하는 방법에서 사용된다.
[0038] 다른 관점에서는 펩타이드-PSA 접합체를 만들기 위해 펩타이드 및 펩타이드 모방체(peptidomimetics)가 PSA와 접합된다. 특정 구체예에서 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2018015296에 기술된 상기 펩타이드 및 펩타이드 모방체는 특정 펩타이드-PSA 접합체를 만들기 위해 PSA와 접합된다. 접합체를 만들기 위해 사용되는 특정 단백질은 가용성 아밀로이드 전구물질 단백질 a(soluble amyloid precursor protein a: sAPPa)이다. 이 단백질은 GABABRIa 수용체에 결합할 수 있게 하는 특정한 결합 부위를 갖고, 그에 따라 GABABRIa의 스시(sushi) 도메인 1과의 특이 결합을 통해 작용 효과(agonistic effect)를 야기한다. 본 명세서에는 이 수용체를 활성화시킬 수 있는 PSA와 접합된 가용성 아밀로이드 전구물질 단백질 a(sAPPa)가 제공된다.
[0039] 또 다른 관점에서 수용체, 리간드, 제2 메신저 및 관련 단백질 및 화합물과 같은 조절 및 신호전달 경로에 수반되는 단백질, 폴리펩타이드 및 펩타이드는 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 접합된다. 특정 구체예에서는 E124 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 EI24 단백질 또는 그의 단편이 PSA와 접합된다. E124-PSA 접합체를 만들 때, SEQ ID NO:1(Met-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Thr-Phe-Leu-Gln-Asp-Leu-Ala-Arg-Gly-Ile-Lys-Asp-Ser-Ile-Trp-Gly-Ile-Cys-Thr-Ile-Ser-Lys-Leu-Asp-Ala-Arg-Ile-Gln-Gln-Lys-Arg-Glu-Glu-Gln-Arg-Arg-Arg-Arg-Ala-Ser-Ser-Val-Leu-Ala-Gln-Arg-Arg-Ala-Gln-Ser-Ile-Glu-Arg-Lys-Gln-Glu-Ser-Glu-Pro-Arg-Ile-Val-Ser-Arg-Ile-Phe-Gln-Cys-Cys-Ala-Trp-Asn-Gly-Gly-Val-Phe-Trp-Phe-Ser-Leu-Leu-Leu-Phe-Tyr-Arg-Val-Phe-Ile-Pro-Val-Leu-Gln-Ser-Val-Thr-Ala-Arg-Ile-Ile-Gly-Asp-Pro-Ser-Leu-His-Gly-Asp-Val-Trp-Ser-Trp-Leu-Glu-Phe-Phe-Leu-Thr-Ser-Ile-Phe-Ser-Ala-Leu-Trp-Val-Leu-Pro-Leu-Phe-Val-Leu-Ser-Lys-Val-Val-Asn-Ala-Ile-Trp-Phe-Gln-Asp-Ile-Ala-Asp-Leu-Ala-Phe-Glu-Val-Ser-Gly-Arg-Lys-Pro-His-Pro-Phe-Pro-Ser-Val-Ser-Lys-Ile-Ile-Ala-Asp-Met-Leu-Phe-Asn-Leu-Leu-Leu-Gln-Ala-Leu-Phe-Leu-Ile-Gln-Gly-Met-Phe-Val-Ser-Leu-Phe-Pro-Ile-His-Leu-Val-Gly-Gln-Leu-Val-Ser-Leu-Leu-His-Met-Ser-Leu-Leu-Tyr-Ser-Leu-Tyr-Cys-Phe-Glu-Tyr-Arg-Trp-Phe-Asn-Lys-Gly-Ile-Glu-Met-His-Gln-Arg-Leu-Ser-Asn-Ile-Glu-Arg-Asn-Trp-Pro-Tyr-Tyr-Phe-Gly-Phe-Gly-Leu-Pro-Leu-Ala-Phe-Leu-Thr-Ala-Met-Gln-Ser-Ser-Tyr-Ile-Ile-Ser-Gly-Cys-Leu-Phe-Ser-Ile-Leu-Phe-Pro-Leu-Phe-Ile-Ile-Ser-Ala-Asn-Glu-Ala-Lys-Thr-Pro-Gly-Lys-Ala-Tyr-Leu-Phe-Gln-Leu-Arg-Leu-Phe-Ser-Leu-Val-Val-Phe-Leu-Ser-Asn-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Thr-Val-Tyr-Leu-Gln-Ser-Ala-Leu-Ser-Ser-Ser-Thr-Ser-Ala-Glu-Lys-Phe-Pro-Ser-Pro-His-Pro-Ser-Pro-Ala-Lys-Leu-Lys-Ala-Thr-Ala-Gly-HIS)에 따른 인간 E124 단백질의 전장(full-length)의 폴리펩타이드, 단편, 또는 변종이 사용될 수 있다. 또다른 관점에서는 E124-PSA 접합체가 암 또는 그와 같은 것을 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 구체예에서 치료되는 암의 구체적인, 그런나 비제한적인 유형은 유방암, 자궁경부암, 백혈병, 위암, 육종, 간암, 폐암, 직장결장암, 및 신장암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 EI24 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 US20180028605에 더 상세하게 기술된다.
[0040] 다른 관점에서 면역체계, 알레르기 반응, 및 알레르기의 조절에 수반되는 단백질 및 펩타이드, 그리고 관련 단백질 및 화합물은 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 접합된다. 일부 구체예에서는 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 PRUNUS PERSICA의 PRU P 3 알레르기항원으로부터 유래된 펩타이드가 접합된다. Pru p 3 단백질 및 그의 변종의 다양한 영역으로부터 개발된 아미노산 서열 Ala-Ser-Ser-Asn-Gly-lle-Arg-Asn-Val-Asn-Asn-Leu-Ala-Arg-Thr-Pro-Asp-Arg-Gln-Ala-Cys(SEQ ID NO:2)가 Pru p 3 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 사용된다. 또다른 관점에서 상기 Pru p 3 단백질-PSA 접합체는 알레르기 치료를 포함하는 면역 질환을 치료하는 방법에서 사용된다. 상기 Pru p 3 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017051049에 더 상세하게 기술된다.
[0041] 다른 관점에서는 종양 괴사인자 수용체(TNF)에 결합 가능한 단백질 및 펩타이드, 그리고 관련 단백질 및 화합물이 TNF 결합 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 접합된다. 특정 구체예에서 종양 괴사인자 수용체(TNF)에 결합 가능한 이 단백질들은 SEQ ID NO:3(V-P-A-Q-W-F-P-R-S-I-P-E-P-S-N-L-C-Q-P-R-E-Y-Y-D-E-R-A-Q-R-R-C-S-Q-C-P-P-G-C-R-A-K-S-F-C-N-E-T-S-D-T-V-C-V-P-C-E-D-S-T-Y-T-Q-L-W-N-W-L-P-E-C-L-S-C-G-S-R-C-S-T-G-Q-V-E-T-Q-A-C-T-L-K-Q-N-R-I-C-T-C-E-P-G-R-Y-C-I-L-P-R-Q-E-G-C-Q-V-C-G-L-L-R-K-C-P-P-G-F-G-V-A-K-P-G-T-A-T-S-N-W-C-A)에 따른 아미노산 서열 또는 그의 변종을 포함하는 수용체 또는 결합 분자이다. 이는 Mukai et al. in Science Signaling 3(148):ra83)에 기술된 바와 같이 인간 TNFR p80 아이소형(isoform)의 CDR2 및 CDR3 결합 도메인으로부터 예측된 CDR2 및 CDR3 TNF 결합 도메인을 포함하는 말(equine) TNFR p80 폴리펩타이드의 절단된(truncated) 세포외 도메인을 나타낸다. 다른 관점에서는 TNF 결합 단백질-PSA 접합체가 알레르기 또는 면역 질환을 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 구체예에서 TNF 결합 단백질-PSA 접합체를 사용하여 치료되는 면역 장애는 염증 매개 질환, 만성 염증성 질환, 면역 매개 다발성 관절염, 류마티스 관절염, 골관절염, 다발성 관절염, 급성 특발 관절염, 건선성 관절염과 같은 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 궤양성 대장염, 건선, 전신 혈관염(systemic vasculitis), 아토피 피부염, 울혈성 심부전, 난치성 포도막염(refractory uveitis), 기관지 천식, 알레르기 질환, 패혈증, 쇼크, 진성 당뇨병, 및 알츠하이머병, 파킨슨병, 뇌졸중 및 근위축성 측색 경화증과 같은 신경변성 질환을 포함하는 TNF로 매개되는 질환이다. PSA와 접합된 TNF 결합 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2016119023에 더 상세하게 기술된다.
[0042] 다른 관점에서는 에리트로포이에틴 수용체(EPOR)에 결합 가능한 단백질 및 펩타이드 그리고 관련 단백질 및 화합물이 EPOE 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 접합된다. 특정 구체예에서는 본 명세서에 제공된 EPOE 단백질-PSA 접합체가 EPO/EPOR 신호전달 경로를 차단 또는 억제하는 데에 사용되고, 특히 암, 더 구체적으로는 간세포암(hepatocellular carcinoma)을 치료하는 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 EPOR 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017219951에 더 구체적으로 기술된다.
[0043] 다른 관점에서는 PSA에 접합된 또다른 신규 화합물을 형성하기 위해 비단백질 화합물이 PSA와 접합된다. 또 다른 관점에서는 이 비단백질 화합물 PSA 접합체가 본 명세서에 제공된 특정한 제제(formulations) 또는 치료 방법을 위해 특정한 단백질 또는 펩타이드 -PSA 접합체와 조합될 수 있다.
[0044] 다른 구체예 군에서는 p38 억제제 PSA 접합체를 만들기 위해 p38 감마 단백질의 세포내 발현을 억제할 수 있는 화합물이 접합된다. 이 화합물은 특정 구체예에 있는 암 치료를 포함하는 치료 방법에서 다른 비단백질 화합물 PSA 접합체와 함께 단백질 또는 펩타이드 PSA 접합체를 사용할 수 있다. 이 구체예들이 만들어진 이유이자 특히 효과적인 암의 비제한적인 한 특정 유형은 감암의 치료를 위한 것이다.
[0045] 특정 구체예에서 p38 감마 단백질의 세포내 발현을 억제할 수 있는 화합물은 SEQ ID NO:4(Y-G-R-K-K-R-R-Q-R-R-R-A-R-V-P-K-E-T-A-L)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드이다. 상기 화합물은 암 및 그 외에 질병의 치료를 위한 제제에서 신규이거나 신규가 아닌 다른 화합물과 함께 조합될 수 있다. 예를 들어 상기의 펩타이드는 특정 구체예에 따라 PSA 접합체이거나 그가 아닐 수 있는 다른 화합물을 선택적으로 포함할 수 있는 제제에 사용되는 PSA 접합체를 형성하는 데에 사용된다. 신규 PSA 접합체를 만드는 데에 적합한 특정 화합물들은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2016198698로 공개된 PCT 출원에 기술된다.
[0046] 다른 관점에서 CCIO로 칭해지는 Clar Cell 10kDa 단백질은 CCIO 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 접합된다. 특정 구체예에서 본 명세서에 제공된 CCIO 단백질-PSA 접합체는 바이러스 감염, 특히 A형 인플루엔자, H1N1 인플루엔자, 및 에볼라 출혈열(EHF)로 알려져 있는 에볼라 바이러스 병(EVD)를 포함하는 인플루엔자 감염을 치료하는 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 CCIO 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2016133560으로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0047] 다른 관점에서는 쿠닌(Kunin) 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 가용성 재조합 단백질 M1형 쿠닌 폴리펩타이드가 접합된다. 이 관점에 따른 특정 구체예에서 가용성 재조합 P-셀렉틴 단백질이 신규 쿠닌 단백질 PSA 접합체를 형성하기 위해 사용된다. 또 다른 관점에서 이 신규 쿠닌 단백질 PSA 접합체는 제제 및 치료 방법, 특히 자궁내막증의 치료를 위해 사용된다. PSA와 접합된 가용성 재조합 단백질 M1형 쿠닌 단백질 폴리펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 CN106146669로 공개된 Guo, Sunwei et al.의 중국 특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0048] 다른 관점에서는 서양 뒤영벌(Bombus terrestris) 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 서양 뒤영벌 유충 유래 폴리펩타이드가 접합된다. 또 다른 관점에서는 이 신규 서양 뒤영벌 단백질-PSA 접합체가 특히 발기기능장애 및 동맥경화증의 치료 및/또는 예방을 포함하는, 제제 및 치료 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 서양 뒤영벌 유충 유래 폴리펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 KR20150073932로 공개된 Ahn Mi Young AC et al.의 한국 특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0049] 다른 관점에서는 JAMA-A 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 JAMA-A로 칭해지는 연접 부착(junctional adhesion) 분자 단백질이 접합된다. 신규 JAMA-A PSA 접합체는 면역 장애 치료 방법에서 사용된다. 특정 구체예에서는 본 명세서에 제공된 JAMA-A 단백질-PSA 접합체가 관절염 치료 방법, 그리고 특히 류마티스 관절염(RA)의 치료 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 JAMA-A 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 CN105125548로 공개된 Li Meizhang, et al.의 중국 특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0050] 다른 관점에서는 TIPE2 단백질-PSA 접합체를 만들기 위해 TIPE2로 칭해지는 종양 괴사인자-알파 유발 단백질 8 유사-2(tumor necrosis factor-alpha induced protein 8 like-2)가 접합된다. 신규 TIPE2 PSA 접합체는 면역조절 또는 면역 장애 치료 방법에서 사용될 수 있다. 특정 구체예에서는 본 명세서에 제공된 TIPE2 단백질-PSA 접합체가 급성 폐 손상과 합병증이 일어난 내독소 패혈증을 치료한느 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 TIPE2 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 CN105126106으로 공개된 Tao Zhen Gang, et al.의 중국 특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0051] 다른 관점에서는 점액 투과성(mucus-penetrating) 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 점액 투과성 펩타이드가 PSA에 접합되고, 상기 점액 투과성 펩타이드 PSA 접합체는 점막 투과가 증강된 비강내 전달을 통한 치료 화합물의 투과 및 전달을 증강시키기 위해 다른 화합물과 함께 사용될 수 있다. 이 구체예들에서는 PSA 접합체를 형성하기 위해 일반적으로 5 내지 10 아미노산의 펩타이드가 사용될 수 있고, 그리고 많은 구체예들에서는 펩타이드의 길이가 약 6 내지 8 아미노산이다. 신규 점액 투과성 펩타이드 PSA 접합체는 비강내 전달이 바람직한 다양한 치료 방법에서 사용될 수 있다. PSA와 접합된 점액 투과성 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2018013907로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0052] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 신규 글루카곤 수용체 유사체 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 글루카곤 수용체 선택(selective) 유사체 및 그의 펩타이드 유도체가 PSA에 접합된다. 이 구체예들에서는 PSA 접합체를 형성하기 위해 일반적으로 5개 내지 15개의 아미노산의 펩타이드가 사용될 수 있고, 많은 구체예들에서는 펩타이드의 길이가 약 7 내지 10 아미노산이고, 그리고 많은 구체예들에서는 신규 PSA 접합체를 형성하기 위해 9개의 아미노산을 가진 펩타이드가 사용된다. 또다른 관점에서는 본 명세서에 제공된 신규 글루카곤 수용체 유사체 펩타이드 PSA 접합체가 특히 비만증 및 당뇨병의 치료 방법을 포함하는 대사 질환의 치료 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 특정 글루카곤-수용체 선택 유사체 및 펩타이드 유도체는 본 명세서에 참조로서 포함된 US2018009871로 공개된 미국특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0053] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 신규 펩타이드 기반 치료제 PSA 접합체를 만들기 위해 펩타이드 기반 치료제가 PSA에 접합된다. 이 구체예들에서 사용되는 펩타이드의 비제한적인 예는 SEQ ID NO:5(Arg-Pro-Met-Arg-Leu-Glu-Ser-Phe-Ser-Ala-Cys-Ile-Trp-Val-Lys-Ala-Thr-Asp-Val-Leu-Asn-Lys-Thr-Ile-Leu-Phe-Ser-Tyr-Gly-Thr-Lys-Arg-Asn-Pro-Tyr-Glu-Ile), 및 SEQ ID NO:6(Gly-Gly-Gly-Phe-Asp-Glu-Thr-Leu-Ala-Phe-Ser-Gly-Arg-Leu-Thr-Gly-Phe-Asn-Ile-Trp-Asp-Ser-Val-Leu-Ser-Asn-Glu-Glu-Ile-Arg-Glu-Thr-Gly-Gly-Ala-Glu-Ser-Cys-His-Ile)을 포함한다. 또 다른 관점에서는 PSA에 접합된 신규 펩타이드 기반 치료제가 암, 특정한 구체예에서는 유방암, 폐암, 식도암, 및 상피암을 치료하는 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 특정 펩타이드-기반 치료제는 본 명세서에 참조로서 포함된 US20180002400으로 공개된 미국특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0054] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 신규 항타우(anti-Tau) 항체 PSA 접합체를 만들기 위해 타우 단백질 에피토프에 결합되는 항체가 PSA에 접합된다. 이 관점의 특정 구체예에서는 신규 PSA 접합된 항체가 병리적 유형의 타우 단백질을 선택적으로 인식한다. 특정 구체예에서는 일반 타우에 비해 병리적 유형의 타우 단백질에 대해 더 높은 친화성을 부여하는 특정 에피토프는 다음으로부터 선택되는 병리적 유형 타우 단백질 내에서 발생하는 아미노산 서열을 포함한다: SEQ ID NO:7(K-H-Q-P-G-G-G), SEQ ID NO:8(K-H-V-P-G-G-G), SEQ ID NO:9(H-H-K-P-G-G-G), 및 SEQ ID NO:10(T-H-V-P-G-G-G). 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 신규 항타우 항체 PSA 접합체가 알츠하이머병 및 다른 형태의 치매를 치료 및 예방하는 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 특정 항체 및 바람직한 에피토프는 본 명세서에 참조로서 포함된 AU2017272259로 공개된 호주특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0055] 다른 관점에서는 증강된 항균 또는 다른 치료 성질을 갖는 신규 알파 나선 항균 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 알파 나선 항균 펩타이드 GV가 PSA에 접합된다. 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 신규 항균 펩타이드 접합체가 치료, 특히 세균성 감염의 치료 방법에서 사용된다. PSA와 접합된 특정 알파 나선 항균 펩타이드 GV 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 CN106366162로 공개된 중국특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0056] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 신규 폴리펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 미세기포 변형 및 GBM 표적(다형성 교아종 표적)을 위한 폴리펩타이드가 PSA에 접합된다. 이 관점의 특정한 구체예에서는 미세기포 변형을 위한 적합한 폴리펩타이드가 N 말단에서부터 C 말단으로의 순서로 배치된 친지질성 도메인, 세포사멸 도메인 및 종양 표적 도메인을 포함하고, 상기 종양 표적 도메인은 친지질성 도메인 및 세포사멸 도메인 사이에 연결된 저밀도 A 지질단백질 펩타이드 모방체 펩타이드이고, 그리고 세포사멸 도메인 및 종양 표적 도메인 사이는 유연한 연결 펩타이드에 의해 연결된다. PSA와 접합된 미세기포 변형 및 GBM 표적을 위한 폴리펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 CN106632688로 공개된 Ren Jinghua et al.의 중국특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0057] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 신규 PEDF 유래 폴리펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 근육 또는 힘줄 재생 또는 혈관 생성을 촉진시키기 위한 PEDF 유래 펩타이드/폴리펩타이드가 PSA에 접합된다. 근육 또는 힘줄 재생을 촉진시키기 위한 PEDF 유래 펩타이드/폴리펩타이드는 합성일 수 있고, 그리고 적어도 20 아미노산의 길이, 약 29 내지 30 아미노산의 길이를 포함하는 다양한 길이이거나, 또는 그렇지 않으면 그가 일반적으로, 하지만 항상 그렇지는 않은, 5 내지 50 아미노산의 길이를 갖도록 아미노산을 더 또는 적게 갖는다. PSA와 접합된 근육 또는 힘줄 재생 또는 혈관 생성을 촉진시키기 위한 PEDF 유래 폴리펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 JP2017165745로 공개된 Tsao Yeou-Ping et al.의 일본특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0058] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 신규 SERCA 칼슘 펌프 활성화 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 SERCA 칼슘 펌프의 활성을 촉진시키기 위한 펩타이드가 PSA에 접합된다. 이 구체예들에 적합한 펩타이드는 다음을 포함한다: M-A-E-K-E-S-T-S-P-H-L-M-V-P-I-L-L-L-V-G-W-I-V-G-C-I-I-V-I-Y-I-V-F-F(SEQ ID NO:11), M-A-E-K-A-E-S-T-S-P-H-L-M-V-P-I-L-L-L-V-G-W-I-V-G-C-I-I-V-I-Y-I-V-F-F(SEQ ID NO:12), M-A-E-K-E-S-T-S-P-H-L-I-V-P-I-L-L-L-V-G-W-I-V-G-C-I-I-V-I-Y-I-V-F-F(SEQ ID NO:13), 및 M-A-E-K-A-E-S-T-S-P-H-L-I-V-P-I-L-L-L-V-G-W-I-V-G-C-I-I-V-I-Y-I-V-F-F(SEQ ID NO:14). 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 SERCA 칼슘 펌프의 활성을 촉진시키기 위한 펩타이드의 신규 PSA 접합체가 치료 방법, 특히 심장 및 심장혈관 질환을 치료하는 방법에서 사용된다. SERCA 칼슘 펌프의 활성을 촉진시키기 위한 특정 폴리펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 US20170298107A1로 공개된 미국특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0059] 다른 관점에서는 중추 신경계 손상 치료를 포함하는 증강된 신경치료 성질을 갖는 신규 신경치료 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 흥분(excitatory) 신경독성 관련 손상을 위한 치료 펩타이드가 PSA에 접합된다. 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 하나의 특정 펩타이드는 Y-E-K-L-L-D-T-E-I(SEQ ID NO:15)의 아미노산 서열 또는 그의 기능적 변종을 갖는다. 신규 접합체의 조제에 사용되는 흥분 신경독성 관련 손상에 용이한 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017185249로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0060] 다른 관점에서는 PSA 접합체를 만들기 위해 SALL4 펩타이드가 사용된다. 이 구체예들에서는 결합되었을 때 SALL4-RBBp4 상호작용을 차단시키는 신규 펩타이드 접합체를 형성하기 위해 망막모세포종 결합 단백질 4(RBBp4)와 결합하는 치료 텝타이드가 PSA와 접합된다. 또 다른 관점에서는 망막모세포종의 치료를 위해 개발되고 본 명세서에서 기술되는 신규 펩타이드 PSA 접합체를 사용하는 방법의 구체예를 포함하여, SALL4의 조절곤란에 의해 매개되는 질환을 갖는 대상을 치료하기 위한 방법 또한 제공된다. 신규 접합체의 조제에서 사용되는 망막모세포종 결합 단백질 4(RBBp4)과의 결합에 적합한 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017190032로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0061] 다른 관점에서는 증강된 투과성 및 다른 치료 성질을 갖는 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 NFKB 필수 조절자(NFKB essential modulator: NEMO) 결합 도메인 CARGO 서열과 연결되는 펩타이드 접합체가 사용된다. 또 다른 관점에서는 포도막염 또는 안구건조증이 있는 대성을 치료하기 위한 방법 또한 제공된다. 신규 접합체의 조제에서 사용되는 적합합 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017189826으로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0062] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 글루카곤 유사 펩타이드 1(GLP-1) 수용체 펩타이드 및 유사체 펩타이드와 연결된 펩타이드 접합체가 사용된다. 특정 신규 GLP-1 펩타이드-PSA 접합체를 만들기 위해 서열 H-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Y-L-D-S-R-R-A-Q-D-F-V-Q-W-L-M-N-T(SEQ ID NO:16) 및 그의 변종을 갖는 GLP-1과 유사성을 갖는 펩타이드가 사용된다. 이 펩타이드들의 특정 구체예에서는 30번 또는 말단 아미노산(일반적으로 C 말단)이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드로 대체된다: E-E-P-S-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO: 17); E-P-S-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:18); G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:19); G-G-P-S-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:20); G-P-S-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:21); K-R-N-K-N-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:22); K-R-N-K-N-P-P-S-OH(SEQ ID NO:23); K-R-N-K-P-P-I-A--OH(SEQ ID NO:24); K-R-N-K-P-P-P-A-OH(SEQ ID NO:25); K-R-N-K-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:26); K-S-S-G-K-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:27); P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:28); PK-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:29); P-K-S-K-A-P-P-P-S-NH2(SEQ ID NO:30); P-K-S-K-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:31); P-K-S-K-E-P-P-P-S-NH2(SEQ ID NO:32); P-K-S-K-E-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:33); P-K-S-K-Q-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:34); P-K-S-K-S-P-P-P-S-NH2(SEQ ID NO:35); P-K-S-K-S-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:36); P-R-N-K-N-N-P-P-S-OH(SEQ ID NO:37); P-S-K-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:38); P-S-S-G-A-P-P-P-S-E-OH(SEQ ID NO:39); P-S-S-G-A-P-P-P-S-NH2(SEQ ID NO:40); P-S-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:41); P-S-S-G-A-P-P-P-S-S-OH(SEQ ID NO:42); P-S-S-G-E-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:43); P-S-S-G-K-K-P-P-S-OH(SEQ ID NO:44); P-S-S-G-K-P-P-P-S-NH2(SEQ ID NO:45); P-S-S-G-K-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:46); P-S-S-G-S-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:47); P-S-S-K-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:48); P-S-S-K-E-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:49); P-S-S-K-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:50); P-S-S-K-Q-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:51); P-S-S-K-S-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:52); S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:53); 및 S-S-G-A-P-P-P-S-OH(SEQ ID NO:54). 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 신규 GLP-1 펩타이드-PSA 접합체가 당뇨병을 포함하는 다양한 대사 질환을 치료하는 데에 사용된다. 신규 GLP-1 PSA 및 관련 접합체의 조제에 사용되는 다른 적합한 펩타이드는 모두 본 명세서에 참조로서 포함된 미국특허번호 제10,010,614호, 미국특허번호 제9,982,029호, 미국특허번호 제9,839,692호, 미국특허번호 제9,988,430호, 미국특허번호 제7,067,488호, 및 WO2017200944로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0063] 또 다른 관련 관점에서는 향상된 그리고 바람직한 제제 및 전달 특성을 갖는 신규 GLP-1 및 GLP-1 유사체 폴리시알화된 화합물이 본 명세서에서 제공된다. 특정 구체예에서는 본 명세서에서 제공되는 GLP-1 및 GLP-1 유사체 폴리시알화된 화합물 및 제제가 향상된 비강내 전달 능력을 갖는다. 다른 관련 관점에서는 비폴리시알화된 GLP-1 및 GLP-1 유사체에 비해 신규 및/또는 향상된 치료 용도를 갖는 신규 GLP-1 및 GLP-1 유사체 폴리시알화된 화합물이 본 명세서에서 제공된다.
[0064] 또 다른 관련 관점에서 특정 구체예는 특정 조직 및 세포 유형에서 폴리시알화된 GLP-1 및 GLP-1 유사체의 효과와 함께 폴리시알산 모이어티의 효과의 결과로서 상승작용을 보이는 것으로 생각된다. 예를 들어 한 관점의 폴리시알산 또는 PSA 모이어티는 그 자체가 특정 신경 조직에서는 소염 성질을 갖는 것으로 보고되었다.
[0065] 따라서 본 명세서의 다른 구체예에서는 본 명세서에서 제공되는 신경 장애 또는 질환의 치료에 용이한 다른 폴리시알화된 화합물과 조합하여 또는 이와 함께 소염제로서 PSA를 사용하는 신경 장애(예: 신경변성)의 치료 방법이 제공된다. 특정 구체예에서 치료되는 예시적인 신경변성 질환은 근위축성 측색 경화증(ALS), 알츠하이머병, 인지장애, 탈수초 질환, 변성 망막 질환(degenerative retinal diseases), 루이체 치매, 파킨슨병, 사건수면, 당뇨신경병증(예: 망막병증), 또는 다발성 경화증을 포함한다. 적합한 폴리시알산은 본 명세서에 참조로서 포함된 Newmann rt al.의 "폴리시알산 및 신경변성 및 신경염증성 장애의 치료 용도(Polysialic acid and use for treatment of neurodegenerative and neuroinflammatory disorders)"라는 명칭의 국제특허출원 PCT/EP2014/055445에 기술되어 있다.
[0066] 특정 구체예에서는, 예를 들어, 파킨슨병의 치료에 용이한 폴리시알화된 엑스텐다타이드 화합물이 제공된다. 한 보고서에서는 엑스텐다인-4(Extendine-4)/엑스텐다타이드이 파킨슨병의 잠재적인 치료제로서 연구되었다. 본 명세서에 참조로서 포함된 Aviles-Olmo, I., et al.의 Extendatide and the treatment of patients with Parkinson's disease, J. Clin Invest., 3013, 123(6):2730-2736.doi:10.1172/JC168295 참조.
[0067] 다른 관점에서 본 명세서에서 제공되는 특정 구체예는 소염제로서 그리고 염증과 연관된 질병 및 장애의 치료를 위해 폴리시알산 화합물만을 포함하거나 또는 이를 포함하여 구성되는 제제를 사용한다. 따라서 일부 구체예는 치료 화합물과 공유결합으로 연결된 폴리시알산 또는 치료 화합물과 함께 폴리시알산을 사용하는 반면, 다른 구체예는 다른 치료 화합물 없이 폴리시알산 화합물을 사용한다.
[0068] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 인간 표피 성장인자 수용체(HER) 과발현 암의 치료에 용이한 펩타이드 DNA 접합체가 사용된다. 특정 구체예에서는 신규 PSA 접합체를 형성하기 위해 하나 이상의 인간 표피 성장인자 수용체(HER) 결합 펩타이드, 링커, 및 단일가닥 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 펩타이드-폴리뉴클레오타이드 키메라가 사용된다. 또 다른 관점에서는 신규 (HER) 결합 키메라 PSA 접합체가 암, 특히 인간 표피 성장인자 수용체를 과발현하는 암을 치료하는 방법에서 사용된다. 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 다른 적합한 펩타이드 및 화합물은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017200787로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0069] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 암을 치료하기 위한 항미생물 펩타이드 TP4가 사용된다. 신규 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 아미노산 서열 F-I-H-H-I-I-G-G-L-F-S-A-G-K-A-I-H-R-L-I-R-R-R-R-R(SEQ ID NO:55) 또는 그의 변종을 갖는 TP4 펩타이드가 사용된다. 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 TP4 PSA 접합체가 예를 들어 악성, MDR 암, 재발암 또는 전이암, 또는 삼중 음성 유방암(TNBC)을 포함하는 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법에서 사용된다. 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 다른 적합한 펩타이드 및 화합물은 본 명세서에 참조로서 포함된 TW201725048로 공개된 대만특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0070] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 폴리오 유사 키네이스 1 폴로 박스 도메인(polo box domain)의 펩타이드 및 모방 결합 작용제가 사용된다. 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 폴리오 유사 키네이스 1 폴로 박스 도메인 PSA 접합체가 다음을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법에서 사용된다: 급성 림프모구백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신 피질 암종(Adrenocortical Carcinoma), 기저세포 암종, 방광암, 골암, 뇌종양, 유방암, 자궁경부암, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 골수증식성 장애, 대장암, 직장결장암, 피부 T 세포 림프종, 식도암, 유잉 종양 가족(Ewing Family of Tumors), 망막모세포종, 위암, 위장관 종양, 신경아교종, 두경부암, 간세포(간)암, 호지킨 림프종, 도세포(Islet Cell) 종양(내분비 췌장), 신장(신장세포)암, 후두암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 림프종, 수모세포종, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 신장암, 직장암, 및 갑상선암. 이 관점에 따른 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 특정 적합한 펩타이드 및 화합물은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017082924로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0071] 다른 관점에서는 증강된 성질을 갖는 PSA 접합체를 만들기 위해 칼시토닌 유전자 관련 펩타이드(CGRP)에 특이적인 단백질이 사용된다. 특정 구체예에서는 본 명세서의 PSA 접합체를 만들기 위해 CGRP를 결합시키는 hNGAL 뮤테인이 사용된다. 또 다른 관점에서는 신규 CGRP 결합 폴리펩타이드 PSA 접합체가 편두통 및 관련 질환의 치료와 같은 치료 방법에서 사용된다. 이 관점에 따른 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 적합한 CGRP 결합 폴리펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 TW201725212로 공개된 대만특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0072] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 PSA 접합체를 만들기 위해 허혈 및 허혈 재관류 손상의 치료 및/또는 예방을 위한 펩타이드가 사용된다. 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 신규 허혈 및 허혈 재관류 손상 펩타이드 PSA 접합체가 허혈 및 허혈 재관류 손상 및 관련 질환의 치료 방법에서 사용된다. 이 관점에 따른 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 특정 펩타이드 변종 및 화합물은 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017117381로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0073] 다른 관점에서는 신규 PSA 펩타이드 접합체를 형성하기 위해 혈뇌장벽 건너 면역글로불린의 전달에 도움을 주기 위한 펩타이드가 사용된다. 본 관점에 따른 특정 구체예에서는 혈뇌장벽 건너 면역글로불린의 전달에 도움을 주기 위한 펩타이드가 링커 모이어티에 공유결합으로 부착되고, 혈뇌장벽 작용물질(agent)에 공유결합으로 부착된 면역글로불린 친화성 리간드를 갖는다. 이 구체예들에서 적합한 혈뇌장벽 작용물질은 서열 L-R-V-R-L-A-S-H-L-R-K-L-R-K-R-L-L-R-D-A(SEQ ID NO:56), 또는 하나 또는 두 개의 보존성 아미노산 치환을 같는 이의 변종을 갖는 펩타이드를 포함한다. 이 관점에 따른 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 혈뇌장벽 건너 면역글로불린의 전달에 도움을 주기 위한 특정 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 US20170058017A1로 공개된 미국특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0074] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 PSA 접합체를 만들기 위해 텔로머레이스 전위(translocation)의 펩타이드 억제제가 사용된다. 이 관점에 따른 특정 구체예에서는 텔로머레이스 전위의 적합한 펩타이드 억제제가 R-R-R-G-G-Xj-A-S-R-S-L-P-L-P-K-R-P-R-R, 또는 이의 변종을 포함하고, 여기서 Xi는 아스파르트산(SEQ ID:57) 및 글루타민산(SEQ ID:58)으로 이루어진 군으로부터 선택된 인산화모방(phosphomimetic) 잔기이다. 이 구체예들의 다른 관점에서는 화학 요법제를 투여받는 대상에서 심장 또는 혈관 독성을 치료하기 위한 조성물 및 방법에서 텔로머레이스 전위의 펩타이드 억제제와 접합된 신규 PSA를 사용하는 것이 제공되고, 상기 심장 또는 혈관 독성은 상기 화학 요법제의 투여와 연관된 것이다. 이 관점에 따른 신규 PSA 접합체의 조제에 사용되는 텔로머레이스 전위의 펩타이드 억제제는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017040309로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0075] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 PSA 접합체를 만들기 위해 신체의 세포 또는 조직으로의 치료 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 전달을 위한 세포 침투(cell-penetrating) 접합체에 관련된 조성물 및 방법이 사용된다. 이 관점에 따른 특정 구체예에서는 적합한 세포 침투 전달 접합체가 세포 침투 펩타이드, 핵 위치 신호, 작동체 모이어티, 및 선택적으로 에피토프 태그를 갖고, 이들은 함께 본 명세서에 제공되는 신규 PSA 접합체를 만들기 위해 사용되는 화합물을 형성한다. 이 관점에 따른 적합한 세포 침투 펩타이드는 HIV TAT 단백질 또는 단백질 형질도입 도메인을 포함하는 이의 단편, 초파리 안테나피디아(Drosophila Antennapedia)(Antp) 펩타이드, 및 폴리아르기닌(Arg8) 펩타이드를 비제한적으로 포함한다. 또 다른 관점에서는 이 신규 접합체가 다양한 치료제를 전달하기 위한 조성물 및 방법에서 사용된다. 이 관점에 따른 세포 침투 접합체는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017048466으로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0076] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 PSA 접합체를 만들기 위해 HIV 융합단백질을 표적하는 폴리펩타이드가 사용된다. 이 관점에 따른 적합한 HIV 융합 표적 폴리펩타이드는 3개의 활성 도메인을 포함하고, 여기에서 제1 도메인은 항CD4 애드넥틴(Adnectin) 단백질이고, 제2 도메인은 gp41 결합 모이어티이고 그리고 제3 도메인은 HIV 융합 펩타이드 억제제 모이어티이다. 또 다른 관점에서는 HIV 융합단백질을 표적하는 폴리펩타이드의 신규 PSA 접합체가 HIV 및 관련 바이러스 감염 및 관련 질환을 치료하는 데에 사용된다. 이 관점에 따른 HIV 융합 표적 폴리펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2016171980으로 공개된 PCT 출원에 더 상세하게 기술된다.
[0077] 다른 관점에서는 신규 암 표적 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 암성 세포를 귀소(home), 그에 분배되고, 표적하고, 그에 유도되고(directed), 그에 축적되고, 그에 이주하고, 그리고/또는 그에 결합하는 펩타이드가 사용된다. 또 다른 관점에서는 암성 세포를 귀소, 그에 분배되고, 표적하고, 그에 유도되고, 그에 축적되고, 그에 이주하고, 그리고/또는 그에 결합하는 펩타이드의 PSA 접합체가 암 및 관련 질환을 치료하기 위한 방법 및 제제에 사용된다. 특정 구체예에서는 본 명세서의 펩타이드가 AU2016283391에 기재된 서열을 포함할 수 있다. 접합체에 사용하기 위한 다른 적합한 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 "치료 펩타이드 및 그의 사용 방법(Therapeutic peptides and methods of use thereof)"이라는 명칭의 AU2016283391(A1)로 공개된 호주특허출원에 상세하게 기술된다.
[0078] 다른 관점에서는 신규 PSA 접합체를 만들기 위해 카르복실 말단 펩타이드 및 지속성 인터페론이 사용된다. 적합한 신규 카르복실 말단 펩타이드는 아미노산 서열 S-S-G-S-S-S-S-S-S-S-K-A-P-P-P-S-L-P-S-P-S-R-L-P-G-P-S-D-T-P-I-L-P-Q-N-G-S(SEQ ID NO:59), 또는 이의 변종을 갖는다. PSA 접합체를 만드는 데에 사용하기에 적합한 다른 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 CN106397570으로 공개된 중국특허출원에 더 상세하게 기술된다.
[0079] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질을 갖는 신규 인테그린 결합 펩타이드 PSA 접합체를 만들기 위해 인테그린 결합 펩타이드가 PSA에 접합된다. 이 관점의 특정 구체예에서 바람직한 인테그린 결합 펩타이드는 아미노산 서열 VGDLTYLK(SEQ ID NO:60) 및 VGDLTYLKK(SEQ ID NO:61)를 갖는다. 또 다른 관점에서는 본 명세서에서 제공되는 신규 인테그린 결합 펩타이드 PSA 접합체가 암, 면역 질환, 자가면역 질환, 만성 섬유증, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 폐공기증, 방사선 유발 폐섬유증, 및 만성 상처 피부병(chronic wounding skin disease)을 포함하는 질병 및 장애의 치료 방법에서 사용된다. 특정 구체예에서는 본 명세서에 제공되는 신규 인테그린 결합 펩타이드 PSA 접합체가 다음의 암을 치료하는 데에 사용된다: 췌장암, 유방암, 직장결장암, 전립선암, 구강 편평세포 암종. PSA와 접합되는 특정 인테그린 결합 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 WO2017218569로 공개된 PCT 출원에 더 기술된다.
[0080] 다른 관점에서는 신규 PSA 접합체가 뮤라밀(muramyl) 펩타이드에 결합 가능한 항체, 결합 단백질, 또는 항원 결합 단편을 사용하여 만들어지고, 바람직하게는 상기 뮤라밀 펩타이드가 뮤라민산 및 알라닌, 아이소글루타민, 글루타민산, 또는 이들의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. 또 다른 관점에서는 뮤라밀 펩타이드 또는 유도체 또는 유사체를 결합시키는 항체 또는 그와 같은 것의 신규 PSA 접합체는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는 것을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 치료 방법에서 사용된다. PSA 접합체를 만드는 데에 용이한 다른 적합한 항체는 본 명세서에 참조로서 포함된 US2017342136으로 공개된 미국특허출원에 상세하게 기술된다.
[0081] 다른 관점에서는 증강된 항신생물 활성, 투과 및 다른 치료 성질을 갖는 PSA 접합체를 만들기 위해 종양 괴사인자 관련 세포자멸사 유발 리간드(TRAIL)를 사용하여 신규 PSA 접합체가 만들어진다. PSA 접합체를 만드는 데에 용이한 적합한 펩타이드 및 단백질은 본 명세서에 참조로서 포함된 US2017247427로 공개된 미국특허출원에 상세하게 기술된다.
[0082] 다른 관점에서는 치료 성질을 갖는 PSA 접합체를 만들기 위해 북장전복(haliotis discus hannai abalone) 내장으로부터 분리된 소염 펩타이드(anti-inflammatory peptide)를 사용하여 신규 PSA 접합체가 만들어진다. 특정 관점에서는 만들어진 신규 PSA 접합체가 염증성 및 면역계 질병 및 장애의 치료에 사용될 수 있다. PSA 접합체를 만드는 데에 용이한 적합한 펩타이드는 본 명세서에 참조로서 포함된 Qian Zhongji의 CN10544010으로 공개된 중국특허출원에 상세하게 기술된다.
[0083] 다른 관점에서는 증강된 치료 성질 또는 다른 바람직한 특성을 갖는 신규 접합체를 만들기 위해 펩타이드 독소를 사용하여 신규 PSA 접합체가 만들어진다. 신규 PSA-독소 접합체를 형성하기 위해 PSA에 접합하는 데에 적합한 펩타이드 독소는 보툴리눔 독소(A 및 B) 및 코노톡신(예: α, δ, κ, μ, ω, 지코노타이드(Ziconotide), 레코노타이드(Leconotide) 등)을 포함한다. 적합한 보툴리눔 신경독은 모두 본 명세서에 참조로서 포함된 미국특허번호 제7,780,967호, 미국특허번호 제7,758,873호, 미국특허번호 제9,220,783호, 및 미국특허번호 제9,598,685호에 기술된다. 보툴리눔 신경독의 생물학적 활성을 확인하기 위한 방법은 본 명세서에 참조로서 포함된 미국특허번호 제9,212,355호에 기술된다. 보통 물고기를 먹는 바다 달팽이에서 발견되는 합성 ω-코노톡신 MVIIA로 보고된 레코노타이드는 PSA 펩타이드 접합체를 만드는 데에 특히 적합한 코노톡신이다. 지코노타이드는 PSA 펩타이드 접합체를 만드는 데에 특히 적합한 또 다른 코노톡신이고, 그리고 이는 모두 본 명세서에 참조로서 포함된 McGivern, J., Neuropsychiatric Dis. Treat., 2007, 3(I), 69-85 및 미국특허번호 제7,524,812호에 기술된다. PSA 접합체를 만드는 데에 사용하기 적합한 지코노타이드 펩타이드 서열은 SEQ ID NO:62(C-K-G-K-G-A-K-C-S-R-L-M-Y-D-C-C-T-G-S-C-R-S-G-K-C) 및 이의 유사체를 포함한다.
[0084] 다른 관점에서는 치료 성질 또는 다른 바람직한 특성을 갖는 PSA 펩타이드 접합체를 만들기 위해 칸나비노이드를 사용하여 신규 PSA 접합체가 만들어진다. 적합한 칸나비노이드는 테트라하이드로칸나비놀(THC), 테트라하이드로칸나비놀산(THCA), 칸나비디올(CBD), 칸나비디올산(CBDA), 칸나비놀(CBN), 칸나비게롤(CBG), 칸나비크로멘(CBC), 칸나비사이클롤(cannabicyclol)(CBL), 칸나비바린(CBV), 테트라하이드로칸나비바린(THCV), 칸나비디바린(CBDV), 칸나미크로메바린(CBCV), 칸나비게로바린(CBGV), 칸나비게롤 모노메틸에테르(CBGM), 칸나비엘소인(CBE), 칸나비시트란(CBT)을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서는 카나비노이드-PSA 접합체가 본 명세서에서 제공되고 그리고 비만증, 식욕부진, 구토(emesis), 통증, 신경병성 동통, 다발성 경화증, 신경 보호, 염증, 암, 파킨슨병, 헌팅턴 무도병, 투렛 증후군, 알츠하이머병, 간질, 양극성장애, 정신분열병, 외상후 스트레스 장애(PTSD), 우울증, 불안, 및 불면증과 같은 질환, 질병, 또는 장애를 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 구체예에서는 본 명세서에서 제공되는 PSA-칸나비노이드가, 예를 들어 용해될 수 있도록, 물과 비수용액 구성요소(예: 오일, 지질, 지방산 등)를 갖는 실질적으로 비수용성의 제제로 제제화된다.
[0085] 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체가 질병의 중증도를, 예를 들어, 최소 10%, 최소 15%, 최소 20%, 최소 25%, 최소 30%, 최소 35%, 최소 40%, 최소 45%, 최소 50%, 최소 55%, 최소 60%, 최소 65%, 최소 70%, 최소 75%, 최소 80%, 최소 85%, 최소 90% 또는 최소 95% 감소시킨다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체가 종양의 크기를, 예를 들어, 약 5% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 100%, 약 40% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 80%, 또는 약 60% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 70%, 또는 약 50% 내지 약 70% 감소시킨다.
[0086] 본 명세서에 개시된 약학적 조성물은 개체에게 통상적인 투여가 가능하게 하기에 충분한 양의 PSA-단백질 접합체를 포함할 수 있다. 이 구체예의 관점에서는 본 명세서에 개시된 약학적 조성물이, 예를 들어, 최소 5mg, 최소 10mg, 최소 15mg, 최소 20mg, 최소 25mg, 최소 30mg, 최소 35mg, 최소 40mg, 최소 45mg, 최소 50mg, 최소 55mg, 최소 60mg, 최소 65mg, 최소 70mg, 최소 75mg, 최소 80mg, 최소 85mg, 최소 90mg, 최소 95mg, 최소 100mg, 최소 200mg, 최소 300mg, 최소 400mg, 최소 500mg, 최소 600mg, 최소 700mg, 최소 800mg, 최소 900mg, 최소 1g, 최소 2g, 최소 3g, 최소 4g, 최소 5g, 최소 6g, 최소 7g, 최소 8g, 최소 9g, 최소 10g, 최소 15g, 최소 20g, 최소 25g, 최소 50g, 최소 100g의 PSA-단백질 접합체일 수 있다.
[0087] 이 구체예의 관점에서는 본 명세서에 개시된 약학적 조성물이, 예를 들어, 최소 5mg, 최소 10mg, 최소 20mg, 최소 25mg, 최소 50mg, 최소 75mg, 최소 100mg, 최소 200mg, 최소 300mg, 최소 400mg, 최소 500mg, 최소 600mg, 최소 700mg, 최소 800mg, 최소 900mg, 최소 1g, 최소 2g, 최소 3g, 최소 4g, 최소 5g, 최소 6g, 최소 7g, 최소 8g, 최소 9g, 최소 10g, 최소 15g, 최소 20g, 최소 25g, 최소 50g, 최소 100g의 PSA-단백질 접합체일 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 약학적 조성물이, 예를 들어, 약 5mg 내지 약 100mg, 약 10mg 내지 약 100mg, 약 50mg 내지 약 150mg, 약 100mg 내지 약 250mg, 약 150mg 내지 약 350mg, 약 250mg 내지 약 500mg, 약 350mg 내지 약 600mg, 약 500mg 내지 약 750mg, 약 600mg 내지 약 900mg, 약 750mg 내지 약 1,000mg, 약 850mg 내지 약 1,200mg, 약 250mg 내지 약 10g, 약 500mg 내지 약 7.5g, 약 1g 내지 약 5g, 약 250mg 내지 약 2.5g, 약 500mg 내지 약 2.5g, 또는 약 1,000mg 내지 약 1,500mg의 범위 내에 있을 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 약학적 조성물이, 예를 들어, 약 10mg 내지 약 250mg, 약 10mg 내지 약 500mg, 약 10mg 내지 약 750mg, 약 10mg 내지 약 1,000mg, 약 10mg 내지 약 1,500mg, 약 50mg 내지 약 250mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 50mg 내지 약 750mg, 약 50mg 내지 약 1,000mg, 약 50mg 내지 약 1,500mg, 약 100mg 내지 약 250mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 750mg, 약 100mg 내지 약 1,000mg, 약 100mg 내지 약 1,500mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 750mg, 약 200mg 내지 약 1,000mg, 약 200mg 내지 약 1,500mg, 약 5mg 내지 약 1,500mg, 약 5mg 내지 약 1,000mg, 또는 약 5mg 내지 약 250mg의 범위 내에 있을 수 있다.
[0088] 본 명세서에 개시된 약학적 조성물에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 최종 농도는 바람직한 어느 농도라도 될 수 있다. 이 구체예의 한 관점에서 약학적 조성물에서 PSA-단백질 접합체의 최종 농도는 치료적으로 효과적인 양일 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 약학적 조성물에서 PSA-단백질 접합체의 최종 농도가, 예를 들어, 최소 0.00001mg/mL, 최소 0.0001mg/mL, 최소 0.001mg/mL, 최소 0.01mg/mL, 최소 0.1mg/mL, 최소 1mg/mL, 최소 10mg/mL, 최소 25mg/mL, 최소 50mg/mL, 최소 100mg/mL, 최소 200mg/mL, 최소 500mg/mL, 최소 700mg/mL, 최소 1,000mg/mL, 또는 최소 1,200mg/mL일 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 용액에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 농도가, 예를 들어, 최대 1,000mg/mL, 최대 1,100mg/mL, 최대 1,200mg/mL, 최대 1,300mg/mL, 최대 1,400mg/mL, 최대 1,500mg/mL, 최대 2,000mg/mL, 최대 2,000mg/mL, 또는 최대 3,000mg/mL일 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 약학적 조성물에서 PSA-단백질 접합체의 최종 농도가, 예를 들어, 약 0.00001mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 0.0001mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 0.01mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 0.1mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 1mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 250mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 750mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 1,000mg/mL 내지 약 3,000mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 2,000mg/mL, 약 250mg/mL 내지 약 2,000mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 2,000mg/mL, 약 750mg/mL 내지 약 2,000mg/mL, 약 1,000mg/mL 내지 약 2,000mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 1,500mg/mL, 약 250mg/mL 내지 약 1,500mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 1,500mg/mL, 약 750mg/mL 내지 약 1,500mg/mL, 약 1,000mg/mL 내지 약 1,500mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 1,200mg/mL, 약 250mg/mL 내지 약 1,200mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 1,200mg/mL, 약 750mg/mL 내지 약 1,200mg/mL, 약 1,000mg/mL 내지 약 1,200mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 250mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 750mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 750mg/mL, 약 250mg/mL 내지 약 750mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 750mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 500mg/mL, 약 250mg/mL 내지 약 500mg/mL, 약 0.00001mg/mL 내지 약 0.0001mg/mL, 약 0.00001mg/mL 내지 약 0.001mg/mL, 약 0.00001mg/mL 내지 약 0.01mg/mL, 약 0.00001mg/mL 내지 약 0.1mg/mL, 약 0.00001mg/mL 내지 약 1mg/mL, 약 0.001mg/mL 내지 약 0.01mg/mL, 약 0.001mg/mL 내지 약 0.1mg/mL, 약 0.001mg/mL 내지 약 1mg/mL, 약 0.001mg/mL 내지 약 10mg/mL, 또는 약 0.001mg/mL 내지 약 100mg/mL의 범위 내일 수 있다.
[0089] 본 명세서의 일부 관점은 질병을 앓는 개체를 치료하는 것을 개시한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "치료하다(treating)"는 개체에서 질병의 임상 증상을 감소시키거나 제거, 또는 개체에서 질병의 임상 증상의 발현을 지연시키거나 예방하는 것을 의미한다. 예를 들어 용어 "치료하다"는 질환의 증상, 또는 질병의 중증도를, 예를 들어, 최소 20%, 최소 25%, 최소 30%, 최소 35%, 최소 40%, 최소 45%, 최소 50%, 최소 55%, 최소 60%, 최소 65%, 최소 70%, 최소 75%, 최소 80%, 최소 85%, 최소 90%, 최소 95%, 또는 최소 100% 감소시키는 것을 의미할 수 있다. 당업계의 숙련자라면 특정한 질병과 연관된 올바른 증상 또는 지표를 알 것이고 그리고 개체가 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체를 사용하는 치료의 후보인지를 결정하는 방법을 알고 있을 것이다.
[0090] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양은 질병과 연관된 증상을, 예를 들어, 최소 10%, 최소 15%, 최소 20%, 최소 25%, 최소 30%, 최소 35%, 최소 40%, 최소 45%, 최소 50%, 최소 55%, 최소 60%, 최소 65%, 최소 70%, 최소 75%, 최소 80%, 최소 85%, 최소 90%, 최소 95% 또는 최소 100% 감소시킨다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양이 질병과 연관된 증상을, 예를 들어, 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25%, 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45%, 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90%, 최대 95% 또는 최대 100% 감소시킨다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양이 질병과 연관된 증상을, 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 60%, 또는 약 30% 내지 약 50% 감소시킨다.
[0091] 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양이 일반적으로 약 0.001mg/kg/day 내지 약 100mg/kg/day의 범위 내에 있다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 효과적인 양은, 예를 들어, 최소 0.001mg/kg/day, 최소 0.01mg/kg/day, 최소 0.1mg/kg/day, 최소 1.0mg/kg/day, 최소 5.0mg/kg/day, 최소 10mg/kg/day, 최소 15mg/kg/day, 최소 20mg/kg/day, 최소 25mg/kg/day, 최소 30mg/kg/day, 최소 35mg/kg/day, 최소 40mg/kg/day, 최소 45mg/kg/day, 또는 최소 50mg/kg/day일 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 효과적인 양은, 예를 들어, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 15mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 20mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 25mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 30mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 35mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 40mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 45mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 50mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 75mg/kg/day, 또는 약 0.001mg/kg/day 내지 약 100mg/kg/day 범위 내에 있을 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 효과적인 양은, 예를 들어, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 15mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 20mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 25mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 30mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 35mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 40mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 45mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 50mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 75mg/kg/day, 또는 약 0.01mg/kg/day 내지 약 100mg/kg/day 범위 내에 있을 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 효과적인 양은, 예를 들어, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 15mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 20mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 25mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 30mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 35mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 40mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 45mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 50mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 75mg/kg/day, 또는 약 0.1mg/kg/day 내지 약 100mg/kg/day 범위 내에 있을 수 있다.
[0092] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양은, 예를 들어, 약 1mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 15mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 20mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 25mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 30mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 35mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 40mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 45mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 50mg/kg/day, 약 1mg/kg/day 내지 약 75mg/kg/day, 또는 약 1mg/kg/day 내지 약 100mg/kg/day 범위 내에 있을 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양은, 예를 들어, 약 5mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 15mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 20mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 25mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 30mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 35mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 40mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 45mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 50mg/kg/day, 약 5mg/kg/day 내지 약 75mg/kg/day, 또는 약 5mg/kg/day 내지 약 100mg/kg/day 범위 내에 있을 수 있다.
[0093] 액체 및 반고체 제제에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 농도가 일반적으로 약 50mg/mL 내지 약 1,000mg/mL 사이일 수 있다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양은, 예를 들어, 약 50mg/mL 내지 약 100mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 200mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 300mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 400mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 500mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 600mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 700mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 800mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 900mg/mL, 약 50mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 200mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 300mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 400mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 500mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 600mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 700mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 800mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 900mg/mL, 약 100mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 300mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 400mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 500mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 600mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 700mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 800mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 900mg/mL, 약 200mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 300mg/mL 내지 약 400mg/mL, 약 300mg/mL 내지 약 500mg/mL, 약 300mg/mL 내지 약 600mg/mL, 약 300mg/mL 내지 약 700mg/mL, 약 300mg/mL 내지 약 800mg/mL, 약 300mg/mL 내지 약 900mg/mL, 약 300mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 400mg/mL 내지 약 500mg/mL, 약 400mg/mL 내지 약 600mg/mL, 약 400mg/mL 내지 약 700mg/mL, 약 400mg/mL 내지 약 800mg/mL, 약 400mg/mL 내지 약 900mg/mL, 약 400mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 600mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 700mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 800mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 900mg/mL, 약 500mg/mL 내지 약 1,000mg/mL, 약 600mg/mL 내지 약 700mg/mL, 약 600mg/mL 내지 약 800mg/mL, 약 600mg/mL 내지 약 900mg/mL, 또는 약 600mg/mL 내지 약 1,000mg/mL일 수 있다.
[0094] 투여량(dosing)은 일회량(single dosage) 또는 누적량(cumulative)(일련(serial)의 투여량)일 수 있고, 그리고 당업계의 숙련자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 예를 들어 질병의 치료는 본 명세서에 개시된 약학적 조성물의 효과량의 1회 투여를 포함할 수 있다. 대안적으로는 질병의 치료가 한 기간에 걸쳐 약학적 조성물의 효과량의 다회 투여, 예를 들어 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회, 2일 1회, 또는 1주 1회 투여를 포함할 수 있다. 투여 시기는 개체의 증상의 중증도와 같은 요인들에 따라 개체마다 차이가 있을 수 있다. 예를 들어 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체를 포함하는 약학적 조성물의 효과량은 무기한적으로(indifinite period of time), 또는 개체가 더 이상 치료를 필요로 하지 않을 때까지 개체에게 1일 1회 투여될 수 있다. 당업계의 통상의 기술자는 개체의 상태가 치료 과정 동안 모니터될 수 있고 그리고 그에 따라 투여되고 있는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체를 포함하는 약학적 조성물의 효과적인 양이 조정될 수 있다는 것을 알 것이다.
[0095] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체는 암이 있는 개체에서 동일한 치료를 받지 않는 환자에 비해 질병의 중증도를, 예를 들어, 최소 10%, 최소 15%, 최소 20%, 최소 25%, 최소 30%, 최소 35%, 최소 40%, 최소 45%, 최소 50%, 최소 55%, 최소 60%, 최소 65%, 최소 70%, 최소 75%, 최소 80%, 최소 85%, 최소 90% 또는 최소 95% 감소시킬 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 PSA-단백질 접합체가 암이 있는 개체에서 동일한 치료를 받지 않는 환자에 비해 질병의 중증도를, 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 100%, 약 40% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 80%, or 약 60% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 70%, 또는 약 50% 내지 약 70% 감소시킬 수 있다.
[0096] 다른 구체예에서는 PSA-단백질 접합체 및 그의 유도체가 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 1주, 2주, 3주, 4주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월 또는 그 이상의 반감기를 갖는다.
[0097] 한 구체예에서 PSA-단백질 접합체의 투여 기간은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 또는 그 이상이다. 다른 구체예에서는 투여가 중단되는 기간이 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 또는 그 이상이다.
[0098] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양은 개체의 질병의 중증도를, 예를 들어, 최소 10%, 최소 15%, 최소 20%, 최소 25%, 최소 30%, 최소 35%, 최소 40%, 최소 45%, 최소 50%, 최소 55%, 최소 60%, 최소 65%, 최소 70%, 최소 75%, 최소 80%, 최소 85%, 최소 90%, 최소 95% 또는 최소 100% 감소시키거나 또는 유지시킨다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양이 개체의 질병의 중증도를, 예를 들어, 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25%, 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45%, 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90%, 최대 95% 또는 최대 100% 감소시키거나 또는 유지시킨다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 PSA-단백질 접합체의 치료적으로 효과적인 양이 개체의 질병의 중증도를, 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 60%, 또는 약 30% 내지 약 50% 감소시키거나 또는 유지시킨다.
[0099] 약학적 조성물 또는 PSA-단백질 접합체가 개체에게 투여된다. 개체는 일반적으로 사람이지만, 길들어짐과 상관 없이 개, 고양이, 새, 가축, 말, 양, 염소, 파충류 및 그 외 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 동물일 수 있다. 일반적으로 치료 후보인 개체는 질병이 양성이든 악성이든 개체가 앓는 질병을 위한 어떤 형태의 치료의 후보이다. 암에 있어서 가장 흔한 유형의 암은 방광암, 유방암, 결장 및 직장암, 자궁내막암, 신장암, 간암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-홋킨스(non-Hodgkins) 림프종, 췌장암, 전립선암, 위암 및 갑상선암을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 수술전(pre-operative) 평가는 일반적으로 통상적인 병력 및 신체검사에 더하여 시술의 모든 관련 유해 및 유익(risks and benefits)을 안내하는 철저한 사전 동의(informed consent)를 포함한다.
강글리오사이드(Gangliosides)
[00100] 본 발명의 구체예에서는 강글리오사이드가 수용성 폴리머, 예를 들어 PEG 또는 PSA 또는 mPSA에 접합된다. 강글리오사이드는 세포 인식(cellular recognition) 및 세포간 소통에서 역할할 수 있는 특징적(distinguishing) 표면 마커를 세포에 제공하는 것으로 알려져 있다. 이는 치료제로서 유용하다.
[00101] 본 발명의 접합체는 강글리오사이드 및 수용성 폴리머를 포함할 수 있고, 여기서 강글리오사이드는 당 사슬에 연결된 하나 이상의 시알산을 갖는 글리코스핑고리피드(glycosphingolipid)(세라마이드 및 올리고당)를 포함한다. 강글리오사이드는 분자에 시알산 유닛이 몇 개 있는가에 따라서 분류될 수 있다. 강글리오사이드의 예로는 GM1, GM2 및 GM3(모노시알로강글리오사이드), GD1a, GD1b, GD2 및 GD3(디시알로강글리오사이드), GT1b(트리시알로강글리오사이드) 및 GQ1(테트라시알로강글리오사이드)이 있다.
[00102] 본 발명에서의 용도를 위해서 바람직한 강글리오사이드는 글루코스에 연결된 세라마이드를 포함하고, 이는 제1 갈락토스에 연결되고, 이는 N-아세틸갈락토사민에 연결되고, 이는 제2 갈락토스에 연결된다. 제2 갈락토스는 한 시알산에 연결될 수 있다. 제1 갈락토스는 1, 2, 3 또는 4개의 시알산에 연결될 수 있다. 시알산은 모노머(각 갈락토스 분자에 하나씩)로서, 또는 올리고시알산(2-4 시알산)으로서 제1 갈락토스에 연결될 수 있다.
[00103] 투여되었을 때 강글리오사이드는 오래 동안 혈액에서 순환되어야 한다. 그의 활성이 표적 세포에 더 효과적이도록 강글리오사이드는, 예를 들어, 본 발명의 방법으로 폴리시알화될 수 있다.
약물 전달 시스템
[00104] 본 발명의 다른 구체예에서는 약물 전달 시스템이 수용성 폴리머, 예를 들어 PEG 또는 PSA 또는 mPSA에 접합된다. 보통 약물 전달 시스템(drug delivery system: DDS)은 실체(entity)와 연관된 약물의 운명(fate) 및 효과를 제어할 수 있는 어느 분자 또는 미립자 실체이다. DDS는 두 개의 보편적인 유형으로 나눠질 수 있다. 제1 유형은 고분자(MDDS), 예를 들어 항체, 네오글리코단백질(neoglycoproteins) 뿐만 아니라, 폴리(하이드록시프로필메타크릴아미드), 폴리라이신 및 중합된(polymerised) 알킬 시아노아크릴레이트와 같은 합성 폴리머를 포함한다. 약물이 원하는 부위를 표적하도록 단클론 항체를 포함하여, 다양한 유형의 고분자 운반체와 약물의 연관성은 예를 들어 Nature 265, 407-411(1977)에 Gregoriadis에 의해 기술된다. 제2 유형은 미립자 DDS(PDDS)이고, 이는 예를 들어 나노구(nanospheres) 또는 미세구(microspheres)를 포함하고, 이는 알부민과 같은 생물분해성 물질 또는 덱스트란 및 알킬시아노아크릴레이트 폴리머와 같은 반생물분해성(semibiodegradable) 물질, 또는 비이온 계면활성제 또는 리포솜으로 형성된 소포(vesicles)를 포함한다. 더 상세한 사항은 예를 들어 NIPS, 4, 146-151(1989)의 Gregoriadis 참조.
[00105] 약물은 DDS에 공유결합으로 연결되거나, 또는 그 안에 수동적으로 포착(entrapped)될 수 있다. 예를 들어 계면활성제 소포 또는 리포솜을 포함하는 PDDS는 올바른 조합의 계면활성제 증 또는 지질 분자로 형성됨으로서 친수성 또는 소수성 약학적 활성 화합물을 포착할 수 있다. 약학적 활성 화합물은, 예를 들어 활성 화합물이 그의 기능을 수행하기 전 또는 후에 신체 내에서 용해되거나 되지 않는 결합에 의해, MDDS에 공유결합으로 보통 연결된다.
[00106] 많은 MDD는 표적 세포 또는 조직의 표면 상의 수용체를 통해 표적 세포 또는 조직에 의해 인식될 수 있는 내인성(예: 항체) 또는 획득(예: 네오글리코단백질) 능력을 갖는다. 일반적으로 그러한 DDS는 주사되었을 때 표적에 의해 특이적으로 흡수된다(taken up). 그러나 특이적 흡수(uptake)는 DDS의 배부분이 다른, 상관없는(치료에 있어서) 조직에 의해 흡수되어 제한된다. 이는 항체 및 다른 DDS 단백질(표적에 대한 그의 특이성과는 상관없이)이, 다른 단백질과 같이, 그의 생물학적 수명 끝에서 이화(catabolized)되어야 하기 때문이다.
[00107] 고분자 유형 MDDS에 사용되는 합성 폴리먼는 예를 들어 폴리(하이드록시프로필메타그릴아미드) 폴리라이신 및 중합된 알킬 시아노아크릴레이트이다. 이들은 세망내피계(RES) 또는 적절한 라이소솜 효소에 의해 다른 조직에서 이화될 수 있다. 그러한 생분해성 고분자 유형 DDS의 이화작용 속도를 어떠한 수단을 사용하여 감소시키는 것, 예를 들어 RES 또는 다른 조직에 의한 DDS의 흡수를 감소시키는 것, 또는 RES에 의해 흡수되었을 때 라이소솜 효소에 의한 분해를 감소시키는 것이 바람직하다.
[00108] 미립자 DDS(PDDS)는 원칙적으로 RES에 의해 순환으로부터 제거된다. RES에 대한 성향 때문에 PDDS는 보통 이 조직들에 약물을 전달하는 데에 사용된다. 그러나 흔히 PDDS가 RES의 것 외에 조직으로 유도되는 것이 바람직하다. 이 목적을 달성하기 위해서는 RES의 PDDS 가로채기(interception)를 차단하거나 지연시켜야 한다.
[00109] 본 발명에서의 용도를 위한 DDS는 처음에는 글리콘을 함유하지 않을 수 있다. 한 선택지는 글리콘을 DDS에 추가하거나 또는 다른 방법으로 DDS 구조 내에 편입시키는 것이다. 그러한 경우의 예시는 리포솜이 만노실화된(mannosylated) 또는 갈락토실화된(galactosylated) 지질을 편입시키는 것이다. 이 글리코리포솜들은 활성이 각자 만노스 또는 갈락토스 수용체를 발현하는 조직을 표적하게 한다.
[00110] 예를 들어 표적 조직에 의한 흡수가 더 효과적이도록 DDS가 혈액에서 오래 동안 순환할 필요가 있을 때(간 실질세포와 같이), 이는 본 발명의 방법에 의해 이롭게 폴리시알화된다.
[00111] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 약학적 조성물이 유효성분을 약학적으로 허용 가능한 조성물로 처리하는 과정을 가능하게 하는 약학적으로 허용 가능한 운반체를 선택적으로 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "약학적으로 허용 가능한 운반체(pharmacologically-acceptable carrier)"는 "약학적 운반체"와 동의어이며, 투여되었을 때 실질적으로 장기 또는 영구적인 악영향이 없는 어느 운반체를 의미하고 그리고 "약학적으로 허용 가능한 매개체, 안정제, 희석제, 첨가체, 보조제 또는 부형제"와 같은 용어를 아우른다. 그러한 운반체는 일반적으로 활성 화합물과 혼합되거나 또는 활성 화합물을 희석 또는 둘러싸는(enclose) 것이 허용되고, 그리고 고체, 반고체, 또는 액체 제제일 수 있다. 유효성분은 가용성이거나 또는 바람직한 운반체 또는 희석제에 현탁액으로서 전달될 수 있는 것으로 이해된다. 다음을 포함하는, 하지만 이들에 제한되지는 않는, 다양한 약학적으로 허용 가능한 운반체 중 어느 것이라도 사용될 수 있다: 비제한적으로 물, 식염수, 글리신, 히알루론산 등과 같은 수성 매체; 비제한적으로 만니톨, 락토스, 녹말, 스테아린산 마그네슘, 사카린 나트륨, 탤컴, 셀룰로스, 글루코스, 수크로스, 탄산 마그네슘 등과 같은 고체 운반체; 용매; 분산매; 코팅(coatings); 항균 및 항진균 제제; 등장성 및 흡수 지연제; 또는 어느 다른 비활성 성분. 약학적으로 허용 가능한 운반체의 선택은 투여 방법에 따라 결정될 수 있다. 어느 약학적으로 허용 가능한 운반체가 유효성분과 부적합한 경우를 제외하고는 그를 약학적으로 허용 가능한 조성물에 사용하는 것이 고려된다. 그러한 약학적 운반체의 구체적인 용도의 비제한적 예시는 Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7th ed.1999); REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20th ed. 2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics(Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001); 및 Handbook of Pharmaceutical Excipients(Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4th edition 2003)에서 찾을 수 있다. 이 프로토콜들은 통상적인 절차이고 그리고 어느 변형이라도 본 명세서의 당업계의 숙련자 및 교시의 범위 내에 있다.
[00112] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 약학적 조성물이 완충제, 보존제, 긴장도 조절제(tonicity adjusters), 염, 항산화제, 삼투압 조절제, 생리적 물질(physiological substance), 약리학적 물질(pharmacological substances), 증량제(bulking agnet), 유화제, 습윤제, 향미료, 착색제 등을 비제한적으로 포함하는 다른 약학적으로 허용 가능한 구성요소(또는 약학적 구성요소)를 선택적으로 포함할 수 있다. 한 구체예에서는 결과적으로 조제되는 제제가 약학적으로 허용 가능하다면 다양한 완충제 및 pH 조절 수단이 본 명세서에 개시된 약학적 조성물을 조제하는 데에 사용될 수 있다. 그러한 완충제는 비제한적으로 아세트산염 완충제, 구연산염 완충제, 인산염 완충제, 중화 식염수 및 붕산염 완충제를 포함한다. 필요에 따라서는 조성물의 pH를 조절하기 위해 산 또는 염기가 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 한 구체예에서는 약학적으로 허용 가능한 항산화제가 비제한적으로 메타중아황산나트륨, 티오황산나트륨, 아세틸시스테인, 뷰틸화 하이드록시아니솔(butylated hydroxyanisole) 및 뷰틸화 하이드록시톨루엔을 포함한다. 유용한 보존제는 비제한적으로 염화 벤즈알코늄, 클로로부탄올, 티메로살, 아세트산페닐수은(phenylmercuric acetate), 페닐질산수은(phenylmercuric nitrate), 예를 들어 DTPA 또는 DTPA-비스아미드(DTPA-bisamide), 칼슘 DTPA, 및 CaNaDTPA-비스아미드와 같은 안정 옥시클로로 조성물 및 킬란트(stabilized oxy chloro composition and chelants)를 포함한다. 한 구체예에서는 약학적 조성물에 유용한 긴장도 조절제가 비제한적으로 예를 들어 염화나트륨, 염화칼륨과 같은 염, 만니톨 또는 글리세린 및 그 외 약학적으로 허용 가능한 긴장도 조절제를 포함한다. 한 구체예에서는 상기 약학적 조성물이 염으로서 제공될 수 있고 그리고 염산, 황산, 아세트산, 젖산, 탈타르산, 말산, 숙신산 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 많은 산과 함께 형성될 수 있다. 염은 그와 일치하는 유리 염기 형태보다 수성 또는 다른 양자성(protonic) 용매에서 더 용해성이 있다. 이들과 약리학 분야에 알려진 다른 물질들이 약학적 조성물에 포함될 수 있는 것으로 이해된다.
[00113] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 치료 화합물(예: PSA-단백질 접합체), 또는 그러한 치료 화합물을 포함하는 조성물이 국소, 장관 또는 비경구 투여 경로를 사용하는 국소 또는 전신 전달을 위해 제제화될 수 있다. 추가적인 구체예에서는 본 명세서에 개시된 치료 화합물 그 자체로만 약학적 조성물로 제제화되거나, 또는 단일 약학적 조성물에서 본 명세서에 개시된 하나 이상의 다른 치료 화합물과 함께 제제화될 수 있다.
[00114] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 치료 화합물, 또는 그러한 치료 화합물의 조성물 제제가 흡입성 제제로 만들어질 수 있다. 한 구체예에서는 장관 또는 비경구 투여에 적합한 흡입성 제제가 비제한적으로 에어로졸, 건조분말을 포함한다. 추가적인 구체예에서 그러한 투여를 위해 의도된 본 명세서에 개시된 치료 화합물 또는 조성물은 약학적 조성물의 생산을 위해 당업계에 알려진 어느 방법에 따라서 조제될 수 있다.
[00115] 한 구체예에서는 그러한 흡입성 투여 제형, 치료 화합물이 가압 투여량 흡입기(pressurised dose inhaler:PDI) 또는 다른 정량 흡입기(metered dose inhaler: MDI) 용도로 액체 분사제의 에어로졸로서 전달을 위해 조제될 수 있다. 한 구체예에서는 PDI 또는 MDI에 사용하기에 적합한 분사제가 비제한적으로 CFC-12, HFA-134a, HFA-227, HCFC-22(디플루오로클로로메탄), HFA-152(디플루오로에탄 및 이소부탄)을 포함한다. 한 구체예에서는 치료 화합물이 분무기(nebulisers) 또는 다른 에어로졸 전달 시스템을 사용하여 전달될 수도 있다. 한 구체예에서는 치료 화합물이 건조분말 흡입기(DPI) 용도로 건조분말로 전달하기 위해 조제될 수 있다. 한 구체예에서는 흡입기 용도의 건조분말이 보통 100pm, 90pm, 80pm, 70pm, 60pm 50pm, 40pm, 30pm, 20pm and 10pm 이하의 질량 중앙 공기역학 지름을 갖는다. 한 구체예에서 약 5pm 내지 약 0.5pm의 범위 내의 공기역학 지름을 갖는 미세입자는 일반적으로 호흡세기관지에 침착되는 반면, 약 2pm 내지 약 0.05pm의 범위 내의 공기역학 지름을 갖는 더 작은 입자는 폐포에 침착될 가능성이 크다. 한 구체예에서는 DPI가 입자를 폐 내로 도입시키기 위해 개체의 흡기에 의존하는 수동 전달 메커니즘, 또는 분말을 개체에게 전달하기 위한 메커니즘을 필요로 하는 능동 전달 시스템일 수 있다. 한 구체에에서는 흡입식 제제를 위한 본 명세서에 개시된 치료 화합물의 치료적으로 효과적인 양이 약 0.0001%(w/v) 내지 약 90%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 80%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 70%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 60%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 50%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 40%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 30%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 20%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 10%(w/v), 약 0.001%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 0.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 50.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v)약 0.01%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 사이일 수 있다. 한 구체에에서는 흡입식 제제, 흡입식 제제를 위한 본 명세서에 개시된 치료 화합물의 치료적으로 효과적인 양이 또한 0.0001%(w/v) 내지 약 90%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 80%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 70%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 60%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 50%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 40%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 30%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 20%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 10%(w/v), 약 0.001%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 0.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 50.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v)약 0.01%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 사이일 수 있다.
[00116] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 치료 화합물, 또는 그러한 치료 화합물을 포함하는 조성물이 고체 제제로 만들어질 수 있다. 한 구체예에서는 장관 또는 비경구 투여에 적합한 고체 제제가 비제한적으로 캡슐제, 정제, 알약, 구내정, 로젠지, 경구 용해 스트립, 흡입 또는 멸균 주사가능 용액 또는 분산으로의 재구성에 적합한 분말 및 과립을 포함한다. 한 구체예에서는 상기의 제제 각각이 비제한적으로 즉시 방출형 제제, 서방형 제제(비제한적으로 왁스 매트릭스 포함), 비드(beaded)(비제한적으로 한 비드의 방출 후 즉시 다른 비드의 방출로 이어지는 이중 비드(double beaded)를 포함), 구형 경구 투약 흡수 시스템(spheroidal oral drug absorption system: "SODAS"), 경구 방출 삼투 시스템(oral relase osmotic system: "OROS"), 저작정, 패치(비제한적으로 전달 최적화 열역학(delivery optimized thermodynamics: "DOT") 포함), 스프링클(sprinkles), 또는 전구약물을 포함할 수 있다. 한 구체예에서는 그러한 투여를 위해 의도된 본 명세서에 개시된 치료 화합물 또는 조성물이 약학적 조성물의 생산을 위해 당업계에 알려진 어느 방법에 따라 조제될 수 있다. 한 구체예에서 그러한 고체 제형, 치료 화합물은 비제한적으로 다음과 혼합될 수 있다: (a) 비제한벅적으로 구연산 나트륨 또는 인산 이칼슘과 같은 적어도 하나의 불활성 통상 부형제(또는 운반체) 또는 (b) 예를 들어 비제한적으로 녹말, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 이소말트(isomalt), 및 규산과 같은 충전물(fillers) 또는 증량제(extenders), (c) 비제한적으로 카르복시메틸셀룰로스, 알리그네이트(alignates), 젤라틴, 폴리바이닐피롤리돈, 수크로스 및 아카시아와 같은 결합체(binders), (d) 예를 들어 글리세롤과 같은 보습제(humectants), (e) 비제한적으로 한천(agar-agar), 탄산칼슘, 옥수수 녹말, 감자 녹말, 타피오카 녹말, 알긴산, 특정 규산염 및 탄산나트륨 복합체와 같은 붕괴제(disintegrating agents), (f) 비제한적으로 파라핀과 같은 용액 지연제, (g) 비제한적으로 4차 암모늄 화합물과 같은 흡수 촉진제, (h) 비제한적으로 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트와 같은 습윤제, (i) 비제한적으로 카올린 및 벤토나이트와 같은 흡착제, (j) 비제한적으로 활석, 스테아린산, 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 고체 폴리에틸렌글리콜, 로릴 황산 나트륨 또는 이들의 혼합물과 같은 윤활제, 및 (k) 완충제. 한 구체예에서 상기 정제는 코팅되지 않거나 또는 위장관에서 붕괴 및 흡수를 지연시키기 위해 알려진 기술로 코팅되었을 수 있고, 그리고 따라서 더 긴 기간 동안 지효성을 제공한다. 추가적인 구체예에서는 비제한적으로 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 시간 지연 물질이 사용될 수 있다. 한 구체예에서 고체 제제에서는 본 명세서에 개시된 치료 화합물의 치료적으로 효과적인 양이 일반적으로 약 0.0001%(w/v) 내지 약 90%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 80%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 70%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 60%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 50%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 40%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 30%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 20%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 10%(w/v), 약 0.001%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 0.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 50.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v)약 0.01%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 사이일 수 있다.
[00117] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 치료 화합물, 또는 그러한 치료 화합물을 포함하는 조성물은 반고체 제제로 만들어질 수 있다. 한 구체예에서 국소 투여에 적합한 반고체 제제는 비제한적으로 연고, 크림, 고약, 및 겔을 포함한다. 한 구체예에서는 그러한 투여를 위해 의도된 본 명세서에 개시된 치료 화합물 또는 조성물이 약학적 조성물의 생산을 위해 당업계에 알려진 어느 방법에 따라 조제될 수 있다. 한 구체예에서는 반고체 제제에서 본 명세서에 개시된 치료 화합물의 치료적으로 효과적인 양이 일반적으로 약 0.0001%(w/v) 내지 약 90%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 80%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 70%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 60%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 50%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 40%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 30%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 20%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 10%(w/v), 약 0.001%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 0.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 50.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v)약 0.01%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 사이일 수 있다. 한 구체예에서는 반고체 제제에서 본 명세서에 개시된 치료 화합물의 치료적으로 효과적인 양이 또한 일반적으로 약 0.0001%(w/v) 내지 약 90%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 80%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 70%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 60%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 50%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 40%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 30%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 20%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 10%(w/v), 약 0.001%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 0.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 50.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v)약 0.01%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 사이일 수 있다.
[00118] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 치료 화합물, 또는 그러한 치료 화합물을 포함하는 조성물은 액체 제제로 만들어질 수 있다. 한 구체예에서 장관 또는 비경구 투여에 적합한 액체 제제는 비제한적으로 용액, 시럽, 엘릭시르, 분산제, 유화액, 및 현탁액을 포함한다. 한 구체예에서는 그러한 투여를 위해 의도된 본 명세서에 개시된 치료 화합물 또는 조성물이 약학적 조성물의 생산을 위해 당업계에 알려진 어느 방법에 따라 조제될 수 있다. 한 구체예에서 그러한 액체 제형에서는 비제한적으로 다음과 혼합될 수 있다: (a) 적합한 수성 및 비수성 운반체, (b) 희석제, (c) 비제한적으로 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 글리세롤과 같은 용매, 비제한적으로 유채유 및 올리브유와 같은 식물성 기름, 올레산에틸과 같은 주사 가능한 유기 에스테르, 및/또는 비제한적으로 계면활성제와 같은 유동제(fluidity agent) 또는 레시틴과 같은 코팅제. 분산제 및 부형제의 경우, 유동성은 특정한 입자 크기를 유지하는 것으로도 제어될 수 있다. 한 구체예에서는 액체 제제에서 본 명세서에 개시된 치료 화합물의 치료적으로 효과적인 양이 일반적으로 약 0.0001%(w/v) 내지 약 90%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 80%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 70%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 60%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 50%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 40%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 30%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 20%(w/v), 0.0001%(w/v) 내지 약 10%(w/v), 약 0.001%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 0.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v), 0.001%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 90.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 80.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 70.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 60.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 50.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 40.0%(w/v), 약 0.01%(w/v) 내지 약 30.0%(w/v)약 0.01%(w/v) 내지 약 20.0%(w/v) 또는 약 0.01%(w/v) 내지 약 10.0%(w/v) 사이일 수 있다.
[00119] 한 구체예에서는 시럽 및 엘릭시르가 비제한적으로 예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 솔비톨 또는 수크로스와 같은 감미제와 제제화될 수 있다. 추가적인 구체예에서는 그러한 제제가 비제한적으로 점활제, 보존제, 향미료, 및 착색제 또한 포함할 수 있다.
[00120] 한 구체예에서 액체 현탁액은 비제한적으로 본 명세서에 개시된 치료 화합물을 수성 현탁액의 생산에 적합한 부형제와 함께 혼합하여 현탁하는 것으로 제제화될 수 있다. 한 구체예에서 그러한 부형제는 예를 들어 비제한적으로 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 알긴산 나트륨, 펙틴, 폴리바이닐 피롤리돈, 폴리바이닐 알코올, 천연 검, 한천, 트라가칸트 검, 아라비아 검이고; 분산제 또는 습윤제는 예를 들어 레시틴과 같은 자연적으로 발생하는 인지질, 또는 예를 들어 비제한적으로 폴리옥시에틸렌 스테아레이트와 같은 지방산과 알킬렌 산화물의 축합체, 또는 예를 들어 비제한적으로 헵타데카에틸렌옥시세타놀과 같은 장쇄 지방족산과 에틸렌 산화물의 축합체, 또는 예를 들어 비제한적으로 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레이트와 같은 지방산으로부터 유래된 부분 에스테르와 에틸렌 산화물의 축합체일 수 있다.
[00121] 한 구체예에서 유현탁은 본 명세서에 개시된 치료 화합물을 다음과 함께 혼합하여 현택하는 것으로 제제화될 수 있다: (a) 비제한적으로 아몬드유, 땅콩 기름, 아보카도 기름, 카놀라유, 피마자유, 야자유, 옥수수 기름, 면실유, 포도씨유, 헤이즐넛 기름, 대마유(hemp oil), 아마인유, 올리브유, 팜유, 땅콩 기름, 유채씨유, 쌀겨 기름, 홍화유, 참기름, 콩기름, 소야 기름(soya oil), 해바라기유, 호두 기름, 밀 배아유, 또는 이들의 조합, (b) 포화지방산, 불포화지방산, 또는 비제한적으로 팔미트산, 스테아린산, 올레산, 리놀레산, 리놀렌산, 또는 이들의 조합과 같이 포화지방산 및 불포화지방산의 조합, (c) 비제한적으로 액체 파라핀과 같은 광유, (d) 계면활성제 또는 세제. 한 구체예에서 상기 유현탁은 예를 들어 밀랍, 경질(hard) 파라핀 또는 세틸 알코올과 같은 증점제를 함유할 수 있다. 한 구체예에서는 맛좋은 경구 제제를 제공하기 위해 앞서 언급된 것과 같은 감미제 및 향미료가 첨가될 수 있다. 한 구체예에서는 이 조성물들이 아스코르브산과 같은 항산화제의 첨가로 보존될 수 있다.
[00122] 한 구체예에서는 물을 첨가하는 것으로 수성 현탁액을 조제하는 데에 적합한 분산가능(dispersible) 분말 및 과립이 분산제 또는 습윤제, 현탁용제 및 하나 이상의 보존제와 함께 혼합된 혼합 치료 화합물을 제공한다.
[00123] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 치료 화합물이 수중유적형 에멀젼의 형태일 수 있다. 한 구체예에서 유상(oily phase)은 본 명세서에 개시된 바와 같은 식물성 기름 또는 본 명세서에 개시된 바와 같은 광유 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 한 추가적인 구체예에서는 적합한 유화제가 비제한적으로 아라비아 검 또는 트라가칸트 검과 같은 자연적으로 발생하는 검, 예를 들어 대두, 레시틴과 같은 자연적으로 발생하는 인지질, 에스테르 또는 예를 들어 비제한적으로 솔비탄 모노올레이트와 같은 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르 및 상기 부분 에스테르와 예를 들어 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레이트와 같은 에틸렌 산화물의 축합체일 수 있다.
[00124] 한 구체예에서는 오랜시간에 걸친 제어 방출 프로파일(profile)을 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 치료 화합물, 또는 그러한 치료 화합물을 포함하는 조성물이 약물 전달 플랫폼(platform) 내에 편입될 수도 있다. 한 구체예에서 그러한 약물 전달 플랫폼은 폴리머 매트릭스, 일반적으로 비제한적으로 생분해성, 생침식성(bioerodible), 및/또는 생체흡수성 폴리머 매트릭스 내에 분산된 본 명세서에 개시된 치료 화합물을 포함한다. 한 구체예에서 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "폴리머"는 합성 호모- 또는 코폴리머, 자연적으로 발생하는 호모- 또는 코폴리머, 그리고 비제한적으로 선형, 분지형 또는 성형(star) 구조를 갖는 이들의 합성 변형 또는 유도체를 의미한다. 한 구체예에서 코폴리머는 예를 들어 비제한적으로 무작위, 블록(block), 분절(segmented), 첨형(tapered) 블록, 이식편(graft), 또는 트리블록(triblock)과 같은 어느 형태로도 배열될 수 있다. 한 구체예에서 폴리머는 일반적으로 축합 폴리머이다. 한 구체예에서 폴리머는 그의 기계적 또는 분해 성질을 증강시키기 위해 가교제(cross-linking agents)를 도입시키거나 또는 측잔기(side residues)의 소수성을 변화시키는 것으로 더 변형될 수 있다. 한 구체예에서 교차결합되었을 때, 폴리머는 보통 75% 이하로 교차결합, 65% 교차결합, 55% 교차결합, 45% 교차결합, 35% 교차결합, 25% 교차결합, 15% 교차결합, 5% 교차결합, 보통 1% 이하로 교차결합된다.
[00125] 한 구체예에서 적합한 폴리머는 비제한적으로 알긴산염, 지방족 폴리에스테르, 폴리알킬렌 수산염, 폴리아미드, 폴리아미도에스테르, 폴리앤하이드라이드(polyanhydrides), 폴리카보네이트, 폴리에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리하이드록시 지방족 카르복시산, 폴리오르토에스테르, 폴리옥사에스테르, 폴리펩타이드, 폴리포스파젠, 다당류, 및 폴리우레탄을 포함한다. 한 구체예에서 상기 폴리머는 보통 약물 전달 플랫폼의 최소 약 10%(w/w), 최소 약 20%(w/w), 최소 약 30%(w/w), 최소 약 40%(w/w), 최소 약 50%(w/w), 최소 약 60%(w/w), 최소 약 70%(w/w), 최소 약 80%(w/w), 또는 최소 약 90%(w/w)를 이룬다. 한 구체예에서 생분해성, 생침식성, 및/또는 생체흡수성 폴리머 및 약물 전달 플랫폼을 만드는 데에 유용한 방법의 예시는 예를 들어 각각 전체 내용이 본 명세서에 참조로서 포함된 Drost, 비제한적으로, Controlled Release Formulation, 미국특허번호 제4,756,911호; Smith, et. al., Sustained Release Drug Delivery Devices, 미국특허번호 제5,378,475호; Wong and Kochinke, Formulation for Controlled Release of Drugs by Combining Hyrophilic and Hydrophobic Agents, 미국특허번호 제7,048,946호; Hughes, et. al., Compositions and Methods for Localized Therapy of the Eye, 미국특허공개번호 제2005/0181017호; Hughes, Hypotensive Lipid-Containing Biodegradable Intraocular Implants and Related Methods, 미국특허공개번호 제2005/024444호; Altman, et al., Silk Fibroin Hydrogels and Uses Thereof, 미국특허공개번호 제2011/0008437호에 기술된다.
[00126] 한 구체예에서 매트릭스를 구성하는 폴리머는 비제한적으로 실크피브로인, 케라틴, 또는 콜라겐과 같은 폴리펩타이드이다. 추가적인 구체예에서 매트릭스를 구성하는 폴리머는 비제한적으로 셀룰로스, 아가로스, 엘라스틴, 키토산, 키틴, 또는 황산 콘드로이틴, 황산 데르마탄, 황상 케라탄, 또는 히알루론산과 같은 글리코사미노글리칸과 같은 다당류이다. 또 다른 구체예에서 매트릭스를 구성하는 폴리머는 비제한적으로 D-젖산, L-젖산, 라세미 젖산, 글리콜산, 카프로락톤(caprolactone), 및 이들의 조합과 같은 폴리에스테르이다.
[00127] 당업계의 통상의 기술자라면 본 명세서에 개시된 적합한 약물 전달 플랫폼을 형성하기에 적합한 폴리머의 선택이 여러 요인들에 따라 결정된다는 것을 인식할 것이다. 적절한 폴리머(들)의 선택에 있어서 더 관련있는 요인은 비제한적으로 약물과 폴리머의 적합성, 약물의 바람직한 방출 동특성(release kinetics), 착상 부위에서 플랫폼의 바람직한 생분해 동특성, 착상 부위에서 플랫폼의 바람직한 생침식 동특성, 착상 부위에서 플랫폼의 바람직한 생체흡수 동특성, 플랫폼의 생체내 기게적 성능(mechanical performance), 처리 온도, 플랫폼의 생체적합성, 및 환자 내성을 포함한다. 어느 정도는 비제한적으로 폴리머의 시험관내 및 생체내 행동을 좌우하는 다른 관련있는 요인은 화학적 조성, 구성요소의 공간 분포, 폴리머의 분자량 및 결정화도를 포함한다.
투여(Administration)
[00128] 한 구체예에서 본 발명의 접합된 화합물은 정맥내, 근육내, 또는 복강내 주사와 같은 주사로 투여될 수 있다. 조성물은 치료, 진단 및/또는 유사한 제제로서 유용할 수 있다.
[00129] 본 발명의 접합된 화합물을 포함하는 조성물을 사람 또는 시험동물에게 투여하기 위한 한 관점에서는 상기 조성물이 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 운반체를 포함한다. 용어 "약학적으로(pharmaceutically)" 또는 "약학적으로 허용 가능한(pharmacologically acceptable)"은 안정적이고, 응집 및 절단물과 같은 단백질 분해를 억제하고, 그리고 추가적으로 하기에 기술된 바와 같이 당업계에 잘 알려진 경로를 사용하여 투여되었을 때 알레르기 반응, 또는 다른 유해 반응을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 의미한다. "약학적으로 허용 가능한 운반체"는 상기에 개시된 제제를 포함하여 어느 그리고 모든 임상적으로 유용한 용매, 분산매, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다.
[00130] 본 명세서에 사용된 바와 같이 "효과적인 양(effective amount)"은 임상적으로 정의된 장애를 가진 포유동물을 치료하는 데에 적합한 투여량을 포함한다.
[00131] 상기 조성물은 경구, 국소, 경피, 비경구, 질, 직장, 두개내 주사, 또는 흡입 스프레이에 의해 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 비경구는 피하 주사, 정맥내, 근육내, 수조내 주사, 또는 주입 기술을 포함한다. 정맥내, 피내, 근육내, 유방내, 복강내, 척수강내, 눈뒤, 폐내 주사 및/또는 특정한 부위에 외과 이식(surgical implantation) 또한 고려된다. 일반적으로 조성물은 발열원에 더하여 수용자에게 유해할 수 있는 다른 불순물이 기본적으로 없다.
[00132] 상기 조성물의 단일 또는 복수의 투여는 담당 의사가 선택한 투여 레벨 및 패턴으로 실행될 수 있다. 질병의 예방 또는 치료에 적절한 투여량은 상기에 기술된 바와 같이 치료될 질병의 유형, 질병의 중증도 및 경과, 약물이 예방 또는 치료 목적인지의 여부, 이전의 치료, 환자의 임상 병력 및 약물에 대한 반응, 그리고 담당 의사의 재량에 따라 결정될 것이다.
[00133] 본 발명은 본 명세서에 정의된 바와 같이 효과적인 양의 접합된 화합물 또는 단백질을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이기도 하다. 상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 운반체, 희석제, 염, 완충제, 또는 부형제를 더 포함할 수 있다. 상기 약학적 조성물은 임상적으로 정의된 장애를 치료하는 데에 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 용액 또는 동결건조된 생성물일 수 있다. 상기 약학적 조성물의 용액은 어느 동결건조 과정이라도 거칠 수 있다.
[00134] 추가적인 관점으로서 본 발명은 대상에게 투여할 용도로 포장된 본 발명의 조성물을 포함하는 키트를 포함한다. 한 구체예에서 그러한 키트는 밀봉된 병 또는 관과 같은 용기에 포장된 본 명세서에 기술된 화합물 또는 조성물(예: 접합된 단백질을 포함하는 조성물)을 포함하고, 방법을 실행하는 데에 있어서 상기 화합물 또는 조성물의 용도를 설명하는 라벨이 상기 용기에 부착되거나 또는 포장물 내에 포함된다. 한 구체예에서 상기 키트는 접합된 단백질을 포함하는 조성물이 담긴 제1 용기 및 제1 용기 내의 조성물을 위한 생리학적으로 허용 가능한 재구성 용액이 담긴 제2 용기를 수용한다. 한 관점에서 상기 화합물 또는 조성물은 단일 투여 제형으로 포장된다. 상기 키트는 특정한 투여 경로에 따라 상기 조성물을 투여하는 데에 적합한 장치를 더 포함할 수 있다. 바람직하게는 상기 키트가 치료 단백질 또는 펩타이드 조성물의 용도를 설명하는 라벨을 포함한다.
[00135] 한 구체예에서 유도체는 자연(native) 치료 화합물의 완전한 기능성 활성도를 유지하고, 그리고 자연 치료 화합물에 비해 생체내에서 연장된 반감기를 제공한다. 다른 구체예에서 상기 유도체는 자연 화합물에 대해 최소 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44.45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56,57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 또는 500 퍼센트(%)의 생물학적 활성을 유지한다.
[00136] 한 구체예에서 약물 전달 플랫폼은 지효성 약물 전달 플랫폼 및 서방형 약물 전달 플랫폼 모두를 포함한다. 한 구체예에서 용어 "지효성(sustained release)"은 약 7일 또는 그 이상의 기간에 걸친 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물의 방출을 의미한다. 한 구체예에서 용어 "서방형(extended release)"은 약 7일 이하의 기간에 걸친 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물의 방출을 의미한다.
[00137] 한 구체예에서는 지효성 약물 전달 플랫폼이 비제한적으로 투여 후 약 3일, 투여 후 약 7일, 투여 후 약 10일, 투여 후 약 15일, 투여 후 약 20일, 투여 후 약 25일, 투여 후 약 30일, 투여 후 약 45일, 투여 후 약 60일, 투여 후 약 75일, 또는 투여 후 약 90일의 기간에 걸쳐 치료 화합물을 방출한다. 다른 구체예에서는 지효성 약물 전달 플랫폼이 비제한적으로 투여 후 약 3일, 투여 후 약 7일, 투여 후 약 10일, 투여 후 약 15일, 투여 후 약 20일, 투여 후 약 25일, 투여 후 약 30일, 투여 후 약 45일, 투여 후 약 60일, 투여 후 약 75일, 또는 투여 후 약 90일의 기간에 걸쳐 실질적으로 영점 방출 동특성으로 치료 화합물을 방출한다.
[00138] 한 구체예에서 PSA-치료 화합물은 비제한적으로 서방형 조성물을 포함하는 지속성 조성물의 형태이다. 한 구체예는 비제한적으로 투여받는 환자에게 오랜시간에 걸쳐 치료 화합물 또는 화합물을 제공하는 서방형 캡슐, 정제 또는 다른 고체 또는 액체 제제를 포함한다. 지속성 조성물은 환자에게 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 16시간, 20시간, 24시간, 28시간, 30시간, 32시간, 34시간, 36시간, 40시간, 48시간, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 2주, 3주 또는 4주 동안 제공할 수 있다. 지속성 제제는 폴리시알화된 치료 화합물의 활성을 짧게는 4시간 또는 길게는 4주, 짧게는 4시간 또는 길게는 3주, 짧게는 4시간 또는 길게는 2주, 짧게는 4시간 또는 길게는 1주, 짧게는 4시간 또는 길게는 6일, 짧게는 4시간 또는 길게는 5일, 짧게는 4시간 또는 길게는 4일, 짧게는 4시간 또는 길게는 3일, 짧게는 4시간 또는 길게는 2일, 짧게는 4시간 또는 길게는 1일, 짧게는 4시간 또는 길게는 20시간, 짧게는 4시간 또는 길게는 16시간, 짧게는 4시간 또는 길게는 14시간, 짧게는 4시간 또는 길게는 12시간, 짧게는 4시간 또는 길게는 10시간, 짧게는 4시간 또는 길게는 8시간, 짧게는 4시간 또는 길게는 6시간 동안 제공할 수 있다.
[00139] 한 구체예에서 지효성 약물 전달 플랫폼은 비제한적으로 투여 후 약 3일, 투여 후 약 7일, 투여 후 약 10일, 투여 후 약 15일, 투여 후 약 20일, 투여 후 약 25일, 투여 후 약 30일, 투여 후 약 45일, 투여 후 약 60일, 투여 후 약 75일, 또는 투여 후 약 90일의 기간에 걸쳐 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물을 방출한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 지효성 약물 전달 플랫폼이 비제한적으로 투여 후 약 3일, 투여 후 약 7일, 투여 후 약 10일, 투여 후 약 15일, 투여 후 약 20일, 투여 후 약 25일, 투여 후 약 30일, 투여 후 약 45일, 투여 후 약 60일, 투여 후 약 75일, 또는 투여 후 약 90일의 기간에 걸쳐 실질적으로 일차 방출 동특성으로 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물을 방출한다.
[00140] 한 구체예에서는 약물 전달 플랫폼이 비제한적으로 투여 후 약 1일, 투여 후 약 2일, 투여 후 약 3일, 투여 후 약 4일, 투여 후 약 5일, 투여 후 약 6일, 또는 투여 후 약 7일의 기간에 걸쳐 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물을 방출한다. 추가적인 구체예에서는 약물 전달 플랫폼이 비제한적으로 투여 후 최대 1일, 투여 후 최대 2일, 투여 후 최대 3일, 투여 후 최대 4일, 투여 후 최대 5일, 투여 후 최대 6일 또는 투여 후 최대 7일의 기간에 걸쳐 실질적으로 영점 방출 동특성으로 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물을 방출한다.
[00141] 한 구체예에서는 약물 전달 플랫폼이 비제한적으로 투여 후 약 1일, 투여 후 약 2일, 투여 후 약 3일, 투여 후 약 4일, 투여 후 약 5일, 투여 후 약 6일, 또는 투여 후 약 7일의 기간에 걸쳐 방출 동특성으로 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물을 방출한다. 추가적인 구체예에서는 약물 전달 플랫폼이 예를 들어 투여 후 최대 1일, 투여 후 최대 2일, 투여 후 최대 3일, 투여 후 최대 4일, 투여 후 최대 5일, 투여 후 최대 6일 또는 투여 후 최대 7일의 기간에 걸쳐 실질적으로 일차 방출 동특성으로 치료 화합물 또는 본 명세서에 개시된 화합물을 방출한다.
시알산(Sialic Acid) 및 PSA
[00142] 본 명세서에 사용된 바와 같이 "시알산 모이어티"는 수용액 또는 현탁액에서 가용성이고 그리고 포유동물에게 약학적으로 효과적인 양의 PSA-단백질 접합체를 투여했을 때 부작용과 같은 부정적인 영향이 거의 없거나 전혀 없는 시알산 모노머 또는 폴리머("다당류")를 포함한다. 한 구체예에서 PSA 및 mPSA는 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 300, 400, 또는 500 시알산 유닛을 갖는 것을 특징으로 한다. 특정 관점에서는 상이한 시알산 유닛이 사슬로 결합된다.
[00143] 본 발명의 한 구체예에서는 PSA 또는 mPSA 화합물의 시알산 부분이 고친수성이고, 그리고 다른 구체예에서는 화합물 전체가 고친수성이다. 친수성은 주로 시알산 유닛에 더하여 수산기의 대응(pendant) 카르복시기에 의해 부여된다. 당류(saccharide) 유닛은 아민, 수산기 또는 황산염기, 또는 이들의 조합과 같은 다른 작용기를 함유할 수 있다. 이 기들은 자연적으로 발생하는 당류 화합물에 존재하거나, 또는 유도 다당류 화합물 내에 도입될 수 있다. 본 발명의 방법 및 접합체에 사용되는 PSA 및 mPSA는 본 명세서의 상기 [배경기술]에서 기술된 바와 같이 더 특징지어질 수 있다.
[00144] 자연적으로 발생하는 폴리머 PSA는 넓은 크기 분포(예: Sigma C-5762) 및 높은 다분산성(PD)을 보이는 다분산 제제(polydisperse preparation)로서 구할 수 있다. 다당류는 보통 내독소를 공동정화(copurifying)할 내재 위험요소를 갖는 박테리아에서 생산되기 때문에, 긴 시알산 폴리머 사슬이 증가된 내독소 함량의 확률을 높일 수 있다. 1-4 시알산 유닛을 갖는 짧은 PSA 분자는 인공적으로도 조제될 수 있고(Kang SH et al., Chem Commun. 2000;227-8; Ress DK and Linhardt RJ, Current Organic Synthesis.2004;1:31-46), 따라서 높은 내독소 레벨의 위험을 최소화한다. 그러나 이제는 좁은 크기 분포 및 낮은 다분산성을 갖고, 무내독소이기도 한 PSA 제제도 생산될 수 있다. 한 관점에서는 본 발명을 위한 특정한 용도의 다당류 화합물이 박테리아에 의해 생산된 것일 수 있다. 이 자연적으로 발생하는 다당류 중 일부는 당지질로 알려져 있다. 한 구체예에서는 상기 다당류 화합물이 실질적으로 말단 갈락토스 유닛을 갖지 않는다.
[00145] 여러 구체예에서 상기 화합물은 화학량적 양(stoichiometric amounts)으로(예: 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:7, 1:8, 1:9, or 1:10 등) PSA 또는 mPSA 화합물과 연결되거나 또는 연관된다. 여러 구체예에서 1-6, 7-12 또는 13-20 PSA 및/또는 mPSA 유닛이 상기 화합물에 연결된다. 다른 구체예에서는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 그 이상의 PSA 및/또는 mPSA 유닛이 상기 화합물에 연결된다.
[00146] 선택적으로 상기 화합물은 글리코실화(glycosylation) 부위를 도입하기 위해 변형된다(즉 자연 글리코실화 부위 외에 부위). 그러한 변형은 당업계에 알려진 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 또한 상기 화합물은 하나 이상의 탄수화물 모이어티를 통한 접합 전에 생체내 또는 시험관내에서 글리코실화될 수 있다.
아미노옥시 연쇄(Aminooxy Linkage)
[00147] 본 발명의 한 구체예에서는 옥심기를 형성하기 위해 하이드록실아민 또는 하이드록실아민 유도체와 알데히드의 반응(예: 과아이오딘산나트륨에 의한 산화 후 탄수화물 모이어티 상에서)이 화합물의 접합체의 제조에 적용된다. 예를 들어 당단백질이 먼저 과아이오딘산나트륨(NaIO4)과 같은 산화제로 산화된다(Rothfus JA et Smith EL., J Biol Chem 1963, 238, 1402-10; and Van Lenten L and Ashwell G., J Biol Chem 1971, 246, 1889-94). 예를 들어 당단백질의 과아이오딘산 산화는 1928, 활성 알데히드기를 형성하기 위한 인근 디올과 과아이오딘산의 산화에 기술된 전형적(classical) 말라프레이드(Malaprade) 반응을 기반으로 한다(Malaprade L., Analytical application, Bull Soc Chim France, 1928, 43, 683-96). 그러한 산화제의 추가적인 예로는 아세트산 납(Pb(OAc)4), 아세트산 망간(MnO(Ac)3), 아세트산 코발트(Co(OAc)2), 아세트산 탈륨(TlOAc), 황산 세륨(Ce(SO4)2)(US 4,367,309) 또는 과루테늄산 포타슘(KRuO4)이 있다(Marko et al., J Am Chem Soc 1997,119, 12661-2). "산화제(oxidizing agent)"는 탄수화물에 있는 인근 디올을 산화시킬 수 있고, 그렇게 함으로써 생리학적 반응 조건 하에서 활성 알데히드기를 생성하는 약한(mild) 산화 화합물을 의미한다.
[00148] 두 번째 단계는 옥심 연쇄를 형성하기 위해 아미노옥시기를 함유하는 폴리머를 산화된 탄수화물 모이어티에 결합시키는 것이다. 본 발명의 한 구체예에서 이 단계는 촉매량(catalytic amounts)의 친핵성 촉매 아닐린 또는 아닐린 유도체가 있는 데서 실행될 수 있다(Dirksen A., Dawson PE, Bioconjugate Chem. 2008; Zeng Y et al., Nature Methods 2009;6:207-9). 아닐린 촉매는 옥심 결찰을 극적으로 가속시켜 아주 낮은 농도의 시약 사용을 가능하게 한다. 본 발명의 다른 구체예에서는 알콕시아민 연쇄를 형성하기 위한 NaCNBH3와의 환원에 의해 옥심 연쇄가 안정된다.
[00149] 본 발명의 한 구체예에서 PSA 또는 mPSA를 단백질에 접합시키기 위한 반응 단계는 별도로 그리고 순차적으로 실행된다(즉 시재료(예: 단백질, 폴리머 등), 시약(예: 산화제, 아닐린 등) 및 반응 생성물(예: 단백질 상에 산화된 탄수화물, 활성 아미노옥시 폴리머 등)은 개별 반응 단계별로 나눠진다).
[00150] 아미노옥시 기술에 대한 추가적인 정보는 각각 전체 내용이 본 명세서에 참조로서 포함된 다음의 참조문헌에서 찾을 수 있다: EP 1681303A1(HASylated erythropoietin); WO 2005/014024(conjugates of a polymer and a protein linked by an oxime linking group); WO 96/40662(aminooxy-containing linker compounds and their application in conjugates); WO 2008/025856(Modified proteins); Peri F et al., Tetrahedron 1998, 54, 12269-78; Kubler-Kielb J and Pozsgay V., J Org Chem 2005, 70, 6887-90; Lees A et al., Vaccine 2006, 24(6), 716-29; 및 Heredia KL et al., Macromoecules 2007, 40(14), 4772-9.
[00151] 항체 상에 PSA의 부착에 대한 추가적인 정보는 각각 전체 내용이 본 명세서에 참조로서 포함된 다음의 참조문헌에서 찾을 수 있다: Konterman R. and Dubel S., Antibody Engineering, 2010, V.1, 2nd ed. Springer Protocals, ISBN-13:978-3642011436; Zhang B, et al.: Unveiling a glycation hot spot in a recombinant humanized monoclonal antibody, Anal Chem., 2008, 80, 2379-2390; Miller AK, et al. Characterization of site-specific glycation during process development of a human therapeutic monoclonal antibody, J. Pharm. Sci., 2011, 100, 2543-2550.
[00152] 본 발명의 이점은 접합체의 고회수(high recovery), 접합되지 않은 단백질에 비해 높은 접합된 당단백질의 활성 유지(retention) 및 높은 접합 효율을 포함한다.
생물작용 분석법(Bioactivity Assays)
[00153] 표적 단백질의 활성에 폴리시알화가 미치는 영향을 구하는 데에 다양한 생물학적 분석법이 유용하다. 변형 전과 폴리시알산/PSA의 부착 후의 표적 단백질이 비교된다. 예를 들어 본 명세서에서 폴리시알화된 효소는 효소 활성을 시험하는 것으로 변형된 표적 단백질의 활성을 시험하는 데에 특히 접합하다. 본 명세서에서 폴리시알화된 항체 또는 그의 결합 단편에 대해서는 표준 항체-리간드 결합 분석법이 사용되고 그리고 변형된 그리고 변형되지 않은 항체가 비교된다. 다른 표적 단백질에 대해서는 본 명세서의 폴리시알화된 표적 단백질의 활성을 측정하기 위해 표적을 위한 생물학적 분석법이 사용될 수 있다. 특정한 표적 단백질을 위해서는 적절한 그리고 민감한(sensitive) 분석법이 필요하다. 또한 상기 분석법은 관련 화합물의 간섭 없이 폴리시알화된 표적 단백질에 대한 특정 판독(readout)을 제공해야 한다. 다양한 표적에 적용 가능한 생물학적 분석법은 본 명세서의 실시예에 기술된다. 본 발명에 따라 폴리시알화된 특정 표적 단백질과 관련된 특정 생물학적 분석법은 특정 표적 단백질에 관련된 것으로 본 명세서에서 언급되고 참조로서 포함된 상기에 언급된 특허 및 특허출원에도 기술된다.
[00154] 본 명세서의 치료-PSA 단백질은 다양한 시험관내 분석법을 사용하여 식별될 수 있다. 바람직하게는 상기 분석법이 동시에 복수의 후보를 선별(screening)할 수 있는 고속 대량(high-throughput) 분석법이다. 일부 구체예에서는 300nm까지의 표면의 굴절률의 변화에 의한 유리 지지대(glass support) 상의 금 박막의 표면에서의 빛의 공명 각도의 변화를 검출하기 위해 SPR을 사용하는 BIACORE　 시스템을 사용하여 생체분자 상호작용이 실시간으로 모니터될 수 있다. BIACORE　 분석은 흡착 상수, 해리 상수, 평형 해리 상수, 및 친화성 상수를 생성한다. 결합 친화성은 BIACORE　 표면 플라스몬 공명 시스템(Biacore, Inc.)을 사용하여 흡착 및 해리 상수를 분석하는 것으로 얻는다. 표적의 공유결합 결합을 위해 바이오센서 칩이 활성화된다. 그럼 다음에는 고정된(immobilized) 물질의 반응 유닛(response unit)의 신호를 얻기 위해 상기 표적이 희석되고 그리고 상기 칩 위로 주입된다. 공명 유닛(resonance units: RU)의 신호는 고정된 물질의 질량에 비례하기 때문에, 이는 매트릭스 상에서 고정된 표적 밀도의 범위를 나타낸다.
[00155] 세포 기반 분석법은 본 명세서에 제공된 다양한 폴리시알화된 단백질의 생물학적 활성을 특정짓고, 특정하고 그리고 비교하는 데에 사용될 수 있다. 일부 구체예에서 상기 세포 기반 분석법은 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA)이다. ELISA 키트는 Cell Sciences.RTM.(Canton, Mass.)과 같은 많은 출처로부터 구매할 수 있다. ELISA 키트의 사용 방법은 당업계에 알려져 있고 그리고 상기 키트는 일반적으로, 예를 들어, 샘플, 표준(standards), 교정 곡선 준비, 및 실험 수행 방법에 대한 사용 안내서를 포함한다. 다른 구체예에서는 상기 세포 기반 분석법이 균일 시간 분해 형광 분광법(homogeneous time-resolved fluorescence assay: HTRF.RTM.)이다. HTRF.RTM. 키트는 Cisbio International(Bedford, Mass.)로부터 구매할 수 있다. HTRF.RTM. 키트의 사용 방법은 당업계에 알려져 있고 그리고 상기 키트는, 예를 들어, 샘플, 표준, 교정 곡선 준비, 및 실험 수행 방법에 대한 사용 안내서를 포함한다. 균일 시간 분해 형광 분광 세포 기반 분석법은 내용이 본 명세서에 참조로서 포함된 미국 특허번호 제5,527,684호, 및 Cisbio HTRF.RTM.Product Center에서 구할 수 있는 문헌 참조번호 62AM4PEB rev02(August 2007)에 기술된다. 내용이 본 명세서에 참조로서 포함된 www.htrf.com/products/gpcr/camp/ 참조.
실시예
실시예 1
아미노옥시(aminooxy)-PSA 중합체의 제조
[00157] 1.3g의 산화된 콜로민산(23kDA)을 18ml의 50mM 아세트산나트륨 pH 5.5±0.02에 용해시켰다. 20배 이상의 몰농도로 1,11-디아미노-3,6,9-트리옥사운데칸(또는 3,6,9-트리옥사-운데칸-1,11-디옥시아민)을 최소량의 50mM 아세트산나트륨 (pH 5.5±0.02)에 용해시켰고, PSA 용액에 첨가하였다. 최종 콜로민산 농도는 62.5mg/ml이었다. 이 반응 혼합물을 22±1.0℃에서 2±0.1시간 동안 저속 혼합기(분당 22회 진동)에서 인큐베이션하였다. 그 다음, 0.65ml의 160mg/ml NaCNBH3 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하여 최종 농도가 5.00mg/ml가 되도록 하였다. 이것(이하 ‘샘플’이라 함)을 4.0±1.0℃에서 3.0±0.20 시간 동안 교반기(분당 22회 진동)에서 혼합을 위해 충분한 두부(頭部)간격(headspace)이 있고, 내독소가 없는 밀폐 용기에서 인큐베이션하였다. 정제하기 위해, 샘플을 2mM 트리에탄올아민(pH8.0±0.02)으로 희석하여 최종 콜로민산 농도가 20mg/ml가 되도록 하였다. 반응 혼합물을 탈염하여 과잉의 1,11-디아미노-3,6,9-트리옥사운데칸, NaCNBH3 및 반응 부산물을 제거하였다. 그 다음, 20mM 트리에탄올아민 버퍼(pH8.0±0.02)를 사용하여 상기 반응 혼합물을 세파덱스(Sephadex) G25컬럼으로 탈염하였다. 탈염된 샘플의 pH를 pH7.8-8.0으로 조정하고, 20mM TEA pH 8.0으로 1회 및 2mM 트리에탄올아민(TEA) pH 8.0으로 2회 한외여과(ultrafiltered)/정용여과(diafiltered)하였다. 상기 샘플을 동결 건조하고 -80℃에서 보관하였다.
[00158] 대안적으로, 탈염 및 한외여과/정용여과(UF/DF)를 하는 동안 정제는 고염에서 이루어졌다. 고염에서 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 고순도 아미노옥시-PSA를 제조하였다. 상이한 분자량의 아미노옥시-PSA가 합성되었다는 것을 유추할 수 있다.
실시예 2
에리트로포이에틴(EPO)과 디아미노옥시-PSA의 커플링
[00159] 0.2mg의 EPO를 4℃에서 30분 동안 10mM의 NaIO4로 산화시킨 후 NaHSO3를 첨가하여 최종 농도 5mM로 산화를 중단시켰다. 컨쥬게이션 반응은 23kDa의 디아미노옥시 중합체와 함께 산화된 EPO를 사용하여 수행되었다. 반응 혼합물에서 중합체의 최종 농도는 1.25mM이었다. 반응 혼합물에서 EPO의 최종 농도는 0.125mg/ml이었다. 반응 혼합물의 최종 pH는 약 5.75였다. 소듐 시아노보로하이드라이드를 반응 혼합물에 50mM 또는 3.17mg/ml의 농도로 첨가하였다. 반응은 4℃에서 24시간 동안 수행하였다. 정제되지 않은 접합체의 특징은 SDS PAGE를 사용한다는 것이다. SDS PAGE의 접합체에서 밴드 이동이 관찰되었다.
실시예 3
친핵성 촉매로 작용하는 아닐린을 갖는 EPO와 디아미노옥시-PSA의 커플링
[00160] 0.2mg의 EPO를 4℃에서 30분 동안 10mM NaIO4로 산화시킨 후 NaHSO3를 첨가하여 최종 농도 5mM로 산화를 중단시켰다. 컨쥬게이션 반응은 산화된 EPO와 디아미노옥시-PSA 중합체(22kDa)를 사용하여 수행되었다. 반응 혼합물에서 중합체의 최종 농도는 1.25mM이었다. 반응 혼합물의 최종 pH는 약 5.75였다. 소듐 시아노보로하이드라이드(cyanoborohydride)를 반응 혼합물에 50mM 또는 3.17mg/ml의 농도로 첨가하였다. 반응에서 최종 단백질 농도는 0.125mg/ml이었다. 200mM 아닐린 용액 84.21㎕를 반응 혼합물 1.6ml에 첨가하였다. 상기 반응은 4℃에서 하룻밤 동안 수행되었다. 접합체의 특징은 SDS PAGE를 사용한다는 것이다. 접합체에서 밴드 이동이 관찰되었다. 접합체의 활성에 대한 아닐린의 부작용은 관찰되지 않았다.
실시예 4
히드라지드-폴리시알산(PSA)와 에리트로포이에틴의 커플링
[00161] 에리트로포이에틴(EPO)의 산화를 위해, NaIO4를 10mM의 농도로 사용하였다. EPO(1mg)는 4℃에서 30분 동안 pH 5.75에서 산화된 다음 5mM의 최종 농도로 NaHSO3를 첨가하여 산화를 중단시켰다. 컨쥬게이션 반응은 히드라지드-PSA 중합체로 산화된 EPO를 사용하여 수행되었다. 접합체에 사용된 히드라지드-PSA의 분자량은 24.34 kDa였다. 반응 혼합물에서 히드라지드-PSA의 최종 농도는 1.25mM이었다. 반응 혼합물에서 EPO의 최종 농도는 0.125 mg/ml이었다. 반응 혼합물의 최종 pH는 약 5.75였다. 소듐 시아노보로하이드라이드를 반응 혼합물에 50mM 또는 3.17mg/ml의 농도로 첨가하였다. 반응은 4℃에서 24시간 동안 진행하였다. 접합체의 특징은 SDS PAGE 및 웨스턴블롯팅(western blotting)을 사용한다는 것이다. SDS PAGE에서 접합체의 밴드 이동이 관찰되었고, 웨스턴블롯팅에서 양성 결과가 나왔다.
실시예 5
신경성장인자(NGF)와 아미노옥시-PSA의 커플링
[00162] pH 6의 10ml Hepes 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg 신경성장인자(NGF)에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 4℃에서 30분 동안 암실에서 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도는 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 그 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축시켰다.
실시예 6
아미노옥시-PSA와 인터페론-알파(IFN-알파)의 커플링
[00163] pH 6의 10ml Hepes 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg 인터페론-알파(IFN-알파)에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 4℃에서 30분 동안 암실에서 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축시켰다.
실시예 7
TPA(조직 플라스미노겐 활성화제)와 아미노옥시-PSA의 커플링
[00164] pH 6의 10ml Hepes 버퍼 (50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg TPA에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 4℃에서 30분 동안 암실에서 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도는 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2,, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축시켰다.
실시예 8
아미노옥시-PSA와 트롬보포이에틴(TPO)의 커플링
[00165] pH 6의 10ml Hepes 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg TPA에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 암실에서 30분 동안 4℃에서 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도는 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축하였다.
실시예 9
트롬빈과 아미노옥시-PSA의 커플링
[00166] pH 6의 10ml Hepes 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg 트롬빈에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 4℃에서 30분 동안 암실에서 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 2.5M 암모늄 아세테이트의 최종 농도를 얻었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축하였다.
실시예 10
아미노옥시-PSA와 FGF의 커플링
[00167] pH 6의 10ml Hepes 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg 섬유아세포 성장 인자(FGF)에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 암실에서 4℃에서 30분 동안 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로농축하였다.
실시예 11
TGF-b와 아미노옥시-PSA의 커플링
[00168] pH 6의 10ml Hepes 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg 형질전환성장인자b (TGF-b)에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 암실에서 4℃에서 30분 동안 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩했습니다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축하였다.
실시예 12
PDGF과 아미노옥시-PSA의 커플링
[00169] pH 6의 10ml Hepes 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg 혈소판 유래 성장 인자(PDGF)에 10mM 과요오드산나트륨을 50㎕ 첨가하였다. 혼합물을 암실에서 4℃에서 30분 동안 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도는 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축하였다.
실시예 13
VEGF와 아미노옥시-PSA의 커플링
[00170] pH 6의 10ml Hepes 버퍼 (50mM Hepes, 5mM CaCl2, 150mM NaCl, 0.01% Tween)에 용해된 10mg 혈관 내피 성장 인자(VEGF)에 50μl 10mM 나트륨 기간을 첨가하였다. 혼합물을 4℃에서 30분 동안 암실에서 진탕하고, 1M 글리세롤 수용액 100μl를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 급랭시켰다. 그 다음, 20.0mg 아미노옥시-PSA(18.8kD)를 첨가하고 혼합물을 4℃에서 밤새 진탕하였다. 8M 암모늄 아세테이트(8M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)를 포함하는 버퍼를 첨가하여 이온 강도를 증가시켜 얻은 암모늄 아세테이트의 최종 농도는 2.5M이었다. 다음으로, 반응 혼합물을 평형 버퍼(2.5M 암모늄 아세테이트, 50mM Hepes, 5mM CaCl2, 350mM NaCl, 0.01% Tween 80, pH 6.9)로 평형화된 HiTrap Butyl FF(GE Healthcare, Fairfield, CT) 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 용출 버퍼(50mM Hepes, 5mM CaCl2, 0.01% Tween 80, pH 7.4)로 용출하고, 용출액을 30,000 MWCO의 Vivaspin(Sartorius, Goettingen, Germany) 장치를 사용하여 원심 여과로 농축하였다.
실시예 14
트롬보모듈린과 디아미노옥시(3 옥사-펜탄-1,5-디옥시아민 링커)-PSA의 커플링
[00171] 트롬보모듈린의 산화를 위해, NaIO4는 2mM의 농도로 사용된다. 3 mg의 트롬보모듈린을 4℃에서 30분 동안 pH 5.75(산성)에서 산화시킨 다음 NaHSO3를 첨가하여 최종 농도 2mM로 산화를 중단시켰다. 컨쥬게이션 반응은 산화된 트롬보모듈린과 디아미노옥시 PSA 중합체(23kDa)를 사용하여 수행된다. 반응 혼합물에서 중합체의 최종 농도가 결정된다. 반응 혼합물의 최종 pH는 약 5.75였다. 소듐 시아노보로하이드라이드를 반응 혼합물에 50mM 또는 3.17mg/ml의 농도로 첨가하였다. 반응은 4℃에서 2시간 동안 수행되었다. 접합체의 특성은 SDS PAGE 및 웨스턴 블롯팅을 사용한다는 것이다. SDS PAGE에서 접합체의 밴드 이동은 양성 결과를 나타낸다.
실시예 15
표면 플라스몬 공명(Surface Plasmon Resonance, SPR)에 의한 트롬보포이에틴(TPO) 결합 친화도 측정
[00172] TPO 결합 친화도는 다음과 같이 Biacore 기기(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)를 사용하여 분석된다:
[00173] TPO는 CMS 바이오센서 칩의 유동 세포에 3가지 밀도로 고정된다. 실험용 TPO 샘플을 러닝 버퍼(running buffer)(10mM Hepes, 150mM NaCl, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)를 사용하여 일련의 7개 희석액 (0.1~50nM X 주어진 단백질 값)로 희석한 다음, 50μL/min의 일정한 유속으로 "단일 주기" 모드를 사용하는 칩에 적용된다. 결합 시간은 4분, 해리 시간은 10분이다. 각 주기 후에 TPO가 칩에서 제거되고("재생") 새로운 TPO 샘플로 실험이 반복된다. 결합 및 해리 상수는 'Bioevaluation' 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 결정된다. 운동 매개변수(결합 속도 상수 ka, 해리 속도 상수 kd 및 평형 해리 상수 KD)가 결정된다. 결합은 또한 포화 시 계산된 최대 결합인 Rmax를 평가하여 결정된다. 운동 결과는 세 가지 다른 TPO 고정 레벨의 평균으로부터 계산된다.
[00174] TPO와 종양괴사인자 용체 사이의 복합체 형성의 반응속도를 결정하기 위해 Biacore 기술이 사용된다. 이를 위해 TPO는 센서 칩 표면의 3가지 다른 레벨에 고정되고, 실험용 TPO 및 트롬보포이에틴 수용체는 버퍼로 재완충되고 샘플은 단일 주기 모드에서 5가지 다른 농도로 주입된다. Biacore T200 장비의 "Bioevaluation" 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 고정된 TPO와 트롬보포이에틴 수용체 사이의 균질한 1:1 상호작용을 가정하여 결합 및 해리 상수를 결정한다.
[00175] 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd), 및 평형 해리 상수(=kd/ka) 등과 같은 TPO-트롬보포이에틴 수용체 상호작용을 설명하는 반응 파라미터가 결정되고, 추가적인 평가 및 데이터 비교가 이루어진다. PSA-변형단백질의 데이터는 수정되지 않은 것과 비교된다.
실시예 16
표면 플라스몬 공명(SPR)에 의한 CD20 결합 친화도 측정
[00176] CD20 결합 친화도는 다음과 같이 Biacore 기기(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)를 사용하여 분석된다:
[00177] CD20은 CMS 바이오센서 칩의 유동 세포에 3가지 밀도로 고정된다. 실험용 TPO 샘플을 러닝 버퍼(10mM Hepes, 150mM NaCl, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)를 사용하여 일련의 7개 희석액 (0.1~50nM X 주어진 단백질 값)으로 희석한 다음, 50μL/min의 일정한 유속으로 "단일 주기" 모드를 사용하는 칩에 적용한다. 결합 시간은 4분, 해리 시간은 10분이다. 각 주기 후에 TPO가 칩에서 제거되고("재생") 새로운 TPO 샘플로 실험이 반복된다. 결합 및 해리 상수는 'Bioevaluation' 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 결정된다. 운동 매개변수(결합 속도 상수 ka, 해리 속도 상수 kd 및 평형 해리 상수 KD)가 결정된다: 결합은 또한 포화 시 계산된 최대 결합인 Rmax를 평가하여 결정된다. 운동 결과는 세 가지 다른 TPO 고정 레벨의 평균으로부터 계산된다.
[00178] Biacore 기술은 CD20과 CD20 수용체 사이의 복합체 형성의 반응속도를 결정하는 데 사용된다. 이를 위해 CD20은 센서 칩 표면의 3가지 다른 레벨에 고정되고 실험용 CD20 및 CD20 수용체는 버퍼로 재완충되고 샘플은 단일 주기 모드에서 5가지 다른 농도로 주입된다. Biacore T200 장비의 "Bioevaluation" 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 고정된 CD20과 CD20 수용체 사이의 균질한 1:1 상호작용을 가정하여 결합 및 해리 상수를 결정한다.
[00179] 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd), 및 평형 해리 상수(=kd/ka) 등과 같은 CD20-CD20 수용체 상호작용을 설명하는 동역학 파라미터가 결정되고, 추가적인 평가 및 데이터 비교가 이루어진다. PSA-변형 단백질의 데이터는 수정되지 않은 것과 비교된다.
실시예 17
표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의한 트롬빈 결합 친화도 측정
[00180] 트롬빈 결합 친화도는 다음과 같이 Biacore 기기(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)를 사용하여 분석한다:
[00181] 트롬빈은 CMS 바이오센서 칩의 유동 세포에 3가지 밀도로 고정된다. 실험용 트롬빈 샘플을 러닝 버퍼(10mM Hepes, 150mM NaCl, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)를 사용하여 일련의 7개 희석액(0.1~50nM X 주어진 단백질 값)으로 희석한 다음, 50μL/min의 일정한 유속으로 "단일 주기" 모드를 사용하는 칩에 적용한다. 결합 시간은 4분, 해리 시간은 10분이다. 각 주기 후에 트롬빈은 칩에서 제거되고("재생") 새로운 트롬빈 샘플로 실험을 반복한다. 결합 및 해리 상수는 'Bioevaluation' 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 결정된다. 운동 매개변수(결합 속도 상수 ka, 해리 속도 상수 kd 및 평형 해리 상수 KD)가 결정된다. 결합은 또한 포화 시 계산된 최대 결합인 Rmax를 평가하여 결정된다. 동역학 결과는 세 가지 다른 TNF 고정 레벨의 평균으로부터 계산된다.
[00182] Biacore 기술은 트롬빈과 트롬보모듈린 사이의 복합체 형성의 동역학을 결정하는 데 사용된다. 이를 위해 트롬빈은 센서 칩 표면의 3가지 다른 레벨에 고정되고 실험용 트롬빈 및 트롬보모듈린(또는 유사체, 예: Solulin)은 버퍼에 완충되고 샘플은 단일 주기 모드에서 5가지 다른 농도로 주입된다. Biacore T200 장비의 "Bioevaluation" 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 고정된 트롬빈과 트롬보모듈린 사이의 균질한 1:1 상호작용을 가정하여 결합 및 해리 상수를 결정한다.
[00183] 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd), 및 평형 해리 상수(=kd/ka) 등과 같은 TNF-종양괴사인자수용체 상호작용을 설명하는 반응 파라미터가 결정되고, 추가적인 평가 및 데이터 비교가 이루어진다. PSA-변형 단백질의 데이터는 수정되지 않은 것과 비교된다.
실시예 18
표면 플라즈몬 공명에 의한 종양 괴사 인자(TNF) 결합 친화도의 측정(SPR)
[00184] TNF 결합 친화도는 다음과 같이 Biacore 기기(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)를 사용하여 분석된다:
[00185] TNF는 CMS 바이오센서 칩의 유동 세포에 3가지 밀도로 고정된다. 실험용 TNF 샘플을 러닝 버퍼(10mM Hepes, 150mM NaCl, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)를 사용하여 일련의 7개 희석액(주어진 단백질 값에 따라 0.1~50nM X)으로 희석한 다음, 50μL/min의 일정한 유속으로 "단일 주기" 모드를 사용하는 칩에 적용된다. 결합 시간은 4분, 해리 시간은 10분이다. 각 주기 후에, TNF는 칩에서 제거되고("재생") 새로운 TNF 샘플로 실험을 반복한다. 결합 및 해리 상수는 'Bioevaluation' 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 결정된다. 운동 매개변수(결합 속도 상수 ka, 해리 속도 상수 kd 및 평형 해리 상수 KD)가 결정된다. 결합은 또한 포화 시 계산된 최대 결합인 Rmax를 평가하여 결정된다. 동역학 결과는 세 가지 다른 TNF 고정 레벨의 평균으로부터 계산된다.
[00186] Biacore 기술은 TNF와 종양괴사인자수용체 사이의 복합체 형성의 반응속도를 결정하는 데 사용된다. 이를 위해, TNF는 센서 칩 표면의 3가지 다른 레벨에 고정되고 연구용 TNF 및 종양괴사인자수용체는 버퍼로 재완충되고 샘플은 단일 주기 모드에서 5가지 다른 농도로 주입된다. Biacore T200 장비의 "Bioevaluation" 프로그램의 Langmuir 모델을 사용하여 고정된 TNF와 종양 괴사 인자 수용체 사이의 균질한 1:1 상호작용을 가정하여 결합 및 해리 상수를 결정한다.
[00187] 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd), 및 평형 해리 상수(=kd/ka) 등과 같은 TNF-종양괴사인자수용체 상호작용을 설명하는 반응 파라미터가 결정되고 추가적인 평가 및 데이터 비교가 이루어진다. PSA-변형 단백질의 데이터는 수정되지 않은 것과 비교된다.
실시예 19
활성화된 단백질 C 분석에 의한 트롬보모듈린 결합 시 트롬빈 활성의 측정
다음의 자료가 출처와 함께 활용된다: C57BL6J 6-8주령 수컷 마우스는, 예를 들어, Jackson Laboratories에서, 인간 APC는 Haemotologic Technologies(Essex Junction, VT, USA)에서, 스펙트라자임(spectrazymw) PCa는 American Diagnostica에서, 소 유래 트롬빈은 GE Amersham Biosciences에서, 재조합 히루딘은 EMD Chemicals에서, 벤자미딘 HCl 수화물 및 V형 소혈청 알부민은 Fisher Scientific에서, 돼지 장 점막으로부터의 헤파린은 Sigma에서, 시험관내 실험용 96-웰(well) Costar(cat# 3595) 플레이트 및 8-웰 생체 내 실험용 EIA/RIA Corning 스트립(cat# 2590)는 Fisher Scientific으로부터 얻어진다.
인간 APC에 대한 마우스 단일클론항체는 상업적으로 얻을 수 있다. 트롬보모듈린 활성의 발색 측정을 사용하는 현재의 많은 분석은 본 명세서에 참조로 포함된 Salem et al., Journal of Biological Chemistry, Vol. 259, No. 19, pp. 12246-12251(1984)에 기반을 두고 있다. 또한, 상업적으로 이용 가능한 발색 분석 BIOPHEN Protein C 2.5도 일부 실험에 사용되며, 이는 Hyphen BioMed(West Chester, Ohio)에서 얻을 수 있다.
[00188] 시험관 내 인간 단백질 C 선량 반응. 인간 단백질 C (32.25, 64.5 및 322.5nM)를 1.7mL 미세원심분리 튜브에서 10분 동안 0.1mL PBS(w/Ca2+)에서 sTM(29.3nM) 및 소 유래 트롬빈(7.36nM)과 함께 배양한다. 25ml 분취량을 제거하고 25ml 재조합 히루딘[0.25U/ml]에 첨가하여 96-웰 플레이트 내의 각 웰에서 트롬빈 활성을 켄칭(quench)한다. 스펙트라자임(2mM)의 50ml 용액을 추가하고 60분에 OD를 측정한다. 3개의 독립적인 실험에서 60분 시점의 값을 평균화(N=3 ± SD)하였다. 인간 단백질 C 및 소 유래 트롬빈의 몰 농도는 각각 62 및 36.7kDa의 MW를 기준으로 계산된다.
[00189] 시험관내 트롬보모듈린 선량 반응. 인간 단백질 C(64.5nM)를 1.7mL 미세원심분리기 튜브에서 0.1mL PBS((w/Ca2+)에서 sTM(0.293, 2.93, 29.3 및 1470nM) 및 소 유래 트롬빈(7.36nM)과 함께 배양한다. 25ml 분취량을 제거하고 96-웰 플레이트 내의 각 웰에 놓고, 25ml 재조합 히루딘[0.25U/ml] 및 스펙트라자임(2mM)의 50ml 용액을 첨가하고, 60분에 OD를 측정한다. 60분 시점에서 독립적인 실험에 대한 값을 평균화(N=3 ± SD)하였다.
[00190] 생체 내 인간 단백질 C 선량 반응. 25g 마우스의 평균 혈액량을 1.5mL로 가정한다.. sTM(29.3nM) 및 소 유래 트롬빈(7.36nM)을 10분 동안 사전 배양하였고 C57BL6J 마우스의 경정맥에 주사했다. 그 직후, 인간 단백질 C(32.25, 64.5 또는 322.5nM)가 반대쪽 경정맥에 주입되었다. 10분 후, 3.8% 시트르산나트륨 및 벤자미딘 HCl(v/v 2:1)에서 하대정맥으로부터 혈액을 수집하고, 수집된 혈액 600ml 당 시트르산나트륨 혼합물 100ml를 첨가하였다. 혈액은 5분 동안 1500xg에서 회전된다. 혈장을 수집하고 액체 질소에서 급속 동결하고 사용할 때까지 -80°C에서 보관하였다.
[00191] 생체 내 트롬보모듈린 선량 반응. sTM(0.293, 2.93, 29.3 및 1470nM) 및 소 유래 트롬빈(7.36nM)을 C57BL6J 마우스의 경정맥에 주사하기 전에 10분 동안 사전 배양하였다. 그 직후, 인간 단백질 C(64.5nM)가 반대쪽 경정맥에 주입되었다. 10분 후, 3.8% 시트르산나트륨 및 벤자미딘 HCl(v/v 2:1)에서 하대정맥으로부터 혈액을 수집하였다. 혈액 600ml당 시트르산나트륨:벤자미딘 HCl 혼합물 100ml를 첨가한다. 위와 같이 혈장을 준비하였다. 또한, 적합하고 관련된 PKC 분석 방법은 본 명세서에 참조로 포함된 Camemolla, R., et al., J Immunol Methods., 2012 Oct 31; 384, (1-2), 21-24, 및 Xu, H., et al, C. J Biol Chem 2005;280(9):7956-7961에 설명되어 있다.
실시예 20
항체 기반 ELISA에 의한 인간 APC 검출
[00192] 20mM Hepes, 150NaCl, 5mM CaCl2, pH7.5 에서 항-인간 APC mAb 1555(5mg/mL)를 4℃에서 하룻밤 동안 고결합 EIA/RIA 8-웰 스트립에 결합하도록 하였다. 웰(Wells)을 20mM Hepes, 150NaCl, 5mM CaCl2, 0.05% Tween-20, pH7.5로 2회 세척하고 실온에서 1시간 동안 20mM Hepes, 150NaCl, 5mM CaCl2, 1% BSA, pH7.5로 막는다. 그런 다음 웰을 각각 5분 동안 2회 세척한다. 인간 APC 표준[0-3200ng/mL]은 20mM Hepes, 150NaCl, 15mM CaCl2, 0.1% BSA, 2U/mL 헤파린, 20mM 벤즈아미딘-염산, pH7.5(100ml/well)에 1:4로 희석된 마우스 혈장에서 준비되었다. 백그라운드(항체 비특이성)를 낮추기 위해 인간 APC 항체[50mg/mL]를 첨가한 인간 APC 표준을 나란히 준비한다. 다양한 용량의 인간 PC 또는 sTM이 제공된 마우스의 혈장 샘플은 표준과 동일하게 준비된다. 표준 및 샘플을 실온에서 1시간 동안 배양하고 각각 5분 동안 4회 세척한다. 1mM 스펙트라자임의 100ml 용액(코팅 버퍼에 1:10으로 희석)을 각 웰에 첨가하고 405nm에서 OD를 2시간 동안 매분 측정하였다. 인간 APC에 대한 원시 값은 과량의 항-인간 APC mAb[50mg/mL]의 존재 하에 얻은 인간 APC 값에서 뺀다. 그런 다음, 표준 곡선을 기반으로 하는 선형 방정식에서 APC 값을 외삽한다. 인간 APC 값[ng/mL]은 N=3-4±SD의 평균으로 보고된다.
실시예 21
혈전성 뇌졸중 모델에서 PSA-트롬보모듈린 유사체(Solulin) 활성
[00193] 이 실험에서, 본 발명에 따라 제조된 다양한 PSA-트롬보모듈린을 시험하고 마우스 혈전성 뇌졸중 모델에서 생물학적 활성에 대해 비교한다. 실험은 문헌[Su, E.J., et al., 2011, Journal of Thrombosis and Haemostasis, 9, 1174-1182, DOI: 10.1111/j.1538-7836.2011.04269.x]에 기재된 방법에 따라 수행되며, 이는 본원발ㅍ명에 참고로 포함된다. 다음의 자료가 출처와 함께 활용된다: C57BL6J 6-8주령 수컷 마우스는 Jackson Laboratories에서 얻어지고, 인간 APC는 Haemotologic Technologies(Essex Junction, VT, USA), 스펙트라자임 PCa에서 얻을 수 있다.
[00194] 허혈성뇌졸중 모델. 수컷(10주)을 클로랄 수화물(450 mg kg-1)로 마취하고 해부 현미경 아래에 안전하게 둔다. 왼쪽 MCA는 설명된 대로 노출되고, 레이저 도플러 프로브(Type N: Transonic Systems, Ithaca, NY, USA)는 MCA 분기점에서 1.5mm 등쪽 중앙에 위치한 대뇌 피질의 표면에 배치된다. 프로브는 유량계(Transonic 모델 BLF21)에 연결되고 상대 조직 관류 유닛(TPU)는 연속 데이터 수집 프로그램(windaq, dataq, Akron, OH, USA)으로 기록된다. Rose Bengal(RB)(Fisher)은 Lactate Ringer's에서 10mg mL-1로 희석된 다음 꼬리 정맥(50mg kg-1)에 주입된다. 3.5mW 녹색광 레이저(540nm; Melles Griot, Albuquerque, NM, USA)가 6cm 거리에서 MCA를 향하고, 대뇌 피질의 TPU가 기록되었다. 안정적인 교합은 TPU가 교합 전 수준의 < 20%로 떨어지고 레이저 제거 후 10분 이내에 반등하지 않을 때 얻어진다.
[00195] PSA-솔루린 전달 및 대뇌 혈류 추적. PSA-Solulin은 꼬리 정맥에 삽입되고 Genie Plus 주사기 펌프(Kent Scientific, Torrington, CT, USA)에 연결된 26-G Abbocath®-T 혈관 카테터(Hospira, Lake Forest, IL, USA)를 통해 투여된다. 마우스는 RB 주입 30분 전 또는 MCAO 30분 또는 60분 후에 Lactate Ringer(대조군) 또는 솔루린을 받는다. (주입)량은 추후 결정.
[00196] 모든 대뇌 혈류(CBF) 추적은 RB 주입 10분 전에 시작되고, 이 시간 동안의 평균 CBF는 100%로 간주되어 CBF를 정상화하는 데 사용된다. RB 주입 시 시간은 0으로 설정된다. MCAO 72시간 후, 동물을 클로랄 수화물(450 mg kg-1)로 재마취하고, 수술 부위를 다시 노출시킨 후 72시간 CBF 데이터를 얻기 위해 도플러 프로브를 이전과 동일한 위치에 다시 부착하였다.
[00197] 박출량을 측정하기 위해, 뇌를 제거하고 2mm 두께의 관상면으로 절단하고 37℃에서 20분 동안 인산염 완충 식염수(PBS)에서 4%의 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)로 염색한다. 그 다음 4% 파라포름알데히드 용액에 10분간 고정시킨다. 관상면은 하기 공식을 사용하여 미국국립보건원(NIH)이 개발한 Image J로 분석된다: V% 박출량 = Σ(병변 범위)/Σ(동측성 대뇌 반구 면적) × 100. V% 박출량은 동측성 반구의 백분율로 계산된 박출량이다.
[00198] 헤모글로빈 분석. MCAO 24시간 후, 뇌를 제거하고, MCAO의 동측(同側) 및 반대측 반구로 분리하고, 각 반구를 얼음 위 PBS에서 균질화하였다. 균질화 및 혼합 후, 샘플을 23°C에서 5분 동안 배양한 다음 4°C에서 30분 동안 중력가속도 25000g에서 원심분리하고, 상층액의 흡광도를 410nm에서 판독하고, 헤모글로빈은 정제된 헤모글로빈 표준((Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)과 비교하여 정량화된다. 면역조직화학. MCAO 72시간 후에 안락사된 비히클- 및 솔루린-처리된 동물의 파라핀 삽입 섹션(5mm)은 제조업체의 지침에 따라 Apoptag 키트(Oncor, Gaithersburg, MD, USA)를 사용하여 검사해야 한다.
[00199] 또한, 본 발명의 명세서는 또한 다음과 같이 설명될 수 있다:
[00200] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 유효량의 단백질-PSA 접합체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 여기서 PSA -접합체는 하기로부터 선택된 단백질에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함한다:
제9인자(FIX), 제8인자(FVIII), 제7a인자(FVIIa), 폰 빌레브란트 인자(VWF), 제5인자(FV), 제10인자(FX), 제11인자(FXI), 제12인자(FXII), 트롬빈(FII), 트롬보모듈린(및 유사체, 예를 들어 솔루린(Solulin)), 단백질 C, 단백질 S, tPA, PAI-1, 조직 인자(TF), ADAMTS 13 프로테아제, IL-1 알파, IL-1 β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-11, 집락자극인자-1(CSF-1), M-CSF, SCF, GM-CSF, 과립구 집락자극인자(G-CSF), EPO, 인터페론-알파(IFN-알파), 공통(consensus) 인터페론, IFN-β, IFN-감마, IFN-오메가, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-31, IL-32 알파, IL-33, 트롬보포이에틴(TPO), Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, 엔지오포이에틴(angiopoietin) 유사 폴리펩타이드 1(ANGPTL1), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 2(ANGPTL2), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 3(ANGPTL3), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 4(ANGPTL4), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 5(ANGPTL5), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 6(ANGPTL6), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 7(ANGPTL7), 비트로넥틴, 혈관 내피세포 성장인자(VEGF), 엔지오제닌(angiogenin), 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 골형성 단백질(bone morphogenetic protein)-1, 골형성 단백질-2, 골형성 단백질-3, 골형성 단백질-4, 골형성 단백질-5, 골형성 단백질-6, 골형성 단백질-7, 골형성 단백질-8, 골형성 단백질-9, 골형성 단백질-10, 골형성 단백질-11, 골형성 단백질-12, 골형성 단백질-13, 골형성 단백질-14, 골형성 단백질-15, 골형성 단백질 수용체 IA, 골형성 단백질 수용체 IB, 골형성 단백질 수용체 II, 뇌유래 신경영양 인자(brain derived neurotrophic factor), 카디오트로핀(cardiotrophin)-1, 섬모 신경영양 인자(ciliary neurotrophic factor), 섬모 신경영양 인자 수용체, 크립토(cripto), 크립틱(cryptic), 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 1(cytokine-induced neutrophil chemotactic factor 1), 사이토카인 유발 호중구, 화학주성 인자 2α, 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 2β, β 내피세포 증식인자, 엔도텔린 1, 표피 성장인자, 에피젠(epigen), 에피레귤린(epiregulin), 상피 유래 호중구 유인물질(epithelial-derived neutrophil attractant), 섬유모세포 성장인자 4, 섬유모세포 성장인자 5, 섬유모세포 성장인자 6, 섬유모세포 성장인자 7, 섬유모세포 성장인자 8, 섬유모세포 성장인자 8b, 섬유모세포 성장인자 8c, 섬유모세포 성장인자 9, 섬유모세포 성장인자 10, 섬유모세포 성장인자 11, 섬유모세포 성장인자 12, 섬유모세포 성장인자 13, 섬유모세포 성장인자 16, 섬유모세포 성장인자 17, 섬유모세포 성장인자 19, 섬유모세포 성장인자 20, 섬유모세포 성장인자 21, 섬유모세포 성장인자 산성, 섬유모세포 성장인자 염기성, 아교세포주 유래(glial cell line-derived) 신경영양 인자 수용체 α1, 아교세포주 유래 신경영양 인자 수용체 α2, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질 α, 성장 관련 단백질 β, 성장 관련 단백질 .감마., 헤파린 결합 표피 성장인자, 간세포 성장인자, 간세포 성장인자 수용체, 간종 유래(hepatoma-derived) 성장인자, 인슐린 유사 성장인자 I, 인슐린 유사 성장인자 수용체, 인슐린 유사 성장인자 II, 인슐린 유사 성장인자 결합 단백질, 각질세포 성장인자, 백혈병 억제 인자, 백혈병 억제 인자 수용체 α, 엔도모르핀(1&2), 뉴로펩타이드, 신경 성장인자, 신경 성장인자 수용체, 뉴로포이에틴, 뉴로트로핀-3, 뉴로트로핀-4, 온코스탄틴 M(OSM), 태반 성장인자, 태반 성장인자 2, 혈소판 유래 내피세포 성장인자, 혈소판 유래 성장인자, 혈소판 유래 성장인자 A 사슬, 혈소판 유래 성장인자 AA, 혈소판 유래 성장인자 AB, 혈소판 유래 성장인자 B 사슬, 혈소판 유래 성장인자 BB, 혈소판 유래 성장인자 수용체 α, 혈소판 유래 성장인자 수용체 β, 프리β(pre-β) 세포 성장 자극인자, 줄기세포 인자(SCF), 줄기세포 인자 수용체, TNF, TNF0, TNF1, TNF2, 전환 성장인자 α, 전환 성장인자 β, 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β1.2, 전환 성장인자 β2, 전환 성장인자 β3, 전환 성장인자 β5, 잠재 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β 결합 단백질 I, 전환 성장인자 β 결합 단백질 II, 전환 성장인자 β 결합 단백질 III, 흉선 기질 림프포이에틴(thymic stromal lymphopoietin: TSLP), 종양 괴사인자 수용체 I형, 종양 괴사인자 수용체 II형, 우로키네이스형(urokinase-type) 플라스미노겐 활성인자, 포스포리페이스 활성 단백질(PUP), 인슐린, 렉틴 리신, 프로락틴, 융모생식샘 자극 호르몬, 난포 자극 호르몬, 갑상샘 자극 호르몬, 조직 플라스미노겐 활성인자, IgG, IgE, IgM, IgA, 및 IgD, α-갈락토시데이스, β-갈락토시데이스, DNA 분해효소, 피투인, 황체형성 호르몬, 에스트로겐, 인슐린, 알부민, 지질단백질, 태아단백질, 트랜스페린, 트롬보포이에틴, 우로키네이스, 인테그린, 트롬빈, 트롬보모듈린, 렙틴, 아달리무맙(adalimumab), 데노스맙(denosumab), 또는 에타너셉트(etanercept).
[00201] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 유효량의 단백질-PSA 접합체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 PSA- 접합체는 하기로부터 선택된 단백질과 공유결합하는 PSA를 포함한다:
제9인자(FIX), 제8인자(FVIII), 제7a인자(FVIIa), 폰 빌레브란트 인자(VWF), 제5인자(FV), 제10인자(FX), 제11인자(FXI), 제12인자(FXII), 트롬빈(FII), 단백질 C, 단백질 S, tPA, PAI-1, 조직 인자(TF), ADAMTS 13 프로테아제, IL-1 알파, IL-1 β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-11, 집락자극인자-1(CSF-1), M-CSF, SCF, GM-CSF, 과립구 집락자극인자(G-CSF), EPO, 인터페론-알파(IFN-알파), 공통 인터페론, IFN-β, IFN-감마, IFN-오메가, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-31, IL-32 알파, IL-33, 트롬보포이에틴(TPO), Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 1(ANGPTL1), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 2(ANGPTL2), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 3(ANGPTL3), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 4(ANGPTL4), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 5(ANGPTL5), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 6(ANGPTL6), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 7(ANGPTL7), 비트로넥틴, 혈관 내피세포 성장인자(VEGF), 엔지오제닌, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 골형성 단백질-1, 골형성 단백질-2, 골형성 단백질-3, 골형성 단백질-4, 골형성 단백질-5, 골형성 단백질-6, 골형성 단백질-7, 골형성 단백질-8, 골형성 단백질-9, 골형성 단백질-10, 골형성 단백질-11, 골형성 단백질-12, 골형성 단백질-13, 골형성 단백질-14, 골형성 단백질-15, 골형성 단백질 수용체 IA, 골형성 단백질 수용체 IB, 골형성 단백질 수용체 II, 뇌유래 신경영양 인자, 카디오트로핀-1, 섬모 신경영양 인자, 섬모 신경영양 인자 수용체, 크립토, 크립틱, 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 1, 사이토카인 유발 호중구, 화학주성 인자 2α, 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 2β, β 내피세포 증식인자, 엔도텔린 1, 표피 성장인자, 에피젠, 에피레귤린, 상피 유래 호중구 유인물질, 섬유모세포 성장인자 4, 섬유모세포 성장인자 5, 섬유모세포 성장인자 6, 섬유모세포 성장인자 7, 섬유모세포 성장인자 8, 섬유모세포 성장인자 8b, 섬유모세포 성장인자 8c, 섬유모세포 성장인자 9, 섬유모세포 성장인자 10, 섬유모세포 성장인자 11, 섬유모세포 성장인자 12, 섬유모세포 성장인자 13, 섬유모세포 성장인자 16, 섬유모세포 성장인자 17, 섬유모세포 성장인자 19, 섬유모세포 성장인자 20, 섬유모세포 성장인자 21, 섬유모세포 성장인자 산성, 섬유모세포 성장인자 염기성, 아교세포주 유래 신경영양 인자 수용체 α1, 아교세포주 유래 신경영양 인자 수용체 α2, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질 α, 성장 관련 단백질 β, 성장 관련 단백질 .감마., 헤파린 결합 표피 성장인자, 간세포 성장인자, 간세포 성장인자 수용체, 간종 유래 성장인자, 인슐린 유사 성장인자 I, 인슐린 유사 성장인자 수용체, 인슐린 유사 성장인자 II, 인슐린 유사 성장인자 결합 단백질, 각질세포 성장인자, 백혈병 억제 인자, 백혈병 억제 인자 수용체 α, 신경 성장인자, 신경 성장인자 수용체, 뉴로포이에틴, 뉴로트로핀-3, 뉴로트로핀-4, 온코스탄틴 M(OSM), 태반 성장인자, 태반 성장인자 2, 혈소판 유래 내피세포 성장인자, 혈소판 유래 성장인자, 혈소판 유래 성장인자 A 사슬, 혈소판 유래 성장인자 AA, 혈소판 유래 성장인자 AB, 혈소판 유래 성장인자 B 사슬, 혈소판 유래 성장인자 BB, 혈소판 유래 성장인자 수용체 α, 혈소판 유래 성장인자 수용체 β, 프리β 세포 성장 자극인자, 줄기세포 인자(SCF), 줄기세포 인자 수용체, TNF, TNF0, TNF1, TNF2, 전환 성장인자 α, 전환 성장인자 β, 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β1.2, 전환 성장인자 β2, 전환 성장인자 β3, 전환 성장인자 β5, 잠재 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β 결합 단백질 I, 전환 성장인자 β 결합 단백질 II, 전환 성장인자 β 결합 단백질 III, 흉선 기질 림프포이에틴(TSLP), 종양 괴사인자 수용체 I형, 종양 괴사인자 수용체 II형, 우로키네이스형 플라스미노겐 활성인자, 포스포리페이스 활성 단백질(PUP), 인슐린, 렉틴 리신, 프로락틴, 융모생식샘 자극 호르몬, 난포 자극 호르몬, 갑상샘 자극 호르몬, 조직 플라스미노겐 활성인자, IgG, IgE, IgM, IgA, 및 IgD, α-갈락토시데이스, β-갈락토시데이스, DNA 분해효소(예: DNA 분해효소 I(DNAse I)), 피투인, 황체형성 호르몬, 에스트로겐, 인슐린, 알부민, 지질단백질, 태아단백질, 트랜스페린, 트롬보포이에틴, 우로키네이스, 인테그린, 트롬빈, 트롬보모듈린, 렙틴, 휴미라(Humira)(아달리무맙), 프롤리아(Prolia)(데노스맙), 또는 이들의 생물학적 활성 단편, 유도체 또는 변종.
[00202] HIV를 치료하는 방법으로서, 유효량의 단백질-PSA 접합체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 PSA-접합체는 gp120-gp41 경계면(interface)에서 HIV 외피 당단백질에 결합하는 단백질에 공유결합으로 이루어진 PSA를 포함한다.
[00203] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 단백질-PSA 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 PSA-접합체는 하기로부터 선택된 단백질에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함한다:
탄산무수화효소 IX, 알파-태아단백, 알파-액티닌-4, A3(A33 항체에 대해 특이적인 항원), ART-4, B7, Ba-733, BAGE, BrE3-항원, CA125, CAMEL, CAP-1, CASP-8/m, CCCL19, CCCL21, CD1, CDla, CD2, CD3, CD4, CDS, CD8, CDl-lA, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD29, CD30,CD32b, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD45, CD46, CD54, CD55, CD59, CD64, CD66a-e, CD67, CD70, CD74, CD79a, CD80, CD83, CD95, CD126, CD133, CD138, CD147, CD154, CDC27, CDK-4/m, CDK 2A, CXCR4, CXCR7, CXCL12, HIF-l-알파, 결장 특이 항원-p(colon-specific antigen-p: CSAp), CEA(CEACAM5), CEACAM6, c-met, DAM, EGFR, EGFRvIII, EGP-1, EGP-2, ELF2-M, Ep-CAM,Flt-1, Flt-3, 엽산 수용체, G250 항원, GAGE, GROB, HLA-DR, HM1.24, 인간 융모성 생식선 자극호르몬(HCG) 및 그의 서브유닛, HER2/neu, HMGB-1, 저산소증 유도인자(HIF-1), HSP70-2M, HST-2 또는 1a, IGF-1R, IFN-감마, IFN-알파, IFN-β, IL-2, IL-4R, IL-6R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-6, IL-8, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL- 25, 인슐린 유사 성장인자-1(IGF-1), KC4-항원, KS-1-항원, KS1-4, Le-Y, LDR/FUT, 대식세포 유주 억제인자(MIF), MAGE, MAGE-3, MART-1, MART-2, NY-ESO-1, TRAG-3, mCRP, MCP-1, MIP-1A, MIP-1B, MIF, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5, MUM-1/2, MUM-3, NCA66, NCA95, NCA90, 췌장암 뮤신(pancreatic cancer mucin), 태반 성장인자, p53, PLAGL2, 전립선 산성 포스파타제(prostatic acid phosphatase), PSA, PRAME, PSMA, P1GF, ILGF, ILGF-1R, IL-6, IL-25, RS5, RANTES, T101, SAGE, S100, 서바이빈(survivin), 서바이빈-2B, TAC, TAG-72, 테나신, TRAIL 수용체, TNF-알파, Tn-항원, 톰슨-프리덴라이히 항원, 종양 괴사 항원, VEGFR, ED-B 피브로넥틴, WT-1, 17-lA-항원, 보체인자 C3, C3a, C3b, C5a, C5, 혈관형성 마커(angiogenesis marker), bcl-2, bcl-6, Kras, cMET, 종양유전자 마커 및 종양유전자 생성물.
[00204] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 단백질-PSA 접합체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 PSA-접합체는 메소텔린을 인식하는 항체 또는 결합 단백질에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함한다.
[00205] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 단백질-PSA 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 PSA-접합체는 하기로부터 선택된 단백질과 공유결합으로 연결된 PSA를 포함한다:
메탈로프로티네이스(metalloproteinase), 서브틸레이스(subtilase), 또는 리페이스(lipase), 트라이아실글리세롤 리페이스, 서브틸레이스, 메탈로프로티네이스, 콜린에스터레이스(cholinesterase), 아세틸콜린에스터레이스, 뷰틸콜린에스터레이스, 트립신, 서브틸리신(subtilisin), 서몰리신, 또는 CT, 콜린에스터레이스, 아세틸콜린에스터레이스, 뷰티릴콜린에스터레이스, 서브틸레이스, 서브틸리신, 서몰리신, 리페이스, 트라이아실글리세롤 리페이스, 메탈로프로티네이스, 키모트립신, -키모트립신, 또는 트립신을 포함하는 에스터레이스 그룹(esterase group)의 효소, 키모트립신-pDMAEMA(CT-pDMAEMA) 접합체, 메탈로프로티네이스-pOEGMA 접합체, 서몰리신-pOEGMA 접합체, 서브틸리신-이온성 액체(ionic liquid) 폴리머 접합체, 서브틸레이스-이온성 액체 폴리머 접합체, 또는 리페이스-pDMAA 접합체.
[00206] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 유효량의 단백질-PSA 접합체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 PSA-접합체는 하기 항체를 포함하는 항체-약물에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함한다:
트라스투주맙 및 퍼투주맙과 같은 항HER2 단클론 항체, 리툭시맙, 오파투무맙, 토시투모맙 및 이브리투모맙과 같은 항CD20 단클론 항체, 오레고보맙과 같은 항CA125 단클론 항체, 에드레콜로맙(edrecolomab)과 같은 항EpCAM(17-A1) 단클론 항체, 세툭시맙, 파니투무맙 및 니모투주맙과 같은 항EGFR 단클론 항체, 브렌툭시맙과 같은 항CD30 단클론 항체, 젬투주맙 및 huMy9-6과 같은 항CD33 단클론 항체, 에타라시주맙과 같은 항혈관(anti-vascular) 인테그린 알파-v β-3 단클론 항체, 5 알렘투주맙과 같은 항CD52 단클론 항체, 에프라투주맙과 같은 항CD22 단클론 항체, 라베투주맙과 같은 항CEA 단클론 항체, 비바투주맙과 같은 항CD44v6 단클론 항체, 시브로투주맙(sibrotuzumab)과 같은 항FAP 단클론 항체, huB4와 같은 항CD19 단클론 항체, huC242와 같은 항CanAg 단클론 항체, huN901과 같은 항CD56 단클론 항체, 다라투무맙과 같은 항CD38 단클론 항체, DS6과 같은 항CA6 단클론 항체 10, 식수투무맙(cixutumumab) 및 3B7과 같은 항IGF-IR 단클론 항체, CNTO 95와 같은 항인테그린 단클론 항체, 및 B-B4과 같은 항신데칸-1 단클론 항체.
[00207] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 유효량의 단백질-PSA 접합체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 PSA-접합체는 항체가 아닌 하기의 결합 화합물을 포함하는 결합 분자 약물 접합체에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함한다:
IFN-a, IFN-f3, 및 IFN-y와 같은 인터페론, 트랜스페린, 표피 성장인자(EGF) 및 EGF 유사 도메인, 가스트린 분비 펩타이드(GRP), 혈소판 유래 성장인자(PDGF), 전환 성장인자(TGF), 우두(vaccinia) 성장인자(VGF), IGF-1 및 IGF-2와 같은 인슐린 및 인슐린 유사 성장인자(IGF), 갑상샘 자극 호르몬 분비 호르몬(TRH), 멜라닌세포 자극 30 호르몬(MSH), 스테로이드 호르몬(예를 들어 에스트로겐 및 안드로겐), 및 소마토스타틴과 같은 기타 적합한 호르몬을 포함하지만 이들에 제한되지 않는 리간드-약물 접합체를 위해 세포 결합 리간드로서 사용될 수 있는 항체 외에 결합 단백질; IL-2, IL-3, IL-4, 및 IL-6과 같은 림포카인; G-CSF, M-CSF 및 GM-CSF와 같은 집락자극인자(CSF); 봄베신; 가스트린; 및 엽산.
[00208] 질병, 암 또는 면역 장애를 치료하는 방법으로서, 유효량의 PSA-트롬빈 접합체를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 PSA-트롬빈 접합체는 트롬빈에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함한다.
[00209] 본 발명을 수행하기 위해 본 발명자에게 알려진 최상의 모드를 포함한 특정 실시예가 본 명세서에 기재되어 있다. 물론, 당업자는 상술한 바에 따라 본 명세서에 기재된 실시예를 변형할 수 있을 것이다. 본 발명자는 숙련된 기술자가 그러한 변형을 적절하게 사용하기를 기대하며, 본 발명이 여기에 구체적으로 설명된 것과 다르게 실시되기를 의도한다. 따라서, 본 발명은 관련 법률이 허용하는 바에 따라, 본 명세서에 첨부된 청구범위에 인용된 대상의 모든 수정 및 등가물을 포함한다. 나아가, 본 명세서에서 달리 나타내지 않거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 모든 가능한 변형에서 상술한 실시예의 임의의 조합 또한 본 발명에 포함된다.
[00210] 본 발명의 대안적인 실시예, 구성 또는 단계의 분류를 제한으로 해석하여서는 안된다. 각각의 분류는 개별적으로 또는 다른 분류와의 조합으로 참조 및 청구될 수 있다. 하나 이상의 분류는 편의 및/또는 특허성을 이유로 포함되거나 삭제될 수 있다. 이러한 포함 또는 삭제가 이루어질 때, 본 명세서는 수정된 분류를 포함하는 것으로 간주되어 청구범위에 사용된 모든 마쿠쉬 분류의 기재된 설명을 충족한다.
[00211] 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 특성, 항목, 수량, 매개변수, 속성, 용어 등을 표현하는 모든 숫자는 모든 경우에 "약"이라는 용어에 의해 수정되는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 특성, 항목, 수량, 매개변수, 속성 또는 그렇게 한정된 용어가 명시된 특성, 항목, 수량, 매개변수 값의 위아래로 ±10%의 범위를 포함함을 의미한다. 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 명세서 및 첨부된 청구범위에 기재된 수치 매개변수는 변경될 수 있는 근사치이다. 최소한 청구범위에 대한 균등론 적용을 제한하려는 시도가 아니라, 각 수치 표시는 적어도 보고된 유효 자릿수에 비추어 그리고 일반적인 반올림을 적용하여 해석되어야 한다. 본 발명의 넓은 범위를 설명하는 수치 범위 및 값이 근사치임에도 불구하고, 특정 실시예에 기재된 수치 범위 및 값은 가능한 한 정확하게 보고된다. 그러나 모든 수치 범위 또는 값에는 본질적으로 해당 테스트 측정에서 발견된 표준편차에서 필연적으로 발생하는 특정 오류가 포함된다. 본 명세서에서 인용된 값의 수치 범위는 단지 범위 내에 속하는 각각의 개별 수치를 개별적으로 참조하는 약식 방법으로서 사용하기 위한 것이다. 본 명세서에 달리 표시되지 않는 한, 수치 범위의 각각의 개별 값은 개별적으로 인용된 것으로 본다. 유사하게, 본 명세서에 사용된 바와 같이, 달리 표시되지 않는 한, 용어 "실질적으로"는 특성, 항목, 수량, 매개변수, 속성 또는 자격을 갖춘 용어의 근사치를 나타내도록 의도된 정도의 용어이며 당업자가 이해하고 해석할 수 있는 범위를 포함한다.
[00212] 실시예 또는 실시예의 측면과 관련하여 "일 수도 있는" 또는 "할 수 있는"이라는 용어의 사용은 "아닐지도 모르는" 또는 "할 수 없는"의 대안적인 의미도 수반한다. 이와 같이, 본 명세서가 실시예 또는 실시예의 측면이 본 발명의 일부로서 포함될 수도 있거나 포함될 수 있다고 개시하는 경우, 부정적인 제한 또는 배제 조건 또한 명시적으로 의도된다. 즉, 이는 실시예 또는 실시예의 측면이 본 발명의 일부로 포함되지 않거나 포함되지 않을 수 있다는 것을 의미한다. 유사한 방식으로, 실시예 또는 실시예의 측면과 관련하여 "선택적으로"라는 용어의 사용은 실시예의 그러한 실시예 또는 실시예의 측면이 본 발명의 일부로서 포함될 수 있거나 또는 포함되지 않을 수 있음을 의미한다. 그러한 부정적인 제한 또는 배제 조항이 적용되는지 여부는 부정적인 제한 또는 배제 조건이 청구범위에 인용되었는지 여부를 기반으로 한다.
[00213] 용어 "a", "an", "the" 및 본 발명을 설명하는 맥락에서(특히 다음 청구범위의 맥락에서) 사용되는 유사한 인용은 달리 명시되지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 또한 식별된 구성에 대한 "첫 번째", "두 번째", "세 번째" 등과 같은 서수 표시는 구성을 구별하는 데 사용되며, 이러한 구성의 필수 또는 제한된 수를 나타내거나 암시하지 않으며, 달리 명시되지 않는 한 그러한 구성의 특정 위치 또는 순서를 나타내지 않는다. 본 명세서에 기재된 모든 방법은 달리 나타내지 않거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 여기에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어(예: "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며 달리 청구된 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 본 명세서의 어떠한 언어도 본 발명을 실시하는 데 필수적인 미청구 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.
[00214] 출원 또는 보정에 따라 추가되었는지 여부에 관계없이 청구범위에서 사용되는 경우, 개방형 연결부 "포함하는"("포함하는", "함유하는" 및 "갖는"과 같은 등가의 개방형 연결구와 함께)은 명시적으로 인용된 모든 요소, 제한, 단계 및/또는 특징을 단독으로 또는 인용되지 않은 대상과 결합하여 포함한다. 즉, 청구범위에서 명명된 요소, 제한 및/또는 특징이 필수적이지만 명명되지 않은 다른 요소, 제한 및/또는 특징도 추가될 수 있다. 본 명세서에 개시된 특정 실시예는 "포함하는" 대신에 또는 그에 대한 수정으로서 폐쇄형 연결부 "구성되는" 또는 "본질적으로 구성되는"을 사용하여 청구범위에서 추가로 제한될 수 있다. 출원 또는 수정에 따라 추가되었는지 여부에 관계없이 청구범위에서 사용될 때, 폐쇄형 연결부 "구성된"은 청구범위에 명시적으로 언급되지 않은 요소, 제한, 단계 또는 특징을 배제한다. "본질적으로 구성되는"이라는 폐쇄형 연결부는 청구범위를 명시적으로 인용된 요소, 제한, 단계 및/또는 특징 및 기본적이고 및 새로운 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 기타 요소, 제한, 단계 및/또는 특징으로 청구범위를 제한한다. 따라서, 개방형 연결부 "포함하는"의 의미는 구체적으로 인용된 모든 요소, 제한, 단계 및/또는 특징뿐만 아니라 임의의 선택적 추가의 지정되지 않은 것들을 포괄하는 것으로 정의된다. 폐쇄형 연결부 "구성되는"은 청구범위에 구체적으로 인용된 요소, 제한, 단계 및/또는 특징만을 포함하는 것으로 정의되는 반면, "본질적으로 구성되는"이라는 폐쇄형 연결부는 청구범위에 구체적으로 인용된 요소, 제한, 단계 및/또는 특징 그리고 실질적으로 청구범위의 기본적이고 새로운 특징에 영향을 미치지 않는 요소, 제한, 단계 및/또는 특징을 포함하는 것으로 정의된다. 따라서, 개방형 연결부 "포함하는"(이와 동등한 개방형 연결부와 함께)은 그 의미 내에 "구성되는" 또는 "본질적으로 구성되는"이라는 폐쇄형 연결부에 명시된 본 발명을 포함한다. 이와 같이, "포함하는"이라는 문구로 본 명세서에 기재되거나 그렇게 청구된 실시예는 "본질적으로 구성되는" 및 "구성되는"에 대하여 명시적으로 또는 본질적으로 모호하지 않게 기술되고, 사용되고, 뒷받침이 된다.
[00215] 본 명세서에서 인용되고 확인된 모든 특허, 특허 간행물 및 기타 간행물은 예를 들어, 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 그러한 간행물에 기재된 구성 및 방법론을 설명하고 개시할 목적으로 그 전체를 인용함에 따라, 개별적 그리고 명시적으로 본 명세서에 포함된다. 본 발명 출원일 이전에 공개된 간행물만 제공된다. 이와 관련하여, 발명가가 선행 발명 또는 다른 이유로 그러한 개시보다 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 아니 된다. 본 명세서의 내용에 대한 날짜 또는 표현에 대한 모든 진술은 출원인이 인용할 수 있는 정보를 기반으로 하며 이러한 본 명세서의 날짜 또는 내용의 정확성을 인정하는 것은 아니다.
단백질 접합체의 서열
서열번호 명칭 아미노산서열
1 E124 MADSVKTFLQDLARGIKDSIWGICTISKLDARIQQKREEQRRRRASSVLAQRRAQSIERKQESEPRIVSRIFQCCAWNGGVFWFSLLLFYRVFIPVLQSVTARIIGDPSLHGDVWSWLEFFLTSIFSALWVLPLFVLSKVVNAIWFQDIADLAFEVSGRK
PHPFPSVSKIIADMLFNLLLQALFLIQGMFVSLFPIHLVGQLVSLLHMSLLYSLYCFEYRWFNKGIEMHQRLSNIERNWPYYFGFGLPLAFLTAMQSSYIISGCLFSILFPLFIISANEAKTPGKAYLFQLRLFSLVVFLSNRLFHKTVYLQSALSSSTSAEKFPSPHPSPAKLKATAGH
2 PRU P 3 ASSNGIRNVNNLARTPDRQAC
3 TNF VPAQWFPRSIPEPSNLCQPREYYDERAQRRCSQCPPGCRAKSFCNETSDTVCVPCEDSTYTQLWNWLPECLSCGSRCSTGQVETQACTLKQNRICTCEPGRYCILPRQEGCQVCGLLRKCPPGFGVAKPGTATSNWCA
4 P38 감마 단백질저해제 YGRKKRRQRRRARVPKETAL
5 항암 RPMRLESFSACIWVKATDVLNKTILFSYGTKRNPYEI
6 항암 GGGFDETLAFSGRLTGFNIWDSVLSNEEIRETGGAESCHI
7 타우단백질 KHQPGGG
8 타우단백질 KHVPGGG
9 타우단백질 HHKPGGG
10 타우단백질 THVPGGG
11 SERCA 칼슘펌프 MAEKESTSPHLMVPILLLVGWIVGCIIVIYIVFF
12 SERCA 칼슘펌프 MAEKAESTSPHLMVPILLLVGWIVGCIIVIYIVFF
13 SERCA 칼슘펌프 MAEKESTSPHLIVPILLLVGWIVGCIIVIYIVFF
14 SERCA 칼슘펌프 MAEKAESTSPHLIVPILLLVGWIVGCIIVIYIVFF
15 신경독성(excitatory neurotoxicity) YEKLLDTEI
16 GLP1 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT
17 GLP1 EEPSSGAPPPS
18 GLP1 EPSSGAPPPS
19 GLP1 GAPPPS
20 GLP1 GGPSSGAPPPS
21 GLP1 GPSSGAPPPS
22 GLP1 KRNKNPPPS
23 GLP1 KRNKNPPS
24 GLP1 KRNKPPIA
25 GLP1 KRNKPPPA
26 GLP1 KRNKPPPS
27 GLP1 KSSGKPPPS
28 GLP1 PESGAPPPS
29 GLP1 PKSGAPPPS
30 GLP1 PKSKAPPPS
31 GLP1 PKSKAPPPS
32 GLP1 PKSKEPPPS
33 GLP1 PKSKEPPPS
34 GLP1 PKSKQPPPS
35 GLP1 PKSKSPPPS
36 GLP1 PKSKSPPPS
37 GLP1 PRNKNNPPS
38 GLP1 PSKGAPPPS
39 GLP1 PSSGAPPPSE
40 GLP1 PSSGAPPPS
41 GLP1 PSSGAPPPS
42 GLP1 PSSGAPPPSS
43 GLP1 PSSGEPPPS
44 GLP1 PSSGKKPPS
45 GLP1 PSSGKPPPS
46 GLP1 PSSGKPPPS
47 GLP1 PSSGSPPPS
48 GLP1 PSSKAPPPS
49 GLP1 PSSKEPPPS
50 GLP1 PSSKGAPPPS
51 GLP1 PSSKQPPPS
52 GLP1 PSSKSPPPS
53 GLP1 SGAPPPS
54 GLP1 SSGAPPPS
55 TP4 FIHHIIGGLFSAGKAIHRLIRRRRR
56 BB 배리어 에이전트 LRVRLASHLRKLRKRLLRDA
57 텔로머레이스 억제제 RRRGGDASRSLPLPKRPRR
58 텔로머레이스 억제제 RRRGGEASRSLPLPKRPRR
59 인터페론 SSGSSSSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQNGS
60 인테그린 결합 VGDLTYLK
61 인테그린 결합 VGDLTYLKK
62 지코노타이드 CKGKGAKCSRLMYDCCTGSCRSGKC
SEQUENCE LISTING <110> Xenetic Biosciences <120> METHODS OF USING GLYCOPOLYSIALYLATED THERAPEUTIC PROTEINS <130> XN1-060WO <160> 62 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 340 <212> PRT <213> artificial <220> <223> E124 protein <400> 1 Met Ala Asp Ser Val Lys Thr Phe Leu Gln Asp Leu Ala Arg Gly Ile 1 5 10 15 Lys Asp Ser Ile Trp Gly Ile Cys Thr Ile Ser Lys Leu Asp Ala Arg 20 25 30 Ile Gln Gln Lys Arg Glu Glu Gln Arg Arg Arg Arg Ala Ser Ser Val 35 40 45 Leu Ala Gln Arg Arg Ala Gln Ser Ile Glu Arg Lys Gln Glu Ser Glu 50 55 60 Pro Arg Ile Val Ser Arg Ile Phe Gln Cys Cys Ala Trp Asn Gly Gly 65 70 75 80 Val Phe Trp Phe Ser Leu Leu Leu Phe Tyr Arg Val Phe Ile Pro Val 85 90 95 Leu Gln Ser Val Thr Ala Arg Ile Ile Gly Asp Pro Ser Leu His Gly 100 105 110 Asp Val Trp Ser Trp Leu Glu Phe Phe Leu Thr Ser Ile Phe Ser Ala 115 120 125 Leu Trp Val Leu Pro Leu Phe Val Leu Ser Lys Val Val Asn Ala Ile 130 135 140 Trp Phe Gln Asp Ile Ala Asp Leu Ala Phe Glu Val Ser Gly Arg Lys 145 150 155 160 Pro His Pro Phe Pro Ser Val Ser Lys Ile Ile Ala Asp Met Leu Phe 165 170 175 Asn Leu Leu Leu Gln Ala Leu Phe Leu Ile Gln Gly Met Phe Val Ser 180 185 190 Leu Phe Pro Ile His Leu Val Gly Gln Leu Val Ser Leu Leu His Met 195 200 205 Ser Leu Leu Tyr Ser Leu Tyr Cys Phe Glu Tyr Arg Trp Phe Asn Lys 210 215 220 Gly Ile Glu Met His Gln Arg Leu Ser Asn Ile Glu Arg Asn Trp Pro 225 230 235 240 Tyr Tyr Phe Gly Phe Gly Leu Pro Leu Ala Phe Leu Thr Ala Met Gln 245 250 255 Ser Ser Tyr Ile Ile Ser Gly Cys Leu Phe Ser Ile Leu Phe Pro Leu 260 265 270 Phe Ile Ile Ser Ala Asn Glu Ala Lys Thr Pro Gly Lys Ala Tyr Leu 275 280 285 Phe Gln Leu Arg Leu Phe Ser Leu Val Val Phe Leu Ser Asn Arg Leu 290 295 300 Phe His Lys Thr Val Tyr Leu Gln Ser Ala Leu Ser Ser Ser Thr Ser 305 310 315 320 Ala Glu Lys Phe Pro Ser Pro His Pro Ser Pro Ala Lys Leu Lys Ala 325 330 335 Thr Ala Gly His 340 <210> 2 <211> 21 <212> PRT <213> artificial <220> <223> PRU P 3 allergen of PRUNUS PERSICA <400> 2 Ala Ser Ser Asn Gly Ile Arg Asn Val Asn Asn Leu Ala Arg Thr Pro 1 5 10 15 Asp Arg Gln Ala Cys 20 <210> 3 <211> 138 <212> PRT <213> artificial <220> <223> tumor necrosis factor receptor (TNF) <400> 3 Val Pro Ala Gln Trp Phe Pro Arg Ser Ile Pro Glu Pro Ser Asn Leu 1 5 10 15 Cys Gln Pro Arg Glu Tyr Tyr Asp Glu Arg Ala Gln Arg Arg Cys Ser 20 25 30 Gln Cys Pro Pro Gly Cys Arg Ala Lys Ser Phe Cys Asn Glu Thr Ser 35 40 45 Asp Thr Val Cys Val Pro Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu Trp 50 55 60 Asn Trp Leu Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Thr Gly 65 70 75 80 Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Leu Lys Gln Asn Arg Ile Cys Thr 85 90 95 Cys Glu Pro Gly Arg Tyr Cys Ile Leu Pro Arg Gln Glu Gly Cys Gln 100 105 110 Val Cys Gly Leu Leu Arg Lys Cys Pro Pro Gly Phe Gly Val Ala Lys 115 120 125 Pro Gly Thr Ala Thr Ser Asn Trp Cys Ala 130 135 <210> 4 <211> 20 <212> PRT <213> artificial <220> <223> p38 gamma protein inhibitor <400> 4 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Arg Val Pro Lys 1 5 10 15 Glu Thr Ala Leu 20 <210> 5 <211> 37 <212> PRT <213> artificial <220> <223> anti-cancer peptide-based therapeutic agent <400> 5 Arg Pro Met Arg Leu Glu Ser Phe Ser Ala Cys Ile Trp Val Lys Ala 1 5 10 15 Thr Asp Val Leu Asn Lys Thr Ile Leu Phe Ser Tyr Gly Thr Lys Arg 20 25 30 Asn Pro Tyr Glu Ile 35 <210> 6 <211> 40 <212> PRT <213> artificial <220> <223> anti-cancer peptide-based therapeutic agent <400> 6 Gly Gly Gly Phe Asp Glu Thr Leu Ala Phe Ser Gly Arg Leu Thr Gly 1 5 10 15 Phe Asn Ile Trp Asp Ser Val Leu Ser Asn Glu Glu Ile Arg Glu Thr 20 25 30 Gly Gly Ala Glu Ser Cys His Ile 35 40 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Tau protein <400> 7 Lys His Gln Pro Gly Gly Gly 1 5 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Tau protein <400> 8 Lys His Val Pro Gly Gly Gly 1 5 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Tau protein <400> 9 His His Lys Pro Gly Gly Gly 1 5 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Tau protein <400> 10 Thr His Val Pro Gly Gly Gly 1 5 <210> 11 <211> 34 <212> PRT <213> artificial <220> <223> SERCA calcium pump <400> 11 Met Ala Glu Lys Glu Ser Thr Ser Pro His Leu Met Val Pro Ile Leu 1 5 10 15 Leu Leu Val Gly Trp Ile Val Gly Cys Ile Ile Val Ile Tyr Ile Val 20 25 30 Phe Phe <210> 12 <211> 35 <212> PRT <213> artificial <220> <223> SERCA calcium pump <400> 12 Met Ala Glu Lys Ala Glu Ser Thr Ser Pro His Leu Met Val Pro Ile 1 5 10 15 Leu Leu Leu Val Gly Trp Ile Val Gly Cys Ile Ile Val Ile Tyr Ile 20 25 30 Val Phe Phe 35 <210> 13 <211> 34 <212> PRT <213> artificial <220> <223> SERCA calcium pump <400> 13 Met Ala Glu Lys Glu Ser Thr Ser Pro His Leu Ile Val Pro Ile Leu 1 5 10 15 Leu Leu Val Gly Trp Ile Val Gly Cys Ile Ile Val Ile Tyr Ile Val 20 25 30 Phe Phe <210> 14 <211> 35 <212> PRT <213> artificial <220> <223> SERCA calcium pump <400> 14 Met Ala Glu Lys Ala Glu Ser Thr Ser Pro His Leu Ile Val Pro Ile 1 5 10 15 Leu Leu Leu Val Gly Trp Ile Val Gly Cys Ile Ile Val Ile Tyr Ile 20 25 30 Val Phe Phe 35 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> excitatory neurotoxicity <400> 15 Tyr Glu Lys Leu Leu Asp Thr Glu Ile 1 5 <210> 16 <211> 29 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 16 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 17 Glu Glu Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 18 Glu Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 19 Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 20 Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 21 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 22 Lys Arg Asn Lys Asn Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 23 Lys Arg Asn Lys Asn Pro Pro Ser 1 5 <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 24 Lys Arg Asn Lys Pro Pro Ile Ala 1 5 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 25 Lys Arg Asn Lys Pro Pro Pro Ala 1 5 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 26 Lys Arg Asn Lys Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 27 Lys Ser Ser Gly Lys Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 28 Pro Glu Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 29 Pro Lys Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 30 Pro Lys Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 31 Pro Lys Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 32 Pro Lys Ser Lys Glu Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 33 Pro Lys Ser Lys Glu Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 34 Pro Lys Ser Lys Gln Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 35 Pro Lys Ser Lys Ser Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 36 Pro Lys Ser Lys Ser Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 37 Pro Arg Asn Lys Asn Asn Pro Pro Ser 1 5 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 38 Pro Ser Lys Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 39 <211> 10 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 39 Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Glu 1 5 10 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 40 Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 41 Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 42 Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Ser 1 5 10 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 43 Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 44 Pro Ser Ser Gly Lys Lys Pro Pro Ser 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 45 Pro Ser Ser Gly Lys Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 46 Pro Ser Ser Gly Lys Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 47 Pro Ser Ser Gly Ser Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 48 Pro Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 49 Pro Ser Ser Lys Glu Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 50 Pro Ser Ser Lys Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 51 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 51 Pro Ser Ser Lys Gln Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 52 Pro Ser Ser Lys Ser Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 53 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> GLP1 <400> 54 Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 <210> 55 <211> 25 <212> PRT <213> artificial <220> <223> TP4 <400> 55 Phe Ile His His Ile Ile Gly Gly Leu Phe Ser Ala Gly Lys Ala Ile 1 5 10 15 His Arg Leu Ile Arg Arg Arg Arg Arg 20 25 <210> 56 <211> 20 <212> PRT <213> artificial <220> <223> BB barrier agent <400> 56 Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu Arg Lys Arg Leu 1 5 10 15 Leu Arg Asp Ala 20 <210> 57 <211> 19 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Telomerase inhibitor <400> 57 Arg Arg Arg Gly Gly Asp Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg 1 5 10 15 Pro Arg Arg <210> 58 <211> 19 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Telomerase inhibitor <400> 58 Arg Arg Arg Gly Gly Glu Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg 1 5 10 15 Pro Arg Arg <210> 59 <211> 37 <212> PRT <213> artificial <220> <223> interferon <400> 59 Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 15 Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu 20 25 30 Pro Gln Asn Gly Ser 35 <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> integrin binding <400> 60 Val Gly Asp Leu Thr Tyr Leu Lys 1 5 <210> 61 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> integrin binding <400> 61 Val Gly Asp Leu Thr Tyr Leu Lys Lys 1 5 <210> 62 <211> 25 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Ziconotide <400> 62 Cys Lys Gly Lys Gly Ala Lys Cys Ser Arg Leu Met Tyr Asp Cys Cys 1 5 10 15 Thr Gly Ser Cys Arg Ser Gly Lys Cys 20 25

Claims (14)

  1. 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체가 하기로부터 선택된 단백질에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)을 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법:
    제9인자(FIX), 제8인자(FVIII), 제7a인자(FVIIa), 폰 빌레브란트 인자(VWF), 제5인자(FV), 제10인자(FX), 제11인자(FXI), 제12인자(FXII), 트롬빈(FII), 트롬보모듈린(및 유사체, 예를 들어 솔루린(Solulin)), 단백질 C, 단백질 S, tPA, PAI-1, 조직 인자(TF), ADAMTS 13 프로테아제, IL-1 알파, IL-1 β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-11, 집락자극인자-1(CSF-1), M-CSF, SCF, GM-CSF, 과립구 집락자극인자(G-CSF), EPO, 인터페론-알파(IFN-알파), 공통(consensus) 인터페론, IFN-β, IFN-감마, IFN-오메가, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-31, IL-32 알파, IL-33, 트롬보포이에틴(TPO), Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, 엔지오포이에틴(angiopoietin) 유사 폴리펩타이드 1(ANGPTL1), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 2(ANGPTL2), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 3(ANGPTL3), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 4(ANGPTL4), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 5(ANGPTL5), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 6(ANGPTL6), 엔지오포이에틴 유사 폴리펩타이드 7(ANGPTL7), 비트로넥틴, 혈관 내피세포 성장인자(VEGF), 엔지오제닌(angiogenin), 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 골형성 단백질(bone morphogenetic protein)-1, 골형성 단백질-2, 골형성 단백질-3, 골형성 단백질-4, 골형성 단백질-5, 골형성 단백질-6, 골형성 단백질-7, 골형성 단백질-8, 골형성 단백질-9, 골형성 단백질-10, 골형성 단백질-11, 골형성 단백질-12, 골형성 단백질-13, 골형성 단백질-14, 골형성 단백질-15, 골형성 단백질 수용체 IA, 골형성 단백질 수용체 IB, 골형성 단백질 수용체 II, 뇌유래 신경영양 인자(brain derived neurotrophic factor), 카디오트로핀(cardiotrophin)-1, 섬모 신경영양 인자(ciliary neurotrophic factor), 섬모 신경영양 인자 수용체, 크립토(cripto), 크립틱(cryptic), 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 1(cytokine-induced neutrophil chemotactic factor 1), 사이토카인 유발 호중구, 화학주성 인자 2α, 사이토카인 유발 호중구 화학주성 인자 2β, β 내피세포 증식인자, 엔도텔린 1, 표피 성장인자, 에피젠(epigen), 에피레귤린(epiregulin), 상피 유래 호중구 유인물질(epithelial-derived neutrophil attractant), 섬유모세포 성장인자 4, 섬유모세포 성장인자 5, 섬유모세포 성장인자 6, 섬유모세포 성장인자 7, 섬유모세포 성장인자 8, 섬유모세포 성장인자 8b, 섬유모세포 성장인자 8c, 섬유모세포 성장인자 9, 섬유모세포 성장인자 10, 섬유모세포 성장인자 11, 섬유모세포 성장인자 12, 섬유모세포 성장인자 13, 섬유모세포 성장인자 16, 섬유모세포 성장인자 17, 섬유모세포 성장인자 19, 섬유모세포 성장인자 20, 섬유모세포 성장인자 21, 섬유모세포 성장인자 산성, 섬유모세포 성장인자 염기성, 아교세포주 유래(glial cell line-derived) 신경영양 인자 수용체 α1, 아교세포주 유래 신경영양 인자 수용체 α2, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질 α, 성장 관련 단백질 β, 성장 관련 단백질 .감마., 헤파린 결합 표피 성장인자, 간세포 성장인자, 간세포 성장인자 수용체, 간종 유래(hepatoma-derived) 성장인자, 인슐린 유사 성장인자 I, 인슐린 유사 성장인자 수용체, 인슐린 유사 성장인자 II, 인슐린 유사 성장인자 결합 단백질, 각질세포 성장인자, 백혈병 억제 인자, 백혈병 억제 인자 수용체 α, 엔도모르핀(1&2), 뉴로펩타이드, 신경 성장인자, 신경 성장인자 수용체, 뉴로포이에틴, 뉴로트로핀-3, 뉴로트로핀-4, 온코스탄틴 M(OSM), 태반 성장인자, 태반 성장인자 2, 혈소판 유래 내피세포 성장인자, 혈소판 유래 성장인자, 혈소판 유래 성장인자 A 사슬, 혈소판 유래 성장인자 AA, 혈소판 유래 성장인자 AB, 혈소판 유래 성장인자 B 사슬, 혈소판 유래 성장인자 BB, 혈소판 유래 성장인자 수용체 α, 혈소판 유래 성장인자 수용체 β, 프리β(pre-β) 세포 성장 자극인자, 줄기세포 인자(SCF), 줄기세포 인자 수용체, TNF, TNF0, TNF1, TNF2, 전환 성장인자 α, 전환 성장인자 β, 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β1.2, 전환 성장인자 β2, 전환 성장인자 β3, 전환 성장인자 β5, 잠재 전환 성장인자 β1, 전환 성장인자 β 결합 단백질 I, 전환 성장인자 β 결합 단백질 II, 전환 성장인자 β 결합 단백질 III, 흉선 기질 림프포이에틴(thymic stromal lymphopoietin: TSLP), 종양 괴사인자 수용체 I형, 종양 괴사인자 수용체 II형, 우로키네이스형(urokinase-type) 플라스미노겐 활성인자, 포스포리페이스 활성 단백질(PUP), 인슐린, 렉틴 리신, 프로락틴, 융모생식샘 자극 호르몬, 난포 자극 호르몬, 갑상샘 자극 호르몬, 조직 플라스미노겐 활성인자, IgG, IgE, IgM, IgA, 및 IgD, α-갈락토시데이스, β-갈락토시데이스, DNA 분해효소, 피투인, 황체형성 호르몬, 에스트로겐, 인슐린, 알부민, 지질단백질, 태아단백질, 트랜스페린, 트롬보포이에틴, 우로키네이스, 인테그린, 트롬빈, 트롬보모듈린, 렙틴, 휴미라(아달리무맙), 프롤리아(데노수맙), 또는 이의 생물학적 활성 단편, 그 유도체 또는 변이체.
  2. 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체가 gp120-gp41 경계면(interface)에서 인체면역결핍바이러스(HIV) 외피(envelope) 당단백질에 결합하는 단백질에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)를 포함하는 것을 특징으로 하는 인체면역결핍바이러스(HIV) 치료 방법.
  3. 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체가 하기로부터 선택된 단백질에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)을 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법:
    탄산무수화효소 IX, 알파-태아단백, 알파-액티닌-4, A3(A33 항체에 특이적인 항원), ART-4, B7, Ba-733, BAGE, BrE3-항원, CA125, CAMEL, CAP-1, CASP-8/m, CCCL19, CCCL21, CD1, CD1a, CD2, CD3, CD4, CDS, CD8, CD1-1A, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD29, CD30, CD32b, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD45, CD46, CD54, CD55, CD59, CD64, CD66a-e, CD67, CD70, CD74, CD79a, CD80, CD83, CD95, CD126, CD133 CD147, CD154, CDC27, CDK-4/m, CDK 2A, CXCR4, CXCR7, CXCL12, HIF-1-알파, 결장 특이적 항원-p (CSAp), CEA (CEACAM5), CEACAM6, c-met, DAM, EGFR, EGFRvIII, EGP-1, EGP-2, ELF2-M, Ep-CAM, Flt-1, Flt-3, 엽산 수용체, G250 항원, GAGE, GROB, HLA-DR, HM1.24, 인간 융모성 생식선 자극호르몬(HCG) 및 그의 서브유닛, HER2/neu, HMGB-1, 저산소증 유도인자(HIF-1), HSP70-2M, HST-2 또는 Ia, IGF-1R, IFN-감마, IFN-알파, IFN-b, IL-2, IL-4R, IL-6R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-6, IL-8, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-25, 인슐린 유사 성장 인자-1 (IGF-1), KC4-항원, KS-1-항원, KS1-4, Le-Y, LDR/FUT, 마크로파지 유주 저지인자 (MIF), MAGE, MAGE-3, MART-1, MART-2, NY-ESO-1, TRAG-3, mCRP, MCP-1, MIP-1A, MIP-1B, MIF, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5, MUM-1/2, MUM-3, NCA66, NCA95, NCA90, 췌장암 뮤신(pancreatic cancer mucin), 태반 성장인자, p53, PLAGL2, 전립선 산성 포스파타제(prostatic acid phosphatase), PSA, PRAME, PSMA, P1GF, ILGF, ILGF-1R, IL-6, IL-25, RS5, RANTES, T101, SAGE, S100, 서바이빈(survivin), 서바이빈-2B, TAC, TAG-72, 테나신, TRAIL 수용체, TNF-알파, Tn-항원, 톰슨-프리덴라이히 항원, 종양 괴사 항원, VEGFR, ED-B 피브로넥틴, WT-1, 17-lA-항원, 보체인자 C3, C3a, C3b, C5a, C5, 혈관형성 마커(angiogenesis marker), bcl-2, bcl-6, Kras, cMET, 종양유전자 마커 및 종양유전자 생성물.
  4. 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체는 메소텔린을 인식하는 항체 또는 결합 단백질에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)을 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법.
  5. 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체는 하기로부터 선택된 단백질에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)을 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법:
    메탈로프로티네이스(metalloproteinase), 서브틸레이스(subtilase), 또는 리페이스(lipase), 트라이아실글리세롤 리페이스, 서브틸레이스, 메탈로프로티네이스, 콜린에스터레이스(cholinesterase), 아세틸콜린에스터레이스, 뷰틸콜린에스터레이스, 트립신, 서브틸리신(subtilisin), 서몰리신, 또는 CT, 콜린에스터레이스, 아세틸콜린에스터레이스, 뷰티릴콜린에스터레이스, 서브틸레이스, 서브틸리신, 서몰리신, 리페이스, 트라이아실글리세롤 리페이스, 메탈로프로티네이스, 키모트립신, -키모트립신, 또는 트립신을 포함하는 에스터레이스 그룹(esterase group)의 효소, 키모트립신-pDMAEMA(CT-pDMAEMA) 접합체, 메탈로프로티네이스-pOEGMA 접합체, 서몰리신-pOEGMA 접합체, 서브틸리신-이온성 액체(ionic liquid) 폴리머 접합체, 서브틸레이스-이온성 액체 폴리머 접합체, 또는 리페이스-pDMAA 접합체.
  6. 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체는 하기 항체를 포함하는 항체-약물에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법:
    트라스투주맙 및 퍼투주맙과 같은 항HER2 단클론 항체, 리툭시맙, 오파투무맙, 토시투모맙 및 이브리투모맙과 같은 항CD20 단클론 항체, 오레고보맙과 같은 항CA125 단클론 항체, 에드레콜로맙(edrecolomab)과 같은 항EpCAM(17-A1) 단클론 항체, 세툭시맙, 파니투무맙 및 니모투주맙과 같은 항EGFR 단클론 항체, 브렌툭시맙과 같은 항CD30 단클론 항체, 젬투주맙 및 huMy9-6과 같은 항CD33 단클론 항체, 에타라시주맙과 같은 항혈관(anti-vascular) 인테그린 알파-v β-3 단클론 항체, 5 알렘투주맙과 같은 항CD52 단클론 항체, 에프라투주맙과 같은 항CD22 단클론 항체, 라베투주맙과 같은 항CEA 단클론 항체, 비바투주맙과 같은 항CD44v6 단클론 항체, 시브로투주맙(sibrotuzumab)과 같은 항FAP 단클론 항체, huB4와 같은 항CD19 단클론 항체, huC242와 같은 항CanAg 단클론 항체, huN901과 같은 항CD56 단클론 항체, 다라투무맙과 같은 항CD38 단클론 항체, DS6과 같은 항CA6 단클론 항체 10, 식수투무맙(cixutumumab) 및 3B7과 같은 항IGF-IR 단클론 항체, CNTO 95와 같은 항인테그린 단클론 항체, 및 B-B4과 같은 항신데칸-1 단클론 항체.
  7. 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 단백질-폴리시알산(PSA) 접합체는 항체가 아닌 하기의 결합 화합물을 포함하는 결합 분자 약물 접합체에 공유결합으로 연결된 PSA를 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법:
    IFN-a, IFN-f3, 및 IFN-y와 같은 인터페론, 트랜스페린, 표피 성장인자(EGF) 및 EGF 유사 도메인, 가스트린 분비 펩타이드(GRP), 혈소판 유래 성장인자(PDGF), 전환 성장인자(TGF), 우두(vaccinia) 성장인자(VGF), IGF-1 및 IGF-2와 같은 인슐린 및 인슐린 유사 성장인자(IGF), 갑상샘 자극 호르몬 분비 호르몬(TRH), 멜라닌세포 자극 30 호르몬(MSH), 스테로이드 호르몬(예를 들어 에스트로겐 및 안드로겐), 및 소마토스타틴과 같은 기타 적합한 호르몬을 포함하지만 이들에 제한되지 않는 리간드-약물 접합체를 위해 세포 결합 리간드로서 사용될 수 있는 항체 외에 결합 단백질; IL-2, IL-3, IL-4, 및 IL-6과 같은 림포카인; G-CSF, M-CSF 및 GM-CSF와 같은 집락자극인자(CSF); 봄베신; 가스트린; 및 엽산.
  8. 폴리시알산(PSA)-트롬빈 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 트롬빈-폴리시알산(PSA) 접합체가 트롬빈에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)을 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법.
  9. 제1항 또는 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질병이 암 또는 자가면역질환인 것을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법.
  10. 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체가 이중가닥 RNA, 단일가닥 RNA 또는 소간섭 RNA(siRNA)로부터 선택되는 RNA 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide)에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)를 포함하는 것을 특징으로 하는 유전자 발현 장애 치료 방법.
  11. 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체는 절단 가능한 링커 모이어티를 통해 RNA 올리고뉴클레오타이드에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)을 포함하는 것을 특징으로 하는 유전자 발현 장애 치료 방법.
  12. 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로, 상기 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체는 선택적으로 링커를 통해 RNA 3' 말단 염기(terminal base)에서 적어도 하나의 RNA 분자에 접합되는 것을 특징으로 하는 유전자 발현 장애 치료 방법.
  13. 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로,
    상기 폴리시알산(PSA)-핵산 접합체는 RNA 올리고뉴클레오타이드에 공유결합으로 연결된 폴리시알산(PSA)를 포함하고, 상기 RNA 올리고뉴클레오타이드는 폴리펩타이드 또는 그의 보체(complementary) 서열을 부호화(coding)하기 위한 부호화 영역을 포함하고,
    상기 폴리펩타이드는 하기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 유전자 발현 장애 치료 방법:
    VEGF, 아포지단백 B, 디스트로핀의 엑손 51, 트랜스티레틴, CEP290 c.2991+1655A>G 돌연변이, KRAS, 보체 5(C5) 단백질, EphA2, CTGF, TRPV1, LDHA, TGF-β1, Cox-2, KRAS G12D, P53, 카스파제-2, 항트롬빈, FANCA, 응고인자 VIII, 응고인자 IX, ANK1, PIG-A, UROD, 아데노신 디아미네이스, JAK3, RAG1/2, 아르테미스(Artemis), IL7R-α, IL-2Rγ, T 세포 표면 당단백질 CD3 델타 사슬, CD3.엡실론, CDKN2, NF1, NF2, LIM 키네이스, 엘라스틴, ALDP, CFTR, 헵시딘, ABCA3, 계면활성 단백질 B, ADAMTS13, 알파.1-항트립신 또는 GAA.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전자 발현 장애가 하기의 질병 중 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 유전자 발현 장애 치료 방법:
    고혈압, 콜레스트롤 수치 상승, 암, 신경변성질환, 정신질환, 낭성섬유증, 혈우병(또는 다른 혈액 응고 질환), 정신분열병, 조울증, 주요우울증, 파킨슨병, 알츠하이머병 및 자폐 스펙트럼 장애와 같은 신경 정신병, 백색증, 앙겔만 증후군, 강직척추염, 아페르 증후군, 샤르코 마리 투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease), 선천성 부신과다 형성증, 낭성섬유증, 다운증후군, 연골무형성증, 알파-1 항트립신 결핍증, 항인지질항체 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐증, 보통염색체 우성 다낭성 신장 질환, 샤르코 마리 투스 질환, 묘성 증후군, 크론병, 낭성섬유증, 더컴병, 듀안 증후군, 듀시엔형 근이영양증, 응고인자 V 레이든 혈전증(Factor V Leiden Thrombophilia), 가족성 고콜레스트롤혈증, 가족성 지중해열, 유약 X 증후군, 고셔병, 혈색소증, 전전뇌증(holoprosencephaly), 헌팅톤 병, 선천대사장애, 클라인펠터 증후군, 마르판 증후군, 메틸말론산증, 근긴장성 이영양증, 신경섬유종증, 누난 증후군, 골형성부전증, 파킨슨병, 페닐케톤뇨증, 폴란드 기형(Poland anomaly), 포르피린증, 유전조로증, 망막색소변성증, 중증 복합 면역결핍, 낫적혈구병, 척수근육위축, 테이-삭스병, 지중해빈혈증, 트리메틸아민뇨증, 터너 증후군, 구개심장안면증후군(velocardiofacial syndrome) 및 윌슨병.
KR1020217027231A 2019-02-04 2020-02-04 글리코폴리시알화된 치료 단백질 사용 방법 KR20210151780A (ko)

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