KR20210005070A - 갈랙틴-10 항체 - Google Patents
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Abstract
현 발명은 단백질 갈랙틴-10, 특히 인간 갈랙틴-10에 결합하는 길항제, 특히 항체 및 이의 항원 결합 단편에 관련한 것이다. 갈랙틴-10 길항제는 갈랙틴-10의 결정화를 방해하며 및 그러므로 병리가 차코트-래이덴 결정 (Charcot-Leyden crystals) (CLCs) 의 형성/존재와 연결된 질환 및 컨디션을 예방 및 치료하는 방법에 유용하다.
Description
본 발명은 단백질 갈랙틴-10 (galectin-10), 특히 인간 갈랙틴-10에, 결합하는 길항제 (antagonists), 특히 항체 및 이의 항원 결합 단편, 에 관한 것이다. 갈랙틴-10 길항제는, 특히 본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 갈랙틴-10의 결정화 (crystallization) 를 방해하며 및 그러므로 병리학적으로 차코트-레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals) (CLCs)의 형성/존재가 연결된 질환 및 컨디션을 예방 및 치료하는 방법에 유용하다.
차코트-레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals) (CLCs)은 1853년에 처음 서술되었으며 및 미세하고, 무색의 결정으로 알레르기성 천식 (allergic asthma) 및 기생충 감염을 포함하는 특정 컨디션을 가진 환자에서 발견되었다. CLC는 인간 조직 및 호산성 염증성 반응 (eosinophilic inflammatory response)관 연관된 분비물에서 자주 관찰된다. 천식 및 기생충 감염 이외에, 이 결정들은, 예를 들어, 골수성 백혈병과 같은 암을 지닌 환자에서 발견되었다. 구조적으로, CLCs는 길이 20-40 μm 및 넓이 2-4 μm를 가진 세포 외 6각 양추 결정 (hexagonal bipyramidal crystals) 으로서 축적된다. 이 결정을 형성하는 단백질이 갈랙틴-10 (galectin-10) 으로 동정 되었다.
갈랙틴-10 ((또한, 차 코트-레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals) 이라고도 알려짐))은 작고 ((16.5kDa), 소수성이고 (hydrophobic), 글라이칸-결합 단백질 (Glycan-binding protein) 로 골수에서, 주로 호산구 (eosinophils), 에 의해 풍부하게 발현된다 (Chua et al. (2012) PLoS One. 7(8): e42549). 갈랙틴-10은 또한 호염구(basophils) 및 폭스피3-양성-트래그 (Foxp3-positive Tregs)에 의해서도 좀 적은 정도로 생산된다 (Kubach et al. (2007) Blood 110(5): 1550-8). 이 단백질은 총 세포 단백질의 7%-10%를 대표하며, 호산구 (eosinophil) 구성 성분 중 가장 풍부하다. 갈랙틴-10은 인간에게서 만 발견되며, 이는 분비 펩티드 신호 및 막 통과 도메인이 결여되어 있으며, 및 어떤 특정 컨디션에서 비-전통적인 및 새로운 아포크린 기전 (apocrine mechanisms)으로 분비된다.
많은 보고서가 호산구 질환을 지닌 환자로부터의 조직에 CLCs가 나타난다고 보이고 있으나, 공통적 견해는 이들 결정은 단지 호산구 사망의 마커일 뿐이다.
갈랙틴-10의 생체 내 기능 및 CLC 형성의 중요성은 아직 모호한 채로 있는데, 이는 특히 생쥐는 갈랙틴-10을 암호화하는 LGALS10 유전자가 있지 않기 때문이다. 여기서 어떻게 갈랙틴-10 결정이 생체 내에서 염증친화성 반응 (pro-inflammatory response) 을 유도하고 및 어떻게 이 반응이 갈랙틴-10 결정화를 방해하는 갈랙틴-10 항체 투여에 의하여 억제되는가를 보고한다. 어떻게 갈랙틴-10 항체 및 IgGs, VHH 항체 및 Fabs를 포함하는 항원 결합 단편이 갈랙틴-10 결정화를 예방할 수 있고 및 이미-존재하는 갈랙틴-10 결정을 녹일 수 있는지에 대하여 여기서 보고한다. 주요하게, 갈랙틴-10 항체는 환자의 점액 (mucos) 샘플로부터 CLCs를 용해할 수 있었다. 종합하면, 이는 갈랙틴-10 결정화를 타겟으로 하는 제제는 병리적 현상이 CLCs 존재와 연결된 컨디션이나 질환을 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 보여준다.
첫 번째 관점에서, 본 발명은 갈랙틴-10 에 결합하는 길항제를 제공하며, 여기서 길항제는 갈랙틴-10의 에피톱 (epitope) 에 결합하고 및 그러므로 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface) 을 차폐한다. 이 길항제는 바람직하게는 인간 갈랙틴-10에 결합한다. 본 발명은 더 나아가 갈랙틴-10에 결합하는 길항제를 제공하고, 이는, 용해성 갈랙틴-10 (soluble galectin-10) 에 결합했을 때, 갈랙틴-10의 결정화를 억제한다. 본 발명은 더 나아가 갈랙틴-10에 결합하는 길항제를 제공하고, 이는, 결정 갈랙틴-10 (crystalline galectin-10) 에 결합했을 때, 결정 갈랙틴-10의 용해를 촉진한다.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 에 결합하고 및 그로써 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)을 차폐하는 길항제는 용해성 갈랙틴-10에 결합했을 때, 갈랙틴-10의 결정화를 억제한다. 다른 한편으로 또는 추가로, 갈랙틴-10 길항제는, 결정 갈랙틴-10 (crystalline galectin-10) 에 결합했을 때, 갈랙틴-10의 용해를 촉진시킬 수 있다.
본 발명의 길항제는 바람직하게는 인간 갈랙틴-10에 결합한다. 어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 갈랙틴-10의, 바람직하게는 인간 갈랙틴-10의, 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)으로부터의 아미노산 하나 또는 그 이상을 포함하는 에피톱에 결합한다. 상기 에피톱은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상, 둘 또는 그 이상, 셋 또는 그 이상, 넷 또는 그 이상, 다섯 또는 그 이상의 아미노산을 포함할 수 있다: Ser2, Leu3, Leu4, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Ala12, Ser13, Thr16, Thr42, Glu43, Met44, Lys45, Asp49, Ile50, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Leu96, Pro97, Asp98, Lys99, Gln101, Met103, Gly106, Gln107, Ser108, Ser109, Tyr110, Thr111, Asp113, His114, Arg115, Ile116, Lys117, Ala120, Gln125, Thr133, Lys134, Phe135, Asn136, Val137, Ser138, Tyr139, Leu140 및 Lys141. 갈랙틴-10의 아미노산 잔기 또는 위치는 여기서 서열번호 141로서 동정 된 인간 단백질 서열을 참조하여 정의된다.
어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 Tyr69 을 포함하는 에피톱에 결합하거나 또는 Tyr69에 인접한 아미노산을 포함하는 에피톱에 결합한다. 바람직한 실시 예에서, 길항제는 Tyr69 을 포함하는 에피톱에 결합한다. 더 나아간 바람직한 실시 예에서, 길항제는 Glu68, Tyr69 and Gly70 을 포함하는 에피톱에 결합하며, 여기서 아미노산 위치는 서열번호 141을 참조하여 동정 된다. 어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 아미노산 Thr42, Glu43, Lys45, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, His114, Arg115, Ile116, Lys117 및 Ala 120을 포함하는 에피톱에 결합한다. 어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 아미노산 Thr42, Glu43, Lys45, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, His114, Arg115, Ile116, Lys117, GLu119, Ala120 및 Lys122 을 포함하는 에피톱에 결합한다. 에피톱은 추가로 Gln74 및/또는 Asp98을 포함할 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 Glu33, Gly59, Arg60 및 Lys79를 포함하는 에피톱에 결합한다. 에피톱은 추가로 Gln74, Gln75 및 Glu77을 포함할 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Leu31, Glu33, Gly59, Arg60, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82 및 Gln84를 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Glu33, Gly59, Arg60, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82 및 Ser109를 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Glu33, Gly59, Arg60, Trp72, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Lys79, Asn80, Met81, Pro82, Gln84 및 Ser109를 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Glu33, Gly59, Arg60, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82, Phe83, Gln84를 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Thr42, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Arg115, Ile116, Lys117, Glu119 및 Ala120을 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Glue43, Asp49, Glu68, Tyr69, Lys73, Asp98, Asp113, His114, Arg115, Lys117, Glu119 및 Ala120을 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Asp49, Glu68, Tyr69, Lys73, Gln74, Asp98, Asp113, His114, Arg115, Ile116 및 Lys117을 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 Ser2, Leu3, Leu4, Pro5, Pro7, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Lys23, Arg25, Met44, Gly86, Gln87, Glu88, Phe89, Glu90, Asn105, Gln125, Thr133, Lys134 및 Phe135를 포함하거나 또는 이들로서 구성된다. 갈랙틴-10의 아미노산의 위치는 여기서 서열번호 141로서 동정 된 인간 단백질 서열을 참조하여 정의된다.
갈랙틴-10 길항제는 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)으로부터의 아미노산으로 구성된 에피톱에 결합할 수 있다. 그러한 실시 예에서, 에피톱은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상, 둘 또는 그 이상, 셋 또는 그 이상, 넷 또는 그 이상, 다섯 또는 그 이상의 아미노산으로 구성될 수 있다: Ser2, Leu3, Leu4, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Ala12, Ser13, Thr16, Thr42, Glu43, Met44, Lys45, Asp49, Ile50, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Leu96, Pro97, Asp98, Lys99, Gln101, Met103, Gly106, Gln107, Ser108, Ser109, Tyr110, Thr111, Asp113, His114, Arg115, Ile116, Lys117, Ala120, Gln125, Thr133, Lys134, Phe135, Asn136, Val137, Ser138, Tyr139, Leu140 및 Lys141. 갈랙틴-10의 아미노산의 위치는 여기서 서열번호 141로서 동정 된 인간 단백질 서열을 참조하여 정의된다.
다른 한편으로 또는 추가로, 길항제는 이합체화 접점(dimerization interface)으로부터의 아미노산 하나 또는 그 이상을 포함하는 에피톱에 결합할 수 있다. 그러한 실시 예에서, 길항제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산을 포함하는 에피톱에 결합할 수 있다: Pro5, Pro7, Leu27, Ala28, Cys29, Leu31, Asn32, Glu33, Pro34, Tyr35, Gln37, His41, Glu46, Glu47, Gln55, Arg60, Arg61, Arg67, Trp72, Gln75, Trp127, Arg128 및 Asp129.
어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 작은 분자, 억제적 폴리펩티드 또는 항체 유사제 (antibody mimetic)이다. 바람직한 실시 예에서, 길항제는, 여기 다른 곳에서 정의한 대로, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 항체는 면역글로블린, 바람직하게는 IgG 유형, 좀 더 바람직하게는 IgG1 면역글로블린이다. 항체는 VHH 항체일 수 있다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화되거나 또는 비-인간 항체의, 예를 들어, 낙타-유래한 항체 (camelid-derived antibody) 의, 생식계 변이체 일 수 있다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 IgG, 바람직하게는 IgG1의 CH1 도메인, 힌지 부위 (hinge region), CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인을 포함할 수 있다.
어떤 특정 실시 예에서, 항원 결합 단편은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 항체 경 쇄 가변 도메인 (light chain variable domain) (VL); 항체 중 쇄 가변 도메인 (heavy chain variable domain) (VH); 단일 체인 항체 (single chain antibody) (scFv); F(ab')2 단편; Fab 단편; Fd 단편; Fv 단편; 한-팔 (one-armed) ((단일가 (monovalent)) 항체; 디아바디 (diabodies), 트리아바디(triabodies), 테트라바디 (tetrabodies), 또는 이러한 항원 결합 단편들의 조합 (combination), 집합 (assembly) 또는 접합 (conjugation)에 의해 형성된 어느 항원 결합 분자. 바람직한 실시 예에서, 항원결합 단편은 Fab이다.
본 발명은, 더 나아간 관점에서, 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 항원 결합 단편을 제공한다. 이들 항체는 하기에 서술된 대로 이들의 구조적 특징의 관점에서 전적으로 정의된다. 어떤 실시 예에서, 항체 및 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)을 포함하고 여기서 VH 및 VL 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함한다:
(i) 서열번호 3을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 2를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii)서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 5를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 60을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 59를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 9를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 8을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 7을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 12를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 10을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 68을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vii) 서열번호 20을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 19를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 75를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(viii) 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ix) 서열번호 25를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 76를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(x) 서열번호 28을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 27을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xi) 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xii) 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 84를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 83을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiii) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 35를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiv) 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xv) 서열번호 41을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 91을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 89를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvi) 서열번호 43을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 92를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvii) 서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 44를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xviii) 서열번호 47을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xix) 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xx) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 52를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 51을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(xxi) 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
어떤 실시 예에서, 항체 및 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 중 쇄 가변 도메인 (heavy chain variable domain) (VH) 및 경 쇄 가변 도메인 (light chain variable domain) (VL)의 조합을 포함한다:
(i) 서열번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iv) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(v) 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vi) 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vii) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(viii) 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ix) 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(x) 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xi) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xii) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xiii) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xiv) 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xv) 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xvi) 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xvii) 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xviii) 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xix) 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 136의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xx) 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(xxi) 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL.
항체 또는 항원 결합 단편의 도메인이 참조 서열에 대비하여 특정한 퍼센트 서열 상동성으로 정의되는 실시 예에서, VH 및/또는 VL 도메인은 참조 서열에 존재하는 동일한 CDR 서열을 유지할 수 있어 변이는 단지 구조 (프레임워크) 부위 (framework regions) 내에서만 존재한다.
어떤 특정 실시 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 ((VL)을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 하기의 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함한다:
(i) 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 160을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 179를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 168을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 167을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 184를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 171을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 169를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 187을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 172를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 188을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(vii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
어떤 실시 예에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 중 쇄 가변 도메인 (heavy chain variable domain) (VH) 및 경 쇄 가변 도메인 (light chain variable domain) (VL)의 조합을 포함한다:
(i) 서열번호 194의 아마 노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아마 노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 195의 아마 노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iv) 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(v) 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vi) 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(vii) 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL.
항체 또는 항원 결합 단편의 도메인이 참조 서열에 대비하여 특정한 퍼센트 서열 상동성으로 정의되는 실시 예에서, VH 및/또는 VL 도메인은 참조 서열에 존재하는 동일한 CDR 서열을 유지할 수 있어 변이는 단지 구조 (프레임워크) 부위 (framework regions) 내에서만 존재한다.
어떤 특정 실시 예에서, 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함하는 VHH 항체다:
(i) 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ii) 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 212를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 211을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iii) 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iv) 서열번호 219를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(v) 서열번호 222를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 221을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 220를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vi) 서열번호 225를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 224를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 223을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vii) 서열번호 228을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 227을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(viii) 서열번호 231을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 230을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 229를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ix) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(x) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 238을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 237을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xii) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiii) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiv) 서열번호 244를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 243을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 242를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xv) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xvi) 서열번호 247을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 246을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 245을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1; 및
(xvii) 서열번호 249를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 248을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1.
어떤 특정 실시 예에서, 항체는 VHH 항체이며 여기서 VHH 도메인은 서열번호 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265 또는 266중 어느 하나로 대표되는 아미노산 서열, 또는 이들과 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
VHH 도메인이 참조 서열에 특정 퍼센트 서열 상동성으로 정의되는 실시 예에서, VHH 도메인은 참조 서열에 존재하는 CDR 서열과 동일하게 유지할 수 있어 변이는 단지 구조 (프레임워크)부위 내에 존재한다.
본 발명은 더 나아가 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 이는 특정 서열번호에 참조하여 여기서 정의된 항체 또는 항원 결합 단편과 똑같은 에피톱에 결합한다. 또한, 여기서 서술된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및/또는 VL 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 본 발명은 더 나아가, 작동적으로 조절 서열에 연결되어 항체, 항원 결합 단편, 가변 중 쇄 도메인 또는 가변 경 쇄 도메인을 숙주 세포 또는 세포-없는 발현 시스템(cell-free expression system) 에서 발현하게 하는 앞에서 언급한 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또한, 상기 언급한 발현 벡터를 함유하는 숙주 세포 또는 세포-없는 발현 시스템을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 첫 번째 관점에 따른 길항제, 특히 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
더 나아가 첫 번째 관점에 따른 길항제, 특히 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하고, 또는 본 발명에 따른 약학적 조성물을 의약품으로서 사용을 제공한다.
더 나아간 관점에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 개체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 개체에게 첫 번째 관점에 따른 길항제, 특히 항체 또는 이의 항원 결합 단편의, 치료적 효과적인 양, 또는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여를 포함한다. 길항제. 항체. 항원 결합 단편 및 또는 약학적 조성물은 갈랙틴-10 결정의 존재 또는 형성과 연관된 질환 또는 컨디션을 치료하기 위하여 투여될 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 질환 또는 컨디션은: 천식 (asthma); 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis); 소아지방변증 (celiac disease); 기생충감염 (helminth infection); 위장관 호산구 염증 (gastrointestinal eosinophilic inflammation); 낭포성 섬유종 (cystic fibrosis) (CF); 알러지성 기관지 폐 아스페르길루스증 (allergic bronchopulmonary aspergillosis) (ABPA); 척-스트라우스 맥관염 (Churg-Straus vasculitis); 만성 호산구 폐렴 (chronic eosinophilic pneumonia), 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia) 로부터 선택된다. 바람직한 실시 예에서, 길항제. 항체. 항원 결합 단편 및 또는 약학적 조성물은 천식 (asthma)을 치료하기 위하여 투여된다.
본 발명은 또한 본 발명의 첫 번째 관점에 따른 길항제, 특히 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 환자로부터 얻은 샘플에서 갈랙틴-10을 검출하는데 사용을 제공한다. 길항제, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 바람직하게는 결정 갈랙틴-10을 검출하는데 사용된다. 환자의 샘플은 객담(sputum) 샘플일 수 있다.
본 발명은 본 발명의 첫 번째 관점에 따른 갈랙틴-10 길항제, 바람직하게는 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 선택적으로 사용 설명서를 포함하는 키트(kit)를 제공한다.
도 1: 생체 내 CL 결정을 닮은 재조합 Gal10 생산 (Production of recombinant Gal10 crystals resembling in vivo CLC crystals)
His-태그 된 Gal10 (His-tagged Gal10) 이 대장균 (E coli) 에서 발현되었다. (A) His-태그를 제거하기 위하여 TEV 프로테아제 제거 전후의 His-태그 된 Gal10의 SDS Page. (B) 다각도 레이저 분산 (Multi-angle laser scattering) (MALLS)으로 질량이 약 40kDa 으로 보이며, His-태그 된 Gal10 이 용액에서 이량체형 (dimeric form )임을 나타낸다. (C) TEV 프로테아제로 쪼개진 후, 단백질 용액은 자동적으로 바늘 모양의 결정으로 결정화된다. (D) 천식환자의 기도에서 보이는 다양한 모양의 결정을 서술한 차코트(Charcot) (1853)의 원본 그림. (E) 형광으로 라벨 된 재조합 Gal10 결정으로부터 얻은 다양한 결정 형태의 스냅사진. 차코트 및 레이덴 Charcot and von Leyden에 의해 원래 서술된 모든 육안으로 보이는 형태의 결정이 발견되었다.
도 2: 축농증 환자의 생체 내에서 자란 CLC 결정의 분리 및 결정 구조 (Isolation and crystal structure of in vivo grown CLC crystals of sinusitis patients).
(A) 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis) 및 코 폴립스 (nasal polyps) (CRSwNP) 환자의 수술 동안에 점액 샘플이 수집되었다. 폴립 조직이 여기 보인다. (B) Gal10의 면역염색은 알러지성 끈적끈적한 뮤신 (mucin)에 상당한 양의 결정 물질이 있음을 보여준다. 비슷한 점액질이 천식환자 및 ABPA 환자의 기도에서도 발견되었다. (C) X-레이 분산 연구 (X-ray diffraction studies)를 위해 올려놓은 생체 밖 (Ex vivo) 에서 얻은 결정. (D) 환자 유래 결정의 X-레이 패턴. (E) 환자 유래 CLC 결정의 결정 구조는 이량체 성질 (dimeric nature)을 보여준다. (F) 얻은 생체 밖 결정 구조를 재조합적으로-생산된 Gal10 결정 및 인간 호산구 세포 주 (human eosinophil cell line) (AML14.3D10)로 부터 얻은 알려진 재결정화된 CLC 결정과의 비교는 완전히 비슷함을 보여주며 ((거리의 루트 평균 제곱 (root mean square of distance) (RMSD)의 차이가 0.2 옹스트롬 (Angstrom)), 이는 재조합 Gal10 결정이 CLCs와 생물학적으로 비슷함 (biosimilar)을 보여준다.
도 3. Gal10 결정의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)의 상세한 분석에 의한 결정화 저항성 Gal10 돌연변이 단백질 창출.
(A) 및 (B) 는 두 개의 인접한 Gal10 이량체 사이의 크리스탈 패킹 인터페이스 (크리스탈 패킹 인터페이스) 에 가깝게 관여하는 다양한 아미노산의 근접 관찰. 강조된 아미노산들은 돌연변이 분석 및 돌연변이 단백질을 창출하기 위하여 선택되었다. (C) TEV 프로테아제 (protease) 에 의한 His 태그 제거 후에 야생형 및 돌연변이 단백질의 자동적 결정화 실험. Tyr69Glu 돌연변이 단백질은 자동결정화에 완전히 저항적이며 및 결정화 저항 용해성 Gal10 돌연변이 단백질로서 이 논문 (특허) 전체를 통해 사용되었다. (D) Gal10 Tyr69Glu 돌연변이 단백질의 X-레이 구조. 이 구조는 Tyr69Glu 돌연변이 단백질의 용액의 용액에서의 작은-각도 X-레이 분산 (small-angle X-ray scattering in solution ) (SAXS) 실험의 분산 프로화일의 모델로서 사용되었다. (E) SAXS 실험의 실험 데이터는 모델 데이터와 겹치며, 돌연변이 단백질이 용액에서 이량체를 형성함을 본질적으로 보여준다. (F) SAXS 데이터에 근거한 야생형과 Y69E Gal10 돌연변이 구조의 겹침.
도 4. Gal10 결정에 의해 유도되는 선천성 기도 염증 (Innate airway inflammation induced by Gal10 crystals)
C57Bl/6 생쥐에 Gal10 결정, 용해성 Gal10mut, 또는 대조군 PBS로 기관지 내로 주사하였다. (a) 처치 6 및 24시간 후에 폐로부터 회수된 호중구 (neutrophils) (왼쪽 팬널) 및 단핵구 (monocytes) (오른쪽 팬널) 의수. (b)처치 후 6 및 24시간에 기관지 폐포 세척세포에서 IL-6 (왼쪽 팬널) 및 TNFα (오른쪽 팬널)의 수준. (C) 처치 후 6 및 24시간에 폐에서 IL-1β 및 CCL-2의 수준. NS는 p 값 >0.12를 의미하고, * 는 p 값 <0.033을 의미하고; ** 는 p 값 <0.002를 의미하고; ***는 p 값 <0.0002를 의미하고; **** 는 p 값 <0.0001을 의미한다.
도 5. Gal10 결정에 의해 유도되는 선천성 염증은 NLRP3 염증조절복합체 (inflammasome) 에 의존하지 않는다 (Innate inflammation induced by Gal10 crystals does not depend on the NLRP3 inflammasome ).
Nlrp3-결여된 (왼쪽 팬널) 및 Caspase1/11-결여된 생쥐(오른쪽 팬널) (결여된 생쥐는 -/-로서 언급된다), 및 이들의 야생형 한배 새끼 (littermates) (+/+로 언급)에 Gal10 결정, 또는 대조군 PBS를 기관지 내로 주사하였다. 각 다른 생쥐 스트레인 (strain)의 소화된 폐로부터 회수된 호중구 (neutrophils) 의수가 처치 후 6 및 24시간에 측정되었다. NS는 p 값 >0.12를 의미하고, * 는 p 값 <0.033을 의미하고; ** 는 p 값 <0.002를 의미하고; ***는 p 값 <0.0002를 의미하고; **** 는 p 값 <0.0001을 의미한다.
도 6. Gal10 결정에 의해 유도되는 선천성 염증은 TLR4에 의존하지 않는다 (innate inflammation induced by Gal10 crystals does not depend on TLR4 ).
Toll-유사 수용체 4 (Toll-like receptor 4) (TLR4)-결여된 및 이들의 야생형 (WT) 한배 새끼에 Gal10 결정, 또는 대조군 PBS를 기관지 내로 주사하였다. 각 다른 생쥐 스트레인 (strain)의 소화된 폐로부터 회수된 호중구 (neutrophils) 의수가 처치 후 24시간에 측정되었다. NS는 p 값 >0.12를 의미하고, * 는 p 값 <0.033을 의미하고; ** 는 p 값 <0.002를 의미하고; ***는 p 값 <0.0002를 의미하고; **** 는 p 값 <0.0001을 의미한다.
도 7. Gal10 결정은 이 질환의 인간화 모델에서 인간 천식의 특징을 증가시 킨다 ( Gal10 crystals boost human asthma features in a humanized model of the disease).
(A) 집 먼지 진드기 (house dust mite)(HDM)의 추출물 및 다른 형태의 갈랙틴 10의 투여 용법을 보여주는 실험 설정 (setup). 말초혈액 단핵구 세포 (Peripheral blood mononuclear cells) (PBMCs)가 복강으로 주사되었다. 집 먼지 진드기 ((HDM) 추출물, 차코트-래이덴 결정 (Charcot-Leyden crystals) (CLC) 및 돌연 변이된 갈랙틴 10 (Gal10mut) 모두는 기관지 내로 투여되었다. (B) (A)하에서 서술된 대로 처치된 생쥐의 왼쪽 폐로부터 회수된 인간 CD45+ 백혈구 (CD45+ leukocytes)의 수. (C) (A)하에서 서술된 대로 처치된 생쥐의 혈청에서의 측정된 인간 IgE 수준.
도 8. Gal10 항체 첨가에 의한 시험관 내에서의 Gal10 자동결정화 방지 (Prevention of Gal10 autocrystallization in vitro by addition of Gal10 antibodies)
(A) TEV 프로테아제로 HIS 태그 (tag) 제거하여 Gal10이 자동결정화되도록 하였다. 이 에세이는 다양한 Gal10-특이 scFv-Fc 항체 클론 또는 상관없는 scFv-Fc 항체의 존재하에서 수행되었으며, 및 결정 형성은 결정화 로버트에서 관찰되었다. (B) 다양한 scFv-Fc 및 IgG1 항체의 활성 개요.
도 9. IgG1 항체 4개 클론에 의한 결정 용해의 저속 촬영 (time-lapse) 이미지 (Time lapse images of crystal dissolution by 4 clones of IgG1 antibodies).
항체가 이미 존재하는 결정을 또한 용해 시킬 수 있는지를 연구하기 위하여, 시험관 내에서 자란 Gal10 결정에 클론을 첨가시키고, 및 회전하는 디스크 공 초점 현미경 (spinning disk confocal microscopy)을 사용하여 관찰하였다. 4 클론 모두 90분 내에 결정을 완전히 용해 시켰으며, 반면에 관련없는 동 타입의 항체는 그렇지 않았다. (B) 결정-용해하는 항체들의 첨가시 결정의 키네틱 용해 커브 (Kinetic dissolution curve). 결정 첨가하기 전에 회전하는 디스크 공 초점 현미경의 고 강도 관찰에서 굴절되는 결정 재료는 모두 병합되었으며 및 1로 정상화 (normalized)하였다.
도 10. 결정 용해하는 클론의 Fab 단편과 Gal10 과의 복합체의 결정구조 (Crystal structure of Fab fragments of crystal dissolving clones in complex with Gal10 ).
Fab 단편과 재조합 Gal10의 혼합물의 결정이 결정화 로버트를 사용하여 수행되었으며, 및 이어서 X-레이 회절 (X-ray diffraction) 로 분석되었다 (A-C). Gal10 결정 구조는 만화 모델로 (검은색) 묘사된다. Fab의 경 쇄 (Light Chain) (LC) 및 중 쇄 (Heavy Chain) (HC) 는 LC는 흰색으로 및 HC는 어두운 회색으로 표면 모드에서 보인다. (D-F) 동시-결정화 구조가 얻어질 수 있는 세 개의 클론은모두 Gal10의 결정적인 Tyr69 잔기를 타겟으로 한다.
도 11. 항체에 의한 CRSwNP 환자의 점액질에서의 CLC 결정 용해화 (Solubilization of CLC crystals in the mucus of CRSwNP patients by antibodies).
일상적인 부비강(sinus) 수술 동안에 CRSwNP 환자의 신선한 점액성 알러지성 뮤신이 수집되었으며, 및 결정 용해성 항체 또는 동종 대조군을 첨가하기 전에 2 일 동안 보관하였다. 결정은 회전하는 디스크 공 초점 현미경에서 매우 굴절성인 이들의 성질 때문에 환자의 신선한 점액질에서 쉽게 동정 될 수 있다. 결정 용해성 항체를 첨가하면, 결정이 하룻밤 동안에 용해된다.
도 12. 인간화된 생쥐 모델에서 생체 내에서 Gal10 결정의 용해는 천식의 주요 특징을 감소시킨다는 개념의 증명 (Proof of concept that solubilizing Gal10 crystals in vivo reduce key features of asthma in a humanized mouse model).
(A) 집 먼지 진드기 (house dust mite)(HDM)의 추출물, Gal10 결정 및 이의 항체의 투여 용법을 보여주는 실험 설정 (setup). 말초혈액 단핵구 세포 (Peripheral blood mononuclear cells) (PBMCs)가 복강으로 주사되었다. 집 먼지 진드기 ((HDM) 추출물, 갈랙틴 10 결정, 1D11 항체 및 이의 대조군 항체가 모두 기관지내로 투여되었다. (B) 폐 절편 (scetion)의 헤마톡실린 에오신 (Hematoxylin Eosin) 염색. (C) 혈청에서 측정된 인간 IgE 수준. (D) (A) 하에서 서술된 대로 처치된 생쥐의 폐에서 뮤신 (Mucin) Muc5ac mRNA 발현. (E) 기저 막으로부터 500 μm둘레 부위로 확장된 많은 염증 세포의, 길이 기저 막 당 발현된, 검사자-맹인화 (Investigator-blinded) 정량적 이미지 분석, (F) 증가 된 농도로 기관지수축제, 메타콜린 (methacoline) 흡입 후 기도 저항성 역학 (dynamic airway resistance)(Rrs)으로서 측정된 기관지 수축.
도 13. scFv 세포질 추출물의 ELISA에 의한 스크리닝 (Screening of scFv periplasmic extracts by ELISA),
scFv 세포질 추출물의 갈랙틴-10 결합 능력이 여기서 서술된 대로 결합 ELISA로 결정 되었다. 흡광도는 450 nm (참조는 620 nm에서) 측정되었다. 각 세포질 마스터 플레이트(periplasmic Master plate) (PMP)를 위해, 빈 대조군 (blank control) 및 음성 대조군 (negative control) (상관 없는 타겟에 결합하는 세포질 추출물) 이 포함 되었다. 가공하지 않은 데이터는 (OD 값) 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01)에 플럿 되었다. 결합자는 ELISA 결합에서 0.5 OD 값보다 더 높은값을 보여주는 scFv로 정의하였다.
도 14. BLI 기술을 사용한 scFv 세포질 추출물 스크리닝 (Screening of scFv periplasmic extracts using BLI technology).
선택된 scFv 세포질 추출물의 갈랙틴-10 결합 능력이 옥텟 레드96 (Octet Red96)을 사용하여 BLI 기술 (BLI technology)로 분석되었다. 포획방법이 사용되었으며, 여기서 인간 및 시노몰구수 (cynomolgus) ((WGS 또는 REF 동종체 (isoforms)) 갈랙틴 -10-His는 희석된 선택된 scFv 세포질 추출물로 배양시키기 전에 항-His1K 바이오센서에 (anti-His1K biosensors) 고정 시켰다. 각 scFv 클론의 어프-레이트 (off-rate)가 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01) 에 플럿되었다.
도 15. Gal10 IgG1 항체에 의한 결정 용해 (Crystal dissolution by Gal10 IgG1 antibodies).
Gal10 항체가 존재하고 있는 결정을 용해할 수 있는지를 연구하기 위하여, 클론을 시험관 내에서 자란 재조합 인간 Gal10 결정에 첨가하고, 및 회전하는 디스크 공초점 현미경을 사용하여 관찰하였다. 8개 클론 모두 연구된 시간-코스에 걸쳐 결정을 완전히 용해 시켰으며, 반면에 상관없는 동종 항체는 그렇지 않았다.
도 16. 결정 용해성 클론의 Fab 단편의 Gal10과의 복합체에 있어서의 결정 구조 (Crystal structure of Fab fragments of crystal dissolving clones in complex with Gal10 )
Fab 단편과 재조합 Gal10 혼합물의 결정이 결정화 로봇을 사용하여 형성되었으며, 및 이어서 X-레이 회절로 분석되었다.
도 17. Gal10 IgG1 항체 및 Fab 단편에 의한 결정 용해 (Crystal dissolution by Gal10 IgG1 antibodies and Fab fragments).
미리-형성된 재조합 인간 CLCs를 사용한 CLC 용해 실험은 시간-코스에 걸쳐 Gal 10 mAbs 및 Gal10 Fabs 존재하에서 수행되었다. 결정의 용해는 회전하는 디스크 공초점 현미경을 사용하여 관찰되었다.
도 18. ELISA에 의한 VHH 세포질 추출물의 스크리닝 (Screening of VHH periplasmic extracts by ELISA)
VHH 세포질 추출물의 갈랙틴 10 결합 능력이 여기서 서술된 결합 ELISA에 의하여 측정되었다. 흡광도는 450 nm (참조는 620nm에서) 측정되었다. 각 세포질 마스터 플레이트(periplasmic Master plate) (PMP)를 위해, 빈 대조군 (blank control) 및 음성 대조군 (negative control) (상관없는 타겟에 결합하는 VHH 세포질 추출물) 이 포함 되었다. 가공하지 않은 데이터가 (OD 값) 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01)에 플럿 되었다.
도 19.BLI 기술을 사용한 VHH 세포질 추출물의 스크리닝 (Screening of VHH periplasmic extracts using BLI technology)
선택된 VHH 세포질 추출물의 결합 능력이 옥텟 레드96 (Octet Red96)을 사용하여 BLI 기술 (BLI technology)로 분석되었다. 이 목적을 위하여, 포획방법이 사용되었으며, 여기서 인간 및 시노몰구수 (cynomolgus) ((WGS 또는 REF 동종체 (isoforms)) 갈랙틴 -10-His는 희석된 선택된 VHH 세포질 추출물로 배양시키기 전에 항-His1K 바이오센서에 (anti-His1K biosensors) 고정 시켰다. 각 VHH 클론의 어프-레이트 (off-rate) (1/s) 및 반응 (response) (nm) 이 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01) 에 플럿 되었다.
도 20. Gal10 VHH 항체에 의한 결정 용해 (Crystal dissolution by Gal10 VHH antibodies).
미리-형성된 재조합 인간 CLCs를 사용한 CLC 용해 실험이 Gal10 VHH 항체의 존재하에서 시간-코스에 걸쳐 존재하에서 수행되었다. 결정의 용해는 회전하는 디스크 공초점 현미경을 사용하여 관찰되었다.
His-태그 된 Gal10 (His-tagged Gal10) 이 대장균 (E coli) 에서 발현되었다. (A) His-태그를 제거하기 위하여 TEV 프로테아제 제거 전후의 His-태그 된 Gal10의 SDS Page. (B) 다각도 레이저 분산 (Multi-angle laser scattering) (MALLS)으로 질량이 약 40kDa 으로 보이며, His-태그 된 Gal10 이 용액에서 이량체형 (dimeric form )임을 나타낸다. (C) TEV 프로테아제로 쪼개진 후, 단백질 용액은 자동적으로 바늘 모양의 결정으로 결정화된다. (D) 천식환자의 기도에서 보이는 다양한 모양의 결정을 서술한 차코트(Charcot) (1853)의 원본 그림. (E) 형광으로 라벨 된 재조합 Gal10 결정으로부터 얻은 다양한 결정 형태의 스냅사진. 차코트 및 레이덴 Charcot and von Leyden에 의해 원래 서술된 모든 육안으로 보이는 형태의 결정이 발견되었다.
도 2: 축농증 환자의 생체 내에서 자란 CLC 결정의 분리 및 결정 구조 (Isolation and crystal structure of in vivo grown CLC crystals of sinusitis patients).
(A) 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis) 및 코 폴립스 (nasal polyps) (CRSwNP) 환자의 수술 동안에 점액 샘플이 수집되었다. 폴립 조직이 여기 보인다. (B) Gal10의 면역염색은 알러지성 끈적끈적한 뮤신 (mucin)에 상당한 양의 결정 물질이 있음을 보여준다. 비슷한 점액질이 천식환자 및 ABPA 환자의 기도에서도 발견되었다. (C) X-레이 분산 연구 (X-ray diffraction studies)를 위해 올려놓은 생체 밖 (Ex vivo) 에서 얻은 결정. (D) 환자 유래 결정의 X-레이 패턴. (E) 환자 유래 CLC 결정의 결정 구조는 이량체 성질 (dimeric nature)을 보여준다. (F) 얻은 생체 밖 결정 구조를 재조합적으로-생산된 Gal10 결정 및 인간 호산구 세포 주 (human eosinophil cell line) (AML14.3D10)로 부터 얻은 알려진 재결정화된 CLC 결정과의 비교는 완전히 비슷함을 보여주며 ((거리의 루트 평균 제곱 (root mean square of distance) (RMSD)의 차이가 0.2 옹스트롬 (Angstrom)), 이는 재조합 Gal10 결정이 CLCs와 생물학적으로 비슷함 (biosimilar)을 보여준다.
도 3. Gal10 결정의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)의 상세한 분석에 의한 결정화 저항성 Gal10 돌연변이 단백질 창출.
(A) 및 (B) 는 두 개의 인접한 Gal10 이량체 사이의 크리스탈 패킹 인터페이스 (크리스탈 패킹 인터페이스) 에 가깝게 관여하는 다양한 아미노산의 근접 관찰. 강조된 아미노산들은 돌연변이 분석 및 돌연변이 단백질을 창출하기 위하여 선택되었다. (C) TEV 프로테아제 (protease) 에 의한 His 태그 제거 후에 야생형 및 돌연변이 단백질의 자동적 결정화 실험. Tyr69Glu 돌연변이 단백질은 자동결정화에 완전히 저항적이며 및 결정화 저항 용해성 Gal10 돌연변이 단백질로서 이 논문 (특허) 전체를 통해 사용되었다. (D) Gal10 Tyr69Glu 돌연변이 단백질의 X-레이 구조. 이 구조는 Tyr69Glu 돌연변이 단백질의 용액의 용액에서의 작은-각도 X-레이 분산 (small-angle X-ray scattering in solution ) (SAXS) 실험의 분산 프로화일의 모델로서 사용되었다. (E) SAXS 실험의 실험 데이터는 모델 데이터와 겹치며, 돌연변이 단백질이 용액에서 이량체를 형성함을 본질적으로 보여준다. (F) SAXS 데이터에 근거한 야생형과 Y69E Gal10 돌연변이 구조의 겹침.
도 4. Gal10 결정에 의해 유도되는 선천성 기도 염증 (Innate airway inflammation induced by Gal10 crystals)
C57Bl/6 생쥐에 Gal10 결정, 용해성 Gal10mut, 또는 대조군 PBS로 기관지 내로 주사하였다. (a) 처치 6 및 24시간 후에 폐로부터 회수된 호중구 (neutrophils) (왼쪽 팬널) 및 단핵구 (monocytes) (오른쪽 팬널) 의수. (b)처치 후 6 및 24시간에 기관지 폐포 세척세포에서 IL-6 (왼쪽 팬널) 및 TNFα (오른쪽 팬널)의 수준. (C) 처치 후 6 및 24시간에 폐에서 IL-1β 및 CCL-2의 수준. NS는 p 값 >0.12를 의미하고, * 는 p 값 <0.033을 의미하고; ** 는 p 값 <0.002를 의미하고; ***는 p 값 <0.0002를 의미하고; **** 는 p 값 <0.0001을 의미한다.
도 5. Gal10 결정에 의해 유도되는 선천성 염증은 NLRP3 염증조절복합체 (inflammasome) 에 의존하지 않는다 (Innate inflammation induced by Gal10 crystals does not depend on the NLRP3 inflammasome ).
Nlrp3-결여된 (왼쪽 팬널) 및 Caspase1/11-결여된 생쥐(오른쪽 팬널) (결여된 생쥐는 -/-로서 언급된다), 및 이들의 야생형 한배 새끼 (littermates) (+/+로 언급)에 Gal10 결정, 또는 대조군 PBS를 기관지 내로 주사하였다. 각 다른 생쥐 스트레인 (strain)의 소화된 폐로부터 회수된 호중구 (neutrophils) 의수가 처치 후 6 및 24시간에 측정되었다. NS는 p 값 >0.12를 의미하고, * 는 p 값 <0.033을 의미하고; ** 는 p 값 <0.002를 의미하고; ***는 p 값 <0.0002를 의미하고; **** 는 p 값 <0.0001을 의미한다.
도 6. Gal10 결정에 의해 유도되는 선천성 염증은 TLR4에 의존하지 않는다 (innate inflammation induced by Gal10 crystals does not depend on TLR4 ).
Toll-유사 수용체 4 (Toll-like receptor 4) (TLR4)-결여된 및 이들의 야생형 (WT) 한배 새끼에 Gal10 결정, 또는 대조군 PBS를 기관지 내로 주사하였다. 각 다른 생쥐 스트레인 (strain)의 소화된 폐로부터 회수된 호중구 (neutrophils) 의수가 처치 후 24시간에 측정되었다. NS는 p 값 >0.12를 의미하고, * 는 p 값 <0.033을 의미하고; ** 는 p 값 <0.002를 의미하고; ***는 p 값 <0.0002를 의미하고; **** 는 p 값 <0.0001을 의미한다.
도 7. Gal10 결정은 이 질환의 인간화 모델에서 인간 천식의 특징을 증가시 킨다 ( Gal10 crystals boost human asthma features in a humanized model of the disease).
(A) 집 먼지 진드기 (house dust mite)(HDM)의 추출물 및 다른 형태의 갈랙틴 10의 투여 용법을 보여주는 실험 설정 (setup). 말초혈액 단핵구 세포 (Peripheral blood mononuclear cells) (PBMCs)가 복강으로 주사되었다. 집 먼지 진드기 ((HDM) 추출물, 차코트-래이덴 결정 (Charcot-Leyden crystals) (CLC) 및 돌연 변이된 갈랙틴 10 (Gal10mut) 모두는 기관지 내로 투여되었다. (B) (A)하에서 서술된 대로 처치된 생쥐의 왼쪽 폐로부터 회수된 인간 CD45+ 백혈구 (CD45+ leukocytes)의 수. (C) (A)하에서 서술된 대로 처치된 생쥐의 혈청에서의 측정된 인간 IgE 수준.
도 8. Gal10 항체 첨가에 의한 시험관 내에서의 Gal10 자동결정화 방지 (Prevention of Gal10 autocrystallization in vitro by addition of Gal10 antibodies)
(A) TEV 프로테아제로 HIS 태그 (tag) 제거하여 Gal10이 자동결정화되도록 하였다. 이 에세이는 다양한 Gal10-특이 scFv-Fc 항체 클론 또는 상관없는 scFv-Fc 항체의 존재하에서 수행되었으며, 및 결정 형성은 결정화 로버트에서 관찰되었다. (B) 다양한 scFv-Fc 및 IgG1 항체의 활성 개요.
도 9. IgG1 항체 4개 클론에 의한 결정 용해의 저속 촬영 (time-lapse) 이미지 (Time lapse images of crystal dissolution by 4 clones of IgG1 antibodies).
항체가 이미 존재하는 결정을 또한 용해 시킬 수 있는지를 연구하기 위하여, 시험관 내에서 자란 Gal10 결정에 클론을 첨가시키고, 및 회전하는 디스크 공 초점 현미경 (spinning disk confocal microscopy)을 사용하여 관찰하였다. 4 클론 모두 90분 내에 결정을 완전히 용해 시켰으며, 반면에 관련없는 동 타입의 항체는 그렇지 않았다. (B) 결정-용해하는 항체들의 첨가시 결정의 키네틱 용해 커브 (Kinetic dissolution curve). 결정 첨가하기 전에 회전하는 디스크 공 초점 현미경의 고 강도 관찰에서 굴절되는 결정 재료는 모두 병합되었으며 및 1로 정상화 (normalized)하였다.
도 10. 결정 용해하는 클론의 Fab 단편과 Gal10 과의 복합체의 결정구조 (Crystal structure of Fab fragments of crystal dissolving clones in complex with Gal10 ).
Fab 단편과 재조합 Gal10의 혼합물의 결정이 결정화 로버트를 사용하여 수행되었으며, 및 이어서 X-레이 회절 (X-ray diffraction) 로 분석되었다 (A-C). Gal10 결정 구조는 만화 모델로 (검은색) 묘사된다. Fab의 경 쇄 (Light Chain) (LC) 및 중 쇄 (Heavy Chain) (HC) 는 LC는 흰색으로 및 HC는 어두운 회색으로 표면 모드에서 보인다. (D-F) 동시-결정화 구조가 얻어질 수 있는 세 개의 클론은모두 Gal10의 결정적인 Tyr69 잔기를 타겟으로 한다.
도 11. 항체에 의한 CRSwNP 환자의 점액질에서의 CLC 결정 용해화 (Solubilization of CLC crystals in the mucus of CRSwNP patients by antibodies).
일상적인 부비강(sinus) 수술 동안에 CRSwNP 환자의 신선한 점액성 알러지성 뮤신이 수집되었으며, 및 결정 용해성 항체 또는 동종 대조군을 첨가하기 전에 2 일 동안 보관하였다. 결정은 회전하는 디스크 공 초점 현미경에서 매우 굴절성인 이들의 성질 때문에 환자의 신선한 점액질에서 쉽게 동정 될 수 있다. 결정 용해성 항체를 첨가하면, 결정이 하룻밤 동안에 용해된다.
도 12. 인간화된 생쥐 모델에서 생체 내에서 Gal10 결정의 용해는 천식의 주요 특징을 감소시킨다는 개념의 증명 (Proof of concept that solubilizing Gal10 crystals in vivo reduce key features of asthma in a humanized mouse model).
(A) 집 먼지 진드기 (house dust mite)(HDM)의 추출물, Gal10 결정 및 이의 항체의 투여 용법을 보여주는 실험 설정 (setup). 말초혈액 단핵구 세포 (Peripheral blood mononuclear cells) (PBMCs)가 복강으로 주사되었다. 집 먼지 진드기 ((HDM) 추출물, 갈랙틴 10 결정, 1D11 항체 및 이의 대조군 항체가 모두 기관지내로 투여되었다. (B) 폐 절편 (scetion)의 헤마톡실린 에오신 (Hematoxylin Eosin) 염색. (C) 혈청에서 측정된 인간 IgE 수준. (D) (A) 하에서 서술된 대로 처치된 생쥐의 폐에서 뮤신 (Mucin) Muc5ac mRNA 발현. (E) 기저 막으로부터 500 μm둘레 부위로 확장된 많은 염증 세포의, 길이 기저 막 당 발현된, 검사자-맹인화 (Investigator-blinded) 정량적 이미지 분석, (F) 증가 된 농도로 기관지수축제, 메타콜린 (methacoline) 흡입 후 기도 저항성 역학 (dynamic airway resistance)(Rrs)으로서 측정된 기관지 수축.
도 13. scFv 세포질 추출물의 ELISA에 의한 스크리닝 (Screening of scFv periplasmic extracts by ELISA),
scFv 세포질 추출물의 갈랙틴-10 결합 능력이 여기서 서술된 대로 결합 ELISA로 결정 되었다. 흡광도는 450 nm (참조는 620 nm에서) 측정되었다. 각 세포질 마스터 플레이트(periplasmic Master plate) (PMP)를 위해, 빈 대조군 (blank control) 및 음성 대조군 (negative control) (상관 없는 타겟에 결합하는 세포질 추출물) 이 포함 되었다. 가공하지 않은 데이터는 (OD 값) 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01)에 플럿 되었다. 결합자는 ELISA 결합에서 0.5 OD 값보다 더 높은값을 보여주는 scFv로 정의하였다.
도 14. BLI 기술을 사용한 scFv 세포질 추출물 스크리닝 (Screening of scFv periplasmic extracts using BLI technology).
선택된 scFv 세포질 추출물의 갈랙틴-10 결합 능력이 옥텟 레드96 (Octet Red96)을 사용하여 BLI 기술 (BLI technology)로 분석되었다. 포획방법이 사용되었으며, 여기서 인간 및 시노몰구수 (cynomolgus) ((WGS 또는 REF 동종체 (isoforms)) 갈랙틴 -10-His는 희석된 선택된 scFv 세포질 추출물로 배양시키기 전에 항-His1K 바이오센서에 (anti-His1K biosensors) 고정 시켰다. 각 scFv 클론의 어프-레이트 (off-rate)가 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01) 에 플럿되었다.
도 15. Gal10 IgG1 항체에 의한 결정 용해 (Crystal dissolution by Gal10 IgG1 antibodies).
Gal10 항체가 존재하고 있는 결정을 용해할 수 있는지를 연구하기 위하여, 클론을 시험관 내에서 자란 재조합 인간 Gal10 결정에 첨가하고, 및 회전하는 디스크 공초점 현미경을 사용하여 관찰하였다. 8개 클론 모두 연구된 시간-코스에 걸쳐 결정을 완전히 용해 시켰으며, 반면에 상관없는 동종 항체는 그렇지 않았다.
도 16. 결정 용해성 클론의 Fab 단편의 Gal10과의 복합체에 있어서의 결정 구조 (Crystal structure of Fab fragments of crystal dissolving clones in complex with Gal10 )
Fab 단편과 재조합 Gal10 혼합물의 결정이 결정화 로봇을 사용하여 형성되었으며, 및 이어서 X-레이 회절로 분석되었다.
도 17. Gal10 IgG1 항체 및 Fab 단편에 의한 결정 용해 (Crystal dissolution by Gal10 IgG1 antibodies and Fab fragments).
미리-형성된 재조합 인간 CLCs를 사용한 CLC 용해 실험은 시간-코스에 걸쳐 Gal 10 mAbs 및 Gal10 Fabs 존재하에서 수행되었다. 결정의 용해는 회전하는 디스크 공초점 현미경을 사용하여 관찰되었다.
도 18. ELISA에 의한 VHH 세포질 추출물의 스크리닝 (Screening of VHH periplasmic extracts by ELISA)
VHH 세포질 추출물의 갈랙틴 10 결합 능력이 여기서 서술된 결합 ELISA에 의하여 측정되었다. 흡광도는 450 nm (참조는 620nm에서) 측정되었다. 각 세포질 마스터 플레이트(periplasmic Master plate) (PMP)를 위해, 빈 대조군 (blank control) 및 음성 대조군 (negative control) (상관없는 타겟에 결합하는 VHH 세포질 추출물) 이 포함 되었다. 가공하지 않은 데이터가 (OD 값) 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01)에 플럿 되었다.
도 19.BLI 기술을 사용한 VHH 세포질 추출물의 스크리닝 (Screening of VHH periplasmic extracts using BLI technology)
선택된 VHH 세포질 추출물의 결합 능력이 옥텟 레드96 (Octet Red96)을 사용하여 BLI 기술 (BLI technology)로 분석되었다. 이 목적을 위하여, 포획방법이 사용되었으며, 여기서 인간 및 시노몰구수 (cynomolgus) ((WGS 또는 REF 동종체 (isoforms)) 갈랙틴 -10-His는 희석된 선택된 VHH 세포질 추출물로 배양시키기 전에 항-His1K 바이오센서에 (anti-His1K biosensors) 고정 시켰다. 각 VHH 클론의 어프-레이트 (off-rate) (1/s) 및 반응 (response) (nm) 이 그래패드 프리즘 7.01 (GraphPad Prism 7.01) 에 플럿 되었다.
도 20. Gal10 VHH 항체에 의한 결정 용해 (Crystal dissolution by Gal10 VHH antibodies).
미리-형성된 재조합 인간 CLCs를 사용한 CLC 용해 실험이 Gal10 VHH 항체의 존재하에서 시간-코스에 걸쳐 존재하에서 수행되었다. 결정의 용해는 회전하는 디스크 공초점 현미경을 사용하여 관찰되었다.
A. 정의
달리 정의되지 않는 한, 여기서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 발명의 기술적 분야에서 이 분야 기술의 전문가에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 가진다
"길항제 (Antagonist)" -여기서 사용된 대로, "길항제 (Antagonist)"는 갈랙틴-10에 결합할 능력이 있고 및 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)를 차단할 수 있는 어느 제제를 의미한다. 크리스탈 팩킹 인터페이스의 차단 (shielding) 또는 ""차폐(obscuring)"로, 길항제의 기능은 갈랙틴-10 분자의 결정화를 방해하는 것이다. 본 발명에 따른 길항제는 전형적으로 특이적으로 갈랙틴-10에 결합하거나 또는 갈랙틴-10에 특이하게 결합 ("specifically bind") 한다. "특이하게 결합 (specifically bind)" 은 길항제가 이의 타겟에, 이 경우 갈랙틴-10 에, 우선적으로 결합하는 능력을 의미한다. 단백질 타겟에 결합할 능력이 있는 제제는, 특히 주어진 단백질 타겟에 결합 특이성을 보일 수 있는 제제는 이 부야 기술 전문가에게 알려졌다. 그러한 제제에는 이것에만 국한하지 않으나, 작은 분자 억제제, 펩티드를 포함하는 생물학적 분자, 및 아피바디 (affibodies), 아필린 (affilins), 아피틴 (affitins), 아드넥틴 (adnectins), 아트리머 (atrimers), 에바신 (evasins), 드라핀 (DARPins), 안티칼린 (anticalins), 아비머 (avimers), 피노머 (fynomers), 베르사바디 (versabodies) 및 두오칼린 (duocalins)과 같은 항체 모사체 (antibody mimetics)가 포함된다. 본 발명에 따른 바람직한 길항제는 항체 및 이의 항원 결합단편이다.
"항체 (Antibody)" 또는 "면역글로블린 (면역글로블린)"-여기서 사용된 대로, "면역글로블린 (면역글로블린)" 이란 용어는 해당하는 어떤 특이적인 면역반응성을 소유하든 또는 아니든, 두 개의 중 쇄 및 두 개의 경 쇄의 조합을 가진 폴리펩티드를 포함한다. "항체 (Antibodies)"는 관심 있는 항원 (여기서는 갈랙틴-10)에 대한 의미 있는 알려진 특이적인 면역반응적인 활성을 가진 그러한 집합을 의미한다. "갈랙틴-10 항체 (galectin-10 antibodies)" 이라는 용어, 인간 갈랙틴-10, 및 어떤 경우에는 이의 종 유사체 (species homologues)를 포함하는, 갈랙틴-10 단백질에 대한 면역적인 특이성을 보여주는 항체를 의미하기 위해서 여기서 사용된다. 항체 (Antibody) 및 면역글로블린 (면역글로블린s)은 이들 사이에 체인 간의 공유 연결이 있이 또는 없이 경 쇄 및 중 쇄를 포함한다. 척추동물 시스템에서 기본적인 면역글로빈 구조가 상대적으로 잘 이해되고 있다.
포괄적인 용어 "면역글로블린 (면역글로블린)"은 생화학적으로 구별될 수 있는 5개의 뚜렷한 부류 (class) 의 항체를 포함한다. 모든 5개 부류의 항체는 본 발명의 범위 내에 있다. 다음의 논의는 일반적으로 면역글로블린 분자의 IgG 부류로 향할 것이다. IgG에 관하여, 면역글로블린은 대략 23,000 달톤 (Daltons) 분자량의 두 개의 동일한 경 쇄 폴리펩티드, 및 53,000-70,000 분자량의 두 개의 동일한 중 쇄를 포함한다. 4개의 체인은 'Y" 모양으로 이황화 결합 (disulfide bonds) 에 의해 연결되어 있으며, 여기서 경 쇄는 "Y"의 입 부분에서 시작되는 중쇄를 괄호로 묶고 및 가변 부위를 통해 계속된다.
항체의 경 쇄는 카파 (kappa) 또는 람다 (lambda) (k,l)로서 분류된다. 각 중 쇄 부류는 경 쇄의 카파 (kappa) 또는 람다 (lambda)와 결합할 수 있다. 일반적으로, 면역글로블린이 하이브리도마 (hybridomas), B 세포 또는 유전적으로 제작된 숙주 세포에 의해 만들어질 때, 경 쇄 및 중 쇄는 서로 공유적으로 결합 되며, 및 두 개의 중 쇄 꼬리 부분 ("tail" portions)은 공유 이황화 결합 또는 비-공유 결합에 의해 서로 결합된다. 중 쇄에서는, 아미노산 서열은 Y 모양의 포크 된 끝의 N-말단으로부터 각 체인의 밑 부분의 C-말단으로 흐른다. 이 분야 기술의 전문가는 중 쇄는, 이들 중 서브클래스 (subclasses) 가 있으면서 (예를 들어, g1-g4), 감마 (gamma), 뮤 (mu), 알파 (alpha), 델타 (delta), 또는 입실론 (epsilon), (g, m, a, d, e)으로 로 분류되는 것을 인지할 것이다. 항체의 "클래스 (class)" 를 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE, 결정하는 것이 이 체인의 성질이다. 면역클로블린의 서브클래스(subclasses) ((아이소타입 (isotypes)), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 등은 잘 규명이 되었으며 및 기능적인 특성화가 주어지는 것으로 알려졌다. 이 클래스들 및 아이소타입의 각 수정된 형태는 즉석 공개의 관점에서 전문가에게는 쉽게 구별될 수 있으며, 및 따라서 즉석 발명의 범위 내에 있다.
상기 제시된 대로, 항체의 가변 부위는 항체가 선택적으로 항원의 에페톱을 을 인식하고 및 특이적으로 항체의 에피톱에 결합하게 한다. 즉, 항체의 VL 도메인 및 VH 도메인이 조합하여 3차원 항원 결합 부위를 결정하는 가변 부위를 형성한다. 이 4차 항체 구조는 Y의 각 팔의 끝에 존재하는 항원 결합 부위를 형성한다. 더 구체적으로, 항원 결합 부위는 각 VH 및 VL 체인에 세 개의 보완성 결정 부위 (complementary determining regions) (CDRs)로 정의된다.
"항체 (antobody)"라는 용어는 여기서 사용한 대로 "VHH 항체" 또는 "중 쇄만인 항체 (Heavy-chain only antibodies)" 를 포함한다.
" VHH 항체" - 여기서 사용된 대로," VHH 항체 (VHH antibody)" 또는 "중 쇄만인 항체 (Heavy-chain only antibodies)" 는 낙타 (camels), 라마 (llama), 알파카 (alpaca)를 포함하는, 낙타류 (Camelidae family) 종에 의해서만 생산되는 타입의 항체를 의미한다. "중 쇄만인 항체 (Heavy-chain only antibodies)" 또는 VHH 항체는 두 개의 중 쇄를 포함하며 및 경 쇄는 없다. 각 중 쇄는 N-말단에 가변 도메인을 가지며, 및 이 가변 도메인들은 전통적인 헤테로테트라머 항체 (heterotetrameric antibodies) 의 중 쇄의 가변 도메인, 즉, 상기 서술된 대로, VH 도메인과 구별하기 위하여, "VHH" 도메인으로서 언급된다.
" 갈랙틴 -10 ( Galectin -10)"-여기서 사용된 대로, "갈랙틴-10 (galectin-10)" ((Gal10 또는 Gal-10) 은 자동결정화되어 차코트-레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals)을 형성하는 작은, 소수성 글라이칸 (glycan) 결합 단백질이다. 갈랙틴-10 은 또한 차코트-레이댄 결정 단백질 (Charcot-Leyden crystal protein) (CLCP), 에오지노필 라이소포스포리파제 (eosinophil lysophospholipase) 또는 라이소 레시틴 아실하이드로레이즈 (lysolecithin acylhydrolase) 라고도 언급된다. "갈랙틴-10 (galectin-10)" 이란 용어는 인간 단백질 및 어느 종의 호모로그 (homologues) 도 커버 하기에 충분하게 넓다. 인간 전장 갈랙틴-10의 아미노산 서열은 서열번호 141 (하기 참조)로 대표된다. 이 서열은 유니프로트 데이터베이스 (UniProt database) 에 인간 갈랙틴-10으로서, 접근 번호 Q05315로, 저장된 서열에 해당한다. 또한 "갈랙틴-10 이란 용어 내에 포함되는 것은, 자연적으로 일어나는 인간 서열의 변이체를, 예를 들어 28번 위치에 Als→Val 변이체, 이다.
서열번호141 
" 갈랙틴 -10 결정 ( Galectin -10 crystals)" 또는 " 차코트 - 레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals)"-갈랙틴-10 결정 (Galectin-10 crystals)", "차코트-레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals)" 및 "CLCs"이란 용어는 여기서 갈랙틴-10으로 형성된 결정을 의미하는데 서로 바꿔서 사용된다. 갈랙틴-10에 의해 형성된 결정은 전형적으로 쌍뿔형 육각 (bi-pyramidal hexagonal) 결정이며 및 대략 길이가 20-40 μm 이고 및 넓이는 2-4 μm이다. 이 결정은 호산성 염증성 장애 (eosinophilic inflammatory disorders) 와 관련이 있다.
" 크리스탈 패킹 인터페이스 (Crystal packing interface)"-갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)" 는 결정 격자 (crystalline lattice) 내에서 하나 또는 그 이상의 이웃하는 갈랙틴-10의 분자와 접촉하는 갈랙틴-10에 표면 패치 (surface patch)를 형성하는 아미노산 세트를 의미한다. CLC는 다른 크리스탈 패킹 인터페이스를 가지며 이들 크리스탈 패킹 인터페이스를 형성하는 아미노산은: Ser2, Leu3, Leu4, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Ala12, Ser13, Thr16, Thr42, Glu43, Met44, Lys45, Asp49, Ile50, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Leu96, Pro97, Asp98, Lys99, Gln101, Met103, Gly106, Gln107, Ser108, Ser109, Tyr110, Thr111, Asp113, His114, Arg115, Ile116, Lys117, Ala120, Gln125, Thr133, Lys134, Phe135, Asn136, Val137, Ser138, Tyr139, Leu140 and Lys141, 로서 특징지어졌으며, 여기서 위치는 상기 서열번호 141에 참고하여 정의된다.
" 에피톱 ( Epitope )"-여기서 사용된 대로, "에피톱 (Epitope)" 이란 용어는 길항제가 결합하는 갈랙틴-10 단백질의 한 부분을 의미한다. 길항제는 전형적으로 길항제의 보완적 결합 부위를 (complementary binding site) 통해 이의 해당하는 갈랙틴-10 에피톱에 결합할 것이다. 길항제가 결합하는 에피톱은 전형적으로 전장 갈랙틴-10 단백질로부터 하나 또는 그 이상의 아미노산을 포함할 것이다. 에피톱은 갈랙틴-10 단백질에서 연속적인 아미노산, 즉 선상 에피톱 (linear epitope) 을 포함하거나, 또는 갈랙틴-10 단백질에서 비-연속적인 아미노산, 즉 구조적 에피톱 (conformational epitope) 인 아미노산을 포함할 수 있다.
"결합 부위 (Binding Site)" - 여기서 사용된 대로, 결합 부위 (Binding Site)" 는 관심 있는 타겟 항원에 (예를 들어, 갈랙틴-10) 선택적으로 결합하는데 책임 있는 폴리펩티드의 부분을 포함한다. 결합 도메인은 적어도 하나의 결합부위를 포함한다. 예시적인 결합 도메인은 항체 가변 도메인이 포함된다. 본 발명의 항체 분자는 단일 결합 부위 또는 다수 (예를 들어, 두 개, 세 개 또는 네 개) 결합 부위를 포함할 수 있다.
"유래한 (Derived From)" -여기서 사용된 대로, 지정한 단백질로부터 "유래한 (Derived From)" (예를 들어, 낙타류 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 이란 용어는 폴리펩티드 또는 아미노산 서열의 기원을 의미한다. 한 실시 예에서, 특정한 시작 폴리펩티드로부터 유래한 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 CDR 서열 또는 이것과 관련 있는 서열이다. 실시 예에서, 특정한 시작 폴리펩티드로부터 유래한 아미노산 서열은 연속적이지 않다. 예를 들어, 한 실시 예에서, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 또는 여섯 CDRs은 시작 항체로부터 유래한다. 한 실시 예에서, 특정한 시작 폴리펩티드 또는 아미노산 서열로부터 유래한 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 이의 시작하는 서열, 또는 이의 한 부분과 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지며 여기서 한 부분은 적어도 3-5 아미노산, 적어도 5-10 아미노산, 적어도 10-20 아미노산, 적어도 20-30 아미노산, 또는 적어도 30-50 아미노산, 또는 달리 이 분야 기술 통상 전문가가 시작 서열에 그 서열이 기원함을 동정할 수 있는 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시 예에서, 시작 항체로부터 유래한 하나 또는 그 이상의 CDR 서열은 변이체 CDR 서열을, 예를 들어, 친화 변이체를, 생산하기 위하여 변경되며, 여기서 변이체 CDR 서열은 타겟 결합 활성은 유지한다.
낙타류-유래 ( Camelid -Derived)" -어떤 실시 예에서, 본 발명의 항체는 낙타류 전통적인 항체 또는 낙타류의 활성적인 면역화로 길러진 VHH 항체로부터 유래한 프레임워크 (framework) 아미노산 서열 및/또는 CDR 아미노산 서열을 포함한다. 그러나 낙타류-유래 아미노산 서열을 포함하는 본 발명의 항체는 인간 아미노산 서열 (즉, 인간 항체) 또는 다른 비-낙타류 포유류 종으로부터 유래한 프레임 워크 및/또는 고정 부위 (constant region) 서열을 포함하도록 제작될 수 있다. 예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류 프레임워크 부위, 중 쇄 부위, 및/또는 힌지 부위 (hinge portion) 가 갈랙틴-10 항체에 포함될 수 있다. 한 실시 예에서, 하나 또는 그 이상의 비-낙타류 아미노산이 "낙타류-유래" 항체의 프레임워크 부위에 존재할 수 있다, 예를 들어, 낙타류 프레임워크 아미노산 서열은 해당하는 인간 또는 비-인간 영장류의 아미노산 잔기가 존재하는 하나 또는 그 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 더욱이, 낙타류-유래 VH 또는 VL 도메인, 또는 이의 인간화된 변이체는, 여기 다른 곳에서 서술된 대로, 인간 항체의 고정 부위(constant region)에 연결될 수 있어, 키메릭 분자 (chimeric molecule) 를 생산한다.
`"보존적 아미노산 대체 (Conservative amino acid substitution)"-"보존적 아미노산 대체 (Conservative amino acid substitution)" 는 아미노산 잔기가 비슷한 측 쇄를 가진 아미노산 잔기로 교체되는 것이다. 비슷한 측 쇄를 지닌 아미노산 잔기 류 (family)가 이 분야 기술에서 정의되었으며, 염기성 측 쇄 ((예를 들어, 라이신 (lysine), 아르기닌 (arginine), 히스티딘 (histidine)), 산성 측 쇄 ((예를 들어, 아스파르틱 에시드 (aspartic acid), 글루타믹 에시드 (glutamic acid)), 비 전하성 측 쇄 (uncharged polar side chains) (예를 들어, 글라이신 (glycine), 아스파르긴 (asparagine), 글루타민 (glutamine), 세린 (serine), 트레오닌 (threonine), 타이로신 (tyrosine), 시스테인 (cysteine)), 비극성 측쇄 (nonpolar side chains) ((예를 들어, 알라닌 (alanine), 발린 (valine), 루이신 (leucine), 이소루이신 (isoleucine), 프로린 (proline), 페닐알라닌 (phenylalanine), 메티오닌 (methionine), 트립토판 (tryptophan)), 베타-가지형 측 쇄 (beta-branched side chains) ((예를 들어, 트레오닌 (threonine), 발린 (valine), 이소루이신 (isoleucine)) 및 방향족 측 쇄 (aromatic side chains) ((예를 들어, 타이로신 (tyrosine), 페닐알라닌 (phenylalanine), 트립토판 (tryptophan), 히스티딘(histidine)) 이 포함 된다. 그러므로 면역글로불린 폴리펩티드에서 비 필수 아미노산 잔 기는 같은 측 쇄 류로부터 다른 아미노산 잔기로 교체될 수 있다. 다른 실시 예에서, 한 줄의 아미노산들이 측 쇄 류 멤버들의 순서 및/또는 조성이 다른 구조적으로 비슷한 줄로 교체될 수 있다.
"중 쇄 부분 (Heavy chain portion)" -여기서 사용된 대로, "중 쇄 부분 (heavy chain portion)" 은 면역글로블린 중 쇄의 고정 도메인으로부터 유래한 아미노산 서열을 포함한다. 중 쇄 부분을 포함하는 폴리펩티드는 적어도 다음 중 하나를 포함한다: CH1 도메인, 힌지 (hinge) (예를 들어, 상부, 중부, 및/또는 하부 힌지 부위) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이들의 변이체 또는 단편. 한 실시 예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 면역글로블린 중 쇄의 Fc 부분을 포함할 수 있다 (예를 들어, 힌지 부분, CH2 도메인, 및 CH3 도메인). 다른 실시 예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 적어도 고정 도메인 (예를 들어, CH2 도메인 전부 또는 일부) 이 결여 될 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 적어도 하나, 및 바람직하게는 모두의 고정 도메인은 인간 면역글로블린 중 쇄로부터 유래한다. 예를 들어, 한 바람직한 실시 예에서, 중 쇄 부분은 전적으로 인간 힌지 도메인을 포함한다. 다른 바람직한 실시 예에서, 중 쇄 부분은 전적으로 인간 Fc 부분 (예를 들어, 인간 면역글로블린으로부터의 힌지, CH2 및 CH3 도메인 서열)을 포함한다.
어떤 특정 실시 예에서, 중 쇄 부분의 고정 도메인의 구성 성분은 다른 면역글로블린으로부터이다. 예를 들어, 폴리펩티드의 중 쇄 부분은 IgG1 분자로부터 유래한 CH2 도메인 및 IgG3 또는 IgG4 분자로부터 유래한 힌지 부분을 포함할 수 있다. 다른 실시 예에서, 고정 도메인 (constant domains) 은 다른 면역글로블린 분자의 부분을 포함하는 키메릭 도메인 (chimeric domains) 이다. 예를 들어, 힌지 (hinge) 는 IgG1 분자로부터 첫 번째 부분 및 IgG3 또는 IgG4 분자로부터 두 번째 부분을 포함할 수 있다. 상기에 제시된 대로, 중 쇄 부분의 고정 도메인은 자연적으로 일어나는 (야생형) 면역글로블린 분자로부터 아미노산 서열이 다르도록 수정될 수 있다는 것이 이 분야 통상 전문가에 의해 이해될 것이다. 즉, 여기서 공개되는 본 발명의 폴리펩티드는 중 쇄 고정 도메인 (CH1, 힌지, CH2 또는 CH3) 및/또는 경 쇄 고정 도메인 (CL) 하나 또는 그 이상에 대하여 변경 또는 수정을 포함할 수 있다. 예시적인 수정에는 하나 또는 그 이상의 도메인에 하나 또는 그 이상의 아미노산의 첨가 (additions), 삭제 (deletions) 또는 치환 ( substitutions) 이 포함 된다.
" 키메릭 (chimeric)"- "키메릭 ((chimeric)" 단백질은 자연에서는 자연적으로 연결되어 있지 않은 두 번째 아미노산에 연결된 첫 번째 아미노산 서열을 포함한다. 아미노산 서열은 정상적으로는 융합 폴리펩티드에서 합치게 되는 별도의 단백질에 존재할 수 있거나 또는 정상적으로 같은 단백질에 존재하나 융합 폴리펩티드에서는 새로운 배열로 놓이게 될 수 있다. 키메릭 단백질은, 예를 들어, 화학적 합성으로, 또는 펩티드 부위가 바람직한 관계에서 암호화되는 폴리뉴클레오타이드를 만들고 및 번역하여 만들 수 있다. 본 발명의 예시적인 키메릭 항체에는 인간 항체, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 고정 도메인에 융합된 낙타류-유래 VH 및 VL 도메인, 또는 이의 인간화된 변이체를 포함하는 융합 단백질이 포함된다.
"가변 부위 (Variable region)" 또는 "가변 도메인 (variable domain)"-가변 부위 (Variable region)" 또는 "가변 도메인 (variable domain)"는 여기서 서로 바꾸어서 사용할 수 있으며 및 동등한 의미가 있는 것을 의도한다. "가변 (variable)" 은 가변 도메인 VH 및 VL의 어떤 특정 부분이 항체 중에서 그 서열이 상당히 다르고 및 각 특정 항체가 그의 항원 타겟에 대한 결합 및 특이성에 사용된다는 사실을 의미한다. 그러나 이 변이성은 항체의 가변 도메인 전체를 통해 골고루 분포되는 것은 아니다. 이는 항원 결합 부위의 한 부분을 형성하는 각 VL 도메인 및 VH 도메인에 있는 "초가변 루프 (hypervariable loops)" 라고 불리는 세 부분에 몰려있다. VLambda 경 쇄 도메인의 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 초가변 루프는 여기서 L1(λ), L2(λ) 및 L3(λ)로 언급되며 및 VL 도메인에 잔기 24-33 ((L1(λ), 9, 10 또는 11 아미노산 서열로 구성)), 49-53 ((L2(λ), 3 잔기로 구성)) 및 90-96 ((L3(λ), 5 잔기로 구성)) 로 정의될 수 있다 (Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)). VKappa 경 쇄 도메인의 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 초가변 루프는 여기서 L1(κ), L2(κ) 및 L3(κ)로 언급되며 및 VL 도메인에 잔기 24-33 ((L1(κ), 6, 7, 8, 11, 12 또는 13 아미노산 서열로 구성)), 49-53 ((L2(κ), 3 잔기로 구성)) 및 90-97 ((L3(κ), 6 잔기로 구성)) 로 정의될 수 있다 (Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)). VH 도메인의 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 초가변 루프는 여기서 H1, H2 및 H3로 언급되며 및 VH 도메인에 잔기 25-33 (H1, 7, 8, 또는 9 잔기로 구성), 52-56 (H2, 3 또는 4 잔기로 구성) 및 91-105 (H3, 길이가 매우 다양하다) 로 정의될 수 있다 (Morea et al., Methods 20:267-279 (2000).
달리 제시되지 않는 한, L1, L2 및 L3란 용어는 각각 VL 도메인의 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 초가변 루프를 의미하며, 및 Vkappa 및 Vlambda 동종체 (isotype)둘 다로부터 얻은 초가변 루프를 포함한다. H1, H2 및 H3란 용어는 각각 VH 도메인의 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 초가변 루프를 의미하며, 및 γ, ε, δ, α 또는 μ를 포함하는 어느 알려진 중 쇄 동종체 (isotype)로부터 얻은 초가변 루프를 포함한다.
초가변 루프 L1, L2, L3, H1, H2 및 H3는 하기에 정의한 대로, 각각 "보완성 결정 부위 (complementarity determining region)" 또는 "CDR"의 한 부분을 포함한다. "가변 루프 (ypervariable loop)" 또는 "보완성 결정 부위 (complementarity determining region)"란 용어는 엄밀하게 동의어는 아니다, 왜냐하면 초가변 루프 (ypervariable loops)(HVs)는 구조에 근거하여 정의되고, 반면에 보완성 결정 부위 (complementarity determining region) (CDRs) 는 서열 가변성에 근거하여 정의되기 때문이며 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD., 1983) 및 HVs 및 CDRs의 경계는 어떤 VH 및 VL 도메인에서 다를 수 있다.
VL 및 VH 도메인의 CDRs는 하기의 아미노산을 포함하는 것으로 전형적으로 정의할 수 있다: 경 쇄 가변 도메인에서 24-34 (LCDR1), 50-56 (LCDR2) 및 89-97 (LCDR3) 잔기, 및 중 쇄 가변 도메인에서 잔기 31-35 또는 31-35b (HCDR1), 50-65 (HCDR2) 및 95-102 (HCDR3); (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). 그러므로 HVs는 해당하는 CDRs 내에서 포함할 수 있고 및 여기서 VH 및 VL 도메인의 초가변 루프 (hypervariable loops)에의 참조는 달리 제시하지 않는 한, 또한 해당하는 CDRs를, 및 그 반대를, 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
가변 도메인의 좀 더 높이 보존된 부분은 하기 서술된 대로, 프레임워크 부위 )framework region) (FRB), 이라고 불린다. 자연 중 쇄 및 경 쇄의 가변 도메인은 각 네 개의 FRs ((FR1, FR2, FR3 및 FR4, 각각) 를 포함하며, 주로 β-쉬트 모양을 취하고 있으며, 세 개의 초가변 루프로 연결된다. 각 체인의 초가변 루프는 FRs에 의하여 인접하여 함께 붙어 있으며, 및 다른 체인으로부터의 초가변 루프와 함께 항체의 항원 결합 부위를 형성하는 데 기여한다. 항체의 구조적인 분석은 서열과 보완성 결정 부위에 의해서 형성되는 결합 부위의 모양 사이에 상호관계를 보여준다 (Chothia et al., J. Mol. Biol. 227: 799-817 (1992));Tramontano et al., J. Mol. Biol, 215:175-182 (1990)). 이들의 매우 높은 서열 가변성에도 불구하고, 6개 루프 중 5개는 "원형구조 (canonical structures)"로 불리는 주-체인 구조 (main-chain conformations)의 단지 작은 레파토아 (small repertoire)에 적응한다. 이 구조는 우선 루프의 길이에 의해 결정되며 및 두 번째로 패킹, 수소결합 또는 특이한 주-체인 구조를 가정할 수 있는 능력을 통해 구조를 결정하는 루프 및 프레임워크 부위 특정 위치에 주요 잔기의 존재에 의해서 결정된다.
" CDR " -여기서 사용된 대로, "CDR" 또는 "보완성 결정부위 (complementarity determining region)"는 중 쇄 및 경 쇄 폴리펩티드 둘 다의 가변 부위 내에서 발견되는 비-연속성 항원 결합부위를 의미한다. 이 특별한 부위들은 카벳 등 ((Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977)) and Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)), 및 쵸티아 등(( Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)) 및 맥칼룸 등(MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)) 에 의해서 서술되었으며 여기서 정의에는 서로에 대해 비교될 때는 겹치거나 또는 서브세트 아미노산 잔기가 포함된다. 상기 인용된 참고문헌 각각에 의해 정의된 CDRs을 포함하는 아미노산 잔기는 비교를 위해 제시된다. 바람직하게, "CDR"이란 용어는 서열 비교에 근거하여 카벳 (Kabat)에 의해 정의된 대로의 CDR이다.
표 1:
CDR
정의
1잔기 수매김은 카벳 등 (Kbatet al., supra)의 명명법에 따른다
2잔기 수매김은 쵸티아 (Chothia et al., supra)의 명명법에 따른다
3잔기 수매김은 멕컬럼 (MacCallum et al., supra)의 명명법에 따른다
" 프레임워크 부위 (Framework region)"-"프레임워크 부위(framework region)" 또는 "FR 부위 (FR region)"는 여기서 사용된 대로, 가변 부위의 한 부분의 아미노산 잔기를 포함하나, 그러나 CDRs의 한 부분은 아니다 (예를 들어, 카벳 (Kabat) 정의의 CDRs을 사용). 그러므로, 프레임워크의 가변 부위는 길이로 약 100-120 아미노산 사이이나 단지 CDRs의 밖의 부분의 아미노산만을 포함한다. 중 쇄 변이 도메인의 특별한 예 및 CDRs을 위하여 카벳(Kabat) 등에 의해 정의 된 대로, 프레임워크 부위 1 은 아미노산 1-30을 포함하는 변이 부위의 도메인에 해당하며; 프레임워크 부위 2 는 아미노산 36-49를 포함하는 변이 부위의 도메인에 해당하며; 프레임워크 부위 3은 아미노산 66-94를 포함하는 변이 부위의 도메인에 해당하며, 및 프레임워크 부위 4는 아미노산 103에서부터 변이 부위 끝까지의 도메인에 해당한다. 경 쇄의 프레임워크 부위는 비슷하게 각 경 쇄 가변 부위 CDRs에 의해 분리된다. 비슷하게, 쵸티아 등 (Chothia et al). 또는 맥칼럼 등 (McCallum et al 에 의한 정의를 사용하여, 프레임워크 부위 경계가 상기 서술된 대로 각각의 CDR 말단에 의해 분리된다. 바람직한 실시 예에서 CDRs는 카벳에 (Kabat)의해 정의 된 대로이다.
자연적으로 일어나는 항체들에서, 각 단량체 항체 (monomeric antibody)에 존재하는 6개 CDRs는 짧고, 비-연속적인 서열의 아미노산으로 항체는 수성 환경에서 3차원 모양으로 가정되므로 특별히 항원 결합 부위를 형성하도록 위치하여 있 다. 중 쇄 및 경 쇄 가변 도메인의 나머지는 아미노산 서열에서 분자 간 변이성이 덜하며 및 프레임워크 부위라고 일컬어진다. 프레임워크 부위는 대개 β-쉬트 (β-sheet) 구조를 수용하며 및 CDRs는 β-쉬트 구조를 연결하는, 및 어떤 경우에는 이의 한 부분을 형성하는, 루프를 형성한다. 그러므로 이 프레임워크 부위들은 체인-간 , 비-공유적인 상호작용으로 이 6개 CDRs들이 올바른 방향으로 위치하도록 제공하는 스케폴드 (scaffold)를 형성하도록 작용한다. 위치한 CDRs에 의하여 형성된 항원 결합 부위는 면역반응적인 항원의 에피톱에 대한 표면 보완성을 지정한다. 이 보완적인 표면은 항체가 면역반응 적인 항원 에피톱에 비-공유적 결합하는 것을 촉진한다. CDRs의 위치는 이분야 기술 전문가에 의해 쉽게 동정 될 수 있다.
" 힌지 부위 (Hinge region)" -여기서 사용된 대로, 힌지 부위 (Hinge region) 라는 용어는 CH1 도메인을 CH2 도메인에 연결 시키는 중 쇄 분자의 한 부분을 포함한다. 이 힌지 부위는 대략 25 잔기를 포함하며 및 유연하다, 그러므로 두 개의 N-말단 항원 결합 부위가 독립적으로 움직이도록 허락한다. 힌지 부위는 3개의 뚜렷한 도메인들로 다시 나누어질 수 있다: 상위. 중간, 및 하위 힌지 도메인 (Roux K.H. et al. J. Immunol. 161:4083-90 1998). "전적으로 인간 (fully human)" 힌지 부위를 포함하는 본 발명의 항체는 하기 표 2에 보여준 힌지 부위 서열 중 하나를 함유할 수 있다.
표 2: 인간
힌지
서열 (Human hinge sequences)
"CH2 도메인 (CH2 domain)"-여기서 사용된 대로, "CH2 도메인 (CH2 domain)"은, 전통적인 수 매김 계획을 사용하여, 예를 들어, 항체의 약 잔기 244에서부터 잔기 360까지 확장되는 중 쇄 분자의 한 부분을 포함한다 (잔기 244에서 360, 카벳 수 매김 시스템; 및 잔기 231-340, EU 수 매김 시스템, Kabat EA et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest. Bethesda, US Department of Health and Human Services, NIH. 1991). CH2 도메인은 다른 도메인과 가깝게 쌍을 이루고 있지 않다는 면에서 유일하다. 오히려, 두 개의 N-연결된 가지형 카보하이드레이트 체인 (branched carbohydrate chains) 이 온전한 자연 IgG 분자의 두 개의 CH2 도메인 사이에 삽입되어 있다. 또한, CH3 도메인이 CH2 도메인으로부터 IgG 분자의 C-말단까지 확장되어 있고 및 대략 108 잔기를 포함한다는 것이 잘 증명되어 있다.
"단편 (Fragment)" - "단편 (Fragment)" 이라는 용어는 본 발명의 항체의 맥락에서 사용된 대로, 온전한 또는 완전한 항체 또는 항체 체인보다 좀 적은 아미노산 잔기를 포함하는 항체 또는 항체 체인의 한 부분 또는 몫을 의미한다. "항원 결합 단편 (antigen binding fragment)" 은 항원에 결합하거나 또는 온전한 항체와 항원 결합에 대하여 (즉, 갈랙틴-10 에 특이적 결합) 경쟁하는 (즉, 이들의 유래된 온전한 항체 와) 면역글로블린 또는 항체의 폴리펩티드 단편을 의미한다. 여기서 사용된 대로, 항체 분자의 "단편 (fragment)"이란 용어는 항체의 항원 결합 단편, 예를 들어, 항체 경 쇄 변이 도메인 (antibody light chain variable domain) (VL), 항체 중 쇄 변이 도메인(antibody heavy chain variable domain) (VH), 단일 체인 항체 (single chain antibody) (scFv), F(ab')2 단편, Fab 단편, Fd 단편, Fv 단편, 한-팔 (단일가) 항체 ((one-armed (monovalent) antibody)), 디아바디 (diabodies), 트리아바디 (triabodies), 테트라바디 (tetrabodies), 또는 그러한 항원 결합 단편의 조합 (combination), 집합 (assembly) 또는 접합 (conjugation) 에 의해 형성되는 어느 항원 결합 분자를 포함한다. 항원 결합 단편 (antigen binding fragment)" 이란 용어는 여기서 사용된 대로 더 나아가 유니바디(unibodies), 도메인 항체 (domain antibodies) 및 나노바디 (nanobodies)로 구성된 군으로부터 선택된 항체 단편을 포함할 의도가 있다. 단편은, 예를 들어, 온전한 또는 완전한 항체 또는 항체 체인의 화학적 또는 효소적 처리 또는 재조합 방법에 의하여 얻을 수 있다.
" Fab " -"Fab" 또는 "Fab 단편 (Fab fragment)"은 중 쇄 및 경 쇄로 구성된 분자로서 여기서 경 쇄는 VL 도메인과 하나의 고정 도메인 (constant domain) (CL, Cκ, Cλ)으로 구성되고 및 중 쇄는 VH 도메인 및 CH1 도메인만으로 구성된 분자를 의미한다. Fab 단편 (Fab fragment)은 전형적으로 Y-모양 면역글로블린 분자의 한-팔 이다. Fab 단편은 면역글로블린 분자로부터 효소 파파인 (papain)의 작용으로 만들어질 수 있다. 파파인은 면역글로블린 분자의 힌지 부위를 쪼개서 두 개의 Fab 단편 및 별도의 Fc 부위를 생산한다.
" scFv " 또는 " scFv 단편 ( scFv fragment)"- "scFv" 또는 "scFv 단편 (scFv fragment)" 은 단일 체인 가변 단편을 의미한다. scFv는 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인의 링커를 통한 융합 단백질이다.
" 결합가 (Valency)"-여기서 사용된 대로 "결합가 (Valency)"는 폴리펩티드에서 잠재적인 타겟 결합의 수를 의미한다. 각 타겟 결합 부위는 하나의 타겟 분자에 특이적으로 결합하거나 또는 타겟 분자의 특정한 부위에 결합한다. 폴리펩티드가 하나 이상의 타겟 결합 부위를 포함할 때, 각 타겟 결합 부위에 같은 또는 다른 분자에 특이적으로 결합할 수 있다. (예를 들어, 다른 리간드, 다른 항원, 또는 같은 항원의 다른 에피톱에 결합할 수 있다).
"특이성 (Specificity)"- 특이성 (Specificity)"이란 용어는 주어진 타겟, 예를 들어, 갈랙틴-10, 에 결합하는 능력을 (예를 들어, 면역반응과) 의미한다. 폴리펩티드는 단일 특이성 (monospecific) 일 수 있으며 및 하나의 타겟에 특이적으로 결합하는 하나 또는 그 이상의 결합 부위를 함유할 수 있거나 또는 폴리펩티드는 다수 특이성 (multispecific) 일 수 있으며 및 같은 타겟 또는 다른 타겟에 특이적으로 결합하는 두 개 또는 그 이상의 결합부위를 함유할 수 있다.
"합성적 (Synthetic)" -"합성적 (Synthetic)"이란 용어는 폴리펩티드에 관한 한 자연적으로는 존재하지 않은 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 자연적으로 존재하는 폴리펩티드의 수정된 형태인 (예를 들어, 첨가, 치환 또는 삭제와 같은 돌연변이를 포함하는) 자연적으로 존재하지 않은 폴리펩티드, 또는 선상의 아미노산 서열로 자연에서는 연결되지 않는 두 번째 아미노산 서열에 연결된 첫 번째 아미노산 서열 (자연적으로 존재 또는 존재하지 않은)을 포함하는 폴리펩티드.
"제작된 (Engineered)" - 여기서 사용된 대로, "제작된 (Engineered)" 이란 용어는 합성적인 방법으로 핵산 또는 폴리펩티드 분자의 조작을 포함한다 (예를 들어, 재조합 기술, 시험관 내 펩티드 합성, 효소적 또는 화학적인 펩티드 커플링 또는 이들 기술의 어떤 조합). 바람직하게는, 본 발명의 항체는 제작된다, 예를 들어, 인간화 및/또는 키메릭 항체, 및 항원 결합, 안정성/반감기 또는 주효인자 기능과 같은 하나 또는 그 이상의 성질을 개선하기 위하여 제작된 항체를 포함한다.
"수정된 항체 (Modified antibody)"-여기서 사용된 대로, '수정된 항체 (Modified antibody)" 는 자연에 존재하지 않게 변경된 합성된 형태의 항체를 포함한다, 예를 들어, 적어도 두 개의 중 쇄 부분을 포함하나 두 개의 완전한 중쇠가 아닌 항체 (도메인 삭제된 또는 미니바디와 같은); 두 개 또는 그 이상 다른 항원 또는 단일 항원의 다른 에피톱에 결합하도록 변경된 다수 특이성 형태의 항체 ((예를 들어 두 개 특이적 (bisect), 세 개 특이적 (trispecific) 등)); scFv 분자 및 이와 유사한 분자에 연결된 중 쇄 분자. scFv 분자는 이 분야 기술에서 알려졌으며, 예를 들어, US 특허 5,892,019에 서술되어 있다. 추가로, "수정된 항체 (modified antibody)" 는 다수가 형태 (multivalent forms) 의 항체를 포함한다 ((예를 들어, 트리발란트 (trivalent), 테트러발란트 (tetravalent), 등, 세 개 또는 그 이상의 카피의 같은 항원에 결합하는 항체). 다른 실시 예에서, 본 발명의 수정된 항체는 적어도 CH2 도메인이 결여된 하나의 중 쇄 부분을 포함하는 융합 단백질이며 및 하나의 수용체-리간드 쌍의 한 멤버의 폴리펩티드의 결합도메인을 포함하는 융합 단백질이다.
수정된 항체 (Modified antibody)" 이란 용어는 또한 여기서 구조적으로 정의된 대로 본 발명의 항체의 아미노산 변이체를 의미하기 위하여 여기서 사용될 수 있다. 이 분야 기술 통상 전문가는 이가 유래 되는 항체와 비교하여 아미노산 서열이 다른 변이체 항체를 생산하기 위하여 항체가 수정될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, "비-필수" 아미노산 잔기에 보존적인 치환 또 변경을 초래하는 뉴클레오타이드 또는 아미노산 치환이 만들어질 수 있다 (예를 들어, CDR 및/또는 프레임워크 잔기에). 아미노산 치환은 하나 또는 그 이상의 아미노산을 자연에 존재하는 또는 비-자연적인 아미노산으로의 교체를 포함할 수 있다
인간화 치환 ( Humanising substitutions)"-여기서 사용된 대로, 인간화 치환 (Humanising substitutions)" 이란 용어는 항체의 VH 또는 VL 도메인의 특정한 위치에 존재하는 아미노산 잔기가 (예를 들어, 낙타류-유래된 갈랙틴-10 항체) 참조 인간 VH 또는 VL 도메인의 해당하는 위치에 일어나는 아미노산 잔기로 교체되는 아미노산 치환을 의미한다. 참조 인간 VH 또는 VL 도메인은 인간 생식라인에 의해 암호화되는 VH 또는 VL 도메인일 수 있다. 인간화 치환은 여기서 정의된 항체의 프레임워크 부위 및/또는 CDRs에 만들어 질 수 있다.
"인간화 변이체 ( Humanised variants)"--여기서 사용된 대로, "인간화 변이체 (Humanised variants)" 는 참조 항체에 비교하여 하나 또는 그 이상의 "인간화 치환 (humanising substitutions)"을 함유하는 변이된 항체를 의미하며, 여기서 참조 항체의 일부분은 (예를 들어, VH 도메인 및/또는 VL 도메인 또는 적어도 하나의 CDR을 함유하는 이의 부분) 비-인간 종으로부터 유래한 아미노산을 가지고 있으며, 및 인간화 치환은 비-인간 종으로부터 유래한 아미노산 서열 내에서 일어난다.
"생식세포계열 변이체 ( Germlined variants)" -"생식세포계열 변이체 (germlined variant)" 라는 용어는 특히 "인간화 변이체 (humanised variants)"를 의미하며 여기서 "인간화 치환 (humanising substitutions)"은 항체의 (예를 들어 낙타류-유래 갈랙틴-10 항체) VH 또는 VL 도메인의 특정한 위치에 존재하는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 인간 생식세포계열에 의해 암호화되는 참조 인간 VH 또는 VL 도메인에 있는 해당하는 위치의 아미노산 잔기로 교체되는 결과를 의미한다. 어느 주어진 "생식세포계열 변이체"에 있어서, 생식세포계열 변이체로 치환되는 교환 아미노산 잔기는 전적으로, 또는 우세하게, 단일 인간 생식세포-암호화된 VH 또는 VL 도메인으로부터 얻어진다. "인간화 변이체 (humanised variant)" 및 "생식세포계열 변이체 (germlined variant)" 라는 용어는 여기서 가끔 서로 바꿔서 사용된다. 하나 또는 그 이상의 인간화 치환 ("humanising substitutions) 을 낙타류-유래 ((예를 들어, 라마(llama) 유래)) VH 또는 VL 도메인에의 도입은 낙타류(라마)-유래 VH 또는 VL 도메인의 "인간화 변이체 (humanised variant)" 의 생산의 결과에 이른다. 만약 치환되어 들어간 아미노산 잔기가 우세하게 또는 전적으로 단일 인간 생식세포-암호화된 VH 또는 VL 도메인 서열로부터라면, 그때는 결과는 낙타류(라마)-유래 VH 또는 VL 도메인의 "인간 생식세포계열 변이체 (human germlined variant)"이다.
"친화력 변이체 (Affinity variants)"-여기서 사용된 대로, "친화력 변이체 (Affinity variants)" 란 용어는 참조 항체에 비교하여 아미노산 서열 하나 또는 그 이상의 변화를 보이는 변이된 항체를 의미하며, 여기서 친화력 변이체는 참조 항체에 비교하여 타겟 항원에 대한 변경된 친화력을 보인다. 예를 들어, 친화력 변이체는 참조 갈랙틴-10 항체에 비교하여, 갈랙틴-10에 대하여 변화된 친화력을 보일 것이다. 바람직하게는, 친화력 변이체는 참조 항체에 비교하여 타겟 항원에, 예를 들어, 갈랙틴-10에 대하여 개선된 친화력을 보일 것이다. 친화력 변이체는 전형적으로, 참조 항체에 비교하여, CDRs의 아미노산 서열에 하나 또는 그 이상의 변화를 보인다. 그러한 치환은 CDRs의 주어진 위치에 존재하는 원래의 아미노산을 다른 아미노산 잔기로 교체하는 결과가 될 수 있으며, 이는 자연적으로 존재하는 아미노산 잔기 또는 비-자연적으로 존재하는 아미노산 잔기 일 수 있다. 아미노산 치환은 보존적이거나 또는 비-보존적일 수 있다.
"높은 인간 상동성 (High human homology)"- 중 쇄 가변 도메인 (VH) 및 경 쇄 가변 도메인 (VL) 을 포함하는 항체는 만약 이 VH 도메인 및 VL 도메인이, 함께, 가장 가깝게 일치되는 인간 생식계열 VH 및 VL 서열과 적어도 90% 아미노산 서열이 상동성을 보이면, 높은 인간 상동성을 가진 것으로 간주 된다. 높은 인간 상동성을 가진 항체는 인간 생식세포계열 서열에 충분히 높은 % 서열 상동성을 보이는 자연 비-인간 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체를 포함할 수 있으며, 예를 들어 낙타류 전통적인 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체는 물론, 그러한 항체의 제작된, 특별히 인간화 또는 생식세포 계열화된, 변이체 및 또한 "전적으로 인간 (fully human)" 항체를 포함한다.
한 실시 예에서, 인간과 높은 유사성을 가진 항체의 VH 도메인은 프레임워크 부위, FR1, FR2, FR3 및 FR4에 걸쳐서 하나 또는 그 이상의 인간 VH 도메인과 80% 또는 그 이상의 아미노산 서열 상동성 (sequence identity) 또는 서열 유사성 (sequence homology) 을 보일 수 있다. 다른 실시 예에서, 본 발명의 폴리펩티드의 VH 도메인과 가장 가깝게 일치하는 인간 생식세포계열 VH 도메인 서열 사이에 아미노산 서열 상동성 또는 서열 유사성은 85% 또는 그 이상, 95% 또는 그 이상, 97% 또는 그 이상, 또는 99% 까지 또는 100%까지 일수 있다.
한 실시 예에서, 높은 인간 유사성을 가진 항체의 VH 도메인은 가장 가깝게 일치하는 인간 VH 서열에 비교하여, 프레임워크 부위, FR1, FR2, FR3 및 FR4에 걸쳐서 하나 또는 그 이상 (예를 들어, 1 에서 10) 아미노산 서열 불일치 (mis-match)를 함유할 수 있다.
다른 실시 예에서, 높은 인간 유사성을 가진 항체의 VL 도메인은 프레임워크 부위, FR1, FR2, FR3 및 FR4에 걸쳐서 하나 또는 그 이상의 인간 VL 도메인과 80% 또는 그 이상의 아미노산 서열 상동성 (sequence identity) 또는 서열 유사성 (sequence homology) 을 보일 수 있다. 다른 실시 예에서, 본 발명의 폴리펩티드의 VL 도메인과 가장 가깝게 일치하는 인간 생식세포계열 VL 도메인 서열 사이에 아미노산 서열 상동성 또는 서열 유사성은 85% 또는 그 이상, 95% 또는 그 이상, 97% 또는 그 이상, 또는 99% 까지 또는 100%까지 일수 있다.
한 실시 예에서, 높은 인간 유사성을 가진 항체의 VL 도메인은 가장 가깝게 일치하는 인간 VL 서열에 비교하여, 프레임워크 부위, FR1, FR2, FR3 및 FR4에 걸쳐서 하나 또는 그 이상 (예를 들어, 1 에서 10) 아미노산 서열 불일치 (mis-match)를 함유할 수 있다.
B.
갈랙틴
-10 길항제 (
Galectin
-10 Antagonists)
첫 번째 관점에서, 현 발명은 갈랙틴-10 (galectin-10) 에 결합하는 길항제를 제공하며, 여기서 길항제는 갈랙틴-10의 에피톱에 결합하고 및 이로써 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)를 차폐한다. 현 발명은 더 나아가 갈랙틴-10 (galectin-10) 에 결합하는 길항제를 제공하며, 이는, 용해성 갈랙틴-10 (soluble galectin-10) 에 결합할 때, 갈랙틴-10의 결정화를 억제한다. 현 발명은 더 나아가 갈랙틴-10 (galectin-10) 에 결합하는 길항제를 제공하며, 이는, 결정성 갈랙틴-10 (crystalline galectin-10) 에 결합할 때, 결정 갈랙틴-10의 용해를 촉진한다. 본 발명의 길항제는 인간 갈랙틴-10에 더 잘 결합한다.
단백질 갈랙틴-10은 상대적으로 작은 ((16.5kDa) 글라이칸-결합하는 (glycan-binding) 단백질이다. 갈랙틴-10 단백질은 용액에서 이량체 (dimer)를 형성하며 및 또한 불용성의 육각형 쌍뿔형 결정 (hexagonal bipyramidal crystals) 을 형성할 수 있다. 이러한 결정은 알레르기성 천식 및 기생충 감염을 지닌 환자에서 처음 관찰되었으며, 및 달리 쵸코트-레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals)(또는 CLCs) 로 알려졌다.
현 발명의 길항제는 갈랙틴-10의 에피톱에 결합한다. 에피톱은 선상 에피톱 (linear epitope) 일수 있다, 즉, 이는 갈랙틴-10의 일차 단백질 서열에서 두 개 또는 그 이상의 연속적인 아미노산으로 구성될 수 있다. 다른 한편으로, 에피톱은 갈랙틴-10의 일차 단백질 서열에서 서로 인접하지 않게 위치한 두 개 또는 그 이상의 아미노산을 포함하거나 또는 이로써 구성된 구조적 에피톱 (conformational epitope) 일수 있다. 길항제가 구조적 에피톱에 결합하는 실시 예에서, 에피톱의 두 개 또는 그 이상의 아미노산은 전형적으로 갈랙틴-10 단백질의 3차원 구조 내에서 서로 근접하게 위치하여 있을 것이다. 본 발명의 갈랙틴-10 길항제가 결합하는 에피톱은 적어도 두 개의 아미노산, 적어도 세 개의 아미노산, 적어도 네 개의 아미노산, 적어도 다섯 개의 아미노산, 적어도 여섯 개의 아미노산, 적어도 일곱 개의 아미노산을 포함하거나 또는 이로 구성될 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제가 결합하는 에피톱은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 아미노산을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
본 발명의 길항제는 갈랙틴-10의 에피톱에 결합하고 및 이로써 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)를 차폐한다. 여기 다른 곳에서 서술된 대로, 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스는 결정 격자 (crystalline lattice)에서 하나 또는 그 이상의 이웃하는 갈랙틴-10 분자와 접촉하는 표면 패치 아미노산이다. 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 차폐 역할을 하는 갈랙틴-10의 에피톱에 결합함으로써, 본 발명의 길항제는 갈랙틴-10의 결정화를 방해한다. 길항제가 갈랙틴-10의 결정화를 방해한다면, 본 발명의 길항제는 크리스탈 패킹 인터페이스를 완전하게 또는 부분적으로 차폐할 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 길항제는, 용해성 갈랙틴-10에 결합할 때, 갈랙틴-10의 결정화를 억제한다. 어떤 특정 실시 예에서, 길항제는, 결정성 갈랙틴-10에 결합할 때, 갈랙틴-10 결정의 용해를 촉진한다.
여기서 서술된 갈랙틴-10 길항제의 길항 성질은 여기서 서술된 에세이에 따라 측정될 수 있다. 예를 들어, 갈랙틴-10 항체를 포함하는, 갈랙틴-10 길항제를 갈락탄-10 결정화를 선호하는 실험조건에서 용해성 갈랙틴-10과 배양하고 및 이 길항제가 이 과정을 억제하는 능력을 측정할 수 있다. 갈랙틴-10 길항제의 억제적 활성은 결정화 억제적 활성이 없는 갈랙틴-10 결합 분자인 대조군에 상대하여 측정될 수 있다. 갈랙틴-10 길항제는 대조군에 비하여 100%로, 대조군에 비하여 90%로, 대조군에 비하여 80%로, 대조군에 비하여 70%로 갈랙틴-10 결정화를 억제할 수 있다.
다른 한편으로, 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편을 포함하는, 갈랙틴-10 길항제는 미리-형성된 갈랙틴-10 결정과 함께 배양될 수 있으며 및 길항제가 결정을 용해하는 능력은 적절한 시간-코스에 걸쳐 측정될 수 있다. 갈랙틴-10 결정은 시험관 내에서 생산된 재조합 갈랙틴-10으로부터 형성된 재조합 결정일 수 있다. 다른 한편으로, 갈랙틴-10 결정은 환자의 샘플에서 얻은, 예를 들어, 환자의 비강 또는 부비강 내의 폴립으로부터 얻은, 결정일 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 본 발명의 갈랙틴-10 길항제는 미리-형성된 갈랙틴-10 결정을 10시간까지, 12시간까지, 14시간까지, 16시간까지, 18시간까지, 20시간까지의 기간에 걸쳐, 용해 시킬 수 있다. 갈랙틴-10 길항제는 결정을 완전히, 즉 100% 용해 시킬 수 있다. 다른 한편으로, 갈랙틴-10 길항제는 시간-코스 동안에 걸쳐서 결정을 50% 이상의 결정이 용해되도록, 60% 이상의 결정이 용해되도록, 70% 이상의 결정이 용해되도록, 80% 이상의 결정이 용해되도록, 90% 이상의 결정이 용해되도록 용해할 수 있다.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)의 아미노산 하나 또는 그 이상을 포함하는 에피톱에 결합하여 크리스탈 패킹 인터페이스를 차폐한다. 크리스탈 패킹 인터페이스를 형성하는 갈랙틴-10의 아미노산은 전형적으로: Ser2, Leu3, Leu4, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Ala12, Ser13, Thr16, Thr42, Glu43, Met44, Lys45, Asp49, Ile50, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Leu96, Pro97, Asp98, Lys99, Gln101, Met103, Gly106, Gln107, Ser108, Ser109, Tyr110, Thr111, Asp113, His114, Arg115, Ile116, Lys117, Ala120, Gln125, Thr133, Lys134, Phe135, Asn136, Val137, Ser138, Tyr139, Leu140 및 Lys141 로서 동정 되며, 여기서 위치는 서열번호 141에 참조하여 정의된다. 그러므로 어떤 특정 실시 예에서, 본 발명의 갈랙틴-10 길항제는: Ser2, Leu3, Leu4, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Ala12, Ser13, Thr16, Thr42, Glu43, Met44, Lys45, Asp49, Ile50, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Leu96, Pro97, Asp98, Lys99, Gln101, Met103, Gly106, Gln107, Ser108, Ser109, Tyr110, Thr111, Asp113, His114, Arg115, Ile116, Lys117, Ala120, Gln125, Thr133, Lys134, Phe135, Asn136, Val137, Ser138, Tyr139, Leu140 및 Lys141 로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 하나 또는 그 이상, 둘 또는 그 이상, 셋 또는 그 이상, 넷 또는 그 이상, 다섯 또는 그 이상, 여섯 또는 그 이상, 일곱 또는 그 이상, 여덟 또는 그 이상, 아홉 또는 그 이상, 열 또는 그 이상을 포함하는 에피톱에 결합한다. 어떤 특정 실시 예에서, 에피톱은 전적으로 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스로부터의 아미노산으로 구성된다. 예를 들어, 에피톱은 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스로부터의 아미노산 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개로 구성될 수 있다. 다른 한편으로, 에피톱은 크리스탈 패킹 인터페이스로부터의 아미노산들을 포함하고 및 추가로 적어도 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 아미노산 밖의 아미노산을 적어도 하나를 포함할 수 있다.
바람직한 실시 예에서, 길항제는 Tyr69를 포함하는 에피톱에 결합한다. 다른 한편으로 또는 추가로, 길항제는 Tyr69의 인접한 아미노산, 특히 Glu68 또는 Gly70를 포함하는 에피톱에 선호적으로 결합할 수 있다. 한 실시 예에서, 길항제는 Glu68, Tyr69 및 Gly70를 포함하는 에피톱에 결합한다.
특정한 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Thr42, Glu43, Lys45, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, His114, Arg115, Ile116, Lys117 및 Ala120를 포함하는 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 특정한 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Thr42, Glu43, Lys45, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, His114, Arg115, Ile116, Lys117, GLu119, Ala120 및 Lys122 를 포함하는 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 특정한 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Thr42, Glu43, Lys45, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Gln74, Asp98, His114, Arg115, Ile116, Lys117, GLu119, Ala120 및 Lys122을 포함하는 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다.
어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Glu33, Gly59, Arg60 및 Lys79를 포함하는 에피톱에 결합한다. 에피톱은 추가로 아미노산: Gln74, Gln75 및 Glu77를 포함할 수 있다.
특정한 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Leu31, Glu33, Gly59, Arg60, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82 및 Gln84를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피톱에 결합한다. 특정한 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Glu33, Gly59, Arg60, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82 및 Ser109를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 특정한 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Glu33, Gly59, Arg60, Trp72, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Lys79, Asn80, Met81, Pro82, Gln84 및 Ser109 를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 특정한 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Glu33, Gly59, Arg60, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82, Phe83, Gln84를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다.
다른 한편의 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Thr42, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Arg115, Ile116, Lys117, Glu119 및 Ala120 를 포함하는 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 다른 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Glu43, Asp49, Glu68, Tyr69, Lys73, Asp98, Asp113, His114, Arg115, Lys117, Glu119 및 Ala120를 포함하는 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 더 나아간 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Asp 49, Glu68, Tyr69, Lys73, Gln74, Asp98, Asp113, His114, Arg115, Ile116 및 Lys117를 포함하는 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 더 나아간 실시 예에서, 길항제는 아미노산: Ser2, Leu3, Leu4, Pro5, Pro7, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Lys23, Arg25, Met44, Gly86, Gln87, Glu88, Phe89, Glu90, Asn105, Gln125, Thr133, Lys134 및 Phe135를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다.
갈랙틴-10의 아미노산 위치는 서열번호 141에서 보여준 인간 단백질에 관련되어 동정 된다.
어떤 특정 실시 예에서, 길항제는 갈랙틴-10 이량체 인터페이스 (dimerization interface)로부터의 하나 또는 그 이상을 포함하는 에피톱에 결합한다. 이량체 도메인을 형성하는 갈랙틴-10의 아미노산은 크리스탈 패킹 인터페이스에 참여하는 아미노산과 다를 수 있다. 그러나 이량체 인터페이스에 위치하여 있는 아미노산에 결합하는 길항제는 또한 크리스탈 패킹 인터페이스를 차단할 수 있으며 및 그러므로 갈랙틴-10의 결정화를 방해한다. 이량체 인터페이스를 형성하는 갈랙틴-10의 아미노산은 전형적으로: Pro5, Pro7, Leu27, Ala28, Cys29, Leu31, Asn32, Glu33, Pro34, Tyr35, Gln37, His41, Glu46, Glu47, Gln55, Arg60, Arg61, Arg67, Trp72, Gln75, Trp127, Arg128 및 Asp129 로 동정 된다. 그러므로 어떤 특정 실시 예에서, 본 발명의 갈랙틴-10 길항제는: Pro5, Pro7, Leu27, Ala28, Cys29, Leu31, Asn32, Glu33, Pro34, Tyr35, Gln37, His41, Glu46, Glu47, Gln55, Arg60, Arg61, Arg67, Trp72, Gln75, Trp127, Arg128 및 Asp129 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상, 둘 또는 그 이상, 셋 또는 그 이상, 넷 또는 그 이상, 다섯 또는 그 이상, 여섯 또는 그 이상, 일곱 또는 그 이상, 여덟 또는 그 이상, 아홉 또는 그 이상, 열 또는 그 이상의 아미노산을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합한다. 갈랙틴-10의 아미노산 위치는 서열번호 141에 관련하여 동정 된다.
어떤 특정 실시 예에서, 본 발명의 갈랙틴-10 길항제는 크리스탈 패킹 인터페이스로부터의 아미노산 하나 또는 그 이상 및 이량체 인터페이스로부터의 하나 또는 그 이상의 아미노산을 포함하는 갈랙틴-10의 에피톱에 결합한다. 인터페이스로부터의 아미노산 하나 또는 그 이상 및 이량체 인터페이스로부터의 하나 또는 그 이상의 아미노산은 상기 동정 된 특별한 아미노산 어느 것이 될 수 있다. 바람직한 실시 예에서, 본 발명의 길항제는 Glu68, Tyr69 및 Gly70 를 포함하는 에피톱에 결합한다.
C.
갈랙틴
-10 항체 및 이의 항원 결합 단편 (
Galectin
-10 antibodies and antigen binding fragments thereof)
바람직한 실시 예에서, 현 발명의 갈랙틴-10 길항제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. "항체 (antibody)" 란 용어는 여기서 가장 넓은 의미에서 사용되며 및, 이것에만 국한하지 않고, 갈랙틴-10 단백질에 대한 적절한 면역학적 특이성을 보이는 한, 단일 클론 항체 (monoclonal antibodies) (전장 단일 클론 항체를 포함하는 ), 다클론 항체 (polyclonal antibodies), 다 특이적 항체 (multispecific antibodies) ((예를 들어, 이중 특이적 (bispecific) 항체)), VHH 항체를 포함한다. 여기서 서술된 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은 B 부분에서 서술된 갈랙틴-10 어느 에피톱에 대한 면역학적 특이성을 보일 수 있다.
"단일 클론 항체 (monoclonal antibody)" 란 용어는 여기서 사용된 대로, 상당히 균질한 항체의 집단으로부터 얻은 항체를 의미한다, 즉 아주 적은 양으로 존재할 수 있는 자연적으로 일어나는 돌연변이를 제외하고는 동일한 집단을 포함하는 개별 항체이다. 단일클론 항체는 매우 특이적이고, 단일 항원성 부위를 향한 것이다. 더 나아가, 항원의 다른 결정인자 (에피톱)에 대한 다른 항체를 포함하는 전형적인 전통적인 항체 제제 (다클론)와는 달리, 각 단일 클론 항체는 항원의 단일 결정인자 (single determinant) 또는 에피톱에 대한 것이다. "항체 단편 (Antibody fragments)" 또는 "항원 결합 단편 (antigen binding fragments)" 은 전장 항체의 한 부분을, 일반적으로 항원 결합 또는 이의 가변 도메인을 포함한다. 항체 단편은 여기 다른 곳에서 서술되며 및 항체 단편의 예에는 Fab, Fab', F(ab')2, 이중-특이 Fab's (bi-specific Fab's), 및 Fv 단편, 디아바디 (diabodies), 선상 항체 (linear antibodies), 단일-체인 항체 분자 (single-chain antibody molecules), 단일 체인 가변 단편 (single chain variable fragment) (scFv) 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중-특이 항체 (multispecific antibodies)가 포함된다 (Holliger and Hudson, Nature Biotechnol. 23:1126-36 (2005), 참조, 이 내용이 참고문헌으로 여기에 병합됨).
여기서 서술된 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은 인간에 치료적 사용을 위한 것이며 및 그러므로 전형적으로 면역글로블린 IgA, IgD, IgE, IgG, IgM 유형, 자주는 IgG 유형일 것이며, 이 경우 이들은 4개의 서브클래스 (sub-classes) IgG1, IgG2a 및 b, IgG3 또는 IgG4 중 어느 것에 속할 수 있다. 바람직한 실시 예에서는, 갈랙틴-10 항체는 Ig 항체이다. 특히 바람직한 것은 IgG1 항체이다. 단일클론 항체는 매우 특이적이며, 단일 항원 부위를 향한 것이므로 단일클론 항체가 바람직하다. 어떤 특정 바람직한 실시 예에서, 갈랙틴-10 항원 결합 단편은 Fab 단편 또는 "Fobs"이다.
갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편은 여기 다른 곳에서 정의한 대로 높은 인간 유사성 (high human homology) 을 보인다. 높은 인간 유사성을 보이는 그러한 항체 분자는 인간 생식세포계열 서열에 충분히 높은 % 서열 상동성을 보이는 자연 비-인간 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체를 포함할 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비-인간 항체의 인간화 또는 생식세포 계열화된 변이체이다.
어떤 특정 실시 예에서, 여기서 서술된 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은 낙타류-유래일 수 있다. 낙타류-유래 항체는 중-쇄 만인 항체, 즉, VHH 항체 일수 있거나 또는 전통적인 헤테로테트라메릭 항체 (heterotetrameric antibodies) 일 수 있다. 바람직한 실시 예에서, 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은 낙타류 헤테로테트라메릭 항체로부터 유래한다. 더 나아간 바람직한 실시 예에서, 갈랙틴-10 항체는 VHH 항체 또는 VHH 항체로부터 유래 된다.
예를 들어, 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은 낙타류를 관심 있는 타겟 으로, 즉, 갈랙틴-10으로, 면역화시키는 단계를 포함하는 방법으로 얻은 면역 라이브러리로부터 선택될 수 있다. 낙타류는 타겟 단백질 또는 이의 폴리펩티드 단편, 또는 단백질 또는 이의 폴리펩티드 단편을 발현하는 mRNA 분자 또는 cDNA 분자로 면역화시킬 수 있다. 낙타류 종에서 항체를 생산하는 방법 및 낙타류 면역 라이브러리로부터 바람직한 타겟에 대한 항체를 선택하는 방법은, 예를 들어, 참고문헌으로 여기에 병합된 국제 특허 출원 번호 (International patent application no.) WO2010/001251, 에 서술되어 있다.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은 이들이 낙타과에 있는 한 종의 VH 도메인 또는 VL 도메인으로부터 얻은 적어도 하나의 초 가변 루프 ((hypervariable)(HV) loop)) 또는 보완성 결정 부위 (complementarity determining region) 를 포함한다는 점에서 낙타류-유래일 수 있다. 특히, 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은 낙타류의 아웃브레드 (outbred), 예를 들어, 라마 (llamas) 를 갈랙틴-10으로 활성적으로 면역화시켜 얻은, VH 및/또는 VL 도메인, 또는 이의 CDRs를 포함할 수 있다.
이 문맥에서 "로부터 얻은 (obtained from)" 이란 용어는 항체의 HVs 또는 CDRs가 낙타과 면역글로블린 유전자에 의해 원래 암호화되는 아미노산 서열 (또는 이의 약간의 변이) 을 포함한다는 의미에서 구조적인 상관관계를 내포한다. 그러나 이는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는데 사용된 생산 과정인 면에서 특별한 관계를 반드시 암시하는 것은 아니다.
낙타류-유래 항체 및 이의 항원 결합 단편은 어느 낙타류 종으로부터, 그중에서도 (inter alia ), 라마 (llama), 단봉낙타 (dromedary), 알파카 (alpaca), 비쿠나 (vicuna), 구아나코 (guanaco) 또는 낙타 (camel)로부터 유래될 수 있다.
낙타류-유래 VH 및 VL 도메인, 또는 이의 CDRs을 포함하는 분자들은, 전형적으로 재조합적으로 발현된 폴리펩티드이며, 키메릭 폴리펩티드이다. "키메릭 폴리펩티드 (chimeric polypeptide)"라는 용어는 그렇지 않으면 연속적으로 존재하지 않은 두 개 또는 그 이상의 펩티드 단편을 바로 옆에 위치하도록 창조한 인공적인 (비-자연적으로 존재하는) 폴리펩티드를 의미한다. 이 정의 내에 포함되는 것은 둘 또는 그 이상의 종, 예를 들어, 낙타류 및 인간에 의해 암호화되는 펩티드 단편을 병렬로 놓아 (juxtaposition) 창조한 "종 (species)" 키메릭 폴리펩티드이다.
어떤 특정 실시 예에서, 전체 VH 도메인 및/또는 전체 VL 도메인이 낙타과 내 종으로부터 얻을 수 있다. 낙타-유래 VH 도메인 및/또는 VL 도메인은 그 후 단백질 제작 (protein engineering)을 하게 할 수 있으며, 여기서 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 삭제가 낙타류 아미노산 서열에 도입된다. 이러한 제작된 변경은 바람직하게는 낙타류 서열에 대비한 아미노산 치환을 포함한다. 그러한 변화에는 "인간화 (humanisation)" 또는 "생식세포계열화 (germlining)" 를 포함하며 여기서 낙타류-암호화된 VH 또는 VL 도메인에 있는 아미노산 잔기 하나 또는 그 이상은 유사한 인간-암화화된 VH 또는 VL 도메인으로부터의 해당 잔기로 교체된다.
낙타류 (예를 들어, 라마)를 갈랙틴-10으로 활성적으로 면역화시켜 분리한 낙타류 VH 및 VL 도메인은 현 발명에 따라 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편을 제작하는 근거로 사용될 수 있다. 온전한 낙타류 VH 및 VL 도메인 (intact camelid VH and VL domains) 으로부터 시작하여, 시작 낙타류 서열과는 다른 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 삭제를 제작하는 것이 가능하다. 어떤 특정 실시 예에서, 그러한 치환, 삽입 또는 삭제는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인의 프레임워크 부위에 존재할 수 있다.
다른 실시 예에서, 여기서 낙타류-유래한 VH 및 VL 도메인 (또는 이의 제작된 변이 체) 및 비-낙타류 항체로부터의 하나 또는 그 이상의 고정 도메인 (constant domain), 예를 들어, 인간-암호화하는 고정 도메인 (또는 이의 제작된 변이체)을 포함하는 "키메릭 (chimeric)" 항체 분자를 제공한다. 그러한 실시 예에서, VH 도메인 및 VL 도메인 둘 다가 낙타류의 같은 종으로부터 얻어지는 것, 예를 들어, VH 및 VL 도메인 둘 다 라마 글라마 (Lama glama) 로부터 얻어지거나 또는 VH 및 VL 도메인 둘 다 라마 파코스 (Lama pacos) 로부터 얻어지는 것이, 바람직하다. 그러한 실시 예에서, VH 및 VL 도메인 둘 다는 단일 동물, 특히 관심 있는 항원으로 활성적으로 면역화된 단일 동물, 로부터 유래될 수 있다.
낙타과 VH 및 VL 도메인의 일차 아미노산 서열에 변화를 제작하는 다른 방법으로서, 개별 낙타류-유래한 초 가변 루프 (hypervariable loops) 또는 CDRs, 또는 이의 조합이 낙타류 VH/VL 도메인으로부터 분리될 수 있고 및 다른 프레임워크로, (즉, 비-낙타과), 예를 들어, 인간 VH/VL 프레임워크로, CDR 이식 (CDR grafting) 에 의해 옮겨질 수 있다.
비-제한적인 실시 예에서, 갈랙틴-10 항체는 CH1 도메인 및/또는 CL 도메인을(각각 중 쇄 및 경 쇄로부터) 포함할 수 있으며, 이의 아미노산 서열은 전적으로 또는 상당히 인간이다. 인간 치료적 사용을 위한 항체 분자를 위해, 항체의 전체 고정 부위는, 또는 적어도 이의 한 부분은 전적으로 또는 상당히 인간의 아미노산 서열을 가지는 것이 전형적이다. 그러므로 하나 또는 그 이상의 또는 어느 CH1 도메인, 힌지 부위, CH2 도메인, CH3 도메인 및 CL 도메인 (및 CH4 도메인 만약 존재하면)은 이의 아미노산 서열에서 전적으로 또는 상당히 인간일 수 있다. CH1 도메인, 힌지 부위, CH2 도메인, CH3 도메인 및/또는 CL 도메인 (및/또는 CH4 도메인 만약 존재하면)은 인간 항체로부터 유래할 수 있으며, 바람직하게는 인간 IgG 항체, 더 바람직하게는 서브타입 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 인간 IgG1 항체로부터 유래할 수 있다.
유리하게도, CH1 도메인, 힌지 부위, CH2 도메인, CH3 도메인 및 CL 도메인 (및 CH4 도메인 만약 존재하면)은 모두 전적으로 또는 상당히 인간 아미노산 서열을 가질 수 있다. 인간화된 또는 키메릭 항체 또는 항체 단편의 고정 부위 맥락에서, "상당히 인간 (substantially human)" 이라는 용어는 아미노산 서열 상동성이 인간 고정 부위 (human constant region) 와 적어도 90%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 95%, 또는 적어도 97%, 또는 적어도 99% 임을 의미한다. 이 맥락에서, "인간 아미노산 서열 (human amino acid sequence)" 이란 용어는 인간 면역글로블린 유전자에 의해 암호화되는 아미노산 서열을 의미하며, 이는 생식세포계열, 재배열된 및 체세포적으로 돌연 변이된 유전자를 포함한다. 본 발명은 또한 "전적으로 인간 (fully human)" 힌지 부위의 존재가 명백히 필요한 실시 예를 제외하고는, 인간 서열에 관한 한 하나 또는 그 이상의 아미노산의 첨가, 삭제 또는 치환에 의해 변경된 "인간 (human)" 서열의 고정 도메인을 포함하는 폴리펩티드도 고려한다.
갈랙틴-10 항체는 중 쇄 및/또는 경 쇄의 고정 부위 내, 특히 Fc 부위 내에 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 삭제를 가질 수 있다. 아미노산 치환은 자연적으로 존재하는 다른 아미노산, 또는 비-자연적인 또는 수정된 아미노산으로 치환된 아미노산의 교체 결과가 될 수 있다. 다른 구조적인 수정도 예를 들어, 당쇄화 패턴 (glycosylation pattern) 과 같은 (예를 들어, N- 또는 O-연결된 당화 부위 ( glycosylation sites)의 첨가 또는 삭제), 또한 허락된다.
갈랙틴-10 항체는 신생아 수용체 (neonatal receptor) FcRn에 결합 친화력을 증가시키기 위하여 Fc 부위 내에 수정될 수 있다. 증가 된 결합친화력은 산성 pH에서 (예를 들어, 약 대략 pH 5.5로부터 대략 pH 6.0까지) 측정 가능하다. 증가 된 결합친화력은 또한 중성 pH (예를 들어, 약 대략 pH 6.9로부터 대략 pH 7.4까지)에서도 측정 가능하다. "증가 된 결합 친화력(increased binding affinity)"은 수정 되지 않은 Fc 부위에 대비하여 FcRn에 증가된 결합 친화력을 의미한다. 전형적으로 수정되지 않은 Fc 부위는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 의 야생형 아미노산 서열을 소유할 것이다. 그러한 실시 예에서, 수정된 Fc 부위를 가진 항체 분자의 증가된 FcRn 결합 친화력은 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 의 FcRn에 대한 결합친화력에 대비하여 측정될 것이다.
어떤 특정 실시 예에서, Fc 부위 내에 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔 기는 FcRn에 결합을 증가시키기 위하여 다른 아미노산으로 치환될 수 있다. FcRn 결합을 증가시키고 및 이로써 항체 약동학을 개선 시키는 몇 가지 Fc 치환이 보고되었다. 그러한 치환은, 예를 들어, Zalevsky et al. (2010) Nat. Biotechnol . 28(2):157-9; Hinton et al. (2006) J Immunol . 176:346-356; Yeung et al. (2009) J Immunol . 182:7663-7671; Presta LG. (2008) Curr . Op. Immunol . 20:460-470; 및 Vaccaro et al. (2005) Nat. Biotechnol . 23(10):1283-88, 에 보고되었으며, 이들의 내용이 전문으로 여기에 병합되었다.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 항체는 아미노산 치환 H433K 및 N434F를 포함하거나 또는 이로 구성된 수정된 인간 IgG Fc 도메인을 포함하며, 여기서 Fc 도메인 수 매김 (numbering) 은 EU 수 매김 (EU numbering) 에 따른다. 더 나아간 실시 예에서, 여기서 서술된 갈랙틴-10 항체는 아미노산 치환 M252Y, S254T, T256E, H433K 및 N434F를 포함하거나 또는 이로 구성된 수정된 인간 IgG Fc 도메인을 포함하며, 여기서 Fc 도메인 수 매김 (numbering) 은 EU 수 매김 (EU numbering) 에 따른다.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 항체는 해당하는 야생형 IgG 서열에 대비하여 2개까지로, 3개까지로, 4개까지로, 5개까지로, 6개까지로, 7개까지, 8개까지로, 9개까지로, 10개까지로, 12개까지로, 15개까지로, 또는 20개까지로의 치환으로 구성된 수정된 인간 IgG Fc 도메인을 포함한다.
갈랙틴-10 항체는 또한, 화학요법치료제 (chemotherapeutic agent), 톡신 (toxin) (예를 들어, 박테리아, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원, 또는 이의 단편의 효소적으로 활성화된 톡신), 또는 방사성 활성 동위원소 (radioactive isotope) ((즉, 방사성 접합 (radioconjugate)), 와 같은 세포독성 제제에 접합 된 항체를 포함하는 면역접합체 (immunoconjugates) 를 형성하도록 수정될 수 있다. Fc 부위는 또한, 여기 참고문헌으로 병합된 찬 및 카터 (Chan and Carter (2010) Nature Reviews: Immunology 10:301-316) 에 의해 서술된 대로 반감기 확장을 위해 제작 (engineered) 될 수 있다.
또 다른 실시 예에서, Fc 부위는 하나 또는 그 이상의 아미노산 수정으로 항체가 항체 의존성 세포의 세포독성 (antibody dependent cellular cytotoxicity) (ADCC)을 매개하는 능력을 향상하고 및/또는 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화력을 증가하도록 수정 된다.
특정한 실시 예에서, Fc 부위는 주효인자 기능(effector function)이 없도록 제작될 수 있다. 어떤 실시 예에서, 본 발명의 항체 분자는 감소한 주효인자 기능을 가진 자연적으로 존재하는 IgG 동종체 (isotype), 예를 들어, IgG4, 로부터 유래한 Fc 부위를 가질 수 있다. IgG4 로부터 유래한 Fc 부위는 더 나아가, 예를 들어, 생체 내에서 IgG4 분자 사이에 팔 (arm)의 교환을 최소화하는 수정을 도입시켜, 치료적 유용성이 증가하도록 수정될 수 있다. IgG4 로부터 유래한 Fc 부위는S228P 치환을 포함하도록 수정될 수 있다.
어떤 특정 실시 예에서, 항체 분자는 당쇄화 (glycosylation)에 관한 한 수정될 수 있다. 예를 들어, 당쇄화 되지 않은 항체 (aglycoslated antibody)가 만들어질 수 있다 (즉, 당쇄화가 결여된 항체). 당쇄화는, 예를 들어, 타겟 항원에 대한 항체의 친화력을 증가시키기 위하여 변경될 수 있다. 그러한 탄수화물 수정은; 예를 들어, 항체 서열 내에 당쇄화 부위 하나 또는 그 이상을 변경하여 달성시킬 수 있다. 예를 들어, 하나 또는 그 이상의 가변 부위 프레임워크 당쇄화 부위를 제거하여 이로써 그 부위에서 당쇄화를 제거하는 결과가 되는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환이 만들어질 수 있다. 그러한 탈당쇄화 (aglycosylation)는 항체의 항원에 대한 친화력을 증가시킬 수 있다.
또한, 예견하는 것은, 감소한 양의 후코실 잔기 (fucosyl residues)를 가진 저후코실화된 항체 (hypofucosylated antibody) 또는 전적으로 또는 부분적으로 탈-후코실화된 항체 (de-fucosylated antibody) (Natsume et al., Drug Design Development and Therapy, Vol.3, pp7-16, 2009에서 서술된 대로) 또는 증가 된 이등분 GlcNac 구조를 갖는 것과 같은, 변경된 유형의 당쇄화를 가진 변이체 갈랙틴-10 항체이다. 그러한 변경된 당쇄화 패턴은 항체의 ADCC 활성을 증가시키는 것으로 나타났으며, "자연의 (native)" 인간 Fc 도메인을 포함하는 해당 항체에 비교하여 전형적으로 ADCC를 10배 강화한다. 그러한 탄수화물 수정은, 예를 들어, 숙주 세포에서 변경된 당쇄화 효소 기구로 (야만-오누크 및 사토 (Yamane-Ohnuki and Satoh, mAbs 1:3, 230-236, 2009) 에서 서술한 대로)) 항체를 발현시켜 달성시킬 수 있다. 강화된 ADCC 기능을 가진 비-후코실화 된 항체의 예들은 바이오와 회사의 (BioWa Inc) 포텔리젠트 기술 (PotelligentTM technology)을 사용하여 생산된 그런 것이다.
D. 예시적인
갈랙틴
-10 항체 (
Exemplary
galectin
-10 antibodies)
현 발명은 예시적인 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 이들 갈랙틴-10 항체들 및 이의 항원 결합 단편들은 본 발명에 따른 바람직한 갈랙틴-10 길항제로서의 역할을 한다. 본 발명의 예시적인 갈랙틴-10 항체들 및 이의 항원 결합 단편들은 하기 서술된 대로 이들의 구조적 특징에 관하여 전적으로 정의한다.
여기서 제공되는 것은 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편으로, 여기서 항체 및 이의 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)을 포함하고 여기서 VH 및 VL 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함한다:
(i) 서열번호 3을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 2를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii)서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 5를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 60을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 59를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 9를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 8을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 7을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 12를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 10을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 68을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vii) 서열번호 20을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 19를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 75를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(viii) 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ix) 서열번호 25를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 76를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(x) 서열번호 28을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 27을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xi) 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xii) 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 84를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 83을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiii) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 35를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiv) 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xv) 서열번호 41을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 91을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 89를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvi) 서열번호 43을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 92를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvii) 서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 44를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xviii) 서열번호 47을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xix) 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xx) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 52를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 51을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(xxi) 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
어떤 특정 실시 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되고, 이는 갈랙틴-10에 결합하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중 쇄 가변 도메인 및 경 쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기서
가변 중 쇄 CDR3 서열은 서열번호 3 [DRNLGYRLGYPYDY] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR2 서열은 서열번호 2 [GISWNGGSTYYAESMKG] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR1 서열은 서열번호 1 [DYAMS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR3 서열은 서열번호 58 또는 [ASYRSSNNAV] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR2 서열은 서열번호 57 [EVNKRAS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR1 서열은 서열번호 56 [AGTSSDVGYGNYVS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고; 및
여기서 서열 변이체는 나열된 서열에서 한 개, 두 개 또는 세 개 아미노산 치환 ((예를 들어, 보존적 치환 (conservative substitutions), 인간화 치환 (humanising substitutions) 또는 친화력 변이체 (affinity variants))을 포함한다.
어떤 특정 실시 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되고, 이는 갈랙틴-10에 결합하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중 쇄 가변 도메인 및 경 쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기서
가변 중 쇄 CDR3 서열은 서열번호 6 [PGDRLWYYRYDY] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR2 서열은 서열번호 5 [AINSGGGSTSYADSVKG] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR1 서열은 서열번호 4 [SYAMS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR3 서열은 서열번호 61 [ASYRYRNNVV] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR2 서열은 서열번호 60 [KVSRRAS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR1 서열은 서열번호 59 [AGTSSDIGYGNYVS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고; 및
여기서 서열 변이체는 나열된 서열에서 한 개, 두 개 또는 세 개 아미노산 치환 ((예를 들어, 보존적 치환 (conservative substitutions), 인간화 치환 (humanising substitutions) 또는 친화력 변이체 (affinity variants))을 포함한다.
어떤 특정 실시 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되고, 이는 갈랙틴-10에 결합하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중 쇄 가변 도메인 및 경 쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기서
가변 중 쇄 CDR3 서열은 서열번호 9 [YIRGSSWSGWSAYDY] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR2 서열은 서열번호 8 [VIASDGSTYYSPSLKS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR1 서열은 서열번호 7 [TSYYAWS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR3 서열은 서열번호 64 [QSADSSDNPV] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR2 서열은 서열번호 63 [KDSERPS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR1 서열은 서열번호 62 [QGGNFGYYYGS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고; 및
여기서 서열 변이체는 나열된 서열에서 한 개, 두 개 또는 세 개 아미노산 치환 ((예를 들어, 보존적 치환, 인간화 치환, 또는 친화력 변이체 (affinity variants))을 포함한다.
어떤 특정 실시 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되고, 이는 갈랙틴-10에 결합하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중 쇄 가변 도메인 및 경 쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기서
가변 중 쇄 CDR3 서열은 서열번호 12 [RPNWYRALDA] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR2 서열은 서열번호 11 [AIAYSGSTYYSPSLKS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 중 쇄 CDR1 서열은 서열번호 10 [TNSYYWS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR3 서열은 서열번호 67 [QSYESSTSPV] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR2 서열은 서열번호 66 [GDSNRPS] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고;
가변 경 쇄 CDR1 서열은 서열번호 65 [QGANLGRYYGI] 또는 이의 서열 변이를 포함하거나 또는 이로 구성되고; 및
여기서 서열 변이체는 나열된 서열에서 한 개, 두 개 또는 세 개 아미노산 치환 ((예를 들어, 보존적 치환, 인간화 치환, 또는 친화력 변이체 (affinity variants))을 포함한다.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)을 포함하거나 또는 이로 구성된 항체 분자로부터 선택된다:
(i) 서열번호 99의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 100의 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(ii) 서열번호 101의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(iii) 서열번호 103의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(iv) 서열번호 105의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 106의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(v) 서열번호 107의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(vi) 서열번호 109의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(vii) 서열번호 111의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(viii) 서열번호 113의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(ix) 서열번호 115의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(x) 서열번호 117의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xi) 서열번호 119의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xii) 서열번호 121의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 122의 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xiv) 서열번호 125의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xv) 서열번호 127의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xvi) 서열번호 129의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xvii) 서열번호 131의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xviii) 서열번호 133의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xix) 서열번호 135의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 136의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xx) 서열번호 137의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL; 및
(xxi) 서열번호 139의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL.
여기서 제공되는 것은 갈랙틴-10에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이고, 여기서 항체 또는 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 ((VL)을 포함하며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함한다:
(i) 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 160을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 179를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 168을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 167을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 184를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 171을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 169를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 187을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 172를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 188을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(vii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)을 포함하거나 또는 이로 구성된 항체 분자로부터 선택된다:
(i) 서열번호 194의 아마 노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아마 노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 195의 아마 노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iv) 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(v) 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vi) 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(vii) 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL.
항체 또는 항원 결합 단편의 도메인이 참조 서열에 특정한 퍼센트 서열 상동성으로 정의되는 실시 예를 위해, VH 및 또는 VL 도메인은 참조 서열에 존재하는 동일한 CDR 서열을 유지할 수 있어 변이가 프레임워크 부위에서만 존재한다.
여기서 제공되는 것은 갈랙틴-10에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이고, 여기서 항체는 VHH 항체이고 및 여기서 VHH 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함한다:
(i) 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ii) 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 212를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 211을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iii) 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iv) 서열번호 219를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(v) 서열번호 222를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 221을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 220를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vi) 서열번호 225를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 224를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 223을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vii) 서열번호 228을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 227을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(viii) 서열번호 231을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 230을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 229를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ix) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(x) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 238을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 237을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xii) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiii) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiv) 서열번호 244를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 243을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 242를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xv) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xvi) 서열번호 247을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 246을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 245를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1; 및
(xvii) 서열번호 249를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 248을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1.
어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10에 결합하는 VHH 항체는 VHH 도메인을 포함하고 이는 서열번호 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265 또는 266중 어느 하나로 대표되는 아미노산 서열, 또는 이들과 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 항체 분자로부터 선택된 VHH 도메인을 포함하거나 이로 구성된다.
VHH 도메인이 참조 서열에 특정 퍼센트 서열 상동성으로 정의되는 실시 예에서, VHH 도메인은 참조 서열에 존재하는 CDR 서열과 동일하게 유지할 수 있어서 변이는 단지 구조 (프레임워크)부위 내에 존재한다.
본 발명은 또한 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 이는 여기서 예시된 갈락티-10 항체와 똑같은 에피톱에 결합한다.
어떤 특정 실시 예에서, 상기 나열된 CDR 서열을 가진 것으로 정의되거나 또는 상기 나열된 특정한 VH/VL/VHH 도메인 아미노산 서열에 특정한 퍼센트 상동성을 가진 것으로 정의된 예시적인 갈랙틴-10 항체 및 이의 항체 결합 단편은 CDR, VH, VL 및/또는 VHH 서열들이 유래한 항체 및 이의 항체 결합 단편의 인간화된 (humanized), 생식세포 계열화된 (germlined) 또는 친화력 변이체 (affinity variants) 이다.
바람직한 실시 예에서, 상기 나열된 CDR 서열을 가진 예시적인 갈랙틴-10 항체 분자는 높은 인간 유사성을 가진다, 예를 들어, CDR 서열들이 유래한 항체 및 이의 항체 결합 단편의 인간화된 (humanized), 생식세포 계열화된 (germlined) 또는 친화력 변이체 (affinity variants) 이다.
제한적이지 않은 실시 예에서, 여기서 서술된 CDR, VH및/또는 VL 서열을 가진 예시적인 갈랙틴-10 항체 및 이의 항체 결합 단편은 CH1 도메인 및/또는 CL 도메인을 (중 쇄 및 경 쇄, 각각) 포함할 수 있으며, 이의 아미노산 서열은 전적으로 또는 상당히 인간이다. 인간 치료에 사용할 의도가 있는 항체 분자는, 항체의 전체 고정 부위 (constant region), 또는 적어도 이의 일부분이 전적으로 또는 상당히 인간 아미노산 서열을 가지는 것이 전형적이다. 그러므로 하나 또는 그 이상, 또는 어느 조합의 CH1 도메인, 힌지 부위, CH2 도메인, CH3 도메인 및 CL 도메인 (및 만약 존재한다면, CH4 도메인) 은 이의 아미노산 서열에 관한 한 전적으로 또는 상당히 인간 (human)이다.
유리하게도, CH1 도메인, 힌지 부위, CH2 도메인, CH3 도메인 및 CL 도메인 (및 만약 존재한다면, CH4 도메인) 은 모두 전적으로 또는 상당히 인간 아미노산 서열을 가질 수 있다. 인간화된 또는 키메릭 항체, 또는 항체 단편의 고정 부위 (constant region)의 문맥상, "상당히 인간 (substantially human)" 이란 용어는 아미노산 상동성이 인간 고정 부위와 적어도 90%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 95%, 또는 적어도 97%, 또는 적어도 99%를 의미한다. "인간 아미노산 서열 human amino acid sequence) 이란 용어는 이 문맥상 인간 면역글로블린 유전자에 의해 암호화되는 아미노산 서열을 의미하며, 이는 생식세포계열, 재배열된 및 체세포적으로 돌연변이 된 유전자를 포함한다. 본 발명은 또한 "전적으로 인간 (fully human)" 힌지 부위의 존재를 전적으로 필요로 하는 그런 실시 예를 제외하고는, 인간 서열에 관하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열이 첨가, 삭제, 또는 치환에 의하여 변경된 "인간 (human)" 서열의 고정 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 고려한다. 여기서 서술된 예시적인 Fc 부위 수정은 상기 나열된 CDR 및/또는 VH/VL 도메인 서열을 가진 갈랙틴-10 항체에 병합될 수 있다. 어떤 특정 실시 예에서, 상기 나열된 CDR 및/또는 VH/VL 도메인 서열을 가진 갈랙틴-10 항체는 아미노산 치환 H433K 및 N434 F를 포함하거나 또는 이로 구성된 수정된 인간 IgG Fc 도메인을 포함하며, 여기서 Fc 도메인 수 매김(numbering) 은 EU 수 매김에 따른다. 어떤 특정 실시 예에서, 상기 나열된 CDR 및/또는 VH/VL 도메인 서열을 가진 갈랙틴-10 항체는 아미노산 치환 M252Y, S254T, T256E, H433K 및 N434F를 포함하거나 또는 이로 구성된 수정된 인간 IgG Fc 도메인을 포함한다.
본 출원서에서 달리 언급하지 않는 한, 아미노산 서열 사이의 % 서열 상동성은 최적의 방식으로 정렬된 두 개의 서열을 비교하여 결정되며 및 여기서 비교되는 아미노산 서열은 두 서열 사이에 최적의 정렬을 위하여 참조 서열에 대하여 첨가 또는 삭제를 포함할 수 있다. 상동성 퍼센트는 두 서열 사이에 아미노산 잔기가 같은 동등한 위치의 수를 측정하고, 이 동등한 위치의 수를 비교 창에 있는 총 위치의 아미노산으로 나누고 및 이 두 서열 사이의 상동성 퍼센트를 얻기 위하여 얻은 결과를 100으로 곱한다. 예를 들어, 블라스트 프로그램 (BLAST program) 인, "블라스트 2 서열 ("BLAST 2 sequences)" 을 사용하는 것이 가능하며 (Tatusova et al, "Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences", FEMS Microbiol Lett. 174:247-250) 이는 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ gorf/bl2.html, 사이트에서 얻을 수 있으며, 사용된 계수는 디폴트로 주어진 것 ((특히 계수 "열린 갭 페널티 (open gap penalty)": 5, 및 "확장 갭 페널티 (extension gap penalty)": 2; 선택된 매트릭스는, 예를 들어, 프로그램에서 제안된 매트릭스 "BLOSUM 62") 을 사용했으며, 비교될 두 서열 사이의 상동성 퍼센트는 프로그램에 의해 직접적으로 계산되었다.
E.
갈랙틴
-10 항체를 암호화하는
폴리뉴클레오타이드
(
Polynucleotides
encoding
galectin
-10 antibodies)
본 발명은 또한 본 발명의 갈랙틴-10 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 분자를 제공한다. 예를 들어, 여기서 서술된 갈랙틴-10 항체의 VH, VL 및/또는 VHH 도메인, 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 분자와 함께 전장 (full-length) 갈랙틴-10 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 분자를 제공한다. 또한, 본 발명의 상기 뉴클레오타이드 서열이 작동적으로 조절 서열에 연결되어 이 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포 또는 세포-없는 발현 시스템(cell-free expression system) 에서 항체 또는 이의 단편을 발현하게 하는 본 발명의 상기 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
본 발명의 갈랙틴-10 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 분자는, 예를 들어, 재조합 DNA 분자를 포함한다. "핵산 (nucleic acid)", " 폴리뉴클레오타이드 (polynucleotide)" 또는 "폴리뉴클레오타이드 분자 (polynucleotide molecule)" 이란 용어는 여기서 사용된 대로, 서로 교환되게 사용되며 및 어느 DNA 또는 RNA 분자, 단일- 또는 이중-가닥 및 만약 단일-가닥이면, 이의 보완적 서열 의미한다. 핵산 분자의 논의에서, 특정한 핵산 분자의 서열 또는 구조는 정상 전통적 서열제공에 따라 5'에서 3'의 방향으로 여기서 서술된다. 어떤 실시 예에서, 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드는 분리 (isolated)" 된다. 이 용어는, 핵산 분자에 적용될 때는, 이것이 기원하는 개체의 자연적으로 존재하는 유전체에 바로 인접한 서열로부터 분리된 핵산 분자를 의미한다. 예를 들어, "분리된 핵산 (isolated nucleic acid)" 은 플라스미드 또는 바이러스 벡터, 또는 원핵 또는 진핵 세포 또는 비-인간 숙주 개체의 유전체 DAN로 통합되는 것과 같은 벡터에 삽입된 DNA 분자를 포함할 수 있다. RNA에 적용될 때는, 분리된 핵산 (isolated nucleic acid)" 은 상기 정의된 분리된 DNA 분자에 의해 암호화되는 RNA 분자를 주로 의미한다. 다른 한편으로, 이 용어는 이것이 자연 상태 (즉, 세포 또는 조직) 에서 연관되어 있을 수 있는 다른 핵산으로부터 정제/분리된 것을 의미할 수 있다. 분리된 핵산 (DNA 또는 RNA) 은 더 나아가 생물학적 또는 합성적 수단에 의해 직접적으로 생산되고 및 이의 생산과정에서 존재하는 다른 성분으로부터 분리된 분자를 대표할 수 있다.
본 발명에 따른 갈랙틴-10 항체의 재조합적 생산을 위하여, 이를 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오타이드 또는 다른 체인 또는 도메인을 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오타이드는 제조될 수 있고 (표준 분자생물학 기술을 사용하여) 및 선택한 숙주 세포, 또는 무-세포 발현 시스템 (cell-free expression system)에서 발현을 위한 복제 가능한 벡터에 삽입시킬 수 있다, 적절한 숙주 세포는, 원핵세포, 효모, 또는 고등 진핵세포, 특히 포유류 세포일 수 있다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 예시에는 SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651) 로 형질 전환된 원숭이 신장 CV1 (monkey kidney CV1 line) ; 인간 배아 신장 세포주 (human embryonic kidney line) ((293 또는 현탁 배양 (suspension culture) 에서 성장을 위해 서브 클론 된 293 세포, Graham et al., J. Gen. Virol. 36:59 (1977)); 새끼 햄스터 신장 세포 (baby hamster kidney cells) (BHK, ATCC CCL 10); 중국 햄스터 난소 세포/-DHFR (Chinese hamster ovary cells/-DHFR) (CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 생쥐 세르톨리 세포 (mouse sertoli cells) (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); 생쥐 골수종 세포 (mouse myeloma cells) SP2/0-AG14 (ATCC CRL 1581; ATCC CRL 8287) 또는 NS0 ((HPA (세포주 수집 번호) culture collections no. 85110503)); 원숭이 신장 세포 (monkey kidney cells) (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 초록 원숭이 신장 세포 (African green monkey kidney cells) (VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 종양 세포 (human cervical carcinoma cells )(HELA, ATCC CCL 2); 고양이 신장 세포 (canine kidney cells) (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 쥐 간 세포 (buffalo rat liver cells) (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포 (human lung cells) (W138, ATCC CCL 75); 인간 간세포 (human liver cells) (Hep G2, HB 8065); 생쥐 유방 종양 (mouse mammary tumor)(MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포 (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간종양 세포주 (human hepatoma line) (Hep G2)는 물론 DSM's PERC-6 세포주이다. 이들 각 숙주 세포에서 사용에 적합한 발현 벡터들은 또한 이 분야 기술에서 일반적으로 알려졌다.
"숙주 세포 (host cell)" 는 일반적으로 배양된 세포 주를 의미한다는 것이 주지되어야 한다. 본 발명에 따른 항원 결합 폴리펩티드를 암호화하는 발현 벡터가 도입되는 전 인간 (whole human beings) 자체는 "숙주 세포" 정의에서 명백하게 제외된다.
F. 항체 생산 (
Antibody production)
더 나아간 관점에서, 본 발명은 또한 항체의 발현이 허락되는 조건하에서 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, 발현 벡터)를 함유하는 숙주 세포 (또는 무-세포 발현 시스템) 을 배양하고, 및 발현된 항체를 회수하는 방법인 본 발명의 항체를 생산하는 방법을 제공한다. 이 재조합 발현 과정은, 본 발명에 따른 갈랙틴-10 항체를 포함하는, 인간 치료적 사용을 의도한 단일 클론 항체를 포함하는, 항체의 대규모 스케일 생산을 위하여 사용될 수 있다. 적절한 벡터, 세포 주 및 생체 내 치료적 사용에 적합한 재조합 항체의 대규모 스케일 제조를 위한 생산 과정은 일반적으로 이 분야 기술에서 가능하며 및 전문가에게는 잘 알려질 것이다.
G. 약학적
조성물 (
Pharmaceutical compositio
ns)
본 발명의 범위는, 하나 또는 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 조합을 함유하고, 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제로 제형화된, 약학적 조성물을 포함한다. 그러한 조성물은 하나 또는 갈랙틴-10 항체의 조합 (예를 들어, 두 개 또는 세 개의 다른) 을 포함할 수 있다. 인간 치료적 용도를 위한 단일 클론 항체의 제형화 기술은 이 분야 기술에서 잘 알려졌으며 및, 예를 들어, 왕 등에서 (Wang et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.96, pp1-26, 2007), 그 전문이 여기에 병합된 내용에서, 리뷰 되어 있다.
조성물을 제형 화하는데 사용될 수 있는 약학적으로 허용 가능한 부형제는, 이것에만 제한되지는 않으나; 이온 교환기 (ion exchangers), 알루미나 (alumina), 알루미늄 스테아레이트 (aluminum stearate), 레시틴 (lecithin), 인간 혈청 알부민 (human serum albumin)과 같은 혈청 단백질 (serum proteins), 인산염 (phosphates)과 같은 버퍼, 글라이신(glycine), 소르빅 에시드 (sorbic acid), 포타슘 소르베이트 (potassium sorbate), 포화된 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물 (partial glyceride mixtures of saturated vegetable fatty acids), 물 (water), 염 (salts) 또는 프로타민 설페이트 (protamine sulfate)와 같은 전해액 (electrolytes), 디소듐 하이드로겐 포스페이트 (disodium hydrogen phosphate), 포타슘 하이드로겐 포스페이트 (potassium hydrogen phosphate), 소듐 클로라이드 (sodium chloride), 아연 염 (zinc salts), 콜로이드 성 실리카 (colloidal silica), 마그네슘 트리실리케이트 (magnesium trisilicate), 폴리비닐 피롤리돈 (polyvinyl pyrrolidone), 셀루로즈-근거한 물질 (cellulose-based substances) (예를 들어, 소듐 카복시메틸셀루로즈 (sodium carboxymethylcellulose), 폴리에틸렌 글리세롤 (polyethylene glycol), 폴리아크릴레이트 (polyacrylates), 왁스 (waxes), 폴리에틸렌- 폴리옥시프로필렌- 블럭 폴리머 (polyethylene- polyoxypropylene- block polymers), 폴리에틸렌 글라이콜 (polyethylene glycol) 및 울 지방 (wool fat)이 포함한다.
어떤 특정 실시 예에서, 조성물은 이것에만 국한하지 않으나 근육 내 (intramuscular), 정맥 내 (intravenous), 피부 내 (intradermal), 복강 내 (intr aperitoneal) 주사, 피하 (subcutaneous), 경막 외 (epidural), 코 (nasal), 경구 (oral), 직장 (rectal), 국부 (topical), 흡입 (inhalational), 구강 (buccal) ((예를 들어, 설하 (sublingual)), 및 경피 (transdermal) 투여를 포함하는 어느 적절한 경로의 투여를 통해 개체에게 투여하기 위하여 제형화된다.
H. 치료 방법 (Methods of treatment)
갈랙틴-10 길항제, 특히 여기서 서술된 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편은, 치료 방법에 사용될 수 있다. 그러므로 여기서 제공되는 것은 본 발명의 첫 번째 관점에 따른 갈랙틴-10 길항제의 의약품으로서 용도이다. 다른 한편으로는, 여기서 제공되는 것은 본 발명의 첫 번째 관점에 따른 갈랙틴-10 길항제의 치료 방법에서의 용도이다. 바람직한 실시 예에서, 본 발명은 여기 다른 곳에서 서술된 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편의 의약품으로서의 용도를 제공한다. 다른 한편으로는, 본 발명은 여기 다른 곳에서 서술된 갈랙틴-10 항체 및 항원 결합 단편의 치료하는 방법에서의 용도를 제공한다. 갈랙틴-10 길항제는, 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하여, 의약품으로서의 용도에서 전형적으로 약학적 조성물로서 제형 화 된다. 중요하게, 갈랙틴-10 길항제과 연관되어 상기 서술된 모든 실시 예에서, 특히 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 여기서 서술된 방법에 똑같이 적용할 만하다.
현 발명은 또한 이를 필요로하는 개체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 그 방법은 개체에 치료적으로 효과 있는 양의 갈랙틴-10 길항제를 본 발명의 첫 번째 관점에 따라 투여하는 것을 포함한다. 바람직한 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 여기 다른 곳에서 서술된 대로 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편이다. 그러한 치료 방법에서, 갈랙틴-10 길항제는, 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하여, 전형적으로 약학적 조성물로서 제형 화 된다. 여기서 사용된 대로, "치료적으로 효과 있는 양 (herapeutically effective amount)" 이라는 용어는 갈랙틴-10 길항제가, 예를 들어, 항체가, 치료적 효과를 나타내기에 충분한 양 또는 용량의 의미하려는 것이며, 예를 들어, 질환 또는 컨디션과 연관된 증상을 근절하거나 또는 적어도 완화 시키는데 요구되는 길항제의 양 또는 용량을 의미하려는 것이다. 적절한 양 또는 용량은 의사에 의해 적절하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 용량은 치료될 개체의 크기 또는 무게, 치료될 개체의 나이, 치료될 개체의 일반적인 신체적 컨디션, 치료될 컨디션, 및 투여 경로와 같은 인자들에 근거하여 조정될 수 있다.
임상적 사용을 위하여, 어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 여기 다른 곳에서 서술된 대로 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편이며 및 개체에 하나 또는 그 이상의 용량으로서 약 0.1 mg/kg 몸무게에서 약 20mg/kg 몸무게로 투여된다. 어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 여기 다른 곳에서 서술된 대로 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편이며 및 개체에 약 0.1 mg/kg 몸무게에서 약 10mg/kg 몸무게의 용량에서 투여된다. 어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 여기 다른 곳에서 서술된 대로 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편이며 및 개체에 약 0.5 mg/kg 몸무게에서 약 10mg/kg 몸무게의 용량에서 투여된다. 어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 여기 다른 곳에서 서술된 대로 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편이며 및 개체에 약 1mg/kg 몸무게에서 약 10mg/kg 몸무게의 용량에서 투여된다.
갈랙틴-10 길항제는, 특히 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 이들이 갈랙틴-10 결정화를 방해할 수 있다는 이유에서, 치료 방법에 유용하다. 여기 다른 곳에서 설명한 대로, 현 발명의 갈랙틴-10 길항제는 갈랙틴-10의 에피톱에 결합하고 이로써 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface) 를 차폐하고 및 따라서 갈랙틴-10의 결정화를 방해한다. 어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 갈랙틴-10의 결정화를 억제한다. 어떤 특정 실시 예에서, 갈랙틴-10 길항제는 결정 갈랙틴-10의 용해를 촉진한다.
갈랙틴-10 길항제는, 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하여, 갈랙틴-10의 결정 또는 CLCs의 존재 또는 형성과 연관된 질환 또는 컨디션을 예방 또는 치료하는 데 사용될 수 있다. 여기서 제공되는 것은 여기서 서술된 갈랙틴-10 길항제의, 특히 갈랙틴-10 항체 및 이의 항원 결합 단편의, 이를 필요로하는 환자 또는 개체에, 효과적인 양의 투여로 갈랙틴-10의 결정 또는 CLCs의 존재 또는 형성과 연관된 질환 또는 컨디션을 예방 또는 치료하는 방법이다.
여기서 사용된 대로, 질환 또는 컨디션을 "예방 (preventing)" 하는 방법은 질환의 발병을 예방, 증상의 악화를 예방, 질환 또는 컨디션의 진전을 예방, 또는 개체가 질환 또는 컨디션을 전개하는 위험인자를 감소시키는 것을 의미한다. 여기서 사용된 대로, 질환 또는 컨디션을 "치료 (treating)" 하는 방법이란 질환 또는 컨디션을 치료하는 것 및/또는 질환 또는 컨디션과 연관된 증상을 경감 또는 근절하여 환자의 고통이 감소하는 것을 의미한다.
갈랙틴-10 결정의 존재가 특징인 질환 또는 컨디션을 가진 환자를 위하여, 치료 방법은, 전형적으로, 환자의 조직에 위치하여 있는 갈랙틴-10 결정을 녹일 수 있는, 갈랙틴-10 길항제, 바람직하게 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여가 관여될 것이다. 갈랙틴-10 결정의 형성이 특징인 질환 또는 컨디션을 전개하는 "위험성 이 있는 (at risk)" 으로 동정 된 환자를 위하여, 예방하는 방법은, 갈랙틴-10 결정화를 억제할 수 있는, 갈랙틴-10 길항제, 바람직하게 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여가 관여될 것이다.
갈랙틴-10 결정 또는 CLCs은 질환 또는 컨디션의 범위에 있는 환자에서 관찰되었다. 여기서 서술된 갈랙틴-10 길항제는: 천식 (asthma); 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis); 소아지방변증 (celiac disease); 기생충감염 (helminth infection); 위장관 호산구 염증 (gastrointestinal eosinophilic inflammation); 낭포성 섬유종 (cystic fibrosis) (CF); 알러지성 기관지 폐 아스페르길루스증 (allergic bronchopulmonary aspergillosis) (ABPA); 척-스트라우스 맥관염 (Churg-Straus vasculitis); 만성 호산구 폐렴 (chronic eosinophilic pneumonia), 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia) 로 구성된 군으로부터 선택된 질환 또는 컨디션을 예방 또는 치료하기 위하여 사용될 수 있다는 것이다. 바람직한 실시 예에서, 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: 천식 (asthma); 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis); 소아지방변증 (celiac disease); 기생충감염 (helminth infection); 위장관 호산구 염증 (gastrointestinal eosinophilic inflammation); 낭포성 섬유종 (cystic fibrosis) (CF); 알러지성 기관지 폐 아스페르길루스증 (allergic bronchopulmonary aspergillosis) (ABPA); 척-스트라우스 맥관염 (Churg-Straus vasculitis); 만성 호산구 폐렴 (chronic eosinophilic pneumonia), 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia) 로 구성된 군으로부터 선택된 질환 또는 컨디션을 예방 또는 치료하기 위하여 사용될 수 있다.
상기 주목된 대로, 갈랙틴-10 결정 또는 CLCs은 특히 호산구 염증 (eosinophilic inflammation) 에 의한 특징적인 질환 또는 컨디션과 연관되어 있다. 바람직한 실시 예에서, 여기서 서술된 갈랙틴-10 길항제는, 바람직하게는, 여기서 서술된 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 호산구 염증과 연관된 질환 또는 컨디션을 치료하는데 사용된다.
특히 바람직한 실시 예에서, 여기서 서술된 갈랙틴-10 길항제는, 바람직하게는 여기서 서술된 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 천식 (asthma)을 예방 또는 치료하는데 사용된다.
여기서 제시된 결과들은 선천성 면역 반응을 유도하고 및 생체 내에서 기도의 염증을 유도하는데 CLCs의 중요한 역할을 강조한다. 이 효과들은 여기서 서술된 예시적인 갈랙틴-10 항체에 의해 성공적으로 뒤집혔다. 여기서 서술된 생쥐 모델에서 관찰된 염증은 NLRP3 염증 복합체와는 독립적인 것으로 발견되었다. 이 결과들은 NLRP3 염증조절복합체 (NLRP3 inflammasome)와는, 즉 CLC 병리학에서 이전에 시사한 염증 복합체와는, 독립적인 경로를 통해 매개 되는 염증 반응에서 CLCs의 원인적인 역할을 처음으로 제시한다. 본 발명의 방법들은 염증적 컨디션 또는 질환, 특히, 기도의 염증적 컨디션 또는 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다는 것이다. 치료적 효과는 NLRP3 염증조절복합체 (inflammasome) 복합체와는 독립적으로 매개할 수 있다.
현 발명은 또한 환자로부터 얻은 샘플에서 갈랙틴-10을 검출하기 위한 갈랙틴-10 길항제의 용도를 제공한다. 어떤 특정 실시 예에서, 본 발명에 따른 갈랙틴-10 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 환자로부터 얻은 샘플에서 갈랙틴-10을 검출하는데 사용된다. 길항제, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 전형적으로 결정 갈랙틴-10을 검출하는데 사용된다. 상기 주목된 대로, 갈랙틴-10 결정 또는 CLC 결정은 여러 다른 질환 및 컨디션을 가진 환자에서 관찰되었다. 환자의 샘플은 다음의 질환 또는 컨디션 중 어느 하나를 가졌거나 또는 가진 것으로 의심되는 개체로부터 분리될 수 있다는 것이다: 천식 (asthma); 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis); 소아지방변증 (celiac disease); 기생충감염 (helminth infection); 위장관 호산구 염증 (gastrointestinal eosinophilic inflammation); 낭포성 섬유종 (cystic fibrosis) (CF); 알러지성 기관지 폐 아스페르길루스증 (allergic bronchopulmonary aspergillosis) (ABPA); 척-스트라우스 맥관염 (Churg-Straus vasculitis); 만성 호산구 폐렴 (chronic eosinophilic pneumonia), 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia). 환자 샘플에서 결정 갈랙틴-10의 검출은 샘플이 얻어진 개체에서 질환 또는 컨디션을 진단하는데 사용될 수 있다. 샘플은 어떤 적절한 환자 샘플일 수 있다, 예를 들어, 질병 상태에서 CLCs가 관찰된 어느 체액 또는 조직. 어떤 특정 실시 예에서, 샘플은 폴립 (polyp), 예를 들어, 코의 폴립 (nasal polyp)으로부터 얻은 조직 샘플이다. 어떤 특정 실시 예에서, 샘플은 점액 (mucus) 샘플이다. 그러한 실시 예에서, 본 발명의 길항제를 사용하여 점액 샘플에서 결정 갈랙틴-10의 검출은 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis) 을 검출 또는 진단하는데 사용될 수 있다. 바람직한 실시 예에서, 환자의 샘플은 객담 (sputum) 샘플이다. 그러한 실시 예에서, 본 발명의 길항제를 사용하여 객담 샘플에서 결정 갈랙틴-10의 검출은 천식 (asthma) 을 검출 또는 진단하는데 사용될 수 있다.
I.
키트
(Kits)
갈랙틴-10 길항제, 여기서 서술된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 어느 것도 키트로서 포장 될 수 있으며 및 선택적으로 사용 설명서가 포함된다.
실시 예시 (
EXAMPLES)
본 발명은 다음의 비-제한적인 실시 예시를 참조하여 더 나아가 이해될 것이다.
실시 예시 1. 재조합
차코트
-
래이덴
결정 (
Charcot
-
Leyden
crystals) (
CLCs
)의 생산 ((Production of recombinant
Charcot
-
Leyden
crystals) (
CLCs
))
CLCs에 대한 이전의 연구가 프리마 인간 혈액 호산구 (prima human blood eosinophils) 또는 백혈구 세포 주의 단백질 풍부 용해액의 자동-결정화에 의해 얻은 결정에 대하여 수행되었으며, 이는 라이소포스포리파아제 (lysophospholipase)와 같은 오염된 단백질의 동시-정제를 초래했다 (Ackerman et al. (1980); Weller et al. (1984) and Archer et al. (1965)).
생체 내에서 기능 연구에 사용을 위한 대량의 순수한 CLC 결정을 만들기 위하여, TEV-쪼개질 수 있는 N-말단 His-태그 (TEV-cleavable N-terminal His-tag)를 지닌, 인간 갈랙틴-10, 이 E. colic에서 생산되었으며 및 고정화된 친화력 크로마토그래피 (immobilized affinity chromatography) 와 크기-배제 크로마토그래피 (size-exclusion chromatography)의 조합으로 정제되었다 (도 1A). 인간 갈랙틴-10 (잔기 1-142, Uniprot Q05315)을 암호화하는 합성적 코돈-최적화된 DNA 서열이 pET28a 박테리아 발현 벡터 (Novagen, cat#69864-3) 의 NcoI/XhoI 부위에 His-tag 및 두 개의 프로테아제 (protease) 절단부위, 엔테로키나아제 (enterokinase (DDDDK) 및 TEV 프로테아제 (ENLYFQG) 와 함께 N-말단 (MASTTHHHHHHDTDIPTTGGGSRPDDDD-KENLYFQGHM)에 클론 되었다. pET28a-갈랙틴-10 (pET28a-galectin-10) 이 가나마이신 (kanamycin) (25 μg/mL)을 선택 마커로 사용하여 BL21 (DE3)에 형질전환 되었다. 발현 배양은 28° C 에서 가나마이신 (25 μg/mL)를 함유하는 루리아-베르타니 (Luria-Bertani) 배지에서 키웠다. 갈랙틴-10의 발현은 배양 OD600가 0.6일 때 이소프로필-b-D-티오갈락토피라노사이드 (isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside) (ITPG)를 최종 농도 1 mM로 첨가하여 유도시켰으며, 이후, 배양은 하룻밤 동안 자라게 하였다. 박테리아는 원심분리로 (6,000g, 20분 동안 4° C에서) 수확하고 및 세포 페이스트 (cellular paste)는 -80° C에 보관하였다. 박테리아 펠렛 (bacterial pellet) 은 녹이고 및 용해 버퍼 (lysis buffer) (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl pH 7.4)에 재현탁 시켰다. 세포는 브란손 음파기 (Branson sonifier)에서 초음파분쇄 (sonication)(30% 출력으로 30s 펄스로 하고 30s 정지시간 간격으로 총 실행 시간 4분) 로 용해 시켰다. 세포 조각은 4° C 에서 원심분리시켜 (20,000g 30분 동안) 제거시켰다. 상등액은 0.22 μm 병 탑 필터 (bottle top filter)를 사용하여 여과시켜 투명하게 하고 및 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl pH 7.4.로 평형 시킨 Ni 세파로즈 (Ni Sepharose) 컬럼에 올려놓았다. 그 다음 컬럼은 20 mM 이미다졸 (imidazole) 및 0.1 % 엠피겐 세제 epmpigen detergent) 로 보충된 로딩 버퍼로 세척하고, 이어서 20 mM 이미다졸 (imidazole) 로 보충된 로딩 버퍼로 세척하였다. 그 다음 단백질은 50 mM 및 500 mM 이미다졸로 보충된 로딩 버퍼를 사용하여 용출시켰다 (elute). 50 mM 및 500 mM 용출 피크 (elution peaks)는 모아 합치고 및 농축시키고 및 PBS pH 7.4를 실행 버퍼 (running buffer) 로하여 HiLoad 16/600 Superdex 200 pg 컬럼에 주사하였다. 갈랙틴-10에 해당하는 용출 분획은 모아 합치고 및 -80° C에 저장하였다. 엔도톡신-수준 (Endotoxin-levels) 은 Endosafe-PTS 시스템 (Charles River) 으로 5 EU mg-1 재조합 단백질보다 적게 측정되었다. His-태그 된 갈랙틴-10 단백질 (His-tagged galectin-10 protein) 은 30 mg/ml까지 용해성이었다.
His-태그 된 갈랙틴-10의 분자량 및 의 올리고머 상태 (oligomeric state) 를 분석하기 위하여, SEC-MALLS 이 수행 되었다 (도 1B). 단백질 샘플은 ((100 μL)은 온라인 UV-검출기 (online UV-detector)(Shimadzu), 다-각도 빛 분산 miniDAWN TREOS 기기 (multi-angle light scattering miniDAWN TREOS instrument) (Wyatt) 및 Optilab T-rEX 굴절계 (refractometer) (Wyatt) 에 커플 된 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL 컬럼 (Superdex 200 Increase 10/300 GL column) (GE Healthcare)에 0.5 ml min-1로 PBS pH 7.4를 실행 버퍼로 하여 25 °C에서 주사되었다. 굴절 계구 증가 ((dn/dc) 값 0.185 ml g-1 이 단백질 농도 및 분자량 측정에 사용되었다. 데이터는 ASTRA6 소프트웨어 (software) (Wyatt)를 사용하여 분석되었다. 밴드 넓혀짐 (band broadening) 에 대한 보정은 동일한 실행 컨디션에서 주사된 BSA로부터 유래한 계수를 사용하여 적용되었다. SEC-MALLS 분석은 His-태그 된 갈랙틴-10 (His-tagged galectin-10) 은 용액에서 이량체 (dimer)인 것을 보여준다 (도 1B). 결정된 40 ± 0.8 kDa 이었으며, 이는 태그 된 이량체 갈랙틴-10의 이론적 무게인 41.2 kDa에 가깝게 일치된다.
재조합 갈랙틴-10 결정을 형성하기 위하여, N-말단으로 태그 된 갈랙틴-10 (농도는 2 에서 4.5 mg/ml 사이)을 자체적으로 생산한 TEV 프로테아제 (protease) (Kapust et al., 2001) 와 배양시켰다. His-태그된 TEV (His-tagged TEV)를 암호화하는 pRK793 플라스미드는 David Waugh (Addgene plasmid #8827) 로부터의 선물이었다. 하룻밤 동안 소화시킨 후, 단백질 용액은 5번 거꾸로 하여 휘젓고 그 후 바늘-모양의 CLC 결정의 자동 생성 때문에 이 용액은 약 30분 동안 흐려졌다 (도 1C). TEV 절개 이후, 재조합 갈랙틴-10은 PBS에서 자동결정화되었으며 및 농도 0.2 mg/ml까지에서만 용해성이었다. TEV-소화 후에 재조합 갈랙틴-10의 N-말단에 세 개의 잔기 (GHM) 가 남았다. 결정은 원래 차코트 및 본 레이댄 (Charcot and von Leyden) 의해 서술된 다양한 거시적 모양과 가깝게 닮았다 (도 1D).
형광-라벨 된 형태의 갈랙틴-10 결정이 또한 생산되었다. 갈랙틴-10 은 두 개의 용매 노출된 시스테인 잔기 (Cys29 및 Cys57)를 함유하므로, 티올-반응성 (thiol-reactive) 형광 염료 5-아이오도아세트아미도풀루오레신 (5-iodoacetamidofluorescein) (5-IAF) 이 태그된 갈랙틴-10을 형광적으로 라벨 하는데 사용되었다. 5-IAF는 100% 디메틸포름아마이드 (dimethylformamide)에서 100mM로 용해시켰다. 갈랙틴-10 단백질 용액 (~5 mg/mL)의 pH는 100 mM Tris pH 8.5 (1M Tris pH 8.5 스톡 용액을 사용하여) 를 첨가하여 pH 8.5로 조정하였다. 다음에, 갈랙틴-10 (monomer)에 10-배 몰수 과량의 5-IAF를 단백질 용액에 첨가하였으며 및 라벨링 반응은 어두운 실온에서 2시간 동안 유지되었다. N-말단 His-테그를 지니고 있는 갈랙틴-10의 분자 흡광 계수 (molar extinction coefficient) 21430 cm- 1 M-1가 사용되었다. 다음, 과량의 비-반응된 5-IAF는 5 mM DTT (1 M DTT를 사용하여) 를 첨가하여 정지시켰다. 과량의 5-IAF는 그 후 샘플을 50mL HiTrap 제염 컬럼 (HiTrap desalting column) (GE Healthcare)에서 PBS를 실행 버퍼 (running buffer)로 하여 실행하여 제거되었다. 다음, 5-IAF 라벨 된 갈랙틴-10 은 농축시키고 및 HiLoad 16/600 Superdex 200 컬럼에 주사되었다. 용출된 피크의 분획은 수집하여 모으고 및 -80 °C에 저장되었다. 엔도톡신-수준 (endotoxin-levels) 은Endosafe-PTS 시스템 (Charles River) 으로 5 EU mg-1 재조합 단백질보다 더 낮게 측정되었다. 형광 갈랙틴-10 결정을 형성하기 위하여 5-IAF 라벨 된 갈랙틴-10의 N-말단 His-tag이 상기 서술된 대로 하룻밤 배양으로 제거되었다. 이 형광 결정은 차코트 (Charcot) 가 원래 서술한 대로 무수한 모양 (myriad shapes)을 가졌다 (도1E ).
실시 예시 2. 생체 내에서 자란
CLCs의
성질 규명 (
Characterisation
of in vivo grown
CLCs
).
지금까지, 생체 내에서 자란 CLC의 결정 격자의 구조 (crystal lattice structure) 에 대한 서술은 없었다. 그러므로 결정이 CRSwNP 환자의 끈끈한 점액질로부터 분리되었다. 기도 점막 조직 및/또는 분비물이 내시경 부비강 수술 (endoscopic sinus surgery) 하는 동안 환자로부터 수집되었다 (도 2A). 증상, 임상적 검사, 코 내시경, 및 비부비동염 및 코 폴립스에 대한 유럽인 포지션 페이퍼 가이드라인 (Eluropean Position Paper on Rhinosinusitis and Nasal Polyps guidelines)에 따른 부비강 컴프터 단층촬영 스캔 (sinus computed tomography scan) 으로 코 폴립종 (Nasal polyposis )이 진단 되었다. 모든 환자는 수술 전 적어도 4 주전부터 경구 및/국부 코티고스테로이드 (corticosteroids) 사용을 금지하였다. 연구 및 샘플 수집은 그핸 대학 병원 (Ghent University Hospital) 윤리 위원회에서 승인되었으며 및 안내된 동의서(informed consent)는 연구에 등록하기 전에 모든 환자로부터 얻었다. 환자로부터 얻은 점액 "끈근한 알레르기성 뮤신 유형 (sticky allergic mucin type)"은 하룻밤 동안 4° C 에서 항생제 (50IU/mL 페니실린 (penicillin and) 50mg/mL 스트렙토마이신 (streptomycin); Invitrogen) 및 0.1% BSA (Sigma)를 함유하는 RPMI 1640 (Sigma-Aldrich, Bornem, Belgium) 에 저장하였다.
CLC 결정의 존재 및 동정을 보이기 위하여, 갈랙틴-10 에 대한 면역 형광 염색(immunofluorescence staining) 이 수행 되었다. 수집된 알레르기성 뮤신은 4% 파라포름 알데히드 (paraformaldehyde)로 고정하고 및 파리핀 (paraffin) 에 박아 넣었다. 박힌 뮤신의 조직 슬라이드 (5 μm)를 자르고, 자이랜 (xyleen) (3x 10분)을 사용하여 파라핀을 제거하고 및 감소 되는 농도의 에탄올 (100%, 90%, 60%, 30%, 0% 에탄올, 2분/단계)에 단계별 담금으로 재수화 (rehydrate) 시켰다. 재수화 후에 슬라이드는 PBS에 5분 동안 담그고 및 이어서 1시간 동안 0.05% 트립신 (trypsin)-EDTA (Life Technologies)와 37° C 에서 습윤 챔버 (moist chamber) 에서 배양하였다. PBS (Life Technologies)로 10분 동안 세척 후에, 슬라이드는 1시간 동안 차단 버퍼 (blocking buffer) ((7.5% BSA (Sigma Aldrich) PBS에서))로 실온에서 습윤 챔버에서 배양시켰다. 이어서, 슬라이드는 하룻밤 동안 4° C에서 항-인간 갈랙틴-10 항체 (anti-human galectin-10 antibody) (Clone EPR11197, Abcam, 차단 버퍼에서 1/200 희석)와 배양시켰다. 그 다음 날, 슬라이드는 PBS로 10분 동안 세척시키고 및 FITC 라벨 된 2차 염소 항-토끼 항체 (FITC labeled secondary goat anti-rabbit antibody) (A11034 Life Technologies, 1/400 희석) 로 배양하였다. 10분 동안 PBS로 세척 후에, 슬라이드는 DAPI를 함유하는 벡타쉴드 (Vectashield)로 고정했다 (mounted). 슬라이드는 어두운 곳에 보관하고 및 공초점 레이저-스캔 현미경 (confocal laser-scanning microscope) (Leica) 으로 그 다음 날 분석 하였다. 이는 갈랙틴-10에 대하여 면역 반응성인 다량의 바늘 모양의 결정의 존재를 보여주었다 (도 2B).
생체 외 (ex vivo ) 결정학을 위한 결정을 정제하기 위하여, 배지는 버리고 및 1g의 점액을 항생제 ((50IU/mL 페니실린 (penicillin) 및 50mg/mL 스트랩토마이신 (streptomycin); Invitrogen), 0.1% BSA (Sigma) 및 1mg/ml 콜라겐 유형 2 (Collagen type 2) (Worthington) 를 함유하는 10ml RPMI 1640 (Sigma-Aldrich, Bornem, Belgium) 에서 철저히 잘랐다. 점액은 더 나아가 GentleMACS Dissociator (Myltenyi Biotec) 를 사용하여 균질화 (homogenized) 시키고 및 이어서 37° C에서 연속적인 회전 하에서 45분 동안 배양시켰다. 배양 후에, 부분적으로 용해된 점액은 GentleMACS Dissociator (Myltenyi Biotec) 로 균질화 (homogenized) 시키고 및 실온에서 400g로 7분 동안 원심분리시켰다. 원심분리 후에 상등액은 버리고 및 펠렛 (pellet)은 50IU/ml 페니실린 (penicillin) 및 50mg/ml 스트랩토마이신 (streptomycin) (Life technologies)을 함유하는 3ml PBS (Life technologies)에 용해했다. 3ml의 분리된 액체는 6ml 피콜-패크 (Ficoll-Paque) (GE Healthcare) 와 혼합하고 및 250g에서 10분 동안 원심분리시켰다. 상등액 및 대부분의 피콜 층을 제거한 후, 항생제가 있는 2.8 ml PBS를 튜브 바닥에 남아 있는 액체 (200 μl)에 첨가하였다. 이 침전 과정을 5번 더 반복하였다. 튜브 바닥에 남아 있는 결정을 함유하는 마지막 액체는 항생제가 있는 2ml PBS에 재현 탁 시키고 및 200g에서 5분 동안 원심분리시켰다. 대부분의 상등액은 제거하고 및 항생제가 있는 800 μl PBS를 튜브 바닥에 남아 있는 200μl 액체에 있는 결정에 첨가하였다. 고정된 크리오 루프 (mounted cryoloops) 를 사용하여 용액으로부터 단일 결정을 수확하였다 (도 2C). 액체 질소에 순간-냉동 (flash-freezing) 하기 전에 결정은 35% (v/v) 글리세롤 (gycerol) 로 보충된 PBS에 잠깐 담가 항 냉동 (cryoprotected) 시켰다. 100K 에서 굴절 실험 (Diffraction experiments) 은 PetraIII (DESY, Hamburg, Germany)의 빔 라인(beamline) P14에서 수행되었다. 모든 데이터는 XDS suite (Kabsch, 2010) 를 사용하여 통합되고 및 계량 (scaled) 되었다. 분자 교체 (Molecular replacement) (MR) 는 갈랙틴-10 구조 (PDB 1LCL) 에 근거하여 조사 모델 (search models) 을 사용하여 Phaser (McCoy et al., 2007)로 수행되었다. 모델 (재)빌딩은 COOT (Emsley et al., 2010) 에서 수행되었으며 및 각 코디네이트 (coordinate) 및 ADP 개선 (refinement)은 PHENIX (Adams et al., 2010) 및 autoBuster (Bricogne et al., 2017) 에서 수행되었다. COOT 및 PHENIX suite 에서 모델 및 맵 평가 툴 (tool)이 결정학적 모델의 질 개선 및 평가를 안내하기 위하여 이 일을 하는 동안 내내 사용되었다. 이 방법을 사용하여, 코 폴립스로 고통받고 있는 환자로부터 분리된 인간 CLC 결정의 구조가 단일 결정 X-레이 굴절을 사용하여 신크로톤 방사선 (synchrotron radiation) (2.2 Å 해상도) 을 사용하여 측정되었다 (도 2D, 2E, 표 17). 얻은 결정구조는 재조합 갈랙틴-10 결정 (1.4 Å 해상도), 및 호산구 용해 및 시험관 내 (in vitro) 에서 결정화로 얻은 (pdb 1LCL, 1.8 A) (Leonidas et al., 1995) 발표된 갈랙틴-10 결정의 구조와 비교되었다. 결과로 얻어진 분석은 이 세 개 모두의 갈랙틴-10 결정 형태는 비슷한 유닛 셀 계수를 (표 17) 가진 공간 군 (space group)P 6522 에 속하는 것을 보였다. 더욱이, E. colic 에서 생산된 재조합 갈랙틴-10 및 인간 호산구 세포주 (human eosinophilic cell line) (pdb 1LCL) 로부터 얻은 갈랙틴-10의 원자 구조는 사실상 인간 CLC 결정 (RMSD < 0.2Å) 에 있는 갈랙틴-10 구조와 동일한 것으로 간주 될 수 있다 (도 2F).
실시 예시 3. 비-자동결정화
갈랙틴
-10
변이체
,
갈랙틴
-10-
Tyr69Glu
의 생산 (Production of a non-
autocrystallizing
galectin
-10 variant,
galectin
-10-Tyr69Glu).
갈랙틴-10의 비-자동결정화 변이체를 생산하기 위하여, 보고된 갈랙틴-10 구조 (PDB 1LCL) 에 대한 크리스탈 패킹 상호작용 (crystal packing interactions) (도 3A 및 도 3B) 이 분석 되었다. 결정 격자에서 이웃하는 갈랙틴-10-Tyr69 잔기와 크리스탈 패킹 상호작용에 관여하는 잔기 Tyr69를 자동결정화의 잠재적으로 주요 잔기로서 선택하였다 (도 3A). 따라서, Tyr69Glu (Y69E) 치환을 지닌 갈랙틴-10의 변이체가 야생형 갈랙틴-10과 동일한 프로토콜에 따라 재조합적으로 생산되었다. 잠재적으로 비-자동결정화되는 갈랙틴-10의 변이체를 생산하기 위하여, 퀵체인지 위치-지정 돌연변이생성 (Quickchange site-directed mutagenesis) (Agilent)을 사용하여 잔기 Tyr69 를 글루타메이트 잔기 (glutamate residue)로 변이시켰다. 돌연변이 생성 PCR을 위해, 하기의 전방 (forward)및 역방향 (reverse) 프라이머가 사용되었다, FP:ATGAACTCTCGTGAAGAAGGTGCATGGAAACAG (서열번호 154) 및 RP: CTGTTTCCATGCACCTTCTTCACGAGAGTTCATC (서열번호 155). pET28a-갈랙틴-10 (pET28a-galectin-10) 플라스미드가 주형 (template) 으로 사용되었다. 결과의 플라스미드 pET28a-갈랙틴-10-Y69E 가 BL21(DE3) 세포를 형질전환시키기 위하여 사용되었다. 단백질 생산 및 정제는 야생형 갈랙틴-10에 비교한 것과 동일하였다. 갈랙틴-10-Y69E의 N-말단 태그를 TEV-매개로 제거한 후, His-태그 된 TEV는 소화 혼합물을 PBS를 실행 버퍼 (running buffer)로 하여 Ni-세파로즈 컬럼 (Ni-sepharose column) 에서 실행시켜 (run) 제거하였다. 다음, 갈랙틴-10-Y69E을 함유하는 컬럼 통과액 (column flow-through)은 농축시키고 및 HiLoad 16/600 Superdex 200 pg 컬럼에 주사하였다. 갈랙틴-10-Y69E에 해당하는 SEC 용출 분획은 수집하여 모으고 및 -80° C에서 저장하였다. 엔도톡신-수준 (endotoxin-levels) 은 Endosafe-PTS 시스템 (Charles River) 으로 5 EU mg-1 재조합 단백질보다 더 낮게 측정되었다. TEV 처치 후, Y69E 갈랙틴-10 돌연변이 단백질 (mutein)은 야생형 갈랙틴-10에 비교하여 자동결정화되지 않음이 발견되었다 (도 3C). 비슷한 방법에 따라서, 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface) 에서 예상되는 중요성에 근거하여 몇 가지 다른 결정화 저항성 돌연변이 단백질이 만들어졌다 (도 3C). SEC-MALLS 분석은 또한, Y69E 변이체가 용액에서 이량체 (dimer)임을 보여주었다. 결정된 분자량은 32.6 kDa 이었으며, 이는 TEV-절개된 이량체 갈랙틴-10-Tyr69Glu (TEV-cleaved dimeric galectin-10-Tyr69Glu) (33.2 kDa) 와 이론적인 분자량과 비슷하게 일치한다.
비-자동결정화 갈랙틴-10-Y69E 돌연변이 단백질의 결정 구조도 또한 얻어졌다. 이를 위해 갈랙틴-10-Y69E은 결정화 실험 전에 6 - 7mg/mL로 농축시켰다. 시팅-탑 나노리터-스케일 증기 확산 결정화(Slitting-drop nanoliter-scale vapour diffusion crystallization) 실험이 293K에서 모스퀴토 결정화 로봇 (Mosquito crystallization robot) (TTP Labtech) 및 상업적으로 구입 가능한 세파스-매트릭스크린 (sparse-matrix screens) (Molecular Dimensions, Hampton research)을 사용하여 세트업 되었다. 돌연변이 갈랙틴-10-Y69E-돌연변이 단백질의 결정이 PEG/Ion 스크린 ((Hampton Research - 0.2 M 암모늄 시트레이트 (ammonium citrate) pH 5.1, 20% PEG3350))의 D12 컨디션에서 24시간 후에 나타났다. 액체 질소에 순간-냉동하기 전에 갈랙틴-10-Y69E 결정은 25% PEG 400으로 보충된 모액 (mother liquor)에 잠시 담구어 항-냉동(cryoprotected) 시켰다.
X-레이 결정학으로의 갈랙틴-10-Tyr69Glu (galectin-10-Tyr69Glu) 분석은 비-자동결정화 변이체는 pdb 1LCL 에서 결정학적 갈랙틴-10 이량체와 (RMSD < 0.3 Å) 사실상 같은 구조를 취하고 있는 것을 보여준다 ) (도 3D 및 F, 표 17).
용해성 돌연변이 단백질의 용액에서의 구조도 또한 용액에서의 작은-각도 X-레이 산란 (small-angle X-ray scattering in solution) (SAXS)을 사용하여 연구되었다. 이 목적을 위하여 SAXS 데이터는 SOLEIL 싱크로트론 (Synchrotron) (Gif-sur-Yvette, France) 에서 SWING 빔 라인 (beam line) 으로 측정되었다. 50 μl 의 갈랙틴-10-Tyr69Glu가 300 Å 구멍 크기의 애질런트 (Agilent 4.6 x 300mm Bio SEC-3) 컬럼에 주사되었으며 및 HBS pH 7.4를 실행 버퍼로 (running buffer) 흐름 속도 0.3 ml min-1로 15 °C 에서 실행되었다. X-레이 산란 데이터는 프레임당 1s 노출 시간으로 연속적인 흐름 모드에서 수집되었다. 데이터는 운동량 전달 범위 (momentum transfer range) 0.0066 Å-1 < q < 0.609 Å-1, q = 4πsinθ/λ 내에서 기록되었다. 미가공 데이터는 Foxtrot v3.3.4 (Synchrotron SOLEIL 에서 개발되었으며 및 Xenocs, Sassenage, France에 의해 제공) 를 사용하여 방사상으로 평균화되었으며 및 버퍼 삭감되었다. 데이터의 질은 용출 피크의 길이에 대비한 회전 반경의 안정성을 체크 하고 및 모든 커브를 가장 강도 높은 산란 프로파일에 스케일링하여 Foxtrot으로 분석되었다. 최종 산란 커브는 용출 피크의 꼭대기에 해당하는 255 - 268프레임으로부터, 스케일 되지 않은, 버퍼-삭감된 산란 프로파일을 평균화하여 얻었다. 구조적 계수는 ATSAS suite version 2.8.3 (Franke et al., 2017)로 결정되었다. 분자량 추산은 DATMW를 사용하여 포로드 부피 (Porod volume) (Petoukhov et al., 2012), 상관관계 부피 (volume of correlation) (Rambo et al., 2013) 및 분명한 부피 (apparent volume) (Fischer et al., 2010) 에 근거한 방법으로 계산되었다. 이량체 갈랙틴-10-Tyr69Glu의 이론적인 SAXS 프로파일은 결정된 X-레이 구조로부터 계산되었으며 및 FoXS server (Schneidman-Duhovny et al., 2016) 를 사용하여 실험적 데이터에 맞추었다. 오차-무게 잔류 차이 플롯 (error-weighted residual difference plot)이 D/s = [Iexp(q) - cImod(q)]/s(q) 대비 q (Trewhella et al., 2017)로 계산되었다. SAXS 분석은 X-레이 결정학으로 얻은 이량체 조립 (dimeric assembly) 은 용액 상의 구조에 해당하는 것으로 나타났다 (도 3E).
실시 예시 4.
CLCs는
생체 내에서 선천성 면역 반응을 유도한다 (
CLCs
induce an innate immune response
in
vivo
)
갈랙틴-10 결정이 생체 내 (in vivo ) 에서 폐 염증을 촉진하는가를 조사하기 위하여, 순수한 C57Bl/6 생쥐 (Janvier) 에 갈랙틴-10 또는 대조군 갈랙틴-10-Tyr69Glu 돌연변이 단백질이 기관지 내 주사로 되었다. 이를 위해, 생쥐는 이소플루란 (isoflurane) (2l/min, 2-3%; 05260-05, Abbott Laboratories)으로 마취시키고 및 그 후 기관지 내로 (intratrachally) (i.t.) 100 μg 갈랙틴-10 결정 또는 용해성 대조군 갈랙틴-10-Tyr69Glu 돌연변이 단백질이 (80 μl PBS에서) 주사되었다. 6 및 24시간 후에, 생쥐는 CO2 흡입으로 안락사시키고 및 폐가 수집되었다. 단일 세포 현탁액을 얻기 위하여, 폐는 먼저 가위로 자르고 및 그 후 37° C 에서 30분 동안 리버레이즈 (LiberaseTM ) (1:50; 05 401 127 001, Sigma-Aldrich) 및 DNase I (1:1000; 04 536 282 001, Sigma-Aldrich)을 함유하는 RPMI-1640 (Thermo Fisher Scientific)에서 소화시켰다. 얻어진 현탁액은 70 μm 필터를 통해 여과시키고 및 RBC 용해 버퍼 (0.15 M NH4Cl, 1 mM KHCO3, 0.1 mM Na2EDTA in MilliQ H2O) 로 RBC를 고갈시켰다. 단일 세포 현탁액은 유동 세포 분석을 위해 염색하였다. 다음의 항체들이 사용되었다: 항-CD3e FITC (145-2C11) (35-0031-U500, Tonbo Biosciences), anti-CD19 FITC (1D3) (35-0193-U500, Tonbo Biosciences), 항-CD11c FITC (HL3) (553801, BD Biosciences), 항-Siglec-F PE (552126, E50-2440) (BD Biosciences), anti-CD127 PE-CF594 (SB/199) (562419, BD Biosciences), 항-CD25 PE-Cy7 (PC61.5) (25-0251-82, ThermoFisher Scientific), 항-CD11b BD Horizon V450 (M1/70) (560455, BD Biosciences), 항-CD45 BV605 (30-F11) (563053, BD Biosciences), anti-CD90.2 APC (52-2.1) (17-0902-82, ThermoFisher Scientific), 항-Ly6G AF700 (1A8) (561236, BD Biosciences), 및 항-CD117 APC-eFluor780 (2B8) (47-1171-82, ThermoFisher Scientific). 생존 세포는 eBioscienceTM Fixable Viability Dye eFluorTM506 (ThermoFisher Scientific)를 사용하여 분별 되었다. 비특이성 항체 결합을 차단하기 위하여 Fc Block 2.4.G2 (1:600, Bioceros)가 사용되었다. 세포 표면 마커는 30분 동안 4o C 어두운 곳에서 염색되었다. 123 count eBeadsTM Counting Beads (ThermoFisher Scientific) 가 각 샘플에 첨가되었다. UltraComp eBeadsTM Compensation Beads (ThermoFisher Scientific) 를 사용하여 세팅이 완료되었다. 데이터는 BD LSRFortessa에서 수집되었으며 및 FlowJo 소프트웨어로 (software) (Tree Star Incorporation) 로 분석되었다.
6시간 후에, 갈랙틴-10 결정을 투여받은 생쥐의 기도에서 강력한 호중구의 유입이 있었으나 용해성 갈랙틴-10-Y69E 돌연변이 단백질 또는 대조군 PBS 용액을 받은 생쥐는 그렇지 않았다 (도. 4A). 24시간 후에 갈랙틴-10 결정을 투여받은 쥐의 기도에서 강력한 단핵구의 유입이 있었으나 용해성 갈랙틴-10-Y69E 돌연변이 단백질 또는 대조군 PBS 용액을 받은 생쥐는 그렇지 않았다 (도. 4A).
갈랙틴-10 결정을 투여받은 생쥐에서 전-염증성 사이토카인 (pro-inflammatory cytokines)의 생산도 또한 측정되었다 (도 4B 및 C). 케모카인 CCL-2도 또한, 측정되었다 (도 4C). 생쥐는 펜토바르비탈 (pentobarbital)의 과량으로 안락사시키고 및 0.01 mM EDTA를 함유하는 1ml의 PBS를 주사하여 기관지폐포 세척 (bronchoalveolar lavage) (BAL) 을 수행하였다. 이어서, BAL은 돌려서 침전시키고 (spun down) (400g, 5분, 4° C) 및 상등액은 -20° C에서 저장시켰다. 폐 조직 용해액도 또한, 생산되었다. 사이토카인 분비를 평가하기 위하여 터모휘셔 사이언티픽회사 (ThermoFisher Scientific) 로부터의 Ready-Set-Go ELISA 키트를 사용하였다. 평편한 바닥 96 반 면적 웰 플레이트 (flatbottom 96 half area well plate) (Greiner)를 웰당 50 μl의 1x 코팅 버퍼 (coating buffer) (00-0000-53, ThermoFisher Scientific)로 희석시킨 캡처 항체 (capture antibody)로 코팅하였으며 및 4° C에서 하룻밤 동안 배양시켰다. 다음의 항체들이 사용되었다: 항-생쥐 IL-1β 캡처 항체 (capture antibody) (1:250; 14-7012-68A); 항-생쥐 IL-6 캡처 항체 (1:250; 14-7061-68); 항-생쥐 TNFα 캡처 항체 (1:250; 14-7423-68), 상업적 제공자 터모휘셔 사이언티픽 (ThermoFisher Scientific) 설명서를 사용하였다. 웰당 50 μl 샘플, 표준 ((생쥐 IL-1β 표준 (39-8012-60); 생쥐 IL-6 표준 (39-8061-60); 생쥐 TN α 표준 (39-8321-60), 모두 ThermoFisher Scientific)) 및 블랭크( blank) 는 2개로 첨가되었다. 배양 및 세척 후에, 1x 에세이 희석액으로 희석된 웰 당 50 μl의 검출 항체 ((바이오티닐레이트된 항-생쥐 IL-1β 검출 항체 (biotinylated anti-mouse IL-1β detecting antibody (1:250; 13-7112-68A); 바이오티닐레이트된 항-생쥐 IL-6 검출 항체 (biotinylated anti-mouse IL-6 detecting antibody) (1:250; 13-7062-68A); 바이오티닐레이트된 항-생쥐 TNFα 검출 항체 (biotinylated anti-mouse TNFα detecting antibody )(1:250; 13-7341-68A)) 모두 ThermoFisher Scientific로부터))가 첨가 되었고, 이어서 실온에서 1시간 동안 더 배양시켰다. 이어서, 웰은 세척시키고 및 에세이 희석액으로 희석시킨 스트렙타빈-HRP 시약이 (streptavidin-HRP reagent) (1:250; 00-4100-94, ThermoFisher Scientific) 첨가되었다. 실온에서 30분 동안 배양 후에, 웰은 세척시키고 및 TMB 기질 용액이 (00-4201-56, ThermoFisher Scientific) 첨가되었다. 반응은 2.5 N H2SO4로 정지시키고, 및 450nm에서 흡광도를 Perkin Elmer Multilabel counter로 측정하였으며 및 데이터는 Wallac 1420 Manager 소프트웨어 software)로 수집되었다. CCL-2 수준 측정을 위하여, 이바이오사이언스 (eBioscience)로부터의 생쥐 CCL2 (MCP-1) ELISA Ready-SET-Go!TM 키트로 제조회사의 안내에 따라 사용되었다 (cat no. 50-112-5204).
갈랙틴-10 결정의 주사는 6시간 후에 IL-6 및 TNF-α 생산을 수반하였으며, 반면에 IL-1β의 유도는 BAL 샘플에서 관찰되지 않았다 (보이지 않음). 대조군 용해성 갈랙틴-10-Tyr69Glu 돌연변이 단백질 또는 PBS는 사이토카인 생산을 유도하지 않았다 (도 4B).
갈랙틴-10 결정의 주사는 또한 폐 조직에서 대량의 IL-1β 및 CCL-2의 생산을 수반하였다 (도 4C).
실시 예시 5.
CLCs에
의해 유도된 선천성 면역반응은 생체 내에서
Nlrp3
염증조절복합체(inflammasome)에 의존하지 않는다 (The innate immune response induced by
CLCs
is not dependent on the
inflammasome
in
vivo
)
많은 무기 및 유기 결정은 Nlrp3 염증조절복합체(inflammasome) 촉발을 통해, ASC 어탑터 (adaptor) 영입을 초래하고, ASC spec 을 형성하고 및 전-IL1β 프로세싱을 (pro-IL-1β processing) 위해 캐스파제 1 (caspase 1) 활성을 초래하여 염증 세포로부터 IL-1β 분비를 끌어내는 잠재력이 있다 (Kool et al., 2011). 최근 BioRxIv (bioRxiv 252957; doi: https://doi.org/10.1101/252957)에 발표된 최근논문은 인간 호산구 세포 주로부터 정제된 차코트-레이댄 결정 (Charcot-Leyden crystals)이 시험관 내에서 Nlrp3 염증조절복합체를 촉발시킬 잠재력이 있다고 보고하였다. 그러나 이는 결정 유도된 염증이 생체 내에서 NLRP3 의존적인지에 대하여 보고하지 않았으며, 이는 염증조절복합체가 치료적 타겟이 될 것을 보여주었다. 염증은 실시 예시 4 에서 처럼 24시간에 조사되었다. Nlrp3 -/-, 또는 Casp1 /11 -/- 생쥐의 기도에 갈랙틴-10 결정이 주사되었을 때, 야생형 한배 새끼 C57Bl/6대조군 생쥐에 비교하여 결정-유도된 세포 유입의 감소는 없었다 (도 5). 그러므로 염증조절복합체의 억제는 생체 내에서 CLC-유도된 염증을 억제하는데 성공적이지 않은 것 같다.
실시 예시 6.
CLCs에
의해 유도된 선천성 면역반응은
Tlr4
독립적이다 (The innate immune response induced by
CLCs
is independent of
Tlr4
).
재조합 갈랙틴-10 결정이, 세포벽에 박테리아 엔도톡신 (endotoxin)을 가지고 있는 E coli 에서 생산된 갈랙틴-10 단백질로부터 생산되었다. 엔도톡신 (endotoxin)은 폐에서 선천성 면역 반응을 촉발시킬 수 있기 때문에, 기도의 염증을 유도하는 갈랙틴-10 결정에의 엔도톡신 오염의 잠재적 중요성을 검사하는 것은 중요하다. 이런 이유로, 엔도톡신 수용체가 없는 Tlr4 -/- 생쥐에서 갈랙틴-10 결정의 면역 반응이 조사되었다. 염증은 실시 예시 4와 같이 조사되었다. 이들 생쥐에서, 주사 후 24시간에 야생형 한배 새끼 C57Bl/6대조군 생쥐에 비교하여 결정-유도된 호중구 기도 염증은 없었다 (도 6).
실시 예시 7.
갈랙틴
-10 결정은 인간 천식으로부터의
PBMCs를
받은 인간화 생쥐에서 기도 염증 및
IgE
합성을
모사한다
(
Galectin
-10 crystals simulate airway inflammation and
IgE
synthesis in humanized mice receiving
PBMCs
from human asthmatics.
생쥐는 갈랙틴-10을 암호화하는 LGALS10을 가지고 있지 않으므로, 갈랙틴-10은 생쥐 면역 시스템에서는 새로운 항원이다. 그러므로 인간 집 먼지 진드기 (human house dust mite)(HDM) 알레르기성 천식 공여자의 면역 시스템을 지닌 인간화 생쥐에서 실험이 세워졌다. PBMCs를 수집하기 위하여, 집 먼지 진드기 알레르기성 환자로부터 50ml 혈액이 EDTA-코팅된 튜브에 수집되었다. 혈액은 RPMI 1640 (v/v)에서 희석시키고 및 12ml 피콜 (Ficoll)에 올려놓았다. 원심분리 후 (1200g, 20분, 실온에서), PBMCs가 수확되고 및 PBS로 세척하였다. 죽은 세포를 제거하기 위하여 세포는 트리판 불루 (trypan blue)를 사용하여 세었다. PBMCs는 PBS에 15x106 cells/ml 농도로 재현탁시켰다. 0일에 NOD Rag -/- ηc-/- (NRG) 생쥐는 3x106 PBMCs의 복강 내 주사로 재조성 (reconstituted) 되었다. 1-4일 및 7-9일에, 모든 생쥐에 50 μl의 PBS로 희석된 20 μg of HDM 추출물(Greer)이 기관지 내로 주사되었다. 갈랙틴-10 결정의 전-염증성 효과를 평가하는 실험에서는, 1, 3, 7 및 9일째 날에 생쥐는 다음의 용법으로 처치되었다 (도 7A) : 용법 1, PBS 대조군 30 μl; 용법 2, 100 μg의 재조합 갈랙틴-10 결정 (1 μl의 스톡) 30 μl의 PBS에 희석; 용법 3, 100 μg 재조합 갈랙틴-10-Tyr69Glu 돌연변이 단백질 (1 μl의 스톡) 30 μl의 PBS에 희석).
27일째 날에, 모든 생쥐는 80 μl의 PBS에 희석시킨 20 μg의 HDM 추출물을 (Greer) 기관지 내로 최종 한번으로 촬렌지시켰다 (challenged). 모든 생쥐는 28일째 날에 복강으로 주사된 과량의 펜토바르비탈을 사용하여 희생시켰다. 생쥐는 엉덩 정맥을 통해 출혈시켰다. 혈액은 건조 튜브에 수집되었다. 이 튜브는 원심분리시켜 (5000 rpm 10분 동안) 혈청을 얻었다. 단일 세포 현탁액을 얻기 위하여, 외쪽 폐가 수집되었으며, 홍채절제 (iridectomy) 가위를 사용하여 잘게 자르고, PBS에서 100μm 메쉬(mesh)로 균질화 (homogenized) 시키고, 과량의 PBS를 첨가하여 세척시키고, 및 400g에서 7분 동안 원심분리시켰다. 펠렛은 PBS에 재현탁시키고 및 더 나아가 사용할 때까지 (유동 세포 분석) 얼음에 보관하였다.
오른쪽 폐의 상부 엽 및 하부 엽은 조직학을 위해 파라핀에 묻어두기 전에 4% PFA에 고정했다. 오른쪽 폐의 중엽은 OCT 에 묻어두qRT-PCR고 및 더 나아가 사용할 때까지 (qRT-PCR 및 면역형과) -80 도 에서 얼렸다.
인간 세포를 검출하기 위하여, 생쥐 왼쪽 폐로부터의 단일 세포 현탁액은 APC-라벨 된 항-인간 CD45로 20분 동안 4도에서 배양시켰다. 죽은 세포는 죽은 세포염색 키트 (Aqua Live/Dead fixable dead cell stain kit) (BD)를 사용하여 염색하였다. PBS로 세포를 세척한 후에, 15000 카운팅 비드 (counting beads) 가 각 샘플에 첨가되었다. 세포는 그 후 Fortessa (BD)에서 유동 세포분석 분석되었다. 사용된 Abs 어느 것도 쥐 조직과 교차-반응 (cross-react) 하지 않았다.
인간 IgE 농도가 인간 IgE 코트 되지 않은 ELISA 키트 (Human IgE uncoated ELISA kit) (ThermoFischer)를 사용하여 NRG 생쥐의 혈청에서 측정되었다. 간단하게, ELISA 플레이트는 항-인간 IgE 항체 (anti-human IgE antibodies)로 코팅 버퍼에서 4도에서 하룻밤 동안 코팅하였다. 과량의 PBS-0.05% Tween 20으로 세척한 후에, ELISA 플레이트는 2시간 동안 실온에서 제조사에서 제공한 차단 버퍼 (blocking buffer)로 차단 시켰다. 세척 후에, IgE 표준 (IgE standards) ((1:2 시리즈 희석 (serial dilution))은 물론 NRG 생쥐로부터의 혈청을 플레이트에 (차단 버퍼에서 1:5 희석) 첨가시키고, 및 2시간 동안 배양하였다. 검출 항체 (detection antibody)를 1시간 동안 실온에서 첨가시켰다. 모든 웰에 TMB 기질을 첨가하여 인간 IgE의 존재를 나타내었다. 플레이트는 450nm에서 스펙트로포토미터 (spectrophotometer)에서 읽었다.
28일 후에, 기도에 인간 CD45+ 세포 유입 (influx)(도 7B), 및 인간 IgE 합성 (도 7C)은 HDM 촬렌지 기간 동안에 갈랙틴-10 결정을 4번 주사를 받은 생쥐에서 갈랙틴-10-Tyr69Glu 돌연변이 단백질을 받은 생쥐 또는 PBS를 받은 생쥐에 비교하여 상당히 더 높았으며, 이는 갈랙틴-10 결정은 폐에서 인간 세포의 유입을 증가시키고 및 HDM 알레르기성 공여자의 면역 시스팀으로 재구성된 생쥐 천식 모델에서 IgE 합성을 증가시키는 것을 보여준다.
실시 예시 8.
갈랙틴
-10 항체의 생산 (Production of
galectin
-10 antibodies
A. 라마 면역화 (Immunization of llamas)
두 마리 라마 (llamas) (llama glama), 유니고 (Ynigo) 및 모토요 (Montoyo) 라고 명명, 에 갈랙틴-10 결정으로(1mg/dose/llama) 근육 내로 단백질 면역화시켰다. 단백질 면역화는 0일에 시작하고 및 갈랙틴-10 결정은 매 14일마다 총 3번 주사로 투여되었다 (총 5주). 마지막 면역화 후 5일에 400ml의 혈액이 면역화시킨 라마에서 수집되었으며 및 RNA 추출을 하게 하였다.
두 마리 면역화시킨 라마의 면역 반응을 측정하기 위하여, 효소-연결된 면역흡수 에세이 (enzyme-linked immunosorbent assay) (ELISA) 세트업이 사용되었다. enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). ELISA를 위하여, 균질한, 비-결정화형태의 갈랙틴-10이 사용되었다.
ELISA를 수행하기 위하여, 맥시솝 (Maxisorp) 플레이트를 갈랙틴-10 (100 μg/mL) 으로 코딩하고 및 카제인(casein)으로 차단했다. 면역화 전- 및 후- 라마 혈청의 시리즈 희석액을 플레이트 각 웰에 첨가하였다. 그 후 코팅된 갈랙틴-10에 결합한 라마 IgG1를 생쥐 항-라마 CH1 특이 항체 (10D12)로 검출하였으며, 및 검출은 항-생쥐 IgG-HRP ((DAMPO)로 인식되었다. 마지막으로, TMB의 첨가 후, 반응은 0.5M H2SO4로 정지시키고 및 흡광도는 450nm (Tecan Sunrise, Magellan software)에서 측정하였다. 면역화된 라마는, 단지 3회의 주사만 수행되었어도 둘 다 갈랙틴-10에 대해 강력한 면역 반응을 보였다.
B. 라이브러리 구축 (Library construction)(scFv)
scFv 라이브러리는 다음과 같이 제작되었다. mRNA는 면역화된 라마의 혈액으로부터 분리된 PBMCs로부터 정제하였다. m RNA는 무작위 핵사머 프라이머 (random hexamer primers) 로 역전사시켜 cDNA를 얻었다. 중 쇄 및 경 쇄 라이브러리를 구성하기 위하여, 2-단계 PCR이 수행되었다, 첫 번째, VH-CH1, VL-CL 및 Vk-Ck 부위를 증폭하기 위하여 태그 되지 않은 프라이머를 직접 cDNA에 사용하였다. PCR 생산물은 그 후 정제되었고 및 VH, VL 및 Vk을 증폭하기 위하여 두 번째 PCR에 태그 된 scFv 프라이머와 함께 사용되었으며 및 이들은 파지미드 벡터 (phagemid vector)에 별도로 클론되어 "람다 (Lambda)" 및 "카파 (Kappa)" 라마 scFv (llama scFv)가 각각 만들어졌다. scFv 융합 단백질은 (G4S)3 링커 ((글라이신 (lysine) 및 세린 (serine) 잔기))에 의해 연결된 VH 및 VL 서열로 구성되며 크기는 약 25 kDa 정도이다. scFv 라이브러리를 만드는 선택은 scFv 단편이 Fabs보다 파지 (phaage)의 끝 (tip)에 단백질 III 융합으로서 더 잘 발현된다는 사실에 근거하였다. 이는 파지 디스플레이 선택 (phage display selection) 동안에 수율 및 다양성이 좀 더 좋은 파지 라이브러리의 결과를 가져온다. 그러나, scFv 단편은 응집체를 형성하는 경향이 있고, 이는 항체 결합력 효과 때문에, 분명한 좀 더 좋은 친화력을 생기게 할 수 있다. scFv 형태 (format)의 항체 단편은 IPTG 유도로 E. coli 박테리아의 원형질막 주위 공간 (periplasmic space) 으로 분비될 수 있다.
고정화시킨 갈랙틴-10에 대한 세 번의 선택으로 특정한 갈랙틴-10 scFv 단편을 발현하는 파지를 강화시켰다.
갈랙틴-10에 특이적인 적절한 scFv 클론의 초기 선택은 바이오패닝 방법 (biopanning approach)에 의해 수행되었다. 간단하게, 갈랙틴-10-HIS를 맥시솝 ELISA 플레이트 (Maxisorp ELISA plates)에 고정시키고, 그 후 scFv 파지 라이브러리 (scFv phages library) ((투입 (Input)) 를 첨가하였다. 결합하지 않은 파지는 몇 번의 세척 단계를 거처 제거시켰다. 마지막으로, 결합한 파지는 트립신 (Trypsin)으로 용출시켰으며 (elute) 및 선택된 파지를 증폭하기 위하여 E. coli 감염이 수행되었다. 이 과정은 항-갈랙틴-10에 높은 친화력을 가진 scFv를 발현하는 파지 집단의 강화의 결과를 가져왔다. 선택 과정의 끝에, 용출된 파지의 수는 앰피실린 (ampicillin) 및 글루코오즈 (glucose)가 있는 고체 LB 배지를 함유하는 페트리 디쉬 (Petri dishes)에 스폿 된 감염된 E. coli (10-1 to 10- 6)를 적정하여 추산하였다. 두 마리 라마로부터의 람다 (Lambda) 및 Kappa (카파) 라이브러리의 첫 번째 선택과정에서 특정한 항-갈랙틴-10 파지는 적게 강화되는 결과를 가져왔다. 두 번째 및 세 번째 선택 과정에서는 갈랙틴-10에 아마도 더 높은 친화력을 가진 scFv를 발현하는 파지의 강화의 결과가 되었다.
두 번째 선택 과정((카파(Kappa) 및 람다(Lambda) 라이브러리 대비 5 μg/mL의 갈랙틴-10)) 및 세 번째 선택 과정 ((카파(Kappa)라이브러리 대비 0.2 μg/mL 및 람다 (Lambda) 라이브러리 대비 0.02 μg/mL))의 결과로부터, 단일 클론이 만들어졌으며 및 6개의 마스터 플레이트 (Master plates)의 창출의 결과가 얻어졌다. 이 마스터 플레이트로부터, 세포질 마스터 플레이트 (periplasmic master plates) (PMP)가 생산되었다. 이 목적을 위해, 마스터 플레이트로부터의 단일 클론은 먼저 96웰 형태 (깊은 웰)에서 증폭되고, 및 scFv의 생산은 IPTG로 하룻밤 동안 배양하여 유도되었다. 다음날, 박테리아는 두 번의 냉동/해동 (-80°C 및 -20°C)사이클로 용해시켰다. 원심분리 후, 상등액은 (세포질 추출물) 수집되고 및 결합 능력을 검사하기 위하여 (ELISA 및 Biacore) 별도의 96 웰 플레이트로 옮겼다.
C. ELISA에 의한 scFv 세포질 추출물 스크리닝 (Screening of the scFv periplasmic extracts by ELISA).
scFvs의 갈랙틴-10에 대한 결합능력을 검사하기 위하여, ELISA 결합 에세이가 설정되었다. 간단하게, 맥시솝 플레이트(maxisorp plate)는 용해성 갈랙틴-10 (soluble galectin-10) (1 μg/mL)으로 코팅하고, 그 후 scFv-Myc를 함유하는 세포질 추출물(PBS로 1/5로 희석)로 배양하기 전에, 카제인 (Casein)으로 차단하였다. 결합자 (binders)의 검출은 항-Myc-HRP 항체 (anti-Myc-HRP antibody)로 수행 되었다. 흡광도는 450nm (참조는 620nm)에서 테칸 기기 (Tecan instrument)로 측정되었다. 두 번째 선택 과정 후에 상당한 수의 갈랙틴-10 scFv 결합자가 분리되었다 (45-87% 결합자). 두 마리 라마 둘 다에서, 람다 라이브러리 (Lambda library) 가 카파 라이브러리 (kappa library)보다 더 높은 수의 갈랙틴-10 결합자를 보였다. 세 번째 선택 과정에서는 갈랙틴-10에 높은 결합 능력을 갖춘 scFv 클론의 수가 증가하는 결과를 얻었다. 람다 라이브러리로부터 만들어진 scFv 클론은 갈랙틴-10에 74-93% 결합자를 보였으며, 반면에 카파 라이브러리로부터 만들어진 scFv 클론은 15-20% 결합자를 보였다.
D. 서열분석 및 scFv 클론 리포메팅 (Sequencing and reformatting of scFv clones)
갈랙틴-10에 결합을 보이는 선택된 scFv 클론은 서열분석 되었다. CDR1-2-3, VH 및 VL 서열에 근거하여, 각 클론은 특정한 부류에 속하는 것으로 분류되었다. 이 과정은 65 VH 부류 (VH families), 13 V카파 부류 (VKappa families) 및 23 V람다 부류 (VLambda families)를 결정하는 결과가 되었다. 아래 표 3에 보여준 클론은 더 니아간 성질 규명을 위해 선택되었다.
표 3.
갈랙틴
-10에 결합하는
scFv
클론
이 클론들의 CDR, VH 및 VL 서열은 하기 표 14, 15 및 16에 보여진다.
표 3의 12 scFv 클론은 scFv-인간 Fc 융합 분자 (scFv-human Fc fusion molecules)로서 재-클론 되었다. 이 목적을 위해, 각 선택된 scFv 클론의 DNA는 처음에 제한효소 (AscI/SfiI)로 소화시켰다. 아가 장미 젤로부터 DNA를 추출한 후에, 이 DNA의 연결 (ligation) 은 미리-소화시킨 인간 Ig 1의 CH2-CH3 고정 도메인을 함유하는 벡터(pup 50: OSCF-Fc 융합 벡터)에 수행되었다. 각 연결된 생산물의 형질전환은 Top 10 박테리아를 사용하여 열-쇼크 (heat-shock) 및 앰피실린을 포함하는 LB-아가로즈 플레이트에 옮겨 수행하였다. 하룻밤 배양 후에, 연결된 생산물은 많은 수의 단일 세포 콜로니를 보였으며 반면에 음성 대조군 (빈 벡터) 에서는 콜로니가 관찰되지 않았다. scFv 클론 당, 4-8개 콜로니를 골랐으며 및 서열분석을 위해 보냈다. 적절한 삽입 (VH/VL)을 보이는 클론이 선택되었으며 및 DNA 서열을 정제하기 위하여 증폭시켰다 ((미디프랩 (MidiPrep)).
그 후 포유류 세포에서 생산이 시작되었다. scFv-인간 Fc (scFv-human Fc) 클론의 각 DNA는 폴리에틸렌이민 (polyethylene) (PEI)을 통해 HEK293E 세포에 형질감염시켰다. 6일 후에, scFv-인간 Fc 분자는 세포 상등액으로부터 단백질-A 세파로즈 비드 (protein-A sepharose beads)를 사용하여 정제하였다. 마지막으로, scFv-인간 Fc 분자의 (~100 kDa) 순도 및 온전성을 평가하기 위하여 SDS-PAGE 분석이 수행되었다
E. scFv-인간 Fc 팬낼 성질규명 Characterization of the scFv-human Fc panel
cFv-인간 Fc 팬낼의 결합 성질을 평가하기 위하여 ELISA 및 T3000 비아코아 (Biacore)로 SPR이 사용되었다.
(i) ELISA 분석
초기 스크리닝 동안에 사용된 세트 업 (set-up)과 비슷하게, 12 scFv-인간 Fc 클론의 상대적인 결합 성질이 ELISA로 분석되었다. 간략하게, 맥시솝 플레이트 (maxisorp plate)를 갈랙틴-10-His 0.2 μg/mL로 코팅하고 및 scFv-인간 Fc 융합 분자의 시리즈 희석액으로 배양시키기 전에 카제인 (Casein)으로 차단하였다. 몇 번의 세척 단계 후, 항-인간 Fc-HRP 항체로 결합된 scFv-인간 Fc 의 검출이 수행되었다. 흡광도는 450nm (참조는 620nm)에서 테칸 기기 (Tecan instrument)로 측정되었다. 마지막으로, 가공하지 않은 데이터 (OD 값)은 Graph Pad Prism 7.01에 플럿되었다. 각 화합물의 EC50 값은 비-선형 회귀분석 (non-linear regression) (log(agonist) 대비 반응 변수 기울기 (response Variable slope) (4가지 계수))로 계산되었다. 그 결과는 아래 표 4에 보여준다.
표 4
scFv
-인간
Fc
항체의 주
팬넬의
ELISA 결합 성질 (ELISA binding characteristics of the lead panel of
scFv
-human
Fc
antibodies).
클론 2C07, 6F05, 4G05 및 2B11는 EC50 값 0.02-0.09 nM 사이로 가장 상대적 결합 능력을 보여준다.
-클론 6F11 및 5E12는 가장 낮은 결합 능력을 보여준다 (EC50 값 0.25-0.48nM).
-하나의 클론 (1A12)는 모호하게 붙으며, 갈랙틴-10에 약한 결합을 보인다.
추가로, 전체 팬넬은, 코팅된 갈랙틴-10 및 갈랙틴-10-His 태그에 비슷한 결합 능력을 보여준다.
(ii)
SPR
분석
scFv-인간 Fc 패널의 결합 성질을 (결합-비율/떨어지는-비율) (on-rate/off-rate) 결정하기 위하여, 갈랙틴-10 에 대한 결합 능력이 Biacore T3000 에서 분석되었다. 이 목적을 위하여, 캡처 방법 (capture approach) 이 세트 업되었다. CM5 Chip이 다클론 항-인간 Fc (anti-human Fc) 8000 RU로 코팅되었고, 그 후 결합 신호가 약 150RU 에서 도달하도록 HBS-EP pH7.4로 희석된, 고정 농도의 scFv-인간 Fc 팬널 (1.5 μg/mL)이 캡처 되었다. 마지막으로, HBS-EP pH7.4 에서 희석된 시리즈 희석액의 갈랙틴-10-His (시리즈 희석, 5 μg/mL부터 1/ 2, 6포인트 희석)가 주사되었다. 가공하지 않은 데이터는 BIA 평가 소프트웨어 (BIA evaluation software)로 블랭크는 제하고 분석되었다 ((4-3). 갈랙틴-10-His에 대한 각 scFv-인간 Fc의 kd / KD 및 Rmax 는 BIA 평가 소프트웨어에서 Fit Kinetics simultaneous ka/kd / Binding with mass transfer / Local Rmax 를 사용하여 결정되었다.
표 5.
scFv
-인간
Fc
항체
패널 의
결합 성질의
비아코아
T3000 (
Biacore
T3000) 에서의 성질규명 (
Characterisation
of the binding properties of the panel of
scFv
-human
Fc
antibodies on
Biacore
T3000).
-클론 6F05 및 2C07는 떨어지는-비율 (off-rate)이 각각 1.17E-04 및 2.59 E-04 s-1로서, 분명히 가장 좋은 친화력을 (각각 0.9 및 0.6 nM)을 보여 준다.
- 그러나 다른 10 클론들은 친화력이 나노몰 범위로 (>17nM), 빠른 떨어지는-비율 (off-rate)을 보여준다.
F. 바이오-레이어 간섭법 (Bio-Layer Interferometry)(BLI)(Octet)에 의한 scFv 클론 스크리닝 (Screening of the scFv clones by Bio-Layer Interferometry (BLI) technology (Octet)
서열분석 및 상기 D 및 E 섹션에서 서술된 클론 성질 규명에 추가하여, ELISA (스크리닝)에서 분명한 결합을 보이는, 마스터 플레이트 1-6로부터의 272 scFv 클론이 선택되었으며 및 이의 갈랙틴-10-His에 대한 결합 능력이 Octet RED96를 사용하여 BLI 에서 분석되었다. BLI는 생물분자의 상호작용을 측정하는 라벨-없는 기술이다. 이는 두 표면: 바이오센서 팁(tip)에 고정된 단백질 층, 및 내부 참조 층, 으로부터 반사되는 백색 광의 간섭 패턴을 분석하는 광학적 분석 기술이다. 바이오센서 팁에 결합된 분자의 수의 어느 변화는 실시간으로 측정될 수 있는 간섭 패턴의 이동의 원인이 된다.
간단하게, 키네틱 버퍼 (Kinetic Buffer)에 희석된 갈랙틴-10-His 태그는 안티-펜타-His 1K 센서 팁 (Alnti-Penta His 1K sensor tips)에 고정 수준 (immobilization level) 이 1nm 될 때까지 캡처시켰다. 그 후, 희석된 세포질 추출물(1/10)이 적용되었고 및 고정된 갈랙틴-10-His 태그에의 결합/해리 (association/dissociation)가 포르테바이오 데이터 분석 9.0 소프트웨어 (ForteBio Data analysis 9.0 software) (subtraction of the reference Tips, 1.1 binding model)를 사용하여 측정되었다. 스크리닝 동안, scFv의 효과적인 농도가 알려지지 않았으므로 단지 scFv의 해리 (off-rate)만 측정될 수 있으며 및 클론마다 변화가 다양할 수 있다. 이 결과는 scFv 패널 내에 있는 선택된 대부분의 클론은 빠른 떨어지는-비율 (off-rates)을 보여주는 것이 확인되었다. 그러나 어떤 클론은, 주로 람다 라이브러리로부터 (2번째 및 3번째 선택), 캡처 된 갈랙틴-10에 느린 떨어지는-비율 (off-rates)을 보여주었다. 그러므로 ELISA 및 BLI 데이터를 고려하여, 새로운 패널의 리드 scFvs (lead scFvs)가 선택되었다.
ELISA 및 BLI 데이터에 근거하여, 두 번째 팬널의 리드 scFv 클론들이 더 나아간 성질 규명을 위하여 더 나아갔다. 이들 scFv 클론의 성질이 하가 표에 보인다.
표 6. 리드
scFv
클론의 두 번째
팬널
(Second panel of lead
scFv
clones)
이들 scFv 클론의 CDR, VH 및 VL 서열들이 하기 표 14-16에 보인다.
G. 선택된 scFv 클론의 생쥐 IgG1 뼈대 (백본) 에의 재구성 (Reformatting of selected scFv clones into a mouse IgG1 backbone)
표 6에 보여준 선택된 리드 (lead)는 더 나아간 성질 규명을 위하여 생쥐 IgG1 뼈대 (백본)에 재-클론 되었다. 이 목적을 위하여, 각 클론의 VH 및 VL은 특정한 프라이머를 사용하여 PCR 증폭되었으며, 전기영동으로 분리하고, 정제하고 및 제한 효소로((BsmBi) 소화시켰다. 소화 및 정화시킨 후, BsmBi로 미리-소화시킨 생쥐 람다 경 쇄 (mouse lambda light chain) (pUPEX116.35) 또는 생쥐 IgG1 중 쇄 (mouse IgG1 heavy chain) (CH1-CH2-CH3, pUPEX116.33) 의 고정 도메인을 함유하는 벡터에 DNA (VH 또는 VL) 라이게이션 (ligation)이 수행되었다. 라이게이트된 생산물의 형질전환은 Top10 박테리아를 사용하여 열 쇼크 및 앰피실린 (벡터의 저항유전자)이 있는 아가로즈 플레이트에 옮겨 수행되었다. 하룻밤 배양 후, 라이게이션 생산물은 많은 수의 단일 콜로니를 보였으며 반면에 음성 대조군 (빈 벡터)에서는 콜로니가 보이지 않았다. 클론 당 (HC 및 LC), 4-8 콜로니를 선택하였고 및 열분석을 위해 보내졌다. 적절한 삽입을 보인 클론이 선택되고 및 DNA 서열을 정제하기 이하여 증폭되었다 ((미디프랩 (MidiPrep)).
10 생쥐 IgG1 생산이 폴리에틸렌이민 (polyethylenimine) (PEI)을 통해 HE 293E 세포에 1 중쇄 당 3 경쇄의 비율로 형질 감염시켜 수행되었다. 6일 후에, 생쥐 단일 클론 항체가 세포 상등액으로부터 단백질-A 세파로즈 비드 (protein-A sepharose beads)를 사용하여 정제하였다. 마지막으로, 항체 (150 kD)의 순도 및 온전성을 평가하기 위하여 SDS-PAGE 분석이 수행되었다.
H. 갈랙틴-10 생쥐 IgG1 팬낼의 결합 성질의 성질규명 (Characterization of the binding properties of the galectin-10 mouse IgG1 panel).
갈랙틴-10 생쥐 IgG1 팬낼의 결합 및 기능적 성질을 평가하기 위하여 몇 가지 에세이가 수행되었다. ELISA 및 T3000 비아코아 (Biacore)로 SPR이 리드 팬낼의 결합 능력을 측정하기 위하여 사용되었다.
(i) ELISA 분석
scFv-인간 Fc 분자의 성질규명 동안 사용된 세트 업 (set-up)과 비슷하게, 10 생쥐IgG1 항체의 상대적인 결합 성질이 ELISA로 분석되었다. 맥시솝 플레이트 (maxisorp plate)를 갈랙틴-10-His 0.2 μg/mL로 하룻밤 동안 코팅하였다. 그 후 각 클론의 시리즈 희석액 (100 nM로부터 1/4 희석, 12포인트 희석)을 코팅된 갈랙틴-10에 배양시켰다. 몇 번의 세척 단계 후, 항-생쥐 Fc-HRP 항체로 결합된 생쥐 IgG1 검출이 수행되었다. 흡광도는 450nm (참조는 620nm)에서 테칸 기기 (Tecan instrument)로 측정되었다. 생쥐 IgG1 아이소타입 대조군이 음성 대조군으로 사용되었다. 다클론 항-갈랙틴-10 항체는 항-갈랙틴-10 코팅의 대조군으로 사용되었다. 가공하지 않은 데이터 (OD 값)은 Graph Pad Prism 7.01에 플럿되었다. 각 항체의 EC50 값은 비-선형 회귀분석 (non-linear regression) (log(agonist) 대비 반응 변수 기울기 (response Variable slope) (4가지 계수))로 계산되었고, 그 결과는 아래 표에 보여준다.
갈랙틴-10 생쥐 IgG1 항체의 새로운 팬낼은 상대적 결합 능력이 코팅된 갈랙틴-10에 대하여 3.22 nM 에서 0.04 nM 사이를 보여주었다. 2F09, 6A05, 6B06 및 2C07은 가장 좋은 상대적 결합 능력 (0.05 - 0.08 nM)을 보여주었다.
표 7 ELISA에 의한 생쥐 IgG1 팬낼의 결합 성질의 성질규명 ( Characterization of the binding properties of the mouse
IgG1
panel by ELISA)
(ii) SPR 분석
생쥐 IgG1 항체의 갈랙틴-10에 대한 결합 능력이 비아코아 T3000에서 분석되었다. 이 목적을 위하여, 이 목적을 위하여, 캡처 방법 (capture approach) 이 세트 업되었다. CM5 Chip이 다클론 항-생쥐 Fc (anti-mouse Fc) 8000 RU로 코팅되었고, 그 후 결합 신호가 약 150RU 에서 도달하도록 HBS-EP pH7.4로 희석된, 고정 농도의 생쥐 IgG1 항체 팬넬 (1.5 μg/mL)이 캡처 되었다. 마지막으로, HBS-EP pH7.4 에서 희석된 시리즈 희석액의 갈랙틴-10-His (시리즈 희석, 5 μg/mL부터 1/ 2) 가 주사되었다. 가공하지 않은 데이터는 BIA 평가 소프트웨어 (BIA evaluation software)로 블랭크는 제하고 분석되었다 ((4-3). 갈랙틴-10-His에 대한 각 mAb의 kd / KD 및 Rmax 는 BIA 평가 소프트웨어에서 Fit Kinetics simultaneous ka/kd / Binding with mass transfer / Local Rmax 를 사용하여 결정되었다.
표 8 비아코아 T3000 (Biacore T3000) 에 의한 생쥐 IgG1 팬낼의 결합 성질의 성질규명 (Characterization of the binding properties of the mouse IgG1 panel by
Biacore
T3000)
이 세트 업에서 10개의 클론이 떨어지는-비율 (off-rate) 3.4-53 1E-04(1/s)를 가지며, 나노 몰에서 서브-나노몰 범위의 친화력을 보였다. ELISA 결합 데이터와 비슷하게, 2F09 및 2C07 이 팬낼 탑에 있는 것이 발견되었다. 생쥐 팬낼의 성질을 규명하는 동안에 측정된 떨어지는-비율 (off-rate)은 스크리닝 동안에 측정된 떨어지는-비율 (off-rate)과 일치하지 않았다. 이는 주로 스크리닝 동안에 사용된 에세이 세트 업의 (BLI, 항-His 센서 팁에 의해 캡처 된 갈랙틴-10-HIs) 및 성질 규명 ((SPR, 다클론 항-생쥐 Fc 칩 (polyclonal anti-mouse Fc Chip)에 의해 캡처 된 생쥐))의 차이에 의한 것으로 설명된다.
I. 갈랙틴-10 생쥐 IgG1 팬낼의 에피톱 맵핑 (Epitope mapping of the galectin-10 mouse IgG1 panel)
다른 클론들의 갈랙틴-10 결합 부위를 동정하기 위하여, BLI 기술을 사용한 에피톱 맵핑 방법 (epitope mapping method) (TANDEM), 이 설정 되었다. 간략하게, 과량의 항체로 (("포화시키는 (saturating)" 항체라고 불림)) 배양되기 전에, 갈랙틴-10-HIs 는 항-HIS 1K 센서 팁 (anti-HIS 1K sensor tips)에 캡처되고, 그 후 바로 최적이 아닌 농도의 "경쟁자 (competitor)" 항체를 함유하는 용액으로 옮겼다. 만약 "포화 (saturating)" 및 경쟁자 항체가 같은 결합부위에 결합하면, 경쟁자 (competitor)"의 결합은 검출되지 않을 것이다 (nm 이동으로 표현). 만약 이들이 결합부위를 공유하지 않으면, "경쟁자 (competitor)" 항체는 "포화시키는 항체 (saturatin gantibody)" 의 존재하에서 결합할 수 있을 것이다. 어느 아이소타입 대조군이 음성 대조군으로서 사용되었으며, 여기서 "경쟁자 (competitor)" 항체로 사용된 모든 클론들은 분명히 갈랙틴-10에 결합함을 보였다.
표 9 경쟁 에세이에 의한
에피톱
맵핑
(
Epitope
mapping by competition assay)
이 결과들은 검사된 10 클론이 서로 경쟁함을 보여 주는 결과이고 이는 이들은 갈랙틴-10-His의 같은 결합 부위/에피톱에 결합함을 제시한다.
비슷한 방법이 첫 번째 팬낼의 scFv-인간 Fc 융합 (scFv-human Fc fusion) 에서도 사용되었다. 모두 갈랙틴-10의 같은 에피톱에 결합하였다, 즉 mIgG1 항-갈랙틴-10과 같은 에피톱 (데이터 보이지 않음).
실시 예시 9. 시험관 내에서 결정화에 영향을 주는 갈랙틴-10 항체의 능력에 대한 성질 규명 (Characterization of
galectin
-10 antibodies for ability to affect crystallization
in vitro).
실시 예시 1 에 서술된 재조합 CLCs 형성에 대한 리드 갤랙틴-10 scFv-인간 Fc 분자 (galectin-10 scFv-human Fc molecules) 및 리드 갤랙틴-10 생쥐 IgG 항체 (galectin-10 mouse IgG antibodie)의 영향이 검사 되었다. 갤랙틴-10 자동결정화가 시험관 내에서 재생이 너무 가능하기 때문에, 갤랙틴-10 자동결정화를 차단할 수 있는 잠재력을 가진 항-갈랙틴-10 항체 (anti-galectin-10 antibodie)를 스크린 하기 위하여, 모스퀴토 결정화 로봇이 (Mosquito crystallization robot) (TTP Labtech) 이 사용 되었다. 이 방식을 사용하여, 갤랙틴-10 자동결정화를 차단하는 클론을 스크린 하였다. 결정 억제 에세이를 위하여, PBS에 있는 용해성 TEV-절개된 야생형 재조합 갈랙틴-10을 하룻밤 동안 항-갈랙틴 항체 또는 상관없는 항체 존재하에서 50% PEG 3350 용액에 대하여 평형 시켰다. 결정 형성 억제를 평가하기 위하여, 250 nL의 PBS에 있는 0.4 - 0.7 mg/mL 농도의 용해성 EV-절개된 야생형 재조합 갈랙틴-10을 100 nL의 항-갈랙틴 항체 또는 상관없는 항체와 혼합시켰다. 다음, 단백질 혼합물은 96 웰 결정화 웰 플레이트의 저장 웰에 함유하고 있는 40마이크로리터의 50% (v/v) PEG 3350에 대해 평형 시켰다. PEG 작용 때문에, 방울 내에 있는 물의 양이 감소하며 및 그러므로 갈랙틴-10이 결정화되어 CLCs을 형성하는 한계점에 도달할 때까지, 갈랙틴-10의 농도는 증가한다. 하룻밤 배양 후에 CLCs 결정의 존재 또는 부재가 입체현미경 (stereomicroscope) 을 사용하여 평가되었다. 결정의 존재는 100% 결정 형성으로서 측정되었으며, 몇 결정은 동등한 50% 결정 형성 및 배양시간 후 결정이 관찰되지 않은 것은 0% 결정 형성으로 정했다. 실험은 정성적이지 않으며 및 단지 다른 갈랙틴-10 클론들이 CL 형성을 차단하는 잠재력을 순위를 매길 목적일 뿐이다. 실험적 세트 업 때문에, 및 높은 농도의 갈랙틴-10 분자가 필요하므로, 단지 scFv-인간 Fc 및 생쥐 IgG1 항-갈랙틴-10 팬낼로부터 선택된 클론들만 검사 되었다.
CLC 결정은 대조군 조건에서는 항상 나타나나 그러나 항-갈랙틴-10 항체를 함유하는 컨디션에서는 존재하지 않는다. 이 실험 세트업은 도 8A에 예시되어 있으며 및 몇몇 클론들의 효과에 대하여 도. 8B에 요약되었다.
결과는 검사한 모든 클론 (총 17) 이 CLC 형성을 차단할 수 있다는 것을 보여준다. scFv-인간 Fc 팬낼 중에 클론 4B10, 2E11 및 6F5는 CLC 환영 (apparition)을 차단하는데 가장 좋은 효능을 가진 것으로 나타났다. 1D11은 생쥐 IgG1 팬낼 중에서 CLC 형성을 차단하는데 가장 좋은 효능을 보였다. 클론 6A05는, 가장 낮은 갈랙틴-10/생쥐 IgG1 항-갈랙틴-10 비율에서도 CLC 형성을 보이지 않았으며 및 이 이유는 불 분명하다. 그러나 모든 음성 대조군 ((상관없는 scFv-인간 Fc 또는 생쥐 IgG1와 갈랙틴-10 배양, 버퍼 또는 BSA (2mg/mL) )에서는 2일 배양 후에 100% CLC 형성을 보였다.
실시 예시 10.
갈랙틴
-10 항체는 이미-존재하는
CLCs
를 시험관 내에서
용
해시킨다 (Galectin-10 antibodies can solubilize pre-existing CLCs
in vitro)
유사한 실험 세트 업을 사용하여 이미 형성된 재조합 갈랙틴-10 결정의 항체-매개하는 용해가 리드 갈랙틴 scFv-인간 Fc 분자 (lead galectin-10 scFv-human Fc molecules) 및 리드 갈랙틴-10 생쥐 IgG 항체 (lead galectin-10 mouse IgG antibodies)를 사용하여 수행되었다. 이 에세이에서는, 항체는 P EG3350 용액에 대하여 하룻밤 평형 시킨 후 (PBS에 있는 250 nL의 용해성 TEV-절개된 야생형 재조합 갈랙틴-10을 50% PEG 3350에 대하여 하룻밤) 형성된 결정에 첨가하였다. 항체 첨가 후 결정 용해는 시간에 따라 관찰되었으며 100 nL의 항-갈랙틴-10 또는 대조군 항체가 첨가되었으며 및 갈랙틴-10 결정의 용해는 입체현미경 (steromicroscope)을 사용하여 관찰되었다. 각 컨디션은 12 복제 (replicas) 에서 수행되었다. 음성 대조군으로서, 상관없는 scFv-인간 Fc 및 생쥐 IgG1는 물론 버퍼만도 포함되었다.
표 10은 검사된 대부분의 갈랙틴-10 항체 클론은 이미-존재하는 CLCs를 용해시킬 수 있음을 보여준다. 이용해는 항-갈랙틴-10 분자와 배양 후 2시간 이내에 일어났다.
실시 예시 11 선택된
갈랙틴
-10 항체의 결정 용해 성질의 더 나아간 성질 규명 (Further characterization of the crystal dissolving properties of selected
galectin
-10 antibodies)
하기 표에 보여준 4개의 클론은 더 나아간 분석을 위해 선택되었다.
표
11 6F05
,
1C09
,
1D11
및
4E08
성질의 요약
A. 6F05, 1C09, 1D11 및 4E08에 의한 CLC의 저속촬영 용해 (Time-lapse solubilization)
CLC결정의 용해 과정을 더 잘 문서화 하고 및 성질 규명하기 위하여, 저속 촬영 실험 (time-lapse experiments)이 회전하는 디스크 공초점 현미경 (spinning disk confocal microscope) 에서 수행되었다. PBS에 있는 2.5 mL의 자동결정화된 CLC 용액 (0.7 mg/mL) 을 유리바닥 있는 챔버 현미경 슬라이드 (chamber microscope slide) (Ibidi) 의 웰에 스폿 (spot) 시켰다. 결정 용해는 그 후 2ml의 항-갈랙틴-10 항체를 7mg/mL 농도로 첨가하면서 시작되었고 및 이어서 시간에 걸쳐서 추적되었다. 증발을 예방하기 위하여 챔버는 진공 기름 (vacuum grease) 및 슬라이드 커버 글래스로 봉하였다.
6F05, 1C09, 1D11 및 4E08 에 의해 유도되는 CLC 용해가 모니터 되었다. 간단하게, CLCs 함유하는 용액을 고정된 농도 (8mg/mL)의 넷 중 하나의 리드 항-갈랙틴-10 항원와 배양하기 전에 μ-슬라이드 웰 플레이트 (μ-slide wells plate)에 스폿 하였다. 각 웰을 위해, 이미징 위치가 정해지고, 및 각 위치는 매 3-5분에 이미지화되었다. 이 실험은 몇몇 항-갈랙틴 항체는 1-2시간 내에 재조합 CLC 결정을 용해할 수 있음을 보여주며, 반면에 상관없는 대조군 아이소타입 항체는 그럴 수 없었다 (도 9A). 더 나아가, 이 고-해상도 저속-촬영 실험은 CLC 결정은 이들의 가장 긴 축을 따라 그 크기가 거의 전적으로 감소 되는 것을 보여준다.
클론1D11는 이미-존재하는 CLCs를 용해하는 가장 좋은 능력을 보여 주며 (도. 9B), 여기서 전체 용해는 1시간 후에 도달되었다. 클론 6F05 및 4E08는, 배양 90분 후에 90% CLC의 용해로, 비슷한 용해 능력을 보여주었다. 생쥐 아이소타입 대조군은 CLCs 에 대한 효과를 보여주지 않았다; 그러나, 시야에서 CLCs의 이동 때문에 소프트웨어가 CLCs에의해 점유되었던 공간이 감소된 것으로 잘못 해석하였다
B. 6F05, 1C09, 1D11 및 4E08의 Fab 포멧 (Fab format)에서 결합 성질의 성질 규명 (Characterisation of the binding properties of 6F05, 1C09, 1D11 and 4E08 in Fab format).
관심 있는 4개의 클론이 Fab 단편으로 다시 포멧되었다. 첫 번째 단계로, 각 클론의 VH 및 VL가 특정한 프라이머를 사용하여 PCR 증폭 되었으며, 전기영동으로 정제하고, 제한효소 (BsmBi)로 소화시키고 및 인간 고정도메인: VL을 위한 인간 람다 고정 도메인 (uman lambda constant domain) (pUPEX116.9) 또는 VH를 위한 CH1 고정 도메인 (CH1 constant domain) (pUPEX86, 일부 힌지 부위 포함)을 함유하는 미리-소화된 벡터에 연결시켰다 (ligated). 각 라이게이트된 생산물의 형질전환은 Top10 박테리아를 사용하여 열 쇼크 및 앰피실린 (벡터의 저항유전자)이 있는 아가로즈 플레이트에 옮겨 수행되었다. 하룻밤 배양 후, 라이게이션 생산물은 많은 수의 단일 콜로니를 보였으며 반면에 음성 대조군 (빈 벡터)에서는 콜로니가 보이지 않았다. 클론 당 (HC 및 LC), 4-8 콜로니를 선택하였고 및 열분석을 위하여 보내졌다. 적절한 삽입을 보인 클론이 선택되고 및 DNA 서열을 정제하기 이하여 증폭되었다 ((미디프랩 (MidiPrep)). 4 리드 클론의 생산이 포유류 세포에서 시작되었다. 형질 감염은 폴리에틸렌이민 (polyethylenimine) (PEI)을 통해 HE 293E 세포에 1 중 쇄 당 1 경 쇄의 비율로 수행되었다. 생산 10일 후에, 인간 Fa가 캡처 셀렉트 IgG-CH1 세파로즈 비드 (Capture Select sepharose beads)를 사용하여 정제되었다. 마지막으로, 항체 (55kD)의 순도 및 온전성을 평가하기 위하여 SDS-PAGE 분석이 수행되었다.
리드들의 결합 성질이 Fab 포멧에서 ELISA 결합 및 상기 서술된 프롤토콜에 따라 OctetRed96 을 사용하여, BLI 결합에서 평가되었다. ELISA 결합 데이터는 (하기 표 12 참조), 4개의 리드는 이들의 코팅된 갈랙틴-10-His에의 결합능력에 근거하여 2개의 군으로 분리될 수 있었다. 클론 1C09 및 1D11는 EC50 값이 1.6-1.9 nM 사이로, 가장 좋은 상대적 결합 능력을 보였으며, 반면에 클론 4E08 및 6F5는 친화력이 25.6-26.7 nM 사이로서 낮은 결합 능력을 보여 주었다.
표12 ELISA에 의한 4 리드 항-
갈랙틴
-10 항체 (
Fab
포멧)의 결합 성질의 성질규명(Characterization of the binding properties of the 4 lead anti-galectin-10 antibodies (
Fab
format) by ELISA)
BLI 기술로 얻은, 결합 데이터는, 비슷한 결과를 보여 주었으며, 클론 1C09 및 1D11가 가장 좋은 결합 능력을 (KD는 10-13 nM 사이, kdis는 3-3.8 E-03 (1/s)사이) 가졌고 클론 4E08 및 6F05은 좀 더 약한 결합 ( (KD 는 147-188 nM사이, kdis 는 25-35 E-03 (1/s)사이)을가졌다-표 13 참조.
표 13
BLI
기술에 의한 4 리드 항-
갈랙틴
-10 항체 (
Fab
포멧)의 결합 성질의 성질규명 (Characterization of the binding properties of the 4 lead anti-galectin-10 antibodies (
Fab
format) by
BLI
technology).
실시 예시 12.
갈랙틴
-10
Fab
단편의
갈랙틴
-10과의 복합체 결정구조 (Crystal structure of
galectin
-10
Fab
fragments in complex with
galectin
-10).
갈랙틴-10과 복합된 다른 갈랙틴-10 Fab 단편의 결정 구조가 얻어졌으며, 이는 어떻게 갈랙틴-10 항체가 이미 존재하는 결정을 용해 시킬 수 있는지를 보여준다. 구조적 연구를 위해, 선택된 항체들의 (1D11, 6F5, 4E8, 1C9) Fab 단편들이 HEK293 세포에서 생산되었다. 재조합 HIs-태그 된 갈랙틴-10 (recombinant His-tagged galectin-10) 1mg/mL이 실온에서 TEV로 TEV: 갈랙틴-10 비율 1:100에서 하룻밤 동안 소화되었다. 다음으로, 정제된 Fab가 소화된 갈랙틴-10 에 1.25 몰 과량으로 첨가되었다. 다음에, 이 단백질 혼합물은 갈랙틴-10: Fab 복합체 (galectin-10:Fab complex)를 분리하기 위하여, HBS 버퍼로 실행되는 HiLoad 16/600 Superdex 200pg 컬럼에 주사되었다. 갈랙틴-10: Fab 복합체에 해당하는 분획을 수집하여 모으고 및 더 나아가 사용할 때까지 -80° C에서 보관하였다. 갈랙틴-10: Fab 복합체는 결정화 살험전에 6 - 7mg/mL로 농축시켰다. 시팅-드롭 나노리터-스케일 증기 확산 결정화 (Sitting-drop nanoliter-scale vapour diffusion crystallization) 실험이 293K에서 모스퀴토 결정화 로봇 Mosquito crystallization robot) (TTP Labtech) 및 상업적으로 구할 수 있는 스파스-매트릭스 스크린 (sparse-matrix screens) (Molecular Dimensions, Hampton research)을사용하여 세트업 되었다.
Fab 1D11와 복합체가 된 갈랙틴-10의 결정이 하룻밤 동안에 프로플랙스 스크린 (ProPlex Screen)의 B7 컨디션에서 ((Molecular Dimensions - 0.2 M 암모늄 아세테이트 (ammonium acetate), 0.1 M 소듐 아세테이트 (sodium acetate) pH 4.0, 15% PEG4000)) 자랐다. Fab 6F5와 복합체가 된 갈랙틴-10은 BCS Eco 스크린 (BCS Eco Screen) 의 G7 컨디션에서 (Molecular Dimensions) ((0.04 M CaCl2, 0.04 M Na-포르메이트 (Na-formate), 0.1 M PIPES pH 7.0, 8% PEG Smear High)) 24시간 내에 결정화되었다. 2주 후에 갈랙틴-10이 Fab 4E8와 PEG/Ion 스크리닝 (Hampton Research) (0.2 M ammonium nitrate, 20% PEG3350)의 B7 컨디션에서 복합체로서 결정으로 나타났다.
액체 질소에 순간-냉동하기 전에 갈랙틴-10: Fab 복합체 결정은 25% PEG 400으로 보충된 모액 (mother liquor)에 잠시 담가 항-냉동(cryoprotected) 시켰다. 회절 실험은 100K에서 빔 라인 (beamlines) SOLEIL 싱크로트론 (synchrotron)의 Proxima 2A (Gif-sur-Yvette, France) 및 ESRF (Grenoble, France)의 ID23-2 에서 수행되었다. 모든 데이터는 XDS suite (Kabsch, 2010)를 사용하여 통합되고 및 스케일 (scaled) 되었다. 분자 치환 (Molecular replacement) (MR)은 갈랙틴-10 (PDB 1LCL) 및 고-해상도 생쥐-Fab 구조 (PDB 5X4G)에 근거하여 서치모델 (search models)을 사용하여 Phaser (McCoy et al., 2007)로 수행 되었다. 모델 (재) 빌딩은 COOT (Emsley et al., 2010) 에서 수행되었으며 및 각 코디네이트 및 ADP 교정 (refinement)은 PHENIX (Adams et al., 2010) 및 autoBuster (Bricogne et al., 2017) 에서 수행되었다. COOT and the PHENIX suite 에 있는 모델 및 맵 검증 도구 (tool)이 이 일을 하는 동안에 결정학 모델의 질을 개선하고 및 검증을 안내하기 위해 사용되었다.
세 개의 다른 갈랙틴-10: Fab 복합체 구조가 결정되었다 (항체 6F5, 1 D11, 및 4E8 에 대해) (도 10A-C, 표 17). 이들 구조는 다른 항체들은, 갈랙틴-10의 자동결정화에 행위에 주요한 잔기로 발견된 (도 3A 및 C) 갈랙틴-10의 잔기 Tyr69 (도.10 D-F) 근처의 에피톱을 타겟으로 함이 보여준다.
실시 예시 13.
갈랙틴
-10 항체는 알레르기성
뮤신에
있는 환자에서 자란
갈
랙틴-10을 생체 외 (
ex
vivo
)
에서
용해시킨다
(
Galectin
-10 antibodies
solubilise
patient grown galectin-10 crystals in allergic mucin
ex vivo)
선택된 클론들이 CRSwNP를 지닌 환자로부터 얻은 알레르기성 뮤신에 함유된 결정을 용해시키는 잠재력에 대하여 연구되었다. 이들 결정들은 그러므로 자연적인 점막 환경에 있고, 및 생체 내에서 자란 것이다. 점액에 있는 인간 CLCs의 항체-매개하는 용해에 대한 저속 실험 (Time-lapse)이 다음과 같이 수행되었다. 환자로부터 분리된 CLC-함유하는 점액 4ml을 유리바닥이 있는 챔버 현미경 슬라이드의 웰에 (Ibidi) 스폿 하였다. 다음, 4ml의 항-갈랙틴-10 또는 대조군 항체 (7mg/mL)을 스폿 된 점액에 첨가하였다. 증발을 막기 위하여, 챔버는 진공 기름 (vacuum grease) 및 슬라이드 커버 글라스로 봉했다. 인간 CLC의 용해는 회전 디스크 공초점 현미경 (spinning disk confocal microscope)을 사용하여 시간에 걸쳐서 추적했다. 현미경 데이터는 Fiji를 사용하여 분석되었다. 이 저속 실험 (time lapse experiment) 은 도 11에 보여준다. 인간 CLCs 는 재조합 갈랙틴-10 결정과 비슷한 용해 과정을 거친다, 그러나 용해는 더 시간이 걸렸다. 그러나 알레르기성 뮤신을 결정 용해하는 항체와 함께 18시간까지의 배양으로 완성되었다.
실시 예시 14.
갈랙틴
-10 항체는
CLCs에
의해 유도되는 기도 염증을
억제
한다 (
Galectin
-10 antibodies inhibit the airway inflammation induced by
CLCs
)
결정 용해하는 항체가 HDM 알레르기성 천식 개체로부터의 PBMCs 로 재구성된 인간화 NRG 생쥐에 투여되었다 (Perros et al. 2009). 생쥐는 갈랙틴-10 결정을 생산하지 않고 및 PBMC 분획은 인간 호중구(eosinophils) (인간에서 내부 유래 갈랙틴-10의 소스)를 포함하지 않으므로, 갈랙틴-10 결정이 생쥐의 기도로 HDM 촬렌지 (HDM challenge)와 함께 투여되었다. 생존 인간 호중구를 생쥐에 적응적으로 옮기는 것은 (adoptive transfer) 매우 어려우므로, 이것이 왜 갈랙틴-10 결정이 HDM 알러지원 노출 때 기관지 내로 투여되어야만 하는 이유다. CLC가 프로토콜 28일째 날에 생쥐에서 관찰되었으며, 이들은, 환자에서 보인 것과 꼭 같이, 언제나 기도 안쪽에 피리오딕 에시드 시프 (Periodic Acid Schiff) (PAS)-양성 점액과 연관되어 있으며, 이는 적응적 이전 방법 (adoptive transfer approach)의 유용성을 첨가한다.
0일에 NOD Rag -/- ηc-/- (NRG) 생쥐는 3x106 PBMCs의 복강 내 주사로 재조성 (reconstituted) 되었다. 1-4일 및 7-9일에, 모든 생쥐에 50 μl의 PBS로 희석된 20 μg of HDM 추출물(Greer)이 기관지 내로 주사되었다. 인간화된 생쥐의 사용은 28-일 프로토콜 시간 프레임 동안에 불가피하게 유도될 수도 있는 쥐 갈랙틴-10 IgG1 항체의 어떤 교란 효과를 피하기 위해서이다.
갈랙틴-10 결정의 전-염증성 효과를 평가하는 실험에서는, 1, 3, 7 및 9일째 날에 NRG 생쥐는 다음의 용법으로 처치되었다 : 용법 1, 200 μg 아이소타입 대조군 (isotype control) 항체, 기관지 내로 (30 μl PBS에 희석); 용법 2, 10 μg의 재조합 갈랙틴-10 결정 (1 μl의 스톡)+ 200 μg 아이소타입 대조군 항체, 기관지 내로 (30 μl의 PBS에 희석); 용법 3, 10 μg 재조합 갈랙틴-10 결정 (1 μl의 스톡) + 200 μg 1D11 항체, 기관지 내로 (30 μl의 PBS에 희석) (도 12A).
11일째 날로부터 앞으로, 생쥐는 i.t 주사로 200 μg의 아이소타입 항체 또는 200 μg의 1D11 항체로 일주일에 3번씩 절단되는 날까지 주사되었다. 27일째 날에, 모든 생쥐는 80 μl의 PBS에 희석시킨 20 μg의 집 먼지 진드기 (house dust mite) 추출물을 (Greer) 기관지 내로 최종 한번으로 촬렌지 시켰다 (challenged). 모든 생쥐는 28일째 날에 희생시켰다.
28일 후에, 폐에서의 염증 정도 (도 12B)가 HDM 촬렌지 기간에 아이소타입 단독을 받은 쥐에 비해 갈랙틴-10 결정 + 아이소타입을 받은 쥐가 상당히 더 높았다. 1D11 항체로의 처치는 갈랙틴-10 결정의 폐 염증 항진 효과를 역전시킨다. 더 나아가, 기도(airways) 기저 막 (basement membrane)으로부터 500μm 둘레에 세포의 유입 정도를 평가하기 위해 조사자 맹검 형태적 분석 (investigator blinded morphometric analysis) (병리학에서 사용을 위한 QuPath 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여) 이 수행 되었다. 이 분석은 기도 주위에 염증 세포의 현저한 증가를 보였다 (도 12E).
IgE 합성의 정도가 (도 12C) ELISA (실시 예시 7 참조) 로 평가되었다. 28일 후에, IgE의 혈청 농도는 HDM 촬렌지 기간에 아이소타입 단독을 받은 쥐에 비해 갈랙틴-10 결정 + 아이소타입을 받은 쥐가 상당히 더 높았다. (도 12C)는 상당히 높았다. 1D11 항체로의 처치는 갈랙틴-10 결정의 IgE 농도 증가에 대한 효과를 역전시켰다.
가불렛 세포 (goblet cell)의 이형성(metaplasia)의 존재가, 뮤신 MUC5AC mRNA 수준을 사용하여 측정하여, 또한 평가되었다. 이 목적을 위하여, 얼린 폐 조직을 에펜도르프 튜브에 (eppendorf tube) 모으고 및 1mL Tripure가 첨가되었다. 조직은 조직 호모게나이져 (homogenizer)를 사용하여 균질화 시켰다. RNA를 추출하기 위하여, 200 μl 의 클로로포름 (chloroform) 이 균질화된 폐를 포함하는 튜브에 첨가되었다. 5분 동안의 배양 후에, 튜브는 12000g에서 15분 동안 원심분리시켰다. 투명한 상층 상이 RNase-없는 에펜도르프 (eppendorf)에 수집되었으며, 및 500 μl 의 이소프로판올 (Isopropanol) 및 1 μl 의 글라이코겐 (Glycogen) 과 10분 동안 혼합하였다. 튜브는 12000g에서 5분 동안 원심분리시켰다. 상등액은 버리고, 정제된 RNA를 함유하는 펠렛은 75% 에탄올로 세척시켰다 (7500g로 5분 동안 원심분리). 펠렛은 실온에서 10분 동안 공기로 건조시키고 및 20 μl 의 RNase-없는 물에 재현탁시켰다. 튜브는 60° C에 10분 동안 놓아두었다. RNA 농도는 각 샘플에서 나노스럽 기기 (Nanodrop instrument)를 사용하여 측정되었다. 1 μg의 RNA가 샌시훼스트 cDNA 합성 키트 (sensifast cDNA sysnthesis kit )(Bioline)를 사용하여 cDNA를 만들기 위하여 사용되었다. 남은 RNA는 -80° C에서 얼렸다. cDNA는 물에 10배로 희석시키고, 및 더 나아가 사용될 때까지 얼렸다. 실시간 PCR을 수행하기 위하여, PCR 플레이트의 각 웰에 다음의 매스터믹스 (mastermix) 가 사용되었다: 10 μl 의 Sensifast SYBR No-Rox mix, 4,75 μl 물, 5 μl의 cDNA. 0.125 μl의 전진 프라이머 (forward primer) 및 0.125 μl의 역 프라이머 (reverse primer) ( 100 μM 스톡으로부터 취함) 가 각 PCR 반응에 첨가되었다. 사용된 프라이머는 다음과 같다: 쥐 Muc5ac (Fwd: CTCCGTCTTAGTCAATAACCACC (서열번호 156); Rev: GGAACTCGTTGGATTTTGGACTG (서열번호 157)); 쥐 GAPDH 집 유지유전자로서 (Fwd: ACAAAATGGTGAAGGTCGGTG (서열번호 158); Rev: TGGCAACAATCTCCACTTTGC 서열번호 159)).
28일 후에, Muc5AC 의 mRNA 농도 (도 12D) HDM 촬렌지 기간에 아이소타입 단독을 받은 쥐에 비해 갈랙틴-10 결정 + 아이소타입을 받은 쥐가 상당히 더 높았다. 1D11 항체로의 처치는 갈랙틴-10 결정의 MUC5AC mRNA 농도 증가에 대한 효과를 역전시켰다. 가블렛 세포의 전형적인 과립-풍부한 모양을 가진 폐 상피세포의 강화된 PAS 염색에 의해 가시화한 대로, 좀 더 상세한 조직학적 분석은 현저히 증가 된 가블렛 세포 이형성 및 점액 생산을 보였다.
BHR은 천식에서 필수적인 특징이므로, 기관지 과반응성 I(Bronchial hyperreactivity) (BHR)이 생쥐 모델에서 평가되었다. 기계적으로 환기시킨 생쥐의 흡입된 기관지수축제 메타콜린 (methacholine)에 대한 반응에서 CLC 투여의 효과는 플랙시벤트의 역동적 저항의 침윤적 측정 (FlexiVent invasive measurement of dynamic resistance) (Hammad et al. 2007)을 사용하여 평가되었다. 간략하게, 생쥐는 유레탄 (urethane)으로 마취시키고 및 D-튜보큐라린 (D-tubocurarine)를 사용하여 마비시키고, 기관절제시키고 (tracheotomize) 및 18G 카테터를 삽관시키고, 이어서 플랙시벤트 장치로 (Flexivent apparatus) 기계적인 환기를 시켰다. 카테터를 통해 증가되는 양의 메타콜린 (methacholine) (0-200 μg/ml)을 에어로졸화시켰다 (aerosolize). 메타콜린 투여 후 10초마다 2분 동안 주어진 표준 흡입 작동 후 역동적 저항 (Dynamic resistance) (rrs)이 기록 되었다. HDM에 CLCs의 첨가는 HDM 단독에 비교하여 기관지 수축의 정도 부양시켰으며 및 1D11으로의 처치는 이 효과를 완전히 중화시켰다 (도 12F 참조).
참고문헌
1.
Ackerman, S.J., D.A. Loegering, and G.J. Gleich, The human eosinophil Charcot-Leyden
crystal protein: biochemical characteristics and measurement by radioimmunoassay . J
Immunol, 1980. 125(5): p. 2118-26.
2.
Weller, P.F., D.S. Bach, and K.F. Austen, Biochemical characterization of human eosinophil Charcot - Leyden crystal protein ( lysophospholipase ). J Biol Chem, 1984. 259(24): p. 15100-5.
3.
Archer, G.T. and A. Blackwood, Formation of Charcot - Leyden Crystals in Human Eosinophils and Basophils and Study of the Composition of Isolated Crystals. J Exp Med, 1965. 122: p. 173-80.
4.
Leonidas D, Elbert BL, Zhou Z-Q, Leffler H, Ackerman SJ, Acharya KR. Crystal structure of human Charcot - Leyden crystal protein, an eosinophil lysophospholipase, identifies it as a new member of the carbohydrate binding family of galectins . Structure 1995; 3:1379-1393
5.
Franke, D., et al., ATSAS 2.8: a comprehensive data analysis suite for small-angle scattering from macromolecular solutions. Journal of applied crystallography, 2017. 50(4): p. 1212-1225.
6.
Petoukhov, M.V., et al., New developments in the ATSAS program package for small-angle scattering data analysis. Journal of applied crystallography, 2012. 45(2): p. 342-350.
7.
Rambo, R.P. and J.A. Tainer, Accurate assessment of mass, models and resolution by small-angle scattering. Nature, 2013. 496(7446): p. 477.
8.
Fischer, H., et al., Determination of the molecular weight of proteins in solution from a single small-angle X-ray scattering measurement on a relative scale. Journal of Applied Crystallography, 2010. 43(1): p. 101-109.
9.
Schneidman-Duhovny, D., et al., FoXS , FoXSDock and MultiFoXS : Single-state and multi-state structural modeling of proteins and their complexes based on SAXS profiles. Nucleic acids research, 2016. 44(W1): p. W424-W429.
10.
Trewhella, J., et al., 2017 publication guidelines for structural modelling of small-angle scattering data from biomolecules in solution: an update. Acta Crystallographica Section D: Structural Biology, 2017. 73(9).
11.
Kool, M., et al., An unexpected role for uric acid as an inducer of T helper 2 cell immunity to inhaled antigens and inflammatory mediator of allergic asthma. Immunity, 2011. 34(4): p. 527-40.
12.
Perros, F., et al., Blockade of CCR4 in a humanized model of asthma reveals a critical role for DC-derived CCL17 and CCL22 in attracting Th2 cells and inducing airway inflammation. Allergy, 2009. 64(7): p. 995-1002.
13.
Emsley, P., Lohkamp, B., Scott, W. G., & Cowtan, K. Features and development of Coot. Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography, 2010, 66(4): p. 486-501.
14.
Adams, Paul D., et al. " PHENIX : a comprehensive Python-based system for macromolecular structure solution." Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography 2010, 66(2): p. 213-221
15.
Bricogne G., Blanc E., Brandl M., Flensburg C., Keller P., Paciorek W., Roversi P, Sharff A., Smart O.S., Vonrhein C., Womack T.O. (2017). BUSTER. Cambridge, United Kingdom: Global Phasing Ltd.
16.
Hammad H., et al., Activation of the D prostanoid 1 receptor suppresses asthma by modulation of lung dendritic cell function and induction of regulatory T cells. J. Exp. Med. 2007, 204: p. 357-367
표 14:
갈랙틴
-10에 결합하는
scFv
항체의 경 쇄
CDR
서열
(Heavy chain
CDR
sequences of
scFv
antibodies binding to
galectin
-10)
표 15:
갈랙틴
-10에 결합하는
scFv
항체의 경 쇄
CDR
서열
(Light chain
CDR
sequences of
scFv
antibodies binding to
galectin
-10)
표 16 :
갈랙틴
-10에 결합하는
scFv
항체의
VH
및
VL
서열
(
VH
and
VL
sequences of
scFv
antibodies binding to
galectin
-10)
표 17: X--
레이
데이터 및 교정 통계
(X-ray data and refinement statistic)
실시 예시 15. 추가의
갈랙틴
-10 항체 생산 (Production of additional
galectin
-10 antibodies).
추가의 갈랙틴-10 항체가 인간 및 게먹이원숭이(시아노몰거스, cynomolgus) 갈랙틴-10을 대상으로 바이오-패닝으로 선택되었으며 및 ELISA 및 BLI로 갈랙틴-10 (인간 및 게먹이원숭이) 에의 결합을 스크린 하였다.
세 개의 시아노몰거스 갈랙틴-10 동종체(isoform)(WGS, REF 및 YRT)의 서열을 아래에 인간 서열과 함께 보여준다.
인간:
MSLLPVPYTEAASLSTGSTVTIKGRPLACFLNEPYLQVDFHTEMKEESDIVFHFQVCFGRRVVMNSREY
WGS: MSLLSVPHTESVSLSTGSTVTIKGRPLVCFLNEPHLQVDFHTEMKEDSDIAFHFQVYFGNRVVMNSREF
REF:
MSLLSVPHTESVSLSTGSTVTIKGRPLVCFFNEPHLQVDFHTEMKEDSDIAFHFQVYFGNRVVMNSREF
YRT:
MSLLSVPHTESVSLSTGSTVTIEARPLVCFFNEPHLQVDFHTEMKEDSDIAFHFQVYFGNRVVMNSREY
GAWKQQVESKNMPFQDGQEFELSISVLPDKYQVMVNGQSSYTFDHRIKPEAVKMVQVWRDISLTKFNVSYLKR
KIWKEEVESKNMPFQDGQEFELSILVLEDKYQVMVNGQAYYNFNHRIPVSSVKMVQVWRDISLTKFNVSN---
KIWKEEVESKNMPFQDGQEFELSILVLEDKYQVMVNGQAYYNFNHRIPVSSVKMVQVWRDISLTKFNVSN---
RTWKEEVESKNMPFQDGQEFELRILVLEDKYQVMVNGQAYYNFNHRIPVSSVKMVQVWRDISLTKFNVSN---
(WGS: 서열번호 267; REF: 서열번호 268; Y RT: 서열번호 269)
인간 및 시아노몰거스의 3개 동종체 (isoform)의 서열 분석은 다음을 보여 주었다:
- 시아노몰거스 갤랙틴-10의 동종체는 인간 갤랙틴-10에 78 - 81% 상동성을 보여 준다.
·
- WGS 및 REF 는 31번 위치에 단일 아미노산이 다르다 31 (F/L).
·
-YRT 동종체는 REF 동종체에 비해 6개 다른 아미노산을 23 (K/E), 24 (G/R), 69 (F/Y), 70 (K/R) , 71 (I/T) 및 92 (S/R) 부위에 보여준다.
·
-단지 YRT 동종체 만 사람에서와 같이 타이로신 잔기를 69번 위치에 가지고 있다.
갈랙틴-10에 결합을 보이는 11개 scFv 클론이 서열 분석되었으며 및 실시 예시 8에서 서술된 대로 인간 Fc 융합분자로서 리포멧 (reformat) 되었다.
A. ELISA 및 바이오-레이어 간섭법 (Bio-Layer Interferometry (BLI)에 의한 스크리닝 (Screening of the scFv by ELISA and Bio-Layer Interferometry (BLI) technology)
(i) ELISA 분석
인간 갈랙틴-10에 대한 scFv (세포질 추출물) 및 시아노몰거스 갤랙틴-10의 2개의 가능한 동종체 (WGS 및 REF)의 결합 능력을 ELISA결합으로 분석하였다. 간략하게, 맥시솝 플레이트 (maxisorp plate)를 1 μg/mL의 인간 갈랙틴-10-His ( human galectin-10-His) 또는 시아노몰거스 (cynomolgus) WGS 또는 REF 동종체 갈랙틴-10-His (cynomolgus WGS or REF isoform galectin-10-His)로 하룻밤 동안 코팅하고, 그 후 1% PBS 카제인 (Casein)으로 차단하고, scFv-Myc 태그를 함유하는 세포질 추출물(periplasmic extract) (1/5로 PBS 0.1% 카제인 으로 희석) 과 함께 배양시켰다. 결합 자의 검출은 항-Myc-HRP 항체 (Bethyl, Catalog A190-105P)로 수행되었다. TMB 기질이 첨가되고 및 반응은 0.5M H2SO4로 정지시켰다. 흡광도는 450nm (참조는 620nm)에서 테칸 기기 (Tecan instrument)로 측정되었다. 마지막으로, 가공하지 않은 데이터 (OD 값)은 Graph Pad Prism 7.01을 사용하여 플럿되었으며, 도 13에서 보여준다. OD 값이 0.5보다 큰 것으로 정의되는 결합자의 MP 플레이트당 및 라이브러리당 수가 측정되었다. 블랭크 대조군 및 음성 대조군 (상관없는 타겟에 결합하는 scFv 세포질 추출물)이 포함되었으며 및 기대했던 대로 결합이 일어나지 않았다.
결과는 마지막 회 선택 후에 상당한 수의 인간 또는 시아노몰거스 (REF 및 WGS 동종체) 갈랙틴-10에 대한 scFv의 결합이 나왔음을 보여준다. 그러나 인간 시아노몰거스 결합자 (REF 및 WGS isoforms) 의 강화에는 매스터플레이트 사이에 상당한 차이가 관찰되었으며, 10,6-87%의 인간 결합자 및 0-92,6%의 시아노몰거스 WGS & REF 동종체 결합자가 관찰되었다. 두 마리 라마에서, 카파 라이브러리보다 (kappa library) 람다 라이브러리 (Lambda library) 가 확실히 더 높은 퍼센트로 인간 및 시아노몰거스 갈랙틴-10에 대한 scFv의 결합을 보였다. 특히 라이브러리 1K의 케이스는 0-4%의 시아노몰거스 결합자 (WGS & REF isoforms)를 보여주었다. 반대로 라이브러리 1L 및 2L은 76-92.6% 인간 시아노몰거스 결합자 (human cynomolgus binders)를 보였으며, 이는 람다 라이브러리는 인간 시아노몰거스 교차 반응성 결합자의 평균 제공자 (mean provider) 일수 있음을 제시한다. 산성 pH 용출이 적용된 (MP07 및 MP08) 컨디션으로부터 만들어진 매스터 플레이트는 상대적으로 높은 퍼센트의 인간 및 시아노몰거스 결합자를 보였으며 카파 라이브러리는 0-60.9% 의 결합자 및 람다 라이브러리는 76.1-89.1% 결합자를 보였다. 예상 한대로 및 이들의 아주 가까운 호모로지 (homology) 때문에 일반적인 경향의 OSCF는 시아노몰거스 갈랙틴-10-His의 WGS 및 REF 동종체에 비슷한 결합력을 보였다.
표 18. 선택 후 만들어진
MP로부터의
scFv
세포질 추출물의 ELISA 결합 스크리닝 (ELISA binding screening of the
scFv
periplasmic
extracts from
MP
generated after selection).
(ii)
BLI
분석
선택 동안에 만들어진 6개의 매스터 플레이트로부터, ELISA 스크리닝 캠페인 동안에 인간 및 시아노몰거스 결합을 보여준 321 클론을 고르고 및 이들의 결합능력을 Octet RED96을 사용하여 BLI에서 검사하였다. 간략하게, 인간 및 시아노몰거스 WGS 또는 REF 동종체의 갈랙틴-10-His 태그를 키네틱 버퍼 (Kinetic buffer)) (PBS 0.01% BSA 0.002% Tween 20) 에 200 μg/mL로 희석시키고, 안티-펜타-His 1K 센서 팁 (Anti-Penta His 1K sensor tips) (ForteBio, Cat#18-5120) 에 고정 수준이 1nm에 도달될 때까지 캡처시켰다. 그 후, scFv 클론을 함유하는 희석된 세포질 추출물 ((1/5 로 키네틱 버퍼에서)을 적용시키고 및 고정된 갈랙틴-10-His에 결합/해리를 포르테바이오 데이타 분석 9.0 소프트웨어 (ForteBio Data analysis 9.0 software)(reference Tips 차감, 1.1 결합모델)를 사용하여 측정하였다. 스크리닝 동안에, scFv의 효과적인 농도가 알려지지 않았으므로, scFv의 해리 (떨어지는-비율)만 측정될 수 있고 및 클론에 따라 많이 다를 수 있다. 결과는 선택된 대부분의 scFv클론은 인간 시아노몰거스 교차-반응성을 보여주는 것이 확인되었다 (도 14 참조)
B. scFv-인간 Fc 팬낼의 성질 규명 (Characterization of the scFv-human Fc panel)
ELISA 및 T3000 비아코어로 (Biacore) SPR 가 scFv-인간 Fc 팬낼의 결합성질을 평가하기 위하여 사용되었다.
(
i) ELISA 분석
초기 스크리닝 동안에 사용된 세트업과 비슷하게, 11개 새로운 scFv-인간 Fc 클론의 상대적인 결합 성질이 ELISA로 분석되었다. 간략하게 맥시솝 플레이트 (maxisorp plate)를 인간 또는 시아노몰거스 (cynomolgus) WGS 또는 REF 동종체의 갈랙틴-10-His로 0.2μg/mL로 하룻밤 동안 코팅하고 및 1% PBS 카제인 (Casein)으로 차단하고, scFv-인간 FC 융합분자의 시리즈 희석액 (100 nM부터, 1/5 희석, 8포인트 희석)과 함께 배양시켰다. 몇 번의 세척 단계 후, 결합된 scFv-인간 Fc의 검출은 항-인간 FCC-HRP 항체 (Jackson ImmunoResearch, Catalog 109-035-008) 로 수행되었다. 흡광도는 450nm (참조는 620nm)에서 테칸 기기 (Tecan instrument)로 측정되었다. 마지막으로, 가공하지 않은 데이터 (OD 값)은 Graph Pad Prism 7.01을 사용하여 플럿되었다. 각 클론의 EC50 값은, 비-선형 회귀 (non-linear regression (log(agonist) 대비 반응 변이 기울기(response Variable slope) (4 계수) 로 계산되었으며, 아래 표 19에 보고 되었다. 양성 대조군으로서, 이전의 갈랙틴-10 항체 팬낼로부터의 클론6F05이 포함되었다.
표 19.
scFv
-인간
Fc
갈랙틴
-10 항체
팬낼의
ELISA 결합 성질 (ELISA binding characteristics of the panel of
scFv
-human
Fc
galectin
-10 antibodies)
scFv-인간 Fc 팬낼의 코팅된 인간 및 시아노몰거스 갈랙틴-10에의 결합은 상대적 결합 능력이 인간에서 0.08-1.48 nM 및 시아노몰거스 WGS 및 YRT 동종체의 갈랙틴-10에서 0.04-2.53 nM 의 범위를 보였다. 하기의 관찰이 얻어졌다:
-양성 대조군 클론 6F05는 인간 타겟에 대하여 scFv 팬낼의 가장 좋은 상대적 결합능력을 보였다 (0.02 nM EC50 값 및 2.4 OD 값을 Bmax로). 그러나 이클론은 시아노몰거스 두 개의 동종체에 대하여 약한 결합을 보여준다 ((모호한 적응 ((fitting) 및 Bmax 0.3 OD 값과동등)).
-클론 0A06, 10B02 및 8H11은 인간 갈랙틴-10에 대한 EC50 값 0.08-0.18 nM 사이 및 두 개의 시아노몰거스 동종체의 갈랙틴-10에 대하여 0.04-0.13 nM로 가장 좋은 결합능력을 보였다.
-클론 7C05를 제외하고, 나머지 scFv-인간 Fc 팬낼은 두 개의 시아노몰거스 동종체의 갈랙틴-10에 대하여 비슷한 결합 프로화일을 보였다.
(ii)
SPR
분석
·
갈랙틴-10에 대한 scFv-인간 Fc 팬낼의 결합 성질이 비아코아 T3000에서 분석 되었다. 이 목적을 위하여, CM5 Chip이 다클론 항-인간 Fc (anti-human Fc) 8000 RU로 코팅되었고, 그 후 결합 신호가 약 150RU 에서 도달하도록 고정 농도의 scFv-인간 Fc 팬낼 (1.5 μg/mL)이 캡처 되었다. 마지막으로, 시리즈 희석액의 인간 또는 시아노몰거스 WGS 동종체의 갈랙틴-10-His (시리즈 희석, 5 μg/mL부터 1/ 2, 6포인트 희석) 가 주사되었다. 가공하지 않은 데이터는 BIA 평가 소프트웨어 (BIA evaluation software)로 블랭크는 제하고 분석되었다 ((4-3). 마지막으로, 갈랙틴-10-His에 대한 각 scFv-인간 Fc의 kd / KD 및 Rmax 는 BIA 평가 소프트웨어에서 Fit Kinetics simultaneous ka/kd / Binding with mass transfer / Local Rmax 를 사용하여 결정되었다. 결과는 아래 표에 보여준다.
표 20
scFv
-인간
Fc
갈랙틴
-10 항체 패널의 결합 성질의
비아코아
T3000 (Biacore T3000)에서의 성질규명 (Characterization of the binding properties of the panel of
scFv
-human
Fc
galectin
-10 antibodies on
Biacore
T3000)
상기 보고된 ELISA 결합 데이터와 비슷하게, scFv-인간 Fc 융합 팬낼은, 인간 및 시아노몰거스 WGS 동종체의 갈랙틴-10 둘 다에 대해 다양한 결합 성질을 보였다. 하기의 관찰이 얻어졌다.
-scFv-인간 Fc 팬낼은 인간 갈랙틴-10-His에 대하여 0.3-5.4 nM 사이 및 시아노몰거스 WGS 동종체의 갈랙틴-10-His에 대하여 0.5-7.9 nM 사이의 친화력을 보였다.
-클론 10A06, 7B07 및 7C05는 인간 갈랙틴-10-His에 대하여 해리-비율 (off-rates) 2.5E - 04 s-1 에서 12.4E-04 s-1까지, 가장 높은 친화력을 보였다 (각각 0.3 nM 에서 1.3 nM 까지). 클론7B07 은 이 팬낼에서 가장 빠른 부착-비율(on-rate) (15E05 1/Ms) 및 Rmax (90 RU)를 보였다.
-scFv-인간 Fc 팬낼은 인간 타겟에 비교하여 시아노몰거스 갈랙틴-10-His 2-배 낮은 Rmax를 보였다.
-클론 7C05, 10A06, 8H11은, 시아노몰거스 WGS 동종체의 갈랙틴-10-His에 대한 해리-비율 (off-rates)이 1.4E - 04 s-1 에서 8E-04 s- 1까지 로 가장 높은 친화력 (각각 0.4 nM 에서 0.9 nM까지)을 보였다. 클론 7B07은 팬낼의 가장 빠른 부착-비율 (on-rate) (500E05 1/Ms) 및 해리-비율(off-rate)(766E-04)을 보인다.
C. 선택된 scFv 클론의 생쥐 IgG1 뼈대에의 리포멧 (Reformatting of selected scFv clones into a mouse IgG1 backbone)
하기 표에서 보여준 대로 7개의 선택된 리드 (leads)는 더 나아간 성질 규명을 위하여 생쥐 IgG1 뼈대 (backbone)에 재-클론 되었다.
표 21 생쥐
IgG1
뼈대 (backbone)에 재-포멧된
scFv
클론
팬낼
(Panel of scFv clones reformatted into a mouse IgG1 backbone)
이들 7 항체의 CDR, VH 및 VL 서열은 하기 표 32, 33, 및 34에 보여준다.
리포멧을 위해, 각 클론의 VH 및 VL 부위는 PCR 증폭되고 및 생쥐 IgG1 고정 도메인 을 암호화하는 발현 벡터에 프레임에 맞게 (in frame) 클론 되었다.
생쥐 IgG1 생산이 폴리에틸렌이민 (polyethylenimine) (PEI)을 통해 HE 293E 세포에 1 중 쇄 당 3 경 쇄의 비율로 형질 감염시켜 수행되었다. 생산 6일 후에, 생쥐 단일 클론 항체가 세포 상등액으로부터 단백질-A 세파로즈 비드 (protein-A sepharose beads)를 사용하여 정제하였다. 마지막으로, 항체 순도 및 온전성을 평가하기 위하여 SDS-PAGE 분석이 수행되었다 (MW는 150 kD과 동등).
실시 예시 16. 생쥐
IgG1
포멧에서
갈랙틴
-10 항체의 성질
규명 (
Characterization of the
galectin
-10 antibodies in mouse
IgG1
format)
A. 갈랙틴-10 생쥐 IgG1 팬낼의 결합 성질의 성질 규명 (Characterization of the binding properties of the galectin-10 mouse IgG1 panel)
(i) ELISA 분석
scFv-인간 Fc 분자의 성질규명 동안 사용된 비슷한 세트업에서, 7 생쥐 IgG1 항체의 상대적인 결합 능력이 ELISA로 분석되었다. 간략하게, 맥시솝 플레이트 (maxisorp plate) 를 0.5 μg/mL의 인산 또는 사이노몰거스 WGS 또는 YRT 동종체의 갈랙틴-10-His로 하룻밤 동안 코팅하였다. 그 후 각 클론의 시리즈 희석액 (100 nM부터, 1/4 희석, 12포인트 희석)을 코팅된 갈랙틴-10위에서 배양시켰다. 몇 번의 세척 단계 후, 결합된 생쥐 IgG1의 검출은 항-생쥐 Fc-HRP 항체 (DAMPO, Jackson ImmunoResearch, Catalog 715-035-150) 로 수행되었다. 흡광도는 450nm (참조는 620nm)에서 테칸 기기 (Tecan instrument)로 측정되었다. 가공하지 않은 데이터 (OD 값)은 Graph Pad Prism 7.01을 사용하여 플럿되었다. 각 항체의 EC50 값은, 비-선형 회귀 (non-linear regression (log(agonist) 대비 반응 변이 기울기(response Variable slope) (4 계수) 로 계산되었으며, 아래 표에 보여준다. 이전 팬낼로부터의 항체 1D11 가 비교를 위해 포함되었다.
표 22 ELISA에 의한 생쥐
IgG1
팬낼의
결합 성질의 성질규명 (Characterization of the binding properties of the mouse
IgG1
panel by ELISA)
다음이 관찰되었다.
-새로운 팬낼의 마우스 IgG1 항-갈랙틴-10 항체는 ELISA에서 상대적 결합 능력을 인간 갈랙틴-10 에 대해 57 nM 에서 4.83 nM 사이, 시아노몰거스 WGS 동종 체에서 0.03 nM to 0.60 nM 및 시아노몰거스 YRT 동종체에서 0.06 nM to 0.30 nM 의 범위를 각각보였다.
- 클론 1D11 는 인간 갈랙틴-10에 대해 가장 좋은 상대적 결합능력을 보이나 (0.10 nM EC50 값), 시아노몰거스 갈랙틴-10에 대해서는 결합을 보이지 않았다.
-인간 갈랙틴-10에 대해, 클론 B07, 10A06 및 8 H11는 EC50 값 0.57 nM 및 1.46 nM 사이로 가장 높은 상대적 결합 능력을 보였다. WGS 동종체 갈랙틴-10에 대해, 클론 8H11, 10A06 및 10B02는, EC50 값 0.03 nM 및 0.04 nM 사이로, 인간 타겟에 비교하여 18-53 배 더 강력한 가장 좋은 결합자인 것으로 발견되었다.
- 마지막으로, 클론 10A06, 10B02 및 11F12 는 시아노몰거스 갈랙틴-10의 YRT 동종체에서 EC50 값 0.06 nM 및 0.21 nM 사이로 가장 좋은 상대적 결합능력을 보였다
(ii)
SPR
분석
갈랙틴-10에 대한 생쥐 IgG1 팬낼의 결합 성질이 비아코아 T3000에서 분석 되었다. 이 목적을 위하여, 캡처 방식이 사용되었다, 여기서 고정된 농도의 (1.5 μg/mL) 생쥐 IgG1 클론이 결합 신호가 약 150RU 에서 도달하도록 CM5 Chip에 고정된 다클론 항-생쥐 Fc 항체에 의해 캡처 된다. 그 후, HBS-EP pH7.4로 희석된 시리즈 희석액의 인간 및 시아노몰거스 WGS 동종체의 갈랙틴-10-His (시리즈 희석, 5 μg/mL부터 1/ 2) 가 주사되었다. 가공하지 않은 데이터는 BIA 평가 소프트웨어 (BIA evaluation software)로 블랭크는 제하고 분석되었다. 갈랙틴-10-His에 대한 각 mAb의 kd / KD 및 Rmax 는 BIA 평가 소프트웨어에서 Fit Kinetics simultaneous ka/kd / Binding with mass transfer / Local Rmax 를 사용하여 결정되었다.
표 23 E 비아코아 T3000에 의한 생쥐
IgG1
팬낼의
결합 성질의 성질 규명
(Characterization of the binding properties of the mouse
IgG1
panel by Biacore T3000)
다음이 관찰되었다.
- 이 단계에서, 7 인간 시아노몰거스 교차 활성인 클론은 나노 몰에서 서브-나몰의 범위에서 o ff rate은 4.2x10-4 s-1 및 660x10-4 s-1로, 인간 및 시아노몰거스 갈랙틴-10에 (WGS 동동체) 대한 친화력을 보인다,
- 클론 1D11는 인간 갈랙틴-10에 가장 좋은 결합자 중의 하나이지만 (친화도가 0.7 nM과 동등) 그러나 시아노몰거스 항원 (Rmax 7 RU와 동등)에는 결합하지 않거나 낮게 결합하는 것으로 발견 되었다.
-인간 갈랙틴-10에 대해, 클론 7B07, 10A06 및 8H11는 EC50 값 0.57 nM 및 1.46 nM 사이로 가장 좋은 상대적 결합 능력을 보여준다. WGS 동종체 갈랙틴-10에 대해, 클론 8H11, 10A06 및 10B02는, EC50 값 0.03 nM 및 0.04 nM 사이로, 18-53-배 더 강력하다
_ 마지막으로, 클론 10A06, 10B02 및 11F12 는 시아노몰거스 갈랙틴-10-His의 YRT 동종 체에서 EC50 값 0.06 nM 및 0.21 nM 사이로 가장 좋은 상대적 결합능력을 보였다.
B.시험관 내에서의 재조합 인간 CLC 결정의 용해 ( Dissolution of recombinant human CLC crystals in vitro)
항-갈랙틴-10 생쥐 IgG1 클론에 의해 유도되는 CLCS의 용해를 회전하는 디스크 공초점 현미경을 사용하여 모니터 되었다. 간략하게, 인간 CLC를 함유하는 용액을 고정된 농도 (50μM)의 생쥐 IgG1 항-갈랙틴-10-항체와 배양하기 전에 μ-슬라이드 웰에 스폿 하였다. 마지막으로, 각 웰을 위해, 이미지 위치를 정하고, 및 각 위치는 매 3-5분마다 총 120분 동안 이미지화하였다. 마지막으로, 소프트웨어에 근거하여, CL Cs에 의해 점령된 표면을 측정하였고, 및 실험 시작할 때 CL에 의해 커버 된 초기 면적을 1로서 정의하였다. 음성 대조군으로, 생쥐 IgG1 동종체 대조군이 포함되었다. CL Cs의 전체적인 크기가 시간에 대비하여 측정되었고 및 Graph Pad Prism 7.01 에 플럿하였다 (도 15 참조). 각 생쥐 IgG1 클론의 EC50 및 EC90 값을 비-선형 회귀 (non-linear regression (log(agonist) 대비 반응 변이 기울기(response Variable slope) (4 계수) 로 계산되었으며, 아래 표에 보고된다.
표 24 시험관 내에서의
갈랙틴
-10 결정의 용해 (Dissolution of
galectin
-10 crystals
in vitro)
실시예시 17.
Fab
포맷의
갈랙틴
-10 항체 특성화
A.
Fab
클론 및
bELISA
데이터의 생성
갈랙틴-10에 대한 7개의 갈랙틴-10 마우스 IgG1 항체의 정확한 에피토프를 결정하기 위해 결정학 연구를 실시하였다.. 이를 위해 상기 실시예 16에서 특징으로하는 7개의 항갈랙틴-10 항체를 Fab로 제작하였다.
이를 위해 각 클론의 VH 및 VL을 특정 프라이머를 사용하여 PCR 증폭하고, 전기 영동으로 정제하고, 제한 효소 (BsmBi)로 분해하고, 인간 불변 도메인을 포함하는 사전 소화 된 벡터에 연결하였다. VL (pUPEX116.9) 또는 VH에 대한 CH1 불변 도메인 (pUPEX86, 힌지 영역의 일부 포함). 라이 게이션 된 각 생성물의 열 충격에 의해 Top10 박테리아로 형질 전환을 수행하고 세포를 암피실린 (벡터의 내성 유전자)이있는 아가 로스 플레이트로 옮겼다. 하룻밤의 배양 후, 결찰 된 생성물은 많은 수의 단일 콜로니를 보였지만 음성 대조군 (빈 벡터)에서는 콜로니가 관찰되지 않았다. 클론 (VH 및 VL) 당 4 ~ 8 개의 콜로니를 골라서 시퀀싱을 위해 보냈다. 정확한 삽입물을 보여준 클론을 선택하고 DNA 서열을 정제하기 위해 증폭했다 (MidiPrep).
7 개의 Fab 리드 클론의 생산은 포유류 세포에서 시작하였다. 폴리에틸렌 이민 (PEI)을 통해 HEK293E 세포에 통합 된 3 개의 경쇄에 대해 1 개의 중쇄 비율로 형질 감염을 수행했다. 생산 10 일 후, Capture Select IgG-CH1 세파로스 비드를 사용하여 세포 상청액으로부터 인간 Fab를 정제했다. 마지막으로, Fab 분자의 순도와 무결성을 평가하기 위해 SDS-PAGE 분석을 수행했다 (MW ~ 55 kDa).
리드 항-갈랙틴-10 Fab의 결합 능력은 ELISA를 결합하여 테스트 하였다. 간단히 말해서, maxisorp 플레이트는 인간 갈랙틴-10-His 1 ㎍ / mL로 밤새 코팅되었다. 그런 다음 각 클론의 연속 희석 (4μM, 희석 1/4, 희석 12 포인트)을 코팅 된 갈랙틴-10에서 배양했다. 여러 세척 단계 후, 결합 된 Fab의 검출은 항-인간 IgG Fab 특이 적-퍼옥시다제를 사용하여 수행되었다. 흡광도는 Tecan 기기로 450nm (620nm 기준)에서 측정되다. 결과를 아래 표에 나타내었다.
표 25.
갈랙틴
-10
Fab의
결합 특성 특성화
ELISA 결합 데이터는 Fab가 코팅 된 인간 갈랙틴-10-His에 대한 결합 능력을 기준으로 3 개의 그룹으로 분리 될 수 있음을 보여주었다.
-그룹 1 : 클론 8H11, 10D02 및 11F12는 가장 높은 상대적 결합 능력 (16-24 nM) 및 Bmax (0.74-1.3 OD 값)를 가진 최상의 결합제로 확인되었다.
-그룹 2 : 클론 7B07은 EC50 값이 24 nM이고 최대 결합 용량이 0.65 OD 값과 같은 비교적 좋은 결합 능력을 보였지만 느린 언덕 경사(sill slope)를 보였으며 이는 갈랙틴-10과의 또 다른 결합 상호 작용을 시사한다.
-그룹 3 : 가장 낮은 상대적 결합 능력 (61-90 nM) 및 Bmax (0.36-0.74 OD 값)를 가진 덜 강력한 결합제는 클론 10B02, 10A06 및 11F02를 포함한다.
-1,4 nM과 동일한 상대적 결합 능력을 가진 클론 1D11은 전체 mAb 데이터와 일치하는 인간 갈랙틴-10에 대한 최고의 결합 능력을 나타냈다.
B.
갈랙틴
-10과 복합체를 이루는
갈랙틴
-10
Fab
단편의 결정 구조
실시예 12에 기술 된 바와 같이 갈랙틴-10과 복합 된 상이한 Fab 단편의 결정 구조가 수득되었다. 결과는 도 16에 제시되어있다. 이들 구조는 클론 8H11, 1D11, 4E8, 6F5, 10D2 및 11F12가 티로신에 결합 함을 보여준다. 69 (Y69), 또는 Y69에 매우 근접한 에피토프 인 반면, 7B7은 갈랙틴-10 이량 체의 반대쪽에 결합한다.
갈랙틴-10 이량 체에 대한 갈랙틴-10 Fab의 결합에 관여하는 갈랙틴-10의 잔기는하기 표 26에 제시되어있다.
표 26.
갈랙틴
-10
Fab의
CDR과
직접 상호 작용하는
갈랙틴
-10의
잔기
갈랙틴-10 이량 체에 대한 결합에 관여하는 갈랙틴-10 Fab CDR 잔기는하기 표 27에 제시되어있다.
표 27. 결정 구조에서
갈랙틴
-
10 이량
체의
잔기와
접촉하는
Fab의
CDR
잔기
실시예시 18.
갈랙틴
-10
mAbs
및
Fab
단편에 의한
CLC
용해 비교
기존의 재조합 인간 갈랙틴-10 결정을 시험관 내에서 용해시키는 갈랙틴-10 Fab의 능력을 갈랙틴-10 mAb와 비교 하였다. 프로토콜은 위의 실시예 16에 기술된 바와 같았다.
결과는 도 17과 아래 표에 나타내었다. 일부 경우에 Fab 단편은 상응하는 mAb보다 CLC를 용해하는 데 더 효과적이었다.
표 28
갈랙틴
-10
mAbs
및
Fab에
의해
매개되는
CLC
용해
실시예시 19.
갈랙틴
-10에 결합하는
VHH
항체 생산
2 개의 라마를 재조합 인간 갈랙틴-10으로 면역시켰다. 메신저 RNA (mRNA)는 면역화 된 라마의 혈액에서 분리 된 PBMC에서 정제되었. mRNA는 cDNA를 얻기 위해 무작위 6 량체 프라이머로 역전사되었다. 태그가 지정된 프라이머를 cDNA에서 직접 사용하여 VHH 영역을 PCR 증폭했다. 그 다음 PCR 산물을 정제하고, 분해하고, 파지 미드 벡터 (VHH-Myc-His 태그)에서 클로닝하여 VHH 라이브러리를 생성했다.
인간과 사이 노몰 구스 갈랙틴-10에 대한 적절한 결합 능력을 가진 VHH 클론을 선택하기 위해 바이오 패닝 접근법이 사용되었다. 이를 위해, 인간 갈랙틴-10-His에 대해 1 차 선택을 수행 한 후 인간 또는 사이 노몰 구스 WGS 또는 YRT 동형 (His 태그)에 대한 2 차 농축을 수행했다. 간단히 말해서, 인간 또는 사이 노몰 구스 (WGS 또는 YRT 이소폼) 갈랙틴-10-His를 Maxisorp ELISA 플레이트에 고정시킨 다음 VHH 파지 라이브러리 (입력)를 추가했다. 결합되지 않은 파지는 여러 세척 단계를 통해 제거되었다. 마지막으로 선별 된 파지를 증폭하기 위해 대장균 감염을 수행하였다. 이 과정은 인간 및 사이노몰구스(cynomolgus) 갈랙틴-10에 대해 높은 친화 도로 VHH를 발현하는 파지 집단의 농축을 초래했다.
2 라운드의 용출 된 파지로부터 0.5 및 0.05 ㎍/mL의 인간, 사이 노몰 구스 WGS 이소 폼 및 갈랙틴-10의 사이 노몰 구스 YRT 이소 폼에 비해 단일 클론이 생성되었다. VHH 클론 항-인간 및 사이 노몰 구스 갈랙틴-10을 함유하는 주변 세포질 추출물을 ELISA 및 BLI (BioLayer Interferometry)에서 결합 능력에 대해 스크리닝했다.
인간 및 사이 노몰 구스 (WGS 및 YRT 동형) 갈랙틴-10에 대한 VHH (주위 세포질 추출물)의 결합 능력을 ELISA로 분석했다. 간단히 말해서, maxisorp 플레이트를 인간 갈랙틴-10-His 또는 사이노몰구스(cynomolgus) WGS 또는 YRT 이소 폼 갈랙틴-10-His 1 μg/mL로 밤새 코팅 한 다음 PBS 1% 카세인으로 차단한 다음 주변 세포질 추출물 (희석 1 / 5 in PBS 0.1 % Casein) 태그가 붙은 VHH-Myc를 포함한다. 결합제의 검출은 항 -Myc-HRP 항체 (Bethyl, Catalog A190-105P)로 수행되었다. TMB 기질을 첨가하고 0.5M H2SO4로 반응을 중단시켰다. 흡광도는 Tecan 기기로 450nm (620nm 기준)에서 측정되었다. 마지막으로, GraphPad Prism 7.01을 사용하여 원시 데이터 (OD 값)를 플로팅하고 도 18에 표시했다. MP 플레이트 당 0.5보다 높은 OD 값으로 정의된 바인더의 수를 결정했다. 블랭크 대조군 및 음성 대조군 (관련없는 표적에 결합하는 VHH 주변 세포질 추출물)이 포함되었고 예상대로 결합이 없음을 보여주었다.
표 29 ELISA 스크리닝에 의한
VHH
주변 세포질 추출물의 특성화
결합 ELISA 외에도 BLI를 사용하여 갈랙틴-10 결합 클론을 스크리닝했다.
선택하는 동안 생성된 두 개의 마스터 플레이트에서 ELISA 스크리닝 캠페인 동안 인간 및 사이노몰구스 결합을 나타내는 130개의 클론을 선택하고 Octet RED96을 사용하여 BLI에서 결합 능력을 테스트했다. 간단히 말해서, 갈랙틴-10-His 태그가 붙은 인간 및 사이노몰구스 WGS 또는 YRT 이소 형은 Anti-Penta His 1K 센서 팁 (ForteBio, Inc.)에서 캡처하기 전에 200 μg/mL의 키네틱 완충액 (PBS 0.01 % BSA 0.002 % Tween 20)에 희석되었다. 1 nm의 고정화 수준에 도달 할 때까지 Cat # 18-5120). 그런 다음 VHH 클론을 포함하는 희석 된 주변 세포질 추출물 (키네틱 버퍼에서 1/5)을 적용하고 고정화 된 갈랙틴-10-His에 대한 결합/해리를 ForteBio 데이터 분석 9.0 소프트웨어를 사용하여 측정했다 (참조 팁 빼기 (최대 1개까지로드 됨). nm와 관련이없는 His 태그 단백질, 1.1 결합 모델). 스크리닝 중에 VHH의 유효 농도가 알려지지 않았고 클론마다 많이 다를 수 있기 때문에 VHH의 해리 (off-rate)만 결정할 수 있다. 결과는 도 19에 나타나 있으며, 선택된 VHH 클론의 대부분이 인간 사이 노몰 구스 교차 반응성을 나타냈음을 확인하였다.
갈랙틴-10에 대한 결합을 나타내는 선택된 VHH 클론을 시퀀싱을 위해 보냈습다. CDR1-2-3 VHH 서열을 기반으로 각 클론을 패밀리로 분류했습다. 이 과정에서 44 가구가 결정되었다. 스크리닝 결합 데이터 (ELISA 및 BLI) 및 이들의 서열을 기반으로 15 개의 VHH 클론을 추가 특성화를 위해 선택했다. 정제된 VHH의 생산은 E.coli에서 시작되었다. 이를 위해, 선택된 VHH는 먼저 적은 양의 글루코스가있는 2TY 배지에서 성장되었고, VHH의 생성은 IPTG (1mM)와 함께 밤새 배양하여 유도되었다. 다음날, 박테리아 펠렛은 2회 동결/해동 ( -80 ° C 및 -20 ° C). 원심 분리 후, VHH-His 태그는 Talon Metal 친 화성 수지 (BD Catalog 635504)를 사용하여 세포 상청액으로부터 정제되었다. 마지막으로, VHH 분자 (MW ~ 15kDa)의 순도와 무결성을 평가하기 위해 SDS-PAGE 분석을 수행했다.
추가 특성화를 위해 선택된 15개 클론의 CDR 및 VHH 도메인 서열은 아래 표 35 및 36에 제시되어있다.
실시예시 20.
갈랙틴
-10에 결합하는
VHH
항체의 특성화
A. ELISA에
의해 측정 된
갈랙틴
-10에 대한
VHH
클론의 결합
15개의 VHH 클론의 결합 능력을 ELISA로 분석하였다. 간단히 말해서, maxisorp 플레이트를 인간 또는 사이노몰구스 WGS 또는 YRT 이소 폼 갈랙틴-10-His로 1 μg/mL로 밤새 코팅하고 PSB 1 % 카세인으로 차단 한 후 VHH의 연속 희석액과 함께 배양하였다 (4 μM에서, 희석 1/3, 12 포인트 희석). 여러 세척 단계 후, 결합 된 VHH의 검출은 항 -Myc-HRP 항체 (Bethyl, Catalog A190-105P)로 수행되었다. 흡광도는 Tecan 기기로 450 nM (620 nm 기준)에서 측정되었다. 마지막으로 원시 데이터 (OD 값)를 GraphPad Prism 7.01에 플로팅했다. 비선형 회귀로 계산된 각 화합물의 EC50 값 (로그 (작용제) 대 반응 변수 기울기 (4 개의 매개 변수))을 표에 나타내었다. 양성 대조군으로 이전 인간 특이적 패널의 클론 1D06이 포함되었다. 결과를 아래 표에 나타내었다.
표 30 ELISA에 의한
갈랙틴
-10
VHH
클론의 특성화
다음과 같이 관찰되었다.
- 클론 13C06 및 13A05는 인간 갈랙틴-10에서 27-69.7 nM EC50 값과 WGS 이소폼에서 10.3-77.8nM EC50 값 및 사이노몰구스 갈랙틴-10의 YRT 동형 16.2-66.3 nM EC50 값과 동일한 상대 결합 능력을 가진 최고의 인간 사이노몰구스 교차 반응성 결합제이다.
-클론 13C07, 13E09, 13G12 및 13H07은 인간 갈랙틴-10에 대한 중간 정도의 결합 능력을 보였으며 EC50 값은 105-180 nM이지만 사이노몰구스 갈랙틴-10에 대한 강한 결합 능력은 WGS 이소 폼에서 7.1-438 nM 사이이고 YRT 이소 폼에서 1.3-33 nM이다.
-클론 13C03은 인간 갈랙틴-10에 대한 강한 결합을 보였으며, 상대 결합 능력은 30 nM이지만 사이노몰구스 동형 (Bmax 0.1 OD 값)에 약한 결합을 나타냈다.
-인간 갈랙틴-10에 대해 독점적으로 선택된 이전 scFv 라이브러리에서 분리 된 클론 1D06은 90 nM과 동일한 EC50 값을 보였지만 사이 노몰 구스 교차 반응성은 없었다.
B.
VHH
클론은 시험관 내에서 인간 재조합
CLC의
용해
VHH 클론 1D06에 의해 유도 된 CLC 용해는 회전 디스크 공 초점 현미경을 사용하여 모니터링되었다. 간단히 말해서, 인간 CLC를 포함하는 용액은 고정 된 농도 (50 μM 또는 100 μM)의 VHH 항체 1D06과 함께 배양하기 전에 μ-슬라이드 웰 플레이트에 스팟팅되었다. 마지막으로 각 웰에 대해 이미징 위치를 정의하고 각 위치를 총 120 분 동안 3-5 분마다 이미지화했다. 마지막으로 소프트웨어를 기반으로 CLC가 차지하는 표면을 결정하고 실험 시작시 CLC가 포함하는 초기 영역을 1로 정의했다. 음성 대조군으로 VHH 이소 타입 대조군이 포함되었다. CLC의 전체 크기는 시간이 지남에 따라 측정되었으며 GraphPad Prism 7.01에 표시되었다 (도 20 참조). VHH 클론의 EC50 및 EC90 값은 비선형 회귀 (로그 (작용제) 대 반응 변수 기울기 (4 개의 매개 변수))로 계산되었으며 아래 표에 나타내었다.
표 31.
VHH
클론
1D06에
의한
CLC의
용해
표 32.
갈랙틴
-10에 결합하는
scFv
항체의
중쇄
CDR
서열
표 33.
갈랙틴
-10에 결합하는
scFv
항체의
경쇄
CDR
서열
표 34.
갈랙틴
-10에 결합하는
scFv
항체의
VH
및
VL
서열
표 35.
갈랙틴
-10에 결합하는
VHH
항체의
CDR
서열
표 36.
갈랙틴
-10에 결합하는
VHH
항체의
VHH
도메인 서열
본 발명은 여기에 설명 된 특정 실시 예에 의해 범위가 제한되지 않는다. 실제로, 본 명세서에 설명 된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변형은 전술 한 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 명백 할 것이다. 그러한 수정은 첨부 된 청구 범위 내에 속하도록 의도된다. 더욱이, 여기에 설명 된 모든 실시 예는 광범위하게 적용 가능하고 적절한 경우 임의의 다른 모든 일관된 실시 예와 결합 할 수있는 것으로 간주된다.
참조에 의한 통합
다양한 간행물이 전술 한 설명 및하기 실시 예 전반에 걸쳐 인용되며, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
<110> ARGENX BVBA
VIB VZW
UNIVERSITEIT GENT
<120> GALECTIN-10 ANTIBODIES
<130> 2020FPI-09-003/EP
<150> GB1806099.6
<151> 2018-04-13
<150> GB1901648.4
<151> 2019-02-06
<160> 266
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 1
Asp Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 2
Gly Ile Ser Trp Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Met Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 3
Asp Arg Asn Leu Gly Tyr Arg Leu Gly Tyr Pro Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 4
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 5
Ala Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 6
Pro Gly Asp Arg Leu Trp Tyr Tyr Arg Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 7
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<213> Artificial
<400> 7
Thr Ser Tyr Tyr Ala Trp Ser
1 5
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<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 8
Val Ile Ala Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
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<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 9
Tyr Ile Arg Gly Ser Ser Trp Ser Gly Trp Ser Ala Tyr Asp Tyr
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<400> 10
Thr Asn Ser Tyr Tyr Trp Ser
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<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 11
Ala Ile Ala Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial
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Arg Pro Asn Trp Tyr Arg Ala Leu Asp Ala
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Asn Arg Tyr Thr Gln Glu Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
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Ser Ser
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<213> Artificial
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Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Val Ser Asn Arg Gly Ser Gly Val Pro
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Gly Val Lys Ala Glu Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Ala
85 90 95
Thr Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
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20 25 30
Ser Trp Tyr Thr Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Glu Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asp Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
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Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Gly Thr Ser Ser Asp Asn Ile
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Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu
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<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 139
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Thr Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Gly Ser Gly Val Ala Gly Thr Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly
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Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<213> Artificial
<400> 140
Gln Pro Val Leu Asn Gln Pro Ser Ala Val Ser Val Ser Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gln Gly Gly Asn Phe Gly Tyr Tyr Tyr Val
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Arg Asp Ser Gly Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asp Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Gly Ser Ser Ser Asp Asn Ala
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1 5 10 15
Gly Ser Thr Val Thr Ile Lys Gly Arg Pro Leu Ala Cys Phe Leu Asn
20 25 30
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35 40 45
Asp Ile Val Phe His Phe Gln Val Cys Phe Gly Arg Arg Val Val Met
50 55 60
Asn Ser Arg Glu Tyr Gly Ala Trp Lys Gln Gln Val Glu Ser Lys Asn
65 70 75 80
Met Pro Phe Gln Asp Gly Gln Glu Phe Glu Leu Ser Ile Ser Val Leu
85 90 95
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1 5
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Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
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Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
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Cys Pro
50
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Cys Pro Ser Cys Pro
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Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
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Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Gly Gly Ala Ala Ala Cys
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20
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Gly
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial
<400> 194
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1 5 10 15
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Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 195
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Ser Ala Ser Val Ser Val Ala Leu Thr Gln
1 5 10 15
Thr Ala Lys Ile Thr Cys Asp Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Ala
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105
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<211> 117
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<213> Artificial
<400> 196
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Asn
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 197
Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Leu Gly Lys
1 5 10 15
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20 25 30
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100 105 110
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<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 198
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tyr
20 25 30
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Thr Val Ser Ser
115
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<213> Artificial
<400> 199
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<213> Artificial
<400> 200
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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115
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<213> Artificial
<400> 201
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<213> Artificial
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<213> Artificial
<400> 203
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1 5 10 15
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<213> Artificial
<400> 204
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115
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<213> Artificial
<400> 205
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<213> Artificial
<400> 206
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<213> Artificial
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Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
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65 70 75 80
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85 90 95
Asn Asn Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
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<213> Artificial
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Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Tyr
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<213> Artificial
<400> 254
Gln Leu Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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<213> Artificial
<400> 256
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
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<213> Artificial
<400> 257
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ser Ser Ser Tyr Ser Met Ser
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<213> Artificial
<400> 258
Glu Leu Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<213> Artificial
<400> 262
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<212> PRT
<213> Artificial
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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<213> Artificial
<400> 264
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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<213> Artificial
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<213> Artificial
<400> 266
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115
Claims (58)
- 갈랙틴-10에 결합하는 길항제로서, 상기 길항제는 갈랙틴-10의 에피톱에 결합하고 및 그러므로 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스 (crystal packing interface)를 차단하는 특징이 있는, 길항제.
- 제1항의 길항제에 있어서, 이 길항제는, 용해성 갈랙틴-10에 결합할 때, 갈랙틴-10 의 결정화를 억제하고 및/또는 이 길항제가 결정 갈랙틴-10에 결합할 때, 결정 갈랙틴-10의 용해를 촉진하는, 특징이 있는, 길항제.
- 갈랙틴-10에 결합하는 길항제로서, 이 길항제는, 용해성 갈랙틴-10에 결합할 때, 갈랙틴-10 의 결정화를 억제하는, 특징이 있는, 길항제.
- 갈랙틴-10에 결합하는 길항제로서, 이 길항제가, 결정 갈랙틴-10에 결합할 때, 결정 갈랙틴-10의 용해를 촉진하는, 특징이 있는, 길항제
- 재1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스로부터의 아미노산 하나 또는 그 이상을 포함하는 갈랙틴-10 의 에피톱에 결합하는 특징이 있는, 길항제.
- 재1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 이 길항제는 인간 갈랙틴-10에 결합하는, 길항제.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는: Ser2, Leu3, Leu4, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Ala12, Ser13, Thr16, Thr42, Glu43, Met44, Lys45, Asp49, Ile50, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Leu96, Pro97, Asp98, Lys99, Gln101, Met103, Gly106, Gln107, Ser108, Ser109, Tyr110, Thr111, Asp113, His114, Arg115, Ile116, Lys117, Ala120, Gln125, Thr133, Lys134, Phe135, Asn136, Val137, Ser138, Tyr139, Leu140 및 Lys141 으로 구성 된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산을 포함하는 에피톱에 결합하는, 길항제이며, 상기 잔기는 서열번호 141에 참조하여 동정 되는, 길항제.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 Tyr69
을 포함하는 에피톱에 결합하거나 또는 Tyr69에 인접한 아미노산을 포함하는 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 아미노산 Thr42, Glu43, Lys45, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, His114, Arg115, Ile116, Lys117 및 Ala120을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 아미노산 Thr42, Glu43, Lys45, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, His114, Arg115, Ile116, Lys117, Glu119, Ala120 및 Lys122를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제10항의 길항제에 있어서, 상기 에핍톱은 추가로 Gln74 및 Asp 98을 포함하는, 길항제.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 갈랙틴-10의 크리스탈 패킹 인터페이스로부터의 아미노산으로 구성된 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 갈랙틴-10의 이량체화 인터페이스 (dimerization interface)로부터의 아미노산 하나 또는 그 이상을 포함하는 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제13항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는: Pro5, Pro7, Leu27, Ala28, Cys29, Leu31, Asn32, Glu33, Pro34, Tyr35, Gln37, His41, Glu46, Glu47, Gln55, Arg60, Arg61, Arg67, Trp72, Gln75, Trp127, Arg128 및 Asp129로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 하나 또는 그 이상을 포함하는 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 Glu33, Gly59, Arg60 및 Lys79를 포함하는 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제15항의 길항제에 있어서, 상기 에피톱이 Leu31, Glu33, Gly59, Arg60, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82 및 Gln84를 포함하거나 또는 이로 구성된, 특징이 있는, 길항제.
- 제15항의 길항제에 있어서, 상기 에피톱은 추가로 Gln74, Gln75 및 Glu77를 포함하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제17항의 길항제에 있어서, 상기 에피톱이 Glu33, Gly59, Arg60, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82 및 Ser109를 포함하거나 또는 이로 구성된, 특징이 있는, 길항제.
- 제17항의 길항제에 있어서, 상기 에피톱이 Glu33, Gly59, Arg60, Trp72, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Lys79, Asn80, Met81, Pro82, Gln84 및 Ser109를 포함하거나 또는 이로 구성된, 특징이 있는, 길항제.
- 제17항의 길항제에 있어서, 상기 에피톱이 Glu33, Gly59, Arg60, Gln74, Gln75, Val76, Glu77, Ser78, Lys79, Asn80, Met81, Pro82, Phe83, Gln84를 포함하거나 또는 이로 구성된, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 Thr42, Asp49, Glu68, Tyr69, Gly70, Ala71, Lys73, Arg115, Ile116, Lys117, Glu119 및 Ala120을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 Glu43, Asp49, Glu68, Tyr69, Lys73, Asp98, Asp113, His114, Arg115, Lys117, Glu119 및 Ala120을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 Asp49, Glu68, Tyr69, Lys73, Gln74, Asp98, Asp113, His114, Arg115, Ile116 및 Lys117을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 Ser2, Leu3, Leu4, Pro5, Pro7, Tyr8, Thr9, Glu10, Ala11, Lys23, Arg25, Met44, Gly86, Gln87, Glu88, Phe89, Glu90, Asn105, Gln125, Thr133, Lys134 및 Phe135를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피톱에 결합하는, 특징이 있는, 길항제.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는: 소 분자 (small molecule); 억제적 폴리펩티드 (inhibitory polypeptide); 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및 아피바다 (affibody), 아필린 (affilin), 아피티닌 (affitin), 아드낵틴 (adnectin), 아트리머 (atrimer), 에베신(evasin), 다르핀( DARPin), 안티칼린 (anticalin), 아비머(avimer), 휘노머 (fynomer), 베르사바디 (versabody) 및 두오칼린 (duocalin)으로 부터 선택되는 항체 모방사 (antibody mimetic) 로 구성된 군으로부터 선택되는, 길항제
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 길항제.
- 제26항의 길항제에 있어서, 상기 항체는 면역글로블린 (immunoglobulin), 바람직하게는, IgG 인, 길항제.
- 제26항의 길항제에 있어서, 상기 길항제는 VHH 항체인, 길항제.
- 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 항체는 인간화된 또는 비-인간 항체의 생식세포계열화된 변이체인, 길항제.
- 제29항의 길항제에 있어서, 상기 비-인간 항체는 낙타류-유래인, 길항제.
- 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 항체가 인간 IgG1, 바람직하게는 IgG1의 CH1 도메인, 힌지 부위 (hinge region), CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인을 포함하는, 길항제.
- 제26항 내지 제31항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 항원 결합 단편은: 항체 경 쇄 가변 도메인 (light chain variable domain) (VL); 항체 중 쇄 가변 도메인 (heavy chain variable domain) (VH 또는 VHH); 단일 체인 항체 (single chain antibody) (scFv); F(ab')2 단편; Fab 단편; Fd 단편; Fv 단편; 한-팔 (one-armed) ((단일가 (monovalent)) 항체; 디아바디 (diabodies), 트리아바디(triabodies), 테트라바디 (tetrabodies), 또는 이러한 항원 결합 단편들의 조합 (combination), 집합 (assembly) 또는 접합 (conjugation)에 의해 형성된 어느 항원 결합 분자, 로 구성된 군으로부터 선택되는 항원결합 단편인, 길항제.
- 제32항의 길항제에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 Fab 단편인, 길항제.
- 제26항 내지 제33항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 항체 및 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)을 포함하고 상기 VH 및 VL 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함하는, 길항제:
(i) 서열번호 3을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 2를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii)서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 5를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 60을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 59를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 9를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 8을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 7을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 12를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 10을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 68을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vii) 서열번호 20을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 19를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 75를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(viii) 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ix) 서열번호 25를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 76를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(x) 서열번호 28을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 27을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xi) 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xii) 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 84를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 83을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiii) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 35를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiv) 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xv) 서열번호 41을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 91을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 89를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvi) 서열번호 43을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 92를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvii) 서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 44를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xviii) 서열번호 47을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xix) 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xx) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 52를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 51을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(xxi) 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
- 제26항 내지 제34항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 항체 및 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 중 쇄 가변 도메인 (heavy chain variable domain) (VH) 및 경 쇄 가변 도메인 (light chain variable domain) (VL)의 조합을 포함하는, 길항제:
(i) 서열번호 99의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iv) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(v) 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vi) 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vii) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(viii) 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ix) 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(x) 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xi) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xii) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xiii) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xiv) 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xv) 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xvi) 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xvii) 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xviii) 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xix) 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 136의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(xx) 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(xxi) 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL.
- 제26항 내지 제33항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 항체 및 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 ((VL)을 포함하며 상기 VH 및 VL 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함하는, 길항제:
(i) 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 160을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 179를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 168을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 167을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 184를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 171을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 169를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 187을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 172를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 188을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(vii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
- 제36항의 길항제에 있어서, 상기 항체 및 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 중 쇄 가변 도메인 (heavy chain variable domain) (VH) 및 경 쇄 가변 도메인 (light chain variable domain) (VL)의 조합을 포함하는, 길항제:
(i) 서열번호 194의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아마 노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 195의 아마 노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iv) 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(v) 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vi) 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(vii) 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL.
- 제26항 내지 제33항 중 어느 한 항의 길항제에 있어서, 상기 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함하는 VHH 도메인을 포함하는 항체인, 길항제:
(i) 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ii) 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 212를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 211을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iii) 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iv) 서열번호 219를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(v) 서열번호 222를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 221을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 220를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vi) 서열번호 225를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 224를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 223을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vii) 서열번호 228을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 227을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(viii) 서열번호 231을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 230을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 229를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ix) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(x) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 238을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 237을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xii) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiii) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiv) 서열번호 244를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 243을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 242를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xv) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xvi) 서열번호 247을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 246을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 245을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1; 및
(xvii) 서열번호 249를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 248을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1.
- 제38항의 길항제에 있어서, 상기 VHH 도메인은 서열번호 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265 또는 266중 어느 하나로 대표되는 아미노산 서열, 또는 이들과 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VHH 도메인, 길항제:
- 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편으로, 여기서 항체 및 이의 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)을 포함하고 상기 VH 및 VL 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함하는, 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편:
(i) 서열번호 3을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 2를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii)서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 5를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 60을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 59를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 9를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 8을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 7을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 12를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 10을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 68을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vii) 서열번호 20을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 19를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 75를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(viii) 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ix) 서열번호 25를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 76를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(x) 서열번호 28을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 27을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xi) 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xii) 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 84를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 83을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiii) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 35를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xiv) 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 11을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xv) 서열번호 41을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 91을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 89를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvi) 서열번호 43을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 92를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xvii) 서열번호 6을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 44를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 4를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xviii) 서열번호 47을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xix) 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(xx) 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 52를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 51을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(xxi) 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
- 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편으로, 상기 항체 및 이의 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)의 조합을포함하는, 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편:
(i) 서열번호 99의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 100의 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(ii) 서열번호 101의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(iii) 서열번호 103의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(iv) 서열번호 105의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 106의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(v) 서열번호 107의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(vi) 서열번호 109의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(vii) 서열번호 111의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(viii) 서열번호 113의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(ix) 서열번호 115의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(x) 서열번호 117의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xi) 서열번호 119의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xii) 서열번호 121의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 122의 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xiv) 서열번호 125의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xv) 서열번호 127의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xvi) 서열번호 129의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xvii) 서열번호 131의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xviii) 서열번호 133의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xix) 서열번호 135의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 136의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL;
(xx) 서열번호 137의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL; 및
(xxi) 서열번호 139의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VH 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 VL.
- 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편으로, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 가변 중 쇄 도메인 (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 ((VL)을 포함하며, 상기 VH 및 VL 도메인은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함하는, 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편:
(i) 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 160을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 179를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(ii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iii) 서열번호 168을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 167을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 184를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(iv) 서열번호 171을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 169를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 187을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(v) 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 172를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 188을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1;
(vi) 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1; 및
(vii) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR3; 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR2; 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 HCDR1; 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR3; 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR2; 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 LCDR1.
- 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편으로, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기로부터 선택된 가변 중 쇄 도메인 (variable heavy chain domain) (VH) 및 가변 경 쇄 도메인 (variable light chain domain) (VL)의 조합을 포함하는, 갈랙틴-10에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편:
(i) 서열번호 194의 아마 노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아마 노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 195의 아마 노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(ii) 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iv) 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(v) 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(vi) 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(vii) 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL.
- 갈랙틴-10에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 서열을 포함하는 VHH 도메인 포함하는, 갈랙틴-10에 결합하는 항체:
(i) 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ii) 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 212를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 211을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iii) 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(iv) 서열번호 219를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(v) 서열번호 222를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 221을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 220를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vi) 서열번호 225를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 224를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 223을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(vii) 서열번호 228을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 227을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(viii) 서열번호 231을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 230을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 229를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(ix) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(x) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 238을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 237을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xi) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xii) 서열번호 241을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 240을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 239를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiii) 서열번호 236을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 235를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 226을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xiv) 서열번호 244를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 243을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 242를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xv) 서열번호 234를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 233을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 232를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1;
(xvi) 서열번호 247을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 246을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 245를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1; 및
(xvii) 서열번호 249를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR3; 서열번호 248을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR2; 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR1.
- 갈랙틴-10에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 VHH 도메인을 포함하고 및 상기 VHH 도메인은 서열번호 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265 또는 266중 어느 하나로 대표되는 아미노산 서열, 또는 이들과 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 구성되는, 갈랙틴-10에 결합하는 항체.
- 항체 또는 이의 항원결합 단편으로, 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편과 같은 에피톱에 결합하는, 항체 또는 이의 항원결합 단편.
- 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 이의 VH, VL 또는 VHH 도메인을 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오타이드.
- 제47항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 작동적으로 조절서열에 연결되어 항체, 항원 결합 단편, 가변 중 쇄 도메인, 가변 경 쇄 도메인 또는 VHH 도메인을 숙주 세포 또는 무-세포 발현 시스템에서 발현이 되게 하는, 발현 벡터.
- 제48항의 발현 벡터를 함유하는 숙주 세포 또는 무-세포 발현 시스템.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 길항제 또는 제40항 내지 제46항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를포함하는, 약학적 조성물.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 길항제, 제40항 내지 제46항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제50항에 따른 약학적 조성물의 의약품으로서의 용도.
- 필요로 하는 개체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 개체에 치료적으로 효과 있는 양의 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 길항제, 제40항 내지 제46항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제50항에 따른 약학적 조성물의 투여를 포함하는, 방법.
- 제52항의 방법에 있어서, 상기 길항제, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물은 갈랙틴-10 결정의 존재 또는 형성과 관련된 질환 또는 컨디션을 예방 또는 치료하기 위하여 투여 되는, 방법.
- 제52항 또는 제53항의 방법에 있어서, 상기 길항제, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물은: 천식 (asthma); 만성 비부비동염 (chronic rhinosinusitis); 소아지방변증 (celiac disease); 기생충감염 (helminth infection); 위장관 호산구 염증 (gastrointestinal eosinophilic inflammation); 낭포성 섬유종 (cystic fibrosis) (CF); 알레르기 기관지 폐 아스페르길루스증 (allergic bronchopneumonia espadrilles) (AB PA); 척-슈트라우스 맥관 염 (Chung-Straus vascular); 만성 호산구 폐렴 (chronic eosinophilic pneumonia), 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia) 으로 구성된 군으로 부처 선택된 질환 또는 컨디션을 예방 또는 치료하기 위하여 투여되는, 방법.
- 제54항의 방법에 있어서, 상기 질환 또는 컨디션은 천식인, 방법.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 길항제 또는 제40항 내지 제46항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편을 환자로부터 얻은 샘플에서 갈랙틴-10을 검출하는데 사용하는, 용도.
- 제56항에 따른 용도에 있어서, 상기 환자 샘플은 점액 샘플 또는 가래 샘플인, 용도.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 길항제 또는 제40항 내지 제46항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는, 키트.
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