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KR20170126855A - 알쯔하이머병에서 인간화된 타우 항체 - Google Patents

알쯔하이머병에서 인간화된 타우 항체 Download PDF

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KR20170126855A
KR20170126855A KR1020177016640A KR20177016640A KR20170126855A KR 20170126855 A KR20170126855 A KR 20170126855A KR 1020177016640 A KR1020177016640 A KR 1020177016640A KR 20177016640 A KR20177016640 A KR 20177016640A KR 20170126855 A KR20170126855 A KR 20170126855A
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KR
South Korea
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seq
antibody
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variable region
sequence
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KR1020177016640A
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미찰 노박
에바 콘트세코바
브라니슬라브 코바세치
로스티스라브 스크라바나
Original Assignee
악손 뉴로사이언스 에스이
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Filing date
Publication date
Application filed by 악손 뉴로사이언스 에스이 filed Critical 악손 뉴로사이언스 에스이
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Abstract

본 발명은 생화학, 분자 생물학, 및 알쯔하이머병 진단, 예방 및 치료 분야이다. 본 명세서는 정상(건강한) 및 병적인(질병-관련된) 타우를 식별할 수 있는 인간 타우에 대한 인간화된 항체를 제공한다.

Description

알쯔하이머병에서 인간화된 타우 항체{HUMANIZED TAU ANTIBODIES IN ALZHEIMER'S DISEASE}
서열 목록
본 출원은 EFS-웹을 통해 ASCII 포맷으로 제출된 서열 목록을 함유하며 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다. 상기 ASCII 사본(2014년 11월 19일자로 생성됨)은 11634.6003.00000_SL.txt라 명명하며 크기가 284,497 바이트이다.
분야
본 발명은 생화학, 분자 생물학, 및 알쯔하이머병 진단, 예방 및 치료 분야이다. 본 명세서는 정상(건강한) 및 병적인(질병-관련된) 타우를 식별할 수 있는 인간 타우에 대한 인간화된 항체를 제공한다.
알쯔하이머병(AD)은 고등 뇌 구조, 예를 들어 기억 및 인지에 관련된 구조를 파괴하는 진행성의 신경퇴행성 질환이다. 상기 질병은 인지 기능의 결손, 및 기억, 학습, 언어 및 고의적이고 의도적인 운동 수행 능력의 감퇴에 이르게 한다. AD의 치료 및 예방에 유효한 방법 및 조성물이 필요하다.
AD는 뇌의 뉴런외 플라크 및 세포내 및 세포외 신경섬유매듭의 존재를 조직학적 특징으로 한다. 플라크는 주로 β 아밀로이드(Aβ)로 구성되는 반면, 매듭은 타우의 병적인 형태, 예를 들어 병적인 타우 형태이성질체 및 이들의 응집체를 포함한다. AD 병리학에서 타우에 대해 인지된 역할이 다수의 연구에서 설명되었다. 예를 들어 브락(Braak)은, AD 신경퇴행에 가장 밀접한 상관현상은 타우 매듭의 존재이며, 아밀로이드 플라크의 존재는 아님을 입증하였다(Braak, H., et al. Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathol 82:239 - 259 (1991)).
타우는 생리학적 환경에서 엄격한 3-차원 구조의 부재를 특징으로 하는, 본질적으로 무질서한 단백질과이다(Skrabana et al., 2006). 그러나, 타우 절두 및 과인산화는 본질적으로 무질서한 상태에서 다수의 용해성 및 불용성의 잘못-무질서한 구조(쌍 나선 필라멘트(PHF) 및 다른 응집체들 포함)로의 병적인 변형을 야기할 수 있다(Wischik, C.M., Novak, M., Edwards, P.C., Klug, A., Tichelaar, W., Crowther, R.A. (1988). Structural characterization of the core of the paired helical filament of Alzheimer disease, Proc Natl Acad Sci USA 85,4884-8; Wischik, C.M., Novak, M.. Thogersen, H.C., Edwards, P.C., Runswick, M.J., Jakes, R., Walker, J.E., Milstein, C., Roth, M., Klug, A. (1988). Isolation of a fragment of tau derived from the core of the paired helical filament of Alzheimer disease, Proc Natl Acad Sci USA 85, 4506-10; Novak et al., 1993; Skrabana et al., 2006; Zilka, N., et al. Chaperone-like Antibodies Targeting Misfolded Tau Protein: New Vistas in the Immunotherapy of Neurodegenerative Foldopathies. Journal of Alzheimer's disease 15 (2008) 169-179; Kovacech B, Novak M. (2010). Tau truncation is a productive posttranslational modification of neurofibrillary degeneration in Alzheimer's disease. Curr Alzheimer Res Dec;7(8):708-16); Kovacech B, Skrabana R, Novak M. (2010). Transition of tau protein from disordered to misordered in Alzheimer's disease. Neurodegener Dis 7: 24-27). 이러한 구조 변화들은 기능의 독성 획득, 고유 단백질의 생리학적 기능의 상실, 또는 이 둘 모두에 이르게 한다(Zilka et al., 2008; Kovacech B, Novak M. (2010)). Tau truncation is a productive posttranslational modification of neurofibrillary degeneration in Alzheimers' disease. Curr Alzheimer Res Dec;7(8):708-16); Kovacech B, Skrabana R, Novak M. (2010). Transition of tau protein from disordered to misordered in Alzheimer's disease. Neurodegener Dis 7: 24-27)).
타우의 생리학적 기능은 튜불린 단량체의, 뉴런 미세소관 네트워크를 구성하는 미세소관으로의 조립을 매개하는데 있다(Buee, L., Bussiere, T., Buee-Scherrer, V., Delacourte, A., Hof, P.R. (2000). Tau protein isoforms, phosphorylation and role in neurodegenerative disorders. Brain Research. Brain Research Reviews. 33, 95-130). 타우는 상기 단백질의 C-말단 부분 중에 위치한 반복적인 영역들을 통해 미세소관에 결합한다(Butner KA, Kirschner MW. 1991). 타우 단백질은 분포된 약한 부위들의 가요성 배열을 통해 미세소관에 결합한다(J Cell Biol 115: 717-730; Lee G, Neve RL, Kosik KS. 1989. The microtubule binding domain of tau protein. Neuron 2: 1615-1624). 이들 반복 도메인(R1-R4)은 서로 동일하지 않지만, 고도로 보존된 31 내지 32개 아미노산을 포함한다(Taniguchi T, Sumida M, Hiraoka S, Tomoo K, Kakehi T, Minoura K, Sugiyama S, Inaka K, Ishida T, Saito N, Tanaka C 2005 (Effects of different anti-tau antibodies on tau fibrillogenesis: RTA-1 and RTA-2 counteract tau aggregation. FEBS Lett 579:1399-1404; Taniguchi S, Suzuki N, Masuda M, Hisanaga S, Iwatsubo T, Goedert M, Hasegawa M. Inhibition of heparin-induced tau filament formation by phenothiazines, polyphenols, and porphyrins. J Biol Chem 280:7614-7623 (2005)). 인간 뇌에서, 타우의 6개의 독특한 동형들이 존재하는데, 이들은 3개(R1, R3 및 R4) 또는 4개(R1 내지 R4)의 반복 도메인과 함께 상기 단백질의 C-말단 단부에서 타우의 N-말단 부분 중의 몇몇 아미노산의 존재 또는 부재하에서 서로 상이하다. 또한, 상기 6개의 인간 동형(출현 순서대로, 각각 2N4R, 1N4R, 2N3R, 0N4R, 1N3R, 및 0N3R 서열번호 151-156)을 나타내는 도 1을 참조하시오. 미세소관 중합을 유도하는 타우의 가장 효능 있는 부분은 서열 306-VQIVYK-311(서열번호 146) 및 274-KVQIINKK-281 영역(서열번호 144), 중복 R1-R2임이 제안되었다(von Bergen M, Friedhoff P, Biernat J, Heberle J, Mandelkow EM, Mandelkow E. 2000. Assembly of tau protein into Alzheimer paired helical filaments depends on a local sequence motif ((306)VQIVYK(311)) forming beta structure. Proc Natl Acad Sci U S A 97: 5129-5134.)Id).
또한, 타우의 병적 및 생리학적 기능들은 완전길이 단백질 동형 및 그의 단편들에 의해 채택된 특이적인 구조적 입체형태, 및 본질적으로 무질서한 구조에 의해 영향을 받는 듯하다. 예를 들어 콘체코바(Kontsekova) 등은 미세소관 조립체상의 절두된 타우 분자들의 기능과 중요한 관계가 있는 몇몇 절두된 타우 분자내의 입체형태적 영역(잔기 297-IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSL-325(서열번호 145)를 포함한다)을 기재하였다(WO 2004/007547).
타우 반복부는 그의 생리학적 역할 외에, 병적인 타우 응집체 및 다른 구조의 형성에 관여하는 것으로 여겨진다. 따라서, 생리학적 및 병적 미세소관 결합 반복 영역-매개된 활성을 식별할 수 있는 타우-표적화된 치료학적 및 진단학적 접근법이 필요하다. 예를 들어, 병적인 쌍 나선 필라멘트(PHF)의 프로나제 내성 코어는 3- 및 4-반복 타우 동형의 미세소관 결합 영역들로 이루어진다(Jakes, R., Novak, M., Davison, M., Wischik, C.M. (1991). Identification of 3- and 4-repeat tau isoforms within the PHF in Alzheimer's disease. EMBO J 10, 2725-2729; Wischik, et al. 1988a; Wischik, et al. 1988b). 더욱이, 노박(Novak) 등은 93 내지 95 아미노산 길이인 상기 PHF의 프로테아제 내성 코어가 3개의 나란한 반복부로 제한됨을 입증하였다(Novak, M., Kabat, J., Wischik, C.M. (1993). Molecular characterization of the minimal protease resistant tau unit of the Alzheimer's disease paired helical filament. EMBO J 12, 365-70). 폰 베르겐(Von Bergen) 등은 최소-타우 펩티드/상호작용 동기(306-VQIVYK-311; 서열번호 146)뿐만 아니라 타우상의 제2 부위(275-VQIINK-280)(서열번호 147)(이들은 베타-시트를 형성하며 병적인 타우 응집체인 PHF의 형성을 개시하는데 잠재적인 원인으로서 기재된다)를 측정하였다(von Bergen M, Friedhoff P, Biernat J, Heberle J, Mandelkow EM, Mandelkow E. 2000. Assembly of tau protein into Alzheimer paired helical filaments depends on a local sequence motif ((306)VQIVYK(311)) forming beta structure. Proc Natl Acad Sci U S A 97: 5129-5134); EP 1214598; WO 2001/18546). 타우의 기능 지도에 대해서 도 2를 참조하시오. 결과적으로, 현행 전략들은 미세소관 안정화에서 타우의 세포내 역할을 붕괴시키지 않는 항-응집 약물의 생성을 목적으로 한다.
더욱이, 생리학적 환경하에서 타우는 세포내 세포질 단백질로 간주되지만, 세포내 타우는 세포외 공간으로 방출되며 신경퇴행에 기여할 수 있다(Gomez-Ramos, A., Diaz-Hernandez, M., Cuadros, R., Hernandez, F., and Avila, J. (2006). Extracellular tau is toxic to neuronal cells. FEBS Lett 580(20), 4842-50). 실제로, 뉴런 상실은 AD 뇌에서 신경섬유 매듭(타우 단백질로 구성됨)의 지형적인 분포와 관련되었다(West, M.J., Coleman, P.D., Flood, D.G., Troncoso, J.C. (1994). Differences in the pattern of hippocampal neuronal loss in normal ageing and Alzheimer's disease. Lancet 344,769-72; Gomez-Isla, T., Price, J.L., McKeel Jr, D.W., Morris, J.C., Growdon, J.H., Hyman, B.T. (1996). Profound loss of layer II entorhinal cortex neurons occurs in very mild Alzheimer's disease. J Neurosci 16(14),4491-500; Gomez-Isla T, Hollister R, West H, Mui S, Growdon JH, Petersen RC, Parisi JE, Hyman BT. Neuronal loss correlates with but exceeds neurofibrillary tangles in Alzheimer's disease. Ann Neurol 41:17-24 (1997)). 더욱이, 전체 타우 및 인산화된 타우의 수준이 AD 환자의 뇌척수액(CSF)에서 증가되며(Hampel, H., Blennow, K., Shaw, L.M., Hoessler, Y.C., Zetterberg, H., Trojanowski, J.Q. (2010). Total and phosphorylated tau protein as biological markers of Alzheimer's disease. Exp Gerontol 45(1), 30-40), 세포외 타우는 뇌에서 "유령 매듭"으로서 기재되었고(Frost, B., Diamond, M.I. (2009). The expanding realm of prion phenomena in neurodegenerative disease. Prion 3(2):74-7), 이는 세포내 타우가 세포외 공간으로 방출됨을 가리킨다. 또한, 세포외 타우 응집체는 세포에 들어가서 세포내 타우의 피브릴화를 자극하고, 이는 추가로 병적인 타우 응집체의 생성을 위한 타우 단량체를 시딩할 수 있다(Frost et al., 2009). 상기와 같은 연구는 세포외, 불용성 타우가 프리온-유사 방식으로 뇌 전체를 통해 타우 병리를 확산시키는 전염제로서 작용할 수 있음을 강조하였다(Frost, B., Jacks, R.L., Diamond, M.I. (2009). Propagation of tau misfolding from the outside to the inside of a cell. J Biol Chem 284(19),12845-52; Frost et al., 2009; Frost, B., Diamond, M.I. (2009). The expanding realm of prion phenomena in neurodegenerative disease. Prion 3(2):74-7). 이상 타우의 표적화는 타우-관련된 세포외 및 세포내 병리를 감소시킬 수 있다. 문헌[Eva Kontsekova, Norbert Zilka, Branislav Kovacech, Petr Novak, Michal Novak. 2014. First-in-man tau vaccine targeting structural determinants essential for pathological tau-tau interaction reduces tau oligomerisation and neurofibrillary degeneration in an Alzheimer's disease model. Alzheimer's Research & Therapy, 6:44]을 참조하시오. 따라서, 세포외 타우의 형성을 방해하거나, 그의 제거를 촉진하거나, 또는 이 둘 모두에 의해서 상기 타우를 감소시킬 수 있는 치료뿐만 아니라 세포내 질병 타우를 감소시키는 치료가 필요하다. 상기 타우의 병적인 변형에 근원하는 분자 기전의 증가된 이해는 치료를 목적으로 타우의 병적인 변형의 특이적인 표적화 가능성을 열었다.
노박(Novak) 등의 국제 공보 제 WO2013/041962 호는 AD에서 타우-타우 응집을 촉진하는 타우의 4개 영역의 발견 및 상기 4개 영역에 결합함으로써 타우 응집을 방지하는 항체를 기재한다.
다른 연구들이 타우 서열에 결합하는 항체들을 기재하고 상기 항체들 중 일부가 또한, 들리는 바에 의하면, 타우 응집 및 제거를 방해한다고 하지만(Asuni AA, Boutajangout A, Quartermain D, Sigurdsson EM. Immunotherapy targeting pathological tau conformers in a tangle mouse model reduces brain pathology with associated functional improvements. J Neurosci 27:9115-9129 (2007)), AD에서 임상 시험 중에 있는 단클론 항-타우 항체는 보고된 바가 없다.
인간 치료에서 외래(마우스) 단클론 항체의 성공은 부분적으로, 상기와 같은 외래 치료법에 대해 인간 수용자에 의해 증가된 면역원성 항글로불린 응답에 의해 방해되었다. 이는 항체의 안전성 및 약동학적 성질을 모두 복잡하게 한다. 이러한 도전은 보다 낮은 면역 반응의 위험을 수반하는 조작된 항체의 개발을 도출하였다. 다양한 특허된 공학 기술들(예를 들어 키메라화, 인간화, CDR 이식, 프레임워크 이식, 친화성 성숙화, 파지 디스플레이, 트랜스제닉 마우스)이 상기 과정을 용이하게 하기 위해서 꾸준히 개발되고 있다. 최근의 리뷰에 대해서, 문헌[Safdari Y1, Farajnia S, Asgharzadeh M, Khalili M. Antibody humanization methods - a review and update. 2013. Biotechnol Genet Eng Rev.29:175-86. doi:10.1080/02648725.2013.801235] 및 문헌[Almagro JC1, Fransson J. Humanization of antibodies. 2008. Front Biosci. 13:1619-33]을 참조하시오.
인간화된 항체는 주로 인간 불변 영역을 가지면서 모 항체의 특이성 및 친화성을 유지하며, 이는 이상적으로는 환자에 대한 면역원성 표적을 적게 제공할 것이다. 전형적인 인간화된 항체는 마우스 또는 래트 기원의 모 항체의 상보성 결정 영역(CDR), 및 대개는 인간 기원이나 종종 상기 모 항체의 결합 성질을 유지하도록 돌연변이된 프레임워크(FR) 및 불변 영역을 수반한다. 그러나 항원-결합 친화성 및 특이성은 항체의 생물학적 활성 및 임상적 성공에 영향을 미치는 유일한 인자가 아니다. 환자 면역계의 항체 활성화의 개선이 일부 인간화된 항체의 가치에 핵심인 반면, 다른 경우에는 세포-매개된 독성의 감소가 목적이다. 궁극적으로, 항체 구조 및 활성의 증가된 이해는 연구자들로 하여금, 종종 돌연변이를 통해, 보다 양호한 항원 결합 성질(결합 친화성, 표적 특이성), 효과기 기능, 안정성, 발현 수준, 정제 성질, 약동학, 및 약역학과 함께 보다 상동성인 보다 진보된 인간화된 항체를 가공하도록 한다. 이러한 개선들 중 다수는 주어진 항체의 상업적인 실행가능성에 중요하다. 때때로, 표적 결합 친화성 및 특이성을 성취한 후에, CDR 또는 FR 중의 아미노산 중 일부를 돌연변이시켜 응집에 대한 인간화된 항체의 감수성을 감소시킬 필요가 있다. 다른 때에, 상기 불변 영역을 개선된 효과기 기능을 위해 변경시킨다(전환시키거나 또는 돌연변이시킨다). 항체 기능 및 활성의 상기 및 다른 태양은 계속해서 임상용 항체의 개발에 대한 도전을 제공하고 있다. 하기에, 뜻밖의 유리한 성질들을 갖도록 조작된 타우에 대한 인간화된 항체들의 세트를 기재한다. 또한 하기에, 병적인 타우를 특이적으로 인식하고 이에 결합하여 그의 응집을 방해하는 능력을 갖는 상기 고도로 특이적이고 고도로 유효한 항체를 포함하는 신규의 방법 및 조성물을 제공한다. 이들 항체, 방법 및 조성물은 모두 AD 및 관련된 타우병증의 진단 및 치료에 유용하다.
본 발명의 상기 및 다른 목적, 특징 및 이점들은 하기에 개시된 실시태양 및 첨부된 특허청구범위의 상세한 설명의 검토 후에 자명해질 것이다.
본 명세서는 인간화된 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 개시하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은
각각 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터의 프레임워크;
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터의 프레임워크; 및
각각 인간 면역글로불린으로부터의 중쇄 및 경쇄 불변 영역
을 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 프레임워크는 9, 21, 27, 28, 30, 38, 48, 67, 68, 70, 및 95 중에서 선택된 위치들 중 하나 이상에서 치환되었으며; 상기 경쇄 프레임워크는 치환되지 않았거나 또는 5번 위치에서 치환되었고; 상기 위치들은 카밧(Kabat)에 따른다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
상기와 같은 항체 및 결합 단편은 또한 하나의 형태로 고려되며, 여기에서 9번 위치의 중쇄는 P가 점유하고, 21번 위치는 P가 점유하고, 27번 위치는 Y가 점유하고, 28번 위치는 I가 점유하고, 30번 위치는 T가 점유하고, 38번 위치는 K가 점유하고, 48번 위치는 I가 점유하고, 67번 위치는 K가 점유하고, 68번 위치는 A가 점유하고, 70번 위치는 L이 점유하고, 및/또는 95번 위치는 F가 점유한다. 하나의 실시태양에서, 상기 5번 위치의 경쇄는 S가 점유한다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 2개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 3개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 4개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 5개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 6개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 7개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 8개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 9개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 10개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 11개 전부가 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 RHA 내지 RHM, 각각 서열번호 13-25의 서열 중에서 선택되고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26(RKA)이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 RHA 내지 RHM, 각각 서열번호 13-25의 서열 중에서 선택되고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27(RKB)이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 13, RHA이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 15, RHC이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 18, RHF이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 19, RHG이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 20, RHH이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 21, RHI이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 22, RHJ이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 23, RHK이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 24, RHL이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 13, RHA이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 15, RHC이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 18, RHF이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 19, RHG이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 20, RHH이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 21, RHI이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 22, RHJ이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 23, RHK이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 24, RHL이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고; 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
또한 인간화된 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은
각각 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터의 프레임워크;
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터의 프레임워크; 및
인간 면역글로불린, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4로부터의 중쇄 및 경쇄 불변 영역
을 포함한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 28 내지 40 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 26 및 27 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 43 내지 55 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 26 및 27 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 43 내지 55 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 27 및 58 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 31의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 32의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 31의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 58의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 32의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 58의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 46의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 47의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 46의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 58의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편을 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 하기의 완전한 쇄들을 포함한다:
서열번호 47의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
서열번호 58의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한, 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하고 서열번호 RHA, 서열식별 RHB, 서열식별 RHC, 서열식별 RHD, 서열식별 RHE, 서열식별 RHF, 서열식별 RHG, 서열식별 RHH, 서열식별 RHI, 서열식별 RHJ, 서열식별 RHL, 서열식별 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나에 적어도 85% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 26, RKA에 적어도 85% 일치하는 성숙한 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체를 고려하며, 여기에서 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
또한, 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하고 서열번호 RHA, 서열식별 RHB, 서열식별 RHC, 서열식별 RHD, 서열식별 RHE, 서열식별 RHF, 서열식별 RHG, 서열식별 RHH, 서열식별 RHI, 서열식별 RHJ, 서열식별 RHL, 서열식별 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나에 적어도 90% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 26, RKA에 적어도 90% 일치하는 성숙한 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체를 고려하며, 여기에서 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
또한, 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하고 서열번호 RHA, 서열식별 RHB, 서열식별 RHC, 서열식별 RHD, 서열식별 RHE, 서열식별 RHF, 서열식별 RHG, 서열식별 RHH, 서열식별 RHI, 서열식별 RHJ, 서열식별 RHL, 서열식별 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나에 적어도 95% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 26, RKA에 적어도 95% 일치하는 성숙한 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체를 고려하며, 여기에서 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
상기 3개의 선행 단락에 따른 상기와 같은 항체 및 결합 단편은 또한 하나의 형태로 고려되며, 여기에서 9번 위치의 중쇄는 P가 점유하고, 21번 위치는 P가 점유하고, 27번 위치는 Y가 점유하고, 28번 위치는 I가 점유하고, 30번 위치는 T가 점유하고, 38번 위치는 K가 점유하고, 48번 위치는 I가 점유하고, 67번 위치는 K가 점유하고, 68번 위치는 A가 점유하고, 70번 위치는 L이 점유하고, 및/또는 95번 위치는 F가 점유한다. 하나의 실시태양에서, 상기 5번 위치의 경쇄는 S가 점유한다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 2개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 3개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 4개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 5개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 6개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 7개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 8개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 9개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 10개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 11개 전부가 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
또한, 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하고 서열번호 RHA, 서열식별 RHB, 서열식별 RHC, 서열식별 RHD, 서열식별 RHE, 서열식별 RHF, 서열식별 RHG, 서열식별 RHH, 서열식별 RHI, 서열식별 RHJ, 서열식별 RHL, 서열식별 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나에 적어도 85% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 27, RKB에 적어도 85% 일치하는 성숙한 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체를 고려하며, 여기에서 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
또한, 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하고 서열식별 RHA, 서열식별 RHB, 서열식별 RHC, 서열식별 RHD, 서열식별 RHE, 서열식별 RHF, 서열식별 RHG, 서열식별 RHH, 서열식별 RHI, 서열식별 RHJ, 서열식별 RHL, 서열식별 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나에 적어도 90% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 27, RKB에 적어도 90% 일치하는 성숙한 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체를 고려하며, 여기에서 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
또한, 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하고 서열번호 RHA, 서열식별 RHB, 서열식별 RHC, 서열식별 RHD, 서열식별 RHE, 서열식별 RHF, 서열식별 RHG, 서열식별 RHH, 서열식별 RHI, 서열식별 RHJ, 서열식별 RHL, 서열식별 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나에 적어도 95% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 27, RKB에 적어도 95% 일치하는 성숙한 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체를 고려하며, 여기에서 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
상기 3개의 선행 단락에 따른 상기와 같은 항체 및 결합 단편은 또한 하나의 형태로 고려되며, 여기에서 9번 위치의 중쇄는 P가 점유하고, 21번 위치는 P가 점유하고, 27번 위치는 Y가 점유하고, 28번 위치는 I가 점유하고, 30번 위치는 T가 점유하고, 38번 위치는 K가 점유하고, 48번 위치는 I가 점유하고, 67번 위치는 K가 점유하고, 68번 위치는 A가 점유하고, 70번 위치는 L이 점유하고, 및/또는 95번 위치는 F가 점유한다. 하나의 실시태양에서, 상기 5번 위치의 경쇄는 S가 점유한다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 2개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 3개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 4개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 5개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 6개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 7개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 8개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 9개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 단지 10개만이 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 11개 위치들 중 11개 전부가 상기와 같이 점유된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
본 명세는 또한 본 섹션(명세서의 요약)의 선행 단락들 전부에서 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, scFv, (scFv)2, 또는 scFv-Fc이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 IgG1 항체이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 글리코실화된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 Tau 151-391/4R에 적어도 5x10-7의 친화성(KD)으로 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성을 SPR에 의해 측정한다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성을 ELISA에 의해 측정한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서와 같은 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 타우에, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에 기탁된 하이브리도마 PTA-11994에 의해 분비된 DC8E8 항체의 친화성의 적어도 80%, 실질적으로 동일한 결합 친화성, 또는 보다 양호한 결합 친화성으로 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성을 SPR에 의해 측정한다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성을 ELISA에 의해 측정한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서와 같은 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체는, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 기탁된 하이브리도마 PTA-11994에 의해 분비된 DC8E8 항체와, 동일한 에피토프(들) 중 적어도 하나에서, 타우에의 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서와 같은 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체는 재조합적으로 생성된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된다.
일부 실시태양에서, 선행 4개 단락의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 선행 5개 단락 중 첫 번째 4개의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 선행 6개 단락 중 첫 번째 4개의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 선행 7개 단락 중 첫 번째 4개의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고, 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14 RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16 RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17 RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25 RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 선행 8개 단락 중 첫 번째 4개의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 선행 9개 단락 중 첫 번째 4개의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 선행 10개 단락 중 첫 번째 4개의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 선행 11개 단락 중 첫 번째 4개의 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서와 같은 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포주에서 재조합적으로 생성된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서와 같은 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 효과기 기능, 반감기, 단백질분해, 및/또는 글리코실화가 변경되도록 변형된 Fc 영역을 함유한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
하기는 선행 2개 단락의 14개의 예시적인 추가의 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체 또는 결합 단편은 항체-의존적인 세포 세포독성, 보체-의존적인 세포독성, 혈청 반감기, 생체분포, 및 Fc 수용체에의 결합으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 기능 특성을 조절하도록 변형된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나 또는 2개의 에피토프에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 3개의 에피토프 전부에 결합한다.
하기는 선행 단락의 14개의 예시적인 추가의 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
본 명세는 또한 본 섹션의 선행 단락들에서와 같은 항체를 제공하거나 고려하며, 여기에서 상기 항체는 69 ℃ 이상의 열안정성 온도를 갖는다.
하기는 선행 단락의 14개의 예시적인 추가의 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
본 명세의 또 다른 태양에서, 본 명세의 항체 및/또는 결합 단편 중 하나 및 또 다른 성분을 포함하는 조성물을 고려한다.
본 명세의 또 다른 태양에서, 본 섹션에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제 또는 안정제를 포함하는 약학 조성물을 고려한다.
하기는 선행 2개 단락의 14개의 예시적인 추가의 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
또한, 선행 조성물 중 어느 하나의 추가적인 버전을 고려하며, 여기에서 상기 조성물은 상기 항체 또는 결합 단편의 동결건조된 분말을 포함한다.
또한 선행 조성물들 중 어느 하나를 고려하며, 여기에서 상기 조성물은 주입 또는 피하 투여를 위해 제형화된다.
또한 제2 치료제를 추가로 포함하는, 상기 조성물 중 어느 하나(또한 조합이라 칭한다)를 고려한다.
하기는 선행 3개 단락의 14개의 예시적인 추가의 조성물 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 조성물 중 일부에서, 상기 치료제 및 항체 또는 결합 단편은 화학적으로 접합된다.
이들 조성물 중 일부에서, 상기 제2 치료제는 AD의 예방 및/또는 치료에 유용하다.
또한 상기 제2 치료제가 예를 들어 베타-아밀로이드 펩티드(예를 들어 N-말단 아밀로이드 베타 펩티드)(다른 화합물, 예를 들어 돌연변이된 디프테리아 독소에 접합될 수도, 접합되지 않을 수도 있다); 다른 항-타우 항체, 베타-아밀로이드에 대한 항체, 예를 들어 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵 및 IVIG 면역글로불린, A베타 올리고머를 표적화하는 다른 면역 요법, 타우의 과인산화를 방지하는 화합물, 타우 올리고머화 및 응집을 방지하거나 또는 타우 올리고머의 해중합을 촉진하는 화합물(예를 들어 메틸티오니늄, 렘버 또는 MLTX) 및 타우 응집체를 표적화하는 다른 능동 및 수동 면역 요법; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 것이 고려된다.
또한, 상기 제2 치료제가 아밀로이드-베타 응집 억제제(예를 들어 트라미프로세이트), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어 세마가세스태트), 및 감마-세크레타제 조절제(타렌플루르빌); 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 것이 고려된다.
하기는 선행 4개 단락의 14개의 예시적인 추가의 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 예에서, 상기 제2 치료제는 아세틸콜린에스테라제 억제제(예를 들어 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린, 영양 보충제), N-메틸-D-아스파테이트(NMDA) 수용체 길항물질(예를 들어 메만틴), DNA 수복의 억제제(예를 들어 피렌제핀 또는 그의 대사산물), 전이금속 킬레이터, 성장 인자, 호르몬, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 산화방지제, 지질 강하제, 선택성 포스포디에스테라제 억제제, 타우 응집의 억제제, 단백질 키나제의 억제제, 항-미토콘드리아 기능장애 약물의 억제제, 뉴로트로핀, 열충격 단백질의 억제제, 지방단백질-결합된 포스포리파제 A2의 억제제, 메만틴, 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 베타-아밀로이드 항체, 타우 펩티드, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된다.
하기는 선행 단락의 14개의 예시적인 추가의 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
또한, 상기 제2 치료제가 치료 약물 표적(36-39 페이지), 알칸설폰산 및 알칸올황산(39-51 페이지), 콜린에스테라제 억제제(51-56 페이지), NMDA 수용체 길항물질(56-58 페이지), 에스트로젠(58-59 페이지), 비-스테로이드성 소염 약물(60-61 페이지), 산화방지제(61-62 페이지), 페록시솜 증식체-활성화된 수용체(PPAR) 작용물질(63-67 페이지), 콜레스테롤-강하제(68-75 페이지); 아밀로이드 억제제(75-77 페이지), 아밀로이드 형성 억제제(77-78 페이지), 금속 킬레이터(78-79 페이지), 항-정신성 약품 및 항-우울제(80-82 페이지), 영양 보충제(83-89 페이지) 및 뇌에서 생물 활성 물질의 유용성을 증가시키는 화합물(89-93 페이지 참조) 및 전구약물(93 및 94 페이지); 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하여 WO 2004/058258(특히 16 및 17 페이지를 참조하시오)에 기재된 화합물들 중에서 선택되는 조성물을 고려한다.
또한 상기 제2 치료제가 타우 올리고머화 및 응집을 방지하는 화합물 및 타우 올리고머를 해중합시키는 화합물(예를 들어 메틸티오니늄, 렘버 또는 LMTX) 중에서 선택되는 조성물을 고려한다.
하기는 선행 2개 단락의 14개의 예시적인 추가의 실시태양들이다:
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
또 다른 태양에서, 상기 명세는 제 1 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 결합 단편 및 담체, 희석제, 부형제 또는 안정제를 포함하는 진단 시약을 제공한다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 진단 시약의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
더욱 또 다른 태양에서, 본 명세는 식 (A)-(L)-(C)를 갖는 면역접합체를 제공하며, 여기에서 (A)는 제 1 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 결합 단편이고; (L)은 링커이고; (C)는 작용제이고; 상기 링커(L)은 (A)를 (C)에 연결시킨다. 일부의 경우에, (C)는 치료제, 영상화제, 검출제 또는 진단제이다. 일부의 경우에, (C)는 치료제이다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG1 아이소타입을 갖도록 한다.
이들 면역 접합체의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이고 상기 불변 영역이 IgG4 아이소타입을 갖도록 한다.
본 발명은 상기 개시된 항체 및 타우-결합 단편 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 분자(RNA 또는 DNA)를 고려한다. 하나의 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중 어느 하나에 적어도 85% 일치하는 서열들 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중 어느 하나에 적어도 90% 일치하는 서열들 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중 어느 하나에 적어도 95% 일치하는 서열들 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중 어느 하나에 적어도 96% 일치하는 서열들 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중 어느 하나에 적어도 97% 일치하는 서열들 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중 어느 하나에 적어도 98% 일치하는 서열들 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 핵산 분자는 서열번호 96-124, 141-142, 및 127-140 중 어느 하나에 적어도 99% 일치하는 서열들 중에서 선택된 핵산 서열 중 하나 이상을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 명세는 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 RHA 내지 서열번호 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다. 다른 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편은 IgG4 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함한다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에서, 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 26, RKA 또는 서열번호 27, RKB의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 카파 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 명세는 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 RHA 내지 서열번호 RHM, 즉 서열번호 13-25 중 어느 하나의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다. 다른 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편은 IgG4 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함한다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에서, 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 26, RKA 또는 서열번호 27, RKB의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 카파 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 14, RHB의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 16, RHD의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 17, RHE의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 25, RHM의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 14, RHB의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 16, RHD의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 17, RHE의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 25, RHM의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 섹션에서 방금 기재한 핵산 분자들 중 어느 하나는 상기 항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하도록 한다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 26, RKA의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 카파 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 RKB의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 카파 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 26, RKA의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 카파 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 RKB의 아미노산 서열에 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 각각의 이들 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 단편이 카파 불변 영역을 추가로 포함하는 중쇄를 포함하는 경우가 또한 있을 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 핵산 서열은 서열번호 13-25(RHA 내지 RHM) 중 어느 하나의 HCVR을 암호화한다.
실시태양의 더욱 또 다른 세트에서, 상기 핵산 서열은 서열번호 14, RHB의 HCVR을 암호화한다.
이들 핵산의 하나의 실시태양에서, 상기 핵산 서열은 서열번호 16, RHD의 HCVR을 암호화한다.
이들 핵산의 하나의 실시태양에서, 상기 핵산 서열은 서열번호 17, RHE의 HCVR을 암호화한다.
이들 핵산의 하나의 실시태양에서, 상기 핵산 서열은 서열번호 25, RHM의 HCVR을 암호화한다.
이들 핵산의 하나의 실시태양에서, 상기 핵산 서열은 서열번호 26, RKA 및 27, RKB 중 어느 하나의 LCVR을 암호화한다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열을 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 RHA 내지 서열번호 RHM(즉 13-25) 중 어느 하나의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 상기 핵산 서열이 엄격한 조건하에서 서열번호 RHA 내지 서열번호 RHM(즉 96-108) 중 어느 하나의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 하며, 여기에서 상기 엄격한 하이브리드화 조건은 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함한다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열을 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 14, RHB의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 상기 핵산 서열이 엄격한 조건하에서 서열번호 97, RHB의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 하며, 여기에서 상기 엄격한 하이브리드화 조건은 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함한다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열을 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 16, RHD의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 상기 핵산 서열이 엄격한 조건하에서 서열번호 99, RHD의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 하며, 여기에서 상기 엄격한 하이브리드화 조건은 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함한다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열을 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 17, RHE의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 상기 핵산 서열이 엄격한 조건하에서 서열번호 100, RHE의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 하며, 여기에서 상기 엄격한 하이브리드화 조건은 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함한다.
항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열을 또한 고려하며, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 25, RHM의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 상기 핵산 서열이 엄격한 조건하에서 서열번호 108, RHM의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 하며, 여기에서 상기 엄격한 하이브리드화 조건은 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함한다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 26, RKA의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 상기 핵산 서열이 엄격한 조건하에서 서열번호 109, RKA의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 하며, 여기에서 상기 엄격한 하이브리드화 조건은 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함한다.
항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 14, RKB의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 추가로 상기 핵산 서열이 엄격한 조건하에서 서열번호 110, RKB의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하도록 하며, 여기에서 상기 엄격한 하이브리드화 조건은 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함한다.
또한 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자들의 집단을 고려하며, 여기에서:
상기 제1 핵산 분자는 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자이고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 서열번호 RHA 내지 서열번호 RHM(즉 서열번호 13-25) 중 어느 하나의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고; 여기에서
상기 제2 핵산 분자는 항-타우 항체의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함한다.
또한 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자들의 집단을 고려하며, 여기에서:
핵산 분자는 항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 26, RKA의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고; 여기에서
상기 제2 핵산 분자는 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함한다.
또한 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자들의 집단을 고려하며, 여기에서:
핵산 분자는 항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 여기에서 상기 LCVR 또는 그의 단편은 서열번호 27, RKB의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하고; 여기에서
상기 제2 핵산 분자는 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기에서 상기 HCVR 또는 그의 단편은 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함한다.
또한 중쇄 가변 영역 RHA-RHM(서열번호 13-25) 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 분자를 고려하며, 여기에서 상기 핵산 서열들은 각각 서열번호 28-40 또는 43-55 중 어느 하나로부터 선택된다. 이들 핵산 분자 중 어느 하나를 하기 단락의 핵산 분자들과 병용할 수 있다.
경쇄 RKA 또는 RKB 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 분자를 또한 고려하며, 여기에서 상기 핵산 분자는 각각 서열번호 58 및 58 중에서 선택된다.
본 명세서에 개시된 바와 같은 아미노산 또는 그의 타우-결합 단편, 경쇄 가변, 완전한 경쇄, 중쇄 가변, 완전한 중쇄를 암호화하는 상기 개시된 핵산들의 모든 가능한 조합들이 고려된다.
상기와 같은 핵산 집단의 일부 예에서, 이들은 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하며, 여기에서 상기 제1 핵산 분자는 서열번호 14, RHB의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자는 서열번호 26, RKA의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
상기와 같은 핵산 집단의 일부 예에서, 이들은 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하며, 여기에서 상기 제1 핵산 분자는 서열번호 16, RHD의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자는 서열번호 26, RKA의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
상기와 같은 핵산 집단의 일부 예에서, 이들은 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하며, 여기에서 상기 제1 핵산 분자는 서열번호 17, RHE의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자는 서열번호 26, RKA의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
상기와 같은 핵산 집단의 일부 예에서, 이들은 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하며, 여기에서 상기 제1 핵산 분자는 서열번호 25, RHM의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자는 서열번호 26, RKA의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
상기와 같은 핵산 집단의 일부 예에서, 이들은 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하며, 여기에서 상기 제1 핵산 분자는 서열번호 16, RHD의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자는 서열번호 27, RKB의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
상기와 같은 핵산 집단의 일부 예에서, 이들은 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하며, 여기에서 상기 제1 핵산 분자는 서열번호 17, RHE의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자는 서열번호 27, RKB의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
상기와 같은 핵산 집단의 일부 예에서, 이들은 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하며, 여기에서 상기 제1 핵산 분자는 서열번호 14, RKB의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자는 서열번호 27, RKB의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또한 각각 본 섹션의 선행 단락에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합 단편의 중쇄를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터들의 세트를 고려한다. 고려되는 또 다른 벡터들의 세트는 본 섹션의 선행 단락 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합 단편의 경쇄를 암호화하는 핵산을 포함하는 것들이다. 고려되는 또 다른 벡터들의 세트는 본 섹션의 선행 단락 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합 단편의 경쇄 및 본 섹션의 선행 단락에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합 단편의 중쇄를 암호화하는 핵산을 포함하는 것들이다.
이들 벡터 중 어느 하나를 포함하는 숙주 세포를 또한 고려한다. 일부 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 원핵생물이다. 다른 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 진핵생물이다. 상술한 핵산 분자들의 집단 중 어느 하나를 포함하는 숙주 세포를 또한 고려한다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 숙주 세포의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 고려된 핵산, 항체, 벡터 및 숙주 세포 중 어느 하나, 및 이들 각각의 조성물을, AD 또는 또 다른 타우병증의 예방 또는 치료를 위한; 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 상기 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하기 위한; 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 진행을 늦추기 위한; 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 AD 또는 관련 증상을 개선시키기 위한; 및 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 위험을 감소시키거나 상기 질병의 개시를 지연시키기 위한 약물로서 사용하기 위해 고려한다.
본 명세의 또 다른 태양은 핵산이 발현되고 항체 또는 그의 타우-결합 단편이 생성되도록, 방금 기재된 숙주 세포 중 어느 하나를 배양함을 포함하는, 인간 타우에 결합하는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 생성시키는 방법이다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또 다른 태양은 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 본 섹션에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 어느 하나를 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 상기 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하는 방법을 고려한다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또 다른 태양은 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 본 섹션에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 어느 하나를 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자의 뇌로부터 타우 응집체의 제거를 촉진하는 방법을 고려한다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또 다른 태양은 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 본 섹션에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 어느 하나를 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 진행을 늦추는 방법을 고려한다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또 다른 태양은 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 본 섹션에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 어느 하나를 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 AD 또는 관련 증상을 개선시키는 방법을 고려한다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또 다른 태양은 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 본 섹션에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 어느 하나를 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 인지의 치료, 예방 또는 역전 방법을 고려한다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또 다른 태양은 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 본 섹션에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 어느 하나를 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 위험을 감소시키거나 상기 질병의 개시를 지연시키는 방법을 고려한다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 이들 조성물, 항체, 및/또는 결합 단편 중 어느 하나를 주사를 통해 투여한다. 다른 실시태양에서, 이들 조성물, 항체 및/또는 결합 단편 중 어느 하나를 정맥내 주입을 통해 투여한다.
또한, 이들 조성물, 항체, 및/또는 결합 단편 중 어느 하나를 상기 피실험자에게 0.1 ㎎/㎏ 체중 내지 20 ㎎/㎏ 체중의 항체 또는 결합 단편의 용량으로, 매주 내지 매월의 빈도로 투여하여 상기 피실험자를 치료하는 실시태양을 고려한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 항체 또는 결합 단편을 0.1 ㎎/㎏ 체중 내지 10 ㎎/㎏ 체중의 용량으로 투여한다. 일부 바람직한 실시태양에서, 상기 항체 또는 결합 단편을 상기 선행 용량들 중 어느 하나에서, 적어도 3개월, 바람직하게는 적어도 6개월, 있음직하게는 적어도 12개월, 가능하게는 24개월의 기간에 걸쳐 투여한다. 또 다른 실시태양에서, 이들 조성물, 항체, 및/또는 결합 단편 중 어느 하나를 상기 피실험자에게 0.1 ㎎/㎏ 체중 내지 10 ㎎/㎏ 체중의 항체 또는 결합 단편의 용량으로, 매주 내지 매월, 바람직하게는 2주마다의 빈도로 투여하여 상기 피실험자를 치료한다. 또 다른 실시태양에서, 이들 조성물, 항체, 및/또는 결합 단편 중 어느 하나를 상기 피실험자에게 0.01 ㎎/㎏ 체중 내지 100 ㎎/㎏ 체중의 항체 또는 결합 단편의 용량으로, 매주 내지 매월의 빈도로 투여하여 상기 피실험자를 치료한다.
상기 두 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또 다른 태양에서, 본 섹션에서 방금 기재한 치료 방법들 중 어느 하나는 상기 피실험자를, 간이 정신상태 검사(MMSE), 알쯔하이머병 평가 척도-인지(ADAS-COG), 임상의 인터뷰-기반 인상(CIBI), 신경학적 검사 배터리(NTB), 치매 장애 평가(DAD), 임상적 치매 척도(CDR-SOB), 신경정신행동검사(NPI), 양전자 단층 촬영(PET-영상화) 스캔, 및 자기 공명 영상화(MRI) 스캔으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 한 가지 유형의 평가에 의해 치료 진행에 대해서 모니터함을 추가로 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 평가 유형은 신경학적 검사 배터리(NTB)이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 평가 유형은 간이 정신상태 검사(MMSE)이다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
일부 실시태양에서, 이들 방법 중 어느 하나의 실시는 상기 피실험자에게 유효량의 적어도 하나의 추가적인 치료제를 동시에 또는 연속적으로 투여함을 추가로 포함한다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
예를 들어, 이들 실시태양 중 일부에서, 상기 추가적인 치료제는 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 항-베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자 및 콜린에스테라제 억제제, 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
이들 실시태양 중 일부 다른 실시태양에서, 상기 콜린에스테라제 억제제는 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민, 또는 영양 보충제; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
상기 두 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 실시태양 중 여전히 일부의 다른 실시태양에서, 상기 추가적인 치료제는 베타-아밀로이드 펩티드(예를 들어 N-말단 아밀로이드 베타 펩티드)(다른 화합물, 예를 들어 돌연변이된 디프테리아 독소에 접합될 수도, 접합되지 않을 수도 있다); 베타-아밀로이드에 대한 항체, 예를 들어 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵, 포네주맵, 및 IVIG 면역글로불린, 에이베타 올리고머를 표적화하는 다른 면역 요법, 타우의 과인산화를 방지하는 화합물, 타우 올리고머화 및 응집을 방지하거나 또는 타우 올리고머의 해중합을 촉진하는 화합물(예를 들어 메틸티오니늄, 렘버 또는 MLTX) 및 타우의 병적인 형태(예를 들어 응집체)를 표적화하는 다른 능동 및 수동 면역 요법; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된다.
이들 다른 실시태양 중 일부에서, 상기 추가적인 치료제는 아밀로이드-베타 응집 억제제(예를 들어 트라미프로세이트), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어 세마가세스태트), 및 감마-세크레타제 조절제(타렌플루르빌); 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된다.
상기 두 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 실시태양 중 일부에서, 상기 추가적인 치료제는 아세틸콜린에스테라제 억제제(예를 들어 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린, 영양 보충제), N-메틸-D-아스파테이트(NMDA) 수용체 길항물질(예를 들어 메만틴), DNA 수복의 억제제(예를 들어 피렌제핀 또는 그의 대사산물), 전이금속 킬레이터, 성장 인자, 호르몬, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 산화방지제, 지질 강하제, 선택성 포스포디에스테라제 억제제, 타우 응집의 억제제, 단백질 키나제의 억제제, 항-미토콘드리아 기능장애 약물의 억제제, 뉴로트로핀, 열충격 단백질의 억제제, 지방단백질-결합된 포스포리파제 A2의 억제제, 메만틴, 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된다.
상기 두 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
이들 실시태양 중 일부에서, 상기 추가적인 치료제는 BACE 억제제; 무스크린산 길항물질; 콜린에스테라제 억제제; 감마 세크레타제 억제제; 감마 세크레타제 조절제; HMG-CoA 리덕타제 억제제; 비-스테로이드성 소염제; N-메틸-D-아스파테이트 수용체 길항물질; 항-아밀로이드 항체; 비타민 E; 니코틴산 아세틸콜린 수용체 작용물질; CB1 수용체 역 작용물질 또는 CB1 수용체 길항물질; 항생제; 성장 호르몬 분비촉진제; 히스타민 H3 길항물질; AMPA 작용물질; PDE4 억제제; GABAA 역 작용물질; 아밀로이드 응집의 억제제; 글리코겐 신타제 키나제 베타 억제제; 알파 세크레타제 활성의 촉진제; PDE-10 억제제, 콜레스테롤 흡수 억제제, 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된다.
이들 실시태양 중 일부에서, 상기 추가적인 치료제는 2차 항체이다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 2차 항체는 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵, 포네주맵, 및 IVIG 면역글로불린 중에서 선택된다.
상기 두 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 두 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
또한 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자를 평가하는 방법을 고려하며, 상기 방법은 본 섹션에 기재된 항체 또는 타우-결합 단편 중 어느 하나의, 상기 피실험자로부터의 생물학적 샘플의 성분에의 결합을 검출하는 단계를 포함하며, 여기에서 상기 생물학적 샘플에 대한 결합의 검출은 상기 피실험자에서 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증을 가리킨다. 이들 실시태양 중 일부에서, 상기 생물학적 샘플은 생검, CSF, 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플이다.
상기 방법의 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
상기 방법의 일부 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
선행 단락들에 기재된 치료 방법들 중 어느 하나를 항체 또는 타우-결합 단편으로 실행할 수 있음을 또한 고려하며, 여기에서 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14, RHB이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
선행 단락들에 기재된 치료 방법들 중 어느 하나를 항체 또는 타우-결합 단편으로 실행할 수 있음을 또한 고려하며, 여기에서 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
선행 단락들에 기재된 치료 방법들 중 어느 하나를 항체 또는 타우-결합 단편으로 실행할 수 있음을 또한 고려하며, 여기에서 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHE이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
선행 단락들에 기재된 치료 방법들 중 어느 하나를 항체 또는 타우-결합 단편으로 실행할 수 있음을 또한 고려하며, 여기에서 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26, RKA이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
선행 단락들에 기재된 치료 방법들 중 어느 하나를 항체 또는 타우-결합 단편으로 실행할 수 있음을 또한 고려하며, 여기에서 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16, RHD이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
선행 단락들에 기재된 치료 방법들 중 어느 하나를 항체 또는 타우-결합 단편으로 실행할 수 있음을 또한 고려하며, 여기에서 상기 항체 및 결합 단편은 또한 상기 중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17, RHM이고 상기 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27, RKB이도록 한다. 임의로, 상기 항체 및 결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
도 1: 인간 타우의 6개 동형의 도해이다
도 2: 인간 타우(2N4R)의 도식적인 기능 지도; 각각 서열번호 147 및 146으로서 "VQIINK" 및 "VQIVYK"를 개시한다.
도 3: DC8E8 카파 경쇄 가변 영역의 단백질(서열번호 8) 및 DNA 서열(서열번호 91)
도 4: DC8E8 중쇄 가변 영역의 단백질(서열번호 7) 및 DNA 서열(서열번호 90)
도 5: DC8E8 카파 경쇄 생식세포 계열 분석(출현 순서대로, 각각 서열번호 167 및 168)
도 6: DC8E8 중쇄 생식세포 계열 분석(출현 순서대로, 각각 서열번호 66 및 169)
도 7: 타우 151-391/4R에 대한 키메릭 및 쥐 DC8E8의 결합
도 8: DC8E8 중쇄 인간화 전략. 구조적으로 중요한 잔기들(프롤린, 시스테인 및 아스파라진)을 굵은 활자 및 이탤릭체로 강조한다. 굵은 밑줄 친 잔기들은 마우스 잔기로의 역-번역을 가리킨다. CDR 영역은 소문자이고 표 헤드에 점으로 나타낸다. CDR의 4 Å내의 잔기들은 표 헤드에 별표로 나타낸다. 도 8은 출현 순서대로, 각각 서열번호 7, 71 및 13-25를 개시한다. 서열번호 71(IMGT 데이터베이스에서 수납 번호 M65092)을 리더 펩티드 MDWTWRFLFVVAAVTGVQS(서열번호 174) 없이 나타냄에 유의한다.
도 9: DC8E8 카파 경쇄 인간화 전략. 구조적으로 중요한 잔기들(프롤린, 시스테인 및 아스파라진)을 굵은 활자 및 이탤릭체로 강조한다. 굵은 밑줄 친 잔기들은 마우스 잔기로의 역-번역을 가리킨다. CDR 영역은 소문자이고 표 헤드에 점으로 나타낸다. CDR의 4 Å내의 잔기들은 표 헤드에 별표로 나타낸다. 도 9는 출현 순서대로, 각각 서열번호 8, 65 및 26-27을 개시한다. 서열번호 65(IMGT 데이터베이스에서 수납 번호 X72449)를 리더 펩티드 QLLGLLMLWVSGSSG(서열번호 175) 없이 나타냄에 유의한다.
도 10: 타우 151-391/4R에 대한 인간화된 및 키메릭 DC8E8의 결합. 완전한 키메릭 항체와, DC8E8 RKA 또는 DC8E8 RKB와 동시-발현된 DC8E8 RHA 또는 DC8E8 RHB의 조합에 의해 암호화된 항체들에 의한 항체 결합의 비교
도 11: 타우 151-391/4R에 대한 인간화된 및 키메릭 DC8E8의 결합: RKA 버전들.
도 12: 타우 151-391/4R에 대한 인간화된 및 키메릭 DC8E8의 결합: RKB 버전들.
도 13: 타우 151-391/4R에 대한 인간화된 및 키메릭 DC8E8의 결합: Vk 버전들(키메릭 경쇄를 갖는다)
도 14: 타우 151-391/4R에 대한 인간화된 및 키메릭 DC8E8의 결합: RKM 버전들.
도 15: 후보 인간화된 DC8E8 항체들의 열 안정성: 정제된 항체를 타우 결합 ELISA 수행 전에 지시된 온도에서 10분 동안 가열하고, 이어서 4 ℃로 냉각시킨다.
도 16: 정제된 인간화된 후보 DC8E8 항체들의 열 이동 분석: 상기 정제된 후보 항체들의 Tm 측정 및 키메릭 및 쥐 DC8E8에의 비교.
도 17: 표면 플라스몬 공명에 의해 분석된 DC8E8 항체들의 결합 동역학: KD 측정: 쥐 DC8E8.
도 18: 표면 플라스몬 공명에 의해 분석된 DC8E8 항체들의 결합 동역학: KD 측정: 키메릭 DC8E8
도 19: 표면 플라스몬 공명에 의해 분석된 DC8E8 항체들의 결합 동역학: KD 측정: 인간화된 DC8E8 RHD/RKA(AX004)
도 20: 표면 플라스몬 공명에 의해 분석된 DC8E8 항체들의 결합 동역학: KD 측정: 인간화된 DC8E8 RHE/RKA(AX005)
도 21: 표면 플라스몬 공명에 의해 분석된 DC8E8 항체들의 결합 동역학: KD 측정: 인간화된 DC8E8 RHD/RKB(AX016)
도 22: 표면 플라스몬 공명에 의해 분석된 DC8E8 항체들의 결합 동역학: KD 측정: 인간화된 DC8E8 RHE/RKB(AX017);
도 23: 비아코어(Biacore) 결과 요약
도 24: 완전히 인간화된 항체 후보 응집 분석: A. AX004(DA); B. AX005(EA); C. AX016(DB); D. AX017(EB).
도 25: 용해도에 대해 평가된 DC8E8의 정제된 인간화된 항체 후보: 농축 중 용해도 프로파일.
도 26: 용해도에 대해 평가된 DC8E8의 정제된 인간화된 항체 후보: 농축 중 용해도 프로파일: 농축 후 결합 활성.
도 27: 인간화된 후보 항체의 동결/해동 응력 분석.
도 28: 완전히 인간화된 항체 후보의 열 유도된 응력 분석: A. AX004(DA); B. AX005(EA); C. AX016(DB); D. AX017(EB).
도 29: ELISA에 의해 측정된 바와 같은 잘못 무질서한 절두된 타우 151-391/4R 및 생리학적 타우 2N4R에 대한 (A) 키메릭 DC8E8 및 (B) 마우스 DC8E8의 결합. (C) 분석된 타우 단백질의 키메릭 및 마우스 항체의 EC50 값.
도 30: 잘못 무질서한 절두된 타우 151-391/4R 및 완전길이 생리학적 타우 2N4R에 대한 마우스 및 키메릭 DC8E8 평형 결합 결합 상수를 표면 플라스몬 공명에 의해 측정하였다.
도 31: ELISA에 의해 측정된, 단백질 타우의 반복 도메인으로부터 유래된 타우 펩티드에 대한 (A) 키메릭 DC8E8 및 (B) 마우스 DC8E8의 결합. (C) 분석된 타우 펩티드에 대한 키메릭 및 마우스 항체의 EC50 값.
도 32: 키메릭 DC8E8은 시험관내 타우 피브릴화 분석에서 병적인 타우-타우 상호작용을 억제한다. 잘못 무질서한 절두된 타우 151-391/4R은 헤파린에 의해 유도되어 입체형태적 변화 및 피브릴화를 겪었으며, 그 정도를 티오플라빈 T 형광에 의해 측정하였고; 키메릭 DC8E8을 상기 병적인 입체형태적 변화 및 타우-타우 상호작용을 방지하는 그의 능력에 대해 시험하였다.
도 33: ELISA에 의해 측정된 바와 같은, 잘못 무질서한 타우 151-391/4R 및 완전길이 생리학적 타우 2N4R에 대한 DC8E8(IgG4 아이소타입) 및 키메릭 DC8E8의 인간화된 리드의 결합. (A) 인간화된 항체 AX004의 결합; (B) 인간화된 항체 AX005의 결합; (C) 인간화된 항체 AX016의 결합; (D) 인간화된 항체 AX017의 결합. (E) 키메릭 DC8E8의 결합. (F) 상기 분석된 타우 단백질들에 대한 키메릭 DC8E8 및 인간화된 리드 AX004, AX005, AX016, AX017의 EC50 값.
도 34: ELISA에 의해 측정된 바와 같은, 잘못 무질서한 타우 151-391/4R 및 완전길이 생리학적 타우 2N4R에 대한 DC8E8(IgG1 아이소타입)의 인간화된 리드의 결합. (A) 인간화된 항체 AX004의 결합; (B) 인간화된 항체 AX005의 결합; (C) 인간화된 항체 AX016의 결합; (D) 인간화된 항체 AX017의 결합. (E) 상기 분석된 타우 단백질들에 대한 인간화된 리드 AX004, AX005, AX016, AX017의 EC50 값.
도 35: 잘못-무질서한 타우 151-391/4R 및 완전길이 2N4R에 대한 인간화된 DC8E8 리드 AX004, AX005, AX016, AX017을 특성화하기 위한 표면 플라스몬 공명(SPR). (A) IgG4 버전. (B) IgG1 버전.
도 36: ELISA에 의해 측정된 바와 같은, 단백질 타우의 미세소관-결합 반복 영역으로부터 유래된 타우 펩티드에 대한 인간화된 항체(IgG4 아이소타입의)의 결합. (A) 인간화된 항체 AX004의 결합; (B) 인간화된 항체 AX005의 결합; (C) 인간화된 항체 AX016의 결합; (D) 인간화된 항체 AX017의 결합. (E) 키메릭 DC8E8의 결합. (F) 분석된 타우 단백질들에 대한 키메릭 DC8E8 및 인간화된 버전 AX004, AX005, AX016, AX017의 EC50 값.
도 37: ELISA에 의해 측정된 바와 같은, 단백질 타우의 미세소관-결합 반복 영역으로부터 유래된 타우 펩티드에 대한 인간화된 항체(IgG1 아이소타입의)의 결합. (A) 인간화된 항체 AX004의 결합; (B) 인간화된 항체 AX005의 결합; (C) 인간화된 항체 AX016의 결합; (D) 인간화된 항체 AX017의 결합. (E) 분석된 타우 단백질들에 대한 키메릭 DC8E8 및 인간화된 버전 AX004, AX005, AX016, AX017의 EC50 값.
도 38: 인간화된 DC8E8 리드는 형광-기반 타우 피브릴화 분석에서 병적인 타우-타우 상호작용을 억제한다. 잘못 무질서한 타우 151-391/4R은 티오플라빈 T 형광에 의해 측정된 바와 같이 입체형태적 변화 및 피브릴화를 겪도록 유도되었으며; 인간화된 항체를 상기 피브릴화 반응에 가하고 상기 병적인 입체형태적 변화를 방지하는 그의 능력에 대해 시험하였다. 모든 시험된 인간화된 항체는 병적인 타우-타우 응집을 억제할 수 있다. (A) IgG4 아이소타입의 인간화된 DC8E8 리드에 의해 유도된 병적인 응집의 억제 및 (B) IgG1 아이소타입의 인간화된 항체에 의해 유도된 병적인 응집의 억제.
도 39: 인간화된 DC8E8 항체(IgG1)를 사용하는 알쯔하이머병 뇌의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 AD 해마(CA1)에서 고 부하의 신경섬유 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. 일반적으로 인간화된 항체 AX005(D) 및 AX017(F)은 AD 뇌에서 덜 병적인 구조를 인식하였다. 툴바: 100 ㎛
도 40: 인간화된 DC8E8 항체(IgG4)를 사용하는 알쯔하이머병 뇌의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 AD 해마(CA1)에서 고 부하의 신경섬유 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. 일반적으로 인간화된 항체 AX005(D) 및 AX017(F)은 AD 뇌에서 덜 병적인 구조를 인식하였다. 툴바: 100 ㎛
도 41: 인간화된 DC8E8 항체(IgG1)를 사용하는 FTDP-17 뇌(R406W에서 타우 돌연변이)의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 뇌 후각 피질에서 고 부하의 신경섬유 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. 일반적으로 인간화된 항체 AX005(D) 및 AX017(F)은 FTDP-17 뇌에서 덜 병적인 구조를 인식하였다. 툴바: 100 ㎛
도 42: 인간화된 DC8E8 항체(IgG4)를 사용하는 FTDP-17 뇌(R406W에서 타우 돌연변이)의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 뇌 후각 피질에서 고 부하의 신경섬유 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. AX005(D) 및 AX017(F)은 FTDP-17 뇌에서 어떠한 병적인 구조도 인식하지 않았다. 툴바: 100 ㎛
도 43: 인간화된 DC8E8 항체(IgG1)를 사용하는 피질기저 퇴행의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 미상핵에서 다수의 신경교 타우 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. 일반적으로 인간화된 항체 AX005(D) 및 AX017(F)은 CBD 뇌에서 덜 병적인 구조를 인식하였으나, 염색 강도는 DC8E8에 필적한다. 툴바: 50 ㎛
도 44: 인간화된 DC8E8 항체(IgG4)를 사용하는 피질기저 퇴행의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 미상핵에서 다수의 신경교 타우 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. 일반적으로 인간화된 항체 AX005(D) 및 AX017(F)은 CBD 뇌에서 덜 병적인 구조를 인식하였으나, 염색 강도는 DC8E8에 필적한다. 툴바: 50 ㎛
도 45: 인간화된 DC8E8 항체(IgG1)를 사용하는 진행성 핵상 마비의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 미상핵에서 다수의 신경교 타우 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. 일반적으로 인간화된 항체 AX005(D) 및 AX017(F)은 약간 덜 병적인 구조를 인식하였다. 상기 염색 강도는 DC8E8에 필적한다. 툴바: 50 ㎛
도 46: 인간화된 DC8E8 항체(IgG4)를 사용하는 진행성 핵상 마비의 면역조직화학적 염색. DC8E8(A) 및 키메릭 DC8E8(B)은 모두 인간 미상핵에서 다수의 신경교 타우 병리를 인식하였다. 인간화된 항체 AX004(C) 및 AX016(E)은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타내었다. 일반적으로 인간화된 항체 AX005(D) 및 AX017(F)은 약간 덜 병적인 구조를 인식하였다. 상기 염색 강도는 DC8E8에 필적한다. 툴바: 50 ㎛
상기 인간 타우 동형들에 상응하는 아미노산 서열들을 출현의 순서대로, 각각 서열번호 151-156에 제공한다:
서열번호 151 (2N4R):
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG SETSDAKSTP TAEDVTAPLV DEGAPGKQAA AQPHTEIPEG TTAEEAGIGD TPSLEDEAAG HVTQARMVSK SKDGTGSDDK KAKGADGKTK IATPRGAAPP GQKGQANATR IPAKTPPAPK TPPSSGEPPK SGDRSGYSSP GSPGTPGSRS RTPSLPTPPT REPKKVAVVR TPPKSPSSAK SRLQTAPVPM PDLKNVKSKI GSTENLKHQP GGGKVQIINK KLDLSNVQSK CGSKDNIKHV PGGGSVQIVY KPVDLSKVTS KCGSLGNIHH KPGGGQVEVK SEKLDFKDRV QSKIGSLDNI THVPGGGNKK IETHKLTFRE NAKAKTDHGA EIVYKSPVVS GDTSPRHLSN VSSTGSIDMV DSPQLATLAD EVSASLAKQG L
서열번호 152 (1N4R):
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG SETSDAKSTP TAEAEEAGIG DTPSLEDEAA GHVTQARMVS KSKDGTGSDD KKAKGADGKT KIATPRGAAP PGQKGQANAT RIPAKTPPAP KTPPSSGEPP KSGDRSGYSS PGSPGTPGSR SRTPSLPTPP TREPKKVAVV RTPPKSPSSA KSRLQTAPVP MPDLKNVKSK IGSTENLKHQ PGGGKVQIIN KKLDLSNVQS KCGSKDNIKH VPGGGSVQIV YKPVDLSKVT SKCGSLGNIH HKPGGGQVEV KSEKLDFKDR VQSKIGSLDN ITHVPGGGNK KIETHKLTFR ENAKAKTDHG AEIVYKSPVV SGDTSPRHLS NVSSTGSIDM VDSPQLATLA DEVSASLAKQ GL
서열번호 153 (2N3R):
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG SETSDAKSTP TAEDVTAPLV DEGAPGKQAA AQPHTEIPEG TTAEEAGIGD TPSLEDEAAG HVTQARMVSK SKDGTGSDDK KAKGADGKTK IATPRGAAPP GQKGQANATR IPAKTPPAPK TPPSSGEPPK SGDRSGYSSP GSPGTPGSRS RTPSLPTPPT REPKKVAVVR TPPKSPSSAK SRLQTAPVPM PDLKNVKSKI GSTENLKHQP GGGKVQIVYK PVDLSKVTSK CGSLGNIHHK PGGGQVEVKS EKLDFKDRVQ SKIGSLDNIT HVPGGGNKKI ETHKLTFREN AKAKTDHGAE IVYKSPVVSG DTSPRHLSNV SSTGSIDMVD SPQLATLADE VSASLAKQGL
서열번호 154 (0N4R):
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKAEEAGI GDTPSLEDEA AGHVTQARMV SKSKDGTGSD DKKAKGADGK TKIATPRGAA PPGQKGQANA TRIPAKTPPA PKTPPSSGEP PKSGDRSGYS SPGSPGTPGS RSRTPSLPTP PTREPKKVAV VRTPPKSPSS AKSRLQTAPV PMPDLKNVKS KIGSTENLKH QPGGGKVQII NKKLDLSNVQ SKCGSKDNIK HVPGGGSVQI VYKPVDLSKV TSKCGSLGNI HHKPGGGQVE VKSEKLDFKD RVQSKIGSLD NITHVPGGGN KKIETHKLTF RENAKAKTDH GAEIVYKSPV VSGDTSPRHL SNVSSTGSID MVDSPQLATL ADEVSASLAK QGL
서열번호 155 (1N3R):
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG SETSDAKSTP TAEAEEAGIG DTPSLEDEAA GHVTQARMVS KSKDGTGSDD KKAKGADGKT KIATPRGAAP PGQKGQANAT RIPAKTPPAP KTPPSSGEPP KSGDRSGYSS PGSPGTPGSR SRTPSLPTPP TREPKKVAVV RTPPKSPSSA KSRLQTAPVP MPDLKNVKSK IGSTENLKHQ PGGGKVQIVY KPVDLSKVTS KCGSLGNIHH KPGGGQVEVK SEKLDFKDRV QSKIGSLDNI THVPGGGNKK IETHKLTFRE NAKAKTDHGA EIVYKSPVVS GDTSPRHLSN VSSTGSIDMV DSPQLATLAD EVSASLAKQG L
서열번호 156 (0N3R):
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKAEEAGI GDTPSLEDEA AGHVTQARMV SKSKDGTGSD DKKAKGADGK TKIATPRGAA PPGQKGQANA TRIPAKTPPA PKTPPSSGEP PKSGDRSGYS SPGSPGTPGS RSRTPSLPTP PTREPKKVAV VRTPPKSPSS AKSRLQTAPV PMPDLKNVKS KIGSTENLKH QPGGGKVQIV YKPVDLSKVT SKCGSLGNIH HKPGGGQVEV KSEKLDFKDR VQSKIGSLDN ITHVPGGGNK KIETHKLTFR ENAKAKTDHG AEIVYKSPVV SGDTSPRHLS NVSSTGSIDM VDSPQLATLA DEVSASLAKQ GL
정의
"친화성"이란 용어는 분자(예를 들어 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 상대(예를 들어 항원)간의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 분자 X의 그의 상대 Y에 대한 친화성을 일반적으로 평형 해리 상수(KD)(또는 그의 역 평형 결합 상수, KA)에 의해 나타낼 수 있다. 친화성을 당해 분야에 공지된 통상적인 방법들, 예를 들어 본 명세서에 기재된 것들에 의해 측정할 수 있다. 예를 들어 문헌[Pope ME, Soste MV, Eyford BA, Anderson NL, Pearson TW. (2009) J Immunol Methods. 341(1-2):86-96] 및 여기에 기재된 방법들을 참조하시오. 결합 친화성을 측정하기 위한 구체적인 예시적인 실시태양들을 하기에 기재한다.
"아미노산"이란 용어는 천연, 변형된, 및 합성 아미노산뿐만 아니라 상기 천연 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 유사물질을 지칭한다. 천연 아미노산은 유전자 암호에 의해 암호화되는 것들뿐만 아니라 나중에 변형되는 아미노산들, 예를 들어 하이드록시프롤린, 감마-카복시글루타메이트, 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 천연 아미노산과 동일한 기본적인 화학 구조, 즉 수소, 카복실기, 아미노기 및 R 기에 결합하는 알파 탄소를 갖는 화합물들, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 상기와 같은 유사체는 변형된 R 기(예를 들어 노르류신) 또는 변형된 펩티드 주쇄를 갖지만, 천연 아미노산과 동일한 기본적인 화학 구조를 유지한다. 아미노산 유사물질은 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만, 천연 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화학적 화합물을 지칭한다. 적합한 아미노산은 비제한적으로 펩티드 중에서 발견되는 20개의 통상적인 천연 아미노산뿐만 아니라 유기 합성 또는 다른 대사 경로에 의해 제조되는 천연 및 비천연 아미노산의 D- 및 L-이성질체 모두를 포함한다. 상기와 같은 비천연 아미노산의 예는 비제한적으로 N-아세틸글루코스아미닐-L-세린, N-아세틸글루코스아미닐-L-쓰레오닌, 및 O-포스포티로신을 포함한다. 변형된 아미노산은 비제한적으로 하이드록시프롤린, 피로글루타메이트, 감마-카복시글루타메이트, O-포스포세린, 아제티딘카복실산, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, 베타-알라닌, 아미노프로피온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로산, 2-아미노헵탄산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 3급-부틸글리신, 2,4-디아미노이소부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-디아미노프로프리온산, N-에틸글리신, N-메틸글리신, N-에틸아스파라진, 호모프롤린, 하이드록시리신, 알로-하이드록시리신, 3-하이드록시프롤린, 4-하이드록시프롤린, 이소데스모신, 알로-이소류신, N-메틸알라닌, N-메틸글리신, N-메틸이소류신, N-메틸펜틸글리신, N-메틸발린, 나프탈라닌, 노르발린, 노르류신, 오르니틴, 펜틸글리신, 피페콜산 및 티오프롤린을 포함한다. 아미노산이란 용어는 또한, 몇몇 유기체 중의 대사산물이지만 단백질에의 통합을 위한 유전 암호에 의해 암호화되지 않는 천연 아미노산을 포함한다. 상기와 같은 아미노산은 비제한적으로 오르니틴, D-오르니틴 및 D-아르기닌을 포함한다.
"항체-의존적인 세포-매개된 세포독성" 및 "ADCC"는 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적인 세포독성 세포(예를 들어 천연 킬러(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포상의 결합된 항체를 인식하고 후속으로 상기 표적 세포의 용해를 야기하는 세포-매개된 반응을 지칭한다. ADCC를 매개하는 주요 세포인 NK 세포는 오직 Fc.감마.RIII만을 발현하는 반면, 단핵세포는 Fc.감마.RI, Fc.감마.RII 및 Fc.감마.RIII을 발현한다. 조혈세포상의 FcR 발현이 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)]의 464 페이지의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해서, 시험관내 ADCC 분석, 예를 들어 미국특허 제 5,500,362 호 또는 미국특허 제 5,821,337 호에 기재된 것을 수행할 수 있다. 상기와 같은 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 및 천연 킬러(NK) 세포를 포함한다. 한편으로, 또는 추가로, 상기 관심 분자의 ADCC 활성을 생체내에서, 예를 들어 문헌[Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)]에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다.
"역 돌연변이"는 인간화된 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 도입되는 돌연변이로, 상기 돌연변이는 모 항체(예를 들어 공여 항체, 예를 들어 쥐 항체) 중의 아미노산에 상응하는 아미노산을 생성시킨다. 상기 모 항체로부터의 몇몇 프레임워크 잔기는 생성된 항체의 잠재적인 면역원성은 최소로 하는 동시에 상기 모 항체의 결합 성질을 실질적으로 유지하기 위해서 상기 명세의 항체의 인간화 중에 유지될 수 있다. 본 명세서에 개시된 하나의 실시태양에서, 상기 모 항체는 마우스 기원의 것이다. 예를 들어 상기 역 돌연변이는 인간 프레임워크 잔기를 모 쥐 잔기로 변화시킨다. 역 돌연변이될 수 있는 프레임워크 잔기의 예는 비제한적으로 정규 잔기, 계면 충전 잔기, 결합 부위에 가까운 특이한 모 잔기, "버니어 대역"(CDR이 놓이는 플랫폼을 형성한다) 중의 잔기(Foote & Winter, 1992, J. Mol. Biol. 224, 487-499) 및 CDR H3에 가까운 것들을 포함한다.
"키메릭" 항체란 용어는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 종으로부터 유래하거나 또는 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체(예를 들어 키메릭 인간화된, 부류-변환된 항체) 중의 상응하는 서열과 일치하거나 상동성인 반면, 상기 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래하거나 또는 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 중의 상응하는 서열과 일치하거나 상동성인 항체뿐만 아니라, 목적하는 생물 활성을 나타내는 한, 상기와 같은 항체의 단편을 지칭한다(미국특허 제 4,816,567 호; 및 문헌[Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]). 하나의 실시태양에서, "키메릭 항체"란 용어는 하나의 공급원 또는 종으로부터의 가변 영역, 즉 결합 영역 및 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된, 대개는 재조합 DNA 기법에 의해 제조된 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 단클론 항체를 지칭한다. 쥐 가변 영역 및 인간 불변 영역을 포함하는 키메릭 항체가 때때로 바람직하다. 상기와 같은 쥐/인간 키메릭 항체는 쥐 면역글로불린 가변 영역을 암호화하는 DNA 분절 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 암호화하는 DNA 분절을 포함하는 발현된 면역글로불린 유전자의 산물이다. 본 발명에 의해 포함되는 "키메릭 항체"의 다른 형태는 상기 부류 또는 하위부류가 원래 항체의 것들로부터 변형되거나 변형된 것들이다. 상기와 같은 "키메릭" 항체를 또한 "부류-변환된 항체"라 지칭한다. 키메릭 항체의 제조 방법은 현재 당해 분야에 공지된 통상적인 재조합 DNA 및 유전자 형질감염 기법을 수반한다. 예를 들어 문헌[Morrison, S. L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855]; 미국특허 제 5,202,238 호 및 미국특허 제 5,204,244 호를 참조하시오.
"경쟁적인 결합"은 시험 중인 면역글로불린/항체/결합 단편이 공통 항원, 예를 들어 타우(예를 들어 타우 151-391/4R)에 대한 참조 항체의 특이적인 결합을 억제하는 분석에서 측정된다. 다수 유형의 경쟁 결합 분석, 예를 들어 고상 직접 또는 간접 방사성면역분석(RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(문헌[Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)]을 참조하시오); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(문헌[Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)]을 참조하시오); 고상 직접 표지된 분석, 고상 직접 표지된 샌드위치 분석(문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)]을 참조하시오); I125 표지를 사용하는 고상 직접 표지 RIA(문헌[Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)]을 참조하시오); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(Cheung et al., Virology 176:546 (1990)); 및 직접 표지된 RIA(Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990))가 공지되어 있다. 전형적으로, 상기와 같은 분석은 이들, 표지되지 않은 시험 면역글로불린 및 표지된 참조 면역글로불린 중 하나를 갖는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 수반한다. 경쟁적인 억제는 상기 시험 면역글로불린의 존재하에서 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 측정함으로써 측정된다. 대개 상기 시험 면역글로불린은 과잉으로 존재한다. 대개, 경쟁 항체가 과잉으로 존재하는 경우, 상기는 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적인 결합을 적어도 50-55%, 55-60%, 60-65%, 65-70%, 70-75% 또는 그 이상까지 억제할 것이다.
"보체 의존적인 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에서 표적을 용해시키는 분자의 능력을 지칭한다. 상기 보체 활성화 경로는 보체 시스템(C1q)의 제1 성분의, 동족 항원과 복합체를 이룬 분자(예를 들어 항체)에의 결합에 의해 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해서, 예를 들어 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 분석을 수행할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "접합"이란 용어는 제1 분자(예를 들어 항체)의 작용기와 제2 분자(예를 들어 치료제 또는 약물)의 작용기간의 화학 반응으로부터 형성된 결합 또는 화학적 부분을 지칭한다. 상기와 같은 결합은 비제한적으로 공유 결합 및 비-공유 결합을 포함하는 반면, 상기와 같은 화학적 부분은 비제한적으로 에스테르, 카보네이트, 이민 포스페이트 에스테르, 하이드라존, 아세탈, 오쏘에스테르, 펩티드 결합, 및 올리고뉴클레오티드 결합을 포함한다. "가수분해적으로 안정한 결합"은 상기 결합이 수중에 실질적으로 안정성이며 유용한 pH 값에서, 예를 들어 비제한적으로, 연장된 기간 동안 생리학적 조건하에서 물과 반응하지 않음을 의미한다. "가수분해적으로 불안정한 또는 분해성 결합"은 상기 결합이 물, 또는 예를 들어 혈액을 포함한 수성 용액 중에서 분해될 수 있음을 의미한다. "효소적으로 불안정한 또는 분해성 결합"은 상기 결합이 하나 이상의 효소에 의해 분해됨을 의미한다. 단지 예로서, 몇몇 PEG 및 관련 중합체는 중합체 주쇄, 또는 PEG 중합체 주쇄와 본 명세서에 제공된 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드의 말단 작용기 중 하나 이상간의 링커기 중에 분해성 결합을 포함한다. 상기와 같은 분해성 결합은 비제한적으로 PEG 카복실산 또는 활성화된 PEG 카복실산과 생물학적 활성제상의 알콜기와의 반응에 의해 형성된 에스테르 결합을 포함하며, 여기에서 상기와 같은 에스테르기는 일반적으로 생리학적 조건하에서 가수분해되어 생물학적으로 활성인 작용제를 방출한다. 다른 가수분해적으로 분해성인 결합은 비제한적으로 카보네이트 결합; 아민과 알데하이드와의 반응으로부터 생성된 이민 결합; 알콜과 포스페이트기와의 반응에 의해 형성된 포스페이트 에스테르 결합; 하이드라지드와 알데하이드의 반응 생성물인 하이드라존 결합; 알데하이드와 알콜의 반응 생성물인 아세탈 결합; 포르메이트와 알콜의 반응 생성물인 오쏘에스테르 결합; 예를 들어 비제한적으로 PEG와 같은 중합체의 단부에서 아민기, 및 펩티드의 카복실기에 의해 형성된 펩티드 결합; 및 예를 들어 비제한적으로 중합체의 단부에서 포스포아미다이트기, 및 올리고뉴클레오티드의 5' 하이드록실기에 의해 형성된 올리고뉴클레오티드 결합을 포함한다.
"DC8E8"이란 용어는 WO2013/041962에 기재되고 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 특허 기탁 번호 PTA-11994하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체를 지칭한다. WO2013/041962에는 268-HQPGGG-273(서열번호 148)(타우 단백질의 첫 번째 반복 도메인 내), 299-HVPGGG-304(서열번호 149)(타우 단백질의 두 번째 반복 도메인 내), 330-HKPGGG-335(서열번호 150)(타우 단백질의 세 번째 반복 도메인 내), 및 362-HVPGGG-367(서열번호 149)(타우 단백질의 네 번째 반복 도메인 내) 중에서 선택된 타우의 4개의 이전에 확인되지 않았던 기능 영역 중 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어 DC8E8)가 병적인 타우 응집체의 형성을 억제하고 타우의 다양한 병적인 형태들을 검출할 수 있으며, 이들 중 일부(예를 들어 병적인 단량체)가 질병 중에 가장 이르게 형성된다는 발견이 개시되어 있다. 인간 잘못-무질서한 타우 II(Tau 151-391/4R)(또한 타우Δ(1-150;392-441)/4R로서 상기 출원에서 지칭된다)에 대해 생성된 하이브리도마가, 면역조직화학(IHC) 및 효소-결합된 면역 분석(ELISA) 모두에 의해 인간 쌍 나선 필라멘트(PHF)에 특이적인 단클론 항체의 생성에 대해서 선별되었다. 상기 생성되는 세트는 마우스 단클론 항체(mAb) DC8E8(IgG1 하위부류의 것이다)를 포함하였다. DC8E8의 에피토프 지도화는 상기가 인간 타우상의 4개의 앞서 확인되지 않았던 에피토프들에 결합함을 밝혀내었다. 더욱이, DC8E8의 추가의 기능 분석은 각각의 에피토프가 타우 내에 특유의 기능 영역을 나타낸다는 것을 밝혀내었다. 이들 영역(AD 진단 및 치료용 신규 표적으로서 기재됨)은 268-HQPGGG-273(서열번호 148)(타우 단백질의 첫 번째 반복 도메인 내), 299-HVPGGG-304(서열번호 149)(타우 단백질의 두 번째 반복 도메인 내), 330-HKPGGG-335(서열번호 150)(타우 단백질의 세 번째 반복 도메인 내), 및 362-HVPGGG-367(서열번호 149)(타우 단백질의 네 번째 반복 도메인 내) 중에서 선택된 타우의 기능 영역들 내에 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "진단하는" 및 "진단"이란 용어들은 숙련가가, 피실험자가 주어진 질병 또는 상태, 이 경우에 알쯔하이머병 및 관련된 타우병증을 앓고 있는지의 여부를 추정하고 심지어 판단하는 방법을 지칭한다. 상기 숙련가는 종종 하나 이상의 진단 지표, 예를 들어 생물마커, 상기 상태의 존재, 중증도 또는 부재를 가리키는 그의 양(존재 또는 부재 포함)을 근거로 진단을 수행한다.
진단과 함께, 임상 질병 모니터링 및 예측이 또한 중요한 관심과 흥미 분야이다. 가장 유효한 치료법을 계획하기 위해서 AD 진행의 단계 및 속도를 아는 것이 중요하다. 보다 정확한 예측을 수행할 수 있다면, 적합한 치료법 및 일부의 경우에 환자에게 덜 심한 치료법을 선택할 수 있다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 병적인 타우 수준의 측정은, 특정한 치료법이 이익이 되고 대안적인 또는 추가적인 치료법이 더 적합할 수 있는 다른 피실험자와 구별되는, AD의 진행에 따른 피실험자를 분류하기 위해서 유용할 수 있다.
예를 들어, DC8E8은 전임상 AD, 임상적으로 초기의 AD 및 완전히 발병한 최종 단계의 AD를 식별할 수 있다(WO2013/041962를 참조하시오). DC8E8은 인간 전임상 AD - 브락(Braak)의 I기에서 병적인 타우의 초기 단계(타우 단량체, 이량체)의 염색을 나타내었다. 상기 항체는 병적인 타우 올리고머의 단계 및 병적인 타우 중합체(매듭)의 단계를 인식하였다. 완전히 발병한 알쯔하이머병(최종 단계 - 브락의 VI기)에서, DC8E8은 병적인 타우 중합체를 신경섬유 매듭, 신경염 플라크 및 신경염 쓰레드의 형태로 주로 인식하였다. DC8E8은 알쯔하이머병에서 매듭 형태의 모든 발생 단계들을 인식하였다. DC8E8은 매듭 형성의 초기 발생 단계 - 단량체성, 이량체성 및 초기 올리고머성 단계, 및 말기 올리고머성, 전-매듭 단계뿐만 아니라 병적인 타우 중합체의 말기 발병 단계 - 세포내 및 세포외 신경섬유 매듭을 인식하였다.
상응하게, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "진단하는" 또는 "진단을 수행하는"은 병적인 타우 수준의 측정을 기반으로, 임상적 결과(의학적 치료가 있거나 없이)를 예견하거나, 적합한 치료(또는 치료가 유효할 것인지의 여부)를 선택하거나, 또는 현행 치료의 모니터링 및 상기 치료의 잠재적인 변화를 제공할 수 있는 예측을 수행함을 추가로 포함한다.
항체 "효과기 기능"은 항체의 Fc 영역(고유 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변형 Fc 영역)에 기인할 수 있는 생물학적 활성들을 지칭한다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합; 보체 의존적인 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC); 식작용; 및 세포 표면 수용체(예를 들어 B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절을 포함한다.
"에피토프" 또는 "항원 결정인자"란 용어는 면역글로불린 또는 항체(또는 그의 항원 결합 단편)가 특이적으로 결합하는 항원상의 부위를 지칭한다. 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 나란히 놓이는 연속적인 아미노산 또는 불연속적인 아미노산 모두로부터 형성될 수 있다. 연속적인 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 변성 용매에 노출시 전형적으로 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 변성 용매로 처리시 전형적으로 상실된다. 에피토프는 전형적으로, 종종 독특한 공간적 입체형태로, 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 입체형태를 측정하는 방법은 예를 들어 x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어 문헌[Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)]을 참조하시오. "입체형태적 에피토프"는 항체 또는 그의 타우-결합 단편이 입체형태-특이적인 방식으로 결합하는 에피토프이다. 단백질-기재 에피토프의 경우에, 상기 결합은 상기 에피토프-함유-단백질의 2차, 3차 또는 4차 구조에 따라 변할 수 있다. 즉, 상기 항체는 구조-특이적인 방식, 3차-구조-특이적인 방식, 또는 4차-구조-특이적인 방식으로 결합한다. 입체형태적 에피토프는 병적인 타우 중에 존재하는 것이다(예를 들어 Tau 151-391/4R 중에 존재한다).
본 명세서에 기재된 항체 및 타우-결합 단편들은 그들의 "에피토프"로서 하기의 4개 타우 부위 중 임의의 하나 이상을 가지며, 이들 중 일부 또는 전부는 입체형태적 에피토프: 268-HQPGGG-273(서열번호 148)(타우 단백질의 첫 번째 반복 도메인 내), 299-HVPGGG-304(서열번호 149)(타우 단백질의 두 번째 반복 도메인 내), 330-HKPGGG-335(서열번호 150)(타우 단백질의 세 번째 반복 도메인 내), 및 362-HVPGGG-367(서열번호 149)(타우 단백질의 네 번째 반복 도메인 내)이다. 이들 에피토프를 또한 본 명세서에서 각각 QT1, QT2, QT3 및 QT4라 칭한다. DC8E8은 QT1-QT4 모두에 결합하며; 실제로, DC8E8의 에피토프는 HXPGGG이고, 여기에서 X는 임의의 아미노산(서열번호 157)이다.
항체의 파파인 절단은 2개의 동일한 항원-결합 단편("Fab" 단편이라 칭하며, 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는다), 및 나머지 "Fc" 단편(그의 명칭은 쉽게 결정화하는 그의 능력을 반영한다(결정화성 단편))을 생성시킨다. 펩신 처리는, 2개의 항원-결합 부위를 가지며 여전히 항원과 가교결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성시킨다. "Fv"는 Fab 단편에 포함되는 중쇄의 부분이다. 이들 단편 중 임의의 단편은 또한 재조합적으로 생성될 수 있다. 항체의 Fc 부분은 항체-의존적인 세포 세포독성(ADCC) 및 보체-의존적인 세포독성 또는 식작용을 포함하여, 상기 항체의 효과기 기능과 관련된다. 항체의 Fc 영역 중의 변경(예를 들어 돌연변이 또는 글리코실화 변화)을 사용하여 그의 효과기 기능 중 어느 하나를 조절할 수 있을 뿐만 아니라 그의 혈청 반감기 및 다른 약동학적 성질들을 증가시킬 수 있다.
상기 Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에서 몇 개 잔기의 부가에 의해 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 상기 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 적어도 하나의 유리 티올기를 갖는 Fab'에 대한 본 명세서에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래, 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편들의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편들의 다른 화학적 커플링들이 또한 공지되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "Fc"란 용어는 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 제외한 항체의 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서 Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인 및 이들 도메인에 N-말단인 가요성 힌지를 지칭한다. IgA 및 IgM의 경우, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc는 면역글로불린 도메인 C 감마 2 및 C 감마 3(C감마2 및 C감마3) 및 C 감마 1(C감마1)과 C 감마 2(C감마2) 사이의 힌지를 포함한다. 상기 Fc 영역의 경계들은 변화할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 대개 그의 카복실-말단에 잔기 C226 또는 P230을 포함하는 것으로 한정되며, 여기에서 상기 넘버링은 EU 넘버링 시스템에 따른다. 인간 IgG1의 경우 상기 Fc 영역은 본 명세서에서, 하나의 실시태양에서, 그의 카복실-말단에 잔기 P232를 포함하는 것으로 한정되며, 여기에서 상기 넘버링은 EU 넘버링 시스템에 따른다(Edelman G M et al., (1969) Proc Natl Acad Sci USA, 63(1): 78-85). 상기 Fc 영역의 C-말단 리신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어 항체의 생성 또는 정제 중에, 또는 상기 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 상응하게, 완전 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 존재 및 부재하는 항체들의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. Fc는 상기 영역을 단독으로 또는 상기 영역을 Fc 폴리펩티드, 예를 들어 항체와 관련하여 지칭할 수 있다. 상기 Fc는 고유 서열 Fc 또는 변형 Fc일 수 있다. 항체 효과기 기능을 변경시키기 위한 상기 Fc 부분 중의 아미노산 잔기의 교체는 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어 윈터(Winter) 등의 미국특허 제 5,648,260 호 및 미국특허 제 5,624,821 호를 참조하시오). PCT 출원 WO 93/10151(본 발명에 참고로 인용된다)에 기재된 하나의 적합한 Fc는 인간 IgG1 항체의 N-말단 힌지 영역에서부터 Fc 영역의 고유 C-말단까지 연장되는 단쇄 폴리펩티드이다. 또 다른 유용한 Fc 폴리펩티드는 미국특허 제 5,457,035 호 및 문헌[Baum et al., 1994, EMBO J. 13:3992-4001]에 기재된 Fc 뮤테인이다. 상기 뮤테인의 아미노산 서열은, 아미노산 19가 Leu에서 Ala로 변화되었고, 아미노산 20이 Leu에서 Glu로 변화되었고, 아미노산 22가 Gly에서 Ala로 변화된 것을 제외하고, WO 93/10151에 제공된 고유 Fc 서열의 경우와 일치한다. 상기 뮤테인은 Fc 수용체에 대해 감소된 친화성을 나타낸다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"이란 용어는 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재하는데 사용된다. 바람직한 FcR은 고유 서열 인간 FcR이다. 더욱이, 바람직한 FcR은, IgG 항체(감마 수용체)에 결합하고 Fc.감마.RI, Fc.감마.RII, 및 Fc.감마.RIII 하위부류의 수용체들(이들 수용체의 대립유전자 변체 및 선택적으로 이어맞춰진 형태들 포함)을 포함하는 것이다. Fc.감마.RII 수용체는 Fc.감마.RIIA("활성화 수용체") 및 Fc.감마.RIIB("억제 수용체")를 포함하는데, 이들은 주로 그들의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 Fc.감마.RIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-계 활성화 동기(ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 Fc.감마.RIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-계 억제 동기(ITIM)를 함유한다(문헌[M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol 15:203-234 (1997)]을 참조하시오). FcR은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)]; 문헌[Capel et al, Immunomethods 4:25-34 (1994)]; 및 문헌[de Haas et al, J. Lab. Clin; Med. 126:330-41 (1995)]에 재고찰되어 있다. 미래에 확인되는 것들을 포함하여 다른 FcR들이 본 명세서의 "FcR"이란 용어에 포함된다. 상기 용어는 또한, 모 IgG로부터 태아로의 전달을 맡고 있고(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), 면역글로불린의 항상성을 조절하는 신생아 수용체, RcRn을 포함한다.
"Fv"는 또한 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 상기 영역은 단단한, 비-공유 결합으로 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 이러한 배열에서 각 가변 도메인의 3개의 고가변 영역들은 상호작용하여 상기 VH-VL 이량체의 표면상의 항원-결합 부위를 한정한다. 집합적으로, 상기 6개의 고가변 영역들은 상기 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 단지 3개의 고가변 영역만을 포함하는 Fv의 절반)조차, 전체 결합 부위보다는 더 낮은 친화성이지만, 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 특정한 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열로부터의 중쇄 또는 경쇄 가변 "프레임워크 영역"을 포함하는 인간화된 항체는 예를 들어 천연 체세포 돌연변이 또는 부위-지향된 돌연변이의 의도적인 도입으로 인해 상기 특정한 생식세포 계열 서열의 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역과 비교되는 아미노산 차이를 함유할 수 있다. 그러나, 선택된 인간화된 항체는 전형적으로 인간 생식세포 계열 면역글로불린 유전자의 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 상기 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역의 아미노산 서열이 적어도 90% 일치하며, 다른 종의 생식세포 계열 면역글로불린 아미노산 서열(예를 들어 쥐 생식세포 계열 서열)과 비교시 상기 인간화된 항체를 인간으로부터 유래되는 것으로서 확인시키는 아미노산 잔기들을 함유한다. 몇몇 경우에, 인간화된 항체는 생식세포 계열 면역글로불린 유전자에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해, 상기 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역의 아미노산 서열이 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 96%, 가장 바람직하게는 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 가장 특히 적어도 99% 일치할 수 있다. 전형적으로, 특정한 인간 생식세포 계열 서열로부터 유래된 인간화된 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역은 인간 생식세포 계열 면역글로불린 유전자에 의해 암호화된 상기 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역의 아미노산 서열로부터 11 이하, 바람직하게는 5 또는 훨씬 더 바람직하게는 4, 3, 2, 또는 1 이하의 아미노산 차이를 나타낼 것이다.
"인간 효과기 세포"는, 하나 이상의 FcR을 발현하고 효과기 기능을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게, 상기 세포는 적어도 Fc.감마.RIII를 발현하고 ADCC 효과기 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵세포(PBMC), 천연 킬러(NK) 세포, 단핵세포, 세포독성 T 세포 및 호중구를 포함하며; PBMC 및 NK 세포가 바람직하다. 상기 효과기 세포를 그의 천연 공급원으로부터, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 혈액 또는 PBMC로부터 단리할 수 있다.
"인간 생식세포 계열 서열"은 인간 집단에서 자연적으로 발견된다. 상기 생식세포 계열 유전자들의 조합은 항체 다양성을 발생시킨다. 상기 항체의 경쇄에 대한 생식세포 계열 항체 서열은 보존된 인간 생식세포 계열 카파 또는 람다 v-유전자 및 j-유전자로부터 온다. 유사하게 상기 중쇄 서열은 생식세포 계열 v-, d- 및 j-유전자로부터 온다(LeFranc, M-P, and LeFranc, G, "The Immunoglobulin Facts Book" Academic Press, 2001). 공개적으로 입수할 수 있는, 주지된 데이터베이스가 모든 공지된 생식세포 계열 서열에 대해 존재한다.
본 명세서에서 "힌지" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역"이란 용어는 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 제1 및 제2 불변 도메인 사이에 아미노산을 포함하는 가요성 폴리펩티드를 포함한다. 본 명세서에서 지칭되는 바와 같은 "힌지 영역"은 길이가 6 내지 62 아미노산의 서열 영역이며, 오직 IgA, IgD 및 IgG 중에 존재하고, 2개의 중쇄를 가교하는 시스테인 잔기를 포함한다. 구조적으로, 하나의 실시태양에서, 상기 IgG CH1 도메인은 EU 220번 위치에서 끝나고, 상기 IgG CH2 도메인은 EU 237번 위치에서 시작한다. 따라서, IgG의 경우 상기 항체 힌지는 본 명세서에서, 하나의 실시태양에서, 221번(IgG1에서 D221) 내지 231번(IgG1에서 A231) 위치를 포함하도록 한정되며, 여기에서 상기 넘버링은 EU 넘버링 시스템에 따른다.
"인간화된 항체"란 용어는 프레임워크 영역(FR) 및/또는 상보성 결정 영역(CDR)이 모 면역글로불린(인간)의 경우에 비해 상이한 특이성의 면역글로불린(마우스)의 CDR을 포함하도록 변형된 항체를 지칭한다. 하나의 실시태양에서, 쥐 CDR은 인간 항체의 프레임워크 영역내로 이식되어 "인간화된 항체"를 제조한다. 또 다른 실시태양에서, 인간 프레임워크를 마우스 항체에 "이식"하거나 이어맞추어, 상기 마우스 항체의 CDR을 보존하고 그의 프레임워크를 인간 기원의 프레임워크로 교체한다. 이식 및 이어맞추기는 PCR 및 돌연변이유발을 포함한 다양한 재조합 DNA 기술에 의해 수행될 수 있다. 다양한 인간화 방법들이 당해 분야에 존재한다(예를 들어 CDR 이식, 재성형, 트렌스제닉 동물, 조합적 라이브러리). 예를 들어 하기의 문헌들을 참조하시오: Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; Neuberger, M. S., et al., Nature 314 (1985) 268-270; Sastry L, Alting-Mess M, Huse WD, Short JM, Sorge JA, Hay BN,Janda KD, Benkovic SJ, Lerner RA (1989) Cloning of the immunological repertoire in for generation of monoclonal catalytic antibodies: construction of a heavy chain variable region-specific cDNA library. Proc Natl Acad Sci USA 86, 5728-5732; 및 Huse WD, Sastry S, Iverson SA, Kang AS, Alting-Mees M,Burton DR, Benkovic SJ, Lerner RA (1989) Generation of a large combinatorial library of the immunoglobulin repertoire in phage lambda. Science 246, 1275-1281. 인간화된 항체는 또 다른 항체를, 그의 원래 항원-결합 성질은 유지하면서 보다 인간같이 만드는 상기 항체의 유전 공학으로부터 생성된다(Presta, L.G. Engineering of therapeutic antibodies to minimize immunogenicity and optimize function. Advanced Drug Delivery Reviews, Volume 58, Issues 5-6: 640-656 (2006)). 상기 인간화된 항체의 제조에 사용되는 인간 가변 도메인들(경쇄 및 중쇄 모두)의 선택이 항원성을 감소시키는데 매우 중요하다. 소위 "최적합" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 공지된 인간 가변-도메인 서열의 라이브러리 또는 인간 생식세포 계열 서열의 라이브러리에 대해 선별한다. 이어서 상기 설치류의 서열에 가장 가까운 인간 서열을 상기 인간화된 항체의 인간 프레임워크 영역으로서 수용할 수 있다(Sims et al., J. Immunol. 1993; 151:2296 et seq.; Chothia et al, Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 1987; 196:901-917). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정한 하위그룹의 모든 인간 항체들의 공통 서열로부터 유래된 특정한 프레임워크 영역을 사용한다. 동일한 프레임워크를 다수의 상이한 인간화된 항체들에 사용할 수 있다(Carter et al., PNAS USA, 1992; 89:4285 et seq.; Presta et al., J Immunol 1993; 151:2623 et seq.). 인간 환자에서 항체 분자의 면역원성을 감소시키도록 설계된 다른 방법들은 베니어(veneered) 항체(예를 들어 미국특허 제 6,797,492 호 및 미국특허출원 공보 20020034765 및 20040253645를 참조하시오) 및 T-세포 에피토프 분석 및 제거에 의해 변형된 항체들(예를 들어 미국특허출원 공보 20030153043 및 미국특허 제 5,712,120 호를 참조하시오)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 인간화된 항체의 특히 바람직한 CDR은 마우스 단클론 DC8E8 항체의 CDR 서열, 즉 서열번호 1-6에 상응한다. 재조합 방법 또는 임의의 다른 방법(천연 항체 제외)에 의해 제조된, 본 명세서에 기재된 인간화된 항체 및 그의 타우-결합 단편의 사본(예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 동일한 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 갖는 면역글로불린)이 또한 상기 용어의 범위내에 있는 인간화된 항체 또는 그의 타우-결합 단편이다.
"고가변 영역"이란 용어는 본 명세서에서 사용시 항원-결합을 맡고 있는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 하나의 실시태양에서, 카밧에 따라, 상기 고가변 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기(예를 들어 경쇄 가변 도메인 중의 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3), 및 중쇄 가변 도메인 중의 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) 및/또는 "고가변 루프"로부터의 잔기(예를 들어 경쇄 가변 도메인 중의 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3), 및 중쇄 가변 도메인 중의 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))를 포함한다.
"프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본 명세서에 정의된 바와 같은 고가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기들이다. 상기 IMGT 특유의 넘버링 시스템에서, 상기 보존된 아미노산은 항상 동일한 위치, 예를 들어 시스테인 23 (첫 번째-CYS), 트립토판 41 (보존된-TRP), 소수성 아미노산 89, 시스테인 104 (두 번째-CYS), 페닐알라닌 또는 트립토판 118 (J-PHE 또는 J-TRP)을 갖는다. 예를 들어 문헌[Lefranc M.-P., Immunology Today 18, 509 (1997)]; 문헌[Lefranc M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999)]; 문헌[Lefranc, M.-P., Pommie, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]을 참조하시오. 또 다른 실시태양에서, 상기 IMGT 특유의 넘버링은 상기 프레임워크 영역(FR1-IMGT: 1번 내지 26번, FR2-IMGT: 39번 내지 55번, FR3-IMGT: 66번 내지 104번 및 FR4-IMGT: 118번 내지 128번 위치) 및 상보성 결정 영역: CDR1-IMGT: 27번 내지 38번, CDR2-IMGT: 56번 내지 65번 및 CDR3-IMGT: 105번 내지 117번 위치의 표준화된 한계를 제공한다. 틈은 점유되지 않은 위치를 나타내기 때문에, CDR-IMGT 길이(괄호 사이에 나타내고 점에 의해 분리되었다, 예를 들어 [8.8.13])는 중요한 정보가 된다. 상기 IMGT 특유의 넘버링은 IMGT 구슬 목걸이(Colliers de Perles)로서 표시된, 2D 그래픽 표시로 사용된다. 예를 들어 문헌[Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002)]; 문헌[Kaas, Q. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)]을 참조하시오. 상기는 또한 3D 구조를 나타내는데 사용된다. 예를 들어 문헌[IMGT/3Dstructure-DB Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)]을 참조하시오. 프레임워크 또는 FR 잔기는 상기 고가변 영역 이외 및 상기 묶음 이외의 가변 도메인 잔기들이다.
상기 카밧 넘버링 시스템을 사용하는 경우, 실제 선형 아미노산 서열은 상기 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 상기 내로의 삽입에 상응하는 보다 적은 또는 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 다음의 단일 아미노산 삽입(카밧에 따른 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 다음에 삽입된 잔기(예를 들어 카밧에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 상기 잔기들의 카밧 넘버링은 "표준" 카밧 넘버링된 서열과 상기 항체의 서열의 상동성 영역들에서의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "면역원성" 또는 "면역원의"란 용어는 치료 약물의 투여에 대한 항체 응답을 지칭한다. 본 명세서에 제공된 항체 및 타우-결합 단편에 대한 면역원성은, 생물학적 유체 중의 상기 치료 단백질, 폴리펩티드 및 펩티드에 대한 항체의 검출을 위한 정성적 및 정량적 분석을 사용하여 획득된다. 상기와 같은 분석은 비제한적으로 방사성면역분석(RIA), 효소-결합된 면역흡수 분석(ELISA), 발광성 면역분석(LIA), 및 형광 면역분석(FIA)을 포함한다. 상기와 같은 면역원성의 분석은 본 명세서에 제공된 항체 및 타우-결합 단편의 투여시의 항체 응답을 대조용 치료 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드 또는 전달 비히클 또는 전달 완충제 투여시의 항체 응답과 비교함을 포함한다.
임의의 척추동물 종으로부터의 항체의 "경쇄"는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열을 근거로, 카파(κ) 및 람다(λ)라 칭하는 2개의 명백히 다른 유형의 것으로 지정될 수 있다.
"고유 항체"는 대개 2개의 동일한 경(L)쇄 및 2개의 동일한 중(H)쇄로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종사량체성 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 공유 디설파이드 결합에 의해 중쇄에 결합되는 반면, 다이설파이드 결합의 수는 상이한 면역글로불린 이이소타입들의 중쇄간에 다양하다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄내 디설파이드 가교를 갖는다. 각각의 중쇄는 하나의 단부에 가변 도메인(VH)에 이어서 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 하나의 단부에 가변 도메인(VL) 및 다른 단부에 불변 도메인을 갖는다. 상기 경쇄의 불변 도메인은 상기 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 상기 경쇄 가변 도메인은 상기 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기들은 상기 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이에서 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "핵산"이란 용어는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함함을 의미한다. 핵산 분자는 단일 가닥이거나 이중 가닥일 수 있으나, 바람직하게는 이중 가닥 DNA이다.
핵산 또는 아미노산의 2개 서열간의 "일치성 비율"은 최적의 정렬 후 획득된, 비교되는 2개 서열간의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 비율을 의미하며, 상기 비율은 순전히 통계적이며 상기 두 서열 간의 차이는 그들의 길이를 따라 무작위로 분포된다. 2개 핵산 또는 아미노산 서열의 비교는 전통적으로 상기 서열들을 최적으로 정렬시킨 후에 이들을 비교함으로써 수행되며, 상기 비교는 분절에 의해 또는 "정렬 창"을 사용하여 수행될 수 있다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 수동 비교 외에, 스미스와 워터맨(Smith and Waterman)(1981)의 국소 상동성 연산[Ad. App. Math. 2:482]에 의해, 니들맨과 분취(Neddleman and Wunsch (1970)의 국소 상동성 연산[J. Mol. Biol. 48:443], 피어슨과 립맨(Pearson and Lipman)(1988)의 유사성 탐색 방법[Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444]에 의해 또는 이들 연산을 사용하는 컴퓨터 소프트웨어[위스콘신 제네닉스 소프트웨어 패키지(the Wisconsin Genetics Software Package)(제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group), 미국 위스콘신 주 매디슨 사이언스 드라이브 575 소재)에서 GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFASTA, 또는 비교 소프트웨어 BLAST NR 또는 BLAST P에 의해]에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 서열의 정체는 적어도 약 75 내지 100 연속 단위 길이의 영역에 걸쳐, 약 50 연속 단위 길이의 영역에 걸쳐, 또는 명시되지 않은 경우, 폴리펩티드의 전체 서열에 걸쳐 존재할 수 있다.
2개의 핵산 또는 아미노산 서열간의 일치성 비율을, 상기 비교하기 위한 핵산 또는 아미노산 서열이 상기 두 서열 간에 최적의 정렬을 위한 참조 서열에 비해 추가 또는 결실을 가질 수 있는 2개의 최적으로-정렬된 서열들을 비교함으로써 측정한다. 일치성 비율을, 상기 아미노산 뉴클레오티드 또는 잔기가 2개 서열간에, 예를 들어 2개의 완전한 서열간에 일치하는 위치들의 수를 측정하고, 상기 일치하는 위치들의 수를 정렬 창 중의 총 위치들의 수로 나누고, 상기 결과에 100을 곱하여 상기 2개 서열간의 일치성 비율을 획득함으로써 계산한다. 하나의 실시태양에서, 항체들간의 서열 일치성 비율을 카밧 넘버링 규약에 의해 최대로 정렬된 항체 서열들을 사용하여 측정한다. 정렬 후에, 주제 항체 영역(예를 들어 중쇄 또는 경쇄의 전체 성숙한 가변 영역)을 참조 항체의 동일한 영역과 비교하는 경우, 상기 주제와 참조 항체 영역 간의 서열 일치성 비율은 상기 주제 및 참조 항체 영역 모두 중의 동일한 아미노산에 의해 점유된 위치들의 수를 상기 2개 영역의 정렬된 위치들의 총수(틈은 카운트하지 않는다)에 의해 나누고, 100을 곱하여 백분율로 전환시킨 것이다.
예를 들어, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 사이트에서 입수할 수 있는 BLAST 프로그램, "BLAST 2 서열"(Tatusova et al., "Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences", FEMS Microbiol., 1999, Lett. 174:247-250)을 디폴트 매개변수(현저하게는 상기 매개변수에 대해서 "끊김 벌점": 5 및 "끊김 확장 벌점": 2; 상기 선택된 매트릭스는 예를 들어 상기 프로그램에 의해 제안된 "BLOSUM 62" 매트릭스이다)와 함께 사용하며; 상기 두 비교 서열 간의 일치성 비율을 상기 프로그램에 의해 직접 계산한다.
참조 아미노산 서열과 적어도 80%, 예를 들어 85%, 90%, 95% 및 98% 일치성을 나타내는 아미노산 서열에 대해서, 바람직한 예는 상기 참조 서열, 몇몇 변형, 현저하게는 적어도 하나의 아미노산의 결실, 부가 또는 치환, 절두 또는 연장을 함유하는 것들을 포함한다. 하나 이상의 연속적인 또는 비-연속적인 아미노산의 치환의 경우에, 치환된 아미노산이 "동등한" 아미노산에 의해 대체된 치환이 바람직하다. 여기에서, "동등한 아미노산"이란 표현은 상응하는 항체 및 하기에 정의되는 특정한 예들의 생물 활성을 변경시키지 않으면서 구조 아미노산들 중 하나 대신 치환되는 듯한 임의의 아미노산을 가리키고자 한다.
동등한 아미노산은 치환되는 아미노산과의 구조적 상동성 또는 생성될 것 같은 다양한 항체들 간의 생물 활성의 비교 시험 결과에 따라 결정될 수 있다. 비제한적인 예로서, 하기 표 1은 상응하는 변형 항체의 생물 활성의 현저한 변형을 생성시키지 않으면서 수행될 것 같은 가능한 치환들을 요약하며; 동일한 조건하에서 역 치환도 당연히 가능하다.
원래 잔기 치환(들)
Ala (A) Val, Gly, Pro
Arg (R) Lys, His
Asn (N) Gln
Asp (D) Glu
Cys (C) Ser
Gln (Q) Asn
Glu (E) Asp
Gly (G) Ala
His (H) Arg
Ile (I) Leu
Leu (L) Ile, Val, Met
Lys (K) Arg
Met (M) Leu
Phe (F) Tyr
Pro (P) Ala
Ser (S) Thr, Cys
Thr (T) Ser
Trp (W) Tyr
Tyr (Y) Phe, Trp
Val (V) Leu, Ala
본 명세와 관련하여, "병적인 타우" 및 "질병 타우"란 용어들은 병적인 타우 형태이성질체 및 구조를 포함하며 하기 중 전부를 포함한다: Tau 유형 IA, IB, IIA 및 IIB(WO2004/007547 A2에 상세히 기재됨), 무질서한, 잘못-무질서한 타우(단량체, 이량체, 삼량체, 올리고머), 잘못-무질서한 용해성 타우, 사르코실-불용성 타우, 세포외 타우 침착물, 타우 응집체, 쌍 나선 필라멘트, 신경섬유 병변, 매듭, 쓰레드, 피브릴, 축삭돌기 회전타원체, 절두된 타우 및 완전길이 타우의 고도로 인산화된 형태를 포함한 신경섬유 병리, 또는 본 명세서에 기재된 항체 및/또는 타우-결합 단편에 의해 검출 가능한 AD 또는 또 다른 타우병증과 관련된 타우의 임의의 다른 형태. Tau 151-391/4R(또한 타우Δ(1-150;392-441)/4R로서 지칭됨)은 병적인 타우의 한 형태를 나타낸다.
"약학적으로 허용 가능한"이란 용어는 동물 또는 인간에서 생체내 사용하기에 생물학적으로 또는 약물학적으로 적합함을 의미하며, 바람직하게는 연방 또는 주 정부 규제 당국에 의해 승인되거나 동물, 및 보다 특히 인간에서의 사용에 대한 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정되는 약전에 나열됨을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "재조합 숙주 세포"(또는 간단히 "숙주 세포")란 용어는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 지칭하는데 사용된다. 상기와 같은 용어가 특정한 피실험자 세포뿐만 아니라 상기와 같은 세포의 자손을 지칭하는데 사용됨은 물론이다. 몇몇 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 이어지는 세대에서 발생할 수도 있기 때문에, 상기와 같은 자손은 실제로는, 모 세포와 일치하지 않을 수도 있으나, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "숙주 세포"란 용어의 범위내에 여전히 포함된다.
"또 다른 타우병증"이란 용어는 환자의 뇌에서 미세소관 결합 단백질 타우의 비정상적인 형태의 출현을 동반하는 모든 신경학적 질병을 포함한다. 상기 용어는 비제한적으로 하기의 질병들을 포함한다: 알쯔하이머병, 게르스트만-스트로이슬러-샤잉커병, 영국 치매, 덴마크 치매, 픽병, 진행성 핵상 마비, 피질기저 퇴행, 은친화성 입자 병, 복합성 괌 파킨슨-치매, 매듭-단독 치매, 구상 신경교 봉입된 백질 타우병증, 전두측두엽 치매(예를 들어 FTDP-17), 및 염색체 17과 관련된 파킨슨증. 예를 들어 문헌[Goedert M, Clavaguera F and Tolnay M. The propagation of prion-like protein inclusions in neurodegenerative diseases. Trends Neurol. Sci]을 참조하시오. 하나의 실시태양에서, 상기 비정상적인 타우 형태들 중 하나 이상은 적어도 하나의 분석에서 본 명세서에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 하나에 의해 인식된다. 일부 실시태양에서, 상기 분석은 IHC이다. 다른 실시태양에서, 상기 분석은 ELISA이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 항체에 관하여 "특이적으로 결합하는"은 상기 항체가 구조적으로 상이한 항원(들) 또는 에피토프의 경우보다 더 큰 친화성으로 그의 표적 항원 또는 에피토프에 결합함을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "표면 플라스몬 공명"이란 용어는 예를 들어 비아코어 시스템(파마시아 바이오센서(Pharmacia Biosensor) AB(스웨덴 웁살라 및 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재))을 사용하여, 바이오센서 매트릭스내 단백질 농도의 변경의 검출에 의해 실시간 생물특이성 상호작용의 분석을 허용하는 광학적 현상을 지칭한다. 추가의 설명에 대해서, 실시예 및 하기 문헌들을 참조하시오: Jonsson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131; 및 Johnnson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
"단쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기에서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 쇄 중에 존재한다. 바람직하게, 상기 Fv 폴리펩티드는 상기 scFv가 항원 결합에 목적하는 구조를 형성할 수 있게 하는 상기 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv에 대한 재고찰에 대해서, 문헌[Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조하시오.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "치료"란 용어는 질병, 질병의 증상 또는 질병에 대한 소인을 치유, 해소, 경감, 완화, 변경, 교정, 개량, 개선시키거나 또는 이들에 영향을 미칠 목적의, 상기 질병, 질병의 증상 또는 질병에 대한 소인을 갖는 피실험자에 대한 치료제의 적용 또는 투여로서 정의된다. 더욱이, 본 명세의 조성물 단독 또는 또 다른 치료제와의 병용이, 상기 인간화된 항-타우 항체 또는 그의 타우-결합 단편 조성물의 부재하에서 치료하고자 하는 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증의 적어도 하나의 증상에 비해 상기 증상을 치유, 해소, 경감, 완화, 변경, 교정, 개량, 개선시키거나 또는 이들에 영향을 미치는 한, 그 결과는 상기 질환의 모든 증상들이 해소, 경감, 완화, 변경, 교정, 개량, 개선되거나 또는 영향을 받든지 받지 않든지에 관계없이 근원하는 질환의 치료로 간주되어야 한다.
"가변"이란 용어는, 가변 도메인 중 일부 영역이 항체들 간의 서열에 있어서 광범위하게 상이하고 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나, 상기 가변성은 항체들의 가변 도메인 전체를 통해 균일하게 분포되지는 않는다. 상기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서 고가변 영역이라 칭하는 3개의 분절에 집중된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분을 프레임워크 영역(FR)이라 칭한다. 고유 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인들은 각각, 베타-시트 구조를 연결하고 일부의 경우 상기 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3개의 고가변 영역에 의해 연결된, 베타-시트 배열을 주로 채택하는 4개의 FR을 포함한다. 각 쇄 중의 고가변 영역(HVR)은 상기 FR에 의해 근접하여 함께 유지되며, 다른 쇄로부터의 고가변 영역들과, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]을 참조하시오). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관련되지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예를 들어 항체 의존적인 세포 세포독성(ADCC)에서 상기 항체의 관여를 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "벡터"란 용어는 상기에 결합된 또 다른 핵산을 운반할 수 있는 핵산 분자를 지칭하는데 사용된다. 벡터의 한 가지 유형은 "플라스미드"이며, 이는 추가적인 DNA 분절이 결찰될 수 있는 환상의 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기에서 추가적인 DNA 분절이 바이러스 게놈내에 결찰될 수 있다. 몇몇 벡터들은 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자율적으로 복제할 수 있다(예를 들어 세균 복제 기원을 갖는 세균 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터들(예를 들어 비-에피솜 포유동물 벡터)이 숙주 세포내로 도입시 상기 숙주 세포의 게놈내에 통합될 수 있으며, 이에 의해 상기 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 몇몇 벡터들은 이들이 작동적으로 연결되는 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 상기와 같은 벡터를 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간단히, "발현 벡터")라 칭한다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태를 갖는다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 상기 플라스미드가 벡터의 가장 통상적으로 사용되는 형태이므로 호환 가능하게 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 동등한 기능을 제공하는 상기와 같은 다른 형태의 발현 벡터들, 예를 들어 바이러스 벡터(예를 들어 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)를 포함하고자 한다.
본 명세는 본 명세서에 포함된 하기 특정한 실시태양들의 상세한 설명을 참조하여 보다 쉽게 이해될 수 있다. 본 명세가 그의 몇몇 실시태양의 구체적인 세부사항을 참조하여 기재되었지만, 상기와 같은 세부사항들을 상기 명세의 범위에 대한 제한으로서 간주하고자 하지는 않는다.
질병 타우에 결합하는 인간화된 항체
본 명세서는 입체형태-의존적인 방식으로 타우의 4개의 상이한 영역들을 인식할 수 있는 인간 질병/병적인 타우에 대한 제1 인간화된 항체를 제공한다. 보다 특히, 본 명세서에 기재된 인간화된 항체는 야생형/정상 타우 및 AD와 관련된 타우(질병 타우)의 입체형태를 식별하는 방식으로 QT1-QT4 중 적어도 1, 2, 3 또는 4개와 결합할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 QT1-QT4 중 2, 3 또는 4개는 이들 항체에 의해 동시에 점유될 수 있다. 즉, 본 명세서에 기재된 항체 및 타우-결합 단편은 그들의 "에피토프"로서 하기 4개의 타우 부위 중 임의의 하나 이상을 가지며, 이들 중 일부 또는 전부는 입체형태적 에피토프들: 268-HQPGGG-273(서열번호 148)(타우 단백질의 첫 번째 반복 도메인 내), 299-HVPGGG-304(서열번호 149)(타우 단백질의 두 번째 반복 도메인 내), 330-HKPGGG-335(서열번호 150)(타우 단백질의 세 번째 반복 도메인 내), 및 362-HVPGGG-367(서열번호 149)(타우 단백질의 네 번째 반복 도메인 내)이다. 이들 에피토프를 또한 본 명세서에서 각각 QT1, QT2, QT3 및 QT4라 칭한다. DC8E8은 QT1-QT4 전부에 결합하며; 실제로, DC8E8의 에피토프는 HXPGGG이고, 여기에서 X는 임의의 아미노산이다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체 및 타우-결합 단편은 모 마우스 단클론 항체 DC8E8의 경우보다 낫지는 않지만 상기만큼 양호하게, 적어도 80%의 Tau 151-139/4R에 대한 친화성을 갖는다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체 및 타우-결합 단편은 마우스 DC8E8 항체에 의해 인식되는 에피토프에 대한 특이성을 유지한다. 하나의 실시태양에서, 이들 항체는 이들을 인간에서 AD 및 관련 타우병증의 치료를 위해 임상에서 사용하기에 최적으로 만드는 하나 이상의 유리한 생화학적 성질들(예를 들어 인간 불변 영역 및 따라서 감소된 면역원성, 높은 발현 수준, 높은 용해도, 정제시 현저한 단백질 응집의 결여, 높은 안정성)을 갖는다.
DC8E8의 인간화는 프레임워크 잔기의 조작에 의해 실험적으로 최적화되었다. 초기 인간화된 버전 RHA/RKA(AX001)는 키메릭 DC8E8 구조물에 비해, 타우에 대한 결합 친화성의 10배 감소를 나타내었다. 이들 데이터는 하나 이상의 프레임워크 아미노산 잔기가 결합 활성의 적은 손실 발생과 함께 DC8E8을 인간화하기 위해 중요함을 암시하였다. 대조적으로, 단일 프레임워크 역-돌연변이는 RHD(AX004) 인간화된 항체에서 결합 친화성을 복원하기에 충분하였다. 이러한 우수성은 뜻밖이었다. 다른 단일 점 역-돌연변이들은 결합 친화성에서 동일한 뜻밖의 이점을 갖지 못하였다. 예를 들어 RHF/RKA(AX006) 및 RHG/RKA(AX007) 구조물을 참조하시오. 또, 다음 최선의 항체는 10개의 역-돌연변이를 가졌다. AX002를 참조하시오. 시험된 모든 역-돌연변이 조합 중에서, AX004가, 단일의 역-돌연변이를 가짐에도 불구하고, 다른 단일의 역-돌연변이 구조물들과 달리, 타우에 대해 가장 양호한 결합 친화성(본 명세서에 기재된 분석에서)을 갖는 것으로 입증되었다. 개선된 친화성을 갖는 다른 인간화된 구조물들은 예를 들어 각각 RKA 및 RKB 경쇄 버전에서 AX002, AX005, AX037 및 AX014, AX016, AX017, AX038을 포함한다.
또한, 본 명세서에 기재된 인간화된 항체의 타우-결합 단편(예를 들어 항체 부분)을 제공한다. 이들 단편은 또한 이들이 야생형/정상 타우 및 AD와 관련된 타우의 입체형태를 식별하는 방식으로 QT1-QT4(상기에 정의됨)의 적어도 1, 2, 3 또는 4개에 결합할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 QT1-QT4 에피토프의 4개 전부는 본 명세서에 기재된 항체 또는 타우-결합 단편 중 4개에 의해 점유될 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 단편 또는 부분은 마우스 단클론 항체 DC8E8과 동일한 친화성 및 성질로 타우에 결합한다. 예를 들어, QT1-QT4 중 하나 이상에 결합할 수 있는 항체 단편 또는 부분은 비제한적으로 Fab(예를 들어 파파인 절단에 의해), Fd, Fab'(예를 들어 펩신 절단 및 부분 환원에 의해) 및 F(ab')2(예를 들어 펩신 절단에 의해), facb(예를 들어 플라스민 절단에 의해), pFc'(예를 들어 펩신 또는 플라스민 절단에 의해), Fd(예를 들어 펩신 절단, 부분 환원 및 재-응집에 의해), Fv 또는 scFv(예를 들어 분자 생물학 기법에 의해) 단편들을 포함하며, 이들은 본 발명에 의해 제공된다. 또한 문헌[William E. Paul (ed.) Fundamental Immunology, 6th Edition, Lippincott Williams & Wilkins, NY, N.Y. (2008)](내용 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다)을 참조하시오. 반감기가 다른 분자, 예를 들어 PEG화된 단편에의 접합에 의해 증가된 임의의 다른 단편들이 또한 본 발명의 범위내에 있다. 몇몇 단편들은 당해 분야에 통상적으로 공지되거나 본 명세서에 제공된 바와 같이, 효소적 절단, 합성 또는 재조합 기법에 의해 생성될 수 있다. 항체들을 또한, 하나 이상의 정지 코돈이 천연 정지 부위의 상류에 도입된 항체 유전자들을 사용하여 다양한 절두된 형태로 생성시킬 수 있다. 예를 들어, F(ab')2 중쇄 부분을 암호화하는 조합 유전자를, 상기 중쇄의 CH1 도메인 및/또는 힌지 영역을 암호화하는 DNA 서열을 포함하도록 설계할 수 있다. 상기 항체의 다양한 부분들을 통상적인 기법에 의해 화학적으로 함께 결합시키거나, 또는 통상적인 유전 공학 기법들을 사용하여 연속적인 단백질로서 제조할 수 있다.
중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 완전 항체를 상이한 "부류"들로 지정할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 완전 항체의 6가지 주요 부류들: IgA, IgD, IgE, IgG, IgY 및 IgM이 존재하며, 이들 중 다수는 "하위부류"(아이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 항체의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인들을 각각 알파(α), 델타(δ), 입실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)라 칭한다. 면역글로불린의 상이한 부류들의 서브유닛 구조 및 3차원 배열은 주지되어 있다. 하나의 실시태양에서, 본 명세서에 기재된 항체들은 기존의 면역원성 아이소타입 중 어느 하나의 불변 영역을 갖는다. 예를 들어, 상기 불변 영역은 람다 또는 카파 영역 및 감마-1, 감마-2, 감마-3, 또는 감마-4 영역의 것일 수 있다. 혼합된 아이소타입의 불변 영역들이 또한 본 명세의 범위내에 있다(예를 들어 IgG4와 혼합된 IgG1). 일부 아이소타입들이 다른 것들보다 우수한 것으로 인식되었다. Bruggemann M, Williams GT, Bindon CI, Clark MR, Walker MR,Jefferis R, Waldmann H, Neuberger MS (1987) Comparison of the effector functions of human immunoglobulins using a matched set of chimeric antibodies. J. Exp. Med. 166, 1351-1361; Bindon CI, Hale G, Bruggemann M, Waldmann H (1988) Human monoclonal IgG isotypes differ incomplement activating function at the level of C4 as well as C1q. J. Exp. Med. 168, 127-42; Shaw DR, Khazaeli MB, LoBuglio AF (1988) Mouse/human chimeric antibodies to a tumor associated antigen: biologic activity of the four human IgG subclasses. J. Natl. Cancer Inst. 80, 1553-9; Steplewski Z, Sun LK, Shearman CW, Ghrayeb J, Daddona P, Koprowski,H (1988) Biological activity of human-mouse IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4 chimeric monoclonal antibodies with antitumor specificity. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 4852-6. 이들 참고문헌에 기재된 하나의 실험 세트에서, 인간 아이소타입 IgM, IgG1, IgG2, IgG3(2개의 알로타입), IgG4, IgA 및 IgE를 자가 보체 매개된 용해뿐만 아니라 항체 의존적인 세포 매개된 세포독성(ADCC)에 대해서 비교하였다. 보체 매개된 용해의 경우, 인간 IgM 및 IgG1이 가장 유효하고, IgG3의 2개의 알로타입이 다음으로 유효한 것으로 입증되었다. IgG2는 불충분한 용해를 제공한 반면 다른 아이소타입들은 용해를 제공하지 않는 듯하였다. ADCC에 대한 결과는 분석(예를 들어 세포 유형)에 따라 IgG1이 다시 매우 유효하고, 이어서 IgG2, IgG3 또는 IgG4 순이었다. IgM을 포함한 다른 아이소타입들은 유효하지 않았다. 그러나 항체들은 다수의 다른 활성들(예를 들어 대식세포에 의한 옵소닌화 촉진)을 가지며, 궁극적으로 아이소타입이 그의 목적하는 용도에 가장 좋은 성질들의 조합을 가질 것인지를 예견하는 것은 어렵거나 심지어 불가능하다.
인간화된 항체의 면역원성에 영향을 미치는 또 다른 인자는 불변 영역 중의 다형태성 결정인자의 존재이다. 이러한 차이를, 감소된 항원성을 위해서 최소화시킬 수 있다. 모집단에서 합리적인 빈도로 관찰되는 인간 IgG의 18개 알로타입들이 존재한다: IgG1은 4개를 갖고; IgG2는 1개를 갖고; IgG3은 13개를 갖고; IgG4는 0개를 갖는다(WHO (1976) Review of the notation for the allotypic and related markers of human immunoglobulins. Eur. J. Immunol. 6, 599-601). 또한 인간 k 경쇄의 3개의 알로타입들이 존재한다. 일부 알로타입은 일부 개인에는 존재하지만 다른 개인들에서는 존재하지 않는다. 일부는 일본인 집단에서 우세하게 발현된다.
비-인간 항체의 다수의 인간화 방법들이 당해 분야에 기재되었다. 하나의 실시태양에서, 인간화된 항체는 비-인간인 공급원으로부터 상기 내로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기를 종종 "수입" 잔기라 칭하며, 상기는 전형적으로 "수입" 가변 도메인으로부터 취해진다. 하나의 실시태양에서, 인간화는 인간 항체의 상응하는 서열 대신 고가변 영역 서열을 치환시킴으로써, 윈터(Winter)와 동료의 방법(Jones et al, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988))에 따라 필수적으로 수행될 수 있다. 상응하게, 상기와 같은 "인간화된" 항체는 키메릭 항체이며(미국특허 제 4,816,567 호), 여기에서 완전한보다 실질적으로 적은 인간 가변 도메인이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열에 의해 치환되었다. 일부 실시태양에서, 인간화된 항체는, 일부 고가변 영역 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체 중의 유사한 부위로부터의 잔기에 의해 치환된 인간 항체이다.
상기 인간화된 항체의 제조에 사용되는 인간 가변 도메인(경쇄 및 중쇄 모두)의 선택은 항원성 감소에 중요하다. 소위 "최적합" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 선별한다. 이어서 상기 설치류의 서열에 가장 가까운 인간 서열(전체 가변 영역 또는 단지 프레임워크)을 인간화된 항체용의 인간 프레임워크 영역(FR)으로서 수용한다(Sims et al, J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al, J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정한 하위 그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 특정한 프레임워크 영역을 사용한다. 동일한 프레임워크를 다수의 상이한 인간화된 항체에 사용할 수 있다(Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol, 151:2623 (1993)).
일부 실시태양에서, 항체들을 모 항체(예를 들어 마우스 항체)의 항원에 대한 높은 친화성 및 다른 유리한 생물학적 성질들을 유지하면서 인간화시키는 것이 중요하다. 상기 목적을 성취하기 위해서, 하나의 실시태양에 따라, 인간화된 항체를, 모 서열의 분석 방법 및 상기 모 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 사용하는 다양한 개념상 인간화된 생성물에 의해 제조한다. 3차원 면역글로불린 모델은 통상적으로 입수할 수 있으며 당해 분야의 숙련가들에게 친숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 있음직한 3차원 입체형태적 구조들을 예시하고 나타내는 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. 이러한 디스플레이의 조사는 상기 후보 면역글로불린 서열의 기능화에서 상기 잔기의 있음직한 역할의 분석, 즉 상기 후보 면역글로불린의 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기들의 분석을 허용한다. 이렇게 하여, FR 잔기를, 목적하는 항체 특성, 예를 들어 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화성을 성취하도록 상기 수용 및 수입 서열 중에서 선택하고 병용할 수 있다. 일반적으로, 상기 고가변 영역 잔기들은 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적으로 및 가장 실질적으로 관련된다.
폴리펩티드 서열번호 가변 영역 단독 서열번호
CDR-H1 1 중쇄 DC8E8 7
CDR-H2 2 경쇄 DC8E8 8
CDR-H3 3 중쇄 CHIMERIC 9 (7에 일치함)
CDR-L1 4 경쇄 CHIMERIC 10 (8에 일치함)
CDR-L2 5 최적화된
중쇄 DC8E8		 11 (7에 일치함)
CDR-L3 6 최적화된
경쇄 DCBE8		 12 (8에 일치함)
상기 표 2는 본 명세서에 기재된 아미노산 서열들 중 일부에 대한 서열번호들을 제공한다. 또 다른 실시태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 또는 타우-결합 단편은 각각 중쇄 CDR 1, 2 및 3으로서 서열번호 1, 2, 3, 및 각각 경쇄 CDR 1, 2 및 3으로서 서열번호 4, 5, 6을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체 또는 단편은 카밧에 따라 정의된 바와 같은 적어도 하나의 CDR을 포함하며, 그의 서열은 서열번호 1 내지 6 중 어느 하나의 CDR과 최적의 정렬 후에 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 90%, 95% 및 98% 일치성을 갖는다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX001) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHA(서열번호 13) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX001-IgG1) 또는 IgG4(AXON001-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX002) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHB(서열번호 14) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX002-IgG1) 또는 IgG4(AXON002-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX003) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHC(서열번호 15) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX003-IgG1) 또는 IgG4(AXON003-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX004) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHD(서열번호 16) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX004-IgG1) 또는 IgG4(AXON004-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX005) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHE(서열번호 17) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX005-IgG1) 또는 IgG4(AXON005-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX006) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHF(서열번호 18) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX006-IgG1) 또는 IgG4(AXON006-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX007) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHG(서열번호 19) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX007-IgG1) 또는 IgG4(AXON007-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX008) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHH(서열번호 20) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX008-IgG1) 또는 IgG4(AXON008-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX009) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHI(서열번호 21) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX009-IgG1) 또는 IgG4(AXON009-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX010) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHJ(서열번호 22) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX010-IgG1) 또는 IgG4(AXON010-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX011) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHK(서열번호 23) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX011-IgG1) 또는 IgG4(AXON011-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX012) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHL(서열번호 24) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX012-IgG1) 또는 IgG4(AXON012-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX013) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHA(서열번호 1) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX013-IgG1) 또는 IgG4(AXON013-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX014) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHB(서열번호 2) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX014-IgG1) 또는 IgG4(AXON014-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX015) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHC(서열번호 15) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX015-IgG1) 또는 IgG4(AXON015-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX016) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHD(서열번호 16) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX016-IgG1) 또는 IgG4(AXON016-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX017) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHE(서열번호 17) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX017-IgG1) 또는 IgG4(AXON017-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX018) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHF(서열번호 18) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX018-IgG1) 또는 IgG4(AXON018-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX019) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHG(서열번호 19) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX019-IgG1) 또는 IgG4(AXON019-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX020) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHH(서열번호 20) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX020-IgG1) 또는 IgG4(AXON020-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX021) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHI(서열번호 21) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX021-IgG1) 또는 IgG4(AXON021-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX022) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHJ(서열번호 22) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX022-IgG1) 또는 IgG4(AXON022-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX023) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHK(서열번호 23) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX023-IgG1) 또는 IgG4(AXON023-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX024) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHL(서열번호 24) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX024-IgG1) 또는 IgG4(AXON024-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX025) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHA(서열번호 13) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX025-IgG1) 또는 IgG4(AXON025-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX026) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHB(서열번호 14) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX026-IgG1) 또는 IgG4(AXON026-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX027) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHC(서열번호 15) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX027-IgG1) 또는 IgG4(AXON027-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX028) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHD(서열번호 16) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX028-IgG1) 또는 IgG4(AXON028-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX029) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHE(서열번호 17) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX029-IgG1) 또는 IgG4(AXON029-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX030) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHF(서열번호 18) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX030-IgG1) 또는 IgG4(AXON030-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX031) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHG(서열번호 19) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX031-IgG1) 또는 IgG4(AXON031-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX032) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHH(서열번호 20) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX032-IgG1) 또는 IgG4(AXON032-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX033) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHI(서열번호 21) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX033-IgG1) 또는 IgG4(AXON033-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX034) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHJ(서열번호 22) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX034-IgG1) 또는 IgG4(AXON034-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX035) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHK(서열번호 23) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX035-IgG1) 또는 IgG4(AXON035-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX036) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHL(서열번호 24) 및 경쇄 가변 영역 VK(서열번호 8)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX036-IgG1) 또는 IgG4(AXON036-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX037) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHM(서열번호 25) 및 경쇄 가변 영역 RKA(서열번호 26)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX037-IgG1) 또는 IgG4(AXON037-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
하나의 실시태양에서, 항체(AX038) 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄 가변 영역 RHM(서열번호) 및 경쇄 가변 영역 RKB(서열번호 27)을 포함한다. 상기 항체는 IgG1(AX037-IgG1) 또는 IgG4(AXON037-IgG4) 불변 영역과 함께 제공된다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역 RHA, RHB, RHC, RHD, RHE, RHF, RHG, RHH, RHI, RHJ, RHK, RHL, 및 RHM 중 어느 하나로부터 선택된 가변 영역을 포함하는 항체 중쇄를 제공한다. 이들 가변 영역 중 어느 하나를 혼합된 아이소타입을 갖는 불변 영역을 포함하여, 임의의 인간 아이소타입의 불변 영역에 결합시킬 수 있다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 RKA 및 RKB 중에서 선택된 가변 영역을 포함하는 항체 경쇄를 제공한다. 이들 가변 영역 중 어느 하나를 혼합된 아이소타입을 갖는 불변 영역을 포함하여, 임의의 인간 아이소타입의 불변 영역에 결합시킬 수 있다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 서열번호 28-40 및 43-55 중 어느 하나의 항체 중쇄를 제공한다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 서열번호 57-59 중에서 선택된 항체 경쇄를 제공한다.
인간화된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 인간 불변 영역의 적어도 일부에 결합시킬 수 있다. 상기 정의에 기재된 바와 같이, 불변 영역의 선택은 부분적으로, 항체-의존적인 세포-매개된 세포독성, 항체 의존적인 세포 식작용 및/또는 보체 의존적인 세포독성을 목적으로 하는 지의 여부에 따라 변한다. 하나의 실시태양에서, 인간 동위원소 IgG1 및 IgG3는 보체-의존적인 세포독성을 가지며 인간 아이소타입 IgG2 및 IgG4는 갖지 않는다. 하나의 실시태양에서, 인간 IgG1 및 IgG3은 또한 인간 IgG2 및 IgG4보다 더 강한 세포 매개된 효과기 기능을 유도한다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 예시적인 인간 경쇄 카파 불변 영역은 서열번호 170의 아미노산 서열을 갖는다. 서열번호 170의 N-말단 아르기닌을 생략시킬 수 있으며, 이 경우 경쇄 카파 불변 영역은 서열번호 171의 아미노산 서열을 갖는다. 예시적인 인간 IgG1 중쇄 불변 영역은 서열번호 172의 아미노산 서열을 갖는다. 예시적인 인간 IgG4 중쇄 불변 영역은 서열번호 173의 아미노산 서열을 갖는다. 항체는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체로서, 별도의 중쇄, 경쇄로서, Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv로서, 또는 중쇄 및 경쇄 성숙한 가변 도메인이 이격자를 통해 결합되는 단쇄 항체로서 발현될 수 있다.
인간 항체의 불변 영역을 암호화하는 cDNA 서열은 당해 분야의 통상적인 숙련가에게 공지되어 있다. 하나의 실시태양에서, 예를 들어 진뱅크(GenBank)를 통해 입수할 수 있는 예시적인 cDNA 서열들(이들은 각각 내용 전체가 참고로 인용된다)은 하기와 같다: 인간 IgG1 불변 중쇄 영역: 진뱅크 수납 번호: J00228; 인간 IgG2 불변 중쇄 영역: 진뱅크 수납 번호: J00230; 인간 IgG3 불변 중쇄 영역: 진뱅크 수납 번호: X04646; 인간 IgG4 불변 중쇄 영역: 진뱅크 수납 번호: K01316; 및 인간 카파 경쇄 불변 영역: 진뱅크 수납 번호: J00241. 하나의 실시태양에서, 상기 불변 영역을 공지된 방법들에 따라 추가로 변형시킬 수 있다. 예를 들어, IgG4 불변 영역에서, 잔기 S241을 프롤린(P) 잔기로 돌연변이시켜 힌지에서 완전한 디설파이드 가교 형성을 허용할 수 있다(예를 들어 문헌[Angel et al., Mol. Immunol. 1993; 30:105-8]을 참조하시오).
보다 명확히 하기 위해서, 하기 표 3은 본 명세서에 기재된 인간화된 항체 중 일부의 다양한 가변 영역들에 상응하는 다양한 아미노산 서열을 요약한다.
인간화된 가변 중쇄 영역 단독 서열번호 인간화된 가변 경쇄 영역 단독 서열번호
RHA 13 RKA 26
RHB 14 RKB 27
RHC 15
RHD 16
RHE 17
RHF 18
RHG 19
RHH 20
RHI 21
RHJ 22
RHK 23
RHL 24
RHM 25
하기 표 4는 본 명세서에 기재된 마우스 및 인간화된 항체의 다양한 완전길이 서열에 상응하는 아미노산 서열들을 요약한다.
완전한 가변 및 중쇄 불변 IgG1 서열번호 완전한 가변 및 중쇄 불변 IgG4 서열번호
RHA 28 RHA 43
RHB 29 RHB 44
RHC 30 RHC 45
RHD 31 RHD 46
RHE 32 RHE 47
RHF 33 RHF 48
RHG 34 RHG 49
RHH 35 RHH 50
RHI 36 RHI 51
RHJ 37 RHJ 52
RHK 38 RHK 53
RHL 39 RHL 54
RHM 40 RHM 55
cDC8E8 41 cDC8E8 56
마우스 DC8E8 42
하기 표 5는 본 명세서에 기재된 인간화된 항체의 경쇄의 다양한 완전길이 서열에 상응하는 다양한 아미노산 서열들을 요약한다.
완전한 인간화된 가변 경쇄 불변 K 서열번호
RKA 57
RKB 58
cDC8E8 카파 59
또한, 키메릭 항체 및 그의 타우-결합 단편을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 키메릭 항체 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄에 대한 인간 IgG1 불변 영역(서열번호 172) 및 경쇄에 대한 카파 불변 영역(서열번호 170)과 함께 중쇄 가변 영역 DC8E8 VH(서열번호 9) 및 경쇄 가변 영역 DC8E8 VK(서열번호 10)를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 키메릭 항체 또는 그의 타우-결합 단편은 중쇄에 대한 인간 IgG4 불변 영역(서열번호 173) 및 경쇄에 대한 카파 불변 영역(서열번호 170)과 함께 중쇄 가변 영역 DC8E8 VH(서열번호 9) 및 경쇄 가변 영역 DC8E8 VK(서열번호 10)를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 인간화된 항체 또는 그의 타우-결합 단편/부분을 재조합적으로 제조한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 인간화된 항체 또는 그의 타우-결합 단편/부분을 적어도 부분적으로 화학 합성에 의해 제조한다. 하나의 실시태양에서, 상기 키메릭 항체 또는 그의 타우-결합 단편/부분을 재조합적으로 제조한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 키메릭 항체 또는 그의 타우-결합 단편/부분을 적어도 부분적으로 화학 합성에 의해 제조한다.
하기 표 6은 본 명세서에 기재된 다른 인간화-관련 분자들 중 일부에 대한 서열들을 요약한다.
분자 아미노산 서열번호 핵산 서열번호
Y15982 Igkv8-21*01 60 72
L17135 Igkv8-28*02 61 73
Y15980 IGKV8-19*01 62 74
AJ235948 IGKV8-30*01 63 75
AJ235947 IGKV8-28*01 64 76
X72449 65 77
AC160990 Musmus IGHV1-81*01 66 78
AC160473 Musmus IGHV1-77*01 67 79
AC160990 Musmus IGHV1-83*01
68 80
AC160473 Musmus IGHV1-75*01
69 81
X02064 Musmus IGHV1-54*02
70 82
M65092
71 83
본 명세서에 기재된 항체들의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 상기 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 성질들을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 상기 항체의 아미노산 서열 변체를, 항체 핵산에 적합한 뉴클레오티드 변화를 도입시키거나 또는 펩티드 합성에 의해 제조한다. 상기와 같은 변형은 예를 들어 상기 항체의 아미노산 서열내 잔기들로부터의 결실, 및/또는 상기 잔기들내로의 삽입 및/또는 상기 잔기들의 치환을 포함한다. 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합을, 최종 구조물이 목적하는 특성을 갖는 한, 상기 최종 구조물에 도달하도록 만든다. 상기 아미노산 변화는 또한 상기 항체의 번역-후 과정, 예를 들어 글리코실화 부위의 수 또는 위치의 변화를 변경시킬 수 있다.
또한, 항체가 그의 완전한 기능을 필수적으로 유지하도록, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 보다 특히 적어도 3개 이상의 보존적인 치환을 각각 서열번호 13-25 및 서열번호 26 및 27의 서열내에 도입시킴으로써 변경시킨 서열을 갖는 항체들 및 결합 단편들이 본 명세에 의해 포함된다.
인간 성숙 가변 영역 프레임워크 잔기로부터의 몇몇 아미노산은 다른 이유들 중에서도 CDR 입체형태 및/또는 항원에의 결합에 대한 그의 가능한 영향, 중쇄와 경쇄간의 상호작용, 불변 영역과의 상호작용을 매개하고, 목적하는 또는 원치않는 번역-후 변형에 대한 부위이고, 인간 가변 영역 서열 중의 그의 위치에 특이한 잔기이고 따라서 잠재적으로 면역원성임을 근거로 치환을 위해 선택될 수 있다. 당해 분야의 통상적인 숙련가는 몇몇 아미노산을 치환을 위해 어떻게 고르고 이어서 상기와 같은 치환의 결과를 어떻게 평가하는지를 알 것이다. 다수의 실시태양에서, 프레임워크내 치환 위치 및 치환시키고자 하는 아미노산은 실험적으로 선택된다.
아미노산 치환을 또한 CDR 중에서 수행할 수 있다. 하나의 가능한 변화는 마우스 DC8E8 항체의 CDR 중의 몇몇 잔기를 인간 CDR 서열로부터, 전형적으로는 예시된 인간화된 항체의 설계에 사용되는 인간 수용 서열의 CDR로부터 상응하는 잔기로 치환시키는 것이다. 일부 항체에서 상기 CDR의 유일한 부분, 즉 결합에 필요한 CDR 잔기의 부분집합(SDR이라 칭한다)이 인간화된 항체에서 결합을 유지하는데 필요하다. 항원과 접촉하지 않고 SDR 중에 있지 않은 CDR 잔기들을 선행 연구들(예를 들어 CDR H2 중의 잔기 H60-H65는 종종 요구되지 않는다)을 기반으로, 코티아(Chothia) 고가변 루프(Chothia, J. Mol. Biol. 196:901, 1987) 밖에 놓인 카밧 CDR의 영역으로부터, 분자 모델링에 의해서 및/또는 실험적으로, 또는 문헌[Gonzales et al., Mol. Immunol. 41:863(2004)]에 기재된 바와 같이 확인할 수 있다. 상기와 같은 인간화된 항체에서 하나 이상의 공여 CDR 잔기가 존재하지 않거나 전체 공여 CDR이 생략된 위치에서, 상기 위치를 점유하는 아미노산은 수용 항체 서열 중의 상응하는 위치(카밧 넘버링에 의해)를 점유하는 아미노산일 수 있다. 상기 CDR 중에 포함되는 공여 아미노산에 대한 상기와 같은 수용체의 치환 수는 경쟁하는 고려사항들의 균형을 반영한다. 상기와 같은 치환은 잠재적으로는 인간화된 항체 중의 마우스 아미노산의 수를 감소시키고 결과적으로 잠재적인 면역원성을 감소시키는데 유리하다. 그러나, 치환은 또한 친화성의 변화를 야기할 수 있고, 친화성의 현저한 감소는 피하는 것이 바람직하다. CDR 내 치환 위치 및 치환시키기 위한 아미노산을 또한 실험적으로 선택할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 항체 및 그의 타우-결합 단편은 각각 서열번호 1, 2 및 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하고, 서열번호 28-40(완전한 RHA-RHM)의 성숙한 중쇄에 적어도 90% 일치하는 중쇄 가변 영역, 및 각각 서열번호 4, 5 및 6의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 57(RKA) 또는 서열번호 58(RKB)의 성숙한 경쇄에 적어도 90% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 성숙한 중쇄 가변 영역은 서열번호 28-40 중 어느 하나에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 일치한다. 일부 실시태양에서, 상기 성숙한 경쇄 가변 영역은 서열번호 57 또는 서열번호 58 중 어느 하나에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치한다.
돌연변이유발에 바람직한 위치에 있는 항체의 몇몇 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법을 문헌[Cunningham and Wells Science, 244:1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같이 "알라닌 주사 돌연변이유발"이라 칭한다. 여기에서, 잔기 또는 표적 잔기들의 그룹이 확인되고(예를 들어 하전된 잔기, 예를 들어 arg, asp, his, lys 및 glu) 아미노산과 항원과의 상호작용에 영향을 미치도록 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 치환된다. 이어서 상기 치환에 대한 기능 감도를 입증하는 아미노산 위치들을, 추가의 또는 다른 변체를 치환 부위에 또는 상기 치환 부위 대신에 도입시킴으로써 한정시킨다. 따라서, 아미노산 서열 변화를 도입시키기 위한 부위는 미리 결정하는 반면, 돌연변이 자체의 성질은 미리 결정할 필요가 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이의 수행성능을 분석하기 위해서 ala 주사 또는 무작위 돌연변이를 표적 코돈 또는 영역에서 수행하고 발현된 항체 변체를 목적하는 활성에 대해 선별한다.
아미노산 서열 삽입은 길이가 하나의 잔기에서부터 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체 또는 또 다른 치료제에 융합된 항체를 포함한다. 상기 항체 분자의 다른 삽입 변체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드 또는 효소(예를 들어 ADEPT를 위한)에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에의 융합을 포함한다.
또 다른 유형의 변체는 아미노산 치환 변체이다. 상기 변체는 상이한 잔기에 의해 치환된 항체 분자 중의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는다. 하나의 실시태양에서, 치환적 돌연변이유발에 가장 중요한 부위는 고가변 영역을 포함하지만, FR 변경이 또한 고려된다. 보존적 치환을 상기뿐만 아니라 하기의 표에 나타낸다. 아미노산 부류에서 명명되는 보다 실질적인 변화들을 도입시킬 수 있으며 생성물을 선별할 수 있다.
항체의 생물학적 성질의 실질적인 변경은 (a) 예를 들어 시트 또는 나선 입체형태로서 치환 영역 중 폴리펩티드 주쇄의 구조, (b) 표적 부위에서 상기 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 부피를 유지하는데 대한 효과가 현저하게 상이한 치환들을 선택함으로써 수행된다. 아미노산들을 그들의 측쇄 성질의 유사성에 따라 분류할 수 있다(A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)):
(1) 비-극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)
(2) 하전되지 않은 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)
(3) 산성: Asp (D), Glu (E)
(4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His (H)
한편으로, 천연 잔기들을 그들의 공통 측쇄 성질을 근거로 그룹들로 분류할 수 있다:
(1) 소수성: Norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적인 치환은 전형적으로 또 다른 부류에 대한 상기 부류들 중 하나의 구성원의 교환을 수반한다.
상기 항체의 적합한 입체형태를 유지하는데 관련되지 않은 임의의 시스테인 잔기를 또한, 일반적으로 세린으로 치환시켜 상기 분자의 산화 안정성을 개선시키고 이상 가교결합을 방지할 수 있다. 환언하면, 시스테인 결합(들)을 상기 항체에 가하여 그의 안정성(특히 상기 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우)을 개선시킬 수 있다.
치환 변체의 특히 바람직한 유형은 모 항체(예를 들어 인간화된 또는 인간 항체)의 하나 이상의 고가변 영역 잔기의 치환을 포함한다. 일반적으로, 추가의 개선을 위해 선택된 생성 변체(들)는 상기가 생성된 모 항체에 비해 개선된 생물학적 성질을 가질 것이다. 상기와 같은 치환 변체의 편리한 생성 방법은 파지 디스플레이를 사용하는 친화성 성숙을 수반한다. 간단히, 다수의 고가변 영역 부위(예를 들어 6 내지 7개 부위)를 돌연변이시켜 각 부위에 모든 가능한 아미노산 치환을 생성시킨다. 상기와 같이 생성된 항체 변체는 각 입자내에 패키징된 M13의 유전자 III 산물에 대한 융합으로서 섬유성 파지 입자로부터 1가 방식으로 디스플레이된다. 이어서 상기 파지-디스플레이된 변체를 본 명세서에 개시된 바와 같이 그의 생물학적 활성(예를 들어 결합 친화성)에 대해 선별한다. 변형을 위한 후보 고가변 영역 부위를 확인하기 위해서, 알라닌 주사 돌연변이유발을 수행하여 항원 결합에 현저하게 기여하는 고가변 영역 잔기들을 확인할 수 있다. 한편으로, 또는 추가로, 상기 항체와 인간 타우간의 접촉 점을 확인하기 위해서 상기 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 것이 이로울 수 있다. 상기와 같은 접촉 잔기 및 이웃하는 잔기들은 본 명세서에서 상세히 설명된 기법들에 따른 치환 후보들이다. 일단 상기와 같은 변체들이 생성되면, 변체의 패널에 본 명세서에 기재된 바와 같이 선별을 수행하고 하나 이상의 관련 분석에서 우수한 성질을 갖는 항체를 추가의 개발을 위해 선택할 수 있다.
상기 항체의 아미노산 변체의 또 다른 유형은 상기 항체의 원래 글리코실화 패턴을 변경시킨다. 변경은 상기 항체에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 부분들을 결실시키고/시키거나 상기 항체 중에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위를 부가함을 의미한다.
항체의 글리코실화는 전형적으로 N-결합되거나 O-결합된다. N-결합된은 상기 탄수화물 부분의 아스파라진 잔기의 측쇄에의 부착을 지칭한다. 트리펩티드 서열 아스파라진-X-세린 및 아스파라진-X-쓰레오닌(여기에서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다)은 상기 아스파라진 측쇄에 대한 탄수화물 부분의 효소적 부착에 대한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 중의 상기 트리펩티드 서열 중 어느 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성시킨다. O-결합된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토스아민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나의, 하이드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 쓰레오닌에의 부착을 지칭하지만, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신을 또한 사용할 수도 있다.
상기 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가는 편의상 아미노산 서열이 상술한 트리펩티드 서열(N-결합된 글리코실화 부위에 대한) 중 하나 이상을 함유하도록 상기 서열을 변경시킴으로써 수행된다. 상기 변경은 또한 원래 항체의 서열(O-결합된 글리코실화 부위에 대한)에의, 하나 이상의 세린 또는 쓰레오닌 잔기의 부가 또는 상기 잔기에 의한 치환에 의해 수행될 수 있다.
상기 항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 상기에 부착된 탄수화물을 변경시킬 수 있다. 예를 들어, 항체의 Fc 영역에 부착된 퓨코스가 결여된 성숙한 탄수화물 구조를 갖는 항체들이 미국특허 출원 US 2003/0157108 A1(프레스타 엘(Presta, L.))에 기재되어 있다. 또한 US 2004/0693621 A1(쿄와 학코 코교 캄파니 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조하시오. 항체의 Fc 영역에 부착된 탄수화물 중의 양분하는 N-아세틸글루코스아민(GlcNAc)을 갖는 항체들이 WO03/011878(장-마레 등(Jean-Mairet et al.) 및 미국특허 제 6,602,684 호(우마나 등(Umana et al.))에 언급되어 있다. 항체의 Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 중의 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체가 WO97/30087(파텔 등(Patel et al.))에 보고되어 있다. 또한 Fc 영역에 부착된 변경된 탄수화물을 갖는 항체에 관한 WO98/58964(라주 에스(Raju, S.)) 및 WO99/22764(라주 에스)를 참조하시오.
상기 명세의 항체 또는 타우-결합 단편의 반감기를 변경시키는 것이 바람직할 수도 있다. 하나의 실시태양에서, 하나 이상의 Fc 아미노산을, 혈중 항체의 반감기가 증가하도록 돌연변이시키거나(여기에서 상기 Fc의 하나 이상의 당 부분이 결실되었다), 또는 상기 항체의 혈중 반감기가 증가하도록 하나 이상의 당 잔기를 부가한다. 통상적인 혈장 단백질, 예를 들어 인간 혈청 알부민(HSA) 및 면역글로불린(Ig)(인간화된 항체 포함)은 전형적으로 2 내지 3주의 긴 반감기를 나타내며, 이는 엔도솜 재순환을 유도하는 신생아 Fc 수용체(FcRn)와의 특이적인 상호작용에 기인할 수 있다(Ghetie(2002) Immunol Res, 25:97-113). 대조적으로, 관심 약제, 특히 재조합 항체 단편, 호르몬 및 인터페론의 대부분의 다른 단백질들은 빠른(혈중) 제거가 문제가 된다. 이는 크기가 약 70 kDa의 신장 여과에 대한 한계값 아래인 단백질의 경우 특히 그렇다(Caliceti (2003) Adv Drug Deliv Rev 55:1261-1277). 이 경우 변형되지 않은 약학 단백질의 혈장 반감기는 1시간보다 상당히 적을 수 있다. 이는 대부분의 치료 용도에 대한 그들의 용도를 제한할 수 있다. 지속되는 약물학적 작용 및 또한 개선된 환자 순응성-필요한 투여 간격이 수일 또는 심지어 수주까지 연장된다-을 성취하기 위해서 다수의 전략들이 확립되었고 생물약학적 약물 개발을 목적으로 당해 분야에 기재되었다.
다른 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 PEG화 또는 다른 중합체에 대한 접합을 통해 반감기 또는 순환에 영향을 미치도록 변형시킬 수 있다. 상기 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있으며, 분지되거나 분지되지 않을 수도 있다. 폴리에틸렌 글리콜의 경우, 바람직한 분자량은 취급 및 제조의 용이성을 위해서 약 1 kDa 내지 약 100 kDa("약"이란 용어는 폴리에틸렌 글리콜의 제조에서 일부 분자가 서술된 분자량보다 더 무겁거나, 약간 덜 무거울 것임을 가리킨다)이다. 다른 크기들이 목적하는 치료학적 프로파일(예를 들어 목적하는 서방성의 지속기간, 존재하는 경우 생물학적 활성에 대한 효과, 취급의 용이성, 항원성의 정도 또는 결여 및 치료학적 단백질 또는 유사체에 대한 폴리에틸렌 글리콜의 다른 공지된 효과)에 따라 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 폴리에틸렌 글리콜은 약 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10,000, 10,500, 11,000, 11,500, 12,000, 12,500, 13,000, 13,500, 14,000, 14,500, 15,000, 15,500, 16,000, 16,500, 17,000, 17,500, 18,000, 18,500, 19,000, 19,500, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000, 50,000, 55,000, 60,000, 65,000, 70,000, 75,000, 80,000, 85,000, 90,000, 95,000, 또는 100,000 Da의 평균 분자량을 가질 수 있다. 분지된 폴리에틸렌 글리콜들이 예를 들어 미국특허 제 5,643,575 호; 문헌[Morpurgo et al., Appl. Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996)]; 문헌[Vorobjev et al., Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999)]; 및 문헌[Caliceti et al., Bioconjug. Chem. 10:638-646 (1999)]에 개시되어 있다. 폴리에틸렌 글리콜을 다수의 아미노산 잔기 중 어느 하나에 대한 결합을 통해 단백질에 부착시킬 수 있다. 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜을 리신, 히스티딘, 아스파트산, 글루탐산 또는 시스테인 잔기에 대한 공유 결합을 통해 폴리펩티드에 결합시킬 수 있다. 하나 이상의 반응 화학을 사용하여 폴리에틸렌 글리콜을 특정한 아미노산 잔기(예를 들어 리신, 히스티딘, 아스파트산, 글루탐산 또는 시스테인) 또는 하나보다 많은 유형의 아미노산 잔기(예를 들어 리신, 히스티딘, 아스파트산, 글루탐산, 시스테인 및 이들의 조합)에 부착시킬 수 있다.
한편으로, 항체 또는 그의 단편은 알부민(비제한적으로 재조합 인간 혈청 알부민 또는 그의 단편 또는 변체를 포함한다(예를 들어 1999년 3월 2일자로 허여된 미국특허 제 5,876,969 호, EP 특허 0 413 622 및 1998년 6월 16일자로 허여된 미국특허 제 5,766,883 호(이들은 내용 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다)를 참조하시오)) 또는 다른 순환하는 혈액 단백질, 예를 들어 트랜스페린 또는 페리틴과의 융합을 통해 증가된 생체내 반감기를 가질 수 있다. 하나의 실시태양에서, 본 발명의 폴리펩티드 및/또는 항체(그의 단편 또는 변체 포함)를 인간 혈청 알부민의 성숙한 형태(즉 EP 특허 0 322 094의 도 1 및 2에 나타낸 바와 같은 인간 혈청 알부민의 아미노산 1-585)(내용 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다)와 융합시킨다. 본 명세의 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 또한 본 발명에 의해 포함된다.
항체 또는 그의 타우-결합 단편을 또한 추가적인 이점, 예를 들어 상기 폴리펩티드의 증가된 용해도, 안정성 및 순환 시간(생체내 반감기), 또는 감소된 면역원성을 제공하도록 화학적으로 변형시킬 수 있다(예를 들어 미국특허 제 4,179,337 호를 참조하시오). 유도체화를 위한 화학 부분들을 수용성 중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜 등 중에서 선택할 수 있다. 상기 항체 및 그의 타우-결합 단편을 상기 분자 내 무작위 위치들에서, 또는 상기 분자내 소정의 위치들에서 변형시킬 수 있으며, 상기는 1, 2, 3개 이상의 부착된 화학적 부분들을 포함할 수 있다.
본 명세의 항체 또는 타우-결합 단편을 상기 항체의 효과기 기능에 관하여, 예를 들어 항원-의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC) 및/또는 보체 의존적인 세포독성(CDC)을 증대시키기 위해서 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이를 상기 항체의 Fc 영역 중에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입시킴으로써 성취할 수 있다. 한편으로 또는 추가로, 시스테인 잔기(들)를 Fc 영역에 도입시키고, 이에 의해 상기 영역 중의 쇄간 디설파이드 결합 형성을 허용할 수 있다. 상기와 같이 생성된 동종이량체성 항체는 개선된 내면화 능력 및/또는 증가된 보체-매개된 세포 살해 및 항체-의존적인 세포 세포독성(ADCC)을 가질 수 있다. 문헌[Caron et al, J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992)] 및 문헌[Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)]을 참조하시오. 한편으로, 항체를, 이중 Fc 영역을 갖고 이에 의해 증대된 보체 용해 및 ADCC 능력을 가질 수 있도록 조작할 수 있다. 문헌[Stevenson et al. Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)]을 참조하시오.
WO00/42072(프레스타 엘)는 인간 효과기 세포의 존재하에서 개선된 ADCC 기능을 갖는 항체들을 기재하며, 여기에서 상기 항체들은 그의 Fc 영역 중에 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게, 개선된 ADCC를 갖는 항체는 상기 Fc 영역의 298, 333 및/또는 334번 위치에 치환을 포함한다. 바람직하게 상기 변경된 Fc 영역은, 상기 위치들 중 1, 2 또는 3개에 치환을 포함하거나 이들 치환으로 이루어지는 인간 IgG1 Fc 영역이다.
변경된 C1q 결합 및/또는 보체 의존적인 세포독성(CDC)을 갖는 항체들이 WO99/51642, 미국특허 제 6,194,551B1 호, 미국특허 제 6,242,195B1 호, 미국특허 제 6,528,624B1 호 및 미국특허 제 6,538,124 호(이두소기 등(Idusogie et al.))에 기재되어 있다. 상기 항체는 그의 Fc 영역의 270, 322, 326, 327, 329, 313, 333 및/또는 334번 아미노산 위치들 중 하나 이상에 아미노산 치환을 포함한다.
상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해서, 예를 들어 미국특허 제 5,739,277 호에 기재된 바와 같이 상기 항체(특히 항체 단편)내에 구제 수용체 결합 에피토프를 통합시킬 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "구제 수용체 결합 에피토프"란 용어는 상기 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기의 증가를 담당하는 IgG 분자(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.
신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 개선된 결합, 및 증가된 반감기를 갖는 항체들이 WO00/42072(프레스타 엘)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 예를 들어 상기 Fc 영역은 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434번 위치 중 하나 이상에 치환을 가질 수 있다. 개선된 FcRn 결합을 갖는 바람직한 Fc 영역-포함 항체 변체는 그의 Fc 영역의 307, 380 및 434번 위치 중 1, 2 또는 3개에 아미노산 치환을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 인간화된 항체 또는 그의 타우-결합 단편/부분은 단클론성이다. 본 명세서에 기재된 단클론 항체(mAb)는 실질적으로 동종의 항체들의 집단으로부터 획득된 항체이다, 즉 상기 집단을 포함하는 개별적인 항체들은, 소량으로 존재할 수도 있는 가능한 천연 돌연변이를 제외하고, 동일하다. 단클론 항체들은 고도로 특이성이며, 단일 항원 부위에 대한 것이다. 각각의 mAb는 항원상의 단일 결정인자(에피토프)에 대한 것이다. 상기 단클론 항체는 그의 특이성 이외에, 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 배양에 의해 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. "단클론"이라는 수식어는 항체의 특성을 상기 항체의 실질적으로 동종인 집단으로부터 획득되는 것으로서 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 상기 항체의 생성을 필요로 하는 것으로서 해석되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체는 불멸화된 B 세포 또는 그의 하이브리도마에서 제조되거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 다른 경우에, 상기 단클론 항체는 단세포 클론, 예를 들어 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편 또는 부분을 암호화하는 DNA 분자에 의해 형질감염된 진핵생물 숙주 세포의 생육으로부터 제조된다. 본 명세의 항체 및 단편을 암호화하는 핵산을 또한 숙주 피실험자의 세포에 의한 상기 항체 및 단편의 발현을 위해 상기 숙주 피실험자에게 전달할 수 있다. 숙주 피실험자의 중추 신경계로의 폴리뉴클레오티드 전달 및 상기 신경계에서의 항-세닐린 항체의 발현을 위한 전략들에 대한 예가 1998년 10월 15일자로 공개된 PCT 출원 제 WO98/44955에 기재되어 있다. 임의의 핵산을 생체내 안정성을 증가시키기 위해 변형시킬 수 있다. 가능한 변형은 비제한적으로 5' 및/또는 3' 단부에서 인접하는 서열들의 첨가; 주쇄 중 포스포디에스테라제 결합보다는 오히려 포스포로티오에이트 또는 2' O-메틸의 사용; 및/또는 비전통적인 염기, 예를 들어 이노신, 퀘우오신 및 와이부토신뿐만 아니라 아세틸-, 메틸-, 티오- 및 다른 변형된 형태의 아데닌, 시티딘, 구아닌, 티민 및 유리딘의 포함을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 타우-결합 단편은 생리학적 타우보다 병적인 타우에 더 높은 친화성을 나타낼 수 있다.
또 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 타우-결합 단편은 타우-타우 응집을 억제할 수 있다.
또 다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 타우-결합 단편은 미세아교세포에 의한 병적인 타우 단백질의 흡수 및 분해를 매개할 수 있다.
하나의 태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 타우-결합 단편은 생리학적 타우보다 병적인 타우에 더 높은 친화성을 나타내고 타우-타우 응집을 억제할 수 있다.
하나의 태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 타우-결합 단편은 생리학적 타우보다 병적인 타우에 더 높은 친화성을 나타내고 타우-타우 응집을 억제하고, 미세아교세포에 의한 병적인 타우 단백질의 흡수 및 분해를 매개할 수 있다.
하기 표 7, 8 및 9는 본 명세서에 기재된 항체들 중 일부의 CDR의 핵산 서열 및 가변 영역들 및 완전한 쇄들을 요약한다.
핵산 서열번호 가변 영역 서열번호
CDR-H1 84 중쇄 DC8E8 90
CDR-H2 85 경쇄 DC8E8 91
CDR-H3 86 중쇄 CHIMERIC 92
CDR-L1 87 경쇄 CHIMERIC 93
CDR-L2 88 최적화된 중쇄 DC8E8 94 (92에 일치함)
CDR-L3 89 최적화된 경쇄 DCBE8 95 (93에 일치함)
인간화된 가변 중쇄 영역 단독 서열번호 인간화된 가변 경쇄 영역 단독 서열번호
RHA 96 RKA 109
RHB 97 RKB 110
RHC 98
RHD 99
RHE 100
RHF 101
RHG 102
RHH 103
RHI 104
RHJ 105
RHK 106
RHL 107
RHM 108
완전한 가변 중쇄 불변 IgG1 서열번호 완전한 가변 중쇄 불변 IgG4 서열번호
RHA 111 RHA 127
RHB 112 RHB 128
RHC 113 RHC 129
RHD 114 RHD 130
RHE 115 RHE 131
RHF 116 RHF 132
RHG 117 RHG 133
RHH 118 RHH 134
RHI 119 RHI 135
RHJ 120 RHJ 136
RHK 121 RHK 137
RHL 122 RHL 138
RHM 123 RHM 139
cDC8E8 124 cDC8E8 140
마우스 DC8E8 125
코돈 최적화된 마우스 DC8E8 126 (124에 일치함)
상이한 실시태양들의 세트에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 또는 그의 부분을 암호화하는 핵산들을 제공한다. 중쇄 가변 영역 DC8E8 VH, RHA, RHB, RHC, RHD, RHE, RHF, RHG, RHH, RHI, RHJ, RHK, RHL, 및 RHM 및 경쇄 가변 영역 DC8E8 VK, RKA 및 RKB를 암호화하는 핵산들은 진스크립트(GeneScript) 독점 기술을 사용하여 코돈 최적화되었다. 본 출원과 관련하여, 코돈 최적화는 뉴클레오티드 서열을, 상기를 암호화하는 아미노산 서열을 변경시키지 않으면서, 그의 발현, G/C 함량, RNA 2차 구조, 및 진핵생물 세포에서의 번역을 개선시키는 방식으로 변형시키는 과정이다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산(DNA 또는 RNA)을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 핵산은 중쇄 가변 영역 RHA, RHB, RHC, RHD, RHE, RHF, RHG, RHH, RHI, RHJ, RHK, RHL, 및 RHM 중 어느 하나를 암호화하는 DNA를 포함한다. 이들 핵산을 하기 표에 나타낸다. 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 및 적어도 98%의 일치성 퍼센트를 나타내는 핵산이 또한 상기 실시태양의 범위내에 있다.
하기 표 10은 본 명세서에 기재된 인간화된 항체의 경쇄의 다양한 완전길이 서열에 상응하는 다양한 핵산 서열들을 요약한다.
완전한 인간화된 가변 경쇄 불변 K cDC8E8 카파
RKA 141
RKB 142
cDC8E8 카파 143
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산(DNA 또는 RNA)을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 핵산은 경쇄 가변 영역 RKA 및 RKB 중 어느 하나를 암호화하는 DNA를 포함한다. 이들 핵산을 상기 표에 나타낸다. 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 및 적어도 98%의 일치성 퍼센트를 나타내는 핵산이 또한 상기 실시태양의 범위 내에 있다.
상기 유전자 암호의 축퇴의 결과로서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 다수의 뉴클레오티드 서열이 존재함을 당해 분야의 통상적인 숙련가들은 인식할 것이다. 이들 핵산 중 일부는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 "야생형" 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 뉴클레오티드 서열에 대해 최소의 상동성을 갖는다. 그럼에도 불구하고, 코돈 용법의 차이로 인해 변하는 핵산들이 본 발명에 의해 특별히 고려된다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산(DNA 또는 RNA)을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 핵산은 인간 IgG1 불변 영역에 결합된 중쇄 가변 영역 RHA, RHB, RHC, RHD, RHE, RHF, RHG, RHH, RHI, RHJ, RHK, RHL, 및 RHM 중 어느 하나를 암호화하는 DNA를 포함한다. 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 및 적어도 98%의 일치성 퍼센트를 나타내는 핵산이 또한 상기 실시태양의 범위내에 있다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산(DNA 또는 RNA)을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 핵산은 인간 IgG4 불변 영역에 결합된 중쇄 가변 영역 RHA, RHB, RHC, RHD, RHE, RHF, RHG, RHH, RHI, RHJ, RHK, RHL, 및 RHM 중 어느 하나를 암호화하는 DNA를 포함한다. 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 및 적어도 98%의 일치성 퍼센트를 나타내는 핵산이 또한 상기 실시태양의 범위내에 있다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산(DNA 또는 RNA)을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 핵산은 인간 카파 영역에 결합된 경쇄 가변 영역 RKA 및 RKB 중 어느 하나를 암호화하는 DNA를 포함한다. 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 및 적어도 98%의 일치성 퍼센트를 나타내는 핵산이 또한 상기 실시태양의 범위내에 있다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 코돈 최적화된 방식으로 DC8E8의 CDR을 각각 암호화하는 핵산(DNA 또는 RNA)을 제공한다.
바람직한 서열과 최적의 정렬 후, 적어도 80%, 예를 들어 85%, 90%, 95% 및 98%의 일치성 비율을 나타내는 핵산 서열은 참조 핵산 서열에 관하여, 몇몇 변형, 예를 들어 특히 결실, 절두, 연장, 키메릭 융합 및/또는 치환, 특히 정확한 변형을 나타내는 핵산 서열을 의미한다. 일부 실시태양에서, 이들은 상기 참조 서열(상기는 상기 유전자 암호의 축퇴와 관련된다)과 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 서열들, 또는 예를 들어 고도로 엄격한 조건하에서, 상기 참조 서열과 특이적으로 하이브리드화하는 듯한 상보성 서열들, 현저하게는 하기에 정의되는 것들이다.
고도로 엄격한 조건하에서의 하이브리드화는 온도 및 이온 강도와 관련된 조건들이 2개의 상보성 DNA 단편간에 하이브리드화가 유지되도록 하는 방식으로 선택됨을 의미한다. 순전히 예시를 근거로, 상술한 폴리뉴클레오티드 단편을 한정하기 위한 상기 하이브리드화 단계의 고도로 엄격한 조건들은 유리하게는 하기와 같다.
DNA-DNA 또는 DNA-RNA 하이브리드화를 2개의 단계로 수행한다: (1) 5X SSC(1XSSC는 0.15 M NaCl + 0.015 M 나트륨 시트레이트의 용액에 상응한다), 50% 포름아미드, 7% 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 10X 덴하르트, 5% 덱스트란 설페이트 및 1% 연어 정자 DNA를 함유하는 포스페이트 완충제(20 mM, pH 7.5) 중에서 42 ℃에서 3시간 동안 예비하이브리드화; (2) 탐침의 길이에 따른 온도(즉: >100 뉴클레오티드 길이의 탐침의 경우 42 ℃)에서 20시간 동안 1차 하이브리드화에 이어서, 2X SSC + 2% SDS에서 2회 20-분 세척, 0.1X SSC + 0.1% SDS에서 20 ℃에서 1회 20-분 세척. 상기 최종 세척을 >100 뉴클레오티드 길이의 탐침의 경우 60 ℃에서 30분 동안 0.1X SSC + 0.1% SDS에서 수행한다. 한정된 크기의 폴리뉴클레오티드에 대한 상술한 고도로 엄격한 하이브리드화 조건들은 문헌[Sambrook, et al., Molecular cloning: a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory; 3rd edition, 2001]에 기재된 과정에 따라, 보다 길거나 보다 짧은 올리고뉴클레오티드에 대해서 당해 분야의 숙련가에 의해 적합화될 수 있다.
발현 시스템
상기 항체 및 그의 타우-결합 단편을 합성적으로 또는 당해 분야의 통상적인 숙련가들에게 공지된 다수의 발현 시스템 중 어느 하나에 의해 제조할 수 있다. 이를 위해서, 상술한 핵산 서열 중 하나 이상을 함유하도록 형질감염되거나, 형질전환되거나, 또는 달리 유전자 또는 재조합 변형된 클로닝 벡터, 발현 벡터, 숙주 세포, 및 트랜스제닉 동물(인간 이외의)을 포함하는 실시태양들을 또한 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 진핵생물이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 원핵생물이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 상기 항체 및 그의 타우 결합 단편 중 하나 이상을 발현한다. 선택된 세포를 배양하고, 필요한 경우 관심 유전자의 단백질 산물을 통상적인 기법을 사용하여 상기 배양물로부터 단리할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 발현 시스템을 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 최적의 수준으로 발현하도록 적합화시켰다. 일부 실시태양에서, 상기 항체 및 그의 타우-결합 단편을, 서비스로서 상기 항체 및 그의 타우-결합 단편을 발현시키는 독점 기술을 사용하는 계약에 근거한 항체 발현 회사들(예를 들어 론자)에 의해 발현시킨다. 또 다른 실시태양에서, 상기 항체 및 그의 타우-결합 단편을 무세포 시스템에서 발현시킨다.
통상적으로 사용되는 항체 발현 시스템의 예는 재조합 바큘로바이러스, 렌티바이러스, 원생동물(예를 들어 진핵생물 기생충 레이슈마니아 타렌톨라에(Leishmania tarentolae)), 미생물 발현 시스템, 예를 들어 효모-계(예를 들어 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 리포리티카(lipolytica), 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 아스퍼질루스(Aspergillus) 및 트리코데르마 풍기(Trichoderma Fungi)) 및 세균-계(예를 들어 이 콜라이(E. coli), 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 락토바실러스(Lactobacillus), 락토코커스(Lactococcus), 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 브레비바실러스(Brevibacillus), 코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum)), 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, CHOK1SVNSO(론자), BHK(아기 햄스터 신장), PerC.6 또는 Per.C6(예를 들어 페르시비아(Percivia), 크루셀(Crucell)), HEK 293의 다양한 계통, Expi293F(상표) 세포(라이프 테크놀로지스(Life Technologies)), 젠스크립트(GenScript)의 YeastHIGH(상표) 테크놀로지(젠스크립트), 인간 신경 전구세포주 AGE1.HN(프로바이오젠(Probiogen)) 및 다른 포유동물 세포, 식물(예를 들어 옥수수, 알팔파, 및 담배), 곤충 세포, 조류의 알, 조류, 및 트랜스제닉 동물(예를 들어 마우스, 염소, 양, 돼지, 소)을 포함한다.
이들 다양한 시스템에 의해 발현된 항체들의 글리코실화 패턴은 발현 시스템에 따라 상당히 다양하다. 예를 들어, CHO 세포의 글리코실화 기구는 약간의 차이와 함께, 인간 글리코실화 기구와 다소 유사하다. 숙주 세포의 선택 외에, 항체의 재조합 생성 도중 글리코실화에 영향을 미치는 인자들은 생육 모드, 배지 제형, 배양 밀도, 산소공급, pH, 정제 설계 등을 포함한다. 다양한 방법들이 올리고사카라이드 생성에 관련된 몇몇 효소의 도입 또는 과발현을 포함하여, 특정 숙주 유기체에서 성취되는 글리코실화 패턴을 변경시키기 위해 제시되었다(미국특허 제 5,047,335 호; 제 5,510,261 호; 및 제 5,278,299 호). 글리코실화, 또는 글리코실화의 몇몇 유형들을 예를 들어 엔도글리코시다제 H(엔도 H)를 사용하여 상기 당단백질로부터 효소적으로 제거할 수 있다. 또한, 상기 재조합 숙주 세포를 몇몇 유형의 폴라사카라이드의 가공에 결함이 있도록 유전자 조작할 수 있다. 상기 및 유사한 기법들이 당해 분야에 주지되어 있으며 이들을 사용하여 본 명세서에 기재된 항체 및 그의 타우-결합 단편을 변경시킬 수 있다.
이들 다양한 시스템의 이점 및 단점은 문헌에서 재고찰되었으며 당해 분야의 통상적인 숙련가에게 공지되었다. 이들 중 일부는 하기의 참고문헌들에 기재되었으며, 이들은 전부 내용 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다: Chadd et al. Therapeutic antibody expression technology. Curr Opin Biotechnol. 2001 Apr;12(2):188-94; Ma et al. Human antibody expression in transgenic rats: comparison of chimeric IgH loci with human VH, D and JH but bearing different rat C-gene regions. J Immunol Methods. 2013 Dec 31;400-401:78-86; Zhang et al. Monoclonal antibody expression in mammalian cells. Methods Mol Biol. 2012;907:341-58.
약학 조성물 및 제형
본 명세서는 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 또는 그의 타우-결합 단편, 및 또 다른 성분, 예를 들어 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 또는 그의 타우-결합 단편, 및 부형제 및/또는 약학 담체를 포함하는 약학 조성물/치료 제형을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 담체는 자연에 존재하는 화합물이 아니다. 하나의 실시태양에서, 상기 부형제는 자연에 존재하는 화합물이 아니다. 또 다른 실시태양에서, 상기 희석제는 자연에 존재하는 화합물이 아니다. 또 다른 실시태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간화된 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 포함하는 제형은 임의로 물을 제외하고, 자연에 존재하는 화합물을 함유하지 않는다.
하나의 실시태양에서, 본 발명에 따라 사용되는 항체들의 치료 제형을 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태로, 임의의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제 또는 안정제(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))를, 목적하는 정도의 순도를 갖는 항체 또는 그의 타우-결합 단편과 혼합함으로써 보관 및/또는 투여를 위해 제조한다. 하나의 실시태양에서, 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 안정제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 산화방지제; 보존제(예를 들어 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라진, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함한 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당, 예를 들어 슈크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨; 염-형성 대-이온, 예를 들어 나트륨; 금속 착체(예를 들어 Zn-단백질 착체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예를 들어 트윈(TWEEN), 플루로닉스(PLURONICS) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 동결건조된 항체 제형의 예는 WO 97/04801에 기재되어 있으며, 본 명세서에 명백히 참고로 인용된다.
추가의 실시태양에서, 상기 제형은 계면활성제를 추가로 포함한다. 상기 계면활성제는 예를 들어 세제, 에톡실화된 피마자유, 폴리글리콜화된 글리세라이드, 아세틸화된 모노글리세라이드, 솔비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 블록 중합체(예를 들어 폴록사머, 예를 들어 플루로닉.RTM.F68, 폴록사머 188 및 407, 트리톤 X-100), 폴리옥시에틸렌 솔비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 및 폴리에틸렌 유도체, 예를 들어 알킬화된 및 알콕실화된 유도체(트윈, 예를 들어 트윈-20, 트윈-40, 트윈-80 및 브리즈(Brij)-35), 모노글리세라이드 또는 그의 에톡실화된 유도체, 디글리세라이드 또는 그의 폴리옥시에틸렌 유도체, 알콜, 글리세롤, 렉틴 및 인지질(예를 들어 포스파티딜 세린, 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 디포스파티딜 글리세롤 및 스핑고마이엘린), 인지질(예를 들어 디팔미토일 포스파티드산) 및 리소인지질(예를 들어 에탄올아민, 콜린, 세린 또는 쓰레오닌의 팔미토일 리소포스파티딜-L-세린 및 1-아실-sn-글리세로-3-포스페이트 에스테르)의 유도체 및 리소포스파티딜 및 포스파티딜콜린의 알킬, 알콕실(알킬 에스테르), 알콕시(알킬 에테르)-유도체, 예를 들어 리소포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린의 라우로일 및 미리스토일 유도체, 및 극성 헤드기의 변형, 즉 콜린, 에탄올아민, 포스파티드산, 세린, 쓰레오닌, 글리세롤, 이노시톨, 및 양으로 하전된 DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, 리소포스파티딜세린 및 리소포스파티딜쓰레오닌, 및 글리세로인지질(예를 들어 세팔린), 글리세로당지질(예를 들어 갈락토피라노시드), 스핑고당지질(예를 들어 세라미드, 강글리오시드), 도데실포스포콜린, 계란 리소레시틴, 후시딘산 유도체--(예를 들어 나트륨 타우로-디하이드로후시데이트 등), 장쇄 지방산 및 그의 염 C6-C12(예를 들어 올레산 및 카프릴산), 아실카르니틴 및 유도체, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘의 N 알파.-아실화된 유도체, 또는 리신 또는 아르기닌의 측쇄 아실화된 유도체, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘 및 중성 또는 산성 아미노산의 임의의 조합을 포함한 디펩티드의 N알파.-아실화된 유도체, 중성 아미노산 및 2개의 하전된 아미노산의 임의의 조합을 포함하는 트리펩티드의 N알파-아실화된 유도체, DSS(도큐세이트 나트륨, CAS 등록 번호 [577-11-7]), 도큐세이트 칼슘, CAS 등록 번호 [128-49-4]), 도큐세이트 칼륨, CAS 등록 번호 [7491-09-0]), SDS(나트륨 도데실 설페이트 또는 나트륨 라우릴 설페이트), 나트륨 카프릴레이트, 콜산 또는 그의 유도체, 담즙산 및 그의 염 및 글리신 또는 타우린 접합체, 우르소데옥시콜산, 나트륨 콜레이트, 나트륨 데옥시콜레이트, 나트륨 타우로콜레이트, 나트륨 글리코콜레이트, N-헥사데실-N,N-디메틸-3-암모니오-1-프로판설포네이트, 음이온성 (알킬-아릴-설포네이트) 1가 계면활성제, 쯔비터이온성 계면활성제(예를 들어 N-알킬-N,N-디메틸암모니오-1-프로판설포네이트, 3-콜아미도-1-프로필디메틸암모니오-1-프로판설포네이트, 양이온성 계면활성제(4급 암모늄 염기)(예를 들어 세틸-트리메틸암모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드), 비이온성 계면활성제(예를 들어 도데실.베타.-D-글루코피라노시드), 폴록사민(예를 들어 테트로닉)(에틸렌디아민에 프로필렌 옥사이드 및 에틸렌 옥사이드의 연속 부가로부터 유래된 사작용성 블록 공중합체), 또는 이미다졸린 유도체의 그룹으로부터 선택될 수 있는 계면활성제, 또는 이들의 혼합물 중에서 선택될 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 계면활성제는 자연에 존재하는 화합물이 아니다. 이들 특정한 계면활성제들 중 각각 하나가 본 명세의 또 다른 실시태양을 구성한다.
하나의 실시태양은, 바람직하게는 염수 또는 선택된 염뿐만 아니라 보존된 용액을 갖는 포스페이트 완충제를 포함하는 상기 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편의 안정한 제형 및 보존제를 함유하는 제형뿐만 아니라 약학적으로 허용 가능한 제형 중에 적어도 하나의 상기 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 포함하는 약학적 또는 수의학적 용도에 적합한 수회-용의 보존된 제형을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 보존된 제형은 수성 희석제 중의 적어도 하나의 공지된 보존제 또는 적어도 하나의 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알콜, 페닐머큐릭 니트라이트, 페녹시에탄올, 포름알데히드, 클로로부탄올, 염화 마그네슘(예를 들어 헥사하이드레이트), 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 나트륨 데하이드로아세테이트 및 티메로살, 또는 이들의 혼합물로 이루어지는 그룹 중에서 임의로 선택된 보존제를 함유한다. 임의의 적합한 농도 또는 혼합물을 당해 분야에 공지된 바와 같이, 예를 들어 0.001 내지 5%, 또는 이 중 임의의 범위 또는 값, 예를 들어 비제한적으로 0.001, 0.003, 0.005, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 이 중 임의의 범위 또는 값으로 사용할 수 있다. 비제한적인 예는 보존제가 없거나, 0.1-2% m-크레졸(예를 들어 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.1-3% 벤질 알콜(예를 들어 0.5, 0.9, 1.1, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), 0.001-0.5% 티메로살(예를 들어 0.005, 0.01), 0.001-2.0% 페놀(예를 들어 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.0005-1.0% 알킬파라벤(들)(예를 들어 0.00075, 0.0009, 0.001, 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01, 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 1.0%) 등을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 보존제 또는 보존제들은 자연적으로 존재하는 화합물이 아니다.
하나의 실시태양에서, 본 명세의 항체 및 그의 타우-결합 단편을 피실험자에게 투여하기에 적합한 약학 조성물 중에 통합시킬 수 있다. 하나의 통상적인 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 본 발명의 항체 또는 그의 타우-결합 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 적합한 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 담체의 추가적인 예는 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 중 하나 이상뿐만 아니라 그의 조합을 포함한다. 다수의 경우에, 상기 조성물 중에 등장화제, 예를 들어 당, 다가알콜, 예를 들어 만니톨, 솔비톨, 또는 염화 나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 저장수명 또는 유효성을 증대시키는 소량의 보조 물질, 예를 들어 습윤 또는 유화제, 보존 또는 완충제를 추가로 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 적합한 양의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 제형에 사용하여 상기 제형을 등장성으로 만든다. 상기 담체의 예는 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 용액의 pH는 약 5 내지 약 8이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 pH는 약 7 내지 약 7.5이다. 추가의 담체는 서방성 제제, 예를 들어 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 함유하는 고형 소수성 중합체의 반투과성 기질을 포함하며, 상기 기질은 성형품, 예를 들어 필름, 리포솜 또는 미세입자의 형태이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 서방성 기질은 물질, 대개는 효소 또는 산/염기 가수분해 또는 용해에 의해 분해 가능한 중합체로 제조된 기질이다. 상기 기질은 일단 체내에 삽입되면, 효소 또는 체액에 의해 작용한다. 상기 서방성 기질은 바람직하게는 생체적합성 물질, 예를 들어 리포솜, 폴리락티드(폴리락티드산), 폴리글리콜리드(글리콜산의 중합체), 폴리락티드 코-글리콜리드(락트산과 글리콜산의 공중합체), 다중무수물, 폴리(오쏘)에스테르, 폴리펩티드, 히아루론산, 콜라겐, 콘드로이친 설페이트, 카복실산, 지방산, 인지질, 폴리사카라이드, 핵산, 폴리아미노산, 아미노산, 예를 들어 페닐알라닌, 티로신, 이소류신, 폴리뉴클레오티드, 폴리비닐 프로필렌, 폴리비닐피롤리돈 및 실리콘 중에서 선택된다. 바람직한 생분해성 기질은 폴리락티드, 폴리글리콜리드, 또는 폴리락티드 코-글리콜리드(락트산과 글리콜산의 공중합체) 중 하나의 기질이다.
몇몇 담체가 예를 들어 투여 경로 및 투여되는 항체의 농도에 따라 더 바람직할 수 있음은 당해 분야의 숙련가들에게 자명할 것이다.
본 발명의 조성물은 다양한 형태로 존재할 수 있다. 여기에는 예를 들어 액체, 반-고체 및 고체 투여형, 예를 들어 액체 용액(예를 들어 주사 및 주입성 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환제, 분말, 리포솜 및 좌약이 포함된다. 일부 실시태양에서, 상기와 같은 조성물은 완충제(예를 들어 중성 완충된 염수 또는 포스페이트 완충된 염수), 탄수화물(예를 들어 글루코스, 만노스, 슈크로스 또는 덱스트란), 만니톨, 단백질, 폴리펩티드 또는 아미노산, 예를 들어 글리신, 산화방지제, 킬레이트제, 예를 들어 EDTA 또는 글루타치온, 항원보강제(예를 들어 수산화 알루미늄) 및/또는 보존제를 또한 포함할 수 있다. 한편으로, 본 발명의 조성물을 동결건조물로서 제형화할 수 있다. 항체 및 그의 타우-결합 단편을 또한 주지된 기술을 사용하여 리포솜내에 캡슐화할 수 있다.
내부 투여에 적합한 투여형은 일반적으로 단위 또는 용기당 약 0.1 밀리그램 내지 약 500 밀리그램의 항체 또는 그의 타우-결합 단편(활성 성분)을 함유한다. 이러한 약학 조성물 중에, 상기 활성 성분은 상기 조성물의 전체 중량을 기준으로 통상적으로 약 0.5 내지 99.999 중량%의 양으로 존재할 것이다.
치료 조성물/제형은 전형적으로 제조 및 보관 조건하에서 멸균성이고 안정해야 한다. 상기 조성물을 용액, 미세유화액, 분산액, 리포솜, 또는 고 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제형화할 수 있다. 멸균 주사성 용액을, 상기 활성 화합물(즉 항체 또는 그의 타우-결합 단편)을 필요한 양으로 적합한 용매 중에서 상기 열거된 성분들 중 하나 또는 이들의 조합과 함께 혼입한 다음, 경우에 따라 여과 살균함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 상기 활성 화합물을 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들 중에서 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 중에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사성 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 상기 활성 성분 + 그의 앞서 멸균-여과된 용액으로부터의 임의의 추가적인 목적하는 성분의 분말을 제공하는 진공 건조 및 동결-건조이다. 용액의 적합한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지시킬 수 있다. 주사성 조성물의 연장된 흡수는 상기 조성물 중에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함시킴으로써 발생할 수 있다.
바람직한 투여형은 의도하는 투여 방식 및 치료 용도에 따라 다르다. 당해 분야의 통상적인 숙련가는 상기와 같은 투여량을 결정하는 과정에 친숙하다. 전형적인 조성물은 주사성 또는 주입성 용액의 형태, 예를 들어 다른 항체에 의한 인간의 수동 면역화에 사용되는 것들과 유사한 조성물이다. 가장 전형적인 투여 방식은 비경구(예를 들어 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 바람직한 실시태양에서, 상기 항체를 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여한다. 또 다른 바람직한 실시태양에서, 상기 항체를 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여한다.
본 발명의 항체 및 그의 타우-결합 단편을 당해 분야에 공지된 다양한 방법들에 의해 투여할 수 있지만, 다수의 치료학적 용도의 경우, 바람직한 투여 경로/방식은 정맥내 주사 또는 주입이다. 숙련가에 의해 인식되는 바와 같이, 상기 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 변할 것이다. 몇몇 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을, 상기 화합물을 빠른 방출에 대해 보호하는 담체와 함께, 예를 들어 조절된 방출 제형, 예를 들어 임플란트, 경피 패치, 및 미세캡슐화된 전달 시스템으로 제조할 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예를 들어 에틸렌 비닐 아세테이트, 다중무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오쏘에스테르 및 폴리락트산을 사용할 수 있다. 상기와 같은 제형의 다수의 제조 방법들이 특허되어있거나 또는 당해 분야의 숙련가들에게 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들어 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조하시오.
몇몇 실시태양에서, 본 발명의 항체 또는 그의 타우-결합 단편을, 예를 들어 불활성 희석제 또는 소화흡수되는 식용 담체와 함께 경구로 투여할 수 있다. 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편(및 경우에 따라 다른 성분들)을 또한 경질 또는 연질 쉘 젤라틴 캡슐에 동봉하거나, 정제로 압착시키거나, 또는 피실험자의 식사에 직접 혼입시킬 수 있다. 경구의 치료학적 투여를 위해서, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 부형제와 통합시키고 삼킬 수 있는 정제, 구강정, 트로키제, 캡슐, 엘릭서, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 비경구 이외로 투여하기 위해서, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 그의 불활성화를 방지하는 물질로 코팅하거나 또는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 상기 물질과 공-투여하는 것이 필요할 수 있다.
본 발명의 몇몇 실시태양은 혈액-뇌 장벽을 횡단하는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 제공한다. AD 및 관련된 타우병증을 포함한 몇몇 신경퇴행성 질병은 상기 혈액-뇌 장벽의 투과성의 증가와 관련 있으며, 따라서 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 뇌에 쉽게 도입시킬 수 있다. 상기 혈액-뇌 장벽이 완전하게 남아있는 경우, 다수의 당해 분야-공지된 접근법들, 예를 들어 비제한적으로 물리적 방법, 지질-기반 방법, 및 수용체 및 채널-기반 방법이 상기를 가로질러 분자를 운반하기 위해 존재한다.
상기 혈액-뇌 장벽을 가로질러 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 운반하는 물리적 방법은 비제한적으로 상기 혈액-뇌 장벽을 완전히 둘러싸거나, 또는 상기 혈액-뇌 장벽에 구멍을 생성시킴을 포함한다. 둘러싸는 방법은 비제한적으로 뇌에 대한 직접 주사(예를 들어 문헌[Papanastassiou et al., Gene Therapy 9: 398-406 (2002)]을 참조하시오) 및 뇌 중 전달 장치의 이식(예를 들어 문헌[Gill et al., Nature Med. 9: 589-595 (2003)]; 및 문헌[Gliadel Wafers.TM., Guildford Pharmaceutical]을 참조하시오)을 포함한다. 상기 장벽에 구멍을 생성시키는 방법은 비제한적으로 초음파(예를 들어 미국특허 공보 제 2002/0038086 호를 참조하시오), 삼투압(예를 들어 고장성 만니톨의 투여(Neuwelt, E. A., Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation, Vols 1 & 2, Plenum Press, N.Y. (1989))), 예를 들어 브래디키닌 또는 투과제 A-7에 의한 투과(예를 들어 미국특허 제 5,112,596 호, 미국특허 제 5,268,164 호, 미국특허 제 5,506,206 호, 및 미국특허 제 5,686,416 호를 참조하시오), 및 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 유전자를 함유하는 벡터에 의한, 상기 혈액-뇌 장벽에 퍼져있는 뉴런의 형질감염(예를 들어 미국특허 공보 제 2003/0083299 호를 참조하시오)을 포함한다.
항체 또는 그의 타우-결합 단편을 상기 혈액-뇌 장벽을 가로질러 운반하는 지질-기반 방법은 비제한적으로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을, 상기 혈액-뇌 장벽의 혈관 내피상의 수용체에 결합하는 그의 활성 단편에 커플링된 리포솜 중에 캡슐화하고(예를 들어 미국특허 출원 공보 제 20020025313 호를 참조하시오) 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 저밀도 지방단백질 입자(예를 들어 미국특허 출원 공보 제 20040204354 호를 참조하시오) 또는 아포지방단백질 E(예를 들어 미국특허 출원 공보 제 20040131692 호를 참조하시오) 중에서 코팅시킴을 포함한다.
상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 상기 혈액-뇌 장벽을 가로질러 운반하는 수용체 및 채널-기반 방법은 비제한적으로 상기 혈액-뇌 장벽의 투과성을 증가시키는 글루코코르티코이드 차단제의 사용(예를 들어 미국특허 출원 공보 제 2002/0065259, 2003/0162695, 및 2005/0124533 호를 참조하시오); 칼슘 채널 활성화(예를 들어 미국특허 출원 공보 제 2005/0089473 호를 참조하시오), ABC 약물 운반체 억제(예를 들어 미국특허 출원 공보 제 2003/0073713 호를 참조하시오); 트랜스페린에 의한 항체 코팅 및 상기 하나 이상의 트랜스페린 수용체의 활성 조절(예를 들어 미국특허 출원 공보 제 2003/0129186 호를 참조하시오), 및 상기 항체의 양이온화(예를 들어 미국특허 제 5,004,697 호를 참조하시오)를 포함한다.
상기 뇌로의 화합물의 투여를 수행하기 위한 다양한 다른 접근법들이 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 직접적인 뇌실내 또는 척추강내 주사에 의해, 바람직하게는 느린 주입을 통해 투여하여 뇌 실질에 대한 영향을 최소화할 수 있다. 상기 목적하는 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 또한 뇌 중의 느린 방출 임플란트, 또는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 생성시키는 이식된 재조합 세포를 사용하여 전달할 수 있다. 상기 혈액 뇌 장벽(BBB)은 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편 투여와 동시에 투과성으로 되어 상기 BBB를 통한 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 이동을 허용할 수 있다. 투과제는 삼투제, 예를 들어 고장성 만니톨, 또는 또 다른 투과제, 예를 들어 브래디키닌, 알킬글리세롤, 초음파, 전자기 조사 또는 부교감신경 자극을 포함한다.
또한, 임의의 특정한 기전에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, 혈중 항체는 뇌로부터 그의 표적 단백질의 제거에서 "배수구-같은" 효과를 가질 수 있음이 고려되었다. 예를 들어 미국 공개 출원 US 20110158986, 단락 [0017]을 참조하시오. 상기가 그 경우라면, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편은 뇌로부터 순환내로 병적인 타우를 제거하여, 상기가 신경 세포 및 조직에 대한 추가의 손상을 일으키는 것을 유효하게 방지하는데 유용할 수 있을 것이다.
본 출원의 다른 어딘가에 개시된 바와 같은 보충 또는 조합 활성 화합물 또는 치료제를 또한 상기 조성물에 혼입시키고, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편와 동시에 투여하거나 또는 연속적으로 투여할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명의 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께 제형화하고/하거나 함께 투여한다. 이들 추가적인 치료제들은 또한 본 명세서에 기재된 항체 또는 그의 타우-결합 단편에 대한 화학적 접합체일 수 있다.
하나의 실시태양에서, 식 (A)-(L)-(C)를 갖는 면역접합체를 제공하며, 여기에서: (A)는 제 1 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 결합 단편이고; (L)은 링커이고; (C)는 작용제이고; 상기 링커(L)은 (A)를 (C)에 연결시킨다. 하나의 실시태양에서, (C)는 효과기 분자, 예를 들어 치료제, 영상화제, 검출제 또는 진단제이다. 일부 실시태양에서, 이들 접합체를 본 명세서에서 항체-약물-접합체(ADC)라 칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 (L) 링커는 상기 (A)를 (C)에 결합시키는데 사용되는 분자이다. 상기 링커는 상기 항체와 효과기 분자 모두에 공유 결합을 형성시킬 수 있다. 적합한 링커는 당해 분야의 숙련가들에게 주지되어 있으며, 비제한적으로 직쇄 또는 분지쇄 탄소 링커, 헤테로사이클릭 탄소 링커, 또는 펩티드 링커를 포함한다. 상기 항체 및 효과기 분자가 폴리펩티드인 경우, 상기 링커들을 그들의 측 그룹을 통해 구성 아미노산에(예를 들어 디설파이드 결합을 통해 시스테인에) 결합시킬 수 있다. 그러나, 바람직한 실시태양에서, 상기 링커를 말단 아미노산의 알파 탄소 아미노 및 카복실기에 결합시킬 것이다.
일부 상황에서, 면역접합체가 그의 표적 부위에 도달했을 때 항체로부터 효과기 분자를 유리시키는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 상기 상황에서, 면역접합체는 상기 표적 부위의 부근에서 절단될 수 있는 결합을 포함할 것이다. 상기 효과기 분자를 상기 항체로부터 방출시키기 위한 상기 링커의 절단은, 상기 표적 세포내부에 또는 상기 표적 세포의 부근에서 상기 면역접합체에 가해지는 효소 활성 또는 조건들에 의해 자극될 수 있다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 링커 단위는 절단될 수 없으며 약물이 예를 들어 항체 분해에 의해 방출된다.
다수의 상이한 반응들을 항체 또는 그의 단편에 대한 약물 및/또는 링커의 공유 부착에 이용할 수 있다. 이는 종종 상기 항체 분자의 아미노산 잔기, 예를 들어 리신의 아민기, 글루탐산 및 아스파트산의 유리 카복실산기, 시스테인의 설프히드릴기 및 방향족 아미노산의 다양한 부분들의 반응에 의해 수행된다. 가장 통상적으로 사용되는 비-특이적인 공유 부착 방법 중 하나는 화합물의 카복시(또는 아미노)기를 항체의 아미노(또는 카복실)기에 결합시키는 카보디이미드 반응이다. 추가로, 이작용성 작용제, 예를 들어 디알데히드 또는 이미도에스테르를 사용하여 화합물의 아미노기를 항체 분자의 아미노기에 결합시켰다. 또한 약물을 항체에 부착시키기 위해 쉬프 염기 반응을 이용할 수 있다. 상기 방법은 글리콜 또는 하이드록시기를 함유하는 약물의 퍼요오데이트 산화를 수반하며, 따라서 알데히드가 형성되고 이어서 이를 결합제와 반응시킨다. 부착은 상기 결합제의 아미노기를 갖는 쉬프 염기의 형성을 통해 발생한다. 이소티오시아네이트가 또한 결합제에 약물을 공유 부착시키기 위한 커플링제로서 사용될 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 링커는 세포내 환경(예를 들어 리소솜 또는 엔도솜 또는 포낭내) 중에 존재하는 절단제에 의해 절단될 수 있다. 상기 링커는 예를 들어 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소, 예를 들어 비제한적으로 리소솜 또는 엔도솜 프로테아제에 의해 절단되는 펩티딜 링커일 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 펩티딜 링커는 적어도 2 아미노산 길이 또는 적어도 3 아미노산 길이이다. 절단제는 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함할 수 있으며, 이들은 전부 디펩티드 약물 유도체를 가수분해시켜 표적 세포내부에 활성 약물을 방출시키는 것으로 공지되어 있다(예를 들어 문헌[Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123]을 참조하시오). 가장 전형적인 것은 191P4D12-발현 세포 중에 존재하는 효소에 의해 절단될 수 있는 펩티딜 링커이다. 상기와 같은 링커의 다른 예들이 예를 들어 미국특허 제 6,214,345 호에 기재되어 있다. 특정한 실시태양에서, 세포내 프로테아제에 의해 절단될 수 있는 펩티딜 링커는 Val-Cit 링커 또는 Phe-Lys 링커이다(예를 들어 상기 Val-Cit 링커에 의한 독소루비신의 합성을 기재하는 미국특허 제 6,214,345 호를 참조하시오). 상기 치료제의 세포내 단백질분해적 방출을 사용하는 한 가지 장점은 상기 작용제가 전형적으로 접합시 약화되고 상기 접합체의 혈청 안정성이 전형적으로 높다는 것이다.
다른 실시태양에서, 상기 절단성 링커는 pH-민감성이다, 즉 일부 pH 값에서 가수분해에 민감하다. 전형적으로, 상기 pH-민감성 링커는 산성 조건하에서 가수분해 가능하다. 예를 들어, 리소솜에서 가수분해성인 산-불안정성 링커(예를 들어 히드라존, 세미카바존, 티오세미카바존, 시스-아코니틱 아미드, 오쏘에스테르, 아세탈, 케탈 등)를 사용할 수 있다. (예를 들어 미국특허 제 5,122,368 호; 제 5,824,805 호; 제 5,622,929 호; 문헌[Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123]; 문헌[Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661]을 참조하시오.) 상기와 같은 링커는 중성 pH 조건, 예를 들어 혈중 조건하에서 비교적 안정하나, 상기 리소솜의 적합한 pH인 pH 5.5 또는 5.0 아래에서 불안정하다. 몇몇 실시태양에서, 상기 가수분해성 링커는 티오에테르 링커(예를 들어 아실히드라존 결합을 통해 치료제에 부착된 티오에테르(예를 들어 미국특허 제 5,622,929 호를 참조하시오))이다.
더욱 다른 실시태양에서, 상기 링커는 환원 조건하에서 절단성이다(예를 들어 디설파이드 링커). 다양한 디설파이드 링커들, 예를 들어 SATA(N-숙신이미딜-S-아세틸티오아세테이트), SPDP(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT(N-숙신이미딜-옥시카보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)톨루엔)-, SPDB 및 SMPT를 사용하여 형성될 수 있는 것들이 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어 문헌[Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931]; 문헌[Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987]을 참조하시오). 또한 미국특허 제 4,880,935 호를 참조하시오.
더욱 다른 특정한 실시태양에서, 상기 링커는 말로네이트 링커(Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93), 말레이미도벤조일 링커(Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304), 또는 3'-N-아미드 유사체(Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12)이다.
더욱 다른 실시태양에서, 상기 링커 단위는 절단될 수 없고 상기 약물이 항체 분해에 의해 방출된다(미국 공보 제 2005/0238649 호를 참조하시오).
하나의 실시태양에서, 상기 링커는 세포외 환경에 실질적으로 민감하지 않다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 링커와 관련하여 "세포외 환경에 실질적으로 민감하지 않음"은 항체-약물 접합체 화합물의 샘플에서 상기 링커의 약 20% 이하, 전형적으로는 약 15% 이하, 보다 전형적으로는 약 10% 이하, 및 훨씬 더 전형적으로 약 5% 이하, 약 3% 이하, 또는 약 1% 이하가, 상기 항체-약물 접합체 화합물이 세포외 환경 중(예를 들어 혈장 중)에 존재할 때 절단됨을 의미한다. 링커가 상기 세포외 환경에 실질적으로 민감하지 않은 지의 여부를, 예를 들어 상기 항체-약물 접합체 화합물을 혈장과 소정의 시간(예를 들어 2, 4, 8, 16 또는 24시간) 동안 배양하고 이어서 상기 혈장 중에 존재하는 유리 약물의 양을 정량분석함으로써 결정할 수 있다.
다른, 서로 배타적이지 않은 실시태양에서, 상기 링커는 세포 내면화를 촉진한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 링커는 치료제에 접합시(즉 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체-약물 접합체 화합물의 링커-치료제 부분의 환경에서) 세포 내면화를 촉진한다.
본 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 다양한 예시적인 링커들이 WO 2004-010957, 미국 공보 제 2006/0074008 호, 미국 공보 제 20050238649 호, 및 미국 공보 제 2006/0024317 호(이들은 각각 내용 전체가 모든 목적을 위해서 본 명세서에 인용된다)에 기재되어 있다.
임상에서 현재 존재하는 항체-약물 접합체(ADC)의 일부 예를 문헌[Feng, Y. et al. Conjugates of Small Molecule Drugs with Antibodies and Other Proteins. Biomedicines 2014, 2, 1-13; doi:10.3390/biomedicines2010001]에서 찾을 수 있다.
다양한 치료제, 영상화제, 검출제, 진단제, 방사성 진단 화합물, 방사성 치료 화합물, 약물, 독소 및 다른 작용제를 항체 및 그의 단편에 부착시키는 것에 대해 보고된 다수의 방법들에 비추어, 당해 분야의 숙련가는 주어진 작용제를 항체 또는 그의 타우-결합 단편에 부착시키기에 적합한 방법을 결정할 수 있을 것이다. 또 다른 실시태양에서, (A) 및 (C)를 서로 직접 결합시킨다.
또 다른 실시태양에서, (L)은 이격자 그룹 또는 연결 그룹, 예를 들어 폴리알데히드, 글루타르알데히드, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DPTA)이다. 항체 또는 단편을 또 다른 화합물에 결합시키기 위한 다른 기법들은 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜-티오)프로피오네이트(SPDP) 및 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC) 또는 유도체를 사용하는 디설파이드 결합의 형성을 포함한다(상기 펩티드가 설프히드릴기가 없는 경우, 이는 시스테인 잔기의 부가에 의해 제공될 수 있다). 이들 시약은 자신과 하나의 단백질상의 펩티드 시스테인 잔기 사이에 디설파이드 결합, 및 다른 아미노산 중의 리신, 또는 다른 유리 아미노기상의 입실론.-아미노를 통한 아미드 결합을 생성시킨다. 다양한 상기와 같은 디설파이드/아미드-형성제는 문헌[Immun. Rev. 62, 185(1982)]에 기재되어 있다. 다른 이작용성 커플링제는 디설파이드 결합보다는 티오에테르를 형성한다. 이들 티오-에테르-형성제 중 다수는 상업적으로 입수할 수 있으며 6-말레이미도카프로산, 2-브로모아세트산, 및 2-요오도아세트산, 4-(N-말레이미도-메틸)사이클로헥산-1-카복실산의 반응성 에스테르를 포함한다. 상기 카복실기는 상기를 숙신이미드 또는 1-하이드록실-2-니트로-4-설폰산, 나트륨염과 결합시킴으로써 활성화될 수 있다.
약물 부하는 p에 의해 나타내며, 분자 중 항체당 약물 부분의 평균수이다(예를 들어 A-L-Dp). 약물 부하는 항체당 1 내지 20 약물 부분(D)의 범위일 수 있다. 본 발명의 ADC는 1 내지 20의 일련의 약물 부분과 접합된 항체의 수집을 포함한다. 접합 반응으로부터 ADC의 제조에서 항체당 약물 부분의 평균수는 질량 분광학 및 ELISA 분석과 같은 통상적인 수단에 의해 특성화될 수 있다. p에 관하여 ADC의 정량적인 분포를 또한 측정할 수 있다. 일부 예에서, 다른 약물 부하를 갖는 ADC로부터 p가 일정 값인 동종 ADC의 분리, 정제 및 특성화를 전기영동과 같은 수단에 의해 성취할 수 있다.
일부 항체-약물 접합체의 경우, p는 상기 항체상의 부착 부위의 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 상기 부착이 상기 예시적인 실시태양에서와 같이 시스테인 티올인 경우, 항체는 단지 하나 또는 다수의 시스테인 티올기를 갖거나 또는 단지 하나 또는 다수의 충분히 반응성인 티올기(이를 통해 링커가 부착될 수 있다)를 가질 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 보다 높은 약물 부하, 예를 들어 p>5는 몇몇 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성, 또는 세포 투과성의 상실을 야기할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명의 ADC에 대한 약물 부하 범위는 1 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 약 3 내지 약 5; 약 3 내지 약 4; 약 3.1 내지 약 3.9; 약 3.2 내지 약 3.8; 약 3.2 내지 약 3.7; 약 3.2 내지 약 3.6; 약 3.3 내지 약 3.8; 또는 약 3.3 내지 약 3.7이다. 실제로, 몇몇 ADC의 경우, 항체당 약물 부분의 최적의 비는 8 미만일 수 있으며, 약 2 내지 약 5일 수 있음이 입증되었다. 미국특허 제 7,498,298 호를 참조하시오.
몇몇 실시태양에서, 이론상 최대 미만의 약물 부분이 접합 반응을 통해 항체에 접합된다. 항체는 하기에 논의되는 바와 같이, 예를 들어 상기 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응하지 않는 리신 잔기를 함유할 수 있다. 일반적으로, 항체는 약물 부분에 결합할 수도 있는 다수의 유리 및 반응성 시스테인 티올기를 함유하지 않으며; 실제로 항체 중의 대부분의 시스테인 티올 잔기는 디설파이드 가교로서 존재한다. 몇몇 실시태양에서, 항체는 부분적인 또는 전적인 환원 조건하에서 환원제, 예를 들어 디티오쓰레이톨(DTT) 또는 트리카보닐에틸포스핀(TCEP)으로 환원되어 반응성 시스테인 티올기를 생성시킬 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 항체에 변성 조건을 가하여 반응성 친핵성기, 예를 들어 리신 또는 시스테인을 드러나게 한다.
ADC의 부하(약물/항체 비)를 다양한 방식으로, 예를 들어 (i) 항체에 비해 몰 과잉의 약물-링커 중간체 또는 링커 시약을 제한하거나, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하거나, (iii) 시스테인 티올 변형의 부분적인 또는 제한 환원 조건에 의해, (iv) 시스테인 잔기의 수 및 위치가 링커-약물 부착의 수 및/또는 위치의 조절을 위해 변형되도록 상기 항체의 아미노산 서열을 재조합 기법에 의해 조작함으로써 조절할 수 있다(예를 들어 본 명세서 및 WO2006/034488에 개시된 바와 같이 제조된 티오Mab 또는 티오Fab).
하나 초과의 친핵성기를 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응시킨 다음 약물 부분 시약과 반응시키는 경우, 상기 생성되는 생성물은 항체에 부착된 하나 이상의 약물 부분의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물임을 알아야 한다. 항체당 약물의 평균 수를 이중 ELISA 항체 분석(항체에 특이적이며 상기 약물에 특이적이다)에 의해 상기 혼합물로부터 계산할 수 있다. 개별적인 ADC 분자를 질량 분광학에 의해 상기 혼합물 중에서 확인하고 HPLC, 예를 들어 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 분리시킬 수 있다(예를 들어 하기 문헌들을 참조하시오: Hamblett, K J., et al. "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, Mar. 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S. C., et al. "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, Mar. 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004). 몇몇 실시태양에서, 단일 부하 값을 갖는 동종 ADC를 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 상기 접합 혼합물로부터 단리할 수 있다.
일부 예시적인 실시태양에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 AD의 예방 및/또는 치료에 또한 유용한 하나 이상의 추가적인 화합물과 함께 제형화하고/하거나 함께 투여할 수 있다. 여기에는 비제한적으로 AD의 능동 및 수동 면역요법에 유용한 화합물, 예를 들어 베타-아밀로이드 펩티드(예를 들어 N-말단 아밀로이드 베타 펩티드), 타우 펩티드(다른 화합물, 예를 들어 돌연변이된 디프테리아 독소에 접합될 수도, 접합되지 않을 수도 있다); 베타-아밀로이드에 대한 항체, 예를 들어 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵, 포네주맵, 및 IVIG 면역글로불린, 에이베타 올리고머를 표적화하는 다른 면역 요법들, 다른 타우 항체들, 타우의 과인산화를 방지하는 화합물들, 및 타우 응집체를 표적화하는 다른 능동 및 수동 면역 요법들이 포함된다. 본 명세서에 기재된 항체 및 타우-결합 단편과의 복합 요법에 도움이 되는 다른 약물은 아밀로이드-베타 응집 억제제(예를 들어 트라미프로세이트), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어 세마가세스태트), 및 감마-세크레타제 조절제(타렌플루르빌)이다. 더욱 또한, 본 발명의 하나 이상의 항체를 상기 치료제들 중 2개 이상과 함께 사용할 수도 있다. 상기 질병의 초기 단계에서, 복합 요법이 유리할 수 있다. 복합 요법, 예를 들어 hAb와 성장 인자 및 신경 가소성 및 재생을 유도하는 다른 생물 활성 분자와의 조합이 상기 질병의 말기 단계에서 또한 유리하다. 상기와 같은 복합 요법은 유리하게는 투여되는 치료제의 보다 낮은 투여량을 사용하며, 따라서 다양한 단독요법들과 관련하여 가능한 독성 또는 합병증을 피한다. 관련된 실시태양에 따라, 본 명세서에 기재된 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 아세틸콜린에스테라제 억제제(예를 들어 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린, 영양 보충제), N-메틸-D-아스파테이트(NMDA) 수용체 길항물질(예를 들어 메만틴), DNA 수복의 억제제(예를 들어 피렌제핀 또는 그의 대사산물), 전이 금속 킬레이터, 성장 인자, 호르몬, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 산화방지제, 지질 강하제, 선택성 포스포디에스테라제 억제제, 타우 응집의 억제제, 단백질 키나제의 억제제, 항-미토콘드리아 기능장애 약물의 억제제, 뉴로트로핀, 열충격 단백질의 억제제, 지방단백질-결합된 포스포리파제 A2의 억제제, 및 그의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염들 중에서 선택된 적어도 하나의 복합 작용제와 함께(하나를 다른 것과 별도로, 다른 것 전에, 다른 것과 동시에, 또는 다른 것 후에 투여한다) 사용한다. 하나의 실시태양에서, 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편에 의한 치료를 콜린에스테라제 억제제(ChEI) 및/또는 메만틴에 의한 치료와 병행하며, 이는 보통의 대증 이점을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 복합 치료제는 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자, 및 콜린에스테라제 억제제로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 하나의 실시태양에서, 상기 콜린에스테라제 억제제는 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민, 또는 영양 보충제이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 추가적인 치료제는 BACE 억제제; 무스카린산 길항물질; 콜린에스테라제 억제제; 감마 세크레타제 억제제; 감마 세크레타제 조절제; HMG-CoA 리덕타제 억제제; 비-스테로이드성 소염제; N-메틸-D-아스파테이트 수용체 길항물질; 항-아밀로이드 항체; 비타민 E; 니코틴산 아세틸콜린 수용체 작용물질; CB1 수용체 역 작용물질 또는 CB1 수용체 길항물질; 항생제; 성장 호르몬 분비촉진제; 히스타민 H3 길항물질; AMPA 작용물질; PDE4 억제제; GABAA 역 작용물질; 아밀로이드 응집의 억제제; 글리코겐 신타제 키나제 베타 억제제; 알파 세크레타제 활성의 촉진제; PDE-10 억제제 및 콜레스테롤 흡수 억제제 중에서 선택된다.
본 명세서에 기재된 항체 및 타우-결합 단편과 함께 적합하게 사용될 수 있는 다른 화합물은 WO 2004/058258(특히 16 및 17 페이지를 참조하시오)에 기재되어 있으며, 치료 약물 표적(36-39 페이지), 알칸설폰산 및 알칸올황산(39-51 페이지), 콜린에스테라제 억제제(51-56 페이지), NMDA 수용체 길항물질(56-58 페이지), 에스트로젠(58-59 페이지), 비-스테로이드성 소염 약물(60-61 페이지), 산화방지제(61-62 페이지), 페록시솜 증식제-활성화된 수용체(PPAR) 작용물질(63-67 페이지), 콜레스테롤-강하제(68-75 페이지); 아밀로이드 억제제(75-77 페이지), 아밀로이드 형성 억제제(77-78 페이지), 금속 킬레이터(78-79 페이지), 정신병 치료제 및 우울증 치료제(80-82 페이지), 영양 보충제(83-89 페이지) 및 뇌에서 생물 활성 물질의 이용 효능을 증가시키는 화합물(89-93 페이지) 및 전구약물(93 및 94 페이지)을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편은 치료시에 현행 치료 표준(콜린에스테라제 억제제 및 메만틴(나멘다) NMDA 길항물질을 포함한다)과 함께 사용된다.
본 발명의 약학 조성물은 "치료 유효량" 또는 "예방 유효량"의 본 발명의 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 포함할 수 있다. "치료 유효량"은 목적하는 치료 결과를 성취하기에 필요한 투여량 및 기간에 유효한 양을 지칭한다. 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 치료 유효량은 질병 상태, 개인의 연령, 성별 및 체중, 및 상기 개인에서 목적하는 응답을 이끌어내는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 능력과 같은 인자들에 따라 변할 수 있다. 치료 유효량은 또한 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 임의의 독성 또는 유해 효과가 치료학적으로 이로운 효과에 의해 압도되는 것이다. "예방 유효량"은 목적하는 예방학적 결과를 성취하기에 필요한 투여량 및 기간에 유효한 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방 용량은 질병 전 또는 질병의 보다 초기 단계에 피실험자에 사용되므로, 상기 예방 유효량은 치료 유효량보다 적을 것이다.
투여량 섭생을 최적의 목적하는 응답(예를 들어 치료학적 또는 예방학적 응답)을 제공하도록 조절할 수 있다. 예를 들어, 주입 프로토콜 또는 단일 일시주사를 투여하거나, 수회의 분할 용량을 시간에 걸쳐 투여하거나, 또는 상기 용량을 치료 상황의 긴급성에 의해 지시되는 대로 비례적으로 감소시키거나 증가시킬 수 있다. 모 조성물을 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 단위 투여형으로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 단위 투여형은 치료되는 피실험자에게 단위 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위들을 지칭하며; 각각의 단위는 요구되는 약학 담체와 함께 목적하는 치료 효과를 생성시키는 것으로 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 단위 투여형에 대한 명세서는 (a) 활성 화합물의 독특한 특성 및 성취하고자 하는 특정한 치료 또는 예방 효과, 및 (b) 개인에서 민감성의 치료를 위한 상기와 같은 활성 화합물의 조제 분야에 고유한 제한에 의해 지시되며 직접적으로 이에 따른다.
투여량 값이, 경감시키고자 하는 상태의 유형 및 중증도에 따라 변할 수 있음에 유의해야 한다. 임의의 특정한 피실험자에 대해서, 특정한 투여량 섭생을 개인의 필요 및 상기 조성물을 투여하거나 상기 조성물의 투여를 관리하는 사람의 전문적인 판단에 따라 조절해야 하며 본 명세서에 제시된 투여량 범위는 단지 예시적인 것이며 특허청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하고자 하는 것은 아님을 추가로 알아야 한다.
예를 들어 하기에 기재되는 상태들의 치료를 위한, 본 명세의 조성물의 유효 용량은 다수의 인자들, 예를 들어 투여 수단, 환자의 표적 부위, 생리학적 상태, 상기 환자가 인간인지 동물인지의 여부, 투여되는 다른 약물, 및 치료가 예방학적인지 치료학적인지의 여부에 따라 변한다. 대개, 상기 환자는 인간이다. 치료 투여량을 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 적정해야 할 필요가 있다. 상응하게, 항체 또는 그의 타우-결합 단편에 의한 치료는 전형적으로 일정 기간에 걸쳐 수회의 투여량을 수반할 것이다.
인간에 대한 본 발명의 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 치료 또는 예방 유효량에 대한 비제한적인 범위는 0.1-20 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 1-10 ㎎/㎏이다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 상기 항체를 적어도 3개월, 바람직하게는 적어도 6개월의 기간에 걸쳐 수회의 투여량, 및 1 내지 10 ㎎/㎏의 용량으로 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.01-0.6 ㎎/㎏의 용량 및 매주 내지 매월의 빈도로 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.05 내지 0.5 ㎎/㎏의 용량으로 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.05 내지 0.25 ㎎/㎏의 용량으로 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.015 내지 0.2 ㎎/㎏의 용량으로 매주 내지 2주마다 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.05 내지 0.15 ㎎/㎏의 용량으로 매주 내지 2주마다 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.05 내지 0.07 ㎎/㎏의 용량으로 매주 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.06 ㎎/㎏의 용량으로 매주 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.1 내지 0.15 ㎎/㎏의 용량으로 2주마다 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.1 내지 0.3 ㎎/㎏의 용량으로 매월 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 0.25 ㎎/㎏의 용량으로 매월 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 1년에 1회 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 1 내지 40 ㎎의 용량 및 매주 내지 매월의 빈도로 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 5 내지 25 ㎎의 용량으로 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 2.5 내지 15 ㎎의 용량으로 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 1 내지 12 ㎎의 용량으로 매주 내지 2주마다 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 2.5 내지 10 ㎎의 용량으로 매주 내지 2주마다 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 2.5 내지 5 ㎎의 용량으로 매주 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 4 내지 5 ㎎의 용량으로 매주 투여한다. 임의로, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 7 내지 10 ㎎의 용량으로 2주마다 투여한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 타우-결합 단편에 의한 다른 수동 면역 실시태양에서, 상기 투여량 범위는 약 0.0001 내지 100 ㎎/㎏, 및 보다 대개는 0.01 내지 5 ㎎/㎏ 숙주 체중이다. 일부 용도에서, 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 양을 적어도 0.1 ㎎/㎏ 체중의 투여량으로, 적어도 0.5 ㎎/㎏ 체중, 1 ㎎/㎏ 체중의 투여량, 또는 0.1 내지 10 ㎎/㎏ 체중의 투여량의 임의의 조합으로 투여할 수 있다. 일부 방법에서, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 적어도 1개월, 적어도 3개월, 또는 적어도 6 개월의 기간에 걸쳐 수회 투여량(동등하거나 상이한)으로 투여할 수 있다. 어느 하나의 치료 기간에 걸친 총 투여 횟수는 예를 들어 4 내지 6일 수 있지만, 다른 숫자를 상기 논의된 인자들에 따라 사용할 수 있다. 치료를 하기에 추가로 기재하는 방법들 중 하나에 의해 모니터할 수 있다.
적합한 항체 제형을 또한, 다른 이미 개발된 치료학적 단클론 항체에 의한 경험을 조사함으로써 결정할 수 있다. 예를 들어, 다수의 단클론 항체들, 예를 들어 리툭산(리툭시맵), 허셉틴(트라스투주맵), 졸레어(오말리주맵), 벡사르(토시투모맵), 캄패쓰(알렘투주맵), 제발린, 온콜림, 레미케이드(인플릭시맵), 루센티스(라니비주맵), 시나기스(필리비주맵), 솔리리스(에쿨리주맵), 카드실라(아도트라스투주맵 엠탄신), 아바스틴(베바시주맵), 에르비툭스(세툭시맵), 심포니(골리뮤맵), 티사브리(나탈리주맵), 맵테라(리툭시맵), 스텔라라(우스테키누맵), 프리투뮤맵, 및 아두카누맵이 임상 상황에 효율적인 것으로 입증되었으며, 유사한 제형들을 본 명세의 항체들과 함께 사용할 수 있다. 예를 들어 단클론 항체를 9.0 ㎎/㎖ 염화나트륨, 7.35 ㎎/㎖ 나트륨 시트레이트 디하이드레이트, 0.7 ㎎/㎖ 폴리솔베이트 80, 및 멸균 주사용수 중에서 IV 투여용으로 제형화된, 100 ㎎(10 ㎖) 또는 500 ㎎(50 ㎖) 일회용 바이알 중의 10 ㎎/㎖의 농도로 공급할 수 있다. pH를 6.5로 조절한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 항체를 약 6.0의 pH에서, 약 20 mM Na-시트레이트, 약 150 mM NaCl을 포함하는 제형 중에서 공급한다.
치료 및 예방 방법
본 명세서에 기재된 항체 및 조성물을 AD 및 관련 타우병증의 다양한 치료 및 예방 방법에 사용할 수 있다. 감소된 면역원성의 유리한 성질 이외에, 이들 항체는 모 마우스 DC8E8 항체보다 질병 타우에 대해 적어도 80%의 결합 친화성을 갖는다. 마우스 DC8E8은 WO2013/041962에 광범위하게 특성화되었으며, 여기에서 상기는 AD의 생체내 모델에서 치료학적 성질을 갖는 것으로 입증되었다. 따라서, 인간화된 DC8E8이 덜 유해한 면역학적 응답을 잠재적으로 이끌어내면서 인간 AD의 치료 및 예방에 또한 유용할 것이라 믿는 타당한 근거가 존재한다.
하나의 실시태양에서, 상기 방법은 상기 항체, 이를 암호화하는 핵산, 또는 상술한 바와 같은 약학 조성물을 피실험자/환자에게 투여함을 포함한다. 예방학적 용도에서, 약학 조성물 또는 약제를 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증에 민감하거나 또는 달리 상기 질병의 위험이 있는 환자에게, 상기 질병의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동 증상, 상기 질병의 발생 중에 나타나는 그의 합병증 및 중간의 병적인 표현형들을 포함하여 상기 질병의 위험을 제거하거나 감소시키거나, 상기 질병의 중증도를 줄이거나, 또는 상기 질병의 개시를 지연시키기에 충분한 양으로 투여한다. 치료학적 용도에서, 조성물 또는 약제를 상기와 같은 질병이 의심되거나 또는 상기 질병을 이미 앓고 있는 환자에게, 상기 질병의 발생 중에 나타나는 그의 합병증 및 중간의 병적인 표현형들을 포함하여 상기 질병의 증상들(생화학적, 조직학적 및/또는 행동)을 치유하거나 또는 적어도 부분적으로 억제하기에 충분한 양으로 투여한다.
상기에 정의된 바와 같이, 치료는 질병, 질병의 증상 또는 질병에 대한 소인을 치유, 해소, 경감, 완화, 변경, 교정, 개량, 개선시키거나 또는 상기에 영향을 미칠 목적으로, 상기 질병, 질병의 증상 또는 질병에 대한 소인을 갖는 피실험자에 대한 치료제의 적용 또는 투여를 포함한다. 더욱이, 본 명세의 조성물 단독 또는 또 다른 치료제와의 병용이 상기 인간화된 항-타우 항체 또는 그의 타우-결합 단편 조성물의 부재하에서 치료하고자 하는 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증의 적어도 하나의 증상에 비해 상기 증상을 치유, 해소, 경감, 완화, 변경, 교정, 개량, 개선시키거나 또는 상기에 영향을 미치는 한, 그 결과는 상기 질환의 모든 증상들이 해소, 경감, 완화, 변경, 교정, 개량, 개선되거나 또는 영향을 받든지 받지 않든지에 관계없이 근원하는 질환의 유효 치료로 간주되어야 한다.
"위험이 있는" 개인은 검출 가능한 질병을 가질 수도, 갖지 않을 수도 있으며, 본 명세서에 기재된 치료 방법 전에 검출 가능한 질병을 나타낼 수도, 나타내지 않을 수도 있다. "위험이 있는"은 개인이 하나 이상의 소위 위험 인자(알쯔하이머병의 발병과 상관 있는 측정 가능한 매개변수이다)를 갖는다. 이들 위험 인자 중 하나 이상을 갖는 개인은 이들 위험 인자(들)가 없는 개인보다 알쯔하이머병을 나타낼 확률이 더 높다. 이들 위험 인자는 비제한적으로 연령, 성별, 인종, 식사, 선행 질병의 병력, 전구 질병의 존재, 유전적(즉 상속성) 고려사항, 및 환경적 노출을 포함하며, 당해 분야의 통상적인 숙련가에게 주지되어 있다.
하나의 실시태양에서, 본 명세는 피실험자에서 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증의 진행을 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 피실험자에게 유효량의 본 명세서에 제공된 바와 같은 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 투여함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 운동 장애를 감소시키거나, 운동 기능을 개선시키거나, 인지 장애를 감소시키거나, 인지 기능을 개선시키거나, 또는 이들의 조합이 가능하다.
다른 실시태양에서, 본 명세는 피실험자에서 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증과 관련된 증상 중 적어도 하나를 개선시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 피실험자에게 유효량의 본 명세서에 제공된 바와 같은 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 투여함을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 본 명세는 알쯔하이머병의 진행을 지연시키는 방법을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 알쯔하이머병의 발병을 "지연시킴"은 상기 질병의 발병을 연기, 방해, 늦춤, 지연, 안정화 및/또는 미룸을 의미한다. 상기 지연은 상기 질병의 병력 및/또는 치료되는 개인에 따라, 다양한 시간의 길이를 가질 수 있다. 당해 분야의 숙련가에게 자명한 바와 같이, 충분한 또는 현저한 지연은 사실상, 상기 개인이 상기 질병을 발병하지 않는다는 점에서 예방을 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 알쯔하이머병의 발병을 "지연시키는" 방법은 상기 방법을 사용하지 않는 경우에 비해, 주어진 시간틀에서 질병 발병의 확률을 감소시키고/시키거나 주어진 시간틀에서 상기 질병의 정도를 감소시키는 방법이다. 상기와 같은 비교는 전형적으로 통계학적 유의수준의 수의 피실험자를 사용하는 임상 연구에 기반한다.
환자, 피실험자 또는 개인은 포유동물, 예를 들어 인간, 소, 말, 개, 고양이, 돼지, 및 양 동물을 포함한다. 상기 피실험자는 바람직하게는 인간이며, 질병을 앓을 수도, 앓지 않을 수도 있거나, 현재 증상을 나타낼 수도, 나타내지 않을 수도 있다. 알쯔하이머병의 경우에, 사실상 누구든 충분히 오래 산다면 알쯔하이머병을 앓을 위험이 있다. 따라서, 본 방법을 피실험 환자의 어떠한 위험성 평가의 필요 없이도 일반적인 집단에 예방학적으로 투여할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 본 명세서에서 환자에게 치료 전에 임의로 진단 시험을 가한다. 하나의 실시태양에서, 본 방법은 알쯔하이머병의 기지의 유전적 위험을 갖는 개인에게 유용하다. 상기와 같은 개인은 상기 질병을 경험했던 친척들이 있는 개인, 및 유전자 또는 생화학적 마커의 분석에 의해 측정된 위험성을 갖는 개인을 포함한다. 알쯔하이머병에 대한 위험의 유전자 마커는 APP 유전자의 돌연변이, 특히 각각 하디(Hardy) 및 스웨덴 돌연변이라 칭하는 717번 위치 및 670 및 671번 위치의 돌연변이를 포함한다(Hardy(1997) Trends Neurosci. 20:154-9). 다른 위험 마커는 프레세닐린 유전자, PS1 및 PS2의 돌연변이, 및 ApoE4, AD의 가족력, 고콜레스테롤혈증 또는 죽상동맥경화증이다. 현재 알쯔하이머병을 앓고 있는 개인은 특징적인 치매뿐만 아니라 상술한 위험 인자들의 존재로부터 인지될 수 있다. 또한, 다수의 진단 시험을 AD를 갖는 개인의 확인에 이용할 수 있다. 여기에는 CSF 타우 및 아밀로이드-베타42 수준의 측정이 포함된다. 상승된 타우 및 감소된 아밀로이드-베타42 수준은 AD의 존재를 의미한다. 하나의 실시태양에서, 알쯔하이머병을 앓고 있는 개인은 ADRDA(알쯔하이머병 및 관련 질환 협회) 기준에 의해 진단될 수 있다. 무증상 환자에서, 치료는 어떠한 연령(예를 들어 10, 20, 30)에서도 시작할 수 있다. 그러나, 대개, 환자가 40, 50, 60 또는 70에 도달할 때까지 치료를 시작할 필요는 없다. 치료는 전형적으로 일정 기간에 걸친 수회 투여량을 수반한다. 치료는 시간에 걸쳐 당해 분야에 공지된 다양한 방식에 의해 모니터될 수 있다. 잠재적인 다운 증후군 환자의 경우에, 치료는 치료제를 어머니에게 투여함으로써 출생 전에 또는 출산 직후에 시작할 수 있다.
환자 선택은 AD 및 관련 타우병증의 치료 분야에 적용된 선택 기준 중 어느 하나에 의해 수행될 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 기준은 특정한 임상 시험에 의해 측정되는 것들이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 기준은 승인된 치료 섭생에 의해 측정되는 것들이다. 포함 및 제외 기준의 조합을 적용할 수 있다. 포함 기준의 예는 비제한적으로 NINCDS/ADRDA 기준에 근거한 있음직한 알쯔하이머병의 진단; MMSE 점수가 15 내지 26의 범위에 있는 경우 순한 내지 보통 정도로 확인된 AD; 환자 뇌의 자기 공명 영상화 스캔(MRI)의 결과가 AD의 진단과 일치한다; 적합한 영상화 방법에 의해, 예를 들어 (11)C-PBB3 또는 란소프라졸-계 방사성약제를 사용함으로써 측정된 환자 뇌 중의 타우 병리의 존재; 및 50 내지 85세의 연령을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 환자 선택은 문헌[Rollin-Sillaire et al. Reasons that prevent the inclusion of Alzheimer's disease patients in clinical trials. Br J Clin Pharmacol. Apr 2013; 75(4): 1089-1097]에 기재된 방법에 따른다.
다수의 결과 척도 및 1차 종점들이 치료의 평가 및 유효량의 측정 방법에 대한 일부 실시태양에 대해서 본 명세서에 제공된다. 하나의 실시태양에서, 주어진 시간틀에서 상기 1차 결과 척도는 알쯔하이머병 평가 척도 13(ADAS-Cog13) 점수의 평균 변화 및 알쯔하이머병 일상활동 척도(ADCS-ADL) 점수의 평균 변화를 포함하며, 2차 결과 척도는 뇌척수액 중의 생물마커(총-타우, 인산화된-타우, 에이베타 1-42 수준)의 변화, 구조적 MRI상에서 평가된 MRI 부피측정 변화, 임상 치매 등급(CDR-SB/CDR-GS)의 변화, 신경정신학적 행동의 변화: 신경정신 행동 검사(NPI) 전체 및 영역 점수, 인지 변화: MMSE 총점 및/또는 안전성: 부작용, 중증 부작용 및 치료 중단의 발생률을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 1차 종점은 하기 중 어느 하나를 포함한다: 사망 발생까지의 시간, 공공시설 수용, 일상 활동을 수행하는 능력의 상실, 중증 치매, 질병 진행속도의 지체, ADCS-ADL, ADAS-cog 점수, MMSE 점수, 인지 수행성능, 혈장 CSF 생물마커, ADAS-총점, 알쯔하이머병 삶의 질 평가 척도에 의해 평가된 삶의 질, 행동 시험 점수, 및 미국 FDA의 임상적 치매 척도.
하나의 실시태양에서, 알쯔하이머병의 치료는 시간에 걸친 행동, 기능, 및 인지 저하의 감소 또는 방지를 지칭한다. 일부 실시태양에서, 알쯔하이머병의 행동, 기능 및 인지 태양을 당해 분야의 통상적인 숙련가들에게 공지된 일련의 표준화된 시험 중 임의의 하나 이상, 예를 들어 비제한적으로 신경정신학적 검사, 간이 정신상태 검사, 간이-cog 검사, 신경정신 행동, 블레스드 로스(Blessed Roth) 치매 평가 척도, 스페인 및 영국 신경정신학적 평가 척도(SENAS), 정신 행동 평가, 기능 평가, 시계 그리기 검사, 보스톤 명명 검사, 캘리포니아 구두 학습 검사, 인지 증상 체크리스트, 연속 수행성능 검사, 통제 단어 연상 검사, 선별검사, 주의력 d2 검사, 델리스-카플란 집행 기능 시스템, 치매 평가 척도, 숫자 경계 검사, 숫자 유창성 검사, 두드림동작 검사, 할스태드 범주 검사, 할스테드-레이탄 신경정신학적 배터리, 후퍼 시각 기구 검사, 카플란 베이크레스트 신경인지 평가, 카우프만 단기 신경정신학적 평가, 루리아-네브라스카 신경정신학적 배터리, 기억 평가 척도, 빠른 신경 선별 검사, 신경정신학적 상태의 평가를 위한 반복성 배터리, 스트룹 검사, 기호 숫자 양상 검사, 촉각수행검사, 주제통각 검사, 런던탑, A형 및 B형 선로 잇기 검사, 언어(단어) 유창성 검사, 및 위스콘신 카드 분류 검사에 의해 평가할 수 있다. 당해 분야의 통상적인 숙련가들에게 공지된 우울증, 불안증, 실어증, 흥분, 및 행동 매개변수들에 대한 추가적인 검사들을 또한 사용한다.
또 다른 실시태양에서, 알쯔하이머병의 치료는 알쯔하이머병 평가 척도(ADAS-cog), 임상적 치매 척도(CDR-sb), 알쯔하이머병 일상활동 척도(ADCS-ADL), 신경정신학적 행동(NPI), 및 간이 정신상태 평가(MMSE)로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 평가들 중 적어도 하나의 개선, 또는 저하 없음, 또는 저하속도의 감소에 의해 결정된다. 일부 실시태양에서, 상기 치료는 ADAS-cog 점수의 저하 속도의 감소를 생성시킨다. 다른 실시태양에서, 상기 치료는 2 내지 5점의 ADAS-cog 점수의 저하 속도의 중간 감소를 생성시킨다.
하나의 실시태양에서, 환자를 미국 식품의약품 안전청으로부터 갱신된 형태로 입수할 수 있는 FDA의 "산업적 알쯔하이머병에 대한 지침: 초기 단계 질병의 치료를 위한 약물 개발"을 토대로 확인 및/또는 선택한다.
하나의 실시태양에서, 인간 피실험자에서 알쯔하이머병의 진단은 알쯔하이머병의 임상 진단 기준(NINCDS-ADRDA)에 따라 수행된다.
이들 검사 중 하나 이상의 주기적인 사용은 알쯔하이머병 및 관련 타우병증의 진행 또는 역행 및 추가적인 치료의 필요성에 관하여 의사나 다른 의료 전문가의 충고를 구할 수 있다. 상기 검사의 선택 및 치료 성공의 결정은 알쯔하이머병 분야의 의료 전문가의 전문적 지식내에 있다. 하나 이상의 검사의 개선된 점수는 상기 피실험자에서 알쯔하이머병의 중증도의 감소를 가리킨다.
진단 방법
타우의 병적인 형태를 검출하는 능력으로 인해 본 명세서에 기재된 항체 및 그의 타우-결합 단편은 다수의 다른 실제적 용도에 유용하다. 상기와 같은 용도의 예는 비제한적으로 병적인 타우 결합 분석, 질병 소인 선별, 질병 진단, 질병 예측, 질병 진행 모니터링, 개인의 유형 및 병적인 타우 수준에 기반한 치료 전략의 결정, 질병과 관련된 병적인 타우 수준 및 유형 또는 약물에 응답할 가능성에 기반한 치료제의 개발, 치료 섭생을 위한 임상 시험에 대한 환자 집단의 분류, 및 개인이 치료제에 응답할 가능성의 예측을 포함한다. 본 명세서에 개시된 항체 및 타우-결합 단편에 의한 알쯔하이머병 및 관련 타우병증과 관련된 병적인 타우 단백질의 시험관내 검출 방법은 비제한적으로 효소 결합된 면역흡수 분석(ELISA), 방사성면역분석(RIA), 웨스턴 블럿, 면역침전, 면역형광, 샌드위치 분석, 및 조직 배열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 본 명세서에 기재된 항체 및 그의 타우-결합 단편을 사용하여, 병적인 타우 이상 조직 분포, 발생 중 이상 발현, 또는 이상 조건, 예를 들어 알쯔하이머병 또는 관련 타우병증에서의 발현을 평가할 수 있다. 추가로, 순환하는 병적인 타우의 항체 검출을 사용하여, AD 및 관련 타우병증의 치료 중 타우 턴오버를 확인할 수 있다.
관련 실시태양에서, 본 발명은 피실험자에서 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증의 존재에 대해서 상기 피실험자를 진단 또는 선별하거나, 또는 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 나타날 피실험자의 위험을 측정하는 방법을 제공하며, 상기 방법은
a) 상기 피실험자 또는 상기 피실험자의 세포, 조직, 기관, 유체, 또는 임의의 다른 샘플을 유효량의 본 명세서에 제공된 바와 같은 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편과 접촉시키고;
b) 병적인 타우 및 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 포함하는 복합체의 존재를 측정함
을 포함하며, 여기에서 상기 복합체의 존재는 병적인 타우의 존재와 관련된 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증의 진단이다.
일부 실시태양에서, 상기 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 사용하여, 발현 양 및 패턴을 평가하기 위해서 생체내, 생체외, 원위치, 시험관내, 체액(예를 들어 혈액, 혈청, 뇨, 혈장, 뇌척수액, 타액) 중 또는 세포 용해물 또는 상등액 중의 병적인 타우를 검출할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 생체내 진단 분석, 예를 들어 생체내 영상화에 사용한다. 상기 실시태양들 중 일부에서, 상기 항체를, 상기 항체(및 병적인 타우)의 존재에 의해 표시되는 관심 세포 또는 조직이 면역영상을 사용하여 국소화될 수 있도록 방사성핵종(예를 들어 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 또는 3H)으로 표지한다. 다른 검출 가능한 표지는 분석 기술, 예를 들어 비제한적으로 형광, 화학발광, 전자-스핀 공명, 자외선/가시 흡광도 분광학, 적외선 분광학, 질량 분광분석, 핵자기 공명, 자기 공명, 방사선 측정 및 전기화학적 방법을 사용하여 관찰될 수 있는 표지를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증의 치료 효능의 평가 방법에 사용할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 방법은 상기 치료 전, 치료 도중 및 치료 후 병적인 타우의 존재를 모니터하기 위해 상기 항체 및 그의 타우-결합 단편 중 하나를 사용함을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 병적인 타우의 수준 또는 유형의 감소는 주어진 치료에 대한 양의 응답을 가리킨다. 또 다른 실시태양에서, 병적인 타우의 수준 또는 유형의 변화의 결여 또는 증가는 상기 치료를 계속해야함을 가리킨다.
일부 실시태양에서, 제1 시점은 예방 또는 치료의 개시 전에 선택될 수 있고 제2 시점은 상기 예방 또는 치료의 개시 후 어느 때에 선택될 수 있다. 병적인 타우 수준을 상이한 시점들에서 취한 각각의 샘플에서 측정할 수 있으며 정성적인 및/또는 정량적인 차이를 나타낼 수 있다. 상기 제1 및 제2 샘플로부터 측정된 병적인 타우 수준 중 하나 이상의 양의 변화를 예후와 상관 지을 수 있으며, 이를 사용하여 치료 효능을 측정하고/하거나 상기 피실험자에서 상기 질병의 진행을 측정할 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 검출을, 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 검출성 물질과의 커플링(즉 물리적인 결합)에 의해 촉진할 수 있다. 검출성 물질은 비제한적으로 다양한 효소, 보결분자단, 형광 물질, 발광 물질, 생물발광 물질 및 방사성 물질을 포함한다. 적합한 효소의 예는 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제를 포함하며; 적합한 보결분자단 복합체의 예는 스트렙트아비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함하고; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리쓰린을 포함하며; 발광 물질의 일례는 루미놀을 포함하고; 생물발광 물질의 예는 루시페라제, 루시페린 및 아쿠오린을 포함하며, 적합한 방사성 물질의 예는 125I, 131I, 35S 또는 3H를 포함한다.
다른 용도
본 명세서에 기재된 항체 및 타우-결합 단편을 또한 표준 기법, 예를 들어 친화성 크로마토그래피 또는 면역침전에 의해 천연 세포 공급원으로부터 또는 재조합 숙주 세포로부터 병적인 타우 단백질을 단리하는데 사용할 수 있다. 또 다른 실시태양에서, 본 명세서에 기재된 항체 및 타우-결합 단편을 경쟁 분석에 의해 병적인 타우에 결합하는 다른 항체를 확인하는데 사용할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체를 친화성-정제 작용제로서 사용할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체 및 그의 타우-결합 단편을 고상, 예를 들어 SEPHADEX(상표) 수지 또는 자기 비드(예를 들어 다이날(Dynal) 브랜드의) 또는 여과지상에, 당해 분야에 주지된 방법을 사용하여 고정화시킨다. 상기 고정화된 항체를 정제하려는 타우(또는 그의 단편)를 함유하는 샘플과 접촉시키고 그 후에 상기 지지체를, 타우 단백질(상기 고정화된 항체에 결합된)을 제외하고 상기 샘플 중의 실질적으로 모든 물질을 제거하는 적합한 용매로 세척한다. 최종적으로, 상기 지지체를 또 다른 적합한 용매, 예를 들어 글리신 완충제(pH 5.0)(상기 항체로부터 타우 단백질을 방출시킬 것이다)로 세척한다.
또한, 항체 및 그의 타우-결합 단편을 사용하기 위한 키트, 예를 들어 시험 샘플 중 병적인 타우의 존재를 검출하기 위한 키트를 제공한다. 예시적인 키트는 항체 및 그의 타우-결합 단편, 예를 들어 생물학적 샘플 중의 표지되거나 표지 가능한 항체 및 변형 단백질을 검출하기 위한 화합물 또는 작용제; 상기 샘플 중의 변형 단백질의 양, 또는 존재/부재를 측정하기 위한 수단; 상기 샘플 중의 변형 단백질의 양을 표준과 비교하기 위한 수단; 및 사용 설명서를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 제공된 바와 같은 항체 또는 타우-결합 단편을 포함하는 의료 장치를 제공하며, 여기에서 상기 장치는 상기 항체 또는 타우-결합 단편을 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복부내, 낭내, 연골내, 강내, 복내, 소뇌내, 뇌실내, 척추강내, 결장내, 경부내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심막내, 복강내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 활막내, 흉곽내, 자궁내, 방광내, 병변내, 일시주사, 질, 직장, 구강, 설하, 비내 및 경피 중에서 선택된 적어도 하나의 방식에 의해 접촉시키거나 투여하기에 적합하다. 하나의 실시태양에서, 상기 장치는 주사기(예를 들어 사전-충전된 주사기)를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 장치는 패치를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 장치는 펌프(예를 들어 미니-펌프)를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 장치는 흡입기를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 장치는 분무기를 포함한다.
또 다른 실시태양에서, AD 및 관련 타우병증의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품을 제공한다. 상기 제조 물품은 상기 물품 중에 함유된 고정 용량의 인간화된 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 갖는 바이알 및 임의로 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 상기 바이알은 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로부터 형성될 수 있으며, 주사기에 의해 관통될 수 있는 마개에 의해 밀봉될 수 있다. 예를 들어 상기 바이알은 다이쿄 그레이(DAIKYO GREY) 플루오로-수지 적층된 마개 및 20 ㎜ 플립 탑 알루미늄 캡을 갖는 정규 유리병 I형 유리 바이알(예를 들어 일부 고정 용량을 위한 20 cc 바이알 또는 또 다른 고정 용량을 위한 50 cc 바이알)일 수 있다. 상기 제조 물품은 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질들, 예를 들어 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 및 주사기 등을 추가로 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 제조 물품은 2개의 바이알을 포함하며, 여기에서 제1 바이알은 주어진 고정 용량의 상기 인간화된 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 함유하고, 제2 바이알은 상이한 고정 용량의 상기 인간화된 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편을 함유한다.
상기 항체들을 사용하여 항-이디오타입 항체를 생성시킬 수 있다(예를 들어 문헌[Greenspan & Bona, FASEB J. 7(5):437-444, 1989]; 및 문헌[Nissinoff, J. Immunol. 147:2429-2438, 1991]을 참조하시오). 상기와 같은 항-이디오타입 항체를 약동학, 약역학, 생체 분포 연구뿐만 아니라 상기 항체로 치료된 개인에서 임상적인 인간-항-인간 항체(HAHA) 응답의 연구에 사용할 수 있다. 예를 들어, 항-이디오타입 항체는 인간화된 DC8E8 항체의 가변 영역에 특이적으로 결합하며 따라서 이를 약동학적 연구에서 인간화된 DC8E8 항체를 검출하는데 사용할 수 있고 이는 치료된 개인에서 인간-항-인간 항체(HAHA) 응답을 정량분석하는데 일조한다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 출원, 및 특허들은 각각의 개별적인 간행물, 특허 출원 또는 특허가 참고로 구체적이고 개별적으로 인용됨을 가리키는 바와 같이 참고로 본 명세서에 인용된다. 특히, 본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 출원 및 특허는 개시된 발명과 관련하여 사용될 수도 있는 조성물 및 방법을 기재하고 개시하기 위해서 본 명세서에 참고로 명백히 인용된다.
하기의 약어들을 하기에 제공되는 실시예들에 적용한다.
Expi293 인간 배아 신장(HEK293 고밀도/무혈청) 세포
A 아데닌
bp 염기쌍
℃ 섭씨
C 시토신
MEM 최소 필수 배지
DNA 데옥시리보핵산
ELISA 효소 결합된 면역-흡수 분석
EC50 최대-절반 응답을 제공하는 항체의 농도
EC80 최대 응답의 80%를 제공하는 항체의 농도
ECD 세포외 도메인
g 그램
G 구아닌
HRP 양고추냉이 퍼옥시다제
IgG 면역글로불린-G
K G 또는 T(IUPAC 규약)
min 분
M A 또는 C(IUPAC 규약)
㎚ 나노미터
OD 광학 밀도
PBS 포스페이트 완충 염수
PCR 폴리머라제 쇄 반응
R A 또는 G(IUPAC 규약)
RNA 리보핵산
RT 실온
s 초
S C 또는 G(IUPAC 규약)
T 티민
TBS 트리스 완충 염수
UV 자외선
V A 또는 C 또는 G(IUPAC 규약)
VH 면역글로불린 중쇄 가변 영역
VK 면역글로불린 카파 경쇄 가변 영역
W A 또는 T(IUPAC 규약)
Y C 또는 T(IUPAC 규약)
실시예
실시예 1: DC8E8 항체의 키메릭 버전의 생성
전체 RNA를 전체 RNA 단리용 RNeasy 미니 프로토콜(퀴아겐(Qiagen))을 사용하여 DC8E8 하이브리도마 세포로부터 단리하였다. DC8E8 RNA(3 ㎍)를 제조사의 프로토콜에 따라 GE 라이프 사이언시즈(Life Sciences) 첫 번째 가닥 cDNA 합성 키트를 사용하여 역-전사시켜 DC8E8 cDNA를 생성시켰다. DC8E8 cDNA를 섹션 8.3에 기재된 바와 같이 3개의 별도의 반응으로 PCR에 의해 증폭시켰다. 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH) cDNA를, 퓨전 하이-피델리티 PCR 마스터 믹스(Phusion High-Fidelity PCR Master Mix)(써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 사용하여 중쇄 프라이머 M13-MHV6 + MHCmix 및 카파 경쇄 PCR 프라이머 M13-MKV5 + MKC로 PCR-증폭시켰다. 각 PCR 반응의 결과는, QIAquick PCR 정제 키트를 사용하여 정제되고 M13-순방향(TGTAAAACGACGGCCAGT (서열번호 158)) 및 M13-역방향 프라이머 (CAGGAAACAGCTATGACC ( 서열번호159 ))를 사용하여 양방향 모두에서 서열분석된 단일 증폭 산물이었다.
Figure pct00001
MHV는 마우스 중쇄 가변 영역 유전자의 리더 서열에 하이브리드화하는 프라이머를 가리키고, MHCG는 마우스 불변 영역 유전자에 하이브리드화하는 프라이머를 가리킨다. 이탤릭체 서열은 상기 M13 순방향 또는 M13 역방향 서열분석 프라이머를 가리킨다.
Figure pct00002
MKV는 마우스 카파 경쇄 가변 영역 유전자의 리더 서열에 하이브리드화하는 프라이머를 가리키고, MKC는 마우스 카파 불변 영역 유전자에 하이브리드화하는 프라이머를 가리킨다. 색칠 된 섹션은 상기 M13 순방향 또는 M13 역방향 서열분석 프라이머를 가리킨다. DC8E8 VK PCR의 공통 서열은 DC8E8 VK 표시되었고(도 3) VH의 공통 DNA 서열은 DC8E8 VH로 표시되었다(도 4). 상기 서열들의 생식세포 계열 분석은 카파 경쇄가 쥐 VK8이며, 체세포 돌연변이는 없음을 나타낸다(도 5). 중쇄는 쥐 VH1이며, CDR 및 프레임워크 모두에서 다수의 체세포 돌연변이를 나타낸다(도 6). 프레임워크 1 중의 2개의 프롤린 잔기의 존재는 중요한 것으로 간주되었다. 이들 잔기는 4Å 근접 잔기의 밖에서 구조 역할을 가질 수 있다.
키메릭 발현 벡터의 구성은 상기 증폭된 가변 영역의 IgG/카파 벡터(본 명세서에서 pHuG1, pHuG4 및 pHuK로 표지되며, 이들의 변형들을 상업적으로 입수할 수 있다)내로의 통상적인 클로닝을 수반하였다. 정확한 구조물을 생성시키는 클론들이 선택되고 서열분석되었다.
Expi293 형질감염 배지 및 항생제 중에서 생육하는 Expi293(인비트로젠) 현탁 세포를 엑스피펙타민(ExpiFectamine) 293 시약을 사용하여 DC8E8 VH.pHuG1 및 DC8E8 VK.pHuK 또는 DC8E8 VH.pHuG4 및 DC8E8 VK.pHuK(각각 50 ㎍ DNA)로 동시-형질감염시켰다. 상기 세포를 10일 동안 100 ㎖ 생육 배지에서 생육시켰다. γ1κ 및 γ4κ(키메릭 DC8E8 항체)의 존재를 통상적인 ELISA 방법에 의해 순화 배지에서 측정하였다.
각 키메릭 항체의 타우 단백질-결합 활성을 결합 ELISA에 의해 측정하고, 원래 마우스 DC8E8 항체의 경우와 비교하였다. 94-웰 맥시솝(MaxiSorp) 플레이트(넝크(Nunc))의 각 웰을 PBS 중의 타우 151-391/4R의 330 ng/㎖의 50 ㎕ 분액으로 코팅하고 4 ℃에서 밤새 배양하였다. 웰들을 PBS-T(0.1% 트윈20)로 3회 세척하였다. 신선한 플레이트를 웰당 250 ㎕의 PBS/0.2% BSA/0.05% 트윈20으로 차단하고 RT에서 1시간 동안 배양하였다. 웰들을 PBS-T(0.1% 트윈20)로 3회 세척하였다. 240 ㎕의 항체(필요한 경우 PBS/0.2% BSA/0.05% 트윈20에 희석함)를 컬럼 1의 웰에 가하고; 120 ㎕의 완충제(PBS/0.2% BSA/0.05% 트윈20)를 다른 웰에 가하였다. 120 ㎕를 컬럼 1에서 컬럼 2의 이웃하는 웰들로 옮겼다. 상기 과정을 상기 실험 샘플들의 일련의 2배 희석물로 컬럼 12까지 계속하였다. 웰당 100 ㎕를 상기 희석 플레이트에서 실험 플레이트로 옮겼다. 플레이트들을 RT에서 1시간 동안 배양하였다. 웰들을 PBS-T로 3회 세척하였다. 염소 항-인간 Fc 퍼옥시다제 접합체를 PBS/0.2% BSA/0.05% 트윈20에서 10000배(또는 10000배 희석 항-마우스) 희석하고 100 ㎕를 각 웰에 가하였다. 플레이트를 RT에서 1시간 동안 배양하고 세척 단계를 반복하였다. 150 ㎕의 기질(K-블루)을 웰당 가하고 RT에서 150분 동안 배양하였다. 상기 반응을, 각 웰에 50 ㎕의 RED STOP 용액을 가하여 정지시켰다. 광학 밀도를 650 ㎚에서 판독하였다. 키메릭 항체들은 모두 쥐 DC8E8 항체에 필적하는 EC50 값으로 타우 151-391/4R에 결합하였다(도 7). 상기 서열을 사용하여 상기 DC8E8 항체의 인간화된 버전을 설계하였다.
실시예 2: 마우스 DC8E8의 인간화된 변체
면역글로불린 서열 M65092를 상기 DC8E8 가변 중쇄 영역(VH)에 대한 그의 보다 높은 서열 일치성 및 유사성으로 인해 상기 인간화된 중쇄 프레임워크(FW)에 대한 인간 공여체 후보로서 선택하였다. 이들 두 가변 영역의 서열 정렬을 도 8에서 찾을 수 있다. 다음 단계는 DC8E8 VH로부터의 CDR1, 2 및 3을 M65092의 수용체 FW내로 이식하는 것이었다. 9, 21, 27, 28, 30, 38, 48, 67, 68, 70 및 95번 카파 위치에서 인간 잔기는 M65092의 야생형 가변 중쇄 영역(RHA) 중에서 보존되지 않는다. 이들 잔기는 그들의 위치(9번 및 21번 위치의 Pro를 제외하고, 프로그램 디스커버리 스튜디오(Discovery Studio)(아셀리스(Accelrys)를 사용하여 카밧 CDR의 4Å 이내)로 인한, 타우 결합에서 그들의 중요성에 대해 시험되었다. 상기 단계는 단클론 항체의 인간화에서 가장 예측할 수 없는 과정 중 하나이며, 생성되는 인간화된 항체의 잠재적인 면역원성을 최소화하는 동시에 모 항체의 결합 성질을 실질적으로 유지시키기 위해 유지될 필요가 있는 상기 모 항체로부터의 중요한 프레임워크 잔기의 확인을 필요로 한다. 이들 각각의 보존되지 않은 잔기를 DC8E8 마우스 균등 잔기로 역-돌연변이시켜, 다양한 재조합 가변 중쇄 영역 RHA 내지 RHM을 생성시켰다(도 8).
상기 경쇄를 인간화시키기 위해서, 인간 카파(경)쇄를 상기 중쇄의 경우와 유사한 방법으로 확인하였다. 초기 분석은 다수의 잠재적인 공여체 후보를 발견하였지만, 이들은 모두 인간 VK4(불충분한 발현을 나타낸다)인 것으로 입증되었다. 상기 분석을 하나 적은 잔기를 갖는 CDR1을 포함하도록 연장시켜 단일 후보, X72449를 생성시켰으며, 이는 상기 VK4 후보보다 쥐 항체에 더 높은 정도의 서열 상동성을 나타내었다. DC8E8 가변 카파 경쇄(VK)의 서열을 X72449의 가변 카파 경쇄와 정렬시켰다. 도 9. RKA는 상기 X72449 프레임워크상에 이식된 DC8E8의 CDR을 갖는 재조합 가변 경쇄를 나타낸다. 또 다른 변체, RKB에서, 상기 X72449 프레임워크 및 카밧 잔기 5상에 이식된 DC8E8의 CDR을 상응하는 DC8E8 경쇄 마우스 잔기로 역 돌연변이시켰다.
RHA 내지 RHM, RKA 및 RKB에 대한 유전자들을 젠스크립트 및/또는 PCR 돌연변이유발에 의해 합성하였다. 상기 유전자들을 진스크립트 독점의 소프트웨어 연산을 사용하여, 침묵 돌연변이유발에 의해 코돈 최적화하여 인간 세포에 의해 우선적으로 사용되는 코돈들을 사용하였다. 이어서 상기 RHA 내지 RHM 유전자들을 각각 당해 분야에서 전형적으로 수행되는 방법을 사용하여, 인간 IgG1 및 IgG4 발현 벡터내에 삽입하였다. RKA 및 RKB 유전자를 동일한 방식으로 K 경쇄 발현 벡터내에 삽입하였다. 상기와 같은 발현 벡터의 다수의 예들이 주지되어 있으며 이들은 당해 분야의 통상적인 숙련가에게 상업적으로 입수될 수 있다. 클론들을 서열분석하고 발현 플라스미드 DNA를 퀴아겐 플라스미드 미니프렙/맥시프렙 키트를 사용하여 제조하였다. 모든 상이한 인간화된 및 키메릭 VH 및 VK 서열을 암호화하는 발현 플라스미드 제제를 사용하여, 인비트로젠의 Expi293 발현 시스템 키트를 사용하여 Expi293 세포를 형질감염시키고, 무혈청 배지에서 10일 동안 배양하였으며, 그 후에 각각의 분비된 항체를 함유하는 순화 배지를 수확하였다. 목적하는 경우, Expi293 순화배지 중의 IgG1k 및 IgG4k 항체의 농도를 통상적인 항체 정량분석 방법을 사용하여 ELISA에 의해 측정하였다.
실시예 3: DC8E8의 인간화된 버전의 성질
DC8E8 항체에 의한 타우 단백질 결합
타우 단백질(151-139/4R)에 대한 결합 활성을 실시예 5에 기재된 바와 같이 결합 ELISA에 의해 측정하였다. 도 10에 나타낸 데이터는 인간화된 DC8E8의 초기 버전의 결합 효능을 나타낸다. 모든 버전이 상기 타우 단백질에 결합되었지만, 상기 초기 세트 중 상기 중쇄의 RHB 버전을 함유하는 항체들이 보다 양호하게 결합하는 것으로 나타났다. 상기 버전의 중쇄는 9, 21, 27, 28, 30, 38, 48, 67, 68, 70 및 95번 카밧 위치 전부에서 쥐 잔기로의 역-돌연변이를 함유하며, 이는 상기 잔기들 중 하나 이상이 완전항체 결합 활성의 유지에 중요함을 암시한다.
상기 인간화된 중쇄의 추가의 버전들을 합성하였으며, 이들은 각각 단일 역-돌연변이를 가졌고, 이들을 ELISA에 의해 결합에 대해 시험하였다. 상기 IgG4 버전에 대한 결과를 나타내며 도 11, 12 및 13에 요약한다. RHB, RHD 및 RHE를 갖는 상기 항체의 버전들은 상기 인간화된 경쇄(RKA 및 RKB) 또는 키메릭 경쇄(cDC8E8) 중 어느 하나와 함께 일관되게 더 양호하였다. 상기 RHD 및 RHE 버전이 단지 단일의 쥐 역-돌연변이를 함유하기 때문에, 버전 RHB의 11개 쥐 역-돌연변이와 상반되게, 이들 2개의 버전은 RKA 경쇄 버전(쥐 역-돌연변이 없음)과 함께, 가능한 리드 후보로서 선택되었다. 이들 역-돌연변이체가 인간화된 항체에 대한 결합 친화성을 복원하기에 충분하였음은 놀라웠다. RHD 및 RHE 돌연변이(버전 RHM)의 병행은 각각의 개별적인 돌연변이에 비해, 병적인 타우-결합 성질에서 현저한 개선을 생성시키지 않았다.
상술한 결과에 비추어, RHD 및 RHE 중에 존재하는 쥐 역-돌연변이를 모두 함유하는 중쇄 버전(RHM)을 부위-지향된 돌연변이유발에 의해 생성시켰다. 도 14는 상기 인간화된 DC8E8 항체의 RHM 버전의 타우 단백질 151-391/4R 결합을 나타내며, 이는 상기 단백질에 대한 친화성이 리드 후보, AX004(RHD/RKA)보다 양호하지는 않음을 암시한다.
고온에 대한 인간화된 후보 항체의 열 안정성
본 실험의 목적은 인간화된 항체들의 열 안정성을 비교하는 것이다. 10분 동안 30° 내지 85 ℃로 변하는 보다 고온이 가해질 때, 4 ℃로 냉각시키고, 각 후보의 EC80 농도에서 결합 ELISA 분석에 사용하였다. 시험된 모든 항체는 균등한 안정성을 나타내며(도 15), 이들은 모두 오직 70 ℃에서만 불활성으로 되었으나, 그 전에는 타우-결합 성질에 대한 어떠한 부적합한 효과도 없었다.
인간화된 후보 항체 Tm의 측정
상기 리드 항체 AX004(DA), AX005(EA), AX016(DB) 및 AX017(DE)의 용융 온도를 측정하기 위해서, 상기 인간화된, 키메릭 및 마우스 항체를 2-단계 친화성 크로마토그래피 및 젤 여과 시스템(실시예 4에 기재된 바와 같다)에서 정제하고 열 이동에 대해 시험하였다. 상기 열 이동 분석은 열 용융 곡선을 모니터하기 위한 미세플레이트 결합 분석이다. 상기 방법은 환경적으로 민감한 염료 SYPRO 오렌지(그의 단백질 결합 성질은 상기 단백질의 변성에 따라 증가한다)를 사용한다. 따라서, 상기 분석된 단백질의 열-유도된 변성시, 상기 염료의 결합이 증가하고 상기 단백질이 완전히 변성되고/풀리는 경우 최대에 도달한다. 따라서 온도의 함수로서 플롯팅된 형광 강도는 전형적인 s자 곡선을 생성시키며, 이때 변곡점(최대 절반 강도)은 상기 단백질의 용융 온도(Tm)에 상응한다. 샘플들을 qPCR 열 사이클러에서 주기당 1 ℃ 증가시키면서 71 주기 동안 형광 염료(사이프로 오렌지)와 함께 배양하였다. 상기 키메릭 및 4개의 인간화된 항체의 Tm을 도 16에 나타내며, 이는 상기 열 안정성 분석에서 획득된 결과들을 입증한다: 상기 후보 항체들은 모두 매우 유사한 Tm(69-70 ℃)을 가지며, 상기 키메릭 항체(70 ℃)의 경우와 유사하지만 상기 마우스(73 ℃) 항체보다는 약간 더 낮다.
인간화된 후보 항체의 친화성
항체 친화성 측정을 비아코어 T200을 사용하여 SPR 분석에 의해 수행하였다. 항-인간 IgG(GE 헬쓰케어, cat.no. BR-1008-39) 또는 항-쥐 IgG(GE 헬쓰케어, cat.no. BR-1008-38)를 제조사의 설명에 따라 포화점까지 CM5 칩(Cat.no. BR-1005-30)에 공유적으로 고정화시켰다. 항체 마우스 DC8E8, 키메릭 DC8E8, AX004, AX005, AX016 및 AX017을 HBS-EP 완충제[0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 계면활성제 P20, GE 헬쓰케어] 중에서 희석하고 친화성 결합에 의해 144 내지 177 RU의 수준으로 고정화시켰다. 재조합 단량체성 타우 151-391/4R(아르곤으로 포화된 PBS 중의)을 HBS-EP 중에 이중 희석으로 20 nM 내지 0.312 nM 범위의 농도로 희석하고 이어서 100 ㎕/분의 유량으로 주입하였다. 결합 시간을 150 초로, 해리 시간을 300초로 설정하였다. 타우 농도를 상기 결합 단계 동안 곡률을 획득하기 위해서 실험적으로 선택하였다. 결합/해리의 동역학을 비아코어 T200 평가 소프트웨어 패키지 2.0을 사용하여 1:1 상호작용 모델에 따라 초기에 분석하였다.
센서그램을 도 17 내지 22에 나타낸다. 불행하게도, 상기 해리 단계의 2상 성질, 및 상기 결합 단계 동안의 잉여 결합의 일부 증거로 인해, 상기 동역학을 분석하는 것이 가능하지 않았다. 상기 나타낸 데이터는 정상상태 분석을 사용하여 획득되었다. 쥐 및 키메릭 DC8E8은 모두 대략 10 nM의 친화성을 나타낸다. 상기 리드 인간화된 항체는 9 mM(RHD/RKB) 내지 대략 16 nM(RHE/RKA) 범위의 유사한 친화성을 보이며, 도 23에 요약되어 있다. 상기 결과는 인간화가 목적하는 매개변수내에서 상기 결합 활성을 성공적으로 유지하였음을 암시한다.
인간화된 후보 항체의 응집
응집은 증가된 면역원성으로 인해 생성 중 수율을 낮추고, 저장수명을 제한하며, 환자에서 감소된 효능을 생성시킬 수 있기 때문에 약물 개발에 심각한 문제로 간주된다. 항체 샘플을 HPLC 시스템에서 크기 배제 컬럼내에 0.4 ㎖/분으로 주입하고 다각도 광 산란에 의해 분석하여 절대 몰 질량을 측정하고 응집에 대해 검사하였다(도 24A, B, C 및 D를 참조하시오). 모든 변체는 160 내지 169.8 kDa 범위의 평균 분자량(이는 상기 분석 셋업에서 IgG 단량체에 대해 예상된 범위이다)과 함께 응집의 표시를 나타내지 않는다. 모든 샘플은 단분산된다(Mw/Mn < 1.05). 질량 회수율은 99.6-99.9%(주입된 질량에 대해 계산된 질량)이며, 이는 양호한 단백질 회수를 가리키고, 상기 샘플이 상기 컬럼에 들러붙거나 불용성 응집체(이는 가드 컬럼에 의해 유지될 것이다)를 함유하지 않는 듯함을 가리킨다. 전체적으로 상기 데이터는 분석된 항-DC8E8 항체 샘플 중 어느 것에서도 응집 우려가 존재하지 않음을 암시한다.
인간화된 후보 항체의 용해도
상기 정제된 후보 항체를 용매 흡수 농축기(MWCO 7500 kDa)를 사용하여 농축시키고 농도를 일정시간 간격으로 측정하였다. 상기 샘플은 모두 뚜렷한 침전 없이 35 내지 41 ㎎/㎖로 농축되었고, 상기 샘플을 결합 ELISA에서 시험하여 어느 것도 타우 펩티드에 대한 결합 효능을 상실하지 않았음을 나타내었다(도 25 및 26). 상기 데이터는 상기 항체들이 적어도 35 ㎎/㎖ 이하의 농도에서 침전되는 경향이 없음을 암시한다.
후보 항체의 동결/해동 응력 분석
상기 정제된 후보 항체의 샘플에 10 주기의, -80 ℃에서 15분에 이은 실온에서 15분의 해동을 가하였다. 이어서 샘플들을 SEC-MALS에 의해 분석하여 응집에 대해 분석하였다(도 27). 상기 데이터는 동결/해동이 시험된 4개의 항체 전부에 대해 응집을 유도하지 않음을 암시한다. 전체적으로, 상기 데이터는 시험된 항-DC8E8 항체 샘플 중 어느 것에서도 응집 우려가 존재하지 않음을 암시한다.
후보 항체의 열-유도된 응력 분석
상기 정제된 후보 항체의 샘플을 a) 실온, b) 37 ℃ 및 c) 50 ℃에서 20일 동안 열 노출시켰다. 이어서 샘플을 SEC-MALS에 의해 분석하여 응집에 대해 분석하였다(도 28). 전체적으로, 상기 데이터는 분석된 항-DC8E8 항체 샘플 중 어느 것에서도 응집 우려가 존재하지 않음을 암시한다.
실시예 4: 재조합 완전길이 타우 동형 2N4R 및 잘못-무질서한 타우 151-391/4R의 제조
재조합 타우 단백질을 클론 T40(Goedert, 1989)(발현 플라스미드 pET-17b(노바겐(Novagen)내로 서브클로닝되고 세균에서 발현되었다)으로부터 생성시켰다. 상기 잘못-무질서한 타우 151-391/4R 및 모든 타우 펩티드를 가장 긴 인간 타우 동형 2N4R(길이가 441 아미노산이며 따라서 또한 타우441(D'Souza, 2005)이라 칭한다)에 따라 넘버링한다. 타우 단백질의 생성은 하기의 단계들을 포함하였다: a) 세균에서 타우의 발현; b) 이온 교환 크로마토그래피에 의한 타우 정제; c) 젤-여과에 의한 타우 정제; d) 단리된 타우의 농축 및 보관;
a) 인간 완전길이 타우 2N4R 및 잘못-무질서한 타우 151-391/4R의 세균 발현: 발현 플라스미드를 에스케리키아 콜라이 생산 균주 BL21(DE3)로 형질전환시켰다. 적합한 발현 플라스미드를 함유하는 세균 세포를 배양하고 문헌["Molecular Cloning: A Laboratory Manual" by Sambrook and Russell (2001)]에 기재된 바와 같이 유도하였다. 타우 단백질 또는 그의 단편의 발현을 구동하는 pET-17b 플라스미드로 형질전환된, BL21(DE3) 세균의 단일 콜로니를 37 ℃에서 300 rpm에서 100 ㎍/㎖ 암피실린이 있는 루리아 브로쓰 배지 500 ㎖ 중에서 생육시키고 0.4 mM의 최종 농도로 이소프로필-β-D-1-티오갈락토피라노시드(IPTG)의 첨가에 의해 유도하였다. 37 ℃에서 3시간 동안 추가로 배양 후, 세균을 4 ℃에서 15분 동안 3,000xg에서 원심분리에 의해 수집하였다.
b) 염기성 및 중성 타우 단백질(완전길이 타우 동형 및 타우 151-39/4R)의 양이온-교환 크로마토그래피 정제를 필수적으로 앞서 기재된 바와 같이 수행하였다(Krajciova et al., 2008). 발현 후, 상기 세균 펠릿을 10 ㎖의 용해 완충제(50 mM 1,4-피페라진디에탄설폰산(PIPES) pH 6.9, 50 mM 염화 나트륨(NaCl), 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 5 mM 디티오쓰레이톨(DTT), 0.1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드(PMSF), 5%(v/v) 글리세롤)에 재현탁시키고, 액체 질소 중에서 급속 동결시키고, 타우 단백질의 정제에 사용될 때까지 -80 ℃에서 보관하였다. 타우 단백질 정제를 위해서, 상기 동결된 세균 현탁액을 급속 해동시키고 얼음상에 놓았다. 세균 세포벽을, 소노펄스(Sonopuls) HD 2200, 50% 사용률로 설정된 팁 TT-13(반델린(Bandelin), 독일 소재), 50 W 출력, 30s 멈춤으로 30s 동안 6회를 사용함으로써 얼음상에서 초음파에 의해 파괴하였다. 상기 용해물을 원심분리(4 ℃에서 15분 동안 21,000xg)에 의해 등명화하고 상등액을 0.45 ㎛ 멤브레인 필터를 통해 여과하였다. 상기 재조합 타우 단백질의 대규모 정제를 AKTA-FPLC 워크스테이션(애머샴 바이오사이언시즈(Amersham Biosciences), 스웨덴 소재)을 사용하여 6 ℃에서 수행하였다. 상기 여과된 용해물을 용해 완충제로 평형화시킨 5-㎖ HiTr ap SP HP 컬럼(GE 헬쓰케어, 스웨덴 웁살라 소재)상에 3 ㎖/분의 유량으로 로딩하고 280 ㎚에서 기준선이 안정성으로 될 때까지 60 ㎖의 용해 완충제로 광범위하게 세척하였다. 결합된 타우 단백질을 완충제 B(1 M NaCl이 보충된 용해 완충제)의 구배(15 ㎖ 내에서 0-30%)에 의해 용출시켰다. 개별적으로 1 ㎖ 분획을 수집하고 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 젤 전기영동(SDS-PAGE)에 의해 분석하였다. 핵산(양으로 하전된 타우 단백질과 함께 정제한다)을 제거하기 위해서, 타우 단백질을 함유하는 분획들을 모으고 완충제 B(45 ㎖ 중의 0-30%)의 덜 급한 구배로 5-㎖ HiTrap SP HP 컬럼(GE 헬쓰케어, 스웨덴 웁살라 소재)을 사용하여 제2 양이온-교환 크로마토그래피 단계에 의해 정제하였다.
c) 정제의 최종 젤-여과 단계에서(모든 타우 단백질들에 대해서 동일함), 이온 교환 크로마토그래피에 의해 수득된 모은 타우 단백질 분획들을, 100 mM NaCl이 보충된, 각각 염기성/중성 또는 산성 타우 단백질에 대한 PIPES 또는 히스티딘 용해 완충제 중에서 3 ㎖/분으로 젤-여과 컬럼(HiLoad 26/60 슈퍼덱스 200 프렙 등급 컬럼, GE 헬쓰케어)상에 주입하였다. 용출된 타우 단백질들을 모았다.
d) 젤-여과 정제 후 타우 단백질 농축을 위해서, 모은 분획들을 1.5 부피의 2.5% 글리세롤로 희석하고 다시 HiTrap SP HP 컬럼(염기성 및 중성 타우 단백질) 또는 HiTrap Q HP 컬럼(산성 타우 단백질)상에 로딩하였다. 이어서 상기 농축된 재조합 타우 단백질을 1 M NaCl 단계 구배로 상기 컬럼으로부터 용출시켰다. 최종적으로, 상기 완충제를 5 ㎖ HiTrap 탈염 컬럼(GE 헬쓰케어)을 사용하여, 아르곤으로 포화된 포스페이트-완충 염수(PBS, 8.09 mM 이나트륨 포스페이트(Na2HPO4), 1.47 mM 칼륨 이수소 포스페이트(KH2PO4), 136.89 mM NaCl, 2.7 mM 염화칼륨(KCl))로 교환하였다. 정제된 샘플들의 단백질 정량분석을 표준으로서 소 혈청 알부민(BSA)과 함께, 비신코닌산(BCA) 정량분석 키트(피어스(Pierce), 미국소재)를 사용하여 수행하였다. 타우 단백질을 실행 분액으로 분액하고, 액체 질소에서 급속-동결시키고, -70 ℃에서 보관하였다.
실시예 5: 키메릭 DC8E8의 성질
a/키메릭 DC8E8은 완전길이 타우 2N4R보다 잘못-무질서한 타우 151-391/4R에 대해 더 높은 친화성을 나타낸다.
병적인 타우 및 생리학적 타우와의 면역반응을 식별하는 키메릭 DC8E8의 능력을 ELISA 및 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 측정하였다.
ELISA 및 SPR 실험을 위해서, 마우스 DC8E8을 하기와 같이 단백질 G 친화성 컬럼상의 무혈청 하이브리도마 상등액으로부터 정제하였다. 상기 하이브리도마 상등액을, 0.2 부피의 PBS를 가하고 pH 페이퍼 스트립(필요한 경우, pH를 4 M NaOH의 첨가에 의해 추가로 조절한다)으로 점검하여 pH 7.5로 조절하고, 상기 용액을 원심분리(20,000xg, 4 ℃, 10분)에 의해 사전 등명화하고, 0.45 ㎛ 멤브레인 필터를 통해 여과하고, 5 ㎖ 단백질 G 세파로스 컬럼(1-0.5 ㎖/분의 유량으로)상에 로딩하였다. DC8E8을 0.1 M 글리신-HCl, pH 2.7로 상기 컬럼으로부터 용출시켰다. 용출된 분획을 1 M 트리스-HCl pH 9.0으로 즉시 중화시켰다. 모든 분획들을 PBS에 대해 투석하고, 한외여과에 의해 농축시키고, -70 ℃에서 보관하였다. 상기 항체의 농도를 식 c(㎎/㎖) = A280 ㎚/1.43을 사용하여, 280 ㎚에서 흡광도를 측정함으로써 측정하였다.
키메릭 DC8E8을, 약간의 변형과 함께 마우스 DC8E8에 대해 상술한 바와 같이 Expi293 세포에서 발현시키고 친화성 크로마토그래피 및 크기-배제 크로마토그래피에 의해 무혈청 순화 배지로부터 정제하였다. 상기 세포 배양 배지를 pH 7.5로 조절하고, 원심분리에 의해 사전 등명화하고, 0.45 ㎛ 멤브레인 필터를 통해 여과하고, 결합 및 세척 완충제로서 둘베코 PBS를 사용하여, 1 ㎖ HiTrap MabSelect SuRe 단백질 A 컬럼상에 로딩하였다. 키메릭 DC8E8 mAb를, 150 mM NaCl이 보충된 0.1 M 나트륨 시트레이트 pH 2.5로 상기 컬럼으로부터 용출시켰다. 용출된 분획들을 1 M 트리스-HCl pH 9.0으로 즉시 중화시켰다. 모은 분획들을 HiLoad 16/600 슈퍼덱스 200 pg 컬럼상에서의 크기 배제 크로마토그래피, 실행 완충제로서 둘베코 PBS에 의해 연마하였다. 상기 항체의 농도를 식 c(㎎/㎖) = A280 ㎚/1.37을 사용하여, 280 ㎚에서 흡광도를 측정함으로써 측정하였다.
직접적인 ELISA 분석을 위해서, 잘못-무질서한 타우 151-391/4R 또는 완전길이 타우 2N4R을 PBS, 50 ㎕/웰 중의 5 ㎍/㎖로 ELISA 플레이트(넝크, 메디솝(MediSorp))상에 고정화시키고, 37 ℃에서 밤새 배양하였다. PBS-0.05% 트윈 20(20-25 ℃에서 1시간)으로 차단시켜 비특이적인 결합을 감소시킨 후에, 상기 플레이트를 37 ℃에서 1시간 동안 차단 완충제(PBS, 0.05% 트윈 20) 중에서 3배 연속 항체 희석액(10000 ng/㎖ 내지 0.17 ng/㎖의 농도 범위) 50 ㎕/웰과 배양하였다. 배양 및 세척 후에, 퍼옥시다제-접합된 2차 항체(항-인간 Ig, 피어스, 써모사이언티픽)를 PBS-트윈 완충제 중에서 1:4000 희석하고 37 ℃에서 1시간 동안 상기 웰(50 μ/웰)에 적용하였다. 세척 후에, 상기 반응을 20분 동안 퍼옥시다제 기질로서 컬러버스트 블루 용액(50 μ/웰)으로 20분 동안 전개시키고 50 ㎕의 2 M H2SO4로 정지시켰다. 흡광도를 멀티스캔 MCC/340 ELISA 판독기(랩시스템스(Labsystems))를 사용하여 450 ㎚에서 측정하였다. 음성 대조군(PBS) 값의 적어도 2배의 흡광도 값을 갖는 판독치를 양으로 간주하였다.
상기 분석은 키메릭 항체 DC8E8이 잘못-무질서한 타우 151-391/4R 및 생리학적 타우 2N4R을 식별할 수 있음을 나타내었다(도 29A). 키메릭 DC8E8은 상기 생리학적 타우 2N4R을, 상기가 병적인/잘못-무질서한 타우 151-391/4R을 인식하는 것보다 훨씬 적은 정도로 인식하였다. 중요하게, 키메릭 DC8E8의 면역반응성은 마우스 DC8E8의 면역반응성에 필적하였다(도 29B). 키메릭 및 마우스 DC8E8은 모두 분석된 타우 단백질(병적인 및 생리학적 타우)에 도 29C에 나타낸 바와 같이 유사한 EC50 값으로 결합하였다. 함께, 이러한 발견은 키메릭 DC8E8의 결합 성질이 원래 마우스 DC8E8의 결합 성질에 필적함을 암시한다.
표면 플라스몬 공명(SPR)을 실시간 결합 사건의 직접적인 모니터링에 의해 단백질 결합의 검출 및 정량분석, 및 단백질 복합체(예를 들어 항체-항원 복합체)의 열역학적 매개변수의 측정에 사용한다. 상기 기술은 진단 및 치료 항체 모두의 특성화에 통상적으로 사용된다(예를 들어 문헌[Karlsson and Larsson, Affinity Measurement Using Surface Plasmon Resonance, in Methods in Molecular Biology, Vol. 248: Antibody Engineering: Methods and Protocols. Edited by: B. K. C. Lo c Humana Press Inc., Totowa, NJ, (2008)]을 참조하시오).
CM5 센서 칩(비아코어 AB, 웁살라 소재)을 갖는 비아코어3000 장비를 SPR 분석에 사용하였다. 아민-커플링 시약(EDC, NHS, 에탄올아민 pH 8.5), P20 세제, 및 10 mM 나트륨 아세테이트 pH 5.0을 비아코어 AB로부터 수득하였다. 이들 실험을 25 ℃에서 실행 완충제로서 0.005%의 P20(PBS-P)을 갖는 PBS pH 7.4 중에서 수행하였다. 키메릭 DC8E8의 경우, 염소 항-인간-Fc 다클론 항체(SIGMA, cat.no. 12136)를 2개의 유동 셀 중에 동시에 1차 아민을 통해 pH 5.0에서 5,000 RU(응답 단위)로 커플링시켰으며, 이 중 하나를 참조 측정을 위해 사용하였다. 마우스 DC8E8의 경우, 분석용 유동 셀을 다클론 항-마우스 항체(No. Z 0420; 닥코사이토메이션(DakoCytomation), 덴마크 글로스트룹 소재)로 코팅하였다.
각 분석 주기에서, 정제된 키메릭 DC8E8 및 마우스 DC8E8을 200-250 RU의 고정화 수준에 도달하도록 분석용 유동 셀에서 별도로 포획하였다. 평형 결합 상수(KA)의 측정뿐만 아니라 동역학적 속도 상수(kON 및 kOFF)의 측정을 위해서, 타우 151-391/4R 및 생리학적 타우 2N4R(상기에 대해 DC8E8 친화성이 시험되었다) 중 어느 하나의 2배 연속 희석물, 또는 대조용으로서 PBS-P를 상기 센서 칩상에 100 ㎕/분의 유량으로 주입하였다. 동역학적 결합 데이터를 미스즈카(Myszka)(1999)에 의해 기재된 바와 같이 이중 참조하였으며 해리 속도 상수 및 결합 속도 상수를 획득하기 위해서 별도로 BIA 평가 소프트웨어 4.1(비아코어 AB)에 의해 적합시켰다. 평형 결합 상수 KA를 결합 및 해리 속도 상수의 비로서 획득하였다.
시험된 타우 단백질에 대한 키메릭 DC8E8의 친화성을 정량분석하기 위해서, 상기 결합 평형 결합 상수(KA)를, 생리학적인 4개의 반복 타우 단백질 동형 2N4R뿐만 아니라 병적인, 잘못-무질서한 타우 151-391/4R에 대한 DC8E8 결합에 대해서 측정하였다. SPR에 사용된 2개의 타우 단백질은 모두 실시예 4에 기재된 바와 같이 제조되었다. 키메릭 DC8E8 항체는 잘못-무질서한 타우151-391/4R 단백질과 생리학적 타우 단백질 2N4R을 식별한다(도 30). 키메릭 DC8E8의 식별 효능의 정도는 원래 마우스 DC8E8 항체의 경우보다 심지어 약간 더 높다. 이러한 결과는 (1) 잘못-무질서한 형태의 타우에 대한 인간화된 DC8E8의 특이성, 및 (2) 완전길이 타우(즉 정상 또는 생리학적 타우)에 비해 잘못-무질서한 타우(즉 질병 또는 병적인 타우)에 대한 DC8E8의 선택성을 입증하였다.
b/키메릭 DC8E8은, 각각 단백질 타우의 미세소관-결합 도메인의 반복 영역 중의 4개의 DC8E8 에피토프 중 하나를 운반하는 타우 펩티드와 결합한다
선행 결과는 마우스 DC8E8이 인간 타우상의 4개의 결합 부위 또는 에피토프(267-273, 298-304, 329-335 및 361-367)를 가지며, 이들은 각각 타우의 미세소관-결합 도메인 중의 반복부 중 하나내에 별도로 위치함을 보였다(WO/2013/041962, Kontsekova et al., 2014). 상기 4개의 에피토프 중 어느 하나에 결합하는 키메릭 DC8E8의 능력을 시험할 목적으로, 타우 펩티드 256-285, 282-311, 314-342, 352-380을 95% 초과 순도로 EZBiolabs(미국소재)에 의해 합성하였다. 상기 펩티드는 각각 4개의 별도의 DC8E8 에피토프 중 하나를 포함하였다. 타우 펩티드에 대한 키메릭 DC8E8의 결합 활성을 실시예 5a/에 기재된 바와 같이 직접 ELISA에 의해 측정하였다. 키메릭 DC8E8은 원래 마우스 DC8E8과 유사하게, 모든 시험된 MTBR-유래된 펩티드(도 31A)에 결합하였다. 중요하게, 펩티드 282-311(MTBRII로부터 유래되었으며 298-304번 위치내에 DC8E8 에피토프를 포함한다)에 대한 키메릭 및 마우스 DC8E8이 가장 높은 면역반응성을 나타내었다. 추가적인 시험된 펩티드(256-285, 314-342, 352-380)에 대한 키메릭 항체의 면역반응성은 EC50 값이 가리키는 바와 같이(도 31C), 원래 마우스 DC8E8의 경우보다 심지어 약간 더 높았다.
c/키메릭 DC8E8은 병적인 타우-타우 상호작용을 억제한다
시험관내 타우 피브릴화 분석을 사용하여 키메릭 항체가 병적인 타우-타우 상호작용에 억제 효과를 갖는지의 여부를 측정하였다. 상기 분석은 타우 단백질의 본래 성질, 즉 황산화된 글리코스아미노글리칸 헤파린과 같이 다중음이온과의 상호작용시 입체형태적 변화를 겪는 그의 능력에 근거한다. 하나의 타우 분자상의 상기 변경된 입체형태는 또 다른 타우 분자와의 그의 병적인 상호작용, 상기 상호작용하는 타우 분자의 미세소관 결합 영역 중 교차-β 시트 구조의 형성을 통한 타우-타우 복합체의 안정화, 및 최종적으로, 알쯔하이머병-유사 쌍 나선 필라멘트(PHF)의 형성을 추가로 유도한다(Skrabana, R., Sevcik, l., Novak, M. (2006). Intrinsically disordered proteins in the neurodegenerative processes: formation of tau protein paired helical filaments and their analysis. Cell Mol Neurobiol 26, 1085-1097). 상기 베타-시트-풍부 구조의 형성은 티오플라빈 T와 같은 형광 염료에 의해 검출될 수 있다(Friedhoff P, Schneider A, Mandelkow EM, Mandelkow E. Rapid assembly of Alzheimer-like paired helical filaments from microtubule-associated protein tau monitored by fluorescence in solution. Biochemistry 37(28):10223-30 (1998)).
시험관내 타우 피브릴화 분석을 위해서, 마우스 및 키메릭 DC8E8을 실시예 5에 기재된 방법에 의해 정제하였다. 병적인 타우-타우 상호작용에 대한 키메릭 DC8E8의 효과를 측정하는 분석을, 10 μM(최종 농도)의 상기 잘못-무질서한 타우 151-391/4R; 10 μM 헤파린(돼지 장 점막으로부터의 헤파린 나트륨 염, ≥150 IU/㎎, 건조 기준, 평균 분자량 6000 Da, SIGMA로부터); 및 12.5 μM(최종 농도) 티오플라빈 T를 함유하는 PBS(0.2 ㎛ 필터를 통해 여과됨) 중에서 셋업하였다. 각각의 반응물(50 ㎕ 최종 부피)을 밀봉된 흑색 고체 폴리스티렌 플레이트(384 웰, 그레이너 바이오원(Greiner BioOne)) 중에서 37 ℃에서 20시간 동안 배양하였다. 티오플라빈 T 형광을 형광 판독기(플루오로스캔 어센트(Fluoroskan Ascent) FL(랩시스템스))를 사용하여 450 ㎚의 여기 파장, 510 ㎚의 방출, 및 200 ms의 측정 시간으로 측정하였다. 병적인 타우-타우 상호작용에 대한 키메릭 DC8E8의 억제 활성을 측정하기 위해서, 정제된 키메릭 DC8E8을 37 ℃에서 배양 전에, 반응 혼합물에 10 μM의 최종 농도로 가하였다. 입체형태적으로 변경되고 피브릴화된 타우의 양을 상기 키메릭 항체의 부재("항체 없음") 및 존재하에서 티오플라빈 T 형광에 의해 측정하였다(도 32). 10 μM 최종 농도로 첨가된 키메릭 DC8E8 및 마우스 DC8E8은 모두 상기 잘못-무질서한 타우 단백질의 병적인 입체형태적 변화 및 피브릴화를 방지하였다. 키메릭 DC8E8은 피브릴화된 병적인 타우 형태의 양을 5.9%까지 감소시켰고, 마우스 DC8E8은 상기 피브릴화된 병적인 타우 형태의 양을 4.7% 미만으로 감소시켰다. 상기 데이터는 키메릭 항체가 모 DC8E8의 경우에 필적하는 능력으로 상기 잘못-무질서한 타우 단백질의 병적인 입체형태적 변화 및 피브릴화를 방지하였음을 나타낸다.
실시예 6: DC8E8의 인간화된 버전의 성질
a/DC8E8의 인간화된 버전은 완전길이 타우 2N4R에 대해서보다 잘못-무질서한 타우 151-391/4R에 대해 더 높은 친화성을 나타낸다
병적인 및 생리학적 타우 단백질과의 면역반응성을 식별하는 DC8E8의 인간화된 버전의 능력을 평가하기 위해서, 실시예 5에 기재된 바와 같이 ELISA 및 SPR을 사용하였다. DC8E8의 모든 인간화된 변체, 즉 AX004, AX005, AX016, AX017(둘 다 아이소타입 IgG4 및 IgG1에서)을 실시예 5에 기재된 키메릭 DC8E8의 정제 방법에 따라 정제하였다.
상기 ELISA는 모든 인간화된 리드 AX004, AX005, AX016, 및 AX017(IgG4 및 IgG1 아이소타입 모두의)은 병적인 타우 151-391/4R을 인식할 수 있음을 나타내었다(도 33A-D; 도 34A-D). 중요하게, 각각의 인간화된 DC8E8 변체의 결합은 생리학적 타우 2N4R의 경우보다 병적인 타우 151-391/4R에 대해서 더 높았다. 그러나, 중쇄의 RHE 버전(AX005 및 AX017)을 함유하는 리드는 중쇄의 RHD 버전을 함유하는 리드 AX004 및 AX016보다 약하게 상기 생리학적 타우에 결합하는 것으로 나타났다(도 33F; 도 34E). AX005 및 AX017은 생리학적 타우에 보다 약하게 결합하지만; 인간화된 리드 AX004, AX005, AX016, 및 AX017의 식별 효능 정도는 EC50 값이 가리키는 바와 같이, 키메릭 DC8E8 항체의 경우와 유사하다. 요컨대, 상기 시험된 인간화된 항체의 결합 성질들이 키메릭 항체(및 모 마우스 DC8E8, 도 29)의 결합 성질에 필적한다.
키메릭 DC8E8에 대해 상술한 바와 같이 수행된 SPR 실험에 대해서, DC8E8 단클론 항체 및 키메릭 DC8E8의 인간화된 변체를 사용하였다. 각각의 분석 주기에서, DC8E8의 정제된 인간화된 버전을 200-250 RU의 고정화 수준에 도달하도록 분석용 유동 셀에서 포획하였다. 상기 시험된 타우 단백질 각각에 대한 인간화된 DC8E8의 친화성을 정량분석하기 위해서, 상기 결합 평형 결합 상수(KA)를, 생리학적인 4개의 반복 타우 단백질 동형 2N4R뿐만 아니라 병적인, 잘못-무질서한 타우 151-391/4R에 대한 상기 항체들의 결합에 대해서 측정하였다. SPR에 사용된 모든 타우 단백질은 실시예 4에 따라 제조되었다. 각각의 인간화된 DC8E8 변체의 친화성은 완전길이 타우 2N4R의 경우보다 잘못-무질서한 151-391/4R의 경우 더 높았다(도 35A, B). 이러한 결과는 (1) 잘못-무질 형태의 타우에 대한 인간화된 DC8E8의 특이성, 및 (2) 완전길이 타우(즉 정상 또는 생리학적 타우)에 비해 잘못-무질서한 타우(즉 질병 또는 병적인 타우)에 대한 DC8E8의 선택성을 입증하였다.
b/DC8E8의 인간화된 버전은, 각각 타우의 미세소관-결합 도메인 중의 4개의 DC8E8 에피토프 중 하나를 운반하는 타우 펩티드와 결합한다
본 실험의 목적은 타우 펩티드 256-285, 282-311, 314-342, 352-380에 결합하는 DC8E8의 인간화된 리드(AX004, AX005, AX016, AX017, 아이소타입 IgG4 및 아이소타입 IgG1)의 능력을 측정하는 것이었다. 이들 펩티드는 각각 타우의 미세소관-결합 반복부(MTBR) 중 4개의 별도의 DC8E8 에피토프 중 하나를 포함하였다. 상기 타우 펩티드에 대한 DC8E8의 인간화된 리드의 결합 활성을 실시예 5에 기재된 바와 같이, ELISA에 의해 측정하였다. 상기 시험된 인간화된 항체들은 각각 키메릭 DC8E8(도 36E)과 유사하게, 모든 MTBR-유래된 펩티드(도 36A-D; 도 37A-D)에 결합하였다. 이는 IgG1 및 IgG4 아이소타입 버전 모두에 대해 참이었다. 상기 인간화된 후보 항체는 EC50 값이 가리키는 바와 같이(도 36F; 도 37E), 펩티드 282-311(MTBRII로부터 유래되었고 298-304번 위치내에 DC8E8 에피토프를 포함한다)에 대해 최고의 면역반응성을 나타내었다 상기 중쇄의 RHE 버전을 함유하는 리드(AX005 및 AX017)는 다른 시험된 펩티드(256-285, 314-342, 352-380)에, 상기 중쇄의 RHD 버전을 함유하는 리드 AX004 및 AX016보다 약하게 결합한다(도 36F; 도 37E). 전체적으로 상기 데이터는 상기 시험된 펩티드에 대한 인간화된 항체 AX004 및 AX016의 면역반응성이 EC50 값이 가리키는 바와 같이(도 36F), 키메릭 DC8E8의 경우와 유사함을 암시한다.
c/DC8E8의 인간화된 버전은 병적인 타우-타우 상호작용을 억제할 수 있다
타우 피브릴화 및 타우 응집체의 형성에 대한 인간화된 후보 항체(즉 AX004, AX005, AX016, AX017, 아이소타입 IgG4 및 아이소타입 IgG1)의 영향을 측정하기 위해서, 시험관내 타우 피브릴화 분석을 수행하였다(실시예 5에 기재된 바와 같이). DC8E8의 모든 인간화된 리드를 실시예 5에 기재된 바와 같이 정제하였다. 피브릴화 분석에 사용된 병적인 타우 단백질 151-391/4R을 실시예 4에 따라 제조하였다.
병적인 타우-타우 상호작용에 대한 인간화된 후보 항체의 억제 활성을 측정하기 위해서, 정제된 인간화된 리드 AX004, AX005, AX016, AX017(아이소타입 IgG4 및 아이소타입 IgG1)를 37 ℃에서 배양 전에, 반응 혼합물에 10 μM의 최종 농도로 별도로 가하였다. 입체형태적으로 변경되고 피브릴화된 타우의 양을 상기 시험된 항체의 부재("항체 없음") 및 존재하에서 티오플라빈 T 형광에 의해 측정하였다. 10 μM 최종 농도로 첨가된 인간화된 항체들은 모두 상기 잘못-무질서한 타우 단백질의 병적인 입체형태적 변화 및 피브릴화를 방지하였다(도 38A, B). 상기 항체들의 아이소타입은 인간화된 항체의 억제 잠재성에 영향을 미치지 않았다. 인간화된 리드 AX004, AX005, AX016 및 AX017(아이소타입 IgG4 및 아이소타입 IgG1 버전 모두)은 피브릴화된 병적인 타우 형태의 양을 3% 미만까지 감소시켰다. 상기 데이터는 인간화된 항체가 원래 마우스 DC8E8의 경우에 필적하는 능력으로 상기 잘못-무질서한 타우 단백질의 병적인 입체형태적 변화 및 피브릴화를 방지하였음을 암시한다.
실시예 7: 키메릭 DC8E8 및 DC8E8의 인간화된 버전은 인간 알쯔하이머병 뇌 및 다른 타우병증에서 병리를 인식한다
인간 뇌조직 샘플(파라핀 블록상의)을 네덜란드 뇌 은행으로부터 수득하였다. 상기 블록을 마이크로톰상에서 절단하였다. 알쯔하이머병 뇌(브락의 VI 단계) 및 FTDP17(R406W 돌연변이)로부터의 해마-뇌후각 피질, 피질기저 퇴행 및 진행성 핵상 마비로부터의 미상핵의 파라핀-절편(8 ㎛)을 상기 연구에 사용하였다. 상기 절편을 1분간 저온(+4 ℃) 98% 포름산으로 처리한 다음 121 ℃에서 20분 동안 가압 쿠커(2100 레트리버(Retriever))에서 열 처리하였다. 상기 조직 절편을 실온에서 10분 동안 차단 용액(섹션 블럭, 앱툼(Aptum)) 중에서 배양하고 이어서 밤새 1차 마우스 항체 DC8E8(1:200), 인간 항체 AX004, AX005, AX016, AX017 및 키메릭 DC8E8(모두 1:1000)과 밤새 배양하였다. 후속으로, 상기 절편들을 실온에서 1시간 동안 비오틴화된 2차 항체(벡타스타틴 엘리트(Vectastatin Elite) ABC 키트, 벡터 레보라토리즈(Vector Laboratories))와 배양하고 이어서 60분 동안 아비딘-비오틴 퍼옥시다제-복합체와 반응시켰다(벡타스타틴 엘리트 ABC 키트, 벡터 레보라토리즈)(둘 다 실온(25 ℃)에서). 상기 면역반응을 퍼옥시다제 기질 키트(벡터 VIP, 벡터 레보라토리즈, 미국 캘리포니아주 소재)로 가시화하고 메틸 그린(벡터 레보라토리즈)으로 대비염색하였다. 면역반응성의 평가를 x100-400 배율로 광학 현미경하에서 수행하였다. 타우-면역양성 병변의 형태학적 세부사항을 세포 국소화 및 염색 패턴을 근거로 한정하였다. 디지털 영상을, 올림푸스(Olympus) DP50 디지털 카메라(올림푸스 옵티컬 캄파니 리미티드(Olympus Optical Co., Ltd.), 일본 토쿄 소재)가 구비된 올림푸스 BX51 현미경을 사용하여 촬영하였다.
알쯔하이머병, 진행성 핵상 마비, 피질기저 퇴행 및 FTDP-17 환자의 면역조직화학적 염색은 키메릭 DC8E8 항체가 마우스 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 나타냄을 밝혀내었다(도 39-46, A,B). 우리는 인간화된 DC8E8 항체 - AX004, AX005, AX016, 및 AX017에 의한 키메릭 항체의 면역조직화학적 염색을 비교하였다. 일반적으로, 인간화된 항체 AX004 및 AX016(IgG1 및 IgG4)은 마우스 또는 키메릭 DC8E8과 매우 유사한 염색 패턴을 나타내었다. 인간화된 항체 AX004 및 AX016은 인간 AD 뇌 중의 광범위한 수의 신경섬유 매듭, 신경망 쓰레드 및 신경염 플라크를 인식하였다(도 39C,E; 40C,E). R406W에서 타우 단백질 상에 돌연변이를 갖는 인간 FTDP-17의 경우에 AX004 및 AX016은 뇌후각 및 측두엽 피질 중의 신경섬유 매듭 및 신경망 쓰레드를 면역표지하였다(도 41C,E; 42C,E). 피질기저 퇴행에서, AX004 및 AX016은 미상핵 중의 신경교 타우 병리를 염색하였다(도 43C,E; 44 C,E). 진행성 핵상 마비에서, AX004 및 AX016은 다수의 핍지교 나선체 및 성상세포 플라크를 인식하였다(도 45C,E; 46C,E). 대조적으로 AX005 및 AX017은 알쯔하이머병(도 39D,F; 40D,F), FTDP-17(도 41D,F), 피질기저 퇴행(도 43D,F; 44D,F) 및 진행성 핵상 마비(도 45D,F; 46D,F)에서 감소된 면역염색을 나타내었다. 흥미롭게도, AX005 및 AX017의 아이소타입 IgG4는 FTDP17에서 병적인 구조를 염색하지 않았다(도 42D,F). 요약하면, 인간화된 항체 AX004 및 AX016은 DC8E8과 동일한 염색 패턴을 갖는다.
<110> NOVAK, MICHAL KONTSEKOVA, EVA KOVACECH, BRANISLAV SKRABANA, ROTISLAV <120> HUMANIZED TAU ANTIBODIES IN ALZHEIMER'S DISEASE <130> INC9532 <160> 179 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Asp Tyr Val Ile Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Phe Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of 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Synthetic polypeptide <400> 24 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 25 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 27 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Phe Tyr Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 28 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 28 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 33 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 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Synthetic polypeptide <400> 44 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Ile Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 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Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro 115 120 <210> 64 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 64 Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Leu Ile Ser Leu Leu Phe Trp Val Ser 1 5 10 15 Gly Thr Cys Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45 Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 50 55 60 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg 65 70 75 80 Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro 115 120 <210> 65 <211> 126 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Ser Gly Ser Ser Gly Asp 1 5 10 15 Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu 20 25 30 Pro Ala Ser Ile Ser Cys 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tctacggggc atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg gaacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga ttatagttat 300 cc 302 <210> 74 <211> 720 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 74 tttctgtcag ctttgcatgg gttcctccag cccagcccac cttctcagaa tttataaacc 60 aggcctttgc attgtgactg atctacatct gaaaggcagg tggagcaaga tggaatcaca 120 gactcaggtc ctcatgtccc tgctgttctg ggtatctggt aagaaattta aagtattaaa 180 accttttcaa agtttcatct ttgtaataag caatttataa tatatgccag tatatagtat 240 ttcttacaca ataatgtttg atattatgac attttaagga catttaaatg acaaattaca 300 actgtaatta taatacatat atattagtgt agctatgcat tttcactgtc tattcattat 360 ttcaggtacc tgtggggaca ttgtgatgac acagtctcca tcctccctga ctgtgacagc 420 aggagagaag gtcactatga gctgcaagtc cagtcagagt ctgttaaaca gtggaaatca 480 aaagaactac ttgacctggt accagcagaa accagggcag cctcctaaac tgttgatcta 540 ctgggcatcc actagggaat ctggggtccc tgatcgcttc acaggcagtg 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ctacttggcc tggtaccagc agaaaccagg gcagcctcct aaactgttga tctacggggc 540 atccactagg gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg gaaccgattt 600 cactcttacc atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga 660 tcatagttat cctcccacag tgcttcagcc tcctacacaa acctcct 707 <210> 77 <211> 380 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 77 ctcagctcct ggggctgcta atgctctggg tctctggatc cagtggggat attgtgatga 60 ctcagtctcc actctccctg cccgtcaccc ctggagagcc ggcctccatc tcctgcaggt 120 ctagtcagag cctcctgcat attaatggat acaactattt ggattggtac ctgcagaagc 180 cagggcagtc tccacagctc ctgatctatt tgggttctaa tcgggcctcc ggggtccctg 240 acaggttcac tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc agagtggagg 300 ctgaggatgt tggggtttat tactgcatgc aagctctaca accgtggacg ttcggccaag 360 ggaccaaggt ggaaatcaaa 380 <210> 78 <211> 294 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 78 caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc ctggggcttc agtgaagctg 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctatggta taagctgggt gaagcagaga 120 actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatccta gaagtggtaa tacttactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcgtac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aaga 294 <210> 79 <211> 294 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 79 caggtccagc tgaagcagtc tggagctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcact gactactata taaactgggt gaagcagagg 120 cctggacagg gccttgagtg gattggaaag attggtcctg gaagtggtag tacttactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aaga 294 <210> 80 <211> 294 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 80 taggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact gactactaca tgcactgggt gaagcagaag 120 cctgggaagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg gaagtggtaa tacttactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca catcctccag cacagcctac 240 atgcagctca 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Thr Asp Tyr 20 25 30 gtc ata agc tgg gtg aag cag aga act gga cag ggc ctt gag tgg att 144 Val Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 gga gag att ttt cct aga agt ggt agt act tac tac aat gag aag ttc 192 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 aag ggc aag gcc aca ctg act gca gac aaa tcc tcc aac aca gcc tac 240 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg cag ctc agc agc gtg aca tct gag gac tct gcg gtc tat ttc tgt 288 Met Gln Leu Ser Ser Val Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 gca aga gat tac tac ggt act tca ttt gct atg gac tac tgg ggt caa 336 Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 gga acc tca gtc acc gtc tcc tca 360 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 91 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 91 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Val Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 92 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(336) <400> 92 gac att gtg atg tca cag tct cca tcc tcc ctg gct gtg tca gca gga 48 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 gag aag gtc act atg agc tgc aaa tcc agt cag agt ctg ctc aac agt 96 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 aga acc cga aag aac tac ctg gct tgg tac cag cag aaa cca ggg cag 144 Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 tct cct aaa ctg ctg atc tac tgg gca tcc act agg gaa tct ggg gtc 192 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 cct gat cgc ttc aca ggc agt gga tct ggg aca gat ttc act ctc acc 240 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 atc agc agt gtg cag gct gaa gac ctg gca gtt tat tac tgc aag caa 288 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 tct ttt tat ctt cgg acg ttc ggt gga ggc acc aag ctg gac atc aaa 336 Ser Phe Tyr Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys 100 105 110 <210> 93 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 93 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Phe Tyr Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys 100 105 110 <210> 94 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 94 caggtccagc tgcagcagag cggccccgaa ctggtcaaac ccggaacctc cgtgaagatg 60 ccttgtaaag cctcaggata cattttcacc gattacgtga tctcttgggt caaacagcga 120 acaggacagg gactggagtg gatcggggaa attttcccca gatccggatc tacttactat 180 aacgagaagt ttaaaggcaa ggccaccctg acagctgaca agagctccaa tacagcttac 240 atgcagctgt ctagtgtgac tagtgaagac tcagcagtct atttctgcgc cagggattac 300 tatgggacaa gttttgccat ggactattgg ggacagggca cttccgtgac cgtctcaagc 360 360 <210> 95 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 95 gatattgtca tgtcacagtc accttcatcc ctggcagtca gcgccggaga aaaagtcact 60 atgtcttgta agtcttcaca gagcctgctg aactcccgga ccagaaagaa ttacctggca 120 tggtatcagc agaagcccgg ccagtctcct aaactgctga tctactgggc atcaacaagg 180 gagagcggag tgccagaccg cttcacaggc tctgggagtg gaactgattt taccctgaca 240 attagctccg tgcaggccga agacctggct gtctactatt gcaaacagag cttctatctg 300 cgaacttttg gcgggggaac caagctggat atcaaa 336 <210> 96 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 96 caggtccagc tgcagcagag cggccccgaa ctggtcaaac ccggaacctc cgtgaagatg 60 ccttgtaaag cctcaggata cattttcacc gattacgtga tctcttgggt caaacagcga 120 acaggacagg gactggagtg gatcggggaa attttcccca gatccggatc tacttactat 180 aacgagaagt ttaaaggcaa ggccaccctg acagctgaca agagctccaa tacagcttac 240 atgcagctgt ctagtgtgac tagtgaagac tcagcagtct atttctgcgc cagggattac 300 tatgggacaa gttttgccat ggactattgg ggacagggca cttccgtgac cgtctcaagc 360 360 <210> 97 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 97 gatattgtca tgtcacagtc accttcatcc ctggcagtca gcgccggaga aaaagtcact 60 atgtcttgta agtcttcaca gagcctgctg aactcccgga ccagaaagaa ttacctggca 120 tggtatcagc agaagcccgg ccagtctcct aaactgctga tctactgggc atcaacaagg 180 gagagcggag tgccagaccg cttcacaggc tctgggagtg gaactgattt taccctgaca 240 attagctccg tgcaggccga agacctggct gtctactatt gcaaacagag cttctatctg 300 cgaacttttg gcgggggaac caagctggat atcaaa 336 <210> 98 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 98 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 99 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 99 caggtccagc tggtgcagtc aggccccgaa gtgaagaagc ccggaagtag tgtcaaggtc 60 ccatgtaaag catcagggta tatttttact gattacgtga tcagctgggt caaacaggca 120 ccaggacagg gactggagtg gatcggggaa attttcccta gatcaggaag cacatactat 180 aacgagaagt ttaaaggcaa ggccaccctg acagctgaca agtccacttc taccgcttac 240 atggagctga gctccctgcg gagtgaagac accgcagtgt atttctgcgc cagagattac 300 tatgggacat cctttgcaat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 100 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 100 caggtccagc tggtccagag cggacccgaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 ccatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 101 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 101 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcgggta tacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 102 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 102 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aatttttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 103 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 103 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttact gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 104 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 104 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt caaacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 105 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 105 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatcggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 106 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 106 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggcaa ggtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 107 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 107 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgccaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 108 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 108 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccctg acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 109 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 109 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct atttctgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 110 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 110 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcgggta tatttttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 360 <210> 111 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 111 gacatcgtga tgacacagtc cccactgtct ctgcccgtca ctcctgggga gccagcatct 60 attagttgca agagctccca gagtctgctg aactcacgga ccagaaagaa ttacctggcc 120 tggtatctgc agaaacccgg acagagccct cagctgctga tctactgggc tagcaccagg 180 gaatccggag tgccagaccg cttcacagga tcaggaagcg gaaccgattt tacactgaag 240 atcagccggg tggaggccga agatgtgggc gtctactatt gtaaacagtc cttctatctg 300 agaacttttg gccaggggac caaggtggag atcaaa 336 <210> 112 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 112 gacatcgtga tgtctcagag tccactgtct ctgccagtca cccctggaga gccagcatca 60 attagctgca agagctccca gagtctgctg aactcacgga caagaaagaa ttacctggcc 120 tggtatctgc agaaacccgg acagagccct cagctgctga tctactgggc tagcacaagg 180 gaatccggag tgccagaccg cttcactgga tccggatctg gaaccgattt tacactgaag 240 atcagccggg tggaggccga agatgtgggc gtctactatt gtaaacagag tttctatctg 300 agaacttttg gccaggggac caaggtggag atcaaa 336 <210> 113 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 113 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 gcctccacca agggcccttc cgtgttccct ctggcccctt cctccaagtc cacctccggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaag gactacttcc ctgagcctgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ctgccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccttcct cctccctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagcct 660 aagtcctgcg acaagaccca cacgtgccct ccatgcccag ctcccgagct gctgggcgga 720 ccaagcgtgt ttctgttccc tcctaagcct aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780 gaggtgacgt gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc cagaggtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc ctcgggagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc 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ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 gcctccacca agggcccttc cgtgttccct ctggcccctt cctccaagtc cacctccggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaag gactacttcc ctgagcctgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ctgccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccttcct cctccctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagcct 660 aagtcctgcg acaagaccca cacgtgccct ccatgcccag ctcccgagct gctgggcgga 720 ccaagcgtgt ttctgttccc tcctaagcct aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780 gaggtgacgt gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc cagaggtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc ctcgggagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gaatacaagt gcaaagtctc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gaccatctcc 1020 aaggccaagg gccagcctcg cgagcctcag gtgtacaccc tgcctccaag cagggaggaa 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtgaagg gcttctaccc ttccgatatc 1140 gccgtggagt gggagtccaa cggccagcct 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 116 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcgggta tacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 gcctccacca agggcccttc cgtgttccct ctggcccctt cctccaagtc cacctccggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaag gactacttcc ctgagcctgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ctgccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccttcct cctccctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagcct 660 aagtcctgcg acaagaccca cacgtgccct ccatgcccag ctcccgagct gctgggcgga 720 ccaagcgtgt ttctgttccc tcctaagcct aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780 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caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct atttctgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 gcctccacca agggcccttc cgtgttccct ctggcccctt cctccaagtc cacctccggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaag gactacttcc ctgagcctgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ctgccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccttcct cctccctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagcct 660 aagtcctgcg acaagaccca cacgtgccct ccatgcccag ctcccgagct gctgggcgga 720 ccaagcgtgt ttctgttccc tcctaagcct aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780 gaggtgacgt gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc cagaggtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc ctcgggagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc 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tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 gcctccacca agggcccttc cgtgttccct ctggcccctt cctccaagtc cacctccggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaag gactacttcc ctgagcctgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ctgccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccttcct cctccctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagcct 660 aagtcctgcg acaagaccca cacgtgccct ccatgcccag ctcccgagct gctgggcgga 720 ccaagcgtgt ttctgttccc tcctaagcct aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780 gaggtgacgt gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc cagaggtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc ctcgggagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gaatacaagt gcaaagtctc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gaccatctcc 1020 aaggccaagg gccagcctcg cgagcctcag gtgtacaccc tgcctccaag cagggaggaa 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtgaagg gcttctaccc ttccgatatc 1140 gccgtggagt 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ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 600 tacacgtgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 660 aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 720 ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacgtg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcagatg gcaggagggg 1260 aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 1320 ctctccctgt ctctgggtaa a 1341 <210> 134 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 134 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttact gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 gcctccacca agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420 agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 600 tacacgtgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 660 aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 720 ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacgtg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcagatg gcaggagggg 1260 aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 1320 ctctccctgt ctctgggtaa a 1341 <210> 135 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 135 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt caaacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggggaa attttcccta gatcaggaag 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gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacgtg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcagatg gcaggagggg 1260 aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 1320 ctctccctgt ctctgggtaa a 1341 <210> 136 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 136 caggtccagc tggtccagag cggagcagaa gtgaagaaac ccggaagtag cgtgaaggtg 60 tcatgcaagg caagcggcgg aacatttagt gattacgtga tctcctgggt ccgacaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatcggggaa attttcccta gatcaggaag cacctactat 180 aacgagaagt ttaaaggccg cgtgaccatc acagcagaca agtccacttc taccgcctac 240 atggagctga gctccctgcg gagcgaagac accgccgtct actattgcgc tagagattac 300 tatgggacat ctttcgccat ggactattgg ggacagggca cactggtgac tgtctctagt 360 gcctccacca agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gctccaggag 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ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacgtg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcagatg gcaggagggg 1260 aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 1320 ctctccctgt ctctgggtaa a 1341 <210> 142 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 142 caggtccagc tgcagcagag cggccccgaa ctggtcaaac ccggaacctc cgtgaagatg 60 ccttgtaaag cctcaggata cattttcacc gattacgtga tctcttgggt caaacagcga 120 acaggacagg 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agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657 <210> 145 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 145 gatattgtca tgtcacagtc accttcatcc ctggcagtca gcgccggaga aaaagtcact 60 atgtcttgta agtcttcaca gagcctgctg aactcccgga ccagaaagaa ttacctggca 120 tggtatcagc agaagcccgg ccagtctcct aaactgctga tctactgggc atcaacaagg 180 gagagcggag tgccagaccg cttcacaggc tctgggagtg gaactgattt taccctgaca 240 attagctccg tgcaggccga agacctggct gtctactatt gcaaacagag cttctatctg 300 cgaacttttg gcgggggaac caagctggat atcaaaagaa ctgtggcagc accaagcgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca 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caggaaacag ctatgaccca gtggatagac tgatggggg 39 <210> 166 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 166 caggaaacag ctatgaccca agggatagac agatggggc 39 <210> 167 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 167 tgtaaaacga cggccagtat ggattttcag gtgcagatta tcagcttc 48 <210> 168 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 168 caggaaacag ctatgaccac tggatggtgg gaagatgg 38 <210> 169 <211> 101 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 169 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 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Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Val Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 172 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 172 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 173 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 173 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 174 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 174 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 175 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 175 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 176 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 176 Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Val Thr Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser <210> 177 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 177 Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Ser Gly Ser Ser Gly 1 5 10 15 <210> 178 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 178 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ile 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 179 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 179 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ser Thr Val Thr Thr Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims (179)

  1. 인간화된 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편으로,
    각각 서열번호 1, 2, 및 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터의 프레임워크;
    각각 서열번호 4, 5, 및 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터의 프레임워크; 및
    각각 인간 면역글로불린으로부터의 중쇄 및 경쇄 불변 영역
    을 포함하고, 상기 중쇄 프레임워크가 9, 21, 27, 28, 30, 38, 48, 67, 68, 70, 및 95 중에서 선택된 위치들 중 하나 이상에서 치환되었으며; 상기 경쇄 프레임워크가 치환되지 않았거나 또는 5번 위치에서 치환되었고; 상기 위치들이 카밧(Kabat)에 따르는 상기 항체 또는 결합 단편.
  2. 제 1 항에 있어서,
    9번 위치의 중쇄가 P에 의해 점유되고, 21번 위치가 P에 의해 점유되고, 27번 위치가 Y에 의해 점유되고, 28번 위치가 I에 의해 점유되고, 30번 위치가 T에 의해 점유되고, 38번 위치가 K에 의해 점유되고, 48번 위치가 I에 의해 점유되고, 67번 위치가 K에 의해 점유되고, 68번 위치가 A에 의해 점유되고, 70번 위치가 L에 의해 점유되고, 및/또는 95번 위치가 F에 의해 점유되는 항체 또는 결합 단편.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    5번 위치의 경쇄가 S에 의해 점유되는 항체 또는 결합 단편.
  4. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 13-25(RHA 내지 RHM) 중에서 선택되고; 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26(RKA)인 항체 또는 결합 단편.
  5. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 13-25(RHA 내지 RHM) 중에서 선택되고; 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27(RKB)인 항체 또는 결합 단편.
  6. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 13이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  7. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  8. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 15이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  9. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  10. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  11. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 18이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  12. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 19이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  13. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 20이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  14. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 21이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  15. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 22이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  16. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 23이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  17. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 24이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  18. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26인 항체 또는 결합 단편.
  19. 제 6 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  20. 제 6 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 IgG4 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  21. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 13이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  22. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  23. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 15이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  24. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  25. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  26. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 18이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  27. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 19이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  28. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 20이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  29. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 21이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  30. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 22이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  31. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 23이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  32. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 24이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  33. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27인 항체 또는 결합 단편.
  34. 제 21 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  35. 제 21 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 IgG4 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  36. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 14이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26이고, 항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  37. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26이고, 항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  38. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26이고, 항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  39. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 25이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 26이고, 항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  40. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27이고, 항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  41. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27이고, 항체가 IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  42. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 16이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27이고, 항체가 IgG4 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  43. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 17이고 경쇄 가변 영역의 서열이 서열번호 27이고, 항체가 IgG4 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  44. 인간화된 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편으로,
    a. 각각 서열번호 1, 2, 및 3의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터의 프레임워크;
    b. 각각 서열번호 4, 5, 및 6의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터의 프레임워크; 및
    c. 인간 면역글로불린으로부터의 중쇄 및 경쇄 불변 영역
    을 포함하는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편.
  45. 항-타우 항체, 또는 그의 타우-결합 단편으로,
    a. 서열번호 28-40 및 43-55 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 및
    b. 서열번호 57 및 58 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 경쇄
    를 포함하는 상기 항체 또는 그의 타우-결합 단편.
  46. 제 1 항 내지 제 45 항 중 어느 한 항에 있어서,
    HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 적어도 하나, 바람직하게는 2개, 보다 바람직하게는 3개의 에피토프 전부에 결합하는 항체 또는 그의 타우-결합 단편.
  47. a. 서열번호 1, 2, 3의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 RHK, 서열번호 24, 서열번호 25 중 어느 하나에 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 98% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
    b. 각각 서열번호 4, 5, 6의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 26에 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 98% 일치하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하고, 항체가 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나, 바람직하게는 2개, 보다 바람직하게는 3개의 에피토프 전부에 결합하는
    항체 또는 그의 타우-결합 단편.
  48. a. 서열번호 1, 2, 및 3의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 RHK, 서열번호 24, 서열번호 25 중 어느 하나에 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 98% 일치하는 중쇄 가변 영역; 및
    b. 각각 서열번호 4, 5, 및 6의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고 서열번호 27에 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 98% 일치하는 성숙한 경쇄 가변 영역
    을 포함하고, 항체가 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나, 바람직하게는 2개, 보다 바람직하게는 3개의 에피토프 전부에 결합하는
    항체 또는 그의 타우-결합 단편.
  49. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서,
    결합 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, scFv, (scFv)2, 또는 scFv-Fc인 항체 또는 결합 단편.
  50. 제 1 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서,
    IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  51. 제 1 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서,
    IgG1 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  52. 제 1 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서,
    IgG4 아이소타입을 갖는 항체 또는 결합 단편.
  53. 제 1 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서,
    글리코실화된 항체 또는 결합 단편.
  54. 제 1 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    Tau 151-391/4R에 적어도 5x10-7의 친화성(KD)으로 결합하는 항체 또는 결합 단편.
  55. 제 1 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서,
    타우에, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에 기탁된 하이브리도마 PTA-11994에 의해 분비된 DC8E8 항체의 친화성의 적어도 80%, 바람직하게는 상기 항체와 실질적으로 동일한 결합 친화성, 또는 보다 바람직하게는 상기 항체보다 더 양호한 친화성으로 결합하는 항체 또는 결합 단편.
  56. 제 1 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 HQPGGG (서열번호 148), HVPGGG (서열번호 149), 및 HKPGGG (서열번호 150) 중에서 선택된 하나, 바람직하게는 2개, 보다 바람직하게는 3개의 에피토프 전부에서, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 기탁된 하이브리도마 PTA-11994에 의해 분비된 DC8E8 항체와 타우에의 결합에 대해 경쟁하는 항체 또는 결합 단편.
  57. 제 1 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 재조합적으로 생성되는 항체 또는 결합 단편.
  58. 제 57 항에 있어서,
    항체가 중국 햄스터 난소(CHO) 세포주에서 재조합적으로 생성되는 항체 또는 결합 단편.
  59. 제 1 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항에 있어서,
    효과기 기능, 반감기, 단백질분해, 및/또는 글리코실화를 변경시키기 위해 변형된 Fc 영역을 함유하는 항체 또는 결합 단편.
  60. 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체-의존적인 세포 세포독성, 보체-의존적인 세포독성, 혈청 반감기, 생체분포, 및/또는 Fc 수용체에의 결합으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 기능 특성을 조절하기 위해 변형된 항체 또는 결합 단편.
  61. 제 1 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 있어서,
    69 ℃ 이상의 열안정성 온도를 갖는 항체.
  62. 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 결합 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제 또는 안정제를 포함하는 약학 조성물.
  63. 제 62 항에 있어서,
    항체 또는 결합 단편의 동결건조된 분말을 포함하는 조성물.
  64. 제 62 항 또는 제 63 항에 있어서,
    주입 또는 피하 투여용으로 제형화된 조성물.
  65. 제 62 항 내지 제 64 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제2 치료제를 또한 포함하는 조성물.
  66. 제 65 항에 있어서,
    제2 치료제 및 항체 또는 결합 단편이 화학적으로 접합된 조성물.
  67. 제 65 항에 있어서,
    제2 치료제가 AD의 예방 및/또는 치료에 유용한 조성물.
  68. 제 65 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제2 치료제가 타우-펩티드, 베타-아밀로이드 펩티드(예를 들어 N-말단 아밀로이드 베타 펩티드)(다른 화합물, 예를 들어 돌연변이된 디프테리아 독소에 접합될 수도, 접합되지 않을 수도 있다); 다른 항-타우 항체, 베타-아밀로이드에 대한 항체, 예를 들어 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵 및 IVIG 면역글로불린, 에이베타 올리고머를 표적화하는 다른 면역 요법, 타우의 과인산화를 방지하는 화합물, 및 타우 응집체를 표적화하는 다른 능동 및 수동 면역 요법; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 조성물.
  69. 제 65 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제2 치료제가 아밀로이드-베타 응집 억제제(예를 들어 트라미프로세이트), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어 세마가세스태트), 및 감마-세크레타제 조절제(타렌플루르빌); 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 조성물.
  70. 제 65 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제2 치료제가 아세틸콜린에스테라제 억제제(예를 들어 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린, 영양 보충제), N-메틸-D-아스파테이트(NMDA) 수용체 길항물질(예를 들어 메만틴), DNA 수복의 억제제(예를 들어 피렌제핀 또는 그의 대사산물), 전이금속 킬레이터, 성장 인자, 호르몬, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 산화방지제, 지질 강하제, 선택성 포스포디에스테라제 억제제, 타우 응집의 억제제, 단백질 키나제의 억제제, 항-미토콘드리아 기능장애 약물의 억제제, 뉴로트로핀, 열충격 단백질의 억제제, 지방단백질-결합된 포스포리파제 A2의 억제제, 메만틴, 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 조성물.
  71. 제 65 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제2 치료제가 치료 약물 표적(36-39 페이지), 알칸설폰산 및 알칸올황산(39-51 페이지), 콜린에스테라제 억제제(51-56 페이지), NMDA 수용체 길항물질(56-58 페이지), 에스트로젠(58-59 페이지), 비-스테로이드성 소염 약물(60-61 페이지), 산화방지제(61-62 페이지), 페록시솜 증식체-활성화된 수용체(PPAR) 작용물질(63-67 페이지), 콜레스테롤-강하제(68-75 페이지); 아밀로이드 억제제(75-77 페이지), 아밀로이드 형성 억제제(77-78 페이지), 금속 킬레이터(78-79 페이지), 항-정신성 약품 및 항-우울제(80-82 페이지), 영양 보충제(83-89 페이지) 및 뇌에서 생물 활성 물질의 유용성을 증가시키는 화합물(89-93 페이지 참조) 및 전구약물(93 및 94 페이지); 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하여 WO 2004/058258(특히 16 및 17 페이지를 참조하시오)에 기재된 화합물들 중에서 선택되는 조성물.
  72. 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 결합 단편 및 담체, 희석제, 부형제 또는 안정제를 포함하는 진단 시약.
  73. 식 (A)-(L)-(C)를 갖는 면역접합체로, (A)가 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 결합 단편이고; (L)이 링커이고; (C)가 작용제이고; 상기 링커(L)이 (A)를 (C)에 연결시키는 면역접합체.
  74. 제 73 항에 있어서,
    (C)가 치료제, 영상화제, 검출제 또는 진단제인 면역접합체.
  75. (C)가 치료제인 면역접합체.
  76. 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 분자.
  77. 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 서열번호 13 내지 서열번호 25 중 어느 하나의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  78. 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 서열번호 14의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  79. 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 서열번호 16의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  80. 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 서열번호 17의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  81. 항-타우 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하고, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 서열번호 25의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  82. 제 77 항 내지 제 81 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 또한 포함하는 중쇄를 포함하는 핵산 분자.
  83. 제 78 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 또한 포함하는 중쇄를 포함하는 핵산 분자.
  84. 제 79 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 또한 포함하는 중쇄를 포함하는 핵산 분자.
  85. 제 80 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 또한 포함하는 중쇄를 포함하는 핵산 분자.
  86. 제 81 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 IgG1 불변 영역을 또한 포함하는 중쇄를 포함하는 핵산 분자.
  87. 제 79 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 IgG4 불변 영역을 또한 포함하는 중쇄를 포함하는 핵산 분자.
  88. 제 80 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 IgG4 불변 영역을 또한 포함하는 중쇄를 포함하는 핵산 분자.
  89. 항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로, 상기 LCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 상기 LCVR 또는 그의 단편이 서열번호 26, RKA의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  90. 항-타우 항체의 경쇄 가변 영역(LCVR) 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자로, 상기 LCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하고, 상기 LCVR 또는 그의 단편이 서열번호 27의 아미노산 서열에 적어도 98% 일치하는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  91. 제 89 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 인간 카파 불변 영역을 또한 포함하는 경쇄를 포함하는 핵산 분자.
  92. 제 90 항에 있어서,
    항체 또는 그의 단편이 인간 카파 불변 영역을 또한 포함하는 경쇄를 포함하는 핵산 분자.
  93. 제 77 항에 있어서,
    핵산 서열이 서열번호 13 내지 25 중 어느 하나의 HCVR을 암호화하는 핵산 분자.
  94. 제 77 항에 있어서,
    핵산 서열이 서열번호 14의 HCVR을 암호화하는 핵산 분자.
  95. 제 77 항에 있어서,
    핵산 서열이 서열번호 16의 HCVR을 암호화하는 핵산 분자.
  96. 제 77 항에 있어서,
    핵산 서열이 서열번호 17의 HCVR을 암호화하는 핵산 분자.
  97. 제 77 항에 있어서,
    핵산 서열이 서열번호 25의 HCVR을 암호화하는 핵산 분자.
  98. 제 89 항 또는 제 90 항에 있어서,
    핵산 서열이 서열번호 26 및 27 중 어느 하나의 LCVR을 암호화하는 핵산 분자.
  99. 제 77 항에 있어서,
    엄격한 조건하에서 서열번호 96-108, 111-123 및 127-139 중 어느 하나의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 엄격한 하이브리드화 조건이 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함하는 핵산 분자.
  100. 제 77 항에 있어서,
    엄격한 조건하에서 서열번호 97, 112 또는 128의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 엄격한 하이브리드화 조건이 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함하는 핵산 분자.
  101. 제 77 항에 있어서,
    엄격한 조건하에서 서열번호 99, 114 또는 130의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 엄격한 하이브리드화 조건이 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함하는 핵산 분자.
  102. 제 77 항에 있어서,
    엄격한 조건하에서 서열번호 100, 115 또는 131의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 엄격한 하이브리드화 조건이 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함하는 핵산 분자.
  103. 제 77 항에 있어서,
    엄격한 조건하에서 서열번호 108, 123 또는 139의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 엄격한 하이브리드화 조건이 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함하는 핵산 분자.
  104. 제 89 항에 있어서,
    엄격한 조건하에서 서열번호 109의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 엄격한 하이브리드화 조건이 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함하는 핵산 분자.
  105. 제 76 항에 있어서,
    엄격한 조건하에서 서열번호 110의 상보성 가닥에 하이브리드화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 엄격한 하이브리드화 조건이 65 ℃에서 5xSSPE, 1% SDS, 1x덴하르트 용액 중에서의 하이브리드화 및 2xSSC, 1% SDS 중에서 및 후속으로 65 ℃에서 0.2xSSC에 의한 세척을 포함하는 핵산 분자.
  106. 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자들의 집단으로, 상기 제1 핵산 분자가 제 77 항의 핵산 분자이고, 상기 제2 핵산 분자가 항-타우 항체의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 LCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 X72449(서열번호 65)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR1, (iii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR CDR3을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  107. 제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자들의 집단으로, 상기 제1 핵산 분자가 제 89 항의 핵산 분자이고, 상기 제2 핵산 분자가 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 HCVR 또는 그의 단편이 (i) 인간 면역글로불린 M65092(서열번호 71)로부터 유래된 프레임워크, (ii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR1, (iii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR2, 및 (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR CDR3을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  108. 제 106 항에 있어서,
    제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하고, 상기 제1 핵산 분자가 서열번호 14의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자가 서열번호 26의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  109. 제 106 항에 있어서,
    제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하고, 상기 제1 핵산 분자가 서열번호 16의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자가 서열번호 26의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  110. 제 106 항에 있어서,
    제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하고, 상기 제1 핵산 분자가 서열번호 17의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자가 서열번호 26의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  111. 제 106 항에 있어서,
    제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하고, 상기 제1 핵산 분자가 서열번호 17의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자가 서열번호 27의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  112. 제 106 항에 있어서,
    제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하고, 상기 제1 핵산 분자가 서열번호 25의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자가 서열번호 26의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  113. 제 106 항에 있어서,
    제1 핵산 분자 및 제2 핵산 분자를 포함하고, 상기 제1 핵산 분자가 서열번호 16의 항-타우 항체의 HCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제2 핵산 분자가 서열번호 27의 LCVR 또는 그의 타우-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자들의 집단.
  114. 제 77 항 내지 제 105 항 중 어느 한 항에 따른 핵산을 포함하는 벡터.
  115. 제 106 항 내지 제 111 항 중 어느 한 항에 따른 핵산의 집단을 포함하는 벡터.
  116. 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체의 중쇄 또는 결합 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터.
  117. 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체의 경쇄 또는 결합 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터.
  118. 제 114 항 내지 제 117 항 중 어느 한 항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  119. 제 118 항에 있어서,
    원핵생물인 숙주 세포.
  120. 제 118 항에 있어서,
    진핵생물인 숙주 세포.
  121. 제 106 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 핵산 분자의 집단을 포함하는 숙주 세포.
  122. 핵산이 발현되고 항체, 그의 타우-결합 단편, 중쇄 또는 경쇄가 생성되도록 제 116 항 내지 제 119 항 중 어느 한 항의 숙주 세포를 배양함을 포함하는, 인간 타우에 결합하는 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 생성 방법.
  123. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 타우-결합 단편을 포함하는 조성물, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 상기 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하는 방법.
  124. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 타우-결합 단편을 포함하는 조성물, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자의 뇌로부터 타우 응집체의 제거를 촉진하는 방법.
  125. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 타우-결합 단편을 포함하는 조성물, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 진행을 늦추는 방법.
  126. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 타우-결합 단편을 포함하는 조성물, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 AD 또는 관련 증상을 개선시키는 방법.
  127. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 타우-결합 단편을 포함하는 조성물, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 인지를 치료하거나, 예방하거나 또는 역전시키는 방법.
  128. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 타우-결합 단편을 포함하는 조성물, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 위험을 감소시키거나 또는 상기 질병의 개시를 지연시키는 방법.
  129. 제 123 항 내지 제 128 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물을 주사를 통해 투여하는 방법.
  130. 제 123 항 내지 제 129 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물을 피실험자에게 0.1 ㎎/㎏ 체중 내지 10 ㎎/㎏ 체중의 항체 또는 결합 단편의 용량으로, 매주 내지 매월, 바람직하게는 2주마다의 빈도로 투여하여, 상기 피실험자를 치료하는 방법.
  131. 제 123 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
    피실험자를, 간이 정신상태 검사(MMSE), 알쯔하이머병 평가 척도-인지(ADAS-COG), 임상의 인터뷰-기반 인상(CIBI), 신경학적 검사 배터리(NTB), 치매 장애 평가(DAD), 임상적 치매 척도(CDR-SOB), 신경정신행동검사(NPI), 양전자 단층 촬영(PET-영상화) 스캔, 및 자기 공명 영상화(MRI) 스캔으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 한 가지 유형의 평가에 의해 치료 진행에 대해서 모니터함을 또한 포함하는 방법.
  132. 제 131 항에 있어서,
    평가 유형이 신경학적 검사 배터리(NTB)인 방법.
  133. 제 131 항에 있어서,
    평가 유형이 간이 정신상태 검사(MMSE)인 방법.
  134. 제 128 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 방법.
  135. 제 128 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 방법.
  136. 제 128 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 방법.
  137. 제 128 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 방법.
  138. 제 128 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 27의 경쇄 가변 영역을 포함하는 방법.
  139. 제 128 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 27의 경쇄 가변 영역을 포함하는 방법.
  140. 제 123 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
    피실험자에게 유효량의 적어도 하나의 추가적인 치료제를 동시에 또는 연속적으로 투여함을 또한 포함하는 방법.
  141. 제 140 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 타우 펩티드, 항-베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자, 및 콜린에스테라제 억제제; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 방법.
  142. 제 141 항에 있어서,
    콜린에스테라제 억제제가 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민, 또는 영양 보충제; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염인 방법.
  143. 제 140 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 베타-아밀로이드 펩티드(예를 들어 N-말단 아밀로이드 베타 펩티드)(다른 화합물, 예를 들어 돌연변이된 디프테리아 독소에 접합될 수도, 접합되지 않을 수도 있다); 타우-펩티드, 다른 항-타우 항체, 베타-아밀로이드에 대한 항체, 예를 들어 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵, 포네주맵, 및 IVIG 면역글로불린, 에이베타 올리고머를 표적화하는 다른 면역 요법들, 타우의 과인산화를 방지하는 화합물들, 및 타우 응집체를 표적화하는 다른 능동 및 수동 면역 요법들; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 방법.
  144. 제 140 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 아밀로이드-베타 응집 억제제(예를 들어 트라미프로세이트), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어 세마가세스태트), 및 감마-세크레타제 조절제(타렌플루르빌); 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 방법.
  145. 제 140 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 아세틸콜린에스테라제 억제제(예를 들어 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린, 영양 보충제), N-메틸-D-아스파테이트(NMDA) 수용체 길항물질(예를 들어 메만틴), DNA 수복의 억제제(예를 들어 피렌제핀 또는 그의 대사산물), 전이 금속 킬레이터, 성장 인자, 호르몬, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 산화방지제, 지질 강하제, 선택성 포스포디에스테라제 억제제, 타우 응집의 억제제, 단백질 키나제의 억제제, 항-미토콘드리아 기능장애 약물의 억제제, 뉴로트로핀, 열충격 단백질의 억제제, 지방단백질-결합된 포스포리파제 A2의 억제제, 메만틴, 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자, 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 방법.
  146. 제 140 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 BACE 억제제; 무스카린산 길항물질; 콜린에스테라제 억제제; 감마 세크레타제 억제제; 감마 세크레타제 조절제; HMG-CoA 리덕타제 억제제; 비-스테로이드성 소염제; N-메틸-D-아스파테이트 수용체 길항물질; 항-아밀로이드 항체; 비타민 E; 니코틴산 아세틸콜린 수용체 작용물질; CB1 수용체 역 작용물질 또는 CB1 수용체 길항물질; 항생제; 성장 호르몬 분비촉진제; 히스타민 H3 길항물질; AMPA 작용물질; PDE4 억제제; GABAA 역 작용물질; 아밀로이드 응집의 억제제; 글리코겐 신타제 키나제 베타 억제제; 알파 세크레타제 활성의 촉진제; PDE-10 억제제, 콜레스테롤 흡수 억제제 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 방법.
  147. 제 140 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 2차 항체인 방법.
  148. 제 147 항에 있어서,
    2차 항체가 또 다른 타우 항체 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵, 포네주맵 및 IVIG 면역글로불린 중에서 선택되는 방법.
  149. 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 타우-결합 단편의, 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심되거나 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자로부터의 생물학적 샘플의 성분에의 결합을 검출하는 단계를 포함하는 상기 피실험자의 평가 방법으로, 상기 생물학적 샘플에 대한 결합의 검출이 상기 피실험자에서 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증을 가리키는 방법.
  150. 제 149 항에 있어서,
    생물학적 샘플이 생검, CSF, 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플인 방법.
  151. 핵산이 발현되고 항체 또는 그의 타우-결합 단편이 생성되도록 배양함을 포함하는, 인간 타우에 결합하는 항체 또는 그의 타우-결합 단편을 생성시키는 방법에서 제 118 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 숙주 세포의 용도.
  152. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하기 위한 약제의 제조 또는 상기 치료 방법에서 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하거나, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  153. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자의 뇌로부터 타우 응집체의 제거를 촉진하기 위한 약제의 제조 또는 상기 촉진 방법에서 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하거나, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  154. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에게 치료 유효량의 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하거나, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 진행을 늦추기 위한 약제의 제조 또는 상기 진행을 늦추는 방법에서 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하거나, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  155. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 증상을 개선시키기 위한 약제의 제조 또는 상기 개선 방법에서 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하거나, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  156. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 인지를 치료하거나, 예방하거나 또는 역전시키기 위한 약제의 제조 또는 상기 치료, 예방 또는 역전 방법에서 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하거나, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  157. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자에서 AD 또는 또 다른 타우병증의 위험을 감소시키거나 또는 상기 질병의 개시를 지연시키기 위한 약제의 제조 또는 상기 감소 또는 지연 방법에서 (1) 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하거나, 또는 (2) 제 62 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  158. 제 152 항 내지 제 157 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물을 주사를 통해 투여하는 용도.
  159. 제 150 항 내지 제 158 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물을 피실험자에게 0.01 ㎎/㎏ 체중 내지 100 ㎎/㎏ 체중의 항체 또는 결합 단편의 용량으로, 매주 내지 매월의 빈도로 투여하여, 상기 피실험자를 치료하는 용도.
  160. 제 152 항 내지 제 159 항 중 어느 한 항에 있어서,
    피실험자를, 간이 정신상태 검사(MMSE), 알쯔하이머병 평가 척도-인지(ADAS-COG), 임상의 인터뷰-기반 인상(CIBI), 신경학적 검사 배터리(NTB), 치매 장애 평가(DAD), 임상적 치매 척도(CDR-SOB), 신경정신행동검사(NPI), 양전자 단층 촬영(PET-영상화) 스캔, 및 자기 공명 영상화(MRI) 스캔으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 한 가지 유형의 평가에 의해 치료 진행에 대해서 모니터함을 또한 포함하는 용도.
  161. 제 160 항에 있어서,
    평가 유형이 신경학적 검사 배터리(NTB)인 용도.
  162. 제 160 항에 있어서,
    평가 유형이 간이 정신상태 검사(MMSE)인 용도.
  163. 제 152 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 용도.
  164. 제 152 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 용도.
  165. 제 152 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 용도.
  166. 제 152 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 용도.
  167. 제 152 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 27의 경쇄 가변 영역을 포함하는 용도.
  168. 제 152 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 타우-결합 단편이 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 27의 경쇄 가변 영역을 포함하는 용도.
  169. 제 152 항 내지 제 169 항 중 어느 한 항에 있어서,
    피실험자에게 유효량의 적어도 하나의 추가적인 치료제를 동시에 또는 연속적으로 투여함을 또한 포함하는 용도.
  170. 제 169 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 항-베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자, 및 콜린에스테라제 억제제; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 용도.
  171. 제 170 항에 있어서,
    콜린에스테라제 억제제가 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민, 또는 영양 보충제; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염인 용도.
  172. 제 169 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 베타-아밀로이드 펩티드(예를 들어 N-말단 아밀로이드 베타 펩티드)(다른 화합물, 예를 들어 돌연변이된 디프테리아 독소에 접합될 수도, 접합되지 않을 수도 있다); 베타-아밀로이드에 대한 다른 항-타우 항체, 예를 들어 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵, 포네주맵, 및 IVIG 면역글로불린, 에이베타 올리고머를 표적화하는 다른 면역 요법들, 타우의 과인산화를 방지하는 화합물들, 및 타우 응집체를 표적화하는 다른 능동 및 수동 면역 요법들; 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 용도.
  173. 제 169 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 아밀로이드-베타 응집 억제제(예를 들어 트라미프로세이트), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어 세마가세스태트), 및 감마-세크레타제 조절제(타렌플루르빌); 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 용도.
  174. 제 169 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 아세틸콜린에스테라제 억제제(예를 들어 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린, 영양 보충제), N-메틸-D-아스파테이트(NMDA) 수용체 길항물질(예를 들어 메만틴), DNA 수복의 억제제(예를 들어 피렌제핀 또는 그의 대사산물), 전이 금속 킬레이터, 성장 인자, 호르몬, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 산화방지제, 지질 강하제, 선택성 포스포디에스테라제 억제제, 타우 응집의 억제제, 단백질 키나제의 억제제, 항-미토콘드리아 기능장애 약물의 억제제, 뉴로트로핀, 열충격 단백질의 억제제, 지방단백질-결합된 포스포리파제 A2의 억제제, 메만틴, 세포사멸 방지 화합물, 금속 킬레이터, DNA 수복의 억제제, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3PDS), 세크레타제 활성제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 베타-아밀로이드 항체, 신경전달물질, 베타-시트 브레이커, 소염 분자, 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 용도.
  175. 제 167 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 BACE 억제제; 무스카린산 길항물질; 콜린에스테라제 억제제; 감마 세크레타제 억제제; 감마 세크레타제 조절제; HMG-CoA 리덕타제 억제제; 비-스테로이드성 소염제; N-메틸-D-아스파테이트 수용체 길항물질; 항-아밀로이드 항체; 비타민 E; 니코틴산 아세틸콜린 수용체 작용물질; CB1 수용체 역 작용물질 또는 CB1 수용체 길항물질; 항생제; 성장 호르몬 분비촉진제; 히스타민 H3 길항물질; AMPA 작용물질; PDE4 억제제; GABAA 역 작용물질; 아밀로이드 응집의 억제제; 글리코겐 신타제 키나제 베타 억제제; 알파 세크레타제 활성의 촉진제; PDE-10 억제제, 콜레스테롤 흡수 억제제 및 이들의 임의의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 용도.
  176. 제 169 항에 있어서,
    추가적인 치료제가 2차 항체인 용도.
  177. 제 176 항에 있어서,
    2차 항체가 또 다른 항-타우 항체, 바피뉴주맵, 솔라뉴주맵, 간테네루맵, 크레네주맵, 포네주맵 및 IVIG 면역글로불린 중에서 선택되는 용도.
  178. 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증이 있거나, 상기 질병이 있는 것으로 의심이 되거나, 또는 상기 질병의 소인이 있는 피실험자를 평가하기 위한 약제의 제조 또는 상기 평가 방법에서 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 결합 단편을 포함하는 조성물의 용도로, 상기 평가가 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항의 항체 또는 타우-결합 단편의, 상기 피실험자로부터의 생물학적 샘플의 성분에의 결합을 검출하는 단계를 포함하고, 상기 생물학적 샘플에 대한 결합의 검출이 상기 피실험자에서 알쯔하이머병 또는 또 다른 타우병증을 가리키는 용도.
  179. 제 178 항에 있어서,
    생물학적 샘플이 생검, CSF, 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플인 용도.
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