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KR20170080604A - 항-인터류킨-33 항체 및 그것의 용도 - Google Patents

항-인터류킨-33 항체 및 그것의 용도 Download PDF

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KR20170080604A
KR20170080604A KR1020177012891A KR20177012891A KR20170080604A KR 20170080604 A KR20170080604 A KR 20170080604A KR 1020177012891 A KR1020177012891 A KR 1020177012891A KR 20177012891 A KR20177012891 A KR 20177012891A KR 20170080604 A KR20170080604 A KR 20170080604A
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KR
South Korea
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amino acid
acid sequence
seq
antibody
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KR1020177012891A
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필립 이. 하쓰
메레디스 하젠
이-춘 샤오
라지타 코슬라
제럴드 알. 나카무라
다야 세샤사이
멘노 반 로케렌 캄파뉴
훙캉 시
원우 자이
잭 3세 비버스
낸시 치앙
Original Assignee
제넨테크, 인크.
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Publication date
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Abstract

본 발명은 인터류킨-33 (IL-33) 항체, 및 상기 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

항-인터류킨-33 항체 및 그것의 용도{ANTI-INTERLEUKIN-33 ANTIBODIES AND USES THEREOF}
본 발명은 항-인터류킨-33 (IL-33) 항체, 및 IL-33-매개된 장애의 치료를 포함하는 상기 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
인터류킨-33 (IL-33)는 IL33 유전자에 의해 인코딩되고, 구조적 세포, 예컨대 평활근, 상피성, 및 내피 세포에서 항시적으로 발현된 인터류킨-1 (IL-1) 사이토카인 패밀리의 구성원이다. IL-33은 대식세포 및 수지상 세포에서 염증성 인자에 의해 유도될 수 있다. 환경적인 유발, 예컨대 알러지항원, 독소, 및 병원체에 의해 야기된 세포성 스트레스는 IL-33 방출로 이어질 수 있다. 생체이용가능한 IL-33은 종양유발성 2 (ST2) 단백질 및 인터류킨-1 수용체 보조 단백질 (IL-1RAcP)의 억제로 구성된 이종이량체 IL-33 수용체 복합체와 결합하여 어댑터 단백질 골수 분화 1차 반응 88 (MyD88) 및 가능하게는 MyD88-어댑터-유사 (Mal) 단백질을 통해 AP-1 및 NF-κB 경로를 활성화시킨다. IL-33은 타고난 유형 II (ILC2) 세포, 비만 세포, 호염기구, 호산구, 및 수지상 세포를 포함하는 수많은 세포 유형을 자극하여 2형 면역력을 촉진한다.
IL-33 경로는 치료적 항-IL-33 길항제, 및 치료 방법을 포함하는 개선된 조성물을 개발할 필요가 있는 알러지-관련된 질환을 포함하는 다양한 질환에 관려하는 것으로 제안되었다.
요약
본 발명은 이중특이적 항-IL-33/항-IL-13 항체를 포함하는 항-IL-33 항체, 및 상기 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
일 측면에서, 본 발명은 약 500 pM 이하의 KD로 인간 및 사이노몰구스 원숭이 (사이노) 인터류킨-33 (IL-33) 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 100 fM 내지 약 500 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 15 pM 내지 약 180 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 15 내지 약 140 pM의 KD 로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 100 fM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 100 내지 약 500 pM의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 125 내지 약 500 pM의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 이전의 항체 중 임의의 하나는 IL-33의 하기에의 결합을 억제할 수 있다: IL-33 수용체 (예를 들면, ST2 및/또는 IL-1RAcP). 일부 구현예에서, 억제는 세포 기반 차단 검정을 사용하여 측정된다. 일부 구현예에서, 항체는 약 0.001 μg/ml 내지 약 0.5 μg/ml의 90% 저해된 농도 (IC90)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.002 μg/ml 내지 약 0.25 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.17 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.004 μg/ml이다. 일부 구현예에서, 항체는 약 800 fM 내지 약 10 pM의 50% 저해된 농도 (IC50)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, IC50은 약 1 pM 내지 약 5 pM이다. 일부 구현예에서, IC50은 약 2.5 pM이다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 nM 내지 약 5 nM의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, IC50은 약 4 nM이다. 일부 구현예에서, HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 세포는 세포 기반 차단 검정에서 사용된다. 일부 구현예에서, HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 세포는 하기의 서열을 포함하는 핵산을 포함한다: 서열식별번호: 311. 일부 구현예에서, 검정은 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 세포를 IL-33으로 처리하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-33은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함한다: 313-318. 일부 구현예에서, sST2-LZ은 세포 기반 차단 검정에서 양성 대조군으로서 사용된다. 일부 구현예에서, sST2-LZ는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 서열식별번호: 310.
상기 측면의 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); 및 (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 16); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQTPEKRLEWVA (서열식별번호: 17); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR (서열식별번호: 18); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVAVSS (서열식별번호: 19). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12) 또는 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 20); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13) 또는 WVRQAPGKGLEWVS (서열식별번호: 21); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 22), RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 23), RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 24), 또는 RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC (서열식별번호: 29); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 30); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC (서열식별번호: 31); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTKLEIK (서열식별번호: 32). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 33), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 34), 또는 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 35); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28).
상기 측면의 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66) 또는 SIYYSGRTYYNPALKS (서열식별번호: 67); 및 (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 76); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGNGTTVTVSS (서열식별번호: 78). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72), QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 76) 또는 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 77); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75) 또는 WGNGTTVTVSS (서열식별번호: 78). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSX1S (서열식별번호: 62) (여기서 X1 는 Met, Leu, 또는 Val임); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDX1VKG (서열식별번호: 63) (여기서 X1 는 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGX1X2FFEV (서열식별번호: 64) (여기서 X1 는 Asn 또는 Asp, 및 X2 는 Trp 또는 Phe임); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 36. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 37. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 16); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQTPEKRLEWVA (서열식별번호: 17); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR (서열식별번호: 18); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVAVSS (서열식별번호: 19). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 38. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC (서열식별번호: 29); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 30); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC (서열식별번호: 31); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTKLEIK (서열식별번호: 32). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 39. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12) 또는 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 20); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13) 또는 WVRQAPGKGLEWVS (서열식별번호: 21); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 22), RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 23), RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 24), 또는 RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 40. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 33), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 34), 또는 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 35); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 41.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 38의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 39의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 41의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPX1LKS (서열식별번호: 90) (여기서 X1은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPALKS (서열식별번호: 67); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 84. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 85. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 86. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 87. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 76); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGNGTTVTVSS (서열식별번호: 78). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 88. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 89.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 86의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 88의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 89의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYX1MN (서열식별번호: 97) (여기서 X1 는 Trp, Phe, 또는 Tyr임); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNX1YX2THYAESVKG (서열식별번호: 98) (여기서 X1 는 Asn, Asp, Ser, 또는 Ala이고, 그리고 X2은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGX1X2YINV (서열식별번호: 99) (여기서 X1 는 Asp 또는 Asn이고, 그리고 X2 는 Trp 또는 Phe임); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGX1SFLN (서열식별번호: 100) (여기서 X1은 Met, Val, 또는 Leu임); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNNYSTHYAESVKG (서열식별번호: 104); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGDWYINV (서열식별번호: 109); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGMSFLN (서열식별번호: 112); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNNYSTHYAESVKG (서열식별번호: 104); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWYINV (서열식별번호: 110); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGMSFLN (서열식별번호: 112); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNDYSTHYAESVKG (서열식별번호: 105); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWYINV (서열식별번호: 110); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGVSFLN (서열식별번호: 115); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 134의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 135의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 117); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWMA (서열식별번호: 119); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR (서열식별번호: 121); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 124). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 134. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 126); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 128); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC (서열식별번호: 130); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 132). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 135.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 136의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 137의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 118); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWMA (서열식별번호: 120); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 122) 또는 RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 123); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 125). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 138. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (서열식별번호: 127); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 129); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (서열식별번호: 131); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 133). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 139.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 134의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 135의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 136의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 137의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 138의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 139의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLX1X2INYVKDYAESVKG (서열식별번호: 161) (여기서 X1은 Asn 또는 Ser이고, 그리고 X2은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLNSINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 159); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLSSINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 162); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLNAINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 163); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 183의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 184의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN (서열식별번호: 167);
(b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWVA (서열식별번호: 168); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR (서열식별번호: 169); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 170). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 183. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 175); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQSPKLLIY (서열식별번호: 176); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC (서열식별번호: 177); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 178). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 184.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 185의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 186의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFN (서열식별번호: 171); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 172); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCIR (서열식별번호: 173); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 174). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 185. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 179); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGKAPKLLIY (서열식별번호: 180); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 181); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 182). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 186. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 187. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 188. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 189. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 190.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 183의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 184의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 185의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 186의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 187의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 188의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 189의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 190의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKX1X2DTFYNQNFKD (서열식별번호: 192) (여기서 X1은 Asn 또는 Ser이고, 그리고 X2은 Gly 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKNGDTFYNQNFKD (서열식별번호: 193); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKSGDTFYNQNFKD (서열식별번호: 194) 또는 DINPKNADTFYNQNFKD (서열식별번호: 195); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 216의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 217의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS (서열식별번호: 200); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVKQSHGKSLESIG (서열식별번호: 201); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR (서열식별번호: 202); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVAA (서열식별번호: 203). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 216. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 208); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKAGNNPKLLIY (서열식별번호: 209); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 210); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTNLELK (서열식별번호: 211). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 217.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 218의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 219의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFS (서열식별번호: 204); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGQGLESIG (서열식별번호: 205); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RATLTIDKSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR (서열식별번호: 206); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 207). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 218. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 212); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKNPKLLIY (서열식별번호: 213); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 214); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 215). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 219.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 216의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 217의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.또 다른 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 220.또 다른 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 219.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 218의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 219의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 220의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 219의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SYWIN (서열식별번호: 222); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIAPGSGFISYNELFKD (서열식별번호: 223); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: EFYYGSFYGGFAY (서열식별번호: 224); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNIHVWLS (서열식별번호: 225); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: KASTLHT (서열식별번호: 226); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSSPLT (서열식별번호: 227).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 236의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 237의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT (서열식별번호: 228); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIKQRPGQGLEWIG (서열식별번호: 229); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR (서열식별번호: 230); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSA (서열식별번호: 231). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 236. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 232); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGNIPKLLIY (서열식별번호: 233); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 234); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGAGTKLEVK (서열식별번호: 235). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 237.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 247의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT (서열식별번호: 238); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGQGLEWIG (서열식별번호: 239); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTITRDTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR (서열식별번호: 240); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 241). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 246. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 242); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKLLIY (서열식별번호: 243); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 244); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 245). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 247.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 236의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 237의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 247의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAX1H (서열식별번호: 248) (여기서 X1은 Met 또는 Ile임); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSX1X2NX3YATX4YX5ASVKG (서열식별번호: 249) (여기서 X1은 Arg 또는 Lys이고, X2은 Asn, Thr, 또는 Gly이고, X3은 Asn 또는 Ser이고, X4은 Ala 또는 Glu이고, 그리고 X5은 Ala 또는 Asp임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: X1X2X3X4PFDY (서열식별번호: 250) (여기서 X1은 Leu 또는 Gln이고, X2 는 Gln, Gly, 또는 Phe이고, X3 는 Gln 또는 Gly이고, 그리고 X4 는 Pro 또는 Asp임); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHX1X2YPX3T (서열식별번호: 253) (여기서 X1은 Asp 또는 Ser이고, X2은 Ser 또는 Ile이고, 그리고 X3은 Leu 또는 Pro임). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAMH (서열식별번호: 254); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSRNNNYATAYAASVKG (서열식별번호: 255); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: LQQPPFDY (서열식별번호: 256); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHDSYPLT (서열식별번호: 257). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAIH (서열식별번호: 258); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSRTNNYATEYDASVKG (서열식별번호: 259); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: LGQPPFDY (서열식별번호: 260); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHSIYPPT (서열식별번호: 261). 일부 구현예에서, 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAMH (서열식별번호: 254); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSKGNSYATAYAASVKG (서열식별번호: 262); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: QFGDPFDY (서열식별번호: 263); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHDSYPLT (서열식별번호: 257).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 282의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 283의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 264); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQASGKGLEWVG (서열식별번호: 267); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR (서열식별번호: 269); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 282. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 273); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 277); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 280). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 283.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 284의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 285의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGDLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 265); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQASGKGLEWVG (서열식별번호: 267); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKRTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR (서열식별번호: 270); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 284. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 274); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 278); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 281). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 285.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 286의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 287의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 266); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVG (서열식별번호: 268); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFSISRDDSKRTAYLQMSSLKTEDSAVYYCAR (서열식별번호: 271); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272). 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 286. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 추가로 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: AIRITQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 275); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 279); 및 (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 280). 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 287.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 282의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 283의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 284의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 285의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 서열식별번호: 286의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 287의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 288의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 289의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 290의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 291의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 292의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 293의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 294의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 295의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 인간 또는 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 또는 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 nM 이하의 KD로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 100 fM 내지 약 1 nM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 75 pM 내지 약 180 Pm의 KD 로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 75 내지 약 140 pM의 KD 로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 100 fM 내지 약 1 nM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 200 내지 약 500 pM의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 250 내지 약 500 pM의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제는 세포 기반 차단 검정을 사용하여 측정된다. 일부 구현예에서, 항체는 약 0.001 μg/ml 내지 약 0.5 μg/ml의 90% 저해된 농도 (IC90)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.002 μg/ml 내지 약 0.25 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.17 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.004 μg/ml이다.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 무당화 부위 돌연변이를 포함한다.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 단클론성, 인간, 인간화된, 또는 키메라성이다.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 IL-33에 결합하는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 (Fab')2 단편으로 구성된 군으로부터 선택된다.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 전장 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG 항체이다. 일부 구현예에서, IgG 항체는 IgG1 항체이다. 일부 구현예에서, IgG 항체는 IgG4 항체이다. 일부 구현예에서, IgG4 항체는 힌지 영역에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 치환 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 S228 (EU 넘버링)에 있다. 일부 구현예에서, 치환 돌연변이는 S228P 돌연변이이다.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 단일특이적 항체이다. 이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 다중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 제2 생물학적 분자에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하고, 상기 제2 생물학적 분자는 인터류킨-13 (IL-13), 인터류킨-4 (IL-4), 인터류킨-5 (IL-5), 인터류킨-17 (IL-17), 인자 D, HtrA1, VEGF, 및 VEGF 수용체로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 생물학적 분자는 인자 D이다. 일부 구현예에서, 제2 생물학적 분자는 HtrA1이다. 일부 구현예에서, 제2 생물학적 분자는 VEGF이다. 일부 구현예에서, 제2 생물학적 분자는 IL-13이다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301). 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 302. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함한다: 303.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33 및 IL-13 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6); 및 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33 및 IL-13 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71); 및 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301).
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33 및 IL-13 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33 및 IL-13 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33 및 IL-13 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 서열식별번호: 306의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제1 경쇄는 서열식별번호: 307의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 서열식별번호: 304의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제2 경쇄는 서열식별번호: 305의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제2 중쇄 및 제2 경쇄.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33 및 IL-13 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 특징으로 하고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 서열식별번호: 308의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제1 경쇄는 서열식별번호: 309의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 서열식별번호: 304의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제2 경쇄는 서열식별번호: 305의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제2 중쇄 및 제2 경쇄.
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 항원-결합 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 (Fab')2 단편으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 Fab이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에서 기재된 항체 중 임의의 것을 인코딩하는 단리된 핵산을 특징으로 한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 항체를 발현시키기 위한 단리된 핵산을 포함하는 벡터 (예를 들면, 발현 벡터)를 특징으로 한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 이전의 핵산 및/또는 벡터를 포함하는 숙주세포를 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 숙주세포는 포유동물 세포이다. 일부 구현예에서, 포유동물 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포이다. 일부 구현예에서, 숙주세포는 원핵 세포이다. 일부 구현예에서, 원핵 세포는 E. 콜리이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에서 기재된 항체 중 임의의 것을 생산하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 배양 배지에서 이전의 벡터 중 임의의 것 (예를 들면, 발현 벡터)을 포함하는 숙주세포를 배양하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 항체를 상기 숙주세포 또는 상기 배양 배지로부터 회수하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 이전의 항체 중 임의의 하나를 포함하는 조성물을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 조성물은 추가로, 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 조성물은 약제학적 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 추가로, 하기를 포함한다: ST2 결합 길항제, 인자 D 결합 길항제, HtrA1 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 인자 D 결합 길항제를 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 HtrA1 길항제를 포함한다. 일부 구현예에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 VEGF 길항제를 포함한다. 일부 구현예에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
일부 측면에서, 이전의 항체 중 임의의 하나는 약제로서 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 이전의 항체 중 임의의 하나는 IL-33-매개된 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-33-매개된 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 및 안과적 장애. 일부 구현예에서, 염증성 병태는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 천식, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 및 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD). 일부 구현예에서, 면역 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 천식, 류마티스성 관절염, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 및 간 질환. 일부 구현예에서, 섬유성 질환은 특발성 폐 섬유증 (IPF)이다. 일부 구현예에서, 호산구 장애는 호산구-관련된 위장 장애 (EGID)이다. 일부 구현예에서, EGID는 호산구 식도염이다. 일부 구현예에서, 감염은 연충 감염, 원생동물 감염, 또는 바이러스성 감염이다. 일부 구현예에서, 원생동물 감염은 라이쉬마니아 메이저 감염이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염 또는 인플루엔자 감염이다. 일부 구현예에서, 통증은 염증성 통증이다. 일부 구현예에서, 중추신경계 장애는 알츠하이머병이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 유방 종양, 결장 종양, 전립선 종양, 폐 종양, 신장 종양, 간 종양, 췌장 종양, 위 종양, 장 종양, 뇌종양, 골 종양, 및 피부 종양. 일부 구현예에서, 안과적 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 연령 관련 황반 변성 (AMD), 눈의 망막증, 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염, 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염이다. 일부 구현예에서, AMD는 습성 AMD, 건조 AMD, 또는 지도형 위축증 (GA)이다. 일부 구현예에서, AMD는 중간 AMD 또는 진행성 AMD이다. 일부 구현예에서, 눈의 망막증은 당뇨 망막병증 (DR) 또는 미숙아 망막증 (ROP)이다. 일부 구현예에서, 눈의 망막증은 고-고도 DR이다. 일부 구현예에서, 결막염은 감염성 결막염 또는 비-감염성 결막염이다. 일부 구현예에서, 결막염은 알러지성 결막염이다.
일부 측면에서, 이전의 항체 중 임의의 하나는 IL-33-매개된 장애를 치료하는 약제의 제조에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-33-매개된 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 및 안과적 장애. 일부 구현예에서, 염증성 병태는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 천식, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 및 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD). 일부 구현예에서, 면역 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 천식, 류마티스성 관절염, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 및 간 질환. 일부 구현예에서, 섬유성 질환은 특발성 폐 섬유증 (IPF)이다. 일부 구현예에서, 호산구 장애는 호산구-관련된 위장 장애 (EGID)이다. 일부 구현예에서, EGID는 호산구 식도염이다. 일부 구현예에서, 감염은 연충 감염, 원생동물 감염, 또는 바이러스성 감염이다. 일부 구현예에서, 원생동물 감염은 라이쉬마니아 메이저 감염이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염 또는 인플루엔자 감염이다. 일부 구현예에서, 통증은 염증성 통증이다. 일부 구현예에서, 중추신경계 장애는 알츠하이머병이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 유방 종양, 결장 종양, 전립선 종양, 폐 종양, 신장 종양, 간 종양, 췌장 종양, 위 종양, 장 종양, 뇌종양, 골 종양, 및 피부 종양. 일부 구현예에서, 안과적 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 연령 관련 황반 변성 (AMD), 눈의 망막증, 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염, 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염이다. 일부 구현예에서, AMD는 습성 AMD, 건조 AMD, 또는 지도형 위축증 (GA)이다. 일부 구현예에서, AMD는 중간 AMD 또는 진행성 AMD이다. 일부 구현예에서, 눈의 망막증은 당뇨 망막병증 (DR) 또는 미숙아 망막증 (ROP)이다. 일부 구현예에서, 눈의 망막증은 고-고도 DR이다. 일부 구현예에서, 결막염은 감염성 결막염 또는 비-감염성 결막염이다. 일부 구현예에서, 결막염은 알러지성 결막염이다. 일부 구현예에서, 약제는 하기와 함께 사용하기 위해 제형화된다: ST2 결합 길항제, 인자 D 결합 길항제, HtrA1 결합 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제. 일부 구현예에서, 약제는 인자 D 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 약제는 HtrA1 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 약제는 VEGF 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 지도형 위축증 (GA)을 치료하는 약제의 제조에서의, IL-33 및 인자 D 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 이전의 항체 중 임의의 하나는 지도형 위축증 (GA)을 치료하는 약제의 제조에서 사용될 수 있고, 상기 약제는 인자 D 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 지도형 위축증 (GA), AMD (습식 또는 건식), DR, PCV, 또는 ROP를 치료하기 위한 약제의 제조에서의, IL-33 및 HtrA1 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 이전의 항체 중 임의의 하나는 지도형 위축증 (GA), AMD (습식 또는 건식), DR, PCV, 또는 ROP 를 치료하는 약제의 제조에서 사용될 수 있고, 상기 약제는 HtrA1 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 습성 AMD를 치료하는 약제의 제조에서의, IL-33 및 VEGF 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 이전의 항체 중 임의의 하나는 습성 AMD를 치료하는 약제의 제조에서 사용될 수 있고, 상기 약제는 VEGF 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-33-매개된 장애 in 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 이전의 항체 중 임의의 하나를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-33-매개된 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 및 안과적 장애. 일부 구현예에서, 염증성 병태는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 천식, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 및 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD). 일부 구현예에서, 면역 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 천식, 류마티스성 관절염, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 및 간 질환. 일부 구현예에서, 섬유성 질환은 특발성 폐 섬유증 (IPF)이다. 일부 구현예에서, 호산구 장애는 호산구-관련된 위장 장애 (EGID)이다. 일부 구현예에서, EGID는 호산구 식도염이다. 일부 구현예에서, 감염은 연충 감염, 원생동물 감염, 또는 바이러스성 감염이다. 일부 구현예에서, 원생동물 감염은 라이쉬마니아 메이저 감염이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염 또는 인플루엔자 감염이다. 일부 구현예에서, 통증은 염증성 통증이다. 일부 구현예에서, 중추신경계 장애는 알츠하이머병이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 유방 종양, 결장 종양, 전립선 종양, 폐 종양, 신장 종양, 간 종양, 췌장 종양, 위 종양, 장 종양, 뇌종양, 골 종양, 및 피부 종양. 일부 구현예에서, 안과적 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 연령 관련 황반 변성 (AMD), 눈의 망막증, 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염, 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염이다. 일부 구현예에서, AMD는 습성 AMD, 건조 AMD, 또는 지도형 위축증 (GA)이다. 일부 구현예에서, AMD는 중간 AMD 또는 진행성 AMD이다. 일부 구현예에서, 눈의 망막증은 당뇨 망막병증 (DR) 또는 미숙아 망막증 (ROP)이다. 일부 구현예에서, 눈의 망막증은 고-고도 DR이다. 일부 구현예에서, 결막염은 감염성 결막염 또는 비-감염성 결막염이다. 일부 구현예에서, 결막염은 알러지성 결막염이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 대상체에게 ST2 결합 길항제, 인자 D 결합 길항제, HtrA1 결합 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 대상체에게 인자 D 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 대상체에게 HtrA1 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 대상체에게 VEGF 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 지도형 위축증 (GA)을 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 인자 D 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 지도형 위축증 (GA)을 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 이전의 항체 중 임의의 하나를 투여하는 것을 포함한다 및 치료적 유효량의 인자 D 결합 길항제. 일부 구현예에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 지도형 위축증 (GA), AMD (습식 또는 건식), DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 HtrA1 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 지도형 위축증 (GA), AMD (습식 또는 건식), DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 이전의 항체 중 임의의 하나 및 치료적 유효량의 HtrA1 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 습성 AMD를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 VEGF 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 습성 AMD를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 이전의 항체 중 임의의 하나 및 치료적 유효량의 VEGF 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다.
이전의 방법 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 하기에 의해 투여된다: 피하로, 정맥내로, 근육내로, 국소로, 경구로, 경피로, 복강내로, 안와내로, 이식으로, 흡입으로, 척추강내로, 심실내로, 비강내로, 초자체내로, 안구내로, 안구주위로, 결막으로, 결막하로, 테논낭하로, 전방내로, 망막하로, 안구뒤로, 또는 소관내로. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 인간이다.
도면의 간단한 설명
도 1A는 세포-기반 IL-33 차단 분석의 개략도를 나타내는 도면이다. SEAP는 NF-κB/AP-1 분비된 알칼리성 포스파타제에 대한 리포터 유전자로서 사용된다. 가용성 ST2 (sST2)는 양성 대조군으로서 사용된다.
도 1B는 인간 IL-33에 대한 세포-기반 IL-33 차단 분석의 결과를 나타내는 그래프이다.
도 1C는 시노몰구스 원숭이 (시노) IL-33에 대한 세포-기반 IL-33 차단 분석의 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 지정된 항-IL-33 항체 클론에 대한 세포-기반 IL-33 차단 분석의 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 지정된 친계 (parental) 및 인간화된 항-IL-33 항체에 대한 세포-기반 IL-33 차단 분석의 결과 (IC50 및 IC90)를 나타내는 표이다.
도 4A는 RNA-seq 분석을 위해 해부된 황반 및 주변부 망막을 나타내는 이미지이다. 상부 및 하부 측두 혈관궁 (superior and inferior temporal vascular arcade) 사이의 황반 영역이 해부용 가위를 사용하여 주변 기저부 (peripheral fundus)로부터 분리되었다. RNA는 RNA-seq를 위해 황반 및 주변부 망막 조직 모두로부터 단리되었다. 점선으로 된 윤곽은 황반의 영역을 나타내고, 채워진 원은 중심와 (fovea)의 영역을 나타낸다. 화살표는 시신경 유두 (optic disc)의 위치를 나타낸다.
도 4B는 건강한 공여체 눈의 황반 및 주변부 망막에서 IL-1α, IL-1β, IL-33, 및 IL-18의 발현을 나타내는 그래프이다. 정상적인 공여체 눈의 황반 (n=14) 및 주변부 (n=22) 망막이 단리되었고 RNA가 RNA-seq에 의해 분석되었다. 데이터는 백만개의 총 리드 당 킬로베이스 당 리드 (RPKM)로서 제시된다. 수평 막대는 평균을 나타낸다. **, P<0.01; ****, P<0.0001; 비쌍형 양측 스투던트 t 검정 (unpaired two-tailed Student's t test).
도 5A은 실선 및 점선에 의해 각각 표시된 정량 분석 (도 5B 참고)에 의해 연구된 중심부 및 주변부 영역을 갖는 눈의 대표적인 단면을 나타내는 이미지이다. 화살표는 중심와 (fovea) 및 섬모체 (ciliary body)를 나타낸다. 막대, 5 mm.
도 5B 및 5C는 84세의 남성 공여체로부터의 대조군 눈의 중심부 (도 5B) 및 주변부 (도 5C) 망막에서 IL-33 (녹색), 비멘틴 (적색), 및 GFAP (황색)의 면역조직화학 삼중 염색을 나타내는 이미지이다. 4',6-디아미디노-2-페닐인돌 (DAPI) 염색은 청색으로 나타나 있다. 화살표는 내부 핵 층 (INL)에서의 IL-33+ 뮬러 세포를 나타내고; 폐쇄된 화살촉은 망막 색소 상피 (RPE)에서의 IL-33+ 세포를 나타내며; 개방된 화살촉은 맥락막 맥관구조에서의 IL-33+ 세포를 나타내고; 꺽쇄 괄호는 신경절 세포 층 (GCL)에서의 IL-33+ 별아교세포를 나타낸다. 막대, 50 μm.
도 5D는 중심부 및 주변부 영역의 각 망막 층에서 IL-33+ 세포의 정량화를 나타내는 그래프이다. IL-33+ 세포는 67-89세 연령 (중위 연령 84세, 5명의 남성 및 2명의 여성)의 정상 인간 공여체의 7개의 눈으로부터 중심부 및 주변부 영역 내에서 대략 500 μm 구획을 따라 정량화되었다. 내부 핵 층 (INL) 및 망막 색소 상피 (RPE)에서의 IL-33+ 세포의 수는 주변부 망막에 비해 중심부 망막에서 더 많았다. GCL, 신경절 세포 층; ONL, 외부 핵 층. *, P<0.05; ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 비쌍형 양측 스투던트 t 검정.
도 5E는 대조군 공여체 눈의 중심부 내의 GCL, INL, RPE, 및 맥락막에서 IL-33+ 세포의 일련의 대표적인 고배율 이미지이다. IL-33 (녹색), 비멘틴 (적색), 및 GFAP (황색) 공동-염색은 IL-33+ 별아교세포 (GFAP+, 꺽쇄 괄호) 및 IL-33+ 뮬러 세포 (비멘틴+, 화살표)를 나타내었다. 맥락막 맥관구조의 IL-33+ 내피 세포 (개방된 화살촉)가 IL-33 (적색) 및 PLVAP (녹색) 공동-염색에 의해 나타나 있다. 폐쇄된 화살촉, IL-33+ RPE. DAPI 염색은 청색으로 나타나 있다. 막대, 10 μm.
도 6A은 안구 질환의 병력이 없는 84세의 남성의 대조군 인간 공여체 눈, 및 AMD로 진단된 82세 여성 공여체의 눈으로부터의 중심부 망막에서 IL-33 (녹색), Iba1 (적색), 및 GFAP (황색)에 대한 형광 면역조직화학 삼중 염색을 나타내는 일련의 대표적인 이미지이다. IL-33+ 뮬러 세포 및 단핵 식균 세포 (Iba1+ 세포)의 수는 하기와 비교하여 망막 변성 (AMD: 병변)의 영역에서 유의미하게 증가되었다: 망막 변성을 나타내지 않은 동일한 공여체의 인접한 영역 (AMD: 비-병변), 또는 대조군 공여체 눈의 중심부 망막 (대조군:중심부). 화살표, IL-33+ 뮬러 세포; 화살촉, 망막하 공간에서 Iba1+ 세포. DAPI (청색), 핵 염색.막대, 100 μm.
도 6B은 대조군 눈의 중심부 망막 및 AMD 눈의 병변 및 비-병변 영역에서 IL-33 (녹색), Iba1 (적색), 및 GFAP (황색)의 면역조직화학을 나타내는 일련의 대표적인 고배율 이미지이다. 명시야 (BF) 이미지는 AMD 병변 부위에서 RPE 손실을 나타낸다. 막대, 50 μm.
도 6C-6E는 67-89세 (중위 연령 84세)의 7명의 대조군 인간 공여체의 중심부 망막 및 82-92세 (중위 연령 86세)의 7명의 AMD 공여체로부터의 눈의 병변 및 비-병변 영역 내의 대략 500 μm-긴 구획을 따라 계수된 INL에서의 IL-33+ 뮬러 세포 (도 6C), 맥락막에서 IL-33+ 세포 (도 6D), 및 망막에서 Iba1+ 세포 (도 6E)의 정량을 나타내는 그래프이다. **, P<0.01; ***, P<0.001, ****, P<0.0001; 투키 사후 검정(Tukey's post-test)을 갖는 일원 (one-way) ANOVA. 수평 막대는 평균을 나타낸다.
도 6F는 인간 AMD 환자로부터의 유리체에서 증가된 IL-33 수준을 나타내는 그래프이다. IL-33 농도는 ELISA에 의해 AMD 환자 (n=6, 1명의 남성 및 5명의 여성, 연령 68-91세, 중위 연령 79세), 황반 주름 (macular pucker)을 갖는 대조군 환자 (n=12, 3명의 남성 및 9명의 여성, 연령 56-79세, 중위 연령 72세), 및 황반 원공 (macular hole)을 갖는 대조군 환자 (n=21, 5명의 남성 및 16명의 여성, 연령 46-75세, 중위 연령 65세)로부터 수득된 유리체 샘플에서 결정되었다. ****, P<0.0001; 투키 사후 검정을 갖는 일원 ANOVA. 수평 막대는 평균을 나타낸다.
도 7A는 스프래그-다우리 (SD) 랫트 망막에서 IL-33 (갈색) 및 비멘틴 (적색)의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 좌측 패널의 이미지에서 화살표는 IL-33+ 뮬러 세포를 가리킨다. 좌측 패널의 삽입도는 IL-33+ 뮬러 세포 (비멘틴+)를 나타낸다. 중심부 및 주변부 망막에서의 INL, RPE, GCL, 및 맥락막 내의 IL-33+ 세포는 ~500 μm의 긴 구획을 따라 계수되었다. 이 정량 결과가 우측 패널에 나타나 있다. 막대, 10 μm. ND, 미검출.
도 7B는 BALB/c 마우스에서 IL-33 (갈색)의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 좌측 패널의 이미지에서 화살표는 IL-33+ 뮬러 세포를 가리킨다. 중심부 및 주변부 망막에서의 INL, RPE, GCL, 및 맥락막 내의 IL-33+ 세포는 ~500 μm의 긴 구획을 따라 계수되었다. 이 정량 결과가 우측 패널에 나타나 있다. 막대, 10 μm.
도 7C는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은 BALB/c 마우스의 망막에서의 IL-1 패밀리 유전자 (IL-1α, IL-1β, IL-33, 및 IL-18)의 발현을 나타내는 그래프이다. 각 데이터 포인트는 각각의 마우스 (n=5)를 나타낸다. 상기 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 실험을 나타낸다.
도 7D은 GFAP- 및 비멘틴-특이적 항체 또는 대조군 항체를 사용한 세포내 염색 후 유세포분석법에 의해 측정된 rMC-1 세포에서의 GFAP 및 비멘틴의 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 활성화된 뮬러 세포는 GFAP+이다.
도 7E는 rMC-1 세포의 핵 ("nucl") 및 세포질 ("cyto") 분획에서의 IL-33 발현을 나타내는 웨스턴 블랏이다. IL-33의 전장 (IL-33p30) 및 가공된 형태 (IL-33p19)가 핵에서 검출되었으나, IL-33p19는 세포질에만 존재하였다. 상기 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 실험을 나타낸다.
도 7F는 qPCR에 의해 고글루코오스 배지 ("HG")에서 배양된 rMC-1 세포에서 GFAP 발현의 시간 경과 분석의 결과를 나타내는 그래프이다. GFAP mRNA는 β-액틴 mRNA에 대해 정규화되었다. 0시간에의 GFAP 발현은 1로 설정되었다. 데이터는 삼반복 실험의 평균 ± SEM을 나타낸다. ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 일원 ANOVA 후 던넷 사후-검정.
도 7G는 고글루코오스 (HG) 및 저글루코오스 (LG)-함유 배지에서 배양된 rMC-1 세포에서 IL-33 분비의 ELISA (좌측 패널) 및 웨스턴 블랏 (우측 패널) 분석을 나타낸다. IL-33p19는 랫트 유리체 및 rMC-1 배양 상청액 모두에서 존재하였다. 나타낸 데이터는 삼반복 웰의 평균 ± SEM이며 3개의 독립적인 실험을 나타낸다. ***, P<0.001; ****, P<0.0001.
본페로니 사후-검정을 갖는 이원 ANOVA. 상기 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 실험을 나타낸다.
도 7H는 HG 배지에서 배양된 rMC-1 세포에서의 증가된 IL-33p19 분비 (도 7G 참고)가 증가된 세포 사멸과 관련이 없음을 보여주는 그래프이다. 세포 생존력은 아넥신 V 및 프로피듐 아이오다이드 (PI) 염색의 유세포분석법에 의해 평가되었다. 살아있는 세포는 아넥신 V- PI-으로서 게이팅되었다. 나타낸 데이터는 삼반복 웰의 평균 ± SEM이다. 상기 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 실험을 나타낸다.
도 7I은 광수용체 세포사멸을 검출하기 위한 망막 구획의 말단 데옥시뉴클레오티딜 전달효소 dUTP 닉 말단 라벨링 (TUNEL) 염색 (갈색)을 나타내는 일련의 이미지이다. 스프래그-다우리 (SD) 랫트는 지정된 바와 같이 며칠 동안 빛 (1200 lux)에 노출되었다. 화살표는 TUNEL+ 광수용체를 나타낸다. 막대, 50 μm.
도 7J은 유세포분석법에 의해 간상체 (좌측 패널) 및 원추체 (우측 패널)의 정량을 나타내는 일련의 그래프이다. 각 데이터 포인트는 개별적인 랫트 (n=8/시점)를 나타낸다. *, P<0.05; ***, P<0.001; ****, P<0.0001.
도 7K는 CLE가 랫트 유리체 (좌측 패널) 및 망막 (우측 패널)에서 IL-33p19의 발현 및 분비를 증가시킨다는 것을 나타낸다. SD 랫트는 최대 10일간 밝은 빛에 노출되었다 (개략도 참고). 유리체 및 망막에서의 IL-33 발현은 ELISA 및 웨스턴 블랏 (WB)에 의해 분석되었다. 망막에서 IL-33p19 대 IL-33p30의 비는 ImageJ 소프트웨어로 정량화되었다. 재조합 랫트 IL-33 단백질 (rrIL-33) (a.a. 109-264; 대략 18 kDa)이 검출 항체에 대한 양성 대조군으로서 사용되었다. ELISA에서의 각 데이터 포인트는 2개의 독립적인 실험 중 하나로부터의 개별적인 랫트 (n=8/시점)를 나타낸다. ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 던넷 사후-검정을 갖는 일원 ANOVA. 상기 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 실험을 나타낸다.
도 7L은 활성화된 rMC-1 세포 및 빛-손상된 망막 (CLE)에서 IL-33 전사체의 RT-PCR 분석을 나타내는 이미지이다. FL, 전장.
도 7M은 dsRed로 대체된 IL-33 사이토카인 도메인 및 온전한 핵 국재화 서열 (NLS) 및 염색질 결합 도메인 (CBD)을 갖는 IL33tm2 / tm2 마우스가 INL에서 뮬러 세포의 핵에서 IL-33 N-term-dsRed의 국재화를 나타낸다는 것을 보여준다. 이미지 (좌측 패널)는 IL33tm2 / tm2 망막 플랫 마운트 (flat-mount)의 공초점 현미경 이미지의 Z-단면도이다. dsRed 신호는 적색으로 나타나 있으며; DAPI 신호는 청색으로 나타나 있다. 화살표는 IL-33+ 뮬러 세포를 나타낸다. IL33tm2 / tm2 망막의 유세포분석법 (중간 패널)은 뮬러 세포 (MC)에서 IL-33의 발현을 확인시켜주었으나, 간상체, 신경절 세포 (RGC), 또는 미세아교 (MGL)에서는 그렇지 않았다. IL-33 N-term-dsRed는 CLE 이후에 가공되었다. IL33tm2 / tm2 뮬러 세포의 dsRed 평균 형광 강도 (MFI) 뿐만 아니라 CLE의 d0 및 d7에서의 세포수가 유세포분석법에 의해 측정되었다 (우측 패널). 데이터는 IL33+/+ 마우스에 의해 정규화된 IL33tm2 / tm2 마우스에서 dsRed의 MFI를 나타낸다. 각 데이터 포인트는 2개의 실험으로부터 모은 개별적인 마우스 (n=6-7/그룹)를 나타낸다. Rho, 로돕신; FCS, 전방 산란. ****, P<0.0001; 비쌍형 양측 스투던트 t 검정. 상기 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 실험을 나타낸다.
도 8A은 CLE 후 막-결합 (ST2L, 좌측 패널) 및 가용성 ST2 (sST2, 우측 패널)의 증가된 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 여러 날 동안 빛에 노출된 BALB/c 마우스로부터의 망막 RNA는 ST2L 및 sST2에 특이적인 프로브를 사용한 qPCR에 의해 분석되었고, 18s rRNA 발현에 의해 정규화되었다. ST2 발현의 배수 변화가 비-노출된 마우스 (d0)에서의 ST2 발현과 대비하여 나타나 있다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=5-6/시점)를 나타낸다. 데이터는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. *, P<0.05; ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 던넷 사후-검정을 갖는 일원 ANVA.
도 8B은 다양한 망막 세포 집단에서의 ST2 발현의 유세포분석법을 나타내는 일련의 그래프이다. 상기 결과는 7일 광노출 후 활성화된 뮬러 세포 (MC)에서 ST2의 배타적인 발현을 나타내었다. ST2는 활성화된 뮬러 세포 (GFAP+ 비멘틴+ MC) 상에서만 발현되었고, 휴지기 (resting) 뮬러 세포 (GFAP- 비멘틴+ MC), 미세아교 (CD11b+ CD45lo MGL), 또는 광수용체 세포 상에서는 발현되지 않았다. ST2-/- 마우스는 아이소타입 대조군 항체 외에 음성 대조군으로서 사용되었다.
도 8C는 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스에서 기준선 (d0) 및 빛에 7일 노출 후 망막 두께의 광간섭 단층촬영 (OCT) 분석을 나타낸다. 대표적인 단면 OCT 이미지가 나타나 있다. 망막 두께의 변화 (델타)는 각 마우스 (n=10/유전자형)에 대해 d0의 망막 두께에서 d7의 망막 두께를 빼내어 계산되었다. 나타낸 데이터는 3개의 독립적인 실험을 나타낸다. 막대, 100 μm. ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 비쌍형 양측 스투던트 t 검정.
도 8D은 CLE 후 IL-1R1-/- 및 IL-18R1-/- 마우스에서 망막 보호의 결여를 나타내는 일련의 그래프이다. ST2-/-, IL-1R1-/-, 및 IL-18R1-/- 마우스 뿐만 아니라 상응하는 야생형 (+/+) 마우스가 14일간 빛에 노출되었다. 망막 두께는 OCT에 의해 측정되었다. 델타 망막 두께는 개별적인 마우스에 대해 d0의 망막 두께에서 d14의 망막 두께를 빼내어 계산되었다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=10-15/유전자형)를 나타낸다. ****, P<0.0001.
도 8E은 간상체 및 원추체가 ST2-/- 마우스에서 보호된다는 것을 나타내는 일련의 그래프이다. 기준선 (d0) 및 CLE 후 다양한 시점에 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스에서의 망막 세포가 유세포분석법에 의해 정량화되었다. 유세포분석법 플롯 (상부 좌측 패널)은 기준선 및 CLE d7에서 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스에서의 간상체 및 원추체 (x105)의 게이팅 전략 및 백분율 뿐만 아니라 절대 수 (괄호 사이)를 나타낸다. 하부 패널에 있는 그래프 내의 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=5-6/유전자형)를 나타낸다. 데이터는 유사한 결과를 갖는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. Rho, 로돕신; CAR, 원추체 어레스틴 (arrestin). *, P<0.05; **, P<0.01; ***, P<0.001; ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 비쌍형 양측 스투던트 t 검정.
도 8F는 시신경 유두 (optic nerve head; ONH)로부터의 거리의 함수로서 플롯팅된 기준선 (d0) 및 빛에 14일 노출 후 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스의 ONL 두께의 형태계측학적 분석을 나타내는 그래프이다. ST2-/- 마우스에서 망막 ONL의 유의미한 보호가 상부 및 하부 사분면 모두에서 관찰되었다. 나타낸 데이터는 평균 ± SEM (n=5-7/유전자형)이다. *, P<0.05; **, P<0.01; 투키 사후-검정을 갖는 이원 ANOVA.
도 8G은 기준선 (d0) 및 7일 CLE 후 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스의 망막전위도검사 (electroretinography; ERG) 분석을 나타내는 일련의 그래프이다. 기준선 및 7일 CLE 후의 25 cdㆍs/m2 플래시 강도에서의 대표적인 ERG 기록이 나타나 있다. 1 및 25 cdㆍs/m2의 플래시 강도에서 평균 암순응된 a- 및 b-파 진폭은 7일 CLE 후 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/- 에서 유의미하게 더 컸다. 나타낸 데이터는 평균 ± SEM (n=10/유전자형)이다. *, P<0.05; **, P<0.01; ***, P<0.001; 투키 사후-검정을 갖는 이원 ANOVA.
도 9A은 가용성 ST2의 시험관내 활성을 나타내는 일련의 그래프이다. 골수 유래의 비만 세포 (BMMC)가 24시간 동안 20 μg/ml의 가용성 ST2-His (sST2) 또는 대조군 His-태그된 단백질의 부재 또는 존재하에 1 ng/ml 재조합 마우스 IL-33로 자극되었다. 상청액에서의 IL-13 및 IL-6 분비가 ELISA에 의해 정량되었다. 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 삼반복 실험의 평균 ± SEM을 나타낸다.
도 9B는 AAV-sST2의 발현을 나타낸다. HEK293 세포는 sST2-His (sST2) 또는 빈 벡터 (EV)를 발현하는 AAV 벡터로 감염되었다. 감염 후 6일에, 배양 상청액에서의 sST2 발현이 ELISA (좌측 패널) 및 웨스턴 블랏 (우측 패널)에 의해 결정되었다. 데이터는 2개의 실험의 평균 ± SEM (n=8)을 나타낸다. ND, 미검출; rsST2, 재조합 가용성 ST2-His.
도 9C는 AAV-sST2의 발현을 나타낸다. BALB/c 마우스에게 AAV 발현 가용성 ST2 (AAV-sST2) 또는 음성 대조군으로서 제공된 AAV 빈 벡터 (AAV-EV)가 망막하에 주사되었다. 망막 (좌측 패널) 및 RPE/맥락막 (우측 패널)에서의 sST2의 발현을 ELISA 및 웨스턴 블랏팅 (WB)에 의해 감염 3주 후에 분석하였다. ST2 및 GAPDH의 웨스턴 블랏팅은 10 μg의 망막 용해물 및 3 μg의 RPE/맥락막 용해물에 대해 수행되었다. rsST2, 재조합 가용성 ST2-His.
도 10은 가용성 ST2의 투여가 광독성 스트레스로부터 광수용체를 보호한다는 것을 나타내는 일련의 그래프이다. 마우스에게 AAV 발현 가용성 ST2 (AAV-sST2)이 망막하에 주사되었고 21일 감염 후 빛에 노출되었다 (상부 패널의 도식). AAV 빈 벡터 (AAV-EV)로 주사된 마우스는 대조군으로서 역할을 하였다. 간상체 및 원추체는 광노출 전 (d0) 및 7일 (d7) 광노출 후 유세포분석법에 의해 정량되었다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=10/그룹)를 나타낸다. ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 비쌍형 양측 스투던트 t 검정. 데이터는 유사한 결과를 갖는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 11A는 3 일간 CLE 후 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/- 마우스에서 감소된 상위 22개의 광노출-유도성 유전자를 나타낸다. 좌측 패널은 마이크로어레이에 의해 분석된 바와 같이 CLE 전 (d0) 및 후 (d3)에 망막에서 유전자 발현의 결과를 나타내는 히트맵 (heatmap)이다. N=5. 우측 패널은 유전자 기호, 발현의 log2 배수 변화, 및 P 값을 나타내는 표이다.
도 11B는 ST2+/+ 마우스 (도 11A 참고)와 비교하여 ST2-/- 마우스에서 감소된 발현을 갖는 유전자의 유전자 온톨로지 (GO) 분석을 나타내는 표이다. 상위 17개의 강화된 (enriched) GO 용어들이 나타나 있다.
도 11C은 CCL2, IL-6, 및 IL-1β의 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 상부 패널은 CLE 후 망막에서 CCL2, IL-6, 및 IL-1β 발현의 시간 경과 qPCR 분석을 나타낸다. 이 결과는 ST2+/+ 마우스 (n=5-6/유전자형)와 비교하여 ST2-/-에서의 감소된 발현을 나타내었다. d0 ST2+/+ 마우스에서의 유전자 발현이 1로 설정되었다. 망막에서의 CCL2 단백질 발현은 ELISA (하부 패널)에 의해 측정되었다. 데이터는 유사한 결과를 갖는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. *, P<0.05; **, P<0.01; ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 투키 사후 검정을 갖는 일원 ANOVA.
도 11D은 IL-33의 첨가가 rMC-1 세포로부터 CCL2 분비를 유도하였음을 보여주는 일련의 그래프이다. rMC-1 세포의 표면 상의 ST2 발현은 유세포분석법 (좌측 패널)에 의해 검출되었다. IL-33을 이용한 rMC-1 세포의 자극은 용량-의존 방식으로 CCL2 분비를 유도하였고, 자극은 IL-33 TRAP의 존재시 폐지되었으나 대조군 단백질의 존재시에는 그렇지 않았다 (우측 패널). 24시간 배양 상청액에서 CCL2 수준은 ELISA에 의해 측정되었다. 나타낸 데이터는 삼반복 웰의 평균 ± SEM이며 유사한 결과를 갖는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. *, P<0.05; **, P<0.01; ****, P<0.0001; 투키 사후-검정 후 이원 ANOVA.
도 11E은 rMC-1 세포로부터의 CCL2의 자가분비 유도 및 방출이 IL-33 TRAP의 첨가에 의해 차단되었음을 보여주는 일련의 그래프이다. rMC-1 세포는 최대 72시간 동안 IL-33 TRAP 또는 대조군 단백질의 존재하에 HG 함유 배지에서 배양되었다. CCL2 mRNA 발현 (좌측 패널) 및 분비 (우측 패널)는 각각 qPCR 및 ELISA에 의해 측정되었다. 나타낸 데이터는 삼반복 실험의 평균 ± SEM이다. ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 투키 사후-검정을 갖는 이원 ANOVA.
도 12A는 유세포분석법에 의해 결정된 바와 같이, CLE 전 (d0) 및 후 (d7) 망막 CD11b+CD45lo 골수 세포 상에서 CCR2, Ly6C, 및 CD115 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 상기 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 12B 및 12C는 광노출시 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/- 마우스에서의 ONL, OS, 및 GCL 내의 감소된 Iba1+ 세포를 나타낸다. 이미지 (도 12B)는 Iba1 염색 (적색)의 대표적인 면역조직화학을 나타낸다. CLE 전 (d0)과 후 (d14)에 전체 상부 및 하부 망막의 각 망막 층 내의 총 Iba1+ 세포 (화살표)가 정량되었다. 상기 정량 결과가 도 12C에 나타나 있다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=10/유전자형)를 나타낸다. 막대, 40 μm. *, P<0.05; **, P<0.01; ****, P<0.0001; 투키 사후 검정을 갖는 일원 ANOVA.
도 12D는 CLE 처리 동안 클로드로네이트 고갈시 혈액 단핵구 서브셋을 정량하기 위한 유세포분석법 게이팅 전략을 나타낸다. ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스는 CLE 동안 매일 클로드로네이트-리포좀 (Clod) 또는 대조군 리포좀 (Ctrl)으로 처리되었다. CLE 후 7일에, 말초 혈액 단핵구는 유세포분석법에 의해 정량되었다. CD115+Ly6Chi 단핵구 및 CD115+Ly6Clo /- 단핵구를 확인하는 대표적인 유세포분석법 플롯이 나타나 있다 (좌측 패널). 상기 결과는 우측 패널의 그래프에 나타나 있다. n=4-6/그룹.
도 12E는 CLE 내의 IL-33/ST2-매개된 광수용체 세포 손실이 순환하는 단핵구에 의존적이라는 것을 나타낸다. ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스는 좌측 패널의 도식에 나타난 바와 같이 CLE 이전에 2일부터 매일 클로드로네이트-리포좀 (Clod)으로 정맥내로 처리되었다. 대조군 리포좀 (Ctrl) 처리는 대조군으로서 역할을 하였다. 망막 세포는 CLE 후 7일에 유세포분석법에 의해 정량되었다 (도 12D 참고). n=4-6/그룹. *, P<0.05; ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 투키 사후 검정을 갖는 일원 ANOVA. 데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 12F는 N-말단 핵 국재화 서열 및 염색질 결합 도메인이 dsRed (좌측 패널의 도식에 나타냄)로 대체되었으나 C-말단 사이토카인 도메인은 유지하는 IL33tm1 / tm1 마우스가 뮬러 세포의 세포질에서 dsRed-IL-33-C-term의 국재화를 나타내었음을 보여준다. 이미지 (좌측 패널)는 IL33tm1 / tm1 망막 플랫 마운트의 공초점 현미경 이미지의 Z-단면도이다. dsRed 신호는 적색으로 나타나 있으며; DAPI 신호는 청색으로 나타나 있다. 화살표는 IL-33+ 뮬러 세포를 나타낸다. 뮬러 세포에서 dsRed-IL-33-C-term의 발현은 유세포분석법에 의해 확인되었다 (하부 우측 패널). IL33tm1 /- 및 IL33tm1/tm1 망막에서 qPCR에 의해 측정된 IL-33 mRNA는 야생형 (WT) 망막과 대등하였지만, IL33tm1 /- 및 IL33tm1 / tm1 마우스에서 망막 및 혈청에서 ELISA에 의해 측정된 IL-33 단백질 수준은 WT 마우스보다 유의미하게 더 높았으며, 이는 N-말단이 결여된 IL-33이 세포로부터 방출되었음을 나타낸다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=6/유전자형)를 나타낸다. 데이터는 유사한 결과를 갖는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. **, P<0.01; ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 투키 사후-검정을 갖는 일원 ANOVA.
도 12G는 IL33tm1 / tm1 마우스에서 CCL2 및 IL-6 발현의 ST2-의존적 증가 및 원추체 및 RGC의 손실을 나타내는 일련의 그래프이다. ST2+/- 또는 ST2-/- 백그라운드 상에서 사육된 IL33+/+, IL33tm1 /+, 및 IL33tm1 / tm1 마우스로부터의 망막은 qPCR 및 유세포분석법에 의해 분석되었다. CCL2 및 IL-6 발현의 유의미한 증가, 뿐만 아니라 원추체 및 RGC의 손실이 IL33+/+ 대조군 마우스와 비교하여 ST2+/- 백그라운드에서 IL33tm1/+ 및 IL33tm1 / tm1 마우스에서 관찰되었으나, ST2-/- 백그라운드에서는 그렇지 않았다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=3-7/유전자형)를 나타낸다. 데이터는 유사한 결과를 갖는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. **, P<0.01; ***, P<0.001; ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 투키 사후 검정을 갖는 일원 ANOVA.
도 13A은 NaIO3으로 처리된 마우스에서 뮬러 세포 활성화를 나타내는 일련의 이미지이다. NaIO3으로 처리된 마우스에서 GFAP 발현의 면역조직화학 (적색)은 염수 처리된 마우스와 비교하여 증가된 GFAP+ 뮬러 세포 (화살표)를 나타내었다. 막대, 100 μm.
도 13B는 NaIO3로 처리된 마우스의 망막에서 증가된 IL-33 가공을 나타낸다. 망막에서의 IL-33 발현은 웨스턴 블랏팅에 의해 분석되었다 (좌측 패널). IL-33p19 대 IL-33p30의 비는 ImageJ 소프트웨어로 정량화되었다 (우측 패널). IL-33의 19-kDa 가공된 형태는 NaIO3 처리 후 3일에 최대였다. 데이터는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 13C는 ST2+/+ 마우스와 비교하여 NaIO3-처리된 ST2-/- 마우스에서 망막에서의 감소된 CCL2 유도를 나타내는 그래프이다. 망막에서의 CCL2 발현은 ELISA에 의해 결정되었다. n=5-7/유전자형. ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 투키 사후 검정을 갖는 일원 ANOVA.
도 13D은 ST2+/+ 마우스와 비교하여 NaIO3-처리된 ST2-/- 마우스에서 망막에서의 감소된 대식세포 침윤을 나타내는 일련의 그래프이다. 망막에서의 대식세포 (CD11b+CD45hi)는 유세포분석법에 의해 정량되었다 (상부 좌측 패널). 망막 대식세포는 미세아교 (CD11b+CD45lo)와 비교하여 높은 수준의 CCR2를 발현한다 (하부 좌측 패널) n=6-7/유전자형. 데이터는 3개의 독립적인 실험을 나타낸다. MΦ, 대식세포; MGL, 미세아교. ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 투키 사후 검정을 갖는 일원 ANOVA.
도 13E은 ST2+/+ 마우스와 비교하여 NaIO3-처리된 ST2-/- 마우스에서 OS 및 ONL 내의 감소된 Iba1+ 세포를 나타내는 일련의 그래프이다. 망막 구획은 면역조직화학에 의해 Iba1에 대해 염색되었다. 염수- 또는 NaIO3-처리된 마우스 (d3)에서 전체 상부 및 하부 망막의 OS 및 ONL에서의 Iba1+ 세포가 정량되었다. n=6/유전자형. *, P<0.05; **, P<0.01; ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 투키 사후-검정을 갖는 일원 ANOVA.
도 13F는 ST2-/- 마우스에서 광수용체의 보호를 나타낸다. NaIO3 처리 전 (d0)과 후 (d7)에 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스의 망막 두께가 OCT에 의해 측정되었다 (중간 패널). 대표적인 단면 OCT 이미지가 나타나 있다 (상부 패널). 델타 망막 두께는 개별적인 마우스에 대해 d0의 망막 두께에서 d7의 망막 두께를 빼내어 계산되었다. 막대, 100 μm. 염수 또는 NaIO3로 처리된 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스의 망막 세포 (d3 및 d7)가 유세포분석법에 의해 정량되었다 (하부 패널). 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=6-8/유전자형)를 나타낸다데이터는 유사한 결과를 갖는 적어도 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. *, P<0.05; **, P<0.01; ***, P<0.001; ****, P<0.0001; 비쌍형 양측 스투던트 t 검정.
도 13G은 RPE 손상-유도된 망막 변성에서 IL-1R1-/- 및 IL-18-/- 마우스에서 망막 보호의 결여를 나타내는 일련의 그래프이다. IL-1R1-/- 및 IL-18-/- 마우스는 20 mg NaIO3로 처리되었다. 기준선 (d0) 및 d7에서의 망막 두께는 OCT에 의해 측정되었다. 델타 망막 두께는 개별적인 마우스에 대해 d0의 망막 두께에서 d7의 망막 두께를 빼내어 계산되었다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=10-13/유전자형)를 나타낸다.
도 13H는 혈액 단핵구의 클로드로네이트 고갈을 나타내는 일련의 그래프이다. ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스는 NaIO3 처리 전 1일부터 매일 클로드로네이트-리포좀 ("Clod") 또는 대조군 리포좀 ("Ctrl")으로 처리되었다. NaIO3 처리 후 3일에, 마우스가 망막 세포 정량화를 위해 안락사되면, 말초 혈액 단핵구가 유세포분석법에 의해 정량화되었다. CD115+Ly6Chi 단핵구 및 CD115+Ly6Clo /- 단핵구를 확인하는 대표적인 유세포분석법 플롯이 나타나 있다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=5/그룹)를 나타낸다.
도 13I는 IL-33/ST2-매개된 광수용체 세포 손실이 순환하는 단핵구에 의존적임을 보여주는 일련의 그래프이다. ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스는 개략도에 나타난 바와 같이 NaIO3 처리 전 1일부터 매일 클로드로네이트-리포좀 (Clod)으로 정맥내로 처리되었다. 대조군 리포좀 (Ctrl) 처리는 대조군으로서 역할을 하였다. 망막 세포는 염수 또는 NaIO3 처리 후 3일에 유세포분석법에 의해 정량되었다. 각 데이터 포인트는 개별적인 마우스 (n=5/그룹)를 나타낸다. *, P<0.05; ****, P<0.0001; ns, 유의미하지 않음; 투키 사후-검정을 갖는 일원 변량분석.
도 14A는 2형 (Th2) 폐 염증의 니포스트론길러스 브라실리엔시스 감염 모델의 개략도를 나타낸다.
도 14B는 N. 브라실리엔시스로 감염 후 ST2+/+ 및 ST2-/- (ST2 KO) 마우스로부터 유래된 폐 조직 (좌측 패널) 및 BALF (우측 패널)에서의 호산구 (eos) 수를 나타낸다. 지정된 유전자형을 갖는 마우스는 실시예 4의 섹션 A에 기재된 바와 같이 대조군 항-돼지풀 (ragweed) 또는 항-IL-13 (α-IL-13) 항체로 처리되었다. 미접촉 ST2+/+ 마우스는 대조군으로서의 역할을 하였다. 하부 패널은 연구의 미가공 데이터를 나타내는 표이다. *, P<0.05; ns, 유의미하지 않음.
도 14C는 실시예 4에 기재된 Th2 폐 염증의 N. 브라실리엔시스 감염 모델로부터의 BALF 사이토카인 분석 결과를 나타낸다. IL-4, IL-5, 및 IL-13의 수준이 실시예 4의 섹션 4A에 기재된 바와 같이 대조군 항-돼지풀, 항-IL-13 (α-IL-13), 및/또는 항-IL-4 (α-IL-4) 항체로 처리된 지정된 유전자형을 갖는 마우스에 대해 나타나 있다. 미접촉 마우스는 대조군으로서 역할을 하였다. 하부 패널은 연구의 미가공 데이터를 나타내는 표이다. *, P<0.05; ns, 유의미하지 않음.
도 15A는 TNP-OVA 항원으로 감작/공격 후 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스로부터 유래된 폐 조직 (상부 좌측 패널) 및 BALF (상부 우측 패널)에서 호산구 수를 나타낸다. 하부 패널의 표는 연구의 미가공 데이터를 나타낸다. 표시된 유전자형을 갖는 마우스는 실시예 4의 섹션 B에 기재된 바와 같이 대조군 항-돼지풀 또는 항-IL-13 (α-IL-13) 항체로 처리되었다. 미접촉 마우스는 대조군으로서 역할을 하였다. *, P<0.05.
도 15B는 실시예 4의 섹션 B에 기재된 TNP-OVA 모델로부터 세포 생존력 (좌측 패널) 및 항원 리콜 분석 (antigen recall assay)에서의 사이토카인 분비 (IL-5, 중간 패널; IL-13, 우측 패널)을 나타내는 일련의 그래프이다. 항-GP120 (α-GP120) 항체는 대조군으로서 역할을 하였다.
도 16A는 IL-33에 의한 비만 세포 탈과립화의 증가를 나타낸다. 상부 패널은 비만 세포 탈과립화 분석의 개략도를 나타내며, 하부 패널은 β-헥사미노다제 (좌측), 트립타제 (중간), 및 히스타민 (우측)에 대한 비만 세포 탈과립화 분석 결과의 그래프를 나타낸다.
도 16B는 실시예 5에 기재된 전신 과민증 분석을 나타내는 개략도이다.
도 16C 및 16D는 수동 전신 과민증 분석 결과를 나타내는 그래프이다 (예를 들면, 도 16B 참고). 도 16C는 DNP-HSA 부가없이 IgE 및 IL-33으로 처리된 ST2+/+ (WT) 또는 ST2-/- (KO) 마우스의 결과를 나타낸다. 도 16D는 IL-33 부가 없이 IgE 및 DNP-HAS로 처리된 ST2+/+ (WT) 또는 ST2-/- (KO) 마우스의 결과를 나타낸다.
도 16E는 수동 전신 과민증 분석의 결과를 나타내는 일련의 그래프를 나타낸다. 좌측 패널의 그래프는 IgE, DNP-HSA, 및 IL-33로 처리된 ST2+/+ (WT) 또는 ST2-/- (KO) 마우스에 대하여 시간 (분)의 함수로서 체온 (℉)을 나타낸다. 우측 패널의 그래프는 지정된 유전자형 및 공격에 대해 45분 내지 60분의 곡선하면적 (AUC)을 나타낸다.
도 16F는 IL-33이 시험관내에서 인간 비만 세포에 의해 IgE 가교결합-의존적 사이토카인 분비를 향상시킨다는 것을 나타낸다. 상부 패널은 실험의 개략도를 나타낸다. 하부 패널의 그래프는 IL-5 (좌측), IL-13 (중간), 및 IL-8 (우측)에 대해 가교결합하는 IL-33 및 IgE로 자극 후 비만 세포 사이토카인 측정 결과를 나타낸다.
도 16G는 IL-33이 시험관내에서 IgE 또는 항원에 독립적으로 비만 세포 사이토카인 분비를 직접 자극한다는 것을 나타낸다. 상부 패널은 실험의 개략도를 나타낸다. 하부 패널의 그래프는 IL-33 (0 ng/ml)의 부재 또는 10 ng/mL IL-33의 존재하에 지정된 사이토카인 (TNF-α, IL-10, IL-13, IL-5, 또는 IL-8)의 발현 수준을 결정하는 ELISA 실험의 결과를 나타낸다.
도 16H는 마이크로어레이 분석에 의해 결정된 바와 같은 IL-33 자극 후 비만 세포에서 지정된 유전자의 상대적 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 좌측 패널은 IL-33 자극 후 상향조절된 유전자의 예를 나타내며, 이는 하기를 포함하였다: 평활근 성장/이동에 관여하는 유전자 (예를 들면, CCL1, IL-3, 및 IL-8); 평활근 수축에 관여하는 유전자 (예를 들면, TNFα, IL-10, IL-6, IL13, 및 IL-3); 및 과다반응에 관여하는 유전자 (예를 들면, TNFα, IL-10, 및 TNFSF14).
도 17A는 IL33+/+ 마우스와 비교하여 IL33-/- 마우스에서 실시예 6에 기재된 바와 같은 K/BxN 혈청 이동 실험으로부터의 관절염 스코어를 나타내는 그래프이다. 상기 데이터는 ST2-/- 또는 ST2+/+ 마우스의 그룹의 평균을 나타낸다.
도 17B는 야생형 (ST2+/+) 마우스 (C57Bl/6 백그라운드)와 비교하여 ST2-/- 마우스에서 실시예 6에 기재된 바와 같은 K/BxN 혈청 이동 실험으로부터의 관절염 스코어를 나타내는 그래프이다. 상기 데이터는 ST2-/- 또는 ST2+/+ 마우스의 그룹의 평균을 나타낸다. 유사한 결과가 Balb/C 백그라운드에서 ST2-/- 유전자형을 사용하여 얻어졌다.
도 17C-17D는 야생형 (ST2+/+) 마우스와 비교하여 ST2-/- 마우스에서 K/BxN 혈청 이동 연구로부터의 관절염 스코어를 나타내는 그래프이다도 17C는 전체 실험에 대한 평균 일일 임상 스코어를 나타내는 반면, 도 17D는 개별적인 마우스에 대해 7일에의 임상 스코어를 나타낸다.
도 18A은 실시예 7에 기재된 바와 같이, IL-33-유도된 대식세포 동원이 IL-4, IL-5, 및 IL-13에 좌우되는지 여부를 결정하는 실험의 개략도이다.
도 18B 및 18C는 IL-33-유도된 대식세포의 폐 내로의 동원이 IL-4, IL-5, 및 IL-13에 비의존적임을 보여주는 그래프이다.
도 19A는 실시예 8에 기재된 바와 같이 HEK-BLUE™ IL-33 세포를 사용한 인간 IL-33에 대한 세포-기반 IL-33 차단 분석의 결과를 보여주는 그래프이다. 인간 IL-33 N-His의 농도는 15 pM이었다. 세포는 20시간 동안 자극되었다. 하기 표는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4, 항-IL-33/항-IL-13 이중특이적 클론 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4 ("10C12-IL-13 KIH IgG4"로 축약됨), 대조군 IgG4 항체, 및 ST2-LZ에 대한 IC90 및 IC50을 보여주는 그래프이다. IC90 표에 대한 괄호 안의 값은 μg/ml 단위의 IC90 값이다.
도 19B는 실시예 8에 기재된 호염기구 IL-33 포스포-p38 분석의 개략도이다.
도 19C는 실시예 8에 기재된 바와 같은 호염기구 IL-33 포스포-p38 분석의 결과를 나타내는 일련의 그래프이다. 상기 그래프는 포스포-p38 형광 강도의 함수로서 최대 형광 강도의 백분율을 나타낸다.
도 19D는 단일특이적 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 이중특이적 항체 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4 ("10C12-IL13 KIH IgG4")가 실시예 8에 기재된 바와 같이, 호염기구에서 IL-33-유도된 포스포-p38 수준의 용량-의존적 억제를 야기하였음을 보여주는 그래프이다. 상기 그래프는 항체 농도의 함수로서 평균 형광 강도 (MFI) (2개의 공여체로부터의 평균)를 플롯팅한다. 대조군 IgG4 항체는 포스포-p38 수준을 억제하지 않았다. 상기 그래프는 또한 항체가 부가되지 않은 ("No Ab") 또는 IL-33이 부가되지 않은 ("No IL-33") 대조군 실험의 결과를 나타낸다.
도 20은 BIACORE® 3000 SPR 분석에 의해 평가된 바와 같이 인간 IL-33, 시노 IL-33, 및 인간 IL-13에 대한 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4 이중특이적 항체 (10C12-IL-13 KIH IgG4)의 결합 동력학을 나타내는 표이다. 상기 표는 3개의 독립적인 항체 제제 (롯트)의 결과를 나타낸다.
도 21A는 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 리포터 세포를 사용한 세포-기반 인간 IL-33 차단의 결과를 나타내는 그래프이다. 용량-반응 곡선은 지정된 항-IL-33 항체 (RG1-20 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4), sST2-LZ, 및 아이소타입 대조군 항체 (IgG4)에 의한 10 pM 인간 IL-33 활성 (OD 620에 의해 측정됨)의 억제를 결정하는데 사용되었다. 상기 그래프는 또한 항체가 부가되지 않은 ("No Ab") 또는 IL-33이 부가되지 않은 ("No IL-33") 대조군 실험의 결과를 나타낸다.
도 21B는 인간 IL-33에 대한 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 리포터 세포의 용량-반응을 나타내는 그래프이다.
도 21C는 지정된 항-IL-33 항체에 의한 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 리포터 세포의 인간 및 시노몰구스 원숭이 IL-33 활성화의 억제를 나타내는 표이다.
도 21D는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ와 비교하여 가장 높은 인간 IL-33 차단 활성을 갖는 5개의 항-IL-33 RG 항체의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다. 상기 그래프는 또한 항체가 부가되지 않은 ("No Ab") 또는 IL-33이 부가되지 않은 ("No IL-33") 대조군 실험의 결과를 나타낸다.
도 22A는 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 리포터 세포를 사용한 세포-기반 시노 IL-33 차단 분석의 결과를 나타내는 그래프이다. 용량-반응 곡선은 표시된 항-IL-33 항체 (RG1-20 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4), sST2-LZ, 및 아이소타입 대조군 항체 (IgG4)에 의한 5 pM 시노몰구스 원숭이 IL-33 활성의 억제를 결정하는데 사용되었다.
도 22B는 시노 IL-33에 대한 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 리포터 세포의 용량-반응을 나타내는 그래프이다.
도 22C는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 가장 높은 시노몰구스 원숭이 IL-33 차단 활성을 갖는 5개의 항-IL-33 RG 항체의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다. 상기 그래프는 또한 항체가 부가되지 않은 ("No Ab") 또는 IL-33이 부가되지 않은 ("No IL-33") 대조군 실험의 결과를 나타낸다.
도 22D는 시노 IL-33을 차단하지 않은 항-IL-33 RG 항체의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 23A는 인간 PBMC로부터의 농축된 NK 세포 (CD56+ CD3-)의 순도의 유세포분석법을 나타내는 일련의 그래프이다.
도 23B는 인간 IL-33에 대한 반응으로 1차 NK 세포로부터의 인간 IFN-γ 분비의 ELISA 분석 결과를 나타내는 그래프이다. 용량-반응 곡선은 IFN-γ ELISA OD 450 값으로부터 생성되었다.
도 23C는 지정된 항-IL-33 항체에 의한 1차 NK 세포의 인간 IL-33 활성화의 억제를 나타내는 그래프이다. 용량-반응 곡선은 지정된 항-IL-33 항체 (RG1-RG20 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4), sST2-LZ, 및 아이소타입 대조군 항체 (IgG4)에 의해 NK 세포에서 인간 IL-33 활성의 억제를 결정하는데 사용되었다.
도 23D는 지정된 항-IL-33 항체에 의한 1차 NK 세포의 인간 IL-33 활성화의 억제를 나타내는 표이다.
도 23E는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 가장 높은 인간 IL-33 차단 활성을 갖는 5개의 항-IL-33 RG 항체의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 23F는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG1-RG5의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 23G는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG6-RG10의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 23H는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG11-RG15의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 23I는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG16-RG20의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 24A는 인간 PBMC로부터의 1차 호염기구 (CD123+)에서 IL-33-유도된 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 유세포분석법을 나타내는 개략도이다.
도 24B는 인간 IL-33의 용량 증가에 대한 반응으로 일차 호염기구로부터의 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화 (ph-p38)의 평균 형광 강도 (MFI)를 나타내는 그래프이다.
도 24C는 지정된 항-IL-33 항체에 의한 1차 호염기구에서 인간 IL-33 활성의 억제를 나타내는 그래프이다. 용량-반응 곡선은 지정된 항-IL-33 항체 (RG1-RG20 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4), sST2-LZ, 및 아이소타입 대조군 항체 (IgG4)에 의한 호염기구에서 인간 IL-33 활성의 억제를 결정하는데 사용되었다.
도 24D는 항-IL-33 항체에 의한 1차 호염기구의 인간 IL-33 활성화의 억제를 나타내는 표이다. "부분 차단"는 가장 높은 항체 농도에서 기준선 수준에 도달하지 못하는 용량-의존적 차단 활성을 나타낸다.
도 24E는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 가장 높은 인간 IL-33 차단 활성을 갖는 5개의 항-IL-33 RG 항체의 용량-반응 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 24F는 1차 호염기구에서 인간 IL-33 활성의 억제를 나타내는 그래프이다. 상기 그래프는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG1-RG5의 용량-반응 곡선을 플롯팅한다.
도 24G는 1차 호염기구에서 인간 IL-33 활성의 억제를 나타내는 그래프이다. 상기 그래프는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG6-RG10의 용량-반응 곡선을 플롯팅한다.
도 24H는 1차 호염기구에서 인간 IL-33 활성의 억제를 나타내는 그래프이다. 상기 그래프는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG11-RG15의 용량-반응 곡선을 플롯팅한다.
도 24I는 1차 호염기구에서 인간 IL-33 활성의 억제를 나타내는 그래프이다. 상기 그래프는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 sST2-LZ 대비 항-IL-33 항체 RG16-RG20의 용량-반응 곡선을 플롯팅한다.
도 24J 및 24K는 0.4 nM (도 24J) 또는 2 nM (도 24K) 항-IL-33 항체 (RG1-RG20 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4), sST2-LZ, 및 아이소타입 대조군 항체 (IgG4)에 의한 호염기구에서 500 pM 인간 IL-33 활성의 억제 정도를 결정하는데 사용된 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화 (Ph-p38)의 평균 형광 강도 (MFI) 값을 나타내는 그래프이다. 각 그래프의 좌측의 표는 지정된 항체에 대한 결과를 요약한다.
도 25A 및 25B는 실시예 9, 섹션 F에 기재된 바와 같이, 인간 (도 25A) 또는 시노 (도 25B) IL-33에 대한 항-IL-33 항체의 차단 활성을 측정하는 경쟁적 결합 ELISA 실험의 결과를 나타내는 그래프이다. 상기 그래프는 항-IL-33 항체 농도 (M)의 함수로서 % IL-33 결합을 플롯팅한다.
본 발명의 구현예의 상세한 설명
I. 정의
본원에 사용된 바와 같이 용어 "약"은 본 기술 분야의 숙련가에게 쉽게 알려진, 각 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 상기 값 또는 파라미터 자체에 관한 구현예를 포함한다 (기술한다).
본원에서의 목적을 위한 "수용체 인간 프레임워크"는, 하기에 정의된 바와 같이, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크로부터 유래된 경쇄 가변 도메인 (VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인 (VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크"로부터 유래된" 수용체 인간 프레임워크는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 이는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 아미노산 변화의 개수는 10 이하, 9 이하, 8 이하, 7 이하, 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 또는 2 이하이다. 일부 구현예에서, VL 수용체 인간 프레임워크는 VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 공통 프레임워크 서열과 서열이 동일하다.
"친화도"는 분자 (예를 들면, 항체)의 단일 결합 부위 및 그의 결합 파트너 (예를 들면, 항원) 간의 비공유 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들면, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유의 결합 친화도를 지칭한다. 그의 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수 (KD)로 표시될 수 있다. 친화도는 본 명세서에서 기재된 것을 포함하는, 본 기술분야에서 공지된 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 예증 및 예시적인 구현예가 하기에 기재되어 있다.
"친화도-성숙된" 항체는, 변경(들)을 갖지 않는 모 항체와 비교하여, 항원에 대한 항체의 친화도를 개선시키는, 하나 이상의 HVR 및/또는 프레임워크 영역에 하나 이상의 변경을 갖는 항체이다. 바람직한 친화도-성숙된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어는 피코몰 친화도를 가질 것이다. 친화도-성숙된 항체는 당해 분야에 공지된 절차에 의해 생산된다. 예를 들면, 문헌[Marks 등 Bio/Technology 10:779-783, 1992]은 VH 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기술한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은 하기에 기재되어 있다: Barbas 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3809-3813, 1994; Schier 등 Gene 169:147-155, 1995; Yelton 등 J. Immunol. 155:1994-2004, 1995; Jackson 등 J. Immunol. 154(7): 3310-3319, 1995; 및 Hawkins 등 J. Mol. Biol. 226:889-896, 1992.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 이는 비제한적으로 단클론성 항체, 다클론성 항체, 다중특이적 항체 (예를 들면, 항-IL-33/항-IL-13 이중특이적 항체를 포함하는 이중특이적 항체), 및 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포함하는 다양한 항체 구조를 포괄한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인터루킨-33 (IL-33)"는 달리 명시되지 않는 한, 영장류 (예를 들면, 인간 및 시노몰구스 원숭이) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함하는, 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 IL-33을 지칭한다. IL-33은 또한 본 기술분양에서 하기로도 지칭된다: 고내피세정맥 (high endothelial venule)의 핵 인자 (NF-HEV; 예를 들면, Baekkevold 등 Am.J. Pathol .163(1): 69-79, 2003 참고), DVS27, C9orf26, 및 인터루킨-1 패밀리 구성원 11 (IL-1F11). 상기 용어는 "전장," 가공되지 않은 IL-33, 뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 야기되는 IL-33의 임의의 유형을 포괄한다. 인간 전장, 가공되지 않은 IL-33은 270개의 아미노산 (a.a. )을 함유하며, IL-331-270으로도 지칭될 수 있다. 인간 IL-33의 가공된 형태는, 예를 들면, IL-3395-270, IL-3399-270, IL-33109-270, IL-33112-270, IL-331-178, 및 IL-33179-270을 포함한다 (Lefrancais 등 Proc. Natl. Acad. Sci. 109(5): 1673-1678, 2012 및 Martin, Semin. Immunol. 25:449-457, 2013). 일부 구현예에서, 인간 IL-33의 가공된 형태, 예를 들면, IL-3395-270, IL-3399-270, IL-33109-270, 또는 칼페인, 프로테이나제 3, 중성구 엘라스타제, 및 카텝신 G와 같은 프로테아제에 의해 가공된 다른 형태는 전장 IL-33과 비교하여 증가된 생물학적 활성을 가질 수 있다. 상기 용어는 또한 L-33의 천연 발생 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 (예를 들면, 엑손 3이 결여된 항시적 활성 스플라이스 변이체 spIL-33, Hong 등 J. Biol. Chem. 286(22): 20078-20086, 2011) 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다. IL-33은 세포 내에 (예를 들면, 핵 내에) 존재할 수 있거나 또는 분비된 사이토카인 형태로서 존재할 수 있다. 전장 IL-33 단백질은 핵 국재화 서열 (인간 IL-33의 a.a. 1-75)을 포함하는 나선-선회-나선 (helix-turn-helix) DNA-결합 모티프를 함유하며, 이는 하기를 포함한다: 염색질 결합 모티프 (인간 IL-33의 a.a. 40-58). 가공된 및 분비된 IL-33의 형태는 N-말단 모티프가 결여되어 있다. 예시적인 인간 IL-33의 아미노산 서열은, 예를 들면, UniProtKB 승인 번호 O95760 하에 발견될 수 있다.
"IL-33 축"는 IL-33 신호 전달에 관여하는 핵산 (예를 들면, 유전자 또는 상기 유전자로부터 전사된 mRNA) 또는 폴리펩타이드를 의미한다. 예를 들면, lL-33 축은 하기를 포함할 수 있다: 리간드 IL-33, 수용체 (예를 들면, ST2 및/또는 IL-1RAcP), 어댑터 분자 (예를 들면, MyD88), 또는 수용체 분자 및/또는 어댑터 분자와 결합하는 단백질 (예를 들면, 키나제, 예컨대 인터루킨-1 수용체-관련된 키나제 1 (IRAK1) 및 인터루킨-1 수용체-관련된 키나제 4 (IRAK4), 또는 E3 유비퀴틴 리가제, 예컨대 TNF 수용체 관련된 인자 6 (TRAF6)).
본원에서 상호교환적으로 사용된 용어들 "인터루킨 1 수용체-유사 1 (IL1RL1)" 및 "ST2"는 달리 명시되지 않는 한 영장류 (예를 들면, 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함하는 임의의 척추동물 공급원로부터의 임의의 천연 ST2를 지칭한다. ST2은 또한 본 기술분야에서 DER4, T1, 및 FIT-1로 지칭된다. 상기 용어는 "전장," 가공되지 않은 ST2, 뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 야기되는 ST2의 임의의 형태를 포괄한다. ST2의 적어도 4개의 동형체 (isoform)가 본 기술분야에 공지되어 있고, 이는 이중 프로모터 시스템으로부터 차별적인 mRNA 발현에서 생기는 가용성 (IL1RL1-a로도 공지된 sST2) 및 막통과 (IL1RL1-b로도 공지된 ST2L), 및 하기에 기재된 바와 같이 선택적 스플라이싱 (alternative splicing)에서 생기는 ST2V 및 ST2LV를 포함한다. ST2L의 도메인 구조는 3개의 세포외 면역글로불린-유사 C2 도메인, 막통과 도메인, 및 세포질 톨 (Toll)/인터루킨-1 수용체 (TIR) 도메인을 포함한다. sST2는 ST2L 내에 함유된 막통과 및 세포질 도메인이 결여되어 있고 독특한 9개의 아미노산 (a.a. )C-말단 서열을 포함한다 (예를 들면, Kakkar 등 Nat. Rev. Drug Disc.7:827-840, 2008 참고). sST2는 가용성 IL-33을 억제하는 유인 수용체 (decoy receptor)로서 기능할 수 있다. 상기 용어는 또한 ST2의 천연 발생 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 (예를 들면, 제3 면역글로불린 모티프가 결여되고 독특한 소수성 꼬리를 갖는 ST2V, 및 ST2L의 막통과 도메인이 결여된 ST2LV) 또는 대립유전자 변이체 (예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같이 천식 위험을 방지하거나 천식 위험을 부여하는 변이체)를 포괄한다. 예시적인 인간 ST2의 아미노산 서열은, 예를 들면, UniProtKB 승인 번호 Q01638 하에, 발견될 수 있다. ST2는 공동-수용체 단백질 IL-1RAcP과 함께 IL-33 수용체의 일부이다. ST2 및 공동-수용체 인터루킨-1 수용체 보조 단백질 (IL-1RAcP)에 대한 IL-33의 결합은 1:1:1 3원 신호전달 복합체를 형성하여 도 1A에 묘사된 바와 같이, 다운스트림 신호 전달을 촉진한다 (예를 들면, Lingel 등 Structure 17(10): 1398-1410, 2009, 및 Liu 등 Proc. Natl. Acad. Sci. 110(37): 14918-14924, 2013 참고).
용어들 "항-IL-33 항체," "IL-33에 결합하는 항체," 및 "IL-33에 특이적으로 결합하는 항체"는 항체가 IL-33을 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 IL-33에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-IL-33 단백질에 대한 항- IL-33 항체의 결합 정도는, 예컨대, 방사선면역분석 (RIA)에 의해 측정된 바와 같이, IL-33에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예에서, IL-33에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8 M 이하, 예를 들면 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들면, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (KD)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항- IL-33 항체는 상이한 종으로부터의 IL-33 간에 보존된 IL-33의 에피토프에 결합한다.
참조 항체로서 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 분석에서 그의 항원에 대한 참조 항체의 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭하거나, 반대로 참조 항체는 경쟁 분석에서 그의 항원에 대한 항체의 결합을 50% 이상 차단한다. 예시적인 경쟁 분석이 본원에 제공된다.
"항체 단편"는 온전한 항체의 부분, 바람직하게는 온전한 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (참고 미국 특허 번호 제5,641,870호, 실시예 2; Zapata 등 Protein Eng .8(10): 1057-1062, 1995); 단쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원-결합 단편, 및 쉽게 결정화하는 능력을 반영하는 명칭인 나머지 "Fc" 단편을 생산한다. Fab 단편은 H 사슬의 가변 영역 도메인 (VH), 및 하나의 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)과 함께 전체 L 사슬로 이루어진다. 항체의 펩신 처리는 하나의 큰 F(ab')2 단편을 생성하며, 이는 2가 항원-결합 활성을 갖는 2개의 디설파이드 연결된 Fab 단편에 거의 상응하며 여전히 항원에 가교결합할 수 있다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카복시 말단에서 추가의 몇 개의 잔기를 가짐으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 자유 티올 그룹을 갖는 Fab'에 대한 본원에서의 지정이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 이들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링 역시 공지되어 있다.
본원에서 용어 "Fc 영역"는 불변 영역의 적어도 부분을 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이 Fc 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226, 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카복실-말단까지 확장한다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 라이신 (Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 명시하지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 하기에 기재된 바와 같이, EU 지수로도 불리는, EU 넘버링 시스템에 따른다: Kabat 등 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
"Fv"는 견고한, 비-공유 결합된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 이루어진다. 이들 2개의 도메인의 폴딩으로부터, 항원 결합을 위해 아미노산 잔기를 제공하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변성 루프 (H 및 L 사슬로부터 각가 3개의 루프)가 나온다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 Hs만을 포함하는 Fv의 절반)조차도, 종종 전체 결합 부위보다 낮은 친화도에도 불구하고, 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 축약된 "단일-사슬 Fv"는 단일 폴리펩타이드 사슬로 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩타이드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함하며, 이는 sFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성하는 것을 가능하게 한다. sFv의 검토를 위해, 하기를 참고한다: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315, 1994.
용어 "디아바디"는 VH 및 VL 도메인 사이에 짧은 링커 (약 5-10개의 잔기)를 갖는 sFv 단편 (이전 단락 참고)을 제작함으로써 제조된 작은 항체 단편을 지칭하며, 이로써 상기 V 도메인들의 사슬내 쌍형성이 아닌 사슬간 쌍형성이 달성되어, 2가 단편, 즉, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편을 야기한다. 이중특이적 디아바디는 2개의 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩타이드 사슬 상에 존재하는 2개의 "교차형 (crossover)" sFv 단편의 이종이량체이다. 디아바디는, 예를 들면, 하기에 더 상세히 기재되어있다: EP 제404,097호; WO 제93/11161호; 및 Hollinger 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993.
"결합 도메인"은 표적 에피토프, 항원, 리간드, 또는 수용체에 특이적으로 결합하는 화합물 또는 분자의 일부를 의미한다. 결합 도메인은 비제한적으로 항체 (예를 들면, 단클론성, 다클론성, 재조합, 인간화, 및 키메라성 항체), 항체 단편 또는 이의 일부 (예를 들면, Fab 단편, Fab'2, scFv 항체, SMIP, 도메인 항체, 디아바디, 미니바디, scFv-Fc, 아피바디, 나노바디, 및 항체의 VH 및/또는 VL 도메인), 수용체, 리간드, 압타머, 및 확인된 결합 파트너를 갖는 다른 분자를 포함한다.
"차단" 항체 또는 "길항제 (antagonist)" 항체는 상기 항체가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 항체이다. 특정 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전하게 억제한다.
"세포-기반 차단 분석"는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 항체의 능력을 측정할 수 있는 분석을 지칭한다. 예를 들면, 세포-기반 분석은 특정 생물학적 또는 생화학적 기능을 억제하는데 필요한 항체의 농도를 측정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)의 반 최대 억제 농도 (IC50) 및/또는 90% 억제 농도 (IC90)는 세포-기반 차단 분석을 사용하여 측정된다. 일부 구현예에서, 세포-기반 차단 분석은 항체가 리간드 (예를 들면, IL-33) 및 그의 수용체 (예를 들면, ST2 및/또는 공동수용체 IL-1RAcP) 간의 상호작용을 차단하는지 여부를 결정하는데 사용된다. IL-33에 대한 예시적인 세포-기반 차단 분석이 본원 실시예 2B에서 제공된다. IL-33에 대한 추가의 예시적인 세포-기반 차단 분석이 본원에, 예를 들면, 실시예 8에서 제공되며, 이는 1차 자연 살해 (NK) 세포 분석 및 1차 호염기구 세포 분석을 포함한다.
항체의 "부류"는 그의 중쇄가 갖는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 항체의 5가지 부류인 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM가 있으며, 이들 중 몇 가지는 하위부류 (아이소타입), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 더 분류될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인는 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다.
항체 "효과기 기능"는 항체의 Fc 영역 (천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 특징을 지칭하며, 이는 항체 아이소타입에 따라 다르다. 항체 효과기 기능의 예는 하기를 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개된 세포독성 (ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체 (예를 들면, B 세포 수용체)의 하향조절; 및 B 세포 활성화.
"항체-의존적 세포-매개된 세포독성" 또는 "ADCC"는 특정 세포독성 세포 (예를 들면, 자연 살해 (NK) 세포, 중성구, 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체 (FcR)에 결합한 분비된 Ig가 이들 세포독성 효과기 세포를 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합시켜 세포독소로 표적 세포를 사멸하게 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. 항체는 세포독성 세포를 "무장시키고 (arm)", 이는 이러한 사멸에 절대적으로 요구된다. ADCC를 매개하는 일차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 하기 문헌의 464 페이지 표 3에 요약되어 있다: Ravetch 등 Annu. Rev. Immunol. 9:457-492, 1991. 관심있는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCC 분석 (예컨대, US 특허 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기재된 것)이 수행될 수 있다. 이러한 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가로, 관심있는 분자의 ADCC 활성은, 예를 들면, 하기에 개시된 바와 같이 동물 모델에서, 생체내에서 평가될 수 있다: Clynes 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:652-656, 1998.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"는 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기술한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 게다가, 바람직한 FcR은 IgG 항체에 결합하는 것 (감마 수용체)이며, 이는 이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이스된 형태를 포함하는, FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 하위부류의 수용체를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하며, 이는 주로 이의 세포질 도메인이 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 (M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234, 1997 검토 참고). FcR은, 예를 들면, 하기 문헌에서 검토된다: Ravetch 등 Annu. Rev. Immunol. 9:457-492, 1991; Capel 등 Immunomethods 4:25-34, 1994; 및 de Haas 등 J. Lab.Clin. Med .126:330-41, 1995.미래에 확인될 것을 포함하는 다른 FcR이 본원 용어 "FcR"에 포함된다. 상기 용어는 또한 신생아 수용체, FcRn을 포함하고, 이는 태아에게 모계 IgG를 전달하는 것을 담당한다 (예를 들면, Guyer 등 J. Immunol. 117:587, 1976; 및 Kim 등 J. Immunol. 24:249, 1994 참고).
"인간 효과기 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현하고 효과기 기능을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게는, 상기 세포는 적어도 FcγRIII을 발현하고 ADCC 효과기 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 자연 살해 (NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포, 및 중성구를 포함하며; PBMC 및 NK 세포가 바람직하다. 효과기 세포는 천연 공급원, 예를 들면, 혈액으로부터 단리될 수 있다.
"보체 의존적 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적 보체 경로의 활성화는 동족 항원에 결합된 항체 (적절한 하위부류의 항체)에 보체 시스템 (C1q)의 제1 구성요소가 결합함으로써 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들면, 문헌[Gazzano-Santoro 등 J. Immunol. Methods 202:163, 1996]에 기재된 바와 같은 CDC 분석이 수행될 수 있다.
"에피토프"는 항체가 선택적으로 결합하는 항원의 부분이다. 폴리펩타이드 항원의 경우, 에피토프는 일반적으로 약 4-15개 아미노산 잔기의 펩타이드 부분이다.
용어들 "전장 항체," "온전한 항체," 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조에 실질적으로 유사한 구조를 갖는 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산되고/거나 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 명시적으로 배제한다.
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택시 가장 공통적으로 존재하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열은 가변 도메인 서열의 하위그룹으로부터 선택된다. 일반적으로, 서열의 하위그룹은 하기 문헌에서와 같은 하위그룹이다: Kabat 등 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD, vols. 1-3, 1991. 일 구현예에서, VL의 경우, 하위그룹은 상기 카밧 등에서와 같은 하위그룹 카파 III 또는 카파 IV이다. 일 구현예에서, VH의 경우, 하위그룹은 상기 카밧 등 에서와 같은 하위그룹 III이다.
비-인간 (예를 들면, 설치류) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라성 항체이다. 대부분, 인간화된 항체는 수령체의 초가변성 영역의 잔기가 비-인간 종 (공여체 항체), 예컨대 원하는 항체 특이성, 친화도, 및 능력을 갖는 마우스, 랫트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 초가변성 영역의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린 (수령체 항체)이다. 일부 경우, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 더욱이, 인간화된 항체는 수령체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 더 개선하기 위해 이뤄진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 또는 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변성 루프는 비-인간 면역글로불린에 상응하며 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화된 항체는 임의로 또한 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 부분, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 추가 세부사항을 위해, 하기를 참고한다: Jones 등 Nature 321:522-525, 1986; Riechmann 등 Nature 332:323-329, 1988; 및 Presta, Curr.Op.Struct. Biol. 2:593-596, 1992.
"면역접합체"는 비제한적으로 세포독성 약물을 포함하는 하나 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체이다.
용어 "단리된"는, 본원에 개시된 다양한 항체를 설명하기 위해 사용되는 경우, 항체가 발현된 세포 또는 세포 배양물로부터 확인되고 분리되고/거나 회수된 항체를 의미한다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 전형적으로 폴리펩타이드에 대한 진단 또는 치료적 용도를 방해할 물질이며, 이는 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는, 예를 들면, 전기영동 (예를 들면, 나트륨 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE), 등전점 전기영동 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들면, 이온 교환 또는 역상 HPLC) 방법에 의해 결정된 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가를 위한 방법의 검토를 위해, 예를 들면, Flatman 등 J. Chromatogr. B 848:79-87, 2007을 참고한다. 바람직한 구현예에서, 항체는 (1) 스피닝 컵 서열분석기 (spinning cup sequenator)를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하는데 충분한 정도까지, 또는 (2) 쿠마시 블루 (Coomassie blue) 또는, 바람직하게는, 은 염색 (silver stain)을 사용하여 비-환원 또는 환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의해 균질한 정도까지 정제될 것이다. 단리된 항체는, 폴리펩타이드 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에, 재조합 세포 내에 원위치 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 폴리펩타이드는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉, 예컨대 천연 발생 돌연변이를 함유하거나 단클론성 항체 제제의 생산 동안 생기는 가능한 변이체 항체 (상기 변이체는 일반적으로 작은 양으로 존재함)를 제외한, 상기 집단을 포함하는 개별적인 항체는 동일하고/거나 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정인자 (에피토프)에 지향된 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제제와 달리, 단클론성 항체 제제의 각 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 지향된다. 따라서, 수식어 "단클론성"는 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득되는 항체의 특징을 가리키며, 이는 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용될 단클론성 항체는 비제한적으로 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파아지-디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자좌의 모두 또는 일부를 함유하는 형질전환 동물을 사용하는 방법을 포함하는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있고, 단클론성 항체를 제조하는 상기 방법 및 다른 예시적인 방법이 본원에 기재되어 있다.
용어 "다중특이적 항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 경쇄 가변 도메인 (VL)를 포함하는 항체를 포함하고, 여기서 VHVL 단위는 폴리에피토프 특이성 (즉, 하나의 생물학적 분자 상의 2개의 상이한 에피토프 또는 상이한 생물학적 분자 상의 각각의 에피토프에 결합할 수 있음)을 갖는다. 이러한 다중특이적 항체는, 비제한적으로, 전장 항체, 둘 이상의 VL 및 VH 도메인을 갖는 항체, 항체 단편, 예컨대 Fab, Fv, dsFv, scFv, 디아바디, 이중특이적 디아바디 및 트리아바디, 공유적 또는 비-공유적으로 연결된 항체 단편을 포함한다. "폴리에피토프 특이성"는 동일하거나 상이한 표적(들) 상의 둘 이상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 지칭한다. "이중 특이성 (Dual specificity 또는 bispecificity)"는 동일하거나 상이한 표적(들) 상의 2개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 지칭한다. 그러나, 이중특이적 항체와 달리, 이중-특이적 항체는 아미노산 서열이 동일한 2개의 항원-결합 아암 (arm)을 가지며 각 Fab 아암은 2개의 항원을 인식할 수 있다. 이중-특이성은 항체가 단일 Fab 또는 IgG 분자로서 2개의 상이한 항원과 고친화도로 상호작용하는 것을 가능하게 한다. 일 구현예에 따르면, IgG1 형태의 다중특이적 항체는 5μM 내지 0.001pM, 3μM 내지 0.001pM, 1μM 내지 0.001pM, 0.5μM 내지 0.001pM 또는 0.1μM 내지 0.001pM의 친화도로 각 에피토프에 결합한다. "단일특이성"는 단 하나의 에피토프에 결합하는 능력을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "노브-인투-홀 (knob-into-hole)" 또는 "KnH" 기술은 돌출부 (knob)를 하나의 폴리펩타이드에 도입하고 공동 (hole)을 이들이 상호작용하는 경계면 (interface)에 있는 다른 폴리펩타이드에 도입함으로써, 2개의 폴리펩타이드가 시험관내 또는 생체내에서 함께 쌍을 형성하는 것을 유도하는 기술을 지칭한다. 예를 들면, KnH는 항체의 Fc:Fc 결합 경계면, CL:CH1 경계면, 또는 VH/VL 경계면에 도입되었다 (예를 들면, US 제2011/0287009호, US 제2007/0178552호, WO 제96/027011호, WO 제98/050431호, 및 Zhu 등 Protein Science 6:781-788, 1997 참고). 일부 구현예에서, KnH는 다중특이적 항체의 제작 동안 2개의 상이한 중쇄의 쌍형성을 유도한다. 예를 들면, Fc 영역에 KnH를 갖는 다중특이적 항체는 각 Fc 영역에 연결된 단일 가변 도메인을 추가로 포함할 수 있거나, 또는 유사하거나 상이한 경쇄 가변 도메인과 쌍을 형성하는 상이한 중쇄 가변 도메인을 추가로 포함할 수 있다. KnH 기술은 또한 2개의 상이한 수용체 세포외 도메인을 쌍형성하거나 또는 상이한 표적 인식 서열을 포함하는 임의의 다른 폴리펩타이드 서열을 쌍형성하는데 (예를 들면, 아피바디, 펩티바디, 및 다른 Fc 융합을 포함함) 사용될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "돌출부 (knob) 돌연변이"는 폴리펩타이드가 또 다른 폴리펩타이드와 상호작용하는 경계면에서 돌출부를 폴리펩타이드에 도입하는 돌연변이를 지칭한다. 일부 구현예에서, 다른 폴리펩타이드는 공동 (hole) 돌연변이를 갖는다 (예를 들면, 미국 특허 번호 5,731,168호; 제5,807,706호; 제5,821,333호; 제7,695,936호; 및 제8,216,805호 참고 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "공동 (hole) 돌연변이"는 폴리펩타이드가 또 다른 폴리펩타이드와 상호작용하는 경계면에서 공동을 폴리펩타이드에 도입하는 돌연변이를 지칭한다. 일부 구현예에서, 다른 폴리펩타이드는 돌출부 돌연변이를 갖는다 (예를 들면, 미국 특허 번호 5,731,168호; 제5,807,706호; 제5,821,333호; 제7,695,936호; 및 제8,216,805호 참고 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)).
"네이키드 항체"는 이종성 모이어티 (예를 들면, 세포독성 모이어티) 또는 방사선표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 네이키드 항체는 약제학적 조성물 내에 존재할 수 있다.
표적 분자에 대한 항체의 결합과 관련하여, 용어 특정한 폴리펩타이드 또는 특정한 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 또는 "특이적"은 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들면, 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써, 측정될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합은 표적, 예를 들면, 과량의 비-표지된 표적에 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 프로브에 대한 표지된 표적의 결합이 과량의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 저해되면, 특이적 결합이 표시된다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 특정한 폴리펩타이드 또는 특정한 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 또는 "특이적"은, 예를 들면, 표적 분자에 대해, 10-4 M 이하, 대안적으로 10-5 M 이하, 대안적으로 10-6 M 이하, 대안적으로 10-7 M 이하, 대안적으로 10-8 M 이하, 대안적으로 10-9 M 이하, 대안적으로 10-10 M 이하, 대안적으로 10-11 M 이하, 대안적으로 10-12 M 이하의 KD 또는 10-4 M 내지 10-6 M 또는 10-6 M 내지 10-10 M 또는 10-7 M 내지 10-9 M의 범위의 KD를 갖는 분자로 표시될 수 있다. 숙련가에 의해 이해될 바와 같이, 친화도와 KD 값은 반비례한다. 항원에 대한 높은 친화도는 낮은 KD 값에 의해 측정된다. 일 구현예에서, 용어 "특이적 결합"는 분자가 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않으면서 특정한 폴리펩타이드 또는 특정한 폴리펩타이드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다.
용어 "가변"는 가변 도메인의 어떤 분절이 항체 간에 서열이 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. 가변 또는 "V" 도메인은 항원 결합을 매개하며 특정한 항체의 그의 특정한 항원에 대한 특이성을 정의한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 110개 아미노산 범위에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 대신에, V 영역은 각각 9-12개 아미노산 길이인 "초가변성 영역"로 불리는 매우 가변성인 더 짧은 영역에 의해 분리된 15-30개의 아미노산의 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 상대적 불변 구간으로 이루어진다. 본원에서 사용될 때 용어 "초가변성 영역" 또는 "HVR"는 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변성 영역은 일반적으로 예를 들면, VL 내의 약 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3), 및 VH 내의 약 잔기 26-35 (H1), 49-65 (H2) 및 95-102 (H3) (일 구현예에서, H1은 약 잔기 31-35임; 상기 카밧 등)로부터의 아미노산 잔기 및/또는 "초가변성 루프"로부터의 잔기 (예를 들면, VL 내의 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 및 91-96 (L3), 및 VH 내의 26-32 (H1), 53-55 (H2), 및 96-101 (H3); 초티아 등 J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987)를 포함한다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 각각은 베타-시트 구조의 루프 연결부, 및 일부 경우에 베타-시트 구조의 형성부를 형성하는, 3개의 초가변성 영역에 의해 연결된, 주로 베타-시트 입체배치를 채택하는 4개의 FR을 포함한다. 각 사슬 내의 초가변성 영역은 FR에 의해 함께 근접하게 유지되며, 다른 사슬의 초가변성 영역과 함께, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 (상기 카밧 등 참고). 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH (또는 VL) 내에서 하기 서열로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4. 불변 도메인은 항체가 항원에 결합하는데 직접 관여하지 않지만, 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC)에 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다.
용어 "카밧에서와 같은 가변 도메인 잔기 넘버링" 또는 "카밧에서와 같은 아미노산 위치 넘버링," 및 이의 변화는 상기카밧 등에서 항체의 편성의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 삽입에 상응하는 몇 가지 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후에 단일 아미노산 삽입물 (카밧에 따르면 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 이후에 삽입된 잔기 (예를 들면 카밧에 따르면 잔기 82a, 82b, 및 82c, 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카밧 넘버링은 "표준" 카밧 넘버링된 서열과 항체의 서열의 상동성의 영역에서의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다.
카밧 넘버링 시스템은 일반적으로 가변 도메인 (경쇄의 대략 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113)에서의 잔기를 언급할 때 사용된다 (예를 들면, 상기 카밧 등). "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 지수"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역에서 잔기를 언급할 때 사용된다 (예를 들면, 상기카밧 등에서 보고된 EU 지수). "카밧에서와 같은 EU 지수"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 본원에서 달리 언급되지 않는 한, 항체의 가변 도메인에서 잔기 번호에 대한 언급은 카밧 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다. 본원에서 달리 언급되지 않는 한, 항체의 불변 도메인에서 잔기 번호에 대한 언급은 EU 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다 (예를 들면, EU 넘버링에 대해, 미국 가출원 제60/640,323호, 도면 참고).
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "투여하는"는 복용량의 화합물 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체 또는 본 발명의 항-IL-33 항체를 인코딩하는 핵산) 또는 조성물 (예를 들면, 약제학적 조성물, 예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체를 포함하는 약제학적 조성물)의 대상체에게 제공하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 기재된 방법에서 이용된 조성물은, 예를 들면, 하기에 의해 투여될 수 있다: 초자체내로, 근육내로, 정맥내로, 진피내로, 경피로, 동맥내로, 복강내로, 병소내로, 두개내로, 관절내로, 전립선내로, 늑막내로, 기관내로, 척추강내로, 비강내로, 질내로, 직장내로, 국소로, 종양내로, 복막으로, 피하로, 결막하로, 방광내로, 점막으로, 심막내로, 탯줄내로, 안구내로, 안와내로, 경구로, 국소로, 경피로, 안구주위로, 결막으로, 테논낭하로, 전방내로, 망막하로, 안구뒤로, 소관내로, 흡입으로, 주사로, 이식으로, 주입으로, 계속되는 주입으로, 직적으로 국재화된 관류 수영 표적 세포에 의해, 카테터로, 세척에 의해, 크림 내에, 또는 지질 조성물 내에.본 명세서에서 기재된 방법에서 이용된 조성물은 또한 전신으로 또는 국소로 투여될 수 있다. 투여 방법은 다양한 인자 (예를 들면, 투여될 화합물 또는 조성물 및 치료될 병태, 질환, 또는 장애의 중증도)에 따라 변할 수 있다.
용어 "천식"는 본 명세서에서 가변 및 재발성 증상, (예를 들면, 기관지확장제에 의한) 가역적 기류 폐색, 및 기관지 과도-반응성(이것은 기저 염증과 관련되거나 그렇지 않을 수 있음)을 특징으로 하는 장애를 지칭한다. 따라서 천식은 염증성/염증성 천식 또는 비-염증성/비-염증성 천식일 수 있다. 천식의 예는 알러지성 천식, 운동-유도된 천식, 아스피린 민감성/악화된 천식, 아토피성 천식, 중증 천식, 경증 천식, 보통 내지 중증 천식, 코르티코스테로이드 미접촉 천식, 만성적 천식, 코르티코스테로이드 내성있는 천식, 코르티코스테로이드 난치성 천식, 새로 진단된 및 미치료된 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드에 통제되지 않는 천식, 및 하기에서 언급된 다른 천식을 포함한다: Bousquet 등 J. Allergy Clin. Immunol. 126(5): 926-938, 2010.
"장애" 또는 "질환"는 항체에 의한 치료에 유익한 임의의 병태이다. 예를 들면, 장애는 IL-33-매개된 장애일 수 있다. 이것은, 포유동물이 문제의 장애에 쉽게 걸리는 병태를 포함하는 만성적 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 본 명세서에서 치료될 장애의 예는 IL-33-매개된 장애 (예를 들면, 천식, 알러지성 비염, 아토피 피부염, 및 섬유증 (예를 들면, 폐 섬유증, 예를 들면, 특발성 폐 섬유증))을 포함한다.
"화학치료제"는 화합물 암의 치료에 유용하다. 화학치료제의 예는 하기를 포함한다: 알킬화제 예컨대 티오테파 및 사이클로스포스파마이드 (CYTOXAN®); 알킬 설포네이트 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민 (알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민 포함); 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라하이드로칸나비놀 (드로나비놀, MARINOL®); 베타-라파콘; 라파콘; 콜히친; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (HYCAMTIN®), CPT-11 (이리노테칸, CAMPTOSAR®), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신) 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그것의 아도젤레신, 카르젤레신 및 바이젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토파이신 (특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로르암부실, 클로르나파진, 클로로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 펜에스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님무스틴; 항생제 예컨대 엔디인 항생제 (예를 들면, 칼리키아마이신, 특히 칼리키아마이신 감마1I 및 칼리키아마이신 오메가일 (참고, 예를 들면, Nicolaou 등Angew.Chem Intl .Ed. Engl.,33:183-186 (1994)); CDP323, 경구 알파-4 인테그린 저해제; 다이네마이신 (다이네마이신 A 포함); 에스페라마이신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색소단백질 엔디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (ADRIAMYCIN®, 모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포좀 주사 (DOXIL®), 리포좀 독소루비신 TLC D-99 (MYOCET®), 페길화된 리포좀 독소루비신 (CAELYX®), 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피머, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물 예컨대 메토트렉세이트, 젬시타빈 (GEMZAR®), 테가푸르 (UFTORAL®), 카페시타빈 (XELODA®), 에포틸론, 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 콤브레타스타틴; 엽산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레벌린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로소크산트론; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK® 다당류 복합체 (JHS NATURAL PRODUCTS, Eugene, Oreg.); 라족산; 라이족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아진산; 트리아지쿠온; 2,2',2'-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®); 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, 파클리탁셀 (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J. ), 알부민-조작된 나노입자 제형 of 파클리탁셀 (아브락산TM), 및 도세탁셀 (TAXOTERE®, Rhome-Poulene Rorer, Antony, France); 클로란부실; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 제제 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 (예를 들면, ELOXATIN®), 및 카보플라틴; 빈카 (튜불린 중합을 미세소관의 형성으로부터 예방함, including 빈블라스틴 (VELBAN®), 빈크리스틴 (ONCOVIN®), 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®), 및 비노렐빈 (NAVELBINE®) 포함); 에토포시드 (VP-16); 이포스파마이드; 미톡산트론; 류코보린; 노반트론; 데다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산 (벡사로텐 (TARGRETIN®); 비스포스포네이트 예컨대 클로드로네이트 (예를 들면, BONEFOS® 또는 OSTAC®), 에티드로네이트 (DIDROCAL®), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트 (조메타®), 알렌드로네이트 (FOSAMAX®), 팔미드로네이트 (AREDIA®), 틸루드로네이트 (SKELID®), 또는 리센드로네이트 (ACTONEL®) 포함); 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오사이드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 비정상적인 세포 증식과 연루된 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것들, 예를 들면, PKC-알파, Raf, H-Ras, 및 표피 성장 인자 수용체 (EGF-R) (예를 들면, 에를로티닙 (타르세바TM)); 및 VEGF-A (세포 증식을 감소시킴); 백신 예컨대 THERATOPE® 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들면, ALLOVECTIN® 백신, LEUVECTIN® 백신, 및 VAXID® 백신; 토포이소머라제 1 저해제 (예를 들면, LURTOTECAN®); rmRH (예를 들면, ABARELIX®); BAY439006 (소라페닙; Bayer); SU-11248 (수니티닙, SUTENT®, Pfizer); 페리포신, COX-2 저해제 (예를 들면 셀레콕십 또는 에토리콕십), 프로테오좀 저해제 (예를 들면 PS341); 보르테조밉 (VELCADE®); CCI-779; 티피파르닙 (R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 저해제 예컨대 오블리메르센 나트륨 (GENASENSE®); 픽산트론; EGFR 저해제; 티로신 키나제 저해제; 세린-트레오닌 키나제 저해제 예컨대 라파마이신 (시롤리무스, RAPAMUNE®); 파르네실전달효소 저해제 예컨대 로나파르닙 (SCH 6636, SARASARTM); 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2종 이상의 조합물 예컨대 CHOP, 사이클로포스파마이드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니솔론의 병용 요법에 대한 약어; 및 폴폭스, 5-FU 및 류코보린과 조합된 옥살리플라틴 (엘록사틴TM)에 의한 치료 레지멘에 대한 약어, 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2종 이상의 조합물.
화학치료제는 본 명세서에서 정의된 바와 같이, 암의 성장을 촉진할 수 있는 호르몬의 효과를, 조절, 감소, 차단, 또는 억제하도록 작용하는 "항-호르몬제" 또는 "내분비 치료제"를 포함한다. 상기는, 비제한적으로 하기를 포함하는 호르몬 자체일 수 있다: 혼합된 효능제/길항제 프로파일을 갖는 항-에스트로겐 (타목시펜 (NOLVADEX®), 4-하이드록시타목시펜, 토레미펜 (FARESTON®), 이독시펜, 드롤록시펜, 랄록시펜 (EVISTA®), 트리옥시펜, 케녹시펜, 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질 (SERMs) 예컨대 SERM3 포함); 효능제 특성 없는 순수한 항-에스트로겐, 예컨대 풀베스트란트 (FASLODEX®), 및 EM800 (그와 같은 제제는 에스트로겐 수용체 (ER) 이량체화를 차단하고, DNA 결합을 억제하고, ER 턴오버를 증가시키고/거나 ER 수준을 억제함); 방향화효소 저해제(스테로이드 방향화효소 저해제 예컨대 포르메스탄 및 엑세메스탄 (AROMASIN®), 및 비스테로이드 방향화효소 저해제 예컨대 아나스트라졸 (ARIMIDEX®), 레트로졸 (FEMARA®) 및 아미노글루테티미드 포함), 및 다른 방향화효소 저해제는 하기를 포함한다: 보로졸 (RIVISOR®), 메게스트롤 아세테이트 (MEGASE®), 파드로졸, 및 4(5)-이미다졸; 황체 호르몬-방출 호르몬 효능제 (류프롤라이드 (LUPRON® 및 ELIGARD®), 고세렐린, 부세렐린, 및 트리프테렐린 포함); 성 스테로이드 (프로게스틴 예컨대 메게스트롤 아세테이트 및 메드록시프로게스테론 아세테이트, 에스트로겐 예컨대 디에틸스틸베스트롤 및 프레마린, 및 안드로겐/레티노이드 예컨대 플루옥시메스테론, 모든 트렌스레티노산 및 펜레티나이드 포함); 오나프리스톤; 항-프로게스테론; 에스트로겐 수용체 다운-조절물질 (ERDs); 항-안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타마이드 및 바이칼루타마이드; 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2종 이상의 조합물.
용어 "세포독성 약물"는 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 세포 기능을 억제 또는 방지하고/거나 세포사 또는 파괴를 중단시키는 서브스턴스를 지칭한다. 세포독성 약물은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 방사성 동위원소 (예를 들면, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학치료제 또는 약물 (예를 들면, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알카로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로르암부실, 다우노루비신 또는 다른 개재 약물); 성장 저해된 제제; 효소 및 그것의 단편 예컨대 핵산분해 효소; 항생제; 독소 예컨대 단편 및/또는 그것의 변이체를 포함하는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소적 활성 독소; 및 본 명세서에서 개시된 다양한 항종양제 또는 항암제.
"유효한 양"의 제제, 예를 들면, 약제학적 제형은, 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하는데 필요한 복용량 및 그 기간 동안에 유효한 양을 지칭한다.
"성장 저해된 제제"는, 본 명세서에서 사용될 때, 시험관내 또는 생체내 세포의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 따라서, 성장 저해된 제제는 S 상에서 세포의 백분율 유의미하게 감소시키는 것일 수 있다. 성장 저해된 제제의 예는 세포 주기 진행 (S 상 이외의 곳에서) 세포 주기 진행을 차단하는 제제, 예컨대 G1 체포 및 M-상 정지를 유도하는 제제를 포함한다. 고전적 M-상 차단제는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산, 및 토포이소머라제 II 저해제 예컨대 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드, 및 블레오마이신을 포함한다. G1를 정지치시는 제제는 또한 S-상 정지로 넘쳐 나오고, 그 예는 DNA 알킬화제 예컨대 타목시펜, 프레드니손, 다카바진, 메클로르에타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 및 ara-C이다. 추가 정보는 아래에서 발견될 수 있다: Mendelsohn 등 eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, 명칭 "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami 등(W. B.Saunders, Philadelphia, 1995), 예를 들면, p.13.탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀) 둘 모두는 주목 나무로부터 유래된 항암 약물이다. 유럽 주목으로부터 유래된 도세탁셀 (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer)은 파클리탁셀 (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb)의 반합성 유사체이다. 파클리탁셀 및 도세탁셀은 튜불린 이량체로부터의 미세소관의 어셈블리를 촉진하고 세포에서 유사분열의 저해를 야기하는 탈중합을 방지하여 미소세관을 안정화시킨다.
용어 "IL-33-매개된 장애"는 본 명세서에서 사용된 바와 같이, IL-33 축에 의해 매개되거나 그것과 관련된 임의의 장애 또는 병태를 지칭한다. 일부 구현예에서, IL-33-매개된 장애는 과잉의 IL-33 수준 또는 활성과 관련되고, 여기서 비정형 증상은 IL-33의 수준 또는 활성으로 인해 신체에서 국소로 및/또는 전신으로 나타날 수 있다. 예시적인 IL-33-매개된 장애는 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 및 안과적 장애를 포함한다. IL-33-매개된 장애는 예를 들면, 하기에서 기재되어 있다: Liew 등 Nature Reviews Immunology 10:103-110, 2010 (이것은 본 명세서에 그 전체가 참고로 편입됨).
예시적인 염증성 병태는 하기를 포함한다: 천식 (예를 들면, 알러지성 천식, 운동-유도된 천식, 아스피린 민감성/악화된 천식, 아토피성 천식, 중증 천식, 온화한 천식, 보통 내지 중증 천식, 코르티코스테로이드 미접촉 천식, 만성적 천식, 코르티코스테로이드 내성있는 천식, 코르티코스테로이드 난치성 천식, 새로 진단된 및 미치료된 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드에 대해 조절되지 않는 천신, 등), 기도 염증, 기도 과민반응, 기도 과반응성, 비부비동염, 용종 있는 비부비동염, 비강 용종증, 관절염 (예를 들면, 골관절염, 류마티스성 관절염, 콜라겐-유도된 관절염, 부상의 결과로서 관절염 관절, 등), 호산구 염증, 비만 세포-매개된 염증성 질환, 패혈증, 패혈성 쇼크, 혈청검사음성 부착부위병증 및 관절병증 (SEA) 증후군, 골다공증, 호산구 식도염, 경피증, 피부염, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 수포성 유천포창, 만성적 두드러기, 연골 염증, 다발근육통 류마티스성, 결절성 다발동맥염, 베게너 육아종증, 베체트병, 근염, 다발성근염, 피부근염, 피부근염, 혈관염, 동맥염, 당뇨병성 신병증, 간질 방광염, 이식편 대 숙주 질환 (GVHD), 위장 염증성 병태 (예를 들면, 염증성 장 질환 (IBD), 궤양성 대장염 (UC), 크론병 (CD), 대장염 (예를 들면, 환경적인 모욕에 의해 야기된 대장염 (예를 들면, 치료 레지멘, 예컨대 화학요법, 방사선 요법, 등에 의해 야기되거나 그것과 관련됨), 감염성 대장염, 허혈성 대장염, 교원성 또는 림프구 대장염, 괴사성 장염, 병태 예컨대 만성적 육아종 질환 또는 소아지방변증에서의 대장염, 음식 알러지, 위염, 감염성 위염 또는 장염 (예를 들면, 헬리코박터 파일로리-감염된 만성적 활성 위염), 및 감염원에 의해 야기된 다른 형태의 위장 염증), 및 염증성 폐 병태 (예를 들면, 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 호산구 폐 염증, 감염-유도된 폐 병태 (하기와 관련된 것들 포함: 바이러스 (예를 들면, 인플루엔자, 파라인플루엔자, 로타바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 및 호흡기 세포융합 바이러스), 박테리아, 진균 (예를 들면, 아스페르길루스), 기생충, 또는 프리온 감염, 알러지항원-유도된 폐 병태, 오염물질-유도된 폐 병태 (예를 들면, 석면증, 규폐증, 또는 베릴륨증), 위 흡인-유도된 폐 병태, 면역 조절장애, 유전적 소인을 갖는 염증성 병태 예컨대 낭포성 섬유증, 물리적 트라우마-유도된 폐 병태 (예를 들면, 환기장치 부상), 폐공기증, 기관지염, 유육종증, 조직구증, 림프관근종증, 급성 폐 손상, 급성 호흡기 곤란 증후군, 만성적 폐 질환, 기관지폐 이형성증, 폐렴 (예를 들면, 공동체-획득된 폐렴, 병원 폐렴, 환기장치-관련된 폐렴, 바이러스 폐렴, 세균성 폐렴, 및 중증 폐렴), 기도 악화, 및 급성 호흡기 곤란 증후군 (ARDS)).
예시적인 면역 장애는 하기를 포함한다: 비만 세포, 예컨대 천식 (예를 들면, 알러지성 천식), 습진, 가려움, 알러지, 아토피 알러지, 과민증, 과민성 쇼크, 알러지성 기관지폐 아스페르길루스증, 알러지성 비염, 알러지성 결막염에 의해 부분적으로 매개된 것들, 뿐만 아니라 하기를 포함하는 자가면역 장애: 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 췌장염, 건선, 판상 건선, 적상 건선, 역형 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 방종양성 자가면역 질환, 자가면역 간염, 수포성 유천포창, 중증 근무력증, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 소아지방변증, 갑상선염 (예를 들면, 그레이브스병), 쇼그렌 증후군, 길랑-바레 질환, 레이노 증후군 현상, 애디슨병, 간 질환 (예를 들면, 원발성 담도성 간경변증, 원발성 경화 담관염, 비-알코올성 지방 간 질환, 및 비-알코올성 지방간염), 및 당뇨병 (예를 들면, I형 당뇨병).
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어들 "섬유성 장애" 또는 "섬유증"는 장기 또는 조직에서 과잉의 섬유질 결합 조직 의 형성을 수반하는 병태를 지칭한다. 예시적인 섬유성 장애는 하기를 포함한다: 폐 섬유증, 간 섬유증 (예를 들면, 간경변 (예를 들면, 알코올-유도된 간경변, 바이러스-유도된 간경변, 후-C형 간염 간경변, 및 원발성 담도성 간경변증)과 관련된 섬유증, 주혈흡충증, 담관염 (예를 들면, 경화 담관염), 및 자가면역-유도된 간염), 신장 섬유증 (예를 들면, 요세관사이질 섬유증, 경피증, 당뇨병성 신염, 및 사구체 신염), 진피 섬유증 (예를 들면, 경피증, 비대성 및 켈로이드 반흔, 신원발성 섬유성 피부병, 및 화상), 골수섬유증, 신경섬유종증, 섬유종, 장 섬유증, 및 수술 과정으로부터 섬유성 유착), 심장 섬유증 (예를 들면, 심근경색증과 관련된 섬유증), 혈관 섬유증 (예를 들면, 혈관성형후 동맥 재협착증 및 죽상경화증과 관련된 섬유증), 눈 섬유증 (예를 들면, 후-백내장 수술, 증식성 초자체망막병증, 및 안와후 섬유증과 관련된 섬유증), 및 골수 섬유증 (예를 들면, 특발성 골수섬유증 및 약물-유도된 골수섬유증). 섬유증은 장기-특이적이거나 전신일 수 있다 (예를 들면, GVHD와 관련된 섬유증 및 전신 경화증).
폐 섬유증의 예는, 예를 들면, 하기를 포함한다: 특발성 폐 섬유증과 관련된 폐(lung) 또는 폐(pulmonary) 섬유증, 콜라겐 혈관 질환, 헤르만스키-푸들라크 증후군, 성인 호흡기 곤란 증후군, 비특이적 간질 폐렴, 호흡기 세기관지염, 유육종증, 조직구증 X, 폐쇄 세기관지염, 및 원인불명의 기질화 폐렴과 관련된 섬유증. 일 구현예에서, 폐 섬유증은 특발성 폐 섬유증이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "호산구 장애"는 과잉의 호산산구 수와 관련된 장애이고, 여기서 비정형 증상은 호산구의 수준 또는 활성으로 인해 신체에서 국소로 및/또는 전신으로 나타날 수 있다. 호산구 장애는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 천식 (아스피린 민감성 천식, 아토피성 천식, 및 중증 천식 포함), 호산구 염증, 아토피 피부염, 알러지성 비염 (계절성 알러지성 비염 포함), 비-알러지성 비염, 만성적 호산구 폐렴, 알러지성 기관지폐 아스페르길루스증, 소아지방변증, 처그-스트라우스 증후군 (동맥주위염 결절성 플러스 아토피), 호산구 근육통 증후군, 과호산구 증후군, 부종성 반응(간헐적 맥관부종 포함), 연충 감염 (여기서 호산구는 보호 역할을 할 수 있음), 사상충 피부염, 호산구-관련된 위장 장애 (EGID) (비제한적으로, 호산구 식도염, 호산구 위염, 호산구 위장염, 호산구 장염 및 호산구 대장염 포함), 비강 미소용종증 및 용종증, 아스피린 불내성, 및 폐쇄성 수면 무호흡증.호산구-유도된 분비성 생성물은 병태 예컨대 만성적 천식, 크론병, 경피증 및 심내막심근 섬유증에서 보여진 섬유성 반응 및 종양에서 혈관신생 및 결합 조직 형성의 촉진과 또한 관련되었다 (Munitz 등Allergy 59:268-275, 2004; Adamko 등Allergy 60:13-22, 2005; Oldhoff 등Allergy 60:693-696, 2005). 다른 예는 하기를 포함한다: 암 (예를 들면, 교모세포종 (예컨대 교모세포종 다형성) 및 비-호지킨 림프종 (NHL)), 아토피 피부염, 알러지성 비염, 염증성 장 질환, 섬유증 (예를 들면, 폐 섬유증 (예를 들면, 경화증에 대해 2차인 특발성 폐 섬유증 (IPF) 및 폐 섬유증) 및 간 섬유증), 및 COPD.
감염의 예는 하기를 포함한다: 연충 감염 (예를 들면, 선충 감염, 예컨대 인간 기생충 트리쿠리스 트리치우라에 의한 감염에 대한 모델인 마우스의 트리쿠리스 뮤리스 감염), 원생동물 감염 (예를 들면, 라이쉬마니아 메이저 감염), 및 바이러스성 감염 (예를 들면, 호흡기 세포융합 바이러스 감염 및 인플루엔자 바이러스 감염).
통증의 예는 염증성 통증, 통각과민증 (예를 들면, 기계적 통각과민증), 이질통증, 및 과민통각 (예를 들면, 항원-유도되거나 될 수 없는 피부 및 관절 과민통각)을 포함한다.
중추신경계 장애의 예는 하기를 포함한다: 지주막하 출혈, 중추신경계의 염증성 질환, 신경퇴행성 질환 (예를 들면, 알츠하이머병, 실험적인 자가면역 뇌척수염, 다발성 경화증, 파킨슨병, 헌팅턴병), 양극성 장애, 및 중추신경계의 감염 (예를 들면, 바이러스성 감염).
고형 종양의 예는 결장, 유방, 전립선, 폐, 신장, 간, 췌장, 난소, 두경부, 구강, 위, 십이지장, 작은 창자, 큰 창자, 위장관, 항문, 담낭, 음순, 비인두, 피부, 자궁, 남성 생식기 장기, 비뇨기, 방광, 및 피부의 종양을 포함한다. 비-상피성 기원의 고형 종양은 육종, 뇌종양, 및 골 종양을 포함한다.
안과적 장애의 예는 하기를 포함한다: 연령 관련 황반 변성 (AMD) (습성 AMD, 건조 AMD, 중간 AMD, 진행성 AMD, 및 지도형 위축증 (GA) 포함), 망막증 (예를 들면, 당뇨 망막병증 (DR), 미숙아 망막증 (ROP), 및 고-고도 DR), 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장 (로도 공지된다 레버 선천성 흑내장), 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염, 비-감염성 결막염, 및 알러지성 결막염).
일부 구현예에서, 안과적 장애는 하기를 포함한다: AMD (습성 AMD, 건조 AMD, 및 GA 포함), 망막증 (예를 들면, DR 및 ROP), PCV, 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 알러지성 결막염, 및 망막 탈착.
다른 구현예에서, 안과적 장애는 중간 AMD, 진행성 AMD, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장 (로도 공지된다 레버 선천성 흑내장), 스타가르트병, 고-고도 당뇨 망막병증, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염 및 비-감염성 결막염)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
상기 목록은 모두를 포함하는 것은 아니며, 질환 또는 장애는 다양한 카테고리 내에 있을 수 있는 것으로 숙련가에 의해 이해될 것이다. 예를 들면, 천식은 일부 사례에서 염증성 장애 및 면역 장애 둘 모두로부터 분류될 수 있고 자가면역 장애인 것으로 일부 임상의에 의해 간주된다.
"IL-33 축 결합 길항제"는 IL-33 축 결합 파트너와 그것의 결합 파트너 중 1종 이상과의 상호작용을 억제하는 분자를 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, IL-33 축 결합 길항제는 IL-33 결합 길항제, ST2 결합 길항제, 및 IL1RAcP 결합 길항제를 포함한다. 예시적인 IL-33 축 결합 길항제는 하기를 포함한다: 항-IL-33 항체 및 그것의 항원-결합 단편 (예를 들면, 항-IL-33 항체 예컨대 ANB-020 (AnaptysBio, Inc.) 또는 EP1725261, US8187596, WO2011031600, WO2014164959, WO2015099175 또는 WO2015106080 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)에서 기재된 항체 중 임의의 것); IL-33 및/또는 그것의 수용체 (ST2 및/또는 IL-1RAcP)에 결합하는 폴리펩타이드 및 블록 리간드-수용체 상호작용 (예를 들면, ST2-Fc 단백질, 예컨대 WO 2014/152195(이것은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입됨)에서 기재된 것들; 면역부착소, 펩티바디, 및 가용성 ST2, 또는 그것의 유도체); 항-IL-33 수용체 항체 (예를 들면, 항-ST2 항체, 예를 들면, AMG-282 (Amgen) 또는 STLM15 (Janssen) 또는 WO 2013/173761 및 WO 2013/165894 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)에서 기재된 항-ST2 항체의 임의의 것; 또는 ST2-Fc 단백질, 예컨대 WO 2013/173761; WO 2013/165894; 또는 WO 2014/152195 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)에서 기재된 것들); 및 IL-33 수용체 길항제, 예컨대 소분자 저해제, IL-33에 결합하는 압타머, 및 IL-33 축 핵산 서열에 대해 엄격한 조건 하에서 혼성화하는 핵산 (예를 들면, 짧은 간섭하는 RNA (siRNA) 또는 군집형태의 규칙적으로 공간사이의 짧은 회귀성 반복 RNA (CRISPR-RNA 또는 crRNA) (하기에서 기재된 crRNA 및 tracrRNA 서열을 갖는 단일 가이드 RNA (sgRNA) 포함): Mali 등(Science.339:823-26, 2013) (이것은 본 명세서에 그 전체가 참고로 편입됨).
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "Th2 세포 (CRTH2)에 대해 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자"는, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면, 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 CRTH2를 지칭한다. CRTH2은 또한, 분화 294 (CD294), DL1R, 및 DP2의 클러스터인 일명 G 단백질 커플링된 수용체 44 (GPR44)이다. 용어는 "전장," 미처리 CRTH2, 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 CRTH2를 포함한다. 예시적인 인간 CRTH2의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q9Y5Y4.
용어 "CRTH2 결합 길항제"는 CRTH2와 그것의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 프로스타글란딘 D2의 상호작용으로부터 생기는 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 방해하는 분자를 지칭한다. 당해기술에서 공지된 예시적인 CRTH2 결합 길항제는 AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, 및 ACT129968를 포함한다.
용어 "인터류킨-5 (IL-5)"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)을 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 IL-5를 지칭한다. 용어는 "전장," 미처리 IL-5, 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 IL-5를 포함한다. 용어는 또한, IL-5의 자연 발생 변이체, 예컨대 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포함한다. 예시적인 IL-5의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 P05113.
용어 "IL-5 결합 길항제"는 IL-5와 그것의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 IL-5 수용체, 알파 (IL5RA)와의 상호작용으로부터 생긴 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 방해하는 분자를 지칭한다. 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 예시적인 IL-5 결합 길항제는, 예를 들면, 항-IL-5 항체 (예를 들면, 메폴리주맙 및 레슬리주맙) 및 항-IL-5R 항체를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "인터류킨-13 (IL-13)"는, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면, 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 IL-13을 지칭한다. IL-13는 T 헬퍼 2형 (Th2) 세포를 포함하는 많은 세포 유형에 의해 분비된 사이토카인이다. 용어는 "전장," 미처리된 IL-13, 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 IL-13을 포함한다. 예시적인 인간 IL-13의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 P35225.
용어 "IL-13 결합 길항제"는 IL-13과 그것의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 IL-4 수용체 알파 (IL4Rα), IL-13 수용체 알파1 (IL13RA1) 및 IL-13 수용체 알파2 (IL13RA2)와의 상호작용으로부터 생긴 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 방해하는 분자를 지칭한다. IL-13 결합 길항제는 항-IL-13 항체, 예를 들면, 레브리키주맙, 228B/C-1, 228A-4, 227-26, 및 227-43를 포함한다 (참고, 예를 들면, U.S. 특허 제7,674,459; 8,067,199; 8,088,618; 8,318,160; 및 8,734,797).
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "인터류킨-17 (IL-17)"는, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면, 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 IL-17을 지칭하고, 패밀리 구성원 IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, 및 IL-17F을 포함한다. 용어는 "전장," 미처리된 IL-17, 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 IL-17을 포함한다. 예시적인 인간 IL-17A의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q16552.예시적인 인간 IL-17B의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q9UHF5.예시적인 인간 IL-17C의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q9P0M4.예시적인 인간 IL-17D의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q8TAD2.예시적인 인간 IL-17E의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q9H293.예시적인 인간 IL-17F의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q96PD4.
용어 "IL-17 결합 길항제"는 IL-17와 하기 예의 그것의 결합 파트너 중 1종 이상과의 상호작용으로부터 생긴 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 방해한은 분자를 지칭한다: 인터류킨-17 수용체 (IL-17R) 패밀리 구성원 단백질 인터류킨 17 수용체 A (IL17RA), 인터류킨 17 수용체 B (IL17RB), 인터류킨 17 수용체 C (IL17RC), 인터류킨 17 수용체 D (IL17RD), 인터류킨 17 수용체 E (IL17RE), 및 인터류킨 17 수용체 E-유사 (IL17REL). 예시적인 IL-17 결합 길항제는, 예를 들면, 항-IL-17 항체 (예를 들면, 익세키주맙 (LY2439821) 및 항-IL-17R 항체 (예를 들면, 브로달루맙 (AMG-827))을 포함한다.
용어 "야누스 키나제 1 (JAK1)"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)을 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 JAK1을 지칭한다. 용어는 "전장," 미처리된 JAK1 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 JAK1을 포함한다. 용어는 또한, JAK1의 자연 발생 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포함한다. 예시적인 JAK1의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 P23458.
용어 "JAK1 길항제"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, JAK1의 생물학적 활성을 억제 또는 감소시키는 화합물 또는 제제를 지칭한다. 예시적인 JAK1 길항제는 소분자 저해제 (예를 들면, 룩솔리티닙, GLPG0634, 및 GSK2586184)를 포함한다.
용어 "ST2 결합 길항제"는 ST2와 IL-33, IL1RAcP, 및/또는 제2 ST2 분자와의 상호작용을 억제하는 분자를 지칭한다. ST2 결합 길항제는 단백질, 예컨대 "ST2-Fc 단백질"일 수 있고, 이 단백질은 IL-33-결합 도메인 (예를 들면, ST2 또는 IL1RAcP 단백질의 모두 또는 일부) 및 다합체화 도메인 (예를 들면, 면역글로불린의 Fc부, 예를 들면, 아이소타입 lgG1, lgG2, lgG3, 및 lgG4로부터 선택된 IgG 의 Fc 도메인, 뿐만 아니라 각 아이소타입 그룹내의 임의의 동종이인자형) (이것은, 링커 (예를 들면, 세린-글리신 (SG) 링커, 글리신-글리신 (GG) 링커, 또는 그것의 변이체 (예를 들면, SGG, GGS, SGS, 또는 GSG 링커))를 통해 서로 직접적으로 또는 간접적으로 부착됨)을 포함하고, 그리고 비제한적으로, WO 2013/173761, WO 2013/165894, 및 WO 2014/152195 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)에서 기재된 ST2-Fc 단백질 및 그것의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, ST2 결합 길항제는 항-ST2 항체, 예를 들면, AMG-282 (Amgen) 또는 STLM15 (Janssen) 또는 WO 2013/173761 및 WO 2013/165894에서 기재된 항-ST2 항체 중 임의의 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "트립타제-베타"는, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면, 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 트립타제-베타를 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어는 트립타제 베타-1 (또한 트립타제 알파-1을 인코딩하는 TPSAB1 유전자에 의해 인코딩됨) 및 트립타제 베타-2 (TPSB2 유전자에 의해 인코딩됨)을 포함한다. 용어는 "전장," 미처리된 트립타제-베타 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 트립타제-베타를 포함한다. 예시적인 인간 트립타제 베타-2의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 P20231.
용어 "트립타제-베타 길항제"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 트립타제 베타의 생물학적 활성 을 억제 또는 감소시키는 화합물 또는 제제를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "인자 D"는, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면, 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 인자 D를 지칭한다. 인자 D은 또한 일명 C3 전활성제 전환효소, 프로페르딘 인자 D 에스테라제, 인자 D (보체), 보체 인자 D, CFD, 및 아딥신이다. 용어는 "전장," 미처리된 인자 D, 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 인자 D를 포함한다. 예시적인 인간 인자 D의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 P00746.
용어 "인자 D 결합 길항제"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 인자 D의 생물학적 활성을 억제 또는 감소시키는 화합물 또는 제제를 지칭한다. 예시적인 인자 D 결합 길항제는, 예를 들면, 소분자 저해제 및 항-인자 D 항체, 예를 들면, WO 2007/056227, WO 01/70818, 및/또는 US 2002/0081293 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)에서 기재된 임의의 항-인자 D 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-인자 D 항체는 하기이거나 그것으로부터 유도된다: 단클론성 항체 166-32, 생산된 by the 하이브리도마 침착된 with the ATCC 및 지정된 HB 12476.
용어 "고온 요건 A 세린 펩티다아제 1" 또는 "HtrA1"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 다르게 명시되지 않는 한 포유동물 예컨대 영장류 (예를 들면, 인간) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 HtrA1을 지칭한다. HtrA1은 또한 HtrA 세린 펩티다아제 1, L56, 및 세린 프로테아제 11로서 당해기술에서 공지되어 있다. 용어는 "전장," 미처리된 HtrA1 뿐만 아니라 세포에서 처리로부터 생기는 임의의 형태의 HtrA1을 포함한다. 용어는 또한, HtrA1의 자연 발생 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포함한다. 예시적인 인간 HtrA1의 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 하에서 발견될 수 있다: UniProtKB 수탁 번호 Q92743.
용어 "HtrA1 결합 길항제" 본 명세서에서 사용된 바와 같이, HtrA1의 생물학적 활성을 억제 또는 감소시키는 화합물 또는 제제를 지칭한다. 예시적인 HtrA1 결합 길항제는, 예를 들면, 소분자 저해제 및 항-HtrA1 항체, 예를 들면, 임의의 항-HtrA1 항체 (WO 2013/055998에서 기재됨) (이것은 본 명세서에 그 전체가 참고로 편입됨)를 포함한다.
용어 "혈관 내피 성장 인자" 또는 "VEGF"는 Swiss Prot 수탁 번호 P15692에 의해 예시된 바와 같이 혈관 내피 성장 인자 단백질 A를 지칭한다. 용어 "VEGF"는 Swiss Prot 수탁 번호 P15692에 의해 예시된 아미노산 서열을 갖는 단백질 뿐만 아니라 그것의 동족체 및 동형체를 포함한다. 용어 "VEGF"는 또한 공지된 동형체, 예를 들면, 하기 예의 스플라이스 동형체를 포함한다: VEGF, 예를 들면, VEGF111, VEGF121, VEGF145, VEGF165, VEGF189, 및 VEGF206, 하기에서 기재된 바와 같이 VEGF165의 플라스민 절단에 의해 생성된 110- 아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자를 포함하는 자연 발생 대립유전자 및 그것의 가공된 형태와 함께: Ferrara Mol. Biol. Cell.21:687 (2010), Leung 등,Science, 246:1306 (1989), 및 Houck 등,Mol . Endocrin.,5:1806 (1991). 용어 "VEGF"는 또한 비-인간 종 예컨대 마우스, 랫트 또는 영장류으로부터의 VEGF를 지칭한다. 때때로 특이 종으로부터의 VEGF는 용어들 예컨대 인간 VEGF에 대한 hVEGF, 쥣과 VEGF에 대한 mVEGF, 등에 의해 지적된다. 용어 "VEGF"는 또한 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자의 아미노산 8 내지 109 또는 1 내지 109를 포함하는 절단된 형태의 폴리펩타이드를 지칭하도록 사용된다. 임의의 그와 같은 형태의 VEGF에 대한 언급은 본원, 예를 들면, by "VEGF109," "VEGF (8-109)," "VEGF (1-109)" 또는 "VEGF165"에서 확인될 수 있다. "절단된" 원상태 VEGF에 대한 아미노산 위치는 원상태 VEGF 서열에서 지적된 바와 같이 넘버링된다. 예를 들면, 절단된 원상태 VEGF 중 아미노산 위치 17 (메티오닌)은 또한 원상태 VEGF 중 위치 17 (메티오닌)이다. 절단된 원상태 VEGF는 원상태 VEGF와 비교할만한 KDR 및 Flt-1 수용체에 대한 결합 친화도를 갖는다. 용어 "VEGF 변이체"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이 원상태 VEGF 서열에서 1종 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는 VEGF 폴리펩타이드를 지칭한다. 임의로, 1종 이상의 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환(들)을 포함한다. 본 명세서에서 기재된 VEGF 변이체의 속기 지정을 위해, 숫자들은 추정 원상태 VEGF의 아미노산 서열을 따라 아미노산 잔기 위치를 지칭하는 것에 주목한다 (Leung 등, supra 및 Houck 등, supra에서 제공됨). 구체화되지 않는 한 다르게는, 용어 "VEGF"는 본 명세서에서 사용된 바와 같이 VEGF-A를 나타낸다.
용어 "VEGF 길항제"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, VEGF에 결합하고, VEGF 발현 수준을 감소시키거나, 또는 1종 이상의 VEGF 수용체에 결합하는 VEGF, VEGF 신호전달, 및 VEGF-매개된 혈관신생 및 내피 세포 생존 또는 증식을 비제한적으로 포함하는 VEGF 생물학적 활성을 중화, 차단, 억제, 폐지, 감소 또는 방해할 수 있는 분자를 의미한다. 예를 들면, VEGF 생물학적 활성을 중화, 차단, 억제, 폐지, 감소 또는 방해할 수 있는 분자는 하기의 1종 이상의 VEGF 수용체 (VEGFR)에 결합하여 그것의 효과를 발휘할 수 있다: (예를 들면, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, 막-결합 VEGF 수용체 (mbVEGFR), 또는 가용성 VEGF 수용체 (sVEGFR)). 본 발명의 방법에서 유용한 VEGF 길항제로서는 VEGF에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드, VEGF에 특이적으로 결합하는 항-VEGF 항체 및 그것의 항원-결합 단편, 수용체 분자 및 유도체가 포함되고, 그렇게 함으로써 그것의 하기에의 결합을 격리한다: 1종 이상의 수용체, 융합 단백질 (예를 들면, VEGF-Trap (Regeneron)), 및 VEGF121-젤로닌 (Peregrine). VEGF 길항제는 또한, 하기를 포함한다: VEGF 폴리펩타이드의 길항제 변이체, VEGF 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 분자의 적어도 단편에 대해 상보적인 안티센스 핵염기 올리고머; VEGF 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 분자의 적어도 단편에 대해 상보적인 작은 RNA; VEGF를 표적으로 하는 리보자임; VEGF; 및 VEGF 압타머에 대한 펩티바디.VEGF 길항제는 또한, VEGFR에 결합하는 폴리펩타이드, VEGFR에 결합하는 항-VEGFR 항체, 및 그것의 항원-결합 단편, 및 유도체를 포함하고, 그렇게 함으로써 하기를 차단, 억제, 폐지, 감소 또는 방해한다: VEGF 생물학적 활성 (예를 들면, VEGF 신호전달), 또는 융합 단백질.VEGF 길항제는 또한 VEGF 또는 VEGFR에 결합하는 비펩타이드 소분자를 포함하고 VEGF 생물학적 활성을 차단, 억제, 폐지, 감소 또는 방해할 수 있다. 따라서, 용어 "VEGF 활성"는 구체적으로 VEGF의 VEGF-매개된 생물학적 활성을 포함한다. 특정 구현예에서, VEGF 길항제는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상까지, VEGF의 발현 수준 또는 생물학적 활성을 감소시키거나 억제한다. 일부 구현예에서, VEGF-특이적 길항제에 의해 저해된 VEGF는 VEGF (8-109), VEGF (1-109), 또는 VEGF165이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 VEGF 길항제는, 비제한적으로, 하기를 포함할 수 있다: 항-VEGFR2 항체 및 관련된 분자 (예를 들면, 라무시루맙, 타니비루맙, 아플리베르셉트), 항-VEGFR1 항체 및 관련된 분자 (예를 들면, 이크루쿠맙, 아플리베르셉트 (VEGF Trap-Eye; EYLEA®), 및 ziv-아플리베르셉트 (VEGF Trap; ZALTRAP®)), 이중특이적 VEGF 항체 (예를 들면, MP-0250, 바누시주맙 (VEGF-ANG2), 및 US 2001/0236388)에서 개시된 이중특이적 항체, 항-VEGF, 항-VEGFR1, 및 항-VEGFR2 아암 중 2개의 조합을 포함하는 이중특이적 항체, 항-VEGF 항체 (예를 들면, 베바시주맙, 세바시주맙, 및 라니바이주맙), 및 비펩타이드 소분자 VEGF 길항제 (예를 들면, 파조파닙, 악시티닙, 반데타닙, 스티바가, 카보잔티닙, 렌바티닙, 닌테다닙, 오란티닙, 텔라티닙, 도비티닙, 세디라닙, 모테사닙, 설파티닙, 아파티닙, 포레티닙, 파미티닙, 및 티보자닙).
용어들 "항-VEGF 항체," "VEGF에 결합하는 항체," 및 "VEGF에 특이적으로 결합하는 항체"는 항체가 VEGF에 표적화하는 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 VEGF에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-VEGF 단백질에 대한 항-VEGF 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역분석 (RIA)에 의해 측정된 바와 같이, VEGF에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예에서, VEGF에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면 10- 8 M 이하, 예를 들면, 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들면, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항체는 상이한 종으로부터의 VEGF 간에 보존된 VEGF의 에피토프에 결합한다.
특정 구현예에서, 항-VEGF 항체는 상기 VEGF 활성이 관여하는 질환 또는 병태를 표적화하고 방해하는 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 항체는, 예를 들면, 치료제로서 그의 유효성을 평가하기 위해, 다른 생물학적 활성 분석을 거칠 수 있다. 이러한 분석은 본 기술분야에 공지되어 있고 항체에 대한 표적 항원 및 의도된 용도에 좌우된다. 그 예는 하기를 포함한다: HUVEC 억제 분석; 종양 세포 성장 억제 분석 (예를 들면, WO 제89/06692호에 기재된 바와 같음); 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC) 및 보체-매개된 세포독성 (CDC) 분석 (U.S. 특허 제5,500,362호); 및 작용적 활성 또는 조혈 분석 (WO 제95/27062호 참고). 항-VEGF 항체는 보통 VEGF-B 또는 VEGF-C와 같은 다른 VEGF 동족체, 뿐만 아니라 PlGF, PDGF, 또는 bFGF와 같은 다른 성장 인자에 결합하지 않을 것이다. 일 구현예에서, 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산된 단클론성 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 단클론성 항체이다. 또 다른 구현예에서, 항-VEGF 항체는 문헌[Presta 등 (1997) Cancer Res.57:4593-4599]에 따라 생성된 재조합 인간화된 항-VEGF 단클론성 항체이며, 이는 비제한적으로 베바시주맙 (BV; 아바스틴®)으로 공지된 항체를 포함한다.
"rhuMAb VEGF" 또는 "아바스틴®"로도 공지된 항-VEGF 항체 "베바시주맙 (BV)"는 하기 문헌에 따라 생성된 재조합 인간화된 항-VEGF 단클론성 항체이다: Presta 등 (1997) Cancer Res.57:4593-4599. 그것은 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역 및 인간 VEGF가 그의 수용체에 결합하는 것을 차단하는 쥣과 항-hVEGF 단클론성 항체 A.4.6.1로부터의 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 대부분의 프레임워크 영역을 포함하여, 베바시주맙의 아미노산 서열의 대략 93%는 인간 IgG1로부터 유래되며, 상기 서열의 약 7%는 쥣과 항체 A4.6.1로부터 유래된다. 베바시주맙은 약 149,000 달톤의 분자량을 가지며 당화되어 있다. 베바시주맙 및 다른 인간화된 항-VEGF 항체는 하기에 추가로 기재되어 있다: U.S. 특허 제6,884,879 (2005년 2월26일에 발행됨, 그 전체 개시내용이 본원에 참고로 명확히 편입됨). 추가의 바람직한 항체는 하기에 기재된 바와 같은 G6 또는 B20 시리즈 항체 (예를 들면, G6-31, B20-4.1)를 포함한다: PCT 출원 공개WO 제2005/012359호 및 WO 제2005/044853호 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음). 추가의 바람직한 항체의 경우, 하기를 참고한다: U.S. 특허 제7,060,269호, 제6,582,959호, 제6,703,020 호; 제6,054,297호; WO 제98/45332호; WO 제96/30046호; WO 제94/10202호; EP 제0666868호 B1; U.S. 특허 출원 공개 제2006009360호, 제20050186208호, 제20030206899호, 제20030190317호, 제20030203409호, 및 제20050112126호; 및 Popkov 등,Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004). 다른 바람직한 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, 191, K101, E103, 및 C104를 포함하거나 또는, 대안적으로, 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, 183, 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 추가의 항-VEGF 항체는 하기에 기재된 항-VEGF 항체를 포함한다: PCT 출원 공개WO 제2009/155724호.
"루센티스®" 또는 "rhuFab V2"로도 공지된 항-VEGF 항체 "라니비주맙"는 인간화된, 친화도-성숙된 항-인간 VEGF Fab 단편이다. 라니비주맙은 대장균 발현 벡터 및 박테리아 발효에서 표준 재조합 기술 방법에 의해 생산된다. 라니비주맙은 당화되지 않으며 ~48,000 달톤의 분자량을 갖는다. WO 제98/45331호 및 US 제2003/0190317호를 참고한다.
"단리된 핵산"는 그의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 보통 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하나, 상기 핵산 분자는 염색체외에 또는 그의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
용어 "제어 서열"는 특정한 숙주 유기체 내의 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 원핵생물에 적합한 제어 서열은, 예를 들면, 프로모터, 선택적으로 작동자 (operator) 서열, 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 이용하는 것으로 공지되어 있다.
용어 "숙주세포," "숙주 세포주," 및 "숙주 세포 배양"는 상호교환적으로 사용되며, 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭하며, 이러한 세포의 자손을 포함한다. 숙주세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하고, 이는 1차 형질전환된 세포 및 계대수를 고려하지 않고 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 모 세포와 핵산 함량이 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 함유할 수 있다. 본래의 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택되는 것으로서 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 있을 때 "작동가능하게 연결된다".예를 들면, 전서열 (presequence) 또는 분비성 리더에 대한 DNA는, 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 전단백질 (preprotein)로서 발현되는 경우, 폴리펩타이드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는,서열의 전사에 영향을 미치는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결되거나; 또는 리보솜 결합 부위는 번역을 용이하게 하기 위해 위치하는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"는 연결되는 DNA 서열들이 인접하고, 분비성 리더의 경우, 연결되는 DNA 서열들이 인접하고 리딩 (reading) 단계에 있다는 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접할 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서의 라이게이션에 의해 달성된다. 그러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커가 종래의 관행에 따라 사용된다.
본원에서 확인된 폴리펩타이드 서열에 관한 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성"는 서열을 정렬하고 필요한 경우 갭을 도입하여 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하고, 임의의 보존적 치환을 서열 동일성의 부분으로서 고려하지 않은 후, 비교되는 폴리펩타이드에서의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은, 예를 들면, 공중이 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN, 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여, 당해 분야의 기술에 속하는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 비교되는 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원에서의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech 사에 의해 승인되었고 소스 코드는 사용자 문서화와 함께 미국저작권청 (Washington D.C.,20559)에 제출되었고, 이는 미국저작권 등록번호TXU510087하에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 Genentech 사(South San Francisco, California)를 통해 공중이 이용가능하다. ALIGN-2 프로그램은 UNIX 운영 체제, 바람직하게는 디지털 UNIX V4.0D 상에서 사용하기 위해 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 변하지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 이용되는 경우, 주어진 아미노산 서열 B에 대한 주어진 아미노산 서열 A의 % 아미노산 서열 동일성 (이는 대안적으로 주어진 아미노산 서열 B에 대해 어떤 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로서 표현될 수 있음)은 아래와 같이 계산된다:
X/Y 곱하기 100
여기서 X는 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의한 A 및 B의 상기 프로그램의 정렬에서 동일한 일치로서 스코어된 아미노산 잔기의 수이며, 여기서 Y는 B에서의 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우, B에 대한 A의 % 아미노산 서열 동일성은 A에 대한 B의 % 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것임이 인정될 것이다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램를 사용하여 바로 이전 단락에서 기재된 바와 같이 수득된다.
본원에 기재된 아미노산 서열은 달리 구체화되지 않는 한 연속적인 아미노산 서열이다.
용어 "패키지 삽입물"는 상기 치료 제품의 사용에 관한 징후, 용법, 복용량, 투여, 병용 요법, 사용 금지 사유 및/또는 경고에 관한 정보를 포함하는, 치료 제품의 상업적 패키지에 관례상 포함된 설명을 지칭하기 위해 사용된다.
용어 "약제학적 조성물"는 내부에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성을 효과적이게 하는 형태의 제제, 및 제형이 투여될 대상에게 받아들이기 어려울 정도로 독성인 추가의 구성요소를 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약제학적으로 허용가능한 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 약제학적 제형 내의 성분을 지칭한다. 약제학적으로 허용가능한 담체는, 비제한적으로, 버퍼, 부형제, 안정제, 또는 보존제를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "전구약물"는 모 약물에 비해 종양 세포에 대한 세포독성이 낮으며, 더 활성인 모 형태로 효소적으로 활성화되거나 전환될 수 있는 약제학적 활성 성분의 전구체 또는 유도체 형태를 지칭한다. 예를 들면, 문헌[Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) 및 Stella 등 "Prodrugs:A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt 등 (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985)]을 참고한다. 본 발명의 전구약물은, 비제한적으로, 포스페이트-함유 전구약물, 티오포스페이트-함유 전구약물, 설페이트-함유 전구약물, 펩타이드-함유 전구약물, D-아미노산-변형된 전구약물, 당화된 전구약물, β-락탐-함유 전구약물, 선택적으로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 전구약물 또는 선택적으로 치환된 페닐아세트아미드-함유 전구약물, 5-플루오로시토신 및 더 활성인 세포독성 유리 약물로 전환될 수 있는 다른 5-플루오로우리딘 전구약물을 포함한다. 본 발명에서 사용하기 위한 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는, 비제한적으로, 상기 기재된 화학치료제를 포함한다.
"감소시키거나 억제하다"는 바람직하게는 20% 이상, 더 바람직하게는 50% 이상, 및 가장 바람직하게는 75%, 85%, 90%, 95% 이상의 전반적인 감소를 야기하는 능력을 의미한다. 감소시키거나 억제하다는 치료될 장애의 증상, 전이의 존재 또는 크기, 원발성 종양의 크기를 지칭할 수 있다.
"대상체"는 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 더 바람직하게는 인간이다. 포유동물은, 비제한적으로, 농장 동물 (예컨대, 소, 및 양), 스포츠 동물, 애완동물 (예컨대 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들면, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함한다.
용어 "치료적 유효량"는 대상체의 질환 또는 장애를 치료하는 항체 또는 항체 단편의 양을 지칭한다. IL-33-매개된 장애의 경우, 치료적 유효량의 항체 또는 항체 단편 (예를 들면, IL-33 및 제2 생물학적 분자, 예를 들면, IL-13에 결합하는 이중특이적 항-IL-33 항체, 예컨대 이중특이적 항-IL-33/항-IL-13 항체를 포함하는, 항-IL-33 항체)은 상기 질환을 완화시키거나 치료할 수 있거나, 또는 상기 질환과 관련된 증상을 예방하거나, 감소시키거나, 완화시키거나, 또는 치료할 수 있다. 증식성 질환 (예를 들면, 고형 종양)의 경우, 치료적 유효량의 항체 또는 항체 단편은 암 세포의 수를 감소시키고; 원발성 종양 크기를 감소시키고; 암세포의 주변 기관 내로의 침윤을 억제하고 (즉, 어느 정도까지 늦추고 바람직하게는 정지시키고); 종양 전이를 억제하고 (즉, 어느 정도까지 늦추고 바람직하게는 정지시키고); 종양 성장을 어느 정도 억제하고; 및/또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감할 수 있다. 항체 또는 항체 단편이 기존 암 세포의 성장을 방지하고/거나 사멸시킬 수 있는 정도까지, 그것은 세포증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우, 생체내 효능은, 예를 들면, 생존 기간, 질환 진행까지의 시간 (TTP), 무질환 생존 (DFS) 기간, 무진행 생존 (PFS) 기간, 반응 속도 (RR), 반응의 지속기간, 및/또는 삶의 질을 평가함으로써, 측정될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "치료" (및 이의 문법적 변경, 예컨대 "치료하다" 또는 "치료하는")는 치료되는 개인의 자연적인 경과를 변경하기 위한 임상적 개입을 지칭하고, 이는 예방을 위해 또는 임상 병리의 과정 동안 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는, 비제한적으로, 질환의 발생 또는 재발의 방지, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접 또는 간접적 병리적 결과의 약화, 전이의 방지, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 완화 또는 일시적 처방, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 질환의 발달을 지연시키거나 또는 질환의 진행을 늦추는데 사용된다. 예를 들면, 천식 요법을 받은 후, 환자가 하기 중 하나 이상의 관찰가능하고/거나 측정가능한 감소 또는 부재를 나타내는 경우, 환자는 천식에 대해 성공적으로 "치료"될 수 있다: 반복적 천명 (recurrent wheezing), 기침, 호흡 곤란, 흉부 압박감, 밤에 일어나거나 악화되는 증상, 차가운 공기, 운동 또는 알러지 유발 항원에의 노출에 의해 촉발되는 증상.
본원에 사용된 바와 같이, "종양"는 악성 또는 양성이든 간에 모든 신생물성 세포 성장 및 증식, 및 모든 전-암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"는 그에 연결된 또 다른 핵산을 운반할 수 있는 핵산 분자를 지칭하는 것으로 의도된다. 벡터의 한 가지 유형은 "플라스미드"며, 이는 추가의 DNA 분절이 라이게이션될 수 있는 원형 이중가닥 DNA 루프를 지칭한다. 벡터의 또 다른 유형은 파아지 벡터이다. 벡터의 또 다른 유형은 바이러스 벡터이며, 여기서 추가의 DNA 분절이 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있다. 어떤 벡터는 이들이 도입되는 숙주세포에서 자율 복제할 수 있다 (예를 들면, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터 (예를 들면, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주세포 내로 도입시 숙주세포의 게놈 내로 통합될 수 있고, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 어떤 벡터는 이들이 작동가능하게 연결된 유전자의 발현을 유도할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" (또는 간단하게, "재조합 벡터" 또는 "발현 벡터")로 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 상호교환적으로 사용될 수 있다.
II. 조성물 및 방법
일 측면에서, 본 발명은 IL-33에 결합하는 신규 항체를 부분적으로 기반으로 한다. 본 발명의 항체는, 예를 들면, IL-33-매개된 장애의 진단 및/또는 치료에 유용하다.
A. 예시적인 항-IL-33 항체
본 발명은 IL-33에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항-IL-33 항체는 하기의 KD 로 인간 및 사이노몰구스 원숭이 (사이노) IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합한다: 100 nM 이하 (예를 들면, 100 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하, 100 pM 이하, 10 pM 이하, 1 pM 이하, 또는 0.1 pM 이하). 일부 사례에서, 항체는 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 1 nM 이하 (예를 들면, 1 nM 이하, 100 pM 이하, 10 pM 이하, 1 pM 이하, 또는 0.1 pM 이하). 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 100 fM 내지 1 nM의 KD 로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 사례에서, 항체는 하기의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다: 1 nM 이하 (예를 들면, 1 nM 이하, 100 pM 이하, 10 pM 이하, 1 pM 이하, 또는 0.1 pM 이하). 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 100 fM 내지 1 nM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 특정 사례에서, 항체는 하기의 KD 로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합한다: 1 nM 이하 (예를 들면, 1 nM 이하, 100 pM 이하, 10 pM 이하, 1 pM 이하, 또는 0.1 pM 이하). 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 1 pM 내지 500 pM의 KD로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 일부 사례에서, 항체는 1 pM 내지 10 pM의 KD 로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 사례에서, 항체는 쥣과 IL-33 에 특이적으로 결합하지 않는다.
예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 900 pM, 약 1 pM 내지 약 800 pM, 약 1 pM 내지 약 700 pM, 약 1 pM 내지 약 600 pM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 1 pM 내지 약 400 pM, 약 1 pM 내지 약 300 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 190 pM, 약 1 pM 내지 약 180 pM, 약 1 pM 내지 약 170 pM, 약 1 pM 내지 약 160 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 140 pM, 약 1 pM 내지 약 130 pM, 약 1 pM 내지 약 120 pM, 약 1 pM 내지 약 110 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM, 약 1 pM 내지 약 70 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 40 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 약 1 pM 내지 약 20 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 10 pM). 일부 사례에서, 항체는 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 250 pM, 약 1 pM 내지 약 225 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 190 pM, 약 1 pM 내지 약 180 pM, 약 1 pM 내지 약 170 pM, 약 1 pM 내지 약 160 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 140 pM, 약 1 pM 내지 약 130 pM, 약 1 pM 내지 약 120 pM, 약 1 pM 내지 약 110 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM, 약 1 pM 내지 약 70 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 40 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 약 1 pM 내지 약 20 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 10 pM). 일부 사례에서, 항체는 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 50 pM 내지 약 180 pM (예를 들면, 약 50 pM, 약 60 pM, 약 70 pM, 약 80 pM, 약 90 pM, 약 100 pM, 약 110 pM, 약 120 pM, 약 130 pM, 약 140 pM, 약 150 pM, 약 160 pM, 또는 약 180 pM). 일부 구현예에서, 이전의 KD 값 중 임의의 것은 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 수 있다 (참고, 예를 들면, 실시예 2, 섹션 D 및 실시예 8, 섹션 E를 포함하는 실시예).
일부 사례에서, 항체는 25°C에서 약 400 pM 이하의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 25°C에서 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 390 pM 이하, 약 380 pM 이하, 약 375 pM 이하, 약 350 pM 이하, 약 325 pM 이하, 약 300 pM 이하, 약 275 pM 이하, 약 250 pM 이하, 약 250 pM 이하, 약 225 pM 이하, 약 200 pM 이하, 약 175 pM 이하, 약 150 pM 이하, 약 130 pM 이하, 약 125 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 75 pM 이하, 약 50 pM 이하, 또는 약 25 pM 이하. 일부 사례에서, 항체는 25°C에서 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 20 pM 내지 약 150 pM (예를 들면, 약 20 pM, 약 30 pM, 약 40 pM, 약 50 pM, 약 60 pM, 약 70 pM, 약 80 pM, 약 90 pM, 약 100 pM, 약 110 pM, 약 120 pM, 약 130 pM, 약 140 pM, 또는 약 150 pM). 일부 사례에서, 항체는 25°C에서 약 130 pM 의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 이전의 KD 값 중 임의의 것은 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 수 있다 (참고, 예를 들면, 실시예 2, 섹션 D 및 실시예 8, 섹션 E를 포함하는 실시예).
일부 사례에서, 항체는 37 ℃에서 약 200 pM 이하 의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 37 ℃에서 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 190 pM 이하, 약 180 pM 이하, 약 175 pM 이하, 약 150 pM 이하, 약 130 pM 이하, 약 125 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 90 pM 이하, 약 80 pM 이하, 약 75 pM 이하, 약 50 pM 이하, 또는 약 25 pM 이하. 일부 사례에서, 항체는37 ℃에서 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 20 pM 내지 약 100 pM (예를 들면, 약 20 pM, 약 30 pM, 약 40 pM, 약 50 pM, 약 60 pM, 약 70 pM, 약 80 pM, 약 90 pM, 또는 약 100 pM). 일부 사례에서, 항체는 37 ℃에서 약 90 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 이전의 KD 값 중 임의의 것은 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 수 있다 (참고, 예를 들면, 실시예 2, 섹션 D 및 실시예 8, 섹션 E를 포함하는 실시예).
일부 사례에서, 항체는 하기의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 900 pM, 약 1 pM 내지 약 800 pM, 약 1 pM 내지 약 700 pM, 약 1 pM 내지 약 600 pM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 1 pM 내지 약 400 pM, 약 1 pM 내지 약 300 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 190 pM, 약 1 pM 내지 약 180 pM, 약 1 pM 내지 약 170 pM, 약 1 pM 내지 약 160 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 140 pM, 약 1 pM 내지 약 130 pM, 약 1 pM 내지 약 120 pM, 약 1 pM 내지 약 110 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM, 약 1 pM 내지 약 70 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 40 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 약 1 pM 내지 약 20 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 10 pM). 일부 사례에서, 항체는 하기의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 100 pM 내지 약 750 pM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 750 pM, 약 200 pM 내지 약 750 pM, 약 225 pM 내지 약 750 pM, 약 250 pM 내지 약 750 pM, 약 265 pM 내지 약 750 pM, 약 275 pM 내지 약 750 pM, 약 300 pM 내지 약 750 pM, 약 325 pM 내지 약 750 pM, 약 350 pM 내지 약 750 pM, 약 375 pM 내지 약 750 pM, 약 400 pM 내지 약 750 pM, 약 425 pM 내지 약 750 pM, 약 450 pM 내지 약 750 pM, 약 475 pM 내지 약 750 pM, 약 500 pM 내지 약 750 pM, 약 525 pM 내지 약 750 pM, 약 550 pM 내지 약 750 pM, 약 575 pM 내지 약 750 pM, 약 600 pM 내지 약 750 pM, 약 650 pM 내지 약 750 pM, 또는 약 250 pM 내지 약 650 pM). 일부 구현예에서, 이전의 KD 값 중 임의의 것은 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 수 있다 (참고, 예를 들면, 실시예 2, 섹션 D 및 실시예 8, 섹션 E를 포함하는 실시예).
예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 25°C에서 약 650 pM 이하의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 25°C에서 하기의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 650 pM 이하, 약 625 pM 이하, 약 600 pM 이하, 약 575 pM 이하, 약 550 pM 이하, 약 525 pM 이하, 약 500 pM 이하, 약 475 pM 이하, 약 450 pM 이하, 약 425 pM 이하, 약 400 pM 이하, 약 375 pM 이하, 약 350 pM 이하, 약 325 pM 이하, 약 300 pM 이하, 약 275 pM 이하, 약 265 pM 이하, 약 250 pM 이하, 약 225 pM 이하, 약 200 pM 이하, 약 175 pM 이하, 약 150 pM 이하, 약 125 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 75 pM 이하, 약 50 pM 이하, 또는 약 25 pM 이하. 일부 사례에서, 항체는25°C에서 하기의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 150 pM 내지 약 500 pM (예를 들면, 약 150 pM, 약 175 pM, 약 200 pM, 약 225 pM, 약 250 pM, 약 265 pM, 약 275 pM, 약 300 pM, 약 325 pM, 약 350 pM, 약 375 pM, 약 400 pM, 약 425 pM, 약 450 pM, 약 475 pM 또는 약 500 pM). 일부 사례에서, 항체는 25°C에서 약 265 pM의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 이전의 KD 값 중 임의의 것은 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 수 있다 (참고, 예를 들면, 실시예 2, 섹션 D 및 실시예 8, 섹션 E를 포함하는 실시예).
다른 사례에서, 항체는 37 ℃에서 약 1 nM 이하의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는37 ℃에서 하기의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 1nM 이하, 약 950 pM 이하, 약 900 pM 이하, 약 850 pM 이하, 약 800 pM 이하, 약 750 pM 이하, 약 700 pM 이하, 약 650 pM 이하, 약 600 pM 이하, 약 550 pM 이하, 약 525 pM 이하, 약 500 pM 이하, 약 475 pM 이하, 약 450 pM 이하, 약 425 pM 이하, 약 400 pM 이하, 약 350 pM 이하, 약 300 pM 이하, 약 250 pM 이하, 약 200 pM 이하, 약 150 pM 이하, 약 100 pM 이하, 또는 약 50 pM 이하. 일부 사례에서, 항체는37 ℃에서 하기의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 250 pM 내지 약 750 pM (예를 들면, 약 250 pM, 약 275 pM, 약 300 pM, 약 325 pM, 약 350 pM, 약 375 pM, 약 400 pM, 약 425 pM, 약 450 pM, 약 475 pM, 약 500 pM, 약 525 pM, 약 550 pM, 약 575 pM, 약 600 pM, 약 625 pM, 약 650 pM, 약 675 pM, 약 700 pM, 약 725 pM, 또는 약 750 pM). 일부 사례에서, 항체는 37 ℃에서 약 475 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 이전의 KD 값 중 임의의 것은 예를 들면, 본원에서 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 수 있다 (참고, 예를 들면, 실시예 2, 섹션 D 및 실시예 8, 섹션 E를 포함하는 실시예). 일부 구현예에서, 본 발명의 항-IL-33 항체는 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제는 세포 기반 차단 검정을 사용하여 측정된다. 일부 사례에서, 항체는 약 0.0001 μg/ml 내지 약 1 μg/ml (예를 들면, 약 0.001 μg/ml 내지 약 0.5 μg/ml) 의 90% 저해된 농도 (IC90)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.002 μg/ml 내지 약 0.25 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.17 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.004 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.003 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.002 μg/ml이다. 일부 구현예에서, IC90은 약 0.001 μg/ml이다.
일부 사례에서, 항체는 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 750 fM 내지 약 250 pM, 약 1 pM 내지 약 250 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 10 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 5 pM) 의 반-최대 저해된 농도 (IC50)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 사례에서, 항체는 하기의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다: 약 10 pM 이하 (예를 들면, 약 10 pM 이하, 약 9 pM 이하, 약 8 pM 이하, 약 7 pM 이하, 약 6 pM 이하, 약 5 pM 이하, 약 4 pM 이하, 약 3 pM 이하, 약 2.5 pM 이하, 약 2 pM 이하, 약 1 pM 이하, 약 900 fM 이하, 약 800 fM 이하, 또는 약 750 fM 이하). 일부 사례에서, 항체는 약 2.4 pM 의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 사례에서, 억제는, 예를 들면, 실시예 8, 섹션 B에서 기재된 바와 같이 HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정을 사용하여 측정된다.
일부 사례에서, 항체는 약 1 nM 내지 약 10 nM 의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 1 nM 내지 약 9 nM, 약 1 nM 내지 약 8 nM, 약 1 nM 내지 약 7 nM, 약 1 nM 내지 약 6 nM, 약 1 nM 내지 약 5 nM, 약 1 nM 내지 약 4 nM, 또는 약 1 nM 내지 약 3 nM). 일부 사례에서, 항체는 약 4.2 nM 의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 사례에서, 억제는, 예를 들면, 실시예 8, 섹션 B에서 기재된 바와 같이 HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정을 사용하여 측정된다.
일부 사례에서, 항체는 인간 자연 살해 (NK) 세포로부터 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 하기의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다: 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 175 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 125 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 75 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 25 pM). 일부 사례에서, 항체는 하기의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다: 약 100 pM 이하, 예를 들면, 100 pM 이하, 75 pM 이하, 50 pM 이하, 30 pM 이하, 또는 25 pM 이하. 일부 사례에서, 항체는 약 30 pM 의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다. 일부 사례에서, 억제는, 예를 들면, 실시예 8, 섹션 C에서 기재된 바와 같이 NK 1차 세포 검정을 사용하여 측정된다.
일부 사례에서, 항체는 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항체는 하기의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다: 약 1 pM 이하 (예를 들면, 1 pM 이하, 0.75 pM 이하, 0.5 pM 이하, 0.25 pM 이하, 0.15 pM 이하, 0.1 pM 이하, 또는 0.05 pM 이하). 일부 사례에서, 항체는 약 0.15 pM의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다. 일부 사례에서, 억제는, 예를 들면, 실시예 8, 섹션 D에서 기재된 바와 같이 호염기구 1차 세포 검정을 사용하여 측정된다.
일부 사례에서, 항체는 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 사례에서, 항체는 하기의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다: 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 175 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 125 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 75 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 25 pM, 약 10 pM 내지 약 60 pM, 약 10 pM 내지 약 50 pM, 또는 약 20 pM 내지 약 50 pM). 일부 사례에서, 항체는 약 21 pM의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 사례에서, 억제는 예를 들면, 실시예 8, 섹션 F 에서 기재된 바와 같이 경쟁적 결합 ELISA를 사용하여 측정된다.
일부 사례에서, 항체는 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 사례에서, 항체는 하기의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다: 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 20 nM, 약 1 pM 내지 약 15 nM, 약 1 pM 내지 약 10 nM, 약 1 pM 내지 약 5 nM, 약 1 pM 내지 약 1 nM, 약 1 pM 내지 약 800 pM, 약 1 pM 내지 약 600 pM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 1 nM 내지 약 400 pM, 약 1 nM 내지 약 300 pM, 약 200 pM 내지 약 1 nM, 약 200 pM 내지 약 800 pM, 약 200 pM 내지 약 600 pM, 약 200 pM 내지 약 500 pM, 약 300 pM 내지 약 600 pM, 또는 약 300 pM 내지 약 500 pM). 일부 사례에서, 항체는 하기의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다: 약 1 nm 이하, 예를 들면, 약 1 nm 이하, 약 800 pM 이하, 약 600 pM 이하, 약 500 pM 이하, 약 430 pM 이하, 약 400 pM 이하, 또는 약 300 pM 이하. 일부 사례에서, 항체는 약 430 pM 의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 일부 사례에서, 억제는 예를 들면, 실시예 8, 섹션 F 에서 기재된 바와 같이 경쟁적 결합 ELISA를 사용하여 측정된다.
일부 사례에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 (예를 들면, 위 또는 아래에서 기재됨)는 하기 특징 중 1개 이상을 가질 수 있다: (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8): (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM 의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM의 KD 로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하고; (iii) 상기 항체는 인간 IL-33의 IL-33 수용체 (예를 들면, ST2 및/또는 IL-1RAcP)에의 결합을, 약 750 fM 내지 약 250 pM의 IC50로, 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 억제하고; (iv) 상기 항체는 사이노 IL-33의 IL-33 수용체 (예를 들면, ST2 및/또는 IL-1RAcP)에의 결합을, 약 1 nM 내지 약 10 nM의 IC50로, 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 억제하고; (v) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM 의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제하고; (vi) 상기 항체는 약 1 pM 이하의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제하고; (vii) 상기 항체는 인간 IL-33의 IL-33 수용체 (예를 들면, ST2 및/또는 IL-1RAcP)에의 결합을, 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 약 1 pM 내지 약 200 pM의 IC50로 억제하고/거나; (viii) 상기 항체는 사이노 IL-33의 IL-33 수용체 (예를 들면, ST2 및/또는 IL-1RAcP)에의 결합을, 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 약 1 pM 내지 약 20 nM의 IC50로 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 1개를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 2개를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 3개를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 4개를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 5개를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 6개를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 7개를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 이전의 특징 중 8개를 가질 수 있다.
예를 들면, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 15 pM 내지 약 180 pM)의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 500 pM)의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 15 pM 내지 약 180 pM)의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 800 fM 내지 약 10 pM)의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 15 pM 내지 약 180 pM)의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 1 nM 내지 약 10 nM (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 5 nM)의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 15 pM 내지 약 180 pM)의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 80 pM)의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다.
추가 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 15 pM 내지 약 180 pM)의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 이하 (예를 들면, 약 0.05 pM 내지 약 0.5 pM)의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다.
또 추가의 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 15 pM 내지 약 180 pM)의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 50 pM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 15 pM 내지 약 180 pM)의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 200 pM 내지 약 1 nM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 500 pM) 의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 800 fM 내지 약 10 pM)의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 500 pM) 의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 1 nM 내지 약 10 nM (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 5 nM)의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다. 또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 500 pM) 의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 80 pM)의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다.
추가 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 500 pM) 의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 이하 (예를 들면, 약 0.05 pM 내지 약 0.5 pM)의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 500 pM)의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 50 pM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 100 pM 내지 약 500 pM)의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하고; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 200 pM 내지 약 1 nM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
추가 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 800 fM 내지 약 10 pM)의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 1 nM 내지 약 10 nM (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 5 nM)의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 추가의 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 800 fM 내지 약 10 pM)의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 80 pM)의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 800 fM 내지 약 10 pM)의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 이하 (예를 들면, 약 0.05 pM 내지 약 0.5 pM)의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 800 fM 내지 약 10 pM)의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 50 pM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 750 fM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 800 fM 내지 약 10 pM)의 IC50로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다); 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 200 pM 내지 약 1 nM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
추가 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 1 nM 내지 약 10 nM (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 5 nM)의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 80 pM)의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다.
또 추가의 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 1 nM 내지 약 10 nM (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 5 nM)의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 이하 (예를 들면, 약 0.05 pM 내지 약 0.5 pM)의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 1 nM 내지 약 10 nM (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 5 nM)의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 50 pM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 예를 들면, HEK-BLUE™ 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정에서 약 1 nM 내지 약 10 nM (예를 들면, 약 1 nM 내지 약 5 nM)의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다); 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 200 pM 내지 약 1 nM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 80 pM)의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 이하 (예를 들면, 약 0.05 pM 내지 약 0.5 pM)의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 80 pM)의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 50 pM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 80 pM)의 IC50로 인간 NK 세포로부터의 TNF-α의 인간 IL-33- 및 IL-12-매개된 유도를 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 200 pM 내지 약 1 nM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 이하 (예를 들면, 약 0.05 pM 내지 약 0.5 pM)의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 50 pM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 이하 (예를 들면, 약 0.05 pM 내지 약 0.5 pM)의 IC50로 인간 호염기구 중 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화의 인간 IL-33-매개된 유도를 억제한다; 및 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 200 pM 내지 약 1 nM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 하기 특징을 가질 수 있다: (i) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 50 pM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다; 및/또는 (ii) 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 20 nM (예를 들면, 약 200 pM 내지 약 1 nM)의 IC50로 경쟁적 결합 ELISA 검정에서 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제한다.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSX1S (서열식별번호: 62) (여기서 X1은 Met, Leu, 또는 Val임); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDX1VKG (서열식별번호: 63) (여기서 X1은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGX1X2FFEV (서열식별번호: 64) (여기서 X1은 Asn 또는 Asp이고, 그리고 X2 는 Trp 또는 Phe임); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 4-6 또는 62-64.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1), SFSLS (서열식별번호: 7), 또는 SFSVS (서열식별번호: 8); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2) 또는 TISGGKTFTDYVDAVKG (서열식별번호: 9); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3), ANYGNFFFEV (서열식별번호: 10), 또는 ANYGDWFFEV (서열식별번호: 11); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 1-11.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12), DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 16), 또는 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 20); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13), WVRQTPEKRLEWVA (서열식별번호: 17), 또는 WVRQAPGKGLEWVS (서열식별번호: 21); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14), RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 22), RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR (서열식별번호: 18), RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 23), RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 24), 또는 RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15) 또는 WGAGTTVAVSS (서열식별번호: 19).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25) 또는 DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC (서열식별번호: 29); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26) 또는 WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 30); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27), GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC (서열식별번호: 31), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 33), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 34), 또는 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 35); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28) 또는 FGSGTKLEIK (서열식별번호: 32).
일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 36, 38, 또는 40-50; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 37, 39, 또는 51-61; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.예를 들면, 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 36 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 37. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 38 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 39. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 40 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 51. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 41 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 52. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 42 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 53. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 43 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 54. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 44 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 55. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 45 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 56. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 46 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 57. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 47 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 58. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 48 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 59. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 49 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 60. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 50 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 61.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6). 일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 36; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 37; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 36 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 37. 일부 사례에서, 예시적인 항-IL-33 항체는 10C12.38.H6.87Y.58I.
다른 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPX1LKS (서열식별번호: 90) (여기서 X1은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 65, 68-71, 또는 90.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66) 또는 SIYYSGRTYYNPALKS (서열식별번호: 67); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 65-71.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72), QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 77), 또는 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 76); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75) 또는 WGNGTTVTVSS (서열식별번호: 78).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81) 또는 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPKDFAVYYC (서열식별번호: 83); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82).
일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 84, 86, 88, 91, 92, 또는 95; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 85, 87, 89, 93, 94, 또는 96; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.예를 들면, 일부 사례s, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 84 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 85. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 86 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 87. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 88 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 89. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 91 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 93. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 92 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 94. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 95 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 96.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71). 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 84; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 85; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 84 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 85. 일부 사례에서, 예시적인 항-IL-33 항체는 4G12.FW4이다.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYX1MN (서열식별번호: 97) (여기서 X1은 Trp, Phe, 또는 Tyr임); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNX1YX2THYAESVKG (서열식별번호: 98) (여기서 X1은 Asn, Asp, Ser, 또는 Ala이고, 그리고 X2은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGX1X2YINV (서열식별번호: 99) (여기서 X1은 Asp 또는 Asn이고, 그리고 X2은 Trp 또는 Tyr임); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGX1SFLN (서열식별번호: 100) (여기서 X1은 Met, Val, 또는 Leu임); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 97-100, 113, 또는 114. 일부 구현예에서, 이전의 항체 중 임의의 것은 하기를 포함하는 HVR-H1을 포함하지 않는다: 아미노산 서열 NYWMN (서열식별번호: 101).
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101), NYFMN (서열식별번호: 102), 또는 NYYMN (서열식별번호: 103); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNNYSTHYAESVKG (서열식별번호: 104), EITLKFNDYSTHYAESVKG (서열식별번호: 105), EITLKFNSYSTHYAESVKG (서열식별번호: 106), EITLKFNAYSTHYAESVKG (서열식별번호: 107), 또는 EITLKFNNYATHYAESVKG (서열식별번호: 108); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGDWYINV (서열식별번호: 109), RNYGNWYINV (서열식별번호: 110), 또는 RNYGNFYINV (서열식별번호: 111); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGMSFLN (서열식별번호: 112), RASESVDKFGVSFLN (서열식별번호: 115), 또는 RASESVDKFGLSFLN (서열식별번호: 116); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 101-116. 일부 구현예에서, 이전의 항체 중 임의의 것은 하기를 포함하는 HVR-H1을 포함하지 않는다: 아미노산 서열 NYWMN (서열식별번호: 101).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 117) 또는 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 118); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWMA (서열식별번호: 119) 또는 WVRQAPGKGLEWMA (서열식별번호: 120); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR (서열식별번호: 121), RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 122), 또는 RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 123); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 124) 또는 WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 125). 일부 구현예에서, 이전의 항체 중 임의의 것은 하기를 포함하는 HVR-H1을 포함하지 않는다: 아미노산 서열 NYWMN (서열식별번호: 101).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 126) 또는 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (서열식별번호: 127); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 128) 또는 WYQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 129); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC (서열식별번호: 130) 또는 GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (서열식별번호: 131); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 132) 또는 FGQGTKVEIK (서열식별번호: 133). 일부 구현예에서, 이전의 항체 중 임의의 것은 하기를 포함하는 HVR-H1을 포함하지 않는다: 아미노산 서열 NYWMN (서열식별번호: 101).
일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 134, 136, 138, 또는 140-148; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 135, 137, 139, 또는 149-157; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.예를 들면, 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 134 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 135. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 136 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 137. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 138 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 139. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 140 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 149. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 141 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 150. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 142 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 151. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 143 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 152. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 144 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 153. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 145 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 154. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 146 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 155. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 147 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 156. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 148 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 157. 일부 구현예에서, 이전의 항체 중 임의의 것은 하기를 포함하는 HVR-H1을 포함하지 않는다: 아미노산 서열 NYWMN (서열식별번호: 101).
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNNYSTHYAESVKG (서열식별번호: 104); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGDWYINV (서열식별번호: 109); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGMSFLN (서열식별번호: 112); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114). 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 134; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 135; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 117); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWMA (서열식별번호: 119); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR (서열식별번호: 121); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 124). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 126); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 128); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC (서열식별번호: 130); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 132). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 134 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 135. 일부 사례에서, 예시적인 항-IL-33 항체는 10H2.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLX1X2INYVKDYAESVKG (서열식별번호: 161) (여기서 X1은 Asn 또는 Ser이고, 그리고 X2은 Ser 또는 Ala이고, 여기서 X1은 Asn, Asp, Ser, 또는 Ala이고, 그리고 X2은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 158, 160, 161, 또는 164-166.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLNSINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 159), EIRLSSINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 162), 또는 EIRLNAINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 163); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 158-160, 또는 162-166.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN (서열식별번호: 167) 또는 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFN (서열식별번호: 171); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWVA (서열식별번호: 168) 또는 WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 172); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR (서열식별번호: 169) 또는 RFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCIR (서열식별번호: 173); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 170) 또는 WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 174).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 175) 또는 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 179); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQSPKLLIY (서열식별번호: 176) 또는 WFQQKPGKAPKLLIY (서열식별번호: 180); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC (서열식별번호: 177) 또는 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 181); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 178) 또는 FGQGTKVEIK (서열식별번호: 182).
일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 183, 185, 187, 또는 189; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 184, 186, 188, 190; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.예를 들면, 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 183 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 184. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 185 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 186. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 187 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 188. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 189 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 190.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLNSINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 159); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166). 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 183; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 184; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN (서열식별번호: 167); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWVA (서열식별번호: 168); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR (서열식별번호: 169); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 170). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 175); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQSPKLLIY (서열식별번호: 176); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC (서열식별번호: 177); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 178). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 183 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 184. 일부 사례에서, 예시적인 항-IL-33 항체는 6C11.
다른 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKX1X2DTFYNQNFKD (서열식별번호: 192) (여기서 X1은 Asn 또는 Ser이고, 그리고 X2은 Gly 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 191, 192, 또는 196-199.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKNGDTFYNQNFKD (서열식별번호: 193), DINPKSGDTFYNQNFKD (서열식별번호: 194), 또는 DINPKNADTFYNQNFKD (서열식별번호: 195); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 191 또는 193-199.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS (서열식별번호: 200) 또는 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFS (서열식별번호: 204); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVKQSHGKSLESIG (서열식별번호: 201) 또는 WVRQAPGQGLESIG (서열식별번호: 205); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR (서열식별번호: 202) 또는 RATLTIDKSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR (서열식별번호: 206); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVAA (서열식별번호: 203) 또는 WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 207).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 208) 또는 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 212); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKAGNNPKLLIY (서열식별번호: 209) 또는 WYQQKPGKNPKLLIY (서열식별번호: 213); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 210) 또는 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 214); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTNLELK (서열식별번호: 211) 또는 FGQGTKVEIK (서열식별번호: 215).
일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 216, 218, 220, 또는 221; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 217 또는 서열식별번호: 219; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.예를 들면, 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 216 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 217. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 218 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 219. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 220 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 219. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 221 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 219.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKNGDTFYNQNFKD (서열식별번호: 193); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199). 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 216; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 217; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS (서열식별번호: 200); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVKQSHGKSLESIG (서열식별번호: 201); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR (서열식별번호: 202); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVAA (서열식별번호: 203). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 208); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKAGNNPKLLIY (서열식별번호: 209); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 210); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTNLELK (서열식별번호: 211). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 216 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 217. 일부 사례에서, 예시적인 항-IL-33 항체는 2B6이다.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SYWIN (서열식별번호: 222); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIAPGSGFISYNELFKD (서열식별번호: 223); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: EFYYGSFYGGFAY (서열식별번호: 224); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNIHVWLS (서열식별번호: 225); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: KASTLHT (서열식별번호: 226); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSSPLT (서열식별번호: 227), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 222-227.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT (서열식별번호: 228) 또는 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT (서열식별번호: 238); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIKQRPGQGLEWIG (서열식별번호: 229) 또는 WVRQAPGQGLEWIG (서열식별번호: 239); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR (서열식별번호: 230) 또는 RVTITRDTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR (서열식별번호: 240); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSA (서열식별번호: 231) 또는 WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 241).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 232) 또는 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 242); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGNIPKLLIY (서열식별번호: 233) 또는 WYQQKPGKAPKLLIY (서열식별번호: 243); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 234) 또는 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 244); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGAGTKLEVK (서열식별번호: 235) 또는 FGQGTKVEIK (서열식별번호: 245).
일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 236 또는 서열식별번호: 246; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 237 또는 서열식별번호: 247; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SYWIN (서열식별번호: 222); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIAPGSGFISYNELFKD (서열식별번호: 223); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: EFYYGSFYGGFAY (서열식별번호: 224); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNIHVWLS (서열식별번호: 225); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: KASTLHT (서열식별번호: 226); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSSPLT (서열식별번호: 227). 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 236; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 237; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT (서열식별번호: 228); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIKQRPGQGLEWIG (서열식별번호: 229); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR (서열식별번호: 230); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSA (서열식별번호: 231). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 232); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGNIPKLLIY (서열식별번호: 233); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 234); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGAGTKLEVK (서열식별번호: 235). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 236 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 237. 일부 사례에서, 예시적인 항-IL-33 항체는 9F6이다.
다른 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAX1H (서열식별번호: 248) (여기서 X1은 Met 또는 Ile; (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSX1X2NX3YATX4YX5ASVKG (서열식별번호: 249) (여기서 X1은 Arg 또는 Lys이고, X2은 Asn, Thr, 또는 Gly이고, X3은 Asn 또는 Ser이고, X4은 Ala 또는 Glu이고, 그리고 X5은 Ala 또는 Asp임); (c) 하기의 아미노산 서열: X1X2X3X4PFDY (서열식별번호: 250) (여기서 X1은 Leu 또는 Gln이고, X2은 Gln, Gly, 또는 Phe이고, X3은 Gln 또는 Gly이고, 그리고 X4은 Pro 또는 Asp임); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHX1X2YPX3T (서열식별번호: 253) (여기서 X1은 Asp 또는 Ser이고, X2은 Ser 또는 Ile이고, 그리고 X3은 Leu 또는 Pro, 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 248-253.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 HVR 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAMH (서열식별번호: 254) 또는 GSAIH (서열식별번호: 258); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSRNNNYATAYAASVKG (서열식별번호: 255), RIRSRTNNYATEYDASVKG (서열식별번호: 259) 또는 RIRSKGNSYATAYAASVKG (서열식별번호: 262); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: LQQPPFDY (서열식별번호: 256), LGQPPFDY (서열식별번호: 260), 또는 QFGDPFDY (서열식별번호: 263); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHDSYPLT (서열식별번호: 257) 또는 LQHSIYPPT (서열식별번호: 261), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 251, 252, 또는 254-263.
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 264), EVQLVESGGDLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 265), 또는 EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 266); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQASGKGLEWVG (서열식별번호: 267) 또는 WVRQAPGKGLEWVG (서열식별번호: 268); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR (서열식별번호: 269), RFTISRDDSKRTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR (서열식별번호: 270), 또는 RFSISRDDSKRTAYLQMSSLKTEDSAVYYCAR (서열식별번호: 271); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272).
일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 273), AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 274), 또는 AIRITQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 275); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 277), GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 278), 또는 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 279); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 280) 또는 FGQGTKVEIK (서열식별번호: 281).
일부 사례에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 282, 284, 또는 286; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임): 283, 285, 또는 287; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 282 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 283. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 284 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 285. 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 286 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 287.
예를 들면, 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAMH (서열식별번호: 254); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSRNNNYATAYAASVKG (서열식별번호: 255); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: LQQPPFDY (서열식별번호: 256); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHDSYPLT (서열식별번호: 257). 일부 사례에서, 본 항체는 하기를 포함한다: (a) 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 282; (b) 적어도 90% 서열 (예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인 (상기 동일성은 하기의 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 283; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 264); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQASGKGLEWVG (서열식별번호: 267); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR (서열식별번호: 269); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기 경쇄 프레임워크 영역을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 273); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 277); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 280). 일부 사례에서, 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 282 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 283. 일부 사례에서, 예시적인 항-IL-33 항체는 101. B11.
일부 사례에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 288 및/또는 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 289. 특정 구현예에서, 항체는 IgG4.S228P 포맷으로 발현된 10C12.38.H6.87Y.58I 이다.
일부 사례에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 292 및/또는 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 293. 특정 구현예에서, 항체는 IgG4.S228P 포맷으로 발현된 4G12.FW4 이다.
일부 사례에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 290 및/또는 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 291. 특정 구현예에서, 항체는 IgG1 포맷으로 발현된 10C12.38.H6.87Y.58I 이다.
일부 사례에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 294 및/또는 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 295. 특정 구현예에서, 항체는 IgG1 포맷으로 발현된 4G12.FW4 이다.
추가 측면에서, 본 발명은 본 명세서에서 제공된 항-IL-33 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들면, 특정 구현예에서, 10C12.38.H6.87Y.58I 또는 4G12.FW4와 동일한 에피포트에 결합하는 항체가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 항-IL-33 항체는, 키메라성, 인간화된 또는 인간 항체를 포함하는 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-IL-33 항체는 항체 단편, 예를 들면, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 전장 항체, 예를 들면, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 온전한 IgG1 항체, 온전한 IgG4 항체, 또는 다른 항체 부류 또는 아이소타입이다. 일부 사례에서, 항체는 힌지 영역에서 돌연변이를 포함하는 IgG4 항체이다. 일부 사례에서, 돌연변이는 치환 돌연변이이다. 일부 사례에서, 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 S228 (EU 넘버링)에 있다. 일부 사례에서, 치환 돌연변이는 S228P 돌연변이이다.
추가 측면에서, 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 항-IL-33 항체는, 아래의 섹션 1-7에서 기재된 바와 같이 단독으로 또는 조합하여 특징들 중 임의의 것을 편입할 수 있다:
1. 항체 친화도
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기의 해리 상수 (KD)를 갖는다: ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, ≤ 1 pM, 또는 ≤ 0.1 pM (예를 들면, 10-6 M 이하, 예를 들면, 10-6 M 내지 10-9 M 이하, 예를 들면, 10-9 M 내지 10-13 M 이하).
일 구현예에서, KD는 방사선표지된 항원 결합 분석 (RIA)에 의해 측정된다. 일 구현예에서, RIA은 관심있는 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 이용하여 수행된다. 예를 들면, 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시킨 다음, 결합된 항원을 항-Fab 항체-코팅된 플레이트로 포획함으로써 측정된다 (예를 들면, Chen 등 J. Mol. Biol. 293:865-881, 1999)을 참고한다. 분석을 위한 조건을 확립하기 위해, 미세적정® 다중-웰 플레이트 (Thermo Scientific)를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6)에서 5 μg/ml의 포획 항-Fab 항체 (Cappel Labs)로 밤새 코팅한 다음, 실온 (대략 23°C)에서 2 내지 5시간 동안 PBS 중의 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 차단한다. 비-흡착성 플레이트 (Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원을 관심있는 Fab의 연속 희석과 혼합한다 (예를 들면, 하기 문헌에서 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함: Presta 등 Cancer Res.57:4593-4599, 1997). 이후, 관심있는 Fab는 밤새 인큐베이션되지만, 상기 인큐베이션은 평형에 도달하게 하기 위해 더 긴 기간 (예를 들면, 약 65시간) 동안 계속될 수 있다. 그 후, 혼합물을 실온에서의 인큐베이션 (예를 들면, 1시간 동안)을 위해 포획 플레이트로 이동시킨다. 그리고 나서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS에서 0.1% 폴리소르베이트 20 (TWEEN®-20)로 8회 세척한다. 플레이트가 건조되면, 150 μl/웰의 섬광기 (MICROSCINT-20TM; Packard)를 첨가하고, 플레이트를 10분 동안 TOPCOUNT™ 감마 계수기 (Packard) 상에서 계수한다. 경쟁적 결합 분석에서 사용하기 위해 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 Fab의 농도를 선택한다.
또 다른 구현예에 따르면, KD는 BIACORE® 표면 플라즈몬 공명 분석을 사용하여 측정된다. 예를 들면, BIACORE®-2000 또는 BIACORE ®-3000 (BIAcore, Inc.,Piscataway, NJ)을 사용하는 분석이 ~10 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 이용하여 25°C에서 수행된다. 일 구현예에서, 카복시메틸레이트화된 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, BIACORE, Inc.)은 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'- (3-디메틸아미노프로필)-카보디이미드 하이드로클로라이드 (EDC) 및 N-하이드록시석신이미드 (NHS)로 활성화된다. 항원을 5 μl/분의 유속으로 주사하기 전에 10 mM 아세트산나트륨, pH 4.8로 5 μg/ml (~0.2 μM)로 희석하여 커플링된 단백질의 대략 10 반응 단위 (RU)를 달성한다. 항원의 주사 후, 1 M 에탄올아민을 주사하여 미반응된 그룹을 차단한다. 동력학 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 μl/분의 유속으로 25°C에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (TWEEN®-20) 표면활성제를 갖는 인산 완충 염수 (PBS) (PBST)에서 주사한다. 결합 속도 (kon) 및 해리 속도 (koff)를 결합 및 해리 센서그램을 동시에 핏팅함으로써 간단한 일대일 랑뮤어 결합 모델 (BIACORE® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 계산한다. 평형 해리 상수 (KD)는 비 koff/kon로서 계산된다. 예를 들면, Chen 등 (J. Mol. Biol. 293:865-881, 1999)을 참고한다. 결합 속도 (on-rate)가 상기 표면 플라즈몬 공명 분석에 의해 106 M-1s-1를 초과하는 경우, 결합 속도는 분광광도계, 예컨대 정지-유동 구비된 분광광도계 (Aviv 기기) 또는 교반 큐벳을 갖는 8000-시리즈 SLM-AMINCO™ 분광광도계 (ThermoSpectronic)에서 측정된 바와 같이, 증가하는 농도의 항원의 존재하에, PBS, pH 7.2에서 20 nM 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25°C에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하여 결정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은, 비제한적으로, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함한다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 하기 문헌을 참고한다: Hudson 등 Nat. Med.9:129-134 (2003). scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들면, Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds.,(Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)을 참고하며; 또한 하기를 참조한다: WO 제93/16185호; 및 미국 특허 번호 제5,571,894호 및 제5,587,458호.회수 (salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의를 위해, 하기를 참고한다: 미국 특허 번호 5,869,046호.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들면, 하기를 참고한다: EP 제404,097호; WO 제1993/01161호; Hudson 등 Nat. Med.9:129-134, 2003; 및 Hollinger 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993.트리아바디 및 테트라바디는 또한 하기에 기재되어 있다: Hudson 등 Nat. Med.9:129-134, 2003.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 모두 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 모두 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (예를 들면, 미국 특허 번호 6,248,516호 B1 참고).
항체 단편은 본원에서 기재된 바와 같이 비제한적으로 온전한 항체의 단백분해 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주세포 (예를 들면 E . 콜리 또는 파아지)에 의한 생산을 포함하는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
3. 키메라성 및 인간화된 항체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 키메라성 항체이다. 특정 키메라성 항체는, 예를 들면, 하기에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 제4,816,567호; 및 Morrison 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855, 1984). 일 예에서, 키메라성 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들면, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가 예에서, 키메라성 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체로부터 변화된 "부류 스위칭된" 항체이다. 키메라성 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라성 항체는 인간화된 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 친계 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서, 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화된다. 일반적으로, 인간화된 항체는 HVR (또는 그의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 일부)은 인간 항체 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체는 선택적으로 또한 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체에서의 일부 FR 잔기는, 예를 들면, 항체 특이성 또는 친화도를 회복하거나 개선하기 위해, 비-인간 항체 (예를 들면, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화된 항체 및 이의 제조 방법은, 예를 들면, Almagro 등 Front. Biosci.13:1619-1633, 2008에서 검토되며, 예를 들면, 하기에 추가로 기재되어 있다: Riechmann 등 Nature 332:323-329, 1988; Queen 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-10033, 1989; US 특허 제5,821,337호, 제7,527,791호, 제6,982,321호, 및 제7,087,409호; Kashmiri 등 Methods 36:25-34, 2005 (특이성 결정 영역 (SDR) 그라프팅을 기술함); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498, 1991 ("재표면화"를 기술함); Dall'Acqua 등 Methods 36:43-60, 2005 ("FR 셔플링"를 기술함); 및 Osbourn 등 Methods 36:61-68, 2005 및 Klimka 등 Br.J. Cancer, 83:252-260, 2000 (FR 셔플링에 대한 "유도된 선택" 접근법을 기술함).
인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 비제한적으로 하기를 포함한다: "최적화" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들면, Sims 등 J. Immunol. 151:2296, 1993 참고); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들면, Carter 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285, 1992; 및 Presta 등 J. Immunol.,151:2623, 1993 참고); 인간 성숙한 (체세포적으로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역 (예를 들면, Almagro 등 Front. Biosci.13:1619-1633, 2008 참고); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들면, Baca 등 J. Biol. Chem. 272:10678-10684, 1997 및 Rosok 등 J. Biol. Chem. 271:22611-22618, 1996 참고)를 포함한다.
4. 인간 항체
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 본 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 하기에 기재되어 있다: van Dijk 등 Curr . Opin . Pharmacol .5:368-74, 2001 및 Lonberg, Curr.Opin. Immunol. 20:450-459, 2008.
인간 항체는 항원 투여에 대한 반응으로 인간 가변 영역을 갖는 온전한 인간 항체 또는 온전한 항체를 생산하도록 변형된 형질전환 동물에게 면역원을 투여함으로써 생산될 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 면역글로불린 유전자좌를 대체하거나, 또는 염색체외에 존재하거나 또는 동물의 염색체 내로 무작위로 통합되는, 인간 면역글로불린 유전자좌의 모두 또는 일부를 함유한다. 이러한 형질전환 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화되었다. 형질전환 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 하기를 참고한다: Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125, 2005.또한 하기를 참조한다: 예를 들면, 미국 특허 번호 제6,075,181호 및 제6,150,584호 (XENOMOUSETM 기술을 기술함); 미국 특허 번호 제5,770,429호 (HUMAB® 기술을 기술함); 미국 특허 번호 제7,041,870호 (K-M MOUSE® 기술을 기술함), 및 U.S. 특허 출원 공개 US 제2007/0061900호 (VELOCIMOUSE® 기술을 기술함). 이러한 동물에 의해 생성된 온전한 항체로부터의 인간 가변 영역은, 예를 들면, 상이한 인간 불변 영역과 조합함으로써 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단클론성 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주가 기재되었다. (예를 들면, Kozbor J. Immunol. 133:3001, 1984; Brodeur 등 Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc.,New York, 1987); 및 Boerner 등 J. Immunol. 147:86, 1991 참고). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체가 또한 하기에 기재되었다: Li 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562, 2006.추가의 방법은, 예를 들면, 하기에 기재된 것을 포함한다: 미국 특허 번호 제7,189,826호 (하이브리도마 세포주로부터 단클론성 인간 IgM 항체의 생산을 기술함) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4): 265-268, 2006 (인간-인간 하이브리도마를 기술함). 인간 하이브리도마 기술 (Trioma 기술)은 또한 하기에 기재되어 있다: Vollmers 등 Histology and Histopathology 20(3): 927-937, 2005 및 Vollmers 등 Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3): 185-91, 2005.
인간 항체는 또한, 인간-유래된 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로써 생성될 수 있다. 이후, 이러한 가변 도메인 서열은 원하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술이 하기에 기재되어 있다.
5. 라이브러리-유래된 항체
본 발명의 항체는 원하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들면, 파아지 디스플레이 라이브러리를 생성하고 원하는 결합 특징을 갖는 항체에 대해 상기 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 본 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은, 예를 들면, Hoogenboom 등 in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien 등, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)에서 검토되며, 예를 들면, 하기 문헌에서 추가로 기재되어 있다: McCafferty 등 Nature 348:552-554, 1990; Clackson 등 Nature 352:624-628, 1991; Marks 등 J. Mol. Biol. 222:581-597, 1992; Marks 등 in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu 등 J. Mol. Biol. 338(2): 299-310, 2004; Lee 등 J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093, 2004; Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472, 2004; 및 Lee 등 J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132, 2004.
특정 파아지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 별도로 클로닝되고 파아지 라이브러리로 무작위로 재조합되며, 이는 이후에 하기 문헌에 기재된 바와 같이 항원-결합 파아지에 대해 스크리닝될 수 있다: Winter 등 Ann. Rev. Immunol ., 12:433-455, 1994.파아지는 전형적으로 단일-사슬 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 제작할 필요없이 면역원에게 높은-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 미접촉 레퍼토리는 클로닝되어 (예를 들면, 인간으로부터) 하기 문헌에 기재된 바와 같이 임의의 면역화 없이 광범위한 비자기 및 또한 자기 항원에게 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다: Griffiths 등 EMBO J. 12:725-734, 1993. 마지막으로, 미접촉 라이브러리는 또한 줄기세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 분절을 클로닝하고, 하기 문헌에 기재된 바와 같이, 고도의 가변 HVR3 영역을 인코딩하고 시험관내 재배열을 달성하는 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써, 합성적으로 제조될 수 있다: Hoogenboom 등 J. Mol. Biol.,227:381-388, 1992.인간 항체 파아지 라이브러리를 기술하는 특허 공개는, 예를 들면 하기를 포함한다: US 특허 제5,750,373호, 및 US 특허 공개 제2005/0079574호, 제2005/0119455호, 제2005/0266000호, 제2007/0117126호, 제2007/0160598호, 제2007/0237764호, 제2007/0292936호, 및 제2009/0002360호.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편이 본원에서 고려되는 인간 항체 또는 인간 항체 단편이다.
6. 다중특이적 항체
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들면, 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 단클론성 항체이다. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 IL-33의 2개의 상이한 에피토프 에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 특이성 중 하나는 IL-33에 대한 것이고 다른 것은 하기의 임의의 다른 항원에 대한 것이다: (예를 들면, 제2 생물학적 분자, 예를 들면, IL-13, IL-4, IL-5, IL-17, 인자 D, HtrA1, VEGF, 또는 VEGF 수용체). 따라서, 이중특이적 항체는 하기에 대한 결합 특이성을 가질 수 있다: IL-33 및 IL-13; IL-33 및 IL-4; IL-33 및 IL-5; IL-33 및 IL-17; IL-33 및 인자 D; IL-33 및 HtrA1; IL-33 및 VEGF; 또는 IL-33 및 VEGF 수용체 (예를 들면, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, 막-결합 VEGF 수용체 (mbVEGFR), 또는 가용성 VEGF 수용체 (sVEGFR)). 일부 사례에서, 이중특이적 항체는 IL-33 및 인자 D에 대한 결합 특이성을 가질 수 있다. 다른 사례에서, 이중특이적 항체는 IL-33 및 HtrA1에 대한 결합 특이성을 가질 수 있다. 또 다른 사례에서, 이중특이적 항체는 IL-33 및 VEGF에 대한 결합 특이성을 가질 수 있다. 다른 사례에서, 이중특이적 항체는 IL-33 및 VEGF 수용체에 대한 결합 특이성을 가질 수 있다. 특히, 이중특이적 항체는 IL-33 및 IL-13에 대한 결합 특이성을 가질 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
예를 들면, 일부 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSX1S (서열식별번호: 62) (여기서 X1은 Met, Leu, 또는 Val임); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDX1VKG (서열식별번호: 63) (여기서 X1은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGX1X2FFEV (서열식별번호: 64) (여기서 X1은 Asn 또는 Asp이고, 그리고 X2 는 Trp 또는 Phe임); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 4-6 또는 62-64, IL-13에 결합하는 제2 결합 도메인을 가질 수 있다. IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은 예를 들면, 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 296-301. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 항-IL-13 항체 레브리키주맙의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
예를 들면, 일부 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 초가변성 영역 (HVRs)을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6), 예컨대 10C12.38.H6.87Y.58I, IL-13에 결합하는 제2 결합 도메인을 갖는다. IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은, 예를 들면, 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301). 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 항-IL-13 항체 레브리키주맙의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
일부 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 36; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 37; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인, 예컨대 10C12.38.H6.87Y.58I, IL-13에 결합하는 제2 결합 도메인을 가질 수 있다. IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은, 예를 들면, 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 302; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 303; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 328; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 329; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 항-IL-13 항체 레브리키주맙 또는 그것의 서열에 대한 것임); (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 항-IL-13 항체 레브리키주맙 또는 그것의 서열에 대한 것임); 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
다른 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPX1LKS (서열식별번호: 90) (여기서 X1은 Ser 또는 Ala임); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 65, 68-71, 또는 90, IL-13에 결합하는 제2 결합 도메인을 가질 수 있다. IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은 예를 들면, 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301), 또는 하기를 갖는 상기 HVR 중 1개 이상 및 그것의 1종 이상의 변이체의 조합: 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들면, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성), (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 것임): 296-301. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 항-IL-13 항체 레브리키주맙의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
예를 들면, 일부 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 초가변성 영역 (HVRs)을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71), 예컨대 4G12.FW4, IL-13에 결합하는 제2 결합 도메인을 가질 수 있다. IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은, 예를 들면, 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함할 수 있다: (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301). 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 항-IL-13 항체 레브리키주맙의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
일부 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기를 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인을 포함한다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 84; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 85; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인, 예컨대 4G12.FW4, IL-13에 결합하는 제2 결합 도메인을 가질 수 있다. IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은, 예를 들면, 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 302; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 303; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 328; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 329; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인. 일부 사례에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인은 하기를 포함할 수 있다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 항-IL-13 항체 레브리키주맙 또는 그것의 서열에 대한 것임); (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 항-IL-13 항체 레브리키주맙 또는 그것의 서열에 대한 것임); 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
일부 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 상기 제1 중쇄는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 306 및 제1 경쇄는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하고: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 307, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄, 상기 제2 중쇄는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하고: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 304 또는 330 및 제2 경쇄를 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함한다: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 305 또는 331. 일부 구현예에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄는 항-IL-13 항체 레브리키주맙의 중쇄 및 경쇄이다.
일부 사례에서, 이중특이적 항-IL-33 항체는 하기를 포함할 수 있다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 상기 제1 중쇄는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 308 및 제1 경쇄는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하고: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 309, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄, 상기 제2 중쇄는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하고: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 304 또는 330 및 제2 경쇄를 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함한다: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기 서열식별번호 또는 그것의 서열에 대한 것임): 305 또는 331. 일부 구현예에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄는 항-IL-13 항체 레브리키주맙의 중쇄 및 경쇄이다.
이전의 이중특이적 항체 중 임의의 것은 약 1 nM 이하의 KD로 인간 및 사이노몰구스 원숭이 (사이노) IL-33 모두에 특이적으로 결합할 수 있다. 이전의 이중특이적 항체 중 임의의 것은 약 1 nM 이하의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합할 수 있다. 예를 들면, 일부 사례에서, 이중특이적 항체는 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 900 pM, 약 1 pM 내지 약 800 pM, 약 1 pM 내지 약 700 pM, 약 1 pM 내지 약 600 pM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 1 pM 내지 약 400 pM, 약 1 pM 내지 약 300 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 190 pM, 약 1 pM 내지 약 180 pM, 약 1 pM 내지 약 170 pM, 약 1 pM 내지 약 160 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 140 pM, 약 1 pM 내지 약 130 pM, 약 1 pM 내지 약 120 pM, 약 1 pM 내지 약 110 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM, 약 1 pM 내지 약 70 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 40 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 약 1 pM 내지 약 25 pM, 약 1 pM 내지 약 20 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 10 pM). 일부 사례에서, 이중특이적 항체는 하기의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 250 pM, 약 1 pM 내지 약 225 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 190 pM, 약 1 pM 내지 약 180 pM, 약 1 pM 내지 약 170 pM, 약 1 pM 내지 약 160 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 140 pM, 약 1 pM 내지 약 130 pM, 약 1 pM 내지 약 120 pM, 약 1 pM 내지 약 110 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM, 약 1 pM 내지 약 70 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 40 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 약 1 pM 내지 약 25 pM, 약 1 pM 내지 약 20 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 10 pM). 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 약 25 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합한다.
이전의 이중특이적 항체 중 임의의 것은 약 1 nM 이하의 KD로 인간 IL-13에 특이적으로 결합할 수 있다. 예를 들면, 일부 사례에서, 이중특이적 항체는 하기의 KD로 인간 IL-13에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 1 nM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 900 pM, 약 1 pM 내지 약 800 pM, 약 1 pM 내지 약 700 pM, 약 1 pM 내지 약 600 pM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 1 pM 내지 약 400 pM, 약 1 pM 내지 약 300 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 190 pM, 약 1 pM 내지 약 180 pM, 약 1 pM 내지 약 170 pM, 약 1 pM 내지 약 160 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 140 pM, 약 1 pM 내지 약 130 pM, 약 1 pM 내지 약 120 pM, 약 1 pM 내지 약 110 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM, 약 1 pM 내지 약 70 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 40 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 약 1 pM 내지 약 25 pM, 약 1 pM 내지 약 20 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 10 pM). 일부 사례에서, 이중특이적 항체는 하기의 KD로 인간 IL-13에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 250 pM (예를 들면, 약 1 pM 내지 약 250 pM, 약 1 pM 내지 약 225 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM, 약 1 pM 내지 약 190 pM, 약 1 pM 내지 약 180 pM, 약 1 pM 내지 약 170 pM, 약 1 pM 내지 약 160 pM, 약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 140 pM, 약 1 pM 내지 약 130 pM, 약 1 pM 내지 약 120 pM, 약 1 pM 내지 약 110 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM, 약 1 pM 내지 약 70 pM, 약 1 pM 내지 약 60 pM, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 1 pM 내지 약 40 pM, 약 1 pM 내지 약 30 pM, 약 1 pM 내지 약 25 pM, 약 1 pM 내지 약 20 pM, 또는 약 1 pM 내지 약 10 pM). 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 약 10 pM 이하 의 KD로 인간 IL-13에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 하기의 KD로 인간 IL-13에 특이적으로 결합한다: 약 1 pM 내지 약 10 pM (예를 들면, 약 1 pM, 약 2 pM, 약 3 pM, 약 4 pM, 약 5 pM, 약 6 pM, 약 7 pM, 약 8 pM, 약 9 pM 또는 약 10 pM이다.
다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공동-발현 (Milstein 등 Nature 305:537, 1983; WO 93/08829; 및 Traunecker 등 EMBO J. 10:3655, 1991 참고), 및 "노브-인-홀 (knob-in-hole)" 엔지니어링 (예를 들면, 미국 특허 번호 5,731,168호 참고). 다중-특이적 항체는 또한, 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위해 정전기 스티어링 (electrostatic steering) 효과를 조작함으로써 (WO 제2009/089004호 A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교결합함으로써 (예를 들면, US 특허 제4,676,980호, 및 Brennan 등 Science, 229:81, 1985 참고); 이중특이적 항체를 생산하기 위해 류신 지퍼를 사용함으로써 (예를 들면, Kostelny 등 J. Immunol ., 148(5): 1547-1553, 1992 참고); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위해 "디아바디" 기술을 사용함으로써 (예를 들면, Hollinger 등 Proc. Natl . Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993 참고); 및 단일-사슬 Fv (scFv) 이량체를 사용함으로써 (예를 들면 Gruber 등 J. Immunol. 152:5368, 1994 참고); 및, 예를 들면, 하기에 기재된 바와 같이, 삼중특이적 항체를 제조함으로써 제조될 수 있다: Tutt 등 J. Immunol. 147:60, 1991.
"옥토퍼스 (Octopus) 항체"를 포함하는, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들면 US 제2006/0025576호 A1 참고).
본원에서의 항체 또는 단편은 또한 IL-33 뿐만 아니라 또 다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 Fab" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들면, US 제2008/0069820호 참고).
노브-인투-홀
다중특이적 항체를 생산하는 방법으로서 노브-인투-홀의 사용은, 예를 들면, 하기에 기재되어 있다: U.S. 특허 제5,731,168호, WO제2009/089004호, US 제2009/0182127호, US 제2011/0287009호, Marvin 및 Zhu, Acta Pharmacol . Sin. (2005) 26(6): 649-658, 및 Kontermann (2005) Acta Pharmacol . Sin., 26:1-9. 간략한 비제한적인 논의가 하기에 제공된다.
"돌출부 (protuberance)"는 제1 폴리펩타이드의 경계면로부터 돌출되어 헤테로다량체를 안정화시키기 위해 인접한 경계면 (즉, 제2 폴리펩타이드의 경계면)에서 보상성 공동 내에 위치할 수 있고, 그렇게 함으로써 예를 들면 동종다량체 형성보다 이종다량체를 선호하는 적어도 하나의 아미노산 측쇄를 지칭한다. 돌출부는 원래의 경계면 내에 존재할 수 있거나 또는 합성으로 도입될 수 있다 (예를 들면, 경계면을 인코딩하는 핵산을 변경함으로써). 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드의 경계면를 인코딩하는 핵산은 돌출부를 인코딩하도록 변경된다. 이를 달성하기 위하여, 제1 폴리펩타이드의 경계면 내의 적어도 하나의 "원래의" 아미노산 잔기를 인코딩하는 핵산은 원래의 아미노산 잔기보다 더 큰 측쇄 부피를 갖는 적어도 하나의 "도입" 아미노산 잔기를 인코딩하는 핵산으로 대체된다. 하나를 초과하는 원래 및 상응하는 도입 잔기가 있을 수 있음이 이해될 것이다. 다양한 아미노 잔기의 측쇄 부피는, 예를 들면, 하기에 나타나 있다: US 제2011/0287009호의 표 1 또는 미국 특허 번호 7,642,228호를 참고한다.
일부 구현예에서, 돌출부의 형성을 위한 도입 잔기는 아르기닌 (R), 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y) 및 트립토판 (W)으로부터 선택된 천연 발생 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 도입 잔기는 트립토판 또는 티로신이다. 일부 구현예에서, 돌출부의 형성을 위한 원래의 잔기는 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌, 또는 발린과 같이, 작은 측쇄 부피를 갖는다. 예를 들면, 미국 특허 번호 7,642,228호를 참고한다.
"공동 (cavity)"는 제2 폴리펩타이드의 경계면에서 오목하여 제1 폴리펩타이드의 인접한 경계면의 상응하는 돌출부를 위한 공간을 제공하는, 적어도 하나의 아미노산 측쇄를 지칭한다. 공동은 원래의 경계면에 존재할 수 있거나 또는 합성으로 도입될 수 있다 (예를 들면, 경계면을 인코딩하는 핵산을 변경함으로써). 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드의 경계면를 인코딩하는 핵산은 공동을 인코딩하도록 변경된다. 이를 달성하기 위해, 제2 폴리펩타이드의 경계면 내의 적어도 하나의 "원래의" 아미노산 잔기를 인코딩하는 핵산은 원래의 아미노산 잔기보다 더 작은 측쇄 부피를 갖는 적어도 하나의 "도입" 아미노산 잔기를 인코딩하는 DNA로 대체된다. 하나를 초과하는 원래 및 상응하는 도입 잔기가 있을 수 있음이 이해될 것이다. 일부 구현예에서, 공동의 형성을 위한 도입 잔기는 알라닌 (A), 세린 (S), 트레오닌 (T), 및 발린 (V)로부터 선택된 천연 발생 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 도입 잔기는 세린, 알라닌, 또는 트레오닌이다. 일부 구현예에서, 공동의 형성을 위한 원래의 잔기는 티로신, 아르기닌, 페닐알라닌, 또는 트립토판과 같이 큰 측쇄 부피를 갖는다.
돌출부는 공동에 "위치할 수 있으며", 이는 각각 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드의 경계면 상의 돌출부 및 공동의 공간적 위치 및 돌출부 및 공동의 크기가 경계면에서 제1 및 제2 폴리펩타이드의 정상적인 결합을 유의미하게 방해하지 않으면서 공동에 위치할 수 있는 것을 의미한다. Tyr, Phe, 및 Trp와 같은 돌출부는 전형적으로 경계면의 축에 수직으로 연장하지 않고 바람직한 형태를 가지므로, 돌출부 및 상응하는 공동의 정렬은 X-선 결정학 또는 핵자기 공명 (NMR)에 의해 수득된 것과 같이 3차원 구조에 기초하여 돌출부/공동 쌍을 모델링하는데 의존할 수 있다. 이것은 본 기술분야에서 널리 허용된 기술을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, IgG1 불변 영역 내의 돌출부 (knob) 돌연변이는 T366W이다. 일부 구현예에서, IgG1 불변 영역 내의 공동 (hole) 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, IgG1 불변 영역 내의 공동 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함한다.
일부 구현예에서, IgG4 불변 영역 내의 돌출부 돌연변이는 T366W이다. 일부 구현예에서, IgG4 불변 영역 내의 공동 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, IgG4 불변 영역 내의 공동 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함한다.
7.항체 변이체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들면, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열 내로 적절한 변형을 도입함으로써, 또는 펩타이드 합성에 의해 제조될 수 있다. 그러한 변형은, 예를 들면, 항체의 아미노산 서열 내의 잔기의 결실, 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합은, 최종 작제물이 원하는 특징, 예를 들면, 항원-결합을 보유하는 경우, 최종 작제물에 도달하도록 이뤄질 수 있다.
a) 치환, 삽입, 및 결실 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심있는 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"의 표제하에 표 1에 나타나 있다. 더 실질적인 변화는 "예시적인 치환"의 표제하에 표 1에 제공되어 있으며, 아미노산 측쇄 부류를 참조하여 하기에 추가로 기재된 바와 같다. 아미노산 치환이 관심있는 항체에 도입될 수 있으며, 생성물은 원하는 활성, 예를 들면, 유지된/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.
표 1
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아미노산은 공통의 측쇄 특성에 따라 분류될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 방향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 부류의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환 변이체의 한 가지 유형은 모 항체 (예를 들면, 인간화된 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변성 영역 잔기를 치환하는 것을 포함한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택된 수득한 변이체(들)는 모 항체에 비해 특정한 생물학적 특성 (예를 들면, 증가된 친화도, 감소된 면역원성)의 변형을 가질 것이고/거나 모 항체의 특정한 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이체는, 예를 들면, 본원에 기재된 것과 같은 파아지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 사용하여, 간편하게 생성될 수 있는 친화도 성숙된 항체이다. 요약하면, 하나 이상의 HVR 잔기가 돌연변이되고 변이체 항체가 파아지 상에 디스플레이되며, 특정한 생물학적 활성 (예를 들면, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다.
변경 (예를 들면, 치환)은, 예를 들면, 항체 친화도를 개선하기 위해, HVR에서 이뤄질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟," 즉, 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 인코딩된 잔기 (예를 들면, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196, 2008 참고), 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에서 이뤄질 수 있으며, 수득한 변이체 VH 또는 VL은 결합 친화도에 대해 시험된다. 제작 및 2차 라이브러리로부터의 재선택에 의한 친화도 성숙은, 예를 들면, 하기에 기재되었다: Hoogenboom 등 in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien 등 ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001). 친화도 성숙의 일부 구현예에서, 임의의 다양한 방법 (예를 들면, 오류유발 PCR, 사슬 셔플링, 또는 올리고뉴클레오타이드-지향된 돌연변이유발)에 의해 성숙에 대해 선택된 가변 유전자 내로 다양성이 도입된다. 이후, 2차 라이브러리가 생성된다. 이후, 원하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 확인하기 위해 라이브러리가 스크리닝된다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 HVR-지향된 접근법을 포함하며, 여기서 몇 개의 HVR 잔기 (예를 들면, 한 번에 4-6 잔기)는 무작위화된다. 항원 결합에 관여하는 HVR 잔기는, 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 특이적으로 확인될 수 있다. 특히 HVR-H3 및 HVR-L3이 종종 표적화된다.
특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은, 이러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 하나 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들면, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들면, 본원에서 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에서 이뤄질 수 있다. 이러한 변경은, 예를 들면, HVR 내의 항원 접촉 잔기의 외부에 있을 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 구현예에서, 각 HVR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인을 위한 유용한 방법은 하기에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다: Cunningham 등 Science 244:1081-1085, 1989. 이 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기 그룹 (예를 들면, 하전된 잔기, 예컨대 Arg, Asp, His, Lys, 및 Glu)이 확인되고 중성 또는 음전하를 띠는 아미노산 (예를 들면, Ala 또는 폴리알라닌)에 의해 대체되어 항체와 항원과의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 결정한다. 추가의 치환이 상기 아미노산 위치에 도입되어 초기 치환에 대한 기능적 민감도를 입증할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 항원-항체 복합체의 결정 구조가 항체 및 항원 간의 접점을 확인하는데 사용될 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 인접하는 잔기는 치환을 위한 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체는 이들이 원하는 특성을 함유하는지 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1개의 잔기부터 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드까지의 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합 뿐만 아니라, 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N- 또는 C-말단을 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 (예를 들면, ADEPT의 경우) 또는 폴리펩타이드에 융합하는 것을 포함한다.
b) 당화 변이체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 당화되는 정도를 증가시키거나 감소시키기 위해 변경된다. 항체에 대한 당화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 당화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 간편하게 달성될 수 있다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 일반적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결에 의해 부착된, 분지형, 바이안테너리 올리고당을 전형적으로 포함한다. 예를 들면, 문헌[Wright 등 TIBTECH 15:26-32, 1997]을 참고한다. 상기 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들면, 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토오스, 및 시알산, 뿐만 아니라 바이안테너리 올리고당 구조의 "줄기" 내의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체에서 올리고당의 변형은 특정한 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 이뤄질 수 있다.
일 구현예에서, Fc 영역에 부착된 (직접적으로 또는 간접적으로) 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들면, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은, 예를 들면, WO 제2008/077546호에 기재된 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분광분석법에 의해 측정된 바와 같이 Asn 297에 부착된 모든 당구조 (예컨대, 복합, 하이브리드 및 높은 만노스 구조)의 합 대비 Asn297에서의 당 사슬 내의 푸코스의 평균 양을 계산함으로써 결정된다. Asn297은 Fc 영역 내의 약 위치 297에 위치한 아스파라긴 잔기 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)를 지칭하나; Asn297은 또한, 항체에서의 작은 서열 변화로 인해 위치 297의 업스트림 또는 다운스트림의 약 ± 3 아미노산, 즉 위치 294 내지 300에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들면, US 특허 공개 제2003/0157108호 및 제2004/0093621호를 참고한다. "탈푸코실화된" 또는 "푸코스-결핍된" 항체 변이체와 관련된 간행물의 예는 하기를 포함한다: US 제2003/0157108호; WO 제2000/61739호; WO 제2001/29246호; US 제2003/0115614호; US 제2002/0164328호; US 제2004/0093621호; US 제2004/0132140호; US 제2004/0110704호; US 제2004/0110282호; US 제2004/0109865호; WO 제2003/085119호; WO 제2003/084570호; WO 제2005/035586호; WO 제2005/035778호; WO 제2005/053742호; WO 제2002/031140호; Okazaki 등 J. Mol. Biol. 336:1239-1249, 2004; Yamane-Ohnuki 등 Biotech. Bioeng . 87:614, 2004. 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka 등 Arch. Biochem . Biophys . 249:533-545, 1986; US 제2003/0157108호; 및 WO 제2004/056312호 A1, 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자, FUT8 , 녹아웃 CHO 세포 (예를 들면, Yamane-Ohnuki 등 Biotech. Bioeng.87:614, 2004; Kanda 등 Biotechnol . Bioeng.94(4): 680-688, 2006; 및 WO 제2003/085107호)를 포함한다.
예를 들면, 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테너리 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된, 이등분한 올리고당을 갖는 항체 변이체가 추가로 제공된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예는, 예를 들면, 하기에 기재되어 있다: WO 제2003/011878호; US 특허 제6,602,684호; 및 US 제2005/0123546호. Fc 영역에 부착된 올리고당 내의 적어도 하나의 갈락토오스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는, 예를 들면, WO 제1997/30087호; WO 제1998/58964호; 및 WO 제1999/22764호에 기재되어 있다.
c) Fc 영역 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역 내로 도입될 수 있고, 이에 의해 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에 아미노산 변형 (예컨대, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들면, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 모두는 아니지만 일부 효과기 기능을 보유하는 항체 변이체를 고려하며, 이는 상기 변이체를 생체내에서 항체의 반감기가 중요하나 특정 효과기 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 적용에 바람직한 후보로 만든다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, 항체가 FcγR 결합이 결여되지만 (따라서 ADCC 활성이 결여될 가능성이 있음), FcRn 결합 능력을 유지한다는 것을 보장하기 위해 Fc 수용체 (FcR) 결합 분석이 수행될 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 하기 문헌의 464 페이지 표 3에 요약되어 있다: Ravetch 등 Annu . Rev. Immunol . 9:457-492, 1991. 관심있는 분자의 ADCC 활성을 평가하는 시험관내 분석의 비-제한적인 예는 하기에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 5,500,362호 (예를 들면 Hellstrom 등 Proc. Natl . Acad . Sci. USA 83:7059-7063, 1986 및 Hellstrom 등 Proc. Natl . Acad . Sci . USA 82:1499-1502, 1985 참고; 미국 특허 번호 5,821,337호 (Bruggemann 등 J. Exp . Med.166:1351-1361, 1987 참고). 대안적으로, 비-방사성 분석 방법이 이용될 수 있다 (예를 들면, 유세포분석을 위한 ACTI™ 비-방사성 세포독성 분석 (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 CytoTox 96® 비-방사성 세포독성 분석 (Promega, Madison, WI). 이러한 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가로, 관심있는 분자의 ADCC 활성은, 예를 들면, 하기에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 생체내에서 평가될 수 있다: Clynes 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:652-656, 1998.C1q 결합 분석은 또한, 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되어 있다는 것을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, WO 제2006/029879호 및 WO 제2005/100402호에서의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참고한다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석이 수행될 수 있다 (예를 들면, Gazzano-Santoro 등 J. Immunol. Methods 202:163, 1996; Cragg 등 Blood 101:1045-1052, 2003; 및 Cragg 등 Blood 103:2738-2743, 2004 참고). FcRn 결합 및 생체내 청소능/반감기 결정은 또한 당해 분야에서 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다 (예를 들면, Petkova 등 Intl. Immunol. 18(12): 1759-1769, 2006 참고).
감소된 효과기 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 제6,737,056호). 이러한 Fc 돌연변이체는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2 이상에서의 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함하고, 이는 잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함한다 (US 특허 제7,332,581호).
FcR에 대해 개선되거나 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들면, 미국 특허 번호 6,737,056호; WO 제2004/056312호; 및 Shields 등 J. Biol. Chem . 9(2): 6591-6604, 2001 참고).
특정 구현예에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역, 예를 들면, Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334에서의 치환 (잔기의 EU 넘버링)을 포함한다.
일부 구현예에서, 변경은 예를 들면, 하기에 기재된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선되거나 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 야기하는 Fc 영역에서 이뤄질 수 있다: US 특허 제6,194,551호, WO 제99/51642호, 및 Idusogie 등 J. Immunol. 164:4178-4184, 2000.
증가된 반감기를 갖고, 태아에게 모계 IgG를 전달하는 것을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn) (Guyer 등 J. Immunol . 117:587, 1976 및 Kim 등 J. Immunol . 24:249, 1994)에 개선될 결합을 갖는 항체가 US 제2005/0014934호에 기재되어 있다. 상기 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 하나 이상의 치환을 내부에 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 하기 Fc 영역 잔기 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 것을 포함한다: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434, 예를 들면, Fc 영역 잔기 434의 치환 (US 특허 제7,371,826호).
또한 하기를 참조한다: Duncan 등 Nature 322:738-40, 1988; 미국 특허 번호 5,648,260호 및 제5,624,821호; 및 WO 제94/29351호 (Fc 영역 변이체의 다른 예에 관함).
d) 시스테인 조작된 항체 변이체
특정 구현예에서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된, "thioMAb"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에 존재한다. 상기 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 이에 의해 반응성 티올 그룹은 항체의 접근가능한 부위에 배치되고, 항체를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합하여 본원에 추가로 기재된 바와 같은 면역접합체를 생성하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 하기 잔기 중 임의의 하나 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카밧 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들면 하기에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다: 미국 특허 번호 7,521,541호.
e)항체 유도체
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 본 기술분야에 공지되어 있고 쉽게 이용가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 비제한적으로 수용성 폴리머를 포함한다. 수용성 폴리머의 비-제한적인 예는, 비제한적으로, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1, 3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 코폴리머, 폴리아미노산 (호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 호모폴리머, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 코-폴리머, 폴리옥시에틸레이트화된 폴리올 (예를 들면, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 물에서의 안정성으로 인해 제조시 이점을 가질 수 있다. 폴리머는 임의의 분자량일 수 있으며, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 폴리머의 수는 다양할 수 있으며, 둘 이상의 폴리머가 부착되는 경우, 이들은 동일 또는 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용된 폴리머의 수 및/또는 유형은, 비제한적으로, 개선될 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 정의된 조건 하에 요법에서 사용될지 여부 등을 포함하는 고려사항들에 기초하여 결정될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 방사선에 노출됨으로써 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티와 항체의 접합체가 제공된다. 일 구현예에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브를 포함한다 (Kam 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:11600-11605, 2005). 방사선은 임의의 파장일 수 있으며, 이는, 비제한적으로, 보통의 세포에게는 해를 입히지 않으나, 항체-비단백질성 모이어티에 인접한 세포가 사멸되는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함한다.
B. 재조합 방법 및 조성물
항체는, 예를 들면, 하기에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산될 수 있다: 미국 특허 번호 4,816,567호. 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-IL-33 항체를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들면, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 인코딩할 수 있다. 추가 구현예에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 (예를 들면, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구현예에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주세포가 제공된다. 하나의 그러한 구현예에서, 숙주세포는 하기를 포함한다 (예를 들면, 하기로 형질전환되었다): (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터. 일 구현예에서, 숙주세포는 진핵, 예를 들면, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 293 세포, 또는 림프양 세포 (예를 들면, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일 구현예에서, 항-IL-33 항체를 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 제공된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 숙주세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하고, 선택적으로 숙주세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 항체를 회수하는 것을 포함한다.
예를 들면, 상기에서 기재된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산은 단리되고 숙주세포에서의 추가의 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터 내로 삽입된다. 이러한 핵산은 종래의 절차를 사용하여 (예를 들면, 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드를 사용하여) 쉽게 단리되고 서열분석될 수 있다.
항체-인코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들면, 항체는, 특히 당화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않은 경우, 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편 및 폴리펩타이드의 발현을 위해, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,648,237호, 제5,789,199호, 및 제5,840,523호를 참고한다. (또한 하기를 참조한다: Charlton, Methods in Molecular Biology, vol. 248 (B.K.C.Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, E. 콜리에서의 항체 단편의 발현을 기술함.)발현 후, 항체는 가용성 분획에서 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물 외에도, 사상균 또는 효모와 같은 진핵 미생물이 항체-인코딩 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이며, 이는 당화 경로가 "인간화"되어 부분적으로 또는 완전한 인간 당화 패턴을 갖는 항체의 생산을 야기하는 진균 및 효모 균주를 포함한다. 문헌[Gerngross Nat. Biotech. 22:1409-1414, 2004 및 Li 등 Nat. Biotech. 24:210-215, 2006]을 참고한다.
당화된 항체의 발현에 적합한 숙주세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히 스포도프테라 프루지페르다 세포의 형질전환을 위해, 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 수많은 배큘로바이러스 균주가 확인되었다.
식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 예를 들면, US 특허 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호, 및 제6,417,429호 (형질전환 식물에서 항체를 생산하는 PLANTIBODIESTM 기술을 기술함)를 참고한다.
척추동물 세포가 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예를 들면, Graham 등 J. Gen Virol .36:59, 1977에 기재된 293 또는 293 세포); 어린 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들면, Mather Biol. Reprod .23:243-251, 1980에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 랫트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유선 종양 (MMT 060562); TRI 세포 (예를 들면, Mather 등,Annals N.Y .Acad. Sci. 383:44-68, 1982에 기재됨); MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub 등 Proc. Natl . Acad . Sci . USA 77:4216, 1980); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들면, 하기를 참고한다: Yazaki 등 Methods in Molecular Biology, vol. 248 (B.K.C.Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268, 2003.
C. 분석
본원에 제공된 항-IL-33 항체는 본 기술분야에 공지된 다양한 분석에 의해 그의 물리적/화학 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인되거나, 스크리닝되거나, 규명될 수 있다.
1. 결합 분석 및 다른 분석
일 측면에서, 본 발명의 항-IL-33 항체는, 예를 들면, ELISA, 웨스턴 블랏 등과 같은 공지된 방법에 의해 그의 항원-결합 활성에 대해 시험된다.
또 다른 측면에서, 경쟁 분석이 IL-33에 결합하는 것에 대해 본 발명의 항-IL-33 항체와 경쟁하는 항체를 확인하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 이러한 경쟁 항체는 본 발명의 항-IL-33 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들면, 선형 또는 형태적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하기 위한 상세한 예시적인 방법은 하기에 제공되어 있다: Morris "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ), 1996.
예시적인 경쟁 분석에서, 고정된 IL-33은 IL-33에 결합하는 제1 표지된 항체 및 IL-33에 결합하기 위해 제1 항체와 경쟁하는 그의 능력에 대해 시험되는 제2 표비표지된 항체를 포함하는 용액에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 IL-33은 제1 표지된 항체를 포함하나 제2 비표지된 항체를 포함하지 않는 용액에서 인큐베이션된다. IL-33에 대한 제1 항체의 결합을 허용하는 조건 하에서의 인큐베이션 후, 과잉의 미결합된 항체는 제거되고 고정된 IL-33과 관련된 표지의 양이 측정된다. 고정된 IL-33과 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소되는 경우, 이는 제2 항체가 IL-33에의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하고 있다는 것을 가리킨다. 하기를 참고한다: Harlow 등 Antibodies: A Laboratory Manual Ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY), 1988.
2. 활성 분석
일 측면에서, 생물학적 활성을 갖는 이의 항-IL-33 항체를 확인하기 위한 분석이 제공된다. 생물학적 활성은, 예를 들면, 생체내, 시험관내, 또는 생체외에서 IL-33 (예를 들면, 혈류 내의 IL-33), 또는 이의 펩타이드 단편에 대한 결합을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 생물학적 활성은 IL-33을 차단하거나 중화시키거나, 또는 IL-33이 리간드, 예를 들면, 수용체 (예를 들면, IL-33 수용체 ST2 및/또는 IL-1RAcP)에 결합하는 것을 방지하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 생물학적 활성은 IL-33 상의 부위 1에 대한 결합 및 하기에 대한 결합의 차단을 포함할 수 있다: IL-33 수용체 (즉, ST2 및/또는 IL-1RAcP). 생체내 및/또는 시험관내에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체가 또한 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 이러한 생물학적 활성에 대해 시험된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-IL-33 항체는 세포-기반 IL-33 차단 분석에서 억제에 대해 시험된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-IL-33 항체는 하기 분석에서 IL-33-유도된 리포터 활성의 억제에 대해 시험된다: 세포-기반 차단 분석 (예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 IL-33 HEK-BLUE™ 세포-기반 분석 (예를 들면, 실시예 2 및 실시예 8, 섹션 B 참고)). 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 하기 분석에서 1차 세포에서의 IL-33 활성의 억제에 대해 시험된다: 예를 들면, 1차 NK 세포 분석 (참고, 예를 들면, 실시예 8, 섹션 C 참고) 또는 1차 호염기구 분석 (예를 들면, 실시예 8, 섹션 D 참고). 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 경쟁적 결합 ELISA에서 IL-33 수용체에 대한 IL-33의 결합에 대해 시험된다 (예를 들면, 실시예 8, 섹션 F).
D. 면역접합체
본 발명은 또한 1종 이상의 세포독성 약물, 예컨대 화학치료제 또는 약물, 성장 저해된 제제, 독소 (예를 들면, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 그것의 단편), 또는 방사성 동위원소에 접합된 본 명세서의 항-IL-33 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
일 구현예에서, 면역접합체는 항체-약물 콘주게이트 (ADC)이고, 여기서 항체는 하기를 비제한적으로 포함하는 1종 이상의 약물에 접합된다: 메이탄시노이드 (참고 미국 특허 번호 5,208,020, 5,416,064 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1); 아우리스타틴 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF (MMAE 및 MMAF) (참고 미국 특허 번호 5,635,483 및 5,780,588, 및 7,498,298); 돌라스타틴; 칼리키아마이신 또는 그것의 유도체 (참고 미국 특허 번호 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 및 5,877,296; Hinman 등Cancer Res.53:3336-3342, 1993; 및 Lode 등Cancer Res.58:2925-2928, 1998); 안트라사이클린 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신 (참고 Kratz 등Current Med. Chem. 13:477-523, 2006; Jeffrey 등Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362, 2006; Torgov 등Bioconj. Chem. 16:717-721, 2005; Nagy 등Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834, 2000; Dubowchik 등Bioorg .& Med. Chem. Letters 12:1529-1532, 2002; King 등 J. Med. Chem. 45:4336-4343, 2002; 및 미국 특허 번호 6,630,579); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065.
또 다른 구현예에서, 면역접합체는 하기를 비제한적으로 포함하는 효소적 활성 독소 또는 그것의 단편에 접합된 본원에서 기재된 바와 같은 항체를 포함한다: 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, (슈도모나스 에어루기노사로부터의) 외독소 A 사슬, 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모덱신 A 사슬, 알파-사르신, 알류라이테스 포르디 단백질, 디안틴 단백질, 파이톨라카 아메리카나 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 차란티아 저해제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 저해제, 젤로닌, 마이토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센.
또 다른 구현예에서, 면역접합체는 방사선접합체를 형성하기 위해 방사선 원자에 접합된 본원에서 기재된 바와 같은 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소는 방사선접합체의 생성을 위해 이용가능하다. 그 예는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사선접합체가 검출을 위해 사용될 때, 섬광계수법 연구에 대한 방사선 원자, 예를 들면 테크네튬-99m (tc99m) 또는 I123, 또는 핵자기 공명 (NMR) 영상화 (자기 공명 영상, mri 로도 공지됨)에 대한 스핀 표지, 예컨대 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
항체 및 세포독성 약물의 콘주게이트는 하기를 사용하여 만들어질 수 있다: 다양한 이작용성 단백질 커플링제 예컨대 N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체 (예컨대 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대 디석신이미딜 우베레이트), 알데하이드 (예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물 (예컨대 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물 (예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디나이트로벤젠). 예를 들면, 리신 면역독소는 하기에서 기재된 바와 같이 제조될 수 있다: Vitetta 등Science 238:1098, 1987.탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 방사선뉴클레오타이드의 항체에의 콘주게이션에 대한 예시적인 킬레이트제이다. 참고 WO 94/11026.링커는 세포 중 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능 링커"일 수 있다. 예를 들면, 산-불안정한 링커, 펩티다아제-민감성 링커, 광불안정한 링커, 디메틸 링커 또는 디설파이드-함유 링커 (참고, 예를 들면, Chari 등Cancer Res.52:127-131, 1992; 미국 특허 번호 5,208,020)가 사용될 수 있다.
본 명세서의 면적콘주게이트 또는 ADCs는, 하기를 비제한적으로 포함하는 가교결합 시약으로 제조된 그와 같은 콘주게이트를 명확히 고려한다: BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 SVSB (석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트) (이것은 하기로부터 상업적으로 이용가능함): (예를 들면, Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL.,U.S.A).
E. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 생물학적 샘플에서 IL-33의 존재를 검출하는데 유용하다. 용어 "검출한다"는 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. 특정 구현예에서, 생물학적 샘플은 하기를 포함한다: 세포 또는 조직, 예컨대 평활근, 상피 세포, 내피 세포, 혈액, 혈구 (예를 들면, 대식세포, 타고난 유형 II (ILC2) 세포, 비만 세포, 호염기구, 호산구, 및 수지상 세포), 중추신경계 세포 (예를 들면, 아교세포), 또는 눈 세포 (예를 들면, 망막 세포 (예를 들면, 뮬러 세포 또는 망막 색소 상피 (RPE) 세포) 및 눈의 혈관 내피 세포).
일 구현예에서, 진단 또는 검출의 방법에서 사용되는 항-IL-33 항체는 제공된다. 추가 측면에서, 생물학적 샘플에서 IL-33의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 항-IL-33 항체의 IL-33에의 결합에 대해 허용된 조건 하에서 상기 생물학적 샘플을 본원에서 기재된 바와 같은 항-IL-33 항체와 접촉시키는 단계, 및 복합체가 항-IL-33 항체와 IL-33 사이에서 형성되는 지를 검출하는 단계를 포함한다. 그와 같은 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 일 구현예에서, 항-IL-33 항체는 항-IL-33 항체에 의한 요법에 자격있는 대상체를 선택하기 위해 사용되고, 예를 들면, 여기서 IL-33는 환자의 선택에 대한 바이오마커이다.
본 발명의 항체를 사용하여 진단될 수 있는 예시적인 장애는 하기를 포함한다: IL-33-매개된 장애 (예들 들면, 염증성 병태 (예를 들면, 천식, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 및 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD)) 포함), 면역 장애 (예를 들면, 천식, 류마티스성 관절염, 알러지, 아토피 알러지, 과민증, 과민성 쇼크, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 및 간 질환), 섬유성 장애 (예를 들면, 폐 섬유증 (예를 들면, 특발성 폐 섬유증), 호산구 장애 (예를 들면, 호산구-관련된 위장 장애 (EGID) (호산구 식도염 포함), 감염 (예를 들면, 연충 감염, 원생동물 감염, 및 바이러스성 감염), 통증 (예를 들면, 염증성 통증), 중추신경계 장애 (예를 들면, 알츠하이머병), 고형 종양 (예를 들면, 유방, 결장, 전립선, 폐, 신장, 간, 췌장, 위, 장, 뇌, 골, 및 피부 종양), 및 안과적 장애 (예를 들면, 연령 관련 황반 변성 (AMD) 또는 눈의 망막증). 일부 사례에서, 본 발명의 항체를 사용하여 진단될 수 있는 안과적 장애는 하기를 포함한다: AMD (예를 들면, 습성 AMD, 건조 AMD, 중간 AMD, 진행성 AMD, 및 지도형 위축증 (GA)), 망막증 (예를 들면, 당뇨 망막병증 (DR), 미숙아 망막증 (ROP), 및 고-고도 DR), 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염, 비-감염성 결막염, 및 알러지성 결막염).
일부 사례에서, 안과적 장애는 하기를 포함한다: AMD (습성 AMD, 건조 AMD, 및 GA 포함), 망막증 (예를 들면, DR 및 ROP), PCV, 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 알러지성 결막염, 및 망막 탈착.
다른 사례에서, 안과적 장애는 중간 AMD, 진행성 AMD, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 고-고도 당뇨 망막병증, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염 및 비-감염성 결막염)을 포함한다.
특정 구현예에서, 표지된 항-IL-33 항체가 제공된다. 라벨은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 직접적으로 검출된 라벨 또는 모이어티 (예컨대 형광성, 발색단, 전자 치밀, 화학발광, 및 방사성 라벨), 뿐만 아니라 효소 반응 또는 분자 상호작용을 통해 간접적으로 검출된 모이어티, 예컨대 효소 또는 리간드.예시적인 라벨은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 방사선동위원소 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I, 형광단 예컨대 희토류 킬레이트 또는 플루오레신 및 그것의 유도체, 로다민 및 그것의 유도체, 단실, 엄벨리페론, 루세리페라제, 예를 들면, 개똥벌레 루시퍼라아제 및 박테리아 루시퍼라아제 (미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 홀스래디쉬 페록시다아제 (HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다아제, 글루코아밀라아제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제, 예를 들면, 글루코오스 옥시다제, 갈락토오스 옥시다제, 및 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소, 헤테로사이클릭 옥시다제 예컨대 우리카제 및 잔틴 옥시다제 (이것은 염료 전구체를 산화시키기 위해 과산화수소를 이용하는 효소와 커플링됨) 예컨대 HRP, 락토페록시다아제, 또는 마이크로페록시다아제, 바이오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파아지 라벨, 안정한 자유 라디칼, 등.
F. 약제학적 제형
본 발명의 항-IL-33 항체의 약제학적 제형은 원하는 정도의 순도를 갖는 그와 같은 항체를 하기 형태의 1종 이상의 선택적인 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합시킴으로서 제조된다: (참고, 예를 들면, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A.Ed.,1980), 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태.약제학적으로 허용가능한 담체는 이용된 복용량 및 농도로 수령체에 대해 일반적으로 비독성이고, 비제한적으로 하기를 포함한다: 버퍼 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 항산화제 (아스코르브산 및 메티오닌 포함); 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10 개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 다른 탄수화물(글루코오스, 만노스, 또는 덱스트린 포함); 킬레이트제 예컨대 EDTA; 당류 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들면, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 표면활성제 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG). 본 명세서의 예시적인 약제학적으로 허용가능한 담체는 추가로, 사이질 약물 분산제 예컨대 가용성 중성-활성 하이알로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들면, 인간 가용성 PH-20 하이알로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)를 포함한다. 어떤 예시적인 sHASEGPs 및 rHuPH20을 포함하는 사용 방법은, 하기에서 기재된다: US 특허 공개 번호2005/0260186 및 2006/0104968. 일 측면에서, sHASEGP은 1종 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다.
예시적인 동결건조된 항체 제형은 하기에서 기재된다: US 특허 번호6,267,958. 수성 항체 제형은 하기에서 기재된 것을 포함한다: US 특허 번호6,171,586 및 WO 2006/044908, 후자 제형은 히스티딘-아세테이트 버퍼를 포함한다.
본 명세서의 제형은 또한, 치료될 특정한 적응증에 대해 필요에 따라 1 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 부정적으로 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 함유할 수 있다. 예를 들면, 하기를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다: ST2 결합 길항제, 보체 경로 저해제 (예를 들면, 인자 D 결합 길항제), HtrA1 결합 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제. 일부 사례에서, 보체 경로 저해제는 인자 D 결합 길항제이다. 일부 사례에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 예를 들면, 아래의 섹션 G, "치료 방법 및 조성물"에서 기재된 것들이다. 일부 사례에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 예를 들면, 아래의 섹션 G, "치료 방법 및 조성물"에서 기재된 것들이다. 일부 사례에서, 항-HtrA1 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 사례에서, 항-인자 D 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 사례에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 예를 들면, 아래의 섹션 G, "치료 방법 및 조성물"에서 기재된 것들이다. 일부 사례에서, 항-VEGF 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 사례에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 수용체 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이다. 일부 사례에서, 항-VEGF 수용체 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 그와 같은 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합하여 적합하게 존재한다.
활성 성분은, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들면, 리포좀, 알부민 마이크로구형체, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐)에서 또는 매크로에멀젼에서 예를 들면, 코아세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들면, 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐, 각각 내에 갇힐 수 있다. 그와 같은 아래에서 개시되어 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A.Ed.,1980.
지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는, 매트릭스가 형상화된 물품, 예를 들면, 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태인 항체를 함유하는 고체 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스를 포함한다.
눈에의 전달 (안과 전달)에 대해, 본 발명의 항체는, 예를 들면, 안과적으로 허용가능한 보존제, 보조용매, 표면활성제, 점도 증강제, 침투 증강제, 버퍼, 염화나트륨, 및/또는 물과 조합될 수 있다. 보존제는, 예를 들면, 사용 동안 미생물 오염을 억제하기 위해 포함될 수 있다. 적합한 보존제는 하기를 포함한다: 에데테이트 디나트륨, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 소르브산, 페닐에틸 알코올, 클로로부탄올, 폴리쿼터늄-1, 또는 당해 기술에서 공지된 다른 제제. 그와 같은 보존제는 전형적으로 0.001 내지 1.0% w/v의 수준에서 이용된다. 일부 사례에서, 본 발명의 약제학적 제형은 보존제를 포함하지 않는다. 특정 사례에서, 눈에 국소로 투여되는 것으로 의도된 조성물은 안약 또는 눈 연고로서 제형화될 수 있다. 일부 사례에서, 항체의 총량은 그와 같은 제형의 약 0.001 내지 1.0% (w/w), 예를 들면, 약 0.01 내지 약 1.0% (w/w)일 것이다.
생체내 투여에 사용될 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균은, 예를 들면, 멸균된 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
G. 치료 방법 및 조성물
본 발명의 항-IL-33 항체 중 임의의 것은 치료 방법에서 사용될 수 있다.
본 발명은 약제로서 사용하기 위한 IL-33 축 결합 길항제를 제공한다. 일 측면에서, 약제로서 사용되는 항-IL-33 항체가 제공된다. 추가 측면에서, IL-33-매개된 장애를 치료하기 위해 사용되는 항-IL-33 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 치료 방법에서 사용되는 항-IL-33 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은 IL-33-매개된 장애를 갖는 개체를 치료하는 방법에서 사용되는 항-IL-33 항체를 제공하고, 상기 방법은 상기 개체에게 유효량의 항-IL-33 항체를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 추가로, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같이 상기 개체에게 유효량의 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 "개체"는 바람직하게는 인간이다.
본 발명은 약제의 제조 또는 준비에서 IL-33 축 결합 길항제를 제공한다. 추가 측면에서, 본 발명은 약제의 제조 또는 준비에서의 항-IL-33 항체의 용도를 제공한다. 일 구현예에서, 약제는 IL-33-매개된 장애의 치료를 위한 것이다. 추가 구현예에서, 약제는 IL-33-매개된 장애를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 것이고, 상기 방법은 IL-33-매개된 장애를 갖는 개체에게 유효량의 약제를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 개체에게 유효량의, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같은 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 "개체"는 인간일 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 염증성 장애, 예를 들면, 천식, 기도 과반응성, 기도 염증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 또는 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 또는 섬유성 장애, 예를 들면, 특발성 폐 섬유증 (IPF)용 약제의 제조에서의, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 예시적인 구현예에서, 본 발명은 천식의 치료용 약제의 제조에서의, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 본원에서 기재된 바와 같은 IL-13에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 예시적인 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6); 및 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301). 또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인.또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: 하기를 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 36 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 37, 및 하기를 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 302 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 303.또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 서열식별번호: 308의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제1 경쇄는 서열식별번호: 309의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 서열식별번호: 304의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제2 경쇄는 서열식별번호: 305의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제2 중쇄 및 제2 경쇄.또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하고:308 및 제1 경쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 1 중쇄 및 제1 경쇄: 309, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하고:304 및 제2 경쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄: 305.
또 다른 측면에서, 본 발명은 지도형 위축증 (GA)을 치료하는 약제의 제조에서의, IL-33 및 인자 D 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 아래에서 기재된 항-인자 D 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 인자 D 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 지도형 위축증 (GA), AMD (습식 또는 건식), DR, PCV, 또는 ROP를 치료하기 위한 약제의 제조에서의, IL-33 및 HtrA1 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-HtrA1 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 HtrA1 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 습성 AMD를 치료하는 약제의 제조에서의, IL-33 및 VEGF 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 아래에서 기재된 항-VEGF 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 VEGF 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
추가 측면에서, 본 발명은 IL-33-매개된 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 사례에서, 상기 방법은 그와 같은 IL-33-매개된 장애를 갖는 개체에게 유효량의 IL-33 축 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 방법은 그와 같은 IL-33-매개된 장애를 갖는 개체에게 유효량의 항-IL-33 항체를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 추가로, 아래에서 기재된 바와 같이 상기 개체에게 유효량의 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 "개체"는 인간일 수 있다.
추가 측면에서, 본 발명은, 예를 들면, 상기 치료 방법 중 임의의 것에서 사용하기 위해 본 명세서에서 제공된 항-IL-33 항체 중 임의의 것을 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 일 구현예에서, 약제학적 제형은 본 명세서에서 제공된 항-IL-33 항체 중 임의의 것 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 제형은, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같이 본 명세서에서 제공된 항-IL-33 항체 및 적어도 1종의 추가의 치료제 중 임의의 것을 포함한다.
이전의 측면 중 임의의 것에서, IL-33 매개된 장애는 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 또는 안과적 장애일 수 있다. 예를 들면, 일부 사례에서, 염증성 병태는 천식, 기도 과반응성, 기도 염증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 또는 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 일 수 있다. 일부 사례에서, 면역 장애는 천식, 류마티스성 관절염, 알러지, 아토피 알러지, 과민증, 과민성 쇼크, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 또는 간 질환일 수 있다. 일부 사례에서, 섬유성 질환은 특발성 폐 섬유증 (IPF) 일 수 있다. 일부 사례에서, 호산구 장애는 호산구-관련된 위장 장애 (EGID) 일 수 있다. 일부 사례에서, EGID는 호산구 식도염일 수 있다. 일부 사례에서, 감염은 연충 감염, 원생동물 감염, 또는 바이러스성 감염일 수 있다. 일부 사례에서, 원생동물 감염은 라이쉬마니아 메이저 감염일 수 있다. 일부 사례에서, 바이러스성 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염 또는 인플루엔자 감염일 수 있다. 일부 사례에서, 통증은 염증성 통증일 수 있다. 일부 사례에서, 중추신경계 장애는 알츠하이머병일 수 있다. 일부 사례에서, 고형 종양은 유방 종양, 결장 종양, 전립선 종양, 폐 종양, 신장 종양, 간 종양, 췌장 종양, 위 종양, 장 종양, 뇌종양, 골 종양, 또는 피부 종양일 수 있다. 특정 사례에서, IL-33-매개된 장애는 하기일 수 있다: 천식, 알러지성 비염, 아토피 피부염, COPD, 호산구 식도염, 또는 폐 섬유증 (예를 들면, IPF). 예를 들면, 일부 사례에서, IL-33-매개된 장애는 천식이다. 다른 사례에서, IL-33-매개된 장애는 하기이다: 폐 섬유증 (예를 들면, IPF).
이전의 측면 중 임의의 것의 일부 사례에서, IL-33-매개된 장애는 안과 장애일 수 있고, 이 장애는 비제한적으로 연령 관련 황반 변성 (AMD) (습성 AMD, 건조 AMD, 중간 AMD, 진행성 AMD, 및 지도형 위축증 (GA) 포함), 망막증 (예를 들면, 당뇨 망막병증 (DR), 미숙아 망막증 (ROP), 및 고-고도 DR), 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염, 비-감염성 결막염, 및 알러지성 결막염)을 포함한다.
일부 사례에서, 안과적 장애는 하기를 포함한다: AMD (습성 AMD, 건조 AMD, 및 GA 포함), 망막증 (예를 들면, DR 및 ROP), PCV, 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 알러지성 결막염, 및 망막 탈착.
다른 사례에서, 안과적 장애는 중간 AMD, 진행성 AMD, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 고-고도 당뇨 망막병증, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염 및 비-감염성 결막염)을 포함한다.
예를 들면, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 안과적 장애를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 사례에서, IL-33 축 결합 길항제는 항-IL-33 항체, 예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체이다. 일부 사례에서, IL-33 축 결합 길항제는 항-IL-33 항체 예컨대 ANB-020 (AnaptyxBio Inc.) 또는 WO2014164959, EP1725261, US8187569, WO2011031600, WO2015099175 또는 WO2015106080 (이들 각각은 그 전체가 참고로 본 명세서에 편입되어 있음)에서 기재된 항체 중 임의의 것; 항-ST2 항체 예컨대 AMG-282 (Amgen) 또는 STLM15 (Janssen), 또는 WO2013173761 또는 WO2013165894 (이들 각각은 그 전체가 참고로 본 명세서에 편입되어 있음)에서 기재된 항체 중 임의의 것; 또는 ST2-Fc 단백질 및 그것의 변이체 예컨대 WO 2013/173761, WO 2013/165894, 또는 WO 2014/152195 (이들 각각은 그 전체가 참고로 본 명세서에 편입되어 있음)에서 기재된 것들이다. 일부 사례에서, 안과 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다: 연령 관련 황반 변성 (AMD) (습성 AMD, 건조 AMD, 중간 AMD, 진행성 AMD, 및 지도형 위축증 (GA) 포함), 망막증 (예를 들면, 당뇨 망막병증 (DR), 미숙아 망막증 (ROP), 및 고-고도 DR), 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장 (로도 공지된다 레버 선천성 흑내장), 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염, 비-감염성 결막염, 및 알러지성 결막염). 일부 사례에서, 안과적 장애는 하기를 포함한다: AMD (습성 AMD, 건조 AMD, 및 GA 포함), 망막증 (예를 들면, DR 및 ROP), PCV, 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 알러지성 결막염, 및 망막 탈착.다른 사례에서, 안과적 장애는 중간 AMD, 진행성 AMD, 녹내장, 포도막염 (예를 들면, 감염성 및 비-감염성 포도막염), 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 고-고도 당뇨 망막병증, 외상성 눈 부상, 및 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염 및 비-감염성 결막염)을 포함한다.
IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)은 요법에서 단독으로 또는 다른 제제와 병용하여 사용될 수 있다. 예를 들면, IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)는 적어도 1종의 추가의 치료제와 공-투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 추가의 치료제는 하기이다: ST2 결합 길항제, 보체 경로 저해제 (예를 들면, 인자 D 결합 길항제), HtrA1 결합 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제. 일부 구현예에서, 추가의 치료제는 화학치료제, 항-호르몬제, 세포독성 약물, 성장 저해된 제제, 또는 이들의 조합이다.
예를 들면, IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)는, 예를 들면, 염증성 장애, 예를 들면, 천식, 기도 과반응성, 기도 염증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 또는 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 또는 섬유성 장애, 예를 들면, 특발성 폐 섬유증 (IPF)의 치료를 위해 항-IL-13 항체와 공-투여될 수 있다. 예시적인 구현예에서, IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)는 천식의 치료를 위해 항-IL-13 항체와 공-투여될 수 있다. 본 명세서에서 기재된 항-IL-13 항체 중 임의의 것은 항-IL-33 축 결합 길항제와 함께 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 항-IL-33 항체는 항-IL-13 항체와 함께 투여된다. 예시적인 구현예에서, 항-IL-33 항체는 하기 6개의 HVR을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6); 및 항-IL-13 항체는 하기 6개의 HVR을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301). 또 다른 구현예에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.또 다른 구현예에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 36 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 37, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 302 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 303.또 다른 구현예에서, 항-IL-33은 하기를 포함하고: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 308 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 309, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: :304 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 305.또 다른 구현예에서, 항-IL-33은 하기를 포함하고: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 308 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 309, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 304 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 305.
또 다른 예에서, IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)는 보체 경로 저해제와 공-투여될 수 있다. 일부 사례에서, 보체 경로 저해제는 하기의 저해제일 수 있다: 대안적인 보체 경로 (예를 들면, 인자 D, 프로페르딘, 인자 B, 인자 Ba, 및 인자 Bb) 또는 고전적 보체 경로 (예를 들면, C3a, C5, C5a, C5b, C6, C7, C8, C9, 및 C5b-9). 일부 사례에서, 보체 경로 저해제는 WO 2007/056227 (이것은 본 명세서에 그 전체가 참고로 편입됨)에서 기재된 임의의 보체 경로 저해제일 수 있다. 일부 사례에서, 보체 경로 저해제는 인자 D 결합 길항제일 수 있다. 특정 사례에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 예를 들면, WO 2007/056227, WO 01/70818, 및/또는 US 2002/0081293 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음)에서 기재된 임의의 인자 D 항체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 일부 사례에서, 항-인자 D 항체는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: 적어도 70% 서열 동일성 (예를 들면, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 미국 종균 협회 (ATCC)에 기탁되고 HB12476로 지정된 하이브리도마로부터 생산된 단클론성 항체 166-32 또는 그것의 서열에 대한 것임). 일부 사례에서, 항-인자 D 항체는 단클론성 항체 166-32의 인간화된 유도체이다. 일부 구현예에서, 항-인자 D 항체는 단클론성 항체 166-32와 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 사례에서, 항-인자 D 항체는 단클론성 항체 166-32로부터 유도된 항체 단편이다. 일부 사례에서, 단클론성 항체 166-32로부터 유도된 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 단클론성 항체 166-32로부터 유도된 항체 단편은 Fab이다.
또 다른 예에서, IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)는 HtrA1 결합 길항제와 공-투여될 수 있다. 일부 사례에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편일 수 있다. 당해 기술에서 공지되고/거나 본 명세서에서 기재된 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항-HtrA1 항체는 항-HtrA1 항체 (WO 2013/055998에서 기재됨)이다. 일부 사례에서, 항-HtrA1 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 항-HtrA1 항체 단편은 Fab이다.
또 다른 예에서, IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)는 VEGF 길항제와 공-투여될 수 있다. 일부 사례에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편일 수 있다. 당해기술에서 공지되고/거나 본 명세서에서 기재된 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙 (아바스틴®) 또는 라니바이주맙 (LUCENTIS®). 일부 사례에서, 항-VEGF 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 항-VEGF 항체 단편은 Fab이다.
일부 사례에서, 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 하기이거나 그것으로부터 유도된다: 임의의 WO 2005/044853 (이것은 본 명세서에 그 전체가 참고로 편입됨)에서 기재된 항-VEGF 항체.예를 들면, 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기이거나 그것으로부터 유도된다: G6 시리즈 항체 (예를 들면, G6, G6-8, G6-23, G6-23.1, G6-23.2, 또는 G6-31) 또는 B20 시리즈 항체 (예를 들면, B20, B20-4, 또는 B20-4.1). 예를 들면, 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임)334, 337, 또는 340; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임)335, 336, 338, 339, 또는 341; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.예를 들면, 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 334 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 335 (예컨대 항-VEGF 항체 G6). 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 334 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 336 (예컨대 항-VEGF 항체 G6.31). 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 337 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 338 (예컨대 항-VEGF 항체 B20). 다른 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 337 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 339 (예컨대 항-VEGF 항체 B20-4). 또 다른 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 340 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 341 (예컨대 항-VEGF 항체 B20-4.1). 일부 구현예에서, 항-VEGF 항체는 이전의 항체 중 임의의 것의 인간화된 유도체이다. 일부 구현예에서, 항-VEGF 항체는 이전의 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab이다.
일 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 염증성 장애, 예를 들면, 천식, 기도 과반응성, 기도 염증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 또는 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 또는 섬유성 장애, 예를 들면, 특발성 폐 섬유증 (IPF)을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체) 및 치료적 유효량의 항-IL-13 항체를 투여하는 것을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 천식을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체) 및 치료적 유효량의 항-IL-13 항체를 투여하는 것을 포함한다. 본 명세서에서 기재된 항-IL-13 항체 중 임의의 것은 항-IL-33 축 결합 길항제와 함께 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 항-IL-33 항체는 항-IL-13 항체와 함께 투여된다. 예시적인 구현예에서, 항-IL-33 항체는 하기 6개의 HVR을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6); 및 항-IL-13 항체는 하기 6개의 HVR을 포함한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301). 또 다른 구현예에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.또 다른 구현예에서, 본 항-IL-33 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 36 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 37, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 302 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 303.또 다른 구현예에서, 항-IL-33은 하기를 포함하고: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 308 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 309, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: :304 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 305.또 다른 구현예에서, 항-IL-33은 하기를 포함하고: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 308 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 309, 및 항-IL-13 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄: 304 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄: 305.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 염증성 장애, 예를 들면, 천식, 기도 과반응성, 기도 염증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 또는 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 또는 섬유성 장애, 예를 들면, 특발성 폐 섬유증 (IPF)을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 천식을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 본원에서 기재된 바와 같은 IL-13에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 예시적인 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6); 및 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299); 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301). 또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인.또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: 하기를 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 36 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 37, 및 하기를 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인: (a) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 302 및 (b) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 303.또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 서열식별번호: 308의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제1 경쇄는 서열식별번호: 309의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 서열식별번호: 304의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제2 경쇄는 서열식별번호: 305의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제2 중쇄 및 제2 경쇄.또 다른 구현예에서, IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체는 하기를 포함한다: (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하고:308 및 제1 경쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 1 중쇄 및 제1 경쇄: 309, 및 (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하고:304 및 제2 경쇄는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄: 305.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 지도형 위축증을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체) 및 치료적 유효량의 인자 D 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 사례에서, 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 예를 들면, WO 2007/056227, WO 01/70818, 및/또는 US 2002/0081293에서 기재된 임의의 인자 D 항체일 수 있다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항-인자 D 항체는 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: 적어도 70% 서열 동일성 (예를 들면, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 미국 종균 협회 (ATCC)에 기탁되고 HB12476로 지정된 하이브리도마로부터 생산된 단클론성 항체 166-32 또는 그것의 서열에 대한 것임). 일부 사례에서, 항-인자 D 항체는 단클론성 항체 166-32의 인간화된 유도체이다. 일부 구현예에서, 항-인자 D 항체는 단클론성 항체 166-32와 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 사례에서, 항-인자 D 항체는 단클론성 항체 166-32로부터 유도된 항체 단편이다. 일부 사례에서, 단클론성 항체 166-32로부터 유도된 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 단클론성 항체 166-32로부터 유도된 항체 단편은 Fab이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 지도형 위축증 (GA)을 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 인자 D 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 상기에서 기재된 항-인자 D 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 인자 D 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 GA, AMD (습식 또는 건식), DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체) 및 치료적 유효량의 HtrA1 결합 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 사례에서, HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 예를 들면, WO 2013/055998에서 기재된 임의의 HtrA1 항체일 수 있다. 일부 사례에서, 항-HtrA1 항체는 항체 단편이다. 일부 사례에서, 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 유도된 항체 단편은 Fab이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 지도형 위축증 (GA), AMD (습식 또는 건식), DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 HtrA1 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 상기에서 기재된 항-HtrA1 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 HtrA1 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 습성 AMD를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체) 및 치료적 유효량의 VEGF 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 사례에서, VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편일 수 있다. 당해기술에서 공지되고/거나 본 명세서에서 기재된 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 일부 사례에서, 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 WO 2005/044853 (이것은 본 명세서에 그 전체가 참고로 편입됨)에서 기재된 항-VEGF 항체이거나 그것으로부터 유도된다. 예를 들면, 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기이거나 그것으로부터 유도된다: G6 시리즈 항체 (G6, G6-8, G6-23, G6-23.1, G6-23.2, 또는 G6-31) 또는 B20 시리즈 항체 (예를 들면, B20, B20-4, 또는 B20-4.1). 예를 들면, 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임)334, 337, 또는 340; (b) 하기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: 적어도 80% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성) (이 동일성은 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나 또는 그것의 서열에 대한 것임)335, 336, 338, 339, 또는 341; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.예를 들면, 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 334 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 335 (예컨대 항-VEGF 항체 G6). 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 334 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 336 (예컨대 항-VEGF 항체 G6.31). 일부 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 337 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 338 (예컨대 항-VEGF 항체 B20). 다른 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 337 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 339 (예컨대 항-VEGF 항체 B20-4). 또 다른 사례에서, 항-VEGF 항체는 하기를 포함한다: 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인: 340 및 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인: 341 (예컨대 항-VEGF 항체 B20-4.1). 일부 구현예에서, 항-VEGF 항체는 이전의 항체 중 임의의 것의 인간화된 유도체이다. 일부 구현예에서, 항-VEGF 항체는 이전의 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 습성 AMD를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 VEGF 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 이중특이적 항체는 본 명세서에서 기재된 항-IL-33 항체 중 임의의 것로부터 유도된 IL-33 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체는 상기에서 기재된 항-VEGF 항체 중 임의의 것으로부터 유도된 VEGF 에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 포도막염 (예를 들면, 감염성 또는 비-감염성 포도막염)을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-33 축 결합 길항제는 단일요법으로서 투여될 수 있다.
또 추가의 측면에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서 결막염 (예를 들면, 감염성 결막염, 비-감염성 결막염, 또는 알러지성 결막염)을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-33 축 결합 길항제는 단일요법으로서 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가의 치료제는 아래에서 기재된 바와 같이 천식 요법이다. 중간 정도의 천식은 현재, 돌파 증상 또는 알러지항원- 또는 운동-유도된 천식을 경감하기 위해 필요에 따라 (3-4 회 / 1일) 매일 흡입된 항-염증성-코르티코스테로이드 또는 비만 세포 저해제 예컨대 크로몰린 나트륨 또는 네도크로밀 플러스 흡입된 베타2-효능제로 치료된다. 예시적인 흡입된 코르티코스테로이드는 QVAR®, PULMICORT®, SYMBICORT®, AEROBID®, FLOVENT®, FLONASE®, ADVAIR®, 및 AZMACORT®을 포함한다. 추가의 천식 요법은 지효성 기관지 확장제 (LABD)를 포함한다. 특정 구현예에서, LABD는 지속성 베타-2 효능제 (LABA), 류코트리엔 수용체 길항제 (LTRA), 지속성 무스카린성 길항제 (라마), 테오필린, 또는 경구 코르티코스테로이드 (OCS)이다. 예시적인 LABD는 SYMBICORT®, ADVAIR®, BROVANA®, FORADIL®, PERFOROMIST™ 및 SEREVENT®를 포함한다.
상기에서 언급된 그와 같은 병용 요법은 병용 투여 (여기서 2종 이상의 치료제는 동일 또는 개별의 제형 내에 포함됨), 및 개별의 투여를 포함하고, 이 경우에, 본 발명의 항체의 투여는 추가의 치료제 또는 제제의 투여 전에, 동시에, 및/또는 그 후에 일어할 수 있다. 일 구현예에서, 항-IL-33 항체의 투여 및 추가의 치료제의 투여는 서로의 약 1 개월 내에, 또는 약 1, 2 또는 3 주 내에, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 일 내에 일어난다. 본 발명의 항체는 방사선 요법과 함께 또한 사용될 수 있다.
IL-33 축 결합 길항제, 예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체 (및 임의의 추가의 치료제)은 비경구, 폐내, 및 비강내를 포함하는 임의의 적당한 수단에 의해, 그리고, 원한다면 국부 치료, 병소내 투여를 위해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 사례에서, IL-33 축 결합 길항제, 예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체는 초자체내로, 근육내로, 정맥내로, 진피내로, 경피로, 동맥내로, 복강내로, 병소내로, 두개내로, 관절내로, 전립선내로, 늑막내로, 기관내로, 척추강내로, 비강내로, 질내로, 직장내로, 국소로, 종양내로, 복막으로, 피하로, 결막하로, 방광내로, 점막으로, 심막내로, 탯줄내로, 안구내로, 안와내로, 경구로, 국소로, 경피로, 안구주위로, 결막으로, 테논낭하로, 전방내로, 망막하로, 안구뒤로, 소관내로, 흡입으로, 주사로, 이식으로, 주입으로, 계속되는 주입으로, 직적으로 국재화된 관류 수영 표적 세포에 의해, 카테터로, 세척에 의해, 크림 내에, 또는 지질 조성물 내에 투여될 수 있다. 본 명세서에서 기재된 방법에서 이용된 조성물은 또한 전신으로 또는 국소로 투여될 수 있다. 투약은, 투여가 잠시 또는 만성적 여부에 부분적으로 좌우되어 임의의 적합한 경로, 예를 들면, 주사로, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의할 수 있다. 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼러스 투여, 및 펄스 주입을 비제한적으로 포함하는 다양한 복용 계획은 본 명세서에서 고려된다.
일부 사례에서, IL-33 축 결합 길항제 (예를 들면, 본 발명의 항-IL-33 항체)는 하기 예에 의해 눈에 직접적으로 투여될 수 있다: 초자체내, 안구내, 눈주위, 결막, 결막하, 서브테논, 전방내, 망막하, 안구뒤, 또는 소관내 주사를 사용하는 안구 조직 주사에 의해; 예를 들면, 카테터 또는 다른 배치 디바이스 (예를 들면, 망막 펠렛, 안구내 삽입물, 좌약 또는 임플란트 (다공성, 비-다공성, 또는 젤라틴성 물질을 포함함))를 사용하는, 눈에 대한 직접적인 적용에 의해; 국소 안구 드롭스 또는 연고에 의해; 또는 맹낭에서 또는 공막 (경공막)에 인접하여 이식되거나 공막 (공막내)에서 또는 눈 내에 느린-방출 디바이스에 의해.전방내 주사는, 제제가 섬유 주대에 도달할 수 있도록 각막을 통해 전방으로일 수 있다. 소관내 주사는 정맥 콜렉터 채널 배수 슐렘 도관 또는 슐렘 도관으로일 수 있다.
본 발명의 항체 양호한 의료 실시와 일치된 방식으로 제형화, 복용 및 투여된다. 이러한 맥락에서 고려하는 인자는 치료될 특정한 장애, 치료될 특정한 포유동물, 개별 환자의 임상 조건, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 계획, 및 개업의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체가 반드기 그럴 필요는 없지만, 장애 문제의 장애를 치료 또는 예방하기 위해 현재 사용되는 1종 이상의 제제로 임의로 제형화된다. 유효량의 그와 같은 다른 제제는 제형 내에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기에서 논의된 다른 인자에 좌우된다. 이들은는 일반적으로, 본원에서 기재된 것과 동일한 복용량 및 투여 경로, 또는 본 명세서에서 기재된 복용량의 약 1 내지 99%에서, 또는 임의의 복용량으로 그리고 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료에 대해, 적절한 복용량의 본 발명의 항체 (단독으로 또는 1종 이상의 다른 추가의 치료제와 병용하여 사용될 때)는 치료될 질환의 유형, 항체의 유형, 질환의 중증도 및 과정, 예방적 또는 치료적 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 요법, 항체에 대한 환자의 임상 이력 및 반응, 및 주치의의 재량에 좌우될 것이다. 항체는 한꺼번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다. 유형 및 질환의 중증도에 따라, 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg (예를 들면, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg)의 항체는 예를 들면, 1종 이상의 개별의 투여에 의해, 또는 계속되는 주입에 의해서 든지 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 복용량일 수 있다. 하나의 전형적인 1일 복용량은 상기 언급된 인자에 따라 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 이상의 범위일 수 있다. 며칠 이상에 걸친 반복된 투여에 대해, 병태에 따라, 치료는 일반적으로, 질환 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 지속된다. 항체의 하나의 예시적인 복용량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg의 1종 이상의 용량 (또는 이들의 임의의 조합)이 환자에게 투여될 수 있다. 그와 같은 용량은 간헐적으로, 예를 들면 매주, 매 2 주, 매 3 주, 또는 매 4 주 투여될 수 있다 (예를 들면, 이로써 환자는 약 2 내지 약 20, 또는 예를 들면, 약 6 용량의 항체를 받아들인다). 예를 들면, 용량은 (예를 들면, 피하 주사에 의해) 1개월 당 1회 투여될 수 있다. 초기의 더 높은 부하 용량, 그 다음 1종 이상의 더 낮은 용량이 투여될 수 있다. 그러나, 다른 복용량 요법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 종래의 기술 및 검정으로 쉽게 모니터링된다.
상기 제형 또는 치료 방법 중 임의의 것은 항-IL-33 항체 대신에 또는 그것에 추가하여 본 발명의 면역접합체를 사용하여 수행될 수 있는 것으로 이해된다.
A. 제조 물품
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기에서 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 수용하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기, 및 용기 상의 또는 그 용기와 관련된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들면, 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백, 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질 예컨대 유리 또는 플라스틱로부터 형성된다. 용기는 병태를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 유효한 또 다른 조성물과 조합한 조성물을 보유하고 멸균된 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들면 상기 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖는 바이알 또는 정맥내 용액 백일 수 있다). 본 조성물 중 적어도 1종의 활성제는 본 발명의 항체이다. 표지 또는 포장 삽입물은, 본 조성물이 선택한 병태를 치료하기 위해 사용된다는 것을 나타낸다. 게다가, 제조 물품은 (a) 조성물을 수용하는 제1 용기로서, 본 조성물은 본 발명의 항체를 포함하는 제1 용기; 및 (b) 조성물을 수용하는 제2 용기로서, 본 조성물은 세포독성 또는 달리 치료제를 추가로 포함하는 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 구현예에서 제조 물품은 추가로, 상기 조성물이 특정한 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타내는 포장 삽입물을 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 제조 물품은 추가로, 약제학적으로-허용가능한 버퍼, 예컨대 정균 주사용 물 (BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로오스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 포함할 수 있다. 다른 버퍼, 희석제, 필터, 니들, 및 주사기을 포함하여 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
상기 제조 물품 중 임의의 것은 항-IL-33 항체 대신에 또는 그것에 추가하여 본 발명의 면역접합체 를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
III. 실시예
하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 예이다. 상기 제공된 일반 기재가 주어진 경우 다양한 다른 구현예가 수행될 수 있는 것으로 이해된다.
실시예 1. 항-IL-33 항체의 생성
여러 전략이 하기된 바와 같이 치료학적 항-IL-33 항체를 개발하기 위해 추구되었다. 후보 항-IL-33 항체에 대한 목적하는 특성은 인간 IL-33으로의 특이적 결합, 시노몰구스 몽키 (cyno) IL-33과의 교차 반응성, IL-33 활성의 억제 (예를 들어, 세포 기반 IL-33 수용체 검정에서 측정된 바와 같이) 및/또는 IL-33 수용체(ST2 및 IL-1RAcP)로의 결합 차단을 포함했다.
A. 마우스 모노클로날 항-인간 IL-33 하이브리도마 항체의 개발 및 특성 분석
BALB/c 마우스 (Charles River, Hollister, CA) 또는 IL33 녹아웃 (ko) 마우스 (Genentech, Inc.)는 하기와 혼합되는 인간 (hu) IL-33 및 시노몰구스 (cyno) 몽키 IL-33 단백질 (Genentech, Inc.) 각각 2 μg으로 주당 2회 복강내 면역화시켰다: 모노포스포릴-지질 A 및 트레할로스 디코리노미콜레이트 (MPL®+TDM) 보조제 (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO) 또는 톨형 수용체 (TLR) 효능제 MPL® (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO), 폴리이노신-폴리시티딜산 (PolyI:C; InvivoGen, San Diego, CA), R848 (InvivoGen), 및 CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드 (InvivoGen)의 조합.비장 및 골수는 마지막 면역화 3일 후 수거하였다. 이들 마우스로부터의 비장 세포는 전기 융합 (Harvard Apparatus, Holliston, MA)을 통해 P3X63-Ag8U.1 마우스 골수종 세포(American Type Culture Collection, Rockville, MD)와 융합시켰다. 융합된 세포는 항-종 IgG-FITC (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA)과 함께 반-고체 CLONACELL™-HY 배지 D (StemCell Technologies) 중에 재현탁하고 OMNIWELL™ 트레이 (Thermo Fisher Scientific, Rochester, NY)로 분주하기 전 CLONACELL™-HY 배지 C (StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada) 중에서 밤새 37 ℃, 7% CO2에서 항온처리하였다. 분주한지 7일 후, 형광성 콜로니를 선택하고 CLONEPIX™ FL (Genetix, New Milton, Hampshire, UK)를 사용하여 CLONACELL™-HY 배지 E (StemCell Technologies)를 함유하는 96-웰 플레이트로 이전시켰다. 상등액은 하기된 바와 같이 픽킹 (picking) 한지 7일 후 인간 IL-33 단백질에 대해 효소-결합된 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 스크리닝하였다. 인간 IL-33 결합을 보여주었던 하이브리도마 세포주를 증식시키고 ELISA로 재시험하였고; ELISA에 의해 인간 및 시노몰구스 IL-33 둘다로의 결합을 입증하는 세포주로부터의 상등액을 수거하고 단백질 A (MABSELECT™ SURE™, GE Healthcare, Pittsburgh, PA)에 의해 정제하였다. 정제된 IgG는 하기된 바와 같이 HEK-BLUE™ 세포 수용체 키트 (InvivoGen)를 사용하는 IL-33의 ST2로의 결합을 차단하는 능력에 대해 평가하였다. 대형 패널의 하이브리도마로부터 IgG 정제의 고속 처리 시스템의 사용은 잠재적차단 클론의 조기 및 효율적인 선택을 가능하게 하였다. RNA는 RNEASY® 키트 (Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 강한 차단 하이브리도마 세포주로부터 추출하였고, cDNA는 하기된 바와 같이 서열 결정을 위해 생성시키고 증폭시켰다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 유전자는 발현을 위해 pRK 플라스미드 벡터 (Genentech, Inc.)에 삽입하였다. 최고 IL-33 차단 활성 및 친화성을 입증하는 고유 클론으로부터의 플라스미드 DNA는 293개 세포에서 재조합적으로 발현시켰다. 이어서 상등액은 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
B. 단일 B 세포 클로닝으로부터 항-IL-33 모노클로날 항체의 생성
유전자전이 마우스는 상기된 바와 같이 인간 및 시노몰구스 IL-33으로 면역화시켰다. 초기 면역화 및 7회 부스팅 후, 면역화된 유전자전이 마우스 유래의 혈청은 IL-33으로의 결합에 대해 시험하였다. 인간 및 시노몰구스 IL-33에 대해 상당히 높은 역가를 갖는 마우스를 동정하고 이어서 HEK-BLUE™ 검정에서 ST-2에 결합하는 IL-33의 혈청 억제에 대해 시험하였다. 비장, 림프 결절 및 골수 조직은 IL-33 차단 활성을 입증한 마우스로부터 단리하였다. 조직은 기계적으로 단일 세포 현탁액으로 감소시켰고 이는 IL-33 항원 (인간 및시노몰구스)과 예비 혼합하고 비장내로 muSCID 마우스에 이식시켰다. 7 또는 8일 후, 비장을 제거하고 단일 세포로서 재현탁시켰다. 비장 세포는 형광단-접합된 마커로 염색시켜 CD138-양성 형질아세포 및 IgM-양성 집단을 동정하였다. IgM-음성이고 인간 및 시노몰구스 IL-33 둘다에 결합할 수 있는 형질아세포 집단은 FACS™ 유동 세포측정에 의해 개별적으로 96-웰 플레이트에 분류하였다. 분류된 세포의 면역글로불린 가변 영역은 분자적으로 클로닝하고 인간 IgG1 포유동물 발현 벡터로 재포맷하였다. 각각의 재포맷된 모노클로날 항체는 포유동물 세포에서 일시적으로 발현시키고 정제하였다. 일반적인 방법은 하기의 문헌에 기재되어 있다: Lin 등 (Nature Protocols 9:1563-1577, 2014).
C. 면역화된 파아지 유래된 라이브러리로부터 항-IL-33 모노클로날 항체의 생성
파아지 상에 나타낸 단일쇄 Fv 라이브러리는 인간 및 시노몰구스 IL-33으로 면역화시킨 유전자전이 마우스로부터 단리된 RNA로부터 작제하였다. ScFv 파아지 디스플레이 라이브러리는 인간 및 시노몰구스 IL-33에 대해 수회 동안 패닝시켰다. 개별 파아지 클론을 증식시키고 인간 및 시노몰구스 IL-33에 결합하는 것에 대해ELISA로 분석하였다. 양성 결합 클론은 IgG 포맷으로의 발현을 위해 재포맷시키고 일시적으로 발현시켰다. IgG는 일시적으로 발현하는 배양물로부터 정제하고 IL-33으로의 결합과 HEK-BLUE™ 세포로의 IL-33의 결합 억제에 대해 시험하였다.
실시예 2. 항-IL-33 항체의 스크리닝 및 서열분석
A. 항-인간/ 사이노 IL-33 항체에 대한 ELISA 스크리닝
상기된 바와 같이 생성된 하이브리도마 클론은 ELISA 포맷에서 인간 및 사이노 IL-33에 결합하는 모노클로날 항체의 생산에 대해 스크리닝하였다. 생성된 1921개의 하이브리도마 세포주를 스크리닝하기 위해, 일반적으로 하기 문헌에 기재된 바와 같이 ELISA를 수행하였다: Baker 등 (Trends Biotechnol .20:149-156, 2002). 간략하게, 96-웰 MAXISORP® 평저 플레이트 (Nalge Nunc International, Rochester, NY)를 코팅 완충액 (0.05 M 카보네이트 완충액, pH 9.6) 중 2 g/ml 농도의 50 mml의 가용성 IL-33 (Genentech)으로 코팅시키고, 밀봉시키고 4°C에서 밤새 저장하였다. 코팅 용액을 제거한 후, 인산 완충 식염수 (PBS) pH 7.4 (ELISA 희석제) 중에 0.5% 소 혈청 알부민 (BSA) 및 0.05% TWEEN®-20을 함유하는 200 ml의 검정/차단 용액을 각각의 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하면서 항온처리하였다. 이어서 웰은 PBS (세척 완충액) 중에 300 ml의 0.05% TWEEN®-20으로 3회 세척하였다.
세척 단계 후, 개별 하이브리도마 클론 기원의 100 ml의 배양 상등액을 개별 웰에 첨가하였다. 플레이트는 1시간 동안 실온에서 교반과 함께 항온처리하고 웰은 이전과 같이 세척 완충액으로 3회 세척하였다.
세척한 후, ELISA 희석제 중에서 서양고추냉이 퍼옥시다제에 커플링된 50 ml의 1:1000 희석된 양 항-마우스 IgG (인간 IgG (MP Biomedicals, Solon, OH)과 교차 반응성이 없음)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트는 1시간 동안 실온에서 교반과 함께 항온처리하고 이전과 같이 세척 완충액으로 3회 세척하고 건조시켰다. 웰은 50 ml의 테트라메틸벤지딘(TMB) 마이크로웰 퍼옥시다제 기질 (BioFX Laboratories, Owing Mills, MD, catalog #TMBW-0100-01)을 각각의 웰에 첨가하고 실온에서 5 내지 10분 동안 또는 색상 변화가 관찰될 때까지 항온처리함에 의해 전개하였다. 효소적 색상 발현을 50 ml의 TMB 스톱 용액 (BioFX Laboratories catalog #BSTP-0100-01)을 각각의 웰에 첨가하여 정지시켰다. 플레이트는 SUNRISE™ 플레이트 판독기 (Tecan US, Inc., Research Triangle Park, NC)로 650nm에서 분석하였다.
제1 면역화 전에 수거된 면역전 혈청을 음성 대조군으로서 사용하였다. 7회 면역화 후 수거된 면역 혈청을 양성 대조군으로서 사용하였다.
클론 2B6, 6C11, 9F6, 10C12, 및 10H2는 인간 IL-33 및 시노몰구스 IL-13 결합에 대해 양성이었다.
B. 세포 기반 IL-33 차단 검정
상기된 방법을 사용하여 수득된 항-IL-33 항체의 IL-33 중화 활성은 세포 기반 차단 검정에 의해 측정하였고, 여기서, IL-33은 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 세포 (InvivoGen)를 자극하고 분비된 알칼린 포스파타제 (SEAP)의 생성을 유발하는, NF-κB 및 AP-1 경로를 활성화시킨다(도 1a). HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 세포는 인간 ST2 작제물 (pUNO1-hIL01RL1a; 서열식별번호: 311)로 안정하게 형질감염된 인간 HEK293 세포이고5개 NF-κB 및 5개 AP-1 결합 부위들과 융합된 IFN-β 최소 프로모터(InvivoGen)의 조절하에 있는 SEAP 리포터 유전자를 함유한다. pUNO1-hIL01RL1a 플라스미드는 하기의 아미노산 서열을 갖는 ST21 단백질을 암호화한다: 서열식별번호: 312.HEK293 세포는 내인성 IL-1RAcP를 발현한다. 세포 기반 차단 검정에 사용되는 IL-33의 아미노산 서열은 다음과 같았다: 성숙한 인간 IL-33 (S112-T270), 서열식별번호: 313; 인간 IL-33 N-His, 서열식별번호: 314; 인간 IL-33 N-His C-Avi, 서열식별번호: 315; 성숙한 사이노 IL-33 (S112-T270), 서열식별번호: 316; 사이노 IL-33 N-His, 서열식별번호: 317; 및 사이노 IL-33 N-His C-Avi, 서열식별번호: 318.
간략하게, IL-33 리간드 및 예비-희석된 항-IL-33 항체를 혼합하고 1시간 동안 실온에서 항온처리하였다. 항체 및 리간드 혼합물은 HEK-BLUE™ IL-33/ IL-1β 세포에 이전시켰다. CO2 항온처리기에서 20시간 동안 37 ℃에서 항온처리한 후, 세포 배양상등액 중 SEAP 활성은 알칼린 포스파타제 (QUANTI-BLUE™, InvivoGen)의 기질과 항온처리한 후 630nm에서 OD 값을 기록함에 의해 측정하였다. sST2-LZ (sST2 (M1-F328) C-말단 류신 지퍼 (LZ)-Flag-His)의 전장 아미노산 서열은 양성 대조군으로서 세포 기반 차단 검정에 사용되었고(예를 들어, 도 2 참조) 이는 하기 서열식별번호: 로 나타낼 수 있다: 319.시그날 펩타이드가 제거된 성숙한 형태의 sST2-LZ는 하기 서열식별번호: 로 나타낸다: 서열식별번호: 310.
IgG 포맷으로 발현되는 경우, 정제된 항-IL-33 항체는 1 nM 미만의 농도에서 IL-33의 완전한 억제를 보여주었다(도 2). 대조적으로, IL-13에 특이적인 음성 대조군 모노클로날 항체를 사용해서는 어떠한억제도 관찰되지 않았다(나타내지 않음).
C. 하이브리도마 분자 클로닝 및 서열분석
각각 하이브리도마 세포주에 의해 발현되는 항체는 RNA 정제 없이 세포로부터 직접 클로닝하였다. 가변 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 영역은 변형된 5' RACE (cDNA 말단의 신속한 증폭) 프로토콜을 사용하여 클로닝하였다(문헌참조: Qzawa 등 BioTechniques 40(4): 469-478, 2006). 제1 가닥 cDNA는 SUPERSCRIPT® III (Invitrogen, Carlsbad, CA) 역전사 효소를 사용하여 하이브리도마 세포로부터 직접 생성시키고 쥐 중쇄 (5'-TTTYTTGTCCACCKTGGTGCTGC-3', 서열식별번호: 320) 및 경쇄 불변 (5'-GTAGAAGTTGTTCAAGAAG-3'; 서열식별번호: 321) 영역에 특이적인 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 함께 사용하고 1시간 동안 55°C에서 수행하였다. 축퇴성 프라이머는 다양한 쥐 중쇄 이소형에 걸쳐 프라이밍이 가능하도록 디자인하였다. 역전사 효소 생성물의 3' 말단에는 37 ℃ 에서 1시간 동안 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제 (Promega, San Luis Obispo, CA) 및 dGTP (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)를 사용하여 폴리-G 꼬리를 생성시켰다. 가변 중쇄 및 경쇄 cDNA의 증폭은 별도로 터치다운 PCR (ADVANTAGE®-GC 2, Clontech, Mountain View, CA)에 의해 수행하고 이는 네스티드(nested) 중쇄 불변 영역 프라이머 (5'-GTGTAGAGKYCAGACTSCAGG-3'; 서열식별번호: 322) 및 경쇄 불변 영역 프라이머 (5'-GAGGCACCTCCAGATGTTAAC-3'; 서열식별번호: 323), 및 폴리-C 함유 N-말단 프라이머 (5'-GATTCAAATCTCAATTATATAATCCGAATATGTTTACCGGCTCGCTCATGGACCCCCCCCCCCCDN-3'; 서열식별번호: 324)를 사용한다. 제2 네스티드 터치다운 PCR 세트는 다음 프라이머를 사용하여 수행하였다: N-말단 프라이머 (5'-CAATTATATAATCCGAATATG-3'; 서열식별번호: 325), 중쇄 불변 영역 프라이머 (5'-GAARTARCCCTTGACCAGGC-3'; 서열식별번호: 326) 및 경쇄 불변 영역 프라이머 (5'-GAAGATGGATACAGTTGGTGC-3'; 서열식별번호: 327).
PCR 생성물은 pCR2.1®-TOPO® 클로닝 벡터 (TOPO® TA cloning Kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)에 연결시키고 ONESHOT® TOP10 컴피턴트 세포에 형질전환시켰다. 형질전환된 에스케리치아 콜리(이. 콜리) 콜로니를단리하고 DNA 플라스미드 단리를 위해 배양하였다. 플라스미드를 서열분석하여 각각의 세포주에 대한 VH 및 VL의 DNA 서열을 측정하였다. 서열 측정 후, 가변 중쇄 및 경쇄 영역은 엔도뉴클레아제 제한 부위 (EcoRI 및 XhoI)를 함유하는 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 증폭시켜 각각 쥐 IgG2a 및 카파 불변 영역 암호화 포유동물 IgG 및 IgK 발현 벡터에 서브클로닝되도록 하였다.
하이브리도마 세포의 서브클로닝 전, 모 클론을 분자적으로 클로닝하여 가변 중쇄 및 경쇄 도메인의 서열을 측정하였다. 클로닝은 서브클로닝 공정 동안의 불안정성으로 인해 하이브리도마 클론이 상실되는 경우에 서열을 포획하기 위해 서브클로닝 전에 수행하였다. 분자 클로닝 서열 데이터를 기준으로, 17C4, 17H2, 및 19C11은 CDR 및 프레임워크 서열의 정렬을 기준으로 시블링(sibling) 클론인 것으로 측정되었다. 이것은 3개의 클론에 대해 생성된 검정 데이터와 일치하였다.
D. 쥐 하이브리도마 유래된 클론의 인간화
고친화성으로 IL-33에 결합하고 사이토킨의 이의 수용체 ST2로의 결합을 차단하는 항체를 발현하는 쥐 하이브리도마는 인간화를 위해 선택하였다. 하이브리도마를 클로닝하는 것으로부터 수득된 항체에 대한 가변 서열은 가장 유사하게 매칭되는 인간 가변 컨센서스 서열과 정렬시켰다. 쥐 하이브리도마 항체로부터의 초가변 영역 (HVR)은 쿤켈(Kunkel) 돌연변이 유발을 사용하여 상응하는 인간 가변 컨센서스 서열에 그래프팅하였다(문헌참조: 예를 들어, Kunkel 등 Methods Enzymol.154:367-382, 1987). 각각의 클론에 대한 추가의 변이체는 경쇄 및 중쇄 둘다에서의 잔기를 프레임워크/HVR 상호작용 및 가변 중쇄 및 가변 경쇄 상호작용의 부위 뿐만 아니라 주요 버니어(Vernier) 위치에서 쥐로 되돌리는 돌연변이에 의해 생성시켰다. 예를 들어, 하이브리도마 클론 10C12에 대해 클로닝된 HVR 서열은 컨센서스 카파 III 경쇄 및 컨센서스 VHIII 중쇄에 그래프팅하여 인간화된 변이체를 생성시켰다.
하이브리도마 클론 10H2에 대해 클로닝된 HVR 서열은 컨센서스 카파 IV 경쇄 및 컨센서스 VH III 중쇄에 그래프팅하여 인간화된 변이체를 생성시켰다. 6C11, 2B6, 및 9F6에 대해 클로닝된 HVR 서열은 10C12 및 10H2와 유사한 포맷으로 인간화시켰다. 인간화된 변이체는 293개 세포에서 일시적으로 발현시키고 이어서 결합 및 기능 에 대해 시험하였다.
IL-33에 대한 하이브리도마 유래된 클론 10C12, 10H2, 6C11, 2B6, 및 9F6의 인간화된 변이체의 결합 역학은 Biacore 3000 또는 T200 기구 (GE Healthcare) 상에서의 표면 플라스몬 공명 (SPR)을 사용하여 측정하였다. 항-인간 Fc (GE Healthcare)는 제조업자의 프로토콜에 따른 아민 기반 커플링을 통해 CM5 센서 칩상에 고정화시켰다. 인간화된 변이체 항-IL-33 항체는 500-600 공명 유닛 (RU)의 수준으로 포획하였다. 항체 결합은 인간 IL-33에 대해 측정하였다 (Genentech, huIL33.his). 0.78 내지 50 nM의 범위를 갖는 인간 IL-33의 2배 농도 시리즈를 실험을 위해 사용하였다. IL-33의 결합을 위한 센서그램은 25 ˚C의 온도에서 30 μl/min의 유속으로 2분의 주사 시간을 사용하여 기록하였고, 전개 완충액은 10mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.005% TWEEN®-20을 사용하였다. 주사 후, 항체로부터 리간드의 해리는 전개 완충액 중에서 600초 동안 모니터링하였다. 상기 표면은 3M의 염화마그네슘의 40 μl 주사와 함께 결합 사이클 사이에 재생하였다. 전개 완충액만을 함유하는 블랭크의 공제 후, 인간화된 항-IL-33 항체에 결합하는IL-33에 대해 관찰된 센서그램은 1:1 랑그뮈르(Langmuir) 결합 모델을 사용하여 분석하였고 해리 상수(KD)를 포함하는, 역학 및 결합 상수를 계산하기 위해 제조업체에 의해 공급되는 소프트웨어를 사용하였다. 항-IL-33 10C12 인간화된 변이체는 바이아코어 (Biacore)에 의한 측정시 인간화 후 인간 IL-33에 대해 높은 결합 친화성을 보유하였다(도 3 및 표 2 참조). 표 2는 또한 B 세포 클로닝 및 파아지 디스플레이로부터 유래된 선택된 항체 클론에 대한 역학 데이터를 보여준다.
인간화된 항-IL-33 항체, 및 단일 B 세포 클로닝으로부터 수득된 항체 (예를 들어, 4G12 및 유도체 및 3E3)의 기능 및 파아지 디스플레이를 시험하기 위해, 세포 기반 수용체 차단 검정에서 이들의 활성은 상기된 바와 같이 측정하였다. 항체는 ST2에 대한 인간 및 시노몰구스 IL-33 둘다의 결합 차단에 대해 시험하였다. 항체의 선택된 그룹에 대한 수용체 차단 검정 결과는 표 3에 나타낸다.
표 2: 선택된 항-IL-33 항체 클론에 대한 역학 데이터
Figure pct00002
표 3: 선택된 항-IL-33 항체 클론에 대한 수용체-차단 데이터
Figure pct00003
실시예 3. 연령 관련 황반 퇴화 (AMD)를 포함하는 안과학적 장애의 염증에서 IL-33의 역할
염증은 전형적으로 감염 또는 손상에 의해 유발되는 방어 반응인 것으로 고려된다. 염증은 또한 감염 또는 명시적 조직 손상의 부재하에 조직 스트레스 및 기능부전에 의해 유도될 수 있다. 상기 멸균 염증 반응의 예는 망막을 포함하는 중추 신경계에서 면역-특권화된 영역에서 발견된다. AMD에서, 다양한 자극 (예를 들어, 광, 산화적 스트레스 및 단백질분해 효소)에대한 망막 및 언더라인 망막 색소 상피 (RPE) 세포의 일생 노출은 일탈적 혈관신생, RPE 세포사 및 광수용체 상실을 유도할 수 있다. 신경 망막 상실은 흔히 멸균성 염증 반응과 관련되고, 이러한 반응은 부분적으로광수용체 및 광수용체 외부-분절 층에서 단핵 식세포의 축적을 특징으로 한다. 단핵 식세포의 모집을 개시하는 인자들은 대부분 공지되어 있지 않다.
A. 인간 황반의 뮐러(Muller) 세포에서 IL-33 발현은 AMD에서 증가된다 .
인간 망막의 중앙 근처 영역인 황반은 선명한 시야를 위해 중요하다. 산화성 스트레스에 대한 일생 노출 또는 시각 사이클의 독성 부산물에 대한 노출로인한 황반에서 RPE 및 광수용체 세포의 감소된 생존능은 시각 기능을 위해 중요한 결과를 가질 수 있다. IL-33 발현이 망막 주변과 비교하여 황반에서 상이한 지를 결정하기 위해, 절개된사후 분석 인간 망막 (도 4a)은 RNA 서열 분석 (RNA-seq)에 의해 분석하였다. IL-33 전사체는 정상 공여자의 망막 주변과 비교하여 황반에서 상당히 증가되었고, 다른 인터류킨 1 (IL-1) 계열 사이토킨, IL-1α, IL-1β 및 IL-18의 발현 수준은 황반과 비교하여 망막 주변에서 유사하거나 증가되었다(도 4b).
정상 인간 망막에서 IL-33의 세포 공급원을 추가로 측정하기 위해, 안구 질환에 대한 어떠한 병력을 갖지 않는 인간 공여자로부터의 7개의 눈을 면역화학염색을 위해 프로세싱하였다. IL-33은 주로 중추 망막의 비멘틴-양성 뮐러 (Mu ller) 세포의 핵에 존재하고, 망막 주변에 상당히 낮은 수의 IL-33-양성 (IL-33+) 뮐러(Muller) 세포를 갖고(도 5a 내지 5e) 이는 RNA-서열분석 결과와 일치한다. IL-33은 또한 RPE 세포의 서브-집단의 핵에서 발현되었고, 망막 주변에 비해 중추 망막에서 약간 높은 발현을 나타내었다 (도 5b, 5c, 및 5d). 망막 신경절 세포층 및 맥락막의 IL-33+ 내피 세포 (식물세포막 소포체 연합된 단백질-양성 (PLVAP+))에서 IL-33+ 성상세포(아교세포섬유 산성 단백질-양성(GFAP+))의 수는 망막 주변과 비교하여 중추 망막에서 상이하지 않았다.
AMD의 병력을 갖는 공여자에서, RPE 및 광수용체 세포 상실 영역은 진행된 건조 AMD 또는 지도모양망막위축을 상기시키고 황반에서 관찰되었다(도 6a 및 6b). 다중-마커 형광 면역화학염색을 사용하여, 증가된 수의 IL-33+ 뮐러 세포 및 골수 세포는 RPE 및 광수용체 위축 영역에서 관찰되었다 (도 6a-6e). AMD 비-병변 영역에서 IL-33+ 뮐러(Muller) 세포의 수는 대조군의 중추 망막에서의 것들 보다 상당히 낮았다 (도 6c). 이론에 국한되는 것 없이, 이것은 비-병변 영역이 전형적으로 망막 주변에 위치한다는 사실 때문일 수 있고, 여기서 IL-33+ 뮐러 (Muller) 세포는 비-AMD 눈의 중추 망막에서 덜 풍부하다 (도 5d). 증가된 IL-33+ 세포는 또한 대조군 또는 비-병변 영역에 상대적으로AMD 병변 영역의 맥락막에서 관찰되었다 (도 6d). Iba1+ 골수 세포의 어떠한 것도 IL-33에 대해 양성이지 않았다 (도 6e). AMD 환자의 서브집단의 유리체에서, IL-33 수준은 정상 대조군 (황반 원공 또는 황반 주름을 갖는 환자들)과 비교하여 상당히 증가되었다 (도 6f).
B. IL-33은 광독성 스트레스 후 시험관내 및 생체내 뮐러 (Muller) 세포로부터 프로세싱되었고 방출되었다 .
래트 망막에서, IL-33은 마우스 망막에 대해 이전에 기재된 바와 같이(도 7b), 중추 및 주변 망막의 비멘틴-양성 뮬러 (Muller) 세포 (도 7a)에서 주로 발현되었다. 인간 눈에서 IL-33 발현 패턴과는 대조적으로, IL-33 발현은 정상 래트 및 마우스눈에서 RPE 또는 맥락막 내피 세포에서 매우 낮았고 소수의 IL-33+ 세포가 RPE 또는 맥락막에서 관찰되었다 (도 7a 및 7b). 정상 마우스 눈에서, IL-33 mRNA 및 단백질 발현은 다른 IL-1 계열 구성원(IL-1α, IL-1β, 및 IL-18)과 비교하여 보다 높았다(도 7c). rMC-1 세포인 밝은 광에 노출된 래트로부터 수득된 뮐러 (Muller) 세포주(문헌참조: Sarthy 등 Invest. Ophthalmol .Vis. Sci. 39:212-216, 1998)를 사용하여 시험관내에서 IL-33 방출의 조절을 연구하였다. 배양 중 rMC-1 뮬러(Muller) 세포는 GFAP의 발현에 의해 나타난 바와 같이 활성화된 표현형을 보여주었다(도 7d) (문헌참조: Sarthy 등 supra). rMC-1 뮬러(Muller) 세포의 서브세포성 분획화는 핵 분획에서 30 kDa pro-IL-33 (IL-33p30) 및 ~24 kDa 및 ~19 kDa (IL-33p19) C-말단 펩타이드를 동정하였고, IL-33p19는 세포질에서 발현된 주요 종이었다(도 7e). 뮬러(Muller) 세포를 활성화시키는 높은 글루코스(25mM) 배지에 rMC-1 세포의 노출 (도 7f; 문헌참조: Sarthy 등, supra)은 낮은-글루코스 (5.5mM) 배지에서 배양된 세포와 비교하여 IL-33 분비를 상당히 증가시켰다 (도 7g). 배양 상등액의 웨스턴 블롯 분석은 유일한 IL-33 종으로서 IL-33p19를 입증하였다 (도 7g). 높은-글루코스 자극 (72시간 까지)은 rMC-1 세포에 대한 세포 침투성 또는 어넥신 V 염색을 유도하지 않았고 (도 7h), 높은-글루코스 배지에서 증가된 IL-33p19 분비가 증가된 세포사와 관련되어 있지 않음을 지적한다. 이들 데이터는 IL-33이 핵으로의 주요 국소화와 함께 인간 및 설치류 둘다의 뮐러 세포에서 발현되고 IL-33p19가 배양 중 활성화된 생존 래트 뮬러(Muller) 세포로부터 방출될 수 있음을 입증하였다.
이어서, IL-33이 생체내 뮬러 세포 활성화 후 뮬러(Muller) 세포로부터 분비되는지의 분석을 수행하였다. 수일 동안 밝은 (1200 lux) 광으로의 설치류의 일정한 노출은 뮬러 세포, 미세아교세포 및 대식세포의 증가된 활성화와 병행하여 간상 세포 및 원추 세포의 진행성 상실을 유도하였다(문헌참조: LaVail 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11249-11253, 1992). 일정 광 노출 (CLE) 후, 증가된 수의 말단 dUTP 닉 말단 라벨링 (TUNEL)-양성세포는 간상 세포 및 원추 세포의 후속적 상실(도 7j)과 함께 외부 핵 층 (ONL)(도 7i)에서 관찰되었다. 희귀 TUNEL-양성 세포는 뮬러 세포가 잔류하는 내부 핵 층 (INL)에서 관찰되었다.
IL-33이 생체내 세포에 의해 방출되는지를 측정하기 위해, CLE 후 다양한 시점에서 유리체를 수거하였다. 정상 래트 유리체에서 IL-33 수준은 대략적으로 1 ng/ml이었다. IL-33 농도는 광-활성화된 눈에서 2배 증가하였고 3일째에 정체기에 도달하고(도 7k), 이는 광-유도된 망막 스트레스 후 IL-33의 방출을 지적한다. 웨스턴 블롯 분석은 프로세싱된 C-말단 19 kDa 단백질(IL-33p19)이 배양 중 rMC-1 세포로부터 방출된 IL-33 단편과 크기가 동일하였고(도 7g) CLE 전후 유리체에 존재하는 주요 IL-33 종이었음을 확인시켜 주었다(도 7k). 전장 IL-33p30은 망막에서 주요 종이었고 광 노출 후 3일째에 개시하여 프로세싱된 IL-33p19 종의 존재가 증가되었고 (도 7k) 시간 과정은 유리체에서 IL33p19 발현과 유사하였다. 광-손상된 망막 및 높은 글루코스 배지에서 배양된 rMC-1 세포에서 IL-33p19의 증가된 존재가또 다른 IL-33 전사체 변이체의 존재로 인한 것인지를 측정하기 위해, RT-PCR은 5' 비해독된 영역(5'-UTR(엑손 1)에서 IL-33의 정지 코돈 (엑손 9)에 걸쳐 PCR 프라이머를 사용하여 수행하였다. 전장 IL-33 전사체만이 둘다 경우에 검출되었다(도 7l). 이론에 국한되는 것 없이, 이것은 IL-33p19가 또 다른 스플라이싱에 의한 것 보다는 단백질분해에 의해 생성되었음을 시사한다. IL-33 프로세싱에 관여하는 프로테아제는 아직 동정되어야만 하고 집중적으로 계속 연구되고 있다.
CLE 후, 래트 뮬러 (Muller) 세포로부터 고유 IL-33의 상실이 관찰되었다. 유전학적으로-가공된 IL33tm2 / tm2 마우스 (문헌참조: Bessa 등 J. Autoimmunity 55:33-41, 2014) (여기서, 핵 국소화 시그날 및 염색질 결합 도메인을 함유하는 IL-33의 N-말단 112개 아미노산은 dsRed 리포터에 융합되어 있다)는 생체내 뮬러 세포에서 IL-33 단백질 발현의 조절을 측정하기 위해 분석하였다. IL33tm2 / tm2 마우스 기원의 망막에서, IL-33 N-term-dsRed는 고유 전장 IL-33 (도 7b)의 국소화와 유사하게, 주로 망막의 INL에 위치된 뮬러 세포의 핵으로 국소화되었다(도 7m). L33tm2 / tm2 망막의 유동 세포측정 분석은 뮬러 세포에서 IL-33-N-term-dsRed의 선택적 발현을 확인시켜 주었다(도 7m). 생존 뮬러 세포로부터 IL-33-dsRed의 상당한 상실은 뮬러 세포의 상실 없이 (도 7m) CLE 후 관찰되었고, 이는 세포사의 부재하에 뮬러 세포로부터 IL-33 C-말단의 방출을 반영한다. 이러한 발견은 광 노출 후 뮬러 세포로부터 고유 IL-33의 관찰된 상실과 일치한다. 따라서, 이들 데이터는 C-말단 프로세싱된 형태의 IL-33이 광독성에 반응하여 세포 활성화 후 뮬러 세포로부터 방출됨을 입증한다.
C. ST2는 활성화된 뮬러 세포 상에 발현되고 광수용체 상실에 기여한다
IL-33은 이의 헤테로 이량체 수용체인 ST2/IL1RAcP와 결합한 후 MyD88-매개된 시그날 전달을 유발한다(문헌참조: 예를 들어, Schmitz 등 Immunity 23:479-490, 2005). 막관통 ST2 (ST2L) 및 막관통 도메인 (sST2)이 없는 ST2의 스플라이스 변이체를 암호화하는 망막 전사체는 CLE 후 4 내지 10배 증가하였고 3일째에 피크에 도달한다 (도 8a). 병행 샘플에서 유동 세포측정 분석은 광-노출된 망막에서 막관통 ST2의 주요공급원으로서 활성화된 (GFAP+) 뮬러 세포를 동정하였고 (도 8b), ST2는 광 노출 전 뮬러 세포 상에 검출가능하지 않았다. ST2는 CD11b+CD45lo 미세아교세포 (도 8b), RGC, 또는 광수용체 상에서 검출되지 않았다.
분석을 수행하여 ST2에 결합하는 IL-33이 CLE 후 광수용체 생존에 영향을 미치는지를 측정하였다. 스펙트럼 도메인 광간섭성 단층촬영기술 (SD-OCT)은 CLE의 7일 (도 8c) 및 14일 (도 8d) 후 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/-에서 망막의 스파링(sparing)을 입증하였다. 총 망막의 유동 세포측정은 간상 세포, 원추 세포 및 신경절 세포가 14일 동안, CLE 동안에 ST2-/- 대 ST2+/+ 마우스에서 보호되었음을 추가로 확인시켜 주었다(도 8e). 눈을 통한 섹션에 대한 형태측정 분석은 망막의 상위 및 하위 절반 둘다에서 망막 광독성 손상 후 ST2-/- 마우스에서 광수용체의 상당한 보호를 보여주었다(도 8f). 망막전도 (ERG)는 CLE 후 7일째 기록하였고 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/-에서 망막 세포의 스파링이 개선된 a- 및 b-파 반응으로 해석되어 망막 기능의 개선을 반영함을 입증하였다(도 8g). ST2-/- 마우스의 망막과 대조적으로, IL-1α, IL1-β, 및 IL-18 각각에 대한 수용체가 없는 IL-1R1-/- 및 IL-18R1-/- 마우스의 망막은 CLE 후 야생형 한배새끼와 비교하여 보호되지 않았다(도 8d).
ST2/IL-33 상호작용의 약리학적 차단이 광수용체를 보호하는지를 추가로 측정하기 위해, 마우스는 가용성 ST2(AAV-sST2)에 이어서 CLE를 발현하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV)로 처리하였다. sST2의 활성 차단은 IL-33 자극된 골수 유래된 비만 세포(BMMC)에서 입증되었다(도 9a). ELISA 및 웨스턴 블롯 분석은 AAV 감염된 HEK293 세포에서 sST2의 발현을 확인시켜 주었다 (도 9b). AAV-sST2의 서브망막 주사는 망막 및 RPE에서 sST2의 고수준의 발현을 유도하였다 (도 9c). AAV-sST2로 처리되었지만 대조군 벡터로는 처리되지 않은 광-노출된 마우스는 간상 세포, 원추 세포 및 신경절 세포의 보호를 보여주었다(도 10). 이들 결과는 이의 시그날 전달 수용체 ST2/IL1RAcP에 결합하는 IL-33이 광-노출된 망막에서 광수용체 상실을 유도하는 병원성 반응을 유발함을 입증한다.
D. IL-33은 광수용체 층으로 골수 세포의 모집을 증가시킨다
ST2/IL1RAcP 시그날 전달의 다운스트림에서 어느 경로가 광수용체 상실을 유발하는지를 측정하기 위해, 3일 동안 일정 광에 노출된 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스의 망막의 마이크로-어레이 분석을 수행하였다. CLE 후, ST2+/+ 마우스의 망막은 CCL2, IL-1β, IL-6, IRF1, IRF7, 및 STAT3을 포함하는, ST2-/-마우스와 비교하여 염증의 특징에서 전체 증가를 나타냈다 (도 11a 및 11b). 실시간 PCR은 CCL2, IL-1β, 및 IL-6의 증가된 발현을 확인시켜 주었고, ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/- 마우스에서 상당히 낮은 발현을 나타냈다 (도 11c). mRNA 발현 데이터와 일치하여, 망막에서 CCL2 단백질 발현은 CLE 후 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/-에서 감소되었다(도 11c).
분석을 수행하여 IL-33이 뮬러 세포에서 CCL2 발현을 유도하는지를 측정하였다. 상기된 생체내 결과와 일치하여, 뮬러 세포 활성화 마커 GFAP를 발현하는 rMC-1 세포는 막관통, 표면-노출된 ST2를 발현시켰다(도 11d). 재조합 IL-33으로 자극되는 경우, rMC-1 세포는 CCL2 발현에서 용량-의존적 증가를 보여주었고, 이는 IL-33 TRAP의 첨가에 의해 차단되었고, IL-33이 뮬러 세포 상의 ST2를 통해 시그날 전달함을 확인시켜 준다(도 11d). IL-33에 추가로, rMC-1 세포는 높은 글루코스 배지에서 배양되는 경우 시간 경과에 따라 CCL2를 발현시키고 분비하였다(도 11e). 배양 배지에 IL-33 TRAP의 첨가에 의해 뮬러 세포에 의해 분비되는 IL-33의 중화는 비히클의 존재하에 배양된 rMC-1 세포와 비교하여 CCL2 발현을 상당히 감소시켰다 (도 11e). 이들 결과는 배양 중 뮬러 세포가 생활성 IL-33을 방출시키고 이어서 이것이 자가분비 활성화를 통해 CCL2를 유도할 수 있음을 입증한다.
망막에서 CD11b+CD45lo (도 12a 및 도 13d) 및 CD11b+CD45hi (도 13d) 세포 둘다는 CCL2의 수용체인 CCR2를 발현한다(도 12a). IL-33이 망막에서 골수 세포 분포에 대한 임의의 효과를 갖는지를 측정하기 위해, 각각의 망막 층에서 Iba1+ 골수 세포는 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스에서 CLE의 전후에 정량하였다. 광 노출 전, Iba1+ 세포는 내부 총상 (plexiform) 층 (IPL) 및 외부 총상층 (OPL)에 군집하였고 ONL, 외부 분절(OS) 및 망막 신경절 세포 층 (GCL)에는 세포가 거의 없었다(도 12b). 14일 동안 CLE 후, Iba1+ 세포는 ONL, OS, 및 GCL에 축적되었고, 동시에 ST2+/+ 마우스의 OPL 및 IPL에서 Iba1+ 세포는 감소하였다. ST2-/- 마우스는 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ONL 및 OS에서 Iba1+ 세포의 40 내지 50% 감소 및 OPL에서 Iba1+ 세포의 50% 증가를 보여주었다 (도 12c). 따라서, CLE 후, ST2/IL1RAcP 시그날 전달은 CCL2 발현을 촉진시키고, 외부 망막 층에서 Iba1+ 골수 세포의 존재 및 광수용체 간상 세포 및 원추 세포의 상실을 증가시켰다. 이들 결과는 ONL에서 골수 세포 존재 및 광-손상 또는 망막 탈착 후 광수용체사멸 유도를 촉진시키는데 있어서 뮬러 세포-분비된 CCL2에 대한 이전에 제안된 역할을 확장시킨다.
광 노출 시 IL-33/ST2-유도된 광수용체 상실이 침윤성 골수 세포에 의해 매개되는지를 결정하기 위해, 본원 발명자는 클로드로네이트를 사용하여 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스에서 말초 단핵구를 고갈시키고 CLE의 7일 후 광수용체 및 신경절 세포의 수를 정량하였다. 클로드로네이트 처리는 각각 80% 및 70% 초과로 Ly6ChiCD115+ 및 Ly6Clo /- CD115+ 말초 단핵구를 고갈시켰다(도 12d). 단핵구 고갈은 ST2+/+ 마우스에서 CLE 후 간상 세포, 원추 세포 및 RGC의 보호를 유도하였다(도 12e). 그러나, ST2 결핍은 단핵구가 고갈되는 경우 광수용체에 대한 추가의 보호를 제공하지 않았고, 이는 침윤성 골수 세포가 IL-33/ST2-유도된 광수용체 상실을 매개함을 지적한다.
뮬러 세포로부터 방출된 IL-33이 병원성 역할을 갖는지를 추가로 측정하기 위해, N-말단 핵 국소화 시그날 및 IL-33의 염색질 결합 도메인이 dsRed (IL33tm1 / tm1 mice)로 대체된 유전학적으로 변형된 마우스를 분석하였다 (Bessa 등 J. Autoimmunity 55:33-41, 2014) (도 12f). IL33tm2 / tm2 마우스와 유사하게, IL33tm1/tm1 마우스는 신경망막의 뮬러 세포에서 선택적 dsRed 염색을 보여주었다. 그러나, dsRed가 IL-33 N-말단을 통해 핵에 부착된 IL33tm2 / tm2 마우스와 대조적으로, IL33tm1/tm1 마우스에서 IL-33 N-말단의 dsRed로의 대체는 IL-33의 핵으로의 부착을 차단하여 dsRed-IL-33-C-말단의 뮬러 세포의 세포질로의 방출을 유도하고 내부 핵 층을 걸쳐 프로세싱한다 (도 12f). 내인성 프로모터의 조절하에 남아있는 IL-33 전사와 양립할 수 있는(Bessa 등, supra), 망막 내 IL-33 mRNA는 IL33+/+ 한배새끼 마우스와 비교하여 IL33tm1/+ 및 IL33tm1/tm1 마우스에서 변화되지 않았고, 혈청 및 망막내 IL-33 단백질은 N-말단이 없는 IL-33의 자발적 방출로 인해 상승하였다 (도 12f). IL-33 축의 병원성 역할과 추가로 일치하여, IL33tm1 /+ 및 IL33tm1 / tm1 마우스로부터의 망막은 마우스가 ST2 수용체 쇄 (ST2+/- 백그라운드)를 발현하는 경우, 증가된 CCL2 및 IL-6 발현 및 광수용체 원추 세포 및 신경절 세포의 상실을 보여주었다 (도 12g). CCL2 및 IL-6 발현 및 망막 세포 상실은 ST2가 없는 IL33tm1 /+ 및 IL33tm1/tm1 마우스에서 대조군 값으로 복구하였다 (도 12g). 이들 결과는 핵으로 국소화하는 능력이 없는 경우 IL-33이 세포로부터 방출되고망막 세포 사멸과 함께 ST2-의존성 사이토킨 및 케모킨 방출을 유도함을 지적한다.
E. 망막으로 귀소하는 순환 단핵구는 망막 색소 상피 파괴 후 IL-33/ST2-유도된 광수용체 세포 상실을 위해 요구된다.
망막 색소 상피 (RPE)는 광수용체 외부 분절을 흡입하고 재활용하고, 독성 시각사이클 생성물을 불활성화시키고 망막의 대사적 요구를 완수함을 통해 광수용체 항상성에서 중요한 역할을 수행한다. RPE는 또한 외부 혈액-망막 장벽 통합성을 유지한다(문헌참조: 예를 들어, Strauss, "The Retinal Pigment Epithelium." In Webvision:The Organization of the Retina and Visual System (Kolb 등, eds.)1995). RPE 세포의 상실은 습윤 및 무수 형태 둘다의 AMD에서 광수용체 상실에 우연한 것으로 제안되었다 (문헌참조: 예를 들어, Bhutto 등 Molecular Aspects of Medicine 33:295-317, 2012). 요오드산나트륨 (NaIO3)은 전신 투여 시 RPE 세포 생존에 비가역적으로 영향을 주는 산화 화합물이고(문헌참조: Carido 등 Invest. Ophthalmol. Vis . Sci . 55:5431-5444, 2014), RPE 세포사에 부수적인 광수용체 상실에 중요한 망막 경로의 역할에 대한 조사를 가능하게 한다.
NaIO3의 전신 투여는 3일까지 중추 망막에서 대다수의 RPE 세포를 제거시켰다. 이것은 광수용체 외부 핵 세포의 상실, 뮬러 세포의 활성화(도 13a) 및 신경 망막에서 IL-33(IL-33p19)의 19-kDa 프로세싱된 형태의 증가된 존재를 수반하였고, 처리 후 3일째에 피크에 도달한다(도 13b). NaIO3를 사용한 처리는 또한 CCL2에서 >1500-배 증가를 유도하였다 (도 13c). NaIO3 투여로 인한 CCL2 단백질 수준의 증가는 ST2가 없는 마우스에서 대략 35% 약화되었다 (도 13c). 뮐러 세포의 IL-33 자극이 골수 세포에 대한 화학-유인제인 CCL2를 유도하는 경우, 분석을 수행하여 IL-33의 차단이 망막에서 골수 세포의 수에 영향을 미치는지를 측정하였다. NaIO3를 사용한 ST2+/+ 마우스의 처리는 망막에 존재하는 CD45hiCD11b+CCR2+ 골수 세포의 수에서 >20배 증가를 유도하였고, 3일째에 피크에 도달하였다. ST2-/- 마우스는 ST2+/+ 마우스와 비교하여 NaIO3 처리 후, 각각 3일 및 7일째에 CD45hiCD11b+CCR2+ 골수 세포수에서 ~70% 및 ~50% 약화된 증가를 보여주었다(도 13d). 대조적으로, CD45낮은CD11b+CCR2+ 미세아교세포의 수는 NaIO3 처리 후 3일째에 ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스 둘다에서 5배 이상 하강하였고 7일째에 회복되지 않았다. Iba1+ 세포의 면역화학염색 분석은 NaIO3 처리 후, 3일째에 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/- 마우스에서 OS 및 ONL에서의 침윤성 Iba1+ 골수 세포의 대략적 50 내지 60% 감소를 보여주었다 (도 13e). ST2-/- 마우스의 신경 망막은 NaIO3 처리 후 7일째에 ST2+/+ 마우스와 비교하여 ST2-/- 마우스에서 상당히 두터워진 망막에 의해 나타난 바와 같이, NaIO3 처리 후 보호되었다(도 13f). 간상 세포, 원추 세포 및 망막 신경절 세포의 상당한 스파링은 FACS 분석에 의해 추가로 입증되었다. ST2-/- 마우스와 대조적으로, IL-1R1-/- 또는 IL-18-/- 마우스의 망막은 NaIO3 처리 후 7일째 WT 마우스와 비교하여 보호되지 않았다(도 13g).
침윤성 골수 세포가 IL-33-유도된 광수용체 상실을 위해 요구되는지를 측정하기 위해, ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스에서 말초 골수 세포는 NaIO3 처리 전에 클로드로네이트를 사용하여 고갈시키고 3일째에 광수용체 및 신경절 세포의 수는 정량하였다. Ly6ChiCD11b+CCR2+ 및 Ly6Clo /- CD115+CDR2+ 말초 단핵구 및 CD45hiCD11b+CCR2+ 망막 대식세포의 성공적인 고갈은 유동 세포측정기에 의해 확인하였다 (도 13h 및 13i). 클로드로네이트-매개된 골수 세포 고갈은 NaIO3-유도된 RPE 세포 상실 후 신경 망막의 보호를 유도하였다(도 13i). CLE에서 단핵구 고갈 실험으로부터의 결과와 유사하게, ST2의 상실은 골수 세포가 고갈되는 경우 추가의 보호를 유도하지 않았고, 이것은 침윤성 대식세포가 RPE가 파괴되는 경우 IL-33/ST2-유도된 광수용체 상실을 위해 요구됨을 지적한다.
요약하면, 유전학적 및 생리학적 방법을 사용하여, 이들 결과는 IL-33이 광수용체층으로의 골수 세포 모집 및 망막 세포 상실에 기여함을 입증하였다. 광-유도된 손상 모델에서 (CLE) 및 RPE 파괴 모델 둘다에서, IL-33 축 시그날 전달은 망막의 ONL 및 OS 층에서 골수 세포의 축적을 촉진시켰다. RPE 세포 상실의 모델에서, IL-33 축 시그날 전달은 망막에서 골수 세포의 축적을 촉진시켰다. 망막 손상의 설치류 모델 및 인간 AMD 둘다에서, 손상된 망막에서 골수 세포의축적은 해부학적으로 광수용체 세포 상실과 관련되어 있다.
F. 재료 및 방법
마우스
ST2 녹아웃 (ST2-/-) BALB/c 마우스 (8 세대들)는 기관 (MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK)으로부터 수득하였다(문헌참조: Townsend 등 J. Exp. Med . 191:1069-1076, 2000). ST2-/- 마우스는 10 세대 동안 C57BI/6 백그라운드로 역교배하여 ST2-/- C57Bl/6 마우스를 생성하였다. IL33tm1 /+ 및 IL33tm2 / tm2 BALB/c 마우스는 하기 제조원으로부터 수득하였다: F.Hoffmann-La Roche Ltd.,Basel, Switzerland (문헌참조: Bessa 등 J. Autoimmunity 55:33-41, 2014). IL33tm1 /+ 마우스의 상당한 이환율 및 치사율로 인해, IL33tm1 /+ 마우스는 ST2-/- BALB/c 마우스와 교배하였고 ST2-/- 백그라운드 상에 유지하였다. IL33tm1 / tm1ST2+/- 마우스는 암컷 IL33tm1 /+ST2-/- 마우스와 수컷 IL33tm1 /+ST2+/+ 마우스를 사육함에 의해 생성하였다. IL-1R1-/- (Il1r1tm1Imx), IL-18R1-/- (Il18r1tm1Aki) 및 IL-18-/- (Il18tm1Aki) C57Bl/6 마우스는 연구소(The Jackson Laboratory)로부터 구입하였다. IL-1R1-/- 및 IL-18R1-/- 마우스는 스피드 컨제닉에 의해 BALB/c 백그라운드로 역교배하여 각각 IL-1R1-/- 및 IL-18R1-/- BALB/c 마우스 (9개 세대)를 생성하였다. 스프라그-돌리 래트는 제조원(The Charles River Laboratories)으로부터 구입하였다. 모든 동물은 12/12 시간 광/암 사이클을 갖는 무병원체 동물 설비에 거주시키고한배 새끼를 실험에 사용하였다. 동물 실험은 안과 및 시각 연구에서 동물의 사용을 위한 기관(Genentech Institutional Animal Care and Use Committee) 및 시각 및 안과 (ARVO) 성명서에서 연구를 위한 위원회에 의해 승인된 프로토콜에 따라 수행하였다.
재조합 단백질
재조합 마우스 IL-33 (a.a. 109-266)은 기관 (R&D Systems)으로부터 구입하였다. 재조합 래트 IL-33 (a.a. 109-264)은 IL-33의 아미노산 109 내지 264를 암호화하는 래트 cDNA 단편을 pET28 벡터 (Novagen)에 서브클로닝함에 의해 생성하였다. 단백질은 이. 콜리에서 발현하고 Ni-NTA 크로마토그래피에 이어서 겔여과에 의해 정제하였다. 재조합 sST2는 마우스 가용성 ST2 (a.a. 1-337)를 C 말단에서 8x-히스티딘 (His) 태그를 갖는 pRK5 발현 벡터에 서브클로닝함에 의해 생성하였다. CHO 세포에서 발현된 융합 단백질은 Ni-NTA 크로마토그래피에 이어서 SUPERDEX® 200 겔 여과에 의해 정제하였다. sST2의 중화 활성은 IL-33 자극된 골수 유래 비만 세포(BMMC)로부터의 사이토킨 생성을 차단시킴에 의해 입증하였다. BMMC를 생성하고 하기된 바와 같이 IL-33으로 자극하였다(문헌참조: Moulin 등 Cytokine 40:216-225, 2007). 간략하게, 105 세포는 96-웰 플레이트 내 200 μl RPMI-1640 배양 배지내에서 24시간 동안 20 μg/ml sST2의 존재하에 또는 대조군 His-태그된 단백질의 존재하에 1 ng/ml IL-33으로 자극하였다. 배양 상등액은 ELISA (R&D Systems)에 의해 IL-6 및 IL-13의 측정을 위해 수거하였다. ST2의 세포외 도메인(ECD)이 IL1RAcP의 ECD와 이종이량체화된 재조합 IL-33 TRAP를 크놉-인-홀 기술을 사용하여 생성하였다(문헌참조: 예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 and Merchant 등 Nature Biotechnology 16:677-681, 1998). 하기 단편을 포함하는 마우스 ST2의 ECD(a.a. 하기번호)를 암호화하는 pRK5 발현 벡터는(26-328) ("크놉" 돌연변이체를 함유하는 C-말단 mIgG2a Fc 단편) 하기 단편을 포함하는 IL1RAcP의 ECD(a.a 하기번호)를 암호화하는 pRK5 발현 벡터와 함께 CHO 세포로 동시 형질감염시켰다. (21-350) ("홀" 돌연변이를 함유하는 C-말단 mIgG2a Fc 단편)융합 단백질은 MabSURE SELECT 칼럼 (GE Healthcare) 및 SUPERDEX® 200 겔 여과에 의해 정제하였다.
일정 광 노출 (CLE)
8주 내지 12주령의 수컷 BALB/c 마우스 또는 6 내지 8주령의 스프라그-돌리 래트는 <100 lux의 광 강도(기준선으로서 사용됨, d0)를 갖는 정상 하우징에 유지시켰다. 광 노출을 위해, 동물은 어떠한 필터 리드가 없는 편평한 와이어 랙만으로 커버된 약간 변형된 정상 케이지에서 단독으로 거주시켰다. 케이지 입사광의 붕괴를 회피하기 위해, 음식 펠렛을 케이지의 바닥 상에 위치시키고 물은 케이지의 측면에 부착된 물병을 통해 제공하였다. 망막 퇴화는 케이지를 각각의 선반 상에 48" 형광 쿨 백광이 조립된 메트로 랙의선반 상에 위치시킴에 의해 유도하였다. 랙은 또한 벽걸이 화이트 패널에 봉입하여 광이 균일하게 선반으로 다시 반사되도록 하였다. 선반 높이는 광원과 상대적으로 조정하여 각각의 선반 상에 광 강도가 광도계에 의한 측정시 ~1200 룩스가 되도록 하였다. 케이지는 각각의 선반 내 및 CLE 동안에 선반 사이에서 회전시켜 균일한 광 노출을 보장하였다. 동물은 평가 전 지정된 바와 같은 다양한 날 동안 광에 노출시켰다.
RPE 손상-유도된 망막 퇴화
6주 내지 8주령의 수컷 C57Bl/6 마우스에 20mg/kg 체중의 요오드화나트륨 (NaIO3) (Sigma)을 정맥내 주사하였다. NaIO3의 용량은 안저 이미지화에 의해 RPE 손상을 평가하고 OCT에 의해 망막 두께 변화를 평가하는 이전의 용량 적정 실험을 기준으로 선택하였다. 망막은 지정된 바와 같이 NaIO3를 주사한지 3일 또는 7일 후 평가하였다. 동등한 용적의 식염수로 주사된 마우스는 대조군으로서 사용하였다.
스펙트럼 도메인 광 간섭성 단층촬영기술 (SD-OCT)
CLE 후, 망막 두께는 SPECTRALIS® HRA+OCT 시스템 (Heidelberg Engineering)을 사용하여 SD-OCT에 의해 측정하였다. 설치류 눈을 조정하기 위해, 시스템은 카메라 앞에 위치한 55° 와이드 필드 렌즈를 사용하여 제조업자의 추천에 따라 변형시켰다. 마우스는 케타민 (70-80 mg/kg 체중) 및 크실라진 (15 mg/kg 체중)의 복강내 주사에 의해 마취시켰다. 동공은 트로피카미드 안과 용액 USP 1% (Bausch & Lomb)의 적가로 확장시켰다. 인공 눈물의 적가는 상기 과정 동안에 각막 탈수를 차단하기 위해 양방향으로 적용하였다. 시신경 기원의 영역 등-측두부(양질의 4분원)를 통한 수평 용적 스캔은 망막 두께를 평가하기 위해 사용하였다. 총 망막 두께는 횡단면 이미지 상에서 내부 제한 막(ILM)으로부터 RPE/맥락막 층으로의 너비로서 한정되고 MATLAB® (MathWorks)에서 커스텀 자동화 이미지 분절 일상을 사용하여 측정하였다.
망막전위도검사법 (ERG)
ERG 기록은 ESPION2™ 망막전위도검사법 시스템 (Diagnosys)을 사용하여 수행하였다. 마우스는 ERG 기록 전 밤새 암 순응시키고 모든 과정은 희미한 적색 광 하에 수행하였다. 마우스는 상기된 바와 같이 마취시키고 이들의 동공을 확장시켰다. 체온은 온혈성 플레이트를 사용하여 측정하고 37 ℃에서 유지시켰다. 표준 전극은 이마를 통해 피하로 삽입하였고 지면 전극은 요추 영역에서 피하 삽입하였다. 골드-링 전극 (마우스 전극 1.5mm ø 3.2mm) (LKC Technologies)을 각각의 눈의 각막 표면 상에 위치시켰다. GONIOVISC™ 하이프로멜로스 안과 완화제 용액 2.5% (HUB Pharmaceuticals)의 적가는 각막 상에 적용하여 각막과 전극 사이에 전기 접촉을 확립하고 상기 과정 동안에 각막 수분을 유지시켰다. 마우스는 COLORDOME™ 광 자극기로 커버된 플랫폼에 위치시켰다. 눈은 강도 당 5회 섬광으로 3회 섬광 강도 (0.05, 1, 및 25 cdㆍs/m2)의 백색 광으로 자극하였다. 연속적 섬광 사이의 최대 간상 세포 회수는 최저 자극 강도에서 15초로부터 최고 자극 강도에서 1분까지 범위의 자극 간 간격을 도입함에 의해 허용되었다. 시그날은 0.15-1000 Hz에서 통과 주파수 대역 여과시키고 2 kHz에서 샘플 채취하였다. 동물 사이에, 전극은 에탄올 닦기를 사용하여 씻고 이어서 멸균 PBS 중에서 세정하였다. ERG 후, 안과 연고는 건조를 예방하기 위해 각막 상에 국소적으로 적용하였다. 기록된 데이터 포인트 모두는 기준선으로부터 a-파의 트로프까지 측정된 a-파 진폭과 a파의 트로프로부터 b 파의 피크까지의 b-파 진폭과 함께 커스텀 MATLAB® 소프트웨어 (Mathworks)를 사용하여 분석하였다. 광의 3 내지 5회 섬광 자극에 대한 반응을 평균화하였다.
단핵구/대식세포의 클로드로네이트 고갈
단핵구/대식세포를 고갈시키기 위해, 200 μl 용적의 리포좀 캡슐화된 클로드로네이트 (Encapsula Nano Sciences) 중 1mg의 용량은 각각 CLE 또는 NaIO3 처리 2일전 또는 1일전에 개시하여 정맥내로 매일 투여하였다. 대조군 마우스에 동일한 용적의 리포좀을 투여하였다. 전신 단핵구 고갈을 모니터링하기 위해, 혈액은 이소플루란으로 마취 하에 심장천공에 의해 수거하였다. 적혈구는 ACK (암모늄-클로라이드-칼륨) 용해 완충액(Life Technologies)을 사용하여 전혈 샘플로부터 제거하였다. 상기 세포는 이어서 유동 세포측정 완충액 중에 재현탁시키고, Fc 차단하고, 알로피코시아닌 (APC)-접합된 항-CD115 (클론 AFS98, eBioscience), 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC)-접합된 항-Ly6C (클론 AL-21, BD Biosciences) 및 피코에리트린 (PE)-접합된 항-CCR2 (R&D systems)로 염색시키고, 유동 세포측정에 의해 분석하였다.
AAV 벡터의 망막하 주사
마우스 sSt2 (a.a. 1-337)-8xHis (서열식별번호: 332)를 암호화하는 AAV2/5 벡터를 산재 CAG 프로모터의 조절하에서 Vector Biosystems에 의해 커스텀 제조하였다. 마우스 sST2 (a.a. 1-337)-8XHis의 아미노산 서열은 하기 서열식별번호: 로 제공된다: 서열식별번호: 333.바이러스 활성은 105 게놈 카피물 (GC)/세포의 다중 감염도(MOI)를 갖는 HEK293 세포의 감염에 의해 입증하였다. 배양 상등액은 감염 6일 후 수거하였고 ELISA (R&D Systems) 및 염소 항-마우스 ST2 Ab (AF1004, R&D Systems)를 사용한 웨스턴 블롯팅에 의해 sST2 분비에 대해 분석하였다. AAV 빈 벡터를 사용한 감염은 음성 대조군으로서 사용하였다. AAV의 망막하 주사를 위해, 마우스는 케타민/크실라진으로 마취시키고 동공은 상기된 바와 같이 확장시켰다. 해부 현미경하에, 작은 절개부는 각막 연결 부근의 공막에서 30-게이지 니들로 제조하였다. 1012 GC/ml를 함유하는 1 μl의 AAV 현탁액을 평활 33-게이지 해밀톤 니들 및 자가-주사 장치를 사용하여 절개부를 통해 오른쪽 눈의 망막하 공간으로 주사하였다. 주사 후, 3개의 항생제 (네오마이신, 폴리믹신 B, 및 바시트라신) 안과 연고는 마취로부터 회수하기 전 눈의 감염 및 건조를 예방하기 위해 국소적으로 적용하였다.
유리체 및 망막 조직 수거
래트 눈으로부터 유리체를 수거하기 위해, 래트는 CO2 질식에 의해 안락사시키고 적출하였다. 각막의 제거 후, 전방 챔버 유체는 SUGI® 웨지-형태의 흡수제 면봉 (Kettenbach Medical)으로 흡수시켰다. 유리체가 부착되어 있는 렌즈는 각이 진 미세수술 겸자를 사용하여 후방 챔버로부터 주의깊게 꺼내었다. 렌즈-유리체 조직은 PBS 중에 용해된 20 μl의 프로테아제 억제제 칵테일 (Roche)을 함유하는 여과된 원심분리 튜브(Costar)에 위치시키고 4°C에서 5분 동안 14,000 x G에서 원심분리하였다. 유리체는 하부 챔버로부터 용출제로서 수거하였다. 망막은 공막 및 색소 상피로부터 분리하고 PBS 중에서 세정하였다. 망막은 유동 세포측정 분석을 위해 해리시키거나 ELISA 및 웨스턴 블롯을 위해균질화시켰다. 망막은 조직 균질화기 (IKA)를 사용하여 세포 용해 완충액 (Cell Signaling)에서 균질화시켰다. 망막 및 RPE/맥락막 균질화물은 4°C에서 10분 동안 14,000 x G에서 원심분리하고 상등액을 수거하였다. 유리체 및 망막 조직 용해물은 분석시까지 -80°C에서 저장하였다.
유동 세포측정
망막은 상기된 바와 같이 단리시키고 37 ℃에서 30분 동안 20 IU/ml의 파파인 및200 IU/ml의 DNase (Worthington Biochemicals)를 함유하는 얼(Earle)의 균염 용액 (EBSS)으로 분해시켰다. 조직은 약한 피펫팅에 의해 해리시켰다. 파파인 분해는 망막 세포를, 오보뮤코이드 프로테아제 억제제 (Worthington Biochemicals)를 함유하는 EBSS 중에 재현탁시켜 종결하였다. 총 망막 세포는 단일 세포 현탁액의 적정액을 표준 농도의 6 μm FLUORESBRITE® YG 미소구 (Polysciences)와 1:1로 혼합함에 이어서 LSRFORTESSA™ 유동 세포측정기 (BD Biosciences) 상에서 계수함에 의해 정량하였다. 생존 세포는 프로피듐 요오다이드-음성 (PI-) 세포 상에 게이팅하였다. 1차 망막 세포는 유동 세포측정 완충액 (0.5% 소 혈청 알부민 및 2 mM EDTA를 함유하는 PBS, pH 8) 중에서 재현탁시키고 30분 동안 비-특이적 염색을 차단하기 위해 항-CD16/CD32 (BD Biosciences)와 항온처리하였다. 마우스 망막 세포는 PE-CY7®-접합된 항-CD11b (클론 M1/70, BD Biosciences), APC-접합된 항-CD90.2 (클론 53-2.1, BD Biosciences), ALEXA FLUOR® 700-접합된 항-CD45 (클론 30-F11, BioLegend), FITC-접합된 항-ST2 (클론 DJ8, MD Bioproducts), PE-접합된 항-CCR2 (R&D systems), 및 FITC-접합된 항-Ly6C 및 PE-접합된 항-CD115 (클론 AFS98, eBioscience)로 염색시켰다. 래트 망막 세포는 PE-CY7®-접합된 항-CD11b/c (클론 OX-42, BD Biosciences), APC-접합된 항-CD90 (클론 OX-7, BD Biosciences), 및/또는 ALEXA FLUOR® 700-접합된 항-CD45 (클론 OX-1, BioLegend)로 염색시켰다.
마우스 및 래트 둘다에 대한 세포내 마커를 검출하기 위해, 하기의 형광단-접합된 항체를 제조업자의 지침에 따라 항체 접합 키트 (Abcam)를 사용하여 생성시켰다: PE-접합된 항-원뿔 어레스틴 (CAR) (EMD Millipore), PE-CY7®-접합된 항-로돕신 (Rho) (클론 1D4, EMD Millipore), PerCP-CY5.5®-접합된 항-신경교섬유질 산성 단백질 (GFAP) (클론 GA5, Thermo Scientific). ALEXA FLUOR® 647-접합된 항-비멘틴 (클론 D21H3)은 제조원(cell Signaling Technology)으로부터 구입하였다. 세포는 바이올렛 고정 생존능 염료 (Life Technologies)로 염색시키고, 고착시키고제조업자의 지침에 따라 INTRAPREP™ 투과 시약 (Beckman Coulter)을 사용하여 투과시켰다. 세포는 이어서 30분 동안 항체 칵테일로 염색시키고 세척하고 LSRFORTESSA™ 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. rMC-1 세포에서 ST2, 비멘틴 및 GFAP의 염색은 1차 망막 세포에 대해 기재된 바와 동일한 방식으로 수행하였다. 모든 데이터는 BD FACSDIVA™ 소프트웨어로 획득하고 FLOWJO® 소프트웨어 (FlowJo)로 분석하였다. 간상 세포 (Rho+CAR-), 원추 세포 (Rho-CAR+), 신경절 세포 (CD90+CD45-), 미세아교세포 (CD11b+CD45lo), 및 대식세포 (CD11b+CD45hi)의 총 수는 각각의 세포 유형의 %와 총 생존 망막 세포를 곱하여 계산하였다.
rMC -1 자극
rMC-1 세포 (Kerafast)는 10% 열-불활성화된 태아 소 혈청 (FBS), 100 U/ml 페니실린, 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 갖는 듈베코 변형 이글 배지(LG-DMEM)에서 낮은 글루코스 (5.5mM)에서 유지시켰다. 높은-글루코스 자극을 위해, 5 x 105 세포를 37 ℃에서 밤새 6-웰 플레이트에서 2% FBS를 갖는 2ml의 LG-DMEM 중에서 배양하였다. 상기 배지는 LG-DMEM 또는 높은-글루코스 (25 mM)-함유 DMEM (HG-DMEM)을 2% FBS로 대체하고 72시간 이하 동안 배양하였다. 세포 생존능은 제조업자의 지침에 따라 FITC 어넥신 V 아폽토시스 검출 키트(BD Biosciences)를 사용하여 어넥신 V 및 요오드화프로피듐 (PI)으로 세포를 염색시킴에 의해 결정하였다. 배양 상등액을 수거하고 IL-33 발현은 ELISA 및 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다. rMC-1 세포의 IL-33 자극을 위해, 2 x 105 세포는 12-웰 플레이트에서10% FBS를 갖는 1ml의 LG-DMEM 중에서 배양하고 24시간 동안 래트 IL-33 (1, 10, 또는 100 ng/ml)으로 자극하였다. rMC-1 세포에 대한 IL-33의 ST2-의존성 활성은 세포를 10 μg/ml의 IL-33 TRAP 또는 대조군 Fc 단백질의 존재하에 IL-33으로 자극시킴에 의해 결정하였다. 배양 상등액 중 CCL2 수준은 ELISA로 측정하였다. rMC-1 세포에서 IL-33의 자가분비 활성을 측정하기 위해, 세포는 지정된 바와 같은 다양한 시간 동안 10 μg/ml IL-33 TRAP 또는 대조군 Fc 단백질의 존재하에 상기된 바와 같은 높은-글루코스 배지로 자극시켰다. RNA 및 배양 상등액은 각각 qPCR 및 ELISA에 의해 CCL2 발현에 대해 수거하였다.
ELISA
유리체, 망막 용해물, 혈청 및 rMC-1 배양 상등액 중 IL-33 농도는 마우스/래트 IL-33 QUANTIKINE® ELISA 키트 (R&D Systems)를 사용하여 측정하였다. CCL2, IL-1α, IL-1β, ST2, IL-6, 및 IL-13은 QUANTIKINE® ELISA 키트 (R&D Systems)로 정량하였다. IL-18은 마우스 IL-18 ELISA 키트 (MBL International)로 측정하였다. 망막 용해물 중 사이토킨 농도는 BCA 검정 (Pierce Biotechnology)에 의해 측정된 총 단백질 함량으로 표준화시켰다. AMD 환자의 유리체에서 IL-33 수준을 평가하기 위해, AMD로 진단된 환자들(1명남성 및 5명 여성, 68 내지 91세, 평균 연령 79) 및 황반 잔주름 (3명 남성 및 9명 여성, 56 내지 79세, 평균 연령 72) 및 황반 홀 (5명 남성 및 16명 여성, 46세 내지 75세, 평균 연령 65)에 대해 수술을 받은 환자들은 기관 (Western Institutional Review Board (WIRB))으로부터의 승인서 및 환자의 서면 통지 동의서와 함께 기관 (Midwest Eye Institute)으로부터 획득하였다. 눈 절개 및 유리체 수거는 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다(문헌참조: Loyet 등 Invest. Ophthalmol .Vis. Sci. 53:6628-6637, 2012). 결막경유 무봉합 유리체절제술은 25-게이지 캐뉼라 (Alcon)를 사용하여 국소 마취하에 수행하였다. 유리체에서 IL-33 수준은 인간 IL-33 QUANTIKINE® ELISA 키트 (R&D Systems)를 사용하여 측정하였다.
정량 RT-PCR
총 RNA는 RNEASY® 플러스 소형 키트 (Qiagen)를 사용하여 망막 및 rMC-1 세포로부터 단리시켰다. 제1 가닥 cDNA는 고-성능 cDNA 역전사 키트 (Applied Biosystems)를 사용하여 합성하였다. IL-33, CCL2, ST2L, sST2, IL-6, IL-1α, IL-1β, IL-18, 및 GFAP의 정량 PCR(qPCR) 은 입증된 프라이머 및 프로브 세트 (Applied Biosystems)와 함께 TAQMAN® 유전자 발현 검정을 사용하여 수행하였고 수준은 18s rRNA (마우스) 또는 β-액틴 (래트)의 발현에 의해 표준화시켰다. rMC-1 세포 및 래트 망막에서 IL-33의 잠재적인 대안적 스플라이스 변이체를 조사하기 위해, RT-PCR은 5' 비해독 영역 (5'-UTR) (엑손 1)에서 전장 IL-33 mRNA의 종료 코돈 (엑손 9)에 걸쳐 있는 PCR 프라이머를 사용하여 수행하였고 하기의 프라이머를 사용하였다: 5'-TTAAGACCAGCTATCTCCCATCA-3' (서열식별번호: 342) 및 5'-ACGTTACATCTTAGAGAGCTTAAACA-3' (서열식별번호: 343). PCR은 제조업자의 지침에 따라 EXPAND™ 고 충실도 PCR 시스템 (Roche)을 사용하여 수행하였다. 수득한 PCR 제품은 1% 아가로스 겔 상에서 전기영동에 의해 분석하였다.
웨스턴 블롯팅
유리체, 망막 용해물 또는 rMC-1 배양 상등액은 NOVEX® SDS 4-20% 트리스-글라이신 폴리아크릴아미드 겔 (Life Technologies) 상에서 전기영동에 의해 단리시키고 IBLOT® 시스템 (Invitrogen)을 사용하여 니트로셀룰로스 막으로 이전시켰다. 차단시킨 후, 막은 래트 IL-33, 또는 토끼 항-GAPDH (Cell Signaling)와 역반응하는 염소 항-마우스 C-말단 IL-33 (AF3626, R&D Systems)을 사용하여 프로빙하고 이어서 적당한 HRP-접합된 2차 항체 (Jackson ImmunoResearch)와 프로빙하였다. 블롯은 ECL 플러스 웨스턴 블롯 검출 시약 (GE Healthcare)을 사용함에 의해 프로세싱하였다. MC-1 세포의 핵 및 세포질 분획은 제조업자의 지침에 따라 NE-PER® 핵 및 세포질 추출 시약 (Thermo Scientific)을 사용하여 제조하였다. 단백질 농도는 BCA 단백질 검정에 의해 정량하였다. 동일양의 단백질은 상기된 바와 같은 웨스턴 블롯팅에 의해 IL-33 발현에 대해 분석하였다. 핵 및 세포질의 서브세포 분획화는 상기 블롯을 각각 마우스 항-HDAC2 및 항-HSP90 (EMD Millipore)으로 프로빙함에 의해 입증하였다.
마이크로어레이 분석
총 RNA는 이중 가닥의 cDNA로 전환시키고 이어서 아질런트 형광 선형 증폭 키트 (Agilent Fluorescent Linear Amplification kit)를 사용하여 CY® 염료-표지된 cRNA로 전환시켰다. CY® 염료-표지된 cRNA를 단편화하고 아질런트 동일계 하이브리드화 키트 플러스(Agilent's In Situ Hybridization Kit Plus)에 기재된 바와 같은 아질런트 전체 마우스 게놈 어레이에 하이브리드화하였다. 모든 샘플은 CY5® 염료로 표지화시키고 CY3® 염료-표지된 범용 마우스 표준물에 대해 하이브리드화하였다. 하이브리드화 후, 어레이를 세척하고 건조시키고 아질런트 DNA 마이크로어레이스캐너 상에서 스캔하였다. 어레이 이미지화 데이터는 아질런트 피쳐 추출 소프트웨어(Agilent's Feature Extraction software 8.5)를 사용하여 분석하였다. 원 피쳐 추출된 데이터는 이전에 기재된 바와 같이 프로세싱하였다(문헌참조: Vander Lugt 등 Nature Immunology 15:161-167, 2014). 마이크로어레이 데이터는 유전자 당 단일 프로브만을 포함하도록 필터링하고 다수의 프로브가 소정의 유전자에 대해 존재하는 경우 최고 가변도를 갖는 프로브를 선택하였다 (문헌참조: Bourgon 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107:9546-9551, 2010). 차등 발현 분석은 limma 소프트웨어 팩키지 (Smyth, Statistical Applications in Genetics and Molecular Biology 3:Article 3, 2004)를 사용하여 수행하였다. ST2-/- 마우스에서 차등적으로 조절되는 유전자를 동정하기 위해, ST2+/+ 마우스에서 CLE에 의해 상향 조절된 프로브를 동정하고 <0.01의 Benjamini-Hochberg 조정된 P 값에서 >1.5 배 변화를 보여주는 프로브를 선택하였다 (문헌참조: 예를 들어, Hochberg 등 Statistics in Medicine 9:811-818, 1990). 이들 프로브는 ST2+/+와 ST2-/- 마우스 사이에서 <0.05의 Benjamini-Hochberg 조정된 P 값에서 >1.25 배 차이를 보여주는 것들로 추가로 필터링하였다.
유전자 존재론 분석
차등적으로 발현되는 것으로서 동정된 유전자는 GOstats R 팩키지를 사용하는 유전자 존재론 분석에 적용하였다 (Falcon 등 Bioinformatics 23:257-258, 2007). ST2+/+ 및 ST2-/- 마우스에 의해 차등적으로 조절되는 유전자 세트는 시험 세트 및 고려할 범용 유전자들로서 CLE에 의해 차등적으로 조절되는 유전자 세트로서 사용되었다. 상기 연구는 유의적인 조건 시험을 사용하여 생물학적 프로세스 존재론에 제한하였다. 0.01의 명목상의 (조정되지 않은) P 값에서 유의적 집적을 보여주었던 유전자 존재론 용어를 선택하였다.
RNA- seq
인간 망막의 RNA-seq 분석을 위해, 어떠한 눈 질환의 병력을 갖지 않는 사후 건강한 공여자 눈은 공여자 서면 동의서와 함께 기관 (Lions Eye Institute)으로부터 획득하였다. 공여자 눈은 사후 분석 4시간 이하에서 적출하고 수거 후 즉시 RNALATER®에서 보존하였다. 황반은 상위 및 하위 측두부 혈관 아케이드의 경계선 내에 완전히 함유되고 용이하게 가시화된다. 황반을 절개 가위를 사용하여 주변적 안저(peripheral)로부터 절개시킨 후, 황반 망막을 망막 아래 RPE 및 맥락막으로부터 분리시켰다. 총 RNA는 RNEASY® 소형 키트 (Qiagen)를 사용하여 망막으로부터 단리시켰다. RNA 농도는 NANODROP™ 8000 분광측정기를 사용하여 측정하였다. RNALATER®에서 보존된 샘플은 일반적으로 아질런트(Agilent) 2100 생분석기 (Agilent Technologies)와 함께 평가된 바와 같이 높은 품질을 생성시킨다. RNA-seq 라이브러리는 제조업자의 지침에 따라 TRUSEQ® RNA 샘플 제조 키트 (Illumina)를 사용하여 제조하고 이어서 Illumina HISEQ® 2000 시스템 (Illumina)에 의해 서열분석하였다. 서열 데이터 분석은 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다(문헌참조: Durinck 등 Nature Genetics 47:13-21, 2015). 서열분석 판독값은 GSNAP 짧은 판독 얼라이너를 사용하여, 표준 인간 게놈 (GRCh37)으로 맵핑하였다(문헌참조: Wu 등 Bioinformatics 26:873-881, 2010). 발현은 소정의 유전자에서 암호화 서열로 얼라이닝하는 판독 수를 암호화 서열의 총 길이 및 판독의 총수로 표준화시킴에 의해 100만 총 판독 당 킬로베이스 당 판독 (RPKM)으로 측정하였다.
조직학 및 면역화학염색
외부 핵 층 (ONL) 두께의 형태측정 분석을 위해, 눈은 24시간 동안 데이비드슨 고정제 (Electron Microscopy Sciences)로 고정시켰다. 시신경을 포함하는 전체 망막을 커버하는 파라핀-매립된 5 μm 분절은 구체의 수직 경선을 따라 절단하고 헤마톡실린 및 에오신 (H&E)으로 염색하였다. 분절의 탑재 후, 슬라이드는 올림푸스 우플란 SApo 0.75 NA 20x 대물렌즈를 갖는 올림푸스 NANOZOOMER® 2.0 HT 디지털 슬라이드 스캐너 (Hamamatsu) 전개 NDP 스캔 소프트웨어를 사용하여 스캐닝하였다. 이미지는 MATLAB® (MathWorks)에서 커스텀 자동화 이미지 분절화 일상 방법을 사용하여 분석하였다.
시신경을 통해 절단된 분절만을 분석하였다. ONL 두께는 시신경 헤드의 측면으로부터 시작하여 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.6, 0.8, 및 1.0 mm의 거리에서 측정하였다. IL33tm2 / tm2 및 IL33tm1 / tm1 편평한-탑재 망막의 이미지화를 위해, 눈은 2시간 동안 4% 파라포름알데하이드에서 고정시키고 PBS 중에서 세정하였다. 망막 조직은 글로브로부터 온전하게 절개하고 PBST 완충액 (1x PBS, 0.5% TWEEN®-20) 중에서 2시간 동안 1 μg/ml DAPI (Invitrogen)로 염색시키고 이어서 PBST 완충액 중에서 5회 세척하고 PBS 중에서 세정하였다. 망막은 편평하게 탑재하고 40x 대물렌즈를 사용하는 니콘 A1R 공초점 현미경을 사용하여 이미지화하였다. 도 7m 및 도 12f에서 이미지는 PHOTOSHOP® (Adobe)를 사용하는 밝기 및 대비로 최소 조정함에 의해 최적화하였다. 래트 눈의 IL-33 및 비멘틴 동-염색을 위해, 눈을 24시간 동안 데이비드슨 고정제로 고정시키고, 70% 에탄올에 침지시키고 파라핀 매립 및 분절을 위해 프로세싱하였다. 분절의 IHC 염색은 Dako Autostainer 플랫폼 (Dako)상에서 수행하였다. 재수화 후, 분절은 Dako 표적 회수 용액(Dako) 중에서 처리하였다. 분절은 1시간 동안 차단 완충액 중에서 IL-33에 대한 5 μg/ml의 마우스 모노클로날 항체 (mAb) mAb (클론 Nessy 1, Enzo Life Sciences) 및 비멘틴에 대한 0.18 μg/ml 토끼 mAb (Cell Signaling Technologies) 또는 음성 대조군 항체로 항온처리하였다. 세척한 후, 분절은 30분 동안 PowerVision 폴리-HRP 항-마우스 IgG 및 폴리-AP 항-토끼 IgG (Leica Biosystems)로 항온처리함에 이어서 디아미노벤지딘 (DAB) 및 패스트 레드(Fast Red)/나프톨 포스페이트 시약 (ScyTek)으로 검출하였다. 헤마톡실린으로 대비염색한 후, 분절은 밝은 필드 현미경으로 이미지화하였다. IL-33. 마우스 눈의 GFAP, 및 Iba1 염색은 1:500의 토끼 폴리클로날 항체 대 GFAP (DAKO) 및 Iba1에 대한 토끼 폴리클로날 항체 (Wako Chemicals) (0.5 μg/ml)로 동일한 방식으로 수행하였다. 미세아교세포 정량은 광학 디스크를 포함하는 수직 경선에서 절단된 망막 분절의 전체 길이를 따라 각각의 망막 층에서 Iba1+ 세포를 수동으로 계수함에 의해 수행하였다. 래트 눈 분절의 TUNEL 염색은 제조업자의 지침에 따라 APOTAG® 퍼옥시다제 동일계 아폽토시스 검출 키트 (Chemicon)를 사용하여 수행하였다.
인간 눈의 IHC 분석을 위해, 67세 내지 89세의 연령 범위를 갖는 7명의 정상 공여자 (5명 남성 및 2명의 여성) 및 82세 내지 92세의 연령 범위를 갖는 7명의 AMD 환자(2명의 남성 및 5명의 여성)는 공여자 또는 공여자 가족의 동의서와 함께 기관(Lions Eye Institute)으로부터 수득하였다. 눈을 상기된 바와 같이 고정하고 분절하였다. IL-33, 비멘틴, GFAP, Iba1, 및 PLVAP의 형광 IHC 공-염색은 상기된 바와 같이 IL-33, 비멘틴, GFAP, 및 Iba1에 대한 항체 및 PLVAP에 대한 인-하우스 마우스 모노클로날 항체를 사용하고 이어서 적당한 형광 염료-표지된 2차 항체 또는 형광성 염료-TSA (tyramide signal amplification)로 염색하고 DAPI로 대비염색함에 의해 수행하였다. 슬라이드는 상기된 바와 같이 슬라이드 스캐너로 스캐닝하였다. 밝기는 시그날을 보다 잘 가시화하기 위해 NDP 뷰 2 소프트웨어 (Hamamatsu)를 사용하여 도 5a-5c, 5e 및 6a-6b에서의 이미지화를 위해 약간 조정하였지만 패널 내 모든 이미지는 유사하게 변형시켰다. IL-33+ 및 Iba1+ 세포 정량은 정상 눈의 중추 및 말초 영역및 AMD 눈의 병변 및 비-병변 영역에서 대략 500 μm-긴 영역을 따라 IL-33+ 및 Iba1+ 세포를 수동으로 계수함에 의해 수행하였다.
통계학적 분석
달리 지적되지 않는 경우 모든 데이터는 프리즘 6 소프트웨어 (GraphPad)를 사용하여 분석하고 그래프로 나타내었다. 통계학적 분석은 그룹 간의 비교를 위해 지적된 바와 같이 쌍을 이루지 않은 투-테일드 스튜던트 t- 시험 또는 ANOVA를 사용하여 수행하였다. < 0.05의 P 값은 유의적인 것으로 고려되었다.
실시예 4. IL-33 경로 및 IL-13 경로 둘다의 차단은 어느 하나 단독 경로의 차단과 비교하여 폐에서의 2형 염증의 보다 큰 억제를 유도한다
A. 2형 ( Th2 ) 염증의 니포스트론길러스 브라실리엔시스 ( Nippostrongylus brasiliensis) 모델
사이토킨 IL-33 및 IL-13 둘다는 2형 면역 반응에서 염증을 촉진하고 대다수의 데이터는 IL-13의 발현을 조절하는데 IL-33에 대한 역할을 지지한다. IL-33 경로 또는 IL-13 경로 중 어느 하나의 상실은 2형 염증 반응을 약화시키는 것으로 평가되고 이는 생체내 개별 사이토킨에 대한 비-중복 역할을 밝힌다. 그러나, IL-33 시그날의 부재가 단독으로 IL-13에서의 환원 또는 추가의 염증 경로 억제로 인해 2형 면역력에 영향을 주는지는 명백하지 않았다.
상기 의문을 해결하기 위해, ST2 +/+ 및 ST2 -/- 마우스에 면역 IL-13에 대한 중화 항체의 존재 또는 부재하에, 생체내에서 2형 염증을 유발하는 제제를 챌린징하였다. 구충인 엔. 브라실리엔시스(N. brasiliensis)는 폐 및 장에서 급성 2형 염증 반응을 유발하고, 이는 호산구의 조직으로의 이동 및 Th2 사이토킨 생성 (IL-4, IL-5, IL-13)을 특징으로 한다(문헌참조: 예를 들어, Frontiers in Immunology 4(74): 1, 2013). 선천적 및 후천적 둘다의 면역 경로는 항-구충 면역력을 위해 요구된다. ST2 +/+ 마우스는 항-IL-13 또는 대조군 항-돼지풀 항체로 처리하여 2형 폐 염증에서 IL-13의 역할을 평가하였다(도 14a). 또한, ST2 -/- 마우스는 대조군 또는 항-IL13 항체로 처리하여 생체내에서 IL-33의 기여, 및 IL-13 및 IL-33의 조합된 기여를 평가하였다. 이전의 보고와 일관되게(문헌참조: 예를 들어, Nature 464:1367), 엔. 브라실리엔시스 감염은 ST2 +/+ 마우스의 BALF 및 폐 조직 둘다에서 강력한 호산구성 염증을 유발하였고, 이것은 ST2의 부재하에서 상당히 감소하였다(즉, ST2-/- 마우스에 보여지는 바와 같이). 유사하게, IL-13에 대한 중화 항체를 사용한 처리는 BALF 및 조직 호산구가 상당히 감소하였다. 놀랍게도, IL-33 시그날 전달 및 IL-13 둘다의 조합된 차단은 호산구의 폐로의 이동을 크게 억제시켰고 이의 수준은 순수 대조군에 필적할만하였다(도 14b). 추가로, IL-13은 ST2 -/- 마우스의 BALF에서 검출되지 않았고, 이는 IL-13 유도에서 IL-33에 대한 역할과 일치하였다. 추가로, 2개 경로의 조합된 차단은 단독의 경로의 차단 보다 BALF에서 IL-4 및 IL-5를 크게 감소시켰다(도 14c).
재료 및 방법
7 내지 9주령의 암컷 ST2 +/+ 및 ST2 -/- Balb/C 마우스는 0일째 옆구리 상에 피하 주사를 통해 200 μl의 식염수 중에 현탁된 500 니폰스트론길러스 브라실리엔시스 (엔. 브라실리엔시스) L3 유충 식염수로 감염시켰다. 감염 후, 동물은 5일 동안 폴리믹신 b- 및 네오마이신-약물첨가된 물 상에 위치시켰다. 항체 (200 μl의 PBS 중 200 μg/마우스)는 -1일, 감염 후 1, 3, 6, 및 8일째에 복강내 (i.p.) 주사를 통해 투여하였다(도 14a를 참조한다). 동물은 폐 염증의 분석을 위해 감염 후 10일째에 희생시켰다. 기관지 세척 유체 (BALF) 및 관류된 폐 조직은 유동 세포측정 및 단백질 분석을위해 수거하였다. 순수 ST2 +/+ 및 ST2 -/- 마우스는 대조군으로서 사용하였다.
폐 조직 프로세싱을 위해, 관류된 폐는 37 ℃에서 1시간 동안 2 mg/ml의 콜라겐아제 D(Roche) 중에서 분해시키고 제조업자의 지침에 따라 GENTLEMACS™ C 튜브 (Miltenyi)를 사용하여 해리시켰다. 단일-세포 현탁액은 30분 동안 빙상에서 항체로 염색시키기 전에 Fc 수용체 블록 (2.4G2; BD Pharmingen) 으로 15분 동안 항온처리하였다. 호산구, 호중구 및 대식세포는 하기의 항체로 분석하였다: 비오티닐화된 항-CD45 (30-F11; eBioscience), 알로피코시아닌/Cy7-항-CD11b (M1/70; BD Pharmingen), 피코에리트린/Cy7-항-CD11c (HL3; BD Pharmingen), 피코에리트린-항-Siglec-F (E50-2440; BD Pharmingen), 알로피코시아닌-항-F4/80 (BM8; eBioscience), 플루오레세인 이소티오시아네이트-항-Gr-1 (RB6-8C5; BD Pharmingen), 및 이어서 스트렙타비딘 PACIFIC ORANGE™ (S32365; Molecular Probes). BALF 사이토킨은 ELISA로 측정하였다.
B. TNP -OVA 연구
엔. 브라실리엔시스 감염 모델은 본 실시예의 섹션 A에 기재되어 있고 이는 병원체에 대한 급성 반응이고 만성 알레르기 염증에 보이는 항원-유도된 반응을 반영하지 않는 것으로 고려된다. 알레르기 염증에서 IL-33 경로 및 IL-13 경로 간의 중복성에 대한 의문은 기도 염증의 잘 특성분석된 TNP-OVA 감작/챌린지 모델을 사용하여 해결하였다. 상기 모델에서, TNP-OVA 항원에 대한 후천성 면역 반응은 상승되고 호산구의 조직으로의 이동 및 T 세포 IL-5 및 IL-13 사이토킨 생성을 특징으로 한다.
ST2 +/+ 및 ST2 -/- 마우스는 항-IL-13 차단 항체의 존재 또는부재하에 TNP-OVA/알룸으로 감작화시키고 TNP-OVA로 챌린징하였다. IL-33 또는 ST2에 대한 중화 시약을 사용한 연구와 일치하여, TNP-OVA 감작화/챌린지 후 ST2 +/+ 마우스에 보이는 강력한 호산구 염증은 ST2-/- 종에서 상당히 감소하였다(문헌참조: 예를 들어, Exp .Lung Research 40(2): 66, 2014). 이전에 입증된 바와 같이, IL-13의 억제는 또한 폐 조직 호산구의 축적을 약화시켰다(문헌참조: Taube 등,J. Immunol. 169(11): 6482, 2002). 본 실시예의 섹션 A에서 상기된 엔. 브라실리엔시스 감염 연구와 일치하여, IL-33 시그날 전달 및 IL-13 둘다의 조합된 차단은 호산구의 폐로의 유입을 순수 마우스에서 보여지는 수준으로 감소시켰다(도 15a). TNP-OVA 항원에 대한 T 세포 반응의 분석은 다시 단독의 각각의 경로의 억제 보다 IL-13 및 IL-5 생성에 대해 보다 큰 효과를 가졌다(도 15b).
상기 섹션 및 본 실시예의 섹션 A에 기재된 생체내 연구는 IL-33 및 IL-13 둘다의 차단은 개별적으로 경로의 어느 하나를 차단시키는 것과 비교하여 2형 폐 염증에 대해 보다 큰 효과를 가짐을 입증하고, IL-33 및 IL-13의 비-중첩 기능을 강조한다. 엔. 브라실리엔시스 구충 감염은 선천성 및 후천성 면역 성분의 활성화를 유도하고, TNP-OVA 연구는 항원에 대한 후천성 면역 반응의 통상의 모델이다. 모델이 2형 염증의 상이한 측면을 반영하지만, 둘다는 완전히 상기 반응을 폐쇄시키는 경로 둘다의 억제와 함께 호산구 염증을 매개하는데 있어서 IL-13 및 IL-33의 역할을 강조한다. 이들 데이터는 염증, 및 IL-33 및 IL-13 둘다의 차단이 천식과 같은 IL-33 매개된장애를 포함하는 2형 면역 장애를 유발한다는 추가의 이득에 기여하는 IL-33의 추가의 기능을 강조한다.
재료 및 방법
7 내지 8주령의 암컷 ST2 +/+ 및 ST2 -/- Balb/C 마우스는 0일째에 100 μl PBS 중 50 μg TNP-OVA 및 2 mg 알룸의 복강내 (i.p.) 주사를 통해 감작화시켰다(Biosearch Technologies). 7마리 마우스는 그룹 당 사용하였다. 감작화 후 35일째 개시하여, 마우스에 분무기를 통해 PBS 중에서 에어로졸 1% TNP-OVA로 7일 연속으로 챌린지하였다. 항-gp120 IgG1 또는 항-마우스 IL-13 IgG1 (200 μl의 PBS 중 100 μg/마우스)은 감작화 후 35 내지 41일째에 복강내 투여하였다. 동물은 폐 염증의 분석을 위해 42일째에 희생시켰다. BALF 및 관류된 폐 조직은 유동 세포측정 및 단백질 분석을 위해 수거하였다. 종격동 림프절은 T 세포 리콜 검정을 위해 수거하였다. 순수 ST2 +/+ 및 ST2 -/- 마우스는 대조군으로서 사용하였다. BALF 사이토킨 수준은 ELISA로 측정하였다. 관류된 폐는 37 ℃에서 1시간 동안 2mg/ml의 콜라겐아제 D(Roche) 중에서 분해시키고 제조업자의 지침에 따라 GENTLEMACS™ C 튜브 (Miltenyi)를 사용하여 해리하였다. 단일-세포 현탁액은 30분 동안 빙상에서 항체로 염색시키기 전에 Fc 수용체 블록 (2.4G2; BD Pharmingen) 으로 15분 동안 항온처리하였다. 호산구, 호중구 및 대식세포는 하기의 항체로 분석하였다: 비오티닐화된 항-CD45 (30-F11; eBioscience), 알로피코시아닌/Cy7-항-CD11b (M1/70; BD Pharmingen), 피코에리트린/Cy7-항-CD11c (HL3; BD Pharmingen), 피코에리트린-항-Siglec-F (E50-2440; BD Pharmingen), 알로피코시아닌-항-F4/80 (BM8; eBioscience), 플루오레세인 이소티오시아네이트-항-Gr-1 (RB6-8C5; BD Pharmingen), 및 이어서 스트렙타비딘 PACIFIC ORANGE™ (S32365; Molecular Probes).
시험관내 T 세포 리콜 검정을 위해, 종격동 림프절 (웰 당 3x105 세포)로부터의 단일 세포 현탁액은 10% FBS를 함유하고 L-글루타민 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640 배지에서 100 μg/ml TNP-OVA (Biosearch Technologies)의 존재 또는 부재하에서 6일 동안 배양하였다. 6일 후, 세포 증식은 CELLTITER-GLO® 발광성 세포 생존능 검정 (Promega)에 의해 측정하였고 상등액은 ELISA를 통한 사이토킨 수준 분석을 위해 수거하였다.
실시예 5. IL-33에 의한 비만 세포 탈과립화 및 사이토킨 분비의 조절
A. IL-33은 시험관내 및 생체내에서 항원-유도된 비만 세포 탈과립화를 증강시킨다 .
항원-IgE 복합체를 사용한 비만 세포의 자극은 미리 형성된 과립으로부터 혈관활성 및 염증 촉진 매개체를 신속히 방출시킨다. 히스타민, 프로테아제 및 프로테오글리칸을 포함하는 이들 매개체는 침입 병원체에 대한 제1 선 방어로서 작용한다. IL-33이 상기 반응을 증강시키는지를 측정하기 위해, 비만 세포는 24시간 동안IgE로 감작화시키고, 1시간 동안 IL-33의 존재 또는 부재하에 항-IgE로 자극하였다. IL-33은 탈과립화 자체를 유도하지 않았지만 이것은 β-헥소스아미니다제, 트립타제, 및 히스타민의 탈과립화를 유의적으로 증강시켰다(도 16a).
생체내 비만 세포 활성화 및 탈과립화의 IL-33 의존성 증강을 확인하기 위해, 수동적 전신성 예방 모델을 사용하였다. 28시간 동안 항-디니트로페닐 (항-DNP) IgE를 사용한 감작화 후, ST2 +/+ 및 ST2-/- 마우스에 IL-33의 존재 또는 부재하에 DNP-HSA를 챌린징하였다. 예방적 반응은 1시간 과정에 걸쳐 체온에서 감소로서 측정하였다(도 16b). 항원의 부재하에, 상기된 시험관내 연구와 유사하게, IL-33은 예방적 반응을 촉진시키지 않았다 (도 16c). 또한, ST2+/+ 및 ST2-/- 는 FcεRI (Fc 엡실론 RI) 활성화 후 체온에서 유사한 변화를 나타냈다(도 16d). 그러나, 시험관내 연구와 일치하여, IL-33의 첨가는 대조군 그룹과 비교하여 체온이 크게 떨어짐에 의해 입증된 바와 같이 비만 세포 반응을 증강시켰다 (도 16e).
B. IL-33은 항원-유도된 비만 세포 사이토킨 분비를 증폭시킨다.
탈과립화에 추가로, 비만 세포는 사이토킨 및 케모킨의 분비를 통한 숙주 방어에기여한다. 비만 세포 사이토킨 방출에서 IL-33의 역할을 평가하기 위해, 비만 세포는 24시간 동안 IgE로 감작화시키고, 72시간 동안 IL-33의 존재 또는 부재하에 항-IgE로 자극시켰다. 항원 자극은 IL-8 분비를 유도하였고, 이는 IL-33의 첨가에 의해 증강시켰다 (도 16f). 단독의 FcεRI 가교결합은 IL-5 또는 IL-13을 분비시키지 않았다 (도 16f). 초기에 보고된 바와 같이, IL-33은 IL-5 및 IL-13의 방출을 자극시켰고, 이는 FcεRI 자극의 첨가로 상당히 증가되었다. 추가로, 비만 세포로부터 TNF-α 및 IL-10의 IL-33-매개된 방출이 관찰되었다 (도 16g). 마이크로어레이 분석은 IL-33이 다수의 케모킨, 사이토킨 및 성장 인자들을 유도하였음을 밝혔다(도 16h) (문헌참조: 예를 들어, Nagarkar 등 J. Allergy Clin. Immunol. 136(1): 202-205, 2015). 이들 결과는 비만 세포 반응 및 방어 기작을 촉진시키는데 IL-33의 역할을 강조한다.
C. 재료 및 방법
시험관내 비만 세포 검정
비만 세포는 이전에 기재된 바와 같이 단리하였다(문헌참조: 예를 들어, Nagarkar 등 J. Allergy Clin . Immunol . 136(1): 202-205, 2015). 10명의 공여자로부터 유래된 말초 혈액-유래된 CD34+ 세포는 제조원(Stemcell Technologies (Vancouver, BC, Canada))으로부터 구입하였고, 이전에 기재된 바와 같이 IL-6 및 SCF의 존재하에 12주의 기간 동안 1차 배양된 시험관내 CD34+ 세포-유래된 인간 비만 세포로 분화시켰다. 0주에서, 세포는 200 ng/ml SCF, 50 ng/ml IL-6, 5 ng/ml IL-3, 11 μM 2-머캅토에탄올 (2-ME, Invitrogen (Carlsbad, CA)), 100 U/ml 페니실린, 및 100 μg/ml 스트렙토마이신 (Invitrogen)을 함유하는 무혈청 이스코브(Iscove)의 메틸셀룰로스 배지 (METHOCULT™ SFBIT H4236, Stemcell Technologies)에 현탁시키고 이어서 37 ℃에서 5% CO2 중에서 항온처리하였다. 배양 2주째에, 200 ng/ml SCF, 50 ng/ml IL-6, 11 μM 2-ME, 100 U/ml 페니실린, 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 함유하는 새로운 메틸셀룰로스 배지는 메틸셀룰로스 배양물 상에 적층시켰다. 배양 4주째에, 200 ng/ml SCF, 50 ng/ml IL-6, 인슐린-트랜스페린-셀레늄 (Invitrogen), 55 μM 2-ME, 100 U/ml 페니실린, 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 보충된 이소코브(Iscove)의 변형된 듈베코 배지(IMDM)의 1ml 적정액을 메틸셀룰로스 배양물 상에 적층시켰다. 배양 6주째에, 모든 세포는 PBS로 메틸셀룰로스 배지를 용해시킨 후 회수하였다. 상기 세포는 이어서 100 ng/ml SCF, 50 ng/ml IL-6, 0.1% BSA, 인슐린-트랜스페린-셀레늄, 55 μM 2-ME, 100 U/ml 페니실린, 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 보충된 IMDM에 현탁시키고 배양하였고, 배양 배지를 몇 주 후에 대체하였다. 한 주 더 배양한 후, 배양 배지는 100 ng/ml SCF, 50 ng/ml IL-6, 5% FBS (Invitrogen), 55 μM 2-ME, 100 U/ml 페니실린, 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 보충된 IMDM으로 전환시켰다. 배양 배지는 이후 주마다 변화시키고, 상기 세포는 추가로 5 내지 7주 동안 항온처리하였다. 12주까지, 대다수의 비-비만 세포는 교모증을 진행하는 것으로 예상되었다. 비만 세포의 최종 순도는 1 μg/ml 골수종 IgE (EMD Millipore, Billerica, MA)으로 48시간 처리 후 배양 12주 후 유동 세포 측정을 사용하여 FcεRI 발현을 측정함에 의해 결정하였다. 비만 세포의 최종 순도는 90 %였다. 10개의 독립적 공여자로부터의 비만세포는 상기 방식으로 생성시켰다.
IL-33 자극된 비만 세포의 마이크로어레이 분석을 위해, 2개의 공여자 (1x106 세포/ml)로부터의 비만 세포는 24시간 동안 2회 10 ng/ml IL-33으로 자극하였다. 이어서 RNA는 마이크로어레이 분석을 위해 수거하였다. IL-33 반응을 측정하기 위해, 비만 세포는 48시간 동안 지정된 바와 같이 IL-33으로 자극하였다(도 16a). 무세포 상등액은 제조업자의 지침에 따라 메소 스케일 디스커버리 Th1/Th2 10-플렉스 패널 (MSD, Rockville, MD)을 사용하여 IL-5, IL-13, IL-4, IL-10, 및 TNF-α 수준의 분석을 위해 수거하였다. IL-33 및 IgE 가교결합 공동-자극 실험을 위해, IgE-감작화된 비만 세포 (0.5x106 세포/ml)는 10 μg/ml 항-IgE (411520; EMD Millipore)의 존재 또는 부재하에 지적된 바와 같이 IL-33으로 자극하였고 무세포 상등액은 72시간 후 수거하였다. 방출된 사이토킨 수준은 IL-8 (DY208; R&D systems), IL-5 (88-7056; eBioscience) 및 IL-13 (88-7439; eBioscience)에 대한 ELISA 키트로 분석하였다.
탈과립화
인간 비만 세포 탈과립화는 총 세포 함량에 대해 방출된 β-헥사미노다제, 트립타제, 및 히스타민의 %로서 측정하였다. 칼슘 이오노포어 A23187 (C7522; Sigma Aldrich)은 10 μM에서 양성 대조군으로서 사용하였다. 비만 세포는 24시간 동안 2 μg/ml의 정제된 인간 IgE (AG30P; EMD Millipore)로 감작화시켰다. 감작화된 비만 세포는 세척하고 티로드(Tyrode)의 완충액 (10 mM HEPES, 130 mM NaCl, 6.2 mM D-글루코스, 3.0 mM KCl, 1.4 mM CaCl2, 1.0 mM MgCl2, 및 0.1% BSA) 중에서 6.25x106 세포/ml로 재현탁시켰다. 비만 세포 (6.25x104/웰)는 96-웰 v-기저 플레이트 중에 3회 분주하였고 20 μl의 최종 용적에서 1시간 동안 100 ng/ml 인간 IL-33의 존재 또는 부재하에 10 μg/ml 항-IgE(411520; EMD Millipore)로 자극하였다. 세포 상등액을 수거하고 세포 펠렛은 티로드 완충액 중에서 20 μl의 0.5% TRITON™ X-100으로 용해시켰다. β-헥소스아미니다제 방출은 형광측정 검정을 사용함에 의해 분석하였다. 상등액 및 세포 용해물 (10 μl)은 1시간 동안 0.1 M 시트레이트 완충액, pH 4.5 중의 50 μl 4mM p-니트로페닐-N-아세틸 -β-D-글루코스아미니드 (N9376, Sigma Aldrich)로 항온처리하고 150 μl의 0.2 M 글라이신은 반응을 종료하기 위해 첨가하였다. 흡광도는 ELISA 판독기에서 405nm에서 측정하였다. 상등액 및 세포 용해물에서 트립타제 수준 및 활성은 제조업자의 지침에 따라 비만 세포 탈과립화 검정 키트 (IMM001; EMD Millipore)를 사용하여 계산하였다. 상등액 및 세포 용해물 중에 히스타민 수준은 히스타민 ELISA 키트를 사용하고제조업자의 지침 (409010; Neogen)에 따라 분석하였다.
수동 전신 과민증
7-8주령의 암컷 ST2+/+ 및 ST2-/- Balb/C 마우스는 0일째 정맥내 주사(i.v.)를 통해 200 μl의 식염수 중 200 μg의 DNP-마우스 IgE (Biosearch Technologies) 로 감작화시켰다. 5마리의 마우스는 그룹 당 사용하였다. 28시간 후, 마우스에는 정맥내로 100 μg의 DNP-HAS (Biosearch Technologies), 2 μg의 쥐 IL-33 (R&D Systems), 또는 200 μl의 식염수 중 이의 조합물을 챌린지하였다. 체온은 챌린지 후 1시간 동안 5분 간격으로 스캐너로 이식된 칩을 스캐닝함에의해 측정하였다.
유전자 발현 분석
RNA 추출 및 PCR은 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다 (문헌참조: 예를들어, Nagarkar 등 J. Allergy Clin. Immunol. 136(1): 202-205, 2015). 총 RNA는 Qiagen RNEASY® 키트 (Germantown, MD)를 사용하여 비만 세포로부터 추출하였다. cDNA는 제조원(Bio-Rad)(Hercules, CA) 기원의 ISCRIPT™ 역전사 슈퍼믹스를 사용하여 총 RNA로부터 생성하였다. cDNA의 증폭은 TAQMAN® 유전자 발현 검정 (Applied Biosystems, Foster City, CA)을 사용하여 수행하였다. 달리 지적되지 않는 경우 유전자 발현에서 배수 변화는 각각의 배지 대조군과 비교하였다. 마이크로어레이 분석을 위해, 비만 세포 샘플로부터의 RNA는 아질런트 1회 증폭을 위해 제출되었다.
마이크로어레이 분석 및 통계
마이크로어레이 및 통계는 기재된 바와 같이 수행하였다(문헌참조: 예를 들어, Nagarkar 등 J. Allergy Clin. Immunol. 136(1): 202-205, 2015). 총 RNA 샘플의 정량 및 정성은 각각 ND-1000 분광측정기 (Thermo Scientific, Wilmington, DE, USA) 및 생분석기 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)을 사용하여 측정하였다. CY® 염료-표지된 cRNA 제조 및 어레이 하이브리드화는 제조업자의 지침 (Agilent Technologies)에 따라 제조하였다.
간략하게, 총 RNA 샘플은 아질런트 퀵 Armp 표지화 키트를 사용하여 이중 가닥 cDNA로 전환시키고 이어서 CY® 염료 -표지된 cRNA로 전환시켰다. 표지된 cRNA는 RNEASY® 소형 키트 (Qiagen)를 사용하여 정제하였다. cRNA 수율 및 CY® 염료 혼입은 ND-1000 분광측정기 (Thermo Scientific)를 사용하여 측정하였다. 750 ng의 표지된 cRNA는 단편화시키고 아질런트 전체 인간 게놈 4 44K v2 어레이에 하이브리드화하였다. 모든 샘플은 CY®5 염료로 표지시키고 CY®3 염료-표지된 범용 인간 표준물(Stratagene, La Jolla, CA, USA)에 대해 하이브리드화시켰다. 샘플은 65°C에서 17시간 동안 하이브리드화하였다. 하이브리드화 후, 어레이를 세척하고 건조시키고 아질런트 스캐너를 사용하여 스캐닝하였다. 아질런트 피쳐 추출 소프트웨어 버젼 11.5를 사용하여, 수득된 어레이 이미지를 분석하였다. 모든통계학적 계산은 R 프로젝트 소프트웨어 팩키지 버전 2.15.1을 사용하여 수행하였다. 어레이 정성 대조군은 R에 대한 어레이정성측정 팩키지를 사용하여 평가하였다. 마이크로어레이는 표준화시키고 프로브 강도는 바이오컨덕터(bioconducgtor)를 사용하여 전환시켰다. 마이크로어레이 데이터의 독립적 필터링은 유전자필터 팩키지를 사용하여 수행하여 1형 오류 대조군을 유지하면서 실제 양성을 검출하는 통계학적 파워를 증가시켰다.
불변이거나 Entrez 유전자 전사체에 상응하지 않는 어레이 피쳐는 전형적으로 차등 유전자 발현 분석을 위해 충분한 정보를 제공하지 않기 때문에, 주석 및 발현 가변성을 기준으로 하는 필터링을 수행하였다. 간략하게, 필터링은 하기와 같이 수행하였다: 1) Entrez 또는 CCGf 유전자를 나타내는 어레이 피쳐만이 보유되었고; 2) 단일Entrez 유전자에 상응하는 다수의 어레이 피쳐는 최고-상호 사분위수 범위(IQR)를 기준으로 단일 어레이 피쳐로 감소하였고; 3) 유전자 발현 마이크로어레이 데이터의 선형 모델 시험 통계는 바이오컨덕터의 림마 팩키지를 사용하여 수행되었다. 간략하게, 상기 방법은 수집된 추정치에 대해 평가된 샘플 분산의 수축에 균등한경험적 바이어스(Bayes) 방법을 사용하고, 이는 어레이 수가 제한되는 경우 매우 보다 안정한 추론을 유도한다. 차등 발현 시험 통계는 인자로서 처리를 포함하는 모델의 선형 대조로서 평가되었다. 다중 가설 시험을 설명하기 위해 조정된 P-값은 벤자미니(Benjamini) 및 호이베르크(Hochberg)의 방법을 사용하여 해결되었다.
실시예 6.K/BxN 혈청 전달 관절염 모델에서 IL-33 축에 대한 염증 촉진 역할
A. IL-33 또는 ST2의 상실은 관절염 질환을 개선한다.
K/BxN 혈청은 면역 복합체를 형성하는 글루코스-6-포스페이트 이소머라제 (GPI)에 대한 자가항체를 함유한다. 순수 면역적격 마우스에 대한 이들 면역 복합체의 투여는 관절 종창, 골 미란, 면역 세포 침윤 및 사이토킨과 케모킨에서의 증가와 같은 류마티스 관절염과 유사한 병을 유도한다. 상기 반응은 대안적 상보적 경로, 비만 세포 및 호중구를 포함하는, 선천적 면역계에 의존한다. 특히 질환 개시 동안에 비만 세포의 비-중복 역할은 이전에 입증되었다(문헌참조: 예를 들어, Lee 등 Science 297:1689-1692, 2002). 비만 세포 활성화(실시예 6에 입증된 바와 같이)에서 IL-33에 대한 역할이 주어진경우, 질환 활성은 IL33-/- (도 17a) 및 ST2-/- (도 17b-17d) 마우스에서 조사하였다. 이전의 보고와 일치하여, ST2의 결핍은 감소된 관절염을 유도하였다. 유사한 관찰은 IL33-/- 마우스에서 나타냈다. 이들 데이터는 IL-33이 염증 촉진 사이토킨 분비, 생존 및 탈과립화를 포함하는, 비만 세포 기능의 다중 측면에 영향을 줄 수 있음을 입증하는 세포 연구상으로 확장한다.
B.재료 및 방법
암컷 ST2+/+ 및 ST2-/- C57Bl/6 마우스는 ST2+/+ 및 ST2-/- Balb/C 종의 10 세대를 역교배시킴에 의해 생성하였다. 7 내지 8주령의 마우스에 0일째 정맥내(i.v.)로 20μl의 관절기원성 K/BxN 혈청을 투여하였다. 10마리의 마우스를 그룹 당 사용하였다. 혈청은 먼저 ST2+/+ 마우스에서 관절염을 유도하기 위해 요구되는 최적의 양을 측정하기 위해 시험하였다. 관절염 증거를 위해 발을 매일 조사하였다. 질환 정도는 하기의 방식을 사용한 가시적 관찰에 의해 스코어링하였다:
0 = 홍반 및 종창의 증거 없음
1 = 중간-발 (부골) 또는 발목에 국한된 홍반 및 약한 종창
2 = 발목에서 중간 발까지 연장하는 홍반 및 약한 종창
3 = 발목에서 발허리뼈 관절까지 연장하는 홍반 및 중간의 종창
4 = 발목, 발 및 손가락을 포함하는 홍반 및 중증 종창
데이터는 평균 스코어로서 플롯팅하고 이는 4개의 발 스코어의 합이다. 질환 중증도는 하기의 방식을 사용하여 측정하였다:
약한 (평균 스코어 0-3)
중간 (평균 스코어 4-8)
중증 질환 (평균 스코어 9-초과).
평균 스코어는 포함된 관절의 수를 반영한다.
7 내지 8주령의 암컷 IL33+/+ 및 IL33-/- C57Bl/6 마우스에 0일째 정맥내 (i.v.)로 70 μl의 관절기원성 K/BxN 혈청을 투여하였다. 5마리의 마우스는 그룹 당 사용하였다. 혈청은 다시 IL33 +/+ 종에서 관절염을 유도하기에 요구되는 최적 양을 측정하기 위해 시험하였다. 질환 활성의 스코어링은 상기 지적된 바와 같이 수행하였다.
실시예 7. 폐로의 IL-33 유도된 대식세포 모집은 IL-4, IL-5, 및 IL-13과 무관하다.
본원에 기재된 생체내 연구는 예를 들어, 조직으로의 호산구 모집을 포함하는, 2형 염증을 촉진시키는데 IL-33에 대한 비-중복 역할을 예시한다. 그러나, IL-33은 또한 2형 면역력으로 전적으로 연결되지 않는 숙주 방어의 다른성분을 유도한다. 대식세포는 특히 식세포작용, 사이토킨 및 성장 인자 분비, 및 상처 복구를 포함하는, 항-미생물 반응 및 조직 항상성의 다중 측면에 기여한다. 이들의 기능에 핵심은 IL-33과 같은 사이토킨에 의해 부분적으로 매개되는 감염부위로의 모집이다.
대식세포의 폐로의 IL-33-유도된 이동이 2형 사이토킨과 무관하고 따라서 면역력에서 IL-33 기능의 보다 광범위한 측면을 지적하지는지를 밝히기 위해, 마우스는 IL-4, IL-5, 및 IL-13에 대한 중화 항체의 존재 또는 부재에서 IL-33으로 처리하였다(도 18a-18c). 폐 염증에서 이들 사이토킨에 대한 역할이 주어진 경우, BALF 세포질을 분석하였다. 호산구 이동에서 이들 사이토킨에 대한 역할과 일치하여, BALF로의 IL-33-유도된 호산구 침윤은 IL-4, IL-5, 및 IL-13의 차단시 완전히 폐지되었다 (도 18c). 그러나, 폐로의 대식세포 침윤은 상기 처리에 의해 방해받지 않았고 (도 18b), 이는 IL-4, IL-5, 및 IL-13의 유도 이상으로 IL-33의 고유 성질을 강조한다. 숙주 방어에서 대식세포에 대한 역할이 주어진 경우, 이들 데이터는 통상의 2형면역 반응 이상으로 IL-33에 대한 대안적 기능을 시사한다.
재료 및 방법
7 내지 8주령의 암컷 C57BL/6 마우스는 기관(Jackson Laboratory)으로부터 구입하였다. 5마리의 마우스는 그룹 당 사용하였다. 재조합 마우스 IL-33 (a.a. 109-266)은 기관 (R&D Systems)으로부터 구입하였다. 동물의 대조군 그룹은 식염수 처리만을 받았다. 0 내지 7일 부터, 마우스에는 100 μg의 대조군 항체 또는 IL-4, IL-5, 및 IL-13에 대한 중화 항체를 복강내(i.p.) 주사하였다(항-IL-4 및 항-IL-5는 기관(R&D Systems)으로 기원하고, 항-IL13은 내부에서 생성되었다) (도 18a). 1일 내지 7일째에, 마우스에는 0.5 μg의 재조합 쥐 IL-33을 매일 복강내 주사하였다. 마우스는 8일째에 안락사시키고 기관지 세척 유체 (BALF)를 수거하였다. 세포 카운트는 유동 세포측정기 분석에 의해 평가하였다. BALF 세포는 빙상에서 30분 동안 항체 염색시키기 전에 15분 동안 Fc 수용체 블록 (2.4G2; BD Pharmingen)과 항온처리하였다 .호산구, 호중구 및 대식세포는 하기의 항체로 분석하였다: 비오티닐화된 항-CD45 (30-F11; eBioscience), 알로피코시아닌/Cy7-항-CD11b (M1/70; BD Pharmingen), 피코에리트린/Cy7-항-CD11c (HL3; BD Pharmingen), 피코에리트린-항-Siglec-F (E50-2440; BD Pharmingen), 알로피코시아닌-항-F4/80 (BM8; eBioscience), 플루오레세인 이소티오시아네이트-항-Gr-1 (RB6-8C5; BD Pharmingen), 및 이어서 스트렙타비딘 PACIFIC ORANGE™ (S32365; Molecular Probes).
실시예 8. 항-IL-33 단일특이적 및 항-IL-33/항-IL-13 이특이적 항체의 특성 분석
본원 발명자는 이전에 이. 콜라이에서 2개의 상이한 경쇄를 갖는 인간 IgG1 이특이적 항체를 생성시키는 기술을 확립하였다(문헌참조: Yu 등,2011, Sci Transl Med 3, 84ra44). 상기 방법은 크놉-인투-홀 기술을 사용하고(문헌참조: 예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168, Ridgway 등,1996, Protein Eng.9, 617-621; Atwell 등,1997, J Mol Biol 270, 26-35, 이는 본원에 이의 전문이 참조로 인용된다) 이는 면역글로불린 중쇄의 이종-이량체화를 촉진시킨다. 경쇄의 잘못된 쌍 형성 없이 2개의 상이한 경쇄의 사용을 가능하게 하기 위해, 본원 발명자는 별도의 이. 콜라이 세포에서 절반 항체로서 각각의 아암을 배양하였다. 본원 발명자는 상기 방법을 적용하여 항-IL-33 및 항-IL-13 모 항체를 인간 IgG4 홀로서 항-IL-33 아암의 발현 및 인간 IgG4 크놉으로서 항-IL-13 아암의 발현을 가능하게 하는 벡터로 서브클로닝함에 의해 항-IL-13/IL-33 이특이적 항체를 생성시켰다.
10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4로서 언급된 이특이적 항-IL-33/항-IL-13 항체는 크놉-인-홀(KIH) 기술을 사용하여 생성시켰다. 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4의 항-IL-33 아암은 서열식별번호: 36의 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 37의 VL 아미노산 서열이고, 이는 항체 10C12.38.H6.87Y.58I에 상응한다. 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4의 항-IL-33 아암은 서열식별번호: 302의 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 303의 VL 아미노산. 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4의 항-IL-33 아암은 서열식별번호: 306의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 307의 경쇄 아미노산 서열을 갖고 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4의 항-IL-13 아암은 서열식별번호: 304의 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 305.
본원 발명자는 이전에 생성되었고 특성 분석된 이특이적 항체의 항-IL-13 CDR을기준으로 하였다. 예를 들어., PCT 공개 번호 WO 2005/062967을 참조한다. 이특이적 항체에 대해, 항-IL-13 항체는 레브리키주맙과 비교하여 FR 영역에 2개의 일탈을 가졌다: 중쇄 상에 Q1E 및 경쇄 상에 M4L.
항체 발현을 위해, 이. 콜라이 균주 64B4를 사용하였다. 밤새 배양물은 30ºC에서 LB (100 μg/ml 카베니실린) 중에 성장시키고, 5 ml의 CRAP 배지 (100 μg/ml 카베니실린)로 1:100으로 희석시키고 (Simmons 등,2002, J. Immunol. Methods, 263:133-147) 30ºC에서 24시간 동안 성장시켰다.
10L 발효기로의 스케일-업을 위해, 초기 종균 배양물 (500 ml)을 정체기로 성장시키고 10L 발효기에 접종하는데 사용되었다 (Simmons 등,2002, J. Immunol. Methods, 263:133-147). 10L의 유가식 배양물을 성장시키고 전체 브로쓰는 미세유체를 통해 수거하였다. 이어서 용해된 세포는 0.4% PEI (v/v)의 최종 농도로 4 ºC에서 밤새 처리하였다. 각각의 혼합물은 이어서 15,000 x g에서 20분 동안 원심분리하고 이어서 0.22μm 필터를 통해 여과하였다. 이어서, IL-33 항체는 400 mL MabSURE SELECT 칼럼 (GE Healthcare Life Sciences) 상에 4 ºC에서 포획하였다. 상기 칼럼은 25 mM TRIS pH 7.5, 150mM NaCl, 2mM NaN3 (TBS)을 사용하여 기준선으로 세척함에 이어서 0.1% Triton X-114 밤새, 0.4M KPO4, 5 mM EDTA, 0.2% 폴리소르베이트 20, 1 mM 아지드화나트륨, pH 7.0을 함유하는 TBS로 세척하고 최종적으로 TBS로 기준선으로 세척한다. 이어서, IL-33 아암은 0.1 M 아세트산 pH 2.7로 용출시키고 용출된 풀은 1M 아르기닌/숙시네이트 pH 9.0을 사용하여 pH 5.0으로 적정하였다.
IL-33 및 IL-13 절반 항체의 동정은 타임-오브-플라이트 (LC-ESI/TOF) 분석과 함께 액체 크로마토그래피 전기분무 이온화에 의해 확인하였다. 순도는 4-20% 농도구배 Tris-글라이신 SDS PAGE 겔에 의해 분석하고 응집 수준은 SEC에 의해 결정하였다.
2개의 절반 항체와 어셈블리 반응 후, 이특이적 항체는 소수성 상호작용, 양이온교환 및 겔 여과 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 구체적으로, 어셈블리를 위해, 절반 항체는 실온에서 4일 동안 200몰 과량의 GSH와 함께 아르기닌 숙시네이트 중에서 pH 8.5에서 1:1의 몰비로 조합하고 이어서 4°C에서 16시간 동안 5mM DHAA를 첨가하였다. 상기 물질은 pH 6.5에서 25% 이소프로판올을 함유하는 황화암모늄 농도 구배를사용하여 소수성 크로마토그래피 칼럼 (Thermo ProPac HIC-10) 상에서 분획화하였다. IL-13/IL-33 이특이적 항체를 함유하는 풀은 이어서 20 mM 히스티딘, pH 5.5 (H 완충액)로 투석하고 양이온 교환 칼럼 (SPFF, GE Healthcare Life Sciences)으로 로딩하고, 0.1% Triton X114, 0.1% Triton X100을 함유하는 H 완충액으로 밤새 세척하고, H 완충액으로 기준선으로 세척하고 이어서 300 mM 아르기닌 숙시네이트 pH 5.5로 용출시켰다. 이특이적 항체 분획을 모으고 크기 배척 크로마토그래피 칼럼 (S200, GE Healthcare Life Sciences) 상으로 로딩하였다. 정제된 항-IL-13/IL-33 이특이성을 함유하는 분획을 모으고, 투석하고 유리병에 넣었다.
인간 IL-33 세포 활성의 억제제로서 단일특이적 항-IL-33 항체 (10C12.38.H6.87Y.58I IgG4) 및 이특이적 항-IL-33/항-IL-13 이특이적 항체 10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4 (또한 본원에서 "10C12-IL-13 KIH IgG4"로서 언급됨)의 효능은 리포터 세포주 및 1차 인간 세포를 사용하는 세포 기반 차단 검정 둘다를 사용하여 조사하였다. 단일특이적 항-IL-33 IgG4 및 이특이적 항-IL-33/항-IL-13 IgG4 포맷은 데코이 수용체인, ST2-LZ의 세포 효능에 대해 시험하였다.
IL-33을 사용한 HEK-BLUE™ IL-33 세포의 자극은 강력한 NF-kB 및 AP-1 활성화를 유도하고, 이는 NF-κB/AP-1-구동된 SEAP 리포터 활성에 의해 측정되었다. 활성은 대조군 IgG4 항체의 첨가에 의해 방해 받지 않았다. 단일특이적 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 이특이적 항체 10C12-IL-13 KIH IgG4 둘다는 IL33 활성의 강력한 용량 의존적 억제를 나타냈고 각각 102.1 및 204.7 pM의 IC90 값을 갖는다 (도 19a). 예상된 바와 같이, 이특이적 항체 활성에 대한 IC90 값은 대략적으로단일특이적 대응물에 대해 수득된 값의 절반이다. 클론 둘다는 데코이 수용체인 ST2-LZ에 대해 보다 큰 억제를 나타냈다 (실시예 2 참조).
HEK-BLUE™ 세포를 사용한 세포기반 차단 검정에 추가로, 단일특이적 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 이특이적 항체 10C12-IL-13 KIH IgG4는 1차 세포에서 IL-33 활성의 억제에 대해 시험되었다. IL-33의 인간 호염구로의 첨가는 시그날 전달 분자 p38의 신속한 인산화를 유도하고 이것은 세포내 염색 방법을 사용하는 유동 세포측정에 의해 측정될 수 있다 (도 19b). CD123 마커를 첨가함에 의해, 호염구 활성은 벌크 말초 혈액 단핵구(PBMC) 집단 내에 조사될 수 있고 세포 단리를 위한 필요성을 제거한다 (도 19b). 이러한 유동 세포측정 기반 방법을 사용하여, 모노클로날 및 이특이적 항체 클론은 호중구에서 인산화된 p38 (포스포-p38)의 IL-33 유도 차단에 대해 조사되었다 (도 19c). 상기된 리포터 세포 데이터와 일치하여, 단일특이적 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 또는 이특이적 항체 10C12-IL-13 KIH IgG4의 첨가는 호중구에서 IL-33-유도된 포스포-p38 수준 내 용량-의존적 억제를 유도했다(도 19d). 대조군 IgG4 항체는 IL-33 시그날에 영향을 주지 않았다(도 19d).
이특이적 항체 10C12-IL-13 KIH IgG4의 인간 IL-33, 사이노 IL-33, 및 인간 IL-13으로의 결합 역학은 BIACORE® 3000 SPR을 사용하여 평가하였다(도 20). 상이한 항체 제제를 사용한 3개의 실험에 걸친 상기 항체의 평균 KD은 표 4에 나타낸다.
표 4: 이특이적 항체 10C12 -IL-13 KIH IgG4의 IL-33 및 IL-13으로의 K D
Figure pct00004
재료 및 방법
HEK-BLUE™ IL-33/ IL-1β 수용체 세포는 제조원(Invivogen (Catalog # hkb-il33))으로부터 구입하였다. 300 pg/ml IL-33 리간드 (IL-33 N-His, 서열식별번호: 314) 및 예비-희석된 항-IL-33 항체:대조군 IgG4, 항-IL33 10C12.38.H6.87Y.581 IgG4, 10C12-IL13 KIH IgG4, 또는 ST2 LZ (서열식별번호: 319)를 혼합하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 항체 및 리간드 혼합물은 HEK-BLUE™ IL-33/ IL-1β 세포로 이전시키고, 웰당 50,000 세포로 씨딩하였다. CO2 항온처리기에서 20시간 동안 37 ℃에서 항온처리한 후, 세포배양상등액 중 SEAP 활성은 알칼린 포스파타제 (QUANTI-BLUE™, InvivoGen)의 기질과 항온처리한 후 630nm에서 광학 밀도 (OD) 값을 기록함에 의해 측정하였다.
인간 PBMC는 30분 동안 10ng/ml의 재조합 인간 IL33으로 자극하였다. 자극 전, 세포는 1시간 동안 증가하는 농도의 대조군 IgG4, 항-IL33 10C12.38.H6.87Y.581 IgG4, 또는 10C12-IL-13 KIH IgG4로 처리하였다. 세포는 FACS 분석을 위해 고정시켰다. 호염구는 플루오레세인 이소티오시아네이트-항-CD123 (11-1239-42; eBioscience)을 사용하여 동정하였다. IL-33 활성은 제조업자의 지침에 따라 피코에리트린-항-포스포-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (6908S; Cell Signaling)로 세포내 염색하여 분석하였다. 데이터는 게이팅된 CD123+ 호중구 집단 내 포스포-p38 시그날의 평균 형광 강도 (MFI)로서 나타낸다.
이특이적 항체10C12-IL13 KIH IgG4의 인간 IL-33, 사이노 IL-33, 및 인간 IL-13으로의 결합 역학은 BIACORE® 3000 (GE Healthcare) 상에서 SPR을 사용하여 평가하였다. 항-인간 Fab (GE Healthcare)는 제조업자의 프로토콜에 따라 아민 기반 커플링을 통해 CM5 센서 칩 상에 고정화시켰다. 이특이적 항체를 포획하고 결합은 인간 IL-33 (Genentech), 사이노 IL-33 (Genentech), 및 인간 IL-13 (Peprotech)에 대해 측정하였다. 1.56 내지 25 nM 범위를 갖는 사이토킨의 2배 농도 시리즈는 실험을 위해 사용되었다. 사이토킨의 결합에 대한 센서그램은 25 ˚C의 온도에서 30 μl/분의 유속으로 2분의 주입 시간을 사용하고, 10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.005% TWEEN®-20의 전개 완충액을 사용하여 기록하였다. 주입 후, 항체로부터 리간드의 해리는 전개 완충액에서 600초 동안 모니터링하였다. 표면은 40 μl의 10 mM 글라이신-HCl pH 2.1의 주입으로 결합 사이클 사이에서 재생시켰다. 전개 완충액만을 함유하는 블랭크를 공제한 후, 이특이적 항체에 결합하는 사이토킨에 대해 관찰된 센서그램은 제조업자에 의해 공급된 소프트웨어와 함께 1:1 랑그뮈르 결합 모델을 사용하여 분석하여 해리 상수 (KD)를 포함하는 역학 및 결합 상수를 계산하였다.
실시예 9. 항-IL-33 항체 10C12 . 38.H6 . 87Y.58I IgG4의 억제 활성 및 결합 역학과 다른 항-IL-33 항체의 비교
A. 도입
항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4의 차단 활성 및 결합 역학은 하기 국제 특허원 공보 WO 2014/164959에 기재된 20개 항-IL-33 항체(본원에서 RG1-RG20으로 언급됨)의 차단 활성 및 결합 역학과 직접 비교하였다. 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4와 비교되는 WO 2014/164959 기원의 항-IL-33 항체는 표 5에 나타내고, 이는 WO 2014/164959로부터의 항체 명칭, 본원에 사용된 약어명, 불변 영역 (IgG1 또는 IgG4), 및 각각의 항체의 VH 및 VL에 대한 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열 서열식별번호를 지적한다.
표 5: WO 2014/164959로부터의 항-IL-33 항체
Figure pct00005
B. 수용체 세포주를 사용한 세포 기반 IL-33 차단 검정
인간 IL-33 세포 활성의 억제제로서 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 표 5에 열거된 각각의 항-IL-33 항체(RG1-RG20)의 효능은 HEK-BLUE™ 수용체 세포주를 사용한 세포 기반 IL-33 차단 검정을 사용하여 조사하였다(도 21a). IL-33 활성의 천연 억제제인 sST2 (sST2-LZ)는 양성 대조군으로서 사용하였다. 인간 IL-33을 사용한 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 세포의 자극은 강력한 NF-κB 및 AP-1 활성화를 유도하였고, 이는 NF-κB/AP-1-구동된 SEAP 리포터 활성에 의해 측정하였다 (도 21b). IL-33 활성은 대조군 IgG4 항체의 첨가에 의해 방해 받지 않았다 (도 21a). 시험된 대부분의 항-IL-33 항체는 인간 IL-33 활성의 용량-의존적 억제를 나타냈고 (도 21a), IC50 값은 도 21c에 열거되어 있다. 2개의 항체만이 데코이 수용체인 sST2-LZ (IC50 = 27 pM)에 대해 보다 큰 억제를 나타냈다. 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4는 최고 차단 활성 (IC50 = 2.4 pM)을 나타냈고, 이어서 RG18 항체 (IC50 = 11 pM)로서 나타났다. 최고 차단 활성을 갖는 5개의 RG 항체 (RG3, RG4, RG7, RG8, 및 RG18) 는 sST2-LZ 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4와 함께 도 21d에 나타낸다.
유사하게, 시노몰구스 몽키 IL-33 세포 활성의 억제제로서 각각의 항체의 효능은 HEK-BLUE™ 수용체 세포주를 사용한 세포 기반 차단 검정을 사용하여 조사하였다 (도 22a). 사이노 IL-33을 사용한 HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 세포의 자극은 강력한 NF-κB 및 AP-1 활성화를 유도하였고, 이는 NF-κB/AP-1-구동된 SEAP 리포터 활성에 의해 측정하였다 (도 22b). 일반적으로, 시험된 항-IL-33 항체는 인간 IL-33에 대한 차단 활성과 비교하여 시노몰구스 몽키 IL-33 활성의 보다 약한 용량-의존적 억제를 나타냈고 IC50 값은 도 21c에 열거되어 있다. 데코이 수용체 sST2-LZ는 최고 차단 활성 (IC50 = 30 pM)을 나타냈고 이어서 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 (IC50 = 4.2 nM)가 나타났고 이어서 RG20 항체 (IC50 = 6.1 nM)로서 나타났다. 최고 차단 활성을 갖는 5개의 RG 항체(RG3, RG9, RG10, RG12, 및 RG20)는 sST2-LZ 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4와 함께 도 22c에 나타낸다. 나타낸 것 중, 인간 IL-33에 대해 높은 차단 활성을 나타내는 RG18 항체는 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4에 상대적으로 시노몰구스 몽키 IL-33에 대해 14배 약한 차단 활성을 나타냈다. 도 22d는 상기 검정에서 비-차단인 RG 항체의 용량-반응 곡선을 보여준다.
재료 및 방법
HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 수용체 세포 (InvivoGen, hkb-il33)에서 IL-33 경로 활성은 제조업자의 지침에 따라 수행되는 비색측정 검정을 사용하여 측정하였다. HEK-BLUE™ IL-33/IL-1β 수용체 세포는 2 mM L-글루타민, 10% FBS, 50 U/ml 페니실린, 50 μg/mL 스트렙토마이신, 100 μg/mL NORMOCIN™ (InvivoGen, ant-nr-1)이 보충된 DMEM 4.5 g/l 글루코스에서 96웰-플레이트에 웰당 500,000 세포로 분주하였다. 세포는 인간 IL-33 (hIL-33; R&D Systems, #3625-IL-010/CF) 또는 내부 생성된 시노몰구스 몽키 N-말단 6-His-태그되고 C-말단 Avi-태그된 IL-33 (S112-T270)의 139 nM 내지 0.003 pM 범위의 5배 연속 희석물과 항온처리하였다(실시예 2 참조). 차단 실험을 위해, 세포는 90 nM 내지 0.51 pM 범위의 항체 또는 sST2-LZ (sST2 (M1-F328) C-말단 류신 지퍼 (LZ)-Flag-His)의 3배 연속 희석물과 배합된 10pM의 인간 IL-33 또는 5pM 사이노 IL-33과 항온처리하였다. 항체 또는 sST2-LZ는 세포에 첨가하기 전 37 ℃에서 30분 동안 IL-33과 예비 항온처리하였다. 각각의 반응은 웰 당 200 μL의 최종 용적을 가졌고 각각의 조건은 3회 시험하였다. 상기 세포는 37 ℃에서 5% CO2를 갖는 습화된 항온처리기에서 항온처리하고 상등액은 20시간 후 수거하였다. SEAP 리포터 활성은 QUANTI-BLUE™ 검정을 사용하여 검출하였다 (InvivoGen, rep-qb1). 20 μl의 상등액은 편평한 96-웰 플레이트에서 80 μl의 용해되고 여과된 QUANTI-BLUE™ 시약에 첨가하고 37 ℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. SEAP 수준은 620nm에서 분광측정기를 사용하여 측정하였다.
C. IL-33 활성에 대한 천연 킬러 ( NK ) 1차 세포 검정
상기된 리포터 세포 검정에 추가로, 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 표 5에 열거된 각각의 항-IL-33 항체 (RG1-RG20)는 또한 1차 인간 천연 킬러 (NK) 세포에서 IL-33 활성의 억제를 위해 시험하였다 (도 23a -23d). IL-33 및 IL-12는 NK 세포 자체를 활성화시킬 수 없지만 함께 이들은 공동 상승 작용하여 NK 세로로부터 IFN-γ를 유도할 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Smithgall 등 Int. Immunol. 20(8): 1019-1030, 2008). 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 항-IL-33 항체 RG1-RG20의 억제 활성은 천연 억제제, sST2 (sST2-LZ)와 비교하였다. IL-12의 존재하에 새롭게-정제된 NK 세포 (도 23a)의 증가하는 농도의 인간 IL-33으로의 자극은 ELISA에 의한 측정시 24시간 후 강력한 IFN-γ 분비를 유도하였다(도 23b). 시험된 대부분의 항-IL-33 항체는 인간 IL-33 활성의 용량-의존적 억제를 나타냈고(도 23c), IC50 값은 도 23d에 열거한다. 섹션 B에서 상기된 리포터 세포주 결과와 유사하게, 단지 2개의 항체는 데코이 수용체 sST2-LZ에 대해 보다 큰 억제를 나타냈다 (IC50 = 150 pM). 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4는 최고 차단 활성 (IC50 = 30 pM)을 나타냈고, 이어서 RG18 항체 (IC50 = 97 pM)로서 나타났다. 최고 차단 활성을 갖는 5개의 RG 항체 (RG7, RG8, RG9, RG18, 및 RG19)는 sST2-LZ 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4와 함께 도 23e에 나타낸다. 도 23f-23i는 5개의 RG 항체, 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4, 및 sST2-LZ 그룹 간의 IC50 곡선을 비교한다.
재료 및 방법
PBMC는 밀도 구배 원심분리에 의해 새로운 전혈로부터 단리시켰다. 전혈은 PBS 중에서 2배 희석하고, LEUCOSEP™ 튜브 (Greiner Bio One, #227290) 중 FICOLL®-Paque (GE Healthcare, #17-1440-03) 상에 적층시키고, 실온에서 20분 동안 2,000 RPM에서 원심분리하였다. PBMC를 함유하는 상간 층은 흡입여과하고 새로운 튜브로 이전시키고 PBS로 2회 세척하였다. NK 세포는 제조업자의 지침에 따라 NK 세포 단리 키트 (Miltenyi Biotec, 130-092-657)를 사용하여 단리하였다. 세포의 순도는 CD56-APC (BD Pharmingen, 555518) 및 CD3-FITC (BD Pharmingen, 561807) 염색으로 유동 세포측정기에 의해 분석하였다.
단리된 NK 세포 (>90% 순도)는 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린, 및 100 μg/mL 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640에서 5x105 세포/ml의 최종 농도로 편평한-바닥 96웰 플레이트에 분주하였다. 세포는 1 ng/ml의 인간 IL-12 (hIL-12; R&D Systems, #219-IL-025/CF) 및 139 nM 내지 0.003 pM의 인간 IL-33 (huIL-33; R&D Systems, #3625-IL-010/CF) 단독의 5배 연속 희석물, 또는 100 nM 내지 0.56 pM의 항체 또는 sST2-LZ의 3배 연속 희석물과 조합된 260pM의 huIL-33과 항온처리하였다. 항체 또는 sST2-LZ는 세포에 첨가하기 전에 37 ℃에서 30분 동안 IL-33으로 예비 항온처리하였다. 각각의 반응은 웰당 200 μl의 최종 용적에 있고 각각의 조건은 3회 시험되었다. 상기 세포는 5% CO2를 갖는 습화된 항온처리기에서 37 ℃에서 밤새 항온처리하였다. 상등액은 24시간 후 수거하였다. 배양 상등액 중 인간 IFN-γ의 수준은 제조업자의 지침에 따라 ELISA (R&D Systems, #DY285)에 의해 측정하였다. 각각의 플레이트에 대해, % IL-33 활성은 다음과 같이 계산하였다:
% IL-33 활성 = 100 x (OD450샘플 - OD450 IL-33 부재) / (OD450항체 부재 - OD450IL-33 부재).
D. 인간 호중구에서 IL-33-유도된 p38 MAPK ( Thr180 / Tyr182 ) 인산화
항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 표 5에 열거된 각각의 항-IL-33 항체 (RG1-RG20)는 또한 1차 인간 호중구에서 IL-33 활성의 억제에 대해 시험되었다. 인간 호중구로의 IL-33의 첨가는 시그날 전달 분자 p38 MAPK (Thr180/Tyr182)의 신속한 인산화를 유도하였고, 이것은 세포 내 염색 방법을 사용하는 유동 세포측정기에 의해 측정될 수 있다. CD123 마커를 첨가함에 의해, 호중구 활성은 벌크 PBMC 집단 내에 조사될 수 있고, 세포 단리를 위한 필요성을 제거한다.
상기 유동 세포측정 기반 방법을 사용하여, 항-IL-33 항체는 호중구에서 포스포-p38의 IL-33-매개된 유도의 차단에 대해 조사되었다(도 24a). IL-33의 PBMC로의 첨가는 호중구 집단에서 p38 MAPK (Thr180/Tyr182) 인산화 (phospho-p38)에서 용량-의존적 증가를 유도하였다(도 24b). 상기된 리포터 세포주 및 NK 세포 데이터와 일치하여, 항-IL-33 항체의 첨가는 호중구에서 IL-33-유도된 포스포-p38에서 용량-의존적 억제를 유발하였고(도 24c), IC50 값은 도 24d에 열거되어 있다. IC50 곡선을 사용하여 측정된 바와 같은 최고 차단 활성을 갖는 항체는 RG11 (IC50 = 0.14 pM), 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 (IC50 = 0.15 pM)이고, 이어서 RG18 항체 (IC50 = 0.38 pM)이다. 최고 차단 활성을 갖는 5개의 RG 항체 (RG3, RG4, RG8, RG11, 및 RG18)는 sST2-LZ 및 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4와 함께 도 24e에 나타낸다. 도 24f-24i는 5개의 RG 항체, 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4, 및 sST2-LZ 그룹 간의 IC50 곡선을 비교한다.
IC50 곡선은 단지 6개 지점으로부터 만들어지기 때문에, 상기된 결과는 특정 항체 농도에서 분석되었다 (도 24j-24k). 0.4 nM (도 24j) 또는 2 nM (도 24k)의 항-IL-33 항체 또는 sST2-LZ 농도에서 수득된 평균 형광성 강도(MFI)를 플롯팅하였다. 도 24j 및 24k에서의 플롯은 최고에서 최저 차단 활성으로부터 분류된 항체를 나타낸다. 2개의 농도에서, 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4는 최고 차단 활성 및 이어서 최저 MFI 값을 나타냈다. 리포터 세포주 및 NK 1차 세포 데이터와 일치하여, RG18 항체는 인간 IL-33에 대한 차단 활성 측면에서 상위 3개 항체 중에 있었다.
재료 및 방법
PBMC는 밀도 구배 원심분리에 의해 새로운 전혈로부터 단리시켰다. 전혈은 PBS 중에서 2배 희석시키고, LEUCOSEPTM 튜브 (Greiner Bio One, #227290) 내 FICOLL®-Paque (GE Healthcare, #17-1440-03) 상에 적층시키고, 실온에서 20분 동안 2000RPM에서 원심분리하였다. PBMC를 함유하는 상간 층은 흡입여과하고 새로운 튜브로 이전시키고 PBS로 2회 세척하였다. 단리된 PBMC는 50 μl의 PBS 중에서 100만 세포/웰로 v-바닥 96웰 플레이트에 분주하였다. 항-IL-33 항체, sST2-LZ, 또는 이소형 대조군 항체의 5배 연속 희석액 (10 nM로부터 3.2 pM의 범위)을 37 ℃에서 30분 동안 500 pM (최종 농도)의 인간 IL-33 (R&D Systems, #6325-IL/CF)로 예비 항온처리하였다. 50 μl의 혼합물을 웰당 100 μ의 최종 용적을 위해 PBMC에 첨가하였다. 세포는 5% CO2를 갖는 습화된 항온처리기에서 37 ℃에서 20분 동안 항온처리하였다. 상기 반응은 100 μl의 예비-가온된 BD PHOSFLOW™ fix 완충액 (BD Biosciences, 557870)의 첨가로 종료시키고 37 ℃에서 10분 동안 항온처리하였다. 세포는 5분 동안 1500 RPM에서 원심분리에 의해 펠렛화하였고 상등액은 버렸다. 세포 펠렛은 200 μl의 유동 세포측정 완충액 (1X PBS, 0.5% BSA, 0.05% 아지드화나트륨)으로 세척하였다. 세포는 100 μl의 냉 BD PHOSFLOW™ Perm 완충액 II (BD Biosciences, 558052)를 느리게 첨가함에 의해 침투성이 되도록 하고 30분 동안 빙상에서 항온처리하였다. 세포 펠렛은 유동 세포측정 완충액 중에서 2회 세척하였다. 호염구에서 p38의 IL-33 의존성 인산화는 각각의 샘플을 항-포스포-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)-PE (1:50에서 사용되는, Cell Signaling Technology, 6908S) 및 항-CD123-FITC (1:10에서 사용되는, eBiosciences, 11-1239-42)로 염색시킴에 의해 분석하였다. 샘플은 암실에서 1시간 동안 실온에서 항온처리하였다. 세포는 펠렛화하고 유동 세포측정 완충액으로 2회 세척하였다. 세포는 BD FACSCALIBUR™ 상에서 분석하여 CD123+ 호염구에서 포스포-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)의 평균 형광성 강도(MFI) 수준을 측정하였다.
E. 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 바와 같은 IL-33에 결합하는 항-IL-33 항체
항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 표 5에 열거된 IL-33에 대한 각각의 항-IL-33 항체 (RG1-RG20)의 결합 역학은 BIACORE® T200 장치 (GE Healthcare) 상에서 표면 플라스몬 공명(SPR)을 사용하여 측정하였다. 항-인간 Fc 또는 항-쥐 Fc (GE Healthcare, 각각 #BR-1008-39 또는 BR-1008-38) 는 제조업자의 프로토콜에 따라 아민-기반 커플링을 통해 CM5 센서 칩 상에 고정화시켰다. 표면은 역학 연구를 위해 모노클로날 인간 IgG4 및 모노클로날 쥐 IgG를 포획하는데 사용되었다. 항체 결합은 인간 IL-33 (R&D systems, #3625-IL-010/CF) 및 사이노 IL-33 N-His (서열식별번호: 317) (Genentech, Inc.)에 대해 측정하였다. 3.7 내지 100 nM의 범위를 갖는 사이토킨의 3배 농도 시리즈를 실험을 위해 사용하였다. IL-33의 결합에 대한 센서그램은 0.01 M N-(2-아세트아미도)이미노디아세트산 (ADA) pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.05% TWEEN®-20의 전개 완충액으로 30 μl/분의 유속으로 4분의 주입 시간을 사용하여 기록하였다. 주입 후, 항체로부터 리간드의 해리는 전개 완충액 중에서 10분 동안 모니터링하였다. 표면은 3 M 염화마그네슘 또는 글라이신-HCl pH 1.7의 주입과 함께 사이클 사이에서 재생시켰다. 모든 결합 실험은 25 ℃ 및 37˚C의 온도에서 수행하였다. 전개 완충액만을 함유하는 블랭크를 공제한 후, 항-IL-33 항체에 결합하는 IL-33에 대해 관찰된 센서그램은 제조업자에 의해 공급된 소프트웨어와 함께 1:1 랑뮈르 결합 모델을 사용하여 분석하여 해리 상수 (KD)를 포함하는 역학 및 결합 상수를 계산하였다. 해리 반감기 (t1/ 2)는 역학적 속도 상수로부터 계산하였다. KD (M) = koff/kon 및 t1/2 (분) = ln(2)/(60*koff). 표 6은 25 ℃에서 인간 IL-33에 결합하는 것에 대해 결합 역학의 결과를 보여준다. 표 7은 37˚C에서 인간 IL-33에 결합하는 것에 대한 결합 역학 결과를 보여준다. 표 8은 25 ℃에서 사이노 IL-33에 결합하는 것에 대해 결합 역학 결과를 보여준다. 표 9는 37˚C에서 사이노 IL-33 결합하는 것에 대해 결합 역학 결과를 보여준다. 표 6 내지 9에서, *IC는 상기 결과가 항체의 약한 포획이 관찰되어 불량한 결합 데이터를 유도하기 때문에 결정적이지 못함을 지적한다.
각각의 조건에서, 항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4는 KD에 의한 측정시, 항-IL-33 항체 RG1-RG20과 비교하여 인간 또는 사이노 IL-33에 대해 최고 친화성을 가졌다 (표 6 내지 9). 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4는 RG18인 인간 IL-33에 대해 최고 친화성을 갖는 RG 항체와 비교하여 대략 2 내지 4배 개선된 친화성을 가졌다 (표 6 및 7). 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4는 또한 25 ℃에서 RG2 이고 37˚C에서 RG10인 사이노 IL-33에 대해 최고 친화성을 갖는 RG 항체와 비교하여 대략 2 내지 4배 개선된 친화성을 가졌다.
표 6: 25 ℃에서 인간 IL-33에 결합하는 것에 대한 항-IL-33 항체의 결합 역학.
Figure pct00006
표 7: 37˚C에서 인간 IL-33에 결합하는 것에 대한 항-IL-33 항체의 결합 역학.
Figure pct00007
표 8: 25 ℃에서 사이노 IL33에 결합하는 것에 대해 항-IL-33 항체의 결합 역학.
Figure pct00008
표 9: 37˚C에서 사이노 IL33에 결합하는 것에 대한 항-IL-33 항체의 결합 역가
Figure pct00009
F. 항-IL-33 항체의 차단 활성을 측정하기 위한 경쟁 결합 ELISA
재료
재조합 인간 ST2-Fc 키메라 단백질 및 인간 IL-33 단백질은 제조원(R&D Systems) (Minneapolis, MN)으로부터 수득되었다. 재조합 몽키 IL-33 단백질은 제조원(Genentech)에서 제조하였다. 인간 및 사이노 IL-33 단백질 둘다는 제조업자의 프로토콜에 따라 EZ-LINK® NHS-PEG4-비오틴 (Thermo Scientific; Rockford, IL)을 사용하여 비오틴 표지시켰다.
실험 방법
항-IL-33 항체 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4 및 표 5에 열거된 각각의 항-IL-33 항체 (RG1-RG20) 가 인간 IL-33 또는 사이노 IL-33의 인간 ST2 수용체로의 결합을 차단하는 능력은 경쟁 결합 ELISA에서 시험되었다. 간략하게, 코팅 완충액 (50 mM 탄산나트륨, pH 9.6) 중에서 제조된 1 μg/ml의 재조합 인간 ST2-Fc 키메라 단백질은 384-웰 MAXISORP® 플레이트(Nalgene Nunc International; Rochester, NY) 상에 코팅시키고 4°C에서 밤새 항온처리하였다. 다음 날에, 비-특이적 결합은 0.5% (w/v)의 소 혈청 알부민 (BSA)의 용액을 함유하는 PBS로 차단시켰다. 검정 완충액 (25 mM PBS, pH 7.2, 0.1% BSA, 0.05% TWEEN®-20) 중에서 제조된 고정된 농도의 비오티닐화된 인간 또는 사이노 IL-33은 단독의 동일한 용적의 연속으로 희석된 항-IL-33 항체 또는 검정 완충액과 혼합하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 비오티닐화된 인간 IL-33 또는 사이노 IL-33의 최종 검정 농도는 각각 20 pM 및 45 pM이었고, 각각의 항체의 최종 검정 농도는 0 내지 300 nM이었다. 예비 혼합된 용액은 ST2-Fc 코팅된 플레이트에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 비오티닐화된 IL-33의 코팅된 ST2-Fc로의 결합은 스트렙타비딘 폴리-HRP80 (Fitzgerald; Buckinghamshire, UK) 및 3,3',5,5'-테트라메틸 벤지딘 (TMB) 마이크로웰 퍼옥시다제 기질 시스템 (KPL; Gaithersburg, MD)의 연속적 첨가에 의해 검출되었다. 흡광도 (450 nm)는 MULTISKAN ASCENT® 플레이트 판독기 (Thermo Scientific; Rockford, IL)를 사용하여 기록하였다. 항 IL-33의 존재하에 비오틴-IL-33의 ST2로의 결합 활성(%)은 항체 농도의 함수로서 플롯팅하였다. 생성된 데이터는 4개-파라미터 방정식에 피팅하여 프리즘 소프트웨어 (Graphpad Software; La Jolla, CA)를 사용하는 각각의 항체에 대한 IC50 값을 측정하였다 (도 25a 및 25b). 각각의 항체의 최대 차단 (%)는 단독의 IL-33을 사용한 시그날과 백그라운드 측정 간의 차이와 상대적으로 항체의 존재하에 측정된 시그날의 감소 비율로서 계산하였다. 각각의 항체에 대한 IC50 및 최대 차단 활성은 표 10에 요약한다. 결과는 3개의 독립적 실험의 평균 데이터를 보여준다.
표 10에 보여지는 바와 같이, 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4는 시험된 임의의 항체 중 가장 효율적인 차단제였고, WO 2014/164959 기원의 모든 항체와 비교하여 IC50 값이 낮았고 최대 차단은 높았다.
표 10: 항-IL-33 항체에 의한 비오틴- huIL -33 또는 비오틴- cyIL -33의 huST2 로의 결합 차단
Figure pct00010
다른 양태
이전의 발명은 설명 및 이해를 명백히 할 목적의 실시예에 의해 일부 상세하게 기재되었지만, 기재 내용 및 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 말아야 한다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학적 문헌의 기재 내용은 전문이 본원에 참조로 인용된다.
<110> Genentech, Inc. F. 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Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Tyr Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 345 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 345 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys 100 105 <210> 346 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 346 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agttatggca tgcattgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagaaa taaatactat 180 acagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatgg acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagagg 300 tatatcagca gctattatgg ggggttcgac ccctggggcc agggagccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 347 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 347 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagt agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaggtcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaac tggatatcaa g 321 <210> 348 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 348 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asp Thr Leu His 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Thr Phe Tyr Tyr Phe Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 349 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 349 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Arg 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 350 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 350 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggta gtggaagtag cacagactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatt tccagagaca attccaggga cacgctgcat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaacgttc 300 tactacttct acggtttgga cgtctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctca 357 <210> 351 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 351 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctttaagaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagttc ctaaggtcct aatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180 cggttcagtg gcagtggatc tgggacagtt ttcactctca ccatcagcag cctgcagact 240 gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tatagcagtg ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 352 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 352 Gln Val Leu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Leu Arg Tyr Asn Trp Lys Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 353 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 353 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Arg Pro 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Ser Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 354 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 354 caggtgcttc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggccac agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggatc cactttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acaatggtgg cacaaactat 180 gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggaattga gcaggctgag atctgacgac acggccgtat attactgtgc gagagagttg 300 cggtataact ggaagtcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 355 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 355 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagtcacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttggc aggccctact tagcctggta ccaacagata 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tgacatccca 180 gacaggttca gtggcaatgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag tagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatgata attcccctta tacttttggc 300 caggggacca ggctggagat caaa 324 <210> 356 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 356 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ser Asp Leu Arg Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser His Tyr Ser Thr Ser Trp Phe Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 357 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 357 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 358 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 358 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaac ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttaga agctttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggaatt ggtctcagat ctcaggacta gtggtggtag tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gctcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaagccac 300 tatagcacca gctggttcgg gggctttgac tactggggcc agggaaccct ggtcactgtc 360 tcctca 366 <210> 359 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 359 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgctt ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaccaa cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 360 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 360 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Asn Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Leu Gly Thr Thr Thr Thr Phe Leu Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 361 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 361 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 362 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 362 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacgtttagc agctatgtca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtggta atggtggtag cacaaactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctggaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatcactg 300 ggaactacca cgactttttt ggggtttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 363 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 363 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacatat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 364 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 364 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ser Gln Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 365 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 365 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Pro Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 366 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 366 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttattact ggagctggat ccggcagccc 120 ccagggaagg gactggagtt gattgggtat atttattaca gtgggagcac caattataac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatatct gtagacacgt ccaagaacca cttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtatatt actgtgcgag atcccagtat 300 accagtagtt ggtacggttc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360 tca 363 <210> 367 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 367 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc acctggttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tacaaggtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggccagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 368 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 368 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser His Asn Gly Asn Ser His Tyr Val Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 369 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 369 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 370 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 370 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cctctggtta cacctttaac agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagctccc acaatggtaa cagtcactat 180 gtacagaagt tccagggcag agtctccatg accacagaca catccacgag tacagcctac 240 atggaactga ggagccttag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagacactcg 300 tataccacca gctggtacgg gggttttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 371 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 371 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctcagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggtcagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321

Claims (348)

  1. 약 500 pM 이하의 KD로 인간 및 사이노몰구스 원숭이 (cyno) 인터류킨-33 (IL-33) 둘 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 약 100 fM 내지 약 500 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 15 pM 내지 약 180 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 15 pM 내지 약 140 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 100 fM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 100 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 125 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  10. 청구항 1, 2, 6, 및 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합하는, 항체.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제할 수 있는, 항체.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 억제는 세포 기반 차단 검정을 사용하여 측정되는, 항체.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 0.001 μg/ml 내지 약 0.5 μg/ml의 90% 저해된 농도 (IC90)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제하는, 항체.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 IC90은 약 0.002 μg/ml 내지 약 0.25 μg/ml인, 항체.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 IC90은 약 0.17 μg/ml인, 항체.
  17. 청구항 15에 있어서, 상기 IC90은 약 0.004 μg/ml인, 항체.
  18. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 800 fM 내지 약 10 pM의 50% 저해된 농도 (IC50)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제하는, 항체.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 IC50은 약 1 pM 내지 약 5 pM인, 항체.
  20. 청구항 19에 있어서, 상기 IC50은 약 2.5 pM인, 항체.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 1 nM 내지 약 5 nM의 IC50로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제하는, 항체.
  22. 청구항 21에 있어서, 상기 IC50은 약 4 nM인, 항체.
  23. 청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2); 및
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3).
  24. 청구항 23에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15).
  25. 청구항 23에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 16);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQTPEKRLEWVA (서열식별번호: 17);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR (서열식별번호: 18); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVAVSS (서열식별번호: 19).
  26. 청구항 23에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12) 또는 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 20);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13) 또는 WVRQAPGKGLEWVS (서열식별번호: 21);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 22), RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 23), RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 24), 또는 RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15).
  27. 청구항 23 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6).
  28. 청구항 27에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28).
  29. 청구항 27에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC (서열식별번호: 29);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 30);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC (서열식별번호: 31); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTKLEIK (서열식별번호: 32).
  30. 청구항 27에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 33), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 34), 또는 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 35); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28).
  31. 청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66) 또는 SIYYSGRTYYNPALKS (서열식별번호: 67); 및
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68).
  32. 청구항 31에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75).
  33. 청구항 31에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 76);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGNGTTVTVSS (서열식별번호: 78).
  34. 청구항 31에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72), QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 76) 또는 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 77);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75) 또는 WGNGTTVTVSS (서열식별번호: 78).
  35. 청구항 31 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71).
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82).
  37. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSX1S (서열식별번호: 62) (여기서 X1은 Met, Leu, 또는 Val임);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDX1VKG (서열식별번호: 63) (여기서 X1은 Ser 또는 Ala임);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGX1X2FFEV (서열식별번호: 64) (여기서 X1은 Asn 또는 Asp이고, 그리고 X2는 Trp 또는 Phe임);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6).
  38. 청구항 37에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6).
  39. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  40. 청구항 39에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15).
  41. 청구항 40에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  42. 청구항 39 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28).
  43. 청구항 42에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기의 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  44. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  45. 청구항 39에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 16);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQTPEKRLEWVA (서열식별번호: 17);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR (서열식별번호: 18); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVAVSS (서열식별번호: 19).
  46. 청구항 45에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  47. 청구항 39, 45, 및 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC (서열식별번호: 29);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 30);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC (서열식별번호: 31); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTKLEIK (서열식별번호: 32).
  48. 청구항 47에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기의 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  49. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 38의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 39의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  50. 청구항 39에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 12) 또는 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 20);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 13) 또는 WVRQAPGKGLEWVS (서열식별번호: 21);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 22), RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 23), RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 24), 또는 RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (서열식별번호: 14); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 15).
  51. 청구항 50에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  52. 청구항 39, 50, 및 51 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 25);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPRLLIF (서열식별번호: 26);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 27), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 33), GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 34), 또는 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC (서열식별번호: 35); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 28).
  53. 청구항 52에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  54. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 41의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  55. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPX1LKS (서열식별번호: 90) (여기서 X1은 Ser 또는 Ala임);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71).
  56. 청구항 55에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71).
  57. 청구항 55에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPALKS (서열식별번호: 67);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71).
  58. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  59. 청구항 58에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 72);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTTVTVSS (서열식별번호: 75).
  60. 청구항 59에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  61. 청구항 58 내지 60 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82).
  62. 청구항 61에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  63. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  64. 청구항 59에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  65. 청구항 58, 59, 및 64 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82).
  66. 청구항 65에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  67. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 86의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  68. 청구항 58에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR (서열식별번호: 76);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIRQPPGKGLEWIG (서열식별번호: 73);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR (서열식별번호: 74); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGNGTTVTVSS (서열식별번호: 78).
  69. 청구항 68에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  70. 청구항 58, 68, 및 69 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (서열식별번호: 79);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQAPRLLIY (서열식별번호: 80);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (서열식별번호: 81); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 82).
  71. 청구항 70에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  72. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 88의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 89의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  73. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYX1MN (서열식별번호: 97) (여기서 X1은 Trp, Phe, 또는 Tyr임);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNX1YX2THYAESVKG (서열식별번호: 98) (여기서 X1은 Asn, Asp, Ser, 또는 Ala이고, 그리고 X2은 Ser 또는 Ala임);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGX1X2YINV (서열식별번호: 99) (여기서 X1은 Asp 또는 Asn이고, 그리고 X2는 Trp 또는 Phe임);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGX1SFLN (서열식별번호: 100) (여기서 X1은 Met, Val, 또는 Leu임);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114).
  74. 청구항 73에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNNYSTHYAESVKG (서열식별번호: 104);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGDWYINV (서열식별번호: 109);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGMSFLN (서열식별번호: 112);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114).
  75. 청구항 73에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNNYSTHYAESVKG (서열식별번호: 104);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWYINV (서열식별번호: 110);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGMSFLN (서열식별번호: 112);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114).
  76. 청구항 73에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: NYWMN (서열식별번호: 101);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EITLKFNDYSTHYAESVKG (서열식별번호: 105);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWYINV (서열식별번호: 110);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDKFGVSFLN (서열식별번호: 115);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: VASSQGS (서열식별번호: 113); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKDIPYT (서열식별번호: 114).
  77. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 134의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 135의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  78. 청구항 77에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS (서열식별번호: 117);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWMA (서열식별번호: 119);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR (서열식별번호: 121); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 124).
  79. 청구항 78에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  80. 청구항 77 내지 79 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 126);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 128);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC (서열식별번호: 130); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 132).
  81. 청구항 80에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 135의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  82. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 134의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 135의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  83. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 136의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 137의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  84. 청구항 83에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 118);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWMA (서열식별번호: 120);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 122) 또는 RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 123); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 125).
  85. 청구항 84에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  86. 청구항 83내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (서열식별번호: 127);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 129);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (서열식별번호: 131); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 133).
  87. 청구항 86에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 137의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  88. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 136의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 137의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  89. 청구항 83에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열식별번호: 118);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWMA (서열식별번호: 120);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 122) 또는 RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열식별번호: 123); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 125).
  90. 청구항 89에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 138의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  91. 청구항 83, 89, 및 90 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (서열식별번호: 127);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGQPPKLLIF (서열식별번호: 129);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (서열식별번호: 131); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 133).
  92. 청구항 91에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 139의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  93. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 138의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 139의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  94. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLX1X2INYVKDYAESVKG (서열식별번호: 161) (여기서 X1은 Asn 또는 Ser이고, 그리고 X2은 Ser 또는 Ala임);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166).
  95. 청구항 94에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLNSINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 159);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166).
  96. 청구항 94에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLSSINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 162);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166).
  97. 청구항 94에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: KFWMN (서열식별번호: 158);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: EIRLNAINYVKDYAESVKG (서열식별번호: 163);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: RNYGNWFFEI (서열식별번호: 160);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVDRYGISFMN (서열식별번호: 164);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNQGS (서열식별번호: 165); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QHSKEVPYT (서열식별번호: 166).
  98. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 183의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 184의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  99. 청구항 98에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN (서열식별번호: 167);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQSPEKGLEWVA (서열식별번호: 168);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR (서열식별번호: 169); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGAGTTVTVSS (서열식별번호: 170).
  100. 청구항 99에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 183의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  101. 청구항 98 내지 100 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC (서열식별번호: 175);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGQSPKLLIY (서열식별번호: 176);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC (서열식별번호: 177); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKLEIK (서열식별번호: 178).
  102. 청구항 101에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 184의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  103. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 183의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 184의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  104. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 185의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 186의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  105. 청구항 104에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFN (서열식별번호: 171);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVA (서열식별번호: 172);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCIR (서열식별번호: 173); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 174).
  106. 청구항 105에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 185의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  107. 청구항 104 내지 106 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 179);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WFQQKPGKAPKLLIY (서열식별번호: 180);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 181); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 182).
  108. 청구항 107에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 186의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  109. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 185의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 186의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  110. 청구항 105에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 187의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  111. 청구항 107에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 188의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  112. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 187의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 188의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  113. 청구항 105에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 189의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  114. 청구항 107에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  115. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 189의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 190의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  116. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKX1X2DTFYNQNFKD (서열식별번호: 192) (여기서 X1은 Asn 또는 Ser이고, 그리고 X2은 Gly 또는 Ala임);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199).
  117. 청구항 116에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKNGDTFYNQNFKD (서열식별번호: 193);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199).
  118. 청구항 116에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: DYNMN (서열식별번호: 191);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: DINPKSGDTFYNQNFKD (서열식별번호: 194) 또는 DINPKNADTFYNQNFKD (서열식별번호: 195);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: HYYYGSSYGGFVY (서열식별번호: 196);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNINVWLS (서열식별번호: 197);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASKLHT (서열식별번호: 198); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSYPLT (서열식별번호: 199).
  119. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 216의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 217의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  120. 청구항 119에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS (서열식별번호: 200);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVKQSHGKSLESIG (서열식별번호: 201);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR (서열식별번호: 202); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVAA (서열식별번호: 203).
  121. 청구항 120에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 216의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  122. 청구항 119 내지 121 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 208);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKAGNNPKLLIY (서열식별번호: 209);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 210); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGSGTNLELK (서열식별번호: 211).
  123. 청구항 122에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 217의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  124. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 216의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 217의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  125. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 218의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 219의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  126. 청구항 125에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFS (서열식별번호: 204);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGQGLESIG (서열식별번호: 205);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RATLTIDKSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR (서열식별번호: 206); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 207).
  127. 청구항 126에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 218의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  128. 청구항 125 내지 127 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 212);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKNPKLLIY (서열식별번호: 213);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 214); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 215).
  129. 청구항 128에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 219의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  130. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 218의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 219의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  131. 청구항 126에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 220의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  132. 청구항 128에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 219의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  133. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 220의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 219의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  134. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SYWIN (서열식별번호: 222);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIAPGSGFISYNELFKD (서열식별번호: 223);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: EFYYGSFYGGFAY (서열식별번호: 224);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: HASQNIHVWLS (서열식별번호: 225);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: KASTLHT (서열식별번호: 226); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQGQSSPLT (서열식별번호: 227).
  135. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 236의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 237의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  136. 청구항 135에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT (서열식별번호: 228);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WIKQRPGQGLEWIG (서열식별번호: 229);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR (서열식별번호: 230); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSA (서열식별번호: 231).
  137. 청구항 136에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 236의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  138. 청구항 135 내지 137 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC (서열식별번호: 232);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGNIPKLLIY (서열식별번호: 233);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC (서열식별번호: 234); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGAGTKLEVK (서열식별번호: 235).
  139. 청구항 138에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 237의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  140. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 236의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 237의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  141. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 247의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  142. 청구항 141에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT (서열식별번호: 238);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGQGLEWIG (서열식별번호: 239);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RVTITRDTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR (서열식별번호: 240); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 241).
  143. 청구항 142에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  144. 청구항 141 내지 143 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 242);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKLLIY (서열식별번호: 243);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 244); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 245).
  145. 청구항 144에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 247의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  146. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 247의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  147. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기 6개의 HVR을 포함하는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAX1H (서열식별번호: 248) (여기서 X1은 Met 또는 Ile임);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSX1X2NX3YATX4YX5ASVKG (서열식별번호: 249) (여기서 X1은 Arg 또는 Lys, X2은 Asn, Thr, 또는 Gly이고, X3은 Asn 또는 Ser이고, X4은 Ala 또는 Glu이고, 그리고 X5은 Ala 또는 Asp임);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: X1X2X3X4PFDY (서열식별번호: 250) (여기서 X1은 Leu 또는 Gln이고, X2 는 Gln, Gly, 또는 Phe이고, X3 는 Gln 또는 Gly이고, 그리고 X4은 Pro 또는 Asp임);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHX1X2YPX3T (서열식별번호: 253) (여기서 X1은 Asp 또는 Ser이고, X2은 Ser 또는 Ile이고, 그리고 X3은 Leu 또는 Pro임).
  148. 청구항 147에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAMH (서열식별번호: 254);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSRNNNYATAYAASVKG (서열식별번호: 255);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: LQQPPFDY (서열식별번호: 256);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHDSYPLT (서열식별번호: 257).
  149. 청구항 147에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAIH (서열식별번호: 258);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSRTNNYATEYDASVKG (서열식별번호: 259);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: LGQPPFDY (서열식별번호: 260);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHSIYPPT (서열식별번호: 261).
  150. 청구항 147에 있어서, 상기 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: GSAMH (서열식별번호: 254);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: RIRSKGNSYATAYAASVKG (서열식별번호: 262);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: QFGDPFDY (서열식별번호: 263);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQGIRNDLD (서열식별번호: 251);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASSLQS (서열식별번호: 252); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: LQHDSYPLT (서열식별번호: 257).
  151. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 282의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 283의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  152. 청구항 151에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 264);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQASGKGLEWVG (서열식별번호: 267);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR (서열식별번호: 269); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272).
  153. 청구항 152에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 282의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  154. 청구항 151 내지 153 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 273);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 277); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 280).
  155. 청구항 154에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 283의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  156. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 282의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 283의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  157. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 284의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 285의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  158. 청구항 157에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGDLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 265);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQASGKGLEWVG (서열식별번호: 267);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFTISRDDSKRTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR (서열식별번호: 270); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272).
  159. 청구항 158에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 284의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  160. 청구항 157 내지 159 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 274);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 278); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGQGTKVEIK (서열식별번호: 281).
  161. 청구항 160에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 285의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  162. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 284의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 285의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  163. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 286의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; (b) 서열식별번호: 287의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  164. 청구항 163에 있어서, 상기 VH 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS (서열식별번호: 266);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H2: WVRQAPGKGLEWVG (서열식별번호: 268);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H3: RFSISRDDSKRTAYLQMSSLKTEDSAVYYCAR (서열식별번호: 271); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-H4: WGQGTLVTVSS (서열식별번호: 272).
  165. 청구항 164에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 286의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  166. 청구항 163 내지 165 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 하기를 추가로 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L1: AIRITQSPSSLSASVGDRVTITC (서열식별번호: 275);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L2: WYQQKPGKAPKRLIY (서열식별번호: 276);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L3: GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC (서열식별번호: 279); 및
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 FR-L4: FGGGTKVEIK (서열식별번호: 280).
  167. 청구항 166에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 287의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  168. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는 결합 도메인을 포함하는 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 286의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 287의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
  169. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 288의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 289의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
  170. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 290의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 291의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
  171. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 292의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 293의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
  172. IL-33에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 294의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 295의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
  173. 청구항 37 내지 172 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 또는 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  174. 청구항 173에 있어서, 상기 항체는 인간 또는 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합하는, 항체.
  175. 청구항 174에 있어서, 상기 항체는 약 1 nM 이하의 KD로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합하는, 항체.
  176. 청구항 175에 있어서, 상기 항체는 약 100 fM 내지 약 1 nM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  177. 청구항 176에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  178. 청구항 177에 있어서, 상기 항체는 약 15 pM 내지 약 180 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  179. 청구항 178에 있어서, 상기 항체는 약 15 pM 내지 약 140 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  180. 청구항 175에 있어서, 상기 항체는 약 100 fM 내지 약 1 nM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  181. 청구항 180에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  182. 청구항 181에 있어서, 상기 항체는 약 100 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  183. 청구항 182에 있어서, 상기 항체는 약 125 pM 내지 약 500 pM의 KD로 사이노 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  184. 청구항 176 또는 181에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 500 pM의 KD로 인간 및 사이노 IL-33 둘 모두에 특이적으로 결합하는, 항체.
  185. 청구항 184에 있어서, 상기 항체는 약 1 pM 내지 약 200 pM의 KD로 인간 IL-33에 특이적으로 결합하는, 항체.
  186. 청구항 1 내지 7 또는 37 내지 185 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제할 수 있는, 항체.
  187. 청구항 186에 있어서, 상기 억제는 세포 기반 차단 검정을 사용하여 측정되는, 항체.
  188. 청구항 187에 있어서, 상기 항체는 약 0.001 μg/ml 내지 약 0.5 μg/ml의 90% 저해된 농도 (IC90)로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제하는, 항체.
  189. 청구항 188에 있어서, 상기 IC90은 약 0.002 μg/ml 내지 약 0.25 μg/ml인, 항체.
  190. 청구항 189에 있어서, 상기 IC90은 약 0.17 μg/ml인, 항체.
  191. 청구항 189에 있어서, 상기 IC90은 약 0.004 μg/ml인, 항체.
  192. 청구항 1 내지 7 또는 37-191 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 800 fM 내지 약 10 pM의 IC50 로 인간 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제하는, 항체.
  193. 청구항 192에 있어서, 상기 IC50은 약 1 pM 내지 약 5 pM인, 항체.
  194. 청구항 193에 있어서, 상기 IC50은 약 2.5 pM인, 항체.
  195. 청구항 1 내지 7 또는 37-194 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 약 1 nM 내지 약 5 nM의 IC50 로 사이노 IL-33의 IL-33 수용체에의 결합을 억제하는, 항체.
  196. 청구항 195에 있어서, 상기 IC50은 약 4 nM인, 항체.
  197. 청구항 1 내지 196 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 무당화 부위 돌연변이를 포함하는, 항체.
  198. 청구항 1 내지 198 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성, 인간, 인간화된, 또는 키메라성인, 항체.
  199. 청구항 1 내지 198 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IL-33에 결합하는 항체 단편인, 항체.
  200. 청구항 199에 있어서, 상기 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 (Fab')2 단편으로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체.
  201. 청구항 1 내지 198 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 전장 항체인, 항체.
  202. 청구항 201에 있어서, 상기 항체는 IgG 항체인, 항체.
  203. 청구항 202에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG1 항체인, 항체.
  204. 청구항 202에 있어서, 상기 IgG 항체는 IgG4 항체인, 항체.
  205. 청구항 204에 있어서, 상기 IgG4 항체는 힌지 영역에서 돌연변이를 포함하는, 항체.
  206. 청구항 205에 있어서, 상기 돌연변이는 치환 돌연변이인, 항체.
  207. 청구항 206에 있어서, 상기 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 S228 (EU 넘버링)에 있는, 항체.
  208. 청구항 207에 있어서, 상기 치환 돌연변이는 S228P 돌연변이인, 항체.
  209. 청구항 1 내지 208 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단일특이적 항체인, 항체.
  210. 청구항 1 내지 208 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다중특이적 항체인, 항체.
  211. 청구항 210에 있어서, 상기 항체는 이중특이적 항체인, 항체.
  212. 청구항 211에 있어서, 상기 이중특이적 항체는 제2 생물학적 분자에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하고, 여기서 상기 제2 생물학적 분자는 인터류킨-13 (IL-13), 인터류킨-4 (IL-4), 인터류킨-5 (IL-5), 인터류킨-17 (IL-17), 인자 D, HtrA1, VEGF, 및 VEGF 수용체로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체.
  213. 청구항 212에 있어서, 상기 제2 생물학적 분자는 인자 D인, 항체.
  214. 청구항 212에 있어서, 상기 제2 생물학적 분자는 HtrA1인, 항체.
  215. 청구항 212에 있어서, 상기 제2 생물학적 분자는 VEGF인, 항체.
  216. 청구항 212에 있어서, 상기 제2 생물학적 분자는 IL-13인, 항체.
  217. 청구항 216에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 하기 6개의 HVR을 포함하는, 항체:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301).
  218. 청구항 217에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 하기를 포함하는, 항체: (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (c) (a)에서와 같은 VH 도메인 및 (b)에서와 같은 VL 도메인.
  219. 청구항 218에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열식별번호: 302의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  220. 청구항 218에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열식별번호: 303의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  221. IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SFSMS (서열식별번호: 1);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: TISGGKTFTDYVDSVKG (서열식별번호: 2);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: ANYGNWFFEV (서열식별번호: 3);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASESVAKYGLSLLN (서열식별번호: 4);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: AASNRGS (서열식별번호: 5); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQSKEVPFT (서열식별번호: 6); 및
    하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301).
  222. IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: 하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: SSIFYWG (서열식별번호: 65);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: SIYYSGRTYYNPSLKS (서열식별번호: 66);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: AGGLYNWNDESFSFYMDV (서열식별번호: 68);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASQSFSSSYLA (서열식별번호: 69);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: GASSRAT (서열식별번호: 70); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQYDRSPLT (서열식별번호: 71); 및
    하기 6개의 HVR을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인:
    (a) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1: AYSVN (서열식별번호: 296);
    (b) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2: MIWGDGKIVYNSALKS (서열식별번호: 297);
    (c) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3: DGYYPYAMDN (서열식별번호: 298);
    (d) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1: RASKSVDSYGNSFMH (서열식별번호: 299);
    (e) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2: LASNLES (서열식별번호: 300); 및
    (f) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3: QQNNEDPRT (서열식별번호: 301).
  223. IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인.
  224. IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체: (a) 서열식별번호: 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 및 (a) 서열식별번호: 302의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 (b) 서열식별번호: 303의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인.
  225. IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체:
    (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 서열식별번호: 306의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제1 경쇄는 서열식별번호: 307의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 및
    (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 서열식별번호: 304의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제2 경쇄는 서열식별번호: 305의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제2 중쇄 및 제2 경쇄.
  226. IL-33 및 IL-13 모두에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 단리된 항체:
    (a) IL-33에 특이적으로 결합하는 제1 중쇄 및 제1 경쇄로서, 상기 제1 중쇄는 서열식별번호: 308의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제1 경쇄는 서열식별번호: 309의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제1 중쇄 및 제1 경쇄, 및
    (b) IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 중쇄 및 제2 경쇄로서, 상기 제2 중쇄는 서열식별번호: 304의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 제2 경쇄는 서열식별번호: 305의 아미노산 서열에 대해 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 제2 중쇄 및 제2 경쇄.
  227. 청구항 210 내지 226 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 항원-결합 항체 단편.
  228. 청구항 227에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 (Fab')2 단편으로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체.
  229. 청구항 228에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 Fab 또는 (Fab')2 단편인, 항체.
  230. 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는, 단리된 핵산.
  231. 청구항 230의 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
  232. 청구항 231의 벡터를 포함하는 숙주세포.
  233. 청구항 232에 있어서, 상기 숙주세포는 포유동물 세포인, 숙주세포.
  234. 청구항 233에 있어서, 상기 포유동물 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포인, 숙주세포.
  235. 청구항 232에 있어서, 상기 숙주세포는 원핵 세포인, 숙주세포.
  236. 청구항 235에 있어서, 상기 원핵 세포는 E. 콜리인, 숙주세포.
  237. 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체를 생산하는 방법으로서, 상기 방법은 청구항 232 의 숙주세포를 배양 배지에서 배양하는 것을 포함하는 방법.
  238. 청구항 237에 있어서, 본 방법은 추가로, 상기 항체를 상기 숙주세포 또는 상기 배양 배지로부터 회수하는 것을 포함하는, 방법.
  239. 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 조성물.
  240. 청구항 239에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 희석제를 추가로 포함하는, 조성물.
  241. 청구항 240에 있어서, 본 조성물은 약제학적 조성물인, 조성물.
  242. 청구항 239 내지 241 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 추가로, ST2 결합 길항제, 인자 D 결합 길항제, HtrA1 결합 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제를 포함하는, 조성물.
  243. 청구항 242에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 인자 D 결합 길항제를 포함하는, 조성물.
  244. 청구항 243에 있어서, 상기 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 조성물.
  245. 청구항 242에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 HtrA1 결합 길항제를 포함하는, 조성물.
  246. 청구항 245에 있어서, 상기 HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 조성물.
  247. 청구항 242에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 VEGF 길항제를 포함하는, 조성물.
  248. 청구항 247에 있어서, 상기 VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 조성물.
  249. 약제로서 사용되는, 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체.
  250. IL-33-매개된 장애를 치료하는데 사용되는, 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체.
  251. 청구항 250에 있어서, 상기 IL-33-매개된 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체: 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 및 안과적 장애.
  252. 청구항 251에 있어서, 상기 염증성 병태는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체: 천식, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 및 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD).
  253. 청구항 251에 있어서, 상기 면역 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체: 천식, 류마티스성 관절염, 알러지, 과민증, 과민성 쇼크, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 및 간 질환.
  254. 청구항 251에 있어서, 상기 섬유성 질환은 특발성 폐 섬유증 (IPF)인, 항체.
  255. 청구항 251에 있어서, 상기 호산구 장애는 호산구-관련된 위장 장애 (EGID)인, 항체.
  256. 청구항 255에 있어서, 상기 EGID는 호산구 식도염인, 항체.
  257. 청구항 251에 있어서, 상기 감염은 연충 감염, 원생동물 감염, 또는 바이러스성 감염인, 항체.
  258. 청구항 257에 있어서, 상기 원생동물 감염은 라이쉬마니아 주요 감염인, 항체.
  259. 청구항 257에 있어서, 상기 바이러스성 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염 또는 인플루엔자 감염인, 항체.
  260. 청구항 251에 있어서, 상기 통증은 염증성 통증인, 항체.
  261. 청구항 251에 있어서, 상기 중추신경계 장애는 알츠하이머병인, 항체.
  262. 청구항 251에 있어서, 상기 고형 종양은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체: 유방 종양, 결장 종양, 전립선 종양, 폐 종양, 신장 종양, 간 종양, 췌장 종양, 위 종양, 장 종양, 뇌종양, 골 종양, 및 피부 종양.
  263. 청구항 251에 있어서, 상기 안과적 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체: 연령 관련 황반 변성 (AMD), 눈의 망막증, 결절 맥락막 맥관병증 (PCV), 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염, 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염인, 항체.
  264. 청구항 263에 있어서, 상기 AMD는 습성 AMD, 건조 AMD, 또는 지리학적 위축증 (GA)인, 항체.
  265. 청구항 263에 있어서, 상기 AMD는 중간 AMD 또는 진행성 AMD인, 항체.
  266. 청구항 263에 있어서, 상기 눈의 망막증은 당뇨 망막병증 (DR) 또는 미숙아 망막증 (ROP)인, 항체.
  267. 청구항 263에 있어서, 상기 눈의 망막증은 고-고도 DR인, 항체.
  268. 청구항 263에 있어서, 상기 결막염은 감염성 결막염 또는 비-감염성 결막염인, 항체.
  269. 청구항 263에 있어서, 상기 결막염은 알러지성 결막염인, 항체.
  270. IL-33-매개된 장애를 치료하는 약제의 제조에서의, 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  271. 청구항 270에 있어서, 상기 IL-33-매개된 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도: 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 및 안과적 장애.
  272. 청구항 271에 있어서, 상기 염증성 병태는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도: 천식, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 및 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD).
  273. 청구항 271에 있어서, 상기 면역 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도: 천식, 류마티스성 관절염, 알러지, 과민증, 과민성 쇼크, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 및 간 질환.
  274. 청구항 271에 있어서, 상기 섬유성 질환은 특발성 폐 섬유증 (IPF)인, 용도.
  275. 청구항 271에 있어서, 상기 호산구 장애는 호산구-관련된 위장 장애 (EGID)인, 용도.
  276. 청구항 275에 있어서, 상기 EGID는 호산구 식도염인, 용도.
  277. 청구항 271에 있어서, 상기 감염은 연충 감염, 원생동물 감염, 또는 바이러스성 감염인, 용도.
  278. 청구항 277에 있어서, 상기 원생동물 감염은 라이쉬마니아 주요 감염인, 용도.
  279. 청구항 277에 있어서, 상기 바이러스성 감염은 RSV 감염 또는 인플루엔자 감염인, 용도.
  280. 청구항 271에 있어서, 상기 통증은 염증성 통증인, 용도.
  281. 청구항 271에 있어서, 상기 중추신경계 장애는 알츠하이머병인, 용도.
  282. 청구항 271에 있어서, 상기 고형 종양은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도: 유방 종양, 결장 종양, 전립선 종양, 폐 종양, 신장 종양, 간 종양, 췌장 종양, 위 종양, 장 종양, 뇌종양, 골 종양, 및 피부 종양.
  283. 청구항 271에 있어서, 상기 안과적 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도: AMD, 눈의 망막증, PCV, 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염, 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염.
  284. 청구항 283에 있어서, 상기 AMD는 습성 AMD, 건조 AMD, 또는 GA인, 용도.
  285. 청구항 283에 있어서, 상기 AMD는 중간 AMD 또는 진행성 AMD인, 용도.
  286. 청구항 283에 있어서, 상기 눈의 망막증은 DR 또는 ROP인, 용도.
  287. 청구항 283에 있어서, 상기 눈의 망막증은 고-고도 DR인, 용도.
  288. 청구항 283에 있어서, 상기 결막염은 감염성 결막염 또는 비-감염성 결막염인, 용도.
  289. 청구항 283에 있어서, 상기 결막염은 알러지성 결막염인, 용도.
  290. 청구항 270 내지 289 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제는 하기와 함께 사용하기 위해 제형화되는, 용도: ST2 결합 길항제, 인자 D 결합 길항제, HtrA1 결합 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제.
  291. 청구항 290에 있어서, 상기 약제는 인자 D 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화되는, 용도.
  292. 청구항 291에 있어서, 상기 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 용도.
  293. 청구항 290에 있어서, 상기 약제는 HtrA1 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화되는, 용도.
  294. 청구항 293에 있어서, 상기 HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 용도.
  295. 청구항 290에 있어서, 상기 약제는 VEGF 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화되는, 용도.
  296. 청구항 295에 있어서, 상기 VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 용도.
  297. GA를 치료하는 약제의 제조에서의, IL-33 및 인자 D 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도.
  298. 청구항 297에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편인, 용도.
  299. GA를 치료하는 약제의 제조에서의, 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체로서, 상기 약제는 인자 D 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화되는, 용도.
  300. 청구항 299에 있어서, 상기 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 용도.
  301. GA, AMD, DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 약제의 제조에서의, IL-33 및 HtrA1 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도.
  302. 청구항 301에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편인, 용도.
  303. GA, AMD, DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 약제의 제조에서의, 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체의 용도로서, 상기 약제는 HtrA1 결합 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화되는, 용도.
  304. 청구항 303에 있어서, 상기 HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 용도.
  305. 습성 AMD를 치료하는 약제의 제조에서의, IL-33 및 VEGF 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 용도.
  306. 청구항 305에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편인, 용도.
  307. 습성 AMD를 치료하는 약제의 제조에서의 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체의 용도로서, 상기 약제는 VEGF 길항제와 함께 사용하기 위해 제형화되는, 용도.
  308. 청구항 307에 있어서, 상기 VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 용도.
  309. 치료를 필요로 하는 대상체에서 IL-33-매개된 장애를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  310. 청구항 309에 있어서, 상기 IL-33-매개된 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 염증성 병태, 면역 장애, 섬유성 장애, 호산구 장애, 감염, 통증, 중추신경계 장애, 고형 종양, 및 안과적 장애.
  311. 청구항 310에 있어서, 상기 염증성 병태는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 천식, 패혈증, 패혈성 쇼크, 아토피 피부염, 알러지성 비염, 류마티스성 관절염, 및 만성적 폐쇄성 폐 질환 (COPD).
  312. 청구항 310에 있어서, 상기 면역 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 천식, 류마티스성 관절염, 알러지, 과민증, 과민성 쇼크, 알러지성 비염, 건선, 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 당뇨병, 및 간 질환.
  313. 청구항 310에 있어서, 상기 섬유성 질환은 특발성 폐 섬유증 (IPF)인, 방법.
  314. 청구항 310에 있어서, 상기 호산구 장애는 호산구-관련된 위장 장애 (EGID)인, 방법.
  315. 청구항 314에 있어서, 상기 EGID는 호산구 식도염인, 방법.
  316. 청구항 310에 있어서, 상기 감염은 연충 감염, 원생동물 감염, 또는 바이러스성 감염인, 방법.
  317. 청구항 316에 있어서, 상기 원생동물 감염은 라이쉬마니아 주요 감염인, 방법.
  318. 청구항 316에 있어서, 상기 바이러스성 감염은 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염 또는 인플루엔자 감염인, 방법.
  319. 청구항 310에 있어서, 상기 통증은 염증성 통증인, 방법.
  320. 청구항 310에 있어서, 상기 고형 종양은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 유방 종양, 결장 종양, 전립선 종양, 폐 종양, 신장 종양, 간 종양, 췌장 종양, 위 종양, 장 종양, 뇌종양, 골 종양, 및 피부 종양.
  321. 청구항 310에 있어서, 상기 안과적 장애는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: AMD, 눈의 망막증, PCV, 당뇨병성 황반 부종, 건조 안구 질환, 베체트병, 망막 탈착, 녹내장, 포도막염, 색소성 망막염, 레베르 선천성 흑내장, 스타가르트병, 외상성 눈 부상, 및 결막염인, 방법.
  322. 청구항 321에 있어서, 상기 AMD는 습성 AMD, 건조 AMD, 또는 GA인, 방법.
  323. 청구항 321에 있어서, 상기 AMD는 중간 AMD 또는 진행성 AMD인, 방법.
  324. 청구항 321에 있어서, 상기 눈의 망막증은 DR 또는 ROP인, 방법.
  325. 청구항 321에 있어서, 상기 눈의 망막증은 고-고도 DR인, 방법.
  326. 청구항 321에 있어서, 상기 결막염은 감염성 결막염 또는 비-감염성 결막염인, 방법.
  327. 청구항 321에 있어서, 상기 결막염은 알러지성 결막염인, 방법.
  328. 청구항 309 내지 327 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 하기를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법: ST2 결합 길항제, 인자 D 결합 길항제, HtrA1 결합 길항제, VEGF 길항제, 트립타제-베타 결합 길항제, Th2 세포 (CRTH2) 결합 길항제 상에서 발현된 화학유인물질 수용체-상동성 분자, 인터류킨-13 (IL-13) 결합 길항제, 인터류킨-17 (IL-17) 결합 길항제, JAK1 길항제, 및/또는 인터류킨-5 (IL-5) 결합 길항제.
  329. 청구항 328에 있어서, 본 방법은 추가로, 상기 대상체에게 인자 D 결합 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  330. 청구항 329에 있어서, 상기 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 방법.
  331. 청구항 328에 있어서, 본 방법은 추가로, 상기 대상체에게 HtrA1 결합 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  332. 청구항 331에 있어서, 상기 HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 방법.
  333. 청구항 328에 있어서, 본 방법은 추가로, 상기 대상체에게 VEGF 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  334. 청구항 333에 있어서, 상기 VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 용도.
  335. 치료를 필요로 하는 대상체에서 GA를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 인자 D 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  336. 청구항 335에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편인, 방법.
  337. 치료를 필요로 하는 대상체에서 GA를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체 및 치료적 유효량의 인자 D 결합 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  338. 청구항 337에 있어서, 상기 인자 D 결합 길항제는 항-인자 D 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 방법.
  339. 치료를 필요로 하는 대상체에서 GA, AMD, DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 HtrA1 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  340. 청구항 339에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편인, 방법.
  341. 치료를 필요로 하는 대상체에서 GA, AMD, DR, PCV, 또는 ROP를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체 및 치료적 유효량의 HtrA1 결합 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  342. 청구항 341에 있어서, 상기 HtrA1 결합 길항제는 항-HtrA1 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 방법.
  343. 치료를 필요로 하는 대상체에서 습성 AMD를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 IL-33 및 VEGF 둘 모두에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  344. 청구항 343에 있어서, 상기 항원-결합 항체 단편은 (Fab')2 단편인, 방법.
  345. 치료를 필요로 하는 대상체에서 습성 AMD를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료적 유효량의 청구항 1 내지 229 중 어느 한 항의 항체 및 치료적 유효량의 VEGF 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  346. 청구항 345에 있어서, 상기 VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인, 방법.
  347. 청구항 309 내지 346 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기에 의해 투여되는, 방법: 피하로, 정맥내로, 근육내로, 국소로, 경구로, 경피로, 복강내로, 안와내로, 이식으로, 흡입으로, 척추강내로, 심실내로, 비강내로, 초자체내로, 안구내로, 안구주위로, 결막으로, 결막하로, 테논낭하로, 전방내로, 망막하로, 안구뒤로, 또는 소관내로.
  348. 청구항 309 내지 347 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
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