KR20150047134A - Ｎ-［２-（｛２-［（２Ｓ）-２-시아노피롤리딘-１-일］-２-옥소에틸｝아미노）-２-메틸프로필］-２-메틸피라졸로［１, ５-ａ］피리미딘-６-카르복사미드의 결정 - Google Patents

Abstract

<과제>
고순도이면서 안정성이 뛰어나고, 흡습성이 낮으며, 매우 물에 녹기 쉬운 특성을 갖는 아나글립틴의 결정 및 그 제조 방법을 제공한다.
<해결 수단>
2θ로 표시되는 회절 각도로서 9.8°, 7.4°, 18.6°, 25.3°, 및 25.8° 부근에 피크를 가지고, 도 1과 실질적으로 동일한 분말 X선 회절 패턴을 나타내는 아나글립틴의 결정. 당해 결정은 N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘을 유기 용매 중에서 반응시킨 후, 칼럼 크로마토그래피 정제에 의해 얻어지는 아나글립틴 비정질을 2-프로판올로부터 결정화시킴으로써 얻어진다.

Description

Ｎ-［２-（｛２-［（２Ｓ）-２-시아노피롤리딘-１-일］-２-옥소에틸｝아미노）-２-메틸프로필］-２-메틸피라졸로［１, ５-ａ］피리미딘-６-카르복사미드의 결정{CRYSTAL OF N-［２-（｛２-［（２S）-２-CYANOPYRROLIDIN-１-YL］-２-OXOETHYL｝AMINO）-２-METHYLPROPYL］-２-METHYLPYRAZOLO［１, ５-a］PYRIMIDINE-６-CARBOXAMIDE}

본 발명은 디펩티딜펩티다아제-4(이하 “DPP-4”로 약칭함)의 활성을 저해하는 Ｎ-［２-（｛２-［（２Ｓ）-２-시아노피롤리딘-１-일］-２-옥소에틸｝아미노）-２-메틸프로필］-２-메틸피라졸로［１, ５-ａ］피리미딘-６-카르복사미드(일반명: 아나글립틴(anagliptin))의 결정 및 그 결정의 제조 방법에 관한 것이다.

글루카곤 유사 펩타이드(이하 “GLP-1”로 약칭함)는 췌장 및 췌장 조직에 대해 다양한 작용을 발현함으로써 혈당을 저하시키지만 세린프로테아제의 일종인 DPP-4에 의해 불활성화된다. 그래서 DPP-4의 활성을 저해함으로써 GLP-1의 불활성화를 억제하는 약제가 혈당저하 작용을 갖는 제2형 당뇨병 치료제로서 개발되었다. GLP-1은 당농도가 낮은 상태에서는 인슐린 분비를 촉진하지 않기 때문에 이 치료제는 저혈당을 일으킬 위험이 적은 치료제로 특징지을 수 있다. 이 DPP-4 저해제는 일본 국내에서는 처음으로 시타글립틴이 출시되었고, 그 후에도 몇 가지 약제가 출시되었다.

아나글립틴도 DPP-4 저해제로서 개발되어, 아나글립틴 및 그 염은 특허문헌 1에 기재되어 있지만 결정형에 관한 기재는 없다. 또한, 아나글립틴과 유사한 구조를 갖는 빌다글립틴(vildagliptin)의 결정에 관한 보고(비특허문헌 1)는 있지만, 여기에서는 결정화를 위한 일반적인 방법이 기재되어 있을 뿐이고, 실제로 어떻게 결정화하였는지 적혀 있지 않기 때문에 재현성 있게 결정화할 수 있는지 여부는 분명하지 않다.

국제공개 제2004/067509호 팜플렛

J. Med. Chem., 46, 2774-2789(2003)

본 발명자들은 특허문헌 1에 기재된 방법으로 아나글립틴 및 그 염산염을 제조하여 분말 X선 회절법에 의해 분석하였더니 두 화합물 모두 비정질 형태였다. 이들이 비정질 형태인 것은 고순도로 하기 위한 재결정 정제를 할 수 없다는 것을 의미하고, 안정성 및 흡습성의 면에서도 바람직하지 않다. 그래서 본 발명에 있어서의 과제는 고순도이면서도 안정성이 뛰어나고 흡습성이 낮은 특성을 갖는 아나글립틴의 결정 및 그 결정의 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 예의 연구를 거듭한 결과, 고순도이면서 안정성이 뛰어나고, 흡습성이 낮으며, 매우 물에 녹기 쉬운 특성을 갖는 아나글립틴 결정을 발견함과 아울러, 아나글립틴의 결정화에 적합한 제조 방법 및 공업적인 제조에 적합한 아나글립틴 결정의 제조 방법을 발견하였다. 즉, 본 발명은 다음과 같다.

(1) N-[2-({2-[(2S)-2-시아노피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}아미노)-2-메틸프로필]-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드(아나글립틴)의 결정.

(2) 분말 X선 회절 패턴에 있어서 2θ로 표시되는 회절 각도로서 9.8°, 17.4°, 18.6°, 25.3° 및 25.8° 부근에 피크(peak)를 갖는 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 결정.

(3) 2θ로 표시되는 회절 각도가 도 1에 나타내는 분말 X선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 결정.

(4) 적외선 흡수 스펙트럼에 있어서 파수 3340㎝^-1, 1664㎝^-1 및 1654㎝^-1 부근에 흡수를 인지하는 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 결정.

(5) ㎝^-1로 표시되는 파수는 도 2에 나타내는 적외선 흡수 스펙트럼과 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 결정.

(6) 시차주사열량 측정(DSC)에 있어서 120℃ 부근에 흡열 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 결정.

(7) 흡열 피크가 도 3에 나타내는 시차주사열량 측정 곡선과 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 결정.

(8) N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘을 유기 용매 중에서 반응시킨 후, 칼럼 크로마토그래피 정제에 의해 얻어지는 아나글립틴 비정질을 2-프로판올로부터 결정화시킴으로써 아나글립틴 결정을 얻는 것을 특징으로 하는 아나글립틴 결정의 제조 방법.

(9) N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘을 유기 용매 중에서 반응시키고, 얻어진 아나글립틴 비정질을 결정석출 용매에 용해한 후, 아나글립틴의 종결정(seed crystal)을 가하여 결정석출시킴으로써 아나글립틴 결정을 얻는 것을 특징으로 하는 아나글립틴 결정의 제조 방법.

(10) 상기 N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘과의 반응을 알칼리탄산염 및 요오드화염의 존재 하에서 행하는 (8) 또는 (9)에 기재된 제조 방법.

(11) 상기 알칼리탄산염이 탄산칼륨이고, 상기 요오드화염이 요오드화칼륨인 (10)에 기재된 제조 방법.

(12) 상기 유기 용매는 아세톤, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 이루어진군에서 선택되는 (8) 또는 (9)에 기재된 제조 방법.

(13) 상기 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘은 N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드에 대해 1~1.2당량인 (8) 또는 (9)에 기재된 제조 방법.

(14) 상기 결정석출 용매가 2-프로판올 또는 에틸아세테이트인 (9)에 기재된 제조 방법.

(15) 상기 아나글립틴의 종결정을 가하여 결정석출시킴으로써 아나글립틴의 결정을 얻은 후, 나아가 여액을 농축한 후에 아나글립틴의 종결정을 가하여 결정석출시킴으로써 아나글립틴의 결정을 얻는 공정을 복수회 행하는 (9)에 기재된 제조 방법.

본 발명의 아나글립틴 결정은 순도가 높고 안정성이 뛰어나고 흡습성이 낮고물에 매우 녹기 쉬우므로 의약품으로 사용하기에 매우 적합하다.

도 1은 화합물 1(결정)의 분말 X선 회절 패턴(실시예 1)이다.
도 2는 화합물 1(결정)의 적외선 흡수 스펙트럼(실시예 2)이다.
도 3은 화합물 1(결정)의 시차주사열량 측정 곡선(실시예 2)이다.
도 4는 화합물 2(비정질)의 분말 X선 회절 패턴(시험예 1)이다.
도 5는 화합물 1(비정질)의 분말 X선 회절 패턴(시험예 1)이다.

N-[2-({2-[(2S)-2-시아노피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}아미노)-2-메틸프로필]-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드(아나글립틴: 이하 “화합물 1”로 약칭함) 및 그 염산염(이하 “화합물 2”로 약칭함)을 하기 식 (1) 및 식 (2)로 나타낸다.

[화합물 1]

[화합물 2]

특허문헌 1(WO2004/067509)의 실시예 2의 화합물인 화합물 2 및 그 유리 염기인 화합물 1은 특허문헌 1의 실시예 1의 화합물의 제조 방법에 기초한 실시예 2의 화합물의 제조 방법으로 제조할 수 있다. 즉, 2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복실산의 테트라하이드로퓨란 용액에 N, N'-카르보닐디이미다졸(이하 “CDI”로 약칭함)을 가하여 반응시킨 용액을 (S)-1-[(2-아미노-1, 1-디메틸에틸)아미노아세틸]피롤리딘-2-카르보니트릴 2염산염과 트리에틸아민의 테트라하이드로퓨란 용액에 적하, 교반한 후, 반응액을 농축한 잔사를 칼럼 크로마토그래피로 정제함으로써 얻을 수 있다(이하“종래 방법”이라고 함).

종래 방법으로 제조한 화합물 1 및 그 염산염인 화합물 2를 분말 X선 회절법에 의해 분석하였는데 두 화합물 모두 비정질 형태였다. 그래서 일반적으로 분말로 되기 쉽다고 생각되는 염의 형태인 화합물 2를 단일 용매(디클로로메탄, 아세토니트릴, 2-프로판올, 에틸아세테이트, 아세톤)를 이용하여 냉각법에 의한 결정화를 시도하였지만 결정은 얻어지지 않았다. 다음으로 혼합 용매(디클로로메탄/에테르, 2-PrOH /에테르, 2-PrOH/헥산, 2-PrOH/에틸아세테이트, i-BuOH/헥산, 물/아세톤)를 이용해서 빈(貧)용매법(침전법)에 의해 결정화를 시도하였지만 얻어진 분말은 결정이 아니었다. 또한, 참고예 1은 더 결정화하기 쉽다고 생각되는 후술의 개량법으로 얻어진 화합물 1의 결정으로부터 염산염인 화합물 2를 조제하여 실험한 것이다.

또한, 상기 화합물 1을 염산염 이외의 염의 형태, 즉 p-톨루엔설폰산염, 질산염, 황산염, 1/2황산염, 인산염, 브롬화수소산염, 메탄설폰산염, 캠퍼설폰산염(camphor sulfonate), 구연산염, 주석산염, 사과산염, 살리실산염, 프탈산염, 말레산염, 푸마르산염, 숙신산염, 옥살산염 및 말론산염으로 하여 단일 용매계 및 혼합 용매계에 의해 결정화를 검토하였지만 결정은 얻어지지 않았다. 또한, 참고예 2는 더 결정화하기 쉽다고 생각되는 후술의 개량법으로 얻어진 화합물 1의 결정으로부터 p-톨루엔설폰산염을 제조하여 실험한 것이다.

한편, 종래 방법으로 제조한 유리 염기인 화합물 1에 대해서도, 참고예 3에 나타내듯이, 단일 용매 또는 혼합 용매를 이용하여 냉각법에 의해 결정화를 시도하였지만 역시 결정은 얻어지지 않았다. 이와 같이 화합물 1 또는 그의 염을 결정의 형태로 하는 것은 곤란했는데, 본 발명자들은 하기 반응 공정식에 나타내는 반응(이하 “개량법”이라고 함)을 행하고, 그 반응 혼합물로부터 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 얻은 비정질의 화합물 1을 2-프로판올에 용해하여 실온에서 방치 또는 빙랭조(ice bath)에서 냉각한 결과, 결정이 석출하는 것을 발견하고, 이 결정을 여과, 건조함으로써 목적으로 하는 결정을 얻는데 성공하였다. 또한, 얻어진 이 결정을 종결정(모정)으로 사용함으로써 하기 반응 공정식에 기초한 공업적인 제조에 적합한 방법을 발견하였다. 그 방법은 칼럼 크로마토그래피가 불필요하고, 안정하게 결정을 공급할 수 있어 스케일업(scale up)이 용이하다는 유리한 효과를 가지고 있다. 그 제조 방법을 이하에 설명한다.

[반응 공정식] 화합물 3 + 화합물 4 → 화합물 1

상기 반응 공정식에서는 N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드(이하 “화합물 3”이라고 함)와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘(이하 “화합물 4”라고 함)을 유기 용매 중에서 반응시킨 후 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 비정질 화합물 1을 얻고, 이를 2-프로판올을 사용하여 결정화시킴으로써 화합물 1의 결정을 얻을 수 있다. 또 공업적인 생산에 적합한 방법으로 화합물 3 및 화합물 4를 유기 용매 중에서 반응시키고, 얻어진 화합물 1의 비정질을 결정석출 용매에 용해시킨 후, 화합물 1의 결정을 종결정(모정)으로서 가하여 결정석출시키고 여과함으로써 화합물 1의 결정을 얻을 수 있다. 또한, 결정을 여과, 제거한 후의 여액을 농축한 후, 화합물 1의 종결정(모정)에 가하여 결정석출시킴으로써 화합물 1의 결정을 얻을 수 있다.

상기 화합물 3은 특허문헌 1의 중간체 실시예 111에 기재된 방법과 같이, 2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복실산에 옥살릴클로라이드를 반응시켜 합성한 산할라이드를 2-아미노-2-메틸프로필아민과 축합시킴으로써 합성하거나, 또는 2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복실산 및 2-아미노-2-메틸프로필아민을 CDI 등의 축합제를 이용하여 축합시킴으로써 합성할 수 있다. 또한 상기 화합물 4는 마찬가지로 특허문헌 1의 중간체 실시예 1에 기재된 방법과 같이, L-프롤린아미드와 클로로아세틸클로라이드를 반응시킨 후, 탈수 반응시켜 합성할 수 있다. 또한, 종결정(모정)은 상기 화합물 3과 상기 화합물 4를 반응시킨 반응 혼합물로부터 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 얻은 비정질의 화합물 1을 2-프로판올에 용해하여 실온에서 방치하거나 빙랭조에서 냉각하여 결정석출시키고, 이 결정을 여과, 건조함으로써 얻을 수 있다.

상기 화합물 3 및 화합물 4의 반응에서는 화합물 3에 대해 화합물 4를 0.8~1.5당량 사용하는 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 1~1.2당량이며, 가장 바람직하게는 1~1.1당량이다. 또한, 상기 화합물 3 및 화합물 4의 반응에서는 알칼리탄산염 및 요오드화염을 가하는 것이 바람직하다. 알칼리탄산염으로는 탄산칼륨, 탄산나트륨 및 탄산수소나트륨 등을 들 수 있고, 요오드화염으로는 요오드화나트륨 및 요오드화칼륨 등을 들 수 있고, 이 중에서도 탄산칼륨 및 요오드화칼륨을 가하는 것이 가장 바람직하다. 또한, 알칼리탄산염은 화합물 3에 대해서 1~1.3당량, 요오드화염은 화합물 3에 대해서 0.5~1.2당량을 이용하는 것이 바람직하다. 또한 반응 온도는 5℃~50℃, 반응 시간은 1시간~40시간의 범위가 바람직하다. 반응 용매로는 아세톤, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이트, 2-프로판올, 테트라하이드로퓨란, 톨루엔 등을 들 수 있고, 이 중에서도 아세톤, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트가 바람직하다. 결정석출 용매로는 2-프로판올, 에탄올, 에틸아세테이트, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란, 톨루엔 등을 들 수 있고, 이 중에서도 2-프로판올 또는 에틸아세테이트가 바람직하다. 결정을 여과한 후의 여액을 농축한 후, 화합물 1의 종결정(모정)을 가하여 결정석출시킴으로써 화합물 1의 결정을 얻는 공정은 복수회 행하는 것이 바람직하며, 통상적으로 2회 행한다.

이와 같이 하여 제조된 본 발명의 화합물 1의 결정의 물성은 다음과 같으며, 분말 X선 회절 패턴을 도 1에, 적외선 흡수 스펙트럼을 도 2에, 시차주사열량 측정 곡선을 도 3에 나타낸다.

1. 분말 X선 회절 패턴에 있어서 2θ로 표시되는 회절 각도로서 9.8°, 17.4°, 18.6°, 25.3° 및 25.8° 부근에 피크를 가진다.

2. 적외선 흡수 스펙트럼에서 파수 3340㎝^-1, 1664㎝^-1 및 1654㎝^-1 부근에 흡수를 인지한다.

3. 시차주사열량 측정(DSC)에 있어서 120℃ 부근에 흡열 피크를 가진다.

4. 물에 대한 용해도는 1g/㎖ 이상이고, 일본 약전에 있어서의 용해성은 "매우 녹기 쉽다”로 분류된다.

본 발명의 화합물 1의 결정은 DPP-4의 활동을 억제하는 작용이 있고, 고순도이면서 안정성이 뛰어나고, 흡습성이 낮기 때문에 의약 조성물로서 사용할 수 있다. 당해 의약 조성물은 당뇨병의 예방 또는 치료제로서 유용하다. 본 발명의 화합물을 의약으로 사용하는 경우의 투여 형태로는 "일본 약전" 제제 총칙 기재의 각종 투여 형태가 목적에 따라 선택될 수 있다. 예를 들면, 정제의 형태로 성형함에 있어서는 보통 당해 분야에서 사용되는 경구 섭취가 가능한 성분을 선택하면 된다. 예를 들면, 유당, 결정 셀룰로스, 백당, 및 인산칼륨 등의 부형제가 그에 해당한다. 또한, 소망에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제 및 응집 방지제 등 제제 분야에서 상용되는 각종 첨가제를 배합해도 좋다.

본 발명의 약학 조성물 중에 유효 성분으로 함유하는 본 발명 화합물의 양은 특히 한정되지 않고 적절하게 선택된다. 유효 성분 화합물의 투여량은 그 용법, 환자의 연령, 성별 기타 조건, 질환의 정도에 따라 적절하게 결정되지만, 경구 투여의 경우, 본 발명 화합물의 양이 1일 체중 1kg당 0.1㎎~100㎎, 바람직하게는 1㎎~10㎎의 범위에서 1일 1~3회에 걸쳐 적절하게 투여할 수 있다. 또한, 통상 성인은 100㎎을 1일 2회 경구 투여한다. 그러나, 투여량 및 투여 횟수는 치료해야 할 증상의 정도 및 선택된 투여 경로를 포함한 관련 상황을 감안하여 결정되기 때문에, 상기 투여량 범위 및 투여 횟수는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

실시예

이하에서는 실시예, 참고예 및 시험예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 분말 X선 회절 측정, 적외선 흡수 스펙트럼 측정, 시차주사열량 측정은 다음의 측정 조건으로 행하였다.

[분말 X선 회절의 측정 조건]

장치: 리가쿠 RAD-R, 관구: Cu, 관전압: 40kV, 관전류: 20mL, 측정 범위: 2~ 80°(2θ)

[적외선 흡수 스펙트럼의 측정 조건]

장치: PERKIN ELMER 1640, 측정 범위: 4000~500㎝^-1, 분해능: 4.0㎝^-1 스캔 횟수: 16

[시차주사열량 측정 조건]

장치: 세이코전자공업 DSC220CU, 측정 범위: 30~260℃, 승온속도: 10℃/분, 분위기: N₂ 30mL/분

[ 실시예 1] 아나글립틴(화합물 1)의 결정화

화합물 3(1.0g), 탄산칼륨(0.69g) 및 요오드화칼륨(0.83g)을 아세톤(25mL)에 현탁하여 빙랭하에 화합물 4(0.77g, 화합물 3에 대해 1.1당량)의 아세톤(17mL) 용액을 가하였다. 냉각조를 제거하고 실온에서 하룻밤 교반하고 감압농축하였다. 잔사에 클로로포름(22mL)과 물(18mL)을 가하여 분액하였다. 수층을 클로로포름(18mL)으로 추출한 후, 유기층을 합쳐 포화식염수(6mL)로 세정하고 무수황산나트륨으로 건조하고 감압농축하였다. 얻어진 유상물을 칼럼 크로마토그래피(용출 용매: 클로로포름/메탄올=30/1→20/1)로 정제하여 비정질 화합물 1(1.2g)을 얻었다. 이 중 100㎎을 2-프로판올(2.4mL)에 용해하고 실온에서 1일간 방치하였더니, 결정이 석출하고, 이 결정을 여과, 건조하여 화합물 1의 결정(36㎎)을 얻었다.

XRD: 9.8°, 17.4°, 18.6°, 25.3°, 25.8°(2θ)

[ 실시예 2] 아나글립틴 (화합물 1) 결정의 공업적 제법

화합물 3(220g), 탄산칼륨(146g) 및 요오드화칼륨(178g)을 아세톤(2.8L)에 현탁하고 빙랭조에서 냉각하였다. 이것에 화합물 4(161g 화합물 3에 대해 1.04당량)의 아세톤(2.8L) 용액을 가하여 5℃에서 40시간 동안 교반하였다. 그 후에 클로로포름(2.8L)과 물(4.2L)을 넣고 1N 염산에 의해 pH값을 7로 조제하였다. 수층을 클로로포름으로 세정한 후 8N 수산화나트륨수용액(175㎖)으로 알칼리성으로 조제하고 클로로포름으로 3회 추출하였다. 유기층을 합쳐 무수황산나트륨으로 건조 후 농축하고, 잔사에 2-프로판올(630㎖)을 가하여 용해시켰다. 여기에 화합물 1의 종결정(모정)을 가하여 5℃에서 하룻밤 교반하고, 석출된 결정을 여과하였다. 여액을 농축하고 잔류물에 2-프로판올(210㎖)을 가해서 용해시켰다. 여기에 화합물 1의 종결정(모정)을 가하여 5℃에서 하룻밤 교반하고, 석출된 결정을 여과하였다. 먼저 여과한 결정과 합쳐서 건조하여 화합물 1의 결정(250g)을 얻었다. 여기에서 종결정은 상기 실시예 1의 방법으로 얻은 결정을 이용하였다.

mp: 117~119℃

ESI-pos: m/z 384 (M+H)⁺

ESI-neg: m/z 282 (M-H)^-

¹H-NMR(Methanol-d₄) δ_ppm: 1.17(6H, s), 2.1~2.2(2H, m), 2.2~2.3(2H, m), 2.51(3H, s), 3.41(2H, dx2), 3.52(2H, dx2), 3.6~3.7(2H, m), 4.78(1H, dd), 6.55(1H, s), 8.87(1H, d), 9.29(1H, s)

IR(KBr)㎝^-1: 3340(N-H), 1664(C=O), 1654(C=O).

Anal. Calcd for C₁₉H₂₅N₇O₂: C, 59.51; H, 6.57; N, 25.57;　found: C, 59.55; H, 6.58; N, 25.90

Solubility (20℃): >1g/㎖ (very soluble)

[ 참고예 1] 아나글립틴 염산염(화합물 2)의 결정화 검토

실시예 2에서 얻은 화합물 1의 결정(5.0g)을 증류수(15㎖)에 용해하고 빙랭조하에 1N 염산(13㎖)을 적하하였다. 적하 종료 후, 동결 건조한 비정질 화합물 2(7.23g)를 얻었다. 얻어진 화합물 2를 100㎎씩 표 1에 나타낸 용매 A에 각각 가열 용해 후 실온에서 방치 또는 용매 B를 가하여 실온에서 방치하였다. 그러나 화합물 2의 결정을 얻을 수 없었다.

[ 참고예 2] 아나글립틴(화합물 1)의 p- 톨루엔설폰산염의 결정화 검토

실시예 2에서 얻은 화합물 1의 결정(5.0g)을 증류수(10㎖)에 용해시켰다. 여기에 p-톨루엔설폰산·H₂O(2.48g)의 수용액(5㎖)을 천천히 가하여 교반한 후,동결 건조한 비정질 화합물 1의 p-톨루엔설폰산염(7.23g)을 얻었다. 얻어진 p-톨루엔설폰산염을 100㎎씩, 표 2에 나타낸 용매 A에 각각 가열 용해한 후 실온에 방치 또는 용매 B를 가하여 실온에 방치하였다. 그러나, 화합물 1의 p-톨루엔설폰산염의 결정은 얻어지지 않았다.

[ 참고예 3] 종래 방법에 의해 얻어진 비정질 아나글립틴(화합물 1)의 결정화 검토

종래 방법에 의해 얻어진 비정질의 화합물 1을 100㎎씩, 표 3에 나타낸 용매 A에 각각 가열 용해시킨 후, 용매 B를 추가할 경우에는 백탁시킨 후, 실온에서 3일간 방치하였지만 결정은 석출되지 않았다. 그래서 5℃에서 1일간 더 방치하였지만 결정은 석출되지 않았다. 따라서, 종래 방법에 의해 얻어진 비정질 화합물 1은 통상적인 방법으로는 결정화가 어렵다는 것을 알게 되었다. 또한, 표 3의 용매 A*의 사용량은 화합물 1의 결정이 약 40㎎ 용해하는 양으로, 각 용매에 대한 용해도로부터 설정하였다.

[ 시험예 1] 분말 X선 회절 측정

종래 방법에 의해 화합물 1과 화합물 2를 조제하고, 분말 X선 회절을 하기의 조건으로 측정한 결과, 결정성 회절 피크가 인지되지 않았고, 화합물 1과 화합물 2는 비정질임이 확인되었다. 이 비정질 화합물 2의 X선 회절 패턴을 도 4에, 화합물 1의 X선 회절 패턴을 도 5에 나타낸다. 한편, 본 명세서의 실시예 1에 기재되어 있는 방법으로 제조한 화합물 1의 X선 회절 패턴은 도 1에 나타내는 것과 같이 결정성 회절 피크가 관측되었고 결정임이 확인되었다.

[ 시험예 2] 60℃(밀폐) 조건의 안정성 시험

개량법에 의해 조제한 비정질 화합물 1, 그 유리 염기를 특허문헌 1의 실시예 1과 동일한 방법으로 염산염으로 한 비정질 화합물 2, 및 본 명세서의 실시예 1에 기재한 방법으로 제조한 화합물 1의 결정의 각 시료를 10㎎씩 갈색 유리병에 넣고, 이를 60℃에서 보존하고, 4주 후에 순도를 비교하였다. 그 결과, 비정질 화합물 1은 초기에는 불순물은 인지되지 않았지만, 4주 후의 순도는 99.4%였다. 비정질 화합물 2는 초기의 순도는 98.8%였지만, 4주 후에 96.1%까지 감소하고, 이때의 불순물 피크의 면적치는 0.6%로부터 3.1%까지 증가하였다. 한편, 화합물 1의 결정은 초기에는 불순물이 인지되지 않았고, 4주 후에도 순도에 변화가 없었다. 또한, 순도 측정은 다음의 조건으로 행하였다.

·칼럼: Develosil CN-5 (Nomura Chemical), 250㎜x4.6㎜φ

·이동상: 20mM NaH₂PO₄ buffer (pH 6.9)/MeCN = 80/20

·유속: 1.0㎖/min.

·파장: UV 247㎚ 및 220㎚

·주입량: 10μL

·시료 농도: 100㎍/㎖(H₂O)

이상의 결과로부터 비정질 화합물1과 비정질 화합물 2에 비해 화합물 1의 결정은 안정성의 면에서 매우 우수한 것으로 나타났다.

[ 시험예 3] 66% RH (20℃) 조건의 흡습성 시험

개량법에 의해 조제한 비정질 화합물 1, 그 유리 염기를 특허문헌 1의 실시예 1과 동일한 방법으로 염산염으로 한 비정질 화합물 2 및 본 명세서의 실시예 1에 기재된 방법으로 조제한 화합물 1 결정의 각 시료 100㎎씩을 아질산나트륨 포화 수용액에 의해 조제한 습도 66%RH의 데시케이터에 넣고 20℃에서 방치하였다. 각 시료의 중량 변화를 경시적으로 측정하고 중량 증가율을 계산하였다. 그 결과, 비정질 화합물 1은 7일 후 1.7%의 중량 증가율을 나타내고, 그때의 순도는 99.8%로 약간 떨어졌다. 비정질 화합물 2는 7일 후 1.7%의 중량 증가율을 나타내고, 그때의 순도는 초기치의 97.9%로부터 90.5%로 떨어졌다. 한편, 화합물 1의 결정은 7일 후에도 0.01%의 중량 증가율로 흡습성은 인지되지 않았으며 순도의 변화도 인지되지 않았다. 이상의 결과로부터 화합물 1의 결정은 비정질 화합물 1과 비정질 화합물 2에 비해 흡습성의 면에서 매우 우수한 것으로 나타났다.

이러한 모든 실험 결과로부터 비정질의 화합물 1과 비정질의 화합물 2에 비해 본 발명의 화합물 1의 결정은 고순도이면서도 안정성이 뛰어나고 흡습성이 낮은 특성을 가지고, 의약품으로 사용하기에 적합한 것임을 알 수 있었다.

Claims (15)

1. Ｎ-［２-（｛２-［（２Ｓ）-２-시아노피롤리딘-１-일］-２-옥소에틸｝아미노）-２-메틸프로필］-２-메틸피라졸로［１, ５-ａ］피리미딘-６-카르복사미드(아나글립틴)의 결정.
2. 제1항에 있어서,
   분말 X선 회절 패턴에 있어서 2θ로 표시되는 회절 각도로서 9.8°, 17.4°, 18.6°, 25.3° 및 25.8° 부근에 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.
3. 제1항에 있어서,
   2θ로 표시되는 회절 각도가 하기 도 1에 나타내는 분말 X선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는 결정.
   [도 1]
   

   
4. 제1항에 있어서,
   적외선 흡수 스펙트럼에 있어서 파수 3340㎝^-1, 1664㎝^-1 및 1654㎝^-1 부근에 흡수를 인지하는 것을 특징으로 하는 결정.
5. 제1항에 있어서,
   ㎝^-1로 표시되는 파수는 하기 도 2에 나타내는 적외선 흡수 스펙트럼과 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는 결정.
   [도 2]
   

   
6. 제1항에 있어서,
   시차주사열량 측정(DSC)에 있어서 120℃ 부근에 흡열 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.
7. 제1항에 있어서,
   흡열 피크가 하기 도 3에 나타내는 시차주사열량 측정 곡선과 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는 결정.
   [도 3]
   

   
8. N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘을 유기 용매 중에서 반응시킨 후, 칼럼 크로마토그래피 정제에 의해 얻어지는 아나글립틴 비정질을 2-프로판올로부터 결정화시킴으로써 아나글립틴 결정을 얻는 것을 특징으로 하는 아나글립틴 결정의 제조 방법.
9. N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘을 유기 용매 중에서 반응시키고, 얻어진 아나글립틴 비정질을 결정석출 용매에 용해한 후, 아나글립틴의 종결정을 가하여 결정석출시킴으로써 아나글립틴 결정을 얻는 것을 특징으로 하는 아나글립틴 결정의 제조 방법.
10. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    상기 N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드와 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘과의 반응을 알칼리탄산염 및 요오드화염의 존재 하에서 행하는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
11. 제10항에 있어서,
    상기 알칼리탄산염이 탄산칼륨이고, 상기 요오드화염이 요오드화칼륨인 것을 특징으로 하는 제조 방법.
12. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    상기 유기 용매는 아세톤, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
13. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    상기 (2S)-N-클로로아세틸-2-시아노피롤리딘은 N-(2-아미노-2-메틸프로필)-2-메틸피라졸로[1, 5-a]피리미딘-6-카르복사미드에 대해 1~1.2당량인 것을 특징으로 하는 제조 방법.
14. 제9항에 있어서,
    상기 결정석출 용매가 2-프로판올 또는 에틸아세테이트인 것을 특징으로 하는 제조 방법.
15. 제9항에 있어서,
    상기 아나글립틴의 종결정을 가하여 결정석출시킴으로써 아나글립틴의 결정을 얻은 후, 나아가 여액을 농축한 후에 아나글립틴의 종결정을 가하여 결정석출시킴으로써 아나글립틴의 결정을 얻는 공정을 복수회 행하는 것을 특징으로 하는 제조 방법.

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