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KR20120086297A - 골 상실-관련된 질환의 치료에서 ｓｉｇｌｅｃ 15 항체 - Google Patents

골 상실-관련된 질환의 치료에서 ｓｉｇｌｅｃ 15 항체 Download PDF

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KR20120086297A
KR20120086297A KR1020127010573A KR20127010573A KR20120086297A KR 20120086297 A KR20120086297 A KR 20120086297A KR 1020127010573 A KR1020127010573 A KR 1020127010573A KR 20127010573 A KR20127010573 A KR 20127010573A KR 20120086297 A KR20120086297 A KR 20120086297A
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KR
South Korea
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seq
antibody
antigen
binding fragment
chain variable
Prior art date
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Ceased
Application number
KR1020127010573A
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English (en)
Inventor
질 버나드 트렘블리
마리오 필리온
매튜 스튜이블
Original Assignee
알레시아 바이오쎄라퓨틱스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=43856338&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20120086297(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 알레시아 바이오쎄라퓨틱스 인코포레이티드 filed Critical 알레시아 바이오쎄라퓨틱스 인코포레이티드
Publication of KR20120086297A publication Critical patent/KR20120086297A/ko
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Abstract

Siglec-15에 특이적으로 결합하는 신규한 항체와 항원 결합 단편이 본 발명에서 기술된다. 일부 구체예에서, 이들 항체 또는 항원 결합 단편은 Siglec-15의 생물학적 활성을 차단할 수 있고, 그리고 골 상실, 더욱 구체적으로, Siglec-15의 세포 표면 발현을 증가시키는 골 질환, 예를 들면, 파골세포의 골 분해 활성이 증가하는 장애의 치료를 위한 조성물에 유용하다. 본 발명은 또한, 이들 항체 또는 항원 결합 단편, 예를 들면, 단일클론, 인간화 또는 키메라 항체를 발현하는 세포에 관계한다. 부가적으로, 이들 항체와 단편을 이용하여 골 상실, 골-관련된 질환 또는 암을 검출하고 치료하는 방법 역시 개시된다.

Description

골 상실-관련된 질환의 치료에서 ＳＩＧＬＥＣ 15 항체{SIGLEC 15 ANTIBODIES IN TREATING BONE LOSS-RELATED DISEASE}
본 발명의 기술 분야
본 발명은 Siglec-15에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체와 이들의 항원 결합 단편, 그리고 암 또는 골 상실, 예를 들면, 골-관련된 질환과 연관되거나 파골세포 분화 또는 활성에서 증가와 연관된 심각한 또는 과도한 골 상실을 진단하고, 예방하고, 치료하는 것을 비롯하여 일정한 질환을 치료하기 위한 그들의 용도에 관계한다. 본 발명은 또한, 파골세포 (osteoclast)의 활성이 증가되는 다양한 다른 유형의 질환의 진단, 예방과 치료를 위한 이들 항체의 용도에 관계한다.
본 발명의 배경기술
골은 골의 구조적, 기계적 및 생화학적 완전성 (integrity), 그리고 인체의 무기질 항상성 (mineral homeostasis)을 뒷받침하기 위하여 요구되는 기능적으로 별개의 세포 집단으로 구성되는 동적 연결 조직이다. 관련된 주요 세포 유형에는 골 형성 (bone formation)을 주도하고 골 질량 (bone mass)을 유지시키는 조골세포 (osteoblast), 그리고 골 재흡수 (bone resorption)를 주도하는 파골세포가 포함된다. 조골세포와 파골세포는 골 개형 (bone remodelling)으로 명명된 동적 과정에서 기능한다. 선조 (progenitor)로부터 이들 세포의 발달과 증식은 골 미세환경 (bone microenvironment)에서 생산된 성장 인자 (growth factor)와 사이토킨 (cytokine)의 네트워크에 의해, 그리고 전신 호르몬 (systemic hormone)에 의해 지배된다. 골 개형은 개체의 일생 동안 진행되고, 그리고 건강한 골 조직과 무기질 항상성의 유지에 필요하다. 이러한 과정은 거의 평형 상태를 유지하고, 그리고 전신 호르몬, 펩티드와 하류 신호전달 경로 단백질, 국소 전사 인자, 사이토킨, 성장 인자 및 기질 개조 유전자 (matrix remodelling gene)의 복잡한 상호작용에 의해 지배된다. 골 개형 과정 동안 발생하는 임의의 간섭 또는 불균형은 골격 질환 (skeletal disease)을 유발할 수 있는데, 가장 일반적인 골격 장애는 골 질량에서 순 감소 (net decrease)로 특징된다. 골 질량에서 이러한 감소의 근본적인 원인은 파골세포 수 및/또는 활성에서 증가이다. 이런 질환 중에서 가장 일반적이고 아마도 가장 많이 알려진 질환은 특히, 폐경 (menopause)이 시작된 여성에서 발생하는 골다공증 (osteoporosis)이다. 실제로, 골다공증은 장년과 노년 여성에서 골절 (skeletal fracture)의 가장 중요한 기초 원인이다. 에스트로겐 결핍이 폐경후 골다공증에서 한 가지 인자로서 강하게 관련되긴 했지만, 개형이 40여년 전에 Frost에 의해 최초로 보고된 바와 같이 개형이 골격 전역에서 별개의 패킷 (packet) 내에서 일어난다는 점에서 개형은 국지적으로 제어된 과정이라는 오래된 증거가 존재한다 (Frost H.M. 1964).
골 개형이 별개의 패킷 내에서 일어나기 때문에, 국지적으로 생산된 호르몬과 효소는 골 재흡수 및 정상적인 개형 과정의 시작을 위하여 전신 호르몬보다 더욱 중요할 지도 모른다. 이런 국지적인 제어는 조골세포와 파골세포가 작동하는 미세환경에서 이들 조골세포와 파골세포에 의해 매개된다. 가령, 파골세포는 골 기질에 부착하고, 그리고 그들 자신 및 구겨진 경계 (ruffled border)를 둘러싸는 한 무리의 액틴에 의해 형성된 밀봉 지역 (sealing zone)에 의해 범위가 결정된 골 표면 사이에서 독립된 구획 (compartment)을 형성한다. 복수의 작은 소포는 효소를 골 기질 방향으로 운반하고 부분적으로 소화된 골 기질을 내화시킨다. 밀봉 지역 내에서 미세환경은 리소솜 효소의 존재가 풍부하고, 그리고 신체의 정상적인 생리 pH에 비하여 고도로 산성이다. 구겨진 경계 막은 또한, 파골세포를 급속하게 비활성화시킬 수 있는 칼시토닌 수용체뿐만 아니라, RANK, RANKL에 대한 수용체, 그리고 대식세포-집락 자극 인자 (M-CSF) 수용체를 발현하고, 이들 둘 모두 파골세포 분화를 주도한다 (Baron, R. 2003).
저해와 자극의 복잡한 패턴에서, 성장 호르몬, 인슐린-유사 성장 인자-1, 성 스테로이드, 갑상선 호르몬, 칼슘생성 호르몬, 예를 들면, PTH와 프로스타글란딘 E2, 다양한 사이토킨, 예를 들면, 인터류킨-1 베타, 인터류킨-6, 그리고 종양 괴사 인자-알파, 그리고 1,25-디히드록시비타민 D (calcitriol)는 골 개형 과정에서 대등하게 작용한다 (Jilka et al. 1992; Poli et al. 1994; Srivastava et al. 1998; de Vemejoul 1996).
따라서 이들 특수한 세포에 의해 산출된 독특한 국지적인 환경이 다른 조직에서 발현되지 않는 독특한 유전자 서열 및/또는 다른 조직에서 발현된 폴리뉴클레오티드와 폴리펩티드의 접합절단 변이체 (splice variant)의 발현에 기인한다는 것은 당연하다. 파골세포 활성에 특이적인 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드 및 이들의 변이체와 유도체의 단리와 확인은 개형 과정의 더욱 명확한 이해를 가능하게 하고, 그리고 골 개형에 관련된 질환 상태 (disease state)의 치료를 위한 조직 특이적 치료 표적을 제공할 것이다.
골 개형에 관련된 많은 질환은 이해가 불충분하거나, 일반적으로 치료불가능하거나, 또는 단지 한정된 정도로만 치료가능하다. 가령, 골관절염 (osteoarthritis)은 치료가 어려운데, 그 이유는 치료법이 없고 치료가 통증을 완화시키고 병든 관절이 기형화되는 것을 예방하는데 초점을 맞추기 때문이다. 비-스테로이드성 소염제 (non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID)가 일반적으로, 통증을 완화시키는데 이용된다.
다른 실례는 미국내에서 FDA의 사용 승인을 받은 현재 유일한 약제가 골 파괴 (bone breakdown)를 예방하는 골흡수억제제 (anti-resorptive agent)인 골다공증이다. 에스트로겐 대체 요법은 골흡수억제제의 한 가지 실례이다. 다른 것들에는 알렌드로네이트 (alendronate) (Fosamax- 비스포스포네이트 골흡수억제제), 리세드로네이트 (risedronate) (Actonel- 비스포스포네이트 골흡수억제제), 랄록시펜 (raloxifene) (Evista- 선택성 에스트로겐 수용체 조절물질 (SERM)), 칼시토닌 (Calcimar- 호르몬), 그리고 부갑상선 호르몬/테리파라티드 (teriparatide) (Forteo- 칼슘 대사 (calcium metabolism)를 조절하는데 도움을 주는 합성 이형의 인간 호르몬, 부갑상선 호르몬)가 포함된다.
비스포스포네이트, 예를 들면, 알렌드로네이트와 리세드로네이트는 골 표면에 영구적으로 결합하고 파골세포 활성을 간섭한다. 이것은 조골세포가 재흡수 (resorption) 속도를 앞지를 수 있도록 한다. 가장 일반적인 부작용은 메스꺼움, 복통 및 느슨한 장 움직이다. 하지만 알렌드로네이트는 식도의 흥분 (irritation)과 염증, 그리고 일부 경우에, 식도의 궤양 역시 유발하는 것으로 보고된다. 리세드로네이트는 알렌드로네이트와 화학적으로 상이하고 식도 흥분을 유발할 가능성이 더욱 낮다. 하지만, 일정한 식품, 칼슘, 철 보충물, 비타민과 무기질, 또는 칼슘, 마그네슘, 또는 알루미늄을 내포하는 제산제 (antacid)가 리세드로네이트의 흡수를 감소시켜 효과의 상실을 유발할 수 있다.
랄록시펜 및 기타 SERMS (가령, 타목시펜)의 가장 일반적인 부작용은 일과성 열감 (hot flash)이다. 하지만, 랄록시펜 및 기타 호르몬 대체 요법은 심부 정맥 혈전증 (deep vein thrombosis)과 폐색전 (pulmonary embolism), 심혈관 질환 및 암을 비롯하여, 혈전의 위험을 증가시키는 것으로 밝혀졌다.
칼시토닌은 골 밀도를 증가시키고 골을 강화시키는데 있어서 에스트로겐 및 기타 골흡수억제제만큼 효과적이지 않다. 주사된 또는 코 스프레이 칼시토닌의 일반적인 부작용은 메스꺼움과 홍조 (flushing)이다. 환자는 코 염증, 콧물, 또는 코피가 발생할 수 있다. 주사가능 칼시토닌은 주사 부위에서 국지적인 피부 적열 (skin redness), 피부 발진 (skin rash), 그리고 홍조를 유발할 수 있다.
골 개형을 수반하는 여러 장애 또는 질환 상태 사이에 연계를 증명하는 상황은 파제트병을 치료하기 위하여 FDA에 의해 최초 승인된 에티드로네이트 (etidronate) (Didronel)를 이용하는 상황이다. 파제트병은 골 약화와 통증으로 이어지는 골의 무질서하고 가속화된 개형으로 특징되는 골 질환이다. 디드로넬 (Didronel)은 '오프-라벨 (off-label)'로서 이용되고 있고, 그리고 일부 연구에서, 확립된 골다공증을 앓는 폐경후 여성에서 골 밀도를 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 이것은 또한, 장기 스테로이드 약물 치료 (가령, 프레드니손 또는 코르티손)를 요하는 환자에서 골 상실을 예방하는데 효과적인 것으로 밝혀졌다. 하지만, 디드로넬의 높은 용량 또는 연속적인 이용은 골연화증 (osteomalacia)으로 불리는 다른 골 질환을 유발할 수 있다. 골다공증과 유사하게, 골연화증은 골절의 증가된 위험을 갖는 약한 골을 유발할 수 있다. 골연화증 우려 및 골 골절의 비율에서 감소와 관련된 충분한 연구의 부족으로 인하여, 미국 FDA는 골다공증 치료용으로 디드로넬을 승인하지 않고 있다.
골다공증 요법은 골 상실의 속도를 감소시키는 골흡수억제 약물에 거의 집중되었지만 최근에 생겨난 요법은 이를 단순히 유지시키거나, 또는 이의 악화를 지체시키는 대신에 골 무기질 밀도를 증가시키는데 가능성을 보인다. 골다공증 초기 단계 파이프라인은 새로운 치료 부류에서 약물 후보, 특히 카텝신 K 저해물질, 오스테오프로테게린 (osteoprotegerin)과 칼슘조절물질 (calcilytics), 그리고 신규한 비스포스포네이트로 거의 구성된다. 이들 중에서 일부는 신규한 약물 이용 유전체학 프로그램이 골 생물학의 더욱 깊은 이해에 기초하여 개발되고 있고, 그리고 장기적으로 골 장애의 치료 국면을 변화시키는 잠재력을 갖는 실례이다.
본 발명에서는 암 또는 골 상실 (가령, 골-관련된 질환과 연관되거나, 또는 파골세포 분화 또는 활성에서 증가와 연관된 심각한 또는 과도한 골 상실)의 진단, 예후, 그리고 치료 (예방 포함)를 위한 Siglec-15에 특이적인 항체의 용도를 기술한다. 특히, 본 발명은 파골세포의 분화를 저해하기 위한 항-siglec-15 항체의 용도에 관계한다.
시알산-결합 면역글로불린-유사 렉틴 (Siglecs)은 시알산과 상호작용하는 능력을 갖는 면역글로불린 (Ig) 슈퍼패밀리의 구성원이다 (McMillan and Crocker, 2008; Crocker et al., 2007). 특정한 구조적 특징 (structural feature)을 공유하는, 특히 시알산에 결합하는 아미노-말단 V-세트 Ig 도메인 및 가변적 숫자의 C2-세트 Ig 도메인을 나타내는 몇몇 Siglec 패밀리 구성원이 존재한다. 이들 막 수용체는 일반적으로, 고도로 특정한 방식으로 발현되고, 그리고 이들 패밀리 구성원 중에서 다수는 조혈 세포에서 발현된다 (McMillan and Crocker, 2008). 이들 단백질은 세포-세포 상호작용을 촉진하고, 신호전달을 매개하고, 그리고 글리칸 (glycan)의 인식을 통하여 면역 기능을 조절하는 것으로 생각된다 (Crocker et al., 2007). 시알산은 세포 표면 상에서 복합적 당접합체 (glycoconjugate)의 단부에 전형적으로 위치하는 9-탄소 당 (carbon sugar)이다. 이들은 매우 다양한 단백질과 지질에 부착될 수 있다 (McMillan and Crocker, 2008).
Siglec-15는 Siglec-14에 높은 상동성 (homology)을 갖는 가장 최근에 보고된 Siglec 패밀리 구성원 중의 하나이다 (Angata et al., 2007). 이들 저자는 Siglec-15가 시알릴 Tn 구조에 우선적으로 결합하고 DAP12 및 DAP10과 상호작용한다고 보고하였다. 이들 상호작용의 기능적 중요성은 알려져 있지 않지만 Siglec-15는 아마도 활성화 기능을 갖는 것으로 제안되었다 (Angata et al., 2007). 포유동물에서 Siglec-15의 잠재적 역할에 대한 이들 예비적 통찰 (preliminary insight)에도 불구하고, 상기 단백질의 생물학적 기능의 이해에서 중요한 진전은 파골세포 분화의 신규한 조절물질을 발견하기 위한 스크린 (screen)의 일부로서 이러한 서열이 확인되었을 때 기여되었다 (Sooknanan et al. 2007). 본 특허 출원에서, 파골세포발생 (osteoclastogenesis)의 생쥐 모형에서 RNA 간섭에 의한 Siglec-15 전사체의 약화는 RANKL 치료에 응하여 전구체의 분화의 유의미한 감소를 유발하는 것으로 밝혀졌다. 유사한 결과가 인간 파골세포에서 개시되었다. 더 나아가, 본 명세서에서 제공된 이들 연구는 또한, 세포 막에서 Siglec-15의 국지화 (localization)가 파골세포 분화에서 이의 기능을 위하여 필요하다는 것을 증명하였다. 게다가, 최근의 한 간행물은 표면 당접합체의 단부에서 시알산의 존재가 적절한 파골세포 분화를 위하여 요구되고, 그리고 아마도 파골세포 전구 세포 (precursor cell)의 융합 (fusion)에 중요하다는 것을 증명하였다 (Takahata et al., 2007). 이러한 최근의 관찰 결과는 분화하는 파골세포 내에서 시알산 결합 및 Siglec-15의 발현 사이에 직접적인 기능적 연계를 산출하고, 그리고 Siglec-15가 파골세포 전구체의 초기 분화 프로그램에서 일정한 역할을 한다는 것을 강하게 암시하였다.
따라서 Siglec-15의 발현 프로필, 파골세포 분화 동안 이의 강한 유도성 (inducibility), 막의 표면에서 이의 국지화, 그리고 이의 구조적 특징 모두 세포 표면에서 상기 단백질을 단일클론 항체로 표적화 (targeting)시키는 실현가능성 (feasibility)에 기여한다. 파골세포를 표적으로 하는 단일클론 항체-기초된 요법의 유일한 다른 실례는 RANKL에 특이적인 인간 단일클론 항체인 데노수맙 (denosumab)이다 (Ellis et al. 2008). 본 발명은 특히, 골-관련된 질환의 상황에서 또는 증가된 파골세포 분화 또는 활성의 상황에서 골 상실의 검출 또는 치료에서 파골세포 분화의 차단제로서 항-siglec-15 항체 또는 항원 결합 단편의 용도에 관계한다. 본 발명은 또한, 암의 검출 또는 치료에서 항체 또는 항원 결합 단편의 용도에 관계한다.
Frost H.M., 1964 Dymanics of Bone Remodelling. In: Bone Biodynamics, Little and Brown, Boston, MA, USA pp.315; Baron, R., Anatomy and Biology of Bone Matrix and Cellular Elements, In: Primer on the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism, Fifth Edition 2003, American Society for Bone and Mineral Research, Washington DC, pp.1-8; Jilka, R. L. et al., "Increased Osteoclast Development After Estrogen Loss: Mediation by Interleukin-6", Science 257: 88-91 (1992). Poli, V. et al., "Interleukin-6 deficient mice are protected from bone loss caused by estrogen depletion", EMBO J 13: 1189-1196 (1994). Srivastava, S. et al., "Estrogen Blocks M-CSF Gene Expression and Osteoclast Formation by Regulating Phosphorylation of Egr-1 and Its Interaction with Sp-1", J Clin Invest 102: 1850-1859 (1998). de Vernejoul, M. C., "Dynamics of Bone Remodelling: Biochemical and Pathophysiological Basis", Eur J Clin Chem Clin Biochem 34: 729-734 (1996). McMillan, S.J. and P.R. Crocker, "CD33-related sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectins in health and disease", Carbohydr Res, 343(12): p. 2050-6 (2008). Crocker, P.R., J.C. Paulson, and A. Varki, Siglecs and their roles in the immune system. Nat Rev Immunol, 7(4): p. 255-66 (2007). Angata, T., et al., Siglec-15: an immune system Siglec conserved throughout vertebrate evolution. Glycobiology, 17(8): p. 838-46 (2007). Sooknanan, R. R., "Polynucleotides and polypeptide sequences involved in the process of bone remodelling", PCT/CA2007/000210 (2007). Takahata, M., et al., Sialylation of cell surface glycoconjugates is essential for osteoclastogenesis. Bone, 41(1): p. 77-86 (2007). Ellis, G. K. et al., "Randomized Trial of Denosumab in Patients Receiving Adjuvant Aromatase Inhibitors for Nonmetastatic Breast Cancer", J Clin Oncol 26: 4875-4882 (2008). Buechler J, Valkirs G, Gray J. "Polyvalent display libraries." U.S. 6,057,098 (2000). Durocher Y, Kamen A, Perret S, Pham PL. "Enhanced production of recombinant proteins by transient transfection of suspension-growing mammalian cells." Canadian patent application No. CA 2446185 (2002). Durocher Y. "Expression vectors for enhanced transient gene expression and mammalian cells expressing them." U.S. patent application No. 60/662,392 (2004). Shankavaram, U. T. et al., "Transcript and protein expression profiles of the NCI-60 cancer panel: an integromic microarray study", Mol Cancer Ther 6: 820-832 (2007). Blixt O. et al., "Sialoside specificity of the siglec family assessed using novel multivalent probes", J Biol Chem, 278, 31007-31019.
본 발명의 요약
본 발명은 골 상실 또는 암의 치료 (예방 포함), 검출과 진단에 유용한 항체와 항원 결합 단편, 그리고 키트에 관계한다. 이들 항체와 항원 결합 단편은 더욱 구체적으로, 분화된 파골세포, 난소 암 세포, 신장 암 세포, 중추신경계의 암 세포, 전립선 암 세포, 흑색종 세포, 유방 암 세포, 폐 암 세포 또는 대장 암 세포의 검출, 그리고 골 상실, 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암의 진단에 유용할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 또한, 골 상실, 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암을 치료하는데 유용할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 Siglec-15 (서열 번호: 2)의 아미노산 20 내지 259 또는 Siglec-15 변이체 (가령, 서열 번호: 4)의 상응하는 영역에 결합할 수 있다. 더욱 구체적으로, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 Siglec-15 (서열 번호: 2)의 아미노산 49 내지 165 또는 Siglec-15 변이체 (가령, 서열 번호: 4)의 상응하는 영역에 결합할 수 있다.
본 발명은 더욱 구체적으로, 파골세포 분화를 촉진할 수 있는 폴리펩티드에 결합할 수 있고, 그리고 상기 폴리펩티드의 파골세포 분화 활성을 저해할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편에 관계한다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259, 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 변이체에 결합하는 것들을 포함한다.
더욱 구체적으로, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 2의 아미노산 49 내지 165, 또는 서열 번호: 2의 아미노산 49 내지 165와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 변이체에 더욱 각별하게 결합할 수 있다.
더욱 특이적으로, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 2와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드에 더욱 각별하게 결합할 수 있다.
본 발명에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 이런 이유로, 파골세포 분화를 촉진하거나 종양 성장을 촉진하는 폴리펩티드의 능력을 간섭할 수 있다.
서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체의 세포외 영역에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편이 더욱 특이적으로 예기된다.
이런 이유로, 본 발명에서는 파골세포 분화를 촉진할 수 있는 폴리펩티드에 결합할 수 있고 시알산-결합 면역글로불린-유사 렉틴 15 (Siglec-15; 서열 번호: 2)의 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259와 적어도 80% 서열 동일성 (또는 서열 번호: 2의 아미노산 49-165와 적어도 80% 동일성)을 갖는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편을 제시하고, 여기서 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 파골세포 분화를 저해하거나, 골 재흡수 (degradation)를 저해하거나, 또는 Siglec-15가 시알산에 결합하는 것을 차단할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 파골세포 전구 세포의 분화된 파골세포로의 분화를 간섭 (저해)할 수 있다.
본 발명에 따라서, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 예로써, 다중클론 항체, 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편일 수 있다.
예시적인 구체예에서, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 항체 또는 이의 단편의 불변 영역의 아미노산을 포함하는 키메라 항체 또는 인간 항체일 수 있다.
불변 영역 또는 이의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 유래될 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, 불변 영역은 IgG2로부터 유래될 수 있다.
특히 유용한 항원 결합 단편에는 예로써, FV (scFv), Fab, Fab' 또는 (Fab')2가 포함된다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 단리된 포유동물 세포 (하이브리도마 세포 제외)에서 또는 이러한 세포로부터, 또는 하이브리도마 세포에서 생산될 수 있다. 단리된 포유동물 세포의 예시적인 구체예는 인간 세포이다.
단리된 포유동물 세포 (가령, 인간 세포) 내에서 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편의 생산이 특히 예기된다. 이렇게 생산된 키메라 항체 또는 인간 항체는 예로써, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 불변 영역 또는 이의 단편을 비롯하여, 인간 항체 또는 이의 단편의 불변 영역의 아미노산을 포함할 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, 불변 영역은 IgG2로부터 유래될 수 있다.
본 발명의 한 측면에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 파골세포 전구 세포의 분화된 인간 파골세포로의 분화를 간섭 (저해)할 수 있다.
예시적인 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 일차 인간 파골세포 전구 세포의 분화된 인간 파골세포로의 분화를 간섭 (저해)할 수 있다.
이런 활성을 갖는 항체 또는 항원 결합 단편에는 예로써, 다중클론 항체, 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편이 포함될 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, 이런 활성을 가질 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편에는 예로써, 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편이 포함된다.
이보다 더욱 특정한 구체예에서, 이런 활성을 가질 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편에는 예로써, 인간 항체 또는 이의 단편의 불변 영역의 아미노산을 포함할 수 있는 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편이 포함된다.
키메라 또는 인간 항체의 불변 영역 또는 이의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 유래될 수 있다. 더욱 구체적으로, 불변 영역은 IgG2로부터 유래될 수 있다.
본 발명의 항체와 항원 결합 단편은 또한, 흑색종 세포와 중추신경계의 암 세포뿐만 아니라 골 세포와 유방, 대장, 폐, 난소, 전립선, 그리고 신장 암 세포를 비롯하여, Siglec-15를 발현하거나 과다발현하는 세포를 전반적으로 표적으로 하는데 이용될 수 있다.
더욱 구체적으로, 이들 항체와 항원 결합 단편은 분화를 겪고 있는 파골세포를 표적으로 하는데 이용될 수 있다.
본 발명에서는 한 측면에서, 서열 번호: 2에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 또는 실질적으로 정제된 항체 또는 항원 결합 단편을 제시한다.
더욱 특이적으로, 그리고 본 발명의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 2의 아미노산 20 및 아미노산 259 사이에 위치하는 도메인에 결합할 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 2의 아미노산 20 및 아미노산 259 내에 포함된 에피토프에 결합할 수 있다.
따라서 본 발명은 서열 번호: 2에 대한 특이성 (specificity)을 갖는 진단적 및/또는 치료적 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 또한, 본 발명에는 본 발명의 항체와 동일한 에피토프 특이성을 갖는 항체 또는 항원 결합 단편이 포함된다. 후보 항체는 본 명세서에서 기술된 항체가 결합하는 에피토프에 상기 항체가 결합하는 지를 결정함으로써 및/또는 상기 에피토프에 결합하는 것으로 알려진 항체 또는 항원 결합 단편으로 경쟁 분석평가 (competition assay)를 수행함으로써 확인될 수 있다.
이런 이유로, 본 발명의 다른 측면에서는 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편과 경쟁할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편을 제시한다.
다른 측면에서, 본 발명에서는 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편을 이용한 치료 방법 및 검출 방법을 제시한다.
용어 "항체"는 본래 항체, 단일클론 또는 다중클론 항체를 지칭한다. 용어 "항체"는 다중특이적 항체, 예를 들면, 이중특이적 항체 역시 포함한다. 인간 항체는 일반적으로, 가변 영역과 불변 영역을 각각 포함하는 2개의 경쇄와 2개의 중쇄로 만들어진다. 경쇄 가변 영역은 프레임 영역과 접하는, CDRL1, CDRL2와 CDRL3으로서 확인된 3개의 CDR을 포함한다. 중쇄 가변 영역은 프레임 영역과 접하는, CDRH1, CDRH2와 CDRH3으로서 확인된 3개의 CDR을 포함한다.
본 명세서에서, 용어 "항원-결합 단편"은 항원 (가령, 서열 번호: 2 또는 이의 변이체)에 결합하는 능력을 유지하는 항체의 하나 또는 그 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 본래 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 항체의 "항원-결합 단편" 내에 포함되는 결합 단편의 실례에는 (i) VL, VH, CL과 CH1 도메인으로 구성되는 일가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH와 CH1 도메인으로 구성되는 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 팔의 VL과 VH 도메인으로 구성되는 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 구성되는 dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 그리고 (vi) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR), 예를 들면, VH CDR3이 포함된다. 게다가, 비록 Fv 단편의 두 도메인, VL과 VH가 별개의 유전자에 의해 코딩되긴 하지만, 이들은 VL과 VH 영역이 대합하여 일가 분자가 형성되는 단일 폴리펩티드 사슬로서 그들의 제조를 가능하게 하는 합성 링커에 의해, 재조합 방법을 이용하여 연결될 수 있다 (단일 사슬 Fv (scFv)로 알려져 있음; 참조: Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 그리고 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). 이런 단일 사슬 항체 역시 항체의 "항원-결합 단편" 내에 포함되는 것으로 의도된다. 게다가, 이들 항원-결합 단편에는 (i) 면역글로불린 힌지 영역 폴리펩티드에 융합되는 결합 도메인 폴리펩티드 (가령, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 또는 링커 펩티드를 거쳐 경쇄 가변 영역에 융합된 중쇄 가변 영역), (ii) 힌지 영역에 융합되는 면역글로불린 중쇄 CH2 불변 영역, 그리고 (iii) CH2 불변 영역에 융합되는 면역글로불린 중쇄 CH3 불변 영역을 포함하는 결합-도메인 면역글로불린 융합 단백질이 포함된다. 힌지 영역은 이합체화 (dimerization)를 예방하기 위하여, 하나 또는 그 이상의 시스테인 잔기를 세린 잔기로 대체함으로써 변형될 수 있다. 이런 결합-도메인 면역글로불린 융합 단백질은 US 2003/0118592 및 US 2003/0133939에서 더욱 개시된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 전통적인 기술을 이용하여 획득되고, 그리고 이들 단편은 본래 항체에서와 동일한 방식으로 유용성에 대하여 스크리닝 (screening)된다.
전형적인 항원-결합 부위는 경쇄 면역글로불린과 중쇄 면역글로불린의 대합 (pairing)에 의해 형성된 가변 영역으로 구성된다. 항체 가변 영역의 구조는 매우 불변하고 매우 유사한 구조를 보인다. 이들 가변 영역은 전형적으로, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명된 3개의 초가변 영역이 사이사이에 위치하는 상대적으로 상동한 프레임 영역 (FR)으로 구성된다. 항원 결합 단편의 전체 결합 활성은 CDR의 서열에 의해 종종 지배된다. FR은 종종, 최적 항원 결합을 위한 CDR의 3 차원에서 적절한 위치결정과 정렬에서 일정한 역할을 한다.
본 발명의 항체 및/또는 항원 결합 단편은 예로써, 재조합 DNA 기술을 통하여, 예로써 생쥐, 쥐 또는 임의의 다른 포유동물로부터 또는 다른 출처로부터 기원될 수 있다.
본 발명의 추가의 범위, 적용가능성 및 이점은 하기에 제공된 비-제한적인 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 하지만, 이러한 상세한 설명은 본 발명의 예시적인 구체예를 지시하긴 하지만, 첨부된 도면과 관련하여 단지 실례로써 제공되는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 상세한 설명
파골세포와 정상 조직 내에서 Siglec-15의 발현 프로필
본 발명은 파골세포의 증가된 활성에 기인한 심각한 골 상실이 관찰되는 다양한 골 관련된 질환에서 발견된 파골세포를 표적으로 하는 단일클론 항체의 용도에 관계한다. 항체를 파골세포로 지향시키기 위하여, 세포의 세포 표면에서 발현되는 파골세포-특이적 항원의 확인이 수행되어야 한다. 세포-특이적 항원을 확인하는데 이용가능한 여러 기술이 존재하고, 그리고 mRNA의 감산 전사-기초된 증폭 (Subtractive Transcription-based Amplification of mRNA, STAR)으로 불리는 혁신적 발견 플랫폼 (discovery platform)인 RANKL로 치료된 분화 파골세포 내에서 Siglec-15를 확인하는데 이용되는 방법은 공개된 특허 출원 No. PCT/CA2007/000210에서 기술된다.
인간 파골세포 STAR 라이브러리의 분석은 분비된 세포 표면 단백질을 인코딩하는 많은 유전자를 산출하였다. AB-0326으로 명명된 이들 중에서 한 가지는 서열 번호: 1에서 도시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 987개 염기쌍의 cDNA에 의해 인코딩되는 서열 번호: 2에 상응하는 328개 아미노산의 폴리펩티드를 인코딩하는 개방 해독 틀을 내포하였다. 공개적으로 가용한 데이터베이스의 검색에서, AB-0326 뉴클레오티드 서열은 CD33 항원-유사 3 (CD33L3)으로 불리는 인간 유전자의 뉴클레오티드 서열과 동일한 것으로 밝혀졌다. CD33L3은 이후에, Siglec 패밀리의 시알산 결합 단백질의 구성원인 것으로 밝혀졌고, 그리고 다른 Siglec에 대한 상동성 (homology)에 기초하여 Siglec-15로 개명되었다 (Crocker et al., 2007). 이러한 정보에 기초하여, 생쥐 오르토로그 (orthologue)는 단리되고, 염기서열분석되고, 그리고 아미노산 수준에서 인간 서열에 대략 85% 동일한 것으로 밝혀졌다. 서열 번호: 3과 서열 번호: 4는 각각, 뮤린 Siglec-15의 cDNA와 폴리펩티드의 서열을 도시한다. 생물정보학적 분석에서, 세포외 구획에 기능적 도메인을 제공하는 타입 I 막-고정된 단백질이 예측되었다. 다른 Siglec 서열에서처럼, 아미노-말단 신호 펩티드 (서열 번호: 2의 아미노산 1과 19 사이에 위치)는 상기 단백질을 세포 막으로 표적화시키고, 그리고 최종 가공된 단백질은 카르복시-말단에 위치하는 (서열 번호: 2의 아미노산 261과 283 사이에 위치) 단일 막통과 나선을 거쳐 막에 고정된다. V-세트 Ig 도메인은 서열 번호: 2의 아미노산 49와 165 사이에 위치하는 반면, C2-세트 Ig 도메인은 서열 번호: 2의 아미노산 178과 244 사이에 위치한다.
본 발명은 파골세포의 분화 동안 Siglec-15의 기능에 관계한다. 기존 연구 결과 (Sooknanan et al. 2007)는 인간 Siglec-15을 인코딩하는 전사체가 RANKL에 응하여 유의미하게 상향 조절된다는 것을 확립하였다. 이러한 결정은 여러 상이한 인간 파골세포 분화 실험으로부터, 상이한 인간 PBMNC 공여자로부터 얼룩진 (spotted) 전체 RNA 샘플을 내포하는 RNA 마크로어레이에서 수행되었다. 게다가, 이들 연구 결과 (Sooknanan et al. 2007)는 Siglec-15 전사체가 30개 인간 정상 조직의 광범위한 패널 중에서 단지 하나의 정상 조직에서만 발현되고, 이것이 Siglec-15 유전자 발현의 매우 높은 파골세포 특이성을 지시한다는 것을 드러냈다. 더욱 민감한 방법, 예를 들면, 반-정량적 (semi-quantitative) RT-PCR을 이용하여, Siglec-15 mRNA의 발현은 많은 파골세포 샘플에서 1일의 RANKL 치료 이내에 자극되었는데, 이것은 상기 유전자가 세포 융합의 개시에 앞서, 파골세포 전구 세포에서 초기에 발현된다는 것을 지시하였다. 최종적으로, Siglec-15의 조직 발현 프로필은 반-정량적 RT-PCR에 의해 평가되고 단일 정상 인간 조직에서만 발현되는 것으로 밝혀졌고, 따라서 Sooknanan 등의 마크로어레이 결과가 확증되었다. 종합하면, 이들 발현 결과는 분화 파골세포에 고도로 한정되는, Siglec-15에 의해 예시되는 표적을 확인하는 능력에서 본 출원인의 발견 접근법 (discovery approach)의 이점 (strength)을 뒷받침한다.
파골세포의 분화의 초기 단계에서 Siglec-15의 발현, 정상 조직 내에서 이의 한정된 발현, 그리고 파골세포의 활성에서 Siglec-15에 대한 결정적인 생물학적 역할에 기초하여, Siglec-15는 골-관련된 질환, 예를 들면, 암-유도된 골 상실 및 골다공증의 검출, 예방, 그리고 치료를 위한 단일클론 항체의 개발을 위한 치료적 표적으로서 선택되었다.
이런 이유로, 다양한 항-siglec-15 항체 및 이들의 면역학적으로 기능적 단편, 예를 들면, 키메라와 인간화 단일클론 항체, 항체 단편, 단일 사슬 항체, 도메인 항체, 그리고 Siglec-15을 표적으로 하기 위한 항원-결합 영역을 보유하는 폴리펩티드가 제시된다.
항원으로서 서열 번호: 2 및 서열 번호: 2로부터 유래된 에피토프
국제 출원 No. PCT/CA2007/000210에서, 본 출원인은 서열 번호: 2가 파골세포 분화에 관여한다는 예상치 못한 발견을 하였다. 이러한 항원은 따라서, in vitro 또는 in vivo에서 상기 항원을 발현하는 세포를 표적으로 하는데 유용하고, 그리고 in vitro 또는 in vivo에서 상기 항원을 측정하기 위한 검출 검사법의 개발에 유용할 수 있다.
이런 이유로, 본 발명에서는 특이적 항체를 산출하는데 유용한 및/또는 서열 번호: 2를 발현하는 세포에 특이적인 항원을 제시한다. 이러한 항원 또는 에피토프는 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체의 적어도 10개 아미노산 (및 전장 까지)의 단편을 포함할 수 있다.
예시적인 항원은 완전한 서열 번호: 2 단백질, 또는 서열 번호: 2와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 변이체 형태, 또는 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체의 적어도 10개 아미노산을 포함하는 단편이다.
본 명세서에서 기술된 항원 또는 에피토프는 항체와 항원 결합 단편을 산출하기 위하여, 담체, 예를 들면, 키홀 림펫 (keyhole limpet, KHL), 소 혈청 알부민 (BSA), 난백알부민 (OVA) 등과 융합될 수 있다.
본 발명에서는 또한, 본 명세서에서 기술된 항체와 항원 결합 단편을 산출하기 위하여 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 내에 포함된 에피토프를 제시한다. 이러한 에피토프는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 서열 번호: 2 변이체의 상응하는 부분 내에 포함된 적어도 10개 아미노산의 단편을 포함할 수 있다.
본 발명에서는 또한, 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체에 대한 항체를 산출하기 위한 조성물을 제시하고, 상기 조성물은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 서열 번호: 2 변이체의 상응하는 부분 내에 포함된 서열 번호: 2의 에피토프 및 담체를 포함할 수 있다.
조성물의 예시적인 구체예는 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체에 대한 항체를 산출하기 위한 제약학적 조성물이다. 이러한 제약학적 조성물은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 서열 번호: 2 변이체의 상응하는 부분 내에 포함된 서열 번호: 2의 에피토프 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명에서는 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체에 대한 항체를 산출하기 위한 방법을 제시한다. 이러한 방법은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 서열 번호: 2 변이체의 상응하는 부분 내에 포함된 서열 번호: 2의 에피토프를 포함하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
추가의 측면에서, 본 발명에서는 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체에 대한 항체를 산출하기 위한, 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 서열 번호: 2 변이체의 상응하는 부분 내에 포함된 서열 번호: 2의 에피토프의 용도를 제시한다.
서열 번호: 2와 80% 동일성을 갖는 서열 번호: 2 변이체의 예시적인 구체예에는 예로써, 그리고 제한 없이, 서열 번호: 4, 그리고 유전자 은행 접근 번호 또는 NCBI 참고 서열: AAY40743.1, XP_512109.2, XP_001089000.1, XP_601064.4, NP_001094508.1, XP_855238.1, XP_574176.2 및 EAX01462.1 하에 데이터베이스 상에 공개된 기타 유사체 (analogue)가 포함된다.
서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체에 결합하는 항체와 항원 결합 단편
항체는 초기에, 목적 항원을 지향하는 그들의 특이성에 대하여 Fab 라이브러리로부터 단리되었다. 최대 특징을 보이는 항체의 경쇄 가변 도메인 또는 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열의 비교는 CDR 내에서 및 가변 영역 내에서 공통 서열을 도출하는 것을 가능하게 하였다. 이들 CDR에 대한 공통은 서열 번호:148-158 및 197-210에서 제공된다. 이들 가변 영역에 대한 공통은 서열 번호:191-196에서 제공된다.
본 명세서에서 기술된 가변 영역은 원하는 종의 불변 영역과 융합되고, 따라서 원하는 종의 주효 세포 (effector cell)에 의한 항체의 인식이 가능할 수 있다. 불변 영역은 예로써, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아류형으로부터 기원할 수 있다. 가변 영역과의 프레임 (frame) 내에 불변 영역의 클로닝 또는 합성은 당업자의 능력 범위 내에 있고, 그리고 예로써, 재조합 DNA 기술에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 일정한 구체예에서, 서열 번호: 2에 결합하는 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아류형일 수 있다. 본 발명의 더욱 특정한 구체예는 IgG1 아류형의 항체에 관계한다. 상기 항체는 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC)을 매개하는데 생물학적 활성인, 보체-매개된 세포독성 (CMC)을 매개하는데 생물학적 활성인, 또는 면역 복합체와 연관되는 IgG1 아류형의 인간화 항체일 수 있다. 전형적인 ADCC는 자연 킬러 (NK) 세포의 활성화를 수반하고, 그리고 NK 세포의 표면 상에서 Fc 수용체에 의한 항체-코팅된 세포의 인식에 의존한다. 이들 Fc 수용체는 항원, 예를 들면, 서열 번호: 2를 발현하는 표적 세포, 특히 골 세포의 표면에 결합하는, IgG1 상에 존재하는 것과 같은 항체의 Fc 도메인을 인식한다. 일단 IgG의 Fc 수용체에 결합되면, NK 세포는 사이토킨 및 세포독성 과립을 방출하고, 이들은 표적 세포에 들어가고 아폽토시스 (apoptosis)를 촉발함으로써 세포 사멸 (cell death)을 촉진한다.
본 발명에서는 서열 번호: 2에 결합하는 항체 수집물을 기술하였다. 일정한 구체예에서, 이들 항체는 다중클론 항체, 단일클론 항체, 예를 들면, 키메라 또는 인간화 항체, 항체 단편, 예를 들면, 항원 결합 단편, 단일 사슬 항체, 도메인 항체, 그리고 항원 결합 영역을 보유하는 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
이런 이유로, 본 발명에서는 다른 측면에서,
a. 서열 번호: 69, 서열 번호: 75, 서열 번호: 81, 서열 번호: 87, 서열 번호: 93, 서열 번호: 99, 서열 번호: 105, 서열 번호: 111, 서열 번호: 173, 서열 번호: 179 및 서열 번호: 185로 구성된 군에서 선택되는 CDRL1 서열;
b. 서열 번호: 70, 서열 번호: 76, 서열 번호: 82, 서열 번호: 88, 서열 번호: 94, 서열 번호: 100, 서열 번호: 106, 서열 번호: 112, 서열 번호: 174, 서열 번호: 180 및 서열 번호: 186으로 구성된 군에서 선택되는 CDRL2 서열 및/또는;
c. 서열 번호: 71, 서열 번호: 77, 서열 번호: 83, 서열 번호: 89, 서열 번호: 95, 서열 번호: 101, 서열 번호: 107, 서열 번호: 113, 서열 번호: 175, 서열 번호: 181 및 서열 번호: 187로 구성된 군에서 선택되는 CDRL3 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편을 제시한다.
이러한 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 또한,
a. 서열 번호: 72, 서열 번호: 78, 서열 번호: 84, 서열 번호: 90, 서열 번호: 96, 서열 번호: 102, 서열 번호: 108, 서열 번호: 114, 서열 번호: 176, 서열 번호: 182 및 서열 번호: 188로 구성된 군에서 선택되는 CDRH1 서열;
b. 서열 번호: 73, 서열 번호: 79, 서열 번호: 85, 서열 번호: 91, 서열 번호: 97, 서열 번호: 103, 서열 번호: 109, 서열 번호: 115, 서열 번호: 177, 서열 번호: 183 및 서열 번호: 189로 구성된 군에서 선택되는 CDRH2 서열 및/또는;
c. 서열 번호: 74, 서열 번호: 80, 서열 번호: 86, 서열 번호: 92, 서열 번호: 98, 서열 번호: 104, 서열 번호: 110, 서열 번호: 116, 서열 번호: 178, 서열 번호: 184 및 서열 번호: 190으로 구성된 군에서 선택되는 CDRH3 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명에서는
a) 서열 번호: 148, 서열 번호: 69, 서열 번호: 75 및 서열 번호: 105로 구성된 군에서 선택되는 CDRL1 서열과 적어도 80% 동일성을 가질 수 있는 CDRL1;
b) 서열 번호: 149, 서열 번호: 150, 서열 번호: 76, 서열 번호: 82 및 서열 번호: 106으로 구성된 군에서 선택되는 CDRL2 서열과 적어도 80% 동일성을 가질 수 있는 CDRL2, 또는;
c) 서열 번호: 151, 서열 번호: 152, 서열 번호: 77, 서열 번호: 83, 서열 번호: 95, 서열 번호: 107 및 서열 번호: 152로 구성된 군에서 선택되는 CDRL3 서열과 적어도 80% 동일성을 가질 수 있는 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편을 제시한다.
또 다른 측면에서, 본 발명에서는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편을 제시하고, 여기서 상기 항체는
a) 서열 번호: 153, 서열 번호: 154, 서열 번호: 84, 서열 번호: 96 및 서열 번호: 102로 구성된 군에서 선택되는 CDRH1 서열과 적어도 80% 동일성을 가질 수 있는 CDRH1;
b) 서열 번호: 155, 서열 번호: 156, 서열 번호: 157, 서열 번호: 73, 서열 번호: 79, 서열 번호: 85, 서열 번호: 97, 서열 번호: 103 및 서열 번호: 109로 구성된 군에서 선택되는 CDRH2 서열과 적어도 80% 동일성을 가질 수 있는 CDRH2, 또는;
c) 서열 번호: 158, 서열 번호: 74, 서열 번호: 98, 서열 번호: 104, 서열 번호: 110 및 서열 번호: 116으로 구성된 군에서 선택되는 CDRH3 서열과 적어도 80% 동일성을 가질 수 있는 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
예시적인 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역의 임의의 개별 CDR 또는 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3의 조합을 포함할 수 있다. CDR3이 더욱 각별하게 선택될 수 있다. 조합에는 예로써, CDRL1과 CDRL3; CDRL1과 CDRL2; CDRL2와 CDRL3 그리고; CDRL1, CDRL2와 CDRL3이 포함될 수 있다.
다른 예시적인 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역의 임의의 개별 CDR 또는 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3의 조합을 포함할 수 있다. CDR3이 더욱 각별하게 선택될 수 있다. 조합에는 예로써, CDRH1과 CDRH3; CDRH1과 CDRH2; CDRH2와 CDRH3 그리고; CDRH1, CDRH2와 CDRH3이 포함될 수 있다.
본 발명에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CDRL1, CDRL2 또는 CDRL3 중에서 적어도 2개의 CDR을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하나의 CDRL1, 하나의 CDRL2 및 하나의 CDRL3을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은
a. CDRL1, CDRL2 또는 CDRL3 중에서 적어도 2개의 CDR, 그리고;
b. 하나의 CDRH1, 하나의 CDRH2 또는 하나의 CDRH3 중에서 적어도 2개의 CDR을 포함할 수 있다.
항체 또는 항원 결합 단편은 더욱 바람직하게는, 하나의 CDRL1, 하나의 CDRL2 및 하나의 CDRL3을 포함할 수 있다.
또한, 항체 또는 항원 결합 단편은 더욱 바람직하게는, 하나의 CDRH1, 하나의 CDRH2 및 하나의 CDRH3을 포함할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명에서는
a. 서열 번호: 72, 서열 번호: 78, 서열 번호: 84, 서열 번호: 90, 서열 번호: 96, 서열 번호: 102, 서열 번호: 108, 서열 번호: 114, 서열 번호: 176, 서열 번호: 182 및 서열 번호: 188로 구성된 군에서 선택되는 CDRH1 서열;
b. 서열 번호: 73, 서열 번호: 79, 서열 번호: 85, 서열 번호: 91, 서열 번호: 97, 서열 번호: 103, 서열 번호: 109, 서열 번호: 115, 서열 번호: 177, 서열 번호: 183 및 서열 번호: 189로 구성된 군에서 선택되는 CDRH2 서열 및/또는;
c. 서열 번호: 74, 서열 번호: 80, 서열 번호: 86, 서열 번호: 92, 서열 번호: 98, 서열 번호: 104, 서열 번호: 110, 서열 번호: 116, 서열 번호: 178, 서열 번호: 184 및 서열 번호: 190로 구성된 군에서 선택되는 CDRH3 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편을 제시한다.
본 발명에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하나의 CDRH1, 하나의 CDRH2 또는 하나의 CDRH3을 포함할 수 있다.
본 발명에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 또한, 하나의 CDRH1, 하나의 CDRH2 및 하나의 CDRH3을 포함할 수 있다.
경쇄 가변 도메인 또는 중쇄 가변 도메인 중에서 단지 하나만 이용가능할 때, 항체 또는 항원-결합 단편은 당분야에 공지된 방법을 이용하여 상보성 가변 도메인의 라이브러리를 스크리닝함으로써 재구성될 수 있다 (Portolano et al. The Journal of Immunology (1993) 150:880-887, Clarkson et al., Nature (1991) 352:624-628).
또한, 본 명세서에서 기술된 CDR중 적어도 하나에서 적어도 하나의 보존성 아미노산 치환을 갖는 가변성 사슬을 포함하는 폴리펩티드 또는 항체가 본 발명에 포함된다.
또한, CDR중 적어도 2개에서 적어도 하나의 보존성 아미노산 치환을 갖는 가변성 사슬을 포함하는 폴리펩티드 또는 항체가 본 발명에 포함된다.
또한, 3개의 CDR에서 적어도 하나의 보존성 아미노산 치환을 갖는 가변성 사슬을 포함하는 폴리펩티드 또는 항체가 본 발명에 포함된다.
또한, CDR중 적어도 하나에서 적어도 2개의 보존성 아미노산 치환을 갖는 가변성 사슬을 포함하는 폴리펩티드 또는 항체가 본 발명에 포함된다.
또한, CDR중 적어도 2개에서 적어도 2개의 보존성 아미노산 치환을 갖는 가변성 사슬을 포함하는 폴리펩티드 또는 항체가 본 발명에 포함된다.
또한, 3개의 CDR에서 적어도 2개의 보존성 아미노산 치환을 갖는 가변성 사슬을 포함하는 폴리펩티드 또는 항체가 본 발명에 포함된다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 하나의 경쇄 가변 도메인의 적어도 하나의 상보성-결정 영역 및 중쇄 가변 도메인의 적어도 하나의 상보성-결정 영역을 포함하는 (단일 폴리펩티드 사슬 상에서 또는 독립된 폴리펩티드 사슬 상에서) 폴리펩티드, 항체 또는 항원 결합 단편에 관계한다.
본 발명은 다른 측면에서, 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편의 6개 상보성-결정 영역 (CDR) 모두를 포함할 수 있는 (단일 폴리펩티드 사슬 상에서 또는 독립된 폴리펩티드 사슬 상에서) 항체에 관계한다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 CDR(들)의 아미노 및/또는 카르복시 영역에 접하는 추가의 아미노산을 더욱 포함할 수 있다. 이들 추가의 아미노산은 본 명세서에서 기술된 상응하는 항체의 프레임 영역과 동일하거나, 또는 예로써, 보존성 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
본 발명의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다:
RSX1aX2aSLLHSNGX3aTYLY (서열 번호: 148),
여기서 X1a는 예로써, 중성 친수성 아미노산일 수 있고;
여기서 X2a는 예로써, 리신 또는 글루타민산일 수 있고;
여기서 X3a는 예로써, 소수성 아미노산 또는 아스파라긴일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X1a는 예로써, 세린일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X2a는 예로써, 리신일 수 있다.
더욱 구체적으로, X3a는 예로써, 이소류신 또는 발린일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X3a는 이소류신일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다:
RASXa10NIXb10Xc10YLA (서열 번호: 197)
여기서 Xa10은 임의의 아미노산 또는 예로써, G 또는 E일 수 있고;
Xb10은 임의의 아미노산 또는 예로써, Y 또는 H일 수 있고, 그리고;
Xc10은 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 N일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다: 화학식 RSSX1xSLLHSNGX2xTYLY (서열 번호: 201)의 CDRL1, 여기서 X1x와 X2x는 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다: 화학식 RSXa6KSLLHSNGNTYLY (서열 번호: 202)의 CDRL1, 여기서 Xa6은 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
항체 또는 항원 결합 단편은 또한, 예로써 서열 번호: 75, 서열 번호: 69, 서열 번호: 105 및 표 3 또는 표 5B에 열거된 다른 CDRL1을 포함하거나 이들로 구성되는 것들에서 선택되는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다:
X1bMSNLAS (서열 번호: 149),
여기서 X1b는 예로써, 염기성 아미노산이다.
더욱 구체적으로, X1b는 예로써, 글루타민 또는 아스파라긴이다.
더욱 특정한 구체예에서, X1b는 글루타민일 수 있다.
또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다:
RX1cSNLX2cS (서열 번호: 150),
여기서 X1c는 예로써, 메티오닌 또는 트레오닌이고, 그리고 X2c는 예로써, 소수성 아미노산일 수 있다.
더욱 구체적으로, X2c는 예로써, 알라닌 또는 발린일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X1c는 예로써, 메티오닌일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X2c는 예로써, 알라닌일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다:
NAKTLXa11Xb11 (서열 번호: 198)
Xa11은 임의의 아미노산 또는 예로써, P 또는 A일 수 있고, 그리고;
Xb11은 임의의 아미노산 또는 예로써, 산성 아미노산, 예를 들면, E 또는 D일 수 있다.
항체 또는 항원 결합 단편은 또한, 예로써 서열 번호: 76, 서열 번호: 82, 서열 번호: 106 및 표 3 또는 표 5B에서 열거된 다른 CDRL2를 포함하거나 이들로 구성되는 것들에서 선택되는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다:
X1dQX2dLEX3dPX4dT (서열 번호: 151)
여기서 X1d는 예로써, 소수성 아미노산일 수 있고;
여기서 X2d는 예로써, 염기성 아미노산일 수 있고;
여기서 X3d는 예로써, 티로신 또는 류신일수 있고, 그리고;
여기서 X4d는 예로써, 방향족 아미노산일 수 있다.
더욱 구체적으로, X1d는 예로써, 메티오닌 또는 알라닌일 수 있고, 더욱 특정한 구체예에서, X1d는 예로써, 메티오닌일 수 있다.
더욱 구체적으로, X2d는 예로써 히스티딘 또는 아스파라긴일 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, X2d는 예로써, 히스티딘일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X3d는 예로써, 티로신일 수 있다.
더욱 구체적으로, X4d는 예로써, 티로신 또는 페닐알라닌일 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, X4d는 예로써, 티로신일 수 있다.
추가의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다:
QQWSSNPX1eT (서열 번호: 152)
여기서 X1e는 프롤린 또는 류신이다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다:
QHYGXa12PLT (서열 번호: 199)
Xa12는 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, A 또는 V일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다: Xa8QXb8LEXc8PYT (서열 번호: 203) 여기서 Xa8, Xb8과 Xc8은 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다: QHHYGXa4PLT (서열 번호: 204) 여기서 Xa4는 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
항체 또는 항원 결합 단편은 또한, 예로써 서열 번호: 77, 서열 번호: 83, 서열 번호: 95, 서열 번호: 107, 서열 번호: 152 및 표 3 또는 표 5B에서 열거된 다른 CDRL3을 포함하거나 이들로 구성되는 것들에서 선택되는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
추가의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다:
GYTFX1fX2fYX3fMX4f (서열 번호: 153)
여기서 X1f는 예로써, 트레오닌 또는 아스파라긴일 수 있고;
여기서 X2f는 예로써, 트레오닌, 아르기닌, 세린 또는 아스파르트산일 수 있고;
여기서 X3f는 예로써, 트립토판 또는 아스파라긴, 아스파르트산 또는 글루타민산일 수 있고, 그리고;
여기서 X4f는 예로써, 티로신, 히스티딘 또는 아스파르트산일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X1f는 예로써, 트레오닌일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X2f는 예로써, 세린일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X3f는 예로써, 트립토판일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X4f는 예로써, 히스티딘일 수 있다.
다른 추가의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다:
GYTFTDYX5fMH (서열 번호: 154)
여기서 X5f는 예로써, 산성 아미노산일 수 있다.
더욱 구체적으로, X5f는 예로써, 글루타민산 또는 아스파르트산일 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, X5f는 예로써, 아스파르트산일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다: GYTFTX1lYWMH (서열 번호: 205) 여기서 X1l은 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다: GYTFTDYX1sMH (서열 번호: 208) 여기서 X1s는 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
항체 또는 항원 결합 단편은 또한, 예로써 서열 번호: 84, 서열 번호: 96, 서열 번호: 102 및 표 3 또는 표 5A에서 열거된 다른 CDRH1을 포함하거나 이들 서열로 구성되는 것들에서 선택되는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다:
LINPX1gNX2gRX3gN (서열 번호: 155)
여기서 X1g는 예로써, 중성 친수성 아미노산일 수 있고;
여기서 X2g는 예로써, 알라닌 또는 글리신일 수 있고, 그리고;
여기서 X3g는 예로써, 프롤린 또는 트레오닌일 수 있다.
더욱 구체적으로, X1g는 예로써, 세린 또는 트레오닌일 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, X1g는 예로써, 트레오닌일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X2g는 예로써, 글리신일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X3g는 예로써, 트레오닌일 수 있다.
또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다:
X1hIDPETGGTA (서열 번호: 156)
여기서 X1h는 예로써, 알라닌 또는 트레오닌일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에 따라서, X1h는 예로써, 트레오닌일 수 있다.
또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다:
EIX1iPX2iX3iSX4iX5iN (서열 번호: 157)
여기서 X1i는 예로써, 아스파르트산 또는 아스파라긴일 수 있고;
여기서 X2i는 예로써, 아스파르트산 또는 세린일 수 있고;
여기서 X3i는 예로써, 아스파르트산 또는 세린일 수 있고;
여기서 X4i는 예로써, 티로신 또는 트레오닌일 수 있고, 그리고;
여기서 X5i는 예로써, 트레오닌 또는 이소류신일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다:
AXa13YPGNGDSR (서열 번호: 200)
Xa13은 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, I 또는 V일 수 있다.
본 발명의 추가의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다: X1tIDPETGGTA (서열 번호: 206) 여기서 X1t는 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
본 발명의 다른 추가의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다: LINPX1mNX2mRX3mN (서열 번호: 207) 여기서 X1m, X2m과 X3m은 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
본 발명의 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다: X1tIDPETGGTA (서열 번호: 209) 여기서 X1t는 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
항체 또는 항원 결합 단편은 또한, 예로써 서열 번호: 73, 서열 번호: 79, 서열 번호: 85, 서열 번호: 97, 서열 번호: 103, 서열 번호: 109 및 표 3 또는 표 5A에서 열거된 다른 CDRH2를 포함하거나 이들 서열로 구성되는 것들에서 선택되는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
추가의 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다:
TX1jFYYX2jX3jX4jNYDVGFAY (서열 번호: 158)
여기서 X1j는 예로써, 중성 친수성 아미노산일 수 있고;
여기서 X2j는 예로써, 중성 친수성 아미노산일 수 있고;
여기서 X3j는 예로써, 티로신 또는 히스티딘일 수 있고, 그리고;
여기서 X4j는 예로써, 티로신 또는 세린일 수 있다.
더욱 구체적으로, X1j는 예로써, 세린 또는 트레오닌일 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, X1j는 예로써, 세린일 수 있다.
더욱 구체적으로, X2j는 예로써, 세린 또는 트레오닌일 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, X2j는 예로써, 트레오닌일 수 있다.
더욱 특정한 구체예에서, X3j는 예로써, 티로신일 수 있다. 더욱 특정한 구체예에서, X4j는 예로써, 세린일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 포함하거나 하기 화학식으로 구성되는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다: TX1vFYYX2vX3vX4vNYDVGFAY (서열 번호: 210) 여기서 X1v, X2v, X3v와 X4v는 본 명세서에서 정의된 바와 동일하다.
항체 또는 항원 결합 단편은 예로써, 서열 번호: 74, 서열 번호: 98, 서열 번호: 104, 서열 번호: 110, 서열 번호: 116 및 표 3 또는 표 5A에서 열거된 다른 CDRH3을 포함하거나 이들 서열로 구성되는 것들에서 선택되는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 기술된 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임 영역은 본 명세서에서 예시된 프레임 영역 중에서 하나 또는 그 이상으로부터 유래될 수 있다. 항체 또는 항원 결합 단편은 따라서, 본 명세서에서 기술된 CDR 중에서 하나 또는 그 이상 (가령, 특정한 CDR로부터 또는 공통 CDR 서열 번호: 148-158 및 197-210으로부터 선택됨), 그리고 본 명세서에서 예시된 경쇄 또는 중쇄 가변 영역으로부터 기원하는 프레임 영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 갖는 중쇄 가변 영역 (또는 단편)을 포함할 수 있다:
X1kX2kQX3kQQX4kX5kX6kEX7kVX8kPGASVKLSCKASGYTFTX 1l YWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPX 1m NX 2m RX 3m NYNEX1nFX2nX3nKATLTVDKSSSTAYMX4nLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSS (서열 번호: 191)
여기서 X1k는 예로써, Q 또는 E일 수 있고;
X2k는 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, V 또는 I일 수 있고;
X3k는 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, V 또는 L일 수 있고;
X4k는 임의의 아미노산 또는 예로써, P 또는 S일 수 있고;
X5k는 임의의 아미노산 또는 예로써, R 또는 G일 수 있고;
X6k는 임의의 아미노산 또는 예로써, A 또는 T일 수 있고;
X7k는 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, L 또는 I일 수 있고;
X8k는 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, R 또는 K일 수 있고;
X1l은 임의의 아미노산 또는 중성 친수성 아미노산, 예를 들면, 예로써 S 또는 T일 수 있고;
X1m은 임의의 아미노산 또는 중성 친수성 아미노산, 예를 들면, T 또는 S일 수 있고;
X2m은 임의의 아미노산 또는 예로써, G 또는 A일 수 있고;
X3m은 임의의 아미노산 또는 예로써, P 또는 T일 수 있고;
X1n은 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, K 또는 R일 수 있고;
X2n은 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, N 또는 K일 수 있고;
X3n은 임의의 아미노산 또는 예로써, N 또는 중성 친수성 아미노산, 예를 들면, S 또는 T일 수 있고, 그리고;
X4n은 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, Q 또는 H일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 갖는 중쇄 가변 영역 (또는 단편)을 포함할 수 있다:
X10VX2oLQQSGAELARPGASVKFSCKASGYTFTRNWIQWVKQRPGQGLEWIGAX a13 YPGNGDSRYTQKFKGKATLTADKSSX1qTAYMQLX2qX3qLX4qSEDSAVYYCARLAGNYAYYFDYWGQGTALTVSS (서열 번호: 192)
여기서 X1o는 예로써, Q 또는 D일 수 있고;
X2o는 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, K 또는 Q일 수 있고;
Xa13은 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, I 또는 V일 수 있고;
X1q는 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 N일 수 있고;
X2q는 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 N일 수 있고;
X3q는 임의의 아미노산 또는 예로써, G 또는 S일 수 있고, 그리고;
X4q는 임의의 아미노산 또는 예로써, A 또는 S일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 갖는 중쇄 가변 영역 (또는 단편)을 포함할 수 있다:
X1rX2rX3rLQQSGX4rELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYX 1s MHWVKQTPVHGLEWIGX 1t IDPETGGTAYNQKFKGKATLTADX1uSSX2uTAYMELSSLTSEDSAVYYCTX 1v FYYX 2v X 3v X 4v NYDVGFAYWGQGTLVTVSA (서열 번호: 193)
여기서 X1r은 예로써, E 또는 Q일 수 있고;
X2r은 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, A 또는 I일 수 있고;
X3r은 임의의 아미노산 또는 예로써, Y 또는 Q일 수 있고;
X4r은 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, A 또는 V일 수 있고;
X1s는 임의의 아미노산 또는 산성 아미노산, 예를 들면, D 또는 E일 수 있고;
X1t는 임의의 아미노산 또는 예로써, A 또는 T일 수 있고;
X1u는 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, K 또는 R일 수 있고;
X2u는 임의의 아미노산 또는 중성 친수성 아미노산, 예를 들면, S 또는 T일 수 있고;
X1v는 임의의 아미노산 또는 중성 친수성 아미노산, 예를 들면, S 또는 T일 수 있고;
X2v는 임의의 아미노산 또는 중성 친수성 아미노산, 예를 들면, T 또는 S일 수 있고;
X3v는 임의의 아미노산 또는 예로써, Y 또는 H일 수 있고, 그리고;
X4v는 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 Y일 수 있다.
추가의 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 갖는 경쇄 가변 영역 (또는 단편)을 포함할 수 있다:
DIVMTX1wAX2wFSNPVX3wLGTX4wASISCRSSX 1x SLLHSNGX 2x TYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSX1ySGSGTX2yFTLRISRVEAEDVGVYYCX a8 QX b8 LEX c8 PYTFGXa9GTKLEIK (서열 번호: 194)
여기서 X1w은 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, Q 또는 H일 수 있고;
X2w은 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, V 또는 A일 수 있고;
X3w은 임의의 아미노산 또는 예로써, T 또는 I일 수 있고;
X4w은 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 P일 수 있고;
X1x는 임의의 아미노산 또는 예로써, E 또는 K일 수 있고;
X2x는 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, V 또는 I일 수 있고;
X1y는 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 G일 수 있고;
X2y는 임의의 아미노산 또는 예로써, D 또는 A일 수 있고;
Xa8은 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, M 또는 A일 수 있고;
Xb8은 임의의 아미노산 또는 염기성 아미노산, 예를 들면, N 또는 H일 수 있고;
Xc8은 임의의 아미노산 또는 예로써, Y 또는 L일 수 있고, 그리고;
Xa9는 임의의 아미노산 또는 예로써, G 또는 S일 수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 갖는 경쇄 가변 영역 (또는 단편)을 포함할 수 있다:
X1zIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASX a10 NIX b10 X c10 YLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLX a11 X b11 GVXa3Xb3RFSGSGSGTQXc3SLKINXd3LQPEDFGSYXe3CQHHYGX a4 PLTFGXa5GTKXb5ELK (서열 번호: 195)
여기서 X1z는 임의의 아미노산 또는 예로써, D 또는 N일 수 있고;
Xa10은 임의의 아미노산 또는 예로써, E 또는 G일 수 있고;
Xb10은 임의의 아미노산 또는 예로써, Y 또는 H일 수 있고;
Xc10은 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 N일 수 있고;
Xa1111은 임의의 아미노산 또는 예로써, P 또는 A일 수 있고;
Xb11은 임의의 아미노산 또는 산성 아미노산, 예를 들면, E 또는 D일 수 있고;
Xa3은 임의의 아미노산 또는 예로써, P 또는 S일 수 있고;
Xb3은 임의의 아미노산 또는 예로써, V 또는 S일 수 있고;
Xc3은 임의의 아미노산 또는 방향족 아미노산, 예를 들면, F 또는 Y일 수 있고;
Xd3은 임의의 아미노산 또는 예로써, N 또는 S일 수 있고;
Xe3은 임의의 아미노산 또는 예로써, H 또는 Y일 수 있고;
Xa4는 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, A 또는 V일 수 있고;
Xa5는 임의의 아미노산 또는 예로써, S 또는 A일 수 있고, 그리고;
Xb5는 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, V 또는 L일 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 화학식을 갖는 경쇄 가변 영역 (또는 단편)을 포함할 수 있다:
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSX a6 KSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRXa7SRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK (서열 번호: 196)
여기서 Xa6은 임의의 아미노산 또는 중성 친수성 아미노산, 예를 들면, S 또는 T일 수 있고, 그리고;
Xa7은 임의의 아미노산 또는 소수성 아미노산, 예를 들면, I 또는 L일 수 있다.
Siglec-15에 결합하는 항체
본 발명의 일정한 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아류형의 항체이다. 바람직한 구체예에서, 항체는 IgG2 아류형의 항체이다. 본 구체예에서, 항체는 파골세포의 표면 상에서 정상 Siglec-15 기능의 생물학적 활성을 차단하는데 생물학적으로 활성인 IgG2 아류형의 인간화 항체이다. 이런 차단은 예로써, 인접한 세포 상에서 Siglec-15와 이의 기질, 이의 리간드, 그 자체, 또는 다른 단백질의 결합을 예방할 수 있다.
본 발명에서는 Siglec-15에 결합하는 항체 수집물을 개시한다. 일정한 구체예에서, 항체는 단일클론 항체 및 이들의 면역학적으로 기능적 단편, 예를 들면, 키메라와 인간화 단일클론 항체, 항체 단편, 단일 사슬 항체, 도메인 항체, 그리고 항원-결합 영역을 보유하는 폴리펩티드로 구성된다.
전형적인 항원-결합 부위는 경쇄 면역글로불린과 중쇄 면역글로불린의 대합 (pairing)에 의해 형성된 가변 영역으로 구성된다. 항체 가변 영역의 구조는 매우 불변하고 매우 유사한 구조를 보인다. 이들 가변 영역은 전형적으로, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명된 3개의 초가변 영역이 사이사이에 위치하는 상대적으로 상동한 프레임 영역 (FR)으로 구성된다. 비록 항원 결합 단편의 전체 결합 활성이 CDR의 서열에 의해 지배되긴 하지만, FR은 최적 항원 결합을 위한 CDR의 3 차원에서 적절한 위치결정과 정렬에서 결정적인 역할을 한다.
표 1에서는 항-siglec-15 항체의 특정 실례의 완전한 경쇄와 중쇄 면역글로불린에 상응하는 뉴클레오티드와 아미노산의 서열을 개시한다.
Figure pct00001
Siglec-15에 결합할 수 있는 항체는 표 1에 열거된 임의의 하나의 H 사슬 면역글로불린과 함께 임의의 하나의 L 사슬을 포함할 수 있다. 일정한 구체예에서, 항체 25A1의 경쇄는 Siglec-15-결합 활성을 갖는 완전한 항체를 형성하기 위하여 25A1의 중쇄 또는 25B4의 중쇄와 결합될 수 있다. 본 발명의 예시적인 구체예에서, 25A1 L 사슬은 25A1 H 사슬과 결합될 수 있고, 25B4 L 사슬은 25B4 H 사슬과 결합될 수 있고, 25B8 L 사슬은 25B8 H 사슬과 결합될 수 있고, 25C1 L 사슬은 25C1 H 사슬과 결합될 수 있고, 25D8 L 사슬은 25D8 H 사슬과 결합될 수 있고, 25E5 L 사슬은 25E5 H 사슬과 결합될 수 있고, 25E6 L 사슬은 25E6 H 사슬과 결합될 수 있고, 또는 25E9 L 사슬은 25E9 H 사슬과 결합될 수 있다. 부가적으로, 항체 또는 항원 결합 단편의 일부 실례는 표 1에서 열거된 항체의 목록으로부터 임의의 2개의 L 사슬 및 임의의 2개의 H 사슬의 임의의 조합으로 구성될 수 있다.
항체 25A1의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 5와 7에서 도시되고, 그리고 항체 25A1의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 6과 8에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 8에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 6에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 6 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25A1 경쇄, 그리고 서열 번호: 8 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25A1 중쇄를 포함할 수 있다.
항체 25B4의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 9와 11에서 도시되고, 그리고 항체 25B4의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 10과 12에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 12에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 10에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 10 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25B4 경쇄, 그리고 서열 번호: 12 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25B4 중쇄를 포함할 수 있다.
항체 25B8의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 13과 15에서 도시되고, 그리고 항체 25B8의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 14와 16에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 16에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 14에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 14 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25B8 경쇄, 그리고 서열 번호: 16 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25B8 중쇄를 포함할 수 있다.
항체 25C1의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 17과 19에서 도시되고, 그리고 항체 25C1의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 18과 20에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 20에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 18에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 18 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25C1 경쇄, 그리고 서열 번호: 20 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25C1 중쇄를 포함할 수 있다.
항체 25D8의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 21과 23에서 도시되고, 그리고 항체 25D8의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 22와 24에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 24에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 22에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 22 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25D8 경쇄, 그리고 서열 번호: 24 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25D8 중쇄를 포함할 수 있다.
항체 25E5의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 25와 27에서 도시되고, 그리고 항체 25E5의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 26과 28에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 28에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 26에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 26 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25E5 경쇄, 그리고 서열 번호: 28 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25E5 중쇄를 포함할 수 있다.
항체 25E6의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 29와 31에서 도시되고, 그리고 항체 25E6의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 30과 32에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 32에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 30에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 30 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25E6 경쇄, 그리고 서열 번호: 32 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25E6 중쇄를 포함할 수 있다.
항체 25E9의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 완전한 뉴클레오티드 서열은 각각, 서열 번호: 33과 35에서 도시되고, 그리고 항체 25E9의 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬의 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 34와 36에서 도시된다. 따라서 예시적인 구체예에서, Siglec-15에 결합하는 항체는 서열 번호: 36에서 도시된 중쇄 아미노산 서열과 결합된 서열 번호: 34에서 도시된 경쇄 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항체는 서열 번호: 34 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25E9 경쇄, 그리고 서열 번호: 36 또는 이의 변이체를 포함하는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 25E9 중쇄를 포함할 수 있다.
표 1에 열거된 아미노산 서열에 각각 독립적으로, 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 또는 99% 동일성을 가질 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 사슬의 조합에 의해 형성된 다른 항-siglec-15 항체 또는 항원 결합 단편의 변이체 역시 제시된다. 일정한 구체예에서, 항체 변이체는 적어도 하나의 경쇄 및 적어도 하나의 중쇄를 포함할 수 있다. 다른 경우에, 항체 변이체는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 중쇄를 포함할 수 있다. 본 발명에 따라서, 변이 영역은 불변 영역 내에 또는 가변 영역 내에 위치할 수 있다. 또한, 본 발명에 따라서, 변이 영역은 프레임 영역 내에 위치할 수 있다. 또한, 본 발명에는 표 1에 열거된 경쇄 서열 또는 이의 변이체의 가변 영역 중에서 하나를 포함하는 경쇄, 그리고 표 1에 열거된 중쇄 서열 또는 이의 변이체의 가변 영역 중에서 하나를 포함하는 중쇄를 포함하는 항체가 포함된다. 이러한 경쇄와 중쇄는 불변 도메인을 포함할 수 있다. 표 1의 경쇄와 중쇄의 조합 역시 본 발명에 포함된다.
경쇄와 중쇄 가변 영역을 내포하는 항체 또는 항원 결합 단편 역시 본 발명에 제시된다. 부가적으로, 일정한 구체예에는 이들 경쇄와 중쇄 가변 영역의 항원 결합 단편, 변이체, 그리고 유도체가 포함된다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에는 서열 번호: 2 또는 이의 변이체에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편이 포함되고, 상기 항체는
a. 서열 번호: 38에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 40에서 정의된 중쇄 가변 도메인;
b. 서열 번호: 42에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 44에서 정의된 중쇄 가변 도메인;
c. 서열 번호: 46에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 48에서 정의된 중쇄 가변 도메인;
d. 서열 번호: 50에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 52에서 정의된 중쇄 가변 도메인;
e. 서열 번호: 54에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 56에서 정의된 중쇄 가변 도메인;
f. 서열 번호: 58에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 60에서 정의된 중쇄 가변 도메인;
g. 서열 번호: 62에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 64에서 정의된 중쇄 가변 도메인;
h. 서열 번호: 66에서 정의된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 68에서 정의된 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
본 명세서에서, 상기에서 제공된 특정 조합의 경쇄 가변 영역은 임의의 다른 경쇄 가변 영역 (특히, 표 2의 것들)으로 교체될 수 있는 것으로 이해된다. 유사하게, 상기에서 제공된 특정 조합의 중쇄 가변 영역은 임의의 다른 중쇄 가변 영역 (특히, 표 2의 것들)으로 교체될 수 있다.
경쇄와 중쇄 가변 영역을 내포하는 항체 역시 본 발명에서 제시된다. 부가적으로, 일정한 구체예에는 이들 경쇄와 중쇄 가변 영역의 항원 결합 단편, 변이체, 그리고 유도체가 포함된다. 이들 경쇄와 중쇄 가변 영역 내에 존재하는 서열의 실례는 표 2에서 개시된다.
Figure pct00002
이런 이유로, Siglec-15에 결합하는 항체와 항원 결합 단편은 동일한 지정된 항체 또는 임의의 조합에서 하나의 경쇄 가변 영역 및 하나의 사슬 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 가령, 예시적인 구체예에서, 항-siglec-15 항체 또는 단편은 25A1 경쇄 가변 영역 (서열 번호: 38) 및 25A1 중쇄 가변 영역 (서열 번호: 40)을 포함할 수 있다. 대안적 구체예에서, 항-siglec-15 항체 또는 단편은 25A1 경쇄 가변 영역 (서열 번호: 38) 및 25B4 중쇄 가변 영역 (서열 번호: 44)을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항-siglec-15 항체는 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 경쇄 가변 영역 및 2개의 동일한 또는 실질적으로 동일한 중쇄 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항-siglec-15 항체는 2개의 상이한 경쇄 가변 영역 및 2개의 상이한 중쇄 영역을 포함할 수 있다.
표 2, 표 5A 및 5B에서 열거된 아미노산 서열에 각각, 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역의 조합에 의해 형성된 다른 항-siglec-15 항체의 변이체 역시 제시된다. 당업자는 또한, 항-siglec-15 항체 변이체가 표 2에 열거된 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열에서 보존성 아미노산 변화, 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 포함할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
본 발명의 일정한 구체예에서, 항-siglec-15 항체 또는 항원 결합 단편은 표 3에 도시된 CDR 서열을 포함하거나, 또는 표 3의 CDR 서열에 실질적인 서열 동일성을 가질 수 있다. 예시적인 구체예에서, 25A1 항-siglec-15 항체는 각각, 서열 번호: 68, 69, 그리고 70에 의해 인코딩되는 CDR1, 2, 그리고 3을 내포하는 경쇄 가변 영역 및/또는 각각, 서열 번호: 71, 72, 그리고 73에 의해 인코딩되는 CDR1, 2, 그리고 3을 내포하는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, CDR3 영역은 항원 결합을 제공하는데 충분할 수 있다. 따라서 CDRL3 또는 CDRH3, 또는 CDRL3과 CDRH3 둘 모두를 포함하는 폴리펩티드는 본 발명에 포함된다.
부가적으로, 항-siglec-15 항체 또는 항원 결합 단편은 표 3에 열거된 CDR의 임의의 조합을 포함할 수도 있다. 가령, 항체 또는 항원 결합 단편은 경쇄 CDR3 및 중쇄 CDR3을 포함할 수 있다. 항-siglec-15 항체 또는 항원 결합 단편 내에 포함되는 CDR은 표 3에 제공된 CDR 서열에 80%, 85%, 90%, 또는 95% 서열 동일성을 갖는 변이체 CDR일 수 있는 것으로 이해된다. 당업자는 또한, 이들 변이체가 표 3에 열거된 CDR 서열에서 보존성 아미노산 변화, 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 포함할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에는 서열 번호: 2 또는 이의 변이체 (서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 아미노산 49-165와 적어도 80% 동일성을 갖는 변이체)에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편이 포함되고,
상기 항체는
a. 표 5B에서 열거된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 표 5A에서 열거된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
b. 서열 번호: 194에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 191에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
c. 서열 번호: 195에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 192에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
d. 서열 번호: 196에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 193에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
e. 서열 번호: 38에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 40에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
f. 서열 번호: 42에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 44에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
g. 서열 번호: 46에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 48에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
h. 서열 번호: 50에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 52에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
i. 서열 번호: 54에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 56에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
j. 서열 번호: 58에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 60에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
k. 서열 번호: 62에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 64에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
l. 서열 번호: 66에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 68에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
m. 서열 번호: 162에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 164에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR ;
n. 서열 번호: 166에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 168에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR, 또는;
o. 서열 번호: 170에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 172에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR을 포함한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 Siglec-15 또는 이의 변이체 (서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 아미노산 49-165와 적어도 80% 동일성을 갖는 변이체)에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편에 관계하고,
상기 항체는
a) 표 5B에 열거된 서열과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 표 5A에 열거된 서열과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
b) 서열 번호: 194와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 191과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
c) 서열 번호: 195와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 192와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
d) 서열 번호: 196과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 193과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
e) 서열 번호: 38과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 40과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인,
f) 서열 번호: 42와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 44와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
g) 서열 번호: 46과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 48과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
h) 서열 번호: 50과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 52와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
i) 서열 번호: 54와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 56과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
j) 서열 번호: 58과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 60과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
k) 서열 번호: 62와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 64와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
l) 서열 번호: 66과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 68과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
m) 서열 번호: 162와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 164와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
n) 서열 번호: 166과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 168과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인, 그리고;
o) 서열 번호: 170과 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 172와 적어도 70% (75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
이번에도, 상기에서 제공된 특정 조합의 경쇄 가변 영역은 본 명세서에서 기술된 임의의 다른 경쇄 가변 영역으로 교체될 수 있다. 유사하게, 상기에서 제공된 특정 조합의 중쇄 가변 영역은 본 명세서에서 기술된 임의의 다른 중쇄 가변 영역으로 교체될 수 있다.
변이체 항체와 항원 결합 단편
본 발명은 또한, 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편의 변이체를 포함한다. 포함되는 변이체 항체 또는 항원 결합 단편은 아미노산 서열에서 변이를 갖는 것들이다. 가령, 포함되는 변이체 항체 또는 항원 결합 단편은 적어도 하나의 변이체 CDR (2개, 3개, 4개, 5개, 6개 및 최대 12개 변이체 CDR), 변이체 경쇄 가변 도메인, 변이체 중쇄 가변 도메인, 변이체 경쇄 및/또는 변이체 중쇄를 갖는 것들이다. 본 발명에 포함되는 변이체 항체 또는 항원 결합 단편은 예로써, 최초 항체 또는 항원 결합 단편과 비교하여 유사한 또는 향상된 결합 친화성 (binding affinity)을 갖는 것들이다.
본 명세서에서 용어 "변이체"는 본 명세서에서 기술된 임의의 서열에 적용되고 예로써, 변이체 CDR (CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 및/또는 CDRH3), 변이체 경쇄 가변 도메인, 변이체 중쇄 가변 도메인, 변이체 경쇄, 변이체 중쇄, 변이체 항체, 변이체 항원 결합 단편 및 서열 번호: 2 변이체를 포함한다.
본 발명에 포함되는 변이체 항체 또는 항원 결합 단편은 삽입, 결실 또는 아미노산 치환 (보존성 또는 비-보존성)을 포함할 수 있는 것들이다. 이들 변이체는 아미노산 서열 내에서 적어도 하나의 아미노산 잔기가 제거되고 상이한 잔기가 그 자리에 삽입될 수 있다.
치환적 돌연변이유발 (substitutional mutagenesis)을 위한 최대 관심 부위에는 초가변 영역 (CDR)이 포함되지만, 프레임 영역 또는 심지어 불변 영역에서 변형 역시 예기된다. 보존성 치환은 하기에 열거된 군 (군 1 내지 6) 중에서 하나로부터 아미노산 (CDR, 가변성 사슬, 항체 등의)을 동일한 군의 다른 아미노산으로 교체함으로써 만들어질 수 있다.
일반적으로, CDR에서 돌연변이는 프레임 영역에서 돌연변이보다, 항체 또는 항원 결합 단편의 항원 결합 활성에 더욱 큰 영향을 줄 수 있다. 본 발명에 포함되는 변이체 항체 또는 항원 결합 단편은 본 명세서에서 제공된 것들과 실질적으로 동일한 항원 결합 능력 (유사한, 동일한, 또는 약간 낮은 결합 능력 포함)을 갖거나, 또는 본 명세서에서 제공된 것들보다 더욱 우수한 항원 결합 능력을 갖는 것들이다.
보존성 치환의 다른 예시적인 구체예는 표 1A에서 "선호되는 치환"의 제목 하에 도시된다. 이런 치환이 바람직하지 않은 특성을 유발하면, 표 1A에서 "예시적인 치환"으로 명명되거나, 또는 아미노산 부류와 관련하여 하기에 더욱 기술된 바와 같은 더욱 실질적인 변화가 도입될 수 있고, 그리고 산물이 스크리닝될 수 있다.
변이체가 치환적 돌연변이유발에 의해 산출되고 본 발명의 폴리펩티드의 생물학적 활성을 유지할 수 있다는 것은 당분야에 공지되어 있다. 이들 변이체는 아미노산 서열에서 적어도 하나의 아미노산 잔기가 제거되고 상이한 잔기가 그 자리에 삽입된다. 가령, 치환적 돌연변이유발을 위한 관심 부위에는 다양한 종으로부터 획득된 특정 잔기가 동일한 부위가 포함될 수 있다. "보존성 치환"으로서 확인된 치환의 실례는 표 1A에서 도시된다. 이런 치환이 바람직하지 않은 변화를 유발하면, 표 1A에서 "예시적인 치환"으로 명명되거나, 또는 아미노산 부류와 관련하여 본 명세서에서 더욱 기술된 바와 같은 다른 유형의 치환이 도입되고, 그리고 산물이 스크리닝된다.
기능 또는 면역학적 정체 (immunological identity)에서 실질적인 변형은 (a) 치환 부위에서, 예로써 시트 (sheet) 또는 나선 형태 (conformation)로서 폴리펩티드 중추의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 크기 (bulk)를 유지하는 것에 대한 효과에서 유의미하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 자연 발생 잔기는 공통 측쇄 특성에 기초된 군으로 분류된다:
(군 1) 소수성: 노르류신, 메티오닌 (Met), 알라닌 (Ala), 발린 (Val), 류신 (Leu), 이소류신 (Ile)
(군 2) 중성 친수성: 시스테인 (Cys), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr)
(군 3) 산성: 아스파르트산 (Asp), 글루타민산 (Glu)
(군 4) 염기성: 아스파라긴 (Asn), 글루타민 (Gln), 히스티딘 (His), 리신 (Lys), 아르기닌 (Arg)
(군 5) 사슬 배향에 영향을 주는 잔기: 글리신 (Gly), 프롤린 (Pro); 그리고
(군 6) 방향족: 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 페닐알라닌 (Phe)
비-보존성 치환은 이들 부류 중에서 한 가지의 구성원의 다른 부류의 구성원으로 교체를 수반할 것이다.
Figure pct00006
Figure pct00007
변이체 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노산 서열에서 변이에는 아미노산 부가, 결실, 삽입, 치환 등, 하나 또는 그 이상의 아미노산의 중추 또는 측쇄에서 하나 또는 그 이상의 변형, 또는 하나 또는 그 이상의 아미노산 (측쇄 또는 중추)에 기 (group) 또는 다른 분자의 부가가 포함될 수 있다.
변이체 항체 또는 항원 결합 단편은 최초 항체 또는 항원 결합 단편 아미노산 서열과 비교하여 아미노산 서열에서 실질적인 서열 유사성 및/또는 서열 동일성을 가질 수 있다. 두 서열 사이에 유사성 정도는 동일성 (동일한 아미노산)과 보존성 치환의 백분율에 기초된다.
일반적으로, 가변성 사슬 사이에 유사성과 동일성의 정도는 본 명세서에서, 애초 설정 (default setting), 다시 말하면, blastp 프로그램, BLOSUM62 매트릭스 (개방 갭 (open gap) 11 및 신장 갭 페널티 (extension gap penalty) 1; gapx 드롭오프 (dropoff) 50, 기대 (expect) 10.0, 단어 크기 (word size) 3) 및 활성화된 필터를 이용한 Blast2 서열 프로그램 (Tatiana A. Tatusova, Thomas L. Madden (1999), "Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequence", FEMS Microbiol Lett. 174:247-250)을 이용하여 결정된다.
이런 이유로, 동일성 퍼센트 (Percent identity)는 최초 펩티드와 비교하여 동일하고, 그리고 동일하거나 유사한 위치를 점유하는 아미노산을 지시할 것이다.
유사성 퍼센트는 동일한 아미노산, 그리고 동일하거나 유사한 위치에서 최초 펩티드와 비교하여 보존성 아미노산 치환으로 대체되는 아미노산을 지시할 것이다.
이런 이유로, 본 발명의 변이체 (즉, 유사체) (VL 변이체, VH 변이체, CDR 변이체, 항체 변이체, 폴리펩티드 변이체 등 포함)는 최초 서열 또는 최초 서열의 일부분과 적어도 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 가질 수 있는 것들을 포함한다.
본 발명에 따라서, 서열 번호: 2 변이체에는 서열 번호: 2의 아미노산 49-165 또는 아미노산 20 내지 259와 적어도 80% 동일한 영역을 갖는 폴리펩티드가 포함된다. 서열 번호: 2의 변이체에는 서열 번호: 2와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 역시 포함된다.
변이체의 예시적인 구체예는 본 명세서에서 기술된 서열에 적어도 81% 서열 동일성, 그리고 최초 서열 또는 최초 서열의 일부분과 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 유사성을 갖는 것들이다.
변이체의 다른 예시적인 구체예는 본 명세서에서 기술된 서열에 적어도 82% 서열 동일성, 그리고 최초 서열 또는 최초 서열의 일부분과 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 유사성을 갖는 것들이다.
변이체의 또 다른 예시적인 구체예는 본 명세서에서 기술된 서열에 적어도 85% 서열 동일성, 그리고 최초 서열 또는 최초 서열의 일부분과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 유사성을 갖는 것들이다.
변이체의 또 다른 예시적인 구체예는 본 명세서에서 기술된 서열에 적어도 90% 서열 동일성, 그리고 최초 서열 또는 최초 서열의 일부분과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 유사성을 갖는 것들이다.
변이체의 추가의 예시적인 구체예는 본 명세서에서 기술된 서열에 적어도 95% 서열 동일성, 그리고 최초 서열 또는 최초 서열의 일부분과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 유사성을 갖는 것들이다.
변이체의 다른 추가의 예시적인 구체예는 본 명세서에서 기술된 서열에 적어도 97% 서열 동일성, 그리고 최초 서열 또는 최초 서열의 일부분과 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 유사성을 갖는 것들이다.
간결함을 위하여, 본 출원인은 본 발명에 포함되는 개별 변이체의 예시적인 구체예를 보여주고 특정된 서열 동일성% 및 서열 유사성%를 포함하는 표 1B를 제공한다. 각 "X"는 소정의 변이체를 정의하는 것으로 간주된다.
Figure pct00008
본 명세서에서, 용어 "동일한"은 서열이 다른 서열과 100% 서열 동일성을 공유하는 것을 의미한다.
본 명세서에서, 용어 "실질적으로 동일한"은 서열이 다른 서열 또는 다른 서열의 일부분과 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 서열 동일성을 공유한다는 것을 의미한다.
본 발명에는 CDR, 경쇄 가변 도메인, 중쇄 가변 도메인, 경쇄, 중쇄, 항체 및/또는 본 명세서에서 기술된 서열과 적어도 80% 동일성을 포함하는 항원 결합 단편이 포함된다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편의 예시적인 구체예는 서열 번호: 38에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 42에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 46에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 50에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 54에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 58에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 62에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 66에 70% (적어도 80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 162에 70% (적어도 80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 166에 70% (적어도 80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열, 그리고 서열 번호: 170에 70% (적어도 80%, 85%, 90%, 95% 및 100% 포함) 동일한 서열로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것들이다.
이들 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 69에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 70에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 71에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 69에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 69에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 70에 적어도 90% 동일한 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 70에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 71에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 71에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 75에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 76에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 77에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 75에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 75에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 76에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 76에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 77에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 77에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 81에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 82에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 83에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 81에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 81에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 82에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 82에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 83에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 83에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 87에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 88에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 89에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 87에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 87에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 88에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 88에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 89에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 89에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 93에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 94에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 95에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 93에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 93에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 94에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 94에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 95에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 95에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 99에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 100에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 101에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 99에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 99에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 100에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 100에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 101에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 101에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 105에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 106에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 107에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 105에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 105에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 106에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 106에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 107에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 107에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 111에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 112에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 113에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 111에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 111에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 112에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 112에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 113에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 113에 적어도 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 173에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 174에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 175에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 173에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 173에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 174에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 174에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 175에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 175에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 179에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 180에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 181에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다 .
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 179에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 179에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 180에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 180에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 181에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 181에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 185에 적어도 80% 동일한 CDRL1 서열, 서열 번호: 186에 적어도 80% 동일한 CDRL2 서열 및 서열 번호: 187에 적어도 80% 동일한 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 185에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 185에 100% 동일할 수 있는 CDRL1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 186에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 186에 100% 동일할 수 있는 CDRL2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 187에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 187에 100% 동일할 수 있는 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.
예시적인 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 40에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 44에 적어도 70% (80% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 48에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 52에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 56에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 60에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 64에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 68에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 164에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열, 서열 번호: 168에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열 및 서열 번호: 172에 적어도 70% (80%, 85%, 90%, 95%, 100% 포함) 동일한 서열로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다.
이들 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 72에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 73에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 74에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 72에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 72에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 73에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 73에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 74에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 74에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 78에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 79에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 80에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 78에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 78에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 79에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 79에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 80에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 80에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 84에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 85에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 86에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 84에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 84에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 85에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 85에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 86에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 86에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 90에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 91에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 92에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 90에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 90에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 91에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 91에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 92에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 92에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 96에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 97에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 98에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 96에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 96에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 97에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 97에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 98에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 98에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
앞서 열거된 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 102에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 103에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 104에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 102에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 102에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 103에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 103에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 104에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 104에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
이들 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 108에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 109에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 110에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 108에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 108에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 109에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 109에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 110에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 110에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
이들 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 114에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 115에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 116에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 114에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다 .
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 114에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 115에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 115에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 116에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 116에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
이들 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 176에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 177에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 178에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 176에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 176에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 177에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 177에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 178에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 178에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
이들 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 182에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 183에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 184에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 182에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 182에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 183에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 183에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 184에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 184에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
이들 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 188에 적어도 80% 동일한 CDRH1 서열, 서열 번호: 189에 적어도 80% 동일한 CDRH2 서열 및 서열 번호: 190에 적어도 80% 동일한 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 188에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 188에 100% 동일할 수 있는 CDRH1 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 189에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 189에 100% 동일할 수 있는 CDRH2 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 더욱 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 190에 적어도 90% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 본 발명에서 제시된 임의의 항체는 서열 번호: 190에 100% 동일할 수 있는 CDRH3 서열을 포함할 수 있다 .
세포 내에서 항체의 생산
본 발명에서 개시된 항체는 당업자에게 익숙한 다양한 방법, 예를 들면, 하이브리도마 방법 또는 재조합 DNA 방법에 의해 만들어질 수 있다.
본 발명의 예시적인 구체예에서, 항체는 전통적인 하이브리도마 기술에 의해 생산될 수 있는데, 여기서 생쥐는 항원으로 면역화되고, 비장 세포는 단리되고 HGPRT 발현이 없는 골수종 세포와 융합되고, 그리고 하이브리드 세포는 히포크산틴 (hypoxanthine), 아미노프테린 (aminopterin)과 티민 (thymine) (HAT) 내포 배지에 의해 선별된다.
본 발명의 추가의 예시적인 구체예에서, 항체는 재조합 DNA 방법에 의해 생산될 수 있다.
이들 항체를 발현하기 위하여, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열은 발현 벡터, 다시 말하면, 특정 숙주 내에서 삽입된 코딩 서열의 전사와 번역 제어를 위한 요소를 내포하는 벡터 내로 삽입될 수 있다. 이들 요소에는 조절 서열, 예를 들면, 인핸서 (enhancer), 구조성 (constitutive)과 유도성 (inducible) 프로모터, 그리고 5'와 3' 비-번역 영역이 포함될 수 있다. 당업자에게 널리 공지된 방법이 이런 발현 벡터를 작제하는데 이용될 수 있다. 이들 방법에는 in vitro 재조합 DNA 기술, 합성 기술, 그리고 in vivo 유전자 재조합이 포함된다.
당업자에게 공지된 다양한 발현 벡터/숙주 세포 시스템이 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열로부터 유래된 폴리펩티드 또는 RNA를 발현하는데 이용될 수 있다. 이들에는 미생물, 예를 들면, 재조합 세균분해바이러스, 플라스미드, 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 세균; 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모; 배큘로바이러스 벡터로 감염된 곤충 세포 시스템; 바이러스 또는 세균 발현 벡터로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 동물 세포 시스템이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 포유동물 시스템 내에서 재조합 단백질의 장기적인 생산을 위하여, 세포주 내에서 안정적인 발현이 수행될 수 있다. 가령, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열은 동일한 또는 별개의 벡터 상에서 바이러스 복제 기점 및/또는 내인성 발현 요소 및 선별가능 또는 가시적인 마커 유전자를 내포할 수 있는 발현 벡터를 이용하여 세포주 내로 형질전환될 수 있다. 본 발명은 이용되는 벡터 또는 숙주 세포에 의해 제한되지 않는다. 본 발명의 일정한 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열은 각각, 별개의 발현 벡터 내로 결찰되고, 그리고 각 사슬은 별개로 발현될 수 있다. 다른 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 경쇄와 중쇄 둘 모두 단일 발현 벡터 내로 결찰되고 동시에 발현될 수 있다.
대안으로, RNA 및/또는 폴리펩티드는 각각, in vitro 전사 시스템 또는 연결된 in vitro 전사/번역 시스템을 이용하여, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터로부터 발현될 수 있다.
일반적으로, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열을 내포하는 및/또는 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 폴리펩티드, 또는 이의 일부분을 발현하는 숙주 세포는 당업자에게 공지된 다양한 절차에 의해 확인될 수 있다. 이들 절차에는 DNA/DNA 또는 DNA/RNA 혼성화, PCR 증폭, 그리고 핵산 또는 아미노산 서열의 검출 및/또는 정량을 위한 막, 용액, 또는 칩 기초된 기술을 비롯한 단백질 생물학적 검정 (bioassay) 또는 면역학적 검정 (immunoassay) 기술이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 특정한 다중클론 또는 단일클론 항체를 이용하여 폴리펩티드의 발현을 검출하고 측정하기 위한 면역학적 방법은 당분야에 공지되어 있다. 이런 기술의 실례에는 효소-결합 면역흡착 측정법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 방사성면역학적검정 (RIA), 그리고 형광 활성화된 세포 분류 (fluorescence activated cell sorting, FACS)가 포함된다. 당업자는 이들 방법을 본 발명에 쉽게 적합시킬 수 있다.
본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 숙주 세포는 따라서, 상응하는 RNA (mRNA, siRNA, shRNA 등)의 전사 및/또는 세포 배양으로부터 폴리펩티드의 발현을 위한 조건 하에 배양될 수 있다. 세포에 의해 생산된 폴리펩티드는 서열 및/또는 이용된 벡터에 따라, 분비되거나 세포내에 잔류될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터는 원핵 또는 진핵 세포 막을 통해 폴리펩티드의 분비를 주도하는 신호 서열을 내포하도록 설계될 수 있다.
유전자 코드 (genetic code)의 고유한 축중성 (degeneracy)으로 인하여, 동일하거나, 실질적으로 동일하거나, 또는 기능적으로 동등한 아미노산 서열을 인코딩하는 다른 DNA 서열이 산출되고, 그리고 예로써, 본 명세서에서 기술된 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 중에서 임의의 한 가지를 인코딩할 수 있는 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 폴리펩티드를 발현하는데 이용될 수 있다. 본 발명의 뉴클레오티드 서열은 유전자 산물의 클로닝, 가공, 및/또는 발현의 변형이 포함되지만 이들에 국한되지 않는, 다양한 목적으로 뉴클레오티드 서열을 변경하기 위한 당분야에 널리 공지된 방법을 이용하여 조작될 수 있다. 무작위 단편화 (random fragmentation)에 의한 DNA 셔플링 (shuffling) 및 유전자 단편과 합성 올리고뉴클레오티드의 PCR 재집합은 뉴클레오티드 서열을 조작하는데 이용될 수 있다. 가령, 올리고뉴클레오티드-매개된 특정 부위 돌연변이유발은 예로써, 새로운 제한 부위 (restriction site)를 발생시키고, 당화 패턴 (glycosylation pattern)을 변경하고, 코돈 선호도 (codon preference)를 변화시키고, 접합절단 변이체를 산출하는 돌연변이를 도입하는데 이용될 수 있다.
이에 더하여, 숙주 세포 계통은 삽입된 서열의 발현을 조절하거나, 또는 발현된 폴리펩티드를 원하는 방식으로 가공하는 능력에 대하여 선별될 수 있다. 폴리펩티드의 이런 변형에는 아세틸화 (acetylation), 카르복실화 (carboxylation), 당화 (glycosylation), 인산화 (phosphorylation), 지질화 (lipidation), 그리고 아실화 (acylation)가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 예시적인 구체예에서, 특정 당화 구조 또는 패턴을 내포하는 항체가 바람직할 수 있다. 폴리펩티드의 "프리프로 (prepro)" 형태를 절단하는 번역후 가공 역시 단백질 표적화, 접힘 (folding), 및/또는 활성을 명시하는데 이용될 수 있다. 특이적 세포 기구 (cell machinery) 및 번역후 활성에 대한 특징적인 기전을 갖는 상이한 숙주 세포 (가령, CHO, HeLa, MDCK, HEK293, 그리고 W138)는 상업적으로 및 American Type Culture Collection (ATCC)로부터 입수가능하고, 그리고 발현된 폴리펩티드의 정확한 변형과 가공이 담보되도록 선택될 수 있다.
하이브리도마 세포가 하이브리드 생쥐 세포이기 때문에, 이들은 뮤린 항체를 생산하는데 엄격하게 이용된다. 이런 뮤린 항체의 글리코실 측쇄가 인간 세포에서 관찰되는 당화 패턴과 유의미하게 상이할 수도 있다는 것은 명백하다. 인간 세포와 하이브리도마 사이에 인산화 패턴에서 차이 역시 항체의 활성에 영향을 줄지도 모른다. 게다가, 인간에 뮤린 항체의 투여는 일반적으로, 이러한 뮤린 항체가 가질 지도 모르는 임의의 생물학적 활성을 잠재적으로 중화시킬 수 있는 항-항체 면역 반응을 유도한다.
인간 면역시스템에 의한 뮤린 항체의 인식을 최소화시키거나, 또는 인간에서 이들 항체의 생물학적 활성을 향상시키기 위하여, 뮤린 항체는 유리하게는, 부분적으로 (가령, 키메라) 또는 완전하게 인간화 항체로 전환된다. (부분적으로 또는 완전하게) 인간화 항체의 경쇄와 중쇄의 재조합 형태는 따라서, 하이브리도마 세포 이외의 포유동물 발현 시스템 (가령, 293 세포, CHO 등) 내로 도입될 수 있다. 포유동물 발현 시스템은 자연 발생 인간 형태의 항체의 당화 패턴에 더욱 가까운 결과의 당화 패턴을 갖는 이점을 획득할 수 있다.
가령, 용균성 IgG1 항체의 경우에, 면역글로불린 사슬의 적절한 당화가 주효 기능을 위하여 필요하다. IgG1 단일클론 항체의 이들 생물학적 기능에는 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC) 및 보체-의존성 세포독성 (CDC)이 포함되는데, 이들 둘 모두 포유동물 세포 내에서 발현 동안 아미노산에 결합되는 글리코실 측쇄의 유형에 의해 상당한 영향을 받을 것이다.
이에 더하여, 최적화된 포유동물 세포 발현 시스템은 종종, 하이브리도마와 비교하여 훨씬 많은 양의 항체를 분비할 것이다. 이런 이유로, 생산을 위하여 인간 세포를 채택하는 데에는 현실적이고, 그리고 아마도 경제적인 이유가 존재한다.
당업자는 자연, 변형된, 또는 재조합 핵산 서열이 이종기원성 서열에 결찰되어, 임의의 전술한 숙주 시스템에서 이종기원성 폴리펩티드 모이어티를 내포하는 융합 폴리펩티드의 번역이 유발될 수 있다는 것을 쉽게 인지할 것이다. 이런 이종기원성 폴리펩티드 모이어티는 상업적으로 입수가능한 친화성 매트릭스를 이용한 융합 폴리펩티드의 정제를 용이하게 할 수 있다. 이런 모이어티에는 글루타티온 S-전이효소 (GST), 말토오스 결합 단백질, 티오레독신 (thioredoxin), 칼모듈린 (calmodulin) 결합 펩티드, 6-His (His), FLAG, c-myc, 헤마글루티닌 (hemaglutinin, HA), 그리고 항체 에피토프, 예를 들면, 단일클론 항체 에피토프가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 융합 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있는 폴리뉴클레오티드에 관계한다. 융합 단백질은 본 명세서에서 기술된 폴리펩티드 (가령, 완전한 경쇄, 완전한 중쇄, 가변 영역, CDR 등)에 융합된 융합 상대 (가령, HA, Fc 등)를 포함할 수 있다.
당업자는 또한, 핵산과 폴리펩티드 서열이 당분야에 널리 공지된 화학적 또는 효소적 방법을 이용하여, 전체적으로 또는 부분적으로 합성될 수 있다는 것을 쉽게 인지할 것이다. 가령, 펩티드 합성은 다양한 고형-상 기술과 기계를 이용하여 수행될 수 있다, 예를 들면, ABI 431A 펩티드 합성장치 (PE Biosystems)가 합성을 자동화하는데 이용될 수 있다. 원하는 경우에, 아미노산 서열은 변이체 단백질을 생산하기 위하여 합성 동안 변경되고 및/또는 다른 단백질로부터 서열과 결합될 수 있다.
항체 접합체 (congugate)
비록 검출 또는 치료 목적을 위하여, 항상 필요한 것은 아니지만, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 검출가능 모이어티 (즉, 검출 또는 진단 목적으로) 또는 치료적 모이어티 (치료 목적으로)와 접합될 수 있다.
검출 목적으로, 접합되지 않은 항체 (일차 항체)는 항원에 대한 결합에 이용될 수 있고, 그리고 검출가능 모이어티를 보유하고 일차 항체에 결합할 수 있는 이차 항체가 추가될 수 있다. 하지만, 앞서 지시된 바와 같이, 항-siglec 15 항체는 검출가능 라벨과 접합될 수 있고, 따라서 이차 항체가 필요하지 않을 수도 있다.
"검출가능 모이어티"는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 화학적 및/또는 기타 물리적 수단에 의해 검출가능한 모이어티이다. 검출가능 모이어티는 당분야에 널리 공지된 방법을 이용하여 본 발명의 항체와 이의 항원 결합 단편에 직접적으로 및/또는 간접적으로 (가령 연쇄 (linkage), 예를 들면, DOTA 또는 NHS 연쇄에 의해) 결합될 수 있다. 매우 다양한 검출가능 모이어티가 이용될 수 있는데, 선택은 요구되는 감도 (sensitivity), 접합 (conjugation)의 용이성, 안정성 요건 및 가용한 기계류 (instrumentation)에 좌우된다. 적절한 검출가능 모이어티에는 형광 라벨 (fluorescent label), 방사성 라벨 (radioactive label) (가령, 제한 없이, 125I, In111, Tc99, I131 및 PET 스캐너용 양전자 방사 동위원소 (positron emitting isotope 등), 핵 자기 공명 활성 라벨 (nuclear magnetic resonance active label), 발광성 라벨 (luminiscent label), 화학발광성 라벨 (chemiluminescent label), 발색단 라벨 (chromophore label), 효소 라벨 (예로써, 그리고 제한 없이, 양고추냉이 과산화효소 (horseradish peroxidase), 알칼리 포스파타아제 (alkaline phosphatase) 등), 양자점 (quantum dot) 및/또는 나노입자가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 검출가능 모이어티는 검출가능 신호를 유발 및/또는 발생시킬 수 있고, 따라서 검출가능 모이어티로부터 신호가 검출될 수 있도록 한다.
본 발명의 다른 예시적인 구체예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 치료적 모이어티 (가령, 약물, 세포독성 모이어티)와 결합 (변형)될 수 있다.
일부 경우에, 치료 목적으로, 접합되지 않은 항체 자체가 예로써, 항원을 격리할 수 있고, 항원 및 다른 결합 상대 사이에 중요한 상호작용을 차단할 수 있고, 주효 세포를 동원할 수 있다. 하지만, 앞서 지시된 바와 같이, 항체는 치료적 모이어티와 접합될 수 있다.
예시적인 구체예에서, 항체와 항원 결합 단편은 화학치료제 또는 세포독성제를 포함할 수 있다. 가령, 항체와 항원 결합 단편은 화학치료제 또는 세포독성제에 접합될 수 있다. 이런 화학치료제 또는 세포독성제에는 이트륨 (Yttrium)-90, 스칸듐 (Scandium)-47, 레늄 (Rhenium)-186, 요오드 (Iodine)-131, 요오드-125, 그리고 당업자에 의해 인지되는 많은 다른 것들 (가령, 루테튬 (lutetium) (가령, Lu177), 비스무트 (bismuth) (가령, Bi213), 구리 (copper) (가령, Cu67))이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 다른 경우에, 화학치료제 또는 세포독성제는 당분야에 공지된 다른 것들 중에서, 5-플루오르우라실, 아드리아마이신 (adriamycin), 이리노테칸 (irinotecan), 탁산 (taxane), 슈도모나스 내독소 (pseudomonas endotoxin), 리신 (ricin) 및 기타 독소로 구성될 수도 있다.
대안으로, 본 발명의 방법을 수행하기 위하여, 그리고 당분야에 공지된 바와 같이, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편 (접합되거나 접합되지 않음)은 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편에 특이적으로 결합할 수 있고, 그리고 바람직한 검출가능, 진단적 또는 치료적 모이어티를 보유할 수 있는 두 번째 분자 (가령, 이차 항체 등)와 병용될 수 있다.
항체의 제약학적 조성물 및 이들의 용도
항체 (접합되거나 접합되지 않음)의 제약학적 조성물 역시 본 발명에 포함된다. 제약학적 조성물은 항체 또는 항원 결합 단편을 포함할 수 있고, 그리고 제약학적으로 허용되는 담체 역시 내포할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편 및 담체를 포함할 수 있는 조성물에 관계한다.
본 발명의 또 다른 측면은 골 질환 또는 암의 치료 또는 진단에서 본 명세서에서 기술된 단리된 항체 또는 항원 결합 단편의 용도에 관계한다.
활성 성분 이외에, 제약학적 조성물은 물, PBS, 염 용액, 젤라틴, 오일, 알코올, 그리고 제약학적으로 이용될 수 있는 제조물로 활성 화합물의 가공을 용이하게 하는 기타 부형제와 보조제를 포함하는 제약학적으로 허용되는 담체를 내포할 수 있다. 다른 경우에, 이들 제조물은 멸균될 수 있다.
본 명세서에서, "제약학적 조성물"은 일반적으로, 제약학적으로 허용되는 희석제, 보존제, 용해제, 유화제, 어쥬번트 및/또는 담체와 함께 작용제의 치료 효과량를 포함한다. 본 명세서에서 "치료 효과량"은 소정의 질환과 투여 섭생 (administration regimen)에 대한 치료 효과를 제공하는 양을 지칭한다. 이런 조성물은 액체 제제, 동결건조된 제제, 또는 달리 건조된 제제이고, 그리고 다양한 완충액 내용물 (가령, Tris-HCl, 아세트산염, 인산염), pH와 이온 강도의 희석제, 첨가제, 예를 들면, 표면에 흡수를 예방하는 알부민 또는 젤라틴, 세정제 (가령, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, 담즙산 염), 용해화제 (가령, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리세롤), 항산화제 (가령, 아스코르브산, 메타이아황산 나트륨 (sodium metabisulfite)), 보존제 (가령, 티메로살, 벤질 알코올, 파라벤), 팽창 물질 (bulking substance) 또는 긴장도 조절제 (tonicity modifier) (가령, 락토오스, 만니톨), 단백질에 중합체, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜의 공유 부착 (covalent attachment), 금속 이온과의 복합화 (complexation), 또는 중합성 화합물, 예를 들면, 폴리유산 (polylactic acid), 폴리글리콜산 (polyglycolic acid), 히드로겔 (hydrogel) 등의 미립자 제조물 내로 또는 상에, 또는 리포좀 (liposome), 마이크로에멀젼 (microemulsion), 교질 입자 (micelle), 단층막 (unilamellar) 또는 다층막 (multilamellar) 소포, 적혈구 허깨비 (erythrocyte ghost), 또는 스페로플라스트 (spheroplast) 상에 상기 물질의 함입 (incorporation)을 포함한다. 이들 조성물은 물리적 상태 (physical state), 용해도 (solubility), 안전성 (stability), in vivo 방출 속도, 그리고 in vivo 제거 속도에 영향을 줄 것이다. 제어된 또는 지속된 방출 조성물에는 친유성 저장소 (lipophilic depot) (가령, 지방산, 왁스, 오일) 내에 제제가 포함된다. 또한, 본 발명에는 중합체 (가령, 폴록사머 또는 폴록사민)로 코팅된 미립자 조성물이 포함된다. 본 발명의 조성물의 다른 구체예는 비경구, 폐, 코, 입, 질, 직장 경로를 비롯한 다양한 투여 경로를 위한 미립자 형태 보호 코팅, 프로테아제 저해물질 또는 침투 증강제 (permeation enhancer)를 함입한다. 한 구체예에서, 제약학적 조성물은 비경구, 암주위 (paracancerally), 경점막, 경피, 근육내, 정맥내, 피내, 피하, 복막내, 뇌실내, 두개내 및 종양내 투여된다.
게다가, 본 명세서에서 "제약학적으로 허용되는 담체" 또는 "제약학적 담체"는 당분야에 공지되어 있고, 여기에는 0.01-0.1 M 또는 0.05 M 인산염 완충액 또는 0.8% 염수가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 부가적으로, 이들 제약학적으로 허용되는 담체는 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액, 그리고 에멀젼일 수 있다. 비-수성 용매의 실례는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예를 들면, 올리브 오일, 그리고 주사가능 유기 에스테르, 예를 들면, 에틸 올리에이트 (ethyl oleate)이다. 수성 담체에는 염수 및 완충된 매체를 비롯하여, 물, 알코올성/수성 용액, 에멀젼 또는 현탁액이 포함된다. 비경구 운반제에는 염화나트륨 용액, Ringer 덱스트로스, 덱스트로스와 염화나트륨, 유산 Ringer 또는 고정유 (fixed oil)가 포함된다. 정맥내 운반제에는 유체와 영양소 보충제, 전해질 보충제, 예를 들면, Ringer 덱스트로스에 기초된 것들 등이 포함된다. 또한, 보존제 및 기타 첨가제, 예를 들면, 항균제, 항산화제, 맞춤제 (collating agent), 비활성 기체 등이 존재할 수 있다.
임의의 화합물에서, 치료 효과량은 초기에, 세포 배양 검사에서 또는 동물 모형, 예를 들면, 생쥐, 쥐, 토끼, 개, 또는 돼지에서 추정될 수 있다. 동물 모형은 또한, 투여의 농도 범위와 경로를 결정하는데 이용될 수 있다. 이런 정보는 이후, 인간에서 투여를 위한 유용한 용량과 경로를 결정하는데 이용될 수 있다. 이들 기술은 당업자에게 충분히 공지되어 있고, 그리고 치료 효과량은 증상 또는 장애를 개선하는 활성 성분의 양을 지칭한다. 치료 효능과 독성은 예로써, ED50 (50%의 집단에서 치료적으로 효과적인 용량) 및 LD50 (50%의 집단을 사멸시키는 용량) 통계치를 계산하고 대비함으로써, 세포 배양액에서 또는 실험 동물로 표준 제약학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 앞서 기술된 임의의 치료적 조성물은 포유동물, 예를 들면, 개, 고양이, 소, 말, 토끼, 원숭이, 그리고 인간이 포함되지만 이들에 국한되지 않는, 이런 치료가 필요한 임의의 개체에 적용될 수 있다.
본 발명에 이용된 제약학적 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 수질내, 수막강내, 뇌실내, 경피, 피하, 복막내, 비내, 장관, 국소, 설하, 또는 직장 수단이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 임의의 숫자의 경로에 의해 투여될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "치료"는 치료적 처치 및 예방적 조치 둘 모두를 지칭하고, 여기서 목적은 표적화된 병리학적 상태 또는 장애를 예방하거나 둔화 (감소)시키는 것이다. 치료가 필요한 개체에는 장애를 이미 앓고 있는 개체, 그리고 장애를 앓기 쉽거나 장애가 예방되어야 하는 개체가 포함된다.
이들 항체 또는 항원 결합 단편은 다양한 골 상실 또는 암의 치료에서 치료적 유용성을 가질 수 있다. 예시적인 구체예에서, 이들 항체 또는 단편은 골 질환과 연관된 골 상실, 예를 들면, 파골세포의 골 분해 활성에서 증가가 나타나는 상태에서 치료적 유용성을 가질 수 있다. 일정한 경우에, 이들 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 2를 발현하는 세포와 상호작용하고, 그리고 ADCC를 매개함으로써 면역학적 반응을 유도할 수 있다. 다른 경우에, 이들 항체와 단편은 서열 번호: 2와 이의 단백질 상대의 상호작용을 차단할 수 있다.
항-siglec-15 항체 또는 항원 결합 단편은 골다공증, 골감소증 (osteopenia), 골연화증, 부갑상선 기능 항진 (hyperparathyroidism), 갑상선 기능 저하 (hypothyroidism), 갑상선 기능 항진증 (hyperthyroidism), 생식기능 저하증 (hypogonadism), 갑상선 중독증 (thyrotoxicosis), 전신성 비반세포증 (systemic mastocytosis), 성체 저인산증 (adult hypophosphatasia), 과부신피질호르몬증 (hyperadrenocorticism), 골형성 부전 (osteogenesis imperfecta), 파제트병 (Paget's disease), 쿠싱병(증후군) (Cushing's disease), 터너 증후군 (Tumer syndrome), 고셰병 (Gaucher disease), 엘러스-단로스 증후군 (Ehlers-Danlos syndrome), 마판 증후군 (Marfan's syndrome), 멘케스 증후군 (Menkes' syndrome), 판코니 증후군 (Fanconi's syndrome), 다발성 골수종 (multiple myeloma), 고칼슘혈증 (hypercalcemia), 저칼슘혈증 (hypocalcemia), 관절증 (arthritides), 치주 질환 (periodontal disease), 구루병 (ricket) (비타민 D 의존성 구루병, 타입 I과 II 구루병, 그리고 반성 유전성 저인산혈증성 구루병 (x-linked hypophosphatemic ricket) 포함), 골성 불완전 섬유생성증 (fibrogenesis imperfecta ossium), 골경화성 질환 (osteosclerotic disorder), 예를 들면, 피크노디소토시스 (pycnodysostosis), 그리고 대식세포-매개된 염증 과정에 의해 유발된 손상이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 다양한 골-관련된 질환의 맥락에서 골 상실의 치료에서 치료적 유용성을 가질 수 있다. 바람직한 구체예에서, 이들 항체와 단편은 심각한 골 상실이 나타나는 상태, 특히 골에 대한 전이성 암에서 치료적 유용성을 갖는다. 일정한 경우에, 항-siglec-15 항체와 단편은 Siglec-15를 발현하는 세포, 예를 들면, 파골세포와 상호작용할 수 있다. 다른 경우에, 항-siglec-15 항체와 단편은 Siglec-15와 이의 단백질 상대의 상호작용을 차단할 수 있다.
항-siglec-15 항체와 이의 항원 결합 단편은 다양한 골 개형 장애에 의해 유발되거나 이들과 연관된 암 또는 골 상실의 치료에서 치료적 유용성을 가질 수 있다. 특히, 항-siglec-15 항체와 이들의 면역학적으로 기능적 단편은 파골세포가 활동 과잉이고 골 표면의 재흡수의 원인이 되는 상태에서 치료적 유용성을 갖는다. 일정한 경우에, 항-siglec-15 항체와 이의 항원 결합 단편은 동일한 질환에 대하여 제공되는 다른 치료제와 공동으로 동시에 투여될 수 있다. 따라서 이들 항체는 당업자에게 공지된 골흡수억제제 (가령, 비스포스포네이트)와 함께 투여될 수 있다. 부가적으로, 이들 항체는 세포분열억제제 (anti-mitotics) (가령, 탁산 (taxane)), 백금-기초된 작용제 (가령, 시스플라틴 (cisplatin)), DNA 손상제 (가령, 독소루비신 (Doxorubicin)), 그리고 당업자에게 공지된 기타 세포독성 요법과 함께 투여될 수 있다. 다른 경우에, 항-siglec-15 항체와 이들의 면역학적으로 기능적 단편은 다른 치료적 항체와 함께 투여될 수 있다. 이들에는 RANKL, EGFR, CD-20, 그리고 Her2를 표적으로 하는 항체가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
일정한 경우에, 이들 항체와 이들의 항원 결합 단편은 동일한 질환에 대하여 제공되는 다른 치료제와 공동으로 동시에 투여될 수 있다. 따라서 이들 항체는 세포분열억제제 (anti-mitotics) (가령, 탁산 (taxane)), 백금-기초된 작용제 (가령, 시스플라틴 (cisplatin)), DNA 손상제 (가령, 독소루비신 (Doxorubicin)), 그리고 당업자에게 공지된 기타 항암 요법과 함께 투여될 수 있다. 다른 경우에, 이들 항체와 이들의 면역학적으로 기능적 단편은 다른 치료적 항체와 함께 투여될 수 있다. 이들에는 EGFR, CD-20, 그리고 Her2를 표적으로 하는 항체가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 발명은 다른 측면에서, 서열 번호: 2-발현 세포 또는 서열 번호: 2 변이체-발현 세포의 성장을 저해하는 방법에 관계하고, 상기 방법은 상기 세포를 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편의 효과량과 접촉시키는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한, 포유동물에서 암 또는 골 상실을 치료하거나, 또는 서열 번호: 2 발현 세포 또는 서열 번호: 2 변이체-발현 세포의 성장을 저해하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편을 병든 포유동물에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에서는 또한, 난소 암 세포, 신장 암 세포, 중추신경계의 암 세포, 전립선 암 세포, 흑색종 세포, 유방 암 세포, 폐 암 세포 또는 대장 암 세포로 구성된 군에서 선택되는 암 세포의 성장을 저해하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 서열 번호: 2에 적어도 80% 동일하거나, 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 아미노산 49 내지 165에 적어도 80% 동일한 영역을 갖는 폴리펩티드의 발현을 감소시킬 수 있는 핵산을 암 세포에 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 암 세포는 서열 번호: 2에 적어도 80% 동일하거나, 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 또는 아미노산 49 내지 165에 적어도 80% 동일한 영역을 갖는 폴리펩티드를 발현할 수 있다.
본 발명에 따라서, 핵산은 예로써, siRNA 또는 안티센스일 수 있다.
본 발명은 또한, 포유동물에서 암 또는 골 상실을 검출하거나, 또는 서열 번호: 2-발현 세포 또는 서열 번호: 2 변이체-발현 세포를 검출하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편을 병든 포유동물에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명은 다른 측면에서, 서열 번호: 2-발현 세포 또는 서열 번호: 2 변이체-발현 세포를 검출하는 방법에 관계하고, 상기 방법은 상기 세포를 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계, 그리고 상기 항체 및 서열 번호: 2-발현 세포 또는 서열 번호: 2 변이체-발현 세포에 의해 형성된 복합체를 검출하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 서열 번호: 2, 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20-259 또는 아미노산 49-165와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 변이체를 검출하는 방법에 관계하고, 상기 방법은 서열 번호: 2 또는 이의 변이체를 발현하는 세포, 또는 서열 번호: 2 또는 이의 변이체를 포함하거나 포함하는 것으로 의심되는 샘플 (생검, 혈청, 혈장, 소변 등)을 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계, 그리고 결합을 측정하는 단계를 포함할 수 있다.
항원에 항체의 결합은 항원의 예상 분자량 (expected molecular weight)에서 증가를 유발할 것이다. 이런 이유로, 항체 또는 항원 결합 단편 및 항원의 특이적 결합 시에 물리적 변화가 일어난다.
이런 변화는 예로써, 전기영동 (electrophoresis), 그 이후에 겔 (gel) 또는 블롯 (blot)의 웨스턴 블롯 (Western blot)과 착색 (coloration), 질량 분석 (mass spectrometry), 컴퓨터와 결합된 HPLC 등을 이용하여 검출될 수 있다. 분자량에서 변동을 계산할 수 있는 장치는 당분야에 공지되어 있고, 여기에는 예로써, PhosphorimagerTM이 포함된다.
항체가 예로써, 검출가능 라벨을 포함할 때, 항원-항체 복합체는 라벨에 의해 방출된 형광, 라벨의 방사 방출 (radiation emission), 기질과 함께 제공된 라벨의 효소 활성 등에 의해 검출될 수 있다.
항체 또는 항원 결합 단편 및 항원 사이에 결합의 검출 및/또는 측정은 당분야에 공지된 다양한 방법에 의해 수행될 수 있다. 항체 또는 항원 결합 단편 및 항원 사이에 결합은 검출가능 라벨에 의해 방출된 신호 (방사 방출, 형광, 색깔 변화 등)를 검출할 수 있는 장치로 모니터링될 수 있다. 이런 장치는 상기 결합이 발생하였음을 지시하는 데이터를 제공하고, 또한 항원에 결합된 항체의 양에 관한 표시를 제공할 수 있다. 이러한 장치 (일반적으로, 컴퓨터와 결합됨)는 또한, 배경 신호 (background signal) (가령, 항원-항체 결합의 부재에서 획득된 신호) 또는 배경 잡음 (background noise) 및 특이적 항체-항원 결합 시에 획득된 신호 사이에 차이를 계산할 수 있다. 이들 장치는 따라서, 사용자에게 항원이 검출되는 지의 여부에 관한 지시와 결론을 제공할 수 있다.
샘플은 암 또는 골 질환을 앓거나, 또는 암 또는 골 질환을 앓는 것으로 의심되거나, 또는 골 상실을 경험하거나, 또는 골 상실을 경험하기 쉬운 포유동물 (가령, 인간)로부터 기원할 수 있다. 샘플은 포유동물로부터 획득된 조직 샘플 또는 세포 배양 상층액일 수 있다.
본 발명에 따라서, 샘플은 포유동물로부터 획득된 혈청 샘플, 혈장 샘플, 혈액 샘플 또는 복수액일 수 있다. 본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원 결합 단편은 유리하게는, 서열 번호: 2를 검출할 수 있다.
상기 방법은 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체에 결합된 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 형성된 복합체를 정량하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 더욱 각별하게, 골 질환 또는 암의 검출, 진단 또는 치료에 이용될 수 있다.
본 발명의 추가적인 측면은 본 명세서에서 기술된 하나 또는 그 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 내포하는 하나 또는 그 이상의 용기를 포함할 수 있는 키트에 관계한다.
핵산, 벡터 및 세포
항체는 일반적으로, 경쇄와 중쇄를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터(들)로부터 발현된 경쇄와 중쇄의 발현을 허용하는 세포에서 만들어진다.
이런 이유로, 본 발명은 본 명세서에서 기술된 CDR (CDR 변이체 포함), 경쇄 가변 도메인 (경쇄 가변 도메인 변이체 포함), 중쇄 가변 도메인 (중쇄 가변 도메인 변이체 포함), 경쇄 (경쇄 변이체 포함), 중쇄 (중쇄 변이체 포함) 중에서 한 가지를 인코딩할 수 있는 핵산을 포함한다.
본 발명의 핵산의 예시적인 구체예에는
a. 서열 번호: 69, 서열 번호: 75, 서열 번호: 81, 서열 번호: 87, 서열 번호: 93, 서열 번호: 99, 서열 번호: 105 및 서열 번호: 111로 구성된 군에서 선택되는 CDRL1 서열;
b. 서열 번호: 70, 서열 번호: 76, 서열 번호: 82, 서열 번호: 88, 서열 번호: 94, 서열 번호: 100, 서열 번호: 106 및 서열 번호: 112로 구성된 군에서 선택되는 CDRL2 서열, 및/또는;
c. 서열 번호: 71, 서열 번호: 77, 서열 번호: 83, 서열 번호: 89, 서열 번호: 95, 서열 번호: 101, 서열 번호: 107 및 서열 번호: 113로 구성된 군에서 선택되는 CDRL3 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산이 포함된다.
본 발명에 따라서, 핵산은 CDRL1, CDRL2 또는 CDRL3 중에서 적어도 2개의 CDR을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인을 인코딩할 수 있다.
또한, 본 발명에 따라서, 핵산은 하나의 CDRL1, 하나의 CDRL2 및 하나의 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인을 인코딩할 수 있다.
본 발명은 또한,
a. 서열 번호: 72, 서열 번호: 78, 서열 번호: 84, 서열 번호: 90, 서열 번호: 96, 서열 번호: 102, 서열 번호: 108 및 서열 번호: 114로 구성된 군에서 선택되는 CDRH1 서열;
b. 서열 번호: 73, 서열 번호: 79, 서열 번호: 85, 서열 번호: 91, 서열 번호: 97, 서열 번호: 103, 서열 번호: 109 및 서열 번호: 115로 구성된 군에서 선택되는 CDRH2 서열, 및/또는;
c. 서열 번호: 74, 서열 번호: 80, 서열 번호: 86, 서열 번호: 92, 서열 번호: 98, 서열 번호: 104, 서열 번호: 110 및 서열 번호: 116으로 구성된 군에서 선택되는 CDRH3 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산에 관계한다.
다른 측면에서, 본 발명에서는
a) 서열 번호: 153, 서열 번호: 154, 서열 번호: 84, 서열 번호: 96 및 서열 번호: 102로 구성된 군에서 선택되는 CDRL1 서열;
b) 서열 번호: 149, 서열 번호: 150, 서열 번호: 76, 서열 번호: 82 및 서열 번호: 106로 구성된 군에서 선택되는 CDRL2 서열, 또는;
c) 서열 번호: 151, 서열 번호: 152, 서열 번호: 77, 서열 번호: 83, 서열 번호: 95, 서열 번호: 107 및 서열 번호: 152로 구성된 군에서 선택되는 CDRL3 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산을 제시한다.
또 다른 측면에서, 본 발명에서는
a) 서열 번호: 153, 서열 번호: 154, 서열 번호: 84, 서열 번호: 96 및 서열 번호: 102로 구성된 군에서 선택되는 CDRH1 서열;
b) 서열 번호: 155, 서열 번호: 156, 서열 번호: 157, 서열 번호: 73, 서열 번호: 79, 서열 번호: 85, 서열 번호: 97, 서열 번호: 103 및 서열 번호: 109로 구성된 군에서 선택되는 CDRH2 서열, 또는;
c) 서열 번호: 158, 서열 번호: 74, 서열 번호: 98, 서열 번호: 104, 서열 번호: 110 및 서열 번호: 116으로 구성된 군에서 선택되는 CDRH3 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산을 제시한다.
본 발명에 따라서, 핵산은 CDRH1, CDRH2 또는 CDRH3 중에서 적어도 2개의 CDR을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인을 인코딩할 수 있다.
본 발명에 따라서, 핵산은 하나의 CDRH1, 하나의 CDRH2 및 하나의 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인을 인코딩할 수 있다.
또한, 본 발명에는 적어도 하나의 보존성 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체를 인코딩하는 핵산이 포함된다.
본 발명에 따라서, 핵산은 적어도 하나의 보존성 아미노산 치환을 포함하는 CDR을 인코딩할 수 있다.
본 발명에 따라서, 핵산은 CDR 중에서 적어도 2개에서 적어도 하나의 보존성 아미노산 치환을 포함하는 CDR을 인코딩할 수 있다.
본 발명에 따라서, 핵산은 3개의 CDR에서 적어도 하나의 보존성 아미노산 치환을 포함하는 CDR을 인코딩할 수 있다.
본 발명에 따라서, 핵산은 CDR 중에서 적어도 하나에서 적어도 2개의 보존성 아미노산 치환을 포함하는 CDR을 인코딩할 수 있다.
본 발명에 따라서, 핵산은 CDR 중에서 적어도 2개에서 적어도 2개의 보존성 아미노산 치환을 포함하는 CDR을 인코딩할 수 있다.
본 발명에 따라서, 핵산은 3개의 CDR에서 적어도 2개의 보존성 아미노산 치환을 포함하는 CDR을 인코딩할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 서열 번호: 37, 서열 번호: 41, 서열 번호: 45, 서열 번호: 49, 서열 번호: 53, 서열 번호: 57, 서열 번호: 61 및 서열 번호: 65로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% (적어도 80% 포함) 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산에 관계한다.
본 발명의 또 다른 측면은 서열 번호: 39, 서열 번호: 43, 서열 번호: 47, 서열 번호: 51, 서열 번호: 55, 서열 번호: 59, 서열 번호: 63 및 서열 번호: 67로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% (적어도 80% 포함) 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산에 관계한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에서 기술된 핵산을 포함하는 벡터에 관계한다.
본 발명에 따라서, 벡터는 발현 벡터일 수 있다.
특정 숙주 내에서 삽입된 코딩 서열의 전사와 번역 제어를 위한 요소를 내포하는 벡터는 당분야에 공지되어 있다. 이들 요소에는 조절 서열, 예를 들면, 인핸서 (enhancer), 구조성 (constitutive)과 유도성 (inducible) 프로모터, 그리고 5'와 3' 비-번역 영역이 포함될 수 있다. 당업자에게 널리 공지된 방법이 이런 발현 벡터를 작제하는데 이용될 수 있다. 이들 방법에는 in vitro 재조합 DNA 기술, 합성 기술, 그리고 in vivo 유전자 재조합이 포함된다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에서 기술된 핵산을 포함할 수 있는 단리된 세포에 관계한다.
단리된 세포는 별개의 벡터 상에서 또는 동일한 벡터 상에서 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산 및 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함할 수 있다. 단리된 세포는 또한, 별개의 벡터 상에서 또는 동일한 벡터 상에서 경쇄를 인코딩하는 핵산 및 중쇄를 인코딩하는 핵산을 포함할 수 있다.
본 발명에 따라서, 세포는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하고, 집합시키고 및/또는 분비할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명에서는 본 명세서에서 기술된 항체를 포함하고 및/또는 발현할 수 있는 세포를 제시한다.
본 발명에 따라서, 세포는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산 및 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함할 수 있다.
세포는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하고, 집합시키고 및/또는 분비할 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 상세를 더욱 개설하기 위하여 제공된다.
스크리닝 검사의 예시적인 구체예
추가적인 측면에서, 본 발명에서는 난소 암 세포, 신장 암 세포, 중추신경계의 암 세포, 전립선 암 세포, 흑색종 세포, 유방 암 세포, 폐 암 세포 또는 대장 암 세포의 성장을 저해할 수 있는 화합물을 확인하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259에 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 발현하는 세포에 후보 화합물을 제공하는 단계, 그리고 상기 폴리펩티드의 활성 또는 발현을 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 폴리펩티드의 감소된 활성 또는 발현은 적절한 저해 화합물을 긍정적으로 확인할 수 있다.
본 발명에 따라서, 후보 화합물은 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합할 수 있다.
본 발명에 따라서, 후보 화합물은 예로써, 항체 또는 항원 결합 단편일 수 있다.
본 발명에 따라서, 후보 화합물은 예로써, siRNA 또는 안티센스일 수 있다.
다른 유형의 분석평가가 본 발명의 범위를 벗어나지 않으면서 수행될 수도 있다.
도면의 간단한 설명
도 1에서는 6명의 상이한 공여자로부터 인간 분화 파골세포 샘플에서 Siglec-15 mRNA의 PCR-기초된 발현 프로파일링을 도시한다. 또한, 30개의 인간 정상 조직으로부터 RNA 샘플에서 발현 프로파일링이 도시된다. 대조로서, 이러한 Siglec-15 발현 패턴은 널리 공지된 파골세포 마커, 카텝신 K (CATK)와 비교되고, 그리고 관리 유전자 글리세르알데히드-3-인산 탈수소화효소 (glyceraldehyde-3-인산염 dehydrogenase, GAPDH)는 각 샘플에서 RNA의 양을 제어하기 위하여 포함되었다.
도 2에서는 암 세포주의 NCI-60 패널로부터 단리된 샘플에서 Siglec-15 mRNA의 발현을 도시한다.
도 3에서는 293-6E 세포에서 Fc 융합 단백질로서 발현되는 정제된 인간 재조합 Siglec-15의 샘플을 내포하는 쿠마시 (Coomassie)-염색된 폴리아크릴아미드 겔을 도시한다. 이러한 제조물은 본 특허에서 개시된 단일클론 항체를 산출하는데 이용되었다.
도 4에서는 항-siglec-15 Fab를 내포하는 Omniclonal 라이브러리 #25로부터 96-웰 평판에서 선택되는 개별 단일클론 항체의 Fc-Siglec-15 ELISA의 결과를 도시한다. 굵은 숫자로 표시된 웰은 예시적인 단일클론 25A1, 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 25E5, 25E6, 그리고 25E9를 내포하였다. 또한, Fc-Siglec-15 융합 단백질의 Fc 부분에 특이적인 단일클론을 확인하기 위하여 Fc 모이어티 단독을 이용하는, 동일한 평판 상에서 ELISA가 도시된다.
도 5에서는 생쥐 Fab를 IgG2 생쥐-인간 키메라 mAb로 전환시키는데 관련된 단계를 예시하는 계획을 도시한다.
도 6에서는 예시적인 항체 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 25E6, 그리고 25E9에 대한, 생쥐 항-siglec-15 Fab의 결합을 상응하는 IgG2 키메라 단일클론 항체의 결합과 비교하는 도면을 도시한다. 획득된 결과는 이들 Fab 가변 영역의 상대적인 결합이 완전한 인간 IgG2 골격으로 이전될 때 유지된다는 것을 지시한다.
도 7에서는 증가하는 농도의 항-siglec-15 IgG2 키메라 단일클론 항체 25B8, 25E6, 그리고 25E9로 치료 시에, 인간 파골세포의 분화의 저해를 도시한다. 치료후, 이들 파골세포는 TRAP 발현에 대하여 염색되었다.
도 8에서는 증가하는 농도의 항-siglec-15 IgG2 키메라 단일클론 항체 25B8, 25E6, 그리고 25D8로 치료 시에, 생쥐 파골세포의 분화의 저해를 도시한다. 치료후, 이들 파골세포는 TRAP 발현에 대하여 염색되었다.
도 9에서는 예시적인 항체 25C8의 존재에서 인간과 생쥐 Siglec-15의 비교적인 결합을 도시한다. 획득된 결과는 인간 Siglec-15에 대하여 산출된 항체의 결합이 생쥐 Siglec-15와도 상호작용한다는 것을 지시한다.
도 10A, 10B와 10C는 ClustalW2 프로그램을 이용하여, 선택된 CDRL1, CDRL2와 CDRL3 서열 (각각)에 대하여 획득된 정렬 결과의 요약이다; 여기서 " * "는 칼럼 내에 잔기가 정렬 내에 모든 서열에서 동일하다는 것을 의미하고, " : "는 보존성 치환이 관찰되었다는 것을 의미하고, 그리고 " . "는 반-보존성 치환이 관찰된다는 의미한다. 공통 CDR은 ClustalW 프로그램을 이용하여 산출되었다 (Larkin M.A., et al., (2007) ClustalW and ClustalX version 2. Bioinformatics 2007 23(21): 2947-2948).
도 11A, 11B와 11C는 ClustalW2 프로그램을 이용하여, 선택된 CDRH1, CDRH2와 CDRH3 서열 (각각)에 대하여 획득된 정렬 결과의 요약이다; 여기서 " * "는 칼럼 내에 잔기가 정렬 내에 모든 서열에서 동일하다는 것을 의미하고, " : "는 보존성 치환이 관찰되었다는 것을 의미하고, 그리고 " . "는 반-보존성 치환이 관찰된다는 의미한다. 공통 CDR은 ClustalW 프로그램을 이용하여 산출되었다 (Larkin M.A., et al., (2007) ClustalW and ClustalX version 2. Bioinformatics 2007 23(21): 2947-2948).
도 12에서는 파골세포의 골 재흡수 활성을 저해하는, Siglec-15에 특이적인 25E9 후보 항체의 능력을 예증한다.
도 13A, 13B, 13C, 13D와 13E는 Siglec-15 항체가 Siglec-15 cDNA를 과다발현하는 세포 (13A)로부터, 인간 (13B)과 생쥐 (13C) 파골세포에서, 그리고 U87 아교모세포종 세포에서 준비된 용해물 (lysate)의 면역블롯팅 (immunoblotting)에 의해, 그리고 본래의 U87 세포의 유세포분석 (flow cytometry)에 의해 상기 단백질을 검출할 수 있다는 것을 증명한다.
도 14A와 14B에서는 Siglec-15에 대하여 산출된 항체가 Siglec-2와 CD33을 비롯한 다른 관련된 Siglec에 결합하지 않는다는 것을 보여준다.
도 15에서는 항-siglec-15 항체가 Siglec-15 및 시알산 사이에 상호작용을 저해할 수 있다는 것을 증명하는 ELISA를 도시한다.
실시예
실시예 1
본 실시예에서는 파골세포 및 인간 조직 RNA 샘플에서 Siglec-15 유전자의 발현 패턴을 기술한다.
확인된 가장 유망한 유전자 중의 하나는 AB-0326으로 명명되었는데, 이것은 세포 표면 타입 I 막 단백질, Siglec-15를 인코딩한다. 이러한 후보는 먼저, 인간 파골세포 라이브러리로부터 단리되고, 또한 유사한 RANKL-의존성 상향 조절이 RT-PCR에 의해, 전구 세포와 비교하여 생쥐 RAW 264.7 세포뿐만 아니라 일차 생쥐 파골세포에서 확증되었다 (Sooknanan et al. 2007). Siglec-15의 조직 발현 프로필은 입증 (validation)을 위하여 선택된 모든 표적에 강제된 기준인 발현의 특이성을 결정하기 위하여 평가되었다. 말초 혈액 단핵 세포 (PBMNC)는 6명의 인간 공여자로부터 획득되고 파골세포 분화 배지 (MCS-F와 RANKL)에서 적어도 14일 동안 배양되었다. 전체 RNA는 전구 세포 (RANKL 치료 없음 (도 1, 위쪽 패널, -))로부터 또는 중간 시간 간격 (도 1, 위쪽 패널, ◀)에서 단리되었다. 1 마이크로그램의 각 RNA 샘플은 제조업체의 지시에 따라 Thermoscript 역전사효소 (Invitrogen, Burlington, ON)를 이용하여 단일-가닥 cDNA로 전환되고, 200-배 희석되고, 그리고 Siglec-15 전사체의 단편을 특이적으로 증폭하기 위하여 미리 최적화된 PCR 반응에서 이용되었다. PCR 반응에 이용된 올리고뉴클레오티드의 서열은 서열 번호: 117과 118에서 도시된다. 도 1 위쪽 패널 (분화 파골세포)에서 도시된 바와 같이, Siglec-15 전사체는 분화 파골세포와 비교하여 전구 세포에서 훨씬 낮은 수준으로 발현되었다. 이에 더하여, Siglec-15 전사체의 수준은 분화가 진행됨에 따라서 증가하였다. 비교에 의해, 공지된 파골세포 마커 유전자, 카텝신 K (도 1, 분화 파골세포에서 CATK) 역시 파골세포 분화 동안 상향조절되었다. CATK 메시지를 증폭하는데 이용된 올리고뉴클레오티드는 서열 번호: 119와 120에서 전시된다. 대조로서, PCR 반응은 관리 유전자 글리세르알데히드-3-인산 탈수소화효소 (GAPDH, 도 1, 분화 파골세포의 아래쪽 패널 참조)를 특이적으로 증폭하는 프라이머로, 동일한 샘플에서 수행되었다. PCR 반응에 이용된 GAPDH-특이적 프라이머의 서열은 서열 번호: 121과 122에서 도시된다. 이러한 후자 반응은 동등한 양의 출발 RNA가 각 샘플 내에 존재했다는 것을 증명한다. 인간 정상 조직으로부터 전체 RNA는 상업적 공급자 (Clontech, Mountain View, CA)로부터 구입되었다. 도 1 (위쪽 패널, 정상 조직)에서 도시된 바와 같이, Siglec-15는 단지 하나의 조직 (폐, 레인 9)에서만 약하게 검출되고, 그리고 모든 다른 조직 샘플로부터 완전하게 부재하였다. 이것은 분화 파골세포에 고도로 한정되는 표적을 확인하는 능력에서 본 출원인의 발견 접근법 (discovery approach)의 이점 (strength)을 뒷받침한다. 도 1에서 레인 번호는 하기 조직에 상응한다: 이들 레인은 하기 조직에 상응한다: 레인 1, 부신; 2, 유방; 3, 공장; 4, 기관; 5, 간; 6, 태반; 7, 대동맥; 8, 뇌; 9, 폐; 10, 부신 피질; 11, 식도; 12, 대장; 13, 난소; 14, 신장; 15, 전립선; 16, 흉선; 17, 골격근; 18, 대정맥; 19, 위; 20, 소장; 21, 심장; 22, 나팔관; 23, 비장; 24, 방광; 25, 자궁 경부; 26, 췌장; 27, 회장; 28, 십이지장; 29, 갑상선; 30, 고환; 레인 10과 11 및 레인 20과 21 사이에 비어있는 레인은 음성 대조 (negative control) (cDNA 없음)를 나타낸다. 획득된 결과는 Siglec-15가 분화 파골세포에서 상향조절되고 거의 모든 정상 인간 조직으로부터 부재한다는 것을 지시하고, 그리고 Siglec-15에 대한 항체가 비-표적 조직과 훨씬 적게 상호작용할 것이라는 것을 암시한다.
암 징후에서 Siglec-15의 발현을 결정하기 위한 추가의 발현 프로파일링 연구가 수행되었다. 당업자는 Siglec-15 유전자가 이들 유형의 징후에서 발현되는 것으로 밝혀지면, 본 발명에서 기술된 항체가 암에서 유용성을 가질 수도 있음을 인지할 것이다. 이를 해결하기 위하여, PCR-기초된 방법은 9가지 유형의 암으로부터 단리된 암 세포주에서 Siglec-15 전사체의 발현 패턴을 결정하기 위하여 조정되었다. 이들 세포주에 의해 대표되는 암 유형은 백혈병, 중추신경계, 유방, 대장, 폐, 흑색종, 난소, 전립선, 그리고 신장 암이다 (표 4 참조). 이들 RNA 샘플은 NCI/NIH에서 Developmental THerapeutics Program으로부터 입수되었다. NCI로부터 입수된 전체 RNA 샘플로부터 증폭된 동일한 RAMP RNA 샘플을 이용하여, 500 ng의 RNA는 앞서 기술된 바와 같이 단일-가닥 cDNA로 전환되었다. 이러한 cDNA 반응물은 희석되고, 따라서 상기 반응물의 1/200이 각 PCR 실험에 이용되었다. PCR은 MJ Research로부터 DNA Engine Tetrad 내에서, Qiagen (Mississauga, ON)으로부터 Hot-Start Taq 중합효소를 이용하여 96-웰 평판에서 수행되었다. 반응 혼합물의 절반은 1.2% 아가로오스/브롬화 에티듐 겔 상에 적하되고, 그리고 앰플리콘 (amplicon)은 UV 광으로 가시화되었다. 동등한 양의 RNA가 각 반응에 이용되는 지를 검증하기 위하여, RNA의 수준이 GAPDH 발현으로 모니터링되었다.
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도 2에서 도시된 바와 같이, Siglec-15는 몇몇 암 유형, 특히 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 그리고 전립선 암에서 발현되는 것으로 밝혀졌다. 실제로, Siglec-15는 백혈병을 제외하고, 이들 샘플에 의해 대표되는 거의 모든 암 징후에서 검출되었다. 이러한 결과는 Siglec-15에 대한 항체가 암 질환에서 유용성을 가질 수도 있다는 것을 암시한다.
실시예 2에서 기술된 항체 (하기 참조)는 또한, 세포 용해물 내에서 면역블롯팅에 의한 Siglec-15의 검출에 이용될 수 있다. 인간 Siglec-15 cDNA의 전체 개방 해독 틀은 CMV 프로모터의 하류에서 포유동물 발현 벡터 내로 클로닝되었다 (pCDNA-Siglec-15). 이러한 구조체, 또는 Siglec-15를 인코딩하지 않는 대조 빈 벡터는 낮은 내인성 수준의 Siglec-15 단백질을 발현하는 A375 흑색종 세포 내로 형질감염되었다. 안정된 형질감염체 (transfectant)의 풀은 G418로 선별에 의해 단리되었다. Siglec-15-형질감염된 (+) 및 대조 (-) A375 세포로부터 세포 용해물은 단일클론 항체 E6로 면역블롯팅에 의해 분석되었다. 도 13A에서 도시된 바와 같이, 상기 항체는 Siglec-15-형질감염된 세포에서 35 kDa의 단일 띠를 검출하지만, 대조 세포에서는 그렇지 못하다. 이것은 일차 아미노산 서열에 기초하여, Siglec-15의 예측된 분자량 (35.62 kDa)과 거의 일치한다 (http://www.bioinformatics.org/sms/prot_mw.html). 용해물은 또한, 유사한 총량의 용해물이 각 레인에 적하된다는 것을 증명하기 위하여 항-β-액틴 항체로 면역블롯팅에 의해 분석되었다. 획득된 결과는 면역블롯팅에 의해, 항체 E6이 클로닝된 Siglec-15 cDNA로 형질감염된 세포로부터 용해물 내에서 과다발현된 Siglec-15를 고도로 특이적인 방식으로 인지한다는 것을 증명한다. 분화된 인간 PBMNC에서 증가된 Siglec-15 mRNA 수준 (도 1)이 Siglec-15 단백질 수준에서 증가에 상응한다는 것을 확증하기 위하여, 용해물은 MCSF 단독 (비-분화됨, C), 또는 MCSF와 RANKL (분화됨, △)로 처리된 인간 PBMNC로부터 제조되었다 (도 13B). 용해물은 또한, 처리되지 않거나 (비-분화됨, C), 또는 RANKL (분화된, △)로 처리된 RAW 264.7 세포로부터 제조되었다 (도 13C). RAW 264.7 세포는 RANKL에 의한 파골세포 분화의 유도 시에 Siglec-15 mRNA 수준을 상향조절하는 것으로 이전에 밝혀졌다 (Sooknanan, 2007). 항체 E9로 면역블롯팅에 의한 이들 용해물의 분석은 RT-PCR 연구에 의해 예측된 바와 같이, 파골세포로의 분화 시에 PBMNC와 RAW 264.7 세포 둘 모두에서 Siglec-15 단백질 수준의 극적이 증가가 나타난다는 것을 증명한다 (도 13B와 13C).
NCI60 패널로부터 mRNA의 RT-PCR 분석 (도 2)은 특히 높은 비율의 CNS-유래된 암 세포주가 Siglec-15를 발현한다는 것을 지시하는 반면, 최근의 한 마이크로어레이 연구에서 매우 높은 수준의 Siglec-15 mRNA를 발현하는, NCI60 패널의 일부가 아닌 U87 아교모세포종 라인을 비롯한 적은 세트의 암 세포주가 밝혀졌다 (Shankavaram, 2007). 이런 이유로, Siglec-15 단백질의 내인성 발현이 U87 세포에서 검출될 수 있는 지의 여부가 조사되었다. 실제로, Siglec-15 크기의 단백질이 U87 세포 용해물의 면역블롯팅에 의해 검출된다. 상기 단백질의 실체를 확인하기 위하여, U87 세포는 Siglec-15를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA (siRNA)의 풀 (SIGLEC15 siGENOME SMARTpool, Dharmacon) (+) 또는 대조, 비-표적화 siRNA 풀 (-, 도 13D)로 형질감염되고, 그리고 세포 용해에 앞서 72시간 동안 성장되었다. Siglec-15로서 이의 확인과 일관되게, 표적화된 siRNA로 처리는 비-표적화된 대조와 비교하여 상기 단백질의 감소된 발현을 유발하였다 (도 13D). Siglec-15가 암 세포의 세포 표면에서 발견되는 지의 여부를 조사하기 위하여, siRNA-처리된 U87 세포를 유세포분석법으로 분석하였다. 생존하는 세포는 얼음 위에 놓여지고, 그리고 세포외 항원에 항체 결합을 허용하지만 세포내 항원에 항체 결합을 허용하지 않는 조건 하에, Siglec-15 항체 E9 (실시예 2 참조) 또는 아이소타입 (isotype) 대조 항체로 염색되었다. 표적화된 siRNA로 처리는 항체 E9의 감소된 결합을 유발했지만 대조 항체의 결합에는 어떤 영향도 주지 않았다 (도 13E). 종합하면, 이들 결과는 Siglec-15가 암 세포에서 발현될 수 있고, 그리고 이것이 세포 표면에서 항체 결합에 대하여 접근가능하다는 것을 증명한다.
실시예 2
본 실시예에서는 Siglec-15에 결합하는 단일클론 항체의 패밀리에 관한 상세를 제공한다.
단일클론 항체를 산출하기 위하여, 재조합 인간 Siglec-15는 대규모 일시 형질감염 기술을 이용하여 293E 세포에서 생산되었다 (Durocher et al., 2002; Durocher, 2004). 서열 번호: 2의 아미노산 20 - 259를 인코딩하는 cDNA (서열 번호: 123 참조)는 BamHI 제한 부위를 함입하는 전방 프라이머 (서열 번호: 124) 및 NotI 제한 부위를 함입하는 후방 프라이머 (서열 번호: 125)를 이용한 PCR에 의해 증폭되었다. 결과의 PCR 산물은 BamHI와 NotI로 절단되고, 그리고 단편은 발현 벡터 pYD5 (서열 번호: 126)내로 결찰되고, 이것은 동일한 제한 효소로 유사하게 절단되어 pYD5-0326으로 불리는 벡터가 산출되었다. pYD5 발현 플라스미드는 융합 단백질이 산출될 수 있도록 하는 인간 Fc 도메인에 대한 코딩 서열, 그리고 융합 단백질의 배양 배지로의 분비를 가능하게 하는 IgG1 신호 펩티드를 인코딩하는 서열을 내포한다. 각 밀리리터의 세포에 대하여, pYD5-032620-259로 불리는 1 마이크로그램의 발현 벡터는 현탁액에서 1.5 - 2.0 백만 개 세포/㎖의 밀도로 성장된 2936E 세포로 형질감염되었다. 이용된 형질감염 시약은 폴리에틸렌이민 (polyethylenimine, PEI) (선형, MW 25,000, Cat# 23966 Polysciences, Inc., Warrington, PA)이었는데, 이것은 1:3의 DNA:PEI 비율로 포함되었다. 이들 세포의 성장은 5일 동안 지속되고, 이후 재조합 Fc-032620-259 융합 단백질의 정제를 위하여 배양 배지가 수확되었다. 상기 단백질은 제조업체 (Sigma-Aldrich Canada Ltd., Oakville, ON)에 의해 지시된 바와 같이, 단백질-A 아가로즈를 이용하여 정제되었다. 정제된 Fc-032620-259 (Fc-Siglec-1520-259로서 표시됨)의 샘플을 보여주는 대표적인 폴리아크릴아미드 겔은 도 3에 도시된다.
Siglec-15에 결합하는 항체는 Biosite 파지 전시 기술을 이용하여 산출되었다. 이들 항체를 산출하기 위한 기술과 방법에 관한 상세한 설명은 U.S. Patent No. 6,057,098에서 찾아볼 수 있다. 간단히 말하면, 이러한 기술은 항원 결합 단편 (Fab)을 전시하는 파지 라이브러리의 엄격한 패닝 (stringent panning)을 이용한다. 몇몇 라운드의 패닝후, 매우 높은 친화성과 특이성으로 Siglec-15에 결합하는 경쇄와 중쇄 가변 영역을 내포하는 재조합 Fab가 농화된, Omniclonal로 명명된 라이브러리가 획득되었다. 이러한 라이브러리, 더욱 정확하게는 Omniclonal AL0025Z1로부터 96개의 개별 재조합 단일클론 Fab가 대장균 (E. coli)으로부터 만들어지고 Siglec-15 결합에 대하여 조사되었다.
각 개별 단일클론 항체의 상대적인 결합을 측정하기 위하여, 대규모 일시 형질감염 기술을 이용하여 재조합 인간 Fc-Siglec-1520-259가 293E 세포에서 생산되었다 (Durocher et al., 2002; Durocher, 2004). 단일클론 제조물의 96-웰 마스터 평판은 각 웰에서 상이한 농도의 정제된 항-siglec-15 Fab를 내포하였다. 두 번째 스톡 마스터 평판은 이들 Fab를 10 ㎍/㎖의 최종 농도로 희석함으로써 만들어지고, 이로부터 모든 차후 희석은 ELISA 측정을 위하여 수행되었다. 단일클론 제조물에 Fc-Siglec-15의 결합을 수행하기 위하여, Fc-Siglec-1520-259는 NHS-비오틴 (Pierce, Rockford, IL)으로 비오틴화되고, 그리고 10 ng/웰이 스트렙타비딘 96-웰 평판에서 코팅되었다. 1 나노그램의 각 Fab 단일클론 제조물은 각 웰에 첨가되고 실온에서 30분 동안 배양되었다. 결합된 항체는 TMB 액체 기질 (Sigma-Aldrich Canada Ltd., Oakville, ON)의 존재에서 HRP-접합된 생쥐 항-카파 경쇄 항체로 검출되고, 그리고 판독 (reading)은 마이크로역가 평판 판독기에서 450 nm에서 수행되었다. 도 4A에서 도시된 바와 같이, 총 53개 (강조된 짙은 회색) 단일클론 항체는 이러한 검사에서 유의미한 결합을 전시하였다 (>0.2 임의의 OD450 단위). 이들 항체는 Siglec-15에 대한 최대 친화성을 갖는 항체의 결합을 두드러지게 하기 위하여 1 ng/웰로 의도적으로 희석되었다. 이들 항체가 Fc 융합 단백질을 이용하여 산출되었기 때문에, 이들 단일클론은 또한, 비오틴화된 Fc 도메인만을 이용한 ELISA에서 조사되었다. 도 4B에서 도시된 바와 같이, 17개 항체는 Fc-Siglec-1520-259 (강조된 밝은 회색)의 Fc 모이어티와 상호작용하였다. 굵게 표시된 값 (도 4 참조)은 예시적인 항체 25A1, 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 25E5, 25E6, 그리고 25E9를 나타낸다. 이들 데이터는 또한, 이들 항체의 결합이 웰마다 달라진다는 것을 드러내고, 이것은 이들 항체가 Siglec-15에 대한 서로 다른 친화성을 나타낸다는 것을 지시하였다.
본 출원인은 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편이 상기 항원에 효율적으로 결합할 수 있음에 주목하였고, 실제로 1 ng의 항체는 500 ng 이하의 서열 번호: 2에 결합할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
Siglec-15에 대한 이들 항체의 특이성은 Siglec 패밀리의 2가지 다른 구성원, CD33과 Siglec-2에 대한 그들의 결합을 조사함으로써 평가되었다. CD33 (GeneBank™ accession No. NM_001772.3)은 Siglec의 CD33-관련된 패밀리의 원형 (prototype)이다: 인간 단백질 중에서, 이들 Siglec는 Siglec-15와 최대 아미노산 서열 유사성을 공유한다 (그들의 2개의 각 N-말단 Ig-유사 도메인 사이에 대략 29% 서열 동일성). Siglec-2 (GeneBank™ accession No. NM_001771.3)는 덜 유사하지만 (23% 서열 동일성), Siglec-15와 유사하게, 그리고 대부분의 다른 Siglec과 상이하게, α2-6-연결된 시알산 접합체에 대한 결합에 현저한 선호도를 갖는다 (Angata 2007, Blixt 2003). Siglec-2의 V-세트와 N-말단 C2-세트 Ig-유사 도메인, 그리고 CD33 (항체 생산을 위한 항원으로서 이용되는 Siglec-15의 영역에 상응함)을 포함하는 서열은 인간 PBMNC cDNA 라이브러리로부터 pYD5 벡터로 클로닝되었다. 이들 구조체로 형질감염된 293-6E 세포로부터, 그리고 비-형질감염된 293-6E 세포 또는 pYD5-Siglec-15 또는 pYD5 빈 벡터로 형질감염된 293-6E 세포로부터 상층액은 발현 수준을 평가하기 위하여 항-Fc 항체로 면역블롯팅에 의해 분석되었다 (도 14A). 이들 구조체의 형질감염은 예상된 크기의 Fc-태그표식된 단백질의 발현을 유발하였다 (도 14A). 이들 상층액의 분취량 (aliquot)은 진공 도트 블롯팅 (vacuum dot blotting) (Bio-dot 장치, Bio-Rad)에 의해 PVDF 위에 흡착되고, 그리고 대표적인 Siglec-15 단일클론 항체의 결합이 평가되었다 (웨스턴 블롯은 이용되지 않았는데, 그 이유는 많은 항체가 고유, 비-변성된 형태의 Siglec-15에만 반응하기 때문이다). 대조로서, 항-Fc와 항-siglec-15 Omniclonal 항체는 4개의 Fc-태그표식된 단백질 모두와 반응하였다 (도 14B). 대조적으로, 단일클론 항체 D8과 E9는 Fc 단독, Siglec-2 또는 CD33에 검출가능 결합을 보이지 않는데, 이것은 이들이 Siglec-15에 고도로 특이적이라는 것을 지시한다.
실시예 3
본 실시예에서는 Fab를 완전한 IgG2 키메라 단일클론 항체로 전환시키는데 이용되는 방법을 개시한다. 이러한 방법의 개요는 도 5에 제공된다.
항원의 생물학적 기능을 확증하는 in vitro와 in vivo 연구를 수행하기 위하여, Fab 내에 포함된 경쇄와 중쇄 가변 영역은 생쥐-인간 키메라 IgG2를 산출하기 위하여 완전한 항체 골격으로 이전되었다. 경쇄와 중쇄 면역글로불린 사슬 둘 모두에 대한 발현 벡터는 i) Fab 발현 벡터의 상류에서 최초 세균 신호 펩티드 서열이 포유동물 신호 펩티드로 대체되고, 그리고 ii) 생쥐 항체에서 경쇄와 중쇄 불변 영역이 인간 불변 영역으로 대체되도록 작제되었다. 이러한 이전을 달성하는 방법은 당업자에게 익숙한 표준 분자 생물학 기술을 이용하였다. 이러한 방법에 관한 짧은 개관이 여기에서 기술된다 (도 5 참조).
경쇄 발현 벡터 - 293E 일시 형질감염 시스템에서 이용되도록 설계된, pTTVH8G로 불리는 기존의 포유동물 발현 플라스미드 (Durocher et al., 2002)는 생쥐 경쇄 가변 영역을 수용하도록 변형되었다. 결과의 생쥐-인간 키메라 경쇄는 생쥐 가변 영역, 그 이후에 인간 카파 불변 도메인을 내포하였다. 인간 카파 불변 도메인을 인코딩하는 cDNA 서열은 프라이머 OGS1773과 OGS1774 (각각, 서열 번호: 127과 128)로 PCR에 의해 증폭되었다. 인간 카파 불변 영역에 대한 뉴클레오티드 서열 및 상응하는 아미노산 서열은 각각, 서열 번호: 129와 130에서 도시된다. 결과의 321개 염기쌍 PCR 산물은 인간 VEGF A의 신호 펩티드 서열 (NM_003376)의 직하류에서 pTTVH8G 내로 결찰되었다. 이러한 클로닝 단계는 또한, 생쥐 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 cDNA의 정확한 위치결정을 가능하게 하는 유일한 제한 엔도뉴클레아제 부위를 위치시켰다. pTTVK1로 불리는 최종 발현 플라스미드의 서열은 서열 번호: 131에서 도시된다. 표 2에서 개시된 서열에 기초하여, 항체 25A1, 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 25E5, 25E6, 그리고 25E9의 경쇄 가변 영역에 특이적인 PCR 프라이머 (각각, 서열 번호: 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 그리고 65)는 그들의 5'-단부에서, VEGF A 신호 펩티드의 마지막 20개 염기쌍과 동일한 서열을 함입하도록 설계되었다. 이들 프라이머의 서열은 각각, 25A1의 경우에 서열 번호: 132; 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 그리고 25E9의 경우에 서열 번호: 133; 25E5의 경우에 서열 번호: 134, 그리고 25E6의 경우에 서열 번호: 135에서 도시된다. 모두 4가지 경쇄 가변 영역을 증폭하는데 동일한 후방 프라이머가 이용되었는데, 그 이유는 극단 3'-단부가 동일했기 때문이다. 이러한 프라이머 (서열 번호: 136)는 3'-단부에서, 인간 카파 불변 도메인의 첫 20개 염기쌍과 동일한 서열을 함입하였다. PCR 단편 및 절단된 pTTVK1 둘 모두 T4 DNA 중합효소의 3' - 5' 엑소뉴클레아제 활성으로 처리되어 상보성 단부 (complementary end)가 산출되고, 이들은 어닐링 (annealing)에 의해 연결되었다. 어닐링 반응물은 적격 (competent) 대장균 (E. coli) 내로 형질전환되고, 그리고 발현 플라스미드는 생쥐 경쇄 가변 영역이 pTTVK1 발현 벡터 내로 적절하게 삽입되도록 담보하기 위하여 염기서열분석 (sequencing)에 의해 검증되었다. 당업자는 이들 경쇄 발현 플라스미드의 작제에 이용된 방법이 최초 Fab 라이브러리 내에 포함된 모든 항-siglec-15 항체에 적용된다는 것을 쉽게 인지할 것이다.
중쇄 발현 벡터 - 중쇄 면역글로불린을 생산하는 발현 벡터는 경쇄 면역글로불린의 생산을 위하여 앞서 기술된 pTTVK1에서와 유사한 방식으로 설계되었다. 키메라 항-siglec-15 항체의 경우에, 안정된 차단 항체에 대한 선호되는 유형인 IgG2 아이소타입이 요구되었다. 이를 위하여, 인간 IgG2 면역글로불린의 불변 영역 (CH1, CH2, 그리고 CH3)은 증폭되고 기존의 IgG1 발현 벡터 내로 결찰되고, 그리고 상세한 방법이 본 명세서에서 기술된다. 인간 IgGK 신호 펩티드 서열, 그리고 IgG1의 인간 Fc 도메인의 CH2와 CH3 영역을 내포하는 플라스미드 pYD11 (Durocher et al., 2002)은 인간 불변 CH1 영역을 인코딩하는 cDNA 서열을 결찰함으로써 변형되었다. 유일한 제한 엔도뉴클레아제 부위를 내포하도록 설계된 PCR 프라이머 OGS1769와 OGS1770 (서열 번호: 137과 138)이 서열 번호: 139와 140에서 도시된 뉴클레오티드 서열 및 상응하는 아미노산 서열을 내포하는 인간 IgG1 CH1 영역을 증폭하는데 이용되었다. IgGK 신호 펩티드 서열의 직하류에서 인간 CH1의 309개 염기쌍 단편의 결찰 이후에, 결과의 플라스미드는 제한 효소 ApaI와 NsiI로 절단되었다.
이들 효소는 발현 벡터 내에서 IgG1 불변 서열이 인간 IgG2 서열에 의해 대체될 수 있도록 하는 정확하게 동일한 위치에서 불변 IgG1과 IgG2 cDNA 둘 모두를 절단한다. 인간 IgG2 불변 도메인을 인코딩하는 cDNA는 상업적으로 가용한 출처 (Open Biosystems, Huntsville, AL)로부터 입수되었다. IgG2 면역글로불린 중쇄를 발현하는데 이용된 최종 플라스미드는 pYD19로 명명되고, 그리고 이의 서열은 서열 번호: 141에서 도시된다. 선택된 중쇄 가변 영역이 상기 벡터 내로 결찰될 때, 결과의 플라스미드는 인간 불변 영역을 보유하는 완전한 IgG2 중쇄 면역글로불린을 인코딩한다. 표 2에서 개시된 서열에 기초하여, 항체 25A1, 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 25E5, 25E6, 그리고 25E9의 중쇄 가변 영역에 특이적인 PCR 프라이머 (각각, 서열 번호: 39, 43, 47, 51, 55, 59, 63, 그리고 67)는 5'-단부에서, IgGK 신호 펩티드의 마지막 20개 염기쌍과 동일한 서열을 함입하도록 설계되었다. 이들 프라이머의 서열은 각각, 25A1의 경우에 서열 번호: 142; 24B4와 25D8의 경우에 서열 번호: 143; 25B8, 25C1, 그리고 25E9의 경우에 서열 번호: 144; 25E5의 경우에 서열 번호: 145; 그리고 25E6의 경우에 서열 번호: 146에서 도시된다. 모두 4가지 중쇄 가변 영역을 증폭하는데 동일한 후방 프라이머가 이용되었는데, 그 이유는 극단 3'-단부가 동일했기 때문이다. 이러한 프라이머 (서열 번호: 147)는 3'-단부에서, 인간 CH1 불변 도메인의 첫 20개 염기쌍과 동일한 서열을 함입하였다. PCR 단편 및 절단된 pYD19 둘 모두 T4 DNA 중합효소의 3' - 5' 엑소뉴클레아제 활성으로 처리되어 상보성 단부 (complementary end)가 산출되고, 이들은 어닐링 (annealing)에 의해 연결되었다. 어닐링 반응물은 적격 (competent) 대장균 (E. coli) 내로 형질전환되고, 그리고 발현 플라스미드는 생쥐 중쇄 가변 영역이 pYD19 발현 벡터 내로 적절하게 삽입되도록 담보하기 위하여 염기서열분석 (sequencing)에 의해 검증되었다. 당업자는 이들 중쇄 발현 플라스미드의 작제에 이용된 방법이 최초 Fab 라이브러리 내에 포함된 모든 항-siglec-15 항체에 적용된다는 것을 쉽게 인지할 것이다.
293E 세포에서 인간 IgG2의 발현 - 경쇄와 중쇄 면역글로불린을 인코딩하는 앞서 준비된 발현 벡터는 일시 형질감염 시스템 (Durocher et al., 2002)을 이용하여 293E 세포에서 발현되었다. 양쪽 면역글로불린 사슬의 아미노-말단에서 함입된 신호 펩티드에 의하여, 성숙 IgG2는 이들 세포의 혈청-없는 배양 배지로부터 수확되었다. 경쇄와 중쇄 발현 벡터를 동시-형질감염시키는데 이용된 방법은 본 명세서에서 기술되었다. 각 밀리미터의 세포에 대하여, 경쇄와 중쇄 발현 플라스미드 둘 모두의 1 마이크로그램 조합은 현탁액에서 1.5 - 2.0 백만 개 세포/㎖의 밀도로 성장된 293E 세포에서 형질감염되었다. 경쇄 대 중쇄 플라스미드의 비율은 조직 배양 배지에서 항체의 최대 수율을 달성하기 위하여 최적화되고, 그리고 상기 비율은 9:1 (L:H)인 것으로 밝혀졌다. 이용된 형질감염 시약은 폴리에틸렌이민 (polyethylenimine, PEI) (선형, MW 25,000, Cat# 23966 Polysciences, Inc., Warrington, PA)인데, 이것은 1:3의 DNA:PEI 비율로 포함되었다. 이들 세포의 성장은 5일 동안 지속되고, 이후 IgG2 키메라 단일클론 항체의 정제를 위하여 배양 배지가 수확되었다. 상기 단백질은 제조업체 (Sigma-Aldrich Canada Ltd., Oakville, ON)에 의해 지시된 바와 같이, 단백질-A 아가로즈를 이용하여 정제되었다.
선택된 단일클론의 상대적인 결합 친화성을 더욱 정확하게 결정하기 위하여, 증가하는 농도의 Fab가 비오틴화된 Fc-Siglec-1520-259와 함께 배양되었다. 10 나노그램의 비오틴화된 Fc-Siglec-1520-259가 스트렙타비딘 마이크로역가 평판에서 코팅되고, 그리고 증가하는 양의 이들 Fab 또는 키메라 IgG2 단일클론 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 25E6, 그리고 25E9가 도 6에서 지시된 바와 같이 첨가되었다. 도 6에서 도시된 바와 같이, 25B4, 25B8, 25C1, 25D8, 25E6, 그리고 25E9 키메라 IgG2 단일클론 항체의 결합은 이들 Fab와 매우 유사하였다. 이러한 결과는 생쥐 Fab로부터 인간 IgG2 중추로 가변 도메인의 전위 (transposition)가 Siglec-15 결합을 공여하는 경쇄와 중쇄 가변 영역의 능력에 별다른 영향을 주지 않았다는 것을 증명한다.
실시예 4
본 실시예에서는 파골세포의 분화를 저해하기 위한 항-siglec-15 항체의 용도를 기술한다.
인간 PBMNC (AllCells, Emoryville, CA)는 5% CO2 공기에서 37℃에서 24시간 동안 적절한 배양 배지에 배치되었다. 이들 세포는 100,000 세포/㎖의 세포 밀도에서 96-웰 평판에 접종되고, 그리고 35 ng/㎖ M-CSF와 30 ng/㎖ RANKL의 존재에서 증가하는 농도 (0.01 ㎍/㎖ - 100 ㎍/㎖)의 항-siglec-15 IgG2 키메라 단일클론 항체로 처리되었다. 분화되지 않은 전구 세포는 M-CSF로만 처리되었다. 대조 웰은 비-Siglec-15 결합 IgG2로 처리되었다. 이들 세포는 고정되고, TRAP에 대하여 염색되고, 그리고 다핵 세포가 계산되고 사진 촬영되었다 (배율 40X). 도 7에서 도시된 바와 같이, Siglec-15를 표적으로 하는 mAb는 인간 파골세포의 분화를 용량-의존성 방식으로 효과적으로 저해할 수 있었다. 파골세포 분화의 저해는 조사된 모든 예시적인 Siglec-15 항체에서 다양한 정도로 관찰되었지만, 가장 활동적인 단일클론은 25B8, 25E6, 그리고 25E9이었다. 대조 키메라 IgG2로 처리된 세포는 저해되지 않았다 (도 8에서 오른쪽 아래 패널, 대조 IgG2 참조). 이러한 결과는 RNA 간섭에 의한 Siglec-15 발현의 녹다운 (knockdown)이 인간 파골세포 분화의 저해를 유발한다는 것을 증명하는, Sooknanan (Sooknanan et al., 2007)에 의해 개시된 실험 결과와 완전하게 일치한다.
분화된 파골세포의 생물학적 기능은 골을 재흡수하는 것이고, 따라서 파골세포의 활성 역시 Siglec-15를 표적으로 하는 항체의 의해 저해될 것이다. 이를 조사하기 위하여, 인간 PBMNC는 합성 인산칼슘 기질 디스크 (BD BioCoat™ Osteologic™ MultiTest Slides)에 접종되고 앞서 기술된 바와 유사한 조건에서 배양되었다. 이들 전구 세포는 대조 아이소타입 IgG, 또는 25D8 또는 25E9 항-siglec-15 항체의 존재에서 M-CSF와 RANKL로 처리되었다. 이들 항체는 1 ㎍/㎖ 또는 10 ㎍/㎖의 농도로 존재하였다. 일단 완전하게 성숙되면, 파골세포는 처리되지 않은 대조 웰 내에 존재하였다. 이들 세포는 디스크로부터 긁어내지고, 그리고 남아있는 골 기질은 칼슘 무기질을 갈색으로 만드는 표준 von Kossa 색소를 이용하여 염색되었다. 도 12에서 도시된 바와 같이, 분화되지 않은 파골세포 (왼쪽 위 패널, M-CSF)를 내포하는 웰은 표면 상에서 흰색 반점으로 나타나는 기질의 분해 (degradation)의 어떤 증거도 보이지 않았다 (분해 구멍 (degradation pit)). 예상된 바와 같이, RANKL로 처리된 세포는 유의미한 분해의 증거를 나타내고, 그리고 표면이 많은 구멍을 내포하였다 (왼쪽 아래 패널, M-CSF + RANKL). 유사하게, 대조 IgG로 처리된 파골세포 역시 골 기질을 분해할 수 있는데, 이것은 이들 대조 항체가 파골세포 활성을 비-특이적으로 저해하지 못한다는 것을 증명하였다. 분화 파골세포가 항-siglec-15 항체로 처리될 때, 25E9 후보는 이러한 검사에서 골 분해를 효과적으로 저해하였다 (도 12, 오른쪽 패널). 대조적으로, 25D8 항체는 이러한 검사에서 분해를 저해하지 못하였다 (도 12의 오른쪽 중간 패널). 종합하면, 이들 결과 (도 7과 도 12)는 Siglec-15에 대한 항체가 파골세포 분화 및 골 분해 활성을 저해한다는 것을 증명한다.
병렬 실험에서, 생쥐 PBMNC가 유사한 방식으로 처리되었다. 도 8에서 도시된 바와 같이, 25B8, 25E6, 그리고 25D8로 명명된 키메라 mAb에 의해 예시되는 항-siglec-15 키메라 항체는 생쥐 파골세포의 분화를 저해할 수 있다. 이러한 결과는 Siglec-15의 인간 오르토로그에 대하여 산출된 단일클론 항체가 생쥐 Siglec-15 단백질에 대해서도 교차-반응성 (cross-reactivity)이라는 것을 확증한다. 이것은 ELISA를 이용하여 실험적으로 검증되었다. 서열 번호: 159와 160에서 도시된 서열을 내포하는 올리고뉴클레오티드를 이용하여, 아미노산 21-256에 상응하는 생쥐 Siglec-15 cDNA의 단편이 증폭되었다. 이러한 PCR 단편은 293-6E 세포에서 발현을 위하여 인간 Siglec-15 단편에 대하여 기술된 바와 같이 pYD5 발현 벡터 내로 결찰되었다. 재조합 Fc-생쥐Siglec-15는 단백질-A 친화성 크로마토그래피를 이용하여 정제되었다.
25C8로 명명된 예시적인 항-siglec-15 단일클론 Fab는 Fc-인간(h)Siglec-1520-259 또는 Fc-생쥐(m)Siglec-1521-256과 함께 배양되었다. 획득된 결과 (도 9 참조)는 인간 Siglec-15에 대하여 산출된 항체의 결합 활성이 Siglec-15의 생쥐 오르토로그와도 교차-반응한다는 것을 지시한다.
앞서 기술된 결과는 파골세포발생에서 Siglec-15의 중요성을 명백하게 증명한다. 파골세포 전구 세포에서 Siglec-15 발현의 약화는 다핵 성숙 파골세포를 형성하는 능력이 상당히 손상된 세포를 유발한다. 따라서 저해물질, 특히 치료적 단일클론 항체로 Siglec-15 표적화는 급성 전이성 골 암 또는 만성 골다공증 동안 골 분해를 직접적으로 담당하는 세포를 표적화하는 매우 선택성 방법인 것으로 증명될 것이다.
실시예 5
본 실시예는 시알산 (SA) 접합체에 Siglec-15의 결합을 차단하는 항-siglec-15 항체의 능력에 관계한다.
시알릴화된 당단백질의 형성은 적절한 파골세포발생을 위하여 요구된다 (Takahata et al., 2007). Siglec-15는 시알산에 결합하고, 그리고 이러한 결합은 아미노산 잔기 R143 (Angata 2007)에 의존한다. Siglec-15 항체가 파골세포 형성을 저해하는 한 가지 기전은 R143을 포함하는 에피토프와의 상호작용으로 인하여, 그들의 표적의 시알산-결합 기능의 간섭을 수반하는 것일 지도 모른다. 이러한 가능성을 조사하기 위하여, Siglec-15의 선호되는 시알산-내포 결합 상대인 Neu5Aca2-6-GalNAc-PAA-비오틴 (Glycotech, Rockville, MD)에 대한 재조합 Fc-Siglec-15의 결합을 차단하는 Siglec-15 항체의 능력을 조사하기 위하여 ELISA-기초된 검사를 실시하였다 (Angata 2007). Fc-Siglec-15는 단백질 A-코팅된 마이크로역가 평판 상에 고정되고, 그리고 이후, 상이한 Siglec-15 항체가 적용되었다. 결합되지 않은 항체의 배양과 제거후, Neu5Aca2-6-GalNAc-PAA-비오틴이 첨가되었다. 이러한 비오틴화된 프로브는 항체가 시알산 결합 부위를 차단하지 않는 경우에만 Siglec-15와 복합체를 형성할 것이다. 비오틴화된 프로브의 존재는 표준 방법에 의해 스트렙타비딘-HRP를 이용하여 검출되었다. 도 15에서 도시된 바와 같이, 항-siglec-15 Omniclonal 및 25D8 항체는 비-표적화, 대조 항체와 비교하여 시알산 결합을 저해한다. 항체 E6 역시 덜 현저하긴 하지만 명백한 효과를 갖는다. 항체 E9는 거의 무효한데, 이것은 상기 항체의 에피토프가 시알산 결합 부위와 겹치지 않는다는 것을 지시한다. 대조 항체 (도 15, ctl IgG2 참조)의 첨가는 Siglec-15에 시알산 모이어티의 결합을 예방하지 못하였다. 상기 방법은 Siglec-15의 존재에 매우 의존하였는데, 그 이유는 단지 Fc만 평판에서 코팅될 때 결합이 전혀 검출되지 않았고, 그리고 SA가 제외될 때에도 결합이 전혀 검출되지 않았기 때문이다 (도 15, SA 없음, Fc + SA, 그리고 Fc 단독 참조). 종합하면, 이들 결과는 Siglec-15 단일클론 항체가 아마도, R143 인근에서 상호작용으로 인하여, Siglec-15의 시알산 결합 기능을 다양한 정도로 간섭할 수 있다는 것을 증명한다. 이러한 특성은 파골세포발생에 대한 그들의 효과에 중요할 수 있을 것이다.
서열 목록
서열 번호: 1
ATGGAAAAGTCCATCTGGCTGCTGGCCTGCTTGGCGTGGGTTCTCCCGACAGGCTCATTTGTGAGAACTAAAATAGATACTACGGAGAACTTGCTCAACACAGAGGTGCACAGCTCGCCAGCGCAGCGCTGGTCCATGCAGGTGCCACCCGAGGTGAGCGCGGAGGCAGGCGACGCGGCAGTGCTGCCCTGCACCTTCACGCACCCGCACCGCCACTACGACGGGCCGCTGACGGCCATCTGGCGCGCGGGCGAGCCCTATGCGGGCCCGCAGGTGTTCCGCTGCGCTGCGGCGCGGGGCAGCGAGCTCTGCCAGACGGCGCTGAGCCTGCACGGCCGCTTCCGGCTGCTGGGCAACCCGCGCCGCAACGACCTCTCGCTGCGCGTCGAGCGCCTCGCCCTGGCTGACGACCGCCGCTACTTCTGCCGCGTCGAGTTCGCCGGCGACGTCCATGACCGCTACGAGAGCCGCCACGGCGTCCGGCTGCACGTGACAGCCGCGCCGCGGATCGTCAACATCTCGGTGCTGCCCAGTCCGGCTCACGCCTTCCGCGCGCTCTGCACTGCCGAAGGGGAGCCGCCGCCCGCCCTCGCCTGGTCCGGCCCGGCCCTGGGCAACAGCTTGGCAGCCGTGCGGAGCCCGCGTGAGGGTCACGGCCACCTAGTGACCGCCGAACTGCCCGCACTGACCCATGACGGCCGCTACACGTGTACGGCCGCCAACAGCCTGGGCCGCTCCGAGGCCAGCGTCTACCTGTTCCGCTTCCATGGCGCCAGCGGGGCCTCGACGGTCGCCCTCCTGCTCGGCGCTCTCGGCTTCAAGGCGCTGCTGCTGCTCGGGGTCCTGGCCGCCCGCGCTGCCCGCCGCCGCCCAGAGCATCTGGACACCCCGGACACCCCACCACGGTCCCAGGCCCAGGAGTCCAATTATGAAAATTTGAGCCAGATGAACCCCCGGAGCCCACCAGCCACCATGTGCTCACCGTGA
서열 번호: 2
MEKSIWLLACLAWVLPTGSFVRTKIDTTENLLNTEVHSSPAQRWSMQVPPEVSAEAGDAAVLPCTFTHPHRHYDGPLTAIWRAGEPYAGPQVFRCAAARGSELCQTALSLHGRFRLLGNPRRNDLSLRVERLALADDRRYFCRVEFAGDVHDRYESRHGVRLHVTAAPRIVNISVLPSPAHAFRALCTAEGEPPPALAWSGPALGNSLAAVRSPREGHGHLVTAELPALTHDGRYTCTAANSLGRSEASVYLFRFHGASGASTVALLLGALGFKALLLLGVLAARAARRRPEHLDTPDTPPRSQAQESNYENLSQMNPRSPPATMCSP
서열 번호: 3
ATAA
서열 번호: 4
MEGSLQLLACLACVLQMGSLVKTRRDASGDLLNTEAHSAPAQRWSMQVPAEVNAEAGDAAVLPCTFTHPHRHYDGPLTAIWRSGEPYAGPQVFRCTAAPGSELCQTALSLHGRFRLLGNPRRNDLSLRVERLALADSGRYFCRVEFTGDAHDRYESRHGVRLRVTAAAPRIVNISVLPGPAHAFRALCTAEGEPPPALAWSGPAPGNSSAALQGQGHGYQVTAELPALTRDGRYTCTAANSLGRAEASVYLFRFHGAPGTSTLALLLGALGLKALLLLGILGARATRRRLDHLVPQDTPPRSQAQESNYENLSQMSPPGHQLPRVCCEELLSHHHLVIHHEK
서열 번호: 5
GAAAATGTGCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATATCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 6
ENVLTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSVSYMYWYQQKPGSSPKPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호: 7
CAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 8
EVQLQQSGTELVRPGSSVKISCKASGYTFTRYWMDWVKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTNYNQKFKGKATLTVDKFSRTAYMELSSLTSEDSAVYYCARSGAYSSDYSYDGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 9
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 10
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호: 11
ACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 12
QVQVQQPGAEIVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPTNGRTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 13
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 14
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서열 번호: 15
AGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 16
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTTFYYSHYNYDVGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 17
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCCCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 18
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서열 번호: 19
CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 20
EIQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEMHWVKQTPVHGLEWIGAIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTSFYYTYYNYDVGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 21
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 22
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호: 23
ACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 24
QVQVQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPSNARTNYNEKFNTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 25
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAACACTCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAAGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGTTTCTGGAGTCCCTGTACGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACCCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 26
QIVLTQSPTLMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKPWIYRTSNLVSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPPTFGAGTKLELKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호: 27
CCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 28
EVKLEESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSKDWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKDKFIISRENAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCSRLEDYEDWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 29
AGTATTGTGATGACCCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTGTGAGTAATGCTGTAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATACATCCAATCGCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCACCACTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATACCTCTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 30
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNAVAWYQQKPGQSPKLLIYYTSNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTITTVQAEDLAVYFCQQDYTSPWTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호: 31
GCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 32
QVQLQQPGAELAKPGASVKLSCKASGYTFNTYNMYWLKQRPGQGLEWIGGIDPSNGDTKINEKFKNKATLTVDKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYYCTSHTYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 33
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 34
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서열 번호: 35
CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
서열 번호: 36
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTSFYYTYSNYDVGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 37
GAAAATGTGCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATATCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
서열 번호: 38
ENVLTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSVSYMYWYQQKPGSSPKPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
서열 번호: 39
GAGGTCCAGCTGCAACAATCTGGGACTGAGCTGGTGAGGCCTGGGTCCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGGTACTGGATGGACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGTTATACTAACTACAATCAAAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGATAAATTCTCCAGAACAGCCTATATGGAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATCGGGGGCCTACTCTAGTGACTATAGTTACGACGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
서열 번호: 40
EVQLQQSGTELVRPGSSVKISCKASGYTFTRYWMDWVKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTNYNQKFKGKATLTVDKFSRTAYMELSSLTSEDSAVYYCARSGAYSSDYSYDGFAYWGQGTLVTVSA
서열 번호: 41
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
서열 번호: 42
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIK
서열 번호: 43
CAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGGGGCTGAAATTGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACTGATTAATCCTACCAACGGTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGGGGGGACGGGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
서열 번호: 44
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서열 번호: 45
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
서열 번호: 46
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSTKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK
서열 번호: 47
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGTTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGACATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAACTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCGGACAGATCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAACTTTCTACTATAGTCACTATAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
서열 번호: 48
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTTFYYSHYNYDVGFAYWGQGTLVTVSA
서열 번호: 49
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCCCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
서열 번호: 50
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서열 번호: 51
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGAAATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAGCTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAAGTTTCTACTATACTTACTATAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
서열 번호: 52
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서열 번호: 53
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
서열 번호: 54
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서열 번호: 55
CAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCGGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACTGATTAATCCTAGCAACGCTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAATACCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGGGGGGACGGGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
서열 번호: 56
QVQVQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPSNARTNYNEKFNTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSS
서열 번호: 57
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAACACTCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAAGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGTTTCTGGAGTCCCTGTACGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACCCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
서열 번호: 58
QIVLTQSPTLMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKPWIYRTSNLVSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPPTFGAGTKLELK
서열 번호: 59
GAAGTGAAGCTTGAGGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAAAGACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGCAGTACGATAAACTATGCACCATCTCTTAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGAGAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTTCAAGACTAGAGGACTACGAAGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
서열 번호: 60
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서열 번호: 61
AGTATTGTGATGACCCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTGTGAGTAATGCTGTAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATACATCCAATCGCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCACCACTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATACCTCTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
서열 번호: 62
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서열 번호: 63
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGCGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCAACACCTATAATATGTACTGGTTGAAACAGAGGCCTGGGCAAGGCCTTGAGTGGATTGGGGGGATTGATCCTAGCAATGGTGATACTAAAATCAATGAGAAGTTCAAGAACAAGGCCACACTGACTGTTGACAAATCCTCCAGTACAGCCTATATGCAACTCAGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACAAGCCATACGTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
서열 번호: 64
QVQLQQPGAELAKPGASVKLSCKASGYTFNTYNMYWLKQRPGQGLEWIGGIDPSNGDTKINEKFKNKATLTVDKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYYCTSHTYWGQGTLVTVSA
서열 번호: 65
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
서열 번호: 66
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSTKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK
서열 번호: 67
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGTTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGACATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAACTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCGGACAGATCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAAGTTTCTACTATACTTACTCTAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
서열 번호: 68
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTSFYYTYSNYDVGFAYWGQGTLVTVSA
서열 번호: 69
SASSSVSYMY
서열 번호: 70
RTSNLAS
서열 번호: 71
QQWSSNPLT
서열 번호: 72
GYTFTRYWMD
서열 번호: 73
EIDPSDSYTN
서열 번호: 74
ARSGAYSSDYSYDGFAY
서열 번호: 75
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QMSNLAS
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서열 번호: 78
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서열 번호: 79
LINPTNGRTN
서열 번호: 80
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CAAAAGTGCAAAGAAGGGAAGACA
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TGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGT
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CATGTGGGCCATGAGGTCCACCAC
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VRTKIDTTENLLNTEVHSSPAQRWSMQVPPEVSAEAGDAAVLPCTFTHPHRHYDGPLTAIWRAGEPYAGPQVFRCAAARGSELCQTALSLHGRFRLLGNPRRNDLSLRVERLALADDRRYFCRVEFAGDVHDRYESRHGVRLHVTAAPRIVNISVLPSPAHAFRALCTAEGEPPPALAWSGPALGNSLAAVRSPREGHGHLVTAELPALTHDGRYTCTAANSLGRSEASVYLFRFHGASGAS
서열 번호: 124
GTAAGCGGATCCGTGAGAACTAAAATAGATACTA
서열 번호: 125:
GTAAGCGCGGCCGCGCTGGCGCCATGGAAGCGGAACAGGTA
서열 번호: 126
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서열 번호: 127
GTAAGCGCTAGCGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCC
서열 번호: 128
GTAAGCGAATTCACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTG
서열 번호: 129
GCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
서열 번호: 130
AVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호: 131
CTCTTCGCGGTCTTTCCAGTACTCTTGGATCGGAAACCCGTCGGCCTCCGAACGGTACTCCGCCACCGAGGGACCTGAGCGAGTCCGCATCGACCGGATCGGAAAACCTCTCGAGAAAGGCGTCTAACCAGTCACAGTCGCAAGGTAGGCTGAGCACCGTGGCGGGCGGCAGCGGGTGGCGGTCGGGGTTGTTTCTGGCGGAGGTGCTGCTGATGATGTAATTAAAGTAGGCGGT
서열 번호: 132
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGAAAATGTGCTCACCCAGTCTCC
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ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGATATTGTGATGACCCAGGCTGC
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서열 번호: 136
GGGAAGATGAAGACAGATGGTGCAGCCACAGC
서열 번호: 137
GTAAGCGCTAGCGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCC
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GTAAGCGAATTCACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTG
서열 번호: 139
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCAGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGT
서열 번호: 140
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
서열 번호: 141
GGACAAACTCTTCGCGGTCTTTCCAGTACTCTTGGATCGGAAACCCGTCGGCCTCCGAACGGTACTCCGCCACCGAGGGACCTGAGCGAGTCCGCATCGACCGGATCGGAAAACCTCTCGAGAAAGGCGTCTAACCAGTCACAGTCGCAAGGTAGGCTGAGCACCGTGGCGGGCGGCAGCGGGTGGCGGTCGGGGTTGTTTCTGGCGGAGGTGCTGCTGATGATGTAATTAAAGTAGGCGGT
서열 번호: 142
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCGAGGTCCAGCTGCAACAATCTGG
서열 번호: 143
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCCAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGG
서열 번호: 144
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCGAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGG
서열 번호: 145
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서열 번호: 146
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGG
서열 번호: 147
GGGGCCAGGGGAAAGACAGATGGGCCCTTCGTTGAGGC
서열 번호: 148
RSX1aX2aSLLHSNGX3aTYLY
X1a는 중성 친수성 아미노산이고,
X3a는 소수성 아미노산 또는 아스파라긴이고,
X2a는 리신 또는 글루타민산이다.
서열 번호: 149
X1bMSNLAS
여기서 X1b는 염기성 아미노산이다.
서열 번호: 150
RX1cSNLX2cS
여기서 X1c는 메티오닌 또는 트레오닌이고,
여기서 X2c는 소수성 아미노산이다.
서열 번호: 151
X1dQX2dLEX3dPX4dT
여기서 X1d는 소수성 아미노산이고;
여기서 X2d는 염기성 아미노산이고;
여기서 X3d는 티로신 또는 류신이고, 그리고;
여기서 X4d는 방향족 아미노산이다.
서열 번호: 152
QQWSSNPX1eT
여기서 X1e는 프롤린 또는 류신이다.
서열 번호: 153
GYTFX1fX2fYX3fMX
여기서 X1f는 트레오닌 또는 아스파라긴이고;
여기서 X2f는 트레오닌, 아르기닌, 세린 또는 아스파르트산이고;
여기서 X3f는 트립토판, 아스파라긴, 아스파르트산 또는 글루타민산이고, 그리고;
여기서 X4f는 티로신, 히스티딘 또는 아스파르트산이다.
서열 번호: 154
GYTFTDYX5fMH
여기서 X5f는 산성 아미노산이다.
서열 번호: 155
LINPX1gNX2gRX3gN
여기서 X1g는 중성 친수성 아미노산이고;
여기서 X2g는 알라닌 또는 글리신이고, 그리고;
여기서 X3g는 프롤린 또는 트레오닌이다.
서열 번호: 156
X1hIDPETGGTA
여기서 X1h는 알라닌 또는 트레오닌이다.
서열 번호: 157
EIX1iPX2iX3iSX4iX5iN
여기서 X1i는 아스파르트산 또는 아스파라긴이고;
여기서 X2i는 아스파르트산 또는 세린이고;
여기서 X3i는 아스파르트산 또는 세린이고;
여기서 X4i는 티로신 또는 트레오닌이고, 그리고;
여기서 X5i는 트레오닌 또는 이소류신이다.
서열 번호: 158
TX1jFYYX2jX3jX4jNYDVGFAY
여기서 X1j는 중성 친수성 아미노산이고;
여기서 X2j는 중성 친수성 아미노산이고;
여기서 X3j는 티로신 또는 히스티딘이고, 그리고;
여기서 X4j는 티로신 또는 세린이다.
서열 번호: 159
GTAAGCGAATTCATGGTGAAAACTAGAAGAGACGC
서열 번호: 160
GTAAGCAAGCTTTTAGCCGTGGAAGCGGAACAGG
서열 번호: 161 (25B02 가변성 경쇄 DNA)
AACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAACAGAAGCAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTACCAGAAGGTGTGTCAGTAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAACCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATCACTGTCAACATCATTATGGTGTTCCTCTTACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGTTGAAA
서열 번호: 162 (25B02 가변성 경쇄 아미노산)
NIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLPEGVSVRFSGSGSGTQFSLKINNLQPEDFGSYHCQHHYGVPLTFGSGTKLELK
서열 번호: 163 (25B02 가변성 중쇄 DNA)
CAGGTGAAGCTTCAGCAGTCCGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTAGGAACTGGATACAGTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTATTTATCCTGGAAATGGTGATAGTAGGTATACTCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCGAACACAGCCTACATGCAACTCAGCGGTTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATTGGCTGGTAACTACGCTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCGCTCTCACAGTCTCCTCA
서열 번호: 164 (25B02 가변성 중쇄 아미노산)
QVKLQQSGAELARPGASVKFSCKASGYTFTRNWIQWVKQRPGQGLEWIGAIYPGNGDSRYTQKFKGKATLTADKSSNTAYMQLSGLASEDSAVYYCARLAGNYAYYFDYWGQGTALTVSS
서열 번호: 165 (25D11 가변성 경쇄 DNA)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGGGAATATTCACAATTATTTAGCATGGTATCAACAGAAGCAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTACCAGAAGGTGTGTCAGTAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAACCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATCACTGTCAACATCATTATGGTGTTCCTCTTACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGTTGAAA
서열 번호: 166 (25D11 가변성 경쇄 아미노산)
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLPEGVSVRFSGSGSGTQFSLKINNLQPEDFGSYHCQHHYGVPLTFGSGTKLELK
서열 번호: 167 (25D11 가변성 중쇄 DNA)
CAGGTGAAGCTTCAGCAGTCCGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTAGGAACTGGATACAGTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTATTTATCCTGGAAATGGTGATAGTAGGTATACTCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCGAACACAGCCTACATGCAACTCAGCGGTTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATTGGCTGGTAACTACGCTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCGCTCTCACAGTCTCCTCA
서열 번호: 168 (25D11 가변성 중쇄 아미노산)
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서열 번호: 169 (25E10 가변성 경쇄 DNA)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGGGAATATTCACAATTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCCTAGCAGATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGAACACAATATTCTCTCAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTACGGTGCTCCTCTTACGTTCGGTGCTGGGACCAAGGTGGAGCTGAAA
서열 번호: 170 (25E10 가변성 경쇄 아미노산)
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGAPLTFGAGTKVELK
서열 번호: 171 (25E10 가변성 중쇄 DNA)
GATGTGCAGCTGCAACAATCTGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAGGAACTGGATACAGTGGGTTAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTGTTTATCCTGGAAATGGTGATAGTAGGTATACTCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAACAGTTTGTCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGCGCAAGATTGGCTGGTAACTACGCTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCGCTCTCACAGTCTCCTCA
서열 번호: 172 (25E10 가변성 중쇄 아미노산)
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서열 번호: 173
RASENIYSYLA
서열 번호: 174
NAKTLPE
서열 번호: 175
QHHYGVPLT
서열 번호: 176
GYTFTRNWIQ
서열 번호: 177
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서열 번호: 178
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서열 번호: 179
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서열 번호: 180
NAKTLPE
서열 번호: 181
QHHYGVPLT
서열 번호: 182
GYTFTRNWIQ
서열 번호: 183
AIYPGNGDSR
서열 번호: 184
ARLAGNYAYYFDY
서열 번호: 185
RASGNIHNYLA
서열 번호: 186
NAKTLAD
서열 번호: 187
QHHYGAPLT
서열 번호: 188
GYTFTRNWIQ
서열 번호: 189
AVYPGNGDSR
서열 번호: 190
ARLAGNYAYYFDY
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
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Figure pct00021
Figure pct00022
SEQUENCE LISTING <110> ALETHIA BIOTHERAPEUTICS INC. TREMBLAY, Gilles, Bernard FILION, Mario STUIBLE, Matthew <120> ANTIBODIES THAT SPECIFICALLY BLOCK THE BIOLOGICAL ACTIVITY OF AN OSTEOCLAST-SPECIFIC ANTIGEN <130> 280317.58 <140> PCT/CA2010/001586 <141> 2010-10-06 <150> US61/248,960 <151> 2009-10-06 <150> US12/580,943 <151> 2009-10-16 <160> 223 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 987 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggaaaagt ccatctggct gctggcctgc ttggcgtggg ttctcccgac aggctcattt 60 gtgagaacta aaatagatac tacggagaac ttgctcaaca cagaggtgca cagctcgcca 120 gcgcagcgct ggtccatgca ggtgccaccc gaggtgagcg cggaggcagg cgacgcggca 180 gtgctgccct gcaccttcac gcacccgcac cgccactacg acgggccgct gacggccatc 240 tggcgcgcgg gcgagcccta tgcgggcccg caggtgttcc gctgcgctgc ggcgcggggc 300 agcgagctct gccagacggc gctgagcctg cacggccgct tccggctgct gggcaacccg 360 cgccgcaacg acctctcgct gcgcgtcgag cgcctcgccc tggctgacga ccgccgctac 420 ttctgccgcg tcgagttcgc cggcgacgtc catgaccgct acgagagccg ccacggcgtc 480 cggctgcacg tgacagccgc gccgcggatc gtcaacatct cggtgctgcc 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gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tgttgacgcc 2880 gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca 2940 ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc 3000 ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag 3060 gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa 3120 ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgcagcaatg 3180 gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa 3240 ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg 3300 gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt 3360 gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt 3420 caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag 3480 cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat 3540 ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct 3600 taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct 3660 tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca 3720 gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc 3780 agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc 3840 aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct 3900 gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag 3960 gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc 4020 tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag cattgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg 4080 agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag 4140 cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt 4200 gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac 4260 gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg 4320 ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc 4380 cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcgtacat ttatattggc 4440 tcatgtccaa tatgaccgcc atgttgacat tgattattga ctagttatta atagtaatca 4500 attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta 4560 aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat 4620 gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg 4680 taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtccgcc ccctattgac 4740 gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt acgggacttt 4800 cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg 4860 cagtacacca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc 4920 attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt 4980 aataaccccg ccccgttgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata 5040 agcagagctc gtttagtgaa ccgtcagatc ctcactctct tccgcatcgc tgtctgcgag 5100 ggccagctgt tgggctcgcg gttgaggaca aactcttcgc ggtctttcca gtactcttgg 5160 atcggaaacc cgtcggcctc cgaacggtac tccgccaccg agggacctga gcgagtccgc 5220 atcgaccgga tcggaaaacc tctcgagaaa ggcgtctaac cagtcacagt cgcaaggtag 5280 gctgagcacc gtggcgggcg gcagcgggtg gcggtcgggg ttgtttctgg cggaggtgct 5340 gctgatgatg taattaaagt aggcggt 5367 <210> 142 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 142 gggttccagg ttccactggc gaggtccagc tgcaacaatc tgg 43 <210> 143 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 143 gggttccagg ttccactggc caggtccaag tgcagcagcc tgg 43 <210> 144 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 144 gggttccagg ttccactggc gagatccagc tgcagcagtc tgg 43 <210> 145 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 145 gggttccagg ttccactggc gaagtgaagc ttgaggagtc tgg 43 <210> 146 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 146 gggttccagg ttccactggc caggtccaac tgcagcagcc tgg 43 <210> 147 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 147 ggggccaggg gaaagacaga tgggcccttc gttgaggc 38 <210> 148 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is a neutral hydrophilic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is lysine or glutamic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is an hydrophobic amino acid or asparagine <400> 148 Arg Ser Xaa Xaa Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Xaa Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 149 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is a basic amino acid <400> 149 Xaa Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 150 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is methionine or threonine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is an hydrophobic amino acid <400> 150 Arg Xaa Ser Asn Leu Xaa Ser 1 5 <210> 151 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL3 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is an hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is a basic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is tyrosine or leucine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is an aromatic amino acid <400> 151 Xaa Gln Xaa Leu Glu Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 152 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL3 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is proline or leucine <400> 152 Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Xaa Thr 1 5 <210> 153 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is threonine or asparagine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is threonine, arginine, serine or aspartic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is tryptophan, asparagine, aspartic acid or glutamic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is tyrosine, histidine or aspartic acid <400> 153 Gly Tyr Thr Phe Xaa Xaa Tyr Xaa Met Xaa 1 5 10 <210> 154 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is an acidic amino acid <400> 154 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Xaa Met His 1 5 10 <210> 155 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is a neutral hydrophilic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is alanine or glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is proline or threonine <400> 155 Leu Ile Asn Pro Xaa Asn Xaa Arg Xaa Asn 1 5 10 <210> 156 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is alanine or threonine <400> 156 Xaa Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala 1 5 10 <210> 157 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is aspartic acid or asparagine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is aspartic acid or serine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is aspartic acid or serine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is tyrosine or threonine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is threonine or isoleucine <400> 157 Glu Ile Xaa Pro Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Asn 1 5 10 <210> 158 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is a neutral hydrophilic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is a neutral hydrophilic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is tyrosine or histidine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is tyrosine or serine <400> 158 Thr Xaa Phe Tyr Tyr Xaa Xaa Xaa Asn Tyr Asp Val Gly Phe Ala Tyr 1 5 10 15 <210> 159 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 159 gtaagcgaat tcatggtgaa aactagaaga gacgc 35 <210> 160 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 160 gtaagcaagc ttttagccgt ggaagcggaa cagg 34 <210> 161 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 25B02 light chain variable region CDNA <400> 161 aacatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agttatttag catggtatca acagaagcag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct taccagaagg tgtgtcagta 180 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacaa cctgcagcct 240 gaagattttg ggagttatca ctgtcaacat cattatggtg ttcctcttac gttcggttct 300 gggaccaagc tggagttgaa a 321 <210> 162 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 25B02 light chain variable region amino acid sequence <400> 162 Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Pro Glu Gly Val Ser Val Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr His Cys Gln His His Tyr Gly Val Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 163 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 25B02 heavy chain variable region cDNA <400> 163 caggtgaagc ttcagcagtc cggggctgag ctggcaagac ctggggcttc agtgaagttt 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcact aggaactgga tacagtgggt aaaacagagg 120 cctggacagg gtctggaatg gattggggct atttatcctg gaaatggtga tagtaggtat 180 actcagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagata aatcctcgaa cacagcctac 240 atgcaactca gcggtttggc atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagattggct 300 ggtaactacg cttactactt tgactactgg ggccaaggca ccgctctcac agtctcctca 360 <210> 164 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 25B02 heavy chain variable region amino acid sequence <400> 164 Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Phe Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Asn 20 25 30 Trp Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ser Arg Tyr Thr Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Gly Asn Tyr Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ala Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 165 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 25D11 light chain variable region cDNA <400> 165 gacatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca acagaagcag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct taccagaagg tgtgtcagta 180 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacaa cctgcagcct 240 gaagattttg ggagttatca ctgtcaacat cattatggtg ttcctcttac gttcggttct 300 gggaccaagc tggagttgaa a 321 <210> 166 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 25D11 light chain variable region amino acid sequence <400> 166 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Pro Glu Gly Val Ser Val Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr His Cys Gln His His Tyr Gly Val Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 167 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 25D11 heavy chain variable region cDNA <400> 167 caggtgaagc ttcagcagtc cggggctgag ctggcaagac ctggggcttc agtgaagttt 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcact aggaactgga tacagtgggt aaaacagagg 120 cctggacagg gtctggaatg gattggggct atttatcctg gaaatggtga tagtaggtat 180 actcagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagata aatcctcgaa cacagcctac 240 atgcaactca gcggtttggc atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagattggct 300 ggtaactacg cttactactt tgactactgg ggccaaggca ccgctctcac agtctcctca 360 <210> 168 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 25D11 heavy chain variable region amino acid sequence <400> 168 Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Phe Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Asn 20 25 30 Trp Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ser Arg Tyr Thr Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Gly Asn Tyr Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ala Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 169 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 25E10 light chain variable region cDNA <400> 169 gacatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaaccc tagcagatgg tgtgccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct 240 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat cattacggtg ctcctcttac gttcggtgct 300 gggaccaagg tggagctgaa a 321 <210> 170 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 25E10 light chain variable region amino acid sequence <400> 170 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ala Pro Leu 85 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region consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Q or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic amino acid such as V or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic amino acid such as for example V or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is any amino acid or for example P or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is any amino acid or for example R or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is any amino acid or for example A or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic amino acid such as for example L or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa is any amino acid or a basic amino acid such as for example R or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example for example S or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example T or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> Xaa is any amino acid or for example G or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (58)..(58) <223> Xaa is any amino acid or for example P or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (63)..(63) <223> Xaa is any amino acid or a basic amino acid such as for example K or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (65)..(65) <223> Xaa is any amino acid or a basic amino acid such as for example N or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (66)..(66) <223> Xaa is any amino acid or for example N or a neutral hydrophilic amino acid such as S or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (82)..(82) <223> Xaa is any amino acid or a basic amino acid such as for example Q or H <400> 191 Xaa Xaa Gln Xaa Gln Gln Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Val Xaa Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp 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or for example G or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> Xaa is any amino acid or for example A or S <400> 192 Xaa Val Xaa Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Phe Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Asn 20 25 30 Trp Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Xaa Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ser Arg Tyr Thr Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Xaa Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Xaa Xaa Leu Xaa Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Gly Asn Tyr Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ala Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 193 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is E or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic amino acid such as for example A or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is any amino acid or for example Y or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic amino acid such as for example A or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa is any amino acid or an acidic amino acid such as for example D or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> Xaa is any amino acid or for example A or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(74) <223> Xaa is any amino acid or a basic amino acid such as for example K or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..(77) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example S or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (98)..(98) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example S or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (102)..(102) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example T or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (103)..(103) <223> Xaa is any amino acid or for example Y or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (104)..(104) <223> Xaa is any amino acid or for example S or Y <400> 193 Xaa Xaa Xaa Leu Gln Gln Ser Gly Xaa Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Xaa Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Xaa Ser Ser Xaa Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Xaa Phe Tyr Tyr Xaa Xaa Xaa Asn Tyr Asp Val Gly Phe Ala Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 194 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is any amino acid or a basic amino acid such as for example Q or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic 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(105)..(105) <223> Xaa is any amino acid or for example G or S <400> 194 Asp Ile Val Met Thr Xaa Ala Xaa Phe Ser Asn Pro Val Xaa Leu Gly 1 5 10 15 Thr Xaa Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Xaa Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Xaa Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Xaa Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Xaa Gln Xaa 85 90 95 Leu Glu Xaa Pro Tyr Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 195 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is any amino acid or for example D or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> Xaa is any amino acid or for example E or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> Xaa is any amino acid or for example Y or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa is any amino acid or for example S or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (55)..(55) <223> Xaa is any amino acid or for example P or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> Xaa is any amino acid or an acidic amino acid such as for example E or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (59)..(59) <223> Xaa is any amino acid or for example P or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (60)..(60) <223> Xaa is any amino acid or for example V or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (71)..(71) <223> Xaa is any amino acid or an aromatic amino acid such as for example F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..(77) <223> Xaa is any amino acid or for example N or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> Xaa is any amino acid or for example H or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (94)..(94) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic amino acid such as for example A or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (100)..(100) <223> Xaa is any amino acid or for example S or A <220> 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amino acid or a hydrophobic amino acid such as for example V or I <400> 201 Arg Ser Ser Xaa Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Xaa Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 202 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example S or T <400> 202 Arg Ser Xaa Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 203 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL3 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is any amino acid or a hydrophobic amino acid such as for example M or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is any amino acid or a basic amino acid such as for example N or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is any amino acid or for example Y or L <400> 203 Xaa Gln Xaa Leu Glu Xaa Pro Tyr Thr 1 5 <210> 204 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL3 consensus <220> 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MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is any amino acid or for example P or T <400> 207 Leu Ile Asn Pro Xaa Asn Xaa Arg Xaa Asn 1 5 10 <210> 208 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is any amino acid or an acidic amino acid such as for example D or E <400> 208 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Xaa Met His 1 5 10 <210> 209 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is any amino acid or for example A or T <400> 209 Xaa Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala 1 5 10 <210> 210 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example S or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is any amino acid or a neutral hydrophilic amino acid such as for example T or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is any amino acid or for example Y or H <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is any amino acid or for example S or Y <400> 210 Thr Xaa Phe Tyr Tyr Xaa Xaa Xaa Asn Tyr Asp Val Gly Phe Ala Tyr 1 5 10 15 <210> 211 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region sequence <400> 211 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Arg Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 212 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region sequence <400> 212 Gln Val Gln Val Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 213 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region sequence <400> 213 Gln Val Gln Val Gln Gln Pro Gly Ala Glu Ile Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 214 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region sequence <400> 214 Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 215 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region sequence <400> 215 Gln Val Gln Val Gln Gln Pro Gly Ala Glu Ile Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 216 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region sequence <400> 216 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Pro Asn Tyr Asn Glu Arg Phe 50 55 60 Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 217 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region sequence <400> 217 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Val Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ser Phe Tyr Tyr Thr Tyr Ser Asn Tyr Asp Val Gly Phe Ala Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 218 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region sequence <400> 218 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Val Phe Ser Asn Pro Val Ile Leu Gly 1 5 10 15 Thr Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Val Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 219 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region sequence <400> 219 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Glu Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 220 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region sequence <400> 220 Asp Ile Val Met Thr His Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 221 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region sequence <400> 221 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 222 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region sequence <400> 222 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 223 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region sequence <400> 223 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Leu 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (92)

  1. 파골세포 분화를 촉진할 수 있는 폴리펩티드에 결합할 수 있고, 그리고 시알산-결합 면역글로불린-유사 렉틴 15 (Siglec-15; 서열 번호: 2)의 아미노산 20 내지 259에 적어도 80% 동일한 서열을 갖는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 파골세포 분화 (osteoclast differentiation)를 저해하거나, 골 재흡수 (bone resorption)를 저해하거나, 또는 Siglec-15가 시알산 (sialic acid)에 결합하는 것을 차단할 수 있는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  2. 청구항 1에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 파골세포 전구 세포의 분화된 파골세포로의 분화를 저해할 수 있는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  3. 청구항 2에 있어서, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 다중클론 항체, 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  4. 청구항 3에 있어서, 단리된 포유동물 세포로부터 생산되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  5. 청구항 4에 있어서, 단리된 포유동물 세포는 인간 세포인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  6. 청구항 5에 있어서, 단리된 항체는 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  7. 청구항 6에 있어서, 인간 항체 또는 이의 단편의 불변 영역의 아미노산을 포함하는 키메라 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  8. 청구항 7에 있어서, 불변 영역 또는 이의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  9. 청구항 8에 있어서, 불변 영역은 IgG2로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  10. 청구항 3에 있어서, 인간 항체 또는 이의 단편의 불변 영역의 아미노산을 포함하는 키메라 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  11. 청구항 10에 있어서, 불변 영역 또는 이의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  12. 청구항 11에 있어서, 불변 영역은 IgG2로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  13. 청구항 2에 있어서, 항원 결합 단편은 FV (scFv), Fab, Fab' 또는 (Fab')2인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  14. 청구항 2에 있어서, 파골세포 전구 세포는 인간 파골세포 전구 세포인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  15. 청구항 8에 있어서, 인간 파골세포 전구 세포는 일차 인간 파골세포 전구 세포인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  16. 청구항 9에 있어서, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 다중클론 항체, 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  17. 청구항 16에 있어서, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 이의 단편인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  18. 청구항 17에 있어서, 인간 항체 또는 이의 단편의 불변 영역의 아미노산을 포함하는 키메라 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  19. 청구항 18에 있어서, 불변 영역 또는 이의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  20. 청구항 19에 있어서, 불변 영역은 IgG2로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  21. 청구항 1 내지 20중 어느 한 항에 있어서, 비-변성된 Siglec-15에 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  22. 청구항 21에 있어서, Siglec-15에 특이적으로 결합하고 Siglec-2 또는 CD33에 결합하지 않는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  23. 청구항 1 내지 22중 어느 한 항에 있어서, 1ng의 항체가 500ng 이하의 서열 번호: 2에 결합할 수 있는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  24. 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 변이체에 특이적으로 결합할 수 있고, 그리고 난소 암 세포, 신장 암 세포, 중추신경계의 암 세포, 전립선 암 세포, 흑색종 세포, 유방 암 세포, 폐 암 세포 또는 대장 암 세포 내에서 서열 번호: 2 또는 변이체를 검출할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  25. 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 변이체에 특이적으로 결합할 수 있고, 그리고 난소 암 세포, 신장 암 세포, 중추신경계의 암 세포, 전립선 암 세포, 흑색종 세포, 유방 암 세포, 폐 암 세포 또는 대장 암 세포의 성장을 저해할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  26. 청구항 1 내지 25중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 38에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 42에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 46에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 50에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 54에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 58에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 62에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 66에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 162에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 166에 적어도 70% 동일한 서열 및 서열 번호: 170에 적어도 70% 동일한 서열로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  27. 청구항 1 또는 26에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 40에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 44에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 48에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 52에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 56에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 60에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 64에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 68에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 164에 적어도 70% 동일한 서열, 서열 번호: 168에 적어도 70% 동일한 서열 및 서열 번호: 172에 적어도 70% 동일한 서열로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  28. Siglec-15 또는 이의 변이체에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는
    a) 서열 번호: 38에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 40에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    b) 서열 번호: 42에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 44에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    c) 서열 번호: 46에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 48에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    d) 서열 번호: 50에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 52에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    e) 서열 번호: 54에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 56에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    f) 서열 번호: 58에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 60에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    g) 서열 번호: 62에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 64에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    h) 서열 번호: 66에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 68에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    i) 서열 번호: 162에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 164에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR;
    j) 서열 번호: 166에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 168에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR, 그리고;
    k) 서열 번호: 170에서 정의된 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 172에서 정의된 중쇄 가변 도메인의 3개의 CDR을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  29. Siglec-15 또는 이의 변이체에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는
    a) 서열 번호: 194와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 191과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    b) 서열 번호: 195와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 192와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    c) 서열 번호: 196과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 193과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    d) 서열 번호: 38과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 40과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    e) 서열 번호: 42와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 44와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    f) 서열 번호: 46과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 48과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    g) 서열 번호: 50과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 52와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    h) 서열 번호: 54와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 56과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    i) 서열 번호: 58과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 60과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    j) 서열 번호: 62와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 64와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    k) 서열 번호: 66과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 68과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    l) 서열 번호: 162와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 164와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
    m) 서열 번호: 166과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 168과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인, 그리고;
    n) 서열 번호: 170과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 172와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  30. 청구항 29에 있어서,
    a) 서열 번호: 194와 적어도 70% 서열 동일성을 갖고 서열 번호: 148 또는 서열 번호: 201에서 정의된 바와 같은 CDRL1, 서열 번호: 149에서 정의된 바와 같은 CDRL2, 그리고 서열 번호: 151 또는 서열 번호: 203에서 정의된 바와 같은 CDRL3을 보유하는 경쇄 가변 도메인, 그리고;
    b) 서열 번호: 191과 적어도 70% 서열 동일성을 갖고 서열 번호: 153 또는 서열 번호: 205에서 정의된 바와 같은 CDRH1, 서열 번호: 155 또는 서열 번호: 207에서 정의된 바와 같은 CDRH2, 그리고 서열 ARGGDGDYFDY을 갖는 CDRH3을 보유하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  31. 청구항 30에 있어서, CDRL1은 RSSKSLLHSNGITYLY, RSSKSLLHSNGVTYLY 또는 RSSESLLHSNGITYLY로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  32. 청구항 29 또는 30에 있어서, CDRL2는 QMSNLAS인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  33. 청구항 29 내지 32중 어느 한 항에 있어서, CDRL3은 AQNLELPYT, MQHLEYPYT 또는 AQNLEYPYT로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  34. 청구항 29 내지 33중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 GYTFTSYWMH 및 GYTFTTYWMH로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  35. 청구항 29 내지 34중 어느 한 항에 있어서, CDRH2는 LINPTNGRTN, LINPSNARTN 및 LINPSNGRPN으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.

  36. 청구항 29에 있어서,
    a) 서열 번호: 195와 적어도 70% 서열 동일성을 갖고 서열 번호: 197에서 정의된 바와 같은 CDRL1, 서열 번호: 198에서 정의된 바와 같은 CDRL2, 그리고 서열 번호: 204에서 정의된 바와 같은 CDRL3을 보유하는 경쇄 가변 도메인, 그리고;
    b) 서열 번호: 192와 적어도 70% 서열 동일성을 갖고 서열 GYTFTRNWIQ를 갖는 CDRH1, 서열 번호: 200에서 정의된 바와 같은 CDRH2, 그리고 서열 ARLAGNYAYYFDY를 갖는 CDRH3을 보유하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  37. 청구항 36에 있어서, CDRL1은 RASGNIHNYLA 및 RASENIYSYLA로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  38. 청구항 36 또는 37에 있어서, CDRL2는 NAKTLPE 및 NAKTLAD로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  39. 청구항 36 내지 38중 어느 한 항에 있어서, CDRL3은 QHHYGVPLT 및 QHHYGAPLT로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  40. 청구항 36 내지 39중 어느 한 항에 있어서, CDRH2는 AIYPGNGDSR 및 AVYPGNGDSR로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  41. 청구항 29에 있어서,
    a) 서열 번호: 196과 적어도 70% 서열 동일성을 갖고 서열 번호: 202에서 정의된 바와 같은 CDRL1, 서열 번호: 150에서 정의된 바와 같은 CDRL2, 그리고 서열 번호: 151 또는 서열 번호: 203에서 정의된 바와 같은 CDRL3을 보유하는 경쇄 가변 도메인, 그리고;
    b) 서열 번호: 193과 적어도 70% 서열 동일성을 갖고 서열 번호: 154 또는 서열 번호: 208에서 정의된 바와 같은 CDRH1, 서열 번호: 156 또는 서열 번호: 209에서 정의된 바와 같은 CDRH2, 그리고 서열 번호: 158 또는 서열 번호: 210에서 정의된 바와 같은 CDRH3을 보유하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  42. 청구항 41에 있어서, CDRL1은 RSSKSLLHSNGNTYLY 및 RSTKSLLHSNGNTYLY로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  43. 청구항 41 또는 42에 있어서, CDRL2는 RMSNLAS인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  44. 청구항 41 내지 43중 어느 한 항에 있어서, CDRL3은 MQHLEYPFT인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  45. 청구항 41 내지 44중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 GYTFTDYDMH 및 GYTFTDYEMH로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  46. 청구항 41 내지 45중 어느 한 항에 있어서, CDRH2는 TIDPETGGTA 및 AIDPETGGTA로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  47. 청구항 41 내지 46중 어느 한 항에 있어서, CDRH3은 TSFYYTYSNYDVGFAY, TSFYYTYYNYDVGFAY 및 TTFYYSHYNYDVGFAY로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  48. 청구항 1 내지 47중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편과 경쟁할 수 있는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  49. 청구항 1 내지 48중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 불변 영역 또는 이의 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  50. 청구항 1 내지 48중 어느 한 항에 있어서, scFv, Fab, Fab' 또는 (Fab')2인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  51. 청구항 1 내지 49중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  52. 청구항 1 내지 49중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다중클론 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  53. 청구항 1 내지 52중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 검출가능 모이어티 또는 세포독성 모이어티와 접합되는 것을 특징으로 하는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  54. 청구항 26 내지 47중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편의 경쇄 가변 도메인 및/또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산.
  55. 청구항 54의 핵산을 포함하는 벡터.
  56. 청구항 55에 있어서, 상기 벡터는 발현 벡터인 것을 특징으로 하는 벡터.
  57. 청구항 54의 핵산을 포함하는 단리된 세포.
  58. 청구항 57에 있어서, 상기 세포는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산 및 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 세포.
  59. 청구항 58에 있어서, 상기 세포는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하고, 집합시키고 및/또는 분비할 수 있는 것을 특징으로 하는 단리된 세포.
  60. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하거나 발현하는 단리된 세포.
  61. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산 및 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 세포.
  62. 청구항 61에 있어서, 상기 세포는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하고, 집합시키고 및/또는 분비할 수 있는 것을 특징으로 하는 단리된 세포.
  63. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 한 가지 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
  64. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 한 가지 및 담체를 포함하는 조성물.
  65. 골 상실의 치료에서, 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 한 가지의 용도.
  66. 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암의 치료에서, 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 한 가지의 용도.
  67. 골 상실 또는 골 질환의 진단에서, 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 한 가지의 용도.
  68. 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암의 진단에서, 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 한 가지의 용도.
  69. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 하나를 병든 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 골 상실을 치료하는 방법.
  70. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 하나를 병든 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암을 치료하는 방법.
  71. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 하나를 병든 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 골 상실 또는 골 질환을 검출하는 방법.
  72. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 하나를 병든 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암을 검출하는 방법.
  73. 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 2 변이체를 검출하는 방법에 있어서, 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체를 발현하는 세포, 또는 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체를 포함하거나 포함하는 것으로 의심되는 샘플을 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 중에서 적어도 한 가지와 접촉시키는 단계, 그리고 결합을 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  74. 청구항 73에 있어서, 샘플은 포유동물로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 방법.
  75. 청구항 74에 있어서, 포유동물은 골 상실을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 것을 특징으로 하는 방법.
  76. 청구항 74에 있어서, 포유동물은 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 것을 특징으로 하는 방법.
  77. 청구항 73 내지 76중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 포유동물로부터 획득된 혈청 샘플, 혈장 샘플 또는 혈액 샘플인 것을 특징으로 하는 방법.
  78. 청구항 73 내지 76중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 포유동물로부터 획득된 조직 샘플인 것을 특징으로 하는 방법.
  79. 청구항 73에 있어서, 샘플은 세포 배양 상층액인 것을 특징으로 하는 방법.
  80. 청구항 78 내지 79중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 2 변이체에 결합된 항체의 양을 정량하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  81. 청구항 1 내지 53중 어느 한 항의 항체를 포함하는 키트.
  82. 골 상실, 난소 암, 신장 암, 중추신경계의 암, 전립선 암, 흑색종, 유방 암, 폐 암 또는 대장 암의 진단 또는 치료를 위한 항체를 산출하기 위한, 서열 번호: 2 또는 이의 적어도 10개 아미노산의 단편의 용도.
  83. 청구항 82에 있어서, 단편은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 내에 포함되는 것을 특징으로 하는 용도.
  84. 파골세포 전구 세포의 분화 (분화된 파골세포로의)를 저해하거나, 또는 파골세포의 재흡수 활성을 저해할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편을 산출하는 방법에 있어서, 서열 번호: 2, 서열 번호: 2와 적어도 80% 동일성을 갖는 변이체 또는 이의 적어도 10개 아미노산의 단편을 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  85. 청구항 84에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편을 단리시키거나 정제하는 단계를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  86. 청구항 85에 있어서, 단편은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259 내에 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
  87. 난소 암 세포, 신장 암 세포, 중추신경계의 암 세포, 전립선 암 세포, 흑색종 세포, 유방 암 세포, 폐 암 세포 또는 대장 암 세포의 성장을 저해할 수 있는 화합물을 확인하는 방법에 있어서, 상기 방법은 서열 번호: 2의 아미노산 20 내지 259에 적어도 80% 동일한 영역을 포함하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드를 발현하는 세포에 후보 화합물을 제공하는 단계, 그리고 상기 폴리펩티드의 활성 또는 발현을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 폴리펩티드의 감소된 활성 또는 발현은 적절한 저해 화합물을 긍정적으로 확인하는 것을 특징으로 하는 방법.
  88. 청구항 87에 있어서, 후보 화합물은 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
  89. 청구항 88에 있어서, 후보 화합물은 항체 또는 항원 결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  90. 청구항 89에 있어서, 후보 화합물은 siRNA 또는 안티센스인 것을 특징으로 하는 방법.
  91. 난소 암 세포, 신장 암 세포, 중추신경계의 암 세포, 전립선 암 세포, 흑색종 세포, 유방 암 세포, 폐 암 세포 또는 대장 암 세포로 구성된 군에서 선택되는 암 세포의 성장을 저해하는 방법에 있어서, 상기 방법은 암 세포에 서열 번호: 2에 적어도 80% 동일한 폴리펩티드의 발현을 약화시킬 수 있는 핵산을 제공하는 단계를 포함하고, 여기서 암 세포는 서열 번호: 2에 적어도 80% 동일한 폴리펩티드를 발현하는 것을 특징으로 하는 방법.
  92. 청구항 90에 있어서, 핵산은 siRNA 또는 안티센스인 것을 특징으로 하는 방법.
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