KR102582752B1

KR102582752B1 - 단백질 키나아제 억제제

Info

Publication number: KR102582752B1
Application number: KR1020197018970A
Authority: KR
Inventors: 캔 허
Original assignee: 프린스턴 드러그 디스커버리 인크
Priority date: 2016-12-13
Filing date: 2017-12-12
Publication date: 2023-09-22
Also published as: JP2020503376A; US20180099961A1; KR20190091312A; AU2017375949A1; US10556897B2; US20180099960A1; WO2018111893A1; CA3044066A1; US10174018B2; CN108473487A; EP3555092A1; US20190071437A1; US11236080B2; US10479786B2; US20200123148A1; CN108473487B; US20180099959A1; EP3555092A4; AU2017375949B2; JP7077335B2

Abstract

본 발명은 일반적으로 단백질 키나아제, 및 특히 단백질 키나아제의 억제제로서 활성을 갖는 신규한 중수소화 및 비중수소화 사이클릭 화합물 및 그에 상응하는 염, 또한, 치료적 유효량의 신규한 중수소화 또는 비중수소화 사이클릭 화합물 및 그에 상응하는 염을 투여함으로써 단백질 키나아제 매개 질환 또는 증상을 갖는 포유류를 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

단백질 키나아제 억제제

본 발명은 신규한 중수소화 및 비중수소화 사이클릭 화합물 및 그의 염, 자가 면역 및 암 질병 또는 증상과 같은 단백질 키나아제-매개 질병 또는 증상의 치료에서 상기 화합물의 사용 방법, 상기 화합물의 약학적 조성물, 및 공동-투여된(co-administered) 치료제와 상기 화합물의 병용 치료(combination treatment)에 관한 것이다.

여기에 제공된 정보는 독자의 이해를 돕기 위한 것이다. 제공된 정보 및 인용된 참고 문헌 중 어느 것도 본 발명의 선행 기술로 인정되지 않는다.

인간 질병의 발달의 기초가 되는 분자적 사건의 규명은 특정 질병의 예방, 관리 및 치료에 대한 개선된 전략의 설계에 있어서 중요한 도전 과제를 제시한다(Lahiry P et al. Kinase mutations in human disease: interpreting genotype-phenotype relationships. Nat Rev Genet. 2010; 11(1):60-74).

인간 질병에서 비정상적으로 조절되는 단백질 티로신 키나아제(PTKs)의 역할은 집중적인 연구의 대상이다(Lahiry id.). 단백질 키나아제는 세포 신호 전달 조절 인자이며, 이들의 기능 조절 장애(dysregulation)는 발암(carcinogenesis), 자가 면역 반응 및 다른 많은 질병 상태에서 일반적으로 나타난다(Lahiry id.; Vargas L et al. Inhibitors of BTK and ITK: state of the new drugs for cancer, autoimmunity and inflammatory diseases. Scand J Immunol. 2013; 78(2):130-9; Nobel ME et al. Protein kinase inhibitors: insights into drug design from structure. Science.2004; 303:1800-1805). 인간 게놈은 서열과 구조에서 보존된 촉매 도메인을 공유하지만 촉매 작용이 어떻게 조절되는지에 따라 현저히 다른 500종 이상의 단백질 키나아제를 암호화한다(Manning G et al. The protein kinase complement of the human genome. Science. 2002; 298:1912-1934; Nobel id.). 단백질 키나아제는 세포 성장 및 증식, 세포 분화, 세포 발달, 세포 분열, 스트레스 반응, 전사 조절, 이상한 미토제네시스(aberrant mitogenesis), 혈관 신생, 혈관 발생 중 비정상적인 내피세포-세포 또는 세포-기질 상호 작용, 염증, Jun-N-terminal kinase(JNK) 신호 전달 및 몇 가지 다른 세포 과정(Manning id)을 포함하는 생리 기능의 조절을 제어하거나 관여하는 중요한 신호 변환 캐스케이드를 조절한다. 단백질 키나아제 억제제는 암세포에서 과도한 단백질 키나아제를 억제하는 유망한 약물로 확립되었다(Gross S et al. Targeting cancer with kinase inhibitors. J Clin Invest. 2015;125(5):1780-1789; Vargas id).

키나아제의 부분적, 비 제한적 목록은 ABL, ACK, ARG, BLK, BMX, BRK, BTK, CSK, DDR1, DDR2, EGFR, EPHA1, FGR, FMS, FRK, FYN(isoform a), FYN(isoform b), HCK, KIT, LCK, LYNa, PDGFRα, PDGFRβ, SRC, SRM, YES, PIK3CA/PIK3R1(Manning id)을 포함한다. 면역 및 신경계의 부적절한 활성화로 인한 질환뿐만 아니라 양성 및 악성 증식성 질환을 비롯한 많은 질병 상태에서 이상(aberrant) 키나아제 활성이 관찰되었다.

본 발명의 신규한 화합물은 하나 이상의 단백질 키나아제의 활성을 억제하고, 키나아제 관련 질환 또는 증상의 치료에 유용할 것으로 기대된다.

본 발명은 일반적으로 단백질 키나아제, 특히 단백질 키나아제의 억제제로서 활성을 갖는 신규한 중수소화(deuterated) 및 비중수소화 화합물 및 이의 염, 또한, 치료적 유효량의 신규한 중수소화 또는 비중수소화 사이클릭 화합물 및/또는 이의 염을 이를 필요로 하는 포유동물에 투여함으로써 단백질 키나아제-매개 질환 또는 증상을 갖는 포유동물을 치료하는 방법에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 [화학식 I]의 화합물, 이의 모든 염, 전구 약물, 거울상 이성질체 및 거울상 이성질체 혼합물을 제공한다:

[화학식 I]

,

여기서,

W₁, W₂, 및 W₃는 독립적으로 수소 또는 중수소(deuterium)이고;

Y는 탄소 또는 질소이고;

R₁은 이고,

여기서

Q는 고리 탄소 원자에 직접 A를 결합하는 단일 결합, 또는 고리 탄소 원자에 A를 연결하는 메틸렌 또는 에틸렌기이고; 및

A는

이고,

여기서 Y₁및 Y₂는 독립적으로 탄소 또는 질소이고;

Z₁및 Z₂는 독립적으로 수소, -(CH₂)_n-OR₅ 여기서 n은 0에서 4 사이의 정수이고, 및 R₅는 수소, 저급 알킬, 또는 저급 알케닐이고,가정하여 n이 1이고 및 R₅가수소인 경우, R₁은 1-피페리디닐(piperazinyl)기가 아니고, 및 n이 2이고, R₅가수소인 경우, 및 R₁은 1-피페리디닐기, W₂는 중수소, 및 -NR₅R₆이고 여기서 R₅ 및 R₆는독립적으로 수소, 저급 알킬, 또는 저급 알케닐이고; T₁및 T₂는 독립적으로 0에서 4 사이의 정수이고 가정하여 T₁ 또는 T₂이 0이면, -(CH₂)T₁ 또는 -(CH₂)T₂는 단일 결합이고, 및 T₁ 및 T₂는 동시에 0이 아니며;

R₂ 및 R₃는 독립적으로 수소; 할로겐; 알콕실(alkoxyl); 저급 알킬(lower alkyl) 또는 저급 알케닐(lower alkenyl)이고, 여기서 상기 저급 알킬 또는 저급 알케닐은 -OH 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서 알콕실은 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, 또는 tert-뷰톡시; 또는 -NR₅R₆을 포함하는 치환된 헤테로사이클로(heterocyclo)이고, 여기서 R₅및 R₆는 독립적으로 수소, 저급 알킬 또는 저급 알케닐이고;

및 여기서 R₁, R₂ 및 R₃의 위치는 교환 가능하다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 [화학식 II]의 화합물, 이의 모든 염, 전구 약물, 거울상 이성질체 및 거울상 이성질체 혼합물을 제공한다:

[화학식 II]

,

여기서 W₁, W₂, 및 W₃는 독립적으로 수소 또는 중수소(deuterium)이고;

여기서 Y는 탄소 또는 질소이고;

여기서 R₂, R₃, 및 R₄ 독립적으로 수소; 할로겐; 알콕시; 저급 알킬 또는 저급 알케닐이고, 여기서 상기 저급 알킬 또는 저급 알케닐은 -OH 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서 알콕시는 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, 또는 tert-뷰톡시; 또는 치환된 헤테로사이클로이고, 여기서 선택적으로 치환됨은 -NR₅R₆를 포함하고, 여기서 R₅ 및 R₆는독립적으로수소, 저급 알킬 또는 저급 알케닐이고;및 여기서 X는 독립적으로 수소, -(CH₂)_n-OR₅이고 여기서 n은 0 내지 4의 정수이고 및 R₅는 수소, 저급 알킬, 또는 저급 알케닐, 또는 -NR₅R₆이다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 [화학식 III]의 화합물, 이의 모든 염, 전구 약물, 거울상 이성질체 및 거울상 이성질체 혼합물을 제공한다:

[화학식 III]

,

여기서 R₂, R₃, 및 R₄ 독립적으로 수소(H); 할로겐; 알콕시; 저급 알킬 또는 저급 알케닐이고, 여기서 상기 저급 알킬 또는 저급 알케닐은 -OH 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서 알콕시는 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, 또는 tert-뷰톡시; 또는 치환된 헤테로사이클로이고, 여기서 선택적으로 치환됨은 -NR₅R₆를 포함하고, 여기서 R₅ 및 R₆는독립적으로수소, 저급 알킬 또는 저급 알케닐이다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 [화학식 IV]의 화합물, 이의 모든 염, 전구 약물, 거울상 이성질체 및 거울상 이성질체 혼합물을 제공한다:

[화학식 IV]

,

여기서 W₂는 수소 또는 중수소이다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 [화학식 V]의 화합물, 이의 모든 염, 전구 약물, 거울상 이성질체 및 거울상 이성질체 혼합물을 제공한다:

[화학식 V]

,

여기서 W₂는 수소 또는 중수소이다.

예시적인 화합물은 다음의 중수소화 및 비중수소화 사이클릭 화합물을 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 I]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 I]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 II]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 II]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 III]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 III]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 IV]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 IV]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 V]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 V]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 VI]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 VI]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 VII]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 VII]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 VIII]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 VIII]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 IX]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 IX]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 X]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 X]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 XI]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 XI]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 XII]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 XII]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 XIII]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 XIII]

.

일 양태에서, 본 발명은 [화합물 XIV]의 구조를 갖는 화합물, 이의 모든 염 또는 전구 약물을 제공한다;

[화합물 XIV]

.

일 양태에서, 본 발명은 동물 또는 인간 대상에서 단백질 키나아제-매개 질환 또는 증상을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V로부터 선택된 하나 이상의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV (화합물 I-XIV), 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X 및/또는 XI로부터 선택된 하나 이상의 화합물의 유효량을 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.

상기 단백질 키나아제-매개 질환 또는 증상은 자가 면역 질환 또는 암이다. 바람직하게 상기 자가 면역 질환은 전신 홍반성 낭창(SLE), 이식 거부(transplant rejection), 다발성 경화증(MS), 전신 경화증(SSc), 일차성 쇼그렌증후군(pSS), 류마티스 관절염(RA) 및 건선 중 적어도 하나일 수 있다. 바람직하게 상기 암은 필라델피아 염색체-양성(Ph+) 만성 골수성 백혈병(CML), 필라델피아 염색체-양성 급성 림프구성 백혈병(Ph+ ALL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소포성 림프종(follicular lymphoma), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma, MZL), 외투세포 림프종(MCL), 발 덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM), T-세포림프종, 다발성공수종(multiple myeloma) 중 적어도 하나일 수 있다.

일 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 추가의 치료제(therapeutic agent)와 조합하여 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V로부터 선택된 하나 이상의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV (화합물 I-XIV), 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X 및/또는 XI로부터 선택된 하나 이상의 화합물을 단백질 키나아제-매개 질환 또는 증상을 앓고 있는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 단백질 키나아제-매개 질환 또는 증상을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

용어 "치료" 또는 "치료법" 및 유사한 용어는 질병 또는 증상의 하나 이상의 증상, 즉 징후를 예방, 완화 또는 개선하거나 및/또는 치료 대상의 생존을 연장 시키는데 효과적인 양의 화합물 투여를 지칭한다. 용어 "단백질 키나아제-매개 질병 또는 증상"은 단백질 키나아제의 생물학적 기능이 질환 또는 상태의 발달, 경로 및/또는 증상에 영향을 미치는 질환 또는 증상을 의미한다. 단백질 키나아제-매개 질병 또는 증상은 단백질 키나아제 활성의 조절이 긍정적인 효과를 제공하는 질병 또는 증상을 포함하며, 즉 본원에 기술된 화합물을 비롯한 단백질 키나아제 억제제로 치료하는 것이 질환 또는 증상의 있거나 위험이 있는 대상에게 치료 효과를 제공하는 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 유리 형태(in free form) 또는 약학적으로 허용 가능한 염 형태의 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V로부터 선택된 하나 이상의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV (화합물 I-XIV), 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X 및/또는 XI로부터 선택된 하나 이상의 화합물 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 및/또는 희석제의 치료학적 유효량을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물에 관하여, 화합물 또는 화합물 군은, 반대로 명백하게 표시되지 않는 한, 화합물(들)의 약학적으로 허용 가능한 염, 전구 약물(들) 및 모든 입체 이성질체 및 이들의 혼합물을 포함한다.

도 1. 인간 간 마이크로좀 배양(microsomal incubation)에서 화합물의 대사 안정성. 인간 간 microsomal preparation과의 배양에서 화합물 I-XIII에 대한 대사 안정성을 측정하였다. 1 μM 농도의 개별 화합물 I-XIII의 배양은 37℃에서 10 mM MgCl₂, 1 mM NADPH 및 2 mM UDPGA를 함유하는 0.1 M 인산염 완충액에서 인간 간 마이크로좀(0.5 mg/mL)으로 최대 1시간 동안 수행하였다. 특정 시간의 농도는 LC-MS/MS에 의해 결정되었다.
도 2. (상부 패널) 화합물 IV 및 다사티닙(dasatinib)을 각각 2.5 mg/kg의 복용량으로 함께 투여한 단일 경구 위관영양 투여(gavage dose) 후, Sprague-Dawley 래트에서 화합물 IV 및 다사티닙의 혈장 농도 대 시간 프로파일; (하부 패널) 화합물 III 및 V를 각각 2.5 mg/kg의 복용량으로 함께 투여한 단일 경구 위관영양 투여(gavage dose) 후, Sprague-Dawley 래트에서 화합물 III 및 V의 혈장 농도 대 시간 프로파일.
도 3. (상부 패널) 화합물 X 및 III을 각각 5 mg/kg의 복용량으로 함께 투여한 단일 경구 위관영양 투여(gavage dose) 후, Sprague-Dawley 래트에서 화합물 X 및 III의 혈장 농도 대 시간 프로파일; (하부 패널) 화합물 XI 및 다사티닙(dasatinib)을 각각 5 mg/kg의 복용량으로 함께 투여한 단일 경구 위관영양 투여(gavage dose) 후, Sprague-Dawley 래트에서 화합물 XI 및 다사티닙의 혈장 농도 대 시간 프로파일.
도 4. 쥐에서 화합물 X 및 다사티닙의 시간에 대한 혈장 농도에 대한 폐 조직 농도의 평균비 여기서 화합물 X 및 다사티닙을 단일 경구 투여량으로 함께 투여하고, 각각 5 mg/kg으로 투여하였다(2-in-1 dosing, N = 3).
도 5. 쥐에서 화합물 XI 및 다사티닙의 시간에 대한 혈장 농도에 대한 폐 조직 농도의 평균비 여기서　화합물 XI 및 다사티닙을 단일 경구 투여량으로 함께 투여하고, 각각 5 mg/kg으로 투여하였다(2-in-1 dosing, N = 3).

정의

본원에서 사용된 바와 같이, 다르게 지시되지 않는 한, 다음의 정의가 적용된다.

"화학적 구조" 또는 "화학적 하부 구조"는 개별적으로 식별 가능한 분자, 치환체 잔기와 같은 분자의 일부분, 선택적으로 치환된 코어 등을 구성하는 임의의 정의 가능한 원자 또는 원자의 그룹을 의미한다. 통상적으로, 리간드의 화학적 하부 구조는 리간드가 표적 분자에 결합하는 역할을 할 수 있거나 또는 상기 리간드의 3차원 형상, 정전하(electrostatic charge), 및/또는 구조적 특성에 영향을 미칠 수있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "전구 약물"은 생체에 투여되었을 때, 한 단계 또는 그 이상의 단계 또는 과정에 의하여 대사되거나, 또는 그렇지 않으면 생물학적으로, 약학적으로 또는 치료학적으로 활성인 형태의 화합물로 전환되는 화합물을 나타낸다. 전구 약물을 제조하기 위하여, 약학적으로 활성인 화합물은 활성 화합물이 대사 또는 가수분해 과정에 의하여 재생될 수 있도록 변형된다.

용어 "결합"은, 표적과 잠재적 결합 화합물 간의 상호 작용과 관련하여, 일반적으로 단백질과의 결합과 비교하여 잠재적 결합 화합물이 표적과 통계적으로 유의한 상관 관계가 있음을 나타낸다(즉, 비특이적 결합).

본원에서 사용된 용어 "조절하는" 또는 "조절하다"는 생물학적 활성, 특히 단백질 키나아제와 같은 특정 생체 분자와 관련된 생물학적 활성을 변화시키는 효과를 의미한다. 예를 들어, 특정 생체 분자의 작용제 또는 길항제는 그의 활성을 증가(예를 들어, 작용제, 활성화제) 또는 감소(예를 들어, 길항제, 억제제)함으로써 생체 분자, 예를 들어 효소의 활성을 조절한다. 이러한 유형의 활성은 일반적으로 활성제 또는 억제제에 대해 최대 유효 농도의 절반(EC₅₀) 또는 최대 억제 농도(IC₅₀)의 절반으로 표시된다. 또한, 저해 활성은 %저해 및/또는 Ki로 나타낼 수 있다.

본 발명의 화합물과 관련하여 본원에서 사용된 "합성" 및 유사한 용어는 하나 이상의 전구물질로부터의 화학적 합성을 의미한다. 또한, "분석"은 실험 조건의 생성 및 실험 조건의 특정 결과에 관한 데이터의 수집을 의미한다. 예를 들어, 효소는 검출 가능한 기질에 작용하는 능력에 기초하여 분석될 수 있다. 화합물 또는 리간드는 특정 표적 분자 또는 분자에 결합하는 그의 능력에 기초하여 분석될 수 있다.

"D", "d" 및 "²H"는 중수소 원자, 수소의 두 배 질량을 갖는 안정한 수소 동위 원소(원자량 2.0144)를 나타낸다. 수소는 동위 원소인 수소(¹H), 중수소(²H 또는 D) 및 삼중 수소(³H 또는 T)의 혼합물로 자연적으로 발생한다. 중수소의 자연적인 풍부도(abundance)는 대략 0.015%이다. 당업자는 수소 원자를 갖는 모든 화합물이 실제로 H 및 D 동위 원소의 혼합물로서 존재하고, 약 0.015%가 중수소 동위 원소임을 인식할 것이다. 0.015%의 천연 풍부도보다 더 풍부한 중수소 수준의 화합물은 부자연스러운 것으로 결과적으로 농축되지 않은 물질에 대해 신규한 것으로 간주되어야 한다. 본원에서 구조식 및 화합물의 D는 0.015% 초과의 양으로 D를 혼입하는 것을 나타낸다.

용어 "저급(lower) 알킬"은 당업계에 공지되어 있고, 직쇄 알킬기 및 분지쇄 알킬기를 포함하는 포화 지방족 기를 포함한다. 특정 실시 예에서, 직쇄 또는 분지쇄 알킬은 그 백본(backbone)에 약 6개 이하의 탄소 원자를 갖는다(예를 들어, 직쇄의 경우 C₁-C₆, 분지쇄의 경우 C₃-C₆).

용어 "저급 알케닐"은 본원에서 C₂-C₆ 알케닐로 지칭되는 2개 내지 6개의 탄소 원자의 직쇄 또는 분지쇄와 같은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 불포화 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소를 의미한다.

용어 "사이클로알킬"은 알킬, 알케닐, 알콕시, 선택적으로 치환된 아미노, 할로겐, 시아노(-CN) 또는 니트로(-NO₂)로 임의적으로 치환되는 C₃-C₇을 포함하는 지방족 기의 3-7원 모노사이클릭(moncyclic) 고리를 의미한다.

용어 "알콕실" 또는 "알콕시"는 당업계에 공지되어 있으며, 상기 정의된 바와 같이, 산소 라디칼을 포함하는 알킬기를 지칭한다. 대표적인 알콕시기로는 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, tert-부톡시 등이 포함된다.

용어 "헤테로사이클로", "헤테로사이클릭" 또는 "헤테로사이클"은 적어도 하나의 탄소 원자-함유 고리 내에서 적어도 하나의 헤테로 원자(예를 들어 산소( "O"), 황( "S") 또는 질소( "N"))를 포함하는 5 내지 10개의 원자를 포함하는 완전 포화 또는 비방향족(즉, "헤테로사이클로알킬") 및 방향족(즉, "헤테로아릴") 사이 클릭 그룹을 포함하는 불포화 사이클릭 기를 지칭한다. 상기 헤테로사이클릭 기의 각 고리는 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로 원자를 가질 수 있다. 상기 헤테로 원자 질소 및 황은 선택적으로 산화될 수 있고, 질소 헤테로 원자는 선택적으로 4급화될 수 있다. 또한, 헤테로사이클로는 아미노(-NR₅R₆)로 선택적으로 치환될 수 있으며, 여기서 R₅ 및 R₆은 독립적으로 수소 및/또는 저급 알킬 또는 하이드록시(-OH), 알콕시, 저급 알킬 또는 저급 알케닐이며, 여기서 상기 저급 알킬 또는 저급 알케닐은 -OH 또는 알콕시 기로 선택적으로 치환될 수 있다.

"할로겐"은 클로로("Cl"), 플루오로("F"), 브로모("Br") 또는 요오드("I")를 나타낸다.

본원에서 제공된 화합물은 키랄 중심을 포함할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 이러한 키랄 중심은 (R) 또는 (S) 배위일 수 있거나 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 따라서, 본원에서 제공된 화합물은 라세미 혼합물(거울상 이성질체의 약 50:50 비)을 비롯한 거울상학적으로 순수한 또는 입체 이성질체 또는 부분 입체 이성질체 혼합물일 수 있다.

용어 "약학적으로 허용되는"은, 지시된 물질이 치료될 질병 또는 질환 및 개별적인 투여 경로를 고려하여 합리적으로 신중한 의사가 환자에게 상기 물질의 투여를 피하도록 하는 특성을 갖지 않음을 나타낸다. 예를 들면, 보통 상기 물질은 예컨대 주사하기 위해 본질적으로 멸균될 필요가 있다.

"약학적으로 허용되는 염"이란 용어는 투여되는 양 및 농도에서 비독성인 염을 의미한다. 이러한 염의 제제는 그의 생리학적 효과를 발휘하는 것을 방해하지 않으면서 화합물의 물리적 특징을 변경함으로써 약리학적 사용을 용이하게 한다.

용어 "약학적으로 허용 가능한 조성물"은 약학적으로 활성인 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 지칭한다.

용어 "치료학적으로 유효량"은 단독, 또는 추가 투여와 함께 및/또는 기타 치료제와 조합하여 원하는 반응을 발생시키는 제제의 양이다. 이것은 일시적으로 질병이나 증상을 늦추는 것을 의미할지라도, 질병의 진행을 중지시키거나 질병이나 증상의 발병을 지연시키는 것을 포함할 수있다.

용어 "단백질 키나아제 매개-질병 또는 증상"은 단백질 키나아제의 생물학적 기능이 질환 또는 증상의 발달, 경로 및/또는 증상에 영향을 미치는 질환 또는 상태를 의미한다.

용어 "돌연변이체"는 야생형 단백질 아미노산 서열과 비교하여 단백질에서의 단일 또는 다중 아미노산 변화를 나타낸다.

본 명세서의 상세한 설명 및 청구 범위에서, 단어 "포함한다" 및 "포함하는" 및 "포함하는"과 같은 단어의 변형은 "포함하지만 이에 한정되지 않는다"를 의미하고, 예를 들어 첨가제, 성분, 정수 또는 단계를 배제하려는 것은 아니다.

본 발명의 화합물

[화학식 I]

,

여기서,

Y는 탄소 또는 질소이고;

R₁은 이고,

여기서

A는

이고,

여기서 Y₁및 Y₂는 독립적으로 탄소 또는 질소이고;

및 여기서 R₁, R₂ 및 R₃의 위치는 교환 가능하다.

바람직하게는 W₂는 중수소 또는 수소이고, 보다 바람직하게는 수소이고, W₁ 및 W₃은 수소이다. Y는 바람직하게는 질소이다. R₂는 바람직하게는 저급 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸이다. R₃은 바람직하게는 저급 알킬 또는 수소, 보다 바람직하게는 수소이다. R₁은 바람직하게는 치환 또는 비치환된 포화 5 또는 6원 질소 함유 헤테로사이클로 고리이다. 상기 치환 또는 비치환된 포화 5원 질소 함유 헤테로사이클로 고리는 치환 또는 비치환된 피롤리딘-1-일, 바람직하게는 3-하이드록시- 또는 3-아미노-피롤리딘-1-일, 더욱 바람직하게는 3-하이드록시 피롤리딘-1-일이다.

[화학식 II]

,

여기서 Y는 탄소 또는 질소이고;

바람직하게는 W₂는 중수소 또는 수소이고, 보다 바람직하게는 수소이고, W₁ 및 W₃은 수소이다. Y는 바람직하게는 질소이다. R₂는 바람직하게는 저급 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸이다. R₃은 바람직하게는 저급 알킬 또는 수소, 보다 바람직하게는 수소이다. R₄는 바람직하게는 저급 알킬 또는 수소, 보다 바람직하게는 수소이다. X는 바람직하게는 수소, 하이드록실 또는 아민, 보다 바람직하게는 하이드록실이다.

[화학식 III]

,

바람직하게는 W₂는 중수소 또는 수소이고, 보다 바람직하게는 수소이고, W₁ 및 W₃은 수소이다. Y는 바람직하게는 질소이다. R₂는 바람직하게는 저급 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸이다. R₃은 바람직하게는 저급 알킬 또는 수소, 보다 바람직하게는 수소이다. R₄는 바람직하게는 저급 알킬 또는 수소, 보다 바람직하게는 수소이다.

[화학식 IV]

,

여기서 W₂는 수소 또는 중수소이다.

[화학식 V]

,

여기서 W₂는 수소 또는 중수소이다.

예시 화합물

[화합물 I]

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[화합물 II]

.

[화합물 III]

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[화합물 IV]

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[화합물 V]

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[화합물 VI]

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[화합물 VII]

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[화합물 VIII]

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[화합물 IX]

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[화합물 X]

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[화합물 XI]

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[화합물 XII]

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[화합물 XIII]

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[화합물 XIV]

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본 발명의 단백질 키나아제 표적 및 징후(Protein Kinase Targets and Indications of the Invention)

단백질 키나아제는 다양한 생물학적 경로에서 생화학적 신호를 전파하는 핵심적인 역할을 한다. 이와 같이, 키나아제는 소분자 치료 중재에 대한 중요한 조절 포인트이다. 500개가 넘는 키나아제가 기술되어 왔고, 특정 키나아제는 광범위한 질병 또는 증상에 관련되어 왔다. 일 양태에서, 본 발명은 동물 또는 사람 대상에서 자가 면역 질환, 과증식 성 질환, 암, 심혈관 질환, 염증성 질환, 신경계 질환 및 기타 질병과 같은(제한되지 않는) 단백질 키나아제 매개 질환 또는 증상(즉, 징후)을 치료하는 방법을 제공한다.

바람직하게는, 상기 단백질 키나아제-매개 질병 또는 증상은 자가 면역 질환 또는 암이다. 보다 바람직하게는, 상기 자가 면역 질환은 전신 홍반성 낭창(SLE), 이식 거부(transplant rejection), 다발성 경화증(MS), 전신 경화증(SSc), 일차성 쇼그렌증후군(pSS), 류마티스 관절염(RA) 및 건선 중 적어도 하나이며; 및 상기 암은 필라델피아 염색체-양성(Ph+) 만성 골수성 백혈병(CML), 필라델피아 염색체-양성 급성 림프구성 백혈병(Ph+ ALL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소포성 림프종(follicular lymphoma), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma, MZL), 외투세포 림프종(MCL), 발 덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM), T-세포림프종, 다발성공수종(multiple myeloma) 중 적어도 하나이다.

다른 실시 양태에서, 본 발명은 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V를 포함하는 하나 이상의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV (화합물 I-XIV)의 하나 이상, 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X 및/또는 XI의 하나 이상의 화합물의 효과적인 유효량을 투여함으로써 ABL, ACK, ARG, BLK, BMX, BRK, BTK, CSK, DDR1, DDR2, EGFR, EPHA1, FGR, FMS, FRK, FYN, HCK, KIT, LCK, LYN, PDGFRα, PDGFRβ, SRC, SRM, YES, PIK3CA/PIK3R1로 구성된 군으로부터 선택된 단백질 키나아제의 활성을 조절하는 방법을 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 동물 또는 인간 대상에서 단백질 키나아제-매개 질환 또는 증상을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V를 포함하는 하나 이상의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV (화합물 I-XIV)의 하나 이상, 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X 및/또는 XI의 하나 이상을 포함하는 조성물의 유효량을 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V를 포함하는 하나 이상의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV (화합물 I-XIV)의 하나 이상, 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X 및/또는 XI의 하나 이상의 화합물의 효과적인 유효량을 투여함으로써 ABL, ACK, ARG, BLK, BMX, BRK, BTK, CSK, DDR1, DDR2, EGFR, EPHA1, FGR, FMS, FRK, FYN(isoform a), FYN(isoform b), HCK, KIT, LCK, LYNa, PDGFRα, PDGFβ, SRC, SRM, YES, PIK3CA/PIK3R1 로 구성된 군으로부터 선택된 단백질 키나아제의 활성을 조절하는 방법을 제공한다.

키나아제 활성에 대한 다수의 상이한 분석은 활성 조절제(active modulator)를 결정하기 위한 시험을 위해 및/또는 특정 키나아제 또는 키나아제 그룹에 대한 조절제의 특이성을 측정하기 위하여 사용된다. 하기 실시 예에서 언급된 분석에 추가하여, 당업자는 특정 용도로 활용되거나 변경될 수 있는 다른 분석법을 알고 이해할 것이다.

ABL, ABL(E255K), ACK, ARG, BLK, BMX, BRK, BTK, CSK, DDR1, DDR2, EGFR, EPHA1, FGR, FMS, FRK, FYN, HCK, KIT, LCK, LYN, PDGFRα, PDGFRβ, SRC, SRM, YES, 및 PIK3CA/PIK3R1를 포함하는 한 벌의 선택된 단백질 키나아제(표 15 참조)의 억제를 측정하기 위해 일반적으로 사용되는 in vitro 스크린에서, 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, 및 XIII는 그들 중에서 BTK, BMX, ABL, ABL(E255K), SRC, ACK, ARG, BLK, DDR2, EPHA, FGR, FMS, FRK, FYN, HCK, LCK, LYN, PDGFRα, PDGFRβ, YES, 및 PIK3CA/PIK3R1를 억제하는 강력한 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다.

상기 언급된 한 벌의 선택된 단백질 키나아제(표 15 참조)의 in vitro 스크린에서, 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, 및 XIII는 10nM에서 BTK, BMX, ABL, ABL(E255K), SRC, ACK, ARG, BLK, DDR2, EPHA1, FGR, FMS, FRK, FYN(isoform a), HCK, LCK, LYNa, PDGFRα, PDGFRβ, YES, 및 PIK3CA/PIK3R1의 50% 이상의 억제를 나타내었다.

생물학적 활성의 추가 시험으로서, 본 발명의 화합물을 확산성 큰 B-세포 림프종 세포주 SU-DHL-4 및 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562(실시예 16 참조)를 사용하여 세포 성장의 저해에 대하여 검증하였다. 이 세포 기반 분석에서 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및 XIV에 대한 IC₅₀ 값은 모두 20nM 미만이었다.

화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및 XIV 에 대한 단백질 키나아제 표적은 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않는다: ABL, ACK, ARG, BLK, BMX, BRK, BTK, CSK, DDR1, DDR2, EGFR, EPHA1, FGR, FMS, FRK, FYN, HCK, KIT, LCK, LYN, PDGFRα, PDGFRβ, SRC, SRM, YES, 및 PIK3CA/PIK3R1.

키나아제의 Tec 패밀리는 Src 패밀리 키나아제(SFKs) 다음으로 두 번째로 큰 세포질 단백질 티로신 키나아제를 형성하고 다섯 마리의 포유동물 개체로 구성된다: Btk, Bmx (bone marrow kinase on the X-chromosome, Etk로도 알려짐), Itk (IL-2 inducible T-cell kinase), Rlk (resting lymphocyte kinase, Txk로도 알려짐), 및 Tec (Hartkamp et al.Bruton's tyrosine kinase in chronic inflammation: from pathophysiology to therapy.Int J Interferon Cytokine Mediat Res. 2015;7: 27-34). Tec와 Bmx 모두가 각각 간과 내피세포와 같은 기질 조직(stromal tissue)에서도 발현되지만 대부분의 Tec 패밀리 키나아제는 주로 조혈계(hematopoietic system)에서 발현된다. 세포 표면 수용체 자극시 Tec 패밀리 키나아제의 활성화는 단백질의 원형 막으로의 재국소화를 요구하며, 이는 활성화된 포스파티딜이노시톨-3 키나아제에 의해 형성된 PH 도메인과 지질 포스파티딜이노시톨(3,4,5) P3의 상호 작용에 의해 매개된다. 이어서 SFK에 의한 인산화와 타이로신 223의 자가 인산화로 인해 Tec 패밀리 키나아제가 완전히 활성화된다.

BTK는 남성에서 X-연관 무감마글로블린증(X-linked agammaglobulinemia)과 쥐에서 마우스 X-연관 면역결핍(X-linked immunodeficiency)로 이끄는 BTK 돌연변이가 있는 Tec 패밀리 키나아제 중 가장 잘 알려진 구성원이다. BTK는 B 세포의 발달, 활성화, 신호 전달 및 생존의 핵심 조절자이다(Hartkamp id). BTK는 여러 다른 조혈 세포 신호 전달 경로, 예를 들어 toll-like receptor(TLR) 및 대식세포에서 사이토카인 수용체-매개 TNF-알파 생산, 비만 세포에서 IgE 수용체(FcepsilonR1) 신호 전달,　B-혈통 림프구 세포에서의 Fas/APO-1 세포 사멸 신호의 억제 및 콜라겐-자극된 혈소판 응집에서 중요한 역할을 한다. BTK 및 Tec 패밀리 키나아제의 다른 구성원은 전신성 홍반 루푸스(SLE), 다발성 경화증(MS), 1형 당뇨병(T1D), 전신 경화증(SSc), 일차성 쇼그렌증후군(pSS) alc 류마티스 관절염(RA)과 같은 자가 면역 질환에서 중요한 역할을 할 수 있다. BTK 억제제 이브루티닙(ibrutinib)은 B 세포 악성 종양, 특히 만성 림프 구성 백혈병(CLL), 맨틀 세포 림프종(MCL) 및 발 덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM) 환자에서 높은 임상 활성을 나타냈다. 그러나 이브루티닙 치료를 받는 환자의 하위 그룹에서 이브루티닙에 대한 내성은 주로 BTK 돌연변이 효소 C481S의 발달로 입증되었다(Woyach JA et al. Resistance mechanisms for the Bruton's tyrosine kinase inhibitor ibrutinib. N Engl J Med. 2014; 370(24):2286-94).

티로신 키나아제 BMX는 TNF 및 다른 매개체에 의해 유도된 염증을 조절하여 공유된 TAK1-TAB 복합체를 조절함으로써 나타나는 것으로 보인다(Gottar-Guillier M et al. The tyrosine kinase BMX is an essential mediator of inflammatory arthritis in a kinase-independent manner. J Immunology. 2011; 186(10):6014). BMX 키나아제는 교모세포종, 전립선암, 유방암 및 폐암의 병인에 역할을 할 수 있다. BMX는 또한 방사선 치료와 병행하여 항 혈관 치료제로서 또는 화학 요법 제제에 대한 민감제로서의 가능성을 보여주었다(Jarboe JS et al. Mini-review: bmx kinase inhibitors for cancer therapy. Recent Pat Anticancer Drug Discov. 2013; 8(3):228-38).

Src 패밀리 키나아제(SFKs)는 Src, Fyn, Yes, Blk, Yrk, Frk (Rak라고도 함), Fgr, Hck, Lck, Srm 및 Lyn을 포함한 11개의 비수용체 티로신 키나아제로 구성된다(Sen B, Johnson FM. Regulation of SRC family kinases in human cancers. J Signal Transduct. 2011:ID865819). Src는 각질형성세포(keratinocytes)에서 발견되는 반면, Blk, Fgr, Hck, Lck 및 Lyn은 주로 조혈 세포에서 발견된다. Frk는 주로 방광, 유방, 뇌, 결장 및 림프성 세포에서 발생한다. Src 패밀리 키나아제는 많은 세포 유형에서 증식과 이동 반응에 관여한다.

Src는 세포 신호 전달에서 많은 역할을 하는 비 수용체 단백질 티로신 키나아제이다. Src는 세포 부착, 성장, 움직임 및 분화를 비롯한 많은 기능의 조절에 관여한다. Src는 많은 세포 유형에서 널리 발현되며 세포 내에서 다른 위치를 가질 수 있다. 수많은 인간 악성 종양은 SRC 발현 및 활성을 증가시키며, 이는 SRC가 종양 발생에 밀접하게 관련되어 있음을 시사한다. SRC 억제제 보스티닙(bosutinib)이 사용되었거나 필라델피아 염색체-양성(Ph+) 만성 골수성 백혈병(CML)의 치료제이며 사라카티닙(saracatinib)이 알츠하이머병과 정신 분열증의 잠재적 치료법으로 연구되었다.

ABL은 세포 분화, 세포 분열, 세포 부착 및 스트레스 반응 과정에 관여하는 세포질 및 핵단백질 티로신 키나아제이다(Hantschel O. Structure, regulation, signaling, and targeting of abl kinases in cancer. Genes Cancer. 2012; 3:436-46). ABL 돌연변이는 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 급성 골수성 백혈병(AML)과 같은 암과 관련된다. 이매티닙, 다사티닙 및 닐로티닙과 같은 몇몇 ABL 억제제는 CML, ALL 및 AML의 치료에 사용되었다. BCR-ABL의 강력한 억제제인 다사티닙은 만성적인 단계(chronic phase), 만성, 가속화에서 새롭게 진단받은 필라델피아 염색체-양성(Ph+) 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 이매티닙을 포함하는 이전 치료에 대한 내성 또는 불내성을 갖는 골수성 또는 림프구 상(phase) Ph+ CML 및 이전 치료법에 내성 또는 불내성을 갖는 필라델피아 염색체-양성 급성 림프 구성 백혈병(Ph+ ALL)을 치료하는데 사용된다. 그러나 다사티닙은 흉수(pleural effusion) 및 폐고혈압(pulmonary hypertension)과 같은 심한 호흡기 독성과 관련이 있으며, 이는 폐 조직에서 다사티닙의 결과일 수 있다(Quintas-Cardama A, et al. Pleural effusion in patients with chronic myelogenous leukemia treated with dasatinib after imatinib failure. J Clin Oncol. 2007; 25(25):3908-14; Guignabert C, et al. Dasatinib induces lung vascular toxicity and predisposes to pulmonary hypertension. J Clin Invest. 2016; 126(9):3207-18).

LCK는 염색체 Ip34.3에 의해 코딩되는 57.9 kDa 막-관련 비-수용체 티로신 키나아제이다. 단백질 구조는 SH3 및 SH2 도메인을 포함한다. LCK 억제제는 급성 림프구성 백혈병, T 세포 림프종, 림프구 감소증, 신장 암종, 결장암, 중증 복합 면역 결핍증, 다발성 경화증, 염증성 장 및 1형 당뇨병을 치료하는데 유용할 수 있다.

Frk는 6q21-q22.3 염색체에 의해 코딩되는 58.5 kDa 티로신 키나아제이다. 상기 구조는 SH2, SH3 및 티로신 키나아제 도메인을 포함한다. Frk의 억제는 1형 당뇨병에서 베타 세포 파괴를 억제하는 수단을 제공할 수 있다. Frk 억제제는 급성 골수성 백혈병 및 1형 당뇨병을 치료하는 데 유용할 수 있다.

Fyn은 6q21 염색체에 의해 암호화된 60.6kDa의 비수용체 티로신 키니 아제이다. Fyn은 단백질 키나아제 C와 칼슘 조절 수준에서 Fyn과 Lyn 경로의 상승적 합류(synergistic confluence)에서 비만 세포 탈과립의 조절에 관여한다. Fyn 억제제는 알츠하이머병, 정신 분열증의 치료 및 예를 들어 흑색종 및 편평 상피 세포 암에서의 전이 예방에 유용할 수 있다.

HCK는 염색체 20q 1.21에 의해 암호화된 59.5kDa 티로신 키나아제이다. 단백질 구조는 SH3, SH2, 및 이분(bipartite) 키나아제 도메인을 포함한다. HCK 억제제는 만성 골수성 백혈병 및 급성 림프구성 백혈병의 치료에 유용할 수 있다.

Kit는 염색체 4ql2에 의해 코딩되는 109.9 kDa 막 횡단 (transmembrane) 티로신 키나아제이다. Kit는 멜라닌세포(melanocytes), 마스트(mast), 균(germ), 및 조혈 세포(hematopoietic cell)의 발달에 중요한 역할을 한다. Kit의 비정상적인 발현 및/또는 활성화는 다양한 병리학적 상태와 연관되어 있다. 비만 세포 종양, 소세포 폐암, 고환암, 위장관 간질 종양(GIST), 아교모세포종, 성상세포종, 신경모세포종, 여성 생식기 암의 암종, 신경 외배엽 기원의 육종, 결장 직장암, 전암상태(carcinoma in situ), 신경 섬유종증과 관련된 슈반세포 신생물(Schwann cell neoplasia), 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 비만 세포증, 흑색 종, 비만 세포종(canine mast cell tumor)을 포함하는 악성 종양 및 천식, 류마티스 관절염, 알레르기성 비염, 다발성 경화증, 염증성장 증후군, 이식 거부, 및 호산구 증가증을 포함하는 염증성 질환 치료에 유용할 수 있다.

LCK는 염색체 Ip34.3에 의해 코딩되는 57.9 kDa 막 관련 비수용체 티로신 키나아제이다. 단백질 구조는 SH3 및 SH2 도메인을 포함한다. LCK 억제제는 급성 림프구성 백혈병, T 세포 림프종, 림프구 감소증, 신장 암종, 결장암, 중증 복합 면역 결핍증, 다발성 경화증, 염증성 장 및 1형 당뇨병을 치료하는데 유용할 수 있다.

혈소판 유래 성장 인자 수용체(PDGF-R)는 혈소판 유래 성장 인자(platelet-derived growth factor; PDGF) 패밀리의 구성원의 세포 표면 티로신 키나아제 수용체이다. PDGF 서브 유닛 -A 및 -B는 세포 증식, 세포 분화, 세포 성장 및 발달 및 암을 포함한 많은 질병을 조절하는 중요한 인자이다. 각각 다른 유전자에 의해 코딩되는 알파 및 베타, PDGF-R의 두 가지 형태가 있다. PDGFRα는 염색체 4ql2에 의해 코딩되는 122.7 kDa 막 관통형 티로신 키나아제이다(기호: PDGFRA). PDGFRβ는 염색체 5q31-q32에 의해 코딩되는 124.0 kDa 막 관통형 티로신 키나아제이다 (기호: PDGFRB). PDGFR 억제제는 특발성 과호산구증후군, 만성 호산구성 백혈병, 신경교종(glioma), 위장관 간질 종양(GIST), 연소형 골수단구성 백혈병, 전이 속질 모세포종, 죽종 형성 및 재협착증과 같은 다양한 질병의 치료에 유용할 수 있다.

Yes는 염색체 18pl 1.31-pl 1.21에 의해 암호화된 60.8 kDa 티로신 키나아제이다(기호: YES1). Yes의 구조는 SH3 및 SH2 도메인 다음에 TK 도메인을 포함합니다. YES 암유전자(oncogene)는 Yamaguchi 육종 바이러스 유전자와 상동성이 있으며, Yes의 아미노산 서열은 Roussarcoma virus의 SRC 유전자 산물과 높은 상동성을 보인다. Yes 키나아제는 뉴런, 정자, 혈소판 및 상피 세포를 포함한 여러 포유류 세포 유형에서 높게 발현된다. 표적 키나아제 Yes는 식도 편평 상피 세포 암을 비롯한 다양한 암에서 증폭되고 과발현된다. Yes 억제제는 식도 편평 세포 암종을 포함한 암 치료에 유용할 수 있다.

일 양태에서, 화학식 I, II, III, IV 및 V의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및 XIV (화합물 I-XIV), 그의 염, 전구 약물 및/또는 이성질체는 질환 또는 상태가 자가 면역 질환 또는 암인 경우, 키나아제 매개 질환 또는 상태의 치료를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다.

염, 전구 약물 및/또는 이성질체를 포함하는 화학식 I, II, III, IV 및 V의 화합물, 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및 XIV (화합물 I-XIV)의 조성물의 양은 화합물의 IC_50; 화합물의 생물학적 반감기; 피험자의 나이, 크기 및 체중; 및 피험자와 관련된 상태 과 같은 인자를 고려한 표준 절차에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로 임상 시험에서의 일상적인 실험은 각 치료제 및 각 관리 프로토콜에 대한 최적의 치료 효과에 대한 특정 범위를 결정할 것이며, 특정 환자에 대한 투여는 환자의 상태 및 초기 투여에 대한 반응성에 따라 효과적이고 안전한 범위 내에서 조정될 것이다. 그러나 궁극적인 관리 프로토콜은 환자의 나이, 성별, 상태 및 크기와 같은 요인을 고려하는 담당 의사의 판단에 따라 규제될 것이다. 일반적으로, 활성 화합물의 투여량은 약 0.01 mg/kg/일 내지 약 1000 mg/kg/일의 범위일 수 있다. 본원에 기재된 화합물은 단일 또는 다중 투여량으로 투여될 수 있다.

전임상 약물 동태학(Preclinical Pharmacokinetics)

시험관 내 대사 안정성: 화합물 I 내지 XIII 및 다사티닙에 대해 인간 간의 마이크로솜에서 시험관 내 대사 안정성 시험을 수행하였다(실험 조건에 대해서는 실시 예 17 참조). 이 실험의 결과는 도 1과 표 1에 나와 있다.

화합물 I, IV, V, VI, VII, VIII, X, XI, XII 및 XIII는 다사티닙에 비해 현저히 더 큰 안정성을 나타내었다. 다사티닙에서 16분인 것에 비하여 화합물 I, IV, V, VI, VII, VIII, X, XI, XII, 및 XIII에 대한 시험 관내 t_1/2는 모두 59분 이상이었다. 화합물 I, IV, V, VI, VII, VIII, X, XI, XII, 및 XIII에 대한 대사 안정성의 유의한 증가는 예상외의 결과였다. 더 긴 생체 외 대사 안정성 반감기(t_1/2)는 다사티닙에 비해 이들 화합물의 생체 내 혈장 t_1/2가 더 길다는 지표이다. 따라서, 이들 화합물은 다사티닙에 비해보다 유리한 약물 동력학적 프로파일, 특히 보다 긴 t_1/2, 더 긴 작용 기간, 보다 적은 제1통과 효과 및 보다 높은 경구 생체 이용률을 가질 것으로 기대된다. 다사티닙의 경우 88μL/min/mg인 것에 비하여 화합물 I, IV, V, VI, VII, VIII, X, XI, XII, 및 XIII의 고유 클리어런스는 24μL/min/mg 미만이었다.

놀랍게도 중수소로 표지된 다사티닙(dasatinib)의 유사체인 화합물 III는 다사티닙과 유사한 대사 안정성을 갖는 것으로 나타났다(도 1, 표 1). 이것은 2-클로로-6-메틸페닐 고리의 4-위치에서의 히드록실화는 산화적 대사 경로인 인간 간 마이크로솜에서 다사티닙의 시험관 내 대사가 보고된 경우 예상치 못한 결과였다(Christopher LJ et al. Biotransformation of [14C]dasatinib: in vitro studies in rat, monkey, and human and disposition after administration to rats and monkey. Drug Metab. Dispos. 2007; 36(7):1341-1356).

화합물 I, IV, V, VI, VII, VIII, X, XI, XII 및 XIII는 다사티닙에 비해 인간 간 마이크로솜에서 예기치 않게 유의하게 증가된 대사 안정성을 나타내었고, 중수소 치환은 다사티닙에 비해 추가의 예기치 않은 결과를 초래한다.

인간 간 마이크로좀 배양에서 화합물의 시험관 내 t_1/2 및 내재적 클리어런스(CLint)*

	In vitro t_1/2 (min)	CLint (μL/min/mg)
다사티닙	16	88
화합물 I	261	5
화합물 II	32	44
화합물 III	24	58
화합물 IV	88	16
화합물 V	67	21
화합물 VI	403	3
화합물 VII	404	3
화합물 VIII	>500	<3
화합물 IX	25	56
화합물 X	87	16
화합물 XI	59	24
화합물 XII	448	3
화합물 XIII	261	5

* 화합물 I-XIII(1 μM)를 10 mM MgCl₂, 1 mM NADPH 및 2 mM UDPGA가 포함된 0.1 M 인산염 완충액에서 인간 간 마이크로솜(0.5 mg/mL)과 함께 37℃에서 60분까지 다양한 시점 동안 항온 배양하였다. 다양한 시점에서 남은 시험 화합물의 농도를 LC-MS/MS로 측정하였다.

생체 내 약물 동태학: 화합물 III, IV, V, X, XI 및 다사티닙의 생체 내 약물 동태 프로파일을 2-in-1 투약 기술을 사용하여 경구 및 정맥 내 투여한 후 Sprague Dawley 래트에서 조사 하였다(실험 조건은 실시 예 18 참조). 화합물 IV는 다사티닙과 함께 투여되었고, 화합물 V는 화합물 III와 함께 투여되었고, 화합물 X는 다사티닙과 함께 투여되었고, 화합물 XI는 화합물 III과 함께 투여되었다. 결과는 도 2 및 3 및 표 2 및 3에 나와 있습니다.

단일 정맥 내 또는 경구 투여 후 Sprague-Dawley 쥐에서 화합물 III, IV, V 및 다사티닙의 약물 동태학적 파라미터(실시예 18).

	화합물 IV		다사티닙		화합물 V		화합물 III
	정맥 내	PO	정맥 내	PO	정맥 내	PO	정맥 내	PO
Dose (mg/kg)	1	2.5	1	2.5	1	2.5	1	2.5
C_max (ng/mL)	N/A	82 ± 23	N/A	15 ± 5	N/A	35 ± 19	N/A	9 ± 6
T_max (hr)	N/A	5.5 ± 4.3	N/A	5.5 ± 4.3	N/A	5.5 ± 4.3	N/A	5.5 ± 4.3
AUC_last (ng/mL*hr)	1877 ± 152	891 ± 341	783 ± 54	193 ± 86	1960 ± 214	524 ± 191	835 ± 114	139 ± 69
AUC_inf (ng/mL*hr)	1879 ± 153	892 ± 341	784 ± 54	196 ± 85	1961 ± 214	539 ± 188	835 ± 114	144 ± 68
t_1/2(hr)	1.4 ± 0.1	2.3 ± 0.2	1.5 ± 0	3.5 ± 0.5	1.4 ± 0.1	4.4 ± 2.8	1.6 ± 0.1	4.7 ± 2.2
CL (mL/hr/kg)	535 ± 45	N/A	1279 ± 88	N/A	514 ± 54	N/A	1211 ± 157	N/A
V (L/kg)	1 ± 0	N/A	3 ± 0	N/A	1 ± 0	N/A	3 ± 0	N/A
F (%)	N/A	18.9 ± 6.7	N/A	9.8 ± 3.6	N/A	11.1 ± 4.3	N/A	7.2 ± 4.2

C_max - 구강 투여 후 혈장 최대 농도; T_max - 구강 투여 후 최대 혈장 농도까지의 시간; AUC_last - 마지막으로 검출 가능한 농도까지 혈장 농도 대 시간 곡선 아래의 면적; AUC_inf - 시간이 무한대까지 외삽된(extrapolated) 시간 대 혈장 농도 대 면적; t_1/2 - 혈장 농도 반감기; CL - 혈장 클리어런스(plasma clearance); V - 분포의 양; F (%) - AUC_inf (경구) 대 AUC_inf (정맥 내) 투여량을 표준화하여 결정한 경구 생체 이용률 퍼센트.

단일 정맥 내 또는 경구 투여 후 Sprague-Dawley 쥐에서 화합물 III, IV, V 및 다사티닙의 약물 동태학적 파라미터.

	화합물 X		다사티닙		화합물XI		화합물 III
	정맥 내	PO	정맥 내	PO	정맥 내	PO	정맥 내	PO
Dose (mg/kg)	1	5	1	5	1	5	1	5
C_max (ng/mL)	N/A	93 ± 101	N/A	7 ± 7	N/A	102 ± 86	N/A	11 ± 11
T_max (hr)	N/A	0.5 ± 0	N/A	0.5 ± 0	N/A	0.5 ± 0	N/A	0.5 ± 0
AUC_last (ng/mL*hr)	2519 ± 446	1122 ± 369	1013 ± 68	93 ± 23	2480 ± 243	1420 ± 343	916 ± 161	124 ± 26
AUC_inf (ng/mL*hr)	2520 ± 446	1204 ± 349	1014 ± 68	97 ± 22	2481 ± 243	1495 ± 273	917 ± 161	137 ± 20
t1/2 (hr)	1.6 ± 0.2	6.8 ± 4.1	1.7 ± 0.3	5.9 ± 1.5	1.6 ± 0.2	6 ± 3.6	1.7 ± 0.2	8.2 ± 4.1
CL (mL/hr/kg)	405 ± 66	N/A	989 ± 64	N/A	406 ± 42	N/A	1113 ± 193	N/A
V (L/kg)	1 ± 0	N/A	2 ± 0	N/A	1 ± 0	N/A	3 ± 0	N/A
F (%)	N/A	18.9 ± 2.2	N/A	3.9 ± 1	N/A	24 ± 3.1	N/A	6 ± 0.9

경구 투여 후, 화합물 IV, V, X 및 XI는 C_max가 15 ± 5 및 7±7 ng/mL인 다사티닙 및 C_max가 9 ± 6 및 11 ± 11 ng/mL인 화합물 다사티닙, 화합물 III의 중수소 유사체와 비교하여 놀랍게 현저하게 더 높은 각각 82 ± 13, 35 ± 19, 93 ± 101 및 102 ± 86 ng/mL의 값을 나타냈다. 화합물 IV, V, X 및 XI의 경구 생체 이용률(oral bioavailability)은 3.9 ± 1 및 9.8 ± 3.6%인 다사티닙 경구 생체 이용률 및 6 ± 0.9 및 7.2 ± 4.2%인 화합물 III의 경구 생체 이용률과 비교하여 18.9 ± 6.7, 11.1 ± 4.3, 18.9 ± 2 및 24 ± 33.1%의 생체 이용률(F)이었다. 이 연구의 결과는 놀랍게도 화합물 IV, V, X 및 XI가 다사티닙 및 화합물 III보다 정맥 내 혈장 제거율(intravenous plasma clearance)이 훨씬 낮다는 것을 보여준다. 이 데이터는 화합물 IV, V, X 및 XI가 다사티닙 또는 화합물 III보다 현저히 더 낮은 내재적 클리어런스 값을 갖는 것으로 입증된 시험관 내 대사 안정성 데이터와 일치한다.

또한, 화합물 IV, V, X 및 XI은 다사티닙 및 화합물 III보다 놀랍게 현저히 낮은 정맥 내 체적 분포 값을 갖는 것으로 밝혀졌으며, 이는 이들 화합물이 다사티닙 및 화합물 III과 비교하여 조직에 널리 분포되어 있지 않음을 시사한다. 또한, 이는 약물에 의한 장기 독성에 대해 이들 화합물이 다사티닙보다 더 낮은 잠재력을 갖는다는 것을 시사한다.

이 결과는 화합물 IV, V, X 및 XI를 생성하기 위한 피리미딘-4-일 그룹의 화학적 치환이 다사티닙과 비교하여 이들 신규한 화합물의 약물 동역학 프로파일에서 예기치 않은 중요한 변화를 초래한다는 것을 나타낸다.

생체 조직 분포: 경구용 위관 영양법으로 투약 된 화합물 X, XI 및 다사티닙의 혈장 대 폐 조직에서의 모 화합물 농도의 비율을 결정하기 위한 연구가 생쥐에서 수행되었다 (실험 조건에 대해서는 실시 예 19 참조). 결과는 도 4와 5에 나와 있다.

화합물 X 및 XI는 예기치 않게 시험된 모든 시점에서 다사티닙과 비교하여 그들의 혈장 농도와 비교하여 폐 조직에서 모 화합물 농도에 대한 유의적으로 낮은 비율을 나타냈다(도 4 및 도 5). 이러한 결과는 화합물 X와 XI가 다사티닙보다 폐 조직에 덜 분포되어 있음을 나타낸다.

다사티닙은 흉수(pleural effusion) 및 폐고혈압(pulmonary hypertension)과 같은 심한 호흡기 독성과 관련이 있으며 폐 조직에 다사티닙이 축적된 것으로 알려져있다(Quintas-Cardama A et al. Pleural effusion in patients with chronic myelogenous leukemia treated with dasatinib after imatinib failure. J Clin Oncol 2007; 25(25):3908-14; Wang X et al. Differential effects of dosing regimen on the safety and efficacy of dasatinib: retrospective exposure-response analysis of a Phase III study. Clin Pharmacol, 2013; 5: 85-97; Guignabert C et al. Dasatinib induces lung vascular toxicity and predisposes to pulmonary hypertension. J Clin Invest 2016; 126(9):3207-18; Iurlo A, et al. Pleural effusion and molecular response in dasatinib-treated chronic myeloid leukemia patients in a real-life Italian multicenter series. Ann Hematol. 2017; Oct 2. Doi: 10.1007/soo277-017-3144-1).

따라서, 혈장부터의 폐 조직 내로의 화합물 X 및 XI의 예상치 못한 현저하게 더 낮은 분포는 이들 화합물이 폐 조직에 축적될 가능성이 낮고 따라서 다사티닙에 비해 약물 유발 폐 독성에 대한 가능성이 낮다는 것을 암시한다.

병용 치료(Combination Therapy)

일 양태에서, 투여될 조성물은 이의 염, 전구 약물 및/또는 이성질체를 포함하는 하나 이상의 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV(화합물 I-XIV)의 하나 이상, 및 바람직하게는 화합물 IV, V, X, 및/또는 XI의 하나 이상을 포함하는 본 발명의 복수의 화합물 및 동일한 질환 또는 상태를 위한 다른 치료학적으로 유효한 제제를 포함하는 다수의 상이한 약리학적 활성 화합물을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 화합물은 질병의 징후에 대해 부가적 또는 상승적 효과를 갖는다.

바람직한 일 양태에서, 본 발명은 동물 또는 사람 대상에서 키나아제 기능 장애-매개 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 동일한 질병 또는 상태를 치료하기 위한 하나 이상의 다른 치료법과 조합하여, 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V을 포함하는 하나 이상의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV(화합물 I-XIV)의 하나 이상, 및 바람직하게는 화합물 IV, V, X, 및/또는 XI의 하나 이상, 이의 염, 전구 약물 및/또는 이성질체의 유효량을 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 다른 요법에는 의료 절차(예를 들어 수술), 치료제 및/또는 방사선이 포함될 수 있다. 치료제에는 화학 요법제, 생물 제제 및 면역 치료제가 포함된다. 병용 요법은 본원에 기재된 하나 이상의 화합물을 하나 이상의 다른 치료제와 상이한 시간 또는 동시 투여로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 투여량은 하나 이상의 본 발명의 화합물 또는 조합으로 사용되는 다른 치료제에 대해 변형될 수 있으며, 이러한 변형은 단독으로 사용되는 화합물 또는 치료에 비해 투여량의 감소이다.

병용에서의 사용에는 다른 의료 절차, 치료법 및 치료법과 함께 사용하는 것이 포함되고 다른 치료 또는 약물은 1, 2, 3 또는 4 내지 24시간과 같은 짧은 시간 내, 또는 1 내지 2일, 2 내지 4일, 4 내지 7일 또는 1 내지 4주의 시간과 같은 긴 시간 내에서 상이한 시간에 투여될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명의 화합물의 용도는 수술과 같은 의학적 처치, 예를 들어 한 번 또는 드물게 환자에게 수행되는데, 화합물이 의료 처치 전후로 단시간 또는 장시간 투여되는 경우일 수 있다.

투여(Administration)

상기 방법 및 화합물은 전형적으로 키나아제 매개 질환 또는 상태를 갖는 사람 대상을 위한 치료에 사용될 것이다. 그러나 다른 동물 대상에서 유사하거나 동일한 적응증을 치료하기 위해 사용될 수도 있다. 이와 관련하여, "대상" 및 "동물 대상" 등과 같은 용어는 인간 및 비인간 척추동물, 즉 사람이 아닌 영장류, 말, 소, 돼지, 양, 설치류 및 개과 고양이과 같은 애완동물과 같은 스포츠 및 상업 동물과 같은 포유동물을 지칭한다.

화학식 I, II, III, IV 및 V의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VIII, IX, X, XI, XII, XIII 및/또는 XIV, 화합물 IV, V, X 및 XI는 경우에 따라서는 본 발명의 범위 내에 있는 염을 형성할 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "염(들)"은 무기 및/또는 유기산 및 염기로 형성된 산성 염 및/또는 염기성 염을 의미한다.

예시적인 산 부가 염류는 아세트산염(아세트산 또는 예를 들면, 트리플루오로아세트산과 같은 트리할로아세트산으로 형성되는 것), 아디프산염(adipates), 알긴산염, 아스코르빈산염(ascorbates), 아스파르트산염(aspartates), 벤조산염, 시트르산염, 캄파산염(camphorates), 캄파술폰산염(camphorsulfonates), 사이클로펜탄프로피온산염(cyclopentanepropionates), 디글루콘산염(digluconates), 도데실황산염(dodecylsulfates), 에탄술폰산염(ethanesulfonates), 푸마르산염 (fumarates), 글루코헵타논산염(glucoheptanoates), 글리세로인산염(glycerophosphates), 헤미황산염 (hemisulfates), 헵타논산염(heptanoates), 헥사논산염(hexanoates), 염산염, 브롬화수소산염, 2-히드록시에탄술폰산염(2- hydroxyethanesulfonates), 젖산염, 말레산염, 메탄술폰산염, 니코틴산염, 질산염, 옥살산염, 펙틴산염(pectinates), 인산염, 피크르산염(picrates), 살리실산염(salicylates), 프로피오네이트(propionates), 타르타르산염(tartrates), 티오시안산염(thiocyantes), 톨루엔술판산염 등을 포함한다.

예시적인 염기 염은 암모늄염, 나트륨염, 리튬염 및 칼륨염과 같은 알칼리금속염, 칼슘염 및 마그네슘염과 같은 알칼리 토금속 염 및 유기 염기(예를 들어, 유기 아민)을 포함하는 염 등을 포함한다.

화합물 I, II, III, IV, V, VI, VIII, IX, X, XI, XII, XIII 및/또는 XIV(화합물 I - XIII)을 포함하는 화학식 I, II, III, IV 및 V의 화합물, 이의 염, 전구 약물, 및/또는 이성질체는 정맥 내, 근육 내, 피하, 경구, 경피, 경점막, 직장 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 정맥 내 투여의 경우, 투여는 볼루스 또는 주입으로 투여될 수 있다.

경구용 약학적 조성물은 하나 이상의 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV(화합물 I-XIV)의 하나 이상, 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X, 및/또는 XI의 하나 이상, 이의 염, 전구 약물 및/또는 이성질체를 고체 부형제와 혼합하고, 선택적으로 생성된 혼합물을 분쇄하고, 원하는 경우에 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물을 가공하여 정제 또는 당의정 코어를 수득하는 것에 의해 수득될 수 있다. 적합한 부형제는 구체적으로 락토즈, 슈크로즈, 만니톨 또는 솔비톨을 비롯한 당과 같은 충전제; 예컨대 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸트 검, 메틸셀룰로즈, 하이드록시프로필메틸셀룰로즈, 소듐 카복시메틸셀룰로즈(CMC)와 같은 셀룰로즈 제제; 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP: 포비돈)이다. 원한다면, 가교 결합된 폴리비닐피롤리돈, 한천 또는 알긴산 또는 이의 염, 예컨대 알긴산 나트륨과 같은 붕해제를 첨가할 수 있다.

주사를 위해, 화학식 I, II, III, IV 및/또는 V의 화합물, 바람직하게는 화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및/또는 XIV, 및 더욱 바람직하게는 화합물 IV, V, X, 및/또는 XI, 이의 염, 전구 약물 및/또는 이성질체를 멸균 액체 용액, 바람직하게는 식염수, 행크 용액 또는 링거 용액과 같은 물리적으로 상용성인 완충액 또는 용액으로 제제화된다. 또한, 화합물은 고체 형태로 제제화될 수 있고, 사용 직전에 재용해되거나 현탁될 수 있다. 동결 건조된 형태도 생산할 수 있다.

본원에 기재된 화합물의 투여는 화학 요법 또는 방사선과 동시에 또는 순차적으로 발생할 수 있다. 의학적 질환 또는 상태를 치료하기 위한 다른 치료제 또는 약물의 투여는 상이한 투여 경로 또는 동일한 투여 경로에 의한 것일 수 있는 것으로 이해된다.

다른 양태에서, 임의의 투여 경로에 대한 병용 요법에서의 사용은 본 발명의 화합물 및 1시간, 2시간, 3시간, 24시간 이하, 별도 제형 또는 상이한 투여 경로에 따라 임의의 제형에서 동일한 투여 경로에 의해 전달되거나 함께 투여되는 하나 이상의 다른 약물 치료제의 전달을 포함한다.

본 발명은 또한 약학적 조합물, 예를 들어 (a) 유리 형태 또는 약학적으로 허용 가능한 염 형태의 본원에서 개시된 바와 같은 본 발명의 화합물을 포함하는 제1약제 및 (b) 적어도 하나의 보조제(co-agent)를 포함하는 키트를 제공한다. 상기 키트에는 관리 지침이 포함될 수 있다.

일반적인 합성 방법(General Synthetic Methods)

본 발명은 또한 본 발명의 신규한 중수소-풍부 및 비-풍부 화합물의 제조 방법을 포함한다. 기술된 반응에서 반응에 원치 않는 참여를 피하기 위해 최종 생성물에서 반응성 작용기, 예를 들어 히드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카복시기를 보호할 필요가 있을 수 있다. 통상적인 보호기는 표준 관행에 따라 사용될 수 있다(예를 들어, TW Greene and PGM Wutsin Protective Groups in Organic Chemistry, John Wiley and Sons, 1991 참조).

예시적인 화합물을 포함하는 화학식 I, II, III, IV 및 V의 화합물은 이하에서 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 일반적으로 반응식 1의 시약(및 다른 적용 가능한 반응식)에 적절한 변형을 가함으로써 합성될 수 있다. 비중수소화 중간체는 일반적으로 상업적으로 입수 가능하며, 합성은 예를 들어 화합물 7(예를 들어 반응식 8 내지 14의 화합물 7H 참조)에서 상업적으로 이용 가능한 적절한 중간체를 사용하여 개시될 수 있음을 알아야 한다.

화합물 I은 반응식 1에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 1

화학 공정의 초기 단계는 중간체 2를 형성하기 위하여 4-브로모-2-클로로-6-메틸 아닐린(1)을 알릴 브로마이드와 반응시키는 것을 포함한다. 약 -70℃에서 질소 가스하에 건조 테트라하이드로푸란 중 중간체 2에 n-부틸 리튬(약 1.5몰 n-부틸 리튬을 1몰 중간체 2에)을 적가한다. 약 40분 후, 중간 리튬 복합체를 d₁-메탄올(CH₃OD; 99% deuterium, # 550574; Lot # MKBW0355V, Aldrich, St Louis, MO)로 ??칭시켜 4 위치에 중수소를 선택적으로 도입하고 중간체 3을 제공한다. 알릴 보호기를 표준 절차에 의해 제거하여 아닐린 중간체 4를 수득한다. 중간체 4를 3-에톡시아크릴로일 클로라이드와 반응시켜 아크릴 아미드 중간체 5를 형성시킨 다음 N-브로모석신이미드 및 티오우레아로 처리하여 티아졸 중간체 6을 형성한다. 티아졸 중간체 6을 염기성 나트륨 하이드라이드로 처리한 후 4,6-디클로로-2-메틸피리미딘을 첨가하여 2-[(6-클로로-2-메틸피리미딘-4-일)아미노]-N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)싸이아졸-5-카르복사마이드(중간체 7)를 수득하였다. 중간체 7을 피페리딘 및 N, N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 원하는 생성 화합물 I(8)을 형성한다.

화합물 II는 반응식 2에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 2

화합물 II의 합성에서, 상기 방법의 처음 6단계는 중간체 7을 생성하기 위한 화합물 I의 합성에 사용된 것과 동일하다. 합성의 마지막 단계는 4-하이드록시피페리딘 및 N,N-디이소프로필에틸아민을 사용하여 중간체 7과 반응시켜 원하는 생성 화합물 II를 형성한다.

화합물 III는 반응식 3에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 3

화합물 III의 합성에서, 상기 방법의 처음 6단계는 중간체 7을 생성하기 위한 화합물 I의 합성에 사용된 것과 동일하다. 합성의 최종 단계는 1-(2-하이드록시에틸)피페라진(Sigma-Aldrich, St Louis, MO) 및 N,N-디이소프로필에틸아민을 사용하여 중간체 7과 반응시켜 원하는 부가 생성 화합물 III을 형성한다.

화합물 IV는 반응식 4에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 4

화합물 IV의 합성에서, 상기 방법의 처음 6단계는 중간체 7을 생성하기 위한 화합물 I의 합성에 사용된 것과 동일하다. 중간체 7을 (S)-3-하이드록실피롤리딘 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 원하는 생성 화합물 IV를 형성한다.

화합물 V는 반응식 5에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 5

화합물 V의 합성에서, 상기 방법의 처음 6단계는 중간체 7을 생성하기 위한 화합물 I의 합성에 사용된 것과 동일하다. 중간체 7을 (R)-3-하이드록시피롤리딘 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 원하는 생성 화합물 V를 형성한다.

화합물 VI은 반응식 6에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 6

화합물 VI의 합성에서, 상기 방법의 처음 6단계는 중간체 7을 생성하기 위한 화합물 I의 합성에 사용된 것과 동일하다. 중간체 7을 디옥산 중 tert-부틸(S)-피롤리딘-3-일카바메이트 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 화합물 300-98을 형성한다. 화합물 300-98은 탈보호되어(deprotected) 생성 화합물 VI를 생성한다.

화합물 VII은 반응식 7에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 7

화합물 VII의 합성에서, 상기 방법의 처음 6단계는 중간체 7을 생성하기 위한 화합물 I의 합성에 사용된 것과 동일하다. 중간체 7을 디옥산 중 tert-부틸(R)-피롤리딘-3-일카바메이트 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 화합물 300-100을 형성한다. 화합물 300-100은 탈보호되어(deprotected) 생성 화합물 VII를 생성한다.

화합물 VIII은 반응식 8에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 8

화합물 VIII의 합성에서, 상업적으로 입수할 수 있는 중간체 7H(Combi-Blocks, Inc., San Diego, CA)를 디옥산에서 피페리딘 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 원하는 생성 화합물 VIII을 형성한다.

화합물 IX은 반응식 9에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 9

화합물 IX의 합성에서, 상업적으로 입수할 수 있는 중간체 7H(Combi-Blocks, Inc., San Diego, CA)를 디옥산에서 4-하이드록시피페리딘 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 원하는 생성 화합물 IX을 형성한다.

화합물 X은 반응식 10에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 10

화합물 X의 합성에서, 상업적으로 입수할 수 있는 중간체 7H를 디옥산에서 (S)-피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 원하는 생성 화합물 X을 형성한다.

화합물 XI는 반응식 11에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 11

화합물 XI의 합성에서, 상업적으로 입수할 수 있는 중간체 7H를 디옥산에서 (R)- 피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 원하는 생성 화합물 XI을 형성한다.

화합물 XII는 반응식 12에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 12

화합물 XII의 합성에서, 상업적으로 입수할 수 있는 중간체 7H를 디옥산에서 tert-부틸(S)-피롤리딘-3-일카르바메이트 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 중간체 300-92를 형성한다. 중간체 300-92는 화합물 XII를 생성하기 위해 탈보호된다.

화합물 XIII는 반응식 13에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 13

화합물 XIII의 합성에서, 상업적으로 입수할 수 있는 중간체 7H를 디옥산에서 tert-부틸(R)-피롤리딘-3-일카르바메이트 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 중간체 300-92를 형성한다. 중간체 300-92는 화합물 XII를 생성하기 위해 탈보호된다.

화합물 XIV 는 반응식 14에 나타낸 방법으로 합성할 수 있다.

반응식 14

화합물 XIV의 합성에서, 상업적으로 입수할 수 있는 중간체 7H를 다이메틸설폭 사이드(DMSO)에서 피롤리딘 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민과 반응시켜 화합물 XIV을 생성한다.

실시예

이하, 본 발명에 관한 실시 예를 설명한다. 더 많은 경우 대체 기술을 사용할 수 있다. 실시 예는 예시적인 것이며 본 발명의 범위를 제한하거나 제한하지 않는다. 일부 실시 예에서, 질량 분석 결과는 화합물이 브로모 또는 클로로 치환체를 갖는 화합물과 같이 분자 내의 원자의 동위 원소 분포로 인해 하나 이상의 값을 가질 수 있음을 나타냈다.

실시 예 1

N-(2-클로로-4-듀테리오-6-메틸-페닐)-2-[[2-메틸-6-(1-피페리딜)피리미딘-4-일]아미노]싸이아졸-5-카복사미드(화합물 I)의 합성

N,N-디알릴-4-브로모-2-클로로-6-메틸아닐린(2)의 제조: 0℃에서 250 mL 플라스크에 4-브로모-2-클로로-6-메틸아닐린 (3 g, 13.61 mmol), 디메틸 포름아미드(DMF)(50 mL) 및 탄산나트륨 (6.37 g, 60.09 mmol, 4.4 eq.)를 첨가하였다. 교반하면서, 알릴 브로마이드(9.4 mL, 108.62 mmol, 8 eq)를 질소 하에 0-5℃에서 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 20분간 교반하고, 질소 하에 120℃에서 3시간 동안 가열하여 TLC 분석에서 출발 물질이 존재하지 않음을 나타내었다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고 냉수에 부은 다음 에틸 아세테이트(EtOAc) (2 x 150 mL)로 추출하였다. 혼합한 유기층을 염수(3 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고(황산나트륨, Na₂SO₄), 감압하에 농축시켜 흑갈색 액체 잔류물을 수득하고, 이를 칼럼 크로마토그래피(헥산 단독)로 정제하여 담갈색 액체인 화합물 2(3.9 g, 95%)를 수득하였다.

N,N-다이알릴-2-클로로-4-듀테로-6-메틸아닐린 (3)의 제조: 질소 하에 -70℃에서 테트라하이드로퓨란(THF)(40 mL) 중 화합물 2 (2 g, 6.65 mmol)의 용액에 n-뷰틸 리튬의 2.5M 용액 (4 ml, 10 mmol)을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 -70℃에서 40분 동안 교반한 후 중수소화 메탄올(MeOD) (2 mL, 49.2 mmol, 99% deuterium, # 550574; Lot # MKBW0355V, Aldrich, St Louis, MO)을 적가하여 ??칭시켰다. 얇은 층 크로마토그래프(TLC) 분석(오직 헥산)이 반응이 완료되었음을 나타내었을 때 40분에 걸쳐 반응 혼합물을 -70℃에서 -20℃까지 교반하였다. 상기 혼합물을 차가운 물(100 mL)에 붓고, 이어서 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고(Na₂SO₄), 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(오직 헥산, 이어서 EtOAc:헥산; 1:20)로 정제하여 화합물 3(1.38 g, 93%)을 담황색 액체로 수득하였다. ¹H Nuclear magnetic resonance (NMR) (CDCl3): 7.20 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.95 (m, 2H), 5.21-5.20 (m, 4H), 3.79 (d, 4H), 2.41 (s, 3H). ¹H NMR은 화합물 3의 4 위치에서 양성자 신호가 없음을 나타냈다.

2-클로로-4-듀테로-6-메틸아닐린 (4)의 제조: DCM(130 mL) 중 아닐린 3 (3 g, 13.31 mmol)의 교반된 용액에 N,N-디메틸바르비투르산 (8.3 g, 53.16 mmol, 4 eq) 및 Pd (PPh₃)₄ (0.5 g, 0.43 mmol, 0.032 eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 환류하에 4시간 동안 가열하였다. TLC 분석(EtOAc:헥산; 1:9)은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (120 mL)에 용해시키고, 유기층을 10% 중탄산나트륨(NaHCO₃) 용액(4 x 60 mL)으로 세척하고, 건조시키고(Na₂SO₄), 농축시켰다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:헥산; 1:9)로 정제하여 목적하는 아닐린 4 (1.67 g, 88%)를 담갈색 액체로서 수득하였다.

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-3-에톡시아크릴아미드 (5)의 제조: 0-5℃에서 화합물 4 (460 mg, 3.23 mmol), 피리딘 (0.4 mL, 4.95 mmol, 1.5 eq) 및 THF (25 mL)의 혼합물에 3-에톡시아크릴로일 클로라이드 (666 mg, 4.95 mmol, 1.5 eq)를 적가한다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 질소 하에 밤새 교반하였다. TLC 분석(EtOAc:헥산; 1:2)은 출발 물질이 없음을 나타냈다. 혼합물에 EtOAc (80 mL) 및 물 (80 mL)을 첨가하고, 유기층을 분리하고 1N 염산(HCl) 용액, 물 및 5% NaHCO₃ 용액으로 세척하고, 건조시키고(Na₂SO₄), 농축시켜 화합물 5를 백색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 정제하지 않고 사용하였다.

2-아미노-N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)티아졸-5-카르복사미드 (6)의 제조: 0℃에서 아크릴아마이드 5 (900mg, 3.74mmol), 1,4-디옥산 (7mL) 및 물 (7mL)의 혼합물에 N-브로모석신이미드 (730mg, 4.10mmol, 1.1 eq.)를 첨가하였다. 슬러리를 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 티오우레아 (285 mg, 3.75 mmol, 1 eq.)를 첨가하고 혼합물을 80℃로 가열하였다. 3시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후 농축 수산화 암모늄 용액 (1 mL)을 첨가하였다. 교반 후, EtOAc (80 mL) 및 물 (80 mL)을 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 분리하고 수성층을 EtOAc (80 mL)로 추출하였다. 혼합한 유기층을 물로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(EtOAc-헥산, 1:4 내지 1:2)에 적용하여 화합물 6 (0.82 g, 82%)을 담갈색 고체로 수득하였다. 액체 크로마토그래피-질량 분석 (LC-MS) 분석은 269.14(M+H)에서 양성자화된 모이온을 나타내었다.

2-[(6-클로로-2-메틸피리미딘-4-일)아미노]-N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)티아졸-5-카르복사미드 (7)의 제조: 0℃에서 수소화나트륨 (60%, 67mg, 1.67mmol) 및 THF (15mL)의 혼합물에 화합물 6 (150mg, 0.56mmol)을 나누어 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 4,6-디클로로-2-메틸피리미딘 (109 mg, 0.67 mmol, 1.2 eq.)의 용액을 적가하였다. LC-MS 분석이 출발 물질의 부재를 나타내는 경우, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 조 화합물 7을 수득하고, 이를 다음 단계에서 정제하지 않고 사용하였다.

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(피페리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (8, 화합물 I):상온에서 디옥산 (10 mL) 중 조 화합물 7 (약 0.56 mmol)의 혼합물에 피페리딘 (143 mg, 1.68 mmol, 3 eq.) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(DIEA) (217 mg, 1.68 mmol, 3 eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 85-90℃에서 20시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 농축 건조시키고, 20% HPLC 등급의 물을 함유하는 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시켰다. 이어서, 혼합물을 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 아세토니트릴에 재현탁하고 4000 rpm에서 15분간 다시 원심분리 하였다. 최종 펠렛을 질소 하에 건조시키고, 목적 화합물 I (화합물 8) (12 mg)의 회백색 고체로 회수하였다. 최종 생성물의 순도는 액체 크로마토그래프-자외선-질량분석(LC-UV-MS)에 의해 95% 이상으로 측정되었다. LC-MS: 444.14 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.52 (s, 1H. NH), 9.82 (s, 1 H, NH), 8.18 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.00 (s, 1H), 3.55 (m, 4H), 3.22 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.65 (m, 6H). ¹H NMR은 화합물 I의 4-위치에서 양성자 신호가 없음을 보여 주었다.

실시예 2

N-(2-클로로-4-듀테리오-6-메틸-페닐)-2-[[6-(4-하이드록시-1-피페리딜)-2-메틸-피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 II)의 제조

화합물 II는 반응식 2에 도시된 합성 절차에 의해 2-[(6-클로로-2-메틸피리미딘-4-일)아미노]-N-(2-클로로-4-듀 테로-6-메틸페닐)티아졸-5-카르복사미드 (7)로부터 합성하였다.

2-[(6-클로로-2-메틸피리미딘-4-일)아미노]-N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)티아졸-5-카르복스아미드(7)를 실시 예 1에 기술된 바와 같이 4-브로모-2-클로로-6-메틸아닐린으로부터 출발하여 6 단계로 제조하였다.

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(4-히드록시피페리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 II): 디옥산 (10 mL) 중 조 화합물 7 (약 0.56 mmol)의 혼합물에 실온에서 4-히드록시피페리딘 (170 mg, 1.68 mmol, 3 eq.) 및 DIEA (217 mg, 1.68 mmol, 3 eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 85-90℃에서 20시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 농축 건조시킨 다음 아세토니트릴 50 mL에 현탁시켰다. 혼합물을 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 메탄올에 용해시키고 컬럼 크로마토그래피(메탄올-메틸렌 클로라이드, 1:9)로 정제하였다. 화합물 II만을 함유하는 컬럼 크로마토그래피 분액을 합하고 질소 흐름 하에 건조시키고 표적 화합물 II (17mg)를 회백색 고체로서 회수하였다. 최종 생성물의 순도는 LC-UV-MS에 의해 95% 이상으로 측정되었다. LC-MS: 460.14 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.42 (s, 1H. NH), 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.75 (m, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.18 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.85 (m, 2H), 1.35 (m, 2H). ¹H NMR은 화합물 II의 4-위치에서 양성자 신호가 없음을 나타냈다.

실시예 3

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(4-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 III)의 제조

상온에서 조 화합물 7 (약 0.56 mmol) 및 디옥산 (10 mL)의 혼합물에 4-(2-하이드록시에틸)피페리딘 (219 mg, 1.68 mmol, 3 eq) 및 DIEA (217 mg, 1.68 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 85 내지 90℃에서 질소 하에 20시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압하에 농축 건조시키고, 20% HPLC 급수를 함유하는 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시켰다. 이어서, 혼합물을 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 아세토니트릴에서 재현탁하고 다시 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 최종 펠렛을 질소 하에 건조시키고, 회백색 고체로서 목적 화합물 III의 회백색 고체(약 40 mg)를 회수하였다. LC-MS: 489.16 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d ₆): 11.42 (s, 1H. NH), 9.83 (s, 1 H, NH), 8.20 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 4.42 (m, 1H), 3.35 (m, 2H), 2.48 (m, 8H), 2.40 (s, 3H), 2.15 (m, 2H).

실시예 4

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((S)-3-히드록시피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 IV)의 제조

조 화합물 7 (약 0.56 mmol) 및 디옥산 (10 mL)의 혼합물에 (S)-피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드 (208 mg, 1.68 mmol, 3 eq) 및 DIEA (400 mg, 3.1 mmol, 5.5 eq.)을 실온에서 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 질소 하에 85-90℃에서 6시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축 건조시키고, 생성된 잔류물을 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 그 후, 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 재현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 합치고 농축 건조시켜 표적 화합물 IV (약 60 mg)를 회백색 고체로 수득하였다. LC-MS: 446 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.40 (s, 1H. NH), 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.80 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 5

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 V)의 제조

조 화합물 7 (약 0.56 mmol) 및 디옥산 (10 mL)의 혼합물에 (R)-피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드 (208 mg, 1.68 mmol, 3 eq) 및 DIEA (400 mg, 3.1 mmol, 5.5 eq.)을 실온에서 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 질소 하에 85-90℃에서 6시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축 건조시키고, 생성된 잔류물을 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 그 후, 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 재현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 합치고 농축 건조시켜 표적 화합물 V (약 103 mg)를 회백색 고체로 수득하였다. LC-MS: 446 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.40 (s, 1H. NH), 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.80 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 6

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 VI, 300-101)의 제조

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 VI, 300-101)의 제조. 300-97 (200 mg, 0.51 mmol) 및 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 tert-부틸(S)-피롤리딘-3-일카바메이트 (186 mg, 1 mmol, 2 eq) 및 DIEA (147 mg, 1.14 mmol, 2 eq)를 상온에서 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 질소 하에 90 내지 91℃에서 12시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축시키고, 메탄올 (4 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 재농축하여 중간체 300-100을 회색 고체로 수득하였다. LC-MS: 545.12 (M+H).

미정제 시료(300-100)에 DCM (4 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 5℃로 냉각시킨 후, TFA-DCM (1:1, 5 mL)의 혼합물을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 (4 mL)과 혼합하고, 이어서 트리에틸아민(2 mL)을 첨가하고 잠시 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고, 50 mL 증류수에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 증류수 50 mL로 재현탁하고, 4000 rpm으로 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 80% 아세토니트릴 100 mL로 추가로 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 증발 건조시켜 회백색 고체로 목적 화합물 VI (300-101) (약 108 mg)을 수득하였다. LC-MS: 445 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 5.80 (s, 1H), 3.60-3.35 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 7

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 VII, 300-99)의 제조

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 VII, 300-99)의 제조. 출발 물질 300-77-2 (200 mg, 0.74 mmol), 4,6-디클로로-2-메틸피리미딘 (147 mg, 0.90 mmol, 1.2 eq.) 및 THF (4 mL)의 교반된 혼합물에 0-5℃에서 THF (2M, 1.31 mL, 2.62 mmol, 3.5 eq.) 중에 소듐 tert-부톡사이드 용액을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고 0-5℃로 재냉각시켰다. 2N HCl 용액(1 mL)을 적가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc-헥산(1:1)과 혼합하고 5분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고 EtOA-헥산(1:1)으로 세척하고 건조시켜 황색 고체(210mg)를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. LC-MS: 395.03 (M+H).

N-(2-클로로-4-듀테로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 VII, 300-99)의 제조. 300-97 (200 mg, 0.51 mmol) 및 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 tert-부틸(R)-피롤리딘-3-일카바메이트 (186 mg, 1 mmol, 2 eq) 및 DIEA (147 mg, 0.5 mmol)를 상온에서 적가하였다. 이어서, 혼합물을 질소 하에 90 내지 91℃에서 12시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축시켰다. 메탄올 (4 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 재농축하여 중간체 300-98을 회색 고체로서 수득하였다. LC-MS: 545.12 (M+H).

미정제 시료(300-98)에 디클로로메탄 (DCM) (4 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 5℃로 냉각시킨 후, 트리플루오로아세트산(TFA)-DCM (1:1, 5 mL)의 혼합물을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 (4 mL)과 혼합하고, 이어서 트리에틸아민 (2 mL)을 첨가하고 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고, 50 mL 증류수에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 증류수 50 mL로 재현탁하고, 4000 rpm으로 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 80% 아세토니트릴 100 mL로 추가로 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 증발 건조시켜 표적 화합물 VII(300-99)를 회백색 고체 (~ 105 mg)로 수득하였다. LC-MS: 445 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 5.80 (s, 1H), 3.60-3.35 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 8

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(피페리딘-1-일)피리디민-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 VIII, H-20)의 제조

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(피페리딘-1-일)피리디민-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 VIII, H-20)의 제조. 실온에서 출발 물질 7H (150 mg, 0.38 mmol), 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 피페리딘(97 mg, 1.14 mmol, 3 eq.) 및 DIEA (147 mg, 1.14 mmol, 3 eq.)를 상온에서 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 90 내지 91℃에서 15시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 농축 건조시키고, 20% HPLC 등급의 물을 함유하는 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시켰다. 이어서, 혼합물을 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 아세토니트릴에서 재현탁하고 다시 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 최종 펠렛을 질소 하에 건조시켜 회백색 고체로서 목적 화합물 VIII (H-20) (~ 129 mg)을 수득하였다. LC-MS: 443 .14 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.52 (s, 1H. NH), 9.82 (s, 1 H, NH), 8.18 (s, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.21 (m, 2H), 6.00 (s, 1H), 3.55 (m, 4H), 3.22 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.65 (m, 6H).

실시예 9

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(4-히드록시피페리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 IX, H-21)의 제조

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(4-히드록시피페리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 IX, H-21)의 제조. 실온에서 출발 물질 7H (150 mg, 0.38 mmol), 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 4-히드록시피페리딘(115 mg, 1.14 mmol, 3 eq.) 및 DIEA (147 mg, 1.14 mmol, 3 eq.)를 상온에서 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 질소 하에 90-92℃에서 10시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 농축 건조시키고, 20% HPLC 등급의 물을 함유하는 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시켰다. 이어서, 혼합물을 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 아세토니트릴에서 재현탁하고 다시 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 최종 펠렛을 질소 하에 건조시켜 회백색 고체로서 목적 화합물 IX (H-21) (130mg)을 수득하였다. LC-MS: 459.14 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.42 (s, 1H. NH), 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 6.05 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.75 (m, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.18 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.85 (m, 2H), 1.35 (m, 2H).

실시예 10

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((S)-3-히드록시피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 X, H-31, 300-89)의 제조

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((S)-3-히드록시피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 X, H-31, 300-89)의 제조. 출발 물질 7H (150 mg, 0.38 mmol) 및 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 (S)-피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드(141 mg, 1.14 mmol, 3 eq) 및 DIEA (245 mg, 1.90 mmol, 5 eq.)를 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 90-92℃에서 12시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축 건조시키고, 생성된 잔류물을 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 그 후, 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 재현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 합치고 농축 건조시켜 표적 화합물 X (H-31) (105 mg)을 회백색 고체로서 수득하였다. LC-MS: 445 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.40 (s, 1H. NH), 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 5.80 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 11

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 XI, H-30, 300-87)의 제조

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 XI, H-30, 300-87)의 제조. 출발 물질 7H (150 mg, 0.38 mmol) 및 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 (R) -피롤리딘-3-올 (100 mg, 1.1 mmol, 3 eq) 및 DIEA (147 mg, 1.14 mmol, 3 eq.)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 90-92℃에서 12시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물은 깨끗한 용액이 아니었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축 건조시키고, 생성된 잔류물을 아세토니트릴 50 mL 중에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 그 후, 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 냉각된 80% 아세토니트릴에 재현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 합치고 농축 건조시켜 회백색 고체로서 목적 화합물 XI (H-30) (~ 75 mg)을 수득하였다. LC-MS: 445 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 11.40 (s, 1H. NH), 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 5.80 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 12

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 XII, H-41, 300-93)의 제조.

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 XII, H-41, 300-93)의 제조. 출발 물질 7H (150 mg, 0.38 mmol) 및 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 tert-부틸 (S)-피롤리딘-3-일카바메이트 (142 mg, 0.76 mmol, 2 eq) 및 DIEA (147 mg, 1.14 mmol, 3 eq)을 실온에서 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 질소 하에 90 내지 91℃에서 10시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축시켰다. 메탄올 (4 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 재농축하여 중간체 300-92를 회색 고체로서 수득하였다. LC-MS: 544.12 (M+H).

미정제 샘플(300-92)에 DCM (4 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 5℃로 냉각시킨 후, TFA-DCM (1:1, 5 mL)의 혼합물을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 (4 mL)과 혼합한 후, TEA (2 mL)를 첨가하고 잠시 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고, 50 mL 증류수에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 증류수 50 mL로 재현탁하고, 4000 rpm으로 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 80% 아세토니트릴 100 mL로 추가로 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 증발 건조시켜 표제 화합물 XII (H-41)을 회백색 고체 (약 88 mg)로 수득하였다. LC-MS: 444 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 5.80 (s, 1H), 3.60-3.35 (m, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 13

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 XIII, H-40, 300-91)의 제조

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드(화합물 XIII, H-40, 300-91)의 제조. 출발 물질 7H (150 mg, 0.38 mmol) 및 디옥산 (8 mL)의 혼합물에 tert-부틸 (R) -피롤리딘-3-일카바메이트 (142 mg, 0.76 mmol, 2 eq) 및 DIEA (147 mg, 1.14 mmol, 3 eq)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 질소 하에 90 내지 91℃에서 12시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 생성물 피크가 나타났다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 농축시켰다. 메탄올 (4 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 재농축하여 중간체 300-90을 회색 고체로서 수득하였다. LC-MS: 544.12 (M+H).

미정제 샘플(300-90)에 DCM (4 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 5℃로 냉각시킨 후, TFA-DCM (1:1, 5 mL)의 혼합물을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 (4 mL)과 혼합한 후, 트리메틸 아민 (TEA) (2 mL)을 첨가하고 잠시 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고, 50 mL 증류수에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 증류수 50 mL로 재현탁하고, 4000 rpm으로 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 80% 아세토니트릴 100 mL로 추가로 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 증발 건조시켜 표제 화합물 XIII (H-40)을 회백색 고체 (약 96 mg)로 수득하였다. LC-MS: 444 (M+H); ¹H NMR(DMSO-d₆): 9.83 (s, 1 H, NH), 8.19 (s, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 5.80 (s, 1H), 3.60-3.35 (m, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.20 (s, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.85 (m, 2H).

실시예 14

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물XIV, H-50)의 제조

N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[2-메틸-6-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일]아미노]티아졸-5-카르복사미드 (화합물 XIV, H-50)의 제조. 출발 물질 7H (300mg, 0.76mmol) 및 DMSO (10mL)의 혼합물에 피롤리딘 (162mg, 2.28mmol, 3 eq.) 및 DIEA (294mg, 2.28mmol, 3 eq.) 및 DMAP (3 mg)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 질소 하에 110℃로 가열하고 110℃에서 15시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석은 완전한 반응을 보였다. 혼합물을 농축 건조시키고, 50 mL 증류수에 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분 동안 원심분리시켰다. 펠렛을 증류수 50 mL로 재현탁하고, 4000 rpm으로 15분간 원심분리 하였다. 펠렛을 80% 아세토니트릴 100 mL로 추가로 현탁시키고, 4000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상등액을 증발 건조시켜 표제 화합물 XIV (H-50)을 회백색 고체 (약 314 mg)로 수득하였다. LC-MS: 429 (M+H); ¹H NMR (DMSO-d ₆): 11.52 (s, 1H. NH), 9.82 (s, 1 H, NH), 8.18 (s, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.21 (m, 2H), 5.79 (s, 1H), 3.35 (m, 4H), 2.39 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.90 (m, 4H).

실시예 15

단백질 키나아제 억제 연구

Carna Biosciences, Inc (Natick, MA)에 의한 오프-칩 이동성 시프트 분석 (MSA)을 사용하여 키나아제 활성 및 저해를 측정하였다.

1) 분석용 완충액(20 mM HEPES, 0.01% Triton X100, 2 mM DTT, pH)으로 x4 화합물 용액 5 μL, x4 기질/ATP/금속 용액 5 μL 및 x2 키나아제 용액 10 μL를 준비하고, 혼합하고 폴리 프로필렌 384 웰 마이크로 플레이트의 웰에서 1 또는 5시간 (키나아제에 따라) 실온에서 인큐베이션 하였다.

2) 70 μL의 Termination Buffer (QuickScout Screening Assist MSA; Carna Biosciences)를 웰에 넣었다.

3) 반응 혼합물을 LabChip 시스템 (Perkin Elmer)에 적용하고, 생성물 및 기질 펩타이드 피크를 분리하고 정량하였다.

4) 키나아제 반응은 생성물(P) 및 기질(S) 펩티드(P/(P+S))의 피크 높이로부터 계산된 생성물 비율에 의해 평가된다.

5) 반응 조건은 Carna Biosciences, Inc (Kobe 650-0047, Chuo-ku, Minatojima-Minamimachi 1-5-5 BMA 3F, www.carnabio.com)의 분석 프로토콜에 따라 수행하였다.

6) 데이터 분석: 반응 제어의 판독 값(완전 반응 혼합물)을 0% 억제로 설정하고 배경 (Enzyme (-))의 판독 값을 100% 억제로 설정한 다음 각 시험 용액의 억제율을 계산하였다.

화합물 I은 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: ABL, ABL(E255K), ACK, ARG, BLK, BMX, BTK, DDR2, EPHA1, FGR, FMS, FRK, FYN(isoform a), HCK, LCK, LYNa, PDGFRα, PDGFRβ, SRC, YES. 화합물 I은 약 0.2, 0.5 및 1.4nM의 IC₅₀으로 재조합 BTK, ACK 및 PDGFRα 활성의 농도 의존적 저해를 나타내었다. 화합물 I은 재조합 PIK3CA/PIK3R1 활성을 약 12nM의 IC₅₀으로 억제하였다.

화합물 I은 하기 재조합 키나아제 상에서 10nM에서 >50% 억제를 나타내었다: YES, FRK, SRC, LYNa, FMS, BMX, ABL, FYN(isoform b), FGR, HCK, FYN(isoform a), LCK, DDR2, ARG, ABL(E255K), BTK, EPHA1, BLK, ACK, SRM, PDGFRβ, PIK3CA/PIK3R1, PDGFRα, CSK, KIT(D816V), KIT(D816Y), BRK.

화합물 I은 하기 재조합 키나아제 상에서 10nM에서 <50% 억제를 나타내었다: PDGFRα(V561D), DDR1, KIT, KIT(V560G), HER4, KIT(D816E), EGFR(L858R), KIT(V654A), PDGFRα(D842V), EGFR, EGFR(L861Q), EGFR(d746-750), JAK1, RET, RET(S891A), FGFR3, ALK, WNK3, RET(Y791F), BRAF(V600E), RAF1, ROCK1, AurA, MAP2K2, RET(M918T), KDR, FGFR2, Erk1, EGFR(T790M), RET(G691S), PDGFRα(T674I), p38α, HER2, JAK3, MAP2K1, p38β, EGFR(T790M/L858R), FLT1, BRAF, KIT(T670I), MET, skMLCK, MNK1, MST1, PKD1, JAK2, YES(T348I), FGFR1, EGFR(d746-750/T790M).

화합물 II은 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, FRK, FYN(isoform a), FYN(isoform b), TEC, BMX, LYNb, ABL, FGR, FMS, BLK, EPHA1, ABL(E255K). 화합물 II은 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 <50% 억제를 나타내었다: PDGFRβ, PDGFRα PIK3CA/PIK3R1, KIT, KIT(V560G), EGFR, HER2, YES(T348I), ITK, p38α, ABL(T315I), RAF1, p38β, BRAF. 화합물 II는 1nM 미만의 IC₅₀으로 재조합 BTK 활성의 농도-의존성 억제를 나타내었다.

화합물 II은 하기 재조합 키나아제 상에서 10nM에서 >50% 억제를 나타내었다: BTK, PDGFRβ, KIT(V560G), PDGFRα, KIT. 화합물 II은 하기 재조합 키나아제 상에서 10nM에서 <50% 억제를 나타내었다: PIK3CA/PIK3R1, EGFR, p38α, RAF1, HER2, p38α, BRAF.

화합물 II은 하기 재조합 키나아제 상에서 100nM에서 >50% 억제를 나타내었다: PDGFRα, KIT(V560G), KIT, PDGFRβ, EGFR. 화합물 II은 하기 재조합 키나아제 상에서 100nM에서 <50% 억제를 나타내었다: p38α, RAF1, PIK3CA/PIK3R1, HER2, p38β, BRAF.

화합물 IV는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

화합물 V는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

화합물 VI는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

화합물 VII는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

화합물 VIII는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

화합물 IX는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

화합물 X은 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K). 화합물 X은 >1nM의 IC₅₀으로 재조합 ABL, ABL (E255K), BTK 및 BTK (C481S) 활성의 농도-의전성 억제를 나타낸다.

화합물 XI는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K). 화합물 XI는 >1nM의 IC₅₀으로 재조합 ABL, ABL (E255K), BTK 및 BTK (C481S) 활성의 농도-의전성 억제를 나타낸다.

화합물 XII는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

화합물 XIII는 하기 재조합 키나아제 상에서 1nM에서 >50% 억제를 나타내었다: SRC, YES, LCK, HCK, BTK, LYNa, TEC, BMX, ABL, ABL (E255K).

실시예 16

세포 억제 분석(Cell Inhibition Assay)

American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA)으로부터 SU-DHL-4 (ATCC^® CRL-2957^TM), K-562 (ATCC^® CCL-243^TM) 및 Mino (ATCC^® CRL-3000^TM)의 세포주를 구입하였다. SU-DHL-4 세포와 Mino 세포는 포화 습도의 5% CO₂하에 37℃에서 T-75 플라스크 10% 태아소혈청(FBS) (Gibco, Life Technologies) (완전 배지)을 첨가한 ATCC-배양 RPMI-1640 배지(ATCC)에서 배양하였다. K-562 세포는 포화 습도의 5% CO₂하에 37℃에서 10% FBS (Gibco, Life Technologies) (완전 배지)가 보충된 ATCC-formulated Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)에서 배양하였다. 세포가 약 1 x 10⁶ cells/mL의 농도가 될 때, 각 세포주에 상응하는 완전한 배지로 2.5-5 x 10⁴cells/mL로 희석 하였다. 세포 현탁액의 A200μL 분취액을 다양한 농도의 시험 화합물 1μL가 미리 첨가된 96-웰 플레이트의 웰에 첨가하고, 상기 플레이트를 포화 습도의 5% CO₂ 하에서 37℃에서 48시간 동안 배양하였다. 세포 배양이 끝나면 PrestoBlue^® Cell Viability 시약 (ThermoFisher Scientific) 10 μL를 웰에 넣고 37℃에서 약 60분 동안 배양합니다. 570 및 600nm에서의 흡수는 SpectraMaxMicroplate 판독기 (Molecular Devices)로 측정하였다. 570 nm에서의 흡광도를 600 nm에서의 흡광도로 정규화하였다. 570 nm에서의 정규화된 흡광도는 median-effect plot (TC Chou.Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies. Pharmacol Rev. 2006;58:621-681)에 따라 IC₅₀ 계산에 사용되었다.

화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및 XIV는 각각 <15nM의 IC₅₀의 값으로 SU-DHL-4의 성장의 농도 의존적 억제를 나타내었다.

화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및 XIV는 각각 <2nM의 IC₅₀의 값으로 K562의 성장의 농도 의존적 억제를 나타내었다.

화합물 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, 및 XIV는 각각 <50nM의 IC₅₀의 값으로 Mino의 성장의 농도 의존적 억제를 나타내었다.

실시예 17

대사 안정성(Metabolic Stability)

간 마이크로좀에서 대사 안정성: 시험 화합물 및 다사티닙을 10 mM MgCl₂, 1 mM NADPH 및 2 mM UDPGA를 함유하는 0.1M 인산 완충액 중에서 인간 간 마이크로 솜 (0.5 mg/mL) (Corning Inc., Tewksbury, MA)에서 1 μM의 농도로 0 에서 60분 범위의 시간 동안 37℃에서 배양하였다(도 1 참조). 다사티닙(HY10181/CS0100, 302962-49-8, Batch No: 13044)은 MedChemExpress USA (Monmouth Junction, NJ)로부터 구입 하였다. 다양한 시점에서 인큐베이션 반응을 100nM 레서핀(reserpine)을 함유하는 2x 부피의 아세토니트릴을 첨가함으로써 급냉시켰다. ??칭된 배양 샘플을 4000 RPM에서 10분간 원심분리하고, 상등액을 LC/MS/MS 분석을 위해 주입하였다. LC/MS/MS 분석은 Shimadzu Prominence UFLCXR 20 시리즈(CBM-20A 컨트롤러, 2개의 LC-20ADXR 솔벤트 공급 장치, SIL-20AC HT 자동 샘플러, CTO-20A 컬럼 오븐 및 SPD-20A UV 검출기 포함).와 결합된 AB Sciex 4000 Q Trap LC/MS/MS 시스템에서 수행되었다. 샘플을 2가지 용매 시스템으로 용리된 Phenomenex Columbus 컬럼 (C18, 4μm, 50 x 2mm)에서 분리 하였다: 25% B로 시작하는 선형 구배에서 0.1% 포름산 (A) 및 메탄올 (B)를 함유하는 물에서 2 mM 암모늄 아세테이트. 포지티브 모드에서의 전자 스프레이 이온화를 사용하여 LC/MS/MS 데이터를 획득했다. 시험 관내 t_1/2 및 내재적 클리어런스는 이전에 보고된 방법을 사용하여 계산되었다(Obatch S. Prediction of human clearance of twenty-nine drugs from hepatic microsomal intrinsic clearance data: An examination of in vitro half-life approach and nonspecific binding to microsomes. Drug Metab Dispos. 1999;27(11):1350-9).

실시예 18

약동학(Pharmacokinetics)

화합물 IV 및 다사티닙(2-in-1)을 정맥 투여를 위해 2.5% DMSO, 20% 프로필렌 글리콜 300 및 8% 덱스트로스 용액(50%)을 함유하는 물에 0.2 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로, 및 구강 투여를 위해 5% DMSO, 20% 프로필렌 글리콜 300 및 10% 덱스트로스 용액(50%)을 함유하는 물에 0.25 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로 용해시켰다. 화합물 V 및 다사티닙(2-in-1)을 정맥 투여를 위해 2.5% DMSO, 20% 프로필렌 글리콜 300 및 8% 덱스트로스 용액(50%)을 함유하는 물에 0.2 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로, 및 구강 투여를 위해 5% DMSO, 20% 프로필렌 글리콜 300 및 10% 덱스트로스 용액(50%)을 함유하는 물에 0.25 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로 용해시켰다. 화합물 X 및 다사티닙(2-in-1)을 정맥 투여를 위해 2.5% DMSO, 30% 프로필렌 글리콜 300 및 10% 덱스트로스 용액(50%)을 함유하는 물에 0.2 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로, 및 구강 투여를 위해 5% DMSO, 50% 프로필렌 글리콜 300 및 10% Solutol^® HS 15 (Sigma-Aldrich)을 함유하는 물에 0.5 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로 용해시켰다. 화합물 XI 및 다사티닙(2-in-1)을 정맥 투여를 위해 2.5% DMSO, 30% 프로필렌 글리콜 300 및 10% 덱스트로스 용액(50%)을 함유하는 물에 0.2 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로, 및 구강 투여를 위해 5% DMSO, 50% 프로필렌 글리콜 300 및 10% Solutol^® HS 15을 함유하는 물에 0.5 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로 용해시켰다.

Sprague-Dawley 쥐 (대략 체중 275-300 g, N = 3)에 상기 투여액으로 5 mL/kg으로 정맥 내 투여하고 10 mL/kg을 경구 투여하였다. 투약 후 0, 0.25 (정맥 내), 0.5, 1, 2, 4, 8, 10 및 24시간에 항응고제로서 EDTA를 함유하는 튜브 내로 혈액 샘플을 수집하고 원심분리에 의해 혈장 샘플을 제조하였다. 혈장 샘플을 내부 표준물질인 100nM reserpine을 포함하는 3x 볼륨의 아세토니트릴과 혼합하고 4000 RPM에서 15분간 원심분리했다. 상등액은 Shimadzu Prominence UFLCXR 20 시리즈(CBM-20A 컨트롤러, 2개의 LC-20ADXR 솔벤트 공급 장치, SIL-20AC HT 자동 샘플러, CTO-20A 컬럼 오븐 및 SPD-20A UV 검출기 포함) 와 결합된 AB Sciex 4000 Q Trap LC/MS/MS 시스템상에서 수행되는 LC/MS 분석을 위해 주입하였다. 샘플을 2가지 용매 시스템으로 용리된 Phenomenex Columbus 컬럼 (C18, 4μm, 50 x 2mm)에서 분리하였다: 25% B로 시작하는 선형 구배에서 0.1% 포름산 (A) 및 메탄올 (B)를 함유하는 물에서 2 mM 암모늄 아세테이트. 샘플을 2가지 용매 시스템으로 용리 된 Phenomenex Columbus 컬럼 (C18, 4μm, 50 x 2mm)에서 분리 하였다: 0.1% 포름산 (A) 및 메탄올 (B)을 함유하는 2mM 암모늄 아세테이트, 25% B. 포지티브 모드에서의 전자 스프레이 이온화를 사용하여 LC/MS/MS 데이터를 획득했다. 화합물 III, IV, V, X, XI 및 다사티닙의 혈장 농도를 각각 표준 곡선을 사용하여 정량하였다.

실시예 19

조직 배양 (Tissue Distribution)

폐 조직 및 혈장 농도 비율: 화합물 X 및 다사티닙(2-in-1)을 5% DMSO, 50% 프로필렌 글리콜 300 및 9% Solutol^® HS 15을 함유하는 물에 0.5 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로 용해시켰다. 화합물 XI 및 다사티닙(2-in-1)을 5% DMSO, 20% 프로필렌 글리콜 300을 함유하는 물에 0.5 mg/mL (각각의 화합물)의 농도로 용해시켰다. 10 mL/kg를 CD-1 마우스(대략 중량 30 g, N = 3)에 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 화합물 X에 대하여 투약 후 1, 2, 4, 10시간, 화합물 XI에 대하여 투여 전, 투약 후 1, 2, 3, 8, 10 및 24시간에 항응고제로서 EDTA를 함유하는 튜브 내로 혈액 샘플을 수집하였다. 혈장 샘플은 원심분리에 의해 준비되었다. 위의 각 시점에서 폐 샘플도 수집했다. 폐 샘플을 4배 증류수 (v/w)에서 균질화시켰다. 혈장 샘플 및 균질화된 폐 조직 샘플을 내부 표준으로서 100nM 레서핀을 함유하는 3x 부피의 아세토니트릴과 혼합하고, 4000 RPM에서 15분 동안 원심분리 하였다. 상등액은 Shimadzu Prominence UFLCXR 20 시리즈(CBM-20A 컨트롤러, 2개의 LC-20ADXR 솔벤트 공급 장치, SIL-20AC HT 자동 샘플러, CTO-20A 컬럼 오븐 및 SPD-20A UV 검출기 포함) 와 결합된 AB Sciex 4000 Q Trap LC/MS/MS 시스템상에서 수행되는 LC/MS 분석을 위해 주입하였다. 샘플을 2가지 용매 시스템으로 용리된 Phenomenex Columbus 컬럼 (C18, 4μm, 50 x 2mm)에서 분리 하였다: 25% B로 시작하는 선형 구배에서 0.1% 포름산 (A) 및 메탄올 (B)를 함유하는 물에서 2 mM 암모늄 아세테이트. 샘플을 2가지 용매 시스템으로 용리 된 Phenomenex Columbus 컬럼 (C18, 4μm, 50 x 2mm)에서 분리 하였다: 0.1% 포름산 (A) 및 메탄올 (B)을 함유하는 2mM 암모늄 아세테이트, 25% B. 포지티브 모드에서의 전자 스프레이 이온화를 사용하여 LC/MS/MS 데이터를 획득했다. 화합물 X, XI 및 다사티닙의 혈장 및 조직 농도를 각각 표준 곡선을 사용하여 측정하였다.

본 명세서에 기술된 예시 및 실시 예는 설명적인 목적(illustrative purposes)을 위한 것이고, 이에 대한 다양한 수정 또는 변경이 당업자에게 제안될 것이며, 본 출원의 정신 및 범위 및 첨부된 청구항의 범위 내에 포함되어야 한다. 여기에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 본원에 참고로 포함된다.

Claims

[화학식 II]의 화합물, 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물;
[화학식 II]

여기서 W₁,W₂,및 W₃는 독립적으로 수소 또는 중수소(deuterium)이고;
여기서 Y는 C-H 또는 질소이고;
여기서 R₂는 메틸이고,
여기서 R₃및 R₄는독립적으로 수소; 할로겐; 알콕실, 여기서 상기 알콕실은 메톡시, 에톡시, 프로필옥시 또는 tert-부톡시임; C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬 또는 C₂-C₆ 알케닐이고, 여기서 C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬 또는 C₂-C₆ 알케닐은 -OH 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 치환기; 또는 선택적으로 치환된 헤테로사이클로(heterocyclo)로 치환되고, 여기서 상기 헤테로사이클로는 선택적으로 -NR₇R₆로 치환되고, 여기서 R6 및 R7은 독립적으로 수소, C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬 또는 C₂-C₆ 알케닐이고;및
여기서 X는 독립적으로 수소; -(CH₂)_n-OR_5,여기서 n은 0 내지 4의 정수이고, R₅는 독립적으로 수소, C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬, 또는 C₂-C₆ 알케닐임; 또는 -NR₇R₆, 여기서 R₆ 및 R₇은 독립적으로 수소, C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬 또는 C₂-C₆ 알케닐이다.
[화학식 III]의 화합물, 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물;
[화학식 III]

여기서 W₁,W₂,및 W₃는 독립적으로 수소 또는 중수소(deuterium)이고;
Y는 C-H 또는 질소이고;
여기서 R₂는 메틸이고,
여기서 R₃,및 R₄는 독립적으로 수소(H); 할로겐; 알콕시; C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬 또는 C₂-C₆ 알케닐이고,
여기서 상기 C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬 또는 C₂-C₆ 알케닐은 -OH 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서 알콕시는 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, 또는 tert-뷰톡시; 또는 선택적으로 치환된 헤테로사이클로이고, 여기서 상기 헤테로사이클로는 선택적으로 -NR₇R₆로 치환되고, 여기서 R₆ 및 R₇은 독립적으로 수소, C₁-C₆의 직쇄 또는 C₃-C₆의 분지쇄 알킬 또는 C₂-C₆ 알케닐 알케닐이다.
제1항 또는 제2항에 있어서,
W₂가 중수소(deuterium), 및 W₁및 W₃은 수소인 화합물, 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물.
제3항에 있어서,
상기 화합물은 [화합물 IV, V, VI 또는 VII], 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물인 화합물, 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물:
[화합물 IV]
,

[화합물 V]
,

[화합물 VI]
, 또는

[화합물 VII]
.
제1항 또는 제2항에 있어서,
W₁,W₂,및 W₃는 각각 수소인 화합물, 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물.
제5항에 있어서,
상기 화합물은 [화합물 X, XI, XII, XIII 또는 XIV], 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물인 화합물, 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물:
[화합물 X]
,

[화합물 XI]
,

[화합물 XII]
,

[화합물 XIII]
, 또는

[화합물 XIV]
.
제1항 또는 제2항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물을 유효성분으로 포함하는 단백질 키나아제-매개 질환 치료용 약학적 조성물로,
상기 단백질 키나아제-매개 질환은 자가 면역 질환 또는 암인 약학적 조성물.
제7항에 있어서,
상기 자가 면역 질환은 전신 홍반성 낭창(SLE), 이식 거부(transplant rejection), 다발성 경화증(MS), 전신 경화증(SSc), 일차성 쇼그렌증후군(pSS), 류마티스 관절염(RA) 및 건선 중 적어도 하나인 약학적 조성물.
제7항에 있어서,
상기 암은 필라델피아 염색체-양성(Ph+) 만성 골수성 백혈병(CML), 필라델피아 염색체-양성 급성 림프구성 백혈병(Ph+ ALL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소포성 림프종(follicular lymphoma), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma, MZL), 외투세포 림프종(MCL), 발 덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM), T-세포 림프종, 다발성공수종(multiple myeloma) 중 적어도 하나인 약학적 조성물.
제7항에 있어서,
상기 화합물은 [화합물 IV, V, VI, VII, X, XI, XII, XIII 또는 XIV], 또는 이의 염, 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체 혼합물인 약학적 조성물:
[화합물 IV]
,

[화합물 V]
,

[화합물 VI]
, 또는

[화합물 VII]

[화합물 X]
,

[화합물 XI]
,

[화합물 XII]
,

[화합물 XIII]
, 또는

[화합물 XIV]
.
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