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KR102464017B1 - 신규한 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 조성물 - Google Patents

신규한 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 조성물 Download PDF

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KR102464017B1
KR102464017B1 KR1020220017330A KR20220017330A KR102464017B1 KR 102464017 B1 KR102464017 B1 KR 102464017B1 KR 1020220017330 A KR1020220017330 A KR 1020220017330A KR 20220017330 A KR20220017330 A KR 20220017330A KR 102464017 B1 KR102464017 B1 KR 102464017B1
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KR
South Korea
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present
amino acid
seq
acid sequence
composition
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KR1020220017330A
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Inventor
김재환
임지헌
안혜인
Original Assignee
김재환
나인바이오팜 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 김재환, 나인바이오팜 주식회사 filed Critical 김재환
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Abstract

본 발명은 신규한 펩타이드 및 이의 여드름 예방 또는 개선용 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 펩타이드 및 이를 포함하는 화장료, 식품 및 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 신규한 펩타이드는 여드름 균에 대한 항균 효과, 피지 개선 효과 및 피부결 개선 효과가 우수한 것을 실험적으로 확인하였다. 이는 본 발명의 펩타이드가 여드름의 예방, 개선 및 치료 효과 및 피부 상태 개선효과가 우수하다는 것을 의미하는 바, 화장료, 식품 및 제약 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.

Description

신규한 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 조성물{Composition for preventing or improving acne comprising a novel peptide}
본 발명은 신규한 펩타이드 및 이의 여드름 예방 또는 개선용 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 펩타이드 및 이를 포함하는 화장료, 식품 및 약학 조성물에 관한 것이다.
여드름은 모낭 및 피지선에 발생하는 염증성 피부 질환으로, 여드름의 발생원인은 크게 피지 분비의 증가, 모낭의 협착, 여드름 균(Propionibacterium acnes)의 증식 등이 있다. 피지의 지질 조성은 피부 표피와 달라 산화가 잘되고 세균의 에너지원으로 사용되기가 용이하므로, 피지의 증가는 여드름균의 증식으로 이어져 여드름을 유발시킬 수 있다. 또한, 증가된 여드름균은 항원으로 인식되어 염증 반응이 일어나게 된다. 이는 구진(papule)의 원인이 되고 악화되면 모낭벽이 파괴되며 조직이 손상되는 낭포, 농포등의 병변으로 발전하게 된다.
여드름의 증상을 완화시키기 위해서는 여드름균의 에너지원이 되는 피지의 분비를 감소시키거나, 분비된 피지를 자주 제거해주어야 한다. 또한, 여드름균은 혐기성 조건에서 활발히 증식하므로 모낭이 협착되지 않도록 피부각질을 잘 제거해 주거나 또는 여드름균의 증식 자체를 억제 시킨다면 여드름 증상이 완화될 수 있다.
여드름균의 억제를 위해 테트라사이클린, 미노사이클린, 에리스로마이신 등의 항생제나 벤조일페록사이드 같은 외용약, 염증 치료를 위한 항염증제, 피지 조절을 위한 호르몬 제제들이 사용될 수 있지만 이는 의약품 분야에 속하는 방법이다.
화장품 분야에서는 레소시놀, 황, 살리실산, 벤조일퍼옥시드 등의 성분을 화장품에 첨가하여 피부 각질제거 및 여드름균을 살균하는 방법이 주로 사용되어 왔다. 그러나 이러한 성분으로 인해 피부가 자극 받아 붉게 달아오르거나 쉽게 건조해지는 등의 부작용이 생기기 쉽고, 이러한 부작용 때문에 화장품 내 첨가되는 농도에도 그 한계가 있으므로, 여드름균 살균효과도 크지 않은 실정이다. 따라서 장기적으로 사용가능하며 정상 피부의 손상이 적어 피부에 안전하고 여드름 개선 효과가 우수한 화장료 원료의 개발이 시급하다.
이에 본 발명자들은 신규 펩타이드를 개발하고, 이의 현저한 여드름 예방 또는 개선 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 항균용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피부결 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피지 감소용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 따라서 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 제공하는 것이다.
또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피부결 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피지 감소용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 신규한 펩타이드는 여드름 균에 대한 항균 효과, 피지 개선 효과 및 피부결 개선 효과가 우수한 것을 실험적으로 확인하였다. 이는 본 발명의 펩타이드가 여드름의 예방, 개선 및 치료 효과 및 피부 상태 개선효과가 우수하다는 것을 의미하는 바, 화장료, 식품 및 제약 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 수비타이드-APAP007(A) 및 수비타이드-APAP009(B)의 세포 독성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 2A는 액체 배지에서 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009의 여드름 균에 대한 항균 활성을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 2B는 고체 배지에서 여드름 균에 대한 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009의 항균 활성을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명에 따른 수비타이드-APAP009의 피지 개선 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명에 따른 수비타이드-APAP009의 피부결 개선 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드; 및 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드;를 제공한다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 신규 펩타이드를 합성하였고, 이를 각각 ‘수비타이드-APAP007’ 및 ‘수비타이드-APAP2009’로 명명하였다. 상기 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009는 각각 서열번호 1 및 2의 아미노산 서열로 표시된다.
본 발명에 있어서, 펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다. 상기 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성방법에 따라 제조될 수 있으며, 바람직하게는 고체상 합성기술에 따라 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 범위에는 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 기능적 동등물을 포함한다.
본 발명에 있어서, 기능적 동등물은 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 서열번호 1 또는 2로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80％ 이상의, 바람직하게는 90％, 더욱 바람직하게는 95％이상의 서열 상동성(즉, 동일성)을 갖는 것으로 예를 들면, 80％, 81％, 82％, 83％, 84％, 85％, 86％, 87％, 88％, 89％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 100％의 서열 상동성을 갖는 것을 포함하며, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드와 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 펩타이드를 말한다. 또한, 본 발명의 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드에는 이의 천연형 아미노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 이의 아미노산 서열 변이체가 또한 본 발명의 범위에 포함된다. 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 변이체란 상기 펩타이드의 천연 아미노산 서열과 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의하여 상이한 서열을 가지는 펩타이드를 의미한다. 분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 펩타이드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다. 상기 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드 또는 이의 변이체는 천연에서 추출하거나 합성 또는 DNA 서열을 기본으로 하는 유전자 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한 상기 서열 상동성은 펩타이드를 구성하는 아미노산 서열의 유사한 부분을 비교하기 위해 사용되는 일반적인 표준 방법에 의해 결정할 수 있다. BLAST 또는 FASTA와 같은 컴퓨터 프로그램은 두 개 이상의 단백질을 각각 구성하는 아미노산이 최적으로 매칭(matching) 되도록 정렬한다(하나 또는 두 서열의 전장서열을 따라 또는 하나 또는 두 서열의 예측된 부분을 따라). 상기 프로그램은 디펄트 오프닝 패널티(default opening penalty) 및 디펄트 갭 페널티(default gap penalty)를 제공하며 컴퓨터 프로그램과 함께 연계되어 사용될 수 있는 PAM250와 같은 스코링 매트릭스를 제공한다. 예를 들어, 백분율로 표시되는 서열 상동성은 다음과 같이 계산할 수 있다: 일치하는 서열(indentical matches)의 총 수에 100을 곱한 다음 대응되는 스팬(machted span) 내의 보다 긴 서열의 길이와두 서열을 정렬하기 위해 보다 긴 서열내로 도입된 갭(gaps)의 수의 합으로 나눈다.
본 발명에 있어서, 실질적으로 동질의 생리활성은 여드름 예방, 개선 또는 치료 활성; 피부결 개선 활성; 및 피지 감소 활성;을 의미한다.
또한 상기 기능적 동등물의 범위에는 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 기본 골격과 피부 상태 개선 활성을 유지하면서 구성하는 아미노산의 일부 화학 구조가 변형된 유도체가 포함된다. 예를 들어 단백질의 안정성, 저장성, 휘발성 또는 용해도 등을 변경시키기 위한 구조변경이 이에 포함된다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 여드름 예방 또는 개선용 화장료 조성물; 여드름 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물; 여드름 예방 또는 개선용 식품 조성물; 또는 여드름 예방 또는 치료용 약학적 조성물;일 수 있다.
본 발명에 있어서, 예방이란 본 발명에 따른 조성물의 투여로 여드름을 억제시키는 모든 행위를 말한다. 또한 치료는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 여드름 증상이 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미하며, 개선은 본 발명의 조성물을 개체에 투여하거나 섭취시켜 여드름의 나쁜 상태를 좋게 하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 구체예에서, 상기 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드는 농도가 0.0001 내지 50μM인 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 0.001 내지 40μM, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 30μM일 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물인 경우, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제 및 담체가 더 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물에는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트, 알란토인 등의 보조성분이 추가로 더 포함될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 적용되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 마스크팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
또한 본 발명의 조성물이 약학적 조성물인 경우, 본 발명의 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드와 함께 여드름에 대하여 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 실제 임상투여 시에 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있으며, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 이용하는 것이 바람직하다.
상기 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스 (Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 또한, 상기 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 상기 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 상기 약학적 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 0.05 내지 5 mg/kg의 농도로 투여되는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 0.1 내지 0.4 mg/kg, 더욱 바람직하게는 0.2 내지 0.35 mg/kg, 더더욱 바람직하게는 0.25 mg/kg일 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 그 방식에 있어 특별히 제한되지 아니하며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학적 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 상기 비경구 투여 방식으로는 예를 들어 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 경피 투여 또는 피하 투여 등이 포함된다.
본 발명의 조성물이 식품인 경우 건강기능식품, 식품 첨가제 또는 식이보조제로 사용될 수 있다.
상기 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 식품 첨가제로 사용할 경우, 상기 혼합물을 그대로 첨가하거나, 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 혼합하여 사용되는 등 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
또한 상기 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 변경될 수 있음은 물론이며, 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 95중량%로 포함되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 1 내지 80중량%로 포함되는 것이다. 그 함량이 0.01중량% 미만일 경우에는 여드름 예방 또는 개선 효과가 미미할 수 있으며, 95중량%를 초과할 경우 사용량 대비 효과 상승률이 낮아 비경제적일 수 있다.
구체적인 예로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드가 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하여 장기간 섭취할 경우에는 상기 범위 이하의 양으로 첨가될 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없으나, 본 발명의 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료, 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 조성물이 음료로 제조될 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당 등의 모노사카라이드; 말토오스, 수크로오스 등의 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린 등의 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐 등의 합성 감미제 등이 사용될 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 10중량%, 바람직하게는 0.01 내지 0.1중량%로 포함된다.
본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있으며, 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기의 첨가제 비율은 크게 제한되지는 않으나, 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 0.1중량% 범위내로 포함되는 것이 바람직하다.
건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우, 본 발명의 식품 조성물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 장기간 복용이 가능하다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 구체예에서, 상기 항균은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 활성인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 항균용 조성물은 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스에 대해 현저한 항균 활성을 보이는바, 여드름 예방, 개선 또는 치료 용도로 활용가능하다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피부결 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피지 감소용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시예에서, 본 발명의 펩타이드가 피부결 개선 및 피지 감소 효과가 우수하다는 것을 확인한바, 이는 본 발명의 조성물이 피부결 개선 및 피지 감소를 포함한 피부 개선용 소재로도 적합하다는 것을 의미한다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 펩타이드 합성
여드름 예방 또는 개선을 위한 항균 펩타이드를 합성하였으며, 합성된 펩타이드를 각각 ‘수비타이드-APAP007’ 및 ‘수비타이드-APAP2009’로 명명하였다. 상기 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009는 각각 서열번호 1 및 2의 아미노산 서열로 표시된다.
명칭 서열번호 아미노산 서열
수비타이드-APAP007 1 HFLGRLVNLAKKIL
수비타이드-APAP009 2 HWLGKLVNLAKKIL
실시예 2. 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009의 세포 독성 평가
상기 실시예 1에서 제조된 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009의 세포 독성을 평가하였다. 구체적으로, 사람의 표피각질세포인 HaCaT 세포와 사람의 섬유아세포인 CCD-986Sk에서 세포독성을 측정하였다. 96 well plate에 각질세포는 3x103cells/well로, 섬유아세포는 5x103cells/well로 분주한 후 10% FBS가 포함된 배지에서 24시간 동안 세포배양조건에서 배양하였다. 배양 후, FBS가 없는 배지에 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009를 다양한 농도(2.5, 5μM)로 첨가하고, 이를 48시간 동안 배양하였다. 이후, CCK8 반응액(Dojindo Molecular Technologies, Kumamoto, Japan)을 웰당 10μl씩 처리하여 4시간 동안 반응시킨 후, 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군으로는 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009를 처리하지 않은 세포의 흡광도 값과 비교하여 세포 생존율을 평가하였다. 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009의 세포독성을 확인한 결과는 도 1A 및 B에 각각 나타내었다.
도 1A 및 B에 나타낸 바와 같이, 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009는 표피각질세포 및 섬유아세포에 대한 독성이 없는 것을 확인하였다.
실시예 3. 여드름 균에 대한 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009의 항균 활성 측정
상기 실시예 1에서 합성된 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009의 여드름 균 성장 억제 효능을 확인하였다. 구체적으로, 여드름 균인 Propionibacterium acnes(P. acnes: KCTC 3314) 균을 Brain Heart Infusion Broth(Difco, Detroit, USA)에 접종하여 혐기팩(Anaerobag. KS-B2002, Kisanbio, Seoul, Korea)과 함께 jar에 넣어 혐기성 환경에서 16시간 동안 37℃로 배양하였다. 이 후 96-well plate에 배지를 각 웰에 100㎕씩 분주하고, 각 펩타이드를 배양액에 다양한 농도(1, 2, 3, 4, 5, 6μM)로 처리하였다. 먼저 배양해 놓은 여드름 균은 600nm에서 흡광도를 측정하여 그 값이 1이 되도록 배지로 희석한 뒤 각 웰에 5㎕씩 분주해주었다. 이후 96-well plate를 혐기팩(Anaerobag. KS-B2002, Kisanbio, Seoul, Korea)과 함께 jar에 넣어 혐기성 환경에서 16시간 동안 37℃로 배양하고 Spectrophotometer를 이용하여 600nm에서 흡광도를 측정하여 여드름 균의 성장 억제능을 확인하였다. 여드름 균의 성장 억제능을 확인한 결과는 도 2A에 나타내었다.
도 2A에 나타낸 바와 같이, 수비타이드-APAP007 처리군 및 수비타이드-APAP009 처리군은 3μM 이상의 농도에서 여드름 균의 성장을 억제하는 것을 확인하였으며, 특히 수비타이드-APAP009 처리군은 2μM 농도에서도 여드름 균의 성장을 억제할 수 있음을 확인하였다.
여드름 균의 성장 억제능이 공통적으로 확인된 농도 범위(3-6μM)에서 고체 배지를 이용한 실험을 진행하였다. 구체적으로, Brain Heart Infusion Agar(Difco, Detroit, USA)로 고체배지를 만든 후, 각 펩타이드(3 내지 6μM) 100㎕ 및 여드름 균을 고체배지에 균일하게 도말하였다. 이후 고체배지를 혐기팩(Anaerobag. KS-B2002, Kisanbio, Seoul, Korea)과 함께 jar에 넣어 혐기성 환경에서 24시간 동안 37 ℃로 배양한 후 여드름 균의 성장 유무를 확인하였다. 고체 배지에서 여드름 균의 성장 억제능을 확인한 결과는 도 2B에 나타내었다.
도 2B에 나타낸 바와 같이, 고체배지를 이용한 실험에서도 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009는 여드름 균 성장 억제 효과가 우수한 것을 확인하였다.
실시예 4. 수비타이드-APAP009의 인체 적용 시험
상기 실시예 1에서 합성된 펩타이드의 임상 효과를 확인하기 위해 공인 인증기관에 의뢰하여 수비타이드-APAP009를 포함하는 조성물이 처방된 화장품 제형의 여드름 개선 효과를 확인하였다. 하기 표 2와 같은 조성의 미스트 타입의 조성물을 제조하여 만 30~53세 성인 여성 시험 대상자의 시험부위에 세정 후 아침 및 저녁(1일 2회)에 시험 제품을 정해진 사용 방법에 따라 사용하도록 하였으며, 기기 측정을 통하여 피지 개선 및 피부결 개선 효과를 평가하였다.
원료명 함량(질량%)
병풀추출물 90.7592
Subitide-APAP009 (5μmol) 0.0008
DPG-K2(OLI 2902) 0.0100
EDTA-2Na 0.0300
Allantoin 0.1000
Niacinamide PC 0.1000
D-판테놀 0.3000
DPGFG 2.0000
글리세린 5.0000
Phytonside RS 0.7000
GCERAPLEX-S 0.5000
Jeju Pore Complex 0.5000
Nmn 0.00001
Snow Algae Powder 0.00001
합계 100
4-1. 피지 개선 평가
피지 개선 평가를 위해 시험 대상자는 세안을 한 후 항온, 항습(22±2℃, RH40~60%) 조건에서 2시간 30분 동안 피부를 적응시켰다. 이후 Sebumeter SM 815 (Courage and Khazaka, Cologne, Germany)를 이용하여 정해진 시험 부위(안면 이마부위, 눈썹에서 1cm 올라온 부위 세곳)을 측정하였다. Sebumeter는 64㎟ 면적의 카세트 헤드 부분에 위치한 필름을 일정시간 동안 피부에 접촉시킨 후 필름에 흡착된 피지를 측정하는 것이다. 필름에 피지가 흡착되면 투명도가 높아지는 원리를 이용하여 일정 압력으로 필름을 30초간 피부에 접촉시킨 후 광도측정법(photometry)를 이용하여 지질 정도를 측정하였다. Sebum 측정값의 단위는 면적당 피지량(㎍/㎠)이다. 피지량 측정 결과는 표 3 및 도 3에 나타내었다.
측정시점 제품 사용 전
(0주)		 제품 사용
2주 후		 제품 사용
4주 후
Sebum 측정값
(평균±표준편차, 단위: ㎍/㎠)		 80.75±28.76 70.13±32.48 58.90±28.44
Sebum 감소율(%) - 13.1 27.1
p-value1) - 0.004
(p<0.05)		 0.001
(p<0.05)
1)Paired t-test
표 3 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 피지 감소율은 제품 사용 전(0주)과 비교하여 제품 사용 2주 후 13.1%, 제품 사용 4주 후 27.1%임을 확인하였다. 상기 결과는 모두 통계적으로 유의한 값(p<0.05)이다. 또한 평가 기간 동안 시험 제품에 의한 피부 유해사례는 발생하지 않았다.
4-2. 피부결 개선 평가
피부결 개선 평가를 위해 시험 대상자는 세안을 한 후 항온, 항습(22±2℃, RH40~60%) 조건에서 30분 동안 피부를 적응시켰다. 이후 시험 부위(볼)에 Antera 3D(Miravex, Dublin, Ireland)를 이용하여 제품 사용 전, 후에 동일한 부위를 측정할 수 있도록 하였다. 피부결 분석은 Antera 3D(Miravex, Ireland)으로 영상화 한 후 기기에서 제공하는 분석프로그램(Antera 3D software, Miravex, Ireland)을 사용하여 기기적 분석값을 적용하였다. Antera 3D는 피부의 질감을 거칠기(Roughness)로 나타내며, 상기 거칠기는 이상적인 형태의 기준에서 실제 피부 표면의 수직 편차를 정량화하여 나타낸다. 측정된 이미지는 Antera 3D program을 이용하여 피부결의 개선 정도를 분석하였으며, 분석값이 작아질수록 피부의 표면이 매끄러워진 것을 의미한다. 선정된 측정 변수는 Ra, Rq이며, 단위는 Arbitrary unit(A.U.)이다. 피부결 개선 효과를 확인한 결과는 표 4 및 도 4에 나타내었다.
측정시점 제품 사용 전
(0주)		 제품 사용
2주 후		 제품 사용
4주 후
피부결(Ra) 분석값
(평균±표준편차, 단위: A.U.)		 6.338±1.323 6.216±1.229 5.841±1.308
피부결 개선율(%) - 1.925 7.842
p-value1) - 0.075
(p>0.05)		 0.001
(p<0.05)
1)Paired t-test
표 4 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 피부결 개선율은 제품 사용 전(0주)과 비교하여 제품 사용 2주 후 1.925%, 제품 사용 4주 후 7.842%임을 확인하였다. 또한 평가 기간 동안 시험 제품에 의한 피부 유해사례는 발생하지 않았다.
종합적으로 본 발명자들은 신규한 펩타이드인 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009를 개발하고, 이의 여드름 균에 대한 항균 효과, 피지 개선 효과 및 피부결 개선 효과를 확인하였다. 이는 본 발명의 수비타이드-APAP007 및 수비타이드-APAP009가 여드름의 예방, 개선 및 치료 효과 및 피부 상태 개선 효과가 우수하다는 것을 의미하는 바, 화장료, 식품 및 제약 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.
<110> NineBiopharm Co.,Ltd. <120> Composition for preventing or improving acne comprising a novel peptide <130> 1-20P <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Subitide-APAP007 <400> 1 His Phe Leu Gly Arg Leu Val Asn Leu Ala Lys Lys Ile Leu 1 5 10 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Subitide-APAP009 <400> 2 His Trp Leu Gly Lys Leu Val Asn Leu Ala Lys Lys Ile Leu 1 5 10

Claims (13)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드.
  2. 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드.
  3. 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 농도는 3μM 내지 50μM이고 상기 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드의 농도는 2μM 내지 50μM인, 조성물.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물.
  8. 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  9. 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 여드름 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물.
  11. 삭제
  12. 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피부결 개선용 화장료 조성물.
  13. 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 펩타이드를 포함하는 피지 감소용 화장료 조성물.
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